BRPI0620091B1

BRPI0620091B1 - Sal cristalino de hidrogenossulfato de (2-hidróxi-etóxi)- amida do ácido 6-(4-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor3-metil-3h-benzoimidazol-5- carboxílico

Info

Publication number: BRPI0620091B1
Application number: BRPI0620091-5A
Authority: BR
Inventors: Christopher John Squire; John DeMattei; Ronald John Roberts; Tsung-Hsun Chuang; Gorkhan Sharma-Singh; Mohammed Pervez; James Gair Ford; Richard Anthony Storey; Paul Alfred Dickinson
Original assignee: Array Biopharma Inc.; Astrazeneca Ab
Priority date: 2005-12-21
Filing date: 2006-12-12
Publication date: 2024-04-30
Also published as: EP1968948A2; US9562017B2; MY157733A; JP5127723B2; US20140221443A1; EP1968948B1; CA2634149C; AR058696A1; CN101360718A; PL1968948T3; WO2007076245A2; JP2009521487A; HUS2100046I1; SI1968948T1; FR21C1051I1; NL301139I1; ECSP088597A; TWI405756B; HRP20130663T1; PT1968948E

Abstract

SAL HIDROGENOSSULFATO, MÉTODO PARA PREPARO E USO DO MESMO. A presente invenção refere-se ao sal hidrogenossulfato do Composto 1 e seus solvatos, suas formas cristalinas e suas formas amorfas, e processos para sua preparação.

Description

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO PEDIDO DE PATENTE AFIM

[001] O presente pedido de patente reivindica a prioridade do pedido de patente provisório no de série 60/752.781, depositado em 21 de dezembro de 2005, que é aqui incorporado em sua totalidade como referência.

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

[002] A presente invenção refere-se a um sal inusitado, e mais particularmente, a um sal inusitado da (2-hidróxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5- carboxílico (aqui doravante denominado "Composto 1"), que é um inibidor de MEK útil no tratamento e/ou profilaxia de estados doentios, tais como câncer, em um mamífero. Mais especificamente, a presente invenção refere-se ao sal hidrogenossulfato do Composto 1, e processos para a preparação do dito sal. São fornecidas também composições farmacêuticas que contêm um sal hidrogenossulfato do Composto 1, e o uso do sal na fabricação de medicamentos para o tratamento e/ou profilaxia de estados doentios proliferativos, tal como câncer, no corpo humano ou animal, e métodos para tratar estados doentios proliferativos, tal como câncer, em um mamífero, administrando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um sal hidrogenos- sulfato do Composto 1.

DESCRIÇÃO DAS TÉCNICAS ANTERIORES

[003] A sinalização de células através de receptores de fatores do crescimento e proteínas cinases é um importante regulador do crescimento, proliferação e diferenciação de células. No crescimento normal de células, os fatores do crescimento, através da ativação de receptores (isto é, PDGF ou EGF e outros), ativam a vias de MAP cinase. Uma das vias mais importantes e mais bem-entendidas, envolvidas no crescimento normal e descontrolado de células, é a via de Ras/Raf cinase. Ras ligada a GTP ativa resulta na ativação e fosforilação indireta de Raf kinase. Raf, então, fosforila MEK1 e 2 em dois resíduos de serina (S218 e S222 no caso de MEK1 e S222 e S226 no caso de MEK2) (Ahn et al., Methods in Enzymology, 332:417- 431(2001)). MEK ativada, então, fosforila seus únicos substratos conhecidos, as MAP cinases ERK1 e 2. A fosforilação de ERK por MEK oorre em Y204 e T202 no caso de ERK1 e Yl85 e T183 no caso de ERK2 (Ahn et al., Methods in Enzymology 2001, 332:417-431). ERK fosforilada dimeriza e depois transloca para o núcleo, onde ela acumula (Khokhlatchev et al., Cell 93:605-615 (1998)). No núcleo, ERK está envolvida em várias funções celulares importantes, incluindo, porém sem limitações, o transporte nuclear, transdução de sinais, reparo do DNA, montagem e translocação de nucleossomas, e processamento e translação do RNAm (Ahn et al., Molecular Cell, 6:1343-1354 (2000)). Além de tudo, o tratamento de células com fatores de crescimento leva à ativação de ERK1 e 2, o que resulta em proliferação e, em alguns casos, diferenciação (Lewis et al., Adv. Cancer Res. 74:49-139 (1998)).

[004] Em doenças proliferativas, as mutações genéticas e/ou superexpressão de receptores de fatores do crescimento, a jusante de proteínas sinalizadoras, ou proteínas cinases envolvidas na via de ERK cinase, levam à proliferação descontrolada de células e, eventualmente, formação de tumores. Por exemplo, alguns cânceres contêm mutações que resultam na ativação continua desta via, devido à produção contínua de fatores do crescimento. Outras mutações levam a defeitos na desativação do complexo ativado GTP-Ras ligada, novamente resultando na ativação da via de MAP cinase. As formas mutadas e oncogênicas de Ras são encontradas em 50% dos cânceres colônicos e > 90% dos pancreáticcos, bem como muitos outros tipos de cânceres (Kohl et al., Science, 260:1834-1837 (1993)). Recentemente, mutações de bRaf foram identificadas em mais do que 60% de melanomas malignos (Davies, H., et al., Nature 2002, 417:949-954 (2002)). Estas mutações em bRaf resultam em uma cascata de MAP cinase constitutivamente ativa. Estudos de amostras de tumores primários e linhagens de células também demonstraram ativação constitutiva ou superativação da via de MAP cinase em cânceres do pâncreas, cólon, pulmão, ovário e rim (Hoshino, R., et al., Oncogene 18:813-822 (1999)). Assim sendo, há uma forte correlação entre cânceres e uma via de MAP cinase superativa, resultando em mutações genéticas.

[005] Como a ativação constitutiva ou a superativação da cascata de MAP desempenha um papel fundamental na proliferação e diferenciação de células, acredita-se que a inibição desta via seja benéfica em doenças hiperproliferativas. MEK é um ator importante na via, pois ela está a jusante de Ras e Raf. Adicionalmente, ela é um alvo terapêutico atrativo porque os únicos substratos conhecidos para a fosforilação de MEK são as MAP cinases, ERK1 e 2. A inibição de MEK demonstrou ter benefício terapêutico potencial em vários estudos. Por exemplo, moléculas pequenas inibidoras de MEK demonstraram inibir o crescimento de tumores humanos em xenoenxertos de camundongos nus (Sebolt-Leopold et al., Nature-Medicine 1999, 5(7):810-816 (1999); Trachet et al., AACR 6-10 de abril de 2002, Poster no 5426; Tecle, H., IBC 2a Conferência Internacional de Proteínas Cinases, 9-10 de setembro de 2002), alodinia estática de bloqueio em animais (documento no WO 01/05390) e inibem o crescimento de células de leucemia mielóide aguda (Milella et al., J. Clin. Invest. 108(6):851-859 (2001)).

[006] Moléculas pequenas inibidoras de MEK foram descritas. Pelo menos três pedidos de patente apareceram nos últimos anos: US 5.525.625; WO 98/43960; WO 99/01421; WO 99/01426; WO 00/41505; WO 00/42002; WO 00/42003; WO 00/41994; WO 00/42022; WO 00/42029; WO 00/68201; WO 01/68619; e WO 02/06213.

[007] Os inibidores de MEK estão descritos também no documento no WO 03/077914. A (2-hidróxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo-2- cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico, ou "Composto 1", está exemplificada no documento no WO 03/077914 e possui a seguinte fórmula estrutural:

[008] O Composto 1 demonstrou possuir atividade inibitória contra MEK, e portanto, ser útil no tratamento de uma doença hiperproliferativa, tal como câncer.

[009] O documento no WO 03/077914 descreve, em termos gerais, certos sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos lá descritos. Especificamente, afirma-se no documento no WO 03/077914 que os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos lá descritos possuem uma porção suficientemente básica podem formar sais de adição de ácido que contêm ânions farmaceuticamente aceitáveis, e vários desses ânions estão listados. Similarmente, sais apropriados dos compostos que possuem uma porção ácida devem ser formados pelo tratamento de um composto com um composto básico, e particularmente, uma base inorgânica.

[0010] A forma de um composto farmaceuticamente ativo, que é usada em medicamentos, é adequadamente uma que produz propriedades razoáveis de manuseio, que permitem que ele seja processado e formulado. Entretanto, é necessário também assegurar que as propriedades biológicas da formulação final, tais como a velocidade de dissolução de comprimidos e a biodisponibilidade do ingrediente ativo sejam otimizadas, e freqüentemente há compromissos a serem feitos ao selecionar uma forma específica que melhor atende a estes vários requisitos. Entretanto, em alguns casos, os sais não se formam facilmente e/ou não são estáveis, o que se deve provavelmente a baixos valores de pKa. O valor de pKa expressa a potência de ácidos e bases, isto é, a tendência de um ácido perder um próton ou de uma base adicionar um próton (Bronsted, J.N., Rec. Trav. Chim. 47:718 (1923)). Isso é particularmente verdadeiro para o Composto 1.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0011] A presente invenção fornece um sal hidrogenossulfato (fármaco:H2SO4 1:1) do Composto 1 e várias formas dele, estando todas elas incluídas no âmbito da invenção. O sal pode estar em várias formas, estando totas elas incluídas no âmbito da invenção. Estas formas incluem formas anidras, bem como solvatos. Uma outra forma pode ser produzida dessolvatando solvatos. Em uma modalidade específica, o sal está na forma anidra.

[0012] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método para usar um sal hidrogenossulfato do Composto 1 como um medicamento para tratar uma doença ou condição hiperproliferativa.

[0013] Um aspecto adicional da invenção é o uso de um sal hidrogenossulfato do Composto 1 na preparação de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição hiperproliferativa.

[0014] Vantagens e características inusitadas adicionais desta invenção serão enunciadas, em parte, no relatório descritivo que se segue, e em parte, ficarão evidentes para os versados nessas técnicas após o exame do relatório descritivo que se segue ou podem ser apreendidas pela prática da invenção. As vantagens da invenção podem ser realizadas e atingidas por meio de instrumentalidades, combinações, composições, e métodos assinalados particularmente nas reivindicações apensadas.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0015] Os desenhos anexos, que são aqui incorporados e fazem parte do relatório descritivo, ilustram modalidades não-limitativas desta invenção, e em conjunto com a descrição detalhada, servem para explicar os princípios da invenção.

[0016] A Figura 1 ilustra a XRPD do sal hidrogenossulfato do Composto 1;

[0017] A Figura 2 ilustra o espectro infravermelho do sal hidrogenossulfato do Composto 1, obtido usando a técnica de amostragem DRIFTS; e

[0018] A Figura 3 ilustra os resultados dos níveis da concentração plasmática do Composto 1 depois da administração de doses de 150 mg de dispersão oral equivalente da base livre do Composto 1 (x) e do sal hidrogenossulfato a cães em jejum (▲).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0019] Far-se-á referência agora detalhadamente a certas modalidades da invenção, cujos exemplos estão ilustrados nas estruturas e fórmulas que a acompanham. Embora a invenção vá ser descrita em conjunto com as modalidades enumeradas, deve-se entender que elas não pretendem limitar a invenção a estas modalidades. Pelo contrário, a invenção pretende cobrir todas alternativas, modificações, e equivalentes, que possam estar incluídas dentro do âmbito da presente invenção, como definida pelas reivindicações. Os versados nessas técnicas devem reconhecer muitos métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles aqui descritos, que poderiam ser usados na prática da presente invenção. A presente invenção não está de forma alguma limitada aos métodos e materiais descritos. Caso um ou mais artigos da literatura, patentes, e materiais similares difiram ou contradigam este pedido de patente, incluindo, porém sem limitações, os termos definidos, o uso dos termos, as técnicas descritas, ou similares, este pedido de patente prevalece.

[0020] A presente invenção fornece um sal hidrogenossulfato (fármaco para H2SO4 1:1) do Composto 1 e várias formas dele, estando todas elas incluídas no âmbito da invenção. O sal pode estar em várias formas, estando todas elas incluídas dentro do âmbito da invenção. Estas formas incluem formas anidras bem como solvatos. Uma outra pode ser produzida dessolvatando os solvatos. Em uma modalidade específica, o sal é o sal hidrogenossulfato do Composto 1. Além disso, a presente invenção fornece uma forma do sal hidrogenossulfato do Composto 1, que apresenta propriedades físicas e farmacêuticas singulares, que a tornam particularmente apropriada para uso em medicamentos.

[0021] Em certas modalidades, os sais do Composto 1 são cristalinos. Os sais cristalinos demonstraram ser mehores do que a base livre em termos de suas propriedades de manuseio do ponto de vista de fabricação, particularmente suas propriedades estáticas e de fluidez. A formação de sais pode proporcionar um meio de purificação, pois as impurezas do processo podem ser separadas e os sais são genericamente mais fáceis de isolar do que a base livre.

[0022] Em uma modalidade da invenção, o sal hidrogenossulfato do Composto 1 é um sal cristalino que surpreendentemente demonstrou possuir melhores propriedades farmacêuticas em comparação com a base livre do Composto 1 e com certas outras formas de sais do Composto 1. Particularmente, a velocidade de dissolução deste sal cristalino, bem como sua biodisponibilidade, demonstraram ser particularmente altas em comparação com a base livre e outros sais, como ilustrado nos exemplos abaixo. A melhor biodisponibilidade do sal hidrogenossulfato do Composto 1 em comparação com a base livre demonstrou ser independente da formulação usada para administração. A biodisponibilidade das formas base livre e hidrogenossulfato foram aqui comparadas quando dosadas nas mesmas formulações de dispersão, mas diferenças similares na biodisponibilidade foram observadas também para formulações de comprimidos.

[0023] Quando se afirma que a presente invenção refere-se a um sal do Composto 1 que é um sal cristalino, o grau de cristalinidade é convenientemente maior do que cerca de 60%, mais convenientemente maior do que cerca de 80%, de preferência maior do que cerca de 90%, e mais preferivelmente, maior do que cerca de 95%. Com a maior preferência, o grau de cristalinidade é maior do que cerca de 98%.

[0024] A extensão da melhor biodisponibilidade oferecida pelo sal hidrogenossulfato é surpreendente e é particularmente útil, pois a base livre do Composto 1 foi classificada como um composto da Classe BCS 4. Os compostos da Classe BCS 4 têm normalmente baixa biodisponibilidade devido à baixa velocidade de dissolução e permeabilidade, e a limitação da permabilidade sobre a absorção significa que não se esperaria usualmente que tais sais exercessem um impacto substancial sobre a absorção (vide, por exemplo: Dressman et al. (2001) Pharm Tech. , julho de 68).

[0025] Os solvatos apropriados do sal hidrogenossulfato do Composto 1 são formados a partir de uma ampla faixa de solventes, particularmente solventes orgânicos tais como tetraidrofurano (THF), acetonitrila (ACN), etanol (EtOH) e metanol (MeOH). Os solventes orgânicos apropriados incluem ésteres tais como ésteres de alquilas de C1-6, por exemplo acetato de etila, e cetonas tais como alquil(C1-6)- cetonas, por exemplo, metal-etil-cetona (2-butanona).

[0026] A preparação do sal pode ser efetuada reagindo uma pasta do Composto 1 com ácido sulfúrico em um solvente orgânico e água. Para a preparação de um sal 1:1, usa-se aproximadamente 1 equivalente de ácido sulfúrico. Assim sendo, em outro aspecto, a invenção fornece um método para preparar um sal hidrogenossulfato do Composto 1, sendo que o dito método compreende: (i) reagir uma pasta do Composto 1 com aproximadamente 1 equivalente de ácido sulfúrico em um líquido orgânico e água; (ii) recuperar o sal a partir da solução resultante; e (iii) depois disso, caso desejado ou necessário, formar um solvato dele.

[0027] A razão molar da quantidade de ácido sulfúrico para o Composto 1 fica adequadamente na faixa entre 1,00:1 e 2:1, por exemplo, em uma faixa entre 1,05:1 e 1,15:1. O ácido sulfúrico usado está adequadamente na forma de ácido sulfúrico concentrado. Em uma modalidade específica, a razão molar de ácido sufúrico para o Composto 1 é 1,10:1,0.

[0028] Adequadamente, a quantidade de água adicionada na etapa (i) fica restrita àquela necessária para assegurar que o sal seja formado. As quantidades precisas usadas dependerão da natureza específica do solvente, da concentração do ácido sulfúrico etc., mas tipicalmente, a água deve estar presente em uma quantidade menor do que 20% v/v do líquido total presente, por exemplo, entre 13 e 17% v/v.

[0029] Em uma modalidade específica, o solvente orgânico usado na etapa (i) é 2-butanona (metal-etil-cetona), a água é aproximadamente 15% do volume do líquido, e a quantidade total de líquido usada em relação ao Composto 1 é aproximadamente 8 mL por grama do Composto 1.

[0030] Adequadamente, a adição de ácido sulfúrico na etapa (i) é conduzida de uma maneira controlada, por exemplo, em uma temperatura abaixo de 10°C, e o restante da etapa (i) é conduzido em temperatura elevada, por exemplo, entre 30 e 90°C, como um outro exemplo, em uma faixa entre 55 e 75°C, e como um outro exemplo, a cerca de 65°C.

[0031] Os líquidos orgânicos apropriados incluem solventes orgânicos nos quais o Composto 1 e seus sais são parcamente solúveis. Como aqui utilizada, a expressão "parcamente solúvel" significa ter uma solubilidade menor do que 100 mL de solvente por grama de soluto, por exemplo, entre 30 e 100 mL de solvente por grama de soluto. Estes solventes incluem alquil-cetonas, por exemplo, alquil(C1-6)-cetonas tais como 2-butanona, álcoois tais como álcoois de C1-6, por exemplo, metanol ou etanol, e ésteres tais como ésteres de alquilas de C1-6, por exemplo, acetato de etila. Em uma modalidade, o solvente orgânico é metal-etil-cetona (2-butanona).

[0032] Adequadamente, a mistura reativa é filtrada entre as etapas (i) e (ii) para remover qualquer material estranho. O resíduo é opcionalmente lavado, por exemplo, com uma mistura do líquido orgânico e água, e o sal desejado é cristalizado a partir do filtrado, que pode ser opcioanlmente combinado com a solução de lavagem.

[0033] Em certas modalidades, o sal hidrogenossulfato é recuperado na etapa (ii) resfriando a mistura reativa, opcionalmente com a adição de mais líquido orgânico, de tal modo que o sal hidrogenossulfato seja precipitado. O líquido orgânico a mais pode ser o mesmo líquido orgânico usado na etapa (i), ou ele pode ser um líquido orgânico diferente, desde que ele atue como um anti-solvente para o sal hidrogenossulfato do Composto 1. A semeadura da solução com cristais do sal hidrogenossulfato do Composto 1 pode auxilar no processo de precipitação.

[0034] Em uma modalidade, antes do resfriamento, o filtrado é primeiramente submetido a uma etapa de destilação, para remover água e assegurar que o sal seja recuperado com um rendimento aceitável. Em uma modalidade específica, o solvente é 2-butanona e o filtrado é destilado à pressão atmosférica.

[0035] Ao resfriar, o sal pode ser recuperado a partir da pasta resultante, por exemplo, por filtração. O material recuperado pode ser então secado, por exemplo, em temperatura elevada, por exemplo, entre 40-60°C, e como outro exemplo, a cerca de 50°C, até atingir peso constante. Caso o produto seja um solvato com o líquido orgânico tal como metanol, el epode ser dessolvatado caso desejado nesta hora por aquecimento.

[0036] As propriedades físicas do sal hidrogenossulfato foram investigadas e estão descritas adicionalmente nos exemplos.

[0037] A invenção inclui também compostos marcados com isótopos, que são idênticos àqueles enunciados na presente invenção, mas exceto que um ou mais átomos são substituídos por um átomo que tem uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa usualmente encontrado na natureza. Os exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxofre, flúor e cloreto, tais como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F e 36Cl, respectivamente. O sal hidrogenossulfato do Composto 1 e seus polimorfos que contêm os isótopos supramencionados e/ou outros isótopos de outros átomos estão dentro do âmbito desta invenção. Certos compostos marcados com isótopos da presente invenção, por exemplo, aqueles nos quais os isótopos radioativos tais como 3H e 14C estão incorporados, são úteis em ensaios de distribuição de fármacos e/ou de tecidos no substrato. Os isótopos tritiados, isto é, 3H e carbono-14, isto é, 14C, são usados de forma particularmente ampla como resultado de sua facilidade de preparação e detectabilidade. Além disso, a substituição por isótopos mais pesados, tais como deutério, isto é, 2H, pode produzir certas vantagens terapêuticas resultantes da maior estabilidade metabólica, por exemplo, maior meia-vida in vivo ou requisitos de dosagens reduzidos e, assim sendo, podem ser utilizados em algumas circunstâncias específicas. Os sais marcados com isótopos da presente invenção podem ser preparados genericamente conduzindo os procedimentos descritos no documento no WO 03/077914, substituindo um reagente não-marcado com isótopo por um reagente marcado com isótopo facilmente disponível durante a preparação, ou, caso desejado, usando um ácido sulfúrico marcado com isótopo na preparação do sal.

[0038] A composição pode estar em uma forma apropriada para administração oral (por exemplo, como comprimidos, pastilhas, cápsulas duras ou moles, emulsões, pós ou grânulos dispersáveis, xaropes, elixires ou suspensões oleosas ou aquosas preparadas de forma extemporânea), para administração por inalação (por exemplo, como um pó finamente dividido ou um aerossol líquido), para administração por insuflação (por exemplo, como um pó finamente dividido), para injeção parenteral (por exemplo, como uma solução, suspensão ou emulsão estéril para disagem intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou infusão), para administração tópica (por exemplo, como cremes, pomadas, géis, soluções ou suspoensões oleosas ou suspensões aquosas preparadas de forma extemporânea), ou para administração retal (por exemplo, como um supositório). Em uma modalidade, o sal hidrogenossulfato do Composto 1 é administrado por via oral. Genericamente, as composições acima podem ser preparadas de uma maneira convencional, usando excipientes convencionais.

[0039] A quantidade administrada do composto ativo dependerá do indivíduo que está sendo tratado, da gravidade do distúrbio ou condição, da taxa de administração, da disposição do composto e do critério do médico prescribente. Entretanto, uma dosagem eficaz fica na faixa entre cerca de 0,01 e cerca de 100 mg por quilograma de peso corporal por dia, de preferência cerca de 1 a cerca de 35 mg/kg/dia, emu ma dose única em em doses divididas. Para um humano de 70 kg, isto daria cerca de 0,7 a 7.000 mg/dia, de preferência cerca de 70 a cerca de 2.500 mg/dia. Em alguns casos, níveis de dosagem abaixo do limite inferior da faixa supramencionada podem ser mais do que adequados, enquanto que em outros casos, doses ainda maiores podem ser empregadas sem causar qualquer efeito colateral nocivo, desde que essas doses maiores sejam primeiramente divididas em várias doses pequenas para administração durante o dia inteiro. Uma forma de dosagem unitária, tal como um comprimido ou cápsula, deve conter usualmente, por exemplo 1-1000 mg de ingrediente ativo, e de preferência 5-420 mg de ingrediente ativo. De preferência, emprega-se uma dose diária na faixa de 0,03-6 mg/kg.

[0040] De acordo com outro aspecto da presente invenção, fornece- se um sal hidrogenossulfato do Composto 1, como aqui definido, para uso em um método de tratamento ou profilaxia do corpo humano ou animal por terapia. Outra característica da presente invenção é o sal hidrogenossulfato do Composto 1, como aqui definido, para uso como um medicamento. Em outro aspecto, a presente invenção fornece o sal hidrogenossulfato do Composto 1, como aqui definido, para uso como um medicamento para o tratamento de estados doentios mediados por MEK, particularmente distúrbios proliferativos, ou crescimento anormal de células, tal como câncer, em um mamífero homeotermo, tal como um ser humano. Conseqüentemente, um outro aspecto da invenção fornece o uso do sal hidrogenossulfato do Composto 1, como aqui definido, na fabricação de um medicamento para uso no tratamento de estados doentios mediados por MEK, particularmente distúrbios proliferativos, ou crescimento anormal de células, tal como câncer, em um mamífero homeotermo tal como um ser humano.

[0041] De acordo com outra característica da invenção, fornece-se um método para tratar estados doentios medidados por MEK, particularmente distúrbios proliferativos, ou crescimento anormal de células, tal como câncer, em um mamífero homeotermo, tal como um ser humano, que necessita de tal tratamento, compreendendo administrar ao dito mamífero uma quantidade eficaz de um sal hidrogenossulfato do Composto 1, como aqui defnido, ou de uma composição farmacêutica como aqui definida.

[0042] Os exemplos de distúrbios proliferativo, que podem ser tratados usando os sais ou composições da invenção, incluem distúrbios hiperproliferativos em um mamífero. Os cânceres específicos são câncer de cérebro, pulmão, células ecamosas, bexiga, estômago, pâncreas, mama, cabeça, pescoço, rim, ovário, próstata, cólon e reto, esôfago, testículo, ginecológico ou tiereóide.

[0043] Entretanto, os compostos e composições da invenção podem ser usados também no tratamento de um distúrbio hiperproliferativo não-canceroso, tal como hiperplasia benigna da pele (por exemplo, psoríase), restenose, ou da próstata (por exemplo, hipertrofia prostática benigna (BPH)).

[0044] Outros exemplos de doenças mediadas por MEK, que podem ser tratadas usando os compostos ou composições da invenção incluem pancreatite ou doença renal (incluindo glomerulonefrite proliferativa e doença renal induzida por diabetes) ou o tratamento de dor em um mamífero.

[0045] Os compostos e composições podem ser usados também para a prevenção de implantação de blastócitos em um mamífero ou para tratar uma doença relacionada à vasculogênese ou angiogênese em um mamífero. Tais doenças podem incluir angiogênese de tumores, doença inflamatória crônica, tal como artrite reumatóide, aterosclerose, doença inflamatório do intestino, doenças da pele tais como psoríase, eczema, e escleroderma, diabetes, retinopatia diabética, retinopatia de prematuridade, degeneração macular relacionada à idade, hemangioma, glioma, melanoma, sarcoma de Kaposi e câncer ovariano, mamário, pulmonar, pancreático, prostático, colônico e epidermóide.

[0046] Os termos "crescimento anormal de células" e "distúrbio hiperproliferativo" são utilizados de forma intercambiável neste pedido de patente e referem-se ao crscimento celular que é independente de mecanismos reguladores normais (por exemplo, perda de inibição de contato). Isto inclui, por exemplo, o crescimento anormal de: (1) células tumorosas (tumores) que proliferam expressando uma tirosina cinase mutada ou a superexpressão de uma tirosina cinase receptora; (2) células benignas e malignas de outras doenças proliferativas nas quais ocorre a ativação aberrante de tirosina cinase; (3) quaisquer tumores que proliferam por tirosina cinases receptoras; (4) quaisquer tumores que proliferam pela ativação aberrante de serina/treonina cinase; e (5) células benignas e malignas de outras doenças proliferativas nas quais ocorre a ativação aberrante de serina/treonina cinase.

[0047] O termo "tratar", como aqui utilizado, a menos que diferentemente indicado, significa reverter, minorar, inibir a progressão, ou prevenir, o distúrbio ou condição para a qual tal termo se aplica, ou um ou mais sintomas de tal distúrbio ou condição. O termo "tratamento", como aqui utilizado, a menos que diferentemente indicado, refere-se ao ato de tratar como o termo "tratar" está definido imediatamente acima.

[0048] Assim sendo, os pacientes que podem ser tratados com os compostos ou composições da presente invenção incluem, por exemplo, pacientes que foram diagnosticados como tendo psoríase, restenose, aterosclerose, BPH, câncer pulmonar, câncer pulmonar de células pequenas, câncer ósseo, CMML, câncer pancreático, colorretal, câncer de pele, câncer da cabeça e pescoço, melanoma (particularmente melanoma cutâneo ou intra-ocular),câncer uterino, câncer ovariano, câncer retal, câncer da região anal, câncer de estômago, câncer de cólon, câncer de mama, testicular, tumores ginecológicos (por exemplo, sarcomas uterinos, carcinoma das tubas de Falópio, carcinoma do endométrico, carcinoma do colo uterino, carcinoma da vagina ou carcinoma da vulva), câncer ovariano, mieloma múltiplo, carcinoma hepatocelular, doença de Hodgkin, câncer do esôfago, câncer do intestino delgado, câncer dos sitema endócrino (por exemplo, câncer da tireóide, paratireóide ou glândulas supra-renais), sarcomas de tecidos moles, câncer da uretra, câncer do pênis, câncer da próstata, leucemia crônica ou aguda, particularmente leucemia mielóide aguda, tumores sólidos da infância, linfomas linfocíticos, câncer da bexiaga, câncer do rim ou ureter (por exemplo, carcinoma de células renais, carcinoma da pelve renal), ou neoplasmas do sistema nervoso central (por exemplo, linfoma primário do sistema nervoso central, tumores do eixo espinhal, gliomas do tronco cerebral ou adenomas hipofisários).

[0049] O sal hidrogenossulfato do Composto 1 pode ser aplicado como uma terapia isolada ou pode envolver, além do sulfato hidrogenossulfato do Composto 1, uma ou mais outras substâncias e/ou tratamentos. Tal tratamento conjunto pode ser realizado através da administração simultânea, seqüencial ou separadados componentes individuais do tratamento. No campo da oncologia médica, é prática normal usar uma combinação de diferentes formas de tratamento para tratar cada paciente com câncer. Na oncologia médica, o(s) outro(s) componente(s) desse tratamento conjunto, além do sal hidrogenossulfato do Composto 1, pode(m) ser cirurgia, radioterapia ou quimioterapia. Tal quimioterapia pode cobrir categorias de agentes terapêuticos tais como: (i) agentes antiangiogênicos, tais como aqueles que inibem os efeitos do fator de crescimento endotelial vascular (por exemplo, o anticorpo antifator do crescimento de células endoteliais vasculares, bevacizumab [Avastin®], e inibidores de tirosina cinase receptora do VEGF, tais como 4-(4-bromo-2-flúor-anilino)-6-metóxi-7-(1-metil- piperidin-4-il-metóxi)-quinazolina (ZD6474; Exemplo 2 dentro do documento no WO 01/32651), 4-(4-flúor-2-metil-indol-5-ilóxi)-6-metóxi- 7-(3-pirrolidin-1-il-propóxi)quinazolina (AZD2171; Exemplo 240 dentro do documento no WO 00/47212), vatalanib (PTK787; WO 98/35985) e SU11248 (sunitinib; WO 01/60814), compostos tais como aqueles descritos nos pedidos de patente nos WO97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 e WO 98/13354, e aqueles que funcionam por mecanismos diferentes daqueles aqui definidos (por exemplo, linomida, inibidores da função de integrina αvβ3, angiostatina, razoxina, talidomida, inibidores de MMP-2 (metaloproteinase da matriz 2), inibidores de MMP-9 (metaloproteinase da matriz 9), e inibidores de COX-II (ciclooxigenase II)), e (ii) agentes apontadores vasculares (por exemplo, fosfato de combretastatina e os compostos descritos nos documentos nos WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 e WO 02/08213, e os agentes danificadores vasculares descritos no pedido de aptente internacional no WO 99/02166, (por exemplo, N-acetilcolchinol-O- fosfato)); (iii) agentes citostáticos tais como antiestrogênios (por exemplo, tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, and iodoxifeno), reguladores descendentes de receptores de estrogênios (por exemplo, fulvestrant), progestogênios (por exemplo, acetato de megestrol), inibidores de aromatases (por exemplo, anastrozol, letrazol, vorazol, e exemestano), antiprogestogênios, antiandrogênios (por exemplo, flutamida, nilutamida, bicalutamida, e acetato de ciproterona), agonistas e antagonistas de LHRH (por exemplo, goserelin acetate, leuprorelin, and buserelin), inibidores de 5α-reductase (por exemplo, finasterida); (iv) agentes antiinvasivos (por exemplo, inibidores de metaloproteinases tais como marimastat e inibidores da função de receptores do ativador de plasminogênio uroquinase ou anticorpos para Heparanese; (v) inibidores da função de fatores do crescimento (tais fatores do crescimento incluem, por exemplo, o fator de crescimento derivado de plaquetas e o fator do crescimento de hepatócitos), tais inibidores incluem anticorpos de fatores do crescimento, anticorpos de receptores de fatores do crescimento (por exemplo, o anticorpo anti-erbb2 trastuzumab [Herceptin®], o anticorpo anti-EGFR panitumumab, o anticorpo anti-erbB1 cetuximab [C225]), e quaisquer anticorpos de fatores do crescimento ou de receptores de fatores do crescimento descritos por Stern et al., "Critical reviews in oncology/haematology", 2005, Volume 54, páginas 11-29); tais inibidores incluem também inibidores de tirosina cinase, tais como os inibidores da família do fator decrescimento epidérmico (por exemplo, inibidores de tirosina cinase da família de EGFR, tais como N-(3-cloro- 4-flúor-fenil)-7-metóxi-6-(3-morfolinopropóxi)- quinazolin-4-amina (gefitinib, AZD1839), N-(3-etinil-fenil)-6,7-bis-(2-metóxi-etóxi)- quinazolin-4-amina (erlotinib, OSI-774) e 6-acrilamido-N-(3-cloro-4- flúor-fenil)-7-(3-morfolinopropóxi)-quinazolin-4-amina (CI 1033)) e inibidores de tirosina cinase erbB2, tais como lapatinib, inibidores da família de fatores do crescimento de hepatócitos, inibidores da família de fatores do crescimento derivados de plaquetas tais como imatinib, inibidores de serina/treonina cinases (por exemplo, inibidores da sinalização de Ras/Raf, tais como inibidores de farnesil transferase, por exemplo, sorafenib (BAY 43-9006)), inibidores da sinalização de células através de MEK e/ou AKT cinases, inibidores de c-kit, inibidores de cinase abl, inibidores da cinase receptora de IGF (fator do crescimento semelhante à insulina); inibidores de aurora cinase (por exemplo, AZD1152, PH739358, VX-680, MLN8054, R763, MP235, MP529, VX528 e AX39459) e inibidores de cinases dpendentes de ciclina, tais como inibidores de CDK2 e/ou CDK4; (vi) fármacos antiproliferativos/antineoplásicos e combinações deles, como usados na oncologia médica, tais como antimetabólitos (por exemplo, antifolatos tais como metotrexato, fluoropirimidinas tais como 5-fluorouracila, tegafur, purina e análogos de adenosina, e citosina arabinosídeo, hidroxiuréia ou, por exemplo, um dos antimetabólitos descritos especificamente no pedido de patente europeu no 239362, tal como ácido N-(5-[N-(3,4-diidro-2-metil-4- oxoquinazolin-6-il-metil)-N-metil-amino-2-tenoil)-L-glutâmico; antibióticos antitumorais (por exemplo, antraciclinas tais como adriamicina, bleomicina, doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina e idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina, e mitramicina); derivados de platina (por exemplo, cisplatina e carboplatina); agentes alquilantes (por exemplo, mostarda nitrogenada, melfalano, clorambucil, bussulfan, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosouréias, e tiotepa); agentes antimitóticos (por exemplo, alcalóides de vinca, tais como vincristina, vinblastina, vindesina,e vinorelbina, e taxóides tais como taxol e taxotere); inibidores de topoisomerase (por exemplo, epipodofilotoxinas tais como etoposida e teniposida, amsacrina, topotecano, camptotecina e irinotecano); enzimas (por exemplo, asparaginase); e inibidores de timidilato sintase (por exemplo, raltitrexed);

[0050] E tipos adicionais de agentes quimioterápicos, incluindo: (vii) modificadores de respostas biológicas (por exemplo, interferon); (viii) anticorpos (por exemplo, edrecolomab); (ix) terapias anti-sentido, por exemplo, aquelas direcionadas para os alvos listados acima, tais como ISIS 2503, um anti-ras anti- sentido; (x) abordagens de terapia gênica, incluindo, por exemplo, abordagens para substituir genes aberrantes, tais como p53 aberrante ou BRCA1 or BRCA2, GDEPT aberrante (terapia com pró-fármacos enzimas direcionadas a genes) abordagens tais como aquelas que usam citosina deaaminase, timidina cinase ou uma enzima nitro- redutase bacteriana e abordagens para aumentar a tolerância dos pacientes à quimioterapia ou radioterapia, tal como a terapia gênica de resistência a múltiplos fármacos; e (xi) abordagens de imunoterapia, incluindo, por exemplo, abordagens ex-vivo e in vivo para aumentar a imunogenicidade de células tumorosas de pacientes, tais como transfecção com citocinas tais como interleucina 2, interleucina 4 ou fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos, abordagens para diminuir a anergia de células T, abordagens que usam células imunes transfectadas, tais como células dendríticas transfectadas com citocinas, abordagens que usam linhagens de células tumorosas transfectadas com citocinas e abordagens que usam anticorpos antiidiotípicos.

[0051] Por exemplo, um sal hidrogenossulfato do Composto 1 pode ser usado em conjunto com uma quantidade eficaz de uma ou mais substâncias selecionadas entre agentes antiangiogênese, inibidores da transdução de sinais, e agentes antiproliferativos.

[0052] Emu ma modalidade específica, os agentes antiangiogênese, tais como inibidores de MMP-2 (metaloproteinase de matriz 2), inibidores de MMP-9 (metaloproteinase de matriz 9), e inibidores de COX-II (ciclooxigenase II), podem sedr usados em conjunto com um sal hidrogenossulfato do Composto 1 da presente invenção e composições farmacêuticas aqui descritas. Os exemplos de inibidores de COX-II úteis incluem CELEBREX® (alecoxib), valdecoxib, e rofecoxib. Os exemplos de inibidores de metaloproteinases de matriz estão descritos nos documentos nos WO 96/33172, WO 96/27583, WO 98/07697, WO 98/03516, WO 98/34918, WO 98/34915, WO 98/33768, WO 98/30566, WO 90/05719, WO 99/52910, WO 99/52889, WO 99/29667, patente no US 5.863.949, e patente no US 5.861.510, sendo todos estes documentos aqui incorporados em sua totalidade como referência. Os inibidores de MMP-2 e MMP-9 apropriados são aqueles têm pouca ou nenhuma atividade para inibir MMP-1. Particularmente, são usados aqueles que inibem seletivamente MMP-2 e/ou MMP-9 em relação a outras metaloproteinases de matriz (isto é, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-l2, e MMP-l3). Os exemplos específicos de inibidores de MMPs úteis na presente invenção são AG-3340, RO 32-3555, e RS 13-0830.

[0053] Portanto, um outro aspecto da presente invenção é o sal hidrogenossulfato do Composto 1 em combinação com qualquer um dos agentes antitumorais listados nos itens (i) - (xi) acima. Um outro aspecto da presente invenção fornece o sal hidrogenossulfato do Composto 1 em combinação com um ou mais dos agentes antitumorais listados nos itens (i) - (xi) acima. Um outro aspecto da presente invenção fornece o sal hidrogenossulfato do Composto 1 em combinação com qualquer uma das classes de agents antitumorais listados nos itens (i) - (xi) acima.

[0054] Neste relatório descritivo, quando o termo "combinação" é utilizado, deve-se entender que ele refere-se à administração simultânea, separada ou seqüencial. Em um aspecto da invenção, "combinação" refere-se à administração simultânea. Em outro aspecto da invenção, "combinação" refere-se à administração separada. Em um outro aspecto da invenção, "combinação" refere-se à administração seqüencial. Quando a administração é seqüencial ou separada, a demora em administrar o segundo componente não deve ser tal que se perca o efeito benéfico da combinação.

[0055] De acordo com outro aspecto da presente invenção, fornece- se um kit que compreende o sal hidrogenossulfato do Composto 1 em combinação com um agente antitumoral selecionado entre um listado nos itens (i) - (xi) acima.

[0056] De acordo com outro aspecto da presente invenção, fornece- se um kit que compreende: a) o sal hidrogenossulfato do Composto 1 em uma primeira forma de dosagem unitária; b) um agente antitumoral selecionado entre um listado nos itens (i) - (xi) acima; em uma segunda forma de dosagem unitária; e c) um meio contentor para conter as ditas primeira e segunda formas de dosagem.

[0057] O Composto 1 demonstrou ter atividade no ensaio que se segue. MEK1 constitutivamente ativa, marcada com 6 His no terminal N (2-393) é expressada em E. coli e a proteína é purificada por métodos convencionais (Ahn et al., Science 265:966-970 (1994)). A atividade de MEKl é avaliada medindo a incorporação de Y-33P-fosfato de Y-33P-ATP em ERK2 marcada com His no terminal N, que é expressada em E. coli e é purificada por métodos convencionais, na presença de MEK1. O ensaio é conduzido em uma placa de polipropileno com 96 cavidades. A mistura de incubação (100 μL) compreende Hepes 25 mM, pH 7,4, MgCl2 10 mM, β-glicerolfosfato 5 mM, ortovanadato de sódio 100 μM, DTT 5 mM, MEK1 5 nM, e ERK2 1 μM. Os inibidores são colocados em suspensão em DMSO, e todas reações, incluindo os controles, são realizadas em uma concentração final de 1% de DMSO. As reações são iniciadas pela adição de ATP 10 μM (com 0,5 μCi de Y-33P- ATP/cavidade) e incubadas à temperatura ambiente por 45 minutos. Um volume igual de TCA a 25% é adicionado apra interromper a reação e precipitar as proteínas. As proteínas precipitadas são retidas sobre placas de filtro de fibra de vidro B, e o excesso de ATP marcado é removido por lavagem usando um colhedor Tomtec MACH III. As placas são deixadas secar ao ar antes de adicionar 30 μL/cavidade de Packard Microscint 20, e as places são contadas usando um Packard TopCount. Neste ensaio, o Composto 1 apresentou uma CI50 menor do que 50 micromolar.

EXEMPLOS

[0058] Para ilustrar a invenção, são incluídos os exemplos que se seguem. Entretanto, deve-se entender que estes exemplos não limitam a invenção e temcionam apenas sugerir um método para praticar a invenção. Os rendimentos são fornecidos para os exemplos como realizados, e poderiam ser possivelmente melhorados através de desenvolvimento adicional. O espectro de 1H RMN (400 MHz) foi referenciado para TMS (0,00 ppm), o espectro de 13C RMN (100 MHz) foi referenciado para o solvente da RMN (39,5 ppm) e o espectro de 19F RMN foi referenciado para tricloro-flúor-metano (0,00 ppm). Os espectros de FTIR foram obtidos em um espectrômetro Nicolet Magna 860 ESP FTIR de várias maneiras, incluindo a partir de uma dispersão a 2% p/p deste material em kBr em pó, usando a técnica de amostragem DRIFTS, em cima da região espectral infravermelha mediana de 4.000 - 400 cm-1. Exemplo 1 Preparação do sal hidrogenossulfato do Composto 1

[0059] Adicionou-se ácido sulfúrico (12,3 mL, 0,226 mol), e em seguida água (115 mL), a uma suspensão da (2-hidróxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H- benzoimidazol-5-carboxílico (100 g, 0,206 mol) (obtenível como descrito no Exemplo 10 do documento no WO 03/077914, que é aqui incorporado como referência e como descrito abaixo) em 2-butanona (680 mL) e água (115 mL) sob agitação a 0-5°C, mantendo uma temperatura de 10°C ou mais baixa. A mistura sob agitação foi aquecida até 65°C e mantida por 30 minutos antes de filtrar para remover qualquer matéria estranha. O filtro foi lavado com uma mistura de 2-butanona (85 mL) e água (15 mL). Os filtrados combinados foram aquecidos até 72°C antes de adicionar 2-butanona (500 mL), mantendo uma temperatura entre 6072°C. A mistura resultante foi destilada à pressão atmosférica (temperatura de destilação aproximada de 73-74°C) até que 500 mL de destilado fossem coletados.

[0060] Uma segunda fração de 2-butanona (500 mL) foi adicioanda, mantendo a temperatura da mistura acima de 70°C. A mistura resultante foi destilada novamente até que 250 mL de destilado fossem coletados. A mistura foi resfriada até 0-5°C durante aproximadamente 1 hora. A lama resultante foi filtrada, lavada com 2-butanona (240 mL) e secada sob pressão reduzida a 50°C, até atingir peso constante, para dar o hidrogenossulfato da (2-hidróxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo-2- cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (103,5 g, 0,186 mol, 90% de rendimento) como um sólido cristalino branco. 1H RMN (400 MHz, D6 DMSO) δ 3.58 (2H, t, CH2OH), 3.89 (2H, t, CH2ON), 3.99 (3H, s, CH3), 6.47 (1H, dd, ArH), 7.29 (1H, dd, ArH), 7.63 (1H, d, ArH), 7.91 (1H, s, ArH), 7.96 (3H, br, ROH, NH, SOH), 8.10 (1H, br, ArNH), 8.94 (1H, s, NCHN), 11.79 (1H, s, ONH). 13C RMN (100 MHz, D6 DMSO) δ 32.1 (CH3), 58.5 (CH2OH), 77.3 (CH2ON), 108.2 (CH), 109.6 (CBr), 115.8 (CH), 120.6 (CCl), 122.0 (C), 125.0 (CC=O), 129.4 (C), 130.5 (CH), 131.1 (CH), 132.3 (C), 140.6 (C), 145.8 (CF), 146.5 (CH), 164.2 (C=O).

[0061] Os resultados da análise infravermelha estão ilustrados na Figura 2. As designações espectrais estão resumidas na Tabela 1. Tabela 1

Exemplo 1A Preparação do sal hidrogenossulfato do Composto 1

[0062] Adicionou-se ácido sulfúrico (1,52 mL, 27,86 mmols) a uma suspensão de (2-hidróxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo-2-clorofenil- amino)-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (10 g, 0,0214 mol) (obtenível como descrito no Exemplo 10 do documento no WO 03/077914, que é aqui incorporado como referência e como descrito abaixo) em tetraidrofurano (THF) (62 mL) e água (8 mL), sob agitação, mantendo uma temperatura de 10°C ou mais baixa. A mistura sob agitação foi aquecida até 65°C e mantida por 30 minutos, antes de filtrar para remover qualquer matéria estranha. Depois, adicionou-se THF (150 mL) à mistura, mantendo a temperatura acima de 60°C. A mistura foi então resfriada até 0-5°C durante aproximadamente 2 horas. A lama resultante foi filtrada, lavada com THF (30 mL) e secada sob pressão reduzida a 50°C até atingir peso constante, para dar o sal hidrogenossulfato da (2-hidróxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo-2- cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (9,81 g, 0,17 mol, 82% de rendimento) como um sólido cristalino esbranquiçado. O material foi igual àquele produzido no Exemplo 1 acima.

Exemplo 1B

[0063] Preparação da (2-hidróxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo- 2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico

[0064] Etapa A: Ácido 2,3,4-triflúor-5-nitro-benzóico: Um frasco de 3 litros com fundo redondo e três gargalos foi carregado com 125 mL de H2SO4. Adicionou-se ácido nítrico fumegante (8,4 mL, 199 mmols) e a mistura foi agitada suavemente. Adicionoue ácido 2,3,4-triflúor-benzóico (25 g, 142 mmols) em 5 parcelas de 5 g durante 90 minutos. A solução amarelo-amarronzada escura foi agitada por 60 minutos quando a reação se completou. A mistura reativa foi vertida sobre 1 litro de uma mistura de gelo/água e extraída com etóxi-etano (3 x 600 mL). Os extratos combinados foram secados (MgSO4) e concentrados sob pressão reduzida, para dar um sólido amarelo. O sólido foi colocado em suspensão em hexanos e agitado por 30 min, e depois disso, ele foi filtrado para dar 29 g (92%) do produto desejado puro como um sólido amarelado: MS APCI (-) m/z 220 (M-1) detectado.

[0065] Etapa B: Ácido 4-amino-2,3-diflúor-5-nitro-benzóico: Adicionou-se solução de hidróxido de amônio (~30% em água) (35 mL, 271 mmols) a uma solução de ácido 2,3,4-triflúor-5-nitro-benzóico (15 g, 67,8 mmols) em 30 mL de água a 0°C sob agitação. Depois de completada a adição de hidróxido de amônio, a mistura reativa foi aquecida até a temperatura ambiente sob agitação. Depois de 2,5 horas, a mistura reativa foi resfriada até 0°C e adicionou-se cuidadosamente HCl concentrado até que o pH da mistura reativa fosse 0. A mistura reativa foi diluída com água (30 mL) e extraída com etóxi- etano (3 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secados (MgSO4) e concentrados sob pressão reduzida, para dar 14 g (95%) do produto desejado puro: MS APCI (-) m/z 217 (M-1) detectado.

[0066] Etapa C: 4-amino-2,3-diflúor-5-nitro-benzoato de metila: Uma solução 2 M de tetrametil-silano(TMS)-diazometano em hexanos (6,88 mL, 13,75 mmols) foi adicionada a uma suspensão de ácido 4- amino-2,3-diflúor-5-nitro-benzóico (2,00 g, 9,17 mmols) em 25 mL de tetraidrofurano (THF): MeOH 4:1 a 0°C sob uma atmosfera de nitrogênio. Depois de coketada a adição, a mistura reativa foi aquecida até a temperatura ambiente. Depois de 0,5 h, o excess de TMS- diazometano foi destruído pela adição cuidadosa de ácido acético. A reação foi então concentrada sob pressão reduzida e secada sob vácuo, para dar 1,95 g (92%) do produto desejado puro: MS APCI (-) m/z 231 (M-1) detectado.

[0067] Etapa D: 4-amino-3-flúor-5-nitro-2-fenil-amino-benzoato de metila: O 4-amino-2,3-diflúor-5-nitro-benzoato de metila (23,48 g, 101,1 mmols) foi colocado em suspensão em xilenos (125 mL) e adicionou-se anilina (92 mL, 1,011 mmol). A mistura reativa foi agitada a 125°C por 16 horas sob N2. A mistura reativa foi resfriada até a temperatura ambiente e os sólidos precipitaram para fora da solução. Os sólidos foram coletados por filtração e lavados com xelenos e depois com etóxi- etano. Foram recuperados 22,22 g (72,78 mmols) de um sólido amarelo que era o produto desejado puro. O filtrado foi concentrado subpressão reduzida, redissolvido em cloreto de metileno e descarregado através de um botoque de sílica-gel, eluindo com cloreto de metileno. As frações desejadas forma concentradas sob pressão reduzida, para dar um sólido marrom que foi triturado com etóxi-etano para dar 5,47 g (17,91 mmols) de um sólido amarelo que era o produto desejado puro. O rendimento do produto combinado foi de 27,69 g (90%). MS APCI (-) m/z 304 (M-1) detectado.

[0068] Etapa E: 7-flúor-6-fenil-amino-3H-benzoimidazol-5- carboxilato de metila: 4-amino-3-flúor-5-nitro-2-fenil-amino-benzoato de metila (16,70 g, 54,71 mmols), ácido fórmico (250 mL, 6,63 mol) e 20% de Pd(OH)2/C (9,00 g, 16,91 mmols) em etanol (250 mL) foram agitados a 40°C por duas horas sob N2 e depois a 95°C por 16 horas. A mistura reativa foi resfriada até a temperatura ambiente e filtrada através de Celite, enxaguando com acetato de etila. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, para dar um sólido amarelo. O sólido foi triturado com etóxi-etano, para dar 13,47 g (86%) do produto desejado como um sólido bronzeado. MS APCI (+) M/Z 286 (M+1) detectado; MS APCI (-) m/z 284 (M-1) detectado.

[0069] Etapa F: 6-(4-bromo-fenil-amino)-7-flúor-3H-benzoimidazol- 5-carboxilato de metila: 7-flúor-6-fenil-amino-3 H- benzoimidazol-5- carboxilato de metila (4,99 g, 17,51 mmols) foi dissolvido em N,N- dimetil-formamida (275 ml). Adicionou-se N-bromo-succinimida (3,15 g, 17,70 mmols) como um sólido, e a mistura reativa foi agitada à temperatura ambiente sob N2. Depois de 30 minutos, a mistura reativa foi interrompida rapidamente pela adição de solução aquosa saturada de bissulfito de sódio. A mistura reativa foi então vertida para dentro de um funil separador, diluída com água e acetato de etila, e as camadas foram separadas. A camada quosa foi extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos combinados foram lavados três vezes com água, uma vez com salmoura e depois secados (Na2SO4) e concentrados sob pressão reduzida para produzir 6,38 g (100%) do produto desejado puro como um sólido bronzeado. MS ESI (+) m/z 364, 366 (padrão M+ Br) detectado.

[0070] Etapa G: 6-(4-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-3H- benzoimidazol-5-carboxilato de metilar: 6-(4-bromo-fenil-amino)-7-flúor- 3H-benzoimidazol-5-carboxilato de metila (6,38 g, 17,51 mmols) foi dissolvido em N,N-dimetil-formamida (275 mL). Adicionou-se N-cloro- succinimida (2,36 g, 17,70 mmols) como um sólido e a mistura reativa foi agitada à temperatura ambiente sob N2 até completer a reação (5-6 dias). A mistura reativa foi interrompida rapidamente pela adição de solução aquosa saturada de bissulfito de sódio, para dar uma suspensão. Os sólidos resultantes foram coletados por filtração, lavados com água e etóxi-etano e secados sob pressão reduzida para produzir 6,07 g (87%) do produto desejado puro como um sólido bege. MS ESI (+) m/z 398, 400 (padrão M+ Br) detectado.

[0071] Etapa H: 6-(4-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H- benzoimidazol-5-carboxilato de metila e 6-(4-bromo-2-cloro-fenil- amino)-7-flúor-1-metil-1H-benzoimidazol-5-carboxilato de metila: Uma solução de 6-(4-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-3H-benzoimidazol-5- carboxilato de metila (150 mg, 0,38 mmol), iodo-metano (28 μL, 0,45 mmol) e carbonato de potássio (78 mg, 0,56 mmol) em dimetil- formamida (1,5 mL) foram agitados a 75 oC por uma hora. A mistura reativa foi diluída com acetato de etila, lavada com solução aquosa saturada de carboanto de potássio (2x) e salmoura, e secada (Na2SO4). A cromatografia instantânea em coluna (cloreto de metileno/acetato de etila 20:1) produziu 56 mg (36%) do mais móvel 6-(4-bromo-2-cloro- fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxilato de metila como um sólido branco. 19F RMN (376 MHz, CD3OD) - 133,5 (s). MS APCI (+) m/z 412, 414 (padrão M+, Br) detectado. Foram isolados também 54 mg (35%) de 6-4(-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-1- metil-1H-benzoimidazol-5-carboxilato de metila como um sólido branco. 19F RMN (376 MHz, CD3OD) - 139,9 (s). MS APCI(+) m/z 412, 414 (padrão M+, Br) detectado.

[0072] Etapa I: Ácido 6-(4-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-3- metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico: 6-(4-bromo-2-cloro-fenil-amino)- 7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxilato de metila (56 mg, 0,14 mmol) foi dissolvido em THF/água 2:1 (3 mL) e adicionou-se NaOH (0,55 mL, solução aquosa 1,0 M, 0,55 mmol). Depois de agitar por duas horas, a reação foi evaporada até um quarto do volume inicial por intermédio de evaporação rotativa e o restante foi diluído até 50 mL com água. A solução aquosa foi acidificada até pH 2 pela adição de solução aquosa 1,0 M de HC1 e extraída com tetraidrofurano/acetato de etila 1:1 (3x), secada (Na2SO4) e concentrada sob pressão reduzida para produzir 43 mg (79%) do ácido carboxílico puro como um sólido esbranquiçado. MS ESI (+) m/z 397, 398 (padrão M+, Br) detectado.

[0073] Etapa J: (2-vinilóxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo-2 cloro- fenil-amino-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico: O ácido 6- (4-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5- carboxílico (2,00 g, 5,0 mmols), O-(2-vinilóxi-etil)-hidroxilamina (0,776 g, 7,5 mmols), HOBt (0,88 g, 6,5 mmols), trietil-amina (1,61 mL, 2,3 mmols) e EDC1 (1,3 g, 6,5 mmols) foram dissolvidos em dimetil-formamida (52 mL), e agitados à temperatura ambiente por 48 horas. A mistura reativa foi diluída com acetato de etila, lavada com água (3x), solução saturada de carboanto de potássio (2x), solução saturada de cloreto de amônio (2x), e salmoura, e secada (Na2SO4) e concentrada sob pressão reduzida para dar um sólido esbranquiçado. A trituração do sólido com etóxi-etano produziu 2,18 g (90%) do produto desejado como um sólido esbranquiçado. MS ESI (=) m/z 483, 485 (padrão M+ Br) detectado.

[0074] Etapa K: (2-hidróxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo-2- cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico: Ácido clorídrico (14 mL, solução aquosa 1,0 M, 14 mmols) foi adicionado a uma suspensão de (2-vinilóxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo-2-cloro- fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H-benzoimidazol-5-carboxílico (2,18 g, 4,50 mmols) em etanol (50 mL), e a mistura reativa foi deixada agitando por 24 horas. A mistura reativa foi concentrada até secar por evaporação rotativa e os sólidos foram fracionados entre acetato de etila/tetraidrofurano 3:1 e solução saturada de carboanto de potássio. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila/ tetraidrofurano 3:1 (3x), os extratos orgânicos combinados foram secados (Na2SO4) e concentrados para produzir 2,11 g (100%) de (2-hidróxi-etóxi)-amida do ácido 6-(4-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H- benzoimidazol-5-carboxílico, como um sólido esbranquiçado. MS ESI (+) m/z 457, 459 (padrão M+, Br) detectado. 1H RMN (400 MHz, MeOH- d4) δ 8,26 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,24 (dd, 1H), 6,40 (dd, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,79 (m, 2H), 3,49 (m, 2H), 19F RMN (376 MHz, MeOH-d4) -133,68 (s).

Exemplo 2 Investigação das propriedades físicas do sal hidrogenossulfato

[0075] O produto do Exemplo 1 foi submetido aos testes que se seguem para determinar suas propriedades físicas.

Difração de raios X de pó (PXRD)

[0076] Todas amostras foram operadas em um difratômetro Bruker D5000. Os espectros da difração de raios X de pó foram determinados montando uma amostra do sal cristalino sobre uma bolacha de monocristal de silício Siemens e espalhando a amostra em uma camada fina com o auxílio de uma lamina de microscópio. A amostra foi girada a 30 revoluções por minuto (para melhorar a estatística da contagem) e irradiada com raios X gerados por um tubo de cobre com foco longo fino operado a 40 kV e 40 mA com um comprimento de onda de 1,5406 angstrons. A fonte de raios X colimados foi passada através de uma fenda de divergência variável automática ajustada em V20 e a radiação refletida foi direcionada através de uma fenda antidispersiva de 2 mm e uma fenda detectora de 0,2 mm. A amostra foi exposta por 1 segundo por increment de 0,02 grau 2-teta (modo de varredura contínuo) cobrindo a faixa de 2 graus até 40 graus 2-teta no modo teta-teta. O tempo de operação foi de 31 minutos e 41 segundos. O instrumento era equipado com um contador de cintilação como detector. O controle e a captação dos dados foi por meio de uma Dell Optiplex 686 NT 4.0 Workstation, operand com o software Diffract+.

[0077] Os dados foram coletados cobrindo a faixa de 2-teta 2 - 40°, em incrementos de 2-teta 0,02° com 4 s por incremento e estão classificados na Tabela 2, com intensidades relativas derivadas a partir de difratogramas medidos com fendas fixas. Tabela 2

[0078] Os resultados da varredura estão indicados na Figura 1, onde a linha cinza superior representa a XRPD do sal hidrogenossulfato do Composto 1 e a linha preta inferior representa a forma livre. Os picos mais intensos, iniciando com o mais intenso, estão indicados na Tabela 3. O pico a 24,59° é particularmente forte. Tabela 3

[0079] Os versados nessas técnicas de difração de raios X de pó devem avaliar que a intensidade relativa dos picos pode ser afetada, por exemplo, por grãos com tamanho acima de 30 mícrons e razões de aspecto não-unitárias, que podem afetar a análise das amostras. Os versados nessas técnicas devem avaliar também que a posição das reflexões pode ser afetada pela altura precisa na qual a amostra está assentada no difratômetro e pela calibração zero do difratômetro. A planaridade da superfície da amostra também pode ter um pequeno efeito. Assim sendo, os dados de padrões de difração apresentados não devem ser considerados como valores absolutos (vide Jenkins, R. & Snyder, R.L., "Introduction to X-Ray Powder Diffractometry", John Wiley & Sons, 1996, para obter mais informações).

Exemplo 3 Investigação In-vivo: Estudo de sais versus base livre na formulação dispersada

[0080] Foi realizado um estudo em cães para medir os níveis plasmáticos do Composto 1 em cães sob jejum após a administração de doses orais equivalentes a 150 mg de base livre em 7,5 mL de várias formulações em dispersão em agentes dispersantes farmaceuticamente aceitáveis com o Composto 1 contido como a forma livre do sal hidrogenossulfato.

[0081] Doses únicas de 150 mg foram adminsitradas por via oral a cães beagle em jejum que pesavam 12-17 kg e tinham cerca de 2 a 6 anos de idade, em cada um dos três dias de dosagem. Os dias de dosagem foram espaçados em 1 semana.

[0082] Todas formulações foram preparadas de forma extemporânea momentos antes da dosagem, adicionando 7,5 mL da solução dispersante apropriada, por intermédio de uma seringa descartável de 10 mL, a frascos que continham 150 mg equivalentes de base livre da forma apropriada do fármaco, tampando e turbilhonando por 30 segundos, para formar uma dispersão.

[0083] A dispersão foi removida do frasco usando a seringa descartável e dosada para o animal por intermédio de um tubo de gavagem posicionado dentro do estômago. Os frascos foram enxaguados duas vezes adicionando, em cada um dos dois enxágües, uma porção separada de 15 mL de água (volume total do enxágüe = 30 mL) por intermédio de uma seringa descartável de 20 mL, tampando, turbilhonando por 5 segundos, removendo a solução de lavagem do frasco usando a seringa descartável e administrando ao animal por intermédio do tubo de gavagem.

[0084] Os cães foram alimentados com cerca de 400 g de Dieta "Special Diet Services Laboratory" A, em cada dia, e tinham água à vontade. O sangue total (2 mL) em tubos heparina lítio foi retirado pela veia jugular imediatamente antes da dosage e em 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12, 18, 24, 36 e 48 horas. O sangue foi centrifugado a 3.000 rpm por 15 minutos e o plasma foi removido para dentro de tubos de sangue vazios e o plasma foi estocado a -20°C até a análise.

[0085] O plasma (50 μL) foi analisado quanto à concentração do Composto 1. Dois cães foram excluídos da análise, pois eles tinham vomitado momentos depois da dosagem. Os perfis das concentrações plasmáticas médias para o Composto 1 observados depois da dosagem oral estão indicados na Figura 3, onde a linha representada por ▲ ilustra uma formulação que incluía o sal hidrogenossulfato do Composto 1, e a linha representada por x ilustra os resultados da base livre do Composto 1 na mesma formulação.

[0086] Parece que mudanças da formulação tiveram um efeito relativamente pequeno sobre a exposição (resultados não ilustrados). Entretanto, quando o Composto 1 foi dosado como o sal hidrogenossulfato, um aumento substancial de aproximadamente 4 a 8 vezes na exposição foi produzido.

[0087] A descrição precedente é considerada como meramente ilustrativa dos princípios da invenção. Além disso, como inúmeras modificações e mudanças devem ficar facilmente evidentes para os versados nessas técnicas, não se deseja limitar a invenção à construção exata e ao processo descrito acima. Conseqüentemente, todas modificações e equivalentes apropriados podem ser válidos para o âmbito da invenção como definida pelas reivindicações que se seguem. [0088] As palavras "compreender", "compreendendo", "incluir", "incluindo" e "inclui", quando utilizadas neste relatório descritivo e nas reivindicações que se seguem, pretendem especificar a presença das características, números inteiros, componentes, ou etapas assinaladas, mas elas não obstam a presença ou adição de uma ou mais outras características, números inteiros, componentes, etapas, ou grupos delas.

Claims

1. Sal cristalino de hidrogenossulfato de (2-hidróxi-etóxi)- amida do ácido 6-(4-bromo-2-cloro-fenil-amino)-7-flúor-3-metil-3H- benzoimidazol-5-carboxílico (Composto 1): Composto 1 caracterizado pelo fato de que apresenta um padrão de difração de raios X de pó com picos específicos a 2-teta igual a 24.59°, 20.97°, 27.65°, 12.24°, 23,49°, 17.02° e 25,91° e tem um espectro infravermelho com picos em 3255, 3200-2700, 2700-2300, 1673, 1653, 1640-1370, 1570, 1506, 1213, 1189, 1100-1000, 1011, 920-600, e 888 cm-1.