BR122021024202B1

BR122021024202B1 - Processo sintético compreendendo compostos de piridazinona bem como os ditos compostos

Info

Publication number: BR122021024202B1
Application number: BR122021024202-0A
Authority: BR
Inventors: D. Keith Hester Ii; Robert J. Duguid; Martha Kelly; Anna Chasnoff; Gang Dong; Edwin L. Crow; Rebecca Taub; Charles H. Reynolds; Duk Soon Choi; Lianhe Shu; Ping Wang
Original assignee: Madrigal Pharmaceuticals, Inc.; F. Hoffmann-La Roche Ltd
Priority date: 2012-09-17
Filing date: 2013-09-17
Publication date: 2022-05-17
Also published as: IL275393B; KR20200023528A; US20160243126A1; JP2019048856A; TW201425300A; EP2895466A4; KR101966490B1; EP4023641B1; EP3689853A1; US20210161904A1; TW201906835A; IL275393A; JP2015535817A; ES2907926T3; WO2014043706A1; ZA201501795B; ES2795450T3; CN105008335B; US11564926B2; JP2020109090A

Abstract

A divulgação descreve métodos de síntese de compostos de piridazinona como análogos do hormônio da tireoide e seus pró-medicamentos. Métodos preferi-dos de acordo com a divulgação levam em consideração preparação em grande escala de compostos de piridazinona tendo pureza alta. Em algumas formas de reali-zação, métodos preferidos de acordo com a divulgação também levam em conside-ração a preparação de compostos de piridazinona em melhor rendimento do que métodos previamente usados para preparar tais compostos. Também divulgadas são formas mórficas de um composto de piridazinona. Ainda divulgado é um método para tratar resistência ao hormônio da tireoide em um indivíduo tendo pelo menos uma mutação de TRβ.

Description

[001] Pedido dividido do BR 11 2015 005891 4, depositado em 17.09.2013.

PEDIDOS RELACIONADOS

[002] Este pedido reivindica prioridade a, e o benefício de Pedido Provisório U.S. No 61/702.137, depositado em 17 de Setembro de 2012 e Pedido Provisório U.S. No 61/790.432, depositado em 15 de Março de 2013, os conteúdos inteiros de cada um dos quais são incorporados aqui por referência em suas totalidades.

INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA DA LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[003] Os conteúdo do arquivo de texto denominado “41245- 522001WO_ST25.txt”, que foi criado em 16 de Setembro de 2013 e é de 4 KB em tamanho, são por meio desta incorporados por referência em sua totalidade.

FUNDAMENTOS

[004] Hormônios da tireoide são críticos para o crescimento e desenvolvimento normais e para manter a homeostase metabólica (Paul M. Yen, Physiological reviews, Vol. 81(3): páginas 1097 - 1126 (2001)). Níveis circulantes de hormônios da tireoide são severamente regulados por mecanismos de retroalimentação no eixo do hipotálamo/hipófise/tireoide (HPT). A disfunção da tireoide levando a hipotireoidismo ou hipertireoidismo claramente demonstra que hormônios da tireoide exercem efeitos profundos sobre a função cardíaca, peso corpóreo, metabolismo, taxa metabólica, temperatura corporal, colesterol, osso, músculo e comportamento.

[005] A atividade biológica dos hormônios da tireoide é mediada por receptores do hormônio da tireoide (TRs ou THRs) (M. A. Lazar, Endocrine Reviews, Vol. 14: páginas 348 - 399 (1993)). TRs pertence à superfamília conhecida como receptores nucleares. TRs formam heterodímeros com o receptor de retinoide que age como fatores de transcrição induzíveis por ligando. TRs têm um domínio de ligação de ligando, um domínio de ligação de DNA, e um domínio amino terminal, e regulam a expressão do gene através de interações com elementos de reposta de DNA e com vários co- ativadores e co-repressores nucleares. Os receptores do hormônio da tireoide são derivados de dois genes separados, α e β. Estes produtos genéticos distintos produzem formas múltiplas de seus respectivos receptores através de processamento de RNA diferencial. As principais isoformas do receptor da tireoide são α1, α2, β1 e β2. Os receptores do hormônio da tireoide α1, β1 e β2 ligam-se ao hormônio da tireoide. Foi mostrado que os subtipos do receptor do hormônio da tireoide podem diferir em sua contribuição a respostas biológicas particulares. Estudos recentes sugerem que TRβ1 desempenha um papel importante em regular TRH (hormônio de liberação de tirotropina) e em regular as ações do hormônio da tireoide no fígado. TRβ2 desempenha um papel importante na regulação de TSH (hormônio estimulante da tireoide) (Abel et al., J. Clin. Invest., Vol 104: páginas 291 - 300 (1999)). TRβ1 desempenha um papel importante em regular a frequência cardíaca (B. Gloss et al. Endocrinology, Vol. 142: páginas 544 - 550 (2001); C. Johansson et al., Am. J. Physiol., Vol. 275: páginas R640-R646 (1998)).

[006] Esforços foram feitos para sintetizar análogos do hormônio da tireoide que exibem seletividade do receptor beta do hormônio da tireoide e/ou ação seletiva do tecido aumentadas. Tais miméticos do hormônio da tireoide podem produzir reduções desejáveis no peso corpóreo, lipídeos, colesterol, e lipoproteínas, com impacto reduzido sobre a função cardiovascular ou função normal do eixo do hipo- tálamo/hipófise/tireoide (ver, por exemplo, Joharapurkar et al., J. Med. Chem., 2012, 55 (12), pp 5649-5675). O desenvolvimento de análogos do hormônio da tireoide que evitam os efeitos indesejáveis do hipertireoidismo e hipotireoidismo enquanto mantendo os efeitos benéficos dos hormônios da tireoide abriria novas possibilidades de tratamento para pacientes com doença metabólica tal como obesidade, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabete e outro transtornos e doenças tais como esteatose hepática e NASH, aterosclerose, doenças cardiovasculares, hipotireoidismo, câncer da tireoide, doenças da tireoide, resistência ao hormônio da tireoide e transtornos e doenças relacionados.

[007] A presente invenção, em parte, fornece métodos para sintetizar análogos do hormônio da tireoide tais como compostos de piridazinona e pró-medicamentos destes. Um método ideal de sintetizar os análogos do hormônio da tireoide e seus pró- medicamentos, por exemplo, forneceria compostos de produto em pureza alta e ren- dimento alto. A presente invenção é dirigida em fornecer uma ou mais destas carac- terísticas desejáveis.

UMÁRIO DA DIVULGAÇÃO

[008] A presente divulgação descreve um processo sintético, que pode ser usado para preparar 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (“Int. 7”), um composto que é útil como um intermediário para fabricar compostos de pirida- zinona como análogos do hormônio da tireoide, como segue: (a) contatar R1MgX ou R1Li com um composto da Fórmula (I):

para formar um composto da Fórmula (II): em que R1 é isopropila ou isopropenila, X é halo e R2 é H ou um grupo de

em que R1 é isopropila ou isopropenila, X é halo e R2 é H ou um grupo de proteção de amina; e (b) converter o composto da Fórmula (II) a um composto da Fórmula (III):

(III) na presença de uma base quando R1 é isopropenila ou na presença de um agente oxidante quando R1 é isopropila. Na etapa (a), o solvente pode ser um solvente orgânico aprótico, tal como THF, éter dietílico, tolueno, ou dioxano, a temperatura de reação pode ser 0 a 60 °C, 20 a 50 °C, 30 a 45 °C, ou 35 a 45 °C, o tempo de reação pode ser 10 min a 10 horas, 1 a 8 horas, ou 3 a 5 horas, e a quantidade do reagente de Grignard (R1MgX) pode ser 3 a 10 equivalentes ou 3 a 6 equivalentes do composto da Fórmula (I).

[009] Na etapa (b), a base é usada para isomerizar o composto da Fórmula (II). Ela pode ser uma base orgânica ou uma base inorgânica. Exemplos de bases incluem, mas não são limitados a, trietilamina, piridina, KOH, NaOH, e carbonatos. A isomerização também pode ser obtida sob outras condições, por exemplo, tratamento com um ácido ou aquecimento em um solvente aprótico.

[010] Também, na etapa (b), o agente oxidante não é particularmente limitado. Por exemplo, pode-se usar bromo em ácido acético ou ácido propiônico.

[011] Exemplos de grupo de proteção de aminas incluem, mas não são limitados a, alquila substituído, acila (por exemplo, benzoíla ou acetila) e silila. Grupos de proteção de hidróxi e amina foram debatidos em T. W. Greene e P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2a. Ed., John Wiley and Sons (1991).

[012] Em uma forma de realização, a etapa (a) é realizada contatando-se R1MgX com o composto da Fórmula (I), em que R1 é isopropenila e X é Br. O solvente usados nesta reação pode ser THF com uma razão de volume para peso de THF para o composto da Fórmula (I) variando entre 7 e 30 (ou entre 7 e 15). Esta etapa pode ser realizada na presença de um ácido de Lewis (por exemplo, um haleto de lítio).

[013] Em uma forma de realização, a etapa (a) é realizada contatando-se R1MgX com o composto da Fórmula (I), em que R1 é isopropila e X é Cl. O solvente usados nesta reação pode ser THF com uma razão de volume para peso de THF para o composto da Fórmula (I) variando entre 7 e 30 (ou entre 7 e 15). Esta etapa pode ser realizada na presença de um ácido de Lewis (por exemplo, um haleto de lítio).

[014] Em uma forma de realização, a base na etapa (b) é um hidróxido metálico (por exemplo, hidróxido de potássio).

[015] Em uma forma de realização, o agente oxidante em etapa (b) é bromo e a etapa (b) é realizada na presença de um ácido.

[016] Em uma forma de realização, o grupo R2 na Fórmula (I) e Fórmula (II) é acetila ou benzoíla. Em uma outra forma de realização, R2 é benzoíla.

[017] Em uma forma de realização, o processo compreende ainda fornecer o composto da Fórmula (I) contatando-se 3,6-dicloropiridazina com 2,6-dicloro-4-amino- fenol para formar 3,5-dicloro-4-((6-cloropiridazin-3-il)óxi)anilina, hidrolisando-se 3,5- dicloro-4-((6-cloropiridazin-3-il)óxi)anilina e protegendo-se o grupo amina de 3,5-di- cloro-4-((6-cloropiridazin-3-il)óxi)anilina antes ou depois da hidrólise para formar o composto da Fórmula (I). O contato de 3,6-dicloropiridazina com 2,6-dicloro-4-amino- fenol é realizado em um solvente aprótico polar (por exemplo, dimetilacetamida (DMAC)) na presença de uma base (por exemplo, Cs2CO3) em uma temperatura de reação entre 60 e 120 °C (por exemplo, cerca de 65 °C). Além disso, uma etapa de purificação pode ser incluída. Isto é, antes da etapa (a), o composto da Fórmula (I) é purificado em uma solução ácida em uma temperatura entre 80 e 100 °C.

[018] Em uma forma de realização, o processo compreende ainda etapa (c) quando presente, remover o grupo de proteção de amina R2 do composto da Fórmula (III) para formar 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona.

[019] Em uma forma de realização, o composto, por exemplo, Int. 7, fabricado pelo método descrito aqui tem uma pureza maior do que 85 %, por exemplo, maior do que 86 %, maior do que 90 %, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, maior do que 97,5 %, maior do que 98 %, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %.

[020] Em uma forma de realização, o composto, isto é, 6-(4-amino-2,6-diclo- rofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona, fabricado pelo método descrito aqui tem menos do que 1,5 % de 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-5-isopropilpiridazin-3(2H)-ona, por exemplo, menos do que 1,0 % de 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-5-isopropilpiridazin- 3(2H)-ona, ou menos do que 0,5 % de 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-5-isopropilpirida- zin-3(2H)-ona.

[021] Em uma outra forma de realização, o composto fabricado pelo processo descrito acima é livre de 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-5-isopropilpiridazin-3(2H)-ona.

[022] O processo sintético desta invenção pode compreender ainda a etapa seguinte para sintetizar compostos de piridazinona como análogos do hormônio da tireoide e seus pró-medicamentos: (d) converter 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-iso- propilpiridazin-3(2H)-ona ao composto da Fórmula (IV):

em que R3 é H ou CH2Ra, em que Ra é hidroxila, aminoácido O-ligado, -OP(O)(OH)2 ou -OC(O)-Rb, Rb sendo alquila inferior, alcóxi, ácido alquílico, cicloalquila, arila, hete- roarila, ou -(CH2)n-heteroarila e n sendo 0 ou 1; R4 é H, e R5 é CH2COOH, C(O)CO2H, ou um éster ou amida deste, ou R4 e R5 juntos são -N=C(Rc)-C(O)-NH-C(O)-; em que Rc é H ou ciano.

[023] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV) é 2-(3,5-di- cloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro- 1,2,4-triazina-6-carbonitrila (“Composto A”) e a etapa acima é realizada contatando- se 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona com (2-cianoace- til)carbamato de etila e um nitrito metálico seguido por tratamento com acetato de potássio em DMAC.

[024] Em uma forma de realização, o processo compreende ainda formar uma forma mórfica de 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)- 3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila (“Composto A”) (Forma I) caracterizada por um padrão de difração de pó de raio X incluindo picos em torno de 10,5, 18,7, 22,9, 23,6, e 24,7 graus 2θ.

[025] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV) é da Fórmula

(V), em que R3 é CH2Ra, e etapa (d) é realizada contatando-se 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona com (2-cianoacetil)carbamato de etila seguido por tratamento com acetato de potássio em DMAC para formar 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3- il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila (“Composto A”) e convertendo-se o Composto A ao composto da Fórmula (V) em uma maneira ade-quada, por exemplo, usando uma das técnicas descritas na Patente U.S. 8.076.334.

[026] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV), por exemplo, 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5- tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila (“Composto A”), fabricado pelo método descrito aqui tem uma pureza maior do que 85 %, por exemplo, maior do que 86 %, maior do que 90 %, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, maior do que 97,5 %, maior do que 98 %, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %. Por exemplo, o teor das impurezas (isto é, quaisquer componentes da composição produzida pelo método descrito aqui, exceto o composto da Fórmula (IV), tais como subprodutos, material de partida, resíduos de solvente, metal pesado, e etc.) é menos do que 15 %, menos do que 14 %, menos do que 10 %, menos do que 8 %, menos do que 5 %, menos do que 4 %, menos do que 3 %, menos do que 2 %, menos do que 1,5 %, menos do que 1 %, menos do que 0,8 %, menos do que 0,5 %, ou menos do que 0,2 %.

[027] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV) fabricado pelo método descrito aqui é o Composto A na Forma I, e tem uma pureza maior do que 85 %, por exemplo, maior do que 86 %, maior do que 90 %, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, maior do que 97,5 %, maior do que 98 %, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %. Por exemplo, o teor das impurezas (isto é, quaisquer componentes da composição produzida pelo método descrito aqui, exceto o Composto A, tais como subprodutos, material de partida, resíduos de solvente, metal pesado, e etc.) é menos do que 15 %, menos do que 14 %, menos do que 10 %, menos do que 8 %, menos do que 5 %, menos do que 4 %, menos do que 3 %, menos do que 2 %, menos do que 1,5 %, menos do que 1 %, menos do que 0,8 %, menos do que 0,5 %, ou menos do que 0,2 %.

[028] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV) fabricado pelo método descrito aqui é o Composto A na Forma I, e a Forma I tem uma pureza maior do que 85 %, por exemplo, maior do que 86 %, maior do que 90 %, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, maior do que 97,5 %, maior do que 98 %, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %. Por exemplo, o teor das impurezas (isto é, quaisquer componentes da composição produzida pelo método descrito aqui, exceto a Forma I, tais como outras formas mórficas do Composto A, subprodutos, material de partida, resíduos de solvente, metal pesado, e etc.) é menos do que 15 %, menos do que 14 %, menos do que 10 %, menos do que 8 %, menos do que 5 %, menos do que 4 %, menos do que 3 %, menos do que 2 %, menos do que 1,5 %, menos do que 1 %, menos do que 0,8 %, menos do que 0,5 %, ou menos do que 0,2 %.

[029] Em uma forma de realização, a composição compreendendo um composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, fabricado pelo método descrito aqui, tem menos do que 1,5 % (por exemplo, menos do que 1,0 %, por exemplo, menos do que 0,5 %) do regioisômero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona correspondente (por exemplo, 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5- dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila, o regioisômero de β-isopropilpiri- dazin-3(2H)-ona do Composto A).

[030] Em uma forma de realização, a composição compreendendo um composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, fabricado pelo método descrito aqui é livre do regioisômero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona correspondente (por exemplo, 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5- tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila, o regioisômero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona do Composto A).

[031] Em uma forma de realização, a composição compreendendo um composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, fabricado pelo método descrito aqui tem menos do que 1,5 % (por exemplo, menos do que 0,1 %) de metal pesado, por exemplo, prata.

[032] Em uma forma de realização, a composição compreendendo um composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, fabricado pelo método descrito aqui é livre de metal pesado, por exemplo, prata, ouro, ou platina.

[033] Os métodos sintéticos descritos aqui incluem vantagens comparadas aos métodos prévios, tais como aqueles divulgados na Patente U.S. 7.452.882. Por exemplo, o rendimento global de 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-diidropirida- zin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila (“Composto A”) é muito aumentado (por exemplo, > 40 % versus ~9 % quando fabricado de acordo com o método divulgado na Patente U.S. 7.452.882). Também, a regiosseletividade da síntese é muito superior. Além disso, os novos métodos oferecem processamento mais fácil, por exemplo, filtrações mais fáceis. Finalmente, nenhum metal pesado é usado nos métodos descritos aqui para o Composto A. Em comparação, prata foi usada na via descrita na Patente U.S. 7.452.882, que precisou de tratamento de re- paro com uma resina.

[034] Ainda em um outro aspecto, a invenção caracteriza uma composição compreendendo mais do que 85 % de um composto da Fórmula (IV), menos do que 1,5 % do regioisômero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona correspondente (isto é,

), e/ou tem menos do que 1,5 % de metal pesado.

[035] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV), por exemplo, Composto A, tem uma pureza maior do que 85 %, por exemplo, maior do que 86 %, maior do que 90 %, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, maior do que 97,5 %, maior do que 98 %, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %. Por exemplo, o teor das impurezas (isto é, quaisquer componentes de uma composição compreendendo o composto da Fórmula (IV), exceto o composto da Fórmula (IV), tais como subprodutos, material de partida, resíduos de solvente, metal pesado, e etc.) é menos do que 15 %, menos do que 14 %, menos do que 10 %, menos do que 8 %, menos do que 5 %, menos do que 4 %, menos do que 3 %, menos do que 2 %, menos do que 1,5 %, menos do que 1 %, menos do que 0,8 %, menos do que 0,5 %, ou menos do que 0,2 %.

[036] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV) é o Composto A na Forma I, e tem uma pureza maior do que 85 %, por exemplo, maior do que 86 %, maior do que 90 %, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, maior do que 97,5 %, maior do que 98 %, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %. Por exemplo, o teor das impurezas (isto é, quaisquer componentes de uma composição compreendendo o Composto A, exceto Composto A, tais como subprodutos, material de partida, resíduos de solvente, metal pesado, e etc.) é menos do que 15 %, menos do que 14 %, menos do que 10 %, menos do que 8 %, menos do que 5 %, menos do que 4 %, menos do que 3 %, menos do que 2 %, menos do que 1,5 %, menos do que 1 %, menos do que 0,8 %, menos do que 0,5 %, ou menos do que 0,2 %.

[037] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV) é o Composto A na Forma I, e a Forma I tem uma pureza maior do que 85 %, por exemplo, maior do que 86 %, maior do que 90 %, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, maior do que 97,5 %, maior do que 98 %, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %. Por exemplo, o teor das impurezas (isto é, quaisquer componentes de uma composição compreendendo a Forma I, exceto Forma I, tais como outras formas mórficas do Composto A, subprodutos, material de partida, resíduos de solvente, metal pesado, e etc.) é menos do que 15 %, menos do que 14 %, menos do que 10 %, menos do que 8 %, menos do que 5 %, menos do que 4 %, menos do que 3 %, menos do que 2 %, menos do que 1,5 %, menos do que 1 %, menos do que 0,8 %, menos do que 0,5 %, ou menos do que 0,2 %.

[038] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, tem menos do que 1,5 % (por exemplo, menos do que 1,0 %, por exemplo, menos do que 0,5 %) do regioisômero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona corres-pondente (por exemplo, 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3- il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila, o regioisômero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona do Composto A).

[039] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, é livre do regioisômero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona correspondente (por exemplo, 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5- dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila, o regioisômero de β-isopropilpiri- dazin-3(2H)-ona do Composto A).

[040] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, tem menos do que 1,5 % (por exemplo, menos do que 1,0 %, por exemplo, menos do que 0,5 %) de metal pesado, por exemplo, prata, ouro, ou platina.

[041] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, fabricado pelo método descrito aqui é livre de metal pesado, por exemplo, prata.

[042] Além disso, a invenção caracteriza uma forma mórfica de 2-(3,5-dicloro- 4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4- triazina-6-carbonitrila (“Composto A”) (Forma I) caracterizada por um padrão de difração de pó de raio X (“XRPD”) incluindo picos em torno de 10,5, 18,7, 22,9, 23,6, e 24,7 graus 2θ.

[043] Em uma forma de realização, a Forma I é caracterizada por um padrão de difração de pó de raio X incluindo ainda picos em torno de 8,2, 11,2, 15,7 16,4, 17,7, 30,0, e 32,2 graus 2θ.

[044] Em uma forma de realização, a Forma I é caracterizada por um padrão de difração de pó de raio X incluindo picos em torno de 8,2, 10,5, 18,7, 22,9, 23,6, e 24,7 graus 2θ.

[045] Em uma forma de realização, a Forma I é caracterizada por um padrão de difração de pó de raio X incluindo picos em torno de 8,2, 10,5, 11,2, 15,7 16,4, 17,7, 18,7, 22,9, 23,6, e 24,7 graus 2θ.

[046] Em uma forma de realização, Forma I é caracterizada por um padrão de difração de pó de raio X incluindo picos em torno de 8,2, 10,5, 11,2, 15,7 16,4, 17,7, 18,7, 22,9, 23,6, 24,7, 30,0, e 32,2 graus 2θ.

[047] Em uma outra forma de realização, a Forma I é caracterizada por um padrão de difração de pó de raio X substancialmente similar àquele apresentado na FIG. 1.

[048] Em um outro aspecto, a presente divulgação descreve um processo de preparar a Forma I. O processo compreende misturar uma amostra contendo o Composto A (por exemplo, preparação bruta ou purificada do Composto A) com um solvente orgânico, tal como álcool (por exemplo, etanol), cetona (por exemplo, metil isobutil cetona, isto é, MIBK), ou uma solução aquosa incluindo álcool ou cetona. Por exemplo, a mistura resultante (por exemplo, uma pasta fluida ou suspensão) contendo o Composto A de partida e o solvente é aquecida em uma primeira temperatura, e depois resfriada até uma segunda temperatura que é mais baixa do que a primeira temperatura. Preferivelmente, o solvente orgânico é etanol. O Composto A de partida que segue na conversão da forma pode ser um solvato, tal como um hidrato (por exemplo, um monoidrato ou diidrato), ou um solvato de um solvente orgânico (por exemplo dimetil acetamida, etanol ou MIBK). Alternativamente, o Composto A de partida pode ser um ansolvato (por exemplo, um anidrato).

[049] Em uma forma de realização, o processo é realizado aquecendo-se o Composto A com o solvente orgânico a uma temperatura elevada (por exemplo, cerca de 60 a 110 °C ou cerca de 80 °C) para formar uma pasta fluida ou suspensão, seguido por resfriamento (por exemplo, até uma temperatura de cerca de 0 a 60 °C, cerca de 40 a 60 °C, cerca de 45 a 55 °C, ou em torno da temperatura ambiente) para fornecer a Forma I do Composto A. Por exemplo, o solvente orgânico é etanol e a pasta fluida contendo o Composto A pode ser resfriada até uma temperatura maior do que cerca de 40 °C para obter a Forma I. Por exemplo, o solvente orgânico é MIBK, e a pasta fluida contendo o Composto A pode ser resfriada até a temperatura ambiente para obter a Forma I.

[050] Em uma outra forma de realização, uma suspensão etanólica do Composto A é aquecida a uma temperatura elevada (por exemplo, cerca de 80 °C) e depois resfriada até uma temperatura não mais baixa do que cerca de 40 °C (por exemplo, cerca de 45 a 55 °C), filtrada (por exemplo, cerca de 45 a 55 °C), lavada com etanol aquecido (por exemplo, 45 a 55 °C) e seca a por exemplo, 45 a 55 °C para obter a Forma I do Composto A que é substancialmente livre de qualquer solvato de Composto A tal como solvato de etanol. Por exemplo, a Forma I do Composto A como preparada tem teor de solvato de etanol de < 5 % (por exemplo, < 2 %, < 1 %, < 0,5 %, ou < 0,1 %).

[051] Em uma forma de realização, o processo compreende ainda, depois de resfriar a mistura, filtrar a mistura. A etapa de filtração pode ser realizada em uma temperatura entre cerca de 0 °C e cerca de 60 °C (por exemplo, cerca de 40 a 60 °C, cerca de 45 a 55 °C, ou em torno da temperatura ambiente) para obter uma torta do filtro.

[052] Em uma forma de realização, o processo compreende ainda, depois de filtrar a mistura, enxaguar a torta do filtro. A etapa de enxágue pode ser realizada em uma temperatura entre cerca de 0 °C e cerca de 60 °C (por exemplo, cerca de 40 a 60 °C, cerca de 45 a 55 °C, ou em torno da temperatura ambiente) com um solvente orgânico (por exemplo, um álcool tal como etanol) para obter uma torta do filtro enxaguada.

[053] Em uma forma de realização, o processo compreende ainda, depois de enxaguar a torta do filtro, secar a torta do filtro enxaguada. A etapa de secagem pode ser realizada em uma temperatura entre cerca de 0 °C e cerca de 60 °C (por exemplo, cerca de 40 a 60 °C, cerca de 45 a 55 °C, ou em torno da temperatura ambiente) para obter a Forma I do Composto A.

[054] Em uma forma de realização, a Forma I tem uma pureza maior do que 91 %, por exemplo, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, ou maior do que 97,5 %.

[055] Em uma forma de realização, a Forma I tem uma pureza maior do que 98 %, por exemplo, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %.

[056] Em um outro aspecto, a divulgação fornece compostos tais como

exemplo, úteis em sintetizar 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)- ona (“Int. 7”).

[057] A divulgação também fornece um método para tratar uma resistência ao hormônio da tireoide (RTH) em um indivíduo em necessidade deste. O método compreende administrar a um indivíduo tendo pelo menos uma mutação de TRβ uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (IV):

[058] A resistência ao hormônio da tireoide (RTH) é uma síndrome caracterizada por uma hipossensibilidade de tecido variável ao hormônio da tireoide e é principalmente causada por mutações dominantes autossômicas para THRβ. Ver Shi et al., Biochemistry 2005, 44, 4612 - 4626.

[059] Em uma forma de realização, o composto usado no método acima é 2- (3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-te- traidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila (“Composto A”), por exemplo, Composto A na Forma I.

[060] Em uma forma de realização, o indivíduo a ser tratado pelo método acima tem obesidade, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabete, esteato-hepatite não alcoólica, esteatose hepática, doença óssea, alteração do eixo tireoidiano, ate- rosclerose, um transtorno cardiovascular, taquicardia, comportamento hipercinético, hipotireoidismo, bócio, transtorno de hiperatividade com déficit de atenção, dificuldades de aprendizagem, retardo mental, perda auditiva, idade óssea retardada, doença neurológica ou psiquiátrica ou câncer da tireoide.

[061] Em uma forma de realização, a mutação de THRβ é selecionada do grupo consistindo em uma substituição da treonina (T) no lugar da alanina residual do tipo selvagem (A) na posição de aminoácido 234 da SEQ ID NO: 1 (A234T); uma substituição da glutamina (Q) no lugar da arginina residual do tipo selvagem (R) na posição de aminoácido 243 da SEQ ID NO: 1 (R243Q); uma substituição de histidina (H) no lugar da arginina residual do tipo selvagem (R) na posição de aminoácido 316 da SEQ ID NO: 1 (R316H); e uma substituição de treonina (T) no lugar da alanina residual do tipo selvagem (A) na posição de aminoácido 317 da SEQ ID NO: 1 (A317T). Em uma outra forma de realização, o composto usado no método restaura a atividade do mutante THRβ.

[062] Em uma forma de realização, a pureza do composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, é obtida da reconversão em pasta fluida de um composto bruto a partir de um solvente adequado descrito aqui. Em uma outra forma de realização, o composto não é um solvato (por exemplo, um hidrato).

[063] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV), por exemplo, Composto A, tem uma pureza maior do que 85 %, por exemplo, maior do que 86 %, maior do que 90 %, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, maior do que 97,5 %, maior do que 98 %, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %.

[064] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV) é o Composto A na Forma I, e tem uma pureza maior do que 85 %, por exemplo, maior do que 86 %, maior do que 90 %, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, maior do que 97,5 %, maior do que 98 %, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %.

[065] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV) é o Composto A na Forma I, e a Forma I tem uma pureza maior do que 85 %, por exemplo, maior do que 86 %, maior do que 90 %, maior do que 92,5 %, maior do que 95 %, maior do que 96 %, maior do que 97 %, maior do que 97,5 %, maior do que 98 %, maior do que 98,5 %, maior do que 99 %, maior do que 99,2 %, maior do que 99,5 %, ou maior do que 99,8 %.

[066] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, tem menos do que 1,5 % (por exemplo, menos do que 1,0 %, por exemplo, menos do que 0,5 %) do regioisômero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona corres-pondente (por exemplo, 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3- il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila, o regioisômero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona do Composto A).

[067] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, é livre do regioisômero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona correspondente (por exemplo, 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5- dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila, o regioisômero de β-isopropilpiri- dazin-3(2H)-ona do Composto A).

[068] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, tem menos do que 1,5 % (por exemplo, menos do que 1,0 %, por exemplo, menos do que 0,5 %) de metal pesado, por exemplo, prata, ouro, ou platina.

[069] Em uma forma de realização, o indivíduo é um mamífero. Em uma outra forma de realização, o indivíduo é um ser humano.

[070] A divulgação fornece ainda um método para determinar uma responsi- vidade de um indivíduo ao composto da Fórmula (IV) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, o método compreendendo: (a) fornecer uma amostra do indivíduo; e (b) detectar uma mutação em um receptor do hormônio da tireoide (“TR”), em que a presença da mutação indica que o indivíduo é responsivo aos compostos ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

[071] Em uma forma de realização, o composto da Fórmula (IV) é 2-(3,5-di- cloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro- 1,2,4-triazina-6-carbonitrila (“Composto A”).

[072] Em uma forma de realização, o TR é TRβ.

[073] Em uma forma de realização, o indivíduo tratado pelo método desta invenção tem obesidade, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabete, esteato-hepatite não alcoólica, esteatose hepática, doença óssea, alteração do eixo tireoidiano, ate- rosclerose, um transtorno cardiovascular, taquicardia, comportamento hipercinético, hipotireoidismo, bócio, transtorno de hiperatividade com déficit de atenção, dificuldades de aprendizagem, retardo mental, perda auditiva, idade óssea retardada, doença neurológica ou psiquiátrica ou câncer da tireoide.

[074] Em uma forma de realização, um método para determinar uma respon- sividade ao composto da Fórmula (IV) pode ser usado junto com o método para tratar uma resistência ao hormônio da tireoide. Isto é, antes do tratamento, um indivíduo é testado para determinar a responsividade ao composto.

[075] Outras características e vantagens da presente invenção são evidentes a partir da descrição detalhada, exemplos, e reivindicações.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[076] A Figura 1 é um difratograma de pó de raio X (XRPD) da Forma I de 2- (3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-te- traidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila (“Composto A”).

[077] A Figura 2 é um diagrama de calorimetria diferencial de varredura (DSC) da Forma I do Composto A.

[078] As Figuras 3A e 3B são imagens da modelagem de MacPymol para mostrar T3 e o Composto A em THRβ, respectivamente.

[079] A Figura 4 é uma imagem de modelagem de MacPymol para mostrar T3 sobreposto e o Composto A em THRβ.

[080] A Figura 5A é uma imagem de modelagem de MacPymol para mostrar interações polares entre T3 e THRβ do tipo selvagem, onde T3 interage com Arg320 muito especificamente.

[081] A Figura 5B é uma imagem de modelagem de MacPymol para mostrar interações polares entre o Composto A e THRβ do tipo selvagem, onde o Composto A interage com Arg320 e Arg316.

[082] A Figura 6 é uma imagem de modelagem de MacPymol para mostrar que mutações levam a muitas mudanças na região polar do domínio de ligação de ligando (“LBD”).

[083] A Figura 7A é uma imagem de modelagem de MacPymol para mostrar interações entre os mutantes de T3 e THRβ: Ala234Thr, Arg243Gln, Arg316His, Ala317Thr.

[084] A Figura 7B é uma imagem de modelagem de MacPymol para mostrar interações entre o Composto A e mutantes de THRβ: Ala234Thr, Arg243Gln, Arg316His, Ala317Thr; indicando que, comparado a T3, o heterociclo negativamente carregado no Composto A acomoda melhor as mutações.

[085] As Figuras 8A e 8B são imagens de modelagem de MacPymol de T3 e Composto A no mutante Arg316His, respectivamente. A interação de T3-Arg320 é provavelmente mais fraca devido à rotação de Arg320 longe do ligando no mutante, enquanto o Composto A mantém a interação favorável com Arg320 e é bem posicionado para o grupo CN para formar uma interação de pi-cátion com o His316 mutado.

[086] As Figuras 9A e 9B são imagens de modelagem de MacPymol do Composto A no THRβ WT e mutante Arg316His, respectivamente.

Descrição Detalhada da Invenção

[087] Como usado no relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um,” “uma,” e “o”, “a” incluem referências no plural a menos que o contexto claramente dite de outro modo. Assim, por exemplo, referência a “um reagente” inclui não apenas um único reagente mas também uma combinação ou mistura de dois ou mais reagentes diferente, referência a “um substituinte” inclui um único substituinte assim como dois ou mais substituintes, e semelhantes.

[088] Como usado aqui, as frases “por exemplo,” “tal como,” ou “incluindo” são significadas como introduzindo exemplos que esclarecem ainda mais o assunto geral. Estes exemplos são fornecidos apenas como um auxiliar para entender a divulgação, e não são significados como sendo limitantes de forma alguma. Além disso como usado aqui, os termos “pode,” “opcional,” “opcionalmente,” ou “pode opcionalmente” significam que a circunstância descrita subsequentemente pode ocorrer ou não, de modo que a descrição inclui exemplos onde a circunstância ocorre e exemplos onde ela não ocorre. Por exemplo, a frase “opcionalmente presente” significa que um objeto pode estar presente ou não, e, assim, a descrição inclui exemplos em que o objeto está presente e exemplos em que o objeto não está presente.

[089] Em descrever e reivindicar a presente invenção, a terminologia seguinte será usada de acordo com as definições apresentadas abaixo.

[090] Como usado aqui, a abreviação “TR” ou “THR” refere-se ao receptor do hormônio da tireoide. Ácidos nucleicos e polipeptídeos de TR de várias espécies (por exemplo, ser humano, rato, frango, etc.) foram previamente descritos. Ver, por exemplo, R. L. Wagner et al. (2001), Molecular Endocrinology 15(3): 398-410; J. Sap et al. (1986), Nature 324:635-640; C. Weinberger et al. (1986), Nature 324:641-646; e C. C. Tompson et al. (1986), Science 237:1610 - 1614; cada um dos quais é incorporado aqui por referência em sua totalidade. A sequência de aminoácido de TRβ humano é fornecida, por exemplo, pelo No de Acesso no Genbank P10828.2, incorporado aqui por referência.

[091] Os resíduos nas posições 234, 243, 316, e 317 de TRβ humano são sublinhados na SEQ ID NO: 1. A porção da sequência de nucleotídeo de TRβ humano que codifica a sequência de aminoácido acima é a SEQ ID NO: 2. A sequência de nucleotídeo de TRβ humano é fornecida, por exemplo, pelo No Acesso no Genbank NM_000461.4, incorporado aqui por referência.

[092] Como usado aqui, a frase “tendo a fórmula” ou “tendo a estrutura” não é intencionada a ser limitante e é usada do mesmo modo que o termo “compreendendo” é comumente usado. O termo “independentemente selecionado de” é usado aqui para indicar que os elementos relatados, por exemplo, grupos R ou semelhantes, podem ser idênticos ou diferentes.

[093] O termo “alquila” como usado aqui refere-se a um grupo hidrocarboneto saturado ramificado ou não ramificado tipicamente embora não necessariamente contendo 1 a cerca de 24 átomos de carbono, tais como metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, t-butila, octila, decila, e semelhantes, assim como grupos cicloalquila tais como ciclopentila, cicloexila e semelhantes. Geralmente, embora não necessariamente, grupos alquila aqui podem conter 1 a cerca de 18 átomos de carbono, e tais grupos podem conter 1 a cerca de 12 átomos de carbono. O termo “alquila inferior” intenciona um grupo alquila de 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 átomos de carbono. “Alquila substituído” refere-se a alquila substituído com um ou mais grupos substituintes, e os termos “alquila contendo heteroátomo” e “heteroalquila” referem-se a um substituinte de alquila em que pelo menos um átomo de carbono é substituído com um heteroátomo, como descrito em mais detalhe infra.

[094] O termo “alquenila” como usado aqui refere-se a um grupo hidrocarboneto linear, ramificado ou cíclico de 2 a cerca de 24 átomos de carbono contendo pelo menos uma ligação dupla, tal como etenila, n-propenila, isopropenila, n-butenila, isobutenila, octenila, decenila, tetradecenila, hexadecenila, eicosenila, tetracosenila, e semelhantes. Geralmente, embora novamente não necessariamente, grupos alquenila aqui podem conter 2 a cerca de 18 átomos de carbono, e por exemplo podem conter 2 a 12 átomos de carbono. O termo “alquenila inferior” intenciona um grupo alquenila de 2 a 6 átomos de carbono. O termo “alquenila substituído” refere-se a alquenila substituído com um ou mais grupos substituintes, e os termos “alquenila contendo heteroátomo” e “heteroalquenila” referem-se a alquenila em que pelo menos um átomo de carbono é substituído com um heteroátomo, por exemplo, N, P, O, ou S.

[095] O termo “alquinila” como usado aqui refere-se a um grupo hidrocarboneto linear ou ramificado de 2 a 24 átomos de carbono contendo pelo menos uma ligação tripla, tal como etinila, n-propinila, e semelhantes. Geralmente, embora novamente não necessariamente, grupos alquinila aqui podem conter 2 a cerca de 18 átomos de carbono, e tais grupos podem conter ainda 2 a 12 átomos de carbono. O termo “alquinila inferior” intenciona um grupo alquinila de 2 a 6 átomos de carbono. O termo “alquinila substituído” refere-se a alquinila substituído com um ou mais grupos substituintes, e os termos “alquinila contendo heteroátomo” e “heteroalquinila” referem-se a alquinila em que pelo menos um átomo de carbono é substituído com um heteroátomo.

[096] O termo “alcóxi” como usado aqui intenciona um grupo alquila ligado através de uma ligação éter terminal, única; isto é, um grupo “alcóxi” pode ser representado como -O-alquila onde alquila é como definido acima. Um grupo “alcóxi inferior” intenciona um grupo alcóxi contendo 1 a 6 átomos de carbono, e inclui, por exemplo, metóxi, etóxi, n-propóxi, isopropóxi, t-butilóxi, etc. Substituintes identificados como “alcóxi C1-C6” ou “alcóxi inferior” aqui, por exemplo, podem conter 1 a 3 átomos de carbono, e como um outro exemplo, tais substituintes podem conter 1 ou 2 átomos de carbono (isto é, metóxi e etóxi).

[097] O termo “ácido alquílico” refere-se a um ácido substituinte que está em um grupo alquila, tal como -(CH2)oCOOH, em que o é um número inteiro entre 1 e 6. O grupo alquila pode ser linear ou ramificado.

[098] O termo “arila” como usado aqui, e a menos que de outro modo especificado, refere-se a um substituinte aromático geralmente, embora não necessariamente, contendo 5 a 30 átomos de carbono e contendo um único anel aromático ou anéis aromáticos múltiplos que são fundidos juntos, diretamente ligados, ou indiretamente ligados (tal que os anéis aromáticos diferentes são ligados a um grupo comum tal como uma porção metileno ou etileno). Grupos arila podem, por exemplo, conter 5 a 20 átomos de carbono, e como um outro exemplo, grupos arila podem conter 5 a 12 átomos de carbono. Por exemplo, grupos arila podem conter um anel aromático ou dois anéis aromáticos fundidos ou ligados, por exemplo, fenila, naftila, bifenila, éter difenílico, difenilamina, benzofenona, e semelhantes. “Arila substituído” refere-se a uma porção arila substituída com um ou mais grupos substituintes, e os termos “arila contendo heteroátomo” e “heteroarila” referem-se a substituinte de arila, em que pelo menos um átomo de carbono é substituído com um heteroátomo, como será descrito em mais detalhe infra. Se não de outro modo indicado, o termo “arila” inclui anéis que são não substituídos, substituídos, e/ou têm substituintes aromáticos contendo heteroátomo.

[099] O termo “aralquila” refere-se a um grupo alquila com um substituinte de arila, e o termo “alcarila” refere-se a um grupo arila com um substituinte de alquila, em que “alquila” e “arila” são como definidos acima. Em geral, grupos aralquila e alcarila aqui contêm 6 a 30 átomos de carbono. Grupos aralquila e alcarila podem, por exemplo, conter 6 a 20 átomos de carbono, e como um outro exemplo, tais grupos podem conter 6 a 12 átomos de carbono.

[0100] O termo “amino” é usado aqui para referir-se ao grupo -NZ1Z2 em que Z1 e Z2 são substituintes de hidrogênio ou que não de hidrogênio, com substituintes que não de hidrogênio incluindo, por exemplo, alquila, arila, alquenila, aralquila, e variantes substituídas e/ou contendo heteroátomo destes.

[0101] Os termos “halo” e “halogênio” são usados no sentido convencional para referir-se a um substituinte de cloro, bromo, fluoro ou iodo.

[0102] O termo “contendo heteroátomo” como em um “grupo alquila contendo heteroátomo” (também denominado um grupo “heteroalquila”) ou um “grupo arila contendo heteroátomo” (também denominado um grupo “heteroarila”) refere-se a uma molécula, ligação ou substituinte em que um ou mais átomos de carbono são substituídos com um átomo exceto carbono, por exemplo, nitrogênio, oxigênio, enxofre, fósforo ou silício, tipicamente nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Similarmente, o termo “heteroalquila” refere-se a um substituinte de alquila que está contendo heteroátomo, o termo “heterociclo” ou “heterocíclico” refere-se a uma porção cíclica que está contendo heteroátomo, os termos “heteroarila” e “heteroaromático” respectivamente referem-se a substituintes de “arila” e “aromáticos” que estão contendo heteroátomo, e semelhantes. Exemplos de grupos heteroalquila incluem alcoxiarila, alquila substituído por alquilsulfanila, alquila amino N-alquilado, e semelhantes. Exemplos de substituintes de heteroarila incluem pirrolila, pirrolidinila, piridinila, quinolinila, indolila, furila, porimidinila, imidazolila, 1,2,4-triazolila, tetrazolila, etc., e exemplos de grupos alicíclico contendo heteroátomo são pirrolidino, morfolino, piperazino, piperidino, tetraidrofuranila, etc.

[0103] “Hidrocarbila” refere-se a radicais hidrocarbila univalentes contendo 1 a cerca de 30 átomos de carbono, incluindo 1 a cerca de 24 átomos de carbono, incluindo ainda 1 a cerca de 18 átomos de carbono, e incluindo ainda cerca de 1 a 12 átomos de carbono, incluindo espécies lineares, ramificadas, cíclicas, saturadas e insaturadas, tais como grupos alquila, grupos alquenila, grupos arila, e semelhantes. “Hidrocarbila substituído” refere-se ao hidrocarbila substituído com um ou mais grupos substituintes, e o termo “hidrocarbila contendo heteroátomo” refere-se ao hidrocarbila em que pelo menos um átomo de carbono é substituído com um heteroátomo.

[0104] O termo “aminoácido O-ligado” significa qualquer aminoácido, que ocorre naturalmente ou sintético, ligado a uma molécula por intermédio de um oxigênio de um grupo carboxila do aminoácido, preferivelmente por intermédio do grupo carboxila do término carbóxi do aminoácido.

[0105] Como usado aqui, o termo “grupo de proteção” significa que uma porção funcional particular, por exemplo, O, S, ou N, é temporariamente bloqueada de modo que uma reação possa ser realizada seletivamente em um outro sítio reativo em um composto multifuncional. Em formas de realização preferidas, um grupo de proteção reage seletivamente em bom rendimento para fornecer um substrato protegido que é estável às reações projetadas; o grupo de proteção deve ser seletivamente removido em bom rendimento por reagentes facilmente disponíveis, preferivelmente não tóxicos qeu não atacam os outros grupos funcionais; o grupo de proteção forma um derivado facilmente separável (mais preferivelmente sem a geração de novos centros estereogênicos); e o grupo de proteção tem um mínimo de funcionalidade adicional para evitar outros sítios de reação. Como detalhado aqui, grupos de proteção de oxigênio, enxofre, nitrogênio e carbono podem ser utilizados. Por exemplo, em certas formas de realização, certos exemplar grupos de proteção de oxigênio podem ser utilizados. Estes grupos de proteção de oxigênio incluem, mas não são limitados a éteres metílicos, éteres metílicos substituídos (por exemplo, MOM (éter metoximetílico), MTM (éter metiltiometílico), BOM (éter benziloximetílico), e PMBM (éter p-metoxibenziloximetílico)), éteres etílicos substituídos, éteres benzílicos substituídos, éteres silílicos (por exemplo, TMS (éter trimetilsilílico), TES (éter trietilsilílico), TIPS (éter triisopropilsilílico), TBDMS (éter t-butildimetilsilílico), éter tribenzil silílico, e TBDPS (éter t-butildifenil silílico), ésteres (por exemplo, formiato, acetato, benzoato (Bz), trifluoroacetato, e dicloroacetato), carbonatos, acetais cíclicos e cetais. Em certas outras formas de realização exemplares, grupos de proteção de nitrogênio são utilizados. Grupos de proteção de nitrogênio, assim como métodos de proteção e desproteção são conhecidos na técnica. Grupos de proteção de nitrogênio incluem, mas não são limitados a, carbamatos (incluindo carbamatos de metila, etila e etila substituído (por exemplo, Troc), amidas, derivados de imida cíclicos, N-Alquil e N-Aril aminas, derivados de imina, e derivados de enamina. Ainda em outras formas de realização, certos grupos de proteção de enxofre exemplares podem ser utilizados. Os grupos de proteção de enxofre incluem, mas não são limitados àqueles grupos de proteção de oxigênio descritos acima assim como ácido carboxílico alifático (por exemplo, ácido acrílico), maleimida, vinil sulfonila, e ácido maleico opcionalmente substituído. Certos outros grupos de proteção exemplares são detalhados aqui, entretanto, será avaliado que a presente invenção não é intencionada a ser limitada a estes grupos de proteção; preferivelmente, uma variedade de grupos de proteção equivalentes adicionais pode ser facilmente identificada usando os critérios acima e utilizados na presente invenção. Adicionalmente, uma variedade de grupos de proteção é descrita em “Protective Groups in Organic Synthesis” Terceira Ed. Greene, T.W. e Wuts, P.G., Eds., John Wiley & Sons, New York: 1999, os conteúdos inteiros do qual são por meio desta incorporados por referência.

[0106] Por “substituído” como em “hidrocarbila substituído,” “alquila substituído,” “arila substituído,” e semelhantes, como aludido em algumas das definições anteriormente mencionadas, é significado que na porção hidrocarbila, alquila, arila, ou outra, pelo menos um átomo de hidrogênio ligado a um átomo de carbono (ou outro) é substituído com um ou mais substituintes que não de hidrogênio. Exemplos de tais substituintes incluem, sem limitação, grupos funcionais e as porções hidrocarbila alquila C1-C24 (incluindo alquila C1-C18, incluindo ainda alquila C1-C12, e incluindo ainda alquila C1-C6), alquenila C2-C24 (incluindo alquenila C2-C18, incluindo ainda alquenila C2-C12, e incluindo ainda alquenila C2-C6), alquinila C2-C24 (incluindo alquinila C2-C18, incluindo ainda alquinila C2-C12, e incluindo ainda alquinila C2-C6), arila C5-C30 (incluindo arila C5-C20, e incluindo ainda arila C5-C12), e aralquila C6-C30 (incluindo aralquila C6-C20, e incluindo ainda aralquila C6-C12).

[0107] Por “grupo funcional,” como aludido em algumas das definições anteriormente mencionadas, é significado um grupo que não hidrogênio compreendendo uma ou mais funcionalidades que não hidrocarboneto. Exemplos de grupos funcionais incluem, sem limitação: halo, hidroxila, sulfidrila, alcóxi C1-C24, alquenilóxi C2-C24, alquinilóxi C2-C24, arilóxi C5-C20, acila (incluindo alquilcarbonila C2C24 (-CO-alquila) e arilcarbonila C6-C20 (-CO-arila)), acilóxi (-O-acila), alcoxicarbonila C2-C24 (-(CO)-O-alquila), ariloxicarbonila C6-C20 (-(CO)-O-arila), halocarbonila (-CO)- X onde X é halo), alquilcarbonato C2-C24 (-O-(CO)-O-alquila), arilcarbonato C6-C20 (- O-(CO)-O-arila), carbóxi (-COOH), carboxilato (-COO-), carbamoíla (-(CO)-NH2), alquilcarbamoíla C1-C24 monossubstituído (-(CO)-NH(C1-C24 alquila)), alquilcarbamoíla dissubstituído (-(CO)-N(alquila C1-C24)2), arilcarbamoíla monossubstituído (-(CO)-NH-arila), tiocarbamoíla (-(CS)-NH2), carbamido (-NH-(CO)- NHz), ciano (-C = N), isociano (-N+=C"), cianato (-O-C = N), isocianato (-O-N+=C’), isotiocianato (-S-C = N), azido (-N=N+=N"), formila (-(CO)-H), tioformila (-(CS)-H), amino (-NH2), (alquila C1-C24)amino mono- e dissubstituído, (arila C5-C20)amino mono- e dissubstituído, alquilamido C2-C24 (-NH-(CO)-alquila), arilamido C5-C20 (-NH-(CO)- arila), imino (-CR=NH onde R = hidrogênio, alquila C1-C24, arila C5-C20, alcarila C6-C20, aralquila C6-C20, etc.), alquilimino (-CR=N(alquila), onde R = hidrogênio, alquila, arila, alcarila, etc.), arilimino (-CR=N(arila), onde R = hidrogênio, alquila, arila, alcarila, etc.), nitro (-NO2), nitroso (-NO), sulfo (-SO2-OH), sulfonato (-SO2-O-), alquilsulfanila C1-C24 (-S-alquila; também denominado “alquiltio”), arilsulfanila (-S-arila; também denominado “ariltio”), alquilsulfinila C1-C24 (-(SO)-alquila), arilsulfinila C5-C20 (-(SO)- arila), alquilsulfonila C1-C24 (-SO2-alquila), arilsulfonila C5-C20 (-SO2-arila), fosfono (- P(O)(OH)2), fosfonato (-P(O)(O-)2), fosfinato (-P(O)(O-)), fosfo (-PO2), e fosfino (-PH2), (alquila C1-C24)-fosfino mono- e dissubstituído, (arila C5-C20)-fosfino mono- e dissubstituído; e as porções hidrocarbila alquila C1-C24 (incluindo alquila C1-C18, incluindo ainda alquila C1-C12, e incluindo ainda alquila C1-C6), alquenila C2-C24 (incluindo alquenila C2-C18, incluindo ainda alquenila C2-C12, e incluindo ainda alquenila C2-C6), alquinila C2-C24 (incluindo alquinila C2-C18, incluindo ainda alquinila C2-C12, e incluindo ainda alquinila C2-C6), arila C5-C30 (incluindo arila C5-C20, e incluindo ainda arila C5-C12), e aralquila C6-C30 (incluindo aralquila C6-C20, e incluindo ainda aralquila C6-C12). Além disso, os grupos funcionais anteriormente mencionados podem, se um grupo particular permitir, ser substituídos ainda com um ou mais grupos funcionais adicionais ou com uma ou mais porções hidrocarbila tais como aquelas especificamente enumeradas acima. Analogamente, as porções hidrocarbila mencionadas acima podem ser substituídas ainda com um ou mais grupos funcionais ou porções hidrocarbila adicionais tais como aquelas especificamente enumeradas.

[0108] O termo “encurtar um processo” refere-se a colapsar um processo de etapas múltiplas em um número menor de etapas ou operações unitárias. Uma operação unitária inclui transformações, mas também abrange etapas de manejo e isolamento. Centrifugação, filtração, destilação, decantação, precipitação/cristalização, e empacotamento são exemplos de operações unitárias. Existem muitos exemplos de encurtamento e outras melhoras no processo na literatura (ver, por exemplo, J. Org. Chem., 2007, 72, 9757 - 9760).

[0109] Será avaliado que algumas das definições mencionadas acima podem sobrepor, tal que algumas porções químicas podem cair dentro de mais do que uma definição.

[0110] Quando o termo “substituído” aparece antes de uma lista de grupos substituídos possíveis, é intencionado que o termo aplica-se a cada membro deste grupo. Por exemplo, a frase “alquila e arila substituídos” deve ser interpretada como “alquila substituído e arila substituído.”

[0111] A divulgação fornece métodos de sintetizar um composto, por exemplo, um que é útil como um intermediário para sintetizar os compostos de piridazinona como análogos do hormônio da tireoide. Compostos de piridazinona como análogos do hormônio da tireoide, assim como seus pró-medicamentos, foram divulgados em por exemplo, Patentes U.S. 7.452.882, 7.807.674, e 8.076.334.

[0112] Em particular, a invenção caracteriza um método de fabricar 6-(4- amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (“Int. 7”) ou um sal deste, o método compreendendo: (a) contatar R1MgX ou R1Li com um composto da Fórmula (I):

para formar um composto da Fórmula (II): R1 CI^^NHR2

(III) na presença de uma base quando R1 é isopropenila ou na presença de um agente oxidante quando R1 é isopropila.

[0113] A presente divulgação também descreve um método para sintetizar os compostos de piridazinona como análogos do hormônio da tireoide, assim como seus pró-medicamentos. Tais compostos incluem aqueles divulgados nas Patentes U.S. 7.452.882, 7.807.674, e 8.076.334. Em particular, a divulgação descreve um método de fabricar um composto da Fórmula (IV) ou um sal farmaceuticamente aceitável deste:

R3 é H ou CH2Ra, em que Ra é hidroxila, aminoácido O-ligado, -OP(O)(OH)2 ou -OC(O)-Rb, Rb sendo alquila inferior, alcóxi, ácido alquílico, cicloalquila, arila, heteroarila, ou -(CH2)n-heteroarila e n sendo 0 ou 1; R4 é H, e R5 é CH2COOH, C(O)CO2H, ou um éster ou amida deste, ou R4 e R5 juntos são -N=C(Rc)-C(O)-NH-C(O)-; em que Rc é H ou ciano. O método compreende: (a) contatar R1MgX ou R1Li com um composto da Fórmula (I):

para formar um composto da Fórmula (II):

(ill) na presença de uma base quando R1 é isopropenila ou na presença de bromo e um ácido quando R1 é isopropila, (c) quando presente, remover o grupo de proteção de amina R2 do composto da Fórmula (lll) para formar 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)- ona; e, opcionalmente (d) converter 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona ao composto da Fórmula (lV) sob uma condição adequada.

[0114] A presente invenção também fornece métodos detalhados para a síntese de vários compostos divulgados da presente invenção de acordo com os esquemas seguintes e como mostrado nos Exemplos.

[0115] Por toda a descrição, onde composições são descritas como tendo, incluindo, ou compreendendo componentes específicos, é considerado que as composições também consistem essencialmente, ou consistem, nos componentes relatados. Similarmente, onde métodos ou processos são descritos como tendo, incluindo, ou compreendendo etapas de processo específicas, os processos também consistem essencialmente, ou consistem, nas etapas de processamento relatadas. Além disso, deve ser entendido que a ordem das etapas ou ordem para realizar certas ações é irrelevante contanto que a invenção permaneça operável. Além disso, duas ou mais etapas ou ações podem ser conduzidas simultaneamente.

[0116] Os processos sintéticos da invenção podem tolerar uma variedade ampla de grupos funcionais, portanto, vários materiais de partida substituídos podem ser usados. Os processos geralmente fornecem o composto final desejado no final ou perto do final do processo global, embora possa ser desejável em certos exemplos converter ainda o composto a um sal farmaceuticamente aceitável, éster ou pró- medicamento deste.

[0117] Em formas de realização, 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4- isopropilpiridazin-3(2H)-ona (“Int. 7”) é preparado de acordo com o Esquema 1 ou 2 abaixo. Esquema 1: Síntese de 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin- 3(2H)-ona (Int. 7) com reagente de Grignard de isopropila (iPrMgX). Esquema 1

Esquema 2: Síntese de 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin- 3(2H)-ona (Int. 7) com reagente de Grignard de isopropenila. Esquema 2

Estágio 1: Síntese de 3,5-dicloro-4-((6-cloropiridazin-3-il)óxi)anilina (Composto 2) e N-(3,5-dicloro-4-((6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)benzamida ou N-(3,5-dicloro- 4-((6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)acetamida (Composto 4)

[0118] O Composto 2 é preparado contatando-se 3,6-dicloropiridazina com 2,6-dicloro-4-aminofenol na presença de uma quantidade pequena de uma base adequada tal como um carbonato metálico (por exemplo, carbonato de césio ou potássio) ou um alcóxido metálico (por exemplo, t-butóxido de potássio) em um solvente orgânico adequado (por exemplo, DMSO ou DMAC) em uma temperatura de reação adequada (por exemplo, 60 a 120 oC) até a conclusão da reação, tipicamente cerca de 3 a 30 horas, por exemplo cerca de 3 a 15 horas.

[0119] O Composto 4 é preparado protegendo-se 2 com um reagente de proteção de amina adequado (tal como anidrido benzoico ou cloreto benzoico) seguido por tratamento do intermediário protegido com acetato de sódio na presença de um solvente orgânico adequado (tal como ácido acético) em uma temperatura de reação adequada (por exemplo, 100 a 120 oC) até a conclusão da reação, tipicamente cerca de 2 a 20 horas, por exemplo cerca de 5 a 15 horas. O produto bruto é purificado com um solvente adequado (por exemplo, uma mistura de água e ácido acético) em uma temperatura adequada (por exemplo, 88 a 100 oC). O Composto 4 protegido por acetato pode ser preparado submetendo-se o Composto 2 às condições de hidrólise.

[0120] Estágio 2: Síntese de N-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6- diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)benzamida ou N-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6- diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)acetamida (Composto 6) e 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4- isopropilpiridazin-3(2H)-ona (Int. 7)

[0121] O Composto 6 é preparado contatando-se o Composto 4 com um Grignard de isopropila em um solvente orgânico adequado (tal como tetraidrofurano ou dioxano) seguido por uma etapa de oxidação. A etapa de oxidação pode ser realizada na presença de um reagente oxidante tal como bromo em um solvente orgânico adequado tal como ácido acético em uma temperatura de reação adequada (por exemplo, 60 a 90 oC) até a conclusão da reação, tipicamente cerca de 2 a 10 horas, por exemplo cerca de 2 a 5 horas.

[0122] Será avaliado que uma reação de desproteção é necessária de modo a completar a transformação do Composto 6 a Int. 7. Em particular, o grupo de N- proteção (isto é, acetila ou benzoíla) deve ser removido de modo a obter o amino livre presente em Int. 7. Assim, em uma forma de realização, Int. 7 é obtido desprotegendo- se o Composto 6 (onde R2 é Bz) com uma base tal como hidróxido metálico (por exemplo, KOH ou NaOH) ou carbonato metálico (por exemplo, carbonato de sódio). Em uma outra forma de realização, Int. 7 é obtido desprotegendo-se o Composto 6 (onde R2 é Ac) com um ácido tal como ácido trifluoroacético.

[0123] Alternativamente, o Composto 7 é preparado contatando-se o Composto 4 com um Grignard de isopropenila em um solvente orgânico adequado (tal como tetraidrofurano ou 2-metil THF) seguido por isomerização (por exemplo, de 5A a 6) e desproteção sob o tratamento de uma base tal como hidróxido metálico (por exemplo, KOH). A etapa de isomerização/desproteção é realizada em uma temperatura de reação adequada (por exemplo, 60 a 90 oC) até a conclusão da reação, tipicamente cerca de 10 a 60 horas, por exemplo cerca de 16 horas a 90 oC.

[0124] A reação de Grignard pode ser realizada na presença de um ácido de Lewis tal como LiCl ou LiBr em uma temperatura de reação adequada (por exemplo, temperatura ambiente até 40 oC) até a conclusão da reação, tipicamente cerca de 2 a 10 horas, por exemplo cerca de 2 a 5 horas.

[0125] Em formas de realização, a síntese do composto 5 ou 5A resulta em rendimento melhorado de Int. 7 em relação a outros métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, a síntese de 5 ou 5A resulta em um rendimento maior do que 45 %, 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 % ou maior do que 90 %.

[0126] Em formas de realização, a reação de Grignard melhora a regiosseletividade, resultando em significantemente menos regioisômero de β- /— C1

isopropila do composto 6, isto é, ci e assim Int. 7 mais puro.

[0127] Em uma forma de realização, a conversão de 6-(4-amino-2,6- diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (“Int. 7”) ao Composto A é realizada de acordo com o Esquema 3 abaixo.

[0128] Estágio 3: Síntese de 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4- isopropilpiridazin-3(2H)-ona (Int. 8) Int. 8 é preparado contatando-se 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4- isopropilpiridazin-3(2H)-ona com carbamato de (2-cianoacetil)etila e um nitrito metálico tal como nitrito de sódio na presença de um ácido (tal como HCl) em um solvente adequado (por exemplo, uma mistura de ácido acético e água) em uma temperatura de reação adequada (por exemplo, abaixo de 10 °C) até que a reação seja concluída.

[0129] Estágio 4: Síntese de 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6- diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila (Composto A)

[0130] O Composto A é preparado contatando-se Int. 8 e uma base tal como acetato de sódio ou acetato de potássio em um solvente adequado (por exemplo, DMAC) em uma temperatura de reação adequada (por exemplo, em torno de 120 °C) até que a reação seja concluída.

[0131] Em formas de realização, a conversão de 6-(4-amino-2,6- diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (“Int. 7”) a um composto da Fórmula (IV) exceto MGL-3916 (tais como pró-medicamentos deste) é realizada sob as condições descritas em, por exemplo, Patentes U.S. 7.452.882, 7.807.674, e 8.076.334, que são por meio desta incorporadas por referência em suas totalidades.

[0132] Os métodos sintéticos descritos aqui resultam em regiosseletividade superior, com a instalação de Grignard do grupo isopropenila ou isopropila versus a formação de éter biarílico na via sintética previamente divulgada em, por exemplo, Patente U.S. 7.452.882, que forneceu regiosseletividade deficiente. Além disso, encurtando-se a formação de éter biarílico na proteção de benzamida, os métodos divulgados aqui evitam o isolamento do produto de éter biarílico, o que foi quase praticamente impossível por causa de tempos de filtração maiores do que 1 semana por lote quando da síntese deste produto em quantidades em quilograma.

[0133] A presente invenção fornece, compostos com pureza alta e/ou em forma mórfica específica (por exemplo, Forma I), composições descritas aqui e métodos para o tratamento ou prevenção de obesidade, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabete, esteato-hepatite não alcoólica, esteatose hepática, doença óssea, alteração do eixo tireoidiano, aterosclerose, um transtorno cardiovascular, taquicardia, comportamento hipercinético, hipotireoidismo, bócio, transtorno de hiperatividade com déficit de atenção, dificuldades de aprendizagem, retardo mental, perda auditiva, idade óssea retardada, doença neurológica ou psiquiátrica ou câncer da tireoide.

[0134] Será avaliado que os métodos divulgados aqui são adequados tanto para preparações em grande escala quanto em pequena escala dos compostos desejados. Em formas de realização preferidas dos métodos descritos aqui, os análogos do hormônio da tireoide podem ser preparados em uma grande escala, por exemplo em uma escala de produção industrial ao invés de em uma escala experimental/laboratorial. Por exemplo, um processo do tipo batelada de acordo com os métodos da divulgação permite a preparação de lotes de pelo menos 1 g, ou pelo menos 5 g, ou pelo menos 10 g, ou pelo menos 100 g, ou pelo menos 1 kg, ou pelo menos 100 kg de análogos do hormônio da tireoide. Além disso, os métodos permitem a preparação de um análogo do hormônio da tireoide tendo uma pureza de pelo menos 98 %, ou pelo menos 98,5 % como medido por HPLC.

Composições farmacêuticas

[0135] A presente invenção também fornece composições farmacêuticas compreendendo um composto da Fórmula IV em combinação com pelo menos um excipiente ou carregador farmaceuticamente aceitáveis.

[0136] Uma “composição farmacêutica” é uma formulação contendo um composto da presente invenção em uma forma adequada para administração a um indivíduo. Em uma forma de realização, a composição farmacêutica está na forma de dosagem em massa ou unitária. A forma de dosagem unitária é qualquer uma de uma variedade de formas, incluindo, por exemplo, uma cápsula, um saco IV, um tablete, uma bomba única em um inalador em aerossol ou um frasco. A quantidade de ingrediente ativo (por exemplo, uma formulação do composto ou sal divulgados, hidrato, solvato ou isômero destes) em uma dose unitária da composição é uma quantidade eficaz e é variada de acordo com o tratamento particular envolvido. Uma pessoa habilitada na técnica avaliará que é algumas vezes necessário fazer variações de rotina à dosagem dependendo da idade e condição do paciente. A dosagem também dependerá da via de administração. Uma variedade de vias é considerada, incluindo oral, pulmonar, retal, parenteral, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, inalacional, bucal, sublingual, intrapleural, intratecal, intranasal, e semelhantes. Formas de dosagem para a administração tópica ou transdérmica de um composto desta invenção incluem pós, pulverizações, unguentos, pastas, cremes, loções, géis, soluções, emplastros e inalantes. Em uma forma de realização, o composto ativo é misturado sob condições estéreis com um carregador farmaceuticamente aceitável, e com quaisquer preservantes, tampões ou propelentes que são necessários.

[0137] Como usado aqui, a frase “farmaceuticamente aceitável” refere-se àqueles compostos, materiais, composições, carregadores, e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo do julgamento médico confiável, adequados para o uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação excessivos, compatíveis com uma razão benefício/risco razoável.

[0138] “Excipiente ou carregador farmaceuticamente aceitáveis” significa um excipiente ou carregador que é útil em preparar uma composição farmacêutica que é geralmente segura, não tóxica e nem biologicamente nem de outro modo indesejável, e inclui excipiente que é aceitável para uso veterinário assim como uso farmacêutico humano. Um “excipiente farmaceuticamente aceitável” como usado no relatório descritivo e reivindicações inclui tanto um quanto mais do que um tal excipiente.

[0139] Uma composição farmacêutica da invenção é formulada para ser compatível com sua via intencionada de administração. Exemplos de vias de administração incluem administração parenteral, por exemplo, intravenosa, intradérmica, subcutânea, oral (por exemplo, inalação), transdérmica (tópica), e transmucosa. Soluções ou suspensões usadas para aplicação parenteral, intradérmica, ou subcutânea podem incluir os componentes seguintes: um diluente estéril tal como água para injeção, solução salina, óleos fixos, polietilenoglicóis, glicerina, propileno glicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos tais como álcool benzílico ou metil parabenos; antioxidantes tais como ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes tais como ácido etilenodiaminatetraacético; tampões tais como acetatos, citratos ou fosfatos, e agentes para o ajuste da tonicidade tais como cloreto de sódio ou dextrose. O pH pode ser ajustado com ácidos ou bases, tais como ácido clorídrico ou hidróxido de sódio. A preparação parenteral pode ser embutida em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de doses múltiplas fabricados de vidro ou plástico.

[0140] O termo “quantidade terapeuticamente eficaz”, como usado aqui, refere-se a uma quantidade de um agente farmacêutico para tratar, melhorar, ou prevenir uma doença ou condição identificadas, ou para exibir um efeito terapêutico ou inibitório detectável. O efeito pode ser detectado por qualquer método de ensaio conhecido na técnica. A quantidade eficaz precisa para um indivíduo dependerá do peso corporal, tamanho, e saúde do indivíduo; da natureza e extensão da condição; e da terapêutica ou combinação de terapêuticas selecionadas para administração. Quantidades terapeuticamente eficazes para uma situação dada podem ser determinadas por experimentação de rotina que está dentro da habilidade e julgamento do médico. Em um aspecto preferido, a doença ou condição a ser tratada é um transtorno metabólico.

[0141] Na prática do método da presente invenção, uma quantidade eficaz de qualquer um dos compostos desta invenção ou uma combinação de qualquer um dos compostos desta invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster destes, é administrada por intermédio de qualquer um dos métodos usuais e aceitáveis conhecidos na técnica, individualmente ou em combinação. Os compostos ou composições podem ser assim administrados oralmente (por exemplo, cavidade bucal), sublingualmente, parenteralmente (por exemplo, intramuscularmente, intravenosamente, ou subcutaneamente), retalmente (por exemplo, por supositórios ou lavagens), transdermicamente (por exemplo, eletroporação dérmica) ou por inalação (por exemplo, por aerossol), e na forma de dosagens sólidas, líquidas ou gasosas, incluindo tabletes e suspensões. A administração pode ser conduzida em uma forma de dosagem unitária única com terapia contínua ou em uma terapia de dose única à vontade. A composição terapêutica também pode estar na forma de uma emulsão ou dispersão oleosas em combinação com um sal lipofílico tal como ácido pamoico, ou na forma de uma composição de liberação prolongada biodegradável para administração subcutânea ou intramuscular.

[0142] Carregadores farmacêuticos úteis para a preparação das composições desta, podem ser sólidos, líquidos ou gases; assim, as composições podem tomar a forma de tabletes, pílulas, cápsulas, supositórios, pós, formulações protegidas entericamente revestidas ou outras (por exemplo, ligação em resinas de troca de íon ou empacotamento em vesículas de lipídeo-proteína), formulações de liberação prolongada, soluções, suspensões, elixires, aerossóis, e semelhantes. O carregador pode ser selecionado dos vários óleos incluindo aqueles de origem de petróleo, animal, vegetal ou sintética, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de gergelim, e semelhantes. Água, solução salina, dextrose aquosa, e glicóis são líquidos carregadores preferidos, particularmente (quando isotônicos com o sangue) para soluções injetáveis. Por exemplo, formulações para administração intravenosa compreendem soluções aquosas estéreis do(s) ingrediente(s) ativo(s) que são preparadas dissolvendo-se ingrediente(s) ativo(s) sólido(s) em água para produzir uma solução aquosa, e que torna a solução estéril. Excipientes farmacêuticos adequados incluem amido, celulose, talco, glicose, lactose, talco, gelatina, malte, arroz, farinha, giz, sílica, estearato de magnésio, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, cloreto de sódio, leite em pó desnatado, glicerol, propileno glicol, água, etanol, e semelhantes. As composições podem ser submetidas a aditivos farmacêuticos convencionais tais como preservantes, agentes estabilizantes, agentes umectantes ou emulsificantes, sais para ajustar a pressão osmótica, tampões e semelhantes. Carregadores farmacêuticos adequados e sua formulação são descritos em Remington’s Pharmaceutical Sciences de E. W. Martin. Tais composições, em qualquer evento, conterão uma quantidade eficaz do composto ativo junto com um carregador adequado de moto a preparar a forma de dosagem apropriada para administração apropriada ao receptor.

[0143] As preparações farmacêuticas também podem conter agentes preservantes, agentes solubilizantes, agentes estabilizantes, agentes umectantes, agentes emulsificantes, agentes adoçantes, agentes corantes, agentes flavorizantes, sais para variar a pressão osmótica, tampões, agentes de revestimento ou antioxidantes. Elas também podem conter outras substâncias terapeuticamente valiosas, incluindo ingredientes ativos adicionais exceto aqueles da fórmula I.

[0144] Os compostos da presente invenção são úteis como medicamentos para o tratamento de uma resistência ao hormônio da tireoide (RTH) em um indivíduo que tem pelo menos uma mutação de TRβ. O indivíduo pode ter uma doença, tal como obesidade, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabete, esteato-hepatite não alcoólica, esteatose hepática, doença óssea, alteração do eixo tireoidiano, aterosclerose, um transtorno cardiovascular, taquicardia, comportamento hipercinético, hipotireoidismo, bócio, transtorno de hiperatividade com déficit de atenção, dificuldades de aprendizagem, retardo mental, perda auditiva, idade óssea retardada, doença neurológica ou psiquiátrica ou câncer da tireoide.

[0145] A quantidade ou dosagem terapeuticamente eficazes de um composto de acordo com esta invenção podem variar dentro de limites amplos e podem ser determinadas em uma maneira conhecida na técnica. Por exemplo, o fármaco pode ser dosado de acordo com o peso corporal. Tal dosagem será ajustada às necessidades individuais em cada caso particular incluindo o(s) composto(s) específico(s) sendo administrado(s), a via de administração, a condição sendo tratada, assim como o paciente sendo tratado. Em uma outra forma de realização, o fármaco pode ser administrado por doses fixas, por exemplo, dose não ajustada de acordo com o peso corporal. Em geral, no caso de administração oral ou parenteral a seres humanos adultos, uma dosagem diária de cerca de 0,5 mg a cerca de 1000 mg deve ser apropriada, embora o limite superior possa ser excedido quando indicado. A dosagem é preferivelmente de cerca de 5 mg a cerca de 400 mg por dia. Uma dosagem preferida pode ser de cerca de 20 mg a cerca de 100 mg por dia. A dosagem diária pode ser administrada como uma dose única ou em doses divididas, ou para administração parenteral ela pode ser fornecida como infusão contínua.

[0146] Uma quantidade eficaz de um agente farmacêutico é aquela que fornece uma melhora objetivamente identificável como observado pelo médico ou outro observador qualificado. Como usado aqui, o termo “maneira de dosagem eficaz” refere-se à quantidade de um composto ativo para produzir o efeito biológico desejado em um indivíduo ou célula.

[0147] As composições farmacêuticas podem ser incluídas em um recipiente, pacote, ou dispensador junto com instruções para administração.

[0148] Os compostos da presente invenção são capazes de formar ainda sais. Todas estas formas também são consideradas dentro do escopo da invenção reivindicada.

[0149] Como usado aqui, “sais farmaceuticamente aceitáveis” referem-se a derivados dos compostos da presente invenção em que o composto precursor é modificado fabricando-se sais de ácido ou base deste. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não são limitados a, sais minerais ou de ácido orgânico de resíduos básicos tais como aminas, álcali ou sais orgânicos de resíduos ácidos tais como ácidos carboxílicos, e semelhantes. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais não tóxicos convencionais ou os sais de amônio quaternário do composto precursor formado, por exemplo, de ácidos inorgânicos ou orgânicos não tóxicos. Por exemplo, tais sais não tóxicos convencionais incluem, mas não são limitados a, aqueles derivados de ácidos inorgânicos e orgânicos selecionados de 2-acetoxibenzoico, 2-hidroxietano sulfônico, acético, ascórbico, benzeno sulfônico, benzoico, bicarbônico, carbônico, cítrico, edético, etano dissulfônico, 1,2-etano sulfônico, fumárico, glicoeptônico, glicônico, glutâmico, glicólico, glicoliarsanílico, hexilresorcínico, hidrabâmico, bromídrico, clorídrico, iodídrico, hidroximaleico, hidroxinaftoico, isetiônico, láctico, lactobiônico, lauril sulfônico, maleico, málico, mandélico, metano sulfônico, napsílico, nítrico, oxálico, pamoico, pantotênico, fenilacético, fosfórico, poligalacturônico, propiônico, salicíclico, esteárico, subacético, succínico, sulfâmico, sulfanílico, sulfúrico, tânico, tartárico, tolueno sulfônico, e os ácidos de amina que ocorrem comumente, por exemplo, glicina, alanina, fenilalanina, arginina, etc.

[0150] Outros exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem ácido hexanoico, ácido ciclopentano propiônico, ácido pirúvico, ácido malônico, ácido 3-(4- hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinâmico, ácido 4-clorobenzenossulfônico, ácido 2- naftalenossulfônico, ácido 4-toluenossulfônico, ácido canforsulfônico, ácido 4- metilbiciclo-[2,2,2]-oct-2-eno-1-carboxílico, ácido 3-fenilpropiônico, ácido trimetilacético, ácido butilacético terciário, ácido mucônico, e semelhantes. A presente invenção também abrange sais formados quando um próton ácido presente no composto precursor é substituído por um íon metálico, por exemplo, um íon de metal alcalino, um íon alcalino terroso, ou um íon de alumínio; ou coordena com uma base orgânica tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N- metilglucamina, dietilamina, dietilaminoetanol, etilenodiamino, imidazol, lisina, arginina, morfolina, 2-hidroxietilmorfolina, dibenziletilenodiamina, trimetilamina, piperidina, pirrolidina, benzilamina, hidróxido de tetrametilamônio e semelhantes.

[0151] Deve ser entendido que todas as referências aos sais farmaceuticamente aceitáveis incluem formas de adição de solvente (solvatos) ou formas cristalinas (polimorfos) como definido aqui, do mesmo sal.

[0152] Os compostos da presente invenção também podem ser preparados como ésteres, por exemplo, ésteres farmaceuticamente aceitáveis. Por exemplo, um grupo de função ácido carboxílico em um composto pode ser convertido ao seu éster correspondente, por exemplo, um éster metílico, etílico ou outro. Também, um grupo álcool em um composto pode ser convertido ao seu éster correspondente, por exemplo, um acetato, propionato ou outro éster.

[0153] Os compostos da presente invenção também podem ser preparados como pró-medicamentos, por exemplo, pró-medicamentos farmaceuticamente aceitáveis. Os termos “pró-fármaco” e “pró-medicamento” são usados permutavelmente aqui e referem-se a qualquer composto que libera um fármaco precursor ativo in vivo. Visto que pró-medicamentos são conhecidos realçar numerosas qualidades desejáveis de produtos farmacêuticos (por exemplo, solubilidade, biodisponibilidade, fabricação, etc.), os compostos da presente invenção podem ser liberados na forma de pró-medicamento. Assim, a presente invenção é intencionada a abranger pró-medicamentos dos compostos presentemente reivindicados, métodos de liberar os mesmos e composições contendo os mesmos. “Pró-medicamentos” são intencionados a incluir quaisquer carregadores covalentemente ligados que liberam um fármaco precursor ativo da presente invenção in vivo quando tal pró-medicamento é administrado a um indivíduo. Pró-medicamentos na presente invenção são preparados modificando-se grupos funcionais presentes no composto em um tal modo que as modificações são clivadas, em manipulação de rotina ou in vivo, ao composto precursor. Pró-medicamentos incluem compostos da presente invenção em que um grupo hidróxi, amino, sulfidrila, carbóxi ou carbonila é ligado a qualquer grupo que pode ser clivado in vivo para formar um grupo hidroxila livre, amino livre, sulfidrila livre, carbóxi livre ou carbonila livre, respectivamente.

[0154] Exemplos de pró-medicamentos incluem, mas não são limitados a, ésteres (por exemplo, acetato, dialquilaminoacetatos, formiatos, fosfatos, sulfatos e derivados de benzoato) e carbamatos (por exemplo, N,N-dimetilaminocarbonila) de grupos funcionais hidróxi, ésteres (por exemplo, ésteres etílicos, ésteres de morfolinoetanol) de grupos funcionais carboxila, derivados de N-acila (por exemplo, N-acetila) bases de N-Mannich, bases de Schiff e enaminonas de grupos funcionais amino, oximas, acetais, cetais e ésteres enólicos de grupos funcionais cetona e aldeído em compostos da invenção, e semelhantes, Ver Bundegaard, H., Design of Prodrugs, p1 - 92, Elesevier, New York-Oxford (1985).

[0155] Os compostos, ou sais farmaceuticamente aceitáveis, ésteres ou pró- medicamentos destes, são administrados oralmente, nasalmente, transdermicamente, pulmonarmente, inalacionalmente, bucalmente, sublingualmente, intraperintonealmente, subcutaneamente, intramuscularmente, intravenosamente, retalmente, intrapleuralmente, intratecalmente e parenteralmente. Em uma forma de realização, o composto é administrado oralmente. Uma pessoa habilitada na técnica reconhecerá as vantagens de certas vias de administração.

[0156] O regime de dosagem utilizando os compostos é selecionado de acordo com uma variedade de fatores incluindo tipo, espécie, idade, peso, sexo e condição médica do paciente; a severidade da condição a ser tratada; a via de administração; a função renal e hepática do paciente; e o composto particular ou sal deste utilizado. Um médico ou veterinário comumente habilitado pode determinar e prescrever facilmente a quantidade eficaz do fármaco necessária para impedir, agir contra ou parar o progresso da condição.

[0157] Técnicas para formulação e administração dos compostos divulgados da invenção podem ser encontradas em Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19a edição, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). Em uma forma de realização, os compostos descritos aqui, e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes, são usados em preparações farmacêuticas em combinação com um carregador farmaceuticamente aceitável ou diluente. Carregadores farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem enchedores sólidos inertes ou diluentes e soluções aquosas estéreis ou orgânicas. Os compostos estarão presentes em tais composições farmacêuticas em quantidades suficientes para fornecer a quantidade de dosagem desejada na faixa descrita aqui.

[0158] A invenção caracteriza um método para tratar ou aliviar um sintoma de resistência ao hormônio da tireoide em um indivíduo administrando-se a um indivíduo expressando um TRβ mutante compreendendo uma mutação no domínio de ligação de ligando uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, por exemplo, Forma I deste.

[0159] A divulgação também fornece um método de determinar uma responsividade de um indivíduo tendo resistência ao hormônio da tireoide (RTH) a um composto da Fórmula (IV) divulgado aqui fornecendo-se uma amostra do indivíduo; e detectar pelo menos uma mutação de TRβ (por exemplo, uma mutação de gene ou uma mutação no domínio de ligação de ligando do polipeptídeo de TRβ, por exemplo, um polipeptídeo como definido na SEQ ID NO: 1); e a presença da dita mutação indica que o indivíduo é responsivo a um composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, por exemplo, Forma I deste. O método pode incluir ainda tratar o indivíduo que tem a mutação administrando-se com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, por exemplo, Forma I deste.

[0160] Em uma forma de realização, o indivíduo que mostra ou mostrará responsividade a um composto da Fórmula (IV) tal como o Composto A tem obesidade, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabete, esteato-hepatite não alcoólica, esteatose hepática, doença óssea, alteração do eixo tireoidiano, aterosclerose, um transtorno cardiovascular, taquicardia, comportamento hipercinético, hipotireoidismo, bócio, transtorno de hiperatividade com déficit de atenção, dificuldades de aprendizagem, retardo mental, perda auditiva, idade óssea retardada, doença neurológica ou psiquiátrica ou câncer da tireoide.

[0161] Além disso, a divulgação também fornece um método que inclui determinar a presença de uma mutação de gene de TRβ em uma amostra de um indivíduo; e selecionar, com base na presença de uma mutação de gene de TRβ, uma terapia que inclui a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (IV), tal como o Composto A, por exemplo, Forma I deste.

[0162] A divulgação também fornece um método que inclui ampliar um ácido nucleico em uma amostra de um indivíduo com um iniciador que é complementar a uma sequência de ácido nucleico de TRβ mutante compreendendo uma mutação de gene de TRβ em uma sequência de ácido nucleico como definido na SEQ ID NO: 2; determinar a presença do ácido nucleico ampliado, e selecionar, com base na presença do ácido nucleico ampliado, uma terapia que inclui a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (IV), ou tratar o indivíduo administrando-se uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula (IV) com base na presença do ácido nucleico ampliado.

[0163] O TRβ mutante descrito aqui é um polipeptídeo de TRβ mutante ou uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de TRβ mutante.

[0164] Em uma forma de realização, o TRβ mutante compreende uma ou mais mutações nas posições de aminoácido 234, 243, 316, e 317 da SEQ ID NO: 1. Mais preferivelmente, a mutação é selecionada do grupo consistindo em uma substituição de treonina (T) no lugar da alanina residual do tipo selvagem (A) na posição de aminoácido 234 da SEQ ID NO: 1 (A234T); uma substituição de glutamina (Q) no lugar da arginina residual do tipo selvagem (R) na posição de aminoácido 243 da SEQ ID NO: 1 (R243Q); uma substituição de histidina (H) no lugar da arginina residual do tipo selvagem (R) na posição de aminoácido 316 da SEQ ID NO: 1 (R316H); e uma substituição de treonina (T) no lugar da alanina residual do tipo selvagem (A) na posição de aminoácido 317 da SEQ ID NO: 1 (A317T).

[0165] Em uma forma de realização, o TRβ mutante compreende uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de TRβ mutante tendo uma ou mais mutações nas posições de aminoácido 234, 243, 316, e 317 da SEQ ID NO: 1. Uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de TRβ mutante ou um fragmento de peptídeo que é característico do polipeptídeo de TRβ mutante pode ser detectada usando qualquer método adequado. Por exemplo, uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de TRβ mutante pode ser detectada usando ressequenciamento de genoma integral ou ressequenciamento de região alvo (este também conhecido como ressequenciamento alvejado) usando fontes adequadamente selecionadas de iniciadores de DNA e reação em cadeia de polimerase (PCR) de acordo com métodos bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Bentley (2006) Curr Opin Genet Dev. 16:545 - 52, e Li et al. (2009) Genome Res 19:1124 - 32. O método tipicamente e geralmente impõe as etapas de purificação de DNA genômico, amplificação de PCR para ampliar a região de interesse, sequenciamento de ciclo, limpeza da reação de sequenciamento, eletroforese capilar, e análise de dados. Iniciadores de PCR de alta qualidade para cobrir a região de interesse são projetados usando ferramentas de projeto de iniciador in silico. O sequenciamento de ciclo é um método simples em que rodadas sucessivas de desnaturação, recozimento, e extensão em um termociclador resultam em ampliação linear dos produtos de extensão. Os produtos são tipicamente terminados com um rótulo fluorescente que identifica a base de nucleotídeo terminal como G, A, T, ou C. Terminadores de corante não incorporado e sais que podem competir por injeção eletroforética capilar são removidos por lavagem. Durante a eletroforese capilar, os produtos da reação de sequenciamento de ciclo migram através dos capilares cheios com polímero. Os fragmentos de DNA negativamente carregados são separados por tamanho conforme eles se movem através dos capilares para o eletrodo positivo. Depois da eletroforese, o programa de coleta de dados cria um arquivo de amostra dos dados brutos. Usando aplicações de programa a jusante, outra análise de dados é realizada para traduzir as imagens de dados de cor coletadas nas bases de nucleotídeo correspondentes. Alternativamente ou além disso, o método pode incluir o uso de captura e/ou sequenciamento de DNA genômico de região alvejada com base em microarranjo. Kits, reagentes, e métodos para selecionar iniciadores de PCR apropriados e realizar ressequenciamento estão comercialmente disponíveis, por exemplo, da Applied Biosystems, Agilent, e NimbleGen (Roche Diagnostics GmbH). Para o uso na presente invenção, iniciadores de PCR podem ser selecionados de modo a ampliar, por exemplo, pelo menos uma porção relevante de uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de TRβ mutante tendo uma ou mais mutações nas posições de aminoácido 234, 243, 316, e 317 da SEQ ID NO: 1.

[0166] Alternativamente ou além disso, uma sequência de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo de TRβ mutante pode ser detectada usando um Southern blot de acordo com métodos bem conhecidos na técnica.

[0167] Em certas formas de realização, os métodos da invenção compreendem a etapa de realizar um ensaio para detectar um mutante de TRβ em uma amostra de um indivíduo. Como usado aqui, uma “amostra de um indivíduo” refere-se a qualquer amostra adequada contendo células ou componentes de células obtidos ou derivados de um indivíduo. Em uma forma de realização a amostra é uma amostra de sangue. Em uma forma de realização a amostra é uma amostra de biópsia obtida, por exemplo, da glândula tireoide.

[0168] A divulgação também fornece um complexo de ligando-TRβ mutante compreendendo: um polipeptídeo de TRβ mutante e um composto da Fórmula (IV). Por exemplo, o polipeptídeo de TRβ mutante formando o complexo compreende uma ou mais mutações nas posições de aminoácido 234, 243, 316, e 317 da SEQ ID NO: 1. Por exemplo, o composto formando o complexo é o Composto A.

[0169] Além disso, a divulgação fornece um complexo de iniciador-ácido nucleico compreendendo: uma sequência de ácido nucleico de TRβ mutante, e um iniciador de PCR que é complementar à sequência de ácido nucleico de TRβ mutante, em que a sequência de ácido nucleico mutante compreende uma mutação de gene EZH2 em uma sequência de ácido nucleico como definido na SEQ ID NO: 2.

[0170] Todas as patentes, pedidos de patente, e publicações mencionados aqui são por meio desta incorporados por referência em suas totalidades. Entretanto, onde uma patente, pedido de patente, ou publicação contendo definições claras são incorporados por referência, aquelas definições claras devem ser entendidos como aplicando-se à patente, pedido de patente, ou publicação incorporados em que elas são encontradas, e não ao restante do texto deste pedido, em particular as reivindicações deste pedido.

[0171] Deve ser entendido que embora a invenção tenha sido descrita em combinação com as formas de realização específicas preferidas desta, que a descrição precedente assim como os exemplos que seguem, são intencionados a ilustrar e não limitar o escopo da invenção. Será entendido por aqueles habilitados na técnica que várias mudanças podem ser feitas e equivalentes podem ser substituídos sem divergir do escopo da invenção, e ainda que outros aspectos, vantagens e modificações estarão evidentes àqueles habilitados na técnica à qual a invenção pertence.

[0172] Todas as porcentagens e razões usadas aqui, a menos que de outro modo indicado, são em peso. Outras características e vantagens da presente invenção estão evidentes a partir dos exemplos diferentes. Os exemplos fornecidos ilustram diferentes componentes e metodologia úteis em praticar a presente invenção. Os exemplos não limitam a invenção reivindicada. Com base na presente divulgação o técnico habilitado pode identificar e utilizar outros componentes e metodologia úteis para praticar a presente invenção.

EXEMPLOS

[0173] A menos que de outro modo especificado, os instrumentos e parâmetros analíticos usados para os compostos descritos nos Exemplos são como segue: Os dados de XRPD foram coletados em Difratômetro de Pó de Raio X (CubiX- Pro XRD) com radiação Cu Kα (45 kV, 40 mA) de 3 a 45 graus 2-teta (2θ) em uma taxa de varredura de 0,12 graus/min e tamanho da etapa de 0,020 graus.

[0174] A amostra foi colocada em recipientes de amostra ultra-micro de retorno zero de Si. A análise foi realizada usando um largura irradiada de 10 mm e os parâmetros seguintes foram ajustados dentro do hardware/software: Tubo de raio X: Cu KV, 45 kV, 40 mA Detector: X’Celerator Ranhura primária de ASS: 1° fixo Ranhura de Divergência (Prog): Automática - comprimento irradiado de 5 mm Ranhuras de Soller: 0,02 radiano Ranhura de Dispersão (PASS): Automática - comprimento observado de 5 mm Faixa de varredura: 3,0 a 45,0° Modo de varredura: Contínuo Tamanho da Etapa: 0,02° Tempo por Etapa: 10 s Comprimento ativo: 2,54°

[0175] A seguir da análise os dados foram convertidos de ranhuras ajustáveis a fixas usando o software X’Pert HighScore Plus com os parâmetros seguintes: Tamanho da ranhura de divergência fixa: 1,00°, 1,59 mm Ponto de Cruzamento: 44,3 °Omega

[0176] Nos Exemplos descritos abaixo, a menos que de outro modo especificado, o Composto 4 é o composto protegido de benzoíla. Exemplo 1: Preparação de N-(3,5-dicloro-4-((6-oxo-1,6-diidropiridazin-3- il)óxi)fenil)benzamida (Composto 4 onde R2 é benzoíla)

[0177] Um frasco de fundo redondo, de três bocas, de 1 L equipado com agitação suspensa, um termopar, condensador de refluxo, e entrada/saída de N2 foi carregado com 3,6-dicloropiridazina (100 g, 0,672 mol, 1 em peso), 4-amino-2,6- diclorofenol (122 g, 0,686 mol, 1,02 equiv), e DMAC (500 mL, 5 vol). A solução resultante foi carregada com carbonato de césio (251 g, 0,771 mol, 1,15 equiv) e a suspensão foi aquecida até 110 °C. Depois de 3 h nesta temperatura, a temperatura do lote foi diminuída para 70 °C e agitou-se nesta temperatura por 16 h. A análise de 1H RMN (DMSO) mostrou que quase toda a dicloropiridazina foi consumida e a reação foi julgada completa. O lote foi resfriado até a temperatura ambiente e transferido para um frasco de fundo redondo, de 3 L com a ajuda de EtOAc (2 L, 20 vol). Gel de sílica (100 g, 1 em peso) foi adicionado e a suspensão foi agitada por 30 min e filtrada. O reator e a torta foram enxaguados com EtOAc (500 mL, 5 vol) até que o filtrado fosse eluído incolor. O filtrado resultante foi tratado com NaCl aquoso a 10 % (2 L, 20 vol), a mistura bifásica foi agitada por 30 min, e a camada aquosa inferior foi descartada. A camada orgânica superior foi concentrada à secura sob pressão reduzida. EtOAc (100 mL, 1 vol) foi adicionado ao resíduo e concentrado à secura sob pressão reduzida para fornecer o composto 2 bruto (251 g, 128 % de rendimento) como um óleo. A análise de HPLC mostrou uma pureza de 93,4 %. A análise de 1H RMN (DMSO) foi compatível com a estrutura designada e mostrou ;-25 % de DMAC e 2 % de EtOAc presentes.

[0178] Outras condições para sintetizar o Composto 2 são descritas nas tabelas 1 a 3 abaixo. Tabela 1. Sumário dos Parâmetros de Reação para o Composto 2

Tabela 2. Sumário dos Parâmetros de Reação para o Composto 2

Tabela 3. Sumário dos Parâmetros de Reação para o Composto 2 (todas as reações são em DMAC)

[0179] O 2 bruto acima foi absorvido em ácido acético (1,48 L, 7,5 vol) e anidrido benzoico (168 g, 0,741 mol, 1,1 equiv) foi adicionado. A mistura resultante foi aquecida até 100 °C e depois de 35 min nesta temperatura, a quantidade de 2 foi 0,8 %. Acetato de sódio (110 g, 2 equiv) foi adicionado e a temperatura aumentada para 110 °C. Depois de 14,5 h nesta temperatura, a análise de HPLC da mistura de reação não mostrou nenhum intermediário remanescente, e a reação foi julgada completa. O lote foi resfriado até 75 °C e água (1,5 L, 7,7 vol) foi adicionada durante um período de 1 hora enquanto mantendo uma temperatura do lote entre 72 a 75 °C. O lote foi resfriado até 21 °C e filtrado através de papel de filtro Sharkskin. O reator e a torta foram lavados sequencialmente com água (1 L, 5 vol). Depois de secar o sólido coletado em um forno a vácuo a 50 °C por 16 h, o rendimento do 4 bruto foi 195 g (77 %). A análise de HPLC (Método B, 220 nm) mostrou uma pureza de 91,6 %. Método de HPLC B: Coluna: Waters Sunfire C18, 3,5 μM, 4,6 * 150 mm Taxa de fluxo: 1,0 mL/min. Fase móvel A: 0,05 % de TFA em água Fase móvel B: 0,05 % de TFA em H2O Diluente: MeCN/H2O a 50:50

[0180] A análise de 1H RMN (DMSO) foi compatível com a estrutura designada e indicou um teor de ácido acético de 1 %. Cloreto de benzoíla também foi usado para a proteção ao invés de anidrido benzoico. Quando cloreto de benzoíla foi usado, bases tais como carbonato de césio ou carbonato de potássio foram usadas e a reação foi realizada na temperatura ambiente.

[0181] Outras condições para sintetizar o Composto 4 são descritas nas tabelas 4 e 5 abaixo. Tabela 4. Proteção/hidrólise do Composto 2 (Rendimentos Relatados a partir de Int. 1) (grupo de proteção de benzoíla)

Tabela 5. Sumário dos Parâmetros de Reação para o Composto 4 (grupo de proteção de acetato)

[0182] Purificação do Composto 4: Um frasco de fundo redondo, de três bocas, de 5 L equipado com agitação suspensa, um termopar, condensador de refluxo, e entrada/saída de N2 foi carregado com o 4 bruto (100 g, 1 em peso) e ácido acético (2 L, 20 vol). A pasta fluida foi agitada e aquecida até 95 °C, e a dissolução ocorreu. Água (2 L, 20 vol) foi adicionada durante um período de 2,75 h enquanto mantendo uma temperatura do lote de ;-95 °C, e a precipitação ocorreu. A pasta fluida resultante foi aquecida a 95 °C por 30 min adicionais antes que o aquecimento fosse removido. Depois que o lote atingiu a temperatura ambiente, ele foi agitado nesta temperatura durante a noite para conveniência e filtrado através de papel de filtro Sharkskin. O reator e a torta foram enxaguados sequencialmente com água (1 L, 10 vol). O sólido branco coletado foi seco em um forno a vácuo a 40 °C a um peso constante de 91 g (91 %). A análise de HPLC do sólido seco mostrou uma pureza de 98,0 %. A análise de 1H RMN (DMSO) foi compatível com a estrutura designada e mostrou um teor de ácido acético de 0,3 %. A Tabela 6 abaixo lista outras condições para purificar o Composto 4. Tabela 6 Purificação do Composto 4 (R2=Bz)

Exemplo 2: Preparação de 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4-isopropilpiridazin- 3(2H)-ona (Int. 7)

[0183] Um frasco de fundo redondo, de quatro bocas, de 4 L equipado com agitação suspensa, um termopar, entrada/saída de N2, e um condensador de refluxo foi carregado com 4 (95 g, 0,253 mol, 1 em peso), THF (665 mL, 7 vol), e LiCl (32,3 g, 0,759 mol, 3 equiv). A suspensão resultante foi aquecida até 35 °C, e solução de brometo de isopropenilmagnésio (0,5 M em THF, 1,72 L, 0,859 mol, 3,4 equiv) foi adicionada durante um período de 80 min enquanto mantendo uma temperatura do lote entre 35 e 45 °C. Depois de aquecer a pasta fluida resultante a 40 °C por 3 h, a análise de HPLC mostrou uma conversão de 87 %). Solução de brometo de isopropenilmagnésio adicional (0,5 M em THF, 51 mL, 0,026 mol, 0,1 equiv) foi adicionada e a pasta fluida foi agitada a 40 a 43 °C por 90 min adicionais. A análise de HPLC mostrou uma conversão de 92,9 % e a reação foi julgada completa. O aquecimento foi removido, a mistura de reação foi resfriada até 14 °C, e HCl aquoso 3 N (380 mL, 4 vol) foi adicionado lentamente durante 15 min enquanto mantendo uma temperatura do lote abaixo de 26 °C, depois do tempo este que todos os sólidos dissolveram. A camada aquosa inferior foi removida e extraída com THF (350 mL, 3,7 vol). Depois de remover a camada aquosa inferior, as camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida até aproximadamente 5 vol com respeito a 4. A solução resultante foi carregada com KOH aquoso a 10 % (p/p) (532 mL, 5,6 vol), e a mistura foi aquecida até 85 °C enquanto separando-se por destilação THF usando um aparelho de destilação de caminho curto. O lote foi mantido a 85 °C por 11 h, e o aquecimento foi removido. O lote foi resfriado até a temperatura ambiente durante a noite para conveniência. A análise de HPLC (Método A abaixo) da pasta fluida resultante mostrou uma conversão de 99 % para Int. 7 e a reação foi julgada completa. Método de HPLC A Coluna: Waters Sunfire C18, 3,5 μM, 4,6 * 150 mm Taxa de fluxo: 1,0 mL/min. Fase móvel A: 0,05 % de TFA em água Fase móvel B: 0,05 % de TFA em H2O Diluente: 50:50 MeCN/H2O

[0184] A temperatura do lote foi ajustada para 48 °C e HCl aquoso 3 N (152 mL, 1,6 vol) foi adicionado durante 35 min para ajustar o pH para 7,5 a 8,0 enquanto mantendo uma temperatura do lote de 46 a 48 °C. O aquecimento foi removido e a pasta fluida foi resfriada até 30 °C. A análise de 1H RMN (DMSO) mostrou uma razão em mol de Int. 7/THF de 1,0:0,22 (Ligação 14). O lote foi filtrado a 30 °C através de papel de filtro Sharkskin e o reator e a torta foram lavados com água (475 mL, 5 vol) sequencialmente. O sólido bege Int. 7 foi seco em um forno a vácuo a 40 °C a um peso constante de 81,6 g (102 % de rendimento). A análise de Karl Fischer indicou um teor de água de 0,8 %. 1H RMN (DMSO) foi compatível com a estrutura designada e indicou um teor de THF de 0,4 %. A análise de HPLC mostrou uma pureza de 92,6 %. As Tabelas 7 a 10 abaixo fornecem sumários de parâmetros de reação para produzir o Int. 7. Tabela 7 Sumário de Rodadas de Isopropenilação de Grignard

Tabela 8 Sumário de Rodadas de Isopropilação de Grignard

Tabela 9 Sumário da Oxidação de Bromo do Composto de Piridazinona 5

Tabela 10 Sumário da Desproteção do Composto 6 para obter Int. 7

[0185] Exemplo 3: Preparação de (2-ciano-2-(2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6- oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)hidrazono)acetil)carbamato de (Z)-etila (Int. 8)

[0186] Um frasco de fundo redondo, de três bocas, de 2 L equipado com agitação suspensa, um termopar, entrada/saída de N2 foi carregado com Int. 7 (75,0 g, 0,239 mol, 1 em peso), ácido acético (600 mL, 8 vol), água (150 mL, 2 vol), e HCl concentrado (71,3 mL, 0,95 vol). A pasta fluida fina resultante foi resfriada até 6 °C e uma solução de NaNO2 (16,8 g, 0,243 mol, 1,02 equiv) em água (37,5 mL, 0,5 vol) foi adicionada durante um período de 10 min enquanto mantendo uma temperatura do lote abaixo de 10 °C. Depois de um adicional de 10 min de agitação entre 5 e 10 °C, a análise de HPLC mostrou conversão completa de Int. 7 ao intermediário de diazônio. Uma solução de NaOAc (54,5 g, 0,664 mol, 2,78 equiv) em água (225 mL, 3 vol) foi adicionada durante um período de 6 min enquanto mantendo uma temperatura do lote abaixo de 10 °C. N-cianoacetiluretano (37,9 g, 0,243 mol, 1,02 equiv) foi imediatamente adicionado, o resfriamento foi removido, e o lote naturalmente aquecido até 8 °C durante 35 min. A análise de HPLC mostrou consumo completo do intermediário de diazônio e a reação foi julgada completa. O lote aqueceu naturalmente até 21 °C e foi filtrado através de papel de filtro Sharkskin. O reator e a torta foram lavados sequencialmente com água (375 mL, 5 vol) duas vezes. O sólido laranja coletado foi seco em um forno a vácuo a 35 °C por 64 h para fornecer o Int. bruto 8 (104,8 g, 91 %).

[0187] Um frasco de fundo redondo, de três bocas, de 1 L equipado com agitação suspensa, um termopar, e entrada/saída de N2 foi carregado com Int. bruto 8 (104,4 g, 1 em peso) e ácido acético (522 mL, 5 vol). A pasta fluida resultante foi aquecida até 50 °C e mantida nesta temperatura por 1,5 h. O lote resfriado naturalmente até 25 °C durante 2 h e foi filtrado através de papel de filtro Sharkskin. O reator e a torta foram lavados sequencialmente com água (522 mL, 5 vol) e a torta condicionada sob vácuo por 1,75 h. O sólido laranja claro foi seco até o peso constante em um forno a vácuo a 40 °C para fornecer 89,9 g (78 % de Int. 7) do produto desejado. 1H RMN (DMSO) foi compatível com a estrutura designada.

[0188] Exemplo 4: Preparação de 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6- diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila (Composto A)

[0189] Um frasco de fundo redondo, de três bocas, de 2 L equipado com agitação suspensa, um termopar, entrada/saída de N2, e condensador de refluxo foi carregado com Int. 8 (89,3 g, 0,185 mol, 1 em peso), DMAC (446 mL, 5 vol), e KOAc (20,0 g, 0,204 mol, 1,1 equiv). A mistura foi aquecida até 120 °C e mantida nesta temperatura por 2 h. A análise de HPLC mostrou conversão completa ao Composto A. A temperatura do lote foi ajustada para 18 °C durante 1 h, e ácido acético (22,3 mL, 0,25 vol) foi adicionado. A temperatura do lote foi ajustada para 8 °C, e água (714 mL, 8 vol) foi adicionada durante 1 h; uma pasta fluida laranja formou-se. O lote foi filtrado através de papel de filtro Sharkskin e a torta foi deixada condicionar durante a noite sob N2 sem vácuo para conveniência. Uma solução pré-misturada de acetona/água 1:1 (445 mL, 5 vol) foi carregada ao frasco e adicionada à torta como um enxágue com vácuo aplicado. Depois de 2 h de condicionar a torta sob vácuo, ela foi transferida para um frasco de fundo redondo, de três bocas, de 1 L limpo equipado com agitação suspensa, um termopar, e entrada/saída de N2. Etanol (357 mL, 4 vol) e acetona (357 mL, 4 vol) foram carregados e a pasta fluida resultante foi aquecida até 60 °C; a dissolução ocorreu. Água (890 mL, 10 vol) foi adicionada durante um período de 90 min enquanto mantendo uma temperatura do lote entre 55 e 60 °C. A pasta fluida resultante foi deixada resfriar até 25 °C e filtrada através de papel de filtro Sharkskin. O reator e a torta foram lavados sequencialmente com uma solução de EtOH/água a 1:1 (446 mL, 5 vol). A torta foi condicionada durante a noite sob N2 sem vácuo para conveniência. As fendas na torta foram alisadas e vácuo aplicado. A torta foi lavada com água (179 mL, 2 vol) e seca em um forno a vácuo a 45 °C a um peso constante de 70,5 g (87 %, composto bruto A). A análise de HPLC mostrou uma pureza de 94,8 %.

[0190] Um frasco de fundo redondo, de três bocas, de 500 ml equipado com agitação suspensa, um termopar, entrada/saída de N2, e condensador de refluxo foi carregado com composto bruto A (70,0 g) e MIBK (350 mL, 5 vol). A pasta fluida laranja foi aquecida até 50 °C e mantida nesta temperatura por 2 h. O lote resfriado naturalmente até 23 °C e foi filtrado através de papel de filtro Sharkskin. O reator e a torta foram lavados sequencialmente com MIBK (35 mL, 0,5 vol) duas vezes. Os coletados sólidos foram secos em um forno a vácuo a 45 °C a um peso constante de 58,5 g (84 %). Este sólido foi carregado a um frasco de fundo redondo, de três bocas, de 500 ml equipado com agitação suspensa, um termopar, entrada/saída de N2, e condensador de refluxo. Etanol (290 mL, 5 vol) foi adicionado e a pasta fluida foi aquecida até o refluxo. Depois de 3,5 h no refluxo, XRPD mostrou que o sólido foi compatível com a Forma I, e o aquecimento foi removido. Em atingir 25 °C, o lote foi filtrado através de papel de filtro, e o reator e a torta foram lavados sequencialmente com EtOH (174 mL, 3 vol). O composto sólido marrom claro A foi seco em um forno a vácuo a 40 °C a um peso constante de 50,4 g (87 %, 64 % de Int. 8). A análise de HPLC mostrou uma pureza de 99,1 %. 1H RMN (DMSO) foi compatível com a estrutura designada.

[0191] Exemplo 5: Preparação aumentada em escala de 2-(3,5-dicloro-4-((5- isopropil-6-oxo-1,6-diidropiridazin-3-il)óxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4- triazina-6-carbonitrila (Composto A)

[0192] Um lote de escala maior de Composto A foi sintetizado de acordo com o esquema abaixo. As condições no esquema abaixo são similares àquelas descritas nos exemplos 1 a 4 acima.

[0193] Síntese de 4: Um vaso de vidro revestido de 50 L (purgado com N2) foi carregado com 3,6-dicloropiridazina (2,00 kg), 4-amino-2,6-diclorofenol (2,44 kg) e N,N-dimetilacetamida (10,0 L). O lote foi purgado com vácuo (26 inHg)/nitrogênio (1 PSIG) 3 vezes. Carbonato de césio (5,03 kg) foi adicionado e a temperatura do lote foi ajustada de 22,3 °C a 65,0 °C durante 3,5 horas. O lote foi mantido a 65,0 °C por 20 horas. Neste ponto, a análise de 1H RMN indicou 3,34 % de 3,6-dicloropiridazina em relação a 2. A temperatura do lote foi ajustada para 21,5 °C e acetato de etila (4,00 L) foi adicionado ao lote. O lote foi agitado por 10 minutos e depois filtrado através de um filtro Nutsche de 18” equipado com pano de filtro de polipropileno. A filtração durou 15 minutos. Acetato de etila (5,34 L) foi carregado ao vaso e transferido para o filtro como um enxágue. O lote depois foi manualmente recolocado em suspensão no filtro antes de reaplicar vácuo. Este processo foi repetido 2 vezes mais e a torta do filtro foi condicionada por 10 minutos. O filtrado foi carregado a um vaso de 100 L que continha (16,0 L) de um cloreto de sódio a 15 % previamente preparado em H2O. O lote foi agitado por 5 minutos e depois deixado separar por 35 minutos. A interface não foi visível, de modo que os 23 L calculados da fase aquosa inferior fossem removidos. 16,0 L de cloreto de sódio a 15 % em H2O foram adicionados ao lote. O lote foi agitado por 6 minutos e depois deixado separar por 7 minutos. A interface foi visível em ~19 L e a fase aquosa inferior foi removida. 17,0 L de cloreto de sódio a 15 % em H2O foram adicionados ao lote. O lote foi agitado por 7 minutos e depois deixado separar por 11 minutos. A fase aquosa inferior foi removida. O vaso foi ajustado para destilação a vácuo e o lote foi concentrado de 17,0 L a 8,0 L durante 2 horas e 20 minutos com a temperatura do lote mantida em torno de 21 °C. Anidrido benzoico (3,19 kg) e ácido acético (18,0 L) foram carregados ao vaso. O vaso foi ajustado para destilação a vácuo e o lote foi concentrado de 28,0 L a 12,0 L durante 2 dias (durante a noite mantido a 20 °C) com a temperatura do lote mantida entre 20 e 55 °C. Neste ponto, a análise de 1H RMN indicou uma razão em mol de ácido acético para acetato de etila de 1,0:0,015. Ácido acético (4,0 L) foi carregado ao lote e o lote foi destilado a 12 L. A análise de 1H RMN indicou uma razão em mol de ácido acético para acetato de etila de 1,0:0,0036. Ácido acético (20,0 L) foi carregado ao lote e a temperatura do lote foi ajustada para 70,0 °C. O lote foi experimentado para análise de HPLC e 2 foi 0,16 %. Acetato de sódio (2,20 kg) foi adicionado ao lote e a temperatura do lote foi ajustada de 72,4 °C a 110,0 °C. Depois de 18,5 horas, a análise de HPLC indicou nenhum Int. B detectado. A temperatura do lote foi ajustada de 111,3 a 74,7 °C e água DI (30,0 L) foi adicionada ao lote durante 2 horas. A temperatura do lote foi ajustada para 20,5 °C e depois filtrada usando um filtro Haselloy Nutsche de 24” equipado com pano de filtro de polipropileno. Uma solução previamente preparada de ácido acético a 1:1 em H2O DI (10,0 L) foi carregado ao vaso e agitada por 5 minutos. A lavagem foi transferida para o filtro e o lote depois foi manualmente recolocado em suspensão no filtro antes de reaplicar vácuo. H2O DI (10,0 L) foi carregada ao vaso e depois transferida para o filtro. O lote foi manualmente recolocado em suspensão no filtro antes de reaplicar vácuo. H2O DI (10,0 L) foi carregada diretamente ao filtro e o lote depois foi manualmente recolocado em suspensão no filtro antes de reaplicar vácuo. A torta do filtro foi deixada condicionar por 18 horas para fornecer 14,4 kg de 4. A análise de HPLC indicou uma pureza de 93,7 %. Esta torta úmida foi carregada adiante na purificação. Um vaso de vidro revestido de 100 L (purgado com N2) foi carregado com 4 bruto (torta úmida de 14,42 kg), ácido acético (48,8 L) e o agitador foi iniciado. H2O DI (1,74 L) foi carregada. A temperatura do lote (uma pasta fluida) foi ajustada de 18,1 a 100,1 °C durante 4,25 horas. O lote foi mantido a 100,1 a 106,1 °C por 1 hora e depois ajustado para 73,1 °C. H2O DI (28,0 L) foi adicionada ao lote durante 1 hora mantendo a temperatura do lote entre 73,1 e 70,3 °C. A temperatura do lote foi ajustada ainda de 70,3 °C a 25,0 °C durante a noite. O lote foi filtrado usando um filtro Hastelloy Nutsche de 24” equipado com pano de filtro de polipropileno. A filtração durou 13 minutos. Uma solução de H2O DI (9,00 L) e ácido acético (11,0 L) foi preparada e adicionada ao vaso de 100 L. A mistura foi agitada por 5 minutos e depois transferida para a torta do filtro. H2O DI (20,0 L) foi carregada ao vaso, agitada por 6 minutos e depois transferida para a torta do filtro. H2O DI (20,0 L) foi carregada ao vaso, agitada por 9 minutos e depois transferida para a torta do filtro. O lote foi deixado condicionar por 3 dias e depois transferido para bandejas de secagem para secagem em forno a vácuo. Depois de 3 dias a 50 °C e 28”/Hg, o lote forneceu um rendimento de 74 % (3,7 kg) de 4 como um sólido branco amarelado. O espectro de 1H RMN foi compatível com a estrutura designada, a análise de HPLC indicou uma pureza de 98,87 % e a análise de KF indicou 0,14 % de H2O.

[0194] Síntese de Int. 7: Um vaso de vidro revestido de 100 L (purgado com N2) foi carregado com tetraidrofurano (44,4 L). O agitador foi iniciado (125 RPM) e 4 (3,67 kg) foi carregado seguido por cloreto de lítio (1,26 kg). A temperatura do lote foi observada como sendo 26,7 °C e foi uma solução âmbar. Solução a 1,64 molar de brometo de isopropenilmagnésio em 2-metil THF (21,29 kg) foi adicionada durante 2 1/2 horas mantendo o lote entre 24,3 e 33,6 °C. O lote foi agitado a 24,5 °C por 17 horas ponto este em que a análise de HPLC indicou 9 % de 4. Um segundo vaso de vidro revestido de 100 L (purgado com N2) foi carregado com cloreto de hidrogênio 3 N (18,3 L). O lote foi transferido para o vaso contendo o HCl 3 N durante 25 minutos mantendo a temperatura do lote entre 20 e 46 °C. Uma solução bifásica foi observada. O lote extinto foi transferido novamente para o primeiro vaso de 100 L para extinguir a quantidade pequena de resíduo deixado para trás. THF (2,00 L) foi usado como um enxágue. A temperatura do lote foi observada como sendo 40,9 ° C e foi agitada em 318 RPM por 45 minutos. A temperatura do lote foi ajustada para 21,8 ° C e as camadas foram deixadas separar. A separação durou 10 minutos. A fase aquosa inferior foi removida (~26,0 L). Uma solução de cloreto de sódio (1,56 kg) em água DI (14,0 L) foi preparada e adicionada ao lote. Esta foi agitada em 318 RPM por 10 minutos e o agitador foi interrompido. A separação durou 3 minutos. A fase aquosa inferior foi removida (~16,0 L). O lote foi destilado a vácuo de 58,0 L para 18,4 L usando ~24”/Hg e uma temperatura da camisa de 50 a 55 °C. Uma solução de hidróxido de potássio (2,30 kg) em água DI (20,7 L) foi preparada em um frasco de fundo redondo de 72 L. O vaso foi ajustado para destilação atmosférica usando 2 cabeças de destilação e o lote foi transferido para o vaso de 72 L. THF (0,75 L) foi usado como um enxágue. O volume do lote foi ~41,0 L, a temperatura foi ajustada para 64,1 °C e a destilação iniciou com a ajuda de uma varredura de N2. O aquecimento foi continuado para conduzir a temperatura do lote até 85,4 °C enquanto destilando ponto este em que o vaso de 72 L foi ajustado para o refluxo (volume do lote foi cerca de 28,0 L no final da destilação). O lote foi mantido a 85 °C por 13 horas ponto este em que a análise de HPLC indicou 0,3 % de composto 6A. O aquecimento foi interrompido e o lote foi transferido para um vaso de vidro revestido de 100 L. Sólidos foram observados. A temperatura do lote foi ajustada de 70,6 °C para 56,7 °C. Uma solução previamente preparada de carbonato de hidrogênio sódico (2,82 kg) em água DI (35,0 L) foi adicionada durante 80 minutos mantendo a temperatura do lote entre 56,7 e 46,7 °C. O pH do lote no final da adição foi 9,8. O lote foi mantido a 46,7 a 49,0 °C por 40 minutos e depois resfriado até 25,0 °C. O lote foi filtrado usando um filtro Nutsche de aço inoxidável de 18”. Água DI (18,4 L) foi carregada ao vaso e transferida para o filtro. A torta do filtro foi manualmente recolocada em suspensão no filtro e depois os líquidos foram removidos. Este processo foi repetido mais uma vez e a torta do filtro foi de 3” de espessura. A torta do filtro foi condicionada no filtro por 3 dias, foi transferida para bandejas de secagem e seca em um forno a vácuo a 45 °C a fornecer 2,93 kg de Int. 7 (95 % de rendimento) com uma pureza de HPLC de 87,6 %.

[0195] Síntese de Int. 8: Um vaso de vidro revestido de 100 L (purgado com N2 e perpendicular a um depurador cáustico) foi carregado com ácido ácido (13,0 L). Int. 7 (2,85 kg) foi carregado ao vaso e o agitador foi iniciado. N-Cianoacetiluretano (1,56 kg) e água DI (5,70 L) foram carregados ao vaso. A temperatura do lote foi ajustada de 17,0 °C a 5,5 °C e uma pasta fluida fina foi observada. Neste ponto cloreto de hidrogênio a 37 % (2,70 L) foi adicionado durante 10 minutos mantendo a temperatura do lote entre 4,8 °C e 8,8 °C. Uma solução previamente preparada de nitrito de sódio (638 g) em água DI (1,42 L) foi adicionada durante 26 minutos mantendo a temperatura do lote entre 5,8 °C e 8,7 °C. Um gás marrom foi observado no espaço de topo do vaso durante a adição. A análise de HPLC não indicou nenhum Int. 7 detectado. Neste ponto uma solução previamente preparada de acetato de sódio (2,07 kg) em água DI (8,50 L) foi adicionada durante 47 minutos mantendo a temperatura do lote entre 5,5 °C e 9,5 °C. Depois da adição, uma camada fina de resíduo laranja foi observada na parede do vaso exatamente acima do nível do lote. A temperatura do lote foi ajustada de 9,4 °C a 24,5 °C e mantida a 25 °C (± 5 °C) por 12 horas. O lote foi filtrado usando um filtro Hastelloy Nutsche de 24” equipado com pano de filtro de polipropileno de trama justa. A filtração durou 30 minutos. O vaso foi enxaguado com 14,3 L de um ácido ácido/água DI a 1:1. O resíduo laranja no reator foi removido por lavagem com o enxágue. O enxágue foi transferido para o filtro onde o lote foi manualmente recolocado em suspensão. Vácuo foi reaplicado para remover a lavagem. Uma segunda lavagem com ácido ácido/água DI a 1:1 foi realizada como acima e o lote foi condicionado no filtro por 26 horas. A análise de HPLC da torta do filtro úmida indicou que a pureza foi 90,4 %. O lote foi seco a um peso constante de 3,97 kg (91 % de rendimento) em um forno a vácuo a 45 °C e 28”/Hg. Preparação do Composto A Solvato de DMAC

[0196] Um vaso de vidro, revestido, de 100 L purgado com N2 foi carregado com Int. 8 (3,90 kg) e acetato de potássio (875 g). N,N-dimetilacetamida (DMAC, 18,3 L) foi carregado ao vaso e o agitador foi iniciado. A temperatura do lote foi ajustada para 115 °C durante 2 h. Depois de 2 h a 115 °C, o lote foi experimentado e a análise de HPLC indicou que 0,27 % de Int. 8 permaneceu. A temperatura do lote foi ajustada para 25,0 °C durante a noite. Ácido acético (975 mL) foi adicionado ao lote e o lote foi agitado ainda por 3 h. O lote foi transferido para um garrafão para ácidos e o vaso foi limpo por enxágue com 800 mL de DMAC. O lote foi transferido de volta para o 100 L vaso usando vácuo através de um filtro em linha de 10 μm e um enxágue com DMAC (1,15 L) foi usado. A filtração foi rápida no começo mas lenta no final, tampando o filtro. A temperatura do lote foi ajustada para 11,1 °C e água DI (35,1 L) foi adicionada durante 2 h e 20 min, mantendo a temperatura do lote entre 5 e 15 °C. O lote foi mantido por 1 h e filtrado, usando um filtro Nutsche de 18” equipado com pano de polipropileno de trama justa. A filtração durou 15 h. Uma lavagem com etanol/água DI a 1:1 (19,5 L) foi carregada ao vaso, resfriada a 10 °C, e transferida para a torta do filtro. A torta foi deixada condicionar sob N2 e vácuo por 8 h e transferida para bandejas de secagem. O lote foi seco em um forno a vácuo a 45 °C e 28”/Hg para fornecer 89 % de rendimento (3,77 kg) de solvato de DMAC do Composto A como um sólido laranja/marrom claro. O espectro de 1H RMN foi compatível com a estrutura designada e a análise de Karl Fischer indicou 0,49 % de H2O. XRPD indicou a forma esperada, isto é, solvato de DMAC do Composto A. Análise termogravimétrica (TGA) indicou 16 % de perda de peso. A análise de HPLC indicou uma pureza de 93,67 %. Preparação do Composto bruto A

[0197] Um vaso de vidro, revestido, de 100 L purgado com N2 foi carregado com o solvato de DMAC do Composto A (3,75 kg) e etanol (15,0 L). O agitador foi iniciado e acetona (15,0 L) foi adicionada. A temperatura do lote foi ajustada de 10,6 °C para 60,0 °C durante 1 h. Neste ponto, o lote estava em solução. Água DI foi adicionada ao lote durante 1,5 h, mantendo a temperatura do lote a 60 ± 5 °C. O lote foi mantido a 60 ± 5 °C por 1 h e resfriado até 23,5 °C. Um filtro Nutsche de 18” equipado com pano de polipropileno de trama justa (0,67 CFM) foi ajustado e o lote foi filtrado. A filtração durou 15 h. Uma lavagem com etanol/água DI a 1:1 (19,5 L) foi carregada ao vaso e transferida para a torta do filtro. A torta foi deixada condicionar sob N2 e vácuo por 8 h e transferida para bandejas de secagem. O lote foi seco em um forno a vácuo a 45 °C e 28”/Hg por cinco dias para fornecer um rendimento de 94 % (2,90 kg) do Composto A como um sólido castanho claro em pó. O espectro de 1H RMN é compatível com a estrutura designada e a análise de Karl Fischer indicou 6,6 % de H2O. XRPD indicou a forma esperada de diidrato. TGA indicou 6,7 % de perda de peso. A análise de HPLC indicou uma pureza de 96,4 % (AUC). Purificação do Composto bruto A

[0198] Um vaso de vidro, revestido, de 50 L purgado com N2 foi carregado com o Composto A bruto (2,90 kg) e metil isobutil cetona (14,5 L). O agitador foi iniciado e a temperatura do lote foi ajustada de 20,2 °C para 50,4 °C durante 1,5 h. O lote foi mantido a 50 °C (± 5 °C) por 1 h e resfriado até 20 a 25 °C. O lote foi mantido a 20 a 25 °C por 2,5 h. Um filtro Nutsche de 18” equipado com pano de polipropileno de trama justa (0,67 CFM) foi ajustado e o lote foi filtrado. A filtração durou 20 min. Metil isobutil cetona (MIBK, 1,45 L) foi carregado ao vaso e transferido para a torta do filtro. A torta foi manualmente recolocada em suspensão e os líquidos foram transferidos com vácuo. Metil isobutil cetona (2,90 L) foi carregado à torta do filtro e a torta foi manualmente recolocada em suspensão. Os líquidos foram transferidos com vácuo e a torta foi condicionada com vácuo e nitrogênio por 15 h. A torta do filtro secou em um disco de duro de 18” x 1 %” marrom claro. Esta foi manualmente fragmentada e conduzida através de moedores de café para fornecer um rendimento de 76 % (2,72 kg) de solvato de MIBK MGL-3196 como um sólido em pó, marrom claro. Nenhuma secagem em forno foi necessária. O espectro de 1H RMN foi compatível com a estrutura designada e a análise de Karl Fischer indicou <0,1 % de H2O. XRPD indicou a forma esperada solvato de MIBK. TGA indicou 17,3 % de perda de peso. A análise de HPLC indicou uma pureza de 98,5 %.

Exemplo 6: Conversão do Composto A para a forma I

[0199] O Composto A purificado (4802 g) como um solvato de MIBK a 1:1 que foi obtido de Int. 8 como descrito no exemplo 5 acima foi adicionado em um reator de 100 L, revestido junto com 24 litros de etanol. A pasta fluida resultante foi aquecida até 80 ± 5 °C (refluxo) durante 1 h e 25 min; a mistura foi agitada nesta temperatura por 4 h e 25 min. A análise dos sólidos filtrados em 2 h e 55 min indicou que a conversão da forma foi completa, com os espectros de XRPD conformando para a forma I. A mistura foi resfriada até 20 ± 5 °C durante 45 min e agitada nesta temperatura por 15 min. A pasta fluida foi filtrada e a torta do filtro foi lavada duas vezes com etanol pré-filtrado (2 x 4,8 L). A torta úmida (4,28 kg) foi seca sob vácuo a 40 ± 5 °C por 118 h para fornecer 3390 g da forma I do Composto A.

[0200] O estudo de Difração de Pó de raio X foi realizado em lotes diferentes da forma mórfica I do Composto A gerada pelo processo descrito acima. XRPD depois da micronização confirma a Forma 1.

[0201] Os dados para a Forma I são fornecidos na tabela 11 abaixo e os difratogramas da Forma I são fornecidos como a Fig. 1.

A Forma I foi descoberta ter um início de fusão em torno de 321 °C, seguido por decomposição na fusão por DSC (Figura 2).

Exemplo 7: Preparação da Forma I do Composto A: conversão do solvato do Composto A para a forma I

[0202] Um vaso de vidro, revestido, de 50 L purgado com N2 foi carregado com o solvato de MIBK do Composto A (2,72 kg) do Exemplo 5 acima e etanol (13,6 L). O agitador foi iniciado e a temperatura do lote foi ajustada de 16,8 °C para 79,4 °C durante 1,3 h. O lote foi mantido a 79,5 °C por 2 h e experimentado para análise de XRPD. XRPD indicou a Forma I, e o lote foi resfriado até 24,9 °C durante 1 h e 10 min. Um filtro Nutsche de 18” equipado com pano de polipropileno de trama justa (0,67 CFM) foi ajustado e o lote foi filtrado. A filtração durou 4 min. Etanol (2,8 L) foi carregado ao vaso e transferido para a torta do filtro. A torta foi manualmente recolocada em suspensão e os líquidos foram transferidos com vácuo. Etanol (2,80 L) foi carregado para a torta do filtro e a torta foi manualmente recolocada em suspensão. Os líquidos foram transferidos com vácuo e a torta foi condicionada com vácuo e nitrogênio por 1 h. A torta do filtro foi transferida para cadinhos de secagem e seca a 45 °C e 28”/Hg por um dia para fornecer um rendimento de 89 % (1,96 kg) de Composto A como um sólido amarelo claro. A análise de HPLC indicou uma pureza de 99,6 %. A análise de XRPD é compatível com a Forma I. A micronização de 300 g deste material em um moinho de jato de 2” forneceu 284 g (95 % de rendimento) de Composto A micronizado. A análise de XRPD confirmou que o Composto A micronizado permaneceu na Forma I.

[0203] O solvato de DMAC do Composto A pode ser convertido, por intermédio do diidrato e do solvato de MIBK, para a forma I como descrito no exemplo 7. Alternativamente, o solvato de DMAC foi convertido diretamente para a forma I em 75 % de rendimento (rendimento calculado a partir do Intermediário 8) aquecendo-o com 8 volumes de etanol a 80 °C por 2 horas seguido por resfriamento até a temperatura ambiente e filtração. Em uma outra reação, uma amostra do Composto A que foi uma mistura do solvato de DMAC e diidrato foi convertida para a forma I em 69 % de rendimento aquecendo-a com 8 volumes de MIBK a 80 °C seguido por resfriamento até a temperatura ambiente.

Modelagem da interação entre o Composto A e o receptor do hormônio da tireoide

[0204] Estruturas cristalinas foram obtidas do banco de dados de proteína de RCSB (números de ID: 1N46, 1NQ0, 1NQ1, 1NQ2 e 1NUO). As estruturas cocristalinas da proteína foram alinhadas usando MacPymol para Mac OS X (Copyright 2006 DeLano Scientific LLC.; agora um produto da Schrodinger Inc.) MacPymol também foi usado para toda a análise das interações de ligando-proteína e para apresentar as figuras 3 a 9. Estas figuras indicam que, geralmente, o Composto A é mais bem capaz de acomodar as variações estruturais nos mutantes de THRβ. Por exemplo, no mutante Arg316His, Arg316 é mutado a His e Arg320 é levemente afastado do ligando. Como um resultado, a interação específica entre Arg320 e T3 é menos ideal no mutante Arg316His. Em comparação, o heterociclo polarizável negativo grande no Composto A forma interações favoráveis que não são interrompidas pela mutação Arg316His. Em outras palavras, o Composto A, tendo um heterociclo mais polarizável, maior, mantém as interações favoráveis com Arg320 e His316 mutado. Ver, por exemplo, as Figuras 8 e 9. Os resultados são similares para outras mutações.

[0205] A tabela abaixo lista as propriedades bioquímicas de certos mutantes de TRβ. Outros mutantes e suas propriedades podem ser encontrados em por exemplo, M. Adams et al., J Clin Invest. 1994; 94(2): 506-515, B. R. Huber et al., Mol Endocrinol, 2003, 17(4):643-652; e B. R. Huber et al., Mol Endocrinol, 2003, 17(1):107- 116, os conteúdos de cada um dos quais são por meio desta incorporados por referência em suas totalidades.

EQUIVALENTES

[0206] A invenção pode ser incorporada em outras formas específicas sem divergir do espírito ou características essenciais desta. As formas de realização precedentes portanto devem ser consideradas em todos os respeitos como ilustrativas ao invés de limitantes na invenção descrita aqui. O escopo da invenção é assim indicado pelas reivindicações anexas ao invés de pela descrição precedente, e todas as mudanças que entram dentro do significado e faixa de equivalência das reivindicações são intencionadas como sendo incluídas nesta.

Claims

1. Processo sintético CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: (a) colocar R1MgX ou R1Li em contato com um composto da Fórmula (I):

para formar um composto da Fórmula (II):

na presença de uma base onde R1 é isopropenila, ou na presença de um agente oxidante onde R1 é isopropila.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda: (c), quando presente, remover o grupo de proteção de amina R2 do composto da Fórmula (III) para formar 6-(4-amino-2,6-diclorofenóxi)-4- isopropilpiridazina-3(2H)-ona.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a etapa (a) é realizada colocando em contato R1MgX com o composto da Fórmula (I), em que R1 é isopropenila e X é Br; ou a etapa (a) é realizada colocando em contato R1MgX com o composto da Fórmula (I), em que R1 é isopropila e X é Cl.

4. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o agente oxidante na etapa (b) é bromo e a etapa (b) é realizada na presença de um ácido.

5. Processo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que R2 é acetila ou benzoíla.

6. Processo, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende ainda: (d) converter 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiri- dazin-3(2H)-ona em 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-diiidropiridazin-3-il)oxi)fe- nil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetraidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrila (“Composto A”) colocando em contato 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona com (2-ciano- acetil)carbamato de etila e um nitrito metálico seguido por tratamento com acetato de potássio em DMAC.

7. Composto CARACTERIZADO pelo fato de que é selecionado a partir de:

8. Composto, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que possui a seguinte estrutura:

, ou um sal do mesmo.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que possui a seguinte estrutura:

, ou um sal do mesmo.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que possui a seguinte estrutura:

, ou um sal do mesmo.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que possui a seguinte estrutura:

, ou um sal do mesmo.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que possui a seguinte estrutura:

, ou um sal do mesmo.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato

, ou um sal do mesmo.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que possui a seguinte estrutura:

, ou um sal do mesmo.