BR112021013924A2 - Inibidores de pcsk9 e métodos de uso do mesmo - Google Patents

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BR112021013924A2
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Michael H. Serrano-Wu
Brian K. Hubbard
Virendar Kaushik
Doug Daniels
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Astrazeneca Ab
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Abstract

inibidores de pcsk9 e métodos de uso do mesmo. a presente invenção refere-se a um novo farmacóforo inibidor de pcsk9 e compostos heteroarila que se ligam à proteína pcsk9.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “INIBIDORES DE PCSK9 E MÉTODOS DE USO DO MESMO”.
PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido Provisório de Patente dos E.U.A. No. 62/794,239, depositado em 18 de janeiro, 2019, que é incorporado aqui por referência em sua totalidade.
ANTECEDENTES
[0002] PCSK9, também referida como “pró-proteína convertase subtilisina/quexina 9”, é um membro da família de pró-proteína convertases secretoras e desempenha um papel importante no metabolismo do colesterol. A PCSK9 aumenta os níveis de colesterol LDL circulante através da degradação intensificada dos receptores de LDL independentemente de sua atividade catalítica. A PCSK9 secretada se liga ao domínio A do Fator de Crescimento Epidérmico (EGFA) do receptor de LDL (LDLR) na superfície celular e o complexo PCSK9/receptor de LDL é internalizado em compartimentos endossômicos/lisossômicos. A afinidade de ligação intensificada de PCSK9 pelo receptor de LDL ao pH ácido dos endossomos/lisossomos tardios reduz a reciclagem do receptor de LDL e em vez disso visa receptores de LDL para degradação lisossômica. Estudos de associação genética demonstraram que mutações de perda-de-função em PCSK9 estão associadas a baixos níveis plasmáticos de LDL-C e uma redução na incidência de eventos cardiovasculares adversos.
[0003] Outra via biológica envolvendo o efeito de PCSK9 nos receptores de LDL é o início do choque séptico. O choque séptico é uma complicação frequentemente fatal de uma infecção microbiana grave (sépsis) que desencadeia uma resposta inflamatória sistêmica descontrolada e subsequente falência de órgãos. A sépsis tem origem nas paredes das células microbianas que contêm porções lipídicas patogênicas tais como lipopolissacarídeo (LPS; bactérias Gram-
negativas). Os LPS são ligandos potentes para receptores imunitários inatos de mamíferos [receptores tipo Toll (TLRs)] e assim figuram proeminentemente na resposta inflamatória séptica (choque séptico ou sépsis).
[0004] A PCSK9 reduz a captação de LPS pelos receptores de LDL do fígado, tal que o LPS livre sobre-estimula a resposta imunitária do corpo ao patógeno levando à sépsis. Assim, a inibição de PCSK9 é benéfica na retenção dos receptores de LDL do fígado para efetuar a eliminação sistêmica do patógeno e a desintoxicação em resposta à sépsis. No entanto, para além da terapia com antibióticos, não existem correntemente tratamentos eficazes para a sépsis ou choque séptico.
[0005] Para doenças cardiovasculares existem poucas opções para inibir a PCSK9. As estatinas sobrerregulam na realidade a PCSK9 nas células HepG2 e nos hepatócitos primários humanos através da expressão aumentada de SREBP-2, um fator de transcrição que sobrerregula ambos os genes LDLR e PCSK9. Uma vez que um nível elevado de PCSK9 diminui a abundância do receptor de LDL na superfície celular, doses crescentes de estatinas não conseguiram alcançar os efeitos redutores do LDL-colesterol proporcionais.
[0006] Dois anticorpos monoclonais (mAbs) que se ligam seletivamente à PCSK9 extracelular e evitam sua interação com o receptor de LDL, alirocumab e evolocumab, receberam recentemente a aprovação do FDA para reduzir os níveis de LDL-C. Em ensaios clínicos, o alirocumab mostrou uma diminuição de cerca de 50% nos níveis de LDL em comparação com o placebo. Elbitar et al., Expert Opin Therapeutic Patents 2016 26: 1377-1392. Os pacientes tomando evolocumab mostraram uma diminuição de cerca de 60-75% nos níveis de LDL. A potência destes fármacos demonstra o potencial dos inibidores de PCSK9 para serem tratamentos eficazes para aqueles com hipercolesterolemia e outras doenças cardiovasculares. No entanto, ambos os fármacos de anticorpos requerem administração intravenosa e podem causar reações alérgicas ou outras respostas imunitárias prejudiciais no corpo.
[0007] O projeto e o desenvolvimento de fármacos eficazes são frequentemente auxiliados por informações sobre como um composto interage com seu alvo biológico, tal como PCSK9. Cunningham et al. descreveram a estrutura cristalina tridimensional de PCSK9 e identificaram diferentes regiões, tal como o domínio C-terminal que é mais flexível do que outras seções da proteína. (Cunningham et al. Nature Struct. Bio. 2007 14:413-419). Assim, o interesse em inibidores de PCSK9 tem sido focado em como várias moléculas pequenas podem interagir com a superfície ou bolsos em PCSK9.
[0008] As doenças cardiovasculares requerem frequentemente gestão ao longo da vida de uma pessoa, ao contrário de uma infecção que poderia ser episódica. Assim, a facilidade de dosagem e administração se tornam fatores-chave para a adesão dos pacientes aos tratamentos com fármacos de manutenção. Existe uma necessidade de inibidores de PCSK9 com eficácia aumentada e maior facilidade de administração, o que pode ser alcançado com inibidores de PCSK9 de moléculas pequenas.
SUMÁRIO
[0009] São divulgados aqui compostos da Fórmula (I): (I)
[0010] em que:
[0011] A é selecionado de H, halo, hidróxi, alquila, tioalquila, alquenila, alcóxi, acilóxi, ciano, cicloalquila, -C(O)OR6 e -C(O)NR6R7;
[0012] B é selecionado de H, alquila e halo, ou
[0013] A e B são tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais estão anexados para formar uma heteroarila com 5 ou 6 membros;
[0014] X é NR5 ou O;
[0015] R1 e R1' são cada um independentemente selecionados de H e alquila; ou
[0016] Se n é 0, R1 e R1', em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou cicloalquenila com 4 a 8 membros;
[0017] R2 é selecionado de H, halo, alquila, alcóxi, amidoalquila, aminoalquila, hidroxialquila, alquilamino, ciano e hidróxi; ou
[0018] R1 e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros; ou
[0019] R1' e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros;
[0020] R2 é selecionado de H, halo, alquila, alcóxi, amidoalquila, aminoalquila e ciano ou
[0021] R2 e R2', tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros;
[0022] cada R3 e R4 é independentemente H ou alquila; ou
[0023] R2 e R3, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros; e
[0024] R5 é H ou alquila; ou
[0025] R1 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 6 a 8 membros; ou
[0026] R2 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 5 a 8 membros;
[0027] cada R6 e R7 é independentemente H ou alquila;
[0028] Y é selecionado de arila, heteroarila e heterociclila;
[0029] e
[0030] n é 0 ou 1.
[0031] Em certas modalidades, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica adequada para uso em um indivíduo no tratamento ou prevenção de doenças cardiovasculares compreendendo uma quantidade eficaz de qualquer um dos compostos descritos aqui (p.ex., um composto da invenção, tal como um composto da fórmula (I)) e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Em certas modalidades, as preparações farmacêuticas podem ser para uso no tratamento ou prevenção de uma condição ou doença como descrito aqui.
[0032] São divulgados aqui métodos de tratamento de doenças e condições que beneficiam da inibição de PCSK9. Estas doenças incluem, mas não estão limitadas a, doenças cardiovasculares, tais como hipercolesterolemia, hiperlipidemia, hiperlipoproteinemia, hipertrigliceridemia, dislipidemia, dislipoproteinemia, aterosclerose, esteatose hepática, síndrome metabólica e doença arterial coronariana.
[0033] Outras doenças e condições que podem ser tratadas usando os métodos descritos aqui incluem, mas não estão limitadas a, sépsis e choque séptico.
[0034] São proporcionadas aqui terapias de combinação de compostos da fórmula (I) com anticorpos monoclonais, estatinas e outros agentes cardiovasculares que podem intensificar o benefício terapêutico cardiovascular para além da capacidade da terapia adjuvante sozinha. São também proporcionadas aqui terapias de combinação de compostos da fórmula (I) com agentes antibióticos que podem reduzir a ocorrência e gravidade da sépsis e choque séptico para além da capacidade da terapia adjuvante sozinha.
[0035] Também é divulgado aqui um novo sítio de ligação em PCSK9, com o qual os compostos de Fórmula I interagem. Certas características comuns a estes compostos, tais como uma tríade de ligações H entre os compostos aqui divulgados e certos resíduos no domínio C-terminal de PCSK9, contribuem para a seletividade e afinidade dos compostos para PCSK9. Este sítio de ligação C-terminal é distinto do domínio catalítico PCSK9, que se entende ser o alvo de muitos inibidores previamente identificados.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0036] FIGURA 1 representa uma estrutura cristalina de PCSK9 mostrando os segmentos desordenados em uma linha tracejada.
[0037] FIGURA 2 é um esquema de uma estrutura cristalina de PCSK9 ligado ao composto 152 mostrando doador de ligação H e aceitadores com setas tracejadas. O farmacóforo abrange os domínios M2 e M3.
[0038] FIGURA 3 é um esquema da tríade de ligação H do farmacóforo, mostrando as distâncias entre o aceitador Val589 (A), o doador Val589 (B) e o aceitador Ser636 (C).
[0039] FIGURA 4 é um esquema de uma estrutura cristalina de PCSK9 ligado ao composto 162 mostrando doador de ligação H e aceitadores com setas tracejadas.
[0040] FIGURA 5 é um esquema de uma estrutura cristalina de PCSK9 ligado ao composto 43, mostrando doador de ligação H e aceitadores com setas tracejadas.
[0041] FIGURA 6 é um esquema de uma estrutura cristalina de PCSK9 ligado ao composto 60, mostrando doador e aceitadores de ligação H com setas tracejadas e ligação de cátion-pi com bolas de alfinete.
[0042] FIGURA 7 é um esquema de uma estrutura cristalina de PCSK9 ligado ao composto 5, mostrando doador de ligação H e aceitadores com setas tracejadas e ligação de cátion-pi com bolas de alfinete.
[0043] FIGURA 8 é um esquema de uma estrutura cristalina de PCSK9 ligada ao composto 133, mostrando doador de ligação H e aceitadores com setas tracejadas e ligação de cátion-pi com bolas de alfinete.
[0044] FIGURA 9 é um esquema de uma estrutura cristalina de PCSK9 ligada ao composto 458B, mostrando a interação com o N-H da glicina 640.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0045] São divulgados aqui compostos da Fórmula (I): (I) em que:
[0046] A é selecionado de H, halo, hidróxi, alquila, tioalquila, alquenila, alcóxi, acilóxi, ciano, cicloalquila, -C(O)OR6 e -C(O)NR6R7;
[0047] B é selecionado de H, alquila e halo, ou
[0048] A e B são tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais estão anexados para formar uma heteroarila com 5 ou 6 membros;
[0049] X é NR5 ou O;
[0050] R1 e R1' são cada um independentemente selecionados de H e alquila; ou
[0051] Se n é 0, R1 e R1', em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou cicloalquenila com 4 a 8 membros;
[0052] R2 é selecionado de H, halo, alquila, alcóxi, amidoalquila, aminoalquila, hidroxialquila, alquilamino, ciano e hidróxi; ou
[0053] R1 e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros; ou
[0054] R1' e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros;
[0055] R2 é selecionado de H, halo, alquila, alcóxi, amidoalquila, aminoalquila e ciano ou
[0056] R2 e R2', tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros;
[0057] cada R3 e R4 é independentemente H ou alquila; ou
[0058] R2 e R3, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros; e
[0059] R5 é H ou alquila; ou
[0060] R1 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 6 a 8 membros; ou
[0061] R2 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 5 a 8 membros;
[0062] cada R6 e R7 é independentemente H ou alquila;
[0063] Y é selecionado de arila, heteroarila e heterociclila;
[0064] e
[0065] n é 0 ou 1.
[0066] São divulgados aqui compostos da Fórmula (I') (I')
[0067] em que:
[0068] A é selecionado de H, halo, alquila, tioalquila, alquenila, alcóxi, acilóxi, ciano, cicloalquila, -C(O)OR6 e -C(O)NR6R7;
[0069] B é selecionado de H, alquila e halo;
[0070] R1 e R1' são cada um independentemente selecionados de H e alquila; ou
[0071] Se n é 0, R1 e R1', em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila com 4 a 8 membros;
[0072] R2 é selecionado de H, halo, alquila, alcóxi, amidoalquila, aminoalquila, hidroxialquila, alquilamino, ciano e hidróxi; ou
[0073] R1 e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros; ou
[0074] R1' e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros;
[0075] R2 é selecionado de H, halo, alquila, alcóxi, amidoalquila, aminoalquila e ciano; ou
[0076] R2 e R2', tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros;
[0077] cada R3 e R4 é independentemente H ou alquila; ou
[0078] R2 e R3, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros; e
[0079] R5 é H ou alquila; ou
[0080] R1 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 6 a 8 membros; ou
[0081] R2 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 5 a 8 membros;
[0082] cada R6 e R7 é independentemente H ou alquila;
[0083] Het é heteroarila ou heterociclila; e
[0084] n é 0 ou 1.
[0085] Todas as modalidades em baixo e aqui são entendidas como sendo modalidades tanto da Fórmula (I) como da Fórmula (I').
[0086] Em certas modalidades, O composto da reivindicação 1, em que A é selecionado de H,
[0087] hidróxi, tioalquila, alquila, alcóxi, acilóxi, ciano, cicloalquila, - C(O)OR6 e -C(O)NR6R7.
[0088] Em certas modalidades, A é H, enquanto, em outras modalidades, A é alquila, tal como tioalquila. Em certas modalidades, A é selecionado de -SCH3, -SCHF2 e -OCHF2. Em algumas modalidades, A é alcóxi. Em outras modalidades, A é cicloalquila. Em certas modalidades, B é H.
[0089] Em certas modalidades, A e B são tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais estão anexados para formar um anel de pirrolila ou tienila, que está não substituído ou substituído por uma ou mais alquilas.
[0090] Em certas modalidades, X é preferencialmente NR5. Em outras modalidades, Y é preferencialmente heteroarila ou heterociclila.
[0091] Em certas modalidades, R1 e R1' são cada um H. No entanto, quando n é 0, R1 e R1', em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, podem formar um anel de cicloalquila com 4 a 8 membros. Em algumas modalidades, a cicloalqila é monocíclica ou bicíclica. Em outras modalidades, R1 e R1', em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, podem formar um anel de cicloalquenila com 4 a 8 membros. Em algumas modalidades, o anel de cicloalquila é um anel de ciclopentila, tal como S,S-ciclopentila. Em algumas modalidades, o anel de cicloalquila está substituído por hidroxila ou hidroxialquila.
[0092] Em certas modalidades, R2 é selecionado de H, halo, alquila, alcóxi, amidoalquila, aminoalquila, alquilamino, ciano e hidroxila. Em certas modalidades, R2 é alquila C1-3. R2 pode estar substituído por um ou mais substituintes selecionados de amino, amido, ciano, hidróxi e heterociclila. Em algumas modalidades, R2' é alquila C1-3, enquanto, em outras modalidades, R2' é H.
[0093] Em certas modalidades, R1 e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros. Em outras modalidades, R1' e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros. Em certas modalidades, R2 e R2', tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros.
[0094] Em certas modalidades, R3 é alquila C1-3, enquanto, em outras modalidades, R3 é H. Em certas modalidades, R4 é H.
[0095] Em certas modalidades, R2 e R3, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros. Em outras modalidades, R1 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 6 a 8 membros. Em outras modalidades, R2 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 5 a 8 membros.
[0096] Em certas modalidades, Y é heteroarila monocíclica, tal como, mas não se limitando a, piridinila, pirazinila, pirimidinila e tiazolila. Em outras modalidades, Y é heteroarila monocíclica, tal como, mas não se limitando a, piridinila, pirazinila e pirimidinila. Em algumas modalidades, Y é selecionado de triazenila, oxazolila, isoxazolila, imidazolila, pirazolila e triazolila. A heteroarila monocíclica pode estar não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados de alquila, tioalquila, alcóxi, alcoxicarbonila, amido, carbóxi, ciano, halo, heteroarila, nitro, sulfonamido e tioalquila. Em uma outra modalidade, Y é uma heteroarila monocíclica pode estar não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados de alquila, tioalquila, alcóxi, alcoxicarbonila, amido, carbóxi, ciano, halo, arila, heteroarila, heterociclila, nitro, sulfonamido e tioalquila.
[0097] Em certas modalidades, a heteroarila monocíclica estar substituída por uma arila, heteroarila ou heterociclila selecionada de fenila, piridinila, 2-hidroxipiridinila, piperidinonila, 2-hidroxi-1- metilpiridinila, triazolila, imidazolidinonila, pirimidonila, 2-hidroxi- isoquinolinila, 3-hidroxipiridazinila, pirrolidinonila, pirazolila e morfolinonila. Em certas modalidades preferenciais, Y é uma heteroarila monocíclica com 6 membros. Em algumas modalidades, a heteroarila monocíclica está substituída por uma heteroarila ou heterociclila que está substituída por um ou mais substituintes selecionados de halo, CN, alquila, alcóxi, hidróxi, carbóxi, -CO2alquila e tetrazolila. Em certas modalidades preferenciais, a heteroarila monocíclica está disposta na posição para de A em relação a X.
[0098] Em outras modalidades, Y é heteroarila bicíclica, tal como,
mas não se limitando a, benzotiazolila, benzimidazolila, benzoxazolila, triazolopiridinila, tiazolopirindinila, quinolinila e quinoxalinila. A heteroarila bicíclica pode estar não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados de alquila, haloalquila, hidroxialquila, tioalquila, alcoxi, alcoxicarbonila, amido, carbóxi, ciano, halo, heteroarila, nitro e sulfonamido. Em certas modalidades, a heteroarila bicíclica está não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados de tioalquila, alcoxicarbonila, amido, carbóxi, halo e heteroarila.
[0099] Em certas modalidades, Y está substituído por um substituinte de amido da fórmula –C(O)NR8R9 ou –NR9C(O)R10, em que
[0100] R8 e R9 são cada um independentemente selecionados de H, alquila, heterociclila e heteroarila; ou
[0101] R8 e R9, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam um
[0102] anel heterocíclico ou de heteroarila com 4, 5, 6 ou 7 membros; e
[0103] R10 é alquila.
[0104] Em certas modalidades, Y está substituído por um substituinte de sulfonamido da fórmula –S(O)2NR8R9 ou – NR9S(O)2R10; em que
[0105] R8 e R9 são cada um independentemente selecionados de H, alquila e heteroarila; ou
[0106] R8 e R9, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam um
[0107] anel heterocíclico com 4, 5, 6 ou 7 membros; e
[0108] R10 é alquila.
[0109] Todas as modalidades anteriores da variável Y na Fórmula (I) são entendidas como sendo também modalidades da variável Het na
Fórmula (I').
[0110] Em certas modalidades, R8 e R9 são cada um independentemente selecionados de H, metila, etila, triazolila e pirazolila. Em modalidades onde um de ou ambos de R 8 e R9 são alquila, cada alquila está independentemente não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados de metila, metóxi, carbóxi, ciano, hidróxi, dimetilamino, etoxicarbonila, fenila, metoxifenila, oxadiazolila, tetrazolila, 2-metil-tetrazolila, triazolila, 1-metiltriazolila, 4-metiltriazolila e 2,4-di-hidro-3H-1,2,4-triazol-3-onila. Em certas modalidades, R8 e R9, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam um anel heterocíclico selecionado de aziradina, isotiazolidina-1,1-dióxido, azetidina, tiazol-4(5Hn)-ona, morfolina, piperidina, piperazina, pirrolidina, tiomorfolina-1,1-dióxido, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptano. Em algumas modalidades, R8 e R9, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam um anel heterocíclico selecionado de 2,8-diazaespiro[5,5]undeceno, tetra-hidroimidazo[1,2-a]pirazina, octa-hidropirazino[2,1-c][1,4]oxazina, tetra-hidropirido[3,4-d]pirimidina, 2-oxa-8-azaespiro[4.5]decano, tetra- hidropirrolo[3,4-c]pirazol, tiomorfolina, 2-oxa-7-azaespiro[3.5]nonano, 2,8-diazaespiro[4.5]decan-3-ona, tetra-hidro-1,7-naftiridina, 1-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-3-ona, tetra-hidropirrolo[3,4-d]imidazol, pirimidina, 8-oxa-2-azaespiro[4.5]decano, hexa-hidro-3H-oxazolo[3,4- a]pirazin-3-ona, 1-oxa-7-azaespiro[3.5]nonano, octa- hidrociclopenta[c]pirrol, tetra-hidro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazina, 2,7- diazaespiro[4.4]nonano, 2,6-diazaespiro[3.4]octano, 7-oxa-2- azaespiro[3.5]nonano, 1-oxa-8λ2-azaespiro[4.5]decano, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptano, tetra-hidrofurano, oxadiazol, triazol, piridinona, tetra-hidro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-3(2H)-ona, piperidinona, 3,6- diazabiciclo[3.1.1]heptano, 5-oxa-2,7-diazaespiro[3.5]nonano, pirazol e piridazin-3(2H)-ona.
[0111] Em algumas modalidades, o anel heterocíclico está não substituído ou substituído por um ou mais substituintes selecionados de alquila, alcoxicarbonila, halo, hidróxi, ciano, carbóxi e heterociclila. Em certas modalidades, o anel heterocíclico está não substituído ou substituído por um ou mais substituintes selecionados de metila, etoxicarbonila, halo, hidróxi, ciano, carbóxi e oxetanila.
[0112] Em certas modalidades, a presente invenção proporciona uma preparação farmacêutica adequada para uso em um paciente humano, compreendendo qualquer um dos compostos mostrados acima (p.ex., um composto da invenção, tal como um composto da fórmula (I)) e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Em certas modalidades, as preparações farmacêuticas podem ser para uso no tratamento ou prevenção de uma condição ou doença como descrito aqui.
[0113] Qualquer um dos compostos divulgados pode ser usado na fabricação de medicamentos para o tratamento de quaisquer doenças ou condições divulgadas aqui. Definições
[0114] A não ser que definidos de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o significado comummente entendido por um perito na técnica da presente divulgação. As seguintes referências proporcionam a um perito uma definição geral de muitos dos termos usados em esta divulgação: Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2.ª ed. 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5.ª Ed., R. Rieger et al. (eds.), Springer Verlag (1991); e Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991). Como usado aqui, os seguintes termos têm os significados atribuídos a eles em baixo, a não ser que especificado de outro modo.
[0115] Em esta divulgação, os termos “compreende”,
“compreendendo”, “contendo” e “tendo” e similares podem ter o significado que lhes foi atribuído na lei de Patentes dos E.U.A. e podem significar “inclui”, “incluindo” e similares; “consistindo essencialmente em” ou “consiste essencialmente” tem do mesmo modo o significado atribuído na lei de Patentes dos E.U.A. e o termo é aberto, permitindo a presença de mais do que aquilo que é recitado desde que as características básicas ou novas daquilo que é recitado não sejam mudadas pela presença de mais do que aquilo que é recitado, mas exclui modalidades da técnica prévia.
[0116] A não ser que especificamente afirmado ou óbvio a partir do contexto, como usado aqui, o termo “ou“ é entendido como sendo inclusivo. A não ser que especificamente afirmado ou óbvio a partir do contexto, como usado aqui, os termos “um”, “uma” e “o/a” são entendidos como sendo singulares ou plurais.
[0117] O termo “acila” é reconhecido na técnica e refere-se a um grupo representado pela fórmula geral hidrocarbilC(O)-, preferencialmente alquilC(O)-.
[0118] O termo “acilamino” é reconhecido na técnica e refere-se a um grupo amino substituído por um grupo acila e pode ser representado, por exemplo, pela fórmula hidrocarbilC(O)NH-.
[0119] O termo “acilóxi” é reconhecido na técnica e refere-se a um grupo representado pela fórmula geral hidrocarbilC(O)O-, preferencialmente alquilC(O)O-.
[0120] O termo “alcóxi” refere-se a um grupo alquila, preferencialmente um grupo alquila inferior, tendo um oxigênio anexado a ele. Grupos alcóxi representativos incluem metóxi, etóxi, propóxi, terc- butóxi e similares.
[0121] O termo “alcoxialquila” refere-se a um grupo alquila substituído por um grupo alcóxi e pode ser representado pela fórmula geral alquil-O-alquila.
[0122] O termo “alquenila”, como usado aqui, refere-se a um grupo alifático contendo pelo menos uma ligação dupla e se destina a incluir tanto “alquenilas não substituídas” quanto “alquenilas substituídas”, o último dos quais refere-se a frações de alquenila tendo substituintes substituindo um hidrogênio em um ou mais carbonos do grupo alquenila. Tais substituintes podem ocorrer em um ou mais carbonos que estão incluídos ou não incluídos em uma ou mais ligações duplas. Além disso, tais substituintes incluem todos aqueles contemplados para grupos alquila, como discutido em baixo, exceto onde a estabilidade é proibitiva. Por exemplo, a substituição de grupos alquenila por um ou mais grupos alquila, carbociclila, arila, heterociclila ou heteroarila é contemplada.
[0123] Um grupo “alquila” ou “alcano” é um hidrocarboneto não aromático de cadeia linear ou ramificado que está completamente saturado. Tipicamente, um grupo alquila de cadeia linear ou ramificado tem de 1 a cerca de 20 átomos de carbono, preferencialmente de 1 a cerca de 10 a não ser que de outro modo definido. Exemplos de grupos alquila de cadeia linear e ramificados incluem metila, etila, n-propila, iso- propila, n-butila, sec-butila, terc-butila, pentila, hexila, pentila e octila. Um grupo alquila C1-C6 de cadeia linear ou ramificado é também referido como um grupo “alquila inferior”.
[0124] Além disso, o termo “alquila” (ou “alquila inferior”) como usado ao longo do relatório descritivo, exemplos e reivindicações se destina a incluir tanto “alquilas não substituídas” quanto “alquilas substituídas”, o último dos quais refere-se a frações de alquila tendo substituintes substituindo um hidrogênio em um ou mais carbonos do esqueleto do hidrocarboneto. Tais substituintes, se não de outro modo especificados, podem incluir, por exemplo, um halogênio, uma hidroxila, uma carbonila (tal como uma carboxila, uma alcoxicarbonila, uma formila ou uma acila), uma tiocarbonila (tal como um tioéster, um tioacetato ou um tioformiato), um alcóxi, uma fosforila, um fosfato, um fosfonato, um fosfinato, um amino, um amido, uma amidina, uma imina, um ciano, um nitro, um azido, uma sulfidrila, um alquiltio, um sulfato, um sulfonato, uma sulfamoila, um sulfonamido, uma sulfonila, uma heterociclila, uma aralquila ou uma fração aromática ou heteroaromática. Será entendido pelos peritos na técnica que as frações substituídas na cadeia de hidrocarbonetos podem estar elas próprias substituídas, se apropriado. Por exemplo, os substituintes de uma alquila substituída podem incluir formas substituídas e não substituídas de grupos amino, azido, imino, amido, fosforila (incluindo fosfonato e fosfinato), sulfonila (incluindo sulfato, sulfonamido, sulfamoila e sulfonato) e silila, bem como éteres, alquiltios, carbonilas (incluindo cetonas, aldeídos, carboxilatos e ésteres), -CF3, -CN e similares. Alquilas substituídas exemplificativas são descritas em baixo. As cicloalquilas podem estar adicionalmente substituídas por alquilas, alquenilas, alcóxis, alquiltios, aminoalquilas, alquilas substituídas por carbonila, -CF3, -CN e similares.
[0125] O termo “Cx-y” quando usado em conjunção com uma fração química, tal como acila, acilóxi, alquila, alquenila, alquinila ou alcóxi, se destina a incluir grupos que contêm de x a y carbonos na cadeia. Por exemplo, o termo “alquila C x-y” refere-se a grupos de hidrocarbonetos saturados substituídos ou não substituídos, incluindo grupos alquila de cadeia linear e alquila de cadeia ramificada que contêm de x a y carbonos na cadeia, incluindo grupos haloalquila tais como trifluorometila e 2,2,2-trifluoroetila, etc. Alquila C0 indica um hidrogênio onde o grupo está em uma posição terminal, uma ligação se interna. Os termos “alquenila C2-y“ e “alquinila C2-y” referem-se a grupos alifáticos insaturados substituídos ou não substituídos análogos em comprimento e possível substituição às alquilas descritas acima, mas que contêm pelo menos uma ligação dupla ou tripla respectivamente.
[0126] O termo “alquilamino”, como usado aqui, refere-se a um grupo amino substituído por pelo menos um grupo alquila.
[0127] O termo “alquiltio”, como usado aqui, refere-se a um grupo tiol substituído por um grupo alquila e pode ser representado pela fórmula geral alquilS-.
[0128] O termo “alquinila”, como usado aqui, refere-se a um grupo alifático contendo pelo menos uma ligação tripla e se destina a incluir tanto “alquinilas não substituídas” quanto “alquinilas substituídas”, o último dos quais refere-se a frações de alquinila tendo substituintes substituindo um hidrogênio em um ou mais carbonos do grupo alquinila. Tais substituintes podem ocorrer em um ou mais carbonos que estão incluídos ou não incluídos em uma ou mais ligações triplas. Além disso, tais substituintes incluem todos aqueles contemplados para grupos alquila, como discutido acima, exceto onde a estabilidade é proibitiva. Por exemplo, a substituição de grupos alquinila por um ou mais grupos alquila, carbociclila, arila, heterociclila ou heteroarila é contemplada.
[0129] O termo “amida”, como usado aqui, refere-se a um grupo em que cada R11 representa independentemente um hidrogênio ou grupo hidrocarbila, ou dois R11 são tomados em conjunto com o átomo N ao qual estão anexados para completarem um heterociclo tendo de 4 a 8 átomos na estrutura anelar.
[0130] Os termos “amina” e “amino” são reconhecidos na técnica e referem-se a aminas tanto não substituídas quanto substituídas e seus sais, p.ex., uma fração que pode ser representada por ou
[0131] em que cada R11 representa independentemente um hidrogênio ou um grupo hidrocarbila, ou dois R11 são tomados em conjunto com o átomo N ao qual estão anexados para completarem um heterociclo tendo de 4 a 8 átomos na estrutura anelar. O termo “aminoalquila”, como usado aqui, refere-se a um grupo alquila substituído por um grupo amino.
[0132] O termo “aralquila”, como usado aqui, refere-se a um grupo alquila substituído por um grupo arila.
[0133] O termo “arila”, como usado aqui, inclui grupos aromáticos de anel único substituídos ou não substituídos nos quais cada átomo do anel é carbono. Preferencialmente, o anel é um anel com 5 a 7 membros, mais preferencialmente um anel com 6 membros. O termo “arila” inclui também sistemas anelares policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos nos quais dois ou mais carbonos são comuns a dois anéis adjacentes em que pelo menos um dos anéis é aromático, p.ex., os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilas, cicloalquenilas, cicloalquinilas, arilas, heteroarilas e/ou heterociclilas. Os grupos arila incluem benzeno, naftaleno, fenantreno, fenol, anilina e similares.
[0134] O termo “carbamato” é reconhecido na técnica refere-se a um grupo
[0135] em que R11 e R12 representam independentemente hidrogênio ou um grupo hidrocarbila, tal como um grupo alquila, ou R 11 e R12 tomados em conjunto com o(s) átomo(s) interveniente(s) completam um heterociclo tendo de 4 a 8 átomos na estrutura anelar.
[0136] Os termos “carbociclo” e "carbocíclico”, como usados aqui, referem-se a um anel saturado ou insaturado no qual cada átomo do anel é carbono. O termo carbociclo inclui tanto carbociclos aromáticos quanto carbociclos não aromáticos. Os carbociclos não aromáticos incluem tanto anéis de cicloalcano, nos quais todos os átomos de carbono estão saturados, quanto anéis de cicloalqueno, que contêm pelo menos uma ligação dupla.
[0137] O termo “carbociclo” inclui anéis monocíclicos com 5 a 7 membros e bicíclicos com 8 a 12 membros. Cada anel de um carbociclo bicíclico pode ser selecionado de anéis saturados, insaturados e aromáticos. Carbociclo inclui moléculas bicíclicas nas quais um, dois ou três ou mais átomos são partilhados entre os dois anéis. O termo “carbociclo fundido” refere-se a um carbociclo bicíclico no qual cada um dos anéis partilha dois átomos adjacentes com o outro anel. Cada anel de um carbociclo fundido pode ser selecionado de anéis saturados, insaturados e aromáticos. Em uma modalidade exemplificativa, um anel aromático, p.ex., fenila, pode ser fundido a um anel saturado ou insaturado, p.ex., ciclo-hexano, ciclopentano ou ciclo-hexeno. Qualquer combinação de anéis bicíclicos saturados, insaturados e aromáticos, como a valência permitir, está incluída na definição de carbocíclico. “Carbociclos” exemplificativos incluem ciclopentano, ciclo-hexano, biciclo[2.2.1]heptano, 1,5-ciclo-octadieno, 1,2,3,4-tetra-hidronaftaleno, biciclo[4.2.0]oct-3-eno, naftaleno e adamantano. Carbociclos fundidos exemplificativos incluem decalina, naftaleno, 1,2,3,4-tetra- hidronaftaleno, biciclo[4.2.0]octano, 4,5,6,7-tetra-hidro-1H-indeno e biciclo[4.1.0]hept-3-eno. “Carbociclos” podem estar substituídos em qualquer uma ou mais posições capazes de abrigar um átomo de hidrogênio.
[0138] Um grupo “cicloalquila” é um hidrocarboneto cíclico que está completamente saturado. “Cicloalquila” inclui anéis monocíclicos e bicíclicos. Normalmente, um grupo cicloalquila monocíclico tem de 3 a cerca de 10 átomos de carbono, mais tipicamente 3 a 8 átomos de carbono a não ser que de outro modo definido. O segundo anel de uma cicloalquila bicíclica pode ser selecionado de anéis saturados, insaturados e aromáticos. Cicloalquila inclui moléculas bicíclicas nas quais um, dois ou três ou mais átomos são partilhados entre os dois anéis. O termo “cicloalquila fundida” refere-se a uma cicloalquila bicíclico na qual cada um dos anéis partilha dois átomos adjacentes com o outro anel. O segundo anel de uma cicloalquila bicíclica fundida pode ser selecionado de anéis saturados, insaturados e aromáticos. Um grupo “cicloalquenila” é um hidrocarboneto cíclico contendo uma ou mais ligações duplas.
[0139] O termo “carbociclilalquila”, como usado aqui, refere-se a um grupo alquila substituído por um grupo carbociclo.
[0140] O termo “carbonato” é reconhecido na técnica e refere-se a um grupo -OCO2-R10, em que R10 representa um grupo hidrocarbila.
[0141] O termo “carbóxi”, como usado aqui, refere-se a um grupo representado pela fórmula -CO2H.
[0142] O termo “éster”, como usado aqui, refere-se a um grupo - C(O)OR10 em que R10 representa um grupo hidrocarbila.
[0143] O termo “éter”, como usado aqui, refere-se a um grupo hidrocarbila ligado através de um oxigênio a um outro grupo hidrocarbila. Conformemente, um substituinte de éter de um grupo hidrocarbila pode ser hidrocarbil-O-. Os éteres podem ser simétricos ou assimétricos. Exemplos de éteres incluem, mas não estão limitados a, heterociclo-O-heterociclo e aril-O-heterociclo. Os éteres incluem grupos “alcoxialquila”, que podem ser representados pela fórmula geral alquil- O-alquila.
[0144] Os termos “halo” e “halogênio” como usados aqui significam halogênio e incluem cloro, flúor, bromo e iodo.
[0145] Os termos “hetaralquila” e “heteroaralquila”, como usados aqui, referem-se a um grupo alquila substituído por um grupo hetarila.
[0146] O termo “heteroalquila”, como usado aqui, refere-se a uma cadeia saturada ou insaturada de átomos de carbono e pelo menos um heteroátomo, em que não existem dois heteroátomos adjacentes.
[0147] Os termos “heteroarila” e “hetarila” incluem estruturas anelares únicas aromáticas substituídas ou não substituídas, preferencialmente anéis com 5 a 7 membros, mais preferencialmente anéis com 5 a 6 membros, estruturas anelares essas que incluem pelo menos um heteroátomo, preferencialmente um a quatro heteroátomos, mais preferencialmente um ou dois heteroátomos. Os termos “heteroarila” e “hetarila” incluem também sistemas anelares policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos nos quais dois ou mais carbonos são comuns a dois anéis adjacentes em que pelo menos um dos anéis é heteroaromático, p.ex., os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilas, cicloalquenilas, cicloalquinilas, arilas, heteroarilas e/ou heterociclilas. Os grupos heteroarila incluem, por exemplo, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina e pirimidina e similares.
[0148] O termo “heteroátomo” como usado aqui significa um átomo de qualquer elemento sem ser carbono ou hidrogênio. Os heteroátomos preferenciais são nitrogênio, oxigênio e enxofre.
[0149] Os termos “heterociclila”, “heterociclo” e “heterocíclico” referem-se a estruturas anelares não aromáticas substituídas ou não substituídas, preferencialmente anéis com 3 a 10 membros, mais preferencialmente anéis com 3 a 7 membros, estruturas anelares essas que incluem pelo menos um heteroátomo, preferencialmente um a quatro heteroátomos, mais preferencialmente um ou dois heteroátomos. Os termos “heterociclila” e “heterocíclico” incluem também sistemas anelares policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos nos quais dois ou mais carbonos são comuns a dois anéis adjacentes em que pelo menos um dos anéis é heterocíclico, p.ex., os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilas, cicloalquenilas, cicloalquinilas, arilas, heteroarilas e/ou heterociclilas. Os grupos heterociclila incluem, por exemplo, piperidina, piperazina, pirrolidina, morfolina, lactonas, lactamas e similares.
[0150] O termo “heterociclilalquila”, como usado aqui, refere-se a um grupo alquila substituído por um grupo heterociclo.
[0151] O termo “hidrocarbila”, como usado aqui, refere-se a um grupo que está ligado através de um átomo de carbono que não tem um substituinte de =O ou =S e, tipicamente, tem pelo menos uma ligação carbono-hidrogênio e um esqueleto principalmente de carbono, mas pode incluir opcionalmente heteroátomos. Assim, grupos como metila, etoxietila, 2-piridila e trifluorometila são considerados como sendo hidrocarbila para os propósitos deste pedido, mas substituintes tais como acetila (que tem um substituinte de =O no carbono de ligação) e etóxi (que está ligado através de oxigênio, não carbono) não são. Os grupos hidrocarbila incluem, mas não estão limitados a, arila, heteroarila, carbociclo, heterociclila, alquila, alquenila, alquinila e suas combinações.
[0152] O termo “hidroxialquila”, como usado aqui, refere-se a um grupo alquila substituído por um grupo hidróxi.
[0153] O termo “inferior” quando usado em conjunção com uma fração química, tal como acila, acilóxi, alquila, alquenila, alquinila ou alcóxi se destina a incluir grupos onde existem dez ou menos átomos diferentes de hidrogênio no substituinte, preferencialmente seis ou menos. Uma “alquila inferior", por exemplo, refere-se a um grupo alquila que contém dez ou menos átomos de carbono, preferencialmente seis ou menos. Em certas modalidades, os substituintes de acila, acilóxi, alquila, alquenila, alquinila ou alcóxi definidos aqui são respectivamente acila inferior, acilóxi inferior, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila inferior ou alcóxi inferior, quer apareçam sozinhos ou em combinação com outros substituintes, tal como nas recitações hidroxialquila e aralquila (em este caso, por exemplo, os átomos dentro do grupo arila não são contados quando se contam os átomos de carbono no substituinte de alquila).
[0154] Os termos “policiclila”, “policiclo” e “policíclico” referem-se a dois ou mais anéis (p.ex., cicloalquilas, cicloalquenilas, cicloalquinilas, arilas, heteroarilas e/ou heterociclilas) nos quais dois ou mais átomos são comuns a dois anéis adjacentes, p.ex., os anéis são “anéis fundidos”. Cada um dos anéis do policiclo pode estar substituído ou não substituído. Em certas modalidades, cada anel do policiclo contém de 3 a 10 átomos no anel, preferencialmente de 5 a 7.
[0155] O termo “silila” refere-se a uma fração de silício com três frações de hidrocarbila anexadas a ela.
[0156] O termo “substituído” refere-se a frações tendo substituintes substituindo um hidrogênio em um ou mais carbonos do esqueleto. Será entendido que “substituição” ou “substituído por” inclui a condição implícita de que tal substituição está de acordo com a valência permitida do átomo substituído e do substituinte e que a substituição resulta em um composto estável, p.ex., que não sofre espontaneamente transformação, tal como por rearranjo, ciclização, eliminação, etc. Como usado aqui, o termo “substituído” é contemplado como incluindo todos os substituintes permitidos de compostos orgânicos. Em um aspecto amplo, os substituintes permitidos incluem substituintes acíclicos e cíclicos, ramificados e não ramificados, carbocíclicos e heterocíclicos, aromáticos e não aromáticos de compostos orgânicos. Os substituintes permitidos podem ser um ou mais e os mesmos ou diferentes para compostos orgânicos apropriados. Para propósitos desta invenção, os heteroátomos tais como nitrogênio podem ter substituintes de hidrogênio e/ou quaisquer substituintes permissíveis de compostos orgânicos descritos aqui que satisfazem as valências dos heteroátomos. Os substituintes podem incluir quaisquer substituintes descritos aqui, por exemplo, um halogênio, uma hidroxila, uma carbonila (tal como uma carboxila, uma alcoxicarbonila, uma formila ou uma acila), uma tiocarbonila (tal como um tioéster, um tioacetato ou um tioformiato), um alcóxi, uma fosforila, um fosfato, um fosfonato, um fosfinato, um amino, um amido, uma amidina, uma imina, um ciano, um nitro, um azido, uma sulfidrila, um alquiltio, um sulfato, um sulfonato, uma sulfamoila, um sulfonamido, uma sulfonila, uma heterociclila, uma aralquila ou uma fração aromática ou heteroaromática. Será entendido pelos peritos na técnica que os substituintes podem estar eles próprios substituídos, se apropriado. A não ser que especificamente afirmado como “não substituído”, as referências a frações químicas aqui são entendidas como incluindo variantes substituídas. Por exemplo, a referência a um grupo ou fração de “arila” inclui implicitamente variantes tanto substituídas quanto não substituídas.
[0157] O termo “sulfato” é reconhecido na técnica e refere-se ao grupo -OSO3H ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
[0158] O termo “sulfonamida” é reconhecido na técnica e refere-se ao grupo representado pelas fórmulas gerais em que R11 e R12 representam independentemente hidrogênio ou hidrocarbila, tal como alquila, ou R11 e R12 tomados em conjunto com o(s) átomo(s) interveniente(s) completam um heterociclo tendo de 4 a 8 átomos na estrutura anelar.
[0159] O termo “sulfóxido” é reconhecido na técnica e refere-se ao grupo -S(O)-R10, em que R10 representa uma hidrocarbila.
[0160] O termo “sulfonato” é reconhecido na técnica e refere-se ao grupo SO3H ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
[0161] O termo “sulfona” é reconhecido na técnica e refere-se ao grupo -S(O)2-R10, em que R10 representa uma hidrocarbila.
[0162] O termo “tioalquila”, como usado aqui, refere-se a um grupo alquila substituído por um grupo tiol.
[0163] O termo “tioéster”, como usado aqui, refere-se a um grupo -
C(O)SR10 ou -SC(O)R10 em que R10 representa uma hidrocarbila.
[0164] O termo “tioéter”, como usado aqui, é equivalente a um éter, em que o oxigênio é substituído por um enxofre.
[0165] O termo “ureia” é reconhecido na técnica e pode ser representado pela fórmula geral
[0166] em que R11 e R12 representam independentemente hidrogênio ou uma hidrocarbila, tal como alquila, ou qualquer ocorrência de R11 tomada em conjunto com R 12 e o(s) átomo(s) interveniente(s) completam um heterociclo tendo de 4 a 8 átomos na estrutura anelar.
[0167] O termo “grupo protetor” refere-se a um grupo de átomos que, quando anexados a um grupo funcional reativo em uma molécula, mascaram, reduzem ou previnem a reatividade do grupo funcional. Tipicamente, um grupo protetor pode ser seletivamente removido como desejado durante o decurso de uma síntese. Exemplos de grupos protetores podem ser encontrados em Greene e Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, 3ª Ed., 1999, John Wiley & Sons, NY e Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1-8, 1971-1996, John Wiley & Sons, NY. Grupos protetores de nitrogênio representativos incluem, mas não estão limitados a, formila, acetila, trifluoroacetila, benzila, benziloxicarbonila (“CBZ”), terc-butoxicarbonila (“Boc”), trimetilsilila (“TMS”), 2-trimetilsilil-etanossulfonila (“TES”), grupos tritila e tritila substituída, aliloxicarbonila, 9- fluorenilmetiloxicarbonila (“FMOC”), nitro-veratriloxicarbonila (“NVOC”) e similares. Grupos protetores de hidroxila representativos incluem aqueles, mas não estão limitados àqueles, onde o grupo hidroxila é acilado (esterificado) ou alquilado tal como éteres de benzila e tritila, bem como éteres de alquila, éteres de tetra-hidropiranila, éteres de trialquilsilila (p.ex., grupos TMS ou TIPS), éteres de glicol, tais como etilenoglicol e derivados de propilenoglicol e éteres de alila.
[0168] A presente invenção inclui todos os compostos isotopicamente marcados farmaceuticamente aceitáveis como descrito aqui em que um ou mais átomos estão substituídos por átomos tendo o mesmo número atômico, mas uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número de massa usualmente encontrado na natureza.
[0169] Exemplos de isótopos adequados para inclusão nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, tais como 2H e 3 11 13 14 36 H, carbono, tais como C, Ce C, cloro, tais como Cl, flúor, tais 18 123 125 13 15 como F, iodo, tais como I e I, nitrogênio, tais como N e N, oxigênio, tais como 15O, 17O e 18O, fósforo, tais como 32P, e enxofre, tais como 35S.
[0170] Certos compostos isotopicamente marcados como divulgado aqui, por exemplo, aqueles incorporando um isótopo radioativo, são úteis em estudos de distribuição de fármacos e/ou substratos em tecidos. Os isótopos radioativos trítio, i.e., 3H, e carbono-14, i.e., 14 C, são úteis para este propósito em vista de sua facilidade de incorporação e meios prontos de detecção.
[0171] A substituição por isótopos mais pesados tais como deutério, i.e., 2H, pode originar certas vantagens terapêuticas resultando de maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia-vida in vivo aumentada ou requisitos de dosagem reduzidos e, consequentemente, pode ser preferencial em algumas circunstâncias.
[0172] A substituição por isótopos emissores de pósitrons, tais 11 18 15 13 como C, F, Oe N, pode ser útil em estudos de Tomografia por Emissão de Pósitrons (PET) para examinar a ocupância do receptor de substrato.
[0173] Em certas modalidades, os compostos da invenção podem ser racêmicos. Em certas modalidades, os compostos da invenção podem ser enriquecidos em um enantiômero. Por exemplo, um composto da invenção pode ter mais do que cerca de 30% de ee, cerca de 40% de ee, cerca de 50% de ee, cerca de 60% de ee, cerca de 70% de ee, cerca de 80% de ee, cerca de 90% de ee ou mesmo cerca de 95% ou mais de ee. Em certas modalidades, os compostos da invenção podem ter mais do que um estereocentro. Em certas tais modalidades, os compostos da invenção podem ser enriquecidos em um ou mais diastereômero. Por exemplo, um composto da invenção pode ter mais do que cerca de 30% de de, cerca de 40% de de, cerca de 50% de de, cerca de 60% de de, cerca de 70% de de, cerca de 80% de de, cerca de 90% de de ou mesmo cerca de 95% ou mais de de.
[0174] Em certas modalidades, a preparação terapêutica pode ser enriquecida para proporcionar predominantemente um enantiômero de um composto (p.ex., da Fórmula (I)). Uma mistura enantiomericamente enriquecida pode compreender, por exemplo, pelo menos cerca de 60 por cento em mol de um enantiômero ou, mais preferencialmente, pelo menos cerca de 75, cerca de 90, cerca de 95 ou mesmo cerca de 99 por cento em mol. Em certas modalidades, o composto enriquecido em um enantiômero está substancialmente isento do outro enantiômero, em que substancialmente isento significa que a substância em questão constitui menos do que cerca de 10% ou menos do que cerca de 5% ou menos do que cerca de 4% ou menos do que cerca de 3% ou menos do que cerca de 2% ou menos do que cerca de 1% em comparação com a quantidade do outro enantiômero, p.ex., na composição ou mistura de compostos. Por exemplo, se uma composição ou mistura de compostos contiver cerca de 98 gramas de um primeiro enantiômero e cerca de 2 gramas de um segundo enantiômero, seria dito que continha cerca de 98 por cento em mol do primeiro enantiômero e somente cerca de 2% do segundo enantiômero.
[0175] Em certas modalidades, a preparação terapêutica pode ser enriquecida para proporcionar predominantemente um diastereômero de um composto (p.ex., da Fórmula (I)). Uma mistura diastereomericamente enriquecida pode compreender, por exemplo, pelo menos cerca de 60 por cento em mol de um diastereômero ou, mais preferencialmente, pelo menos cerca de 75, cerca de 90, cerca de 95 ou mesmo cerca de 99 por cento em mol.
[0176] O termo “indivíduo” para o qual a administração é contemplada inclui, mas não está limitado a, humanos (i.e., um homem ou mulher de qualquer faixa etária, p.ex., um indivíduo pediátrico (p.ex., bebê, criança, adolescente) ou indivíduo adulto (p.ex., adulto jovem, adulto de meia-idade ou adulto sênior)) e/ou outros primatas (p.ex., macacos-cinomólgos, macacos rhesus); mamíferos, incluindo mamíferos comercialmente relevantes tais como gado, porcos, cavalos, ovelhas, cabras, gatos e/ou cães; e/ou pássaros, incluindo pássaros comercialmente relevantes tais como galinhas, patos, gansos, codornizes e/ou perus. Os indivíduos preferenciais são humanos.
[0177] Como usado aqui, um terapêutico que “previne” uma disfunção ou condição refere-se a um composto que, em uma amostra estatística, reduz a ocorrência da disfunção ou condição na amostra tratada em relação a uma amostra de controle não tratada ou retarda o início ou reduz a gravidade de um ou mais sintomas da disfunção ou condição em relação à amostra de controle não tratada.
[0178] O termo “tratar” inclui tratamentos profiláticos e/ou terapêuticos. O termo tratamento “profilático ou terapêutico” é reconhecido na técnica e inclui administração ao indivíduo de uma ou mais das composições divulgadas. Se for administrado antes da manifestação clínica da condição indesejada (p.ex., doença ou outro estado indesejado do indivíduo), então o tratamento é profilático (i.e., protege o indivíduo contra o desenvolvimento da condição indesejada), ao passo que, se for administrado após manifestação da condição indesejada, o tratamento é terapêutico (i.e., se destina a diminuir, melhorar ou estabilizar a condição indesejada existente ou seus efeitos secundários).
[0179] O termo “pró-fármaco” se destina a englobar compostos que, sob condições fisiológicas, são convertidos nos agentes terapeuticamente ativos da presente invenção (p.ex., um composto da Fórmula (I)). Um método comum para preparar um pró-fármaco é incluir uma ou mais frações selecionadas que são hidrolisadas sob condições fisiológicas para divulgar a molécula desejada. Em outras modalidades, o pró-fármaco é convertido por uma atividade enzimática do indivíduo. Por exemplo, ésteres ou carbonatos (p.ex., ésteres ou carbonatos de álcoois ou ácidos carboxílicos) são pró-fármacos preferenciais da presente invenção. Em certas modalidades, alguns dos ou todos os compostos da Fórmula (I) em uma formulação representada acima podem estar substituídos pelo pró-fármaco adequado correspondente, p.ex., em que uma hidroxila no composto progenitor é apresentado como um éster ou um carbonato ou ácido carboxílico.
[0180] Uma “quantidade eficaz”, como usada aqui, refere-se a uma quantidade que é suficiente para alcançar um efeito biológico desejado. Uma “quantidade terapeuticamente eficaz”, como usada aqui, refere-se a uma quantidade que é suficiente para alcançar um efeito terapêutico desejado. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz pode se referir a uma quantidade que é suficiente para melhorar pelo menos um sinal ou sintoma de câncer.
[0181] Uma “resposta” a um método de tratamento pode incluir uma diminuição nos ou melhoria dos sintomas negativos, uma diminuição na progressão de uma doença ou seus sintomas, um aumento nos sintomas benéficos ou resultados clínicos, um abrandamento dos efeitos secundários, estabilização da doença, remediação parcial ou total da doença, entre outros.
Inibidores Alostéricos de PCSK9
[0182] Os requerentes identificaram e caracterizaram um sítio previamente não caracterizado de PCSK9, ao qual os compostos aqui divulgados se ligam. Como resultado, os Requerentes identificaram um conjunto de características químicas, ou um farmacóforo, que caracteriza os compostos que podem interagir com este sítio e inibir a atividade de PCSK9.
[0183] O conceito de 'farmacóforo' não é recente. Foi introduzido pela primeira vez por Paul Ehrlich em 1909 como "uma estrutura molecular que carrega (pharos) as características essenciais responsáveis pela atividade biológica de um fármaco (farmacêuticos)". Ehrlich, Uber den jetzigen stand derchemotherapie. Chem. Ber. 42:17. Esta definição foi posteriormente atualizada em 1977 por Peter Gund para "um conjunto de características estruturais em uma molécula que é reconhecida em um sítio recetor e é responsável pela atividade biológica daquela molécula" Gund, Three dimensional pharmacophoric pattern search. Prog. Mol. Subcell. Biol. 5: 117-143. Mais recentemente, a recomendação oficial da IUPAC de 1997 resumiu o conceito da seguinte forma: "Um farmacóforo é o conjunto de características estéricas e eletrônicas necessárias para garantir as interações supramoleculares ideais com um alvo biológico específico e para desencadear (ou bloquear) sua resposta "Wermuth, C.-G. et al. 1998 Glossary of terms used in medicinal chemistry (IUPAC Recommendations 1998). Pure Appl. Chem. 70:1129-1143. Assim, um farmacóforo não representa uma molécula única ou uma associação específica de grupos funcionais, mas um entendimento que é responsável pelas capacidades de interação molecular comum de um grupo de compostos em relação à sua estrutura alvo. O farmacóforo pode ser considerado como o maior denominador comum partilhado por um conjunto de moléculas ativas. Os farmacóforos são normalmente definidos por descritores farmacofóricos que incluem ligações H, sítios de interação hidrofóbica e eletrostática, definidos por átomos, centros de anel e pontos virtuais.
[0184] Usando as relações estrutura-atividade descritas abaixo e aqui, os Requerentes identificaram um farmacóforo que se liga a PCSK9 e inibe sua atividade. PCSK9 tem três domínios conhecidos: o prodomínio, o domínio catalítico e o domínio C- terminal. Cunningham na p. 414. No sítio ativo de PCSK9, foi identificada uma tríade catalítica de serina protease de Ser386, His226 e Asp186 que interage com LDLR e facilita sua internalização dentro da célula e eventual degradação. Estudos de mutantes com falta de função mostraram que o domínio C-terminal também é necessário para a atividade de degradação, mas não pode não se ligar ao LDLR. O sítio de ligação aqui identificado está localizado no domínio C-terminal. Sem desejar ser limitado por qualquer teoria, os inibidores divulgados podem agir alostericamente para modificar a conformação e função do domínio C-terminal de PCSK9 em outro lugar, em vez de se ligar diretamente ao sítio do domínio catalítico da enzima.
[0185] O domínio C-terminal de PCSK9 tem três módulos, denotados M1, M2 e M3. Os limites dos módulos foram descritos como incluindo intervalos ligeiramente diferentes de resíduos de aminoácidos conforme a pesquisa em PCSK9 foi desenvolvida. As diferenças nas gamas servem principalmente como descritores de localização e não denotam qualquer atividade específica de um ou mais resíduos específicos. Em algumas modalidades, o domínio M1 varia dos resíduos 457-527, o domínio M2 varia dos resíduos 534-601 e o domínio M3 varia dos resíduos 608-679. Em outras modalidades, o domínio M1 varia dos resíduos 447-530, o domínio M2 varia dos resíduos 531-604 e o domínio M3 varia dos resíduos 608-683.
[0186] FIGURA 1 fornece uma estrutura cristalina do domínio C-
terminal. Halgren et al., J. Chem. Inf. Modelo. 2009 49:377-389. Na estrutura cristalina, o domínio C-terminal tinha vários segmentos desordenados e um maior nível de flexibilidade. Cunningham na p. 416. Os resultados experimentais na técnica sugerem que o domínio C- terminal está envolvido na secreção de PCSK9, que é necessária para a sua atividade na degradação de LDLR. Cunningham na p. 417. O domínio C-terminal também desempenha um papel no direcionamento do complexo PCSK9-LDLR para os endossomos/organelos de lisossomos dentro das células para degradação. Saavedra et al. J. Biol. Chem. 2012 287: 43492-43501. Estudos de mutantes em que o domínio M2 de PCSK9 foi removido resultaram na perda da atividade extracelular da enzima, mas não na sua atividade intracelular. Saavedra na p. 43500. Assim, o sítio de ligação presentemente descrito localizado no domínio C-terminal poderia influenciar a atividade de PCSK9 em qualquer uma de uma série de vias conhecidas ou indeterminadas.
[0187] As principais características do sítio de ligação incluem uma tríade de pares de átomos ligados por hidrogênio que abrangem os domínios M2 e M3, como mostrado na FIGURA 2. Com base nas estruturas cristalinas de PCSK9 ligado aos compostos divulgados, os compostos de Fórmula I interagem com o sítio de ligação como segue: Tipo de ligação H Resíduo PCSK9 Átomo de 2-aminopirimidina Aceitador A Val 589 Aceitador é uma pirimidina N Doador B Val 589 Doador é o grupo 2-NH Aceitador C Ser 636 Aceitador é a outra pirimidina N
[0188] Os números dessas posições de resíduos são relativos à isoforma mais comum de PCSK9. Uma isoforma é um peptídeo ou proteína que possui diferenças em sua sequência de aminoácidos, mas é traduzida do mesmo gene. No entanto, devido à inclusão e deleção de alguns resíduos durante a transcrição e tradução, a numeração dos aminoácidos aqui descritos pode mudar em uma isoforma diferente. As isoformas também podem ocorrer devido a variações naturais na sequência genética. A presente divulgação inclui todas as isoformas de PCSK9 e suas posições de resíduos correspondentes em isoformas ou outras sequências mutantes. Em algumas modalidades, as isoformas de PCSK9 podem ter cerca de 90%, cerca de 91%, cerca de 92%, cerca de 93%, cerca de 94%, cerca de 95%, cerca de 96%, cerca de 97%, cerca de 98%, cerca de 99%, cerca de 99,2%, cerca de 99,4%, cerca de 99,6%, cerca de 98,8% ou cerca de 99,9% de homologia de sequência com PCSK9 humano tendo a sequência dada na seção Ensaios Biológicos abaixo. As sequências isoforma (SEQID Nos 1-6) são fornecidas após a seção de Ensaios Biológicos.
[0189] Como os compostos divulgados atuam como um aceitador de ligação H em um nitrogênio de pirimidinila e um doador A no 2-NH- de seu grupo 2-amino pirimidinila com Val589, uma tríade de ligação no sítio de ligação é formada a partir de dois resíduos PCSK9. O outro nitrogênio de pirimidinila se liga como um aceitador C de ligação a H a Ser636. A distância de ligação entre cada átomo da tríade do farmacóforo, conforme divulgado neste documento, é de cerca de 2,3 Å a cerca de 2,5 Å, como mostrado na FIGURA 3. Por exemplo, o aceitador A é 2,3-2,4 Å do doador B e 2,3-2,5 Å do aceitador C. O doador B é 2,3-2,5 Å do aceitador C.
[0190] Como mostrado abaixo, os três átomos de nitrogênio do núcleo 2-aminopirimidinila dos compostos divulgados interagem com a tríade. Análogos sem uma dessas características de ligação não exibem ligação detetável a PCSK9 humano.
Ligação não Ligação não Ligação não KD = 54 µM detetável detetável detetável
[0191] Como mostrado na FIGURA 4, esta tríade de ligação H é evidente em compostos totalmente elaborados da invenção, tal como o composto 162.
[0192] São divulgados aqui métodos de inibição de PCSK9, compreendendo o contato de PCSK9 com um inibidor de PCSK9 que se liga a um bolso de ligação definido pelos resíduos de aminoácidos Val589 e Ser636 de PCSK9 humano. Em algumas modalidades, o inibidor de PCSK9 é um inibidor alostérico. Em algumas modalidades, o método compreende o contato da superfície de uma célula que secreta PCSK9 com um inibidor de PCSK9 que se liga a um bolso de ligação definido pelos resíduos de aminoácidos Val589 e Ser636 de PCSK9 humano. Em certas modalidades, o método compreende a ligação de PCSK9 que é intracelular com um inibidor de PCSK9 que se liga a um bolso de ligação definido pelos resíduos de aminoácidos Val589 e Ser636 de PCSK9 humano. Em algumas modalidades, o método compreende o contato de uma célula que expressa PCSK9 com um inibidor de PCSK9 que se liga a um bolso de ligação definido pelos resíduos de aminoácidos Val589 e Ser636 de PCSK9 humano. Em outras modalidades, o método compreende a ligação de PCSK9 que está no plasma, com um inibidor de PCSK9 que se liga a um bolso de ligação definido pelos resíduos de aminoácidos Val589 e Ser636 de PCSK9 humano.
[0193] Em algumas modalidades, o inibidor compreende um grupo aceitador/doador de ligação H com duas frações aceitadoras de ligação H e uma fração doadora de ligação H disposta para doar uma ligação H e aceitar uma ligação H da funcionalidade de amida estrutural do resíduo Val589, e aceitar uma ligação H da cadeia lateral de hidroximetila de Ser636 de PCSK9 humano.
[0194] Em certas modalidades, o inibidor compreende um grupo aceitador/doador de ligação H com duas frações doadoras de ligação H e uma fração aceitadora de ligação H disposta para doar uma ligação H e aceitar uma ligação H da funcionalidade de amida estrutural do resíduo Val589, e doar uma ligação H para a cadeia lateral de hidroximetila de Ser636 de PCSK9 humano.
[0195] Em certas modalidades, o inibidor compreende ainda um ou mais dos seguintes:
[0196] a) uma fração aceitadora de ligação H disposta para se ligar aos resíduos de aminoácidos Ser642, His643 ou Val 644,
[0197] b) uma fração doadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Ala637 ou Thr641, e
[0198] c) uma fração de interação de empilhamento cátion-pi disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Arg495 ou His591,
[0199] em que o grupo aceitador/doador de ligação H está ligado aos resíduos de aminoácidos Val589 e Ser636 de PCSK9 humano. Em certas modalidades, o inibidor compreende ainda uma fração aceitadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Glu612. A ligação pode ser uma ligação H direta ou ligação H indireta (por exemplo, onde ocorre ligação H mediada por água).
[0200] Embora a tríade de ligação H seja comum aos compostos inibidores aqui divulgados, alguns compostos têm ligações H adicionais a outros resíduos no farmacóforo. Por exemplo, como mostrado na FIGURA 5, o composto 43 forma a tríade comum de ligação H de 2-aminopirimidina com o farmacóforo e o 2-aminobenzotiazol forma uma ligação H com Ala637 e uma molécula de água. A ligação de H adicional ocorre com o substituinte sulfonamida no anel benzotiazol. O resíduo Val644 é um doador de ligação H e Ser642 é um aceitador de ligação H.
[0201] A estrutura cristalina do composto 60 ligado ao farmacóforo, mostrado na FIGURA 6, ilustra que, além da tríade de ligação H, as interações de empilhamento cátion-pi ocorrem entre Arg495 no domínio M1 e o anel de benzoxazol. Estas interações de empilhamento cátion- pi também podem ocorrer com His591 (mostrado como HIE591) no domínio M2 como mostrado no composto 5 ligado ao sítio de ligação na FIGURA 7. O composto 5 tem ligações H adicionais entre His643 e o oxigênio de carbonila e entre Thr641 e o hidrogênio do grupo hidroxila.
[0202] A versatilidade do sítio de ligação para ligar compostos de estrutura variável é ainda ilustrada pelo composto 133. Como mostrado na FIGURA 8, o composto 133 tem dois grupos funcionais 2- aminopirimidinila que interagem com o sítio de ligação. O anel pirimidinila com seu substituinte tiometila se liga à tríade de ligação H comum formada a partir de Ser 636 e Val 589. O anel pirimidila substituído com um éster metílico forma cinco ligações H adicionais com Ala637, Val644 e duas moléculas de água. Uma interação de empilhamento cátion-pi ocorre entre His591 (mostrado como HIE591) e o anel de pirimidina. Além disso, a FIGURA 9 ilustra a interação do composto 458B com o NH da glicina 640.
[0203] A substituição em torno do núcleo de 2-aminopirmidinila pode ser selecionada para envolver uma combinação dessas características de afinidade para promover a ligação H aumentada ou empilhamento de cátions-pi, aumentando assim a afinidade de um composto para o sítio de ligação, aumentando assim seu efeito inibitório. O sítio de ligação envolve resíduos de todos os três subdomínios do domínio C-terminal. A flexibilidade do farmacóforo que envolve este sítio de ligação fornece inúmeras oportunidades para projetar compostos, tais como compostos tendo o grupo central 2-aminopirimidila ou um equivalente bioisóstero, com estruturas que se ligam por hidrogênio à tríade (por exemplo, com dois doadores e um aceitador de ligações H) e envolvem um ou mais dos outros elementos de afinidade (por exemplo, a interação de empilhamento cátion-pi e os sítios de ligação H adicionais).
[0204] Conforme usado neste documento, o termo "interage" no contexto de um inibidor em relação a um ou mais resíduos de PCSK9 refere-se a associações diretas ou indiretas do inibidor com a estrutura da enzima ou com a cadeia lateral de qualquer determinado resíduo. Por exemplo, as interações incluem ligações covalentes, ligações de hidrogênio, atrações hidrofóbicas, interações cátion-pi, interações ânion-pi e outras bem conhecidas na técnica.
[0205] Os aminoácidos que se ligam ao farmacóforo dos inibidores, a tríade formada entre Val589 e Se 636, também podem interagir adicionalmente com resíduo(s) de aminoácido(s) nos domínios M1, M2 e M3. Em certas modalidades, o inibidor interage com pelo menos um resíduo no domínio M2 C-terminal e pelo menos um resíduo no domínio M3 C-terminal. Em algumas modalidades, o inibidor ainda interage com pelo menos um resíduo no domínio M1 C-terminal. Em certas modalidades, o inibidor interage com pelo menos um resíduo no domínio M1 C-terminal e pelo menos um resíduo no domínio M3 C-terminal. Em outras modalidades, o inibidor interage com pelo menos um resíduo no domínio M1 C-terminal e pelo menos um resíduo no domínio M2 C- terminal. Em certas modalidades, o inibidor interage com PCSK9 entre os resíduos de aminoácidos 558-590 no domínio M2 C-terminal e os resíduos de aminoácidos 631-650 no domínio M3 C-terminal.
[0206] Em certas modalidades, o inibidor interage com pelo menos um resíduo na cadeia beta 3 e na cadeia beta 5 do domínio M2 C- terminal e na cadeia beta 3 e na cadeia beta 4 do domínio M3 C- terminal. Em certas modalidades, o inibidor interage com o PCSK9 criado entre os resíduos de aminoácidos 558-566 na cadeia beta 3 do domínio M2 C-terminal e os resíduos de aminoácidos 587-590 na cadeia beta 5 do domínio M2 C-terminal. Em outras modalidades, o inibidor interage com um bolso em PCSK9 criado entre os resíduos de aminoácidos 631-637 na cadeia beta 3 do domínio C-terminal M3 e os resíduos de aminoácidos 644-650 na cadeia beta 4 do domínio C- terminal M3.
[0207] A avaliação estrutural do sítio de ligação de PCSK9 pode ser realizada usando uma série de técnicas bem conhecidas do perito na técnica. Por exemplo, as FIGS. 4-8 ilustram renderizações 3-D de interações do composto PCSK9 conforme determinado a partir de estruturas cristalinas de raios-X. Detalhes sobre a preparação e análise das estruturas cristalinas são fornecidos nos exemplos abaixo. A análise dos dados de raios-X fornece uma renderização 3D do composto ligado ao PCSK9, onde a orientação do átomo e as distâncias podem indicar o tipo de ligações presentes, tais como covalente, ligação H, empilhamento pi e outras.
[0208] Outros métodos incluem técnicas de modelagem de computador 3D que renderizam uma imagem gerada por computador de um composto interagindo com um substrato. Tal como acontece com os dados de estrutura cristalina, os programas de modelagem de computador podem apresentar informações 3D como um invólucro da superfície ou em formato de bola / bastão mostrando átomos em matriz 3D. Em um exemplo não limitativo, está bem dentro dos peritos na técnica usar um modelo de computador de um composto atualmente divulgado ligado a PCSK9 para identificar como e onde o composto interage com PCSK9. Métodos de Uso
[0209] O gene PCSK9 foi identificado usando técnicas de mapeamento genético no DNA de indivíduos com hipercolesterolemia autossômica dominante (Abifadel, et al. Nat. Genet. 2003 34: 154-6). A proteína codificada é uma serina protease que é maioritariamente expressa no fígado, intestino, rim e sistema nervoso. Embora não desejando ser limitado por nenhuma teoria particular, estudos sobre mutações no gene indicaram que seu papel putativo era na redução dos receptores de LDL na superfície celular independentemente de sua atividade catalítica. (Abifadel, et al. Expert Opin. Ther. Pat. 2010 20: 1547-71). A ligação de PCSK9 aos receptores resulta em sua degradação lisossômica. Esta degradação intensificada resulta em aumentos na quantidade de lipoproteína de baixa densidade LDL circulante (LDL-c). PCSK9 é sobrerregulado por estatinas, SREBP-1a e SREBP-2, agonista de LXR e insulina, mas subregulado por colesterol dietético, glucagon, etinilestradiol, ácido quenodesoxicólico e pelo receptor farnesoide X (FXR) ativado por ácidos biliares (Maxwell, et al. J. Lipid Res. 2003 44: 2109–19; Persson et al. Endocrinology 2009 150: 1140–6; Langhi et al. FEBS Lett. 2008 582: 949–55). Uma vez que um nível elevado de PCSK9 diminui a abundância do receptor de LDL na superfície celular, doses crescentes de estatinas não conseguem alcançar os resultados redutores do LDL-colesterol proporcionais. Assim são divulgados aqui métodos para tratamento de uma ampla gama de doenças e condições cardiovasculares que beneficiam da inibição de PCSK9 diminuindo deste modo o LDL-c.
[0210] Em certas modalidades, os métodos de inibição de PCSK9 divulgados ocorrem em um indivíduo com sua necessidade, tratando deste modo uma doença ou disfunção mediada por PCSK9.
[0211] Igualmente são divulgados aqui métodos de tratamento ou prevenção de uma doença ou disfunção mediada por PCSK9 compreendendo administração de um composto da Fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades são divulgados aqui métodos de tratamento de uma doença ou disfunção mediada por PCSK9 compreendendo administração de um composto da Fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades são divulgados aqui métodos de prevenção de uma doença ou disfunção mediada por PCSK9 compreendendo administração de um composto da Fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. A prevenção de eventos cardiovasculares através da inibição de PCSK9 foi descrita, p.ex., em Robinson et al., Artherosclerosis 2015 243: 593-597.
[0212] Doenças e condições cardiovasculares exemplificativas incluem, mas não estão limitadas a, dislipidemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, hiperlipidemia, hipoalfalipoproteinemia, síndrome metabólica, complicações diabéticas, aterosclerose, acidente vascular cerebral, demência vascular, doença renal crônica, doença cardíaca coronariana, doença arterial coronariana, retinopatia, inflamação, trombose, doença vascular periférica ou insuficiência cardíaca congestiva.
[0213] Em certas modalidades, doenças e condições cardiovasculares exemplificativas incluem, mas não estão limitadas a, hipercolesterolemia, hiperlipidemia, hiperlipoproteinemia, hipertrigliceridemia, dislipidemia, dislipoproteinemia, aterosclerose, esteatose hepática, síndrome metabólica e doença arterial coronariana. Em certas modalidades, a doença é hipercolesterolemia, tal como hipercolesterolemia familiar ou hipercolesterolemia autossômica dominante. Em certas modalidades, a doença é hiperlipidemia. Em certas modalidades, a doença é doença arterial coronariana.
[0214] Em certas modalidades, os métodos de tratamento divulgados podem diminuir elevados níveis de colesterol sérico circulante, tal como LDL-colesterol e VLDL-colesterol. Adicionalmente, os métodos divulgados são úteis para diminuir os triglicerídeos séricos circulantes, lipoproteína A sérica circulante, LDL sérica circulante e lipoproteínas aterogênicas. Em certas modalidades, as doenças ou condições tratadas com os compostos e composições divulgados incluem aterosclerose e formação de placas ateroscleróticas. Os indivíduos tendo uma mutação de ganho-de-função no gene PCSK9 também beneficiam com o tratamento com os compostos e composições divulgados neutralizando a mutação através de sua inibição de PCSK9.
[0215] A inibição de PCSK9 mostrou também benefício terapêutico no tratamento de sépsis em um indivíduo. O choque séptico é uma complicação frequentemente fatal de uma infecção microbiana grave (sépsis) que desencadeia uma resposta inflamatória sistêmica descontrolada e subsequente falência de órgãos. A sépsis tem origem nas paredes das células microbianas que contêm porções lipídicas patogênicas tais como lipopolissacarídeo (LPS; bactérias Gram- negativas). Os LPS são ligandos potentes para receptores imunitários inatos de mamíferos [receptores tipo Toll (TLRs)] e assim figuram proeminentemente na resposta inflamatória séptica (choque séptico ou sépsis). A PCSK9 reduz a captação de LPS pelos receptores de LDL do fígado, tal que o LPS livre sobre-estimula a resposta imunitária do corpo ao patógeno levando à sépsis. A inibição de PCSK9 é benéfica na retenção dos receptores de LDL do fígado para efetuar a eliminação sistêmica do patógeno e a desintoxicação em resposta à sépsis (Ver, p.ex., Walley et al. Sci. Translat. Med. 2014 6: 1-10).
[0216] São divulgados aqui métodos de tratamento de sépsis ou choque séptico compreendendo administração de um composto da Fórmula (I) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, os métodos de tratamento divulgados são úteis para aumentar a captação de LPS. Certas modalidades proporcionam um método de diminuição da resposta inflamatória induzida por sépsis ou choque séptico. Composições Farmacêuticas
[0217] As composições e métodos da presente invenção podem ser utilizados para tratar um indivíduo com sua necessidade. Em certas modalidades, o indivíduo é um mamífero tal como um humano ou um mamífero não humano. Quando administrada a um indivíduo, tal como um humano, a composição ou o composto é preferencialmente administrado como uma composição farmacêutica compreendendo, por exemplo, um composto da invenção e um transportador farmaceuticamente aceitável. Os transportadores farmaceuticamente aceitáveis são bem conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, soluções aquosas tais como água ou solução salina fisiologicamente tamponada ou outros solventes ou veículos tais como glicóis, glicerol, óleos tais como azeite ou ésteres orgânicos injetáveis. Em uma modalidade preferencial, quando tais composições farmacêuticas são para administração humana, particularmente para vias de administração invasivas (i.e., vias, tais como injeção ou implantação, que contornam o transporte ou difusão através de uma barreira epitelial), a solução aquosa está isenta de pirogênios ou substancialmente isenta de pirogênios. Os excipientes podem ser escolhidos, por exemplo, para efetuar a liberação retardada de um agente ou para visar seletivamente uma ou mais células, tecidos ou órgãos. A composição farmacêutica pode estar na forma de unidade de dosagem tal como comprimido, cápsula (incluindo cápsula polvilhada e cápsula de gelatina), grânulo, liófilo para reconstituição, pó, solução, xarope, supositório, injeção ou similares. A composição pode estar também presente em um sistema de entrega transdérmica, p.ex., um emplastro dérmico. A composição pode estar também presente em uma solução adequada para administração tópica, tal como um colírio.
[0218] Um transportador farmaceuticamente aceitável pode conter agentes fisiologicamente aceitáveis que atuam, por exemplo, para estabilizar, aumentar a solubilidade ou para aumentar a absorção de um composto tal como um composto da invenção. Tais agentes fisiologicamente aceitáveis incluem, por exemplo, carboidratos, tais como glucose, sacarose ou dextranos, antioxidantes, tais como ácido ascórbico ou glutationa, agentes quelantes, proteínas de baixo peso molecular ou outros estabilizantes ou excipientes. A escolha de um transportador farmaceuticamente aceitável, incluindo um agente fisiologicamente aceitável, depende, por exemplo, da via de administração da composição. A preparação ou composição farmacêutica pode ser um sistema de entrega de fármacos autoemulsificante ou um sistema de entrega de fármacos automicroemulsificante. A composição (preparação) farmacêutica pode ser também um lipossomo ou outra matriz polimérica, que pode ter incorporado aí, por exemplo, um composto da invenção. Os lipossomos, por exemplo, que compreendem fosfolipídeos ou outros lipídeos, são transportadores não tóxicos, fisiologicamente aceitáveis e metabolizáveis que são relativamente simples de preparar e administrar.
[0219] A frase “farmaceuticamente aceitável” é usada aqui para se referir àqueles compostos, materiais, composições e/ou formas de dosagem que são, dentro do escopo do bom senso médico, adequados para uso em contato com os tecidos de um indivíduo sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica ou outro problema ou complicação, compatíveis com uma razão benefício/risco razoável.
[0220] A frase “transportador farmaceuticamente aceitável” como usada aqui significa um material, composição ou veículo farmaceuticamente aceitável, tal como um enchimento, diluente, excipiente, solvente ou material encapsulante líquido ou sólido. Cada transportador tem de ser “aceitável” no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não prejudicial ao indivíduo. Alguns exemplos de materiais que podem servir como transportadores farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) açúcares, tais como lactose, glucose e sacarose; (2) amidos, tais como amido de milho e amido de batata; (3) celulose, e seus derivados, tais como celulose de carboximetila de sódio, celulose de etila e acetato de celulose; (4)
tragacanto em pó; (5) malte; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tais como manteiga de cacau e ceras para supositórios; (9) óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de cártamo, óleo de gergelim, azeite, óleo de milho e óleo de soja; (10) glicóis, tais como propilenoglicol; (11) polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietilenoglicol; (12) ésteres, tais como oleato de etila e laurato de etila; (13) ágar; (14) agentes tamponantes, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; (15) ácido algínico; (16) água isenta de pirogênios; (17) solução salina isotônica; (18) solução de Ringer; (19) álcool etílico; (20) soluções de tampão fosfato; e (21) outras substâncias não tóxicas compatíveis usadas em formulações farmacêuticas.
[0221] Uma composição (preparação) farmacêutica pode ser administrada a um indivíduo por qualquer uma de um número de vias de administração incluindo, por exemplo, oralmente (por exemplo, poções como em soluções ou suspensões aquosas ou não aquosas, comprimidos, cápsulas (incluindo cápsulas polvilhadas e cápsulas de gelatina), bólus, pós, grânulos, pastas para aplicação na língua); absorção através da mucosa oral (p.ex., sublingualmente); analmente, retalmente ou vaginalmente (por exemplo, como um pessário, creme ou espuma); parenteralmente (incluindo intramuscularmente, intravenosamente, subcutaneamente ou intratecalmente como, por exemplo, uma solução ou suspensão estéril); nasalmente; intraperitonealmente; subcutaneamente; transdermicamente (por exemplo como um emplastro aplicado na pele); e topicamente (por exemplo, como um creme, pomada ou pulverização aplicado na pele ou como um colírio). O composto pode ser também formulado para inalação. Em certas modalidades, um composto pode ser simplesmente dissolvido ou suspenso em água estéril. Detalhes de vias de administração apropriadas e composições adequadas para as mesmas podem ser encontrados, por exemplo, nas Pat. dos E.U.A. Nos.
6,110,973, 5,763,493, 5,731,000, 5,541,231, 5,427,798, 5,358,970 e 4,172,896, bem como nas patentes citadas aí.
[0222] As formulações podem ser convenientemente apresentadas em forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por quaisquer métodos bem conhecidos na técnica da farmácia. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com um material transportador para produzir uma única forma de dosagem variará dependendo do indivíduo sendo tratado, do modo de administração particular. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com um material transportador para produzir uma única forma de dosagem será geralmente aquela quantidade do composto que produz um efeito terapêutico. Geralmente, em cem por cento, esta quantidade variará de cerca de 1 por cento a cerca de noventa e nove por cento do ingrediente ativo, preferencialmente de cerca de 5 por cento a cerca de 70 por cento, o mais preferencialmente de cerca de 10 por cento a cerca de 30 por cento.
[0223] Os métodos de preparação destas formulações ou composições incluem o passo de associação de um composto ativo, tal como um composto da invenção, ao transportador e, opcionalmente, um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas por associação uniforme e íntima de um composto da presente invenção a transportadores líquidos, ou transportadores sólidos finamente divididos, ou ambos, e depois, se necessário, moldagem do produto.
[0224] As formulações da invenção adequadas para administração oral podem estar na forma de cápsulas (incluindo cápsulas polvilhadas e cápsulas de gelatina), hóstias, pílulas, comprimidos, pastilhas (usando uma base aromatizada, usualmente sacarose e acácia ou tragacanto), liófilo, pós, grânulos ou como uma solução ou suspensão em um líquido aquoso ou não aquoso ou como uma emulsão líquida óleo-em-água ou água-em-óleo ou como um elixir ou xarope ou como pastilhas (usando uma base inerte, tal como gelatina e glicerina ou sacarose e acácia) e/ou como colutórios e similares, cada um contendo uma quantidade predeterminada de um composto da presente invenção como um ingrediente ativo. As composições ou compostos podem ser também administrados como um bólus, eletuário ou pasta.
[0225] Para preparar formas de dosagem sólidas para administração oral (cápsulas (incluindo cápsulas polvilhadas e cápsulas de gelatina), comprimidos, pílulas, drageias, pós, grânulos e similares), o ingrediente ativo é misturado com um ou mais transportadores farmaceuticamente aceitáveis, tais como citrato de sódio ou fosfato dicálcico e/ou qualquer um dos seguintes: (1) enchimentos ou extensores tais como amidos, lactose, sacarose, glucose, manitol e/ou ácido silícico; (2) aglutinantes, tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, pirrolidona de polivinila, sacarose e/ou acácia; (3) umectantes, tais como glicerol; (4) agentes desintegrantes, tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos e carbonato de sódio; (5) agentes retardadores de solução, tais como parafina; (6) aceleradores da absorção, tais como compostos de amônio quaternário; (7) agentes molhantes, tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol; (8) absorventes, tais como caulino e argila bentonítica; (9) lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, lauril sulfato de sódio e suas misturas; (10) agentes complexantes, tais como ciclodextrinas modificadas e não modificadas; e (11) agentes corantes. No caso de cápsulas (incluindo cápsulas polvilhadas e cápsulas de gelatina), comprimidos e pílulas, as composições farmacêuticas podem também compreender agentes tamponantes. Composições sólidas de um tipo similar podem ser também usadas como enchimentos em cápsulas de gelatina com enchimento mole ou duro usando tais excipientes como lactose ou açúcares do leite, bem como polietilenoglicóis de elevado peso molecular e similares.
[0226] Um comprimido pode ser preparado por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Os comprimidos prensados podem ser preparados usando aglutinante (por exemplo, gelatina ou celulose de hidroxipropilmetila), lubrificante, diluente inerte, conservante, desintegrante (por exemplo, glicolato de amido sódico ou celulose de carboximetila sódica reticulada), agente tensoativo ou dispersante. Os comprimidos moldados podem ser preparados por moldagem em uma máquina adequada de uma mistura do composto em pó umedecido com um diluente líquido inerte.
[0227] Os comprimidos e outras formas de dosagem sólidas das composições farmacêuticas, tais como drageias, cápsulas (incluindo cápsulas polvilhadas e cápsulas de gelatina), pílulas e grânulos, podem ser opcionalmente sulcados ou preparadas com revestimentos e invólucros, tais como revestimentos entéricos e outros revestimentos bem conhecido na técnica de formulação farmacêutica. Podem ser também formulados de modo a proporcionar liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo aí usando, por exemplo, celulose de hidroxipropilmetila em proporções variáveis para proporcionar o perfil de liberação desejado, outras matrizes poliméricas, lipossomos e/ou microesferas. Podem ser esterilizados por, por exemplo, filtração através de um filtro de retenção de bactérias ou por incorporação de agentes esterilizantes na forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas em água estéril ou algum outro meio injetável estéril imediatamente antes do uso. Estas composições podem também conter opcionalmente agentes opacificantes e podem ser de uma composição que libertam somente o(s) ingrediente(s) ativo(s) ou, preferencialmente, em uma certa porção do trato gastrointestinal,
opcionalmente, de uma maneira retardada. Exemplos de composições de embebição que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras. O ingrediente ativo pode estar também na forma microencapsulada, se apropriado, com um ou mais dos excipientes descritos acima.
[0228] As formas de dosagem líquidas úteis para administração oral incluem emulsões farmaceuticamente aceitáveis, liófilos para reconstituição, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires. Adicionalmente ao ingrediente ativo, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes comummente usados na técnica, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, ciclodextrinas e seus derivados, agentes solubilizantes e emulsificantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propilenoglicol, 1,3- butilenoglicol, óleos (em particular, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, gérmen, azeitona, rícino e gergelim), glicerol, álcool tetra-hidrofurílico, polietilenoglicóis e ésteres de ácidos graxos de sorbitana e suas misturas.
[0229] Para além dos diluentes inertes, as composições orais podem também incluir adjuvantes tais como agentes molhantes, agentes emulsificantes e de suspensão, agentes adoçantes, aromatizantes, corantes, perfumantes e conservantes.
[0230] As suspensões, adicionalmente aos compostos ativos, podem conter agentes de suspensão como, por exemplo, álcoois isoestearílicos etoxilados, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonita, ágar- ágar e tragacanto e suas misturas.
[0231] As formulações das composições farmacêuticas para administração retal, vaginal ou uretral podem ser apresentadas como um supositório, que pode ser preparado por mistura de um ou mais compostos ativos com um ou mais excipientes ou transportadores não irritantes adequados compreendendo, por exemplo, manteiga de cacau, polietilenoglicol , uma cera para supositórios ou um salicilato, e que é sólido à temperatura ambiente, mas líquido à temperatura corporal e, portanto, fundirá no reto ou cavidade vaginal e liberar o composto ativo.
[0232] As formulações das composições farmacêuticas para administração à boca podem ser apresentadas como um colutório ou uma pulverização oral ou uma pomada oral.
[0233] Alternativamente ou adicionalmente, as composições podem ser formuladas para entrega através de um cateter, endoprótese, fio ou outro dispositivo intraluminal. A entrega através de tais dispositivos pode ser especialmente útil para entrega à bexiga, uretra, ureter, reto ou intestino.
[0234] As formulações que são adequadas para administração vaginal incluem também pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações em pulverização contendo tais transportadores como são conhecidos na técnica como sendo apropriados.
[0235] As formas de dosagem para a administração tópica ou transdérmica incluem pós, pulverizações, pomadas, pastas, cremes, loções, géis, soluções, emplastros e inalantes. O composto ativo pode ser misturado sob condições estéreis com um transportador farmaceuticamente aceitável e com quaisquer conservantes, tampões ou propulsores que possam ser requeridos.
[0236] As pomadas, pastas, cremes e géis podem conter, adicionalmente a um composto ativo, excipientes, tais como gorduras animais e vegetais, óleos, ceras, parafinas, amido, tragacanto, derivados de celulose, polietilenoglicóis, silicones, bentonitas, ácido silícico, talco e óxido de zinco ou suas misturas.
[0237] Os pós e pulverizações podem conter, adicionalmente a um composto ativo, excipientes tais como lactose, talco, ácido silícico, hidróxido de alumínio, silicatos de cálcio e pó de poliamida ou misturas destas substâncias. As pulverizações podem conter adicionalmente propulsores usuais, tais como clorofluoro-hidrocarbonetos e hidrocarbonetos voláteis não substituídos, tais como butano e propano.
[0238] Os emplastros transdérmicos têm a vantagem adicional de proporcionarem entrega controlada de um composto da presente invenção ao corpo. Tais formas de dosagem podem ser preparadas por dissolução ou dispersão do composto ativo no meio apropriado. Intensificadores da absorção podem ser também usados para aumentar o fluxo do composto através da pele. A taxa de tal fluxo pode ser controlada proporcionando uma membrana de controle da taxa ou dispersando o composto em uma matriz de polímero ou gel.
[0239] Formulações oftálmicas, pomadas oculares, pós, soluções e similares estão também contemplados como estando dentro do escopo desta invenção. Formulações oftálmicas exemplificativas são descritas nas Publicações dos E.U.A. Nos. 2005/0080056, 2005/0059744, 2005/0031697 e 2005/004074 e Patente dos E.U.A. No. 6,583,124, os conteúdos das quais são incorporados aqui por referência. Se desejado, as formulações oftálmicas líquidas têm propriedades similares àquelas dos fluidos lacrimais, humor aquoso ou humor vítreo ou são compatíveis com tais fluidos. Uma via de administração preferencial é administração local (p.ex., administração tópica, tal como colírios, ou administração através de um implante).
[0240] As frases “administração parenteral” e “administrado parenteralmente” como usadas aqui significam modos de administração sem ser administração enteral e tópica, usualmente por injeção, e inclui, sem limitação, injeção e infusão intravenosas, intramusculares, intra- arteriais, intratecais, intracapsulares, intraorbitais, intracardíacas, intradérmicas, intraperitoneais, transtraqueais, subcutâneas,
subcuticulares, intra-articulares, subcapsulares, subaracnoides, intraespinhais e intraesternais. As composições farmacêuticas adequadas para administração parenteral compreendem um ou mais compostos ativos em combinação com uma ou mais soluções, dispersões, suspensões ou emulsões aquosas ou não aquosas isotônicas estéreis farmaceuticamente aceitáveis ou pós estéreis que podem ser reconstituídos em soluções ou dispersões injetáveis estéreis imediatamente antes do uso, que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos, solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do receptor pretendido ou agentes de suspensão ou espessantes.
[0241] Exemplos de transportadores aquosos e não aquosos adequados que podem ser usados nas composições farmacêuticas da invenção incluem água, etanol, polióis (tais como glicerol, propilenoglicol, polietilenoglicol e similares), e suas misturas adequadas, óleos vegetais, tais como azeite, e ésteres orgânicos injetáveis, tais como oleato de etila. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de materiais de revestimento, tais como lecitina, pela manutenção do tamanho das partículas requerido no caso de dispersões, e pelo uso de tensoativos.
[0242] Estas composições podem também conter adjuvantes tais como conservantes, agentes molhantes, agentes emulsificantes e agentes dispersantes. A prevenção da ação de microrganismos pode ser assegurada pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, fenol, ácido sórbico e similares. Pode ser também desejável incluir agentes isotônicos, tais como açúcares, cloreto de sódio e similares nas composições. Adicionalmente, a absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser provocada pela inclusão de agentes que retardam a absorção tais como monoestearato de alumínio e gelatina.
[0243] Em alguns casos, de modo a prolongar o efeito de um fármaco, é desejável desacelerar a absorção do fármaco a partir da injeção intramuscular ou subcutânea. Isto pode ser alcançado pelo uso de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo tendo solubilidade em água insatisfatória. A taxa de absorção do fármaco depende então da sua taxa de dissolução que, por seu turno, pode depender do tamanho dos cristais e forma cristalina. Alternativamente, a absorção retardada de um fármaco parenteralmente administrado é alcançada por dissolução ou suspensão do fármaco em um veículo de óleo.
[0244] As formas de deposição injetáveis são preparadas por formação de matrizes microencapsuladas dos compostos em questão em polímeros biodegradáveis tais como polilactídeo-poliglicolídeo. Dependendo da razão entre fármaco e polímero, e da natureza do polímero particular usado, a taxa de liberação de fármaco pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). As formulações de depósito injetáveis são também preparadas por aprisionamento do fármaco em lipossomos ou microemulsões que são compatíveis com tecido corporal.
[0245] Para uso nos métodos desta invenção, os compostos ativos podem ser dados per se ou como uma composição farmacêutica contendo, por exemplo, 0,1 a 99,5% (mais preferencialmente, 0,5 a 90%) de ingrediente ativo em combinação com um transportador farmaceuticamente aceitável.
[0246] Os métodos de introdução podem ser também proporcionados por dispositivos recarregáveis ou biodegradáveis. Vários dispositivos poliméricos de liberação lenta foram desenvolvidos e testados in vivo nos últimos anos para a entrega controlada de fármacos, incluindo biofarmacêuticos proteináceos. Uma variedade de polímeros biocompatíveis (incluindo hidrogéis), incluindo polímeros tanto biodegradáveis quanto não degradáveis, pode ser usada para formar um implante para a liberação sustentada de um composto em um local alvo particular.
[0247] Os níveis de dosagem reais dos ingredientes ativos nas composições farmacêuticas podem ser variados de modo a obter uma quantidade do ingrediente ativo que é eficaz para alcançar a resposta terapêutica desejada para um paciente, composição e modo de administração particular, sem ser tóxico para o paciente.
[0248] O nível de dosagem selecionado dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto ou combinação de compostos particular usado ou do seu éster, sal ou amida, a via de administração, o momento de administração, a taxa de excreção do(s) composto(s) particular(es) sendo usada(s), a duração do tratamento, outros fármacos, compostos e/ou materiais usados em combinação com o(s) composto(s) particular(es) usado(s), idade, sexo, peso, condição, saúde geral e historial médico prévio do indivíduo sendo tratado e fatores similares bem conhecidos nas técnicas médicas.
[0249] Um médico ou veterinário perito na técnica pode prontamente determinar e prescrever a quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica requerida. Por exemplo, o médico ou veterinário poderia iniciar doses da composição farmacêutica ou composto a níveis mais baixos do que aqueles requeridos de modo a alcançar o efeito terapêutico desejado e aumentar gradualmente a dosagem até o efeito desejado ser alcançado. Por “quantidade terapeuticamente eficaz” se entende a concentração de um composto que é suficiente para provocar o efeito terapêutico desejado. É geralmente entendido que a quantidade eficaz do composto variará de acordo com o peso, sexo, idade e historial médico do indivíduo. Outros fatores que influenciam a quantidade eficaz podem incluir a, mas não estão limitados à, gravidade da condição do indivíduo, disfunção sendo tratada, estabilidade do composto e, se desejado, um outro tipo de agente terapêutico sendo administrado com o composto de a invenção. Uma dose total maior pode ser entregue por múltiplas administrações do agente. Os métodos para determinar a eficácia e dosagem são conhecidos dos peritos na técnica (Isselbacher et al. (1996) Harrison's Principles of Internal Medicine 13 ed., 1814-1882, aqui incorporado por referência).
[0250] Em geral, uma dose diária adequada de um composto ativo usado nas composições e métodos da invenção será aquela quantidade do composto que é a menor dose eficaz para produzir um efeito terapêutico. Uma tal dose eficaz dependerá geralmente dos fatores descritos acima.
[0251] Se desejado, a dose diária eficaz do composto ativo pode ser administrada como uma, duas, três, quatro, cinco, seis ou mais subdoses administradas separadamente em intervalos apropriados ao longo do dia, opcionalmente, em formas de dosagem unitária. Em certas modalidades da presente invenção, o composto ativo pode ser administrado duas ou três vezes diariamente. Em modalidades preferenciais, o composto ativo será administrado uma vez diariamente.
[0252] Em certas modalidades, os compostos da invenção podem ser usados sozinhos ou administrados conjuntamente com um outro tipo de agente terapêutico. Como usada aqui, a frase “administração conjunta” refere-se a qualquer forma de administração de dois ou mais compostos terapêuticos diferentes, tal que o segundo composto seja administrado enquanto o composto terapêutico previamente administrado é ainda eficaz no corpo (p.ex., os dois compostos são simultaneamente eficazes no indivíduo, que pode incluir efeitos sinérgicos dos dois compostos). Por exemplo, os diferentes compostos terapêuticos podem ser administrados na mesma formulação ou em uma formulação separada, concomitantemente ou sequencialmente.
Em certas modalidades, os diferentes compostos terapêuticos podem ser administrados no espaço de uma hora, 12 horas, 24 horas, 36 horas, 48 horas, 72 horas ou uma semana um do outro. Assim, um indivíduo que recebe tal tratamento pode beneficiar de um efeito combinado de diferentes compostos terapêuticos.
[0253] Em certas modalidades, a administração conjunta de compostos da invenção com um ou mais agente(s) terapêutico(s) adicional(ais) proporciona eficácia melhorada em relação a cada administração individual do composto da invenção (p.ex., composto da fórmula I ou Ia) ou ao um ou mais agente(s) terapêutico(s) adicional(ais). Em certas tais modalidades, a administração conjunta proporciona um efeito aditivo, em que um efeito aditivo refere-se à soma de cada um dos efeitos da administração individual do composto da invenção e do um ou mais agente(s) terapêutico(s) adicional(ais).
[0254] Esta invenção inclui o uso de sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos da invenção nas composições e métodos da presente invenção. Em certas modalidades, os sais contemplados da invenção incluem, mas não estão limitados a, sais de alquila, dialquila, trialquila ou tetra-alquila amônio. Em certas modalidades, os sais contemplados da invenção incluem, mas não estão limitados a, sais de L-arginina, benentamina, benzatina, betaína, hidróxido de cálcio, colina, deanol, dietanolamina, dietilamina, 2-(dietilamino)etanol, etanolamina, etilenodiamina, N-metilglucamina, hidrabamina, 1H-imidazol, lítio, L- lisina, magnésio, 4-(2-hidroxietil)morfolina, piperazina, potássio, 1-(2- hidroxietil)pirrolidina, sódio, trietanolamina, trometamina e zinco. Em certas modalidades, os sais contemplados da invenção incluem, mas não estão limitados a, sais de Na, Ca, K, Mg, Zn ou outros metálicos.
[0255] Os sais de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis podem também existir como vários solvatos, tais como com água, metanol, etanol, dimetilformamida e similares. Podem ser também preparadas misturas de tais solvatos. A fonte de tal solvato pode ser do solvente de cristalização, inerente ao solvente de preparação ou cristalização ou adventício a tal solvente.
[0256] Agentes molhantes, emulsificantes e lubrificantes, tais como lauril sulfato de sódio e estearato de magnésio, bem como agentes corantes, agentes de liberação, agentes de revestimento, agentes adoçantes, aromatizantes e perfumantes, conservantes e antioxidantes podem estar também presentes nas composições.
[0257] Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, hidrocloreto de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e similares; (2) antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato de ascorbila, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propila, alfa-tocoferol e similares; e (3) agentes quelantes de metal, tais como ácido cítrico, ácido etilenodiaminatetra-acético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico e similares. Exemplos
[0258] Exemplos de compostos da Fórmula (I), ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, tendo atividade biológica útil estão listados nas Tabelas 1-10. Os espectros de 1H RMN foram realizados em um espectrômetro Varian MR-400 operando a 400 MHz (frequência de prótons), equipado com: uma bobina de gradiente z autoblindada 5 mm 1H/nX de ponta sonda de banda larga para detecção reversa, unidade de canal de bloqueio digital de deutério, unidade de detecção digital em quadratura com deslocamento de frequência de deslocamento do transmissor. O deslocamento químico é relatado como valores δ em ppm em relação ao trimetilsilano (TMS) como um padrão interno. As constantes de acoplamento (valores J) são dadas em hertz (Hz) e as multiplicidades são relatadas usando a seguinte abreviatura (s
= singuleto, d = dupleto, t = tripleto, q = quarteto, m = multipleto, br = largo, nd = não determinado). A.
Métodos analíticos Método 1 (FA ácido) Configuração de UPLC Solventes: - Água (Elevada pureza através da unidade PureLab Option) com ácido fórmico a 0,1% B Acetonitrila (Grau UV longíquo) com ácido fórmico a 0,1% (V/V) Coluna: - Acquity UPLC HSS C18 1,8 um 100 x 2,1 mm. (Mais cartucho guarda) Caudal: - 0,5 mL/min Gradiente: Tempo (min) % de A % de B 0,00 95 5 1,2 95 5 3,5 0 100 4,9 0 100 5 95 5 6 95 5
Injeções 0,5-2 uL Detecção de UV através de Waters DAD Gama de Partida (nm) 210 Gama Final (nm) 400 Resolução (nm) 1,2 Detecção de MS: Waters SQD2, UPLC-MS de quadrapolo único Gama de varredura para Dados de MS (m/z) Início (m/z) 100 Final (m/z) 700 ou 1500 quando requerido Com troca +va/-va A ionização é ESI.
As voltagens e temperaturas de ESI são: Fonte 150 C 3,5 KV capilar 25 V cone Método 2 (FA básico)
Configuração de UPLC Solventes: - Acetonitrila (Grau UV longíquo) Água (Elevada pureza através da unidade PureLab Option) com bicarbonato de amônio a 10 mM (hidrogenocarbonato de amônio) Coluna: - Acquity UPLC BEH Shield RP18 1,7 um 100 x 2,1 mm. (Mais cartucho guarda) Caudal: - 0,5 mL/min Gradiente: - A: Água/Básica B: MeCN/Básico Tempo % de A % de B 0,00 95 5 1,20 95 5 3,5 0 100 4,90 0 100 5,00 95 5 6,00 95 5
Injeções Típicas 0,5-2 uL (concentração ~ 0,2 - 1 mg/mL). Detecção de UV através de Waters DAD Gama de Partida (nm) 210 Gama Final (nm) 400 Resolução (nm) 1,2 Outros traços de comprimento de onda são extraídos dos dados de DAD.
Detecção de MS: Waters SQD2, UPLC-MS de quadrapolo único O divisor de fluxo dá aproximadamente 300 uL/min para espec de massa Gama de varredura para Dados de MS (m/z) Início (m/z) 100 Final (m/z) 700 ou 1500 quando requerido Com troca +va/-va Condições de HPLC preparativa de fase reversa HPLC preparativa Waters Micromass ZQ/Gestor de amostras 2767 Detector de arranjo de fotodíodos 2996;
Coluna: Coluna XTerra Prep MS C18 (5 µm, 19 x 150 mm, Waters) Caudal: 20 mL/min com detecção de MS Comprimento de onda de UV: 254 nm. Fase móvel: Solvente A (água:MeCN:HCO2H 95:5:0,05); Solvente B (água:MeCN:HCO2H 5:95:0,05) Gradiente: Tempo (min) % de A % de B 0,00 100,0 0,00 1,00 100 0,00 10,00 0,00 100,0 11,00 0,00 100,0 12,00 100,0 0,00
[0259] A cromatografia flash é levada a cabo usando um sistema Isolera MPLC (fabricado pela Biotage) usando sílica gel pré- empacotada ou cartuchos de fase reversa (fornecidos pela Biotage ou Interchim). B. Sínteses Químicas
[0260] Os procedimentos gerais usados nos métodos para preparar os compostos da presente invenção são descritos em baixo: Esquema 1 2-Cloro-5-(metiltio)pirimidina (100B)
[0261] Dissulfeto de dimetila (13,96 mL, 155,4 mmol, 1,0 eq) foi adicionado sob nitrogênio a uma solução resfriada a -75 °C de 5-bromo- 2-cloropirimidina (100A) (30 g, 155,4 mmol, 1,0 eq) em tetra-hidrofurano anidro (700 mL). A esta mistura foi adicionada uma solução de lítio de n-butila (2,5 M, 68,4 mL, 170,9 mmol, 1,0 eq) gota a gota ao longo de 1,5 h, com a temperatura interna mantida de -70 °C a -75 °C ao longo da adição. Após adição completa, a mistura foi agitada a -75 °C durante 4,5 h e foi depois extinta pela adição lenta de uma solução saturada de cloreto de amônio (100 mL). O banho de resfriamento foi removido e a reação foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente sob nitrogênio ao longo de 18 h. A mistura reacional foi diluída com acetato de etila (500 mL), lavada com água (50 mL) e depois salmoura saturada (50 mL). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e depois concentrada sob pressão reduzida. O óleo amarelo-pálido em bruto obtido foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso-hexano para acetato de etila, 0-50%) para dar o produto desejado 2-cloro-5- (metiltio)pirimidina como um sólido amarelo-pálido ceroso (100B).
[0262] Rendimento: 7,39 g (29%). 1H RMN (CDCl3) δ 8,48 (2H, s), 2,54 (3H, s); MS (ESI+) m/z 161 (M+H)+. Método Geral 1 (2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (100C)
[0263] (3-Amino-2-metilpropil)carbamato de terc-butila (4,79 g, 25,52 mmol, 1,05 eq) foi adicionado a uma suspensão agitada de 2- cloro-5-(metiltio)pirimidina (100B) (3,89 g, 24,31 mmol, 1,0 eq) e carbonato de césio (11,85 g, 36,46 mmol, 1,4 eq) em dimetilformamida anidra (50 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h e depois concentrada sob pressão reduzida até ~20 mL. O licor foi diluído com acetato de etila (100 mL), lavado com água (75 mL) e salmoura (50 mL) e depois seco sobre sulfato de magnésio. Os solventes foram removidos sob vácuo para originar um resíduo em bruto que foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso-hexano para acetato de etila, 0-50%) para dar o produto desejado (2-metil-3-((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (100C) como um óleo amarelo-pálido.
[0264] Rendimento: 6,59 g (86%). MS (ESI+) m/z 313 (M+H)+. (S)-(2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (100D)
[0265] (2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila racêmico (100C) (5 g) foi purificado por SFC quiral usando as seguintes condições: YMC amilose-C 30/70 MeOH/CO2, 100 mL/min, 120 bar, 40 C, GLS 40 psi, Sistema 3900 psi, queda 140 bar, Stacker, DAD 245 nm.
[0266] Isômero eluindo em primeiro lugar, 1,3 minutos. (R)-(2-Metil- 3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila
[0267] Rendimento: 2,05 g. ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,34 (s, 2H), 5,79 (dd, J=6,7, 6,7 Hz, 1H), 5,18 (dd, J=5,8, 5,8 Hz, 1H), 3,50 - 3,39 (m, 1H), 3,33 - 3,14 (m, 2H), 3,04 - 2,94 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 1,94 - 1,85 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 0,95 (d, J=6,9 Hz, 3H). MS (ESI+) m/z 313 (M+H)+.
[0268] Isômero eluindo em segundo lugar, 1,7 minutos. (S)-(2-Metil-3- ((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (100D)
[0269] Rendimento: 2,48 g. ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,34 (s, 2H), 5,77 - 5,69 (m, 1H), 5,15 (dd, J =6,5, 6,5 Hz, 1H), 3,50 - 3,40 (m, 1H), 3,33 - 3,16 (m, 2H), 3,03 - 2,94 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 1,95 - 1,85 (m, 1H), 1,47 (s, 9H), 0,95 (d, J =6,9 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 313 (M+H)+. Método Geral 2 Hidrocloreto de (R)-2-metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano- 1,3-diamina (100E)
[0270] Uma solução de cloreto de hidrogênio (15 mL, 4 M em 1,4- dioxano) foi adicionada a (S)-(2-etil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-
il)amino)propil)carbamato de terc-butila (100D) (600 mg, 2,48 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob vácuo para originar o produto desejado hidrocloreto de (R)-2-metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3- diamina (100E) como um semissólido amarelo-pálido.
[0271] Rendimento: 548 mg (100%) sal de HCl. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,39 (s, 2H), 8,00 - 7,96 (m, 3H), 7,72 - 7,72 (m, 1H), 3,32 - 3,18 (m, 2H), 2,88 - 2,80 (m, 1H), 2,66 - 2,55 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,13 - 2,00 (m, 1H), 0,96 (d, J=6,8 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 213 (M+H)+. Método Geral 3 (S)-2-((2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de etila (100F)
[0272] Etil-2-clorobenzotiazol-6-carboxilato (600 mg, 2,48 mmol, 1,0 eq) foi adicionado a uma solução agitada de hidrocloreto de (R)-2-metil- N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (100E) (548 mg, 2,48 mmol, 1,0 eq) e trietilamina (1,73 mL, 12,44 mmol, 5,0 eq) em dimetilformamida anidra (20 mL) sob nitrogênio. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h e depois concentrada sob vácuo até ~5 mL. Água (25 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (3 x50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (20 mL) e salmoura (25 mL), depois secas sobre sulfato de magnésio. Os solventes foram removidos sob vácuo para dar um óleo amarelo em bruto que foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso- hexano para acetato de etila, 0-100%) para dar o (S)-2-((2-metil-3-((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de etila (100F) desejado como um sólido esbranquiçado.
[0273] Rendimento: 647 mg (62%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,37 (s, 2H), 8,27 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,99 (dd, J=1,8, 8,5 Hz, 1H), 7,51 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,02 - 6,98 (m, 1H), 5,83 (dd, J=6,7, 6,7 Hz, 1H), 4,38 (q, J=7,2 Hz, 2H), 3,67 - 3,47 (m, 2H), 3,42 - 3,24 (m, 2H), 2,37 (s, 3H),
2,20 - 2,11 (m, 1H), 1,40 (dd, J=7,2, 7,2 Hz, 3H), 1,07 (d, J=7,0 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 418 (M+H)+. Método Geral 4 Ácido (S)-2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carboxílico (Exemplo 1)
[0274] Hidróxido de lítio mono-hidratado (318 mg, 7,75 mmol, 5,0 eq) foi adicionado a uma solução agitada de (S)-2-((2-metil-3-((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de etila (100F) (647 mg, 1,55 mmol, 1,0 eq) em etanol (7 mL) e água (5 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h e depois concentrada sob pressão reduzida. Água (5 mL) foi adicionada ao resíduo e esta mistura foi acidificada até pH ~3 com uma solução de ácido clorídrico aquoso (2 M). Um precipitado que se formou foi coletado por filtração, lavado com água e depois seco sob elevado vácuo para dar o produto desejado ácido (S)-2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carboxílico (Exemplo 1) como um sólido amarelo-pálido. Método Geral 5 (S)-2-Metil-2-(2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carboxamido)propanoato de metila (100G)
[0275] Hexafluorofosfato de 3-óxido de 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio (HATU, 146 mg, 0,385 mmol, 1,5 eq) foi adicionado a uma solução de ácido (S)-2- ((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol- 6-carboxílico (1) (100 mg, 0,257 mmol, 1,0 eq), trietilamina (0,36 mL, 2,57 mmol, 10,0 eq) e hidrocloreto de metil-2-amino-2-metilpropanoato (196 mg, 1,28 mmol, 4,9 eq) em dimetilformamida (5 mL) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo em bruto obtido foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso-hexano para acetato de etila, 0-75%) para dar o (S)-2-metil-2-(2-((2)-metil-3-((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6- carboxamido)propanoato de metila (G) desejado como um sólido esbranquiçado.
[0276] Rendimento: 120 mg (95%).¹H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,34 (s, 2H), 8,10 (d, J=1,8 Hz, 1H), 7,77 (dd, J=1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,47 (d, J=8,5 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,45 (dd, J=6,3, 22,4 Hz, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,29 - 2,16 (m, 1H), 1,59 (s, 6H), 1,08 (d, J=6,9 Hz, 3H) prótons permutáveis NH não observados; MS (ESI+) m/z 489 (M+H)+. Ácido (S)-2-metil-2-(2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carboxamido)propanoico (Exemplo 2) Método análogo ao Método Geral 4
[0277] Hidróxido de lítio mono-hidratado (50 mg, 1,22 mmol, 5,0 eq) foi adicionado a uma solução agitada de (S)-2-metil-2-(2-((2-metil-3-((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6- carboxamido)propanoato de metila (100G) (120 mg, 0,245 mmol, 1,0 eq) em etanol (5 mL) e água (5 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob vácuo e o resíduo foi diluído com água (3 mL) e acidificado até pH ~3 com solução aquosa de ácido clorídrico (2 M). Um precipitado que se formou foi coletado por filtração, lavado com água e depois seco sob elevado vácuo para dar o composto do título como um sólido esbranquiçado.
[0278] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: Tabela 1
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,43 (dd, J =4,8, 4,8 Hz, 1H), 8,33 (s, 2H), 8,26 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,81 (dd, J =1,8, 8,5 Hz, 1H), 7,53 (dd, 1 390 J =5,6, 5,6 Hz, 1H), 7,38 (d, J =8,4 Hz, 1H), 3,35 - 3,23 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,17 - 2,07 (m, 1H), 0,96 (d, J =6,7 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,34 (s, 2H), 8,00 (d, J =1,1 Hz, 1H), 7,72 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,32 (d, J =8,5 Hz, 1H), 7,20 - 7,20 (m, 1H), 2 3,54 - 3,48 (m, 1H), 3,43 - 475 3,27 (m, 3H), 2,36 (s, 3H), 2,19 - 2,13 (m, 1H), 1,74 (d, J =3,2 Hz, 6H), 1,03 (d, J =6,9 Hz, 3H) NH prótons não observados. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,90 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,30 (dd, J =5,5, 5,5 Hz, 1H), 8,21 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,79 (dd, J =1,8, 8,4 Hz, 1H), 7,52 (dd, J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 7,38 (d, 3 479 J =8,4 Hz, 1H), 7,33 (d, J =4,4 Hz, 4H), 7,27 - 7,22 (m, 1H), 4,48 (d, J =6,0 Hz, 2H), 3,48 - 3,41 (m, 1H), 3,31 - 3,23 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,17 - 2,00 (m, 1H), 0,96 (d, J =6,8 Hz, 3H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,73 (d, J =1,3 Hz, 1H), 7,51 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,39 (dd, J =1,5, 8,3 Hz, 1H), 6,77 (s, 1H), 5,77 - 5,74 (m, 1H), 3,89 - 4 3,85 (m, 2H), 3,71 (s, 2H), 447 3,63 - 3,47 (m, 2H), 3,42 - 3,25 (m, 2H), 3,12 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,8 Hz, 3H) prótons NH não observados. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,67 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,51 (d, J =8,1 Hz, 1H), 7,32 (dd, J =1,8, 8,1 Hz, 1H), 6,67 - 6,64 (m, 1H), 5,70 (dd, J =6,8, 6,8 5 Hz, 1H), 4,02 - 3,95 (m, 2H), 473 3,63 - 3,49 (m, 2H), 3,42 - 3,29 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,09 (m, 1H), 1,95 - 1,88 (m, 2H), 1,06 (d, J =6,8 Hz, 3H) prótons NH não observados. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,38 (s, 2H), 8,36 - 8,30 (m, 2H), 8,18 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,76 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,56 (dd, J =6,1, 6 6,1 Hz, 1H), 7,40 (d, J =8,6 403 Hz, 1H), 3,52 - 3,44 (m, 1H), 3,34 - 3,27 (m, 3H), 2,83 (d, J =4,5 Hz, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,22 - 2,10 (m, 1H), 1,00 (d, J =6,8 Hz, 3H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,34 (s, 2H), 8,26 (dd, J =5,6, 5,6 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,51 (dd, J =5,8, 5,8 7 Hz, 1H), 7,37 (s, 2H), 3,94 - 507 3,83 (m, 4H), 3,48 - 3,40 (m, 1H), 3,31 - 3,24 (m, 8H), 2,34 (s, 3H), 2,14 - 1,99 (m, 1H), 0,96 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,34 (s, 2H), 8,31 (d, J =5,6 Hz, 2H), 8,17 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,73 (dd, J =1,8, 8,4 Hz, 1H), 7,52 (dd, J 8 =5,9, 5,9 Hz, 1H), 7,37 (d, J 447 =8,4 Hz, 1H), 3,76 (d, J =5,1 Hz, 2H), 3,49 - 3,40 (m, 1H), 3,33 - 3,22 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,17 - 2,07 (m, 1H), 0,96 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,33 (s, 2H), 8,02 (s, 1H), 7,72 (dd, J =1,4, 8,5 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,45 (d, J =8,3 Hz, 1H), 6,20 - 6,18 (m, 1H), 3,73 - 3,58 (m, 3H), 9 460 3,49 (dd, J =4,2, 13,8 Hz, 1H), 3,40 - 3,20 (m, 2H), 3,01 - 2,91 (m, 2H), 2,59 (s, 6H), 2,36 (s, 4H), 2,20 - 2,13 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,69 (d, J 10 =1,5 Hz, 1H), 7,51 (d, J =8,3 417 Hz, 1H), 7,36 (dd, J =1,8, 8,3 Hz, 1H), 6,75 - 6,74 (m,
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1H), 5,70 (dd, J =6,4, 6,4 Hz, 1H), 3,63 - 3,47 (m, 2H), 3,42 - 3,25 (m, 2H), 3,08 (s, 6H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (s, 2H), 8,32 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,50 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,35 - 7,30 (m, 1H), 5,90 (dd, J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 3,76 (s, 4H), 3,62 - 11 3,53 (m, 1H), 3,48 (dd, J 458 =4,8, 13,8 Hz, 1H), 3,43 - 3,35 (m, 1H), 3,29 (dd, J =7,5, 13,7 Hz, 1H), 3,05 - 2,98 (m, 4H), 2,62 (s, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,19 - 2,12 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,36 (s, 2H), 7,90 (s, 1H), 7,52 - 7,44 (m, 2H), 7,00 (s, 1H), 5,90 (s, 1H), 4,75 - 4,68 (m, 1H), 4,51 (dd, J =8,0, 8,0 Hz, 2H), 4,15 - 12 455 4,15 (m, 2H), 3,65 - 3,57 (m, 1H), 3,55 - 3,48 (m, 1H), 3,41 - 3,33 (m, 1H), 3,30 - 3,24 (m, 1H), 2,61 (s, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,12 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,33 (s, 2H), 8,22 (dd, J =5,4, 5,4 Hz, 1H), 8,15 (s, 13 502 1H), 7,74 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,51 (dd, J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 7,36 (d, J =8,3 Hz, 1H),
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 7,25 (dd, J =1,8, 8,3 Hz, 1H), 4,49 (s, 1H), 3,52 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 5H), 3,47 - 3,40 (m, 2H), 3,29 - 3,19 (m, 4H), 2,48 (d, J =7,5 Hz, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,14 - 2,08 (m, 1H), 0,96 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 8,09 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,66 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,52 (d, J =8,3 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 14 6,50 (dd, J =5,2, 5,2 Hz, 447 1H), 5,69 (dd, J =6,7, 6,7 Hz, 1H), 3,69 - 3,55 (m, 5H), 3,40 (s, 6H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,34 (s, 2H), 8,29 (dd, J =5,4, 5,4 Hz, 2H), 8,17 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,74 (dd, J =1,8, 8,5 Hz, 1H), 7,52 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 7,36 (d, 15 433 J =8,4 Hz, 1H), 4,71 (dd, J =5,4, 5,4 Hz, 1H), 3,55 - 3,41 (m, 3H), 3,31 - 3,23 (m, 5H), 2,34 (s, 3H), 2,17 - 2,06 (m, 1H), 0,96 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 8,09 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,90 - 7,90 (m, 16 1H), 7,72 (dd, J =1,9, 8,4 469 Hz, 1H), 7,52 (d, J =9,0 Hz, 2H), 7,14 (s, 1H), 5,99 (s, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,62 (ddd,
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ J =4,4, 6,9, 14,3 Hz, 1H), 3,51 (d, J =13,4 Hz, 1H), 3,41 - 3,33 (m, 1H), 3,29 - 3,22 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,21 - 2,13 (m, 1H), 1,08 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,52 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,46 (d, J =7,9 Hz, 1H), 6,79 - 6,78 (m, 1H), 5,67 (dd, J =6,5, 6,5 Hz, 1H), 3,95 - 3,81 (m, 3H), 3,73 (s, 1H), 17 468 3,64 - 3,56 (m, 1H), 3,55 - 3,48 (m, 1H), 3,42 - 3,34 (m, 1H), 3,32 - 3,25 (m, 1H), 3,19 (s, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,30 (d, J =6,0 Hz, 2H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,69 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,52 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,33 (dd, J =1,6, 8,3 Hz, 1H), 6,77 (s, 1H), 5,69 (dd, J =6,5, 6,5 Hz, 1H), 3,96 (d, J =9,9 Hz, 1H), 18 3,67 (d, J =13,4 Hz, 1H), 489 3,64 - 3,55 (m, 5H), 3,51 (dd, J =4,5, 13,7 Hz, 1H), 3,42 - 3,34 (m, 1H), 3,29 (dd, J =7,5, 14,2 Hz, 1H), 3,18 (s, 1H), 3,03 (s, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (s, 2H), 7,92 (d, J =1,1 Hz, 1H), 7,52 - 7,50 (m, 2H), 6,87 - 6,87 (m, 1H), 5,73 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 19 471 1H), 4,82 (s, 4H), 4,43 - 4,43 (m, 4H), 3,64 - 3,48 (m, 2H), 3,42 - 3,26 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 8,03 (s, 1H), 7,64 (dd, J =1,9, 8,4 Hz, 1H), 7,49 (d, J =8,4 Hz, 1H), 6,53 - 6,53 (m, 1H), 6,01 - 5,99 (m, 1H), 4,41 (d, J =5,8 20 Hz, 2H), 3,62 (ddd, J =4,3, 428 6,7, 14,3 Hz, 1H), 3,51 (dd, J =4,3, 13,8 Hz, 1H), 3,41 - 3,22 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,13 (m, 1H), 1,08 (d, J =6,9 Hz, 3H) prótons NH não observados. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,68 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,51 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,33 (dd, J =1,6, 8,3 Hz, 1H), 6,87 - 6,86 (m, 1H), 5,77 (dd, J =6,2, 6,2 Hz, 1H), 4,70 - 4,60 (m, 4H), 21 514 3,70 (s, 3H), 3,63 - 3,47 (m, 3H), 3,42 - 3,25 (m, 2H), 2,37 (s, 6H), 2,20 - 2,12 (m, 2H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H) prótons NH não observados. ¹H RMN (400 MHz, DMSO)
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ δ 8,33 (s, 2H), 8,23 (dd, J =5,5, 5,5 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,51 (dd, J =5,9, 5,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J =8,2 Hz, 1H), 7,27 - 7,23 (m, 1H), 4,58 - 4,51 (m, 2H), 4,45 (dd, J =5,7, 5,7 Hz, 2H), 3,53 - 3,53 (m, 4H), 3,47 - 3,39 (m, 2H), 3,29 - 3,22 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,29 (s, 4H), 2,17 - 2,06 (m, 1H), 0,95 (d, J =6,7 Hz, 3H). prótons NH não observados. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,34 (s, 2H), 8,22 (dd, J =5,5, 5,5 Hz, 1H), 7,76 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,52 (dd, J =5,9, 5,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J =8,2 Hz, 1H), 7,29 (dd, J =1,6, 8,3 Hz, 1H), 4,90 - 22 489 4,90 (m, 1H), 3,79 - 3,79 (m, 3H), 3,65 (s, 1H), 3,59 - 3,40 (m, 4H), 3,31 - 3,20 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,17 - 2,05 (m, 1H), 0,95 (d, J =6,7 Hz, 3H) prótons NH não observados. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 8,10 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,72 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,49 - 23 7,45 (m, 2H), 7,18 - 7,17 (m, 484 1H), 6,04 (d, J =4,9 Hz, 1H), 4,83 (d, J =5,5 Hz, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,64 - 3,48 (m, 2H), 3,41 - 3,26 (m, 2H), 2,36 (s,
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 3H), 2,21 - 2,13 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,42 - 12,42 (m, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,41 (d, J =1,6 Hz, 1H), 8,33 (s, 2H), 8,03 (dd, J =1,6, 8,5 Hz, 1H), 24 7,51 (dd, J =5,9, 5,9 Hz, 488 1H), 7,41 (d, J =8,4 Hz, 1H), 3,95 (s, 2H), 3,49 - 3,38 (m, 2H), 3,29 - 3,20 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,17 - 2,08 (m, 1H), 0,96 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,21 (s, 1H), 8,39 (dd, J =5,5, 5,5 Hz, 1H), 8,34 (s, 3H), 8,15 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,72 (dd, J =1,8, 8,5 Hz, 25 1H), 7,52 (dd, J =5,3, 5,3 461 Hz, 1H), 7,36 (d, J =8,4 Hz, 1H), 3,48 - 3,43 (m, 4H), 3,33 - 3,23 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,17 - 2,06 (m, 1H), 0,96 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,39 (s, 2H), 7,95 (s, 1H), 7,52 (s, 2H), 6,93 - 6,93 (m, 1H), 5,65 (dd, J =6,6, 6,6 Hz, 1H), 4,56 (dd, J =12,0, 26 465 12,0 Hz, 4H), 3,60 (ddd, J =4,5, 7,2, 14,4 Hz, 1H), 3,51 (s, 1H), 3,42 - 3,26 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,20 - 2,11 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,55 - 8,52 (m, 2H), 8,34 (s, 2H), 8,05 (dd, J =1,8, 8,6 Hz, 1H), 7,65 (s, 3H), 7,51 (dd, J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 27 456 7,43 (d, J =8,5 Hz, 1H), 3,52 - 3,44 (m, 1H), 3,30 - 3,20 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,16 - 2,08 (m, 1H), 0,97 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,13 (dd, J =5,3, 5,3 Hz, 1H), 8,57 - 8,57 (m, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,24 (s, 1H), 7,83 - 7,79 (m, 1H), 7,57 - 7,57 (m, 1H), 7,42 (d, J =8,4 28 Hz, 1H), 4,76 (d, J =5,6 Hz, 471 2H), 3,50 - 3,43 (m, 1H), 3,35 - 3,23 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,17 - 2,08 (m, 1H), 0,97 (d, J =6,8 Hz, 3H) prótons NH não observados. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,29 (s, 2H), 8,03 (s, 1H), 7,93 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,49 (dd, J =1,8, 8,4 Hz, 1H), 7,33 (d, J =8,4 Hz, 1H), 7,12 (dd, J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 4,82 (dd, J =5,3, 9,4 Hz, 29 473 1H), 4,33 - 4,25 (m, 1H), 4,14 - 4,07 (m, 1H), 3,47 - 3,23 (m, 4H), 2,66 - 2,55 (m, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,21 - 2,08 (m, 2H), 0,97 (d, J =6,8 Hz, 3H) prótons NH não observados, VT @ 85 oC.
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,32 (s, 2H), 7,85 (s, 1H), 7,71 (d, J =1,4 Hz, 1H), 7,37 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,29 (dd, J =1,6, 8,2 Hz, 1H), 7,02 (s, 30 1H), 3,97 (s, 2H), 3,50 - 461 3,30 (m, 4H), 3,01 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 2,22 - 2,13 (m, 1H), 1,01 (d, J =6,8 Hz, 3H) prótons NH não observados, VT @ 125 oC. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,03 (dd, J =5,6, 5,6 Hz, 1H), 8,38 (s, 3H), 8,24 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,81 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,57 (dd, J =5,9, 5,9 31 484 Hz, 1H), 7,41 (d, J =8,3 Hz, 1H), 4,64 (d, J =5,6 Hz, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,53 - 3,44 (m, 1H), 3,35 - 3,27 (m, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,21 - 2,10 (m, 1H), 1,00 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,60 (1H, s), 9,09 (1H, dd, J =5,7, 5,7 Hz), 8,38 (3H, s), 8,24 (1H, d, J =1,8 Hz), 7,81 (1H, dd, J =1,8, 8,3 Hz), 7,58 (1H, dd, J =5,9, 5,9 32 471 Hz), 7,43 (1H, d, J =8,3 Hz), 4,67 (2H, d, J =5,8 Hz), 3,54 - 3,45 (2H, m), 3,36 - 3,27 (2H, m), 2,38 (3H, s), 2,21 - 2,10 (1H, m), 1,01 (3H, d, J =6,8 Hz).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,16 (dd, J =5,6, 5,6 Hz, 1H), 8,41 (d, J =5,6 Hz, 1H), 8,38 (s, 2H), 8,23 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,80 (dd, J =1,8, 8,6 Hz, 1H), 7,57 (dd, J 33 =5,9, 5,9 Hz, 1H), 7,42 (d, J 485 =8,6 Hz, 1H), 4,80 (d, J =5,6 Hz, 2H), 4,15 (s, 3H), 3,53 - 3,45 (m, 1H), 3,36 - 3,27 (m, 3H), 2,38 (s, 3H), 2,21 - 2,10 (m, 1H), 1,00 (d, J =6,6 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 11,30 (2H, s), 8,80 (1H, dd, J =5,3, 5,3 Hz), 8,38 (3H, s), 8,24 (1H, d, J =1,5 Hz), 7,81 (1H, dd, J =1,6, 8,5 Hz), 7,58 (1H, dd, J 34 486 =5,9, 5,9 Hz), 7,42 (1H, d, J =8,3 Hz), 4,30 (2H, d, J =5,3 Hz), 3,53 - 3,45 (1H, m), 3,35 - 3,27 (3H, m), 2,39 (3H, s), 2,21 - 2,11 (1H, m), 1,00 (3H, d, J =6,6 Hz). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,94 (s, 1H), 8,38 (s, 2H), 8,36 (d, J =5,6 Hz, 1H), 8,25 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,83 (dd, J =1,8, 8,3 Hz, 1H), 7,58 (dd, J =5,9, 5,9 Hz, 1H), 35 470 7,42 (d, J =8,3 Hz, 1H), 4,59 (d, J =4,8 Hz, 2H), 3,53 - 3,45 (m, 1H), 3,36 - 3,27 (m, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,21 - 2,11 (m, 1H), 1,00 (d, J =6,8 Hz, 3H) prótons NH não
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ observados. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,09 (dd, J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 8,38 (s, 3H), 8,23 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,81 (dd, J =1,8, 8,6 Hz, 1H), 7,58 (dd, J =5,9, 5,9 Hz, 1H), 7,42 (d, 36 485 J =8,3 Hz, 1H), 4,74 (d, J =5,6 Hz, 2H), 4,38 (s, 3H), 3,53 - 3,45 (m, 1H), 3,36 - 3,27 (m, 3H), 2,39 (s, 3H), 2,21 - 2,11 (m, 1H), 1,00 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (s, 2H), 8,14 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,93 - 7,93 (m, 1H), 7,79 (dd, J =1,7, 8,5 Hz, 1H), 7,52 (d, J =8,4 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 5,82 - 5,81 (m, 1H), 4,94 - 4,87 (m, 37 458 1H), 3,88 - 3,82 (m, 2H), 3,61 (ddd, J =4,5, 7,0, 14,4 Hz, 2H), 3,53 - 3,50 (m, 1H), 3,41 - 3,24 (m, 3H), 2,56 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,11 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,41 (s, 2H), 8,38 (d, J =5,5 Hz, 1H), 8,40 - 8,37 (m, 1H), 8,04 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,61 - 7,54 (m, 2H), 7,49 (d, 38 560 J =6,9 Hz, 5H), 7,43 (d, J =8,3 Hz, 2H), 4,57 - 4,57 (m, 2H), 4,26 - 4,25 (m, 3H), 3,55 - 3,45 (m, 2H), 3,33 (dd, J =6,8, 13,3 Hz, 3H),
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 2,42 (s, 3H), 2,24 - 2,16 (m, 1H), 1,03 (d, J =6,7 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (2H, s), 7,94 (1H, d, J =1,4 Hz), 7,56 - 7,53 (1H, m), 7,50 (1H, d, J =8,3 Hz), 6,76 (1H, s), 5,68 (1H, dd, J =6,6, 6,6 Hz), 4,42 (2H, s), 39 458 4,04 - 3,92 (2H, m), 3,68 - 3,49 (3H, m), 3,42 - 3,26 (2H, m), 2,40 (6H, d, J =18,1 Hz), 2,25 - 2,11 (1H, m), 1,06 (3H, d, J =6,9 Hz); Um próton NH não observado ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,33 (2H, s), 8,30 (1H, dd, J =5,6, 5,6 Hz), 7,96 (1H, d, J =1,6 Hz), 7,54 - 7,47 (2H, m), 7,34 (1H, d, J =8,3 Hz), 4,45 (1H, s), 4,17 (1H, s), 40 444 3,92 (1H, s), 3,76 - 3,69 (2H, m), 3,47 - 3,40 (2H, m), 3,29 - 3,23 (3H, m), 2,34 (3H, s), 2,17 - 2,06 (1H, m), 0,96 (3H, d, J =6,8 Hz); Um próton NH não observado ¹H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,33 (2H, s), 7,97 (1H, d, J =1,6 Hz), 7,60 (1H, dd, J =1,8, 8,4 Hz), 7,48 (1H, d, J =8,5 Hz), 4,59 - 4,10 (4H, 41 472 m), 3,52 - 3,40 (6H, m), 2,45 (6H, s), 2,34 (3H, s), 2,24 - 2,16 (1H, m), 1,08 (3H, d, J =6,8 Hz); Um próton NH não observado
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,49 - 8,47 (m, 3H), 8,34 (s, 1H), 7,98 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,49 (dd, J =1,8, 8,4 Hz, 1H), 7,37 (d, J =8,4 Hz, 1H), 4,52 - 4,52 42 (m, 2H), 4,21 (s, 2H), 4,14 - 470 4,06 (m, 4H), 3,97 (s, 1H), 3,33 - 3,26 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,09 (s, 1H), 0,96 (d, J =6,8 Hz, 3H). Sal de formiato.
Um NH não observado. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,54 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,39 (dd, J =1,6, 8,3 Hz, 1H), 6,89 - 6,89 (m, 1H), 5,69 - 5,66 (m, 1H), 4,80 (s, 1H), 43 544 4,43 (d, J =9,2 Hz, 1H), 4,10 - 4,08 (m, 2H), 3,80 - 3,49 (m, 6H), 3,43 - 3,25 (m, 3H), 2,95 (d, J =12,8 Hz, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,70 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,53 (d, J =8,4 Hz, 1H), 7,33 (dd, J =1,8, 8,3 Hz, 1H), 6,85 - 6,85 (m, 1H), 5,71 (dd, J =6,6, 6,6 44 514 Hz, 1H), 4,72 - 4,12 (m, 3H), 3,98 (d, J =7,8 Hz, 1H), 3,90 - 3,81 (m, 2H), 3,63 - 3,48 (m, 2H), 3,43 - 3,25 (m, 2H), 3,08 - 3,06 (m, 2H), 2,89 - 2,83 (m, 1H), 2,37 (s, 3H),
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,55 - 8,54 (m, 1H), 8,37 (s, 2H), 7,64 (s, 1H), 7,50 (d, J =8,3 Hz, 1H), 6,86 - 6,86 (m, 1H), 5,80 (dd, J =6,5, 6,5 Hz, 1H), 3,74 (s, 45 498 4H), 3,63 - 3,46 (m, 6H), 3,42 - 3,24 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,09 (m, 1H), 1,83 - 1,86 (m, 4H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H), NH próton não observado. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,69 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,53 (d, J =8,4 Hz, 1H), 7,32 (dd, J =1,7, 8,3 Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 5,71 (dd, J =6,6, 6,6 Hz, 1H), 4,18 - 4,18 (m, 2H), 46 3,91 (d, J =9,7 Hz, 1H), 3,79 540 - 3,74 (m, 1H), 3,63 - 3,48 (m, 2H), 3,43 - 3,26 (m, 2H), 3,10 (d, J =8,8 Hz, 2H), 2,91 - 2,88 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,26 - 1,12 (m, 2H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H), 0,78 - 0,75 (m, 2H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,42 (s, 1H), 8,38 (s, 2H), 7,64 (d, J =1,4 Hz, 1H), 7,52 - 7,49 (m, 1H), 7,30 (dd, J 47 540 =1,8, 8,3 Hz, 1H), 5,72 (dd, J =6,7, 6,7 Hz, 1H), 3,63 - 3,47 (m, 9H), 3,43 - 3,25 (m, 3H), 2,96 - 2,89 (m, 1H),
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,12 (m, 1H), 1,87 (t, J =6,1 Hz, 4H), 1,20 (d, J =6,4 Hz, 6H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,51 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,31 (d, J =8,0 Hz, 1H), 6,75 - 6,68 (m, 1H), 5,75 (dd, J =6,7, 6,7 Hz, 1H), 3,63 - 48 498 3,46 (m, 4H), 3,42 - 3,26 (m, 2H), 2,92 - 2,91 (m, 2H), 2,39 (d, J =18,2 Hz, 6H), 2,20 - 2,09 (m, 1H), 1,70 (s, 4H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H), 0,69 (s, 2H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (s, 2H), 7,68 (d, J =1,4 Hz, 1H), 7,52 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,33 (dd, J =1,5, 8,3 Hz, 1H), 5,86 (dd, J =6,6, 6,6 Hz, 1H), 4,78 (d, J =6,8 Hz, 2H), 4,25 (s, 2H), 49 514 3,89 - 3,84 (m, 2H), 3,70 - 3,26 (m, 6H), 2,58 (s, 3H), 2,51 (dd, J =4,7, 4,7 Hz, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,11 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H), NH próton não observado. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,68 (d, J =1,4 Hz, 1H), 7,53 - 7,50 (m, 50 1H), 7,33 (td, J =1,4, 8,5 Hz, 466 1H), 6,68 (s, 1H), 5,69 (t, J =6,6 Hz, 1H), 3,62 - 3,47 (m, 2H), 3,42 - 3,26 (m, 2H),
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,08 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H), NH não observado.
Esquema 2 Método Geral 6 2-Cloro-N-(4-metoxibenzil)benzo[d]tiazol-6-sulfonamida (101B).
[0279] (4-Metoxifenil)metanamina (134 mg, 0,97 mmol, 1,05 eq) foi adicionada gota a gota a uma solução resfriada em gelo de cloreto de 2-clorobenzotiazol-6-sulfonila (101A) (250 mg, 0,932 mmol, 1,0 eq), trietilamina (0,39 mL, 2,79 mmol, 3,0 eq) em tetra-hidrofurano (10 mL), e a mistura agitada a 0 C durante 1 hora. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida para dar um sólido que foi lavado com água gelada (10 mL), tetra-hidrofurano gelado (10 mL) e depois seco sob vácuo para dar a 2-cloro-N-(4-metoxibenzil)benzo[d]tiazol-6- sulfonamida desejada como um sólido branco (101B).
[0280] Rendimento: 295 mg (85%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,56 (d, J =1,6 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,11 (d, J =8,7 Hz, 1H), 7,90 (dd, J =1,9, 8,7 Hz, 1H), 7,10 (d, J =8,8 Hz, 2H), 6,76 (d, J =8,8 Hz, 2H), 3,98 (s, 2H), 3,67 (s, 3H); MS (ESI+) m/z 369 (M+H)+.
[0281] Os intermediários na Tabela 2 foram sintetizados usando condições análogas àquelas descritas para o intermediário 101B: Tabela 2
LC-MS 1 Composto No. H RMN Estrutura (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,33 (1H, d, J =1,6 Hz), 8,12 (1H, d, J =8,5 Hz), 7,95 (1H, dd, J =1,8, 8,6 Intermediário Hz), 4,55 (1H, d, J 305 =3,9 Hz), 4,08 (2H, dd, J =6,5, 9,3 Hz), 3,64 (2H, dd, J =5,3, 9,2 Hz), 2,13 - 2,13 (1H, m).
Intermediário Não adquiridos 263 Intermediário Não adquiridos 418 ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,36 (d, J =1,8 Hz, 1H), 8,07 (d, J =8,7 Hz, 1H), 7,96 (dd, J =1,8, 8,6 Hz, Intermediário 1H), 5,13 (dd, J =5,3, 335 5,3 Hz, 1H), 4,07 (q, J =7,2 Hz, 2H), 3,82 (d, J =5,5 Hz, 2H), 1,17 (dd, J =7,2, 7,2 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (d, J Intermediário =1,8 Hz, 1H), 8,07 (d, 293 J =8,5 Hz, 1H), 7,97 (dd, J =1,8, 8,6 Hz,
LC-MS 1 Composto No. H RMN Estrutura (M+H)+ 1H), 5,18 (s, 1H), 3,73 (dd, J =4,3, 4,3 Hz, 2H), 3,15 (dd, J =5,8, 10,4 Hz, 2H), 2,01 - 2,01 (m, 1H).
Intermediário Não adquiridos 430 (S)-N-(4-Metoxibenzil)-2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-sulfonamida (101C)
[0282] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método geral 3.
[0283] Rendimento: 298 mg, (69%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,56 (1H, d, J =1,6 Hz), 8,24 (1H, s), 8,11 (1H, d, J =8,7 Hz), 7,90 (1H, dd, J =1,9, 8,7 Hz), 7,10 (2H, d, J =8,8 Hz), 6,76 (2H, d, J =8,8 Hz), 3,98 (2H, s), 3,67 (3H, s); MS (ESI+) m/z 545 (M+H)+ . (S)-2-((2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-sulfonamida (Exemplo 87)
[0284] Ácido trifluoroacético (5 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução resfriada em gelo de N-(4-metoxibenzil)-2-((2-metil-3-((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-sulfonamida (101C) (250 mg, 0,459 mmol, 1,0 eq) em diclorometano anidro (5 mL). A mistura foi agitada em gelo durante 30 minutos e depois deixada a aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 18 h. A mistura reacional foi diluída com diclorometano (15 mL) e hidrogenocarbonato de sódio saturado (15 mL) foi adicionado lentamente. A fase orgânica foi separada, lavada com salmoura (5 mL), seca sobre sulfato de magnésio e depois concentrada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo em bruto obtido foi purificado por cromatografia flash (eluindo
DCM para metanol, 0-10%) dar a (S)-2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin- 2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-sulfonamida (Exemplo 87) desejada como um sólido branco.
[0285] Rendimento: 190 mg (97%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,40 (dd, J =5,5, 5,5 Hz, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,12 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,66 (dd, J =2,0, 8,4 Hz, 1H), 7,51 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 7,44 (d, J =8,5 Hz, 1H), 7,21 (s, 2H), 3,49 - 3,42 (m, 1H), 3,31 - 3,23 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,17 - 2,07 (m, 1H), 0,96 (d, J =6,8 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 425 (M+H)+.
[0286] Usando os procedimentos descritos no Esquema 2, seguindo o Método Geral 3, os seguintes exemplos foram preparados: Tabela 3 1 Estrutura Ex. # H RMN LC-MS (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 8,05 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,74 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,60 (d, J =8,5 Hz, 1H), 7,16 (s, 1H), 5,70 (dd, J =6,8, 88 6,8 Hz, 1H), 4,50 - 4,45 (m, 1H), 481 4,05 - 4,01 (m, 2H), 3,62 - 3,57 (m, 3H), 3,54 (dd, J =4,1, 13,6 Hz, 1H), 3,43 - 3,26 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,21 - 2,05 (m, 1H), 1,08 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,45 (dd, J =5,4, 5,4 Hz, 1H), 8,33 (s, 2H), 8,11 (d, J =1,9 Hz, 1H), 7,60 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,51 (dd, J =5,7, 5,7 Hz, 89 1H), 7,47 (d, J =8,5 Hz, 1H), 439 7,26 (q, J =5,1 Hz, 1H), 3,50 - 3,42 (m, 1H), 3,31 - 3,20 (m, 3H), 2,41 - 2,34 (m, 6H), 2,29 - 2,07 (m, 1H), 0,96 (d, J =6,8 Hz, 3H).
Estrutura Ex. # H RMN LC-MS (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,96 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,64 (dd, J =1,8, 8,5 Hz, 1H), 7,57 (d, J =8,5 Hz, 1H), 90 494 5,86 (t, J =13,1 Hz, 1H), 3,64 - 3,26 (m, 6H), 3,08 - 2,95 (m, 8H), 2,38 (s, 3H), 2,21 - 2,11 (m, 1H), 1,08 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,39 (2H, s), 7,97 (1H, d, J =1,8 Hz), 7,65 (1H, dd, J =1,8, 8,5 Hz), 7,59 (1H, d, J =8,5 Hz), 7,11 (1H, s), 5,63 (1H, t, J =10,5 91 495 Hz), 3,77 - 3,73 (4H, m), 3,65 - 3,52 (2H, m), 3,43 - 3,26 (2H, m), 3,04 - 2,95 (4H, m), 2,38 (3H, s), 2,21 - 2,10 (1H, m), 1,08 (3H, d, J =6,9 Hz); ¹H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,33 (2H, s), 8,11 (1H, d, J =1,6 Hz), 7,74 (1H, dd, J =2,0, 8,5 Hz), 7,52 (1H, d, J =8,5 Hz), 4,00 (2H, q, J =7,2 Hz), 3,77 92 511 (2H, s), 3,49 (2H, d, J =6,1 Hz), 3,42 - 3,40 (2H, m), 2,35 (3H, s), 2,25 - 2,16 (1H, m), 1,15 - 1,06 (6H, m); N-CH3 obscurecido por pico de MeOH ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (s, 2H), 8,07 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,74 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,54 (d, J =8,5 Hz, 1H), 93 7,18 (s, 1H), 5,80 (dd, J =6,5, 469 6,5 Hz, 1H), 5,02 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 1H), 3,73 - 3,70 (m, 2H), 3,64 - 3,50 (m, 2H), 3,43 - 3,25 (m, 2H), 3,13 (dd, J =5,9, 10,4
Estrutura Ex. # H RMN LC-MS (M+H)+ Hz, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,21 - 2,10 (m, 1H), 1,07 (d, J =7,0 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,39 (2H, s), 8,05 (1H, d, J =1,6 Hz), 7,74 (1H, dd, J =1,9, 8,5 Hz), 7,61 (1H, d, J =8,5 Hz), 5,68 (1H, dd, J =6,7, 6,7 Hz), 94 3,81 (2H, dd, J =7,6, 7,6 Hz), 508 3,64 - 3,53 (4H, m), 3,43 - 3,26 (2H, m), 3,06 - 2,98 (1H, m), 2,38 (3H, s), 2,21 - 2,11 (1H, m), 2,02 (6H, s), 1,33 - 1,24 (1H, m), 1,08 (3H, d, J =6,9 Hz). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,44 (dd, J =5,5, 5,5 Hz, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,07 (d, J =1,9 Hz, 1H), 7,88 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 7,62 (dd, J =2,0, 8,5 Hz, 1H), 7,52 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 95 1H), 7,43 (d, J =8,5 Hz, 1H), 545 7,14 (d, J =8,8 Hz, 2H), 6,81 (d, J =8,8 Hz, 2H), 3,89 (d, J =5,8 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,52 - 3,42 (m, 1H), 3,32 - 3,23 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,17 - 2,07 (m, 1H), 0,97 (d, J =6,7 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,63 (s, 1H), 8,55 - 8,46 (m, 2H), 8,35 (s, 2H), 8,20 (d, J =1,9 Hz, 1H), 7,61 (dd, J =1,9, 8,5 96 Hz, 1H), 7,52 (d, J =8,4 Hz, 1H), 505 3,94 - 3,85 (m, 9H), 3,38 - 3,21 (m, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,18 - 2,08 (m, 1H), 0,97 (d, J =6,8 Hz, 3H). Esquema 3
Hidrocloreto de 2-metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3- diamina (102A)
[0287] A metodologia aplicada foi análoga ao Método Geral 2.
[0288] Uma solução de cloreto de hidrogênio (54 mL, 4 M em 1,4- dioxano) foi adicionada a (2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)carbamato de terc-butila (100C) (4,25 g, 13,60 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob vácuo para originar o hidrocloreto de 2-metil-N1- (5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (102A) desejado como um semissólido amarelo-pálido. A amostra semibruta foi levada para a próxima reação sem purificação adicional. N1-(6-Bromobenzo[d]tiazol-2-il)-2-metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2- il)propano-1,3-diamina (102B)
[0289] A metodologia aplicada foi análoga ao Método Geral 3.
[0290] 6-Bromo-2-clorobenzotiazol (828 mg, 3,33 mmol, 0,95 eq) foi adicionado a uma suspensão agitada de hidrocloreto de 2-metil-N1-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (102A) (1,00 g, 3,51 mmol, 1,0 eq) e carbonato de césio (3,43 g, 10,52 mmol, 3,0 eq) em dimetilformamida anidra (25 mL) sob nitrogênio. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h e foi depois concentrada sob vácuo até ~3 mL. Água (25 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (3 x50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (20 mL) e salmoura (25 mL), depois secas sobre sulfato de magnésio. Os solventes foram removidos sob vácuo para dar um óleo amarelo em bruto que foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso-hexano para acetato de etila, 0-100%) para dar a N1-(6- bromobenzo[d]tiazol-2-il)-2-metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano- 1,3-diamina (102B) desejada como um sólido amarelo pegajoso.
[0291] Rendimento: 266 mg (18%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,37 (s, 2H), 7,66 (d, J =0,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J =1,9 Hz, 2H), 6,58 (s, 1H), 5,69 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 1H), 3,67 - 3,23 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,17 - 2,09 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H). Método Geral 7 4-(2-((2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butila (102C)
[0292] Uma solução de N1-(6-bromobenzo[d]tiazol-2-il)-2-metil-N3- (5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (102B) (50 mg, 0,12 mmol, 1,0 eq) foi adicionada a uma solução de ácido (1-(terc- butoxicarbonil)-1H-pirazol-4-il)borônico (27,8 mg, 0,13 mmol, 1,0 eq), carbonato de césio (58 mg, 0,18 mmol, 1,5 eq) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (7 mg, 0,01 mmol, 0,05 eq) em água (0,20 mL) e N,N-dimetilformamida (0,80 mL) sob nitrogênio. A mistura reacional foi aquecida até 90 ºC durante 16 h. Uma alíquota adicional de ácido (1-(terc-butoxicarbonil)-1H-pirazol-4-il)borônico (27,8 mg, 0,13 mmol, 1,0 eq) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (7 mg, 0,01 mmol, 0,05 eq) foi adicionada à reação e a mistura foi aquecida até 90 ºC sob nitrogênio durante 16 h adicionais. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida; água (2 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (3 x5 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 mL) e salmoura (2 mL), secas por passagem através de um separador de fases e depois concentradas sob vácuo. O resíduo em bruto obtido foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso-hexano para acetato de etila, 0-75%) para dar o 4-(2-((2-metil-3-((5-
(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-il)-1H- pirazol-1-carboxilato de terc-butila (102C) desejado como um sólido esbranquiçado. O produto semibruto foi levado para a próxima reação sem purificação adicional. N1-(6-(1H-Pirazol-4-il)benzo[d]tiazol-2-il)-2-metil-N3-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (Exemplo 97)
[0293] Uma solução de cloreto de hidrogênio (2 mL, 4 M em 1,4- dioxano) foi adicionada a 4-(2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-il)-1H-pirazol-1-carboxilato de terc-butila (102C) (100 mg, 0,12 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob vácuo para originar a N1-(6-(1H-pirazol-4-il)benzo[d]tiazol-2-il)-2- metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (Exemplo 97) desejada como um sólido esbranquiçado.
[0294] Usando os procedimentos descritos no Esquema 3, de acordo com o Método Geral 7, os seguintes exemplos foram preparados: Tabela 4 1 Estrutura Ex. # H RMN LC-MS (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (s, 2H), 7,84 (s, 2H), 7,69 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,43 (dd, J =1,8, 8,4 Hz, 1H), 6,00 - 5,91 97 412 (m, 1H), 3,63 - 3,26 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,21 - 2,11 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H) NH próton permutável não observado. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,74 (s, 1H), 98 426 7,66 (d, J =1,3 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,52 (d, J =8,4 Hz,
Estrutura Ex. # H RMN LC-MS (M+H)+ 1H), 7,39 (dd, J =1,7, 8,3 Hz, 1H), 6,61 - 6,61 (m, 1H), 5,76 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,63 - 3,47 (m, 2H), 3,43 - 3,26 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,19 - 2,11 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,39 (s, 2H), 7,59 (d, J =8,3 Hz, 1H), 7,43 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,16 (dd, J =1,8, 8,3 Hz, 1H), 6,64 - 6,64 (m, 1H), 5,74 99 (dd, J =6,2, 6,2 Hz, 1H), 3,64 441 - 3,49 (m, 2H), 3,43 - 3,27 (m, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,18 - 2,14 (m, 1H), 1,08 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,39 (s, 2H), 8,14 (dd, J =1,8, 5,0 Hz, 1H), 7,79 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,64 - 7,57 (m, 2H), 7,47 (dd, J =1,7, 8,3 Hz, 1H), 6,97 (dd, J =5,0, 7,3 Hz, 1H), 100 453 6,61 - 6,61 (m, 1H), 5,74 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,63 - 3,50 (m, 2H), 3,43 - 3,27 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,11 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H).
Método Geral 8 2-Metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)-N3-(6-(oxazol-2- il)benzo[d]tiazol-2-il)propano-1,3-diamina (Exemplo 101)
[0295] N1-(6-Bromobenzo[d]tiazol-2-il)-2-metil-N3-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (102B) (90 mg, 0,21 mmol, 1,0 eq) foi adicionada a uma solução de 2-(tri-n-butilestanil)oxazol
(0,044 mL, 0,21 mmol, 1,0 eq) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (23 mg, 0,02 mmol, 0,1 eq) em N,N-dimetilformamida (0,80 mL) sob nitrogênio. A mistura reacional foi aquecida até 90 ºC durante 16 h. Uma alíquota adicional de 2-(tri-n-butilestanil)oxazol (0,044 mL, 0,21 mmol, 1,0 eq) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (23 mg, 0,02 mmol, 0,1 eq) foi adicionada à mistura reacional, aquecendo até 110 ºC durante 18 h. A reação foi resfriada até à temperatura ambiente, diluída com água (2 mL) e extraída com acetato de etila (3 x5 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com água (2 mL) e salmoura (2 mL), filtrada através de uma almofada de celite e seca por passagem através de um separador de fases antes da concentração até à secura sob vácuo. O resíduo em bruto obtido foi purificado duas vezes por cromatografia flash (em primeiro lugar eluindo iso-hexano para acetato de etila, 0- 100%, depois acetato de etila para metanol, 0-10%) para dar um resíduo semibruto que foi adicionalmente purificado por HPLC preparativa de fase reversa para dar a 2-metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)-N3-(6- (oxazol-2-il)benzo[d]tiazol-2-il)propano-1,3-diamina (101) desejada como um sólido esbranquiçado.
[0296] Usando os procedimentos descritos no Esquema 3, de acordo com o Método Geral 8, os seguintes exemplos foram preparados: Tabela 5 1 Estrutura Ex. # H RMN LC-MS (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,39 (s, 2H), 8,26 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,98 (dd, J =1,8, 8,5 Hz, 1H), 7,68 (s, 101 413 1H), 7,58 (d, J =8,4 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 6,75 - 6,75 (m, 1H), 5,68 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 1H), 3,65 - 3,57 (m, 1H),
Estrutura Ex. # H RMN LC-MS (M+H)+ 3,56 - 3,50 (m, 1H), 3,43 - 3,28 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,17 (s, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H).
¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (s, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,53 (s, 2H), 7,13 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 5,84 (t, J =6,9 102 Hz, 1H), 3,64 - 3,48 (m, 2H), 427 3,43 - 3,25 (m, 2H), 2,52 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 2,19 - 2,10 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H).
Esquema 4
[0297] Usando os procedimentos descritos no Esquema 4, de acordo com o Método Geral 3, os seguintes exemplos foram preparados: Tabela 6 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,10 (s, 1H), 8,34 (s, 2H), 7,79 (d, J =7,8 Hz, 1H), 7,71 - 7,66 (m, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,46 (d, J =8,4 Hz, 2H), 7,22 103 341 (dd, J =7,4, 7,4 Hz, 1H), 3,43 - 3,35 (m, 2H), 3,31 - 3,25 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,12 - 2,08 (m, 1H), 0,94 (d, J =6,8 Hz, 3H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,33 (s, 3H), 7,75 (d, J =7,9 Hz, 1H), 7,64 (dd, J =5,6, 5,6 Hz, 1H), 7,59 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 1H), 7,53 (d, J =3,8 Hz, 104 341 2H), 7,34 - 7,28 (m, 1H), 3,45 - 3,35 (m, 2H), 3,28 (t, J =6,2 Hz, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,16 - 2,08 (m, 1H), 0,98 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,32 (s, 2H), 7,92 (dd, J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 7,48 (dd, J =5,7, 5,7 Hz, 1H), 7,32 (d, J =7,7 Hz, 1H), 7,22 (d, J 105 =7,4 Hz, 1H), 7,10 (dd, J =7,4, 7,4 330 Hz, 1H), 6,99 - 6,94 (m, 1H), 3,30 - 3,16 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,13 - 2,05 (m, 1H), 0,94 (d, J =6,7 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,26 (s, 2H), 7,96 (dd, J =5,6, 5,6 Hz, 1H), 7,57 (d, J =7,1 Hz, 1H), 7,46 (dd, J =5,9, 5,9 Hz, 1H), 7,28 (d, J 106 =7,3 Hz, 1H), 7,16 - 7,11 (m, 1H), 346 6,95 - 6,90 (m, 1H), 3,37 - 3,30 (m, 1H), 3,23 - 3,14 (m, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,09 - 1,97 (m, 1H), 0,87 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,33 (s, 2H), 7,93 (s, 1H), 7,89 (d, J =2,6 Hz, 1H), 7,61 (d, J =2,8 Hz, 1H), 107 7,44 (dd, J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 7,05 291 (dd, J =5,7, 5,7 Hz, 1H), 3,31 - 3,14 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,09 - 1,99 (m, 1H), 0,92 (d, J =6,8 Hz, 3H).
Esquema 7
(2,2-Dimetil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (105A)
[0298] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 1 exceto que foi requerido aquecimento adicional.
[0299] (3-Amino-2,2-dimetilpropil)carbamato de terc-butila (0,13 g, 0,65 mmol, 1,05 eq) foi adicionado a uma suspensão agitada de 2-cloro- 5-(metiltio)pirimidina (100B) (0,10 g, 0,62 mmol, 1,0 eq) e carbonato de césio (0,24 g, 0,75 mmol, 1,2 eq) em N,N-dimetilformamida anidra (1,5 mL) e a mistura agitada a 80 ºC durante 4 h. A mistura reacional foi concentrada sob vácuo, diluída com acetato de etila (20 mL), lavada com água (7,5 mL) e salmoura (5,0 mL), depois seca através de um separador de fases. Os solventes foram removidos sob vácuo para dar o (2,2-dimetil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (105A) desejado como um óleo amarelo-pálido.
[0300] Rendimento: 0,163 g (81%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,37 (s, 2H), 7,24 (dd, J =6,6, 6,6 Hz, 1H), 6,93 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 1H), 3,20 (d, J =6,8 Hz, 2H), 2,85 (d, J =8,7 Hz, 2H), 2,40 (s, 3H), 1,43 (d, J =3,3 Hz, 9H), 0,83 (s, 6H). Hidrocloreto de 2,2-dimetil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano- 1,3-diamina (105B)
[0301] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 2.
[0302] Uma solução de cloreto de hidrogênio (5 mL, 4 M em 1,4- dioxano) foi adicionada a (2,2-dimetil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)carbamato de terc-butila (105A) (0,16 g, 0,50 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob vácuo para originar o hidrocloreto de 2,2-dimetil- N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (105B) desejado como um semissólido amarelo-pálido.
[0303] Rendimento: 0,13 g (100%) sal de HCl. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,39 (s, 2H), 7,95 (s, 3H), 7,70 (s, 1H), 3,25 (d, J =5,5 Hz, 2H), 2,68 - 2,61 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 0,96 (s, 6H). N1-(Benzo[d]oxazol-2-il)-2,2-dimetil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2- il)propano-1,3-diamina (Exemplo 164)
[0304] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3 exceto que carbonato de césio foi usado como uma base geral.
[0305] 2-Clorobenzoxazol (0,06 mL, 0,54 mmol, 0,1 eq) foi adicionado a uma solução agitada de hidrocloreto de 2,2-dimetil-N1-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (105B) (0,13 g, 0,49 mmol, 1,0 eq) e carbonato de césio (0,48 g, 1,48 mmol, 3,0 eq) em N,N- dimetilformamida anidra (2,0 mL) sob nitrogênio. A mistura foi agitada a 80 ºC ou temperatura ambiente durante 16 h e foi depois concentrada sob vácuo. Água (2,5 mL) foi adicionada e a mistura extraída com acetato de etila (3 x5 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 mL) e salmoura (2 mL), depois secas através de um separador de fases. Os solventes foram removidos sob vácuo para dar um óleo amarelo em bruto que foi purificado por HPLC preparativa para dar a N1-(benzo[d]oxazol-2-il)-2,2-dimetil-N3-(5-(metiltio)pirimidin- 2-il)propano-1,3-diamina (Exemplo 164) desejada como um sólido esbranquiçado.
[0306] Usando os procedimentos descritos no Esquema 7, de acordo com o Método Geral 3, os seguintes exemplos foram preparados: Tabela 9
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,33 (s, 2H), 8,21 (s, 1H), 7,53 - 7,51 (m, 1H), 7,37 (d, J =7,8 Hz, 1H), 164 7,24 (d, J =7,4 Hz, 1H), 7,14 (dd, J 344 =7,4, 7,4 Hz, 1H), 7,02 (dd, J =7,3, 7,3 Hz, 1H), 3,30 - 3,23 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 0,93 (s, 6H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,36 (s, 2H), 7,34 (d, J =7,5 Hz, 1H), 7,23 (d, J =7,8 Hz, 1H), 7,15 (dd, J =7,2, 7,2 Hz, 1H), 7,01 (dd, J =7,3, 165 342 7,3 Hz, 1H), 6,28 - 6,27 (m, 1H), 5,73 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 1H), 3,47 - 3,38 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 0,69 - 0,65 (m, 2H), 0,58 - 0,54 (m, 2H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,36 (s, 2H), 8,35 - 8,29 (m, 1H), 7,84 (d, J =6,7 Hz, 1H), 7,35 (d, J =7,8 Hz, 1H), 7,25 (d, J =7,4 Hz, 1H), 166 7,12 (dd, J =7,4, 7,4 Hz, 1H), 6,99 328 (dd, J =7,3, 7,3 Hz, 1H), 4,47 - 4,40 (m, 1H), 4,29 (dd, J =6,5, 12,9 Hz, 1H), 2,38 (d, J =14,1 Hz, 6H) próton NH não observado. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,30 (s, 2H), 7,84 (d, J =8,2 Hz, 1H), 7,41 (dd, J =5,4, 5,4 Hz, 1H), 7,31 (d, J =7,7 Hz, 1H), 7,21 (d, J =7,4 167 Hz, 1H), 7,10 (dd, J =7,4, 7,4 Hz, 330 1H), 6,96 (dd, J =7,2, 7,2 Hz, 1H), 3,91 - 3,83 (m, 1H), 3,38 - 3,34 (m, 2H), 2,32 (s, 3H), 1,85 - 1,77 (m, 2H), 1,24 (d, J =6,5 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (2H, s), 7,37 (1H, d, J =7,8 Hz), 168 348 7,24 (1H, s), 7,17 (1H, dd, J =7,6, 7,6 Hz), 7,04 (1H, dd, J =7,7, 7,7
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ Hz), 6,23 - 6,23 (1H, m), 5,95 (1H, dd, J =6,5, 6,5 Hz), 3,96 - 3,74 (2H, m), 3,69 - 3,58 (2H, m), 2,37 (3H, s), 1,47 (3H, d, J =21,8 Hz); ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,32 (s, 2H), 7,86 (dd, J =5,3, 5,3 Hz, 1H), 7,44 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 7,32 (d, J =7,5 Hz, 1H), 7,22 (d, J =7,3 Hz, 1H), 7,10 (dd, J =7,3, 7,3 169 344 Hz, 1H), 6,99 - 6,94 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 1,94 - 1,84 (m, 1H), 1,42 - 1,23 (m, 3H), 0,93 (dd, J =7,5, 7,5 Hz, 4H). 2H não observado, sob pico de água. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,86 (d, J =6,4 Hz, 1H), 8,36 (s, 2H), 8,32 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,88 - 7,82 170 (m, 2H), 7,44 (d, J =8,4 Hz, 1H), 416 4,49 - 4,40 (m, 2H), 4,30 (q, J =7,1 Hz, 2H), 2,44 - 2,32 (m, 7H), 1,33 (dd, J =7,1, 7,1 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,36 (s, 2H), 7,38 (d, J =7,8 Hz, 1H), 7,25 - 7,24 (m, 1H), 7,17 (dd, J =7,5, 7,5 Hz, 1H), 7,04 (dd, J =7,7, 171 328 7,7 Hz, 1H), 5,37 (d, J =7,0 Hz, 1H), 5,10 (d, J =7,3 Hz, 1H), 4,26 - 4,14 (m, 2H), 3,11 - 3,04 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,06 - 1,98 (m, 2H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,77 (d, J =5,9 Hz, 1H), 8,36 (s, 2H), 8,27 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,86 (d, J 172 =6,7 Hz, 1H), 7,81 (dd, J =1,8, 8,4 388 Hz, 1H), 7,40 (d, J =8,4 Hz, 1H), 4,47 - 4,38 (m, 2H), 2,47 - 2,34 (m, 6H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,79 (1H, s), 8,36 (2H, s), 7,89 (1H, s), 5,46 (1H, d, J =5,9 Hz), 5,38 (1H, 173 347 d, J =4,9 Hz), 4,61 - 4,48 (2H, m), 3,96 (3H, s), 2,49 (3H, dd, J =6,6, 6,6 Hz), 2,37 (3H, s). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,36 (s, 2H), 7,37 (d, J =7,7 Hz, 1H), 7,17 (dd, J =7,4, 7,4 Hz, 1H), 7,07 174 - 7,02 (m, 1H), 5,80 (dd, J =5,7, 5,7 332 Hz, 1H), 5,63 (s, 1H), 4,82 - 4,81 (m, 1H), 4,12 - 4,06 (m, 1H), 3,74 - 3,49 (m, 4H), 2,38 (s, 3H). Esquema 8 3-Cloro-N-(2-clorobenzo[d]tiazol-6-il)propani-1-sulfonamida (106B)
[0307] Hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral) (326 mg, 8,15 mmol, 3,0 eq) foi adicionado porção a porção a uma solução resfriada em gelo de 2-clorobenzotiazol-6-amina (500 mg, 2,71 mmol, 1,0 eq) em N,N-dimetilformamida (25 mL) e a mistura agitada durante 1 hora sob resfriamento em gelo. Uma solução de cloreto de 3- cloropropano-1-sulfonila (673 mg, 3,80 mmol, 1,4 eq) em N,N- dimetilformamida (3 mL) foi adicionada gota a gota e a mistura reacional foi depois deixada a aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 3 h. A mistura reacional foi diluída com salmoura (20 mL) e extraída com acetato de etila (2 x 25 mL). As frações orgânicas combinadas foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para dar um óleo amarelo-pálido que foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso- hexanos para acetato de etila, 0-100%) para dar o produto desejado 3- cloro-N-(2-clorobenzo[d]tiazol-6-il)propano-1-sulfonamida 106B como uma goma esbranquiçada.
[0308] Rendimento: 427 mg (48%). ¹H RMN (400 MHz, MeOD) δ 7,87 - 7,84 (m, 2H), 7,38 (dd, J =2,3, 8,8 Hz, 1H), 3,67 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 2H), 2,27 - 2,19 (m, 2H). Nota Prótons de CH2 obscurecidos por MeOD. 1,1-Dióxido de 2-(2-clorobenzo[d]tiazol-6-il)isotiazolidina (106C)
[0309] Hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral) (98 mg, 2,46 mmol, 2,0 eq) foi adicionado a uma solução resfriada em gelo de 3-cloro-N-(2-clorobenzo[d]tiazol-6-il)propano-1-sulfonamida (106B) (400 mg, 1,23 mmol, 1,0 eq) em N,N-dimetilformamida (5 mL). A mistura reacional foi agitada durante 1 hora sob resfriamento em gelo e depois extinta pela adição cuidadosa de uma solução saturada de cloreto de amônio (20 mL). A mistura resultante foi extraída com acetato de etila (3 x 20 mL) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (20 mL), salmoura (20 mL) e depois concentradas sob vácuo para dar uma goma. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso-hexano para acetato de etila, 0-100%) para dar o produto desejado (106C) como uma goma esbranquiçada.
[0310] Rendimento: 220 mg (62%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 7,92 (d, J =8,9 Hz, 1H), 7,72 (d, J =2,1 Hz, 1H), 7,38 (dd, J =2,4, 8,9 Hz, 1H), 3,84 (dd, J =6,5, 6,5 Hz, 2H), 3,43 (dd, J =7,5, 7,5 Hz, 2H), 2,63 - 2,55 (m, 2H). 1,1-Dióxido de 2-(2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-il)isotiazolidina (Exemplo 175)
[0311] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0312] Rendimento: 25 mg (15%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,34 (s, 2H), 8,03 (dd, J =5,6, 5,6 Hz, 1H), 7,57 (d, J =2,3 Hz, 1H), 7,51 (dd, J =5,9, 5,9 Hz, 1H), 7,35 (d, J =8,8 Hz, 1H), 7,14 (dd, J =2,4, 8,7 Hz, 1H), 3,72 (dd, J =6,5, 6,5 Hz, 2H), 3,47 (dd, J =7,5, 7,5 Hz, 2H), 3,45 - 3,38 (m, 1H), 3,30 - 3,22 (m, 3H), 2,44 - 2,36 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,13 - 2,06 (m, 1H), 0,95 (d, J =6,8 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 465 (M+H)+. Esquema 9 N-(2-Clorobenzo[d]tiazol-6-il)metanossulfonamida (107B)
[0313] Cloreto de metanossulfonila (0,055 mL, 0,706 mmol, 1,3 eq) foi adicionada gota a gota a uma solução resfriada em gelo de 2- clorobenzotiazol-6-amina (100 mg, 0,54 mmol, 1,0 eq) e piridina (0,066 mL, 0,815 mmol, 1,5 eq) em diclorometano anidro (5 mL). A mistura foi agitada a 0 C durante 15 minutos e foi depois deixada a aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 1 hora. A mistura reacional foi extinta com água (1 mL). A fração orgânica foi removida e concentrada sob pressão reduzida para dar um óleo amarelo-pálido que foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso-hexanos para acetato de etila, 0-100%) para dar a N-(2-clorobenzo[d]tiazol-6-il)metanossulfonamida (107B) desejada como uma goma amarelo-pálida.
[0314] Rendimento: 135 mg (94,8%) ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 7,88 (d, J =8,8 Hz, 1H), 7,79 (d, J =2,1 Hz, 1H), 3,00 (s, 3H). Próton de H aromático obscurecido por CDCl 3, próton permutável NH não observado. N-(2-Clorobenzo[d]tiazol-6-il)-N-metilmetanossulfonamida (107C)
[0315] Hidreto de sódio (dispersão a 60% em óleo mineral) (31 mg, 0,772 mmol, 1,5 eq) foi adicionado porção a porção a uma solução resfriada em gelo de N-(2-clorobenzo[d]tiazol-6-il)metanossulfonamida (107B) (135 mg, 0,515 mmol, 1,0 eq) em tetra-hidrofurano anidro (2 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Iodometano (0,048 mL, 0,772 mmol, 1,5 eq) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h adicionais. Água (1 mL) foi adicionada e os solventes foram depois removidos sob elevado vácuo para dar uma goma amarelo-pálido que foi purificada por cromatografia flash (eluindo iso-hexanos para acetato de etila, 0-100%) para dar a N- (2-clorobenzo[d]tiazol-6-il)-N-metilmetanossulfonamida (107C) desejada como uma goma amarelo-pálida.
[0316] Rendimento: 100 mg (70%) ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 7,95 (d, J =8,8 Hz, 1H), 7,86 (d, J =2,1 Hz, 1H), 7,48 (dd, J =2,3, 8,8 Hz, 1H), 3,39 (s, 3H), 2,88 (s, 3H). N-Metil-N-(2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-il)metanossulfonamida (Exemplo 176)
[0317] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0318] Rendimento: 89 mg (60%) ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,62 (d, J =2,0 Hz, 1H), 7,51 (d, J =8,7 Hz, 1H), 7,24 (d, J =3,2 Hz, 1H), 5,74 (dd, J =6,5, 6,5 Hz, 1H), 3,34 - 3,33 (m, 6H), 2,86 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H). Nem todos os prótons permutáveis NH observados; MS (ESI+) m/z 453 (M+H)+. Esquema 10
4-(((5-(Metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)pirrolidin-2-ona (108B)
[0319] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 1.
[0320] 5-Aminometil-pirrolidin-2-ona (108A) (1,0 g, 8,76 mmol, 1,0 eq) foi adicionada a uma suspensão agitada de 2-cloro-5- (metiltio)pirimidina (100B) (1,4 g, 8,76 mmol, 1,0 eq) e carbonato de césio (8,56 g, 26,28 mmol, 3,0 eq) em dimetilformamida anidra (10 mL). A mistura foi aquecida até 50 °C durante 18 h e depois concentrada sob pressão reduzida. O licor obtido foi diluído com acetato de etila (50 mL), lavado com água (10 mL) e salmoura (10 mL) e depois seco através de um separador de fases. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida para originar um resíduo em bruto que foi purificado por trituração em metanol para dar o produto desejado 4-(((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)pirrolidin-2-ona (108B) como um sólido amarelo. A fase aquosa foi concentrada sob pressão reduzida, combinada com o filtrado e purificada por cromatografia flash (eluindo diclorometano para metanol, 0-10%) para dar o produto desejado 4-(((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)pirrolidin-2-ona (108B) como um sólido amarelo. Ambos os lotes foram combinados e usados no próximo passo.
[0321] Rendimento: 0,74 g (36%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 5,79 - 5,76 (m, 1H), 5,48 (dd, J =5,5, 5,5 Hz, 1H), 3,57 - 3,50 (m, 3H), 3,20 (dd, J =5,3, 9,5 Hz, 1H), 2,89 - 2,84 (m, 1H), 2,53 - 2,46 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,16 (dd, J =6,4, 17,1 Hz, 1H). 4-(((5-(Metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)-2-oxopirrolidina-1- carboxilato de terc-butila (108C)
[0322] 4-Dimetilaminopiridina (5 mg, 0,04 mmol, 0,1 eq) foi adicionada a uma suspensão agitada de 4-(((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)metil)pirrolidin-2-ona (108B) (100 mg, 0,4 mmol, 1,0 eq), dicarbonato de di-terc-butila (229 mg, 1,0 mmol, 2,5 eq) e trietilamina (0,146 mL, 1,00 mmol, 2,5 eq) em diclorometano (4,2 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h e depois água (3,0 mL) foi adicionada. A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 5,0 mL) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2,5 mL), depois passadas através de um separador de fases. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida para originar um resíduo em bruto que foi purificado por cromatografia de fase reversa (eluindo solução fórmica a 0,1% para acetonitrila, 5-100%) para dar o produto desejado 4-(((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)-2-oxopirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (108C).
[0323] Rendimento: 72 mg (53%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,35 (s, 2H), 7,62 (t, J =6,1 Hz, 1H), 3,73 (dd, J =7,8, 10,4 Hz, 1H), 3,50 - 3,44 (m, 1H), 3,29 (d, J =6,4 Hz, 2H), 2,60 - 2,55 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,28 (dd, J =9,6, 20,9 Hz, 1H), 1,44 (s, 9H). (4-Amino-2-(((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)-4- oxobutil)carbamato de terc-butila (108D)
[0324] Uma solução de hidróxido de amônio (2,2 mL) foi adicionada a 4-(((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)-2-oxopirrolidina-1- carboxilato de terc-butila (108C) (72 mg, 0,21 mmol) e a mistura foi aquecida a 80 oC durante 1,5 h. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente, depois extraída com diclorometano (3 x 5 mL). Os solventes orgânicos foram secos passando através de um separador de fases, depois removidos sob pressão reduzida para originar o produto desejado (4-amino-2-(((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)-4- oxobutil)carbamato de terc-butila (108D).
[0325] Rendimento: 61 mg (86%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,33 (s, 2H), 7,32 (s, 1H), 7,25 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 6,81 (s, 2H), 3,24 (dd, J =6,2, 6,2 Hz, 2H), 2,97 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,18 - 2,08 (m, 1H), 2,04 (d, J =6,4 Hz, 2H), 1,38 (s, 9H). Sal de di-hidrocloreto de 4-amino-3-(((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)metil)butanamida (108E)
[0326] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 2.
[0327] Uma solução de cloreto de hidrogênio (0,7 mL, 4 M em 1,4- dioxano) foi adicionada a (4-amino-2-(((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)metil)-4-oxobutil)carbamato de terc-butila (108D) (61 mg, 0,17 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida para originar o produto desejado sal de di-hidrocloreto de 4-amino-3-(((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)metil)butanamida (108E) como um sólido amarelo-pálido.
[0328] Rendimento: 56 mg (100%) sal de HCl. 4-((6-(N-(4-Metoxibenzil)sulfamoil)benzo[d]tiazol-2-il)amino)-3-(((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)butanamida (177)
[0329] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0330] 2-Cloro-N-(4-metoxibenzil)benzo[d]tiazol-6-sulfonamida
(101B) (70 mg, 0,19 mmol, 1,10 eq) foi adicionada a uma solução agitada de sal de di-hidrocloreto de 4-amino-3-(((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)metil)butanamida (108E) (56 mg, 0,17 mmol, 1,0 eq) e trietilamina (0,072 mL, 0,51 mmol, 3,0 eq) em dimetilformamida anidra (2,0 mL) sob nitrogênio. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h e depois concentrada sob pressão reduzida. Água (2,5 mL) foi adicionada e o precipitado resultante foi coletado por filtração, depois lavado com metanol. O filtrado orgânico foi concentrado sob pressão reduzida para dar um resíduo em bruto que foi purificado por cromatografia flash (eluindo diclorometano para metanol, 0-25%) para dar o produto desejado 4-((6-(N-(4-metoxibenzil)sulfamoil)benzo[d]tiazol- 2-il)amino)-3-(((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)butanamida (Exemplo 177) como um sólido esbranquiçado.
[0331] Rendimento: 25 mg (25%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,45 (dd, J =5,6, 5,6 Hz, 1H), 8,33 (s, 2H), 8,08 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,88 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 1H), 7,62 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,49 - 7,42 (m, 2H), 7,39 - 7,37 (m, 1H), 7,14 (d, J =8,7 Hz, 2H), 6,87 - 6,87 (m, 1H), 6,81 (d, J =8,7 Hz, 2H), 3,89 (d, J =6,0 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,48 (d, J =1,1 Hz, 2H), 3,37 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 2H), 2,43 - 2,37 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,22 - 2,17 (m, 2H). 4-((5-(Metiltio)pirimidin-2-il)amino)-3-(((6-sulfamoilbenzo[d]tiazol- 2-il)amino)metil)butanamida (178)
[0332] Ácido trifluoroacético (0,3 mL) foi adicionado gota a gota a o uma solução resfriada a 0 C de 4-((6-(N-(4- metoxibenzil)sulfamoil)benzo[d]tiazol-2-il)amino)-3-(((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)metil)butanamida (177) (20 mg, 0,03 mmol, 1,0 eq) em diclorometano anidro (0,3 mL). A mistura foi agitada durante 30 minutos e depois deixada a aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 8 h. Uma alíquota adicional de ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionada e a mistura foi agitada durante 16 h. A mistura reacional foi concentrada sob pressão, depois cuidadosamente tornada básica com a adição de uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (3 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 5 mL). A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura (3 mL), seca sobre sulfato de magnésio anidro e depois concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto obtido foi purificado por cromatografia flash (eluindo diclorometano para metanol, 0-20%) para dar o produto desejado 4-((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)-3-(((6-sulfamoilbenzo[d]tiazol-2- il)amino)metil)butanamida (Exemplo 178) como um sólido branco.
[0333] Rendimento: 12 mg (75%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,41 (dd, J =5,5, 5,5 Hz, 1H), 8,33 (s, 2H), 8,13 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,67 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,47 - 7,43 (m, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,21 (s, 2H), 6,86 (s, 1H), 3,46 - 3,46 (m, 2H), 3,36 (dd, J =6,2, 6,2 Hz, 2H), 2,39 - 2,38 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,21 - 2,17 (m, 2H).
[0334] Usando os procedimentos descritos no Esquema 10, o seguinte exemplo foi sintetizado: Tabela 10 LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,45 (dd, J =5,4, 5,4 Hz, 1H), 8,33 (s, 2H), 8,08 (d, J =1,9 Hz, 1H), 7,88 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 7,81 (q, J =4,5 Hz, 1H), 7,62 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,47 - 7,41 (m, 179 2H), 7,14 (d, J =8,8 Hz, 2H), 6,81 602 (d, J =8,8 Hz, 2H), 3,89 (d, J =4,8 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,52 - 3,42 (m, 2H), 3,38 - 3,31 (m, 2H), 2,59 (d, J =4,5 Hz, 3H), 2,48 - 2,35 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,22 - 2,17 (m, 2H). Esquema 11
4-((2-Clorobenzo[d]tiazol-6-il)sulfonil)morfolina (109B)
[0335] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 6 usando diclorometano como solvente em vez de tetra- hidrofurano.
[0336] Rendimento: 686 mg. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,25 (d, J =1,8 Hz, 1H), 8,10 (d, J =8,6 Hz, 1H), 7,85 (dd, J =1,3, 8,6 Hz, 1H), 3,75 (dd, J =4,7, 4,7 Hz, 4H), 3,04 (dd, J =4,7, 4,7 Hz, 4H); MS (ESI+) m/z 319 (M+H)+. (3-((5-(Difluorometóxi)pirimidin-2-il)amino)-2- metilpropil)carbamato de terc-butila (109D)
[0337] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 1.
[0338] Rendimento: 433 mg. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,16 - 8,15 (m, 2H), 5,05 - 5,05 (m, 1H), 3,47 - 3,38 (m, 1H), 3,31 - 3,17 (m, 2H), 3,04 - 2,95 (m, 1H), 1,96 - 1,86 (m, 1H), 1,60 - 1,58 (m, 1H), 0,96 - 0,94 (m, 3H); MS (ESI+) m/z 333 (M+H)+. Hidrocloreto de N1-(5-(difluorometóxi)pirimidin-2-il)-2- metilpropano-1,3-diamina (109E)
[0339] Uma solução de cloreto de hidrogênio (2,7 mL, 4 M em 1,4- dioxano) foi adicionada a (3-((5-(difluorometóxi)pirimidin-2-il)amino)-2-
metilpropil)carbamato de terc-butila (109D) (300 mg, 0,903 mmol) e agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos. Os solventes foram removidos sob vácuo para dar o composto do título hidrocloreto de N1- (5-(difluorometóxi)pirimidin-2-il)-2-metilpropano-1,3-diamina (109E) em bruto foi levado para o próximo passo sem purificação adicional.
[0340] Rendimento: 225 mg (Quant.). MS (ESI +) m/z 233 (M+H)+. N1-(5-(Difluorometóxi)pirimidin-2-il)-2-metil-N3-(6- (morfolinossulfonil)benzo[d]tiazol-2-il)propano-1,3-diamina (180)
[0341] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0342] Rendimento: 225 mg. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,21 (s, 2H), 7,97 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,65 (dd, J =1,8, 8,5 Hz, 1H), 7,59 (d, J =8,5 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,43 (t, J =71,6 Hz, 1H), 5,72 (dd, J =6,6, 6,6 Hz, 1H), 3,77 - 3,73 (m, 4H), 3,62 - 3,51 (m, 2H), 3,43 - 3,29 (m, 2H), 3,01 (dd, J =4,6, 4,6 Hz, 4H), 2,21 - 2,12 (m, 1H), 1,08 (d, J =6,9 Hz, 3H); (ESI+) m/z 515 (M+H)+.
[0343] Seguindo os procedimentos descritos no Esquema 11, os seguintes exemplos foram sintetizados: Tabela 11 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,21 (s, 2H), 7,94 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,64 - 7,60 (m, 2H), 6,93 (s, 1H), 6,44 (t, J =72,8 Hz, 1H), 5,66 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 1H), 181 4,44 - 4,39 (m, 1H), 3,88 (tt, J 570 =7,5, 7,8 Hz, 3H), 3,80 - 3,74 (m, 1H), 3,62 - 3,51 (m, 2H), 3,42 - 3,17 (m, 3H), 2,37 - 2,29 (m, 1H), 2,23 - 2,14 (m, 2H), 1,08 (d, J =6,9 Hz, 3H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,22 (s, 2H), 7,96 - 7,95 (m, 1H), 7,65 - 7,57 (m, 2H), 6,88 - 6,83 (m, 1H), 5,68 - 5,62 (m, 182 1H), 4,31 (s, 4H), 3,62 - 3,49 555 (m, 2H), 3,42 - 3,28 (m, 2H), 2,97 - 2,92 (m, 4H), 2,19 - 2,10 (m, 1H), 1,98 - 1,93 (m, 4H), 1,08 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,21 - 8,20 (2H, m), 7,68 (1H, d, J =1,5 Hz), 7,54 - 7,51 (1H, m), 7,33 (1H, dd, J =1,5, 8,3 Hz), 183 6,42 - 6,42 (1H, m), 5,69 (1H, t, 522 J =6,4 Hz), 3,69 - 3,48 (6H, m), 3,42 - 3,28 (2H, m), 2,63 - 2,56 (6H, m), 2,18 - 2,09 (1H, m), 1,08 - 1,05 (3H, m); ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,16 - 8,15 (m, 3H), 7,65 - 7,64 (m, 1H), 7,42 (t, J =5,9 Hz, 1H), 7,29 - 7,26 (m, 1H), 7,17 - 7,13 184 (m, 1H), 4,72 - 4,65 (m, 1H), 493 3,71 - 3,63 (m, 2H), 2,45 - 2,42 (m, 12H), 2,08 - 1,98 (m, 1H), 1,67 - 1,25 (m, 4H), 0,88 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,44 (t, J =5,5 Hz, 1H), 8,30 - 8,23 (m, 3H), 7,82 (dd, J =1,9, 8,4 Hz, 1H), 7,50 (t, J =5,9 Hz, 185 438 1H), 7,41 - 7,38 (m, 1H), 4,30 (q, J =7,1 Hz, 2H), 2,17 - 2,07 (m, 1H), 1,35 - 1,30 (m, 3H), 0,98 - 0,95 (m, 3H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,43 - 8,39 (m, 1H), 8,25 - 8,24 (m, 2H), 8,12 (d, J =1,9 Hz, 1H), 186 7,66 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 445 7,51 - 7,43 (m, 2H), 7,21 (d, J =4,8 Hz, 2H), 2,16 - 2,07 (m, 1H), 0,98 - 0,95 (m, 3H). Esquema 12 (2-Metil-3-(piridin-2-ilamino)propil)carbamato de terc-butila (110B)
[0344] Uma solução de 3-amino-2-metilpropilcarbamato de terc- butila (110A) (150 mg, 0,80 mmol, 1,0 eq) em 1,4-dioxano (2 mL) foi adicionada a uma solução de 2-bromopiridina (0,076 mL, 0,80 mmol, 1,0 eq), terc-butóxido de sódio (383 mg, 3,98 mmol, 5,0 eq), 2-diciclo- hexilfosfino-2′,4′,6′-tri-isopropilbifenila (38 mg, 0,08 mmol, 0,1 eq) e tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) (73 mg, 0,08 mmol, 0,1 eq) em 1,4-dioxano (10 mL) sob nitrogênio. A mistura reacional foi aquecida até 70 ºC durante 72 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo obtido foi dividido entre água (2 mL) e acetato de etila (5 mL). A mistura foi filtrada através de celite e a fase aquosa foi depois removida e extraída com acetato de etila (3 x5 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 mL) e salmoura (2 mL), depois secas por passagem através de um separador de fases antes da concentração até à secura sob vácuo. O resíduo em bruto obtido foi purificado por cromatografia de fase reversa (eluindo solução aquosa de bicarbonato de amônio a 10 mM para acetonitrila, 5-95%) para dar (2-metil-3-(piridin-2-ilamino)propil)carbamato de terc-butila (110B) desejado semipuro como um sólido esbranquiçado que foi usado no próximo passo sem purificação adicional.
[0345] Rendimento: 27 mg (12%). MS (ESI +) m/z 266 (M+H)+. Hidrocloreto de 2-metil-N1-(piridin-2-il)propano-1,3-diamina (110C)
[0346] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 2.
[0347] Uma solução de cloreto de hidrogênio (0,4 mL, 4 M em 1,4- dioxano) foi adicionada a (2-metil-3-(piridin-2-ilamino)propil)carbamato de terc-butila (108B) (27 mg, 0,10 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob vácuo para originar o produto desejado hidrocloreto de 2-metil-N1- (piridin-2-il)propano-1,3-diamina (110C) como um semissólido amarelo- pálido. A amostra semibruta foi levada para a próxima reação sem purificação adicional.
[0348] Rendimento: 25 mg (assumido quant. %). 2-Metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)-N3-(piridin-2-il)propano-1,3- diamina (Exemplo 187)
[0349] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0350] 2-Cloro-5-metilsulfanil-pirimidina (100B) (17 mg, 0,11 mmol, 1,05 eq) foi adicionado a uma solução agitada de hidrocloreto de 2-metil- N1-(piridin-2-il)propano-1,3-diamina (110C) (24 mg, 0,10 mmol, 1,0 eq) e carbonato de césio (99 mg, 0,30 mmol, 3,0 eq) em N,N- dimetilformamida anidra (0,5 mL) sob nitrogênio. A mistura foi aquecida até 50 °C durante 16 h e foi depois concentrada sob vácuo. Água (2 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (3 x5 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 mL) e salmoura (2 mL), depois secas por passagem através de um separador de fases. Os solventes foram removidos sob vácuo para dar um óleo amarelo em bruto que foi purificado por cromatografia de fase reversa (eluindo solução aquosa de bicarbonato de amônio a 10 mM para acetonitrila, 5-95%) para dar a 2-metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)-N3- (piridin-2-il)propano-1,3-diamina (Exemplo 187) desejada como um sólido amarelo pegajoso.
[0351] Rendimento: 1,5 mg (5%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 8,10 (dd, J =0,6, 3,6 Hz, 1H), 7,41 - 7,35 (m, 1H), 6,54 (dd, J =5,3, 6,8 Hz, 1H), 6,38 (d, J =8,4 Hz, 1H), 5,93 - 5,93 (m, 1H), 4,96 - 4,96 (m, 1H), 3,53 - 3,21 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,10 - 2,01 (m, 1H), 1,03 (d, J =6,9 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 290 (M+H)+. Esquema 13 5-((2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)pirazina-2-carboxilato de metila (188)
[0352] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0353] 5-Bromopirazina-2-carboxilato de metila (114 mg, 0,53 mmol, 1,0 eq) foi adicionado a uma solução agitada de hidrocloreto de 2-metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (102A) (150 mg, 0,53 mmol, 1,0 eq) e carbonato de césio (514 mg, 1,58 mmol, 3,0 eq) em N,N-dimetilformamida anidra (2,0 mL) sob nitrogênio. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h e depois concentrada sob vácuo. Água (2,5 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (3 x5 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 mL) e salmoura (2,5 mL), depois secas passando através de um separador de fases. Os solventes foram removidos sob vácuo para dar um óleo marrom que foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso-hexanos para acetato de etila, 0-100%). O produto semibruto obtido foi adicionalmente purificado por cromatografia flash (eluindo diclorometano para metanol, 0-10%) para dar a 5-((2-metil-3- ((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)pirazina-2-carboxilato de metila (Exemplo 188) desejada como um sólido branco.
[0354] Rendimento: 60 mg (32%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,76 (s, 1H), 8,37 (s, 2H), 7,91 (d, J =1,4 Hz, 1H), 6,36 - 6,36 (m, 1H), 5,56 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,60 - 3,51 (m, 2H), 3,40 - 3,26 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,10 - 2,03 (m, 1H), 1,04 (d, J =6,9 Hz, 3H). MS (ESI+) m/z 349 (M+H)+. Ácido 5-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)pirazina-2-carboxílico (189)
[0355] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 4.
[0356] Hidróxido de lítio mono-hidratado (23 mg, 55 mmol, 5,0 eq) foi adicionado a uma solução agitada de 5-((2-metil-3-((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)pirazina-2-carboxilato de metila (188) (38 mg, 0,11 mmol, 1,0 eq) em etanol (0,4 mL) e água (0,4 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h e depois concentrada sob pressão reduzida. Água (0,5 mL) foi adicionada ao resíduo e esta mistura foi acidificada até pH ~3 com uma solução de ácido clorídrico aquoso (2 M). Um precipitado pegajoso foi coletado sob filtração e depois extraído com acetato de etila (3 x 3 mL), lavado com água (1 mL) e depois seco por passagem através de um separador de fases. Os solventes foram removidos sob vácuo para dar o ácido 5-((2- metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)pirazina-2- carboxílico (Exemplo 189) desejado como um sólido amarelo-pálido.
[0357] Rendimento: 34 mg (94%); ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,52 (s, 1H), 8,36 (s, 2H), 7,99 (s, 2H), 7,65 - 7,64 (m, 1H), 3,39 - 3,20 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,12 - 2,03 (m, 1H), 0,94 (d, J =6,8 Hz, 3H), Um próton NH não observado; MS (ESI+) m/z 335 (M+H)+. (4-Hidroxipiperidin-1-il)(5-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)pirazin-2-il)metanona (Exemplo 190)
[0358] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 5.
[0359] Hexafluorofosfato de 3-óxido de 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio (HATU, 58 mg, 0,15 mmol, 1,5 eq) foi adicionado a uma solução de ácido 5-((2- metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)pirazina-2- carboxílico (189) (34 mg, 0,10 mmol, 1,0 eq) e 4-hidroxipiperidina (103 mg, 1,02 mmol, 10 eq) em N,N-dimetilformamida (1 mL) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo em bruto obtido foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa para dar a (4- hidroxipiperidin-1-il)(5-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)pirazin-2-il)metanona (Exemplo 190) desejada como um sólido esbranquiçado.
[0360] Rendimento: 22 mg (53%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,46 (s, 1H), 8,37 (s, 2H), 7,79 (s, 1H), 5,97 - 5,97 (m, 1H), 5,71 - 5,71 (m, 1H), 4,15 - 4,15 (m, 2H), 4,01 - 3,94 (m, 1H), 3,58 - 3,47 (m, 2H), 3,42 - 3,25 (m, 4H), 2,37 (s, 3H), 2,08 (ddd, J =11,5, 11,5, 5,1 Hz, 1H), 2,00 - 1,94 (m, 2H), 1,62 - 1,60 (m, 3H), 1,04 (d, J =6,8 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 418 (M+H)+. Esquema 16
5-(5-Metil-1,3,4-oxadiazol-2-il)piridin-2-amina (111B)
[0361] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 7.
[0362] 2-Bromo-5-metil-1,3,4-oxadiazol (0,58 g, 3,58 mmol, 1,05 eq) foi adicionado a uma solução de 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)piridin-2-amina (111A) (0,75 g, 3,41 mmol, 1,0 eq), carbonato de césio (3,33 g, 10,22 mmol, 3,0 eq) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (0,39 g, 0,34 mmol, 0,10 eq) em água (5,5 mL) e 1,4-dioxano (22,5 mL) sob nitrogênio. A mistura reacional foi aquecida até 100 ºC durante 16 h. Os solventes foram removidos sob vácuo, água (20 mL) foi adicionada e a mistura extraída com acetato de etila (6 x50 mL) As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (10 mL) e salmoura (10 mL), secas por passagem através de um separador de fases e depois concentradas sob vácuo. O resíduo em bruto obtido foi purificado por cromatografia de fase reversa (eluindo solução de bicarbonato de amônio a 10 mM para acetonitrila, 5-30%) para dar a 5-(5-metil-1,3,4-oxadiazol-2-il)piridin-2-amina (111B) desejada como um sólido esbranquiçado.
[0363] Rendimento: 153 mg (25%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,49 (d, J =2,0 Hz, 1H), 7,87 (dd, J =2,4, 8,8 Hz, 1H), 6,75 (s, 2H), 6,57 (d, J =8,8 Hz, 1H), 2,53 (s, 3H). (2-Metil-3-((5-(5-metil-1,3,4-oxadiazol-2-il)piridin-2- il)amino)propil)carbamato de terc-butila (111C)
[0364] N-(2-Metil-3-oxopropil)carbamato de terc-butila (111B) (225 mg, 1,21 mmol, 1,2 eq) foi adicionado a uma solução de 5-(5-metil-1,3,4- oxadiazol-2-il)piridin-2-amina (114B) (153 mg, 1,00 mmol, 1,0 eq), ácido acético (0,230 mL, 4,02 mmol, 4,0 eq) e peneiras moleculares (tipo 4 Å, 250 mg) em diclorometano anidro (20 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos e depois triacetoxiboro-hidreto de sódio (532 mg, 2,51 mmol, 2,5 eq) foi adicionado em uma porção. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 40 h. N-(2-Metil-3-oxopropil)carbamato de terc-butila (225 mg, 1,21 mmol, 1,2 eq) foi adicionado e a mistura reacional agitada à temperatura ambiente durante 72 h adicionais. A reação foi extinta pela adição cuidadosa de uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (30 mL). A mistura foi agitada vigorosamente durante 30 minutos e a camada de diclorometano foi depois isolada e concentrada sob pressão reduzida para dar uma goma. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso- hexano para acetato de etila, 0-100%) para dar o (2-metil-3-((5-(5-metil- 1,3,4-oxadiazol-2-il)piridin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (111C) desejado como uma goma esbranquiçada. A amostra em bruto foi levada para a próxima reação sem purificação adicional.
[0365] Rendimento: 101 mg (29%). Hidrocloreto de 2-metil-N1-(5-(5-metil-1,3,4-oxadiazol-2-il)piridin-2- il)propano-1,3-diamina (111D)
[0366] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 2.
[0367] Uma solução de cloreto de hidrogênio (1,2 mL, 4 M em 1,4- dioxano) foi adicionada a (2-metil-3-((5-(5-metil-1,3,4-oxadiazol-2- il)piridin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (110C) (101 mg, 0,29 mmol) e a mistura agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob vácuo para originar o hidrocloreto de 2- metil-N1-(5-(5-metil-1,3,4-oxadiazol-2-il)piridin-2-il)propano-1,3-diamina
(111D) desejado como um sólido esbranquiçado. A amostra em bruto foi levada para a próxima reação sem purificação adicional.
[0368] Rendimento: 93 mg (assumido quant. %). Hidrocloreto de 2-metil-N1-(5-(5-metil-1,3,4-oxadiazol-2-il)piridin-2- il)-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (Exemplo 203)
[0369] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0370] 2-Cloro-5-metilsulfanil-pirimidina (100B, 51 mg, 0,32 mmol, 1,1 eq) foi adicionado a uma suspensão agitada de hidrocloreto de 2- metil-N1-(5-(5-metil-1,3,4-oxadiazol-2-il)piridin-2-il)propano-1,3-diamina (111D) (93 mg, 0,29 mmol, 1,0 eq) e carbonato de césio (283 mg, 0,87 mmol, 3,0 eq) em N,N-dimetilformamida anidra (2,9 mL) sob nitrogênio. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h, aquecida até 40 ºC durante 16 h adicionais e depois concentrada sob vácuo. Água (10 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (10 mL) e salmoura (10 mL), depois secas passagem através de um separador de fases. Os solventes foram removidos sob vácuo para dar um óleo amarelo que foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso- hexano para acetato de etila, 0-100%) para dar um resíduo em bruto que foi adicionalmente purificado por HPLC preparativa de fase reversa para dar a 2-metil-N1-(5-(5-metil-1,3,4-oxadiazol-2-il)piridin-2-il)-N3-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (Exemplo 203) desejada como um sólido amarelo.
[0371] Rendimento: 3,5 mg (3%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,70 (d, J =1,8 Hz, 1H), 8,37 (s, 2H), 8,00 (dd, J =2,3, 8,8 Hz, 1H), 6,47 (d, J =8,1 Hz, 1H), 5,79 - 5,69 (m, 2H), 3,55 - 3,25 (m, 4H), 2,59 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,12 - 2,04 (m, 1H), 1,05 (d, J =6,8 Hz, 3H) ; MS (ESI+) m/z 372 (M+H)+. Esquema 17
2-(6-(((R)-2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)piridin-3-il)ciclopropano-1-carboxilato de etila (112B)
[0372] A um tubo de reação foram adicionados hidrocloreto de (R)- 2-metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (100E) (544 mg, 2,19 mmol), 2-(6-bromopiridin-3-il)ciclopropano-1-carboxilato de etila (650 mg, 2,41 mmol), L-Prolina (101 mg, 0,875 mmol), fosfato de potássio (928 mg, 4,37 mmol) e dimetilsulfóxido (5 mL) e a mistura foi aspergida com nitrogênio durante 2 minutes antes de iodeto de cobre (I) (83 mg, 0,437 mmol) ter sido adicionado. O tubo foi selado sob nitrogênio e aquecido a 90 °C durante a noite. A reação foi resfriada, diluída com acetato de etila (20 mL), passada através de uma almofada de celite e o filtrado concentrado sob vácuo. O resíduo resultante foi diluído com acetato de etila (30 mL) e água (20 mL) e a fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etila (2 x 30 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com água (2 x 40 mL) e depois salmoura (2 x 50 mL), secos sobre sulfato de magnésio e depois concentrados sob vácuo para dar o composto do título 2-(6-(((R)-2-metil-3-((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)piridin-3-il)ciclopropano-1- carboxilato de etila (112B) em bruto como um óleo marrom-pálido.
[0373] (N.B. A purificação através de cromatografia de fase normal não conseguiu resolver várias impurezas de operação próxima).
[0374] Rendimento: 284 mg. ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) d 8,36 (s, 2H), 8,21 (dd, J =2,1, 6,2 Hz, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,26 - 7,19 (m, 1H), 7,12 (d, J =8,1 Hz, 1H), 6,33 (d, J =8,6 Hz, 1H), 4,22 - 4,15 (m, 2H), 3,53 - 3,46 (m, 1H), 3,39 - 3,31 (m, 2H), 3,23 - 3,17 (m, 1H), 2,49 (ddd, J =11,8, 11,8, 11,8 Hz, 1H), 2,33 (s, 3H), 2,12 - 2,02 (m, 1H), 1,79 - 1,74 (m, 1H), 1,55 - 1,48 (m, 1H), 1,32 - 1,24 (m, 3H), 1,24 - 1,17 (m, 1H), 1,02 (d, J =6,8 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 402 (M+H)+. Ácido 2-(6-(((R)-2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)piridin-3-il)ciclopropano-1-carboxílico (112C)
[0375] A uma solução de 2-(6-(((R)-2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin- 2-il)amino)propil)amino)piridin-3-il)ciclopropano-1-carboxilato de etila (112B, 274 mg, 0,682 mmol) em etanol (6 mL) e água (4 mL) foi adicionado hidróxido de lítio mono-hidratado (143 mg, 3,41 mmol) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo obtido foi diluído com água (8 mL). A solução foi ajustada até pH ~ 2 com uma solução aquosa a 2 M de ácido clorídrico e foi depois extraída com diclorometano/metanol (metanol a 20% em diclorometano, 2 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram passadas através de um cartucho separador de fases e depois concentradas sob vácuo para dar o composto do título ácido 2-(6-(((R)-2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)piridin-3-il)ciclopropano-1-carboxílico (112C) como um óleo marrom que foi usado diretamente sem purificação adicional.
[0376] Rendimento: 280 mg. MS (ESI+) m/z 374 (M+H)+. 7-(2-(6-(((R)-2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)piridin-3-il)ciclopropano-1-carbonil)-2,7- diazaespiro[3.5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (112D)
[0377] 2,7-Diazaespiro[3.5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (65 mg, 0,281 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido 2-(6-(((R)-2-
metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)piridin-3- il)ciclopropano-1-carboxílico (112C, 70 mg, 0,187 mmol), hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3- triazolo[4,5-b]piridínio (HATU, 86 mg, 0,225 mmol) e trietilamina (0,26 mL, 1,87 mmol) em dimetilformamida (2 mL) e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. Uma vez completa, a mistura reacional foi concentrada sob vácuo e o resíduo obtido foi diluído com acetato de etila (5 mL) e água (3 mL). A fase aquosa foi separada e extraída com acetato de etila (2 x 5 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com água (5 mL), salmoura (2 x 10 mL), secos sobre sulfato de magnésio e depois concentradas sob vácuo. O resíduo em bruto obtido foi purificado usando cromatografia em coluna (eluindo metanol a 0-10% em diclorometano) para dar o composto do título 7-(2-(6-(((R)-2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)piridin-3-il)ciclopropano-1-carbonil)-2,7- diazaespiro[3.5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (112D) como um sólido esbranquiçado.
[0378] Rendimento: 69 mg. ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,35 (s, 2H), 7,92 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,15 (dd, J =2,1, 8,5 Hz, 1H), 6,34 (d, J =8,6 Hz, 1H), 5,96 (dd, J =6,2, 6,2 Hz, 1H), 5,00 (s, 1H), 3,73 - 3,63 (m, 5H), 3,49 (s, 4H), 3,38 - 3,29 (m, 2H), 3,26 - 3,18 (m, 2H), 2,37 - 2,30 (m, 4H), 2,10 - 1,98 (m, 1H), 1,89 - 1,82 (m, 1H), 1,61 - 1,53 (m, 2H), 1,44 (s, 9H), 1,29 - 1,23 (m, 2H), 1,21 - 1,14 (m, 1H), 1,02 (d, J =6,8 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z (M+H)+. (2-(6-(((R)-2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)piridin-3-il)ciclopropil)(2,7- diazaespiro[3.5]nonan-7-il)metanona (Exemplo 204)
[0379] Ácido trifluoroacético (0,2 mL) foi adicionado a uma solução agitada de 7-(2-(6-(((R)-2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)piridin-3-il)ciclopropano-1-carbonil)-2,7-
diazaespiro[3.5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (112D, 69 mg, 0,119 mmol) em diclorometano (2 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. Os solventes foram removidos sob vácuo e depois azeotropados com diclorometano (3 x 5 mL). O resíduo em bruto obtido foi dissolvido em dimetilsulfóxido (1,5 mL) e purificado por HPLC preparativa. Os licores obtidos foram secos sob vácuo, depois liofilizados a partir de uma mistura de acetonitrila/água para originar o composto do título (2-(6-(((R)-2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)piridin-3-il)ciclopropil)(2,7-diazaespiro[3.5]nonan- 7-il)metanona (204) como um sólido branco fofo.
[0380] Rendimento: 15 mg. ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,54 (s, 1H), 8,35 (s, 2H), 7,89 - 7,86 (m, 1H), 7,16 (dd, J =2,0, 8,6 Hz, 1H), 6,36 (d, J =8,6 Hz, 1H), 5,98 (dd, J =6,9, 6,9 Hz, 1H), 5,49 - 5,49 (m, 1H), 3,76 (s, 4H), 3,51 - 3,43 (m, 2H), 3,39 - 3,30 (m, 3H), 3,22 (dd, J =6,6, 13,4 Hz, 2H), 2,38 - 2,31 (m, 4H), 2,11 - 2,01 (m, 1H), 1,89 - 1,79 (m, 5H), 1,59 - 1,52 (m, 1H), 1,27 - 1,14 (m, 1H), 1,03 (d, J =6,8 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 482 (M+H)+.
[0381] Seguindo os procedimentos descritos no Esquema 17, os seguintes exemplos foram sintetizados: Tabela 14 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 7,93 (d, J =2,0 Hz, 1H), 7,14 (dd, J =2,3, 8,6 Hz, 1H), 6,33 (d, J =8,6 Hz, 1H), 5,97 - 5,90 (m, 1H), 4,90 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 1H), 205 3,57 - 3,11 (m, 10H), 3,06 (d, J 496 =6,1 Hz, 2H), 2,36 (d, J =7,1 Hz, 7H), 2,09 - 1,99 (m, 1H), 1,89 - 1,82 (m, 2H), 1,82 - 1,76 (m, 3H), 1,59 - 1,48 (m, 1H), 1,19 - 1,12 (m, 1H), 1,02 (d, J =6,8 Hz, 3H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 7,91 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,16 (dd, J =2,3, 8,6 Hz, 1H), 6,35 (d, J =8,6 Hz, 1H), 5,94 - 5,91 (m, 1H), 5,14 (s, 1H), 4,46 206 (d, J =2,8 Hz, 4H), 3,53 - 3,44 (m, 483 6H), 3,39 - 3,30 (m, 2H), 3,25 - 3,19 (m, 1H), 2,35 (s, 4H), 2,09 - 2,01 (m, 1H), 1,90 - 1,85 (m, 5H), 1,20 - 1,14 (m, 1H), 1,03 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 7,91 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 6,38 (d, J =7,3 Hz, 1H), 5,91 - 5,91 (m, 1H), 5,44 - 5,18 (m, 1H), 4,72 (dd, J =20,0, 62,4 Hz, 1H), 4,49 - 4,43 (m, 1H), 4,13 - 4,13 (m, 1H), 4,03 - 3,97 (m, 1H), 207 3,87 - 3,87 (m, 2H), 3,53 - 3,45 498 (m, 1H), 3,38 - 3,31 (m, 2H), 3,22 (dd, J =6,4, 6,4 Hz, 2H), 3,10 - 3,00 (m, 2H), 2,64 (tt, J =22,1, 20,6 Hz, 2H), 2,42 - 2,38 (m, 1H), 2,36 (s, 4H), 2,09 - 2,01 (m, 1H), 1,87 - 1,82 (m, 1H), 1,28 - 1,22 (m, 1H), 1,03 (d, J =6,8 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 7,95 (d, J =2,4 Hz, 1H), 7,16 (dd, J =2,4, 8,6 Hz, 1H), 6,33 (d, J =8,5 Hz, 1H), 5,95 - 5,92 (m, 1H), 4,88 (dd, J =6,1, 6,1 208 Hz, 1H), 3,52 - 3,17 (m, 4H), 3,14 401 (s, 3H), 2,99 (s, 3H), 2,36 (s, 4H), 2,06 - 2,00 (m, 1H), 1,90 - 1,85 (m, 1H), 1,59 - 1,53 (m, 1H), 1,17 (ddd, J =4,5, 6,2, 8,3 Hz, 1H), 1,02 (d, J =6,8 Hz, 3H).
Esquema 18 N1-(5-Bromopirazin-2-il)-2-metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2- il)propano-1,3-diamina (113B)
[0382] Uma solução de hidrocloreto de 2-metil-N-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina em bruto (100E) (340 mg, 1,60 mmol, 1,0 eq) em dimetilformamida (8 mL) foi adicionada a uma suspensão de 2,5-dibromopirazina (457 mg, 1,92 mmol, 1,2 eq) e carbonato de césio (1,56 g, 4,80 mmol, 3,0 eq) em dimetilformamida (2 mL). A mistura reacional foi aquecida até 90 ºC durante 18 h. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo obtido foi dividido entre água (20 mL) e diclorometano (50 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (3 x25 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (25 mL), secas por passagem através de um separador de fases e depois concentradas até à secura sob vácuo. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash (eluindo com iso-hexanos para acetato de etila, 0-100%) para dar o composto do título N1-(5-bromopirazin-2-il)-2-metil- N3-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (113B) desejada como uma goma amarelo-pálida.
[0383] Rendimento: 230 mg (38%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,36 (s, 2H), 8,06 (d, J =1,3 Hz, 1H), 7,67 (d, J =1,4 Hz, 1H), 5,67 - 5,51 (m, 2H), 3,55 - 3,31 (m, 3H), 3,25 - 3,12 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,04 (s, 1H), 1,03 (d, J =6,9 Hz, 3H). N1-(5-(2-Metoxipiridin-3-il)pirazin-2-il)-2-metil-N3-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (209)
[0384] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no
Método Geral 7, (N.B. 1,4-dioxano usado em vez de dimetilformamida).
[0385] Uma solução de N1-(5-bromopirazin-2-il)-2-metil-N3-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (113B) (50 mg, 0,135 mmol, 1,0 eq) foi adicionada a uma solução de ácido 2-metoxi-3-fenilborônico (23 mg, 0,149 mmol, 1,1 eq), carbonato de césio (132 mg, 0,406 mmol, 3 eq) e tetraquis(trifenilfosfina)paládio (0) (15,6 mg, 0,0135 mmol, 0,1 eq) em água (1 mL) e 1,4-dioxano (2 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura reacional foi aquecida para 80 °C durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida, água (2 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (3 x15 mL) As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (10 mL) e concentradas sob vácuo. O resíduo em bruto obtido foi purificado por HPLC preparativa para dar a N1-(5-(2-metoxipiridin-3-il)pirazin-2-il)-2- metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (154) desejada como um sólido esbranquiçado.
[0386] Rendimento: 24 mg (44%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,77 (d, J =1,4 Hz, 1H), 8,37 (s, 2H), 8,18 - 8,13 (m, 2H), 7,99 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,01 (dd, J =4,9, 7,4 Hz, 1H), 5,69 (dd, J =6,5, 6,5 Hz, 1H), 5,55 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 1H), 4,04 (s, 3H), 3,59 - 3,48 (m, 2H), 3,42 - 3,25 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,19 - 2,06 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 398 (M+H)+. Esquema 19 (2-Metil-3-oxopropil)carbamato de terc-butila (114B)
[0387] Cuidado - reação exotérmica; Periodinano de Dess-Martin
(2,94 g, 6,94 mmol, 1,3 eq) foi adicionado porção a porção ao longo de 20 minutos a uma solução de (3-hidróxi-2-metilpropil)carbamato de terc- butila (1,0 g, 5,34 mmol, 1,0 eq) em diclorometano (50 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi diluída com diclorometano (25 mL) e lavada com solução aquosa de ditionito de sódio a 1 M (2 x 10 mL) e solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2 x 10 mL). A fase orgânica foi seca passando através de um separador de fases e depois concentrada sob vácuo para dar (2-metil- 3-oxopropil)carbamato de terc-butila (114B) em bruto que foi usado imediatamente no próximo passo sem purificação adicional. (3-((5-Bromopiridin-2-il)amino)-2-metilpropil)carbamato de terc- butila (114C)
[0388] A metodologia aplicada foi análoga ao método descrito no Esquema 13 (para a geração de 109D).
[0389] O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (eluindo iso-hexanos para acetato de etila, 0-100%) para dar o (3-((5- bromopiridin-2-il)amino)-2-metilpropil)carbamato de terc-butila (114C) desejado como uma goma amarelo-pálida.
[0390] Rendimento: 875 mg (47%) (MS (ESI+) m/z 345 (M+H)+). (3-((2'-Metóxi-[3,3'-bipiridin]-6-il)amino)-2-metilpropil)carbamato de terc-butila (114D)
[0391] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 7.
[0392] (3-((2'-Metóxi-[3,3'-bipiridin]-6-il)amino)-2- metilpropil)carbamato de terc-butila (114D) em bruto foi usado imediatamente no próximo passo sem purificação adicional.
[0393] Rendimento: 110 mg, MS (ESI+) m/z 373 (M+H)+. N1-(2'-Metóxi-[3,3'-bipiridin]-6-il)-2-metilpropano-1,3-diamina (114E)
[0394] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no
Método Geral 2.
[0395] N1-(2'-Metóxi-[3,3'-bipiridin]-6-il)-2-metilpropano-1,3-diamina (114E) em bruto foi levada imediatamente para o próximo passo sem purificação adicional.
[0396] Rendimento em bruto: 75 mg MS (ESI +) m/z 273 (M+H)+. N1-(2'-Metóxi-[3,3'-bipiridin]-6-il)-2-metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2- il)propano-1,3-diamina (210)
[0397] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 1.
[0398] O resíduo em bruto obtido foi purificado por HPLC preparativa para dar o produto desejado, N1-(2'-metóxi-[3,3'-bipiridin]-6- il)-2-metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina como um sólido esbranquiçado (155).
[0399] Rendimento: 8 mg (7%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,36 (s, 2H), 8,30 (d, J =2,1 Hz, 1H), 8,11 (dd, J =1,9, 5,0 Hz, 1H), 7,67 (dd, J =2,4, 8,7 Hz, 1H), 7,57 (dd, J =1,9, 7,3 Hz, 1H), 6,95 (dd, J =5,0, 7,3 Hz, 1H), 6,45 (d, J =8,4 Hz, 1H), 5,90 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 1H), 5,11 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,56 - 3,23 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,13 - 2,04 (m, 1H), 1,05 (d, J =6,9 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 397 (M+H)+. Esquema 20 (3-([3,3'-Bipiridin]-6-ilamino)-2-metilpropil)carbamato de terc-butila (115A)
[0400] A metodologia aplicada foi análoga ao esquema 19 (exemplo 115B) para gerar o aldeído (114B) e, depois, usando metodologia análoga ao método geral 7.
[0401] A N1-([3,3'-bipiridin]-6-il)-2-metilpropano-1,3-diamina (115A)
em bruto foi imediatamente levada para o próximo passo.
[0402] Rendimento: 253 mg (63%) ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,82 (d, J =1,8 Hz, 1H), 8,48 (dd, J =1,6, 4,8 Hz, 1H), 8,36 (d, J =2,1 Hz, 1H), 8,00 - 7,96 (m, 1H), 7,76 (dd, J =2,6, 8,7 Hz, 1H), 7,44 - 7,40 (m, 1H), 6,90 - 6,76 (m, 2H), 6,62 - 6,59 (m, 1H), 4,10 (q, J =5,3 Hz, 1H), 3,19 - 3,18 (m, 4H), 3,03 - 2,94 (m, 1H), 2,88 - 2,80 (m, 1H), 1,93 - 1,82 (m, 1H), 1,40 - 1,38 (m, 9H). N1-([3,3'-Bipiridin]-6-il)-2-metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2- il)propano-1,3-diamina (211)
[0403] A metodologia aplicada foi análoga ao método descrito no Esquema 13 (para a geração de 109D).
[0404] O resíduo em bruto obtido foi purificado por cromatografia de fase reversa (eluindo solução aquosa de bicarbonato de amônio a 10 mM para acetonitrila, 5-95%) para dar o produto desejado, N1-([3,3'- bipiridin]-6-il)-2-metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (211) como um sólido esbranquiçado.
[0405] Rendimento: 32 mg (14%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,77 (1H, d, J =2,1 Hz), 8,53 (1H, dd, J =1,6, 4,8 Hz), 8,37 - 8,35 (3H, m), 7,81 - 7,77 (1H, m), 7,63 (1H, dd, J =2,5, 8,7 Hz), 7,33 (1H, dd, J =4,6, 7,8 Hz), 6,50 (1H, d, J =8,7 Hz), 5,93 (1H, dd, J =6,1, 6,1 Hz), 5,25 (1H, dd, J =6,1, 6,1 Hz), 3,56 - 3,25 (4H, m), 2,36 (3H, s), 2,18 - 2,00 (1H, m), 1,06 (3H, d, J =6,9 Hz); MS (ESI+) m/z 367 (M+H)+. Esquema 21
2-Bromo-5-((trimetilsilil)etinil)piridina (116B)
[0406] Trietilamina (49 mL, 352,25 mmol, 25 eq) foi adicionada a 2- bromo-5-iodopiridina (4,0 g, 14,09 mmol, 1,0 eq) seguida por etiniltrimetilsilano (2,9 mL, 21,13 mmol, 1,5 eq), iodeto de cobre (I) (270 mg, 1,41 mmol, 0,1 eq), dicloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II) (99 mg, 0,14 mmol, 0,01 eq) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 17 h. A mistura foi concentrada sob vácuo para dar uma goma em bruto que foi purificada por cromatografia flash (eluindo com iso- hexano para acetato de etila, 0-40%) para dar o intermediário 2-bromo- 5-((trimetilsilil)etinil)piridina (116B) como um sólido branco.
[0407] Rendimento: 2,5 g (69%). MS (ESI+) m/z 254/256 (M+H)+. 2-Bromo-5-(1-(4-metoxibenzil)-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridina (116C)
[0408] A uma solução de 2-bromo-5-((trimetilsilil)etinil)piridina (116B) (250 mg, 0,983 mmol, 1,0 eq) em etanol (20 mL) foi adicionado 1-(azidometil)-4-metoxibenzeno (177 mg, 1,08 mmol, 1,1 eq) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Uma solução de fluoreto de tetrabutilamônio a 1 M em tetra-hidrofurano (0,54 mL, 1,08 mmol, 1,1 eq) foi adicionada e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura reacional foi concentrada sob vácuo e depois purificada por cromatografia flash (eluindo com iso-hexano para acetato de etila, 0-100%) para dar 2-bromo-5-(1-(4-metoxibenzil)-1H-
1,2,3-triazol-5-il)piridina (116C) como um sólido esbranquiçado.
[0409] Rendimento: 0,21 g (61%). MS (ESI+) m/z 347 (M+H)+. (3-((5-(1-(4-Metoxibenzil)-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-2-il)amino)-2- metilpropil)carbamato de terc-butila (116D)
[0410] A uma solução desgaseificada de 2-bromo-5-(1-(4- metoxibenzil)-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridina (116C) (135 mg, 0,391, 1,0 eq) em sulfóxido de dimetila (5 mL) foram adicionados (3-amino-2- metilpropil)carbamato de terc-butila (96 mg, 0,508 mmol, 1,3 eq), L- prolina (18 mg, 0,156 mmol, 0,4 eq), fosfato de potássio (1,6,5 mg, 0,078 mmol, 0,2 eq) e iodeto de cobre (I) (15 mg, 0,782 mmol, 0,2 eq). A mistura foi agitada a 90 C durante 28 h, diluída com água (20 mL) e extraída com diclorometano (3 x 20 mL). As fases orgânicas foram combinadas e concentradas sob vácuo e o resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash (eluindo com iso-hexano para acetato de etila, 0-100%) para dar 2-bromo-5-(1-(4-metoxibenzil)-1H-1,2,3- triazol-5-il)piridina (116D) como um sólido marrom-pálido.
[0411] Rendimento: 0,080 g (45%). MS (ESI +) m/z 453 (M+H)+. (3-((5-(1-(4-Metoxibenzil)-1H-1,2,3-triazol-5-il)piridin-2-il)amino)-2- metilpropil)carbamato de terc-butila (116E)
[0412] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 2.
[0413] Rendimento: 25 mg (29%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,42 (d, J =2,0 Hz, 1H), 8,35 (s, 2H), 7,90 (dd, J =2,4, 8,7 Hz, 1H), 7,52 (s, 1H), 6,94 - 6,90 (m, 2H), 6,44 (d, J =9,0 Hz, 1H), 5,94 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 1H), 5,49 (s, 2H), 5,09 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 1H), 3,81 (s, 4H), 3,53 - 3,22 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,10 - 2,01 (m, 1H), 1,03 (d, J =6,9 Hz, 3H), (NH não observado). N1-(5-(1H-1,2,3-Triazol-5-il)piridin-2-il)-2-metil-N3-(4- (metiltio)fenil)propano-1,3-diamina (212)
[0414] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no
Método Geral 3.
[0415] Rendimento: 18 mg (96%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,53 (d, J =2,1 Hz, 1H), 8,38 (s, 2H), 7,84 (s, 1H), 7,82 (dd, J =2,3, 8,7 Hz, 1H), 6,45 (d, J =8,4 Hz, 1H), 6,17 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 1H), 5,31 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 3,57 - 3,26 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,19 - 2,06 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,8 Hz, 3H), (NH não observado); MS (ESI+) m/z 457 (M+H)+. Esquema 22 (2-Metil-3-((5-(piridin-2-il)pirazin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (117B)
[0416] A uma solução de 5-(piridin-2-il)pirazin-2-amina (200 mg, 1,16 mmol, 1,0 eq) em diclorometano (10 mL) foram adicionados (2- metil-3-oxopropil)carbamato de terc-butila (117B) (221 mg, 1,17 mmol, 1,0 eq), peneiras moleculares de 3 Å (750 mg), ácido acético (0,266 mL, 4,65 mmol) e triacetoxiboro-hidreto (616 mg, 2,9 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura reacional foi diluída com diclorometano (25 mL) e filtrada. A fase orgânica foi lavada com água (25 mL) e salmoura (25 mL), depois passada através de um cartucho separador de fases. Os solventes foram removidos sob vácuo para originar (2-metil-3-((5-(piridin-2-il)pirazin-2- il)amino)propil)carbamato de terc-butila (117B) em bruto que foi usado no próximo passo sem purificação adicional.
[0417] Rendimento: 310 mg (78%). 2-Metil-N1-(5-(piridin-2-il)pirazin-2-il)propano-1,3-diamina (117C)
[0418] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 2.
[0419] Rendimento: 200 mg (100%). 2-Metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)-N3-(5-(piridin-2-il)pirazin-2- il)propano-1,3-diamina (213)
[0420] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 1.
[0421] Rendimento: 20 mg (10%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,04 (d, J =1,4 Hz, 1H), 8,62 - 8,61 (m, 1H), 8,37 (s, 2H), 8,10 (d, J =8,0 Hz, 1H), 7,94 (d, J =1,4 Hz, 1H), 7,77 - 7,72 (m, 1H), 7,20 (dd, J =4,8, 6,5 Hz, 1H), 5,75 - 5,63 (m, 2H), 3,58 - 3,50 (m, 2H), 3,42 - 3,28 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,19 - 2,06 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 368 (M+H)+.
[0422] Seguindo os procedimentos descritos no Esquema 22, os seguintes exemplos foram sintetizados: Tabela 15 LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,70 (d, J =1,4 Hz, 1H), 8,37 (s, 2H), 8,27 (d, J =2,3 Hz, 1H), 7,69 (dd, J =1,4, 7,0 Hz, 2H), 6,45 - 6,43 (m, 1H), 214 357 5,65 (dd, J =6,3, 6,3 Hz, 1H), 5,53 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 1H), 3,57 - 3,24 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,14 - 2,04 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,20 (d, J =2,0 Hz, 1H), 8,71 (d, J =4,9 Hz, 2H), 8,40 215 368 (dd, J =2,3, 8,8 Hz, 1H), 8,37 (s, 2H), 7,08 (dd, J =4,8, 4,8 Hz, 1H), 6,47 (d, J =8,5 Hz,
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1H), 5,88 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 5,43 (dd, J =6,1, 6,1 Hz, 1H), 3,56 - 3,27 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,14 - 2,00 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 - 8,36 (m, 3H), 8,16 (s, 1H), 7,78 (dd, J =2,4, 8,7 Hz, 1H), 6,51 (d, J =8,4 Hz, 216 1H), 5,83 - 5,78 (m, 1H), 371 5,57 (dd, J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,57 - 3,24 (m, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,14 - 1,99 (m, 1H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 7,99 (d, J =2,1 Hz, 1H), 7,36 (dd, J =2,4, 8,5 Hz, 1H), 6,37 (d, J =8,5 Hz, 1H), 5,94 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 4,96 (dd, 217 J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 4,14 (q, 376 J =7,2 Hz, 2H), 3,52 - 3,45 (m, 3H), 3,42 - 3,31 (m, 2H), 3,26 - 3,20 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,09 - 2,00 (m, 1H), 1,25 (dd, J =7,2, 7,2 Hz, 3H), 1,03 (d, J =6,9 Hz, 3H).
Esquema 23
5-(1-Metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazin-2-amina (118B)
[0423] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 7, (N.B. 1,4-dioxano/água usado como solvente em vez de dimetilformamida)
[0424] Rendimento: 158 mg (73%) m/z 176 (M+H)+. (2-Metil-3-((5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazin-2- il)amino)propil)carbamato de terc-butila (118C)
[0425] A metodologia aplicada foi análoga ao método descrito no Esquema 13 (para a geração de 109D).
[0426] (2-Metil-3-((5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazin-2- il)amino)propil)carbamato de terc-butila (118C) em bruto foi levado imediatamente para o próximo passo.
[0427] Rendimento: 101 mg (34%) MS (ESI+) m/z 347 (M+H)+. 2-Metil-N1-(5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazin-2-il)propano-1,3- diamina (118D)
[0428] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 2.
[0429] 2-Metil-N1-(5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazin-2- il)propano-1,3-diamina (106D) em bruto foi levada imediatamente para o próximo passo.
[0430] Rendimento: 71 mg (assumido) MS (ESI +) m/z 367 (M+H)+. 2-Metil-N1-(5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)pirazin-2-il)-N3-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (218)
[0431] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 1.
[0432] Rendimento: 25 mg (23%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 3H), 8,30 (s, 1H), 8,05 (dd, J =2,3, 8,9 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H), 6,56 (d, J =9,2 Hz, 1H), 6,11 - 6,06 (m, 1H), 4,14 (s, 3H), 2,63 (s, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,19 - 2,10 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,8 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 371(M+H)+. Esquema 24 N1-(5-Bromopirazin-2-il)-2-metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2- il)propano-1,3-diamina (119a)
[0433] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0434] Rendimento: 230 mg (38%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,36 (s, 2H), 8,06 (d, J =1,3 Hz, 1H), 7,67 (d, J =1,4 Hz, 1H), 5,67 - 5,51 (m, 2H), 5,30 (s, 2H), 3,55 - 3,31 (m, 3H), 3,25 - 3,12 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,04 (s, 1H), 1,03 (d, J =6,9 Hz, 3H). 2-Metil-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)-N3-(5-(5-(trifluorometil)-1H- pirazol-4-il)pirazin-2-il)propano-1,3-diamina (219)
[0435] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 7, (N.B. 1,4-dioxano/água usado e nenhumas alíquotas adicionais de reagentes foram adicionadas)
[0436] Rendimento: 18 mg (31%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 13,70 (s, 1H), 8,35 - 8,34 (m, 2H), 8,26 (d, J =1,0 Hz, 1H), 8,13 - 8,12 (m, 1H), 8,00 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,55 - 7,44 (m, 1H), 7,23 - 7,18 (m, 1H), 3,35 - 3,18 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,11 - 2,02 (m, 1H), 0,95 (d, J =6,8 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 426 (M+H)+. Esquema 25
(2-Metil-3-(pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)propil)carbamato de terc-butila (120A).
[0437] Um tubo de micro-ondas contendo 5-cloropirazolo[1,5- c]pirimidina (500 mg, 3,26 mmol, 1 eq) e (3-amino-2- metilpropil)carbamato de terc-butila (100E) (6,13 g, 32,56 mmol, 10 eq) foi aquecido até 140 C durante 30 minutos sob irradiação de micro- ondas. A mistura reacional em bruto foi purificada por cromatografia flash (eluindo com iso-hexano para acetato de etila, 0-100%) para dar (2-metil-3-(pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)propil)carbamato de terc- butila (120A)
[0438] Rendimento: 700 mg (70%). MS (ESI+) m/z 306 (M+H)+. 2-Metil-N1-(pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-il)propano-1,3-diamina (120B)
[0439] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 2.
[0440] MS (ESI+) m/z 229 (M+H)+. (2-Metil-3-(pirazolo[1,5-a]pirimidin-5-ilamino)propil)carbamato de terc-butila (220)
[0441] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0442] Rendimento: 20 mg (14%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,34 (s, 2H), 7,27 (d, J =7,6 Hz, 1H), 6,79 (d, J =1,8 Hz, 1H), 5,29 (d, J =7,6 Hz, 1H), 5,08 (d, J =1,5 Hz, 1H), 2,44 - 2,37 (m, 4H), 1,36 (s, 3H), 1,20 - 1,11 (m, 1H), (2 x NH não observado); MS (ESI+) m/z 330 (M+H)+. Esquema 26
6-Bromonicotinimidato de metila (121B)
[0443] Metóxido de sódio (0,71 g, 13,22 mmol, 1,1 eq) foi adicionado a uma solução resfriada em gelo de 6-bromonicotinonitrila (121A) (2,2 g, 12,02 mmol, 1,0 eq) em dioxano/água (20 mL/20 mL). A mistura foi agitada sob resfriamento em gelo durante 30 minutos e depois deixada a aquecer até à temperatura ambiente. Após 1 hora, a mistura foi diluída com acetato de etila (200 mL) e água (200 mL). A fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi adicionalmente extraída com acetato de etila (50 mL). Os orgânicos foram combinados e os solventes foram removidos sob vácuo para originar 6-bromonicotinimidato de metila (121B) em bruto que foi usado no próxima passo sem purificação adicional.
[0444] Rendimento: 2,5 g (96%). 6-Bromo-N'-metilnicotinimido-hidrazida (121C)
[0445] Hidrazina de metila (0,73 mL, 13,96 mmol, 1,2 eq) foi adicionada a uma solução de 6-bromonicotinimidato (121B) (2,5 g, 11,63 mmol, 1,0 eq) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob vácuo para originar 6-bromo-N'-metilnicotinimido-hidrazida (121C) em bruto que foi usado no próximo passo sem purificação adicional.
[0446] Rendimento: 2 g (75%). 2-Bromo-5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piridina (121D)
[0447] Ácido fórmico (10 mL, 265 mmol, 30,4 eq) foi adicionado a 6- bromo-N'-metilnicotinimido-hidrazida (121C) (2,0 g, 8,73 mmol, 1,0 eq)
e a mistura foi aquecida até ao refluxo durante 1 hora. A mistura reacional foi diluída com água (100 mL) e depois extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (50 mL), secas sobre sulfato de sódio e filtradas. Os solventes foram removidos sob vácuo para originar um resíduo marrom em bruto que foi purificado por cromatografia flash (eluindo com metanol a 0-10% em diclorometano/diclorometano) para dar 2-bromo-5-(1-metil-1H-1,2,4- triazol-3-il)piridina (121D) como um sólido esbranquiçado.
[0448] Rendimento: 500 mg (23%). MS (ESI+) m/z 240 (M+H)+. (2-Metil-3-((5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piridin-2- il)amino)propil)carbamato de terc-butila (121E)
[0449] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 7, (N.B. 1,4-dioxano/água usado e nenhumas alíquotas adicionais de reagentes foram adicionadas)
[0450] Rendimento: 125 mg 2-Metil-N1-(5-(1-metil-1H-1,2,4-triazol-3-il)piridin-2-il)-N3-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)propano-1,3-diamina (221)
[0451] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 2 para a desproteção e depois Método Geral 1.
[0452] Rendimento: 25 mg (18%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,42 (d, J =2,0 Hz, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,04 (s, 1H), 7,76 (dd, J =2,4, 8,8 Hz, 1H), 7,48 (dd, J =6,0, 6,0 Hz, 1H), 6,82 (dd, J =5,8, 5,8 Hz, 1H), 6,57 (d, J =8,4 Hz, 1H), 4,16 (s, 3H), 3,32 - 3,17 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,09 - 1,99 (m, 1H), 0,93 (d, J =6,7 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 371 (M+H)+. Esquema 27
(3-((5-Bromopiridin-2-il)amino)-2-metilpropil)carbamato de terc- butila (122B)
[0453] N-(2-Metil-3-oxopropil)carbamato de terc-butila (100E) (1,0 g, 5,34 mmol, 1,0 eq) foi adicionado a uma solução de 5-bromopiridin- 2-amina (122A) (920 mg, 5,34 mmol, 1,0 eq), ácido acético (1,2 mL, 21,36 mmol, 4,0 eq) e peneiras moleculares (tipo 4 Å, 1,0 g) em diclorometano anidro (50 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos e depois triacetoxiboro-hidreto de sódio (2,83 g, 13,35 mmol, 2,5 eq) foi adicionado em uma porção. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 h. A reação foi extinta pela adição cuidadosa de uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (30 mL). A mistura foi agitada vigorosamente durante 30 minutos e a camada de diclorometano foi depois separada e lavada com uma solução aquosa de tiossulfato de sódio (1 M, 15 mL). A fase orgânica foi isolada e concentrada sob pressão reduzida para dar (3-((5-bromopiridin-2-il)amino)-2- metilpropil)carbamato de terc-butila (122B) como uma goma marrom- pálida que foi usada na próxima reação sem purificação adicional.
[0454] Rendimento: 875 mg (47%). (3-((2'-Metóxi-[3,3'-bipiridin]-6-il)amino)-2-metilpropil)carbamato de terc-butila (122C)
[0455] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 7.
[0456] Rendimento: 138 mg. N1-(2'-Metóxi-[3,3'-bipiridin]-6-il)-2-metil-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2- il)propano-1,3-diamina (222)
[0457] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita para o Método Geral 2 para a desproteção e depois Método Geral 1.
[0458] Rendimento: 57 mg. ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,36 (s, 2H), 8,23 (d, J =2,0 Hz, 1H), 7,68 (dd, J =2,3, 8,7 Hz, 1H), 7,32 - 7,27
(m, 2H), 7,03 - 6,95 (m, 2H), 6,48 (d, J =8,7 Hz, 1H), 5,94 - 5,90 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,56 - 3,47 (m, 1H), 3,44 - 3,35 (m, 2H), 3,28 (dd, J =6,6, 13,4 Hz, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,18 - 2,07 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 396 (M+H)+. Esquema 28 6'-Cloro-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (123B)
[0459] 2-Amino-5-iodopiridina (123A) (1,12 g, 5,00 mmol, 1,0 eq) foi combinada com 2-hidroxipiridina (582 mg, 6,00 mmol, 1,2 eq), carbonato de potássio (760 mg, 5,50 mmol, 1,1 eq), iodeto de cobre (I) (143 mg, 0,75 mmol, 0,15 eq) e 8-hidroxiquinolina (110 mg, 0,75 mmol, 0,15 eq) em dimetilsulfonamida anidra (5 mL). A mistura foi desgaseificada sob uma corrente de nitrogênio e depois aquecida a 130 ºC durante 21 h. A mistura reacional foi deixada a resfriar até à temperatura ambiente, depois vertida em uma mistura de solução aquosa de hidróxido de amônio a 10% (100 mL) e acetato de etila (50 mL). Carvão ativado (1 g) foi adicionado e a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite, lavando com acetato de etila (2 x 50 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura saturada (50 mL), secos sobre sulfato de magnésio anidro, filtrados e depois concentrados sob pressão reduzida. O sólido amarelo-pálido em bruto foi purificado por cromatografia flash (eluindo diclorometano para metanol, 0-10%) para dar o produto desejado 6'-cloro-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona como um sólido esbranquiçado (123B).
[0460] Rendimento: 245 mg, (26%). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ
7,88 (1H, d, J =2,5 Hz), 7,60 (1H, ddd, J =0,7, 2,1, 6,8 Hz), 7,49 (1H, ddd, J =2,2, 6,7, 9,1 Hz), 7,41 (1H, dd, J =2,7, 8,7 Hz), 6,52 (1H, dd, J =0,4, 8,8 Hz), 6,45 (1H, ddd, J =0,7, 1,3, 9,2 Hz), 6,28 (1H, ddd, J =6,7, 6,7, 1,3 Hz), 6,23 (2H, s); MS (ESI+) m/z 188 (M+H)+ . (2-Metil-3-((2-oxo-2H-[1,3'-bipiridin]-6'-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (123C)
[0461] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Esquema 19.
[0462] 6'-Cloro-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (123B) foi usada em excesso (245 mg, 1,31 mmol, 1,1 eq). Peneiras moleculares de 4Å foram usadas na reação. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (eluindo diclorometano para metanol, 0-7%) para dar o produto desejado (2-metil-3-((2-oxo-2H-[1,3'-bipiridin]-6'- il)amino)propil)carbamato de terc-butila (123C) como um sólido marrom- pálido.
[0463] Rendimento: 249 mg, (58%). MS (ESI +) m/z 359 (M+H)+. 6-((2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)-2H- [1,3'-bipiridin]-2-ona (223)
[0464] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita Método Geral 2 usando uma razão (4:1) de HCl a 4 M em 1,4-dioxano-água, seguido pelo Método Geral 3 usando carbonato de césio (3,0 eq) em combinação com trietilamina (2,0 eq).
[0465] Rendimento: 152 mg (57% ao longo de 2 passos).
[0466] ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,35 (2H, s), 7,91 (1H, d, J =2,6 Hz), 7,61 (1H, ddd, J =0,6, 2,1, 6,8 Hz), 7,52 - 7,45 (2H, m), 7,40 (1H, dd, J =2,7, 8,9 Hz), 6,90 (1H, dd, J =5,8, 5,8 Hz), 6,57 (1H, dd, J =0,5, 8,9 Hz), 6,45 (1H, ddd, J =0,7, 1,2, 9,2 Hz), 6,28 (1H, ddd, J =6,7, 6,7, 1,4 Hz), 3,33 - 3,14 (4H, m), 2,35 (3H, s), 2,10 - 2,00 (1H, m), 0,94 (3H, d, J =6,8 Hz); MS (ESI+) m/z 383 (M+H)+ .
[0467] Usando os procedimentos descritos no Esquema 28, os seguintes exemplos foram sintetizados: Tabela 16 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,34 (2H, s), 8,18 (0,5H, s), 8,10 (1H, dd, J =0,4, 2,6 Hz), 8,03 (1H, dd, J =1,6, 3,9 Hz), 7,52 (1H, dd, J =2,7, 9,0 Hz), 7,50 - 7,45 (2H, m), 7,04 (1H, 224 dd, J =1,6, 9,4 Hz), 6,91 (1H, 384 dd, J =5,8, 5,8 Hz), 6,57 (1H, dd, J =0,5, 9,0 Hz), 3,35 - 3,15 (4H, m), 2,35 (3H, s), 2,10 - 2,00 (1H, m), 0,94 (3H, d, J =6,8 Hz). Sal de formiato parcial. ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,34 (2H, s), 8,16 (1H, s), 7,64 (1H, d, J =2,8 Hz), 7,47 (1H, dd, J =6,0, 6,0 Hz), 7,19 (1H, dd, J =2,9, 9,0 Hz), 6,46 (1H, d, J =8,9 Hz), 6,11 (1H, 225 375 dd, J =5,1, 5,1 Hz), 3,75 - 3,68 (4H, m), 3,30 - 3,05 (4H, m), 2,94 - 2,87 (4H, m), 2,35 (3H, s), 2,05 - 1,92 (1H, m), 0,91 (3H, d, J =6,8 Hz). Sal de formiato. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,40 - 8,31 (4H, m), 8,09 (1H, s), 7,65 (1H, dd, J =2,5, 8,8 Hz), 6,49 (1H, d, J =8,8 Hz), 226 5,77 (1H, dd, J =6,2, 6,2 Hz), 357 5,44 (1H, dd, J =5,7, 5,7 Hz), 3,57 - 3,23 (4H, m), 2,36 (3H, s), 2,13 - 2,02 (1H, m), 1,05 (3H, d, J =6,8 Hz).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,04 (1H, s), 8,41 - 8,33 (3H, m), 8,10 (1H, dd, J =2,0, 9,3 Hz), 7,59 (4H, s l), 7,03 (1H, 227 d, J =9,3 Hz), 3,44 - 3,23 (4H, 371 m), 2,41 (3H, s), 2,39 (3H, s), 2,20 - 2,09 (1H, m), 1,01 (3H, d, J =6,6 Hz). Sal de bis(trifluoroacetato). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,39 (2H, s), 8,23 (1H, d, J =2,3 Hz), 8,10 (1H, s), 7,78 (1H, dd, J =2,0, 9,1 Hz), 7,57 (1H, s l), 6,91 (1H, d, J =9,1 228 371 Hz), 5,11 (3H, s l), 3,43 - 3,24 (4H, m), 2,46 (3H, s), 2,40 (3H, s), 2,19 - 2,09 (1H, m), 1,01 (3H, d, J =6,8 Hz). Sal de bis(trifluoroacetato). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,34 (2H, s), 8,16 (1H, s), 7,98 (1H, d, J =2,4 Hz), 7,47 (1H, dd, J =6,0, 6,0 Hz), 7,43 (1H, dd, J =2,7, 8,9 Hz), 7,16 (1H, d, J =1,4 Hz), 6,92 (1H, dd, J =5,8, 5,8 Hz), 6,87 (1H, 229 370 d, J =1,1 Hz), 6,60 (1H, dd, J =0,6, 8,9 Hz), 3,35 - 3,26 (3H, m), 3,26 - 3,14 (2H, m), 2,35 (2H, s), 2,21 (3H, s), 2,10 - 2,00 (1H, m), 0,94 (3H, d, J =6,8 Hz). Sal de formiato. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (2H, s), 8,05 (1H, d, J 230 373 =2,4 Hz), 7,92 (1H, dd, J =2,8, 9,0 Hz), 6,43 (1H, dd, J
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ =0,5, 9,1 Hz), 5,96 (1H, dd, J =5,8, 5,8 Hz), 3,80 (2H, ddt, J =3,5, 3,5, 3,5 Hz), 3,53 - 3,44 (1H, m), 3,39 - 3,30 (2H, m), 3,22 (1H, dd, J =6,8, 13,6 Hz), 2,63 - 2,53 (3H, m), 2,36 (3H, s), 2,22 - 2,01 (3H, m), 1,03 (3H, d, J =6,9 Hz). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,39 - 8,34 (3H, m), 7,77 - 7,74 (1H, m), 7,73 (1H, d, J =2,7 Hz), 7,70 (1H, d, J =1,5 Hz), 6,47 (1H, dd, J =0,5, 9,0 Hz), 6,44 (1H, dd, J =2,1, 2,1 231 356 Hz), 5,84 (1H, dd, J =6,1, 6,1 Hz), 5,19 (1H, dd, J =6,1, 6,1 Hz), 3,56 - 3,33 (3H, m), 3,31 - 3,23 (1H, m), 2,36 (3H, s), 2,12 - 2,03 (1H, m), 1,05 (3H, d, J =6,9 Hz). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (2H, s), 8,16 (1H, d, J =2,5 Hz), 7,87 - 7,76 (1H, m), 7,41 (1H, dd, J =2,6, 8,9 Hz), 7,22 - 7,11 (1H, m), 6,48 (1H, 232 d, J =8,8 Hz), 5,81 (1H, s l), 356 5,52 (1H, s l), 3,57 - 3,48 (1H, m), 3,47 - 3,34 (2H, m), 3,27 (1H, dd, J =7,2, 13,7 Hz), 2,36 (3H, s), 2,15 - 2,04 (2H, m), 1,06 (3H, d, J =6,9 Hz).
Esquema 29
(2-Metil-3-((5-(2-oxopirrolidin-1-il)pirazin-2- il)amino)propil)carbamato de terc-butila (124B)
[0468] Uma solução de N-(3-amino-2-metilpropil)carbamato de terc- butila (100E) (436 mg, 2,20 mmol, 1,1 eq) em dimetilsulfonamida anidra (10 mL) foi adicionada a 2-bromo-5-(pirrolidinon-1-il)pirazina (124A) (510 mg, 2,00 mmol, 1,0 eq), fosfato de potássio tribásico (866 mg, 4,00 mmol, 2 eq), L-prolina (94 mg, 0,80 mmol, 0,4 eq) e iodeto de cobre (I) (76 mg, 0,40 mmol, 0,2 eq). A mistura foi desgaseificada e mantida sob uma corrente de nitrogênio, depois aquecida a 90 ºC com agitação durante 20 h. A mistura reacional foi deixada a resfriar até à temperatura ambiente, depois vertida em uma mistura de água (50 mL) e acetato de etila (50 mL). As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2 x 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura saturada (50 mL), secos sobre sulfato de magnésio anidro, filtrados e depois concentrados sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash (eluindo diclorometano para metanol, 0-6%) para dar o produto desejado (2- metil-3-((5-(2-oxopirrolidin-1-il)pirazin-2-il)amino)propil)carbamato de terc-butila (124B) como um sólido amarelo.
[0469] Rendimento: 375 mg, (54%). MS (ESI +) m/z 350 (M+H)+. 1-(5-((2-Metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)pirazin-2-il)pirrolidin-2-ona (233)
[0470] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita Método Geral 2 usando uma razão [4:1] de HCl a 4 M em 1,4-dioxano-água,
seguido pelo Método Geral 3.
[0471] Rendimento: 71 mg (18% ao longo de 2 passos).
[0472] ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,02 (1H, d, J =1,5 Hz), 8,35 (2H, s), 7,64 (1H, d, J =1,5 Hz), 5,63 (1H, dd, J =6,2, 6,2 Hz), 5,24 (1H, dd, J =5,7, 5,7 Hz), 3,97 (2H, t, J =7,1 Hz), 3,55 - 3,46 (1H, m), 3,45 - 3,32 (2H, m), 3,28 - 3,19 (1H, m), 2,62 (2H, t, J =8,1 Hz), 2,36 (3H, s), 2,20 - 2,02 (3H, m), 1,03 (3H, d, J =6,8 Hz); MS (ESI+) m/z 374 (M+H)+ . Esquema 30 2-(2,2-Difluoroetil)-2,7-diazaespiro[3.5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (125B).
[0473] 1,1-Difluoro-2-iodo-etano (128 mg, 0,67 mmol, 1,2 eq) foi adicionado a uma suspensão de 2,7-diazaespiro[3.5]nonano-7- carboxilato de terc-butila (125A) (126 mg, 0,56 mmol, 1,0 eq), carbonato de potássio (231 mg, 1,67 mmol, 3,0 eq) em dimetilformamida (1,0 mL) e a mistura foi agitada a 60 oC durante 2 h. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente, diluída com água e extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca por passagem através de um separador de fases e depois concentrada sob pressão reduzida para originar o 2-(2,2-difluoroetil)-2,7- diazaespiro[3.5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (125B) desejado como um óleo amarelo-pálido.
[0474] Rendimento: 73 mg (45%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,87 - 5,57 (m, 1H), 3,41 - 3,30 (m, 4H), 3,14 (s, 4H), 2,89 - 2,77 (m, 2H), 1,76 - 1,67 (m, 4H), 1,46 (s, 9H). 2-(2,2-Difluoroetil)-2,7-diazaespiro[3.5]nonano (125C)
[0475] Ácido trifluoroacético (1,3 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de 2-(2,2-difluoroetil)-2,7-diazaespiro[3.5]nonano-7- carboxilato de terc-butila (125B) (73 mg, 0,25 mmol, 1,0 eq) em diclorometano (1,3 mL). A mistura foi agitada durante 30 minutos e depois concentrada até à secura sob pressão reduzida para originar o produto desejado 2-(2,2-difluoroetil)-2,7-diazaespiro[3.5]nonano (125C) como um óleo amarelo-pálido que foi usado na próxima reação sem purificação adicional.
[0476] Os intermediários na Tabela 17 foram sintetizados usando condições análogas àquelas descritas para o intermediário 125C: Tabela 17 LC-MS 1 Composto No. H RMN Estrutura (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 4,67 - 4,24 (m, 4H), 3,74 (s, 2H), 3,35 - 3,08 Intermediário N/A (m, 6H), 1,76 - 1,66 (m, 4H). NH não observado. ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,87 - 5,57 (m, 1H), 3,41 - 3,30 (m, 4H), 3,14 Intermediário N/A (s, 4H), 2,89 - 2,77 (m, 2H), 1,76 - 1,67 (m, 4H), 1,46 (s, 9H).
Esquema 31 2-(2,2,2-Trifluoroetil)-2,7-diazaespiro[3.5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (126B).
[0477] Trifluorometanossulfonato de 2,2,2-trifluoroetila (153 mL, 1,06 mmol, 1,2 eq) foi adicionado a uma suspensão de 2,7- diazaespiro[3.5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (126A) (200 mg, 0,88 mmol, 1,0 eq), carbonato de césio (862 mg, 2,65 mmol, 3,0 eq) em acetonitrila (2,0 mL) e a mistura foi agitada a 80 oC durante 16 h. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente, diluída com água e extraída com acetato de etila. A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca passando através de um separador de fases e depois concentrada sob pressão reduzida para originar 2-(2,2,2- trifluoroetil)-2,7-diazaespiro[3.5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (126B) como um sólido branco pegajoso. A amostra foi usada no próximo passo sem purificação adicional
[0478] Rendimento: 341 mg (Quant.). ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 3,38 - 3,30 (m, 4H), 3,19 (s, 4H), 3,01 (q, J =9,4 Hz, 2H), 1,73 - 1,69 (m, 4H), 1,45 (s, 9H). 2-(2,2,2-Trifluoroetil)-2,7-diazaespiro[3.5]nonano (126C)
[0479] Ácido trifluoroacético (1,3 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de 2-(2,2,2-trifluoroetil)-2,7-diazaespiro[3.5]nonano-7- carboxilato de terc-butila (126B) (110 mg, 0,357 mmol, 1,0 eq) em diclorometano (1,0 mL). A mistura foi agitada durante 30 minutos e depois concentrada até à secura sob pressão reduzida para originar 2- (2,2,2-trifluoroetil)-2,7-diazaespiro[3.5]nonano (126C) como um óleo marrom-pálido, que foi usado diretamente no próximo passo sem purificação adicional, rendimento de 100% assumido. Esquema 32 2-Metil-5-oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonano (127B)
[0480] Hidreto de lítio e alumínio (solução a 1 M em tetra- hidrofurano, 1,97 mL, 1,97 mmol, 3,0 eq) foi adicionado gota a gota sob nitrogênio a uma solução resfriada a 0 ºC de 5-oxa-2,8- diazaespiro[3.5]nonano-2-carboxilato de terc-butila (127A) (150 mg, 0,657 mmol, 1,0 eq) em tetra-hidrofurano (4,0 mL). A reação foi agitada a 0 ºC durante 5 minutos, o banho de resfriamento foi removido e a reação foi depois aquecida até 70 ºC durante 16 h (foi observada efervescência a 0 ºC e 35 ºC). A mistura reacional foi resfriada até 0 ºC e extinta pela adição lenta de água (0,075 mL), solução aquosa de hidróxido de sódio (15%, 0,075 mL) e depois água (0,22 mL). O banho de resfriamento foi removido e a mistura reacional foi agitada durante 15 minutos, sulfato de magnésio foi adicionado e agitado durante 40 minutos adicionais. A mistura foi seca passando por um separador de fases, lavada com tetra-hidrofurano e éter de dietila e depois concentrada até à secura sob pressão reduzida para originar 2-metil-5- oxa-2,8-diazaespiro[3.5]nonano (127B) como um óleo marrom-pálido. A amostra foi levada para a próxima reação sem purificação adicional.
[0481] Rendimento: assumido 100%. ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 3,63 - 3,56 (m, 2H), 3,47 - 3,43 (m, 2H), 3,00 (s, 2H), 2,94 - 2,86 (m, 2H), 2,83 - 2,79 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), NH não observado.
[0482] O intermediário na Tabela 18 foi sintetizado usando condições análogas àquelas descritas para o intermediário 127B: Tabela 18 LC-MS 1 Composto No. H RMN Estrutura (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 3,63 - 3,56 (m, 2H), 3,47 - 3,43 (m, 2H), 3,00 (s, 2H), 2,94 - 2,86 (m, Intermediário - 2H), 2,83 - 2,79 (m, 2H), 2,40 (s, 3H), NH não observado. Esquema 33 6-(Dimetilcarbamoil)-2-azaespiro[3.3]heptano-2-carboxilato de terc-butila (128B)
[0483] O método usado foi análogo àquele descrito no Método
Geral 5 usando ácido 2-(terc-butoxicarbonil)-2-azaespiro[3.3]heptano- 6-carboxílico para originar o produto desejado 6-(dimetilcarbamoil)-2- azaespiro[3.3]heptano-2-carboxilato de terc-butila (128B).
[0484] Rendimento: 111 mg (Quant.). ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 3,87 (s, 2H), 3,70 (s, 2H), 3,23 - 3,14 (m, 1H), 2,86 (s, 3H), 2,79 (s, 3H), 2,32 - 2,24 (m, 4H), 1,37 - 1,36 (m, 9H). N,N-Dimetil-2-azaespiro[3.3]heptano-6-carboxamida (128C)
[0485] Ácido trifluoroacético (2,1 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de 6-(dimetilcarbamoil)-2-azaespiro[3.3]heptano-2- carboxilato de terc-butila (128B) (110 mg, 0,357 mmol, 1,0 eq) em diclorometano (2,1 mL). A mistura foi agitada durante 30 minutos e depois concentrada até à secura sob pressão reduzida para originar o produto desejado N,N-dimetil-2-azaespiro[3.3]heptano-6-carboxamida (128C) como um óleo marrom-pálido. A amostra foi levada para a próxima reação sem purificação adicional, rendimento de 100% assumido. Esquema 34 (S)-5-Fluoro-2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (129A)
[0486] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0487] Rendimento: 134 mg (20%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,38 (s, 2H), 8,13 (d, J =6,9 Hz, 1H), 7,21 (d, J =12,2 Hz, 1H), 7,12 (s, 1H), 5,62 (t, J =6,7 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,64 - 3,46 (m, 2H), 3,42 - 3,22
(m, 2H), 2,38 - 2,38 (m, 3H), 2,18 - 2,09 (m, 1H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 422 (M+H)+. Ácido (S)-5-fluoro-2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carboxílico (129B)
[0488] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 4.
[0489] Rendimento: 98 mg (quant.).¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 12,82 (s, 1H), 8,57 - 8,54 (m, 1H), 8,33 - 8,32 (m, 2H), 8,18 (d, J =7,4 Hz, 1H), 7,50 (t, J =6,1 Hz, 1H), 7,16 (d, J =12,5 Hz, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,16 - 2,06 (m, 1H), 0,97 - 0,94 (m, 3H). Prótons permutáveis NH não observados; MS (ESI+) m/z 408 (M+H)+. (S)-6-(5-Fluoro-2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carbonil)-2,6- diazaespiro[3.4]octano-2-carboxilato de terc-butila (129C)
[0490] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 5.
[0491] Rendimento: 20 mg (54%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,27 (d, J =1,8 Hz, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,99 (dd, J =1,7, 8,5 Hz, 1H), 7,51 (d, J =8,5 Hz, 1H), 7,00 - 6,97 (m, 1H), 5,47 (dd, J =6,7, 6,7 Hz, 1H), 4,37 (q, J =7,2 Hz, 2H), 3,63 - 3,49 (m, 2H), 3,40 - 3,23 (m, 2H), 2,47 (s, 3H), 2,17 - 2,09 (m, 1H), 1,40 (dd, J =7,2, 7,2 Hz, 3H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H); MS (ESI+) m/z 489 (M+H)+. Sal de formiato de (S)-(5-fluoro-2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin- 2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-il)(2,6- diazaespiro[3.4]octan-6-il)metanona (Exemplo 240)
[0492] Ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução resfriada a 0 ºC de (S)-6-(5-fluoro-2-((2-metil-3-((5- (metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carbonil)- 2,6-diazaespiro[3.4]octano-2-carboxilato de terc-butila (149) (17 mg, 0,0166 mmol, 1,0 eq) em diclorometano anidro (1 mL). A mistura foi agitada durante 30 minutos e depois concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto obtido foi purificado por HPLC preparativa (aditivo fórmico) para dar o produto desejado sal de formiato de (S)-(5-fluoro-2- ((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol- 6-il)(2,6-diazaespiro[3.4]octan-6-il)metanona (Exemplo 189) como um sólido esbranquiçado.
[0493] Rendimento: 9 mg (100%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 - 8,36 (m, 3H), 7,60 - 7,52 (m, 1H), 5,84 - 5,72 (m, 1H), 3,98 (d, J =9,0 Hz, 1H), 3,84 - 3,57 (m, 6H), 3,50 - 3,24 (m, 4H), 2,86 (s, 12H), 2,38 - 2,37 (m, 3H), 2,29 - 2,13 (m, 3H), 1,09 - 1,04 (m, 3H). Prótons permutáveis NH não observados; MS (ESI+) m/z 502 (M+H)+.
[0494] Usando os procedimentos descritos no Esquema 34, os seguintes exemplos foram preparados: Tabela 19 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 - 8,37 (m, 2H), 8,24 (d, J =7,4 Hz, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,52 - 7,44 (m, 1H), 5,72 - 5,69 (m, 1H), 4,91 - 4,87 (m, 2H), 241 502 3,80 - 3,78 (m, 3H), 3,64 - 3,56 (m, 1H), 3,54 - 3,48 (m, 1H), 3,42 - 3,24 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,09 - 1,05 (m, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (s, 2H), 8,28 - 8,26 (m, 1H), 5,71 (t, J =6,5 Hz, 1H), 3,86 (t, J =5,0 Hz, 2H), 3,70 - 242 3,57 (m, 3H), 3,53 - 3,48 (m, 451 1H), 3,41 - 3,22 (m, 2H), 2,78 (s, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,20 - 2,11 (m, 1H), 1,08 - 1,06 (m, 3H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,38 (s, 2H), 7,56 (d, J =6,3 Hz, 1H), 6,85 (t, J =6,0 Hz, 1H), 5,63 (t, J =6,7 Hz, 1H), 243 3,78 (s, 2H), 3,63 - 3,45 (m, 478 2H), 3,42 - 3,22 (m, 4H), 2,95 - 2,80 (m, 4H), 2,38 (s, 3H), 2,20 - 2,08 (m, 1H), 1,06 (d, J =6,9 Hz, 3H).
Esquema 35 2-((3-((5-Mercaptopirimidin-2-il)amino)-2-metilpropil)amino)-N,N- dimetilbenzo[d]tiazol-6-carboxamida (130A)
[0495] N,N-dimetil-2-((2-metil-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)propil)amino)benzo[d]tiazol-6-carboxamida (Composto 10, 75 mg, 0,18 mmol), metanotiolato (126 mg, 1,80 mmol, 10,0 eq) e N- metilpirrolidina (1,5 mL) foram adicionados a um vaso de micro-ondas sob nitrogênio, selados e depois aquecidos até 160 ºC durante 1 hora. A análise de LCMS indicou conversão completa no tiol desejado 2-((3- ((5-((difluorometil)tio)pirimidin-2-il)amino)-2-metilpropil)amino)-N,N- dimetilbenzo[d]tiazol-6-carboxamida (130A), que foi usada diretamente no próximo passo sem purificação. 2-((3-((5-((Difluorometil)tio)pirimidin-2-il)amino)-2- metilpropil)amino)-N,N-dimetilbenzo[d]tiazol-6-carboxamida (244)
[0496] Hidróxido de potássio (201 mg, 3,58 mmol, 20,0 eq) e água (0,5 mL) foram adicionado à solução de tiol em bruto de 2-((3-((5- ((difluorometil)tio)pirimidin-2-il)amino)-2-metilpropil)amino)-N,N- dimetilbenzo[d]tiazol-6-carboxamida em pirrolidina de N-metila (1,5 mL)
e a mistura foi resfriada até -70 ºC, congelando até um sólido. Bromodifluorometildietilfosfonato (40 uL, 0,215 mmol, 1,2 eq) foi adicionado em uma porção e a reação foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 1 hora, depois rerresfriada até -70ºC. Uma alíquota adicional de bromodifluorometildietilfosfonato (40 uL, 0,215 mmol, 1,2 eq) foi adicionada, e a mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 1 hora. Água (10 mL) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (3 x20 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (20 mL) e salmoura (25 mL), depois secas sobre sulfato de magnésio. Os solventes foram removidos sob vácuo para dar um óleo marrom em bruto que foi purificado por cromatografia flash (eluindo diclorometano para metanol, 0-10%) e depois por HPLC preparativa para dar a 2-((3- ((5-((difluorometil)tio)pirimidin-2-il)amino)-2-metilpropil)amino)-N,N- dimetilbenzo[d]tiazol-6-carboxamida (244) desejada como um sólido esbranquiçado.
[0497] Rendimento: 15 mg (19%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,42 - 8,39 (m, 2H), 7,69 (d, J =1,4 Hz, 1H), 7,55 - 7,52 (m, 1H), 7,36 (dd, J =1,8, 8,3 Hz, 1H), 6,33 (s, 1H), 6,15 (t, J =6,7 Hz, 1H), 3,65 - 3,51 (m, 2H), 3,43 - 3,29 (m, 2H), 3,08 (s, 6H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,09 - 1,06 (m, 3H); MS (ESI+) m/z 453 (M+H)+.
[0498] Seguindo a metodologia descrita no Esquema 35, os seguintes exemplos foram preparados: Tabela 20 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,43 (s, 2H), 7,65 (d, J =1,4 Hz, 1H), 7,53 (d, J =7,9 Hz, 245 535 1H), 7,31 (dd, J =1,8, 8,3 Hz, 1H), 6,68 (t, J =56,8 Hz, 1H), 6,38 (s, 1H), 6,16 (dd, J =6,5,
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 6,5 Hz, 1H), 4,48 (s, 4H), 3,64 - 3,53 (m, 6H), 3,44 - 3,31 (m, 2H), 2,20 - 2,12 (m, 1H), 1,91 (s, 4H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,42 - 8,38 (m, 2H), 7,66 - 7,65 (m, 1H), 7,54 - 7,52 (m, 1H), 7,33 - 7,30 (m, 1H), 6,32 246 (s, 1H), 6,14 (t, J =6,6 Hz, 534 1H), 3,64 - 3,52 (m, 6H), 3,46 - 3,32 (m, 6H), 2,20 - 2,12 (m, 1H), 1,83 - 1,82 (m, 4H), 1,09 - 1,06 (m, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,44 - 8,39 (m, 2H), 7,66 (d, J =1,3 Hz, 1H), 7,54 - 7,51 (m, 1H), 6,12 (t, J =6,5 Hz, 1H), 3,64 - 3,51 (m, 6H), 3,44 - 247 616 3,30 (m, 3H), 3,25 - 3,23 (m, 4H), 3,02 (q, J =9,4 Hz, 2H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 1,80 - 1,77 (m, 4H), 1,07 (d, J =6,9 Hz, 3H). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,44 - 8,38 (m, 4H), 7,70 (d, J =1,5 Hz, 2H), 7,57 - 7,54 (m, 2H), 7,36 - 7,32 (m, 2H), 6,69 (s, 1H), 6,54 (s, 1H), 6,09 (t, J =6,6 Hz, 2H), 4,45 (t, J =8,4 248 550 Hz, 3H), 4,00 - 3,82 (m, 6H), 3,65 - 3,52 (m, 4H), 3,45 - 3,30 (m, 4H), 3,07 (s, 6H), 2,89 - 2,83 (m, 2H), 2,62 (s, 1H), 2,20 - 2,12 (m, 2H), 1,08 (d, J =6,9 Hz, 6H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ ¹H RMN (400 MHz, DMSO) δ 8,41 - 8,35 (m, 3H), 8,25 (d, J =1,5 Hz, 1H), 7,97 - 7,92 (m, 249 1H), 7,81 (dd, J =1,8, 8,4 Hz, 426 1H), 7,44 - 7,35 (m, 1H), 3,51 - 3,42 (m, 2H), 2,17 - 2,09 (m, 1H), 0,99 - 0,96 (m, 3H). Esquema 36 ((1R,3R)-3-((5-(Metiltio)pirimidin-2-il)amino)ciclopentil)carbamato de rac-terc-butila (131B)
[0499] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 1.
[0500] Rendimento: 220 mg (44%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ δ 8,35 - 8,34 (m, 4H), 5,35 (s, 1H), 5,18 - 5,15 (m, 1H), 4,84 - 4,82 (m, 1H), 4,56 - 4,53 (m, 1H), 4,36 (dd, J =6,9, 13,8 Hz, 1H), 4,26 - 4,18 (m, 1H), 4,02 - 3,94 (m, 2H), 2,55 - 2,47 (m, 1H), 2,36 (d, J =1,0 Hz, 6H), 2,30 - 2,16 (m, 2H), 2,10 - 1,89 (m, 4H), 1,46 - 1,43 (m, 24H).; MS (ESI+) m/z 325 (M+H)+. Hidrocloreto de rac-(1R,3R)-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2- il)ciclopentano-1,3-diamina (131C)
[0501] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 2.
[0502] Rendimento: 250 mg (% quant.). MS (ESI+) m/z 225 (M+H)+.
[0503] Usado no próximo passo sem purificação adicional. rac-N,N-Bis(4-metoxibenzil)-2-(((trans)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)benzo[d]tiazol-6-sulfonamida (131D)
[0504] A metodologia aplicada foi análoga àquela descrita no Método Geral 3.
[0505] Rendimento: 52 mg (23%). ¹H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,36 (s, 2H), 8,00 (d, J =1,6 Hz, 1H), 7,74 (dd, J =1,9, 8,5 Hz, 1H), 7,58 - 7,55 (m, 1H), 7,01 - 6,96 (m, 4H), 6,76 - 6,73 (m, 4H), 5,59 - 5,54 (m, 1H), 5,22 (d, J =6,9 Hz, 1H), 4,50 - 4,44 (m, 1H), 4,35 - 4,30 (m, 1H), 4,25 (s, 4H), 3,77 - 3,76 (m, 6H), 2,37 - 2,37 (m, 6H), 2,23 - 2,07 (m, 2H); MS (ESI+) m/z 677 (M+H)+. rac-2-(((trans)-3-((5-(Metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)benzo[d]tiazol-6-sulfonamida (250)
[0506] Ácido trifluoroacético (1 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução resfriada em gelo de rac-N,N-bis(4-metoxibenzil)-2-(((trans)-3- ((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)ciclopentil)amino)benzo[d]tiazol-6- sulfonamida (131D) (45 mg, 66,48 mmol, 1,0 eq) em diclorometano anidro (1 mL). A mistura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente ao longo de 18 h e foi depois concentrada até à secura sob pressão reduzida. O resíduo em bruto obtido foi purificado por HPLC preparativa e as frações limpas obtidas foram liofilizadas para dar a 2- (((trans)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)benzo[d]tiazol-6-sulfonamida (Exemplo 250) desejada como um pó branco.
[0507] Rendimento: 23 mg (79%). 1H RMN (CDCl3) δ 8,36 (s, 2H), 8,17 (d, J =1,8 Hz, 1H), 7,84 (dd, J =2,0, 8,5 Hz, 1H), 7,59 - 7,52 (m, 1H), 5,34 (d, J =6,5 Hz, 1H), 4,79 (s, 2H), 4,50 - 4,43 (m, 1H), 4,34 - 4,27 (m, 1H), 2,37 - 2,37 (m, 6H), 2,22 - 2,07 (m, 2H).; MS (ESI+) m/z 437 (M+H)+.
Esquema 41 Passo 1: Exemplo 301C
[0508] A uma solução do Exemplo 301A (1 g, 3,14 mmol) em DMF (30 mL) foram adicionados Cs2CO3 (2,05 g, 6,28 mmol) e Exemplo 301B (5,6 g, 62,8 mmol). A mistura foi aquecida até 25 ºC durante 1 h. A TLC detectou que o material de partida havia sido consumido. A reação foi filtrada e o filtrado (Exemplo 301C em bruto) foi usado para o próximo passo sem qualquer purificação. Passo 2: Exemplo 301D
[0509] Uma solução do Exemplo 301C foi tratado com Boc2O (1,03 g, 4,72 mmol) e agitado à t.a durante 2 h. Água (100 mL) foi adicionada, depois extraída com EA (50 mL x 2), lavada com água e salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, depois purificado por cromatografia em sílica gel (eluída com éter de petróleo/EtOAc = 1/5~1/1) para dar o produto desejado (Exemplo 301D, 1,2 g, 81% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS [M+H]+ = 573 Passo 3: Exemplo 301E
[0510] A uma solução do Exemplo 301D (1,2 g, 2,54 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (1 mL) à t.a. Após adição, a mistura reacional foi agitada à t.a. durante 1 h. A TLC detectou que o material de partida havia sido consumido, a mistura foi concentrada para dar o produto desejado (Exemplo 301E 945 mg, rendimento: 100%) como um óleo amarelo, que foi usado para o próximo passo sem purificação adicional. Passo 4: Exemplo 301
[0511] A uma solução do Exemplo 301E (945 mg, 2,54 mmol) em ACN (10 mL) foram adicionados TEA (514 mg, 5,08 mmol) e Exemplo 301F (408 mg, 2,54 mmol) à t.a., depois até 70 oC durante 18 h. A TLC detectou que o material de partida havia sido consumido. A reação foi concentrada e purificada por cromatografia em sílica gel (eluída com éter de petróleo/EtOAc = 3/1~5/3) para dar o produto desejado Exemplo 301 (780 mg, rendimento: 61%) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 497. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,78 (s, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,12 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,54 (dd, J = 8,5, 1,8 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 3,94-3,86 (m, 1H), 3,59 (dd, J = 16,6, 11,9 Hz, 6H), 3,39 (dd, J = 19,4, 5,9 Hz, 4H), 2,85-2,81 (m, 4H), 2,33 (s, 3H). Esquema 42 Passo 1: Exemplo 302B
[0512] Uma solução do Exemplo 302A (6,77 g, 21 mmol) em THF (200 mL) sob atmosfera de N2 foi resfriada até -65 oC. MeMgBr (21 mL, 63,1 mmol, 3 M em THF) foi adicionado gota a gota, depois agitado a - 65 oC durante 0,5 h. A reação foi aquecida até à t.a. durante 2 h, extinta por adição de água (200 mL). Após extração com EtOAc (200 mL x 2), a camada orgânica combinada foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (eluída com éter de petróleo/EtOAc = 3/1) para dar o produto desejado Exemplo 302B (4 g, 56% de rendimento) como um óleo amarelo. LCMS [M+H]+ = 339 Passo 2: Exemplo 302C
[0513] A uma solução do Exemplo 302B (4 g, 0,012 mmol) em MeOH (40 mL), uma suspensão de catalisador de Pd/C (400 mg) foi introduzida no reator. O vaso foi purgado com nitrogênio e depois com hidrogênio, e a mistura reacional foi agitada à t.a. durante 18 h. A TLC e a LCMS detectaram que o material de partida havia sido consumido. O Exemplo 302C (4 g, rendimento: 100%) foi obtido por filtração e concentrado e usado no próximo passo sem qualquer purificação. LCMS [M+H]+ = 205 Passo 3: Exemplo 302D
[0514] A uma solução do Exemplo 301A (154 mg, 0,48 mmol) em DMF (30 mL) foram adicionados Cs 2CO3 (313 mg, 0,96 mmol) e Exemplo 302C (982 mg, 4,8 mmol), a mistura foi aquecida até 25 ºC durante 2 h. A TLC detectou que o material de partida havia sido consumido. A reação foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e purificada por cromatografia em sílica gel (eluída com éter de petróleo/EtOAc = 1/1~1/4) para dar o produto desejado Exemplo 302D (500 mg, rendimento: 100%) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 487 Passo 4: Exemplo 302E
[0515] A uma solução do Exemplo 302D (486 mg, 2 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado TFA (1 mL) à t.a. Após adição, a mistura reacional foi agitada à t.a. durante 1 h. A TLC detectou que o material de partida havia sido consumido, a mistura foi concentrada para dar o produto desejado Exemplo 302E (532 mg, rendimento: 100%) como um óleo amarelo que foi usado para o próximo passo sem purificação adicional. Passo 5: Exemplo 302
[0516] O Exemplo 302E (193 mg, 0,5 mmol), TEA (101 mg, 1 mmol) e o Exemplo 301F (81 mg, 0,5 mmol) foram dissolvidos em ACN (5 mL), a mistura foi aquecida até 60 oC durante 18 h. A LCMS detectou que TM havia sido formado. Purificado por Pre-HPLC para dar o produto desejado Exemplo 302 (15 mg, rendimento: 6%) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 511
[0517] 1 H RMN (400MHz, CDCl3) δ 8,41 (s, 2H), 7,98 (s, 1H), 7,65 (s, 2H), 6,10 (s, 1H), 3,77-3,72 (m, 4H), 3,67-3,52 (m, 4H), 3,04-2,98 (m, 4H), 2,38 (s, 3H), 1,33 (s, 3H). Esquema 43 Passo 1: Exemplo 303B
[0518] A uma solução do Exemplo 303A (33 g, 500 mmol) e carbonocloridato de metila (49,5 g, 520 mmol) em THF (75 mL) foi adicionado KOH (56,1 g, 1000 mmol) em H2O (50 mL) ao longo de um período de 30 min (mantendo a temperatura interna abaixo de 40 oC). Após adição, a suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A suspensão foi filtrada e o bolo de filtração foi lavado com EtOH (50 mL x 3) e seco em vácuo para originar o produto desejado Exemplo 303B (67 g, 82,7% de rendimento) como um sólido branco. LCMS
[M+H]+ = 163 Passo 2: Exemplo 303C
[0519] A uma solução do Exemplo 303B (4 g, 24,52 mmol) em MeOH (300 mL) e HCl (5 mL, 4,0 M em MeOH) foi adicionado Pd/C (8 g) à temperatura ambiente. A suspensão foi agitada sob 15 psi de H 2 à temperatura ambiente durante 44 h. A LCMS mostrou que o material de partida havia sido consumido completamente e o produto desejado havia sido detectado. A mistura foi filtrada e o bolo de filtração foi lavado com MeOH (30 mL x 3). Os filtrados foram concentrados sob pressão reduzida para originar o produto Exemplo 303C (3,7 g, rendimento: 54,4%) como sólido amarelo. LCMS [M+H]+ = 133,2 Passo 3: Exemplo 303D
[0520] Uma solução do Exemplo 303C (2,18 g, 7,84 mmol), Exemplo 301A (0,5 g, 1,57 mmol) e DIEA (13,35 g, 103,5 mmol) em MeCN (100 mL) foi aquecida até 80 ºC e agitada durante 4 h. A LCMS mostrou que o material de partida havia sido consumido completamente e o produto desejado havia sido detectado. A mistura reacional Exemplo 303D foi usada para o próximo passo sem purificação adicional. LCMS [M+H]+ = 415,5 Passo 4: Exemplo 303E
[0521] Boc2O (5 g, 22,9 mmol) foi adicionado a uma solução de Exemplo 303D à temperatura ambiente e agitado durante 1 h. A LCMS mostrou que o material de partida havia sido consumido. A reação foi diluída com DCM (200 mL) e lavada com água (150 mL x 2), salmoura (200 mL x 3), seca sobre Na 2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida, que foi purificada por cromatografia em sílica gel (eluída com éter de petróleo/EtOAc = 2/1~1/9) para originar o produto Exemplo 303E (680 mg, rendimento: 76,7% ao longo de dois passos) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 515,5 Passo 5: Exemplo 303F
[0522] A uma solução do Exemplo 303E (840 mg, 1,63 mmol) em THF (20 mL) foram adicionados CaCl 2 (363 mg, 3,27 mmol) e NaBH4 (124 mg, 3,27 mmol) à temperatura ambiente e a reação foi agitada durante 16 h. A reação foi vertida em NH4Cl aq. sat (100 mL) e diluída com EtOAc (30 mL) e separada. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (30 mL x 2) e as camadas orgânicas combinadas foram concentradas e purificadas por cromatografia em sílica gel (eluída com éter de petróleo/EtOAc = 3/1~1/9) para originar o produto Exemplo 303F (383 mg, rendimento: 48,3%) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 487,6 Passo 6: Exemplo 303G
[0523] A uma solução do Exemplo 303F (553 mg, 1,14 mmol) dissolvido em DCM (10 mL) foi adicionado HCl/Dioxano (4,0 M, 10 mL) à temperatura ambiente e a reação foi agitada durante 0,5 h. A TLC mostrou que o material de partida havia sido consumido. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida para originar o produto Exemplo 303G (563 mg, rendimento: 100%) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 387,5 Passo 7: Exemplo 303
[0524] A uma solução do Exemplo 303G (563 mg, 1,14 mmol) e K2CO3 (940 mg, 6,82 mmol) em DMF (10 mL) foi adicionado o Exemplo 301A (183 mg, 1,14 mmol) à temperatura ambiente. A reação foi depois aquecida até 60 ºC e agitada durante 16 h. A TLC mostrou que o material de partida havia sido consumido. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e diluída com EtOAc (30 mL) e lavada com água (20 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (20 mL x 4) e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL x 2), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (eluída com éter de petróleo/EtOAc = 3/1~1/9) para originar o produto em bruto, que foi purificado por HPLC preparativa para originar o produto Exemplo 303 (75,2 mg, rendimento: 12,93%), como um sólido amarelo-claro. LCMS [M+H]+ = 511
[0525] 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,37 (s, 2H), 7,96 (s, 1H), 7,66- 7,58 (m, 2H), 6,82 (s, 1H), 5,87 (s, 1H), 3,83-3,73 (m, 5H), 3,59-3,44 (m, 5H), 3,01 (s, 4H), 2,38 (s, 3H), 2,14-2,08 (m, 1H).
Passo 1: Exemplo 304B
[0526] O Exemplo 304A (23,6 g, 0,12 mol), NaN3 (15,1 g, 0,23 mol) e NH4Cl (7,5 g, 0,14 mol) foram suspensos em DMF (250 mL), e a mistura resultante foi aquecida até 80 ºC durante 1 h. Após a TLC ter detectado que a reação estava completa, EtOAc (1 L) foi adicionado, e o extrato orgânico foi lavado com água (200 mL x 5), seco sobre sulfato de magnésio anidro e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (eluída com éter de petróleo/EtOAc = 5/1) para dar o produto desejado Exemplo 304B (29 g, 100% de rendimento) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 247 Passo 2: Exemplo 304C
[0527] A uma solução do Exemplo 304B (29 g, 0,12 mol) em EtOH (400 mL) foram adicionados HCl (22 mL) e Pd/C (1 g), e a mistura heterogênea foi agitada à t.a. durante 18 h sob H2. A TLC detectou que o material de partida havia sido maioritariamente consumido. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado para dar o produto desejado Exemplo 304C (21 g, rendimento: 100%) como um sólido branco.
LCMS [M+H]+ = 221 Passo 3: Exemplo 304D
[0528] A uma solução do Exemplo 304C (6,6 g, 3 mol) em DMF (50 mL) foram adicionados 2-cloro-5-(metiltio)pirimidina (2,4 g, 15 mmol) e TEA (7,6 g, 75 mmol). A mistura resultante foi agitada a 100 ºC durante 1 h. A TLC detectou que o material de partida havia sido consumido. A mistura reacional foi concentrada e purificada por cromatografia em sílica gel (eluída com éter de petróleo/EtOAc = 1/1~1/4) para dar o produto desejado Exemplo 304D (450 mg, rendimento: 8%) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 345 Passo 4: Exemplo 304E
[0529] A uma solução do Exemplo 304D (450 mg, 1,3 mmol) em EtOH (5 mL) foi adicionada hidrazina hidratada (131 mg, 2,6 mL) à t.a. A TLC após 3 h detectou que o material de partida havia sido consumido, ponto esse em que a reação foi concentrada e purificada por cromatografia em sílica gel (eluída com DCM/MeOH = 10/1) para dar o produto desejado Exemplo 304E (120 mg, rendimento: 43%) como um sólido branco. Passo 5: Exemplo 304
[0530] À solução do Exemplo 304E (43 mg, 0,20 mmol) e 2-cloro- N,N-dimetilbenzo[d]tiazol-6-sulfonamida (37 mg, 0,13 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionado DBU (40 mg, 0,26 mmol). A mistura resultante foi agitada a 50 ºC durante 1 h. A TLC detectou que o material de partida havia sido consumido, e a mistura reacional foi concentrada e purificada por Pre-TLC para dar o produto desejado Exemplo 304 (30 mg, rendimento: 51%) como um sólido branco. LCMS [M+H] + = 454,9. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H), 7,99 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,67 (dd, J = 8,5, 1,7 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,97 (s, 1H), 4,11 (dd, J = 9,3, 4,8 Hz, 1H), 3,74 (dd, J = 13,7, 4,3 Hz, 1H), 3,66 (s, 1H), 3,58 (dd, J = 13,6, 6,3 Hz, 2H), 2,70 (s, 6H), 2,37 (s, 3H).
Esquema 45 Passo 1: Exemplo 305
[0531] À solução do Exemplo 304E (30 mg, 0,14 mmol) e 2-cloro- N-metilbenzo[d]tiazol-6-sulfonamida (24,5 mg, 0,09 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionado DBU (47 mg, 0,18 mmol). Após adição, a mistura foi agitada a 50 ºC durante 1 h. A LCMS determinou que o material de partida havia sido consumido. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente, diluída com EtOAc (5 mL) e lavada com salmoura (5 mL). A camada orgânica foi concentrada e purificada por Pre-TLC para dar o produto desejado Exemplo 305 (23,8 mg, rendimento: 60%) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 440,9
[0532] 1 H RMN (400 MHz, MeOD-d4) δ 8,35 (s, 2H), 8,07 (s, 1H), 7,69 (dd, J = 8,0, 1H), 7,50 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,06 (m, 0,46H), 3,57 (m, 4H), 2,51 (s, 3H), 2,32 (s, 3H). Esquema 46
[0533] O Exemplo 306 (30 mg, rendimento: 50%) foi preparado de modo análogo a um sólido branco começando a partir do Exemplo 306A: LCMS [M+H]+ = 454,9. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 2H),
7,98 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,66 (dd, J = 8,5, 1,7 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,04 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,11 (dd, J = 9,3, 5,1 Hz, 1H), 3,74-3,64 (m, 2H), 3,61-3,54 (m, 2H), 2,70 (s, 6H), 2,36 (s, 3H). Esquema 47 Passo 1: Exemplo 307A
[0534] A uma solução do Exemplo 306E (100 mg, 0,47 mmol) em DMF (0,5 mL) foram adicionados DBU (89 mg, 0,58 mmol) e 2- clorobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de metila (89 mg, 0,39 mmol). A mistura foi aquecida até 50 ºC durante 1 h. Após a TLC ter determinado que o material de partida havia sido consumido, a mistura foi concentrada e purificada por cromatografia em sílica gel (eluída com éter de petróleo/EtOAc = 1/1~1/4) para dar o produto desejado Exemplo 307A (50 mg, rendimento: 26%) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 406 Passo 2: Exemplo 307B
[0535] A uma solução do Exemplo 307A (50 mg, 0,12 mmol) em THF (1 mL) foi adicionado LiOH (0,4 mL, 1 M em água) e a mistura resultante foi agitada à t.a. por 18 h. Após a TLC ter determinado que o material de partida havia sido consumido, a mistura foi concentrada e purificada por cromatografia em sílica gel (eluída com DCM/MeOH = 10/1) para dar o produto desejado Exemplo 307B (5 mg, rendimento: 11%) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 392
Passo 3: Exemplo 307
[0536] Uma solução do Exemplo 307B (10 mg, 0,025 mmol) foi carregada com hidrocloreto de dimetilamina (2,5 mg, 0,031 mmol), TEA (8 mg, 0,075 mmol) e HBTU (14 mg, 0,038 mmol). A mistura resultante foi agitada à t.a. durante 1 h. Após a TLC ter detectado que o material de partida havia sido consumido, a mistura foi concentrada e purificada por Pre-TLC (eluída com EtOAc) para dar o produto desejado Exemplo 307 (2 mg, rendimento: 19%) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ =
419. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,36 (s, 2H), 7,67 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 8,3, 1,5 Hz, 1H), 5,91 (s, 1H), 4,14-4,00 (m, 1H), 3,72-3,64 (m, 2H), 3,53 (dd, J = 13,8, 6,3 Hz, 2H), 3,07 (s, 6H), 2,37 (s, 3H). Esquema 48 Passo 2: Exemplo 308A
[0537] Um tubo de Schlenk equipado com barra de agitação magnética foi carregado com TBAI (5 g, 13,6 mmol), ciclopenteno (9,25 g, 136 mmol) e O-Ftalimida (10 g, 68 mmol) em 250 mL de benzeno. Uma solução de TBHP a 65% (18,8 g, 136 mmol) foi adicionada antes do frasco ter sido selado e a mistura reacional foi agitada a 80 ºC durante 12 h. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi diluída em acetato de etila e lavada com salmoura. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluindo com PE/acetato de etila = 5/1) para originar o composto desejado Exemplo 308A (6,5 g) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 214.
[0538] 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2,08-2,17 (m, 1H), 2,32-2,47 (m, 1H), 2,41-2,53 (m, 1H), 2,80-2,88 (m, 1H), 5,33-5,46 (m, 1H), 5,61- 5,70 (m, 1H), 6,07-6,16 (m, 1H), 7,67-7,75 (m, 2H), 7,80-7,87 (m, 2H). Passo 2: Exemplo 308B
[0539] A uma solução do Exemplo 308A (5 g, 23,5 mmol) em THF (25 mL) foi adicionada hidrazina hidratada a 50% em H2O (3,52 g, 35,2 mmol). A mistura foi agitada a 70 °C durante 2 h. A mistura foi depois filtrada e concentrada sob pressão reduzida. Dicarbonato de di-terc- butila (10,2 g, 47 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluindo com PE/acetato de etila = 5/1) para originar o composto desejado Exemplo 308B (550 mg) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 184. Passo 3: Exemplo 308C
[0540] A uma solução do Exemplo 308B (700 mg, 3,825 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado m-CPBA (790 mg, 4,59 mmol) porção a porção a 0 °C. Após adição, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A mistura resultante foi resfriada até 0 ºC e o ácido m-clorobenzoico filtrado e lavado com DCM frio adicional. O filtrado e a lavagem combinados foram agitados com NaHSO 3 a 20% durante 30 min. As camadas de DCM foram separadas e extraídas com NaOH a 3 N (3 x 30 mL), NaCl saturado (30 mL) e, depois, secas sobre Na2SO4. A evaporação deixou um sólido branco, que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluindo com PE/acetato de etila = 5/1) para originar o composto desejado Exemplo 308C (455 mg) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 144. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,07-1,17 (m, 1H), 1,48 (s, 9H), 1,66-1,76 (m, 1H), 1,89-1,96 (m, 1H), 2,05-2,16 (m, 1H), 3,41-3,50 (m, 1H), 3,53 (s l, 1H), 4,07-4,26 (m, 1H), 4,63-4,77 (m, 1H). Passo 4: Exemplo 308D
[0541] Uma mistura do Exemplo 308C (445 mg, 2,28 mmol), NaN3 (297 mg, 4,57 mmol), NH4Cl (61 mg, 1,14 mmol), 2-metoxietanol (5 mL) e H2O (1 mL) foi agitada em um banho mantido a 80 oC durante 16 hr. A solução resultante foi evaporada até à secura, e o resíduo dissolvido em H2O (5 mL). Esta solução foi saturada com NaCl e depois extraída com DCM (4 x 5 mL). A solução de DCM foi evaporada, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluindo com MeOH/DCM = 3%-5%) para originar o composto desejado Exemplo 308D (420 mg) como um óleo incolor. LCMS [M+H]+ = 188. Passo 5: Exemplo 308E
[0542] Uma suspensão do Exemplo 308D (420 mg, 1,74 mmol), Pd/C (cat.) em EtOH (5 mL) foi agitada à t.a. durante 16 h sob atmosfera de H2. A mistura foi filtrada e concentrada in vacuo. O resíduo foi seco e usado diretamente no próximo passo sem purificação adicional Exemplo 308E (320 mg). LCMS [M+H]+ = 217. Passo 6: Exemplo 308F
[0543] Uma mistura do Exemplo 308E (150 mg, 0,694 mmol), 2- cloro-5-(metiltio)pirimidina (111 mg, 0,694 mmol), DIPEA (180 mg, 1,4 mmol) em DMSO (5 mL) foi agitada a 130 oC durante 3 hr. A solução resultante foi resfriada até à temperatura ambiente, vertida em água e extraída com EtOAc (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluindo com PE/EA = 2/1) para originar o composto desejado Exemplo 308F (100 g) como um óleo incolor. LCMS [M+H]+ = 341.
[0544] 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1,45 (s, 9H), 1,75-1,85 (m, 1H), 2,13-2,21 (m, 1H), 2,23-2,30 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 3,83-4,05 (m, 3H), 5,33 (s l, 1H), 5,57 (s l, 1H), 8,35 (s, 2H). Passo 7: Exemplo 308G
[0545] A uma solução do Exemplo 308F (100 mg, 0,294 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado HCl a 4 M em dioxano (3 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, seca e usada diretamente no próximo passo sem purificação adicional Exemplo 308G (70,6 mg). LCMS [M+H]+ = 241. Passo 8: Exemplo 308H
[0546] Uma mistura do Exemplo 308G (70,6 mg, 0,256 mmol), 6- ((2-clorobenzo[d]tiazol-6-il)sulfonil)-2,6-diazaespiro[3.4]octano-2- carboxilato de terc-butila (130 mg, 0,294 mmol), DIPEA (99 mg, 0,768 mmol) em DMF (4 mL) foi agitada a 40 oC durante 2 dias. A solução resultante foi resfriada até à temperatura ambiente, vertida em água e extraída com EtOAc (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluindo com MeOH/DCM = 5%) para originar o composto desejado Exemplo 308H (70 mg) como um sólido branco. LCMS [M+H]+ = 648. Passo 9: Exemplo 308
[0547] A uma solução do Exemplo 308H (70 mg, 0,108 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado HCl a 4 M em dioxano (3 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada e purificada por prep-HPLC para originar o composto do título Exemplo 308 (20 mg) como um sólido branco. LCMS [M+H] + =
548.
[0548] 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,47 - 1,56 (m, 1 H), 1,63 - 1,73 (m, 1 H), 1,97 (t, J=6,98 Hz, 2 H), 2,06 - 2,23 (m, 2 H), 2,31 - 2,41 (m, 3 H), 3,19 (t, J=6,98 Hz, 2 H), 3,35 (s, 2 H), 3,68 (t, J=6,04 Hz, 4 H),
3,95 - 4,02 (m, 1 H), 4,15 (s l, 1 H), 4,38 (s l, 1 H), 7,48 (d, J=8,33 Hz, 1 H), 7,59 (dd, J=8,33, 1,88 Hz, 2 H), 8,16 (d, J=1,88 Hz, 1 H), 8,37 (s, 2 H), 8,49 (d, J=7,79 Hz, 2 H), 8,66 (s l, 1 H). Esquema 49 Passo 1: Exemplo 309A
[0549] Ciclopentadienileto de sódio (solução a 2 M em THF, 50 mL, 100 mmol, 1 equiv) foi adicionado gota a gota a uma solução de éter de benzilclorometila (90%, 23 g, 130 mmol, 1,3 equiv) em DMF (200 mL) a -40 °C. Após 20 min de agitação vigorosa a -40 °C, a mistura reacional foi vertida em uma mistura 2:1 de pentano/água gelada (900 mL). Após agitação e permitir que as fases se separassem, a camada orgânica foi lavada duas vezes com 150 mL de água fria e seca sobre Na 2SO4 com agitação, mantendo a temperatura abaixo de 0 °C para evitar isomerização das ligações duplas. Após remoção do agente de secagem por filtração, o pentano foi removido in vacuo a 0 °C para originar (benziloximetil)ciclopent-2,4-eno 1 como um óleo laranja-pálido. O material em bruto resultante foi mantido a 0 °C sob árgon e diluído com THF (160 mL), resfriado até -78 °C e adicionado gota a gota através de uma cânula a uma suspensão de (–)-Ipc2BH (solução a 1 M em THF, 100 mL, 100 mmol, 1 equiv) em THF (400 mL) a -78 °C. A mistura foi deixada a aquecer lentamente até -10 °C e agitada durante 3 dias a essa temperatura. A reação foi depois extinta por adição de MeOH (40 mL), seguida por uma solução aquosa a 3 M de NaOH (40 mL) e H 2O2 a 30% (40 mL). Após 24 h de agitação vigorosa à temperatura ambiente, o THF foi removido sob pressão reduzida e a suspensão aquosa restante foi dividida entre EtOAc (400 mL) e salmoura (200 mL). Após extração, a camada orgânica foi seca sobre Na 2SO4 e concentrada in vacuo. O óleo laranja em bruto foi purificado por cromatografia em coluna (eluente: 9:1 ~ 8:2 heptano:EtOAc) para dar o Exemplo 309A (4,8 g, 23,53 mmol, 23%) como um óleo amarelo-pálido. Rf = 0,29 (eluente: 7:3 heptano:EtOAc); 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 2,23-2,32 (m, 1H), 2,35 (s, 1H), 2,63-2,73 (m, 1H), 2,81-2,88 (m, 1H), 3,28 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 5,4, 9,1 Hz, 1H), 4,29 (td, J = 4,1, 7,0 Hz, 1H), 4,52 (s, 2H), 5,53-5,58 (m, 1H), 5,70-5,74 (m, 1H), 7,24-7,37 (m, 5H). Passo 2: Exemplo 309B
[0550] A uma solução do Exemplo 309A (4,8 g, 23,53 mmol, 1 equiv) em THF anidro (100 mL) foi adicionado NaH (50% em óleo mineral, 1,13 g, 28,2 mmol, 1,2 equiv) a 0 °C e a mistura foi agitada durante 20 min à temperatura. Brometo de benzila (BnBr, 3,6 mL, 30,5 mmol, 1,3 equiv) e iodeto de tetrabutilamônio (TBAI, 100 mg, 0,3 mmol, 0,01 equiv) foram depois adicionados a 0 °C e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente. Após 15 h, gelo esmagado foi adicionado cuidadosamente e a mistura foi agitada durante 30 min. Após extração com EtOAc (150 mL), a camada orgânica foi lavada com H2O (150 mL), salmoura (150 mL), seca sobre Na 2SO4 e concentrada in vacuo. A purificação por cromatografia em coluna (eluente: 98:2 ~ 95:5 heptano:EtOAc) deu o Exemplo 309B (6,3 g, 21,4 mmol, 80%) como um xarope incolor. Rf = 0,41 (eluente: 9:1 heptano:EtOAc). LCMS [M+H]+ = 295.1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 2,42 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 2,65-2,70 (m, 1H), 3,07 (s l, 1H), 3,33 e 3,44 (ABX, JAB = 9,2 Hz, JAX = 5,7 Hz, JBX = 7,3 Hz, 2H), 4,08 (ddd, J = 3,0, 3,3, 7,0 Hz, 1H), 4,51 (d, J = 3,4 Hz, 2H), 4,54 (s, 2H), 5,64-5,66 (m, 1H), 5,74-5,75 (m, 1H), 7,22-7,34 (m, 10H). Passo 3: Exemplo 309C
[0551] Uma solução a 0,5 M de 9-BBN em THF (88 mL, 44 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução do Exemplo 309B (6,50 g, 22,0 mmol) em THF anidro (10 mL) a 0 °C sob nitrogênio. A reação foi lentamente aquecida até à t.a. durante a noite. A reação foi resfriada até 0 °C e tratada sequencialmente com EtOH (7 mL), solução de NaOH a 3 N (20 mL) e H2O2 (33%, 20 mL). A mistura resultante foi agitada à t.a. durante a noite. O resíduo resultante foi filtrado e lavado com EtOAc (200 mL). A esta suspensão, água foi adicionada (150 mL) e, após separação das fases, a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 × 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2SO4) e concentradas até à secura. O produto em bruto foi purificado em sílica gel (eluente: 1:1 heptano:EtOAc) deu o Exemplo 309C (6,0 g, 19,3 mmol, 87%) como um óleo amarelo. LCMS [M+H]+ = 313. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,35-7,25 (m, 10H, CH-arom.), 4,52 (s, 2 H, CH 2- benzila), 4,49 (d, 1H, J = 11,8 Hz, CHH-benzila), 4,44 (d, 1H, J = 11,8 Hz, CHH-benzila), 4,33-4,28 (m, 1H, H-1), 4,07 (ddd, 1H, J = 6,6 Hz, 6,6 Hz, 4,1 Hz, H-3), 3,53 (dd, 1H, J = 9,0 Hz, 4,2 Hz, OCHH), 3,49 (d, 1H, J = 9,0 Hz, 4,3 Hz, OCHH), 2,35-2,25 (m, 2H, H-4, H-5a), 2,05 (dddd, 1H, J = 13,5 Hz, 6,7 Hz, 3,5 Hz, 1,7 Hz, H-2a), 1,89-1,82 (m, 1H, H-2b), 1,52-1,46 (m, 1H, H-5b). Passo 4: Exemplo 309D
[0552] O composto Exemplo 309C (6,0 g, 19,3 mmol) foi dissolvido em piridina seca (30 mL) e resfriado até 0 oC. TosCl (5,5 g, 28,9 mmol)
foi adicionado em porções ao longo de um período de 30 min. Após a adição, a reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A suspensão foi diluída com acetato de etila (300 mL) e H 2O (200 mL). A fase orgânica foi separada, lavada com solução sat. de NH4Cl (3 × 200 mL), salmoura (100 mL) e seca sobre MgSO4. O solvente foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (hexano/acetato de etila 5:1) para dar 4-metilbenzenossulfonato de (1R,3S,4R)-3-(benziloxi)-4-((benzilóxi)metil)ciclopentila (1,4 g, 3,0 mmol, 15%) como um óleo incolor. Rf = 0,26 (acetato de etila a 20% em hexano). LCMS [M+H]+ = 467. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ7,79 (m, 2H), 7,38-7,27 (m, 12H), 5,05-4,99 (m, 1H), 4,50 (s, 2H), 4,45 (s, 2H), 3,96-3,92 (m, 1H), 3,48-3,40 (td, 2H, J =6,3 Hz), 2,45 (s, 3H), 2,33-2,20 (m, 2H), 2,14-2,01 (m, 2H), 1,69-1,62 (m, 1H).
[0553] O composto 4-metilbenzenossulfonato de (1R,3S,4R)-3- (benziloxi)-4-((benzilóxi)metil)ciclopentila (1,4 g, 3,0 mmol) foi dissolvido em DMF seco (20 mL) e NaN3 (2,1 g, 15,4 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada a 60 ºC durante 14 h. Após a adição de acetato de etila (300 mL), a camada orgânica foi lavada com solução sat. de NaHCO3 (2 × 100 mL) e salmoura (100 mL) e seca sobre MgSO 4. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (hexano/acetato de etila 10:1) para dar o Exemplo 309D (1,0 g, 2,95 mmol, 95%) como um óleo incolor. Rf = 0,54 (acetato de etila a 20% em hexano). LCMS [M+H]+ = 338. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,39-7,25 (m, 10H), 4,52 (dd, J = 26,0, 18,6 Hz, 2H), 4,49 (s, 2H), 3,97-3,89 (m, 1H), 3,86 (td, J = 7,0, 5,1 Hz, 1H), 3,44 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 2,54-2,43 (m, 1 H), 2,24 (td, J = 13,8, 6,8 Hz, 1H), 1,99 (dddd, J = 13,4, 8,7, 4,7, 1,3 Hz, 1H), 1,84 (dddd, J= 28,2, 20,8, 9,5, 4,2 Hz, 2H). Passo 5: Exemplo 309E
[0554] O composto Exemplo 309D (1,0 g, 2,95 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 seca (20 mL) e resfriado até -78 oC. Uma solução de BCl3 a 1 M (40 mL) em CH2Cl2 foi adicionada por meio de um funil de gotejamento ao longo de um período de 45 min e a mistura foi agitada a -78 ºC por 3 h, depois aquecida até à temperatura ambiente. A reação foi extinta com MeOH seco (20 mL) a -78 ºC e foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. Os solventes foram evaporados e o resíduo foi purificado em sílica gel (hexano/acetato de etila 1:1) para dar (1S,2R,4S)-4-azido-2-(hidroximetil)ciclopentanol (420 mg, 2,67 mmol, 90%) obtido como um óleo amarelo. LCMS [M+H] + = 158. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 4,07 (dd, J = 13,3, 6,0 Hz, 1H), 4,02-3,95 (m, 1H), 3,79 (ddd, J = 10,4, 5,2, 3,0 Hz, 1H), 3,56 (dd, J = 10,4, 8,0 Hz, 1H), 2,36-2,20 (m, 4H), 1,99-1,92 (m, 1H), 1,77 (dddd, J = 14,0, 6,0, 4,5, 1,6 Hz, 1H), 1,58 (ddd, J = 13,9, 9,8, 6,8 Hz, 1H).
[0555] O composto (1S,2R,4S)-4-azido-2-(hidroximetil)ciclopentanol (0,42 g, 2,67 mmol) foi dissolvido em DMF seca (10 mL), e imidazol (198 mg, 2,94 mmol) foi adicionado à temperatura ambiente. Após a adição porção a porção de TBDPSCl (808 mg, 2,94 mmol) a 0 ºC, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A reação foi diluída com CH2Cl2 (200 mL), lavada uma vez com NH4Cl sat. (70 mL) e com salmoura (50 mL) e seca sobre MgSO4. O solvente foi removido in vacuo e o produto em bruto foi purificado por sílica gel (hexano/acetato de etila 10:1) para dar o Exemplo 309E (630 mg, 1,6 mmol, 60%) obtido como um óleo amarelo. LCMS [M+H]+ = 360. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,69-7,66 (m, 4H), 7,49- 7,40 (m, 6H), 4,15 (dd, J = 7,0, 7,0 Hz, 1H), 4,02-3,99 (m, 1H), 3,81 (dd, J = 4,8, 4,8 Hz, 1H), 3,59 (dd, J = 7,2, 7,2 Hz, 1H), 2,35-2,28 (m, 2H), 1,91-1,88 (m, 1H), 1,83-1,78 (m, 1H), 1,70-1,62 (m, 1H), 1,08 (s, 9H). Passo 6: Exemplo 309F
[0556] Pd/C a 10% (63 mg) foi adicionado a uma suspensão do composto Exemplo 309E (630 g, 1,6 mmol) em EtOH seco (100 mL). A reação foi evacuada duas vezes para trocar a atmosfera de gás inerte e, depois, conectada a dois balões que foram preenchidos com H 2. A suspensão foi vigorosamente agitada à temperatura ambiente durante 15 h. O catalisador de paládio foi removido por uso de um Filtro de PTFE (Whatman Puradisc) e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A amina (588 g, 100%) foi obtida como um líquido incolor e foi usada sem purificação adicional. LCMS [M+H]+ = 370.
[0557] A uma solução de amina (588 mg, 1,6 mmol) em DCM (50 mL) a 0 oC foi adicionado Boc2O (700 mg, 3,2 mmol) em DCM (10 mL) e agitado a 0 oC, depois agitado à TA durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada e o produto em bruto foi purificado por sílica gel (hexano/acetato de etila 5:1) para dar o Exemplo 309F (650 mg, 1,38 mmol, 87%) obtido como um óleo incolor. LCMS [M+H]+ = 470. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,68-7,65 (m, 4H), 7,48-7,40 (m, 6H),4,97 (s l, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,02 (s l, 1H), 3,74 (dd, J = 4,2, 4,2 Hz, 1H), 3,51 (dd, J = 8,4, 8,4 Hz, 1H), 2,29-2,22 (m, 2H), 1,78-1,57 (m, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,07 (s, 9H). Passo 7: Exemplo 309G
[0558] O composto Exemplo 309F (630 mg, 1,34 mmol), DIEA (300 mg, 2,28 mmol) e DMAP (278 mg, 2,28 mmol) em DCM (50 mL) foi adicionado TosCl (384 mg, 2,0 mmol) a 0 oC. A mistura foi agitada à TA durante 14 h e depois foi concentrada até à secura. O produto em bruto foi purificado por sílica gel (hexano/acetato de etila 10:1) para dar 4- metilbenzenossulfonato de (1S,2R,4S)-4-((terc-butoxicarbonil)amino)- 2-(((terc-butildifenilsilil)óxi)metil)ciclopentila (590 mg, 0,94 mmol, 70%) obtido como um óleo incolor. LCMS [M+H] + = 625.
[0559] 4-Metilbenzenossulfonato de (1S,2R,4S)-4-((terc- butoxicarbonil)amino)-2-(((terc-butildifenilsilil)óxi)metil)ciclopentila (590 g, 0,94 mmol) foi dissolvido em DMF seco (10 mL) e NaN3 (92 mg, 1,4 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada a 60 ºC durante 14 h. Após a adição de acetato de etila (100 mL), a camada orgânica foi lavada com solução sat.
de NaHCO3 (2 × 50 mL) e salmoura (50 mL) e seca sobre MgSO4. O solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sílica gel (hexano/acetato de etila 5:1) para dar ((1S,3R,4S)-3-azido-4-(((terc-butildifenilsilil)óxi)metil)ciclopentil)carbamato de terc-butila (460 mg, 0,93 mmol, 99%) como um óleo incolor. Rf = 0,54 (acetato de etila a 20% em hexano). LCMS [M+H]+ = 496. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,72-7,67 (m, 4H), 7,46-7,40 (m, 6H),4,45 (s l, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,08 (s l, 1H), 3,79-3,72 (m, 1H), 3,68-3,62 (m, 1H), 2,41-2,35 (m, 2H), 1,80-1,47 (m, 5H), 1,46 (s, 9H), 1,08 (s, 9H).
[0560] Pd/C a 10% (46 mg) foi adicionado a uma suspensão de ((1S,3R,4S)-3-azido-4-(((terc- butildifenilsilil)óxi)metil)ciclopentil)carbamato de terc-butila (460 g, 0,93 mmol) em EtOH seco (50 mL). A reação foi evacuada duas vezes para trocar a atmosfera de gás inerte e, depois, conectada a dois balões que foram preenchidos com H2. A suspensão foi vigorosamente agitada à temperatura ambiente durante 15 h. O catalisador de paládio foi removido por uso de um Filtro de PTFE (Whatman Puradisc) e o solvente foi removido sob pressão reduzida. A amina Exemplo 309G (460 g, 0,93 mmol, quant.) foi obtida como um líquido incolor e foi usada sem purificação adicional. LCMS [M+H]+ = 470 Passo 8: Exemplo 309H
[0561] A uma solução do composto Exemplo 309G (70 mg, 0,17 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado TBAF a 1 M (1,7 mL, 0,17 mmol) a 0 oC sob N2, depois agitado à TA durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada para dar o produto 13 em bruto, o produto em bruto foi próximo passo. LCMS [M+H]+ = 231. Passo 9: Exemplo 309I
[0562] Uma mistura do composto Exemplo 309H (bruto, 0,17 mmol), 2-cloro-N,N-dimetilbenzo[d]tiazol-6-sulfonamida (46 mg, 0,17 mmol) e DIEA (65 mg, 0,51 mmol) em DMSO foi agitada a 60 oC durante a noite. A mistura foi purificada por Prep-HPLC para dar o composto Exemplo 309I (38 mg, 47%) como sólido branco. LCMS [M+H] + = 472. Passo 10: Exemplo 309J
[0563] Uma solução de HCl a 4 M/dioxano (5 L) foi adicionada ao composto Exemplo 309I (38 mg, 0,08 mmol) em DCM (1 mL) e a mistura foi agitada à TA durante 1 h. A mistura foi concentrada para dar o composto Exemplo 309J (30 mg, 100%) como sólido branco. LCMS [M+H]+ = 372. Passo 16: Exemplo 309
[0564] Uma mistura do composto Exemplo 309J (30 mg, 0,08 mmol), 2-cloro-5-(metiltio)pirimidina (15 mg, 0,09 mmol) e DIEA (34 mg, 0,25 mmol) em DMSO (2,5 mL) foi agitada a 120 oC durante 4 h. A mistura foi purificada por Prep-HPLC para dar o composto Exemplo 309 (5 mg, 12%) como sólido branco. LCMS [M+H]+ = 496.
[0565] 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,36 (s, 2H), 8,09 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 2,0, 1,6 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,62 (s l, 5H), 4,54 (m l, 1H), 3,63-3,58 (m, 2H), 2,70 (s, 3H), 2,69-2,65 (m, 1H), 2,37 (s, 3H), 2,36-2,28 (m, 1H), 2,16-2,10 (m, 1H), 2,05-1,99 (m, 1H), 1,86-1,82 (m, 1H). Esquema 50 Passo 1: Exemplo 310A
[0566] A uma mistura de ((1S,3S)-3-aminociclopentil)carbamato de terc-butila (1,5 g, 7,5 mmol), 2-cloro-5-(metiltio)pirimidina (1,3 g, 8,3 mmol) em sulfóxido de dimetila (28 mL) foi adicionada N,N-Di-
isopropiletilamina (3,7 mL, 22,5 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada a 130 °C durante 6,5 h sob atmosfera de N2. À mistura foram depois adicionados água (90 mL) e acetato de etila (160 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (100 mL), secas sobre sulfato de magnésio anidro, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (PE:EA = 20:1 ~ PE:EA = 6:1) para dar o Exemplo 310A (1,8 g, 76% de rendimento) como um óleo amarelo. LCMS [M+H]+ = 325. Passo 2: Exemplo 310B
[0567] A uma mistura do Exemplo 310A (1,8 g, 5,7 mmol) em metanol (2 mL) foi adicionado HCl/dioxano (8,0 mL, 4 mol/L) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2,5 h sob atmosfera de N2. A mistura foi depois evaporada para dar o Exemplo 310B (1,5 g, 100% de rendimento) como um sólido marrom. LCMS [M+H]+ = 225. Passo 3: Exemplo 310C
[0568] A uma mistura do Exemplo 310B (1,5 g, 5,7 mmol), 2- clorobenzo[d]tiazol-6-carboxilato de etila (1,4 g, 5,7 mmol) em DMSO (28 mL) foi adicionada DIEA (2,9 mL, 17,3 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada a 80 °C durante 18 h sob atmosfera de N2. À mistura foram depois adicionados água (80 mL) e acetato de etila (150 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (90 mL), secas sobre sulfato de magnésio anidro, filtradas e evaporadas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (PE:EA = 30:1~5:1) para dar o Exemplo 310C (1,9 g, 77% de rendimento) como um sólido amarelo. LCMS [M+H]+ = 430. Passo 4: Exemplo 310D
[0569] A uma mistura do Exemplo 310C (1,9 g, 4,4 mmol) em etanol (20 mL) e água (10 mL) foi adicionado hidróxido de lítio mono-hidratado (372 mg, 8,9 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h sob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi depois concentrada. Ao resíduo foram adicionados água (60 mL) e HCl (3 mol/L) até pH = 5. O precipitado foi filtrado e o bolo de filtração foi seco para dar o Exemplo 310D (1,5 g, 84% de rendimento) como um sólido marrom. LCMS [M+H]+ = 402. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 8,49-8,47 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,26-8,25 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,81-7,79 (m, 1H), 7,55-7,53 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,40-7,38 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,39-4,33 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,21-2,19 (m, 2H), 2,12-2,10 (m, 2H), 1,98-1,94 (t, J = 13,6 Hz, 1H). Passo E: Exemplo 310
[0570] Uma mistura do Exemplo 310D (30 mg, 0,075 mmol), dimetilamina (6,75 mg, 0,15 mmol), HATU (28,5 mg, 0,075 mmol) em DCM foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A solução resultante foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por Prep-HPLC para originar o composto do título Exemplo 310 (20 mg) como um sólido amarelo. LCMS [M+H]+ = 429. 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6) δ 1,54-1,64 (m, 2H), 1,98 (t, J = 6,75 Hz, 2H), 2,09-2,16 (m, 1H), 2,18-2,27 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,97 (s, 6H), 4,35 (s l, 2H), 7,30 (dd, J = 8,35, 1,49 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,24 Hz, 1H), 7,57 (s l, 1H), 7,74- 7,81 (m, 1H), 8,35 (s, 2H), 8,58 (s l, 1H).
[0571] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: Tabela 31 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,34 (s, 2H), 8,29 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 1,3 311 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 7,3 Hz, 485 1H), 7,37 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,96-4,79 (m, 1H), 4,34 (td, J
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ = 6,9, 13,7 Hz, 2H), 3,53- 3,44 (m, 2H), 3,14-3,03 (m, 2H), 2,97-2,84 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,24-2,05 (m, 2H), 1,95 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,89- 1,80 (m, 1H), 1,75-1,62 (m, 1H), 1,61-1,50 (m, 2H), 1,45- 1,32 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,34 (s, 2H), 8,32 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,53 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,42-7,34 (m, 2 H), 4,48-4,39 (m, 1H), 4,35 (td, J = 6,5, 312 514 13,5 Hz, 2H), 4,20-4,05 (m, 1H), 3,79-3,34 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,24-2,17 (m, 4H), 2,15-2,06 (m, 4H), 1,95 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,61 - 1,52 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,39 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 8,34 (s, 2H), 7,97 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,48 (dd, J = 1,7, 8,5 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 313 483 4,68 (s, 4H), 4,51 (s l, 2H), 4,34 (td, J = 6,9, 13,7 Hz, 2H), 4,19 (s l, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,24-2,05 (m, 2H), 1,95 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 1,62-1,51 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,58 (s, 2H), 8,31 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,24 (dd, J = 1,7, 8,2 Hz, 1H), 314 4,49-4,30 (m, 2H), 3,74 (t, J 541 = 6,6 Hz, 2H), 3,40-3,29 (m, 4H), 2,83 (s, 3H), 2,25 - 2,08 (m, 2H), 1,98 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,87 (quin, J = 7,1 Hz, 2H), 1,69 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,64 - 1,49 (m, 6H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,34 (s, 2H), 8,29 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 1,7, 8,2 Hz, 1H), 315 4,38-4,29 (m, 2H), 3,73 (t, J 525 = 6,7 Hz, 2H), 3,40-3,26 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,24-2,05 (m, 2H), 1,95 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 1,87 (quin, J = 7,1 Hz, 2H), 1,68 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,62-1,47 (m, 6H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,53 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,33 (s, 2H), 7,84 (dd, J = 2,4, 8,9 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 7,0 316 384 Hz, 1H), 6,59 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 4,42-4,28 (m, 2H), 2,52 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,19- 2,06 (m, 2H), 1,97-1,81 (m, 2H), 1,58-1,44 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 9,34 (s, 1H), 8,33 (s, 2H), 8,26 (s, 1H), 8,08 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,99 (dd, J = 1,7, 5,5 317 369 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 4,39-4,27 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,18-2,06 (m, 2H), 1,95-1,81 (m, 2H), 1,57-1,44 (m, 2H). H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1
8,38 (s, 2H), 7,97 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,70 - 7,59 (m, 2H), 6,95 (s l, 1H), 6,00 (s l, 1H), 318 3,84 (dd, J = 4,7, 13,8 Hz, 511 1H), 3,78-3,71 (m, 4H), 3,66- 3,50 (m, 5H), 3,07-2,95 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 2,17-2,08 (m, 1H). H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1
8,38 (s, 2H), 7,97 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,70-7,59 (m, 2H), 6,95 (s l, 1H), 6,00 (s l, 1H), 319 3,84 (dd, J = 4,7, 13,8 Hz, 511 x 1H), 3,78-3,71 (m, 4H), 3,66- 3,50 (m, 5H), 3,07-2,95 (m, 4H), 2,39 (s, 3H), 2,17-2,08 (m, 1H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,34 (s, 2H), 8,30 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,53 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 320 7,38-7,31 (m, 2H), 4,65 (s l, 525 1H), 4,35 (td, J = 6,8, 13,7 Hz, 2H), 4,06 (quin, J = 6,3 Hz, 1H), 3,68-3,58 (m, 2H), 3,57-3,38 (m, 2H), 2,59-2,52
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,24- 2,05 (m, 2H), 2,03-1,89 (m, 4H), 1,63-1,50 (m, 2H), 1,36- 1,25 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,34 (s, 2H), 8,29 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,53 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,40 - 4,27 (m, 321 487 2H), 3,74 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 3,63-3,37 (m, 4H), 3,47 (s, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,24-2,04 (m, 2H), 1,95 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 1,74 (t, J = 7,1 Hz, 2H), 1,62 - 1,43 (m, 6H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,34 (s, 2H), 8,31 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,53 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,24 (d, J 322 = 8,1 Hz, 1H), 4,34 (td, J = 519 6,9, 13,7 Hz, 2H), 3,72 (s l, 4H), 2,63 (s l, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,24-2,05 (m, 2H), 1,95 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 1,62-1,49 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,35 (d, J = 6,7 Hz, 1H ), 8,34 (s, 2H), 7,84 (s, 1H), 7,53 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 323 7,43-7,32 (m, 2H), 4,39-4,30 511 (m, 2H), 3,88 (s l, 4H), 3,24 (s l, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,25- 2,05 (m, 2H), 1,95 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 1,63-1,48 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,34 (s, 2H), 8,30 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 1,6, 8,3 Hz, 1H), 324 4,59-4,18 (m, 2H), 4,34 (td, J 510 = 6,9, 13,7 Hz, 2H), 3,92- 3,48 (m, 2 H), 3,11-2,86 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,24-2,00 (m, 4H), 1,95 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,89-1,80 (m, 1H), 1,76 - 1,50 (m, 4H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,52 (s, 1H), 8,37 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,34 (s, 2H), 7,87 (d, J = 1,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 325 508 1,7, 8,2 Hz, 1H), 4,87 (s, 2H), 4,41-4,30 (m, 2H), 4,15 (t, J = 5,4 Hz, 2H), 3,89 (s l, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,25-2,06 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,63-1,50 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,71 (s l, 1H), 8,38- 8,30 (m, 3H), 7,97 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,60-7,44 (m, 3H), 326 7,42-7,37 (m, 1H), 4,61 (s l, 493 2H), 4,57 (s l, 2H), 4,40-4,31 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,25- 2,06 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,7 Hz, 2 H), 1,63-1,51 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,57 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 8,41 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,18 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,75 (dd, J = 1,7, 8,5 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,48 327 513 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 4,40-4,30 (m, 2H), 4,24-4,12 (m, 1H), 3,61 (td, J = 5,0, 13,3 Hz, 1H), 3,29-3,24 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,24-2,06 (m, 2H), 1,95 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,63- 1,51 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,34 (s, 2H), 8,30 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,74-7,70 (m, 1H), 7,54 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,22 (dd, J = 1,6, 8,3 Hz, 1H), 4,63 328 (s l, 1H), 4,40-4,29 (m, 2H), 500 3,82-3,56 (m, 1H), 3,41-3,12 (m, 4H), 2,86 (s l, 2H), 2,63- 2,53 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,24-2,04 (m, 2H), 1,95 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 1,62-1,49 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,45 (s l, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,34 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 8,06 (s l, 1H), 7,82 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,4 Hz, 329 535 1H), 7,40 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,31 (dd, J = 1,7, 8,3 Hz, 1H), 4,43 (s l, 2H), 4,39-4,31 (m, 2H), 3,65 (s l, 2H), 3,30 (s l, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,25-2,06
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,63-1,50 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,34 (s, 2H), 8,30 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,21 (dd, J = 1,7, 8,2 Hz, 1H), 330 510 4,34 (td, J = 6,8, 13,8 Hz, 2H), 3,37 (s l, 4H), 3,23 (s l, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,23-2,05 (m, 2H), 1,95 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,68 (s l, 4H), 1,60-1,50 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,35 (s, 2H), 8,31 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 331 7,22 (dd, J = 8,0, 1,6 Hz, 1H), 511 4,34 (s, 6H), 3,40 (s l, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,24-2,08 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,80 (s l, 4H), 1,60-1,54 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,35 (s, 2H), 8,32 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,38 (s, 2H), 4,41- 332 4,32 (m, 2H), 3,66-3,49 (m, 525 5H), 3,48-3,35 (m, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,24-2,08 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,80 (d, J = 25,2 Hz, 2H), 1,62- 1,52 (m, 4H), 1,43 (s l, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,35 (s, 2H), 8,30 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H), 4,78 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 333 485 4,40-4,32 (m, 2H), 3,73 (d, J = 3,2 Hz, 2H), 3,21-3,14 (m, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,24-2,07 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,73 (s l, 2H), 1,60-1,54 (m, 2H), 1,35 (d, J = 8,4 Hz, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,35 (s, 2H), 8,33 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,89 (s l, 1H), 7,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,41-7,36 (m, 2H), 4,39-4,32 334 (m, 2H), 3,97 (d, J = 30 Hz, 485 1H), 3,68-3,42 (m, 3H), 3,27 (s, 2H), 3,16 (s, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,24-2,08 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 4H), 1,62-1,52 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,38 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,35 (s, 2H), 7,98 (d, J = .6 Hz, 1H), 7,54-7,48 (m, 2H), 7,37 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,72 (s l, 1H), 4,49 (s l, 2H), 4,39- 335 457 4,34 (m, 2H), 4,28-4,19 (m, 1H), 4,06-4,01 (m, 1H), 3,84- 3,74 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,25-2,07 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,60-1,52 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,38 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,35 (s, 2H), 7,98 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,55-7,48 (m, 2H), 7,37 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,80 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,38-4,30 336 471 (m, 3H), 4,03 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 3,78-3,73 (m, 1H), 3,54 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,24-2,07 (m, 2H), 2,03- 1,94 (m, 3H), 1,58-1,53 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,38 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,34 (s, 2H), 8,32 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,53 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 337 548 6,66 (t, J = 4,8 Hz, 1H), 4,36 (q, J = 13,2, 6,4 Hz, 2H), 3,79 (s, 4H), 3,58 (s l, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,24-2,07 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,58-1,53 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,34 (s, 2H), 8,32 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,53 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,26 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,76 (s l, 1H), 338 501 4,35 (q, J = 13,6, 7,2 Hz, 2H), 3,84-3,82 (m, 1H), 3,49-3,33 (m, 4H), 3,29-2,58 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,23-2,07 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,61-1,53 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,41 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,35 (s, 2H), 8,29 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,75 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 339 7,39 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,36 533 (q, J = 13,6, 6,8 Hz, 2H), 4,21-4,17 (m, 1H), 3,30-3,24 (m, 2H), 3,14 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,23-2,06 (m, 6H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,60-1,54 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,23 (s, 2H), 7,62 (s, 1H), 7,37 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,35-4,27 (m, 2H), 4,03-3,82 340 501 (m, 1H), 3,55-3,37 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,23-2,07 (m, 2H), 1,98 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,63-1,51 (m, 2H), 1,25-1,12 (m, 4H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 9,00 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 8,42 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,19 (s, 1H), 7,76 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,4 341 496 Hz, 1H), 6,20 (s, 1H), 4,53 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,36 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,23-2,06 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 1,95 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,57-1,53 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,39-8,71 (m, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,18 (s, 1H), 7,75 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,43-7,37 (m, 2H), 4,45-4,33 (m, 3H), 3,87- 342 471 3,82 (m, 2H), 3,71 (q, J = 14,0, 8,0 Hz, 1H), 3,57 (q, J = 8,8, 4,0 Hz, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,22-2,07 (m, 3H), 2,01- 1,89 (m, 3H), 1,59-1,53 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,36 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,34 (s, 2H), 8,20-8,14 (m, 2H), 7,72 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,49-4,45 (m, 1H), 4,38-4,31 (m, 3H), 343 515 4,25 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,18 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,58-3,53 (m, 1H), 3,39-3,35 (m, 1H), 2,34 (s, 3H), 2,22-2,07 (m, 3H), 1,95 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,79-1,70 (m, 2H), 1,61-1,55 (m, 3H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 10,81 (s, 1H), 8,41 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,35 (s, 2H), 8,09 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,65 (dd, J = 8,0, 1,6 Hz, 1H), 7,55 344 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,40 (d, J 473 = 8,8 Hz, 1H), 4,40-4,33 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,24-2,06 (m, 2H), 1,96 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 1,76-1,52 (m, 2H), 1,24 (s, 9H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,35 (s, 2H), 8,31 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,75 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,26 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H), 4,38-4,32 345 554 (m, 2H), 4,01 (s, 1H), 3,31 (s, 2H), 3,13 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 2,68 (t, J = 2,0 Hz, 1H), 2,68- 2,51 (m, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,23-2,06 (m, 2H), 1,96 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 1,85-1,78 (m, 2H), 1,63-1,54 (m, 4H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,35 (s, 2H), 8,30 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,23 (dd, J = 8,0, 1,6 Hz, 1H), 346 484 4,38-4,32 (m, 2H), 2,89-2,56 (m, 4H), 2,49-2,44 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,34-2,32 (m, 1H), 2,23-2,06 (m, 4H), 1,96 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 1,86-1,78 (m, 2H), 1,62-1,53 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,36 (s, 2H), 7,96 (d, J = 2,0Hz, 1H), 7,60 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H). 7,47 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,46-4,42 (m, 347 3H), 4,30-4,22 (m, 3H), 4,07- 526 4,04 (m, 1H), 3,74 (t, J = 8,8 Hz, 4H), 3,32-3,26 (m, 1H), 2,45 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,36-2,25 (m, 2H), 2,12-2,09 (m, 2H), 1,74-1,71 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,44 (s, 2H), 7,96 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,60 (dd, J = 8,4, 1,6 Hz, 1H). 7,54 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,46-4,42 (m, 348 3H), 4,30-4,22 (m, 3H), 4,07- 496 4,04 (m, 1H), 3,64 (t, J = 8,4 Hz, 4H), 3,25 (s, 3H), 2,40 (s, 3H), 2,37 (m, 1H), 2,35- 2,27 (m, 2H), 2,25-2,22 (m, 2H), 1,87-1,73 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,38-8,25 (m, 3H) , 7,75 (d, J = 1,34 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 7,25 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8,19 Hz, 1H), 7,25 (dd, J = 8,19, 1,48 Hz, 1H), 4,35 (dt, 349 J = 13,57, 6,65 Hz, 2H), 2,92 512 (d, J = 15,58 Hz, 3H), 2,43 (s l, 5H), 2,35 (s, 3H), 2,24 - 2,15 (m, 1H), 2,15-2,05 (m, 1H), 1,96 (t, J = 6,72 Hz, 2H), 1,87 (s l, 2H), 1,62 - 1,40 (m, 4H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,45-8,18 (m, 3H), 7,75 (d, J = 1,61 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,25 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 7,24 (dd, J = 8,19, 1,75 Hz, 1H), 4,48-4,30 350 (m, 4H), 4,35 (dt, J = 13,57, 511 6,65 Hz, 2H), 2,92 (d, J = 15,58 Hz, 3H), 2,43 (s l, 5H), 2,42-2,29 (m, 5H), 2,24 - 2,15 (m, 1H), 2,15-2,05 (m, 1H), 2,02-1,96 (m, 3H), 1,80 (s l, 4H), 1,61 - 1,40 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,45-8,26 (m, 3H), 8,02 (d, J = 1,61 Hz, 1H), 7,60- 7,48 (m, 2H), 7,38 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 4,42-4,30 (m, 2H), 4,11 (s l, 2H), 3,78 (s l, 351 511 2H), 3,52 (d, J = 16,39 Hz, 4H), 2,36 (s, 3H), 2,20 (d, J = 5,10 Hz, 1H), 2,12 (d, J = 6,98 Hz, 1H), 1,96 (t, J = 6,72 Hz, 2H), 1,71 (t, J = 5,10 Hz, 4H), 1,62-1,52 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,45-8,22 (m, 3 H), 7,87 (s l, 1H),7,53 (d, J = 7,25 Hz, 1H),7,43-7,32 (m, 2H), 4,91 (s l, 1H), 4,46-4,27 (m, 2H), 352 471 4,23 (s l, 1H), 3,68-3,14 (m, 3H), 3,33-3,24 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,05-2,24 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,72 Hz, 3H), 1,79 (s l, 1H),1,62-1,47 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 11,91 (s l, 1H), 8,41- 8,26 (m, 3H), 7,81 (s, 1H), 7,55 (d, J = 7,25 Hz, 1H), 7,50 (s l, 1 H), 7,41 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 7,34-7,26 (m, 353 1H), 4,52 (d, J = 40 Hz, 2H), 507 4,41-4,29 (m, 2H), 3,70 (s l, 2H), 2,70 (s l, 2H), 2,62 (s l, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,26-2,16 (m, 1H), 2,15-2,07 (m, 1H), 1,97 (t, J = 6,72 Hz, 2H), 1,64-1,51 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,38-8,25 (m, 3H), 7,75(d, J = 1,34 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 7,25 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 8,19 Hz, 1H), 7,25 (dd, J = 8,19, 1,48 Hz, 354 1H), 4,35 (dt, J = 13,57, 6,65 538 Hz, 2H), 2,92 (d, J 15,58 Hz, 3H), 2,43 (s l, 5H), 2,35 (s, 3H), 2,15-2,24 (m, 1H), 2,05- 2,15 (m, 1H), 1,96 (t, J = 6,72 Hz, 2H), 1,87 (s l, 2H), 1,40- 1,62 (m, 4H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,97 (s, 1H), 8,65 (s l, 1H), 8,47-8,47 (m, 3H), 7,86 (d, J = 1,34 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 7,25 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 8,06 Hz, 1H), 7,38-7,32 (m, 355 519 1H), 4,78 (s, 2H), 4,41-4,30 (m, 2H), 3,82 (s l, 2H), 3,04- 2,93 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,26-2,16 (m, 1H), 2,15 - 2,07 (m, 1H), 1,97 (t, J = 6,72 Hz, 2H), 1,64-1,51 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,42-8,31 (m, 3H), 7,87 (d, J = 1,34 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 7,52 Hz, 1H),7,43 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 8,33, 1,88 Hz, 1H), 7,14 (s, 356 507 1H), 6,90 (s, 1H), 4,73 (s, 2 H), 4,43-4,29 (m, 2H), 4,12- 4,03 (m, 2H), 3,92 (s l, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,26-2,16 (m, 1H), 2,15 - 2,07 (m, 1H), 1,97 (t, J = 6,72 Hz, 2H), 1,64-
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1,48 (m, 2H). H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1
8,38 (s, 2H), 7,69-7,74 (m, 1H), 7,53 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 1,61, 8,33 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 6,72 Hz, 1H), 4,42-4,53 (m, 1H), 4,32 357 (t, J = 6,18 Hz, 1H), 3,88 (d, 526 J = 11,28 Hz, 1H), 3,74 (t, J = 10,61 Hz, 2H), 3,28 (s l, 2H), 2,73 (d, J = 11,55 Hz, 3H), 2,32-2,49 (m, 8H), 2,07- 2,22 (m, 3H), 1,59-1,72 (m, 3H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,85 (s l, 1H), 8,42 (s l, 1H), 8,35 (s, 2H), 7,91 (d, J = 16,39 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 6,18 Hz, 1H), 7,35-7,47 (m, 2H), 4,34 (d, J = 6,45 Hz, 358 510 2H), 3,38-3,55 (m, 4H), 3,31 (s l, 1H), 3,24 (s l, 1H), 3,17 (s l, 1H), 3,08 (s l, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,06-2,25 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,45 Hz, 5H), 1,86 (s l, 1H), 1,50 - 1,63 (m, 2H). H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 1
8,49 (d, J = 4,03 Hz, 1H), 8,38 (s, 2H), 7,79 (d, J = 1,61 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 7,43-7,47 (m, 1H), 7,29 359 (s, 2H), 5,35 (d, J = 6,72 Hz, 518 1H), 4,87 (s l, 2H), 4,49 (d, J = 6,98 Hz, 1H), 4,32 (s, 1H), 3,94 (s l, 2H), 3,17 (t, J = 5,78 Hz, 2H), 2,37-2,47 (m, 5H), 2,18-2,26 (m, 2H), 1,67
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ (s, 1H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,31-8,38 (m, 3H), 7,80 (d, J = 1,53 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 7,32 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 8,24 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 1,53, 8,24 Hz, 1H), 4,52 (s l, 360 2H), 4,30-4,42 (m, 2H), 2,41 523 (t, J = 5,49 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,20 (d, J = 7,32 Hz, 1H), 2,11 (d, J = 7,02 Hz, 1H), 1,96 (t, J = 6,71 Hz, 2H), 1,57 (dd, J = 3,97, 7,02 Hz, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,80 (s l, 1H), 8,54 (s l, 1H), 8,36 (s, 2H), 7,81 (s l, 1H), 7,62 (s l, 1H), 7,46 (d, J = 8,19 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 7,66 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 361 510 6,72 Hz, 2H), 3,69 (dd, J = 4,84, 13,03 Hz, 2H), 3,27 (s l, 2H), 2,92 (s l, 4H), 2,31- 2,40 (m, 3H), 2,08-2,28 (m, 2H), 1,98-2,02 (m, 2H), 1,50- 1,69 (m, 8H) H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1
8,36 (s, 2H), 7,72 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,33 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,19 Hz, 1H), 5,73 (s l, 1H), 5,31 (d, J = 362 6,85 Hz, 1H), 4,40-4,50 (m, 526 2H), 4,24-4,33 (m, 1H), 3,98 (s l, 1H), 3,85 (d, J = 9,67 Hz, 2H), 2,99-3,15 (m, 2H), 2,86 (s l, 1H), 2,26-2,51 (m, 5H), 2,04-2,21 (m, 2H), 1,53-1,63
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,50 (d, J = 1,88 Hz, 1H), 8,36 (s, 2 H), 8,22 (s l, 1H), 7,94 (d, J = 8,06 Hz, 363 1H), 7,56 (s l, 1H), 6,71 (d, J 360 = 9,13 Hz, 1H), 4,35 (s l, 2H), 3,80 (s, 3 H) 2,36 (s, 3H), 2,24-2,04 (m, 2H),1,02-1,86 (m, 2H), 1,66-1,45 (m, 2H). 1 H RMN (DMSO-d6, 400MHz) δ 8,35 (s, 2H), 8,33 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,55 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 1,2 Hz, 2H), 5,19 (m l, 1H), 5,08 (m l, 1H), 364 4,39-4,33 (m, 2H), 3,97 (m l, 487 1H), 3,90 (m l, 1H), 3,78-3,76 (m, 1H), 3,70-3,65 (m l, 1H), 3,30-3,23 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,22 - 2,06 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,61-1,54 (m, 2H). 1 H RMN (DMSO-d6, 400MHz) δ 8,35 (s, 2H), 8,33 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,55 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,37 (d, J = 1,2 Hz, 2H), 4,94 365 (m l, 2H), 4,39-4,33 (m, 2H), 487 4,09 (m l, 1H), 3,99 (m l, 1H), 3,60-3,56 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,22 - 2,06 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,61-1,54 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6 + D2O) δ 8,35 (s, 2H), 7,91 (s, 1H), 7,44 (s, 2H), 4,40- 4,33 (m, 2H), 4,5-4,02 (m, 2H), 3,90-3,85 (m, 3H), 366 496 3,74-3,72 (m, 2H), 3,52 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,22 - 2,06 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,61-1,54 (m, 2H). 1 H RMN (DMSO-d6, 400MHz) δ 8,65 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 8,35 (s, 2H), 8,13 (s, 1H), 7,7.56-7,53 (m, 3H), 367 4,40-4,33 (m, 2H), 3,63 (t, J 507 = 4,4 Hz, 4H), 2,84 (t, J = 4,4 Hz, 4H), 2,35 (s, 3H), 2,22- 2,06 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,61-1,54 (m, 2H). 1 H RMN (DMSO-d6, 400MHz) δ 8,52 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 8,35 (s, 2H), 8,13 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,66 (dd, J = 2,0, 2,0 Hz, 1H), 7,56 (d, 368 J = 7,2 Hz, 1H), 7,47 (d, 437 J=8,8 Hz, 1H), 7,22 (s l, 2H), 4,40-4,33 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,22-2,06 (m, 2H), 1,96 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,61-1,54 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,63 (d, J = 7,32 Hz, 1H), 8,33 (s, 2H), 8,11 (s, 369 1H), 7,58-7,49 (m, 2H), 7,44 521 (d, J = 7,93 Hz, 1H), 4,29 (s l, 1H), 4,19-4,09 (m, 1H), 3,69-3,54 (m, 4H), 2,83 (s l,
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 4H), 2,34 (s, 3H), 1,90 (s l, 1H), 1,81 (d, J = 8,24 Hz, 2H), 1,67 (s l, 4H), 1,36 (s l, 1H), 1,23 (s, 1H). 1 H RMN (400MHz, CD3OD) δ 8,54 (s, 2H), 8,01 (s, 1H), 7,69-7,62 (m, 2H), 5,52 (s, 2H), 4,64-4,59 (m, 2H), 3,88- 370 513 3,84 (m, 2H), 2,57-2,44 (m, 5H), 2,31-2,24 (m, 2H), 1,92- 1,83 (m, 2H), 1,56-1,49 (m, 4H). Esquema 51 Passo 1: Exemplo 371A
[0572] A mistura de 2-fluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)piridina (1,0 g, 4,5 mmol), 3-bromo-2-metoxipiridina (930 mg, 4,9 mmol), Pd(dppf)Cl2 (320 mg, 0,45 mmol) e Na 2CO3 (950 mg, 9,0 mmol) em dioxano:H2O= 4:1 (50 mL) foi agitada a 110 oC sob atmosfera de N2 durante a noite. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e água (50 mL) foi adicionada. A mistura foi extraída com EtOAc (20 mL x3), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas; o resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel eluindo com éter de petróleo: EtOAc = 5:1 para originar o Exemplo 371A (660 mg, 72%) como um sólido branco.
Passo 2: Exemplo 371
[0573] A mistura de hidrocloreto de (1S, 3S)-N1-(5- (metiltio)pirimidin-2-il)ciclopentano-1,3-diamina (100 mg, 0,38 mmol), Exemplo 371A (86 mg, 0,42 mmol) e Cs2CO3 (376 mg, 1,15 mmol) em DMSO (5 mL) foi agitada a 130 oC durante 2 dias. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e água (10 mL) foi adicionada. A mistura foi extraída com EtOAc (10 mL x5), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para originar o Exemplo 371 (10 mg, 6,4%). LCMS [M+H]+ = 409.
[0574] 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,41 (s, 2H), 8,20-8,17 (m, 2H), 8,09 (s, 1H), 7,82 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 7,13-7,07 (m, 2H), 4,51-4,49 (m, 1H), 4,29-4,27 (m, 1H), 3,99 (s, 1H), 2,41-2,33 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,19-2,15 (m, 2H), 1,78-1,75 (m, 1H). Esquema 52 Passo 1: Exemplo 372A
[0575] A mistura de 2-fluoro-4-iodopiridina (200 mg, 0,9 mmol), piridin-2(1H)-ona (102 mg, 1,1 mmol), CuI (17 mg, 0,09 mmol), N,N'- Dimetil-1,2-ciclo-hexanodiamina (19 mg, 0,17 mmol) e K3PO4 (381 mg, 1,8 mmol) em DMSO (5 mL) foi agitada a 100 oC sob atmosfera de N2 durante 3 h. A mistura foi resfriada e água (20 mL) foi adicionada. A mistura foi extraída com EtOAc (20 mL x3), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas deu produto em bruto, que foi purificado por cromatografia em sílica gel eluindo com éter de petróleo: EtOAc = 5:1- 1:1 para originar o Exemplo 372A (97 mg, 57%) como um sólido esbranquiçado. Passo 2: Exemplo 372
[0576] A mistura do Exemplo 372A (50 mg, 0,19 mmol), hidrocloreto de (1S,3S)-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)ciclopentano-1,3- diamina (40 mg, 0,21 mmol) e Cs2CO3 (185 mg, 0,57 mmol) em DMSO (3 mL) foi agitada a 130 oC durante 2 dias. A mistura foi resfriada e água (10 mL) foi adicionada. A mistura foi extraída com EtOAc (10 mL x5), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas. O resíduo foi purificado por prep-HPLC para originar o Exemplo 372 (10 mg, 13%). LCMS [M+H]+ = 395. 1H RMN (400 MHz, CD 3OD) δ 8,39 (s, 2H), 7,99 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,70-7,64 (m, 2H), 7,20 (s, 1H), 7,05-7,03 (m, 1H), 7,67 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,58-6,54 (m, 1H), 4,51-4,47 (m, 1H), 4,29-4,27 (m, 1H), 2,42-2,33 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,20-2,14 (m, 2H), 1,78-1,74 (m, 1H).
[0577] Usando os procedimentos acima, o seguinte exemplo foi sintetizado: LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (CD3OD, 400MHz) δ 8,42 (s, 2H), 8,11-8,10 (d, J= 2,0 Hz, 1H), 7,99-7,96 (dd, J = 2,0 Hz, J= 2,4 Hz 1H), 7,97-7,96 (d, J= 2,4 Hz, 1H), 7,69-7,64 (m, 2H), 7,16- 373 7,13 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 6,68- 395 6,66 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,55-6,51 (m, 1H), 4,52-4,49 (t, J = 6,8 Hz 1H), 4,31-4,28 (m, 1H), 2,43-2,33 (m, 2H), 2,33(s, 3H), 2,21-2,15 (m, 2H), 1,82-1,74 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (CD3OD ,400 MHz) δ 8,49 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 8,36 (s, 2H), 8,23 (dd, J = 9,5, 2,1 Hz, 1H), 7,83 (dd, J = 7,2, 1,9 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 9,5 375 409 Hz, 1H), 6,49 (t, J = 6,9 Hz, 1H), 4,51 – 4,39 (m, 1H), 4,24 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 3,64 (s, 3H), 2,46 – 2,25 (m, 5H), 2,21 – 2,03 (m, 2H), 1,80 – 1,65 (m, 2H).
Esquema 54 Método geral 1 6'-cloro-5-metóxi-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (Exemplo 400A)
[0578] Uma mistura do composto 2-cloro-5-iodopiridina (191 mg, 0,8 mmol, 1,0 eq), 5-metoxipiridin-2(1H)-ona (100 mg, 0,8 mmol, 1,0 eq), CuI (15 mg, 0,08 mmol, 0,1 eq), N,N'-Dimetil-1,2-ciclo-hexanodiamina (23 mg, 0,16 mmol, 0,2 eq) e K3PO4 (339 mg, 1,6 mmol, 0,2 eq) em DMSO (5 mL) foi agitada a 120 oC sob atmosfera de N2 durante a noite. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e água (20 mL) foi adicionada. A mistura foi extraída com EtOAc (20 mL x2), As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em sílica gel eluindo com PE: EA = 1:1 para originar 400A (60 mg, 0,23 mmol, 32%) como um sólido esbranquiçado. Procedimento geral 2 5-metóxi-6'-(((1S,3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (Exemplo 400)
[0579] A mistura de 400A (53 mg, 0,22 mmol, 1,0 eq), 131C (50 mg, 0,22 mmol, 1,0 eq), tBuXphos Pd G3 (18 mg, 0,022 mmol, 0,1 eq) e tBuOK (49 mg, 0,44 mmol, 0,2 eq) em dioxano (5 mL) foi agitada a 110oC sob atmosfera de N2 durante a noite. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e filtrada. O filtrado foi concentrado e purificado por Prep-TLC e depois Prep-HPLC para originar o composto 400 (50 mg, 53%, sal de TFA) como um sólido esbranquiçado. LCMS [M+H]+ =
425.
[0580] 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,36 (s, 2H), 8,09 (s, 1H), 7,95 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 7,50 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,10 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 6,61 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 4,48-4,46 (m, 1H), 4,25-4,23 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 2,40-2,35 (m, 5H), 2,16-2,13 (m, 2H), 1,76-1,74 (m, 2H).
[0581] Usando os procedimentos acima, o seguinte exemplo foi sintetizado: 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ: 8,35 (s, 2H), 7,88-7,85 (m, 2H), 7,06-7,04 (m, 1H) 4,47- 4,43 (t, J = 14 Hz, 1H), 4,23- 4,19 (m, 1H),3,67-3,64 (t, J = 401 399,4 11,2 Hz, 2H),2,53-2,50 (t, J = 12,4 Hz, 2H), 2,40-2,2.28 (m, 5H), 2,14-2,09 (m, 2H), 2,00- 1,93 (m, 4H) , 1,75-1,69 (m, 2H). Esquema 55
5-hidroxi-6'-(((1S,3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (Exemplo 402)
[0582] A uma solução de 400 (50 mg, 0,12 mmol, 1,0 eq) em DCM (10 mL) foi adicionado BBr3 (1 mL) a 0 ºC. A mistura foi agitada à ta durante a noite, extinta com MeOH e depois concentrada. O resíduo foi purificado por Prep-TLC e depois Prep-HPLC para originar o composto Exemplo 402 (50 mg, 53%, sal de TFA) como um sólido esbranquiçado: 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,37 (s, 2H), 8,06 (s, 1H), 7,94 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 7,45 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 7,12-7,09 (m, 2H), 6,58 (d, J= 9,6 Hz, 1H), 4,49-4,46 (m, 1H), 4,31-4,28 (m, 1H), 2,42-2,30 (m, 5H), 2,17-2,13 (m, 2H), 1,79-1,73 (m, 2H). [M+H]+= 411. Esquema 56 4-hidroxi-5'-(((1S,3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)-2H-[1,2'-bipiridin]-2-ona (Exemplo 403)
[0583] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 1, Método Geral 2 e Método Geral 3 a partir do material de partida 4- 1 (benzilóxi)piridin-2(1H)-ona originaram o composto do título: H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,32 (s, 2H), 7,89 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,45 (d, J =
7,5 Hz, 2H), 7,39 (dd, J = 9,0, 2,7 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,13 (dd, J = 7,5, 2,6 Hz, 1H), 5,88 (d, J = 8,6, 2,5 Hz, 1H), 4,48 – 4,25 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,32 – 2,19 (m, 2H), 2,06 – 1,92 (m, 2H), 1,70 – 1,52 (m, 2H). [M+H]+ = 411,49. Esquema 57 Procedimento geral 4 6'-cloro-4-metóxi-3,3'-bipiridina (404)
[0584] Uma mistura de ácido (6-cloropiridin-3-il)borônico (1,0 g, 6,4 mmol, 1 eq), 3-bromo-4-metoxipiridina (1,2 g, 6,4 mmol, 1 eq), Pd(dppf)Cl2 (468 mg, 0,64 mmol, 0,1 eq) e Na2CO3 (1,3 g, 12,8 mmol, 2 eq) em dioxano (8 mL) e água (2 mL) foi agitada a 105 oC sob atmosfera de N2 durante a noite. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e extinta com água (10 mL). A mistura foi extraída com EtOAc (20 mL x3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel eluindo com éter de petróleo: EtOAc = 5:1 para originar o composto 404 (200 mg, 14%) como um sólido marrom.
[0585] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: Estrutura Ex. # 405
Estrutura Ex. # 406 407 Esquema 58 2-cloro-5-(2,2,2-trifluoroetóxi)pirimidina (408)
[0586] A uma solução de 2-cloropirimidin-5-ol (0,5 g, 3,8 mmol, 1,0 eq) e CS2CO3 (1,49 g, 4,6 mmol, 1,2 eq) em DMF (20 mL) foi adicionado trifluorometanossulfonato de 2,2,2-trifluoroetila (0,97 g, 4,2 mmol, 1,1 eq). A suspensão resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h e depois dividida entre EtOAc (30 mL) e água (80 mL). A camada aquosa separada foi extraída com EtOAc (20 mL x3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas para originar 408 (0,74 g), que foi usado no próximo passo diretamente. LCMS [M+H]+ = 213. Esquema 59 2-cloro-5-(difluorometóxi)pirimidina (409)
[0587] Uma solução de 2-cloropirimidin-5-ol (101,6 g, 0,76 mol, 1,0 eq) em DMF (2000 mL) foi carregada com Cs2CO3 (300 g, 0,92 mol, 1,2 eq) e depois agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. 2-Cloro-2,2-
difluoroacetato de sódio (340 g, 2,3 mol, 3,0 eq) foi adicionado, e a mistura reacional foi agitada a 100 °C durante 3,5 h. A mistura reacional foi vertida em água (5 L) e extraída com EA (3 x 1 L). As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na 2SO4 anidro e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 10:1) para originar 409 (70 g). Esquema 60 2-cloro-5-ciclopropilpirimidina (410A)
[0588] À solução de 5-bromo-2-cloropirimidina (100 g, 518 mmol, 1,0 eq), ácido ciclopropilborônico (53 g, 616 mmol, 1,2 eq) e Pd(dppf)Cl 2 (10 g, 13,7 mmol, 0,03 eq) em dioxano (1,5 L) foi adicionado Cs 2CO3 (250 g, 769 mmol, 1,5 eq) e agitado a 110 °C durante 12 h sob N 2. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente e filtrada. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluir com hexano:acetato de etila = 15:1) para originar 410A (55 g) como um sólido amarelo. LCMS [M+H]+ = 155. Procedimento geral 5 ((1S, 3S)-3-((5-Ciclopropilpirimidin-2- il)amino)ciclopentil)carbamato de terc-butila (410B)
[0589] Uma mistura de 410A (40 g, 260 mmol, 1 eq), ((1S,3S)-3- aminociclopentil)carbamato de terc-butila (55 g, 275 mmol, 1,05 eq) e
DIPEA (105 g, 814 mmol, 3,13 eq) em DMSO (400 mL) foi agitada a 110 °C durante 12 h sob N2. A mistura foi depois resfriada até à temperatura ambiente e diluída com água (1000 mL). A mistura resultante foi extraída com EtOAc (100 mL x 3), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gel (eluindo com hexano:acetato de etila = 5:1 a 4:1) para originar o composto 410B (55 g) como um sólido pálido. LCMS [M+H]+ = 319. Procedimento geral 6 (1S, 3S)-N1-(5-ciclopropilpirimidin-2-il)ciclopentano-1, 3-diamina (410C)
[0590] A uma solução de 410B (44 g, 13,8 mmol, 1,0 eq) em MeOH (250 mL) foi adicionado HCl (4 M em dioxano, 250 mL) gota a gota e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2,5 h. Após a reação estar completa, a mistura foi concentrada até à secura sob vácuo. O resíduo foi redissolvido em MeOH (500 mL) e resina de permuta iônica (forma Ambersep® 900 OH-) foi adicionada para ajustar o pH até cerca de 8. A mistura foi separada por filtração e o filtrado foi concentrado para originar 410C (44,5) como um óleo amarelo. LCMS [M+H]+ = 219.
[0591] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: Estrutura Ex. # 411 412
Estrutura Ex. # 413 414 415 415A Esquema 61 2-bromo-5-(metiltio)piridina (416)
[0592] Uma solução de 2,5-dibromopiridina (1 g, 4,22 mmol, 1 eq) em THF (20 mL) foi resfriada até -78 °C sob N2. Depois, n-BuLi (2,5 M, 1,77 mL, 4,43 mmol, 1,05 eq) foi adicionado gota a gota a -78 °C. A mistura reacional foi agitada durante 20 minutos, seguida pela adição lenta de 1,2-dimetildissulfano (0,411 mL, 4,64 mmol, 1,1 eq). A mistura reacional foi agitada durante outra 1 hora antes da extinção por NH 4Cl saturado. A mistura reacional foi extraída com EA (100 mL) e água (100 mL) e, depois, lavada com salmoura. A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4 anidra. A mistura foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 10:1) para dar 416 (86,8 mg): ESI [M+H]+ = 204,1 1 H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,25 (t, J = 6,2 Hz, 1H), 7,41 (ddd, J = 8,9,
8,3, 1,6 Hz, 2H), 2,58 – 2,40 (m, 3H). Esquema 62 (1S,3S)-N1-(tieno[3,2-b]piridin-5-il)ciclopentano-1,3-diamina (417)
[0593] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 2 e Método Geral 6 a partir do material de partida 5-clorotieno[3,2-b]piridina permitiram a síntese do composto do título.
[0594] Usando os procedimentos acima, o seguinte exemplo foi sintetizado: 1 Estrutura Ex. # H RMN LC-MS (M+H)+ 418 224,3 Esquema 63 Procedimento geral 7 3-(6-cloropiridin-3-il)pirimidin-4(3H)-ona (419)
[0595] Uma solução de pirimidin-4(3H)-ona (1,5 g, 15,61 mmol, 1,0 eq), ácido (6-cloropiridin-3-il)borônico (2,9 g, 18,73 mmol, 1,2 eq), Cu(OAc)2 (7,9 g, 43,71 mmol, 2,8 eq), piridina (2,5 mL, 31,22 mmol, 2,0 eq) e peneiras moleculares de 4 Å (8 g) em DCM (60 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h. A mistura foi filtrada através de celite, e o filtrado foi concentrado e purificado por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc: 1:1) para obter o Exemplo 419 como um sólido amarelo (170 mg, rendimento de 5,3%).
[0596] 1 H RMN (400MHz, CDCl3) δ 8,43 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,97 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,80 (dd, J = 8,4, 2,8 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,59 (dd, J = 6,8, 0,8 Hz, 1H); MS (ESI+) m/z 208,0 (M+H) +
[0597] Usando os procedimentos descritos no Esquema 63, os seguintes exemplos foram preparados: Estrutura Ex. # 420 421 422 Esquema 64 (E)-3-(2-Fluoropiridin-4-il)acrilato de etila (423A)
[0598] A uma suspensão de NaH a 60% (1,54 g, 38,4 mmol, 1,2 eq) em THF (15 mL) foi adicionada gota a gota uma solução de 2- (etoxi(propóxi)fosforil)acetato de etila (8,6 g, 38,4 mmol, 1,2 eq) em THF a 0 °C sob atmosfera de N2. A mistura foi agitada a 0 °C durante 25 min seguida por adição de uma solução de 2-fluoroisonicotinaldeído (4,0 g, 32,0 mmol, 1,0 eq) em DMF (15 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h e, depois, extinta por NH4Cl aq. sat. a 0 °C. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4 e concentradas sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (PE para PE: EA = 1: 15) para dar 423A (3,0 g, rendimento de 50%) como um sólido branco. LCMS: m/z 196 [M+H] +, tr 2,890 min. 1H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,26 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 16,1 Hz, 1H), 7,29 – 7,26 (m, 1H), 7,00 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 4,30 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,35 (t, J = 7,1 Hz, 3H). 3-(2-Fluoropiridin-4-il)propanoato de etila (423B)
[0599] A uma solução de 423A (3,0 g, 20,5 mmol) em EtOH (20 mL) foi adicionado Pd/C a 10% (400 mg). O sistema reacional foi purgado com H2 e a mistura foi agitada sob atmosfera de H 2 durante a noite. O Pd/C foi separado por filtração e o filtrado foi concentrado sob vácuo para dar 423B (2,3 g, 76,7% de rendimento), que foi usado diretamente: LCMS: m/z 198,1 [M+H]+, tr 2,801 min. 1H-RMN (400 MHz, CDCl 3) δ 8,12 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,04 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 4,13 (p, J = 6,8 Hz, 2H), 3,03 – 2,97 (m, 2H), 2,66 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,24 (t, J = 6,7 Hz, 3H). ácido 3-(2-oxo-1,2-di-hidropiridin-4-il)propanoico (423C)
[0600] A um frasco de 100 mL com 423B (1,53 g, 7,77 mmol) foi adicionado HCl concentrado (5 mL). A mistura foi aquecida até 100 °C durante 16 h. A mistura foi depois resfriada até à temperatura ambiente e 2 mL de água foram adicionados. NaHCO3 sólido foi adicionado porção a porção para ajustar o pH até 6. A mistura foi extraída com i- PrOH a 30% em CHCl3, as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (MeOH/DCM) para dar 423C (1,6 g, 91% de rendimento), que foi usado no próximo passo diretamente. LCMS: m/z 167,8 [M+H]+; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,14 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,05 (dt, J = 5,3, 1,7 Hz, 1H), 6,82 – 6,76 (m, 1H), 3,01 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2,73 (t, J = 7,5 Hz, 2H). 3-(2-Oxo-1,2-di-hidropiridin-4-il)propanoato de metila (423D)
[0601] A um frasco de 100 mL com uma solução de 423C em bruto (1,6 g) em MeOH (28 mL) foi adicionado H2SO4 a 98% (0,15 mL). A reação foi aquecida até 90 °C durante 16 h e depois resfriada até à temperatura ambiente. NaCl aq. sat. foi adicionado à mistura acima, que foi extraída com i-PrOH a 30% em CHCl3. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4 e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (MeOH: DCM = 1:15) para dar o produto 423D (702 mg, rendimento 55%). LCMS: m/z 182,1 [M+H] +. Procedimento geral 8 3-(6'-Fluoro-2-oxo-2H-[1,3'-bipiridin]-4-il)propanoato de metila (423)
[0602] A um tubo selado foram adicionados 423D (100,0 mg, 0,55 mmol, 1,0 eq), 2-fluoro-5-iodopiridina (147 mg, 0,66 mmol, 1,2 eq), CuI (21,0 mg, 0,10 mmol, 0,2 eq), N,N'-Dimetil-1,2-ciclo-hexanodiamina (15,5 mg, 0,10 mmol, 0,2 eq) e K 2CO3 (151,0 mg, 1,10 mmol, 2,0 eq). Dioxano (3 mL) foi adicionado e a mistura resultante foi purgada com N 2 e agitada a 110 ºC durante 16 h. A mistura foi depois diluída com diclorometano e filtrada. O filtrado foi lavado com água e separado. A fase aquosa foi extraída com diclorometano três vezes. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na 2SO4, concentradas e purificadas por cromatografia em sílica gel para dar 423 (42 mg, 27,6% de rendimento). LCMS: m/z 278,08 [M+H] + Esquema 65
6'-Fluoro-2-oxo-2H-[1,3'-bipiridina]-5-carboxilato de metila (424A)
[0603] Uma mistura de 6-fluoropiridin-3-amina (1,1 g, 10 mmol, 1,0 eq) e 2-oxo-2H-piran-5-carboxilato de metila (1,5 g, 10 mmol, 1,0 eq) em EtOH (10 mL) foi agitada ao refluxo durante a noite e, depois, resfriada até à temperatura ambiente. O precipitado resultante foi coletado por filtração e purificado por cromatografia em sílica gel eluindo com éter de petróleo: EtOAc = 2:1 para originar o composto 424A (440 mg, 18%) como um sólido esbranquiçado. 6'-(((1S,3S)-3-((5-(Metiltio)pirimidin-2-il)amino)ciclopentil)amino)-2- oxo-2H-[1,3'-bipiridina]-5-carboxilato de metila (424B)
[0604] Métodos análogos àqueles descritos acima a partir do material de partida 131C e 424A originaram 424B. Procedimento geral 9 ácido 6'-(((1S, 3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)-2-oxo-2H-[1, 3'-bipiridina]-5-carboxílico (Exemplo 424)
[0605] A uma solução do composto 424B (100 mg, 0,22 mmol, 1,0 eq) em MeOH: H2O = 5:1 (10 mL) foi adicionado NaOH (35 mg, 0,88 mmol, 4,0 eq). A mistura foi agitada a 50 ºC durante 3 h e depois acidificada até pH = 5-6 após resfriamento até à temperatura ambiente. A mistura resultante foi concentrada e redissolvida em THF (50 mL). O sólido foi separado por filtração e o filtrado foi concentrado e triturado com EA: MeOH = 5:1 para originar o Exemplo 424 (90 mg, 93%) como um sólido amarelo-claro: 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8,35(s, 2H), 8,25s, 1H), 8,10 1H), 7,87 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,51 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 4,36-4,33 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,22-2,10 (m, 2H), 2,01-1,93 (m, 2H), 1,57-1,55 (m, 2H).
[0606] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,31 (s, 2H), 8,11 (dd, J = 9,6, 2,5 Hz, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 6,67 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,58-4,51 (m, 1H), 425 447,5 4,33-4,27 (m, 1H), 2,50 – 2,28 (m, 2H), 2,24 – 2,10 (m, 5H), 1,93 – 1,82 (m, 1H), 1,82 – 1,73 (m, 2H), 1,06 – 0,96 (m, 2H), 0,78 – 0,65 (m, 2H). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,40 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,25( d, J = 21,6 Hz, 2H), 8,11 (s, 1H), 8,06-8,03 (m, 1H), 7,87 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 9,2 Hz,1H), 6,63 426 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 4,8Hz, 1H), 3,86 (s, 3H), 2,40-2,32 (m, 2H) , 2,18 (t, J = 12,8 Hz, 2H) , 1,86-1,75 (m, 3H) , 0,99-0,97 (m, 2H) , 0,69 (d, J = 4,8 Hz, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ 8,37-8,36 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,19 (s, 2H), 8,10- 8,06(m, 2H), 8,04-8,03 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,85-7,83 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,00-6,97 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 6,64-6,62 (d, J 427 433,4 = 9,6 Hz, 1H), 4,46-4,42 (t, J = 13,6 Hz, 1H), 4,31-4,29 (t, J = 11,2 Hz, 1H), 2,39-2,31 (m, 2H), 2,15-2,11 (t, J = 16,4 Hz, 1H),1,83-1,72 (m, 3H), 0,98-0,94 (m, 2H), 0,68-0,64 (m, 2H). 1H RMN (400MHz, CD3OD) δ: 8,49-8,48 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,24-8,19 (m, 3H), 7,83- 7,81 (m, 1H), 7,74-7,72 (m, 1H), 7,09-7,07 (d, J = 9,2 Hz, 428 1H), 6,88-6,47 (m, 2H), 4,47- 429 4,40 (m, 1H), 4,27-4,21 (m, 1H), 3,66-3,64 (d, J = 9,6 Hz 3H), 2,44-2,26 (m, 2H), 2,19- 2,07 (m, 2H), 1,77-1,65 (m, 2H). H-RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1
10,40 (s, 1H), 10,14 (s, 1H), 7,92 (s, 2H), 7,36 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,28 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 4,62 (s, 1H), 429 467 4,31 (s, 1H), 2,87 (q, J = 7,1 Hz, 3H), 2,72 (d, J = 7,5 Hz, 3H), 2,44 (s, 3H), 2,43 – 2,25 (m, 3H), 2,08 (dt, J = 14,2, 7,7 Hz, 1H), 1,97 – 1,71 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) : δ 8,378 (s, 2H), 8,12(s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,73-7,72 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,10-7,08 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 430 439 6,92-6,90 (m, 1H), 4,48 (s, 1H), 4,29 (s, 1H), 2,38-2,33 (m,5H), 2,16-2,14 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 1,76-1,75 (d, J = 3,6 Hz, 2H). Esquema 66 2-cloro-5-((trimetilsilil)etinil)piridina (431A)
[0607] A uma solução desgaseificada de 2-cloro-5-iodopiridina (5 g, 20,88 mmol, 1,0 eq) em trietilamina (35 mL) foram adicionados etiniltrimetilsilano (3,2 mL, 22,97 mmol, 1,1 eq), CuI (397,7 mg, 2,09 mmol, 0,1 eq) e Pd(PPh3)2Cl2 (1,5 g, 2,09 mmol, 0,1 eq). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h sob Nitrogênio. Água (150 mL) foi adicionada e o sistema foi extraído com Et2O (100 mL x2). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e depois concentradas sob pressão reduzida. O 431A em bruto resultante (6,2 g, sólido preto) foi usado para o passo seguinte sem purificação adicional. MS (ESI+) m/z 209,9 (M+H) +
2-cloro-5-etinilpiridina (431B)
[0608] Uma solução de 431A (bruto, 20,88 mmol, 1,0 eq) e K2CO3 (2,9 g, 20,88 mmol, 1,0 eq) em metanol (50 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. Após remoção do solvente sob pressão reduzida, DCM foi adicionado (150 mL) e a mistura foi filtrada. A filtração foi concentrada e purificada por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc = 10:1) para originar o composto 432B como um sólido amarelo (1,0 g, rendimento de 34,8% em dois passos). MS (ESI+) m/z 138,1 (M+H)+; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ: 8,55 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,98 (dd, J = 8,4, 2,4 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,56 (s, 1H). 2-cloro-5-(1-((trimetilsilil)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)piridina (431C)
[0609] Uma solução de 431B (345 mg, 2,54 mmol, 1,0 eq), (azidometil)trimetilsilano (327 mg, 2,54 mmol, 1,0 eq), CuI (48 mg, 0,25 mmol, 0,1 eq), NEt3 (513 mg, 5,08 mmol, 2,0 eq) em THF (10 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reacional foi depois concentrada para originar 431C (673 mg) que foi usado sem purificação adicional. 2-cloro-5-(1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piridina (431)
[0610] A uma solução de 431C em THF (10 mL) foi adicionado TBAF (0,80 g, 3,0 mmol, 1,2 eq) e a solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (PE: EA = 1:1) para originar 431 (150 mg). Esquema 67
2-cloro-5-(iodoetinil)piridina (432A)
[0611] LDA (4,4 mL, 8,73 mmol, 1,2 eq) foi adicionado gota a gota a uma solução de 431B (1,0 g, 7,27 mmol, 1,0 eq) em THF (15 mL) a - 78 °C sob nitrogênio. A mistura foi agitada a -78 °C durante 0,5 horas, depois uma solução de iodo (2,0 g, 8,00 mmol, 1,1 eq) em THF (10 mL) foi adicionada gota a gota. A solução resultante foi lentamente aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante outras 5 h e, depois, extinta por adição de solução sat. de cloreto de amônio (25 mL). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa extraída com EtOAc (50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com Na2S2O3 (25 mL x2) e salmoura (30 mL), secas sobre Na 2SO4 e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc: 20:1) para originar 432A como sólido amarelo (1,56 g, 82,1% de rendimento). MS (ESI+) m/z 263,9 (M+H)+; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ: 8,51 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,94 (dd, J = 8,3, 2,4 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,3 Hz, 1H). 2-cloro-5-(5-iodo-1-((trimetilsilil)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)piridina (432B)
[0612] CuI (108,4 mg, 5,69 mmol, 1,0 eq) e Et 3N (1,6 mL, 11,39 mmol, 2,0 eq) foram agitados em THF (60 mL) à temperatura ambiente sob nitrogênio durante 1 hora. Uma solução de 432A (1,5 g, 5,69 mmol, 1,0 eq) e (azidometil)trimetilsilano (735,8 mg, 5,69 mmol, 1,0 eq) em THF (20 mL) foi adicionada em uma porção única à solução catalisadora acima. Depois, a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A reação foi extinta por adição de solução de cloreto de amônio a 10% (15 mL) e concentrada. O resíduo foi lavado com água (30 mL) e EtOAc (8 mL) para originar 432B como sólido amarelo (1,6 g, rendimento de 72,7%), que foi usado no próximo passo diretamente. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 8,74 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,14 (dd, J = 8,3, 2,5 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 3,80 (s, 2H), 0,00 (s, 9H). MS (ESI+) m/z 393,0 (M+H)+ 2-cloro-5-(5-iodo-1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piridina (432C)
[0613] A uma solução de 432B (1,6 g, 4,07 mmol, 1,0 eq) em THF (70 mL) foi adicionada água (0,15 mL, 8,15 mmol, 2,0 eq), seguida por adição de TBAF (4,9 mL, 4,89 mmol, 1,2 eq) gota a gota a 0 °C. A mistura reacional resultante foi agitada a 0 °C durante 15 min e vertida em água (100 mL), que foi extraída com DCM (300 mL). A camada orgânica separada foi lavada com salmoura (80 mL), seca sobre Na 2SO4 e concentrada. O resíduo foi purificado por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc: DCM: 2:1:1) para obter 432B como sólido amarelo (810 mg, rendimento de 62,3%). MS (ESI+) m/z 320,9 (M+H)+; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ: 8,91 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 8,32 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,13 (s, 3H). 2-cloro-5-(5-fluoro-1-metil-1H-1,2,3-triazol-4-il)piridina (432)
[0614] Uma suspensão de 406B (800 mg, 2,50 mmol, 1,0 eq) e KF (1,5 g, 25,00 mmol, 10,0 eq) em acetonitrila/água (14 mL, 1:1) foi reagida em reator de micro-ondas a 160 °C durante 20 min. Após evaporação sob pressão reduzida, o resíduo foi dissolvido com DCM (300 mL) e filtrado. O filtrado foi concentrado e purificado por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc: DCM: 2:1:1) para originar o Exemplo 432 como sólido amarelo (220 mg, rendimento de 41,4%). MS (ESI+) m/z 213,0 (M+H) +; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,77 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,17 (dd, J = 8,3, 2,4 Hz, 1H), 7,67 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,01 (s, 3H).
Esquema 68 (6-bromopiridin-3-il)carbamato de 4-nitrofenila (433A)
[0615] A uma solução de 6-bromopiridin-3-amina (600 mg, 3,47 mmol, 1,0 eq) em acetonitrila (20 mL) foi adicionado carbonocloridato de 4-nitrofenila (768,9 mg, 3,81 mmol, em 4 mL de acetonitrila, 1,1 eq) gota a gota, e a temperatura do sistema foi mantida abaixo de 40 °C. Após a adição, a mistura foi continuada a agitar à temperatura ambiente durante 30 min e foi observado um precipitado amarelo. O precipitado foi filtrado e lavado com acetonitrila (2 mL) para originar 433A como um sólido amarelo (1,1 g, ~50% de pureza), que foi usado no próximo passo sem purificação adicional. Procedimento geral 10 3-(6-bromopiridin-3-il)-1-metilimidazolidina-2,4-diona (Exemplo 433)
[0616] Uma solução de hidrocloreto de 2-(metilamino)acetato de metila (454,1 mg, 3,25 mmol, 1,0 eq) e DIPEA (1,7 mL, 9,76 mmol, 3,0 eq) em acetonitrila (15 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 15 min. 433A (1,1 g, 3,25 mmol, 1,0 eq) foi adicionado, e o sistema resultante foi continuado a agitar à temperatura ambiente durante 10 min. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc: 1:1) para originar o composto Exemplo 433 como um óleo amarelo (510 mg, rendimento de 54,6% por dois passos). MS (ESI+) m/z 270,1 (M+H) +; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 8,48 - 8,52 (m, 1H), 7,82 – 7,89 (m, 2H), 4,19 (s, 2H), 3,00 (s, 3H). Esquema 69
(2-Metoxietil)glicinato de metila (434A)
[0617] A uma solução de 2-metoxietan-1-amina (2,9 mL, 33,36 mmol, 1,0 eq) em THF (40 mL) foi adicionado gota a gota Et3N (9,3 mL, 66,90 mmol, 2,0 eq), seguido pela adição de 2-bromoacetato de metila (2,8 mL, 29,58 mmol, 0,9 eq). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 19 min. A mistura reacional foi diluída com EA, depois lavada com água e salmoura. A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM: MeOH = 20:1) para originar 434A (830 mg) como um líquido incolor. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,62 (s, 3H), 3,38-3,34 (m, 4H), 3,23 (s, 3H), 2,65 (t, J = 5,6 Hz, 2H). 3-(6-bromopiridin-3-il)-1-(2-metoxietil)imidazolidina-2,4-diona (Exemplo 434)
[0618] Métodos análogos àqueles descritos acima a partir do material de partida 434A e 433A originaram o Exemplo 434 como um sólido amarelo: 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,59 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 8,5, 2,7 Hz, 1H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,22 (s, 2H), 3,70 – 3,64 (m, 2H), 3,64 – 3,60 (m, 2H), 3,39 (s, 3H). ESI (M+H) + = 314,3. Esquema 70 1-(4-iodofenil)piridin-2(1H)-ona (435)
[0619] Uma solução de 1,4-di-iodobenzeno (1,0 g, 3,0 mmol, 1,0 eq), piridin-2(1H)-ona (288 mg, 3 mmol, 1,0 eq), CuI (58 mg, 0,3 mmol,
0,1 eq) e K2CO3 (828 mg, 6 mmol, 2,0 eq) em DMSO (10 mL) foi agitada a 130 °C sob N2 durante 2 h. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente e diluída com acetato de etila (30 mL). A mistura orgânica foi lavada com água e salmoura à vez, seca sobre Na 2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 10: 1 para EA) para originar 200 mg do Exemplo 435 como um sólido branco. ESI (M+H)+ = 298,09 Esquema 71 3-(2-Cloropiridin-4-il)-2,2-dimetilpropanoato de metila (436A)
[0620] Uma solução de isobutirato de metila (3,3 g, 32,0 mmol, 2,08 eq) em THF (25 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de LDA (17 mL, 34,0 mmol, 2,2 eq) em THF (50 mL) a -78 °C sob atmosfera de N2 ao longo de 15 min. A mistura resultante foi agitada a -78 °C durante 45 minutos e, depois, tratada com uma solução de 2-cloro-4- (clorometil)piridina (2,5 g, 15,4 mmol, 1,0 eq) em THF (6 mL) ao longo de 5 minutos . O banho de resfriamento foi removido, e a mistura reacional foi agitada durante 18 h à ta. Ácido clorídrico a 1,0 N foi adicionado gota a gota à solução acima (50 mL) para extinguir a reação. A fase orgânica foi separada, a fase aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre sulfato de sódio e concentradas sob vácuo. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna para proporcionar o composto 436A (3,2 g) como um óleo amarelo: LCMS: m/z 228,0. 1H
RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,33 – 8,21 (m, 1H), 7,16 – 7,07 (m, 1H), 6,98 (dd, J = 5,1, 1,5 Hz, 1H), 3,68 (s, 3H), 2,84 (s, 2H), 1,21 (s, 6H). 2,2-Dimetil-3-(2-oxo-1,2-di-hidropiridin-4-il)propanoato de metila (436B)
[0621] Uma solução de 436A (1,2 g, 5,3 mmol, 1,0 eq), acetato de sódio (868 mg, 10,6 mmol, 2,0 eq) em ácido acético (5,3 mL) foi aquecida em um reator de micro-ondas a 160 °C durante 1 h. A mistura foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi vertido em água. A fase aquosa foi extraída duas vezes com isopropanol a 15% em DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCO3 aq. sat. e secas sobre Na2SO4 e concentradas sob vácuo. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM: MeOH = 20: 1) para originar 436B (330 mg) como um sólido branco: ESI [M+H] + = 210,24. Procedimento geral 11 3-(6'-Cloro-2-oxo-2H-[1,3'-bipiridin]-4-il)-2,2-dimetilpropanoato de metila (436C)
[0622] Uma suspensão de 436B (330 mg, 1,58 mmol, 1,0 eq), 2- cloro-5-iodopiridina (567 mg, 2,37 mmol, 1,5 eq), N 1,N2-dimetilciclo- hexano-1,2-diamina (44,8 mg, 0,316 mmol, 0,2 eq), CuI (60 mg, 0,316 mmol, 0,2 eq) e K3CO3 (436 mg, 3,16 mmol, 2,0 eq) em dioxano (8 mL) foi agitada a 110 °C durante a noite sob N2. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EtOAc = 3: 1 a PE: EtOAc = 1: 1) para originar 436C (350 mg) como um óleo amarelo: ESI [M+H]+ = 321,77. Esquema 72
(E)-4-((dimetilamino)metileno)isocromano-1,3-Diona (437A)
[0623] Cloreto de fosforila (10 mL, 107 mmol, 2,1 eq) foi adicionado, com agitação, a uma solução de ácido 2-(carboximetil)benzoico (10 g, 50 mmol, 1,0 eq) em DMF (100 mL) a 0 °C. A mistura resultante foi agitada durante 1 h adicional e, depois, vertida em água gelada. O precipitado formado foi coletado por filtração e lavado com água para dar o 437A como um sólido amarelo (10 g). 1-Oxo-1H-isocromeno-4-carboxilato de metila (437B)
[0624] Gás de cloreto de hidrogênio seco foi passado através de uma solução em agitação de 437A (6,2 g, 0,03 mmol, 1,0 eq) em metanol (180 mL) à temperatura ambiente durante 2 h. A solução foi aquecida sob refluxo durante 2 h e depois concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com água e depois extraído com DCM (20 mL x3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (PE: EA = 3:1) para originar 437B (1,9 g). 2-(6-Cloropiridin-3-il)-1-oxo-1,2-di-hidroisoquinolina-4-carboxilato de metila (Exemplo 437)
[0625] Uma solução de 437B (0,83 g, 0,41 mmol, 1,0 eq) e 6- cloropiridin-3-amina (0,53 g, 0,41 mmol, 1,0 eq) em AcOH (15 mL) foi aquecida até 120 oC e agitada durante 2 h. O sistema foi resfriado até à temperatura ambiente e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (PE: EA = 10:1) para originar o Exemplo 437 (400 mg).
Esquema 73 Procedimento geral 12 2-(6-cloropiridin-3-il)piridazin-3(2H)-ona (438)
[0626] Uma mistura de 2-cloro-5-iodopiridina (5,95 g, 25 mmol, 1,0 eq), piridazin-3(2H)-ona (2,52 g, 26,3 mmol, 1,05 eq), CuI (475 mg, 2,5 mmol, 0,1 eq), trans-N,N'-Dimetil-1,2-ciclo-hexanodiamina (534 mg, 3,76 mmol, 0,15 eq) e K2CO3 (6,9 g, 50 mmol, 2,0 eq) em DMSO (25 mL) foi agitada a 120 °C sob atmosfera de N2 durante a noite. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e filtrada. O filtrado foi diluído com água e depois extraído com EA (200 mL x 2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em sílica gel eluindo com PE: EA = 5:1-1:1 para originar 438 (3,6 g, 69%) como um sólido branco. Esquema 74 2-(6-Cloropiridin-3-il)-3-cianopropanoato de metila (439A)
[0627] A uma solução fria (-78 °C) de 2-(6-cloropiridin-3-il)acetato de metila (3,0 g, 16,2 mmol, 1,0 eq) em THF (30 mL) foi adicionado gota a gota LiHMDS (24,24 mL, 24,24 mmol, 1,5 eq). A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante 2 h. 2-Bromoacetonitrila (1,7 mL, 24,24 mmol, 1,5 eq) foi adicionada gota a gota a -78 °C. A mistura reacional foi agitada a -78 °C durante outras 2 h antes de ter sido extinta por água.
A mistura reacional foi extraída com EA três vezes. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 2:1) para originar 439A (1,46 g) como um óleo amarelo: ESI (M+H)+ = 225,3 3-(6-cloropiridin-3-il)pirrolidin-2-ona (439B)
[0628] A uma solução fria (0 ℃) de 439A (700 mg, 3,1 mmol, 1,0 eq) e CoCl2 (370 mg, 1,56 mmol, 0,5 eq) em THF/água (6 mL/3 mL) foi adicionado NaBH4 (590 mg, 15,6 mmol, 5,0 eq) sob N2 a 0 ℃. A mistura reacional foi agitada durante 2 h enquanto a temperatura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente. A reação foi depois extinta com NH4Cl saturado e filtrada através de celite. O filtrado foi extraído com DCM três vezes. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na 2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 1:1) para originar 439B (360 mg) como um sólido branco: 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,32 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,64 (dd, J = 8,3, 2,5 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,65 (t, J = 9,4 Hz, 1H), 3,54 – 3,50 (m, 2H), 2,66 (ddd, J = 13,5, 9,4, 4,9 Hz, 1H), 2,32 – 2,15 (m, 1H). ESI (M+H)+ = 197,2. 3-(6-cloropiridin-3-il)-1-metilpirrolidin-2-ona (Exemplo 439)
[0629] A uma solução fria (0 ℃) de 439B (210 mg, 1,1 mmol, 1,0 eq) em THF (10 mL) foi adicionado NaH a 60% (64 mg, 1,6 mmol, 1,5 eq). A mistura reacional foi agitada a 0 ℃ durante 15 minutos antes da adição de iodometano (0,053 mL, 0,8 mmol, 0,8 eq) em THF (0,5 mL) gota a gota. A solução resultante foi continuada a agitar durante outras 2 h a 0°C e extinta com NH4Cl saturado. O sistema foi dividido e separado, e a fase aquosa foi depois extraída com EA três vezes. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 1:4) para originar o Exemplo 439 (80 mg) como um óleo marrom. ESI (M+H)+ = 211,2
[0630] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CD3OD) δ: 1 8,37 (s, 1H), 8,33 (s, 2H), 8,13 (s, 1H), 7,81 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 6,60 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 4,40- 440 4,32 (m, 2H), 4,13 (s, 3H), 383 2,28-2,24 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,28-2,24 (m, 2H), 2,03- 1,97 (m, 2H), 1,63-1,60 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ8,37 (d, J = 2 Hz, 1H), 8,16 (s, 2H), 8,13 (s, 1H) 7,82 (dd, J = 9,2Hz, 2,4Hz, 1H), 6,69(t, J = 441 73,6Hz, 1H), 6,60 (d, J 403,1 =8,4Hz,1H), 4,39-4,31 (m, 2H),4,15 (s, 3H), 2,29-2,22 (m, 2H), 2,04-1,96 (m, 2H), 1,63- 1,58 (m, 2H). H RMN (400 MHz, CD3OD) δ: 1 8,37 (s, 2H), 8,25 (dd, J = 9,4, 2,0 Hz, 1H), 8,13 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 9,4 Hz, 442 1H), 4,44 - 4,51 (m, 1H), 4,19 - 401 4,32 (m, 1H), 4,03 (d, J = 1,1 Hz, 3H), 2,25 - 2,47 (m, 5H), 2,10 - 2,22 (m, 2H), 1,68 - 1,83 (m, 2H) H RMN (400 MHz, CD3OD) δ: 1 8,36-8,28 (m, 4H), 8,08 (s, 443 1H), 7,61 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 409 7,13 (d, J= 5,6 Hz, 1H), 6,59 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 4,42-4,30
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,29-2,25 (m, 2H), 2,04- 1,98 (m, 2H), 1,63-1,60 (m, 2H). H RMN (METANOL-d4) δ: 1
8,32 (s, 2H), 7,91 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1H), 6,57 (d, J = 9,0 Hz, 444 1H), 4,37 – 4,45 (m, 1H), 4,23 414 – 4,35 (m, 1H), 4,08 (s, 2H), 3,02 (s, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,20 - 2,31 (m, 2H), 1,93 - 2,07 (m, 2H), 1,52 - 1,67 (m, 2H) 1 H RMN (400MHz, CD3OD) :δ 8,33 - 8,47 (m, 3H), 8,15 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,93 (dd, J = 9,6, 2,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 9,6 Hz, 445 396 1H), 6,59 (dd, J = 6,8, 0,8 Hz, 1H), 4,39 - 4,51 (m, 1H), 4,22 - 4,33 (m, 1H), 2,27 - 2,47 (m, 5H), 2,06 - 2,22 (m, 2H), 1,68 - 1,85 (m, 2H) H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 1
8,32 (s, 2H), 7,64 – 7,47 (m, 2H), 7,15 – 7,03 (m, 2H), 6,75 – 6,68 (m, 2H), 6,60 (d, J = 8,9 446 Hz, 1H), 6,44 (t, J = 6,7, 1,3 394,5 Hz, 1H), 4,41 (m, 2H), 3,99 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,30 – 2,17 (m, 2H), 2,03 – 1,93 (m, 2H), 1,69 – 1,50 (m, 2H). H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 1
8,23 (s, 2H), 7,83 (d, J = 2,4 447 Hz, 1H), 7,41 – 7,29 (m, 2H), 495 6,82 (s, 1H), 6,51 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,35 (s, 1H), 6,26 (dd,
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ J = 7,0, 1,8 Hz, 1H), 4,33 – 4,18 (m, 2H), 2,70 (s, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,21 – 2,10 (m, 2H), 1,96 – 1,80 (m, 2H), 1,56 – 1,41 (m, 2H), 1,30 (s, 6H). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ: 12,87 (s, 1H), 8,87-8,85 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,31-8,29 (m, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,07(s, 2H), 8,06 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 7,87- 7,83 (m, 1H), 7,63–7,59 (m, 1H), 7,52-7,50 (m, 1H), 7,02- 448 483,3 6,97 (m, 2H), 6,58-6,55 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,35-4,30 (m, 2H), 2,18-2,07 (m, 2H), 1,93- 1,66(m, 2H), 1,75-1,69 (m, 1H), 1,55-1,47(m, 2H), 0,86- 0,81 (m, 2H), 0,62-0,58(m, 2H). H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 1
8,42 – 8,31 (m, 3H), 8,21 (dd, J = 9,7, 2,4 Hz, 1H), 8,07 (dd, J = 3,9, 1,6 Hz, 1H), 7,49 (dd, J = 9,5, 3,9 Hz, 1H), 7,16 – 449 395,5 7,05 (m, 1H), 4,47 (p, J = 6,8 Hz, 1H), 4,31 – 4,18 (m, 1H), 2,50 – 2,24 (m, 2H), 2,22 – 2,04 (m, 1H), 1,86 – 1,64 (m, 1H). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,16-8,14 (t, J = 7,6 Hz, 3H), 8,03-8,01 (m, 1H), 7,62-7,59 (m, 1H), 7,47-7,44 (m, 1H), 450 416,5 7,07-7,04 (m, 1H), 6,87-6,50 (m, 2H), 4,40 – 4,32 (m, 2H), 2,28-2,24 (m, 2H), 2,03-2,00 (m, 2H), 1,62-1,57 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 1
8,32 (s, 2H), 7,96 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,45 (dd, J = 2,8, 9,2 Hz, 1H), 7,01 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 451 6,60(d, J = 9,2Hz, 1H), 6,57 (dd, J = 2,0, 7,2 Hz, 1H), 4,41- 4,34(m, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,34-2,23(m, 2H), 2,02- 1,97(m, 2H), 1,62-1,59(m, 2H). H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 1
8,39 (s, 2H), 7,82 (dd, J = 9,4, 2,1 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 4,47 (p, J = 7,0 Hz, 1H), 452 4,27 – 4,14 (m, 1H), 3,75 (t, J 399,3 = 9,6 Hz, 1H), 3,57 – 3,44 (m, 2H), 2,93 (d, J = 10,0 Hz, 3H), 2,60 – 2,47 (m, 1H), 2,45 – 2,25 (m, 5H), 2,18 – 2,02 (m, 3H), 1,80 – 1,65 (m, 2H). H RMN (400 MHz, MeOD) δ 1
8,06 (s, 2H), 7,80 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,31 (dd, J = 8,7, 2,4 Hz, 1H), 6,55 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,40 – 4,30 (m, 1H), 4,29 – 4,19 (m, 1H), 3,58 (t, J = 9,2 453 Hz, 1H), 3,53 – 3,45 (m, 2H), 2,9 (s, 3H), 2,54 – 2,43 (m, 1H), 2,30 – 2,16 (m, 2H), 2,09 – 1,99 (m, 1H), 1,99 – 1,89 (m, 2H), 1,79 – 1,70 (m, 1H), 1,63 – 1,50 (m, 2H), 0,95 – 0,84 (m, 2H), 0,65 – 0,55 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CD3OD) δ: 1
8,07 (s, 2H), 7,93 (s, 1H), 7,59- 7,56 (m, 2H), 7,45-7,42 (m, 1H), 6,62-6,59 (m, 2H), 6,46- 6,45 (m, 1H),4,28-4,25 (m, 454 389,2 2H), 2,15-2,10 (m, 2H), 2,00- 1,97 (m, 2H), 1,80-1,75 (m, 1H), 1,60-1,50 (m, 2H), 0,92- 0,89 (m, 2H), 0,61-0,59 (m, 2H). H RMN (400MHz, CD3OD) δ: 1
8,14 (s, 2H), 7,93 (t, J = 2,8 Hz, 1H), 7,62-7,56 (m, 2H), 7,44 (dd, J =8,8 HZ, 2,4 Hz, 1H), 6,61 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,46 455 447,1 (dt, J = 1,6 Hz, 6,8 Hz1H), 4,531 (q, J = 8,8 Hz, 2H), 4,36- 4,31 (m, 2H), 2,27-2,23 (m, 2H), 2,01-1,97 (m, 2H), 1,62- 1,56 (m, 2H). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,84 (s, 1H), 8,25 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 8,09-7,98 (m, 3H), 7,47 (dd, J = 8,4 Hz, 2,8 Hz, 1H), 7,19-7,17 (m, 1H), 6,63 456 449,4 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,59 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,51-4,48 (m, 1H), 4,39-4,366 (m, 1H), 2,34-2,27 (m, 2H), 2,08-2,04 (m, 2H), 1,69-1,61 (m, 2H). H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 1
8,24 (s, 2H), 8,09 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,96 (dd, J = 9,6, 2,4 457 Hz, 1H), 7,70 – 7,59 (m, 2H), 379,4 7,14 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 6,65 (dd, J = 10,0, 1,2 Hz, 1H), 6,51 (td, J = 6,8, 1,2 Hz, 1H), 4,47
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ (m,1H), 4,37 – 4,26 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 2,39 (m, 1H), 2,26 – 2,13 (m, 2H), 1,88 – 1,71 (m, 2H). H RMN (400 MHz, MeOD) δ 1
7,97 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,64 – 7,56 (m, 2H), 7,50 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 7,44 (dd, J = 9,0, 2,7 Hz, 1H), 6,64 – 6,58 (m, 2H), 458 394,4 6,47 (ddd, J = 11,0, 8,0, 5,0 Hz, 2H), 4,30 (dp, J = 25,7, 6,4 Hz, 2H), 2,32 (d, J = 15,9 Hz, 3H), 2,29 – 2,18 (m, 2H), 1,99 (q, J = 6,9 Hz, 2H), 1,66 – 1,51 (m, 2H) H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 1
8,36 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,92 (s, 1H), 7,50 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 7,35 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 6,96 (d, J= 9,2 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 458A 389 6,50 (d, J= 8,8 Hz, 1H), 6,25 (s, 1H), 4,30-4,28 (m, 1H), 4,26- 4,25 (m, 1H), 2,21-2,18 (m, 2H), 1,97-1,93 (m, 2H), 1,54- 1,52 (m, 2H). H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 1
8,15 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 7,94 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,66 – 7,53 (m, 2H), 7,44 (dd, J = 9,0, 2,7 Hz, 1H), 6,69(t, J = 73,6 Hz, 458B 415,2 1H), 6,55(d, J = 9,2Hz, 2H), 6,48 – 6,44 (m, 2H), 4,45 – 4,28 (m, 2H), 2,33 – 2,16 (m, 2H), 2,11 – 1,91 (m,2H), 1,70 – 1,51 (m, 2H). Esquema 75
1-(2-(((1S,3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)pirimidin-5-il)piridin-2(1H)-ona (Exemplo 459)
[0631] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 5 e Método Geral 1 a partir do material de partida 2-cloro-5-iodopirimidina originaram o composto do título: H RMN (400 MHz, CD 3OD) δ 8,41- 1 8,40 (d, J = 2,4 Hz, 2H), 8,34 (s, 2H), 7,63-7,59(m, 2H), 6,63-6,61 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,49-6,46 (m, 1H), 4,49-4,41 (m, 2H), 2,40-2,39 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 2,31-2,25 (m, 2H), 2,08-2,05 (t, J = 13,6 Hz, 2H), 1,69-1,64 (m, 2H).
[0632] Usando os procedimentos acima, o seguinte exemplo foi sintetizado: LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 1 8,51 (s, 2H), 8,07 (s, 2H), 8,04 (dd, J = 3,9, 1,5 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 9,5, 3,9 Hz, 1H), 7,07 (dd, J = 9,5, 1,5 Hz, 1H), 4,51 – 4,43 (m, 1H), 4,42 – 4,34 (m, 460 391,3 1H), 2,26 (td, J = 10,3, 4,6 Hz, 2H), 2,01 (dt, J = 11,3, 5,5 Hz, 2H), 1,75 (td, J = 8,6, 4,5 Hz, 1H), 1,68 – 1,54 (m, 2H), 0,94 – 0,85 (m, 2H), 0,66 – 0,55 (m, 2H).
Esquema 76 ácido (E)-3-(2-(metoxicarbonil)fenil)acrílico (461A)
[0633] Uma mistura de 2-formilbenzoato de metila (2,5 g, 15,23 mmol, 1,0 eq), ácido malônico (1,8 g, 17,67 mmol e 1,16 eq), morfolina (0,15 mL) e piridina (4 mL) foi agitada a 100 °C durante 4 h. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a solução resultante foi vertida em uma mistura de gelo esmagado (50 g) e HCl aq. a 35% (25 mL). O precipitado foi filtrado, lavado com água (25 mL x2). Depois, o sólido branco foi recristalizado a partir de metanol para originar 461A (2,0 g, rendimento de 63,7%): 1 H RMN (400MHz, CDCl3) δ 8,58 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,99 (dd, J = 7,8, 1,1 Hz, 1H), 7,61 - 7,68 (m, 1H), 7,53 - 7,60 (m, 1H), 7,41 - 7,51 (m, 1H), 6,33 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H). 2-(3-Azido-3-oxoprop-1-en-1-il)benzoato de (E)-metila (461B)
[0634] A uma solução de 461A (1,2 g, 5,82 mmol, 1,0 eq) e Et 3N (1,6 mL 11,64 mmol, 2,0 eq) em tolueno (15 mL) foi adicionado DPPA (1,2 mL, 5,53 mmol, 0,95 eq) gota a gota. A mistura foi continuada a agitar à temperatura ambiente durante 16 h. A solução foi concentrada e purificada por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc = 10:1) para originar 461B como sólido branco (1,0 g, rendimento de 74,6%): 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,56 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 8,00 (dd, J = 7,8, 0,9 Hz, 1H), 7,53 - 7,67 (m, 2H), 7,42 - 7,53 (m, 1H), 6,31 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 3,95 (s, 3H). 1-Oxo-1,2-di-hidroisoquinolina-5-carboxilato de metila (461)
[0635] Uma solução de 461B (500 mg, 2,16 mmol, 1,0 eq) em difenilmetano (3 mL) foi agitada a 80 °C durante 1 hora sob nitrogênio. Depois, a mistura foi continuada a agitar a 240 °C durante 3 h. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a mistura foi purificada por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc: 2:1) para originar produto em bruto e adicionalmente purificado por Prep-HPLC para originar o Exemplo 461 como um sólido branco (30 mg, rendimento de 6,8%): MS (ESI+) m/z 204,0 (M+H)+; 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ 11,51 (s l, 1H), 8,46 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,57 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,24 - 7,46 (m, 2H), 3,90 (s, 3H). Esquema 77 2-metóxi-5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridina (462A)
[0636] Uma suspensão de ácido (6-metoxipiridin-3-il)borônico (820 mg, 5,4 mmol, 1,0 eq), 4-bromo-1-metil-1H-pirazol (1,04 g, 6,4 mmol, 1,2 eq), Pd(dppf)Cl2 (392,3 mg, 0,54 mmol, 0,1 eq) e Cs2CO3 (3,5 g, 10,8 mmol, 2,0 eq) em dioxano/água (40 mL/10 mL) foi agitada a 110 °C sob N2 durante 16 h. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A fase orgânica foi separada e lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM: MeOH = 20:1) para originar 462A (662,4 mg) como um sólido amarelo: ESI (M+H)+ = 190,1. 5-(1-metil-1H-pirazol-4-il)piridin-2(1H)-ona (Exemplo 462)
[0637] A uma solução de 462A (200 mg, 1,1 mmol) em EtOH (0,5 mL) foi adicionada solução de HBr (40% em H2O, 2,5 mg). A mistura reacional foi agitada a 80 ℃ durante 20 h. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente e basificada por adição de NH 3 aquoso gota a gota. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash (DCM: MeOH: NH4OH = 10:1:0,1) para originar o Exemplo 462 (120 mg) como um sólido cinza. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,94 (dd, J = 9,4, 2,6 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,38 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 6,57 (dd, J = 21,7, 9,3 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H). ESI (M+H)+ = 176,1. Esquema 78.
Método geral 13 (1S, 3S)-N1-(5-iodopiridin-2-il)-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2- il)ciclopentano-1,3-diamina (463A)
[0638] Uma suspensão de 131C (150 mg, 0,669 mmol, 1,0 eq), 2- fluoro-5-iodopiridina (178,9 mg, 0,802 mmol, 1,2 eq) e K 2CO3 (277,2 mg, 2,006 mmol, 3,0 eq) em DMSO (5 mL) foi agitada a 140 °C sob N 2 durante 16,5 h. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente e filtrada. O filtrado foi diluído com acetato de etila e lavado com água e salmoura, seco sobre Na 2SO4, filtrado e concentrado sob vácuo reduzido. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 1:1) para dar 463A (125,5 mg). ESI (M+H)+ = 428,1. Método geral 14 3-Metil-1-(6-(((1S, 3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)piridin-3-il)imidazolidina-2,4-diona (463)
[0639] Uma suspensão de 463A (65,5 mg, 0,153 mmol, 1,0 eq), 3- metilimidazolidina-2,4-diona (35,0 mg, 0,307 mmol, 2,0 eq), N 1,N2- dimetilciclo-hexano-1,2-diamina (10,9 mg, 0,077 mmol, 0,5 eq), CuI (14,6 mg, 0,077 mmol, 0,5 eq) e K3PO4 (97,6 mg, 0,460 mmol, 3,0 eq) em i-PrOH (3 mL) foi purgada com N 2. A mistura reacional foi agitada a
110 °C sob irradiação de micro-ondas durante 4 h. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM: MeOH = 20:1) para dar o Exemplo 463 (20 mg) como um pó branco: 1H RMN (400 MHz, TFA-d4) δ 8,8 (s l, 2H), 8,40 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 8,25 (dd, J = 9,8, 2,3 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,83-4,78 (m, 1H), 4,68 (s, 2H), 4,56-4,39 (m, 1H), 3,28 (s, 3H), 2,62 – 2,49 (m, 2H), 2,54(s, 3H), 2,45 – 2,30 (m, 2H), 1,96-1,88 (m, 2H). ESI (M+H) + = 414,3.
[0640] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,31 1 (s, 2H), 7,85 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,67 – 7,53 (m, 2H), 7,44 (dd, J = 11,4, 2,2 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,47 (td, J = 6,8, 1,3 Hz, 1H), 4,58 464 407,5 (p, J = 6,8 Hz, 1H), 4,43 (dd, J = 13,0, 6,7 Hz, 1H), 2,43 – 2,25 (m, 2H), 2,15 – 2,04 (m, 2H), 1,94 – 1,81 (m, 1H), 1,78 – 1,58 (m, 2H), 1,07 – 0,97 (m, 2H), 0,78 – 0,67 (m, 2H). H RMN (400MHz, DMSO-d6) δ: 1 13,34 (s l, 1H), 8,49 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 8,33 (dd, J = 7,6, 1,3 Hz, 1H), 7,99 - 8,11 (m, 3H), 7,46 - 7,70 (m, 4H), 7,08 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 6,66 465 483,3 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 4,25 – 4,48 (m, 2H), 2,06 - 2,25 (m, 2H), 1,84 - 2,02 (m, 2H), 1,65 - 1,78 (m, 1H), 1,42 - 1,60 (m, 2H), 0,78 - 0,92 (m, 2H), 0,54 - 0,68 (m, 2H)
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,30 1 (s, 2H), 8,14 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,96 (dd, J = 9,5, 2,4 Hz, 1H), 7,89 (dd, J = 8,7, 2,1 Hz, 3H), 7,75 (d, J = 0,5 Hz, 1H), 7,10 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 6,70 (dd, J = 8,4, 1,9 Hz, 1H), 4,59 – 466 469,3 4,48 (m, 1H), 4,38 – 4,26 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 2,49 – 2,28 (m, 2H), 2,21 (dt, J = 13,2, 6,7 Hz, 2H), 1,86 (tt, J = 7,9, 4,9 Hz, 1H), 1,82 – 1,68 (m, 2H), 1,06 – 0,97 (m, 2H), 0,76 – 0,62 (m, 2H).
Esquema 79 (1S, 3S)-N1-(5-(2-clorofenil)piridin-2-il)-N3-(5-(metiltio)pirimidin-2- il)ciclopentano-1,3-diamina (Exemplo 467)
[0641] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 4 a partir do material de partida 463A e ácido (2-clorofenil)borônico originaram o composto do título: 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 10,20 (s, 1H), 8,53(s l, 1H), 8,45 (s, 2H), 7,95 (dd, J = 9,2, 1,4 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,56 – 7,47 (m, 1H), 7,36 (dd, J = 5,9, 3,4 Hz, 2H), 7,25-7,27(m, 1H), 7,13 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 4,59 (s l, 1H), 4,24 (s l, 1H), 2,52 – 2,29 (m, 5H), 2,20 (ddt, J = 20,7, 13,8, 7,0 Hz, 2H), 1,99 – 1,86 (m, 1H), 1,74 (dt, J = 13,0, 6,6 Hz, 1H). ESI (M+H) + = 412,3. Esquema 80
(1S, 3S)-N1-(5-ciclopropilpirimidin-2-il)-N3-(5-iodopiridin-2- il)ciclopentano-1,3-diamina (468A)
[0642] Métodos análogos àqueles descritos acima a partir do material de partida 425C (44,5 g, 208,7 mmol, 1,0 eq) originaram 425D (24,7 g) como um sólido pálido. LCMS [M+H]+ = 422. 2-(6-(((1S, 3S)-3-((5-ciclopropilpirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)piridin-3-il)piridazin-3(2H)-ona (Exemplo 468)
[0643] A uma solução de 468A (18,7 g, 44,4 mmol, 1,0 eq), piridazin-3(2H)-ona (8,53 g, 88,8 mmol, 2,0 eq), (1S, 2S)-N1,N2- dimetilciclo-hexano-1,2-diamina (1,26 g, 8,88 mmol, 0,2 eq) e CuI (0,85 g, 4,44 mmol, 0,1 eq) em DMSO (150 mL) foi adicionado K2CO3 (18,5 g, 133,2 mmol, 3,0 eq) e o sistema resultante foi agitado a 135 °C durante 12 h sob N2. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente e vertida em água (1 L) e extraída com acetato de etila (150 mL x3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre Na2SO4 anidro. A fase de acetato de etila foi filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (eluir com DCM: MeOH = 100:1 a 50:1) para originar o Exemplo 468 (25,3 g) como um sólido amarelo-pálido: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,15 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 8,07 (s, 2H), 8,02 (dd, J = 3,9, 1,6 Hz, 2H), 7,60 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1H), 7,46 (dd, J = 9,4, 3,9 Hz, 1H), 7,06 (dd, J = 9,5, 1,6 Hz, 1H), 6,59 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,42 – 4,27 (m,
2H), 2,34 – 2,18 (m, 2H), 1,99 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,81 – 1,70 (m, 1H), 1,65 – 1,53 (m, 2H), 0,95 – 0,85 (m, 2H), 0,66 – 0,54 (m, 2H). LCMS [M+H]+ = 390.
[0644] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,17 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 8,07 (s, 2H), 7,70 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1H), 7,04 – 6,93 (m, 1H), 6,83 (dd, J = 7,0, 2,8 Hz, 2H), 6,59 (d, J = 8,9 Hz, 469 1H), 4,42 – 4,24 (m, 2H), 406,3 2,37 – 2,15 (m, 3H), 2,10 – 1,91 (m, 3H), 1,75 (ddd, J = 13,5, 8,4, 5,1 Hz, 1H), 1,60 (dd, J = 12,7, 8,8 Hz, 2H), 0,96 – 0,85 (m, 2H), 0,60 (dt, J = 6,2, 4,7 Hz, 2H). H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1 8,16 (s, 1H), 8,09 (s, 2H), 7,76 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,23 – 7,13 (m, 2H), 7,01 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,95 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,5 Hz, 470 1H), 5,14 (s, 1H), 4,43 (d, J = 388,3 5,3 Hz, 1H), 4,17 (s, 1H), 2,36 – 2,26 (m, 2H), 2,14 – 1,95 (m, 3H), 1,75 – 1,64 (m, 2H), 1,58 (s, 1H), 0,90 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 0,58 (d, J = 5,0 Hz, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 1
8,09 (s, 2H), 8,05 (s, 1H), 7,87 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,52 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 5,49 (s, 1H), 5,35 (s, 1H), 4,50 – 4,35 (m, 1H), 4,25 (s, 2H), 4,21 (s, 471 408,4 1H), 3,11 (s, 3H), 2,32 (dd, J = 10,2, 5,3 Hz, 2H), 1,72 (td, J = 8,5, 4,3 Hz, 1H), 1,67 – 1,53 (m, 2H), 0,92 (dd, J = 13,2, 6,0 Hz, 2H), 0,59 (q, J = 5,0 Hz, 2H). H RMN (400 MHz, TFA-d) δ 1
8,47 (t, J = 103,6 Hz, 4H), 7,24 (s, 1H), 6,61 (t, J = 70,1 472 Hz, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,68 (s, 434,3 2H), 4,44 (s, 1H), 3,28 (s, 3H), 2,57 (s, 2H), 2,39 (d, J = 18,4 Hz, 2H), 1,93 (s, 2H). 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,07 (s, 2H), 7,91 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,42 – 4,25 (m, 2H), 4,08 (s, 2H), 3,02 (s, 3H), 473 408,4 2,30 – 2,16 (m, 2H), 2,03 – 1,93 (m, 2H), 1,75 (ddd, J = 17,0, 8,5, 5,2 Hz, 1H), 1,63 – 1,52 (m, 2H), 0,90 (ddd, J = 12,8, 7,4, 4,1 Hz, 2H), 0,65 – 0,58 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,93 (s, 2H), 7,93 (d, J = 0,4 Hz, 1H), 7,62-7,56 (m, 2H), 474 389 7,45-7,42 (m, 1H), 6,62-6,59 (m, 2H), 6,47-6,43 (m, 1H), 4,38 – 4,31 (m, 2H), 2,27-
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 2,23 (m, 2H), 2,00-1,97 (t, J = 13,6Hz, 2H), 1,77-1,73 (m, 1H), 1,62-1,56 (m, 2H), 0,93- 0,89 (m, 2H) 0,68-0,64 (m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,39-8,39 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,15-8,12 (m, 4H), 7,84- 7,82 (m, 1H), 7,09-7,06 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,61-6,59 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,47-4,40 (m, 475 391 1H), 4,27-4,21 (m, 1H), 2,43- 2,26 (m, 2H), 2,18-2,03 (m, 2H), 2,43-2,26 (m, 2H), 2,18- 2,03 (m, 2H), 1,81-1,66 (m, 3H), 0,95-0,89 (m, 2H), 0,64- 0,60(m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,26 (s, 2H), 8,03 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,98 (dd, J = 9,6, 2,4 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,50 (p, J = 6,8 Hz, 1H), 4,27 (dd, J = 12,4, 6,2 Hz, 476 1H), 4,20 (s, 2H), 3,69 – 3,58 452,5 (m, 4H), 3,38 (s, 3H), 2,50 – 2,24 (m, 2H), 2,24 – 2,08 (m, 2H), 1,84 (tt, J = 8,5, 5,2 Hz, 1H), 1,81 – 1,70 (m, 2H), 1,05 – 0,93 (m, 2H), 0,77 – 0,60 (m, 2H). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ: 8,15 (s, 2H), 8,08-8,01 (m, 1H), 7,79-7,77 (d, J = 9,6 Hz, 477 1H), 7,62-7,54 (m, 1H), 7,54- 447,4 7,53 (d, J = 2 Hz, 1H), 6,96- 6,93 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,63- 6,60 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 4,46-
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 4,39 (m, 1H), 4,32-4,27 (m, 1H), 3,49-3,47 (m, 2H), 2,40- 2,26 (m, 2H), 2,12-2,00 (m, 2H), 1,83-1,76(m, 1H), 1,74- 1,65 (m, 2H), 0,97-0,88(m, 2H), 0,66-0,61 (m, 2H).
Esquema 74 ácido 2-oxo-1,2-di-hidroquinolina-5-carboxílico (478A)
[0645] Uma suspensão de ácido 2-cloroquinolina-5-carboxílico (300 mg, 1,45 mmol, 1,0 eq) em AcOH (5 mL) e H2O (2 mL) foi agitada a 130oC durante a noite. A reação foi resfriada até 0 ºC e agitada durante 0,5 h. O precipitado foi coletado por filtração, e o sólido foi seco em vácuo para dar 478A (250 mg). ácido 1-(6-(((1S, 3S)-3-((5-ciclopropilpirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)piridin-3-il)-2-oxo-1,2-di-hidroquinolina- 5-carboxílico (Exemplo 478)
[0646] Uma suspensão de 478A (18 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq), (1S,3S)- N1-(5-ciclopropilpirimidin-2-il)-N3-(5-iodopiridin-2-il)ciclopentano-1,3- diamina (40 mg, 0,1 mmol, 1,0 eq), quinolin-8-ol (3 mg, 0,02 mmol, 0,2 eq), CuI (4 mg, 0,02 mmol, 0,2 eq), K2CO3 (20 mg, 0,15 mmol, 1,5 eq), em DMSO (3 mL), foi purgada com N2. A mistura reacional foi depois agitada a 120 °C sob irradiação de micro-ondas durante 2 h. A mistura reacional foi filtrada e o filtrado foi dividido entre acetato de etila (5 mL) e água (10 mL). Após separação, a fase aquosa foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por Prep-HPLC para dar o Exemplo 478 (4,7 mg): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 9,11 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 8,25 (s, 2H), 8,05 (s, 1H), 7,95 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 7,67 – 7,50 (m, 1H), 7,27-7,15 (m, 2H), 6,84 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,58-4,45 (m, 1H), 4,38-4,28 (m, 1H), 2,53 – 2,28 (m, 2H), 2,27 – 2,06 (m, 2H), 1,91-1,68(m, 3H), 1,03-0,92(m, 2H), 0,73-0,63 (d, J = 4,5 Hz, 2H). ESI (M+H)+ = 483.
[0647] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: LC-MS Estrutura Ex. # 1H RMN (M+H)+ 1H RMN (400 MHz, MeOD) δ 8,22 (s, 2H), 8,11-8,01 (m, 2H), 7,83 – 7,73 (m, 2H), 7,53 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,34 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,5 Hz, 479 439 1H), 6,75 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,56-4,44 (m, 1H), 4,38-4,28 (m, 1H), 2,51 – 2,29 (m, 2H), 2,28 – 2,12 (m, 2H), 1,90 – 1,68 (m, 3H), 1,03 – 0,91 (m, 1H), 0,76-0,60(m, 1H) 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,07 (s, 2H), 7,91 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 4,40 – 4,30 (m, 1H), 4,31 – 4,22 (m, 3H), 4,04 – 480 395 3,97 (m, 2H), 3,73 – 3,64 (m, 2H), 2,31 – 2,15 (m, 2H), 1,99 – 1,91 (m, 2H), 1,80 – 1,70 (m, 1H), 1,64 – 1,50 (m, 2H), 0,94 – 0,86 (m, 2H), 0,63 – 0,56 (m, 2H). Esquema 75 Método geral 15 6'-(((1S, 3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)ciclopentil)amino)- 4-(2H-tetrazol-5-il)-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (Exemplo 481)
[0648] Uma mistura de 451 (35 mg, 0,083 mmol, 1,0 eq), NH4Cl (44 mg, 0,83 mmol, 10,0 eq) e NaN3 (54 mg, 0,83 mmol, 10,0 eq) em DMF (2 mL) foi agitada a 100 oC durante 5 h. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente e filtrada. O filtrado foi purificado por Prep-HPLC para dar o Exemplo 481 (13 mg, 33,7%) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 8,37 (s, 2H), 8,15 (d, J = 2,0Hz, 1H), 7,98(dd, J = 2,1 Hz, 9,6 Hz, 1H), 7,83 (dd, J = 0,4 Hz, 7,2 Hz,1H), 7,34 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,10-7,15 (m, 2H), 4,46-4,50 (m, 1H), 4,27-4,31 (m, 1H), 2,43-2,43 (m, 5H), 2,11-2,18 (m, 2H), 1,71-1,80 (m, 2H). LCMS [M+H]+= 463,4.
[0649] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8,28(s, 2H), 8,14 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 482 7,14 (dd, J = 2,0, 7,2 Hz, 1H), 7,07(d, 457,5 J = 9,2Hz, 1H), 4,52-4,51 (m, 1H), 4,34-4,31 (m, 1H), 2,43-2,30(m, 2H), 2,19-2,14(m, 2H), 1,78-1,72(m, 3H), 0,99-0,97(m, 2H), 0,72-0,689(m, 2H). 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,42 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 8,23(s, 2H), 8,17-8,14 (m, 2H), 7,92-7,89 (m, 1H), 7,02 (dd, J = 2,8, 8,8 Hz, 1H), 6,80 (dd, J = 0,8, 483 457,4 9,6 Hz, 1H), 4,50-4,47 (m, 1H), 4,34- 4,31 (m, 1H), 2,43-2,30 (m, 2H), 2,17- 2,14(m, 2H), 1,85-1,70 (m, 3H), 1,01- 0,96 (m, 2H), 0,71-0,67 (m, 2H).
Esquema 76
1-Metil-6-oxo-1,6-di-hidropiridina-3-carboxilato de metila (484A)
[0650] Uma solução de 2-oxo-2H-piran-5-carboxilato de metila (3 g, 19,465 mmol, 1,0 eq) e metilamina (33% em EtOH, 1,904 g, 20,439 mmol, 1,05 eq) em EtOH (10 mL) foi agitada a 60 ℃ durante 18 h em tubo selado. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 1:2) para originar 484A (393,6 mg) como um sólido amarelo: ESI (M+H)+ = 168,1 5-Bromo-1-metil-6-oxo-1,6-di-hidropiridina-3-carboxilato de metila (484B)
[0651] Uma solução de 484A (393,6 mg, 2,355 mmol, 1 eq) e NBS (628,6 mg, 3,532 mmol, 1,5 eq) em AcOH (16 mL) foi agitada a 80 ºC durante 2 h. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 1:1) para originar 484B (377,3 mg) como um sólido branco: 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,26 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,18 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,68 (s, 3H).
ESI (M+H) + = 246,0. 6'-Cloro-1-metil-2-oxo-1,2-di-hidro-[3,3'-bipiridina]-5-carboxilato de metila (484C)
[0652] Métodos análogos àqueles descritos acima a partir do material de partida 484B e ácido (6-cloropiridin-3-il)borônico originaram 484C: 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,68 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,21 – 8,13 (m, 1H), 8,08 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,39 (t, J = 11,7 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,69 (s, 3H). ESI (M+H) + = 279,2 6'-(((1S, 3S)-3-((Terc-butóixicarbonil)amino)ciclopentil)amino)-1-metil- 2-oxo-1,2-di-hidro-[3,3'-bipiridina]-5-carboxilato de metila (484D)
[0653] Métodos análogos àquele descritos acima a partir do material de partida 484C e ((1S,3S)-3-aminociclopentil)carbamato de terc-butila originaram 484D: ESI (M+H) = 443,3 6'-(((1S, 3S)-3-Aminociclopentil)amino)-1-metil-2-oxo-1,2-di-hidro- [3,3'-bipiridina]-5-carboxilato de metila (484E)
[0654] A uma solução de 484D (35 mg) em DCM (1 mL) foi adicionado gota a gota TFA (1 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos e depois concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em MeOH, seguido pela adição de resinas de permuta iônica (forma Ambersep® 900 OH-) para ajustar o nível pH até 8. A mistura filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar 484E (27 mg) 8 como um óleo amarelo. 1-Metil-6'-(((1S, 3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)-2-oxo-1,2-di-hidro-[3,3'-bipiridina]-5- carboxilato de metila (484F)
[0655] Métodos análogos àquele descritos acima a partir do material de partida 484E e 2-cloro-5-(metiltio)pirimidina originaram 484F: ESI (M+H)+ = 467,2. ácido 1-metil-6'-(((1S, 3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)-2-oxo-1,2-di-hidro-[3,3'-bipiridina]-5-
carboxílico (Exemplo 484)
[0656] Métodos análogos àqueles descritos acima a partir do material de partida 484F originaram o Exemplo 484: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,51 (dd, J = 14,0, 2,1 Hz, 2H), 8,35 (s, 2H), 8,25 (dd, J = 10,7, 2,2 Hz, 2H), 7,10 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 4,51 – 4,41 (m, 1H), 4,31 – 4,20 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 2,49 – 2,39 (m, 1H), 2,35 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 2,33 – 2,27 (m, 1H), 2,22 – 2,07 (m, 2H), 1,84 – 1,65 (m, 2H). ESI (M+H) + = 453,3. Esquema 77 6'-(((1S,3S)-3-aminociclopentil)amino)-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (485)
[0657] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 2 e Procedimento Geral 6 a partir do material de partida 6'-cloro-2H-[1,3'- bipiridin]-2-ona originaram 485: m/z 271,0 [M+H]+.
[0658] Usando os procedimentos acima, o seguinte exemplo foi sintetizado: 1 Estrutura Ex. # H RMN LC-MS (M+H)+ 486 271,1 Esquema 78
6'-(((1S, 3S)-3-(tieno[3,2-d]pirimidin-2-ilamino)ciclopentil)amino)- 2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (487)
[0659] Uma solução de 485 (150 mg, 0,405 mmol, 1,0 eq,), DIPEA (260 mg, 2,0 mmol, 5,0 eq) e 2-clorotieno[3,2-d]pirimidina (69 mg, 0,405 mmol, 1,0 eq) em DMA (2 mL) foi agitada a 150 ˚C durante 30 min. A mistura resultante foi diluída com acetato de etila (10 mL), lavada com água (2x 10 mL), e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila (4x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram concentradas sob vácuo e purificadas com Prep-HPLC para dar 487 (12 mg) como um sólido branco: LCMS m/z 405 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 10,73 (s l, 1H), 10,21 (s l, 1H), 9,03 (s l, 1H), 8,19 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 7,92 (dd, J = 9,4, 2,3 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,54 – 7,43 (m, 2H), 7,41 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,26 – 7,21 (m, 1H), 6,69 (dd, J = 9,3, 1,2 Hz, 1H), 6,38 – 6,29 (m, 1H), 4,81 – 4,59 (m, 1H), 4,53 – 4,25 (m, 1H), 2,52 – 2,31 (m, 3H), 2,08 (dt, J = 14,3, 7,8 Hz, 1H), 1,98 – 1,77 (m, 2H).
[0660] Usando os procedimentos acima, o seguinte exemplo foi sintetizado: LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,83 1 (s, 1H), 8,16 (dd, J = 2,7, 0,7 Hz, 1H), 8,05 (dd, J = 5,3, 1,4 Hz, 1H), 8,01 (dt, J = 3,0, 1,5 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 9,0, 2,7 Hz, 1H), 7,45 (ddd, J = 9,5, 4,2, 1,5 Hz, 1H), 7,18 (d, J 488 = 5,4 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 9,4, 1,6 406,1 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 5,49 (s, 1H), 4,49 (p, J = 6,2 Hz, 1H), 4,36 (p, J = 6,3 Hz, 1H), 2,40 – 2,22 (m, 2H), 2,12 – 1,98 (m, 2H), 1,63 (ddt, J = 15,5, 9,8, 5,0 Hz, 2H). Esquema 79
2-(6-(((1S, 3S)-3-(tieno[2,3-d]pirimidin-2- ilamino)ciclopentil)amino)piridin-3-il)piridazin-3(2H)-ona (489)
[0661] Uma solução de 486 (50 mg, 0,18 mmol), 5-clorotiazolo[4,5- d]pirimidina (30,5 mg, 0,18 mmol), DIPEA (70 mg, 0,54 mmol) em DMSO (5 mL) foi agitada em 100 ° C sob N2 durante a noite. A mistura reacional foi extraída com EA e água. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por prep-TLC e prep-HPLC para originar 2,6 mg de 489 (2,3 mg): ESI (M+H)+ = 406,48; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,76 (s, 1H), 8,39 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 3,8, 1,6 Hz, 1H), 7,52 (dd, J = 9,5, 3,9 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 7,16 – 7,06 (m, 2H), 4,67 – 4,48 (m, 1H), 4,36 – 4,23 (m, 1H), 2,52 – 2,31 (m, 2H), 2,30 – 2,12 (m, 2H), 1,86 – 1,69 (m, 2H).
[0662] Usando os procedimentos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,80 1 (m, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,18 (m., 1H), 8,09 (dd, J = 3,9, 1,6 Hz, 1H), 7,52 (dd, J = 9,5, 3,9 Hz, 1H), 7,17 – 7,05 490 420,5 (m, 2H), 7,00 (m,1H), 4,58 (m, 1H), 4,32 (m, 1H), 2,69 (s, 3H), 2,52 – 2,30 (m, 2H), 2,21 (m 2H), 1,80 (m, 2H).
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 1 8,49(s, 2H), 7,95-7,74(m, 1H), 7,63- 7,57(m, 2H), 7,44 (dd, J = 2,4, 8,8 491 Hz, 1H), 6,60-6,63 (m, 2H), 6,44- 417,3 6,48 (m, 1H), 4,52-4,48(m, 1H), 4,37-4,34(m, 1H), 2,31-2,24(m, 2H), 2,07-2,00(m, 2H), 1,66-1,61(m, 2H). H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,57 1 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,94 (dd, J = 0,4, 2,8 Hz, 1H), 7,63-7,57 (m, 2H), 7,46-7,43 (m, 1H), 6,62-6,60 (m, 492 374,2 2H), 6,48-6,44 (m, 1H), 4,52-4,50 (m, 1H), 4,36-4,34 (m, 1H), 2,28- 2,25 (m, 2H), 2,05-1,77 (m, 2H), 1,62-1,66 (m, 2H). H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,22 1 (s, 2H), 7,93 (dd, J = 0,4, 2,8 Hz, 1H), 7,63-7,57 (m, 2H), 7,44 (dd, J = 493 2,8, 9,2 Hz, 1H), 6,63-6,60 (m, 2H), 383,3 6,48-6,44 (m, 1H), 4,39-4,32 (m, 2H), 2,28-2,23 (m, 2H), 2,02-1,97 (m, 2H), 1,64-1,58 (m, 2H).
Esquema 80 2-cloro-7-metiltieno[3,2-d]pirimidina (494A)
[0663] Uma suspensão de 2,4-dicloro-7-metiltieno[3,2-d]pirimidina (500 mg, 2,3 mmol, 1 eq), Pd(OH)2 (20% em carbono, 200 mg, 0,14 mmol, 0,55 eq) e NaOAc (400 mg, 4,8 mmol, 2,0 eq) em EA (8 mL) e i- PrOH (1 mL) foi agitada em um dispositivo de Parr sob atmosfera de H 2 (50 psi) durante 18 h à temperatura ambiente. A mistura reacional foi filtrada em celite e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 4:1) para dar 494A (320 mg) como um pó branco. ESI (M+H) + = 185,0; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,09 (s, 1H), 7,73 (q, J = 1,1 Hz, 1H), 2,51 (d, J = 1,2 Hz, 3H). 6'-(((1S, 3S)-3-((7-Metiltieno[3,2-d]pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (494)
[0664] Uma suspensão de 494A (28,45 mg, 0,1541 mmol, 1,0 eq), 485 (50 mg, 0,185 mmol, 1,2 eq) e K2CO3 (63,9 mg, 0,462 mmol, 3,0 eq) em DMSO (5 mL) foi agitada a 140 °C durante 16 h sob N 2. A mistura reacional foi extraída com DCM e água. A fase orgânica foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM: MeOH = 20:1) para dar 494 (10,4 mg) como um pó branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,92 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 7,60 (dd, J = 6,8, 1,8 Hz, 1H), 7,47 (ddd, J = 9,0, 6,6, 2,1 Hz, 1H), 7,39 (dd, J = 8,9, 2,7 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 6,92 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 6,44 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,27 (td, J = 6,7, 1,3 Hz, 1H), 4,52 – 4,39 (m, 1H), 4,38 – 4,26 (m, 1H), 2,27 (d, J = 0,9 Hz, 3H), 2,16 (dd, J = 9,8, 5,4 Hz, 2H), 2,03 – 1,86 (m, 3H), 1,63 – 1,47 (m, 1H). ESI (M+H)+ = 419,3
[0665] Usando os procedimentos acima, o seguinte exemplo foi sintetizado: 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 10,53 1 (s, 1H), 10,27 (s, 1H), 8,56(s l, 2H) 7,91 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 7,83 (s, 495 1H), 7,49 – 7,37 (m, 2H), 7,24 (d, J 363,4 = 5,8 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 6,32 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 4,60 (s, 1H), 4,42 – 4,25 (m, 1H), 2,48 –
LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 2,28 (m, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,11 – 1,99 (m, 1H), 1,98 – 1,84 (m, 1H), 1,79 (ddd, J = 12,5, 11,1, 7,0 Hz, 1H).
Esquema 81 1-(2-cloropirimidin-5-il)etan-1-ol (496)
[0666] À solução de 1-(2-cloropirimidin-5-il)etan-1-ona (500 mg, 3,2 mmol, 1,0 eq) em MeOH (15 mL) foi adicionado NaBH4 (240 mg, 6,4 mmol, 2,0 eq) a 0 °C. Após agitação à temperatura ambiente durante 2 h, água (5 mL) foi adicionada à mistura acima para extinguir a reação. A mistura resultante foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano:acetato de etila = 5:1 para acetato de etila) para dar 496 como um sólido pálido (100 mg). ESI [M+H]+ = 159,1. Esquema 82 2-(6-(((1S,3S)-3-((5-(metiltio)piridin-2- il)amino)ciclopentil)amino)piridin-3-il)piridazin-3(2H)-ona (497)
[0667] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 2 a partir do material de partida 416 e 486 originaram 497: 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,28 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,04 (dd, J = 9,6, 2,3 Hz, 1H), 7,97 (dd, J = 3,8, 1,5 Hz, 1H), 7,82 (dd, J = 9,4, 2,2 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,40 (dd, J = 9,5, 3,9 Hz, 1H), 7,00 (ddd, J = 9,6, 6,5, 5,0
Hz, 3H), 4,37 – 4,20 (m, 2H), 2,39 (s, 3H), 2,37 – 2,29 (m, 2H), 2,17 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,80 – 1,67 (m, 2H). ESI (M+H)+ = 395,3
[0668] Usando os procedimentos acima, o seguinte exemplo foi sintetizado: 1 LC-MS Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,27 (s, 2H), 7,59 (t, J =8,3 Hz, 1H), 7,64-7,53 (m, 2H), 7,44 (m, 1H), 6,61 (d, J = 9 498 Hz, 2H), 6,64 (m, 1H), 4,72 393,2 (q, J =6,5 Hz, 1H), 4,37 (m, 2H), 2,25 (m, 2H), 1,99 (m, 2H), 1,60 (m, 2H), 1,43 (d, J = 10 Hz, 3H).
Esquema 83 Procedimento geral 16 6'-(((1S, 3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)ciclopentil)amino)- [3,3'-bipiridin]-4-ol (Exemplo 499)
[0669] A uma solução do composto 402 (40 mg, 0,1 mmol, 1 eq) em NMP (3 mL) foram adicionados LiCl (42 mg, 1 mmol, 10 eq) e Ácido p- toluenossulfônico (172 mg, 1 mmol, 10 eq). A mistura foi agitada a 180 ºC durante 4 h e resfriada até à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com água (10 mL) e depois basificada com NaHCO3 sat. até pH = 10. A mistura resultante foi extraída com acetato de etila (10 mL x 6), as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (20 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas. O resíduo resultante foi purificado por Prep-HPLC para originar o Exemplo 499 (10 mg, 26%) como um sólido amarelo. LCMS [M+H]+ = 395; 1H RMN (400 MHz,
CD3OD) δ: 8,33 (s, 2H), 8,18 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,77-7,72 (m, 1H), 6,63 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,52 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,45-4,35 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,30-2,24 (m, 2H), 2,04-1,98 (m, 2H), 1,63-1,60 (m, 2H).
[0670] Usando os procedimentos acima, o seguinte exemplo foi sintetizado: LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,94 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,67 – 7,53 (m, 2H), 7,43 (dd, J = 9,0, 2,7 Hz, 1H), 6,65 – 6,55 (m, 2H), 6,46 (td, 499A 405 J = 6,8, 1,3 Hz, 1H), 4,40 – 4,25 (m, 2H), 2,31 – 2,19 (m, 2H), 1,98 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 1,68 – 1,49 (m, 3H), 0,84 – 0,73 (m, 2H), 0,49 (s, 2H). Esquema 84 (1S, 3S)-N1-(5-(difluorometóxi)pirimidin-2-il)-N3-(5-nitropiridin-2- il)ciclopentano-1,3-diamina (500A)
[0671] Uma suspensão de 411 (43 g, 176 mmol, 1,0 eq), 2-cloro-5- nitropiridina (27,9 g, 176 mmol, 1,0 eq) e K2CO3 (48,6 g, 382 mmol, 2,0 eq) em DMSO (500 mL) foi agitada a 80 °C durante 16 h. A mistura reacional foi resfriada até à temperatura ambiente e filtrada. O filtrado foi dividido entre EA (400 mL) e água (400 mL); e a fase aquosa foi extraída com EA (300 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (400 mL) e depois concentradas sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (PE: EA = 3:1) para dar 500A (52 g). N2-((1S, 3S)-3-((5-(difluorometóxi)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)piridina-2,5-diamina (500B)
[0672] A uma solução de 500A (45 g, 123 mmol, 1,0 eq) em MeOH (450 mL) foi adicionado Pd/C a 10% (4,5 g). Depois, a mistura reacional foi desgaseificada com H2 três vezes e agitada sob H 2 à temperatura ambiente durante 8 h. A mistura reacional foi filtrada através de celite. O filtrado foi concentrado para remover o solvente, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (EA: MeOH = 30:1) para dar 500B (31 g). 3-(6-(((1S,3S)-3-((5-(difluorometóxi)pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)piridin-3-il)-1-metilimidazolidina-2,4- diona (Exemplo 500)
[0673] Uma solução de 500B (27,2 g, 81 mmol, 1,0 eq) e carbonocloridato de 4-nitrofenila (16,3 g, 81 mmol, 1,0 eq) em acetonitrila (280 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hr. Hidrocloreto de metilglicinato de metila (11,8 g, 84 mmol, 1,1 eq) e DIPEA (31,3 g, 24,2 mmol, 3,0 eq) foram adicionados à reação e agitados durante 16 h adicionais. A mistura reacional foi concentrada para remover a maioria do solvente, e o resíduo foi dividido entre DCM (70 mL) e água (70 mL). A fase orgânica foi separada e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel (DCM: MeOH = 40:1) para dar produto em bruto como pasta semiaquosa. O composto foi adicionalmente purificado por trituração em PE/EA (4:1, 40 mL) e descolorido com carbono ativado em MeOH para dar o Exemplo 500 (25 g): 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,16 (s, 2H), 7,91 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,36 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1H), 6,93 – 6,43 (m,
2H), 4,47 – 4,25 (m, 2H), 4,08 (s, 2H), 3,02 (s, 3H), 2,35 – 2,19 (m, 2H), 2,12 – 1,87 (m, 2H), 1,69 – 1,46 (m, 2H). Esquema 85 2-cloro-6-metiltieno[3,2-d]pirimidina (501A)
[0674] Uma solução de 2,4-dicloro-6-metiltieno[3,2-d]pirimidina (1,5 g, 6,85 mmol, 1,0 eq), zinco (1,8 g, 27,39 mmol, 4,0 eq) e ácido acético (2,4 mL, 41,08 mmol, 6,0 eq) em metanol (30 mL) foi agitada a 70 °C durante 16 h. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a mistura foi filtrada, e o bolo de filtração foi lavado com metanol (30 mL x 2). O filtrado foi concentrado e purificado por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc = 4:1) para obter 501A (620 mg, rendimento de 47,6%) como um sólido branco. MS (ESI+) m/z 185,0 (M+H)+ 6-(bromometil)-2-clorotieno[3,2-d]pirimidina (501B)
[0675] Uma solução de 501A (600 mg, 3,25 mmol, 1,0 eq), N- Bromossuccinimida (694,0 mg, 3,90 mmol, 1,2 eq) e AIBN (26,7 mg, 0,16 mmol, 0,05 eq) em tetracloreto de carbono (20 mL) foi submetida ao refluxo em um tubo selado durante 16 h. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a mistura foi concentrada e purificada por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc: 4:1) para obter 501B (614 mg, rendimento de 71,2%) como um sólido amarelo. MS (ESI+) m/z 262,9
(M+H)+ acetato de (2-clorotieno[3,2-d]pirimidin-6-il)metila (501C)
[0676] Uma solução de 510B (600 mg, 2,3 mmol, 1,0 eq) e acetato de césio (2,2 g, 11,4 mmol, 5,0 eq) em DMF (15 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. A mistura foi diluída com EtOAc (100 mL), lavada com água (80 mL) e salmoura (60 mL), seca sobre Na2SO4. Após a filtração, o filtrado foi concentrado e purificado por coluna flash (éter de petróleo:EtOAc: 4:1) para obter 501C (373 mg, rendimento de 67,5%) como um sólido branco. MS (ESI+) m/z 243,0 (M+H)+; 1H RMN (400MHz, CDCl3) δ 9,07 (s, 1H), 7,39 - 7,52 (m, 1H), 5,43 (d, J = 0,9 Hz, 2H), 2,17 (s, 3H). (2-clorotieno[3,2-d]pirimidin-6-il)metanol (501D)
[0677] Uma solução de 501C (160 mg, 0,66 mmol, 1,0 eq) e carbonato de potássio (136,7 mg, 0,99 mmol, 1,5 eq) em metanol (15 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Depois, a mistura foi concentrada e purificada por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc: 1:1) para obter 501D (100 mg, rendimento de 75,8%) como sólido branco: MS (ESI+) m/z 201,0 (M+H)+ 6-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-2-clorotieno[3,2-d]pirimidina (501E)
[0678] Uma solução de 501D (100 mg, 0,50 mmol, 1,0 eq) em DMF (5 mL) foi resfriada até 0 °C. TBSCl (97,6 mg, 0,65 mmol, 1,3 eq) foi adicionado seguido por trietilamina (0,14 mL, 1,00 mmol, 2,0 eq). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi diluída com acetato de etila (60 mL), lavada com água (60 mL) e salmoura (30 mL), seca sobre Na 2SO4. O filtrado foi concentrado e purificado por coluna flash (éter de petróleo: EtOAc: 4:1) para obter 501D (126 mg, rendimento de 80,5%) como sólido branco: MS (ESI +) m/z 315,2 (M+H)+ 6'-(((1S,3S)-3-((6-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)tieno[3,2-
d]pirimidin-2-il)amino)ciclopentil)amino)-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (501F)
[0679] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 5 a partir do material de partida 501E e 485 originaram 501F. 6'-(((1S, 3S)-3-((6-(hidroximetil)tieno[3,2-d]pirimidin-2- il)amino)ciclopentil)amino)-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (501)
[0680] TBAF (3 mL) foi adicionado à solução de 501F (bruto, 0,16 mmol, 1,0 eq) em DMSO (10 mL) e agitado durante 30 min. Depois, a mistura foi diluída com água (50 mL) e extraída com EtOAc (50 mL x2), seca sobre Na2SO4. O filtrado foi concentrado e purificado por coluna flash em sílica gel (DCM: MeOH: 15:1) para originar o composto em bruto, que foi adicionalmente purificado por Prep-HPLC para obter 501 puro (2,3 mg, rendimento de 3,3% por dois passos) como sólido branco: MS (ESI+) m/z 435,1 (M+H)+
[0681] 1 H RMN (400MHz, CD3OD) δ 8,84 (s, 1H), 7,98 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,82 (dd, J = 9,6, 2,4 Hz, 1H), 7,47 - 7,61 (m, 2H), 7,06 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 6,55 (dt, J = 9,1, 1,0 Hz, 1H), 6,41 (td, J = 6,8, 1,3 Hz, 1H), 4,83 (d, J = 1,1 Hz, 2H), 4,50 (t, J = 6,8 Hz, 1H), 4,17 - 4,28 (m, 1H), 2,22 - 2,39 (m, 2H), 2,07 - 2,17 (m, 2H), 1,63 - 1,77 (m, 2H). Esquema 86 ((1S, 3S)-3-((5-Bromopiridin-2-il)óxi)ciclopentil)carbamato de terc-
butila (502A)
[0682] A uma solução fria (0 ℃) de ((1S, 3R)-3- hidroxiciclopentil)carbamato de terc-butila (865 mg, 4,3 mmol, 1,5 eq) e 5-bromopiridin-2-ol (500 mg, 2,9 mmol, 1,0 eq) em THF (20 mL) foi adicionado PPh3 (1,884 g, 7,2 mmol, 2,5 eq), seguido por adição de DEAD (1,04 mL, 7,2 mmol, 2,5 eq) gota a gota sob N2. A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 1,5 h. A mistura reacional foi depois dividida entre EA e água. A fase orgânica separada foi lavada com salmoura e seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 5:1) para originar 502A (1,02 g) como um sólido branco: ESI (M+H)+ = 357,2. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,15 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,60 (ddd, J = 13,9, 7,8, 6,1 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,50 (s, 1H), 4,20 (s, 1H), 2,20 (tt, J = 12,3, 6,3 Hz, 3H), 1,87 – 1,72 (m, 2H), 1,58 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 1,44 (s, 9H). (1S, 3S)-3-((5-bromopiridin-2-il)óxi)ciclopentan-1-amina (502B)
[0683] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 6 a partir do material de partida 502A originaram 502B como óleo amarelo. N-((1S, 3S)-3-((5-bromopiridin-2-il)óxi)ciclopentil)-5- (metiltio)pirimidin-2-amina (502C)
[0684] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 5 a partir do material de partida 502B e 2-cloro-5-(metiltio)pirimidina originaram 502C como óleo amarelo: ESI (M+H)+ = 381,1 6'-(((1S, 3S)-3-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)ciclopentil)óxi)-2H- [1,3'-bipiridin]-2-ona (502)
[0685] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 14 a partir do material de partida 502 e piridin-2(1H)-ona originaram 502 como sólido branco: ESI (M+H)+ = 396,3. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,40 (s, 2H), 8,21 – 8,14 (m, 1H), 7,74 (dd, J = 8,8, 2,8 Hz, 1H), 7,66 – 7,57 (m, 2H), 6,90 (dd, J = 8,8, 0,5 Hz, 1H), 6,63 (dt, J = 8,9, 1,1 Hz,
1H), 6,49 (td, J = 6,8, 1,3 Hz, 1H), 5,61 – 5,53 (m, 1H), 4,51 (p, J = 7,1 Hz, 1H), 2,39 (s, 3H), 2,37 – 2,26 (m, 3H), 2,08 – 1,99 (m, 1H), 1,91 (tdd, J = 10,0, 7,7, 2,7 Hz, 1H), 1,74 – 1,60 (m, 1H). Esquema 87 ((1R,4R)-4-azidociclopent-2-en-1-il)carbamato de terc-butila (503A)
[0686] A uma solução de ((1R,4S)-4-hidroxiciclopent-2-en-1- il)carbamato de terc-butila (200 mg, 1,0 mmol, 1,0 eq) em THF (10 mL) foram adicionados DPPA (414 mg, 1,5 mmol, 1,5 eq) e DBU (230 mg, 1,5 mmol, 1,5 eq) à temperatura ambiente e depois agitados durante 2 dias. Água (10 mL) foi adicionada à solução acima, que foi depois extraída com EtOAc (10 mL x3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (30 mL), secas sobre Na2SO4, filtradas, concentradas e purificadas por cromatografia em sílica gel eluindo com PE: EA = 5:1 para originar 503A (200 mg, 89%) como um sólido branco. ((1R, 4R)-4-aminociclopent-2-en-1-il)carbamato de terc-butila (503B)
[0687] A uma solução de 503A (200 mg, 0,9 mmol, 1,0 eq) em THF: H2O = 4: 1 (10 mL) foi adicionado PPh3 (234 mg, 0,9 mmol, 1,0 eq) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. A mistura foi depois agitada a 50 ºC durante a noite e depois resfriada até à temperatura ambiente. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em sílica gel eluindo com DCM: MeOH = 20:1-3:1 para originar 503B (100 mg, 57%) como um semissólido. ((1R,4R)-4-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)ciclopent-2-en-1-
il)carbamato de terc-butila (503C)
[0688] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 5 a partir do material de partida 503B e 2-cloro-5-(metiltio)pirimidina originaram 503C como um sólido marrom. (1R, 3R)-N1-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)ciclopent-4-eno-1,3-diamina (503D)
[0689] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 6 a partir do material de partida 503C originaram 503D como óleo marrom, que foi usado no próximo passo diretamente. 6'-(((1R, 4R)-4-((5-(metiltio)pirimidin-2-il)amino)ciclopent-2-en-1- il)amino)-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (503)
[0690] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 2 a partir do material de partida 503D originaram 503 como um sólido esbranquiçado: LCMS [M+H]+ = 393; 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,34 (s, 2H), 7,96 (s, 1H), 7,65-7,55 (m, 2H), 7,48-7,45 (m, 1H), 6,63-6,60 (m, 2H), 6,50-6,46 (m, 1H), 6,02-6,00 (m, 2H), 5,20-5,15 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,20-2,16 (m, 2H). Esquema 88 ((1R, 3R)-Ciclopent-4-eno-1, 3-di-il)dicarbamato de benzila e terc- butila (504A)
[0691] A uma solução de 503B (0,5 g, 2,5 mmol, 1,0 eq) em THF (10 mL) e H2O (2 mL) foram adicionados Na2CO3 (0,65 g, 5,8 mmol, 2,5 eq) e Cbz-Cl (510 mg, 3,0 mmol, 1,2 eq). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2,5 h. A mistura reacional foi vertida em água (50 mL) e extraída com acetato de etila (25 mL x3). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre Na2SO4 anidro. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel (hexano:acetato de etila = 5:1) para dar 504A (566 mg) como um sólido pálido. ESI [M+H]+ = 333. ((1R,3R)-4-Hidroxiciclopentano-1,3-di-il)dicarbamato de benzila e terc-butila (504B-1) & ((1R,3R)-4-hidroxiciclopentano-1,3-di- il)dicarbamato de benzila e terc-butila (504B-2)
[0692] A uma solução de 504A (524 mg, 1,7 mmol, 1 eq) em THF (10 mL) foi adicionado BH3.THF (1 N, 7,8 mL, 7,8 mmol, 4,5 eq) a 0 °C. A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h. H2O (7,5 mL) e NaOH (3 M, 12 mL) foi adicionada, seguida por H2O2 (30%, 20 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante outros 10 min antes da adição de EtOH (7,5 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. Após vertimento em água (20 mL), a mistura foi extraída com acetato de etila (15 mL x 6). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre Na2SO4 anidro. A fase orgânica foi separada por filtração e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em sílica gel (hexano:acetato de etila = 10:1 a 1:2) para originar os compostos do título (566 mg no total) como um sólido pálido: ESI [M+H]+ = 351. ((1R,3R)-3-amino-4-hidroxiciclopentil)carbamato de terc-butila (504-1) & ((1R,4R)-4-amino-2-hidroxiciclopentil)carbamato de terc- butila (504-2)
[0693] 360 mg de material de partida (1,1 mmol, 1 eq) em MeOH (25 mL) foram agitados com Pd(OH) 2 (100 mg) sob H2 à temperatura ambiente durante 19 hr. O catalisador foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado para originar o composto do título como um sólido pálido. Rendimento: 200 mg. ESI [M+H]+ = 217.
[0694] Usando os procedimentos descritos acima, os seguintes exemplos foram sintetizados: LC-MS 1 Estrutura Ex. # H RMN (M+H)+ 1 H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,10 (s, 2H), 7,94 (s, 1H), 7,67 – 7,54 (m, 2H), 7,45 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1H), 6,62 (dd, J = 9,0, 3,0 Hz, 2H), 6,46 (t, J 505 = 6,7 Hz, 1H), 4,40 – 4,28 (m, 405,2 1H), 4,10 (m, 2H), 2,65 – 2,47 (m, 1H), 2,23 – 2,11 (m, 1H), 2,06 (m, 1H), 1,76 (m, 1H), 1,63 (m, 1H), 0,98 – 0,78 (m, 2H), 0,66 – 0,51 (m, 2H). H RMN (400 MHz, MeOD) δ 1 8,13 – 8,04 (s, 2H), 7,96 (s, 1H), 7,65 – 7,53 (m, 2H), 7,53 – 7,38 (m, 1H), 6,74 – 6,56 (m, 2H), 6,46 (m, 1H), 4,39 506 (m, 1H), 4,16 – 3,96 (m, 2H), 405,2 2,51 (m, 1H), 2,19 (m, 1H), 2,04 (m, 1H), 1,76 (m, 1H), 1,71 – 1,58 (m, 1H), 0,97 – 0,84 (m, 2H), 0,67 – 0,54 (m, 2H). H RMN (400 MHz, MeOD) δ 1 8,10 – 8,04 (s, 2H), 7,95 (s, 1H), 7,59 (m, 2H), 7,50 – 7,41 (m, 1H), 6,79 – 6,56 (m, 2H), 6,46 (m, 1H), 4,55 – 4,44 (m, 507 1H), 4,41 – 4,27 (m, 2H), 2,27 405,2 (m, 1H), 2,22 – 2,09 (m, 1H), 2,06 – 1,93 (m, 1H), 1,93 – 1,80 (m, 1H), 1,81 – 1,66 (m, 1H), 0,97 – 0,80 (m, 2H), 0,68 – 0,49 (m, 2H).
Esquema 89 ((1R,4S)-4-((terc-butildifenilsilil)óxi)ciclopent-2-en-1-il)carbamato de terc-butila (508A)
[0695] A uma solução fria (0 ℃) de ((1R, 4S)-4-hidroxiciclopent-2- en-1-il)carbamato de terc-butila (500 mg, 2,5 mmol, 1,0 eq) e imidazol (342 mg, 5,0 mmol, 2,0 eq) em DMF (10 mL) foi adicionado gota a gota TBDPSCl (0,85 mL, 3 mmol, 1,3 eq). A mistura reacional foi depois agitada durante 16 h enquanto a temperatura foi deixada a aumentar até à temperatura ambiente. A mistura reacional foi dividida entre EA e água. A camada orgânica separada foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash de fase reversa (CH3CN:H2O = 40% - 90%) para originar 508A (869,2 mg) como um óleo límpido: 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,65 (dd, J = 6,8, 1,0 Hz, 4H), 7,53 – 7,41 (m, 6H), 7,10 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,67 (t, J = 6,7 Hz, 1H), 4,25 (dd, J = 14,6, 7,2 Hz, 1H), 3,20 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 2,53 (dt, J = 3,6, 1,8 Hz, 1H), 2,52 – 2,43 (m, 1H), 1,60 – 1,49 (m, 1H), 1,39 (s, 9H), 1,03
(s, 9H). ((1R,2R,4S,5S)-4-((terc-butildifenilsilil)óxi)biciclo[3.1.0]hexan-2- il)carbamato de terc-butila (508B)
[0696] A uma solução fria (-15 ℃) de Et2Zn (4,6 mL, 4,6 mmol, 3,0 eq) em DCM seco (5 mL) foi adicionado gota a gota di-iodometano (0,74 mL, 9,2 mmol, 6 eq) em DCM (4 mL). A mistura reacional foi agitada a - 15 ℃ durante 10 minutos até um precipitado branco se ter formado. Depois, 508A (670 mg, 1,5 mmol, 1,0 eq) em DCM (5 mL) foi adicionado gota a gota à mistura reacional. A agitação foi continuada durante 22 h enquanto a temperatura foi deixada a aquecer até à temperatura ambiente gradualmente. A reação foi extinta por adição de NH 4Cl saturado e, depois, foi dividida entre DCM e água. A fase orgânica separada foi lavada com salmoura, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 10:1) para originar 508B (280 mg) como um óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,75 – 7,59 (m, 4H), 7,47 – 7,30 (m, 6H), 4,66 – 4,50 (m, 1H), 4,39 (td, J = 8,0, 4,8 Hz, 1H), 4,01 (s, 1H), 2,17 – 2,07 (m, 1H), 1,44 (d, J = 7,8 Hz, 9H), 1,34 – 1,24 (m, 2H), 1,05 (d, J = 5,7 Hz, 9H), 0,83 (dt, J = 9,0, 2,9 Hz, 1H), 0,46 – 0,33 (m, 1H). (1R, 2R, 4S, 5S)-4-((terc-butildifenilsilil)óxi)biciclo[3.1.0]hexan-2- amina (508C)
[0697] A uma solução de 508B (230 mg) em DCM (3 mL) foi adicionado TFA (5 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h e depois concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi redissolvido em MeOH e o nível de pH foi aumentado até 8 por adição de resinas de permuta iônica. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para originar 508C (189,2 mg) como um óleo amarelo. N-((1R,2R,4S,5S)-4-((terc-butildifenilsilil)óxi)biciclo[3.1.0]hexan-2- il)-5-(metiltio)pirimidin-2-amina (508D)
[0698] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 5 a partir do material de partida 504C e 2-cloro-5-(metiltio)pirimidina originaram 504D como um óleo marrom. (1S,2S,4R,5R)-4-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)biciclo[3.1.0]hexan-2-ol (508E)
[0699] A uma solução de 508D (50 mg) em THF (2 mL) foi adicionada gota a gota piridina HF (0,5 mL). A mistura reacional foi agitada durante 4 hr à temperatura ambiente e depois dividida entre EA e água. A fase orgânica separada foi lavada com salmoura. A fase orgânica foi seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (DCM: MeOH = 10:1) para originar 508E (54,4 mg) como um óleo amarelo-claro. ESI (M+H)+ = 238,3 2-((1S,2R,4R,5R)-4-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)biciclo[3.1.0]hexan-2-il)isoindolina-1,3-diona (508F)
[0700] A uma solução de 508E (50 mg, 0,2 mmol, 1,0 eq), isoindolina-1,3-diona (37 mg, 0,25 mmol, 1,2 eq) e PPh3 (600 mg, 2,3 mmol, 10,0 eq) em THF (10 mL) foi adicionado gota a gota DEAD (398 mg, 2,3 mmol, 10,0 eq) a 0 ℃ sob N2. A mistura reacional foi agitada durante 2 h enquanto a temperatura foi deixada a aumentar até à temperatura ambiente gradualmente. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica gel (PE: EA = 1:1) duas vezes para originar 508F (214 mg, contaminados com impurezas) como um óleo amarelo: ESI (M+H)+ = 367,4 (1R,2R,4R,5S)-N2-(5-(metiltio)pirimidin-2-il)biciclo[3.1.0]hexano- 2,4-diamina (508G)
[0701] Uma solução de 508F (214 mg, 0,584 mmol) e hidrazina hidratada (0,2 mL) em EtOH (5 mL) foi agitada a 60 ℃ sob N2 durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e purificada por cromatografia flash em sílica gel (DCM:MeOH = 20:1) para originar 508G (30 mg) como um óleo amarelo: ESI (M+H)+ = 237,4 6'-(((1S,2R,4R,5R)-4-((5-(metiltio)pirimidin-2- il)amino)biciclo[3.1.0]hexan-2-il)amino)-2H-[1,3'-bipiridin]-2-ona (508)
[0702] Métodos análogos àqueles descritos no Método Geral 2 a partir do material de partida 508G originaram 508 como um sólido amarelo: ESI (M+H)+ = 407,4. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,35 (s, 2H), 8,07 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,93 (dd, J = 9,6, 2,4 Hz, 1H), 7,72 – 7,57 (m, 2H), 7,12 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,51 (td, J = 6,8, 1,2 Hz, 1H), 4,23 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,22 – 2,10 (m, 1H), 1,93 (dt, J = 9,7, 4,3 Hz, 1H), 1,61 (dt, J = 9,9, 6,4 Hz, 2H), 0,76 (dt, J = 7,8, 3,9 Hz, 1H), 0,69 (dd, J = 14,0, 7,9 Hz, 1H). C. Ensaios Biológicos
[0703] A PCSK9 recombinante humana foi expressa como se segue: Sequência de proteína: SEQID NO:1
QEDEDGDYEELVLALRSEEDGLAEAPEHGTTATFHRCAKDPWRLPG TYVVVLKEETHLSQSERTARRLQAQAARRGYLTKILHVFHGLLPGFLV KMSGDLLELALKLPHVDYIEEDSSVFAQSIPWNLERITPPRYRADEYQ PPDGGSLVEVYLLDTSIQSDHREIEGRVMVTDFENVPEEDGTRFHRQ ASKCDSHGTHLAGVVSGRDAGVAKGASMRSLRVLNCQGKGTVSGT LIGLEFIRKSQLVQPVGPLVVLLPLAGGYSRVLNAACQRLARAGVVLV TAAGNFRDDACLYSPASAPEVITVGATNAQDQPVTLGTLGTNFGRCV DLFAPGEDIIGASSDCSTCFVSQSGTSQAAAHVAGIAAMMLSAEPELT LAELRQRLIHFSAKDVINEAWFPEDQRVLTPNLVAALPPSTHGAGWQ LFCRTVWSAHSGPTRMATAVARCAPDEELLSCSSFSRSGKRRGER MEAQGGKLVCRAHNAFGGEGVYAIARCCLLPQANCSVHTAPPAEAS MGTRVHCHQQGHVLTGCSSHWEVEDLGTHKPPVLRPRGQPNQCV GHREASIHASCCHAPGLECKVKEHGIPAPQEQVTVACEEGWTLTGC SALPGTSHVLGAYAVDNTCVVRSRDVSTTGSTSEGAVTAVAICCRSR HLAQASQELQSGSGGLNDIFEAQKIEWHENLYFQGHHHHHH
[0704] O seguinte método de ensaio foi usado para identificar e avaliar compostos da Fórmula (I) que são eficazes na inibição da função de PCSK9. Exemplo: Ensaio SPR de PCSK9
[0705] Os dados de ressonância de plasmon de superfície foram coletados em um sistema BiacoreTM T200 ou 3000 (GE Healthcare) a 25 °C. A estreptavidina foi imobilizada em um chip sensor CM5 (GE Healthcare) ou CMD500d (XanTec Bioanalytics) usando química de acoplamento de amina padrão a 25 °C com HBS-N (HEPES a 10 mM, NaCl a 0,15 M, pH 7,4) como o tampão de operação. Resumidamente, a superfície de carboximetil dextrana foi ativada com uma injeção de 12 min de uma razão 1:1 de hidrocloreto de 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodi-imida (EDC) a 0,4 M/N-hidroxissuccinimida (NHS) a 0,1 M a um caudal de 10 μL/min. Para captura da estreptavidina, a proteína foi diluída até 0,2 mg/mL em acetato de sódio a 10 mM (pH 4,5) e capturada por injeção de 100 µL na superfície ativada do chip. Os grupos ativados residuais foram bloqueados com uma injeção de 7 min de etanolamina a 1 M (pH 8,5). A proteína PCSK9 marcada com Avi foi capturada na superfície da estreptavidina por injeção de 150 µL de proteína diluída até 16 µg/mL em HBS-N, tween- 20 a 0,05%, CaCl2 a 0,1 mM. As densidades superficiais típicas obtidas foram de 8000-10000 RU. Os dados de ligação de SPR foram obtidos usando uma série de diluição apropriada de cada composto a um caudal de 30 μL/min, com um tempo de captura de 100 s e tempos de dissociação de 300 s. O tampão de operação para os estudos de ligação do composto foi HBS-N, tween-20 a 0,05%, CaCl2 a 0,1 mM, DMSO a 4%. Os dados foram corrigidos quanto aos efeitos de volume excluídos do DMSO. Todos os dados foram duplamente referenciados para injeções em branco e superfície de referência usando procedimentos de processamento padrão e o processamento de dados e o ajuste cinético foram realizados usando software Scrubber, versão 2.0c (Software BioLogic). Os dados foram ajustados usando um modelo de ligação 1:1 simples para determinar os valores de ka, kd e KD.
[0706] A capacidade dos compostos da Fórmula (I) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis de se ligar a e inibir PCSK9 foi estabelecida com os compostos representativos da Fórmula (I) listados na tabela em baixo: Afinidade por PCSK9 (nM) Categoria KD = 2,000-20,000 nM + KD = 200 – 2,000 nM ++ KD < 200 nM +++ Exemplo # KD 1 +++ 2 ++ 3 ++ 4 +++ 5 +++ 6 ++ 7 +++ 8 ++ 9 ++ 10 +++ 11 +++ 12 +++ 13 +++ 14 ++ 15 +++
Exemplo # KD 16 +++ 17 +++ 18 +++ 19 +++ 20 +++ 21 +++ 22 +++ 23 +++ 24 +++ 25 ++ 26 +++ 27 +++ 28 +++ 29 ++ 30 ++ 31 +++ 32 +++ 33 +++ 34 +++ 35 +++ 36 +++ 37 ++ 38 +++ 39 +++ 40 +++ 41 +++ 42 ++ 43 +++
Exemplo # KD 44 +++ 45 +++ 46 +++ 47 +++ 48 +++ 49 +++ 50 +++ 87 +++ 88 +++ 89 +++ 90 +++ 91 +++ 92 +++ 93 +++ 94 +++ 95 +++ 96 +++ 97 ++ 98 ++ 99 ++ 100 ++ 102 ++ 103 + 104 + 105 +++ 106 ++ 107 ++ 164 +
Exemplo # KD 165 ++ 166 ++ 167 + 168 ++ 169 + 170 ++ 171 + 172 + 173 + 174 + 175 +++ 176 +++ 177 + 178 + 179 + 180 +++ 181 +++ 182 +++ 183 +++ 184 +++ 185 ++ 186 ++ 187 ++ 188 +++ 189 ++ 190 + 203 +++ 204 ++
Exemplo # KD 205 ++ 206 +++ 207 +++ 208 ++ 209 ++ 210 ++ 211 ++ 212 +++ 213 + 214 + 215 ++ 216 ++ 217 +++ 218 + 219 ++ 220 + 221 ++ 222 ++ 223 +++ 224 +++ 225 ++ 226 ++ 227 ++ 228 ++ 229 ++ 230 +++ 231 ++ 232 ++
Exemplo # KD 233 ++ 240 +++ 241 +++ 242 ++ 243 +++ 244 ++ 245 +++ 246 +++ 247 +++ 248 +++ 249 ++ 250 +++ 301 ++ 302 +++ 303 + 304 ++ 305 ++ 306 ++ 307 ++ 308 ++ 309 ++ 310 +++ 311 +++ 312 +++ 313 +++ 314 +++ 315 +++ 316 ++
Exemplo # KD 317 ++ 318 +++ 319 + 320 +++ 321 +++ 322 +++ 323 +++ 324 +++ 325 +++ 326 +++ 327 +++ 328 +++ 329 +++ 330 +++ 331 +++ 332 +++ 333 +++ 334 +++ 335 +++ 336 +++ 337 +++ 338 +++ 339 +++ 340 +++ 341 +++ 342 +++ 343 +++ 344 ++
Exemplo # KD 345 +++ 346 +++ 347 +++ 348 +++ 349 +++ 350 +++ 351 +++ 352 +++ 353 +++ 354 +++ 355 +++ 356 +++ 357 +++ 358 +++ 359 +++ 360 +++ 361 +++ 362 +++ 363 +++ 364 +++ 365 +++ 366 +++ 367 +++ 368 +++ 369 + 370 +++ 371 +++ 372 +
Exemplo # KD 373 +++ 375 +++ 400 +++ 401 +++ 402 +++ 403 +++ 424 +++ 425 +++ 426 +++ 427 +++ 428 +++ 429 +++ 430 +++ 440 +++ 441 +++ 442 +++ 443 +++ 444 +++ 445 +++ 446 +++ 447 +++ 448 +++ 449 +++ 450 +++ 451 +++ 452 +++ 453 +++ 454 +++
Exemplo # KD 455 +++ 456 +++ 457 +++ 458 +++ 458A +++ 458B +++ 459 +++ 460 +++ 463 +++ 464 +++ 465 +++ 466 +++ 467 +++ 468 +++ 469 +++ 470 +++ 471 +++ 472 +++ 473 +++ 474 +++ 475 +++ 476 +++ 477 +++ 478 +++ 479 +++ 480 +++ 481 +++ 482 +++
Exemplo # KD 483 +++ 484 +++ 487 +++ 488 +++ 489 +++ 490 +++ 491 +++ 492 +++ 493 +++ 494 +++ 495 +++ 497 +++ 498 +++ 499 +++ 499A +++ 500 +++ 501 +++ 502 +++ 503 +++ 505 +++ 506 +++ 507 +++ 508 +++ Exemplo: Ensaio celular in vitro para medir os efeitos dos compostos nos níveis de PCSK9 secretada, níveis de LDLR celular e viabilidade celular.
[0707] O rastreamento de compostos foi realizado em placas de cultura de tecidos de 96 poços com 25.000 células HepG2 plaqueadas em 200 µL de meio de ensaio (DMEM - Gibco 31966-021 com FBS esgotado em lipoproteína a 10% - Sigma S5394). As placas de células foram incubadas durante a noite (20-24 hrs) e, depois, o meio de ensaio foi removido, as células lavadas com 200 µL de DMEM, e 200 µL de composto ou veículo (DMSO a 0,3%) em meio de ensaio foram adicionados a cada poço. Após 48 horas de incubação com o composto, as seguintes análises foram realizadas.
[0708] Para medição dos níveis de PCSK9 secretada, umas amostras de 100 µL do meio de ensaio de cultura de células foram coletadas e armazenadas a -80 °C antes da análise usando um Estojo de Detecção de PCSK9 (humana) AlphaLISA (Perkin Elmer AL270F). Amostras (5 µL) de meio de ensaio de cultura de células foram transferidas para optiPlate branca de 384 poços (Perkin Elmer – 6007290). Foram também incluídas amostras de 5 µL de meio de ensaio sozinho para determinar o fundo do ensaio e amostras de meio de ensaio enriquecidas com uma concentração conhecida de PCSK9 humana recombinante (curva padrão). Para cada 5 µL de amostra, 20 µL de uma solução de esférulas aceitadoras AntiPCSK9 AlphaLISA (concentração final 10 µg/mL) e Anticorpo Anti-PCSK9 Biotinilado (concentração final 1 nM) diluídos em tampão de imunoensaio AlphaLISA (todos proporcionados no Estojo de Detecção AlphaLISA) foram adicionados e as placas incubadas à temperatura ambiente durante 1 hora. Após incubação, 25 µL de uma solução de esférulas dadores de estreptavidina (concentração final 40 µg/mL) diluídos em tampão de imunoensaio AlphaLISA foram adicionados a cada amostra e as amostras incubadas durante 1 hora adicional à temperatura ambiente protegidas da luz. Na presença da PCSK9 (analito), as esférulas dadoras e aceitadoras ficam próximas. A emissão de luz a 615 nm é depois medida em um leitor de placas Enspire Alpha após excitação. A percentagem de inibição foi calculada usando a seguinte fórmula após a concentração de PCSK9 ter sido determinada usando os valores da curva padrão: (1-(valor do poço de teste - valor médio de fundo)/(valor médio do veículo - valor médio de fundo))*100
[0709] A análise de viabilidade celular foi realizada nas mesmas placas de células que a análise de PCSK9, após a amostra do meio celular ter sido coletada. O ensaio é baseado na redução do composto de tetrazólio MTS por células viáveis para gerar um produto de formazano colorido que é solúvel em meio de cultura de células. A cada poço de célula, contendo 100 µL de meio de cultura restante, 20 µL de reagente MTS (Promega G543) foram adicionados. Foram também incluídos poços contendo 100 µL de meio de ensaio mais reagente MTS sem células para determinar as medições de fundo. As placas foram incubadas a 37 °C durante 1 hora e a densidade óptica (OD) medida a um comprimento de onda de 490 nm. Os valores de OD foram convertidos em % de mudança nos valores de viabilidade usando a seguinte fórmula: - (1-(valor do poço de teste - valor médio de fundo)/(valor médio do veículo - valor médio de fundo))*100
[0710] Os níveis de LDLR celular foram determinados usando o Imunoensaio de LDL R humano (R&D systems DLDLR0) e todos os reagentes proporcionados no imunoensaio a não ser que afirmado. As células HepG2 foram tratadas como descrito acima, e após incubação de 48 horas do composto, o meio foi removido, as células lavadas com solução salina tamponada com fosfato e as células lisadas em 50 µL de tampão de lise (Tris-HCl a 25 mM pH 7,4, NaCl a 150 mM, EDTA a 1 mM, NP-40 a 1% e glicerol a 5%) com inibidores de protease (Cocktail inibidor Halt - Pierce 78430). Os lisados foram depurados por centrifugação e as amostras armazenadas a -80 °C antes da análise no imunoensaio. Adicionalmente às amostras foi incluída uma curva padrão de uma concentração conhecida de LDLR recombinante diluído no diluente do calibrador e nenhum LDLR para determinar o fundo do ensaio. As amostras (30 µL) foram incubadas em tiras de poços da microplaca (pré-revestidas com anticorpo de captura) com 50 µL de diluente de ensaio durante 2 horas à temperatura ambiente. Depois, as tiras dos poços da microplaca foram lavadas quatro vezes com tampão de lavagem e 200 µL de conjugado de LDLR humano adicionados. Após uma incubação de 2 horas adicionais à temperatura ambiente, as placas foram lavadas como antes e 200 µL de solução de substrato adicionados. Após 20 minutos, 50 µL de solução de paragem foram aplicados e a densidade óptica de cada poço medida a 450 nm e correção de comprimento de onda de 540 nm aplicada. A percentagem de aumento foi calculada usando a seguinte fórmula após a concentração de LDLR ter sido determinada usando os valores da curva padrão: (valor do poço de teste - valor médio de fundo)/(valor médio do veículo - valor médio de fundo)*100
[0711] Como um controle positivo, um inibidor da tradução de PCSK9, R-4-(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-il)-N-(3-cloropiridin-2-il)- N-(piperidin-3-il)benzamida (SI-1), foi sintetizado de acordo com WO
2014170786.
[0712] Usando os ensaios acima, a capacidade dos compostos da Fórmula (I) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis de inibir a função de PCSK9 foi estabelecida com os compostos representativos da Fórmula (I) listados na tabela em baixo: Inibição de Mudança na Concentração de Aumento em Exemplo # Secreção de PCSK9 Viabilidade Celular Inibidor (µM) LDLR (%) (%) (%) 10 75 56 32 1 17 75 40 58 -6 88 75 61 90 -9 89 75 57 136 -14 91 75 52 76 -2 128 75 48 125 12 159 75 49 116 11 175 75 72 109 -8 SI-1 18,8 95 47 7
D. Caracterização Farmacóforo
[0713] PCSK9(31-692)-AVI-TEV-His6 foi expresso usando células HEK293 e purificado a partir do meio de crescimento por cromatografia de afinidade de níquel seguida por cromatografia de exclusão por tamanho. A proteína pura foi concentrada a ~8 mg/mL, misturada com o composto inibidor até uma concentração final de 1 mM e incubada a 4 °C durante quatro horas.
[0714] Os co-cristais foram deixados crescer pelo método de gota suspensa de difusão de vapor em formato de 24 poços. Os cristais foram crio-resfriados para coleta de dados síncrotron na linha de luz ESRF ID30A-1 em um detetor Pilatus3 2M ou linha de luz DLS i04 em um detetor Pilatus 6M-F. Parâmetros Cristalográficos
[0715] Os seguintes parâmetros cristalográficos são dados para os compostos 5, 87, 105 e 188.
5 87 105 188 Exemplo # 5 87 105 188 Comprimento de onda (Å) 58,01-2,48 (2,58- 74,17-2,44 89,37-2,95 74,65-2,44 (2,48- Gama de resolução (Å) 2,48) (2,48-2,44) (3,05-2,95) 2,44) Grupo espacial P 21 21 21 P 21 21 21 P 21 21 21 P 21 21 21 63,04 70,80 62,99 70,64 119,39 63,07 70,71 Célula unitária 148,23 148,34 132,60 149,30
Exemplo # 5 87 105 188 134,77 Reflexos totais 158294 160732 284167 163750 Reflexos únicos 24142 25385 45785 25629 Multiplicidade 6,6 (6,6) 6,3 (5,9) 6,2 (6,3) 6,4 (5,9) Completude (%) 99,1 (92,6) 100,0 (96,7) 100,0 (100,0) 100,0 (100,0) Média I/sigma(I) 9,2 (1,7) 5,8 (1,1) 7,3 (1,6) 4,8 (1,3) Fator B de Wilson 88,5 34,335 48,1 R-convergência 0,164 (1,119) 0,200 (1,429) 0,110 (0,743) 0,286 (1,264) R-média 0,193 (1,317) 0,218 (1,581) 0,133 (0,890) 0,311 (1,388) CC1/2 0,993 (0,609) 0,991 (0,618) 0,994 (0,828) 0,980 (0,539) CC* R-trabalho 0,2070 0,2333 0,2135 0,2419 R-livre 0,2555 0,2951 0,2530 0,2990 Número de átomos que não 4352 4499 4478 são de hidrogênio macromoléculas 4258 4357 8635 4345 ligandos 32 27 46 24 água 56 109 0 103 Resíduos de proteína 574 580 580 RMS (ligações) 0,008 0,008 0,008 0,010 RMS (ângulos) 1,358 1,359 1,368 1,365 Ramachandran favorecido (%) 95,00 96,45 93,30 95,41 Ramachandran atípicos (%) 0,36 0,35 1,12 0,71 Fator B médio macromoléculas 40,54 42,65 68,38 31,06 ligandos 45,17 39,89 92,21 26,97 solvente 36,14 39,77 - 23,91 Listagem de Sequências de Isoformas Exemplificativas de PCSK9 (ID Uniprot fornecido) SEQ ID NO:1 Q8NBP7#VAR_017197
MGTVSSRRSWWPLPLLLLLLLLLGPAGARAQEDEDGDYEELVLALLS EEDGLAEAPEHGTTATFHRCAKDPWRLPGTYVVVLKEETHLSQSER TARRLQAQAARRGYLTKILHVFHGLLPGFLVKMSGDLLELALKLPHVD YIEEDSSVFAQSIPWNLERITPPRYRADEYQPPDGGSLVEVYLLDTSI QSDHREIEGRVMVTDFENVPEEDGTRFHRQASKCDSHGTHLAGVVS GRDAGVAKGASMRSLRVLNCQGKGTVSGTLIGLEFIRKSQLVQPVGP LVVLLPLAGGYSRVLNAACQRLARAGVVLVTAAGNFRDDACLYSPAS APEVITVGATNAQDQPVTLGTLGTNFGRCVDLFAPGEDIIGASSDCST CFVSQSGTSQAAAHVAGIAAMMLSAEPELTLAELRQRLIHFSAKDVIN EAWFPEDQRVLTPNLVAALPPSTHGAGWQLFCRTVWSAHSGPTRM ATAVARCAPDEELLSCSSFSRSGKRRGERMEAQGGKLVCRAHNAF GGEGVYAIARCCLLPQANCSVHTAPPAEASMGTRVHCHQQGHVLTG CSSHWEVEDLGTHKPPVLRPRGQPNQCVGHREASIHASCCHAPGLE CKVKEHGIPAPQEQVTVACEEGWTLTGCSALPGTSHVLGAYAVDNT
CVVRSRDVSTTGSTSEGAVTAVAICCRSRHLAQASQELQ SEQ ID NO:2 Q8NBP7#VAR_017198
MGTVSSRRSWWPLPLLLLLLLLLGPAGARAQEDEDGDYEELVLALRS EEDGLVEAPEHGTTATFHRCAKDPWRLPGTYVVVLKEETHLSQSER TARRLQAQAARRGYLTKILHVFHGLLPGFLVKMSGDLLELALKLPHVD YIEEDSSVFAQSIPWNLERITPPRYRADEYQPPDGGSLVEVYLLDTSI QSDHREIEGRVMVTDFENVPEEDGTRFHRQASKCDSHGTHLAGVVS GRDAGVAKGASMRSLRVLNCQGKGTVSGTLIGLEFIRKSQLVQPVGP LVVLLPLAGGYSRVLNAACQRLARAGVVLVTAAGNFRDDACLYSPAS APEVITVGATNAQDQPVTLGTLGTNFGRCVDLFAPGEDIIGASSDCST CFVSQSGTSQAAAHVAGIAAMMLSAEPELTLAELRQRLIHFSAKDVIN EAWFPEDQRVLTPNLVAALPPSTHGAGWQLFCRTVWSAHSGPTRM ATAVARCAPDEELLSCSSFSRSGKRRGERMEAQGGKLVCRAHNAF GGEGVYAIARCCLLPQANCSVHTAPPAEASMGTRVHCHQQGHVLTG CSSHWEVEDLGTHKPPVLRPRGQPNQCVGHREASIHASCCHAPGLE CKVKEHGIPAPQEQVTVACEEGWTLTGCSALPGTSHVLGAYAVDNT
CVVRSRDVSTTGSTSEGAVTAVAICCRSRHLAQASQELQ SEQ ID NO:3 Q8NBP7#VAR_021337
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CVVRSRDVSTTGSTSEGAVTAVAICCRSRHLAQASQELQ SEQ ID NO:4 Q8NBP7#VAR_021338
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CVVRSRDVSTTGSTSEGAVTAVAICCRSRHLAQASQELQ SEQ ID NO:5 Q8NBP7#VAR_021339
MGTVSSRRSWWPLPLLLLLLLLLGPAGARAQEDEDGDYEELVLALRS EEDGLAEAPEHGTTATFHRCAKDPWRLPGTYVVVLKEETHLSQSER TARRLQAQAARRGYLTKILHVFHGLLPGFLVKMSGDLLELALKLPHVD YIEEDSSVFAQSIPWNLERITPPRYRADEYQPPDGGSLVEVYLLDTSI QSDHREIEGRVMVTDFENVPEEDGTRFHRQASKCDSHGTHLAGVVS GRDAGVAKGASMRSLRVLNCQGKGTVSGTLIGLEFIRKSQLVQPVGP LVVLLPLAGGYSRVLNAACQRLARAGVVLVTAAGNFRDDACLYSPAS APEVITVGATNAQDQPVTLGTLGTNFGRCVDLFAPGEDIIGASSDCST CFVSQSGTSQAAAHVAGIAAMMLSAEPELTLAELRQRLIHFSAKDVIN EAWFPEDQRVLTPNLVAALPPSTHGAGWQLFCRTVWSAHSGPTRM ATAIARCAPDEELLSCSSFSRSGKRRGERMEAQGGKLVCRAHNAFG GEGVYAIARCCLLPQANCSVHTAPPAEASMGTRVHCHQQGHVLTGC SSHWEVEDLGTHKPPVLRPRGQPNQCVGHREASIHASCCHAPGLEC KVKEHGIPAPQEQVTVACEEGWTLTGCSALPGTSHVLGAYAVDNTC
VVRSRDVSTTGSTSEGAVTAVAICCRSRHLAQASQELQ SEQ ID NO:6 Q8NBP7#VAR_017201
MGTVSSRRSWWPLPLLLLLLLLLGPAGARAQEDEDGDYEELVLALRS EEDGLAEAPEHGTTATFHRCAKDPWRLPGTYVVVLKEETHLSQSER TARRLQAQAARRGYLTKILHVFHGLLPGFLVKMSGDLLELALKLPHVD YIEEDSSVFAQSIPWNLERITPPRYRADEYQPPDGGSLVEVYLLDTSI QSDHREIEGRVMVTDFENVPEEDGTRFHRQASKCDSHGTHLAGVVS GRDAGVAKGASMRSLRVLNCQGKGTVSGTLIGLEFIRKSQLVQPVGP LVVLLPLAGGYSRVLNAACQRLARAGVVLVTAAGNFRDDACLYSPAS APEVITVGATNAQDQPVTLGTLGTNFGRCVDLFAPGEDIIGASSDCST CFVSQSGTSQAAAHVAGIAAMMLSAEPELTLAELRQRLIHFSAKDVIN EAWFPEDQRVLTPNLVAALPPSTHGAGWQLFCRTVWSAHSGPTRM ATAVARCAPDEELLSCSSFSRSGKRRGERMEAQGGKLVCRAHNAF GGEGVYAIARCCLLPQANCSVHTAPPAEASMGTRVHCHQQGHVLTG CSSHWEVEDLGTHKPPVLRPRGQPNQCVGHREASIHASCCHAPGLE CKVKEHGIPAPQEQVTVACEEGWTLTGCSALPGTSHVLGAYAVDNT CVVRSRDVSTTGSTSEEAVTAVAICCRSRHLAQASQELQ
Incorporação por Referência
[0716] Todas as publicações e patentes mencionadas aqui são deste modo incorporadas por referência em sua totalidade como se cada publicação ou patente individual fosse especificamente e individualmente indicada como estando incorporada por referência. Em caso de conflito, o presente pedido, incluindo quaisquer definições aqui, controlará. Equivalentes
[0717] Embora modalidades específicas da presente invenção tenham sido discutidas, o relatório descritivo acima é ilustrativo e não restritivo. Muitas variações da invenção se tornarão aparentes aos peritos na técnica após revisão deste relatório descritivo e das reivindicações em baixo. O escopo total da invenção deve ser determinado por referência às reivindicações, em conjunto com seu escopo total de equivalentes, e ao relatório descritivo, em conjunto com tais variações.

Claims (81)

REIVINDICAÇÕES
1. Método de inibição de PCSK9, caracterizado por compreender o contato de PCSK9 com um inibidor de PCSK9 que se liga a um bolso de ligação definido pelos resíduos de aminoácidos Val589 e Ser636 de PCSK9 humano.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o inibidor ser um inibidor alostérico.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado por o método compreender o contato da superfície de uma célula que secreta PCSK9 com o inibidor.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o método compreender o contato de PCSK9 intracelular com o inibidor.
5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o método compreender o contato de PCSK9 que está circulando no plasma com o inibidor.
6. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o inibidor compreender um grupo doador/aceitador de ligação H com duas frações aceitadoras de ligação H e uma fração doadora de ligação H dispostas para doar uma ligação H e aceitar uma ligação H da funcionalidade de amida estrutural do resíduo Val589 e aceitar uma ligação H da cadeia lateral de hidroximetila de Ser636 de PCSK9 humano.
7. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o inibidor compreender um grupo doador/aceitador de ligação H com duas frações doadoras de ligação H e uma fração aceitadora de ligação H dispostas para doar uma ligação H e aceitar uma ligação H da funcionalidade amida estrutural do resíduo Val589, e doar uma ligação H para a cadeia lateral de hidroximetila de Ser636 de PCSK9 humano.
8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado por o inibidor compreender um anel pirimidinila e as duas porções aceitadoras de ligação H serem os dois átomos de nitrogênio presentes no anel pirimidinila.
9. Método, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado por o inibidor compreender uma fração 2-NH-pirimidinila e a fração doadora de ligação H ser o átomo de hidrogênio amino.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado por o inibidor compreender ainda um ou mais dos seguintes: a) uma fração aceitadora de ligação H disposta para se ligar aos resíduos de aminoácidos Ser642, His643 ou Val 644, b) uma fração doadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Ala637 ou Thr641, e c) uma fração de interação de empilhamento cátion-pi disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Arg495 ou His591, em que o grupo aceitador/doador de ligação H está ligado aos resíduos de aminoácidos Val589 e Ser636 de PCSK9 humano.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado por o inibidor compreender ainda uma fração aceitadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Glu612.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado por o inibidor interagir com pelo menos um resíduo no domínio M2 C-terminal e pelo menos um resíduo no domínio M3 C-terminal.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado por o inibidor ainda interagir com pelo menos um resíduo no domínio M1 C-terminal.
14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado por o inibidor interagir com pelo menos um resíduo no domínio M1 C-terminal e pelo menos um resíduo no domínio M3 C-terminal.
15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado por o inibidor interagir com pelo menos um resíduo no domínio M1 C-terminal e pelo menos um resíduo no domínio M2 C-terminal.
16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado por o inibidor interagir com um bolso em PCSK9 entre os resíduos de aminoácidos 558-590 no domínio M2 C-terminal e os resíduos de aminoácidos 631-650 no domínio M3 C- terminal.
17. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o inibidor interagir com pelo menos um resíduo na cadeia beta 3 e cadeia beta 5 do domínio C-terminal M2 e na cadeia beta 3 e cadeia beta 4 do domínio M3 C-terminal.
18. Método, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado por o inibidor interagir com um bolso em PCSK9 criado entre os resíduos de aminoácidos 558-566 na cadeia beta 3 do domínio M2 C-terminal e os resíduos de aminoácidos 587-590 na cadeia beta 5 do domínio M2 C-terminal.
19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado por o inibidor interagir com um bolso em PCSK9 criado entre os resíduos de aminoácidos 631-637 na cadeia beta 3 do domínio M3 C-terminal e os resíduos de aminoácidos 644-650 na cadeia beta 4 do domínio M3 C-terminal.
20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado por o inibidor ser um composto de fórmula (I):
(I) em que: A é selecionado de H, halo, hidróxi, alquila, tioalquila, alquenila, alcóxi, acilóxi, ciano, cicloalquila, -C(O)OR6 e -C(O)NR6R7; B é selecionado de H, alquila e halo, ou A e B são tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais estão anexados para formar uma heteroarila com 5 ou 6 membros; X é NR5 ou O; R1 e R1' são, cada um, independentemente selecionados de H e alquila; ou se n é 0, R1 e R1', em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou cicloalquenila com 4 a 8 membros; R2 é selecionado de H, halo, alquila, alcóxi, amidoalquila, aminoalquila, hidroxialquila, alquilamino, ciano e hidróxi; ou R1 e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros; ou R1' e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros; R2' é selecionado de H, halo, alquila, alcóxi, amidoalquila, aminoalquila e ciano, ou R2 e R2', tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros; cada R3 e R4 é independentemente H ou alquila; ou R2 e R3, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros; e R5 é H ou alquila; ou R1 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 6 a 8 membros; ou R2 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formam um anel de cicloalquila ou heterociclila com 5 a 8 membros; cada R6 e R7 é independentemente H ou alquila; Y é selecionado de arila, heteroarila e heterociclila; e n é 0 ou 1.
21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por A ser selecionado de H, hidróxi, tioalquila, alquila, alcóxi, acilóxi, ciano, cicloalquila, -C(O)OR6 e -C(O)NR6R7.
22. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por A ser H.
23. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por A ser alquila.
24. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por A ser tioalquila.
25. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por A ser alcóxi.
26. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por A ser cicloalquila.
27. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por A ser selecionado de -SCH3, -SCHF2 e -OCHF2.
28. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por A e B serem tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais estão anexados para formar um anel de pirrolila ou tienila, que está não substituído ou substituído por uma ou mais alquilas.
29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 28, caracterizado por B ser H.
30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 29, caracterizado por X ser NR5.
31. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 30, caracterizado por Y ser heteroarila ou heterociclila.
32. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 31, caracterizado por R1 e R1' serem, cada um, H.
33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 31, caracterizado por n ser 0, e R1 e R1', em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formarem um anel de cicloalquila ou cicloalquenila monocíclico ou bicíclico com 4 a 8 membros que está não substituído ou substituído, p.ex., por um ou mais hidróxi.
34. Método, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado por R1 e R1', em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formarem uma cicloalquila monocíclica ou bicíclica com 4 a 8 membros.
35. Método, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado por R1 e R1', em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formarem uma cicloalquenila monocíclica ou bicíclica com 4 a 8 membros.
36. Método, de acordo com a reivindicação 33,
caracterizado por o anel de cicloalquila ser um anel de ciclopentila.
37. Método, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado por o anel de cicloalquila estar substituído por hidroxila ou hidroxialquila.
38. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 37, caracterizado por R2 ser selecionado de H, halo, alquila, alcóxi, amidoalquila, aminoalquila, alquilamino, ciano e hidroxila.
39. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 38, caracterizado por R2 ser alquila C1-3.
40. Método, de acordo com a reivindicação 39, caracterizado por R2 estar substituído por um ou mais substituintes selecionados de amino, amido, ciano, hidróxi e heterociclila.
41. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 40, caracterizado por R2' ser alquila C1-3.
42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 40, caracterizado por R2' ser H.
43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 31, caracterizado por R1 e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formarem um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros.
44. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 31, caracterizado por R1' e R2, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formarem um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros.
45. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 31, caracterizado por R2 e R2', tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados, formarem um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros.
46. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 45, caracterizado por R3 ser alquila C1-3.
47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 45, caracterizado por R3 ser H.
48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 31, caracterizado por R2 e R3, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formarem um anel de cicloalquila ou heterociclila com 3 a 8 membros.
49. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 48, caracterizado por R4 ser H.
50. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 31, caracterizado por R1 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formarem um anel de cicloalquila ou heterociclila com 6 a 8 membros.
51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 31, caracterizado por R2 e R5, em conjunto com os átomos aos quais estão anexados, formarem um anel de cicloalquila ou heterociclila com 5 a 8 membros.
52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 51, caracterizado por Y ser heteroarila monocíclica.
53. Método, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado por Y ser selecionado de piridila, piridinila, pirazinila, pirimidinila e tiazolila.
54. Método, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado por Y ser selecionado de triazenila, oxazolila, isoxazolila, imidazolila, pirazolila e triazolila.
55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 54, caracterizado por a heteroarila monocíclica estar não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados de alquila, tioalquila, alcóxi, alcoxicarbonila, amido, carbóxi, ciano, halo, arila, heteroarila, heterociclila, nitro, sulfonamido e tioalquila.
56. Método, de acordo com a reivindicação 55, caracterizado por a heteroarila monocíclica estar substituída por uma arila, heteroarila ou heterociclila com 6 membros selecionada de fenila, piridinila, 2-hidroxipiridinila, piperidinonila, 2-hidroxi-1-metilpiridinila, triazolila, imidazolidinonila, pirimidonila, 2-hidroxi-isoquinolinila, 3- hidroxipiridazinila, pirrolidinonila, pirazolila e morfolinonila.
57. Método, de acordo com a reivindicação 56, caracterizado por a heteroarila monocíclica estar substituída por uma heteroarila ou heterociclila que está substituída por um ou mais substituintes selecionados de halo, CN, alquila, alcóxi, hidróxi, carbóxi, -CO2alquila e tetrazolila.
58. Método, de acordo com a reivindicação 55, caracterizado por a heteroarila monocíclica estar disposta na posição para de A em relação a X.
59. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 51, caracterizado por Y ser heteroarila bicíclica.
60. Método, de acordo com a reivindicação 59, caracterizado por Y ser selecionado de benzotiazolila, benzoxazolila, benzimidazolila, triazolopiridinila, tiazolopirindinila, quinolinila e quinoxalinila.
61. Método, de acordo com a reivindicação 59 ou 60, caracterizado por a heteroarila bicíclica estar não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados de alquila, haloalquila, hidroxialquila, tioalquila, alcóxi, alcoxicarbonila, amido, carbóxi, ciano, halo, heteroarila, nitro e sulfonamido.
62. Método, de acordo com a reivindicação 59 ou 60, caracterizado por a heteroarila bicíclica estar não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados de tioalquila, alcoxicarbonila, amido, carbóxi, halo e heteroarila.
63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 62, caracterizado por Y estar substituído por um substituinte de amido da fórmula –C(O)NR8R9 ou –NR9C(O)R10, em que R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados de H, alquila, heterociclila e heteroarila; ou R8 e R9, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam um anel heterocíclico ou de heteroarila com 4, 5, 6 ou 7 membros; e R10 é alquila.
64. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 20 a 61, caracterizado por Y estar substituído por um substituinte de sulfonamido da fórmula –S(O)2NR8R9 ou –NR9S(O)2R10; em que R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados de H, alquila e heteroarila; ou R8 e R9, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formam um anel heterocíclico com 4, 5, 6 ou 7 membros; e R10 é alquila.
65. Método, de acordo com a reivindicação 63 ou 64, caracterizado por R8 e R9 serem, cada um, independentemente selecionados de H, metila, etila, triazolila e pirazolila.
66. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 63 a 65, caracterizado por um de, ou ambos de, R8 e R9 serem alquila, e cada alquila estar independentemente não substituída ou substituída por um ou mais substituintes selecionados de metila, metóxi, carbóxi, ciano, hidróxi, dimetilamino, etoxicarbonila, fenila, metoxifenila, oxadiazolila, tetrazolila, 2-metil-tetrazolila, triazolila, 1- metiltriazolila, 4-metiltriazolila e 2,4-di-hidro-3H-1,2,4-triazol-3-onila.
67. Método, de acordo com a reivindicação 63 ou 64, caracterizado por R8 e R9, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formarem um anel heterocíclico selecionado de aziradina, isotiazolidina-1,1-dióxido, azetidina, tiazol- 4(5Hn)-ona, morfolina, piperidina, piperazina, pirrolidina, tiomorfolina- 1,1-dióxido, 2-oxa-6-azaespiro[3.3]heptano.
68. Método, de acordo com a reivindicação 63 ou 64,
caracterizado por R8 e R9, tomados em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados, formarem um anel heterocíclico selecionado de 2,8-diazaespiro[5,5]undeceno, tetra-hidroimidazo[1,2- a]pirazina, octa-hidropirazino[2,1-c][1,4]oxazina, tetra-hidropirido[3,4- d]pirimidina, 2-oxa-8-azaespiro[4.5]decano, tetra-hidropirrolo[3,4- c]pirazol, tiomorfolina, 2-oxa-7-azaespiro[3.5]nonano, 2,8- diazaespiro[4.5]decan-3-ona, tetra-hidro-1,7-naftiridina, 1-oxa-4,9- diazaespiro[5.5]undecan-3-ona, tetra-hidropirrolo[3,4-d]imidazol, pirimidina, 8-oxa-2-azaespiro[4.5]decano, hexa-hidro-3H-oxazolo[3,4- a]pirazin-3-ona, 1-oxa-7-azaespiro[3.5]nonano, octa- hidrociclopenta[c]pirrol, tetra-hidro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazina, 2,7- diazaespiro[4.4]nonano, 2,6-diazaespiro[3.4]octano, 7-oxa-2- azaespiro[3.5]nonano, 1-oxa-8λ2-azaespiro[4.5]decano, 2-oxa-6- azaespiro[3.3]heptano, tetra-hidrofurano, oxadiazol, triazol, piridinona, tetra-hidro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-3(2H)-ona, piperidinona, 3,6- diazabiciclo[3.1.1]heptano, 5-oxa-2,7-diazaespiro[3.5]nonano, pirazol e piridazin-3(2H)-ona.
69. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado por o anel heterocíclico estar não substituído ou substituído por um ou mais substituintes selecionados de alquila, alcoxicarbonila, halo, hidróxi, ciano, carbóxi e heterociclila.
70. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracterizado por o anel heterocíclico estar não substituído ou substituído por um ou mais substituintes selecionados de metila, etoxicarbonila, halo, hidróxi, ciano, carbóxi e oxetanila.
71. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por o inibidor ser selecionado a partir de , ,
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72. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado por o inibidor ser selecionado a partir de , , , , , , ,
,e .
73. Composição farmacêutica, caracterizada por compreender um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 72, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
74. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por o inibidor ter uma fração aceitadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Ser642, uma fração aceitadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Val644 e uma fração doadora de ligação H disposta para se ligar com resíduo de aminoácido Ala637.
75. Método, de acordo com a reivindicação 74, caracterizado por o inibidor ser .
76. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por o inibidor ter uma fração doadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Ala637 e uma fração de interação de empilhamento cátion-pi disposta para se ligar ao aminoácido Arg495.
77. Método, de acordo com a reivindicação 76, caracterizado por o composto ser .
78. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por o inibidor ter uma fração doadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Ala637, uma fração doadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Thr641, uma fração aceitadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido His643, uma fração de interação de empilhamento cátion-pi disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Arg495 e uma fração de interação de empilhamento cátion-pi disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido His591.
79. Método, de acordo com a reivindicação 78, caracterizado por o composto ser .
80. Método, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por o inibidor ter uma fração doadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Ala637, uma fração aceitadora de ligação H disposta para se ligar ao resíduo de aminoácido Val644 e uma fração de interação de empilhamento cátion-pi disposto para se ligar ao aminoácido 591.
81. Método, de acordo com a reivindicação 80, caracterizado por o composto ser .
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