BR112020026789A2

BR112020026789A2 - Formulação de alta concentração estável para anticorpos anti-fxia

Info

Publication number: BR112020026789A2
Application number: BR112020026789-9A
Authority: BR
Inventors: Niklas Gombert; Marieke Veurink; Alexander Klak; Stefan Christian SCHNEID; Stefan Heke; Matthias Plitzko
Original assignee: Bayer Aktiengesellschaft
Priority date: 2018-07-05
Filing date: 2019-07-05
Publication date: 2021-03-30
Also published as: KR20210028673A; PE20210779A1; SG11202100046UA; CN112543627A; BR112020026492A2; IL279868A; MX2021000037A; MX2021000028A; PE20210462A1; CA3105256A1; TW202034898A; CN112367975A; CA3105261A1; SG11202100028PA; WO2020008022A1; US20210290534A1; EP3817727A1; AU2019298656A1; US20210292434A1; JP2021529800A

Abstract

a presente invenção refere-se a formulações farmacêuticas líquidas de alta concentração particularmente adequadas para administração subcutânea compreendendo anticorpos humanos contra o fator de coagulação fxia como ingrediente ativo, especialmente aqueles descritos na wo2013167669, que são estáveis como formulações líquidas durante um longo período. a invenção também se refere aos liofilizados da formulação líquida especificada com tempo de reconstituição reduzido e também ao uso dessas formulações na terapia e profilaxia de distúrbios trombóticos ou tromboembólicos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "FOR- MULAÇÃO DE ALTA CONCENTRAÇÃO ESTÁVEL PARA ANTI- CORPOS ANTI-FXIa".

INTRODUÇÃO

[001] A presente invenção refere-se a formulações farmacêuticas líquidas de alta concentração particularmente adequadas para admi- nistração subcutânea compreendendo anticorpos humanos contra o fator de coagulação FXIa como ingrediente ativo, especialmente aque- les descritos na WO2013167669, que são estáveis como formulações líquidas durante um longo período. A invenção também se refere a lio- filizados da formulação líquida especificada com tempo de reconstitui- ção reduzido e também ao uso dessas formulações na terapia e profi- laxia de distúrbios trombóticos ou tromboembólicos.

[002] A coagulação do sangue é um mecanismo de proteção do organismo que ajuda a "vedar" defeitos na parede dos vasos sanguí- neos de forma rápida e confiável. Assim, a perda de sangue pode ser evitada ou reduzida ao mínimo. A hemostasia após lesão dos vasos sanguíneos é afetada principalmente pelo sistema de coagulação, no qual uma cascata enzimática de reações complexas de proteínas plasmáticas é desencadeada. Numerosos fatores de coagulação do sangue estão envolvidos neste processo, cada um dos quais converte, na ativação, o respectivo precursor inativo próximo em sua forma ati- va. No final da cascata, ocorre a conversão do fibrinogênio solúvel em fibrina insolúvel, resultando na formação de um coágulo sanguíneo. Na coagulação sanguínea, tradicionalmente distinguem-se os sistemas intrínseco e extrínseco, que terminam em uma via de reação articular final.

[003] O fator de coagulação XIa é um componente central da transição do início para a amplificação e propagação da coagulação: em circuitos de retroalimentação positivos, trombina ativa, além do fa-

tor V e do fator VIII, também o fator XI para o fator XIa, pelo qual o fa- tor IX é convertido em fator IXa e, através do complexo de fator IXa/fator VIIIa gerado desta maneira, o fator X é ativado e a formação de trombina é, por sua vez, portanto, altamente estimulada, levando a um forte crescimento do trombo e estabilizando o trombo. Os anticor- pos anti-FXIa são conhecidos na técnica anterior como anticoagulan- tes, isto é, substâncias para inibir ou prevenir a coagulação do sangue (ver a WO2013167669).

[004] As proteínas terapêuticas, tais como, por exemplo, anticor- pos monoclonais humanos, são geralmente administradas por injeção como formulações farmacêuticas líquidas. Uma vez que muitos anti- corpos monoclonais humanos terapeuticamente eficazes possuem propriedades desfavoráveis, tais como baixa estabilidade ou tendência à agregação, é necessário modular essas propriedades desfavoráveis por meio de uma formulação farmacêutica adequada. Um agregado ou anticorpo desnaturado pode ter, por exemplo, uma baixa eficácia tera- pêutica. Um anticorpo agregado ou desnaturado também pode provo- car reações imunológicas indesejadas. As formulações farmacêuticas estáveis de proteínas também devem ser adequadas para prevenir instabilidades químicas. A instabilidade química das proteínas pode levar à degradação ou fragmentação e, portanto, redução da eficácia ou até mesmo efeitos colaterais tóxicos. A formação ou geração de todos os tipos de fragmentos de baixo peso molecular deve, portanto, ser evitada ou pelo menos minimizada. Todos esses são fatores que podem afetar a segurança de uma preparação e, portanto, devem ser levados em consideração. Além disso, uma baixa viscosidade é fun- damental quando se utiliza seringas ou bombas, visto que mantém a força necessária baixa e, portanto, aumenta a capacidade de injeção. A baixa viscosidade também é fundamental durante a produção, por exemplo, possibilitando a carga precisa de uma preparação. O uso te-

rapêutico de um anticorpo monoclonal humano, entretanto, frequente- mente requer o uso de alta concentração de anticorpos, o que frequen- temente leva a problemas de alta viscosidade. Em seu artigo de sínte- se, Daugherty and Mrsny (Adv Drug Deliv Rev. 2006;58(5-6):686-706) examinam este e outros problemas que podem ocorrer na formulação farmacêutica líquida de anticorpos monoclonais.

[005] Para injeção subcutânea (s.c.), requisitos especiais em uma formulação devem ser considerados adicionalmente. Em comparação com a aplicação intravenosa, o volume de injeção é limitado para inje- ção única por seringas, uma vez que as formulações em volumes de liberação maiores do que 1 a 2 mililitros não são bem toleradas. Isso leva à necessidade de uma concentração mais alta de anticorpos para administrar a mesma dose. Isso significa que o anticorpo deve atingir concentrações de cerca de 100 mg/ml ou mais. As formulações de proteínas altamente concentradas podem representar muitos desafios para a fabricação e administração de proteínas terapêuticas. Além dis- so, a aplicação conveniente através de uma pequena agulha é neces- sária para garantir a aceitação e cooperação do paciente. Para formu- lações de anticorpos altamente concentradas, ambos os atributos riva- lizam com o aumento da concentração de anticorpos, a viscosidade aumenta e impede a administração.

[006] Uma formulação líquida de baixa concentração para anti- corpos anti-FXIa adequada para aplicação intravenosa (i.v.) que permi- te um maior volume de injeção em comparação com a aplicação sub- cutânea é descrita no pedido de patente PCT/EP2018/050951. Esta formulação de baixa concentração compreende de 10 a 40 mg/ml de anticorpo anti-FXIa e um sistema tampão de histidina/glicina compre- endendo de 5 a 10 mM de histidina e de 130 a 200 mM de glicina, em que a formulação possui um pH de 5,7 a 6,3. Considerando um volu- me de aplicação limitado de ≤ 2 ml para aplicação subcutânea, a for-

mulação de baixa concentração descrita na PCT/EP2018/050951 não é adequada para a administração da dose terapeuticamente relevante planejada. Um aumento da concentração de anticorpo anti-FXIa para cerca de 100 mg/ml ou mais é inevitável e óbvio. No entanto, o aumen- to da concentração de anticorpo anti-FXIa no sistema tampão de histi- dina/glicina descrito na PCT/EP2018/050951 resultou em um aumento exponencial na viscosidade da solução para valores inaceitáveis.

[007] Vários métodos foram propostos para superar os desafios associados com as formas de dosagem de alta concentração. Por exemplo, para resolver o problema de estabilidade associado às for- mulações de anticorpos de alta concentração, o anticorpo é frequen- temente liofilizado e, em seguida, reconstituído pouco antes da admi- nistração. A reconstituição geralmente não é a ideal, pois adiciona uma etapa adicional, às vezes demorada, ao processo de administra- ção e pode introduzir contaminantes na formulação. Além disso, mes- mo os anticorpos reconstituídos podem sofrer de agregação e alta vis- cosidade. Portanto, as formulações líquidas que são estáveis durante um longo período seriam vantajosas.

[008] Várias formulações líquidas de alta concentração para pro- teínas e anticorpos utilizando diferentes excipientes para diminuir a viscosidade são conhecidas na técnica. A WO2009043049, por exem- plo, descreve o uso de um excipiente selecionado do grupo que con- siste em creatina, creatinina, carnitina e suas misturas para reduzir a viscosidade da formulação de proteína farmacêutica líquida com uma concentração de pelo menos 70 mg/ml de proteína. Considerando que, na WO2016065181, o uso de vários n-acetil aminoácidos para reduzir a viscosidade de formulações de alta concentração é descrito.

[009] A arginina é conhecida como excipiente redutor da viscosi- dade. Mas até agora apenas as formulações de proteína de alta con- centração são conhecidas em que grandes quantidades de arginina ou grandes quantidades de arginina e histidina eram necessárias para fornecer redução suficiente da viscosidade. A US20150239970 des- creve o uso de grandes quantidades de arginina (mais do que 150 mM) para uma formulação líquida de alta concentração de um anticor- po anti-IL-6. Considerando que, na US8703126, o uso de cerca de 150 a 200 mM de sal ou tampão derivado de arginina ou histidina é des- crito.

[0010] Existe uma necessidade de formulações líquidas altamente concentradas de anticorpos anti-FXIa que compreendem uma peque- na fração de agregados e produtos de degradação, sejam estáveis como um líquido durante um longo período, sem a necessidade de se- rem liofilizadas e possuam uma viscosidade mínima. Além disso, o pH das formulações para aplicação s.c. deve estar na faixa de 4,7 a 7,4 e a osmolaridade não deve exceder uma faixa de 240 a 400 mOsm/kg.

[0011] A presente invenção aborda a necessidade acima mencio- nada e fornece formulações farmacêuticas líquidas de alta concentra- ção compreendendo cerca de 100 mg/ml ou mais anticorpos anti-FXIa e baixas quantidades de agregados e produtos de degradação, que são estáveis como líquidos durante um longo período. Estas formula- ções também possuem uma baixa viscosidade e podem, portanto, ser simplesmente administradas a pacientes, mesmo através de injeção subcutânea, por exemplo, por meio de seringas, dispositivos de cane- ta, autoinjetores ou quaisquer outros dispositivos conhecidos na técni- ca. A formulação líquida anti-FXIa de alta concentração também pode ser liofilizada, preferivelmente por um método baseado em pulveriza- ção-congelamento como descrito no pedido de patente EP17170483.6 que fornece tempos de reconstituição significativamente mais curtos do que os métodos convencionais de liofilização.

[0012] A invenção fornece formulações farmacêuticas de alta con- centração com baixa viscosidade, especialmente adequadas para apli-

cação subcutânea, compreendendo cerca de 100 mg/ml ou mais anti- corpos anti-FXIa e um sistema tampão triplo em um baixo pH de 4,7 a 5,3, compreendendo histidina, glicina e arginina, em que baixas quan- tidades de arginina são suficientes para reduzir a viscosidade e que são estáveis como líquidos durante um longo período.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0013] A FIG. 1 mostra esquematicamente um mecanismo para o método de liofilização levando a péletes liofilizados com tempo de re- constituição reduzido (Método 3).

[0014] A Fig. 2 representa graficamente o perfil de temperatura e pressão medido ao longo do tempo durante a liofilização convencional (Método 1) da solução de anticorpo.

[0015] A Fig. 3 representa graficamente o perfil de temperatura e pressão medido ao longo do tempo durante o congelamento e seca- gem da solução de anticorpo de acordo com o Método 2 (como des- crito na WO2006/008006).

[0016] A FIG. 4 representa graficamente o perfil de temperatura na torre de esfriamento medido ao longo do tempo durante o processa- mento da solução de anticorpo de acordo com o método de liofilização conforme descrito nesta invenção (Método 3).

[0017] A FIG. 5 representa graficamente o perfil de temperatura e pressão medido ao longo do tempo durante o congelamento e seca- gem da solução de anticorpo de acordo com o método de liofilização conforme aqui descrito (Método 3).

[0018] A FIG. 6 mostra imagens de Microscopia Eletrônica de Var- redura (SEM) de um pélete produzido de acordo com o método de liofi- lização conforme descrito nesta invenção (Método 3).

[0019] A FIG. 7 mostra imagens de Microscopia Eletrônica de Var- redura (SEM) de um liofilizado produzido de acordo com a liofilização convencional (Método 1).

[0020] A FIG. 8 mostra imagens de Microscopia Eletrônica de Var- redura (SEM) de um liofilizado produzido de acordo com o processo de liofilização divulgado na WO2006/008006 (Método 2).

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

[0021] Em uma modalidade, a formulação farmacêutica líquida compreende de 5 a 30 mM de histidina, de 20 a 100 mM de glicina e menos de 150 mM de arginina. Em uma modalidade preferida, a for- mulação farmacêutica líquida compreende de 10 a 20 mM de histidina, de 25 a 75 mM de glicina e de 50 a 75 mM de arginina. Em uma moda- lidade particularmente preferida, a formulação farmacêutica líquida compreende histidina 20 mM, glicina 50 mM e arginina 50 mM. Além disso, a formulação farmacêutica líquida possui um pH de 4,7 a 6,0. Em uma modalidade preferida, a formulação farmacêutica líquida pos- sui um pH de 4,7 a 5,3. Em uma modalidade particularmente preferida, a formulação farmacêutica líquida possui um pH de 5. A formulação farmacêutica líquida de acordo com a invenção compreende anticor- pos anti-FXIa em concentrações de cerca de 100 mg/ml ou mais. Em uma modalidade preferida, o anticorpo anti-FXIa está presente em concentrações de cerca de 100 a 300 mg/ml. Em uma modalidade par- ticularmente preferida, o anticorpo anti-FXIa possui uma concentração de 135 a 165 mg/ml, o mais preferível de cerca de 150 mg/ml. Em uma outra modalidade particularmente preferida, o anticorpo anti-FXIa pos- sui uma concentração de cerca de 100 mg/ml. Em todas as modalida- des, o anticorpo anti-FXIa é particularmente preferível 076D-M007- H04-CDRL3-N110D.

[0022] A formulação farmacêutica líquida também pode compre- ender um estabilizante. Os estabilizantes são açúcares, por exemplo. “Açúcares” referem-se a um grupo de compostos orgânicos que são solúveis em água e são divididos entre monossacarídeos, dissacarí- deos e polióis. Um açúcar preferido é um dissacarídeo não redutor,

preferência particular sendo dada à trealose. Em uma modalidade, o estabilizante está presente em uma extensão de 1 a 10% em peso pa- ra volume (p/v), de preferência em uma extensão de 3 a 7% (p/v) e particularmente preferível em uma extensão de 5% (p/v). Em uma mo- dalidade preferida, o diidrato de trealose está presente em uma exten- são de 1 a 10% em peso para volume (p/v), de preferência em uma extensão de 3 a 7% (p/v) e particularmente preferível em uma exten- são de 5% (p/v).

[0023] A formulação farmacêutica líquida também pode compre- ender um tensoativo. O termo "tensoativo" refere-se a qualquer deter- gente possuindo uma região hidrófila e uma hidrofóbica e inclui deter- gentes não iônicos, catiônicos, aniônicos e zwitteriônicos. Detergentes preferidos podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em monooleato de polioxietileno sorbitano (também conhecido como po- lissorbato 80 ou TWEEN 80), monolaurato de polioxietileno sorbitano (também conhecido como polissorbato 20 ou TWEEN 20), poloxâmero 188 (um copolímero de polioxietileno e polioxipropileno) e N- laurilsarcosina. Para as composições divulgadas, é dada preferência a um tensoativo não iônico. Preferência particular é dada ao uso de po- lissorbato 80, polissorbato 20 ou poloxâmero 188 para as composições da presente invenção. O tensoativo pode ser utilizado em uma concen- tração de 0,005% a 0,5% (p/v), sendo dada preferência a uma faixa de concentração de 0,01% a 0,2% (p/v). É dada preferência particular ao uso de uma concentração de agente tensoativo de 0,05% a 0,1% (p/v). Especialmente preferível é o uso de polissorbato 80 em uma concen- tração de 0,1% (p/v). Mais especialmente preferível é o uso de polis- sorbato 20 ou poloxâmero 188 em uma concentração de 0,05% (p/v).

[0024] Conservantes ou outros aditivos, cargas, estabilizantes ou veículos podem ser opcionalmente adicionados às formulações farma- cêuticas líquidas de acordo com a invenção. Conservantes adequados são, por exemplo, cloreto de octadecildimetilbenzilamônio, cloreto de hexametônio e álcoois aromáticos tais como fenol, parabenos ou m- cresol. Outros aditivos, estabilizantes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis são descritos, por exemplo, em Remington’s Science And Practice of Pharmacy (22nd edition, Loyd V. Allen, Jr, editor. Philadel- phia, PA: Pharmaceutical Press. 2012).

[0025] A invenção, portanto, fornece uma formulação farmacêutica líquida de alta concentração compreendendo cerca de 100 mg/ml ou mais do anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D e um sis- tema tampão de histidina/glicina/arginina, em que a formulação com- preende de 5 a 30 mM de histidina, 20 a 100 mM de glicina e menos de 150 mM de arginina, de preferência de 10 a 20 mM de histidina, de 25 a 75 mM de glicina e de 50 a 75 mM de arginina e possui um pH de 4,7 a 5,3, de preferência pH 5. Isso resulta em uma formulação de alta concentração do anticorpo 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em baixa viscosidade, estabilização suficiente e baixa agregação que é estável como formulação líquida, mas também permite a liofilização opcional da formulação.

[0026] Uma modalidade de acordo com a invenção é uma formu- lação farmacêutica líquida compreendendo cerca de 100 mg/ml do an- ticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D e um sistema tam- pão de histidina/glicina/arginina, em que a formulação compreende histidina 5 a 30 mM, glicina 20 a 100 mM e menos de 150 mM de argi- nina, de preferência histidina 10 a 20 mM, glicina 25 a 75 mM e argini- na 50 a 75 mM e possui um pH de 4,7 a 5,3, de preferência pH 5.

[0027] Uma modalidade de acordo com a invenção é uma formu- lação farmacêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/ml ou mais, histidina 5 a 30 mM, de preferência histidina 10 a 20 mM,

glicina 20 a 100 mM, de preferência glicina 25 a 75 mM e menos de 150 mM de arginina, de preferência arginina 50 a 75 mM, em que a formulação possui um pH de 4,7 a 5,3, de prefe- rência um pH de 5. A formulação opcionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em tensoativo, con- servantes, veículos e estabilizantes.

[0028] Uma modalidade de acordo com a invenção é uma formu- lação farmacêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/ml ou mais, histidina 5 a 30 mM, de preferência histidina 10 a 20 mM, glicina 20 a 100 mM, de preferência glicina 25 a 75 mM e menos de arginina 150 mM, de preferência arginina 50 a 75 mM, 1 a 10% (p/v) de estabilizante, de preferência 3 a 7% (p/v) de diidrato de trealose, em que a formulação possui um pH de 4,7 a 5,3, de prefe- rência um pH de 5. A formulação opcionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em tensoativo, con- servantes, veículos e estabilizantes.

[0029] Em uma modalidade, a formulação farmacêutica líquida compreende polissorbato 80, polissorbato 20 ou poloxâmero 188 como tensoativo em uma concentração de 0,005% a 0,5% (p/v), de prefe- rência de 0,01% a 0,2% (p/v).

[0030] Uma modalidade preferida é uma formulação farmacêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/ml ou mais, histidina 10 a 20mM, glicina 25 a 100 mM e arginina 50 a

75 mM, 3 a 7% (p/v) de diidrato de trealose, e polissorbato 80, polissorbato 20 ou poloxâmero 188 em uma concentração de 0,01% a 0,2% (p/v), em que a formulação possui um pH de 4,7 a 5,3, de prefe- rência um pH de 5. A formulação opcionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em conservantes, veículos e estabilizantes.

[0031] Uma modalidade preferida é uma formulação farmacêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/ml ou mais, histidina 10 a 20 mM, glicina 25 a 100 mM e arginina 50 a 75 mM, 3 a 7% (p/v) de diidrato de trealose, e polissorbato 80 em uma concentração de 0,01% a 0,2% (p/ v), em que a formulação possui um pH de 4,7 a 5,3, de prefe- rência um pH de 5. A formulação opcionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em conservantes, veículos e estabilizantes.

[0032] Uma outra modalidade preferida é uma formulação farma- cêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/ml ou mais, histidina 10 a 20 mM, glicina 25-100 mM e arginina 50-75 mM, 3 a 7% (p/v) diidrato de trealose, e polissorbato 20 ou poloxâmero 188 em uma concentração de 0,01% a 0,2% (p/v),

em que a formulação possui um pH de 4,7 a 5,3, de prefe- rência um pH de 5. A formulação opcionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em conservantes, veículos e estabilizantes.

[0033] Uma modalidade particularmente preferida é uma formula- ção farmacêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/ml ou mais, histidina 20 mM, glicina 50 mM e arginina 50 mM, 5% (p/v) de diidrato de trealose, e polissorbato 80 em uma concentração de 0,1% (p/v), em que a formulação possui um pH de 5. A formulação op- cionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em conservantes, veículos e estabilizantes.

[0034] Uma outra modalidade particularmente preferida é uma formulação farmacêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/ml ou mais, histidina 20 mM, glicina 50 mM e arginina 50 mM, 5% (p/v) de diidrato de trealose, e polissorbato 20 em uma concentração de 0,05% (p/v), em que a formulação possui um pH de 5. A formulação op- cionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em conservantes, veículos e estabilizantes.

[0035] Uma outra modalidade particularmente preferida é uma formulação farmacêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/ml ou mais, histidina 20 mM, glicina 50 mM e arginina 50 mM, 5% (p/v) de diidrato de trealose, e poloxâmero 188 em uma concentração de 0,05% (p/v), em que a formulação possui um pH de 5. A formulação op- cionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em conservantes, veículos e estabilizantes.

[0036] Uma outra modalidade particularmente preferida é uma formulação farmacêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 150 mg/ml ou mais, histidina 20 mM, glicina 50 mM e arginina 50 mM, 5% (p/v) de diidrato de trealose, e polissorbato 80 em uma concentração de 0,1% (p/v), em que a formulação possui um pH de 5. A formulação op- cionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em conservantes, veículos e estabilizantes.

[0037] Uma outra modalidade particularmente preferida é uma formulação farmacêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 150 mg/ml ou mais, histidina 20 mM, glicina 50 mM e arginina 50 mM, 5% (p/v) de diidrato de trealose, e polissorbato 20 em uma concentração de 0,05% (p/v), em que a formulação possui um pH de 5. A formulação op- cionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em conservantes, veículos e estabilizantes.

[0038] Uma outra modalidade particularmente preferida é uma formulação farmacêutica líquida que compreende anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 150 mg/ml ou mais, histidina 20 mM, glicina 50 mM e arginina 50 mM, 5% (p/v) de diidrato de trealose, e poloxâmero 188 em uma concentração de 0,05% (p/v), em que a formulação possui um pH de 5. A formulação op- cionalmente compreende outros ingredientes selecionados do grupo que consiste em conservantes, veículos e estabilizantes.

[0039] O anticorpo anti-FXIa a ser utilizado de acordo com a pre- sente invenção é capaz de se ligar à forma ativada do fator XI do plasma, FXIa. De preferência, o anticorpo anti-FXIa se liga especifica- mente ao FXIa. De preferência, o anticorpo anti-FXIa é capaz de inibir a agregação plaquetária e a trombose associada. De preferência, a inibição da agregação plaquetária mediada por anticorpos não com- promete a hemostasia primária dependente das plaquetas. No contex- to da presente invenção, o termo "sem comprometer a hemostasia" significa que a inibição do fator de coagulação XIa não leva a eventos de sangramento indesejáveis e mensuráveis.

[0040] Como aqui utilizado, "fator de coagulação XIa", "fator XIa" ou "FXIa" refere-se a qualquer FXIa de qualquer espécie de mamífero que expressa o fator zimogênio XI. Por exemplo, FXIa pode ser huma- no, primata não humano (tal como babuíno), camundongo, cachorro, gato, vaca, cavalo, porco, coelho e qualquer outra espécie que ex- pressa o fator de coagulação XI envolvido na regulação do fluxo san- guíneo, coagulação e/ou trombose.

[0041] Como aqui utilizado, um anticorpo "liga-se especificamente a", é "específico de/para" ou "reconhece especificamente" um antígeno (aqui, FXIa) se tal anticorpo for capaz de discriminar entre tal antígeno e um ou mais antígenos de referência, uma vez que a especificidade de ligação não é absoluta, mas uma propriedade relativa. Em sua for- ma mais geral (e quando nenhuma referência definida é mencionada), "ligação específica" se refere à capacidade do anticorpo de discriminar entre o antígeno de interesse e um antígeno não relacionado, confor- me determinado, por exemplo, de acordo com um dos os seguintes métodos. Tais métodos compreendem, mas não são limitados a estes, Western blots, testes de ELISA, RIA, ECL, IRMA e varreduras de pep- tídeos. Por exemplo, um ensaio ELISA padrão pode ser realizado. A pontuação pode ser realizada por desenvolvimento de cor padrão (por exemplo, anticorpo secundário com peróxido de raiz forte e tetrametil benzidina com peróxido de hidrogênio). A reação em certas cavidades é pontuada pela densidade óptica, por exemplo, em 450 ran. O contex- to típico (= reação negativa) pode ser 0,1 OD; a reação positiva típica pode ser 1 OD. Isso significa que a diferença positivo/negativo pode ser mais de 10 vezes. Tipicamente, a determinação da especificidade de ligação é executada não mediante o uso de um único antígeno de referência, mas um conjunto de cerca de três a cinco antígenos não relacionados, tais como leite em pó, BSA, transferrina ou semelhantes. No entanto, "ligação específica" também pode se referir à capacidade de um anticorpo em discriminar entre o antígeno alvo e um ou mais antígenos estreitamente relacionados, por exemplo, homólogos, que são utilizados como pontos de referência. Por exemplo, o anticorpo pode ter pelo menos 1,5 vezes, 5 2 vezes, 5 vezes 10 vezes, 100 ve- zes, 103 vezes, 104 vezes, 105 vezes, 106 vezes ou afinidade relativa maior com relação ao antígeno alvo em comparação com o antígeno de referência. Adicionalmente, "ligação específica" pode estar relacio- nada com a capacidade de um anticorpo em discriminar entre diferen- tes partes do seu antígeno alvo, por exemplo, diferentes domínios ou regiões de FXIa.

[0042] "Afinidade" ou "afinidade de ligação" KD são frequentemen- te determinados pela medição da constante de associação de equilí- brio (ka) e constante de dissociação de equilíbrio (kd) e cálculo do quociente de kd para ka (KD = kd/ka). O termo "imunoespecífico" ou "ligação específica" significa de preferência que o anticorpo se liga ao fator de coagulação XIa com uma afinidade KD menor ou igual a 106M

(afinidade monovalente). O termo "alta afinidade" significa que a KD que o anticorpo se liga ao fator de coagulação XIa com uma afinidade KD menor ou igual a 107M (afinidade monovalente). Tais afinidades podem ser facilmente determinadas utilizando técnicas convencionais, tais como por diálise de equilíbrio; mediante o uso do instrumento BIA- core 2000, utilizando os procedimentos gerais descritos pelo fabrican- te; através de radioimunoensaio utilizando antígeno alvo marcado ra- dioativamente; ou por outro método conhecido do especialista versa- do. Os dados de afinidade podem ser analisados, por exemplo, pelo método descrito em [Kaufman RJ, Sharp PA. (1982) Amplification and expression of sequences cotransfected with a modular dihydrofolate reductase complementary dna gene. [J Mol Biol.159:601-621].

[0043] Tal como aqui utilizado, o termo "anticorpo" inclui moléculas de imunoglobulina (por exemplo, qualquer tipo, incluindo IgG, IgE1, IgM, IgD, IgA e IgY e/ou qualquer classe, incluindo IgGI, lgG2, lgG3, lgG4, IgAI e IgA2) isoladas da natureza ou preparadas por meios re- combinantes e inclui todos os anticorpos convencionalmente conheci- dos e seus fragmentos funcionais. O termo "anticorpo" também se es- tende a outras matrizes de proteína que são capazes de orientar in- serções de CDR de anticorpo na mesma conformação de ligação ativa conforme aquela encontrada em anticorpos naturais, de tal modo que a ligação do antígeno alvo observada com essas proteínas quiméricas seja mantida em relação à atividade de ligação do anticorpo natural a partir do qual as CDRs foram derivadas.

[0044] Um "fragmento funcional" ou "fragmento de anticorpo de ligação ao antígeno" de um anticorpo/imunoglobulina é aqui definido como um fragmento de um anticorpo/imunoglobulina (por exemplo, uma região variável de uma IgG) que retém a região de ligação ao an- tígeno. Uma "região de ligação ao antígeno" de um anticorpo é tipica- mente encontrada em uma ou mais regiões hipervariáveis de um anti-

corpo, isto é, as regiões CDR-1, -2 e/ou -3; no entanto, as regiões va- riáveis da "estrutura" também podem desempenhar um papel impor- tante na ligação ao antígeno, tal como através do fornecimento de uma estrutura para as CDRs. De preferência, a "região de ligação ao antí- geno" compreende pelo menos os resíduos de aminoácido 4 a 103 da cadeia leve variável (VL) e 5 a 109 da cadeia pesada variável (VH), mais preferivelmente resíduos de aminoácido 3 a 107 da VL e 4 a 111 da VH, e particularmente preferíveis são as cadeias VL e VH comple- tas (posições de aminoácido 1 a 109 da VL e 1 a 113 da VH; numera- ção de acordo com a WO 97/08320). Uma classe preferida de imuno- globulinas para uso na presente invenção é IgG.

[0045] "Fragmentos funcionais" da invenção incluem fragmentos Fab, Fab1, F(ab')2 e Fv; diacorpos; anticorpos lineares; moléculas de anticorpo de cadeia única (scFv); e anticorpos multiespecíficos forma- dos a partir de fragmentos de anticorpos, Fvs ligados por dissulfeto (sdFv), e fragmentos compreendendo um domínio VL ou VH, que são preparados a partir de imunoglobulinas intactas ou preparados por meios recombinantes.

[0046] Os fragmentos de anticorpo de ligação ao antígeno podem compreender as regiões variáveis isoladamente ou em combinação com a totalidade ou uma parte das seguintes: região de dobradiça, domínios CH1, CH2, CH3 e CL. Também incluídos na invenção estão os fragmentos de anticorpo de ligação ao antígeno compreendendo qualquer combinação de regiãoões variáveis com uma região de do- bradiça, domínios CH1, CH2, CH3 e CL.

[0047] O anticorpo e/ou fragmento de anticorpo de ligação ao antí- geno pode ser monoespecífico (por exemplo, monoclonal), biespecífi- co, trispecífico ou de maior especificidade múltipla. De preferência, um anticorpo monoclonal é utilizado.

[0048] O termo "anticorpo monoclonal"l como aqui utilizado refere-

se a um anticorpo obtido de uma população de anticorpos substanci- almente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais que compreen- dem a população são idênticos, exceto por possíveis mutações de ocorrência natural que podem estar presentes em quantidades meno- res. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo dire- cionados contra um único sítio antigênico. Além disso, em contraste com as preparações de anticorpos convencionais (policlonais) que tipi- camente incluem diferentes anticorpos direcionados contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é direcionado contra um único determinante no antígeno. Além de sua especificida- de, os anticorpos monoclonais são vantajosos pelo fato de que eles são sintetizados pela cultura homogênea, não contaminada por outras imunoglobulinas com especificidades e características diferentes. O modificador "monoclonal" indica o caráter do anticorpo como sendo obtido de uma população substancialmente homogênea de anticorpos, e não deve ser interpretado como requerendo a produção do anticorpo por qualquer método particular.

[0049] O anticorpo ou fragmento de anticorpo de ligação ao antí- geno pode ser, por exemplo, humano, humanizado, murino (por exem- plo, camundongo e rato), burro, ovelha, coelho, cabra, porquinho da índia, camelídeo, cavalo ou galinha. De preferência, é usado um anti- corpo anti-FXIa humano ou humanizado.

[0050] Como aqui utilizado, anticorpos "humanos" incluem anticor- pos tendo a sequência de aminoácido de uma imunoglobulina humana e incluem anticorpos isolados de bibliotecas de imunoglobulinas hu- manas, de células B humanas ou de animais transgênicos para uma ou mais imunoglobulinas humanas, assim como anticorpos humanos sintéticos.

[0051] Um "anticorpo humanizado" ou fragmento de anticorpo hu- manizado funcional é definido nessa invenção como aquele que é (i)

derivado de uma fonte não humana (por exemplo, um camundongo transgênico que possui um sistema imunológico heterólogo), cujo anti- corpo se baseia em uma sequência da linha germinativa humana; ou (ii) quimérico, em que o domínio variável é derivado de uma origem não humana e o domínio constante é derivado de uma origem humana ou (iii) CDR enxertado, em que as CDRs do domínio variável são de origem não humana, enquanto uma ou mais estruturas do domínio va- riável são de origem humana e o domínio constante (se houver) é de origem humana.

[0052] Os anticorpos adequados para serem utilizados de acordo com a presente invenção são, por exemplo, divulgados na WO 2013/167669. Em uma modalidade, o anticorpo anti-FXIa compreende i) SEQ ID NO: 19 para a sequência de aminoácido para o domínio va- riável da cadeia leve e SEQ ID NO: 20 para a sequência de aminoáci- do para o domínio variável da cadeia pesada; ou ii) SEQ ID NO: 29 para a sequência de aminoácido para o domínio variável da cadeia leve e SEQ ID NO: 30 para a sequência de aminoácido para o domínio variável da cadeia pesada; ou iii) SEQ ID NO: 27 para a sequência de aminoácidos para o domínio variável da cadeia leve e SEQ ID NO: 20 para a sequência de aminoácido para o domínio variável da cadeia pesada conforme divulgado na WO 2013/167669. Nas modalidades preferidas, o anticorpo anti-FXIa é selecionado dos anticorpos 076D- M007-H04, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D e 076D-M028-H17 divul- gados na WO 2013/167669. Nas modalidades preferidas particulares, o anticorpo anti-FXIa é 076D-M007-H04-CDRL3-N110D, aqui repre- sentado pela SEQ ID NO: 1 para a sequência de aminoácido para o domínio variável da cadeia pesada e SEQ ID NO: 2 para a sequência de aminoácido para o domínio variável de cadeia leve.

[0053] O termo "formulação farmacêutica" ou "formulação" como aqui utilizado, refere-se a uma preparação que está em uma forma que permite que a atividade biológica de um ingrediente ativo nela contido seja eficaz e que não contém componentes adicionais que são inacei- tavelmente tóxicos para um indivíduo ao qual a formulação seria admi- nistrada.

[0054] Como aqui utilizado, "viscosidade" é a resistência do fluido em circular, e pode ser medida em unidades de centipoise (cP) ou mi- liPascal-segundo (mPa*s), onde 1 cP = 1 mPa*s, em uma determinada taxa de cisalhamento. A viscosidade pode ser medida utilizando um viscosímetro, por exemplo, um pequeno viscosímetro de amostra co- mo mVroc, RheoSense. A viscosidade pode ser medida utilizando quaisquer outros métodos e em quaisquer outras unidades conhecidas na técnica (por exemplo, viscosidade absoluta, cinemática ou dinâmi- ca), entendendo que é a redução percentual na viscosidade proporcio- nada pelo uso dos excipientes descritos pela invenção que é importan- te. Independentemente do método utilizado para determinar a viscosi- dade, a redução percentual na viscosidade nas formulações de excipi- ente versus formulações de controle permanecerá aproximadamente a mesma em uma determinada taxa de cisalhamento.

[0055] Tal como aqui utilizado, uma formulação contendo uma quantidade de um excipiente eficaz para "reduzir a viscosidade" (ou uma quantidade ou concentração "redutora da viscosidade" de tal ex- cipiente) significa que a viscosidade da formulação em sua forma final para administração (se uma solução, ou se um pó, após reconstituição com a quantidade pretendida de diluente) é pelo menos 5% menor do que a viscosidade de uma formulação de controle apropriada, tal como água, tampão, outros agentes redutores de viscosidade conhecidos tais como sal, etc. e aquelas formulações de controle, por exemplo, aqui exemplificadas.

[0056] Da mesma forma, uma formulação de "viscosidade reduzi- da" é uma formulação que apresenta viscosidade reduzida em compa-

ração com uma formulação de controle.

[0057] O termo "tampão", como aqui utilizado, refere-se a uma so- lução tamponada, cujo pH muda apenas marginalmente após a adição de substâncias ácidas ou básicas. As soluções tamponadas contêm uma mistura de um ácido fraco e sua base correspondente, ou uma base fraca e seu ácido correspondente, respectivamente. Tampões farmaceuticamente aceitáveis exemplares incluem acetato (por exem- plo, acetato de sódio), succinato (tal como succinato de sódio), fosfato, ácido glutâmico, glutamato, gluconato, histidina, glicina, citrato ou ou- tros tampões de ácido orgânico. Opcionalmente, as misturas de um ou mais dos ácidos e bases mencionados acima podem ser utilizadas em uma solução tamponada. A concentração de tampão exemplar de ca- da um dos ácidos e bases mencionados acima pode ser de cerca de 1 mM a cerca de 200 mM, de cerca de 10 mM a cerca de 100 mM ou de cerca de 20 mM a 50 mM, dependendo, por exemplo, do tampão e da tonicidade desejada (por exemplo, isotônico, hipertônico ou hipotônico) da formulação.

[0058] O termo "sistema de tamponamento", conforme usado nes- ta invenção, refere-se a uma mistura de um ou mais dos ácidos e ba- ses anteriormente mencionados. Um sistema tampão preferido desta invenção contém um ou mais aminoácidos. Mais preferivelmente, o sistema tampão compreende uma mistura de histidina, glicina e argini- na em que pequenas quantidades de arginina, abaixo de 150 mM, são suficientes para reduzir a viscosidade. De preferência, a arginina está contida em uma concentração de 50 a 75 mM, mais preferivelmente em uma concentração de 50 mM.

[0059] No contexto desta invenção, "% (p/v)" define a concentra- ção de massa de um componente em porcentagem dentro de uma composição, em que w significa a massa (medida em g, mg etc.) do componente empregado, e v significa o volume final (medido em L, ml etc.) da composição.

[0060] O termo "paciente" refere-se a indivíduos humanos ou ani- mais que recebem um tratamento preventivo ou terapêutico.

[0061] O termo "tratamento" aqui se refere ao uso ou administra- ção de uma substância terapêutica em/a um paciente, ou ao uso ou administração de uma substância terapêutica em/a um tecido isolado ou em/a uma linhagem celular de um paciente, que está sofrendo de uma doença, apresenta um sintoma de uma doença ou possui predis- posição para uma doença, com o objetivo de curar, melhorar, influen- ciar, interromper ou aliviar a doença, seus sintomas ou a predisposição para a doença.

[0062] "Dose eficaz" descreve aqui a quantidade de ingrediente ativo com a qual o efeito desejado pode ser pelo menos parcialmente alcançado. Uma "dose terapeuticamente eficaz" é, portanto, definida como a quantidade de ingrediente ativo que é suficiente para curar pe- lo menos parcialmente uma doença, ou para eliminar pelo menos par- cialmente os efeitos adversos no paciente que são provocados pela doença. As quantidades realmente necessárias para este propósito dependem da gravidade da doença e do estado imunológico geral do paciente.

[0063] As composições farmacêuticas adequadas para uso na presente invenção incluem composições em que os ingredientes ativos estão contidos em uma quantidade eficaz para atingir o propósito pla- nejado, isto é, o tratamento de uma doença particular. A determinação de uma dose eficaz está bem dentro da capacidade daqueles versa- dos na técnica.

[0064] A concentração da proteína terapêutica, tal como um anti- corpo, na formulação dependerá do uso final da formulação farmacêu- tica e pode ser facilmente determinada por uma pessoa de habilidade na técnica.

[0065] As proteínas terapêuticas para administração subcutânea são frequentemente administradas em altas concentrações. As altas concentrações de proteínas terapêuticas particularmente contempla- das em (sem levar em conta o peso das modificações químicas tais como a PEGilação), incluindo anticorpos, são pelo menos ao redor de 70, 80, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 250, 300, 350, 400, 450 ou 500 mg/ml e/ou menos do que cerca de 250, 300, 350, 400, 450 ou 500 mg/ml. Altas concentrações de proteínas terapêuticas exemplares, tais como anticorpos, na formulação, podem variar de cerca de 100 mg/ml a cerca de 500 mg/ml. Preferivelmente, as concentrações da proteína terapêutica de acordo com a invenção estão na faixa de cerca de 100 a 300 mg/ml, mais preferivelmente na faixa de 135 a 165 mg/ml, o mais preferível de cerca de 150 mg/ml. Uma outra concentra- ção mais preferida é de cerca de 100 mg/ml. Neste contexto, uma concentração de "cerca de" um determinado valor, por exemplo, o limi- te superior ou inferior de um dada faixa de concentração, deve ser en- tendida como abrangendo todas as concentrações que se desviam até ± 10% deste valor dado.

[0066] O termo "agregados de alto peso molecular" (sinônimo: "HMW") descreve agregados que são compostos de pelo menos dois monômeros de proteína.

[0067] A invenção fornece ainda um produto que compreende uma das formulações farmacêuticas de acordo com a invenção e de prefe- rência também instruções de uso. Em uma modalidade, o produto compreende um recipiente que compreende formulações líquidas de acordo com a invenção. Os recipientes utilizáveis são, por exemplo, garrafas, frascos, tubos, cartuchos, seringas com uma ou várias câma- ras ou quaisquer outros recipientes conhecidos na técnica. Os recipi- entes podem, por exemplo, ser compostos de vidro ou plástico. Dispo-

sitivos de administração exemplares incluem seringas, com ou sem agulhas, bombas de infusão, injetores de jato, dispositivos de caneta, injetores transdérmicos ou outros injetores sem agulha. Seringas, ca- netas, autoinjetores ou quaisquer outros dispositivos conhecidos na técnica podem compreender uma agulha de injeção composta, por exemplo, de metal. A invenção fornece ainda um kit que compreende as formulações farmacêuticas anteriormente mencionadas.

[0068] Em uma modalidade, o recipiente é uma seringa. Em uma outra modalidade, a seringa é pré-carregada. Em uma outra modalida- de, a seringa está contida em um dispositivo de injeção. Em uma outra modalidade, o dispositivo de injeção é um autoinjetor. Em outra moda- lidade, o recipiente é um cartucho. Em uma outra modalidade, o cartu- cho está contido em um dispositivo de caneta ou qualquer outro dispo- sitivo conhecido na técnica. Em outra modalidade, o recipiente é um frasco.

[0069] As composições de acordo com a invenção apresentam estabilidade aumentada em altas concentrações de anticorpos em comparação com as formulações para anticorpos anti-FXIa disponíveis na técnica anterior. As formulações preferidas são estáveis como for- mulações líquidas, mas também podem ser liofilizadas. A formulação farmacêutica líquida de acordo com a invenção consequentemente também pode ser um liofilizado reconstituído obtido por métodos con- vencionais de liofilização (Método 1) ou por um método baseado em pulverização-congelamento como, por exemplo, descrito na WO2006/008006 (Método 2) ou Método 3 conforme aqui descrito. De preferência, o liofilizado é obtido pelo Método 3 à base de pulveriza- ção-congelamento como aqui descrito, que fornece péletes liofilizados com tempo de reconstituição reduzido.

[0070] Em processos convencionais, a liofilização é geralmente executada em câmaras de liofilização padrão compreendendo uma ou mais bandejas ou prateleiras dentro de uma câmara de secagem (a vácuo). Os frascos podem ser carregados com o produto a ser liofili- zado e dispostos nessas bandejas. Esses secadores normalmente não possuem paredes com temperatura controlada e fornecem transferên- cia de calor não homogênea para os frascos colocados na câmara do secador. Especialmente aqueles frascos que são posicionados nas bordas trocam energia de forma mais intensa do que aqueles posicio- nados no centro das placas, devido à transferência de calor radiante e à condução de gás no intervalo entre a parede da câmara e a pilha de placas/prateleiras. Esta não uniformidade de distribuição de energia leva a uma variação da cinética de congelamento e secagem entre os frascos nas bordas e aqueles no centro, e podem resultar em variação nas atividades dos conteúdos ativos dos respectivos frascos e perdas de rendimento do produto. Para garantir a uniformidade do produto final, é necessário conduzir um extenso trabalho de desenvolvimento e validação em escalas tanto de laboratório quanto de produção.

[0071] A WO2006/008006 A1 refere-se a um processo para fabri- cação estéril, incluindo liofilização, armazenamento, ensaio e carga de produtos biofarmacêuticos peletizados em recipientes finais, tais como frascos. O processo descrito combina congelamento por pulverização e secagem por congelamento e compreende as etapas de: a) conge- lamento de gotículas do produto para formar péletes, em que as gotí- culas são formadas pela passagem de uma solução do produto atra- vés de bocais assistidos por frequência e péletes são formados a partir das referidas gotículas, através da sua passagem por um fluxo contra- corrente de gás criogênico; b) liofilização dos péletes; c) armazena- mento e homogeneização dos péletes liofilizados; d) ensaio dos péle- tes liofilizados enquanto estão sendo armazenados e homogeneiza- dos; e e) carregamento dos péletes liofilizados nos referidos recipien- tes.

[0072] As formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção são adequadas para administração parenteral.

A administra- ção parenteral inclui, inter alia, injeção ou infusão intravenosa, injeção ou infusão intra-arterial (em uma artéria), injeção intramuscular, inje- ção intratecal, injeção subcutânea, injeção ou infusão intraperitoneal, administração intraóssea ou injeção em um tecido.

As composições de acordo com a invenção são particularmente adequadas para adminis- tração subcutânea.

As formas de administração adequadas para ad- ministração parenteral são, inter alia, preparações para injeção ou in- fusão na forma de soluções, suspensões, emulsões, na forma líquida ou como liofilizados ou pós estéreis, que são reconstituídos antes da administração.

Se desejável, as formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção também podem ser secadas por congelamento e reconstituídas antes da administração, enquanto mantém a atividade biológica.

No entanto, a secagem por congelamento da formulação de anticorpo de acordo com a invenção por métodos convencionais leva a liofilizados com tempos de reconstituição de até duas horas e mais.

Esses longos tempos de reconstituição são pesados e impraticáveis, tanto para profissionais de saúde quanto para pacientes.

Portanto, um método baseado em pulverização-congelamento para a produção de péletes liofilizados compreendendo anticorpos anti-FXIa que apresen- tam um tempo de reconstituição significativamente reduzido em com- paração com o anticorpo FXIa compreendendo liofilizados obtidos pela liofilização convencional foi desenvolvido.

Este método baseado em pulverização-congelamento, como aqui descrito (Método 3), leva a um anticorpo anti-FXIa liofilizado compreendendo péletes com um tempo de reconstituição de aproximadamente 10 minutos quando reconstituí- do para uma concentração de anticorpo de cerca de 150 mg/ml.

O mé- todo de liofilização por pulverização para reduzir o tempo de reconsti- tuição de péletes liofilizados compreendendo um anticorpo anti-FXIa como aqui descrito (Método 3) e aplicado no exemplo 7 do presente pedido compreende as etapas de: a) congelar gotículas de uma solução compreendendo um anticorpo anti-FXIa para formar péletes; b) liofilizar os grânulos; em que na etapa a) as gotículas são formadas por meio da formação de gotículas da solução compreendendo um anticorpo anti- FXIa em uma torre de esfriamento que possui uma superfície de pare- de interna controlável por temperatura e uma temperatura interna abaixo da temperatura de congelamento da solução e na etapa b) os péletes são liofilizados em um recipiente rotativo que fica alojado den- tro de uma câmara de vácuo.

[0073] A criação de péletes congelados para o Método 3 pode ser executada de acordo com qualquer tecnologia conhecida. É importan- te, no entanto, deve ser evitado cair anticorpo compreendendo gotícu- las em nitrogênio líquido para formar péletes.

[0074] Em vista da etapa de liofilização subsequente do Método 3, os péletes congelados favoravelmente possuem uma distribuição de tamanho de partícula limitada. Depois, os péletes congelados podem ser transportados em condições estéreis e frias para um liofilizador. Os péletes são então distribuídos através das superfícies de transporte dentro da câmara de secagem pela rotação do recipiente. A secagem por sublimação é, em princípio, possível em qualquer tipo de liofiliza- dor adequado para péletes. Secadores por congelamento que forne- cem espaço para fluxo de vapor de sublimação, temperaturas de pa- rede controladas e áreas de corte transversal adequadas entre a câ- mara de secagem e o condensador são preferidos.

[0075] As gotículas utilizadas na etapa a) do Método 3 podem ser formadas por meio da formação de gotículas da solução através da passagem por bocais assistidos por frequência. De preferência, a fre-

quência de oscilação é ≥ 200 Hz a ≤ 5000 Hz, mais particularmente ≥ 400 Hz a ≤ 4000 Hz ou ≥ 1000 Hz a ≤ 2000 Hz.

[0076] Independentemente do bocal ser assistido por frequência, o diâmetro da abertura do bocal pode estar na faixa de 100 µm a 500 µm, de preferência na faixa de 200 µm a 400 µm, muito preferivelmen- te na faixa de 300 µm a 400 µm. Os referidos diâmetros de bocal resul- tam em tamanhos de gotícula na faixa de cerca de 200 µm a cerca de 1000 µm, de preferência na faixa de cerca de 400 µm a cerca de 900 µm, muito preferivelmente na faixa de cerca de 600 µm a 800 µm.

[0077] Neste contexto, um tamanho de "cerca de" um determinado valor, por exemplo, o limite superior ou inferior de um determinado in- tervalo de tamanho deve ser entendido como abrangendo todos os tamanhos de gotícula que se desviam até ± 30% deste valor dado. Por exemplo, um tamanho de gotícula resultante de cerca de 400 µm abrange tamanhos de gotícula que variam entre 280 µm e 520 µm. Da mesma forma, a faixa de tamanho de cerca de 100 µm a cerca de 500 µm deve ser entendida como abrangendo tamanhos de gotícula de 70 mm a 650 µm.

[0078] As gotículas apresentam uma certa distribuição de tamanho de gotícula em torno de um valor médio que deve ser mais ou menos aquele referido acima.

[0079] A mediana do tamanho do pélete dos péletes obtidos na etapa a) do método descrito acima é de cerca de ≥ 200 μm a cerca de ≤ 1500 μm. É preferida uma mediana de tamanho de pélete de cerca de ≥ 500 μm a cerca de ≤ 900 μm.

[0080] A FIG. 1 representa esquematicamente um mecanismo pa- ra conduzir o método à base de liofilização por pulverização para re- duzir o tempo de reconstituição dos péletes liofilizados compreenden- do um anticorpo anti-FXIa, como descrito acima. O mecanismo com- preende, como componentes principais, a torre de esfriamento 100 e a câmara de secagem a vácuo 200. A torre de esfriamento compreende uma parede interna 110 e uma parede externa 120, definindo assim um espaço 130 entre a parede interna 110 e a parede externa 120. Este espaço 130 abriga um meio de esfriamento 140 na forma de tu- bulação. Um líquido refrigerante pode entrar e sair do meio de esfria- mento 140, conforme indicado pelas setas do desenho. O líquido refri- gerante que flui através do meio de esfriamento 140 leva a um esfria- mento da parede interna 110 e, assim, a um esfriamento do interior da torre de esfriamento 100. Na produção de péletes congelados (criopé- letes), o líquido é pulverizado para dentro da torre de esfriamento atra- vés do bocal 150. As gotículas de líquido são simbolizadas de acordo com o numeral de referência 160. As gotículas de líquido eventual- mente se solidificam (congelam) em seu caminho descendente, o que é simbolizado de acordo com o numeral de referência 170. Péletes congeladas 170 percorrem uma rampa 180 onde uma válvula 190 permite a entrada na câmara de secagem a vácuo 200. Embora não representado aqui, é claro que também é possível e até mesmo prefe- rido que a rampa 180 seja controlada por temperatura de modo a man- ter os péletes 170 em um estado congelado enquanto eles são coleta- dos antes da válvula fechada 190. Dentro da câmara de secagem a vácuo 200, um tambor rotativo 210 está localizado para acomodar os péletes congelados a serem secos. A rotação ocorre em torno do eixo horizontal para conseguir uma transferência eficiente de energia para os péletes. O calor pode ser introduzido através do tambor ou através de um aquecedor infravermelho encapsulado. Como um resultado fi- nal, péletes liofilizados simbolizados pelo número de referência 220 são obtidos.

[0081] A superfície interna da torre de esfriamento utilizada no mé- todo descrito acima possui uma temperatura não mais quente do que - 120 °C, de preferência ≥ -180 °C a ≤ -120 °C. De preferência, a tempe-

ratura é de ≥ −160 °C a ≤ −140 °C.

[0082] As temperaturas acima referidas de ≥ −160 °C a ≤ −140 °C são otimizadas para tamanhos de gotículas na faixa de cerca de ≥ 600 μm a cerca de ≤ 800 μm que são congeladas enquanto caem a uma distância de 2 m a 4 m, particularmente ao redor de 3 m.

[0083] A superfície interna da torre de esfriamento é esfriada me- diante a passagem de um líquido refrigerante através de um ou mais tubos que estão em contato térmico com a superfície interna. O líquido refrigerante pode ser nitrogênio líquido ou vapor de nitrogênio em uma temperatura desejada.

[0084] Quando se utiliza o mecanismo como representado na Fig. 1, o método baseado em pulverização-secagem por congelamento pa- ra reduzir o tempo de reconstituição de péletes liofilizados compreen- dendo um anticorpo anti-FXIa como descrito nesta invenção (Método 3) compreende as etapas de: a) congelar as gotículas de uma solução compreendendo um anticorpo anti-FXIa para formar péletes; b) liofilizar os péletes; em que na etapa a) as gotículas são formadas por meio da formação de gotículas da solução compreendendo um anticorpo anti- FXIa em uma torre de esfriamento (100) que possui uma superfície de parede interna controlável por temperatura (110) e uma temperatura interna abaixo da temperatura de congelamento da solução e em que na etapa b) os grânulos são liofilizados em um recipiente rotativo (210) que está alojado dentro de uma câmara de vácuo (200).

[0085] Além disso, o Método 3 pode compreender ainda as etapas c) e d) após a etapa b): c) armazenar e homogeneizar os péletes liofilizados d) carregar os péletes liofilizados em recipientes.

[0086] A etapa de armazenamento e homogeneização c) também pode ser realizada no recipiente rotativo dentro da câmara de vácuo utilizada para liofilização. Na etapa d) quantidades definidas pelo usuá- rio de péletes liofilizados são colocadas nos recipientes finais. Os reci- pientes de armazenamento são transferidos para uma linha de carre- gamento isolada e ancorados em uma estação de ancoragem estéril. Os conteúdos dos recipientes são transferidos de dentro do isolador para o armazenamento da máquina de carregamento. O método 3 que resulta em nenhum ou apenas um dano mínimo ao anticorpo anti-FXIa processado leva em conta o carregamento preciso da quantidade de anticorpo desejada dentro de faixas limitadas especificadas. O método permite ainda o carregamento flexível e individualizado em recipientes para uso final.

[0087] No contexto da presente invenção, os termos "liofilização convencional" e "convencionalmente liofilizado" referem-se a um pro- cesso de liofilização padrão em frascos realizado em uma câmara de liofilização padrão compreendendo uma ou mais bandejas ou pratelei- ras dentro uma câmara de secagem (a vácuo) e não inclui a etapa do processo de pulverização-congelamento. Tipicamente, o produto a ser liofilizado é colocado em frascos que são então colocados na câmara de secagem (a vácuo).

[0088] No contexto da presente invenção, o termo "reduzir o tempo de reconstituição de péletes liofilizados em comparação com liofiliza- dos obtidos por liofilização convencional" deve ser entendido como uma redução do período de tempo necessário para a dissolução com- pleta ou quase completa dos péletes liofilizados obtidos pelo método de acordo com a presente invenção após a adição do meio de recons- tituição, por exemplo, água estéril, em comparação com os liofilizados obtidos por liofilização convencional. O tempo de reconstituição é par- ticularmente reduzido em pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pe-

lo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90% ou pelo menos 95%. No contexto da presente inven- ção, o termo "reconstituição/dissolução completa ou quase completa de péletes liofilizados" refere-se à dissolução de pelo menos 98% do teor de sólidos dos péletes liofilizados no meio de reconstituição, mais particularmente de pelo menos 98,5% do teor de sólidos dos péletes liofilizados, mais particularmente pelo menos 99%, pelo menos 99,5%, pelo menos 99,75% ou pelo menos 99,9% do teor de sólidos dos péle- tes liofilizados.

[0089] O princípio de operação do Método 3 possui várias vanta- gens distintas. Em primeiro lugar, as gotículas pulverizadas do anticor- po anti-FXIa compreendendo a solução não entram em contato com um gás criogênico de uma forma contrafluxo, tal como descrito na WO2006/008006 A1. Não há necessidade de introduzir um gás crio- gênico no espaço interno da torre de esfriamento e, portanto, todas as etapas de manuseio e esterilização do gás criogênico podem ser omi- tidas. Todas as etapas deste método podem ser realizadas sob condi- ções estéreis e sem comprometer a esterilidade entre as etapas indivi- duais.

[0090] Em segundo lugar, este método (Método 3) foi experimen- talmente encontrado para não resultar em danos significativos ao anti- corpo anti-FXIa, evitando assim perdas de afinidade de ligação no produto final. Na verdade, o anticorpo anti-FXIa compreendendo péle- tes liofilizados obtidos por este método (Método 3) apresentou afinida- de de ligação aumentada para o antígeno FXIa conforme avaliado por ELISA indireto em comparação com o anticorpo anti-FXIa compreen- dendo liofilizados obtidos por liofilização convencional (Método 1) ou o processo de liofilização de acordo com a WO2006/008006 (Método 2). A prevenção de danos ao anticorpo anti-FXIa permite o carregamento preciso de uma quantidade desejada de anticorpo anti-FXIa ativo den-

tro de uma estreita faixa especificada. Além disso, este método permi- te mais flexibilidade no depósito dos péletes liofilizados em diversos volumes e sistemas de aplicação, em comparação com a liofilização convencional.

[0091] Em terceiro lugar, através da condução da etapa de liofili- zação em um recipiente rotativo dentro da câmara de vácuo, a posição espacial de cada pelota individual é uniformemente distribuída ao lon- go do tempo. Isso garante condições de secagem uniformes e, portan- to, elimina variações espaciais da atividade do anticorpo, por exemplo, afinidade de ligação, como seria o caso de frascos liofilizados em uma prateleira.

[0092] Por último, observou-se que o anticorpo anti-FXIa compre- endendo péletes produzidos de acordo com este método (Método 3) apresenta um tempo de reconstituição consideravelmente encurtado, em particular em comparação com o anticorpo anti-FXIa compreen- dendo liofilizados obtidos por liofilização convencional (Método 1), mas também em comparação com os péletes obtidos pelo processo divul- gado na WO2006/008006 A1 (Método 2).

[0093] No entanto, em contraste com muitas outras formulações líquidas de anticorpos, que não são estáveis durante longos períodos de tempo, as formulações líquidas de anticorpos de alta concentração de acordo com a invenção surpreendentemente apresentam alta esta- bilidade em testes de longo prazo, o que torna a liofilização com todas as suas desvantagens e limitações geralmente desnecessárias.

[0094] Como aqui utilizado, as formulações "estáveis" de proteínas biologicamente ativas são formulações que apresentam agregação reduzida e/ou perda reduzida de atividade biológica de pelo menos 20% após armazenamento em 2 a 8 °C durante pelo menos 6 meses ou após armazenamento de pelo menos 12 meses a < -60 °C em comparação com uma amostra de fórmula de controle. Ou, alternati-

vamente, que apresentam agregação reduzida e/ou perda reduzida de atividade biológica sob condições de estresse térmico, por exemplo, múltiplos ciclos de congelamento/descongelamento ou estresse de agitação, por exemplo, (300 rpm durante 3 h) etc.

[0095] As formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção possuem propriedades farmacológicas valiosas e podem ser utilizadas para prevenção e tratamento de doenças em seres humanos e animais. As formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a in- venção que podem ser utilizadas para doenças e seu tratamento in- cluem particularmente o grupo de doenças trombóticas ou tromboem- bólicas. Consequentemente, as formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção são adequadas para o tratamento e/ou profila- xia de doenças ou complicações que podem surgir da formação de coágulos.

[0096] No contexto da presente invenção, as "doenças trombóticas ou tromboembólicas" incluem doenças que ocorrem tanto na artéria quanto na vasculatura venosa e que podem ser tratadas com as for- mulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção, em parti- cular doenças nas artérias coronárias do coração, tais como a síndro- me coronariana aguda (SCA), o infarto do miocárdio com elevação do segmento ST (STEMI) e sem elevação do segmento ST (sem STEMI), angina pectoris estável, angina pectoris instável, reoclusões e reeste- noses após intervenções coronárias tais como angioplastia, implanta- ção de stent ou bypass aortocoronário, mas também doenças trombó- ticas ou tromboembólicas em outros vasos levando a distúrbios oclusi- vos arteriais periféricos, embolias pulmonares, tromboembolias veno- sas, tromboses venosas, em particular em veias profundas da perna e veias renais, ataques isquêmicos transitórios e também acidente vas- cular cerebral trombótico e acidente vascular cerebral tromboembólico.

[0097] A estimulação do sistema de coagulação pode ocorrer por várias causas ou distúrbios associados. No contexto de intervenções cirúrgicas, imobilidade, confinamento ao leito, infecções, inflamação ou câncer ou terapia do câncer, inter alia, o sistema de coagulação pode ser altamente ativado e pode haver complicações trombóticas, em par- ticular tromboses venosas. As formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção são, portanto, adequadas para a profilaxia de tromboses no contexto de intervenções cirúrgicas em pacientes que sofrem de câncer. As formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção são, portanto, também adequadas para a profilaxia de tromboses em pacientes com um sistema de coagulação ativado, por exemplo, nas situações de estimulação descritas.

[0098] As formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção são, portanto, também adequadas para a prevenção e trata- mento de tromboembolias cardiogênicas, por exemplo, isquemias ce- rebrais, acidente vascular cerebral e tromboembolias e isquemias sis- têmicas, em pacientes com arritmias cardíacas agudas, intermitentes ou persistentes, por exemplo, fibrilação atrial, e em pacientes submeti- dos à cardioversão e também em pacientes com distúrbios das válvu- las cardíacas ou com válvulas cardíacas artificiais.

[0099] Além disso, as formulações farmacêuticas líquidas de acor- do com a invenção são adequadas para o tratamento e prevenção de coagulação intravascular disseminada (DIC) que pode ocorrer em co- nexão com sepse, entre outros, mas também devido a intervenções cirúrgicas, distúrbios neoplásicos, queimaduras ou outras lesões e po- de causar danos graves aos órgãos por meio de microtromboses.

[00100] Além disso, as complicações tromboembólicas ocorrem em anemias hemolíticas microangiopáticas e pelo contato do sangue com superfícies estranhas no contexto da circulação extracorpórea, por exemplo, hemodiálise, ECMO ("oxigenação por membrana extracorpó- rea"), LVAD ("dispositivo de assistência ventricular esquerda") e méto-

dos semelhantes, fístulas AV, próteses de válvulas vasculares e cardí- acas.

[00101] Além do mais, as formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção são adequadas para o tratamento e/ou profila- xia de doenças envolvendo formações de microcoágulos ou depósitos de fibrina em vasos sanguíneos cerebrais que podem levar a distúr- bios de demência tais como demência vascular ou doença de Alzhei- mer. Aqui, o coágulo pode contribuir para o distúrbio tanto por meio de oclusões quanto pela ligação de outros fatores relevantes para a do- ença.

[00102] Além do mais, as formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção podem ser utilizadas para inibir o crescimento tumoral e a formação de metástases, e também para a profilaxia e/ou tratamento de complicações tromboembólicas, por exemplo, trom- boembolias venosas, para pacientes com tumor, em particular aqueles submetidos a grandes intervenções cirúrgicas ou quimio- ou radiotera- pia.

[00103] Além disso, as formulações farmacêuticas líquidas de acor- do com a invenção podem ser utilizadas para o tratamento ou profila- xia de doenças inflamatórias como artrite reumatóide (RA), ou doenças neurológicas como a doença de Alzheimer (AD). Mais adiante, esses anticorpos podem ser úteis para o tratamento de câncer e metástases, microangiopatia trombótica (TMA), degeneração macular relacionada à idade, retinopatias diabéticas, nefropatias diabéticas, assim como ou- tras doenças microvasculares.

[00104] Além disso, as formulações farmacêuticas líquidas de acor- do com a invenção podem ser utilizadas para o tratamento e/ou profi- laxia de pacientes em diálise, especialmente a prevenção da fístula de Cimino de trombose de derivação na hemodiálise. A hemodiálise pode ser executada com fístulas arteriovenosas nativas, enxertos de alça sintética, cateteres venosos centrais de grande calibre ou outros dis- positivos que consistem em superfícies artificiais. A administração de anticorpos desta invenção irá prevenir a formação de coágulos dentro da fístula (e propagação de coágulos embolizados nas artérias pulmo- nares), tanto durante a diálise quanto logo após.

[00105] Além disso, as formulações farmacêuticas líquidas de acor- do com a invenção também são úteis para o tratamento e/ou profilaxia de pacientes submetidos a tromboses intracardíacas e intrapulmona- res após as operações de fonte safena cardiopulmonares (por exem- plo, ECMO: oxigenação por membrana extracorpórea).

[00106] Existe uma grande necessidade de anticoagulação em pa- cientes em diálise sem aumentar o risco de eventos de sangramento indesejados e onde é elevada a incidência de tromboembolismo veno- so (TEV) e fibrilação atrial (por exemplo, doença renal em estágio ter- minal em pacientes em hemodiálise) nesta população. As formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção também são úteis para o tratamento e/ou profilaxia destes tipos de pacientes.

[00107] As formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção também são úteis para o tratamento e/ou profilaxia de paci- entes afetados com púrpura trombocitopênica idiopática (IPT). Esses pacientes apresentam risco trombótico aumentado em comparação com a população em geral. A concentração do fator de coagulação FXI é significativamente maior em pacientes com IPT em comparação com os controles e aPTT é significativamente maior em pacientes com IPT.

[00108] Além disso, as formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção também são adequadas para a profilaxia e/ou tratamento da hipertensão pulmonar.

[00109] No contexto da presente invenção, o termo "hipertensão pulmonar" inclui hipertensão arterial pulmonar, hipertensão pulmonar associada com distúrbios do coração esquerdo, hipertensão pulmonar associada com distúrbios pulmonares e/ou hipoxia e hipertensão pul- monar devido a tromboembolias crônicas (CTEPH).

[00110] "Hipertensão arterial pulmonar" inclui hipertensão arterial pulmonar idiopática (IPAH, anteriormente também conhecida como hipertensão pulmonar primária), hipertensão arterial pulmonar familiar (FPAH) e hipertensão arterial pulmonar associada (APAH), que está associada com as colagenoses, derivação circulatória pulmonar sistê- mica congênita, hipertensão portal, infecções por HIV, a ingestão de certos fármacos e medicamentos, com outros distúrbios (distúrbios da tireóide, distúrbios de armazenamento de glicogênio, Morbus Gaucher, teleangiectasia hereditária, hemoglobinopatias, distúrbios mieloprolife- rativos, esplenectomia), com distúrbios tendo uma contribuição veno- sa/capilar significativa, tais como distúrbio venooclusivo pulmonar e hemangiomatose pulmonar-capilar, e também hipertensão pulmonar persistente em neonatos.

[00111] A hipertensão pulmonar associada a distúrbios do coração esquerdo inclui um átrio ou ventrículo esquerdo doente e defeitos na válvula mitral ou aorta.

[00112] A hipertensão pulmonar associada a distúrbios pulmonares e/ou hipoxia inclui distúrbios pulmonares obstrutivos crônicos, distúrbio pulmonar intersticial, síndrome da apnéia do sono, hipoventilação al- veolar, doença crônica de altitude elevada e defeitos inerentes.

[00113] A hipertensão pulmonar devido à tromboembolias crônicas (CTEPH) compreende a oclusão tromboembólica das artérias pulmo- nares proximais, a oclusão tromboembólica das artérias pulmonares distais e embolias pulmonares não trombóticas (tumor, parasitas, cor- pos estranhos).

[00114] A presente invenção fornece ainda a utilização das formu- lações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção para a produ- ção de medicamentos para o tratamento e/ou profilaxia da hipertensão pulmonar associada a sarcoidose, histiocitose X e linfangiomatose.

[00115] Além disso, as formulações farmacêuticas líquidas de acor- do com a invenção também são adequadas para o tratamento e/ou profilaxia da coagulação intravascular disseminada no contexto de uma doença infecciosa e/ou da síndrome inflamatória sistêmica (SIRS), disfunção de órgão séptico, falência de órgãos sépticos e fa- lência de múltiplos órgãos, síndrome da angústia respiratória aguda (ARDS), lesão pulmonar aguda (ALI), choque séptico e/ou falência de órgãos sépticos.

[00116] No curso de uma infecção, pode haver uma ativação gene- ralizada do sistema de coagulação (coagulação intravascular dissemi- nada ou coagulopatia de consumo, mais abaixo referida como "DIC") com microtrombose em vários órgãos e complicações hemorrágicas secundárias. Além do mais, pode haver dano endotelial com aumento da permeabilidade dos vasos e difusão de fluido e proteínas para o espaço extravasal. Enquanto a infecção progride, pode haver insufici- ência de um órgão (por exemplo, insuficiência renal, insuficiência he- pática, insuficiência respiratória, déficit do sistema nervoso central e insuficiência cardiovascular) ou insuficiência de múltiplos órgãos.

[00117] No caso da DIC, existe uma ativação massiva do sistema de coagulação na superfície das células endoteliais lesadas, nas su- perfícies de corpos estranhos ou tecido extravascular reticulado. Como uma consequência, ocorre coagulação em pequenos vasos de vários órgãos com hipoxia e subsequente disfunção orgânica. Um efeito se- cundário é o consumo de fatores de coagulação (por exemplo, fator X, protrombina e fibrinogênio) e plaquetas, o que reduz a capacidade de coagulação do sangue e pode resultar em sangramento intenso.

[00118] As formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção também são adequadas para a profilaxia primária de distúr- bios trombóticos ou tromboembólicos e/ou distúrbios inflamatórios e/ou distúrbios com permeabilidade vascular aumentada em pacientes nos quais as mutações genéticas levam à atividade aumentada das enzi- mas, ou níveis aumentados dos zimogênios e estes são estabelecidos por testes/medições relevantes da atividade enzimática ou das con- centrações de zimogênio.

[00119] A presente invenção fornece ainda o uso das formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção para o tratamento e/ou profilaxia de distúrbios, especialmente os distúrbios mencionados acima.

[00120] A presente invenção fornece ainda o uso das formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção para a produção de um medicamento para o tratamento e/ou profilaxia de distúrbios, espe- cialmente os distúrbios mencionados acima.

[00121] A presente invenção fornece ainda um método para o tra- tamento e/ou profilaxia de distúrbios, especialmente os distúrbios mencionados acima, utilizando uma quantidade terapeuticamente efi- caz de um composto da invenção.

[00122] A presente invenção fornece ainda as formulações farma- cêuticas líquidas de acordo com a invenção para uso em um método para o tratamento e/ou profilaxia de distúrbios, especialmente os dis- túrbios mencionados acima, utilizando uma quantidade terapeutica- mente eficaz de um composto de acordo com a invenção.

[00123] Estas doenças corretamente descritas em seres humanos também podem ocorrer com uma etiologia comparável em outros ma- míferos e podem ser tratadas com as formulações farmacêuticas líqui- das da presente invenção.

[00124] No contexto desta invenção, o termo "tratamento" ou "tra- tar" é utilizado no sentido convencional e significa atender, preocupar- se e cuidar de um paciente com o objetivo de combater, reduzir, ate- nuar ou aliviar uma doença ou anormalidade de saúde, e melhorar as condições de vida prejudicadas por essa doença.

[00125] A presente invenção, portanto, fornece ainda o uso das formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção para o tratamento e/ou prevenção de distúrbios, especialmente os distúrbios mencionados acima.

[00126] A presente invenção fornece ainda o uso das formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção para a produção de um medicamento para o tratamento e/ou prevenção de distúrbios, es- pecialmente os distúrbios mencionados acima.

[00127] A presente invenção fornece ainda o uso de formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção em um método para o tratamento e/ou prevenção de distúrbios, especialmente das doen- ças anteriormente mencionadas.

[00128] A presente invenção fornece ainda um método para tratar e/ou prevenir doenças, mais particularmente as doenças acima menci- onadas, utilizando uma quantidade eficaz de uma das formulações farmacêuticas líquidas de acordo com a invenção.

[00129] Em uma modalidade preferida, o tratamento e/ou preven- ção é a administração parenteral das formulações farmacêuticas líqui- das de acordo com a invenção. É dada preferência particular à admi- nistração subcutânea.

[00130] As formulações farmacêuticas de acordo com a invenção podem ser utilizadas isoladamente ou, se necessário, em combinação com uma ou mais outras substâncias farmacologicamente ativas, con- tanto que esta combinação não leve a efeitos colaterais indesejáveis e inaceitáveis. A presente invenção, portanto, fornece ainda medicamen- tos compreendendo pelo menos uma das composições de acordo com a invenção e um ou mais outros ingredientes ativos, especialmente para o tratamento e/ou prevenção das doenças anteriormente mencio- nadas.

[00131] Os líquidos de acordo com a invenção podem ser adminis- trados como um único tratamento, mas também podem ser adminis- trados repetida e sucessivamente, ou podem ser administrados a lon- go prazo após o diagnóstico. EXEMPLO 1: INFLUÊNCIA DA CONCENTRAÇÃO DE ANTICORPOS

NA VISCOSIDADE E FORMAÇÃO DE PARTÍCULAS

[00132] O PCT/EP2018/050951 descreve uma formulação de baixa concentração de anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D compreendendo 25 mg/ml de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em L- histidina 10 mM, glicina 130 mM, diidrato de trealose 5%, polissorbato 80 0,05% em pH 6,0 que é especialmente adequado para administra- ção intravenosa.

[00133] Para uma aplicação subcutânea é importante determinar a concentração máxima da composição que, quando concentrada nesta formulação particular, resultou em valores aumentados de viscosidade e formação de partículas. Os cenários clínicos da dose necessária propuseram um objetivo de concentração de aproximadamente 150 mg/ml. Portanto, a concentração de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi aumentada utilizando uma centrífuga (Sigma, Typ 3K30) em 2000 G em combinação com um tubo de centrifugação (Merck Milipore, Amicon Ultra-15) contendo uma membrana de filtro de 30 kDa que se- parou a composição e o anticorpo.

[00134] 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi formulado em concen- trações crescentes no sistema tampão de histidina/glicina conforme descrito no PCT/EP2018/050951 para a formulação de baixa concen- tração de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D: (1) L-histidina 10 mM, glicina 130 mM, diidrato de trealose 5%, polis- sorbato 80 0,05% em pH 6,0

[00135] As composições nestes exemplos, assim como as compo- sições nos exemplos abaixo, foram analisadas em relação à concen-

tração de anticorpos utilizando espectrômetro UV/VIS (NanoDrop 2000, ThermoFisher Scientific) absorvendo o comprimento de onda em 280 nm. Para possível dispersão de luz, o teste também foi corrigido em 320 nm.

[00136] A viscosidade dinâmica da solução foi medida utilizando um pequeno viscosímetro de amostra (mVroc, RheoSense). 250 µl de amostras de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foram injetados em ta- xas de vazão de 50 µl/min a 100 µl/min através do canal de fluxo a 20 °C.

[00137] A formação de partículas foi monitorada utilizando citome- tria de fluxo (MFI, ProteinSimple, 2 µm a 100 µm) e obscurecimento de luz (Pamas SVSS, Pamas) cobrindo uma faixa de 2 µm a 100 µm de tamanho de partícula. Tabela 1: Influência da concentração de 076D-M007-H04-CDRL3- N110D na viscosidade e formação de partículas na composição 1 Concentração de Viscosidade Contagem de partículas de 2 Anticorpos dinâmica µm a 100 µm mg / ml mPa*s Partículas /ml 10 1,14 1097 20 1,40 3004 40 2,25 5767 60 3,97 6681 80 6,85 8327 100 13,30 9833 110 18,57 10000 120 30,73 17497 130 58,29 10462

139.5 129,07 34146

[00138] A Tabela 1 resume a viscosidade e a carga de partículas medidas com o aumento da concentração de 076D-M007-H04- CDRL3-N110D na composição 1. Não foi possível aumentar a concen- tração de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D até a faixa proposta de aproximadamente 150 mg/ml sem aumentar a formação de partículas e exceder os limites aceitáveis de viscosidade em cerca de 30 mPa*s. Portanto, a formulação de baixa concentração para anticorpos FXIa compreendendo um sistema tampão de histidina/glicina (formulação 1) como descrito na PCT/EP2018/050951 não foi considerada adequada para uma formulação de alta concentração de 076D-M007-H04- CDRL3-N110D conforme necessário para administração subcutânea. EXEMPLO 2: INFLUÊNCIA DE DIFERENTES EXCIPIENTES

[00139] Para diminuir a viscosidade e aumentar a concentração de anticorpos, foi testada a influência de diferentes excipientes. Este exemplo mostra a influência de diferentes excipientes nos atributos viscosidade e segundo coeficiente virial.

[00140] O segundo coeficiente virial (valor B22) foi determinado através da medição da dispersão de luz estática (SLS) no comprimen- to de onda de 658 nm na dependência da concentração de anticorpos da composição em uma faixa de 1 mg/ml a 10 mg/ml (NanoStar, Wyatt Technologies). Por dispersão de luz estática, as interações intermole- culares podem ser monitoradas. Se as massas moleculares aumentam desproporcionalmente com o aumento da concentração, os anticorpos tendem à agregação. As condições predominantes na formulação são chamadas de “atrativas”. Se, em contraste, as massas moleculares diminuem desproporcionalmente, condições “repulsivas” prevalecem no sistema. A tendência à agregação é limitada.

[00141] O 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi formulado em apro- ximadamente 120,0 mg/ml em um sistema tampão de histidina-glicina compreendendo L-Histidina 10 mM e glicina 130 mM em pH 6,0 (com- posição 2) com diferentes excipientes em concentrações de 50 mM, 75mM e 150mM respectivamente. As seguintes composições foram testadas: (2) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM em pH 6,0

(3) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloreto de sódio 50 mM em pH 6,0 (4) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloreto de sódio 75 mM em pH 6,0 (5) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloreto de sódio 150 mM em pH 6,0 (6) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, diidrato de cloreto de cálcio 50 mM em pH 6,0 (7) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, diidrato de cloreto de cálcio 75 mM em pH 6,0 (8) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, diidrato de cloreto de cálcio 150 mM em pH 6,0 (9) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloridreto de L-lisina 50 mM em pH 6,0 (10) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloridreto de L-lisina 75 mM em pH 6,0 (11) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloridreto de L-lisina 150 mM em pH 6,0 (12) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloridreto de L-Arginina 50 mM em pH 6,0 (13) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloridreto de L-Arginina 75 mM em pH 6,0 (14) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloridreto de L-Arginina 150 mM em pH 6,0

Tabela 2: Influência de diferentes excipientes sobre a viscosidade e segundo coeficiente virial (B22) Composição Viscosidade dinâmica Segundo coeficiente virial No. mPa*s ml * mol/g² 2 39,8 -3,36E-05 3 23,1 2,42E-05 4 17,9 1,02E-05 5 12,7 9,56E-06 6 9,49 1,30E-05 7 8,26 1,76E-05 8 7,60 1,31E-04 9 14,3 6,49E-05 10 13,7 2,20E-05 11 10,7 3,07E-05 12 8,99 3,95E-05 13 7,20 5,59E-05 14 7,31 7,05E-05

[00142] A Tabela 2 resume a viscosidade dinâmica e o segundo coeficiente virial para as composições 2 a 14. Os valores de viscosida- de diminuíram de 39,8 mPa*s (para a composição 2 compreendendo um sistema tampão de histidina-glicina sem mais excipientes) com to- dos os excipientes testados até cinco dobras. Em geral, o efeito de re- dução da viscosidade aumentou com o aumento das quantidades do excipiente. O cloreto de sódio, lisina, cloreto de cálcio e arginina dimi- nuíram a viscosidade da solução em uma concentração de 150 mM para 12,7 mPa*s, 10,7 mPa*s, 7,6 mPa*s e 7,31 mPa*s, respectiva- mente. No entanto, a viscosidade mais baixa foi alcançada utilizando arginina 75 mM com uma viscosidade resultante de 7,2 mPa*s.

[00143] A arginina foi selecionada por ser o excipiente mais eficaz para reduzir a viscosidade neste sistema. Outros experimentos foram conduzidos utilizando arginina como agente redutor de viscosidade. No entanto, mais investigações para equilibrar a viscosidade reduzida com a estabilidade do anticorpo ainda foram necessárias.

[00144] Além disso, os valores de viscosidade dinâmica (Tabela 2) da composição (14) indicaram uma mudança significativa da interação proteína-proteína. Portanto, as composições (2) e (14) foram testadas exemplarmente sob condições de estresse.

[00145] Como a arginina era o agente de redução de viscosidade mais eficaz e também mostrou um efeito positivo no segundo coefici- ente virial, a composição 14 (contendo arginina 150 mM) foi testada provocando a geração de partículas sob diferentes condições de es- tresse em comparação com a composição inicial 2 (sem excipiente). Três diferentes condições de estresse que podem potencialmente le- var à agregação da proteína e formação de oligômeros (HMW) até par- tículas visíveis foram induzidas às composições 2 e 14. As condições de estresse testadas foram estresse de agitação (300 rpm durante 3 h) utilizando um agitador (Type HS 260C, IKA), 3 ciclos de congelamen- to/descongelamento de -20 °C a 20 °C durante 6 horas cada e arma- zenamento em 2 a 8 °C durante 1 semana. Tabela 3: Estabilidade das composições 2 e 14 após diferentes condi- ções de estresse Com- Teste de Armazena- Teste de congela- Teste de Agi- posição mento men- tação to/descongelamento Contagem de partícu- Contagem de partícu- Formação de las de 2 µm a 100 µm las de 2 µm a 100 µm partículas No. Partículas/ml Partículas/ml Partículas/ml 2 4610 6938 32773 14 813 2969 23767

[00146] Como mostrado na Tabela 3, a adição de arginina (compo- sição 14) teve um efeito global positivo sobre o comportamento de formação de partículas de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D sob todas as três condições de estresse em comparação com a composição 2 sem um excipiente redutor de viscosidade. EXEMPLO 3: INFLUÊNCIA DO pH

[00147] Além de diferentes excipientes, uma mudança de pH pode influenciar a viscosidade e a estabilidade de um anticorpo. Uma faixa de pH de 4,7 a 7,4 é considerada adequada para aplicação subcutâ- nea.

[00148] O segundo coeficiente virial e a formação de partículas fo- ram avaliados conforme descrito anteriormente. A estabilidade térmica das composições foi determinada através da medição da fluorescência de fontes de triptofano intrínsecas e extrínsecas nas composições con- tendo anticorpos. As composições foram aquecidas em um perfil de temperatura de 15 °C a 95 °C utilizando um método de fluorimetria de varredura diferencial (DSF) (Prometheus, NanoTemper) e coleta de dados de fluorescência em comprimento de onda de 330 nm e 350 nm. Um aumento da temperatura de fusão (Tm) medida com DSF é uma forte indicação de maior estabilidade conformacional.

[00149] O 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi formulado em apro- ximadamente 120 mg/ml em L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM e clo- ridreto de L-Arginina 75 mM em três valores de pH diferentes. As se- guintes composições foram testadas: (15) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloridreto de L-Arginina 75 mM, pH 6,0 (16) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloridreto de L-Arginina 75 mM, pH 5,5 (17) L-Histidina 10 mM, Glicina 130 mM, cloridreto de L-Arginina 75 mM, pH 5,0

Tabela 4: Influência das etapas de pH no segundo coeficiente virial, formação de partículas e estabilidade térmica das composições 15 a 17 Compo- Segundo coefi- Contagem de partículas Estabilidade sição ciente virial 2 µm a 100 µm térmica No. ml * mol/g² Partículas/ml °C 15 7,43E-06 294 66,38 16 1,15E-05 28 64,71 17 1,14E-04 31 59,36

[00150] A Tabela 4 resume o segundo coeficiente virial, a formação de partículas, assim como a estabilidade térmica das composições 15 a 17. A diminuição do pH de pH 6,0 para pH 5,5 e pH 5,0, respectiva- mente, aumentou o segundo coeficiente virial de 7,43E-06 ml*mol/g2 para 1,14E-04 ml*mol/g2 e diminuiu a formação de partículas que foi induzida devido ao processamento da amostra ao redor de 294 partí- culas > 2 µm para 31 partículas. Os valores de Tm, no entanto, diminuí- ram de 66,38 °C para 59,36 °C.

[00151] Devido ao efeito positivo sobre o segundo coeficiente virial, foi decidido que um pH reduzido em aproximadamente 5,0 era o prefe- rido para outras experiências. No entanto, a troca com a estabilidade conformacional diminuída foi observada e posteriormente abordada no Exemplo 5. EXEMPLO 4: INFLUÊNCIA DA CONCENTRAÇÃO DE TENSOATIVO

[00152] Este exemplo mostra o efeito do aumento das concentra- ções de tensoativo na estabilidade das composições em termos de formação de partículas subvisíveis utilizando Micro Flow Imaging (MFI 5200, Protein Simple) em uma faixa de partícula de 2 µm a 100 µm. As composições foram expostas a diferentes condições de estresse, con- forme descrito no Exemplo 2. O tensoativo selecionado era polissorba- to 80.

[00153] O 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi formulado em apro-

ximadamente 150 mg/ml com L-Histidina 20 mM em pH 5,0 com con- centrações crescentes de polissorbato 80. As seguintes composições foram testadas: (18) L-Histidina 20 mM, pH 5,0, polissorbato 80 a 0,00% (19) L-Histidina 20 mM, pH 5,0, polissorbato 80 a 0,01% (20) L-Histidina 20 mM, pH 5,0, polissorbato 80 a 0,05% (21) L-Histidina 20 mM, pH 5,0, polissorbato 80 a 0,10% (22) L-Histidina 20 mM, pH 5,0, polissorbato 80 a 0,15% (23) L-Histidina 20 mM, pH 5,0, polissorbato 80 a 0,20% Tabela 5: Influência de diferentes concentrações de tensoativos na formação de partículas de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D - Estresse de agitação induzido na composição 18 a 23 Composi- Contagem de Contagem de Contagem de Contagem de ção partículas partículas partículas partículas 2 µm a 100 5 µm a 100 10 µm a 100 25 µm a 100 µm µm µm µm No. Partículas/ml Partículas/ml Partículas/ml Partículas/ml 18 59077 25417 3819 68 19 40888 9064 2588 265 20 16155 3620 925 74 21 21419 4434 1078 74 22 18942 4488 1200 130 23 18739 3949 1315 92

[00154] A Tabela 5 resume a formação de partículas de 076D- M007-H04-CDRL3-N110D enquanto induz estresse de agitação nas composições.

Tabela 6: Influência de diferentes concentrações de tensoativos na formação de partículas de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D - Estresse de congelamento/descongelamento induzido na composição 20 a 23 Composi- Contagem de Contagem de Contagem de Contagem de ção partículas partículas partículas partículas 2 µm a 100 5 µm a 100 10 µm a 100 25 µm a 100 µm µm µm µm No. Partículas/ml Partículas/ml Partículas/ml Partículas/ml 20 5275 897 51 3 21 4475 637 36 3 22 6692 469 48 0 23 9103 1386 69 0

[00155] A Tabela 6 resume a formação de partículas de 076D- M007-H04-CDRL3-N110D enquanto induz estresse de congelamen- to/descongelamento nas composições.

[00156] O efeito protetor do tensoativo atingiu um patamar em uma concentração de aproximadamente polissorbato 80 a 0,05% na com- posição (20) a polissorbato 80 a 0,20% na composição 23. Para garan- tir o efeito protetor ao longo da vida útil e criar um corredor de robustez seguro polissorbato 80 a 0,1% foi particularmente preferido. Adicio- nalmente, o efeito protetor de polissorbato 80 a 0,1% (composição 21), como mostrado na Tabela 6, resultou em 637 partículas > 5 µm na comparação com 897 partículas > 5 µm na composição 20, enquanto induz estresse de congelamento/descongelamento que indica que a concentração de polissorbato 80 deve ser pelo menos 0,1%.

[00157] Concentrações mais elevadas de polissorbato 80, conforme mostrado na Tabela 5 e na Tabela 6, não apresentaram melhora signi- ficativa nos efeitos protetores. EXEMPLO 5: COMBINAÇÃO DE DIFERENTES EXCIPIENTES

[00158] Este exemplo mostra uma abordagem combinada dos exemplos anteriores. Seu objetivo era otimizar os efeitos que foram descritos anteriormente para diminuir a viscosidade e melhorar a esta-

bilidade de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D, enquanto fornece infor- mações mais detalhadas sobre a faixa de concentração de arginina para reduzir a osmolalidade das composições para níveis fisiológicos (240 a 400 mOsm/kg) foi necessário reduzir as concentrações globais dos excipientes.

[00159] O propósito da seguinte varredura foi otimizar a redução da viscosidade, mas também as propriedades de prevenção de formação de partículas da formulação de alta concentração para 076D-M007- H04-CDRL3-N110D enquanto reduz o teor de arginina para 50 mM e revela um efeito benéfico em concentrações mais baixas.

[00160] Também foram investigados os efeitos sinérgicos da argini- na em combinação com glicina e metionina. Portanto, sistemas de tamponamento com diferentes excipientes e combinações dos mes- mos em vários valores de pH foram configurados e avaliados em rela- ção ao segundo coeficiente virial, estabilidade térmica e viscosidade.

[00161] O 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi formulado em apro- ximadamente 150 mg/ml em diferentes composições: (24) L-Histidina 20 mM (25) L-Histidina 20 mM, cloridreto de L-Arginina 50 mM (26) L-Histidina 20 mM, cloridreto de L-Arginina 30 mM (27) L-Histidina 20 mM, cloridreto de L-Arginina 50 mM, L-Metionina 10 mM (28) L-Histidina 20 mM, Glicina 130 mM (29) L-Histidina 20 mM, cloridreto de L-Arginina 50 mM, Glicina 130 mM (30) tampão de fosfato 20 mM (31) tampão de acetato 20 mM

[00162] Todas as composições foram testadas em uma faixa de pH de 5,0 a 6,0 em etapas de 0,2. Tabela 7: Influência das alterações de pH no segundo coeficiente virial

(B22) de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em diferentes composições Compo- pH 5,0 pH 5,2 pH 5,4 pH 5,6 pH 5,8 pH 6,0 sição No. ml * ml * ml * ml * ml * ml * mol/g² mol/g² mol/g² mol/g² mol/g² mol/g² 24 -6,70E-05 -1,13E-04 -1,13E-04 -1,56E-04 -1,64E-04 -2,70E-04 25 1,49E-05 8,38E-06 7,47E-06 3,58E-06 -3,71E-05 -2,80E-05 26 -3,75E-05 -4,98E-05 -6,24E-05 -1,40E-04 -1,25E-04 - 27 -8,50E-05 -8,91E-05 -6,03E-05 -6,72E-05 -8,53E-05 -1,62E-04 28 8,89E-05 6,54E-05 -7,11E-05 -1,61E-04 -2,60E-04 -4,83E-04 29 2,94E-05 - - - - - 30 -1,17E-04 -1,08E-04 -1,09E-04 -1,07E-04 -9,51E-05 -1,56E-04 31 9,01E-06 -1,82E-05 -4,79E-05 -5,52E-05 -8,37E-05 -8,51E-05

[00163] A Tabela 7 resume o segundo coeficiente virial de diferen- tes composições compreendendo aproximadamente 150 mg/ml de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D na dependência do pH das composi- ções. Como já descrito no Exemplo 3, a diminuição do pH geral resul- tou em um segundo coeficiente virial aumentado. Os valores de B22 (representando interações intermoleculares) estavam entre -2,70E-04 mol*ml/g2 e 2,94E-05 mol*ml/g2. As composições 25, 28, 29 e 31 ti- nham um segundo coeficiente virial acima de zero em pH 5,2 e inferior (ver a Tabela 7), o que era preferível, pois altos valores de B22 são uma indicação de uma estabilidade coloidal. Em contraste, a composi- ção 26 não mostrou melhora significativa, embora contendo arginina 30 mM. Este efeito observado levou à conclusão de que uma concen- tração de apenas 30 mM de arginina não era suficiente para uma for- mulação de alta concentração viável de 076D-M007-H04-CDRL3- N110D.

Tabela 8: Influência das alterações de pH na estabilidade térmica (Tm) de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em diferentes composições Composição pH 5,0 pH 5,2 pH 5,4 pH 5,6 pH 5,8 pH 6,0 No. °C °C °C °C °C °C 24 60,7 62,7 63,6 65,7 66,3 67,5 25 60,5 61,2 63,0 63,8 65,6 66,0 26 - - - - - - 27 59,7 61,0 61,8 63,3 64,9 66,0 28 64,7 65,7 65,1 67,3 67,8 68,7 29 - - - - - 30 66,5 67,0 67,9 68,6 69,2 69,8 31 66,1 67,2 68,3 69,0 69,7 78,5

[00164] A Tabela 8 resume a estabilidade térmica de diferentes composições compreendendo aproximadamente 150 mg/ml de 076D- M007-H04-CDRL3-N110D na dependência do pH das composições. Os valores de Tm estavam entre 59,7 °C e 78,5 °C. O pH geral diminu- ído resultou em valores de Tm diminuídos. As composições que foram estabilizadas utilizando os aminoácidos histidina, glicina, arginina e/ou metionina em diferentes combinações e concentrações (24 a 28) tive- ram um valor de Tm menor do que as composições contendo tampão de fosfato ou acetato.

[00165] Surpreendentemente, entre as composições contendo ami- noácidos, a composição 28 apresentou um valor de Tm significativa- mente mais elevado de +4 °C a +5 °C em comparação com as compo- sições sem glicina, levando à conclusão de que a glicina teve um efei- to estabilizante sobre o anticorpo.

[00166] O efeito positivo da arginina no segundo coeficiente virial, assim como o efeito positivo da glicina na estabilidade térmica de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D, levou à conclusão de que uma com- posição preferível deve incluir ambos os aminoácidos além da histidi- na.

[00167] A combinação dos excipientes, glicina e arginina, além da histidina na composição 32 (histidina 20 mM, arginina 50 mM, glicina 50 mM, diidrato de trealose a 5%, polissorbato 80 a 0,10%, pH 5,0) confirmou um efeito sinérgico. O segundo coeficiente virial da compo- sição 32 foi de 3,385E-05 ml*mol/g2 e estava com ele na faixa das composições 25, 28 e 29 (conforme representado na Tabela 7). A Tm da composição 32 era de 63,3 °C comparável com a composição 28 compreendendo apenas glicina além de histidina. Esses dados mos- tram que a combinação de glicina e arginina, além de histidina, reduziu a interação proteína-proteína (segundo coeficiente virial) e ao mesmo tempo aumentou a estabilidade térmica (Tm). Tabela 9: Influência das alterações de pH sobre a viscosidade dinâmi- ca de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em diferentes composições Composição pH 5,0 pH 6,0 No. mPa*s mPa*s 25 54,3 74,6 27 45,7 - 29 25,6 - 30 - 50,6

[00168] A Tabela 9 mostra a viscosidade dinâmica de diferentes composições compreendendo aproximadamente 150 mg/ml de 076D- M007-H04-CDRL3-N110D em pH 5,0 e pH 6,0. Embora os segundos coeficientes viriais das composições 25 e 29 estivessem em uma faixa comparável, a viscosidade dinâmica da composição 29 é a única for- mulação que levou a uma viscosidade aceitável de 25,6 mPa*s em pH 5,0.

[00169] A osmolalidade foi medida utilizando um osmômetro de ponto de congelamento e uma calibração de três pontos (50, 300, 2000 mOsm/kg - Osmomat 030, GonoTech, Berlin). A composição 29 levou a uma osmolalidade de aproximadamente 324 mOsm/kg sem conter tensoativos adicionais como polissorbato 80 ou estabilizantes como diidrato de trealose. Era sabido que a adição de 5% de diidrato de trealose leva a 145 mOsm/kg adicionais, aumentando o valor de osmolalidade da composição. A osmolalidade teórica resultante da composição 29 em combinação com 5% de diidrato de trealose foi, portanto, com 469 mOsm/kg, esperada de ser hipertônica e fora da faixa aceitável de 240 a 400 mOsm/kg.

[00170] A quantidade de glicina na composição 29 foi, portanto, re- duzida de 130 mM para 50 mM (levando à composição 32). Essa re- dução resultou em uma osmolalidade de 241 mOsm/kg. A combinação com 5% de diidrato de trealose como estabilizante levaria então arit- meticamente a uma osmolalidade aceitável de 386 mOsm/kg.

[00171] Este valor aritmético foi confirmado pela medição da osmo- lalidade da composição 32, que mostrou uma osmolaridade de 371 mOsm/kg. EXEMPLO 6: LIOFILIZAÇÃO ATRAVÉS DA SECAGEM POR CON-

GELAMENTO CONVENCIONAL

[00172] Este exemplo mostra a adequação da composição líquida de alta concentração compreendendo 076D-M007-H04-CDRL3-N110D e um sistema tampão de histidina-glicina-arginina para a liofilização convencional. Trealose foi adicionada como estabilizante.

[00173] 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi formulado em aproxi- madamente 150 mg/ml em: (32) L-Histidina 20 mM, cloridreto de L-Arginina 50 mM, Glicina 50 mM, diidrato de trealose 5%, polissorbato 80 a 0,10%, pH 5,0.

[00174] Para desenvolver um processo de liofilização adequado, era essencial determinar a temperatura de colapso que decidia em qual temperatura a secagem primária poderia ser conduzida. A tempe- ratura de colapso foi medida utilizando um lio-microscópio (Lyostat 2, Biopharma), através do congelamento da composição em -50 °C antes de extrair vácuo (0,1 mbar) e aquecendo a amostra com uma rampa de 1 °C/minuto a 20,0 °C. Durante o aquecimento, as imagens da composição foram tiradas e analisadas até que um colapso do sistema testado pudesse ser observado.

[00175] A temperatura de colapso de 076D-M007-H04-CDRL3- N110D foi observada ser -14,3 °C e é um parâmetro essencial para a seleção do ciclo de liofilização seguinte.

[00176] A composição líquida 32 que compreende o anticorpo anti- FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi processada de acordo com um método convencional de liofilização (Método 1). A solução conten- do 150 mg/ml de anticorpo anti-FXIa foi colocada em frascos de vidro 10R tipo I e secada por congelamento em um secador por congela- mento de frasco convencional. Um total de 20 frascos foi carregado com 2,25 ml de solução por frasco, semitampados e carregados em um liofilizador Virtis Genesis. A solução foi congelada a -45 °C e a se- cagem primária foi executada em +10 °C, seguida por uma etapa de secagem secundária a 40 °C. O processo de liofilização completo exi- giu aprox. 38 horas. Os frascos foram tampados dentro do secador por congelamento e selados imediatamente após a descarga.

[00177] Os detalhes do ciclo de liofilização de acordo com um mé- todo convencional de liofilização (Método 1) para a composição 32 es- tão resumidos na Tabela 12. Tabela 12: Ciclo de liofilização da composição 32 (Método 1) Tempo Temp Pressão [hh:mm] [°C] [mbar] Carga 00:01 20,0 1000 Congelamento 00:30 -5,0 1000 Congelamento 01:00 -5,0 1000 Congelamento 00:40 -45,0 1000 Congelamento 03:30 -45,0 1000 Evacuação 00:01 -45,0 0,100 Secagem primária 01:00 10 0,1

Tempo Temp Pressão [hh:mm] [°C] [mbar] Secagem primária 19:00 10 0,1 Secagem secundária 01:00 40 0,04 Secagem secundária 10:00 40 0,04 Carga 00:01 Resumo de Congelamento 05:41 Tempo Secagem primária 20:00 Secagem secundária 11:00 Total 36:42

[00178] O perfil de pressão e temperatura medido ao longo do tem- po durante o processo de liofilização convencional assim conduzido é representado graficamente na Figura 2.

[00179] O método de liofilização convencional descrito acima resul- tou em uma torta ou pó amarelado que pode ser posteriormente re- constituído.

[00180] Para a reconstituição do liofilizado, 2 ml de água estéril pa- ra injetáveis como meio de reconstituição foram injetados em cada um dos frascos. Os frascos foram então agitados suavemente durante cerca de 10 a 20 segundos. A reconstituição deste liofilizado obtido por liofilização convencional resultou em um tempo de reconstituição de 137 min.

[00181] Após a reconstituição, uma solução límpida e amarelada sem quaisquer partículas visíveis foi observada. Nenhuma agregação ou sinais de agregação foram detectados. EXEMPLO 7: LIOFILIZAÇÃO POR DIFERENTES MÉTODOS DE SE- CAGEM POR PULVERIZAÇÃO-CONGELAMENTO

[00182] Visto que o tempo de reconstituição do liofilizado obtido por um método de liofilização convencional, conforme descrito no Exemplo 6 (Método 1) foi, com mais de 2 horas, inaceitavelmente longo, dois outros métodos de liofilização diferentes foram aplicados e compara-

dos com a secagem por congelamento convencional conforme descrito acima.

[00183] Em primeiro lugar, a composição líquida 32 compreenden- do o anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi proces- sada de acordo com o método descrito na WO 2006/008006 (Método 2). 138 ml de solução contendo 150 mg/ml de anticorpo anti-FXIa fo- ram pulverizados através de um bocal de 400 µm e atomizados em uma frequência de 470 Hz com uma taxa de cerca de 19,5 g/min e uma sobreposição de pressão de 220 mbar. As gotículas foram conge- ladas em um recipiente isolado carregado com nitrogênio líquido que foi posicionado em aprox. 25 cm abaixo do bocal e agitadas durante todo o processo. Após a conclusão da pulverização, os péletes conge- lados foram removidos através do despejo do nitrogênio líquido atra- vés de uma peneira pré-esfriada, e colocados em uma estante de aço forrada com folha de plástico nas prateleiras pré-esfriadas de um liofili- zador Virtis Advantage Pro e liofilizados. A secagem primária foi con- duzida na temperatura de prateleira de 0 °C ao longo de uma duração de 33 horas, seguida pela secagem secundária durante 5 horas a 30 °C. Após a conclusão da secagem, os péletes secos foram instantane- amente transferidos para dentro de garrafas de vidro que foram fecha- das com firmeza. Subsequentemente, 520 mg de péletes foram pesa- dos em frascos de vidro 10R tipo I sob uma atmosfera de nitrogênio seco. O perfil de pressão e temperatura medido ao longo do tempo durante o congelamento e secagem da solução de anticorpos de acor- do com o método descrito na WO 2006/008006 é representado grafi- camente na Figura 3.

[00184] Em segundo lugar, a composição líquida 32 compreenden- do o anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi proces- sada de acordo com o método à base de secagem por pulverização- congelamento para reduzir o tempo de reconstituição de péletes liofili-

zadas ("Método 3 como aqui descrito) que compreende as etapas de: a) congelar as gotículas de uma solução compreendendo um anticorpo anti-FXIa para formar péletes; b) liofilizar os péletes; em que na etapa a) as gotículas são formadas por meio da formação de gotículas da solução compreendendo um anticorpo anti- FXIa em uma torre de esfriamento que possui uma superfície de pare- de interna controlável por temperatura e uma temperatura interna abaixo da temperatura de congelamento da solução e na etapa b) os péletes são liofilizados em um recipiente rotativo que fica alojado den- tro de uma câmara de vácuo.

[00185] Portanto, 250 ml de solução contendo 150 mg/ml de anti- corpo anti-FXIa foram liofilizados através da pulverização da solução em uma torre de esfriamento de parede resfriada. O bico de pulveriza- ção tinha uma abertura com um diâmetro de 400 μm. Isso corresponde a um tamanho de gotícula ao redor de 800 μm. A frequência de oscila- ção foi 1445 Hz, a pressão de deflexão 0,4 bar e a bomba funcionou em 14 rpm. Após a conclusão da secagem, os péletes secos foram instantaneamente transferidos para garrafas de vidro que foram fecha- das com firmeza. Subsequentemente, 520 mg de péletes foram pesa- dos em frascos de vidro 10R tipo I sob uma atmosfera de nitrogênio seco. O perfil de temperatura na torre de esfriamento medido ao longo do tempo é representado graficamente na Figura 4. O perfil de tempe- ratura e pressão medido ao longo do tempo durante o congelamento e secagem da solução de anticorpos é representado graficamente na Figura 5. O método 3, conforme descrito nesta invenção, produziu pé- letes uniformes apresentando distribuição limitada de tamanho e peso e uma grande área de superfície. A umidade residual nos péletes obti- dos por este método foi de 0,268%.

[00186] Os liofilizados obtidos por liofilização convencional (Método

1) compreendiam 0,15% de umidade residual.

[00187] As análises de cromatografia por exclusão de tamanho dos péletes obtidos pelos três processos de liofilização diferentes são for- necidas na Tabela 13. Tabela 13: Análises de cromatografia por exclusão de tamanho dos péletes obtidos pelos três diferentes processos de liofilização

SEC Amostra Dímero Soma de Soma de Monô- [% de agregados agregados mero área] de alto peso de baixo pe- [% de molecular so molecular Área] (HMW) (LMW) Método 3 1,66 1,82 1,20 96,96 (como aqui descrito) Método 1 1,35 1,41 1,13 97,45 (Liofilização Conven- cional) Método 2 1,57 1,77 1,15 97,07 (WO2006/008006)

[00188] No geral, dados analíticos comparáveis foram obtidos por cromatografia de exclusão de tamanho para os três métodos de liofili- zação.

[00189] Para determinar a quantidade de anticorpo intacto em rela- ção aos componentes protéicos gerais presentes na amostra, a pureza de IgG foi analisada por eletroforese em gel de SDS capilar (CGE). As amostras de teste e de referência foram separadas por CGE utilizando um capilar de sílica fundida bruta na presença de dodecil sulfato de sódio (SDS). O teste foi executado sob condições não redutoras. As amostras separadas foram monitoradas por absorvência em 220 nm. A intenção do ensaio era integrar a área máxima do pico principal e ana- lisar os subprodutos após a redução.

[00190] Os resultados da eletroforese em gel capilar (CGE) e análi-

ses ELISA são dados na Tabela 14. Tabela 14: Eletroforese em gel capilar (CGE) e análises ELISA dos péletes obtidos pelos três diferentes processos de liofilização

CGE ELISA Amostra IgG HHL HH HL [% de área [% de área [% de área [% de área cor.] cor.] cor.] cor.] Método 3 95,82 2,51 0,38 0,18 112 (111,95) Método 1 95,80 2,60 0,36 0,17 101 (100,73) Método 2 95,83 2,55 0,38 0,17 87 (86,87)

[00191] Os tempos de reconstituição dos péletes obtidos pelos três métodos diferentes de liofilização foram comparados como se segue. 2 ml de água estéril para injeção como meio de reconstituição foram in- jetados em cada um dos frascos. Depois tirar as imagens, os frascos foram agitados suavemente durante cerca de 10 a 20 segundos. A re- constituição dos péletes ao longo do tempo foi observada visualmente e documentada fotograficamente.

[00192] Os tempos de reconstituição dos péletes obtidos pelos três diferentes métodos de liofilização são dados abaixo: Método de liofilização Tempo de reconstituição Concentração de Ab Método 1 137 min 150 mg/ml Método 2 16 min 150 mg/ml Método 3 11 min 150 mg/ml

[00193] A reconstituição do anticorpo anti-FXIa liofilizado compre- endendo péletes obtidos de acordo com o Método 3 conforme descrito nesta invenção, foi significativamente mais rápida do que a reconstitui- ção do anticorpo anti-FXIa equivalente compreendendo liofilizados ob- tidos por liofilização convencional (Método 1), mas também mais rápi- da em comparação com os péletes liofilizados obtidos de acordo com a WO 2006/008006 (Método 2).

[00194] Os péletes obtidos pelos três métodos diferentes de liofili-

zação foram posteriormente submetidos às medições de Microscopia Eletrônica de Varredura (SEM). Portanto, o preparo das amostras foi executado em um saco de luvas sob atmosfera de nitrogênio, cada amostra foi preparada individualmente. A amostra foi colocada em um suporte e borrifada com ouro. Subsequentemente a medição por mi- croscopia eletrônica de varredura foi executada. Imagens SEM são mostradas nas Figuras 6 a 8.

[00195] Pode-se observar que os péletes produzidos de acordo com o Método 3, conforme descrito nesta invenção, apresentam uma morfologia particularmente homogênea, que pode melhorar as propri- edades de manuseio nas etapas posteriores do processo. EXEMPLO 8: ESTABILIDADE DE LONGO PRAZO DA FORMULA-

ÇÃO DE ALTA CONCENTRAÇÃO LIOFILIZADA

[00196] Este exemplo descreve a estabilidade a longo prazo da formulação liofilizada de alta concentração de 076D-M007-H04- CDRL3-N110D em 2 a 8 °C e 25 °C.

[00197] 2,25 ml da composição 32 foram colocados em frascos de vidro 6R esterilizados. A formulação líquida foi liofilizada de acordo com o método convencional de secagem por congelamento (Método 1), conforme descrito no exemplo 6. A composição liofilizada 32 a ser reconstituída para conter 150 mg/ml de 076D-M007-H04-CDRL3- N110D compreendia, portanto, 0,047 mg de L-Histidina, 0,158 mg de cloridreto de L-arginina, 0,056 mg de glicina, 0,75 mg de diidrato de trealose e 0,015 mg de polissorbato 80 por mg de 076D-M007-H04- CDRL3-N110D.

[00198] Assim que reconstituída com água, a composição liofilizada tinha um pH de cerca de 5,0.

[00199] A composição liofilizada foi armazenada durante um perío- do de tempo de 12 meses em 2 a 8 °C e 25 °C. Em certos momentos (3, 6, 9, 12, 18 e 24 meses) as amostras foram reconstituídas com água estéril.

[00200] Após reconstituição (volume final 2,25 ml/frasco), as com- posições líquidas foram analisadas quanto à capacidade de uso em aplicações farmacêuticas. Além dos métodos analíticos descritos aci- ma que medem a estabilidade física (concentração, agregação, forma- ção de partículas, viscosidade dinâmica, osmolalidade, etc.), a estabi- lidade química, assim como a atividade de 076D-M007-H04-CDRL3- N110D foram analisadas.

[00201] O teor monomérico foi medido utilizando cromatografia de exclusão por tamanho (SEC) que separou monômeros de fragmentos (baixo peso molecular, LMW) e oligômeros (alto peso molecular, HMW) com base em seu tamanho espacial. A separação das frações foi conseguida utilizando um gel Tosoh TSK super SW3000 em combi- nação com um Agilent HPLC 1200. As amostras foram eluídas em um tampão PBS 160 mM / arginina 200 mM no pH 6,8 em uma taxa de vazão de 0,2 ml/min.

[00202] As variantes de carga de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foram determinadas utilizando uma focagem isoelétrica capilar (cIEF). Neste método, as amostras de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foram separadas em um campo elétrico (SCIEX PA800 Enhanced, Beckman Coulter) devido à sua carga, enquanto as variantes foram detectadas utilizando um método UV-vis. A etapa de focalização das variantes de carga foi alcançada mantendo as amostras durante 15 minutos em 25 kV sob polaridade normal. A mobilização química foi conduzida man- tendo as amostras em 30 kV durante 30 minutos. Após este procedi- mento a coleta de dados foi interrompida.

[00203] O teste bioquímico para 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi relatado como a capacidade de ligação utilizando um Ensaio Imunoab- sorvente Ligado a Enzima (ELISA). A capacidade de ligação foi então comparada com um padrão de referência contendo L-histidina 20 mM /

cloridreto de L-arginina 50 mM / tampão de glicina 50 mM, diidrato de trealose 5% e polissorbato 80 0,1% no pH 5 em < -60 °C. Os valores de absorção do padrão de referência e das amostras de teste foram comparados.

[00204] A formação de partículas foi monitorada utilizando obscure- cimento de luz (HIAC, Beckman Coulter) cobrindo uma faixa de 2 µm a 100 µm de tamanho de partícula. Os experimentos foram conduzidos com o procedimento de teste automatizado como um teste triplicado para amostras agrupadas de 10 frascos individuais. Para cada medi- ção foram utilizados 5 ml de amostras.

[00205] A determinação da turvação das soluções foi realizada com o auxílio de uma medida de turvação utilizando o turbidímetro 2100N IS (HachLange, Düsseldorf). 3 ml de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foram medidos e comparados com um padrão de referência óptica de acordo com Ph.Eur. (RS I-IV). Tabela 15: Dados de estabilidade de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D liofilizado em 2 a 8 °C. Resultados do teste após reconstituição com água estéril Pontos tem- pH Contagem de partícu- Contagem de partícu- porais las 10 µm a 100 µm las de 25 µm a 100 µm Meses Partículas/ml Partículas/ml 0 5,0 25 1 3 4,9 25 1 6 4,9 29 8 9 4,9 - - 12 5,0 21 2 18 5,0 - - 24 5,0 53 6

[00206] A Tabela 15 mostra os resultados do estudo de estabilidade da composição liofilizada de alta concentração 32 de 076D-M007-H04- CDRL3-N110D em 2 a 8 °C. Ao longo de um período de 24 meses,

nenhuma alteração significativa nos parâmetros de estabilidade tais como pH ou material particulado pode ser observada. Tabela 16: Dados de estabilidade de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D liofilizado em 2 a 8 °C. Outros resultados de teste após reconstituição com água estéril Pontos SEC Elisa cIEF Concentração temporais de proteína Meses HMW % % de mo- % % do Pico mg/ml nômero Principal 0 1,2 98 119 74 144 3 1,4 97 128 73 152 6 1,3 98 114 73 151 9 1,5 98 105 72 153 12 1,7 97 91 72 152 18 1,6 97 119 73 150 24 1,7 97 96 69 154

[00207] A Tabela 16 mostra outros resultados do estudo de estabili- dade da composição liofilizada de alta concentração 32 de 076D- M007-H04-CDRL3-N110D. Ao longo de um período de 24 meses, ne- nhuma mudança significativa nos parâmetros de estabilidade tais co- mo teor monomérico, capacidade de ligação, variantes de carga ou concentração de proteína pode ser observada. Tabela 17: Dados de estabilidade de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D liofilizado a 25 °C. Resultados do teste após reconstituição com água estéril Pontos tem- pH Contagem de partícu- Contagem de partícu- porais las 10 µm a 100 µm las 25 µm – 100 µm Meses Partículas/ml Partículas/ml 0 5,0 25 1 3 4,9 27 1 6 4,9 42 6 9 4,9 - - 12 4,9 16 1

[00208] A Tabela 17 mostra os resultados do estudo de estabilidade da composição liofilizada de alta concentração 32 de 076D-M007-H04- CDRL3-N110D a 25 °C. Ao longo de um período de 12 meses, ne- nhuma mudança significativa nos parâmetros de estabilidade tais co- mo pH ou material particulado pode ser observada. Tabela 18: Dados de estabilidade de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D liofilizado a 25 ° C. Outros resultados de teste após reconstituição com água estéril Pontos SEC Elisa cIEF Concentra- temporais ção de pro- teína Meses HMW % % de mo- % % Máxima Mg / ml nômeros Principal 0 1,2 98 119 74 144 3 2,6 96 112 71 147 6 3,3 96 101 70 151 9 4,0 95 105 69 154 12 4,7 94 94 68 151

[00209] A Tabela 18 mostra outros resultados do estudo de estabili- dade da composição liofilizada de alta concentração 32 de 076D- M007-H04-CDRL3-N110D. Em comparação com os dados de estabili- dade em 2 a 8 °C, uma diminuição do teor monomérico de 98 para 94%, assim como uma mudança de 74% para 68% nas variantes de carga (cIEF), pode ser observada. No entanto, os parâmetros de esta- bilidade tais como concentração de proteína e capacidade de ligação não apresentaram nenhuma alteração significativa neste período de tempo.

[00210] A composição global 32 no estado liofilizado foi confirmada como estável após armazenamento em 2 a 8 °C durante pelo menos 12 meses. EXEMPLO 9: ESTABILIDADE DE LONGO PRAZO DA FORMULA-

ÇÃO LÍQUIDA DE ALTA CONCENTRAÇÃO

[00211] Este exemplo descreve a estabilidade a longo prazo da formulação líquida de alta concentração de 076D-M007-H04-CDRL3- N110D na composição 32 em duas concentrações de anticorpo dife- rentes [150 mg/ml (32) e 100 mg/ml (34)] em comparação a uma com- posição compreendendo fosfato como tampão (34) em vez de aminoá- cidos.

[00212] 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi formulado em aproxi- madamente 150 mg/ml na seguinte composição: (32) L-Histidina 20 mM, cloridreto de L-Arginina 50 mM, Gli- cina 50 mM, diidrato de trealose a 5%, Polissorbato 80 a 0,01%, pH 5,0 ou em tampão de fosfato: (33) Fosfato 50 mM, diidrato de trealose a 5%, Polissorbato 80 a 0,1%, pH 5,0

[00213] Adicionalmente, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D foi testa- do a uma concentração de anticorpos de aproximadamente 100 mg/ml no mesmo sistema tampão da composição 32: (34) L-Histidina 20 mM, cloridreto de L-Arginina 50 mM, Gli- cina 50 mM, diidrato de trealose a 5%, polissorbato 80 a 0,01%, pH 5,0

[00214] As composições líquidas foram armazenadas durante um período de tempo de 6 meses em 2 a 8 °C. Em momentos especifica- dos (2, 4 e 6 meses), as amostras foram analisadas como descrito acima.

[00215] Adicionalmente, as amostras foram analisadas quanto à pureza de IgG em condições reduzidas (cadeias pesadas e leves) utili- zando um método de eletroforese capilar (CGE, red.-SCIEX PA 800 Enhanced, Beckman Coulter) para comparar a fragmentação das dife- rentes modalidades.

[00216] Como mostrado na Tabela 19, todos os parâmetros tais como capacidade de ligação, teor monomérico, assim como turvação,

foram estáveis durante um período de 6 meses em 2 a 8 °C nas com- posições 32 e 34. Tabela 19: Dados de estabilidade do 076D-M007-H04-CDRL3-N110D líquido em 2 a 8 °C durante 6 meses Pontos tem- Composição pH Turva- Concentração ELISA porais ção de proteína Meses No. NTU mg/ml % 0 32 5,02 6,79 142,30 107 33 5,31 18,70 150,42 99 34 4,99 7,65 102,85 96 2 32 5,01 6,83 147,20 71 33 5,46 25,70 146,15 94 34 4,97 8,02 102,08 105 4 32 5,02 6,13 148,36 93 33 - - - 91 34 4,98 7,71 101,30 88 6 32 5,08 6,57 156,05 124 33 5,61 28,20 149,38 94 34 5,06 8,41 104,78 98

[00217] A Tabela 19 mostra os resultados do estudo de estabilidade das formulações líquidas de alta concentração 32 a 34 de 076D-M007- H04-CDRL3-N110D. As composições compreendendo a histidi- na/glicina/arginina, composição 32 (150 mg/ml de 076D-M007-H04- CDRL3-N110D), assim como a composição 34 (100 mg/ml de 076D- M007-H04-CDRL3-N110D) eram estáveis em termos de pH, turvação, concentração de proteína, assim como capacidade de ligação.

[00218] No entanto, 076D-M007-H04-CDRL3-N110D não foi estável nas mesmas condições de armazenamento em tampão de fosfato (composição 33). O tampão de fosfato contendo a composição 33 não foi capaz de estabilizar o pH da solução e o valor de turvação aumen- tou quase para o padrão de referência IV (30 NTU).

Tabela 20: Dados de estabilidade do 076D-M007-H04-CDRL3-N110D líquido em 2 a 8 °C durante 6 meses Ponto Com- Conta- Conta- cIEF CGE SEC tempo- posição gem de gem de redu- ral partícu- partícu- zido las 10 µm las 25 µm a 100 µm a 100 µm Meses No. Partículas/ml % Máxi- Soma % de HMW ma Prin- de H + Monô- % cipal L % meros 0 32 600 222 68,66 98,60 96,05 2,92 33 823 190 69,26 98,65 95,25 3,73 34 450 68 67,26 98,35 96,12 2,84 2 32 977 160 69,54 - 96,88 2,98 33 126 7 69,05 - 96,07 3,77 34 257 52 69,42 - 97,01 2,85 4 32 117 71 68,67 98,18 96,01 3,03 33 - - - - - - 34 135 14 68,78 98,03 96,06 2,95 6 32 18 2 68,85 98,33 95,98 2,98 33 2050 68 53,65 96,72 92,03 5,49 34 68 9 68,67 98,01 96,07 2,88

[00219] A Tabela 20 mostra outros resultados do estudo de estabili- dade de orientação das formulações líquidas de alta concentração 32 a 34 de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D. A composição 32 (150 mg/ml), assim como a composição 34 (100 mg/ml) eram estáveis em termos de material particulado, formação de variantes de carga (cIEF), fragmentação sob condições reduzidas (CGE), assim como teor mo- nomérico (SEC).

[00220] No entanto, o 076D-M007-H04-CDRL3-N110D não foi está- vel nas mesmas condições de armazenamento em tampão de fosfato (composição 34). A formação de partículas aumentou desproporcio- nalmente em comparação com as composições que compreendem os tampões de histidina-glicina-arginina. Os resultados da focagem isoe- létrica (cIEF) mostraram que após 6 meses as variantes de carga de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D aumentaram no tampão fosfato em comparação com as composições tampões de histidi- na/glicina/arginina. Adicionalmente, os fragmentos reduzidos que fo- ram analisados utilizando CGE mostraram uma diminuição da soma das cadeias pesadas e leves indicando uma fragmentação do anticor- po no tampão de fosfato.

[00221] A análise dos dados de estabilidade de longo prazo da for- mulação líquida levou à conclusão de que a composição 32, compre- endendo o sistema de tampão de histidina-glicina-arginina de acordo com a invenção, surpreendentemente estabiliza as formulações de alta concentração de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D no estado líquido durante pelo menos 6 meses. A liofilização da formulação de acordo com a invenção é possível, mas não necessária, pois a formulação de alta concentração de anticorpos anti-FXIa de acordo com esta inven- ção é estável como formulação líquida durante um longo período.

[00222] Se a liofilização for desejada, ela deve preferivelmente ser conduzida pelo método de secagem de pulverização-congelamento descrito nesta invenção, que fornece um tempo de reconstituição signi- ficativamente mais curto em comparação com os liofilizados obtidos através da liofilização convencional ou obtidos pelo processo divulga- do na WO 2006/008006 A1.

[00223] As Tabelas 21 e 22 mostram outros resultados do estudo de estabilidade da composição líquida de alta concentração 32 de 076D-M007-H04-CDRL3-N110D. Ao longo de um período de 9 meses, nenhuma mudança significativa nos parâmetros de estabilidade tais como teor monomérico, capacidade de ligação, variantes de carga ou concentração de proteína pode ser observada.

Tabela 21: Dados de estabilidade do 076D-M007-H04-CDRL3-N110D líquido em 2 a 8 °C durante 9 meses Pontos tem- Composição pH Turvação Concentração ELISA porais de proteína Meses No. NTU mg/ml % 1 32 5,00 RS III 154,60 93,96 3 32 5,01 RS III 153,68 91,70 6 32 5,06 RS III 152,38 100,57 9 32 4,98 - 153,85 - Tabela 22: Dados de estabilidade do 076D-M007-H04-CDRL3-N110D líquido em 2 a 8 °C durante 9 meses Pontos Compo- Conta- Conta- cIEF CGE SEC tempo- sição gem de gem de redu- rais partícu- partícu- zido las 10 las 25 μm a 100 μm a 100 μm μm Meses No. Partículas/ml % Máxi- Soma % de HMW ma Prin- de Monô- % cipal H+L % meros 1 32 - - 71,17 98,85 97,80 1,11 3 32 - - 75,33 98,67 97,43 1,36 6 32 23 2 71,32 97,78 97,38 1,28 9 32 - - 74,11 98,28 97,43 1,40 EXEMPLO 10: ESTABILIDADE À LONGO PRAZO DO VOLUME

CONGELADO DA FORMULAÇÃO DE ALTA CONCENTRAÇÃO

[00224] Este exemplo descreve a estabilidade à longo prazo da formulação líquida de alta concentração de 076D-M007-H04-CDRL3- N110D na composição líquida (32) ao longo de um período de tempo de 18 meses em < -60 °C.

[00225] A composição líquida foi armazenada durante um período de tempo de 12 meses a < -60 °C. Em momentos especificados (1, 2,

3, 6, 9, 12 e 18 meses) as amostras foram analisadas como descrito acima.

[00226] Conforme mostrado na Tabela 23, todos os parâmetros re- levantes tais como pH, variantes de carga, teor monomérico, alto teor molecular, atividade e concentração de proteína foram estáveis duran- te um período de 18 meses a < -60 °C na composição 32. A composi- ção geral 32 no estado congelado foi confirmada de ser estável após armazenamento a < -60 °C durante pelo menos 18 meses. Tabela 23: Dados de estabilidade do 076D-M007-H04-CDRL3-N110D líquido a < -60 °C durante 18 meses Pontos pH cIEF SEC ELISA Concentração temporais de proteína Meses % Máxima % de Mo- HMW % mg/ml Principal nomeros % 0 4,9 70 96 2,5 101 158 1 5,0 69 96 2,7 84 153 2 5,0 69 96 2,7 93 154 3 5,0 68 96 2,7 104 150 6 4,9 69 97 2,7 94 160 9 5,0 69 97 2,8 68 158 12 4,9 68 96 2,8 100 144 18 4,9 70 96 2,6 102 160

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Formulação farmacêutica líquida estável, caracterizada pelo fato de que compreende: o anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/mL ou mais, histidina 10 a 20 mM, glicina 25 a 75 Mm, e arginina 50 a 75 mM, em que a referida formulação apresenta um pH de 4,7 a 5,3.

2. Formulação farmacêutica líquida, de acordo com a rei- vindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende outros ingre- dientes selecionados do grupo que consiste em conservantes, veícu- los, tensoativos e estabilizantes.

3. Formulação farmacêutica líquida, de acordo com a rei- vindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a concentração de histidina é de 20 mM.

4. Formulação farmacêutica líquida, de acordo com qual- quer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a concentração de glicina é de 50 mM.

5. Formulação farmacêutica líquida, de acordo com qual- quer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que a concentração de arginina é de 50 mM.

6. Formulação farmacêutica líquida, de acordo com qual- quer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que compreende de 1 a 10% (p/v) de um estabilizante.

7. Formulação farmacêutica líquida, de acordo com qual- quer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizada pelo fato de que compreende de 3 a 7% (p/v) de diidrato de trealose.

8. Formulação farmacêutica líquida, de acordo com qual-

quer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que compreende tensoativos em uma concentração de 0,005% a 0,2% (p/v).

9. Formulação farmacêutica líquida, de acordo com qual- quer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o tensoativo é selecionado do grupo que consiste em polissorbato 80, polissorbato 20 e poloxâmero 188.

10. Formulação farmacêutica líquida estável, caracterizada pelo fato de que compreende: o anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/mL ou mais, histidina 20 mM, glicina 50 mM, arginina 50 mM, diidrato de trealose a 5% (p/v), e polissorbato 80 a 0,1% (p/v), em que a referida formulação apresenta um pH de 5.

11. Formulação farmacêutica líquida estável, caracterizada pelo fato de que compreende: o anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 100 mg/mL ou mais, histidina 20 mM, glicina 50 mM, arginina 50 mM, diidrato de trealose a 5% (p/v), e polissorbato 20 ou poloxâmero 188 a 0,05% (p/v), em que a referida formulação apresenta um pH de 5.

12. Formulação farmacêutica líquida estável, caracterizada pelo fato de que compreende: o anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 150 mg/mL ou mais, histidina 20 mM,

glicina 50 mM, arginina 50 mM, diidrato de trealose a 5% (p/v), e polissorbato 80 a 0,1% (p/v), em que a referida formulação apresenta um pH de 5.

13. Formulação farmacêutica líquida estável, caracterizada pelo fato de que compreende: o anticorpo anti-FXIa 076D-M007-H04-CDRL3-N110D em uma concentração de cerca de 150 mg/mL ou mais, histidina 20 mM, glicina 50 mM, arginina 50 mM, diidrato de trealose a 5% (p/v), e polissorbato 20 ou poloxâmero 188 a 0,05% (p/v), em que a referida formulação apresenta um pH de 5.

14. Liofilizado, caracterizado pelo fato de que é obtenível através da liofilização de uma formulação farmacêutica líquida, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 13.

15. Liofilizado, como definida na reivindicação 12, caracteri- zado pelo fato de que é obtido por um método que compreende as etapas de: (a) congelar as gotículas de uma solução compreendendo um anticorpo anti-FXIa para formar péletes; (b) liofilizar os péletes; em que, na etapa (a), as gotículas são formadas por meio da forma- ção de gotículas da solução compreendendo um anticorpo anti-FXIa em uma torre de esfriamento (100) que possui uma superfície de pa- rede interna controlável por temperatura (110) e uma temperatura in- terna abaixo da temperatura de congelamento da solução, e em que, na etapa (b), os péletes são liofilizados em um recipiente rotativo (210) que está alojado dentro de uma câmara de vácuo (200).

16. Forma de dosagem, caracterizado pelo fato de que compreende uma formulação farmacêutica líquida ou um liofilizado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 15.

17. Forma de dosagem, como definido na reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que é uma seringa, um frasco, um dispositi- vo de caneta ou um autoinjetor.

18. Formulação farmacêutica líquida ou liofilizada, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pe- lo fato de que é para uso no tratamento ou profilaxia de distúrbios trombóticos ou tromboembólicos.

19. Uso de uma formulação farmacêutica líquida ou liofili- zada, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ca- racterizado pelo fato de que é para produção de medicamentos para tratamento ou profilaxia de distúrbios trombóticos ou tromboembólicos.

20. Kit para tratamento ou profilaxia de distúrbios trombóti- cos ou tromboembólicos, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma formulação farmacêutica, como definida em qual- quer uma das reivindicações 1 a 13, ou um liofilizado, como definido na reivindicação 14 ou 15, ou uma forma de dosagem, como definida na reivindicação 16 ou 17; e (b) instruções para administração.