BR112020013164A2

BR112020013164A2 - derivados da amino-fluorpiperidina como inibidor da quinase

Info

Publication number: BR112020013164A2
Application number: BR112020013164-4A
Authority: BR
Inventors: In Woo Kim; Seung Hwarn Jeong; Nam Youn Kim; Jun Hee Lee
Original assignee: Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2017-12-28
Filing date: 2018-12-28
Publication date: 2020-12-01
Also published as: AU2018394995A1; RU2762637C1; EP3733671A4; DOP2020000109A; PH12020551014A1; JP7032535B2; NZ765159A; CN111491934B; KR102577241B1; MX2020006708A; CA3084777A1; MY196186A; ECSP20035222A; KR20190080540A; TN2020000125A1; ES2923682T3; EP3733671A1; MA51429A; AU2018394995B2; JP2021505644A

Abstract

A presente invenção refere-se a um composto representado pela seguinte Fórmula Química 1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e o composto de acordo com a presente invenção pode ser útil na prevenção ou tratamento de doenças que estão associadas a ações inibitórias da quinase.

Description

"DERIVADOS DA AMINO-FLUORPIPERIDINA COMO INIBIDOR DA QUINASE" CAMPO TÉCNICO

[001] A presente invenção refere-se a um derivado amino-fluorpiperidina com atividade inibitória da quinase, um processo para a preparação do mesmo e seu uso.

ANTECEDENTES DA TÉCNICA

[002] A proteína quinase é uma enzima que catalisa a fosforilação de resíduos específicos de outras proteínas e desempenha um papel importante nas vias de transdução de sinal que transduzem sinais extracelulares para o núcleo. Além disso, está envolvida em várias doenças in vivo. No início ou desenvolvimento de doença inflamatória, doença autoimune, doença proliferativa ou hiperproliferativa e/ou doença mediada por imunidade, existem várias evidências de que as células T (ou linfócitos T) e as células B (ou linfócitos B) desempenham um papel importante.

[003] A Janus quinase (doravante denominada "JAK") é uma proteína tirosina quinase citoplasmática que desempenha papéis essenciais na regulação da função celular no sistema linfo-hematopoiético. Sabe-se que as citocinas desempenham um papel importante na regulação da inflamação, imunidade e função celular normal, e JAK ativa as proteínas STAT (transdutoras de sinal e ativadoras de transcrição) através da fosforilação da tirosina para fornecer vias de sinalização rápida para as citocinas. Sabe-se que a sinalização JAK/STAT está associada às alergias, asma, doenças autoimunes (por exemplo, rejeição de transplante, artrite reumatoide, esclerose lateral amiotrófica, esclerose múltipla etc.), cânceres sólidos, câncer de sangue (por exemplo, leucemia, linfoma e assim por diante).

[004] A família JAK é classificada em quatro elementos: JAK 1, JAK 2, JAK 3 e TYK 2. Os elementos da família JAK se emparelham para mediar sinais de uma variedade de citocinas. A mesma inclui JAK2 e JAK1 associadas à sinalização do fator de crescimento hematopoiético, e uma combinação de TYK2 e JAK2 é importante para a sinalização de interferon e contribui para a tolerância do hospedeiro. A JAK2 pode induzir anemia, trombocitopenia, leucopenia, especialmente quando está envolvida na sinalização do fator de crescimento hematopoiético e causa inibição excessiva.

[005] A expressão de JAK1I, JAK2 e TYK2 foi amplamente distribuída, enquanto a expressão de JAK3 estava restrita a linfócitos e está associada à sinalização para cadeias gama comuns, elementos de IL-2, ILA, IL-7, Receptores IL- 9, IL-15 e I1L-21, particularmente a cadeia gama comum da família IL-2. Assim que a citocina é ligada, o receptor transporta JAK3 adjacente próximo, o que induz a autofosforilação do terminal C da cadeia B. Como resultado, causa a ativação da proteína STAT, que é uma etapa importante na retransmissão do sinal para o núcleo. JAK3 controla as vias de sinal de várias citocinas através deste processo. Isso faz do JAK3 um alvo atraente para a imunossupressão.

[006] As células B desempenham um papel importante no desenvolvimento de doenças autoimunes e/ou inflamatórias. Agentes terapêuticos à base de proteínas que reduzem as células B, por exemplo, Rituxan, são eficazes em doenças inflamatórias induzidas por autoanticorpos, como artrite reumatoide. Assim, os inibidores da proteína quinase que desempenham um papel na ativação das células B são agentes terapêuticos úteis para o tratamento de doenças mediadas por células B, por exemplo, para a produção de autoanticorpos.

[007] A transdução de sinal através do receptor de células B (BCR) regula várias respostas de células B, incluindo proliferação e diferenciação em células produtoras de anticorpos maduras. O BCR é um elemento regulador importante da atividade das células B, e a transdução de sinal anormal pode causar a formação de autoanticorpos patogênicos, levando a uma pluralidade de doenças autoimunes e/ou inflamatórias e a proliferação de células B desreguladas.

[008] A tirosina quinase de Bruton (doravante denominada "BTK") é um importante regulador do desenvolvimento, ativação, sinalização e sobrevivência de células B. A BTK está envolvida nas vias de transdução de sinal iniciadas pela ligação de vários ligantes extracelulares aos seus receptores de superfície celular. Após a ligação do receptor do antígeno das células B (BCR), a atividade da BTK pela ação coincidente das proteínas tirosina quinases Lyn e Syk é necessária para a indução da mobilização de cálcio mediada pela fosfolipase C-y2. Portanto, a inibição da BTK pode ser uma abordagem terapêutica útil no bloqueio do processo de início de doenças mediadas por células B.

[009] Como mencionado acima, a Janus quinase e as quinases com base em TEC desempenham um papel importante na ativação de células T e/ou células B envolvidas no desenvolvimento de doenças inflamatórias, doenças autoimunes, doenças proliferativas ou doenças hiperproliferativas e doenças imunomediadas. Portanto, o desenvolvimento de substâncias que inibem efetivamente essas doenças pode ser útil como um agente terapêutico relacionado. Exemplos específicos das doenças que podem ser tratadas e prevenidas incluem câncer, rejeição de transplantes, esclerose múltipla, artrite reumatoide, artrite psoriática, psoríase, asma, dermatite alérgica, dermatite atópica, eczema, diabetes tipo |, complicações diabéticas, colite ulcerativa, doença de Crohn, distúrbio autoimune da tireoide, depilação sistêmica, síndrome de Sjogren e similares.

[010] O inibidor da JAK3 quinase, tofacitinibe (CP-690550) (Pfizer Inc.) está atualmente aprovado e é comercializado para o tratamento da artrite reumatoide. Além disso, um inibidor da BTK quinase, o ibrutinibe (PClI-32765) (Pharmacyclics) está em estágio clínico, mas efeitos colaterais graves, como erupção cutânea e diarreia, foram relatados em casos clínicos. Assim, é necessário desenvolver uma substância mais estável e eficaz que iniba a JAK e/ou o BTK (vide Nat Rev Rheumatol. 2009 Jun 5(6) 317-24; Expert Opin Investig Drugs. 2014 Aug 23(8) 1067- 77; Drug Discov Today 2014 Aug 19(8) 1200-4; WOZ2002/096909; WO2010-009342).

[011] Portanto, os presentes inventores descobriram um novo derivado de amino-fluorpiperidina com uma excelente atividade inibitória como inibidor de quinase, completando assim a presente invenção.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO PROBLEMA TÉCNICO

[012] É um objetivo da presente invenção fornecer um derivado de amino- fluorpiperidina com uma capacidade inibitória contra a quinase, particularmente tirosina-quinase, um processo para preparar e usar o mesmo.

[013] É outro objetivo da presente invenção fornecer uma composição farmacêutica compreendendo o derivado amino-fluorpiperidina como ingrediente ativo.

SOLUÇÃO TÉCNICA

[014] De modo a alcançar os objetivos acima é fornecido um composto representado pela seguinte Fórmula Química 1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: Fórmula química a rodas o

OSLO % PN em que, na Fórmula Química 1, R1 é alquila C1-5, halogênio ou ciano, XéN-R2,OousS,

R2 é alquila C1-5, haloalquila C1-5 ou cicloalquila Ca.

[015] Preferencialmente, R: é metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, pentila, isopentila, neopentila, bromo, cloro, flúor ou ciano.

[016] Preferencialmente, R2 é metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, pentila, isopentila, neopentila, fluormetila, difluormetila, trifluormetila, 2- fluoretila, 2,2-difluoretila, 2,2,2-trifluoretila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou cicloexila.

[017] Exemplos representativos do composto representado pela Fórmula Química 1 são os seguintes: 1) 1 - ((8S, 4R) -3- (5-cloro-2- (1-etil-1H-pirazol-4- ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona, 2) 1 - ((38, 4R) -3- (5-cloro-2- (1- (2,2-difluoretil) -1H-pirazol-4-ilamino) -7H- pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona, 3) 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (1-ciclopropil-1H-pirazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona, 4) 1 - ((38, 4R) -3- (5-cloro-2- (isoxazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin- 4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1 -il) prop-2-en-1-ona, 5) 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (isotiazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin- 4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1 -il) prop-2-en-1-ona, 6) 4 - ((3S, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3-ilamino) -2- (1-etil-1]H-pirazol-4- ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidina-S-carbonitrila, 7) 4 - ((38, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3-ilamino) -2- (1- (2,2-difluoretil) - 1H-pirazol-4-ilamino) -7H-pirrol [ 2,3-d] pirimidina-S-carbonitrila, 8) 4 - ((3S, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3-ilamino) -2- (1-ciclopropil-1H- pirazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidina-S5-carbonitrila, 9) 4 - ((3S, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3-ilamino) -2- (isoxazol-4-ilamino) - 7H-pirrol [2,3-d] pirimidina-S-carbonitrila,

10) 1 - ((3S, 4R) -3- (2- (1-etil-1AH-pirazol-4-ilamino) -5-metil-7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona, 11) 1 - ((38S, 4R) -4-flúor-3- (2- (isoxazol-4-ilamino) -5-metil-7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) piperidina- 1-il) prop-2-en-1-ona, e 12) 1 - ((3S, 4S) -3- (S-cloro-2- (1-etil-1H-pirazol-4- ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona.

[018] Além disso, os compostos da presente invenção podem existir na forma de sais, especialmente sais farmaceuticamente aceitáveis. Como sais, os sais comumente empregados na técnica, tais como sais de adição de ácido formados por ácidos livres farmaceuticamente aceitáveis, podem ser utilizados sem limitação. O termo "sal farmaceuticamente aceitável”, conforme empregado no presente documento, refere-se a qualquer sal de adição orgânico ou inorgânico do composto representado pela Fórmula Química 1, cuja concentração tem ação eficaz porque é relativamente atóxico e inofensivo para os pacientes e cujos efeitos colaterais não degradam a eficácia benéfica do composto acima.

[019] Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser obtidos por métodos convencionais utilizando ácidos inorgânicos ou orgânicos. Por exemplo, o sal farmaceuticamente aceitável! pode ser preparado dissolvendo o composto representado pela Fórmula Química 1 em um solvente orgânico miscível em água, por exemplo, acetona, metanol, etanol ou acetonitrila, seguido pela adição de um ácido orgânico ou ácido inorgânico e filtrando e secagem dos cristais precipitados. Alternativamente, pode ser preparado submetendo um solvente ou uma quantidade excessiva de ácido a partir da mistura de reação com adição de ácido à pressão reduzida e então secagem do resíduo ou por adição de um solvente orgânico diferente e filtragem do sal precipitado. Neste momento, os sais preferidos podem incluir sais derivados de ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico, ácido acético, ácido glicólico, ácido lático, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido malônico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido fumárico, ácido málico, ácido mandélico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido palmítico, ácido maleico, ácido hidroxmaleico, ácido benzóico, ácido hidroxibenzóico, ácido fenilacético, ácido cinâmico, ácido salicílico, ácido metanossulfônico, ácido benzenossulfônico ou ácido toluenossulfônico e semelhantes.

[020] Um sal ou solvato farmaceuticamente inaceitável do composto da Fórmula Química 1 pode ser usado como intermediário na produção do composto da Fórmula Química 1, ou o sal farmaceuticamente aceitável ou o seu solvato.

[021] O composto da Fórmula Química 1 de acordo com a presente invenção inclui não apenas sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, mas todos os solvatos e hidratos que podem ser preparados a partir deles, e inclui todos os estereoisômeros possíveis. O solvato, o hidrato e o estereoisômero do composto representado pela Fórmula Química 1 podem ser preparados e utilizados a partir do composto da Fórmula Química 1 usando métodos comuns.

[022] Além disso, o composto representado pela Fórmula Química 1 de acordo com a presente invenção pode ser preparado tanto na forma cristalina quanto na forma não cristalina, e quando o composto representado pela Fórmula Química 1 é preparado na forma cristalina, pode ser opcionalmente hidratado ou solvatado. Na presente invenção, o composto representado pela Fórmula Química 1 pode não apenas incluir um hidrato estequiométrico, mas incluir um composto contendo várias quantidades de água. O solvato do composto representado pela Fórmula Química 1 de acordo com a presente invenção inclui solvatos estequiométricos e solvatos não estequiométricos.

[023] Além disso, como um exemplo, a presente invenção pode produzir o composto representado pela Fórmula Química 1 através do Esquema de Reação 1 a seguir.

Esquema de reação 1

2 & 2 > 1

O i UN od | dr 12 e “o : Li or [ ANOS [ Pe Ps emo ndo E AS Pa N 2 Né N 2 né N 13 14 15 F. ba alba. F. F. s e AAA SO ne SNS x AO ; INE ó RO IO TA > ADO

ENA RAÇA NEN TONWONN

H H H 16 117 1 (no Esquema de Reação 1, R: e X são como definidos anteriormente, Z é halogênio e, de preferência, Z é cloro).

[024] A etapa i é uma etapa de preparação de um composto representado pela Fórmula Química 1-3, fazendo reagir um composto representado pela Fórmula Química 1-1 com um composto representado pela Fórmula Química 1-2. A reação é preferencialmente realizada à temperatura ambiente a alta temperatura na presença de diisopropiletilamina e o solvente é preferencialmente etanol.

[025] A etapa ii é uma reação para remover o grupo protetor do composto representado pela Fórmula Química 1-3, que é uma etapa para preparar o composto representado pela Fórmula Química 1-4. A reação é preferencialmente realizada na presença de ácido clorídrico (preferencialmente, ácido clorídrico 6N), e o solvente é preferencialmente metanol.

[026] A etapa iii é uma etapa de preparação de um composto representado pela Fórmula Química 1-5, fazendo reagir um composto representado pela Fórmula Química 1-4 com cloreto de acila. A reação é preferencialmente realizada de -20ºC a

0ºC na presença de trietilamina ou hidrogenocarbonato de sódio. Além disso, o solvente é preferencialmente uma mistura de diclorometano ou tetraidrofurano e água.

[027] A etapa iv é uma etapa de preparação de um composto representado pela Fórmula Química 1 fazendo reagir um composto representado pela Fórmula Química 1-5 com uma amina. A reação é preferencialmente realizada em temperatura alta na presença de ácido trifluoracético, e o solvente é preferencialmente 2-butanol.

[028] Além disso, como mostrado no Esquema de Reação 1, um composto representado pela Fórmula Química 1-3, um composto representado pela Fórmula Química 1-6, um composto representado pela Fórmula Química 1-7 e um composto representado pela Fórmula Química 1 também podem ser preparados nesta ordem e cada etapa iv, ii e iii é a mesma descrita acima, exceto os reagentes.

[029] De acordo com outra modalidade da presente invenção, é fornecida uma composição farmacêutica para prevenir ou tratar doenças que é benéfica para ações inibitórias da quinase, compreendendo o composto representado pela Fórmula Química 1, ou um sal, hidrato, solvato ou isômero farmaceuticamente aceitável do mesmo como um ingrediente ativo.

[030] Neste caso, as doenças que estão associadas às ações inibitórias da quinase incluem doenças inflamatórias, doenças autoimunes, doenças proliferativas ou doenças hiperproliferativas e doenças imunomediadas, cânceres, tumores ou similares.

[031] O termo "prevenção", conforme empregado no presente documento, refere-se a qualquer ato para retardar ou inibir a ocorrência, disseminação ou recorrência das doenças acima mencionadas por administração da composição da presente invenção, e o termo "tratamento", conforme empregado no presente documento, refere-se a qualquer ato para melhorar ou alterar os sintomas das doenças acima para melhor, através da administração da composição da presente invenção.

[032] A composição farmacêutica da presente invenção pode ser formulada em tipos para administrações orais ou parentéricas, de acordo com uma prática farmacêutica padrão. Estas formulações podem conter aditivos, tais como veículo, adjuvante ou diluente farmaceuticamente aceitável, além do ingrediente ativo.

[033] Os veículos adequados incluem, por exemplo, solução salina fisiológica, polietileno glicol, etanol, óleo vegetal e miristato de isopropila e similares. Os diluentes incluem, por exemplo, lactose, dextrose, sacarose, manitol, sorbitol, celulose e/ou glicina e similares, mas não estão limitados a isso. Além disso, os compostos da presente invenção podem ser dissolvidos em óleos, propileno glicol ou outros solventes normalmente utilizados na preparação de soluções de injeção. Além disso, os compostos da presente invenção podem ser formulados em pomadas ou cremes para aplicação tópica.

[034] As formas de dosagem farmacêutica dos compostos da presente invenção podem incluir o uso de compostos na forma de sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis e o uso dos compostos isoladamente ou como uma combinação e/ou uma mistura adequada juntamente com outros compostos farmaceuticamente ativos.

[035] Os compostos da presente invenção podem ser formulados em soluções de injeção dissolvendo, suspendendo ou emulsificando os compostos em um solvente solúvel em água, como solução salina normal, dextrose a 5% ou um solvente não aquoso, como glicerídeo de ácido graxo sintético, ácido graxo superior éster ou propilenoglicol. As formulações da presente invenção podem incluir aditivos convencionai,s tais como, solubilizantes, agentes isotônicos, agentes de suspensão, agentes emulsificantes, estabilizadores e conservantes.

[036] Uma dose preferida do composto da presente invenção pode variar de acordo com a condição e peso de um paciente, a gravidade de uma doença, o tipo de um medicamento e a via e duração da administração, mas pode ser adequadamente selecionada por aqueles versados na técnica. No entanto, para alcançar os efeitos desejáveis, o composto da presente invenção pode ser administrado diariamente a uma dose de 0,0001 a 100 mg/kg (peso corporal) e, de preferência, 0,001 a 100 mg/kg (peso corporal). A administração pode ser realizada uma vez ao dia ou em doses divididas todos os dias por via oral ou parentérica. Dependendo do método de administração, a composição pode conter o composto da presente invenção em uma quantidade de 0,001 a 99% em peso, preferencialmente 0,01 a 60% em peso.

[037] A composição farmacêutica de acordo com a presente invenção pode ser administrada aos mamíferos, como um rato, um camundongo, um animal doméstico, um ser humano, através de várias vias. A administração pode ser realizada através de todos os métodos possíveis, por exemplo, injeção oral, retal, intravenosa, intramuscular, subcutânea, intraendometrial e intracerebroventricular.

EFEITOS VANTAJOSOS

[038] O composto representado pela Fórmula Química 1 de acordo com a presente invenção ou um sal, hidrato, solvato ou isômero farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser utilizado de maneira útil para a prevenção ou tratamento de doenças associadas a ações inibitórias de quinase.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES

[039] A presente invenção será descrita em mais detalhes a seguir, a título de exemplo. No entanto, estes exemplos são fornecidos apenas para fins ilustrativos e não devem ser interpretados como limitando o escopo da presente invenção aos mesmos.

[040] Exemplo 1: Preparação de 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (1-etil-1H- pirazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4 -ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2- en-1-ona F., a IL,

[041] Etapa 1: Preparação de (3S, 4R) -3 - ((2,5-dicloro-7H-pirrol [2,3-d birimidin-4-il) amino) -4-fluorpiperidina-1-carboxilato de t-butila

[042] Após 2,4,5-tricloro-7 H-pirrol [2,3-d] pirimidina (2,0 g, 9,0 mmol) ter sido dissolvido em etanol (10,0 mL), N, N-diisopropiletilamina (4,8 mL, 28,0 mmol) e (3S, 4R) -3-amino-4-fluorpiperidina-1-carboxilato de t-butila (2,0 g, 9,0 mmol) foram adicionados ao mesmo. A mistura de reação foi agitada a 110ºC por 24 horas. Após adição de acetato de etila, água destilada foi adicionada e a camada orgânica foi separada. A camada orgânica separada foi tratada com sulfato de sódio, filtrada e concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi separado por cromatografia em coluna para obter 1,8 g (rendimento: 45,9%) do composto do título.

1H RMN (500 MHz, CD3OD) ô 7,12 (s, 1H), 6,35-6,33 (m, 1H), 5,08-4,98 (m, 1H), 4,52-4,49 (m, 1H), 4,02-4,00 (m, 1H) ), 3,75-3,73 (m, 1H), 3,44-3,42 (m, 1H), 2,09-1,46 (m, 2H), 1,41 (s, 9H)

[043] Etapa 2: Preparação de 2,5-dicloro-N - ((3S, 4R) -4-fluorpiperidin-3-il) - 7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-amina Solução de ácido clorídrico 6N (180,0 mL, excesso) dissolvida em metanol foi adicionada ao (3S, 4R) -3 - ((2,5-dicloro-7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-il ) amino) -4- fluorpiperidina-1-carboxilato de tbutila (1,8 g, 44 mmol). Após agitação à temperatura ambiente durante 30 minutos, a solução reacional foi concentrada e depois a reação seguinte foi realizada sem separação.

[044] Etapa 3: Preparação de 1 - ((3S, 4R) —3 - ((2,5-dicloro-7H-pirrol [2,3-d birimidin-4-il) amino) -4-fluorpiperidina-1-il) prop-2-en-1-ona

[045] Após 2,5-dicloro-N - ((3S, 4R) -4-fluorpiperidin-3-il) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-amina (1,3 g, 4,0 mmol) e bicarbonato de sódio (1,8 g, 22,0 mmol) foi dissolvido em tetraidrofurano/água destilada (5,0 mL/1,0 mL), adicionou-se cloreto de acriloíla (355,0 ul, 4,0 mmol) a 0ºC. A mistura de reação foi agitada a 0ºC por 1 hora. Depois de adicionar acetato de etila, foi adicionada água destilada e a camada orgânica foi separada. A camada orgânica separada foi tratada com sulfato de sódio, fittada e concentrada em pressão reduzida. O resíduo foi separado por cromatografia em coluna para obter 1,1 mg (rendimento: 67,5%) do composto do título.

1H RMN (500 MHz, CD30D) à 7,14 (s, 1H), 6,92-6,87 (m, 1H), 6,25-6,22 (m, 1H), 5,78-5,76 (m, 1H), 5,17-5,03 (m, 1H) ), 4,60-4,28 (m, 3H), 3,49-3,44 (m, 1H), 3,23-3,20 (m, 1H), 2,17-2,15 (m, 1H), 2,01-1,94 (m, 1H)

[046] Etapa 4: Preparação de 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (1-etil-1H-pirazol-4- ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4 -ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona

[047] 1 - ((3S, 4R) -3 - ((2,5-dicloro-7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-1l) amino) -4- fluorpiperidina-1-il) prop-2-en-1-ona (1,0 g, 2,8 mmol) e 1-etil-1H-pirazol-4-amina (238,7 mg, 2,1 mmol) foram dissolvidas em 2-butanol (10,0 mL). Após adição de ácido trifluoracético (197,3 mL, 2,6 mmol), a mistura de reação foi reagida a 110ºC por 12 horas e, em seguida, o solvente foi concentrado. O produto da reação foi neutralizado por adição de uma solução de amônia 7N dissolvida em metanol e o resíduo foi separado por cromatografia em coluna para obter 179,0 mg (rendimento: 19,3%) do composto do título.

1H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 7,96-7,91 (m, 1H), 7,53-7,48 (m, 1H), 6,84- 6,62 (m, 2H), 6,30-6,14 (m, 1H), 5,81-5,61 (m , 1H), 5,12-5,02 (m, 1H), 4,55-4,41 (m,

1H), 4,24-4,01 (m, 4H), 3,53-3,41 (m, 1H), 3,25-2,95 (m, 1H), 2,20 -2,17 (m, 1H), 1,99-1,84 (m, 1H), 1,44-1,39 (m, 3H)

[048] Exemplo 2: Preparação de 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (1- (2,2- difluoreti) — -1H-pirazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4- fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona . no í NY

LA

[049] Foram obtidos 29,3 mg (rendimento: 57,1%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que 1- (2,2-difluoretil) -1H-pirazol-4- amina foi usada em vez de 1-etil-1AH-pirazol-4-amina no Exemplo 1.

17H RMN (500 MHz, CD3OD) ô 8,10-7,99 (m, 1H), 7,62-7,51 (m, 1H), 6,84- 6,61 (m, 2H), 6,29-6,13 (m, 1H), 5,82-5,60 (m , 1H), 5,12-5,02 (m, 1H), 4,55-4,41 (m, 3H), 4,23-4,02 (m, 1H), 3,52-3,40 (m, 1H), 3,26-2,95 (m, 1H), 2,22 -2,11 (m, 1H), 1,99-1,86 (m, 1H), 1,32-1,28 (m, 2H)

[050] Exemplo 3: Preparação de 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (1-ciclopropil- 1H-pirazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4 -ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop- 2-en-1-ona F., <q NE

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[051] Foram obtidos 7,3 mg (rendimento: 13,3%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que 1-ciclopropil-1H-pirazol-4-amina foi usada em vez de 1-etil-1 H-pirazol-4- amina no Exemplo 1.

1H RMN (500 MHz, CD3OD) ô 7,99-7,96 (m, 1H), 7,50-7,48 (m, 1H), 6,85- 6,61 (m, 2H), 6,29-6,15 (m, 1H), 5,81-5,63 (m , 1H), 5,14-5,04 (m, 1H), 4,58-4,42 (m, 1H), 4,27-4,01 (m, 1H), 3,57-3,46 (m, 2H), 3,26-2,97 (m, 1H), 2,20 -2,17 (m, 1H), 2,01-1,98 (m, 1H), 1,94-1,60 (m, 1H), 1,04-0,89 (m, 4H)

[052] Exemplo 4: Preparação de 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (isoxazol-4- ilamino) -7H-pirrol 2.30 pirimidin-4-ilamino) 4- fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona a eo NORA

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[053] Foram obtidos 18,7 mg (rendimento: 24,1%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que isooxazol-4-amina foi usada em vez de 1-etil-1H-pirazol-4-amina no Exemplo 1.

7H NMR (500 MHz, CD3;OD) ô 9,08-8,99 (m, 1H), 8,51-8,40 (m, 1H), 6,89- 6,66 (m, 2H), 6,33-6,09 (m, 1H), 5,85-5,60 (m , 1H), 5,15-4,98 (m, 1H), 4,62-4,28 (m, 1H), 4,27-3,96 (m, 2H), 3,58-3,38 (m, 1H), 3,09-2,65 (m, 1H), 2,25 -2,08 (m, 1H), 1,97-1,78 (m, 1H)

[054] Exemplo 5: Preparação de 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (isotiazol-4- ilamino) -7H-pirrol 2.30 pirimidin-4-ilamino) 4- fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona HNº a o

H

[055] Foram obtidos 7,3 mg (rendimento: 40,3%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que isotiazol-4-amina foi usada em vez de 1-etil-1H-pirazol-4-amina no Exemplo 1.

1H NMR (500 MHz, CD3xOD) ô 9,00-8,85 (m, 1H), 8,65-8,55 (m, 1H), 7,15- 6,65 (m, 2H), 6,35-6,10 (m, 1H), 5,85-5,60 (m , 1H), 5,20-5,05 (m, 1H), 4,65-4,00 (m, 3H), 3,60-3,40 (m, 1H), 3,10-3,00 (m, 1H), 2,10-1,90 (m, 1H), 1,65 -1,55 (m, 1H)

[056] Exemplo 6: Preparação de 4 - ((3S, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3- ilamino) -2- (1-etil-1H-pirazol-4-ilamino -7H-pirrol [2,3 -d] pirimidina-S-carbonitrila HNº .

No NÓS

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[057] Foram obtidos 2,8 mg (rendimento: 23,1%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que o 2,4-dicloro-7H-pirrol [2,3-d] pirimidina-S-carbonitrila foi substituída por 2 ,4,5-tricloro-7H-pirrol [2,3-d] pirimidina no Exemplo 1.

7H RMN (500 MHz, CD3OD) 5 8,00-7,90 (m, 1H), 7,60-7,50 (m, 2H), 6,90- 6,60 (m, 1H), 6,30-6,10 (m, 1H), 5,82-5,60 (m , 1H), 5,20-5,00 (m, 1H), 4,60-4,45 (m, 1H), 4,30-4,00 (m, 3H), 3,60-3,40 (m, 1H), 2,25-2,10 (m, 1H), 2,08 -1,85 (m, 2H), 1,63-1,52 (m, 1H), 1,45-1,38 (m,3H) Exemplo 7: Preparação de 4 - ((3S, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3-ilamino) - 2- (1- (2,2-difluoretil) -1H-pirazol-4-ilamino) -7H -pirrol [2,3-d] pirimidina-S-carbonitrila F. R HN" O A. .. AE

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[058] Foram obtidos 5,6 mg (rendimento: 42,4%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que 2,4-dicloro-7H-pirrol [2,3-d] pirimidina-S-carbonitrila foi usada em vez de 2, 4,5-tricloro-7H-pirrol [2,3-d] pirimidina e 1- (2,2-difluoretil) -AH-pirazol-4-amina foram usada em vez de 1-etil-1H-pirazol-4 - amina no Exemplo 1.

1H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 8,17-7,97 (m, 1H), 7,70-7,50 (m, 2H), 6,90- 6,60 (m, 1H), 6,33-5,98 (m, 2H), 5,82-5,60 (m , 1H), 5,20-5,00 (m, 1H), 4,60-4,40 (m, 3H), 4,30-3,00 (m, 3H), 2,25-2,10 (m, 1H), 2,02-1,85 (m, 1H), 1,65 -1,50 (m, 1H)

[059] Exemplo 8: Preparação de 4 - ((3S, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3- ilamino)-2-(1-ciclopropil-1H-pirazol-4-ilamino)-7H-pirro] 2,3-d pirimidina-5- carbonitrila F,. < rd

N NOS IO

[060] Foram obtidos 4,1 mg (rendimento: 32,8%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que o 2,4-dicloro-7H-pirrol [2,3-d] pirimidina-S-carbonitrila foi usada em vez de 2 ,4,5-tricloro-7 H-pirrol [2,3-d] pirimidina e 1-ciclopropil-1H-pirazol-4-amina foi usada em vez de 1-etil-1H-pirazol-4-amina no Exemplo 1. 17H RMN (500 MHz, CD3OD) ô 8,05-7,97 (m, 1H), 7,60-7,50 (m, 2H), 6,90- 6,60 (m, 1H), 6,30-6,10 (m, 1H), 5,82-5,60 (m , 1H), 5,20-5,00 (m, 1H), 4,62-4,40 (m, 1H), 4,30-4,00 (m, 1H), 3,60-3,30 (m, 2H), 3,10-3,00 (m, 1H), 2,30 -2,10 (m, 1H), 2,05-1,95 (m, 1H), 1,65-1,55 (m, 1H), 1,08-0,93 (m, 4H) Exemplo 9: Preparação de 4 -((3S,4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3-ilamino) -2- (isoxazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidina-5 -carbonitrila

NES o NÓS

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[061] Foram obtidos 11,5 mg (rendimento: 12,2%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que 2,4-dicloro-7H-pirrol [2,3-d]

pirimidina-S-carbonitrila foi usada em vez de 2, 4,5-tricloro-7H-pirrol [2,3-d] pirimidina e isooxazol|-4-amina foi usada em vez de 1-etil-1AH-pirazol-4-amina no Exemplo 1.

17H RMN (500 MHz, CD3OD) ô 9,10-9,00 (m, 1H), 8,50-8,40 (m, 1H), 7,63- 7,55 (m, 1H), 6,90-6,65 (m, 1H), 6,30-6,10 (m , 1H), 5,85-5,60 (m, 1H), 5,20-5,05 (m, 1H), 4,65-4,00 (m, 3H), 3,65-3,00 (m, 2H), 2,10-1,90 (m, 1H), 1,65 -1,50 (m, 1H)

[062] Exemplo 10: Preparação de 1 - ((3S, 4R) -3- (2- (1-etil-1 H-pirazol-4- ilamino) -5-metil-7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4 -ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en- 1-ona F.., f ar boars o

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[063] Foram obtidos 13,8 mg (rendimento: 41,4%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que 2,4-dicloro-5-metil-7 H-pirrol [2,3-d] pirimidina foi substituída por 2 , 4,5-tricloro-7H-pirrol [2,3-d] pirimidina no Exemplo 1.

7H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 8,00-7,85 (m, 1H), 7,50-7,40 (m, 1H), 6,90- 6,60 (m, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,33-6,13 (m, 1H) ), 5,85-5,60 (m, 1H), 5,20-5,02 (m, 1H), 4,55-4,40 (m, 1H), 4,15-4,00 (m, 3H), 3,55-3,40 (m, 1H), 3,30-2,98 (m, 1H), 2,40-2,30 (m, 3H), 2,25-1,55 (m, 3H), 1,45-1,32 (m, 3H)

[064] Exemplo 11: Preparação de 1 - ((38S, 4R) -4-flúor-3- (2- (isoxazol-4- ilamino) -5-metil-7 H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) piperidin-1-il) prop-2-en-1-ona F., a tç

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[065] Foram obtidos 10,4 mg (rendimento: 13,5%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que 2,4-dicloro-5-metil-7H-pirrol [2,3-d]

pirimidina foi usada em vez de 2,4,5-tricloro-7H-pirrol [2,3-d] pirimidina e isooxazol-4- amina em vez de 1-etil-1 H-pirazol-4-amina no Exemplo 1.

1H NMR (500 MHz, CD3OD) ô 9,10-9,00 (m, 1H), 8,50-8,40 (m, 1H), 6,95- 6,68 (m, 1H), 6,60-6,52 (m, 1H), 6,33-6,13 (m , 1H), 5,85-5,60 (m, 1H), 5,20-5,02 (m, 1H), 4,55-4,40 (m, 1H), 4,35-4,00 (m, 2H), 3,60-3,40 (m, 1H), 3,10 -3,00 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,10-1,95 (m, 2H)

[066] Exemplo 12: Preparação de 1 - ((3S, 4S) -3- (5-cloro-2- (1-etil-1H- pirazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin4 -ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2- en-1-ona

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[067] Foram obtidos 14,4 mg (rendimento: 15,5%) do composto do título da mesma maneira que no Exemplo 1, exceto que (3S, 4S) -3-amino-4-fluorpiperidina- 1-carboxilato de t-butila foi usado em vez de (3S, 4R) -3-amino-4-fluorpiperidina-1- carboxilato de t-butila no Exemplo 1.

1H NMR (500 MHz, CD3OD) 5 7,95-7,88 (m, 1H), 7,55-7,48 (m, 1H), 6,88- 6,60 (m, 2H), 6,30-6,15 (m, 1H), 5,85-5,60 (m , 1H), 5,15-4,97 (m, 1H), 4,60-4,35 (m, 1H), 4,15-4,05 (m, 2H), 4,04-3,92 (m, 1H), 3,90-3,65 (m, 2H), 2,20 -1,80 (m, 3H), 1,48-1,35 (m, 3H)

[068] Exemplo experimental 1: Medição da atividade inibitória contra as enzimas JAK3 e BTK

[069] As atividades inibitórias de JAK3 e BTK quinases foram medidas para os compostos preparados nos Exemplos através de análise in vitro na plataforma ADP Glow (Glo).

[070] Especificamente, as atividades inibitórias contra JAK3 e BTK quinase foram medidas usando um kit de ensaio JAK3 quinase (Promega, V9441) e um kit de ensaio BTK quinase (Promega, V9071) que foram adquiridos da Promega.

JAK3 e BTK humanos purificados recombinantes foram diluídos com 1 x tampão de reação de quinase (JAK3: Tris-Cl 40 mM, pH 7,5, MgCl2 20 mM, BSA 0,1 mg/mL e DTT/BTK 50 uM: Tris-Cl 40 mM, pH 7,5, MgCl2 20 mM, BSA 0,1 mg/ml, MnCl2 2 mM e DTT 50 uM) e adicionado às placas de 96 poços (JAK3: concentração final de 4 ng por reação/BTK: concentração final de 8 ng por reação). Os compostos preparados nos exemplos anteriores foram tratados de modo a constituírem, ao final, uma solução aquosa de 1% de DMSO e um coquetel de substrato contendo ATP (JAK3: concentração final de 5 uM/BTK: concentração final de 10 uM) e 0,2 ug/ul de peptídeo poli (Glu4, Tyr1) (concentração final de JAK3 e BTK) no total de 25 ul de reagentes foi adicionado às placas de 96 poços para iniciar a reação enzimática.

Após a incubação (30 º C) durante 1 hora, foi adicionado volume equivalente (25 ul por reação) de ADP Glo e incubado (30 * C) por 40 minutos à temperatura ambiente.

Em seguida, um reagente de detecção de quinase (50 uL por reação) foi adicionado e incubado (30ºC) por 30 minutos em temperatura ambiente.

A atividade da quinase foi medida por quimioluminescência de acordo com as instruções do kit de ensaio ADP Glo quinase, e a atividade inibitória dos compostos de acordo com a presente invenção foi calculada.

Para a análise dos resultados de cada composto, foi utilizado o Microsoft Excel e os valores de ICs5o foram calculados pelo software SigmaPlot.

Os resultados são mostrados na Tabela 1 abaixo.

Além disso, para comparação, tofacitinibe e o ibrutinibe foram avaliados de maneira semelhante.

Tabela 1 a es Ro de a es ss o | 6 eo = 7 0,2 0,8 8 eso = | e ão | retaenie |as [O eremie

[071] Exemplo Experimental 2: Ensaio de Células Mediadas por JAK3 (Ensaio HT-2/IL-2

[072] As atividades inibitórias contra JAK3 quinase no nível celular foram medidas para os compostos preparados nos Exemplos através de análise in vitro da fosforilação de STATS induzida por estimulação de I|L-2 em células HT-2. Especificamente, a fosforilação de STATS foi analisada usando o kit de teste HTRFOphospho-STATS (Tyr694) (Cisbio, S4AT5PEG), que foi adquirido da Cisbio. As células HT-2 foram cultivadas por 2 horas em meio livre de fator de crescimento. As células HT-2 cultivadas foram distribuídas em placas de 96 poços por 50 uL, de modo a obter uma densidade de 2,5 x 10º células/poço. Os compostos preparados nos exemplos anteriores foram preparados de modo a ser finalmente uma solução aquosa de DMSO a 0,3% e as células HT-2 foram tratadas com os compostos durante 30 minutos. Após o tratamento do composto, a IL-2 foi preparada de modo a finalmente obter uma concentração de 20 ng/ml, e as células HT-2 foram tratadas por 10 minutos. As células foram então rompidas por tratamento de tampões de lise por 30 minutos. O nível de fosforilação de STATS foi medido de acordo com as instruções do kit de ensaio HTRF&O phospho-STATS5, e foi calculada a atividade inibitória dos compostos de acordo com a invenção.

Para a análise dos resultados de cada composto, foi utilizado o Microsoft Excel e os valores de ICso foram calculados pelo software SigmaPlot.

Tabela 2 4 9 241,5 n

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto representado pela Fórmula Química 1 que se segue ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: Fórmula química 1 - HN R, Ts x NO SN is CARACERIZADO pelo fato de que, na Fórmula Química 1, R1 é alquila C1-5, halogênio ou ciano, XéN-R2a,OousS, R2 é alquila C1-5, haloalquila C1-5 ou cicloalquila Ca.

2. Composto ou um seu sal do mesmo farmaceuticamente aceitável, de acordo com a fórmula 1, CARACTERIZADO pelo fato de que Ri é metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, pentila, isopentila, neopentila, bromo, cloro, flúor ou ciano.

3. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que: R2 é metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, pentila, isopentila, neopentila, fluormetila, difluormetila, trifluormetila, 2-fluoretila, 2,2-difluoretila, 2,2,2- trifluoretila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila ou cicloexila.

4. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que os compostos representados pela Fórmula Química 1 são qualquer um dos selecionados do grupo consistindo em: 1) 1 - ((38S, 4R) -3- (S-cloro-2- (1-etil-1 H-pirazol-4- ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona,

2) 1 - ((38, 4R) -3- (5-cloro-2- (1- (2,2-difluoretil) -1H-pirazol-4-ilamino) -7H- pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona, 3) 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (1-ciclopropil-1H-pirazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona, 4) 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (isoxazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin- 4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1 -il) prop-2-en-1-ona, 5) 1 - ((3S, 4R) -3- (5-cloro-2- (isotiazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin- 4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1 -il) prop-2-en-1-ona, 6) 4 - ((3S, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3-ilamino) -2- (1-etil-1H-pirazol-4- ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidina-S-carbonitrila, 7) 4 - ((38, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3-ilamino) -2- (1- (2,2-difluoretil) - 1H-pirazol-4-ilamino) -7H-pirrol [ 2,3-d] pirimidina-5-carbonitrila, 8) 4 - ((3S, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3-ilamino) -2- (1-ciclopropil-1H- pirazol-4-ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidina-S5-carbonitrila, 9) 4 - ((38S, 4R) -1-acriloil-4-fluorpiperidin-3-ilamino) -2- (isoxazol-4-ilamino) - 7H-pirrol [2,3-d] pirimidina-S-carbonitrila, 10) 1 - ((38, 4R) -3- (2- (1-etil-1H-pirazol-4-ilamino) -5-metil-7 H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona, 11) 1 - ((38S, 4R) -4-flúor-3- (2- (isoxazol-4-ilamino) -5-metil-7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) piperidina- 1-il) prop-2-en-1-ona, e 12) 1 - ((3S, 4S) -3- (5-cloro-2- (1-etil-1H-pirazol-4- ilamino) -7H-pirrol [2,3-d] pirimidin-4-ilamino) -4-fluorpiperidin-1-il) prop-2-en-1-ona.

5. Composição farmacêutica para a prevenção ou tratamento de doença inflamatória, doença autoimune, doença proliferativa, doença hiperproliferativa, doença mediada por imunidade, câncer ou tumor, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende o composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.