BR112020004325A2 - compostos para reduzir a viscosidade de formulações biológicas - Google Patents

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Ramesh S. Kashi
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Abstract

A presente invenção refere-se a compostos de aminoácidos pegilados de fórmula (I) e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que X, R1, R2, R3A, R3B e n são como definidos na presente invenção. A presente invenção também se refere a composições que compreendem um composto de aminoácido pegilado da invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um carreador farmaceuticamente aceitável, em combinação com uma alta concentração de um ingrediente biológico ativo (ABI). Em modalidades da invenção, o ABI é um anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que se liga especificamente ao receptor 1 de morte programada humano (PD-1). A invenção se refere adicionalmente a métodos para reduzir a viscosidade de uma solução aquosa de uma composição farmacêutica compreendendo adicionar um composto da invenção à solução. A invenção também fornece métodos para tratar uma doença ou condição patológica, tal como câncer, administrando-se a um indivíduo, em necessidade de tal tratamento, uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica da invenção.

Description

COMPOSTOS PARA REDUZIR A VISCOSIDADE DE FORMULAÇÕES BIOLÓGICAS CAMPO DA INVENÇÃO
[001] Esta invenção se refere a novos aminoácidos pegilados da Fórmula (I) e usos dos mesmos. Os compostos são úteis como excipientes para reduzir a viscosidade de formulações compreendendo altas concentrações de produtos terapêuticos biológicos.
REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS RELACIONADOS
[002] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório US No. 62/554,134, depositado em 5 de setembro de 2017, os conteúdos do qual são por meio deste incorporados a título de referência em sua totalidade.
REFERÊNCIA À LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS APRESENTADO ELETRONICAMENTE
[003] A listagem de sequências do presente pedido é apresentada eletronicamente por intermédio de EFS-Web como uma listagem de sequências formatada por ASCII com um nome de arquivo “24494WOPCT-SEQLIST- 07AUG2018.TXT”, data de criação de 7 de agosto de 2018 e um tamanho de 33,1 Kb. Esta listagem de sequências apresentada por intermédio de EFS-Web é parte do relatório descritivo e é incorporada na presente invenção a título de referência em sua totalidade.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[004] Avanços em biotecnologia permitiram o lançamento de numerosos produtos terapêuticos de proteína recombinante e anticorpo monoclonal. Produtos biológicos comercialmente viáveis frequentemente requerem o desenvolvimento de formulações líquidas contendo uma alta concentração (50 mg/mL ou mais) de ingrediente biológico ativo, especialmente quando a administração subcutânea é a via de liberação preferida. Entretanto, a formulação dos mesmos produtos permanece um desafio por várias razões,
incluindo fornecer estabilidade suficiente, superar a formação de agregado potencial e superar a alta viscosidade associada com altas concentrações de proteína ou anticorpo. Ver Shire et al., Challenges in the Development of High Protein Content Concentration Formulations. J. Pharm. Sci. 93(6): 1390 - 1402 (2004). Formulações líquidas altamente viscosas são particularmente problemáticas devido às dificuldades em fabricação e liberação.
[005] Vários métodos de controlar a viscosidade da formulação através da modificação de componentes de formulação foram propostos. Para revisão, ver Jezek et al. Viscosity of concentrated therapeutic protein compositions, Advanced Drug Delivery Reviews, 63:1101 - 1117 (2011); Tomar et al., Molecular basis of high viscosity in concentrated antibody solutions; Strategies for high concentration drug product development. MABS 8(2): 216 - 228 (2116). Por exemplo, EP 2 116 265 propõe modificar o pH da formulação fora da faixa de pH fisiológico como um meio para reduzir a viscosidade ou incluir >100 mM de sal na formulação. Liu et al. (US 2007/0053900) propõem o uso de histidina e/ou HCl de arginina, em combinação com outros componentes da formulação, para controlar a viscosidade de formulações compreendendo uma alta concentração de anticorpo. Kaisheva et al. (US 2003/0138417) divulgam o uso de um modificador de tonicidade selecionado de vários sais ou aminoácidos, especialmente prolina, em combinação com um tampão de succinato ou histidina e polisorbato em formulações de anticorpo de alta concentração. Bowen et al. (WO 2011/139718) propõem a adição de compostos específicos a formulações biológicas para reduzir a viscosidade, incluindo certos aminoácidos carregados. Soane et al. (US 9,605,051) divulgam a cafeína como um excipiente redutor de viscosidade para o uso com formulações de anticorpo terapêuticas de alta concentração. Métodos adicionais de controlar a viscosidade de solução de formulações biológicas através de componentes de formulação são divulgados em Larson et al., WO 2015/038818, Dauty et al. e Publicação do Pedido US No 2014/0044708.
[006] Não obstante dos componentes de formulação propostos debatidos acima para reduzir a viscosidade de formulações biológicas, existe uma necessidade de excipientes e composições de formulação que sejam capazes de controlar a viscosidade de soluções compreendendo uma alta concentração de proteína ou anticorpo.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[007] A presente invenção é dirigida a compostos de aminoácido pegilado da Fórmula I, que são úteis como excipientes em formulações farmacêuticas compreendendo ingredientes biológicos ativos. Mais particularmente, a presente invenção inclui compostos da Fórmula I: (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que: Xé , , , ou ; R1 é H ou metila; R2 é H ou ; R3A e R3B são cada H ou juntos formam oxo; R4A e R4B são cada H ou juntos formam oxo; R5 é H ou metila; e cada ocorrência de n é independentemente 1 a 5; e em que indica o ponto de ligação ao restante do composto.
[008] Os compostos da Fórmula I são úteis para reduzir a viscosidade de formulações farmacêuticas compreendendo ingredientes biológicos ativos; isto é, anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígenodos mesmos ou proteínas terapêuticas. Consequentemente, em certas modalidades, a presente invenção fornece composições compreendendo um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, um ingrediente biológico ativo (ABI) e um carreador farmaceuticamente aceitável. Em modalidades específicas, as composições farmacêuticas da invenção opcionalmente compreendem um ou mais excipientes adicionais. Em algumas modalidades, o ABI está presente na composição a uma alta concentração, por exemplo, de cerca de 50 mg/mL a cerca de 250 mg/mL. Em modalidades específicas, o ABI é um anticorpo anti-PD- 1 humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a PD-1 humano. A invenção inclui ainda métodos para tratar uma doença ou condição patológica por administração de um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a um paciente em necessidade do mesmo ou por administração de uma composição compreendendo um composto da Fórmula I ou seu sal e um carreador farmaceuticamente aceitável.
[009] Modalidades, submodalidades, aspectos e características da presente invenção são descritos ainda aqui ou serão evidentes a partir da seguinte descrição, exemplos e reivindicações anexas.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[010] Esta invenção se refere a novos aminoácidos pegilados da Fórmula (I) e usos dos mesmos. Os compostos são úteis como excipientes para reduzir a viscosidade de formulações compreendendo altas concentrações de produtos terapêuticos biológicos, como discutido mais completamente, infra. I. Definições e Abreviações
[011] Como usado por todo o relatório descritivo e reivindicações anexas,
as seguintes abreviações aplicam-se: ABI ingrediente biológico ativo API ingrediente farmacêutico ativo (Boc)2O bicarbonato de di-terc-butila CDR região determinante de complementaridade nas regiões variáveis de imunoglobulina, definida usando o sistema de numeração de Kabat, a menos que de outro modo indicado CELITE terra diatomácea CHO ovário de hamster chinês CI intervalo de confiança CTLA4 antígeno 4 associado a linfócito T citotóxico DCM diclorometano DIEA N,N-di-isopropiletilamina DMF N,N-dimetilformamida D2O água deuterada DTPA ácido dietilenotriaminapenta acético EC50 concentração resultante em 50% de eficácia ou ligação ELISA ensaio imunossorvente ligado à enzima EtOAc acetato de etila EtOH etanol FFPE fixa em formalina, embutida em parafina FR região de framework HATU (3-óxido hexafluorofosfato de 1-[bis(dimetilamino)metileno]- 1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio) HRP peroxidase de raiz forte HNSCC carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço IC50 concentração resultante em 50% de inibição
IgG imunoglobulina G IHC imuno-histoquímica ou imuno-histoquímico LC-MS cromatografia líquida-espectrometria de massa (também abreviada como LCMS) mAb anticorpo monoclonal Me metila MeOH metanol MES ácido 2-(N-morfolino)etanossulfônico NCBI Centro Nacional de Informação Biotecnológica RMN ressonância magnética nuclear NSCLC câncer pulmonar de células não-pequenas PCR reação em cadeia de polimerase PD-1 morte programada 1 (também conhecida como, morte celular programada 1 e receptor 1 de morte programada) PD-L1 ligante 1 de morte celular programada 1 PD-L2 ligante 2 de morte celular programada 1 PEG polietilenoglicol PS80 polisorbato 80 TEA trietilamina (também abreviada Et3N) TFA ácido trifluoroacético TLC cromatografia em camada fina TNBC câncer de mama triplo negativo VH região variável de cadeia leve de imunoglobulina VK região variável de cadeia leve kappa de imunoglobulina VL região variável de cadeia leve de imunoglobulina v/v volume por volume WFI água para injeção p/v peso por volume
[012] De modo que a invenção possa ser mais facilmente entendida, certos termos técnicos e científicos são especificamente definidos abaixo. A menos que especificamente definido em outra parte neste documento, todos os outros termos técnicos e científicos usados na presente invenção têm o significado comumente entendido por um técnico no assunto à qual esta invenção pertence.
[013] Como usado por todo o relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas no singular “um”, “uma” e “o”, “a” incluem a referência no plural a menos que o contexto claramente dite de outro modo.
[014] Referência a “ou” indica qualquer uma ou ambas as possibilidades a menos que o contexto claramente dite uma das possibilidades indicadas. Em alguns casos, “e/ou” foi utilizado para destacar qualquer uma ou ambas as possibilidades.
[015] Um “ingrediente biológico ativo” (ou “ABI”), como usado na presente invenção, se refere a um princípio ativo de uma formulação farmacêutica que é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou uma proteína ou peptídeo terapêuticos. Um ABI é o componente de uma formulação farmacêutica biológica que é útil para induzir um efeito terapêutico positivo desejado quando administrado a um paciente, por exemplo, tratar ou prevenir uma doença ou condição, que pode incluir parar ou retardar a progressão de uma doença ou condição patológica, reduzir a severidade ou duração dos sintomas clínicos da doença, prolongar a sobrevivência de um paciente em relação à sobrevivência esperada em um paciente não tratado similar e induzir a remissão completa ou parcial da doença ou condição. Um “ingrediente farmacêutico ativo” (ou “API”) se refere a qualquer princípio ativo em uma formulação farmacêutica que é útil para tratar ou prevenir uma doença ou condição patológica, incluindo, mas não limitado a, anticorpos e fragmentos de ligação ao antígenodos mesmos, proteínas e moléculas pequenas.
[016] “Anticorpo B”, como usado na presente invenção, é um anticorpo monoclonal anti-IL23p19 de IgG1, humanizado, de alta afinidade.
[017] “Tratar” ou “tratamento” significa administrar uma composição da invenção a um paciente de modo a induzir um efeito terapêutico positivo. Os termos não necessariamente indicam uma eliminação total de todos os sintomas da doença ou distúrbio. “Tratamento” de um câncer ou condição imune se refere à administração de uma composição da invenção a um paciente tendo uma condição imune ou condição cancerosa ou diagnosticado com ou predisposto a um câncer ou um infecção patogênica (por exemplo, viral, bacteriana, fúngica), para obter pelo menos um efeito terapêutico positivo, tal como, por exemplo, número reduzido de células cancerígenas, tamanho de tumor reduzido, taxa reduzida de infiltração de célula cancerígena em órgãos periféricos ou taxa reduzida de metástase tumoral ou crescimento tumoral. “Tratamento” pode incluir um ou mais do seguinte: induzir/aumentar uma resposta imune antitumoral, estimular uma resposta imune a um patógeno, toxina e/ou auto- antígeno, estimular uma resposta imune a uma infecção viral, diminuir o número de um ou mais marcadores tumorais, inibir o crescimento ou sobrevivência de células tumorais, eliminar ou reduzir o tamanho de uma ou mais lesões cancerosas ou tumores, diminuir o nível de um ou mais marcadores tumorais, melhorar, reduzir a severidade ou duração do câncer, prolongar a sobrevivência de um paciente em relação à sobrevivência esperada em um paciente não tratado similar.
[018] “Condição imune” ou “distúrbio imune” abrange, por exemplo, inflamação patológica, um distúrbio inflamatório e um distúrbio ou doença autoimunes. “Condição imune” também se refere a infecções, infecções persistentes e condições proliferativas, tais como câncer, tumores e angiogênese, incluindo infecções, tumores e canceres que resistem à erradicação pelo sistema imune. “Condição cancerosa” inclui, por exemplo, câncer, células cancerígenas, tumores, angiogênese e condições pré-cancerosas tais como displasia.
[019] Efeitos terapêuticos positivos no câncer podem ser medidos de vários modos (Ver, W. A. Weber, J. Nucl. Med. 50:1S-10S (2009)). Por exemplo, com respeito à inibição do crescimento tumoral, de acordo com padrões de NCI, um T/C ≦ 42% é o nível mínimo de atividade antitumoral. Um T/C < 10% é considerado um nível alto de atividade antitumoral, com T/C (%) = Volume de tumor mediano do tratado/Volume de tumor mediano do controle × 100. Em algumas modalidades, o tratamento obtido por administração de uma formulação da invenção é qualquer um de sobrevivência isenta de progressão (PFS), sobrevivência isenta de doença (DFS) ou sobrevivência global (OS). PFS, também referido como “Tempo para Progressão Tumoral” indica a duração de tempo durante e depois do tratamento que o câncer não cresce e inclui a quantidade de tempo que os pacientes experimentaram uma resposta completa ou uma resposta parcial, bem como a quantidade de tempo que os pacientes experimentaram doença estável. DFS se refere à duração de tempo durante e depois do tratamento que o paciente permanece livre da doença. OS se refere a um prolongamento na expectativa de vida quando comparado a indivíduos ou pacientes ingênuos ou não tratados. Embora uma modalidade das formulações, métodos de tratamento e usos da presente invenção possa não ser eficaz em obter um efeito terapêutico positivo em a cada paciente, isto deve ser feito em um número estatisticamente significativo de indivíduos como determinado por qualquer teste estatístico conhecido na técnica tal como o teste t de Student, o teste chi2, o teste U de acordo com Mann e Whitney, o teste Kruskal-Wallis (teste
H), teste Jonckheere-Terpstra e o teste Wilcoxon.
[020] O termo “paciente” (alternativamente referido como “indivíduo” ou “indivíduo” na presente invenção) se refere a um mamífero (por exemplo, rato, camundongo, cão, gato, coelho) capaz de ser tratado com as formulações da invenção, o mais preferivelmente um ser humano. O termo “paciente” também pode incluir animais não humanos incluindo animais de criação e animais domésticos incluindo, mas não limitados a, gado, cavalos, ovelha, suíno, cabras, coelhos, gatos, cães e outros mamíferos em necessidade de tratamento. Em algumas modalidades, o paciente é um paciente adulto. Em outras modalidades, o paciente é um paciente pediátrico. Um paciente “em necessidade de tratamento” é um indivíduo diagnosticado com, suspeito de ter ou predisposto a uma doença ou distúrbio em que uma composição da invenção é intencionada a tratar ou um paciente para quem a prevenção de um distúrbio é desejada.
[021] O termo “anticorpo” se refere a qualquer forma de anticorpo que exiba a atividade biológica desejada. Assim, ele é usado no sentido mais amplo e especificamente abrange, mas não é limitado a, anticorpos monoclonais (incluindo anticorpos monoclonais de comprimento total), anticorpos policlonais, anticorpos humanizados, anticorpos completamente humanos e anticorpos quiméricos. “Anticorpos parentais” são anticorpos obtidos por exposição de um sistema imune a um antígeno antes da modificação dos anticorpos para um uso intencionado, tal como humanização de um anticorpo para o uso como um anticorpo terapêutico humano.
[022] Em geral, a unidade estrutural básica de anticorpo compreende um tetrâmero. Cada tetrâmero inclui dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeo, cada par tendo uma cadeia “leve” (cerca de 25 kDa) e uma cadeia “pesada” (cerca de 50 a 70 kDa). A porção amino-terminal de cada cadeia inclui uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos principalmente responsáveis pelo reconhecimento de antígeno. As regiões variáveis de cada par de cadeia leve/pesada formam o sítio de ligação a anticorpo. Assim, em geral, um anticorpo intacto tem dois sítios de ligação. A porção carbóxi-terminal da pesada cadeia pode definir uma região constante principalmente responsável pela função efetora. Tipicamente, cadeias leves humanas são classificadas como cadeias leves kappa e lambda. Além disso, cadeias pesadas humanas são tipicamente classificadas como mu, delta, gama, alfa ou épsilon e definem o isótipo do anticorpo como IgM, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente. Dentro das cadeias leves e pesadas, as regiões variáveis e constantes são unidas por uma região “J” de cerca de 12 ou mais aminoácidos, com a cadeia pesada também incluindo uma região “D” de cerca de 10 mais aminoácidos. Ver geralmente, Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2a ed. Raven Press, N.Y. (1989).
[023] Tipicamente, os domínios variáveis tanto das cadeias pesadas quanto leves compreendem três regiões hipervariáveis, também chamadas regiões determinantes de complementaridade (CDRs), que são localizadas dentro de regiões de estrutura relativamente conservadas (FR). As CDRs são usualmente alinhadas pelas regiões de framework, permitindo a ligação a um epítopo específico. Em geral, do terminal N ao terminal C, os domínios variáveis tanto de cadeias leves quanto pesadas compreendem FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. A atribuição de aminoácidos a cada domínio está, geralmente, de acordo com as definições de Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5a ed.; NIH Publ. No 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1 - 75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252:6609 - 6616; Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196:901 - 917 ou Chothia, et al., (1989) Nature 342:878 - 883.
[024] Um anticorpo que “se liga especificamente a” uma proteína alvo específica é um anticorpo que exibe ligação preferencial àquele alvo quando comparado a outras proteínas, mas esta especificidade não requer especificidade de ligação absoluta. Um anticorpo é considerado “específico” para seu alvo intencionado se sua ligação for determinante da presença da proteína alvo em uma amostra, por exemplo, sem produzir resultados indesejados tais como falso-positivos. Anticorpos ou fragmentos de ligação dos mesmos, úteis na presente invenção se ligarão à proteína alvo com uma afinidade que é pelo menos duas vezes maior, preferivelmente pelo menos dez vezes maior, mais preferivelmente pelo menos 20 vezes maior e o mais preferivelmente pelo menos 100 vezes maior do que a afinidade com proteínas não-alvos. Como usado na presente invenção, um anticorpo é dito se ligar especificamente a um polipeptídeo compreendendo uma sequência de aminoácido dada, por exemplo, a sequência de aminoácido de uma molécula de PD-1 humano madura, se ele se liga a polipeptídeos compreendendo esta sequência mas não se liga a proteínas que carecem desta sequência.
[025] “Anticorpo quimérico” se refere a um anticorpo em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é idêntico com ou homólogo às sequências correspondentes em um anticorpo derivado de uma espécie particular (por exemplo, ser humano) ou que pertence a uma classe ou subclasse de anticorpo particular, enquanto o restante da(s) cadeia(s) é idêntico com ou homólogo às sequências correspondentes em um anticorpo derivado de uma outra espécie (por exemplo, camundongo) ou que pertence a uma outra classe ou subclasse de anticorpo, bem como fragmentos de tais anticorpos, contanto que eles exibam a atividade biológica desejada.
[026] O termo “quantidade farmaceuticamente eficaz” ou “quantidade terapeuticamente eficaz” significa uma quantidade por meio da qual composição ou formulação terapêutica suficiente é introduzida a um paciente para tratar uma doença ou condição. Um técnico no assunto reconhece que este nível pode variar de acordo com as características do paciente tais como idade, peso, etc. O termo “quantidade eficaz”, quando usado com um composto da invenção (isto é, um composto da Fórmula I), significa a quantidade de composto suficiente para diminuir a viscosidade de uma formulação em relação à mesma formulação sem o composto. Uma “quantidade eficaz” de um ingrediente farmacêutico ativo ou ingrediente biológico ativo significa uma quantidade suficiente para evocar a resposta que é buscada em uma célula, tecido, sistema, animal ou ser humano. Em uma modalidade, a quantidade eficaz é uma “quantidade terapeuticamente eficaz” para o alívio dos sintomas da doença ou condição sendo tratada. Em uma outra modalidade, a quantidade eficaz é uma “quantidade profilaticamente eficaz” para a profilaxia dos sintomas da doença ou condição sendo prevenidos. Quando o composto ativo (isto é, princípio ativo) é administrado como o sal, referências à quantidade de princípio ativo são à forma de ácido livre ou base livre do composto. Uma “quantidade eficaz”, quando usada para modificar um composto da invenção, isto é, um composto da Fórmula I, significa que quantidade suficiente do composto está presente em uma formulação para realizar a função conforme desejado, por exemplo, reduzindo ou mantendo a viscosidade de uma solução dentro de uma faixa aceitável.
[027] O termo “cerca de”, quando da modificação da quantidade (por exemplo, mM ou M) de uma substância ou composição, da porcentagem (v/v ou p/v) de um componente da formulação, do pH de uma solução/formulação ou do valor de um parâmetro que caracteriza uma etapa em um método ou semelhantes se refere à variação na quantidade numérica que pode ocorrer, por exemplo, através de procedimentos de medição, manejo e amostragem típicos envolvidos na preparação, caracterização e/ou uso da substância ou composição; através de erro inadvertido nestes procedimentos; através de diferenças na fabricação, fonte ou pureza do ingredientes utilizado para fabricar ou usar as composições ou realizar os procedimentos; e semelhantes. Em certas modalidades, “cerca de” pode significar uma variação de ± 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 1,0, 2,0, 3,0, 4,0 ou 5,0 da unidade apropriada. Em certas modalidades, “cerca de” pode significar uma variação de ± 0,1%, 0,5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5% ou 10%.
[028] Os termos “câncer”, “canceroso” ou “maligno” se referem a ou descrevem a condição fisiológica em mamíferos que é tipicamente caracterizada por crescimento celular desregulado. Exemplos de câncer incluem, mas não são limitados a, carcinoma, linfoma, leucemia, blastoma e sarcoma. Exemplos mais particulares de tais canceres incluem carcinoma de células escamosas, mieloma, câncer pulmonar de células pequenas, câncer pulmonar de células não- pequenas, glioma, linfoma de Hodgkin, linfoma de não-Hodgkin, câncer gastrointestinal (trato), câncer renal, câncer ovariano, câncer de fígado, leucemia linfoblástica, leucemia linfocítica, câncer colorretal, câncer do endométrio, câncer do rim, câncer de próstata, câncer da tireoide, melanoma, condrossarcoma, neuroblastoma, câncer pancreático, glioblastoma multiforme, câncer cervical, câncer cerebral, câncer de estômago, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, carcinoma do cólon e câncer de cabeça e pescoço.
[029] “Chothia” significa um sistema de numeração de anticorpo descrito em Al-Lazikani et al., JMB 273:927 - 948 (1997).
[030] “Kabat” como usado na presente invenção significa um sistema de alinhamento e numeração de imunoglobulina pioneiro por Elvin A. Kabat ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.).
[031] Os termos “fragmento de ligação a PD-1”, “fragmento de ligação ao antígeno do mesmo”, “fragmento de ligação deste” ou “fragmento deste” abrangem um fragmento ou um derivado de um anticorpo que substancialmente ainda mantém sua atividade biológica de ligação ao antígeno (PD-1 humano) e que inibe sua atividade (por exemplo, bloqueando a ligação de PD-1 a PDL1 e PDL2). Portanto, o termo “fragmento de anticorpo” ou fragmento de ligação a PD-1 se refere a uma porção de um anticorpo de comprimento total, geralmente a ligação a antígeno ou região variável do mesmo. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem os fragmentos Fab, Fab’, F(ab’)2 e Fv. Tipicamente, um fragmento de ligação ou derivado mantém pelo menos 10% de sua atividade inibitória de PD-1. Em algumas modalidades, um fragmento de ligação ou derivado mantém pelo menos 25%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% ou 100% (ou mais) de sua atividade inibitória de PD-1, embora qualquer fragmento de ligação com afinidade suficiente para exercer o efeito biológico desejado seja útil. Em algumas modalidades, um fragmento de ligação ao antígeno se liga ao seu antígeno com uma afinidade que é pelo menos duas vezes maior, preferivelmente pelo menos dez vezes maior, mais preferivelmente pelo menos 20 vezes maior e o mais preferivelmente pelo menos 100 vezes maior do que a afinidade com antígenos não relacionados. Em uma modalidade, o anticorpo tem uma afinidade que é maior do que cerca de 109 litros/mol, como determinado, por exemplo, por análise de Scatchard. Munsen et al. (1980) Analyt. Biochem. 107:220 - 239. Também é intencionado que um fragmento de ligação a PD-1 possa incluir variantes tendo substituições de aminoácido conservativas que não alteram substancialmente sua atividade biológica.
[032] “Anticorpo humano” se refere a um anticorpo que compreende sequências proteicas de imunoglobulina humana apenas. Um anticorpo humano pode conter cadeias de carboidrato de murino se produzido em um camundongo, em uma célula de camundongo ou em um hibridoma derivado de uma célula de camundongo. Similarmente, “anticorpo de camundongo” ou “anticorpo de rato” se refere a um anticorpo que compreende apenas sequências de imunoglobulina de camundongo ou rato, respectivamente.
[033] “Anticorpo humanizado” se refere a formas de anticorpos que contêm sequências de anticorpos não humanos (por exemplo, de murino) bem como anticorpos humanos. Tais anticorpos contêm sequência mínima derivada de imunoglobulina não humana. Em geral, o anticorpo humanizado compreenderá substancialmente todos de pelo menos um e tipicamente dois, domínios variáveis, em que todas ou substancialmente todas as alças hipervariáveis correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana e todas ou substancialmente todas as regiões FR são aquelas de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado opcionalmente também compreenderá pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana. As formas humanizadas de anticorpos de roedor geralmente compreenderão as mesmas sequências de CDR dos anticorpos parentais de roedor, embora certas substituições de aminoácido possam ser incluídas para aumentar a afinidade, aumentar a estabilidade do anticorpo humanizado ou por outras razões.
[034] Anticorpos úteis nas composições da presente invenção também incluem anticorpos com regiões Fc modificadas (ou bloqueadas) para fornecer funções efetoras alteradas. Ver, para exemplo, Pat. US No 5,624,821; WO2003/086310; WO2005/120571; WO2006/0057702; Presta (2006) Adv. Drug Delivery Rev. 58:640 - 656. Tal modificação pode ser usada para realçar ou suprimir várias reações do sistema imune, com efeitos benéficos possíveis em diagnose e terapia. Alterações da região Fc incluem mudanças de aminoácido (substituições, supressões e inserções), glicosilação ou desglicosilação e adição de Fc múltiplo. Mudanças ao Fc também podem alterar a meia-vida de anticorpos em anticorpos terapêuticos e uma meia-vida mais longa resultaria em dosagem menos frequente, com a conveniência aumentada e uso diminuído concomitantes de material. Ver Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol., 116:731 a 734 - 35.
[035] “Anticorpo completamente humano” se refere a um anticorpo que compreende sequências proteicas de imunoglobulina humana apenas. Um anticorpo completamente humano pode conter cadeias de carboidrato de murino se produzido em um camundongo, em uma célula de camundongo ou em um hibridoma derivado de uma célula de camundongo. Similarmente, “anticorpo de camundongo” se refere a um anticorpo que compreende sequências de imunoglobulina de camundongo apenas. Um anticorpo completamente humano pode ser gerado em um ser humano, em um animal transgênico tendo sequências de linhagem germinativa de imunoglobulina humana, por exibição de fago ou outros métodos biológicos moleculares.
[036] “Região hipervariável” se refere aos resíduos de aminoácido de um anticorpo que são responsáveis pela ligação a antígeno. A região hipervariável compreende resíduos de aminoácido de uma “região determinante de complementaridade” ou “CDR” (por exemplo, resíduos 24 a 34 (CDRL1), 50 a 56 (CDRL2) e 89 a 97 (CDRL3) no domínio variável de cadeia leve e resíduos 31 a 35 (CDRH1), 50 a 65 (CDRH2) e 95 a 102 (CDRH3) no domínio variável de cadeia pesada como medido pelo sistema de numeração Kabat (Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.) e/ou aqueles resíduos de uma “alça hipervariável” (isto é, resíduos 26 a 32 (L1), 50 a 52 (L2) e 91 a 96 (L3) no domínio variável de cadeia leve e 26 a 32 (H1), 53 a 55 (H2) e 96 a 101 (H3) no domínio variável de cadeia pesada (Chothia e Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901 - 917). Como usado na presente invenção, o termo resíduos de “framework” ou “FR” se refere àqueles resíduos de domínio variável exceto os resíduos de região hipervariável definidos na presente invenção como resíduos de CDR. Resíduos de CDR e FR são determinados de acordo com a definição de sequência padrão de Kabat. Kabat et al. (1987) Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda Md.
[037] “Variantes conservativamente modificadas” ou “substituição conservativa” se referem a substituições de aminoácidos que são conhecidas dos técnicos no assunto e podem ser feitas geralmente sem alterar a atividade biológica da molécula resultante, mesmo em regiões essenciais do polipeptídeo. Tais substituições exemplares são preferivelmente feitas de acordo com aquelas apresentadas na Tabela 1 como segue: Tabela 1. Substituições de Aminoácido Conservativas Exemplares Resíduo original Substituição conservativa Ala (A) Gly; Ser Arg (R) Lys, His Asn (N) Gln; His Asp (D) Glu; Asn Cys (C) Ser; Ala Gln (Q) Asn Glu (E) Asp; Gln Gly (G) Ala His (H) Asn; Gln Ile (I) Leu; Val Leu (L) Ile; Val Lys (K) Arg; His Met (M) Leu; Ile; Tyr Phe (F) Tyr; Met; Leu Pro (P) Ala
Resíduo original Substituição conservativa Ser (S) Thr Thr (T) Ser Trp (W) Tyr; Phe Tyr (Y) Trp; Phe Val (V) Ile; Leu
[038] Além disso, os técnicos no assunto reconhecem que, em geral, substituições de aminoácido únicas em regiões não essenciais de um polipeptídeo não alteram substancialmente a atividade biológica. Ver, para exemplo, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4a Edição).
[039] A frase “consiste essencialmente em” ou variações tais como “consistem essencialmente em” ou “consistindo essencialmente em”, como usado por todo o relatório descritivo e reivindicações, indica a inclusão de quaisquer elementos ou grupo de elementos relatados e a inclusão opcional de outros elementos, de natureza similar ou diferente dos elementos relatados, que não mudam materialmente as propriedades básicas ou novas do regime de dosagem, método ou composição específicos. Como um exemplo não limitante, um composto de ligação que consiste essencialmente em uma sequência de aminoácido relatada também pode incluir um ou mais aminoácidos, incluindo substituições de um ou mais resíduos de aminoácido, que não afetam materialmente as propriedades do composto de ligação.
[040] “Compreendendo” ou variações tais como “compreendem”, “compreende” ou “compreendido de” são usados por todo o relatório descritivo e reivindicações em um sentido inclusivo, isto é, para especificar a presença das características estabelecidas mas não para excluir a presença ou adição de outras características que podem realçar materialmente a operação ou utilidade de qualquer uma das modalidades da invenção, a menos que o contexto requeira de outro modo devido à linguagem de expressão ou implicação necessária.
[041] “Anticorpo isolado” e “fragmento de anticorpo isolado” se refere ao estado de purificação e, em tal contexto, significa que a molécula mencionada é substancialmente livre de outras moléculas biológicas tais como ácidos nucleicos, proteínas, lipídeos, carboidratos ou outro material tal como fragmento celular e meio de crescimento. Geralmente, o termo “isolado” não é intencionado a se referir a uma ausência completa de tal material ou a uma ausência de água, tampões ou sais, a menos que eles estejam presentes em quantidades que substancialmente interfiram com o uso experimental ou terapêutico do composto de ligação como descrito na presente invenção.
[042] “Anticorpo monoclonal” ou “mAb” ou “Mab”, como usado na presente invenção, se refere a uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, as moléculas de anticorpo compreendendo a população são idênticas em sequência de aminoácido exceto para mutações que ocorrem naturalmente possíveis que podem estar presentes em quantidades menores. Ao contrário, preparações de anticorpo (policlonal) convencionais tipicamente incluem uma grande quantidade de anticorpos diferentes tendo sequências de aminoácido diferentes em seus domínios variáveis, particularmente suas CDRs, que são frequentemente específicas para epítopos diferentes. O modificador “monoclonal” indica o caráter do anticorpo como sendo obtido a partir de uma população substancialmente homogênea de anticorpos e não deve ser interpretado como necessitando da produção do anticorpo por qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais a serem usados de acordo com a presente invenção podem ser fabricados pelo método de hibridoma primeiro descrito por Kohler et al. (1975) Nature 256: 495 ou pode ser fabricado por métodos de DNA recombinante (Ver, para exemplo, Pat. US No
4,816,567). Os “anticorpos monoclonais” também podem ser isolados de bibliotecas de fago de anticorpo usando as técnicas descritas em Clackson et al. (1991) Nature 352: 624 - 628 e Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581 - 597, por exemplo. Ver também Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731.
[043] “Tumor” conforme o mesmo se aplica a um indivíduo diagnosticado com ou suspeito de ter, um câncer se refere a um neoplasma maligno ou potencialmente maligno ou massa tecidual de qualquer tamanho e inclui tumores primários e neoplasmas secundários. Um tumor sólido é um crescimento ou massa anormais de tecido que usualmente não contém cistos ou áreas líquidas. Diferentes tipos de tumores sólidos são mencionados para o tipo de células que os formam. Exemplos de tumores sólidos são sarcomas, carcinomas e linfomas. Leucemias (canceres do sangue) geralmente não formam tumores sólidos (National Cancer Institute, Dictionary of Cancer Terms).
[044] “Regiões variáveis” ou “região V” como usado na presente invenção significa o segmento de cadeias de IgG que é variável em sequência entre anticorpos diferentes. O mesmo se estende ao resíduo 109 de Kabat na cadeia leve e 113 na cadeia pesada.
[045] O termo “tampão” abrange aqueles agentes que mantêm o pH da solução das formulações da invenção em uma faixa aceitável, ou, para formulações liofilizadas da invenção, fornecem um pH de solução aceitável antes da liofilização.
[046] O termo “formulação farmacêutica” se refere a preparações que estão em tal forma como para permitir que os ingredientes ativos sejam eficazes e que não contenham nenhum componente adicional que são tóxicos aos indivíduos aos quais a formulação seria administrada.
[047] “Farmaceuticamente aceitável” se refere a excipientes (veículos, aditivos) e composições que podem ser razoavelmente administrados a um indivíduo para fornecer uma dose eficaz do princípio ativo utilizado e que são “geralmente consideradas como segura” por exemplo, que são fisiologicamente toleráveis e não produzem tipicamente uma reação alérgica ou adversa similar, tal como distúrbio gástrico e semelhantes, quando administradas a um ser humano. Em uma outra modalidade, este termo se refere a entidades e composições moleculares aprovadas por uma agência reguladora do governo federal ou de um governo estatal ou listadas na Farmacopeia US ou uma outra farmacopeia geralmente reconhecida para o uso em animais e mais particularmente em seres humanos.
[048] Uma “formulação estável” é uma em que o API nesta essencialmente mantém sua estabilidade física e/ou estabilidade química e/ou atividade biológica durante o armazenamento. Várias técnicas analíticas para medir a estabilidade proteica estão disponíveis na técnica e são revisadas em Peptide and Protein Drug Delivery, 247 - 301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) e Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29 - 90 (1993). A estabilidade pode ser medida em uma temperatura selecionada por um período de tempo selecionado.
[049] Uma formulação farmacêutica de anticorpo “estável” é uma formulação farmacêutica de anticorpo sem nenhuma mudança significativa observada em uma temperatura refrigerada (2 a 8 °C) por pelo menos 3 meses, preferivelmente 6 meses e mais preferivelmente 1 ano e ainda mais preferivelmente através de 2 anos. Adicionalmente, uma formulação líquida “estável” inclui uma que exibe características desejadas em temperaturas incluindo a 25 °C e 40 °C por períodos incluindo 1 mês, 3 meses, 6 meses, 12 meses e/ou 24 meses. Critérios aceitáveis típicos para estabilidade são como segue. Tipicamente, não mais do que cerca de 10%, preferivelmente cerca de 5%, de monômero de anticorpo é degradado como medido por SEC-HPLC. A formulação farmacêutica de anticorpo é incolor ou clara a levemente opalescente por análise visual. A concentração, pH e osmolalidade da formulação têm não mais do que +/-10% de mudança. A potência está tipicamente dentro de 50 a 150% da referência. Tipicamente, não mais do que cerca de 10%, preferivelmente cerca de 5% de clipagem é observado. Tipicamente, não mais do que cerca de 10%, preferivelmente cerca de 5% de agregação é formado.
[050] Um anticorpo “mantém sua estabilidade física” em uma formulação farmacêutica se ele não mostrar nenhum aumento significativo de agregação, precipitação e/ou desnaturação durante a examinação visual de cor e/ou clareza ou como medido por dispersão de luz UV, cromatografia de exclusão por tamanho (SEC) e dispersão de luz dinâmica. As mudanças da conformação de proteína podem ser avaliadas por espectroscopia por fluorescência, que determina a estrutura terciária da proteína e por espectroscopia por FTIR, que determina a estrutura secundária da proteína.
[051] Um anticorpo “mantém sua estabilidade química” em uma formulação farmacêutica, se ele não mostrar nenhuma alteração química significativa. A estabilidade química pode ser avaliada detectando-se e quantificando-se formas quimicamente alteradas da proteína. Processos de degradação que frequentemente alteram a estrutura química da proteína incluem hidrólise ou clipagem (avaliada por métodos tais como cromatografia de exclusão por tamanho e SDS-PAGE), oxidação (avaliada por métodos tal como por mapeamento de peptídeo em combinação com espectroscopia de massa ou MALDI/TOF/MS), desamidação (avaliada por métodos tais como cromatografia de troca iônica, focalização isoelétrica capilar, mapeamento de peptídeo, medição de ácido isoaspártico) e isomerização (avaliada medindo-se o teor de ácido isoaspártico, mapeamento de peptídeo, etc.).
[052] Um anticorpo “mantém sua atividade biológica” em uma formulação farmacêutica, se a atividade biológica do anticorpo, em um dado tempo, estiver dentro de uma faixa predeterminada da atividade biológica exibida no momento em que a formulação farmacêutica foi preparada. A atividade biológica de um anticorpo pode ser determinada, por exemplo, por um ensaio de ligação ao antígeno.
[053] Uma modalidade da presente invenção é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como originalmente definido ou como definido em qualquer uma das modalidades, submodalidades, aspectos, classes ou subclasses precedentes, em que o composto ou seu sal está em uma forma substancialmente pura. Como usado na presente invenção “substancialmente pura” significa adequadamente pelo menos cerca de 60% em peso, tipicamente pelo menos cerca de 70% em peso, preferivelmente pelo menos cerca de 80% em peso, mais preferivelmente pelo menos cerca de 90% em peso (por exemplo, de cerca de 90% em peso a cerca de 99% em peso), ainda mais preferivelmente pelo menos cerca de 95% em peso (por exemplo, de cerca de 95% em peso a cerca de 99% em peso ou de cerca de 98% em peso a 100% em peso) e o mais preferivelmente pelo menos cerca de 99% em peso (por exemplo, 100% em peso) de um produto contendo um composto da Fórmula I ou seu sal (por exemplo, o produto isolado de uma mistura de reação que fornece o composto ou sal) consiste no composto ou sal. O nível de pureza dos compostos e sais pode ser determinado usando um método padrão de análise tal como cromatografia em camada fina, eletroforese em gel, cromatografia líquida de alta eficiência e/ou espectrometria de massa. Se mais do que um método de análise for utilizado e os métodos fornecerem diferenças experimentalmente significativas no nível de pureza determinado, então o método que fornece o nível mais alto de pureza controla. Um composto ou sal de 100% de pureza é um que é livre de impurezas detectáveis como determinado por um método padrão de análise.
[054] Com respeito a um composto da invenção que tem um ou mais centros assimétricos e pode ocorrer como misturas de estereoisômeros, um composto substancialmente puro pode ser uma mistura substancialmente pura dos estereoisômeros ou um diastereômero ou enantiômero individual substancialmente puro a menos que expressamente retratado de outro modo. A presente invenção abrange todas as formas estereoisoméricas dos compostos da Fórmula I. A menos que uma estereoquímica específica seja indicada, a presente invenção destina-se a compreender todas as tais formas isoméricas dos mesmos compostos. Centros de assimetria que estão presentes nos compostos da Fórmula I podem, todos independentemente um do outro, ter configuração (R) ou configuração (S). Quando ligações ao carbono quiral são retratadas como linhas retas nas fórmulas estruturais da invenção, é entendido que tanto as configurações (R) quanto (S) do carbono quiral e consequentemente tanto os enantiômeros quanto as misturas dos mesmos, são incluídos dentro da fórmula. Similarmente, quando um nome de composto é relatado sem uma designação quiral para um carbono quiral, é entendido que tanto as configurações (R) quanto (S) do carbono quiral e consequentemente enantiômeros, diastereômeros individuais e misturas dos mesmos, são incluídos pelo nome. A produção de estereoisômeros específicos ou misturas dos mesmos pode ser identificada nos Exemplos onde tais estereoisômeros ou misturas foram obtidos, mas isto, de modo algum, limita a inclusão de todos os estereoisômeros e misturas dos mesmos de estarem dentro do escopo desta invenção.
[055] A invenção inclui todos os enantiômeros e diastereômeros possíveis e misturas de dois ou mais estereoisômeros, por exemplo, misturas de enantiômeros e/ou diastereômeros, em todas as razões. Assim, enantiômeros são um objeto da invenção em forma enantiomericamente pura, tanto como antípodas levorrotatórios quanto como dextrorrotatórios, na forma de racematos e na forma de misturas dos dois enantiômeros em todas as razões. No caso de um isomerismo cis/trans, a invenção inclui a forma cis e a forma trans, bem como misturas destas formas em todas as razões. A preparação de estereoisômeros individuais pode ser realizada, se desejado, por separação de uma mistura por métodos habituais, por exemplo, por cromatografia ou cristalização, pelo uso de materiais de partida estereoquimicamente uniformes para a síntese ou por síntese estereosseletiva. Opcionalmente, uma derivação pode ser realizada antes de uma separação de estereoisômeros. A separação de uma mistura de estereoisômeros pode ser realizada em uma etapa intermediária durante a síntese de um composto da Fórmula I ou ela pode ser feita em um produto racêmico final. A estereoquímica absoluta pode ser determinada por cristalografia de raio X de produtos cristalinos ou intermediários cristalinos que são derivados, se necessário, com um reagente contendo um centro estereogênico de configuração conhecida. A menos que um isômero, sal, solvato (incluindo hidratos) ou sal solvatado particular de tal racemato, enantiômero ou diastereômero seja indicado, a presente invenção inclui todos os tais isômeros, bem como sais, solvatos (incluindo hidratos) e sais solvatados de tais racematos, enantiômeros, diastereômeros e misturas dos mesmos.
[056] “Oxo” significa um átomo de oxigênio conectado a um outro átomo por uma ligação dupla e pode ser representado por “=O”.
[057] Quando qualquer variável (por exemplo, n) ocorre mais do que uma vez em qualquer constituinte ou na Fórmula I, sua definição em cada ocorrência é independente de sua definição em qualquer outra ocorrência. Também, combinações de substituintes e/ou variáveis são permissíveis apenas se tais combinações resultarem em compostos estáveis.
[058] Uma linha ondulada , como usado na presente invenção, indica um ponto de ligação ao restante do composto.
[059] Sob nomenclatura padrão usada por toda esta divulgação, a porção terminal da cadeia lateral designada é descrita por último, precedida pela funcionalidade adjacente em direção ao ponto de ligação.
[060] Na escolha dos compostos da presente invenção, um técnico no assunto reconhecerá que os vários substituintes, isto é, R1, R2, etc., devem ser escolhidos em conformidade com princípios bem conhecidos da conectividade e estabilidade da estrutura química.
[061] A menos que expressamente estabelecido ao contrário, todas as faixas citadas aqui são inclusivas. Por exemplo, na Fórmula I, “n é de 1 a 5” significa que n pode ser 1, 2, 3, 4 ou 5. Também deve ser entendido que qualquer faixa citada aqui inclui, dentro de seu escopo, todas as subfaixas dentro desta faixa. Assim, por exemplo, “n é de 1 a 5” é intencionado a incluir como aspectos deste, que n é de 1 a 4, n é de 1 a 3, n é 1 ou 2, n é de 2 a 5, n é de 2 a 4 e n é 2 ou 3.
[062] Um composto “estável” é um composto que pode ser preparado e isolado e cuja estrutura e propriedades permanecem ou podem ser feitas com que permaneçam essencialmente inalteradas por um período de tempo suficiente para permitir o uso do composto para os propósitos descritos na presente invenção (por exemplo, administração terapêutica a um indivíduo). Os compostos da presente invenção são limitados aos compostos estáveis incluídos pelas Fórmulas I.
[063] O termo “composto” se refere ao composto e, em certas modalidades, à medida em que eles são estáveis, qualquer hidrato ou solvato deste. Um hidrato é o composto complexado com água e um solvato é o composto complexado com um solvente orgânico.
[064] Como indicado acima, os compostos da presente invenção podem ser utilizados na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis. Os técnicos no assunto reconhecerão aqueles exemplos em que os compostos da invenção podem formar sais. O termo “sal farmaceuticamente aceitável” se refere a um sal (incluindo um sal interno tal como um zwitteríon) que possui efetividade similar ao composto precursor e que não é biologicamente ou de outro modo indesejável (por exemplo, é nem tóxico nem de outro modo deletério ao receptor deste). Assim, uma modalidade da invenção fornece sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da invenção. O termo “sal(is)”, como utilizado aqui, denota qualquer um do seguinte: sais ácidos formados com ácidos inorgânicos e/ou orgânicos, bem como sais básicos formados com bases inorgânicas e/ou orgânicas. Sais dos compostos da invenção podem ser formados por métodos conhecidos pelos técnicos no assunto, por exemplo, reagindo-se um composto da invenção com uma quantidade de ácido ou base, tal como uma quantidade equivalente, em um meio tal como um em que o sal precipita ou em meio aquoso seguido por liofilização. Todos os tais sais ácidos e sais básicos são intencionados a serem sais farmaceuticamente aceitáveis dentro do escopo da invenção e todos os sais ácidos e básicos são considerados equivalente às formas livres dos compostos correspondentes para propósitos da invenção.
[065] Como apresentado aqui, a presente invenção inclui composições farmacêuticas compreendendo um composto da Fórmula I, um ingrediente biológico ativo, opcionalmente um ou mais outros componentes ativos (por exemplo, um segundo ABI ou um API) e um carreador farmaceuticamente aceitável. As características do portador dependerão da via de administração. Por “farmaceuticamente aceitável” é significado que os ingredientes da composição farmacêutica devem ser compatíveis entre si, não interferirem com a efetividade do(s) ingrediente(s) ativo(s) e não serem deletérios (por exemplo, tóxicos) ao receptor deste. Assim, composições de acordo com a invenção podem, além do inibidor, conter diluentes, preenchedores, sais, tampões, estabilizadores, solubilizadores e outros materiais bem conhecidos na técnica.
[066] A administração de uma composição da presente invenção pode ser adequadamente parenteral, em que a composição é adequadamente formulada para administração pela via selecionada usando métodos de formulação bem conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, os métodos para preparar e administrar as formulações descritas nos capítulos 39, 41, 42, 44 e 45 em Remington - The Science and Practice of Pharmacy, 21a edição, 2006. Em uma modalidade, os compostos da invenção são administrados intravenosamente em um ambiente hospitalar. Em uma outra modalidade, a administração é subcutânea. II. Os compostos da invenção:
[067] Os compostos da invenção (isto é, os compostos da Fórmula I) são úteis como excipientes em formulações farmacêuticas compreendendo ingredientes biológicos ativos (isto é, um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo), especialmente formulações compreendendo uma alta concentração de ingrediente biológico ativo, para reduzir a viscosidade da formulação. Composições compreendendo uma alta concentração de ABI e um composto da invenção são capazes de serem administrados por intermédio de administração intravenosa ou subcutânea a um paciente em necessidade do mesmo.
[068] Em cada uma das várias modalidades dos compostos da invenção descritos na presente invenção, cada variável incluindo aquelas da Fórmula I e as várias modalidades desta, é selecionada independentemente das outras variáveis a menos que de outro modo indicado.
[069] A presente invenção abrange para cada uma das várias modalidades dos compostos da invenção descritos na presente invenção, incluindo aqueles da Fórmula I e as várias modalidades dos mesmos e os compostos dos exemplos, todas as formas dos compostos tais como, por exemplo, quaisquer solvatos, hidratos, estereoisômeros e tautômeros dos ditos compostos e de quaisquer sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, a menos que de outro modo indicado. Adicionalmente, nos exemplos descritos na presente invenção, os compostos da invenção podem ser retratados na forma de sal. Em tais casos, deve ser entendido que os compostos da invenção incluem as formas de ácido livre ou base livre de tais sais e qualquer sal farmaceuticamente aceitável das ditas formas de ácido livre ou base livre.
[070] Em um aspecto, a presente invenção inclui compostos da Fórmula I: (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X, n, R1, R2, R3A e R3B são como definidos aqui para os compostos da Fórmula (I) (isto é, como definido no Resumo da invenção); em que os compostos podem ser adequados para o uso como um excipiente em uma formulação farmacêutica líquida para reduzir a viscosidade global da solução.
[071] Uma primeira modalidade da invenção (Modalidade E1) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X, n, R1, R2, R3A e R3B são como definidos na Fórmula (I) no Resumo da invenção.
[072] Uma segunda modalidade (Modalidade E2) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é:
e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[073] Uma terceira modalidade (Modalidade E3) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é: e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[074] Uma quarta modalidade (Modalidade E4) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é: e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[075] Uma quinta modalidade (Modalidade E5) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é: e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[076] Uma sexta modalidade (Modalidade E6) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é: e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[077] Uma sétima modalidade (Modalidade E7) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é definido em qualquer uma das Modalidades E2 a E6, R1 é H e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[078] Uma oitava modalidade (Modalidade E8) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é definido em qualquer uma das Modalidades E2 a E6, R1 é metila e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[079] Uma nona modalidade (Modalidade E9) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é definido em qualquer uma das Modalidades E2 a E6, R1 é definido em qualquer uma das Modalidades E7 a E8, R2 é H e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[080] Uma décima modalidade (Modalidade E10) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é definido em qualquer uma das Modalidades E2 a E6, R1 é definido em qualquer uma das Modalidades E7 a E8, R2 é e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[081] Uma décima primeira modalidade (Modalidade E11) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é definido em qualquer uma das Modalidades E2 a E6, R1 é definido em qualquer uma das Modalidades E7 a E8, R2 é e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[082] Em uma submodalidade da Modalidade E11, R2 é .
[083] Em uma outra submodalidade da Modalidade E11, R2 é .
[084] Em uma outra submodalidade da Modalidade E11, R2 é .
[085] Uma décima segunda modalidade (Modalidade E12) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é definido em qualquer uma das Modalidades E2 a E6, R1 é definido em qualquer uma das Modalidades E7 a E8, R2 é e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[086] Em uma submodalidade da Modalidade E12, R2 é .
[087] Em uma outra submodalidade da Modalidade E12, R2 é .
[088] Em uma submodalidade das Modalidades E10 a E12, o n em R2 é 1. Em outras submodalidades das Modalidades E10 a E12, o n em R2 é 2. Em submodalidades adicionais das Modalidades E10 a E12, o n em R2 é 3. Ainda em outras submodalidades das Modalidades E10 a E12, o n em R2 é 4. Ainda em submodalidades adicionais das Modalidades E10 a E12, o n em R2 é 5. Em outras submodalidades das Modalidades E10 a E12, o n em R2 é 1 a 4, 1 a 3 ou 1 a 2.
[089] Uma décima terceira modalidade (Modalidade E13) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é definido em qualquer uma das Modalidades E2 a E6, R1 é definido em qualquer uma das Modalidades E7 a E8, R2 é definido em qualquer uma das Modalidades E9 a E12, R3A e R3B são todos H e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[090] Uma décima quarta modalidade (Modalidade E14) é um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que X é definido em qualquer uma das Modalidades E2 a E6, R1 é definido em qualquer uma das Modalidades E7 a E8, R2 é definido em qualquer uma das Modalidades E9 a E13, R3A e R3B juntos formam oxo e todas as outras variáveis são como definidas na Modalidade E1.
[091] Uma décima quinta modalidade da invenção (Modalidade E15) é um composto da Fórmula I, tendo ou consistindo na estrutura:
, , , ,
, , ,
, , , ,
, , ,
, , , , , ou , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[092] Outras modalidades da invenção incluem o seguinte: (a) Uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de um ingrediente biológico ativo, um composto da Fórmula I, como definido acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um carreador farmaceuticamente aceitável. (b) A composição farmacêutica de (a), compreendendo ainda uma quantidade eficaz de um segundo ingrediente biológico ativo ou um ingrediente farmacêutico ativo. (c) A composição farmacêutica de (a), em que o ABI é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. (d) A composição farmacêutica de (c), em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga especificamente a um antígeno selecionado do grupo consistindo em: PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, LAG3, BTLA, TIM3, HVEM, GITR, CD27, TIGIT, ILT2, ILT3, ILT4, ILT5, SIRPα, NKG2A, NKG2C, NKG2E, TSLP, IL10, VISTA, VEGF, EGFR, Her2/neu, receptores de VEGF, outros receptores de fator de crescimento, CD20, CD28, CD40, CD-40L, CD70, OX-40, 4-
1BB e ICOS. (e) A composição farmacêutica de (d), em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga especificamente a um antígeno selecionado do grupo consistindo em: PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, LAG3, GITR, CD27 e TIGIT. (f) A composição farmacêutica de (c), em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga especificamente a PD-1, PD-L1 ou PD-L2. (g) A composição farmacêutica de (f), em que o ABI é pembrolizumabe, nivolumabe, pidilizumabe, atezolizumabe, avelumabe ou durvalumabe. (h) A composição farmacêutica de (c), em que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo se liga especificamente a PD-1. (i) A composição farmacêutica de (a), em que o ABI é pembrolizumabe. (j) A composição farmacêutica de (f), (g) ou (h), compreendendo ainda um segundo ABI, em que o segundo ABI é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a um antígeno selecionado do grupo consistindo em: CTLA4, LAG3, GITR, CD27 e TIGIT. (k) Um método para tratar uma doença ou outra condição patológica que compreende administrar a um indivíduo em necessidade de tal tratamento uma composição compreendendo uma quantidade eficaz de um composto da Fórmula I, como definido acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ABI. (l) Um método para tratar uma condição cancerosa que compreende administrar a um indivíduo em necessidade de tal tratamento uma quantidade eficaz de um composto da Fórmula I, como definido acima ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ABI. (m) Um método para tratar uma doença ou outra condição patológica que compreende administrar a um indivíduo em necessidade de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de a composição farmacêutica de (a), (b), (c), (d), (e), (f), (g), (h), (i) ou (j). (n) Um método para tratar uma condição cancerosa que compreende administrar a um indivíduo em necessidade de tal tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de a composição farmacêutica de (d), (e), (f), (g), (h), (i) ou (j). (q) Um método de tratar uma condição cancerosa como apresentado em (l) ou (n) em que o câncer é selecionado do grupo consistindo em: melanoma, câncer pulmonar, câncer de cabeça e pescoço, câncer de bexiga, câncer de mama, câncer gastrointestinal, mieloma múltiplo, câncer hepatocelular, linfoma, câncer renal, mesotelioma, câncer ovariano, câncer esofágico, câncer anal, câncer do trato biliar, câncer colorretal, câncer cervical, câncer da tireoide, câncer salivar, câncer de próstata (por exemplo, adenocarcinoma da próstata refratário a hormônio), câncer pancreático, câncer de cólon, câncer esofágico, câncer de fígado, câncer da tireoide, glioblastoma, glioma e outras malignidades neoplásicas.
[093] A presente invenção também inclui um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para o uso em reduzir a viscosidade de uma formulação biológica (isto é, uma formulação compreendendo um ABI).
[094] A presente invenção inclui ainda uma formulação farmacêutica compreendendo um composto da Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um ABI selecionado de: (a) um anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (b) um anticorpo anti-PDL1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (c) um anticorpo anti-PDL2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (d) um anticorpo anti-Her2/Neu ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (e) um anticorpo anti-OX40 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (e) um anticorpo anti-4-1BB ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (f) um anticorpo anti-CTLA4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (g) um anticorpo anti-LAG3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (h) um anticorpo anti-GITR ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (i) um anticorpo anti-CD27 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo e (j) um anticorpo anti-TIGIT ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, (i) para o uso em, (ii) para o uso como um medicamento para ou (iii) para o uso na preparação (ou fabricação) de um medicamento para tratar câncer. Nestes usos, os compostos da presente invenção podem ser opcionalmente utilizados em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
[095] Nas modalidades dos compostos e sais da invenção, deve ser entendido que cada modalidade pode ser combinada com uma ou mais outras modalidades, na medida em que uma tal combinação fornece um composto ou sal estável e é compatível com a descrição das modalidades. Deve ser entendido ainda que as modalidades das composições e métodos fornecidos como (a) a (q) acima são entendidas como incluindo todas as modalidades dos compostos e/ou sais, incluindo tais modalidades como resultado de combinações das modalidades.
[096] As modalidades adicionais da invenção incluem as composições farmacêuticas, combinações e métodos apresentados acima e os usos apresentados no parágrafo precedente, em que o composto da presente invenção utilizado nesta é um composto de uma das modalidades, submodalidades, classes ou subclasses descritas acima. O composto pode ser opcionalmente usado na forma de um sal farmaceuticamente aceitável nestas modalidades.
[097] Modalidades adicionais da presente invenção incluem cada uma das composições farmacêuticas, combinações, métodos e usos apresentados nos parágrafos precedentes, em que o composto da presente invenção ou seu sal utilizado nesta é substancialmente puro. III. Composições da invenção
[098] A invenção fornece formulações biológicas estáveis (isto é, composições farmacêuticas) compreendendo um composto da invenção (isto é, um composto da Fórmula I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um ingrediente biológico ativo (ABI), em que o ABI é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou uma proteína ou peptídeo terapêuticos. Em modalidades adicionais, a invenção fornece formulações estáveis compreendendo um composto da invenção e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ingrediente farmacêutico ativo. Em modalidades específicas, o API é uma molécula pequena.
[099] A invenção fornece ainda composições farmacêuticas compreendendo um composto da invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga especificamente a um antígeno selecionado do grupo consistindo em: PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, LAG3, BTLA, TIM3, HVEM, GITR, CD27, TIGIT, ILT2, ILT3, ILT4, ILT5, SIRPα, NKG2A, NKG2C, NKG2E, TSLP, IL10, VISTA, VEGF, EGFR, Her2/neu, receptores de VEGF, outros receptores de fator de crescimento, CD20, CD28, CD40, CD-40L, CD70, OX-40, 4-1BB e ICOS.
[0100] Em modalidades da invenção, a quantidade de ABI é uma quantidade terapeuticamente aceitável.
[0101] Em modalidades específicas, a invenção se refere a uma composição farmacêutica compreendendo um composto da invenção (isto é, um composto da fórmula (I)) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um anticorpo anti-PD-1 humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, que se liga especificamente a PD-1 humano (por exemplo, um anticorpo anti-PD-1 humano ou humanizado) como o ingrediente biológico ativo (ABI de PD-1), bem como métodos para usar as formulações da invenção. Qualquer anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser usado nas composições e métodos da invenção. Em modalidades particulares, o ABI de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1, que é selecionado de pembrolizumabe (incluindo qualquer biossimilar de pembrolizumabe) e nivolumabe (incluindo qualquer biossimilar de nivolumabe). Em modalidades específicas, o anticorpo anti-PD-1 é pembrolizumabe. Em modalidades alternativas, o anticorpo anti-PD-1 é nivolumabe. A Tabela 2 fornece sequências de aminoácido para anticorpos anti- PD-1 humano exemplares pembrolizumabe e nivolumabe. Anticorpos de PD-1 alternativos e fragmentos de ligação ao antígenoque são úteis nas formulações e métodos da invenção são mostrados na Tabela 3.
[0102] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-PD-1 humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo para o uso nas composições farmacêuticas da invenção compreende três CDRs de cadeia leve de CDRL1, CDRL2 e CDRL3 e/ou três CDRs de cadeia pesada de CDRH1, CDRH2 e CDRH3.
[0103] Em uma modalidade da invenção, CDRL1 é a SEQ ID NO:1 ou uma variante da SEQ ID NO:1, CDRL2 é a SEQ ID NO:2 ou uma variante da SEQ ID NO:2 e CDRL3 é a SEQ ID NO:3 ou uma variante da SEQ ID NO:3.
[0104] Em uma modalidade, CDRH1 é a SEQ ID NO:6 ou uma variante da SEQ ID NO:6, CDRH2 é a SEQ ID NO:7 ou uma variante da SEQ ID NO:7 e CDRH3 é a SEQ ID NO:8 ou uma variante da SEQ ID NO:8.
[0105] Em uma modalidade, as três CDRs de cadeia leve são SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 e SEQ ID NO:3 e as três CDRs de cadeia pesada são SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 e SEQ ID NO:8.
[0106] Em uma modalidade alternativa da invenção, CDRL1 é a SEQ ID
NO:11 ou uma variante da SEQ ID NO:11, CDRL2 é a SEQ ID NO:12 ou uma variante da SEQ ID NO:12 e CDRL3 é a SEQ ID NO:13 ou uma variante da SEQ ID NO:13.
[0107] Em uma modalidade, CDRH1 é a SEQ ID NO:16 ou uma variante da SEQ ID NO:16, CDRH2 é a SEQ ID NO:17 ou uma variante da SEQ ID NO:17 e CDRH3 é a SEQ ID NO:18 ou uma variante da SEQ ID NO:18.
[0108] Em uma modalidade, as três CDRs de cadeia leve são SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 e SEQ ID NO:3 e as três CDRs de cadeia pesada são SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 e SEQ ID NO:8.
[0109] Em uma modalidade alternativa, as três CDRs de cadeia leve são SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12 e SEQ ID NO:13 e as três CDRs de cadeia pesada são SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17 e SEQ ID NO:18.
[0110] Em uma outra modalidade da invenção, CDRL1 é a SEQ ID NO:21 ou uma variante da SEQ ID NO:21, CDRL2 é a SEQ ID NO:22 ou uma variante da SEQ ID NO:22 e CDRL3 é a SEQ ID NO:23 ou uma variante da SEQ ID NO:23.
[0111] Ainda em uma outra modalidade, CDRH1 é a SEQ ID NO:24 ou uma variante da SEQ ID NO:24, CDRH2 é a SEQ ID NO:25 ou uma variante da SEQ ID NO:25 e CDRH3 é a SEQ ID NO:26 ou uma variante da SEQ ID NO:26.
[0112] Em uma outra modalidade, as três CDRs de cadeia leve são SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22 e SEQ ID NO:23 e as três CDRs de cadeia pesada são SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25 e SEQ ID NO:26.
[0113] Em certas modalidades, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um anticorpo anti-PD-1 humano ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, em que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve e uma região variável de cadeia pesada. Em algumas modalidades, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO:4 ou uma variante da SEQ ID NO:4 e a região variável de cadeia pesada compreende a SEQ ID NO:9 ou uma variante da SEQ ID NO:9. Em outras modalidades, a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO:14 ou uma variante da SEQ ID NO:14 e a região variável de cadeia pesada compreende a SEQ ID NO:19 ou uma variante da SEQ ID NO:19. Em outras modalidades, a região variável de cadeia pesada compreende a SEQ ID NO:27 ou uma variante da SEQ ID NO:27 e a região variável de cadeia leve compreende a SEQ ID NO:28 ou uma variante da SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29 ou uma variante da SEQ ID NO:29 ou SEQ ID NO:30 ou uma variante da SEQ ID NO:30. Em tais modalidades, uma sequência variante de região variável de cadeia leve ou cadeia pesada é idêntica à sequência de referência exceto tendo uma, duas, três, quatro ou cinco substituições de aminoácido. Em algumas modalidades, as substituições são na região de framework (isto é, fora das CDRs). Em algumas modalidades, uma, duas, três, quatro ou cinco das substituições de aminoácido são substituições conservativas.
[0114] Em uma modalidade das composições farmacêuticas da invenção, o anticorpo anti-PD-1 humano ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO:4 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO:9. Em uma outra modalidade, o anticorpo anti-PD-1 humano ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO:14 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO:19. Em uma modalidade das formulações da invenção, o anticorpo anti-PD-1 humano ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO:28 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO:27. Em uma outra modalidade, o anticorpo anti-PD-1 humano ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO:29 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO:27. Em uma outra modalidade, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO:30 e uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo na SEQ ID NO:27.
[0115] Em uma outra modalidade, as composições farmacêuticas da invenção compreendem um composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um anticorpo anti-PD-1 humano ou proteína de ligação ao antígeno que tem um domínio VL e/ou um domínio VH com pelo menos 95%, 90%, 85%, 80%, 75% ou 50% de homologia de sequência a um dos domínios VL ou domínios VH descritos acima e exibe ligação específica a PD-
1. Em uma outra modalidade, o anticorpo anti-PD-1 humano ou proteína de ligação ao antígeno das composições farmacêuticas da invenção compreende os domínios VL e VH tendo até 1, 2, 3, 4 ou 5 ou mais substituições de aminoácido e exibe ligação específica a PD-1.
[0116] Em qualquer uma das modalidades acima, o ABI de PD-1 pode ser um anticorpo anti-PD-1 de comprimento total ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente a PD-1 humano. Em certas modalidades, o ABI de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 de comprimento total selecionado de qualquer classe de imunoglobulinas, incluindo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE. Preferivelmente, o anticorpo é um anticorpo de IgG. Qualquer isótipo de IgG pode ser usado, incluindo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Diferentes domínios constantes podem ser fixados às regiões VL e VH fornecidas aqui. Por exemplo, se um uso intencionado particular de um anticorpo (ou fragmento) da presente invenção exigir funções efetoras alteradas, um domínio constante de cadeia pesada exceto IgG1 pode ser usado. Embora anticorpos de IgG1 proporcionem meia-vida longa e funções efetoras, tais como ativação do complemento e citotoxicidade celular dependente de anticorpo, tais atividades podem não ser desejáveis para todos os usos do anticorpo. Em tais exemplos, um domínio constante de IgG4, por exemplo, pode ser usado.
[0117] Em modalidades da invenção, o ABI de PD-1 é um anticorpo anti-PD- 1 compreendendo uma cadeia leve compreendendo ou consistindo em uma sequência de resíduos de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:5 e uma cadeia pesada compreendendo ou consistindo em uma sequência de resíduos de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:10. Em modalidades alternativas, o ABI de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma cadeia leve compreendendo ou consistindo em uma sequência de resíduos de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:15 e uma cadeia pesada compreendendo ou consistindo em uma sequência de resíduos de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:20. Em outras modalidades, o API de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma cadeia leve compreendendo ou consistindo em uma sequência de resíduos de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:32 e uma cadeia pesada compreendendo ou consistindo em uma sequência de resíduos de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:31. Em modalidades adicionais, o API de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma cadeia leve compreendendo ou consistindo em uma sequência de resíduos de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:33 e uma cadeia pesada compreendendo ou consistindo em uma sequência de resíduos de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:31. Ainda em modalidades adicionais, o API de PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma cadeia leve compreendendo ou consistindo em uma sequência de resíduos de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:34 e uma cadeia pesada compreendendo ou consistindo em uma sequência de resíduos de aminoácido como apresentado na SEQ ID NO:31. Em algumas coformulações da invenção, o API de PD-1 é pembrolizumabe ou um biossimilar de pembrolizumabe. Em algumas coformulações da invenção, o API de PD-1 é nivolumabe ou um biossimilar de nivolumabe.
[0118] Comumente, variantes de sequência de aminoácido dos anticorpos anti-PD-1 e fragmentos de ligação ao antígenodas composições farmacêuticas da invenção terão uma sequência de aminoácido tendo pelo menos 75% de identidade de sequência de aminoácido com a sequência de aminoácido de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno de referência (por exemplo, sequência de cadeia pesada, cadeia leve, VH, VL ou humanizada), mais preferivelmente pelo menos 80%, mais preferivelmente pelo menos 85%, mais preferivelmente pelo menos 90% e o mais preferivelmente pelo menos 95, 98 ou 99%. Identidade ou homologia com respeito a uma sequência é definida aqui como a porcentagem de resíduos de aminoácido na sequência candidata que são idênticos com os resíduos de anti-PD-1, depois de alinhar as sequências e introduzir intervalos, se necessário, para obter a porcentagem máxima de identidade de sequência e não considerar nenhuma substituição conservativa como parte da identidade de sequência. Nenhuma das extensões, supressões ou inserções de terminal N, terminal C ou internas na sequência de anticorpo deve ser interpretada como afetando a identidade ou homologia de sequência.
[0119] Identidade de sequência se refere ao grau ao qual os aminoácidos de dois polipeptídeos são os mesmos em posições equivalentes quando as duas sequências são idealmente alinhadas. A identidade de sequência pode ser determinada usando um algoritmo BLAST em que os parâmetros do algoritmo são selecionados para fornecer a maior correspondência entre as respectivas sequências sobre o comprimento inteiro das respectivas sequências de referência. As referências seguintes se referem a algoritmos BLAST frequentemente usados para análise de sequência: ALGORÍTMOS BLAST: Altschul, S.F., et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403 - 410; Gish, W., et al., (1993) Nature Genet. 3:266 - 272; Madden, T.L., et al., (1996) Meth. Enzymol. 266:131 - 141; Altschul, S.F., et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389 - 3402; Zhang, J., et al., (1997) Genome Res. 7:649 - 656; Wootton, J.C., et al., (1993) Comput. Chem. 17:149 - 163; Hancock, J.M. et al., (1994) Comput. Appl. Biosci. 10:67 - 70; SISTEMAS DE CLASSIFICAÇÃO DE ALINHAMENTO: Dayhoff, M.O., et al., “A model of evolutionary change in proteins.” em Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), páginas 345 - 352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Schwartz, R.M., et al., “Matrices for detecting distant relationships.” em Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl.
3.” M.O. Dayhoff (ed.), páginas 353 - 358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219:555 - 565; States, D.J., et al., (1991) Methods 3:66 - 70; Henikoff, S., et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 - 10919; Altschul, S.F., et al., (1993) J. Mol. Evol. 36:290 - 300; ESTASTÍTICA DE ALINHAMENTO: Karlin, S., et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264 - 2268; Karlin, S., et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873 - 5877; Dembo, A., et al., (1994) Ann. Prob. 22:2022 - 2039; e Altschul, S.F. “Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments.” em Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), (1997) páginas 1 - 14, Plenum, New York.
[0120] Do mesmo modo, qualquer classe de cadeia leve pode ser usada nas composições e métodos da presente invenção. Especificamente, kappa, lambda ou variantes destas são úteis nas presentes composições e métodos. Tabela 2. Sequências de anticorpo de PD-1 exemplares
Característica Sequência de aminoácido SEQ ID NO. do anticorpo Cadeia leve de Pembrolizumabe CDR1 RASKGVSTSGYSYLH 1 CDR2 LASYLES 2 CDR3 QHSRDLPLT 3
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQA Região variável PRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSR 4
DLPLTFGGGTKVEIK EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQA
PRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSR Cadeia leve DLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFY 5
PREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADY
EKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Cadeia pesada de Pembrolizumabe CDR1 NYYMY 6 CDR2 GINPSNGGTNFNEKFKN 7 CDR3 RDYRFDMGFDY 8
QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQG Região variável LEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDD 9
TAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSS QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQG LEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDD TAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGL
YSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCP Cadeia pesada 10
APEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFN WYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC KVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSR WQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Característica Sequência de aminoácido SEQ ID NO. do anticorpo Cadeia leve de Nivolumabe CDR1 RASQSVSSYLA 11 CDR2 DASNRAT 12 CDR3 QQSSNWPRT 13
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLI Região variável YDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWP 14
RTFGQGTKVEIK EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLI
YDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWP Cadeia leve RTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE 15
AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKH
KVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC Cadeia pesada de Nivolumabe CDR1 NSGMH 16 CDR2 VIWYDGSKRYYADSVKG 17 CDR3 NDDY 18
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKG Região variável LEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAED 19
TAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSS QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKG LEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAED TAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAA LGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTV
PSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGP Cadeia pesada 20
SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPS SIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVF SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
Tabela 3. Anticorpos PD-1 Adicionais e Fragmentos de Ligação ao Antígeno Úteis nas Composições da Invenção. A. Anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno compreendendo CDRs de cadeia leve e pesada de hPD-1.08A em WO2008/156712 CDRL1 SEQ ID NO:21 CDRL2 SEQ ID NO:22 CDRL3 SEQ ID NO:23 CDRH1 SEQ ID NO:24 CDRH2 SEQ ID NO:25 CDRH3 SEQ ID NO:26 B. Anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno compreendendo a região variável de cadeia pesada de h109A maduro e uma das regiões variáveis de cadeia leve de K09A maduro em WO 2008/156712 Cadeia pesada VR SEQ ID NO:27 Cadeia leve VR SEQ ID NO:28 ou SEQ ID NO:29 ou SEQ ID NO:30 C. Anticorpos e fragmentos de ligação ao antígeno compreendendo a cadeia pesada de 409 maduro e um das cadeias leves de K09A maduro em WO 2008/156712 Cadeia pesada SEQ ID NO:31 Cadeia leve SEQ ID NO:32 ou SEQ ID NO:33 ou SEQ ID NO:34
[0121] Em algumas modalidades das composições farmacêuticas da invenção, o ABI (por exemplo, o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) está presente a uma concentração de cerca de 10 mg/mL a cerca de 250 mg/mL. Em modalidades adicionais o ABI está presente a uma concentração de cerca de 25 mg/mL a cerca de 250 mg/mL, de cerca de 50 mg/mL a cerca de 250 mg/mL, de cerca de 75 mg/mL a cerca de 250 mg/mL, de cerca de 100 mg/mL a cerca de 250 mg/mL, de cerca de 10 mg/mL a cerca de 200 mg/mL, de cerca de 25 mg/mL a cerca de 200 mg/mL, de cerca de 50 mg/mL a cerca de 200 mg/mL, de cerca de 75 mg/mL a cerca de 200 mg/mL, de cerca de 100 mg/mL a cerca de 200 mg/mL, de cerca de 10 mg/mL a cerca de 150 mg/mL,
de cerca de 25 mg/mL a cerca de 150 mg/mL, de cerca de 50 mg/mL a cerca de 150 mg/mL, de cerca de 75 mg/mL a cerca de 150 mg/mL, de cerca de 100 mg/mL a cerca de 150 mg/mL, de cerca de 100 mg/mL a cerca de 250 mg/mL ou de cerca de 100 mg/mL a cerca de 200 mg/mL.
[0122] Em modalidades alternativas, o ABI está presente a uma concentração de cerca de 10 mg/mL, cerca de 20 mg/mL, cerca de 25 mg/mL, cerca de 30 mg/mL, cerca de 40 mg/mL, cerca de 50 mg/mL, cerca de 60 mg/mL, cerca de 70 mg/mL, cerca de 75 mg/mL, cerca de 80 mg/mL, cerca de 90 mg/mL, cerca de 100 mg/mL, cerca de 110 mg/mL, cerca de 120 mg/mL, cerca de 130 mg/mL, cerca de 140 mg/mL, cerca de 150 mg/mL, cerca de 160 mg/mL, cerca de 170 mg/mL, cerca de 180 mg/mL, cerca de 190 mg/mL, cerca de 200 mg/mL, cerca de 210 mg/mL, cerca de 220 mg/mL, cerca de 230 mg/mL, cerca de 240 mg/mL ou cerca de 250 mg/mL.
[0123] Como observado na presente invenção, os compostos da Fórmula I são úteis para reduzir a viscosidade de uma solução, desse modo permitindo que altas concentrações de ABI sejam utilizadas em uma formulação de solução (isto é, sem a necessidade de liofilização/reconstituição para obter uma alta concentração de ABI). Assim, em certas modalidades, a composição farmacêutica da invenção é uma solução aquosa. Em modalidades deste aspecto da invenção, a viscosidade da solução é <30 mPa.s (miliPascal.segundo ou cP (centipoise)), mPa-S, <29 mPa-S, <28 mPa-S, <27 mPa-S, <26 mPa-S, <25 mPa-S, <24 mPa-S, <23 mPa-S, <22 mPa-S, <21 mPa-S, <20 mPa-S, <19 mPa-S ou <18 mPa-S. Em outras modalidades, a viscosidade da solução é de cerca de 15 mPa- S a cerca de 30 mPa-S, de cerca de 17 mPa-S a cerca de 28 mPa-S, de cerca de 17 mPa-S a cerca de 27 mPa-S, de cerca de 17 mPa-S a cerca de 26 mPa-S, de cerca de 17 mPa-S a cerca de 25 mPa-S, de cerca de 18 mPa-S a cerca de 28 mPa-S, de cerca de 18 mPa-S a cerca de 27 mPa-S, de cerca de 18 mPa-S a cerca de 26 mPa-
S, de cerca de 18 mPa-S a cerca de 25 mPa-S, de cerca de 19 mPa-S a cerca de 28 mPa-S, de cerca de 19 mPa-S a cerca de 27 mPa-S, de cerca de 19 mPa-S a cerca de 26 mPa-S, de cerca de 19 mPa-S a cerca de 25 mPa-S, de cerca de 20 mPa-S a cerca de 28 mPa-S, de cerca de 20 mPa-S a cerca de 27 mPa-S, de cerca de 20 mPa-S a cerca de 26 mPa-S ou de cerca de 20 mPa-S a cerca de 25 mPa-S. A viscosidade pode ser medida usando qualquer viscosímetro conhecido na técnica, por exemplo, um mVROC (Viscometer/Rheometer-On-A-Chip, RheoSense, Inc. San Ramon, CA).
[0124] Como ditado pela necessidade da formulação particular a ser desenvolvida, um ou mais excipientes adicionais podem ser adicionados às composições farmacêuticas da invenção. Tais excipientes adicionais são seguros para o uso em composições farmacêuticas e não afetam prejudicialmente a estabilidade da formulação. Um exemplo de um excipiente adicional que pode ser adicionado às formulações da invenção inclui adjuvantes, que podem ser adicionados para aumentar a resposta imune do sistema imune do paciente ao ABI. Outros excipientes que podem ser adicionados às formulações incluem, mas não são limitados a: um tampão, um estabilizador, um solubilizador, um modificador de tonicidade, um agente quelante, um conservante, dextrano, sulfato de dextrano, dextrano T40, dietanolamina, guanidina, cloreto de cálcio, citrato de sódio, albumina, gelatina, polietilenoglicol (PEG), lipídeos e heparina. O técnico no assunto é facilmente capaz de determinar quais excipientes adicionais devem ser incluídos em uma formulação farmacêutica desejado, dependente de sua função na formulação, bem como o modo projetado de administração, dosagem e outros fatores tais como o tempo e a temperatura de armazenamento esperados da formulação. O técnico no assunto reconhece que a quantidade dos excipientes adicionais pode variar e pode determinar facilmente uma quantidade apropriada que seja tanto segura para administração a seres humanos ou animais quanto eficaz para a função desejada função. Tipicamente, um excipiente adicional pode estar presente a uma concentração de cerca de 10 a cerca de 500 mM. IV. Métodos de Uso
[0125] Em um aspecto, a invenção se refere a um método para reduzir a viscosidade de uma formulação farmacêutica compreendendo adicionar um composto da Fórmula I à formulação, em que a formulação é uma solução aquosa. Em modalidades da invenção, a formulação farmacêutica compreende um ABI. Em modalidades específicas, o ABI está presente a uma concentração de 50 mg/mL ou mais, 75 mg/mL ou mais, 100 mg/mL ou mais, 125 mg/mL ou mais, 150 mg/mL ou mais, 175 mg/mL ou mais ou 200 mg/mL ou mais.
[0126] Assim, a invenção fornece um método para reduzir a viscosidade de uma formulação farmacêutica compreendendo: (a) fornecer uma formulação farmacêutica compreendendo um ABI e um composto da Fórmula I, em que o ABI está presente a uma concentração de cerca de 50 mg/mL a cerca de 250 mg/mL, em que a formulação está em solução aquosa; e (b) adicionar um composto da Fórmula I à solução; em que a viscosidade da formulação farmacêutica a seguir da adição do composto é <30 mPa-S, <29 mPa-S, <28 mPa-S, <27 mPa-S, <26 mPa-S, <25 mPa- S, <24 mPa-S, <23 mPa-S, <22 mPa-S, <21 mPa-S, <20 mPa-S, <19 mPa-S ou <18 mPa-S.
[0127] A viscosidade de uma composição farmacêutica da invenção em solução é mais baixa do que uma composição farmacêutica compreendendo os mesmos excipientes e no mesmo pH, mas ausente em um composto da Fórmula I. Em certas modalidades da invenção, a viscosidade de uma composição farmacêutica da invenção em solução é mais baixa do que a mesma composição compreendendo arginina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, histidina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, fenilalanina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma, tirosina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma ou lisina ou um sal farmaceuticamente aceitável da mesma (isto é, sem um composto da Fórmula I).
[0128] A invenção também se refere a um método de tratar câncer em um indivíduo, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica compreendendo (1) um ABI (2) um composto da Fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e (3) um carreador farmaceuticamente aceitável, em que o ABI é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou uma proteína ou peptídeo terapêuticos, que trata câncer. Em modalidades específicas deste método, a composição é administrada ao indivíduo por intermédio de administração intravenosa. Em outras modalidades, a composição é administrada ao indivíduo por administração subcutânea.
[0129] Em qualquer um dos métodos da invenção, o câncer pode ser selecionado do grupo consistindo em: melanoma, câncer pulmonar, câncer de cabeça e pescoço, câncer de bexiga, câncer de mama, câncer gastrointestinal, mieloma múltiplo, câncer hepatocelular, linfoma, câncer renal, mesotelioma, câncer ovariano, câncer esofágico, câncer anal, câncer do trato biliar, câncer colorretal, câncer cervical, câncer da tireoide, câncer salivar, câncer de próstata (por exemplo, adenocarcinoma da próstata refratário a hormônio), câncer pancreático, câncer de cólon, câncer esofágico, câncer de fígado, câncer da tireoide, glioblastoma, glioma e outras malignidades neoplásicas.
[0130] Em algumas modalidades, o câncer pulmonar é câncer pulmonar de células não-pequenas.
[0131] Em modalidades alternadas, o câncer pulmonar é câncer pulmonar de células pequenas.
[0132] Em algumas modalidades, o linfoma é linfoma de Hodgkin.
[0133] Em outras modalidades, o linfoma é linfoma de não-Hodgkin. Em modalidades particulares, o linfoma é linfoma mediastinal de grandes células B.
[0134] Em algumas modalidades, o câncer de mama é câncer de mama triplo negativo.
[0135] Em outras modalidades, o câncer de mama é câncer de mama ER+/HER2-.
[0136] Em algumas modalidades, o câncer de bexiga é câncer urotelial.
[0137] Em algumas modalidades, o câncer de cabeça e pescoço é câncer de nasofaringe. Em algumas modalidades, o câncer é câncer da tireoide. Em outras modalidades, o câncer é câncer salivar. Em outras modalidades, o câncer é carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço.
[0138] Em algumas modalidades, o câncer é câncer colorretal metastático com altos níveis de instabilidade de microssatélites (MSI-H).
[0139] Em algumas modalidades, o câncer é selecionado do grupo consistindo em: melanoma, câncer pulmonar de células não-pequenas, linfoma de Hodgkin clássico reincidente ou refratário, linfoma mediastinal de grandes células B, carcinoma de células escamosas da cabeça e pescoço, câncer urotelial, câncer esofágico, gástrico câncer, câncer cervical e câncer hepatocelular.
[0140] Em outras modalidades dos métodos de tratamento acima, o câncer é uma malignidade de Heme. Em certas modalidades, a malignidade de Heme é leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), linfoma difuso de grandes células B (DLBCL), DLBCL positiva para EBV, linfoma mediastinal de grandes células B primário, linfoma de grandes células B rico em célula T/histiócito, linfoma folicular, linfoma de Hodgkin (HL), linfoma de células do manto (MCL), mieloma múltiplo (MM), proteína de leucemia-1 mieloide (Mcl-1), síndrome mielodisplásica (MDS), linfoma de não-Hodgkin (NHL) ou linfoma linfocítico pequeno (SLL).
[0141] Malignidades que demonstram sobrevivência livre de doença e global melhorada em relação à presença de linfócitos infiltrantes de tumor em biópsia ou material cirúrgico, por exemplo, melanoma, câncer colorretal, hepático, renal, estomacal/esofágico, de mama, pâncreas e ovariano são abrangidas nos métodos e tratamentos descritos na presente invenção. Tais subtipos de câncer são conhecidos como sendo suscetíveis ao controle imune por linfócitos T. Adicionalmente, incluídas são malignidades refratárias ou recorrentes cujo crescimento pode ser inibido usando os anticorpos descritos na presente invenção.
[0142] Em algumas modalidades, as composições da invenção são administradas a um indivíduo tendo um câncer caracterizado por expressão elevada de PD-L1 e/ou PD-L2 em amostras de tecido testadas, incluindo: canceres de ovário, renal, colorretal, pancreático, de mama, hepático, gástrico, esofágico e melanoma. Canceres adicionais que podem se beneficiar de tratamento com as composições da invenção incluem aqueles associados com infecção persistente com vírus tais como vírus da imunodeficiência humana, vírus da hepatite da classe A, B e C, vírus Epstein Barr, papilomavírus humanos que são conhecidos como sendo casualmente relacionados a, por exemplo, sarcoma de Kaposi, câncer de fígado, câncer de nasofaringe, linfoma, canceres cervical, vulvar, anal, peniano e oral.
[0143] Aspectos adicionais incluem métodos de usar uma composição farmacêutica da invenção para tratar um paciente tendo, suspeito de ter ou em risco de ter uma infecção ou doença infecciosa. Em modalidades específicas deste aspecto da invenção, o ABI da composição farmacêutica é um anticorpo anti-PD-1 antagonista ou fragmento de ligação ao antígeno. Assim, a invenção fornece um método para tratar infecção crônica em um indivíduo mamífero compreendendo administrar uma quantidade eficaz de uma composição da invenção ao indivíduo. Em algumas modalidades específicas deste método, a composição é administrada ao indivíduo por intermédio de administração intravenosa. Em outras modalidades, a composição é administrada ao indivíduo por administração subcutânea.
[0144] Neste aspecto, as composições da invenção podem ser usadas sozinhas ou em combinação com vacinas, para estimular a resposta imune a patógenos, toxinas e auto-antígenos. As composições da invenção podem ser usadas para estimular a resposta imune a vírus infecciosos aos seres humanos, incluindo, mas não limitados a: vírus da imunodeficiência humana, vírus da hepatite da classe A, B e C, vírus Epstein Barr, citomegalovírus humano, papilomavírus humanos e vírus do herpes. As composições da invenção que compreendem anticorpos anti-PD-1 antagonistas ou fragmentos de anticorpo podem ser usadas para estimular a resposta imune à infecção com parasitas bacterianos ou fúngicos e outros patógenos. Infecções virais com hepatite B e C e HIV estão entre aquelas consideradas como sendo infecções virais crônicas.
[0145] As composições da invenção podem ser administradas a um paciente em combinação com um ou mais “agentes terapêuticos adicionais”. O agente terapêutico adicional pode ser um agente bioterapêutico (incluindo, mas não limitado a anticorpos para VEGF, EGFR, Her2/neu, receptores de VEGF, outros receptores de fator de crescimento, CD20, CD40, CD-40L, OX-40, 4-1BB e ICOS), um agente inibitório de crescimento, um agente imunogênico (por exemplo, células cancerosas atenuadas, antígenos tumorais, células apresentadoras de antígeno tais como células dendríticas pulsadas com antígeno ou ácidos nucleicos derivados de tumor, citocinas imunoestimulantes (por exemplo, IL-2, IFNα2, GM-CSF) e células transfectadas com genes que codificam citocinas imunoestimulantes tais como, mas não limitadas a GM-CSF).
[0146] Como observado acima, em algumas modalidades dos métodos da invenção, o método compreende ainda administrar um agente terapêutico adicional. Em modalidades particulares, o agente terapêutico adicional é um anticorpo anti-LAG3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo anti-GITR ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo anti-TIGIT ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo anti-CD27 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo de ILT2 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo de ILT3 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo de ILT4 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, um anticorpo de ILT5 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou um anticorpo de IL-10 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo. Em uma modalidade, o agente terapêutico adicional é um vetor viral da doença de Newcastle que expressa IL-
12. Em uma outra modalidade, o agente terapêutico adicional é dinaciclibe. Ainda em outras modalidades, o agente terapêutico adicional é um agonista de STING. Em uma outra modalidade, o agente terapêutico adicional é dinaciclibe. Ainda em outras modalidades, o agente terapêutico adicional é um inibidor de PARP. Em uma outra modalidade, o agente terapêutico adicional é dinaciclibe. Em modalidades adicionais, o agente terapêutico adicional é um inibidor de MEK. Em modalidades adicionais, o agente terapêutico adicional é um antagonista de CXCR2. Em modalidades adicionais, o agente terapêutico adicional é navarixina. Em modalidades adicionais, o agente terapêutico adicional é olarparibe. Em modalidades adicionais, o agente terapêutico adicional é selumetinibe.
[0147] Vias de administração adequadas podem, por exemplo, incluir liberação parenteral, incluindo intramuscular, subcutânea, bem como intratecal, intraventricular direta, intravenosa, intraperitoneal. Fármacos podem ser administrados em uma variedade de vias convencionais, tais como injeção intraperitoneal, parenteral, intra-arterial ou intravenosa.
[0148] A seleção de uma dosagem do agente terapêutico adicional depende de vários fatores, incluindo a taxa de regeneração séria ou tecidual da entidade, do nível dos sintomas, da imunogenicidade da entidade e da acessibilidade das células, tecido ou órgão alvos no indivíduo a ser tratado. A dosagem do agente terapêutico adicional deve ser uma quantidade que fornece um nível aceitável de efeitos colaterais. Consequentemente, a quantidade de dose e frequência de dosagem de cada agente terapêutico adicional (por exemplo, agente bioterapêutico ou quimioterapêutico) dependerá em parte do agente terapêutico particular, da severidade do câncer a ser tratado e das características do paciente. A orientação em selecionar doses apropriadas de anticorpos, citocinas e moléculas pequenas está disponível. Ver, para exemplo, Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601 - 608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341:1966 - 1973; Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med. 344:783 - 792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342:613 - 619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24 - 32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343:1594 - 1602; Physicians’ Desk Reference 2003 (Physicians’ Desk Reference, 57a Ed); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57a edição (Novembro de 2002). A determinação do regime de dosagem apropriado pode ser feita pelo clínico, por exemplo, usando parâmetros ou fatores conhecidos ou suspeitos na técnica que afetem o tratamento ou prognosticados para afetar o tratamento e dependerá, por exemplo, do histórico clínico do paciente (por exemplo, terapia prévia), do tipo e estágio do câncer a ser tratado e biomarcadores de resposta a um ou mais dos agentes terapêuticos na terapia de combinação.
[0149] Várias referências da literatura estão disponíveis para facilitar a seleção de carreadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis para o agente terapêutico adicional. Ver, para exemplo, Remington’s Pharmaceutical Sciences e U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984); Hardman et al. (2001) Goodman and Gilman’s The Farmacológico Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams and Wilkins, New York, NY; Avis et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner e Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY.
[0150] Em algumas modalidades, uma composição da invenção é administrada por infusão contínua ou por doses em intervalos de, por exemplo, um dia, 1 a 7 vezes por semana, uma semana, duas semanas, três semanas, mensalmente, bimensalmente, etc. Um protocolo de dose preferido é um envolvendo a dose ou frequência de dose máxima que evite efeitos colaterais indesejáveis significativos. Uma dose semanal total é geralmente pelo menos 0,05 μg/kg, 0,2 μg/kg, 0,5 μg/kg, 1 μg/kg, 10 μg/kg, 100 μg/kg, 0,2 mg/kg, 1,0 mg/kg, 2,0 mg/kg, 10 mg/kg, 25 mg/kg, 50 mg/kg de peso corpóreo ou mais. Ver, para exemplo, Yang et al. (2003) New Engl. J. Med. 349:427 - 434; Herold et al. (2002) New Engl. J. Med. 346:1692 - 1698; Liu et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg.
Psych. 67:451 - 456; Portielji et al. (20003) Cancer Immunol. Immunother. 52:133 - 144. A dose desejada de um produto terapêutico de molécula pequena, por exemplo, um mimético de peptídeo, produto natural ou produto químico orgânico, é cerca da mesma como para um anticorpo ou polipeptídeo, em uma base em mol/kg.
[0151] Em certas modalidades, dosar compreenderá administrar a um indivíduo doses progressivas de 1,0, 3,0 e 10 mg/kg da formulação farmacêutica, isto é, uma formulação compreendendo um ABI e um composto da Fórmula I, durante o curso do tratamento. A formulação pode ser uma formulação líquida reconstituída ou ela pode ser uma formulação líquida não previamente liofilizada. Cursos de tempo podem variar e podem continuar contanto que efeitos desejados sejam obtidos. Em certas modalidades, a progressão da dose continuará até uma dose de cerca de 10 mg/kg. Em certas modalidades, o indivíduo terá uma diagnose histológica ou citológica de melanoma ou outra forma de tumor sólido e, em certos exemplos, um indivíduo pode ter doença não mensurável. Em certas modalidades, o indivíduo terá sido tratado com outros produtos quimioterapêuticos, enquanto em outras modalidades, o indivíduo será ingênuo ao tratamento.
[0152] Ainda em modalidades adicionais, o regime de dosagem compreenderá administrar uma dose de 1, 3 ou 10 mg/kg de qualquer uma das formulações farmacêuticas descritas na presente invenção (isto é, uma formulação compreendendo um ABI e um composto da Fórmula I), por todo o curso do tratamento. Para um tal regime de dosagem constante, o intervalo entre as doses será cerca de 14 dias (± 2 dias). Em certas modalidades, o intervalo entre as doses será cerca de 21 dias (± 2 dias).
[0153] Em certas modalidades, o regime de dosagem compreenderá administrar uma dose de cerca de 0,005 mg/kg a cerca de 10 mg/kg, com progressão da dose intra-paciente. Em certas modalidades, uma dose de 5 mg/kg ou 10 mg/kg será administrada em intervalos de a cada 3 semanas ou a cada 2 semanas. Ainda em modalidades adicionais, uma dose de 3 mg/kg será administrada em intervalos de três semanas para pacientes com melanoma ou pacientes com outros tumores sólidos. Nestas modalidades, os pacientes devem ter doença não resecável; entretanto, os pacientes podem ter tido cirurgia prévia.
[0154] Em certas modalidades, um indivíduo será administrado com uma infusão IV de 30 minutos de qualquer uma das formulações farmacêuticas descritas aqui. Em certas modalidades para a dose progressiva, o intervalo de dosagem será cerca de 28 dias ((± 1 dia) entre a primeira e segunda doses. Em certas modalidades, o intervalo entre a segunda e terceira doses será cerca de 14 dias (± 2 dias). Em certas modalidades, o intervalo de dosagem será cerca de 14 dias (± 2 dias), para doses subsequentes à segunda dose.
[0155] A administração subcutânea pode ser realizada por injeção usando uma seringa ou usando outros dispositivos de injeção (por exemplo, o dispositivo Inject-ease®); canetas injetoras; ou dispositivos sem agulha (por exemplo, MediJector e BioJector®).
[0156] As modalidades da invenção também incluem uma ou mais das formulações biológicas descritas aqui (i) para o uso em, (ii) para o uso como um medicamento ou composição para ou (iii) para o uso na preparação de um medicamento para: (a) terapia (por exemplo, do corpo humano); (b) medicina; (c) indução de ou aumento de uma resposta imune antitumoral (d) diminuição do número de um ou mais marcadores tumorais em um paciente; (e) parada ou retardo do crescimento de um tumor ou um câncer sanguíneo; (f) parada ou retardo da progressão de doença relacionada a PD-1; (g) parada ou retardo da progressão do câncer; (h) estabilização da doença relacionada a PD-1; (i) inibição do crescimento ou sobrevivência de células tumorais; (j) eliminação ou redução do tamanho de uma ou mais lesões cancerosas ou tumores; (k) redução da progressão, início ou severidade da doença relacionada a PD-1; (l) redução da severidade ou duração dos sintomas clínicos da doença relacionada a PD-1 tal como câncer (m) prolongamento da sobrevivência de um paciente em relação à sobrevivência esperada em um paciente não tratado similar n) indução de remissão completa ou parcial de uma condição cancerosa ou outra doença relacionada a PD-1, (o) tratamento de câncer ou (p) tratamento de infecção ou doença infecciosa.
[0157] Todas as publicações mencionadas aqui são incorporadas a título de referência para o propósito de descrever e divulgar as metodologias e materiais que poderiam ser usados em relação à presente invenção.
[0158] Tendo descrito as diferentes modalidades da invenção aqui com referência aos desenhos anexos, deve ser entendido que a invenção não é limitada àquelas modalidades precisas e que várias mudanças e modificações podem ser efetuadas nesta por um técnico no assunto sem divergir do escopo ou espírito da invenção como definido nas reivindicações anexas. EXEMPLO 1 Preparação do Composto 1 (C1): Ácido (S)-12-((1H-imidazol-4-il)metil)-10- oxo-2,5,8-trioxa-11-azatridecan-13-oico Água Etapa 1 Etapa 2
[0159] Etapa 1. Preparação de 12-((1H-imidazol-4-il)metil)-10-oxo-2,5,8- trioxa-11-azatridecan-13-oato de (S)-metila:
[0160] A uma solução de 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)- metila (1-1) (5 g, 29,6 mmol) em diclorometano (25 ml) e trietilamina (8,97, 89 mmol), foi adicionado cloreto de 2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)acetila (1-2) (5,81 g, 29,6 mmol) (recentemente preparado a partir de ácido) em diclorometano (25 ml) às gotas a 0 °C. A mistura de reação foi agitada por 3 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado foi adicionado à mistura de reação, que depois foi concentrada para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 10% em diclorometano para produzir 12-((1H-imidazol-4-il)metil)-10-oxo-2,5,8-trioxa-11-azatridecan-13- oato de (S)-metila (1-3) como um líquido. LC-MS ESI/APCI calculado para C14H23N3O6 [M + 1]+ 330,35, encontrado 330,2. RMN de 1H 400 MHz, DMSO-d6: δ 8,15 (d, J = 10,40 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 4,58 (t, J = 9,20 Hz, 1H), 3,92 (s, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,58 (s, 3H), 3,50 - 3,52 (m, 8H), 2,97 (d, J = 9,20 Hz, 2H).
[0161] Etapa 2. Preparação de ácido (S)-12-((1H-imidazol-4-il)metil)-10- oxo-2,5,8-trioxa-11-azatridecan-13-oico:
[0162] A uma solução agitada de 12-((1H-imidazol-4-il)metil)-10-oxo-2,5,8- trioxa-11-azatridecan-13-oato de (S)-metila (1-3) (4,7 g, 14,2 mmol) em MeOH (50,0 mL) e água (10,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (0,85 g, 21,3 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. HCl a 1,5 N foi adicionado à mistura de reação e a mesma foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 5% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para produzir ácido (S)-12-((1H-imidazol-4-il)metil)-10-oxo-2,5,8-trioxa-11-
azatridecan-13-oico (C1) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C13H21N3O6 [M + H]+ 316,33, encontrado 316,4. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 8,22 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 4,41 (t, J = 4,80 Hz, 1H), 3,94 (s, 2H), 3,52 - 3,54 (m, 8H), 3,26 (s, 3H), 3,16 (q, J = 4,80 Hz, 1H), 2,98 (q, J = 8,40 Hz, 1H). EXEMPLO 2 Preparação do Composto 2 (C2): Ácido (S)-12-(3-guanidinopropil)-10-oxo- 2,5,8-trioxa-11-azatridecan-13-oico Água Etapa 1 Etapa 2
[0163] Etapa 1. Preparação de 12-(3-guanidinopropil)-10-oxo-2,5,8-trioxa- 11-azatridecan-13-oato de (S)-etila:
[0164] A uma solução de 2-amino-5-guanidinopentanoato de (S)-etila (2-1) (5 g, 24,72 mmol) em diclorometano (25 ml) e trietilamina (10,34 ml, 74,2 mmol), foi adicionado cloreto de 2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)acetila (2-2) (4,86 g, 24,72 mmol) (recentemente preparado a partir de ácido) em diclorometano (25 ml) às gotas a 0 °C. A mistura de reação foi agitada por 3 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação, que foi concentrada para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 10% em diclorometano para fornecer 12-(3-guanidinopropil)-10-oxo-2,5,8-trioxa-11-azatridecan-13-oato de (S)-etila (2-3) como um líquido. LC-MS ESI/APCI calculado para C15H30N4O6 [M + 1]+ 363,42, encontrado 363,2. RMN de 1H 400 MHz, DMSO-d6: δ 8,01 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 4,26 (t, J = 8,00 Hz, 1H), 4,14 (q, J = 1,20 Hz, 2H), 4,09 - 4,10 (m, 2H), 3,95
(s, 2H), 3,53 - 3,54 (m, 8H), 3,43 (s, 3H), 1,87 - 1,84 (m, 2H), 1,46 - 1,48 (m, 2H), 1,19 (t, J = 9,60 Hz, 3H).
[0165] Etapa 2. Preparação de ácido (S)-12-(3-guanidinopropil)-10-oxo- 2,5,8-trioxa-11-azatridecan-13-oico:
[0166] A uma solução agitada de 12-(3-guanidinopropil)-10-oxo-2,5,8- trioxa-11-azatridecan-13-oato de (S)-etila (2-3) (4 g, 11,04 mmol) em metanol (50 ml) e água (10 ml) foi adicionado hidróxido de sódio (0,662 g, 16,56 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. A mistura de reação foi neutralizada com HCl a 1,5 N e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 5% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa, eluindo com água para fornecer ácido (S)-12-(3-guanidinopropil)-10-oxo-2,5,8-trioxa-11- azatridecan-13-oico (C2) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C13H26N4O6 [M + H]+ 335,19, encontrado 335,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 4,14 - 4,16 (m, 1H), 4,01 (s, 2H), 3,60 - 3,61 (m, 6H), 3,53 - 3,53 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 3,11 (t, J = 6,36 Hz, 2H), 1,79 - 1,81 (m, 1H), 1,66 - 1,68 (m, 1H), 1,51 - 1,52 (m, 2H). EXEMPLO 3 Preparação do Composto 3 (C3): Ácido (S)-5-guanidino-2-(2-(2- metoxietóxi)-N-(2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)pentanoico
Oxidação Etapa 1 de Swern Etapa 2 Etapa 3 Etapa 4 Água
[0167] Os vários materiais de partida e reagentes usados nos esquemas estão comercialmente disponíveis ou são facilmente fabricados pelos técnicos no assunto. O Composto 3-2 foi sintetizado seguindo o protocolo da literatura divulgado em Seifert et al. J. Med. Chem. 2014, 57, 9870 - 9888.
[0168] Etapa 2. Preparação de 5-guanidino-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)pentanoato de (S)-etila:
[0169] A uma solução de 2-amino-5-guanidinopentanoato de (S)-etila (3-3) (30,0 g, 148 mmol) em MeOH (300,0 mL) foi adicionado 2-(2-metoxietóxi) acetaldeído (3-2) (26,2 g, 222 mmol) e ácido acético (1,69 ml, 29,6 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio (13,8 g, 222 mmol) foi adicionado às porções. A mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e concentrado para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel, eluindo com metanol a 7% para fornecer 5-guanidino-2-((2-(2-metoxietóxi)etil)amino)pentanoato de (S)-etila (3- 4). LC-MS ESI/APCI calculado para C13H28N4O4 [M + H]+ 305,3, encontrado 305,2.
[0170] Etapa 3. Preparação de 5-guanidino-2-(2-(2-metoxietóxi)-N-(2-(2- metoxietóxi)etil)acetamido)pentanoato de (S)-etila:
[0171] HATU (25,5 g, 67,1 mmol), trietilamina (12,47 ml, 89 mmol), 5- guanidino-2-((2-(2-metoxietóxi)etil)amino)pentanoato de (S)-etila (3-4) (17,70 g, 58,2 mmol) em DMF (100 ml) foram adicionados a uma solução de ácido 2-(2- metoxietóxi)acético (3-5) (6 g, 44,7 mmol) em DMF (30 ml). A mistura de reação foi agitada por 5 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e o produto foi extraído com diclorometano (5 X 100 mL). The camada orgânica combinada foi lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 10% em diclorometano para fornecer 5-guanidino-2-(2-(2-metoxietóxi)-N-(2-(2- metoxietóxi)etil)acetamido)pentanoato de (S)-etila (3-6) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C18H36N4O7 [M + H]+ 421,5, encontrado 421,2.
[0172] Etapa 4. Preparação de ácido (S)-5-guanidino-2-(2-(2-metoxietóxi)- N-(2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)pentanoico:
[0173] A uma solução agitada de 5-guanidino-2-(2-(2-metoxietóxi)-N-(2-(2- metoxietóxi)etil)acetamido)pentanoato de (S)-etila (3-6) (4 g, 9,07 mmol) em MeOH (40,0 mL) e água (8,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (0,571 g, 14,27 mmol) e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. A mistura de reação foi neutralizada com HCl a 1,5 N e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 10% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para produzir ácido (S)-5-guanidino-2-(2-(2-metoxietóxi)-N-(2-(2- metoxietóxi)etil)acetamido)pentanoico (C3) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C16H32N4O7 [M + H]+ 393,44, encontrado 393,4. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 4,33 - 4,31 (m, 1H), 4,24 (s, 2H), 3,58 - 3,62 (m, 12H), 3,23 (s, 3H), 3,28 (s, 3H), 3,09 - 3,11 (m, 2H), 1,89 - 1,92 (m, 1H), 1,64 - 1,67 (m, 1H), 1,47 - 1,48 (m, 2H). EXEMPLO 4 Preparação do Composto 4 (C4): Ácido (S)-3-(1H-imidazol-4-il)-2-(2-(2- metoxietóxi)-N-(2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)propanoico Etapa 1 Etapa 2 Etapa 3 Água
[0174] Etapa 1. Preparação de 3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)propanoato de (S)-metila:
[0175] A uma solução 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)- metila (4-1) (15 g, 89 mmol) em metanol (150 ml) foi adicionado 2-(2- metoxietóxi)acetaldeído (4-2) (15,6 g, 133 mmol) e ácido acético (1,01 ml, 17,8 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio
(8,36 g, 133 mmol) foi adicionado às porções. A mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e concentrado para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% para fornecer 3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2-metoxietóxi)etil)amino)propanoato de (S)- metila (4-3). LC-MS ESI/APCI calculado para C12H21N3O4 [M + H]+ 272,3, encontrado 272,2.
[0176] Etapa 2. Preparação de 3-(1H-imidazol-4-il)-2-(2-(2-metoxietóxi)-N- (2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)propanoato de (S)-metila:
[0177] A uma solução de ácido 2-(2-metoxietóxi)acético (4-4) (4,2g, 31,3 mmol) em diclorometano (40 ml), HATU (17,86 g, 47,0 mmol), trietilamina (8,80 ml, 62,6 mmol) e 3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)propanoato de (S)-metila (4-3) (8,5 g, 31,3 mmol) em diclorometano (60 mL) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada por 5 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e produto foi extraído com diclorometano (5 X 100 mL). Depois, a camada orgânica combinada foi lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com 5% de metanol em diclorometano para fornecer 3-(1H-imidazol-4-il)-2-(2-(2-metoxietóxi)-N-(2-(2- metoxietóxi)etil)acetamido)propanoato de (S)-metila (4-4) como um sólido. LC- MS ESI/APCI calculado para C17H29N3O7 [M + H]+ 388,42, encontrado 388,2.
[0178] Etapa 4. Preparação de ácido (S)-3-(1H-imidazol-4-il)-2-(2-(2- metoxietóxi)-N-(2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)propanoico:
[0179] A uma solução agitada de 3-(1H-imidazol-4-il)-2-(2-(2-metoxietóxi)-
N-(2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)propanoato de (S)-metila (4-5) (7,1 g, 15,21 mmol) em MeOH (70,0 mL) e água (15,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (1,08 g, 27,1 mmol) e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. A mistura de reação foi neutralizada com HCl a 1,5 N e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 10% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para produzir ácido (S)-3-(1H-imidazol-4-il)-2-(2-(2-metoxietóxi)-N-(2-(2- metoxietóxi)etil)acetamido)propanoico (C4) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C16H27N3O7 [M + H]+ 374,44, encontrado 374,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 8,49 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 4,35 - 4,36 (m, 1H), 4,27 (s, 2H), 3,48 - 3,50 (m, 12H), 3,29 - 3,27 (m, 2H), 3,29 (s, 3H), 3,25 (s, 3H). EXEMPLO 5 Preparação do Composto 5 (C5): Ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-5-guanidinopentanoico Oxidação Etapa 1 de Swern Água Etapa 2 Etapa 3
[0180] Etapa 2. Preparação de 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-5- guanidinopentanoato de (S)-etila:
[0181] A uma solução 2-amino-5-guanidinopentanoato de (S)-etila (5-3) (10,0 g, 49,5 mmol) em MeOH (100,0 mL), foi adicionado 2-(2- metoxietóxi)acetaldeído (5-2) (23,3 g, 198 mmol) e ácido acético (0,565 ml, 9,9 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio (4,66 g, 74,2 mmol) foi adicionado às porções e a mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e produto foi extraído com diclorometano (5 X 100 mL). Depois, a camada orgânica combinada foi lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 10% em diclorometano para produzir 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-5- guanidinopentanoato de (S)-etila (5-4). LC-MS ESI/APCI calculado para C18H38N4O6 [M + 1]+ 406,28, encontrado 407,4. RMN de 1H (400 MHz, DMSO): δ 7,42 (bs, 1H), 7,25 (bs, 1H), 6,85 (bs, 2H), 4,12 - 4,05 (m, 2H), 3,49 - 3,47 (m, 4H), 3,43 - 3,40 (m, 8H), 3,38 - 3,36 (m, 1H), 3,24 (s, 6H), 3,11 - 3,09 (m, 2H), 2,80 - 2,66 (m, 4H), 1,63 - 1,60 (m, 2H), 1,50 - 1,43 (m, 2H), 1,20 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
[0182] Etapa 3. Preparação de ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-5-guanidinopentanoico:
[0183] A uma solução agitada de 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-5- guanidinopentanoato de (S)-etila (5-4) (5,4 g, 13,3 mmol) em MeOH (60,0 mL) e água (10,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (0,797 g, 19,9 mmol) e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 h. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. HCl a 1,5 N foi adicionado à mistura de reação e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 10% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para produzir ácido (S)-2-(bis(2-
(2-metoxietóxi)etil)amino)-5-guanidinopentanoico (C5) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C16H34N4O6 [M + H]+ 379,4, encontrado 379,0. RMN de 1 H (400 MHz, D2O): δ 3,86 - 3,66 (m, 4H), 3,86 - 3,76 (m, 1H), 3,62 - 3,60 (m, 4H), 3,57 - 3,55 (m, 4H), 3,47 - 3,39 (m, 4H), 3,29 (s, 6H), 3,17 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,86 - 1,80 (m, 2H), 1,74 - 1,62 (m, 2H). EXEMPLO 6 Preparação do Composto 6 (C6): Ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H-imidazol-4-il)propanoico Oxidação Etapa 1 de Swern Água Etapa 2 Etapa 3
[0184] Etapa 2. Preparação de 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H- imidazol-4-il)propanoato de (S)-metila:
[0185] A uma solução 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)- metila (6-3) (10 g, 59,1 mmol) em MeOH (100,0 mL), foi adicionado 2-(2- metoxietóxi)acetaldeído (6-2) (27,9 g, 236 mmol) e ácido acético (0,67 ml, 11,82 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio (5,57 g, 89 mmol) foi adicionado às porções. A mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e o produto foi extraído com diclorometano (5 X 100 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% em diclorometano para produzir 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H- imidazol-4-il)propanoato de (S)-metila (6-4) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C17H31N3O6 [M + 1]+ 374,44, encontrado 374,2 .
[0186] Etapa 3. Preparação de ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H-imidazol-4-il)propanoico:
[0187] A uma solução agitada de 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H- imidazol-4-il)propanoato de (S)-metila (6-4) (6,5 g, 17,30 mmol) em MeOH (65,0 mL) e água (12,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (1,03 g, 25,95 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. A mistura de reação foi neutralizada com HCl a 1,5 N e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 10% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para produzir ácido (S)-2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H-imidazol-4-il)propanoico (C6) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C16H29N3O6 [M + H]+ 360,41, encontrado 360,2. RMN de 1H (400 MHz, D2O): 400 MHz, D2O: δ 8,22 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 3,90 (t, J = 7,20 Hz, 1H), 3,60 - 3,62 (m, 4H), 3,55 - 3,56 (m, 4H), 3,50 - 3,50 (m, 4H), 3,28 (s, 6H), 3,19 - 3,19 (m, 4H), 3,06 - 3,07 (m, 2H). EXEMPLO 7 Preparação do Composto 7 (C7): Cloridrato do ácido (S)-3-(1H-imidazol-4- il)-2-(2-(2-metoxietóxi)-N-(2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)propanoico
Etapa 1 Oxidação de Swern Etapa 2 Etapa 3 Etapa 4 Água
[0188] Etapa 2. Preparação de 3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)propanoato de (S)-metila:
[0189] A uma solução 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)- metila (7-3) (15 g, 89 mmol) em metanol (150 ml) foi adicionado 2-(2- metoxietóxi)acetaldeído (7-2) (15,6 g, 133 mmol) e ácido acético (1,01 ml, 17,8 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio (8,36 g, 133 mmol) foi adicionado às porções. A mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e concentrado para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% em para fornecer 3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2-metoxietóxi)etil)amino)propanoato de (S)- metila (7-4). LC-MS ESI/APCI calculado para C12H21N3O4 [M + H]+ 272,3, encontrado 272,2.
[0190] Etapa 3. Preparação de 3-(1H-imidazol-4-il)-2-(2-(2-metoxietóxi)-N-
(2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)propanoato de (S)-metila:
[0191] A uma solução de ácido 2-(2-metoxietóxi)acético (7-5) (4,2g, 31,3 mmol) em diclorometano (40 ml), HATU (17,86 g, 47,0 mmol), trietilamina (8,80 ml, 62,6 mmol) e 3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)propanoato de (S)-metila (7-4) (8,5 g, 31,3 mmol) em diclorometano(60 ml) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada por 5 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e o produto foi extraído com diclorometano (5 X 100 mL). Depois, a camada orgânica combinada foi lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com 5% de metanol em diclorometano para fornecer 3-(1H-imidazol-4-il)-2-(2-(2-metoxietóxi)-N-(2-(2- metoxietóxi)etil)acetamido)propanoato de (S)-metila (7-6) como um sólido. LC- MS ESI/APCI calculado para C17H29N3O7 [M + H]+ 388,42, encontrado 388,2.
[0192] Etapa 4. Preparação de cloridrato do ácido (S)-3-(1H-imidazol-4-il)- 2-(2-(2-metoxietóxi)-N-(2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)propanoico:
[0193] A uma solução agitada de 3-(1H-imidazol-4-il)-2-(2-(2-metoxietóxi)- N-(2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)propanoato de (S)-metila (7-6) (7,1 g, 18,34 mmol) em MeOH (70,0 mL) e água (15,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (1,1 g, 27,5 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. A mistura de reação foi acidificada com HCl a 1,5 N ao pH 2 a 3 e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com HCl a 0,1% em água para fornecer cloridrato do ácido (S)-3-(1H-imidazol-4-il)-2-(2- (2-metoxietóxi)-N-(2-(2-metoxietóxi)etil)acetamido)propanoico (C7) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C16H27N3O7 [M + H]+ 374,44, encontrado
374,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 8,52 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 4,32 (s, 2H), 4,28 - 4,29 (m, 1H), 3,54 - 3,54 (m, 12H), 3,43 - 3,43 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 3,25 (s, 3H). EXEMPLO 8 Preparação do Composto 8 (C8): Dicloridrato do ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-5-guanidinopentanoico Oxidação Etapa 1 de Swern Água Etapa 2 Etapa 3
[0194] Etapa 2. Preparação de 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-5- guanidinopentanoato de (S)-etila:
[0195] A uma solução 2-amino-5-guanidinopentanoato de (S)-etila (8-3) (10,0 g, 49,5 mmol) em MeOH (100,0 mL) foi adicionado 2-(2- metoxietóxi)acetaldeído (8-2) (23,3 g, 198 mmol) e ácido acético (0,565 ml, 9,9 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio (4,66 g, 74,2 mmol) foi adicionado às porções. A mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e o produto foi extraído com diclorometano (5 X 100 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 10% em diclorometano para produzir 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-5- guanidinopentanoato de (S)-etila (8-4). LC-MS ESI/APCI calculado para C18H38N4O6 [M + 1]+ 407,28, encontrado 407,4. RMN de 1H (400 MHz, DMSO): δ
7,42 (bs, 1H), 7,25 (bs, 1H), 6,85 (bs, 2H), 4,12 - 4,05 (m, 2H), 3,49 - 3,47 (m, 4H), 3,43 - 3,40 (m, 8H), 3,38 - 3,36 (m, 1H), 3,24 (s, 6H), 3,11 - 3,09 (m, 2H), 2,80 - 2,66 (m, 4H), 1,63 - 1,60 (m, 2H), 1,50 - 1,43 (m, 2H), 1,20 (t, J = 7,2 Hz, 3H).
[0196] Etapa 3. Preparação de dicloridrato do ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-5-guanidinopentanoico
[0197] A uma solução agitada de 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-5- guanidinopentanoato de (S)-etila (8-4) (5,4 g, 13,3 mmol) em MeOH (60,0 mL) e água (10,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (0,797 g, 19,9 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. HCl a 1,5 N foi adicionado à mistura de reação e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. A mistura de reação foi acidificada com HCl a 1,5 N ao pH 2 a 3 e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com HCl a 0,1% em água para fornecer dicloridrato do ácido (S)- 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-5-guanidinopentanoico (C8) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C16H34N4O6 [M + H]+ 379,25, encontrado 379,0. RMN de 1H (400 MHz, D2O): δ 3,86 - 3,66 (m, 4H), 3,86 - 3,76 (m, 1H), 3,62 - 3,60 (m, 4H), 3,57 - 3,55 (m, 4H), 3,47 - 3,39 (m, 4H), 3,29 (s, 6H), 3,17 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,86 - 1,80 (m, 2H), 1,74 - 1,62 (m, 2H). EXEMPLO 9 Preparação do Composto 9 (C9): Dicloridrato do ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H-imidazol-4-il)propanoico
Oxidação Etapa 1 de Swern Água Etapa 2 Etapa 3
[0198] Etapa 2. Preparação de 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H- imidazol-4-il)propanoato de (S)-metila:
[0199] A uma solução 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)- metila (9-3) (10 g, 59,1 mmol) em MeOH (100,0 mL) foi adicionado 2-(2- metoxietóxi)acetaldeído (9-2) (27,9 g, 236 mmol) e ácido acético (0,67 ml, 11,82 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio (5,57 g, 89 mmol) foi adicionado às porções. A mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e o produto foi extraído com diclorometano (5 X 100 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% em diclorometano para produzir 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H- imidazol-4-il)propanoato de (S)-metila (9-4) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C17H31N3O6 [M + 1]+ 374,44, encontrado 374,2.
[0200] Etapa 3. Preparação de dicloridrato do ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H-imidazol-4-il)propanoico:
[0201] A uma solução agitada de 2-(bis(2-(2-metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H- imidazol-4-il)propanoato de (S)-metila (9-4) (6,5 g, 17,30 mmol) em MeOH (65,0 mL) e água (12,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (1,03 g, 25,95 mmol) e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. A mistura de reação foi acidificada com HCl a 1,5 N ao pH 2 a 3 e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com HCl a 0,1% em água para fornecer dicloridrato do ácido (S)-2-(bis(2- (2-metoxietóxi)etil)amino)-3-(1H-imidazol-4-il)propanoico (C9) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C16H29N3O6 [M + H]+ 360,41, encontrado 360,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 8,58 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 4,43 (t, J = 4,60 Hz, 1H), 3,79 - 3,80 (m, 4H), 3,58 - 3,59 (m, 6H), 3,47 - 3,48 (m, 6H), 3,39 - 3,40 (m, 2H), 3,26 (s, 6H). EXEMPLO 10 Preparação do Composto 10 (C10): Ácido (S)-6-amino-2-(2-(2- metoxietóxi)acetamido)hexanoico Etapa 1 Etapa 2 Etapa 3 Composto 10-2 foi sintetizado seguindo-se o protocolo apresentado em Journal of the American Chemical Society, 2015, vol. 137, 6975 – 6978
[0202] Etapa 2. Preparação de ácido (S)-6-((terc-butoxicarbonil)amino)-2- (2-(2-metoxietóxi)acetamido)hexanoico:
[0203] A uma solução de ácido (S)-2-amino-6-((terc-
butoxicarbonil)amino)hexanoico (10-2) (9,18 g, 37,3 mmol) em diclorometano (50 ml) e trietilamina (11,3 g, 111 mmol) foi adicionado cloreto de 2-(2- metoxietóxi)acetila (10-3) (5,66 g, 37,3 mmol (recentemente preparado a partir de ácido) em diclorometano (50 ml) às gotas a 0 °C. A mistura de reação foi agitada por 3 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e concentrado para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com 15% de metanol em diclorometano para fornecer ácido (S)-6-((terc- butoxicarbonil)amino)-2-(2-(2-metoxietóxi)acetamido)hexanoico (10-4) como um líquido. LC-MS ESI/APCI calculado para C16H30N2O7 [M + 1]+ 363,41, encontrado 363,2.
[0204] Etapa 3. Preparação de ácido (S)-6-amino-2-(2-(2- metoxietóxi)acetamido)hexanoico:
[0205] A uma solução agitada de ácido (S)-6-((terc-butoxicarbonil)amino)- 2-(2-(2-metoxietóxi)acetamido)hexanoico (10-4) (4 g, 11,04 mmol) em diclorometano (20,0 mL) foi adicionado TFA (8,50 ml, 110 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 4 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. A mistura de reação foi neutralizada com HCl a 1,5 N e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 10% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para fornecer ácido (S)-6- amino-2-(2-(2-metoxietóxi)acetamido)hexanoico (C10) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C11H22N2O5[M + H]+ 263,3, encontrado 263,4. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 4,14 (t, J = 5,20 Hz, 1H), 4,01 (s, 2H), 3,65 - 3,66 (m, 2H), 3,56 -
3,57 (m, 2H), 3,31 (s, 3H), 2,89 (t, J = 7,60 Hz, 2H), 1,78 - 1,78 (m, 1H), 1,64 - 1,66 (m, 3H), 1,55 - 1,55 (m, 2H). EXEMPLO 11 Preparação do Composto 11 (C11): Ácido (S)-6-amino-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)hexanoico Etapa 1 Etapa 2 Etapa 3
[0206] Etapa 2. Preparação de ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-6-((terc-butoxicarbonil)amino)hexanoico:
[0207] A uma solução de ácido (S)-2-amino-6-((terc- butoxicarbonil)amino)hexanoico (11-2) (6 g, 24,36 mmol) em MeOH (60,0 mL) foram adicionados 2-(2-metoxietóxi)acetaldeído (11-3) (11,51 g, 97 mmol) e ácido acético (0,27 ml, 4,87 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C. Cianoboroidreto de sódio (4,59 g, 73,1 mmol) foi adicionado às porções e a mistura de reação foi agitada por 20 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e concentrado para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% para fornecer ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-6-((terc-butoxicarbonil)amino)hexanoico (11-4) LC-MS ESI/APCI calculado para C21H42N2O8 [M + H]+ 451,56, encontrado 451,2.
[0208] Etapa 3. Preparação de ácido (S)-6-amino-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)hexanoico:
[0209] A uma solução agitada de ácido (S)-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)-6-((terc-butoxicarbonil)amino)hexanoico (11-4) (3 g, 6,6 mmol) em diclorometano (15,0 mL), foi adicionado TFA (5,06 ml, 66,6 mmol) e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 4 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. A mistura de reação foi neutralizada com bicarbonato de sódio saturado e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 10% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para fornecer ácido (S)-6-amino-2-(bis(2-(2- metoxietóxi)etil)amino)hexanoico (C11) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C16H34N2O6 [M + H]+ 351,45, encontrado 351,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 3,52 - 3,53 (m, 13H), 3,28 (s, 6H), 3,26 - 3,28 (m, 4H), 2,91 (t, J = 7,60 Hz, 2H), 1,74 - 1,76 (m, 2H), 1,58 - 1,60 (m, 2H), 1,43 - 1,44 (m, 2H). EXEMPLO 12 Preparação do Composto 12 (C12): Ácido (S)-3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)propanoico Oxidação Etapa 1 de Swern Água Etapa 2 Etapa 3
[0210] Etapa 2. Preparação de 3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)propanoato de (S)-metila:
[0211] A uma solução 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)- metila (12-3) (10 g, 59 mmol) em metanol (150 ml) foi adicionado 2-(2- metoxietóxi)acetaldeído (12-2) (10,47 g, 88,7 mmol) e ácido acético (1,01 ml, 17,4 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio (5,49 g, 88,7 mmol) foi adicionado às porções. A mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e concentrado para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% em para fornecer 3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2-metoxietóxi)etil)amino)propanoato de (S)- metila (12-4). LC-MS ESI/APCI calculado para C12H21N3O4 [M + H]+ 272,3, encontrado 272,2.
[0212] Etapa 3. Preparação de ácido (S)-3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)propanoico:
[0213] A uma solução agitada de 3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)propanoato de (S)-metila (12-4) (5 g, 18,4 mmol) em MeOH (50,0 mL) e água (10,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (1,1 g, 27,6 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 5% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para fornecer ácido (S)-3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2-metoxietóxi)etil)amino)propanoico (C12) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C11H19N3O4 [M + H]+ 258,28, encontrado 258,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 7,54 (s, 1H), 6,78 (s, 1H), 3,49 -
3,50 (m, 6H), 3,26 (s, 3H), 3,24 (t, J = 7,20 Hz, 1H), 2,76 - 2,76 (m, 2H), 2,66 - 2,67 (m, 1H), 2,50 - 2,52 (m, 1H). EXEMPLO 13 Preparação do Composto 13 (C13): (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-histidina Água Etapa 1 Etapa 2
[0214] Etapa 1. Preparação de (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-histidinato de metila:
[0215] A uma solução de 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)- metila (13-1) (5 g, 29,6 mmol) em diclorometano (25 ml) e trietilamina (8,97, 89 mmol) foi adicionado cloreto de 2-(2-metoxietóxi)acetila (13-2) (4,49 g, 29,6 mmol) (recentemente preparado a partir de ácido) em diclorometano (25 ml) às gotas a 0 °C. A mistura de reação foi agitada por 3 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação, que foi concentrada para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% em diclorometano para fornecer (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-histidinato de metila (13-3) como um líquido. LC-MS ESI/APCI calculado para C12H19N3O5 [M + 1]+ 286,30, encontrado 286,2.
[0216] Etapa 2. Preparação de (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-histidina:
[0217] A uma solução de (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-histidinato de metila (13-3) (4,7 g, 16,4 mmol) em MeOH (47,0 mL) e água (5,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (0,98 g, 24,6 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. HCl a 1,5 N foi adicionado à mistura de reação, que foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 5% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para fornecer (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-histidina (C13) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C11H17N3O5 [M + H]+ 272,27, encontrado 272,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 8,22 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 4,41 (q, J = 4,96 Hz, 1H), 3,93 (d, J = 3,00 Hz, 2H), 3,55 - 3,57 (m, 4H), 3,25 (s, 3H), 3,13 - 3,16 (m, 1H), 2,99 - 3,00 (m, 1H). EXEMPLO 14 Preparação do Composto 14 (C14): Ácido (S)-5-guanidino-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)pentanoico Oxidação Etapa 1 de Swern Água Etapa 2 Etapa 3
[0218] Etapa 2. Preparação de 5-guanidino-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)pentanoato de (S)-etila:
[0219] A uma solução 2-amino-5-guanidinopentanoato de (S)-etila (14-3) (30,0 g, 148 mmol) em MeOH (300,0 mL) foi adicionado 2-(2- metoxietóxi)acetaldeído (14-2) (26,2 g, 222 mmol) e ácido acético (1,69 ml, 29,6 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio (13,8 g, 222 mmol) foi adicionado às porções. A mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação, que foi concentrada para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% em para fornecer 5-guanidino-2-((2-(2-metoxietóxi)etil)amino)pentanoato de (S)- etila (14-4). LC-MS ESI/APCI calculado para C13H28N4O4 [M + H]+ 305,3, encontrado 305,2.
[0220] Etapa 3. Preparação de ácido (S)-5-guanidino-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)pentanoico:
[0221] A uma solução de 5-guanidino-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)pentanoato de metil (S)-etila (14-4) (5 g, 16,4 mmol) em MeOH (50,0 mL) e água (5,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (0,98 g, 24,6 mmol) e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. HCl a 1,5 N foi adicionado à mistura de reação e a mesma foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 5% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para fornecer ácido (S)-5-guanidino-2-((2-(2-metoxietóxi)etil)amino)pentanoico (C14) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C11H24N4O4 [M + H]+ 277,34, encontrado 277,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 3,55 - 3,56 (m, 6H), 3,28 (s, 3H), 3,15 - 3,17 (m, 1H), 3,10 (t, J = 6,80 Hz, 2H), 2,81 - 2,82 (m, 1H), 2,68 - 2,70 (m, 1H), 1,50 - 1,52 (m, 4H). EXEMPLO 15 Preparação do Composto 15 (C15): Dicloridrato de (2-(2- metoxietóxi)acetil)-L-arginina
Água Etapa 1 Etapa 2
[0222] Etapa 1. Preparação de (2-(2-metoxietóxi)etil)-L-argininato de etila:
[0223] A uma solução de 2-amino-5-guanidinopentanoato de (S)-etila (15- 1) (5 g, 24,72 mmol) em diclorometano (25 ml) e trietilamina (10,34 ml, 74,2 mmol) foi adicionado cloreto de 2-(2-metoxietóxi)acetila (15-2) (3,76 g, 24,72 mmol) (recentemente preparado a partir de ácido) em diclorometano (25 ml) às gotas a 0 °C. A mistura de reação foi agitada por 3 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e concentrado para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% em diclorometano para fornecer (2- (2-metoxietóxi)etil)-L-argininato de etila (15-3) como um líquido. LC-MS ESI/APCI calculado para C13H26N4O5 [M + 1]+ 319,37, encontrado 319,2.
[0224] Etapa 2. Preparação de dicloridrato de (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L- arginina:
[0225] A uma solução de (2-(2-metoxietóxi)etil)-L-argininato de metil etila (15-3) (6,1 g, 19,1 mmol) em MeOH (61,0 mL) e água (6,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (1,15 g, 28,7 mmol) e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. A mistura de reação foi acidificada com HCl a 1,5 N ao pH (2 a 3) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com HCl a 0,1% em água para fornecer dicloridrato de (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-arginina (C15). LC-MS ESI/APCI calculado para C11H22N4O5 [M + 1]+ 291,32, encontrado 291,2.
RMN de 1H 400 MHz, DMSO-d6: δ 9,36 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,67 (s, 4H), 3,89 (t, J = 6,00 Hz, 1H), 3,85 (s, 2H), 3,58 - 3,59 (m, 2H), 3,44 - 3,47 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 3,02 - 3,04 (m, 2H), 1,64 - 1,65 (m, 2H), 1,56 - 1,57 (m, 2H). EXEMPLO 16 Preparação do Composto 16 (C16): ((2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oil)-L- histidina Água Etapa 1 Etapa 2
[0226] Etapa 1. Preparação de (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oil)-L- histidinato de metila:
[0227] A uma solução de 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)- metila (16-1) (5 g, 29,6 mmol) em diclorometano (25 ml) e trietilamina (8,97, 89 mmol) foi adicionado cloreto de 2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oíla (16-2) (5,81 g, 29,6 mmol) (recentemente preparado a partir de ácido) em diclorometano (25 ml) às gotas a 0 °C. A mistura de reação foi agitada por 3 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e a mistura foi concentrada para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 10% em diclorometano para produzir (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oil)-L-histidinato de metila (16-3) como um líquido. LC-MS ESI/APCI calculado para C16H27N3O7 [M + 1]+ 374,18, encontrado 374,2.
[0228] Etapa 2. Preparação de ((2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oil)-L- histidina:
[0229] A uma solução agitada de 12-((1H-imidazol-4-il)metil)-10-oxo-2,5,8- trioxa-11-azatridecan-13-oato de (S)-metila (16-3) (4,7 g, 14,2 mmol) em MeOH (50,0 mL) e água (10,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (0,85 g, 21,3 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. HCl a 1,5 N foi adicionado à mistura de reação e a mesma foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um celite leito e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 5% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa, eluindo com água para produzir ((2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oil)-L-histidina (C16) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C15H25N3O7 [M + H]+ 317,33, encontrado 317,17. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 8,52 (s, 1H), 7,22 (s, 1H), 4,70 - 4,59 (m, 1H), 3,99 - 3,97 (m, 2H), 3,54 - 3,61 (m, 11H), 3,26 - 3,28 (m, 4H), 3,09 - 3,07 (m, 2H). EXEMPLO 17 Preparação do Composto 17 (C17): (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oil)-L- arginina Água Etapa 1 Etapa 2
[0230] Etapa 1. Preparação de (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oil)-L- argininato de etila:
[0231] A uma solução de L-argininato de etila (17-1) (9 g, 44,5 mmol) em diclorometano (100 ml) e trietilamina (10,34 ml, 74,2 mmol) foi adicionado cloreto de 2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oíla (17-2) (10,71 g, 44,5 mmol)
(recentemente preparado a partir de ácido) em diclorometano (25 ml) às gotas a 0 °C. A mistura de reação foi agitada por 3 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e concentrado para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 10% em diclorometano para fornecer (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oil)-L-argininato de etila (17-3) como um líquido. LC-MS ESI/APCI calculado para C17H34N4O7 [M + 1]+ 407,24, encontrado 407,2.
[0232] Etapa 2. Preparação de (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oil)-L- arginina:
[0233] A uma solução agitada de (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-oil)-L- argininato de etila (17-3) (5 g, 11,19 mmol) em metanol (50 ml) e água (10 ml) foi adicionado hidróxido de sódio (0,74 g, 18,45 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. A mistura de reação foi neutralizada com HCl a 1,5 N e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 5% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para fornecer (2,5,8,11- tetraoxatridecan-13-oil)-L-arginina (C17) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C15H30N4O7 [M + H]+ 379,21, encontrado 379,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 4,35 - 4,36 (m, 1H), 4,05 (s, 2H), 3,58 - 3,69 (m, 10H), 3,52 - 3,53 (m, 2H), 3,29 - 0,00 (m, 3H), 3,14 (t, J = 6,80 Hz, 2H), 1,86 - 1,87 (m, 1H), 1,69 - 1,70 (m, 1H), 1,54 - 1,56 (m, 2H). EXEMPLO 18 Preparação do Composto 18 (C18): (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-L-
histidina Água Etapa 1 Etapa 2
[0234] Etapa 2. Preparação de (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-L- histidinato de metila:
[0235] A uma solução L-histidinato de metila (18-1) (6,0 g, 53,2 mmol) em MeOH (50,0 mL), foi adicionado 2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-al (18-2) (70,97 g, 53,2 mmol) e ácido acético (1,69 ml, 29,6 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio (3,34 g, 53,2 mmol) foi adicionado às porções. A mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e concentrado para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% em para fornecer (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-L- histidinato de metila (18-3). LC-MS ESI/APCI calculado para C16H29N3O6 [M + H]+ 360,21, encontrado 360,2.
[0236] Etapa 3. Preparação de (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-L-histidina:
[0237] A uma solução de (2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)-L-histidinato de metila (18-3) (4,5 g, 12,5 mmol) em MeOH (50,0 mL) e água (5,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (0,75 g, 18,78 mmol) e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. HCl a 1,5 N foi adicionado à mistura de reação e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 5% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para fornecer (2,5,8,11- tetraoxatridecan-13-il)-L-histidina (C18) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C15H27N3O6 [M + H]+ 346,19, encontrado 346,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 4,37 (t, J = 4,00 Hz, 1H), 4,05 (s, 2H), 3,52 - 3,53 (m, 12H), 3,29 (s, 3H), 3,14 (t, J = 6,80 Hz, 2H), 1,87 - 1,88 (m, 1H), 1,69 - 1,70 (m, 1H), 1,54 - 1,56 (m, 2H). EXEMPLO 19 Preparação do Composto 19 (C19): (2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-L- histidina Água Etapa 2 Etapa 3
[0238] Etapa 2. Preparação de (2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-L-histidinato de metila:
[0239] A uma solução 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)- metila (19-1) (5 g, 29,6 mmol) em metanol (75 ml) foi adicionado 2-(2-(2- metoxietóxi)etóxi)acetaldeído (19-2) (7,1 g, 44,3 mmol) e ácido acético (1,01 ml, 17,4 mmol). A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 15 minutos. A mistura de reação foi resfriada até 0 °C e cianoboroidreto de sódio (2,79 g, 44,3 mmol) foi adicionado às porções. A mistura de reação foi agitada por 6 horas na temperatura ambiente. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. Bicarbonato de sódio saturado depois foi adicionado à mistura de reação e concentrado para fornecer o produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com metanol a 7% em para fornecer (2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-L-histidinato de metila (19-3). LC-MS ESI/APCI calculado para C14H25N3O5 [M + H]+ 316,18, encontrado 316,2.
[0240] Etapa 3. Preparação de (2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-L-histidina:
[0241] A uma solução agitada de 3-(1H-imidazol-4-il)-2-((2-(2- metoxietóxi)etil)amino)propanoato de (S)-metila (19-3) (3 g, 9,51 mmol) em MeOH (50,0 mL) e água (10,0 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (0,57 g, 14,2 mmol) e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 h. A conclusão da reação foi confirmada por TLC. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol e filtrado através de um leito CELITE e o filtrado foi novamente concentrado. O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia em coluna flash de sílica gel eluindo com amônia a 5% em metanol e novamente purificado por cromatografia de fase reversa eluindo com água para fornecer (2- (2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-L-histidina (C19) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C13H23N3O5 [M + H]+ 302,16, encontrado 302,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 8,20 (s, 1H), 7,16 (s, 1H), 3,85 (t, J = 6,40 Hz, 1H), 3,70 (t, J = 4,80 Hz, 2H), 3,59 - 3,61 (m, 6H), 3,52 - 3,53 (m, 2H), 3,28 (s, 3H), 3,16 - 3,17 (m, 4H). EXEMPLO 20 Preparação do Composto 20 (C20): Ácido (S)-2-(bis(2-(2- hidroxietóxi)etil)amino)-5-guanidinopentanoico em dioxano Água Etapa 1 Etapa 2 e 3
[0242] Etapa 1. Preparação de 10-(2-(2-((terc- butildimetilsilil)óxi)etóxi)etil)-11-(3-guanidinopropil)-2,2,3,3-tetrametil-4,7- dioxa-10-aza-3-siladodecan-12-oato de (S)-etila:
[0243] A uma solução agitada de 2-amino-5-guanidinopentanoato de (S)-
etila (20-1) (10 g, 49,6 mmol) em MeOH (100 ml), foi adicionado 2-(2-((terc- butildimetilsilil)óxi)etóxi)acetaldeído (20-2) (43,2 g, 198 mmol) e ácido acético (1,0 ml) e a mistura de reação foi agitada a 0 °C por 15 minutos. Depois, cianoboroidreto de sódio (2,79 g, 44,3 mmol) foi adicionado na mesma temperatura. Depois, a mistura resultante foi agitada por 16 horas na temperatura ambiente. Análise de TLC e LCMS mostrou a formação do produto desejado. Solução de bicarbonato de sódio saturado (50 mL) foi adicionada à mistura de reação, que depois foi concentrada. A camada aquosa foi retro- extraída com DCM (5 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 150 mL). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica em malha 60 a 120, eluindo com MeOH a 10% para fornecer 10-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)etil)-11-(3-guanidinopropil)- 2,2,3,3-tetrametil-4,7-dioxa-10-aza-3-siladodecan-12-oato de (S)-etila (20-3) como um líquido. LC-MS ESI/APCI calculado para C28H62N4O6Si2 [M + H]+ 606,42, encontrado 606,1.
[0244] Etapa 2. Preparação de 2-(bis(2-(2-hidroxietóxi)etil)amino)-5- guanidinopentanoato de (S)-etila:
[0245] A uma solução agitada de 10-(2-(2-((terc- butildimetilsilil)óxi)etóxi)etil)-11-(3-guanidinopropil)-2,2,3,3-tetrametil-4,7- dioxa-10-aza-3-siladodecan-12-oato de (S)-etila (20-3) (5,1 g, 8,40 mmol) em CH2Cl2 (20 mL) foi adicionado HCl em dioxano (10,5 mL, 42,0 mmol) e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 2 horas. A mistura de reação foi concentrada para fornecer 2-(bis(2-(2-hidroxietóxi)etil)amino)-5- guanidinopentanoato de (S)-etila como um sólido.
[0246] Etapa 3. Preparação de ácido (S)-2-(bis(2-(2- hidroxietóxi)etil)amino)-5-guanidinopentanoico:
[0247] A uma solução agitada de 2-(bis(2-(2-hidroxietóxi)etil)amino)-5- guanidinopentanoato de (S)-etila (3,11 g, 8,22 mmol) em MeOH (50 mL), água (10 mL) e NaOH (0,493 g, 12,33 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 5 horas. A análise de TLC e LCMS mostrou a formação do produto desejado. A mistura de reação foi concentrada e neutralizada com HCl a 1,5 N e concentrada. O resíduo foi dissolvido em metanol, filtrado através de CELITE e concentrado para fornecer o produto bruto. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica eluindo com amônia a 3 a 5% em metanol para fornecer ácido (S)-2-(bis(2- (2-hidroxietóxi)etil)amino)-5-guanidinopentanoico (C20) como um sólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C14H30N4O6 [M + H]+ 351,22, encontrado 351,2. RMN de 1 H 400 MHz, D2O: δ 3,82 - 3,83 (m, 1H), 3,77 - 3,78 (m, 4H), 3,64 - 3,65 (m, 4H), 3,55 - 3,56 (m, 4H), 3,42 - 3,48 (m, 4H), 3,17 (t, J = 6,80 Hz, 2H), 1,82 - 1,84 (m, 4H). EXEMPLO 21 Preparação do Composto 21 (C21): Ácido (S)-2-(bis(2-(2- hidroxietóxi)etil)amino)-3-(1H-imidazol-4-il)propanoico em dioxano Água Etapa 1 Etapa 2 e 3
[0248] Etapa 1. Preparação de 11-((1H-imidazol-4-il)metil)-10-(2-(2-((terc- butildimetilsilil)óxi)etóxi)etil)-2,2,3,3-tetrametil-4,7-dioxa-10-aza-3- siladodecan-12-oato de (S)-metila:
[0249] A uma solução agitada de 2-amino-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)-metila (21-1) (5 g, 29,6 mmol) em MeOH (50 mL) foi adicionado 2-(2-((terc- butildimetilsilil)óxi)etóxi)acetaldeído (21-2) (32,3 g, 148 mmol) e ácido acético (0,846 mL, 14,78 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0 °C por 15 minutos.
Cianoboroidreto de sódio (2,79 g, 44,3 mmol) depois foi adicionado na mesma temperatura. A mistura resultante foi agitada por 16 horas na temperatura ambiente. A análise de TLC e LCMS mostrou a formação do produto desejado. Solução de bicarbonato de sódio saturado (50 mL) foi adicionada à mistura de reação, que foi concentrada. A camada aquosa foi retro-extraída com CH2Cl2 (5 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (1 x 150 mL). A camada orgânica foi seca em Na2SO4, filtrada e concentrada. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica em malha 60 a 120, eluindo com MeOH a 10% em diclorometano para fornecer 11- ((1H-imidazol-4-il)metil)-10-(2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)etil)-2,2,3,3- tetrametil-4,7-dioxa-10-aza-3-siladodecan-12-oato de (S)-metila (21-3) como um líquido. LC-MS ESI/APCI calculado para C28H57N3O6Si2 [M + H]+ 589,38, encontrado 589,2.
[0250] Etapa 2: A uma solução agitada de 11-((1H-imidazol-4-il)metil)-10- (2-(2-((terc-butildimetilsilil)óxi)etóxi)etil)-2,2,3,3-tetrametil-4,7-dioxa-10-aza-3- siladodecan-12-oato de (S)-metila 3 (8 g, 13,94 mmol) em CH2Cl2 (80 mL), HCl em dioxano (8,68 g, 69,7 mmol), foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 0 °C por 1 hora. A análise de TLC e LCMS mostrou a formação do produto desejado. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo para fornecer o composto desejado 2-(bis(2-(2-hidroxietóxi)etil)amino)-3-(1H-imidazol-4- il)propanoato de (S)-metila, que foi usado na etapa seguinte sem nenhuma purificação.
[0251] Etapa 3: A uma solução agitada de 2-(bis(2-(2- hidroxietóxi)etil)amino)-3-(1H-imidazol-4-il)propanoato de (S)-metila (3,0 g, 8,69 mmol) em metanol (30 mL), NaOH (0,521 g, 13,03 mmol), foi adicionado e a mistura de reação foi agitada na temperatura ambiente por 4 horas. A análise de TLC e LCMS mostrou a formação do produto desejado. A mistura de reação foi concentrada, o aquoso foi neutralizado com HCl a 1,5 N e concentrado, o resíduo foi dissolvido em metanol, filtrado através de CELITE, concentrado para fornecer o produto bruto. O bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica eluindo com amônia a 3 a 5% em metanol para fornecer o produto que foi purificado ainda por cromatografia de fase reversa, eluindo com água, para fornecer ácido (S)-2-(bis(2-(2-hidroxietóxi)etil)amino)-3-(1H- imidazol-4-il)propanoico (C21) como um líquido. LC-MS ESI/APCI calculado para C14H25N3O6 [M + H]+ 332,17, encontrado 332,2. RMN de 1H 400 MHz, D2O: δ 8,21 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 3,96 (t, J = 7,12 Hz, 1H), 3,66 - 3,67 (m, 4H), 3,57 - 3,59 (m, 4H), 3,50 - 3,51 (m, 4H), 3,25 - 3,26 (m, 6H). EXEMPLO 22 Preparação do Composto 22 (C22): [(2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-fenilalanina
[0252] Cloridrato de 2-amino-3-(4-(terc-butóxi)phenil)propanoato de (S)- terc-butila (22-1) (2,75 g, 10,67 mmol) e ácido 2-(2-metoxietóxi)acético (22-2) (1,717 g, 12,0 mmol) foram colocados em suspensão em 50 mL de CH2Cl2. Solução de 2,4,6-trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfinano (T3P) (50% em EtOAc, 13,58 mL, 21,34 mmol) foi adicionada seguido por DIEA (2,79 mL, 16 mmol) imediatamente depois. A mistura foi agitada na temperatura ambiente por 2 horas. A mistura depois foi tratada com TFA (8,16 mL, 107 mmol) e agitada durante a noite. A mistura foi concentrada sob alto vácuo. O resíduo foi submetido à cromatografia em sílica eluído com 0 a 70% de hexano/EtOAc- EtOH (3:1) para fornecer (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-fenilalanina (C22) como um óleo. LC-MS ESI/APCI calculado para C14H19NO5 [M + 1]+ 282,13, encontrado
282,18. RMN de 1H 400 MHz, DMSO-d6: δ 12,71 (s, 1H), 7,76 (d, J = 8,21 Hz, 1H), 7,19 - 7,31 (m, 5H), 4,53 (m, 1H), 3,85 (m, 2H), 3,47 (m, 4H), 3,25 (s, 1H), 3,12 (dd, J = 4,81 Hz, 14,10 Hz, 1H), 2,98 (dd, J = 9,19 Hz, 14,20 Hz, 1H). EXEMPLO 23 Preparação do Composto 23 (C23): (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-tirosina
[0253] Cloridrato de 2-amino-3-(4-(terc-butóxi)phenil)propanoato de (S)- terc-butila (23-1) (3,48 g, 10,55 mmol) e ácido 2-(2-metoxietóxi)acético (23-2) (1,698 g, 12,66 mmol) foram colocados em suspensão em 50 mL de CH2Cl2. Solução de 2,4,6-trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfinano (T3P) (50% em EtOAc, 13,43 mL, 21,10 mmol) foi adicionada seguido por DIEA (2,76 mL, 15,82 mmol) imediatamente depois. A mistura foi agitada na temperatura ambiente por 2 horas. A mistura depois foi tratada com TFA (8,07 mL, 105 mmol) e agitada durante a noite. A mistura foi concentrada sob alto vácuo. O resíduo foi submetido à cromatografia em sílica eluído com 0 a 70% de hexano/EtOAc- EtOH (3:1) para fornecer (2-(2-metoxietóxi)acetil)-L-tirosina (C23) como um óleo. O óleo solidificou lentamente em repouso por uma semana na temperatura ambiente para fornecer um semissólido. LC-MS ESI/APCI calculado para C14H19NO6 [M + 1]+ 298,12, encontrado 298,19. RMN de 1H 400 MHz, DMSO- d6: δ 12,74 (s, 1H), 9,19 (s, 1H), 7,65 (d, J = 9,37 Hz, 1H), 6,99 (d, J = 8,45 Hz, 2H), 6,66 (d, J = 8,62 Hz, 2H), 4,44 (m, 1H), 3,85 (m, 2H), 3,41 - 3,56 (m, 4H), 3,26 (s, 1H), 2,99 (dd, J = 5,15 Hz, 14,00 Hz, 1H), 2,86 (dd, J = 8,58 Hz, 13,91 Hz, 1H). EXEMPLO 24 Viscosidade das Composições Farmacêuticas Compreendendo Excipientes
Pegilados
[0254] Formulações de pembrolizumabe compreenderam o seguinte: tampão de histidina a 10 mM, pembrolizumabe a uma concentração de 200 mg/mL e o excipiente de teste (excipiente pegilado da invenção, como descrito na presente invenção) a uma concentração de 200 mM, o pH ajustado para pH 5,5. Formulações de pembrolizumabe sem excipientes consistiram em pembrolizumabe a 200 mg/mL em de tampão de histidina a 10 mM no pH 5,5. O tampão de histidina a 10 mM usado com as formulações de pembrolizumabe consistiram em L-histidina a 10 mM em água estéril, o pH ajustado para 5,5.
[0255] Formulações de Anticorpo B compreenderam o seguinte: tampão de histidina a 10 mM, Anticorpo B a uma concentração de 177 mg/mL e o excipiente de teste (excipiente pegilado da invenção, como descrito na presente invenção) a uma concentração de 200 mM, o pH ajustado para pH 6,0. A formulação de Anticorpo B sem excipientes consistiu em 177 mg/mL de Anticorpo B em tampão de histidina a 10 mM no pH 6,0. O tampão de histidina a 10 mM usado com o Anticorpo B consistiu em L-histidina a 10 mM em água estéril, o pH ajustado para 6,0.
[0256] Medições de viscosidade: Todas as medições de viscosidade foram conduzidas usando o mVROC (Viscometer/Rheometer-On-A-Chip, RheoSense, Inc., San Ramon, CA). As formulações de teste foram colocadas em um 250 µl de seringa hermética Hamilton, que depois foi colocada dentro do invólucro da seringa do mVROC. O instrumento injetou a formulação no chip para a medição da viscosidade em uma taxa de fluxo apropriada. A maioria das medições foi feita em duplicatas.
[0257] A viscosidade da formulação de teste é fornecida na Tabela 4 abaixo. Os resultados indicam que os excipientes pegilados testados (isto é, os compostos da Fórmula I) foram capazes de reduzir a viscosidade das formulações de anticorpo monoclonal de alta concentração em relação à mesma formulação sem um excipiente da invenção.
Além disso, todas as formulações de teste compreendendo tampão de histidina a 10 mM, pembrolizumabe a 200 mg/mL e composto a 0,2 M da Fórmula I tiveram uma viscosidade mais baixa do que as formulações de teste compreendendo tampão de histidina a 10 mM, pembrolizumabe a 200 mg/mL, arginina ou histidina a 0,2 M, o que demonstra que os compostos da invenção fornecem capacidade de redução de viscosidade superior em relação aos compostos tipicamente usados na indústria.
Similarmente, a formulação de teste compreendendo tampão de histidina a 10 mM, Anticorpo B a 177 mg/mL e composto a 0,2 M da Fórmula I teve uma viscosidade mais baixa do que a mesma formulação sem um composto da Fórmula I.
Tabela 4. Viscosidade das Formulações de Teste Média da Viscosidade Viscosidade Excipiente Estrutura do Excipiente Viscosidade 1 (mPa-s) 2 (mPa-s) (mPa-s) Formulações de pembrolizumabe: tampão de histidina a 10 mM, pembrolizumabe a 200 mg/mL, excipiente a 0,2 M Nenhum 47,25 46,91 47,08 (Lote 1 de Pembro) Nenhum 47,25 49,91 48,58 (Lote 2 de Pembro)
Arginina 30,25 30,55 30,40
Histidina 35,79 35,32 35,56
Exemplo 1 23,12 23,27 23,20
Exemplo 2 22,05 22,24 22,15
Exemplo 3 21,12 21,18 21,15
Exemplo 4 19,64 19,28 19,46
18,19** 18,02* 18,37* **Média Exemplo 5 *Média dos *Média dos dos 8 4 valores 4 valores valores
17,83** 17,57* 18,10* **Média Exemplo 6 *Média dos *Média dos dos 6 3 valores 3 valores valores
Exemplo 10 26,39 26,35 26,37
Exemplo 11 21,36 21,50 21,43
Exemplo 12 22,19 22,33 22,26
Exemplo 13 20,05 20,09 20,07
Exemplo 14 24,59 24,76 24,68
Exemplo 15 18,67 ND 18,67
Exemplo 16 23,33 23,54 23,44
Exemplo 17 23,09 22,82 22,96
Exemplo 18 22,82 22,47 22,65
Exemplo 19 26,58 26,83 26,71
Exemplo 20 25,28 25,42 25,35
Exemplo 21 23,19 23,16 23,18
Exemplo 22 17,77 17,63 17,70
Exemplo 23 20,15 20,09 20,12
Formulações de Anticorpo B: tampão de histidina a 10 mM, Anticorpo B a 177 mg/mL, excipiente a 0,2 M
Exemplo 8 22,25 22,19 22,22
Exemplo 9 26,55 26,67 26,61
Nenhum 41,52 41,08 41,30

Claims (33)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula I: (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: Xé , , , ou ; R1 é H ou metila; R2 é H ou ; R3A e R3B são cada H ou juntos formam oxo; R4A e R4B são cada H ou juntos formam oxo; R5 é H ou metila; e cada ocorrência de n é independentemente 1 a 5; e em que indica o ponto de ligação ao restante do composto.
2. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R2 é H.
3. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R2 é .
4. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que R2 é .
5. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que R1 é metila.
6. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo da reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que R3A e R3B são H.
7. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que R3A e R3B juntos formam oxo.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que cada ocorrência de n é independentemente 1 a
3.
9. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta a estrutura: , , , , , , , , , , ,
, , , , , , , , ou .
10. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um ingrediente biológico ativo (ABI) e o composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que o ABI é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo ou uma proteína terapêutica.
11. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que o ABI é um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, presente a uma concentração de cerca de 50 a 250 mg/mL.
12. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente tampão de histidina em cerca de pH 5,0 a cerca de pH 6,0 a uma concentração de cerca de 5 mM a cerca de 20 mM.
13. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 12, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente cerca de cerca de 0,01% a cerca de 0,04% p/v de tensoativo não iônico.
14. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que o tensoativo não iônico é polisorbato 80.
15. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que o polisorbato 80 está presente a uma razão em peso de aproximadamente 0,02% p/v.
16. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 15, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um estabilizador.
17. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que o estabilizador é sacarose.
18. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo fato de que a sacarose está presente a uma razão em peso de cerca de 6% a cerca de 8% p/v.
19. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 18, caracterizada pelo fato de que o ABI é um anticorpo anti- PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga especificamente ao receptor 1 de morte programada humano (PD-1).
20. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende três regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de cadeia leve compreendendo a SEQ ID NO:1, SEQ
ID NO:2 e SEQ ID NO:3 e três CDRs de cadeia pesada compreendendo a SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7 e SEQ ID NO:8.
21. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma região VL que compreende a sequência de aminoácido apresentada na SEQ ID NO:4 e uma região VH que compreende a sequência de aminoácido apresentada na SEQ ID NO:9.
22. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo compreende uma cadeia leve que compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos como apresentada na SEQ ID NO:5 e uma cadeia pesada que compreende ou consiste em uma sequência de aminoácidos como apresentada na SEQ ID NO:10.
23. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 humano ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo é pembrolizumabe.
24. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 e 19 a 23, caracterizada pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo está presente a uma concentração de 100 a 250 mg/mL e em que a composição compreende histidina a 10 mM, sacarose a 7% e polisorbato 80 a 0,02%.
25. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 24, caracterizada pelo fato de que a composição é uma solução aquosa.
26. Composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 10 a 25, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um segundo ABI.
27. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende pembrolizumabe a 100 a 200 mg/mL, tampão de histidina a 10 mM e o composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9.
28. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 27, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente sacarose e polisorbato 80.
29. Método para reduzir a viscosidade de uma formulação farmacêutica, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) fornecer uma formulação farmacêutica compreendendo um ABI a uma concentração de cerca de 50 mg/mL a cerca de 250 mg/mL, em que a formulação está em solução aquosa; e (b) adicionar um composto definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9 à solução; em que a viscosidade da formulação farmacêutica após a adição do composto é <25 mPa-S.
30. Uso de uma composição farmacêutica definida em qualquer uma das reivindicações 10 a 28, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para tratar uma doença ou condição patológica.
31. Uso de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a composição farmacêutica é formulada para ser administrada por administração intravenosa ou subcutânea.
32. Uso de um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para reduzir a viscosidade de uma composição farmacêutica em solução aquosa, em que a composição farmacêutica compreende um ingrediente biológico ativo (ABI) que está presente a uma concentração de cerca de 50 a 250 mg/mL.
33. Invenção de produto, processo, sistema, kit ou uso, caracterizada pelo fato de que compreende um ou mais elementos descritos no presente pedido de patente.
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