BR112020003126A2 - agentes de rnai e composições para inibição da expressão de angiopoietina tipo 3 (angptl3), e métodos de uso - Google Patents

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Abstract

A presente invenção refere-se aos agentes de RNAi, por exemplo, agentes de RNAi de fita dupla, capazes de inibir a expressão do gene angiopoietina tipo 3 (também chamado ANGPTL3, ANGPL3, proteína de angiopoietina tipo 3), e composições que incluem agentes de RNAi de ANGPTL3. São também descritos os métodos de uso de agentes de RNAi de ANGPTL3 e composições. Os agentes de RNAi de ANG-PTL3 descritos aqui podem ser conjugados aos ligantes de direcionamento para facilitar a liberação para as células, incluindo para os hepatócitos. Composições farmacêuticas que incluem um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3, opcionalmente com um ou mais terapêuticos adicionais, são descritas. A liberação dos agentes de RNAi de AN-GTL3 in vivo fornece inibição da expressão de gene ANGPTL3, e pode resultar em níveis de triglicerídeos e/ou colesterol mais baixos no indivíduo. Os agentes de RNAi podem ser usados em métodos de tratamento de doenças e distúrbios relacionados ao ANGPTL3, incluindo doenças cardiometabólicas tais como hipertrigliceridemia e hiperlipidemia.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "AGENTES
DE RNAI E COMPOSIÇÕES PARA INIBIÇÃO DA EXPRESSÃO DE ANGIOPOIETINA TIPO 3 (ANGPTL3), E MÉTODOS DE USO".
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica a prioridade do Pedido de Patente Provisória dos Estados Unidos número de Série 62/694.976, depositado em 7 de Julho de 2018, Pedido de Patente Provisória dos Estados Unidos número de Série 62/651.284, depositado em 2 de Abril de 2018, Pedido de Patente Provisória dos Estados Unidos número de Série 62/583.919, depositado em 9 de Novembro de 2017, e Pedido de Patente Provisória dos Estados Unidos número de Série 62/558.819, depositado em 14 de Setembro de 2017, os teores dos quais são incorporados aqui por referência em sua totalidade.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIA
[0002] Este pedido contém uma Listagem de Sequência que foi enviada em formato ASCII e é pelo presente incorporada por referência em sua totalidade. A cópia ASCII é chamada 30658 SequencelListing e tem 111 kb em tamanho.
CAMPO DA INVENÇÃO
[0003] A presente invenção refere-se aos agentes de interferência de RNA (RNAi), por exemplo, agentes de RNAi fita dupla, para inibição de expressão gênica de angiopoietina tipo 3, composições que incluem agentes de RNAi de angiopoietina tipo 3, e métodos de uso dos mesmos.
ANTECEDENTES
[0004] Angiopoietina tipo 3 (também chamada ANGPTL3, ANGPL3, ANG3, ou proteína de angiopoietina tipo 3) é uma proteína angiopoietina codificada pelo gene de angioietina tipo 3 que é reportado estar envolvido na regulação do metabolismo lipídico. ANGPTL3 é um polipeptídeo de 460 aminoácidos que consiste em um peptídeo de sinal,
domínio em espiral enrolado N-terminal, e um domínio similar ao fibrinogênio C-terminal. ANGPTL3 é conhecido ser principalmente produzido em hepatócitos em humanos, e depois da síntese é secretado na circulação. ANGPTL3 age como um inibidor de lipoproteína lipase, que catalisa a hidrólise de triglicerídeos, e lipase endotelial, que hidrolisa os fosfolipídeos de lipoproteína. A inibição destas enzimas pode causar aumentos nos níveis plasmáticos de triglicerídeos, lipoproteínas de alta densidade (HDL), e fosfolipídeos. Além disso, mutações de perda de função em ANGPTL3 induzem à hipobetalipoproteinemia familiar, que é caracterizado por baixos níveis de triglicerídeos e lipoproteína de baixa densidade (LDL-C) em plasma. Em humanos, a perda de função em ANGPTL3 está também correlacionada com um risco diminuído de doença cardiovascular ateroesclerótica.
[0005] Um terapêutico eficaz que alveja ANGPTL3 forneceria um impacto benéfico no tratamento (incluindo tratamento profilático) de doenças cardiometabólicas tais como hipertrigliceridemia, obesidade, hiperlipidemia, metabolismo de clolesterol e/ou lipídio anormal, aterosclerose, diabetes melito tipo Il, doença cardiovascular, doença da artéria coronária, esteato-hepatite não alcoólica, doença hepática gordurosa não alcoólica, hipercolesterolemia familiar homozigótica e heterozigótica, hipercolesterolemia resistente à estatina e outros distúrbios e doenças metabólicas relacionadas. Enquanto certos compostos com base em RNA de fita dupla foram identificados como sendo capazes de inibir a expressão de um gene ANGPTL3 (veja, por exemplo, Publicações de Pedido de Patente Internacional nºº* WO 2012/177784, WO 2016/168286, e WO 2016/154127), os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui não foram anteriormente descritos ou conhecidos, e fornecem inibição específica de ANGPTL3 altamente potente e altamente eficiente de expressão de um gene ANGTPL3.
SUMÁRIO
[0006] Existe uma necessidade de novos agentes de interferência de RNA específico de ANGPTL3 (RNAi) (também chamado aqui agente de RNAi, gatilho de RNAi, ou gatilho), por exemplo, agentes de RNAi fita dupla, que são capazes de seletiva e eficientemente inibir a expressão de um gene ANGPTL3. Além disso, existe uma necessidade de composições que incluem novos agentes de RNAi específico de ANGPTL3 para o tratamento de doenças associadas com, entre outras coisas, níveis de triglicerídeos (TG) elevados.
[0007] Em geral, a presente invenção apresenta agentes de RNAi específico de gene ANGPTL3, composições que incluem agentes de RNAi de ANGPTL3, e métodos para inibição de expressão de um gene ANGPTL3 in vitro e/ou in vivo usando os agentes de RNAi de ANGPTL3 e composições que incluem agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui. Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui podem seletiva e eficientemente diminuir ou inibir a expressão de um gene ANGPTLS3, e desse modo reduzir os níveis de TG e/ou níveis de colesterol em um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano ou animal.
[0008] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos podem ser usados em métodos para tratamento terapêutico (incluindo o tratamento profilático e preventivo) de sintomas e doenças associadas com níveis de TG elevados e/ou níveis de colesterol elevados, incluindo, porém não limitados à hipertrigliceridemia, obesidade, hiperlipidemia, metabolismo de clolesterol| e/ou lipídio anormal, aterosclerose, diabetes melito tipo |l, doença cardiovascular, doença da artéria coronária, esteato-hepatite não alcoólica doença hepática gordurosa não alcoólica, hipercolesterolemia — familiar — homozigótica = e — heterozigótica, hipercolesterolemia resistente à estatina e outros distúrbios e doenças metabólicas relacionadas. Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui podem seletivamente reduzir a expressão de gene ANGPTL3, que pode induzir a uma redução, entre outras coisas, nos níveis de TG e/ou níveis de colesterol, em um indivíduo. Os métodos descritos aqui incluem a administração de um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 a um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano ou animal, usando quaisquer métodos adequados conhecidos na técnica, tais como injeção subcutânea ou administração intravenosa.
[0009] Em um aspecto, a invenção apresenta agentes de RNAi para inibição da expressão do gene ANGPTL3 humano, em que o agente de RNAi inclui uma fita senso e uma fita antissenso. São também descritas aqui composições que incluem ou consistem em um agente de RNAi capaz de inibir a expressão de um gene ANGPTL3, em que o agente de RNAi inclui ou consiste em uma fita senso e uma fita antissenso, e a composição também compreende pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável. As composições descritas aqui que incluem um ou mais dos agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos são capazes de seletiva e eficientemente diminuir expressão de um gene ANGPTL3. As composições que incluem um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 podem ser administradas a um indivíduo, tal como um indivíduo humano ou animal, para o tratamento (incluindo tratamento profilático ou inibição) de sintomas e doenças associadas com TG elevado, clorestero| elevado, e/ou expressão de ANGPTL3 realçado.
[0010] Um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita senso (também referida como uma fita passageiro), e uma fita antissenso (também referida como uma fita guia). A fita senso e a fita antissenso podem ser parcialmente, substancialmente, ou totalmente complementar umas às outras. O comprimento das fitas senso e antissensode agente de RNAi descritas aqui de cada qual pode ser de 16 a 30 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso têm independentemente de 17 a 26 nucleotídeos em comprimento. As fitas senso e antissenso podem ser de comprimentos iguais ou comprimentos diferentes. Em algumas modalidades, as fitas senso e antissenso têm independentemente de 21 a 26 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso ou antissenso têm independentemente de 21 a 24 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, tanto a fita senso quanto a fita antissenso têm 21 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso e/ou antissenso têm independentemente de 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, ou 30 nucleotídeos em comprimento. Os agentes de RNAi descritos aqui, na liberação a uma célula expressando ANGPTL3, inibem a expressão de um ou mais genes ANGPTLS3 in vivo ou in vitro.
[0011] Uma fita senso dos agentes de RNAi de ANGTL3 descritos aqui inclui pelo menos 16 nucleotídeos consecutivos que têm pelo menos 85% de identidade a uma sequência de alongamento núcleo (também referida aqui como um "alongamento de núcleo" ou "sequência núcleo") do mesmo número de nucleotídeos em um mRNA de ANGPLT3. Em algumas modalidades, este alongamento de núcleo de fita senso tem de 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, ou 23 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, este alongamento de núcleo de fita senso tem de 17 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, este alongamento de núcleo de fita senso tem de 19 nucleotídeos em comprimento.
[0012] Uma fita antissenso de um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui pelo menos 16 nucleotídeos consecutivos que têm pelo menos 85% de complementaridade a um alongamento núcleo do mesmo número de nucleotídeos em um mRNA de ANGPLT3 e a um alongamento núcleo do mesmo número de nucleotídeos na fita senso correspondente. Em algumas modalidades, este alongamento de núcleo de fita antissenso é de 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, ou 23 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, este alongamento de núcleo de fita antissenso é de 19 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, este alongamento de núcleo de fita antissenso é de 17 nucleotídeos em comprimento
[0013] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui alvejam a porção de um gene ANGPTL3 tendo a sequência de qualquer uma das sequências descritas na Tabela 1.
[0014] Exemplos de fitas senso e fitas antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 que podem ser incluídos nos agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui são fornecidos na Tabela 3 e Tabela 4. Exemplos de dúplices de agente de RNAi de ANGPTL3 são fornecidos na Tabela 5. Exemplos de sequências de alngamento núcleo de 19 nucleotídeos que consistem em ou são incluídos nas fitas senso e fitas antissenso de agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui, são fornecidos na Tabela 2.
[0015] Em outro aspecto, a invenção apresenta métodos para liberação de agentes de RNAi de ANGPTL3 para as células do fígado em um indivíduo, tal como um mamífero, in vivo. São também descritas aqui composições para uso em tais métodos. O um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 pode ser liberado para alvejar células ou tecidos usando qualquer tecnologia de liberação de oligonucleotídeo conhecida na técnica. Métodos de liberação de ácido nucleico incluem, porém não estão limitados a, por encapsulação em lipossomas, por iontoforese, ou por incorporação em outros veículos, tais como hidrogéis, ciclodextrinas, — nanocápsulas — biodegradáveis, e microesferas bioadesivas, vetores proteináceos, ou Dynamic Polyconjugates'"Y (DPCs) (veja, por exemplo, WO 2000/053722, WO 2008/0022309, WO 2011/ 104169, e WO 2012/083185, cada um dos quais é incorporado aqui por referência).
[0016] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 é liberado para alvejar células ou tecidos covalentemente ligando ou conjugando o agente de RNAi a um grupo de direcionamento, tal como um ligante de receptor de asialoglicoproteína (isto é, um ligante que inclui um composto que tem afinidade para o receptor de asiologlicoproteína). Em algumas modalidades, um ligante de receptor de asialoglicoproteína inclui, consiste em, ou consiste essencialmente em, uma galactose ou cluster derivado de galactose. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 é ligado a um ligante de direcionamento que compreende o derivado de galactose N-acetil- galactosamina. Em algumas modalidades, um cluster derivado de galactose inclui um trímero de N-acetil-galactosamina ou um tetrâmero de N-acetil-galactosamina. Em algumas modalidades, um cluster derivado de galactose é um trímero de N-acetil-galactosamina ou um tetrâmero de N-acetil-galactosamina. Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 que são conjugados aos ligantes de direcionamento que incluem N-acetil-galactosamina são seletivamente internalizados por células hepáticas, e hepatócitos em particular, ou através de endocitose mediada por receptor ou por outros meios. Exemplos de grupos de direcionamento úteis para liberação de agentes de RNAi são descritos, por exemplo, em Publicações de Pedido de Patente Internacional nºº WO 2018/044350 e WO 2017/156012, que são incorporados por referência em sua totalidade.
[0017] Um grupo de direcionamento pode ser ligado à extremidade 3' ou 5' de uma fita senso ou uma fita antissenso de um agente de RNAi de ANGPTL3. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é ligado à extremidade 3' ou 5' de a fita senso. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é ligado à extremidade da fita senso. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é ligado internamente a um nucleotídeo na fita senso e/ou na fita antissenso do agente de RNAi. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é ligado ao agente de RNAi por meio de um ligante.
[0018] Um grupo de direcionamento, com ou sem um ligante, pode ser ligado à extremidade 5' ou 3' de qualquer uma das fitas senso e/ou antissenso descritas nas tabelas 2, 3, e 4. Um ligante, com ou sem um grupo de direcionamento, pode ser ligado à extremidade 5' ou 3' de qualquer uma das fitas senso e/ou antissenso descritas nas tabelas 2, 3,04.
[0019] Em algumas modalidades, descritos aqui são composições que incluem um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 que têm as estruturas dúplices descritas na Tabela 5.
[0020] Em um outro aspecto, são descritas aqui composições farmacêuticas que incluem um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos, opcionalmente combinados com um ou mais terapêuticos adicionais (isto é, segundo, terceiro, etc.). Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas que incluem um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos, opcionalmente combinados com um ou mais terapêuticos adicionais (isto é, segundo, terceiro, etc.), podem ser formuladas em um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, estas composições podem ser administradas a um indivíduo, tal como um mamífero. Em algumas modalidades, o mamífero é um humano.
[0021] Em algumas modalidades, são descritas aqui composições que incluem uma combinação ou coquetel de pelo menos dois agentes de RNAi de ANGPTL3 tendo sequências de nucleotídeo diferentes. Em algumas modalidades, os dois ou mais diferentes agentes de RNAi de ANGPTL3 são cada qual separada e independentemente ligados aos grupos de direcionamento. Em algumas modalidades, os dois ou mais diferentes agentes de RNAi de ANGPTL3 são cada qual ligados aos grupos de direcionamento que incluem ou consistem em ligantes de direcionamento que incluem uma ou mais porções que alvejam o receptor de asialoglicoproteína. Em algumas modalidades, os dois ou mais diferentes agentes de RNAi de ANGPTL3 são cada qual ligados aos grupos de direcionamento que incluem ou consistem em ligantes de direcionamento que incluem um ou mais galactose-derivatives. Em algumas modalidades, os dois ou mais diferentes agentes de RNAi de ANGPTL3 são cada qual ligados aos grupos de direcionamento que incluem ou consistem em ligantes de direcionamento que incluem um ou mais N-acetil-galactosaminas.
[0022] Em outro aspecto, a invenção apresenta métodos para inibição de expressão de um gene ANGPTL3, em que os métodos incluem administrar a um indivíduo ou a uma célula de um indivíduo uma quantidade de um agente de RNAi de ANGPTL3 capaz de inibir a expressão de um gene ANGPTL3, em que o agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita senso e uma fita antissenso, e em que a fita antissenso inclui a sequência de qualquer uma das sequências de nucleotídeo de fita antissenso na Tabela 2 ou Tabela 3. Em algumas modalidades, são descritos aqui métodos de inibição de expressão de um gene ANGPTL3, em que os métodos incluem administrar a um indivíduo ou a uma célula uma quantidade de um agente de RNAi de ANGPTL3 capaz de inibir a expressão de um gene ANGPTL3, em que o agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita senso e uma fita antissenso, e em que a fita senso inclui a sequência de qualquer uma das sequências de nucleotídeo de fita senso nas tabelas 2 ou 4. Também são descritas aqui composições para uso em tais métodos.
[0023] Em um outro aspecto, a invenção apresenta métodos de tratamento (incluindo tratamento preventivo ou profilático) de doenças ou sintomas causados por níveis de TG elevados e/ou níveis de colesterol elevados, em que os métodos incluem administrar a um indivíduo em necessidade dos mesmos um agente de RNAi de ANGPTL3 tendo uma fita antissenso que inclui a sequência de qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 3. Em algumas modalidades, são descritos aqui métodos de tratamento (incluindo tratamento preventivo)
de doenças ou sintomas causados por níveis de TG elevados e/ou níveis de colesterol elevados, em que os métodos incluem administrar a um indivíduo em necessidade dos mesmos um agente de RNAi de ANGPTL3 tendo uma fita senso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 4. Também são descritas aqui composições para uso em tais métodos.
[0024] São também descritos métodos de tratamento de um indivíduo humano tendo um estado patológico (tal como uma condição ou doença), ou ser em risco de desenvolver um estado patológico, que é mediado pelo menos, em parte, pela expressão de gene ANGPTL3, os métodos que compreendem a etapa de administrar ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi de ANGPTL3 e/ou composição contendo agente de RNAi de ANGPTL3. O método de tratamento de um indivíduo com um agente de RNAi de ANGPTL3 e/ou composição contendo agente de RNAi de ANGPTL3 pode opcionalmente ser combinado com uma ou mais etapas de administração de um ou mais terapêuticos adicionais (isto é, segundo, terceiro, etc.) ou tratamentos. Um terapêutico adicional pode ser outro agente de RNAi de ANGPTL3 (por exemplo, um agente de RNAi de ANGPTL3 que alveja uma sequência diferente dentro do gene ANGPTL3). Um terapêutico adicional pode também ser um fármaco de molécula pequena, anticorpo, fragmento de anticorpo, e/ou aptâmero. Em algumas modalidades, o um ou mais terapêuticos adicionais é uma estatina, tal como atorvastatina, fluvastatina, pravastatina, pitavastatina, rosuvastatina, ou sinvastatina.
[0025] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos são opcionalmente combinados com um ou mais terapêuticos adicionais. O agente de RNAi de ANGPTL3 e terapêutico(s) adicional(s) podem ser administrados em uma composição simples ou eles podem ser administrados separadamente. Em algumas modalidades, o um ou mais terapêuticos adicionais é administrado separadamente em formas de dosagem separada do agente de RNAi (por exemplo, o agente de RNAi de ANGPTL3 é administrado pela injeção subcutânea, enquanto o terapêutico adicional envolvido no método de regime de dosagem de tratamento é administrado oralmente). Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos são administrados a um indivíduo em necessidade dos mesmos por meio de injeção subcutânea, e o um ou mais terapêuticos opcionais adicionais são administrados oralmente, que juntamente fornecem para um regime de tratamento para doenças e condições associadas com níveis de TG e/ou colesterol elevados. Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos são administrados a um indivíduo em necessidade dos mesmos por meio de injeção subcutânea, e o um ou mais terapêuticos opcionais adicionais são administrados por meio de uma injeção subcutânea separada. Em algumas modalidades, o agente de RNAi de ANGPTL3 e um ou mais terapêuticos adicionais são combinados em uma forma de dosagem única (por exemplo, um "coquetel" formulado em uma única composição para injeção subcutânea). Os agentes de RNAi de ANGPTL3, com ou sem o um ou mais terapêuticos adicionais, podem ser combinados com um ou mais excipientes para formar composições farmacêuticas.
[0026] Em algumas modalidades, são descritos aqui métodos para inibição de expressão de um gene ANGPTL3 em uma célula ou um indivíduo, em que os métodos incluem administrar à célula ou indivíduo um agente de RNAi de ANGPTL3 tendo uma fita senso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências na Tabela 4, e uma fita antissenso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências na Tabela 3.
[0027] Em algumas modalidades, composições para liberação de um agente de RNAi de ANGPTL3 para uma célula hepática,
particularmente hepatócitos, in vivo, são descritas, as composições compreendendo: um agente de RNAi de ANGPTL3 conjugado a um grupo de direcionamento. Em algumas modalidades, o grupo de direcionamento é um ligante de receptor de asialoglicoproteína.
[0028] Em algumas modalidades, são descritos aqui métodos para inibição de expressão de um gene ANGPTL3 em uma célula, os métodos que compreendem administrar um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 tendo a estrutura duplex de um duplex mencionado na Tabela 5.
[0029] Em algumas modalidades, são descritos aqui métodos de tratamento (incluindo tratamento profilático ou preventivo) de doenças, distúrbios ou sintomas causados por níveis de TG elevados e/ou níveis de colesterol elevados, em que os métodos incluem administrar a um indivíduo em necessidade dos mesmos uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi de ANGPTL3 que inclui uma fita antissenso que é pelo menos parcialmente complementar à porção do mMRNA de ANGPTL3 tendo a sequência na Tabela 1. Em algumas modalidades, são descritos aqui métodos de tratamento (incluindo tratamento profilático ou preventivo) de doenças ou sintomas causados por níveis de TG elevados e/ou níveis de colesterol elevados, em que os métodos incluem administrar a um indivíduo em necessidade dos mesmos uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi de ANGPTL3 que inclui uma fita antissenso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 3, e uma fita senso que compreende qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 4 que é pelo menos parcialmente complementar à fita antissenso. Em algumas modalidades, são descritos aqui métodos de tratamento (incluindo tratamento profilático ou preventivo) de doenças ou sintomas causados por níveis de TG elevados e/ou níveis de colesterol elevados, em que os métodos incluem administrar a um indivíduo em necessidade dos mesmos uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi de ANGPTL3 que inclui uma fita senso que compreende qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 4, e uma fita antissenso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 3 que é pelo menos parcialmente complementar à fita senso.
[0030] Em algumas modalidades, são descritos aqui métodos para inibição de expressão de um gene ANGPTL3 em uma célula, em que os métodos incluem administrar à célula um agente de RNAi de ANGPTL3 que inclui uma fita antissenso que é pelo menos parcialmente complementar à porção do MRNA de ANGPTL3 tendo a sequência na Tabela 1. Em algumas modalidades, são descritos aqui métodos de inibição de expressão de um gene ANGPTL3 em uma célula, em que os métodos incluem administrar a uma célula um agente de RNAi de ANGPTL3 que inclui uma fita antissenso que compreende a sequência de qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 3, e uma fita senso que compreende qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 4 que é pelo menos parcialmente complementar à fita antissenso. Em algumas modalidades, são descritos aqui métodos de inibição de expressão de um gene ANGPTL3 em uma célula, em que os métodos incluem administrar um agente de RNAi de ANGPTL3 que inclui uma fita senso que compreende qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 4, e uma fita antissenso que inclui a sequência de qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 3 que é pelo menos parcialmente complementar à fita senso.
[0031] Em algumas modalidades, são descritas aqui composições para inibição da expressão de um gene ANGPTL3 em uma célula, em que os métodos incluem administrar uma composição que compreende um agente de RNAi de ANGPTL3 tendo a estrutura duplex de um duplex mencionado na Tabela 5.
[0032] Em algumas modalidades, são descritas aqui composições para liberação de um agente de RNAi de ANGPTL3 para uma célula hepática in vivo, a composição incluindo um agente de RNAi de ANGPTL3 conjugado ou ligado a um grupo de direcionamento. Em algumas modalidades, o grupo de direcionamento é um ligante de receptor de asialoglicoproteina. Em algumas modalidades, composições para liberação de um agente de RNAi de ANGPTL3 para uma célula hepática in vivo são descritas, a composição incluindo um agente de RNAi de ANGPTL3 ligado a um ligante de direcionamento de N-acetil-galactosamina.
[0033] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 são descritos aqui designados para alvejar posições específicas em um gene ANGPTL3 (SEQ ID NO:1). Como definido aqui, uma sequência de fita antissenso é designada para alvejar um gene ANGPTL3 em uma determinada posição no gene quando a nucleobase de terminal 5' da fita antissenso é alinhada com uma posição que é de 19 nucleotídeos a jusante (para a extremidade 3') da posição no gene quando pareando a base ao gene. Por exemplo, como ilustrado nas tabelas 1 e 2 aqui, uma sequência de fita antissenso designada para alvejar um gene ANGPTL3 na posição 304 requer que quando pareando a base ao gene, a nucleobase de terminal 5' da fita antissenso é alinhada com a posição 322 do gene ANGPTL3.
[0034] Como fornecido aqui, um agente de RNAi de ANGPTL3 não requer que a nucleobase na posição 1 (5' > 3') da fita antissenso seja complementar ao gene, contanto que existam pelo menos 85% de complementaridade (por exemplo, pelo menos 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ou 100% de complementaridade) da fita antissenso e o gene através de uma sequência de alongamento núcleo de pelo menos 16 nucleotídeos consecutivos. Por exemplo, para um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui que é designado para alvejar a posição 304 de um gene ANGPTL3, a nucleobase de terminal
5' da fita antissenso do agente de RNAi de ANGPTL3 deve ser alinhada com a posição 322 do gene; entretanto, a nucleobase de terminal 5' da fita antissenso pode ser, porém não deve ser, complementar à posição 322 de um gene ANGPTL3, contanto que existam pelo menos 85% de complementaridade (por exemplo, pelo menos 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, ou 100% de complementaridade) da fita antissenso e o gene através de uma sequência de alongamento núcleo de pelo menos 16 nucleotídeos consecutivos. Como mostrado, entre outras coisas, pelos vários exemplos descritos aqui, o sítio específico de ligação do gene pela fita antissenso do agente de RNAi de ANGPTL3 (por exemplo, se o agente de RNAi de ANGPTL3 é designado para alvejar um gene ANGPTL3 na posição 304, na posição 921, na posição 922, ou em alguma outra posição) é importante para o nível de inibição obtido pelo agente de RNAi de ANGPTLS3.
[0035] O uso de agentes de RNAi de ANGPTL3 fornece métodos para tratamento terapêutico (incluindo profilático) de doenças/distúrbios associados com níveis de TG e/ou colesterol elevados e/ou expressão de ANGPTL3 realçada ou elevada. Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos mediam a interferência de RNA para inibir a expressão de um ou mais genes necessários para a produção de ANGPTL3. Agentes de RNAi de ANGPTL3 podem também ser usados para tratar ou prevenir várias doenças ou distúrbios, incluindo hipertrigliceridemia, obesidade, hiperlipidemia, metabolismo de clolesterol e/ou lipídio anormal, aterosclerose, diabetes, doença cardiovascular, doença da artéria coronária, e outros distúrbios e doenças metabólicas relacionadas. Além disso, composições para liberação de agentes de RNAi de ANGPTL3 para células hepáticas in vivo são descritas
[0036] As composições farmacêuticas incluindo um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 podem ser administradas de diversas maneiras dependendo se o tratamento local ou sistêmico é desejado. À administração pode ser, porém não está limitada à, administração intravenosa, intra-arterial, subcutânea, intraperitoneal, subdérmica (por exemplo, por meio de um dispositivo implantado) e intraparenquimatosa. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas são descritas aqui, administradas por injeção subcutânea.
[0037] Em algumas modalidades, são descritas aqui composições para liberação de um agente de RNAi de ANGPTL3 para uma célula hepática in vivo, em que a composição inclui um agente de RNAi de ANGPTL3 conjugado ou ligado a um grupo de direcionamento. Em algumas modalidades, o grupo de direcionamento é um ligante de receptor de asialoglicoproteina. Em algumas modalidades, composições para liberação de um agente de RNAi de ANGPTL3 para uma célula hepática in vivo são descritas, em que a composição inclui um agente de RNAi de ANGPTL3 ligado a um ligante de direcionamento que inclui N-acetil-galactosamina.
[0038] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui podem incluir um ou mais grupos de direcionamento tendo a estrutura de (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), (NAG39)s, each como definido aqui in Tabela 6.
[0039] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui incluem um grupo de alvejamento na extremidade 5' da fita senso tendo a estrutura de (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35),
(NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), (NAG39)s, cada qual como definido aqui na Tabela
6.
[0040] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos e/ou composições que incluem agentes de RNAi de ANGPTL3 podem ser usados nos métodos para tratamento terapêutico de doenças ou condições causadas por níveis de TG e/ou colesterol elevados. Tais métodos incluem administração de um agente de RNAi de ANGPTL3 como descrito aqui a um indivíduo, por exemplo, um indivíduo humano ou animal.
[0041] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3) Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3), em que a SEQ ID NO:3 está localizada nas posições 1 a 21 (5' > 3') da fita antissenso.
[0042] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo modificado diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3') usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2), em que a, c, 9, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"- flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso. Como a pessoa versada na técnica claramente entenderia, a inclusão de uma ligação de fosforotioato, como mostrado nas sequências de nucleotídeo modificado descritas aqui, substitui a ligação de fosfodiéster tipicamente presente em oligonucleotídeos (veja, por exemplo, Figs. 5A a 5K mostrando todas as ligações internucleosídeo) Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotideo (58 > 3) usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2), em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotiocato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[0043] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo modificado diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3') usAfscUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfasGfsc (SEQ ID NO:4), em que a, c, g, e urepresentam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"- flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso. Como a pessoa versada na técnica claramente entenderia, a inclusão de uma ligação de fosforotioato, como mostrado nas sequências de nucleotídeo modificado descritas aqui, substitui a ligação de fosfodiéster tipicamente presente em oligonucleotídeos (veja, por exemplo, Figs. 5A a 5K mostrando todas as ligações internucleosídeo) Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotideo (5' > 3) usAfscUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfasGfsc (SEQ ID NO4), em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[0044] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ I|D NO:6) Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ ID NO:6), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3')
UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ |D NO:6), em que a SEQ ID NO:5 está localizada nas posições 1 a 21 (5' > 3') da fita antissenso.
[0045] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo modificado diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3') usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsu (SEQ ID NO:5), em que a, c, 9, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2”- flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso. Como a pessoa versada na técnica claramente entenderia, a inclusão de uma ligação de fosforotioato, como mostrado nas sequências de nucleotídeo modificado descritas aqui, substitui a ligação de fosfodiéster tipicamente presente em oligonucleotídeos (veja, por exemplo, Figs. 5A a 5K mostrando todas as ligações internucleosídeo). Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotideo (58 > 3) usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfaGfsu (SEQ ID NO:5), em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[0046] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3')
UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ |D NO:8) Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ ID NO:8), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ ID NO:8), em que a SEQ ID NO:8 está localizada nas posições 1 a 21 (5' > 3') da fita antissenso.
[0047] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo modificado diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3') usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfggsc (SEQ ID NO:7), em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"- flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotideo (58 > 3) usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfggsc (SEQ ID NO:7), em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforoticato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[0048] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10) Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10), em que a SEQ ID NO:10 está localizada nas posições 1 a 21 (5' > 3') da fita antissenso.
[0049] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo modificado diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3') usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfgGfsu (SEQ ID NO:9), em que a, c, g, e urepresentam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"- flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotíiddeo (5' > 3) usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfgGfsu (SEQ ID NO:9), em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[0050] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UGUUGAAUUAAUGUCCAUGGA (SEQ ID NO:12) Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) UGUUGAAUUAAUGUCCAUGGA (SEQ |D NO:12), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UGUUGAAUUAAUGUCCAUGGA (SEQ ID NO:12), em que a SEQ ID NO:12 está localizada nas posições 1 a 21 (5' > 3') da fita antissenso.
[0051] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo modificado diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3') usGfsusugaauuaaUfgUfcCfaUfgGisa (SEQ ID
NO:11), em que a, c, g, e u representam 2"-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"- flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotíideo (5' > 3) usGfsusugaauuaaUfgUufcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:11), em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[0052] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo modificado diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3') usGfsusUfgAfaUfuAfaUfgUfcCfaUfgGisa (SEQ ID NO:13), em que a, c, 9, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTLS3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo (5' > 3") usGfsusUfgAfaUfuAfaUfgUufcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:13), em que a, c, 9, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"-
flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[0053] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ ID NO:15) Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ ID NO:15), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ ID NO:15), em que a SEQ ID NO:14 está localizada nas posições 1 a 21 (5' > 3') da fita antissenso.
[0054] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo modificado diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3') asCfsasUfcGfucuaaCfaUfaGfcAfaCfsc (SEQ ID NO:14), em que a, c, g, e u representam 2"-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"- flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotíiddeo (5' > 323) asCfsasUfcGfucuaaCfaUfaGfcAfaCfsc (SEQ ID NO:14), em que a, c, 9, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforoticato, e em que a fita senso é pelo menos substancialmente complementar à fita antissenso.
[0055] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3) e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3) GCUCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:17). Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3") UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) GCUCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:17), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[0056] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3) e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3) GCUCAACAU(A?NJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:19), em que (AºY) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3") UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferido em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3') GCUCAACAU(A?NJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:19), em que (A?YN) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina, e em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[0057] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3) e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3") GCUCAAC(A?N)JU(A?NJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:21), em que (AºY) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina.
Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3") UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 37) GCUCAAC(A?N)JU(A?NJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:21), em que (AN) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina, e em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[0058] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ ID NO:6) e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') ACUCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:24). Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ ID NO:6), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3") ACUCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:24), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[0059] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ ID NO:8) e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3) GCCCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ |D NO:26). Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3") UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ ID NO:8), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) GCCCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ ID NO:26), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[0060] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10) e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') ACCCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ |D NO:28). Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) ACCCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ ID NO:28), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[0061] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UGUUGAAUUAAUGUCCAUGGA (SEQ ID NO:12) e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') UCCAUGGACAUUAAUUCAACA (SEQ ID NO:30). Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) UGUUGAAUUAAUGUCCAUGGA (SEQ ID NO:12), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) UCCAUGGACAUUAAUUCAACA (SEQ ID NO:30), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[0062] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3') ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ ID NO:15) e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleobase diferindo em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeo (5' > 3) GGUUGCUAUGUUAGACGAUGU (SEQ ID NO:32). Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ ID NO:15), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo diferindo em não mais do que 1 nucleotídeo da sequência de nucleotídeo (5' > 3) GGUUGCUAUGUUAGACGAUGU (SEQ ID NO:32), em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[0063] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') gcucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:16), em que a, c, gy eu representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfaGfsc (SEQ ID NO:2), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) gcucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:16), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N- acetil-galactosamina.
[0064] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') gcucaacaUfa 2NUfuugaucagua (SEQ ID NO:18), em que a, c, g, eu representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; a 2N representa 2'-O-metil-2-aminoadenosina (veja a Tabela 6); Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotiocato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' = 3") usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfaGfsc (SEQ ID NO:2), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) gcucaacaUfa 2NUfuugaucagua (SEQ ID NO:18), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N- acetil-galactosamina.
[0065] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') usAfscUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfasGfsc (SEQ ID NO:4), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') gcucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:16), em que a, c, gy, eu representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) usAfscUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfasGfsc (SEQ ID NO4), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) gcucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:16), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N- acetil-galactosamina.
[0066] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) gcucaaca 2NUfa 2NUfuugaucagua (SEQ ID NO:20), em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; a 2N representa 2'-O-metil-2-aminoadenosina (veja a Tabela 6); Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforoticato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTLS3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfaGfsc (SEQ ID NO:2), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) gcucaaca 2NUfa 2NUfuugaucagua (SEQ ID NO:20), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5º da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N-acetil-galactosamina.
[0067] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3") usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') gcUfcAfaCfaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:22), em que a, c, g, eu representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; a 2N representa 2'-O-metil-2-aminoadenosina (veja a Tabela 6); Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforoticato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' = 3") usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfaGfsc (SEQ ID NO:2), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) gecUfcAfaCfaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:22), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N- acetil-galactosamina.
[0068] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsu (SEQ ID NO:5), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') acucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:23), em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina,
citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgufuGfaGfsu (SEQ ID NO:5), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) acucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:23), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N- acetil-galactosamina.
[0069] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfggsc (SEQ ID NO:7), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') gccecauggAfCfAfuuaauucaaa (SEQ ID NO:25), em que a, c, gy, eu representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfggsc (SEQ ID NO:7), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) gccecauggAfCfAfuuaauucaaa (SEQ ID NO:25), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N- acetil-galactosamina.
[0070] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfgGfsu (SEQ ID NO:9), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) acccauggAfCfAfuuaauucaaa (SEQ ID NO:27), em que a, c, g, eu representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' — 3) usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfgGfsu (SEQ ID NO:9), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) acccauggAfCfAfuuaauucaaa (SEQ ID NO:27), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N- acetil-galactosamina.
[0071] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') usGfsusugaauuaaUfgUufcCfaUfgGisa (SEQ ID NO:11), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') uccauggaCfAfUfuaauucaaca (SEQ ID NO:29), em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') usGfsusugaauuaaUfgUfcCfaUufgGfisa (SEQ ID NO:11), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') uccauggaCfAfUfuaauucaaca (SEQ ID NO:29), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5º, em que o ligante de direcionamento inclui N-acetil-galactosamina.
[0072] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') usGfsusUfgAfaUfuAfaUfgUfcCfaUfgGisa (SEQ ID NO:13), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') uccauggaCfAfUfuaauucaaca (SEQ ID NO:29), em que a, c, g, eu representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina,
respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) usGfsusUfgAfaUfuAfaUfgUfcCfaUfgGisa (SEQ ID NO:13), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3) uccauggaCfAfUfuaauucaaca (SEQ ID NO:29), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N- acetil-galactosamina.
[0073] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') asCfsasUfcGfucuaaCfaUfaGfcAfaCfsc (SEQ ID NO:14), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') gguugcuaUfGfUfuagacgaugu (SEQ ID NO:31), em que a, c, g, eu representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2'-flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; e s representa uma ligação de fosforotioato. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') asCfsasUfcGfucuaaCfaUfaGfcAfaCfsc (SEQ ID NO:14), e uma fita senso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende a sequência de nucleotídeo modificado (5' > 3') cccuaaaaGfGfGfacaguauucu (SEQ ID NO:31), e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N-acetil-galactosamina.
[0074] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo que difere em O ou 1 nucleotídeo de uma das seguintes sequências de nucleotídeo (5' 3 3'): UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3); UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ ID NO:6); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ ID NO:8); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10); UGUUGAAUUAAUGUCCAUGGA (SEQ ID NO:12); ou ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ ID NO:15); em que o agente de RNAi de ANGPTL3 também inclui uma fita senso que é pelo menos parcialmente complementar à fita antissenso; e em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos tanto na fita antissenso quanto na fita senso são nucleotídeos modificados.
[0075] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo que difere em O ou 1 nucleotídeo de uma das seguintes sequências de nucleotídeo (5' > 3'): UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3); UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ ID NO:6); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ ID NO:8);
UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10); UGUUGAAUUAAUGUCCAUGGA (SEQ |D NO:12); ou ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ ID NO:15); em que o agente de RNAi de ANGPTL3 também inclui uma fita senso que é pelo menos parcialmente complementar à fita antissenso; em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos tanto na fita antissenso quanto na fita senso são nucleotídeos modificados; e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5º da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N-acetil-galactosamina.
[0076] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo que difere em O ou 1 nucleotídeo de uma das seguintes sequências de nucleotídeo (5' 3 3'): UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3); UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ ID NO:6); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ ID NO:8); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10); UGUUGAAUUAAUGUCCAUGGA (SEQ |D NO:12); ou ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ ID NO:15); em que o agente de RNAi de ANGPTL3 também inclui uma fita senso que é pelo menos parcialmente complementar à fita antissenso; em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos tanto na fita antissenso quanto na fita senso são nucleotídeos modificados; e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5º da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N-acetil-galactosamina; e em que a respectiva sequência de fita antissenso está localizada nas posições 1 a 21 da fita antissenso.
[0077] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso e uma fita senso, em que a fita antissenso e a fita senso consistem em, consistem essencialmente em, ou compreendem sequências de nucleotídeo que diferem em O ou 1 nucleotídeo de um dos seguintes pares de sequência de nucleotídeo (5' >3) UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3) e GCUCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:17); UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3) e GCUCAACAU(A?PNJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:19), em que (A?YN) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina; UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3) e GCUCAAC(A?N)JU(A?NJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:21), em que (AN) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina; UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ ID NO:6) e ACUCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:24); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ ID NO:8) e GCCCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ ID NO:26); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10) e ACCCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ ID NO:28); UGUUGAAUUAAUGUCCAUGGA (SEQ ID NO:12) e UCCAUGGACAUUAAUUCAACA (SEQ ID NO:30); ou ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ ID NO:15) e GGUUGCUAUGUUAGACGAUGU (SEQ |D NO:32); em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos tanto na fita antissenso quanto na fita senso são nucleotídeos modificados.
[0078] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso e uma fita senso, em que a fita antissenso e a fita senso consistem em, consistem essencialmente em, ou compreendem sequências de nucleotídeo que diferem em O ou 1 nucleotídeo de uma das seguintes sequências de nucleotídeo (5' > 3') pairs: UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3) e GCUCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:17); UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3) e GCUCAACAU(A?PNJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:19), em que (A?ºYN) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina; UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3) e GCUCAAC(A?N)JU(A?NJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:21), em que (AY) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina; UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ ID NO:6) e ACUCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ |D NO:24); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ ID NO:8) e GCCCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ ID NO:26); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10) e ACCCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ ID NO:28); UGUUGAAUUVAAUGUCCAUGGA (SEQ ID NO:12) e UCCAUGGACAUUAAUUCAACA (SEQ ID NO:30); ou ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ ID NO:15) e GGUUGCUAUGUUAGACGAUGU (SEQ |D NO:32); em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos tanto na fita antissenso quanto na fita senso são nucleotídeos modificados; e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5º da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N-acetil-galactosamina.
[0079] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo modificado que difere em O ou 1 nucleotídeo de uma das seguintes sequências de nucleotídeo (5' 3 3"): usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2); usAfscUfgAfuCfaAfaUfaUfgufuGfasGfsc (SEQ ID NO:4); usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsu (SEQ ID NO:5); usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfggsc (SEQ ID NO:7); usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfgGfsu (SEQ ID NO:9); usGfsusugaauuaaUfgufcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:11); usGfsusUfgAfaUfuAfaUfgUfcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:13); asCfsasUfcGfucuaaCfaUfaGfcAfaCfsc (SEQ ID NO:14); em que a, c, gq, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"- flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; s representa uma ligação de fosforotioato; e em que o agente de RNAi de ANGPTL3 também inclui a fita senso que é pelo menos parcialmente complementar à fita antissenso; e em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos na fita senso são nucleotídeos modificados.
[0080] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo modificado que difere em O ou 1 nucleotídeo de uma das seguintes sequências de nucleotídeo (5' 3 3"): usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2); usAfscUfgAfuCfaAfaUfaUufgUfuGfasGfsc (SEQ ID NO:4); usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsu (SEQ ID NO:5); usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfggsc (SEQ ID NO:7);
usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfgGfsu (SEQ ID NO:9); usGfsusugaauuaaUfgUufcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:11); usGfsusUfgAfaUfuAfaUfgUufcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:13); asCfsasUfcGfucuaaCfaUfaGfcAfaCfsc (SEQ ID NO:14); em que o agente de RNAi de ANGPTL3 também inclui a fita senso que é pelo menos parcialmente complementar à fita antissenso; em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos na fita senso são nucleotídeos modificados; em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos tanto na fita antissenso quanto na fita senso são nucleotídeos modificados; e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5, em que o ligante de direcionamento inclui N-acetil-galactosamina.
[0081] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso e uma fita senso que consistem em, consistem essencialmente em, ou compreendem sequências de nucleotídeo modificado que diferem em O ou 1 nucleotídeo de um dos seguintes pares de sequência de nucleotídeo (5' > 3"): usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfaGfsc (SEQ ID NO:2) e gcecucaacaUfAfufuugaucagua (SEQ ID NO:16); usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2) e gcucaacaUfa 2NUfuugaucagua (SEQ ID NO:18); usAfscUfgAfuCfaAfaUfaUufgUfuGfasGfsc (SEQ ID NO:4) e gcucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:16); usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfaGfsc (SEQ ID NO:2) e gcucaaca 2NUfa 2NUfuugaucagua (SEQ ID NO:20); usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUfuGfaGfsc (SEQ ID NO:2) e gcUufcAfaCfaUfAfuUfuugaucagua (SEQ ID NO:22); usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsu (SEQ ID NO:5) e acucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:23); usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfggsc (SEQ ID NO:7) e geccauggAfCfAfuuaauucaaa (SEQ ID NO:25); usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfgGfsu (SEQ ID NO:9) e acccauggAfCfAfuuaauucaaa (SEQ ID NO:27); usGfsusugaauuaaUfgUufcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:11) e uccauggaCfAfUfuaauucaaca (SEQ ID NO:29); usGfsusUfgAfaUfuAfaUfgUfcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:13) e uccauggaCfAfUfuaauucaaca (SEQ ID NO:29); ou asCfsasUfcGfucuaaCfaUfaGfcAfaCfsc (SEQ ID NO:14) e gguugcuaUufGfUfuagacgaugu (SEQ ID NO:31); em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"- flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; a 2N representa 2'-O-metil-2-aminoadenosina (veja a Tabela 6); es representa uma ligação de fosforotioato.
[0082] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso e uma fita senso que consistem em, consistem essencialmente em, ou compreendem um dos pares de sequência de nucleotídeo (5' 3 3'): usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2) e gcucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:16); usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2) e gcucaacaUfa 2NUfuugaucagua (SEQ ID NO:18); usAfscUfgAfuCfaAfaUfaUfgufuGfasGfsc (SEQ ID NO:4) e gcucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:16); usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2) e gcucaaca 2NUfa 2NUfuugaucagua (SEQ ID NO:20); usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2) e gcUufcAfaCfaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:22);
usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgUufuGfaGfsu (SEQ ID NO:5) e acucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:23); usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfggsc (SEQ ID NO:7) e gecceauggAfCfAfuuaauucaaa (SEQ ID NO:25); usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfgGfsu (SEQ ID NO:9) e acccauggAfCfAfuuaauucaaa (SEQ ID NO:27); usGfsusugaauuaaUfgUfcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:11) e uccauggaCfAfUfuaauucaaca (SEQ ID NO:29); usGfsusUfgAfaUfuAfaUfgUufcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:13) e uccauggaCfAfUfuaauucaaca (SEQ ID NO:29); ou asCfsasUfcGfucuaaCfaUfaGfcAfaCfsc (SEQ ID NO:14) e gguugcuaUufGfUfuagacgaugu (SEQ ID NO:31); em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2”- flúor adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; a 2N representa 2'-O-metil-2-aminoadenosina (veja a Tabela 6); s representa uma ligação de fosforotioato; e em que a fita senso também inclui resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' e na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, e a fita senso também inclui um ligante de direcionamento que é covalentemente ligado à extremidade terminal 5', em que o ligante de direcionamento inclui N- acetil-galactosamina.
[0083] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que inclui uma sequência de nucleobase que difere em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeos selecionados do grupo que consiste em (5' > 3'): UACUGAUCAAAUAUGUUGA (SEQ ID NO:50); UGUUGAAUUAAUGUCCAUG (SEQ ID NO:55); UUUGAAUUAAUGUCCAUGG (SEQ ID NO:60); ou ACAUCGUCUAACAUAGCAA (SEQ ID NO:64).
[0084] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que inclui uma sequência de nucleobase que difere em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeos selecionados do grupo que consiste em (5' > 3"): UACUGAUCAAAUAUGUUGA (SEQ ID NO:50); UGUUGAAUUAAUGUCCAUG (SEQ ID NO:55); UUUGAAUUAAUGUCCAUGG (SEQ ID NO:60); ou ACAUCGUCUAACAUAGCAA (SEQ ID NO:64); e em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[0085] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso que inclui uma sequência de nucleobase que difere em O ou 1 nucleobase da sequência de nucleotídeos selecionados do grupo que consiste em (5' > 3"): UACUGAUCAAAUAUGUUGA (SEQ ID NO:50); UGUUGAAUUAAUGUCCAUG (SEQ ID NO:55); UUUGAAUUAAUGUCCAUGG (SEQ ID NO:60); ou ACAUCGUCUAACAUAGCAA (SEQ ID NO:64); e em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados, e em que a SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:60, ou SEQ ID NO:64, respectivamente, são localizadas nas posições de nucleotídeo 1 a 19 (5' > 3') da fita antissenso.
[0086] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso e uma fita senso, que cada qual inclui sequências de nucleobase que diferem em O ou 1 nucleobase dos pares de sequência de nucleotídeo selecionados do grupo que consiste em (5' > 3): UACUGAUCAAAUAUGUUGA (SEQ ID NO:50) e UCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:130); UACUGAUCAAAUAUGUUGA (SEQ ID NO:50) e
UCAACAU(A?NJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:131), em que (AN) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina; UACUGAUCAAAUAUGUUGA (SEQ ID NO:50) e UCAAC(A?N)JU(A?N)JUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:132), em que (AºYN) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina; UGUUGAAUUVUAAUGUCCAUG (SEQ ID NO:55) e CAUGGACAUUAAUUCAACA (SEQ ID NO:145); UUUGAAUUAAUGUCCAUGG (SEQ ID NO:60) e CCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ ID NO:150); ACAUCGUCUAACAUAGCAA (SEQ ID NO:64) e UUGCUAUGUUAGACGAUGU (SEQ ID NO:154).
[0087] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma fita antissenso e uma fita senso, que cada qual inclui sequências de nucleobase que diferem em O ou 1 nucleobase dos pares de sequência de nucleotídeo selecionados do grupo que consiste em (5' > 3): UACUGAUCAAAUAUGUUGA (SEQ ID NO:50) e UCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:130); UACUGAUCAAAUAUGUUGA (SEQ ID NO:50) e UCAACAU(A?PNJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:131), em que (AN) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina; UACUGAUCAAAUAUGUUGA (SEQ ID NO:50) e UCAAC(A?N)JU(APN)JUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:132), em que (AN) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenina; UGUUGAAUUVUAAUGUCCAUG (SEQ ID NO:55) e CAUGGACAUUAAUUCAACA (SEQ ID NO:145); UUUGAAUUAAUGUCCAUGG (SEQ ID NO:60) e CCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ ID NO:150); ACAUCGUCUAACAUAGCAA (SEQ ID NO:64) e UUGCUAUGUUAGACGAUGU (SEQ ID NO:154); e em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
[0088] Em algumas modalidades, as composições descritas aqui que compreendem um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 são embalados em um Kit, recipiente, embalagem, aplicador, seringas pré- carregadas, ou frasconetes. Em algumas modalidades, as composições descritas aqui são administradas parenteralmente.
[0089] Como usado aqui, os termos "oligonucleotídeo" e "polinucleotídeo" significam um polímero de nucleosídeos ligados, cada um dos quais pode ser independentemente modificado ou não modificado.
[0090] Como usado aqui, um "agente de RNAi" (também referido como um "gatilho de RNAi") significa uma composição que contém uma molécula de oligonucleotídeo de RNA ou similar ao RNA (por exemplo, RNA quimicamente modificado) que é capaz de degradar ou inibir (por exemplo, degrada ou inibe sob condições apropriadas) a translação de transcrições de RNA mensageiro (mMRNA) de um mRNA alvo de uma maneira específica de sequência. Como usado aqui, agentes de RNAi podem operar através do mecanismo de interferência do RNA (isto é, indução da interferência de RNA através da interação com a maquinaria de via de reação de interferência de RNA (complexo de silenciamento induzido por RNA ou RISC) de células mamíferas), ou por qualquer(s) mecanimo(s) ou via(s) de reação alternativo(s). Enquanto acredita-se que agentes de RNAi, visto que tal termo é usado aqui, operam principalmente através do mecanismo de interferência de RNA, os agentes de RNAi descritos não são ligados por ou limitados a qualquer via de reação ou mecanismo de ação. Agentes de RNAi são descritos aqui compreendidos de uma fita senso e uma fita antissenso, e incluem, porém não estão limitados a: RNAs de interferência curtos (ou pequenos) (sIiRNAs), RNAs de fita dupla (dsSsRNA), micro RNAs
(MIRNAs), RNAs de grampo de cabelo curto (ShRNA), e substratos de Dicer. A fita antissenso dos agentes de RNAi descrita aqui é pelo menos parcialmente complementar ao mRNA sendo alvejado (isto é, MRNA de ANGPTL3). Agentes de RNAi podem incluir um ou mais nucleotídeos modificados e/ou uma ou mais ligações de não fosfodiéster.
[0091] Como usado aqui, os termos "silenciar," "reduzir," "inibir," "sub-regular," ou "bloquear" quando referindo-se à expressão de um determinado gene, significam que a expressão do gene, quando medida pelo nível de RNA transcrito do gene ou do nível de polipeptídeo, proteína, ou subunidade de proteína transladada do MRNA em uma célula, grupo de células, tecido, órgão, ou indivíduo no qual o gene é transcrito, é reduzida quando a célula, grupo de células, tecido, órgão, ou indivíduo é tratado com os agentes de RNAi descritos aqui como comparado a uma segunda célula, grupo de células, tecido, órgão, ou indivíduo que não está sendo ou não foi desse modo tratado.
[0092] Como usado aqui, os termos "sequência" e "sequência de nucleotídeo" significam uma sucessão ou ordem de nucleobases ou nucleotídeos, descritos com uma sucessão de letras usando nomenclatura padrão.
[0093] Como usado aqui, uma "base," "base de nucleotídeo," ou "nucleobase," é um composto de purina ou pirimidina heterocíclica que é um componente de um nucleotídeo, e inclui as bases de purina primárias, adenina e guanina, e as bases de pirimidina primárias, citosina, timina, e uracila. A nucleobase pode também ser modificada para incluir, sem limitação, bases universais, bases hidrofóbicas, bases promíscuas, bases de tamanho expandido, e bases fluoradas. (Veja, por exemplo, Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Herdewijn, P. ed. Wiley-VCH, 2008). A síntese de tais nucleobases modificadas (incluindo compostos de fosforamidita que incluem nucleobases modificadas) é conhecida na técnica.
[0094] Como usado aqui, e a menos que de outro modo indicado, o termo "complementar," quando usado para descrever uma primeira sequência de nucleobase ou nucleotídeo (por exemplo, fita senso de agente de RNAi ou mRNA alvejado) em relação a uma segunda sequência de nuclecbase ou nucleotídeo (por exemplo, oligonucleotídeo de fita antissenso simples ou fita antissenso de agente de RNAi), significa a capacidade de um oligonucleotídeo ou polinucleotídeo incluindo a primeira sequência de nucleotídeo de hibridizar-se (formar ligações de hidrogênio de par de base sob condições fisiológicas mamíferas (ou condições similares in vitro)) e formar uma estrutura helical duplex ou dupla sob certas condições padrão com um oligonucleotídeo ou polinucleotídeo incluindo a segunda sequência de nucleotídeo. Sequências complementares incluem pares de base Watson-Crick ou pares de base não Watson-Crick e incluem nucleotídeos naturais ou modificados ou mímicos de nucleotídeo, pelo menos na medida em que os requisitos de hibridação acima sejam cumpridos. Complementaridade e identidade de sequência são independentes de modificação. Por exemplo, a e Af, como definidos aqui, são complementares a U (ou T) e idênticos a A para os propósitos de determinação de identidade ou complementaridade.
[0095] Como usado aqui, "perfeitamente complementar" ou "totalmente complementar" significa que em um par hibridizado de moléculas de sequência de nucleobase ou nucleotídeo, todas (100%) as bases em uma sequência contígua de um primeiro oligonucleotídeo hibridizar-se-ão com o mesmo número de bases em uma sequência contígua de um segundo oligonucleotídeo. A sequência contígua pode compreender toda ou uma parte de uma primeira ou segunda sequência de nucleotídeo.
[0096] Como usado aqui, "parcialmente complementar" significa que em um par hibridizado de moléculas de sequência de nucleobase ou nucleotídeo, pelo menos 70%, porém não todas, das bases em uma sequência contígua de um primeiro oligonucleotídeo hibridizar-se-ão com o mesmo número de bases em uma sequência contígua de um segundo oligonucleotídeo. A sequência contígua pode compreender toda ou uma parte de uma primeira ou segunda sequência de nucleotídeo.
[0097] Como usado aqui, "substancialmente complementar" significa que em um par hibridizado de moléculas de sequência de nucleobase ou nucleotídeo, pelo menos 85%, porém nem todas, as bases em uma sequência contígua de um primeiro oligonucleotídeo hibridizar-se-ão com o mesmo número de bases em uma sequência contígua de um segundo oligonucleotídeo. A sequência contígua pode compreender toda ou uma parte de uma primeira ou segunda sequência de nucleotídeo.
[0098] Como usado aqui, os termos "complementar," "totalmente complementar," "parcialmente complementar," e "substancialmente complementar" são usados com respeito ao pareamento de nucleobase ou nucleotídeo entre a fita senso e a fita antissenso de um agente de RNAi, ou entre a fita antissenso de um agente de RNAi e uma sequência de um mRNA de ANGPTL3.
[0099] Como usado aqui, o termo "substancialmente idêntico" ou "identidade substancial," como aplicado a uma sequência de ácido nucleico significa a sequência de nucleotídeo (ou uma porção de sequência de nucleotídeo) tem pelo menos cerca de 85% de identidade de sequência ou mais, por exemplo, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 99% de identidade, em comparação com uma sequência de referência. A porcentagem de identidade de sequência é determinada comparando as duas sequências idealmente alinhadas sobre uma janela de comparação. A porcentagem é calculada determinando o número das posições nas quais o mesmo tipo de base de ácido nucleico ocorre e mambas as sequências para produzir o número de posições pareadas, dividindo o número de posições pareadas pelo número total das posições na janela de comparação e multiplicando o resultado por 100 para produzir a porcentagem de identidade de sequência. As invenções descritas aqui abrangem as sequências de nucleotídeo substancialmente idênticas àquelas descritas aqui.
[00100] Como usado aqui, os termos "tratar," "tratamento," e similares, significam os métodos ou etapas adotados para fornecer mitigação de ou alívio do número, gravidade, e/ou frequência de um ou mais sintomas de uma doença em um indivíduo. Como usado aqui, "tratar" e "tratamento" podem incluir o tratamento preventivo, controle, tratamento profilático, e/ou inibição ou redução do número, gravidade, e/ou frequência de um ou mais sintomas de uma doença em um indivíduo.
[00101] Como usado aqui, a frase "introduzir em uma célula," quando referindo-se a um agente de RNAi, significa funcionalmente liberar o agente de RNAi em uma célula. A frase "liberação funcional," significa a liberação do agente de RNAi à célula de uma maneira que permita o agente de RNAi ter a atividade biológica esperada, por exemplo, inibição específica de sequência de expressão de gene.
[00102] A menos que estabelecido de outro modo, o uso do símbolo É: como usado aqui significa que qualquer grupo ou grupos podem ser ligados a ele, que está de acordo com o escopo das invenções descritas aqui.
[00103] Como usado aqui, o termo "isômeros" refere-se aos compostos que têm fórmulas moleculares idênticas, porém que diferem na natureza ou na sequência de ligação de seus átomos ou na disposição de seus átomos no espaço. Isomeros que diferem na disposição de seus átomos em espaço são chamados
"estereoisômeros." Estereoisômeros que não são imagens refletidas umas das outras são chamados "diastereoisômeros, e estereoisômeros que são imagens não sobreponíveis são chamados "enantiômeros," ou algumas vezes isômeros óticos. Um átomo de carbono ligado a quatro substituintes não idênticos é chamado um "centro quiral"."
[00104] “Como usado aqui, a menos que especificamente identificado em uma estrutura como tendo uma conformação particular, para cada estrutura na qual centros assimétricos estão presentes e desse modo dão origem aos enantiômeros, ou outras configurações estereoisoméricas, ca estrutura descrita aqui destina-se a representar todos os tais possíveis isômeros, incluindo suas formas opticamente puras e racêmicas. Por exemplo, as estruturas são descritas destinadas a abranger misturas de diastereômeros, bem como estereoisômeros simples.
[00105] Como usado em uma reivindicação aqui, a frase "que consiste em" exclui qualquer elemento, etapa ou ingrediente não reivindicado na reivindicação. Quando usado em uma reivindicação aqui, a frase "que consiste essencialmente em" limita o escopo de uma reivindicação aos materiais ou etapas especificados e aqueles que não afetam materialmente a(s) característica(s) básica(s) e nova(s) da invenção reivindicada.
[00106] A pessoa versada na técnica facilmente entenderia ou apreciaria que os compostos e composições descritos aqui podem ter certos átomos (por exemplo, átomos de N, O, ou S) em um estado protonado ou desprotonado dependendo do ambiente no qual o composto ou composição é colocado. Consequentemente, como usado aqui, as estruturas descritas aqui consideram que certos grupos funcionais, tais como, por exemplo, OH, SH, ou NH, podem ser protonados ou desprotonados. A invenção aqui destina-se a abranger os compostos composições descritos independentemente de seu estado de protonação baseado no ambiente (tal como pH), como seria facilmente entendido pela pessoa versada na técnica.
[00107] Como usado aqui, o termo "ligado" ou "conjugado" quando referindo à conexão entre dois compostos ou moléculas significa que dois compostos ou moléculas são ligados por uma ligação covalente. À menos que estabelecido, os termos "ligado" e "conjugado" como usado aqui podem referir-se à conexão entre um primeiro composto e um segundo composto com ou sem quaisquer átomos intervenientes ou grupos de átomos.
[00108] Como usado aqui, o termo "incluindo" é usado aqui para significar, e é usado alternadamente com, a frase "incluindo, porém não limitado a." O termo "ou" é usado aqui para significar, e é usado alternadamente com, o termo "e/ou," a menos que o contexto claramente indica de outro modo.
[00109] A menos que de outro modo definido, todos os termos técnicos e específicos usados aqui têm o mesmo significado como comumente entendido por alguém versado na técnica. Embora métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos aqui possam ser usados na prática ou teste da presente invenção, métodos adeuados são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes, e outras referências mencionadas aqui são incorporados por referência em sua totalidade. No caso de conflito, a presente especificação, incluindo definições, controlará. Além disso, os materiais, métodos e exemplos são ilustrativos apenas e não se destinam a ser limitantes.
[00110] Outros objetivos, características, aspectos e vantagens da invenção serão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada, figuras acompanhantes e a partir das reivindicações.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[00111] FIG 1Aa1D. Representação de estrutura química de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5488, conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil-galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6) na extermidade 5' terminal da fita senso, mostrada em uma forma de sal de sódio.
[00112] FIG. 2A a 2D. Representação de estrutura química de agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5488, conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil-galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6) na extermidade 5' terminal da fita senso, mostrada em uma forma de ácido livre.
[00113] FIG. 3A a 3D. Representação de estrutura química de agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5775, conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil-galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6) na extermidade 5' terminal da fita senso, mostrada em uma forma de sal de sódio.
[00114] FIG. 4A a 4D. Representação de estrutura química de agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5775, conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil-galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6) na extermidade 5' terminal da fita senso, mostrada em uma forma de ácido livre.
[00115] FIG.5A. Diagrama esquemático das fitas senso e antissenso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5488 (veja as Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. SA descreve SEQ ID NOs: 2 e 300.
[00116] As seguintes abreviações são usadas nas Figuras 3A a 3B: a, c, g, e u são nucleotídeos de 2'-O-metila modificados; Af, Cf, Gf, e Uf são nucleotídeos de 2'-flúor modificados; p é uma ligação de fosfodiéster; s é uma ligação de fosforotioato; invAb é um resíduo abásico invertido; a 2N é um nucleotídeo de 2'-O-metil-2-
aminoadenosina modificado (veja a Tabela 6); e (NAG37)s é ligante de direcionamento de tridentato de N-acetil-galactosamina tendo a estrutura descrita na Tabela 6.
[00117] FIG.5B.Diagrama esquemático das fitas antissenso e senso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5775 (veja as Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. 5B descreve SEQ ID NOs: 2 e 334.
[00118] FIG.5C.Diagrama esquemático das fitas antissenso e senso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5791 (veja as Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. SC descreve SEQ ID NOs: 4 e 300.
[00119] FIG.5D.Diagrama esquemático das fitas antissenso e senso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5777 (veja as Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. 5D descreve SEQ ID NOs: 2 e 336.
[00120] FIG.5E.Diagrama esquemático das fitas antissenso e senso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5743 (veja as Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. SE descreve SEQ ID NOs: 2 e 326.
[00121] FIG.5F. Diagrama esquemático das fitas antissenso e senso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5487 (veja as Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. 5F descreve SEQ ID NOs: 5 e 299.
[00122] —FIG.5G. Diagrama esquemático das fitas antissenso e senso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5307 (veja as
Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. 5G descreve SEQ ID NOs: 7 e 278.
[00123] FIG.5H. Diagrama esquemático das fitas antissenso e senso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5418 (veja as Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. 5SH descreve SEQ ID NOs: 9 e 292.
[00124] FIG.5I. Diagrama esquemático das fitas antissenso e senso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5577 (veja as Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. 51 descreve SEQ ID NOs: 11 e 279.
[00125] FIG.5J. Diagrama esquemático das fitas antissenso e senso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5308 (veja as Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. 5J descreve SEQ ID NOs: 13 e 279.
[00126] FIG.5K.Diagrama esquemático das fitas antissenso e senso modificadas de agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5840 (veja as Tabelas 3 a 5), conjugado a um ligante de tridentato de N-acetil- galactosamina tendo a estrutura de (NAG37)s (veja a Tabela 6). Fig. 5SK descreve SEQ ID NOs: 15 e 357.
DESCRIÇÃO DETALHADA Agentes de RNAi
[00127] São descritos aqui agentes de RNAi para inibição da expressão de um gene ANGPTL3 (referido aqui como agentes de RNAi de ANGPTL3 ou gatilhos de RNAi de ANGPTL3). Cada agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita senso e uma fita antissenso. A fita senso e a fita antissenso cada qual pode ter 16 a 30 nucleotídeos em comprimento. As fitas senso ou antissenso podem ser do mesmo comprimento ou podem ser de diferentes comprimentos. Em algumas modalidades, as fitas senso ou antissenso têm cada qual independentemente de 17 a 27 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso ou antissenso têm cada qual independentemente de 17 a 21 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, ambas as fitas senso ou antissenso têm cada qual de 21 a 26 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, as fitas senso ou antissenso têm cada qual de 21 a 24 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, a fita senso tem cerca de 19 nucleotídeos em comprimento enquanto a fita antissenso tem cerca de 21 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, a fita senso tem cerca de 21 nucleotídeos em comprimento enquanto a fita antissenso tem cerca de 23 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, uma fita senso tem 23 nucleotídeos em comprimento e uma fita antissenso é 21 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, ambas as fitas senso ou antissenso têm cada qual 21 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, as fitas antissenso e senso de agente de RNAi têm cada qual independentemente de 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22,23, 24, 25, 26, ou 27 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de fita dupla tem um comprimento duplex de cerca de 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24 nucleotídeos.
[00128] Em algumas modalidades, a região de complementaridade perfeita, substancial ou parcial entre a fita senso e a fita antissenso é de 16 a 26 (por exemplo, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, ou 26) nucleotídeos em comprimento e ocorre em ou próximo à extremidade 5' da fita antissenso (por exemplo, esta região pode ser separada da extremidade 5' da fita antissenso por O, 1, 2, 3, ou 4 nucleotídeos que não são perfeita, substancial ou parcialmente complementar).
[00129] A fita senso e fita antissenso cada qual contém um alongamento núcleo (também referido aqui como uma "sequência núcleo" ou uma "sequência de alongamento núcleo") que tem de 16 a 23 nucleotídeos em comprimento. Um alongamento núcleo de fita antissenso é 100% (perfeitamente) complementar ou pelo menos cerca de 85% (substancialmente) complementar à sequência de nucleotídeo (algumas vezes referida, por exemplo, como uma sequência alvo) presente no MRNA de ANGPTL3 alvo. Uma sequência de alongamento núcleo de fita senso é 100% (perfeitamente) complementar ou pelo menos cerca de 85% (substancialmente) complementar a uma sequência de alongamento núcleo na fita antissenso, e desse modo a sequência de alongamento núcleo de fita senso é tipicamente perfeitamente idêntica ou pelo menos cerca de 85% idêntica à sequência de nucleotídeo (sequência alvo) presente no MRNA de ANGPTL3 alvo. Uma sequência de alongamento núcleo de fita senso pode ser do mesmo comprimento com uma sequência núcleo antissenso correspondente ou ela pode ter um comprimento diferente. Em algumas modalidades, a sequência de alongamento núcleo de fita antissenso tem 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, ou 23 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, a sequência de alongamento núcleo de fita senso tem 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, ou 23 nucleotídeos em comprimento.
[00130] Exemplos de sequência de nucleotídeos usados na formação de agentes de RNAi de ANGPTL3 são fornecidos nas tabelas 2,3, e 4. Exemplos de duplexes de agente de RNAi, que incluem as sequências de fita senso e fita antissenso nas tabelas 2, 3, e 4, são mostrados na Tabela 5.
[00131] Asfitas senso e antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 se anelam para formar um duplex. Uma fita senso e uma fita antissenso de um agente de RNAi de ANGPTL3 podem ser parcial, substancial ou totalmente complementares umas às outras. Dentro da região duplex complementar, a sequência de alongamento núcleo de fita senso é pelo menos 85% complementar ou 100% complementar à sequência de alongamento núcleo antissenso. Em algumas modalidades, a sequência de alongamento núcleo de fita senso contém uma sequência de pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, ou pelo menos 23 nucleotídeos que é pelo menos 85% ou 100% complementar a uma sequência de 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, ou 23 nucleotídeos correspondente da sequência de alongamento núcleo de fita antissenso (isto é, as sequências de alongamento núcleo senso e antissenso de um agente de RNAi de ANGPTL3 têm uma região de pelo menos 16, pelo menos 17, pelo menos 18, pelo menos 19, pelo menos 20, pelo menos 21, pelo menos 22, ou pelo menos 23 nucleotídeos que é pelo menos 85% de base pareada ou 100% base pareada.)
[00132] Emalgumas modalidades, a fita antissenso de um agente de RNAi de ANGPTL3 descrita aqui difere em 0, 1, 2, ou 3 nucleotídeos de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 2 ou Tabela
3. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui difere em 0, 1, 2, ou 3 nucleotídeos de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2 ou Tabela 4.
[00133] A fita senso e/ou a fita antissenso podem opcional e independentemente conter um adicional de 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 nucleotídeos (extensão) na extremidade 3', na extremidade 5', ou tanto nas extremidades 3' quanto 5' das sequências de alongamento núcleo. Os núcleotídeos adicionais de fita antissenso, se presentes, podem ou não ser complementares à sequência correspondente no MRNA de ANGPTL3. Os nucleotídeos adicionais de fita senso, se presentes, podem ou não ser idênticos à sequência correspondente no mRNA de ANGPTL3. Os nucleotídeos adicionais de fita antissenso, se presentes,
podem ou não ser complementares aos nucleotídeos adicionais de fita senso correspondentes, se presentes.
[00134] Como usado aqui, uma extensão compreende 1, 2,3,4,5, ou 6 nucleotídeos na extremidade 5' e/ou extremidade 3' da sequência de alongamento núcleo de fita senso e/ou sequência de alongamento núcleo de fita antissenso. Os nucleotídeos de extensão em uma fita senso podem ou não ser complementares aos nucleotídeos, ou nucleotídeos de sequência de alongamento núcleo ou nucleotídeos de extensão, na fita antissenso correspondente. Contrariamente, os nucleotídeos de extensão em uma fita antissenso podem ou não ser complementares aos nucleotídeos, ou nucleotídeos de alongamento núcleo ou nucleotídeos de extensão, na fita senso correspondente. Em algumas modalidades, tanto a fita senso quanto a fita antissenso de um agente de RNAi contêm extensões 3' e 5". Em algumas modalidades, um ou mais dos nucleotídeos de extensão 3' de uma base de fita emparelham-se com um ou mais nucleotídeos de extensão 5' da outra fita. Em outras modalidades, um ou mais de nucleotídeos de extensão 3' de uma base de fita não se emparelham com um ou mais nucleotídeos de extensão 5' da outra fita. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 tem uma fita antissenso tendo uma extensão 3' e uma fita senso tendo uma extensão 5'. Em algumas modalidades, os nucleotídeos de extensão são não pareados e formam uma protuberância. Como usado aqui, uma "protuberância" refere-se a uma extensão de um ou mais nucleotídeos não pareados localizados em uma extremidade termina da fita antissenso que não forma parte da porção hibridizada ou em duplex de um agente de RNAi descrito aqui.
[00135] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita antissenso tendo uma extensão em 3' de 1,2,3, 4, 5, ou 6 nucleotídeos em comprimento. Em outras modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita antissenso tendo uma extensão em 3' de 1, 2, ou 3 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, um ou mais dos nucleotídeos de extensão de fita antissenso compreendem nucleotídeos de uracila ou timidina ou nucleotídeos que são complementares à sequência de mMRNA de ANGPTL3 correspondente.
[00136] Em algumas modalidades, a extremidade 3' da fita antissenso pode incluir resíduos abásicos (Ab), que podem também ser referidos como um "sítio abásico" ou "nucleotídeo abásico." Um resíduo abásico (Ab) é um nucleotídeo ou nucleosídeo que não tem uma nucleobase na posição 1º da porção açúcar. (Veja, por exemplo, Patente dos Estados Unidos nº 5.998.203). Em algumas modalidades, Ab ou AbAb pode ser adicionado à extremidade 3' da fita antissenso.
[00137] Em algumas modalidades, a fita senso ou a fita antissenso pode incluir um "tampão terminal," que como usado aqui é um composto de não nucleotídeo ou outra porção que pode ser incorporada em um ou mais terminais de uma fita de um agente de RNAi descrito aqui, e pode fornecer o agente de RNAi, em aguns casos, com certas propriedades benéficas, tal como, por exemplo, proteção contra degradação de exonuclease. Em algumas modalidades, resíduos abásicos invertidos (invAb) são adicionados como tampões terminais (veja a Tabela 6). (Veja, por exemplo, F. Czauderna, Nucleic Acids Res., 2003, 31(11), 2705-16). Tampões terminais são geralmente conhecidos na técnica, e incluem, por exemplo, resíduos abásicos invertidos bem como cadeias de carbono tal como grupos C3, C6, ou C12 terminais. Em algumas modalidades, um tampão terminal é presente na extremidade 5' terminal, a extremidade 3' terminal, ou both the 5' e 3' terminal ends da fita senso.
[00138] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita senso tendo uma extensão 3' de 1,2, 3,4, ou 5 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, um ou mais da fita senso nucleotídeos de extensão compreende adenosina, nucleotídeos de uracila, ou timidina, dinucleotídeo de AT, ou nucleotídeos que correspondem aos nucleotídeos na sequência de mMRNA de ANGPTL3. Em algumas modalidades, a extensão de fita senso 3' inclui ou consiste em uma das seguintes sequências, porém não está limitada a: T, UT, TT, UU, UUT, TTT, ou TTTT (cada qua listada de 5'a3').
[00139] Em algumas modalidades, a extremidade 3' da fita senso pode incluir resíduos abásicos ou tampões terminais abásicos invertidos adicionais. Em algumas modalidades, UUAb, UAb, ou Ab são adicionados à extremidade 3' da fita senso.
[00140] Em algumas modalidades, um ou mais resíduos abásicos invertidos (invAb) são adicionados à extremidade 3' da fita senso. Em algumas modalidades, um ou mais resíduos abásicos invertidos (invAb) são adicionados à extremidade 5' da fita senso. Em algumas modalidades, um ou mais resíduos abásicos invertidos ou sítios abásicos invertidos são inseridos entre o ligante de direcionamento e a sequência de nucleobase da fita senso do agente de RNAi. Em algumas modalidades, a inclusão de um ou mais resíduos abásicos invertidos ou sítios abásicos invertidos em ou próximo à extremidade terminal ou extremidades terminais da fita senso de um agente de RNAi permite atividade realçada ou outras propriedades desejadas de um agente de RNAi.
[00141] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita senso tendo uma extensão 5' de 1, 2, 3,4,5, ou 6 nucleotídeos em comprimento. Em algumas modalidades, um ou mais dos nucleotídeos de extensão de fita senso compreendem nuceotídeos de uracila ou adenosina ou nucleotídeos que correspondem aos nucleotídeos na sequência de mMRNA de ANGPTL3. Em algumas modalidades, a extensão 5' de fita senso é uma das seguintes sequências, porém não está limitada a: CA, AUAGGC, AUAGG, AUAG, AUA, A, AA, AC, GCA, GGCA, GGC, UAUCA, UAUC, UCA, UAU, U, UU (cada uma listada de 5' a 3'). Uma fita senso pode ter uma extensão 3' e/ou um extensão 5'.
[00142] Em algumas modalidades, a extremidade 5' da fita senso podem incluir um ou mais resíduos abásicos adicionais (por exemplo, (Ab) ou (AbAb)). Em algumas modalidades, um ou mais resíduos abásicos invertidos (invAb) são adicionados à extremidade 5' da fita senso. Em algumas modalidades, um ou mais resíduos abásicos invertidos podem ser inseridos entre o ligante de direcionamento e a sequência de nucleobase da fita senso do agente de RNAi. Em algumas modalidades, a inclusão de um ou mais resíduos abásicos invertidos em ou próximo à extremidade terminal ou extremidades terminais da fita senso de um agente de RNAi pode permitir atividade realçada ou outras propriedades desejadas de um agente de RNAi. Em algumas modalidades, um resíduo abásico (deoxirribose) pode ser substituído com um resíduo de ribitol (ribose abásico).
[00143] Emalgumas modalidades, a extremidade 3' da sequência de alongamento núcleo de fita antissenso, ou a extremidade 3' da sequência de fita antissenso, podem incluir um resíduo abásico invertido (invAb (veja a Tabela 6)).
[00144] Exemplos de sequências usados na formação de agentes de RNAi de ANGPTL3 são fornecidos nas tabelas 2, 3, e 4. Em algumas modalidades, um agente de fita antissendo de RNAi de ANGPTL3 inclui uma sequência de qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 3. Em certas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende ou consiste em qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 3. Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 inclui a sequência de nucleotídeos (de extremidade 5' > extremidade 3') 1 a 17, 2a 15, 2a 17, 1a 18,2a18,
1-19, 2a 19, 1a 20, 2a 20,1 a21,2a21,1a22,2a22,1a23,2a 23, 1 a 24, ou 2 a 24 de qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou
3. Em algumas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de ANGPTL3 inclui a sequência de qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 4. Em algumas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de ANGPTL3 inclui a sequência de nucleotídeos (de extremidade 5' > extremidade 3') 1 a 18, 1 a 19, 1 a 20, 1-21, 1a 22,1a23,1a24, 1a25,1a26,2a19,2a20,2a21,2a22,2a23,2a24,3a20,3a 21,3a22,3a23,3a24,4a21,4a22,4a23,4a24,5a222,5a238, ou 5 a 24 of qualquer uma das sequências nas tabelas 2 ou 4. Em certas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende ou consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 4.
[00145] Em algumas modalidades, as fitas senso ou antissenso dos agentes de RNAi descritos aqui contêm o mesmo número de nucleotídeos. Em algumas modalidades, as fitas senso ou antissenso dos agentes de RNAi descritos aqui contêm diferentes de nucleotídeos. Em algumas modalidades, a extremidade 5' de fita senso e a extremidade 3' de fita antissenso de um agente de RNAi formam uma extremidade embotada. Em algumas modalidades, a extremidade 3' de fita senso e a extremidade 5' de fita antissenso de um agente de RNAi formam uma extremidade embotada. Em algumas modalidades, ambas as extremidades de um agente de RNAi formam extremidades embotadas. Em algumas modalidades, nenhuma extremidade de um agente de RNAi é extremidade embotada. Como usado aqui uma "extremidade embotada" refere-se a uma extremidade de um agente de RNA de fita dupla na qual os nucleotídeos terminais das duas fitas aneladas são complementares (formam um par de base complementar).
[00146] Em algumas modalidades, a extremidade 5' de fita senso e a extremidade 3' de fita antissenso de um agente de RNAi formam uma extremidade desgastada. Em algumas modalidades, a extremidade 3' de fita senso e a extremidade 5' de fita antissenso de um agente de RNAi formam uma extremidade desgastada. Em algumas modalidades, ambas as extremidades de um agente de RNAi formam uma extremidade desgastada. Em algumas modalidades, nenhuma extremidade de um agente de RNAi é uma extremidade desgastada. Como usado aqui uma extremidade desgastada refere-se a uma extremidade de um agente de RNAi de fita dupla na qual os nucleotídeos das duas fitas aneladas de um par (isto é, não formam uma protuberância), porém não são complementares (isto é, formam um par não complementar). Em algumas modalidades, um ou mais nucleotídeos não pareados na extremidade de uma fita de um agente de RNAi de fita dupla formam uma protuberância. Os nucleotídeos não pareados podem estar na fita senso ou na fita antissenso, criando rotuberâncias 3' ou 5". Em algumas modalidades, o agente de RNAi contém: uma extremidade embotada e uma extremidade desgastada, uma extremidade embotada e uma extremidade de protuberância 5', uma extremidade embotada e uma extremidade de protuberância 3', uma extremidade desgastada e uma extremidade de protuberância 5', uma extremidade desgastada e uma extremidade de protuberância 3', duas extremidades de protuberância 5º, duas extremidades de protuberância 3', uma extremidade de protuberância 5' e uma extremidade de protuberância 3', duas extremidades desgastadas, ou duas extremidades embotadas. Tipicamente, quando presentes, as protuberâncias estão localizadas nas extremidades 3' terminais da fita senso, da fita antissenso, ou tanto da fita senso quanto da fita antissenso.
[00147] —“Nucleotídeos modificados, quando usados em várias construções de polinucleotídeo ou oligonucleotídeo, podem conserver a atividade do composto em células, enquanto no mesmo tempo aumentando a estabilidade do soro destes compostos, e podem também minimizer a possibilidade de ativação da atividade de interferon em humanos na administração da construção de polinucleotídeo ou oligonucleotídeo.
[00148] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 é preparado ou fornecido como um sal, sal misto ou um ácido filtro. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 é preparado como um sal de sódio. Tais formas que são bem conhecidas na técnica estão no escopo das invenções descritas aqui. Nucleotídeos Modificados
[00149] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 contém um ou mais nucleotídeos modificados. Como usado aqui, um "nucleotídeo — modificado" é um nucleotídeo diferente de um ribonucleotídeo (nucleotídeo de 2'-hidroxila). Em algumas modalidades, pelo menos 50% (por exemplo, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100%) dos nucleotídeos são nucleotídeos modificados. Como usado aqui, nucleotídeos modificados podem incluir, porém não estão limitados a, deoxirribonucleotídeos, mímicos de nucleotídeo, nucleotídeos abásicos (representados aqui como Ab), 2'-nucleotídeos modificados, nucleotídeos de ligações 3' a 3' (invertidas) (representados aqui como invdN, invN, invn), nucleotídeos compreendendo nuceobase modificados, nucleotídeos ligados em ponte, ácidos nucleicos de peptídeo (PNAs), mímicos de 2',3-seco nucleotídeo (análogos de nucleobase não bloqueados, representados aqui como Nuna ou NUNA), nucleotídeos bloqueados (representados aqui como Nina ou NLNA), nucleotídeos de 3'-O-metóxi (2' internucleosídeo ligado) (representados aqui como 3'-OMen), nucleotídeos de 2'-F- Arabino (representados aqui como NfANA ou Nfana), 5'-Me, 2'-flúor nucleotídeo (representados aqui como 5Me-Nf), nucleotídeos de morfolino, desoxirribonucleotídeos de fosfonato de vinila (representados aqui como vpdN), nucleotídeos contendo fosfonato de vinila, e nucleotídeos “contendo fosfonato de ciclopropila (CPrpN). 2" nucleotídeos modificados (isto é, um nucleotídeo com um grupo diferente de um grupo hidroxila na posição 2' do anel açúcar de cinco membros) incluem, porém não estão limitados a, nucleotídeos de 2'-O-metil (representados aqui como uma letra minúscula nº na sequência de nucleotídeo), nucleotídeos de 2'-deóxi-2'-flúor (também referidos aqui como 2'-flúor nucleotídeo, e representados aqui como Nf), nucleotídeos de 2'-deóxi (representados aqui como dN), nucleotídeos de 2'-metoxietila (2-O0-2-metoxiletil) (também referidos aqui como 2"- MOE, e representados aqui como NM), nucleotídeos de 2'-amino, e nucleotídeos de 2'-alquila. Não é necessário que todas as posições em um determinado composto sejam uniformemente modificados. Contrariamente, mais do que uma modificação pode ser incorporada em um único agente de RNAi de ANGPTL3 ou ainda em um único nucleotídeo do mesmo. As fitas senso e fitas antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 podem ser sintezadas e/ou modificadas por métodos conhecidos na técnica. A modificação em um nucleotídeo é independente da modificação em outro nucleotídeo.
[00150] Nucleobases modificadas incluem nucleobases sintéticas e naturais, tais como pirimidinas 5-substituídas, 6-azapirimidinas e purinas — substituídas por N-2, N-6 e O6 (por exemplo, 2-aminopropiladenina, 5-propiniluracila, ou 5-propinilcitosina), 5- metilcitosina (5-me-C), 5-hidroximetil citosina, inosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, derivados de 6-alquila (por exemplo, 6- metila, 6-etila, 6-isopropila, ou 6-n-butil) de adenina e guanina, 2-alquila (por exemplo, 2-metila, 2-etila, 2-isopropila, ou 2-n-butila) e outros derivados de alquila de adenina e guanina, 2-tiouracila, 2-tiotimina, 2- tiocitosina, 5-halouracila, citosina, 5-propinil uracila, 5-propinil citosina,
6-azo uracila, 6-azo citosina, 6-azo timina, 5-uracil (pseudouracil), 4-tiouracila, 8-halo, 8-amino, 8-sulfidrila, 8-tioalguila , 8-hidroxila e outras adeninas e guaninas 8-substituídas, 5-halo (por exemplo, 5- bromo), 5-trifluorometila, e outras uracilas e citosinas 5-substituídas, 7-metilguanina e 7-metiladenina, 8-azaguanina e 8-aza-adenina, 7-deazaguanina, 7-deaza-adenina, 3-deazaguanina, e 3-deaza- adenina.
[00151] Em algumas modalidades, todos ou substancialmente todos os nucleotídeos de um agente de RNAi são nucleotídeos modificados. Como usado aqui, um agente de RNAi, em que substancialmente todos os nucleotídeos presentes são nucleotídeos modificados, é um agente de RNAi tendo quatro ou menos (isto é, O, 1, 2, 3, ou 4) nucleotídeos tanto na fita senso quanto na fita antissenso sendo ribonucleotídeos (isto é, não modificados). Como usado aqui, uma fita senso, em que substancialmente todos os nucleotídeos presentes são nucleotídeos modificados, é uma fita senso tendo dois ou menos (isto é, O, 1, ou 2) nucleotídeos na fita senso sendo ribonucleotídeos não modificados. Como usado aqui, uma fita antissenso, senso em que substancialmente todos os nucleotídeos presentes são nucleotídeos modificados, é uma fita antissenso tendo dois ou menos (isto é, O, 1, ou 2) nucleotídeos na fita senso sendo ribonucleotídeos não modificados. Em algumas modalidades, um ou mais nucleotídeos de um agente de RNAi são um ribonucleotídeo não modificado. Ligações Internucleosídeo Modificado
[00152] Em algumas modalidades, um ou mais nucleotídeos de um agente de RNAi de ANGPTL3 são ligados por ligações ou estruturas não padrão (isto é, ligações internucleosídeo modificado ou estruturas modificadas). Estruturas e ligações internucleosídeo modificado incluem, porém não estão limitados a, grupos fosforotioato (representados aqui como uma letra minúscula "s"), fosforotioatos quirais, tiofosfatos, fosforoditioatos, fosfotriésteres, “aminoalquil- fosfotriésteres, fosfonatos de alquila (por exemplo, fosfonatos de metila ou 3" -alguileno fosfonatos) fosfonatos quirais, fosfinatos, fosforamidatos (por exemplo, 3'”-amino fosforamidate, aminoalquilfosforamidatos, ou tionofosforamidatos), tionoalquil- fosfonatos, tionoalquilfosfotriésteres, ligações — de morfolino, boranofosfatos tendo ligações 3'-5' normais, análogos de 2"-5' ligados de boranofosfatos, ou boranofosfatos tendo polaridade invertida, em que os pares adjacentes de unidades de nucleosídeo são ligados 3'-5' a 5-3' ou 2-5' a 5-2'. Em algumas modalidades, uma estrutura ou ligação internucleosídeo modificado não tem um átomo de fósforo. Ligações internucleosídeo modificado que não têm um átomo de fósforo incluem, porém não estão limitados a, ligações interaçúcar de alquila ou cicloaquila de cadeia curta, ligações interaçúcar de heteroátomo e alquila ou cicloaquila mistas, ou uma ou mais ligações interaçúcar heteroatômica ou heterocícliica de cadeia curta. Em algumas modalidades, estruturas internucleosídeo modificado incluem, porém não estão limitadas a, estruturas de siloxano, estruturas de sulfeto, estruturas de sulfóxido, estruturas de sulfona, estruturas de formacetila e tioformacetila, estruturas de formacetila de metileno e tioformacetila, estruturas contendo aceno, estruturas de sulfamato, estruturas de metilenoimino e metileno-hidrazino, estruturas de sulfonato e sulfonamida, estruturas de amida, e outras estruturas tendo componentes mistos de N, O, S, e CH>.
[00153] Em algumas modalidades, uma fita senso de um agente de RNAi de ANGPTL3 pode conter 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 ligações de fosforotioato, uma fita antissenso de um agente de RNAi de ANGPTL3 pode conter 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 ligações de fosforotioato, ou tanto a fita senso quanto a fita antissenso independentemente podem conter 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 ligações de fosforotioato. Em algumas modalidades, uma fita senso de um agente de RNAi de ANGPTL3 pode conter 1, 2, 3, ou 4 ligações de fosforotioato, uma fita antissenso de um agente de RNAi de ANGPTL3 pode conter 1, 2, 3, ou 4 ligações de fosforotioato, ou tanto a fita senso quanto a fita antissenso independentemente podem conter 1, 2, 3, ou 4 ligações de fosforotioato.
[00154] Emalgumas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de ANGPTL3 contém pelo menos duas ligações internucleosídeo de fosforotioato. Em algumas modalidades, as pelo menos duas ligações internucleosídeo de fosforotioato estão entre os nucleotídeos nas posições 1 a 3 da extremidade 3' da fita senso. Em algumas modalidades, uma ligação internucleosídeo de fosforotioato está na extremidade 5' da fita senso, e a outra ligação de fosforotioato está na extremidade 3' da fita senso. Em algumas modalidades, duas ligações internucleosídeo de fosforotioato estão localizadas na extremidade 5' da fita senso, e a outra ligação de fosforotioato está na extremidade da fita senso. Em algumas modalidades, a dose de fita senso não inclui quaisquer ligações internucleosídeo de fosforoticato entre os nucleotídeos, porém contém uma, duas ou três ligações de fosforotioato entre os nucleotídeos terminais tanto nas extremidades 5' quanto 3' e os tampões terminais de rersíduo abásico invertido opcionalmente presentes. Em algumas modalidades, o ligante de direcionamento é ligado à fita senso por meio de uma ligação de fosforotioato.
[00155] Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 contém quatro ligações internucleosídeo de fosforoticato. Em algumas modalidades, as quatro ligações internucleosídeo de fosforotioato estão entre os nucleotídeos nas posições 1 a 3 a partir da extremidade 5' da fita antissenso e entre os nucleotídeos nas posições 19 a 21,20 a 22,21 a 23,22 a24,23a25, ou 24 a 26 a partir da extremidade 5º. Em algumas modalidades, três ligações internucleosídeo de fosforotioato estão localizadas entre as posições 1 a 4 a partir da extremidade 5' da fita antissenso, e uma quarta ligação internucleosídeo de fosforoticato está localizada entre as posições 20 a 21 a partir da extremidade 5' da fita antissenso. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 contém pelo menos três ou quatro ligações internucleosídeo de fosforotioato na fita antissenso.
[00156] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 contém um ou mais nucleotídeos modificados e uma ou mais ligações internucleosídeo — modificado. Em algumas modalidades, a 2'-nucleosídeo modificado é combinado com ligação internucleosídeo modificado. AGENTES DE RNAi DE ANGPTL3
[00157] Emalgumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui avejam um gene ANGPTL3 em ou próximo às posições da sequência de gene ANGPTL3 mostrada em Tabela 1. Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui inclui uma sequência de alongamento núcleo que é totalmente, — substancialmente, ou pelo menos parcialmente complementar à sequência de ANGPTL3 19-mer alvo descrita na Tabela 1.
[00158] Tabela 1. Sequências de MRNA de ANGPTL3 19-mer alvo (tiradas de transcrição de angiopoietina tipo 3 de homo sapiens (ANGPTL3), GenBank NM 014495.3 (SEQ ID NO:1)) Sequências de ANGPTL3 19-mer|Posições alvo correspondentes na (5'>3") SEQ ID NO: 1
Sequências de ANGPTL3 19-mer|Posições alvo correspondentes na) (53) SEQ ID NO: 1
[00159] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 inclui uma fita antissenso, em que a posição 19 da fita antissenso (5'>23') é capaz de formar um par de base com a posição 1 de uma sequência alvo 19-mer descritas na Tabela 1. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 inclui uma fita antissenso, em que a posição 1 da fita antissenso (5'33') é capaz de formar um par de base com a posição 19 da sequência alvo 19-mer descrita na Tabela 1.
[00160] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 inclui uma fita antissenso, em que a posição 2 da fita antissenso (5' > 3') é capaz de formar um par de base com a posição 18 da sequência alvo 19-mer descrita na Tabela 1. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 inclui uma fita antissenso, em que as posições 2 a 18 da fita antissenso (5' > 3') são capazes de formar pares de base com cada uma das respectivas bases complementares localizadas nas 18 a 2 da sequência alvo 19-mer descrita na Tabela 1.
[00161] Para os agentes de RNAi descrito aqui, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (da extremidade 5' > extremidade 3') pode ser perfeitamente complementar ao gene ANGPTL3, ou pode ser não complementar ao gene ANGPTL3. Em algumas modalidades, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (da extremidade 5' > extremidade 3') é um U, A, ou dT. Em algumas modalidades, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (da extremidade 5' > extremidade 3') forma um par de base A:U ou U:A com a fita senso.
[00162] Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende a sequência de nucleotídeos (da extremidade 5' > extremidade 3') 2 a 18 ou 2 a 19 de qualquer uma das sequências antissenso na Tabela 2 ou Tabela 3. Em algumas modalidades, uma fita senso de RNAi de ANGPTL3 compreende a sequência de nucleotídeos (da extremidade 5' > extremidade 3) 1 a 17, 1 a 18, ou 2 a 18 de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2 ou Tabela 4.
[00163] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 é compreendido de (i) uma fita antissenso que compreende a sequência de nucleotídeos (da extremidade 5' > extremidade 3") 2a 18 ou 2a 19 de qualquer uma das sequências antissenso na Tabela 2 ou Tabela 3, e (ii) uma fita senso que compreende a sequência de nucleotídeos (da extremidade 5' > extremidade 3') 1 a 17 ou 1 a 18 de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2 ou Tabela 4.
[00164] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 incluem sequências de nucleotídeo 19-mer núcleo mostradas na seguinte Tabela 2.
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[00165] As fitas senso e fitas antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 que compreendem ou consistem nas sequências na Tabela 2 podem ser nucleotídeos modificados ou nucleotídeos não modificados. Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 tendo as sequências de fita senso e antissenso que compreendem ou consistem nas sequências na Tabela 2 são todos ou substancialmente todos nucleotídeos modificados
[00166] Em algumas modalidades, a fita antissenso de um agente de RNAi de ANGPTL3 descrita aqui difere em 0, 1, 2, ou 3 nucleotídeos de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 2. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente de RNAi de ANGPTL3 descrita aqui difere em 0, 1, 2, ou 3 nucleotídeos de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2.
[00167] Como usado aqui, cada N listado em uma sequência descrita na Tabela 2 pode ser independentemente selecionado de quaisquer e todas as nucleobases (incluindo aquelas encontradas tanto nos nucleotídeos modificados quanto não modificados) Em algumas modalidades, um nucleotídeo N listado em uma sequência descrita na Tabela 2 tem uma nucleobase que é complementar ao N nucleotídeo na posição correspondente na outra fita. Em algumas modalidades, um nucleotídeo N listado em uma sequência descrita na Tabela 2 tem uma nucleobase que não é complementar ao N nucleotídeo na posição correspondente na outra fita. Em algumas modalidades, um nucleotídeo N listado em uma sequência descrita na Tabela 2 tem uma nucleobase que é igual ao nucleotídeo N na posição correspondente na outra fita. Em algumas modalidades, um nucleotídeo N listado em uma sequência descrita na Tabela 2 tem uma nucleobase que é diferente do nucleotídeo N na posição correspondente na outra fita.
[00168] Certas fitas antissendo de agente de RNAi de ANGPTL3 modificado, bem como suas sequências de nucleobase não modificada subjacentes, são fornecidas na Tabela 3. Certas fitas senso de agente de RNAi de ANGPTL3 modificado bem como suas sequências de nucleobase não modificada subjacentes, são fornecidas na Tabela 4. Na formaçao de agentes de RNAi de ANGPTL3, cada um dos nucleotídeos em cada uma das sequências de base subjacentes listas nas tabelas 3 e 4, bem como na Tabela 2, acima, podem ser um nucleotídeo modificado.
[00169] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 são descritos aqui formados por anelação de uma fita antissenso com uma fita senso. Uma fita senso contendo uma sequência listada na Tabela 2 ou Tabela 4, pode ser hibridizada em qualquer fita antissenso contendo uma sequência listada na Tabela 2 ou Tabela 3, contanto que as duas sequências tenham uma região de pelo menos 85% de complementaridade a mais do que a sequência contíngua de 16, 17,18, 19, 20, ou 21 nucleotídeos.
[00170] Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências na Tabela 2 ou Tabela 3.
[00171] Emalgumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende ou consiste em um duplex tendo as sequências de nucleobase da fita senso e da fita antissenso de qualquer uma das sequências naTabela 2, Tabela 3 ou Tabela 4.
[00172] Exemplos de fitas antissenso contendo nucleotídeos modificados são fornecidos na Tabela 3. Exemplos de fitas senso contendo nucleotídeos modificados são fornecidos na Tabela 4.
[00173] Como usado nas tabelas 3 e 4, as seguintes notações são usadas para indicar nucleotídeos modificados, grupos de direcionamento, e grupos de ligação: A = adenosina-3'-fosfato; [6 = citidina-3-fosfato;
G = guanosina-3-fosfato; U = uridina-3-fosfato | = inosina-3'-fosfato n = qualquer nucleotídeo de 2-OMe modificado a = 2'-O-metiladenosina-3”-fosfato as = 2'-O-metiladenosina-3'-fosforotioato c = 2'-O-metilcitidina-3'-fosfato cs = 2'-O-metilcitidina-3'-fosforotioato g = 2'-O-metilguanosina-3'-fosfato gs = 2'-O-metilguanosina-3'-fosforotioato t = 2'-O-metil-5-metiluridina-3'-fosfato ts = 2'-O-metil-5-metiluridina-3-fosforotioato u = 2'-O-metiluridina-3'-fosfato us = 2'-O-metiluridina-3'-fosforotioato i = 2'-O-metilinosina-3'-fosfato is = 2'-O-metilinosina-3'-fosforotioato Nf = qualquer nucleotídeo de 2'-flúor modificado Af = 2'-fluoroadenosina-3'-fosfato Afs = 2'-fluoroadenosina-3'-fosforotioato cf = 2'-fluorocitidina-3'-fosfato Cfs = 2-fluorocitidina-3-fosforotioato ef = 2'-fluoroguanosina-3'-fosfato Gfs = 2'-fluoroguanosina-3-fosforotioato Tf = 2'-fluoro-5'-metiluridina-3"-fosfato Tfs = 2'-fluoro-5S-metiluridina-3”-fosforotioato Uf = 2'-fluorouridina-3-fosfato Ufs = 2'-fluorouridina-3-fosforotioato dN = qualquer 2'-deoxirribonucleotídeo dA = 2 -deoxiadenosina-3”-fosfato dAs = 2 -deoxiadenosina-3-fosforoticato de = 2 -deoxicitidina-3-fosfato dos = 2'-deoxicitidina-3'-fosforotioato dG = 2 -deoxiguanosina-3"-fosfato des = 2 -deoxiguanosina-3”-fosforoticato daT = 2 -deoxitimidina-3-fosfato dis = 2'-deoxitimidina-3-fosforotioato dU = 2 -deoxiuridina-3'-fosfato dus = 2'-deoxiuridina-3-fosforoticoato Numa = mímicos de 2',3'-seco nucleotídeo (análogos de nucleobase desbloqueados)-3"-Fosfato Nunas = miímicos de 2',3-seco nucleotídeo (análogos de nucleobase desbloqueados )-3"-fosforotioato Aura = 2',3-seco-adenosina-3"-fosfato Aunas = 2',3-seco-adenosina-3"-fosforotioato Cura = 2',3-seco-citidina-3'-fosfato Cunas = 2',3-seco-citidina-3'-fosforotioato Gunma = 2',3-seco-guanosina-3"'-fosfato Gunas = 2',3-seco-guanosina-3"-fosforotioato Uunma = 2',3-seco-uridina-3'-fosfato Uunas = 2',3-seco-uridina-3'-fosforotioato a 2N = vejaTabela6 a 2Ns= vejaTabela6 pu 2N= vejaTabela6 pu 2?Ns =vejaTabela6 Ninha = nucleotídeo bloqueado Nfana = nucleotídeo de 2'-F-Arabino NM = nucleotídeode 2'"'-O-metoxietila AM = 2'-O-metoxietiladenosina-3"-fosfato AMs = 2-O-metoxietiladenosina-3”-fosforotioato GM = 2'-O-metoxietiguanosina-3'-fosfato
GMs = 2'-O-metoxietilguanosina-3"-fosforotioato TM = 2'-O-metoxietiltimidina-3'-fosfato TMs = 2-O-metoxietiltimidina-3-fosforotioato mCM = veja Tabela6 mCMs = vejaTabela6 R = ribitol (invdN)= qualquer deoxirribonucleotídeo invertido (nucleotídeo 3'-3' ligado) (invAb)=" (3"-3' ligado) deoxirribonucleotídeo abásico invertido, veja Tabela 6 (invAb)s = (3'-3' ligado) deoxiribonucleotídeo-S'"-fosforotioato abásico invertido, veja Tabela 6 (invn) = qualquer nucleotídeo de 2-OMe invertido (nucleotídeo 3'-3' ligado) s = ligação de fosforotioato sp = vejaTabela6 D2u = vejaTabela6 pD2u = vejaTabela6 vpdN = deoxirribonucleotídeo de vinil fosfonato (SMe-Nf) = 5S'"-Me, nucleotídeo de 2'-flúor cPrp = fosfonato de ciclopropila, veja Tabela 6 epTcPr= veja Tabela6 epTM = vejaTabela6
[00174] Como a pessoa versada na técnica facilmente entenderia, a menos que de outro modo indicado pela sequência (tal como, por exemplo, por uma ligação de fosforotioato "s"), quando presente em um oligonucleotídeo, os monômeros de nucleotídeo são mutualmente ligados por ligações de 5'-3"-fosfodiéster. Como a pessoa versada na técnica claramente entenderia, a inclusão de uma ligação de fosforoticato, como mostrado nas sequências de nucleotídeo modificado descritas aqui, substitui a ligação de fosfodiéster tipicamente presente em oligonucleotídeos (veja, por exemplo, Figs. 5A a 5K mostrando todas as ligações internucleosídeo). Além disso, a pessoa versada na técnica facilmente entenderia que o nucleotídeo terminal na extremidade 3' de uma determinada sequência de oligonucleotídeo tipicamente teria um grupo hidroxila (-OH) na respectiva posição 3' do determinado monômero em vez de uma porção fosfato ex vivo. Além disso, como a pessoa versada facilmente entenderia e apreciaria, enquanto as estruturas químicas de fosforoticato descritas aqui tipicamente mostram o ânion no átomo de enxofre, as invenções descritas aqui abrangem todos os tautômeros e/ou diastereômeros de fosforotioato (por exemplo, onde o átomo de enxofre tem uma ligação dupla e o ânion está em um átomo de oxigênio). A menos que expressamente indicado de outro modo aqui, tais entendimentos da pessoa versada na técnica são usados quando descrevendo os agentes de RNAi de ANGPTL3 e composições de agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui.
[00175] Certos exemplos de grupos de direcionamento e grupos de ligação usados com os agentes de RNAi de ANGPTL3 são descritos aqui, fornecidos abaixo na Tabela 6. Mais especificamente, grupos de direcionamento e grupos de ligação incluem os seguintes, para os quais suas estruturas químicas são fornecidas abaixo na Tabela 6: (PAZ), (NAG13), (NAG13)s, (NAG18), (NAG18)s, (NAG24), (NAG24)s, (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), (NAG39)s. Cada fita senso e/ou fita antissenso pode ter quaisquer grupos de direcionamento ou grupos de ligação listados aqui, bem como outros grupos de direcionamento ou ligação, conjugados à extremidade 5' e/ou 3' da sequência.
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[00176] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 são descritos aqui formados por anelação de uma fita antissenso com uma fita senso. Uma fita senso contendo uma sequência listada na Tabela 2 ou Tabela 4 pode ser hibridizada em qualquer fita antissenso contendo uma sequência listada na Tabela 2 ou Tabela 3, contanto que as duas sequências tenham uma região de pelo menos 85% de complementaridade sobre uma sequência contígua de 16, 17, 18, 19, ou 21 nucleotídeos.
[00177] Emalgumas modalidades, a fita antissenso de um agente de RNAi de ANGPTL3 descrita aqui difere em 0, 1, 2, ou 3 nucleotídeos de qualquer uma das sequências de fita antissenso na Tabela 3. Em algumas modalidades, a fita senso de um agente de RNAi de ANGPTL3 descrita aqui difere em 0, 1, 2, ou 3 nucleotídeos de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 4.
[00178] Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências na Tabela 2 ou Tabela 3. Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende a sequência de nucleotídeos (da extremidade 5' > extremidade 3') 1 a 17, 2a 17, 1a 18,2a18,1a19,2a19,1a20,2 a 20, 1a21,2a21,1a22,2a22,1a23,2a23,1a24, ou? a24de qualquer uma das sequências na Tabela 2 ou Tabela 3. Em certas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende ou consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 3.
[00179] Emalgumas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências na Tabela 2 ou Tabela 4. Em algumas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende a sequência de nucleotídeos (da extremidade 5' > extremidade 3') 1 a
17,2a17,3a17,4a17,1a18,22a18,3a18,4218,1a219,2a19, 3a19,4a19,1a20,2a20,3a20,4a20,1a21,2a21,3a21,4a 21,1a22,2a22,3a22,4a22,1a23,2a23,3a23,4a23,1a2A, 2 a24,3a24,oud4a24 de qualquer uma das sequências na Tabela 2 ou Tabela 4. Em certas modalidades, uma fita senso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende ou consiste em uma sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 4.
[00180] Para os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (da extremidade 5º > extremidade 3') pode ser perfeitamente complementar a um gene ANGPTL3, ou pode ser não complementar a um gene ANGPTL3. Em algumas modalidades, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (da extremidade 5' > extremidade 3') é um U, A, ou dT (ou uma versão modificada do mesmo). Em algumas modalidades, o nucleotídeo na posição 1 da fita antissenso (da extremidade 5' > extremidade 3') forma um par de base A:U ou U:A com a fita senso.
[00181] Em algumas modalidades, uma fita antissenso de agente de RNAi de ANGPTL3 compreende a sequência de nucleotídeos (da extremidade 5' > extremidade 3') 2 a 18 ou 2 a 19 de qualquer uma das sequências antissenso na Tabela 2 ou Tabela 3. Em algumas modalidades, uma fita senso de RNAi de ANGPTL3 compreende a sequência de nucleotídeos (da extremidade 5' > extremidade 3") 1 a 17 ou 1 a 18 de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2 ou Tabela 4.
[00182] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 inclui (i) uma fita antissenso que compreende a sequência de nucleotídeos (da extremidade 5' > extremidade 3') 2 a 18 ou 2 a 19 de qualquer uma das sequências antissenso na Tabela 2 ou Tabela 3, e (ii) uma fita senso que compreende a sequência de nucleotídeos (da extremidade 5' > extremidade 3') 1 a 17 ou 1 a 18 de qualquer uma das sequências de fita senso na Tabela 2 ou Tabela 4.
[00183] Uma fitasenso contendo uma sequência listada na Tabela 2 ou Tabela 4 pode ser hibridizada em qualquer fita antissenso contendo uma sequência listada na Tabela 2 ou Tabela 3, contanto que as duas sequências tenham uma região de pelo menos 85% de complementaridade sobre uma sequência contígua de 16, 17, 18, 19, ou 21 nucleotídeos. Em algumas modalidades, o agente de RNAi de ANGPTL3 tem uma fita senso que consiste na sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 4, e uma fita antissenso que consiste na sequência modificada de qualquer uma das sequências modificadas na Tabela 3. Certos pareamentos de sequência representativos são exemplificados pelo nºs ID de Duplex mostrados em Tabela 5.
[00184] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em um duplex representado por qualquer um dos nºs ID de Duplex apresentados aqui. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende a fita senso e fita antissenso sequência de nucleotídeos de qualquer um dos duplexes representados por qualquer um dos nºs ID de Duplex apresentados aqui. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende a fita senso e fita antissenso sequência de nucleotídeos de qualquer um dos duplexes representados por qualquer um dos nºs ID de Duplex apresentados aqui e um grupo de direcionamento e/ou grupo de ligação, em que o grupo de direcionamento e/ou grupo de ligação é covalentemente ligado (isto é, conjugado) à fita senso ou à fita antissenso. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 inclui as sequências de nucleotídeo modificado de fita senso e fita antissenso de qualquer um dos nºs ID de Duplex apresentados aqui. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende as sequências de nucleotídeo modificado de fita senso e fita antissenso de qualquer um dos nºs ID de Duplex apresentados aqui e um grupo de direcionamento e/ou grupo de ligação, em que o grupo de direcionamento e/ou grupo de ligação é covalentemente ligado à fita senso ou à fita antissenso.
[00185] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita antissenso e uma fita senso tendo as sequências de nucleotídeo de qualquer um dos duplexes de fita antissenso/fita senso de Tabela 2 ou Tabela 5, e também compreende um grupo de direcionamento. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita antissenso e uma fita senso tendo as sequências de nucleotídeo de qualquer um dos duplexes de fita antissenso/fita senso de Tabela 2 ou Tabela 5, e também compreende um grupo de direcionmento de ligante de receptor de asialoglicoproteína.
[00186] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita antissenso e uma fita senso tendo as sequências de nucleotídeo de qualquer um dos duplexes de fita antissenso/fita senso de Tabela 2 ou Tabela 5, e também compreende um grupo de direcionamento selecionado do grupo que consiste em (NAG13), (NAG13)s, (NAG18), (NAG18)s, (NAG24), (NAG24)s, (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, cada qual como definido na Tabela 6. Em algumas modalidades, o grupo de direcionamento é (NAG25) ou (NAG25)s como definido na Tabela 6. Em outras modalidades, o grupo de direcionamento é (NAG37) ou (NAG37)s, como definido na Tabela 6.
[00187] Emalgumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita antissenso e uma fita senso tendo a sequência de nucleotídeo modificado de qualquer uma das sequências de nucleotídeo de fita antissenso e/ou fita senso na Tabela 3 ou Tabela 4.
[00188] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende uma fita antissenso e uma fita senso tendo uma sequência de nucleotídeo modificado de qualquer uma das sequências de nucleotídeo de fita antissenso e/ou fita senso de qualquer um dos duplexes de Tabela 5, e também compreende um grupo de direcionmento de ligante de receptor de asialoglicoproteína.
[00189] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em qualquer um dos duplexes de Tabela 5. Tabela 5. Duplexes de Agentes de RNAi de ANGPTL3 com Números ID de Fita Senso e Antissenso correspondentes
[00190] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 é preparado ou fornecido como um sal, sal misto, ou um ácido livre. Os agentes de RNAi descritos aqui, na liberação de uma célula expressando um gene ANGPTL3, inibem ou bloqueiam a expressão de um ou mais genes ANGPTL3 in vivo e/ou in vitro.
Grupos de direcionamento, Grupos de ligação, e Veículos de liberação
[00191] Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 é conjugado a um ou mais grupos não nucleotídeo incluindo, porém não limitados a, um grupo de direcionamento, um grupo de ligação, um polímero de liberação, ou o veículo de liberação. O grupo não nucleotídeo pode realçar o direcionamento, liberação ou ligação do agente de RNAi. Exemplos de grupos de direcionamento e grupos de ligação são fornecidos na Tabela 6. O grupo não nucleotídeo pode ser covalentemente ligado à extremidade 3' e/ou 5' da fita senso e/ou da fita antissenso. Em algumas modalidades, um agente de RNAi de ANGPTL3 contém um grupo não nucleotídeo ligado à extremidade 3' e/ou 5º da fita senso. Em algumas modalidades, um grupo não nucleotídeo é ligado à extremidade 5' de uma fita senso de agente de RNAi de ANGPTL3. Um grupo não nucleotídeo pode ser ligado direta ou indiretamente ao agente de RNAi por meio de um ligante/grupo de ligação. Em algumas modalidades, um grupo não nucleotídeo é ligado ao agente de RNAi por meio de uma ligação ou ligante lábil, clivável ou reversível.
[00192] Em algumas modalidades, um grupo não nucleotídeo realça as propriedades farmacocinéticas ou de biodistribuição de um agente de RNAi ou conjugado ao qual ele é ligado para melhorar distribuição de célula ou tecido e captação específica de célula do agente de RNAi ou conjugado. Em algumas modalidades, um grupo não nucleotídeo realça a endocitose do agente de RNAi.
[00193] Grupos de direcionamento ou porções de direcionamento realçam as propriedades farmacocinéticas ou de biodistribuição de um conjugado ou agente de RNAi ao qual eles são ligados para melhorar a distribuição específica de célula (incluindo, em alguns casos, específica de órgão) e captação específica de célula (ou específica de órgão) do conjugado ou agente de RNAi. Um grupo de direcionamento pode ser monovalente, divalente, trivalente, tetravalente, ou ter maior valência para o alvo ao qual está direcionado. Grupos de direcionamento representativos, sem limitação, compostos com afinidade para moléculas de superfície celular, ligantes de receptor de célula, haptenos, anticorpos, anticorpos monoclonais, fragmentos de anticorpo, e mímicos de anticorpo com afinidade para moléculas de superfície celular. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento é ligado a um agente de RNAi usando um ligante, tal como um ligante de PEG ou um, dois ou três resíduos abásicos e/ou ribitol (ribose abásica), que pode, em alguns casos, funcionar como ligantes. Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento compreende uma cluster derivado de galactose.
[00194] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui podem ser sintezados tendo um grupo reativo, tal como um grupo amino (também referido aqui como uma amina), no terminal 5' e/ou no terminal 3º. O grupo reativo pode ser usado subsequentemente para ligar uma porção de direcionamento usando métodos típicos na técnica.
[00195] Em algumas modalidades, um grupo de direcionamento compreende um ligante de receptor de asialoglicoproteína. Como usado aqui, um ligante de receptor de asialoglicoproteína é um ligante que contém um composto que tem afinidade para o receptor de asiologlicoproteina. Como observado aquii o receptor de asialoglicoproteína é altamente expresso em hepatócitos. Em algumas modalidades, um ligante de receptor de asialoglicoproteína inclui ou consiste em um ou mais derivados de galactose. Como usado aqui, o termo derivado de galactose inclui tanto galactose quanto derivados de galactose tendo afinidade para o receptor de asialoglicoproteína que é igual ou maior do que aquela de galactose. Derivados de galactose incluem, porém não estão limitados à: galactose, galactosamina, N- formilgalactosamina, N-acetil-galactosamina, N-propionil- galactosamina, N-n-butanoil-galactosamina, e N-iso-butanoilgalactos- amina (veja, por exemplo: S.T. lobst and K. Drickamer, J.B.C., 1996, 271, 6686). Derivados de galactose, e clusters de derivados de galactose, que são úteis para o direcionamento in vivo de oligonucleotídeos e outras moléculas ao fígado são conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Baenziger and Fiete, 1980, Cell, 22, 611- 620; Connolly et a/., 1982, J. Biol. Chem., 257, 939-945).
[00196] Derivados de galactose foram usados para alvejar as moléculas para hepatócitos in vivo através de sua ligação ao receptor de asialoglicoproteína expressa na superfície de hepatócitos. A ligação de ligantes de receptor de asialoglicoproteína ao(s) receptor(s) de asialoglicoproteína(s) facilita o direcionamento específico de célula aos hepatócitos e endocitose da molécula em hepatócitos. Ligantes de receptor de asialoglicoproteína podem ser monoméricos (por exemplo, tendo um único derivado de galactose) ou multiméricos (por exemplo, tendo múltiplos derivados de galactose). O derivado de galactose ou cluster derivado de galactose pode ser ligado à extremidade 3' ou 5' da fita senso ou antissenso do agente de RNAi usando métodos conhecidos na técnica. A preparação de grupos de direcionamento, tal como clusters derivados de galactose, é descrita em, por exemplo, Publicação de Pedido de Patente Internacional nº WO 2018/044350 por Arrowhead Pharmaceuticals, Inc., e Publicação de Pedido de Patente Internacional nº WO 2017/156012 por Arrowhead Pharmaceuticals, Inc., os teores de ambos os quais são incorporados por referência em sua totalidade.
[00197] Como usado aqui, um cluster derivado de galactose compreende uma molécula tendo dois a quatro derivados de galactose terminal. Um derivado de galactose terminal é ligado a uma molécula através de seu C-1 carbono. Em algumas modalidades, o cluster derivado de galactose é um trímero de derivado de galactose (também referido como derivado de galactose triantenário ou derivado de galactose trivalente). Em algumas modalidades, o cluster derivado de galactose — compreende — N-acetil-galactosaminas. Em algumas modalidades, o cluster derivado de galactose compreende três N-acetil- galactosaminas. Em algumas modalidades, o cluster derivado de galactose é tetrâmero de derivado de galactose (também referida como derivado de galactose tetra-antenário ou derivado de galactose tetravalente). Em algumas modalidades, o cluster derivado de galactose compreende quatro N-acetil-galactosaminas.
[00198] Como usado aqui, um trímero de derivado de galactose contém três derivados de galactose, cada qual ligado ao ponto de ramificação central. Como usado aqui, tetrâmero de derivado de galactose contém quatro derivados de galactose, cada qual ligado ao ponto de ramificação central. Os derivados de galactose podem ser ligados ao ponto de ramificação central por meio dos C-1 carbonos dos sacarídeos. Em algumas modalidades, os derivados de galactose são ligados ao ponto de ramificação por meio de ligantes ou espaçores. Em algumas modalidades, o ligante ou espaçador é um espaçor hidrofílico flexível, tal como um grupo PEG (veja, por exemplo, Patente dos Estados Unidos nº 5.885.968; Biessen et al. J. Med. Chem. 1995 Vol. 39 p. 1538-1546). Em algumas modalidades, o espaçador PEG é um espaçador PEG;z. O ponto de ramificação pode ser qualquer molécula pequena que permite a ligação de três derivados de galactose e também permite a ligação do ponto de ramificação ao agente de RNAi. Um exemplo de grupo de ponto de ramificação é uma dilisihna ou diglutamato. A ligação do ponto de ramificação ao agente de RNAi pode ocorrer através um ligante ou espaçador. Em algumas modalidades, o ligante ou espaçador compreende um espaçador hidrofílico flexível, tal como, porém não limitado a, um espaçador PEG. Em algumas modalidades, o ligante compreende um ligante rígido, tal como um grupo cíclico. Em algumas modalidades, um derivado de galactose compreende ou consiste em N-acetil-galactosamina. Em algumas modalidades, o cluster derivado de galactose é compreendido de tetrâmero de derivado de galactose, que pode ser, por exemplo, um tetrâmero de N-acetil-galactosamina.
[00199] “Modalidades da presente invenção incluem composições farmacêuticas para liberação de um agente de RNAi de ANGPTL3 para uma célula hepática in vivo. Tais composições farmacêuticas podem incluir, por exemplo, um agente de RNAi de ANGPTL3 conjugado a um cluster derivado de galactose. Em algumas modalidades, o cluster derivado de galactose é compreendido de um trímero de derivado de galactose, que pode ser, por exemplo, um trímero de N-acetil-galactosa- mina, ou tetrâmero de derivado de galactose, que pode ser, por exemplo, um tetrâmero de N-acetil-galactosamina.
[00200] Grupos de direcionamento incluem, porém não estão limitados a, (PAZ), (NAG13), (NAG13)s, (NAG18), (NAG18)s, (NAG24), (NAG24)s, (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30O), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), e (NAG39)s como definido na Tabela 6. Outros grupos de direcionamento, incluindo ligantes de direcionamento de cluster de galactose, são conhecidos na técnica.
[00201] Em algumas modalidades, um grupo de ligação é conjugado ao agente de RNAi. O grupo de ligação facilita a ligação covalente do agente a um grupo de direcionamento, polímero de liberação, ou veículo de liberação. O grupo de ligação pode ser ligado à extremidade 3' e/ou 5' da fita senso ou fita antissenso de agente de RNAi. Em algumas modalidades, o grupo de ligação é ligado à fita senso do agente de RNAi. Em algumas modalidades, o grupo de ligação é conjugado à extremidade 5' ou 3' de uma fita senso do agente de RNAi. Em algumas modalidades, um grupo de ligação é conjugado à extremidade 5' de uma fita senso do agente de RNAi. Exemplos de grupos de ligação, podem incluir, porém não estão limitados a: grupos reativos tais como amnas primárias e alcinas, grupos alquila, nucleotídeos abásicos, ribitol (ribose abásico), e/ou grupos PEG.
[00202] “Um ligante ou grupo de ligação é uma conexão entre dois átomos que ligam um grupo químico (tal como um agente de RNAi) ou segmento de interesse para outro grupo químico (tal como um grupo de direcionamento ou polímero de liberação) ou segmento de interesse por meio de uma ou mais ligações covalentes. Uma ligação (linkage) lábil contém uma ligação (bond) lábil. Uma ligação pode opcionalmente incluir um espaçador que aumenta a distância entre os dois átomos ligados. Um espaçador pode também adicionar flexibilidade e/ou comprimento à ligação. Espaçadores incluem, porém ão estão limitados a, grupos alquila, grupos alquenila, grupos alquinila, grupos arila, grupos aralquila, grupos aralquenila e grupos aralquinila; cada um dos quais pode conter um ou mais heteroátomos, heterociclos, aminoácidos, nucleotídeos, e sacarídeos. Grupos espaçadores são bem conhecidos na técnica e a lista anterior não se destina a limitar o escopo da invenção.
[00203] Em algumas modalidades, quando dois ou mais agentes de RNAi são incluídos em uma única composição, cada um dos agentes de RNAi pode ser ligado ao mesmo grupo de direcionamento ou dois grupos de direcionamento diferentes (isto é, grupos de direcionamento tendo estruturas químicas diferentes) Em algumas modalidades, grupos de direcionamento são ligados aos agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui sem o uso de um ligante adicional. Em algumas modalidades, o grupo de direcionamento por si só é designado ter um ligante ou outro sítio para facilitar a conjugação facilmente presente. Em algumas modalidades, quando dois ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 são incluídos em um único, cada um dos agentes de RNAi pode utilizar o mesmo ligante ou ligantes diferentes (isto é, ligantes tendo diferentes estruturas químicas).
[00204] “Qualquer uma das sequências de nucleotídeo de agente de RNAi de ANGPTL3 listadas nas tabelas 2, 3, ou 4, se modificado ou não modificado, pode conter grupo(s) de direcionamento ou grupo(s) de ligação 3' e/ou 5'. Qualquer uma das sequências do agente de RNAi de ANGPTL3 listadas na Tabela 3 ou 4, ou é de outro modo descrita aqui, que contém um grupo de direcionamento ou grupo de ligação 3' ou 5', pode alternativamente não conter nenhum um grupo de direcionamento ou grupo de ligação 3' ou 5', ou pode conter um grupo de direcionamento ou grupo de ligação 3' ou 5' diferente incluindo, porém não limitados àqueles descritos na Tabela 6. Qualquer um dos duplexes de agente de RNAi de ANGPTL3 listados na Tabela 5, se modificados ou não modificados, pode também compreender um grupo de direcionamento ou grupo de ligação, incluindo, porém não limitado àqueles descritos na Tabela 6, e o grupo de direcionamento ou grupo de ligação pode ser ligado ao terminal 3' ou 5' da fita senso ou da fita antissenso do duplex de agente de RNAi de ANGPTL3.
[00205] “Exemplos de grupos de direcionamento e grupos de ligação são fornecidos na Tabela 6. A Tabela 4 fornece diversas modalidades das fitas senso de agente de RNAi de ANGPTL3 tendo um grupo de direcionamento ou grupo de ligação ligado à extremidade 5' ou 3. Tabela 6. Estruturas Representando Vários Nucleotídeos Modificados, Grupos de Direcionamento, e Grupos de Ligação o é i tio A NH : LAS Yv o o, ! A o” o o N NH, o A 2º Fx Nx e E vpdT 5Me-Gf o | o XT o
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[00206] Em cada uma das estruturas acima na Tabela 6, NAG compreende uma N-acetil-galactosamina ou outro derivado de galactose, como seria entendido por uma pessoa versada na técnica a ser anexado em vista das estruturas acima e da descrição fornecida aqui. Por exemplo, em algumas modalidades, NAG nas estruturas fornecidas na Tabela 6 é representado pela seguinte estrutura: oro "OS de (N-acetil-galactosamina).
[00207] Cada (NAGx) pode ser ligado a um agente de RNAi de ANGPTL3 por meio de um grupo fosfato (como em (NAG25), (NAG30), e (NAG31)), ou um grupo fosforotioato, (como é (NAG25)s, (NAG29)s, (NAG30)s, (NAG31)s, ou (NAG37)s), ou outro grupo de ligação. rot rot o S Grupo Fosfato Grupo Fosforotioato
[00208] Outros grupos de ligação conhecidos na técnica podem ser usados.
[00209] Em algumas modalidades, o veículo de liberação pode ser usado para liberar um agente de RNAi a uma célula ou tecido. O veículo de liberação é um composto que melhora a liberação do agente de RNAi a uma célula ou tecido. O veículo de liberação pode incluir, ou consistir em, porém não está limitado a: um polímero, tal como um polímero anfipático, um polímero ativo de membrana, um peptídeo, um peptídeo de melitina, um peptídeo tipo melitina (MLP), um lipídio, um polímero ou peptídeo reversivelmente modificado, ou uma poliamina ativa de membrana reversivelmente modificada.
[00210] Em algumas modalidades, os agentes de RNAi podem ser combinados com lipídios, nanopartículas, polímeros, lipossomas, micelas, DPCs ou outros sistemas de liberação disponíveis na técnica. Os agentes de RNAi podem também ser quimicamente conjugados aos grupos de direcionamento, lipídios (incluindo, porém não limitados a, colesterol e derivados de colesterila), nanopartículas, polímeros, lipossomas, micelas, DPCs (veja, por exemplo, WO 2000/053722, WO 2008/0022309, WO 2011/104169, e WO 2012/083185, WO 2013/ 032829, WO 2013/158141, cada um dos quais é incorporado aqui por referência), ou outros sistemas de liberação disponíveis na técnica. Composições Farmacêuticas e Formulações
[00211] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui podem ser preparados como composições farmacêuticas ou formulações (também referidas aqui como "medicamentos") Em algumas modalidades, composições farmacêuticas incluem pelo menos um agente de RNAi de ANGPTL3. Estas composições farmacêuticas são particularmente úteis na inibição da expressão do mRNA alvo em uma célula alvo, um grupo de células, um tecido, ou um organismo. As composições farmacêuticas podem ser usadas para tratar um indivíduo tendo uma doença, distúrbio ou condição que se beneficiaria da redução no nível do MRNA alvo, ou inibição na expressão do gene alvo. As combinações farmacêuticas podem ser usadas para tratar um indivíduo em risco de desenvolver uma doença, distúrbio ou condição que se beneficiaria da redução do nível do MRNA alvo ou uma inibição na expressão do gene alvo. Em uma modalidade, o método inclui administrar um agente de RNAi de ANGPTL3 ligado a um ligante de direcionamento como descrito aqui, a um indivíduo a ser tratado. Em algumas modalidades, um ou mais excipientes — farmaceuticamente —* aceitáveis (incluindo veículos, portadores, diluentes, e/ou polímeros de liberação) são adicionados às composições farmacêuticas que incluem an agente de RNAi de ANGPTL3, desse modo formando uma formulação farmacêutica ou medicamento adequado para liberação in vivo a um indivíduo, incluindo um humano.
[00212] As composições farmacêuticas que incluem um agente de RNAi de ANGPTL3 e métodos descritos aqui diminuem o nível do MRNA alvo em uma célula, grupo de células, grupo de células, tecido, órgão, ou indivíduo, incluindo administrando ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui, desse modo inibindo a expressão de MRNA de ANGPTL3 no indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo foi anteriormente identificado ou diagnosticado como tendo uma super regulação patogênica do gene alvo na célula ou tecido alvejado. Em algumas modalidades, o indivíduo foi anteriormente identificado ou diagnosticado como tendo níveis de triglicerídeo (TG) elevado e/ou colesterol elevado ou alguma outra dislipidemia. Em algumas modalidades, o indivíduo foi anteriormente diagnosticado com tendo uma ou mais doenças cardiometabólicas tais como hipertrigliceridemia, obesidade, hiperlipidemia, metabolismo de clolesterol e/ou lipídio anormal, aterosclerose, aterosclerose, diabetes melito tipo Il, doença cardiovascular, doença da artéria coronária, esteato-hepatite não alcoólica, doença hepática gordurosa não alcoólica, hipercolesterolemia familiar homozigótica e heterozigótica, hipercolesterolemia resistente à estatina e outros distúrbios e doenças metabólicas relacionadas. Em algumas modalidades, o indivíduo estava sofrendo de sintomas associados com uma ou mais doenças cardiometabólicas que são associadas com ou causadas por níveis elevados ou aumentados de TG, níveis de colesterol elevados ou aumentados, ou esteatose hepática.
[00213] Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas incluindo um agente de RNAi de ANGPTL3 são usadas para o tratamento ou controle de apresentações clínicas associadas com níveis de TG elevados, níveis de colesterol elevados, esteatose hepática, e/ou super expressão de mMRNA de ANGPTL3 em um indivíduo. Em algumas modalidades, uma quantidade terapeuticamente (incluindo profilaticamente) eficaz de uma ou mais composições farmacêuticas é administrada a um indivíduo em necessidade de tal tratamento. Em algumas modalidades, a administração de qualquer um dos agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos pode ser usada para diminuir o número, gravidade, e/ou frequência de sintomas de uma doença em um indivíduo.
[00214] As composições farmacêuticas descritas que incluem um agente de RNAi de ANGPTL3 podem ser usadas para tratar pelo menos um sintoma em um indivíduo tendo uma doença ou distúrbio que se beneficiaria da redução ou inibição na expressão de mMRNA de ANGPTL3. Em algumas modalidades, ao indivíduo é administrada uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma ou mais composições farmacêuticas que incluem um agente de RNAi de ANGPTL3, desse modo tratando o sintoma. Em outras modalidades, ao indivíduo é administrada uma quantidade profilaticamente eficaz de um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3, desse modo prevenindo ou inibindo pelo menos um sintoma.
[00215] Aviade administração é a via pela qual um agente de RNAi de ANGPTL3 é colocado em contato com o corpo. Em geral, métodos de administração de fármacos e oligonucleotídeos e ácidos nucleicos para o tratamento de um mamífero são bem conhecidos na técnica e podem ser aplicados à administração das composições descritas aqui. Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui podem ser administrados por meio de qualquer via adequada na preparação apropriadamente ajustada para a via particular. Desse modo, as composições farmacêuticas descritas aqui podem ser administradas por injeção, por exemplo, intravenosamente, intramuscularmente, intracutaneamente, — subcutaneamente, intra-articularmente, ou intraperitonealmente. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas descritas aqui são administradas por meio de injeção subcutânea.
[00216] Ascombinações farmacêuticas incluindo um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui podem ser liberadas a uma célula, grupo de células, tecido, ou indivíduo usando tecnologias de liberação de oligonucleotídeo conhecidas na técnica. Em geral, qualquer método adequado conhecido na técnica para liberação de uma molécula de ácido nucleico (in vitro ou in vivo) pode ser adaptado para uso com as composições descritas aqui. Por exemplo, a liberação pode ser por administração local, (por exemplo, injeção direta, implantação, ou administração tópica), administração sistêmica, ou subcutânea, intravenosa, —intraperitoneal, ou vias parenterais, incluindo administração intracraniana — (por — exemplo, intraventricular, intraparenquimatosa e intratecal), intramuscular, transdermal, via aérea (aerossol), nasal, oral, retal, ou tópica (incluindo bucal e sublingual). Em certas modalidades, as combinações são administradas por infusão ou injeção subcutânea ou intravenosa.
[00217] Em algumas modalidades, as combinações farmacêuticas descritas — aqui “compreendem um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. As combinações farmacêuticas são descritas aqui formuladas para administração a um indivíduo.
[00218] Como usado aqui, uma composição farmacêutica ou medicamento inclui uma quantidade farmacologicamente eficaz de pelo menos um dos compostos terapêuticos descritos e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Excipientes farmaceuticamente aceitáveis (excipients) são substâncias diferentes do Ingrediente Farmacêutico Ativo (API, produto terapêutico, por exemplo, agente de RNAi de ANGPTL3) que são intencionalmente incluídas no sistema de liberação de fármaco. Excipientes não exercem ou não se destinam exercer um efeito terapêutico na dosagem pretendida. Excipientes podem agir para a) auxiliar no processamento do sistema de liberação de fármaco durante a fabricação, b) proteger, suportar ou realçar a estabilidade, biodisponibilidade ou aceitablidade do paciente do API, c) assistir na identificação do produto, e/ou d) realçar qualquer outro atributo da segurança global, eficácia, de liberação do API durante armazenagem ou uso. Um exciiente farmaceuticamente aceitável pode ou não ser uma substância inerte.
[00219] — Excipientsincluem, porém não estão limitados a: realçadores de absorção, antiaderentes, agentes antiespumação, antioxidantes, aglutinantes, agentes de tamponamento, portadores, agentes de revestimento, corantes, realçadores de liberação, polímeros de liberação, detergentes, dextran, dextrose, diluentes, desintegrantes, emulsificantes, extensores, cargas, aromatizantes, deslizantes, umectantes, lubrificantes, óleos, polímeros, conservantes, salina, sais, solventes, açúcares, tensoativos, agentes de suspensão, matrizes de liberação prolongada, adoçantes, agentes espessantes, agentes de tonicidade, veículos, agentes repelentes de água, e agentes umectantes.
[00220] “Composições farmacêuticas adequadas para uso injetável incluem soluções aquosas estéreis (onde solúveis em água) ou dispersões e pós estéreis para a preparação extemporânea de dispersão ou soluções injetáveis estéreis. Para administração intravenosa, veículos adequados incluem salina fisiológica, água bacteriostática, CcCremophor& ELTM (BASF, Parsippany, NJ) ou salina tamponada por fosfato (PBS). Veículos adequados devem ser estáveis sob as condições de fabricação e armazenagem e devem ser conservadas contra a ação contaminante de micro-organismos tais como bactérias e fungos. O solvente pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, e polietileno glicol líquido), e misturas adequadas dos mesmos. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula requerido, no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. Em muitos casos, será preferivel incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois tais como manitol, sorbitol, e cloreto de sódio na composição. Absorção prolongada das composições injetáveis pode ser realizada incluindo na composição um reagente que retarda a absorção, por exemplo, monostearato de alumínio e gelatina.
[00221] Soluções estéreis injetáveis podem ser preparadas incorporando o composto ativo na quantidade requerida em um solvente apropriado com um ou uma combinação de ingredientes enumerados acima, como requerido, seguido por esterilização do filtro. Geralmente, dispersões são preparadas incorporando o composto ativo em um veículo estéril, que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação incluem secagem a vácuo e liofilização, que produz um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado de uma solução filtrada anteriormente esterilizada do mesmo.
[00222] —“Formulações adequadas para administração intra-articular podem ser na forma de uma preparação aquosa estéril do fármaco que pode estar na forma microcristalina, por exemplo, na forma de uma suspensão microcristalina aquosa. Formulações lipossômicas ou sistemas de polímero biodegradáveis podem também ser usadas para apresentar o fármaco para administração tanto intra-articular quanto oftálmica.
[00223] Os compostos ativo podem ser preparados com veículos que protegerão o composto contra rápida eliminação do corpo, tal como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes e sistemas de liberação microencapsulados. Polímeros biodegradáveis, biocompatíveis podem ser usados, tais como etileno acetate de vinila, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres, e ácido poliláctico. Métodos para preparação de tais formulações serão evidentes para aqueles versados na técnica. Suspensões lipossômicas podem também ser usadas como veículos farmaceuticamente aceitáveis. Estes podem ser preparados de acordo com métodos conhecidos por aqueles versados na técnica, por exemplo, como descrito na Patente dos Estados Unidos nº 4.522.811.
[00224] Os agentes de RNAide ANGPTL3 podem ser formulados em composições em forma de unidade de dosagem para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. A forma de unidade de dosagem refere-se às unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para o indivíduo a ser tratado; cada unidade contém uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico requerido. A especificação para as formas unitárias de dosagem da invenção é ditada por e diretamente dependente das características únicas do composto ativo e do efeito terapêutico a ser alcançado, e das limitações inerentes à técnica de composição de tal composto ativo para o tratamento de indivíduos.
[00225] Uma composição farmacêutica pode conter outros componentes adicionais comumente encontrados em composições farmacêuticas. Tais componentes adicionais incluem, porém não estão limitados a: antipruríticos, adstringentes, anestésicos locais, analgésicos, anti-histamínicos ou agentes anti-inflamatórios (por exemplo, acetaminofeno, AINEs, difenidramina, etc.). É também previsto que células, tecidos ou órgãos isolados que expressam ou compreendem os agentes de RNAi definidos aqui podem ser usados como "composições farmacêuticas." Como usado aqui, "quantidade farmacologicamente eficaz," "quantidade terapeuticamente eficaz," ou simplismente "quantidade eficaz" refere-se àquela quantidade de um agente de RNAi para produzir um um resultado farmacológico, terapêutico ou preventivo.
[00226] Em algumas modalidades, os métodos descritos aqui também compreendem a etapa de administrar um segundo terapêutico ou tratamento além de administrar um agente de RNAi descrito aqui. Em algumas modalidades, o segundo terapêutico é outro agente de RNAi de ANGPTL3 (por exemplo, um agente de RNAi de ANGPTL3 que alveja uma sequência diferente dentro do ANGPTL3 alvo). Em outras modalidades, o segundo terapêutico pode ser um fármaco de molécula pequena, um anticorpo, um fragmento de anticorpo, ou um aptâmero.
[00227] Geralmente, uma quantidade eficaz de um composto ativo estará na faixa de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal/dia, por exemplo, de cerca de 1,0 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um composto ativo estará na faixa de cerca de 0,25 a cerca de 5 mg/kg de peso corporal por dose. Em algumas modalidades, uma quantidade eficaz de um ingrediente ativo estará na faixa de cerca de 0,5 a cerca de 4 mg/kg de peso corporal por dose. A quantidade administrada também provavelmente dependerá de tais variáveis como o estado de saúde global do paciente, a eficácia biológica relativa do composto liberado, a formulação do fármaco, a presença e tipos de excipientes na formulação, e a via de administração. Além disso, deve-se entender que a dosagem inicial administrada pode ser aumentada além do nível superior acima para alcançar rapidamente o nível sanguíneo ou nível tecidual desejado, ou a dosagem inicial pode ser menor que a ideal.
[00228] Para tratamento de doença ou para formação de um medicamento ou composição para tratamento de uma doença, as combinações farmacêuticas descritas aqui incluindo um agente de RNAi de ANGPTL3 podem ser combinados com um excipiente ou com um segundo agente terapêutico ou tratamento incluindo, porém não limitados a: um segundo ou outro agente de RNAi, um fármaco de molécula pequena, um anticorpo, um fragmento de anticorpo, peptídeo e/ou um aptâmero.
[00229] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos, quando adicionados aos excipientes farmaceuticamente aceitáveis ou adjuvantes, podem ser embalados em Kits, recipients, embalagens ou aplicadores. As combinações farmacêuticas descritas aqui podem ser embaladas em seringas précarregadas ou frasconentes. Métodos de Tratamento e Inibição de Expressão
[00230] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui podem ser usados para tratar um indivíduo (por exemplo, um humano ou outro mamífero) tendo uma doença ou distúrbio que se beneficiaria da administração do agente de RNAi. Em algumas modalidades, os agentes de RNAi descrito aqui podem ser usados para tratar um indivíduo (por exemplo, um humano) que se beneficiaria da redução e/ou inibição na expressão de níveis de MRNA de ANGPTL3 e/ou proteína de ANGPTL3, por exemplo, um indivíduo que foi diagnosticado com hipertrigliceridemia, obesidade, hiperlipidemia, metabolismo de clolesterol e/ou lipídio anormal, aterosclerose, diabetes melito tipo |l, doença cardiovascular, doença da artéria coronária, esteato-hepatite não alcoólica doença hepática gordurosa não alcoólica, hipercolesterolemia — familiar — homozigótica = e — heterozigótica, hipercolesterolemia resistente à estatina e outros distúrbios e doenças metabólicas relacionadas.
[00231] Em algumas modalidades, ao indivíduo é administrada uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3. O tratamento de um indivíduo pode incluir tratamento terapêutico e/ou profilático. Ao indivíduo é administrada uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer um ou mais agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui. O indivíduo pode ser um humano, paciente, ou paciente humano. O indivíduo pode ser um adulto, adolescente, criança ou bebê. A administração de uma composição farmacêutica descrita aqui pode ser a um ser humano ou animal.
[00232] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui podem ser usados para tratar pelo menos um sintoma em um indivíduo tendo um distúrbio ou doença relacionado a ANGPTL3, ou tendo uma doença ou distúrbio que é mediado pelo menos em parte pela expressão de gene ANGPTL3. Em algumas modalidades, os agentes de RNAi de ANGPTL3 são usados para tratar ou controlar uma apresentação clínica de um indivíduo com um distúrbio ou doença relacionado a ANGPTL3. Ao indivíduo é administrada uma quantidade terapeuticamente eficaz de um ou mais dos agentes de RNAi de ANGTL3 ou composição contendo agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos aqui Em algumas modalidades, os métodos descritos aqui compreendem administrar uma composição que compreende um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito aqui a um indivíduo a ser tratado. Em algumas modalidades, ao indivíduo é administrada uma quantidade profilaticamente eficaz de qualquer um ou mais dos agentes de RNAi de ANGPTL3 descritos, desse modo tratando o indivíduo prevenindo ou inibindo pelo menos um sintoma.
[00233] Em certas modalidades, a presente invenção fornece métodos para tratamento de doenças, distúrbios, condições, ou estados patológicos mediados pelo menos em parte pela expressão de gene ANGPTL3, em um paciente em necessidade dos mesmos, em que os métodos incluem administrar ao paciente qualquer um dos agentes de RNAi de ANGTL3 descritos aqui.
[00234] Em algumas modalidades, o nível de expressão de gene e/ou nível de MRNA de um gene ANGPTL3 em um indivíduo ao qual um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito é administrado, é reduzido em pelo menos cerca de 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou mais do que 99% com relação ao indivíduo antes de ser administrado o agente de RNAi de ANGPTL3 ou a um indivíduo que não recebe o agente de RNAi de ANGPTL3. O nível de expressão de gene e/ou nível de mMRNA no indivíduo pode ser reduzido em uma célula, grupo de células, e/ou tecido do indivíduo.
[00235] Em algumas modalidades, o nível de proteína de ANGPTL3 em um indivíduo ao qual um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito foi administrado é reduzido em pelo menos cerca de 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou mais do que 99% com relação ao indivíduo antes de ser administrado o agente de RNAi de ANGPTL3 ou a um indivíduo que não recebe o agente de RNAi de ANGPTL3. O nível de proteína no indivíduo pode ser reduzido em uma célula, grupo de células, tecido, sangue, e/ou outro fluido do indivíduo.
[00236] Em algumas modalidades, os níveis de triglicerídeo (TG) em um indivíduo ao qual um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito foi administrado é reduzido em pelo menos cerca de 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou mais do que 99% com relação ao indivíduo antes de ser administrado o agente de RNAi de ANGPTL3 ou a um indivíduo que não recebe o agente de RNAi de ANGPTL3. O nível de TG no indivíduo pode ser reduzido em uma célula, grupo de células, tecido, sangue, e/ou outro fluido do indivíduo.
[00237] Em algumas modalidades, os níveis de colesterol totais em um indivíduo ao qual um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito foi administrado são reduzidos em pelo menos cerca de 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou mais do que 99% com relação ao indivíduo antes de ser administrado o agente de RNAi de ANGPTL3 ou a um indivíduo que não recebe o agente de RNAi de ANGPTL3. Em algumas modalidades, os níveis de lipoproteína de baixa densidade (LDL) de colesterol em um indivíduo ao qual um agente de RNAi de ANGPTL3 descrito foi administrado foram reduzidos em pelo menos cerca de 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou mais do que 99% com relação ao indivíduo antes de ser administrado o agente de RNAi de ANGPTL3 ou a um indivíduo que não recebe o agente de RNAi de ANGPTL3. Os níveis de colesterol totais e/ou LDL níveis de colesterol no indivíduo podem ser reduzidos em uma célula, grupo de células, tecido, sangue, e/ou outro fluido do indivíduo.
[00238] Uma redução nos níveis de MRNA de ANGPTLB3, níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de TG, níveis de colesterol, e níveis de colesterol LDL podem ser avaliados por quaisquer métodos conhecidos na técnica. Como usado aqui, uma reduçao ou decréscimo no nível de MRNA de ANGPTL3 e/ou nível de proteína são coletivamente referido aqui como uma redução ou decréscimo em ANGPTL3 ou inibição ou redução da expressão de ANGPTL3. Os exemplos estabelecidos aqui ilustram métodos conhecidos para avaliar a inibição da expressão de gene ANGPTL3. Célula, Tecidos, Órgãos, e Organismos não Humanos
[00239] Células, tecidos, órgãos, e organismos não humanos que incluem pelo menos um dos agentes de RNAi de ANGTL3 são descritos aqui contemplados. A célula, tecido, órgão, ou organismo não humano é preparado liberando o agente de RNAi à célula, tecido, órgão ou organismo não humano.
[00240] As modalidades e itens fornecidos acima são ilustrados agora com os seguintes exemplos não limitados.
EXEMPLOS Exemplo 1. Síntese de agentes de RNAi de ANGPTL3.
[00241] Duplexes de agente de RNAi de ANGPTL3 mostrados na Tabela 5, acima, foram sintetizados de acordo com os seguintes procedimentos gerais: A. Síntese. As fitas senso ou antissenso dos agentes de RNAi foram sintetizadas de acordo com tecnologia de fosforamidita em fase sólida usada em síntese de oligonucleotídeo. Dependendo da escala, um MerMade96EO (Bioautomation) um MerMade1280 (Bioautomation), ou um OP Pilot 100 (GE Healthcare) foi usado. As sínteses foram realizadas em um suporte sólido feito de vidro de poro controlado (CPG, 500 À ou 600À, obtidos de Prime Síntese, Aston, PA, USA). Todas as fosforamiditas de RNA e 2-RNA modificado foram adquiridas de Thermo Fisher Scientific (Milwaukee, WI, USA) ou Hongene Biotech (Shanghai, PRC). As 2'-O-metil fosforamiditas incluíam as seguintes: (5'-O-dimetoxitritil-Nº-(benzoil)-2'-O-metil- adenosina-3'-O-(2-cianoetil-N N-di-isopropilamino) fosforamidita, 5-O- dimetóxi-tritil-Nº-(acetil)-2-O-metil-citidina-3'-O-(2-cianoetil-N, N-di- isopropil-amino) fosforamidita, (5"-O-dimetoxitritil-N2-(isobutiril)-2'-O-
metil-guanosina-3"-O-(2-cianoetil-N, N-di-isopropilamino) fosforamidita, e 5'-O-dimetoxitritil-2"-O-metil-uridina-3"-O-(2-cianoetil-N, N-di- isopropilamino) fosforamidita. As — 2'-deóxi-2'-fluoro-fosforamiditas transportavam os mesmo grupos de proteção, como as 2'-O-metil amiditas. — 5'-(4,4"-Dimetoxitritil)-2',3'-seco-uridina, — 2'-benzoil-3"-[(2- cianoetil)-(N,N- di-isopropil)]-fosforamidita foi também adquirida de Thermo Fisher Scientific ou Hongene Biotech. 5'-dimetoxitritil-2-O-metil- inosina-3"-O-(2-cianoetil-N, N-di-isopropilamino) fosforamiditas foram adquiridas de Glen Research (Virginia) ou Hongene Biotech. As (3'-O- dimetoxitritil-2"-deoxiribose-5'-O-(2-cianoetil-N N-di-isopropilamino) fosforamiditas abásicas foram adquiridas de ChemGenes (Wilmington, MA, USA) ou SAFC (St Louis, MO, USA). A 5-O-dimetoxitritil-N2, Nº- (fenoxiacetato)-2'-O-metil-diaminopurina-3'-O-(2-cianoetil-N,N-di- isopropilamino) fosforamidita foi obtida de ChemGenes ou Hongene Biotech.
[00242] As fosforamiditas contendo ligante de direcionamento foram dissolvidas em diclorometano anidroso ou acetonitrila anidrosa (50 mM), enquanto todas as outras amiditas foram dissolvidas em acetonitrila anidrosa (50 mM), ou dimetilformamida anidrosa e peneiras moleculare (3À) foram adicionadas. 5-Benziltio-1H-tetrazol (BTT, 250 mM em acetonitrila) ou 5-Etiltio-1H-tetrazol (ETT, 250 MM em acetonitrila) foi usado como solução ativadora. Os tempos de acoplamento foram de 12 min (RNA), 15 min (ligante de direcionamento), 90 seg (2/OMe), e 60 seg (2'F). A fim de introduzir ligações de fosforotioato, uma solução a 100 de 3-fenil 1,2,4-ditiazolina-5-ona (POS, obtida de PoliOrg, Inc., Leominster, MA, USA) em acetonitrila anidrosa foi empregada. A menos que especificamente identificado um agente de RNAi "nu" RNAi não tendo nenhum ligante de direcionamento presente, cada um dos duplexes de agente de RNAi de ANGPTL3 sintezados e testados nos seguintes Exemplos utilizou N-acetil-galactosamina como "NAG" nas estruturas químicas de ligante de direcionamento representadas na Tabela 6.
B. Clivagem e desproteção de oligômero ligado ao suporte. Após finalização da síntese de fase sólida, o suporte sólido secado foi tratado com uma solução de volume 1:1 de 40 % em peso de metilamina em água e solução de hidróxido de amônio a 28% (Aldrich) durante 1,5 horas a 30ºC. A solução foi evaporada e o resíduo sólido foi reconstituído em água (veja abaixo).
C. Purificação. Os oligômeros brutos foram purificados por HPLC de permuta aniônica usando uma coluna TSKgel SuperQ-5PW 13um e sistema Shimadzu LC-8. O tampão A foi Tris a 20 MM, EDTA a mM, pH 9,0 e continha acetonitrila a 20% e tampão B foi o mesmo como o tampão A com a adição de cloreto de sódio a 1,5 M. Traços de UV a 260 nm fora registrados. Frações apropriadas foram agrupadas, em seguida executadas em HPLC de exclusão de tamanho usando uma coluna GE Healthcare XK 26/40 embalada com Sephadex G-25 fina com um tampao de execução de água DI filtrada ou bicarbonato de amônio a 100 mM, pH 6,7 e acetonitrile a 20%.
D. Anelação. Fitas complementares foram misturadas combinando soluções de RNA equimolares (senso e antissenso) em 1x Salina Tamponada por Fosfato (Corning, Cellgro) para formar os agentes de RNAi. Alguns agentes de RNAi foram liofilizados e armazenados a -15 a -25ºC. A concentração de duplex foi determinada medindo a absorbância da solução em um espectrômetro UV-Vis 1x Salina Tamponada por Fosfato. A absorbância da solução a 260 nm foi em seguida multiplicada por um fator de conversão e o fator de diluição para determinar a concentração de duplex. O fator de conversão usado foi ou 0,037 mg/(mL:cm) ou foi calculado a partir de um coeficiente de extração experimentalmente determinado.
Exemplo 2. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em
Camundongos.
[00243] Para avaliar a atividade in vivo de agentes de RNAi de ANGPTL3 que são designados para alvejar diferentes posições no gene ANGPTL3, camundongos C57bl/6 fêmeas de seis a oito semanas de idade foram usados. As amostras de soro de pré-dose foram tiradas no -1 após um jejum de quatro horas. No dia 1, cada camundongo foi fornecida uma única administração subcutânea de 200 ul contendo 3 mg/kg (mpk) de um agente de RNAi de ANGPTL3 em D5W (dextrose em 5% de água), ou controle (DSW) sem nenhum agente de RNAi, de acordo com os grupos de dosagem recitados na Tabela 7. Tabela 7. Grupos de Dosagem de Exemplo 2 [E stmaraaeAT incanieção mo da 7 [E peeeaS — mmerssns: |
[00244] Cada um dos agentes de RNAi incluía uma sequência modificada e um ligante de direcionamento contendo N-acetil-galactosa- mina conjugado à extremidade 5' terminal da fita senso. (Veja tabelas 3, 4, e 5 para estruturas de sequências modificadas e ligante de direcionamento). As injeções foram realizadas entre a pele e o músculo (isto é, injeções subcutâneas) na pele solta sobre a área do pescoço e ombro. Três (3) camundongos em cada grupo foram testados (n=3).
Soro foi coletado nos dias 8, 13, 22, 29, e dia 36 (para os Grupos 1 e 5- 11 apenas). Os camundongos foram submetidos ao jejum durante quatro horas antes de cada coleta. Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio de ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Triglicerídeos, lipoproteína de alta densidade (HDL), e colesterol total em soro foram medidos em um Cobas& Integra 400 (Roche Diagnostics),) de acordo com as recomendações do fabricante.
[00245] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de HDL, e níveis de colesterol total para cada animal foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de ANGPTL3, triglicerídeo, HDL, e colesterol! total, respectivamente, para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré-tratamento de expressão naquele animal (neste caso no dia -1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento." A expressão, em um ponto específico de tempo, foi em seguida normalizada para o grupo de controle DSW dividindo a relação "normalizada para pré- tratamento" para um animal individual pela relação "normalizada para pré-tratamento" média de todos os camundongos no grupo de controle D5W . Isto resultou na expressão para cada ponto de tempo normalizado para aquela no grupo de controle.
[00246] Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas 8 a 11:
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[00247] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 ADO5342 e ADO5343 (Grupos 2 e 3) incluíam sequências de nucleotídeo que foram designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 743 do gene; agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5344 (Grupo 4) incluía sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 744 do gene; agentes de RNAi de ANGPTL3 ADO5306 e ADO5S307 (Grupos 5 e 6) incluíam sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 921 do gene; agentes de RNAi de ANGPTL3 ADO5308 e ADO5309 (Grupos 7 e 8) incluíam sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 922 do gene; agentes de RNAi de ANGPTL3 ADO5310 e ADO5311 (Grupos 9 e 10) incluíam sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 1302 do gene; e agentes de RNAi de ANGPTL3 ADO5312 (Grupo 11) incluíam sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 1304 do gene. (veja SEQ ID NO:1 para a sequência de gene ANGPTL3 referenciada).
[00248] Como mostrado na Tabela 8, acima, cada um dos agentes de RNAi em pelo menos Grupos 5, 6, 7, 8, 9, 10, e 11 mostrou inibição de ANGPTL3. Por exemplo, no dia 29, Grupo 7 (agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5308), que incluía sequências de nucleotídeo designadas para alvejar a posição 922 do gene ANGPTL3, mostrou uma redução de aproximdamente 91% (0,088) em proteína de ANGPTL3 em comparação com o controle. Similarmente, tanto o Grupo 5 (agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5306) quanto Grupo 6 (agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5307), que foram designados para alvejar a posição 921 do gene ANGPTL3, mostraram mais do que 75% de redução em proteína de ANGPTL3 no dia 29 (isto é, 0,240 e 0,206).
Exemplo 3. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em camundongos.
[00249] Para avaliar a atividade in vivo de agentes de RNAi de ANGPTL3 que são designados para alvejar as posições 921 e 922 no gene ANGPTL3, camundongos C57bl/6 fêmeas de seis a oito semanas de idade foram usados. Amostras de soro pré-dose foram tiradas no dia -1 após um jejum de quatro horas. No dia 1, a cada camundongo foi fornecida uma administração de 200 ul contendo 1 mg/kg (mpk) de um agente de RNAi de ANGPTL3 em D5W (dextrose em 5% de água), ou control (DSW) com sem agente de RNAi, de acordo com os grupos de dosagem relacionados na Tabela 12. Tabela 12. Grupos de Dosagem de Exemplo 3 [E [retas [mma nas [E msKes ADS ncia radar | [AA ren
[00250] Cada um dos agentes de RNAi incluía uma sequência modificada e um ligante de direcionamento contendo N-acetil-galactosa- mina conjugado à extremidade 5' terminal da fita senso. (Veja tabelas 3, 4, e 5 para estruturas de sequências modificadas e ligante de direcionamento). As injeções foram realizadas entre a pele e o músculo (isto é, injeções subcutâneas) na pele solta sobre a área do pescoço e ombro. Três (3) camundongos em cada grupo foram testados (n=3). Soro foi coletado nos dias 9, 15, 22, e 29. Os camundongos foram submetidos ao jejum durante quatro horas antes de cada coleta. Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio de ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Triglicerídeos, lipoproteína de alta densidade (HDL), e colesterol total em soro foram medidos em um Cobas€O Integra 400 (Roche Diagnostics), de acordo com as recomendações do fabricante.
[00251] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de HDL, e níveis de colesterol total para cada animal foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de ANGPTL3, triglicerídeo, HDL, e colesterol! total, respectivamente, para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré-tratamento de expressão naquele animal (neste caso no dia -1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento." A expressão, em um ponto específico de tempo, foi em seguida normalizada para o grupo de controle DSW dividindo a relação "normalizada para pré- tratamento" para um animal individual pela relação "normalizada para pré-tratamento" média de todos os camundongos no grupo de controle D5W . Isto resultou na expressão para cada ponto de tempo normalizado para aquela no grupo de controle.
[00252] Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas 13 a 16:
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[00253] Enquanto tendo diferentes padrões de sequência e modificação, os agentes de RNAi de ANGPTL3 nos Grupos 2 a 11 incluíam sequências de nucleotídeo que foram cada qual designada para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 921 do gene; e os agentes de RNAi de ANGPTL3 nos Grupos 12 a 19 incluíam sequências de nucleotídeo que foram cada qual designada para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 922 do gene. (Veja SEQ ID NO:1 para a sequência de gene ANGPTL3 referenciada). Como mostrado na Tabela 12 acima, cada um dos agentes de RNAi obteve inibição de ANGPTL3 como comparado ao controle. Por exemplo, Grupo 12 (agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5308) obteve aproximadamente uma redução de 80% nos níveis de proteína de ANGPTL3 em comparação ao controle (0,209) no dia 22. Exemplo 4. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em Camundongos.
[00254] Para avaliar a atividade in vivo de agentes de RNAi de ANGPTL3 que são designados para alvejar posições adicionais no gene ANGPTL3, camundongos C57bl/6 fêmeas de seis a oito semanas de idade foram usados. Amostras de soro pré-dose foram tiradas no dia -1 após um jejum de quatro horas. No dia 1, a cada camundongo foi fornecida uma administração de 200 ul contendo 1 mg/kg (mpk) ou 0,5 mg/kg (mpk) de um agente de RNAi de ANGPTL3 em D5W (dextrose em 5% de água), ou control (DSW) com sem agente de RNAi, de acordo com os grupos de dosagem relacionados na Tabela 17. Tabela 17. Grupos de Dosagem de Exemplo 4
[00255] Cada um dos agentes de RNAi incluía uma sequência modificada e um ligante de direcionamento contendo N-acetil-galactosa- mina conjugado à extremidade 5' terminal da fita senso. (Veja tabelas 3, 4, e 5 para estruturas de sequências modificadas e ligante de direcionamento). As injeções foram realizadas entre a pele e o músculo (isto é, injeções subcutâneas) na pele solta sobre a área do pescoço e ombro. Três (3) camundongos em cada grupo foram testados (n=3). Soro foi coletado nos dias 8, 15, 22, 29, e dia 43 (Grupos 1-3, 9, e 11- 13 apenas). Os camundongos foram submetidos ao jejum durante quatro horas antes de cada coleta. Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio de ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Triglicerídeos, lipoproteína de alta densidade (HDL), e colesterol total em soro foram medidos em um Cobas& Integra 400 (Roche Diagnostics),) de acordo com as recomendações do fabricante.
[00256] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de HDL, e níveis de colesterol total para cada animal foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de ANGPTL3, triglicerídeo, HDL, e colesterol! total, respectivamente, para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré-tratamento de expressão naquele animal (neste caso no dia -1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento." A expressão, em um ponto específico de tempo, foi em seguida normalizada para o grupo de controle DSW dividindo a relação "normalizada para pré- tratamento" para um animal individual pela relação "normalizada para pré-tratamento" média de todos os camundongos no grupo de controle D5W.. Isto resultou na expressão para cada ponto de tempo normalizado para aquela no grupo de controle.
[00257] Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas 18 a 22:
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[00258] Os agentes de RNAi de ANGPTL3 ADOS5487 e ADO5488 (Grupos 2 e 3) incluíam sequências de nucleotídeo que foram designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 304 do gene; agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5489 e ADO5490 (Grupos 4 e 5) incluíam sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 172 do gene; agentes de RNAi de ANGPTL3 ADO5491 e ADO5492 (Grupos 6 e 7) incluíam sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 1008 do gene; agente de RNAi de ANGPTL3 ADO593 (Grupo 8) incluíam sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 1009 do gene; agentes de RNAi de ANGPTL3 ADOS494, ADO5495, e ADO5308 (Grupos 9, 10, 11, e 12) incluíam sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 1302 do gene; e agentes de RNAi de ANGPTL3 ADO5418 (Grupo 13) incluíam sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de um gene ANGPTL3 na posição 921 do gene. (veja SEQ ID NO:1 para a sequência de gene ANGPTL3 referenciada).
[00259] Como mostrado na Tabela 18 acima, enquanto a maioria dos agentes de RNAi obteve uma redução nos níveis de proteína de ANGPTL3 em quase todos os pontos de tempo medidos, os agentes de RNAi de ANGPTL3 no Grupo 2 (ADO5487) e Grupo 3 (ADO5488), em que cada qual incluía sequências de nucleotídeo designadas para inibir a expressão de gene ANGPTL3 na posição 304 do gene, superaram os outros grupos neste estudo. Por exemplo, nos dias 15 e 22, o agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5488 (Grupo 3) obteve mais do que 90% de bloqueio de proteína de ANGPTL3 (isto é, 0,070 no dia 15 e 0,092 no dia 22). Similarmente, o agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5487 (Grupo 2) obteve quase 75% de bloqueio nos dias 15 e 22 (isto é, 0,170 no dia 15 e 0,138 no dia 22). Além disso, as mesmas tendências foram observadas através dos parâmetros medidos adicionais incluindo TG, colesterol total, e LDL, visto que tanto o Grupo 2 (ADO5487) quanto Grupo 3 (ADO5488) geralmente superaram os outros agentes de RNAi testados (veja tabelas 19-22). Por exemplo, Para os Grupos 2 e 3, no dia 29, os níveis de triglicerídeos foram reduzidos em pelo menos 28% (isto é, 0,556 ou 0,721), colesterol! total foi reduzido em pelo menos 31% (isto é, 0,560 ou 0,683), e níveis de LDL foram reduzidos em quase 20% (0,744 ou 0,801). Exemplo 5. Teste /n Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em Macacosccinomolgos.
[00260] Agentes de RNAi de ANGPTL3 foram avaliados em macacos cinomolgos. No dia 1, primatas cynomolgus macaque (Macaca fascicularis) (também referidos aqui como "cinos") foram administrados com uma única injeção subcutânea de 0,3 mL/kg (aproximadamente 2- 3 mL de volume, dependendendo da massa do animal) contendo 3,0 mg/kg de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5308 ou ADO05418, formulado em salina. Cada um dos agentes de RNAi de ANGTL3 continha nucleotídeos modificados e incluía ligantes de direcionamento de N-acetil-galactosamina conjugados à extermidade 5' terminal da fita senso, como mostrado nas tabelas 3, 4, e 5.
[00261] Dois (2) cinos em cada grupo foram testados (n=2). Amostras de sangue foram tiradas e amostras de soro foram analisadas nos dias -37 (pré-dose), -15 (pré-dose), e -1 (pré-dose), 8, 16, 23, 30, e
37. Os cinos foram submetidos ao jejum durante a noite antes de cada coleta. Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Os níveis de proteína de ANGPTL3 foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de ANGPTL3 para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré-tratamento médio de expressão naquele animal (neste caso nos dias -37, -15, e -1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento."
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[00263] Cada um dos macacos cinomolgos dosados com ADO5308 ou ADO5418 mostrou uma redução na proteína de ANGPTL3 em comparação com as medições pré-tratamento através de todos os pontos de tempo medidos. Por exemplo, para animais individuais, no dia 16, os cinos dosados com ADO5418 mostraram uma redução de aproximadamente 64% (0,358 nível de proteína normalizado) ou 69% (0,309 nível de proteína normalizado) na proteína de ANGPTL3. Além disso, ainda no dia 37, os cinos de Grupo 2 (ADO5418) mostraram uma redução média de aproximadamente 73% (0,270) nos níveis de ANGPTL proteína. Exemplo 6. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em Camundongos.
[00264] Para avaliar a atividade in vivo de agentes de RNAi de ANGPTL3 adicionais que são designados para alvejar a posição 304 no gene ANGPTL3, camundongos C57bl/6 fêmeas de seis a oito semanas de idade foram usados. Amostras de soro pré-dose foram tiradas no dia -1 após um jejum de quatro horas. No dia 1, a cada camundongo foi fornecida uma administração de 200 ul contendo 0,5 mg/kg (mpk) de um agente de RNAi de ANGPTL3 em D5W (dextrose em 5% de água), ou controle (DSW) sem agente de RNAi, de acordo com os grupos de dosagem relacionados na Tabela 25. Tabela 25. Grupos de Dosagem de Exemplo 6
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[00265] Cada um dos agentes de RNAi incluía uma sequência modificada e um ligante de direcionamento contendo N-acetil-galactosa- mina conjugado à extremidade 5' terminal da fita senso. (Veja tabelas 3, 4, e 5 para estruturas de sequências modificadas e ligante de direcionamento). As injeções foram realizadas entre a pele e o músculo (isto é, injeções subcutâneas) na pele solta sobre a área do pescoço e ombro. Três (3) camundongos em cada grupo foram testados (n=3). Soro foi coletado nos dias 8, 15, 22, 30, e no dia 43 para certos grupos (isto é, Grupos 1, 2, 5, e 10 apenas). Os camundongos foram submetidos ao jejum durante quatro horas antes de cada coleta. Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Triglicerídeos, colesterol! total, lipoproteína de alta densidade (HDL), e lipoproteína de baixa densidade (LDL) em soro foram medidos em um Cobas& Integra 400 (Roche Diagnostics), de acordo com as recomendações do fabricante.
[00266] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de colesterol total, níveis de HDL, e níveis de LDL para cada animal foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de ANGPTL3, triglicerídeo, HDL, e colesterol! total, respectivamente, para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré- tratamento de expressão naquele animal (neste caso no dia -1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento." A expressão, em um ponto específico de tempo, foi em seguida normalizada para o grupo de controle DSW dividindo a relação "normalizada para pré-tratamento" para um animal individual pela relação "normalizada para pré-tratamento" média de todos os camundongos no grupo de controle D5W. Isto resultou na expressão para cada ponto de tempo normalizado para aquela no grupo de controle.
[00267] Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas:
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[00268] Cada um dos agentes de RNAi de ANGTL3 testados (isto é, ADO5S488, ADO5652, ADO5653, ADO5654, ADOS5655, ADO5656, ADOS5657, ADO5658, ADOS66O0, ADOS5661, e ADOS662) cada qual incluía sequências de nucleotídeo designadas para alvejar o gene de ANGPTL3 na posição 304 (veja, por exemplo, SEQ ID NO:1). Como mostrado acima, cada um dos agentes de RNAi mostrou uma redução substancial nos níveis de proteína de ANGPTL3 pelo menos no dia 22. Reduções dos níveis de TG e colesterol total foram também observados. Exemplo 7. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em Camundongos.
[00269] Paratambém avaliar a atividade in vivo de agentes de RNAi de ANGPTL3 adicionais que são designados para alvejar a posição 304 no gene ANGPTL3, camundongos C57bl/6 fêmeas de seis a oito semanas de idade foram usados. Amostras de soro pré-dose foram tiradas no dia -1 após um jejum de quatro horas. No dia 1, a cada camundongo foi fornecida uma administração de 200 ul contendo 0,5 mg/kg (mpk) de um agente de RNAi de ANGPTL3 em D5W (dextrose em 5% de água), ou controle (DSW) sem agente de RNAi, de acordo com os grupos de dosagem relacionados na Tabela 31. Tabela 31. Grupos de Dosagem de Exemplo 7 [9 osmeeseaDost once neção roda 1 [E [es aAES — [imensa |
[00270] Cada um dos agentes de RNAi incluía uma sequência modificada e um ligante de direcionamento contendo N-acetil-galactosa- mina conjugado à extremidade 5' terminal da fita senso. (Veja tabelas 3, 4, e 5 para estruturas de sequências modificadas e ligante de direcionamento). As injeções foram realizadas entre a pele e o músculo (isto é, injeções subcutâneas) na pele solta sobre a área do pescoço e ombro. Três (3) camundongos em cada grupo foram testados (n=3). Soro foi coletado nos dias 8, 15, 22, e 29. Os camundongos foram submetidos ao jejum durante quatro horas antes de cada coleta. Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Triglicerídeos, colesterol! total, lipoproteína de alta densidade (HDL), e lipoproteína de baixa densidade (LDL) em soro foram medidos em um Cobas& Integra 400 (Roche Diagnostics), de acordo com as recomendações do fabricante.
[00271] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de colesterol total, níveis de HDL, e níveis de LDL para cada animal foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de ANGPTL3, triglicerídeo, HDL, e colesterol! total, respectivamente, para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré- tratamento de expressão naquele animal (neste caso no dia -1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento." A expressão, em um ponto específico de tempo, foi em seguida normalizada para o grupo de controle DSW dividindo a relação "normalizada para pré-tratamento" para um animal individual pela relação "normalizada para pré-tratamento" média de todos os camundongos no grupo de controle DSW. Isto resultou na expressão para cada ponto de tempo normalizado para aquela no grupo de controle.
[00272] Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas 32-36:
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Exemplo 8. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em Macacos Cinomolgos.
[00273] Agentes de RNAi de ANGPTL3 adicionais foram avaliados em macacos cinomolgos. No dia 1, primatas cynomolgus macaque (Macaca fascicularis) (também referidos aqui como "cinos") foram administrados com um única injeção subcutânea de 0,3 mL/kg (aproximadamente 1 a 2 mL de volume, dependendendo da massa do animal) contendo 3,0 mg/kg de um dos agentes de RNAi de ANGPTL3 ADOS5577, ADOS53SO07, ADOS488, ADO5654, ou ADO5659, each formulado em salina. Cada um dos agentes de RNAi de ANGTL3 continha nucleotídeos modificados e incluía ligantes de direcionamento de N- acetil-galactosamina conjugados à extermidade 5' terminal da fita senso, como mostrado nas tabelas 3, 4, e 5.
[00274] Dois (2)cinosem cada grupo foram testados (n=2). Amostras de sangue foram tiradas e amostras de soro foram analisadas nos dias -8 (pré-dose), 1 (pré-dose), 8, 15, 22, 29, e 36. Os cinos foram submetidos ao jejum durante a noite antes de cada coleta. Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Triglicerídeos, colesterol total, lipoproteína de alta densidade (HDL), e lipoproteína de baixa densidade (LDL) em soro foram medidos em um Cobas€ Integra 400 (Roche Diagnostics), de acordo com as recomendações do fabricante.
[00275] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de colesterol total, níveis de HDL, e níveis de LDL para cada animal foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de ANGPTL3, triglicerídeo, HDL, e colesterol! total, respectivamente, para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré- tratamento médio de expressão naquele animal (neste caso nos dias - 8, e 1 (pré-dose)) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento."
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[00277] Cada um dos macacos cinomolgos dosados com qualquer um de ADO5577, ADO5307, ADOS5488, ADO5654, ou ADO5659 mostrou uma redução na proteína de ANGPTL3 em comparação com as medições pré-tratamento através de todos os pontos de tempo medidos. Exemplo 9. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em Macacos Cinomolgos.
[00278] Agentes de RNAi de ANGPTL3 adicionais foram avaliados em macacos cinomolgos. No dia 1, primatas cynomolgus macaque (Macaca fascicularis) (também referidos aqui como "cinos") foram administrados com uma única injeção subcutânea de 0,3 mL/Kkg (aproximadamente 2 a 3 mL de volume, dependendendo da massa do animal) contendo 2,0 mg/kg de um agente de RNAi de ANGPTL3, que incuía ADOS488, ADO5743, ADO5775, ou ADO5841, cada qual formulado em salina. Cada um dos agentes de RNAi de ANGTL3 continha nucleotídeos modificados e incluía ligantes de direcionamento de N-acetil-galactosamina conjugados à extermidade 5' terminal da fita senso, como mostrado nas tabelas 3, 4, e 5. Agentes de RNAi de ANGPTL3 ADO5488, ADO5743, e ADO5775 incluíam sequências de nucleotídeo designadas para alvejar a posição 304 do gene ANGPTL3. Agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5841 incluía sequências de nucleotídeo designadas para alvejar a posição 1035 do gene ANGPTL3.
[00279] Três (3) cinos em cada grupo foram testados (n=3). Amostras de sangue foram tiradas e amostras de soro foram analisadas nos dias -14 (pré-dose), -7 (pré-dose), 1 (pré-dose), 8, 15, 22, 29, e 35. Os cinos foram submetidos ao jejum durante a noite antes de cada coleta. Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Triglicerídeos, colesterol total, lipoproteína de alta densidade (HDL), e lipoproteína de baixa densidade (LDL) em soro foram medidos em um Cobas& Integra 400 (Roche Diagnostics), de acordo com as recomendações do fabricante.
[00280] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de colesterol total, níveis de HDL, e níveis de LDL para cada animal foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de ANGPTL3, triglicerídeo, HDL, e colesterol! total, respectivamente, para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré- tratamento médio de expressão naquele animal (neste caso nos dias - 14, -7, e 1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento."
[00281] Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas 42 a 45:
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[00282] Cada dos macacos cinomolgos dosados com qualquer de ADOS5488, ADO5743, ADO5775, e ADO5841, cada qual em níveis de dosagem de 2,0 mg/kg, mostrou uma redução na proteína de ANGPTL3 em comparação com as medições pré-tratamento em cada um dos pontos de tempo medidos. Exemplo 10. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 Adicionais em Camundongos.
[00283] Para avaliar a atividade in vivo de outros agentes de RNAi de ANGPTL3 que são designados para alvejar a posição 304 no gene ANGPTL3, camundongos C57bl/6 fêmeas de seis a oito semanas de idade foram usados. Amostras de soro pré-dose foram tiradas no dia -1 após um jejum de quatro horas. No dia 1, a cada camundongo foi fornecida uma administração de 200 ul contendo 0.5 mg/Kkg (mpk) de um agente de RNAi de ANGPTL3 em D5W (dextrose em 5% de água), ou controle (DSW) sem agente de RNAi, de acordo com os grupos de dosagem relacionados na Tabela 47. Tabela 47. Grupos de Dosagem de Exemplo 10 [6 esmaga AmosTas oncaineção rode E ora AS mena 9 estara ADA near de
[00284] Cada um dos agentes de RNAi incluía uma sequência modificada e um ligante de direcionamento contendo N-acetil-galactosa- mina conjugado à extremidade 5' terminal da fita senso. (Veja tabelas 3, 4, e 5 para estruturas de sequências modificadas e ligante de direcionamento). Como observado acima, cada um dos agentes de RNAi de ANGTL3 dosados neste estudo incluía sequências de nucleotídeo designadas para alvejar o gene de ANGPTL3 na posição
304. As injeções foram realizadas entre a pele e o músculo (isto é, injeções subcutâneas) na pele solta sobre a área do pescoço e ombro. Três (3) camundongos em cada grupo foram testados (n=3). Soro foi coletado nos dias 8, 15, 22, 29, e for some grupos no dia 36 (isto é, Grupos 1, 2, e 9-13 apenas). Os camundongos foram submetidos ao jejum durante quatro horas antes de cada coleta. Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Triglicerídeos, colesterol total, lipoproteína de alta densidade (HDL), e lipoproteína de baixa densidade (LDL) em soro foram medidos em um Cobasã& Integra 400 (Roche Diagnostics), de acordo com as recomendações do fabricante.
[00285] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de colesterol total, níveis de HDL, e níveis de LDL para cada animal foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de ANGPTL3, triglicerídeo, HDL, e colesterol! total, respectivamente, para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré- tratamento de expressão naquele animal (neste caso no dia -1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento." A expressão, em um ponto específico de tempo, foi em seguida normalizada para o grupo de controle DSW dividindo a relação "normalizada para pré-tratamento" para um animal individual pela relação "normalizada para pré-tratamento" média de todos os camundongos no grupo de controle DS5W. Isto resultou na expressão para cada ponto de tempo normalizado para aquela no grupo de controle.
[00286] Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas 48-52:
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[00287] “Como indicado na Tabela 48 acima, cada um dos agentes de RNAi de ANGTL3 testados mostrou uma redução significante em proteína de ANGPTL3 em todos os pontos de tempo, e tendências similares são observadas com respeito às reduções nos níveis de TG, níveis de colesterol total, e níveis de LDL. Exemplo 11. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em Camundongos.
[00288] Para avaliar a resposta à dose de agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5488, camundongos C57bl/6 fêmeas de seis a oito semanas de idade foram usados. Amostras de soro pré-dose foram tiradas no dia -1 após um jejum de quatro horas. No dia 1, a cada camundongo foi fornecida uma administração de 200 ul contendo respectiva dose mg/kg de um agente de RNAi de ANGPTL3 em D5W (dextrose em 5% de água), ou controle (DSW) sem agente de RNAi, de acordo com os grupos de dosagem relacionados na Tabela 53: Tabela 53. Grupos de Dosagem de Exemplo 11 co EA ren
[00289] O agente de RNAitestado (ADO5488) incluía uma sequência modificada e um ligante de direcionamento contendo Nr-acetil- galactosamina conjugado à extremidade 5' terminal da fita senso. (Veja tabelas 3, 4, e 5 para estruturas de sequências modificadas e ligante de direcionamento). As injeções foram realizadas entre a pele e o músculo (isto é, injeções subcutâneas) na pele solta sobre a área do pescoço e ombro. Quatro (4) camundongos em cada grupo foram testados (n=4). Soro foi coletado nos dias 8, 15, 22, e 29. Os camundongos foram submetidos ao jejum durante quatro horas antes de cada coleta. Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Triglicerídeos, colesterol! total, lipoproteína de alta densidade (HDL), e lipoproteína de baixa densidade (LDL) em soro foram medidos em um Cobas& Integra 400 (Roche Diagnostics), de acordo com as recomendações do fabricante.
[00290] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de colesterol total, níveis de HDL, e níveis de LDL para cada animal foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de ANGPTLS3, triglicerídeo, HDL, e colesterol! total, respectivamente, para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré- tratamento de expressão naquele animal (neste caso no dia -1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento." A expressão, em um ponto específico de tempo, foi em seguida normalizada para o grupo de controle DSW dividindo a relação "normalizada para pré-tratamento" para um animal individual pela relação "normalizada para pré-tratamento" média de todos os camundongos no grupo de controle DSW. Isto resultou na expressão para cada ponto de tempo normalizado para aquela no grupo de controle.
[00291] Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas 54-58:
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[00292] — Adicionalmente, os níveis de MRNA de ANGPTL3 foram também avaliados. Todos os camundongos de cada respectivo grupo foram sacrificados no dia 29 após coleta de soro, os fígados foram colhidos, e aproximadamente 100 mg de amostras de fígado foram coletados e congelados em nitrogênio líquido para isolamento de RNA. Os níveis de MRNA de ANGPTL3 nos fígados de camundongos foram em seguida medidos por RT-qPCR, os resultados dos quais são estabelecidos na seguinte Tabela 59: Tabela 59. Nível de mMRNA de Média de ANGPTL3 no dia 29, Normalizado para Controle de Exemplo 11
RM ID grupo Média — Com | Baixa Variância relação ao | Variância Elevada mMRNA de | (Erro) (Erro) ANGPTL3 Grupo 2 (0,05 mg/Kg de | 0,798 0,126 0,149 Pa Grupo 3 (0,1 mg/Kg de | 0,563 0,054 0,059 Paes Grupo 4 (0,5 mg/Kg de | 0,277 0,074 0,100 Pat Grupo 5 (1,0 mg/Kg de | 0,123 0,035 0,049 att Grupo 6 (25 mg/Kg de | 0,036 0,007 0,009 Paes Grupo 7 (5,0 mg/Kg de | 0,038 0,011 0,016 Pati
[00293] Como mostrado, entre outras coisas, nas Tabelas 54 e 59, a administração de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5488 mostrou uma redução tanto na proteína de ANGPTL3 quanto MRNA de ANGPTLS3. Exemplo 12. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em
Camundongos de Nocaute de Receptor de LDL (LDLR).
[00294] Para avaliaro efeito de administração de agente de RNAi em um modelo de doença, camundongos tendo uma mutação genética quanto ao receptor de LDL (referidos aqui como camundongos KO de LDLR) foram comercialmente obtidos (The Jackson Laboratory). Os camundongos KO de LDLR são homozigotos para a mutação Ldlrimiter, e têm níveis séricos de colesterol elevados, particularmente quando colocados em uma dieta rica em gordura. Durante três semanas antes do início do estudo, trinta e nove (39) camundongos KO de LDLR foram colocados em uma dieta rica em gordura (Teklad Custom Diets TD.88137). Um adicional de oito (8) camundongos KO de LDLR foram colocados em uma dieta de comida normal durante o mesmo período de três semanas. Amostras de soro pré-dose foram tiradas no dia -15 e dia -1 após um jejum de quatro horas. No dia 1, a cada camundongo foi fornecida uma administração de 200 ul/30 g corpo corporal do animal contendo a respectiva dose mg/kg de um agente de RNAi de ANGPTL3 em D5W (dextrose em 5% de água), controle (DSW) sem agente de RNAi, ou um agente de RNAi de controle que incluía a sequência de nucleotídeo designada para alvejar o genoma do vírus da hepatite B (HBV). Uma segunda injeção da mesma formulação foi administrada aos animais no dia 29. O regime de dosagem para o estudo é recitado na seguinte Tabela 60:
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[00295] “Cada camundongo permaneceu em sua respectiva dieta por toda a duração do estudo. O agente de RNAi testado (ADO5488) incluía uma sequência modificada e um ligante de direcionamento contendo N- acetil-galactosamina conjugado à extremidade 5' terminal da fita senso. (Veja tabelas 3, 4, e 5 para estruturas de sequências modificadas e ligante de direcionamento). As injeções foram realizadas entre a pele e o músculo (isto é, injeções subcutâneas) na pele solta sobre a área do pescoço e ombro. Soro foi coletado nos dias 8, 15, 22, 29 (segunda pré- dose), 36, 43, 50, e 57. Camundongos KO de LDLR foram submetidos ao jejum durante quatro horas antes de cada coleta. No dia 15, quatro (4) camundongos KO de LDLR de Grupos 1, 2, e 3 (isto é, os grupos aos quais está sendo administrada a dieta rica em gordura "Western") foram sacrificados após coleta de soro, e no dia 29, mais quatro (4) camundongos KO de LDLR de Grupos 1, 2, e 3 foram sacrificados após coleta de soro, para os proprósitos de realização de avaliações de mMRNA.
[00296] Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Triglicerídeos, colesterol total, lipoproteína de alta densidade (HDL), e lipoproteína de baixa densidade (LDL) em soro foram medidos em um Cobas€ Integra 400 (Roche Diagnostics), de acordo com as recomendações do fabricante.
[00297] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de colesterol total, níveis de HDL, e níveis de LDL para cada animal foram normalizados. Para normalização, os respectivos níveis de proteína de ANGPTL3, TG, colesterol! total, HDL, ou LDL para cada animal em um ponto de tempo foi dividido pelo nível de pré-tratamento médio de expressão naquele animal (neste caso, a média de dia -15 e dia -1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré- tratamento."
[00298] A expressão, em um ponto específico de tempo, foi em seguida normalizada para o grupo de controle DSW ao qual foi administrada a mesma dieta (isto é, ou a dieta rica em gordura "Western" ou a dieta com comida normal) dividindo a relação "normalizada para pré-tratamento" para um animal individual pela relação "normalizada para pré-tratamento" média de todos os camundongos no grupo de controle DSW na respectiva mesma, resultando na expressão para cada ponto de tempo normalizado para aquela no grupo de controle.
[00299] Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas 61 a 65:
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[00300] “Como mostrado nas tabelas 61 a 65, os grupos dosados com 3,0 mg/kg de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5488 (isto é, Grupos 2 e 5) mostrou significantes reduções nos níveis de proteína de ANGPTL3, nos níveis de TG, e colesterol total neste modelo. Os camundongos KO de LDLR em uma dieta rica em gordura "Western" mostraram níveis particularmente reduzidos, com uma redução aproximadamente 99% nos níveis de proteína de ANGPTL3 no dia 57 (0,007) em comparação com o controle da administração de duas doses de 3 mg/kg de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5488. É também observado que o Grupo 3, que incluía um agente de RNAi controle que incluía sequências de nucleotídeo designadas para alvejar um mMRNA de HBV, realizado como esperado e não mostrou essencialmente nenhuma inibição de ANGPTL3.
[00301] Adicionalmente, os níveis de MRNA de ANGPTL3 foram também avaliados. No dia 15, quatro (4) camundongos foram sacrificados de cada um dos Grupos 1, 2, e 3. No dia 29, mais quatro (4) camundongos foram sacrificados de cada um dos Grupos 1,2,e3. No dia 57, todos os animais restantes de todos os Grupos foram sacrificados. No sacrifício, os fígados foram colhidos, e aproximadamente 100 mg de amostras de fígado dos lóbulos medianos foram coletados e congelados em nitrogênio líquido para isolamento de RNA. Os níveis de MRNA de ANGPTL3 nos fígados de camundongos foram em seguida medidos por RT-gGPCR, e normalizado para os níveis de mRNA dos camundongos no Grupo 1 (dieta rica em gordura "Western"; administração de DSW; dia 15, sacrifício), os resultados dos quais são estabelecidos na seguinte Tabela 66:
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[00302] A administração de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5488 mostrou em uma redução significante nos níveis de MRNA de ANGPTL3 tanto nos animais na dieta rica na gordura "Western" quanto nos animais na dieta com comida normal. Exemplo 13. Teste In Vivo de Agentes de RNAi de ANGPTL3 em Macacos Resos Alimentados com Dieta com Xarope de Milho Rico em Frutose (HFCS).
[00303] Agente de RNAi ADO5488 de ANGPTL3 foi tamabém avaliado em macacos Reso alimentados com dieta de xarope de milho rico em frutose (HFCS). Os macacos reso foram colocados em uma dieta com HFCS 37 dias antes da dosagem. Estes animais ficaram conhecidos desenvolver triglicerídeos plasmáticos aumentados mais do que 180 mg/dL na dieta com HFCS. No dia 1 e novamente no dia 29, quatro (4) macacos reso foram administrados com uma injeção subcutânea contendo 4,0 mg/kg de agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS488 formulado em salina (n=4). Mais dois macacos reso foram administrados com controle de salina normal. O agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5488 continha nucleotídeos modificados e incluía ligantes de direcionamento de N-acetil-galactosamina conjugados à extermidade 5' terminal da fita senso, como mostrado nas tabelas 3, 4, e5.
[00304] As amostras de sangue em jejum foram tiradas para análise, e amostras de soro foram analisadas nos dias -8 (pré-dose), 8, 15, 21, 29, e 36. Os níveis de expressão de ANGPTLS, triglicerídeos, colestero| total, lipoproteína de alta densidade (HDL), e lipoproteína de baixa densidade (LDL) em soro foram medidos em um Cobas€& Integra 400 (Roche Diagnostics), de acordo com as recomendações do fabricante.
[00305] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de colesterol total, níveis de HDL, e níveis de LDL para cada animal foram normalizados. Para normalização, o nível de proteína de
ANGPTLS3, triglicerídeo, HDL, e colesterol! total, respectivamente, para cada animal em um ponto de tempo, foi dividido pelo nível de pré- tratamento de expressão naquele animal (neste caso no dia -8) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento."
[00306] Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas 67 a 71:
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[00307] Os macacos reso dosados com ADO5488 em níveis de dosagem de 4,0 mg/kg mostraram uma significante redução na proteína de ANGPTL3 em comparação com as medições pré-tratamento em cada um dos pontos de tempo medidos. Além disso, reduções nos níveis de triglicerídeo e colesterol! total foram evidentes. Exemplo 14. Teste In Vivo de agentes de RNAi de ANGPTL3 e Estatinas em Camundongos de Nocaute de Receptor de LDL (LDLR).
[00308] Para avaliaro efeito da coadministração de agentes de RNAi e estatinas em um modelo de doença, camundongos KO de LDLR foram comercialmente obtidos (The Jackson Laboratory). Durante três semanas antes do início do estudo, quarenta e um (41) camundongos KO de LDLR, machos de 7 a 8 semanas de idade foram colocados em uma dieta rica em gordura ("Western") (Teklad Custom Diets TD.88137), e mantidos em tal dieta por toda a duração do estudo. Amostras de soro pré-dose foram tiradas no dia 1 do estudo após um jejum de quatro horas. O regime de Dosagem para o estudo é recitado na seguinte Tabela 72: Tabela 72. Grupos de Dosagem de Exemplo 14 Grupo | Regime de dosagem e | Regime de dosagem | Camundongos dose de atorvastatina e dose de Agente de | KO de LDL (n=) Gavagem oral de | DSW (sem agente de diariamente — iniciando | 23 no dia 1 N/A Única injeção de 2,5 2 mg/Kg de ADO5488 | 7 en, | Po a mem nr am | oral de atorvastatina | mg/Kg de ADO5488 administrada no dia 23 diariamente — iniciando no dia 1 20 mg/kg* gavagem oral | Única injeção de 2,5 de atorvastatina / mg/Kg de ADO5488 4 administrada no dia 23 6 diariamente — iniciando no dia 1 10 mg/kg de gavagem N/A oral de atorvastatina administrada 7 diariamente — iniciando
ES mg/kg* gavagem oral | N/A de atorvastatina administrada diariamente — iniciando no dia 1 * os camundongos foram tratados a 40 mg/kg durante os primeiros 11 dias, então posteriormente mudado para 20 mg/kg.
[00309] O veículo usado para a gavagem oral no estudo foi uma mistura de 1:1 de solução Ora-Plus&:Ora-SweetO, que foi adquirida comercialmente. Para a preparação das administrações de gavagem oral de atorvastatina, a respectiva dose desejada de atorvastatina foi primeiro dissolvida em água estéril (0,3 mL de água por 1 mL da dormulação desejada) e agitada em vórtex até tornar-se homogênea pela adição de uma mistura de 1:1 de sólução Ora-Plus&:Ora-SweetO (0,7 mL veículo por 1 mL de formulação desejada) e agitada em vórtex. No dia 1 e para cada dia depois disso, uma dose de gavagem oral foi administrada para cada um dos Grupos, exceto para o Grupo 2. No dia 23, os Grupos 1, 2, 3, e 4 receberam uma única administração subcutânea de dose de 2,5 mg/kg (31,25 ug/mL de solução) de um agente de RNAi de ANGPTL3 em D5W (dextrose em 5% de água), ou controle de veículo (DSW) sem agente de RNAi.
[00310] O agente de RNAitestado (ADO5488) incluía uma sequência modificada e um ligante de direcionamento contendo Nr-acetil- galactosamina conjugado à extremidade 5' terminal da fita senso. (Veja tabelas 3, 4, e 5 para estruturas de sequências modificadas e ligante de direcionamento). As injeções foram realizadas entre a pele e o músculo (isto é, injeções subcutâneas) na pele solta sobre a área do pescoço e ombro. Soro foi coletado nos dias 8, 15, 22 (pre-Agente de RNAi injection), 29, 36, 43, e 50. Camundongos KO de LDLR foram submetidos ao jejum durante quatro horas antes de cada coleta.
[00311] Os níveis de proteína de ANGPTL3 em soro foram medidos por ensaio ELISA (R&D Systems), de acordo com as recomendações do fabricante. Entre outros biomarcadores, triglicerídeos, colesterol total, e lipoproteína de baixa densidade (LDL) em soro foram medidos em um Cobas&O Integra 400 (Roche Diagnostics), de acordo com as recomendações do fabricante.
[00312] Os níveis de proteína de ANGPTL3, níveis de triglicerídeos, níveis de colesterol total, níveis de HDL, e níveis de LDL para cada animal foram normalizados. Para normalização, os respectivos níveis de proteína de ANGPTL3, TG, colesterol! total, ou LDL para cada animal em um ponto de tempo foram divididos pelo nível de pré-tratamento de expressão naquele animal (neste caso, níveis de pré-dose no dia 1) para determinar a relação de expressão "normalizada para pré-tratamento." Os dados do estudo mencionado neste Exemplo são mostrados nas seguintes Tabelas 73 a 76:
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[00313] Os camundongos administrados diariamente com atorvastatina mostrou aproximadamente 40 a 60% de redução em triglicerídeos, aproximadamente 23 a 40% de redução em colesterol total, e aproximadamente 30 a 45% de redução em LDL, respectivamente. Camundongos tratados com doses maiores de atorvastatina tipicamente forneceram reduções mais profundas.
[00314] A administração com agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS5488 com a coadministração de atorvastatina (isto é, Grupos 3 e 4) mostrou efeitos aditivos sobre os parâmetros lipídicos. Por exemplo, para os grupos que envolveram a coadministração de atorvastatina e agente de RNAi, reduções totais em triglicerídeos, colesterol total, e LDL, foram de 95%, 70%, e -80%, respectivamente. O perfil de parâmetros lipídicos globais com a coadministração de atorvastatina foi levemente melhor do que a administração de agente de RNAi de ANGPTL3 ADO5488 sozinho. Além disso, Grupos com agente de RNAi de ANGPTL3 ADOS488 mostraram uma clara redução nos níveis de proteína de ANGPTL3, enquanto nenhuma redução na proteína de ANGPTL3 foi observada nos grupos que não envolviam a administração de um agente de RNAi de ANGPTL3.
OUTRAS MODALIDADES
[00315] Deve-se entender que enquanto a invenção foi descrita em conjunção com a descrição detahada da mesma, a descrição anterior destina-se a ilustrar e não limitar o escopo da invenção, que é definida pela reivindicações anexas. Outros aspectos, vantagens e modificações estão no escopo das seguintes reivindicações.

Claims (60)

REIVINDICAÇÕES
1. Agente de RNAi para inibição da expressão de um gene ANGPTL3, caracterizado pelo fato de que compreende: uma fita antissenso que compreende pelo menos 17 nucleotídeos contíguos que diferem em O ou 1 nucleotídeo de qualquer uma das sequências fornecidas na Tabela 2 ou Tabela 3; e uma fita senso que compreende a sequência de nucleotídeo que é pelo menos parcialmente complementar à fita antissenso.
2. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a fita antissenso compreende nucleotídeos 2 a 18 de qualquer uma das sequências fornecidas na Tabela 2 ou Tabela 3.
3. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a fita senso compreende a sequência de nucleotídeo de pelo menos 17 nucleotídeos contíguos que diferem em O ou 1 nucleotídeo de qualquer uma das sequências de fita senso fornecidas na Tabela 2 ou Tabela 4, e em que a fita senso tem uma região de pelo menos 85% de complementaridade sobre os 17 nucleotídeos contíguos à fita antissenso.
4. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que pelo menos um nucleotídeo de agente de RNAi é um nucleotídeo modificado ou inclui uma ligação internucleosídeo modificado.
5. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos da fita senso e/ou antissenso de agente de RNAi são nucleotídeos modificados.
6. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 e 5, caracterizado pelo fato de que o nucleotídeo modificado é selecionado do grupo que consiste em: nucleotídeo de 2"-
O-metila, nucleotídeo de 2'-flúor, nucleotídeo de 2'-deóxi, mímico de 2',3-seco nucleotídeo, nucleotídeo bloqueado, nucleotídeo de 2'-F- arabino, nucleotídeo de 2'-metoxietila, nucleotídeo abásico, ribitol, nucleotídeo invertido, nucleotídeo de 2'-O-metila invertido, nucleotídeo de 2'-deóxi invertido, nucleotídeo de 2'-amino modificado, nucleotídeo de 2'-alquil modificado, nucleotídeo de morfolino, deoxirribonucleotídeo de fosfonato de vinila, e nucleotídeo de 3'-O-metil.
7. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos — modificados são nucleotídeos de 2'-O-metila e nucleotídeos de 2'-flúor.
8. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências de fita antissenso modificada fornecidas na Tabela 3.
9. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que a fita senso compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências de fita senso modificada fornecidas na Tabela 4.
10. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a fita antissenso compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências modificadas fornecidas na Tabela 3 e a fita senso compreende a sequência de nucleotídeo de qualquer uma das sequências modificadas fornecidas na Tabela 4.
11. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que agente de RNAi é ligado a um ligante de direcionamento.
12. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento compreende n-acetil-galactosamina.
13. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 11 ou 12, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento compreende uma estrutura selecionada do grupo que consiste em: (NAG13), (NAG13)s, (NAG18), (NAG18)s, (NAG24), (NAG24)s, (NAG25), (NAG25)s, (NAG26), (NAG26)s, (NAG27), (NAG27)s, (NAG28), (NAG28)s, (NAG29), (NAG29)s, (NAG30), (NAG30)s, (NAG31), (NAG31)s, (NAG32), (NAG32)s, (NAG33), (NAG33)s, (NAG34), (NAG34)s, (NAG35), (NAG35)s, (NAG36), (NAG36)s, (NAG37), (NAG37)s, (NAG38), (NAG38)s, (NAG39), (NAG39)s.
14. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento compreende a estrutura de (NAG37) ou (NAG37)s.
15. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 11 a 14, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento é ligado à fita senso.
16. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento é ligado à extremidade 5' terminal da fita senso.
17. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que a fita senso tem entre 18 e 30 nucleotídeos em comprimento, e a fita antissenso tem entre 18 e 30 nucleotídeos em comprimento.
18. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a fita senso e a fita antissenso têm cada qual entre 18 e 27 nucleotídeos em comprimento.
19. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a fita senso e a fita antissenso têm cada qual entre 18 e 24 nucleotídeos em comprimento.
20. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 19,
caracterizado pelo fato de que a fita senso e a fita antissenso têm cada qual de 21 nucleotídeos em comprimento.
21. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 20, caracterizado pelo fato de que o agente de RNAi tem duas extremidades embotadas.
22. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que a fita senso compreende um ou dois tampões terminais.
23. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que a fita senso compreende um ou dois resíduos abásicos invertidos.
24. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que agente de RNAi é compreendido de uma fita senso e uma fita antissenso que formam um duplex tendo a estrutura de qualquer um dos duplexes na Tabela 5.
25. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende uma fita antissenso que consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo que difere em O ou 1 nucleotídeo de uma das seguintes sequências de nucleotídeo (5' > 3"): UACUGAUCAAAUAUGUUGAGC (SEQ ID NO:3); UACUGAUCAAAUAUGUUGAGU (SEQ ID NO:6); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGC (SEQ ID NO:8); UUUGAAUUAAUGUCCAUGGGU (SEQ ID NO:10); UGUUGAAUUAAUGUCCAUGGA (SEQ ID NO:12); ou ACAUCGUCUAACAUAGCAACC (SEQ |D NO:15).
26. Agente de RNAi de acordo com areivindicação 25, caracterizado pelo fato de que a fita senso consiste em, consiste essencialmente em, ou compreende uma sequência de nucleotídeo que difere em O ou 1 nucleotídeo de uma das seguintes sequências de nucleotídeo (5' 3 3'): GCUCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:17); GCUCAACAU(A?PNJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:19), em que (A?N) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenosina; GCUCAAC(APN)JU(APNJUUUGAUCAGUA (SEQ ID NO:21), em que (AN) representa um nucleotídeo de 2-aminoadenosina; ACUCAACAUAUUUGAUCAGUA (SEQ |D NO:24); GCCCAUGGACAUUVAAUUCAAA (SEQ ID NO:26); ACCCAUGGACAUUAAUUCAAA (SEQ ID NO:28); UCCAUGGACAUUAAUUCAACA (SEQ ID NO:30); ou GGUUGCUAUGUUAGACGAUGU (SEQ ID NO:32).
27. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 25 ou 26, caracterizado pelo fato de que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos são nucleotídeos modificados.
28. Agente de RNAi de acordo com areivindicação 25 ou 26, caracterizado pelo fato de que a fita senso inclui ainda resíduos abásicos invertidos na extremidade 3' terminal da sequência de nucleotídeo, na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, ou em ambas.
29. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende uma fita antissenso que compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma sequência de nucleotídeo modificado que difere em O ou 1 nucleotídeo de uma das seguintes sequências de nucleotídeo (5' > 3"): usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUufgUufuGfaGfsc (SEQ ID NO:2); usAfscUfgAfuCfaAfaUfaUfgufuGfasGfsc (SEQ ID NO:4); usAfscsUfgAfuCfaAfaUfaUfgufuGfaGfsu (SEQ ID NO:5); usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfggsc (SEQ ID NO:7); usUfsusGfaAfuUfaAfuGfuCfcAfuGfgGfsu (SEQ ID NO:9); usGfsusugaauuaaUfgUufcCfaUfgGfsa (SEQ ID NO:11);
usGfsusUfgAfaUfuAfaUfgUfcCfaUfgGisa (SEQ ID NO:13); ou asCfsasUfcGfucuaaCfaUfaGfcAfaCfsc (SEQ ID NO:14); em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"”-flúor adenosina, citidina,y guanosina, ou uridina, respectivamente; s representa uma ligação de fosforotioato; e em que que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos na fita senso são nucleotídeos modificados.
30. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a fita senso compreende, consiste em, ou consiste essencialmente em uma sequência de nucleotídeo modificado que difere em O ou 1 nucleotídeo de uma das seguintes sequências de nucleotídeo (5' > 3"): gcucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:16); gcucaacaUfa 2NUfuugaucagua (SEQ ID NO:18); gcucaaca 2NUfa 2NUfuugaucagua (SEQ ID NO:20); geUfcAfaCfaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:22); acucaacaUfAfUfuugaucagua (SEQ ID NO:23); gccecauggAfCfAfuuaauucaaa (SEQ ID NO:25); acccauggAfCfAfuuaauucaaa (SEQ ID NO:27); uccauggaCfAfUfuaauucaaca (SEQ ID NO:29); ou gguugcuaUfGfUfuagacgaugu (SEQ ID NO:31); em que a, c, g, e u representam 2'-O-metil adenosina, citidina, guanosina, ou uridina, respectivamente; Af, Cf, Gf, e Uf representam 2"'-flúor adenosina, citidina,y guanosina, ou uridina, respectivamente; s representa uma ligação de fosforotioato; a 2N representa a 2'-O-metil-2-aminoadenosina; e em que todos ou substancialmente todos os nucleotídeos na fita senso são nucleotídeos modificados.
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31. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 30, caracterizado pelo fato de que a fita senso inclui ainda resíduos abásicos invertidos na extremidade terminal 3' da sequência de nucleotídeo, na extremidade 5' da sequência de nucleotídeo, ou em ambas.
32. Agente de RNAi de acordo com qualquer uma das reivindicações 25 a 31, caracterizado pelo fato de que a fita senso de agente de RNAi é ligado a um ligante de direcionamento.
33. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento tem afinidade quanto ao receptor de asialoglicoproteína.
34. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento compreende N-acetil-galactosamina.
35. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que agente de RNAi tem a estrutura duplex selecionada do grupo que consiste em: ADOS488 (SEQ ID NOs: 2 e 300) e ADO5775 (SEQ ID NOs: 2 e 334); ADO5791 (SEQ ID NOs: 4 e 300); ADOS5777 (SEQ ID NOs: 2 e 336); ADO5743 (SEQ ID NOs: 2 e 326); ADOS487 (SEQ ID NOs: 5 e 299); ADO5307 (SEQ ID NOs: 7 e 278); ADOS5418 (SEQ ID NOs: 9 e 292); ADOS5577 (SEQ ID NOs: 11 e 279); ADOS5308 (SEQ ID NOs: 13 e 279); e ADOS5840 (SEQ ID NOs: 15 e 357).
36. Agente de RNAi de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que agente de RNAi tem a estrutura duplex selecionada do grupo que consiste em: ADOS488 (SEQ ID NOs: 2 e 300) e ADO5775 (SEQ ID NOs: 2 e 334).
37. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende agente de RNAi como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36, em que a composição compreende um excipiente farmaceuticamente aceitável.
38. Composição de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um segundo agente de RNAi para inibição da expressão de ANGPTL3.
39. Composição de acordo com a reivindicação 37 ou 38, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um ou mais terapêuticos adicionais.
40. Método para inibição da expressão de um gene ANGPTL3 em uma célula, caracterizado pelo fato de que o método compreende introduzir em uma célula uma quantidade eficaz de um agente de RNAi como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36 ou composição como definida em qualquer uma das reivindicações 37 a 39.
41. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que a célula está dentro de um indivíduo.
42. Método de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um indivíduo humano.
43. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 42, caracterizado pelo fato de que a expressão de gene ANGPTL3 é inibida em pelo menos cerca de 30%.
44. Método de tratamento de um distúrbio ou doença relacionado a ANGPTL3, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar a um indivíduo humano em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição como definida em qualquer uma das reivindicações 37 a 39.
45. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença é uma doença cardiometabólica.
46. Método de acordo com a reivindicação 44, caracterizado pelo fato de que a doença é hipertrigliceridemia, obesidade, hiperlipidemia, metabolismo de clolesterol e/ou lipídio anormal, aterosclerose, diabetes melito tipo Il, doença cardiovascular, doença da artéria coronária, esteato-hepatite não alcoólica, doença hepática gordurosa não alcoólica, hipercolesterolemia familiar homozigótica e heterozigótica, ou hipercolesterolemia resistente à estatina.
47. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 46, caracterizado pelo fato de que agente de RNAi é administrado em uma dose de cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 5,0 mg/kg de peso corporal do indivíduo humano.
48. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 47, caracterizado pelo fato de que agente de RNAi é administrado em duas ou mais doses.
49. Método de diminuição dos níveis de triglicerídeos em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 37 a 39.
50. Método de diminuição dos níveis de colesterol em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 37 a 39.
51. Método de diminuição dos níveis de lipoproteína de baixa densidade (LDL) em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 37 a 39.
52. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 51, caracterizado pelo fato de que o método compreende ainda a administração de uma estatina.
53. Método de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que a estatina é selecionada do grupo que consiste em: atorvastatina, fluvastatina, pravastatina, pitavastatina, rosuvastatina, e sinvastatina.
54. Uso de agente de RNAi como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36 ou composição com definida em quaquer uma das reivindicações 37 a 39, para o tratamento de uma doença, distúrbio ou sintoma que é mediado pelo menos, em parte, pela expressão de gene ANGPTL3.
55. Uso de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que o sintoma é níveis de triglicerídeos elevados e/ou níveis de colesterol elevados.
56. Uso de agente de RNAi como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 36 ou composição como definida em qualquer uma das reivindicações 37 a 39, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de composições farmacêuticas para tratamento de uma doença, distúrbio ou sintoma que é mediado pelo menos em parte pela expressão de gene ANGPTL3.
57. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 54 a 56, caracterizado pelo fato de que a doença é hipertrigliceridemia, obesidade, hiperlipidemia, metabolismo de clolesterol e/ou lipídio anormal, aterosclerose, diabetes melito tipo |l, doença cardiovascular, doença da artéria coronária, esteato-hepatite não alcoólica, doença hepática gordurosa não alcoólica, hipercolesterolemia familiar homozigótica e heterozigótica, ou hipercolesterolemia resistente à estatina.
58. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 54 a 56, caracterizado pelo fato de que a doença é uma doença cardiometabólica.
59. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 54 a 58, caracterizado pelo fato de que agente de RNAi é administrado em uma dose de cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 5,0 mg/kg de peso corporal do indivíduo humano.
60. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 54 a 59, caracterizado pelo fato de que os níveis de triglicerídeos, níveis de colesterol, e/ou os níveis de lipoproteína de baixa densidade (LDL) no indivíduo são diminuídos.
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Families Citing this family (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112961855A (zh) 2011-06-21 2021-06-15 阿尔尼拉姆医药品有限公司 血管生成素样3(ANGPTL3)iRNA组合物及其使用方法
SG11201901841TA (en) * 2016-09-02 2019-03-28 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Targeting ligands
FI3607069T3 (fi) 2017-04-05 2023-01-13 Tuotteita ja koostumuksia
EP4013870A1 (en) 2019-08-13 2022-06-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Small ribosomal protein subunit 25 (rps25) irna agent compositions and methods of use thereof
WO2021087036A1 (en) 2019-11-01 2021-05-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. HUNTINGTIN (HTT) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
TW202132568A (zh) 2019-11-13 2021-09-01 美商阿尼拉製藥公司 用於治療血管收縮素原相關病症之方法及組成物
IL293824A (en) 2019-12-13 2022-08-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Compositions of RNA material (c9orf72) human chromosome 9 open reading frame 72 and methods of using them
TW202138559A (zh) 2019-12-16 2021-10-16 美商阿尼拉製藥公司 含類ＰＡＴＡＴＩＮ磷脂酶結構域３（ＰＮＰＬＡ３）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
WO2021167841A1 (en) 2020-02-18 2021-08-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Apolipoprotein c3 (apoc3) irna compositions and methods of use thereof
EP4114947A1 (en) 2020-03-05 2023-01-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing complement component c3-associated diseases
EP4114948A1 (en) 2020-03-06 2023-01-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof
CA3172117A1 (en) * 2020-03-18 2021-09-23 Bob D. Brown Compositions and methods for inhibiting angptl3 expression
EP4121534A1 (en) 2020-03-18 2023-01-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating subjects having a heterozygous alanine-glyoxylate aminotransferase gene (agxt) variant
EP4127168A1 (en) 2020-03-26 2023-02-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Coronavirus irna compositions and methods of use thereof
KR20220158011A (ko) * 2020-03-26 2022-11-29 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 PNPLA3의 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제, 이의 약제학적 조성물, 및 사용 방법
WO2021206922A1 (en) 2020-04-07 2021-10-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Transmembrane serine protease 2 (tmprss2) irna compositions and methods of use thereof
EP4133076A1 (en) 2020-04-07 2023-02-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiotensin-converting enzyme 2 (ace2) irna compositions and methods of use thereof
CA3181400A1 (en) 2020-04-27 2021-11-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Apolipoprotein e (apoe) irna agent compositions and methods of use thereof
IL297680A (en) 2020-04-30 2022-12-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc IRNA compounds complement factor b (cfb) and methods of using them
WO2021252557A1 (en) 2020-06-09 2021-12-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai compositions and methods of use thereof for delivery by inhalation
TW202214856A (zh) 2020-06-18 2022-04-16 美商阿尼拉製藥公司 黃嘌呤脫氫酶（ＸＤＨ）ｉＲＮＡ組成物及其使用之方法
EP4217489A1 (en) 2020-09-24 2023-08-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dipeptidyl peptidase 4 (dpp4) irna compositions and methods of use thereof
WO2022068923A1 (zh) * 2020-09-30 2022-04-07 纳肽得(青岛)生物医药有限公司 血管生成素样3(ANGPTL3)的siRNA及其用途
JP2023544413A (ja) 2020-10-05 2023-10-23 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｇタンパク質共役受容体７５（ＧＰＲ７５）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
WO2022079222A1 (en) * 2020-10-16 2022-04-21 Sanofi Novel rna compositions and methods for inhibiting angptl3
EP4232582A1 (en) 2020-10-23 2023-08-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Mucin 5b (muc5b) irna compositions and methods of use thereof
JP2023549500A (ja) 2020-11-13 2023-11-27 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 凝固第Ｖ因子（Ｆ５）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
EP4259795A1 (en) 2020-12-08 2023-10-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Coagulation factor x (f10) irna compositions and methods of use thereof
WO2022150260A1 (en) 2021-01-05 2022-07-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. COMPLEMENT COMPONENT 9 (C9) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
BR112023015761A2 (pt) 2021-02-12 2023-11-07 Alnylam Pharmaceuticals Inc Superóxido dismutase 1 (sod1) composições de irna e métodos de uso das mesmas para tratar ou prevenir doenças neurodegenerativas associadas a superóxido dismutase 1 (sod1)
JP2024509783A (ja) 2021-02-25 2024-03-05 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド プリオンタンパク質（ｐｒｎｐ）ｉｒｎａ組成物およびその使用方法
CA3211059A1 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof
WO2022187435A1 (en) 2021-03-04 2022-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof
EP4305169A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycogen synthase kinase 3 alpha (gsk3a) irna compositions and methods of use thereof
CN117203336A (zh) 2021-03-29 2023-12-08 阿尔尼拉姆医药品有限公司 亨廷顿蛋白(HTT)iRNA药剂组合物以及其使用方法
WO2022212153A1 (en) 2021-04-01 2022-10-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Proline dehydrogenase 2 (prodh2) irna compositions and methods of use thereof
JP2024517686A (ja) 2021-04-26 2024-04-23 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 膜貫通プロテアーゼ、セリン６（ＴＭＰＲＳＳ６）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
EP4330396A1 (en) 2021-04-29 2024-03-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Signal transducer and activator of transcription factor 6 (stat6) irna compositions and methods of use thereof
WO2022245583A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Sodium-glucose cotransporter-2 (sglt2) irna compositions and methods of use thereof
EP4347823A1 (en) 2021-06-02 2024-04-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof
AU2022283796A1 (en) 2021-06-04 2023-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. HUMAN CHROMOSOME 9 OPEN READING FRAME 72 (C9ORF72) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
JP2024523000A (ja) 2021-06-08 2024-06-25 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド シュタルガルト病及び／又は網膜結合タンパク質４（ｒｂｐ４）関連障害を治療又は予防するための組成物及び方法
IL309296A (en) 2021-06-30 2024-02-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Methods and compositions for the treatment of angiotensinogen-related disorder (AGT-)
TW202333748A (zh) 2021-07-19 2023-09-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 用於處置具有或有風險發展非原發性高草酸鹽尿疾病或病症的個體的方法及組成物
WO2023003922A1 (en) 2021-07-21 2023-01-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Metabolic disorder-associated target gene irna compositions and methods of use thereof
TW202325312A (zh) 2021-07-23 2023-07-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 β－鏈蛋白（ＣＴＮＮＢ１）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
EP4377458A1 (en) 2021-07-29 2024-06-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa reductase (hmgcr) irna compositions and methods of use thereof
EP4381067A1 (en) 2021-08-03 2024-06-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Transthyretin (ttr) irna compositions and methods of use thereof
EP4381071A1 (en) 2021-08-04 2024-06-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna compositions and methods for silencing angiotensinogen (agt)
IL310407A (en) 2021-08-13 2024-03-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Factor XII (F12) IRNA compositions and methods of using them
WO2023044370A2 (en) 2021-09-17 2023-03-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna compositions and methods for silencing complement component 3 (c3)
CA3232420A1 (en) 2021-09-20 2023-03-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Inhibin subunit beta e (inhbe) modulator compositions and methods of use thereof
IL310929A (en) * 2021-09-23 2024-04-01 Shanghai Argo Biopharmaceutical Co Ltd Preparations and methods for inhibiting expression of angiopoietin-like protein 3
CA3234887A1 (en) 2021-10-15 2023-04-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Extra-hepatic delivery irna compositions and methods of use thereof
WO2023076450A2 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. HUNTINGTIN (HTT) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
CN118302525A (zh) 2021-10-29 2024-07-05 阿尔尼拉姆医药品有限公司 补体因子B（CFB）iRNA组合物及其使用方法
WO2023093896A1 (zh) * 2021-11-29 2023-06-01 上海舶望制药有限公司 用于抑制乙型肝炎病毒(hbv)蛋白表达的组合物和方法
WO2023122656A1 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Treatment of kidney diseases with angiopoietin like 3 (angptl3) inhibitors
WO2023134705A1 (zh) * 2022-01-11 2023-07-20 上海金中锘美生物医药科技有限公司 抑制angptl3表达的rna干扰剂及其用途
WO2023141314A2 (en) 2022-01-24 2023-07-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Heparin sulfate biosynthesis pathway enzyme irna agent compositions and methods of use thereof
WO2023196941A1 (en) * 2022-04-08 2023-10-12 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Treatment of a non-alcoholic fatty liver disease
CN116987696A (zh) * 2022-08-04 2023-11-03 北京福元医药股份有限公司 用于抑制angptl3基因表达的双链核糖核酸及其修饰物、缀合物和用途
WO2024032608A1 (zh) * 2022-08-08 2024-02-15 大睿生物医药科技(上海)有限公司 调控ANGPTL3基因活性的siRNA分子
WO2024039776A2 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Universal non-targeting sirna compositions and methods of use thereof
WO2024044542A2 (en) * 2022-08-22 2024-02-29 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of angptl3-related diseases and disorders
WO2024102913A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Treatment of kidney diseases with a combination of angiopoietin like 3 (angptl3) inhibitors and solute carrier family 5 member 2 (slc5a2) inhibitors

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
NL9201440A (nl) 1992-08-11 1994-03-01 Univ Leiden Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.
US5998203A (en) 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
MXPA01009073A (es) 1999-03-10 2002-05-06 Phogen Ltd Suministro de acidos nucleicos y proteinas a las celulas.
RU2002115295A (ru) 1999-12-09 2004-01-10 Санкио Компани, Лимитед (Jp) Способ испытания терапевтического или профилактического средства от гиперлипидемии
CN101905024A (zh) * 2001-11-16 2010-12-08 杰南技术公司 含有血管生成素-样蛋白质3angptl3的组合物及其使用方法
CA2500224C (en) * 2002-09-25 2015-04-28 University Of Massachusetts In vivo gene silencing by chemically modified and stable sirna
WO2006006948A2 (en) 2002-11-14 2006-01-19 Dharmacon, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY
EP1560931B1 (en) 2002-11-14 2011-07-27 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
US20040198640A1 (en) 2003-04-02 2004-10-07 Dharmacon, Inc. Stabilized polynucleotides for use in RNA interference
US20040224405A1 (en) 2003-05-06 2004-11-11 Dharmacon Inc. siRNA induced systemic gene silencing in mammalian systems
US20070276134A1 (en) * 2006-05-24 2007-11-29 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for complexes of nucleic acids and organic cations
CN101500548A (zh) 2006-08-18 2009-08-05 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于体内递送多核苷酸的多缀合物
CA2910760C (en) 2007-12-04 2019-07-09 Muthiah Manoharan Targeting lipids
AU2010324658A1 (en) * 2009-11-26 2012-05-03 Quark Pharmaceuticals, Inc. siRNA compounds comprising terminal substitutions
JP5822845B2 (ja) * 2010-01-08 2015-11-25 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド アンジオポエチン様３発現の調節
EP3023495B1 (en) 2010-02-24 2019-05-08 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Compositions for targeted delivery of sirna
WO2012058210A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACIDS (siNA)
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
CN112961855A (zh) * 2011-06-21 2021-06-15 阿尔尼拉姆医药品有限公司 血管生成素样3(ANGPTL3)iRNA组合物及其使用方法
US8932572B2 (en) 2011-08-26 2015-01-13 Arrowhead Madison Inc. Poly(vinyl ester) polymers for in vivo nucleic acid delivery
US9796974B2 (en) * 2011-11-18 2017-10-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified RNAi agents
CN103764153A (zh) 2012-04-18 2014-04-30 箭头研究公司 用于体内核酸递送的聚(丙烯酸酯)聚合物
EP2844261B1 (en) * 2012-05-02 2018-10-17 Sirna Therapeutics, Inc. SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) COMPOSITIONS
PT3087183T (pt) * 2013-12-24 2020-10-08 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulação da expressão da proteína relacionada com angiopoietina 3
SI3137605T1 (sl) 2014-05-01 2021-02-26 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Sestavki in metode za modulacijo ekspresije angiopoetin 3-podobnega
KR102494171B1 (ko) 2014-08-20 2023-02-02 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 변형 이중-가닥 rna 제제
WO2016154127A2 (en) 2015-03-20 2016-09-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for treating hypertriglyceridemia
AU2016247922B2 (en) * 2015-04-13 2022-04-28 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (ANGPTL3) iRNA compositions and methods of use thereof
JOP20210043A1 (ar) * 2015-10-01 2017-06-16 Arrowhead Pharmaceuticals Inc تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa
UY37146A (es) 2016-03-07 2017-09-29 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Ligandos de direccionamiento para compuestos terapéuticos
MA45328A (fr) * 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Compositions acide nucléique-polypeptide et utilisations de celles-ci
MA45340A (fr) * 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques du récepteur des androgènes et leurs utilisations
SG11201901841TA (en) 2016-09-02 2019-03-28 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Targeting ligands

Also Published As

Publication number Publication date
TWI823866B (zh) 2023-12-01
ECSP20018305A (es) 2020-06-30
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