BR112019025387A2

BR112019025387A2 - métodos para auxiliar no diagnóstico e avaliação de uma lesão traumática cerebral branda em um indivíduo humano com o uso de troponina cardíaca i e biomarcadores precoces

Info

Publication number: BR112019025387A2
Application number: BR112019025387-4A
Authority: BR
Inventors: Beth McQuiston; Frederick Korley; Agim Beshiri; Jaime Marino; Saul Datwyler
Original assignee: Abbott Laboratories
Priority date: 2017-05-30
Filing date: 2018-05-30
Publication date: 2020-07-07
Also published as: CN110709704A; CN110720041B; EP3631467A1; WO2018222784A1; US20180364261A1; US20220047205A1; AU2018275235A1; US11931161B2; US20190000369A1; JP2020522685A; EP3631466A1; CA3059601A1; US10849548B2; US20210059594A1; CA3059607A1; AU2018275236A1; WO2018222783A1; CN110720041A; JP7269183B2; US11129564B2

Abstract

São revelados métodos que auxiliam no diagnóstico e avaliação de um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma lesão na cabeça, tal como lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa, ou moderada a severa mediante a detecção de níveis de troponina cardíaca I (cTnI) e um ou mais biomarcadores precoces que não são cTnI, tais como ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas, em amostras biológicas tomadas a partir de um indivíduo humano em pontos no tempo dentro de cerca de 24 horas da lesão após o indivíduo sofreu ou pode ter sofrido a lesão na cabeça.

Description

“MÉTODOS PARA AUXILIAR NO DIAGNÓSTICO E AVALIAÇÃO DE UMA LESÃO TRAUMÁTICA CEREBRAL BRANDA EM UM INDIVÍDUO HUMANO COM O USO DE TROPONINA CARDÍACA I E BIOMARCADORES PRECOCES” INFORMAÇÕES DE PEDIDO RELACIONADO

[001]Este pedido reivindica a prioridade sobre o pedido n° U.S. 62/512.688 depositado em 30 de maio de 2017, pedido n° U.S. 62/512.710 depositado em 30 de maio de 2017 e pedido n° U.S. 62/528.214 depositado em 3 de julho de 2017, cujo conteúdo de cada um dos quais está incorporado ao presente documento a título de referência.

CAMPO DA TÉCNICA

[002]A presente revelação se refere a métodos para auxiliar no diagnóstico e avaliação de um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma lesão na cabeça (ou ter uma lesão real ou suspeita), tal como lesão traumática cerebral branda (TBI), mediante a detecção de níveis de troponina cardíaca I (cTnI) e um ou mais biomarcadores precoces que não são cTnI, tais como ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas, em amostras biológicas tomadas a partir de um indivíduo humano em pontos no tempo após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

ANTECEDENTES

[003]Mais de 5 milhões de lesões traumáticas cerebrais brandas (TBIs) ocorrem a cada ano apenas no Estados Unidos. Atualmente, não há medição precisa, objetiva e simples disponível para ajudar na avaliação do paciente. De fato, grande parte da avaliação e diagnóstico de TBI tem por base dados subjetivos. Infelizmente, as medições objetivas tais como TC de cabeça e pontuação de coma de Glasgow (GCS) não são muito compreensivas ou sensíveis na avaliação de TBI branda.

Ademais, a TC de cabeça não é reveladora para vasta maioria do tempo para TBI branda, é dispendiosa e expõe o paciente à radiação desnecessária. Adicionalmente, um TC de cabeça negativa não significa que o paciente esteja livre de uma concussão; ao contrário, significa apenas que certas intervenções, tais como cirurgia,

não são necessárias. Os médicos e pacientes precisam de informações confiáveis e objetivas para avaliar essa condição para promover triagem e recuperação adequada.

Até o momento, dados limitados têm sido disponibilizados para o uso de troponina cardíaca I no cenário de cuidado agudo ou cenário de cuidado hiperagudo (pontos no tempo muito precocemente agudos após a lesão) para auxiliar no gerenciamento e avaliação do paciente.

[004]A concussão ou TBI branda é muito mais difícil de detectar de forma objetiva e apresenta um desafio diário em unidades de pronto atendimento a nível global. A concussão normalmente não causa patologia grave, tal como hemorragia, e nenhuma anormalidade em varreduras por tomografia computadorizada convencionais do cérebro, mas, ao contrário, a disfunção neuronal de início rápido que se resolve de uma maneira espontânea ao longo de poucos dias a poucas semanas. Existe uma necessidade não atendida para vítimas de TBI branda no local, em salas de emergência e clínicas, na área esportiva e em atividade militar (por exemplo, combate).

[005]Os algoritmos atuais para avaliação da gravidade de lesão cerebral incluem a pontuação da escala de coma de Glasgow e outras medições. Essas medições podem ser às vezes adequadas para gravidade aguda relacionada, mas são insuficientemente sensíveis para patologia sutil que pode resultar em déficit persistente. GCS e outras medições também não têm capacidade para diferenciação entre tipos de lesão e podem não ser adequadas. Dessa forma, os pacientes agrupados em um único nível de GCS que entram em um teste clínico podem ter tipo e gravidade de lesão vastamente heterogêneos. Devido ao fato de que os resultados também podem variar consequentemente, a classificação inadequada compromete a integridade de um teste clínico. A classificação aprimorada da lesão terá capacidade para delimitação mais precisa de tipo e gravidade da doença para pacientes de TBI em testes clínicos.

[006]Adicionalmente, os testes de lesão cerebral atuais dependem de medições de resultado tais como escala de resultado de Glasgow estendida, que capturam fenômenos globais mas deixam de avaliar diferenças sutis em resultado.

Dessa forma, 30 testes consecutivos para agentes terapêuticos de lesão cerebral falharam. As medições de resultado sensíveis são necessárias para determinar o quão bem os pacientes têm se recuperado da lesão cerebral a fim de testar agentes terapêuticos e profiláticos.

[007]Os pacientes de lesão traumática cerebral (TBI) são pelo menos três vezes mais propensos a morrer de causas cardiovasculares do que a população em geral. A lesão cardíaca a partir de TBI também está associada a edema pulmonar neurogênico. O fenômeno de lesão cardíaca em condições neurológicas tem sido descrito em pacientes com hemorragia subaracnóidea espontânea e acredita-se que resulte a partir de um surto fulminante em níveis de catecolamina. No entanto, os mecanismos subjacentes à mortalidade cardiovascular em excesso em TBI têm sido estudados de forma insatisfatória e, portanto, não são bem compreendidos.

Consequentemente, não está claro se: o início da lesão cardíaca ocorre na fase aguda ou crônica de TBI; existem subtipos particulares de TBI que são preferencialmente afetados pela lesão cardíaca; e quais são os gatilhos biológicos da lesão cardíaca em TBI. Vários estudos retrospectivos têm investigado a lesão do miocárdio na fase aguda de TBI. Com o uso de ensaios convencionais de troponina cardíaca, esses estudos têm relatado a lesão cardíaca (conforme determinado por níveis elevados de troponina) dentro de 24 horas da lesão em 30% dos pacientes de TBI severa. A lesão cardíaca em TBI está associada à idade e gravidade da lesão. Os pacientes de TBI com lesão cardíaca têm um risco maior de mortalidade em paciente do que aqueles sem lesão cardíaca. No entanto, essas constatações estão sujeitas à parcialidade de espectro uma vez que são derivadas de estudos retrospectivos e as medições de troponina foram realizadas a critério dos médicos (são raramente feitos no cuidado de rotina de pacientes de TBI). Adicionalmente, a associação entre lesão cardíaca e resultado neurológico em TBI não foi estudada. Adicionalmente, a função da lesão cardíaca em TBI branda e moderada não foi estudada.

SUMÁRIO

[008]A presente revelação é dirigida a um método para auxiliar no diagnóstico e avaliação da lesão traumática cerebral branda em um indivíduo humano. O método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas; e b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce; ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[009]Em algumas modalidades do método acima, o indivíduo é diagnosticado ou determinado como tendo sofrido uma lesão traumática cerebral branda. Em outras modalidades do método acima, o indivíduo é diagnosticado ou determinado como tendo sofrido uma lesão traumática cerebral moderada. Em mais outras modalidades do método acima, o indivíduo é diagnosticado ou determinado como tendo sofrido uma lesão traumática cerebral severa. Em mais outras modalidades, o indivíduo é diagnosticado ou determinado como tendo sofrido uma lesão traumática cerebral moderada a severa.

[010]Em algumas modalidades no método acima, o indivíduo recebeu uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o ensaio ser realizado.

Em algumas modalidades, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base em uma pontuação da escala de coma de Glasgow que foi realizada anteriormente. Por exemplo, dependendo de uma condição médica do indivíduo, uma pontuação da escala de coma de Glasgow pode ser examinada pouco depois de o indivíduo chegar a uma sala de emergência, centro de trauma ou outro local para examinar e/ou avaliar se o indivíduo tem um TBI. Tal pontuação da escala de coma de Glasgow pode ser fornecido antes de o ensaio ser realizado para confirmar e determinar se o indivíduo tem uma TBI branda, moderada ou severa ou moderada a severa. Depois que o ensaio é realizado, uma ou mais pontuações subsequentes da escala de coma de Glasgow podem ser realizadas com base nos resultados do ensaio como parte do gerenciamento do médico (ou outro profissional médico) do TBI (tal como, por exemplo, para determinar se intervenção cirúrgica e/ou farmacológica pode ser necessária). Em outras modalidades, o indivíduo pode não ter recebido uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes de o ensaio ser realizado.

[011]Em algumas modalidades no método acima, o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[012]Em algumas modalidades no método acima, os níveis de referência de cTnI e biomarcador precoce são correlacionados com (correspondem a) uma lesão traumática cerebral branda. Em algumas modalidades no método acima, os níveis de referência de cTnI e biomarcador precoce são correlacionados com (correspondem a) uma lesão traumática cerebral moderada. Em outras modalidades do método acima, os níveis de referência de cTnI e biomarcador precoce se correlacionaram com (correspondem a) uma lesão traumática cerebral severa. Em algumas modalidades no método acima, os níveis de referência de cTnI e biomarcadores precoces são correlacionados com (correspondem a) uma lesão traumática cerebral moderada a severa.

[013]Em algumas modalidades, o indivíduo pode ser suspeito de ter TBI branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em outros aspectos, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma TBI moderada com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em outros aspectos, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma TBI severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em outros aspectos, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma TBI moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em outros aspectos, o nível de referência de GFAP ou o nível de referência se correlaciona com ou corresponde a uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15 (uma TBI branda). Em outros aspectos, o nível de referência se correlate ou corresponde a uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 8 (uma TBI severa). Em outros aspectos, o nível de referência se correlaciona ou corresponde a uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 9 a 13 (uma TBI moderada). Em outros aspectos, o nível de referência se correlaciona com ou corresponde a uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12 (uma TBI moderada a severa).

[014]Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI é de cerca de 5 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI é de cerca de 10 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI é de cerca de 15 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI é de cerca de 20 pg/ml.

Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI é de cerca de 35 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI é de cerca de 50 pg/ml.

[015]Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 400 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 500 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 550 pg/ml.

[016]Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para GFAP é de cerca de 70 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para GFAP é de cerca de 100 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para GFAP é de cerca de 150 pg/ml.

[017]Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência é determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de

85% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 30% e 100%. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência é determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade de pelo menos cerca de 87,5% e uma especificidade de pelo menos cerca de 31%. Em algumas modalidades do ensaio acima, o nível de referência é entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml. Em algumas modalidades do ensaio acima, o nível de referência é entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência é entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml.

[018]Em algumas modalidades no método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça. Especificamente, em algumas modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 30 minutos da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 1 hora da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça. Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 2 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça. Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 3 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça. Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 4 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça. Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 5 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 6 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 7 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima,

a amostra é tomada dentro de cerca de 8 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 9 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 10 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima,

a amostra é tomada dentro de cerca de 11 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 12 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 13 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima,

a amostra é tomada dentro de cerca de 14 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 15 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 16 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima,

a amostra é tomada dentro de cerca de 17 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 18 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 19 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima,

a amostra é tomada dentro de cerca de 20 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 21 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 22 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima,

a amostra é tomada dentro de cerca de 23 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça. Em outras modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 24 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

[019]Em algumas modalidades, o método acima compreende adicionalmente tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral. Em algumas modalidades, o método acima compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa antes do tratamento com um tratamento de lesão traumática cerebral. Em algumas modalidades, o método acima compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa após o tratamento com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[020]Em algumas modalidades, o método acima compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo lesão traumática cerebral branda. Em algumas modalidades, o método acima compreende adicionalmente tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda com um tratamento de lesão traumática cerebral. Em algumas modalidades, o método acima compreende monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda antes de tratar com um tratamento de lesão traumática cerebral. Em outras modalidades, o método acima compreende monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda após o tratamento com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[021]Em uma outra modalidade, a presente revelação é dirigida a um método para auxiliar na determinação de se deve realizar uma varredura de tomografia computadorizada de cabeça (TC) em um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma (ou tem uma lesão real ou suspeita) lesão na cabeça. O método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce na amostra, em que a amostra é uma amostra biológica e biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; e b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[022]Em algumas modalidades no método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça. Especificamente, em algumas modalidades do método acima, a amostra é tomada dentro de cerca de 30 minutos da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

Em outras modalidades do método acima,

[023]Em algumas modalidades do método acima, uma varredura por TC é realizada no indivíduo. Em outras modalidades do método acima, uma varredura por TC não é realizada no indivíduo.

[024]Em algumas modalidades do método descrito acima, o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois que ensaio é realizado, e em que o indivíduo é suspeito de ter uma TBI com base no resultado da varredura por TC. Em algumas modalidades, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base em uma varredura por TC que já foi realizada. Por exemplo, dependendo de uma condição médica do indivíduo (tal como, se o paciente estiver inconsciente), uma varredura por TC pode ser conduzida pouco depois de o indivíduo chegar a uma sala de emergência, centro de trauma ou outro local para examinar e/ou avaliar se o indivíduo tem uma TBI. Tal varredura por TC pode ser realizada antes de o ensaio ser realizado para confirmar e determinar se o indivíduo tem uma TBI branda, moderada ou severa ou moderada a severa. Depois que o ensaio é realizado, uma ou mais varreduras por TC subsequentes podem ser realizadas com base nos resultados do ensaio como parte do gerenciamento do médico (ou outro profissional médico) do TBI (tal como, por exemplo, para determinar se intervenção cirúrgica e/ou farmacológica pode ser necessária). Em outras modalidades, o indivíduo pode não ter recebido uma varredura por TC antes de o ensaio ser realizado.

[025]Em algumas modalidades no método acima, o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC. Em algumas modalidades, o indivíduo é diagnosticado como tendo uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC. Em outras modalidades, o indivíduo é diagnosticado como não tendo uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC.

[026]Em algumas modalidades no método acima, os níveis de referência de cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com (correspondem a) uma tomografia computadorizada de cabeça positiva.

[027]Em algumas modalidades no método acima, os níveis de referência de cTnI e do biomarcador precoce se correlacionaram com (corresponderam a) indivíduos de controle que não sofreu uma lesão na cabeça.

[028]Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI é de cerca de 5 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI é de cerca de 10 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI é de cerca de 15 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI é de cerca de 20 pg/ml.

[029]Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 400 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 500 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 550 pg/ml.

[030]Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para GFAP é de cerca de 50 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para GFAP é de cerca de 100 pg/ml. Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para GFAP é de cerca de 150 pg/ml.

[031]Em modalidades do método acima, o nível de referência é determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 65% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 29% e 100%. Em modalidades do método acima, o nível de referência determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade de pelo menos cerca de 85% e uma especificidade de pelo menos cerca de 33%. Em modalidades do método acima, o nível de referência é determinado entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml. Em modalidades do método acima, o nível de referência é entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml. Em modalidades do método acima, o nível de referência é entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml.

[032]Em uma outra modalidade, a presente revelação é dirigida a um método para auxiliar no diagnóstico e avaliação de um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido um (ou tem uma lesão real ou suspeita de) lesão na cabeça. O método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; e b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[033]Em algumas modalidades do método acima, o indivíduo é diagnosticado ou determinado como tendo sofrido uma lesão traumática cerebral branda. Em outras modalidades do método acima, o indivíduo é diagnosticado ou determinado como tendo sofrido uma lesão traumática cerebral moderada. Em mais outras modalidades do método acima, o indivíduo é diagnosticado ou determinado como tendo sofrido uma lesão traumática cerebral severa. Em mais outras modalidades, o indivíduo é diagnosticado ou determinado como tendo sofrido uma lesão traumática cerebral moderada a severa.

[034]Em algumas modalidades no método acima, o indivíduo recebeu uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[035]Em algumas modalidades no método acima, o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[036]Em algumas modalidades no método acima, os níveis de referência de cTnI e biomarcador precoce são correlacionados com (correspondem a) uma lesão traumática cerebral branda. Em algumas modalidades no método acima, os níveis de referência de cTnI e biomarcador precoce são correlacionados com (correspondem a) uma lesão traumática cerebral moderada. Em outras modalidades do método acima, os níveis de referência de cTnI e biomarcador precoce se correlacionaram com (correspondem a) uma lesão traumática cerebral severa. Em algumas modalidades no método acima, os níveis de referência de cTnI e biomarcadores precoces são correlacionados com (correspondem a) uma lesão traumática cerebral moderada a severa.

[037]Em algumas modalidades, o indivíduo pode ser suspeito de ter TBI branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em outros aspectos, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma TBI moderada com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em outros aspectos, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma TBI severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em outros aspectos, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma TBI moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em outros aspectos, o nível de referência de GFAP ou o nível de referência se correlaciona com ou corresponde a uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15 (uma TBI branda). Em outros aspectos, o nível de referência se correlate ou corresponde a uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 8 (uma TBI severa). Em outros aspectos, o nível de referência se correlaciona ou corresponde a uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 9 a 13 (uma TBI moderada). Em outros aspectos, o nível de referência se correlaciona com ou corresponde a uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12 (uma TBI moderada a severa).

[038]Em algumas modalidades, o método acima compreende adicionalmente tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral. Em algumas modalidades, o método acima compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa antes do tratamento com um tratamento de lesão traumática cerebral. Em algumas modalidades, o método acima compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa após o tratamento com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[039]Em algumas modalidades, o método acima compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo lesão traumática cerebral branda. Em algumas modalidades, o método acima compreende adicionalmente tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda com um tratamento de lesão traumática cerebral. Em algumas modalidades, o método acima compreende monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda antes de tratar com um tratamento de lesão traumática cerebral. Em outras modalidades, o método acima compreende monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda após o tratamento com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[040]Em ainda outra modalidade, a presente revelação é dirigida a um método para auxiliar na determinação de se deve realizar uma varredura de tomografia computadorizada de cabeça (TC) em um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma (ou tem uma lesão real ou suspeita de) lesão na cabeça. O método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce na amostra, em que a amostra é uma amostra biológica e biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; e b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[041]Em algumas modalidades do método acima, uma varredura por TC é realizada no indivíduo. Em outras modalidades do método acima, uma varredura por TC não é realizada no indivíduo.

[042]Em algumas modalidades do método descrito acima, o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois que ensaio é realizado, e em que o indivíduo é suspeito de ter uma TBI com base no resultado da varredura por TC. Em algumas modalidades, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base em uma varredura por TC que já foi realizada. Por exemplo, dependendo de uma condição médica do indivíduo (tal como, se o paciente estiver inconsciente), uma varredura por TC pode ser conduzida pouco depois de o indivíduo chegar a uma sala de emergência, centro de trauma ou outro local para examinar e/ou avaliar se o indivíduo tem uma TBI. Tal varredura por TC pode ser realizada antes de o ensaio ser realizado para confirmar e determinar se o indivíduo tem uma TBI branda, moderada ou severa ou moderada a severa. Depois que o ensaio é realizado, uma ou mais varreduras por TC subsequentes podem ser realizadas com base nos resultados do ensaio como parte do gerenciamento do médico (ou outro profissional médico) do TBI (tal como, por exemplo, para determinar se intervenção cirúrgica e/ou farmacológica pode ser necessária). Em outras modalidades, o indivíduo pode não ter recebido uma varredura por TC antes de o ensaio ser realizado.

[043]Em algumas modalidades no método acima, o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC. Em algumas modalidades, o indivíduo é diagnosticado como tendo uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC. Em outras modalidades, o indivíduo é diagnosticado como não tendo uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC.

[044]Em algumas modalidades no método acima, os níveis de referência de cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com (correspondem a) uma tomografia computadorizada de cabeça positiva.

[045]Em algumas modalidades no método acima, os níveis de referência de cTnI e do biomarcador precoce se correlacionaram com (corresponderam a) indivíduos de controle que não sofreu uma lesão na cabeça.

[046]Em uma outra modalidade, a presente revelação se refere a um método para tratar uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa em um indivíduo humano, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce; e c) tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[047]Em algumas modalidades do método acima, o tratamento de lesão traumática cerebral para um indivíduo que sofre de uma TBI branda pode envolver ter o indivíduo em repouso durante um certo período de tempo, abstendo-se de atividades físicas durante um certo período de tempo, administração de um ou mais agentes terapêuticos (por exemplo, fármacos para fornecer alívio para uma dor de cabeça ou enxaqueca, etc.) ou combinações dos mesmos. Em outras modalidades do método acima, o tratamento de lesão traumática cerebral para um indivíduo que sofre de uma TBI moderada, severa ou moderada a severa, o tratamento envolve a administração de um ou mais agentes terapêuticos (por exemplo, fármacos tais como diuréticos, fármacos anticonvulsivos), a realização de um ou mais procedimentos cirúrgicos (por exemplo, tais como a remoção de um hematoma, reparação de uma fratura no crânio, craniotomia descompressiva, etc.), recebimento ou fornecimento de uma ou mais terapias (tal como reabilitação, fisioterapia, terapia ocupacional, terapia cognitivo-comportamental, gestão da raiva, etc.) ou qualquer combinação dos mesmos. Opcionalmente, tais métodos também podem envolver o fornecimento de uma ou mais terapias cardioprotetoras. Tais terapias cardioprotetoras podem ser administradas em combinação com os tratamentos para a TBI ou sozinhas sem qualquer tratamento de TBI, dependendo das circunstâncias.

[048]Em modalidades do método acima, o método compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa.

[049]Em uma outra modalidade, a presente revelação se refere a um método para tratar uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa em um indivíduo humano, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce; e c) tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[050]Em algumas modalidades do método acima, o tratamento de lesão traumática cerebral para um indivíduo que sofre de uma TBI branda pode envolver ter o indivíduo em repouso durante um certo período de tempo, abstendo-se de atividades físicas durante um certo período de tempo, administração de um ou mais agentes terapêuticos (por exemplo, fármacos para fornecer alívio para uma dor de cabeça ou enxaqueca, etc.) ou combinações dos mesmos. Em outras modalidades do método acima, o tratamento de lesão traumática cerebral para um indivíduo que sofre de uma TBI moderada, severa ou moderada a severa, o tratamento envolve a administração de um ou mais agentes terapêuticos (por exemplo, fármacos tais como diuréticos, fármacos anticonvulsivos), a realização de um ou mais procedimentos cirúrgicos (por exemplo, tais como a remoção de um hematoma, reparação de uma fratura no crânio, craniotomia descompressiva, etc.), recebimento ou fornecimento de uma ou mais terapias (tal como reabilitação, fisioterapia, terapia ocupacional, terapia cognitivo-comportamental, gestão da raiva, etc.) ou qualquer combinação dos mesmos. Opcionalmente, tais métodos também podem envolver o fornecimento de uma ou mais terapias cardioprotetoras. Tais terapias cardioprotetoras podem ser administradas em combinação com os tratamentos para a TBI ou sozinhas sem qualquer tratamento de TBI, dependendo das circunstâncias.

[051]Em modalidades do método acima, o método compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa.

[052]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, os níveis de cTnI são determinados por um imunoensaio.

[053]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, os níveis de UCH-L1 são determinados por um imunoensaio

[054]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, os níveis de GFAP são determinados por um imunoensaio.

[055]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, cada um dos níveis de cTnI e UCH-L1 é determinado por imunoensaio.

[056]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, cada um dos níveis de cTnI e GFAP é determinado por imunoensaio.

[057]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, cada um dos níveis de cTnI, GFAP e UCH-L1 é determinado por imunoensaio.

[058]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, os níveis de cTnI são determinados por um ensaio de química clínica.

[059]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, os níveis de UCH-L1 são determinados por um ensaio de química clínica.

[060]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, os níveis de GFAP é determinado por um ensaio de química clínica.

[061]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, cada um dos níveis de cTnI e UCH-L1 é determinado por um ensaio de química clínica.

[062]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, cada um dos níveis de cTnI e GFAP é determinado por um ensaio de química clínica.

[063]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, cada um dos níveis de cTnI, GFAP e UCH-L1 é determinado por um ensaio de química clínica.

[064]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, os níveis de cTnI são determinados por um ensaio de detecção de molécula única.

[065]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, os níveis de UCH-L1 são determinados por um ensaio de detecção de molécula única.

[066]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, os níveis de GFAP são determinados por um ensaio de detecção de molécula única.

[067]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, cada um dos níveis de cTnI e UCH-L1 são determinados por um ensaio de detecção de molécula única.

[068]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, cada um dos níveis de cTnI e GFAP são determinados por um ensaio de detecção de molécula única.

[069]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, cada um dos níveis de cTnI, GFAP e UCH-L1 são determinados por ensaio de detecção de molécula única.

[070]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, a amostra é uma amostra de sangue total.

[071]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, a amostra é uma amostra de plasma.

[072]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, a amostra é uma amostra de soro.

[073]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, a medição da cTnI compreende: Acolocar a amostra, simultânea ou sequencialmente, em qualquer ordem em contato com: (1) um anticorpo de captura de cTnI, que se liga a um epítopo em cTnI ou fragmento de cTnI para formar um complexo de anticorpo de captura de cTnI- antígeno de cTnI, e (2) um anticorpo de detecção de cTnI que inclui uma identificação detectável e se liga a um epítopo em cTnI que não é ligado pelo anticorpo de captura de cTnI, para formar um complexo de antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI, de modo que um complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI- anticorpo de detecção de cTnI seja formado, e Bmedir a quantidade ou concentração de cTnI na amostra com base no sinal gerado pela identificação detectável no complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI.

[074]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, a amostra é obtida depois que o indivíduo sofreu uma lesão na cabeça causada por agitação física, impacto brusco por uma força mecânica externa ou outra força que resulta em um trauma de cabeça aberto ou fechado, uma ou mais quedas, explosões ou estouros ou outros tipos de trauma por força brusca.

[075]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, a amostra é obtida depois que o indivíduo ingeriu ou foi exposto a um produto químico, toxina ou combinação de um produto químico e toxina. Por exemplo, o produto químico ou toxina pode ser fogo, mofo, amianto, um pesticida, um inseticida, um solvente orgânico, uma tinta, uma cola, um gás, um metal orgânico, um fármaco de abuso ou uma ou mais combinações dos mesmos.

[076]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, a amostra é obtida a partir de um indivíduo que sofre de uma doença autoimune, um distúrbio metabólico, um tumor cerebral, hipoxia, um vírus, meningite, hidrocefalia ou combinações dos mesmos.

[077]Em modalidades de qualquer um dos métodos descritos acima, os métodos podem ser realizados em qualquer indivíduo sem considerar fatores selecionados a partir do grupo que consiste na condição clínica do indivíduo, nos valores de laboratório do indivíduo, na classificação do indivíduo como sofrendo de lesão traumática cerebral branda, moderada ou severa ou moderada a severa, na exibição do indivíduo de níveis baixos ou altos de cTnI e no tempo de qualquer evento em que o dito indivíduo possa ter sofrido uma lesão na cabeça.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[078]A Figura 1 mostra o resultado de biomarcador UCH-L1 versus tempo a partir da lesão.

[079]A Figura 2 mostra um diagrama de caixa de resultados de ensaio de UCH-L1 por ponto no tempo.

[080]A Figura 3 mostra um diagrama de caixa de resultados de ensaio de hsTnI por ponto no tempo.

[081]A Figura 4 mostra diagrama de caixa de resultados de ensaio de hsTnI no ponto no tempo 1 (tomado dentro de 0 a 6 horas após a lesão na cabeça) e no ponto no tempo 2 (tomado 3 a 6 horas após a amostra do ponto no tempo 1) correlacionados com os resultados de varredura por TC positiva versus negativa.

[082]A Figura 5 mostra diagramas de caixa de quantidade absoluta (“delta absoluto”) de resultados de hsTnI (isto é, a diferença absoluta entre o ponto no tempo 2 (tomado 3 a 6 horas após a amostra do ponto no tempo 1) e o ponto no tempo 1 (tomado dentro de 0 a 6 horas após a lesão na cabeça)) correlacionados com os resultados de varredura por TC positiva versus negativa.

[083]A Figura 6 mostra diagrama de caixa de resultados de ensaio de hsTnI no ponto no tempo 1 (tomado dentro de 0 a 6 horas após a lesão na cabeça) e no ponto no tempo 2 (tomado 3 a 6 horas após a amostra do ponto no tempo 1) correlacionados com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa.

[084]A Figura 7 mostra diagrama de caixa de quantidade absoluta (“delta absoluto”) de resultados de ensaio de hsTnI (isto é, a diferença absoluta entre o ponto no tempo 1 (tomado dentro de 0 a 6 horas após a lesão na cabeça) e o ponto no tempo 2 (tomado 3 a 6 horas após a amostra do ponto no tempo 1)) correlacionados com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa.

[085]A Figura 8 mostra uma análise de característica de operação de receptor (ROC) de resultados de ensaio de UCH-L1 no ponto no tempo 1 (tomado dentro de 0 a 12 horas após a lesão na cabeça) correlacionado com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa.

[086]A Figura 9 mostra análise de ROC de resultados de ensaio de UCH-L1 no ponto no tempo 1 (tomado mais de 12 horas após a lesão na cabeça) correlacionado com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa.

[087]A Figura 10 mostra análise de ROC de quantidade absoluta (“delta absoluto”) da combinação de níveis de hsTnI e níveis de UCH-L1 (isto é, a diferença absoluta entre níveis de hsTnI no ponto no tempo 2 e níveis de hsTnI no ponto no tempo 1 e a diferença absoluta entre níveis de UCH-L1 no ponto no tempo 2 e níveis de UCH-L1 no ponto no tempo 1) correlacionada com resultado de pontuação de GCS (branda versus moderada/severa). A amostra no ponto no tempo 1 é tomada dentro de 0 a 12 horas da lesão na cabeça, enquanto a amostra no ponto no tempo 2 é tomada cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a amostra no ponto no tempo 1 é tomada.

[088]A Figura 11 mostra análise de ROC de quantidade absoluta (“delta absoluto”) da combinação de níveis de hsTnI e níveis de UCH-L1 (isto é, a diferença absoluta entre níveis de hsTnI no ponto no tempo 2 e níveis de hsTnI no ponto no tempo 1 e a diferença absoluta entre níveis de UCH-L1 no ponto no tempo 2 e níveis de UCH-L1 no ponto no tempo 1) correlacionada com resultado de pontuação de GCS (branda versus moderada/severa). A amostra no ponto no tempo 1 é tomada mais de 12 horas da lesão na cabeça, enquanto a amostra no ponto no tempo 2 é tomada cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a amostra no ponto no tempo 1 é tomada.

[089]A Figura 12 mostra a situação de TC (resultados de varredura por TC positiva ou negativa) e níveis de hsTnI de indivíduos humanos versus tempo de coleta de sangue em relação à lesão.

[090]A Figura 13 mostra resultados de pontuação de GCS e níveis de hsTnI de indivíduos humanos versus tempo de coleta de sangue em relação à lesão.

[091]A Figura 14 mostra situação de TC (resultados de varredura por TC positiva ou negativa) e níveis de ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1) de indivíduos humanos versus tempo de coleta de sangue em relação à lesão.

[092]A Figura 15 mostra resultados de pontuação de GCS e níveis de UCH- L1 de indivíduos humanos versus tempo de coleta de sangue em relação à lesão.

[093]A Figura 16 mostra situação de TC (resultados de varredura por TC positiva ou negativa) e níveis de proteína glial fibrilar ácida (GFAP) de indivíduos humanos versus tempo de coleta de sangue em relação à lesão.

[094]A Figura 17 mostra resultados de pontuação de GCS e níveis de GFAP de indivíduos humanos versus tempo de coleta de sangue em relação à lesão.

[095]A Figura 18 mostra uma análise de característica de operação de receptor (ROC) de níveis de hsTnI correlacionados com situação de TC (resultado de varredura por TC positiva versus negativa) em amostras tomadas dentro de cerca de 2 horas da suspeita de lesão. A amostra no ponto no tempo 1 é tomada dentro de 2 horas da lesão na cabeça, enquanto a amostra no ponto no tempo 2 é tomada cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a amostra no ponto no tempo 1 é tomada.

[096]A Figura 19 mostra uma análise de característica de operação de receptor (ROC) de níveis de hsTnI correlacionados com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa em amostras tomadas dentro de cerca de 2 horas de suspeita de lesão. A amostra no ponto no tempo 1 é tomada dentro de 2 horas da lesão na cabeça, enquanto a amostra no ponto no tempo 2 é tomada cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a amostra no ponto no tempo 1 é tomada.

[097]A Figura 20 mostra curva de ROC de resultados de ensaio de hsTnI para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 correlacionados com resultados de varredura por TC positiva versus negativa.

[098]A Figura 21 mostra curva de ROC de resultados de ensaio de hsTnI para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 correlacionados com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa.

[099]A Figura 22 mostra análise de ROC de quantidade absoluta (“delta absoluto”) de resultados de hsTnI (isto é, a diferença absoluta entre níveis de hsTnI no ponto no tempo 2 e níveis de hsTnI no ponto no tempo 1) correlacionados com situação de TC (resultado de varredura por TC positiva versus negativa). A amostra no ponto no tempo 1 é tomada dentro de 2 horas da lesão na cabeça, enquanto a amostra no ponto no tempo 2 é tomada cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a amostra no ponto no tempo 1 é tomada.

[0100]A Figura 23 mostra análise de ROC de quantidade absoluta (“delta absoluto”) de resultados de hsTnI (isto é, a diferença absoluta entre níveis de hsTnI no ponto no tempo 2 e níveis de hsTnI no ponto no tempo 1) correlacionados com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa. A amostra no ponto no tempo 1 é tomada dentro de 2 horas da lesão na cabeça, enquanto a amostra no ponto no tempo 2 é tomada cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a amostra no ponto no tempo 1 é tomada.

[0101]A Figura 24 mostra curva de ROC de quantidade absoluta (“delta absoluto”) de resultados de ensaio de hsTnI para todos os indivíduos correlacionados com resultados de varredura por TC positiva versus negativa.

[0102]A Figura 25 mostra curva de ROC de quantidade absoluta (“delta absoluto”) de resultados de ensaio de hsTnI para todos os indivíduos correlacionados com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa.

[0103]A Figura 26 mostra curva de ROC de resultados de ensaio de UCH-L1 para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 correlacionados com resultados de varredura por TC positiva versus negativa.

[0104]A Figura 27 mostra curva de ROC de resultados de ensaio de UCH-L1 para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 correlacionados com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa.

[0105]A Figura 28 mostra análise de ROC da combinação de níveis de hsTnI e níveis de UCH-L1 correlacionada com situação de TC (resultado de varredura por

TC positiva versus negativa) em amostras tomadas em um primeiro ponto no tempo 1 dentro de 24 horas após a lesão na cabeça.

[0106]A Figura 29 mostra análise de ROC da combinação de níveis de hsTnI e níveis de UCH-L1 correlacionados com resultado de pontuação de GCS (branda versus moderada/severa) em amostras tomadas em um primeiro ponto no tempo 1 dentro de 24 horas após a lesão na cabeça.

[0107]A Figura 30 mostra curva de ROC de resultados de ensaio de GFAP para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 correlacionados com resultados de varredura por TC positiva versus negativa.

[0108]A Figura 31 mostra curva de ROC de resultados de ensaio de GFAP para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 correlacionados com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa.

[0109]A Figura 32 mostra análise de ROC da combinação de níveis de hsTnI e níveis de GFAP correlacionada com situação de TC (resultado de varredura por TC positiva versus negativa) em amostras tomadas em um primeiro ponto no tempo 1 dentro de 24 horas após a lesão na cabeça.

[0110]A Figura 33 mostra análise de ROC da combinação de níveis de hsTnI e níveis de GFAP correlacionada com resultado de pontuação de GCS (branda versus moderada/severa) em amostras tomadas em um primeiro ponto no tempo 1 dentro de 24 horas após a lesão na cabeça.

[0111]A Figura 34 mostra um diagrama de caixa de resultados de ensaio de GFAP por ponto no tempo.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0112]A presente revelação fornece métodos novos e aperfeiçoados para usar níveis e/ou alterações nos níveis de cTnI (por exemplo, mediante a realização de um ensaio para determinar o nível de cTnI em uma ou mais amostras biológicas e, então, comparando-se aqueles níveis com um ou mais níveis de referência) como um auxílio na avaliação, diagnósticos e/ou estratificação de se um indivíduo que sofreu uma lesão ou que acredita-se que tenha sofrido uma lesão na cabeça tem sofrido TBI branda, uma TBI moderada, uma TBI severa, uma TBI moderada a severa ou nenhuma TBI absolutamente. Os métodos descritos no presente documento podem ser realizados rapidamente – em apenas 2 horas e até cerca de 24 horas após uma lesão ou suspeita de lesão na cabeça. O uso de cTnI para diferenciar entre TBI branda, moderada, severa, moderada a severa ou nenhuma TBI dessa maneira é desconhecido anteriormente. Não apenas tais métodos permitem que um médico rapidamente determine e classifique (ou reclassifique) ou submeta à triagem um paciente como tendo uma TBI ou nenhuma TBI, para aqueles pacientes identificados ou determinados como tendo sofrido uma TBI, os métodos descritos no presente documento permitem que o médico determine o tipo de TBI (branda versus moderada, severa ou moderada a severa). A capacidade para determinar rapidamente a probabilidade de classificar uma TBI como branda, moderada, severa ou moderada a severa permite que o médico desenvolva um curso de tratamento adequado (por exemplo, plano de tratamento) para o indivíduo. Tal plano de tratamento pode incluir a probabilidade de (1) ordenar um ou mais testes adicionais para obter informações clínicas adicionais sobre a TBI (por exemplo, tal como uma IRM, etc.); (2) começar (continuar) a monitorar o indivíduo; (3) começar a tratar o indivíduo com um tratamento de lesão traumática cerebral (e se o tratamento for iniciado, qual tipo de tratamento começar (por exemplo, um ou mais tratamentos terapêuticos, protegendo as vias aéreas, um ou mais tratamentos cirúrgicos, ordenando repouso, etc.); (4) começar qualquer tratamento cardioprotetor para proteger o coração do indivíduo (tal como, opcionalmente, mediante a administração de um ou mais betabloqueadores, diuréticos, inibidores de conversão de angiotensina, bloqueadores do canal de cálcio, terapias de redução de lipídio, estatinas, nitratos, terapia antiplaquetária, agentes anticoagulantes, agentes anticoagulação ou combinações dos mesmos ou outros agentes cardioprotetores conhecidos na técnica); ou (5) realizar quaisquer combinações de (1) a (4).

[0113]Adicionalmente, a presente revelação fornece métodos para usar níveis ou alterações nos níveis de cTnI e UCH-L1 e/ou GFAP como um auxílio na determinação de se uma tomografia computadorizada de cabeça (TC) deve ser realizada em um indivíduo que sofreu ou que se acredita que tenha sofrido uma TBI.

Os métodos descritos no presente documento podem ser realizados rapidamente – em apenas 2 horas e até cerca de 24 horas após uma lesão ou suspeita de lesão na cabeça. O uso de cTnI e UCH-L1 e/ou GFAP como um auxílio para assistir um médico para determinar a probabilidade de realizar uma TC de cabeça em indivíduos que sofreram ou que se acredita que tenha sofrido uma TBI não é conhecido anteriormente.

[0114]Adicionalmente, a presente revelação fornece métodos para tratar uma lesão traumática cerebral. Especificamente, os métodos envolvem o uso de níveis e/ou alterações nos níveis de cTnI e UCH-L1 e/ou GFAP, conforme descrito no presente documento (por exemplo, mediante a realização de um ensaio para determinar o nível de cTnI e UCH-L1 e/ou GFAP em uma ou mais amostras biológicas e, então, comparando-se aqueles níveis com um ou mais níveis de referência) para avaliar, diagnosticar e/ou estratificar se um indivíduo que sofreu uma lesão na cabeça ou que acredita-se que tenha sofrido uma lesão na cabeça sofreu TBI branda, uma TBI moderada, TBI severa, TBI moderada a severa ou nenhuma TBI. Uma vez que um indivíduo foi identificado, determinado, classificado ou estratificado como tendo uma TBI branda, moderada ou severa ou TBI moderada a severa, então, dependendo do tipo de TBI (branda versus moderada, severa ou moderada a severa), o indivíduo pode ser tratado com um tratamento de lesão traumática cerebral adequado. Por exemplo, para uma TBI branda, o tratamento de lesão traumática cerebral pode envolver um ou mais dentre tendo o indivíduo em repouso durante um certo período de tempo, abstendo-se de atividades físicas durante um certo período de tempo, administração de um ou mais agentes terapêuticos (por exemplo, fármacos para fornecer alívio para uma dor de cabeça ou enxaqueca, etc.) ou combinações dos mesmos. Para uma TBI moderada, severa ou moderada a severa, o tratamento de lesão traumática cerebral pode envolver a administração de um ou mais agentes terapêuticos (por exemplo, fármacos tais como diuréticos, fármacos anticonvulsivos),

a realização de um ou mais procedimentos cirúrgicos (por exemplo, tais como a remoção de um hematoma, reparação de uma fratura no crânio, craniotomia descompressiva, etc.), o recebimento de uma ou mais terapias (tais como reabilitação, fisioterapia, terapia ocupacional, terapia cognitivo-comportamental, gestão da raiva, etc.) ou combinações dos mesmos. Opcionalmente, tais métodos também podem envolver o fornecimento de uma ou mais terapias cardioprotetoras.

Tais terapias cardioprotetoras podem ser administradas em combinação com os tratamentos para a TBI ou sozinhas sem qualquer tratamento de TBI, dependendo das circunstâncias.

[0115]Além da realização dos métodos descritos acima, um versado na técnica (por exemplo, médico) entenderia e saberia como realizar teste adicional a fim de detectar ou avaliar outros comorbidades (por exemplo, outras doenças, distúrbios ou condições além de TBI). Adicionalmente, a fim de confirmar que as alterações em quantidades ou níveis de cTnI nos métodos descritos no presente documento são atribuíveis a uma lesão na cabeça ou uma suspeita de lesão na cabeça de um indivíduo e não o resultado de uma síndrome cardíaca aguda (tal como um infarto do miocárdio, insuficiência cardíaca, etc.), um médico ou outro prestador de serviços de saúde poderia conduzir ou realizar um ou mais testes ou procedimentos adicionais para confirmar a ausência de uma síndrome cardíaca aguda. Tais procedimentos ou testes adicionais incluem um ou mais dentre um eletrocardiograma, uma contagem de células de sangue completo (CBC), um painel metabólico abrangente, um perfil lipídico (por exemplo, para determinar HDL, LDL, triglicerídeos, etc.), um angiograma, um ou mais testes para detectar ou determinar os níveis de um ou mais dentre proteína C-reativa (CRP), peptídeo natriurético do cérebro, ceramidas de plasma, etc.

[0116]Os títulos de seção, conforme usado nessa seção e em toda a revelação no presente documento, são meramente para propósitos de organização e não se destinam a serem limitantes.

1. DEFINIÇÕES

[0117]A não ser que definido de outro modo, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado que o comumente entendido por uma pessoa com habilidade comum na técnica. Em caso de conflito, o presente documento, incluindo definições, prevalecerá. Os métodos e materiais preferenciais são descritos abaixo, embora os métodos e materiais semelhantes ou equivalentes àqueles descritos no presente documento possam ser usados na prática ou no teste da presente revelação. Todas as publicações, pedidos de patente, patentes e outras referências mencionadas no presente documento são incorporadas a título de referência em sua totalidade. Os materiais, métodos e exemplos revelados no presente documento são ilustrativos apenas e não destinados a serem limitantes.

[0118]Os termos “compreende (ou compreendem)”, “inclui (ou incluem)”, “ter”, “tem”, “pode”, “contém (ou contêm)”, e variantes dos mesmos, conforme usado no presente documento, se destinam a ser frases, termos ou palavras de transição abrangentes que não excluem a possibilidade de atos ou estruturas adicionais. As formas no singular “um”, “uma”, “o” e “a” incluem referências no plural a menos que o contexto dite claramente o contrário. A presente revelação também contempla outras modalidades “que compreende”, “que consiste em” e “que consiste essencialmente em”, as modalidades ou elementos apresentados no presente documento, seja explicitamente estabelecidos ou não.

[0119]Para a recitação de faixas numéricas no presente documento, cada número interveniente entre as mesmas com o mesmo grau de precisão é explicitamente contemplado. Por exemplo, para a faixa de 6 a 9, os números 7 e 8 são contemplados além de 6 e 9, e para a faixa de 6,0 a 7,0, o número 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9 e 7,0 são explicitamente contemplados.

[0120]“Anticorpo maturado por afinidade” é usado no presente documento para se referir a um anticorpo com uma ou mais alterações em uma ou mais CDRs, que resultam no aprimoramento na afinidade (isto é, KD, kd ou ka) do anticorpo para um antígeno alvo em comparação com um anticorpo parental, que não possui a alteração (ou alterações). Os anticorpos maturados por afinidade exemplificadores terão afinidades nanomolares ou até picomolares para o antígeno alvo. Uma variedade de procedimentos para produzir anticorpos maturados por afinidade é conhecida na técnica, incluindo a triagem de uma biblioteca de anticorpo combinadora que foi preparada com o uso de bio-exibição. Por exemplo, Marks et al., BioTechnology, 10: 779 a 783 (1992) descrevem maturação por afinidade por embaralhamento de domínio VH e VL. A mutagênese aleatória de CDR e/ou resíduos de framework é descrita por Barbas et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 91: 3.809 a

3.813 (1994); Schier et al., Gene, 169: 147 a 155 (1995); Yelton et al., J. Immunol., 155: 1.994 a 2.004 (1995); Jackson et al., J. Immunol., 154(7): 3.310 a 3.319 (1995); e Hawkins et al, J. Mol. Biol., 226: 889 a 896 (1992). A mutação seletiva em posições de mutagênese seletiva e em posições de hipermutação ou contato com um resíduo de aminoácido de intensificação de atividade é descrita na patente nº U.S. 6.914.128 B1.

[0121]“Anticorpo” e “anticorpos”, como usado no presente documento, se refere a anticorpos monoclonais, anticorpos multiespecíficos, anticorpos humanos, anticorpos humanizados (completa ou parcialmente humanizados), anticorpos de animais tais como, porém sem limitação, um pássaro (por exemplo, um pato ou um ganso), um tubarão, uma baleia e um mamífero, incluindo um não primata (por exemplo, uma vaca, um porco, um camelo, uma lhama, um cavalo, uma cabra, um coelho, um carneiro, um hamster, um porquinho da Índia, um gato, um cão, um rato, um camundongo, etc.) ou um primata não humano (por exemplo, um macaco, um chimpanzé, etc.), anticorpos recombinantes, anticorpos quiméricos, Fvs de cadeia única (“scFv”), anticorpos de cadeia única, anticorpos de domínio único, fragmentos Fab, fragmentos F(ab'), fragmentos F(ab')2, Fvs ligados por dissulfeto (“sdFv”) e anticorpos anti-idiotípicos (“anti-Id”), anticorpos de domínio duplo, anticorpos de domínio variável duplo (DVD) ou domínio variável triplo (TVD) (imunoglobulinas de domínio variável duplo e métodos para fabricação dos mesmos são descritos em Wu, C., et al., Nature Biotechnology, 25(11):1.290 a 1.297 (2007) e pedido internacional PCT n° WO 2001/058956, estando o conteúdo de cada um dos quais incorporado ao presente documento a título de referência), e fragmentos de ligação a epítopo funcionalmente ativos de qualquer um dos mencionados acima. Em particular, os anticorpos incluem moléculas de imunoglobulina e fragmentos imunologicamente ativos de moléculas de imunoglobulina, ou seja, moléculas que contêm um sítio de ligação a analito. As moléculas de imunoglobulina podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), classe (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) ou subclasse. Por uma questão de simplicidade, um anticorpo contra um analito é frequentemente denominado no presente documento como sendo um “anticorpo anti-analito” ou meramente um “anticorpo de analito” (por exemplo, um anticorpo anti-troponina cardíaca I e/ou anti-UCH-L1 e/ou anti-GFAP ou um anticorpo de troponina cardíaca I e/ou anti-UCH-L1 e/ou anti-GFAP).

[0122]“Fragmento de anticorpo”, conforme usado no presente documento, se refere a uma porção de um anticorpo intacto que compreende o sítio de ligação a antígeno ou região variável. A porção não inclui os domínios de cadeia pesada constante (isto é, CH2, CH3 ou CH4, dependendo do isotipo do anticorpo) da região Fc do anticorpo intacto. Os exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, porém sem limitação, fragmentos Fab, fragmentos Fab’, fragmentos Fab’-SH, fragmentos F(ab’)2, fragmentos Fd, fragmentos Fv, diacorpos, moléculas de Fv de cadeia única (scFv), polipeptídeos de cadeia única que contêm apenas um domínio variável de cadeia leve, polipeptídeos de cadeia única que contêm as três CDRs do domínio variável de cadeia leve, polipeptídeos de cadeia única que contêm apenas uma região variável de cadeia pesada e polipeptídeos de cadeia única que contêm as três CDRs da região variável de cadeia pesada.

[0123]A “área sob a curva” ou “AUC” se refere à área sob uma curva de ROC.

AUC sob uma curva de ROC é uma medição de precisão. Uma AUC de 1 representa um teste perfeito, enquanto que uma AUC de 0,5 representa um teste insignificante.

Uma AUC preferencial pode ser de pelo menos aproximadamente 0,700, pelo menos aproximadamente 0,750, pelo menos aproximadamente 0,800, pelo menos aproximadamente 0,850, pelo menos aproximadamente 0,900, pelo menos aproximadamente 0,910, pelo menos aproximadamente 0,920¸ pelo menos aproximadamente 0,930, pelo menos aproximadamente 0,940, pelo menos aproximadamente 0,950, pelo menos aproximadamente 0,960, pelo menos aproximadamente 0,970, pelo menos aproximadamente 0,980, pelo menos aproximadamente 0,990 ou pelo menos aproximadamente 0,995.

[0124]“Microesfera” e “partícula” são usados no presente documento de forma intercambiável e se referem a um suporte sólido substancialmente esférico. Um exemplo de uma microesfera ou partícula é uma micropartícula. As micropartículas que podem ser usadas no presente documento podem ser qualquer tipo conhecido na técnica. Por exemplo, a microesfera ou partícula pode ser uma microesfera magnética ou partícula magnética. As microesferas/partículas magnéticas podem ser ferromagnéticas, ferrimagnéticas, paramagnéticas, superparamagnéticas ou ferrofluídicas. Os materiais ferromagnéticos exemplificadores incluem Fe, Co, Ni, Gd, Dy, CrO2, MnAs, MnBi, EuO e NiO/Fe. Os exemplos de materiais ferrimagnéticos incluem NiFe2O4, CoFe2O4, Fe3O4 (ou FeO.Fe2O3). As microesferas podem ter uma porção de núcleo sólida que é magnética e é circundada por uma ou mais camadas não magnéticas. Alternativamente, a porção magnética pode ser uma camada ao redor de um núcleo não magnético. As micropartículas podem ser de qualquer tamanho que funcionaria nos métodos descritos no presente documento, por exemplo, a partir de cerca de 0,75 a cerca de 5 nm ou a partir de cerca de 1 a cerca de 5 nm ou a partir de cerca de 1 a cerca de 3 nm.

[0125]“Proteína de ligação” é usada no presente documento para se referir a uma proteína monomérica ou multimérica que se liga a e forma um complexo com um parceiro de ligação, tal como, por exemplo, um polipeptídeo, um antígeno, um composto químico ou outra molécula ou um substrato de qualquer tipo. Uma proteína de ligação se liga especificamente a um parceiro de ligação. As proteínas de ligação incluem anticorpos, bem como fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos e outras diversas formas e derivados dos mesmos, conforme são conhecidos na técnica e descritos no presente documento abaixo, e outras moléculas que compreendem um ou mais domínios de ligação a antígeno que se ligam a uma molécula de antígeno ou um sítio particular (epítopo) na molécula de antígeno. Consequentemente, uma proteína de ligação inclui, porém sem limitação, um anticorpo, uma imunoglobulina tetramérica, uma molécula de IgG, uma molécula de IgG1, um anticorpo monoclonal, um anticorpo, um anticorpo enxertado com CDR, um anticorpo humanizado, um anticorpo maturado por afinidade e fragmentos de qualquer um de tais anticorpos que retêm a capacidade para se ligar a um antígeno.

[0126]“Anticorpo biespecífico” é usado no presente documento para se referir a um anticorpo de comprimento total que é gerado por tecnologia de quadroma (consultar Milstein et al., Nature, 305(5934): 537 a 540 (1983)), por conjugação química de dois anticorpos monoclonais diferentes (consultar, Staerz et al., Nature, 314(6012): 628 a 631 (1985)) ou por abordagens de knob-into-hole ou similares, que introduzem mutações na região Fc (consultar Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci.

USA, 90(14): 6.444 a 6.448 (1993)), resultando em múltiplas espécies de imunoglobulina diferentes das quais apenas uma é o anticorpo biespecífico funcional.

Um anticorpo biespecífico liga um antígeno (ou epítopo) em um de seus braços de ligação (um par de HC/LC) e liga um antígeno diferente (ou epítopo) em seu segundo braço (um par diferente de HC/LC). Por meio dessa definição, um anticorpo biespecífico tem dois braços de ligação a antígeno distintos (tanto em especificidade como sequências de CDR) e é monovalente para cada antígeno ao qual o mesmo se liga.

[0127]Como usado no presente documento, os termos “troponina cardíaca I”, “cTnI” ou “troponina I”, como usado de forma intercambiável no presente documento, se referem a uma dentre duas formas exclusivas de troponina cardíaca (sendo que a outra forma exclusiva é troponina cardíaca T (também mencionada como “cTnT”)), liberada no sangue a partir do músculo cardíaco para qual várias espécies podem existir no sangue. Não apenas o termo “troponina cardíaca I” ou “cTnI” incluem a versão de comprimento total dessa forma, mas inclui também: (1) diversos complexos de cTnI (ou seja, um com o outro e/ou com troponina cardíaca C (cTnC)); (2)

fragmentos de cTnI que resultam a partir de degradação proteolítica; (3) formas fosforiladas e oxidadas de cTnI (Consulte, por exemplo, a patente nº U.S. 6.991.907, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência); e (4) quaisquer isoformas de cTnI.

[0128]Em algumas modalidades, os métodos da presente revelação permitem a detecção e/ou determinação da concentração de uma ou mais dentre as diversas formas de cTnI em uma amostra como uma entidade separada, por exemplo, cTnI complexada, cTnI livre (por exemplo, tal como comprimento total, fragmentos, isoformas, etc.), cTnI modificada (por exemplo, oxidada ou fosforilada) e, opcionalmente, fornece uma concentração para a cTnI na amostra biológica.

[0129]Mais especificamente, em algumas modalidades, a revelação descrita no presente documento emprega ensaios de alta sensibilidade que permitem a detecção e quantificação de cTnI em níveis 10 a 100 vezes menores que os níveis medidos por ensaios de troponina tradicionais (por exemplo, imunoensaios) conhecidos na técnica. Mais especificamente, os ensaios são definidos como alta sensibilidade (por exemplo, ensaios de alta sensibilidade para troponina) se tais ensaios atenderem pelo menos as duas condições a seguir: : 1) um coeficiente de variância menor do que 10% no 99o valor percentil da população saudável de referência e 2) concentrações acima do limite de detecção do ensaio são mensuráveis em mais do que 50% dos indivíduos saudáveis (Consultar, Apple FS, et al., Clin Chem., 58:54 a 61 (2012), cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência). Os exemplos de ensaios conhecidos na técnica que permitem a detecção altamente sensível de troponina incluem aqueles disponíveis junto à Quanterix (imunoensaio de troponina I humana Simoa) para uso de pesquisa apenas, bem como aqueles descritos na patente n° U.S. 9.182.405, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência.

[0130]“Situação de troponina cardíaca I” ou “situação de cTnI”, como usado de forma intercambiável no presente documento, pode se referir ao nível ou quantidade de troponina cardíaca I em um ponto no tempo (tal como com uma medição única de troponina I), o nível ou quantidade de troponina cardíaca I associada ao monitoramento (tal como com um teste de repetição em um indivíduo para identificar um aumento ou diminuição na quantidade de troponina cardíaca I), o nível ou quantidade de troponina cardíaca I associado ao tratamento para lesão traumática cerebral (se uma lesão cerebral primária e/ou uma lesão cerebral secundária) ou combinações dos mesmos.

[0131]“CDR” é usada no presente documento para se referir à “região determinante de complementaridade” dentro de uma sequência variável de anticorpo.

Existem três CDRs em cada uma das regiões variáveis da cadeia pesada e da cadeia leve. Precedente do N-terminal de uma cadeia pesada ou leve, essas regiões são denotadas “CDR1”, “CDR2” e “CDR3”, para cada uma das regiões variáveis. O termo "conjunto de CDRs", como usado no presente documento, se refere a um grupo de três CDRs que ocorre em uma única região variável que liga o antígeno. Um sítio de ligação a antígeno, portanto, pode incluir seis CDRs, que compreendem a CDR definida de cada uma dentre uma região variável de cadeia pesada e uma de cadeia leve. Um polipeptídeo que compreende uma única CDR, (por exemplo, uma CDR1, CDR2 ou CDR3) pode ser mencionado como uma “unidade de reconhecimento molecular”. As análises cristalográficas de complexos de antígeno-anticorpo têm demonstrado que os resíduos de aminoácidos de CDRs formam contato extensivo com antígeno ligado, em que o contato de antígeno mais extensivo é com a CDR3 de cadeia pesada. Dessa forma, as unidades de reconhecimento molecular podem ser principalmente responsáveis pela especificidade de um sítio de ligação ao antígeno.

Em geral, os resíduos de CDR são diretamente e mais substancialmente envolvidos na influência da ligação a antígeno.

[0132]Os limites exatos dessas CDRs foram definidos de modo diferente de acordo com diferentes sistemas. O sistema descrito por Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) e (1991)) não só fornece um sistema de numeração de resíduos inequívoco aplicável a qualquer região variável de um anticorpo, mas fornece também limites de resíduos precisos que definem as três CDRs. Essas CDRs podem ser mencionadas como “CDRs de Kabat”. Chothia e colaboradores (Chothia e Lesk, J.

Mol. Biol., 196: 901 a 917 (1987); e Chothia et al., Nature, 342: 877 a 883 (1989)) constatara que certas subporções dentro das CDRs de Kabat adotam conformações de cadeia principal de peptídeo quase idênticas, apesar de ter grande diversidade no nível de sequência de aminoácidos. Essas subporções foram designadas como “L1”, “L2” e “L3” ou “H1”, “H2” e “H3”, em que o “L” e o “H” designam as regiões de cadeia leve e cadeia pesada, respectivamente. Essas regiões podem ser denominadas como “CDRs de Chothia”, que têm limites que se sobrepõem com as CDRs de Kabat.

Outros limites que definem CDRs que sobrepõem com as CDRs de Kabat foram descritos por Padlan, FASEB J., 9: 133 a 139 (1995) e MacCallum, J. Mol. Biol., 262(5): 732 a 745 (1996). Ainda outras definições de limites de CDR podem não seguir estritamente um dos sistemas no presente documento, mas irão se sobrepor não obstante com as CDRs de Kabat, embora possam ser encurtadas ou prolongadas tendo em vista a previsão ou descobertas experimentais de que resíduos ou grupos de resíduos particulares ou mesmo CDRs inteiras não impactam significativamente a ligação ao antígeno. Os métodos usados no presente documento podem usar CDRs definidas de acordo com qualquer um desses sistemas, embora certas modalidades usem CDRs definidas por Kabat ou Chotia.

[0133]“Componente”, “componentes” ou “pelo menos um componente” se referem, em geral, a um anticorpo de captura, detecção ou conjugado, um calibrador, um controle, um painel de sensibilidade, um contentor, um tampão, um diluente, um sal, uma enzima, um cofator para uma enzima, um reagente de detecção, um reagente/solução de pré-tratamento, um substrato (por exemplo, como uma solução), uma solução de parada e similares que pode ser incluída em um kit para ensaio de uma amostra de teste, tal como uma amostra de urina, sangue total, soro ou plasma de paciente, de acordo com os métodos descritos no presente documento e outros métodos conhecidos na técnica. Alguns componentes podem ser em solução ou liofilizados para reconstituição para uso em um ensaio.

[0134]“Correlacionado a”, como usado no presente documento, se refere a comparado a.

[0135]“Varredura por TC”, como usado no presente documento, se refere a uma varredura por tomografia computadorizada (TC). Uma varredura por TC combina uma série de imagens de raios X tomadas a partir de ângulos diferentes e usa processamento de computador para criar fatias ou imagens de seção transversal, dos ossos, vasos sanguíneos e tecidos moles dentro do corpo. A varredura por TC pode usar TC por raios X, tomografia por emissão de pósitrons (PET), tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), tomografia computadorizada axial (CAT scan) ou tomografia auxiliada por computador. A varredura por TC pode ser uma varredura por TC convencional ou uma varredura por TC espiral/helicoidal.

Em uma varredura por TC convencional, a varredura é tomada fatia por fatia e, após cada fatia, a varredura para e se move para baixo até a próxima fatia, por exemplo, a partir do topo do abdômen até a pélvis. A varredura por TC convencional exige que pacientes segurem sua respiração para evitar artefato de movimento. A varredura por TC espiral/helicoidal é uma varredura contínua que é tomada de um modo espiral e é um processo muito mais rápido em que as imagens submetidas à varredura são contíguas.

[0136]“Derivado” de um anticorpo, conforme usado no presente documento, pode se referir a um anticorpo que tem uma ou mais modificações para sua sequência de aminoácidos quando comparado a um paciente parental ou genuíno e exibe uma estrutura de domínio modificada. O derivado pode ser ainda capaz de adotar a configuração de domínio típica encontrada em anticorpos nativos, bem como uma sequência de aminoácidos, que tem capacidade de se ligar a alvos (antígenos) com especificidade. Os exemplos típicos de derivados de anticorpo são anticorpos acoplados a outros polipeptídeos, domínios de anticorpo rearranjados ou fragmentos de anticorpos. O derivado também pode compreender pelo menos um composto adicional, por exemplo, um domínio de proteína, sendo que o dito domínio de proteína é ligado por ligações covalentes ou não covalentes. A ligação pode ser com base na fusão genética de acordo com os métodos conhecidos na técnica. O domínio adicional presente na proteína de fusão que compreende o anticorpo pode ser, de preferência, ligado por um ligante flexível, vantajosamente, um ligante de peptídeo, em que o dito ligante de peptídeo compreende vários aminoácidos ligados por peptídeo hidrofílicos de um comprimento suficiente para abranger a distância entre a extremidade C-terminal do domínio de proteína adicional e a extremidade N-terminal do anticorpo ou vice-versa. O anticorpo pode ser ligado a uma molécula efetora que tem uma conformação adequada para atividade biológica ou ligação seletiva a um suporte sólido, uma substância biologicamente ativa (por exemplo, uma citocina ou hormônio do crescimento), um agente químico, um peptídeo, uma proteína ou um fármaco, por exemplo.

[0137]“Determinado por um ensaio” é usado no presente documento para se referir à determinação de um nível de referência por meio de qualquer ensaio adequado. A determinação de um nível de referência pode ser, em algumas modalidades, alcançada por um ensaio do mesmo tipo que o ensaio que deve ser aplicado à amostra a partir do indivíduo (por exemplo, por um imunoensaio, ensaio de química clínica, um ensaio de detecção de molécula única, imunoprecipitação de proteína, imunoeletroforese, análise química, SDS-PAGE e análise Western blot ou imunocoloração de proteína, análise de eletroforese, um ensaio de proteína, um ensaio de ligação competitiva, um ensaio de proteína funcional ou métodos de cromatografia ou espectrometria, tais como cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou cromatografia líquida–espectrometria de massa (LC/MS)). A determinação de um nível de referência pode ser, em algumas modalidades, alcançada por um ensaio do mesmo tipo e sob as mesmas condições de ensaio que o ensaio que deve ser aplicado à amostra a partir do indivíduo. Conforme observado no presente documento, esta revelação fornece níveis de referência exemplificadores (por exemplo, calculados mediante a comparação de níveis de referência em pontos no tempo diferentes). Está dentro da habilidade comum na técnica de um elemento versado adaptar a revelação no presente documento para outros ensaios para obter níveis de referência específicos de ensaio para aqueles outros ensaios com base na descrição fornecida por esta revelação. Por exemplo, um conjunto de amostras de treinamento que compreende amostras obtidas a partir de indivíduos humanos conhecidos por terem sofrido uma lesão na cabeça (e mais particularmente, amostras obtidas a partir de indivíduos humanos conhecidos por terem sofrido uma (i) TBI branda; e/ou (ii) TBI moderada, severa ou moderada a severa e amostras obtidas a partir de indivíduos humanos conhecidos por não terem sofrido uma lesão na cabeça pode ser usado para obter níveis de referência específicos de ensaio. Será compreendido que um nível de referência “determinado por um ensaio” e que tem um nível citado de “sensibilidade” e/ou “especificidade” é usado no presente documento para se referir a um nível de referência que foi determinado para fornecer um método da sensibilidade e/ou especificidade citada quando o dito nível de referência é adotado nos métodos da revelação. Está dentro da habilidade comum na técnica de um elemento versado determinar a sensibilidade e especificidade associada a um determinado nível de referência nos métodos da revelação, por exemplo por meio de análise estatística repetida de dados de ensaio com o uso de uma pluralidade de níveis de referência possíveis diferentes.

[0138]Praticamente, mediante a discriminação entre um indivíduo como tendo uma lesão traumática cerebral ou não tendo uma lesão traumática cerebral ou um indivíduo como tendo uma lesão traumática cerebral branda versus moderada, severa ou moderada a severa, o versado na técnica irá equilibrar o efeito de elevação de um corte em sensibilidade e especificidade. A elevação ou redução de um corte terá um impacto bem definido e previsível em sensibilidade e especificidade e outras medições estatísticas padrão. É fato bem conhecido que a elevação de um corte irá aperfeiçoar a especificidade mas é propensa a piorar a sensibilidade (proporção daquela com doença com resultado positivo). Em contrapartida, a redução de um corte irá aperfeiçoar a sensibilidade mas irá piorar a especificidade (proporção daquela sem doença com resultado negativo). As ramificações para detectar lesão traumática cerebral ou determinar uma lesão traumática cerebral branda versus moderada, severa ou moderada a severa ficarão prontamente evidente aos versados na técnica. Na discriminação de se um indivíduo tem ou não teve uma lesão traumática cerebral ou uma lesão traumática cerebral branda versus a moderada, severa ou moderada a severa, quanto maior o corte, a especificidade se aperfeiçoa à medida que mais verdadeiros negativos (isto é, indivíduos que não têm uma lesão traumática cerebral, que não têm uma lesão traumática cerebral branda, que não têm uma lesão traumática cerebral moderada, que não tem uma lesão traumática cerebral severa ou que não têm uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa) são distinguidos daqueles que têm uma lesão traumática cerebral, uma lesão traumática cerebral branda, uma lesão traumática cerebral moderada, uma lesão traumática cerebral severa ou uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa. Mas ao mesmo tempo, a elevação do corte diminui o número de casos identificados como positivos, bem como o número de verdadeiros positivos, assim a sensibilidade precisa diminuir. De modo contrário, quanto menor o corte, a sensibilidade se aperfeiçoa à medida que mais verdadeiros positivos (isto é, indivíduos que têm uma lesão traumática cerebral, que têm uma lesão traumática cerebral branda, que tem uma lesão traumática cerebral moderada, que têm uma lesão traumática cerebral severa ou que têm uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa) são distinguidos daqueles que não têm uma lesão traumática cerebral, uma lesão traumática cerebral branda, uma lesão traumática cerebral moderada, uma lesão traumática cerebral severa ou uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa. Mas ao mesmo tempo, a redução do corte aumenta o número de casos identificados como positivos em geral, bem como o número de falsos positivos, assim, a especificidade precisa diminuir.

[0139]Em geral, um valor de sensibilidade alto auxilia um versado a descartar doença ou condição (tal como uma lesão traumática cerebral, lesão traumática cerebral branda, lesão traumática cerebral moderada, lesão traumática cerebral severa ou lesão traumática cerebral moderada a severa) e um valor de especificidade alto auxilia um versado a confirmar a doença ou condição. Se um versado deseja descartar ou confirmar a doença depende de quais consequências existem para o paciente para cada tipo de erro. Consequentemente, um indivíduo não pode conhecer ou prever o equilíbrio preciso empregado para derivar um corte de teste sem a revelação completa das informações subjacentes sobre como o valor foi selecionado. O equilíbrio da sensibilidade contra especificidade e outros fatores irão se diferir em uma base de caso a caso. Isto se deve ao fato de que às vezes é preferencial fornecer valores de corte alternativos (por exemplo, referência), assim um médico ou profissional pode escolher.

[0140]“Fármacos de abuso” é usado no presente documento para se referir a uma ou mais substâncias aditivas (tais como um fármaco) tomadas por razões não médicas (tais como, por exemplo, efeitos recreativos e/ou que alteram a mente). A dependência, uso ou indulgência excessiva de tais fármacos de abuso é muitas vezes mencionada como “abuso de substância”. Os exemplos de fármacos de abuso incluem álcool, barbitúricos, benzodiazepinas, cânhamo, cocaína, alucinógenos (tais como cetamina, mescalina (peiote), PCP, psilocibino, DMT e/ou LSD), metaqualona, opioides, anfetaminas (incluindo metanfetaminas), esteroides anabólicos, inalantes (ou seja, substâncias que contêm substâncias voláteis que contêm propriedades psicoativas tais como, por exemplo, nitritos, tintas spray, fluidos de limpeza, marcadores, colas, etc.) e combinações dos mesmos.

[0141]“Anticorpo específico duplo” é usado no presente documento para se referir a um anticorpo de comprimento total que pode ligar dois antígenos diferentes (ou epítopos) em cada um de seus dois braços de ligação (um par de HC/LC) (consultar a publicação PCT n° WO 02/02773). Consequentemente, uma proteína de ligação específica dupla tem dois braços de ligação de antígeno idênticos, com especificidade idêntica e sequências CDR idênticas e é bivalente para cada antígeno ao qual a mesma se liga.

[0142]“Domínio variável duplo” é usado no presente documento para se referir a dois ou mais sítios de ligação a antígeno em uma proteína de ligação, que podem ser divalentes (dois sítios de ligação a antígeno), tetravalentes (quatro sítios de ligação a antígeno) ou proteínas de ligação multivalentes. Os DVDs podem ser monoespecíficos, isto é, têm capacidade para ligar um antígeno (ou um epítopo específico) ou multiespecífico, isto é, têm capacidade para ligar dois ou mais antígenos (isto é, dois ou mais epítopos da mesma molécula de antígeno alvo ou dois ou mais epítopos de antígenos-alvo diferentes). Uma proteína de ligação de DVD preferencial compreende dois polipeptídeos de DVD de cadeia pesada e dois polipeptídeos de DVD de cadeia leve e é mencionada como uma “imunoglobulina de DVD” ou “DVD-Ig.” Tal proteína de ligação de DVD-Ig é, dessa forma, tetramérica e reminiscente de uma molécula de IgG, mas fornece mais sítios de ligação a antígeno do que uma molécula de IgG. Dessa forma, cada metade de uma molécula de DVD- Ig tetramérica é reminiscente de uma metade de uma molécula de IgG e compreende um polipeptídeo de DVD de cadeia pesada e um polipeptídeo de DVD de cadeia leve, mas diferente de um par de cadeias pesada e leve de uma molécula de IgG que fornece um único domínio de ligação a antígeno, um par de cadeias pesada e leve de uma DVD-Ig fornece dois ou mais sítios de ligação a antígeno.

[0143]Cada sítio de ligação a antígeno de uma proteína de ligação de DVD- Ig pode ser derivado a partir de um anticorpo monoclonal doador (“parental”) e, dessa forma, compreende um domínio variável de cadeia pesada (VH) e um domínio variável de cadeia leve (VL) com um total de seis CDRs envolvidas na ligação a antígeno por sítio de ligação a antígeno. Consequentemente, uma proteína de ligação de DVD-Ig que liga dois epítopos diferentes (isto é, dois epítopos diferentes de duas moléculas de antígeno diferentes ou dois epítopos da mesma molécula de antígeno) compreende um sítio de ligação a antígeno derivado a partir de um primeiro anticorpo monoclonal parental e um sítio de ligação a antígeno de um segundo anticorpo monoclonal parental.

[0144]Uma descrição do projeto, expressão e caracterização de moléculas de ligação de DVD-Ig é fornecida na publicação PCT nº WO 2007/024715, patente nº U.S. 7.612.181 e Wu et al., Nature Biotech., 25: 1.290 a 1.297 (2007). Um exemplo preferencial de tais moléculas de DVD-Ig compreende uma cadeia pesada que compreende a fórmula estrutural VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, em que VD1 é um primeiro domínio variável de cadeia pesada, VD2 é um segundo domínio variável de cadeia pesada, C é um domínio constante de cadeia pesada, X1 é um ligante com a condição de que não é CH1, X2 é uma região Fc e n é 0 ou 1, mas, de preferência, 1; e uma cadeia leve que compreende a fórmula estrutural VD1-(X1)n-VD2-C-(X2)n, em que VD1 é um primeiro domínio variável de cadeia leve, VD2 é um segundo domínio variável de cadeia leve, C é um domínio constante de cadeia leve, X1 é um ligante com a condição de que não é CH1 e X2 não compreende uma região Fc; e n é 0 ou 1, mas, de preferência, 1. Tal DVD-Ig pode compreender duas cadeias pesadas e duas cadeias leves, em que cada cadeia compreende domínios variáveis ligados em tandem sem uma região constante interveniente entre regiões variáveis, em que uma cadeia pesada e uma cadeia leve se associam para formar sítios de ligação a antígeno funcionais em tandem e um par de cadeias pesada e leve podem se associar com um outro par de cadeias pesada e leve para formar uma proteína de ligação tetramérica com quatro sítios de ligação a antígeno funcionais. Em um outro exemplo, uma molécula de DVD-Ig pode compreender cadeias pesada e leve que compreendem, cada uma, três domínios variáveis (VD1, VD2, VD3) ligados em tandem sem uma região constante interveniente entre domínios variáveis, em que um par de cadeias pesada e leve pode se associar para formar três sítios de ligação a antígeno e em que um par de cadeias pesada e leve pode se associar com um outro par de cadeias pesada e leve para formar uma proteína de ligação tetramérica com seis sítios de ligação a antígeno.

[0145]Em uma modalidade preferencial, uma proteína de ligação de DVD-Ig não apenas liga as mesmas moléculas-alvo ligadas por seus anticorpos monoclonais parentais, mas também possui uma ou mais propriedades desejáveis de um ou mais dentre seus anticorpos monoclonais parentais. De preferência, tal propriedade adicional é um parâmetro de anticorpo de um ou mais dentre os anticorpos monoclonais parentais. Os parâmetros de anticorpo que podem ser contribuídos para uma proteína de ligação de DVD-Ig a partir de um ou mais dentre seus anticorpos monoclonais parentais incluem, porém sem limitação, especificidade de antígeno, afinidade de antígeno, potência, função biológica, reconhecimento de epítopo, estabilidade de proteína, solubilidade de proteína, eficiência de produção, imunogenicidade, farmacocinética, biodisponibilidade, reatividade cruzada de tecido e ligação de antígeno ortólogo.

[0146]Uma proteína de ligação de DVD-Ig liga pelo menos um epítopo de troponina cardíaca I e/ou UCH-L1 e/ou GFAP. Os exemplos não limitadores de uma proteína de ligação de DVD-Ig incluem uma proteína de ligação de DVD-Ig que liga um ou mais epítopos de troponina cardíaca I e/ou UCH-L1 e/ou GFAP, uma proteína de ligação de DVD-Ig que liga um epítopo de uma troponina cardíaca I e/ou UCH-L1 e/ou GFAP de ser humano e um epítopo de troponina cardíaca I e/ou UCH-L1 e/ou GFAP de uma outra espécie (por exemplo, camundongo) e uma proteína de ligação de DVD-Ig que liga um epítopo de uma troponina cardíaca I e/ou UCH-L1 e/ou GFAP de ser humano e um epítopo de uma outra molécula alvo.

[0147]“Faixa dinâmica”, conforme usado no presente documento, se refere à faixa na qual uma leitura de ensaio é proporcional à quantidade de molécula alvo ou analito na amostra que é analisada.

[0148]“Epítopo”, “epítopos” ou “epítopos de interesse” se refere a um sítio (ou sítios) em qualquer molécula que é reconhecido e pode se ligar a um sítio (ou sítio) complementar em seu parceiro de ligação específica. A molécula e parceiro de ligação específica são parte de um par de ligação específica. Por exemplo, um epítopo pode ser em um polipeptídeo, uma proteína, um hapteno, um antígeno de carboidrato (tal como, porém sem limitação, glicolipídios, glicoproteínas ou lipopolissacarídeos) ou um polissacarídeo. Seu parceiro de ligação específica pode ser, porém sem limitação, um anticorpo.

[0149]“Fragmento de ligação a antígeno de fragmento” ou “fragmento Fab”, como usado no presente documento, se refere a um fragmento de um anticorpo que se liga a antígenos e que contém um sítio de ligação a antígeno, uma cadeia leve completa e parte de uma cadeia pesada. Fab é um fragmento monovalente que consiste nos domínios VL, VH, CL e CH1. Fab é composto de um domínio constante e um domínio variável de cada uma dentre a cadeia pesada e a cadeia leve. O domínio variável contém o parátopo (o sítio de ligação a antígeno), que compreende um conjunto de regiões determinantes de complementaridade, na extremidade terminal amino do monômero. Cada braço do Y, dessa forma, liga um epítopo no antígeno. Os fragmentos Fab podem ser gerados tal como foi descrito na técnica, por exemplo, com o uso da enzima papaína, que pode ser usada para clivar um monômero de imunoglobulina em dois fragmentos Fab e um fragmento Fc ou podem ser produzidos por meios recombinantes.

[0150]“Fragmento F(ab')2”, como usado no presente documento, se refere a anticorpos gerados por meio da digestão de pepsina de anticorpos IgG inteiros para remover a maior parte da região Fc, enquanto deixa intacta parte da região de dobradiça. Os fragmentos F(ab')2 têm duas porções F(ab) de ligação a antígeno ligadas em conjunto por ligações de dissulfeto e, portanto, são divalentes com um peso molecular de cerca de 110 kDa. Os fragmentos de anticorpo divalentes (fragmentos F(ab')2) são menores do que as moléculas de IgG inteiras e possibilitam uma melhor penetração no tecido, facilitando, assim, o melhor reconhecimento de antígeno em imunoistoquímica. O uso de fragmentos F(ab')2 evita também a ligação não específica a receptor Fc em células vivas ou à proteína A/G. Os fragmentos F(ab')2 podem tanto ligar como precipitar antígenos.

[0151]“Framework” (FR) ou “sequência framework”, como usado no presente documento, pode significar as sequências restantes de uma região variável menos as CDRs. Devido ao fato de que a definição exata de uma sequência de CDR pode ser determinada por meio de diferentes sistemas (por exemplo, consultar acima), o significado de uma sequência framework está sujeito a interpretações correspondentemente diferentes. As seis CDRs (CDR-L1, L2 e L3 de cadeia leve e CDR-H1, H2 e H3 de cadeia pesada) dividem também as regiões framework na cadeia leve e na cadeia pesada em quatro subregiões (FR1, FR2, FR3 e FR4) em cada cadeia, na qual CDR1 está posicionada entre FR1 e FR2, CDR2 entre FR2 e

FR3, e CDR3 entre FR3 e FR4. Sem especificar as subregiões particulares como FR1, FR2, FR3 ou FR4, uma região framework, conforme denominado por outros, representa as FRs combinadas dentro da região variável de uma única cadeia de imunoglobulina de ocorrência natural. Conforme usado no presente documento, uma FR representa uma das quatro subregiões e FRs representam duas ou mais das quatro subregiões que constituem uma região framework.

[0152]São conhecidas na técnica as sequências FR de cadeia leve e cadeia pesada humana que podem ser usadas como sequências framework “aceitantes” de cadeia pesada e cadeia leve (ou simplesmente, sequências “aceitantes”) para humanizar um anticorpo não humano com o uso de técnicas conhecidas na técnica.

Em uma modalidade, as sequências aceitantes de cadeia pesada e cadeia leve humanas são selecionadas a partir das sequências framework listadas em bancos de dados disponíveis publicamente tais como V-base (protocolo HTTP://vbase.mrc- cpe.cam.ac.uk/) ou no sistema de informações internacional ImMunoGeneTics® (IMGT®) (protocolo HTTP://imgt.cines.fr/texts/IMGTrepertoire/LocusGenes/).

[0153]“Sítio de ligação a antígeno funcional”, como usado no presente documento, pode significar um sítio em uma proteína de ligação (por exemplo, um anticorpo) que tem capacidade para ligar um antígeno alvo. A afinidade de ligação a antígeno do sítio de ligação a antígeno pode não ser tão forte quanto a proteína de ligação parental, por exemplo, anticorpo parental, a partir da qual o sítio de ligação a antígeno é derivado, mas a capacidade de se ligar ao antígeno precisa ser mensurável com o uso de qualquer um dentre uma variedade de métodos conhecidos para avaliar a proteína, por exemplo, anticorpo, ligação a um antígeno. Ademais, a afinidade de ligação a antígeno de cada um dos sítios de ligação a antígeno de uma proteína multivalente, por exemplo, anticorpo multivalente, no presente documento, não precisa ser quantitativamente igual.

[0154]“GFAP” é usado no presente documento para descrever proteína glial fibrilar ácida. GFAP é uma proteína que é codificada pelo gene GFAP em seres humanos e que pode ser produzida (por exemplo, por meios recombinantes, em outras espécies).

[0155]“Situação de GFAP” pode significar o nível ou quantidade de GFAP em um ponto no tempo (tal como com uma medição única de GFAP), o nível ou quantidade de GFAP associada ao monitoramento (tal como com um teste de repetição em um indivíduo para identificar um aumento ou diminuição na quantidade de GFAP), o nível ou quantidade de GFAP associada ao tratamento para lesão traumática cerebral (se uma lesão cerebral primária e/ou uma lesão cerebral secundária) ou combinações dos mesmos.

[0156]“Escala de coma de Glasgow” ou “GCS”, como usado no presente documento, se refere a uma escala de 15 pontos para estimar e categorizar os resultados de lesão cerebral com base na capacidade social em geral ou dependência de outros. O teste mede a resposta motora, resposta verbal e resposta de abertura ocular com esses valores: I. Resposta motora (6 – Obedece comandos completamente; 5 – Localiza estímulos nocivos; 4 – Abstém-se de estímulos nocivos; 3 – Flexão anormal, isto é, postura de decorticação; 2 – Resposta extensora, isto é, postura de descerebração; e 1 – Sem resposta); II. Resposta verbal (5 – Alerta e Orientado; 4 – Fala confuso, ainda coerente; 3 – Palavras inadequadas e frases misturadas consistindo em palavras; 2 – Sons incompreensíveis; e 1 – Sem sons); e III. Abertura ocular (4 – Abertura ocular espontânea; 3 – Olhos abrem para fala; 2 – Olhos abrem para dor; e 1 – Sem abertura ocular). A pontuação final é determinada mediante a adição dos valores de I+II+III. A pontuação final pode ser categorizada em quatro níveis possíveis para sobrevivência, com um número menor que indica lesão mais severa e um prognóstico menos satisfatório: Branda (13-15); Incapacidade moderada (9-12) (Perda de consciência mais que 30 minutos; Deficiências cognitivas ou físicas que podem ou não resolver: e Benefício a partir da reabilitação); Incapacidade severa (3-8) (Coma: estado inconsciente. Sem resposta significativa, sem atividades voluntárias); e Estado vegetativo (Menos que 3) (Ciclos de sono- vigília; Excitação, mas sem interação com o ambiente; Sem resposta localizada à dor). A lesão cerebral moderada é definida como uma lesão cerebral que resulta em uma perda de consciência a partir de 20 minutos a 6 horas e uma escala de coma de Glasgow de 9 a 12. A lesão cerebral severa é definida como uma lesão cerebral que resulta em uma perda de consciência de mais de 6 horas e uma escala de coma de Glasgow de 3 a 8.

[0157]“Escala de resultado de Glasgow”, como usado no presente documento, se refere a uma escala global para resultado funcional que classifica a situação do paciente em uma dentre cinco categorias: Morto, Estado vegetativo, Incapacidade severa, Incapacidade moderada ou Boa recuperação.

[0158]“Escala de resultado de Glasgow estendida” ou “GOSE”, como usado de forma intercambiável no presente documento, fornece categorização mais detalhada em oito categorias mediante a subdivisão das categorias de incapacidade severa, incapacidade moderada e boa recuperação em uma categoria inferior e superior conforme mostrado na Tabela 1.

Tabela 1 1 Morte D Condição de inconsciência com apenas 2 Estado vegetativo VX respostas de reflexo, mas com períodos de abertura ocular espontânea Incapacidade severa Paciente que é dependente de suporte 3 SD - inferior diário para incapacidade mental ou física, normalmente uma combinação de ambas. Se o paciente puder ser deixado Incapacidade severa sozinho por mais de 8 horas na 4 SD + superior residência, consiste em nível superior de SD, se não, então consiste em nível baixo de SD. Incapacidade Pacientes têm alguma incapacidade tal 5 MD - como afasia, hemiparesia ou epilepsia moderada inferior e/ou déficits de memória ou personalidade, mas têm capacidade de cuidar de si próprios. São independentes na residência, mas Incapacidade dependentes externamente. Se tiverem 6 MD + moderada superior capacidade de retornar ao trabalho mesmo com regime especial, consiste no nível superior de MD, se não, então consiste no nível baixo de MD.

Retomada da vida normal com a Boa recuperação capacidade de trabalhar mesmo que a 7 GR - inferior situação pré-lesão não fosse alcançada. Alguns pacientes têm déficits psicológicos ou neurológicos menores. Se esses déficits não forem Boa recuperação 8 GR + incapacitantes, então, consiste no nível superior superior de GR, se incapacitantes, então, consiste no nível inferior de GR.

[0159]“Anticorpo humanizado” é usado no presente documento para descrever um anticorpo que compreende sequências de região variável de cadeia leve e pesada a partir de uma espécie não humana (por exemplo, um camundongo) mas em que pelo menos uma porção da sequência de VH e/ou VL tenha sido alterada para ser mais “semelhante a humano”, isto é, mais similar às sequências variáveis de linhagem germinativa humana. Um “anticorpo humanizado” é um anticorpo ou uma variante, derivado, análogo ou fragmento do mesmo que se liga imunoespecificamente a um antígeno de interesse e que compreende uma região framework (FR) que tem substancialmente a sequência de aminoácidos de um anticorpo humano e uma região determinante de complementaridade (CDR) que tem substancialmente a sequência de aminoácidos de um anticorpo não humano. Como usado no presente documento, o termo “substancialmente” no contexto de uma CDR se refere a uma CDR que tem uma sequência de aminoácidos pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos de uma CDR de anticorpo não humano.

Um anticorpo humanizado compreende substancialmente todos ou pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis (Fab, Fab´, F(ab´)2, FabC, Fv) nos quais todas ou substancialmente todas as regiões CDR correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana (isto é, anticorpo doador) e todas ou substancialmente todas as regiões framework são aquelas de uma sequência de consenso de imunoglobulina humana. Em uma modalidade, um anticorpo humanizado compreende também pelo menos uma porção de uma região constante (Fc) de imunoglobulina, tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana. Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado contém a cadeia leve bem como pelo menos o domínio variável de uma cadeia pesada. O anticorpo pode também incluir as regiões CH1, dobradiça, CH2, CH3 e CH4 da cadeia pesada. Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado contém apenas uma cadeia leve humanizada. Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado contém apenas uma cadeia pesada humanizada. Em modalidades específicas, um anticorpo humanizado contém apenas um domínio variável humanizado de uma cadeia leve e/ou cadeia pesada humanizada.

[0160]Um anticorpo humanizado pode ser selecionado a partir de qualquer classe de imunoglobulinas, incluindo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE e qualquer isotipo, incluindo, sem limitação, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Um anticorpo humanizado pode compreender sequências a partir de mais de uma classe ou isotipo e domínios constantes particulares podem ser selecionados para otimizar as funções efetoras desejadas com o uso de técnicas bem conhecidas na técnica.

[0161]As regiões framework e CDRs de um anticorpo humanizado não precisam corresponder precisamente às sequências parentais, por exemplo, a CDR do anticorpo doador ou a framework de consenso pode ser mutagenizado por meio de substituição, inserção e/ou deleção de pelo menos um resíduo de aminoácido de modo que o resíduo de CDR ou framework no sítio não corresponda ao anticorpo doador ou à framework de consenso. Em uma modalidade preferencial, tais mutações, entretanto, não serão extensivas. Normalmente, pelo menos 80%, de preferência, pelo menos 85%, com mais preferência, pelo menos 90% e com a máxima preferência pelo menos 95% dos resíduos de anticorpo humanizado corresponderão àqueles das sequências de FR e CDR parentais. Como usado aqui, o termo "framework de consenso" se refere à região framework na sequência de imunoglobulina de consenso. Como usado aqui, o termo “sequência de imunoglobulina de consenso” se refere à sequência formada a partir dos aminoácidos (ou nucleotídeos) que ocorrem mais frequentemente em uma família de sequências de imunoglobulina relacionadas (consultar, por exemplo, Winnaker, From Genes to

Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Alemanha 1987)). Uma “sequência de imunoglobulina de consenso” pode compreender, dessa forma, um “"região (ou regiões) framework de consenso” e/ou uma “CDR(s) de consenso”. Em uma família de imunoglobulinas, cada posição na sequência de consenso é ocupada pelo aminoácido que ocorre mais frequentemente naquela posição na família. Se dois aminoácidos ocorrerem de forma igualmente frequente, qualquer um pode ser incluído na sequência de consenso.

[0162]“Hiperagudo”, como usado no presente documento, se refere a extremamente agudo ou dentro de um curso de cerca de 2 horas da lesão ou suspeita de lesão na cabeça. Hiperagudo está dentro de um estágio inicial, por exemplo, um biomarcador hiperagudo é um biomarcador precoce, tal como cTnI, ubiquitina carbóxi- terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas, que pode ser usado para avaliar a lesão ou suspeita de lesão dentro do estágio inicial de cerca de 2 horas da lesão ou suspeita de lesão.

[0163]“Idêntico” ou “identidade”, conforme usado no presente documento no contexto de duas ou mais sequências de polinucleotídeos ou polipeptídeos, pode significar que as sequências têm uma porcentagem especificada de resíduos que são os mesmos em uma região especificada. A porcentagem pode ser calculada alinhando de modo ideal as duas sequências, comparando as duas sequências sobre a região especificada, determinando o número de posições nas quais o resíduo idêntico ocorre em ambas as sequências para render o número de posições correspondentes, dividindo o número de posições correspondentes pelo número total de posições na região especificada, e multiplicando o resultado por 100 para render a porcentagem de identidade de sequência. Em casos em que as duas sequências são de comprimentos diferentes ou o alinhamento produz uma ou mais extremidades escalonadas e a região especificada de comparação inclui apenas uma única sequência, os resíduos da única sequência estão incluídos no denominador, mas não no numerador do cálculo.

[0164]“Lesão na cabeça” ou “lesão de cabeça”, como usado de forma intercambiável no presente documento, se refere a qualquer trauma no couro cabeludo, crânio ou cérebro. Tais lesões podem incluir qualquer batida mínima no crânio ou pode ser uma lesão cerebral grave. Tais lesões incluem lesões primárias para o cérebro e/ou secundárias para o cérebro. As lesões cerebrais primárias ocorrem durante a agressão inicial e resultam a partir do deslocamento das estruturas físicas do cérebro. Mais especificamente, uma lesão cerebral primária é o dano físico para o parênquima (tecido, vasos) que ocorre durante o evento traumático, resultando em cisalhamento e compressão do tecido cerebral circundante. As lesões cerebrais secundárias ocorrem subsequente à lesão primária e podem envolver um uma gama de processos celulares. Mais especificamente, uma lesão cerebral secundária se refere às mudanças que evoluem durante um período de tempo (a partir de horas a dias) após a lesão cerebral primária. Isto inclui uma cascata inteira de mudanças celulares, químicas, de tecido ou vaso sanguíneo no cérebro que contribui para a destruição adicional do tecido cerebral.

[0165]Uma lesão na cabeça pode ser fechada ou aberta (penetrante). Uma lesão na cabeça fechada se refere a um trauma no couro cabeludo, crânio ou cérebro em que não há penetração do crânio por um objeto de impacto. Uma lesão na cabeça aberta se refere a um trauma no couro cabeludo, crânio ou cérebro em que há penetração do crânio por um objeto de impacto. Uma lesão na cabeça pode ser causada por agitação física de uma pessoa, por impacto brusco por uma força mecânica externa ou outra força que resulta em um trauma de cabeça fechado ou aberto (por exemplo, acidente de veículo tal como com um automóvel, avião, trem, etc.; golpe na cabeça tal como com uma taco de beisebol ou a partir de uma arma de fogo), um acidente vascular cerebral (por exemplo, derrame), uma ou mais quedas (por exemplo, como em esportes ou outras atividades), explosões ou detonações (coletivamente, “lesões por explosão”) e por outros tipos de trauma por força brusca.

Alternativamente, uma lesão na cabeça pode ser causada pela ingestão e/ou exposição a um produto químico, toxina ou uma combinação de um produto químico e toxina. Os exemplos de tais produtos químicos e/ou toxinas incluem incêndios,

bolores, asbestos, pesticidas e inseticidas, solventes orgânicos, tintas, colas, gases (tais como monóxido de carbono, sulfeto de hidrogênio e cianeto), metais orgânicos (tais como metil mercúrio, tetraetil chumbo e estanho orgânico) e/ou um ou mais fármacos de abuso. Alternativamente, uma lesão na cabeça pode ser causada como resultado de um indivíduo que sofre a partir de uma doença autoimune, um distúrbio metabólico, um tumor cerebral, um ou mais vírus, meningite, hidrocefalia, hipoxia ou qualquer combinação dos mesmos. Em alguns casos, não é possível ter certeza de se qualquer tal evento ou lesão ocorreu ou aconteceu. Por exemplo, pode não existir histórico sobre um paciente ou indivíduo, o indivíduo pode não ter capacidade de falar, o indivíduo pode estar ciente de quais eventos foi exposto, etc. Tais circunstâncias são descritas no presente documento como o indivíduo “pode ter sofrido uma lesão na cabeça”. Em certas modalidades no presente documento, a lesão na cabeça fechada não inclui e especificamente exclui um acidente vascular cerebral, tal como derrame.

[0166]“Polinucleotídeo isolado”, como usado no presente documento, pode significar um polinucleotídeo (por exemplo, de origem genômica, cDNA ou sintética, ou uma combinação das mesmas) que, em virtude de sua origem, o polinucleotídeo isolado não está associado a todo ou uma porção de um polinucleotídeo com o qual o “polinucleotídeo isolado” é encontrado na natureza; está ligado de maneira funcional a um polinucleotídeo que não está ligado na natureza; ou não ocorre na natureza como parte de uma sequência maior.

[0167]“Identificação” e “identificação detectável”, como usado no presente documento, se refere a uma porção química fixada a um anticorpo ou um analito para tornar a reação entre o anticorpo e o analito detectáveis e o anticorpo ou analito assim identificado é mencionado como “identificado de forma detectável”. Uma identificação pode produzir um sinal que é detectável por meio visual ou instrumental. Diversas identificações incluem substâncias de produção de sinal, tais como cromogênios, compostos fluorescentes, compostos quemiluminescentes, compostos radioativos e similares. Os exemplos representativos de identificações incluem porções químicas que produzem luz, por exemplo, compostos de acridínio e porções químicas que produzem fluorescência, por exemplo, fluoresceína. Outras identificações são descritas no presente documento. Nesse sentido, a porção química, por si mesma, pode não ser detectável mas pode se tornar detectável mediante a reação com mais outra porção química. O uso do termo “identificado de forma detectável” destina-se a abranger tal identificação.

[0168]Qualquer identificação detectável adequada conforme é conhecido na técnica pode ser usada. Por exemplo, a identificação detectável pode ser uma identificação radioativa (tal como 3H, 14C, 32P, 33P, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I, 177Lu, 166Ho e 153Sm), uma identificação enzimática (tal como peroxidase de rábano silvestre, peroxidase alcalina, glicose 6-fosfato desidrogenase e similares), uma identificação quemiluminescente (tal como ésteres acridínio, tioésteres ou sulfonamidas; luminol, isoluminol, ésteres de fenantridínio e similares), uma identificação fluorescente (tal como fluoresceína (por exemplo, 5-fluoresceína, 6- carboxifluoresceína, 3’6-carboxifluoresceína, 5(6)-carboxifluoresceína, 6-hexacloro- fluoresceína, 6-tetraclorofluoresceína, isotiocianato de fluoresceína e similares)), rodamina, ficobiliproteínas, R-ficoeritrina, pontos quânticos (por exemplo, selenieto de cádmio capeado com sulfeto de zinco), uma identificação termométrica ou uma identificação de reação em cadeia de imuno-polimerase. Uma introdução a identificações, procedimentos de identificação e detecção de identificações é encontrada em Polak e Van Noorden, Introduction to Immunocytochemistry, 2a Edição, Springer Verlag, N.Y. (1997) e em Haugland, Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals (1996), que é um manual e catálogo combinado publicado por Molecular Probes, Inc., Eugene, Oregon. Uma identificação fluorescente pode ser usada em FPIA (consultar, por exemplo, a patente n° U.S. 5.593.896, 5.573.904,

5.496.925, 5.359.093 e 5.352.803, que estão aqui incorporadas, por referência em suas totalidades). Um composto de acridínio pode ser usado como uma identificação detectável em um ensaio quemiluminescente homogêneo (consultar, por exemplo, Adamczyk et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 16: 1.324 a 1.328 (2006); Adamczyk et al.,

Bioorg. Med. Chem. Lett. 4: 2.313 a 2.317 (2004); Adamczyk et al., Biorg. Med. Chem.

Lett. 14: 3.917 a 3.921 (2004); e Adamczyk et al., Org. Lett. 5: 3.779 a 3.782 (2003)).

[0169]Em um aspecto, o composto de acridínio é um acridínio-9-carboxamida.

Os métodos para preparar acridínio 9-carboxamidas são descritos em Mattingly, J.

Biolumin. Chemilumin. 6: 107 a 114 (1991); Adamczyk et al., J. Org. Chem. 63: 5.636 a 5.639 (1998); Adamczyk et al., Tetrahedron 55: 10.899 a 10.914 (1999); Adamczyk et al., Org. Lett. 1: 779 a 781 (1999); Adamczyk et al., Bioconjugate Chem. 11: 714 a 724 (2000); Mattingly et al., In Luminescence Biotechnology: Instruments and Applications; Dyke, K. V. Ed.; CRC Press: Boca Raton, páginas 77 a 105 (2002); Adamczyk et al., Org. Lett. 5: 3.779 a 3.782 (2003); e patente n° U.S. 5.468.646,

5.543.524 e 5.783.699 (cada um dos quais está incorporado ao presente documento a título de referência, em sua totalidade, para seus ensinamentos relacionados aos mesmos).

[0170]Um outro exemplo de um composto de acridínio é um éster arílico de acridínio-9-carboxilato. Um exemplo de um éster arílico de acridínio-9-carboxilato da fórmula II é 10-metil-9-(fenoxicarbonil)acridínio fluorosulfonato (disponível junto à Cayman Chemical, Ann Arbor, MI). Os métodos para preparar éster arílico de acridínio 9-carboxilato são descritos em McCapra et al., Photochem. Photobiol. 4:

1.111 a 1.121 (1965); Razavi et al., Luminescence 15: 245 a 249 (2000); Razavi et al., Luminescence 15: 239 a 244 (2000); e patente n° U.S. 5.241.070 (cada um dos quais está incorporado ao presente documento a título de referência, em sua totalidade, para seus ensinamentos relacionados aos mesmos). Tais ésteres arílicos de acridínio-9-carboxilato são indicadores quemiluminescentes eficazes para peróxido de hidrogênio produzido na oxidação de um analito por pelo menos uma oxidase em termos da intensidade do sinal e/ou da rapidez do sinal. O curso da emissão quemiluminescente para o éster arílico de acridínio-9-carboxilato é concluído rapidamente, isto é, em 1 segundo, enquanto que a emissão quemiluminescente de acridínio-9-carboxamida se estende além de 2 segundos. O éster arílico de acridínio- 9-carboxilato, no entanto, perde suas propriedades quemiluminescentes na presença de proteína. Portanto, seu uso exige a ausência de proteína durante a detecção e geração de sinal. Os métodos para separar ou remover proteínas na amostra são bem conhecidos pelos versados na técnica e incluem, mas não se limitam a, ultrafiltração, extração, precipitação, diálise, cromatografia e/ou digestão (consultar, por exemplo, Wells, High Throughput Bioanalytical Sample Preparation. Methods and Automation Strategies, Elsevier (2003)). A quantidade de proteína removida ou separada da amostra de teste pode ser de cerca de 40%, cerca de 45%, cerca de 50%, cerca de 55%, cerca de 60%, cerca de 65%, cerca de 70%, cerca de 75%, cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90% ou cerca de 95%. Os detalhes adicionais relacionados a éster arílico de acridínio-9-carboxilato e seu uso são apresentados no pedido de patente n° U.S. 11/697.835, depositado em 9 de abril de 2007. Os ésteres de acridínio-9-carboxilato podem ser dissolvidos em qualquer solvente adequado, tal como N,N-dimetilformamida anidra desgaseificada (DMF) ou colato de sódio aquoso.

[0171]“Sequência de ligação” ou “sequência de peptídeos de ligação” se refere a uma sequência de polipeptídeos natural ou artificial que é conectada a uma ou mais sequências de polipeptídeos de interesse (por exemplo, comprimento total, fragmentos, etc.). O termo “conectado” se refere à união da sequência de ligação à sequência de polipeptídeos de interesse. Tais sequências de polipeptídeos são, de preferência, unidas por uma ou mais ligações peptídicas. As sequências de ligação podem ter um comprimento a partir de cerca de 4 a cerca de 50 aminoácidos. De preferência, o comprimento da sequência de ligação é a partir de cerca de 6 a cerca de 30 aminoácidos. As sequências de ligação naturais podem ser modificadas por substituições, adições ou deleções de aminoácido para criar sequências de ligação artificiais. As sequências de ligação podem ser usadas para muitos propósitos, incluindo em Fabs recombinantes. As sequências de ligação exemplificadoras incluem, porém sem limitação: (i) Etiquetas de histidina (His), tais como um etiqueta 6X His, que tem uma sequência de aminoácidos de HHHHHH (SEQ ID NO:4), são úteis como sequências de ligação para facilitar o isolamento e purificação de polipeptídeos e anticorpos de interesse; (ii) Sítios de clivagem de enteroquinase,

como etiquetas His, são usados no isolamento e purificação de proteínas e anticorpos de interesse. Muitas vezes, os sítios de clivagem de enteroquinase são usados juntamente com etiquetas His no isolamento e purificação de proteínas e anticorpos de interesse. Diversos sítios de clivagem de enteroquinase são conhecidos na técnica. Os exemplos de sítios de clivagem de enteroquinase incluem, mas não se limitam a, a sequência de aminoácidos de DDDDK (SEQ ID NO:5) e derivados da mesma (por exemplo, ADDDDK (SEQ ID NO:6), etc.); (iii) Sequências variadas podem ser usadas para ligar ou conectar as regiões variáveis de cadeia leve e/ou pesada de fragmentos de região variável de cadeia única. Os exemplos de outras sequências de ligação podem ser encontrados em Bird et al., Science 242: 423 a 426 (1988); Huston et al., PNAS USA 85: 5.879 a 5.883 (1988); e McCafferty et al., Nature 348: 552 a 554 (1990). As sequências de ligação também podem ser modificadas para funções adicionais, tais como fixação de fármacos ou fixação a suportes sólidos. No contexto da presente revelação, o anticorpo monoclonal, por exemplo, pode conter uma sequência de ligação, tal como uma etiqueta His, um sítio de clivagem de enteroquinase ou ambos.

[0172]“Formação de imagens por ressonância magnética” ou “IRM”, como usado de forma intercambiável no presente documento, se refere a uma técnica de imageamento médico usada em radiologia para formar imagens da anatomia e dos processos fisiológicos do corpo tanto na saúde como na doença. A IRM é uma forma de imageamento médico que mede a resposta dos núcleos atômicos de tecidos corporais a ondas de rádio de alta frequência quando colocados em um campo magnético forte e que produz imagens dos órgãos internos. Os digitalizadores de IRM, que têm por base a ciência de ressonância magnética nuclear (RMN), usam campos magnéticos fortes, ondas de rádio e gradientes de campo para gerar imagens do interior do corpo.

[0173]“Anticorpo monoclonal”, como usado no presente documento se refere a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos exceto para possíveis mutações de ocorrência natural que possam estar presentes em quantidades menores. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo dirigidos contra um único antígeno. Adicionalmente, em contraste com preparações de anticorpo policlonal que tipicamente incluem anticorpos diferentes dirigidos contra determinantes diferentes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é dirigido contra um único determinante no antígeno. Os anticorpos monoclonais no presente documento incluem especificamente anticorpos “quiméricos” em que uma porção da cadeia pesada e/ou leve é idêntica ou homóloga às sequências correspondentes em anticorpos derivados a partir de uma espécie particular ou que pertencem a uma classe ou subclasse de anticorpo particular, enquanto o restante da cadeia (ou cadeias) é idêntico ou homólogo a sequências correspondentes em anticorpos derivados a partir de uma outra espécie ou que pertencem a uma outra classe ou subclasse de anticorpo, bem como fragmentos de tais anticorpos, contanto que exibam o efeito biológico desejado.

[0174] “Proteína de ligação multivalente” é usado no presente documento para se referir a uma proteína de ligação que compreende dois ou mais sítios de ligação a antígeno (também mencionados no presente documento como "domínios de ligação a antígeno"). Uma proteína de ligação multivalente é, de preferência, manipulada para ter três ou mais sítios de ligação a antígeno e não é, em geral, um anticorpo de ocorrência natural. O termo "proteína de ligação multiespecífica" se refere a uma proteína de ligação que pode ligar dois ou mais alvos relacionados ou não relacionados, incluindo uma proteína de ligação com capacidade para ligar dois ou mais epítopos diferentes da mesma molécula alvo.

[0175]“Valor preditivo negativo” ou “NPV”, como usado de forma intercambiável no presente documento, se refere à probabilidade que um indivíduo tem um resultado negativo, dado que o mesmo tem um resultado do teste negativo.

[0176]“Nível de referência”, como usado no presente documento, se refere a um valor de corte de ensaio que é usado para avaliar a eficácia de diagnóstico, prognóstico ou terapêutica e que foi ligado ou está associado no presente documento a diversos parâmetros clínicos (por exemplo, presença de doença, estágio da doença, gravidade da doença, progressão, não progressão ou melhora da doença, etc.). Uma “quantidade absoluta”, como usado no presente documento, se refere ao valor absoluto de uma mudança ou diferença entre pelo menos dois resultados de ensaio tomados ou amostrados em diferentes pontos no tempo e, que similar a um nível de referência, foi ligado ou está associado no presente documento a diversos parâmetros clínicos (por exemplo, presença de doença, estágio da doença, gravidade da doença, progressão, não progressão ou melhora da doença, etc.). “Valor absoluto”, como usado no presente documento, se refere à magnitude de um número real (tal como, por exemplo, a diferença entre dois níveis comparados (tais como níveis tomados em um primeiro ponto no tempo e níveis tomados em um segundo ponto no tempo)) sem considerar seu sinal, isto é, independentemente de se é positivo ou negativo.

[0177]Esta revelação fornece níveis de referência e quantidades absolutas exemplificadoras (por exemplo, calculadas mediante a comparação de níveis de referência em pontos no tempo diferentes). No entanto, é bem conhecido que níveis de referência e quantidades absolutas podem variar dependendo da natureza do imunoensaio (por exemplo, anticorpos empregados, condições de reação, pureza da amostra, etc.) e que os ensaios podem ser comparados e padronizados. Está adicionalmente dentro da habilidade comum na técnica de um elemento versado adaptar a revelação no presente documento para outros imunoensaios para obter níveis de referência e quantidades absolutas específicos de imunoensaio para aqueles outros imunoensaios com base na descrição fornecida por esta revelação.

Enquanto que o valor preciso do nível de referência e quantidades absolutas pode variar entre ensaios, as constatações, conforme descrito no presente documento, devem ser, em geral, aplicáveis e terem capacidade de serem extrapoladas para outros ensaios.

[0178]“Dispositivo de ponto-de-cuidado” se refere a um dispositivo usado para fornecer teste de diagnóstico médico em ou próximo ao ponto-de-cuidado (ou seja, fora de um laboratório), no momento e local de cuidado do paciente (tal como em um hospital, consultório médico, instalação de urgência ou outra instalação de cuidados médicos, residência de um paciente, uma casa de repouso e/ou uma instalação de cuidados de longa duração e/ou hospício). Os exemplos de dispositivos de ponto-de- cuidado incluem aqueles produzidos por Abbott Laboratories (Abbott Park, IL) (por exemplo, i-STAT e i-STAT Alinity, Universal Biosensors (Rowville, Austrália) (consultar o documento n° US 2006/0134713), Axis-Shield PoC AS (Oslo, Noruega) e Clinical Lab Products (Los Angeles, EUA).

[0179]“Valor preditivo positivo” ou “PPV”, como usado de forma intercambiável no presente documento, se refere à probabilidade que um indivíduo tem um resultado positivo, dado que o mesmo tem um resultado do teste positivo.

[0180]“Reagentes de controle de qualidade” no contexto de imunoensaios e kits descritos no presente documento, incluem, mas não se limitam a, calibradores, controles e painéis de sensibilidade. Um “calibrador” ou “padrão” tipicamente é usado (por exemplo, um ou mais, tal como uma pluralidade) a fim de estabelecer curvas de calibração (padrão) para a interpolação da concentração de um analito, tal como um anticorpo ou um analito. Alternativamente, um único calibrador, que é próximo a um nível de referência ou nível de controle (por exemplo, níveis “baixo”, “médio” ou “alto”), pode ser usado. Múltiplos calibradores (isto é, mais de um calibrador ou uma quantidade variada de calibradores) podem ser usados em conjunto para compreender um “painel de sensibilidade”.

[0181]Uma curva de “característica de operação de receptor” ou curva de “ROC” se refere a uma plotagem gráfica que ilustra o desempenho de um sistema de classificador binário à medida que seu limiar de discriminação é variado. Por exemplo, uma curva de ROC pode ser uma plotagem da taxa de verdadeiro positivo contra a taxa de falso positivo para os diferentes pontos de corte possíveis de um teste de diagnóstico. A mesma é criada mediante a plotagem da fração de falsos positivos dentre os positivos (TPR = taxa de verdadeiro positivo) versus a fração de falsos positivos dentre os negativos (FPR = taxa de falso positivo), em vários cenários de limiar. TPR é conhecida também como sensibilidade e FPR é um menos a especificidade ou taxa de falso negativo. A curva de ROC demonstra o acordo entre sensibilidade e especificidade (qualquer aumento em sensibilidade será acompanhado de uma diminuição em especificidade); quanto mais próximo à curva segue a borda direita e, então, a borda de topo do espaço de ROC, mais preciso será o teste; quanto mais próximo à curva chega à diagonal de 45 graus do espaço de ROC, menos preciso será o teste; o coeficiente angular da linha tangente em um ponto de corte gera a razão de probabilidade (LR) para aquele valor do teste; e a área sob a curva é uma medida de precisão de teste.

[0182]“Anticorpo recombinante” e “anticorpos recombinantes” se referem a anticorpos preparados por uma ou mais etapas, incluindo clonagem de sequências de ácidos nucleicos que codificam todos ou parte de um ou mais anticorpos monoclonais em um vetor de expressão adequado por meio de técnicas recombinantes e subsequentemente expressando o anticorpo em uma célula hospedeira adequada. Os termos incluem, mas não se limitam a, anticorpos monoclonais produzidos de modo recombinante, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados (completa ou parcialmente humanizados), estruturas multiespecíficas ou multivalentes formadas a partir de fragmentos de anticorpo, anticorpos bifuncionais, heteroconjugados Abs, DVD-Ig®s e outros anticorpos conforme descrito em (i) no presente documento. (Imunoglobulinas de domínio variável duplo e métodos para fabricação das mesmas são descritos em Wu, C., et al., Nature Biotechnology, 25:1.290 a 1.297 (2007)). O termo “anticorpo bifuncional”, como usado no presente documento, se refere a um anticorpo que compreende um primeiro braço que tem uma especificidade para um sítio antigênico e um segundo braço que tem uma especificidade para um sítio antigênico diferente, isto é, os anticorpos bifuncionais têm uma especificidade dupla.

[0183]“Avaliação de risco”, “classificação de risco”, “identificação de risco” ou “estratificação de risco” de indivíduos (por exemplo, pacientes), como usado no presente documento, se refere à avaliação de fatores que incluem biomarcadores, para predizer o risco de ocorrência de eventos futuros incluindo início de doença ou progressão da doença, de modo que as decisões de tratamento relacionadas ao indivíduo possam ser tomadas com uma base mais informada.

[0184]“Amostra”, “amostra de teste”, “espécime”, “amostra biológica”, “amostra a partir de um indivíduo” e “amostra de paciente”, como usado no presente documento, podem ser usadas de forma intercambiável e podem ser uma amostra de sangue tal como sangue total, tecido, urina, soro, plasma, fluido amniótico, líquido cefalorraquidiano, tecido ou células placentárias, células endoteliais, leucócitos ou monócitos. A amostra pode ser usada diretamente conforme obtida a partir de um paciente ou pode ser pré-tratada, tal como por filtração, destilação, extração, concentração, centrifugação, inativação de componentes interferentes, adição de reagentes e similares, para modificar o caráter da amostra de alguma maneira, conforme discutido no presente documento ou de outro modo conforme é conhecido na técnica.

[0185]Uma variedade de tipos de célula, tecido ou fluido corporal pode ser usada para obter uma amostra. Tais tipos de célula, tecidos e fluido podem incluir seções de tecidos tais como amostras de biópsia e autópsia, seções congeladas tomadas para propósitos histológicos, sangue (tal como sangue total), plasma, soro, eritrócitos, plaquetas, fluido intersticial, líquido cefalorraquidiano, etc. Os tipos de célula e tecidos podem incluir também fluido linfático, líquido cefalorraquidiano, um fluido coletado. Um tecido ou tipo de célula pode ser fornecido mediante a remoção de uma amostra de células a partir de um ser humano e um animal não humano, mas pode ser também realizado com o uso de células isoladas anteriormente (por exemplo, isoladas por uma outra pessoa, em um outro momento e/ou para um outro propósito). Os tecidos de arquivo, tais como aqueles que têm histórico de tratamento ou resultado, também podem ser usados. O isolamento e/ou purificação de nucleotídeo ou proteína pode não ser necessário.

[0186]“Sensibilidade” de um ensaio, como usado no presente documento, se refere à proporção de indivíduos para quais o resultado é positivo que são corretamente identificados como positivos (por exemplo, a identificação de forma correta daqueles indivíduos com uma doença ou condição médica para qual estão sendo testados). Por exemplo, isto poderia incluir identificar corretamente indivíduos como tendo uma TBI a partir daqueles que não têm TBI, identificar corretamente indivíduos que tem uma TBI moderada, severa ou moderada a severa a partir daqueles que têm uma TBI branda, identificar corretamente indivíduos como tendo uma TBI branda a partir daqueles que têm uma TBI moderada, severa ou moderada a severa, identificar corretamente indivíduos como tendo uma TBI moderada, severa ou moderada a severa a partir daqueles que não têm TBI ou identificar corretamente indivíduos como tendo uma TBI branda a partir daqueles que não têm TBI, identificar corretamente indivíduos como provavelmente se beneficiando do imageamento ou de uma varredura por TC da cabeça ou uma IRM a partir daqueles que não são propensos a se beneficiarem de um imageamento da cabeça ou uma varredura por TC ou IRM, etc.).

[0187]“Especificidade” de um ensaio, como usado no presente documento, se refere à proporção de indivíduos para quais o resultado é negativo que são corretamente identificados como negativos (por exemplo, a identificação de forma correta daqueles indivíduos que não têm uma doença ou condição médica para qual estão sendo testados). Por exemplo, isto poderia incluir identificar corretamente indivíduos que têm uma TBI a partir daqueles que não têm uma TBI, identificar corretamente indivíduos que não têm uma TBI moderada, severa ou moderada a severa a partir daqueles que têm uma TBI branda, identificar corretamente indivíduos como não tendo uma TBI branda a partir daqueles que têm uma TBI moderada, severa ou moderada a severa ou identificar corretamente indivíduos como não tendo qualquer TBI ou identificar corretamente indivíduos como tendo uma TBI branda a partir daqueles que não têm TBI, etc.).

[0188] “Série de composições de calibração” se refere a uma pluralidade de composições que compreendem uma concentração conhecida de um analito, tal como cTnI ou um biomarcador precoce, tal como UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas, em que cada uma das composições se difere das outras composições na série pela concentração do analito.

[0189]“Fase sólida” ou “suporte sólido”, como usado de forma intercambiável no presente documento, se refere a qualquer material que pode ser usado para fixar e/ou atrair e imobilizar (1) um ou mais agentes de captura ou parceiros de ligação específica de captura ou (2) um ou mais agentes de detecção ou parceiros de ligação específica de detecção. A fase sólida pode ser escolhida por sua capacidade intrínseca de atrair e imobilizar um agente de captura. Alternativamente, a fase sólida pode ter afixado na mesma um agente de ligação que tem a capacidade de atrair e imobilizar o (1) agente de captura ou parceiro de ligação específica de captura ou (2) agente de detecção ou parceiro de ligação específica de detecção. Por exemplo, o agente de ligação pode incluir uma substância carregada que tem carga oposta em relação ao agente de captura (por exemplo, parceiro de ligação específica de captura) ou agente de detecção (por exemplo, parceiro de ligação específica de detecção) por si mesmo ou a uma substância carregada conjugada ao (1) agente de captura ou parceiro de ligação específica de captura ou (2) agente de detecção ou parceiro de ligação específica de detecção. Em geral, o agente de ligação pode ser qualquer parceiro de ligação (de preferência, específica) que é imobilizado (fixado) na fase sólida e que tem a capacidade de imobilizar o (1) agente de captura ou parceiro de ligação específica de captura ou (2) agente de detecção ou parceiro de ligação específica de detecção através de uma reação de ligação. O agente de ligação possibilita a ligação indireta do agente de captura a um material de fase sólida antes do desempenho do ensaio ou durante o desempenho do ensaio. Por exemplo, a fase sólida pode ser plástico, plástico derivado, metal magnético ou não magnético, vidro ou silício, incluindo, por exemplo, um tubo de ensaio, poço de microtitulação, lâmina, microesfera, micropartícula, circuito integrado ou outras configurações conhecidas dos versados na técnica.

[0190]“Ligação específica” ou “ligando especificamente”, como usado no presente documento, pode se referir à interação de um anticorpo, uma proteína ou um peptídeo com uma segunda espécie química, em que a interação depende da presença de uma estrutura particular (por exemplo, um determinante antigênico ou epítopo) na espécie química; por exemplo, um anticorpo reconhece e se liga a uma estrutura de proteína específica em vez de proteínas de modo geral. Se um anticorpo for específico quanto ao epítopo “A”, a presença de uma molécula que contém o epítopo “A” (ou A livre, não identificado), em uma reação que contém “A” identificado e o anticorpo, reduzirá a quantidade de A identificado ligado ao anticorpo.

[0191]“Parceiro de ligação específica” é um membro de um par de ligação específica. Um par de ligação específica compreende duas moléculas diferentes, que especificamente se ligam uma à outra através de meio químico ou físico. Portanto, adicionalmente aos pares de ligação específica para antígeno e anticorpo de imunoensaios comuns, outros pares de ligação específica podem incluir biotina e avidina (ou estreptavidina), carboidratos e lectinas, sequências de nucleotídeos complementares, moléculas efetoras e receptoras, cofatores e enzimas, enzimas e inibidores de enzimas e similares. Adicionalmente, os pares de ligação específica podem incluir membros que são análogos dos membros de ligação específica originais, por exemplo, um analito-análogo. Os membros de ligação específica imunorreativos incluem antígenos, fragmentos de antígeno e anticorpos, incluindo anticorpos monoclonais e policlonais, bem como complexos e fragmentos dos mesmos, se isolados ou produzidos de modo recombinante.

[0192]“Estatisticamente significativo”, como usado no presente documento, se refere à probabilidade que uma relação entre duas ou mais variáveis é causada por algo diferente do acaso. O teste de hipótese estatística é usado para determinar se o resultado de um conjunto de dados é estatisticamente significativo. Em teste de hipótese estatística, um resultado estatístico significativo é alcançado sempre que o valor p observado de uma estatística de teste é menor que o nível de importância definido do estudo. O valor p é a probabilidade de obter resultados pelo menos tão extremos como aqueles observados, dado que a hipótese nula é verdadeira. Os exemplos de análise de hipótese estatística incluem o teste de postos sinalizados de Wilcoxon, teste t, qui-quadrado ou teste exato de Fisher. “Significativo”, como usado no presente documento, se refere a uma mudança que não foi determinada como sento estatisticamente significativa (por exemplo, pode não ter sido submetida ao teste de hipótese estatística).

[0193]“Indivíduo” e “paciente” conforme usado no presente documento se referem intercambiavelmente a qualquer vertebrado, incluindo, mas sem limitação, um mamífero (por exemplo, vaca, porco, camelo, lhama, cavalo, cabra, coelho, ovelha, hamsters, porquinho da índia, gato, cachorro, rato e camundongo, um primata não humano (por exemplo, um macaco, tal como um macaco cinomolgo ou rhesus, chimpanzé, etc.) e um ser humano). Em algumas modalidades, o indivíduo pode ser um ser humano ou não humano. Em algumas modalidades, o sujeito é um ser humano. O indivíduo ou paciente pode ser submetido a outras formas de tratamento.

Em algumas modalidades, quando o indivíduo é um ser humano, o indivíduo não inclui quaisquer seres humanos que têm sofrido um acidente cerebrovascular (por exemplo, um derrame).

[0194]“Tratar”, “tratando” ou “tratamento” são, cada um, usados de forma intercambiável no presente documento para descrever a reversão, alívio ou inibição do progresso de uma doença e/ou lesão ou um ou mais sintomas de tal doença, para qual tal termo se aplica. Dependendo da condição do indivíduo, o termo também se refere à prevenção de uma doença e inclui prevenir o início de uma doença ou prevenir os sintomas associados a uma doença. Um tratamento pode ser realizado de uma forma aguda ou crônica. O termo também se refere à redução da gravidade de uma doença ou de sintomas associados a tal doença antes da aflição com a doença. Tal prevenção ou redução da gravidade de uma doença antes da aflição se refere à administração de uma composição farmacêutica a um indivíduo que não está no momento da administração afligido com a doença. “Prevenção” também se refere à prevenção da recorrência de uma doença ou de um ou mais sintomas associados a tal doença. “Tratamento” e “terapeuticamente” se referem à ação de tratar, conforme "tratando” é definido acima.

[0195]“Lesão traumática cerebral” ou “TBI”, como usado de forma intercambiável no presente documento, se refere a uma lesão complexa com um amplo espectro de sintomas e incapacidades. TBI é muitas vezes um evento agudo similar a outras lesões. TBI pode ser classificada como “branda”, “moderada” ou “severa”. As causas de TBI são diversas e incluem, por exemplo, agitação física por uma pessoa, um acidente de carro, lesões a partir de armas de fogo, acidentes vasculares cerebrais (por exemplo, derrames), quedas, explosões ou detonações e outros tipos de trauma por força brusca. Outras causas de TBI incluem a ingestão e/ou exposição a um ou mais produtos químicos e/ou toxinas (tais como incêndios, bolores, asbestos, pesticidas e inseticidas, solventes orgânicos, tintas, colas, gases (tais como monóxido de carbono, sulfeto de hidrogênio e cianeto), metais orgânicos (tais como metil mercúrio, tetraetil chumbo e estanho orgânico), um ou mais fármacos de abuso ou combinações dos mesmos). Alternativamente, a TBI pode ocorrer em indivíduos que sofrem de uma doença autoimune, um distúrbio metabólico, um tumor cerebral, hipoxia, um ou mais vírus, meningite, hidrocefalia ou combinação dos mesmos. Os adultos jovens e os idosos são os grupos etários em risco maior para TBI. Em certas modalidades no presente documento, a lesão traumática cerebral ou TBI não inclui e especificamente exclui acidentes vasculares cerebrais tais como derrames.

[0196]“TBI branda”, como usado no presente documento, se refere a uma lesão cerebral em que a perda de consciência é breve e normalmente poucos segundos ou minutos e/ou confusão e desorientação é mais curta que 1 hora. TBI branda também é mencionada como uma concussão, trauma de cabeça menor, TBI menor, lesão cerebral menor e lesão na cabeça menor. Embora IRM e varreduras por TC sejam muitas vezes normais, o indivíduo com TBI branda pode ter problemas cognitivos tais como dor de cabeça, dificuldade para pensar, problemas de memória, déficits de atenção, alterações de humor e frustração.

[0197]TBI branda é a TBI mais predominante e muitas vezes perdida no momento da lesão inicial. Tipicamente, um indivíduo tem um número de escala de coma de Glasgow entre 13 e 15 (tal como 13 a 15 ou 14 a 15). Quinze por cento

(15%) das pessoas com TBI branda têm sintomas que duram 3 meses ou mais. TBI branda é definida como o resultado do movimento contundente da cabeça ou impacto que causa uma breve mudança na situação mental (confusão, desorientação ou perda de memória) ou perda de consciência durante menos que 30 minutos. Os sintomas comuns de TBI branda incluem fadiga, dores de cabeça, perturbações visuais, perda de memória, atenção/concentração insatisfatória, perturbações do sono, tontura/perda de equilíbrio, irritabilidade-perturbações emocionais, sensações de depressão e convulsões. Outros sintomas associados a TBI branda incluem náusea, perda de olfato, sensibilidade à luz e sons, mudanças de humor, tornar-se perdido ou confuso e/ou lentidão no pensamento.

[0198]“TBI moderada”, como usado no presente documento, se refere a uma lesão cerebral em que a perda de consciência e/ou confusão e desorientação é entre 1 e 24 horas e o indivíduo tem um número de escala de coma de Glasgow entre 9 e 13 (tal como 9 a 12 ou 9 a 13). O indivíduo com TBI moderada têm resultados de imageamento de cérebro anormais. “TBI severa”, como usado no presente documento, se refere a uma lesão cerebral em que a perda de consciência é maior que 24 horas e a perda de memória após a lesão ou lesão de crânio penetrante mais longa que 24 horas e o indivíduo tem um número de escala de coma de Glasgow entre 3 e 8. Os déficits se situam na faixa a partir da deficiência de funções cognitivas de nível superior a estados comatosos. Os sobreviventes podem ter função limitada de braços ou pernas, linguagem ou fala anormal, perda da capacidade de pensar ou problemas emocionais. Os indivíduos com lesões severas podem ser deixados em estados não responsivos a longo prazo. Para muitas pessoas com TBI severa, a reabilitação a longo prazo é muitas vezes necessária para maximizar a função e independência.

[0199]TBI “moderada a severa”, como usado no presente documento, se refere a um espectro de lesão cerebral que inclui moderada a severa e dessa forma abrange TBI moderada sozinha, TBI severa sozinha e TBI moderada a severa combinada. Os indivíduos que sofrem de uma TBI moderada a severa podem ter um número de escala de coma de Glasgow entre 3 e 13 (tal como 3 a 12 ou 3 a 13). Por exemplo, em algumas situações clínicas, um indivíduo pode ser inicialmente diagnosticado como tendo uma TBI moderada, mas que, no decorrer do tempo (minutos, horas ou dias), progride para ter uma TBI severa (como, por exemplo, em situações quando existe um sangramento cerebral). Tais indivíduos seriam exemplos de pacientes que poderiam ser classificados como “moderada a severa”. Os sintomas comuns de TBI moderada a severa incluem déficits cognitivos incluindo dificuldades com atenção, concentração, capacidade de distração, memória, velocidade de processamento, confusão, perseverança, impulsividade, processamento de linguagem e/ou “funções executivas”, não entendimento da palavra falada (afasia receptiva), dificuldade de falar e ser compreendido (afasia expressiva), fala arrastada, fala muito rápida ou muito lenta, problemas de leitura, problemas de escrita, dificuldades com interpretação de toque, temperatura, movimento, posição de membro e discriminação fina, a integração ou padronização de impressões sensoriais em dados psicologicamente significativos, perda parcial ou total da visão, fraqueza de músculos oculares e visão dupla (diplopia), visão turva, problemas julgamento de distância, movimentos involuntários dos olhos (nistagmo), intolerância da luz (fotofobia), audição, tal como diminuição ou perda da audição, zumbido nos ouvidos (tinido), sensibilidade aumentada a sons, perda ou sentido diminuído de olfato (anosmia), perda ou sentido diminuído de paladar, as convulsões associadas à epilepsia que podem ser vários tipos e podem envolver interrupção em consciência, percepção sensorial ou movimentos motores, controle do intestino e bexiga, distúrbios do sono, perda de estamina, mudanças de apetite, regulação de temperatura corporal, dificuldades menstruais, comportamentos dependentes, capacidade emocional, falta de motivação, irritabilidade, agressão, depressão, desinibição ou negação/falta de sensibilização.

[0200] “Ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1” ou “UCH-L1” como usado de forma intercambiável no presente documento se refere a uma enzima de desubiquitinação codificada pelo gene UCH-L1 em seres humanos. UCH-L1, também conhecida como ubiquitina carboxil-terminal esterase L1 e ubiquitina tiolesterase, é um membro de uma família de genes cujos produtos hidrolisam adutos C-terminal pequenos de ubiquitina para gerar o monômero de ubiquitina.

[0201]“Situação de UCH-L1” pode significar o nível ou quantidade de UCH- L1 em um ponto no tempo (tal como com uma medição única de UCH-L1), o nível ou quantidade de UCH-L1 associada ao monitoramento (tal como com um teste de repetição em um indivíduo para identificar um aumento ou diminuição na quantidade de UCH-L1), o nível ou quantidade de UCH-L1 associada ao tratamento para lesão traumática cerebral (se uma lesão cerebral primária e/ou uma lesão cerebral secundária) ou combinações dos mesmos.

[0202]“Variante” é usado para descrever um peptídeo ou polipeptídeo que se difere na sequência de aminoácidos mediante a inserção, deleção ou substituição conservativa de aminoácidos, mas retém pelo menos uma atividade biológica. Os exemplos representativos de "atividade biológica" incluem a capacidade de ser ligado por um anticorpo específico ou de promover uma resposta imunológica. Variante também é usado no presente documento para descrever uma proteína com uma sequência de aminoácidos que é substancialmente idêntica a uma proteína mencionada com uma sequência de aminoácidos que retém pelo menos uma atividade biológica. Uma substituição conservativa de um aminoácido, isto é, que substitui um aminoácido por um aminoácido diferente de propriedades similares (por exemplo, hidrofilicidade, grau e distribuição de regiões carregadas) é reconhecida na técnica como envolvendo tipicamente uma alteração menor. Estas alterações menores podem ser identificadas, em parte, considerando-se o índice hidropático de aminoácidos, conforme entendido na técnica. Kyte et al., J. Mol. Biol. 157:105 a 132 (1982). O índice hidropático de um aminoácido tem por base uma consideração de sua hidrofobicidade e carga. É conhecido na técnica que aminoácidos de índices hidropáticos similares podem ser substituídos e ainda reter a função de proteína. Em um aspecto, os aminoácidos que têm índices hidropáticos de ±2 são substituídos. A hidrofilicidade de aminoácidos também pode ser usada para revelar substituições que resultariam em proteínas que retêm função biológica. Uma consideração da hidrofilicidade de aminoácidos no contexto de um peptídeo permite o cálculo da maior hidrofilicidade média local desse peptídeo, uma medida útil que foi relatada como se correlacionando bem com a antigenicidade e imunogenicidade. Patente nº U.S.

4.554.101, incorporada totalmente no presente documento a título de referência. A substituição de aminoácidos que tem valores de hidrofilicidade similares pode resultar em peptídeos que retêm atividade biológica, por exemplo, imunogenicidade, conforme é compreendido na técnica. As substituições podem ser realizadas com aminoácidos que têm valores de hidrofilicidade dentro de ±2 um do outro. Tanto o índice de hidrofobicidade quando o valor de hidrofilicidade de aminoácidos são influenciados pela cadeia lateral específica desse aminoácido. Consistente com esta observação, as substituições de aminoácido que são compatíveis com a função biológica são compreendidas como dependendo da similaridade relativa dos aminoácidos, e particularmente, das cadeias laterais desses aminoácidos, conforme revelado pela hidrofobicidade, hidrofilicidade, carga, tamanho e outras propriedades.

“Variante” também pode ser usado para se referir a um fragmento antigenicamente reativo de um anticorpo anti-cTnI e/ou anti-UCH-L1 e/ou anti-GFAP que se difere do fragmento correspondente do anticorpo anti-cTnI e/ou anti-UCH-L1 e/ou anti-GFAP em sequência de aminoácidos, mas ainda é antigenicamente reativo e pode competir com o fragmento correspondente do anticorpo anti-cTnI e/ou anti-UCH-L1 e/ou anti- GFAP pela ligação com cTnI e/ou anti-UCH-L1 e/ou anti-GFAP. “Variante” também pode ser usado para descrever um polipeptídeo ou um fragmento do mesmo que foi processado de modo diferencial, tal como por meio de proteólise, fosforilação ou outra modificação pós-traducional, ainda retém sua reatividade de antígeno.

[0203]“Vetor” é usado no presente documento para descrever uma molécula de ácido nucleico que pode transportar um outro ácido nucleico ao qual o mesmo foi ligado. Um tipo de vetor é um “plasmídeo”, que se refere a uma alça de DNA de fita dupla circular na qual segmentos de DNA adicionais podem ser ligados. Um outro tipo de vetor é um vetor viral, em que segmentos de DNA adicionais podem ser ligados no genoma viral. Certos vetores podem replicar de modo autônomo em uma célula hospedeira na qual são introduzidos (por exemplo, vetores bacterianos que têm uma origem de replicação bacteriana e vetores de mamífero epissômicos). Outros vetores (por exemplo, vetores de mamífero não epissômicos) podem ser integrados no genoma de uma célula hospedeira mediante a introdução na célula hospedeira e, assim, são replicados juntamente com o genoma hospedeiro. Ademais, certos vetores têm capacidade para direcionar a expressão de genes à qual os mesmos são ligados de modo operacional. Tais vetores são mencionados no presente documento como “vetores de expressão recombinantes” (ou simplesmente “vetores de expressão”). Em geral, os vetores de expressão de utilidade em técnicas de DNA recombinante são muitas vezes sob a forma de plasmídeos. “Plasmídeo” e "vetor" podem ser usados de forma intercambiável à medida que o plasmídeo é a forma de vetor mais comumente usada. Entretanto, outras formas de vetores de expressão, tais como vetores virais (por exemplo, retrovírus defeituosos para replicação, adenovírus e vírus adeno-associados), que servem funções equivalentes, podem ser usadas. Nesse sentido, as versões de RNA de vetores (incluindo vetores virais de RNA) também podem encontrar uso no contexto da presente revelação.

[0204]Exceto onde definido em contrário no presente documento, os termos científicos e técnicos usados em conexão com a presente revelação deverão ter os significados que são comumente entendidos pelos versados na técnica. Por exemplo, quaisquer nomenclaturas usadas em conjunto com, e técnicas de, cultura de célula e tecido, biologia molecular, imunologia, microbiologia, genética e química de proteína e ácido nucleico e hibridização descritas no presente documento são aquelas que são bem conhecidas e comumente usadas na técnica. O significado e escopo dos termos deve ser evidente; no caso, entretanto, de qualquer ambiguidade latente, as definições fornecidas no presente documento prevalecem sobre qualquer definição extrínseca ou do dicionário. Adicionalmente, exceto onde exigido em contrário pelo contexto, os termos no singular devem incluir pluralidades e termos no plural devem incluir o singular.

2. Métodos para auxiliar no diagnóstico e na avaliação de se um indivíduo humano pode ter sofrido ou sofreu uma (tem uma lesão real ou suspeita) lesão na cabeça com o uso de troponina cardíaca I (cTnI) e um biomarcador precoce

[0205]A presente revelação se refere, entre outros métodos, a um método para auxiliar no diagnóstico e na avaliação de se um indivíduo humano sofreu ou pode ter sofrido uma (ou tem uma lesão real ou suspeita) lesão na cabeça. O método pode ajudar na determinação da extensão da lesão traumática cerebral em um indivíduo humano com uma suspeita de lesão real na cabeça, por exemplo, determinar se o indivíduo tem lesão traumática cerebral branda ou uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa. Como usado aqui, “determinar se o indivíduo tem lesão traumática cerebral branda ou uma moderada, severa ou moderada a severa” se refere ao fato de que o método mencionado anteriormente pode ser usado, por exemplo, com outras informações (por exemplo, dados de avaliação clínica), para determinar que o indivíduo é mais propenso do que não ter lesão traumática cerebral branda ou lesão traumática cerebral moderada a severa. O método pode incluir realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo humano dentro de cerca de 24 horas, tal como dentro de cerca de 2 horas, após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce na amostra e determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa. Em algumas modalidades, o indivíduo é determinado como tendo (1) uma TBI moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma TBI branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce. A amostra pode ser uma amostra biológica. O biomarcador precoce inclui ubiquitina carbóxi- terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas.

[0206]Em algumas modalidades, o método pode incluir obter uma amostra dentro de cerca de 24 horas, tal como dentro de cerca de 2 horas, de uma lesão real ou suspeita de lesão para o indivíduo e colocar a amostra em contato com um anticorpo para cTnI para permitir a formação de um complexo do anticorpo e cTnI e com um anticorpo para o biomarcador precoce para permitir a formação de um complexo do anticorpo e do biomarcador precoce. O método inclui também detectar o complexo de anticorpo-cTnI resultante e o complexo de anticorpo-biomarcador precoce resultante.

[0207]Em algumas modalidades, a amostra pode ser obtida ou tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 0 minuto, dentro de cerca de 1 minuto, dentro de cerca de 2 minutos, dentro de cerca de 3 minutos, dentro de cerca de 4 minutos, dentro de cerca de 5 minutos, dentro de cerca de 6 minutos, dentro de cerca de 7 minutos, dentro de cerca de 8 minutos, dentro de cerca de 9 minutos, dentro de cerca de 10 minutos, dentro de cerca de 11 minutos, dentro de cerca de 12 minutos, dentro de cerca de 13 minutos, dentro de cerca de 14 minutos, dentro de cerca de 15 minutos, dentro de cerca de 20 minutos, dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas de uma lesão na cabeça real ou suspeita de lesão.

[0208]Em algumas modalidades, a amostra é tomada a partir do indivíduo humano dentro de cerca de 2 horas da lesão ou suspeita de lesão na cabeça. Por exemplo, a amostra pode ser tomada a partir do indivíduo humano dentro de cerca de 0 minuto, cerca de 1 minuto, cerca de 2 minutos, cerca de 3 minutos, cerca de 4 minutos, cerca de 5 minutos, cerca de 6 minutos, cerca de 7 minutos, cerca de 8 minutos, cerca de 9 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 11 minutos, cerca de 12 minutos, cerca de 13 minutos, cerca de 14 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 90 minutos ou cerca de 2 horas da lesão ou suspeita de lesão na cabeça. Em algumas modalidades, o início da presença de cTnI e/ou do biomarcador precoce aparece dentro de cerca de 0 minuto, cerca de 1 minuto, cerca de 2 minutos, cerca de 3 minutos, cerca de 4 minutos, cerca de 5 minutos, cerca de 6 minutos, cerca de 7 minutos, cerca de 8 minutos, cerca de 9 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 11 minutos, cerca de 12 minutos, cerca de 13 minutos, cerca de 14 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 90 minutos ou cerca de 2 horas após a lesão na cabeça.

[0209]Em algumas modalidades, o indivíduo pode ter recebido uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois que o nível de cTnI e/ou do biomarcador precoce é determinado em um ou mais pontos no tempo. Em certas modalidades, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em certas modalidades, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma lesão traumática cerebral branda com base em uma TC de cabeça anormal. Em algumas modalidades, o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado.

Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma TC de cabeça normal.

[0210]Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12 (TBI moderada a severa). Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 8 (uma TBI severa). Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 9 a 13 (uma TBI moderada). Em algumas modalidades, o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que têm lesão traumática cerebral branda. Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15 (uma TBI branda).

[0211]Em geral, um nível de referência de cTnI e um nível de referência de um biomarcador precoce também podem ser empregados como um parâmetro de comparação contra qual se avalia resultados obtidos mediante o ensaio de uma amostra de teste acerca de cTnI e biomarcador precoce, respectivamente. Em geral, na realização de tal comparação, o nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce são obtidos mediante a execução de um ensaio particular um número suficiente de vezes e sob condições adequadas de modo que uma ligação ou associação da presença de analito, quantidade ou concentração com um estágio ou ponto final particular de TBI ou com indícios particulares possa ser feita.

Tipicamente, o nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce são obtidos com ensaios de indivíduos de referência (ou populações de indivíduos). O cTnI e/ou biomarcador precoce medido pode incluir fragmentos dos mesmos, produtos de degradação dos mesmos e/ou produtos de clivagem enzimática dos mesmos.

[0212]Em certas modalidades, o nível de referência pode ser correlacionado com indivíduos de controle que não sofreram uma lesão na cabeça.

[0213]Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI e/ou nível de referência do biomarcador precoce é determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 65% e cerca de 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 100%. Em algumas modalidades, a sensibilidade é entre pelo menos cerca de 65% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 70%, entre pelo menos cerca de 75% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 75% e pelo menos cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 75% e pelo menos cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 75% e pelo menos cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 75% e pelo menos cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 75% e pelo menos cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 85% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 85% e pelo menos cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 85% e pelo menos cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 85% e pelo menos cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 95% e cerca de 100% ou entre pelo menos cerca de 95% e pelo menos cerca de 99%. Em algumas modalidades, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 65,0%, pelo menos cerca de 70,0%, pelo menos cerca de 75,0%, pelo menos cerca de 80,0%, pelo menos cerca de 85,0%, pelo menos cerca de 87,5%, pelo menos cerca de 90,0%, pelo menos cerca de 95,0%, pelo menos cerca de 99,0%, pelo menos cerca de 99,1%, pelo menos cerca de 99,2%, pelo menos cerca de 99,3%, pelo menos cerca de 99,4%, pelo menos cerca de 99,5%, pelo menos cerca de 99,6%, pelo menos cerca de 99,7%, pelo menos cerca de 99,8%, pelo menos cerca de 99,9% ou pelo menos cerca de 100,0%.

[0214]Em algumas modalidades, a especificidade é entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 70%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 60%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 50%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 70%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 60%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 50%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 70%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 60%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 70%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 80% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 80% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 80% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 80% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 80% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 90% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 90% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 90% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 95% e cerca de 99% ou entre pelo menos cerca de 95% e cerca de

100. Em algumas modalidades, a especificidade é pelo menos cerca de 30,0%, pelo menos cerca de 31,0%, pelo menos cerca de 32,0%, pelo menos cerca de 33,0%, pelo menos cerca de 34,0%, pelo menos cerca de 35,0%, pelo menos cerca de 36,0%, pelo menos cerca de 37,0%, pelo menos cerca de 38,0%, pelo menos cerca de 39,0%,

pelo menos cerca de 40,0%, pelo menos cerca de 45,0%, pelo menos cerca de 50,0%, pelo menos cerca de 55,0%, pelo menos cerca de 60,0%, pelo menos cerca de 65,0%, pelo menos cerca de 70,0%, pelo menos cerca de 75,0%, pelo menos cerca de 80,0%, pelo menos cerca de 85,0%, pelo menos cerca de 90,0%, pelo menos cerca de 91,0%, pelo menos cerca de 92,0%, pelo menos cerca de 93,0%, pelo menos cerca de 94,0%, pelo menos cerca de 95,0%, pelo menos cerca de 96,0%, pelo menos cerca de 97,0%, pelo menos cerca de 98,0%, pelo menos cerca de 99,0%, pelo menos cerca de 99,1%, pelo menos cerca de 99,2%, pelo menos cerca de 99,3%, pelo menos cerca de 99,4%, pelo menos cerca de 99,5%, pelo menos cerca de 99,6%, pelo menos cerca de 99,7%, pelo menos cerca de 99,8%, pelo menos cerca de 99,9% ou pelo menos cerca de 100,0%. Por exemplo, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 99% e a especificidade é de pelo menos cerca de 75%, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 99% e a especificidade é de pelo menos cerca de 99% ou a sensibilidade é de pelo menos cerca de 100% e a especificidade é de pelo menos cerca de 100%.

[0215]Em algumas modalidades, a quantidade de cTnI na amostra é a partir de cerca de 1 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 3 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 2 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 1,5 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de

50 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 30 pg/ml,

cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de

1,5 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 3 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 2 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 80 pg/ml,

cerca de 2 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de

2 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 15 pg/ml,

cerca de 2 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de

2 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 3 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 100 pg/ml,

cerca de 3 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de

3 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 25 pg/ml,

cerca de 3 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de

3 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de

50 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 40 pg/ml,

cerca de 4 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de

4 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 7 pg/ml,

cerca de 4 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de

60 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 50 pg/ml,

cerca de 5 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de

5 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de

55 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 45 pg/ml,

cerca de 6 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de

6 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 8 pg/ml,

cerca de 6 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de

7 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 35 pg/ml,

cerca de 7 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de

7 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 70 pg/ml,

cerca de 8 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de

8 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 10 pg/ml,

cerca de 8 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de

9 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 35 pg/ml,

cerca de 9 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de

9 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 45 pg/ml,

cerca de 10 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 40 pg/ml,

cerca de 20 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 30 pg/ml ou cerca de 20 pg/ml a cerca de 25 pg/ml.

Em algumas modalidades, a quantidade de cTnI pode ser de pelo menos cerca de 0,5 pg/ml, pelo menos cerca de 1,0 pg/ml, pelo menos cerca de 1,5 pg/ml, pelo menos cerca de 2,0 pg/ml, pelo menos cerca de 2,5 pg/ml, pelo menos cerca de 3,0 pg/ml, pelo menos cerca de 4,0 pg/ml, pelo menos cerca de 5,0 pg/ml, pelo menos cerca de 6,0 pg/ml, pelo menos cerca de 7,0 pg/ml, pelo menos cerca de 8,0, pg/ml, pelo menos cerca de 9,0 pg/ml, pelo menos cerca de 10 pg/ml, pelo menos cerca de 15 pg/ml, pelo menos cerca de 20 pg/ml, pelo menos cerca de 25 pg/ml, pelo menos cerca de 30 pg/ml, pelo menos cerca de 35 pg/ml, pelo menos cerca de 40 pg/ml, pelo menos cerca de 45 pg/ml, pelo menos cerca de 50 pg/ml, pelo menos cerca de 60 pg/ml, pelo menos cerca de 70 pg/ml, pelo menos cerca de 80 pg/ml, pelo menos cerca de 90 pg/ml ou pelo menos cerca de 100 pg/ml.

[0216]Em algumas modalidades, a quantidade do biomarcador precoce, tal como UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas, pode ser entre pelo menos cerca de 1 pg/ml a cerca de 1.000 pg/ml. Em algumas modalidades, o nível de referência do biomarcador precoce, tal como UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas, pode ser entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 450 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 20 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 15 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 10 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de

450 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de

300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de

50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 20 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 15 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de

10 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 500 pg/ml,

entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 450 pg/ml, entre pelo menos cerca de

10 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 20 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 15 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 600 pg/ml,

entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 525 pg/ml, entre pelo menos cerca de

25 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 425 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 600 pg/ml,

entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de

50 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 450 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 450 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 450 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de

300 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 450 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 450 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 600 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 600 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 600 pg/ml e cerca de 800 pg/ml ou entre pelo menos cerca de 600 pg/ml e cerca de 700 pg/ml.

Em algumas modalidades, a quantidade do biomarcador precoce, tal como UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas, pode ser de pelo menos cerca de 0,5 pg/ml, pelo menos cerca de 1,0 pg/ml, pelo menos cerca de

1,5 pg/ml, pelo menos cerca de 2,0 pg/ml, pelo menos cerca de 2,5 pg/ml, pelo menos cerca de 3,0 pg/ml, pelo menos cerca de 4,0 pg/ml, pelo menos cerca de 5,0 pg/ml,

pelo menos cerca de 6,0 pg/ml, pelo menos cerca de 7,0 pg/ml, pelo menos cerca de

8,0, pg/ml, pelo menos cerca de 9,0 pg/ml, pelo menos cerca de 10 pg/ml, pelo menos cerca de 15 pg/ml, pelo menos cerca de 20 pg/ml, pelo menos cerca de 25 pg/ml, pelo menos cerca de 30 pg/ml, pelo menos cerca de 35 pg/ml, pelo menos cerca de 40 pg/ml, pelo menos cerca de 45 pg/ml, pelo menos cerca de 50 pg/ml, pelo menos cerca de 100 pg/ml, pelo menos cerca de 150 pg/ml, pelo menos cerca de 200 pg/ml,

pelo menos cerca de 250 pg/ml, pelo menos cerca de 300 pg/ml, pelo menos cerca de 350 pg/ml, pelo menos cerca de 400 pg/ml, pelo menos cerca de 450 pg/ml, pelo menos cerca de 500 pg/ml, pelo menos cerca de 550 pg/ml, pelo menos cerca de 600 pg/ml, pelo menos cerca de 650 pg/ml, pelo menos cerca de 700 pg/ml, pelo menos cerca de 750 pg/ml, pelo menos cerca de 800 pg/ml, pelo menos cerca de 850 pg/ml,

pelo menos cerca de 900 pg/ml, pelo menos cerca de 950 pg/ml ou pelo menos cerca de 1.000 pg/ml.

[0217]Além da realização dos métodos descritos acima, um versado na técnica (por exemplo, médico) entenderia e saberia como realizar teste adicional a fim de detectar ou avaliar outros comorbidades (por exemplo, outras doenças, distúrbios ou condições além de TBI). Tais procedimentos ou testes adicionais incluem um ou mais dentre um eletrocardiograma, uma contagem de células de sangue completo (CBC), um painel metabólico abrangente, um perfil lipídico (por exemplo, para determinar HDL, LDL, triglicerídeos, etc.), um angiograma, um ou mais testes para detectar ou determinar os níveis de um ou mais dentre proteína C-reativa (CRP), peptídeo natriurético do cérebro, ceramidas de plasma, etc.

[0218]Em uma modalidade, a fim de confirmar que as alterações em quantidades ou níveis de cTnI nos métodos descritos no presente documento são atribuíveis a uma lesão na cabeça ou uma suspeita de lesão na cabeça de um indivíduo e não o resultado de uma síndrome cardíaca aguda (tal como um infarto do miocárdio, insuficiência cardíaca, etc.), um médico ou outro prestador de serviços de saúde poderia conduzir ou realizar um ou mais testes ou procedimentos adicionais para confirmar a ausência de uma síndrome cardíaca aguda. Tais procedimentos ou testes adicionais incluem um ou mais dentre um eletrocardiograma, uma contagem de células de sangue completo (CBC), um painel metabólico abrangente, um perfil lipídico (por exemplo, para determinar HDL, LDL, triglicerídeos, etc.), um angiograma, um ou mais testes para detectar ou determinar os níveis de um ou mais dentre proteína C-reativa (CRP), peptídeo natriurético do cérebro, ceramidas de plasma, etc.

[0219]

[0220]Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente tratar o indivíduo humano avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral, conforme descrito a seguir. Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente monitorar o indivíduo humano avaliado como tendo lesão traumática cerebral branda, conforme descrito a seguir. Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente solicitar testes adicionais para obter informações clínicas adicionais sobre a lesão traumática cerebral. Em algumas modalidades, o método inclui tratar o indivíduo humano avaliado como tendo uma lesão cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento cardioprotetor para proteger o coração, conforme descrito a seguir.

[0221]A natureza do ensaio empregado nos métodos descritos no presente documento não é crítica e o teste pode ser qualquer ensaio conhecido na técnica como, por exemplo, imunoensaios, imunoprecipitação de proteína, imunoeletroforese, análise química, SDS-PAGE e análise Western blot ou imunocoloração de proteína, análise de eletroforese, um ensaio de proteína, um ensaio de ligação competitiva, um ensaio de proteína funcional ou métodos de cromatografia ou espectrometria, tais como cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou cromatografia líquida– espectrometria de massa (LC/MS). Além disso, o ensaio pode ser empregado em um formato de química clínica tal como seria conhecido por um versado na técnica. Tais ensaios são descrito em mais detalhes no presente documento nas Seções 8 a 12.

É fato conhecido na técnica que os valores (por exemplo, níveis de referência, cortes, limiares, especificidades, sensibilidades, concentrações de calibradores e/ou controles, etc.) usados em um ensaio que emprega tipo de amostra específico (por exemplo, tal como um imunoensaio que usa soro ou um dispositivo de ponto-de- cuidado que emprega sangue total) podem ser extrapolados para outros formatos de ensaio com o uso de procedimentos conhecidos na técnica, tais como padronização de ensaio. Por exemplo, uma maneira na qual a padronização de ensaio pode ser realizada é mediante a aplicação de um fato ao calibrador empregado no ensaio para tornar a leitura de concentração de amostra maior ou menor para obter um coeficiente angular que se alinha com o método comparador. Outros métodos para padronizar resultados obtidos em um ensaio a outro ensaio são bem conhecidos e têm sido descritos na literatura (Consultar, por exemplo, David Wild, Immunoassay Handbook, 4a Edição, capítulo 3.5, páginas 315 a 322, cujo conteúdo estão incorporado ao presente documento a título de referência).

3. Método para auxiliar na determinação de se deve realizar uma varredura por TC em um indivíduo humano que pode ter sofrido ou sofreu uma (ou tem uma lesão real ou suspeita) lesão na cabeça com o uso de troponina cardíaca I (cTnI) e um biomarcador precoce

[0222]A presente revelação se refere, entre outros métodos, a um método para auxiliar na determinação de se deve realizar uma varredura por tomografia computadorizada (TC) em um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma (ou tem uma lesão real ou suspeita) lesão na cabeça. Como usado aqui, “determinação de se deve realizar uma varredura por TC em um indivíduo humano” se refere ao fato de que o método mencionado anteriormente pode ser usado, por exemplo, com outras informações (por exemplo, dados de avaliação clínica), para determinar que o indivíduo é mais propenso do que não a ter uma varredura por TC de cabeça positiva. Especificamente, tal método pode compreender as etapas de: (a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas, tal como dentro de cerca de 2 horas, após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce na amostra e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce; e (b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce. A amostra pode ser uma amostra biológica. O biomarcador precoce inclui ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas.

[0223]Em algumas modalidades, o método pode incluir obter uma amostra dentro de cerca de 24 horas, tal como dentro de cerca de 2 horas, de uma suspeita de lesão real para o indivíduo e colocar a amostra em contato com um anticorpo para cTnI para permitir a formação de um complexo do anticorpo e cTnI e com um anticorpo para o biomarcador precoce para permitir a formação de um complexo do anticorpo e do biomarcador precoce. O método inclui também detectar o complexo de anticorpo-cTnI resultante e o complexo de anticorpo-biomarcador precoce resultante.

[0224]Em algumas modalidades, a amostra pode ser obtida ou tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 0 minuto, dentro de cerca de 1 minuto, dentro de cerca de 2 minutos, dentro de cerca de 3 minutos, dentro de cerca de 4 minutos, dentro de cerca de 5 minutos, dentro de cerca de 6 minutos, dentro de cerca de 7 minutos, dentro de cerca de 8 minutos, dentro de cerca de 9 minutos, dentro de cerca de 10 minutos, dentro de cerca de 11 minutos, dentro de cerca de 12 minutos, dentro de cerca de 13 minutos, dentro de cerca de 14 minutos, dentro de cerca de 15 minutos, dentro de cerca de 20 minutos, dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas de uma suspeita de lesão na cabeça.

[0225]Em algumas modalidades, a amostra é tomada a partir do indivíduo humano dentro de cerca de 2 horas da lesão ou suspeita de lesão na cabeça. Por exemplo, a amostra pode ser tomada a partir do indivíduo humano dentro de cerca de 0 minuto, cerca de 1 minuto, cerca de 2 minutos, cerca de 3 minutos, cerca de 4 minutos, cerca de 5 minutos, cerca de 6 minutos, cerca de 7 minutos, cerca de 8 minutos, cerca de 9 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 11 minutos, cerca de 12 minutos, cerca de 13 minutos, cerca de 14 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 90 minutos ou cerca de 2 horas da lesão ou suspeita de lesão na cabeça. Em algumas modalidades, o início da presença de cTnI e/ou do biomarcador precoce aparece dentro de cerca de 0 minuto, cerca de 1 minuto, cerca de 2 minutos, cerca de 3 minutos, cerca de 4 minutos, cerca de 5 minutos, cerca de 6 minutos, cerca de 7 minutos, cerca de 8 minutos, cerca de 9 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 11 minutos, cerca de 12 minutos, cerca de 13 minutos, cerca de 14 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 90 minutos ou cerca de 2 horas após a lesão na cabeça.

[0226]Em algumas modalidades, o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado. Em algumas modalidades, o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC. Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce são correlacionados com a varredura por TC de cabeça positiva.

[0227]Em geral, um nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce podem ser empregados como um parâmetro de comparação contra qual se avalia resultados obtidos mediante o ensaio de uma amostra de teste acerca de cTnI e biomarcador precoce, respectivamente. Em geral, na realização de tal comparação, o nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce são obtidos mediante a execução de um ensaio particular um número suficiente de vezes e sob condições adequadas de modo que uma ligação ou associação da presença de analito, quantidade ou concentração com um estágio ou ponto final particular de TBI ou com indícios particulares possa ser feita. Tipicamente, o nível de referência de cTnI e o nível de referência do biomarcador precoce são obtidos com ensaios de indivíduos de referência (ou populações de indivíduos). O cTnI e/ou biomarcador precoce medido pode incluir fragmentos dos mesmos, produtos de degradação dos mesmos e/ou produtos de clivagem enzimática dos mesmos.

[0228]Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI e/ou nível de referência do biomarcador precoce é determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 65% e cerca de 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 100%. Em algumas modalidades, a sensibilidade é entre pelo menos cerca de 65% a cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 65% e pelo menos cerca de 70%, entre pelo menos cerca de 75% a cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 75% e pelo menos cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 75% e pelo menos cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 75% e pelo menos cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 75% e pelo menos cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 75% e pelo menos cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 85% a cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 85% e pelo menos cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 85% e pelo menos cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 85% e pelo menos cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 95% a cerca de 100% ou entre pelo menos cerca de 95% e pelo menos cerca de 99%. Em algumas modalidades, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 65,0%, pelo menos cerca de 70,0%, pelo menos cerca de 75,0%, pelo menos cerca de 80,0%, pelo menos cerca de 85,0%, pelo menos cerca de 87,5%, pelo menos cerca de 90,0%, pelo menos cerca de 95,0%, pelo menos cerca de 99,0%, pelo menos cerca de 99,1%, pelo menos cerca de 99,2%, pelo menos cerca de 99,3%, pelo menos cerca de 99,4%, pelo menos cerca de 99,5%, pelo menos cerca de 99,6%, pelo menos cerca de 99,7%, pelo menos cerca de 99,8%, pelo menos cerca de 99,9% ou pelo menos cerca de 100,0%.

[0229]Em algumas modalidades, a especificidade é entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 70%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de

60%, entre pelo menos cerca de 30% e cerca de 50%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 70%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 60%, entre pelo menos cerca de 40% e cerca de 50%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 70%, entre pelo menos cerca de 50% e cerca de 60%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 60% e cerca de 70%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 80%, entre pelo menos cerca de 70% e cerca de 75%, entre pelo menos cerca de 80% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 80% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 80% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 80% e cerca de 90%, entre pelo menos cerca de 80% e cerca de 85%, entre pelo menos cerca de 90% e cerca de 100%, entre pelo menos cerca de 90% e cerca de 99%, entre pelo menos cerca de 90% e cerca de 95%, entre pelo menos cerca de 95% e cerca de 99% ou entre pelo menos cerca de 95% e cerca de

100. Em algumas modalidades, a especificidade é pelo menos cerca de 30,0%, pelo menos cerca de 31,0%, pelo menos cerca de 32,0%, pelo menos cerca de 33,0%,

pelo menos cerca de 34,0%, pelo menos cerca de 35,0%, pelo menos cerca de 36,0%, pelo menos cerca de 37,0%, pelo menos cerca de 38,0%, pelo menos cerca de 39,0%, pelo menos cerca de 40,0%, pelo menos cerca de 45,0%, pelo menos cerca de 50,0%, pelo menos cerca de 55,0%, pelo menos cerca de 60,0%, pelo menos cerca de 65,0%, pelo menos cerca de 70,0%, pelo menos cerca de 75,0%, pelo menos cerca de 80,0%, pelo menos cerca de 85,0%, pelo menos cerca de 90,0%, pelo menos cerca de 91,0%, pelo menos cerca de 92,0%, pelo menos cerca de 93,0%, pelo menos cerca de 94,0%, pelo menos cerca de 95,0%, pelo menos cerca de 96,0%, pelo menos cerca de 97,0%, pelo menos cerca de 98,0%, pelo menos cerca de 99,0%, pelo menos cerca de 99,1%, pelo menos cerca de 99,2%, pelo menos cerca de 99,3%, pelo menos cerca de 99,4%, pelo menos cerca de 99,5%, pelo menos cerca de 99,6%, pelo menos cerca de 99,7%, pelo menos cerca de 99,8%, pelo menos cerca de 99,9% ou pelo menos cerca de 100,0%. Por exemplo, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 99% e a especificidade é de pelo menos cerca de 75%, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 99% e a especificidade é de pelo menos cerca de 99% ou a sensibilidade é de pelo menos cerca de 100% e a especificidade é de pelo menos cerca de 100%.

[0230]Em algumas modalidades, a quantidade de cTnI na amostra é a partir de cerca de 1 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 3 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 2 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 1,5 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 100 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 90 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 80 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 70 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 60 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 55 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de

cerca de 20 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 30 pg/ml ou cerca de 20 pg/ml a cerca de 25 pg/ml. Em algumas modalidades, a quantidade de cTnI pode ser de pelo menos cerca de 0,5 pg/ml, pelo menos cerca de 1,0 pg/ml, pelo menos cerca de 1,5 pg/ml, pelo menos cerca de 2,0 pg/ml, pelo menos cerca de 2,5 pg/ml, pelo menos cerca de 3,0 pg/ml, pelo menos cerca de 4,0 pg/ml, pelo menos cerca de 5,0 pg/ml, pelo menos cerca de 6,0 pg/ml, pelo menos cerca de 7,0 pg/ml, pelo menos cerca de 8,0, pg/ml, pelo menos cerca de 9,0 pg/ml, pelo menos cerca de 10 pg/ml, pelo menos cerca de 15 pg/ml, pelo menos cerca de 20 pg/ml, pelo menos cerca de 25 pg/ml, pelo menos cerca de 30 pg/ml, pelo menos cerca de 35 pg/ml, pelo menos cerca de 40 pg/ml, pelo menos cerca de 45 pg/ml, pelo menos cerca de 50 pg/ml, pelo menos cerca de 60 pg/ml, pelo menos cerca de 70 pg/ml, pelo menos cerca de 80 pg/ml, pelo menos cerca de 90 pg/ml ou pelo menos cerca de 100 pg/ml.

[0231]Em algumas modalidades, a quantidade do biomarcador precoce, tal como UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas, pode ser entre pelo menos cerca de 1 pg/ml a cerca de 1.000 pg/ml. Em algumas modalidades, o nível de referência do biomarcador precoce, tal como UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas, pode ser entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 450 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 20 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 15 pg/ml, entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 10 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 900 pg/ml,

entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de

5 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de

10 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 20 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 15 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 600 pg/ml,

300 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 450 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 450 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 800 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 700 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 600 pg/ml, entre pelo menos cerca de 500 pg/ml e cerca de 550 pg/ml, entre pelo menos cerca de 600 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 600 pg/ml e cerca de 900 pg/ml, entre pelo menos cerca de 600 pg/ml e cerca de 800 pg/ml ou entre pelo menos cerca de 600 pg/ml e cerca de 700 pg/ml. Em algumas modalidades, a quantidade do biomarcador precoce, tal como UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas, pode ser de pelo menos cerca de 0,5 pg/ml, pelo menos cerca de 1,0 pg/ml, pelo menos cerca de 1,5 pg/ml, pelo menos cerca de 2,0 pg/ml, pelo menos cerca de 2,5 pg/ml, pelo menos cerca de 3,0 pg/ml, pelo menos cerca de 4,0 pg/ml, pelo menos cerca de 5,0 pg/ml, pelo menos cerca de 6,0 pg/ml, pelo menos cerca de 7,0 pg/ml, pelo menos cerca de 8,0, pg/ml, pelo menos cerca de 9,0 pg/ml, pelo menos cerca de 10 pg/ml, pelo menos cerca de 15 pg/ml, pelo menos cerca de 20 pg/ml, pelo menos cerca de 25 pg/ml, pelo menos cerca de 30 pg/ml, pelo menos cerca de 35 pg/ml, pelo menos cerca de 40 pg/ml, pelo menos cerca de 45 pg/ml, pelo menos cerca de 50 pg/ml, pelo menos cerca de 100 pg/ml, pelo menos cerca de 150 pg/ml, pelo menos cerca de 200 pg/ml, pelo menos cerca de 250 pg/ml, pelo menos cerca de 300 pg/ml, pelo menos cerca de 350 pg/ml, pelo menos cerca de 400 pg/ml, pelo menos cerca de 450 pg/ml, pelo menos cerca de 500 pg/ml, pelo menos cerca de 550 pg/ml, pelo menos cerca de 600 pg/ml, pelo menos cerca de 650 pg/ml, pelo menos cerca de 700 pg/ml, pelo menos cerca de 750 pg/ml, pelo menos cerca de 800 pg/ml, pelo menos cerca de 850 pg/ml, pelo menos cerca de 900 pg/ml, pelo menos cerca de 950 pg/ml ou pelo menos cerca de 1.000 pg/ml.

[0232]Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI, UCH-L1 e/ou GFAP são conforme mostrado nas Tabelas A, B e C abaixo: Tabela A: cTnI UCH-L1 Cerca de 5 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 500 pg/ml

Cerca de 5 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 550 pg/ml

Tabela B cTnI GFAP Cerca de 5 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 100 pg/ml

Cerca de 35 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 150 pg/ml

Tabela C cTnI UCH-L1 GFAP Cerca de 5 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml

Cerca de 15 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 70 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml

[0233]Em algumas modalidades do método acima, o nível de referência para cTnI, UCH-L1 e/ou GFAP são conforme mostrado nas Tabelas D, E e F abaixo: Tabela D: CTnI UCH-L1

Cerca de 5 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 550 pg/ml

Tabela E cTnI GFAP Cerca de 5 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 150 pg/ml

Cerca de 35 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 150 pg/ml

Tabela F cTnI UCH-L1 GFAP Cerca de 5 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 5 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 10 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml

Cerca de 15 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 15 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 20 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 35 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 400 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 550 pg/ml Cerca de 100 pg/ml Cerca de 50 pg/ml Cerca de 500 pg/ml Cerca de 150 pg/ml

[0234]Além da realização dos métodos descritos acima, um versado na técnica (por exemplo, médico) entenderia e saberia como realizar teste adicional a fim de detectar ou avaliar outros comorbidades (por exemplo, outras doenças, distúrbios ou condições além de TBI). Tais procedimentos ou testes adicionais incluem um ou mais dentre um eletrocardiograma, uma contagem de células de sangue completo (CBC), um painel metabólico abrangente, um perfil lipídico (por exemplo, para determinar HDL, LDL, triglicerídeos, etc.), um angiograma, um ou mais testes para detectar ou determinar os níveis de um ou mais dentre proteína C-reativa (CRP), peptídeo natriurético do cérebro, ceramidas de plasma, etc.

[0235]Em uma modalidade, a fim de confirmar que as alterações em quantidades ou níveis de cTnI nos métodos descritos no presente documento são atribuíveis a uma lesão na cabeça ou uma suspeita de lesão na cabeça de um indivíduo e não o resultado de uma síndrome cardíaca aguda (tal como um infarto do miocárdio, insuficiência cardíaca, etc.), um médico ou outro prestador de serviços de saúde poderia conduzir ou realizar um ou mais testes ou procedimentos adicionais para confirmar a ausência de uma síndrome cardíaca aguda. Tais procedimentos ou testes adicionais incluem um ou mais dentre um eletrocardiograma, uma contagem de células de sangue completo (CBC), um painel metabólico abrangente, um perfil lipídico (por exemplo, para determinar HDL, LDL, triglicerídeos, etc.), um angiograma, um ou mais testes para detectar ou determinar os níveis de um ou mais dentre proteína C-reativa (CRP), peptídeo natriurético do cérebro, ceramidas de plasma, etc.

[0236]Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente tratar o indivíduo humano que foi determinado como tendo uma TBI com um tratamento de lesão traumática cerebral, conforme descrito a seguir. Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente monitorar, conforme descrito a seguir, o indivíduo humano que foi determinado como tendo uma TBI. Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente solicitar testes adicionais para obter informações clínicas adicionais sobre a lesão traumática cerebral. Em algumas modalidades, o método inclui tratar o indivíduo humano avaliado como tendo uma lesão cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento cardioprotetor para proteger o coração, conforme descrito a seguir.

[0237]A natureza do ensaio empregado nos métodos descritos no presente documento não é crítica e o teste pode ser qualquer ensaio conhecido na técnica como, por exemplo, imunoensaios, imunoprecipitação de proteína, imunoeletroforese, análise Western blot ou imunocoloração de proteína, métodos de espectrometria, tais como cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou cromatografia líquida– espectrometria de massa (LC/MS). Além disso, o ensaio pode ser empregado no formato de química clínica tal como seria conhecido por um versado na técnica. Tais ensaios são descrito em mais detalhes no presente documento nas Seções 8 a 12.

4. Métodos para auxiliar no diagnóstico e na avaliação de se um indivíduo humano pode ter sofrido ou sofreu uma (ou tem uma lesão real ou suspeita de lesão) lesão na cabeça com base em alterações em níveis de troponina cardíaca I (cTnI) e níveis de biomarcador precoce

[0238]A presente revelação se refere, entre outros métodos, a um método para auxiliar no diagnóstico e na avaliação de se um indivíduo humano sofreu ou pode ter sofrido uma (ou tem uma lesão real ou suspeita) lesão na cabeça. O método pode ajudar na determinação da extensão da lesão traumática cerebral em um indivíduo humano com uma suspeita de lesão ou lesão real na cabeça, por exemplo, determinando se o indivíduo tem lesão traumática cerebral branda ou uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa. Como usado aqui, “determinar se o indivíduo tem lesão traumática cerebral branda ou uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa” se refere ao fato de que o método mencionado anteriormente pode ser usado, por exemplo, com outras informações (por exemplo, dados de avaliação clínica), para determinar que o indivíduo é mais propenso do que não ter lesão traumática cerebral branda ou lesão traumática cerebral moderada a severa. O método pode incluir realizar um ensaio em pelo menos duas amostras obtidas a partir do indivíduo, a primeira amostra tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas, tal como dentro de cerca de 2 horas, após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça e a segunda amostra tomada a partir do indivíduo a partir de cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a primeira amostra é tomada; detectar nas pelo menos duas amostras troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce; e determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa. O indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI diminui ou aumenta em pelo menos uma quantidade absoluta a partir da primeira amostra até a segunda amostra e o nível do biomarcador precoce diminui ou aumenta em pelo menos uma quantidade absoluta a partir da primeira amostra até a segunda amostra ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando não há diminuição ou aumento em pelo menos uma quantidade absoluta no nível de cTnI a partir da primeira amostra até a segunda amostra e/ou não há diminuição ou aumento em pelo menos uma quantidade absoluta no nível do biomarcador precoce a partir da primeira amostra até a segunda amostra.

As amostras pode ser amostras biológicas. O biomarcador precoce inclui ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas.

[0239]Em uma alternativa, o método pode incluir realizar um ensaio em pelo menos duas amostras obtidas a partir do indivíduo, a primeira amostra tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas, tal como dentro de cerca de 2 horas, após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça e a segunda amostra tomada a partir do indivíduo a partir de cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a primeira amostra é tomada; detectar nas pelo menos duas amostras cTnI e o biomarcador precoce; e determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI diminui ou aumenta em pelo menos uma primeira quantidade absoluta a partir da primeira amostra até a segunda amostra e o nível do biomarcador precoce diminui ou aumenta em pelo menos uma primeira quantidade absoluta a partir da primeira amostra até a segunda amostra ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando não há diminuição ou aumento em pelo menos uma segunda quantidade absoluta no nível de cTnI a partir da primeira amostra até a segunda amostra e/ou não há diminuição ou aumento em pelo menos uma segunda quantidade absoluta no nível do biomarcador precoce a partir da primeira amostra até a segunda amostra. As amostras pode ser amostras biológicas.

[0240]Em algumas modalidades, o método pode incluir colocar as amostras em contato com um anticorpo para cTnI, para permitir a formação de um complexo do anticorpo e cTnI. O método inclui também detectar o complexo de anticorpo-cTnI resultante para determinar os níveis de cTnI para cada uma dentre a primeira amostra e a segunda amostra. O início da presença de cTnI aparece dentro de cerca de 0 a cerca de 2 horas após o início da suspeita de lesão. Em algumas modalidades, o início da presença de cTnI aparece dentro de cerca de 0 minuto, cerca de 1 minuto, cerca de 2 minutos, cerca de 3 minutos, cerca de 4 minutos, cerca de 5 minutos, cerca de 6 minutos, cerca de 7 minutos, cerca de 8 minutos, cerca de 9 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 11 minutos, cerca de 12 minutos, cerca de 13 minutos, cerca de 14 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 90 minutos ou cerca de 2 horas após a lesão na cabeça.

[0241]Em algumas modalidades, a primeira amostra é obtida em um primeiro ponto no tempo dentro de cerca de 24 horas da suspeita de lesão e a segunda amostra é obtida no segundo ponto no tempo ou opcionalmente em um terceiro ponto no tempo ou quarto ponto no tempo, após o primeiro ponto no tempo. Em algumas modalidades, a primeira amostra é tomada dentro de cerca de 24 horas após a suspeita de lesão e a segunda amostra é tomada dentro de cerca de 3 horas a cerca de 6 horas após a primeira amostra. Em algumas modalidades, a primeira amostra pode ser obtida ou tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 0 minuto, dentro de cerca de 1 minuto, dentro de cerca de 2 minutos, dentro de cerca de 3 minutos, dentro de cerca de 4 minutos, dentro de cerca de 5 minutos, dentro de cerca de 6 minutos, dentro de cerca de 7 minutos, dentro de cerca de 8 minutos, dentro de cerca de 9 minutos, dentro de cerca de 10 minutos, dentro de cerca de 11 minutos, dentro de cerca de 12 minutos, dentro de cerca de 13 minutos, dentro de cerca de 14 minutos, dentro de cerca de 15 minutos, dentro de cerca de 20 minutos, dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas de uma suspeita de lesão na cabeça.

[0242]Em algumas modalidades, a primeira amostra é obtida em um primeiro ponto no tempo dentro de cerca de 2 horas da suspeita de lesão e a segunda amostra é obtida no segundo ponto no tempo ou opcionalmente em um terceiro ponto no tempo ou quarto ponto no tempo, após o primeiro ponto no tempo. Em algumas modalidades, a primeira amostra é tomada dentro de cerca de 2 horas após a suspeita de lesão e a segunda amostra é tomada dentro de cerca de 3 horas a cerca de 6 horas após a primeira amostra. Em algumas modalidades, a primeira amostra é tomada cerca de 0 a cerca de 2 horas após a lesão ou suspeita de lesão na cabeça.

Por exemplo, a primeira amostra pode ser tomada entre cerca de 0 e cerca de 2 horas, cerca de 0 horas e cerca de 90 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 60 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 45 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 30 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 20 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 15 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 10 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 5 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 90 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 60 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 45 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 30 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 20 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 15 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 10 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 90 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 60 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 45 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 30 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 20 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 15 minutos, cerca de 15 minutos e cerca de 90 minutos, cerca de 15 minutos e cerca de 60 minutos, cerca de 15 minutos e cerca de 45 minutos, cerca de 15 minutos e cerca de 30 minutos, cerca de 15 minutos e cerca de 20 minutos, cerca de 20 minutos e cerca de 90 minutos, cerca de 20 minutos e cerca de 60 minutos, cerca de 20 minutos e cerca de 45 minutos ou cerca de 20 minutos e cerca de 30 minutos após a suspeita de lesão. Por exemplo, a primeira amostra pode ser tomada a partir do indivíduo humano dentro de cerca de 0 minuto, cerca de 1 minuto, cerca de 2 minutos, cerca de 3 minutos, cerca de 4 minutos, cerca de 5 minutos, cerca de 6 minutos, cerca de 7 minutos, cerca de 8 minutos, cerca de 9 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 11 minutos, cerca de 12 minutos, cerca de 13 minutos, cerca de 14 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 90 minutos ou cerca de 2 horas da lesão ou suspeita de lesão na cabeça.

[0243]Em algumas modalidades, a segunda amostra é tomada cerca de 1 hora a cerca de 10 horas após o primeiro ponto no tempo, tal como cerca de 3 horas a cerca de 6 horas após o primeiro ponto no tempo. Em algumas modalidades, a segunda amostra é tomada cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas ou cerca de 10 horas após a primeira amostra.

[0244]Em algumas modalidades, o indivíduo pode ter recebido uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o nível de cTnI ser determinado em um ou mais pontos no tempo. Em certas modalidades, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em certas modalidades, o indivíduo pode ser suspeito de ter uma lesão traumática cerebral branda com base em uma TC de cabeça anormal. Em algumas modalidades, o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma TC de cabeça normal.

[0245]Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI é correlacionado com indivíduos que tem uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa. Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI é correlacionado com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12 (TBI moderada a severa). Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI é correlacionada com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 8 (uma TBI severa). Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI é correlacionado com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 9 a 13 (uma TBI moderada).

Em algumas modalidades, o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow. Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI é correlacionado com indivíduos que tem lesão traumática cerebral branda. Em algumas modalidades, o nível de referência de cTnI é correlacionado com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15 (uma TBI branda).

[0246]Em algumas modalidades, a quantidade absoluta pode ser determinada por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 65% e cerca de 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 65% e cerca de 100%. Por exemplo, a quantidade absoluta pode ser determinada por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 80% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 65% e 100%. Em algumas modalidades, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 65,0%, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 70,0%, pelo menos cerca de 75,0%, pelo menos cerca de 80,0%, pelo menos cerca de 85,0%, pelo menos cerca de 90,0%, pelo menos cerca de 95,0%, pelo menos cerca de 99,0%, pelo menos cerca de 99,1%, pelo menos cerca de 99,2%, pelo menos cerca de 99,3%, pelo menos cerca de 99,4%, pelo menos cerca de 99,5%, pelo menos cerca de 99,6%, pelo menos cerca de 99,7%, pelo menos cerca de 99,8%, pelo menos cerca de 99,9% ou pelo menos cerca de 100,0%. Em algumas modalidades, a especificidade é de pelo menos cerca de 65,0%, pelo menos cerca de 70,0%, pelo menos cerca de 75,0%, pelo menos cerca de 80,0%, pelo menos cerca de 85,0%, pelo menos cerca de 90,0%, pelo menos cerca de 91,0%, pelo menos cerca de 92,0%,

pelo menos cerca de 93. %, pelo menos cerca de 94,0%, pelo menos cerca de 95,0%, pelo menos cerca de 96,0%, pelo menos cerca de 97,0%, pelo menos cerca de 98.0%, pelo menos cerca de 99,0%, pelo menos cerca de 99,1%, pelo menos cerca de 99,2%, pelo menos cerca de 99,3%, pelo menos cerca de 99,4%, pelo menos cerca de 99,5%, pelo menos cerca de 99,6%, pelo menos cerca de 99,7%, pelo menos cerca de 99,8%, pelo menos cerca de 99,9% ou pelo menos cerca de 100,0%. Por exemplo, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 100% e a especificidade é de pelo menos cerca de 75%, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 99% e a especificidade é de pelo menos cerca de 99% ou a sensibilidade é de pelo menos cerca de 87% e a especificidade é de pelo menos cerca de 95%.

[0247]Em algumas modalidades, a quantidade absoluta de cTnI na amostra é a partir de cerca de 1 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 3 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 2 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 1,5 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 3 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 2 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 35 pg/ml,

cerca de 2 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de

2 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 6 pg/ml,

cerca de 2 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 3 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de

35 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 25 pg/ml,

3 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 3 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de

20 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 10 pg/ml,

cerca de 4 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 4 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de

45 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 35 pg/ml,

cerca de 5 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de

5 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 5 pg/ml a cerca de 6 pg/ml,

cerca de 6 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de

6 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 15 pg/ml,

cerca de 7 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de

7 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de

35 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 25 pg/ml,

cerca de 8 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de

8 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de

40 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 30 pg/ml,

cerca de 9 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de

9 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 20 pg/ml,

cerca de 10 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 30 pg/ml ou cerca de 20 pg/ml a cerca de 25 pg/ml.

Em algumas modalidades, a quantidade absoluta de cTnI pode ser de pelo menos cerca de 0,5 pg/ml, pelo menos cerca de 1,0 pg/ml, pelo menos cerca de 1,5 pg/ml, pelo menos cerca de 2,0 pg/ml, pelo menos cerca de 2,5 pg/ml, pelo menos cerca de 3,0 pg/ml, pelo menos cerca de 4,0 pg/ml, pelo menos cerca de 5,0 pg/ml, pelo menos cerca de 6,0 pg/ml, pelo menos cerca de 7,0 pg/ml,

pelo menos cerca de 8,0, pg/ml, pelo menos cerca de 9,0 pg/ml, pelo menos cerca de

10 pg/ml, pelo menos cerca de 15 pg/ml, pelo menos cerca de 20 pg/ml, pelo menos cerca de 25 pg/ml, pelo menos cerca de 30 pg/ml, pelo menos cerca de 35 pg/ml, pelo menos cerca de 40 pg/ml, pelo menos cerca de 45 pg/ml ou pelo menos cerca de 50 pg/ml.

[0248]Em algumas modalidades, a quantidade absoluta do biomarcador precoce, tal como UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas, pode ser entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml. Em algumas modalidades, a quantidade absoluta pode ser entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml,

entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de

400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 750 pg/ml ou entre pelo menos cerca de 400 pg/ml e cerca de 500 pg/ml.

Em algumas modalidades, a quantidade absoluta pode ser de pelo menos cerca de 5 pg/ml, pelo menos cerca de 6 pg/ml, pelo menos cerca de 7 pg/ml, pelo menos cerca de 8 pg/ml, pelo menos cerca de 9 pg/ml, pelo menos cerca de 10 pg/ml, pelo menos cerca de 11 pg/ml, pelo menos cerca de 12 pg/ml, pelo menos cerca de 13 pg/ml, pelo menos cerca de 14 pg/ml, pelo menos cerca de 15 pg/ml, pelo menos cerca de 16 pg/ml, pelo menos cerca de 17 pg/ml, pelo menos cerca de 18 pg/ml, pelo menos cerca de 19 pg/ml, pelo menos cerca de 20 pg/ml, pelo menos cerca de 21 pg/ml, pelo menos cerca de 22 pg/ml, pelo menos cerca de 23 pg/ml, pelo menos cerca de 24 pg/ml, pelo menos cerca de 25 pg/ml, pelo menos cerca de 26 pg/ml, pelo menos cerca de 27 pg/ml, pelo menos cerca de 28 pg/ml, pelo menos cerca de 29 pg/ml, pelo menos cerca de 30 pg/ml, pelo menos cerca de 35 pg/ml, pelo menos cerca de 40 pg/ml, pelo menos cerca de 45 pg/ml, pelo menos cerca de 50 pg/ml, pelo menos cerca de 55 pg/ml, pelo menos cerca de 60 pg/ml, pelo menos cerca de 65 pg/ml, pelo menos cerca de 70 pg/ml, pelo menos cerca de 75 pg/ml, pelo menos cerca de 80 pg/ml, pelo menos cerca de 85 pg/ml, pelo menos cerca de 90 pg/ml, pelo menos cerca de 95 pg/ml, pelo menos cerca de 100 pg/ml, pelo menos cerca de 110 pg/ml, pelo menos cerca de 120 pg/ml, pelo menos cerca de 129 pg/ml, pelo menos cerca de 130 pg/ml, pelo menos cerca de 140 pg/ml, pelo menos cerca de 150 pg/ml, pelo menos cerca de 200 pg/ml, pelo menos cerca de 250 pg/ml, pelo menos cerca de 300 pg/ml, pelo menos cerca de 350 pg/ml, pelo menos cerca de 400 pg/ml, pelo menos cerca de 450 pg/ml, pelo menos cerca de 500 pg/ml, pelo menos cerca de 550 pg/ml, pelo menos cerca de 600 pg/ml, pelo menos cerca de 650 pg/ml, pelo menos cerca de 700 pg/ml, pelo menos cerca de 750 pg/ml, pelo menos cerca de 800 pg/ml, pelo menos cerca de 900 pg/ml ou pelo menos cerca de

1.000 pg/ml.

[0249]Além da realização dos métodos descritos acima, um versado na técnica (por exemplo, médico) entenderia e saberia como realizar teste adicional a fim de detectar ou avaliar outros comorbidades (por exemplo, outras doenças, distúrbios ou condições além de TBI). Tais procedimentos ou testes adicionais incluem um ou mais dentre um eletrocardiograma, uma contagem de células de sangue completo (CBC), um painel metabólico abrangente, um perfil lipídico (por exemplo, para determinar HDL, LDL, triglicerídeos, etc.), um angiograma, um ou mais testes para detectar ou determinar os níveis de um ou mais dentre proteína C-reativa (CRP), peptídeo natriurético do cérebro, ceramidas de plasma, etc.

[0250]Em uma modalidade, a fim de confirmar que as alterações em quantidades ou níveis de cTnI nos métodos descritos no presente documento são atribuíveis a uma lesão na cabeça ou uma suspeita de lesão na cabeça de um indivíduo e não o resultado de uma síndrome cardíaca aguda (tal como um infarto do miocárdio, insuficiência cardíaca, etc.), um médico ou outro prestador de serviços de saúde poderia conduzir ou realizar um ou mais testes ou procedimentos adicionais para confirmar a ausência de uma síndrome cardíaca aguda. Tais procedimentos ou testes adicionais incluem um ou mais dentre um eletrocardiograma, uma contagem de células de sangue completo (CBC), um painel metabólico abrangente, um perfil lipídico (por exemplo, para determinar HDL, LDL, triglicerídeos, etc.), um angiograma, um ou mais testes para detectar ou determinar os níveis de um ou mais dentre proteína C-reativa (CRP), peptídeo natriurético do cérebro, ceramidas de plasma, etc.

[0251]Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente tratar o indivíduo humano avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral, conforme descrito a seguir. Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente monitorar o indivíduo humano avaliado como tendo lesão traumática cerebral branda, conforme descrito a seguir. Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente solicitar testes adicionais para obter informações clínicas adicionais sobre a lesão traumática cerebral. Em algumas modalidades, o método inclui tratar o indivíduo humano avaliado como tendo uma lesão cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento cardioprotetor para proteger o coração, conforme descrito a seguir.

[0252]A natureza do ensaio empregado nos métodos descritos no presente documento não é crítica e o teste pode ser qualquer ensaio conhecido na técnica como, por exemplo, imunoensaios, imunoprecipitação de proteína, imunoeletroforese, análise Western blot ou imunocoloração de proteína, métodos de espectrometria, tais como cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou cromatografia líquida– espectrometria de massa (LC/MS). Além disso, o ensaio pode ser empregado no formato de química clínica tal como seria conhecido por um versado na técnica. Tais ensaios são descrito em mais detalhes no presente documento nas Seções 8 a 12.

5. Método para auxiliar na determinação de se deve realizar uma varredura por TC em um indivíduo humano que pode ter sofrido ou sofreu uma (ou tem uma lesão real ou suspeita de lesão) lesão na cabeça com base em alterações em níveis de troponina cardíaca I (cTnI) e níveis de biomarcador precoce

[0253]A presente revelação se refere, entre outros métodos, a um método para auxiliar na determinação de se deve realizar uma varredura por tomografia computadorizada (TC) em um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma

(ou tem uma lesão real ou suspeita) lesão na cabeça. Como usado aqui, “determinação de se deve realizar uma varredura por TC em um indivíduo humano” se refere ao fato de que o método mencionado anteriormente pode ser usado, por exemplo, com outras informações (por exemplo, dados de avaliação clínica), para determinar que o indivíduo é mais propenso do que não a ter uma varredura por TC de cabeça positiva. Especificamente, tal método pode compreender as etapas de: realizar um ensaio em pelo menos duas amostras obtidas a partir do indivíduo, a primeira amostra tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas, tal como dentro de cerca de 2 horas, da suspeita de lesão e a segunda amostra tomada a partir do indivíduo a partir de cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a primeira amostra é tomada; detectar nas pelo menos duas amostras troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce; e realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI diminui ou aumenta em pelo menos uma quantidade absoluta a partir da primeira amostra até a segunda amostra e o nível do biomarcador precoce diminui ou aumenta em pelo menos uma quantidade absoluta a partir da primeira amostra até a segunda amostra e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando não há diminuição ou aumento em pelo menos uma quantidade absoluta no nível de cTnI a partir da primeira amostra até a segunda amostra e/ou não há diminuição ou aumento em pelo menos uma quantidade absoluta no nível do biomarcador precoce a partir da primeira amostra até a segunda amostra. As amostras pode ser amostras biológicas. O biomarcador precoce inclui ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas.

[0254]Em algumas modalidades, o método pode incluir colocar as amostras em contato com um anticorpo para cTnI, para permitir a formação de um complexo do anticorpo e cTnI e com um anticorpo para o biomarcador precoce, para permitir a formação de um complexo do anticorpo e do biomarcador precoce. O método inclui também detectar o complexo de anticorpo-cTnI resultante para determinar os níveis de cTnI para cada uma dentre a primeira amostra e a segunda amostra e detectar o complexo de anticorpo-biomarcador precoce resultante para determinar os níveis do biomarcador precoce para cada uma dentre a primeira amostra e a segunda amostra.

O início da presença de cTnI e/ou do biomarcador precoce aparece dentro de cerca de 0 a cerca de 24 horas, tal como dentro de cerca de 2 horas, após o início da suspeita de lesão. Em algumas modalidades, o início da presença de cTnI e/ou do biomarcador precoce aparece dentro de cerca de 0 minuto, cerca de 1 minuto, cerca de 2 minutos, cerca de 3 minutos, cerca de 4 minutos, cerca de 5 minutos, cerca de 6 minutos, cerca de 7 minutos, cerca de 8 minutos, cerca de 9 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 11 minutos, cerca de 12 minutos, cerca de 13 minutos, cerca de 14 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 60 minutos, cerca de 90 minutos ou cerca de 2 horas após a lesão na cabeça.

[0255]Em algumas modalidades, a primeira amostra é obtida em um primeiro ponto no tempo dentro de cerca de 24 horas da suspeita de lesão e a segunda amostra é obtida no segundo ponto no tempo ou opcionalmente em um terceiro ponto no tempo ou quarto ponto no tempo, após o primeiro ponto no tempo. Em algumas modalidades, a primeira amostra é tomada dentro de cerca de 24 horas após a suspeita de lesão e a segunda amostra é tomada dentro de cerca de 3 horas a cerca de 6 horas após a primeira amostra. Em algumas modalidades, a primeira amostra pode ser obtida ou tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 0 minuto, dentro de cerca de 1 minuto, dentro de cerca de 2 minutos, dentro de cerca de 3 minutos, dentro de cerca de 4 minutos, dentro de cerca de 5 minutos, dentro de cerca de 6 minutos, dentro de cerca de 7 minutos, dentro de cerca de 8 minutos, dentro de cerca de 9 minutos, dentro de cerca de 10 minutos, dentro de cerca de 11 minutos, dentro de cerca de 12 minutos, dentro de cerca de 13 minutos, dentro de cerca de 14 minutos, dentro de cerca de 15 minutos, dentro de cerca de 20 minutos, dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas de uma suspeita de lesão na cabeça.

[0256]Em algumas modalidades, uma primeira amostra é obtida em um primeiro ponto no tempo dentro de cerca de 2 horas da suspeita de lesão e uma segunda amostra é obtida no segundo ponto no tempo ou opcionalmente em um terceiro ponto no tempo ou quarto ponto no tempo, após o primeiro ponto no tempo para determinar se o indivíduo terá uma varredura por TC de cabeça positiva ou negativa. Em algumas modalidades, a primeira amostra é tomada dentro de cerca de 2 horas após a suspeita de lesão e a segunda amostra é tomada dentro de cerca de 3 horas a cerca de 6 horas após a primeira amostra. Em algumas modalidades, o primeiro ponto no tempo é de cerca de 0 a cerca de 2 horas após a lesão ou suspeita de lesão na cabeça. Por exemplo, o primeiro ponto no tempo pode ser entre cerca de 0 e cerca de 2 horas, cerca de 0 horas e cerca de 90 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 60 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 45 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 30 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 20 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 15 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 10 minutos, cerca de 0 horas e cerca de 5 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 90 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 60 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 45 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 30 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 20 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 15 minutos, cerca de 5 minutos e cerca de 10 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 90 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 60 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 45 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 30 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 20 minutos, cerca de 10 minutos e cerca de 15 minutos, cerca de 15 minutos e cerca de 90 minutos, cerca de 15 minutos e cerca de 60 minutos, cerca de 15 minutos e cerca de 45 minutos, cerca de 15 minutos e cerca de 30 minutos, cerca de 15 minutos e cerca de 20 minutos, cerca de 20 minutos e cerca de

90 minutos, cerca de 20 minutos e cerca de 60 minutos, cerca de 20 minutos e cerca de 45 minutos ou cerca de 20 minutos e cerca de 30 minutos após a suspeita de lesão.

[0257]Em algumas modalidades, o segundo ponto no tempo ou opcionalmente um terceiro ponto no tempo ou quarto ponto no tempo, é de cerca de 1 hora a cerca de 10 horas após o primeiro ponto no tempo, tal como cerca de 3 horas a cerca de 6 horas após o primeiro ponto no tempo. Em algumas modalidades, o segundo ponto no tempo é de cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 3 horas, cerca de 4 horas, cerca de 5 horas, cerca de 6 horas, cerca de 7 horas, cerca de 8 horas, cerca de 9 horas ou cerca de 10 horas após o primeiro ponto no tempo.

[0258]Em algumas modalidades, a quantidade absoluta pode ser determinada por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 65% e cerca de 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 65% e cerca de 100%. Por exemplo, a quantidade absoluta pode ser determinada por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 80% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 65% e 100%. Em algumas modalidades, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 65,0%, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 70,0%, pelo menos cerca de 75,0%, pelo menos cerca de 80,0%, pelo menos cerca de 85,0%, pelo menos cerca de 90,0%, pelo menos cerca de 95,0%, pelo menos cerca de 99,0%, pelo menos cerca de 99,1%, pelo menos cerca de 99,2%, pelo menos cerca de 99,3%, pelo menos cerca de 99,4%, pelo menos cerca de 99,5%, pelo menos cerca de 99,6%, pelo menos cerca de 99,7%, pelo menos cerca de 99,8%, pelo menos cerca de 99,9% ou pelo menos cerca de 100,0%. Em algumas modalidades, a especificidade é de pelo menos cerca de 65,0%, pelo menos cerca de 70,0%, pelo menos cerca de 75,0%, pelo menos cerca de 80,0%, pelo menos cerca de 85,0%, pelo menos cerca de 90,0%, pelo menos cerca de 91,0%, pelo menos cerca de 92,0%, pelo menos cerca de 93. %, pelo menos cerca de 94,0%, pelo menos cerca de 95,0%, pelo menos cerca de 96,0%, pelo menos cerca de 97,0%, pelo menos cerca de 98.0%, pelo menos cerca de 99,0%, pelo menos cerca de 99,1%, pelo menos cerca de 99,2%,

pelo menos cerca de 99,3%, pelo menos cerca de 99,4%, pelo menos cerca de 99,5%, pelo menos cerca de 99,6%, pelo menos cerca de 99,7%, pelo menos cerca de 99,8%, pelo menos cerca de 99,9% ou pelo menos cerca de 100,0%. Por exemplo, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 100% e a especificidade é de pelo menos cerca de 75%, a sensibilidade é de pelo menos cerca de 99% e a especificidade é de pelo menos cerca de 99% ou a sensibilidade é de pelo menos cerca de 87% e a especificidade é de pelo menos cerca de 95%.

[0259]Em algumas modalidades, a quantidade absoluta de cTnI na amostra é a partir de cerca de 1 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 3 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 2 pg/ml, cerca de 1 pg/ml a cerca de 1,5 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 6 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 5 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 4 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 3 pg/ml, cerca de 1,5 pg/ml a cerca de 2 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 2 pg/ml a cerca de 6 pg/ml,

6 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 6 pg/ml a cerca de 7 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 7 pg/ml a cerca de 8 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 8 pg/ml a cerca de 9 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 9 pg/ml a cerca de 10 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 30 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 25 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 20 pg/ml, cerca de 10 pg/ml a cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 50 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 45 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 40 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 35 pg/ml, cerca de 20 pg/ml a cerca de 30 pg/ml ou cerca de 20 pg/ml a cerca de 25 pg/ml. Em algumas modalidades, a quantidade absoluta de cTnI pode ser de pelo menos cerca de 0,5 pg/ml, pelo menos cerca de 1,0 pg/ml, pelo menos cerca de 1,5 pg/ml, pelo menos cerca de 2,0 pg/ml, pelo menos cerca de 2,5 pg/ml, pelo menos cerca de 3,0 pg/ml, pelo menos cerca de 4,0 pg/ml, pelo menos cerca de 5,0 pg/ml, pelo menos cerca de 6,0 pg/ml, pelo menos cerca de 7,0 pg/ml, pelo menos cerca de 8,0, pg/ml, pelo menos cerca de 9,0 pg/ml, pelo menos cerca de 10 pg/ml, pelo menos cerca de 15 pg/ml, pelo menos cerca de 20 pg/ml, pelo menos cerca de 25 pg/ml, pelo menos cerca de 30 pg/ml, pelo menos cerca de 35 pg/ml, pelo menos cerca de 40 pg/ml, pelo menos cerca de 45 pg/ml ou pelo menos cerca de 50 pg/ml.

[0260]Em algumas modalidades, a quantidade absoluta do biomarcador precoce, tal como UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas, pode ser entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml.

Em algumas modalidades, a quantidade absoluta pode ser entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de

400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de

100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 5 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 10 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 20 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 500 pg/ml,

entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de

25 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 25 pg/ml e cerca de 50 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 50 pg/ml e cerca de 100 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 100 pg/ml e cerca de 200 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 750 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 500 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 400 pg/ml, entre pelo menos cerca de 200 pg/ml e cerca de 300 pg/ml, entre pelo menos cerca de 300 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml,

Em algumas modalidades, a quantidade absoluta pode ser de pelo menos cerca de 5 pg/ml, pelo menos cerca de 6 pg/ml, pelo menos cerca de 7 pg/ml, pelo menos cerca de 8 pg/ml, pelo menos cerca de 9 pg/ml, pelo menos cerca de 10 pg/ml, pelo menos cerca de 11 pg/ml, pelo menos cerca de 12 pg/ml, pelo menos cerca de 13 pg/ml, pelo menos cerca de 14 pg/ml, pelo menos cerca de 15 pg/ml, pelo menos cerca de 16 pg/ml, pelo menos cerca de 17 pg/ml, pelo menos cerca de 18 pg/ml, pelo menos cerca de 19 pg/ml, pelo menos cerca de 20 pg/ml, pelo menos cerca de 21 pg/ml, pelo menos cerca de 22 pg/ml, pelo menos cerca de 23 pg/ml, pelo menos cerca de 24 pg/ml, pelo menos cerca de 25 pg/ml, pelo menos cerca de 26 pg/ml, pelo menos cerca de 27 pg/ml, pelo menos cerca de 28 pg/ml, pelo menos cerca de 29 pg/ml, pelo menos cerca de 30 pg/ml, pelo menos cerca de 35 pg/ml, pelo menos cerca de 40 pg/ml, pelo menos cerca de 45 pg/ml, pelo menos cerca de 50 pg/ml, pelo menos cerca de 55 pg/ml, pelo menos cerca de 60 pg/ml, pelo menos cerca de 65 pg/ml, pelo menos cerca de 70 pg/ml, pelo menos cerca de 75 pg/ml, pelo menos cerca de 80 pg/ml, pelo menos cerca de 85 pg/ml, pelo menos cerca de 90 pg/ml, pelo menos cerca de 95 pg/ml, pelo menos cerca de 100 pg/ml,

pelo menos cerca de 110 pg/ml, pelo menos cerca de 120 pg/ml, pelo menos cerca de 129 pg/ml, pelo menos cerca de 130 pg/ml, pelo menos cerca de 140 pg/ml, pelo menos cerca de 150 pg/ml, pelo menos cerca de 200 pg/ml, pelo menos cerca de 250 pg/ml, pelo menos cerca de 300 pg/ml, pelo menos cerca de 350 pg/ml, pelo menos cerca de 400 pg/ml, pelo menos cerca de 450 pg/ml, pelo menos cerca de 500 pg/ml, pelo menos cerca de 550 pg/ml, pelo menos cerca de 600 pg/ml, pelo menos cerca de 650 pg/ml, pelo menos cerca de 700 pg/ml, pelo menos cerca de 750 pg/ml, pelo menos cerca de 800 pg/ml, pelo menos cerca de 900 pg/ml ou pelo menos cerca de

1.000 pg/ml.

[0261]Além da realização dos métodos descritos acima, um versado na técnica (por exemplo, médico) entenderia e saberia como realizar teste adicional a fim de detectar ou avaliar outros comorbidades (por exemplo, outras doenças, distúrbios ou condições além de TBI). Tais procedimentos ou testes adicionais incluem um ou mais dentre um eletrocardiograma, uma contagem de células de sangue completo (CBC), um painel metabólico abrangente, um perfil lipídico (por exemplo, para determinar HDL, LDL, triglicerídeos, etc.), um angiograma, um ou mais testes para detectar ou determinar os níveis de um ou mais dentre proteína C-reativa (CRP), peptídeo natriurético do cérebro, ceramidas de plasma, etc.

[0262]Em uma modalidade, a fim de confirmar que as alterações em quantidades ou níveis de cTnI nos métodos descritos no presente documento são atribuíveis a uma lesão na cabeça ou uma suspeita de lesão na cabeça de um indivíduo e não o resultado de uma síndrome cardíaca aguda (tal como um infarto do miocárdio, insuficiência cardíaca, etc.), um médico ou outro prestador de serviços de saúde poderia conduzir ou realizar um ou mais testes ou procedimentos adicionais para confirmar a ausência de uma síndrome cardíaca aguda. Tais procedimentos ou testes adicionais incluem um ou mais dentre um eletrocardiograma, uma contagem de células de sangue completo (CBC), um painel metabólico abrangente, um perfil lipídico (por exemplo, para determinar HDL, LDL, triglicerídeos, etc.), um angiograma, um ou mais testes para detectar ou determinar os níveis de um ou mais dentre proteína C-reativa (CRP), peptídeo natriurético do cérebro, ceramidas de plasma, etc.

[0263]Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente tratar o indivíduo humano que foi determinado como tendo uma TBI com um tratamento de lesão traumática cerebral, conforme descrito a seguir. Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente monitorar, conforme descrito a seguir, o indivíduo humano que foi determinado como tendo uma TBI. Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente solicitar testes adicionais para obter informações clínicas adicionais sobre a lesão traumática cerebral. Em algumas modalidades, o método inclui tratar o indivíduo humano avaliado como tendo uma lesão cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento cardioprotetor para proteger o coração, conforme descrito a seguir.

[0264]A natureza do ensaio empregado nos métodos descritos no presente documento não é crítica e o teste pode ser qualquer ensaio conhecido na técnica como, por exemplo, imunoensaios, imunoprecipitação de proteína, imunoeletroforese, análise Western blot ou imunocoloração de proteína, métodos de espectrometria, tais como cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou cromatografia líquida– espectrometria de massa (LC/MS). Além disso, o ensaio pode ser empregado no formato de química clínica tal como seria conhecido por um versado na técnica. Tais ensaios são descrito em mais detalhes no presente documento nas Seções 8 a 12.

6. Métodos para tratar um indivíduo humano que tem lesão traumática cerebral com terapia cardioprotetora

[0265]A presente revelação se refere, entre outros métodos, a um método para tratar um indivíduo humano que tem ou é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral. A ocorrência de lesão do miocárdio durante a fase aguda da lesão traumática cerebral (TBI) pode ser um colaborador para o resultado insatisfatório de TBI. Como tal, a administração de uma ou mais terapias cardioprotetoras ou agentes terapêuticos (por exemplo, terapias que melhoram o coração) pode aperfeiçoar o resultado de TBI e pode ser empregada nos métodos descritos no presente documento. Essas terapias cardioprotetoras podem ser administradas sozinhas sem quaisquer outros agentes terapêuticos. Alternativamente, essas terapias cardioprotetoras podem ser administradas em combinação com outros agentes terapêuticos administrados para tratar a TBI, tais como aquelas reveladas na Seção 7, abaixo.

[0266]Especificamente, os métodos da revelação que envolvem uma ou mais terapias cardioprotetoras ou agentes terapêuticos incluem: a) realizar um ensaio em uma amostra tomada a partir do indivíduo humano dentro de cerca de 24 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I, em que a amostra é uma amostra biológica; e b) fornecer uma terapia cardioprotetora ou agente terapêutico para o indivíduo se o nível de troponina cardíaca I na amostra for maior do que um nível de referência de troponina cardíaca I. Em algumas modalidades, a terapia cardioprotetora pode incluir opcionalmente administrar um ou mais betabloqueadores, diuréticos, inibidores de enzima conversora da angiotensina (ACE), bloqueadores do canal de cálcio, terapias de redução de lipídio, estatinas (também conhecidas como inibidores da redutase 3- hidroxi-3-metilglutaril coenzima A (HMG-CoA)), nitratos, antiplaquetários, agentes anticoagulantes, agentes anticoagulação e similares, tal como é conhecido na técnica.

A natureza, quantidades e temporização para a administração de tais terapias cardioprotetoras e agentes terapêuticos são bem conhecidas na técnica.

[0267]Em algumas modalidades, a amostra pode ser obtida ou tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 0 minuto, dentro de cerca de 1 minuto, dentro de cerca de 2 minutos, dentro de cerca de 3 minutos, dentro de cerca de 4 minutos, dentro de cerca de 5 minutos, dentro de cerca de 6 minutos, dentro de cerca de 7 minutos, dentro de cerca de 8 minutos, dentro de cerca de 9 minutos, dentro de cerca de 10 minutos, dentro de cerca de 11 minutos, dentro de cerca de 12 minutos, dentro de cerca de 13 minutos, dentro de cerca de 14 minutos, dentro de cerca de 15 minutos, dentro de cerca de 20 minutos, dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas de uma suspeita de lesão na cabeça.

[0268]Em geral, um nível de referência de cTnI também pode ser empregado como um parâmetro de comparação contra o qual se avalia resultados obtidos mediante o ensaio de uma amostra de teste acerca de cTnI. Em geral, na realização de tal comparação, o nível de referência de cTnI é obtido mediante a execução de um ensaio particular um número suficiente de vezes e sob condições adequadas de modo que uma ligação ou associação da presença de analito, quantidade ou concentração com um estágio ou ponto final particular de TBI ou com indícios particulares possa ser feita. Tipicamente, o nível de referência de cTnI é obtido com ensaios de indivíduos de referência (ou populações de indivíduos). A cTnI medida pode incluir fragmentos da mesma, produtos de degradação da mesma e/ou produtos de clivagem enzimática da mesma.

[0269]Em algumas modalidades, o método pode incluir obter amostras a partir do indivíduo e colocar as amostras em contato com um anticorpo para troponina cardíaca I para permitir a formação de um complexo do anticorpo e da troponina cardíaca I. O método inclui também detectar o complexo de anticorpo-troponina cardíaca I resultante.

[0270]A natureza do ensaio empregado nos métodos descritos no presente documento não é crítica e o teste pode ser qualquer ensaio conhecido na técnica como, por exemplo, imunoensaios, imunoprecipitação de proteína, imunoeletroforese, análise Western blot ou imunocoloração de proteína, métodos de espectrometria, tais como cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou cromatografia líquida– espectrometria de massa (LC/MS). Tais ensaios são descrito em mais detalhes no presente documento nas Seções 8 a 12. Além disso, o ensaio pode ser empregado no formato de química clínica tal como seria conhecido por um versado na técnica.

Por exemplo, um formato de química clínica pode incluir um ensaio que envolve um anticorpo ou nenhum anticorpo. Os exemplos de analisadores que podem ser usados para o formato de química clínica são descritos nas publicações de patente nº U.S.

2016/0320422 e 2015/0112630.

7. Tratamento e monitoramento de indivíduos que sofrem de lesão traumática cerebral

[0271]O indivíduo identificado ou avaliado nos métodos descritos acima como tendo lesão traumática cerebral, tal como lesão traumática cerebral branda ou uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa, pode ser tratado ou monitorado. Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente tratar o indivíduo humano avaliado como tendo lesão traumática cerebral com um tratamento de lesão traumática cerebral, tal como quaisquer tratamentos conhecidos na técnica.

Por exemplo, o tratamento de lesão traumática cerebral pode assumir uma variedade de formas dependendo da gravidade da lesão na cabeça. Por exemplo, para indivíduos que sofrem de TBI branda, o tratamento pode incluir um ou mais dentre repouso, abstenção de atividades físicas, tais como esportes, evitação de luz ou usar óculos escuros quando em lugares externos com luz, administração de um ou mais agentes terapêuticos (por exemplo, tais como um medicamento para alívio de uma dor de cabeça ou enxaqueca, medicamento anti-náusea, etc.). O tratamento para pacientes que sofrem de uma TBI moderada, severa ou moderada a severa poderia incluir a administração de um ou mais agentes terapêuticos adequados (tais como, por exemplo, diuréticos, medicamentos anticonvulsivos, medicamentos para sedar e colocar um indivíduo em um coma induzido por fármaco outros medicamentos farmacêuticos ou biofarmacêuticos (conhecidos ou desenvolvidos no futuro para tratamento de TBI), um ou mais procedimentos cirúrgicos (tais como, por exemplo, remoção de hematoma, reparação de uma fratura no crânio, craniotomia descompressiva, etc.) protegendo as vias aéreas e uma ou mais terapias (tais como, por exemplo, uma ou mais dentre reabilitação, fisioterapia, terapia ocupacional,

terapia cognitivo-comportamental, gestão da raiva, acompanhamento psicológico, etc.). Em algumas modalidades, o método inclui adicionalmente monitorar o indivíduo humano avaliado como tendo lesão traumática cerebral (por exemplo, traumática branda, moderada ou severa ou moderada a severa). Em algumas modalidades, um indivíduo identificado como tendo lesão traumática cerebral, tal como lesão traumática cerebral branda ou lesão traumática cerebral severa, pode ser monitorado com varredura por TC ou IRM. Os tratamentos empregados para TBI branda, moderada ou severa ou moderada a severa descritos no presente documento podem ser administrados em conjunto com uma ou mais terapias cardioprotetoras ou agentes terapêuticos descritos na Seção 6.

8. Métodos para medir o nível de cTnI

[0272]Nos métodos descritos acima, os níveis de cTnI podem ser medidos por qualquer meio, tal como métodos dependentes de anticorpo, tais como imunoensaios, imunoprecipitação de proteína, imunoeletroforese, análise química, SDS-PAGE e análise Western blot, imunocoloração de proteína, análise de eletroforese, um ensaio de proteína, um ensaio de ligação competitiva, um ensaio de proteína funcional ou métodos de cromatografia ou espectrometria, tais como cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou cromatografia líquida– espectrometria de massa (LC/MS). Além disso, o ensaio pode ser empregado no formato de química clínica tal como seria conhecido por um versado na técnica.

[0273]Em algumas modalidades, a medição do nível de cTnI inclui colocar a amostra em contato com um primeiro membro de ligação específica e segundo membro de ligação específica. Em algumas modalidades, o primeiro membro de ligação específica é um anticorpo de captura e o segundo membro de ligação específica é um anticorpo de detecção. Em algumas modalidades, a medição do nível de cTnI inclui colocar a amostra, simultânea ou sequencialmente, em qualquer ordem, em contato com: (1) um anticorpo de captura (por exemplo, anticorpo de captura de cTnI), que se liga a um epítopo em cTnI ou fragmento de cTnI para formar um complexo de anticorpo de captura-antígeno de cTnI (por exemplo, complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI) e (2) um anticorpo de detecção (por exemplo, cTnI-anticorpo de detecção), que inclui uma identificação detectável e se liga a um epítopo em cTnI que não é ligado pelo anticorpo de captura, para formar um complexo de antígeno de cTnI-anticorpo de detecção (por exemplo, complexo de antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI), de modo que um complexo de anticorpo de captura-antígeno de cTnI-anticorpo de detecção (por exemplo, complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI) seja formado e medir a quantidade ou concentração de cTnI na amostra com base no sinal gerado pela identificação detectável no complexo de anticorpo de captura-antígeno de cTnI-anticorpo de detecção.

[0274]Em algumas modalidades, o primeiro membro de ligação específica é imobilizado em um suporte sólido. Em algumas modalidades, o segundo membro de ligação específica é imobilizado em um suporte sólido. Em algumas modalidades, o primeiro membro de ligação específica é um anticorpo de cTnI conforme descrito a seguir.

[0275]Em algumas modalidades, a amostra é diluída ou não diluída. A amostra pode ser a partir de cerca de 1 a cerca de 25 microlitros, cerca de 1 a cerca de 24 microlitros, cerca de 1 a cerca de 23 microlitros, cerca de 1 a cerca de 22 microlitros, cerca de 1 a cerca de 21 microlitros, cerca de 1 a cerca de 20 microlitros, cerca de 1 a cerca de 18 microlitros, cerca de 1 a cerca de 17 microlitros, cerca de 1 a cerca de 16 microlitros, cerca de 15 microlitros ou cerca de 1 microlitro, cerca de 2 microlitros, cerca de 3 microlitros, cerca de 4 microlitros, cerca de 5 microlitros, cerca de 6 microlitros, cerca de 7 microlitros, cerca de 8 microlitros, cerca de 9 microlitros, cerca de 10 microlitros, cerca de 11 microlitros, cerca de 12 microlitros, cerca de 13 microlitros, cerca de 14 microlitros, cerca de 15 microlitros, cerca de 16 microlitros, cerca de 17 microlitros, cerca de 18 microlitros, cerca de 19 microlitros, cerca de 20 microlitros, cerca de 21 microlitros, cerca de 22 microlitros, cerca de 23 microlitros, cerca de 24 microlitros ou cerca de 25 microlitros. Em algumas modalidades, a amostra é a partir de cerca de 1 a cerca de 150 microlitros ou menos ou a partir de cerca de 1 a cerca de 25 microlitros ou menos.

[0276]Alguns instrumentos (tais como, por exemplo, o instrumento da Abbott Laboratories ARCHITECT® e outros instrumentos de laboratório central) além de um dispositivo de ponto-de-cuidado podem ter capacidade para medir níveis de cTnI em uma amostra em cerca de 0,032 µg/l a 10% de CV ou inferior.

[0277]Outros métodos de detecção incluem o uso de ou podem ser adaptados para o uso em um dispositivo de nanoporo ou dispositivo de nanopoço. Os exemplos de dispositivos de nanoporo são descritos na publicação de patente internacional nº WO 2016/161402, que está incorporada ao presente documento a título de referência em sua totalidade. Os exemplos de dispositivos de nanopoço são descritos na publicação de patente internacional nº WO 2016/161400, que está incorporada ao presente documento a título de referência em sua totalidade.

9. Métodos para medir o nível de UCH-L1

[0278]Nos métodos descritos acima, os níveis de UCH-L1 podem ser medidos por qualquer meio, tal como métodos dependentes de anticorpo, tais como imunoensaios, imunoprecipitação de proteína, imunoeletroforese, análise química, SDS-PAGE e análise Western blot, imunocoloração de proteína, análise de eletroforese, um ensaio de proteína, um ensaio de ligação competitiva, um ensaio de proteína funcional ou métodos de cromatografia ou espectrometria, tais como cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou cromatografia líquida– espectrometria de massa (LC/MS). Além disso, o ensaio pode ser empregado no formato de química clínica tal como seria conhecido por um versado na técnica.

[0279]Em algumas modalidades, a medição do nível de UCH-L1 inclui colocar a amostra em contato com um primeiro membro de ligação específica e segundo membro de ligação específica. Em algumas modalidades, o primeiro membro de ligação específica é um anticorpo de captura e o segundo membro de ligação específica é um anticorpo de detecção. Em algumas modalidades, a medição do nível de UCH-L1 inclui colocar a amostra, simultânea ou sequencialmente, em qualquer ordem, em contato com: (1) um anticorpo de captura (por exemplo, anticorpo de captura de UCH-L1), que se liga a um epítopo em UCH-L1 ou fragmento de UCH-L1 para formar um complexo de anticorpo de captura-antígeno de UCH-L1 (por exemplo, complexo de anticorpo de captura de UCH-L1-antígeno de UCH-L1) e (2) um anticorpo de detecção (por exemplo, UCH-L1-anticorpo de detecção), que inclui uma identificação detectável e se liga a um epítopo em UCH-L1 que não é ligado pelo anticorpo de captura, para formar um complexo de antígeno de UCH-L1-anticorpo de detecção (por exemplo, complexo de antígeno de UCH-L1-anticorpo de detecção de UCH-L1), de modo que um complexo de anticorpo de captura-antígeno de UCH-L1- anticorpo de detecção (por exemplo, complexo de anticorpo de captura de UCH-L1- antígeno de UCH-L1-anticorpo de detecção de UCH-L1) seja formado e medir a quantidade ou concentração de UCH-L1 na amostra com base no sinal gerado pela identificação detectável no complexo de anticorpo de captura-antígeno de UCH-L1- anticorpo de detecção.

[0280]Em algumas modalidades, o primeiro membro de ligação específica é imobilizado em um suporte sólido. Em algumas modalidades, o segundo membro de ligação específica é imobilizado em um suporte sólido. Em algumas modalidades, o primeiro membro de ligação específica é um anticorpo de UCH-L1 conforme descrito a seguir.

[0281]Em algumas modalidades, a amostra é diluída ou não diluída. A amostra pode ser a partir de cerca de 1 a cerca de 25 microlitros, cerca de 1 a cerca de 24 microlitros, cerca de 1 a cerca de 23 microlitros, cerca de 1 a cerca de 22 microlitros, cerca de 1 a cerca de 21 microlitros, cerca de 1 a cerca de 20 microlitros, cerca de 1 a cerca de 18 microlitros, cerca de 1 a cerca de 17 microlitros, cerca de 1 a cerca de 16 microlitros, cerca de 15 microlitros ou cerca de 1 microlitro, cerca de 2 microlitros, cerca de 3 microlitros, cerca de 4 microlitros, cerca de 5 microlitros, cerca de 6 microlitros, cerca de 7 microlitros, cerca de 8 microlitros, cerca de 9 microlitros, cerca de 10 microlitros, cerca de 11 microlitros, cerca de 12 microlitros, cerca de 13 microlitros, cerca de 14 microlitros, cerca de 15 microlitros, cerca de 16 microlitros, cerca de 17 microlitros, cerca de 18 microlitros, cerca de 19 microlitros, cerca de 20 microlitros, cerca de 21 microlitros, cerca de 22 microlitros, cerca de 23 microlitros, cerca de 24 microlitros ou cerca de 25 microlitros. Em algumas modalidades, a amostra é a partir de cerca de 1 a cerca de 150 microlitros ou menos ou a partir de cerca de 1 a cerca de 25 microlitros ou menos.

[0282]Alguns instrumentos (tais como, por exemplo, o instrumento da Abbott Laboratories ARCHITECT® e outros instrumentos de laboratório central) além de um dispositivo de ponto-de-cuidado podem ter capacidade para medir níveis de UCH-L1 em uma amostra superior ou maior que 25.000 pg/ml.

[0283]Outros métodos de detecção incluem o uso de ou podem ser adaptados para o uso em um dispositivo de nanoporo ou dispositivo de nanopoço. Os exemplos de dispositivos de nanoporo são descritos na publicação de patente internacional nº WO 2016/161402, que está incorporada ao presente documento a título de referência em sua totalidade. Os exemplos de dispositivo de nanopoço são descritos na publicação de patente internacional nº WO 2016/161400, que está incorporada ao presente documento a título de referência em sua totalidade.

10. Métodos para medir o nível de GFAP

[0284]Nos métodos descritos acima, os níveis de GFAP podem ser medidos por qualquer meio, tal como métodos dependentes de anticorpo, tais como imunoensaios, imunoprecipitação de proteína, imunoeletroforese, análise química, SDS-PAGE e análise Western blot ou imunocoloração de proteína, análise de eletroforese, um ensaio de proteína, um ensaio de ligação competitiva, um ensaio de proteína funcional ou métodos de cromatografia ou espectrometria, tais como cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) ou cromatografia líquida– espectrometria de massa (LC/MS). Além disso, o ensaio pode ser empregado no formato de química clínica tal como seria conhecido por um versado na técnica.

[0285]Em algumas modalidades, a medição do nível de GFAP inclui colocar a amostra em contato com um primeiro membro de ligação específica e segundo membro de ligação específica. Em algumas modalidades, o primeiro membro de ligação específica é um anticorpo de captura e o segundo membro de ligação específica é um anticorpo de detecção. Em algumas modalidades, a medição do nível de GFAP inclui colocar a amostra, simultânea ou sequencialmente, em qualquer ordem, em contato com: (1) um anticorpo de captura (por exemplo, anticorpo de captura de GFAP), que se liga a um epítopo em GFAP ou fragmento de GFAP para formar um complexo de anticorpo de captura-antígeno de GFAP (por exemplo, complexo de anticorpo de captura de GFAP-antígeno de GFAP) e (2) um anticorpo de detecção (por exemplo, GFAP-anticorpo de detecção), que inclui uma identificação detectável e se liga a um epítopo em GFAP que não é ligado pelo anticorpo de captura, para formar um complexo de antígeno de GFAP-anticorpo de detecção (por exemplo, complexo de antígeno de GFAP-anticorpo de detecção de GFAP), de modo que um complexo de anticorpo de captura-antígeno de GFAP-anticorpo de detecção (por exemplo, complexo de anticorpo de captura de GFAP-antígeno de GFAP- anticorpo de detecção de GFAP) seja formado e medir a quantidade ou concentração de GFAP na amostra com base no sinal gerado pela identificação detectável no complexo de anticorpo de captura-antígeno de GFAP-anticorpo de detecção.

[0286]Em algumas modalidades, o primeiro membro de ligação específica é imobilizado em um suporte sólido. Em algumas modalidades, o segundo membro de ligação específica é imobilizado em um suporte sólido. Em algumas modalidades, o primeiro membro de ligação específica é um anticorpo de GFAP conforme descrito a seguir.

[0287]Em algumas modalidades, a amostra é diluída ou não diluída. A amostra pode ser a partir de cerca de 1 a cerca de 25 microlitros, cerca de 1 a cerca de 24 microlitros, cerca de 1 a cerca de 23 microlitros, cerca de 1 a cerca de 22 microlitros, cerca de 1 a cerca de 21 microlitros, cerca de 1 a cerca de 20 microlitros, cerca de 1 a cerca de 18 microlitros, cerca de 1 a cerca de 17 microlitros, cerca de 1 a cerca de 16 microlitros, cerca de 15 microlitros ou cerca de 1 microlitro, cerca de 2 microlitros, cerca de 3 microlitros, cerca de 4 microlitros, cerca de 5 microlitros, cerca de 6 microlitros, cerca de 7 microlitros, cerca de 8 microlitros, cerca de 9 microlitros, cerca de 10 microlitros, cerca de 11 microlitros, cerca de 12 microlitros, cerca de 13 microlitros, cerca de 14 microlitros, cerca de 15 microlitros, cerca de 16 microlitros, cerca de 17 microlitros, cerca de 18 microlitros, cerca de 19 microlitros, cerca de 20 microlitros, cerca de 21 microlitros, cerca de 22 microlitros, cerca de 23 microlitros, cerca de 24 microlitros ou cerca de 25 microlitros. Em algumas modalidades, a amostra é a partir de cerca de 1 a cerca de 150 microlitros ou menos ou a partir de cerca de 1 a cerca de 25 microlitros ou menos.

[0288]Alguns instrumentos (tais como, por exemplo, o instrumento da Abbott Laboratories ARCHITECT® e outros instrumentos de laboratório central) além de um dispositivo de ponto-de-cuidado podem ter capacidade para medir níveis de GFAP em uma amostra superior ou maior que 25.000 pg/ml.

[0289]Outros métodos de detecção incluem o uso de ou podem ser adaptados para o uso em um dispositivo de nanoporo ou dispositivo de nanopoço. Os exemplos de dispositivos de nanoporo são descritos na publicação de patente internacional nº WO 2016/161402, que está incorporada ao presente documento a título de referência em sua totalidade. Os exemplos de dispositivo de nanopoço são descritos na publicação de patente internacional nº WO 2016/161400, que está incorporada ao presente documento a título de referência em sua totalidade.

11. Anticorpos

[0290]Os métodos descritos no presente documento pode usar um anticorpo isolado que se liga especificamente à troponina cardíaca I (cTnI) e/ou anticorpo isolado que se liga especificamente ao biomarcador precoce que não é cTnI, tal como ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas.

a. Anticorpos de troponina cardíaca I

[0291]Os métodos descritos no presente documento podem usar um anticorpo isolado que se liga especificamente à troponina cardíaca I, tal como, por exemplo, troponina cardíaca humana I (ou fragmentos da mesma), mencionado como “anticorpo de troponina cardíaca I”. Os anticorpos de troponina cardíaca I podem ser usados para avaliar a situação de troponina cardíaca I como uma medição de lesão traumática cerebral, detectar a presença de troponina cardíaca I em uma amostra biológica, quantificar a quantidade de troponina cardíaca I presente em uma amostra biológica ou detectar a presença de e quantificar a quantidade de troponina cardíaca I em uma amostra biológica.

(1) Troponina cardíaca humana I (cTnI)

[0292]A troponina cardíaca humana I (cTnI) juntamente com troponina T (TnT) e troponina C (TnC), são as 3 subunidades que formam o complexo de troponina dos filamentos delgados do músculo estriado. A troponina cardíaca I é a subunidade inibitória; que bloqueia interações de actina-miosina e assim media o relaxamento do músculo estriado. A subfamília de cTnI contém três genes: cTnI-esquelético- contração rápida, cTnI-esquelético-contração lenta e cTnI-cardíaco. Esse gene codifica a proteína de cTnI-cardíaco e é exclusivamente expresso em tecidos de músculo cardíaco.

[0293]A troponina cardíaca humana I pode ter a seguinte sequência de aminoácidos:

[0294]MADGSSDAAR EPRPAPAPIR RRSSNYRAYA TEPHAKKKSK

ISASRKLQLK TLLLQIAKQE LEREAEERRG EKGRALSTRC QPLELAGLGF AELQDLCRQL HARVDKVDEE RYDIEAKVTK NITEIADLTQ KIFDLRGKFK RPTLRRVRIS

ADAMMQALLG ARAKESLDLR AHLKQVKKED TEKENREVGD WRKNIDALSG MEGRKKKFES (SEQ ID NO: 1).

[0295]A troponina cardíaca humana I pode ser um fragmento ou variante da SEQ ID NO: 1. O fragmento de troponina cardíaca I pode ter entre 5 e 210 aminoácidos, entre 10 e 210 aminoácidos, entre 50 e 210 aminoácidos, entre 60 e 210 aminoácidos, entre 65 e 210 aminoácidos, entre 100 e 210 aminoácidos, entre 150 e 210 aminoácidos, entre 100 e 210 aminoácidos ou entre 175 e 210 aminoácidos de comprimento. O fragmento pode compreender um número contíguo de aminoácidos a partir da SEQ ID NO: 1.

(2) Anticorpo de reconhecimento de troponina cardíaca I

[0296]O anticorpo é um anticorpo que se liga à troponina cardíaca I, um fragmento da mesma, um epítopo de troponina cardíaca I ou uma variante da mesma.

O anticorpo pode ser um fragmento do anticorpo anti-troponina cardíaca I ou um variante ou um derivado do mesmo. O anticorpo pode ser um anticorpo policlonal ou monoclonal. O anticorpo pode ser um anticorpo quimérico, um anticorpo de cadeia única, um anticorpo maturado por afinidade, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo completamente humano ou um fragmento de anticorpo, tal como um fragmento Fab ou uma mistura dos mesmos. Os fragmentos de anticorpo ou derivados podem compreender fragmentos F(ab’)2, Fv ou scFv. Os derivados de anticorpo podem ser produzidos por peptidomiméticos. Adicionalmente, as técnicas descritas para a produção de anticorpos de cadeia única podem ser adaptadas para produzir anticorpos de cadeia única.

[0297]Os anticorpos anti-troponina cardíaca I podem ser um anticorpo quimérico anti-troponina cardíaca I ou humanizado anti-troponina cardíaca I. Em uma modalidade, tanto o anticorpo humanizado como o anticorpo quimérico são monovalentes. Em uma modalidade, tanto o anticorpo humanizado como o anticorpo quimérico compreendem uma única região Fab ligada a uma região Fc.

[0298]Os anticorpos humanos podem ser derivados a partir da tecnologia de exibição em fago ou a partir de camundongos transgênicos que expressam genes de imunoglobulina humana. O anticorpo humano pode ser gerado como resultado de uma resposta imunológica humana in vivo e isolado. Consultar, por exemplo, Funaro et al., BMC Biotechnology, 2008(8):85. Portanto, o anticorpo pode ser um produto do repertório humano e não animal. Devido ao fato de que o mesmo é de origem humana, os riscos de reatividade contra auto-antígenos podem ser minimizados.

Alternativamente, as bibliotecas de exibição em levedura padrão e tecnologias de exibição podem ser usadas para selecionar e isolar anticorpos humanos anti- troponina cardíaca I Por exemplo, as bibliotecas de fragmentos variáveis de cadeia única virgens (scFv) podem ser usadas para selecionar anticorpos humanos anti- troponina cardíaca I. Os animais transgênicos podem ser usados para expressar anticorpos humanos.

[0299]Os anticorpos humanizados podem ser moléculas de anticorpo a partir de anticorpo de espécie não humana que se liga ao antígeno desejado que tem uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs) a partir da espécie não humana e regiões framework a partir de uma molécula de imunoglobulina humana.

[0300]O anticorpo é distinguível de anticorpos conhecidos pelo fato de que possui função biológica (ou funções biológicas) diferente daquelas conhecidas na técnica.

i. Epítopo

[0301]O anticorpo pode se ligar de modo imunoespecífico à troponina cardíaca humana I (SEQ ID NO: 1), um fragmento da mesma ou uma variante da mesma. O anticorpo pode reconhecer e ligar de modo imunoespecífico pelo menos três aminoácidos, pelo menos quatro aminoácidos, pelo menos cinco aminoácidos, pelo menos seis aminoácidos, pelo menos sete aminoácidos, pelo menos oito aminoácidos, pelo menos nove aminoácidos ou pelo menos dez aminoácidos dentro de uma região de epítopo. O anticorpo pode reconhecer e ligar de modo imunoespecífico a um epítopo que tem pelo menos três aminoácidos contíguos, pelo menos quatro aminoácidos contíguos, pelo menos cinco aminoácidos contíguos, pelo menos seis aminoácidos contíguos, pelo menos sete aminoácidos contíguos, pelo menos oito aminoácidos contíguos, pelo menos nove aminoácidos contíguos ou pelo menos dez aminoácidos contíguos de uma região de epítopo.

(3) Anticorpos anti-troponina cardíaca I

[0302]Os anticorpos anti-troponina cardíaca I podem ser gerados com o uso das técnicas descritas acima bem como com o uso de técnicas de rotina conhecidas na técnica. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-troponina cardíaca I pode ser um anticorpo de troponina cardíaca I não conjugado, tal como anticorpos de troponina cardíaca I disponíveis junto à Abcam (tal como anticorpo anti-troponina cardíaca I (ab47003)), Thermofisher (tal como anticorpo monoclonal de troponina cardíaca I (12F10), anticorpo policlonal de troponina cardíaca I, anticorpo de troponina cardíaca

I (1HCLC), ABFINITY™ oligoclonal de coelho, anticorpo de troponina cardíaca I (1H11L19), ABFINITY™ monoclonal de coelho), Santa Cruz (tal como anticorpo de troponina cardíaca I (C-4) (Número de catálogo sc-133117), anticorpo de troponina cardíaca I (4) (Número de catálogo sc-130351), anticorpo de troponina cardíaca I (12) (Número de catálogo sc-130350), anticorpo de troponina cardíaca I (H-170) (Número de catálogo sc-15368), anticorpo de troponina cardíaca I (C-19) (Número de catálogo sc-8118), troponina cardíaca I-C anticorpo (G-11) (Número de catálogo sc-376662), troponina cardíaca I-C anticorpo (M46) (Número de catálogo sc-52277), troponina cardíaca I-C anticorpo (10B11) (Número de catálogo sc-52266) e hytest (monoclonal de camundongo anti-troponina cardíaca I (Número de catálogo 4T21).

b. Anticorpos de UCH-L1

[0303]Os métodos descritos no presente documento podem usar um anticorpo isolado que se liga especificamente à ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (“UCH-L1”) (ou fragmentos da mesma), denominado como “anticorpo de UCH-L1”.

Os anticorpos de UCH-L1 podem ser usados para avaliar a situação de UCH-L1 como uma medição de lesão traumática cerebral, detectar a presença de UCH-L1 em uma amostra, quantificar a quantidade de UCH-L1 presente em uma amostra ou detectar a presença de e quantificar a quantidade de UCH-L1 em uma amostra.

(1) Ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1)

[0304]A ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (“UCH-L1”), que também é conhecida como “ubiquitina C-terminal hidrolase”, é uma enzima de desubiquitinação.

UCH-L1 é um membro de uma família de genes cujos produtos hidrolisam adutos C- terminal pequenos de ubiquitina para gerar o monômero de ubiquitina. A expressão de UCH-L1 é altamente específica para neurônios e para células do sistema neuroendócrino difuso e seus tumores. Está abundantemente presente em todos os neurônios (responde por 1 a 2% de proteína cerebral total), expressa especificamente em neurônios e testículo/ovário. A tríade catalítica de UCH-L1 contém uma cisteina na posição 90, um aspartato na posição 176 e uma histidina na posição 161 que são responsáveis por sua atividade de hidrolase.

[0305]A UCH-L1 humana pode ter a seguinte sequência de aminoácidos:

[0306]MQLKPMEINPEMLNKVLSRLGVAGQWRFVDVLGLEEESLGSVPAPA

CALLLLFPLTAQHENFRKKQIEELKGQEVSPKVYFMKQTIGNSCGTIGLIHAVANNQD KLGFEDGSVLKQFLSETEKMSPEDRAKCFEKNEAIQAAHDAVAQEGQCRVDDKVN

FHFILFNNVDGHLYELDGRMPFPVNHGASSEDTLLKDAAKVCREFTEREQGEVRFS AVALCKAA (SEQ ID NO: 2).

[0307]A UCH-L1 humana pode ser um fragmento ou variante de SEQ ID NO:

2. O fragmento de UCH-L1 pode ter entre 5 e 225 aminoácidos, entre 10 e 225 aminoácidos, entre 50 e 225 aminoácidos, entre 60 e 225 aminoácidos, entre 65 e 225 aminoácidos, entre 100 e 225 aminoácidos, entre 150 e 225 aminoácidos, entre 100 e 175 aminoácidos ou entre 175 e 225 aminoácidos de comprimento. O fragmento pode compreender um número contíguo de aminoácidos a partir da SEQ ID NO: 2.

(2) Anticorpo de reconhecimento de UCH-L1

[0308]O anticorpo é um anticorpo que se liga a UCH-L1, um fragmento do mesmo, um epítopo de UCH-L1 ou um variante do mesmo. O anticorpo pode ser um fragmento do anticorpo anti-UCH-L1 ou uma variante ou um derivado do mesmo. O anticorpo pode ser um anticorpo policlonal ou monoclonal. O anticorpo pode ser um anticorpo quimérico, um anticorpo de cadeia única, um anticorpo maturado por afinidade, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo completamente humano ou um fragmento de anticorpo, tal como um fragmento Fab ou uma mistura dos mesmos. Os fragmentos de anticorpo ou derivados podem compreender fragmentos F(ab’)2, Fv ou scFv. Os derivados de anticorpo podem ser produzidos por peptidomiméticos. Adicionalmente, as técnicas descritas para a produção de anticorpos de cadeia única podem ser adaptadas para produzir anticorpos de cadeia única.

[0309]Os anticorpos anti-UCH-L1 podem ser um anticorpo quimérico anti- UCH-L1 ou humanizado anti-UCH-L1. Em uma modalidade, tanto o anticorpo humanizado como o anticorpo quimérico são monovalentes. Em uma modalidade,

tanto o anticorpo humanizado como o anticorpo quimérico compreendem uma única região Fab ligada a uma região Fc.

[0310]Os anticorpos humanos podem ser derivados a partir da tecnologia de exibição em fago ou a partir de camundongos transgênicos que expressam genes de imunoglobulina humana. O anticorpo humano pode ser gerado como resultado de uma resposta imunológica humana in vivo e isolado. Consultar, por exemplo, Funaro et al., BMC Biotechnology, 2008(8):85. Portanto, o anticorpo pode ser um produto do repertório humano e não animal. Devido ao fato de que o mesmo é de origem humana, os riscos de reatividade contra auto-antígenos podem ser minimizados.

Alternativamente, as bibliotecas de exibição em levedura padrão e tecnologias de exibição podem ser usadas para selecionar e isolar anticorpos humanos anti-UCH- L1. Por exemplo, as bibliotecas de fragmentos variáveis de cadeia única virgens (scFv) podem ser usadas para selecionar anticorpos humanos anti-UCH-L1. Os animais transgênicos podem ser usados para expressar anticorpos humanos.

[0311]Os anticorpos humanizados podem ser moléculas de anticorpo a partir de anticorpo de espécie não humana que se liga ao antígeno desejado que tem uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs) a partir da espécie não humana e regiões framework a partir de uma molécula de imunoglobulina humana.

[0312]O anticorpo é distinguível de anticorpos conhecidos pelo fato de que possui função biológica (ou funções biológicas) diferente daquelas conhecidas na técnica.

i. Epítopo

[0313]O anticorpo pode se ligar de modo imunoespecífico a UCH-L1 (SEQ ID NO: 2), um fragmento da mesma ou uma variante da mesma. O anticorpo pode reconhecer e ligar de modo imunoespecífico pelo menos três aminoácidos, pelo menos quatro aminoácidos, pelo menos cinco aminoácidos, pelo menos seis aminoácidos, pelo menos sete aminoácidos, pelo menos oito aminoácidos, pelo menos nove aminoácidos ou pelo menos dez aminoácidos dentro de uma região de epítopo. O anticorpo pode reconhecer e ligar de modo imunoespecífico a um epítopo que tem pelo menos três aminoácidos contíguos, pelo menos quatro aminoácidos contíguos, pelo menos cinco aminoácidos contíguos, pelo menos seis aminoácidos contíguos, pelo menos sete aminoácidos contíguos, pelo menos oito aminoácidos contíguos, pelo menos nove aminoácidos contíguos ou pelo menos dez aminoácidos contíguos de uma região de epítopo.

(3) Anticorpos anti-UCH-L1

[0314]Os anticorpos anti-UCH-L1 podem ser gerados com o uso das técnicas descritas acima bem como com o uso de técnicas de rotina conhecidas na técnica.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-UCH-L1 pode ser um anticorpo UCH-L1 não conjugado, tal como anticorpos UCH-L1 disponíveis junto à United State Biological (Número de catálogo: 031320), Cell Signaling Technology (Número de catálogo: 3524), Sigma-Aldrich (Número de catálogo: HPA005993), Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Números de catálogo: sc-58593 ou sc-58594), R&D Systems (Número de catálogo: MAB6007), Novus Biologicals (Número de catálogo: NB600- 1160), Biorbyt (Número de catálogo: orb33715), Enzo Life Sciences, Inc. (Número de catálogo: ADI-905-520-1), Bio-Rad (Número de catálogo: VMA00004), BioVision (Número de catálogo: 6130-50), Abcam (Números de catálogo: ab75275 ou ab104938), anticorpos Invitrogen (Números de catálogo: 480012), ThermoFisher Scientific (Números de catálogo: MA1-46079, MA5-17235, MA1-90008 ou MA1- 83428), EMD Millipore (Número de catálogo: MABN48) ou Sino Biological Inc.

(Número de catálogo: 50690-R011). O anticorpo anti-UCH-L1 pode ser conjugado a um fluoróforo, tal como anticorpos UCH-L1 conjugados disponíveis junto à BioVision (Número de catálogo: 6960-25) ou Aviva Systems Biology (Números de catálogo OAAF01904-FITC).

c. Anticorpos de GFAP

[0315]Os métodos descritos no presente documento podem usar um anticorpo isolado que se liga especificamente à proteína glial fibrilar ácida (“GFAP”) (ou fragmentos da mesma), denominado como “anticorpo GFAP”. Os anticorpos de GFAP podem ser usados para avaliar a situação de GFAP como uma medição de lesão traumática cerebral, detectar a presença de GFAP em uma amostra, quantificar a quantidade de GFAP presente em uma amostra ou detectar a presença de e quantificar a quantidade de GFAP em uma amostra.

(1) Proteína glial fibrilar ácida (GFAP)

[0316]A proteína glial fibrilar ácida (GFAP) é uma proteína filamentosa intracitoplasmática de 50 kDa que constitui uma porção do citoesqueleto em astrócitos e foi comprovada como sendo o marcador mais específico para células de origem astrocítica. A proteína GFAP é codificada pelo gene GFAP em seres humanos. GFAP é o filamento intermediário principal de astrócitos maduros. No domínio de haste central da molécula, GFAP compartilha homologia estrutural considerável com os outros filamentos intermediários. GFAP está envolvida no formato e motilidade de astrócito mediante o fornecimento de estabilidade estrutural para processos astrocíticos. A proteína glial fibrilar ácida e seus produtos de ruptura (GFAP-BDP) são proteínas específicas de cérebro liberadas no sangue como parte da resposta patofisiológica após a lesão traumática cerebral (TBI). Após a lesão no SNC causada por trauma, distúrbios genéticos ou produtos químicos, os astrócitos se proliferam e mostram hipertrofia extensiva dos processos e corpo celular e GFAP é consideravelmente suprarregulada. Em contrapartida, com a malignidade de astrócito crescente, existe uma perda progressiva de produção de GFAP. GFAP também pode ser detectada em células Schwann, células gliais entéricas, neoplasmas de glândula salivar, carcinomas renais metastáticos, cartilagem epiglótica, pituicitos, oligodendrócitos imaturos, meningiomas papilares e células mioepiteliais da mama.

[0317]A GFAP humana pode ter a seguinte sequência de aminoácidos:

[0318]MERRRITSAARRSYVSSGEMMVGGLAPGRRLGPGTRLSLARMPPP

LPTRVDFSLAGALNAGFKETRASERAEMMELNDRFASYIEKVRFLEQQNKALAAEL NQLRAKEPTKLADVYQAELRELRLRLDQLTANSARLEVERDNLAQDLATVRQKLQD ETNLRLEAENNLAAYRQEADEATLARLDLERKIESLEEEIRFLRKIHEEEVRELQEQL ARQQVHVELDVAKPDLTAALKEIRTQYEAMASSNMHEAEEWYRSKFADLTDAAARN AELLRQAKHEANDYRRQLQSLTCDLESLRGTNESLERQMREQEERHVREAASYQE

ALARLEEEGQSLKDEMARHLQEYQDLLNVKLALDIEIATYRKLLEGEENRITIPVQTF SNLQIRETSLDTKSVSEGHLKRNIVVKTVEMRDGEVIKESKQEHKDVM (SEQ ID NO: 3).

[0319]A GFAP humana pode ser um fragmento ou variante da SEQ ID NO: 3.

O fragmento de GFAP pode ter entre 5 e 400 aminoácidos, entre 10 e 400 aminoácidos, entre 50 e 400 aminoácidos, entre 60 e 400 aminoácidos, entre 65 e 400 aminoácidos, entre 100 e 400 aminoácidos, entre 150 e 400 aminoácidos, entre 100 e 300 aminoácidos ou entre 200 e 300 aminoácidos de comprimento. O fragmento pode compreender um número contíguo de aminoácidos a partir da SEQ ID NO: 3. O fragmento ou variante de GFAP humana da SEQ ID NO: 3 pode ser um produto de ruptura de GFAP (BDP). O BDP de GFAP pode ser de 38 kDa, 42 kDa (mais fraco 41 kDa), 47 kDa (mais fraco 45 kDa); 25 kDa (mais fraco 23 kDa); 19 kDa ou 20 kDa.

(2) Anticorpo de reconhecimento de GFAP

[0320]O anticorpo é um anticorpo que se liga a GFAP, um fragmento do mesmo, um epítopo de GFAP ou uma variante do mesmo. O anticorpo pode ser um fragmento do anticorpo anti-GFAP ou uma variante ou um derivado do mesmo. O anticorpo pode ser um anticorpo policlonal ou monoclonal. O anticorpo pode ser um anticorpo quimérico, um anticorpo de cadeia única, um anticorpo maturado por afinidade, um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo completamente humano ou um fragmento de anticorpo, tal como um fragmento Fab ou uma mistura dos mesmos. Os fragmentos de anticorpo ou derivados podem compreender fragmentos F(ab’)2, Fv ou scFv. Os derivados de anticorpo podem ser produzidos por peptidomiméticos. Adicionalmente, as técnicas descritas para a produção de anticorpos de cadeia única podem ser adaptadas para produzir anticorpos de cadeia única.

[0321]Os anticorpos anti-GFAP podem ser um anticorpo quimérico anti-GFAP ou humanizado anti-GFAP. Em uma modalidade, tanto o anticorpo humanizado como o anticorpo quimérico são monovalentes. Em uma modalidade, tanto o anticorpo humanizado como o anticorpo quimérico compreendem uma única região Fab ligada a uma região Fc.

[0322]Os anticorpos humanos podem ser derivados a partir da tecnologia de exibição em fago ou a partir de camundongos transgênicos que expressam genes de imunoglobulina humana. O anticorpo humano pode ser gerado como resultado de uma resposta imunológica humana in vivo e isolado. Consultar, por exemplo, Funaro et al., BMC Biotechnology, 2008(8):85. Portanto, o anticorpo pode ser um produto do repertório humano e não animal. Devido ao fato de que o mesmo é de origem humana, os riscos de reatividade contra auto-antígenos podem ser minimizados.

Alternativamente, as bibliotecas de exibição em levedura padrão e tecnologias de exibição podem ser usadas para selecionar e isolar anticorpos humanos anti-GFAP.

Por exemplo, as bibliotecas de fragmentos variáveis de cadeia única virgens (scFv) podem ser usadas para selecionar anticorpos humanos anti-GFAP. Os animais transgênicos podem ser usados para expressar anticorpos humanos.

[0323]Os anticorpos humanizados podem ser moléculas de anticorpo a partir de anticorpo de espécie não humana que se liga ao antígeno desejado que tem uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs) a partir da espécie não humana e regiões framework a partir de uma molécula de imunoglobulina humana.

[0324]O anticorpo é distinguível de anticorpos conhecidos pelo fato de que possui função biológica (ou funções biológicas) diferente daquelas conhecidas na técnica.

i. Epítopo

[0325]O anticorpo pode se ligar de modo imunoespecífico a GFAP (SEQ ID NO: 3), um fragmento da mesma ou uma variante da mesma. O anticorpo pode reconhecer e ligar de modo imunoespecífico pelo menos três aminoácidos, pelo menos quatro aminoácidos, pelo menos cinco aminoácidos, pelo menos seis aminoácidos, pelo menos sete aminoácidos, pelo menos oito aminoácidos, pelo menos nove aminoácidos ou pelo menos dez aminoácidos dentro de uma região de epítopo. O anticorpo pode reconhecer e ligar de modo imunoespecífico a um epítopo que tem pelo menos três aminoácidos contíguos, pelo menos quatro aminoácidos contíguos, pelo menos cinco aminoácidos contíguos, pelo menos seis aminoácidos contíguos, pelo menos sete aminoácidos contíguos, pelo menos oito aminoácidos contíguos, pelo menos nove aminoácidos contíguos ou pelo menos dez aminoácidos contíguos de uma região de epítopo.

(3) Anticorpos anti-GFAP

[0326]Os anticorpos anti-GFAP podem ser gerados com o uso das técnicas descritas acima bem como com o uso de técnicas de rotina conhecidas na técnica.

Em algumas modalidades, o anticorpo anti-GFAP pode ser um anticorpo de GFAP não conjugado, tal como anticorpos de GFAP disponíveis junto à Dako (Número de catálogo: M0761), ThermoFisher Scientific (Números de catálogo: MA5-12023, A- 21282, 13-0300, MA1-19170, MA1-19395, MA5-15086, MA5-16367, MA1-35377, MA1-06701 ou MA1-20035), AbCam (Números de catálogo: ab10062, ab4648, ab68428, ab33922, ab207165, ab190288, ab115898 ou ab21837), EMD Millipore (Números de catálogo: FCMAB257P, MAB360, MAB3402, 04-1031, 04-1062, MAB5628), Santa Cruz (Números de catálogo: sc-166481, sc-166458, sc-58766, sc- 56395, sc-51908, sc-135921, sc-71143, sc-65343 ou sc-33673), Sigma-Aldrich (Números de catálogo: G3893 ou G6171) ou Sino Biological Inc. (Número de catálogo: 100140-R012-50). O anticorpo anti-GFAP pode ser conjugado a um fluoróforo, tal como anticorpos de GFAP conjugados disponíveis junto à ThermoFisher Scientific (Números de catálogo: A-21295 ou A-21294), EMD Millipore (Números de catálogo: MAB3402X, MAB3402B, MAB3402B ou MAB3402C3) ou AbCam (Números de catálogo: ab49874 ou ab194325).

d. Preparação/Produção de anticorpo

[0327]Os anticorpos podem ser preparados por meio de qualquer uma dentre uma variedade de técnicas, inclusive aquelas bem conhecidas pelos versados na técnica. Em geral, os anticorpos podem ser produzidos por técnicas de cultura celular, incluindo a geração de anticorpos monoclonais através de técnicas convencionais ou através da transfecção de genes de anticorpo, cadeias pesadas e/ou cadeias leves em hospedeiros de célula bacteriana ou de mamífero, a fim de permitir a produção de anticorpos, em que os anticorpos podem ser recombinantes. As várias formas do termo “transfecção” são destinadas a abranger uma ampla variedade de técnicas comumente usadas para a introdução de DNA exógeno em uma célula hospedeira procariótica ou eucariótica, por exemplo, eletroporação, precipitação com fosfato de cálcio, transfecção com DEAE-dextrano e similares. Embora seja possível expressar anticorpos em células hospedeiras procarióticas ou eucarióticas, a expressão de anticorpos em células eucarióticas é preferencial e o mais preferencial em células hospedeiras de mamífero, devido ao fato de que é mais provável que tais células eucarióticas (e em particular células de mamífero) montem e secretem um anticorpo apropriadamente dobrado e imunologicamente ativo do que células procarióticas.

[0328]As células hospedeiras de mamífero exemplificadoras para expressar os anticorpos recombinantes incluem células de ovário de hamster chinês (células CHO) (incluindo células dhfr-CHO, descritas em Urlaub e Chasin, Proc. Natl. Acad.

Sci. USA, 77: 4.216 a 4.220 (1980)), usadas com um marcador selecionável DHFR, por exemplo, conforme descrito em Kaufman e Sharp, J. Mol. Biol., 159: 601 a 621 (1982), células de mieloma NS0, células COS e células SP2. Quando vetores de expressão recombinante que codificação genes de anticorpos são introduzidos em células hospedeiras de mamífero, os anticorpos são produzidos por meio da cultura das células hospedeiras durante um período de tempo suficiente para permitir a expressão do anticorpo nas células hospedeiras ou, mais preferencialmente, secreção do anticorpo no meio de cultura no qual as células hospedeiras estão crescendo. Os anticorpos podem ser recuperados a partir do meio de cultura com o uso de métodos de purificação de proteínas padrão.

[0329]As células hospedeiras também podem ser usadas para produzir fragmentos de anticorpos funcionais, tais como fragmentos Fab ou moléculas ScFv.

Será compreendido que variações no procedimento acima podem ser realizadas. Por exemplo, pode ser desejável transfectar uma célula hospedeira com DNA que codifica fragmentos funcionais da cadeia leve e/ou da cadeia pesada de um anticorpo. A tecnologia de RNA recombinante também pode ser usada para remover parte ou todo o DNA que codifica qualquer uma das ou ambas as cadeias leve e pesada que não seja necessária para a ligação aos antígenos de interesse. As moléculas expressas a partir de tais moléculas de DNA truncado são também abrangidas pelos anticorpos.

Além disso, podem ser produzidos anticorpos bifuncionais nos quais uma cadeia pesada e uma leve são um anticorpo (isto é, liga um analito, por exemplo, troponina humana I, UCH-L1 ou GFAP) e a outra cadeia pesada e leve é específica para um antígeno diferente do analito mediante a reticulação de um anticorpo a um segundo anticorpo por meio de métodos de reticulação química padrão.

[0330]Em um sistema preferencial para expressão recombinante de um anticorpo, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, um vetor de expressão recombinante que codifica tanto a cadeia pesada do anticorpo como a cadeia leve do anticorpo é introduzido em células dhfr-CHO por meio de transfecção mediada por fosfato de cálcio. Dentro do vetor de expressão recombinante, os genes de cadeia pesada e leve do anticorpo são, cada um, ligado de maneira operacional a elementos reguladores intensificadores de CMV/promotores de AdMLP para conduzir níveis altos de transcrição dos genes. O vetor de expressão recombinante transporta também um gene DHFR, que permite a seleção de células CHO que foram transfectadas com o vetor com o uso de amplificação/seleção com metotrexato. As células hospedeiras transformantes selecionadas são cultivadas para permitir a expressão das cadeias pesada e leve do anticorpo e o anticorpo intato é recuperado a partir do meio de cultura. As técnicas de biologia molecular padrão são usadas para preparar o vetor de expressão recombinante, transfectar as células hospedeiras, selecionar transformantes, cultivar as células hospedeiras e recuperar o anticorpo a partir do meio de cultura. Ainda adicionalmente, o método para sintetizar um anticorpo recombinante pode ser por meio da cultura de uma célula hospedeira em um meio de cultura adequado até um anticorpo recombinante ser sintetizado. O método pode adicionalmente compreender o isolamento do anticorpo recombinante a partir do meio de cultura.

[0331]Os métodos para preparar anticorpos monoclonais envolvem a preparação de linhagens de células imortais com capacidade para produzir anticorpos que têm a especificidade desejada. Tais linhagens de células podem ser produzidas a partir de células de baço obtidas a partir de um animal imunizado. O animal pode ser imunizado com o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) ou um fragmento e/ou variante do mesmo. O peptídeo usado para imunizar o animal pode compreender aminoácidos que codificam Fc humano, por exemplo a região cristalizável de fragmento ou região de cauda de anticorpo humano. As células de baço podem ser, então, imortalizadas por meio, por exemplo, da fusão com um parceiro de fusão celular de mieloma. Uma variedade de técnicas de fusão pode ser empregada. Por exemplo, as células de baço e células de mieloma podem ser combinadas com um detergente não iônico durante alguns minutos e, então, colocadas em placas em densidade baixa em um meio seletivo que suporta esse crescimento de células híbridas, mas não células de mieloma. Uma tal técnica usa seleção de hipoxantina, aminopterina, timidina (HAT). Uma outra técnica inclui eletrofusão. Após um tempo suficiente, normalmente cerca de 1 a 2 semanas, as colônias de híbridos são observadas. As colônias únicas são selecionadas e seus sobrenadantes de cultura testados acerca da atividade de ligação contra o polipeptídeo. Os hibridomas que têm alta reatividade e especificidade podem ser usados.

[0332]Os anticorpos monoclonais podem ser isolados dos sobrenadantes de colônias de hibridoma em crescimento. Além disso, diversas técnicas podem ser empregadas para intensificar o rendimento, tal como a injeção das linhagem de células de hibridoma na cavidade peritoneal de um hospedeiro vertebrado adequado, tal como um camundongo. Os anticorpos monoclonais podem ser, então, coletados a partir do fluido de ascites ou do sangue. Os contaminantes podem ser removidos dos anticorpos por meio de técnicas convencionais, tais como cromatografia, filtração em gel, precipitação e extração. A cromatografia por afinidade é um exemplo de um método que pode ser usado em um processo para purificar os anticorpos.

[0333]A enzima proteolítica papaína, de preferência, cliva moléculas de IgG para render diversos fragmentos, dois dos quais (os fragmentos F(ab)) compreendem, cada um, um heterodímero covalente que inclui um sítio de ligação a antígeno intacto.

A enzima pepsina tem capacidade para clivar moléculas de IgG para fornecer diversos fragmentos, incluindo o fragmento F(ab’)2, que compreende ambos os sítios de ligação a antígeno.

[0334]O fragmento Fv pode ser produzido por meio da clivagem proteolítica preferencial de uma IgM e em ocasiões raras moléculas de imunoglobulina IgG ou IgA. O fragmento Fv pode ser derivado com o uso de técnicas recombinantes. O fragmento Fv inclui um heterodímero VH::VL não covalente que inclui um sítio de ligação a antígeno que retém grande parte das capacidades de ligação e reconhecimento de antígeno da molécula de anticorpo nativa.

[0335]O anticorpo, fragmento de anticorpo ou derivado pode compreender um conjunto de regiões determinantes de complementaridade (“CDR”) de cadeia pesada e cadeia leve, respectivamente, interposto entre um conjunto de framework (“FR”) de cadeia pesada e cadeia leve que fornece suporte para as CDRs e definem a relação espacial das CDRs uma em relação à outra. O conjunto de CDRs pode conter três regiões hipervariáveis de uma região V de cadeia pesada ou leve.

[0336]Outros métodos adequados para produzir ou isolar anticorpos da especificidade necessária podem ser usados, incluindo, porém sem limitação, métodos que selecionam anticorpo recombinante a partir de uma biblioteca de proteínas ou peptídeos (por exemplo, porém sem limitação, uma biblioteca de exibição em bacteriófago, ribossoma, oligonucleotídeo, RNA, cDNA, levedura ou similares); por exemplo, conforme disponível junto à diversos vendedores comerciais, tais como Cambridge Antibody Technologies (Cambridgeshire, UK), MorphoSys (Martinsreid/Planegg, Del.), Biovation (Aberdeen, Escócia, UK) BioInvent (Lund, Suécia), com o uso de métodos conhecidos na técnica. Consultar a patentes nºs U.S.

4.704.692; 5.723.323; 5.763.192; 5.814.476; 5.817.483; 5.824.514; 5.976.862. Os métodos alternativos dependem da imunização de animais transgênicos (por exemplo, camundongos SCID, Nguyen et al. (1997) Microbiol. Immunol. 41:901 a 907; Sandhu et al. (1996) Crit. Rev. Biotechnol. 16:95 a 118; Eren et al. (1998) Immunol.

93:154 a 161) que têm capacidade para produzir um repertório de anticorpos humanos, conforme conhecido na técnica e/ou conforme descrito no presente documento. Tais técnicas incluem, mas não se limitam a, exibição em ribossoma (Hanes et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:4.937 a 4.942; Hanes et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:14.130 a 14.135); tecnologias de produção de anticorpo de célula única (por exemplo, método de anticorpo de linfócito selecionado ("SLAM") (patente nº U.S. 5.627.052, Wen et al. (1987) J. Immunol. 17:887 a 892; Babcook et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7.843 a 7.848); microgotícula de gel e citometria de fluxo (Powell et al. (1990) Biotechnol. 8:333 a 337; One Cell Systems, (Cambridge, Mass).; Gray et al. (1995) J. Imm. Meth. 182:155 a 163; Kenny et al. (1995) Bio/Technol. 13:787 a 790); Seleção de célula B (Steenbakkers et al.

(1994) Molec. Biol. Reports 19:125 a 134 (1994)).

[0337]Um anticorpo maturado por afinidade pode ser produzido por qualquer um dentre uma série de procedimentos que são conhecidos na técnica. Por exemplo, consultar Marks et al., BioTechnology, 10: 779 a 783 (1992) descrevem maturação por afinidade por embaralhamento de domínio VH e VL. A mutagênese aleatória de CDR e/ou resíduos de framework é descrita por Barbas et al., Proc. Nat. Acad. Sci.

USA, 91: 3.809 a 3.813 (1994); Schier et al., Gene, 169: 147 a 155 (1995); Yelton et al., J. Immunol., 155: 1.994 a 2.004 (1995); Jackson et al., J. Immunol., 154(7): 3.310 a 3.319 (1995); Hawkins et al, J. Mol. Biol., 226: 889 a 896 (1992). A mutação seletiva em posições de mutagênese seletiva e em posições de hipermutação ou contato com um resíduo de aminoácido de intensificação de atividade é descrita na patente nº U.S.

6.914.128 B1.

[0338]As variantes de anticorpo também podem ser preparadas com o uso da entrega de um polinucleotídeo que codifica um anticorpo para um hospedeiro adequado tal como para fornecer animais transgênicos ou mamíferos, tais como cabras, vacas, cavalos, carneiro e similares, que produzem tais anticorpos em seu leite. Esses métodos são conhecidos na técnica e são descritos, por exemplo, na patente n° U.S. 5.827.690; 5.849.992; 4.873.316; 5.849.992; 5.994.616; 5.565.362; e

5.304.489.

[0339]As variantes de anticorpo também podem ser preparadas mediante a entrega de um polinucleotídeo para fornecer plantas transgênicas e células vegetais cultivadas (por exemplo, porém sem limitação, tabaco, maís e lentilha-de-água) que produzem tais anticorpos, porções especificadas ou variantes nas partes de planta ou em células cultivadas a partir das mesmas. Por exemplo, Cramer et al. (1999) Curr.

Top. Microbiol. Immunol. 240:95 a 118 e referências citadas no presente documento, descrevem a produção de folhas de tabaco transgênico que expressam grandes quantidades de proteínas recombinantes, por exemplo, com o uso de um promotor induzível. O maís transgênico tem sido usado para expressar proteínas de mamífero em níveis de produção comercial, com atividades biológicas equivalentes àquelas produzidas em outros sistemas recombinantes ou purificadas a partir de fontes naturais. Consultar, por exemplo, Hood et al., Adv. Exp. Med. Biol. (1999) 464:127 a 147 e referências citadas no mesmo. As variantes de anticorpo também têm sido produzidas em grandes quantidades a partir de sementes de planta transgênica que incluem fragmentos de anticorpo, tais como anticorpos de cadeia única (scFv's), incluindo sementes de tabaco e tubérculos de batata. Consultar, por exemplo, Conrad et al. (1998) Plant Mol. Biol. 38:101 a 109 e referência citada no mesmo. Dessa forma, os anticorpos também podem ser produzidos com o uso de plantas transgênicas, de acordo com métodos conhecidos.

[0340]Os derivados de anticorpo podem ser produzidos, por exemplo, mediante a adição de sequências exógenas para modificar a imunogenicidade ou reduzir, intensificar ou modificar a ligação, afinidade, taxa de associação, taxa de dissociação, avidez, especificidade, meia-vida ou qualquer outra característica adequada. Em geral, parte de ou todas as sequências de CDR humana ou não humana são mantidas, enquanto as sequências não humanas das regiões constante e variável são substituídas por aminoácidos humanos ou outros aminoácidos.

[0341]Os fragmentos de anticorpo pequenos podem ser diacorpos que têm dois sítios de ligação a antígeno, em que os fragmentos compreendem um domínio variável de cadeia pesada (VH) conectado a um domínio variável de cadeia leve (VL) na mesma cadeia de polipeptídeo (VH VL). Consultar, por exemplo, documento n° EP 404.097; WO 93/11161; e Hollinger et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6.444 a 6.448. Com o uso de um ligante que é curto demais para permitir o pareamento entre os dois domínios na mesma cadeia, os domínios são forçados a parear com os domínios complementares de uma outra cadeia e criar dois sítios de ligação a antígeno. Consultar também a patente n° U.S. 6.632.926 de Chen et al., que está incorporada ao presente documento a título de referência, em sua totalidade, e revela variantes de anticorpo que têm um ou mais aminoácidos inseridos em uma região hipervariável do anticorpo parental e uma afinidade de ligação para um antígeno alvo que é pelo menos cerca de duas vezes mais forte que a afinidade de ligação do anticorpo parental para o antígeno.

[0342]O anticorpo pode ser um anticorpo linear. O procedimento para fabricar um anticorpo linear é conhecido na técnica e descrito em Zapata et al., (1995) Protein Eng. 8(10):1.057 a 1.062. Brevemente, esses anticorpos compreendem um par de segmentos Fd em tandem (VH-CH1-VH-CH1) que formam um par de regiões de ligação a antígeno. Os anticorpos lineares podem ser biespecíficos ou monoespecíficos.

[0343]Os anticorpos podem ser recuperados e purificados a partir de culturas celulares recombinantes por meio de métodos conhecidos que incluem, porém sem limitação, purificação de proteína A, sulfato de amônio ou precipitação de etanol, extração de ácido, cromatografia de troca de cátions ou ânions, cromatografia de fosfocelulose, cromatografia de interação hidrofóbica, cromatografia de afinidade, cromatografia de hidroxilapatita e cromatografia de lectina. A cromatografia líquida de alta eficiência ("HPLC") também pode ser usada para purificação.

[0344]Pode ser útil para identificar de modo detectável o anticorpo. Os métodos para conjugar anticorpos a esses agentes são conhecidos na técnica. Para o propósito de ilustração apenas, os anticorpos podem ser identificados com uma porção química detectável tal como um átomo radioativo, um cromóforo, um fluoróforo ou similares. Tais anticorpos identificados podem ser usados para técnicas de diagnóstico, in vivo ou em uma amostra de teste isolada. Os mesmos podem ser ligados a uma citocina, a um ligante, a um outro anticorpo. Os agentes adequados para o acoplamento a anticorpos para obter um efeito antitumoral incluem citocinas, tais como interleucina 2 (IL-2) e fator de necrose tumoral (TNF); fotossensibilizadores, para uso em terapia fotodinâmica, incluindo tetrassufonato de ftalocianina alumínio (III), hematoporfirina e ftalocianina; radionuclídeos, tais como iodo-131 (131I), ítrio-90 (90Y), bismuto-212 (212Bi), bismuto-213 (213Bi), tecnétio-99m (99mTc), rênio-186 (186Re) e rênio-188 (188Re); antibióticos, tais como doxorrubicina, adriamicina, daunorrubicina, metotrexato, daunomicina, neocarzinostatina e carboplatina; toxinas bacterianas, de planta e outras toxinas, tais como toxina da difteria, pseudomonas exotoxina A, enterotoxina estafilocócica A, toxina abrina-A, ricina A (ricina A deglicosilada e ricina A nativa), toxina de TGF-alfa, citotoxina a partir de cobra chinesa (naja naja atra) e gelonina (uma toxina de planta); proteínas de inativação de ribossoma a partir de plantas, bactérias e fungos, tais como restrictocina (uma proteína de inativação de ribossoma produzida por Aspergillus restrictus), saporina (uma proteína de inativação de ribossoma a partir de Saponaria officinalis) e RNase; inibidores de tirosina quinase; ly207702 (um nucleosídeo de purina difluorado); lipossomas que contêm agentes anticísticos (por exemplo, oligonucleotídeos antissenso, plasmídeos que codificam toxinas, metotrexato, etc.); e outros anticorpos ou fragmentos de anticorpo, tais como F(ab).

[0345]A produção de anticorpos através do uso de tecnologia de hibridoma, o método de anticorpo de linfócito selecionado (SLAM), animais transgênicos e bibliotecas de anticorpo recombinante é descrita em maiores detalhes abaixo.

(1) Anticorpos monoclonais anti-analito com o uso de tecnologia de hibridoma

[0346]Os anticorpos monoclonais podem ser preparados com o uso de uma ampla variedade de técnicas conhecidas na técnica que incluem o uso de tecnologias de hibridoma, recombinante e exibição em fago, ou uma combinação das mesmas.

Por exemplo, os anticorpos monoclonais podem ser produzidos com o uso de técnicas de hibridoma que incluem aquelas conhecidas na técnica e mostradas, por exemplo, em Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Segunda Edição, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 1988); Hammerling, et al., In Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, (Elsevier, N.Y., 1981). Também é observado que o termo “anticorpo monoclonal" como usado no presente documento não se limita a anticorpos produzidos através da tecnologia de hibridoma. O termo “anticorpo monoclonal" se refere a um anticorpo que é derivado de um único clone, incluindo qualquer clone eucariótico, procariótico ou de fago e não ao método por meio do qual é produzido.

[0347]Os métodos para gerar anticorpos monoclonais, bem como anticorpos produzidos pelo método podem compreender cultivar uma célula de hibridoma que secreta um anticorpo da revelação em que, de preferência, o hibridoma é gerado mediante a fusão de esplenócitos isolados a partir de um animal, por exemplo, um rato ou camundongo, imunizado com o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) com células de mieloma e, então, mediante a triagem dos hibridomas que resultam da fusão acerca de clones de hibridoma que secretam um anticorpo com capacidade para ligar um polipeptídeo da revelação. Brevemente, os ratos podem ser imunizados com um antígeno de analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP). Em uma modalidade preferencial, o antígeno de analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) é administrado com um adjuvante para estimular a resposta imunológica. Tais adjuvantes incluem adjuvante de Freund completo ou incompleto, RIBI (muramil dipeptídeos) ou ISCOM (complexos de imunoestimulação). Tais adjuvantes podem proteger o polipeptídeo a partir da dispersão rápida mediante o sequestro do mesmo em um depósito local ou podem conter substâncias que estimulam o hospedeiro a secretar fatores que são quimiotáticos para macrófagos e outros componentes do sistema imunológico. De preferência, se um polipeptídeo estiver sendo administrado, a programação de imunização irá envolver duas ou mais administrações do polipeptídeo, espalhadas por várias semanas, no entanto, uma única administração do polipeptídeo também pode ser usada.

[0348]Após a imunização de um animal com um antígeno de analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP), os anticorpos e/ou células produtoras de anticorpo podem ser obtidos a partir do animal. Um soro que contém anticorpo anti-analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) é obtido a partir do animal mediante o sangramento ou sacrifício do animal. O soro pode ser usado conforme é obtido a partir do animal, uma fração de imunoglobulina pode ser obtida a partir do soro ou anticorpos anti-analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) podem ser purificados a partir do soro. O soro ou imunoglobulinas obtidas dessa maneira são policlonais, dessa forma, tendo uma gama heterogênea de propriedades.

[0349]Uma vez que uma resposta imunológica é detectada, por exemplo, anticorpos específicos para o analito de antígeno (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) são detectados no soro de rato, o baço do rato é coletado e esplenócitos isolados. Os esplenócitos são, então, fundidos por meio de técnicas bem conhecidas a quaisquer células de mieloma adequadas, por exemplo, células a partir da linhagem de células SP20 disponível junto à American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, Va., US). Os hibridomas são selecionados e clonados por diluição limitada. Os clones de hibridoma são, então, analisados por meio de métodos conhecidos na técnica acerca de células que secretam anticorpos com capacidade para ligar o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP).

O fluido de ascite, que em geral contém altos níveis de anticorpos, pode ser gerado mediante a imunização de ratos com clones de hibridoma positivos.

[0350]Em uma outra modalidade, os hibridomas imortalizados produtores de anticorpo podem ser preparados a partir do animal imunizado. Após a imunização, o animal é sacrificado e as células B esplênicas são fundidas em células de mieloma imortalizadas conforme é bem conhecido na técnica. Consultar, por exemplo, Harlow e Lane, supra. Em uma modalidade preferencial, as células de mieloma não secretam polipeptídeos de imunoglobulina (uma linhagem de células não secretórias). Após a fusão e seleção de antibiótico, os hibridomas são submetidos à triagem com o uso do analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) ou uma porção do mesmo ou uma célula que expressa o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP). Em uma modalidade preferencial, a triagem inicial é realizada com o uso de um ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA) ou radioimunoensaio (RIA), de preferência, um ELISA. Um exemplo de triagem por ELISA é fornecido na publicação PCT nº WO 00/37504.

[0351]Os hibridomas de produção de anticorpos anti-analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) são selecionados, clonados e adicionalmente submetidos à triagem acerca de características desejáveis, incluindo crescimento de hibridoma robusto, alta produção de anticorpos e características de anticorpo desejáveis. Os hibridomas podem ser cultivados e expandidos in vivo em animais singênicos, em animais desprovidos de um sistema imunológico, por exemplo, camundongos nus ou em cultura celular in vitro. Os métodos para selecionar, clonar e expandir hibridomas são bem conhecidas pelos versados na técnica.

[0352]Em uma modalidade preferencial, os hibridomas são hibridomas de rato. Em uma outra modalidade, os hibridomas são produzidos em uma espécie de não rato e não humana tal como camundongos, carneiro, porcos, cabras, gado ou cavalos. Em ainda outra modalidade preferencial, os hibridomas são hibridomas humanos, em que um mieloma não secretório humano é fundido com uma célula humana que expressa um anticorpo anti-analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP).

[0353]Os fragmentos de anticorpo que reconhecem epítopos específicos podem ser gerados por meio de técnicas conhecidas. Por exemplo, os fragmentos Fab e F(ab')2 da revelação podem ser produzidos por meio de clivagem proteolítica de moléculas de imunoglobulina, com o uso de enzimas tais como papaína (para produzir dois fragmentos Fab idênticos) ou pepsina (para produzir um fragmento F(ab')2). Um fragmento F(ab')2 de uma molécula de IgG retém os dois sítios de ligação a antígeno da molécula de IgG maior ("parental"), incluindo tanto cadeias leves (que contêm as regiões de cadeia leve constante e cadeia leve variável), como os domínios CH1 das cadeias pesadas e uma região de dobradiça de formação de dissulfeto da molécula de IgG parental. Consequentemente, um fragmento F(ab')2 ainda tem capacidade para reticulação de moléculas de antígeno como a molécula de IgG parental.

(2) Anticorpos monoclonais anti-analito com o uso de SLAM

[0354]Em um outro aspecto da revelação, os anticorpos recombinantes são gerados a partir de linfócitos isolados únicos com o uso de um procedimento mencionado na técnica como o método de anticorpo de linfócito selecionado (SLAM), conforme descrito na patente nº U.S. 5.627.052; publicação PCT nº WO 92/02551; e Babcook et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 7.843 a 7.848 (1996). Nesse método, células únicas que secretam anticorpos de interesse, por exemplo, linfócitos derivados a partir de qualquer um dos animais imunizados são submetidas à triagem com o uso de um ensaio de placa hemolítica específica de antígeno, em que o analito de antígeno (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP), uma subunidade do analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) ou um fragmento do mesmo, é acoplado a eritrócitos de ovelha com o uso de um ligante, tal como biotina, e usado para identificar células únicas que secretam anticorpos com especificidade para o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP). Após a identificação de células que secretam anticorpo de interesse, os cDNAs de região variável de cadeia leve e pesada são recuperados a partir das células por meio de transcriptase reversa-PCR (RT-PCR) e essas regiões variáveis podem ser, então, expressas, no contexto de regiões constantes de imunoglobulina adequadas (por exemplo, regiões constantes humanas), em células hospedeiras de mamífero, tais como células COS ou CHO. As células hospedeiras transfectadas com as sequências de imunoglobulina amplificadas, derivadas a partir de linfócitos selecionados in vivo ,

podem, então, se submeter à análise adicional e seleção in vitro, por exemplo, por panning das células transfectadas para isolar células que expressam anticorpos para o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP). As sequências de imunoglobulina amplificadas podem ser adicionalmente manipuladas in vitro, tal como por meio de método de maturação por afinidade in vitro. Consultar, por exemplo, publicação PCT nº WO 97/29131 e publicação PCT nº WO 00/56772.

(3) Anticorpos monoclonais anti-analito com o uso de animais transgênicos

[0355]Em uma outra modalidade da revelação, os anticorpos são produzidos por meio da imunização de um animal não humano que compreende alguns ou todos dentre os loci de imunoglobulina humana com um antígeno de analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP). Em uma modalidade, o animal não humano é um camundongo transgênico XENOMOUSE®, uma cepa de camundongo manipulada que compreende fragmentos grandes dos loci de imunoglobulina humana e é deficiente em produção de anticorpos de camundongo. Consultar, por exemplo, Green et al., Nature Genetics, 7: 13 a 21 (1994) e patentes nºs U.S. 5.916.771;

5.939.598; 5.985.615; 5.998.209; 6.075.181; 6.091.001; 6.114.598; e 6.130.364.

Consultar também publicação PCT n° WO 91/10741; WO 94/02602; WO 96/34096; WO 96/33735; WO 98/16654; WO 98/24893; WO 98/50433; WO 99/45031; WO 99/53049; WO 00/09560; e WO 00/37504. O camundongo transgênico XENOMOUSE® produz um repertório humano semelhante a adulto de anticorpos completamente humanos e gera anticorpos monoclonais humanos específicos de antígeno. O camundongo transgênico XENOMOUSE® contém aproximadamente 80% do repertório de anticorpo humano através da introdução de fragmentos YAC de configuração de linhagem germinativa dimensionados em megabase dos loci de cadeia pesada humana e x loci de cadeia leve. Consultar Mendez et al., Nature Genetics, 15: 146 a 156 (1997), Green e Jakobovits, J. Exp. Med., 188: 483 a 495 (1998), cujas descrições estão aqui incorporadas, por referência.

(4) Anticorpos monoclonais anti-analito com o uso de bibliotecas de anticorpo recombinante

[0356]Os métodos in vitro também podem ser usados para fabricar os anticorpos da revelação, em que uma biblioteca de anticorpos é submetida à triagem para identificar um anticorpo que tem a especificidade de ligação a analito desejada (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP). Os métodos para tal triagem de bibliotecas de anticorpo recombinante são bem conhecidos na técnica e incluem métodos descritos, por exemplo, na patente n° U.S. 5.223.409 (Ladner et al.); publicação PCT nº WO 92/18619 (Kang et al.); publicação PCT nº WO 91/17271 (Dower et al.); publicação PCT nº WO 92/20791 (Winter et al.); publicação PCT nº WO 92/15679 (Markland et al.); publicação PCT nº WO 93/01288 (Breitling et al.); publicação PCT nº WO 92/01047 (McCafferty et al.); publicação PCT nº WO 92/09690 (Garrard et al.); Fuchs et al., Bio/Technology, 9: 1.369 a 1.372 (1991); Hay et al., Hum.

Antibod. Hybridomas, 3: 81 a 85 (1992); Huse et al., Science, 246: 1.275 a 1.281 (1989); McCafferty et al., Nature, 348: 552 a 554 (1990); Griffiths et al., EMBO J., 12: 725 a 734 (1993); Hawkins et al., J. Mol. Biol., 226: 889 a 896 (1992); Clackson et al., Nature, 352: 624 a 628 (1991); Gram et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 3.576 a

3.580 (1992); Garrard et al., Bio/Technology, 9: 1.373 a 1.377 (1991); Hoogenboom et al., Nucl. Acids Res., 19: 4.133 a 4.137 (1991); Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci.

USA, 88: 7.978 a 7.982 (1991); publicação de pedido de patente nº U.S.

2003/0186374; e publicação PCT n° WO 97/29131, estando o conteúdo de cada um dos quais incorporado ao presente documento a título de referência.

[0357]A biblioteca de anticorpo recombinante pode ser a partir de um indivíduo imunizado com o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) ou uma porção do analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP). Alternativamente, a biblioteca de anticorpo recombinante pode ser a partir de um indivíduo virgem, isto é, um indivíduo que não foi imunizado com o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP), tal como uma biblioteca de anticorpo humano a partir de um indivíduo humano que não foi imunizado com analito humano (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP). Os anticorpos da revelação são selecionados por meio da triagem da biblioteca de anticorpo recombinante com o peptídeo que compreende analito humano (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) para assim selecionar aqueles anticorpos que reconhecem o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP). Os métodos para conduzir tal triagem e seleção são bem conhecidos na técnica, tal como descrito nas referências no parágrafo anterior. Para selecionar anticorpos da revelação que têm afinidades de ligação particulares para o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP), tais como aqueles que dissociam a partir de analito humano (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) I com uma constante de taxa Koff particular, o método conhecido na técnica de ressonância de plasmón de superfície pode ser usado para selecionar anticorpos que têm a constante de taxa Koff desejada. Para selecionar anticorpos da revelação que têm uma atividade de neutralização particular para o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP), tais como aqueles com um IC50 particular, os métodos padrão conhecidos na técnica para avaliar a inibição da atividade de analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) podem ser usados.

[0358]Em um aspecto, a revelação pertence a um anticorpo isolado ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, que liga analito humano (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP). De preferência, o anticorpo é um anticorpo neutralizante. Em diversas modalidades, o anticorpo é um anticorpo recombinante ou um anticorpo monoclonal.

[0359]Por exemplo, os anticorpos também podem ser gerados com o uso de diversos métodos de exibição em fago conhecidos na técnica. Em métodos de exibição em fago, os domínios de anticorpo funcionais são exibidos sobre a superfície de partículas de fago que carregam as sequências de polinucleotídeos que codificam as mesmas. Tal fago pode ser usado para exibir domínios de ligação a antígeno expressos a partir de um repertório ou biblioteca de anticorpo combinatória (por exemplo, humano ou murino). O fago que expressa um domínio de ligação a antígeno que liga o antígeno de interesse pode ser selecionado ou identificado com antígeno, por exemplo, com o uso de antígeno identificado ou antígeno ligado ou capturado em uma superfície sólida ou microesfera. O fago usado nesses métodos são tipicamente fago filamentoso que inclui domínios de ligação fd e M13 expressos a partir do fago com Fab, Fv ou domínios de anticorpo Fv estabilizados com dissulfeto fundidos de modo recombinante ao gene de fago III ou proteína de gene VIII. Os exemplos de métodos de exibição em fago que podem ser usados para fabricar os anticorpos incluem aqueles revelados em Brinkmann et al., J. Immunol. Methods, 182: 41 a 50 (1995); Ames et al., J. Immunol. Methods, 184:177 a 186 (1995); Kettleborough et al., Eur. J. Immunol., 24: 952 a 958 (1994); Persic et al., Gene, 187: 9 a 18 (1997); Burton et al., Advances in Immunology, 57: 191 a 280 (1994); publicação PCT nº WO 92/01047; publicação PCT nº WO 90/02809; WO 91/10737; WO 92/01047; WO 92/18619; WO 93/11236; WO 95/15982; WO 95/20401; e patentes nº U.S. 5.698.426;

5.223.409; 5.403.484; 5.580.717; 5.427.908; 5.750.753; 5.821.047; 5.571.698;

5.427.908; 5.516.637; 5.780.225; 5.658.727; 5.733.743; e 5.969.108.

[0360]Conforme descrito nas referências acima, após a seleção de fago, as regiões de codificação de anticorpo a partir do fago podem ser isoladas e usadas para gerar anticorpos inteiros que incluem anticorpos humanos ou qualquer outro fragmento de ligação ao antígeno desejado e expressos em qualquer hospedeiro desejado, incluindo células de mamífero, células de inseto, células de planta, levedura e bactérias, por exemplo, conforme descrito em detalhes abaixo. Por exemplo, as técnicas para produzir de modo recombinante fragmentos Fab, Fab' e F(ab')2 também podem ser empregadas com o uso de métodos conhecidos na técnica tais como aqueles descritos na publicação PCT nº WO 92/22324; Mullinax et al., BioTechniques, 12(6): 864 a 869 (1992); Sawai et al., Am. J. Reprod. Immunol., 34: 26 a 34 (1995); e Better et al., Science, 240: 1.041 a 1.043 (1988). Os exemplos de técnicas que podem ser usadas para produzir anticorpos e Fvs de cadeia única incluem aqueles descritos na patente n° U.S. 4.946.778 e 5.258.498; Huston et al., Methods in Enzymology, 203: 46 a 88 (1991); Shu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7.995 a 7.999 (1993); e Skerra et al., Science, 240: 1.038 a 1.041 (1988).

[0361]Alternativamente à triagem de bibliotecas de anticorpo recombinante por exibição de fago, outras metodologias conhecidas na técnica para a triagem de bibliotecas combinatórias grandes podem ser aplicadas à identificação de anticorpos da revelação. Um tipo de sistema de expressão alternativo é aquele em que a biblioteca de anticorpo recombinante é expressa como fusões de RNA-proteína, conforme descrito na publicação PCT nº WO 98/31700 (Szostak e Roberts) e em Roberts e Szostak, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 12.297 a 12.302 (1997). Nesse sistema, uma fusão covalente é criada entre um mRNA e o peptídeo ou proteína que o mesmo codifica por meio de tradução in vitro de mRNAs sintéticas que carregam puromicina, um antibiótico aceitante de peptidila, na extremidade 3'. Dessa forma, um mRNA específico pode ser enriquecido a partir de uma mistura complexa de mRNAs (por exemplo, uma biblioteca combinatória) com base nas propriedades da proteína ou peptídeo codificado, por exemplo, anticorpo ou porção do mesmo, tal como a ligação do anticorpo ou porção do mesmo, ao antígeno de especificidade dupla. As sequências de ácidos nucleicos que codificam anticorpos ou porções dos mesmos, recuperadas a partir da triagem de tais bibliotecas podem ser expressas por meios recombinantes conforme descrito acima (por exemplo, em células hospedeiras de mamífero) e, ademais, podem ser submetidas à maturação por afinidade adicional através de ciclos adicionais de triagem de fusões de mRNA-peptídeo, em que as mutações foram introduzidas na sequência (ou sequências) originalmente selecionada ou por meio de outros métodos para maturação por afinidade in vitro de anticorpos recombinantes, conforme descrito acima. Um exemplo preferencial dessa metodologia é a tecnologia de exibição PROfusion.

[0362]Em uma outra abordagem, os anticorpos também podem ser gerados com o uso de métodos de exibição em levedura conhecidos na técnica. Em métodos de exibição em levedura, os métodos genéticos são usados para prender domínios de anticorpo à parede celular de levedura e exibir os mesmos sobre a superfície da levedura. Em particular, tal levedura pode ser usada para exibir domínios de ligação a antígeno expressos a partir de um repertório ou biblioteca de anticorpo combinatória (por exemplo, humano ou murino). Os exemplos de métodos de exibição em levedura que podem ser usados para fabricar os anticorpos incluem aqueles revelados na patente nº U.S. 6.699.658 (Wittrup et al.) incorporada ao presente documento a título de referência.

e. Produção de anticorpos de analito recombinante

[0363]Os anticorpos podem ser produzidos por qualquer uma dentre várias técnicas conhecido na técnica. Por exemplo, a expressão a partir de células hospedeiras, em que vetor (ou vetores) de expressão que codifica as cadeias pesada e leve é transfectado em uma célula hospedeira por meio de técnicas padrão. As várias formas do termo “transfecção” são destinadas a abranger uma ampla variedade de técnicas comumente usadas para a introdução de DNA exógeno em uma célula hospedeira procariótica ou eucariótica, por exemplo, eletroporação, precipitação com fosfato de cálcio, transfecção com DEAE-dextrano e similares. Embora seja possível expressar os anticorpos da revelação em células hospedeiras procarióticas ou eucarióticas, a expressão de anticorpos em células eucarióticas é preferencial e o mais preferencial em células hospedeiras de mamífero, devido ao fato de que é mais provável que tais células eucarióticas (e em particular células de mamífero) montem e secretem um anticorpo apropriadamente dobrado e imunologicamente ativo do que células procarióticas.

[0364]As células hospedeiras de mamífero exemplificadoras para expressar os anticorpos recombinantes da revelação incluem células de ovário de hamster chinês (células CHO) (incluindo células dhfr-CHO, descritas em Urlaub e Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4.216 a 4.220 (1980), usadas com um marcador selecionável DHFR, por exemplo, conforme descrito em Kaufman e Sharp, J. Mol.

Biol., 159: 601 a 621 (1982), células de mieloma NS0, células COS e células SP2.

Quando vetores de expressão recombinante que codificação genes de anticorpos são introduzidos em células hospedeiras de mamífero, os anticorpos são produzidos por meio da cultura das células hospedeiras durante um período de tempo suficiente para permitir a expressão do anticorpo nas células hospedeiras ou, mais preferencialmente, secreção do anticorpo no meio de cultura no qual as células hospedeiras estão crescendo. Os anticorpos podem ser recuperados a partir do meio de cultura com o uso de métodos de purificação de proteínas padrão.

[0365]As células hospedeiras também podem ser usadas para produzir fragmentos de anticorpos funcionais, tais como fragmentos Fab ou moléculas ScFv.

Será compreendido que variações no procedimento acima podem ser realizadas. Por exemplo, pode ser desejável transfectar uma célula hospedeira com DNA que codificam fragmentos funcionais da cadeia leve e/ou da cadeia pesada de um anticorpo desta revelação. A tecnologia de RNA recombinante também pode ser usada para remover parte ou todo o DNA que codifica qualquer uma das ou ambas as cadeias leve e pesada que não seja necessária para a ligação aos antígenos de interesse. As moléculas expressas a partir de tais moléculas de DNA truncado são também abrangidas pelos anticorpos da revelação. Além disso, podem ser produzidos anticorpos bifuncionais nos quais uma cadeia pesada e uma cadeia leve são um anticorpo da revelação (isto é, liga o analito humano (por exemplo, troponina humana I, UCH-L1 ou GFAP)) e as outras cadeias pesada e leve são específicas para um antígeno diferente do analito humano (por exemplo, troponina humana I, UCH-L1 ou GFAP) mediante a reticulação de um anticorpo da revelação a um segundo anticorpo por meio de métodos de reticulação química padrão.

[0366]Em um sistema preferencial para expressão recombinante de um anticorpo, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, da revelação, um vetor de expressão recombinante que codifica tanto a cadeia pesada do anticorpo como a cadeia leve do anticorpo é introduzido em células dhfr-CHO por meio de transfecção mediada por fosfato de cálcio. Dentro do vetor de expressão recombinante, os genes de cadeia pesada e leve do anticorpo são, cada um, ligado de maneira operacional a elementos reguladores intensificadores de CMV/promotores de AdMLP para conduzir níveis altos de transcrição dos genes. O vetor de expressão recombinante transporta também um gene DHFR, que permite a seleção de células CHO que foram transfectadas com o vetor com o uso de amplificação/seleção com metotrexato. As células hospedeiras transformantes selecionadas são cultivadas para permitir a expressão das cadeias pesada e leve do anticorpo e o anticorpo intato é recuperado a partir do meio de cultura. As técnicas de biologia molecular padrão são usadas para preparar o vetor de expressão recombinante, transfectar as células hospedeiras, selecionar transformantes, cultivar as células hospedeiras e recuperar o anticorpo a partir do meio de cultura. Ainda adicionalmente, a revelação fornece um método de síntese de um anticorpo recombinante da revelação por meio da cultura de uma célula hospedeira da revelação em um meio de cultura adequado até um anticorpo recombinante da revelação ser sintetizado. O método pode adicionalmente compreender o isolamento do anticorpo recombinante a partir do meio de cultura.

(1) Anticorpo humanizado

[0367]O anticorpo humanizado pode ser um anticorpo ou uma variante, derivado, análogo ou porção do mesmo que se liga imunoespecificamente a um antígeno de interesse e que compreende uma região framework (FR) que tem substancialmente a sequência de aminoácidos de um anticorpo humano e uma região determinante de complementaridade (CDR) que tem substancialmente a sequência de aminoácidos de um anticorpo não humano. O anticorpo humanizado pode ser a partir de um anticorpo de espécie não humana que se liga ao antígeno desejado que tem uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs) da espécie não humana e regiões framework a partir de uma molécula de imunoglobulina humana.

[0368]Como usado no presente documento, o termo “substancialmente” no contexto de uma CDR se refere a uma CDR que tem uma sequência de aminoácidos pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% idêntica à sequência de aminoácidos de uma CDR de anticorpo não humano. Um anticorpo humanizado compreende substancialmente todos ou pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis (Fab, Fab´, F(ab´)2, FabC, Fv) nos quais todas ou substancialmente todas as regiões CDR correspondem àquelas de uma imunoglobulina não humana (isto é, anticorpo doador) e todas ou substancialmente todas as regiões framework são aquelas de uma sequência de consenso de imunoglobulina humana. De acordo com um aspecto, um anticorpo humanizado compreende também pelo menos uma porção de uma região constante (Fc) de imunoglobulina, tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana. Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado contém tanto a cadeia leve como pelo menos o domínio variável de uma cadeia pesada. O anticorpo pode também incluir as regiões CH1, dobradiça, CH2, CH3 e CH4 da cadeia pesada. Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado contém apenas uma cadeia leve humanizada. Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado contém apenas uma cadeia pesada humanizada. Em modalidades específicas, um anticorpo humanizado contém apenas um domínio variável humanizado de uma cadeia leve e/ou de uma cadeia pesada.

[0369]Um anticorpo humanizado pode ser selecionado a partir de qualquer classe de imunoglobulinas, incluindo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE e qualquer isotipo, incluindo, sem limitação, IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. O anticorpo humanizado pode compreender sequências a partir de mais de uma classe ou isotipo e domínios constantes particulares podem ser selecionados para otimizar as funções efetoras desejadas com o uso de técnicas bem conhecidas na técnica.

[0370]As regiões framework e CDR de um anticorpo humanizado não necessitam corresponder precisamente às sequências parentais, por exemplo, a CDR de anticorpo doador ou a framework de consenso pode ser mutagenizada por meio de substituição, inserção e/ou deleção de pelo menos um resíduo de aminoácido de modo que o resíduo de CDR ou de framework naquele sítio não corresponda ao anticorpo doador ou à framework de consenso. Em uma modalidade, tais mutações, entretanto, não serão extensivas. Normalmente, pelo menos 90%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99% dos resíduos de anticorpo humanizado corresponderão àqueles das sequências de FR e CDR parentais. Como usado aqui, o termo "framework de consenso" se refere à região framework na sequência de imunoglobulina de consenso. Como usado aqui, o termo “sequência de imunoglobulina de consenso” se refere à sequência formada a partir dos aminoácidos (ou nucleotídeos) que ocorrem mais frequentemente em uma família de sequências de imunoglobulina relacionadas (consultar, por exemplo, Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Alemanha 1987)). Em uma família de imunoglobulinas, cada posição na sequência de consenso é ocupada pelo aminoácido que ocorre mais frequentemente naquela posição na família. Se dois aminoácidos ocorrerem de forma igualmente frequente, qualquer um pode ser incluído na sequência de consenso.

[0371]O anticorpo humanizado pode ser projetado para minimizar a resposta imunológica indesejada em direção a anticorpos de roedor anti-humano, que limita a duração e eficácia das aplicações terapêuticas daquelas porções químicas em recebedores humanos. O anticorpo humanizado pode ter um ou mais resíduos de aminoácido introduzidos no mesmo a partir de uma fonte que é não humana. Esses resíduos não humanos são muitas vezes mencionados como resíduos de “importação”, que são tipicamente tomados a partir de um domínio variável. A humanização pode ser realizada mediante a substituição de sequências de região hipervariável pelas sequências correspondentes de um anticorpo humano.

Consequentemente, tais anticorpos “humanizados” são anticorpos quiméricos em que substancialmente menos de um domínio variável humano intacto foi substituído pela sequência correspondente a partir de uma espécie não humana. Por exemplo, consultar a patente n° U.S. 4.816.567, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência. O anticorpo humanizado pode ser um anticorpo humano em que alguns resíduos de região hipervariável e possivelmente alguns resíduos de FR são substituídos por resíduos a partir de sítios análogos em anticorpos de roedor. A humanização ou engenharia de anticorpos da presente revelação pode ser realizada com o uso de qualquer método conhecido, tal como, porém sem limitação, aqueles descritos nas patentes nºs U.S. 5.723.323; 5.976.862; 5.824.514;

5.817.483; 5.814.476; 5.763.192; 5.723.323; 5.766.886; 5.714.352; 6.204.023;

6.180.370; 5.693.762; 5.530.101; 5.585.089; 5.225.539; e 4.816.567.

[0372]O anticorpo humanizado pode reter alta afinidade para o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP) e outras propriedades biológicas favoráveis. O anticorpo humanizado pode ser preparado por meio de um processo de análise das sequências parentais e diversos produtos humanizados conceituais com o uso de modelos tridimensionais das sequências humanizadas e parentais. Os modelos de imunoglobulina tridimensionais estão comumente disponíveis. Estão disponíveis programas de computador que ilustram e exibem estruturas de conformação tridimensional prováveis de sequências de imunoglobulina candidatas selecionadas. A inspeção dessas exibições permite a análise da função provável dos resíduos no funcionamento da sequência de imunoglobulina candidata, isto é, a análise de resíduos que influenciam a capacidade da imunoglobulina candidata se ligar ao seu antígeno. Dessa maneira, os resíduos de FR podem ser selecionados e combinados a partir das sequências de recebedor e de importação de modo que as características de anticorpo desejadas, tais como afinidade aumentada para o analito (por exemplo, troponina cardíaca I, UCH-L1 ou GFAP), sejam alcançadas. Em geral, os resíduos de região hipervariável podem ser diretamente e mais substancialmente envolvidos na influência da ligação de antígeno.

[0373]Como uma alternativa para a humanização, os anticorpos humanos (também mencionados no presente documento como “anticorpos completamente humanos”) podem ser gerados. Por exemplo, é possível isolar anticorpos humanos a partir de bibliotecas através de tecnologias PROfusion e/ou relacionadas à levedura.

Também é possível produzir animais transgênicos (por exemplo, camundongos) que têm capacidade, sob imunização, para produzir um repertório completo de anticorpos humanos na ausência de produção de imunoglobulina endógena. Por exemplo, a deleção de homozigoto do gene de região de junção (JH) de cadeia pesada de anticorpo em camundongos mutantes de linhagem germinativa e quiméricos resulta na inibição completa da produção de anticorpos endógenos. A transferência da matriz de gene de imunoglobulina de linhagem germinativa humana em tais camundongos mutantes de linhagem germinativa irá resultar na produção de anticorpos humanos sob provocação de antígeno. Os anticorpos completamente humanos ou humanizados podem ser preparados de acordo com os métodos descritos nas patentes n°s U.S. 5.770.429; 5.833.985; 5.837.243; 5.922.845; 6.017.517; 6.096.311;

6.111.166; 6.270.765; 6.303.755; 6.365.116; 6.410.690; 6.682.928; e 6.984.720, o conteúdo de cada uma das quais está incorporado ao presente documento a título de referência.

12. Variações em métodos

[0374]Os métodos revelados para determinar a presença ou quantidade de analitos de interesse (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) presentes em uma amostra podem ser conforme descrito no presente documento. Os métodos também podem ser adaptados em vista de outros métodos para analisar analitos. Os exemplos de variações bem conhecidas incluem, mas não se limitam a, imunoensaio, tal como imunoensaio do tipo sanduíche (por exemplo, imunoensaios do tipo sanduíche monoclonal-monoclonal, imunoensaios do tipo sanduíche monoclonal-policlonal, incluindo imunoensaio de detecção de enzima (imunoensaio de enzima (EIA) ou ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA), imunoensaio de inibição competitiva (por exemplo, direto e inverso), técnica de imunoensaio multiplicado por enzima (EMIT), um ensaio de ligação competitiva, transferência de energia por ressonância de bioluminescência (BRET), ensaio de detecção de anticorpo de uma etapa, ensaio homogêneo, ensaio heterogêneo, ensaio de coleta instantânea, etc.

a. Imunoensaio

[0375]Os analitos de interesse e/ou peptídeos ou fragmentos dos mesmos (por exemplo, cTnI e UCH-L1 e/ou GFAP, e/ou peptídeos ou fragmentos dos mesmos, isto é, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) e/ou fragmentos), podem ser analisados com o uso de anticorpos para cTnI e um ou mais biomarcadores adicionais que não são cTnI (tais como anticorpos de UCH-L1 e/ou GFAP) em um imunoensaio. A presença ou quantidade de analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) pode ser determinada com o uso de anticorpos e da detecção de ligação específica aos analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)). Por exemplo, o anticorpo ou fragmento de anticorpo do mesmo, pode se ligar especificamente aos analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH- L1 e/ou GFAP)). Se for desejado, um ou mais anticorpos podem ser usados em combinação com um ou mais anticorpos monoclonais/policlonais comercialmente disponíveis. Tais anticorpos estão disponíveis junto a empresas tais como R&D Systems, Inc. (Minneapolis, MN) e Enzo Life Sciences International, Inc. (Plymouth Meeting, PA).

[0376]A presença ou quantidade de analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) presentes em uma amostra de corpo pode ser prontamente determinada com o uso de um imunoensaio, tal como imunoensaio do tipo sanduíche (por exemplo, imunoensaios do tipo sanduíche monoclonal-monoclonal, imunoensaios do tipo sanduíche monoclonal-policlonal, incluindo detecção de radioisotopo (radioimunoensaio (RIA)) e detecção de enzima (imunoensaio de enzima (EIA) ou ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA) (por exemplo, ensaios Quantikine ELISA, R&D Systems, Minneapolis, MN)). Um exemplo de um dispositivo de ponto-de-cuidado que pode ser usado é i-STAT® (Abbott, Laboratories, Abbott Park, IL). Outros métodos que podem ser usados incluem um imunoensaio de micropartícula quemiluminescente, em particular aquele que emprega o analisador automatizado ARCHITECT® (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL), como um exemplo. Outros métodos incluem, por exemplo, espectrometria de massa e imunoistoquímica (por exemplo, com seções a partir de biópsias de tecido), com o uso de anti-analito (por exemplo, anti-cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)), anticorpos (monoclonal, policlonal, quimérico, humanizado, humano, etc.) ou fragmentos de anticorpo dos mesmos contra analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)). Outros métodos de detecção incluem aqueles descritos, por exemplo, nas patentes n°s U.S.

6.143.576; 6.113.855; 6.019.944; 5.985.579; 5.947.124; 5.939.272; 5.922.615;

5.885.527; 5.851.776; 5.824.799; 5.679.526; 5.525.524; e 5.480.792, cada uma das quais está aqui incorporada a título de referência, em sua totalidade. A ligação imunológica específica do anticorpo aos analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) pode ser detectada através de identificações diretas, tais como etiquetas fluorescentes ou luminescentes, metais e radionuclídeos fixados ao anticorpo ou através de identificações indiretas, tais como fosfatase alcalina ou peroxidase de rábano silvestre.

[0377]O uso de anticorpos imobilizados ou fragmentos de anticorpo dos mesmos pode ser incorporado no imunoensaio. Os anticorpos podem ser imobilizados em uma variedade de suportes, tais como partículas de matriz magnética ou cromatográfica, a superfície de uma placa de ensaio (tal como poços de microtitulação), peças de um material de substrato sólido e similares. Uma tira de ensaio pode ser preparada mediante o revestimento do anticorpo ou pluralidade de anticorpos em uma matriz em um suporte sólido. Essa tira pode ser, então, imersa na amostra de teste e processada rapidamente através de lavagens e etapas de detecção para gerar um sinal mensurável, tal como um ponto colorido.

[0378]Um formato homogêneo pode ser usado. Por exemplo, depois que a amostra de teste é obtida a partir de um indivíduo, uma mistura é preparada. A mistura contém a amostra de teste que é avaliada acerca dos analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) e um primeiro parceiro de ligação específica e um ou mais parceiros de ligação específicas adicionais (tais como um segundo parceiro de ligação específica, um terceiro parceiro de ligação específica, um quarto parceiro de ligação específica, um quinto parceiro de ligação específica, etc.). Em algumas modalidades, a mistura contém a amostra de teste que é avaliada acerca dos analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) e um primeiro parceiro de ligação específica, um segundo parceiro de ligação específica e um terceiro parceiro de ligação específica. A ordem na qual a amostra de teste, o primeiro parceiro de ligação específica, o segundo parceiro de ligação específica e o terceiro parceiro de ligação específica (se estiver presente) são adicionados para formar a mistura não é de importância crítica.

A amostra de teste é simultaneamente colocada em contato com o primeiro parceiro de ligação específica, o segundo parceiro de ligação específica e/ou o terceiro parceiro de ligação específica.

Em algumas modalidades, o primeiro parceiro de ligação específica e qualquer cTnI contida na amostra de teste podem formar um complexo de primeiro parceiro de ligação específica-analito (por exemplo, cTnI)-antígeno e o segundo parceiro de ligação específica e um ou mais parceiros de ligação específica adicionais (por exemplo, o terceiro parceiro de ligação específica, o quarto parceiro de ligação específica, um quinto parceiro de ligação específica, etc.) e quaisquer biomarcadores precoces além de cTnI (por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP) contidos na amostra de teste podem formar um complexo de segundo parceiro de ligação específica-analito

(por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP)-antígeno e um complexo de terceiro parceiro de ligação específica-analito (por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP)-antígeno.

Em algumas modalidades, o primeiro parceiro de ligação específica pode se ligar a cTnI e o segundo parceiro de ligação específica pode se ligar a UCH-L1. Em algumas modalidades, o primeiro parceiro de ligação específica pode se ligar a cTnI e o segundo parceiro de ligação específica pode se ligar a GFAP.

Em mais outras modalidades, o primeiro parceiro de ligação específica pode se ligar a cTnI, o segundo parceiro de ligação específica pode se ligar a UCH-L1 e o terceiro parceiro de ligação específica pode se ligar a GFAP.

O primeiro parceiro de ligação específica pode ser um anticorpo anti-analito (por exemplo, anticorpo anti-cTnI que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3)

aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 1 ou um anticorpo anti-UCH-L1 que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três aminoácidos contíguos da SEQ ID NO:2 ou um anticorpo anti-GFAP que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 3). O segundo parceiro de ligação específica pode ser um anticorpo anti-analito (por exemplo, anticorpo anti-cTnI que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 1 ou um anticorpo anti-UCH- L1 que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três aminoácidos contíguos da SEQ ID NO:2 ou um anticorpo anti-GFAP que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 3). O terceiro parceiro de ligação específica pode ser um anticorpo anti-analito (por exemplo, anticorpo anti- cTnI que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 1 ou um anticorpo anti-UCH-L1 que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três aminoácidos contíguos da SEQ ID NO:2 ou um anticorpo anti-GFAP que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 3). Ademais, um ou mais dentre o primeiro, o segundo e/ou o terceiro parceiros de ligação específica podem ser identificados com ou conter uma identificação detectável conforme descrito acima.

[0379]Um formato heterogêneo pode ser usado. Por exemplo, depois que a amostra de teste é obtida a partir de um indivíduo, uma primeira mistura é preparada.

A mistura contém a amostra de teste que é avaliada acerca dos analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) e um primeiro parceiro de ligação específica, em que o primeiro parceiro de ligação específica e qualquer cTnI contida na amostra de teste formam um complexo de primeiro parceiro de ligação específica-analito (por exemplo, cTnI)-antígeno e um ou mais parceiros de ligação específica adicionais (tais como um segundo parceiro de ligação específica, um terceiro parceiro de ligação específica, um quarto parceiro de ligação específica, um quinto parceiro de ligação específica, etc.), em que o um ou mais parceiros de ligação específica adicionais e qualquer um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI contidos na amostra de teste formam um ou mais complexos de parceiro de ligação específica-analito (por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP)-antígeno.

Em algumas modalidades, a mistura contém a amostra de teste que é avaliada acerca dos analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) e um primeiro parceiro de ligação específica, um segundo parceiro de ligação específica e um terceiro parceiro de ligação específica.

A ordem na qual a amostra de teste, o primeiro parceiro de ligação específica, o segundo parceiro de ligação específica e o terceiro parceiro de ligação específica (se estiver presente) são adicionados para formar a mistura não é de importância crítica.

A amostra de teste é simultaneamente colocada em contato com o primeiro parceiro de ligação específica, o segundo parceiro de ligação específica e/ou o terceiro parceiro de ligação específica. Em algumas modalidades, o primeiro parceiro de ligação específica e qualquer cTnI contidos na amostra de teste podem formar um complexo de primeiro parceiro de ligação específica-analito (por exemplo, cTnI)- antígeno e o segundo parceiro de ligação específica e um ou mais parceiros de ligação específica adicionais (por exemplo, o terceiro parceiro de ligação específica, o quarto parceiro de ligação específica, um quinto parceiro de ligação específica, etc.) e quaisquer biomarcadores precoces além de cTnI ((por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP) contidos na amostra de teste podem formar um complexo de segundo parceiro de ligação específica-analito (por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP)-antígeno e/ou um complexo de terceiro parceiro de ligação específica analito (por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP)-antígeno. Em algumas modalidades, o primeiro parceiro de ligação específica pode se ligar a cTnI e o segundo parceiro de ligação específica pode se ligar a UCH-L1. Em algumas modalidades, o primeiro parceiro de ligação específica pode se ligar a cTnI e o segundo parceiro de ligação específica pode se ligar a GFAP.

Em mais outras modalidades, o primeiro parceiro de ligação específica pode se ligar a cTnI, o segundo parceiro de ligação específica pode se ligar a UCH-L1 e o terceiro parceiro de ligação específica pode se ligar a GFAP. O primeiro parceiro de ligação específica pode ser um anticorpo anti-analito (por exemplo, anticorpo anti-cTnI que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 1 ou um anticorpo anti-UCH- L1 que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três aminoácidos contíguos da SEQ ID NO:2 ou um anticorpo anti-GFAP que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 3). O segundo parceiro de ligação específica pode ser um anticorpo anti-analito (por exemplo, anticorpo anti- cTnI que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 1 ou um anticorpo anti-UCH-L1 que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três aminoácidos contíguos da SEQ ID NO:2 ou um anticorpo anti-GFAP que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 3). O terceiro parceiro de ligação específica pode ser um anticorpo anti-analito (por exemplo, anticorpo anti-cTnI que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 1 ou um anticorpo anti-UCH-L1 que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três aminoácidos contíguos da SEQ ID NO:2 ou um anticorpo anti-GFAP que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 3). Ademais, um ou mais dentre o primeiro, o segundo e/ou o terceiro parceiros de ligação específica podem ser identificados com ou conter uma identificação detectável conforme descrito acima. A ordem na qual a amostra de teste e cada um dos parceiros de ligação específica (primeiro parceiro de ligação específica, segundo parceiro de ligação específica, terceiro parceiro de ligação específica, quarto parceiro de ligação específica, quinto parceiro de ligação específica, etc.) são adicionados para formar a mistura não é de importância crítica.

[0380]Um ou mais dentre os parceiros de ligação específica (por exemplo, primeiro parceiro de ligação específica, segundo parceiro de ligação específica, terceiro parceiro de ligação específica, quarto parceiro de ligação específica e/ou quinto parceiro de ligação específica, etc.) podem ser imobilizados em uma fase sólida. A fase sólida usada no imunoensaio (para qualquer um dos parceiros de ligação específica descritos no presente documento) pode ser qualquer fase sólida conhecida na técnica, tal como, porém sem limitação, uma partícula magnética, uma microesfera, um tubo de ensaio, uma placa de microtitulação, um cadinho, uma membrana, uma molécula de arcabouço, um filme, um papel filtro, um disco e um chip. Naquelas modalidades em que a fase sólida é uma microesfera, a microesfera pode ser uma microesfera magnética ou uma partícula magnética. As microesferas/partículas magnéticas podem ser ferromagnéticas, ferrimagnéticas, paramagnéticas, superparamagnéticas ou ferrofluídicas. Os materiais ferromagnéticos exemplificadores incluem Fe, Co, Ni, Gd, Dy, CrO2, MnAs, MnBi, EuO e NiO/Fe. Os exemplos de materiais ferrimagnéticos incluem NiFe2O4, CoFe2O4, Fe3O4 (ou FeO.Fe2O3). As microesferas podem ter uma porção de núcleo sólida que é magnética e é circundada por uma ou mais camadas não magnéticas.

Alternativamente, a porção magnética pode ser uma camada ao redor de um núcleo não magnético. O suporte sólido em que o primeiro membro de ligação específica é imobilizado pode ser armazenado na forma seca ou em um líquido. As microesferas magnéticas podem ser submetidas a um campo magnético antes ou depois de colocar a amostra em contato com uma microesfera magnética na qual o primeiro membro de ligação específica é imobilizado.

[0381]Depois que a mistura que contém o um ou mais complexos de parceiro de ligação específica-analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 ou GFAP))-antígeno é formada, quaisquer analitos não ligados são removidos do complexo com o uso de qualquer técnica conhecida na técnica. Por exemplo, os analitos não ligados podem ser removidos por meio de lavagem. Desejavelmente, no entanto, o primeiro parceiro de ligação específica está presente superior a quaisquer analitos (por exemplo, cTnI e UCH-L1 e/ou GFAP)) presentes na amostra de teste, de modo que todos os analitos (por exemplo, cTnI e UCH-L1 e/ou GFAP)) que estão presentes na amostra de teste são ligados pelo primeiro parceiro de ligação específica.

[0382]Depois que todos os analitos não ligados (por exemplo, cTnI e UCH-L1 e/ou GFAP) são removidos, um ou mais parceiros de ligação específica adicionais (tais como um segundo parceiro de ligação específica, um terceiro parceiro de ligação específica, um quarto parceiro de ligação específica, um quinto parceiro de ligação específica, etc.) são adicionados à mistura para formar um complexo adicional (ou seja, segundo, terceiro, quarto, quinto, etc.) de parceiro de ligação específica-analito de interesse (por exemplo, um ou mais biomarcadores além de cTnI (tal como UCH- L1 e/ou GFAP))-parceiro de ligação específica adicional (ou seja, segundo, terceiro, quarto, quinto, etc.). O parceiro de ligação específica adicional (ou seja, segundo, terceiro, quarto, quinto, etc.) pode ser um anticorpo anti-analito (por exemplo, um anticorpo para um biomarcador além de cTnI (tal como, por exemplo, um anticorpo anti-UCH-L1 que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 2 e/ou anticorpo anti-GFAP que se liga a um epítopo que tem uma sequência de aminoácidos que compreende pelo menos três (3) aminoácidos contíguos da SEQ ID NO: 3).

Ademais, o parceiro de ligação específica adicional (ou seja, segundo, terceiro, quarto, quinto, etc.) é identificado com ou contém uma identificação detectável conforme descrito acima.

[0383]O uso de anticorpos imobilizados ou fragmentos de anticorpo dos mesmos pode ser incorporado no imunoensaio. Os anticorpos podem ser imobilizados em uma variedade de suportes, tais como partículas de matriz magnética ou cromatográfica (tais como uma microesfera magnética), partículas de látex ou partículas de látex de superfície modificada, polímero ou filme polimerizado, plástico ou filme plástico, substrato plano, a superfície de uma placa de ensaio (tal como poços de microtitulação), peças de um material de substrato sólido e similares. Uma tira de ensaio pode ser preparada mediante o revestimento do anticorpo ou pluralidade de anticorpos em uma matriz em um suporte sólido. Essa tira pode ser, então, imersa na amostra de teste e processada rapidamente através de lavagens e etapas de detecção para gerar um sinal mensurável, tal como um ponto colorido.

(1) Imunoensaio do tipo sanduíche

[0384]Um imunoensaio do tipo sanduíche mede a quantidade de antígeno entre duas camadas de anticorpos (isto é, pelo menos um anticorpo de captura) e um anticorpo de detecção (por exemplo, pelo menos um anticorpo de detecção). Para cada analito de interesse, tal como cTnI ou um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) a ser detectado, o anticorpo de captura e o anticorpo de detecção se ligam a epítopos diferentes no antígeno, por exemplo, analito de interesse, tal como cTnI ou um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP). Desejavelmente, a ligação do anticorpo de captura a um epítopo não interfere com a ligação do anticorpo de detecção a um epítopo. Os anticorpos monoclonais ou policlonais podem ser usados como os anticorpos de detecção e captura no imunoensaio do tipo sanduíche.

[0385]Em geral, pelo menos dois anticorpos são empregados para separar e quantificar o analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) em uma amostra de teste. Mais especificamente, os pelo menos dois anticorpos se ligam a certos epítopos de cada analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) que formam um complexo imune que é denominado como um “sanduíche”. Um ou mais anticorpos podem ser usados para capturar o analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) na amostra de teste (esses anticorpos são frequentemente mencionados como um anticorpo de "captura" ou anticorpos de “captura”) e um ou mais anticorpos são usados para ligar uma identificação detectável (ou seja, quantificável) ao sanduíche (esses anticorpos são frequentemente denominados de o anticorpo de “detecção" ou anticorpos de “detecção”). Em um ensaio do tipo sanduíche, a ligação de um anticorpo a seu epítopo desejavelmente não é diminuída pela ligação de qualquer outro anticorpo no ensaio a seu respectivo epítopo. Os anticorpos são selecionados de modo que o um ou mais primeiros anticorpos colocados em contato com uma amostra de teste suspeita de conter analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH- L1 e/ou GFAP)) não se liguem a todo ou à parte de um epítopo reconhecido pelos segundos ou subsequentes anticorpos, interferindo, assim, com a capacidade do um ou mais segundos anticorpos de detecção de se ligarem aos analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)).

[0386]Os anticorpos podem ser usados como um primeiro anticorpo no dito imunoensaio. O anticorpo se liga imunoespecificamente a epítopos no analito (por exemplo, cTnI ou um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH- L1 e/ou GFAP)). Adicionalmente aos anticorpos da presente revelação, o dito imunoensaio pode compreender um segundo anticorpo que se liga imunoespecificamente a epítopos que não são reconhecidos ou ligados pelo primeiro anticorpo.

[0387]Uma amostra de teste suspeita de conter analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) pode ser colocada em contato com pelo menos um primeiro anticorpo (ou anticorpos) de captura e pelo menos um segundo anticorpo (ou anticorpos) de detecção para cada analito simultânea ou sequencialmente. No formato de ensaio do tipo sanduíche, uma amostra de teste suspeita de conter analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) é primeiramente colocada em contato com o pelo menos um primeiro anticorpo de captura para cada analito que se liga especificamente a um epítopo particular sob condições que permitem a formação de um complexo de primeiro anticorpo-analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) antígeno. Se mais de um anticorpo de captura for usado, um complexo de primeiro múltiplo anticorpo de captura-antígeno (tal como cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) é formado. Em um ensaio do tipo sanduíche, os anticorpos, de preferência, o pelo menos um anticorpo de captura para cada analito, são usados em quantidades de excesso molar da quantidade máxima de cada analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) esperada na amostra de teste. Por exemplo, a partir de cerca de 5 µg/ml a cerca de 1 mg/ml de anticorpo por ml de tampão de revestimento de micropartícula podem ser usados.

i. Anticorpo de captura anti-cTnI

[0388]Opcionalmente, antes de colocar a amostra de teste em contato com o pelo menos um primeiro anticorpo de captura, o pelo menos um primeiro anticorpo de captura pode ser ligado a um suporte sólido que facilita a separação do complexo de primeiro anticorpo-analito (por exemplo, cTnI) da amostra de teste. Qualquer suporte sólido conhecido na técnica pode ser usado, incluindo, porém sem limitação, suportes sólidos produzidos a partir de materiais poliméricos sob as formas de poços, tubos ou microesferas (tais como uma micropartícula). O anticorpo (ou anticorpos) pode ser ligado ao suporte sólido por meio de adsorção, por ligação covalente com o uso de um agente de acoplamento químico ou por outros meios conhecidos na técnica, desde que tal ligação não interfira com a capacidade do anticorpo para se ligar ao analito (por exemplo, cTnI). Ademais, se necessário, o suporte sólido pode ser derivado para permitir a reatividade com diversos grupos funcionais no anticorpo. Tal derivação exige o uso de certos agentes de acoplamento tais como, porém sem limitação, anidrido maléico, N-hidróxi succinimida e 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil)carbodiimida.

[0389]Depois que a amostra de teste suspeita de conter analito (por exemplo, cTnI) é incubada a fim de permitir a formação de um complexo de primeiro anticorpo de captura (ou múltiplo anticorpo)-analito (por exemplo, cTnI). A incubação pode ser realizada em um pH a partir de cerca de 4,5 a cerca de 10,0, a uma temperatura a partir de cerca de 2 °C a cerca de 45 °C e durante um período a partir de pelo menos cerca de um (1) minuto a cerca de dezoito (18) horas, a partir de cerca de 2 a 6 minutos, a partir de cerca de 7 a 12 minutos, a partir de cerca de 5 a 15 minutos ou a partir de cerca de 3 a 4 minutos.

ii. Anticorpos de captura anti-UCH-L1 e/ou GFAP

[0390]Opcionalmente, antes de colocar a amostra de teste em contato com o pelo menos um primeiro anticorpo de captura, o pelo menos um primeiro anticorpo de captura pode ser ligado a um suporte sólido que facilita a separação do complexo de primeiro anticorpo-analito (por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP) da amostra de teste.

Qualquer suporte sólido conhecido na técnica pode ser usado, incluindo, porém sem limitação, suportes sólidos produzidos a partir de materiais poliméricos sob as formas de poços, tubos ou microesferas (tais como uma micropartícula). O anticorpo (ou anticorpos) pode ser ligado ao suporte sólido por meio de adsorção, por ligação covalente com o uso de um agente de acoplamento químico ou por outros meios conhecidos na técnica, desde que tal ligação não interfira com a capacidade do anticorpo para se ligar ao analito (por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP). Ademais, se necessário, o suporte sólido pode ser derivado para permitir a reatividade com diversos grupos funcionais no anticorpo. Tal derivação exige o uso de certos agentes de acoplamento tais como, porém sem limitação, anidrido maléico, N-hidróxi succinimida e 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida.

[0391]Depois que a amostra de teste suspeita de conter analito (por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP) é incubada a fim de permitir a formação de um complexo de primeiro anticorpo de captura (ou múltiplo anticorpo)-analito (por exemplo, UCH-L1 e/ou GFAP). A incubação pode ser realizada em um pH a partir de cerca de 4,5 a cerca de 10,0, a uma temperatura a partir de cerca de 2 °C a cerca de 45 °C e durante um período a partir de pelo menos cerca de um (1) minuto a cerca de dezoito (18) horas, a partir de cerca de 2 a 6 minutos, a partir de cerca de 7 a 12 minutos, a partir de cerca de 5 a 15 minutos ou a partir de cerca de 3 a 4 minutos.

iii. Anticorpo de detecção

[0392]Após a formação do complexo de primeiro/múltiplo anticorpo de captura-analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)), o complexo é, então, colocado em contato com pelo menos um segundo anticorpo de detecção (sob condições que permitem a formação de um complexo de primeiro/múltiplo anticorpo-analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) antígeno-segundo anticorpo). Em algumas modalidades, a amostra de teste é colocada em contato com o anticorpo de detecção simultaneamente com o anticorpo de captura. Se o complexo de primeiro anticorpo-analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) for colocado em contato com mais de um anticorpo de detecção, então, um complexo de primeiro/múltiplo anticorpo de captura-analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP))-múltiplo anticorpo de detecção é formado. Conforme com o primeiro anticorpo, quando o pelo menos segundo (e subsequente) anticorpo é colocado em contato com o complexo de primeiro anticorpo-analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)), um período de incubação sob condições similares àquelas descritas acima é necessário para a formação do complexo de primeiro/múltiplo anticorpo-analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP))- segundo/múltiplo anticorpo. De preferência, pelo menos um segundo anticorpo contém uma identificação detectável. A identificação detectável pode ser ligada ao pelo menos um segundo anticorpo antes de, simultaneamente com ou após a formação do complexo de primeiro/múltiplo anticorpo-analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP))- segundo/múltiplo anticorpo. Qualquer identificação detectável conhecida na técnica pode ser usada.

[0393]Os ensaios quemiluminescentes podem ser realizados de acordo com os métodos descritos em Adamczyk et al., Anal. Chim. Acta 579(1): 61 a 67 (2006).

Embora qualquer formato de ensaio adequado possa ser usado, um quimioluminômetro de microplaca (Mithras LB-940, Berthold Technologies U.S.A., LLC, Oak Ridge, TN) possibilita o ensaio de múltiplas amostras de volumes pequenos rapidamente. O quimioluminômetro pode ser equipado com múltiplos injetores de reagente com o uso de microplacas de poliestireno pretas de 96 poços (Costar n° 3792). Cada amostra pode ser adicionada em um poço separado, seguido da adição simultânea/sequencial de outros reagentes conforme determinado pelo tipo de ensaio empregado. Desejavelmente, a formação de pseudobases em soluções neutras ou básicas que empregam um éster arílico de acridínio é evitada, tal como por meio de acidificação. A resposta quemiluminescente é, então, registrada poço a poço. Nesse sentido, o tempo para registrar a resposta quemiluminescente dependerá, em parte, do atraso entre a adição dos reagentes e do acridínio particular empregado.

[0394]A ordem em que a amostra de teste e o parceiro (ou parceiros) de ligação específica são adicionados para formar a mistura para o ensaio quemiluminescente não é de importância crítica. Se o primeiro parceiro de ligação específica for identificado de forma detectável com um composto de acridínio, os complexos de primeiro parceiro de ligação específica-antígeno (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) identificados de forma detectável se formam. Alternativamente, se um segundo parceiro de ligação específica for usado e o segundo parceiro de ligação específica é identificado de forma detectável com um composto de acridínio, os complexos de primeiro parceiro de ligação específica-analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP))-segundo parceiro de ligação específica identificados de forma detectável se formam. Qualquer parceiro de ligação específica não ligado, se identificado ou não identificado, pode ser removido da mistura com o uso de qualquer técnica conhecida na técnica, tal como lavagem.

[0395]O peróxido de hidrogênio pode ser gerado in situ na mistura ou fornecido ou suprido para a mistura antes, simultaneamente com ou após a adição de um composto de acridínio descrito acima. O peróxido de hidrogênio pode ser gerado in situ de várias formas tais como ficaria evidente para um versado na técnica.

[0396]Alternativamente, uma fonte de peróxido de hidrogênio pode ser simplesmente adicionada à mistura. Por exemplo, a fonte do peróxido de hidrogênio pode ser um ou mais tampões ou outras soluções que são conhecidas por conter peróxido de hidrogênio. Nesse sentido, uma solução de peróxido de hidrogênio pode simplesmente ser adicionada.

[0397]Sob a adição simultânea ou subsequente de pelo menos uma solução básica à amostra, um sinal detectável, ou seja, um sinal quemiluminescente, indicativo da presença de analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) é gerado. A solução básica contém pelo menos uma base e tem um pH maior ou igual a 10, de preferência, maior ou igual a 12. Os exemplos de soluções básicas incluem, porém sem limitação, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio, hidróxido de cálcio, hidróxido de amônio, hidróxido de magnésio, carbonato de sódio, bicarbonato de sódio, hidróxido de cálcio, carbonato de cálcio e bicarbonato de cálcio. A quantidade de solução básica adicionada à amostra depende da concentração da solução básica. Com base na concentração da solução básica usada, um versado na técnica pode facilmente determinar a quantidade de solução básica para adicionar à amostra. Outras identificações além de identificações quemiluminescentes podem ser empregadas.

Por exemplo, as identificações enzimáticas (incluindo, porém sem limitação fosfatase alcalina) podem ser empregadas.

[0398]O sinal quemiluminescente ou outro sinal, que é gerado pode ser detectado com o uso de técnicas de rotina conhecidas pelos versados na técnica.

Com base na intensidade do sinal gerado, a quantidade dos analitos de interesse (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH- L1 e/ou GFAP)) na amostra pode ser quantificada. Especificamente, a quantidade dos analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) na amostra é proporcional à intensidade do sinal gerado. A quantidade de analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) presentes pode ser quantificada mediante a comparação da quantidade de luz gerada com uma curva padrão para analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) ou por meio da comparação com um padrão de referência. A curva padrão pode ser gerada com o uso de diluições em série ou soluções de concentrações conhecidas do analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) por espectroscopia de massa, métodos gravimétricos e outras técnicas conhecidas na técnica.

(2) Ensaio de inibição competitiva direta

[0399]Em um formato competitivo direto, uma alíquota dos analitos identificados de interesse (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) que têm uma identificação fluorescente, uma etiqueta fixada com um ligante clivável, etc.) de uma concentração conhecida é usada para competir com os analitos de interesse (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) em uma amostra de teste para a ligação ao anticorpo de analitos de interesse (por exemplo, um anticorpo cTnI e um ou mais anticorpos adicionais que não se ligam a uma cTnI (tal como um anticorpo de UCH-L1 e/ou GFAP)).

[0400]Em um ensaio de competição direta, um parceiro de ligação específica imobilizado (tal como um anticorpo) pode ser sequencial ou simultaneamente colocado em contato com a amostra de teste e analitos de interesse identificados, fragmentos de analitos de interesse ou variante de analitos de interesse dos mesmos.

Os analitos de peptídeo interesse, analitos de fragmento de interesse ou analitos de variante de interesse podem ser identificados com qualquer identificação detectável, incluindo uma identificação detectável compreendida de etiqueta fixada a um ligante clivável. Nesse ensaio, o anticorpo para cada analito pode ser imobilizado em um suporte sólido. Alternativamente, o anticorpo para cada analito pode ser acoplado a um anticorpo, tal como um anticorpo anti-espécie, que foi imobilizado em um suporte sólido, tal como uma micropartícula ou substrato plano.

[0401]Os analitos de interesse identificados, a amostra de teste e o anticorpo para cada analito são incubados sob condições similares àquelas descritas acima em conexão com o formato de ensaio do tipo sanduíche. As duas espécies diferentes de complexos de anticorpo-analito de interesse podem ser, então, geradas para cada analito. Especificamente, um dos complexos de anticorpo-analito de interesse gerados contém uma identificação detectável (por exemplo, uma identificação fluorescente, etc.) enquanto que o outro complexo de anticorpo-analito de interesse não contém uma identificação detectável. O complexo de anticorpo-analito de interesse pode ser, mas não precisa ser, separado do restante da amostra de teste antes da quantificação da identificação detectável. Independentemente de se o complexo de anticorpo-analito de interesse é separado do restante da amostra de teste, a quantidade de identificação detectável no complexo de anticorpo-analito de interesse é, então, quantificada. A concentração dos analitos de interesse (tal como analitos de interesse associados à membrana, analitos de interesse solúveis, fragmentos de analitos de interesse solúveis, variantes de analitos de interesse (analitos de interesse solúveis ou associados à membrana) ou quaisquer combinações dos mesmos) na amostra de teste pode ser determinada, por exemplo, conforme descrito acima.

(3) Ensaio de inibição competitiva inversa

[0402]No ensaio de competição inversa, os analitos de interesse imobilizados (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) podem ser sequencial ou simultaneamente colocados em contato com uma amostra de teste e pelo menos um anticorpo identificado.

[0403]Os analitos de interesse podem ser ligados a um suporte sólido, tal como os suportes sólidos discutidos acima em conexão com o formato de ensaio do tipo sanduíche.

[0404]Os analitos de interesse imobilizados, amostra de teste e pelo menos um anticorpo identificado para cada analito são incubados sob condições similares àquelas descritas acima em conexão com o formato de ensaio do tipo sanduíche.

Dois complexos de analitos de interesse-anticorpo de espécie diferente são, então, gerados para cada analito. Especificamente, para cada analito, um dentre os complexos de analito de interesse-anticorpo gerados é imobilizado e contém uma identificação detectável (por exemplo, uma identificação fluorescente, etc.) enquanto o outro complexo de analito de interesse-anticorpo não é imobilizado e contém uma identificação detectável. O complexo de analito de interesse-anticorpo não imobilizado e o restante da amostra de teste são removidos da presença do complexo de analito de interesse-anticorpo imobilizado através de técnicas conhecidas na técnica, tal como lavagem. Uma vez que o complexo de analito de interesse-anticorpo não imobilizado é removido, a quantidade de identificação detectável no complexo de analito de interesse-anticorpo imobilizado é, então, quantificada após a clivagem da etiqueta. A concentração de cada analito de interesse na amostra de teste pode ser, então, determinada mediante a comparação da quantidade de identificação detectável conforme descrito acima.

(4) Imunoensaio de uma etapa ou Ensaio de “coleta instantânea”

[0405]Em um imunoensaio de coleta instantânea, um substrato sólido é pré- revestido com um agente de imobilização. O agente de captura para cada analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) e o agente de detecção para cada analito são adicionados ao substrato sólido em conjunto, seguido de uma etapa de lavagem antes da detecção.

O agente de captura pode ligar o analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) e compreende um ligante para um agente de imobilização. O agente de captura e os agentes de detecção podem ser anticorpos ou qualquer outra porção química com capacidade para capturar ou detectar conforme descrito no presente documento ou conhecido na técnica. O ligante pode compreender uma etiqueta de peptídeo e um agente de imobilização pode compreender um anticorpo anti-etiqueta de peptídeo.

Alternativamente, o ligante e o agente de imobilização podem ser qualquer par de agentes com capacidade para ligar em conjunto para que sejam empregados como um ensaio de coleta instantânea (por exemplo, par de ligação específica e outros tais como são conhecidos na técnica). Mais de um analito pode ser medido. Em algumas modalidades, o substrato sólido pode ser revestido com um antígeno e o analito a ser analisado é um anticorpo.

[0406]Em certas outras modalidades, em um imunoensaio de uma etapa ou de “coleta instantânea”, um suporte sólido (tal como uma micropartícula) pré-revestido com um agente de imobilização (tal como biotina, estreptavidina, etc.) e pelo menos um primeiro membro de ligação específica e um segundo membro de ligação específica (que funciona como reagentes de captura e detecção, respectivamente) são usados. O primeiro membro de ligação específica compreende um ligante para o agente de imobilização (por exemplo, se o agente de imobilização no suporte sólido for estreptavidina, o ligante no primeiro membro de ligação específica pode ser biotina) e também se liga ao analito de interesse (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)). O segundo membro de ligação específica compreende uma identificação detectável e se liga a um analito de interesse (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)). O suporte sólido e o primeiro e o segundo membros de ligação específica podem ser adicionados a uma amostra de teste (sequencial ou simultaneamente). O ligante no primeiro membro de ligação específica se liga ao agente de imobilização no suporte sólido para formar um complexo de suporte sólido/primeiro membro de ligação específica. Qualquer analito de interesse presente na amostra se liga ao complexo de suporte sólido/primeiro membro de ligação específica para formar um complexo de suporte sólido/primeiro membro de ligação específica/analito. O segundo membro de ligação específica se liga ao complexo de suporte sólido/primeiro membro de ligação específica/analito e a identificação detectável é detectada. Uma etapa de lavagem opcional pode ser empregada antes da detecção. Em certas modalidades, em um ensaio de uma etapa mais de um analito pode ser medido. Em certas outras modalidades, mais de dois membros de ligação específica podem ser empregados. Em certas outras modalidades, múltiplas identificações detectáveis podem ser adicionadas. Em certas outras modalidades, múltiplos analitos de interesse podem ser detectados ou suas quantidades, níveis ou concentrações, medidos, determinados ou avaliados.

[0407]O uso de um ensaio de coleta instantânea pode ser feito em uma variedade de formatos conforme descrito no presente documento e conhecido na técnica. Por exemplo, o formato pode ser um ensaio do tipo sanduíche tal como descrito acima, mas alternativamente pode ser um ensaio de competição, pode empregar um único membro de ligação específica ou usar outras variações tais como são conhecidas.

13. Outros fatores

[0408]Os métodos de diagnóstico, prognóstico e/ou avaliação, conforme descrito acima, podem incluir adicionalmente o uso de outros fatores para o diagnóstico, prognóstico e avaliação. Em algumas modalidades, a lesão traumática cerebral pode ser diagnosticada com o uso da escala de coma de Glasgow oi da escala de resultado de Glasgow estendida (GOSE). Outros testes, escalas ou índices também podem ser usados sozinhos ou em combinação com a escala de coma de Glasgow. Um exemplo é a escala do Ranchos Los Amigos. A escala do Ranchos Los Amigos mede os níveis de consciência, cognição, comportamento e interação com o ambiente. A escala do Ranchos Los Amigos inclui: Nível I: Sem resposta; Nível II: Resposta generalizada; Nível III: Resposta localizada; Nível IV: Confuso-agitado; Nível V: Confuso-inadequado; Nível VI: Confuso-adequado; Nível VII: Automático- adequado; e Nível VIII: Intencional-adequado.

14. Amostras

[0409]Em algumas modalidades, a amostra é obtida após o indivíduo humano sofrer uma lesão na cabeça causada por agitação física, impacto brusco por uma força mecânica externa ou outra força que resulta em um trauma de cabeça aberto ou fechado, uma ou mais quedas, explosões ou estouros ou outros tipos de trauma por força brusca. Em algumas modalidades, a amostra é obtida depois que o indivíduo humano ingeriu ou foi exposto a um produto químico, toxina ou combinação de um produto químico e toxina. Os exemplos de tais produtos químicos e/ou toxinas incluem incêndios, bolores, asbestos, pesticidas e inseticidas, solventes orgânicos,

tintas, colas, gases (tais como monóxido de carbono, sulfeto de hidrogênio e cianeto), metais orgânicos (tais como metil mercúrio, tetraetil chumbo e estanho orgânico) e/ou um ou mais fármacos de abuso. Em algumas modalidades, a amostra é obtida a partir de um indivíduo humano que sofre de uma doença autoimune, um distúrbio metabólico, um tumor cerebral, hipoxia, um ou mais vírus, meningite, hidrocefalia ou combinações dos mesmos.

[0410]Em ainda outra modalidade, os métodos descritos no presente documento usam amostras que também podem ser usados para determinar se ou não um indivíduo tem ou está em risco de desenvolver lesão traumática cerebral branda mediante a determinação dos níveis de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) em um indivíduo com o uso do anticorpo anti-cTnIs (e dos anticorpos anti-UCH-L1 e/ou anti-GFAP) descrito a seguir ou fragmentos de anticorpo dos mesmos. Dessa forma, em modalidades particulares, a revelação fornece também um método para determinar se um indivíduo que tem ou está em risco para lesões traumáticas cerebrais, discutidas no presente documento e conhecidas na técnica, é um candidato para terapia ou tratamento. Em geral, o indivíduo é pelo menos um que: (i) experimentou uma lesão na cabeça; (ii) ingeriu e/ou foi exposto a um ou mais produtos químicos e/ou toxinas; (iii) sofre de uma doença autoimune, um distúrbio metabólico, um tumor cerebral, hipoxia, um ou mais vírus, meningite, hidrocefalia ou sofre de quaisquer combinações dos mesmos; ou (iv) quaisquer combinações de (i) a (iii); ou que foi realmente diagnosticado como tendo ou estando em risco para TBI (tal como, por exemplo, indivíduos que sofrem de uma doença autoimune, um distúrbio metabólico, um tumor cerebral, hipoxia, um ou mais vírus, meningite, hidrocefalia ou combinações dos mesmos) e/ou que demonstra uma concentração ou quantidade desfavorável (isto é, clinicamente indesejável) de cTnI ou fragmento de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP ou fragmento de UCH-L1 e/ou GFAP), conforme descrito no presente documento.

a. Amostra biológica ou de teste

[0411]Como usado no presente documento, “amostra”, “amostra de teste”, “amostra biológica” se referem à amostra de fluido que contém ou é suspeita de conter cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP). A amostra pode ser derivada a partir de qualquer fonte adequada. Em alguns casos, a amostra pode compreender um líquido, sólido particulado fluente ou suspensão líquida de partículas sólidas. Em alguns casos, a amostra pode ser processada antes da análise descrita no presente documento. Por exemplo, a amostra pode ser separada ou purificada a partir de sua fonte antes da análise; no entanto, em certas modalidades, uma amostra não processada que contém cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) pode ser analisada diretamente. Em um exemplo particular, a fonte que contém cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) é uma substância corporal humana (por exemplo, fluido corporal, sangue tal como sangue total, soro, plasma, urina, saliva, suor, escarro, sémen, muco, fluido lacrimal, fluido linfático, fluido amniótico, fluido intersticial, lavagem de pulmão, líquido cefalorraquidiano, fezes, tecido, órgão ou similares). Os tecidos podem incluir, porém sem limitação, tecido de músculo esquelético, tecido de fígado, tecido de pulmão, tecido de rim, tecido do miocárdio, tecido de cérebro, medula óssea, tecido de colo do útero, pele, etc. A amostra pode ser uma amostra líquida ou um extrato líquido de uma amostra sólida. Em certos casos, a fonte da amostra pode ser um órgão ou tecido, tal como uma amostra de biópsia, que pode ser solubilizada por desintegração de tecido/lise celular.

[0412]Uma ampla gama de volumes da amostra fluida pode ser analisada.

Em algumas modalidades exemplificadoras, o volume de amostra pode ser de cerca de 0,5 nl, cerca de 1 nl, cerca de 3 nl, cerca de 0,01 µl, cerca de 0,1 µl, cerca de 1 µl, cerca de 5 µl, cerca de 10 µl, cerca de 100 µl, cerca de 1 ml, cerca de 5 ml, cerca de 10 ml ou similares. Em alguns casos, o volume da amostra fluida é entre cerca de 0,01 µl e cerca de 10 ml, entre cerca de 0,01 µl e cerca de 1 ml, entre cerca de 0,01 µl e cerca de 100 µl ou entre cerca de 0,1 µl e cerca de 10 µl.

[0413]Em alguns casos, a amostra fluida pode ser diluída antes do uso em um ensaio. Por exemplo, em modalidades em que a fonte que contém cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) é um fluido corpóreo humano (por exemplo, sangue total, soro ou plasma), o fluido pode ser diluído com um solvente adequado (por exemplo, um tampão tal como tampão PBS).

Uma amostra fluida pode ser diluída cerca de 1 vez, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 10 vezes, cerca de 100 vezes ou mais, antes do uso. Em outros casos, a amostra fluida não é diluída antes do uso em um ensaio.

[0414]Em alguns casos, a amostra pode se submeter ao processamento pré- analítico. O processamento pré-analítico pode oferecer funcionalidade adicional tal como remoção de proteína não específica e/ou funcionalidade de mistura implantável eficaz e ainda barata. Os métodos gerais de processamento pré-analítico podem incluir o uso de armadilha eletrocinética, eletrocinética AC, ondas acústicas de superfície, isotacoforese, dieletroforese, eletroforese ou outras técnica pré- concentração conhecidas na técnica. Em alguns casos, a amostra fluida pode ser concentrada antes do uso em um ensaio. Por exemplo, em modalidades em que a fonte que contém cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) é um fluido corpóreo humano (por exemplo, sangue, soro), o fluido pode ser concentrado por meio de precipitação, evaporação, filtração, centrifugação ou uma combinação dos mesmos. Uma amostra fluida pode ser concentrada cerca de 1 vez, cerca de 2 vezes, cerca de 3 vezes, cerca de 4 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 6 vezes, cerca de 10 vezes, cerca de 100 vezes ou mais, antes do uso.

b. Controles

[0415]Pode ser desejável incluir uma amostra de controle. A amostra de controle pode ser analisada concomitantemente com a amostra a partir do indivíduo conforme descrito acima. Os resultados obtidos a partir da amostra de indivíduo podem ser comparados aos resultados obtidos a partir da amostra de controle. As curvas padrão podem ser fornecidas, com as quais os resultados do ensaio para a amostra podem ser comparados. Tais curvas padrão apresentam níveis de marcador em função de unidades de ensaio, isto é, intensidade de sinal fluorescente, se uma identificação fluorescente for usada. Com o uso de amostras tomadas a partir de múltiplos doadores, as curvas padrão podem ser fornecidas para níveis de referência do cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) em tecido saudável normal, bem como para níveis “em risco” da cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) em tecido tomado a partir de doadores, que podem ter uma ou mais dentre as características apresentadas acima.

[0416]Dessa forma, em vista do exposto acima, é fornecido um método para determinar a presença, quantidade ou concentração de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) em uma amostra de teste. O método compreende analisar a amostra de teste acerca de cTnI e UCH-L1 e/ou GFAP por meio de um imunoensaio, por exemplo, empregando-se pelo menos um anticorpo de captura que se liga a um epítopo em cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) e pelo menos um anticorpo de detecção que se liga a um epítopo em cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) que é diferente do epítopo para o anticorpo de captura e opcionalmente inclui uma identificação detectável e que compreende comparar um sinal gerado pela identificação detectável como uma indicação direta ou indireta da presença, quantidade ou concentração de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) na amostra de teste com um sinal gerado como uma indicação direta ou indireta da presença, quantidade ou concentração de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) em um calibrador. O calibrador é opcionalmente e, de preferência, parte de uma série de calibradores em que cada um dos calibradores se difere dos outros calibradores na série pela concentração de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI

(tal como UCH-L1 e/ou GFAP).

15. Kit

[0417]É fornecido no presente documento um kit que pode ser usado para analisar ou avaliar uma amostra de teste acerca de cTnI e/ou fragmento de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP ou fragmento de UCH-L1 e/ou GFAP). O kit compreende pelo menos um componente para analisar a amostra de teste acerca de cTnI e instruções para analisar a amostra de teste que contém cTnI e instruções para analisar a amostra de teste acerca de um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP). Por exemplo, o kit pode compreender instruções para analisar a amostra de teste acerca de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) por meio de imunoensaio, por exemplo, imunoensaio de micropartícula quemiluminescente. As instruções incluídas nos kits podem ser afixadas ao material de embalagem ou podem ser incluídas como um folheto informativo. Embora as instruções sejam tipicamente materiais escritos ou impressos, as mesmas não são limitadas a tais materiais. Qualquer meio capaz de armazenar tais instruções e comunicar as mesmas a um usuário final é contemplado por esta revelação. Tais meios incluem, porém sem limitação, mídia de armazenamento eletrônico (por exemplo, discos magnéticos, fitas, cartuchos, chips), mídia óptica (por exemplo, CD ROM) e similares. Conforme usado no presente documento, o termo “instruções” pode incluir o endereço de um site da Internet que fornece as instruções.

[0418]O pelo menos um componente pode incluir pelo menos uma composição que compreende um ou mais anticorpos isolados ou fragmentos de anticorpo dos mesmos que se ligam especificamente a cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP). O anticorpo pode ser um anticorpo de detecção de cTnI e/ou anticorpo de captura e/ou um anticorpo que se liga a um ou mais biomarcadores além de cTnI, tal como um anticorpo de captura de UCH-L1 e/ou GFAP e/ou um anticorpo de detecção de UCH- L1 e/ou GFAP).

[0419]Alternativa ou adicionalmente, o kit pode compreender um calibrador ou controle, por exemplo, purificado e opcionalmente liofilizado, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) e/ou pelo menos um recipiente (por exemplo, tubo, placas de microtitulação ou tiras) que já pode ser revestido com um anticorpo anti-cTnI ou um anticorpo além de um anticorpo anti-cTnI (tal como um anticorpo monoclonal anti-UCH-L1 e/ou GFAP )) para conduzir o ensaio e/ou um tampão, tal como um tampão de ensaio ou um tampão de lavagem, qualquer um dos quais pode ser fornecido como uma solução concentrada, uma solução de substrato para a identificação detectável (por exemplo, uma identificação enzimática) ou uma solução de parada. De preferência, o kit compreende todos os componentes, isto é, reagentes, padrões, tampões, diluentes, etc., que são necessários para realizar o ensaio. As instruções podem incluir também instruções para gerar uma curva padrão.

[0420]O kit pode compreender adicionalmente padrões de referência para quantificar cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH- L1 e/ou GFAP). Os padrões de referência podem ser empregados para estabelecer curvas padrão para interpolação e/ou extrapolação de concentrações de cTnI e concentrações de um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH- L1 e/ou GFAP). Em algumas modalidades, os padrões de referência para cTnI podem corresponder ao 99o percentil derivado a partir de uma população de referência saudável. Tais padrões de referência podem ser determinados com o uso de técnicas de rotina conhecidas na técnica. Os padrões de referência podem incluir um alto nível de concentração de UCH-L1 e/ou GFAP, por exemplo, cerca de 100.000 pg/ml, cerca de 125.000 pg/ml, cerca de 150.000 pg/ml, cerca de 175.000 pg/ml, cerca de 200.000 pg/ml, cerca de 225.000 pg/ml, cerca de 250.000 pg/ml, cerca de 275.000 pg/ml ou cerca de 300.000 pg/ml; um nível médio de concentração de UCH-L1 e/ou GFAP, por exemplo, cerca de 25.000 pg/ml, cerca de 40.000 pg/ml, cerca de 45.000 pg/ml, cerca de 50.000 pg/ml, cerca de 55.000 pg/ml, cerca de 60.000 pg/ml, cerca de 75.000 pg/ml ou cerca de 100.000 pg/ml; e/ou um nível baixo de concentração de UCH-L1 e/ou

GFAP, por exemplo, cerca de 1 pg/ml, cerca de 5 pg/ml, cerca de 10 pg/ml, cerca de 12,5 pg/ml, cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml, cerca de 25 pg/ml, cerca de 30 pg/ml, cerca de 35 pg/ml, cerca de 40 pg/ml, cerca de 45 pg/ml, cerca de 50 pg/ml, cerca de 55 pg/ml, cerca de 60 pg/ml, cerca de 65 pg/ml, cerca de 70 pg/ml, cerca de 75 pg/ml, cerca de 80 pg/ml, cerca de 85 pg/ml, cerca de 90 pg/ml, cerca de 95 pg/ml ou cerca de 100 pg/ml.

[0421]Quaisquer anticorpos, que são fornecidos no kit, tais como anticorpos recombinantes específicos para cTnI e/ou para um ou mais anticorpos específicos ou um ou mais biomarcadores além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP), podem incorporar uma identificação detectável, tal como um fluoróforo, porção química radioativa, enzima, identificação de biotina/avidina, cromóforo, identificação quemiluminescente ou similares ou o kit pode incluir reagentes para identificar os anticorpos ou reagentes para detectar os anticorpos (por exemplo, anticorpos de detecção) e/ou para identificar os analitos (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)) ou reagentes para detectar o analito (por exemplo, cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP)). Os anticorpos, calibradores e/ou controles podem ser fornecidos em recipientes separados ou pré-dispensados em um formato de ensaio adequado, por exemplo, em placas de microtitulação.

[0422]Opcionalmente, o kit inclui componentes de controle de qualidade (por exemplo, painéis de sensibilidade, calibradores e controles positivos). A preparação de reagentes de controle de qualidade é bem conhecida na técnica e é descrita em encartes para uma variedade de produtos de imunodiagnóstico. Os membros de painel de sensibilidade são opcionalmente usados para estabelecer características de desempenho de ensaio e ainda são opcionalmente indicadores úteis da integridade dos reagentes do kit de imunoensaio e da padronização de ensaios,

[0423]O kit também pode incluir opcionalmente outros reagentes necessários para conduzir um ensaio de diagnóstico ou facilitar as avaliações de controle de qualidade, tais como tampões, sais, enzimas, cofatores de enzima, substratos,

reagentes de detecção e similares. Outros componentes, tais como tampões e soluções para o isolamento e/ou tratamento de uma amostra de teste (por exemplo, reagentes de pré-tratamento), também podem ser incluídos no kit. O kit pode incluir adicionalmente um ou mais outros controles. Um ou mais componentes do kit podem ser liofilizados, em tal caso, o kit pode compreender adicionalmente reagentes adequados para a reconstituição dos componentes liofilizados.

[0424]Os diversos componentes do kit são opcionalmente fornecidos em recipientes adequados conforme necessário, por exemplo, uma placa de microtitulação. O kit pode incluir adicionalmente recipientes para reter ou armazenar uma amostra (por exemplo, um recipiente ou cartucho para uma amostra de urina, sangue total, plasma ou soro). Onde adequado, o kit opcionalmente também pode conter vasos de reação, vasos de mistura e outros componentes que facilitam a preparação de reagentes ou da amostra de teste. O kit pode incluir também um ou mais instrumentos para assistir na obtenção de uma amostra de teste, tal como uma seringa, pipeta, fórceps, colher de medida ou similares.

[0425]Se a identificação detectável for pelo menos um composto de acridínio, o kit pode compreender pelo menos um acridínio-9-carboxamida, pelo menos um éster arílico de acridínio-9-carboxilato ou qualquer combinação dos mesmos. Se a identificação detectável for pelo menos um composto de acridínio, o kit pode compreender também uma fonte de peróxido de hidrogênio, tal como um tampão, solução e/ou pelo menos uma solução básica. Se for desejado, o kit pode conter uma fase sólida, tal como uma partícula magnética, microesfera, tubo de ensaio, placa de microtitulação, cadinho, membrana, molécula de arcabouço, filme, papel filtro, disco ou chip.

[0426]Se for desejado, o kit pode compreender adicionalmente um ou mais componentes, sozinhos ou em combinação adicional com instruções, para analisar a amostra de teste acerca de outro analito, que pode ser um biomarcador, tal como um biomarcador de lesão traumática cerebral ou distúrbio.

a. Adaptação de kit e método

[0427]O kit (ou componentes do mesmo), bem como o método para avaliar ou determinar a concentração de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) em uma amostra de teste por meio de um imunoensaio, conforme descrito no presente documento, pode ser adaptado para uso em uma variedade de sistemas automatizados e semi-automatizados (incluindo aqueles em que a fase sólida compreende uma micropartícula), conforme descrito, por exemplo, patente n° U.S. 5.063.081, publicação de pedido de patente n° U.S.

2003/0170881, 2004/0018577, 2005/0054078 e 2006/0160164 e conforme comercialmente disponível, por exemplo, junto à Abbott Laboratories (Abbott Park, IL) como Abbott Point of Care (i-STAT® ou i-STAT Alinity, Abbott Laboratories), bem como aqueles descritos na patente n° U.S. 5.089.424 e 5.006.309 e conforme comercialmente disponível, por exemplo, junto à Abbott Laboratories (Abbott Park, IL) como ARCHITECT® ou a série de dispositivos Abbott Alinity.

[0428]Algumas das diferenças entre um sistema automatizado ou semi- automatizado em comparação com um sistema não automatizado (por exemplo, ELISA) incluem o substrato ao qual o primeiro parceiro de ligação específica (por exemplo, anticorpo de analito ou anticorpo de captura) é fixado (que pode afetar a formação de sanduíche e reatividade de analito) e a duração e temporização da captura, detecção e/ou qualquer etapa de lavagem opcional. Enquanto um formato não automatizado, tal como um ELISA, pode exigir um tempo de incubação relativamente mais longo com a amostra e reagente de captura (por exemplo, cerca de 2 horas), um formato automatizado ou semi-automatizado (por exemplo, ARCHITECT® e qualquer plataforma sucessora, Abbott Laboratories) pode ter um tempo de incubação relativamente mais curto (por exemplo, aproximadamente 18 minutos para ARCHITECT®). De modo similar, enquanto um formato não automatizado, tal como um ELISA, pode incubar um anticorpo de detecção tal como o reagente conjugado durante um tempo de incubação relativamente mais longo (por exemplo, cerca de 2 horas), um formato automatizado ou semi-automatizado (por exemplo, ARCHITECT® e qualquer plataforma sucessora) pode ter um tempo de incubação relativamente mais curto (por exemplo, aproximadamente 4 minutos para o ARCHITECT® e qualquer plataforma sucessora).

[0429]Outras plataformas disponíveis junto à Abbott Laboratories incluem, porém sem limitação, AxSYM®, IMx® (consultar, por exemplo, patente n° U.S.

5.294.404, que está incorporada ao presente documento a título de referência, em sua totalidade), PRISM®, EIA (microesfera) e Quantum™ II, bem como outras plataformas. Adicionalmente, os ensaios, kits e componentes do kit podem ser empregados em outros formatos, por exemplo, em eletroquímica ou outros sistemas de ensaio portáteis ou de ponto-de-cuidado. Conforme mencionado anteriormente, a presente revelação é, por exemplo, aplicável ao sistema de imunoensaio eletroquímico comercial Abbott Point of Care (i-STAT®, Abbott Laboratories) que realiza imunoensaios do tipo sanduíche. Os imunossensores e seus métodos de fabricação e operação em dispositivos de teste de uso único são descritos, por exemplo, na patente nº U.S. 5.063.081, publicação de pedido de patente n° U.S.

2003/0170881, 2004/0018577, 2005/0054078 e 2006/0160164, que estão aqui incorporados a título de referência, em suas totalidades, para seus ensinamentos relacionados aos mesmos.

[0430]Em particular, em relação à adaptação de um ensaio ao sistema i- STAT®, a configuração a seguir é preferencial. Um chip de silício microfabricado é fabricado com um par de eletrodos de trabalho amperométricos de ouro e um eletrodo de referência de cloreto de prata-prata. Em um dos eletrodos de trabalho, microesferas de poliestireno (0,2 mm de diâmetro) com anticorpo de captura imobilizado são aderidas a um revestimento polimérico de álcool polivinílico padronizado sobre o eletrodo. Esse chip é montado em um cartucho i-STAT® com um formato de fluido adequado para imunoensaio. Em uma porção do chip de silício, existe um parceiro de ligação específica para cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP), tal como um ou mais anticorpos de cTnI, um ou mais anticorpos monoclonais/policlonais ou um fragmento dos mesmos, uma variante dos mesmos ou um fragmento de uma variante dos mesmos que pode ligar cTnI) ou um ou mais anti-cTnI DVD-Igs (ou um fragmento dos mesmos, uma variante dos mesmos ou um fragmento de uma variante dos mesmos que pode ligar cTnI) e um ou mais anticorpos específicos para um ou mais biomarcadores além de cTnI (tal como anticorpos de UCH-L1 e/ou GFAP (um ou mais anticorpos monoclonais/policlonais ou um fragmento dos mesmos, uma variante dos mesmos ou um fragmento de uma variante dos mesmos que pode ligar UCH-L1 e/ou GFAP) ou um ou mais anti-UCH-L1 e/ou anti-GFAP DVD-Igs (ou um fragmento dos mesmos, uma variante dos mesmos ou um fragmento de uma variante dos mesmos que pode ligar UCH-L1 e/ou GFAP e/ou GFAP), qualquer dos quais pode ser identificado de forma detectável. Dentro da bolsa de fluido do cartucho está um reagente aquoso que inclui fosfato de p-aminofenol.

[0431]Em operação, uma amostra a partir de um indivíduo suspeito de sofrer de TBI é adicionada à câmara de retenção do cartucho de teste e o cartucho é inserido no leitor i-STAT®. Um elemento de bomba dentro do cartucho empurra a amostra para um conduto que contém o chip. A amostra é colocada em contato com os sensores permitindo que o conjugado de enzima se dissolva na amostra. A amostra é oscilada através dos sensores para promover a formação do sanduíche de aproximadamente 2 a 12 minutos. Na penúltima etapa do ensaio, a amostra é empurrada para uma câmara de refugo e o fluido de lavagem, que contém um substrato para a enzima fosfatase alcalina, é usado para remover por lavagem o conjugado de enzima em excesso e a amostra do chip sensor. Na etapa final do ensaio, a identificação de fosfatase alcalina reage com fosfato de p-aminofenol para clivar o grupo fosfato e permitir que o p-aminofenol liberado seja oxidado de maneira eletroquímica no eletrodo de trabalho. Com base na corrente medida, o leitor tem capacidade para calcular a quantidade de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) na amostra por meio de um algoritmo embutido e curva de calibração determinada por fábrica.

[0432]Os métodos e kits conforme descrito no presente documento necessariamente abrangem outros reagentes e métodos para realizar o imunoensaio.

Por exemplo, são abrangidos diversos tampões tais como são conhecidos na técnica e/ou que podem ser prontamente preparados ou otimizados para serem empregados, por exemplo, para lavagem, como um diluente de conjugado e/ou como um diluente de calibrador. Um diluente de conjugado exemplificador é diluente de conjugado ARCHITECT® empregado em certos kits (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL) e que contém ácido 2-(N-morfolino)etanossulfônico (MES), um sal, um bloqueador de proteína, um agente antimicrobiano e um detergente. Um diluente de calibrador exemplificador é o diluente de calibrador humano ARCHITECT® empregado em certos kits (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL), que compreende um tampão que contém MES, outro sal, um bloqueador de proteína e um agente antimicrobiano.

Adicionalmente, conforme descrito no pedido de patente nº U.S. 61/142.048 depositado em 31 de dezembro de 2008, a geração de sinal aperfeiçoada pode ser obtida, por exemplo, em um formato de cartucho i-STAT®, com o uso de uma sequência de ácidos nucleicos ligada ao anticorpo de sinal como um amplificador de sinal.

[0433]Embora certas modalidades no presente documento sejam vantajosas quando empregadas para avaliar doença, tal como lesão traumática cerebral, os ensaios e kits também podem ser opcionalmente empregados para avaliar cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) em outras doenças, distúrbios e condições conforme for adequado.

[0434]O método de ensaio também pode ser usado para identificar um composto que melhora doenças, tais como lesão traumática cerebral. Por exemplo, uma célula que expressa cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) pode ser colocada em contato com um composto candidato. O nível de expressão de cTnI e um ou mais biomarcadores precoces além de cTnI (tal como UCH-L1 e/ou GFAP) na célula colocada em contato com o composto pode ser comparado com aquele em uma célula de controle com o uso do método de ensaio descrito no presente documento.

[0435]A presente revelação tem múltiplos aspectos, ilustrados pelos exemplos não limitantes a seguir.

16. Exemplos

[0436]Ficará prontamente evidente aos versados na técnica que outras modificações e adaptações adequadas dos métodos da presente revelação descritos no presente documento são prontamente aplicáveis e consideráveis, e podem ser feitas com o uso de equivalentes adequados sem se afastar do escopo da presente revelação ou dos aspectos e das modalidades reveladas no presente documento. Agora com a descrição da presente revelação em detalhes, a mesma será mais claramente compreendida mediante a referência aos seguintes exemplos, que são meramente destinados a apenas ilustrar alguns aspectos e modalidades da revelação e não devem ser vistos como limitadores para o escopo da revelação. As revelações de todas as referências de jornal, patentes U.S. e publicações mencionadas no presente documento estão incorporadas ao presente documento a título de referência, em suas totalidades.

[0437]A presente revelação tem múltiplos aspectos, ilustrados pelos exemplos não limitantes a seguir.

Exemplo 1 Ensaio de UCH-L1 i-STAT®

[0438]Os pares de anticorpo monoclonal, tais como Anticorpo A como um anticorpo monoclonal de captura e Anticorpo B e C como um anticorpo monoclonal de detecção, foram testados. O anticorpo A é um anticorpo anti-UCH-L1 exemplificador que foi internamente desenvolvido na Abbott Laboratories (Abbott Park, IL). O anticorpo B e C reconhecem epítopos diferentes de UCH-L1 e intensificam a detecção de antígeno na amostra que foram desenvolvidos por Banyan Biomarkers (Alachua, Flórida). Outros anticorpos que foram internamente desenvolvidos na Abbott Laboratories (Abbott Park, IL) também mostram ou espera- se que mostrem intensificação similar de sinal quando usados em conjunto como anticorpos de captura ou anticorpos de detecção, em diversas combinações. O projeto de ensaio de UCH-L1 foi avaliado contra atributos de desempenho principais.

A configuração de cartucho foi Configuração de Anticorpo: Anticorpo A (anticorpo de captura)/Anticorpo B+C (anticorpo de detecção); Condições de reagente: 0,8% de sólidos, 125 µg /ml de conjugado de agrupamento de fosfatase alcalina e Fab; Impressão de entrada de amostra: Padrão UCH-L1. O tempo de ensaio foi de 10 a 15 min (com 7 a 12 min de tempo de captura de amostra). O ensaio de UCH-L1 i- STAT foi usado em um estudo de população de pacientes com TBI.

Exemplo 2 Ensaio de GFAP i-STAT®

[0439]O ensaio de GFAP i-STAT® foi usado em um estudo de população de pacientes com TBI. Os pares de anticorpo monoclonal, tais como Anticorpo A como um anticorpo monoclonal de captura e Anticorpo B como um anticorpo monoclonal de detecção, foram usados. O Anticorpo A e Anticorpo B são anticorpos anti-GFAP exemplificadores que foram internamente desenvolvidos na Abbott Laboratories (Abbott Park, IL). O projeto de ensaio de GFAP foi avaliado contra atributos de desempenho principais. A configuração de cartucho foi Configuração de Anticorpo: Anticorpo A (anticorpo de captura)/Anticorpo B (anticorpo de detecção); Condições de reagente: 0,8% de sólidos, 250 µg/ml de conjugado de agrupamento de fosfatase alcalina e Fab; Impressão de entrada de amostra: GFAP específico. O tempo de ensaio foi de 10 a 15 min (com 7 a 12 min de tempo de captura de amostra).

Exemplo 3 Estudo 1 - População de TBI

[0440]O estudo 1 foi um projeto grande e complexo. Sua parceria institucional e pública-privada é compreendida de mais de 11 sítios clínicos, 7 núcleos, para um total de quase 50 instituições, corporações e filantropia colaboradoras. Um estudo piloto inicial, com base nos dados clínicos a partir de três sítios clínicos, ajudou a refinar elemento de dados comuns de TBI e criou um protótipo do Centro de informações de TBI para o Estudo 1.

[0441]Grupos de indivíduos: Um total de 2.700 a 3.000 pacientes de TBI foram inscritos regularmente através de 3 grupos clínicos, diferenciados por trajetória de cuidado clínico: 1. Pacientes avaliados no Departamento de Emergência e dispensados (ED); 2. Pacientes admitidos no hospital, mas não no CTI (ADM); e 3.

Pacientes admitidos no CTI (ICU). Um adicional de 100 pacientes por grupo clínico (n=300) com trauma extracraniano, mas sem TBI, foram inscritos como controles para uma inscrição total de 3.000 pacientes. Esse plano de estratificação facilitou a análise de pesquisa de eficácia comparativa (CER) e não foi limitado pela diferenciação tradicional em TBI “branda/moderada/severa”. A coleta de dados foi dependente da trajetória de cuidado clínico (ED, ADM, CTI) e de requisitos de cada objetivo. Os pacientes em cada grupo foram estratificados em 3 coortes que definem a extensão de dados a serem coletados.

[0442]Os controles foram pacientes adultos com trauma ortopédico que atendem os seguintes critérios: 1. Uma pontuação de lesão abreviada ≤4 (não constitui ameaça de vida) para sua lesão de extremidade e/ou pélvis e/ou fratura de costela; 2. Atendem os mesmos critérios de inclusão e exclusão que os indivíduos de TBI exceto pelo fato de que o critério de ter se submetido a uma TC ou IRM no ED acerca da suspeita de lesão na cabeça não se aplica. A TBI foi excluída para a lesão atual mediante a entrevista de controles potenciais sobre perda de consciência (LOC), perturbação da consciência e amnésia pós-traumática (PTA)/RA; 3. A cada sítio foi fornecido um plano para o número de controles a alvejar de acordo com as distribuições de idade e gênero derivadas a partir da Coorte de TBI; e 4. Controles foram inscritos na coorte CA-IRM para acompanhamento e queda para avaliação abrangente (CA) em 2 semanas se incapazes de concluir a visita de IRM.

[0443]Elegibilidade de indivíduo: Foram inscritos pacientes adultos de todas as idades apresentando para o Departamento de Emergência (ED) com um histórico de TBI aguda de acordo com os critérios do Congresso Americano de Medicina de Reabilitação (ACRM - “American Congress of Rehabilitation Medicine”), em que o paciente tem sofrido um rompimento fisiológico da função cerebral induzido de modo traumático, conforme manifestado por ≥ um dentre os seguintes: qualquer período de perda de consciência (LOC); qualquer perda de memória para eventos (por exemplo,

amnésia) imediatamente antes ou depois do acidente; qualquer alteração de estado mental no momento do acidente (sensação atordoada, desorientada e/ou confusa); e/ou déficits neurológicos focais que podem ou não ser permanentes. A indução de modo traumático incluiu a cabeça sendo atingida, a cabeça atingindo um objeto ou o cérebro sendo submetido a um movimento de aceleração/desaceleração (por exemplo, chicotada) sem trauma externo direto para a cabeça.

[0444]Os critérios de Inclusão/Exclusão usados são mostrados na Tabela 2.

Tabela 2 Critério Fonte de Comentários dados Critérios de inclusão

1. Idade 0 a 100 Gráfico

2. TBI documentada/verificada Gráfico, (Critérios de ACRM) Entrevist a

3. Lesão ocorreu < 24 horas atrás Gráfico, Entrevist a

4. TC de cérebro agudo para Gráfico Indivíduo precisa ter varredura por cuidado clínico TC do cérebro

5. Acuidade visual/audição Gráfico, adequada para teste Entrevist a

6. Fluência em Inglês ou Espanhol Gráfico, Bateria de testes ou disponibilidade Entrevist do pessoal a

7. Capacidade de fornecer Entrevist consentimento informado a Critérios de exclusão

1. Politrauma significativo que iria Gráfico Traumo corporal significativo pode interferir com acompanhamento e confundir resultados de TBI em teste. avaliação de resultado

2. Prisioneiros ou pacientes sob Gráfico, custódia Entrevist a

3. Gravidez em indivíduos do sexo Gráfico, feminino Entrevist a

4. Pacientes em retenção Gráfico psiquiátrica (por exemplo, 5150, 5250)

5. Principais distúrbios de saúde Gráfico, Distúrbios psiquiátricos debilitantes mental de linha de base Entrevist podem impactar significativamente a debilitantes (por exemplo, a confiabilidade do acompanhamento esquizofrenia ou transtorno e/ou impor dificuldades na atribuição bipolar) que iriam interferir com o do índice de TBI. acompanhamento e a validade da avaliação de resultado

6. Principal doença neurológica Gráfico, Deficiência cognitiva debilitante debilitante (por exemplo, acidente Entrevist documentada irá confundir avaliação vascular cerebral, CVA, a de resultado além de não ser demência, tumor) que prejudica a passível de consentimento total. cognição consciente de linha de base ou validade do acompanhamento e avaliação de resultado

7. Histórico significativo de Gráfico, condições pré-existentes que Entrevist iriam interferir com o a acompanhamento e avaliação de resultado (por exemplo, abuso de substância, alcoolismo, HIV/AIDS, principais doenças transmissíveis que possam interferir com o consentimento, cânceres em estágio terminal, dificuldades de aprendizagem, distúrbios de desenvolvimento)

8. Contraindicações para IRM (para Triagem coorte de CA+IRM) de IRM

9. Baixa probabilidade de Entrevist acompanhamento (por exemplo, a participante ou família indicando baixo interesse, residência em outro estado ou país, privação de habitação ou falta de contatos confiáveis)

10. Participante atual em um ensaio Gráfico, Exceção para exclusão de co- com intervenção (por exemplo, Entrevist inscrição é feita para sítios que fármaco, dispositivo, a participam de consórcio de comportamental) resultados de ressuscitação pré- hospitalar com ácido tranexâmico para Estudo de TBI.

11. TBI penetrante Gráfico

12. Lesão da medula espinhal com Gráfico pontuação ASIA de C ou pior

[0445]Para cada um dos 3 grupos clínicos (isto é, ED, ADM e CTI), os indivíduos foram adicionalmente colocados em uma das três coortes de avaliação diferentes: Breve avaliação (Coorte BA), Coorte de Avaliação abrangente (CA) ou Coorte de Avaliação abrangente + IRM (CA+IRM). Consultar a Tabela 3 para plano por etapas com taxa de acompanhamento de 80%.

Tabela 3 (Ad) Ano 1 Ano 2 Ano 3 Ano 4 Total Grupo CA+IRM CA N CA+IRM CA N CA BA N BA N ED 150 87 231 50 58 108 155 100 255 300 900 ADM 150 87 237 50 58 108 155 100 255 300 900 CTI 150 87 237 50 58 108 155 100 255 300 900 Controles 0 99 99 0 66 66 135 0 135 0 300 Total 450 360 810 150 240 390 600 300 900 900 3000

[0446]A coorte de breve avaliação (BA) incluiu 1.200 indivíduos totais, com 400 indivíduos cada para Grupos ED, ADM e CTI. Os seguintes dados foram reunidos para a Coorte BA: dados de evolução clínica total e demográficos; retirada de sangue para soro, plasma, DNA e RNA no Dia 1 (<24 horas da lesão); repetição de retirada de sangue para soro dentro de 3 a 6 horas da coleta de linha de base do Dia 1 (opcional para sítios incluírem esse componente); varredura por TC de cérebro clínica a partir do Dia 1 adquirida como parte do evolução hospitalar; e dados de resultado coletados através de entrevista telefônica estruturada em 2 semanas, 3, 6 e 12 meses com o uso de medições de resultado por NIH TBI-CDEs v.2.0 Core, conforme publicado no site da web de NINDS CDE.

[0447]A coorte de avaliação abrangente (CA) incluiu 1.200 indivíduos totais, com 300 indivíduos + 100 controles cada para Grupos ED, ADM e CTI. Os seguintes dados foram reunidos para a Coorte CA: dados de evolução clínica completa e demográficos; dados clínicos diários de alta densidade para Grupos ADM e CTI; retirada de sangue para soro, plasma, RNA e DNA no Dia 1 (<24 horas da lesão); repetição de retirada de sangue para soro dentro de 3 a 6 horas da coleta de linha de base do Dia 1 (opcional para sítios incluírem esse componente); retirada de sangue para soro, plasma e RNA do Dia 3 (48 a 72 horas) e 5 (96 a 120 horas) para ADM e CTI; coleta de líquido cefalorraquidiano nos dias 1 a 5 (opcional para sítios incluírem esse componente); todas as varreduras por TC cerebrais clínicas adquiridas como parte da evolução hospitalar; retirada de sangue para soro, plasma e RNA em 2 semanas e 6 meses; e dados de resultado coletados através de entrevista presencial estruturada em 2 semanas, 6 e 12 meses e em 3 meses através de entrevista por telefone estruturada com o uso de medições de resultado suplementar e básico NIH TBI-CDEs v.2.0 Core.

[0448]A Coorte de avaliação abrangente + IRM (CA+IRM) incluiu 600 indivíduos totais, com 200 cada para Grupos ED, ADM e CTI. Os seguintes dados foram reunidos para a Coorte CA+IRM: dados de evolução clínica completa e demográficos; dados clínicos diários de alta densidade para Grupos ADM e CTI; retirada de sangue para soro, plasma, RNA e DNA no Dia 1 (<24 horas da lesão); repetição de retirada de sangue para soro dentro de 3 a 6 horas da coleta de linha de base do Dia 1 (opcional para sítios incluírem esse componente); retirada de sangue para soro, plasma e RNA no Dia 3 (48 a 72 horas) e 5 (96 a 120 horas) para ADM e CTI; coleta de líquido cefalorraquidiano nos dias 1 a 5 (opcional para sítios incluírem esse componente); todas as varreduras por TC de cabeça clínicas adquiridas como parte da evolução hospitalar; retirada de sangue para soro, plasma e RNA em 2 semanas e 6 meses; IRM de pesquisa 3T em 2 semanas e 6 meses; e dados de resultado coletados através de entrevista presencial estruturada em 2 semanas, 6 e 12 meses e em 3 meses através de entrevista por telefone estruturada com o uso de medições de resultado suplementar e básico NIH TBI-CDEs v.2.0 Core.

[0449]Mediante a inscrição, a coleta de dados começou no hospital. Para pacientes de CA+IRM, o IRM de 2 semanas foi concluído em 14 dias + 4 dias a partir da data da lesão. Os resultados de 2 semanas correspondentes foram concluídos + 3 dias do IRM de 2 semanas. Para pacientes CA e BA, os resultados de 2 semanas foram concluídos + 4 dias de 14 dias a partir da data da lesão. Os resultados em 3 meses foram concluídos + 7 dias de 90 dias a partir da data da lesão. Para pacientes CA+IRM, IRMs em 6 meses foram concluídos + 14 dias de 180 dias a partir da data da lesão, com resultados de 6 meses correspondentes + 14 dias do IRM de 6 meses.

Para pacientes CA e BA, os resultados de 6 meses foram concluídos + 14 dias de 180 dias a partir da data da lesão. BTACT deve ser concluído com + 7 dias dos Resultados (mas não no mesmo dia e não mais que 201 dias a partir da lesão). Os resultados em 12 meses foram concluídos + 30 dias de 360 dias a partir da data da lesão.

[0450]HsTnI e UCH-L1 foram medidas em um tamanho pequeno de amostra de 59 pacientes a partir do Estudo 1 com o uso do ensaio de hsTnI Abbott Architect STAT (Tabela 4).

Tabela 4Características de indivíduo por varredura por TC e resultado de IRM Características do indivíduo Total TC ou IRM Positiva* TC e IRM 3T Valor P (n= 59) (n = 46, 77,97%) Negativa (n = 13, 22,03% Idade 46,0 [24,0 a 60,0] 45,5 [23,0 a 60,0] 50,0 [39,0 a 57,0] 0,7419 Sexo Masculino 50 / 59 (85%) 39 / 46 (85%) 11 / 13 (85%) 1,0000 Feminino 9 / 59 (15%) 7 / 46 (15%) 2 / 13 (15%) Raça/Etnia Afroamericana ou Africana 6 / 58 (10%) 4 / 45 (9%) 2 / 13 (15%) 0,2398 Caucasiana 48 / 58 (83%) 39 / 45 (87%) 9 / 13 (69%) Hispânica 4 / 58 (7%) 2 / 45 (4%) 2 / 13 (15%) Histórico de TBI Sim, sem LOC 9 / 56 (16%) 3 / 43 (7%) 6 / 13 (46%) Sim, com LOC 8 / 56 (14%) 6 / 43 (14%) 2 / 13 (15%) Sem TBI anterior 39 / 56 (70%) 34 / 43 (79%) 5 / 13 (38%) Apresentação em ED Perda de consciência Não 6 / 58 (10%) 2 / 45 (4%) 4 / 13 (31%) 0,0227 Sim 47 / 58 (81%) 38 / 45 (84%) 9 / 13 (69%) Desconhecido 5 / 58 (9%) 5 / 45 (11%) Escala de coma de Glasgow 15,0 [3,0 a 15,0] 14,0 [3,0 a 15,0] 15,0 [15,0 a 15,0] 0,0162

Classificação de escala de coma de

Glasgow

Severa (3 a 8) 16 / 59 (27%) 16 / 46 (35%) 0,0177

Moderada (9 a 12) 3 / 59 (5%) 3 / 46 (7%)

Branda (13 a 15) 40 / 59 (68%) 27 / 46 (59%) 13 / 13 (100%)

Mecanismo de lesão

Veículo motorizado (condutor/passageiro) 10 / 59 (17%) 9 / 46 (20%) 1 / 13 (8%) 0,2975

Motocicleta/ATV/ carro de golfe 5 / 59 (8%) 3 / 46 (7%) 2 / 13 (15%)

(condutor/passageiro)

Indivíduo atingido por qualquer tipo de 3 / 59 (5%) 2 / 46 (7%) 1 / 13 (8%)

veículo

Queda de um objeto móvel 3 / 59 (5%) 3 / 46 (7%)

(bicicleta/skate/cavalo/etc)

Queda de um objeto estacionário 27 / 59 (46%) 20 / 46 (43%) 7 / 13 (54%)

(telhado/escada/etc)

Agressão 10 / 59 (17%) 9 / 46 (20%) 1 / 13 (8%)

Atingido na cabeça por objeto, não 1 / 59 (2%) 1 / 13 (8%)

agressão (árvore/etc)

Nível de álcool (g/dl) 0,1 [0,0 a 0,2] 0,1 [0,0 a 0,2] 0,0 [0,0 a 0,0] 0,1588

Detecção de drogas

Negativo 51 / 59 (86%) 41 / 46 (89%) 10 / 13 (77%) 0,3567

Positivo 8 / 59 (14%) 5 / 46 (11%) 3 / 13 (23%)

Resultados de biomarcador

Tempo de coleta desde a lesão 771,0 (+/-/339,8) 779,4 (+/- 296,8) 743,0 (+/- 468,7) 0,7383

(Minutos)

UCH-L1 (pg/ml) 342,5 [102,8 a 514,0 [167,2 a 62,4 [44,5 a <

718,3] 859,8] 136,8] 0,0001

Pontuações de prognóstico

Escala de resultado de Glasgow (3 6,0 [5,0 a 7,0] 5,5 [4,0 a 7,0} 7,0 [7,0 a 7,0] 0,0130 meses) Escala de resultado de Glasgow (6 6,0 [5,0 a 7,0] 6,0 [4,0 a 7,0] 7,0 [5,5 a 7,5] 0,1941 meses) Escala de resultado de Glasgow 7,0 [5,0 a 8,0] 6,5 [5,0 a 8,0] 7,0 [6,0 a 8,0] 0,4412 (12 meses) Primeiros 3 itens do questionário 0,0 [0,0 a 2,0] 0,0 [0,0 a 2,5] 0,0 [0,0 a 2,0] 0,8378 de Rivermead (6 meses) Últimos 13 itens do questionário de 9,0 [4,0 a 15,0] 8,5 [4,0 a 15,0 13,0 [0,0 a 27,0] 0,5449 Rivermead (6 meses) Índice de velocidade de 30,0 [5,0 a 55,0] 30,0 [5,0 a 50,0] 43,0 [18,0 a 0,3235 processamento WAIS-III (6 77,0] meses) Escala de satisfação com a vida (6 21,5 (+/- 6,2) 21,7 (+/- 5,7) 20,4 (+/- 8,5) 0,6205 meses) Medição de independência 126,0 [125,0 a 126,0 (124,0 a 126,0 [126,0 a 0,2958 funcional (6 meses) 126,0] 126,0] 126,0] *24 indivíduos receberam um MRL Variáveis contínuas são apresentadas como mediana [Faixa interquartil de 25 a 75%] e comparadas com o uso do teste de soma de posto de Wilcoxon ou Média (+/- SD) e comparadas com o uso de um teste t com base na distribuição dos dados.

Variáveis categóricas são apresentadas como número / total (por cento) e comparadas com o uso do teste exato de Fisher ou qui-quadrado.

[0451]Adicionalmente a uma retirada de sangue dentro de 24 horas da lesão cerebral, cada paciente teve uma avaliação médica extensiva que inclui TC de cabeça, teste neuropsiquiátrico, escala de coma de Glasgow (GCS) e muitos pacientes também tiveram um IRM de acompanhamento dentro de 2 semanas da lesão. Após um processamento e protocolo de retirada de sangue padronizado e meticuloso, as amostras de plasma foram separadas em alíquota para armazenamento a -80 °C, posteriormente descongeladas e testadas. Cada amostra foi executada em duplicata com os resultados listados sendo uma média das duas execuções. A Figura 1 mostra que níveis de UCH-L1 se correlacionaram com a lesão ao longo das primeiras 24 horas após a lesão (faixa de aproximadamente 2 a 23 horas). A Tabela 4 mostra que os níveis de etanol (ETOH) não se correlacionam com níveis de biomarcadores (correlação de Pearson = 0,023, valor p = 0,89) à medida que o consumo de ETOH está frequentemente relacionado a TBI, em particular TBI severa.

[0452]A Tabela 5 mostra a análise de dados em um tamanho pequeno de amostra de 191 pacientes a partir do Estudo 1, especificamente a análise da alteração entre o ponto no tempo 2 e o ponto no tempo 1 em níveis de hsTnI e UCH-L1. A amostra de ponto no tempo 1 é tomada dentro de 24 horas a partir da lesão e a amostra de ponto no tempo 2 é tomada cerca de 3 a 6 horas depois que a amostra de ponto no tempo 1 é tomada. UCH-L1 parece ter uma alteração significativa a partir do ponto no tempo 1 até ponto no tempo 2 (n = 191, delta mediano (isto é, alteração a partir do ponto no tempo 1 até o ponto no tempo 2) = -38 pg/ml, valor p de teste de postos sinalizados de Wilcoxon < 0,0001). Consultar também a Figura 2. A Figura 2 mostra um gráfico de bigode e caixa que indica os níveis de UCH-L1 determinados em todos os pacientes do Estudo no ponto no tempo 1 e ponto no tempo 2. GFAP parece ter uma alteração significativa a partir do ponto no tempo 1 até ponto no tempo 2 (n = 191, delta mediano (isto é, alteração a partir do ponto no tempo 1 até o ponto no tempo 2) = -1 pg/ml, valor p de teste de postos sinalizados de Wilcoxon = 0,7932).

Consultar também a Figura 34. A Figura 34 mostra um gráfico de bigode e caixa que indica os níveis de GFAP determinados em todos os pacientes do Estudo no ponto no tempo 1 e ponto no tempo 2. HsTnI parece ter uma alteração significativa a partir do ponto no tempo 1 até ponto no tempo 2 (n = 89, delta mediano (isto é, alteração a partir do ponto no tempo 1 até o ponto no tempo 2) = -0,091537 pg/ml, valor p de teste de postos sinalizados de Wilcoxon < 0,6085). Consultar também a Figura 3. A Figura 3 mostra um gráfico de bigode e caixa que indica os níveis de hsTnI determinados em todos os pacientes do Estudo no ponto no tempo 1 e ponto no tempo 2. Esses dados foram simplesmente análises que comparam os pontos no tempo e não têm por base a TC, IRM ou GCS +/-. UCH-L1 parece ter uma alteração significativa a partir do ponto no tempo 1 até ponto no tempo 2 (n = 191, delta mediano (isto é, alteração a partir do ponto no tempo 1 até o ponto no tempo 2) = -38 pg/ml, valor p de teste de postos sinalizados de Wilcoxon < 0,0001).

Tabela 5 Tamanhos Estatística de Delta Delta Delta Ensaio de amostra postos sinalizados Valor P mediano mínimo máximo (n) de Wilcoxon hsTnI 89 0,091537 -226,4837 29.419,421 122 0,6085 UCH-L1 191 -38 -6.070 2.528 -5.398,5 < 0,0001 GFAP 191 -1 -18.183 10.368 193,5 0,7932

[0453]Os dados a partir das 191 amostras a partir do Estudo 1 foram adicionalmente analisados com base em quando o ponto no tempo 1 amostra foi tomado, por exemplo, 0 a cerca de 6 horas após a lesão (“grupo de 0 a 6 horas”), cerca de 6 a cerca de 12 horas após a lesão (“grupo de 6 a 12 horas”) e correlacionados com resultados de varredura por TC de cabeça e/ou pontuações de GCS. Os níveis de hsTnI nas amostras de ponto no tempo 1 e ponto no tempo 2 foram comparados com os resultados positivo e negativo de varredura por TC de cabeça e/ou pontuações de GCS que indicam TBI branda ou moderada/severa. À medida que essa análise foi com base no tempo em que a amostra de ponto no tempo 1 foi tomado, o número de indivíduos por grupo foi pequeno. Consultar a Tabela 6.

Tabela 6 Faixa de tempo (horas)* N° total 0a6 6 a 12 12 a 18 18 a 24 >24 de Indivíduo s Varredur Positiva 6 21 33 31 4 95 a por TC Negativa 8 17 25 25 0 75 Pontuaç Branda 12 27 45 41 1 126 ão de Moderada 2 10 15 15 2 44 GCS /Severa *tempo da primeira amostra tomada a partir do tempo da lesão

[0454]Varredura por TC. A Figura 4 mostra os resultados de hsTnI nos indivíduos a partir do grupo de 0 a 6 horas que tiveram varreduras por TC de cabeça positiva e negativa. A Figura 4 mostra a distribuição dos níveis de hsTnI no ponto no tempo 1 e ponto no tempo 2 nos indivíduos que tiveram uma varredura por TC positiva ou negativa. Os níveis de hsTnI nos indivíduos com TC positiva foram maiores do que os indivíduos com TC negativa tanto no ponto no tempo 1 como no ponto no tempo 2 para o grupo de 0 a 6 horas. Os níveis de hsTnI nos indivíduos a partir do grupo de 0 a 6 horas que têm uma varredura por TC positiva tiveram um aumento expressivo a partir do ponto no tempo 1 até o ponto no tempo 2.

[0455]A Figura 5 mostra a quantidade absoluta (“delta absoluto”) em níveis de hsTnI em indivíduos a partir do grupo de 0 a 6 horas. Os indivíduos que têm uma varredura por TC de cabeça positiva tiveram uma alteração maior em níveis de hsTnI a partir do ponto no tempo 1 até o ponto no tempo 2 em comparação com indivíduos que têm uma varredura por TC de cabeça negativa.

[0456]Pontuações de GCS. A Figura 6 mostra os resultados de hsTnI nos indivíduos a partir do grupo de 0 a 6 horas que foram identificados como tendo TBI branda ou moderada a severa (“moderada/severa”) com base em sua pontuação de GCS. A Figura 6 mostra a distribuição dos níveis de hsTnI no ponto no tempo 1 e ponto no tempo 2 nos indivíduos determinados como tendo branda ou moderada/severa. Os níveis de hsTnI nos indivíduos com moderada/severa foram significativamente maiores do que os indivíduos com branda tanto no ponto no tempo 1 como no ponto no tempo 2 para o grupo de 0 a 6 horas. Os níveis de hsTnI no grupo de 0 a 6 horas tiveram um aumento expressivo a partir do ponto no tempo 1 ao ponto no tempo 2.

[0457]A Figura 7 mostra a quantidade absoluta (ou alteração entre o ponto no tempo 1 e o ponto no tempo 2; “delta absoluto”) em níveis de hsTnI do grupo de 0 a 6 horas. Os indivíduos determinados como tendo TBI moderada/severa com base na pontuação de GCS tiveram uma alteração maior em níveis de hsTnI a partir do ponto no tempo 1 ao ponto no tempo 2 em comparação com indivíduos determinados como tendo TBI branda com base na pontuação de GCS.

[0458]A Figura 8 mostra análise de ROC de resultados de ensaio de UCH-L1 no ponto no tempo 1 (tomado dentro de 0 a 12 horas após a lesão na cabeça) correlacionado com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa.

[0459]A Figura 9 mostra análise de ROC de resultados de ensaio de UCH-L1 no ponto no tempo 1 (tomado mais de 12 horas após a lesão na cabeça) correlacionado com pontuações de GCS de TBI branda versus moderada/severa.

[0460]A Figura 10 mostra análise de ROC de quantidade absoluta (“delta absoluto”) da combinação de níveis de hsTnI e níveis de UCH-L1 (isto é, a diferença absoluta entre níveis de hsTnI no ponto no tempo 2 e níveis de hsTnI no ponto no tempo 1 e a diferença absoluta entre níveis de UCH-L1 no ponto no tempo 2 e níveis de UCH-L1 no ponto no tempo 1) correlacionada com resultado de pontuação de GCS (branda versus moderada/severa). A amostra no ponto no tempo 1 é tomada dentro de 0 a 12 horas da lesão na cabeça, enquanto a amostra no ponto no tempo 2 é tomada cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a amostra no ponto no tempo 1 é tomada. A Figura 11 mostra análise de ROC de quantidade absoluta (“delta absoluto”) da combinação de níveis de hsTnI e níveis de UCH-L1 (isto é, a diferença absoluta entre níveis de hsTnI no ponto no tempo 2 e níveis de hsTnI no ponto no tempo 1 e a diferença absoluta entre níveis de UCH-L1 no ponto no tempo 2 e níveis de UCH-L1 no ponto no tempo 1) correlacionada com resultado de pontuação de GCS (branda versus moderada/severa). A amostra no ponto no tempo 1 é tomada mais de 12 horas da lesão na cabeça, enquanto a amostra no ponto no tempo 2 é tomada cerca de 3 a cerca de 6 horas depois que a amostra no ponto no tempo 1 é tomada.

Exemplo 4 Estudo 2 - Desenvolvimento de um esquema de classificação de múltipla modalidade para lesão traumática cerebral

[0461] O objetivo desse estudo foi desenvolver um esquema de classificação para lesão cerebral que indica a natureza (tipo) e a gravidade da lesão. Por exemplo, os biomarcadores séricos revelaram tipo de célula. Os pacientes de trauma foram divididos em três grupos para análise: apenas com lesão cerebral, apenas com lesão não cerebral e lesão combinada. Os grupos de trauma de lesão cerebral e lesão não cerebral foram comparados um com o outro e com a combinação de trauma cerebral/não cerebral. Esses grupos de trauma foram comparados com controles sem trauma. O LCR a partir de pacientes de trauma foi comparado com o LCR a partir de pacientes sem trauma. Um objetivo secundário foi determinar se qualquer uma das medições, sozinha ou em combinação, tiveram utilidade como um preditor de resultado clínico após TBI.

[0462]Um esquema de classificação de múltipla modalidade objetivo e medição de resultado para lesão traumática cerebral foram desenvolvidos com base em várias medidas: 1) biomarcadores à base de sangue; 2) medições fisiológicas e avaliação; e 3) medições radiográficas (TC e IRM 3T). Os biomarcadores à base de sangue podem indicar quais tipos de célula são danificados (por exemplo, glial versus neuronal) e a radiografia pode detectar alterações estruturais.

[0463]Sítio de estudo: Os pacientes de trauma foram recrutados no Hennepin County Medical Center (HCMC) no estado de Minnesota. Os participantes incluíram pacientes de trauma de todas as idades se apresentando ao departamento de emergência do HCMC (ED), setor de trauma ou como transferência direta para neurocirurgia. Os pacientes de trauma foram excluídos se tivessem uma distúrbio neurológico ou psiquiátrico maior, fossem anormais em termos de desenvolvimento ou fosse prisioneiros. Os indivíduos foram identificados mediante a pesquisa de registros médicos acerca de todas as admissões de trauma e verificação cruzada com o registro de trauma do American College of Surgeons usado no hospital.

[0464]Todos os pacientes de trauma foram recrutados para triagem no momento da apresentação e se submeteram a: 1) um histórico padronizado (modelo) e exame físico; 2) análise de biomarcadores séricos se o sangue for retirado para outras indicações; 3) estudo radiográfico conforme clinicamente indicado; 4) acompanhamento conforme clinicamente indicado com 1) a 3); 5) análise de espécime patológica em pacientes a caminho da sala de operação apenas; 6) análise de LCR em pacientes que recebem cateteres de ventriculostomia apenas; 7) análise de oxigenação de tecido cerebral em pacientes que recebem Licox apenas; e 8) avaliação de resultado no centro de TBI conforme clinicamente indicado. No momento da admissão, os participantes potenciais se submeteram a um processo de triagem de 24 horas (Tabela 7) antes de fornecer o consentimento informado.

Tabela 7Avaliações de triagem Adulto Pediátrico Histórico de trauma cirúrgico e físico Todos Seleções a partir de Histórico de trauma neurocirúrgico e físico Acordado SCAT3: SAC, SSS-C Criança SCAT3: SAC, SSS-C OR Espécime patogênica VC Análise de LCR Licox Oxigenação de tecido cerebral OR: Pacientes a caminho da sala de operação; VC: Pacientes que recebem cateteres de ventriculostomia; Licox: Pacientes que recebem Licox

[0465]Além disso, os pacientes que consentiram e os controles (idade e gênero correlacionados) se submeteram ao mencionado acima mais aos seguintes estudos adicionais: 1 genômico, soro e LCR; e 2) IRM 3T em circunstâncias selecionadas (marcadores séricos no grupo de teste; marcadores normais no grupo de controle). Os pacientes de trauma incluíram o espectro total que se situa na faixa de com lesão não cerebral, TC negativa a com lesão cerebral em termos estruturais, que exige cirurgia. Os pacientes e controles foram recrutados durante aproximadamente 15 meses. Os indivíduos de trauma sobreviventes foram acompanhados até serem dispensados dos serviços do HCMC. Os indivíduos avaliados no ER e liberados foram convidados para o acompanhamento de pesquisa.

[0466]O processo de triagem incluiu um exame físico e histórico médico padronizado. O modelo foi o modelo atual “Surgery-Trauma History and Physical” em EPIC com uma questão adicional que pergunta se o paciente sofreu um trauma na cabeça. Se o paciente sofreu, três seções aparecem automaticamente para informações adicionais. A primeira foi informações a partir do modelo físico e histórico de trauma de neurocirugia, incluindo grau subaracnóideo, grau hemorrágico, hemorragia intracerebral e histórico social (nível de educação, emprego, condições de habitação e etnia). As duas finais foram ferramentas de avaliação de lesão cerebral padronizadas: a avaliação padronizado de concussão (SAC) e a pontuação de gravidade dos sintomas (SSS). As versões pediátricas dessas avaliações estavam disponíveis e foram usadas quando indicado. Adicionalmente, a questão de perda de consciência já incluída no modelo "Surgery Trauma History and Physical" foi copiada nessa seção exibida com um subconjunto de questões que forneceu um entendimento mais claro do evento de perda de consciência e da orientação atual do paciente. A avaliação mais clinicamente precisa tomada durante as primeiras 24 horas da admissão foi usada para análise de dados futura.

[0467]Os indivíduos não TBI também foram incluídos com base nos seguintes critérios: ter entre 15 e 50 anos de idade no momento da inscrição; ter características semelhantes à população de TBI em termos de gênero, idade, imparcialidade, nível educacional e critérios de digitalizador; e ter capacidade para comunicação e fluência linguística suficientemente claras para permitir que o indivíduo forneça consentimento informado por escrito, ou consentimento com o consentimento dos pais ou responsáveis para menores de idade, e concluir avaliações do estudo para participação em todas as partes do estudo. Os indivíduos não TBI foram excluídos se: fossem diagnosticados com TBI branda nos últimos 6 meses; uma TBI anterior moderada a severa (GCS <13) nos últimos 10 anos; epilepsia com crises recorrentes nos últimos 10 anos; abuso de drogas (exceto maconha) nos últimos 10 anos com base na triagem de DAST-10; abuso de álcool com base na triagem de AUDIT-C; distúrbios psiquiátricos primários do Eixo I ou II atuais, exceto distúrbios classificados como menores e que não se espera que afetem a conduta ou integridade do estudo; um histórico de massa cerebral, neurocirurgia, acidente vascular cerebral, doença da substância branca e/ou demência; uma disfunção cognitiva conhecida ou doença/malformação estrutural do cérebro; uma lesão cerebral estrutural em descobertas anteriores de neuroimagem; prescritos com medicamentos antipsicóticos/antiepilépticos; não tivessem capacidade (tal como devido a necessidades urgentes de assistência médica) ou relutantes em concluir os procedimentos do estudo com precisão ou tivessem algum conflito de interesses que pudesse afetar os resultados do estudo, na opinião do investigador; ou contraindicações para IRM, incluindo: a. gravidez atual ou suspeita por prática no local; b. outras condições que possam constituir um risco para o indivíduo durante a participação no estudo, por investigador; e c. incapacidade de cumprir qualquer parte da política de segurança de RM do site.

[0468]Coleta e manuseio de espécime. Até 40 ml (aproximadamente 3 colheradas) de sangue foram obtidos em cada coleta de espécime. 2 tubos de soro e 2 tubos de plasma foram retirados nas Consultas 1, 2, 4 e 5. No Encontro 3, 2 tubos de soro, 1 tubo de plasma e 1 ou 2 tubos de sangue total foram retirados. Essas espécimes de estudo foram processadas, separadas em alíquotas, congeladas e transportadas para Abbott Laboratories para armazenamento e teste de biomarcador.

As alíquotas de amostra foram enviadas para locais de teste para teste adicional de biomarcador de TBI. Uma amostra foi considerada não avaliável para o estudo se: continha volume insuficiente para realizar as medições necessárias, estava grosseiramente hemolisada, lipêmica ou ictérica; não foi coletada no tipo adequado de tubo coletor; não foi devidamente identificada; ou não foi armazenada adequadamente pelo local de coleta ou no Abbott Laboratories.

[0469]As espécimes de soro foram obtidas através de retirada de sangue. Se uma retirada de sangue fosse obtida no momento da admissão para propósitos clínicos, a espécime adicional foi obtida e retida para propósitos de pesquisa. Se o sangue não foi retirado para propósitos clínicos, o pessoal de pesquisa treinado retirou o sangue necessário para pesquisa. O sangue foi retirado através de venopunção, exceto quando um acesso venoso central fosse exigido pelo padrão de cuidado, em tal caso, o sangue foi retirado através desse acesso. A primeira retirada de sangue foi tomada mediante a admissão, a segunda 3 a 6 horas após a primeira e a terceira foi tomada em 24 horas após o trauma. Os esforços de descoberta também estavam em andamento para encontrar marcadores genéticos de suscetibilidade a TBI ou marcadores preditivos de TBI. Em cada ponto no tempo, 40 ml (menos que 3 colheradas) de sangue foram coletados: 20 ml de soro (2 tubos) e 20 ml de plasma (2 tubos). Durante o Encontro 1, apenas 2 tubos de soro e 1 tubo de plasma foram coletados para a análise de biomarcador de sangue. Essa coleta de sangue total foi de 6,0 ml em um tubo de sangue total. Se um paciente fosse inscrito no Encontro 2 em vez do Encontro 1, teria 2 tubos de soro e 1 tubo de plasma coletados para a análise de biomarcador de sangue. Essa coleta de sangue total foi de 6,0 ml em um tubo de sangue total.

[0470]A quantidade de sangue retirado foi limitada de acordo com a tabela padronizada NINOS (Tabela 8). O número de tentativas para retirar sangue foi limitado para crianças com a idade de sete anos para duas tentativas. No caso em que a tabela padronizada NINOS não permitisse que sangue suficiente fosse retirado para o estudo ou existiram duas tentativas falhas para retirar sangue em um paciente criança, o acesso à amostra sanguínea restante retirada sob o padrão de cuidado clínico foi solicitado para concluir a análise de biomarcador nesse estudo. Essa retirada de sangue permitiu a análise de até 390 biomarcadores à base de sangue relacionados às lesões traumáticas cerebrais.

Tabela 8Volumes de retirada de sangue total máximos permissíveis Volume máximo Volume Hgb Hgb Mínimo exigido permissível máximo Volume Mínimo no momento da Peso Peso (ml) em uma (clínico + de exigido no retirada de sangue se corporal corporal retirada de pesquisa) sangue momento indivíduo tem (Kg) (lbs) sangue (= (ml) em um total (ml) da retirada compromisso 2,5% de período de de sangue respiratório/CV volume de 30 dias sangue total) 1 2,2 100 2,5 5 7,0 9,0 a 10,0 2 4,4 200 5 10 7,0 9,0 a 10,0 3 6,3 240 6 12 7,0 9,0 a 10,0 4 8,8 320 8 16 7,0 9,0 a 10,0 5 11 400 10 20 7,0 9,0 a 10,0 6 13,2 480 12 24 7,0 9,0 a 10,0 7 15,4 560 14 28 7,0 9,0 a 10,0

8 17,4 640 16 32 7,0 9,0 a 10,0 9 19,8 720 18 36 7,0 9,0 a 10,0 10 22 800 20 40 7,0 9,0 a 10,0 880 a 11 a 15 24 a 33 22 a 30 44 a 60 7,0 9,0 a 10,0

1.200

1.280 a 16 a 20 35 a 44 32 a 40 64 a 80 7,0 9,0 a 10,0

1.600

1.680 a 21 a 25 46 a 55 42 a 50 64 a 100 7,0 9,0 a 10,0

2.000

2.080 a 26 a 30 57 a 66 52 a 60 104 a 120 7,0 9,0 a 10,0

2.400

2.480 a 31 a 35 68 a 77 62 a 70 124 a 140 7,0 9,0 a 10,0

2.800

2.880 a 36 a 40 79 a 88 72 a 80 144 a 160 7,0 9,0 a 10,0

3.200

3.280 a 41 a 45 90 a 99 82 a 90 164 a 180 7,0 9,0 a 10,0

3.600 101 a 3.680 a 46 a 50 92 a 100 184 a 200 7,0 9,0 a 10,0 110 4.000 112 a 4.080 a 51 a 55 102 a 110 204 a 220 7,0 9,0 a 10,0 121 4.400 123 a 4.480 a 56 a 60 112 a 120 224 a 240 7,0 9,0 a 10,0 132 4.800 134 a 4.880 a 61 a 65 122 a 130 244 a 260 7,0 9,0 a 10,0 143 5.200 145 a 5.280 a 68 a 70 132 a 140 264 a 280 7,0 9,0 a 10,0 154 5.600 156 a 5.680 a 71 a 75 142 a 150 284 a 300 7,0 9,0 a 10,0 185 6.000 167 a 6.080 a 76 a 80 152 a 160 304 a 360 7,0 9,0 a 10,0 176 6.400 178 a 6.480 a 81 a 85 162 a 170 324 a 340 7,0 9,0 a 10,0 187 6.800 189 a 6.880 a 86 a 90 172 a 180 344 a 360 7,0 9,0 a 10,0 198 7.200 200 a 7.280 a 91 a 95 182 a 190 364 a 380 7,0 9,0 a 10,0 209 7.600 96 a 211 a 7.680 a 192 a 200 384 a 400 7,0 9,0 a 10,0 100 220 8.000

[0471]720Além do exame físico inicial, aqueles pacientes que foram enviados para a sala de operação se submeteram à análise de espécime patológica, aqueles pacientes que receberam Licox tiveram informações de oxigenação do tecido cerebral registradas e aqueles pacientes que receberam cateteres de cateteres de ventriculostomia tiveram o LCR coletado para análise. A fim de analisar o LCR, 5,0 ml foram coletados nos mesmos intervalos que o sangue foi retirado. Os estudos radiográficos foram realizados de acordo com o padrão de cuidado. Nenhuma das avaliações realizadas durante os processos de triagem foi analisada com o restante dos dados até que o consentimento informado fosse obtido. Se o paciente finalmente não concordou com a pesquisa, as espécimes e as avaliações iniciais foram descartadas.

[0472]Depois que os participantes foram dispensados, os registros médicos dos pacientes foram acessados acerca de informações sobre a evolução clínica, incluindo o tempo gasto no ED, quaisquer cirurgias ou outros métodos de neuromonitoramento usados e a avaliação de resultado dos cuidados agudos. Se o paciente passou algum tempo no CTI, as informações também foram extraídas a partir desse período de tempo, incluindo dados de monitores Moberg e o nível de intensidade terapêutica diária.

[0473]Os pacientes de trauma foram divididos em três grupos para análise: apenas com lesão cerebral, apenas com lesão não cerebral e lesão combinada. Dois grupos de controle com idade e gênero correlacionados foram incluídos nesse estudo e recrutados a partir do ED: controles sem trauma e LCR. Os controles sem trauma foram aqueles que não experimentaram qualquer trauma, e esse grupo era composto principalmente por familiares e amigos dos pacientes admitidos por lesão cerebral.

Ambos os grupos de controle consentiram em se submeter a uma única avaliação intensiva que incluiu uma retirada de sangue e avaliações cognitivas, neurológicas e de qualidade de vida (SAC, NOS-TBI, QoLABI). Os pacientes que receberam cateteres de ventriculostomia eletiva ou de drenagem lombar consentiram (no pré- operatório) em fazer parte do grupo de controle de LCR. Foram coletados 5 ml de LCR a partir do cateter de ventriculostomia de pacientes nesse grupo de controle para comparação com o LCR coletado a partir da parte do grupo de estudo que recebeu um cateter de ventriculostomia como parte de seu padrão de cuidado. O grupo de controle de LCR também teve a chance de participar da mesma avaliação intensiva que os outros dois grupos de controle que incluíram uma retirada de sangue e uma varredura por IRM 3T.

[0474]Acompanhamento: Todos os pacientes que consentiram em participar da porção de acompanhamento do estudo foram solicitados a retornar para o hospital.

Os pacientes que retornaram foram atendidos na clínica ambulatorial de TBI em 2 semanas, 4 semanas, meses, 6 meses e 1 ano. Se não tivessem uma consulta agendada na clínica ambulatorial de TBI, seria agendado um horário para entrar no Laboratório de Pesquisa de Lesões Cerebrais (PL.610) naqueles pontos no tempo. A Tabela 9 fornece uma linha do tempo para cada uma das avaliações. As retiradas de sangue para análise de biomarcador foram feitas em cada um dentre os cinco pontos no tempo de acompanhamento no mesmo método, conforme descrito acima. A bateria de avaliação de resultado listada nas Tabelas 10 e 11 foi concluída em 3 meses, 6 meses e um ano. As varreduras radiográficas que faziam parte do padrão de cuidado foram acessadas através dos registros médicos dos participantes, mas os controles e participantes consentidos selecionados também foram submetidos a varreduras de IRM 3T em 2 semanas e 6 meses após sua lesão cerebral. Cada exame de IRM levou aproximadamente uma hora e incluiu as seguintes sequências de pulso: (1) Localizador TR sagital curto, (2) Fse axial, (3) FLAIR axial, (4) SWI axial, (5) imageamento axial T2*. No caso em que os pacientes não tiveram capacidade de entrar no hospital para acompanhamento, os mesmos foram contatados por telefone em três meses e um ano após sua lesão para concluir o BT ACT, que foi uma avaliação cognitiva de 15 a 20 minutos projetada para ser administrada por telefone.

Tabela 9Linha do tempo de resultado Retira IRM Coleta de LCR Varredu Avaliações Tempo total da de 3T ra por (minutos) sangu TC e ADM X X (se 10 indicado) 2 X X 70 semana s 4 X 10 semana s 3 meses X X 70 6 meses X X 70 1 ano X X X* X 160 (130 sem TC) Tabela 10Avaliações de resultado– Não finalizadas Adulto Pediátrico

Todos GOS e GOSE GOSE pediátrico SCAT3: SSS e Criança SCAT3: Relatório de Criança e pais; SAC SAC-C

GOAT COAT Duração de Duração de amnésia amnésia Acordado Resultado NOS-TBI NOS-TBI Qualidade de Qualidade de vida: vida: - Cronograma de classificação neuropsiquiátrica -MPAI-4 - Inventário de qualidade de vida pediátrica (Para criança e para representante) Não CRS-R (Apenas grau de reflexo de tronco cerebral?) Acordado Tabela 11Avaliações infantis possíveis Nome Idade Tempo Descrição Barley III, 0 a 3,5 30 a 90 Desenvolvimento cognitivo, linguístico (receptivo e expressivo) BSID* e motor Mais comumente usado em teste para essa faixa etária BITSEA* 1a3 7 a 12 Percepção parental de comportamento social e emocional 17 itens de 42 são para autismo, assim pode se tornar mais curto CBCL 1,5 a 5 25 a 30 Percepção parental de desempenho em atividades, desempenho social e escolar MSEL* 1 15 a 25 Capacidade cognitiva e motora (motricidade grossa, recepção 3 25 a 35 visual, motricidade fina, linguagem, predominantemente para 5 40 a 60 preparação para escola) Shape 3a6 45 a 75 Processos de inibição e permuta: Funções executivas School* emergentes Trails- 2a6 5 a 10 Função neuropsicológica: Velocidade psicomotora, Atenção Preschool* complexa, Função executiva Teste de traçado avançado *Acesso solicitado

[0475]Plano de análise estatística. Os dados de biomarcador foram analisados mediante o exame da retirada de concentração máxima para cada biomarcador por paciente ou por tempo a partir de baldes de incidente ou ambos. Para abordar o objetivo principal de determinar associações entre concentrações de biomarcador em sangue e dados clínicos de imagens neurológicas e de ressonância magnética, várias análises foram empregadas. A análise de componentes principais foi usada para examinar quais biomarcadores podem estar explicando a mesma variância ou se um biomarcador está contribuindo com muito pouca variância. Os biomarcadores foram usados em uma análise de regressão logística e alguns biomarcadores foram excluídos com base nos resultados a partir da análise de componentes principais e na entrada clínica. Um nível de significância de 0,05 foi usado para a análise de regressão logística. A análise de ROC também foi usada para examinar a capacidade preditiva de cada biomarcador na determinação da situação de IRM ou resultados de testes neurológicos, para esse conjunto de dados.

Exemplo 5 Estudo 2 - Análise

[0476]A troponina I (hsTnI) de alta sensibilidade foi medida com o uso do ensaio de hsTnI Abbott Architect STAT em amostras tomadas a partir de indivíduos, conforme descrito no Exemplo 4. As Figuras 12, 14 e 16 mostram que níveis de hsTnI (Figura 12), UCH-L1 (Figura 14) e GFAP (Figura 15) se correlacionaram com a lesão ao longo das primeiras 24 horas após a lesão (faixa de aproximadamente 2 a 23 horas) com base nos resultados de varredura por TC. As Figuras 13, 15 e 17 mostram que níveis de hsTnI (Figura 13), UCH-L1 (Figura 15) e GFAP (Figura 17) se correlacionaram com a lesão ao longo das primeiras 24 horas após a lesão (faixa de aproximadamente 2 a 23 horas) com base na pontuação de GCS.

[0477]Amostras tomadas a partir de Indivíduos dentro de 2 horas da lesão: níveis de hsTnI e UCH-L1 em amostras tomadas a partir de indivíduo humanos dentro de cerca de 2 horas de suspeita de lesão foram medidos. A Figura 18 mostra a análise de ROC de níveis de hsTnI correlacionados com a situação de TC (resultado de varredura por TC positiva versus negativa; AUC = 0,430). A Tabela 12 mostra as sensibilidades e especificidades do uso de níveis de corte de hsTnI para predizer um resultado positivo de varredura por TC.

Tabela 12Varredura por TC – Análise de níveis de referência de biomarcador único Biomarcador Níveis (pg/ml) Sensibilidade (%) Especificidade (%) 1,15 87,5 31,25 hsTnI 1,29 75,0 31,25 854 83,33 69,57 UCH-L1 688 91,67 68,12 78 91,67 30,43 459 66,67 98,55 193 75,00 97,10 181,9 83,33 97,10

GFAP 108 91,67 91,30 34 91,67 71,01 33 100,00 68,12

30 100,00 66,67 11 100,00 31,88

[0478]A Figura 19 mostra a análise de ROC de hsTnI correlacionada com os resultados de pontuação de GCS (TBI branda versus moderada/severa; AUC = 0,588). A Tabela 13 mostra as sensibilidades e especificidades do uso de níveis de corte de hsTnI para predizer TBI moderada/severa com base nas pontuações de GCS.

Tabela 13Pontuação de GCS– Análise de níveis de referência de biomarcador único Biomarcador Níveis (pg/ml) Sensibilidade (%) Especificidade (%) 5,80 85,71 33,33 hsTnI 4,71 85,71 40,0 3019 70,00 85,92 2919 80,00 84,51 UCH-L1 856 90,00 69,01 305 100,00 54,93 78 100,00 30,99 36 70,00 69,01 28 80,00 60,56 GFAP 23 90,00 59,16 12 90,00 35,21 11 90,00 29,58

[0479]Amostras tomadas a partir de todos os indivíduos: A Figura 20 mostra a curva de ROC que correlaciona os níveis de hsTnI para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 com o resultado de varredura por TC. A Figura 26 mostra a curva de ROC que correlaciona os níveis de UCH-L1 para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 com o resultado de varredura por TC. A Figura 30 mostra a curva de ROC que correlaciona os níveis de GFAP para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 com o resultado de varredura por TC. A sensibilidade e especificidade de níveis de referência para todos os indivíduos com base na curva de ROC são mostradas na Tabela 14.

Tabela 14Varredura por TC – Análise de níveis de referência de biomarcador único Biomarcador Nível de referência Sensibilidade (%) Especificidade (pg/ml) (%) 1,65 81,58 20,59 hsTnI 2,16 71,05 30,88

14,75 31,58 79,41 30,43 21,05 82,35 2783 31,58 75,00 413 81,58 45,59 UCH-L1 383 84,21 41,18 340 86,84 39,71 293 86,84 30,88 1929 31,58 100,00 164 81,58 85,29 132 84,21 82,35 116 86,84 77,94

GFAP 109 92,11 76,47 108 94,74 76,47 33 100,00 38,24 27 100,00 30,88

[0480]A Figura 28 mostra análise de ROC da combinação de níveis de hsTnI e níveis de UCH-L1 correlacionada com situação de TC (resultado de varredura por TC positiva versus negativa) em amostras tomadas em um primeiro ponto no tempo 1 dentro de 24 horas após a lesão na cabeça. A Tabela 15 mostra as sensibilidades e especificidades do uso de uma combinação de níveis de corte de hsTnI e níveis de corte de UCH-L1 para predizer um resultado positivo de varredura por TC. Os cortes no cenário abaixo são onde o indivíduo está acima do corte para hsTnI ou UCH-L1 (ou ambos).

Tabela 15Varredura por TC – Análise de níveis de referência de ambos os biomarcadores Níveis de Níveis de UCH- Sensibilidade Especificidade hsTnI (pg/ml) L1 (pg/ml) (%) (%) 10 450 76,32 32,35 10 400 81,58 29,41 5 550 81,58 29,41

[0481]A Figura 32 mostra análise de ROC da combinação de níveis de hsTnI e níveis de GFAP correlacionada com situação de TC (resultado de varredura por TC positiva versus negativa) em amostras tomadas em um primeiro ponto no tempo 1 dentro de 24 horas após a lesão na cabeça. A Tabela 16 mostra as sensibilidades e especificidades do uso de uma combinação de níveis de corte de hsTnI e níveis de corte de GFAP para predizer um resultado positivo de varredura por TC. Os cortes no cenário abaixo são onde o indivíduo está acima do corte para hsTnI ou GFAP (ou ambos).

Tabela 16Varredura por TC – Análise de níveis de referência de ambos os biomarcadores Níveis de Níveis de GFAP Sensibilidade Especificidade hsTnI (pg/ml) (pg/ml) (%) (%) 5 150 86,84 54,41 10 150 84,21 64,71 10 100 94,74 58,82 15 100 94,74 64,71 15 50 94,74 42,65 15 100 94,74 64,71 15 150 84,21 70,59 20 150 84,21 70,59 35 150 81,58 73,53 50 150 81,58 82,53 50 100 94,74 75,00

[0482]A Figura 21 mostra a curva de ROC que correlaciona os níveis de hsTnI para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 com as pontuações de GSF. A Figura 27 mostra a curva de ROC que correlaciona os níveis de UCH-L1 para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 com as pontuações de GSF. A Figura 31 mostra a curva de ROC que correlaciona os níveis de GFAP para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 com as pontuações de GSF. A sensibilidade e especificidade de níveis de referência para todos os indivíduos com base na curva de ROC são mostradas na Tabela 17. Tabela 17Pontuação de GCS– Análise de níveis de referência de biomarcador único Biomarcador Nível de Sensibilidade Especificidade referência (%) (%) (pg/ml) 43,79 32,14 94,87 hsTnI 21,23 46,43 85,90 1,94 85,71 30,77 5895 32,14 96,15 515 82,14 50,00 UCH-L1 410 85,71 43,59 305 89,29 34,62 293 89,29 30,77

2972 32,14 98,72 52 82,14 42,31

GFAP 47 85,71 39,74 34 89,29 33,33

[0483]A Figura 29 mostra análise de ROC da combinação de níveis de hsTnI e níveis de UCH-L1 correlacionados com resultado de pontuação de GCS (branda versus moderada/severa) em amostras tomadas em um primeiro ponto no tempo 1 dentro de 24 horas após a lesão na cabeça. A Tabela 18 mostra as sensibilidades e especificidades do uso de uma combinação tanto dos níveis de corte de hsTnI como dos níveis de corte de UCH-L1 para predizer a TBI moderada/severa com base nas pontuações de GCS. Os cortes no cenário abaixo são onde o indivíduo está acima do corte para hsTnI ou UCH-L1 (ou ambos). Tabela 18Pontuação de GCS – Análise de níveis de referência de ambos os biomarcadores Níveis de Níveis de UCH- Sensibilidade Especificidade hsTnI (pg/ml) L1 (pg/ml) (%) (%) 10 400 89,29 30,77 10 550 85,71 39,74 5 550 89,29 30,77 5 500 89,29 29,49

[0484]A Figura 33 mostra análise de ROC da combinação de níveis de hsTnI e níveis de GFAP correlacionada com resultado de pontuação de GCS (branda versus moderada/severa) em amostras tomadas em um primeiro ponto no tempo 1 dentro de 24 horas após a lesão na cabeça. A Tabela 19 mostra as sensibilidades e especificidades do uso de uma combinação tanto dos níveis de corte de hsTnI como dos níveis de corte de GFAP para predizer a TBI moderada/severa com base nas pontuações de GCS. Os cortes no cenário abaixo são onde o indivíduo está acima do corte para hsTnI ou GFAP (ou ambos).

Tabela 19Pontuação de GCS – Análise de níveis de referência de ambos os biomarcadores Níveis de Níveis de GFAP Sensibilidade Especificidade hsTnI (pg/ml) (pg/ml) (%) (%) 5 70 85,71 32,05 10 70 85,71 39,74

10 100 85,71 48,72 15 100 85,71 53,85 15 150 82,14 62,82 20 100 85,71 53,85 20 150 82,14 62,82 35 100 85,71 56,41 35 150 82,14 66,67 50 150 78,57 73,08 Exemplo 6 Estudo 2 - Análise de quantidade absoluta

[0485]Amostras tomadas a partir de Indivíduos dentro de 2 horas da lesão: níveis de hsTnI foram medidos em amostras tomadas a partir de indivíduos humanos em um primeiro ponto no tempo dentro de cerca de 2 horas da suspeita de lesão e amostras tomadas a partir dos indivíduos humanos em um segundo ponto no tempo 3 a 6 horas após o primeiro ponto no tempo. A Figura 22 mostra análise de ROC de quantidade absoluta (“delta absoluto”) de resultados de hsTnI (isto é, a diferença absoluta entre níveis de hsTnI no ponto no tempo 2 e níveis de hsTnI no ponto no tempo 1) correlacionados com situação de TC (resultado de varredura por TC positiva versus negativa; AUC = 0,514). A Tabela 20 mostra as sensibilidades e especificidades do uso de níveis de corte de hsTnI para predizer um resultado positivo de varredura por TC, em que um valor menor do que o corte é previsto para ter um resultado positivo de varredura por TC.

Tabela 20Varredura por TC - Análise de delta absoluto de hsTnI Biomarcador Quantidade Sensibilidade Especificidade absoluta (pg/ml) (%) (%) 2,54 66,67 55,56 hsTnI 1,16 83,33 27,78

[0486]A Figura 23 mostra análise de ROC de quantidade absoluta (“delta absoluto”) de resultados de hsTnI (isto é, a diferença absoluta entre níveis de hsTnI no ponto no tempo 2 e níveis de hsTnI no ponto no tempo 1) correlacionados com o resultado de pontuação de GCS (branda versus moderada/severa; AUC = 0,380). A Tabela 21 mostra as sensibilidades e especificidades do uso de níveis de corte de hsTnI para predizer a TBI moderada/severa com base nas pontuações de GCS, em que um valor menor do que o corte é previsto para ter TBI moderada/severa.

Tabela 21Pontuação de GCS - Análise de delta absoluto de hsTnI Biomarcador Quantidade Sensibilidade Especificidade absoluta (pg/ml) (%) (%) 4,73 66,67 31,25 hsTnI 20,62 83,33 12,5

[0487]Amostras tomadas a partir de todos os indivíduos: A Figura 24 mostra a curva de ROC que correlaciona os níveis de hsTnI para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 com o resultado de varredura por TC. A sensibilidade e especificidade de quantidades absolutas (ou alteração entre o ponto no tempo 1 e o ponto no tempo 2) em níveis de hsTnI para todos os indivíduos com base na curva de ROC são mostradas na Tabela 22.

Tabela 22 Quantidade absoluta Sensibilidade (%) Especificidade (pg/ml) (%) 16,050 88,24 19,36 10,755 82,35 19,36 0,720 35,29 70,97 0,389 29,41 90,32

[0488]A Figura 25 mostra uma curva de ROC que correlaciona a quantidade absoluta de alteração em níveis de hsTnI para todos os indivíduos no ponto no tempo 1 e ponto no tempo 2 com pontuações de GCS (branda versus moderada/severa). A sensibilidade e especificidade das quantidades absolutas (ou alteração entre o ponto no tempo 1 e o ponto no tempo 2) em níveis de hsTnI para todos os indivíduos com base na curva de ROC são mostradas na Tabela 23.

Tabela 23 Quantidade absoluta Sensibilidade (%) Especificidade (%) (pg/ml) 3,33 45,46 32,43 5,80 72,73 21,62 17,17 81,82 13,51

[0489]É compreendido que a descrição detalhada antecedente e exemplos anexos são meramente ilustrativos e não devem ser tomados como limitações sob o escopo da revelação, que é definido apenas pelas reivindicações anexas e seus equivalentes.

[0490]Diversas alterações e modificações para as modalidades reveladas ficarão evidentes aos versados na técnica. Tais alterações e modificações, incluindo, sem limitação, aquelas relacionadas às estruturas químicas, substituintes, derivados, intermediários, sínteses, composições, formulações ou métodos de uso da revelação, podem ser feitas sem que se desvie da essência e escopo da mesma.

[0491]Por razões de completeza, diversos aspectos da revelação são apresentados nas seguintes cláusulas numeradas:

[0492]Cláusula 1. Um método para auxiliar no diagnóstico e avaliação de lesão traumática cerebral branda em um indivíduo humano, sendo que método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas; e b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0493]Cláusula 2. O método, da cláusula 1, em que o indivíduo recebeu uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0494]Cláusula 3. O método da cláusula 2, em que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0495]Cláusula 4. O método da cláusula 3, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que têm uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa.

[0496]Cláusula 5. O método da cláusula 4, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12.

[0497]Cláusula 6. O método da cláusula 2, em que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0498]Cláusula 7. O método da cláusula 6, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que tem lesão traumática cerebral branda.

[0499]Cláusula 8. O método da cláusula 7, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15.

[0500]Cláusula 9. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 8, em que o nível de referência para cTnI é de cerca de 5 pg/ml, cerca de 10 pg/ml, cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml, cerca de 35 pg/ml ou cerca de 50 pg/ml.

[0501]Cláusula 10. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 9, em que o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 400 pg/ml, cerca de 500 pg/ml ou cerca de 550 pg/ml.

[0502]Cláusula 11. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 9, em que o nível de referência para GFAP é de cerca de 70 pg/ml, cerca de 100 pg/ml ou cerca de 150 pg/ml.

[0503]Cláusula 12. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 11, em que o nível de referência é (a) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 85% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 30% e 100%; (b) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade de pelo menos cerca de 87,5% e uma especificidade de pelo menos cerca de 31%; (c) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml; (d) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml; ou entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml.

[0504]Cláusula 13. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 12, em que a amostra é tomada dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da suspeita de lesão na cabeça.

[0505]Cláusula 14. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 13, que compreende adicionalmente tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[0506]Cláusula 15. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 14, que compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo lesão traumática cerebral branda.

[0507]Cláusula 16. Um método para auxiliar na determinação de se deve realizar uma varredura por tomografia computadorizada de cabeça (TC) em um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido lesão na cabeça, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce na amostra, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas; e b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0508]Cláusula 17. O método da cláusula 16, em que a amostra é tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da suspeita de lesão na cabeça.

[0509]Cláusula 18. O método da cláusula 16 ou 17, em que o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0510]Cláusula 19. O método da cláusula 18, em que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC.

[0511]Cláusula 20. O método de qualquer uma das cláusulas 16 a 19, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com tomografia computadorizada de cabeça positiva.

[0512]Cláusula 21. O método da cláusula 20, em que os níveis de referência são correlacionados com indivíduos de controle que não sofreram uma lesão de cabeça.

[0513]Cláusula 22. O método de qualquer uma das cláusulas 16 a 21, em que o nível de referência para cTnI é de cerca de 5 pg/ml, cerca de 10 pg/ml, cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml, cerca de 35 pg/ml ou cerca de 50 pg/ml.

[0514]Cláusula 23. O método de qualquer uma das cláusulas 16 a 22, em que o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 400 pg/ml, cerca de 450 pg/ml ou cerca de 550 pg/ml.

[0515]Cláusula 24. O método de qualquer uma das cláusulas 16 a 22, em que o nível de referência para GFAP é de cerca de 50 pg/ml, cerca de 100 pg/ml ou cerca de 150.

[0516]Cláusula 25. O método de qualquer uma das cláusulas 16 a 24, em que o nível de referência é (a) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 65% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 29% e 100%; (b) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade de pelo menos cerca de 85% e uma especificidade de pelo menos cerca de 33%; (c) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml; (d) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml; ou (e) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de

1.000 pg/ml.

[0517]Cláusula 26. Um método para auxiliar no diagnóstico e na avaliação de um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma lesão na cabeça, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas; e b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0518]Cláusula 27. O método, da cláusula 26, em que o indivíduo recebeu uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0519]Cláusula 28. O método da cláusula 27, em que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0520]Cláusula 29. O método da cláusula 28, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que têm uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa.

[0521]Cláusula 30. O método da cláusula 29, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12.

[0522]Cláusula 31. O método da cláusula 27, em que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0523]Cláusula 32. O método da cláusula 31, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que tem lesão traumática cerebral branda.

[0524]Cláusula 33. O método da cláusula 32, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15.

[0525]Cláusula 34. O método de qualquer uma das cláusulas 26 a 33, em que a amostra é tomada dentro de cerca de 5 minutos, dentro de cerca de 10 minutos, dentro de cerca de 12 minutos, dentro de cerca de 15 minutos, dentro de cerca de 20 minutos, dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 60 minutos ou dentro de cerca de 90 minutos após uma suspeita de lesão na cabeça.

[0526]Cláusula 35. O método de qualquer uma das cláusulas 26 a 34, que compreende adicionalmente tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[0527]Cláusula 36. O método de qualquer uma das cláusulas 26 a 35, que compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo lesão traumática cerebral branda.

[0528]Cláusula 37. Um método para auxiliar na determinação de se deve realizar uma varredura por tomografia computadorizada de cabeça (TC) em um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma lesão na cabeça, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce na amostra, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas; e b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0529]Cláusula 38. O método da cláusula 37, em que o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0530]Cláusula 39. O método da cláusula 38, em que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC.

[0531]Cláusula 40. O método de qualquer uma das cláusulas 37 a 39, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com tomografia computadorizada de cabeça positiva.

[0532]Cláusula 41. O método da cláusula 40, em que os níveis de referência são correlacionados com indivíduos de controle que não sofreram uma lesão na cabeça.

[0533]Cláusula 42. O método de qualquer uma das cláusulas 37 a 41, em que a amostra é tomada dentro de cerca de 5 minutos, dentro de cerca de 10 minutos, dentro de cerca de 12 minutos, dentro de cerca de 15 minutos, dentro de cerca de 20 minutos, dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 60 minutos ou dentro de cerca de 90 minutos após uma suspeita de lesão na cabeça.

[0534]Cláusula 43. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 42, em que a medição do nível de cTnI é feita por meio de um imunoensaio ou ensaio de química clínica.

[0535]Cláusula 44. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 43, em que a medição do nível de cTnI compreende: A. colocar a amostra, simultânea ou sequencialmente, em qualquer ordem em contato com: (1) um anticorpo de captura de cTnI, que se liga a um epítopo em cTnI ou fragmento de cTnI para formar um complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI e (2) um anticorpo de detecção de cTnI que inclui uma identificação detectável e se liga a um epítopo em cTnI que não é ligado pelo anticorpo de captura de cTnI, para formar um complexo de antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI, de modo que um complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI seja formado e B. medir a quantidade ou concentração de cTnI na amostra com base no sinal gerado pela identificação detectável no complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI.

[0536]Cláusula 45. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 44, em que a amostra é selecionada a partir do grupo que consiste em uma amostra de sangue total, uma amostra de soro, uma amostra de líquido cefalorraquidiano e uma amostra de plasma.

[0537]Cláusula 46. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 45, em que a amostra é obtida depois que o indivíduo sofreu uma lesão na cabeça causada por agitação física, impacto brusco por uma força mecânica externa ou outra força que resulta em um trauma de cabeça aberto ou fechado, uma ou mais quedas, explosões ou estouros ou outros tipos de trauma por força brusca.

[0538]Cláusula 47. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 45, em que a amostra é obtida depois que o indivíduo ingeriu ou foi exposto a um produto químico, toxina ou combinação de um produto químico e toxina.

[0539]Cláusula 48. O método da cláusula 47, em que o produto químico ou toxina é fogo, mofo, amianto, um pesticida, um inseticida, um solvente orgânico, uma tinta, uma cola, um gás, um metal orgânico, um fármaco de abuso ou uma ou mais combinações dos mesmos.

[0540]Cláusula 49. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 45, em que a amostra é obtida a partir de um indivíduo que sofre de uma doença autoimune, um distúrbio metabólico, um tumor cerebral, hipoxia, um vírus, meningite, hidrocefalia ou combinações dos mesmos.

[0541]Cláusula 50. O método de qualquer uma das cláusulas 1 a 49, em que o dito método pode ser realizado em qualquer indivíduo sem considerar fatores selecionados a partir do grupo que consiste na condição clínica do indivíduo, nos valores de laboratório do indivíduo, na classificação do indivíduo como sofrendo de lesão traumática cerebral branda, moderada ou severa ou moderada a severa, na exibição do indivíduo de níveis baixos ou altos de cTnI e no tempo de qualquer evento em que o dito indivíduo possa ter sofrido uma lesão na cabeça.

[0542]Cláusula 51. Um método para auxiliar no diagnóstico e na avaliação de lesão traumática cerebral branda em um indivíduo humano, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP) ou uma combinação das mesmas; e b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0543]Cláusula 52. O método, da cláusula 51, em que o indivíduo recebeu uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0544]Cláusula 53. O método da cláusula 52, em que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0545]Cláusula 54. O método da cláusula 53, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que têm uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa.

[0546]Cláusula 55. O método da cláusula 54, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12.

[0547]Cláusula 56. O método da cláusula 52, em que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0548]Cláusula 57. O método da cláusula 56, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que tem lesão traumática cerebral branda.

[0549]Cláusula 58. O método da cláusula 57, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15.

[0550]Cláusula 59. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 58, em que o nível de referência para cTnI é de cerca de 5 pg/ml, cerca de 10 pg/ml, cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml, cerca de 35 pg/ml ou cerca de 50 pg/ml.

[0551]Cláusula 60. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 59, em que o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 400 pg/ml, cerca de 500 pg/ml ou cerca de 550 pg/ml.

[0552]Cláusula 61. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 60, em que o nível de referência para GFAP é de cerca de 70 pg/ml, cerca de 100 pg/ml ou cerca de 150 pg/ml.

[0553]Cláusula 62. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 61, em que o nível de referência é (a) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 85% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 30% e 100%; (b) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade de pelo menos cerca de 87,5% e uma especificidade de pelo menos cerca de 31%; (c) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml; (d) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml; ou entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml.

[0554]Cláusula 63. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 62, em que a amostra é tomada dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

[0555]Cláusula 64. Um método para auxiliar na determinação de se deve realizar uma varredura por tomografia computadorizada de cabeça (TC) em um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma lesão na cabeça, sendo que o método compreende:

a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após a lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce na amostra, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; e b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0556]Cláusula 65. O método da cláusula 64, em que a amostra é tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da suspeita de lesão na cabeça.

[0557]Cláusula 66. O método da cláusula 64 ou 65, em que o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0558]Cláusula 67. O método da cláusula 66, em que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC.

[0559]Cláusula 68. O método de qualquer uma das cláusulas 64 a 67, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com tomografia computadorizada de cabeça positiva.

[0560]Cláusula 69. O método da cláusula 68, em que os níveis de referência são correlacionados com indivíduos de controle que não sofreram uma lesão de cabeça.

[0561]Cláusula 70. O método de qualquer uma das cláusulas 64 a 69, em que o nível de referência para cTnI é de cerca de 5 pg/ml, cerca de 10 pg/ml, cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml, cerca de 35 pg/ml ou cerca de 50 pg/ml.

[0562]Cláusula 71. O método de qualquer uma das cláusulas 64 a 70, em que o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 400 pg/ml, cerca de 450 pg/ml ou cerca de 550 pg/ml.

[0563]Cláusula 72. O método de qualquer uma das cláusulas 64 a 71, em que o nível de referência para GFAP é de cerca de 50 pg/ml, cerca de 100 pg/ml ou cerca de 150.

[0564]Cláusula 73. O método de qualquer uma das cláusulas 64 a 71, em que o nível de referência é (a) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 65% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 29% e 100%; (b) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade de pelo menos cerca de 85% e uma especificidade de pelo menos cerca de 33%; (c) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml; (d) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml; ou (e) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de

1.000 pg/ml.

[0565]Cláusula 74. Um método para auxiliar no diagnóstico e na avaliação de lesão traumática cerebral branda em um indivíduo humano, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP ou uma combinação das mesmas; e b) determinar se o indivíduo sofreu uma TBI branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0566]Cláusula 75. O método, da cláusula 74, em que o indivíduo recebeu uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0567]Cláusula 76. O método da cláusula 75, em que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0568]Cláusula 77. O método da cláusula 76, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que têm lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa.

[0569]Cláusula 78. O método da cláusula 77, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12.

[0570]Cláusula 79. O método da cláusula 75, em que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0571]Cláusula 80. O método da cláusula 79, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que tem lesão traumática cerebral branda.

[0572]Cláusula 81. O método da cláusula 30, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15.

[0573]Cláusula 82. Um método para auxiliar na determinação de se deve realizar uma varredura por tomografia computadorizada de cabeça (TC) em um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma lesão na cabeça, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce na amostra, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas; e b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0574]Cláusula 83. O método da cláusula 82, em que a amostra é tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

[0575]Cláusula 84. O método da cláusula 82 ou 83, em que o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0576]Cláusula 85. O método da cláusula 84, em que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC.

[0577]Cláusula 86. O método de qualquer uma das cláusulas 82 a 85, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com tomografia computadorizada de cabeça positiva.

[0578]Cláusula 87. O método da cláusula 86, em que os níveis de referência são correlacionados com indivíduos de controle que não sofreram uma lesão de cabeça.

[0579]Cláusula 88. Um método para tratar uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa em um indivíduo humano, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma lesão real na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda ou a moderada, severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce; e c) tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[0580]Cláusula 89. O método da cláusula 88, que compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa.

[0581]Cláusula 90. Um método para tratar uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa em um indivíduo humano, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce; e c) tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[0582]Cláusula 91. O método da cláusula 90, que compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa.

[0583]Cláusula 92. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 91, que compreende adicionalmente tratar o indivíduo com pelo menos uma terapia cardioprotetora.

[0584]Cláusula 93. O método da cláusula 92, em que a pelo menos uma terapia cardioprotetora compreende um betabloqueador, um diurético, um inibidor de enzima conversora da angiotensina (ACE), um bloqueador do canal de cálcio, uma terapia de redução de lipídio, uma estatina, um nitrato, um antiplaquetário, um agente anticoagulante, um agente anticoagulação ou combinações dos mesmos.

[0585]Cláusula 94. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 93, em que a medição do nível de cTnI é feita por meio de um imunoensaio ou ensaio de química clínica.

[0586]Cláusula 95. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 94, em que a medição do nível de cTnI compreende: A colocar a amostra, simultânea ou sequencialmente, em qualquer ordem em contato com: (1) um anticorpo de captura de cTnI, que se liga a um epítopo em cTnI ou fragmento de cTnI para formar um complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI, e (2) um anticorpo de detecção de cTnI que inclui uma identificação detectável e se liga a um epítopo em cTnI que não é ligado pelo anticorpo de captura de cTnI, para formar um complexo de antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI, de modo que um complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI- anticorpo de detecção de cTnI seja formado, e B medir a quantidade ou concentração de cTnI na amostra com base no sinal gerado pela identificação detectável no complexo de anticorpo de captura de cTnI- antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI.

[0587]Cláusula 96. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 95, em que a amostra é selecionada a partir do grupo que consiste em uma amostra de sangue total, uma amostra de soro, uma amostra de líquido cefalorraquidiano e uma amostra de plasma.

[0588]Cláusula 97. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 96, em que a amostra é obtida depois que o indivíduo sofreu uma lesão na cabeça causada por agitação física, impacto brusco por uma força mecânica externa ou outra força que resulta em um trauma de cabeça aberto ou fechado, uma ou mais quedas, explosões ou estouros ou outros tipos de trauma por força brusca.

[0589]Cláusula 98. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 97, em que a amostra é obtida depois que o indivíduo ingeriu ou foi exposto a um produto químico, toxina ou combinação de um produto químico e toxina.

[0590]Cláusula 99. O método da cláusula 98, em que o produto químico ou toxina é fogo, mofo, amianto, um pesticida, um inseticida, um solvente orgânico, uma tinta, uma cola, um gás, um metal orgânico, um fármaco de abuso ou uma ou mais combinações dos mesmos.

[0591]Cláusula 100. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 99, em que a amostra é obtida a partir de um indivíduo que sofre de uma doença autoimune, um distúrbio metabólico, um tumor cerebral, hipoxia, um vírus, meningite, hidrocefalia ou combinações dos mesmos.

[0592]Cláusula 101. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 100, em que o dito método pode ser realizado em qualquer indivíduo sem considerar fatores selecionados a partir do grupo que consiste na condição clínica do indivíduo, nos valores de laboratório do indivíduo, na classificação do indivíduo como sofrendo de lesão traumática cerebral branda, moderada ou severa ou moderada a severa, na exibição do indivíduo de níveis baixos ou altos de cTnI e no tempo de qualquer evento em que o dito indivíduo possa ter sofrido uma lesão na cabeça.

[0593]Cláusula 102. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 101, em que a amostra é uma amostra de sangue total.

[0594]Cláusula 103. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 101, em que a amostra é uma amostra de soro.

[0595]Cláusula 104. O método de qualquer uma das cláusulas 51 a 101, em que a amostra é uma amostra de plasma.

[0596]Cláusula 105. O método de qualquer uma das cláusulas 102 a 104, em que o ensaio é um imunoensaio.

[0597]Cláusula 106. O método de qualquer uma das cláusulas 102 a 104, em que o ensaio é um ensaio de química clínica.

[0598]Cláusula 107. O método de qualquer uma das cláusulas 102 a 104, em que o ensaio é um ensaio de detecção de molécula única.

[0599]Cláusula 108. Um método para avaliar um indivíduo humano acerca da lesão traumática cerebral branda em um indivíduo humano, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma suspeita de lesão real na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP) ou uma combinação das mesmas; e b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0600]Cláusula 109. O método, da cláusula 108, em que o indivíduo recebeu uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0601]Cláusula 110. O método da cláusula 109, em que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0602]Cláusula 111. O método da cláusula 110, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que têm uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa.

[0603]Cláusula 112. O método da cláusula 111, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12.

[0604]Cláusula 113. O método da cláusula 108, em que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0605]Cláusula 114. O método da cláusula 113, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que tem lesão traumática cerebral branda.

[0606]Cláusula 115. O método da cláusula 114, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15.

[0607]Cláusula 116. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 115, em que o nível de referência para cTnI é de cerca de 5 pg/ml, cerca de 10 pg/ml, cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml, cerca de 35 pg/ml ou cerca de 50 pg/ml.

[0608]Cláusula 117. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 116, em que o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 400 pg/ml, cerca de 500 pg/ml ou cerca de 550 pg/ml.

[0609]Cláusula 118. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 117, em que o nível de referência para GFAP é de cerca de 70 pg/ml, cerca de 100 pg/ml ou cerca de 150 pg/ml.

[0610]Cláusula 119. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 118, em que o nível de referência é (a) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 85% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 30% e 100%; (b) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade de pelo menos cerca de 87,5% e uma especificidade de pelo menos cerca de 31%; (c) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml; (d) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml; ou entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml.

[0611]Cláusula 120. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 119, em que a amostra é tomada dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da lesão ou suspeita de lesão na cabeça.

[0612]Cláusula 121. Um método para determinar se deve realizar uma varredura por tomografia computadorizada de cabeça (TC) em um indivíduo humano que tem uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma lesão ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce na amostra, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP ou uma combinação das mesmas; e b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0613]Cláusula 122. O método da cláusula 121, em que a amostra é tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

[0614]Cláusula 123. O método da cláusula 121 ou 122, em que o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0615]Cláusula 124. O método da cláusula 123, em que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC.

[0616]Cláusula 125. O método de qualquer uma das cláusulas 121 a 124, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com tomografia computadorizada de cabeça positiva.

[0617]Cláusula 126. O método da cláusula 125, em que os níveis de referência são correlacionados com indivíduos de controle que não sofreram uma lesão de cabeça.

[0618]Cláusula 127. O método de qualquer uma das cláusulas 121 a 126, em que o nível de referência para cTnI é de cerca de 5 pg/ml, cerca de 10 pg/ml, cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml, cerca de 35 pg/ml ou cerca de 50 pg/ml.

[0619]Cláusula 128. O método de qualquer uma das cláusulas 121 a 127, em que o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 400 pg/ml, cerca de 450 pg/ml ou cerca de 550 pg/ml.

[0620]Cláusula 129. O método de qualquer uma das cláusulas 121 a 128, em que o nível de referência para GFAP é de cerca de 50 pg/ml, cerca de 100 pg/ml ou cerca de 150.

[0621]Cláusula 130. O método de qualquer uma das cláusulas 121 a 129, em que o nível de referência é (a) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 65% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 29% e 100%; (b) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade de pelo menos cerca de 85% e uma especificidade de pelo menos cerca de 33%; (c) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml; (d) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml; ou (e) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de

1.000 pg/ml.

[0622]Cláusula 131. Um método para avaliar um indivíduo humano acerca da lesão traumática cerebral branda em um indivíduo humano, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP ou uma combinação das mesmas; e b) determinar se o indivíduo sofreu uma TBI branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0623]Cláusula 132. O método, da cláusula 131, em que o indivíduo recebeu uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0624]Cláusula 133. O método da cláusula 132, em que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0625]Cláusula 134. O método da cláusula 133, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que têm lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa.

[0626]Cláusula 135. O método da cláusula 134, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12.

[0627]Cláusula 136. O método da cláusula 135, em que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

[0628]Cláusula 137. O método da cláusula 136, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que tem lesão traumática cerebral branda.

[0629]Cláusula 138. O método da cláusula 137, em que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15.

[0630]Cláusula 139. A método para determinar se deve realizar uma varredura por tomografia computadorizada de cabeça (TC) em um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma lesão na cabeça, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce na amostra, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP), ou uma combinação das mesmas; e b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

[0631]Cláusula 140. O método da cláusula 139, em que a amostra é tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

[0632]Cláusula 141. O método da cláusula 139 ou 140, em que o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado.

[0633]Cláusula 142. O método da cláusula 141, em que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC.

[0634]Cláusula 143. O método de qualquer uma das cláusulas 139 a 142, em que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com a tomografia computadorizada de cabeça positiva. Cláusula 144. O método da cláusula 143, em que os níveis de referência são correlacionados com indivíduos de controle que não sofreram uma lesão de cabeça.

[0635]Cláusula 145. Um método para tratar uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa em um indivíduo humano, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce; e c) tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[0636]Cláusula 146. O método da cláusula 145, que compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa.

[0637]Cláusula 147. Um método para tratar uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa em um indivíduo humano, sendo que o método compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce; e c) tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral.

[0638]Cláusula 148. O método da cláusula 147, que compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa.

[0639]Cláusula 149. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 148, que compreende adicionalmente tratar o indivíduo com pelo menos uma terapia cardioprotetora.

[0640]Cláusula 150. O método da cláusula 149, em que a pelo menos uma terapia cardioprotetora compreende um betabloqueador, um diurético, um inibidor de enzima conversora da angiotensina (ACE), um bloqueador do canal de cálcio, uma terapia de redução de lipídio, uma estatina, um nitrato, um antiplaquetário, um agente anticoagulante, um agente anticoagulação ou combinações dos mesmos.

[0641]Cláusula 151. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 150, em que a medição do nível de cTnI é feita por meio de um imunoensaio ou ensaio de química clínica.

[0642]Cláusula 152. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 151, em que a medição do nível de cTnI compreende: Acolocar a amostra, simultânea ou sequencialmente, em qualquer ordem em contato com: (1) um anticorpo de captura de cTnI, que se liga a um epítopo em cTnI ou fragmento de cTnI para formar um complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI, e

(2) um anticorpo de detecção de cTnI que inclui uma identificação detectável e se liga a um epítopo em cTnI que não é ligado pelo anticorpo de captura de cTnI, para formar um complexo de antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI, de modo que um complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI- anticorpo de detecção de cTnI seja formado, e Bmedir a quantidade ou concentração de cTnI na amostra com base no sinal gerado pela identificação detectável no complexo de anticorpo de captura de cTnI- antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI.

[0643]Cláusula 153. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 152, em que a amostra é selecionada a partir do grupo que consiste em uma amostra de sangue total, uma amostra de soro, uma amostra de líquido cefalorraquidiano e uma amostra de plasma.

[0644]Cláusula 154. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 153, em que a amostra é obtida depois que o indivíduo sofreu uma lesão na cabeça causada por agitação física, impacto brusco por uma força mecânica externa ou outra força que resulta em um trauma de cabeça aberto ou fechado, uma ou mais quedas, explosões ou estouros ou outros tipos de trauma por força brusca.

[0645]Cláusula 155. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 153, em que a amostra é obtida depois que o indivíduo ingeriu ou foi exposto a um produto químico, toxina ou combinação de um produto químico e toxina.

[0646]Cláusula 156. O método da cláusula 155, em que o produto químico ou toxina é fogo, mofo, amianto, um pesticida, um inseticida, um solvente orgânico, uma tinta, uma cola, um gás, um metal orgânico, um fármaco de abuso ou uma ou mais combinações dos mesmos.

[0647]Cláusula 157. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 156, em que a amostra é obtida a partir de um indivíduo que sofre de uma doença autoimune, um distúrbio metabólico, um tumor cerebral, hipoxia, um vírus, meningite, hidrocefalia ou combinações dos mesmos.

[0648]Cláusula 158. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 157, em que o dito método pode ser realizado em qualquer indivíduo sem considerar fatores selecionados a partir do grupo que consiste na condição clínica do indivíduo, nos valores de laboratório do indivíduo, na classificação do indivíduo como sofrendo de lesão traumática cerebral branda, moderada ou severa ou moderada a severa, na exibição do indivíduo de níveis baixos ou altos de cTnI e no tempo de qualquer evento em que o dito indivíduo possa ter sofrido uma lesão na cabeça.

[0649]Cláusula 159. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 158, em que a amostra é uma amostra de sangue total.

[0650]Cláusula 160. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 158, em que a amostra é uma amostra de soro.

[0651]Cláusula 161. O método de qualquer uma das cláusulas 108 a 158, em que a amostra é uma amostra de plasma.

[0652]Cláusula 162. O método de qualquer uma das cláusulas 159 a 161, em que o ensaio é um imunoensaio.

[0653]Cláusula 163. O método de qualquer uma das cláusulas 159 a 161, em que o ensaio é um ensaio de química clínica.

[0654]Cláusula 164. O método de qualquer uma das cláusulas 159 a 161, em que o ensaio é um ensaio de detecção de molécula única.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para avaliar um indivíduo humano acerca da lesão traumática cerebral branda em um indivíduo humano, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma suspeita de lesão real na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP) ou uma combinação das mesmas; e b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo recebeu uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o ensaio ser realizado.

3. Método, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que têm uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa.

5. Método, de acordo com a reivindicação 4, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12.

6. Método, de acordo com a reivindicação 2, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

7. Método, de acordo com a reivindicação 6, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que tem lesão traumática cerebral branda.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o nível de referência para cTnI é de cerca de 5 pg/ml, cerca de 10 pg/ml, cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml, cerca de 35 pg/ml ou cerca de 50 pg/ml.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, CARACTERIZADO pelo fato de que o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 400 pg/ml, cerca de 500 pg/ml ou cerca de 550 pg/ml.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, CARACTERIZADO pelo fato de que o nível de referência para GFAP é de cerca de 70 pg/ml, cerca de 100 pg/ml ou cerca de 150 pg/ml.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o nível de referência é (a) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 85% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 30% e 100%; (b) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade de pelo menos cerca de 87,5% e uma especificidade de pelo menos cerca de 31%; (c) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml; (d) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml; ou entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, CARACTERIZADO pelo fato de que a amostra é tomada dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da lesão ou suspeita de lesão na cabeça.

14. Método para determinar se deve realizar uma varredura por tomografia computadorizada de cabeça (TC) em um indivíduo humano que tem uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma lesão ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce na amostra, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP ou uma combinação das mesmas; e b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14, CARACTERIZADO pelo fato de que a amostra é tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da lesão ou suspeita de lesão na cabeça.

16. Método, de acordo com a reivindicação 14 ou 15, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC.

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 17, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com tomografia computadorizada de cabeça positiva.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência são correlacionados com indivíduos de controle que não sofreram uma lesão de cabeça.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 19, CARACTERIZADO pelo fato de que o nível de referência para cTnI é de cerca de 5 pg/ml, cerca de 10 pg/ml, cerca de 15 pg/ml, cerca de 20 pg/ml, cerca de 35 pg/ml ou cerca de 50 pg/ml.

21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 20, CARACTERIZADO pelo fato de que o nível de referência para UCH-L1 é de cerca de 400 pg/ml, cerca de 450 pg/ml ou cerca de 550 pg/ml.

22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o nível de referência para GFAP é de cerca de 50 pg/ml, cerca de 100 pg/ml ou cerca de 150.

23. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 14 a 21, CARACTERIZADO pelo fato de que o nível de referência é (a) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade entre pelo menos cerca de 65% e 100% e uma especificidade entre pelo menos cerca de 29% e 100%; (b) determinado por um ensaio que tem uma sensibilidade de pelo menos cerca de 85% e uma especificidade de pelo menos cerca de 33%; (c) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 100 pg/ml; (d) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 500 pg/ml; ou (e) entre pelo menos cerca de 1 pg/ml e cerca de 1.000 pg/ml.

24. Método para avaliar um indivíduo humano acerca da lesão traumática cerebral branda em um indivíduo humano, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP ou uma combinação das mesmas; e b) determinar se o indivíduo sofreu uma TBI branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

25. Método, de acordo com a reivindicação 24, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo recebeu uma pontuação da escala de coma de Glasgow antes ou depois de o ensaio ser realizado.

26. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

27. Método, de acordo com a reivindicação 26, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que têm lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa.

28. Método, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 3 a 12.

29. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é suspeito de ter lesão traumática cerebral branda com base na pontuação da escala de coma de Glasgow.

30. Método, de acordo com a reivindicação 29, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com indivíduos que tem lesão traumática cerebral branda.

31. Método, de acordo com a reivindicação 30, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência são correlacionados com uma pontuação da escala de coma de Glasgow de 13 a 15.

32. Método para determinar se deve realizar uma varredura por tomografia computadorizada de cabeça (TC) em um indivíduo humano que sofreu ou pode ter sofrido uma lesão na cabeça, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de troponina cardíaca I (cTnI) e um nível de um biomarcador precoce na amostra, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende ubiquitina carbóxi-terminal hidrolase L1 (UCH-L1), proteína glial fibrilar ácida (GFAP) ou uma combinação das mesmas; e b) realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce e não realizar uma varredura por TC no indivíduo quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce.

33. Método, de acordo com a reivindicação 32, CARACTERIZADO pelo fato de que a amostra é tomada a partir do indivíduo dentro de cerca de 30 minutos, dentro de cerca de 1 hora, dentro de cerca de 2 horas, dentro de cerca de 3 horas, dentro de cerca de 4 horas, dentro de cerca de 5 horas, dentro de cerca de 6 horas, dentro de cerca de 7 horas, dentro de cerca de 8 horas, dentro de cerca de 9 horas, dentro de cerca de 10 horas, dentro de cerca de 11 horas, dentro de cerca de 12 horas, dentro de cerca de 13 horas, dentro de cerca de 14 horas, dentro de cerca de 15 horas, dentro de cerca de 16 horas, dentro de cerca de 17 horas, dentro de cerca de 18 horas, dentro de cerca de 19 horas, dentro de cerca de 20 horas, dentro de cerca de 21 horas, dentro de cerca de 22 horas, dentro de cerca de 23 horas ou dentro de cerca de 24 horas da lesão real ou suspeita de lesão na cabeça.

34. Método, de acordo com a reivindicação 32 ou 33, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo recebeu uma varredura por TC antes ou depois de o ensaio ser realizado.

35. Método, de acordo com a reivindicação 34, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo é suspeito de ter uma lesão traumática cerebral com base na varredura por TC.

36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 32 a 35, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência da cTnI e do biomarcador precoce são correlacionados com tomografia computadorizada de cabeça positiva.

37. Método, de acordo com a reivindicação 36, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de referência são correlacionados com indivíduos de controle que não sofreram uma lesão de cabeça.

38. Método para tratar uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa em um indivíduo humano, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 24 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce; e c) tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral.

39. Método, de acordo com a reivindicação 38, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa.

40. Método para tratar uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa em um indivíduo humano, sendo que o método é CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: a) realizar um ensaio em uma amostra obtida a partir do indivíduo dentro de cerca de 2 horas após uma lesão real ou suspeita de lesão na cabeça para medir ou detectar um nível de cTnI e um nível de um biomarcador precoce, em que a amostra é uma amostra biológica e o biomarcador precoce compreende UCH-L1, GFAP, ou uma combinação das mesmas; b) determinar se o indivíduo sofreu uma lesão traumática cerebral (TBI) branda, moderada ou severa ou moderada a severa, em que o indivíduo é determinado como tendo (1) uma lesão traumática cerebral moderada, severa ou moderada a severa quando o nível de cTnI na amostra é maior do que um nível de referência de cTnI e o nível do biomarcador precoce na amostra é maior do que um nível de referência do biomarcador precoce ou (2) uma lesão traumática cerebral branda quando o nível de cTnI na amostra é menor do que um nível de referência de cTnI e/ou o nível do biomarcador precoce na amostra é menor do que um nível de referência do biomarcador precoce; e c) tratar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa com um tratamento de lesão traumática cerebral.

41. Método, de acordo com a reivindicação 40, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende adicionalmente monitorar o indivíduo avaliado como tendo uma lesão traumática cerebral branda, moderada, severa ou moderada a severa.

42. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende adicionalmente tratar o indivíduo com pelo menos uma terapia cardioprotetora.

43. Método, de acordo com a reivindicação 42, CARACTERIZADO pelo fato de que a pelo menos uma terapia cardioprotetora compreende um betabloqueador, um diurético, um inibidor de enzima conversora da angiotensina (ACE), um bloqueador do canal de cálcio, uma terapia de redução de lipídio, uma estatina, um nitrato, um antiplaquetário, um agente anticoagulante, um agente anticoagulação ou combinações dos mesmos.

44. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, CARACTERIZADO pelo fato de que a medição do nível de cTnI é feita por meio de um imunoensaio ou ensaio químico clínico.

45. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 44, CARACTERIZADO pelo fato de que a medição do nível de cTnI compreende: Ccolocar a amostra, simultânea ou sequencialmente, em qualquer ordem em contato com: (1) um anticorpo de captura de cTnI, que se liga a um epítopo em cTnI ou fragmento de cTnI para formar um complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI, e (2) um anticorpo de detecção de cTnI que inclui uma identificação detectável e se liga a um epítopo em cTnI que não é ligado pelo anticorpo de captura de cTnI, para formar um complexo de antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI, de modo que um complexo de anticorpo de captura de cTnI-antígeno de cTnI- anticorpo de detecção de cTnI seja formado, e Dmedir a quantidade ou concentração de cTnI na amostra com base no sinal gerado pela identificação detectável no complexo de anticorpo de captura de cTnI- antígeno de cTnI-anticorpo de detecção de cTnI.

46. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 45, CARACTERIZADO pelo fato de que a amostra é selecionada a partir do grupo que consiste em uma amostra de sangue total, uma amostra de soro, uma amostra de líquido cefalorraquidiano e uma amostra de plasma.

47. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, CARACTERIZADO pelo fato de que a amostra é obtida depois que o indivíduo sofreu uma lesão na cabeça causada por agitação física, impacto brusco por uma força mecânica externa ou outra força que resulta em um trauma de cabeça aberto ou fechado, uma ou mais quedas, explosões ou estouros ou outros tipos de trauma por força brusca.

48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 47, CARACTERIZADO pelo fato de que a amostra é obtida depois que o indivíduo ingeriu ou foi exposto a um produto químico, toxina ou combinação de um produto químico e toxina.

49. Método, de acordo com a reivindicação 48, CARACTERIZADO pelo fato de que o produto químico ou toxina é fogo, mofo, amianto, um pesticida, um inseticida, um solvente orgânico, uma tinta, uma cola, um gás, um metal orgânico, um fármaco de abuso ou uma ou mais combinações dos mesmos.

50. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, CARACTERIZADO pelo fato de que a amostra é obtida a partir de um indivíduo que sofre de uma doença autoimune, um distúrbio metabólico, um tumor cerebral, hipoxia, um vírus, meningite, hidrocefalia ou combinações dos mesmos.

51. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 50, CARACTERIZADO pelo fato de que o dito método pode ser realizado em qualquer indivíduo sem considerar fatores selecionados a partir do grupo que consiste na condição clínica do indivíduo, nos valores de laboratório do indivíduo, na classificação do indivíduo como sofrendo de lesão traumática cerebral branda, moderada ou severa ou moderada a severa, na exibição do indivíduo de níveis baixos ou altos de cTnI e no tempo de qualquer evento em que o dito indivíduo possa ter sofrido uma lesão na cabeça.

52. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 51, CARACTERIZADO pelo fato de que a amostra é uma amostra de sangue total.

53. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 51, CARACTERIZADO pelo fato de que a amostra é uma amostra de soro.

54. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 51, CARACTERIZADO pelo fato de que a amostra é uma amostra de plasma.

55. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 54, CARACTERIZADO pelo fato de que o ensaio é um imunoensaio.

56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 54, CARACTERIZADO pelo fato de que o ensaio é um ensaio químico clínico.

57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 54, CARACTERIZADO pelo fato de que o ensaio é um ensaio de detecção de molécula única.