BR112019024195A2 - Composto e composição farmacêutica de derivados de indolina substituídos como inibidores da replicação viral da dengue - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a derivados de indolina substituídos, métodos para prevenir ou tratar infecções virais da dengue ao usar os referidos compostos e refere-se também aos referidos compostos para uso como um medicamento, mais preferencialmente para uso como um medicamento para tratar ou prevenir infecções virais da dengue. A presente invenção refere-se ainda a composições farmacêuticas ou preparações de combinação dos compostos, com as composições ou preparações para uso como um medicamento, mais preferencialmente para a prevenção ou tratamento de infecções virais da dengue. A invenção refere-se também a processos para preparação dos compostos.

Description

Relatório descritivo da patente de invenção para "COMPOSTO E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA DE DERIVADOS

DE INDOLINA SUBSTITUÍDOS COMO INIBIDORES DA REPLICAÇÃO VIRAL DA DENGUE".

[001] A presente invenção refere-se a derivados de indolina substituídos, com métodos para prevenir ou tratar infecções virais da dengue ao usar os referidos compostos e refere-se também aos referidos compostos para uso como um medicamento, mais preferencialmente para uso como um medicamento para tratar ou prevenir infecções virais da dengue. A presente invenção refere-se ainda a composições farmacêuticas ou preparações de combinação dos compostos, com as composições ou preparações para uso como um medicamento, mais preferencialmente para a prevenção ou tratamento de infecções virais da dengue. A invenção refere-se também a processos para preparação dos compostos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] Os flavivírus, que são transmitidos por mosquitos ou carrapatos, causam infecções com risco de vida no homem, tais como encefalite e febre hemorrágica. São conhecidos quatro serotipos distintos, mas intimamente relacionados, do flavivírus dengue, assim chamados DENV-1, -2, -3 e -4. A dengue é endêmica na maioria das regiões tropicais e subtropicais em todo o mundo, predominantemente em áreas urbanas e semiurbanas. De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS), 2,5 bilhões de pessoas dos quais 1 bilhão de crianças estão em risco de infecção pelo DENV (OMS, 2002). 50 a 100 milhões de casos estimados de febre da dengue [DF], meio milhão de casos de doença da dengue grave (i.e., febre hemorrágica da dengue [DHF] e síndrome do choque da dengue [DSS]), e mais do que 20.000 mortes ocorrem globalmente a cada ano. A DHF se tem tornado uma causa principal de hospitalização e morte entre crianças em regiões endêmicas. Ao todo, a dengue representa a causa mais comum de doença arboviral. Devido a grandes surtos recentes em países situados na América Latina, Sudeste Asiático e no Pacífico Ocidental (incluindo Brasil, Porto Rico, Venezuela, Camboja, Indonésia, Vietnã, Tailândia), os números de casos de dengue têm aumentado dramaticamente ao longo dos últimos anos. Não só está o número de casos de dengue a aumentar à medida que a doença está se disseminando para novas áreas, mas também os surtos tendem a ser mais graves.

[003] Após infecção com outro serotipo, os anticorpos heterólogos pré-existentes formam complexos com o serotipo do vírus da dengue recém-infectado mas não neutralizam o patógeno. Ao invés se acredita que a entrada do vírus nas células é facilitada, resultando em replicação não controlada do vírus e títulos virais no pico mais elevados. Em infecções tanto primárias como secundárias, títulos virais mais elevados estão associados a doença da dengue mais grave. Uma vez que anticorpos maternos podem passar facilmente para crianças por amamentação, isto poderá ser uma das razões pelas quais as crianças são mais afetadas por doença da dengue grave do que os adultos.

[004] Em localizações com dois ou mais serotipos circulando simultaneamente, também referidas como regiões hiperendêmicas, o risco de doença da dengue grave é significativamente mais elevado devido a um risco aumentado de se experienciar uma infecção secundária, mais grave. Além do mais, em uma situação de hiperendemicidade, a probabilidade da emergência de estirpes mais virulentas é aumentada, o que por seu turno aumenta a probabilidade de febre hemorrágica da dengue (DHF) ou síndrome do choque da dengue.

[005] Os mosquitos que transportam a dengue, incluindo Aedes aegypti e Aedes albopictus (mosquito-tigre), estão se movendo para norte no globo. De acordo com os Centers for Disease Control and

Prevention (CDC) dos Estados Unidos (EUA), ambos os mosquitos são correntemente omnipresentes no sul do Texas. A disseminação para norte de mosquitos transportando a dengue não está confinada aos EUA, mas foi também observada na Europa.

[006] Dengvaxia®, a vacina contra a dengue produzida pela Sanofi Pasteur, foi em primeiro lugar aprovada no México e tem recebido entretanto aprovação em mais países. Não obstante, a vacina deixa bastante espaço para melhoria devido à sua eficácia limitada, especialmente contra DENV-1 e -2, baixa eficácia em pacientes sem tratamento prévio de flavivírus e o prolongado calendário de doseamento.

[007] Apesar destas insuficiências, a vacina é um grande avanço nas definições endêmicas, uma vez que irá oferecer proteção a uma grande parte da população, mas provavelmente não a crianças muito jovens, sobre as quais recai a maior incidência da dengue. Além disso, o calendário de dosagem e a eficácia muito limitada em sujeitos sem tratamento prévio de flavivírus fazem com que seja inadequada e provavelmente não compensatória/rentável para viajantes de áreas não endêmicas para áreas endêmicas da dengue. As insuficiências acima mencionadas das vacinas da dengue são a razão pela qual existe uma necessidade de um antiviral da dengue profilático pré-exposição.

[008] Além do mais, hoje em dia, não estão disponíveis fármacos antivirais específicos para o tratamento ou prevenção da infecção pelo vírus da febre da dengue. Claramente existe ainda uma grande necessidade médica não atendida de terapêuticos para a prevenção ou tratamento de infecções virais em animais, mais em particular em humanos e especialmente para infecções virais causadas por flavivírus, mais em particular vírus da dengue. Compostos com boa potência antiviral, nenhuns ou baixos níveis de efeitos secundários, uma atividade de amplo espectro contra múltiplos serotipos do vírus da dengue, uma baixa toxicidade e/ou boas propriedades farmacocinéticas ou -dinâmicas são altamente necessários.

[009] WO-2010/021878 descreve derivados de 2-fenilpirrolidina e indolina como antagonistas dos receptores de mentol do frio para tratamento de doenças inflamatórias e centrais. WO-2013/045516 descreve derivados de indol e indolina para uso no tratamento de infecções virais da dengue.

[0010] A presente invenção proporciona agora compostos, derivados de indolina substituídos, que mostram elevada atividade potente contra todos os quatro (4) serotipos do vírus da dengue.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0011] A presente invenção é baseada na descoberta inesperada de que pelo menos um dos problemas acima mencionados pode ser resolvido pelos compostos atuais da invenção.

[0012] A presente invenção proporciona compostos que se mostraram possuir atividade antiviral potente contra todos os quatro (4) serotipos correntemente conhecidos. A presente invenção demonstra ainda que estes compostos inibem eficientemente a proliferação do vírus da dengue (DENV). Portanto, estes compostos constituem uma classe útil de compostos potentes que podem ser usados no tratamento e/ou prevenção de infecções virais em animais, mamíferos e humanos, mais especificamente para o tratamento e/ou prevenção de infecções com vírus da dengue.

[0013] A presente invenção refere-se ainda ao uso de tais compostos como medicamentos e com seu uso para a fabricação de medicamentos para tratamento e/ou prevenção de infecções virais, em particular com vírus pertencendo à família dos vírus da dengue em animais ou mamíferos, mais em particular em humanos. A invenção refere-se também a métodos para a preparação de todos tais compostos e com composições farmacêuticas compreendendo os mesmos em uma quantidade eficaz.

[0014] A presente invenção refere-se também a um método de tratamento ou prevenção de infecções virais da dengue em humanos pela administração de uma quantidade eficaz de um ou mais tais compostos, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, opcionalmente em combinação com um ou mais outros medicamentos, como outro agente antiviral, a um paciente com sua necessidade.

[0015] Um aspecto da invenção é o fornecimento de compostos da fórmula (I), incluindo qualquer sua forma estereoquimicamente isomérica: Cl CH3

O R3

O N A COOH (I) R1 H

N R2 em que R1 é trifluorometila, trifluorometóxi ou cloro; R2 é hidrogênio, flúor ou metóxi; R3 é hidrogênio ou metóxi; A representa -(CH2)n- em que n é 3 ou 4; -O-(CH2)n- em que n é 2 ou 4; -O-(CH2)n- em que n é 3 e um ou dois CH2 estão substituídos por um ou dois CH3; -CH2-O-(CH2)n- em que n é 2; ou -X-Y- em que X é um -O-, -OCH2- ou -NH-; e Y é cicloalquila C3-4 opcionalmente substituída por flúor ou Y é biciclo[1.1.1]pentanila; ou um sal do mesmo, solvato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável.

[0016] Os compostos especificamente mencionados acima são selecionados do grupo compreendendo: Cl Cl OMe OMe

O O F O N F O N N H N H F O F O F OH F OH

O O Cl Cl OMe OMe

O O F O N F O N N H N H F O F O F OH F OH

O O Cl Cl OMe OMe

O O F O N N H N O F O N H O F O F OH F F OH

O Cl Cl OMe OMe

O O O O F O N F O N N H N H F O OH F O OH

F F Cl Cl OMe O OMe

F O O N N H O F O N F N H O F F O O F OH

HO Cl Cl OMe OMe

O O N F O N F O N N H H F O O F F F OH OH O

Cl Cl OMe OMe

O O F O N F O N N H N H O O F F F F OH OH

O Cl Cl MeO OMe MeO OMe

O O F O N F O N N H N H F O F O F OH F OH

O O Cl Cl OMe MeO OMe

O O F F N F O N N H N H F O O

F O F MeO OH

OH O Cl Cl OMe OMe

O F O F F N F N N H F N H O F O

O MeO OH MeO OH

O Cl Cl OMe OMe O

O F F F N F O N H N F O F N H

O OH MeO MeO O

HO Cl Cl OMe OMe

O O O F O N F O N N H N H O O O F F OH F F F OH F

Cl Cl OMe OMe

O O F N O N H F O N O N H F F O F F O F F O OH

HO Cl Cl OMe OMe

O O

O O Cl N N

N H F O N H O OH F N OH

F H MeO

[0017] Um primeiro grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que A representa -(CH2)n- em que n é 3 ou 4.

[0018] Um segundo grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que A representa -O-(CH2)n- em que n é 2 ou 4.

[0019] Um terceiro grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que A representa

[0020] -O-(CH2)n- em que n é 3 e um ou dois CH2 estão substituídos por um ou dois CH3; ou A representa .

[0021] Um quarto grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que A representa -CH2-O-(CH2)n- em que n é 2.

[0022] Um quinto grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que A representa -X-Y- em que X é um -O-, -OCH2- ou -NH-; e Y é cicloalquila C3-4 opcionalmente substituída por flúor.

[0023] Um sexto grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que A representa -X-Y- em que X é um -O-, -OCH2- ou -NH-; e Y é biciclo[1.1.1]pentanila.

[0024] Um sétimo grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que R1 é trifluorometóxi, R2 é hidrogênio e R3 é hidrogênio.

[0025] Um oitavo grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que R1 é trifluorometóxi, R2 é hidrogênio e R3 é metóxi.

[0026] Um nono grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que R1 é trifluorometila, R2 é metóxi e R3 é hidrogênio.

[0027] Um décimo grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que R1 é trifluorometóxi, R2 é flúor e R3 é hidrogênio.

[0028] Um décimo primeiro grupo de compostos são compostos da fórmula (I) em que R1 é cloro, R2 é metóxi e R3 é hidrogênio.

[0029] Parte da corrente invenção é também uma composição farmacêutica compreendendo um composto mencionado acima ou uma sua forma estereoisomérica, sal, solvato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável em conjunto com um ou mais excipientes, diluentes ou transportadores farmaceuticamente aceitáveis.

[0030] Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos referidos compostos incluem os seus sais de adição de ácidos e bases. Sais de adição de ácidos adequados são formados a partir de ácidos que formam sais não tóxicos. Sais de bases adequados são formados a partir de bases que formam sais não tóxicos.

[0031] Os sais de ácidos farmaceuticamente aceitáveis como mencionados anteriormente se destinam a compreender as formas de sais de adição de ácidos não tóxicas terapeuticamente ativas que os compostos da fórmula (I) são capazes de formar. Estes sais de adição de ácidos farmaceuticamente aceitáveis podem ser convenientemente obtidos por tratamento da forma de base com tal ácido apropriado. Ácidos apropriados compreendem, por exemplo, ácidos inorgânicos tais como ácidos hidro-hálicos, p.ex., ácido clorídrico ou bromídrico, ácido sulfúrico, nítrico, fosfórico e similares; ou ácidos orgânicos tais como, por exemplo, ácido acético, propanoico, hidroxiacético, láctico, pirúvico, oxálico (i.e., etanodioico), malônico, succínico (i.e., ácido butanodioico), maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, metanossulfônico, etanossulfônico, benzenossulfônico, p-toluenossulfônico, ciclâmico, salicílico, p-aminossalicílico, pamoico e os ácidos similares.

[0032] Os compostos da invenção podem também existir em formas não solvatadas e solvatadas. O termo "solvato" é usado no presente documento para descrever um complexo molecular compreendendo o composto da invenção e uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, etanol.

[0033] O termo "polimorfo" se refere à capacidade do composto da invenção de existir em mais do que uma forma ou estrutura de cristal.

[0034] Os compostos da presente invenção podem ser administrados como produtos cristalinos ou amorfos. Podem ser obtidos por exemplo como tampões sólidos, pós ou filmes por métodos tais como precipitação, cristalização, liofilização, secagem por pulverização ou secagem por evaporação. Podem ser administrados sozinhos ou em combinação com um ou mais outros compostos da invenção ou em combinação com um ou mais outros fármacos. Geralmente serão administrados como uma formulação em associação a um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. O termo "excipiente" é usado no presente documento para descrever qualquer ingrediente sem ser o(s) composto(s) da invenção. A escolha de excipiente depende largamente de fatores tais como o modo de administração particular, o efeito do excipiente na solubilidade e estabilidade e a natureza da forma de dosagem.

[0035] Os compostos da presente invenção ou qualquer seu subgrupo podem ser formulados em várias formas farmacêuticas para propósitos de administração. Como composições apropriadas podem ser citadas todas as composições usualmente usadas para administração sistêmica de fármacos. Para preparar as composições farmacêuticas desta invenção, uma quantidade eficaz do composto particular, opcionalmente na forma de sal de adição, como o ingrediente ativo é combinada em mistura com adição íntima com um transportador farmaceuticamente aceitável, transportador esse que pode tomar uma ampla variedade de formas dependendo da forma de preparação desejada para administração. Estas composições farmacêuticas estão desejavelmente na forma de dosagem unitária adequada, por exemplo, para administração oral ou retal. Por exemplo, na preparação das composições na forma de dosagem oral, pode ser usado qualquer um dos meios farmacêuticos usuais tais como, por exemplo, água, glicóis, óleos, álcoois e similares no caso de preparações líquidas orais tais como suspensões, xaropes, elixires, emulsões, e soluções; ou transportadores sólidos tais como amidos, açúcares, caulim, diluentes, lubrificantes, aglutinantes, agentes de desintegração e similares no caso de pós, pílulas, cápsulas e comprimidos. Devido à sua facilidade de administração, os comprimidos e as cápsulas representam as formas unitárias de dosagem oral mais vantajosas, caso esse em que obviamente são usues transportadores farmacêuticos sólidos. São também incluídas preparações na forma sólida que podem ser convertidas, imediatamente antes do uso, em formas líquidas.

[0036] É especialmente vantajoso formular as composições farmacêuticas mencionadas acima na forma de dosagem unitária para facilidade de administração e uniformidade de dosagem. Forma de dosagem unitária como usada no presente documento se refere a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias, contendo cada unidade uma quantidade predeterminada de ingrediente ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação ao transportador farmacêutico requerido. Exemplos de tais formas de dosagem unitária são comprimidos (incluindo comprimidos sulcados ou revestidos), cápsulas, pílulas, pacotes de pó, hóstias, supositórios, soluções ou suspensões injetáveis e similares e seus múltiplos segregados.

[0037] Os peritos no tratamento de doenças infecciosas serão capazes de determinar a quantidade eficaz a partir dos resultados de teste apresentados doravante. Em geral é contemplado que uma quantidade diária eficaz seria de 0,01 mg/kg a 50 mg/kg de peso corporal, mais preferencialmente de 0,1 mg/kg a 10 mg/kg de peso corporal. Pode ser apropriado administrar a dose requerida como duas, três, quatro ou mais subdoses em intervalos apropriados ao longo do dia. As referidas subdoses podem ser formuladas como formas de dosagem unitária, por exemplo, contendo 1 a 1000 mg e, em particular, 5 a 200 mg de ingrediente ativo por forma de dosagem unitária.

[0038] A dosagem e frequência de administração exatas dependem do composto particular da invenção usado, da condição particular sendo tratada, da gravidade da condição sendo tratada, da idade, peso e condição física geral do paciente particular bem como outra medicação que o indivíduo possa estar tomando, tal como é bem conhecido dos peritos na técnica. Além do mais é evidente que a quantidade eficaz pode ser diminuída ou aumentada dependendo da resposta do sujeito tratado e/ou dependendo da avaliação do médico prescrevendo os compostos da presente invenção. As gamas de quantidades eficazes mencionadas acima são portanto apenas orientações e não se destinam a limitar o escopo ou uso da invenção em qualquer medida.

[0039] A presente divulgação se destina também a incluir quaisquer isótopos de átomos presentes nos compostos da invenção. Por exemplo, isótopos de hidrogênio incluem trítio e deutério e isótopos de carbono incluem C-13 e C-14.

[0040] Como usado no presente documento, qualquer fórmula química com ligações mostradas somente como linhas sólidas e não como ligações cunhadas sólidas ou cunhadas picotadas, ou de outro modo indicadas como tendo uma configuração particular (p.ex., R, S) em torno de um ou mais átomos, contempla cada estereoisômero possível, ou mistura de dois ou mais estereoisômeros.

[0041] Anteriormente e doravante, os termos "composto da fórmula

(I)" e "intermediários da síntese da fórmula (I)" se destinam a incluir os seus estereoisômeros e as suas formas tautoméricas.

[0042] Os termos "estereoisômeros", "formas estereoisoméricas" ou "formas estereoquimicamente isoméricas" anteriormente ou doravante são usados indistintamente.

[0043] A invenção inclui todos os estereoisômeros dos compostos da invenção como estereoisômeros puros ou como uma mistura de dois ou mais estereoisômeros. Enantiômeros são estereoisômeros que são imagens não sobreponíveis no espelho uma da outra. Uma mistura 1:1 de um par de enantiômeros é um racemato ou mistura racêmica. Os diastereômeros (ou diastereoisômeros) são estereoisômeros que não são enantiômeros, i.e., não estão relacionados como imagens no espelho. Substituintes em radicais (parcialmente) saturados cíclicos bivalentes podem estar na configuração cis ou trans; por exemplo, se um composto contiver um grupo cicloalquila dissubstituído, os substituintes podem estar na configuração cis ou trans.

[0044] O termo "estereoisômeros" inclui também quaisquer rotâmeros, também denominados isômeros conformacionais, que os compostos de fórmula (I) possam formar.

[0045] Portanto, a invenção inclui enantiômeros, diastereômeros, racematos, isômeros E, isômeros Z, isômeros cis, isômeros trans, rotâmeros e qualquer mistura dos mesmos, sempre que quimicamente possível.

[0046] O significado de todos estes termos, i.e., enantiômeros, diastereômeros, racematos, isômeros cis, isômeros trans e suas misturas é conhecido do versado na técnica.

[0047] A configuração absoluta é especificada de acordo com o sistema de Cahn-Ingold-Prelog. A configuração em um átomo assimétrico é especificada por R ou S. Os estereoisômeros resolvidos cuja configuração absoluta não é conhecida podem ser designados por

(+) ou (-) dependendo da direção na qual rodam a luz polarizada plana. Por exemplo, enantiômeros resolvidos cuja configuração absoluta não seja conhecida podem ser designados por (+) ou (-) dependendo da direção na qual rodam o plano da luz polarizada.

[0048] Quando um estereoisômero específico é identificado, isto significa que o referido estereoisômero está substancialmente isento, i.e., associado a menos do que 50%, preferencialmente menos do que 20%, mais preferencialmente menos do que 10%, ainda mais preferencialmente menos do que 5%, em particular menos do que 2% e o mais preferencialmente menos do que 1%, dos outros estereoisômeros. Assim, quando um composto da fórmula (I) está por exemplo especificado como (R), isto significa que o composto está substancialmente isento do isômero (S); quando um composto de fórmula (I) está por exemplo especificado como E, isto significa que o composto está substancialmente isento do isômero Z; quando um composto de fórmula (I) está por exemplo especificado como cis, isto significa que o composto está substancialmente isento do isômero trans.

[0049] Alguns dos compostos de acordo com a fórmula (I) podem também existir na sua forma tautomérica. Tais formas, na medida em que possam existir, embora não explicitamente indicadas na fórmula (I) acima, se destinam a estar incluídas no escopo da presente invenção.

[0050] Os compostos da fórmula (I) da presente invenção têm todos pelo menos um átomo de carbono assimétrico como indicado na figura abaixo pelo átomo de carbono marcado com *: Cl CH3

O R3 O * N A COOH (I) R1 H

N R2

[0051] Devido à presença do referido centro quiral, um "composto da fórmula (I)" pode ser o enantiômero (R), o enantiômero (S), a forma racêmica ou qualquer combinação possível dos dois enantiômeros individuais em qualquer razão. Quando a configuração absoluta de um átomo de carbono assimétrico não era conhecida, um descritor de estereoquímica relativa foi usado: *R ou *S (ou R* e S*) para indicar a estereoquímica pura mas desconhecida do centro quiral.

[0052] Uma vez que o radical A permite substituições introduzindo átomos de carbono assimétricos, os compostos da fórmula (I) podem ter mais do que um átomo de carbono assimétrico. Quando a estereoquímica absoluta dos mais do que um átomos de carbono assimétricos não foi determinada, a estereoquímica relativa foi indicada usando os descritores de estereoquímica relativa *R e *S e onde possível em combinação com cis e trans quando o radical A contém uma porção cíclica.

[0053] Em um aspecto, a presente invenção refere-se a um primeiro grupo de compostos da fórmula (I) em que os compostos da fórmula (I) têm a rotação específica (-).

[0054] Em um aspecto adicional, a presente invenção refere-se a um segundo grupo de compostos da fórmula (I) em que os compostos da fórmula (I) têm a rotação específica (+).

[0055] Em uma modalidade, a presente invenção refere-se a um composto da fórmula (I) tendo a rotação específica (+) em que o referido composto é selecionado do grupo consistindo nos compostos (1C), (1D), (2A), (4C), (4D), (5A), (6AB), (6BB), (7B), (8B), (9B), (10B), (11B), (12B), (13B), (14A), (15B), (17C), (17D), (18B), (19AB), (19BB), (20C), (20D), (21B), (22AB), (22BB), (23B), (24B), (25B), (27B), (28AB), (28BB), (29AB), (29BB), (30A), (31A), (32B), (33C), e (33D). Exemplos Métodos de LC/MS

[0056] A medição por Cromatografia Líquida de Elevado

Desempenho (HPLC) foi realizada usando uma bomba de LC, um arranjo de díodos (DAD) ou um detector de UV e uma coluna como especificada nos respectivos métodos. Se necessário foram incluídos detectores adicionais (ver tabela de métodos abaixo).

[0057] O fluxo a partir da coluna foi conduzido para o Espectrômetro de Massa (MS) que estava configurado com uma fonte de íons à pressão atmosférica. Está dentro do conhecimento do versado na técnica definir os parâmetros de ajuste (p.ex., gama de varredura, tempo de permanência...) de modo a se obterem íons permitindo a identificação do peso molecular (PM) monoisotópico nominal do composto. A aquisição de dados foi realizada com software apropriado.

[0058] Os compostos são descritos pelos seus tempos de retenção (Tr) experimentais e íons. Se não especificado diferentemente na tabela de dados, o íon molecular relatado corresponde ao [M+H]+ (molécula protonada) e/ou [M-H]- (molécula desprotonada). No caso de o composto não tiver sido diretamente ionizável é especificado o tipo de aducto (i.e., [M+NH4]+, [M+HCOO]-, etc…). No caso de moléculas com múltiplos padrões isotópicos (Br, Cl), o valor relatado é o obtido para a massa isotópica mais baixa. Todos os resultados foram obtidos com incertezas experimentais que estão comumente associadas ao método usado.

[0059] Doravante, "SQD" significa Detector de Quadropolo Único, "MSD" Detector Seletivo de Massa, "TA" temperatura ambiente, "BEH" híbrido em ponte de etilsiloxano/sílica, "DAD" Detector de Arranjo de Díodos, "HSS" sílica de Elevada Resistência.

[0060] Códigos de métodos de LC/MS (Fluxo expresso em mL/min; temperatura da coluna (T) em °C; Tempo de operação em minutos).

Código Fluxo Tempo de Instrumen- do Coluna Fase móvel Gradiente ------- operação to método T da Col (min) De A a A: 10mM Waters: 95% até A Waters: CH3COON BEH C18 a 5% em 0,8 mL/min Acquity® H4 em 95% LC-A (1,7 µm, 1,3 min, ------- 2 UPLC® - H2O + 5% 2,1 x 50 manter 55°C DAD-SQD CH3CN mm) durante 0,7 B: CH3CN min. De A a A: 10mM 100% até Waters: CH3COON A a 5% em Waters: HSS T3 H4 2,10 min, 0,7 mL/min Acquity® LC-B (1,8 µm, em 95% até A a 0% ------- 3,5 UPLC® - 2,1 x 100 H2O + 5% em 0,90 55°C DAD-SQD mm) CH3CN min, até A B: CH3CN a 5% em 0,5 min A a 84,2% durante 0,49 min, até A a 10,5% em A: Waters: 2,18 min, ® Waters: CH3COON Acquity manter 0,343 BEH C18 H4 7mM UPLC® - durante mL/min LC-C (1,7 µm, 95%/ 6,2 DAD- 1,94 min, ------- 2,1 x 100 CH3CN Quattro de volta 40°C mm) 5%,

TM Micro para A a B: CH3CN 84,2% em 0,73 min, manter durante 0,73 min.

Código Fluxo Tempo de Instrumen- do Coluna Fase móvel Gradiente ------- operação to método T da Col (min) Aa 84,2%/B a 15,8% até A a 10,5% em 2,18 A: min, Waters: Waters CH3COON manter 0,343 Acquity® BEH® H4 7mM durante mL/min LC-D Classe H - C18 (1,7 95%/ 1,96 min, 6,1 ------- DAD e µm, 2,1 x CH3CN de volta 40°C SQD2TM 100 mm) 5%, para A a B: CH3CN 84,2%/B a 15,8% em 0,73 min, manter durante 0,49 min. Métodos de SFC/MS

[0061] A medição por SFC foi realizada usando um sistema de cromatografia Analítica com fluido Supercrítico (SFC) composto por uma bomba binária para administração de dióxido de carbono (CO2) e modificador, um autoamostrador, um forno de coluna, um detector de arranjo de díodos equipado com uma célula de fluxo a elevada pressão resistindo até 400 bar. Se configurado com um Espectrômetro de Massa (MS), o fluxo a partir da coluna foi conduzido para o (MS). Está dentro do conhecimento do versado na técnica definir os parâmetros de ajuste (p.ex., gama de varredura, tempo de permanência...) de modo a se obterem íons permitindo a identificação do peso molecular (PM) monoisotópico nominal do composto. A aquisição de dados foi realizada com software apropriado.

[0062] Métodos Analíticos de SFC/MS (Fluxo expresso em mL/min; temperatura da coluna (T) em °C; Tempo de operação em minutos, Contrapressão (BPR) em bars). Tempo de Fluxo Código do operação coluna fase móvel gradiente --------- método ------------ T da Col

BPR B a 25% coluna Daicel A:CO2 manter 6 2,5 9,5 Chiralpak® OD3 B:EtOH min, até 50% SFC-A ------- ------- (3,0 ȝm, 150 x (+0,2% em 1 min 4,6 mm) iPrNH2) manter 2,5 40 110 min A:CO2 coluna Daicel B a 10%- 2,5 9,5 Chiralpak® AD3 B: EtOH 50% em 6 SFC-B (+0,2% ------- ------- (3,0 ȝm, 150 x min, manter 4,6 mm) iPrNH 2+3%H 3,5 min 40 110 2O) coluna Daicel A:CO2 B a 10%- 2,5 9,5 Chiralpak® AD3 B: iPrOH 50% em 6 SFC-C ------- ------- (3,0 ȝm, 150 x (+0,2% min, manter 4,6 mm) iPrNH2) 3,5 min 40 110 coluna Daicel A:CO2 B a 10%- 2,5 9,5 Chiralpak® OD3 B: EtOH 50% em 6 SFC-D ------- ------- (3,0 ȝm, 150 x (+0,2% min, manter 4,6 mm) iPrNH2) 3,5 min 40 110 coluna Daicel A:CO2 B a 10%- 2,5 9,5 Chiralpak® AD3 B: EtOH 50% em 6 SFC-E ------- ------- (3,0 ȝm, 150 x (+0,2% min, manter 4,6 mm) iPrNH2) 3,5 min 40 110 coluna Daicel 3 7 Chiralcel® OJ-H A:CO2 B a 30% SFC-F manter 7 ------- ------- (5 ȝm, 150 x B: MeOH min, 35 100 4,6 mm) coluna Daicel B a 40% 3,5 3 Chiralcel® OD-3 A:CO2 SFC-G manter 3 ------- -------- (3 ȝm, 100 x B: iPrOH min, 4,6 mm) 35 103 coluna Daicel 3,5 3 Chiralcel® OD-3 A:CO2 B a 40% SFC-H manter 3 ------- -------- (3 ȝm, 100 x B: MeOH min, 4,6 mm) 35 103

Tempo de Fluxo Código do operação coluna fase móvel gradiente --------- método ------------ T da Col

BPR coluna Daicel 3,5 3a6 Chiralcel® OD-3 A:CO2 B a 40% SFC-I manter 3 a 6 ------- -------- (3 ȝm, 100 x B: EtOH min, 4,6 mm) 35 103 coluna Regis 3,5 3 A:CO2 B a 40% Whelk O1, S,S SFC-J manter 3 ------- -------- (3 ȝm, 100 x B: MeOH min, 4,6 mm) 35 103 coluna Daicel A:CO2 Chiralcel® OD- B a 35% 3 7 H B: iPrOH SFC-K manter 7 ------- ------- (5 ȝm, 150 x (+0,3% min, 35 100 4,6 mm) iPrNH2) coluna Daicel 3,5 3 Chiralcel® AD-3 A:CO2 B a 45% SFC-L manter 3 ------- -------- (3 ȝm, 100 x B: EtOH min, 4,6 mm) 35 103 coluna Daicel Chiralcel® OD- B a 40% 3 7 A:CO2 SFC-M H manter 7 ------- ------- B: MeOH min, (5 ȝm, 150 x 35 100 4,6 mm) coluna Daicel A:CO2 B a 15% 3,5 10 Chiralpak® AD- B: EtOH SFC-N manter 10 ------- ------- 3 (3 ȝm, 100 x (+0,3% min, 35 103 4,6 mm) iPrNH2) coluna Phenomenex B a 25% 3,5 3 A:CO2 SFC-O Luxcellulose-2 manter 3 ------- -------- (3 ȝm, 100 x B: MeOH min, 35 103 4,6 mm) coluna Daicel 3,5 3 Chiralcel® OD-3 A:CO2 B a 30% SFC-P manter 3 ------- -------- (3 ȝm, 100 x B: MeOH min, 4,6 mm) 35 103 coluna Daicel A:CO2 B a 60% 3,5 3 Chiralcel® AD-3 B: iPrOH SFC-Q manter 3 ------- -------- (3 ȝm, 100 x (+0,3% min, 4,6 mm) 35 103 iPrNH2)

Tempo de Fluxo Código do operação coluna fase móvel gradiente --------- método ------------ T da Col

BPR coluna Daicel 3,5 3a6 Chiralcel® OD-3 A:CO2 B a 50% SFC-R manter 3 a 6 ------- -------- (3 ȝm, 100 x B: EtOH min, 4,6 mm) 35 103 coluna Daicel A:CO2 Chiralcel® OD- B a 50% 3 7 H B: EtOH SFC-S manter 7 ------- ------- (5 ȝm, 150 x (+0,3% min, 35 100 4,6 mm) iPrNH2) coluna Regis 3,5 3 Whelk O1, S,S A:CO2 B a 50% SFC-T manter 3 ------- -------- (3 ȝm, 100 x B: MeOH min, 4,6 mm) 35 103 Pontos de Fusão

[0063] Os valores são valores de pico ou gamas de fusão e são obtidos com incertezas experimentais que estão comumente associadas a este método analítico. DSC823e (indicado como DSC)

[0064] Para um número compostos, os pontos de fusão foram determinados com um DSC823e (Mettler-Toledo). Os pontos de fusão foram medidos com um gradiente de temperatura de 10 °C/minuto. A temperatura máxima foi 300°C. Rotações Ópticas:

[0065] As rotações ópticas foram medidas em um polarímetro 341 da PerkinElmer com uma lâmpada de sódio e relatadas como se segue: [Į]º (Ȝ, c g/100 mL, solvente, T °C).

[0066] [Į]ȜT = (100Į) / (l x c): onde l é o comprimento do percurso em dm e c é a concentração em g/100 mL para uma amostra a uma temperatura T (°C) e um comprimento de onda Ȝ (em nm). Se o comprimento de onda da luz usado for 589 nm (linha D do sódio), então o símbolo D poderia ser ao invés usado. O sinal da rotação (+ ou -) deve ser sempre dado. Quando se usa esta equação, a concentração e o solvente são sempre proporcionados entre parênteses após a rotação. A rotação é relatada usando graus e não são dadas quaisquer unidades de concentração (se assume como sendo g/100 mL).

[0067] Nota de estereoquímica: Nos exemplos em baixo, as indicações de estereoquímica *R e *S se referem a uma estereoquímica pura mas desconhecida dos centros quirais. Abreviaturas usadas na parte experimental (M+H)+ íon molecular protonado iPrNH2 isopropilamina MH+ aq. aquoso iPrOH 2-propanol Boc terc-butiloxicarbonila K2CO3 carbonato de potássio Boc2O dicarbonato de di-terc-butila KNO3 nitrato de potássio l amplo LiAlH4 hidreto de alumínio e lítio acetonitrila m/z razão entre massa e CH3CN carga CHCl3 clorofórmio Me metila CH2Cl2 diclorometano MeOH metanol CH3OH metanol MgSO4 sulfato de magnésio CO2 dióxido de carbono min minuto(s) CsCO3 carbonato de césio MTBE meti-terc-butiléter d dubleto N2 nitrogênio DCM diclorometano Na2CO3 carbonato de sódio DIEA di-isopropiletilamina Na2SO4 sulfato de sódio DIPE éter de di-isopropila NaBH4 boro-hidreto de sódio DMA dimetilacetamida NaCl cloreto de sódio DMAP 4-dimetilaminopiridina NaHCO3 bicarbonato de sódio DME 1,2-dimetoxietano NaOH hidróxido de sódio DMF dimetilformamida NH4Cl cloreto de amônio DMSO sulfóxido de dimetila NH4HCO3 bicarbonato de amônio 1-etil-3-(3-dimetilamino- EDCl NMP N-metilpirrolidona propil)carbodi-imida eq. equivalente q quarteto éter de dietila rt ou RT temperatura ambiente Et2O trietilamina cloreto de 2- Et3N SEMCl (trimetilsilil)etoximetila EtOAc acetato de etila s singleto EtOH etanol t tripleto hidrogênio tBuOK terc-butanolato de H2 potássio HNO3 ácido nítrico TEA trietilamina H2O água TFA ácido trifluoroacético H2SO4 ácido sulfúrico THF tetra-hidrofurano hexafluorofosfato de O-(7- aza-1H-benzotriazol-1-il)- HATU 2-Me-THF 2-metiltetra-hidrofurano N,N,N',N'-tetrametil-urônio - CAS [148893-10-1] HCl ácido clorídrico TMSCl cloreto de trimetilsilila cromatografia líquida de HPLC TMSCF3 trifluorometiltrimetilsilano elevado desempenho Exemplo 1: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2-metilbutanoico (Composto 1) e separação nos Estereoisômeros 1A, 1B, 1C e 1D Síntese do intermediário 1a:

[0068] A uma solução agitada de 4-bromo-2-metilbutanoato de terc- butila [CAS 1210410-44-8] (1,0 g, 4,22 mmol) em DMF (15 mL) foram adicionados 3-amino-5-metóxifenol [CAS 162155-27-3] (587 mg, 4,22 mmol) e Cs2CO3 (2,75 g, 8,43 mmol). A reação foi agitada a 60 °C durante 65 h, e foi permitido que alcançasse a temperatura ambiente. A mistura foi vertida em H2O (100 mL). O produto foi extraído com CH2Cl 2 (2 vezes). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (50 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc de 100/0 a 50/50. As frações desejadas foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com CH3CN, originando 4-(3-amino-5-metoxifenóxi)-2-metilbutanoato de terc-butila 1a (440 mg). Síntese do intermediário 1b:

[0069] Uma mistura de 6-(trifluorometóxi)indolina [CAS 959235-95- 1] (5 g, 24,6 mmol), ácido 2-(4-clorofenil)acético [CAS 1878-66-6] (4,2 g, 24,6 mmol), HATU (14,3 g, 36,9 mmol) e di-isopropiletilamina (12,2 mL, 73,8 mmol) em DMF (60 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 20 h. A mistura foi vertida lentamente em H2O em agitação (275 mL) e a suspensão resultante foi agitada durante 50 minutos. Os sólidos foram separados por filtração e lavados (4x) com H2O. O resíduo sólido foi absorvido em tolueno (125 mL), filtrado sobre um filtro de papel, e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo sólido foi agitado em Et2O/heptano 2/1 (30 mL), separado por filtração, lavado (3 x) com Et2O/heptano 1/1 e seco sob vácuo a 50 ºC para proporcionar 2-(4- clorofenil)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1b (7,33 g). Síntese do intermediário 1c:

[0070] A -70°C, sob fluxo de N 2, LiHMDS a 1 M em THF (41,2 mL, 41,2 mmol) foi adicionada a uma solução de 2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1b (7,33 g, 20,6 mmol) em 2-Me- THF (300 mL). A mistura foi agitada durante 50 min a -70 ºC e cloreto de trimetilsilila (4,21 mL, 33,0 mmol) foi lentamente adicionado. A agitação foi continuada a -70 ºC durante 35 min e uma solução de N-

bromossuccinimida (4,03 g, 22,7 mmol) em THF (40 mL) e 2-Me-THF (60 mL) foi adicionada gota a gota. Após agitação durante 3,5 h a -70 °C, a reação foi extinta com uma solução saturada de NH4Cl (300 mL). Foi permitido que a mistura alcançasse a temperatura ambiente. Água (50 mL) e salmoura (50 mL) foram adicionados. A mistura foi extraída com éter de di-isopropila (150 mL). A camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO4, filtrada, o solvente evaporado sob pressão reduzida e coevaporado com CH3CN para dar 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (7,87 g). Síntese do intermediário 1d:

[0071] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (850 mg, 1,96 mmol), 4-(3- amino-5-metoxifenóxi)-2-metilbutanoato de terc-butila 1a (620 mg, 2,10 mmol) e di-isopropiletilamina (506 µL, 2,93 mmol) em CH3CN (30 mL) foi agitada a 60 °C durante 18 h. Foi permitido que a mistura alcançasse a temperatura ambiente e foi vertida em água (125 mL). O produto foi extraído (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, separadas por filtração e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (12 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH 100/0/0 a 40/45/15. As frações desejadas foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com dioxano para proporcionar 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2-metilbutanoato de terc-butila 1d (1,27 g). Síntese do Composto 1 e separação nos Estereoisômeros 1A, 1B, 1C e 1D:

[0072] Uma solução resfriada (banho de gelo) de 4-(3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)-2-metilbutanoato de terc-butila 1d (1,27 g, 1,96 mmol) em

HCl a 4 M em dioxano (9 mL) foi agitada a 0 °C dura nte 20 min e à temperatura ambiente durante 2 h. O precipitado foi separado por filtração, lavado (3 x) com dioxano e o sólido foi seco ao ar para originar ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2-metilbutanoico como um sal de HCl (Composto 1, 900 mg).

[0073] Os 4 estereoisômeros do Composto 1 (900 mg) foram separados através de SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, iPrOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. Os estereoisômeros nas frações de produto dos primeiros dois picos eluídos não foram completamente separados e requereram separação adicional através de SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, EtOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida.

[0074] O estereoisômero eluído em primeiro lugar foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (12 g) com gradiente de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc 100/0/0/0 a 40/45/14,7/0,3. As frações desejadas foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com CH3CN. O produto foi liofilizado a partir de uma mistura de solventes de CH3CN (2 mL) e H2O (1,2 mL) para proporcionar o Estereoisômero 1A (63 mg).

[0075] O estereoisômero eluído em segundo lugar foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (12 g) com gradiente de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc 100/0/0/0 a 40/45/14,7/0,3. As frações desejadas foram combinadas e evaporadas e coevaporadas com CH3CN. O produto foi liofilizado a partir de uma mistura de solventes de CH3CN (2 mL) e H2O (1,2 mL) para proporcionar o Estereoisômero 1B (79 mg).

[0076] O estereoisômero eluído em terceiro lugar foi purificado por HPLC preparativa (Fase estacionária: RP XBridge® Prep C18 OBD – 10 µm, 30 x 150 mm, fase móvel: solução de NH4HCO3 a 0,25% em água, CH3CN). As frações desejadas foram combinadas e os orgânicos voláteis foram evaporados sob pressão reduzida. O resíduo foi misturado com EtOAc (25 mL) e HCl a 1 N (0,5 mL). Após agitação durante 10 min, as camadas foram separadas. A camada orgânica foi isolada, lavada com salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada, evaporada sob pressão reduzida e coevaporada com CH3CN. O resíduo foi liofilizado a partir de uma mistura de solventes de CH3CN (1,5 mL) e H2O (0,75 mL) para proporcionar o Estereoisômero 1C (62 mg).

[0077] O estereoisômero eluído em quarto lugar foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (12 g) com gradiente de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc 100/0/0/0 a 40/45/14,7/0,3. As frações desejadas foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com CH3CN. O produto foi liofilizado a partir de uma mistura de solventes de CH3CN (2 mL) e H2O (1,2 mL) para proporcionar o Estereoisômero 1D (105 mg) Composto 1: 1

[0078] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,10 (dd, J=7,0, 1,3 Hz, 3 H) 1,69 (dq, J=13,6, 6,7 Hz, 1 H) 1,91 - 2,01 (m, 1 H) 2,43 - 2,48 (m, 1 H) 3,07 - 3,26 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,85 (t l, J=6,5 Hz, 2 H) 4,04 (td, J=10,3, 7,2 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,4 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,75 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,89 - 5,98 (m, 2 H) 6,43 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,3, 1,4 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 7,40 - 7,47 (m, 2 H) 7,51 - 7,58 (m, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,16 (s l, 1 H)

[0079] LC/MS (método LC-A): Rt 1,14 min, MH+ 593 Estereoisômero 1A: 1

[0080] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,10 (d, J=7,0 Hz, 3 H) 1,69 (dq, J=13,5, 6,6 Hz, 1 H) 1,91 - 2,01 (m, 1 H) 2,46 - 2,48 (m, 1 H)

3,08 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,85 (t, J=6,6 Hz, 2 H) 4,04 (td, J=10,3, 6,9 Hz, 1 H) 4,45 - 4,57 (m, 1 H) 5,55 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,75 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 - 5,96 (m, 2 H) 6,43 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,3, 1,7 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 7,40 - 7,46 (m, 2 H) 7,55 (d, J=8,6 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,16 (s l, 1 H)

[0081] LC/MS (método LC-A): Rt 1,15 min, MH+ 593

[0082] [Į]D20: -37,6° (c 0,415, DMF)

[0083] SFC quiral (método SFC-A): Rt 3,52 min, MH+ 593 pureza quiral 100%. Estereoisômero 1B: 1

[0084] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,09 (d, J=7,0 Hz, 3 H) 1,69 (dq, J=13,6, 6,6 Hz, 1 H) 1,91 - 2,01 (m, 1 H) 2,44 - 2,48 (m, 1 H) 3,08 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,79 - 3,90 (m, 2 H) 4,04 (td, J=10,4, 7,2 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,6 Hz, 1 H) 5,55 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,75 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 - 5,97 (m, 2 H) 6,43 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=7,8 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=7,2 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,16 (s l, 1 H)

[0085] LC/MS (método LC-A): Rt 1,15 min, MH+ 593

[0086] [Į]D20: -65,3° (c 0,455, DMF)

[0087] SFC quiral (método SFC-A): Rt 4,15 min, MH+ 593 pureza quiral 97,1%. Estereoisômero 1C: 1

[0088] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,11 (d, J=7,0 Hz, 3 H) 1,70 (dq, J=13,5, 6,5 Hz, 1 H) 1,90 - 2,03 (m, 1 H) 2,44 - 2,49 (m, 1 H) 3,07 - 3,25 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,86 (t, J=6,6 Hz, 2 H) 3,98 - 4,11 (m, 1 H) 4,46 - 4,57 (m, 1 H) 5,56 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,1 Hz, 1 H) 5,90 - 5,99 (m, 2 H) 6,44 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=7,9, 1,8 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,4 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=7,8 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) 12,18 (s l, 1 H)

[0089] LC/MS (método LC-A): Rt 1,15 min, MH+ 593

[0090] [Į]D20: +35,2° (c 0,455, DMF)

[0091] SFC quiral (método SFC-A): Rt 2,84 min, MH+ 593 pureza quiral 99,3%. Estereoisômero 1D: 1

[0092] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,10 (d, J=7,0 Hz, 3 H) 1,70 (dq, J=13,5, 6,6 Hz, 1 H) 1,92 - 2,02 (m, 1 H) 2,46 - 2,49 (m, 1 H) 3,09 - 3,29 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,80 - 3,92 (m, 2 H) 4,05 (td, J=10,5, 7,0 Hz, 1 H) 4,53 (td, J=10,4, 6,5 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,93 - 5,97 (m, 2 H) 6,44 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,40 - 7,47 (m, 2 H) 7,56 (d, J=8,4 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) 12,17 (s l, 1 H)

[0093] LC/MS (método LC-A): Rt 1,15 min, MH+ 593

[0094] [Į]D20: +64,3° (c 0,42, DMF)

[0095] SFC quiral (método SFC-A): Rt 2,65 min, MH+ 593 pureza quiral 98,1%. Exemplo 2: síntese do ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2,2- dimetilbutanoico (Composto 2) e separação quiral nos Enantiômeros 2A e 2B Síntese do intermediário 2a:

[0096] A uma solução agitada de 4-bromo-2,2-dimetilbutanoato de metila [CAS 4833-99-2] (2,5 g, 12 mmol) em DMF (35 mL) foram adicionados 3-amino-5-metóxifenol [CAS 162155-27-3] (1,66 g, 12 mmol) e Cs2CO3 (7,79 g, 23,9 mmol). A reação foi agitada a 60 °C durante 65 h, e foi permitido que alcançasse a temperatura ambiente. A mistura foi vertida em H2O (150 mL). O produto foi extraído com CH2Cl2. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (25 g) usando um gradiente de heptano/CH2Cl2/MeOH 100/0/0 a 0/100/0 a 0/99/1. As frações desejadas foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com tolueno. Os sólidos foram secos sob vácuo a 50 ºC para proporcionar 4-(3-amino-5-metoxifenóxi)-2,2-dimetilbutanoato de metila 2a (440 mg). Síntese do intermediário 2b:

[0097] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (1,57 g, 3,61 mmol), 4-(3-amino- 5-metoxifenóxi)-2,2-dimetilbutanoato de metila 2a (970 mg, 3,63 mmol) e di-isopropiletilamina (961 µL, 5,58 mmol) em CH3CN (25 mL) foi agitada a 55 °C durante 18 h. Foi permitido que a m istura alcançasse a temperatura ambiente e foi vertida em água (125 mL). O produto foi extraído (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (40 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH 100/0/0 a 40/45/15. As frações desejadas foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com dioxano para proporcionar 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2- metilbutanoato de metila 2b (2,24 g). Síntese do Composto 2 e separação nos Enantiômeros 2A e 2B:

[0098] NaOH a 1 M em água (9 mL, 9 mmol) foi adicionado a uma solução em agitação de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-

(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2-metilbutanoato de metila 2b (2,24 g, 3,61 mmol) em dioxano (15 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 dias. HCl a 1 M (10 mL) foi adicionado lentamente. Após agitação durante 20 min, o produto foi extraído com Et2O. A camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo (2,9 g) foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (80 g) com gradiente de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc 100/0/0/0 a 40/45/14,7/0,3. As frações desejadas foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com éter de di-isopropila. O resíduo (1,6 g) foi purificado ainda através de HPLC preparativa (Fase estacionária: RP XBridge® Prep C18 OBD – 10 µm, 50 x 150 mm, fase móvel: solução de NH4Ac a 0,5% em água + CH3CN a 10%, MeOH). As frações de produto foram combinadas e os orgânicos voláteis foram evaporados sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre 2-Me-THF (300 mL) e salmoura. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado ainda por cromatografia flash em sílica-gel (12 g) com gradiente de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc 100/0/0/0 a 0/75/24,5/0,5 a 40/45/14,7/0,3. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O sólido espumoso foi seco sob vácuo a 45 ºC para proporcionar ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2,2- dimetilbutanoico (Composto 2, 0,97 g) como uma mistura racêmica.

[0099] Os enantiômeros do Composto 2 (800 mg) foram separados através de SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, EtOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O produto eluído em primeiro lugar foi misturado com EtOAc (15 mL), água (5 mL) e HCl a 1 N (1 mL). Após agitação durante 15 minutos, as camadas foram separadas. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada, evaporada sob pressão reduzida e coevaporada com MeOH. O resíduo foi triturado com água (4 mL) e MeOH (1,5 mL) enquanto se resfriava em um banho de gelo. Os sólidos foram removidos por filtração, lavados (4x) com H2O/MeOH 4/1 e secos sob vácuo a 45 °C para proporcionar o Enantiômero 2A (292 mg). O produto eluído em segundo lugar foi misturado com EtOAc (15 mL), água (5 mL) e HCl a 1 N (1 mL). Após agitação durante 30 minutos, as camadas foram separadas. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada, evaporada sob pressão reduzida e coevaporada com MeOH. O resíduo foi triturado com água (4 mL) e MeOH (1,5 mL) enquanto se resfriava em um banho de gelo. Os sólidos foram removidos por filtração, lavados (4x) com H2O/MeOH 2/1 e secos sob vácuo a 45 °C para proporcionar o E nantiômero 2B (342 mg). Composto 2: 1

[00100] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,13 (d, J=2,6 Hz, 6 H) 1,87 (t, J=7,2 Hz, 2 H) 3,08 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,85 (t, J=7,2 Hz, 2 H) 4,04 (td, J=10,4, 7,2 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,2 Hz, 1 H) 5,54 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,74 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,90 - 5,96 (m, 2 H) 6,43 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,3, 1,4 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,39 - 7,48 (m, 2 H) 7,50 - 7,60 (m, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,19 (s l, 1 H)

[00101] LC/MS (método LC-A): Rt 1,22 min, MH+ 607 Enantiômero 2A: 1

[00102] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,13 (d, J=2,6 Hz, 6 H) 1,87 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 3,08 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,85 (t, J=7,2 Hz, 2 H) 3,97 - 4,12 (m, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,5 Hz, 1 H) 5,54 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 5,74 (t, J=2,1 Hz, 1 H) 5,90 - 5,96 (m, 2 H) 6,43 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,39 - 7,49 (m, 2 H) 7,55 (d, J=8,6 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,20 (s l, 1 H)

[00103] LC/MS (método LC-A): Rt 1,23 min, MH+ 607

[00104] [Į]D20: +49,6° (c 0,56, DMF)

[00105] SFC quiral (método SFC-B): Rt 6,47 min, MH+ 607 pureza quiral 100%. Enantiômero 2B: 1

[00106] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,13 (d, J=2,6 Hz, 6 H) 1,87 (t, J=7,2 Hz, 2 H) 3,08 - 3,28 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,85 (t, J=7,2 Hz, 2 H) 4,04 (td, J=10,3, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,5 Hz, 1 H) 5,54 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,74 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,90 - 5,96 (m, 2 H) 6,43 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,41 - 7,46 (m, 2 H) 7,55 (m, J=8,6 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,20 (s l, 1 H)

[00107] LC/MS (método LC-A): Rt 1,23 min, MH+ 607

[00108] [Į]D20: -49,2° (c 0,445, DMF)

[00109] SFC quiral (método SFC-B): Rt 7,18 min, MH+ 607 pureza quiral 98,8%. Exemplo 3: síntese do ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2,2- dimetilbutanoico (Composto 3) Síntese do intermediário 3a:

[00110] 5-Oxaespiro[2.4]heptan-4-ona (930 mg, 8,29 mmol) foi misturada com uma solução de HBr a 33% em AcOH (8 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h e vertida em água gelada (50 mL). Após agitação durante 10 min, o precipitado foi separado por filtração, lavado (5x) com água e seco sob vácuo a 45 °C para proporcionar ácido 1-(2-bromoetil)ciclopropano-1-carboxílico 3a (753 mg). Síntese do intermediário 3b:

[00111] Uma solução de ácido 1-(2-bromoetil)ciclopropano-1- carboxílico 3a (540 mg, 2,8 mmol) em MeOH (11 mL) foi agitada sob atm de N2 enquanto se resfriava em um banho de gelo. Cloreto de tionila (304 µL, 4,2 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 40 h. Os solventes foram evaporados sob pressão reduzida e coevaporados com CH3CN para proporcionar 1-(2-bromoetil)ciclopropano-1-carboxilato de metila 3b (380 mg). Síntese do intermediário 3c:

[00112] A uma solução agitada de 1-(2-bromoetil)ciclopropano-1- carboxilato de metila 3b (380 mg, 1,84 mmol) em DMF (10 mL) foram adicionados 3-amino-5-metóxifenol [CAS 162155-27-3] (250 mg, 1,80 mmol) e Cs2CO3 (1,17 g, 3,59 mmol). A reação foi agitada a 60 °C durante 18 h, e foi permitido que alcançasse a temperatura ambiente. A mistura foi vertida em H2O (60 mL). O produto foi extraído (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida e coevaporado com tolueno. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (12 g) usando um gradiente de heptano/CH2Cl2/MeOH 100/0/0 a 0/100/0 a 0/99/1. As frações de produto foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com CH3CN para proporcionar 1-(2-(3-amino-5- metoxifenóxi)etil)ciclopropano-1-carboxilato de metila 3c (220 mg). Síntese do intermediário 3d:

[00113] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (320 mg, 0,736 mmol), 1-(2-(3- amino-5-metoxifenóxi)etil)ciclopropano-1-carboxilato de metila 3c (220 mg, 0,829 mmol) e di-isopropiletilamina (254 µL, 1,47 mmol) em 2- butanol (7,5 mL) foi agitada a 55 °C durante 16 h. Foi permitido que a mistura alcançasse a temperatura ambiente e foi vertida em água (25 mL). O produto foi extraído (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (12 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH 100/0/0 a 60/30/10. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com dioxano para proporcionar 1-(2-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)etil)ciclopropano- 1-carboxilato de metila 3d (456 mg). Síntese do Composto 3:

[00114] NaOH a 1 M em água (1,84 mL, 1,84 mmol) foi adicionado a uma solução em agitação de 1-(2-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)etil)ciclopropano- 1-carboxilato de metila 3d (0,456 mg, 0,737 mmol) em dioxano (3 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente sob atm de N2 durante 42 h. Água (15 mL) e HCl a 1 N (2 mL) foram adicionados. Após agitação durante 10 min, o precipitado foi separado por filtração, lavado (3 x) com água e seco sob vácuo a 45 °C. O resíduo foi purificado através de HPLC preparativa (Fase estacionária: RP XBridge® Prep C18 OBD – 10 µm, 30 x 150 mm, fase móvel: solução de NH4HCO3 a 0,25% em água, CH3CN). As frações de produto foram combinadas e os solventes orgânicos foram evaporados. A solução aquosa restante foi extraída (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com MeOH. A espuma resultante foi agitada em H2O/MeOH 3/1 (4 mL), separada por filtração, lavada (3 x) com H2O/MeOH 3/1 e seca sob vácuo a 45 ºC para proporcionar ácido 1-(2-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)etil)ciclopropano-1-carboxílico (Composto 3, 255 mg) como uma mistura racêmica. Composto 3: 1

[00115] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,73 - 0,84 (m, 2 H) 1,00 - 1,11 (m, 2 H) 1,81 - 1,91 (m, 2 H) 3,07 - 3,26 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,97 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,3, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,6 Hz, 1 H) 5,55 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 5,77 (t, J=2,1 Hz, 1 H) 5,90 - 5,98 (m, 2 H) 6,42 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,00 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,39 - 7,49 (m, 2 H) 7,55 (d, J=8,4 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,19 (s l, 1 H)

[00116] LC/MS (método LC-B): Rt 2,19 min, MH+ 605 Exemplo 4: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-3-metilbutanoico (Composto 4) e separação nos Estereoisômeros 4A, 4B, 4C e 4D Síntese do intermediário 4a:

[00117] A uma solução agitada de 4-bromo-3-metilbutanoato de etila [CAS 56703-10-7] (1,0 g, 4,78 mmol) em DMF (15 mL) foram adicionados 3-amino-5-metóxifenol [CAS 162155-27-3] (666 mg, 4,78 mmol) e Cs2CO3 (3,12 g, 9,57 mmol). A reação foi agitada a 70 °C durante 16 h, e foi permitido que alcançasse a temperatura ambiente. A mistura foi vertida em H2O (75 mL). O produto foi extraído (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (25 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc de 100/0 a 50/50. As frações de produto foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com CH3CN, originando 4-(3-amino-5- metoxifenóxi)-3-metilbutanoato de etila 4a (430 mg). Síntese do intermediário 4b:

[00118] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (430 mg, 1,15 mmol), 4-(3- amino-5-metoxifenóxi)-3-metilbutanoato de etila 4a (430 mg, 1,61 mmol) e di-isopropiletilamina (396 µL, 2,30 mmol) em CH3CN (15 mL) foi agitada a 60 °C durante 18 h sob atmosfera de N 2. Foi permitido que a mistura alcançasse a temperatura ambiente, e foi vertida em água (75 mL). O produto foi extraído (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (12 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH 100/0/0 a 40/45/15. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com EtOH para proporcionar 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-3-metilbutanoato de etila 4b (714 mg). Síntese do Composto 4 e separação nos Estereoisômeros 4A, 4B, 4C e 4D:

[00119] NaOH a 1 M em água (2,9 mL, 2,9 mmol) foi adicionado a uma solução em agitação de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-

(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-3-metilbutanoato de etila 4b (714 mg, 1,15 mmol) em uma mistura de solventes de dioxano (5 mL) e EtOH (2 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. HCl a 1 N (3 mL) foi adicionado lentamente. Após agitação durante 2 min, o produto foi extraído (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram separadas, secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (40 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc 100/0/0/0 a 40/45/14,7/0,3. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi agitado em Et2O (5 mL). Os sólidos foram separados por filtração, lavados (3 x) com Et2O e secos sob vácuo a 50ºC para proporcionar ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-3-metilbutanoico (Composto 4, 290 mg) como uma mistura racêmica.

[00120] Os 4 estereoisômeros do Composto 4 (274 mg) foram separados através de SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, iPrOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. Os estereoisômeros nas frações de produto do segundo e do terceiro picos eluídos não foram completamente separados e requereram separação adicional através de SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, EtOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. Os 4 estereoisômeros foram solidificados por liofilização a partir de uma mistura de solventes de CH3CN e água para proporcionar os Estereoisômeros 4A (72 mg), 4B (35 mg), 4C (35 mg) e 4D (67 mg). Composto 4: 1

[00121] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,96 (d, J=6,6 Hz, 3 H)

2,05 - 2,15 (m, 1 H) 2,16 - 2,28 (m, 1 H) 2,39 (dd, J=15,4, 5,5 Hz, 1 H) 3,08 - 3,27 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,65 - 3,75 (m, 2 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,2 Hz, 1 H) 4,43 - 4,59 (m, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,93 (t, J=1,8 Hz, 1 H) 5,97 (s, 1 H) 6,43 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,43 (d, J=7,8 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,4 Hz, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 12,10 (s l, 1 H)

[00122] LC/MS (método LC-B): Rt 2,07 min, MH+ 593 Estereoisômero 4A: 1

[00123] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,96 (d, J=6,8 Hz, 3 H) 2,05 - 2,13 (m, 1 H) 2,22 (dq, J=13,1, 6,6 Hz, 1 H) 2,33 - 2,40 (m, 1 H) 3,06 - 3,21 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,65 - 3,76 (m, 2 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,2 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,1, 6,4 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,93 (t, J=1,9 Hz, 1 H) 5,97 (t, J=1,7 Hz, 1 H) 6,43 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,00 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,43 (m, J=8,6 Hz, 2 H) 7,55 (m, J=8,6 Hz, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 11,51 (s l, 1 H)

[00124] LC/MS (método LC-B): Rt 2,04 min, MH+ 593

[00125] [Į]D20: -59,6° (c 0,245, DMF)

[00126] SFC quiral (método SFC-C): Rt 5,84 min, MH+ 593 pureza quiral 100%. Estereoisômero 4B: 1

[00127] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,96 (d, J=6,6 Hz, 3 H) 2,07 - 2,14 (m, 1 H) 2,22 (dq, J=13,2, 6,5 Hz, 1 H) 2,38 (dd, J=15,2, 5,5 Hz, 1 H) 3,02 - 3,23 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,65 - 3,76 (m, 2 H) 4,04 (td, J=10,3, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,5, 6,2 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,93 (t, J=1,8 Hz, 1 H) 5,97 (t, J=1,7 Hz, 1 H) 6,43 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,00 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,41 - 7,46 (m, 2 H) 7,55 (m, J=8,4 Hz, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 12,00 (s l, 1 H)

[00128] LC/MS (método LC-B): Rt 2,04 min, MH+ 593

[00129] [Į]D20: -47,5° (c 0,255, DMF)

[00130] SFC quiral (método SFC-C): Rt 6,34 min, MH+ 593 pureza quiral 98,0%. Estereoisômero 4C: 1

[00131] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,96 (d, J=6,6 Hz, 3 H) 2,06 - 2,14 (m, 1 H) 2,22 (dq, J=13,3, 6,4 Hz, 1 H) 2,37 (dd, J=15,3, 5,6 Hz, 1 H) 3,08 - 3,22 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,66 - 3,74 (m, 2 H) 4,04 (td, J=10,5, 7,0 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,6 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,1 Hz, 1 H) 5,93 (t, J=1,7 Hz, 1 H) 5,97 (t, J=1,8 Hz, 1 H) 6,44 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,44 (m, J=8,6 Hz, 2 H) 7,55 (m, J=8,6 Hz, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 10,85 - 12,62 (m, 1 H)

[00132] LC/MS (método LC-B): Rt 2,04 min, MH+ 593

[00133] [Į]D20: +47,7° (c 0,26, DMF)

[00134] SFC quiral (método SFC-C): Rt 6,31 min, MH+ 593 pureza quiral 100%. Estereoisômero 4D: 1

[00135] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,96 (d, J=7,0 Hz, 3 H) 2,06 - 2,15 (m, 1 H) 2,17 - 2,28 (m, 1 H) 2,38 (dd, J=15,4, 5,5 Hz, 1 H) 3,07 - 3,26 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,65 - 3,76 (m, 2 H) 4,05 (td, J=10,2, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,4 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,93 (t, J=1,5 Hz, 1 H) 5,97 (t, J=1,5 Hz, 1 H) 6,46 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 7,44 (m, J=8,4 Hz, 2 H) 7,55 (m, J=8,4 Hz, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 11,95 (s l, 1 H)

[00136] LC/MS (método LC-B): Rt 2,04 min, MH+ 593

[00137] [Į]D20: +60,7° (c 0,285, DMF)

[00138] SFC quiral (método SFC-C): Rt 7,58 min, MH+ 593 pureza quiral 100%. Exemplo 5: síntese do ácido 2-(1-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluoro-metóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropil)acético (Composto 5) e separação quiral nos Enantiômeros 5A e 5B Síntese do intermediário 5a:

[00139] 2-(1-(Bromometil)ciclopropil)acetato de metila [855473-50-6] (306 mg, 1,478 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 3- metóxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (250 mg, 1,478 mmol) e K2CO3 (306 mg, 2,217 mmol) em DMF (2,5 mL). A mistura foi agitada a 60 ºC durante 16 h. A reação foi resfriada até 0 °C e diluída com ág ua e gelo. A mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 2-(1-((3-metóxi-5-nitrofenóxi)metil)ciclopropil)acetato de metila 5a. O rendimento foi considerado como quantitativo. O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 5b:

[00140] Uma solução de 2-(1-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)ciclopropil)acetato de metila 5a (520 mg, 1,761 mmol) em MeOH (8 mL), contendo uma quantidade catalítica de Pd/C a 10% (300 mg, 0,282 mmol), foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 à temperatura ambiente durante 18 h. O catalisador foi removido por filtração sobre uma curta almofada de Celite® e o bolo de filtração foi enxaguado várias vezes com EtOAc. Os filtrados combinados foram evaporados para dar 2-(1-((3-amino-5-

metoxifenóxi)metil)ciclopropil)acetato de metila 5b (390 mg), que foi usado sem purificação adicional no próximo passo. Síntese do intermediário 5c:

[00141] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (250 mg, 0,575 mmol), 2-(1-((3- amino-5-metóxi-fenóxi)metil)ciclopropil)acetato de metila 5b (184 mg, 0,575 mmol) e di-isopropiletilamina (200 µL, 1,15 mmol) em CH3CN (7,5 mL) foi agitada a 60 °C durante 18 h. O solvente fo i concentrado sob pressão reduzida. Água/gelo foi adicionado e a mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (30 µm, 24 g, heptano/EtOAc 75/25). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi cristalizado a partir de CH3CN/éter de di-isopropila e seco para dar 2-(1-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluoro-metóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropil)acetato de metila 5c (206 mg). Síntese do Composto 5 e separação nos Enantiômeros 5A e 5B:

[00142] LiOH mono-hidratado (63 mg, 1,502 mmol) em água (1,63 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de 2-(1-((3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropil)acetato de metila 5c (186 mg, 0,3 mmol) em THF (3,7 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. HCl a 3 N foi adicionado para acidificar a mistura reacional, e a solução aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi cristalizado a partir de CH3CN/éter de di-isopropila e seco para dar ácido 2-(1-((3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropil)acético (Composto 5, 115 mg).

[00143] A separação dos enantiômeros do Composto 5 (71 mg) foi realizada por SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, EtOH + iPrNH2 a 0,4%). Para ambos os enantiômeros, as frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. Os resíduos foram divididos entre água e Et2O. As misturas foram acidificadas até pH 1-2 pela adição de HCl a 1 N e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída novamente com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. Os resíduos foram secos sob vácuo a 50 °C para proporcionar o E nantiômero 5A (22 mg) e o Enantiômero 5B (23 mg) como pós esbranquiçados. Composto 5: 1

[00144] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,49 – 0,55 (m, 4 H) 2,33 (s, 2 H) 2,99 - 3,25 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,73 (s, 2 H) 4,05 (td, J=10,40, 7,25 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,25, 6,31 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=9,14 Hz, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 5,95 (s, 1 H) 6,45 (d, J=9,14 Hz, 1 H) 7,02 (d l, J=9,14 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,20 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,51 Hz, 3 H) 8,03 (s, 1 H) 12,01 (s l, 1 H)

[00145] LC/MS (método LC-C): Rt 3,18 min, MH+ 605

[00146] PF = 111°C Enantiômero 5A: 1

[00147] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,46 - 0,58 (m, 4 H) 2,33 (s, 2 H) 3,04 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,72 (s, 2 H) 4,05 (td, J=10,2, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,6 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=9,1 Hz, 1 H) 5,74 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 (t, J=1,6 Hz, 1 H) 5,94 - 5,97 (m, 1 H) 6,45 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,4 Hz, 2 H) 7,51 - 7,59 (m, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,12 (s l, 1 H)

[00148] LC/MS (método LC-A): Rt 1,15 min, MH+ 605

[00149] [Į]D20: +37,0° (c 0,135, DMF)

[00150] SFC quiral (método SFC-E): Rt 5,84 min, MH+ 605 pureza quiral 100%. Enantiômero 5B: 1

[00151] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,46 - 0,57 (m, 4 H) 2,33 (s, 2 H) 3,05 - 3,26 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,72 (s, 2 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,4 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,74 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 (t, J=1,8 Hz, 1 H) 5,94 - 5,97 (m, 1 H) 6,45 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,4 Hz, 2 H) 7,50 - 7,61 (m, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,11 (s l, 1 H)

[00152] LC/MS (método LC-A): Rt 1,15 min, MH+ 605

[00153] [Į]D20: -48,8° (c 0,16, DMF)

[00154] SFC quiral (método SFC-E): Rt 6,53 min, MH+ 605 pureza quiral 100%. Exemplo 6A: síntese do ácido (1R*,2R*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo- 2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)- ciclopropanocarboxílico (Composto 6A) e separação nos Estereoisômeros 6AA e 6AB Síntese do intermediário 6a:

[00155] A uma solução de 2-formilciclopropanocarboxilato de etila [20417-61-2] (9 mL, 67,996 mmol) em MeOH (200 mL) foi adicionado porção a porção NaBH4 (5,15 g, 133,993 mmol) a 0°C e a mistura foi agitada a 0°C durante 2 h. CH 2Cl2 e água foram adicionados. As camadas foram separadas; a camada aquosa foi extraída com CH2Cl2 e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar 2- (hidroximetil)ciclopropanocarboxilato de etila 6a (9,15 g). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 6b:

[00156] Azodicarboxilato de di-terc-butila (4,8 g, 20,809 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução de 3-metóxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (3,2 g, 18,917 mmol), 2- (hidroximetil)ciclopropanocarboxilato de etila 6a (3 g, 20,809 mmol) e PPh3 (5,46 g, 20,809 mmol) em THF (150 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente sob N2 durante 18 h. A solução foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por LC preparativa (SiOH irregular 20-45 µm, 220 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25). As frações puras foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para dar 2-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)ciclopropanocarboxilato de metila 6b (1,4 g). Síntese do intermediário 6c e separação quiral nos enantiômeros 6d e 6e:

[00157] Uma solução de 2-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)ciclopropanocarboxilato de metila 6b (1,3 g, 4,402 mmol) em EtOH (65 mL) contendo uma quantidade catalítica de Pd/C a 10% (750 mg, 0,704 mmol) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 à temperatura ambiente durante 4 h. O catalisador foi removido por filtração sobre uma curta almofada de Celite® e o bolo de filtração foi enxaguado várias vezes com EtOAc. Os filtrados combinados foram evaporados. O resíduo em bruto foi purificado por LC preparativa (SiOH Irregular 20-45 µm, 40 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações puras foram combinadas e o solvente foi evaporado até à secura para dar 2-((3- amino-5-metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxilato de metila 6c (780 mg). Os enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralpak® AD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 80%, EtOH a 20%) para dar o enantiômero eluído em primeiro lugar 6d (trans R*,R*, 344 mg, [Į]D20: -78,6° (c 0,257, DMF)) e o enantiômero eluído em segundo lugar 6e (trans S*,S*, 371 mg, [Į]D20: +74,5°(c 0,251, DMF)). Síntese do intermediário 6f:

[00158] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (376 mg, 0,864 mmol), 2-((3- amino-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxilatometoxifenóxi)metil)ciclopropi l)acetato de (1R*,2R*)-metila 6d (344 mg, 1,297 mmol) e di- isopropiletilamina (298 µL, 1,729 mmol) em CH3CN (12 mL) foi agitada a 80 °C durante 5 dias. O solvente foi concentrado sob pressão reduzida. Água/gelo foi adicionado e a mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (25-30 µm, 40 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para dar 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)-ciclopropanocarboxilato de (1R*,2R*)-metila 6f (500 mg). Síntese do Composto 6A e separação quiral nos Estereoisômeros 6AA e 6AB:

[00159] LiOH mono-hidratado (169 mg, 4,039 mmol) em água (10 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclo-propanocarboxilato de (1R*,2R*)-metila 6f (500 mg, 0,808 mmol) em THF (10 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h e a 45 ºC durante 5 h. HCl a 3 N foi adicionado para acidificar a solução, e a mistura foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (20-45 µm, 40 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para dar ácido (1R*,2R*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo- 2-(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxílico (Composto 6A, 780 mg). Os dois estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 55%, iPrOH a 45%) para dar, após solidificação a partir de heptano/éter de di-isopropila, o Estereoisômero eluído em primeiro lugar 6AA (123 mg) e o Estereoisômero eluído em segundo lugar 6AB (125 mg). Estereoisômero 6AA: 1

[00160] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,75 - 0,96 (m, 1 H) 1,00 – 1,07 (m, 1 H) 1,44 - 1,57 (m, 1 H) 1,57 - 1,70 (m, 1 H) 3,09 - 3,27 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,69 (d ld, J=10,25, 7,72 Hz, 1 H) 3,80 - 3,95 (m, 1 H) 4,00 – 4,09 (m, 1 H) 4,39 - 4,65 (m, 1 H) 5,57 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,95 (s, 1 H) 5,97 (s, 1 H) 6,46 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 7,02 (d l, J=8,20 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,20 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,55 (d l, J=8,20 Hz, 2 H) 8,04 (s l, 1 H) 12,02 (s l, 1 H)

[00161] LC/MS (método LC-C): Rt 2,95 min, MH+ 591

[00162] [Į]D20: -78,0° (c 0,282, DMF)

[00163] SFC quiral (método SFC-G): Rt 1,08 min, MH+ 591 pureza quiral 99,82%. Estereoisômero 6AB: 1

[00164] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,79 - 0,90 (m, 1 H) 1,00 – 1,08 (m, 1 H) 1,43 - 1,57 (m, 1 H) 1,57 - 1,72 (m, 1 H) 2,95 - 3,27

(m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,63 - 3,78 (m, 1 H) 3,78 - 3,98 (m, 1 H) 4,00 – 4,09 (m, 1 H) 4,29 - 4,65 (m, 1 H) 5,57 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 5,76 (s l, 1 H) 5,95 (s, 1 H) 5,96 (s, 1H) 6,46 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=7,57 Hz, 1 H) 7,34 (d l, J=7,88 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=7,88 Hz, 2 H) 7,55 (d l, J=7,88 Hz, 2 H) 8,04 (s l, 1 H) 11,88 (s l, 1 H)

[00165] LC/MS (método LC-C): Rt 2,95 min, MH+ 591

[00166] [Į]D20: +12,9° (c 0,272, DMF)

[00167] SFC quiral (método SFC-G): Rt 1,87 min, MH+ 591 pureza quiral 99,55%. Exemplo 6B: síntese do ácido ((1S*,2S*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo- 2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)- ciclopropanocarboxílico (Composto 6B) e separação nos Estereoisômeros 6BA e 6BB Síntese do intermediário 6g:

[00168] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (405 mg, 0,932 mmol), 2-((3- amino-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxilatometoxifenóxi)metil)ciclopropi l)acetato de (1S*,2S*)-metila 6e (371 mg, 1,398 mmol) e di- isopropiletilamina (321 µL, 1,864 mmol) em CH3CN (12 mL) foi agitada a 80 °C durante 48 h. O solvente foi concentrado so b pressão reduzida. Água/gelo foi adicionado e a mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (25-30 µm, 40 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para dar 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)-ciclopropanocarboxilato de (1S*,2S*)-metila 6g (580 mg). Síntese do Composto 6B e separação quiral nos Estereoisômeros 6BA e 6BB:

[00169] LiOH mono-hidratado (203 mg, 4,846 mmol) em água (10 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução de 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxilato de (1S*,2S*)-metila 6g (600 mg, 0,969 mmol) em THF (10 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 7 h. HCl a 3 N foi adicionado para acidificar a solução, e a mistura foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (20-45 µm, 40 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para dar ácido (1S*,2S*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo- 2-(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxílico (Composto 6B, 348 mg). Os dois estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 55%, iPrOH a 45%) para dar, após solidificação a partir de heptano/éter de di-isopropila, o Estereoisômero eluído em primeiro lugar 6BA (109 mg) e o Estereoisômero eluído em segundo lugar 6BB (102 mg). Estereoisômero 6BA: 1

[00170] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,73 - 0,98 (m, 1 H) 0,98 - 1,08 (m, 1 H) 1,49 - 1,58 (m, 1 H) 1,58 - 1,71 (m, 1 H) 3,00 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,68 (dd, J=10,40, 7,57 Hz, 1 H) 3,84 (dd, J=10,56, 6,15 Hz, 1 H) 4,00 - 4,08 (m, 1 H) 4,50 - 4,57 (m, 1 H) 5,57 (d, J=8,83

Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,95 (s, 1 H) 5,96 (s, 1H) 6,46 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=7,25 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=7,88 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,26 (s l, 1H)

[00171] LC/MS (método LC-D): Rt 2,82 min, MH+ 591

[00172] [Į]D20: -12,5° (c 0,28, DMF)

[00173] SFC quiral (método SFC-G): Rt 1,10 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 6BB: 1

[00174] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,78 - 0,95 (m, 1 H) 1,00 -1,08 (m, 1H) 1,48 - 1,59 (m, 1 H) 1,59 - 1,68 (m, 1 H) 2,91 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,68 (d ld, J=10,40, 7,57 Hz, 1 H) 3,84 (dd, J=10,56, 6,15 Hz, 1 H) 4,00- 4,09 (m, 1 H) 4,30 - 4,58 (m, 1 H) 5,57 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,95 (s, 1 H), 5,96 (s, 1H) 6,45 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=7,88 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,20 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,11 (s l, 1 H)

[00175] LC/MS (método LC-D): Rt 2,81 min, MH+ 591

[00176] [Į]D20: +81,4° (c 0,28, DMF)

[00177] SFC quiral (método SFC-G): Rt 1,87 min, sem MH+, pureza quiral 99,02%. Exemplo 7: síntese do ácido (1r,3r)-3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)ciclobuteno- carboxílico (Composto 7) e separação nos Enantiômeros 7A e 7B

Síntese do intermediário 7a:

[00178] Sob um fluxo de N2, a uma solução de 3- hidroxiciclobutanocarboxilato de etila [17205-02-6] (1 g, 6,936 mmol) em CH2Cl2 (30 mL) foram adicionados piridina (0,838 mL) e anidrido de tosila (2,49 g, 7,63 mmol). A mistura foi agitada ao longo da noite à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada sob vácuo, suspensa em éter de dietila (200 mL) e lavada com ácido clorídrico a 0,5 M (2 × 60 mL), uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (2 × 60 mL), água (60 mL) e salmoura (50 mL). A solução foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para originar 3- (tosilóxi)ciclobutanocarboxilato de etila 7a (2,0 g). Síntese do intermediário 7b:

[00179] 3-(Tosilóxi)ciclobutanocarboxilato de etila 7a (1,94 g, 6,504 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 3-metóxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (1,0 g, 5,912 mmol) e K2CO3 (981 mg, 7,095 mmol) em DMF (10 mL). A mistura foi agitada a 80 ºC durante 16 h. A mistura foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 80 g, heptano/EtOAc 95/5 a 85/15). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar 3-(3- metóxi-5-nitrofenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etila 7b (1,1 g). Síntese do intermediário 7c:

[00180] Uma solução de 3-(3-metóxi-5- nitrofenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etila 7b (1,1 g, 3,725 mmol) em EtOH (20 mL) contendo uma quantidade catalítica de Pd/C a 10% (396 mg, 0,373 mmol) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 à temperatura ambiente durante 4 h. O catalisador foi removido por filtração sobre uma curta almofada de Celite® e o bolo de filtração foi enxaguado várias vezes com MeOH. Os filtrados combinados foram evaporados sob pressão reduzida para dar 3-(3-amino-5- metoxifenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etila 7c (920 mg). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 7d:

[00181] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (1,072 g, 2,467 mmol), 3-(3- amino-5-metoxifenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etila 7c (720 mg, 2,714 mmol) e di-isopropiletilamina (850 µL, 4,934 mmol) em CH3CN (32 mL) foi agitada a 60 °C durante 4 dias. A mistura f oi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HCl a 1 N e salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo para dar 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin- 1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etila 7d (1,6 g), que foi usado como tal no próximo passo. Síntese do Composto 7 e separação quiral nos Enantiômeros 7A e 7B:

[00182] A 0ºC, LiOH mono-hidratado (325 mg, 7,75 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução de 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etila 7d (1,6 g, 2,585 mmol) em THF/água/MeOH (1/1/1) (30 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura foi diluída com água e HCl a 3 N foi adicionado para acidificar a solução. A mistura foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (15-40 µm, 80 g, CH2Cl2/MeOH 100/0 a 98/2). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para dar ácido (1r,3r)- 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclobuteno-carboxílico (Composto 7, 1,16 g). Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 55%, MeOH a 45%) para dar, após solidificação a partir de heptano/éter de di-isopropila, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 7A (358 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 7B (388 mg). Composto 7: 1

[00183] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,19 - 2,30 (m, 2 H) 2,57 (qd, J=6,8, 3,6 Hz, 2 H) 2,95 - 3,05 (m, 1 H) 3,08 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 4,03 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,53 (td, J=10,4, 6,3 Hz, 1 H) 4,68 (quin, J=6,7 Hz, 1 H) 5,54 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,62 (s, 1 H) 5,85 (s, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 6,53 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=7,9 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,45 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) 12,34 (s l, 1 H)

[00184] LC/MS (método LC-C): Rt 2,95 min, MH+ 591 Enantiômero 7A: 1

[00185] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,20 - 2,28 (m, 2 H) 2,53 - 2,60 (m, 2 H) 2,95 - 3,04 (m, 1 H) 3,07 - 3,26 (m, 2 H) 3,60 (s, 3 H) 4,03 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,3 Hz, 1 H) 4,67 (t, J=6,8 Hz, 1 H) 5,53 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,61 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,84 (s, 1 H) 5,91 (s, 1 H) 6,52 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,24 - 12,40 (m, 1 H)

[00186] LC/MS (método LC-C): Rt 2,96 min, MH+ 591

[00187] [Į]D20: -41,6° (c 0,298, DMF)

[00188] SFC quiral (método SFC-H): Rt 1,25 min, MH+ 591, pureza quiral 100%. Enantiômero 7B: 1

[00189] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,19 - 2,28 (m, 2 H) 2,57 (qd, J=6,8, 3,9 Hz, 2 H) 2,95 - 3,04 (m, 1 H) 3,08 - 3,25 (m, 2 H) 3,60 (s, 3 H) 4,03 (td, J=10,5, 7,1 Hz, 1 H) 4,53 (td, J=10,4, 6,3 Hz, 1 H)

4,67 (quin, J=6,7 Hz, 1 H) 5,53 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,61 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,84 (s, 1 H) 5,91 (s, 1 H) 6,52 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,32 (s l, 1 H)

[00190] LC/MS (método LC-C): Rt 2,95 min, MH+ 591

[00191] [Į]D20: +43,7° (c 0,332, DMF)

[00192] SFC quiral (método SFC-H): Rt 2,05 min, MH+ 591, pureza quiral 100%. Exemplo 8: síntese do ácido (1s,3s)-3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)ciclobuteno- carboxílico (Composto 8) e separação nos Enantiômeros 8A e 8B Síntese do intermediário 8a:

[00193] Sob um fluxo de N2, a uma solução de 3- hidroxiciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etila [160351-88-2] (1,86 g, 12,901 mmol) em CH2Cl2 (50 mL) foram adicionados piridina (1,56 mL) e anidrido de tosila (4,63 g, 14,192 mmol). A mistura foi agitada durante 6 h à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada sob vácuo, suspensa em éter de dietila (200 mL) e lavada com ácido clorídrico a 0,5 M (2 × 60 mL), uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (2 × 60 mL), água (60 mL) e salmoura (50 mL) e, depois, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para originar 3-(tosilóxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etila 8a (3,97 g). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 8b:

[00194] 3-(Tosilóxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-etila 8a (3,85 g, 12,904 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 3-metóxi-5- nitrofenol [7145-49-5] (1,98 g, 11,73 mmol) e K2CO3 (1,95 g, 14,07 mmol) em DMF (20 mL). A mistura foi agitada a 80 ºC durante 16 h. A mistura foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 120 g, heptano/EtOAc 95/5 a 85/15). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar 3-(3- metóxi-5-nitrofenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etila 8b (2,04 g). Síntese do intermediário 8c:

[00195] Uma solução de 3-(3-metóxi-5- nitrofenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etila 8b (2,04 g, 6,908 mmol) em EtOH (50 mL) contendo uma quantidade catalítica de Pd/C a 10% (735 mg, 0,691 mmol) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 à temperatura ambiente durante 4 h. O catalisador foi removido por filtração sobre uma curta almofada de Celite® e o bolo de filtração foi enxaguado várias vezes com EtOH. Os filtrados combinados foram evaporados sob pressão reduzida para dar 3-(3-amino-5- metoxifenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etila 8c (1,8 g). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 8d:

[00196] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (1,5 g, 3,462 mmol), 3-(3-amino- 5-metoxifenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etila 8c (870 mg, 3,462 mmol) e di-isopropiletilamina (1,19 mL, 6,924 mmol) em CH3CN (30 mL) foi agitada a 80°C durante 16 h. A mistura foi dilu ída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HCl a 1 N e salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo. O composto foi cristalizado a partir de CH3CN/Et2O para dar o intermediário 8 (fração 1, 820 mg). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar outro lote do intermediário 8 em bruto (fração 2, 1 g).

[00197] A reação foi duplicada começando a partir de 692 mg (1,592 mmol) de 1c (usando as mesmas condições de reação como descrito acima). O produto de reação foi cristalizado a partir de Et2O para dar o intermediário 8 (fração 3, 400 mg). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar outro lote do intermediário 8 (fração 4, 600 mg). As frações 2 e 4 foram combinadas e purificadas por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 80 g, heptano/EtOAc 90/10 a 70/30). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar a fração 5 (250 mg). As frações 1, 3 e 5 foram combinadas e secas para dar 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etila 8d (1,53 g). Síntese do Composto 8 e separação quiral nos Enantiômeros 8A e 8B:

[00198] A 0ºC, LiOH mono-hidratado (318 mg, 7,58 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução de 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-etila 8d (1,53 g, 2,529 mmol) em THF/água/MeOH (1/1/1) (30 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura foi diluída com água e HCl a 3 N foi adicionado para acidificar a solução. A mistura foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (15-40 µm, 40 g, CH2Cl2/MeOH 100/0 a 98,5/1,5). As frações puras foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para dar ácido (1s,3s)-3-(3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclobutanocarboxílico (Composto 8, 1,26 g). Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 55%, EtOH a 45%) para dar, após solidificação a partir de éter/éter de di-isopropila, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 8A (442 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 8B (433 mg). Composto 8: 1

[00199] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,03 - 2,13 (m, 2 H) 2,57 - 2,66 (m, 2 H) 2,66 - 2,76 (m, 1 H) 3,08 - 3,26 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 4,04 (td, J=10,2, 7,3 Hz, 1 H) 4,44 - 4,58 (m, 2 H) 5,54 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,66 (s, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 6,49 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,02 (d l, J=8,2 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,45 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) 12,27 (s l, 1 H)

[00200] LC/MS (método LC-C): Rt 2,90 min, MH+ 591 Enantiômero 8A: 1

[00201] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,01 - 2,14 (m, 2 H) 2,55 - 2,72 (m, 3 H) 3,08 - 3,24 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 4,04 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,41 - 4,57 (m, 2 H) 5,54 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,66 (s, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 6,48 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=8,2 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H)

[00202] LC/MS (método LC-C): Rt 2,90 min, MH+ 591

[00203] [Į]D20: -47,1° (c 0,274, DMF)

[00204] SFC quiral (método SFC-I): Rt 1,18 min, MH+ 591, pureza quiral 100%.

Enantiômero 8B: 1

[00205] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,02 - 2,13 (m, 2 H) 2,55 - 2,70 (m, 3 H) 3,06 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 4,04 (td, J=10,2, 7,3 Hz, 1 H) 4,39 - 4,57 (m, 2 H) 5,54 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,66 (s, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 6,48 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=7,9 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H)

[00206] LC/MS (método LC-C): Rt 2,91 min, MH+ 591

[00207] [Į]D20: +40,0° (c 0,25, DMF)

[00208] SFC quiral (método SFC-I): Rt 2,16 min, MH+ 591, pureza quiral 100%. Exemplo 9: síntese do ácido 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico (Composto 9) e separação quiral nos Enantiômeros 9A e 9B Síntese do intermediário 9a:

[00209] 3-metóxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (1,1 g, 6,4 mmol), azodicarboxilato de di-terc-butila (TBAD, 1,65 g, 7,04 mmol) e trifenilfosfina (2,35 g, 8,96 mmol) foram dissolvidos em THF seco (25 mL) à temperatura ambiente sob atmosfera de N2. Uma solução de 3- (hidroxilmetil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metila [180464-87-3]

(1,0 g, 6,4 mmol) em THF seco (5 mL) foi adicionada gota a gota (exotérmica). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida e o óleo amarelo residual foi purificado por cromatografia em sílica-gel (100 g) usando um gradiente de EtOAc:EtOH (3:1)/heptano 0/100 a 50/50. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado com uma pequena quantidade de Et2O. O sólido foi separado por filtração e lavado com uma pequena quantidade de Et2O e seco sob vácuo a 50 °C para 3-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metila 9a (1,06 g). Síntese do intermediário 9b:

[00210] Uma solução de 3-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metila 9a (1,06 g, 3,44 mmol) em MeOH (150 mL) contendo uma quantidade catalítica de Pd/C a 10% (366 mg, 0,34 mmol) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 à temperatura ambiente durante 10 min. O catalisador foi removido por filtração sobre uma curta almofada de Celite® sob atmosfera de N2 e o bolo de filtração foi enxaguado várias vezes com MeOH. Os filtrados combinados foram evaporados para dar 3-((3- amino-5-metoxifenóxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metila 9b (961 mg) como um óleo preto que foi usado sem purificação adicional no próximo passo. Síntese do intermediário 9c:

[00211] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (1,16 g, 2,67 mmol), 3-((3-amino- 5-metoxifenóxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metila 9b (961 mg, 3,47 mmol) e di-isopropiletilamina (689 µL, 4,0 mmol) em CH3CN (50 mL) foi agitada a 80°C durante a noite. O so lvente foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em CH2Cl2.

A solução orgânica foi lavada com HCl a 1 N e água, seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (100 g) usando um gradiente de EtOAc:EtOH (3:1)/heptano 0/100 a 50/50. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi suspenso em uma pequena quantidade de heptano/EtOAc 10/1 e o sólido foi separado por filtração e lavado com uma pequena quantidade de heptano. Os sólidos foram secos a vácuo a 50 ºC para dar 3-((3-((1- (4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metila 9c (1,21 g) como um pó branco. Síntese do Composto 9 e separação nos Enantiômeros 9A e 9B:

[00212] LiOH (92 mg, 3,84 mmol) foi adicionado a uma solução de 3- ((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)- 5-metoxifenóxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metila 9c (1,21 g, 1,92 mmol) em uma mistura de solventes de MeOH (20 mL), THF (40 mL) e água (20 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. HCl a 1 N (1 mL) foi adicionado e os voláteis orgânicos foram evaporados sob pressão reduzida. A mistura aquosa residual foi diluída com água, acidificada com HCl a 1 N até pH 2 e extraída duas vezes com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi seco sob vácuo a 50 ºC para dar ácido 3-((3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluoro-metóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico (Composto 9, 1,06 g) como um sólido amarelo-pálido.

[00213] Os enantiômeros do Composto 9 (994 mg) foram separados por SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralcel® Diacel OD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, EtOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida. O produto eluído em primeiro lugar foi dividido entre EtOAc e água. HCl a 1 N foi adicionado e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída novamente com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas, evaporadas sob pressão reduzida e secas sob vácuo a 50 ºC para dar o Enantiômero 9A (353 mg). O produto eluído em segundo lugar foi dividido entre EtOAc e água. HCl a 1 N foi adicionado e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída novamente com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas, evaporadas sob pressão reduzida e secas sob vácuo a 50 ºC para dar o Enantiômero 9B (193 mg). Composto 9: 1

[00214] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,92 (s, 6 H) 3,06 - 3,27 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,87 (s, 2 H) 4,06 (td, J=10,3, 7,1 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,6 Hz, 1 H) 5,58 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,75 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 - 5,97 (m, 2 H) 6,46 (d, J=9,1 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,41 - 7,47 (m, 2 H) 7,51 - 7,58 (m, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 12,37 (s l, 1 H)

[00215] LC/MS (método LC-A): Rt 1,09 min, MH+ 617 Enantiômero 9A: 1

[00216] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,92 (s, 6 H) 3,07 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,87 (s, 2 H) 3,98 - 4,11 (m, 1 H) 4,51 (td, J=10,2, 6,4 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,75 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 - 5,96 (m, 2 H) 6,46 (d, J=9,1 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,4 Hz, 2 H) 7,50 - 7,59 (m, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 12,37 (s l, 1 H)

[00217] LC/MS (método LC-B): Rt 1,91 min, MH+ 617

[00218] [Į]D20: -43,6° (c 0,5, DMF)

[00219] SFC quiral (método SFC-D): Rt 5,26 min, MH+ 617 pureza quiral 98,6%. Enantiômero 9B:

[00220] H RMN (360 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,93 (s, 6 H) 3,08 - 3,25 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,88 (s, 2 H) 4,00 - 4,11 (m, 1 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,6 Hz, 1 H) 5,58 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,76 (t, J=1,8 Hz, 1 H) 5,92 - 5,98 (m, 2 H) 6,47 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,4 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,4 Hz, 2 H) 7,51 - 7,60 (m, 2 H) 8,04 (s l, 1 H) 12,38 (s l, 1 H)

[00221] LC/MS (método LC-B): Rt 1,91 min, MH+ 617

[00222] [Į]D20: +42,2° (c 0,41, DMF)

[00223] SFC quiral (método SFC-D): Rt 6,47 min, MH+ 617 pureza quiral 99,5%. Exemplo 10: síntese do ácido (1s,3s)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluoro-metóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclobutenocarboxílico (Composto 10) e separação quiral nos Enantiômeros 10A e 10B Síntese do intermediário 10a:

[00224] Sob um fluxo de N2, a uma solução de 3- (hidroximetil)ciclobutanocarboxilato de metila [89941-55-9] (1,4 g, 9,71 mmol) em CH2Cl2 (20 mL) foram adicionados piridina (1,17 mL) e anidrido de tosila (3,49 g, 10,682 mmol). A mistura foi agitada durante 16 h à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada sob vácuo, suspensa em éter de dietila (200 mL) e lavada com ácido clorídrico a

0,5 M (2 × 50 mL), uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (2 × 50 mL) e salmoura (50 mL). A mistura foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para originar 3- ((tosilóxi)metil)ciclobutanocarboxilato de metila 10a (2,15 g). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese dos intermediários 10b e 10c:

[00225] 3-((Tosilóxi)metil)ciclobutanocarboxilato 10a (2,15 g, 7,206 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 3-metóxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (1,22 g, 7,206 mmol) e K2CO3 (1,5 g, 10,809 mmol) em DMF (14 mL). A mistura foi agitada a 60 ºC durante 16 h. A mistura foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 80 g, heptano/EtOAc 85/15 a 80/20). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura. Os estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralpak® AD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 55%, MeOH a 45%) para dar 3-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-metila 10b (541 mg) e 3-((3-metóxi-5-nitrofenóxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)- metila 10c (428 mg). Síntese do intermediário 10d:

[00226] Uma solução de 3-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-metila 10b (530 mg, 1,795 mmol) em MeOH (10 mL) contendo uma quantidade catalítica de Pd/C a 10% (191 mg, 0,179 mmol) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 à temperatura ambiente durante 4 h. O catalisador foi removido por filtração sobre uma curta almofada de Celite® e o bolo de filtração foi enxaguado várias vezes com MeOH. Os filtrados combinados foram evaporados sob pressão reduzida para dar 3-((3-

amino-5-metoxifenóxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-metila 10d (480 mg). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 10e:

[00227] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (580 mg, 1,334 mmol), 3-((3- amino-5-metoxifenóxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-metila 10d (460 mg, 1,734 mmol) e di-isopropiletilamina (460 µL, 2,667 mmol) em CH3CN (10 mL) foi agitada a 60 °C durante 48 h. A mist ura foi concentrada sob pressão reduzida e absorvida com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HCl a 1 N e água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo para dar, após cristalização a partir de Et2O/éter de di-isopropila, 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)ciclobuteno- carboxilato de (1s,3s)-metila 10e (625 mg). Síntese do Composto 10 e separação quiral nos Enantiômeros 10A e 10B:

[00228] A 0ºC, LiOH mono-hidratado (127 mg, 3,029 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução de 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1s,3s)-metila 10e (625 mg, 1,01 mmol) em THF/água/MeOH (1/1/1) (15 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h. A mistura foi resfriada até 0 ºC e foi diluída com água. HCl a 3 N foi adicionado para acidificar a solução e a mistura foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi cristalizado a partir de Et2O/éter de di- isopropila para dar ácido (1s,3s)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)ciclobuteno- carboxílico (Composto 10, 440 mg). Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Whelk® O1 (S,S)

5 µm 250 x 21,1 mm, fase móvel: CO2 a 58%, MeOH a 42%) para dar, após solidificação a partir de heptano/éter de di-isopropila/éter, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 10A (116 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 10B (119 mg). Composto 10: 1

[00229] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,87 - 1,99 (m, 2 H) 2,18 - 2,30 (m, 2 H) 2,53 - 2,61 (m, 1 H) 2,97 (quin, J=8,9 Hz, 1 H) 3,08 - 3,27 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,78 (d l, J=6,3 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,2 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,5 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,72 - 5,78 (m, 1 H) 5,94 (s, 2 H) 6,45 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 6,95 - 7,06 (m, 1 H) 7,34 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) 12,08 (s l, 1 H)

[00230] LC/MS (método LC-D): Rt 2,94 min, MH+ 605

[00231] PF = 128°C Enantiômero 10A: 1

[00232] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,84 - 1,97 (m, 2 H) 2,15 - 2,30 (m, 2 H) 2,53 - 2,61 (m, 1 H) 2,94 (quin, J=8,9 Hz, 1 H) 3,07 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,77 (d l, J=6,3 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,4, 6,9 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,1 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,74 (t, J=1,9 Hz, 1 H) 5,93 (s, 2 H) 6,44 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H)

[00233] LC/MS (método LC-C): Rt 3,08 min, MH+ 605

[00234] [Į]D20: -44,0 (c 0,314, DMF)

[00235] SFC quiral (método SFC-J): Rt 1,63 min, MH+ 605, pureza quiral 100%. Enantiômero 10B: 1

[00236] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,85 - 1,97 (m, 2 H) 2,17 - 2,28 (m, 2 H) 2,53 - 2,58 (m, 1 H) 2,94 (quint, J=8,8 Hz, 1 H) 3,07 - 3,24 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,72 - 3,82 (m, 2 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,3 Hz,

1 H) 4,52 (td, J=10,4, 6,9 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,72 - 5,77 (m, 1 H) 5,93 (s, 2 H) 6,44 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H)

[00237] LC/MS (método LC-C): Rt 3,08 min, MH+ 605

[00238] [Į]D20: +45,5° (c 0,308, DMF)

[00239] SFC quiral (método SFC-J): Rt 2,14 min, MH+ 605, pureza quiral 99,57%. Exemplo 11: síntese do ácido (1r,3r)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)ciclobuteno- carboxílico (Composto 11) e separação quiral nos Enantiômeros 11A e 11B Síntese do intermediário 11a:

[00240] Uma solução de 3-((3-metóxi-5-nitrofenóxi)metil)ciclobuteno- carboxilato de (1r,3r)-metila 10c (410 mg, 1,388 mmol) em MeOH (10 mL) contendo uma quantidade catalítica de Pd/C a 10% (148 mg, 0,139 mmol) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 à temperatura ambiente durante 4 h. O catalisador foi removido por filtração sobre uma curta almofada de Celite® e o bolo de filtração foi enxaguado várias vezes com MeOH. Os filtrados combinados foram evaporados sob pressão reduzida para dar 3-((3-amino-5- metoxifenóxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-metila 11a (370 mg).

O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 11b:

[00241] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (460 mg, 1,058 mmol), 3-((3- amino-5-metoxifenóxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-metila 11a (365 mg, 1,376 mmol) e di-isopropiletilamina (365 µL, 2,117 mmol) em CH3CN (8 mL) foi agitada a 60 °C durante 48 h. A mistu ra foi concentrada sob pressão reduzida e absorvida com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HCl a 1 N e água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo para dar, após cristalização a partir de Et2O/éter de di-isopropila, 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-metila 11b (515 mg). Síntese do Composto 11 e separação quiral nos Enantiômeros 11A e 11B:

[00242] A 0ºC, LiOH mono-hidratado (105 mg, 2,496 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução de 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)ciclobutanocarboxilato de (1r,3r)-metila 11b (515 mg, 0,832 mmol) em THF/água/MeOH (1/1/1) (15 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 48 h. A mistura foi resfriada até 0ºC e foi diluída com água. HCl a 3 N foi adicionado para acidificar a solução e a mistura foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 24 g, CH2Cl2/CH3OH 100/0 a 98/2). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar ácido (1r,3r)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)ciclobutanocarboxílico (Composto 11, 460 mg). Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral

(Fase estacionária: Whelk® O1 (S,S) 5 µm 250 x 21,1 mm, fase móvel: CO2 a 58%, MeOH a 42%) para dar, após cristalização a partir de éter/éter de di-isopropila, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 11A (121 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 11B (120 mg). Composto 11: 1

[00243] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,92 - 2,04 (m, 2 H) 2,21 - 2,31 (m, 2 H) 2,57 - 2,62 (m, 1 H) 3,04 - 3,26 (m, 3 H) 3,63 (s, 3 H) 3,88 (d l, J=6,9 Hz, 2 H) 4,00 - 4,11 (m, 1 H) 4,47 - 4,58 (m, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,78 (s, 1 H) 5,96 (d l, J=9,7 Hz, 2 H) 6,45 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,02 (d l, J=8,2 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,45 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) 12,12 (s l, 1 H)

[00244] LC/MS (método LC-D): Rt 2,95 min, MH+ 605 Enantiômero 11A: 1

[00245] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,94 - 2,03 (m, 2 H) 2,21 - 2,31 (m, 2 H) 2,55 - 2,62 (m, 1 H) 3,04 - 3,25 (m, 3 H) 3,62 (s, 3 H) 3,87 (d, J=7,3 Hz, 2 H) 4,04 (td, J=10,4, 6,9 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,3 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,78 (t, J=1,9 Hz, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 6,45 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,12 (s l, 1 H)

[00246] LC/MS (método LC-C): Rt 3,08 min, MH+ 605

[00247] [Į]D20: -43,3° (c 0,319, DMF)

[00248] SFC quiral (método SFC-J): Rt 1,73 min, MH+ 605, pureza quiral 100%. Enantiômero 11B: 1

[00249] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,92 - 2,02 (m, 2 H) 2,21 - 2,32 (m, 2 H) 2,55 - 2,62 (m, 1 H) 3,04 - 3,25 (m, 3 H) 3,62 (s, 3 H) 3,87 (d, J=6,9 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,3, 7,1 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,5 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,78 (t , J=1,9 Hz, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 6,45 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=8,2 Hz, 1 H) 7,33 (d,

J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,16 (s l, 1 H)

[00250] LC/MS (método LC-C): Rt 3,08 min, MH+ 605

[00251] [Į]D20: +45,5° (c 0,323, DMF)

[00252] SFC quiral (método SFC-J): Rt 2,36 min, MH+ 605, pureza quiral 99,61%. Exemplo 12: síntese do ácido 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)propanoico (Composto 12) e separação quiral nos Enantiômeros 12A e 12B Síntese do intermediário 12a:

[00253] 1,4-Diazabiciclo[2.2.2]octano (66 mg, 0,591 mmol) foi adicionado a uma solução de 3-metóxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (2,0 g, 11,825 mmol), etilacetilenocarboxilato (1,2 mL, 11,825 mmol) em CH2Cl2 (20 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi vertida em água e as camadas foram decantadas. A camada orgânica foi lavada com água, salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para dar 3-(3- metóxi-5-nitrofenóxi)acrilato de etila 12a (3,22 g, mistura E/Z). Síntese do intermediário 12b:

[00254] Uma mistura de 3-(3-metóxi-5-nitrofenóxi)acrilato de etila 12a (3,2 g, 11,97 mmol) e Pd/C (10%) (2,5 g, 2,395 mmol) em CH3OH (100 mL) foi hidrogenada sob uma pressão de 3 bar durante 3 h. O catalisador foi removido por filtração através de uma almofada de Celite®. O bolo de filtração foi enxaguado com CH3OH e os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 80 g, heptano/EtOAc 75/25). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar 3-(3-amino-5- metoxifenóxi)propanoato de etila 12b (1,8 g). Síntese do intermediário 12c:

[00255] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (1,0 g, 2,301 mmol), 3-(3-amino- 5-metoxifenóxi)-propanoato de etila 12b (716 mg, 2,991 mmol) e di- isopropiletilamina (793 µL, 4,602 mmol) em CH3CN (29 mL) foi agitada a 60°C durante 16 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e absorvida com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HCl a 1 N e água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 80 g, heptano/EtOAc 75/25). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar ácido 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2- (6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)propanoico 12c (660 mg). Síntese do Composto 12 e separação quiral nos Enantiômeros 12A e 12B:

[00256] A 0ºC, LiOH mono-hidratado (79 mg, 1,889 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução de ácido 3-(3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)propanoico 12c (560 mg, 0,944 mmol) em THF/água/MeOH (1/1/1) (15 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi resfriada até 0 ºC e foi diluída com água. HCl a 3 N foi adicionado para acidificar a solução. A mistura foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado através de fase reversa (Fase estacionária: YMC-DispoPack AT ODS-25: 120 g, fase móvel: Gradiente de NH4HCO3 a 75%, 0,2%, CH3CN a 25% até NH4HCO3 a 35%, 0,2%, CH3CN a 65%). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar ácido 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)propanoico (Composto 12, 126 mg). Os dois enantiômeros foram separados em um lote de 70 mg através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD- H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 65%, iPrOH a 35% (+ iPrNH2 a 0,3%) para dar, após liofilização em uma mistura de CH3CN (2 mL)/água (8 mL), o Enantiômero eluído em primeiro lugar 12A (30 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 12B (35 mg). Composto 12: 1

[00257] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,56 (t, J=6,1 Hz, 2 H) 3,04 - 3,26 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,95 - 4,11 (m, 3 H) 4,43 - 4,61 (m, 1 H) 5,56 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 5,94 (d l, J=7,1 Hz, 2 H) 6,46 (d, J=9,1 Hz, 1 H) 7,00 (d l, J=8,1 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,43 (d, J=8,1 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,6 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H)

[00258] LC/MS (método LC-C): Rt 2,84 min, MH+ 565 Enantiômero 12A: 1

[00259] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,62 (t l, J=6,0 Hz, 2 H) 3,09 - 3,24 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 4,00 - 4,10 (m, 3 H) 4,47 - 4,57 (m, 1 H) 5,58 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,95 (d l, J=6,6 Hz, 2 H) 6,49 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,02 (d l, J=8,2 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) 12,04 - 12,63 (m, 1 H)

[00260] LC/MS (método LC-C): Rt 2,83 min, MH+ 565

[00261] [Į]D20: -47,3° (c 0,275, DMF)

[00262] SFC quiral (método SFC-K): Rt 2,50 min, MH+ 565, pureza quiral 100%. Enantiômero 12B: 1

[00263] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,58 - 2,67 (m, 2 H) 3,08 - 3,25 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,99 - 4,12 (m, 3 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,1 Hz, 1 H) 5,58 (s, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,95 (d l, J=6,6 Hz, 2 H) 6,50 (s l, 1 H) 7,02 (d l, J=7,9 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) 12,35 (s l, 1 H)

[00264] LC/MS (método LC-C): Rt 2,83 min, MH+ 565

[00265] [Į]D20: +41,8° (c 0,297, DMF)

[00266] SFC quiral (método SFC-K): Rt 4,34 min, MH+ 565, pureza quiral 99,1%. Exemplo 13: síntese do ácido 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)pentanoico (Composto 13) e separação quiral nos Enantiômeros 13A e 13B Síntese do intermediário 13a:

[00267] A uma solução agitada de 5-bromo-valerato de metila [CAS 5454-83-1] (1,06 mL, 7,19 mmol) em DMF (25 mL) foram adicionados 3-amino-5-metóxifenol [CAS 162155-27-3] (1,0 g, 7,19 mmol) e Cs2CO3 (4,68 g, 14,4 mmol). A reação foi agitada a 60 °C d urante 18 h, e foi permitido que alcançasse a temperatura ambiente. A mistura foi vertida em H2O (125 mL). O produto foi extraído (2 x) com CH2Cl2. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (25 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc 100/0 a 50/50. As frações de produto foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com CH3CN. O produto foi seco sob vácuo a 45 ºC para proporcionar 5-(3-amino-5- metoxifenóxi)pentanoato de metila 13a (200 mg). Síntese do intermediário 13b:

[00268] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (340 mg, 0,78 mmol), 5-(3- amino-5-metoxifenóxi)pentanoato de metila 13a (198 mg, 0,78 mmol) e di-isopropiletilamina (270 µL, 1,56 mmol) em CH3CN (30 mL) foi agitada a 60°C durante 18 h. Foi permitido que a mistura al cançasse a temperatura ambiente e foi vertida em água (150 mL). O produto foi extraído (2 x) com Et2O. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4, filtradas e evaporadas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (40 g) usando um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH 100/0/0 a 40/45/15. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com dioxano para proporcionar 5-(3- ((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)pentanoato de metila 13b (475 mg). Síntese do Composto 13 e separação nos Enantiômeros 13A e 13B:

[00269] NaOH a 1 M em água (1,96 mL, 1,96 mmol) foi adicionado a uma solução em agitação de 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)pentanoato de metila 13b (475 mg, 0,78 mmol) em dioxano (5 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4,5 h. A mistura reacional foi diluída com água (20 mL), HCl a 1 N (2,1 mL). Após agitação durante 10 min, o produto foi extraído com 2-Me-THF. A camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (40 g) com um gradiente de heptano/EtOAc/EtOH/HOAc 100/0/0/0 a 40/45/14,7/0,3. As frações de produto foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida até um volume residual de ~7,5 mL, permitindo precipitação do produto de reação. Os sólidos foram separados por filtração, lavados (3 x) com EtOAc/heptano 1/3 e secos sob vácuo a 45ºC para proporcionar ácido 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)pentanoico (Composto 13, 139 mg) como uma mistura racêmica.

[00270] Os enantiômeros do Composto 13 (112 mg) foram separados através de SFC quiral preparativa (Fase estacionária: Chiralpak® Diacel OD 20 x 250 mm, fase móvel: CO2, EtOH + iPrNH2 a 0,4%). As frações contendo o primeiro produto eluído foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e coevaporadas com CH3CN. O resíduo foi liofilizado a partir de uma mistura de solventes de CH3CN (1,5 mL) e água (1 mL) para proporcionar o Enantiômero 13A (39 mg). As frações contendo o segundo produto eluído foram combinadas, evaporadas sob pressão reduzida e evaporadas com CH3CN. O resíduo foi liofilizado a partir de CH3CN (1,75 mL) e água (1,25 mL) para proporcionar o Enantiômero 13B (33 mg). Composto 13 1

[00271] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,55 - 1,69 (m, 4 H) 2,25 (t, J=7,0 Hz, 2 H) 3,07 - 3,26 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,83 (t, J=5,9 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,2 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,4 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,75 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,91 - 5,97 (m, 2 H) 6,42 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,3, 1,7 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,38 - 7,48 (m, 2 H) 7,55 (d, J=8,6 Hz, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 12,01 (s, 1 H)

[00272] LC/MS (método LC-A): Rt 1,13 min, MH+ 593 Enantiômero 13A: 1

[00273] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,55 - 1,69 (m, 4 H)

2,24 (t, J=7,0 Hz, 2 H) 3,07 - 3,26 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,83 (t, J=5,9 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,5, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,4 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,75 (t, J=2,1 Hz, 1 H) 5,92 - 5,96 (m, 2 H) 6,42 (d, J=8,6 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,39 - 7,48 (m, 2 H) 7,55 (d, J=8,6 Hz, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 12,02 (s l, 1 H)

[00274] LC/MS (método LC-B): Rt 2,08 min, MH+ 593

[00275] [Į]D20: -48,6° (c 0,43, DMF)

[00276] SFC quiral (método SFC-D): Rt 5,27 min, MH+ 593 pureza quiral 100%. Enantiômero 13B: 1

[00277] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,55 - 1,69 (m, 4 H) 2,24 (t, J=7,2 Hz, 2 H) 3,04 - 3,25 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,83 (t, J=5,9 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,2 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,2 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,75 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,92 - 5,96 (m, 2 H) 6,42 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,1, 1,5 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,1 Hz, 1 H) 7,42 - 7,46 (m, 2 H) 7,55 (d, J=8,6 Hz, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 12,00 (s l, 1 H)

[00278] LC/MS (método LC-B): Rt 2,08 min, MH+ 593

[00279] [Į]D20: +48,3° (c 0,42, DMF)

[00280] SFC quiral (método SFC-D): Rt 6,94 min, MH+ 593 pureza quiral 100%. Exemplo 14: síntese do ácido 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluoro-metóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)pentanoico (Composto 14) e separação quiral nos Enantiômeros 14A e 14B

Síntese do intermediário 14a:

[00281] Em um tubo selado sob atmosfera de N2, PdCl2(PPh3)2 (1,5 g, 2,2 mmol) foi adicionado a uma solução desgaseificada de 1-bromo- 3-metóxi-5-nitrobenzeno [CAS 16618-67-0] (5,0 g, 22 mmol), acrilato de metila (6,0 mL, 67 mmol) em CH3CN (45 mL) e trietilamina (12 mL). A reação foi agitada a 70°C durante 18 h. A mistura f oi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 120 g, gradiente de heptano/EtOAc de 90/10 a 75/25) para dar 3-(3-metóxi-5-nitrofenil)acrilato de (E)-metila 14a (2,0 g). Síntese do intermediário 14b:

[00282] Sob N2 a 0 ºC, hidreto de di-isobutilalumínio (1 M em CH2Cl2) (20 mL, 20 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 3-(3- metóxi-5-nitrofenil)acrilato de (E)-metila 14a (2,4 g, 10,12 mmol) em CH2Cl2 (65 mL). A reação foi lentamente aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 2 h. A mistura foi extinta com HCl (3 N) e extraída com CH2Cl2. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para dar (E)-3-(3-metóxi-5- nitrofenil)prop-2-en-1-ol 14b (2,1 g). O composto foi usado como tal no próximo passo.

Síntese do intermediário 14c:

[00283] Sob N2 a 0°C, Periodinano de Dess-Martin (24 mL, 11,04 mmol) foi lentamente adicionado a uma solução de (E)-3-(3-metóxi-5- nitrofenil)prop-2-en-1-ol 14b (2,1 g, 10,04 mmol) em CH2Cl2 (64 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h. Água foi adicionada e a mistura foi filtrada. O filtrado foi extraído com CH2Cl2, seco sobre MgSO4 e evaporado até à secura para dar (E)-3-(3-metóxi- 5-nitrofenil)acrilaldeído 14c (2,5 g). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 14d:

[00284] Sob N2, (carbetoximetileno)trifenilfosforano (5,0 g, 14,48 mmol) foi adicionado em uma porção a uma mistura de (E)-3-(3-metóxi- 5-nitrofenil)acrilaldeído 14c (2,5 g, 9,65 mmol, 80% puro) em CH2Cl2 (62 mL) e agitado à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 80 g, gradiente de heptano/EtOAc de 85/15 a 60/30) para dar 5-(3-metóxi-5- nitrofenil)penta-2,4-dienoato de (2E,4E)-etila 14d (2,1 g). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 14e:

[00285] Uma mistura de 5-(3-metóxi-5-nitrofenil)penta-2,4-dienoato de (2E,4E)-etila 14d (1,9 g, 6,85 mmol) em EtOH (40 mL) e EtOAc (6,7 mL) foi hidrogenada sob uma pressão atmosférica de H2 durante 18 h com Pd/C (10%) (0,73 g, 0,69 mmol) como um catalisador. O catalisador foi removido por filtração através de uma almofada de Celite®. A Celite® foi lavada com EtOAc e os filtrados combinados foram concentrados sob vácuo. O resíduo foi hidrogenado novamente em EtOH (40 mL) e EtOAc (6,7 mL) sob uma pressão atmosférica de H2 durante 72 h com Pd/C (10%) (0,73 g, 0,69 mmol) como um catalisador. O catalisador foi removido por filtração através de uma almofada de Celite®. A Celite® foi lavada com EtOAc e os filtrados combinados foram concentrados sob vácuo para dar 5-(3-amino-5-metoxifenil)pentanoato de etila 14e (1,4 g). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 14f:

[00286] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (1,6 g, 3,71 mmol), 5-(3-amino-5- metoxifenil)pentanoato de etila 14e (1,4 g, 5,57 mmol) e di- isopropiletilamina (1,3 mL, 7,43 mmol) em CH3CN (19 mL) foi agitada a 80°C durante 18 h. A mistura foi absorvida com EtOA c e lavada com HCl a 0,5 N (duas vezes) e água. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 40 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25) para dar 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo- 2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)pentanoato de etila 14f (1,8 g). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do Composto 14 e separação quiral nos Enantiômeros 14A e 14B:

[00287] Uma solução de LiOH mono-hidratado (0,62 g, 15 mmol) em água (16 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de 5-(3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenil)pentanoato de etila 14f (1,8 g, 2,98 mmol) em THF (36 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. LiOH mono- hidratado (0,62 g, 15 mmol) foi adicionado novamente e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 h. A solução foi acidificada com HCl (3 N) e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 40 g, CH2Cl2/MeOH 100/0 a 98/2) para dar ácido 5-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo- 2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)pentanoico (composto 14, 920 mg). Os enantiômeros foram separados através de

SFC quiral (Fase estacionária: Chiralpak® AD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 55%, EtOH a 45%) para dar, após solidificação a partir de pentanoEt2O, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 14A (248 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 14B (263 mg). Composto 14: 1

[00288] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,47 (s l, 4 H) 2,15 – 2,22 (m, 2 H) 2,34 – 2,43 (m, 2 H) 3,07 - 3,26 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,92 - 4,14 (m, 1 H) 4,40 - 4,64 (m, 1 H) 5,56 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 6,00 (s, 1 H) 6,13 (s l, 1 H) 6,20 (s, 1 H) 6,37 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=7,88 Hz, 1 H) 7,33 (d l, J=7,88 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=8,20 Hz, 2 H) 7,56 (d l, J=8,20 Hz, 2 H) 8,04 (s l, 1 H) 12,01 (s l, 1 H)

[00289] LC/MS (método LC-C): Rt 3,18 min, MH+ 577 Enantiômero 14A: 1

[00290] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,40 - 1,61 (m, 4 H) 2,14 - 2,24 (m, 2 H) 2,33 - 2,42 (m, 2 H) 3,06 - 3,23 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,92 - 4,18 (m, 1 H) 4,40 - 4,59 (m, 1 H) 5,40 - 5,69 (m, 1 H) 6,00 (s, 1 H) 6,13 (s, 1 H) 6,20 (s, 1 H) 6,30 - 6,47 (m, 1 H) 6,91 - 7,12 (m, 1 H) 7,28 - 7,38 (m, 1 H) 7,44 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 7,56 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,95 - 8,29 (m, 1 H) 11,99 (s l, 1 H)

[00291] LC/MS (método LC-C): Rt 3,21 min, MH+ 577

[00292] [Į]D20: +55,8° (c 0,312, DMF)

[00293] SFC quiral (método SFC-L): Rt 1,32 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Enantiômero 14B: 1

[00294] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,40 – 1,53 (m, 4 H) 2,15 – 2,25 (m, 2 H) 2,32 – 2,44 (m, 2 H) 3,00 - 3,27 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,95 - 4,18 (m, 1 H) 4,44 - 4,79 (m, 1 H) 5,57 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 6,00 (s, 1 H) 6,13 (s, 1 H) 6,20 (s, 1 H) 6,37 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 7,02 (d l, J=7,25 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,20 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 7,56 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,04 (s, 1 H) 12,00 (m, 1 H)

[00295] LC/MS (método LC-C): Rt 3,20 min, MH+ 577

[00296] [Į]D20: -53,7° (c 0,326, DMF)

[00297] SFC quiral (método SFC-L): Rt 1,74 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Exemplo 15: síntese do ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)butanoico (Composto 15) e separação quiral nos Enantiômeros 15A e 15B Síntese do intermediário 15a:

[00298] Brometo de 4-etóxi-4-oxobutilzinco (5,2 mL, 2,6 mmol) e Pd2(dba)3 (0,20 g, 0,22 mmol) foram adicionados a uma solução desgaseificada de 1-bromo-3-metóxi-5-nitrobenzeno [CAS 16618-67-0] (0,5 g, 2,2 mmol), tri-terc-butilfosfina (87 mg, 0,43 mmol) e Cs2CO3 (1,4 g, 4,3 mmol) em THF (8,8 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h sob atmosfera de N2. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 80 g, heptano/EtOAc de 95/5 a 80/20) para dar 4- (3-metóxi-5-nitrofenil)butanoato de etila 15a (370 mg). Síntese do intermediário 15b:

[00299] Uma mistura de 4-(3-metóxi-5-nitrofenil)butanoato de etila 15a (0,37 g, 1,38 mmol) em EtOH (8,1 mL) foi hidrogenada sob uma pressão atmosférica de H2 durante 18 h com Pd/C (10%) (0,15 g, 0,14 mmol) como um catalisador. O catalisador foi removido por filtração através de uma almofada de Celite®. A Celite® foi lavada com EtOAc e o filtrado foi concentrado sob vácuo para dar 4-(3-amino-5- metoxifenil)butanoato de etila 15b (350 mg). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 15c:

[00300] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (0,43 g, 0,98 mmol), 4-(3-amino- 5-metoxifenil)butanoato de etila 15b (0,35 g, 1,48 mmol) e di- isopropiletilamina (0,34 mL, 2,0 mmol) em CH3CN (5,1 mL) foi agitada a 80 °C durante 18 h. A mistura foi absorvida com EtO Ac e lavada com HCl a 0,5 N (duas vezes) e água. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 40 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25) para dar 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo- 2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenil)butanoato de etila 15c (340 mg). Síntese do Composto 15 e separação quiral nos Enantiômeros 15A e 15B:

[00301] Sob N2, uma solução de LiOH mono-hidratado (0,12 g, 2,9 mmol) em água (3,1 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de 4- (3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenil)butanoato de etila 15c (0,34 g, 0,58 mmol) em THF (7 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h. A solução foi acidificada com HCl (3 N) e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 24 g, CH2Cl2/MeOH 100/0 a 98/2) para dar, após solidificação a partir de Et2O, ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenil)butanoico (composto 15, 285 mg). Os enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 65%, MeOH a 35%) para dar, após solidificação a partir de Et2O, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 15A (75 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 15B (85 mg). Composto 15: 1

[00302] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,66 - 1,86 (m, 2 H) 2,11 - 2,26 (m, 2 H) 2,32 – 2,44 (m, 2 H) 3,03 - 3,26 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 4,04 (td, J=10,32, 7,09 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,32, 6,15 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 6,00 (s, 1 H) 6,14 (s, 1 H) 6,21 (s, 1 H) 6,38 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,20, 1,26 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,20 Hz, 1 H) 7,38 - 7,50 (m, 2 H) 7,56 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,01 (s, 1 H)

[00303] LC/MS (método LC-D): Rt 2,96 min, MH+ 563 Enantiômero 15A: 1

[00304] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,56 - 1,87 (m, 2 H) 2,11 – 2,21 (m, 2 H) 2,35 - 2,42 (m, 2 H) 3,02 - 3,22 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,97 - 4,18 (m, 1 H) 4,39 - 4,61 (m, 1 H) 5,56 (d, J=8,59 Hz, 1 H) 5,99 (s, 1 H) 6,13 (s, 1 H) 6,20 (s, 1 H) 6,37 (d l, J=9,09 Hz, 1 H) 7,00 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,08 Hz, 1 H) 7,43 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 11,99 (s l, 1 H)

[00305] LC/MS (método LC-C): Rt 3,08 min, MH+ 563

[00306] [Į]D20: -59,0° (c 0,293, DMF)

[00307] SFC quiral (método SFC-M): Rt 2,19 min, sem MH+, pureza quiral 99,31%. Enantiômero 15B: 1

[00308] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,60 - 1,86 (m, 2 H) 2,10 – 2,21 (m, 2 H) 2,35 - 2,42 (m, 2 H) 3,02 - 3,23 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,82 - 4,26 (m, 1 H) 4,36 - 4,71 (m, 1 H) 5,56 (d, J=9,09 Hz, 1 H) 5,99 (s, 1 H) 6,13 (s, 1 H) 6,20 (s, 1 H) 6,37 (d, J=9,09 Hz, 1 H) 7,00 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,08 Hz, 1 H) 7,43 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 11,97 (s l, 1 H)

[00309] LC/MS (método LC-C): Rt 3,08 min, MH+ 563

[00310] [Į]D20: +48,0° (c 0,225, DMF)

[00311] SFC quiral (método SFC-M): Rt 3,73 min, sem MH+, pureza quiral 99,61%. Exemplo 16: síntese do ácido 3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxibenzil)óxi)propanoico (Composto 16) Síntese do intermediário 16a:

[00312] Cloreto de terc-butildimetilsilila (6,1 g, 40,48 mmol) foi adicionado a uma solução de (3-amino-5-metoxifenil)metanol [1261566- 52-2] (3,1 g, 20,24 mmol) e imidazol (4,13 g, 60,71 mmol) em CH2Cl2 (130 mL) à temperatura ambiente. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h, extinta com água e extraída com CH2Cl2. A camada orgânica foi separada, lavada com água e salmoura, seca sobre MgSO4, filtrada e evaporada até à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 120 g, heptano/EtOAc de

85/15 a 65/35). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar 3-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-5-metoxianilina 16a (3,4 g). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 16b:

[00313] Uma mistura de brometo de benzila (3,8 mL, 31,8 mmol), 3- (((terc-butildimetilsilil)óxi)-metil)-5-metoxianilina 16a (3,4 g, 12,71 mmol), K2CO3 (5,27 g, 38,14 mmol) e DMAP (155 mg, 1,27 mmol) em CH3CN (66 mL) foi agitada a 60°C durante 18 h. A mistura foi filtrada e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 120 g, heptano/EtOAc de 100/0 a 90/10). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar N,N-dibenzil-3-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-5- metoxianilina 16b (6 g). Síntese do intermediário 16c:

[00314] TBAF (1 M em THF) (15,3 mL, 15,3 mmol) foi adicionado a uma solução de N,N-dibenzil-3-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-5- metoxianilina 16b (5,69 g, 12,71 mmol) em Me-THF (64 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foi diluída com EtOAc, lavada 3 vezes com salmoura e com uma solução aquosa saturada de NaHCO3, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 120 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar (3- (dibenzilamino)-5-metoxifenil)metanol 16c (4,1 g). Síntese do intermediário 16d:

[00315] 3-Bromopropionato de etila (0,126 mL, 0,99 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de (3-(dibenzilamino)-5- metoxifenil)metanol 16c (300 mg, 0,90 mmol), NaH (dispersão a 60% em óleo mineral) (40 mg, 0,99 mmol) em DMF (7,0 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. Após diluição com EtOAc,

o material em bruto foi lavado com salmoura (5 x). A camada orgânica foi seca sobre MgSO4 e evaporada até à secura. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 24 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar 3-((3-(dibenzilamino)-5- metoxibenzil)óxi)propanoato de etila 16d (97 mg). Síntese do intermediário 16e:

[00316] Uma mistura de 3-((3-(dibenzilamino)-5- metoxibenzil)óxi)propanoato de etila 16d (97 mg, 0,22 mmol) em EtOH (1,3 mL) e EtOAc (0,66 mL) foi hidrogenada sob uma pressão de 7 bar de H2 à temperatura ambiente durante 18 h com Pd/C (10%) (24 mg, 0,022 mmol) como um catalisador. O catalisador foi removido por filtração através de uma almofada de Celite®. A Celite® foi lavada com EtOAc e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para dar 3-((3- amino-5-metoxibenzil)óxi)-propanoato de etila 16e (52 mg). Síntese do intermediário 16f:

[00317] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (74 mg, 0,17 mmol), 3-((3-amino- 5-metoxibenzil)óxi)-propanoato de etila 16e (52 mg, 0,21 mmol) e di- isopropiletilamina (59 µL, 0,34 mmol) em CH3CN (0,89 mL) foi agitada a 80 °C durante 18 h. A mistura foi concentrada sob p ressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 12 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxibenzil)óxi)propanoato de etila 16f (48 mg). Síntese do Composto 16:

[00318] Uma solução de LiOH mono-hidratado (33 mg, 0,79 mmol) em água (0,43 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de 3-((3- ((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-

metoxibenzil)óxi)propanoato de etila 16f (48 mg, 0,079 mmol) em THF (0,97 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h. A solução foi acidificada com HCl (3 N) e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 12 g, CH2Cl2/MeOH 100/0 a 98/2). Foi realizada uma segunda purificação através de cromatografia de fase reversa (Fase estacionária: YMC-actus Triart-C18 10 µm 30 x 150 mm, fase móvel: Gradiente de NH4HCO3 a 65%, 0,2%, CH3CN a 35% até NH4HCO3 a 25%, 0,2%, CH3CN a 75%). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar, após liofilização em CH3CN/água, ácido 3-((3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxibenzil)óxi)propanoico (composto 16, 5 mg). Composto 16: 1

[00319] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,34 - 2,42 (m, 2 H) 3,03 - 3,23 (m, 2 H) 3,49 - 3,59 (m, 2 H) 3,63 (s, 3 H) 3,97 - 4,21 (m, 2 H) 4,27 (s, 2 H) 4,49 - 4,57 (m, 1 H) 5,58 (d, J=8,59 Hz, 1 H) 6,11 (s, 1 H) 6,21 (s, 1 H) 6,33 (s, 1 H) 6,48 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 7,00 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,08 Hz, 1 H) 7,43 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 7,56 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H)

[00320] LC/MS (método LC-C): Rt 2,84 min, MH+ 579 Exemplo 17: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2- (6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2- metilbutanoico (Composto 17) e separação nos Estereoisômeros 17A, 17B, 17C e 17D.

Síntese do intermediário 17a:

[00321] 4-Bromo-2-metilbutanoato de terc-butila [CAS 1210410-44-8] (3,9 g, 16,446 mmol) foi adicionado gota a gota a uma mistura de 3- metóxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (2,78 g, 16,446 mmol) e K2CO3 (3,409 g, 24,669 mmol) em DMF (25 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 7 h e a 60 ºC durante 16 h. Após resfriamento até 0ºC, a mistura foi diluída com água e gelo e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado até à secura. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (20-45 µm, 80 g, fase móvel: heptano/EtOAc 75/25). As frações puras foram combinadas e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar 4-(3-metóxi-5-nitrofenóxi)-2- metilbutanoato de terc-butila 17a (2,59 g). Síntese do intermediário 17b:

[00322] Uma mistura de 4-(3-metóxi-5-nitrofenóxi)-2-metilbutanoato de terc-butila 17a (2,9 g, 8,913 mmol) em MeOH (50 mL) foi hidrogenada sob uma pressão atmosférica de H2 durante 4 h com Pd/C (10%) (1,52 g, 1,426 mmol) como um catalisador. O catalisador foi removido por filtração através de uma almofada de Celite®. A Celite® foi lavada com EtOAc e o filtrado concentrado sob pressão reduzida. A mistura foi purificada por cromatografia flash em sílica-gel (20-45 µm, 40 g, fase móvel: heptano/EtOAc 85/15). As frações puras foram combinadas e o solvente evaporado até à secura para dar 4-(3-amino-5-metoxifenóxi)- 2-metilbutanoato de terc-butila 17b (2,29 g). Síntese do intermediário 17c:

[00323] Uma mistura de 6-(trifluorometóxi)indolina [CAS 959235-95- 1] (2,5 g, 12,3 mmol), ácido 2-(4-cloro-2-metoxifenil)acético [CAS 170737-95-8] (2,47 g, 12,3 mmol), HATU (7 g, 18,5 mmol) e di- isopropiletilamina (6,1 mL, 36,9 mmol) em DMF (40 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. Água e EtOAc foram adicionados. A camada orgânica foi separada, lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada, e o solvente evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em sílica-gel (15-40 µm, 80 g, heptano/EtOAc 85/15). As frações puras foram combinadas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar, após cristalização a partir de CH3CN/heptano, 2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 17c (4,3 g). Síntese do intermediário 17d:

[00324] A -78°C, sob fluxo de N 2, LiHMDS a 1 M em THF (19,7 mL, 19,7 mmol) foi adicionada gota a gota a uma mistura de 2-(4-cloro-2- metoxifenil)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 17c (3,8 g, 9,8 mmol) em THF (50 mL). TMSCl (1,5 mL, 11,8 mmol) foi adicionado gota a gota. A mistura foi agitada durante 15 min a -78 °C e uma solução de N-bromossuccinimida (1,9 g, 10,8 mmol) em THF (35 mL) foi adicionada gota a gota. Após agitação durante 2 h a -78 °C, a reação foi extinta com uma solução saturada de NH4Cl. A mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente evaporado sob pressão reduzida para dar 2-bromo-2-(4-cloro-2- metoxifenil)-1-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 17d (4,5 g). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do intermediário 17e e separação nos Estereoisômeros 17f, 17g, 17h e 17i:

[00325] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 17d (2 g, 4,304 mmol), 4-(3-amino- 5-metoxifenóxi)-2-metilbutanoato de terc-butila 17b (763 mg, 2,583 mmol) e di-isopropiletilamina (1,5 mL, 8,608 mmol) em CH3CN (70 mL) foi agitada a 60 °C durante 6 h. A mistura foi resf riada até 0 ºC, diluída água e gelo e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (25-30 µm, 40 g, heptano/EtOAc 80/20). Uma segunda purificação foi realizada por cromatografia flash em sílica-gel (25-30 µm, 40 g, heptano/EtOAc 85/15). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo- 2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2- metilbutanoato de terc-butila 17e (787 mg). Os estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralpak® AD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 83%, EtOH a 17%) para dar uma mistura de 17f e 17g (348 mg) e 17h (164 mg) e 17i (184 mg) puros. 17f e 17g foram separados ainda através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralpak® AD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 88%, EtOH a 12%) para dar 17f (145 mg) e 17g (140 mg). Síntese do Composto 17:

[00326] Uma mistura de 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2-metilbutanoato de terc-butila 17e (180 mg, 0,265 mmol) em HCl (4 M em dioxano) (3 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 5 mL de trietilamina foram adicionados e a solução foi evaporada sob vácuo. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 12 g, CH2Cl2/MeOH de 99/1 a 96/4). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura (m = 115 mg). O resíduo foi solidificado em pentano/éter de di-isopropila e algumas gotas de CH3CN para dar ácido 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2-metilbutanoico (Composto 17, 75 mg). Síntese do Estereoisômero 17A:

[00327] Uma mistura de 17f (145 mg, 0,214 mmol) em HCl (4 M em dioxano) (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 5 mL de Et3N foram adicionados e a solução foi evaporada sob vácuo. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 12 g, CH2Cl2/MeOH de 99,5/0,5 a 95/5). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura (m = 93 mg). O resíduo foi solidificado a partir de pentano/éter de di-isopropila e algumas gotas de CH3CN para dar o Estereoisômero 17A (64 mg). Síntese do Estereoisômero 17B:

[00328] Uma mistura de 17g (135 mg, 0,199 mmol) em HCl (4 M em dioxano) (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 5 mL de Et3N foram adicionados e a solução foi evaporada sob vácuo. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 12 g, CH2Cl2/MeOH de 99,5/0,5 a 95/5). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura (m = 65 mg). O resíduo foi solidificado a partir de pentano/éter de di-isopropila e algumas gotas de CH3CN para dar o Estereoisômero 17B (38 mg). Síntese do Estereoisômero 17C:

[00329] Uma mistura de 17h (162 mg, 0,239 mmol) em HCl (4 M em dioxano) (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 5 mL de Et3N foram adicionados e a solução foi evaporada sob vácuo. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 12 g, CH2Cl2/MeOH de 99,5/0,5 a 95/5). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura (m = 85 mg). O resíduo foi solidificado a partir de pentano/éter de di-isopropila e algumas gotas de CH3CN para dar o Estereoisômero 17C (68 mg). Síntese do Estereoisômero 17D:

[00330] Uma mistura de 17i (179 mg, 0,264 mmol) em HCl (4 M em dioxano) (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 6 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 5 mL de Et3N foram adicionados e a solução foi evaporada sob vácuo. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 24 g, CH2Cl2/MeOH de 99,5/0,5 a 95/5). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura (m = 98 mg). O resíduo foi solidificado a partir de pentano/éter de di-isopropila e algumas gotas de CH3CN para dar o Estereoisômero 17D (54 mg). Composto 17: 1

[00331] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,11 (d l, J=6,62 Hz, 3 H) 1,54 - 1,82 (m, 1 H) 1,82 - 2,07 (m, 1 H) 3,10 - 3,22 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,77 - 3,87 (m, 2 H) 3,91 (s, 3 H) 3,96 - 4,18 (m, 1 H) 4,30 – 4,43 (m, 1 H) 5,60 (d l, J=8,20 Hz, 1 H) 5,76 (s l, 1 H) 5,87 (s 1 H) 5,88 (s, 1H) 6,46 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 6,98 – 7,6 (m, 2 H) 7,15 (s l, 1 H) 7,28 – 7,44 (m, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 12,20 (s l, 1 H) (1H não tendo CH CO2H sob DMSO)

[00332] LC/MS (método LC-C): Rt 3,16 min, MH+ 623 Estereoisômero 17A: 1

[00333] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,10 (d l, J=7,07 Hz, 3 H) 1,59 - 1,82 (m, 1 H) 1,82 - 2,04 (m, 1 H) 3,04 - 3,24 (m, 2 H) 3,61 (s,

3 H) 3,71 - 3,87 (m, 2 H) 3,90 (s, 3 H) 3,96 - 4,21 (m, 1 H) 4,32 - 4,56 (m, 1 H) 5,59 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,85 (s, 1 H) 5,87 (s, 1H) 6,44 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,85 (s, 1 H) 5,87 (s, 1H) 6,44 (d l, (1H não tendo CH CO2H sob DMSO)

[00334] LC/MS (método LC-D): Rt 3,07 min, MH+ 623

[00335] [Į]D20: -18,4° (c 0,305, DMF)

[00336] SFC quiral (método SFC-N): Rt 4,75 min, MH+ 623, pureza quiral 99,3%. Estereoisômero 17B: 1

[00337] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,09 (d l, J=6,57 Hz, 3 H) 1,64 - 1,83 (m, 1 H) 1,83 - 2,09 (m, 1 H) 3,00 - 3,23 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,68 - 3,86 (m, 2 H) 3,90 (m, 3 H) 3,96 - 4,21 (m, 1 H) 4,26 - 4,56 (m, 1 H) 5,59 (d l, J=8,08 Hz, 1 H) 5,75 (s l, 1 H) 5,86 (s, 1H) 5,87 (s, 1 H) 6,44 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 6,97 – 7,06 (m, 2 H) 7,14 (s, 1 H) 7,26 – 7,34 (m, 2 H) 8,02 (s l, 1 H) 12,20 (s l, 1 H) (1H não tendo CH CO2H sob DMSO)

[00338] LC/MS (método LC-D): Rt 3,03 min, MH+ 623

[00339] [Į]D20: -51,0° (c 0,298, DMF)

[00340] SFC quiral (método SFC-N): Rt 5,90 min, MH+ 623, pureza quiral 97,94%. Estereoisômero 17C: 1

[00341] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,09 (d, J=6,57 Hz, 3 H) 1,61 - 1,84 (m, 1 H) 1,88 – 2,02 (m, 1 H) 3,07 - 3,26 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,76 - 3,88 (m, 2 H) 3,90 (s, 3 H) 3,97 - 4,18 (m, 1 H) 4,27 - 4,45 (m, 1 H) 5,59 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,86 (s l, 1 H) 5,87 (s l, 1 H) 6,39 - 6,49 (m, 1 H) 6,97 - 7,02 (m, 1 H) 7,02 - 7,05 (m, 1 H) 7,14 (d, J=2,02 Hz, 1 H) 7,29 - 7,32 (m, 1 H) 7,32 - 7,37 (m, 1 H) 8,02 (s, 1 H) 12,19 (s l, 1 H) (1H não tendo CH CO2H sob DMSO)

[00342] LC/MS (método LC-C): Rt 3,16 min, MH+ 623

[00343] [Į]D20: +41,6° (c 0,257, DMF)

[00344] SFC quiral (método SFC-N): Rt 6,86 min, MH+ 623, pureza quiral 98,89%. Estereoisômero 17D: 1

[00345] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,11 (d, J=6,94 Hz, 3 H) 1,70 (dq, J=13,44, 6,55 Hz, 1 H) 1,97 (dq, J=13,64, 6,80 Hz, 1 H) 3,09 -3,26 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,85 (t l, J=6,31 Hz, 2 H) 3,91 (s, 3 H) 3,97 - 4,09 (m, 1 H) 4,31 - 4,47 (m, 1 H) 5,60 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,86 (s l, 1 H) 5,88 (s l, 1 H) 6,45 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,86 (s l, 1 H) 5,88 (s l, 1 H) 6,45 (d l, J=1,26 Hz, 1 H) 7,32 (d, J=8,20 Hz, 1 H) 7,34 (d l, J=8,20 Hz, 1 H) 7,34 (d l, (1H não tendo CH CO2H sob DMSO)

[00346] LC/MS (método LC-C): Rt 3,15 min, MH+ 623

[00347] [Į]D20: +15,8° (c 0,297, DMF)

[00348] SFC quiral (método SFC-N): Rt 8,14 min, MH+ 623, pureza quiral 98,6%. Exemplo 18: síntese do ácido 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2- (6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2,2-dimetil- butanoico (Composto 18) e separação quiral nos Enantiômeros 18A e 18B.

Síntese do intermediário 18a:

[00349] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 17d (800 mg, 1,291 mmol), 4-(3- amino-5-metoxifenóxi)-2,2-dimetilbutanoato de metila 2a (518 mg, 1,937 mmol) e di-isopropiletilamina (445 µL, 2,583 mmol) em CH3CN (6 mL) foi agitada a 80 °C durante 48 h. A mistura foi con centrada até à secura. O resíduo foi absorvido com EtOAc, lavado com HCl a 1 N (duas vezes) e com água. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob vácuo para dar 4-(3-((1-(4-cloro-2- metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)-2,2-dimetilbutanoato de metila 18a (950 mg). O composto foi usado como tal no próximo passo. Síntese do Composto 18 e separação quiral nos Enantiômeros 18A e 18B:

[00350] A 0ºC, LiOH mono-hidratado (184 mg, 4,38 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução de 4-(3-((1-(4-cloro-2- metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)-2,2-dimetilbutanoato de metila 18a (950 mg, 1,459 mmol) em THF/MeOH/água (1/1/1) (30 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h e, depois, a 60 ºC durante 16 h. A mistura foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada aquosa foi lentamente acidificada até pH 5-6 com HCl a 3 N e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas foram secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi evaporado sob vácuo. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 40 g, CH2Cl2/CH3OH, de 100/0 a 99/1). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura (m = 350 mg). Uma pequena porção do resíduo foi cristalizada a partir de Et2O/éter de di-isopropila. O precipitado foi separado por filtração e seco para dar ácido 4-(3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2- (6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)-2,2- dimetilbutanoico (Composto 18, 25 mg). A quantidade restante (290 mg) foi usada para separação quiral. Os enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 75%, MeOH a 25%) para dar, após solidificação a partir de heptano/éter de di-isopropila, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 18A (68 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 18B (70 mg). Composto 18: 1

[00351] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,14 (d, J=2,2 Hz, 6 H) 1,87 (t, J=7,1 Hz, 2 H) 3,09 - 3,26 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,80 - 3,88 (m, 2 H) 3,90 (s, 3 H) 3,98 - 4,07 (m, 1 H) 4,33 - 4,42 (m, 1 H) 5,60 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 5,85 (s, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 6,44 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 6,98 - 7,06 (m, 2 H) 7,15 (d, J=1,6 Hz, 1 H) 7,33 (dd, J=11,7, 8,2 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,23 (s l, 1 H)

[00352] LC/MS (método LC-C): Rt 3,40 min, MH+ 637

[00353] PF = 138°C Enantiômero 18A: 1

[00354] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,14 (d, J=2,2 Hz, 6 H) 1,87 (t l, J=7,1 Hz, 2 H) 3,09 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,81 - 3,87 (m, 2 H) 3,90 (s, 3 H) 3,98 - 4,07 (m, 1 H) 4,33 - 4,42 (m, 1 H) 5,59 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 5,84 (s, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 6,44 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 6,98 - 7,06 (m, 2 H) 7,14 (d, J=1,9 Hz, 1 H) 7,33 (dd, J=10,7, 8,5 Hz, 2 H) 8,02 (s, 1 H) 11,94 - 12,35 (m, 1 H)

[00355] LC/MS (método LC-C): Rt 3,40 min, MH+ 637

[00356] [Į]D20: -30,2° (c 0,315, DMF)

[00357] SFC quiral (método SFC-O): Rt 1,31 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Enantiômero 18B: 1

[00358] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,13 (d, J=2,5 Hz, 6 H) 1,87 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 3,10 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,80 - 3,87 (m, 2 H) 3,90 (s, 3 H) 4,02 (td, J=10,2, 7,1 Hz, 1 H) 4,33 - 4,41 (m, 1 H) 5,59 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,73 - 5,76 (m, 1 H) 5,84 (s, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 6,44 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 6,97 - 7,08 (m, 2 H) 7,14 (d, J=1,9 Hz, 1 H) 7,33 (dd, J=11,2, 8,4 Hz, 2 H) 8,02 (s, 1 H) 11,92 - 12,44 (m, 1 H)

[00359] LC/MS (método LC-C): Rt 3,40 min, MH+ 637

[00360] [Į]D20: +28,0° (c 0,354, DMF)

[00361] SFC quiral (método SFC-O): Rt 1,60 min, sem MH+, pureza quiral 99,45%. Exemplo 19A: síntese do ácido (1R*,2R*)-2-((3-((1-(4-cloro-2- metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Composto 19A) e separação nos Estereoisômeros 19AA e 19AB.

Síntese do intermediário 19a:

[00362] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 17d (0,37 g, 0,796 mmol), 2-((3- amino-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxilatometoxifenóxi)metil)ciclopropi l)acetato de (1R*,2R*)-metila 6d (0,317 g, 1,194 mmol) e di- isopropiletilamina (0,274 mL, 1,593 mmol) em CH3CN (10 mL) foi agitada a 80°C durante 6 h. A reação foi resfriada até 0 ºC e foi diluída com água e gelo. A mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado até à secura. O composto foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (25-30 µm, 24 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações puras foram combinadas e o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar 2-((3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometil)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)-

ciclopropanocarboxilato de (1R*,2R*)-metila 19a (306 mg). Síntese do Composto 19A e separação nos Estereoisômeros 19AA e 19AB:

[00363] Uma solução de LiOH mono-hidratado (77 mg, 1,826 mmol) em água (5 mL) foi adicionada a uma solução de 2-((3-((1-(4-cloro-2- metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxilato de (1R*,2R*)-metila 19a (237 mg, 0,365 mmol) em THF (5 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h e concentrada sob vácuo. O composto foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (20-45 µm, 24 g, CH2Cl2/MeOH 99,5/0,5 a 98/2). As frações puras foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para dar ácido (1R*,2R*)-2-((3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometil)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxílico (Composto 19A, 170 mg). Os estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 65%, MeOH a 35%) para dar, após solidificação a partir de CH3CN/éter de di-isopropila/heptano, o Estereoisômero eluído em primeiro lugar 19AA (67 mg) e o Estereoisômero eluído em segundo lugar 19AB (59 mg). Estereoisômero 19AA: 1

[00364] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,85 -0,95 (m, 1 H) 0,99 - 1,08 (m, 1 H) 1,55 (dt, J=8,12, 4,30 Hz, 1 H) 1,57 – 1,67 (m, 1 H) 3,10 – 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 - 3,73 (m, 1 H) 3,83 (d ld, J=10,40, 6,31 Hz, 1 H) 3,90 (s, 3 H) 3,98 -4,08 (m, 1 H) 4,29 - 4,44 (m, 1 H) 5,60 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,87 (s, 2 H) 6,45 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 6,96 - 7,07 (m, 2 H) 7,14 (d, J=1,26 Hz, 1 H) 7,31 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 7,32 - 7,38 (m, 1 H) 8,02 (s l, 1 H) 12,23 (s l, 1 H)

[00365] LC/MS (método LC-D): Rt 2,84 min, MH+ 621

[00366] [Į]D20: -65,6° (c 0,25, DMF)

[00367] SFC quiral (método SFC-P): Rt 1,44 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 19AB: 1

[00368] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,87 - 0,95 (m, 1 H) 0,99 - 1,07 (m, 1 H) 1,50 - 1,57 (m, 1 H) 1,59 - 1,70 (m, 1 H) 3,09 - 3,24 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,63 - 3,72 (m, 1 H) 3,85 (d ld, J=10,40, 6,31 Hz, 1 H) 3,90 (s, 3 H) 3,99 - 4,09 (m, 1 H) 4,30 - 4,44 (m, 1 H) 5,60 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,87 (s, 2 H) 6,45 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 7,00 - 7,09 (m, 2 H) 7,14 (d, J=1,26 Hz, 1 H) 7,30 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 7,34 (d l, J=8,20 Hz, 1 H) 8,02 (s l, 1 H) 12,26 (s l, 1 H)

[00369] LC/MS (método LC-D): Rt 2,85 min, MH+ 621

[00370] [Į]D20: +37,1° (c 0,28, DMF)

[00371] SFC quiral (método SFC-P): Rt 2,20 min, sem MH+, pureza quiral 99,84%. Exemplo 19B: síntese do ácido (1S*,2S*)-2-((3-((1-(4-cloro-2- metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Composto 19B) e separação nos Estereoisômeros 19BA e 19BB.

Síntese do intermediário 19b:

[00372] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-cloro-2-metoxifenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 17d (0,39 g, 0,839 mmol), 2-((3-

amino-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxilatometoxifenóxi)metil)ciclopropi l)acetato de (1S*,2S*)-metila 6e (0,334 g, 1,259 mmol) e di- isopropiletilamina (0,289 mL, 1,679 mmol) em CH3CN (10 mL) foi agitada a 80 °C durante 7 h. A reação foi resfriada até 0 ºC e foi diluída com água e gelo. A mistura foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado até à secura. O composto foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (25-30 µm, 24 g, heptano/EtOAc 80/20). As frações puras foram combinadas e o solvente foi removido sob pressão reduzida para dar 2-((3-((1-(4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometil)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)- ciclopropanocarboxilato de (1S*,2S*)-metila 19b (308 mg). Síntese do Composto 19B e separação nos Estereoisômeros 19BA e 19BB:

[00373] Uma solução de LiOH mono-hidratado (98 mg, 2,334 mmol) em água (5 mL) foi adicionada a uma solução de 2-((3-((1-(4-cloro-2- metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxilato de (1S*,2S*)-metila 19b (303 mg, 0,467 mmol) em THF (5 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h e depois concentrada sob vácuo. O composto foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (20-45 µm, 24 g, CH2Cl2/MeOH 100/0 a 98/2). As frações puras foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para dar ácido (1S*,2S*)-2-((3-((1- (4-cloro-2-metoxifenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etil)amino)- 5-metoxifenóxi)metil)ciclopropanocarboxílico (Composto 19B, 250 mg). Os estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 65%, MeOH a 35%) para dar, após solidificação a partir de CH3CN/éter de di-isopropila/heptano, o Estereoisômero eluído em primeiro lugar

19BA (97 mg) e o Estereoisômero eluído em segundo lugar 19BB (103 mg). Estereoisômero 19BA: 1

[00374] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,85 - 0,95 (m, 1 H) 0,95 - 1,09 (m, 1 H) 1,54 (dt, J=8,34, 4,42 Hz, 1 H) 1,55 - 1,66 (m, 1 H) 3,09 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,66 (dd, J=10,36, 7,33 Hz, 1 H) 3,85 (dd, J=10,61, 6,06 Hz, 1 H) 3,89 (s, 3 H) 3,96 - 4,12 (m, 1 H) 4,26 - 4,43 (m, 1 H) 5,59 (d, J=8,59 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 5,88 (s, 1H) 6,44 (d, J=9,09 Hz, 1 H) 6,93 - 7,06 (m, 2 H) 7,14 (d, J=2,02 Hz, 1 H) 7,30 (d, J=8,08 Hz, 1 H) 7,34 (d, J=8,08 Hz, 1 H) 8,02 (s, 1 H) 12,20 (s l, 1 H)

[00375] LC/MS (método LC-D): Rt 2,84 min, MH+ 621

[00376] [Į]D20: -47,6° (c 0,271, DMF)

[00377] SFC quiral (método SFC-P): Rt 1,48 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 19BB: 1

[00378] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,85 - 0,97 (m, 1 H) 0,98 - 1,07 (m, 1 H) 1,51 - 1,58 (m, 1 H) 1,55 -1,67 (m, 1 H) 3,07 - 3,25 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,65 - 3,74 (m, 1 H) 3,83 (d ld, J=10,36, 5,81 Hz, 1 H) 3,90 (s, 3 H) 3,97 - 4,14 (m, 1 H) 4,30 - 4,42 (m, 1 H) 5,60 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 5,76 (s, 1 H) 5,87 (s, 2 H) 6,44 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 6,98 - 7,07 (m, 2 H) 7,14 (d, J=1,52 Hz, 1 H) 7,30 (d, J=8,08 Hz, 1 H) 7,33 (d l, J=8,08 Hz, 1 H) 8,02 (s, 1 H) 12,24 (s l, 1 H)

[00379] LC/MS (método LC-D): Rt 2,84 min, MH+ 621

[00380] [Į]D20: +56,8° (c 0,264, DMF)

[00381] SFC quiral (método SFC-P): Rt 2,12 min, sem MH+, pureza quiral 99,59%. Exemplo 20: síntese de ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metóxi-6- (trifluoro-metil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)-2- metilbutanoico (Composto 20) e separação nos Estereoisômeros 20A,

20B, 20C e 20D Síntese do intermediário 20a:

[00382] Uma mistura de 1-metóxi-4-nitro-2-(trifluorometil)benzeno [CAS 654-76-2] (24,5 g, 110,8 mmol) e 4-clorofenóxiacetonitrila [CAS 3598-13-8] (20,4 g, 121,9 mmol) em DMF (100 mL) foi adicionada gota a gota durante 30 min a uma solução agitada de tBuOK (27,35 g, 243,7 mmol) em DMF (100 mL) a -10°C. Após adição, a soluç ão roxa foi mantida a -10 °C durante 1 h. 500 mL de água gelada e 500 mL de HCl a 6 N foram adicionados e o precipitado foi separado por filtração, lavado com água e seco sob pressão reduzida para originar 40,4 g de 2-(5-metóxi-2-nitro-4-(trifluorometil)fenil)acetonitrila 20a (usada como tal no próximo passo). Síntese do intermediário 20b:

[00383] Uma solução de 2-(5-metóxi-2-nitro-4- (trifluorometil)fenil)acetonitrila 20a (26 g, 99,9 mmol) em etanol/água (9/1) (500 mL) e AcOH (5,2 mL) foi hidrogenada durante 1 h a uma pressão de 3,5 Bar com Pd/C a 10% (15,3 g) como o catalisador. A mistura reacional foi filtrada através de uma almofada de Celite® e o bolo de filtração foi lavado com uma mistura de solventes de CH2Cl2 e CH3OH. Os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi filtrado através de um filtro de vidro carregado com sílica 60- 200 µm e usando heptano/EtOAc 80/20 como o eluente. As frações contendo o composto esperado foram combinadas e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 5-metóxi-6-(trifluorometil)- 1H-indol 20b (15,6 g). Síntese do intermediário 20c:

[00384] A 0°C, BH 3-Piridina (23,5 mL, 232,4 mmol) foi adicionada gota a gota a uma solução de 5-metóxi-6-(trifluorometil)-1H-indol 20b (10 g, 46,5 mmol) em EtOH (60 mL). HCl a 6 N (140 mL) foi lentamente adicionado enquanto se mantinha a temperatura abaixo de 10 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante 2 h. Água (200 m L) foi adicionada e a mistura foi basificada até pH 8-9 com uma solução aquosa concentrada de NaOH (a temperatura de reação foi mantida abaixo de 20 °C). O precipitado foi separado por filtração, lavado com água (duas vezes) e coevaporado sob pressão reduzida com tolueno para dar 5-metóxi-6- (trifluorometil)indolina 20c (9 g). Síntese do Composto 20 e separação nos Estereoisômeros 20A, 20B, 20C e 20D:

[00385] O composto 20 (330 mg) foi obtido seguindo os procedimentos descritos para a síntese do Composto 1 começando a partir do intermediário 20c. Os 4 Estereoisômeros 20A (50 mg), 20B (18 mg), 20C (68 mg) e 20D (32 mg) foram obtidos, em esta ordem de eluição, através de duas separações SFC quirais subsequentes: (Fase estacionária: Chiralpak® AD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 40%, iPrOH a 60%) e (Fase estacionária: Chiralcel® OJ-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 60%, MeOH a 40%); seguida por purificação individual por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 12 g, CH2Cl2/MeOH 99,5/0,5 a 90/10) e subsequente solidificação a partir de CH3CN/éter de di-isopropila/heptano. Estereoisômero 20A:

[00386] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,10 (d, J=7,07 Hz, 3 H) 1,60 – 1,72 (m, 1 H) 1,90 – 2,01 (m, 1 H) 3,20 – 3,32 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,79 - 3,90 (m, 5 H) 3,93 - 4,09 (m, 1 H) 4,42 – 4,53 (m, 1 H) 5,53 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 5,93 (s l, 1 H) 5,95 (s l, 1 H) 6,38 (d l, J=9,09 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d l, J=8,08 Hz, 2 H) 7,55 (d l, J=8,08 Hz, 2 H) 7,55 (d l, (1H não tendo CH CO2H sob DMSO)

[00387] LC/MS (método LC-C): Rt 2,95 min, MH+ 607

[00388] [Į]D20: -40,9° (c 0,257, DMF)

[00389] SFC quiral (método SFC-Q): Rt 1,07 min, MH+ 607, pureza quiral 100%. Estereoisômero 20B: 1

[00390] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,09 (d, J=6,94 Hz, 3 H) 1,69 (dq, J=13,52, 6,53 Hz, 1 H) 1,88 - 2,11 (m, 1 H) 3,08 - 3,28 (m, 2 H) 3,53 - 3,66 (m, 3 H) 3,79 - 3,90 (m, 5 H) 3,92 - 4,11 (m, 1 H) 3,92 - 4,11 (m, 1 H) 4,32 - 4,67 (m, 1 H) 5,54 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 5,95 (s, 1H) 6,30 - 6,45 (m, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 7,55 (d, (1H não tendo CH CO2H sob DMSO)

[00391] LC/MS (método LC-C): Rt 2,95 min, MH+ 607

[00392] [Į]D20: -50,0° (c 0,266, DMF)

[00393] SFC quiral (método SFC-Q): Rt 1,07 min, MH+ 607, pureza quiral 100%. Estereoisômero 20C: 1

[00394] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,09 (d l, J=6,94 Hz, 3 H) 1,52 - 1,83 (m, 1 H) 1,86 - 2,06 (m, 1 H) 3,07 - 3,28 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,73 - 3,91 (m, 5 H) 3,94 - 4,04 (m, 1 H) 4,37 - 4,58 (m, 1 H) 5,54 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 5,95 (s, 1H) 6,39 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 5,95 (s, 1H) 6,39 (d l, J=8,20 Hz, 2 H) 7,55 (d l, J=8,20 Hz, 2 H) 7,55 (d l, (1H não tendo CH CO2H sob DMSO)

[00395] LC/MS (método LC-C): Rt 2,95 min, MH+ 607

[00396] [Į]D20: +26,0° (c 0,288, DMF)

[00397] SFC quiral (método SFC-Q): Rt 1,56 min, MH+ 607, pureza quiral 99,68%. Estereoisômero 20D: 1

[00398] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,09 (d, J=7,07 Hz, 3 H) 1,60 - 1,75 (m, 1 H) 1,85 – 1,99 (m, 1 H) 3,11 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,77 - 3,91 (m, 5 H) 3,93 - 4,05 (m, 1 H) 4,44 - 4,56 (m, 1 H) 5,54 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 5,93 (s l, 1 H) 5,95 (s l, 1 H) 6,38 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 5,93 (s l, 1 H) 5,95 (s l, 1 H) 6,38 (d l, J=8,59 Hz, 2 H) 7,55 (d l, J=8,08 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H) 12,22 (s l, 1 H) (1H não tendo CH CO2H sob DMSO)

[00399] LC/MS (método LC-C): Rt 2,96 min, MH+ 607

[00400] [Į]D20: +57,4° (c 0,27, DMF)

[00401] SFC quiral (método SFC-Q): Rt 2,19 min, MH+ 607, pureza quiral 100%. Exemplo 21: síntese do ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metóxi-6- (trifluoro-metil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)-2,2- dimetilbutanoico (Composto 21) e separação quiral nos Enantiômeros 21A e 21B Síntese do intermediário 21a:

[00402] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(5-metóxi-6-

(trifluorometil)indolin-1-il)etanona 20e (904 mg, 2,014 mmol), 4-(3- amino-5-metoxifenóxi)-2,2-dimetilbutanoato de metila 2a (700 mg, 2,619 mmol) e di-isopropiletilamina (694 µL, 4,029 mmol) em CH3CN (10 mL) foi agitada a 80°C durante 16 h. A mistura foi conc entrada sob pressão reduzida. O resíduo foi absorvido com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado para dar 4-(3-((1- (4-clorofenil)-2-(5-metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)- 5-metoxifenóxi)-2,2-dimetilbutanoato de metila 21a (1,58 g), que foi usado como tal no próximo passo. Síntese do Composto 21 e separação quiral nos Enantiômeros 21A e 21B:

[00403] A 0ºC, LiOH mono-hidratado (254 mg, 6,046 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-metóxi-6- (trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)-2,2- dimetilbutanoato de metila 21a (1,28 g, 2,015 mmol) em THF/MeOH/água (15 mL). A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente e agitada durante 48 h. A mistura foi resfriada até 0 °C e água foi adicionada. A mistura foi acidificada até pH 4-5 com HCl a 3 N e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e o solvente foi evaporado. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 40 g, CH2Cl2/CH3OH: 100/0 a 98/2). As frações contendo composto esperado foram combinadas e evaporadas até à secura. Foi realizada uma segunda purificação através de Fase reversa (Fase estacionária: YMC- actus Triart-C18 10 µm 30 x 150 mm, fase móvel: Gradiente de NH4HCO3 aquoso a 70%, 0,2%, CH3CN a 30% até NH4HCO3 aquoso a 0%, 0,2%, CH3CN a 100%). As frações puras foram combinadas e concentradas sob vácuo para dar ácido 4-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5- metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)- 2,2-dimetilbutanoico (Composto 21, 455 mg). Os enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 55%, MeOH a 45%) para dar, após solidificação a partir de heptano/éter de di-isopropila, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 21A (106 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 21B (103 mg). Composto 21: 1

[00404] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,13 (d, J=3,8 Hz, 6 H) 1,87 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 3,14 - 3,30 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (m, 5 H) 3,98 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,51 (td, J=10,3, 6,1 Hz, 1 H) 5,52 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,73 (t, J=1,9 Hz, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 6,39 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H) 12,23 (s l, 1 H)

[00405] LC/MS (método LC-C): Rt 3,19 min, MH+ 621 Enantiômero 21A: 1

[00406] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,08 - 1,15 (m, 6 H) 1,85 (t, J=7,3 Hz, 2 H) 3,13 - 3,30 (m, 2 H) 3,55 - 3,65 (m, 3 H) 3,80 - 3,89 (m, 5 H) 3,98 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,4, 6,3 Hz, 1 H) 5,54 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,73 (t, J=1,9 Hz, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 5,95 (s, 1 H) 6,38 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,56 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,34 (s, 1 H)

[00407] LC/MS (método LC-C): Rt 3,21 min, MH+ 621

[00408] [Į]D20: -41,7° (c 0,254, DMF)

[00409] SFC quiral (método SFC-H): Rt 1,23 min, MH+ 621, pureza quiral 100%. Enantiômero 21B: 1

[00410] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,08 - 1,16 (m, 6 H) 1,86 (t, J=7,1 Hz, 2 H) 3,15 - 3,29 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,80 - 3,90 (m, 5 H) 3,98 (td, J=10,2, 7,3 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,4, 6,3 Hz, 1 H) 5,53 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,70 - 5,75 (m, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 5,95 (s, 1 H) 6,38 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,56 (d, J=8,5 Hz, 2

H) 8,34 (s, 1 H)

[00411] LC/MS (método LC-C): Rt 3,21 min, MH+ 621

[00412] [Į]D20: +44,0° (c 0,275, DMF)

[00413] SFC quiral (método SFC-H): Rt 2,38 min, MH+ 621, pureza quiral 100%. Exemplo 22A: síntese do ácido (1R*,2R*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5- metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Composto 22A) e separação nos Estereoisômeros 22AA e 22AB Síntese do Composto 22A e separação nos Estereoisômeros 22AA e 22AB:

[00414] O composto 22A (284 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 20e usando os procedimentos descritos para a síntese do Composto 6A. Os dois estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 50%, EtOH a 50%) para dar, após solidificação a partir de pentano/éter de di-isopropila, o Estereoisômero eluído em primeiro lugar 22AA (79 mg) e o Estereoisômero eluído em segundo lugar 22AB (74 mg). Estereoisômero 22AA: 1

[00415] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,85 – 0,93 (m, 1 H) 1,00 - 1,08 (m, 1 H) 1,54 (dt, J=8,12, 4,30 Hz, 1 H) 1,60 -1,68 (m, 1 H) 3,12 - 3,26 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,68 (dd, J=10,40, 7,57 Hz, 1 H) 3,79 -

3,90 (m, 4 H) 3,93 - 4,05 (m, 1 H) 4,50 (td, J=10,40, 6,31 Hz, 1 H) 5,55 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 6,39 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H) 12,23 (s l, 1 H)

[00416] LC/MS (método LC-C): Rt 2,80 min, MH+ 605

[00417] [Į]D20: -75,0° (c 0,3, DMF)

[00418] SFC quiral (método SFC-R): Rt 0,86 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 22AB: 1

[00419] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,88 (t l, J=9,30 Hz, 1 H) 1,02 (dt, J=8,43, 4,45 Hz, 1 H) 1,47 - 1,58 (m, 1 H) 1,59 - 1,68 (m, 1 H) 3,13 - 3,28 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,64 - 3,72 (m, 1 H) 3,84 (s, 4 H) 3,92 - 4,06 (m, 1 H) 4,50 (td, J=10,32, 6,15 Hz, 1 H) 5,55 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,95 (s, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 6,39 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H) 12,08 (s l, 1 H)

[00420] LC/MS (método LC-D): Rt 2,69 min, MH+ 605

[00421] [Į]D20: +10,0° (c 0,281, DMF)

[00422] SFC quiral (método SFC-R): Rt 1,84 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Exemplo 22B: síntese do ácido (1S*,2S*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5- metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Composto 22B) e separação nos Estereoisômeros 22BA e 22BB

Síntese do Composto 22B e separação nos Estereoisômeros 22BA e 22BB:

[00423] O composto 22B (257 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 20e usando o procedimento descrito para a síntese do Composto 6B. Os dois estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 50%, EtOH a 50%) para dar, após solidificação a partir de pentano/éter de di-isopropila, o estereoisômero eluído em primeiro lugar 22BA (49 mg) e o estereoisômero eluído em segundo lugar 22BB (61 mg). Estereoisômero 22BA: 1

[00424] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,83 - 1,00 (m, 1 H) 0,98 - 1,09 (m, 1 H) 1,54 (dt, J=8,35, 4,33 Hz, 1 H) 1,58 - 1,70 (m, 1 H) 3,13 - 3,28 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,68 (dd, J=10,09, 7,57 Hz, 1 H) 3,78 - 3,89 (m, 4 H) 3,95 - 4,05 (m, 1 H) 4,50 (td, J=10,25, 6,31 Hz, 1 H) 5,55 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,95 (s l, 1 H) 5,96 (s l, 1 H) 6,39 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H) 12,24 (s l, 1 H)

[00425] LC/MS (método LC-D): Rt 2,68 min, MH+ 605

[00426] [Į]D20: -9,3° (c 0,291, DMF)

[00427] SFC quiral (método SFC-S): Rt 1,48 min, MH+ 605, pureza quiral 100%.

Estereoisômero 22BB: 1

[00428] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,82 - 0,95 (m, 1 H) 1,04 - 1,06 (m, 1 H) 1,55 (dt, J=8,28, 4,22 Hz, 1 H) 1,58 - 1,68 (m, 1 H) 3,13 - 3,28 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,68 (dd, J=10,40, 7,25 Hz, 1 H) 3,81 - 3,88 (m, 4 H) 3,95 - 4,02 (m, 1 H) 4,46 - 4,55 (m, 1 H) 5,54 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 6,39 (d, J=9,14 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H) 12,20 (s l, 1 H)

[00429] LC/MS (método LC-C): Rt 2,80 min, MH+ 605

[00430] [Į]D20: +80,0° (c 0,275, DMF)

[00431] SFC quiral (método SFC-S): Rt 3,12 min, MH+ 605, pureza quiral 99,55%. Exemplo 23: síntese do ácido (1s,3s)-3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5- metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)ciclobuteno-ccarboxílico (Composto 23) e separação quiral nos Enantiômeros 23A e 23B Síntese do Composto 23 e separação quiral nos enantiômeros 23A e 23B:

[00432] O composto 23A (280 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 20e usando os procedimentos descritos para a síntese do Composto 8. Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 45%, EtOH a 55%) para dar, após solidificação a partir de heptano/éter de di-isopropila, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 23A (60 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 23B (71 mg). Composto 23: 1

[00433] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,02 - 2,15 (m, 2 H) 2,58 - 2,65 (m, 2 H) 2,66 - 2,75 (m, 1 H) 3,14 - 3,29 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (s, 3 H) 3,98 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,42 - 4,57 (m, 2 H) 5,51 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,65 (t, J=1,9 Hz, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 6,42 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,34 (s, 1 H) 12,11 - 12,40 (m, 1 H)

[00434] LC/MS (método LC-C): Rt 2,76 min, MH+ 605 Enantiômero 23A: 1

[00435] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,02 - 2,15 (m, 2 H) 2,57 - 2,65 (m, 2 H) 2,66 - 2,75 (m, 1 H) 3,14 - 3,28 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (s, 3 H) 3,98 (td, J=10,3, 7,1 Hz, 1 H) 4,42 - 4,56 (m, 2 H) 5,51 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,65 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 6,42 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,34 (s, 1 H) 12,02 - 12,49 (m, 1 H)

[00436] LC/MS (método LC-C): Rt 2,75 min, MH+ 605

[00437] [Į]D20: -38,1° (c 0,307, DMF)

[00438] SFC quiral (método SFC-R): Rt 0,84 min, MH+ 605, pureza quiral 100%. Enantiômero 23B: 1

[00439] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,02 - 2,15 (m, 2H) 2,56 - 2,75 (m, 3 H) 3,14 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,84 (s, 3 H) 3,93 - 4,04 (m, 1 H) 4,43 - 4,57 (m, 2 H) 5,51 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 5,65 (s, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 6,42 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,44 (d l, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d l, J=8,5 Hz, 2 H) 8,34 (s, 1 H) 12,07 - 12,47 (m, 1 H)

[00440] LC/MS (método LC-C): Rt 2,76 min, MH+ 605

[00441] [Į]D20: +36,9° (c 0,309, DMF)

[00442] SFC quiral (método SFC-R): Rt 1,86 min, MH+ 605, pureza quiral 100%. Exemplo 24: síntese do ácido (1s,3s)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5- metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-ciclobutanocarboxílico (Composto 24) e separação quiral nos Enantiômeros 24A e 24B Síntese do Composto 24 e separação quiral nos Enantiômeros 24A e 24B:

[00443] O composto 24 (550 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 20e usando os procedimentos descritos para a síntese do Composto 10. Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Whelk® O1 (S,S) 5 µm 250 x 21,1 mm, fase móvel: CO2 a 50%, MeOH a 50%) para dar, após solidificação a partir de Et2O, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 24A (190 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 24B (177 mg). Composto 24: 1

[00444] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,93 (l q, J=9,77 Hz, 2 H) 2,11 - 2,32 (m, 2 H) 2,53 - 2,60 (m, 1 H) 2,97 (quin, J=8,91 Hz, 1 H) 3,16 - 3,30 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,74 - 3,82 (m, 2 H) 3,85 (s, 3 H) 3,96 - 4,06 (m, 1 H) 4,51 (td, J=10,25, 5,99 Hz, 1 H) 5,55 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 5,94 (s l, 2 H) 6,39 (d, J=8,51 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,44 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,34 (s, 1 H) 12,07 (s l, 1 H)

[00445] LC/MS (método LC-C): Rt 2,91 min, MH+ 619

Enantiômero 24A: 1

[00446] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,87 - 2,02 (m, 2 H) 2,15 - 2,30 (m, 2 H) 2,52 - 2,59 (m, 1 H) 2,95 (qt J = 8,83 Hz, 1 H) 3,07 - 3,29 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,77 (d l, J=6,31 Hz, 2 H) 3,84 (s, 3 H) 3,95 – 4,07 (m, 1 H) 4,42 – 4,56 (m, 1 H) 5,54 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,74 (t, J=2,05 Hz, 1 H) 5,81 - 6,01 (m, 2 H) 6,38 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H) 12,11 (s l, 1 H)

[00447] LC/MS (método LC-C): Rt 2,89 min, MH+ 619

[00448] [Į]D20: -41,5° (c 0,224, DMF)

[00449] SFC quiral (método SFC-T): Rt 1,81 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Enantiômero 24B: 1

[00450] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,91 (q, J=9,35 Hz, 2 H) 2,17 - 2,26 (m, 2 H) 2,53 - 2,61 (m, 1 H) 2,94 (quin, J=8,91 Hz, 1 H) 3,13 - 3,27 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,72 - 3,79 (m, 2 H) 3,84 (s, 3 H) 3,90 - 4,06 (m, 1 H) 4,50 (td, J=10,32, 6,46 Hz, 1 H) 5,54 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,72 - 5,75 (m, 1 H) 5,91 - 5,95 (m, 2 H) 6,38 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,20 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H) 12,07 (s l, 1 H)

[00451] LC/MS (método LC-C): Rt 2,89 min, MH+ 619

[00452] [Į]D20: +36,6° (c 0,232, DMF)

[00453] SFC quiral (método SFC-T): Rt 2,26 min, sem MH+, pureza quiral 98,71%. Exemplo 25: síntese do ácido (1r,3r)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5- metóxi-6-(trifluorometil)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-ciclobutanocarboxílico (Composto 25) e separação quiral nos Enantiômeros 25A e 25B

Síntese do Composto 25 e separação quiral nos Enantiômeros 25A e 25B:

[00454] O composto 25 (310 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 20e usando os procedimentos descritos para a síntese do Composto 11. Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Whelk® O1 (S,S) 5 µm 250 x 21,1 mm, fase móvel: CO2 a 50%, MeOH a 50%) para dar, após solidificação a partir de Et2O/pentano, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 25A (94 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 25B (105 mg). Composto 25: 1

[00455] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,80 - 2,04 (m, 2 H) 2,22 - 2,31 (m, 2 H) 2,56 - 2,64 (m, 1 H) 3,09 (l qt, J=7,33 Hz, 1 H) 3,14 - 3,28 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,84 (s, 3 H) 3,87 (d, J=6,57 Hz, 2 H) 3,93 - 4,06 (m, 1 H) 4,45 - 4,56 (m, 1 H) 5,54 (d, J=8,59 Hz, 1 H) 5,77 (s, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 6,38 (d, J=9,09 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1H) 7,43 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H) 12,10 (s l, 1 H)

[00456] LC/MS (método LC-C): Rt 2,87 min, MH+ 619 Enantiômero 25A: 1

[00457] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,91 - 2,03 (m, 2 H) 2,18 - 2,29 (m, 2 H) 2,55 - 2,62 (m, 1 H) 3,01 - 3,11 (m, 1 H) 3,14 - 3,28 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,84 (s, 3 H) 3,86 (d, J=7,07 Hz, 2 H) 3,93 - 4,05 (m, 1 H) 4,42 – 4,58 (m, 1 H) 5,54 (d, J=8,59 Hz, 1 H) 5,77 (s, 1 H) 5,92 - 5,95 (m, 1 H) 5,95 - 5,98 (m, 1 H) 6,38 (d, J=8,59 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H)

7,43 (d, J=8,08 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,08 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H)

[00458] LC/MS (método LC-C): Rt 2,90 min, MH+ 619

[00459] [Į]D20: -41,1° (c 0,28, DMF)

[00460] SFC quiral (método SFC-T): Rt 1,91 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Enantiômero 25B: 1

[00461] H RMN (400 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,90 - 2,04 (m, 2 H) 2,19 - 2,29 (m, 2 H) 2,55 - 2,60 (m, 1 H) 3,00 - 3,30 (m, 3 H) 3,62 (s, 3 H) 3,84 (s, 3 H) 3,86 (d l, J=7,07 Hz, 2 H) 3,94 - 4,04 (m, 1 H) 4,45 - 4,55 (m, 1 H) 5,54 (d, J=8,59 Hz, 1 H) 5,77 (s, 1 H) 5,88 - 5,95 (m, 1 H) 5,95 - 5,98 (m, 1 H) 6,38 (d l, J=8,59 Hz, 1 H) 7,23 (s, 1 H) 7,43 (d, J=8,59 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,08 Hz, 2 H) 8,33 (s, 1 H)

[00462] LC/MS (método LC-C): Rt 2,90 min, MH+ 619

[00463] [Į]D20: +40,6° (c 0,32, DMF)

[00464] SFC quiral (método SFC-T): Rt 2,48 min, sem MH+, pureza quiral 98,68%. Exemplo 26A: síntese do ácido (1R*,2R*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5- fluoro-6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Composto 26A)

Síntese do intermediário 26a:

[00465] Uma solução de 4-bromo-2-fluoro-1- (trifluorometóxi)benzeno[CAS 105529-58-6] (98,7 g, 381,1 mmol) em H2SO4 concentrado (98%, 200 mL) foi resfriada até 0 °C c om um banho de gelo. KNO3 (43,0 g, 425,3 mmol) foi adicionado em porções. Após adição, o banho de gelo foi removido e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 h. A mistura reacional foi vertida em água gelada (2 L) enquanto se agitava. A mistura foi extraída com CH2Cl2 (3 x 500 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (2 x 500 mL), salmoura (500 mL), secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para originar 1-bromo-5-fluoro-2-nitro-4- (trifluorometóxi)benzeno 26a (117,2 g), que foi usado no próximo passo sem purificação adicional. Síntese do intermediário 26b:

[00466] A uma suspensão agitada de 1-bromo-5-fluoro-2-nitro-4- (trifluorometóxi)benzeno 26a (70,0 g, 230 mmol) e NH4Cl (123,2 g, 2,30 mol) em iPrOH (1 L) e água (330 mL) foi adicionado pó de ferro redutor (64,3 g, 1,15 mol) sob atmosfera de N2. A mistura reacional foi agitada a 60 °C durante 16 h. A mistura reacional foi diluí da com EtOAc (1 L) e filtrada através de Celite®. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre EtOAc (1 L) e água (800 mL). As camadas foram separadas e a fase orgânica foi lavada com salmoura

(1 L), seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por destilação sob pressão reduzida (bomba de óleo, p.e. 60~64°C). 2-Bromo-4-fluoro-5-(trifluorom etóxi)anilina 26b (47,3 g) foi obtida como um óleo amarelo. Síntese do intermediário 26c:

[00467] A uma mistura de 2-bromo-4-fluoro-5-(trifluorometóxi)anilina 26b (18,4 g, 67,2 mmol), etinil(trimetil)silano (19,9 g, 202,4 mmol, 28,00 mL) em Et3N (300 mL) foram adicionados CuI (1,28 g, 6,72 mmol) e Pd(PPh3)2Cl2 (2,40 g, 3,42 mmol). A mistura reacional foi aquecida sob atmosfera de N2 a 90°C durante 16 h. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a mistura foi diluída com MTBE (300 mL) e filtrada através de Celite®. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (ISCO®, 220 g Coluna Flash de Sílica SepaFlash®, eluente: gradiente de EtOAc de 0 a 5% em éter de petróleo @ 100 mL/min). 4-Fluoro-5- (trifluorometóxi)-2-((trimetilsilil)etinil)anilina 26c (16,1 g, pureza de 90%) foi obtida como um óleo marrom. Síntese do intermediário 26d:

[00468] Uma mistura de 4-fluoro-5-(trifluorometóxi)-2- ((trimetilsilil)etinil)anilina 26c (16,1 g, 55,3 mmol) e tBuOK (18,6 g, 165,8 mmol) em NMP (220,00 mL) foi aquecida a 90 °C duran te 16 h sob atmosfera de N2. Após resfriamento até à temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em água gelada (1 L) e extraída com MTBE (3 x 300 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 x 200 mL), salmoura (300 mL), secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (ISCO®, 120 g Coluna Flash de Sílica SepaFlash®, eluente: gradiente de EtOAc de 0 a 5% em éter de petróleo, caudal = 85 mL/min) para originar o produto 5-fluoro-6-(trifluorometóxi))- 1H-indol 26d (11 g) como um óleo verde-escuro. O resíduo foi combinado com outra fração (quantidade total = 17,2 g) e purificado ainda por destilação sob pressão reduzida (bomba de óleo, p.e. 60~64 °C) para proporcionar 5-fluoro-6-(trifluorome tóxi)-1H-indol 26d (14,7 g, pureza de 95%) como um óleo incolor. Síntese do intermediário 26e:

[00469] A 0°C, BH 3-Piridina (1,2 mL, 11 mmol) foi adicionada lentamente a uma solução de 5-fluoro-6-(trifluorometóxi)-1H-indol 26d (500 mg, 2,3 mmol) em EtOH (3,2 mL). HCl a 6 N (7,6 mL) foi lentamente adicionado enquanto se mantinha a temperatura abaixo de 10 °C. A mistura foi agitada a 0 °C durante 2 h. Água (100 m L) foi adicionada e a mistura foi basificada até pH 14 com NaOH concentrado (a temperatura foi mantida abaixo de 20°C). CH 2Cl2 foi adicionado. A camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para dar a 5-fluoro-6-(trifluorometóxi)indolina 26e (550 mg). O composto foi usado no próximo passo sem purificação adicional. Síntese do intermediário 26f:

[00470] A uma mistura de ácido 2-bromo-2-(4-clorofenil)acético [CAS 3381-73-5] (0,61 g, 2,4 mmol), 5-fluoro-6-(trifluorometóxi)indolina 26e (0,55 g , 2,2 mmol, pureza de 89%) e DMAP (0,027 g, 0,22 mmol) em CH2Cl2 (14 mL) foi adicionado EDCI (0,51 g, 2,7 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi diluída com uma solução de K2CO3 a 10% em água. As camadas foram decantadas. A camada orgânica foi lavada com água, seca sobre MgSO4, filtrada e o solvente foi concentrado sob pressão reduzida para dar 2-bromo-2-(4- clorofenil)-1-(5-fluoro-6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 26f (1,1 g, óleo roxo). O composto foi usado no próximo passo sem purificação adicional. Síntese do Composto 26A:

[00471] O composto 26A (135 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 26f usando os procedimentos descritos para a síntese do

Composto 6A. Composto 26A: 1

[00472] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,87 - 0,94 (m, 1 H) 1,01 - 1,07 (m, 1 H) 1,55 (dq, J=8,55, 4,40 Hz, 1 H) 1,60 - 1,68 (m, 1 H) 3,12 - 3,30 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,68 (dd, J=10,40, 7,57 Hz, 1 H) 3,85 (dd, J=10,40, 6,31 Hz, 1 H) 4,01 - 4,08 (m, 1 H) 4,48 - 4,55 (m, 1 H) 5,57 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,94 (s l, 1 H) 5,95 (s l, 1 H) 6,46 (d l, J=8,83 Hz, 1 H) 7,40 - 7,48 (m, 3 H) 7,54 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,94 Hz, 1 H) 12,22 (s l, 1 H)

[00473] LC/MS (método LC-C): Rt 2,97 min, MH+ 609

[00474] PF = 120°C Exemplo 26B: síntese do ácido (1S*,2S*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5- fluoro-6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-ciclopropanocarboxílico (Composto 26B) Síntese do Composto 26B:

[00475] O composto 26B (150 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 26f usando o procedimento descrito para a síntese do Composto 6B. Composto 26B: 1

[00476] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 0,86 – 0,94 (m, 1 H) 1,04 (dq, J=8,20, 4,31 Hz, 1 H) 1,55 (dq, J=8,43, 4,33 Hz, 1 H) 1,58 - 1,67 (m, 1 H) 3,12 - 3,30 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,68 (dd, J=10,40, 7,57 Hz, 1 H) 3,85 (dd, J=10,25, 6,15 Hz, 1 H) 4,04 (q, J=8,72 Hz, 1 H) 4,47 - 4,55 (m, 1 H) 5,57 (d, J=8,83 Hz, 1 H) 5,75 (s, 1 H) 5,94 (s l, 1 H) 5,95 (s l, 1 H) 6,46 (d l, J=8,51 Hz, 1 H) 7,40 - 7,48 (m, 3 H) 7,54 (d, J=8,51 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,94 Hz, 1 H) 12,21 (s l, 1 H)

[00477] LC/MS (método LC-C): Rt 2,97 min, MH+ 609

[00478] PF = 126°C Exemplo 27: síntese do ácido ((1s,3s)-3-(3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro- 6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)ciclobuteno-carboxílico (Composto 27) e separação nos Enantiômeros 27A e 27B Síntese do Composto 27 e separação quiral nos Enantiômeros 27A e 27B:

[00479] O composto 27 (175 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 26f usando o procedimento descrito para a síntese do Composto 8. Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 55%, EtOH a 45%) para dar, após solidificação a partir de heptano/éter de di-isopropila, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 27A (33 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 27B (35 mg). Composto 27: 1

[00480] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,01 - 2,17 (m, 2 H) 2,57 - 2,65 (m, 2 H) 2,66 - 2,77 (m, 1 H) 3,08 - 3,28 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,99 - 4,10 (m, 1 H) 4,43 - 4,57 (m, 2 H) 5,54 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,66 (s, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 6,49 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 7,45 (d, J=8,5 Hz, 3 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,9 Hz, 1 H) 12,06 - 12,47 (m, 1 H)

[00481] LC/MS (método LC-C): Rt 2,88 min, MH+ 609

Enantiômero 27A: 1

[00482] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,00 - 2,12 (m, 2 H) 2,57 - 2,65 (m, 3 H) 3,11 - 3,25 (m, 2 H) 3,60 (s, 3 H) 4,04 (d l, J=7,3 Hz, 1 H) 4,40 - 4,48 (m, 1 H) 4,48 - 4,57 (m, 1 H) 5,53 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 5,65 (s, 1 H) 5,85 (s, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 6,48 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=8,5 Hz, 3 H) 7,54 (d l, J=8,5 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,9 Hz, 1 H)

[00483] LC/MS (método LC-D): Rt 2,79 min, MH+ 609

[00484] [Į]D20: -40,5° (c 0,252, DMF)

[00485] SFC quiral (método SFC-I): Rt 1,18 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Enantiômero 27B: 1

[00486] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,00 - 2,13 (m, 2 H) 2,54 - 2,67 (m, 3 H) 3,10 - 3,27 (m, 2 H) 3,60 (s, 3 H) 3,99 - 4,10 (m, 1 H) 4,40 - 4,48 (m, 1 H) 4,48 - 4,56 (m, 1 H) 5,54 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 5,66 (s, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 5,92 (s, 1 H) 6,48 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=8,5 Hz, 3 H) 7,54 (d l, J=8,5 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,9 Hz, 1 H)

[00487] LC/MS (método LC-D): Rt 2,79 min, MH+ 609

[00488] [Į]D20: +37,5° (c 0,333, DMF)

[00489] SFC quiral (método SFC-I): Rt 2,56 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Exemplo 28: síntese do ácido (1R*,2S*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2- (6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)-2- fluorociclopropanocarboxílico (Composto 28A) e separação nos Estereoisômeros 28AA e 28AB e síntese do ácido (1S*,2R*)-2-((3-((1- (4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxílico (Composto 28B) e separação nos Estereoisômeros 28BA e 28BB

Síntese dos intermediários 28a e 28b:

[00490] Rh2(OPiv)4.2H2O (2% em mol, 0,599 mmol, 387 mg) foi adicionado a uma solução de 1-(((2-fluoroalil)óxi)metil)-4- metoxibenzeno [CAS 1673563-84-2] (29,9 mmol) em CH2Cl2 anidro (86 mL) em um frasco de fundo redondo com três tubuladuras equipado com uma câmara de bolhas. Após resfriamento da solução até 0 ºC, uma solução do etilacetato de diazo a 83% comercialmente disponível em diclorometano (3 equiv., 89,85 mmol) em CH2Cl2 anidro (86 mL) foi lentamente adicionada usando uma microbomba com um caudal de 24 mL/h. A mistura foi agitada à temperatura ambiente até à completação 19 da reação (indicada por análise de TLC e F NMR) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (éter de petróleo/EtOAc, 9/1 a 7/3) para dar em rendimento de 60% uma mistura de diastereômeros (dr 53:47). Os diastereômeros foram separados por cromatografia em coluna em sílica-gel (éter de petróleo/EtOAc, de 100/0 a 80/20) para dar 2-fluoro- 2-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)ciclopropanocarboxilato de trans-etila 28a e 2-fluoro-2-(((4-metoxibenzil)óxi)metil)ciclopropanocarboxilato de cis- etila 28b. Síntese do intermediário 28c:

[00491] DDQ (1,5 equiv., 27,9 mmol, 6,33 g) foi adicionada a uma solução de 2-fluoro-2-(((4- metoxibenzil)óxi)metil)ciclopropanocarboxilato de trans-etila 28a (1 equiv., 18,6 mmol, 5,25 g) em diclorometano (340 mL) e água (30 mL) a 0°C. A mistura foi agitada durante 20 h. Uma solu ção de NaHCO 3 aquoso saturado foi adicionada e a mistura foi agitada durante 30 minutos. A camada aquosa foi extraída três vezes com CH2Cl2. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de NaHCO3 e salmoura. A camada orgânica foi evaporada sob pressão reduzida e o resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (éter de petróleo/EtOAc, 9/1 a 6/4) para dar 2-fluoro-2- (hidroximetil)-ciclopropanocarboxilato de trans-etila 28c (876 mg). Síntese do intermediário 28d:

[00492] DDQ (1,5 equiv., 15,8 mmol, 3,6 g) foi adicionada a uma solução de 2-fluoro-2-(((4- metoxibenzil)óxi)metil)ciclopropanocarboxilato de cis-etila 28b (1 equiv., 10,6 mmol, 2,98 g) em diclorometano (193 mL) e água (17 mL) a 0°C. A mistura foi agitada durante 20 h. Uma solução de NaHCO3 aquoso saturado foi adicionada e a mistura foi agitada durante 30 minutos. A camada aquosa foi extraída três vezes com CH2Cl2. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de

NaHCO3 e salmoura. A camada orgânica foi evaporada sob pressão reduzida e o resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em sílica- gel (éter de petróleo/EtOAc, 9/1 a 6/4) para dar 2-fluoro-2-(hidroximetil)- ciclopropano-carboxilato de cis-etila (876 mg). Síntese do intermediário 28e:

[00493] Sob um fluxo de N2 a 10 ºC, azodicarboxilato de di-terc-butila (948 mg, 4,118 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução de 3-metóxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (633 mg, 3,743 mmol), 2-fluoro-2- (hidroximetil)ciclopropanocarboxilato de trans-etila 28c (607 mg, 3,743 mmol) e PPh3 (1,08 g; 4,118 mmol) em THF (30 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente sob N2 durante 18 h. A solução foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (15-40 µm, 80 g, heptano/EtOAc de 95/5 a 80/20). As frações puras foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para dar 2-fluoro-2-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)ciclopropano-carboxilato de trans-metila 28e (930 mg). Síntese do intermediário 28f:

[00494] Uma solução de 2-fluoro-2-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)ciclopropano-carboxilato de trans-metila 28e (810 mg, 2,586 mmol) em EtOH (20 mL) e THF (10 mL) contendo uma quantidade catalítica de Pd/C a 10% (275 mg, 0,259 mmol) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 à temperatura ambiente durante 4 h. O catalisador foi removido por filtração sobre uma curta almofada de Celite® e o bolo de filtração foi enxaguado várias vezes com EtOH. Os filtrados combinados foram evaporados sob pressão reduzida para dar 2-((3-amino-5-metoxifenóxi)-metil)-2-fluorociclopropanocarboxilato de trans-metila 28f (710 mg) que foi usado no próximo passo sem purificação adicional. Síntese do intermediário 28g e separação nos Estereoisômeros 28h, 28i, 28j e 28k:

[00495] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (927 mg, 2,133 mmol), 2-((3- amino-5-metoxifenóxi)-metil)-2-fluorociclopropanocarboxilato de trans- metila 28f (725 mg, 2,559 mmol) e di-isopropiletilamina (735 µL, 4,265 mmol) em CH3CN (4 mL) foi agitada a 80 °C durante 12 h. O solve nte foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi absorvido com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HCl a 1 N, água, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (15-40 µm, 40 g, heptano/EtOAc de 95/5 a 80/20). As frações puras foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para dar 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)- trans-2-fluorociclopropanocarboxilato de metila 28g (550 mg). Os quatro estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 70%, EtOH a 30%) para dar 28h (118 mg), 28i (114 mg), 28j (158 mg) e 28k (165 mg). Síntese do Composto 28A e separação nos Estereoisômeros 28AA e 28AB:

[00496] LiOH mono-hidratado (23,3 mg, 0,556 mmol) foi adicionado a uma solução do estereoisômero 28h (118 mg, 0,185 mmol) em THF/MeOH/água (1/1/1) (2 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura foi diluída com água e gelo, lentamente acidificada com HCl a 1 N e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar, após cristalização a partir de heptano/éter de di-isopropila, ácido (1R*,2S*)-2- ((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)- 5-metoxifenóxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxílico 28A (110 mg) (durante esta reação ocorreu racemização total no centro quiral central).

[00497] Um segundo lote do Composto 28A (100 mg) foi obtido similarmente começando a partir do estereoisômero 28i. Os dois lotes foram combinados. Os dois estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 65%, EtOH a 35%) para dar o estereoisômero eluído em primeiro lugar (94 mg) e o estereoisômero eluído em segundo lugar (80 mg). O estereoisômero eluído em primeiro lugar foi solidificado a partir de éter de di-isopropila para dar o Estereoisômero 28AA (47 mg). O estereoisômero eluído em segundo lugar foi solidificado a partir de heptano para dar o Estereoisômero 28AB (37 mg). Síntese do Composto 28B e separação nos Estereoisômeros 28BA e 28BB:

[00498] LiOH mono-hidratado (31,2 mg, 0,744 mmol) foi adicionado a uma solução do estereoisômero 28j (158 mg, 0,248 mmol) em THF/MeOH/água (1/1/1) (2 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura foi diluída com água e gelo, lentamente acidificada com HCl a 1 N e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar, após cristalização a partir de MeOH/água, ácido (1S*,2R*)-2-((3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-2-fluorociclopropano-carboxílico 28B (100 mg) (durante esta reação ocorreu racemização total no centro quiral central).

[00499] Um segundo lote de 28A (105 mg) foi obtido similarmente começando a partir do estereoisômero 28k.

[00500] Os dois estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 60%, MeOH a 30%) para dar o estereoisômero eluído em primeiro lugar (88 mg) e o estereoisômero eluído em segundo lugar (78 mg). O estereoisômero eluído em primeiro lugar foi solidificado a partir de heptano/éter de di-isopropila para dar o Estereoisômero 28BA (54 mg). O estereoisômero eluído em segundo lugar foi solidificado a partir de heptano/éter de di-isopropila para dar o Estereoisômero 28BB (60 mg). Estereoisômero 28AA: 1

[00501] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,37 (dt, J=11,7, 7,1 Hz, 1 H) 1,62 - 1,76 (m, 1 H) 2,18 - 2,31 (m, 1 H) 3,07 - 3,23 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,98 - 4,10 (m, 1 H) 4,15 - 4,29 (m, 1 H) 4,43 (dd, J=18,9, 12,0 Hz, 1 H) 4,48 - 4,57 (m, 1 H) 5,58 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,78 (s, 1 H) 5,97 (s, 1 H) 5,99 (s, 1 H) 6,49 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=7,9 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,71 (s l, 1 H)

[00502] LC/MS (método LC-C): Rt 2,83 min, MH+ 609

[00503] [Į]D20: -43,3° (c 0,3, DMF)

[00504] SFC quiral (método SFC-F): Rt 1,98 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 28AB: 1

[00505] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,32 - 1,42 (m, 1 H) 1,62 - 1,75 (m, 1 H) 2,24 (dt, J=18,5, 9,2 Hz, 1 H) 3,08 - 3,25 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,99 - 4,08 (m, 1 H) 4,13 - 4,26 (m, 1 H) 4,39 - 4,57 (m, 2 H) 5,58 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 5,78 (s, 1 H) 5,96 (s l, 1 H) 5,99 (s l, 1 H) 6,49 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=7,6 Hz, 1 H) 7,33 (d l, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=8,2 Hz, 2 H) 7,55 (d l, J=8,2 Hz, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 12,71 (s l, 1 H)

[00506] LC/MS (método LC-C): Rt 2,84 min, MH+ 609

[00507] [Į]D20: +52,5° (c 0,301, DMF)

[00508] SFC quiral (método SFC-F): Rt 3,29 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 28BA: 1

[00509] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,32 - 1,42 (m, 1 H)

1,62 - 1,72 (m, 1 H) 2,18 - 2,29 (m, 1 H) 3,08 - 3,23 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 4,04 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,15 - 4,26 (m, 1 H) 4,45 (dd, J=18,8, 11,8 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,5, 6,1 Hz, 1 H) 5,58 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,78 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 5,99 (s, 1 H) 6,49 (d, J=9,1 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,76 (s l, 1 H)

[00510] LC/MS (método LC-D): Rt 2,71 min, MH+ 609

[00511] [Į]D20: -57,1° (c 0,31, DMF)

[00512] SFC quiral (método SFC-F): Rt 2,26 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 28BB: 1

[00513] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,35 (dt, J=11,7, 7,1 Hz, 1 H) 1,59 - 1,71 (m, 1 H) 2,17 - 2,28 (m, 1 H) 3,08 - 3,25 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 4,04 (td, J=10,5, 7,1 Hz, 1 H) 4,17 - 4,29 (m, 1 H) 4,43 (dd, J=19,5, 11,7 Hz, 1 H) 4,52 (td, J=10,4, 6,3 Hz, 1 H) 5,59 (d, J=9,1 Hz, 1 H) 5,78 (t, J=1,9 Hz, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 5,99 (s, 1 H) 6,49 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,79 (s l, 1 H)

[00514] LC/MS (método LC-D): Rt 2,70 min, MH+ 609

[00515] [Į]D20: +38,1° (c 0,289, DMF)

[00516] SFC quiral (método SFC-F): Rt 3,68 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Exemplo 29: síntese do ácido (1S*,2S*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2- (6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)-2- fluorociclopropanocarboxílico (Composto 29A) e separação nos Estereoisômeros 29AA e 29AB e síntese do ácido (1R*,2R*)-2-((3-((1- (4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxílico (Composto 29B) e separação nos Estereoisômeros 29BA e 29BB

Síntese do intermediário 29a:

[00517] Sob um fluxo de N2 a 10ºC, azodicarboxilato de di-terc-butila (750 mg, 3,256 mmol) foi adicionado porção a porção a uma solução de 3-metóxi-5-nitrofenol [7145-49-5] (501 mg, 2,96 mmol), 2-fluoro-2- (hidroximetil)ciclopropanocarboxilato de cis-etila 28d (480 mg, 2,96 mmol) e PPh3 (854 mg, 3,256 mmol) em THF (23 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente sob N2 durante 18 h. A solução foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (15-40 µm, 80 g, heptano/EtOAc 70/30). As frações puras foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para dar 2-fluoro-2-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)ciclopropanocarboxilato de cis-metila 29a (660 mg). Síntese do intermediário 29b:

[00518] Uma solução de 2-fluoro-2-((3-metóxi-5- nitrofenóxi)metil)ciclopropano-carboxilato de cis-metila 29a (610 mg, 1,947 mmol) em EtOH (15 mL) e THF (7,5 mL) contendo uma quantidade catalítica de Pd/C a 10% (207 mg, 0,195 mmol) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 à temperatura ambiente durante 4 h. O catalisador foi removido por filtração sobre uma curta almofada de Celite® e o bolo de filtração foi enxaguado várias vezes com EtOH. Os filtrados combinados foram evaporados para dar 2-((3- amino-5-metoxifenóxi)metil)-2-fluorociclopropano-carboxilato de cis- metila 29b (560 mg) que foi usado no próximo passo sem purificação adicional. Síntese do intermediário 29c e separação nos Estereoisômeros 29d, 29e, 29f e 29g:

[00519] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (716 mg, 1,647 mmol), 2-((3- amino-5-metóxi-fenóxi)-metil)-2-fluorociclopropanocarboxilato de cis- metila 29b (560 mg, 1,977 mmol) e di-isopropiletilamina (568 µL, 3,295 mmol) em CH3CN (3,5 mL) foi agitada a 80 °C durante 12 h. O sol vente foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi absorvido com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com HCl a 1 N, água, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica-gel (15-40 µm, 40 g, heptano/EtOAc de 95/5 a 80/20). As frações puras foram combinadas e evaporadas sob pressão reduzida para dar 2-((3-((1-(4-clorofenil)-2- oxo-2-(6-(trifluorometil)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)-cis- 2-fluorociclopropanocarboxilato de metila 29c (500 mg). Os quatro estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralpak® AD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 65%, EtOH a 35%) para dar uma mistura de 29d+29e (250 mg), 29f (125 mg) e 29g (114 mg). A mistura de 29d+29e foi separada ainda através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralpak® AD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 75%, EtOH a 25%) para dar 29d (88 mg) e 29e (66 mg).

Síntese do Composto 29A e separação nos Estereoisômeros 29AA e 29AB:

[00520] LiOH mono-hidratado (17,4 mg, 0,414 mmol) foi adicionado a uma solução do estereoisômero 29d (88 mg, 0,138 mmol) em THF/MeOH/água (1/1/1) (1 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura foi diluída com água e gelo, lentamente acidificada com HCl a 1 N e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar ácido (1S*,2S*)-2-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1- il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)-2-fluorociclopropanocarboxílico 29A (80 mg) (durante esta reação ocorreu racemização total no centro quiral central).

[00521] Um segundo lote de 29A (90 mg) foi obtido similarmente começando a partir do estereoisômero 29f. Os dois lotes foram combinados. Os dois estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 65%, MeOH a 35%) e purificados ainda por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 4 g, CH2Cl2/MeOH 99/1) para dar o estereoisômero eluído em primeiro lugar (43 mg) e o estereoisômero eluído em segundo lugar (40 mg). O estereoisômero eluído em primeiro lugar foi solidificado em heptano/éter de di-isopropila para dar o estereoisômero 29AA (29 mg). O estereoisômero eluído em segundo lugar foi solidificado em heptano/éter de di-isopropila para dar o estereoisômero 29AB (27 mg). Síntese do Composto 29B e separação nos Estereoisômeros 29BA e 29BB:

[00522] LiOH mono-hidratado (13 mg, 0,311 mmol) foi adicionado a uma solução do estereoisômero 29e (66 mg, 0,104 mmol) em THF/MeOH/água (1/1/1) (1 mL). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente durante 4 h. A mistura foi diluída com água e gelo, lentamente acidificada com HCl a 1 N e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para dar, após cristalização a partir de MeOH/água, ácido (1R*,2R*)-2-((3-((1-(4- clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenóxi)metil)-2-fluorociclopropano-carboxílico 29B (60 mg) (durante esta reação ocorreu racemização total no centro quiral central).

[00523] Um segundo lote de 29A (100 mg) foi obtido similarmente começando a partir do estereoisômero 29g. Os dois lotes foram combinados. Os dois estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 70%, MeOH a 30%) e purificados ainda por cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm, 4 g, CH2Cl2/MeOH 99/1) para dar o estereoisômero eluído em primeiro lugar (38 mg) e o estereoisômero eluído em segundo lugar (31 mg). O estereoisômero eluído em primeiro lugar foi solidificado em heptano/éter de di-isopropila para dar o estereoisômero 29BA (24 mg). O estereoisômero eluído em segundo lugar foi solidificado em heptano/éter de di-isopropila para dar o estereoisômero 29BB (20 mg). Estereoisômero 29AA: 1

[00524] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,30 - 1,37 (m, 1 H) 1,69 (dt, J=19,7, 6,9 Hz, 1 H) 1,98 - 2,06 (m, 1 H) 3,08 - 3,24 (m, 2 H) 3,63 (s, 3 H) 4,01 - 4,09 (m, 1 H) 4,10 - 4,23 (m, 2 H) 4,48 - 4,57 (m, 1 H) 5,59 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,81 (s, 1 H) 5,99 (d l, J=5,7 Hz, 2 H) 6,49 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=7,9 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=7,9 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 8,03 (s l, 1 H) 12,58 (s l, 1 H)

[00525] LC/MS (método LC-D): Rt 2,67 min, MH+ 609

[00526] [Į]D20: -15,7° (c 0,242, DMF)

[00527] SFC quiral (método SFC-P): Rt 2,53 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 29AB: 1

[00528] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,29 - 1,38 (m, 1 H) 1,69 (dt, J=19,5, 6,5 Hz, 1 H) 1,97 - 2,10 (m, 1 H) 3,08 - 3,25 (m, 2 H) 3,63 (s, 3 H) 4,00 - 4,10 (m, 1 H) 4,10 - 4,23 (m, 2 H) 4,52 (d l, J=6,0 Hz, 1 H) 5,60 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 5,82 (s l, 1 H) 6,00 (d l, J=6,6 Hz, 2 H) 6,50 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=7,6 Hz, 1 H) 7,34 (d l, J=7,9 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=8,2 Hz, 2 H) 7,55 (d l, J=8,2 Hz, 2 H) 8,04 (s l, 1 H) 12,58 (s l, 1 H)

[00529] LC/MS (método LC-D): Rt 2,67 min, MH+ 609

[00530] [Į]D20: +77,4° (c 0,323, DMF)

[00531] SFC quiral (método SFC-P): Rt 4,47 min, sem MH+, pureza quiral 99,20%. Estereoisômero 29BA: 1

[00532] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,33 (td, J=9,8, 6,6 Hz, 1 H) 1,69 (dt, J=19,9, 6,9 Hz, 1 H) 2,03 (ddd, J=9,5, 7,1, 3,0 Hz, 1 H) 3,08 - 3,25 (m, 2 H) 3,63 (s, 3 H) 4,05 (td, J=10,3, 7,1 Hz, 1 H) 4,10 - 4,23 (m, 2 H) 4,52 (td, J=10,2, 6,3 Hz, 1 H) 5,59 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,80 - 5,84 (m, 1 H) 6,00 (d l, J=7,6 Hz, 2 H) 6,49 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,0, 1,4 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,58 (s l, 1 H)

[00533] LC/MS (método LC-D): Rt 2,67 min, MH+ 609

[00534] [Į]D20: -74,2° (c 0,302, DMF)

[00535] SFC quiral (método SFC-P): Rt 2,37 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 29BB: 1

[00536] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,34 (td, J=9,8, 6,6 Hz, 1 H) 1,69 (dt, J=19,9, 6,9 Hz, 1 H) 2,02 (ddd, J=9,5, 7,1, 3,0 Hz, 1 H) 3,09 - 3,25 (m, 2 H) 3,63 (s, 3 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,10 - 4,22 (m, 2 H) 4,52 (td, J=10,3, 6,5 Hz, 1 H) 5,59 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,81

(t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,96 - 6,03 (m, 2 H) 6,49 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,55 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H) 12,58 (s l, 1 H)

[00537] LC/MS (método LC-D): Rt 2,70 min, MH+ 609

[00538] [Į]D20: +12,0° (c 0,3, DMF)

[00539] SFC quiral (método SFC-P): Rt 3,73 min, sem MH+, pureza quiral 99,14%. Exemplo 30: síntese do ácido (1s,3s)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro- 6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)- ciclobutanocarboxílico (Composto 30) e separação quiral nos Enantiômeros 30A e 30B Síntese do Composto 30 e separação quiral nos Enantiômeros 30A e 30B:

[00540] O composto 30 (105 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 26f usando os procedimentos descritos para a síntese do Composto 10. Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OJ-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 70%, MeOH a 30%) para dar, após liofilização em CH3CN/água, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 30A (43 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 30B (47 mg). Enantiômero 30A: 1

[00541] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,85 - 1,98 (m, 2 H) 2,17 - 2,28 (m, 2 H) 2,53 - 2,59 (m, 1 H) 2,96 (quin, J=8,9 Hz, 1 H) 3,09

- 3,23 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,72 - 3,81 (m, 2 H) 4,05 (td, J=10,3, 7,4 Hz, 1 H) 4,51 (td, J=10,2, 6,5 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 5,93 (s, 2 H) 6,45 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 3 H) 7,54 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,9 Hz, 1 H) 11,24 - 13,06 (m, 1 H)

[00542] LC/MS (método LC-C): Rt 3,08 min, MH+ 623

[00543] [Į]D20: +42,6° (c 0,298, DMF)

[00544] SFC quiral (método SFC-F): Rt 2,91 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Enantiômero 30B: 1

[00545] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,87 - 1,99 (m, 2 H) 2,16 - 2,29 (m, 2 H) 2,53 - 2,59 (m, 1 H) 2,96 (t l, J=8,8 Hz, 1 H) 3,11 - 3,23 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,77 (d l, J=6,0 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,2, 7,3 Hz, 1 H) 4,51 (td, J=10,3, 6,5 Hz, 1 H) 5,56 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,74 (s, 1 H) 5,93 (s, 2 H) 6,45 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,44 (d l, J=8,2 Hz, 3 H) 7,54 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,9 Hz, 1 H) 11,43 - 12,72 (m, 1 H)

[00546] LC/MS (método LC-C): Rt 3,07 min, MH+ 623

[00547] [Į]D20: -44,2° (c 0,217, DMF)

[00548] SFC quiral (método SFC-F): Rt 4,10 min, sem MH+, pureza quiral 99,09%. Exemplo 31: síntese do ácido (1r,3r)-3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-(5-fluoro- 6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)-2-oxoetil)amino)-5-metoxifenóxi)metil)- ciclobutanocarboxílico (Composto 31) e separação quiral nos Enantiômeros 31A e 31B

Síntese do Composto 31 e separação quiral nos Enantiômeros 31A e 31B:

[00549] O composto 31 (75 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 26f usando o procedimento descrito para a síntese do Composto 11. Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OJ-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 70%, MeOH a 30%) para dar, após liofilização em CH3CN/água, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 31A (23 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 31B (24 mg). Enantiômero 31A: 1

[00550] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,90 - 2,03 (m, 2 H) 2,20 - 2,30 (m, 2 H) 2,55 - 2,62 (m, 1 H) 3,07 (t l, J=7,7 Hz, 1 H) 3,12 - 3,24 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,87 (d l, J=6,9 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,3, 7,1 Hz, 1 H) 4,51 (td, J=10,4, 6,6 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,78 (s, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 6,45 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 3 H) 7,54 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,16 (d l, J=6,9 Hz, 1 H)

[00551] LC/MS (método LC-C): Rt 3,07 min, MH+ 623

[00552] [Į]D20: +43,1° (c 0,255, DMF)

[00553] SFC quiral (método SFC-F): Rt 3,25 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Enantiômero 31B: 1

[00554] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,90 - 2,03 (m, 2 H)

2,19 - 2,31 (m, 2 H) 2,55 - 2,62 (m, 1 H) 3,01 - 3,10 (m, 1 H) 3,12 - 3,23 (m, 2 H) 3,62 (s, 3 H) 3,86 (d l, J=6,9 Hz, 2 H) 4,05 (td, J=10,2, 7,3 Hz, 1 H) 4,51 (td, J=10,3, 6,5 Hz, 1 H) 5,57 (d, J=8,8 Hz, 1 H) 5,78 (s, 1 H) 5,94 (s, 1 H) 5,95 (s, 1 H) 6,45 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 3 H) 7,54 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 8,15 (d l, J=6,6 Hz, 1 H)

[00555] LC/MS (método LC-C): Rt 3,07 min, MH+ 623

[00556] [Į]D20: -43,4° (c 0,244, DMF)

[00557] SFC quiral (método SFC-F): Rt 4,85 min, sem MH+, pureza quiral 99,09%. Exemplo 32: síntese do ácido (1s,3s)-3-(3-((2-(6-cloro-5-metóxi-indolin- 1-il)-1-(4-clorofenil)-2-oxoetil)amino)-5- metoxifenóxi)ciclobutanocarboxílico (Composto 32) e separação quiral nos Enantiômeros 32A e 32B.

Síntese do intermediário 32a:

[00558] O intermediário 32a (3,58 g) foi sintetizado a partir de 6-cloro- 5-metóxi-indolina [CAS 1369041-89-3] usando o procedimento descrito para a síntese do intermediário 26f. Síntese do intermediário 32b:

[00559] O intermediário 32b (210 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 32a usando o procedimento descrito para a síntese do intermediário 8d. Síntese do Composto 32 e separação quiral nos Enantiômeros 32A e 32B:

[00560] O composto 32 (165 mg) foi sintetizado a partir do intermediário 32b usando o procedimento descrito para a síntese do Composto 28. Os dois enantiômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 30 mm, fase móvel: CO2 a 50%, EtOH a 50%) para dar, após purificação através de cromatografia flash em sílica-gel (15-40 µm; 4 g, CH2Cl2/CH3OH 97/3) e solidificação a partir de heptano, éter de di-isopropila, o Enantiômero eluído em primeiro lugar 32A (26 mg) e o Enantiômero eluído em segundo lugar 32B (31 mg). Composto 32: 1

[00561] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,03 - 2,15 (m, 2 H) 2,57 - 2,66 (m, 2 H) 2,66 - 2,75 (m, 1 H) 3,06 - 3,23 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,80 (s, 3 H) 3,95 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,43 - 4,52 (m, 2 H) 5,50 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,65 (t, J=1,9 Hz, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 6,40 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,10 (s, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,54 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,11 (s, 1 H) 12,26 (s l, 1 H)

[00562] LC/MS (método LC-C): Rt 2,66 min, MH+ 569 Enantiômero 32A: 1

[00563] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,03 - 2,15 (m, 2 H) 2,57 - 2,66 (m, 2 H) 2,66 - 2,76 (m, 1 H) 3,04 - 3,24 (m, 2 H) 3,57 - 3,64 (m, 3 H) 3,80 (s, 3 H) 3,89 - 4,00 (m, 1 H) 4,42 - 4,54 (m, 2 H) 5,50 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 5,65 (s, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 6,40 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 7,10 (s, 1 H) 7,44 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 7,54 (d l, J=8,2 Hz, 2 H) 8,11 (s, 1 H) 12,26 (s l, 1 H)

[00564] LC/MS (método LC-D): Rt 2,56 min, MH+ 569

[00565] [Į]D20: -55,4° (c 0,332, DMF)

[00566] SFC quiral (método SFC-R): Rt 1,73 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Enantiômero 32B: 1

[00567] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 2,02 - 2,14 (m, 2 H)

2,58 - 2,65 (m, 2 H) 2,66 - 2,74 (m, 1 H) 3,04 - 3,24 (m, 2 H) 3,61 (s, 3 H) 3,80 (s, 3 H) 3,95 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,42 - 4,53 (m, 2 H) 5,50 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,65 (t, J=2,0 Hz, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 6,40 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,10 (s, 1 H) 7,44 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,54 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,11 (s, 1 H) 12,26 (s l, 1 H)

[00568] LC/MS (método LC-D): Rt 2,56 min, MH+ 569

[00569] [Į]D20: +53,4° (c 0,35, DMF)

[00570] SFC quiral (método SFC-R): Rt 3,16 min, sem MH+, pureza quiral 99,59%. Exemplo 33: síntese de ácido 3-((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5-metoxifenóxi)amino)- ciclobutanocarboxílico (Composto 33) e separação quiral nos Estereoisômeros 33A, 33B, 33C e 33D.

Síntese do intermediário 33a:

[00571] Sob nitrogênio, uma mistura de 3-metóxi-5-nitroanilina [CAS 586-10-7] (0,50 g, 2,973 mmol), 3-oxociclobutanocarboxilato de etila [CAS 87121-89-9] (1,27 g, 8,92 mmol) e ácido acético (0,34 mL, 5,947 mmol) em EtOH seco (26 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. NaBH3CN (0,374 g, 5,947 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 18 h. Salmoura foi adicionada e a mistura foi extraída duas vezes com CH2Cl2. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 24 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 75/25). As frações puras foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida para dar 3-((3-metóxi-5-nitrofenil)amino)ciclobutano- carboxilato de etila 33a (820 mg). O composto foi usado no próximo passo sem purificação adicional. Síntese do intermediário 33b:

[00572] Uma solução de 3-((3-metóxi-5-nitrofenil)amino)ciclobutano- carboxilato de etila 33a (820 mg, 2,8 mmol) em EtOH (16 mL) e EtOAc (14 mL) contendo uma quantidade catalítica de Pd/C a 10% (300 mg, 0,28 mmol) foi hidrogenada sob pressão atmosférica de H2 à temperatura ambiente durante 18 h. O catalisador foi removido por filtração sobre uma curta almofada de Celite® e o bolo de filtração foi enxaguado várias vezes com EtOAc. Os filtrados combinados foram evaporados sob pressão reduzida para dar 3-((3-amino-5- metoxifenil)amino)ciclobutanocarboxilato de etila 33b (800 mg) que foi usado no próximo passo sem purificação adicional. Síntese do intermediário 33c:

[00573] Uma mistura de 2-bromo-2-(4-clorofenil)-1-(6- (trifluorometóxi)indolin-1-il)etanona 1c (0,936 g, 2,154 mmol), 3-((3- amino-5-metoxifenil)amino)ciclobutanocarboxilato de etila 33b (0,74 g, 2,8 mmol) e di-isopropiletilamina (0,742 mL, 4,307 mmol) em CH3CN (11 mL) foi agitada a 80°C durante 18 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 40 g, heptano/EtOAc de 85/15 a 70/30). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar 3-((3-((1- (4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenil)amino)ciclobutanocarboxilato de etila 33c (600 mg). Síntese do Composto 33 e separação quiral nos Estereoisômeros 33A, 33B, 33C e 33D:

[00574] Uma solução de LiOH mono-hidratado (0,407 g, 9,71 mmol) em água (5,3 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de 3-((3-((1- (4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)-5- metoxifenil)amino)ciclobutanocarboxilato de etila 33c (600 mg, 0,971 mmol) em THF (12 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 72 h, acidificada com AcOH, concentrada sob pressão reduzida e coevaporada duas vezes com tolueno. Foi realizada purificação por cromatografia flash em sílica-gel (30 µm, 24 g, CH2Cl2/MeOH de 99/1 a 96/4). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura. Foi realizada uma segunda purificação através de cromatografia de Fase Reversa (Fase estacionária: YMC-actus Triart-C18 10 µm 30 x 150 mm, fase móvel: Gradiente de NH4HCO3 aquoso a 65%, 0,2%, CH3CN a 35% até NH4HCO3 aquoso a 25%, 0,2%, CH3CN a 75%). As frações puras foram combinadas e evaporadas até à secura para dar ácido 3- ((3-((1-(4-clorofenil)-2-oxo-2-(6-(trifluorometóxi)indolin-1-il)etil)amino)- 5-metoxifenil)amino)ciclobutanocarboxílico (Composto 33, 80 mg). Os estereoisômeros foram separados através de SFC quiral (Fase estacionária: Chiralcel® OD-H 5 µm 250 x 20 mm, fase móvel: CO2 a 60%, EtOH a 40%) para dar 4 frações que foram liofilizadas a partir de CH3CN/água para dar Estereoisômero 33A (19 mg), Estereoisômero 33B (24 mg), Estereoisômero 33C (19 mg) e Estereoisômero 33D (26 mg). Estereoisômero 33A: 1

[00575] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,94 - 2,02 (m, 2 H) 2,43 (ddd, J=11,8, 7,7, 4,1 Hz, 2 H) 2,91 (dt, J=9,5, 4,7 Hz, 1 H) 3,07 -

3,21 (m, 2 H) 3,56 (s, 3 H) 3,78 - 3,88 (m, 1 H) 4,05 (td, J=10,4, 7,3 Hz, 1 H) 4,50 (td, J=10,3, 6,8 Hz, 1 H) 5,38 (d, J=1,9 Hz, 1 H) 5,43 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 5,46 (s, 1 H) 5,60 (s, 1 H) 5,63 (d, J=6,3 Hz, 1 H) 6,19 (d, J=8,5 Hz, 1 H) 7,00 (dd, J=8,2, 1,6 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,43 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,54 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H)

[00576] LC/MS (método LC-C): Rt 2,86 min, MH+ 590

[00577] [Į]D20: -26,2° (c 0,248, DMF)

[00578] SFC quiral (método SFC-I): Rt 1,48 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 33B: 1

[00579] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,82 - 1,95 (m, 2 H) 2,41 - 2,47 (m, 2 H) 2,68 (t l, J=8,5 Hz, 1 H) 3,08 - 3,21 (m, 2 H) 3,56 (s, 3 H) 3,62 (d ld, J=15,4, 8,2 Hz, 1 H) 4,06 (td, J=10,3, 7,1 Hz, 1 H) 4,46 - 4,56 (m, 1 H) 5,41 (s, 1 H) 5,43 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 5,50 (s, 1 H) 5,60 (s, 2 H) 6,14 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,01 (d l, J=8,2 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,43 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,54 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H)

[00580] LC/MS (método LC-C): Rt 2,84 min, MH+ 590

[00581] [Į]D20: -27,9° (c 0,248, DMF)

[00582] SFC quiral (método SFC-I): Rt 2,20 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 33C: 1

[00583] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,93 - 2,03 (m, 2 H) 2,41-2,46 (m, 2 H) 2,82 - 2,95 (m, 1 H) 3,07 - 3,21 (m, 2 H) 3,56 (s, 3 H) 3,78 - 3,88 (m, 1 H) 4,00 - 4,11 (m, 1 H) 4,45 - 4,56 (m, 1 H) 5,37 (s, 1 H) 5,40 - 5,49 (m, 2 H) 5,58 - 5,66 (m, 2 H) 6,19 (d l, J=8,5 Hz, 1 H) 7,00 (d l, J=6,6 Hz, 1 H) 7,32 (d l, J=8,2 Hz, 1 H) 7,43 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,54 (d, J=8,2 Hz, 2 H) 8,02 (s l, 1 H)

[00584] LC/MS (método LC-C): Rt 2,86 min, MH+ 590

[00585] [Į]D20: +26,7° (c 0,221, DMF)

[00586] SFC quiral (método SFC-I): Rt 2,91 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Estereoisômero 33D: 1

[00587] H RMN (500 MHz, DMSO-d6) į ppm 1,78 - 1,96 (m, 2 H) 2,40 - 2,47 (m, 2 H) 2,65 - 2,71 (m, 1H) 3,08 - 3,21 (m, 2 H) 3,56 (s, 3 H) 3,58 - 3,67 (m, 1 H) 4,06 (td, J=10,2, 7,3 Hz, 1 H) 4,44 - 4,56 (m, 1 H) 5,38 - 5,46 (m, 2 H) 5,50 (s, 1 H) 5,60 (s, 2 H) 6,14 (d l, J=8,8 Hz, 1 H) 7,00 (d l, J=6,9 Hz, 1 H) 7,33 (d, J=8,2 Hz, 1 H) 7,43 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 7,54 (d, J=8,5 Hz, 2 H) 8,03 (s, 1 H)

[00588] LC/MS (método LC-C): Rt 2,84 min, MH+ 590

[00589] [Į]D20: +23,4° (c 0,295, DMF)

[00590] SFC quiral (método SFC-I): Rt 5,35 min, sem MH+, pureza quiral 100%. Tabela: compostos preparados como descrito acima Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe

O 1 N racêmico

F O N H F O F OH

O Cl OMe O *R 1A N [Į]D20 = -37,6°

F O N H F O *R F OH

O Cl OMe O *R 1B N [Į]D20 = -65,3°

F O N H O *S F F OH O

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe O *S 1C N [Į]D20 = +35,2°

F O N H O *R F F OH

O Cl OMe O *S 1D N [Į]D20 = +64,3°

F O N H O *S F F OH

O Cl OMe

O 2 N racêmico

F O N H F O F OH

O Cl OMe O *R 2A N [Į]D20 = +49,6°

F O N H F O F OH

O Cl OMe O *S 2B N [Į]D20 = -49,2°

F O N H F O F OH

O Cl OMe

O 3 N racêmico

F O N H F O F OH O

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe

O 4 N racêmico

F O N H F O F OH

O Cl OMe O *R 4A N [Į]D20 = -59,6°

F O N H F O F *R OH

O Cl OMe O *R 4B N [Į]D20 = -47,5°

F O N H F O F *S OH

O Cl OMe O *S 4C N [Į]D20 = +47,7°

F O N H F O F *R OH

O Cl OMe O *S 4D N [Į]D20 = +60,7°

F O N H F O F *S OH

O Cl OMe

O 5 N racêmico

F O N H F O F OH O

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe

O 5A *R

N [Į]D20 = +37,0°

F O N H F O F OH

O Cl OMe

O 5B *S

N [Į]D20 = -48,8°

F O N H F O F OH

O Cl OMe 6AA O *R [Į]D20 = -78,0°

N F O N H O O *R *R F

F OH Cl OMe 6AB O *S [Į]D20 = +12,9°

N F O N H O O *R *R F

F OH Cl OMe 6BA O *R [Į]D20 = -12,5°

N F O N H O O *S *S F

F OH Cl OMe 6BB O *S [Į]D20 = +81,4°

N F O N H O O *S *S F

F OH Cl OMe 7 O

O - F O N N H

F O OH F trans

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe 7A O *R O [Į]D20 = -41,6°

F O N N H

F O OH F trans Cl OMe 7B O *S O [Į]D20 = +43,7°

F O N N H F O OH

F trans Cl OMe 8 O

O - F O N N H F O OH

F cis Cl OMe 8A O *R O [Į]D20 = -47,1°

F O N N H F O OH

F cis Cl OMe 8B O *S O [Į]D20 = +40,0°

F O N N H F O OH

F cis Cl OMe 9 O

O racêmico

F O N N H F O OH

F Cl OMe 9A O *R

O [Į]D20 = -43,6°

F O N N H F O OH F

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe 9B O *S

O [Į]D20 = +42,2°

F O N N H F O OH

F Cl OMe

O 10 F

O N N -

H O F cis

F O

HO Cl OMe O *R 10A F

O N N [Į]D20 = -44,0°

H O F cis

F O

HO Cl OMe O *S 10B F

O N N [Į]D20 = +45,5°

H O F cis

F O

HO Cl OMe

O 11 F

O N N -

H O F trans

F O

HO Cl OMe O *R 11A F

O N N [Į]D20 = -43,3°

H O F trans

F O HO

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe O *S 11B F

O N N [Į]D20 = +45,5°

H O F trans

F O

HO Cl OMe 12 O racêmico

F O N N H O F O F

OH Cl OMe 12A O *R [Į]D20 = -47,3°

F O N N H O F O F

OH Cl OMe 12B O *S [Į]D20 = +41,8°

F O N N H O F O F

OH Cl OMe

O 13 racêmico

F O N N H F O O F

OH Cl OMe

O 13A *R [Į]D20 = -48,6°

F O N N H F O O F

OH Cl OMe

O 13B *S [Į]D20 = +48,3°

F O N N H F O O F OH

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe

O 14 N racêmico

F O N H F F OH

O Cl OMe

O 14A *R

N [Į]D20 = +55,8°

F O N H F F OH

O Cl OMe

O 14B *S

N [Į]D20 = -53,7°

F O N H F F OH

O Cl OMe 15 O racêmico

F O N N H O F F

OH Cl OMe 15A O *R [Į]D20 = -59,0°

F O N N H O F F

OH Cl OMe 15B O *S [Į]D20 = +48,0°

F O N N H O F F

OH Cl OMe

O 16 N racêmico

F O N H O F F OH O

Composto Estrutura Rotação óptica Cl MeO OMe

O 17 N racêmico

F O N H F O F OH

O Cl MeO OMe

O 17A *R

N [Į]D20 = -18,4°

F O N H O *R F F OH

O Cl MeO OMe

O 17B *R

N [Į]D20 = -51,0°

F O N H O *S F F OH

O Cl MeO OMe

O 17C *S

N [Į]D20 = +41,6°

F O N H O *R F F OH

O Cl MeO OMe

O 17D *S

N [Į]D20 = +15,8°

F O N H O *S F F OH

O Cl MeO OMe

O 18 N racêmico

F O N H F O F OH O

Composto Estrutura Rotação óptica Cl MeO OMe

O 18A *R

N [Į]D20 = -30,2°

F O N H F O F OH

O Cl MeO OMe

O 18B *S

N [Į]D20 = +28,0°

F O N H F O F OH

O Cl MeO OMe

O 19AA *R

N [Į]D20 = -65,6°

F O N H F O *R *R O F

OH trans Cl MeO OMe

O 19AB *S

N [Į]D20 = +37,1°

F O N H F O *R *R O F

OH trans Cl MeO OMe

O 19BA *R

N [Į]D20 = -47,6°

F O N H O F O *S *S F

OH trans Cl MeO OMe

O 19BB *S

N [Į]D20 = +56,8°

F O N H O F O *S *S F

OH trans

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe

O 20A F F *R

N [Į]D20 = -40,9°

F N H O *R MeO OH

O Cl OMe

O 20B F F *R

N [Į]D20 = -50,0°

F N H O *S MeO OH

O Cl OMe

O 20C F F *S

N [Į]D20 = +26,0°

F N H O *S MeO OH

O Cl OMe

O 20D F F *S

N [Į]D20 = +57,4°

F N H O *R MeO OH

O Cl OMe

O 21 F

F

N racêmico

N H F

O MeO OH

O Cl OMe

O 21A F F *R

N [Į]D20 = -41,7°

N H F

O MeO OH

O

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe

O 21B F F *S

N [Į]D20 = +44,0°

N H F

O MeO OH

O Cl OMe

O 22AA F F *R

N [Į]D20 = -75,0°

F N H O *R O *R MeO OH trans Cl OMe

O 22AB F F *S

N [Į]D20 = +10,0°

F N H O *R O *R MeO OH trans Cl OMe

O 22BA F F *S

N [Į]D20 = -9,3°

F N H O *S O *S MeO OH trans Cl OMe

O 22BB F F *R

N [Į]D20 = +80,0°

F N H O *S O *S MeO OH trans Cl OMe 23 F

O O - F N F N H

O OH MeO cis Cl OMe 23A F O *R

O [Į]D20 = -38,1°

F N F N H

O OH MeO cis

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe 23B F O *S

O [Į]D20 = +36,9°

F N F N H

O OH MeO cis Cl OMe

O

F 24 F

N N - H

F O MeO cis O

HO Cl OMe O *R 24A F

F

N N [Į]D20 = -41,5°

H

F O MeO cis O

HO Cl OMe O *S 24B F

F

N N [Į]D20 = +36,6°

H

F O MeO cis O

HO Cl OMe

O

F 25 F

N N - H

F O MeO trans O

HO Cl OMe O *R 25A F

F

N N [Į]D20 = -41,1°

H

F O MeO trans O

HO

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe O *S 25B F

F

N N [Į]D20 = +40,6°

H

F O MeO trans O

HO Cl OMe

O 26A N -

F O N H O F O *R *R F

F OH trans Cl OMe

O 26B N -

F O N H F O *S *S O F

F OH trans Cl OMe 27 O

O - F O N N H

F O OH F cis

F Cl OMe 27A O *R

O [Į]D20 = -40,5°

F O N N H

F O OH F cis

F Cl OMe 27B O *S

O [Į]D20 = +37,5°

F O N N H

F O OH F cis

F Cl OMe 28AA O *R trans [Į]D20 = -43,3°

F O N N H F O F O *R F *S OH

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe 28AB O *S trans [Į]D20 = +52,5°

F O N N H F O F O *R F *S

OH Cl OMe 28BA O *R trans [Į]D20 = -57,1°

F O N N H F O F O *S F *R

OH Cl OMe 28BB O *S trans [Į]D20 = +38,1°

F O N N H F O F O *S F *R

OH Cl OMe 29AA O *R cis [Į]D20 = -15,7°

F O N N H F O F O *S F *S

OH Cl OMe 29AB O *S cis [Į]D20 = +77,4°

F O N N H F O F O *S F *S

OH Cl OMe 29BA O *R cis [Į]D20 = -74,2°

F O N N H F O F O *R F *R

OH Cl OMe 29BB O *S cis [Į]D20 = +12,0°

F O N N H F O F O *R F *R OH

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe

O *R 30A F

O N N [Į]D20 = +42,6°

H O F F

F cis O

HO Cl OMe

O *S 30B F

O N N [Į]D20 = -44,2°

H O F F

F cis O

HO Cl OMe

O *R 31A F

O N N [Į]D20 = +43,1°

H O F F

F trans O

HO Cl OMe

O *S 31B F

O N N [Į]D20 = -43,4°

H O F F

F trans O

HO Cl OMe 32 O

O - Cl N

N H

O OH MeO trans Cl OMe 32A O *R

O [Į]D20 = -55,4° Cl N

N H

O OH MeO trans

Composto Estrutura Rotação óptica Cl OMe 32B O *S

O [Į]D20 = +53,4° Cl N

N H

O OH MeO trans Cl OMe 33A O *R

O [Į]D20 = -26,2°

F O N N H F N OH

F H trans Cl OMe 33B O *R

O [Į]D20 = -27,9°

F O N N H F N OH

F H cis Cl OMe 33C O *S

O [Į]D20 = +26,7°

F O N N H F N OH

F H trans Cl OMe 33D O *S

O [Į]D20 = +23,4°

F O N N H F N OH

F H cis

ATIVIDADE ANTIVIRAL DOS COMPOSTOS DA INVENÇÃO Ensaio antiviral de DENV-2

[00591] A atividade antiviral de todos os compostos da invenção foi testada contra a estirpe de DENV-2 16681 que foi marcada com proteína fluorescente verde intensificada (eGFP). O meio de cultura consiste em meio essencial mínimo suplementado com 2% de soro fetal de bezerro inativado pelo calor, gentamicina a 0,04% (50 mg/mL) e 2 mM de L-glutamina. Células Vero, obtidas da ECACC, foram suspensas em meio de cultura e 25 µL foram adicionados a placas de 384 poços (2500 células/poço), que já contêm os compostos antivirais. Tipicamente, estas placas contêm uma diluição em série de 5 vezes de

9 passos de diluição do composto de teste a 200 vezes a concentração final em DMSO a 100% (200 nL). Além disso, a concentração de cada composto é testada em quadruplicado (gama de concentrações finais: 25 µM – 0,000064 µM ou 2,5 µM – 0,0000064 µM para os compostos mais ativos). Finalmente, cada placa contém poços que são atribuídos como controles de vírus (contendo células e vírus na ausência de composto), controles de células (contendo células na ausência de vírus e composto) e controles de meio (contendo meio na ausência de células, vírus e compostos). Aos poços atribuídos como controle de meio, 25 µL de meio de cultura foram adicionados ao invés de células Vero.

Assim que as células são adicionadas às placas, as placas foram incubadas durante 30 minutos à temperatura ambiente para permitir que as células se distribuíssem uniformemente dentro dos poços.

Em seguida, as placas foram incubadas em um incubador totalmente umidificado (37 °C, CO2 a 5%) até ao dia seguinte.

Depois, a estirpe de DENV-2 16681, marcada com eGFP, foi adicionada a uma multiplicidade de infecção (MOI) de 0,5. Portanto, 15 µL de suspensão de vírus foram adicionados a todos os poços contendo composto de teste e aos poços atribuídos como controle de vírus.

Em paralelo, 15 µL de meio de cultura foram adicionados aos controles de meio e células.

Em seguida, as placas foram incubadas durante 3 dias em um incubador totalmente umidificado (37°C, CO 2 a 5%). No dia da leitura, a fluorescência de eGFP foi medida usando um microscópio de fluorescência automatizado a 488 nm (laser azul). Usando um sistema LIMS interno, curvas de resposta à dose de inibição para cada composto foram calculadas e a concentração eficaz semimáxima (EC50) foi determinada.

Portanto, a percentagem de inibição (I) para cada concentração de teste é calculada usando a seguinte fórmula: I = 100*(ST-SCC)/(SVC-SCC); ST, SCC e SVC são a quantidade de sinal de eGFP nos poços com compostos de teste, controle de células e controle de vírus, respectivamente.

A

EC50 representa a concentração de um composto à qual a replicação do vírus é inibida em 50%, como medida por uma redução de 50% da intensidade fluorescente de eGFP em comparação com o controle de vírus. A EC50 é calculada usando interpolação linear (Tabela 1).

[00592] Em paralelo, a toxicidade dos compostos foi avaliada nas mesmas placas. Assim que a leitura do sinal de eGFP foi feita, 40 µL de ATPlite, um corante da viabilidade celular, foram adicionados a todos os poços das placas de 384 poços. O ATP está presente em todas as células metabolicamente ativas e a concentração diminui muito rapidamente quando as células sofrem necrose ou apoptose. O sistema de ensaio ATPLite é baseado na produção de luz causada pela reação de ATP com luciferase e D-luciferina adicionadas. As placas foram incubadas durante 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, as placas foram medidas em um ViewLux. A concentração citotóxica semimáxima (CC50) foi também determinada, definida como a concentração requerida para reduzir o sinal luminescente em 50% em comparação com aquela dos poços de controle de células. Finalmente, o índice de seletividade (SI) foi determinado para os compostos, que foi calculado como se segue: SI = CC50/EC50. Tabela 1: EC50, CC50 e SI para os compostos da invenção no ensaio antiviral de DENV-2 # do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 1 0,00050 3 11 3 24400 3 1A 0,018 3 9,6 3 523 3 1B 0,018 4 10 4 579 4 1C 0,000094 3 12 3 131193 3 1D 0,00023 3 12 3 57700 3 2 0,00062 3 12 3 19200 3 2A 0,00038 3 13 3 34500 3 2B 0,019 3 11 4 565 3 3 0,00050 3 10 3 17700 3 4 0,00014 3 10 3 73900 3

# do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 4A 0,0029 3 9,0 3 3090 3 4B 0,011 3 10 3 935 3 4C 0,00011 4 13 4 121878 4 4D 0,00017 3 13 3 81200 3 5 0,00092 3 9,7 3 11300 3 5A 0,00051 3 12 3 26300 3 5B 0,011 3 10 3 921 3 6AA 0,00074 3 8,3 3 8870 3 6AB 0,000016 6 12 7 >199223 6 6BA 0,012 3 8,7 3 703 3 6BB 0,00018 3 12 3 83800 3 7 0,00049 3 12 3 14600 3 7A 0,0091 3 10 3 1130 3 7B 0,00012 3 13 3 121027 3 8 0,000048 5 13 5 >126733 5 8A 0,00086 3 12 3 11600 3 8B 0,000023 10 14 10 >102836 10 9 0,00070 3 9,8 3 14700 3 9A 0,090 3 11 3 125 3 9B 0,00039 3 12 4 32500 3 10 0,00027 3 12 3 44900 3 10A 0,0027 3 10 3 3790 3 10B 0,00011 3 11 3 109987 3 11 0,00013 4 12 4 97100 4 11A 0,0038 3 10 3 2710 3 11B 0,00011 4 11 4 118692 4 12 0,0011 3 11 3 9440 3 12A 0,038 3 10 3 267 3 12B 0,00069 3 14 3 21500 3 13 0,00025 3 12 4 38100 3 13A 0,0014 6 9,1 7 5720 6 13B 0,00013 4 12 4 88200 4 14 0,00023 3 9,6 3 50200 3 14A 0,00011 3 16 3 151558 3

# do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 14B 0,060 3 9,3 3 156 3 15 0,00042 3 8,3 3 25500 3 15A 0,049 3 8,4 3 171 3 15B 0,00045 3 12 5 24900 3 16 0,00033 4 16 5 56100 4 17 0,00018 3 13 3 100043 3 17A 0,076 3 11 3 147 3 17B 0,18 3 11 3 59 3 17C 0,00023 3 12 3 39300 3 17D 0,00012 4 14 4 >9720 4 18 0,00049 3 11 3 26100 3 18A 0,0099 3 12 4 1160 3 18B 0,00028 3 12 3 62700 3 19AA 0,010 3 11 4 1030 3 19AB 0,000012 8 12 9 >390600 8 19BA 0,016 3 11 3 707 3 19BB 0,000038 5 8,8 5 >148612 5 20A 0,44 3 12 3 27 3 20B 0,18 3 12 3 69 3 20C 0,00017 3 12 3 59500 3 20D 0,00023 3 13 3 53400 3 21 0,0011 3 15 3 11000 3 21A 0,016 3 11 3 687 3 21B 0,00032 3 12 3 45200 3 22AA 0,016 4 13 4 798 4 22AB 0,000034 6 12 7 >196427 6 22BA 0,015 3 12 3 786 3 22BB 0,00046 3 14 3 27600 3 23 0,000093 4 12 4 116424 4 23A 0,034 3 11 3 321 3 23B 0,000062 7 12 8 >88755 7 24 0,00064 4 12 4 18300 4 24A 0,024 3 11 3 469 3 24B 0,00034 3 12 3 43100 3

# do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 25 0,00045 4 12 4 26800 4 25A 0,0071 3 12 3 1640 3 25B 0,00028 3 13 3 52900 3 26A 0,00010 4 14 4 >12200 4 26B 0,00094 4 12 4 10600 4 27 0,000067 4 13 4 149640 4 27A 0,00041 3 11 3 14300 3 27B 0,000022 6 13 7 >205482 6 28AA 0,33 3 11 3 34 3 28AB 0,00068 3 13 3 19000 3 28BA 0,017 3 10,0 3 574 3 28BB 0,00020 3 12 3 70600 3 29AA 0,061 3 9,2 3 151 3 29AB 0,00053 3 12 3 22300 3 29BA 0,0034 3 9,8 3 2890 3 29BB 0,000069 3 12 4 124722 3 30A 0,00024 3 13 4 47400 3 30B 0,0059 3 11 3 1800 3 31A 0,00020 3 12 3 70300 3 31B 0,0026 3 12 3 4400 3 32 0,00013 3 15 3 130935 3 32A 0,063 3 13 3 205 3 32B 0,000081 5 14 5 >230623 5 33A 0,013 3 17 4 1110 3 33B 0,0079 3 14 3 1760 3 33C 0,0032 3 19 3 5930 3 33D 0,00052 3 18 3 39000 3 N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.

[00593] Ensaio de PCR quantitativa com transcriptase reversa (RT- qPCR) tetravalente

[00594] A atividade antiviral dos compostos da invenção foi testada contra a estirpe de DENV-1 TC974#666 (NCPV), estirpe de DENV-2 16681, estirpe de DENV-3 H87 (NCPV) e estirpe de DENV-4 H241

(NCPV) em um ensaio de RT-qPCR.

Portanto, células Vero foram infectadas com DENV-1 ou -2 ou -3 ou -4 na presença ou ausência de compostos de teste.

Ao dia 3 pós-infecção, as células foram lisadas e os lisados celulares foram usados para preparar cDNA tanto de um alvo viral (a 3'UTR de DENV; Tabela 2) como de um gene de referência celular (ȕ-actina, Tabela 2). Subsequentemente, uma PCR em tempo real em dúplex foi realizada em um instrumento Lightcycler480. O valor de Cp gerado é inversamente proporcional à quantidade de expressão de RNA destes alvos.

A inibição da replicação de DENV por um composto de teste resulta em um desvio de Cps para o gene de 3´UTR.

Por outro lado, se um composto de teste for tóxico para as células, será observado um efeito similar na expressão de ȕ-actina.

O método comparativo de ǻǻCp é usado para se calcular a EC50, que é baseada na expressão genética relativa do gene alvo (3'UTR) normalizada com o gene de manutenção celular (ȕ-actina). Além disso, os valores de CC50 são determinados com base nos valores de Cp adquiridos para o gene de manutenção de ȕ-actina.

Tabela 2: Iniciadores e sondas usados para a RT-PCR quantitativa, em tempo real.

Iniciador/sonda Alvo Sequênciaa, b F3utr258 DENV 3'-UTR 5'-CGGTTAGAGGAGACCCCTC-3' R3utr425 DENV 3'-UTR 5'-GAGACAGCAGGATCTCTGGTC-3' P3utr343 DENV 3'-UTR FAM-5'-AAGGACTAG-ZEN- AGGTTAGAGGAGACCCCCC-3'-IABkFQ Factina743 ȕ-actina 5'-GGCCAGGTCATCACCATT-3' Ractina876 ȕ-actina 5'-ATGTCCACGTCACACTTCATG-3' Pactina773 ȕ-actina HEX-5'-TTCCGCTGC-ZEN- CCTGAGGCTCTC-3'-IABkFQ a Os corantes repórter (FAM, HEX) e elementos extintores (ZEN e IABkFQ) estão indicados a negrito e itálico. b A sequência de nucleotídeos dos iniciadores e sondas foi selecionada da região conservada na região 3´UTR do genoma do vírus da dengue, com base no alinhamento de 300 sequências de nucleotídeos dos quatro serotipos da dengue depositados no Genbank (Gong et al., 2013, Methods Mol Biol, Capítulo 16).

[00595] O meio de cultura consistiu em meio essencial mínimo suplementado com 2% de soro fetal de bezerro inativado pelo calor, gentamicina a 0,04% (50 mg/mL) e 2 mM de L-glutamina. Células Vero, obtidas da ECACC, foram suspensas em meio de cultura e 75 µL/poço foram adicionados a placas de 96 poços (10000 células/poço), que já contêm os compostos antivirais. Tipicamente, estas placas contêm uma diluição em série de 5 vezes de 9 passos de diluição do composto de teste a 200 vezes a concentração final em DMSO a 100% (500 nL; gama de concentrações finais: 25 µM – 0,000064 µM ou 2,5 µM – 0,0000064 µM para os compostos mais ativos). Além disso, cada placa contém poços que são atribuídos como controles de vírus (contendo células e vírus na ausência de composto) e controles de células (contendo células na ausência de vírus e composto). Assim que as células foram adicionadas às placas, as placas foram incubadas em um incubador totalmente umidificado (37 °C, CO 2 a 5%) até ao dia seguinte. Vírus da dengue de serotipo 1, 2, 3 e 4 foram diluídos de modo a se obter um Cp de ~22-24 no ensaio. Portanto, 25 µL de suspensão de vírus foram adicionados a todos os poços contendo composto de teste e aos poços atribuídos como controle de vírus. Em paralelo, 25 µL de meio de cultura foram adicionados aos controles de células. Em seguida, as placas foram incubadas durante 3 dias em um incubador totalmente umidificado (37 °C, CO 2 a 5%). Após 3 dias, o sobrenadante foi removido dos poços e as células lavadas duas vezes com PBS gelado (~100 µL). Os péletes de células dentro das placas de 96 poços foram armazenados a -80°C durante pelo menos 1 dia. Em se guida, o RNA foi extraído usando o estojo de lise Cells-to-CTTM, de acordo com a orientação do fabricante (Life Technologies). Os lisados celulares podem ser armazenados a -80°C ou imediatamente usad os no passo de transcrição reversa.

[00596] Na preparação do passo de transcrição reversa, a mistura A (tabela 3A) foi preparada e 7,57 µL/poço foram distribuídos em uma placa de 96 poços. Após adição de 5 µL dos lisatos de células foi realizado um passo de desnaturação de cinco minutos a 75 °C (tabela 3B). Em seguida, 7,43 µL de mistura B foram adicionados (tabela 3C) e o passo de transcrição reversa foi iniciado (tabela 3D) para gerar cDNA.

[00597] Finalmente, uma mistura de RT-qPCR foi preparada, mistura C (tabela 4A), e 22,02 µL/poço foram distribuídos em placas de qPCR LightCycler de 96 poços às quais 3 µL de cDNA foram adicionados e a qPCR foi realizada de acordo com as condições na tabela 4B em um LightCycler 480.

[00598] Usando o software LightCycler e um sistema LIMS interno, curvas de resposta à dose para cada composto foram calculadas e a concentração eficaz semimáxima (EC50) e a concentração citotóxica semimáxima (CC50) foram determinadas (Tabelas 5-8). Tabela 3: Síntese de cDNA usando Mistura A, desnaturação, Mistura B e transcrição reversa. Mistura A A Placas 8 Vol. de Amostras 828 20 Reação (µL) Volume para Item de Mistura Concentração (µL) x Unidade Estoque Final 1 amostra amostras H2O Milli-Q 7,27 6019,56 R3utr425 µM 20 0,27 0,15 124,20 Ractina876 µM 20 0,27 0,15 124,20 Volume 7,57 mistura/poço (µL) Lisatos de células 5,00

Passo de B desnaturação: Passo Temp Tempo Desnaturação 75°C 5' manutenç Manutenção 4°C ão

C Mistura B Amostras 864 Item de Mistura Concentração Volume para (µL) x Unidade Estoque Final 1 amostra amostras tampão Expand X 10,00 1,00 2,00 1728,0 HIFI 2 MgCl2 mM 25,00 3,50 2,80 2419,2 dNTPs mM 10,00 1,00 2,00 1728,0 Inibidor de Rnase U/µL 40,00 1,00 0,50 432,0 Expand RT U/µL 50,00 0,33 0,13 112,3 Volume Total 7,43 Mistura (µL)

D Protocolo de síntese cDNA Passo Temp Tempo Transc rev 42°C 30' Desnaturação 99°C 5' Manutenção 4°C manutenção Tabela 4: Mistura e protocolo de qPCR.

A Mistura C Vol. de Reação Amostras 833 25 (µL) Item de Concentração Volume para (µL) Mistura x Unidade Estoque Final 1 amostra amostras H2O grau PCR 7,74 6447,42 Roche Mistura 2xMM X 2 1 12,50 10412,50 Roche F3utr258 µM 20 0,3 0,38 316,54 R3utr425 µM 20 0,3 0,38 316,54

P3utr343 µM 20 0,1 0,13 108,29 Factina743 µM 20 0,3 0,38 316,54 Ractina876 µM 20 0,3 0,38 316,54 Pactina773 µM 20 0,1 0,13 108,29 Volume Mistura/Tubo 22,02 (µL) cDNA 3,00

B Protocolo qPCR3 Taxa da Passo Temp Tempo rampa pré-incub/desnat 95°C 10 min 4,4 Desnaturação 95°C 10 seg 4,4 emparelhamento 58°C 1 min 2,2 40 ciclos Alongamento 72°C 1 seg 4,4 Resfriamento 40°C 10 seg 1,5 Tabela 5: EC50, CC50 e SI para os compostos contra o serotipo 1 nos ensaios de RT-qPCR RT-qPCR serotipo 1 TC974#666 # do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 1C 0,00023 3 >2,5 3 >11000 3 1D 0,00027 3 >2,5 3 >11400 3 2A 0,00057 3 >2,5 3 >7920 3 4C 0,000066 4 >1,0 4 >61000 4 4D 0,00023 4 >1,0 4 >7140 4 5A 0,00058 3 >1,0 3 >1930 3 6AB 0,000022 3 >2,5 3 >133413 3 6BB 0,00013 3 >2,5 2 >24100 2 7B 0,00015 3 >2,5 3 >23200 3 8B 0,000032 3 >1,0 3 >38900 3 9B 0,00081 3 >1,0 3 >2080 3 10B 0,00027 3 >2,5 3 >18700 3 11B 0,00020 4 >2,5 4 >11800 4 12B 0,00047 3 >2,5 3 >8660 3

RT-qPCR serotipo 1 TC974#666 # do composto EC50 (µM) N CC50 (µM) N SI N 13B 0,00019 3 >2,5 3 >10400 3 14A 0,00026 3 >1,0 3 >6140 3 15B 0,00024 3 >1,0 2 >6280 2 17C 0,00019 3 >1,0 3 >8230 3 17D 0,00021 3 >1,0 3 >15400 3 18B 0,00055 3 >1,0 3 >2220 3 19AB 0,000021 3 >1,0 3 >56300 3 19BB 0,000091 3 >1,0 3 >13300 3 20C 0,00030 4 >1,0 4 >4540 4 20D 0,00089 4 >1,0 4 >1820 4 21B 0,0010 3 >2,5 3 >1950 3 22AB 0,000091 3 >1,0 3 >15700 3 22BB 0,0015 3 >2,5 1 >1740 1 23B 0,000092 5 >1,0 5 >18200 5 24B 0,0022 4 >1,0 4 >898 4 25B 0,0013 4 >1,0 4 >1210 4 27B 0,000013 4 >1,0 4 >114234 4 28AB 0,00041 4 >1,0 4 >4260 4 28BB 0,00011 4 >1,0 4 >29800 4 29AB 0,00023 4 >1,0 4 >5680 4 29BB 0,000048 4 >1,0 4 >30400 4 30A 0,000094 5 >1,0 5 >54900 5 31A 0,00019 3 >1,0 3 >6090 3 32B 0,00011 4 >1,0 4 >10300 4 33C 0,00097 4 >1,0 4 >3500 4 33D 0,00048 4 >1,0 4 >7130 4 N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.

Tabela 6: EC50, CC50 e SI para os compostos contra o serotipo 2 nos ensaios de RT-qPCR

RT-qPCR serotipo 2 16681 # do CC50 composto EC50 (µM) N (µM) N SI N 1C 0,00018 3 >2,5 3 >15300 3 1D 0,00023 3 >2,5 3 >9200 3 2A 0,00048 3 >2,5 3 >6500 3 4C 0,000060 4 >1,0 4 >51900 4 4D 0,00013 4 >1,0 4 >15600 4 5A 0,00042 3 >1,0 3 >3220 3 6AB 0,000017 3 >2,5 3 >187753 3 6BB 0,00012 3 >2,5 3 >23700 3 7B 0,00012 3 >2,5 3 >30600 3 8B 0,000025 3 >1,0 3 >54100 3 9B 0,00050 3 >1,0 3 >2680 3 10B 0,00011 3 >2,5 3 >27400 3 11B 0,00010 3 >2,5 3 >22400 3 12B 0,00053 3 >2,5 3 >8920 3 13B 0,00012 3 >2,5 3 >23900 3 14A 0,00020 3 >1,0 3 >5890 3 15B 0,00023 4 >1,0 3 >4310 3 17C 0,00011 3 >1,0 3 >13700 3 17D 0,00010 3 >1,0 3 >24100 3 18B 0,00034 4 >1,0 3 >4590 3 19AB 0,000014 3 >1,0 3 >92300 3 19BB 0,000078 3 >1,0 3 >14100 3 20C 0,000071 4 >1,0 4 >19200 4 20D 0,00019 4 >1,0 4 >7660 4 21B 0,00016 3 >2,5 3 >12700 3 22AB 0,000029 4 >1,0 3 >46400 3 22BB 0,00033 3 >2,5 2 >9450 2 23B 0,000034 5 >1,0 4 >51700 4 24B 0,00026 4 >1,0 4 >11300 4 25B 0,00027 4 >1,0 3 >6080 3 27B 0,000014 4 >1,0 4 >92800 4 28AB 0,00031 4 >1,0 4 >5530 4

RT-qPCR serotipo 2 16681 # do CC50 composto EC50 (µM) N (µM) N SI N 28BB 0,00010 4 >1,0 4 >19900 4 29AB 0,00025 3 >1,0 3 >5180 3 29BB 0,000025 4 >1,0 4 >60200 4 30A 0,000076 4 >1,0 4 >65700 4 31A 0,00011 3 >1,0 3 >11600 3 32B 0,000033 4 >1,0 3 >35800 3 33C 0,0010 4 >1,0 4 >4630 4 33D 0,00066 4 >1,0 4 >6620 4 N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.

Tabela 7: EC50, CC50 e SI para os compostos contra o serotipo 3 nos ensaios de RT-qPCR RT-qPCR serotipo 3 H87 # do CC50 composto EC50 (µM) N (µM) N SI N 1C 0,0024 4 >2,5 4 >1300 4 1D 0,0034 4 >2,5 4 >949 4 2A 0,0061 4 >2,5 4 >390 4 4C 0,00077 4 >1,0 3 >1660 3 4D 0,0023 4 >1,0 4 >727 4 5A 0,0081 3 >1,0 3 >170 3 6AB 0,00013 3 >2,5 3 >15300 3 6BB 0,0016 3 >2,5 3 >1320 3 7B 0,0018 3 >2,5 3 >1810 3 8B 0,00016 3 >1,0 3 >7020 3 9B 0,0080 3 >1,0 3 >203 3 10B 0,0029 3 >2,5 3 >1370 3 11B 0,0018 3 >2,5 3 >1650 3 12B 0,0047 4 >2,5 4 >401 4 13B 0,0019 4 >2,5 4 >1350 4 14A 0,0028 3 >1,0 3 >584 3 15B 0,0028 3 >1,0 2 >525 2

RT-qPCR serotipo 3 H87 # do CC50 composto EC50 (µM) N (µM) N SI N 17C 0,0036 3 >1,0 3 >401 3 17D 0,0027 3 >1,0 3 >541 3 18B 0,0043 3 >1,0 3 >281 3 19AB 0,00014 3 >1,0 3 >8790 3 19BB 0,00085 5 >1,0 5 >1910 5 20C 0,0034 4 >1,0 3 >249 3 20D 0,0089 4 >1,0 4 >178 4 21B 0,0065 3 >2,5 3 >357 3 22AB 0,00049 3 >1,0 3 >4430 3 22BB 0,0090 3 >2,5 3 >245 3 23B 0,00033 5 >1,0 5 >6770 5 24B 0,014 5 >1,0 5 >123 5 25B 0,0063 5 >1,0 5 >190 5 27B 0,000091 4 >1,0 4 >22600 4 28AB 0,0053 3 >1,0 3 >277 3 28BB 0,0012 3 >1,0 3 >1680 3 29AB 0,0046 4 >1,0 4 >264 4 29BB 0,00039 3 >1,0 3 >3050 3 30A 0,0019 3 >1,0 3 >840 3 31A 0,0015 4 >1,0 4 >791 4 32B 0,00057 3 >1,0 3 >2870 3 33C 0,011 4 >1,0 4 >185 4 33D 0,0023 4 >1,0 4 >732 4 N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados. Tabela 8: EC50, CC50 e SI para os compostos contra o serotipo 4 nos ensaios de RT-qPCR RT-qPCR serotipo 4 H241 # do EC50 CC50

N N SI N composto (µM) (µM) 1C 0,016 3 8,7 3 427 3 1D 0,024 3 7,3 3 280 3

RT-qPCR serotipo 4 H241 # do EC50 CC50

N N SI N composto (µM) (µM) 2A 0,027 3 2,2 3 125 3 4C 0,015 3 >1,0 2 >73 2 4D 0,026 3 3,2 3 73 3 5A 0,058 3 8,0 3 206 3 6AB 0,0029 3 >1,0 2 >425 2 6BB 0,020 3 5,4 3 205 3 7B 0,013 3 8,8 2 582 2 8B 0,0013 3 8,7 2 8240 2 9B 0,036 3 6,7 3 372 3 10B 0,022 3 >1,0 2 >57 2 11B 0,017 3 5,7 3 273 3 12B 0,039 3 9,2 2 318 2 13B 0,015 3 3,7 2 323 2 14A 0,015 3 8,9 3 510 3 15B 0,035 3 10,0 3 456 3 17C 0,016 3 1,7 2 95 2 17D 0,015 3 2,9 3 168 3 18B 0,033 3 3,0 2 148 2 19AB 0,00069 3 6,4 3 8200 3 19BB 0,0068 3 5,2 3 905 3 20C 0,020 3 >1,0 2 >60 2 20D 0,055 3 >1,0 1 >21 1 21B 0,048 3 9,0 3 115 3 22AB 0,0033 3 9,1 2 2890 2 22BB 0,071 3 8,2 3 126 3 23B 0,0027 3 6,0 2 2230 2 24B 0,066 3 7,8 3 115 3 25B 0,055 3 9,9 3 202 3 27B 0,00081 3 8,3 3 9330 3 28AB 0,069 3 9,0 3 158 3 28BB 0,018 3 >1,0 2 >58 2 29AB 0,035 3 8,0 2 118 2

RT-qPCR serotipo 4 H241 # do EC50 CC50

N N SI N composto (µM) (µM) 29BB 0,0028 3 8,3 3 2790 3 30A 0,018 3 7,3 3 399 3 31A 0,017 4 7,3 4 445 4 32B 0,010 3 4,3 3 295 3 33C 0,34 3 4,2 3 9,8 3 33D 0,022 3 5,4 3 256 3 N = o número de experiências independentes nas quais os compostos foram testados.

Claims (16)

REIVINDICAÇÕES

1. Composto da fórmula (I), incluindo qualquer uma das suas formas estereoquimicamente isomérica, Cl CH3

O R3

O N A COOH (I) R1 H

N R2 caracterizado pelo fato de que R1 é trifluorometila, trifluorometóxi ou cloro; R2 é hidrogênio, flúor ou metóxi; R3 é hidrogênio ou metóxi; A representa -(CH2)n- em que n é 3 ou 4; -O-(CH2)n- em que n é 2 ou 4; -O-(CH2)n- em que n é 3 e um ou dois CH2 estão substituídos por um ou dois CH3; -CH2-O-(CH2)n- em que n é 2; ou -X-Y- em que X é um -O-, -OCH2- ou -NH-; e Y é cicloalquila C3-4 opcionalmente substituída por flúor ou Y é biciclo[1.1.1]pentanila; ou um seu sal, solvato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido composto é selecionado de

Cl Cl OMe OMe

O O

F O N F O N

N H N H

F O F O

F OH F OH

O O Cl Cl OMe OMe

O O

F O N F O N

N H N H

F O F O

F OH F OH

O O Cl Cl OMe OMe

O

O

F O N

N H N

O F O N H O

F O

F OH F

F OH

O Cl Cl OMe OMe

O O

O O

F O N F O N

N H N H

F O OH F O OH

F F Cl Cl OMe O OMe

F O

O N

N H O F O N

F N H O

F

F O

O F

OH

HO Cl Cl OMe OMe

O O

N F O N

F O N N H

H

F O O F

F F OH

OH O

Cl Cl OMe OMe

O

O

F O N

F O N N H

N H O O

F

F F

F OH

OH

O Cl Cl MeO OMe MeO OMe

O O

F O N F O N

N H N H

F O F O

F OH F OH

O O Cl Cl OMe MeO OMe

O O

F

F N

F O N N H

N H F

O O

F O F MeO OH

OH O Cl Cl OMe OMe

O O

F F

F N F

N H N

F N H

O F O

O MeO OH MeO OH

O Cl Cl OMe O OMe

F O

F N F

N H F O

F O N

F N H

O OH MeO O MeO

HO Cl Cl OMe OMe

O O

O

F O N N

N H F O N

O O H

F F O OH

F F

F OH F

Cl Cl OMe OMe

O

O

F N

O N H

F O N O

N H F F

O F

F O

F F

OH O

HO Cl Cl OMe OMe

O O

O O Cl N F O N

N H N H

O OH F N OH

F H MeO

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido composto tem a rotação específica (+) medida em DMF como solvente.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o referido composto é selecionado de: Cl Cl OMe OMe O *S O *S

F O N F O N

N H N H O *R O *S

F F

F OH F OH

O O Cl Cl OMe OMe O *R O *S

F O N F O N

N H N H

F O F O F OH F *R OH

O O Cl Cl OMe OMe O *S O *R

F O N F O N

N H N H

F O F O F *S OH F OH

O O

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5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é trifluorometóxi, R2 é hidrogênio e R3 é hidrogênio.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 1,

caracterizado pelo fato de que A representa -(CH2)n- em que n é 3 ou 4.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que A representa -O-(CH2)n- em que n é 2 ou

4.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que A representa -O-(CH2)n- em que n é 3 e um ou dois CH2 estão substituídos por um ou dois CH3; ou A representa .

9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que A representa -X-Y- em que X é um -O-, - OCH2- ou -NH-; e Y é cicloalquila C3-4 opcionalmente substituída por flúor.

10. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em conjunto com um ou mais excipientes, diluentes ou transportadores farmaceuticamente aceitáveis.

11. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que compreende um segundo ou mais ingredientes ativos.

12. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o segundo ou mais ingredientes ativos é um agente antiviral.

13 Composto da fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para uso como um medicamento.

14 Composto da fórmula (I), de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento de infecção pela dengue e para a prevenção ou tratamento de doenças associadas à infecção pela dengue.

15. Composto da fórmula (I) para uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a infecção pela dengue é infecção por vírus da estirpe DENV-1, DENV-2, DENV-3 ou DENV-4.

16. Invenção, em qualquer forma de suas modalidades ou em qualquer classe ou categoria aplicável de reivindicação, por exemplo, produto, processo, uso ou sequência abrangida pelo objeto inicialmente descrito, divulgado ou ilustrado no presente pedido de patente; Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, ou de estereoisômero farmaceuticamente aceitável do mesmo, para preparar uma composição ou medicamento para prevenção ou tratamento de doenças associadas à infecção pela dengue.