BR112019010470A2 - métodos de realce de resposta imune com everolimo, dactolisib ou ambos - Google Patents

Abstract

a presente invenção refere-se a um método de realce de resposta imune em um indivíduo.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para MÉTODOS DE REALCE DE RESPOSTA IMUNE COM EVEROLIMO, DACTOLISIB OU AMBOS.

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS DE PATENTE RELACIONADOS [001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade para o Pedido de Patente Provisória dos Estados Unidos n^Q 62/425.766, depositado em 23 de novembro de 2016; Pedido de Patente Provisória dos Estados Unidos n^Q 62/476.160, depositado em 24 de março de 2017; e Pedido de Patente Provisória n^Q 62/576.511, depositado em 24 de outubro de 2017, os conteúdos de cada dos quais são incorporados aqui por referência.

CAMPO DA INVENÇÃO [002] A presente invenção refere-se a (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo, para uso simultâneo, separado ou sequencial para promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo; uma composição farmacêutica compreendendo tal combinação; um método de promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo compreendendo a administração de referido RAD001 ou BEZ235 ou combinação a um indivíduo com necessidade do mesmo; uso do mesmo para preparação de um medicamento para a promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo; e uma embalagem comercial para o mesmo.

ANTECEDENTE DA INVENÇÃO [003] mTOR é uma serina/treonina cinase evolutivamente conservada que desempenha um papel central na integração de estímulos ambientais na forma de fatores de crescimento, aminoácidos, e energia. No estudo do sistema imune, mTOR é emergente como um regu

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2/84 lador crítico de função imune por causa de seu papel na detecção e integração de sugestões do microambiente imune. Com a maior apreciação de metabolismo celular como um regulador importante de função celular imune, a mTOR pova ser uma elo vital entre a função imune e o metabolismo. mTOR tem a capacidade de dirigir a resposta imune adaptative, por exemplo, promoção de diferenciação, ativação, e função em células T, células B, e células apresentadoras de antígeno.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [004] Em um aspecto, a presente invenção refere-se a um método que compreende a etapa de administração de (a) uma dose baixa de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) uma dose baixa de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo, a um paciente, em que o paciente experiencia menos doenças devido à infecção do que um paciente não administrado com RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma combinação do mesmo.

[005] Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a (a)

RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo para uso simultâneo, separado ou sequencial para a promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo.

[006] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo. Em algumas modalidades, BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é eficaz na promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indi

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3/84 víduo, tal como imunidade inata. Em algumas modalidades, a combinação é conjuntamente terapeuticamente eficaz na promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo.

[007] Em um aspecto, a presente invenção fornece um método de promoção e/ou realce de uma resposta imune no indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo com necessidade do mesmo (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo em uma quantidade eficaz na promoção e/ou realce da referida resposta imune.

[008] Em um aspecto, a presente invenção também fornece um método de tratamento de uma condição relacionada com idade, compreendendo administração a um indivíduo com necessidade do mesmo uma quantidade eficaz de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo para tratar referida condição relacionada com idade.

[009] Em um aspecto, a presente invenção fornece o uso de (a)

RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo para a promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo, e para a preparação de um medicamento para a promoção e/ou realce de uma resposta imune.

[0010] Em um aspecto, a presente invenção fornece o uso de (a)

RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo para o tratamento de uma condição relacionada com idade em um indivíduo.

[0011] Em um aspecto, a presente invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo como ingredientes ativos (a) RAD001,

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4/84 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo, juntamente com instruções para o uso simultâneo, separado ou sequencial do mesmo na promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo.

[0012] Em um aspecto, a presente invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e instruções para o uso simultâneo, separado ou sequencial com (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [0013] A Figura 1 mostra o aumento nos títulos de anticorpo para linhagens de vacina contra influenza em grupos tratados com RAD001 e/ou BEZ235 versus placebo. É mostrado o aumento na relação (4 semanas após vacinação/linha de base) em títulos de média geométrica (GMT) para cada das 3 linhagens de vacina contra influenza (A/H1N1 [A/California/7/2009], A/H3N2 [A/Texas/50/2012], ou B [B/Massachusetts/2/2012]) em grupos tratados com RAD001 e/ou BEZ001 em relação ao grupo de placebo. A linha em negrito preta indica o aumento de duplicação de 1,2 em relações de GMT em relação ao placebo que é requerido em 2 das 3 linhagens de vacina contra influenza para atingir a finalidade primária do estudo. Os asteriscos indicam que a probabilidade de que o aumento em GMT em relação a placebo exceda 1,0 é 100%.

[0014] Figura 2 mostra que ο BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 diminui a incidência e gravidade da infecção do trato respiratório durante as 6 semanas que os indivíduos foram tratados com fármaco de estudo. Ο BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 diminui a incidência e gravidade da infecção do trato respira

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5/84 tório durante as 6 semanas que os indivíduos foram tratados com fármaco de estudo. (Topo) A porcentagem de indivíduos em cada grupo que reportou ter uma ou mais infecções do trato respiratório durante as 6 semanas em que elas foram tratadas com fármaco de estudo é mostrada. (Fundo) A porcentagem de indivíduos que experienciram as infecções do trato respiratório de gravidade moderada durante as 6 semanas em que elas foram tratadas com fármaco de estudo é mostrada. Nenhum indivíduo no estudo experenciou infecções do trato respiratório que foram avaliados como severos. Os números no topo de cada barra indicam a mudança de porcentagem em relação ao placebo. [0015] A Figura 3 mostra que o tratamento de BEZ235 e RAD001 + BEZ235, porém não placebo, leva à superregulação do sistema imune e expressão de gene induzida por interferon. A análise enriquecida por série de reações de mudaças de expressão de gene no sangue total antes versusapós as 6 semanas de tratamento com o fármaco de estudo é mostrada. Esta análise revelou que um enriquecimento altamente significativo de séries de reação relacionados à sinalização de interferon e sistema imune no grupo de monoterapia de BEZ235 e de combinação de BEZ235 + RAD001, porém não no grupo de placebo. O eixo X indica a mudança de duplicação de Iog2 média na expressão de genes em cada série de reações. O eixo y indica o —Iog10 do valor de p da superregulação da série de reações, com um valor maior do que 6 indicando significância estatística com uma taxa de descoberta falsa de Bonferroni menor do que 0,05. Cada ponto representa uma série de reações biológicas específica.

[0016] A Figura 4 mostra que ο BEZ235 tem variabilidade de PK inaceitável mente alta em doses acima de 10 mg. A dose (mg) vs AUCIast é mostrada. Cada ponto representa o AUC de BEZ235 no dia 1 ou dia 8 de dosagem para cada paciente individual em cada grupo.

[0017] A Figura 5 mostra que BEZ235 sozinho ou em combinação

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6/84 com RAD001 superregula as proteínas de remodelamento de matriz extracellular.

DESCRIÇÃO DETALHADA DE CERTAS MODALIDADES DA INVENÇÃO [0018] Em um aspecto, a presente invenção refere-se a (a)

RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo. Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo, compreendendo administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmopor administração simultânea, separada ou sequencial.

[0019] Os termos gerais usados aqui são definidos com os seguintes significados, a menos que explicitamente estabelecido de outro modo:

[0020] Os termos compreendendo e incluindo são usados aqui em seu sentido sentido em aberto e não limitante, a menos que de outro modo observado.

[0021] Os termos um/uma (a) e um/uma (an) e o/a (the) e referências similares no contexto da descrição da invenção (especialmente no contexto das reivindicações seguintes) devem ser interpretados para cobrir tanto singular quanto plural, a menos que de outro modo indicado aqui ou claramente contrariado pelo contexto. Onde a forma plural é usada para compostos, sais, e similares, esta é tomada para significar também um único composto, sal, ou similares.

[0022] O termo combinação ou combinação farmacêutica é definido aqui para se referir a uma combinação fixada em uma forma de dosagem única, uma combinação não fixada ou um kit de partes para

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7/84 a administração combinada onde RAD001, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e BEZ235, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo pode ser administrado independentemente ao mesmo tempo ou separadamente dentro dos intervalos de tempo que permitem que os parceiros de combinação mostrem um efeito cooperativos, por exemplo, sinérgico.

[0023] O temo combinação fixada significa que os ingredientes ativos ou agentes terapêuticos, por exemplo, RAD001 e BEZ235, são administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma forma de dosagem ou entidade única.

[0024] O termo combinação não fixada significa que os ingredientes ativos ou agentes terapêuticos, por exemplo, RAD001 e BEZ235, são tanto administrados a um paciente como formas de dosagem ou entidades separadas simultaneamente, concorrentemente ou sequencialmente sem nenhum limite de tempo específico, em que tal adminnistração forneceu níveis terapeuticamente eficazes dos dois compostos no corpo do indivíduo, por exemplo, mamífero ou ser humano, com necessidade dos mesmos.

[0025] O termo composição farmacêutica é definido aqui para se referir a uma mistura ou solução contendo pelo menos um agente terapêutico a ser administrado a um indivíduo, por exemplo, um mamífero ou ser humano, para tratar uma doença ou condição particular que afeta o indivíduo do mesmo.

[0026] O termo farmaceuticamente aceitável é definido aqui para se referir àqueles compostos, agentes biológicos, materiais, composições e/ou formas de dosagem, que são, dentro do escopo do diagnóstico médico seguro, adequadas para contato com tecidos de um indivíduo, por exemplo, um mamífero ou ser humano, sem toxicidade excessiva, resposta alérgica a irritação e outras complicações do problema commensurate com uma relação risco/benefício razoável.

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8/84 [0027] Os termos administração combinada conforme usados aqui são definidos como abrangendo a adminnistração dos agentes terapêuticos selecionados a um único indivíduo, por exemplo, um mamífero ou ser humano, e são destinados a incluir regimes de tratamento em que os agentes não são necessariamente administrados pela mesma rotina de administração ou no mesmo tempo.

[0028] O termo tratando ou tratamento como usado aqui compreende a tratamento que atenua, reduz ou alivia pelo menos um sintoma em um indivíduo ou que afeta um retardo da progressão de uma doença, condição e/ou distúrbio. Por exemplo, o tratamento pode ser a diminuição de um ou vários sintomas de um distúrbio ou erradicação completa de um distúrbio. Dentro do significado da presente invenção, o termo tratar também indica prender, retardar o início (isto é, o período antes da manifestação clínica de uma doença) e/ou reduzir o risco de desenvolver ou agravar uma doença.

[0029] O termo conjuntamente terapeuticamente ativo ou efeito terapêutico conjunto como usado aqui significa que os agentes terapêuticos podem ser fornecidos separadamente (em uma maneira cronologicamente alternada, por exemplo, em uma maneira específica da sequência) de tal forma que o animal de sangue quente (por exemplo, ser humano) a ser tratado ainda mostrem uma interação, tal como uma interação sinérgica (efeito terapêutico conjunto). Se este é o caso pode, inter alia, ser determinado seguindo-se os níveis de sangue, mostrando que ambos os agentes terapêuticos estão presentes no sangue do ser humano a ser tratado pelo menos durante certos intervalos de tempo.

[0030] Uma quantidade eficaz, quantidades farmaceuticamente eficazes, ou quantidade terapeuticamente eficaz de um agente terapêutico é uma quantidade suficiente para fornecer uma melhora observável durante os sinais clinicamente observáveis de linha de base e

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9/84 sintomas da promoção e/ou realce da resposta imune.

[0031] O termo efeito sinérgico como usado aqui refere-se à ação de dois agentes tais como, por exemplo, (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, produzindo um efeito, por exemplo, promovendo e/ou realçando uma resposta imune em um indivíduo, que é maior do que a adição única dos efeitos de cada fármaco administrado por si mesmo. Um efeito sinérgico pode ser calculado, por exemplo, usando métodos adequados tais como a equação de Sigmoid-Emax (Holford, N. H. G. and Scheiner, L. B., Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453 (1981)), a equação de aditividade de Loewe (Loewe,

S. and Muischnek, H., Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326 (1926)) e a equação de efeito médio (Chou, T. C. and Talalay, P., Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984)). Cada equação referida acima pode ser aplicada a dados experimentais para gerar um gráfico correspondente para auxiliar na avaliação dos efeitos da combinação de fármaco. A curva de gráficos correspondentes associada com as equações referidas acima é a curva de efeito de concentração, curva de isobolograma e curva de índice de combinação, respectivamente.

[0032] O termo indivíduo ou paciente como usado aqui inclui animais, que são capazes de promover e/ou realçar uma resposta imune e/ou ter uma condição relacionada com idade. Os exemplos de indivíduos incluem mamíferos, por exemplo, seres humanos cachorros, vacas, cavalos, porcos, ovelhas, cabras, gatos, camundongos, colhos, ratos e animais transgênicos não humanos. Em algumas modalidades, o inivíduo é um ser huamano, por exemplo, um ser humano sofrendo de, em risco de sofrer de, ou potencial mente capaz de sofrer de uma condição relacionada com a idade.

[0033] O termo cerca de ou aproximadamente deve ter o significado de dentro de 10%, por exemplo, dentro de 5%, de um determi

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10/84 nado valor ou faixa.

[0034] O termo promover ou realçar na relação a uma resposta imune refere-se a um aumento em uma resposta imune, tal como aumento na capacidade das células imunes alvejar e/ou matar células de câncer, alvejar e/ou matar patógenos e células infectadas por patógeno, e imunidade protetora após vacinação, entre outros. Em algumas modalidades, a imunidade protetora refere-se à presença de resposta imune suficiente (tais como títulos de anticorpo) para proteger contra infecção subsequente por um patógeno que expressa o mesmo antígeno ou proteção contra um novo patógeno.

[0035] Os termos imunossenescência ou imunoscenessente referem-se a um decréscimo em função imune resultando em resposta imune prejudicada, por exemplo, para câncer, vacinação, patógenos infecciosos, entre outros. Envolve tanto a capacidade do hospedeiro responder a infecções e ao desenvolvimento de memória imune de longo prazo, especialmente por vacinação. Esta deficiência imune é ubíqua e encontrada em mambas espécies de vida longa e curta como uma função de sua idade em relação à expectativa de vida em vez de tempo cronológico. Ela é considerada um fator contribuidor principal para a frequência aumentada de morbidade e mortalidade entre os idosos. A imunossenescência não é um fenômeno deteriorador randômico, em vez disso parece inversamente repetir um padrão evolucionário e a maioria dos parâmetros afetados por imunossenescência parecem estar sob controle genético. A imunossenescência pode também ser, às vezes, prevista como o resultado do desafio contínuo da exposição inevitável a uma variedade de antígenos tais como viroses e bactérias.

[0036] A imunossenescência é uma condição multifatorial que lava a muitos problemas de saúde patologicamente significantes, por exemplo, na população envelhecida. As mudanças biológicas depen

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11/84 dentes de idade tal como um declínio na função de células-tronco hematopoiéticas, um aumento em PD1+ linfócitos, um declínio na função de fagócitos, macrófagos, células dendríticas, monócitos, células T, células B e células NK, e um declínio em imunidade inata, mediada por célula ou humoral contribui para o início de imunossenescência. Em um aspecto, a imunossenescência pode ser medida em um indivíduo medindo-se o comprimento de telômero em células imunes (veja, por exemplo, US 5.741.677). A imunossenescência pode também ser determinada documentando-se em um indivíduo um Número menor do que o normal de células T naive CD4 e/ou CD8, uma diminuição em células pró-B e células pré-B iniciais, uma diminuição em repertório de células T e B, um aumento no número de células T de expressão de PD1, por exemplo, um número menor do que o normal de céçlulas T negativas PD-1, um aumento em células T CD8+CD28neg, um aumento em células T CD57+ e/ou KLRG1+ CD8+, um aumento no número de células T LAG-3-positivas, uma mudança em glicoproteínas de superfície de célula T, uma mudança em glicosilação de anticorpo, uma mudança na glicosilação de proteínas expressas intracelularmente o uma superfície de células imunes, um aumento em células T expressando ICOS, CTLA-4, Tim-3 e/ou LAG-3, ou resposta à vacinação diminuída em indivíduos que envelhecem.

[0037] O termo resposta imune prejudicadarefere-se a um estado em que um indivíduo não tem uma resposta imune apropriada, por exemplo, à câncer, vacinação, infecção de patógeno, entre outros. Em algumas modalidades, um indivíduo tendo uma resposta imune prejudicada está previsto para não obter níveis de título de anticorpo protetor após vacinação profilática, ou em que um indivíduo não tem uma diminuição em imunidade mediada por célula ou carga de doença após vacinação terapêutica. Um indivíduo pode também ter uma resposta imune prejudicada, se o indivíduo tiver uma expressão prejudi

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12/84 cada de genes de resposta imune inata. Um indivíduo pode também ter uma resposta imune prejudicada, se o indivíduo for um membro de uma população conhecida por ter função imune diminuída ou que tem uma história de função imune diminuída tais como os idosos, indivíduos sujeitos a tratamento de quimioterapia, indivíduos asplênicos, indivíduos imunocomprometidos, ou indivíduos tendo HIV/AIDS. Os métodos descritos aqui permitem o tratamento de uma resposta imune prejudicada por administração de uma dose de realce imunológico, baixa, de um inibidor de mTOR, por exemplo, um inibidor de mTOR alostérico, tal como RAD001.

[0038] O termo dose de realce imunológico, baixa quando usado em conjunto com um inibidor de mTOR, por exemplo, um inibidor de mTOR alostérico, por exemplo, RAD001 ou rapamicina, ou um inibidor de mTOR catalítico, refere-se a uma dose de inibidor de mTOR que parcialmente, porém não totalmente, inibe a atividade de mTOR, por exemplo, como medido pela inibição da atividade de P70 S6 cinase. Os métodos para avaliação da atividade de mTOR, por exemplo, pela inibição de P70 S6 cinase, são descritos aqui. A dose é insuficiente para resultar em imunossupressão complete, porém é suficiente para realçar a resposta imune. Em uma modalidade, a dose de realce imunológico, baixa, de inibidor de mTOR resulta em uma diminuição no número ou porcentagem de células T PD-1 positivas e/ou um aumento no número ou porcentagem de células T PD-1 negativas, ou um aumento na relação de células T PD-1 negativas/Células T PD-1 positivas. Em uma modalidade, a dose de realce imunológico, baixa, de inibidor de mTOR resulta em um aumento no número de células T naive. Em uma modalidade, a dose de realce imunológico, baixa, de inibidor de mTOR resulta em um ou mais dos seguintes:

[0039] um aumento na expressão de genes induzidos por interferon em células sangíneas

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13/84 [0040] um decréscimo na porcentagem de células T que expressam os marcadores LAG-3, CTLA-4, ICOS ou Tim-3;

[0041] um aumento na expressão de um ou mais dos seguintes marcadores: CD62Lhigh, CD127high, CD27+, e BCL2, por exemplo, em células T de memória, por exemplo, precursores de célula T de memória;

[0042] um decréscimo na expressão de KLRG1 ou CD57, por exemplo, em células T de memória ou naive, por exemplo, precursores de célula T de memória; e [0043] um aumento do número de precursores de célula T de memória, por exemplo, células com qualquer um ou combinação das seguintes características: CD62Lhigh aumentada, CD127high aumentada, CD27+ aumentada, KLRG1 diminuída, e BCL2 aumentada;

[0044] em que qualquer das mudanças descritas acima ocorre, por exemplo, pelo menos transitoriamente, por exemplo, em comparação a um indivíduo não tratado.

[0045] Em uma modalidade, uma dose de um inibidor de mTOR é associada com, ou fornece, inibição de mTOR de pelo menos 5, porém não mais do que 90%, pelo menos 10, porém não mais do que 90%, pelo menos 15, porém não mais do que 90%, pelo menos 20, porém não mais do que 90%, pelo menos 30, porém não mais do que 90%, pelo menos 40, porém não mais do que 90%, pelo menos 50, porém não mais do que 90%, pelo menos 60, porém não mais do que 90%, ou pelo menos 70, porém não mais do que 90%.

[0046] Em uma modalidade, uma dose de um inibidor de mTOR é associada com, ou fornece, inibição de mTOR de pelo menos 5, porém não mais do que 80%, pelo menos 10, porém não mais do que 80%, pelo menos 15, porém não mais do que 80%, pelo menos 20, porém não mais do que 80%, pelo menos 30, porém não mais do que 80%, pelo menos 40, porém não mais do que 80%, pelo menos 50, porém

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14/84 não mais do que 80%, ou pelo menos 60, porém não mais do que 80%.

[0047] Em uma modalidade, uma dose de um inibidor de mTOR é associada com, ou fornece, inibição de mTOR de pelo menos 5, porém não mais do que 70%, pelo menos 10, porém não mais do que 70%, pelo menos 15, porém não mais do que 70%, pelo menos 20, porém não mais do que 70%, pelo menos 30, porém não mais do que 70%, pelo menos 40, porém não mais do que 70%, ou pelo menos 50, porém não mais do que 70%.

[0048] Em uma modalidade, uma dose de um inibidor de mTOR é associada com, ou fornece, inibição de mTOR de pelo menos 5, porém não mais do que 60%, pelo menos 10, porém não mais do que 60%, pelo menos 15, porém não mais do que 60%, pelo menos 20, porém não mais do que 60%, pelo menos 30, porém não mais do que 60%, ou pelo menos 40, porém não mais do que 60%.

[0049] Em uma modalidade, uma dose de um inibidor de mTOR é associada com, ou fornece, inibição de mTOR de pelo menos 5, porém não mais do que 50%, pelo menos 10, porém não mais do que 50%, pelo menos 15, porém não mais do que 50%, pelo menos 20, porém não mais do que 50%, pelo menos 30, porém não mais do que 50%, ou pelo menos 40, porém não mais do que 50%.

[0050] Em uma modalidade, uma dose de um inibidor de mTOR é associada com, ou fornece, inibição de mTOR de pelo menos 5, porém não mais do que 40%, pelo menos 10, porém não mais do que 40%, pelo menos 15, porém não mais do que 40%, pelo menos 20, porém não mais do que 40%, pelo menos 30, porém não mais do que 40%, ou pelo menos 35, porém não mais do que 40%.

[0051] Em uma modalidade, uma dose de um inibidor de mTOR é associada com, ou fornece, inibição de mTOR de pelo menos 5, porém não mais do que 30%, pelo menos 10, porém não mais do que 30%,

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15/84 pelo menos 15, porém não mais do que 30%, pelo menos 20, porém não mais do que 30%, ou pelo menos 25, porém não mais do que 30%.

[0052] Em uma modalidade, uma dose de um inibidor de mTOR é associada com, ou fornece, inibição de mTOR de pelo menos 1,2, 3, 4 ou 5, porém não mais do que 20%, pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5, porém não mais do que 30%, pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5, porém não mais do que 35, pelo menos 1, 2, 3, 4 ou 5 , porém não mais do que 40%, ou pelo menos 1,2, 3, 4 ou 5, porém não mais do que 45%.

[0053] Em uma modalidade, uma dose de um inibidor de mTOR é associada com, ou fornece, inibição de mTOR de pelo menos 1,2, 3, 4 ou 5, porém não mais do que 90%.

[0054] Como é descrito aqui, a extensão da inibição de mTOR pode ser expressa como a extensão de inibição de P70 S6K, por exemplo, a extensão da inibição de mTOR pode ser determinada pelo nível de decréscimo em atividade de P70 S6K, por exemplo, pelo decréscimo em fosforilação de um substrato de P70 S6K. O nível de inibição de mTOR pode ser avaliado por um método descrito aqui, por exemplo, pelo ensaio de base.

[0055] O termo promove ou realça na relação a uma resposta imune refere-se a um aumento em uma resposta imune, tal como aumento na capacidade das células imunes alvejar e/ou matar células de câncer, alvejar e/ou matar patógenos e células infectadas por patógeno, e imunidade protetora após vacinação, entre outros. Em algumas modalidades, a imunidade protetora refere-se à presença de resposta imune suficiente (tais como títulos de anticorpo) para proteger contra infecção subsequente por um patógeno que expressa o mesmo antígeno.

Inibidores de mTOR [0056] Como usado aqui, o termo inibidor de mTORr refere-se a

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16/84 um composto ou ligante, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que inibe a mTOR cinase em uma célula. Em uma modalidade, um inibidor de mTOR é um inibidor alostérico. Em uma modalidade, um inibidor de mTOR é um inibidopr catalítico.

[0057] Inibidores de mTOR alostéricos incluem o composto tricíclico neutro rapamicina (sirolimo), compostos relacionados a rapamicina, isto é, compostos tendo similaridade estrutural e funcional à rapamicina incluindo, por exemplo, derivados de rapamicina, análogos de rapamicina (também referidos como rapálogos) e outros compostos de macrólido que inibem a atividade de mTOR.

[0058] Rapamicina é um antibiótico de macrólido conhecido produzido por Streptomyces hygroscopicus tendo a estrutura mostrada na Fórmula A.

[0059] Veja, por exemplo, McAlpine, J.B., et al., J. Antibiotics (1991) 44: 688; Schreiber, S.L., et al., J. Am. Chem. Soc. (1991) 113: 7433; Patente dos Estados Unidos n^Q 3.929.992. Existem vários esquemas de numeração propostos para rapamicina. Para evitar confusão, quando os análogos de rapamicina específicos são nomeados aqui, os nomes são fornecidos com referência à rapamicina usando o esquema de numeração de fórmula A.

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17/84 [0060] Análogos de rapamicina útil na invenção são, por exemplo, análogos substituídos por O em que o grupo hidroxila no anel de cicloexila de rapamicina é substituído por OR1 em que Ri is hidroxialquila, hidroxialcoxialquila, acilaminoalquila, ou aminoalquila; por exemplo, RAD001, também conhecido como, everolimo como descrito nos US 5.665.772 e W094/09010, os conteúdo dos quais são incorporados aqui por referência. Outros análogos de rapamicina adequados incluem aqueles substituídos na posição 26 ou 28. O análogo de rapamicina pode ser um epímero de um análogo mencionado acima, particularmente um epímero de um análogo substituído na posição 40, 28 ou 26, e pode opcionalmente ser também hidrogenado, por exemplo, como descrito nos US 6.015.815, WO95/14023 e WO99/15530, os conteúdo dos quais são incorporados aqui por referência, por exemplo, ABT578 também conhecido como zotarolimo ou um análogo de rapamicina descrito em US 7.091.213, WO98/02441 e WO01/14387, os conteúdo dos quais são incorporados aqui por referência, por exemplo, AP23573 também conhecido como ridaforolimus.

[0061] Os exemplos de análogos de rapamicina adequados para uso na presente invenção de US 5.665.772 incluem, porém não são limitados a, 40-O-benzil-rapamicina, 40-O-(4’-hidroximetil)benzilrapamicina, 40-O-[4’-(1,2-dihidroxietil)]benzil-rapamicina, 40-O-alilrapamicina, 40-O-[3’-(2,2-di metil-1,3-dioxolan-4(S)-il)-prop-2’-en-1 ’-il]rapamicina, (2’E,4’S)-40-O-(4’,5’-dihidroxipent-2’-en-r-il)-rapamicina, 40-O-(2-hidróxi)etoxicarbonilmetil-rapamicina, 40-O-(2-hidróxi)etilrapamicina, 40-O-(3-hidróxi)propil-rapamicina, 40-O-(6-hidróxi)hexilrapamicina, 40-O-[2-(2-hidróxi)etóxi]etil-rapamicina, 40-O-[(3S)-2,2dimetildioxolan-3-il]metil-rapamicina, 40-O-[(2S)-2,3-dihidroxiprop-1-il]rapamicina, 40-O-(2-acetóxi)etil-rapamicina, 40-O-(2-nicotinoilóxi)etilrapamicina, 40-O-[2-(N-morfolino)acetóxi]etil-rapamicina, 40-O-(2-Nimidazolilacetóxi)etil-rapamicina, 40-O-[2-(N-metil-N’Petição 870190047974, de 22/05/2019, pág. 38/124

18/84 piperazinyl)acetóxi]etil-rapamicina, 39-0-desmetil-39,40-0,0-etilenorapamicina, (26R)-26-diidro-40-O-(2-hidróxi)etil-rapamicina, 40-0-(2aminoetil)-rapamicina, 40-O-(2-acetaminoetil)-rapamicina, 40-0-(2nicotinamidoetil)-rapamicina, 40-O-(2-(N-metil-imidazo-2’ilcarbethoxamido)etil)-rapamicina, 40-O-(2-etoxicarbonilaminoetil)rapamicina, 40-O-(2-tolilsulfonamidoetil)-rapamicina, e 40-O-[2-(4’,5’dicarboetóxi-1 ’,2’,3’-triazol-1 ’-il)-etil]-rapamici na.

[0062] Outros análogos de rapamicina útil na presente invenção são análogos onde o grupo hidroxila no anel de cicloexila de rapamicina e/ou o grupo hidróxi na posição 28 é substituído por um grupo hidroxiéster são conhecidos, por exemplo, análogos de rapamicina encontrados no US RE44.768, por exemplo, tensirolimo.

[0063] Outros análogos de rapamicina úteis na presente invenção incluem aqueles em que o grupo metóxi na posição 16 é substituído por outro substituinte, por exemplo, (opcionalmente substituído por hidróxi) alquinilóxi, benzila, ortometoxibenzila ou clorobenzila e/ou em que o grupo metóxi na posição 39 é deletado juntamente com o carbono 39 de modo que o anel de cicloexila de rapamicina torne-se um anel de ciclopentila sem o grupo metóxi de posição 39; por exemplo, como descrito nos WO95/16691 e WO96/41807, os conteúdo dos quais são incorporados aqui por referência. Os análogos podem ser também modificados de tal forma que o hidróxi na posição 40 de rapamicina seja alquilado e/ou a 32-carbonila seja reduzida.

[0064] Os análogos de rapamicina de WO95/16691 incluem, porém não são limitados a, 16-demetóxi-16-(pent-2-inil)óxi-rapamicina, 16-demetóxi-16-(but-2-inil)óxi-rapamicina, 16-demetóxi-16(propargil)óxi-rapamicina, 16-demetóxi-16-(4-hidróxi-but-2-i ni l)óxirapamicina, 16-demetóxi-16-benzilóxi-40-O-(2-hidroxietil)-rapamicina, 16-demetóxi-16-benzilóxi-rapamicina, 16-demetóxi-16-ortometoxibenzil-rapamicina, 16-demetóxi-40-O-(2-metoxietil)-16-pent-2Petição 870190047974, de 22/05/2019, pág. 39/124

19/84 inil)óxi-rapamicina, 39-demetóxi-40-desóxi-39-formil-42-norrapamicina, 39-demetóxi-40-desóxi-39-hidroximetil-42-nor-rapamicina, 39-demetóxi-40-desóxi-39-carbóxi-42-nor-rapamicina, 39-demetóxi-40desóxi-39-(4-metil-piperazin-1-il)carbonil-42-nor-rapamicina, 39demetóxi-40-desóxi-39-(morfolin-4-il)carbonil-42-nor-rapamicina, 39demetóxi-40-desóxi-39-[N-metila, N-(2-piridin-2-il-etil)]carbamoil-42nor-rapamicina e 39-demetóxi-40-desóxi-39-(ptoluenossulfonilidrazonometil)-42-nor-rapamicina.

[0065] Análogos de rapamicina de WO96/41807 incluem, porém não são limitados a, 32-deoxo-rapamicina, 16-O-pent-2-inil-32-deoxorapamicina, 16-O-pent-2-inil-32-deoxo-40-O-(2-hidróxi-etil)-rapamicina, 16-O-pent-2-inil-32-(S)-diidro-40-O-(2-hidroxietil)-rapamicina, 32(S)diidro-40-O-(2-metóxi)etil-rapamicina, e 32(S)-diidro-40-O-(2hidroxietil)-rapamicina.

[0066] Outro análogo rapamicina adequada é umirolimo como descrito nos US 2005/0101624, os conteúdo dos quais são incorporados aqui por referência.

[0067] Em células de mamífero, o alvo de rapamicina (mTOR) cinase existe como um complexo multiproteína descrito como o complexo de mTORCI ou mTORC2, que sente a capacidade de nutrientes e energia e integra entradas de fatores de crescimento e sinalização de estresse. O complexo de mTORCI é sensível aos inibidores de mTOR alostéricos tal como rapamicina, é composto de mTOR, ΟβΙ_, e proteínas de mTOR associadas reguladoras (raptor), e se liga à proteína FKBP12 de peptidil-proil isomerase (uma proteína de ligação de FK506 1 A, 12 kDa). Em contraste, o complexo de mTORC2 é composto de proteínas de mTOR, ΟβΙ_, e proteínas de compainha insensíveis à rapamicina de mTOR (rictor), e não se ligam à proteína de FKBP12 in vitro.

[0068] O complexo de mTORCI foi mostrado foi envolvido em

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20/84 controle de translação de proteína, operando como um fator de crescimento e aparato sensível a nutriente para regulação de crescimento e proliferação. A mTORCI regula a translação de proteína por meio de dois substratos a jusante fundamentais: P70 S6 cinase, que, sucessivamente, fornece proteína P70 S6 ribossômica, e proteína 1 de ligação de fator 4E de fator de iniciação de translação eucariótica (4EBP1), que desempenha um papel fundamental na modulação de translação dependente de cap regulada por elF4E. O complexo de mTORCI regula crescimento celular em resposta à energia e homeostase de nutriente da célula, e a desregulamentação de mTORCI é comum em uma ampla variedade de cânceres humanos. A função de mTORC2 envolve a regulação de sobrevivência celular por meio de fosforilação de Akt e a modulação de dinâmica de citoesqueleto de actina.

[0069] O complexo de mTORCI é sensível aos inibidores de mTOR alostéricos tais como rapamicina e derivados em grande parte devido ao modo de ação da rapamicina, que envolve a formação de um complexo intracelular com a FKBP12 e ligação ao domínio de ligação de FKBP12-rapamicina (FRB) de mTOR. Isto resulta em uma mudança conformacional em mTORCI que é acreditado alterar e enfraquecer a interação com seu raptor de proteína de sustentação, sucessivamente impedindo substratos tal como P70 S6K1 de acessar a mTOR e ser fosforilado. A rapamicina e rapálogos tal como RAD001 ganharam relevância clínica inibindo-se a hiperativação de mTOR associada com distúrbios de prliferação tanto benignos quanto malignos. [0070] RAD001, de outro modo conhecida como everolimo (Afinitor®), tem o nome químico (1 R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21 R,23S_!24E_!26E_!28E_!30S_!32S,35R)1,18-di hidróxi-12-{( 1 R)-2-[( 1 S,3R,4R)-4-(2-hidroxietóxi)-3metoxicicloexil]-1 -metiletil}-19,30-dimetóxi-15,17,21,23,29,35hexametil-11,36-dioxa-4-aza-triciclo[30,3,1,04,9]hexatriacontaPetição 870190047974, de 22/05/2019, pág. 41/124

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16,24,26,28-tetraeno-2,3,10,14,20-pentaona e a seguinte estrutura química

[0071] O everolimo é um fármaco aprovado por FDA para o tratamento de câncer de rim avançado e está sendo investigado em vários outros testes clínicos de fase III em oncologia. Os estudos pré-clínicos mostraram que o everolimo é capaz de inibir a proliferação de uma ampla variedade de linhagens de célula de tumor tanto in vitro quanto in vivo, presumivelmente através da supressão de função de mTORCI sensível à rapamicina. O everolimo, como um derivado de rapamicina, é um inibidor de mTOR alostérico that is highly potent na inibição de parte da função de mTORCI, isto é, P70 S6 cinase (P70 S6K) e o substrato P70 S6 de P70 S6K a jusante. Os inibidores de mTOR alostéricos tipo everolimo (e outros análogos de rapamicina) têm pouco ou nenhum efeito na inibição na série de reações de mTORC2, ou sua ativação resultante de sinalização de Akt. Outros exemplos de inibidores de mTOR alostéricos incluem sirolimo (rapamicina, AY-22989), 40[3-hidróxi-2-(hidroximetil)-2-metilpropanoato]-rapamicina (também chamada de tensirolimo ou CCI-779) e ridaforolimo (AP-23573/MK8669). Outros exemplos de inibidores de mTOR alostéricos incluem zotarolimo (ABT578) e umirolimo.

[0072] Alternativamente ou adicionalmente, inibidores de mTOR

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22/84 competitivos com ATP, catalíticos, foram descobertos alvejar o domínio de mTOR cinase diretamente e alvejar tanto mTORCI quanto mTORC2. Estes são também inibidores mais completos de mTORCI do que tais inibidores de mTOR alostéricos como rapamicina, porque eles modulam as produções de mTORCI resistentes à rapamicina tais como fosforilação de 4EBP1-T37/46 e tranlação dependente de cap. [0073] BEZ235 é um inibidor de mTOR catalítico, tendo o nome químico 2-metil-2-[4-(3-metil-2-oxo-8-quinolin-3-il-2,3-diidroimidazo[4,5-c]quinolin-1-il)-fenil]-propionitrila e a seguinte estrutura química

[0074] BEZ235 pode também ser usado em sua forma de sal de monotosilato. A síntese de BEZ235 é descrita no W02006/122806, os conteúdos dos quais são aqui incorporados por referência.

[0075] Como um inibidor de mTOR catalítico, ο BEZ235 é capaz de interromper a função complete do complexo de mTORCI, incluindo tanto ambas as funções de sensibilidade de rapamicina (fosforilação de P70 S6K, e subsequentemente fosforilação de P70 S6) e insensibilidade de rapamicina (fosforilação de 4EBP1). Ο BEZ235 tem um efeito diferencial de acordo com a concentração de fármaco usada, desse modo a inibição de mTORCI predomina em uma concentração muito baixa (menor ou igual a 10 nmol/L), a inibição de mTORCI e mTORC2 predomina em baixa concentração (menor do que 200 nmol/L), porém a inibição de PI3K/mTOR dual em concentrações relativamente maiores (aproximadamente 500 nmol/L).

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23/84 [0076] A estrutura dos ingredientes ativos indentificada pelos números de código, os nomes comerciais ou genéricos pode ser tomada da edição real do compêndio padrão The Merck Index ou de bases de dados, por exemplo, patentes internacionais (por exemplo, IMS World Publications). O conteúdo correspondente das mesmas é incorporado aqui por referência.

[0077] Em algumas modalidades, a invenção fornece uma combinação compreendendo (a) RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e (b) BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para uso simultâneo, separado ou sequencial para o realce ou promoção de uma resposta imune em um indivíduo.

[0078] Em algumas modalidades, RAD001 é na forma neutra. Em algumas modalidades, ο BEZ235 é o sal de monotosilato. Em algumas modalidades, o RAD001 é administrado em uma faixa de dosagem de 0,01 - 0,2 mg, por exemplo, 0,1 mg. Em algumas modalidades, o BEZ235 é administrado em uma faixa de dosagem de 1 a 20 mg, por exemplo, 10 mg.

[0079] Em algumas modalidades, o(s) composto(s) ou combinação do(s) mesmo(s) é(são) em uma forma de dosagem de liberação imediata. Em algumas modalidades, o(s) composto(s) ou combinação do(s) mesmo(s) é(são) administrado(s) uma vez por semana. Em algumas modalidades, o(s) composto(s) ou combinação do(s) mesmo(s) é(são) administrado(s) uma vez por dia.

[0080] Em algumas modalidades, o indivíduo é imunocomprometido. Em algumas modalidades, o indivíduo é HIV+ or has AIDS. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma doença infecciosa.

[0081] Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma resposta imune prejudicada. Em algumas modalidades, o indivíduo é imunoscenessente. Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma condição relacionada com idade, por exemplo, imunossenescência.

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24/84 [0082] Em uma modalidade da invenção, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável.

Métodos de Tratamento [0083] Em um aspecto, a presente invenção fornece um método que compreende a etapa de administração de (a) uma dose baixa de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) uma dose baixa de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo, a um paciente, em que o paciente experiencia menos doenças devido à infecção do que um paciente não administrado com RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma combinação do mesmo.

[0084] Em algumas modalidades, a imunidade inata do paciente é realçada.

[0085] Em algumas modalidades, a imunidade específica de antígeno não é realçada.

[0086] Em algumas modalidades, pelo menos um gene indutor de interferon (ISG) é super regulado.

[0087] Em algumas modalidades, a infecção é uma infecção do trato urinário.

[0088] Em algumas modalidades, a infecção é uma infecção dos dentes ou gengivas.

[0089] Em algumas modalidades, a infecção é uma infecção do trato respiratório.

[0090] Em algumas modalidades, a infecção é uma infecção viral.

[0091] Em algumas modalidades, o paciente é idoso.

[0092] Em algumas modalidades, o paciente tem pelo menos 65

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25/84 anos de idade.

[0093] Em algumas modalidades, o paciente tem pelo menos 75 anos de idade.

[0094] Em algumas modalidades, o paciente tem pelo menos 85 anos de idade.

[0095] Em algumas modalidades, a baixa dose de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo, é administrada ao paciente durante cerca de até 6 semanas consecutivas; cerca de até 8 semanas consecutivas; cerca de até 10 semanas consecutivas; cerca de até 12 semanas consecutivas; cerca de até 16 semanas consecutivas; cerca de até 20 semanas consecutivas; cerca de até 6 meses consecutivos; cerca de até 1 ano, ou como parte de tratamento de longo prazo (indefinidamente).

[0096] Em algumas modalidades, a baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é administrada ao paciente durante cerca de até 3 semanas consecutivas; cerca de até 6 semanas consecutivas; cerca de até 8 semanas consecutivas; cerca de até 10 semanas consecutivas; cerca de até 12 semanas consecutivas; cerca de até 16 semanas consecutivas; cerca de até 20 semanas consecutivas; cerca de até 24 semanas consecutivas, ou cerca de até 6 meses consecutivos.

[0097] Em algumas modalidades, o paciente continua a experienciar menos doenças devido à infecção de cerca de 1 dia até cerca de 1 ano após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.

[0098] Em algumas modalidades, o paciente continua a experienciar menos doenças devido à infecção durante pelo menos 1 mês e até cerca de 1 ano após a administração do RAD001 ou um sal farma

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26/84 ceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.

[0099] Em algumas modalidades, o paciente continua a experienciar menos doenças devido à infecção durante pelo menos 3 meses e até cerca de 1 ano após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.

[00100] Em algumas modalidades, o paciente continua a experienciar menos doenças devido à infecção durante pelo menos 6 meses após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.

[00101] Em algumas modalidades, o paciente é administrado com baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como uma monoterapia.

[00102] Em algumas modalidades, o paciente é administrado com baixa dose de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como uma monoterapia.

[00103] Em algumas modalidades, o paciente é administrado tanto com baixa dose de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo quanto com baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como uma terapia de combinação.

[00104] Em algumas modalidades, a variabilidade de AUC farmacêutica de pacientes que recebem a baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é menor do que a de um paciente que recebe uma dose maior de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00105] Em algumas modalidades, RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é na forma neutra.

[00106] Em algumas modalidades, BEZ235 ou um sal farmaceuti

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27/84 camente aceitável do mesmo é o sal de monotosilato.

[00107] Em algumas modalidades, o método compreende a administração de 0,01 - 0,2 mg de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00108] Em algumas modalidades, o método compreende a administração de 1 - 50 mg de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00109] Em algumas modalidades, o indivíduo é imunocomprometido.

[00110] Em algumas modalidades, o indivíduo tem uma resposta imune prejudicada.

[00111] Em algumas modalidades, o indivíduo é imunoscenessente. [00112] Em um aspecto, a presente invenção fornece um método de superregulação de pelo menos um gene indutor de interferon (ISG), compreendendo administração de (a) uma dose baixa de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) uma dose baixa de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo, a um paciente.

[00113] Em um aspecto, a presente invenção fornece um método de superregulação de pelo menos uma proteína envolvida em remodelamento de matriz extracelular, compreendendo administração de (a) uma dose baixa de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) uma dose baixa de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo, a um paciente.

[00114] Em algumas modalidades, a proteína envolvida em remodelamento de matriz extracelular é significativamente superregulada após o tratamento durante pelo menos 1 dia, cerca de 1 semana, cerca de 3 semanas, cerca de 4 semanas, cerca de 5 semanas, cerca de 6 semanas, cerca de 8 semanas, cerca de 10 semanas, cerca de 12

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28/84 semanas, cerca de 16 semanas, cerca de 20 semanas, cerca de 24 semanas, ou cerca de 6 meses.

[00115] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um método de tratamento de uma doença ou condição associada com remodelamento de matriz extracelular anormal, compreendendo administração de (a) uma dose baixa de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) uma dose baixa de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo, a um paciente.

[00116] Em algumas modalidades, a doença ou condição associada com remodelamento de matriz extracelular anormal é selecionada de insuficiência cardíaca, tal como insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada, insuficiência renal crônica, glomerunefropatia, envelhecimento da pele, NASH, fibrose/cirrose de hepatite, fibrose pulmonar incluindo fibrose pulmonar idiopática, enrijecimento/disfunção do tendão relacionada com envelhecimento, artrite incluindo osteoartrite, sarcopenia, mielofibrose, mielodisplasia, disfunção relacionada ao envelhecimento da barrera hematocefálica, nefropatia diabética, aterosclerose, ou cicatrização de ferida.

[00117] Em algumas modalidades, a invenção fornece um método de promoção ou realce de uma resposta imune em um indivíduo compreendendo administração ao referido indivíduo de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo em uma quantidade que é terapeuticamente eficaz ou conjuntamente terapeuticamente eficaz na promoção ou realce de uma resposta imune.

[00118] Em algumas modalidades, a invenção fornece um método de tratamento de uma condição relacionada com idade em um indivíduo compreendendo administração ao referido indivíduo de (a)

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RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo em uma quantidade que é terapeuticamente eficaz ou conjuntamente terapeuticamente eficaz para tratar, prevenir ou melhorar uma condição relacionada com idade, por exemplo, imunossenescência.

[00119] Em algumas modalidades, a invenção fornece o uso de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo para a preparação de um medicamento para a promoção ou realce de uma resposta imune.

[00120] Em algumas modalidades, a invenção fornece o uso de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo para a preparação de um medicamento para o tratamento de uma condição relacionada com idade, por exemplo, imunossenescência.

[00121] Em algumas modalidades, a invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e instruções para o uso simultâneo, separado ou sequencial com BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na promoção ou realce de uma resposta imune.

[00122] Em algumas modalidades, a invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e instruções para o uso simultâneo, separado ou sequencial com BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, no tratamento de uma condição relacionada com idade.

[00123] Em algumas modalidades, um benefício do uso da combinação é que as doses menores de (a) RAD001, ou um sal farmaceuti

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30/84 camente aceitável do mesmo; e (b) BEZ235, ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, quando usadas em combinação podem ser usadas, por exemplo, de forma que as dosages não precisem frequentemente ser menores, mas sejam também aplicadas menos frequentemente, ou exibam menor incidência de efeitos colaterais observados com doses maiores ou com um dos parceiros de combinação apenas. Isto está de acordo com os desejos e requisites dos pacientes a serem tratados.

[00124] Pode-se mostrar, por modelos de teste estabelecidos, que a administração de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo resulta nos efeitos benéficos descritos descries aqui acima. A pessoa versada na técnica é totalmente habiltada a selecionar um modelo de teste relevante para provar tais efeitos benéficos. A atividade farmacológicas de um composto ou combinação pode, por exemplo, ser demonstrada em um estudo quiral ou em um procedimento de teste in vivo ou in vitro como conhecido na técnica ou como descrito aqui anteriormente.

[00125] Em um aspecto, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade, que é conjuntamente terapeuticamente eficaz na promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo, de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Nesta composição, os parceiros de combinação (a) e (b) são administrados em uma formulação única ou forma de dosagem única por qualquer rotina adequada. A forma de dosagem unitária pode também ser uma combinação fixada.

[00126] Em um outro aspecto, a invenção fornece composições farmacêuticas separadamente compreendendo uma quantidade, que é conjuntamente terapeuticamente eficaz na promoção e/ou realce de

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31/84 uma resposta imune em um indivíduo, de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, que é administrada concorrentemente ou separadamente, ou administrada sequencialmente.

[00127] As composições farmacêuticas para administração separada dos parceiros de combinação, ou para a administração em uma combinação fixada, isto é, uma composição galênica única compreendendo (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, podem ser preparadas de uma maneira conhecida na técnica e são aquelas adequadas para administração entérica (tal como oral ou retal) e/ou parentérica aos indivíduos e compreendendo a quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um parceiro de combinação apenas, por exemplo, como indicado acima, ou em combinação com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.

[00128] A nova composição farmacêutica pode conter de cerca de 0,1% a cerca de 99,9%, por exemplo, de cerca de 1% a cerca de 60%, do(s) ingrediente(s) ativo(s).

[00129] Em algumas modalidades de acordo com qualquer das modalidades precedentes, o indivíduo tem pelo menos 65 anos de idade.

[00130] Em algumas modalidades, o indivíduo tem insuficiência cardíaca congestiva, [00131] Em algumas modalidades, o indivíduo tem diabetes melito. [00132] Em algumas modalidades, o indivíduo tem insuficiência renal crônica.

[00133] Em algumas modalidades, o indivíduo é um fumante atual. [00134] Em algumas modalidades, o indivíduo tem COPD.

[00135] A doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) é uma doença pulmonar caracterizado por obstrução crônica do fluxo de ar pulmonar que interfere na respiração normal e não é totalmente reversível.

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Os termos mais familiares bronquite crônica e efisema não são mais usados, porém são agora incluídos dentro do diagnóstico da COPD. A COPD não é simplesmente uma tosse de fumante, mas uma doença pulmonar, com risco de vida, subdiagnosticada. Um diagnóstico de COPD é confirmado por um teste simples chamado espirometria, que mede quão profundamente uma pessoa pode respirar e quão rápido o ar pode entrar e sair dos pulmões. Tal diagnóstico deve ser considerado em qualquer paciente que tem sintomas de tosse, produção de esputo, ou dispineia (respiração trabalhosa ou difícil), e/ou uma história de exposição a fatores de risco para a doença. Quando a espirometria está indisponível, o diagnóstico da COPD deve ser feito usando todas as ferramentas disponíveis. Os sintomas e sinais clínicos, tais como falta de ar anormal e aumento do tempo expiratório forçado, podem ser usados para ajudar no diagnóstico. Um fluxo de pico é consistente com a COPD, mas pode não ser específico à COPD, porque el epode ser causado por outras doenças pulmonares e por mau desempenho durante o teste. Tosse crônica e produção de esputo, frequentemente, precedem o desenvolvimento da limitação do fluxo de ar por muito anos, embora nem todos os indivíduos com tosse e produção de esputo venham a desenvolver a COPD.

[00136] Em algumas modalidades, o indivíduo reside em uma clínica de repouso facility.

[00137] Em algumas modalidades, o indivíduo é residente em uma casa assistida.

[00138] Em algumas modalidades, o indivíduo reside em uma casa de repouso especializada.

[00139] Em algumas modalidades, o indivíduo reside em uma casa de reabilitação.

[00140] Em algumas modalidades, o indivíduo requer assistência com uma ou mais atividades no dia a dia.

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33/84 [00141] As atividades no dia a dia (ADL) são atividades de rotina que aquela pessoa tende a fazer a cada dia sem necessidade de assistência. Há seis ADLs básicas: comida, banho, se vestir, ir ao banheiro, transferência (caminhar) e continência. A capacidade do indivíduo de realizar as ADLs é importante para determinar que tipo de cuidado de longo prazo (por exemplo, cuidado em casa ou cuidado na casa de repouso) e cobertura das necessidades individuais (isto é, Medicare, Medicaid ou cuidado seguro de longo prazo).

[00142] As ADLs (atividades do dia a dia): coisas que normalmente fazemos diariamente, incluindo qualquer atividade diária que realizamos para cuidados pessoais tais como cozinhar, se alimentar, tomar banho, se vestir, se arrumar, trabalhar, afazeres domésticos, e lazer. A capacidade ou incapacidade de realizar as ADLs pode ser usada como uma medição muito prática de capacidade/incapacidade em muitos distúrbios.

[00143] Em algumas modalidades, o indivíduo tem incapacidade de mobilidade.

[00144] A incapacidade ou dificuldade de mobilidade refere-se à capacidade prejudicada de uma pessoa usar um ou mais de suas extremidades, ou uma diminuição da força necessária para andar, apertar, ou levanter objetos. O uso de uma cadeira de rodas, muletas, ou um andador pode ser utilizado para auxiliar na mobilidade. A dificuldade de mobilidade pode ser causada por vários fatores, tal como a sarcopenia relacionada com o envelhecimento, doença, um acidente, ou um distúrbio congênito e pode ser o resultado de comprometimento muscular, neuromuscular or ortopédico.

[00145] As composições farmacêuticas que compreendem um composto ou combinação descrita, incluindo as combinações fixadas ou combinação não fixadas, para adminnistração entérica ou parentérica são, por exemplo, aquelas em forma de dosagem unitária, tais

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34/84 como comprimidos revestidos de açúcar, comprimidos, cápsulas ou supositórios, ou ampolas. Se não forem indicados de outra forma, estes são preparados de uma maneira conhecida na técnica, por exemplo, por meio de várias técnicas de mistura, cominutação, granulação, revestimento de açúcar, dissolução, processo de liofilização, ou fabricação convencionais facilmente evidenciadas para aqueles versados na técnica. Será apreciado que o conteúdo unitário de um parceiro de combinação contido em uma dose individual de cada forma de dosagem não precisa em si contituir uma quantidade eficaz, visto que a quantidade eficaz necessária pode ser alcançada por administração de várias unidades de dosagem. Será também apreciado que o conteúdo unitário de um parceiro de combinação para administração parenteral pode conter uma quantidade de dosagem maior do parceiro de combinação que é diluído na quantidade de dosagem eficaz antes da administração.

[00146] Uma forma de dosagem unitária contendo a combinação de agentes ou agentes individuais da combinação de agentes pode ser na forma de microcomprimidos fechados dentro de uma cápsula, por exemplo, uma cápsula de gelatina. Para isto, uma cápsula de gelatina como a que é empregada nas formulações farmacêuticas pode ser usada, tal como a cápsula de gelatina dura conhecida como CAPSUGEL™, disponível por Pfizer.

[00147] As formas de dosagem unitária da presente invenção podem opcionalmente também compreender veículos ou excipientes convencionais usados para produtos farmacêuticos. Os exemplos de tais veículos incluem, porém não são limitados a desintegrantes, ligantes, lubrificantes, deslizantes, estabilizas, e cargas, diluentes, corantes, sabores, e preservativos. Alguém versado na técnica pode selecionar um ou mais dos veículos acima mencionados em relação às propriedades desejadas particulares da forma de dosagem por esperi

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35/84 mentação de rotina e sem qualquer ônus indevido. A quantidade de cada veículo usado pode variar dentro de faixas convencionais na técnica. As referências seguintes que são todas, desse modo, incorporadas por técnicas de descrição de referência e excipientes usados para formular as formas de dosagem oral. Veja The Handbook of Pharmaceutical Excipients, 4^Q edição, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals Association (2003); e Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 20^Q edição, Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2003).

[00148] Estes veículos convencionais adicionais opcionais podem ser incorporados na forma de dosagem oral incorporando-se um ou mais veículos convencionais na mistura antes ou durante a granulação por fusão ou combinando-se um ou mais veículos convencionais com os grânulos na forma de dosagem oral. Na última modalidade, a mistura combinada pode ser também misturada, por exemplo, através de um misturador de V, e subsequentemente comprimida ou moldada em um comprimido, por exemplo, um comprimido monolítico, encapsulado por uma cápsula, ou carregado em um sachê.

[00149] Os exemplos de farmaceuticamente aceitável desintegrantes incluem, porém não são limitados a, amidos; argilas; celuloses; alginates; gomas; polímeros reticulados, por exemplo, crospovidona ou polivinil pirrolidona de ligação cruzada, por exemplo, POLYPLASDONE XL™ de International Specialty Products (Wayne, NJ); de ligação cruzada carboximetilcelulose sódica ou croscarmelose sódica, por exemplo, AC-DI-SOL™ de FMC; e de carboximetilcelulose de cálcio de ligação cruzada; polissacarídeos de soja; e goma guar. O desintegrante pode estar presente em uma quantidade de cerca de 0% a cerca de 10% em peso da composição. Em uma quantidade, o desintegrante é presente em uma quantidade de cerca de 0,1% a cerca de 5% em peso da composição.

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36/84 [00150] Os exemplos de ligantes farmaceuticamente aceitável incluem, porém não são limitados a amidos; celuloses e derivados dos mesmos, por exemplo, celulose microcristalina, por exemplo, AVICEL PH™ de FMC (Filadélfia, PA), hidroxipropil celulose hidroxiletil celulose e hidroxilpropilmetil celulose METHOCEL™ de Dow Chemical Corp. (Midland, Ml); sacarose; dextrose; xarope de milho; polissacarideos; e gelatina. O aglutinante pode estar presente em uma quantidade de cerca de 0% a cerca de 50%, por exemplo, 2 a 20% em peso da composição.

[00151] Exemplos de farmaceuticamente aceitável, lubrificantes e deslizantes farmaceuticamente aceitável incluem, porém não são limitados a, silica coloidal, trissilicato de magnésio, amidos, talco, fosfato de cálcio tribásico, estearato de magnésio, estearato de alumínio, estearato de cálcio, carbonato de magnésio, óxido de magnésio, polietileno glicol, celulose pulverizada e celulose microcristalina. O lubrificante pode estar presente em uma quantidade de cerca de 0% a cerca de 10% em peso da composição. Em uma quantidade, o lubrificante pode estar presente em uma quantidade de cerca de 0,1% a cerca de 1,5% em peso da composição. O deslizante pode estar presente em uma quantidade de cerca de 0,1 % a cerca de 10% em peso.

[00152] Os exemplos de cargas farmaceuticamente aceitáveis e diluentes farmaceuticamente aceitável incluem, porém não são limitados a, açúcar de confeiteiro, açúcar compressível, dextratos, dextrina, dextrose, lactose, manitol, celulose microcristalina, celulose pulverizada, sorbitol, sacarose e talco. A carga e/ou diluente, por exemplo, pode estar presente em uma quantidade de cerca de 0% a cerca de 80% em peso da composição.

[00153] As relações ideais, as dosagens individuais e combinadas, e concentrações do agente terapêutico que produzem eficácia sem toxicidade são com base na cinética da disponibilidade do agente te

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37/84 rapêutico para alvejar sitos, e são determinadas usando métodos conhecidos por aqueles versados na técnica.

[00154] De acordo com a presente invenção, a quantidade terapeuticamente eficaz de cada de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo pode ser administrada simultaneamente ou sequencialmente e em qualquer ordem, e os componentes podem ser administrados separadamente ou como uma combinação fixada. Por exemplo, em um aspecto, a invenção fornece um método de prevenir ou tratar uma infecção ou doença relacionada com idade de acordo com a invenção que pode compreender (i) a administração do primeiro agente (a) em forma de sal ou livre farmaceuticamente aceitável, e (ii) a administração de um agente (b) em forma de sal ou livre farmaceuticamente aceitável, simultaneamente ou sequencialmente em qualquer ordem, em quantidades conjuntamente terapeuticamente eficazes, em algumas modalidades em quantidades sinergicamente eficazes, por exemplo, em dosagens diárias ou intermitentes que correspondem às quantidades descritas aqui. Os agentes terapêuticos individuais podem ser administrados separadamente em diferentes momentos durante o curso da terapia ou concorrentemente em formas de combinação únicas ou divididas. Além disso, o termo administrando também abrange o uso de um prófármaco de um agente terapêutico que se converte in vivo no agente terapêutico. A presente Invenção deve, consequentemente, ser entendida como abrangendo todos os tais regimes de tratamento simultâneo e alternado e o termo administração deve ser interpretado consequentemente.

[00155] A dosagem eficaz de cada dos agentes terapêuticos ou combinação dos mesmos pode variar dependendo do agente terapêutico particular ou composição farmacêutica empregada, o modo de

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38/84 administração, a condição a ser tratada, e a gravidade da condição sendo tratada. Desse modo, o regime de dosagem é selecionado de acordo com vários fatores incluindo a rotina de administração e a função renal e hepatica do paciente. Um clínico ou médico versado na técnica pode facilmente determinar e prescrever a quantidade eficaz dos ingredientes ativos únicos requeridos para aliviar, contrariar ou prender o progresso da condição.

[00156] Em modalidades onde dois agentes terapêuticos são usados em combinação, a dosagem eficaz de cada dos agentes terapêuticos pode requerer mais frequentemente a administração de um dos agentes terapêuticos em comparação com o(s) outro(s) agente(s) terapêutico(s) na combinação. Consequentemente, para permitir dosagem apropriada, os produtos farmacêuticos embalados podem conter uma ou mais formas de dosagem que contêm a combinação de compostos, e uma ou mais formas de dosagem que contêm um do(s) agente(s) da combinação de agente(s) terapêutico(s), porém não o(s) outro(s) agente(s) terapêutico(s) da combinação.

[00157] Quando a combinação de agentes terapêuticos, tal como uma combinação de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; e (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é aplicada na forma como comercializada como fármacos únicos, sua dosagem e modo de administração podem ser de acordo com a informação fornecida no rótulo da embalagem do respectivo fármaco comercializado, se não mencionado aqui de outra forma.

[00158] Em algumas modalidades, RAD001, por exemplo, sua forma livre, é administrado oralmente em uma dose na faixa de cerca de 0,01 mg a cerca de 1 mg diariamente e/ou semanalmente. Em algumas modalidades, a dosagem de RAD001, particularmente sua forma livre, é administrada oralmente em uma dosagem de 0,1 mg diariamente a uma pessoa adulta.

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39/84 [00159] Em algumas modalidades, BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, por exemplo, seu sal de ptoluenossulfonato, é administrado oralmente em uma dose na faixa de cerca de 1 mg a cerca de 20 mg diariamente ou cerca de 1 mg a cerca de 50 mg diariamente e/ou semanalmente. Em algumas modalidades, a dosagem de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, tal como seu sal de p-toluenossulfonato, é administrada, por exemplo, oralmente, em uma dosagem de cerca de 10 mg diariamente a uma pessoa adulta, tal como uma pessoa de 65 anos de idade ou mais. Em algumas modalidades, a dosagem de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é de cerca de 2 mg a cerca de 19 mg, cerca de 3 mg a cerca de 17 mg, cerca de 4 mg a cerca de 16 mg, cerca de 5 mg a cerca de 15 mg, cerca de 6 mg a cerca de 14 mg, cerca de 7 mg a cerca de 13 mg, cerca de 8 mg a cerca de 12 mg, ou cerca de 9 mg a cerca de 11 mg. Em algumas modalidades, a dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é de cerca de 1 mg, cerca de 2 mg, cerca de 3 mg, cerca de 4 mg, cerca de 5 mg, cerca de 6 mg, cerca de 7 mg, cerca de 8 mg, cerca de 9 mg, cerca de 10 mg, cerca de 11 mg, cerca de 12 mg, cerca de 13 mg, cerca de 14 mg, cerca de 15 mg, cerca de 16 mg, cerca de 17 mg, cerca de 18 mg, cerca de 19 mg, cerca de 20 mg, cerca de 25 mg, cerca de 30 mg, cerca de 35 mg, cerca de 40 mg, cerca de 45 mg, ou cerca de 50 mg. Em algumas modalidades, ο BEZ235 é administrado oralmente como seu sal de p-toluenossulfonato. Em algumas modalidades, BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é administrado duas vezes por dia, uma vez por dia, uma vez a cada dois dias, uma vez a cada três dias, uma vez a cada quatro dias, uma vez a cada cinco dias, uma vez a cada seis dias, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vês a cada três semanas,uma vez a cada quatro semanas, uma vez por mês, uma vez a cada dois meses, uma vês a

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40/84 cada três meses, uma vez a cada quatro meses, uma vez a cada seis meses, ou uma vez por ano.

[00160] A dosagem ideal de cada agente terapêutico para promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo e/ou tratamento de uma condição relacionada com idade em um indivíduo pode ser determinada empiricamente para cada indivíduo usando métodos conhecidos e dependerá de vários fatores, incluindo, embora não limitados a, o grau de avanço da doença; a idade, peso corporal, saúde geral, gênero e dieta do indivíduo; do tempo e da rotina de administração; e de outros medicamentos que o indivíduo está tomando. As dosagens ideais podem ser estabelecidas usando teste de rotina e procedimentos que são bem conhecidos na técnica.

[00161] A quantidade de cada agente terapêutico que pode ser combinada com os materiais veículo para produzir uma forma de dosagem única variará dependendo do indivíduo tratado e do modo particular de administração. Em algumas modalidades, as formas de dosagem unitárias contendo a combinação de agentes terapêuticos como descrito aqui conterá as quantidades de cada agente da combinação que são administradas quando os agentes terapêuticos são administrados sozinhos.

[00162] A frequência de dosagem pode variar dependendo do agente terapêutico usado e da condição particular a ser tratada. Em geral, o uso da dosagem minima que é suficiente para fornecer terapia eficaz é preferido. Os pacientes podem geral mente ser monitorados quanto à eficácia terapêutica usando ensaios adequados para a condição sendo tratada, que será familiar àqueles versados na técnica.

[00163] Em um aspecto, a presente invenção fornece um método de promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo compreendendo administração a um indivíduo com necessidade do mesmo (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mes

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41/84 mo; (b) BEZ235, ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo em uma quantidade que é terapeuticamente eficaz ou conjuntamente terapeuticamente eficaz na promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo.

[00164] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de tratamento de uma condição relacionada com idade em um indivíduo, compreendendo administração a um indivíduo com necessidade do mesmo uma quantidade de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo em uma quantidade que é terapeuticamente eficaz ou conjuntamente terapeuticamente eficaz para tratar uma condição relacionada com idade, tal como imunossenescência.

[00165] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo compreendendo administração a um indivíduo com necessidade do mesmo BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em uma quantidade que é terapeuticamente eficaz na promoção e/ou realce de uma resposta imune em um indivíduo, tal como uma resposta imune inata.

[00166] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de tratamento de uma condição relacionada com idade em um indivíduo, compreendendo administração a um indivíduo com necessidade do mesmo uma quantidade de BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo em uma quantidade que é terapeuticamente eficaz para tratar uma condição relacionada com idade, tal como imunossenescência.

[00167] Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c)

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42/84 uma combinação do mesmo para o realce e/ou promoção de uma resposta imune e/ou para a preparação de um medicamento para o realce e/ou promoção de uma resposta imune.

[00168] Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo para o tratamento de uma condição relacionada com idade e/ou para a preparação de um medicamento para o tratamento de uma condição relacionada com idade, tal como imunossenescência.

[00169] Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para o realce e/ou promoção de uma resposta imune e/ou para a preparação de um medicamento para o realce e/ou promoção de uma resposta imune, tal como uma resposta imune inata.

[00170] Em outro aspecto, a presente invenção fornece o uso de BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para o tratamento de uma condição relacionada com idade e/ou para a preparação de um medicamento para o tratamento de uma condição relacionada com idade, tal como imunossenescência.

[00171] Em um aspecto, a presente invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo como ingredientes ativos (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo juntamente com instruções para o uso simultâneo, separado ou sequencial do mesmo no realce e/ou tratamento de uma resposta imune.

[00172] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo como ingredientes ativos (a) RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b)

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BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo juntamente com instruções para o use simultâneo, separado ou sequencial do mesmo no tratamento de uma condição relacionada com idade, tal como imunossenescência.

[00173] Em um aspecto, a presente invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e instruções para o uso simultâneo, separado ou sequencial com BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, no realce e/ou promoção de uma resposta imune.

[00174] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo RAD001, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e instruções para o uso simultâneo, separado ou sequencial com BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, no tratamento de uma condição relacionada com idade, tal como imunossenescência.

[00175] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e instruções para o uso simultâneo, separado ou sequencial com RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, no realce e/ou promoção de uma resposta imune, tal como uma resposta imune inata.

[00176] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e instruções para o uso simultâneo, separado ou sequencial com RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, no tratamento de uma condição relacionada com idade, tal como imunossenescência.

[00177] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e instruções para uso no realce e/ou pro

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44/84 moção de uma resposta imune, tal como uma resposta imune inata. [00178] Em outro aspecto, a presente invenção fornece uma embalagem comercial compreendendo BEZ235, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e instruções para uso no tratamento de uma condição relacionada com idade, tal como imunossenescência.

Infecções Patogênicas [00179] Em outro aspecto, os métodos fornecidos aqui podem ser usados para tratar ou prevenir uma infecção por um patógeno em um indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo é imunodeficiente. Em algumas modalidades, o indivíduo é imunoscenessente. Em algumas modalidades, o patógeno é um patógeno viral, por exemplo, um patógeno viral, por exemplo, HIV, virus que causam meningite, vírus que causam encefalite, Hepatite A, Hepatite B, Hepatite C, vírus da raiva, vírus da poliomielite, vírus da influenza, vírus da parainfluenza, adenovirus, rinovírus, vírus do sarampo, vírus da caxumba, rubéola, coqueluche, papiloma vírus, vírus da febre amarela, vírus cincicial respiratório, parvovirus, vírus de Norwalk, vírus da chikungunya, vírus da febre hemorrágica incluindo vírus Ebola, vírus da dengue, vírus da Zika, e vírus da Herpes, por exemplo, varicela, citomegalovírus e vírus da Epstein-Barr. Em algumas modalidades, a infecção é uma infecção viral, tal como uma infecção viral crônica. Em algumas modalidades, uma infecção viral crônica é selecionada de Hepatite A, Hepatite B, Hepatite C, Vírus de Epstein-Barr, HIV, Citomegalovírus, Vírus do Herpes Simplex 1, Vírus do Herpes Simplex 2, Papilomavírus Humano, Adenovirus, e Herpesvirus Associado com Sarcoma de Kaposi. Em algumas modalidades, uma infecção viral crônica compreende HIV.

[00180] Por exemplo, Lichterfeld e colegas observaram que células CD8T+ T específicas de HIV mostraram comprimento reduzido de telômero e um aumento em comprimento de telômero e atividade de telomerase na inbição de PD-1 (veja, por exemplo, Lichterfeld, M et al.

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45/84 (2008) Blood 112(9):3679- 3687). Em outro exemplo, PD-1 foi significantemente superregulada em linfócitos T citotóxico CD8+ específicos de hepatite C (HVC) (veja, por exemplo, Golden-Mason, L (2007) J. Virol. 81(17): 9249-9258).

[00181] Em algumas modalidades, uma infecção viral compreende uma infecção do trato respiratório viral. Em algumas modalidades, a infecção do trato respiratória viral é uma infecção do trato respiratório viral superior. Em algumas modalidades, a infecção do trato respiratória viral é uma infecção do trato respiratório virl infeior. Em algumas modalidades, a infecção do trato respiratória viral é causada por um rhinovirus, coronavirus, influenza vírus, vírus cincial respiratório (RSV), adenovirus, metapneumovírus, enterovirus, bocavírus paramyxovirus, e/ou vírus da parainfluenza. Em algumas modalidades, uma infecção do trato respiratório viral é pneumonia. Em algumas modalidades, uma infecção do trato respiratório viral inclui um abcesso pulmonar. Em algumas modalidades, uma infecção do trato respiratório viral inclui bronquite.

[00182] Em algumas modalidades, o patógeno é um patógeno bacteriana, por exemplo, um patógeno bacteriana selecionado de Meningococcus, Haemophilus, Pneumococcus, Staphylococcus, Streptococcus, Neisseria, Moraxella, Escherichia coli, Klebsiella, Pseudomonas, Enterobacter, Proteus, Serratia, Legionella, Salmonella, Shigella, Acinetobacer, Listeria, Chlamydia, e Mycobacterium, entre outros.

[00183] Em algumas modalidades, o patógeno é um patógeno parasitário, por exemplo, Toxoplasma, Leishmania e malaria, T. cruzii, Helminth, por exemplo, Schistosoma.

[00184] Em algumas modalidades, o patógeno é um patógeno de levedura ou fúngico, por exemplo, Candida, Cryptococcus, Coccidioides, Blastomyces, aspergillus ou mucormycetes.

Senescência e Outros Distúrbios

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46/84 [00185] Em outro aspecto, os métodos fornecidos aqui podem ser usados para tratar senescência em um indivíduo. Como usado aqui, o termo senescência é destinado a incluir todos os tipos de envelhecimento. Em algumas modalidades, senescência compreende imunodeficiência, por exemplo, imunossenescência. A imunossenescência inclui resposta imune reduzida à infecção com idade e resulta de involução do timo em linhagens de célula T, resultando em diminuição da produção e exportação de células T (veja, por exemplo, Shimatani, K etal. (2009) PNAS 106 (37):15807-15812). Em algumas modalidades, há um aumento na população de uma população de célula T CD4+ ou CD8+ dependente de idade bona fide definida por uma expressão persistente de PD-1, que inibe as respostas de céçlula T a antígenos (veja, por exemplo, Shimatani, K et al. (2009) PNAS 106 (37):1580715812; Nunes, C et al. (2012) Clinical Cancer Research 18(3):678687). Em algumas modalidades, a senescência compreende senescência celular, em que uma célula não se divide mais. Em algumas modalidades, a imunossenescência relacionada com idade compreende produção diminuída de linfócitos naive por células por célulastronco hematopoiéticas (Chen, Science Signalling, ra75, 2009). A senescência celular é correlacionada com o encurtamento progressivo de telômeros que ocorre com cada divisão celular ou a expressão cellular de p16. Em algumas modalidades, a senescência compreende uma diminuição relacionada com idade na função de neutrófilo, linfócitos, células de NK, macrófagos e/ou células dendrílicas (veja, por exemplo, Boraschi D etal. (2013) Sei Transi Med 5(185):ps8; Kumar R and Burns EA. (2008) Expert Rev. Vaccines 7(4): 467-479.

EXEMPLIFICAÇÃO [00186] Os exemplos seguintes ilustram a invenção descrita acima; eles não são, entretanto, destinados a limitar o escopo da invenção de modo algum. Os efeitos bnéficos dos compostos farmacêuticos, com

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47/84 binaões, e composições da presente invenção podem também ser determinados por outros modelos de teste tal como a uma pessoa versada na técnica pertinente.

Exemplo 1: Dados que apoiam a reivindicação de que BEZ235 não realçam a imunidade específica do antíqeno, porém diminuem as taxas de infecção realçando-se a imunidade inata por meio de superrequlacão de genes induzidos por interferon (ISGs) [00187] Um total de 264 voluntários idosos > 65 anos de idade, sem modificações médicas instáveis, foram inscritos em um ensaio randomizado duplo-cego controlado por placebo. Os indivíduos foram randomicamente designados para receber placebo ou um de quatro regimes de dosagem de inibidor de mTOR por via oral: RAD001: 0,5 mg diariamente, RAD001 0,1 mg diariamente, BEZ235 10 mg diariamente, ou uma combinação de 0,1 mg RAD001 e 10 mg de BEZ235 diariamente. Os indivíduos foram tratados durante 6 semanas com fármaco de estudo e, após um intervalo livre de fármaco de 2 semanas, receberam uma vacina influenza sazonal em 2014 (Fluvax®, CSL Biotherapies). Títulos de anticorpo de inibição de hemaglutinação (HI) para as 3 linhagens de influenza na vacina contra influenza foram medidos em soro coletado em linha de base e quatro semanas após vacinação de influenza. Os títulos de HI de soro foram medidos em Quest Diagnostics. Os indivíduos foram em seguida deixados mais 9 meses livres de fármaco de estudo. A finalidade primária do estudo foi um aumento de

1,2 vezes em relação ao placebo na relação (GMT 4 semanas após vacinação/GMT em linha de base) de título de média geométrica (HI) de inibição de hemaglutinação a pelo menos 2 de 3 linhagens de vacina contra influenza. Esta finalidade foi escolhida porque um aumento de aproximadamente 1,2 vezes na relação de GMT de influenza induzida pelo adjuvante de vacina de MF-59 foi associada com uma diminuição em doença da influenza (1).

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48/84 [00188] Apenas a combinação de dose baixa de RAD001 (0,1 mg diariamente) e BEZ235 (10 mg diariamente) encontru a finalidade primária do estudo e resultou em um aumento maior do que 1,2 vezes estatisticamente significante na relação de GMT de influenza em 3/3 linhagens de vacina contra influenza (Figura 1). A monoterapia de RAD001 (0,1 mg ou 0,5 mg diariamente) resultou em um aumento maior do que 1,2 vezes estatisticamente significante em relação de GMT de influenza em apenas 1/3 linhagens de vacina contra influenza. A monoterapia de BEZ235 não resultou em um aumento em relações de GMT de influenza para qualquer das 3 linhagens de vacina contra influenza. Estes resultados sugerem que uma combinação de um inibidor de mTOR alostérico (RAD001) e catalítico (BEZ235) de dose baixa resultou em melhoria em resposta de vacinação de influenza maior do que monoterapia de RAD001 ou BEZ235.

[00189] Como uma avaliação adicional de função imune, a taxa geral de infecção em cada grupo de tratamento foi avaliada fazendo com que os indivíduos registrassem quaisquer infecções que eles tivessem experimentado durante o ano após o início do tratamento com o fármaco de estudo e uma agenda que foi revisada pelos pesquisadores do estudo em cada visita de estudo. O número de infecções por pessoa por ano foi significativamente diminuído em relação a placebo nos indivíduos na combinação de RAD001 0,1 mg + BEZ235 10 mg e na monoterapia de grupos de tratamento de BEZ235 (Tabela 1). Além disso, a taxa de infecções de trato urinário (Tabela 2) e as infecções de dente e gengiva (Tabela 3) foram menores na de monoterapia de BEZ235 e grupos de tratamento de RAD001 + BEZ235 do que nos grupos de tratamento de monoterapia de placebo ou RAD001.

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Tabela 1: BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 foi associada com um redução significante nas taxas de infecção durante um ano após a administração de fármaco de estudo

Taxa de infecção/pessoa durante um ano após administração de fármaco de estudo

RAD001 0,1 mg diariamente	RAD001 0,5 mg diariamente	BEZ235 10 mg diariamente	RAD001 0,1 mg e BEZ23510 mg diariamente	Placebo
2,0	2,1	1,8*	1 7**	2,5

*p=0,015; **p=0,003

Tabela 2: BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 foi associada com uma redução na porcentagem de indivíduos com infecções de trato urinário durante um ano após a administração de fármaco de estudo

Porcentagem de indivíduos com infecções do trato urinário durante um ano após o a administração de fármaco de estudo

RAD001 0,1 mg diariamente N=51	RAD001 0,5 mg diariamente N=46	BEZ235 10 mg diariamente N=46	RAD001 0,1 mg e BEZ23510 mg diariamente N=53	Placebo N=48
10	11	4	0	12

Tabela 3: BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 foi associada com uma redução na taxa de infecções de dnete e gengiva durante um ano após a administração de fármaco de estudo

Número de infecções no dente ou gengiva por pessoa durante um ano após a administração do fármaco de estudo

RAD001 0,1 mg diariamente	RAD001 0,5 mg diariamente	BEZ235 10 mg diariamente	RAD001 0,1 mg e BEZ235 10 mg diariamente	Placebo
0,02	0,02	0,02	0,04	0,13

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50/84 [00190] A taxa de infecções durante as 6 semanas que os indivíduos foram tratados com fármaco de estudo foi também examinada. As principais infecções que ocorreram durante as 6 semanas de tratamento com o fármaco de estudo foram infecções no trato respiratório. Tanto BEZ235 quanto RAD001 + BEZ235 levam a uma redução na incidência e gravidade das infecções do trato respiratório durante as 6 semanas que os indivíduos foram tratados com fármaco de estudo (Figura 2).

[00191] Para explorar os possíveis mecanismos pelos quais a combinação de taxas de infecção reduzidas por terapia de combinação de RAD001 + BEZ235 ou monoterapia de BEZ235 de baixa dose nos idosos, o perfil de expressão de gene de RNAseq foi realizada em sangue total obtido de indivíduos em linha de base e após 6 semanas de tratamento de placebo, BEZ235 or RAD001 + BEZ235. A análise de RNAseq de sangue total revelou um enriquecimento altamente significativo de série de reações relacionada à sinalização de interferon (Figura 3). Alguns dos genes cuja expressão foi mais altamente superregulada na vias enriquecida incluíram um conjunto de genes de Tipo 1 induzidos por interferon (ISGs) que desempenham um papel crítico na resposta imune a vírus (Tabela 4) (2). Estas descobertas sugerem que a superregulação de um conjunto de sistema imune e genes induzidos por interferon por terapia de combinação de BEZ235 + RAD001 e/ou BEZ235 de baixa dose realça a função imune e, desse modo, reduz as taxas de infecção nos idosos.

Perfil de expressão de gene por RNASeq [00192] As amostras de sangue venoso periférico foram coletadas em tubos PAXgene Blood RNA. O RNA total foi purificado a partir de sangue coletado de PAXgene e q qualidade e a produção do RNA isolado avaliadas usando um Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, Estados Unidos da América). As bibliotecas, de

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RNA-Seq foram preparadas a partir do RNA usando o Illumina TruSeq Stranded Total RNA com o kit Ribo-Zero Globin. Este kit realizou a remoção de RNA ribossômico e mRNA da globina em uma etapa única. As bibliotecas obtidas foram sequenciadas usando a plataforma de Illumina HiSeq2500 em modo de final emparelhado a um comprimento de leitura 2x76 pares de base (bp). As imagens do instrumento foram processadas usando o software do fabricante para gerar Arquivos de sequência de FASTQ.

[00193] A qualidade de leitura foi avaliada executando-se o FasQC (versão 0,10) nos arquivos FASTQ. As leituras de sequenciamento mostraram excelente qualidade, com um escore médio de Phred maior do que 30 durante todas as posições de base. Uma média de 100 milhões de leituras de final emparelhado de 76bp por amostra foi mapeada para o genoma de Homo sapiens (versão GRCh38) e RefSeq UCSC foi usado para gene humano e anotação de transcrição. Uma tubulação de quantificação de gene interna foi usada para determinar o número de mapeamento de contagens para cada gene (Schuierer,

S. & Roma, G. The exon quantification pipeline (EQP): a comprehensive approach to the quantification of gene, exon and junction expression from RNA-seq data. Nucleic acids research (2016)). Em média, 88% das leituras totais foram mapeados para o genoma ou as transcrições, e 30% das leituras alinhadas mapeadas para sequências expressas. As amostras com menos do que oito milhões de leituras expressas foram removidas de outra análise, bem como três amostras que demonstram um desequilíbrio de filamento.

Análise de Expressão de Gene Diferencial de RNASeq [00194] Qualquer gene com uma expressão média de menos do que uma contagem por milhão em qualquer tratamento/condição de tempo foi considerado indetectável e removido de outra análise. Os dados de contagem para os genes restantes foie m seguida normali

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52/84 zado no software R Statistical Computing (v3.1.3) usando o procedimento de normalização Voom localizado na embalagem limma (Law, CW, Chen, Y, Shi, W, e Smyth, GK (2014). Voom: precision weights unlock linear model analysis tools for RNA-seq read counts. Genome Biology 15, R29.).

[00195] Na avaliação da qualidade técnica dos dados, realizou-se uma análise de componente de princípio usando a função de prcomp em R. Esta análise indicou que o primeiro componente principal refletiu aspectos de processamento de amostra (batelada de extração de RNA, produção de mRNA, etc). Desse modo, incluiu-se o valor deste componente principal como um ajuste para a variação técnica em análise subsequente.

[00196] Para cada gene, o modelo misturado linear seguinte foi ajustado aos dados de expressão normalizados por voom, ajustando para covariáveis relevantes (idade, gênero, e BMI) bem como PC1 usando o software SAS v9.3.

[00197] dados misturados de proc = exprsData anovaf;

[00198] classe SubjID Day Trt Gender;

[00199] modelo Iog2exprs = Day Trt Day*Trt PC1 Age Gender Bmi / solução DDFM=KenwardRoger;

[00200] Dia / tipo repetido = um indivíduo =SubjlD;

[00201] por gene;

[00202] onde Iog2exprs refere-se à mediçãpo de expressão normalizada de voom; Day refere-se ao momento em que a amostra foi tomada (pré- ou pós-dose); Trt refere-se ao grupo de tratamento do indivíduo; PC1 refere-se ao valor de PC1 para aquela amostra; Age refere-se à idade do indivíduo; Gender refere-se ao sexo do indivíduo; Bmi refere-se ao índice de massa corporal do indivíduo; e SubjlD refere-se ao ID do indivíduo. As mudanças de duplicação de expressão diferencial e valores de p foram obtidos usando a declaração de estimativa de

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SAS. Esta análise resultou em assinaturas de resposta de expressão de gene para cada dos braços de tratamento (BEZ, RAD+BEZ, e Placebo). Estas assinaturas de expressão de gene consistiam na mudança de duplicação de pós- vs pré-tratamento e valores de p para cada tratamento.

Análise de Enriquecimento de Série de Reações de Expressão de Gene de RNASeq [00203] Para esta análise, procurou-se por estabilização de genes superregulada ou subregulada em série de reações biológica definida dentro de cada assinatura de resposta de tratamento. As vias canônicas (c2.cp.v5.0.entrez.gmt) foram baixadas dos dados de base de assinatura canônicos (http://software.broadinstitute.org/gsea/msigdb/). As assinaturas foram definidas como descrito na seção Análise de Expressão Diferencial de RNASeq. Para cada série de reações e assinatura de resposta de tratamento, um teste de KS ponderado foi realizado como previamente descrito (Subramanian et al. Gene set enrichment analysis: A knowledge-based approach for interpreting genomewide expression profiles. Proc. Nat. Acad. Sci. volume 102. N^Q 43. 15545-15550 2005) e o Iog10 (valores de p) resultante são plotados como uma função de mudança de duplicação dos genes na série de reações na Figura 3.

Expressão de gene de RNASeq - Designação de genes superregulados [00204] Os genes foram considerados superregulados se sua mudança de duplicação foi determinada ser um outlier usando o método de Tukey de detecção de outlier. Especificamente, um gene superregulado encontra os seguintes critérios: log2(FC pós- vs prétratamento) maior do que Q3 + 1,5*(Q3-Q1) em que Q3 é o quartil superior (isto é, terceiro) Q1 o quatril inferior (isto é, primeiro) de log2(FC) para cada tratamento.

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Tabela 4: genes de série de reações superregulados na grupos de monoterapia de BEZ235 e terapia de combinação de BEZ235 + RAD001

Legenda: Tratamento; Homem; Genes; Série de reações; Valor de p de distorção de superregulação; Genes superregulados.

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55/84 [00205] A descoberta de que a monoterapia de BEZ235 não melhorou a resposta à vacinação de influenza, porém diminuiu as taxas de infecção, foi total mente inesperada. A resposta de vacinação de influenza é uma leitura de imunidade adaptativa específica de antígeno. Desse modo, estas descobertas sugerem que BEZ235, ao contrário de RAD001, não melhora a resposta imune aos antígenos específicos. Em vez disso, BEZ235, bem como a combinação de BEZ235 + RAD001, pode reduzir as taxas de infecção melhorando-se a resposta imune inata não específica de antígeno a múltiplos patógenos por meio de superregulação de expressão de ISG.

Examplo 2: RAD001 + BEZ235 pode ter eficácia maior do que monterapia de RAD001 ou de BEZ235 para melhorar a resposta à vacinação nos idosos (uma finalidade relacionada com a idade) porque a combinação resulta na inibição de TORC1 mais completa e seletiva do que cada monoterapia [00206] O envelhecimento pode ser devido a perturbações de um conjunto discreto de vias de sinalização de célula incluindo a série de reaações de mTOR. A mTOR sinaliza por meio de dois complexos: TORC1 e TORC2. Muitos dos efeitos benéficos de inibição de mTOR sobre o envelhecimento nas espécies pré-clínicas podem ser mediados pela inibição de TORC1 (3,4). Em contraste, a inibição de TORC2 foi associada com hiperglicemia, hipercolesterolemia e com tempo de vida diminuído em camundongos machos (4,5). Além disso, vários modelos de animal de vida longa têm atividade de TORC2 aumentada em vez de diminuída (6). Consequentemente, a inibição específica de TORC1 pode ser ideal para o tratamento de condições relacionadas ao envelhecimento em seres humanos tal como declínio da função imune. Rapálogos tal como RAD001 são uma classe de inibidores de mTOR alostéricos que consistentemente inibem apenas o nódulo de S6K a jusante do complexo de TORC1 (7). As baixas concentrações

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56/84 de BEZ235 tal como foram obtidas no soro de idosos tratados com 10 mg de BEZ235 diariamente (aproximadamente 10 a 20 nM) também inibem consistentemente apenas o nódulo de S6K a jusante de TORC1 (8). Em doses superiores, BEZ235 inibe completamente TORC1, porém também inibe TORC2 (8,9). Entretanto, as baixas doses de inibidores catalíticos em combinação com baixas doses de RAD001 inibem sinergicamente a maioria se não todos os nódulos a jusante de TORC1 sem inibição da atividade de TORC2 (8,10). As descobertas clínicas sugerem que a inibição de TORC1 mais completa e seletiva obtida com uma combinação de RAD001 e BEZ235 de baixa dose é associada com melhor realce de resposta de vacina contra influenza em idosos do que monoterapia de RAD001 ou BEZ235 de baixa dose. Uma combinação de RAD001 e BEZ235 de baixa dose também pode ter melhor eficácia para outras condições relacionadas ao envelhecimento do que monoterapia de RAD001 e/ou BEZ235 devido à inibição de TORC1 mais completa e seletiva da combinação.

Exemplo 3: BEZ235 ou BEZ235 + RAD001 podem ser usados para realçar com segurança a função imune e diminuir as taxas de infecção nos idosos por meio de superrequlacão de baixo nível de um conjunto de genes induzidos por interferon (ISGs) [00207] A magnitude de superregulação de ISG no sangue total após tratamento de monoterapia de BEZ235 ou combinação de RAD001 + BEZ235 foi pequena (1 a 9%). Um aumento de baixo nível na expressão de ISG pode ser suficiente para realçar a função imune e diminuir as taxas de infecção nos idosos ao mesmo tempo em que evitando os eventos adversos indesejados que ocorrem em pacientes tratados com interferon que tem um aumento muito maior na indução de ISG (11). Desse modo, acredita-se que a indução de ISG de baixo nível evita os problemas de segurança e tolerabilidade associados com indução de ISG de alto nível em pacientes tratados com terapia

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57/84 de interferon.

Exemplo 4: Um curso de 6 semanas de BEZ235 ou BEZ235 + RAD001 leva a melhorias persistentes em função imune após a descontinuacão de fármaco [00208] A monoterapia de BEZ235 e a combinação de RAD001 + BEZ235 leva a uma redução significante na taxa de infecção geral durante um ano, apesar do fato de o fármaco de estudo ter sido descontinuado após 6 semanas de tratamento. Os resultados sugerem que ο inibidor da terapia de mTOR pode levar a melhorias persistentes na função imune durantes após a descontinuação do fármaco. Os cursos de curta duração da rapamicina inibidora de mTOR também foram mostrados prolongar o tempo de vida em camundongos, sustentando a concepção de que os efeitos benéficos de inibição transitória de mTOR persistiram durante meses após a descontinuação (12,13).

Exemplo 5: A variabilidade de PK de BEZ235 pode ser mitigada por meio da adminnistracão de doses baixas [00209] Ο BEZ235 foi desenvolvido como um inibidor catalítico de PI3K-mTOR dual para indicações oncológicas. Entretanto, as altas doses de BEZ235 usadas para indicações oncológicas (até a dose máxima tolerada, de 1200 mg diariamente) foram associadas com variabilidade entre pacientes inaceitável mente alta (AUCtau,ss coeficiente de porcentagem de variação (%CV) = 113%). A variabilidade de PK pode ser devido em parte à baixa solubilidade de BEZ235 acima de pH 3. Entretanto, a variabilidade entre pacientes de BEZ235 10 mg diariamente foi aceitável (AUCIast,ss %CV = 39%), possivelmente, porque as baixas doses de BEZ235 são capazes de serem absorvidas no baixo pH do estômago. O aumento da variabilidade de PK de BEZ235 em doses acima de 10 mg diariamente é mostrado na Figura 4.

Exemplo 6: BEZ235 sozinho ou em combinação com RADOOlpode

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58/84 ter efeitos antienvelhecimento amplos por meio da superrequlacão de proteínas de remodelamento de matriz extracelular [00210] O remodelamento de matriz extracelular é um mecanismo comum subjacente a um conjunto diverso de intervenções antienvelhecimento (14). Estas descobertas sugerem que a falta de regeneração da matriz extracelular contribui com o envelhecimento, e aqueles agentes que promovem o remodelamento da matriz extracelular podem ter efeitos benéficos sobre condições relacionadas ao envelhecimento. A proteômica do soro sugere que a monoterapia de BEZ235 ou a terapia de combinação de BEZ235 + RAD001 promove o remodelamento de matriz extracelular. As amostras de soro foram obtidas de indivíduos idosos em linha de base ou após 6 semanas de tratamento com placebo, BEZ235 10 mg diariamente, ou a combinação de BEZ235 10 mg diariamente + RAD001 0,1 mg diariamente. As 6 semanas de monoterapia de BEZ235 ou a combinação de BEZ235 + RAD001, porém não placebo, levam a superregulação altamente significativa (valor de neglogW p de 14,34 para BEZ235 e 13,32 para combinação de BEZ235 + RAD001) na expressão de proteínas envolvidas em desmontagem/remodelamento de matriz extracelular (Figura 5). Estas descobertas sugerem que a monoterapia de BEZ235 ou a combinação de BEZ235 + RAD001 pode ter efeitos antienvelhecimento amplos estimulando-se o remodelamento da matriz extracelular. A monoterapia de BEZ235 ou a combinação de BEZ235 + RAD001 pode ser particularmente eficaz no tratamento de condições relacionadas ao envelhecimento associado com anormalidades associadas com envelhecimento na matriz extracelular de tecidos incluindo insuficiência cardíaca, insuficiência renal crônica e envelhecimento da pele.

Exemplo 7: Ο BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001

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59/84 pode diminuir as infecções do trato respiratório (RTIs) em idosos [00211] Nos Estados Unidos, a pneumonia e a influenza são a 5^â causa principal de morte em pessoas de 85 anos de idade ou mais (National Vital Statistics Report, Deaths, Final Data for 2014, 2016). Além disso, os vírus respiratórios (para os quais atualmente não existe nenhum tratamento eficaz) causam a maioria das pneumonias adquiridas na comunidade nesta população (Jain et al 2015). Além disso, 7% das pessoas > 85 anos de idade vão à emergência com RTIs a cada ano (Goto et al 2016). Finalmente, as hospitalizações para RTIs aumentam o risco de indivíduos com > 85 de idade serem admitidos em uma clínica de repouso. Nos Estados Unidos, apenas 10% das pessoas com idade de 85 a 95 residem em uma clínica de repouso, porém 36% de indivíduos >85 anos que são hospitalizados recebem alta para uma clínica de repouso (The Older Population 2010 US Census Briefs, National Center for Health Statistics Data Brief 2015).

[00212] A prevenção de RTIs é também uma necessidade médica não satisfeita para idosos > 65 anos de idade com fatores de risco subjacentes tais como doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), asma, bronquite crônica, diabtes melito tipo 2 (T2DM), insuficiência cardíaca congestiva (CHF), e tabagismo atual. Por exemplo, as RTIs são a causa mais comum de exarcebações de COPD e asma (Nicholson et al BMJ, 2003; Sethi et al 2008). As RTIs são também a causa subjacente de 16% de internações hospitalares em pacientes com insuficiência cardíaca congestiva (Chin and Goldman 1997). Os pacientes com T2DM também estão em risco aumentado de infecções menores do trato respiratório (Muller et al 2005) e têm um risco aumentado de hospitalização com pneumonia (Kornum et al 2008). O Tabagismo atual também aumenta o risco de desenvolver a pneumonia adquirida em comunidade (Almirall et al 1999). Finalmente, indivíduos que já tiveram pneumonia estão em risco aumentado para pneumonia atual

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60/84 (Hedlund et al 1992).

[00213] Consequentemente, o propósito deste estudo é avaliar a eficácia, tolerabilidade e segurança de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 para suportar a seleção de dose para outro desenvolvimento para reduzir a incidênia de RTIs em idosos em risco aumentado de morbidade ou mortalidade relacionada com RTI.

[00214] Derterminar se os inibidores de mTOR baixa dose diminuem a incidência e gravidade de RTIs em populações idosas de alto risco definidas como idade > 85 anos ou idade > 65 anos que são fumantes atuais, têm COP subjacente, asma, bronquite crônica, CHF, e/ou T2DM, e/ou que foram internados em hospital ou para uma emergência com uma RTI nos últimos 12 meses.

Objetivos e Finalidades Relacionadas

Tabela 5. Objetivos e finalidades relacionadas

Objetivos

Finalidades

Primary Objective • Para avaliar o relacionamento responsável por dose de 2 doses diferentes de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 como medido pela porcentagem de indivíduos que experienciam um ou mais RTIs em comparação com placebo durante 16 semanas de trataEndpoint for Primary Objective • A porcentagem de indivíduos que desenvolveu um ou mais RTIs através da Semana 16 como avaliado por critérios de diagnóstico pré-especificados mento.

Objetivos Secundários • Para avaliar a segurança e tolerabilidade de 2 doses diferentes de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em idosos • Para avaliar a eficácia de

Finalidades para Objetivos Secundários • Todas as finalidades de segurança (incluindo eventos adversos e laboratórios de segurança) até e incluindo 8 semanas após dose.

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BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo na redução da sua incidência de RTIs durante 24 semanas • Para avaliar a eficácia de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo na diminuição da incidência de RTIs virais confirmadas em laboratório durante 16 semanas.

• Para avaliar a farmacocinética (PK) de 2 doses diferentes de BEZ235 fornecido sozinho ou em combinação com RAD001

Objetivos exploratórios • Para explorar o efeito de

BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo sobre a incidência de RTIs em cada dos seguintes subconjuntos de idosos:

• > 85 anos de idade, • > 65 anos de idade com:

• Asma ou • COPD ou bronquite crônica u • T2DM ou • CHFou • Fumante atual ou • A porcentagem de indivíduos que desenvolveu um ou mais RTIs através da Semana 24 como avaliado pelos critérios de diagnóstico clínico préespecificados • Incidência de RTIs virais confirmadas em laboratório através da Semana 16 como avaliado por PCR de vírus respiratório de swabs nasofaríngeas • Para determinar se covariáveis, por exemplo, tamanho do corpo, idade, gênero, raça, função de órgão, efetam a exposição sistêmica a BEZ225 e se estas covariáveis devem ser usadas para ajustar a dosage em estudos futuros.

Finalidades para Objetivos Exploradores • Porcentagem de indivíduos em cada subgrupo que desenvolve um ou mais RTIs através das semanas 16 e 24 como avaliado por critérios de diagnósticos clínicos pré-especificados • Número total de infecções por pessoa através da Semana 16 ou Semana 24 como avaliado por critérios de diagnósticos clínicos pré-especificados • Número total de UTIs por pessoa através da Semana 16 ou Semana 24 como avaliado por critérios de diagnósticos clínicos pré-especificados

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62/84 • Visita à emegência ou hospitalização para RTI dentro dos últimos 12 meses • Para explorar o efeito de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo em taxas de infecção totais durante 16 ou 24 semanas • Para explorar o efeito de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo sobre taxas de infecção de trato urinário (UTI) durante 16 ou 24 semanas • Para explorar o efeito de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo diminuição da gravidade ou duração de sintomas de infecção do trato respiratório superior no subconjuntode indivíduos que desenvolvem infecções do trato respiratório superior • Para explorar o efeito de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 sobre a resposta à vacinação contra influenza no subconjunto de indivíduos que recebem a vacinação contra influenza como parte de seu cuidado de saúde de rotina durante o estudo • Para explorar o efeito de • Severidade e duração de sintomas do trato respiratório superior como avaliado pela Pesquisa do Sintoma Respiratório Superior de Wisconsin curta (WURSS-21) • Mudança no título médio geométrico (GMT) de inibição de hemaglutinação (HI) de linha de base para 4 semanas após vacinação contra influenza • Número de visitas a um médico para sintomas relacionados a infecções; número total de CXRs feito para avaliar as infecções, número total de antibióticos prescritos para infecções; número total de visitas ao ED para infecções; e número total de hospitalizações para infcções através da Semana 16 ou 24 do estudo como avaliado pela revisão do registro médico • Mudança de linha de base na Semana 16 no 6MWT • Mudança de linha de base na Semana 16 na força de preensão como avaliado por um dinamômetro • Mudança de linha de base na Semana 16 na função cardíaca como avaliado por ecocardiograma.

• Mudança de linha de base na Semana 16 na percepção da falta de ar como avaliado por

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BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo na utilização de fontes de cuidado de saúde para infecções • Para explorar o efeito de

BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo sobre a melhora na função física como avaliado pelo teste de caminhada de 6 minutos (6WMT) • Para explorar o efeito de

BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo sobre a força de preensão • Para explorar o efeito de

BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo sobre a função cardíaca • Para explorar o efeito de

BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo sobre a percepção de falta de ar • Para explorar o efeito de

BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo sobre a expressão de gene e circulação de biomarcadores no sangue um questionário administrado antes e após o 6 MWT • Mudança de linha de base na Semana 16 na expressão de gene no sangue total e em biomarcadores solúveis em soro

Planejamento de Estudo [00215] Esta é um estudo de planejamento adaptativode 2 estágios de descoberta de dose, de grupo paralelo, controlado por placebo, ce

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64/84 go, randomizado, de 24 semanas para avaliar a segurança, tolerabilidade e eficácia deduas doses de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo em idosos sem modificações médicas instáveis. Os indivíduos podem ser incluídos se eles estiverem em risco aumentado de uma infecção do trato respiratório como definido por ser >85 anos de idade ou > 65 anos de idade e um fumante atual, ou com subjacente à COPD, asma, bronquite crônica, T2DM, ou CHF e/ou tiverem sido hospitalizados ou avaliados em uma emergência no último ano durante uma RTI. O estudo será composto de um período de análise de 6 semanas, um período de ccilo de 4 semanas, período de tratamento de 16 semanas e um período de acompanhamento de 8 semanas.

[00216] Períodos de Estudo: A duração total planejada do estudo para cada indivíduo é de até 24 semanas, da randomização até a última visita de acompanhamento (Figura 3-1); o tratamento de estudo é adotado durante 16 semanas.

[00217] Período de Análise: Durante a visita de análise (no máximo 6 semanas antes da linha de base/randomização), os indivíduos serão avaliados quanto à elegibilidade para participar do teste com base em critérios de inclusão/exclusão.

[00218] Período em Ciclo: Durante o período em ciclo (no máximo 4 semanas antes da baselina/randomização), os indivíduos que obtiveram os critérios de eligibilidade durante a visita de análise serão inscritos no estudo e virão ao consultório e passarão por um teste de força de preensão manual e teste de caminhada de 6 minutos (6MWT) para familiarizar os indivíduos com este teste e, desse modo, reduzir a variabilidade do teste na visita de linha de base. Aos indivíduos também será administrado um questionário sobre falta de ar antes e após um 6 MWT. Além disso, durante o período em ciclo, os indivíduos passarão por ecocardiografia basal para avaliar a função cardíaca.

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65/84 [00219] Fase de Tratamento Cega: Parte 1 (a ser conduzida realizada no hemisfério norte ou sul) [00220] Fase de Tratamento (16 semanas): na visita de linha de base (Visita 3), indivíduos elegíveis serão randomizados para 1 de 3 grupos de tratamento em uma relação de 1:1:1 [00221] (1) BEZ235 5 mg diariamente [00222] (2) BEZ235 10 mg diariamente [00223] (3) Pareamento de placebo diariamente [00224] Os indivíduos serão tratados durante 16 semanas com fármaco de estudo. Aproximadamente, 56 indivíduos serão inscritos em cada grupo de tratamento para uma incrição total de aproximadamente 168 indivíduos. Supõe-se que haverá aproximadamente uma taxa de abondono de 10%, resultando em aproximadamente 150 indivíduos completando a Parte 1 do estudo (aproximadamente 50 indivíduos em cada ramificação). Se a taxa de abondono for maior do que 10%, as substituições poderão ser inscritas.

[00225] Na visita de linha de base, os indivíduos passarão por avaliação clínica e coleta de sangue para avaliações de segurança de linha de base, EAST (níveis de IgE) e avaliações de biomarcador. Os indivíduos que não receberam ainda sua vacina contra influenza sazonal terão os títulos de influenza tirados. Os indivíduos também passarão por força de preensão, 6MWT e completarão um questionário sobre falta de ar antes e após o 6 MWT na visita de linha de base. Aos indivíduos será fornecida sua primeira dose de fármaco de estudo no consultório e enviados para casa com o fármaco de estudo. Os indivíduos também serão enviados para casa a partir da visita de linha de base com um diário. Os indivíduosos indivíduos serão instruídos a registrar o tempo e o número de cápsulas da medicação de estudo administrada em casa todo dia no diário. Os indivíduos também serão instruídos a registrar qualquer infecção que ocorra entre as visitas no

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66/84 diário. Finalmente, os indivíduos também serão enviados para casa com uma curta Pesquisa de Sintoma Respiratório Superior Wisconsin (WURSS-21) que eles serão instruídos a preencher diariamente se desenvolverem os sintomas de uma infecção do trato respiratório superior até seus sintomas serem resolvidos.

[00226] Após os indivíduos terem tomado o fármaco de estudo durante 1 semana, um telefonema entre os indivíduos e o site deve ocorrer para confirmar que a primeira semana de fármaco de estudo foi bem tolerada. Se o fármaco de estudo não for tolerado durante a primeira semana de tratamento com fármaco de estudo, o pesquisador pode interromper o fármaco de estudo após diálogo com o Monitor Médico resTORbio.

[00227] Desde que o fármaco de estudo continue a ser bem tolerado, os indivíduos serão tratados com fármaco de estudo durante 16 semanas, tempo durante o qual eles retornarão ao consultório a cada 2 semanas (visitas na semana 2, 4, 6 e 8) durante as primeiras 8 semanas, e em seguida a cada 4 semanas (visita na semana 12 e 16) durante as 8 semanas finais para ter avaliações clínicas e coleta de sangue para avaliações de segurança. O sangue também será oletado para avaliações de PK nas visitas da semana 4, 6, e 8. O sangue será coletado para avaliações de biomarcador na linha de base e nas visitas das semanas 6, 16 e 24. Os sites entrarão em contato com os indivíduos duas vezes por semana durante o estudo por telefone ou nas visitas ao site para confirmar que os indivíduos estão tomando o fármaco de estudo conforme o instruído e que o fármaco de estudo continua a ser bem tolerado. Os sites também administrarão um Questionário sobre Infecção do Trato Respiratório durante cada contato e instruirão os indivíduos que desenvolveram 2 ou mais sintomas de infecção do trato respiratório ou um ou mais sintomas de infecção não do trato respiratório a entrar a entrar para uma visita não programada o

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67/84 mais cedo possível de modo que eles possam ser avaliados pelo pesquisador.

[00228] Os indivíduos que vêm ao site para uma visita não programada devido aos sintomas de infecção será avaliada pelos pesquisadores que capturarão sinais e sintomas relevantes da infecção em uma Planilha do Pesquisador de Infecção como descrito no Manual de Operações do Estudo. Os indivíduos que têm sintomas de uma RTI terão um swab nasofaríngeo tomado no consultório. Se os indivíduos não puderem ou não quiserem voltar ao site para uma visita não programada, o pesquisador pode ligar para o indivíduo e completar a Planilha do Pesquisador de Infecção por telefone e obter o swab nasofaríngeo quando o indivíduo entrar para sua visita seguinte. Cuidados medicos apropriados serão fornecidos a todas as infecções. Os indivíduos que requerem cuidados médicos adicionais devem ser encaminhado ao seu médico ou a um hospital se indicado.

[00229] Os indivíduos que recebem uma vacina contra influenza sazonal como parte de seu cuidado com saúde de rotina durante o estudo serão solicitados a voltar ao site para uma visita não programada aproximadamente 4 semanas após sua vacinação contra influenza para ter os títulos de influenza representados.

[00230] Após 16 semanas de tratamento com fármaco de estudo, os indivíduos terão sangue coletado para os laboratórios de segurança e avaliações de biomarcador, e passarão avaliação de força de preensão repetida, 6MWT, e completarão um questionário sobre falta de ar antes e após o 6MWT na vistita da semana 16. Os indivíduos também terão um ecocardiograma repetido após completarem 16 semanas de tratamento com fármaco de estudo.

[00231] Período de Acompanhamento Pós-tratamento (8 semanas): Todos os indivíduos serão acompanhados durante 8 semanas após sua última dose de fármaco de estudo, tempo durante o qual eles

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68/84 serão instruídos a registrar qualquer infecção que ocorra em seus diáros. Os sites continuarão a ligar para os indivíduos duas vezes por semana e administrar o Contato Duas Vezes por Semana para o Questionário sobre Sintomas Respiratórios. Os indivíduos que desenvolverem 2 ou mais sintomas de infecção do trato respiratório ou um ou mais sintomas de infecção não do trato respiratório serão instruídos a entrar para uma visita não programada o mais cedo possível de modo que eles possam ser avaliados pelo pesquisador como descrito acima. Os indivíduos com sintomas de infecção do trato respiratório terão um swab nasofaríngeo tomado para PCR de vírus respiratório. Outros detalhes são fornecidos no Manual de Operções de Estudo.

[00232] No final da Visita de Semana 24 do estudo, os indivíduos passarão por um exame físico complete e terão sangue coletado para os laboratórios de segurança e avaliações de biomarcador, e passarão por avaliação de força de preensão repetida, 6MWT, e completarão um questionário sobre falta de ar antes e após o 6MWT.

[00233] No dia ou após a Visita de Semana 24, o pesquisador revisará os registros médico do indivíduo para determinar se ocorreram infecções adicionais que não foram capturadas na base de dados do estudo. A informação sobre as infecções que tinham sido capturadas seriam registradas na Planilha de Infecção de Pesquisador adequada. [00234] Os pacientes que desenvolvem anormalidades de laboratório importantes do ponto de vista médico ou AEs importantes do ponto de vista medico, consideradas relacionadas ao fármaco de estudo, e que não são resolvidas ou estabilizadas no final do período de acompanhamento serão seguidos além do período de de acompanhamento pós-tratamento planejado, até que estes eventos tenham sido resolvidos ou estabilizados. Se no final da conclusão do estudo estes eventos não forem resolvidos, eles deverão ser capturados como em andamento na base de dados.

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69/84 [00235] Análise Interina (IA): Uma IA será realizada quando pelo menos 120 indivíduos randomizados na Parte 1 tiverem completado a Visita de Semana 16. Um Comitê de Monitoramento de Dados (DCM) revisará os resultados da IA e farão recomendações ao estudo. As possíveis decisões na análise interina são:

[00236] - se se deve interromper o estudo das ramificações de dosagem de monoterapia de BEZ235 por futilidade, ou continuar com as ramificações de tratamento de 1 ou 2 BEZ235 na Parte 2;

[00237] - se se redimensionar o estudo com base na taxa de infecções do trato respiratório durante a Parte 1;

[00238] - se se deve mudar a duração de tratamento com base nos dados de seguração e dados de taxa de infecção do trato respiratório da Parte 1; e/ou [00239] - se a amostragem de PK adicional é necessária e/ou se o regime de amostragem de PK pode ser simplificado.

[00240] Parte 2 (a ser conduzida no hemisfério oposto da Parte 7): na Parte 2, entre 310 e 430 indivíduos que obtiveram os critérios de eligibilidade durante a visita de análise serão inscritos no estudo. Estes indivíduos serão randomizados para placebo, 0, 1 ou 2 doses de BEZ235 da Parte 1, e 5 mg ou 10 mg de BEZ235 +RAD001 0,1 mg. Procedimentos idênticos àqueles na Parte 1 aplicar-se-ão durante os períodos de acompanhamento de análise, em ciclo, tratamento e o pós-tratamento na Parte 2.

Figura 3-1 Planaiamento de Estudo:

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Tabela 1. Parte 1

BEZ235 5 mg diariamente

	BEZ235 10 mg diariamente
	Placebo
Randomização	Finalidade primária
Análise	Tratamento duplo-cego	Acompanhamento
6 semanas	16 semanas	8 semanas
	Em ciclo
4 semanas

Tabela 2. Parte 2

Dose(s) de BEZ235 escolhida(s) da Parte 1

	BEZ235 + RAD001 0,1 mg diariamente
	Placebo

	Randomização	Finalidade primária
Análise	Tratamento duplo-cego	Acompanhamento
6 semanas	16 semanas	8 semanas
	Em ciclo
4 semanas
[00241]	Fundamentação para o Planejamento do Estudo: O estudo

é planejado como um estudo de grupo paralelo, controlado por placebo cego, randomizado padrão para obter eficácia, tolerabilidade e dados de segurança de uma maneira imparcial e determiner as características de resposta de dose dos fármacos investigados. Um períodos em ciclo é incluído para obter os ecocardiogramas de linha de base e familiarizar os indivíduos com o 6MWT e avaliações de força de prePetição 870190047974, de 22/05/2019, pág. 91/124

71/84 ensão manuais. Dezesseis semanas de tratamento em partes 1 e 2 são consideradas suficientes para resultar em uma redução clinicamente significative em RTIs durante a temporada de frio e gripe no inverno em cada hemisfério. As últimas 8 semanas do estudo fornecerão informação sobre se a redução em RTIs persistem após os indivíduos terem continuado o tratamento com fármaco de estudo. As amostras de PK serão obtidas em todos os indivíduos nas visitas da semana 4, 6, e 8 para permitir a caracterização de PK após os fármacos de estudo terem atingido níveis de estado estacionários.

[00242] Publicação de Estudo: Os dados de dois testes clínicos anteriores conduzidos por Novartis (CRAD002X2202 e CBEZ235Y2201) sugerem que as 6 semanas de tratamento de indivíduos >65 anos de idade com baixas doses de BEZ235 e/ou RAD001 foram seguras e diminuíram a incidência de RTIs. O risco/benefício de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 pode ser mais favorável em idosos que estão com risco aumentado de morbidade ou mortalidade relacionada com RTI. Consequentemente, no estudo atual foram inscritos indivíduos que são considerados estar em risco aumentado de morbidade e mortalidade relacionadas com RTI, conforme definido, por terem uma das seguintes condições:

[00243] - Idade >= 85 [00244] - Idade >= 65 anos com:

[00245] - Asma [00246] - COPD Ouro Classe I ou II [00247] o Pós-broncodilatador FEVi/FVC <0,70 e FEVi > 50% previstos [00248] - Bronquite crônica [00249] - T2DM [00250] - Classificação funcional l-ll da CHF New York Heart Association

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72/84 [00251] o Nenhum sintoma ou sintoma suave (falta de ar e/ou angina) e limitação ligeira durante atividade ordinária [00252] - Fumante atual [00253] - Uma ou mais visitas à emergência ou hospitalizações para uma RTI durante os 12 meses prévios

Outros Critérios de Inclusão:

[00254] As mulheres devem estar na pós-menopausa. Os mulheres são consideradas estar na pós-menopausa e sem potencial para engravidar se elas tiverem tido 12 meses de amenoreeia natural (espontânea) com um perfil clínico apropriado (por exemplo, idade apropriada, história de sintomas de vasomotor) ou tiverem tido ooferectomia bilateral cirúrgica (com ou sem histerectomia), histerectomia total ou laqueadura pelo menos seis semanas atrás. No caso de ooforectomia unicamente, apenas quando a estado reprodutivo da mulher foi confirmado pela avaliação de acompanhamento do nível de hormônio é que ela é considerada sem potencial de engravidar.

[00255] Os indivíduos machos sexualmente ativos com um parceiro com potencial de engravidar deve estar disposto a usar camisinha ao mesmo tempo em que estiver usando o fármaco de estudo e durante 1 semana após a interrupção do fármaco de estudo, e não deve ser pai de uma criança neste período. Uma camisinha é requerida vasectomizado para impeder a liberação do fármaco por meio de fluido seminal.

[00256] Na análise e linha de base, os sinais vitais (pressão sanguínea sistólica e diastólica, taxa de pulso e taxa respiratória) serão avaliados na posição sentada após o o indivíduo ter resistido durante pelo menos três (3) minutos. Os sinais vitais na posição sentada devem estar dentro das seguintes faixas:

[00257] · Temperatura corporal oral ou timpânica entre 35,0-37,5Ό [00258] · Pressão sanguínea sistólica, 90 a 160 mm Hg [00259] · Pressão sanguínea diastólica, 50 a 95 mm Hg

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73/84 [00260] · Taxa de pulso, 40 a 95 bpm [00261] Se os sinais vitais estiverem for a destas faixas, o pesquisador pode obter até duas leituras adicionais, de modo que até 3 medições consecutivas sejam feitas. Pelo menos o último conjunto de leituras deve estar dentro das faixas fornecidas acima para que o indivíduo seja qualificado.

[00262] Os indivíduos devem pesar pelo menos 40 kg.

[00263] O indivíduo deve ser capaz de se comunicar bem com o pesquisador, e entender e cumprir as exigências do estudo.

[00264] Os resultados de um estudo pode ser qualificado usando os métodos diferentes. Por exemplo, os resultados podem ser quantificados observando a taxa de infecção durante um período de tempo particular conforme calculado dividindo o número total de infecções pelo Número total de indivíduos. Alternativamente, os resultados de um estudo pode ser quantificado observando-se a percentage de indivíduos tendo uma ou mais infecções durante um período de tempo particular.

[00265] Finalidade Primária: A finalidade primária do estudo é uma diminuição na porcentagem de indivíduos que experienciam uma ou mais RTIs durante as 16 semanas de tratamento com o fármaco de estudo, porque as RTIs causam morbidade e mortalidade significantes nos idosos (Millett et al 2013).

[00266] Finalidades Secundárias: Como finalidade secundária, a porcentagem de indivíduos que experienciam uma ou mais RTIs durante 24 semanas (16 semanas em tratamento com o fármaco de estudo seguidas por 8 semanas sem tratamento com fármaco de estudo) será avaliada para determinar se os indivíduos continuam a ter um taxa reduzida de infecções do trato respiratório após a descontinuação do fármaco de estudo.

[00267] Visto que a maioria das infecções do trato respiratório nos idosos é causada por vírus (Jain et al 2015), o efeito de BEZ235 sozi

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74/84 nho ou em combinação com RAD001 sobre a incidência de infecções virais do trato respiratório confirmadas em laboratório (como determinado pela PCR de vírus respiratória de swabs nasofaríngeas) será avaliado durante as 16 semanas que os indivíduos estiverem recebendo fármaco de estudo.

[00268] Como uma finalidade secundária adicional, a farmacocinética (PK) de BEZ235 fornecida sozinha ou em combinação com RAD001 será avaliada.

[00269] Finalidades exploradoras: Como finalidade exploradora, o efeito de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 sobre a incidência de RTIs será explorado em subconjuntos específicos de idosos para determinar se a eficácia varia entre os subgrupos.

[00270] O efeito de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação ao placebo sobre a incidência de todas as infecções bem como a incidência de UTIs de linha de base na Semana 16 ou 24 também será explorado, porque no teste clínico CBEZ235Y2201 os indivíduos tratados durante 6 semanas com BEZ235 10 mg diariamente ou uma combinação de BEZ235 10 mg mais RAD001 0,1 mg diariamente tiveram uma diminuição significativa na taxa de todas as infecções bem como uma diminuição na taxa de UTIs durante o ano após a dministração do fármaco de estudo.

[00271] Como uma finalidade exploradora adicional, o efeito de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo na duração e/ou gravidade de sintomas do trato respiratório superior será avaliado usando a pesquisa de WURSS-21.

[00272] Os resultados de CBEZ235Y2201 indicaram que a resposta de voluntários idosos à vacinação de influenza foi realçada quando eles receberam, em um percurso de 6 semanas, baixa dose de BEZ235 em combinação com RAD001 duas semanas antes de receber a vacina contra influenza. Consequentemente, como uma finalida

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75/84 de exploradora, o efeito de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 em comparação com placebo sobre a resposta à vacinação contra influenza será avaliado em indivíduos que recebem uma vacina contra influenza como parte de seu cuidado de saúde de rotina durante o estudo.

[00273] A inibição de mTOR por BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 pode ter efeitos antienvelhecimento além de melhorar justamente a função imune e diminuir as taxas de infecção. No teste clínico anterior, um conjunto de indivíduos tratado durante 6 semanas com uma combinação de BEZ235 10 mg e RAD001 0,1 mg diariamente, porém não indivíduos tratados com placebo, espontaneamente, reportou um aumento em energia enquanto tomavam fármaco de estudo. Além disso, os camundongos velhos tratados com a rapamicina inibidora de mTOR foram observados ter atividade física aumentada e/ou força de preensão em comparação com controles tratados com placebo (Flynn et al 2013). Consequentemente, como uma finalidade exploradora adicional, avaliar-se-á se ο BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 aumenta a força de preensão e/ou resistência como avaliado por um 6MWT.

[00274] Os inibidores de mTOR também foram reportados melhorar função cardíaca, em camundongos velhos (Flynn et al 2013). Consequentemente, como finalidades exploradoras adicionais, determinerse-á se ο BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001, em comparação com placebo, melhora a função cardíaca como avaliado por ecocardiografia na Semana 16 em relação à linha de base.

[00275] Como uma finalidade exploradora, os efeitos de BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 sobre expressão de gene no sangue total e sobre a proteômica do soro será avaliado para também elucidar os mecanismos pelos quais BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 podem melhorar a função imune e/ou impactar a

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76/84 biologia do envelhecimento.

[00276] Justificativa para Dose/Regime, Rotine de Administração e Duração de Tratamento: No estudo clínico de Novartis CBEZ235Y2201, todo inibidor de regimes de dosagem de mTOR (BEZ235 10 mg diariamente, RAD001 0,5 mg ou 0,1 mg diariamente, e BEZ235 10 mg diariamente mais RAD001 0,1 mg diariamente) foram bem tolerados e reduziram a incidência de infecções do trato respiratório entre 50 e 60% durante as 6 semanas de tratamento com fármaco de estudo recebido por idosos. Além disso, a combinação de BEZ235 10 mg e RAD001 0,1 mg diariamente melhorou significativamente a resposta à vacinação contra influenza. No estudo atual estender-se-á estas descobertas e determiner-se-á se BEZ235 sozinho ou em combinação com RAD001 dimui a incidência de infecções do trato respiratório quando os indivíduos são tratados durante mais de 16 semanas durante o frio do inverno e temporada de gripe em cada hemisfério quando as taxas de infecção do trato respiratório as mais altas. Também investigar-se-á o nível de dose mínimo eficaz para BEZ235 comparando-se a segurança e eficácia de BEZ235 5 mg vs 10 mg diariamente. Ο BEZ235 10 mg diariamente foi escolhido como uma dose no estudo atual porque ele foi associado com uma redução tanto nas infecções do trato respiratório quanto nas infecções totais no estudo clínico CBEZ235Y2201. BEZ235 5 mg diariamente é previsto pela modelagem e estiomulação inibir a fosforilação de S6K por apenas 10% e, consequentemente, pode ser subterapêutico e pode estabelecer a dose minimamente eficaz no estudo atual. Testar-se-á as doses de BEZ235 acima de 10 mg até BEZ235 10 mg duas vezes ao dia, porque a variabilidade de PK de BEZ235 em estudos clínicos prévios foi alta em doses de 25 mg e acima. Consequentemente, certos regimes de dosagem contemplados aqui compreendem a adminnistração de, por exemplo, 10 mg de BEZ235 duas vezes ao dia. Em algumas tais

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77/84 modalidades, um regime de dosagem compreende a administração de, por exemplo, 10 mg de BEZ235 duas vezes ao dia apenas (isto é, sem RAD001) ou em combinação com RAD001, por exemplo, em combinação com uma dose diária de 0,1 mg de RAD001. Em algumas modalidades, os regimes de dosagem contemplados aqui compreendem administração diária de uma quantidade de RAD001 variando de cerca de 0,015 mg a cerca de 0,1 mg. Em algumas tais modalidades, uma quantidade de RAD001 variando de cerca de 0,015 mg a cerca de 0,1 mg é administrada em combinação com uma quantidade de BEZ235. Referências

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MODALIDADE ENUMERADAS [00277] Em uma primeira modalidade, a invenção é um método que compreende a etapa de administração de (a) uma dose baixa de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) uma dose baixa de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo a um paciente, em que o paciente experiencia menos doenças devido à infecção do que um paciente não administrado com RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma combinação do mesmo.

[00278] Em uma seundo modalidade, a invenção é um método de acordo com a primeira modalidade, em que a imunidade inata do paciente é realçada.

[00279] Em uma terceira modalidade, a invenção é um método de acordo com a primeira ou segunda modalidade, em que a imunidade específica de antígeno não é realçada.

[00280] Em uma quarta modalidade, a invenção é um método de acordo com a segunda modalidade, em que pelo menos um gene indutor de interferon (ISG) é super regulado.

[00281] Em uma quinta modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a quarta modalidade, em que a infecção é uma infecção do trato urinário, ou uma infecção dos dentes ou gengivas.

[00282] Em uma sexta modalidade, a invenção é um método de

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80/84 acordo com qualquer uma da primeira até a quarta modalidade, em que a infecção é uma infecção do trato respiratório.

[00283] Em uma sétima modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a quarta modalidade, em que a infecção é uma infecção viral.

[00284] Em uma oitava modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a sétima modalidades, em que o paciente é idoso.

[00285] Em uma nona modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a oitava modalidades, em que o paciente tem pelo menos 65 anos de idade.

[00286] Em uma décima modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a nona modalidades, em que o paciente tem pelo menos 75 anos de idade, ou pelo menos 85 anos de idade.

[00287] Em uma décima primeira modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a décima modalidades, em que a baixa dose de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo, é administrada ao paciente durante cerca de até 6 semanas consecutivas.

[00288] Em uma décima segunda modalidade, a invenção é um método de acordo com a décima primeira modalidade, em que o paciente continua a experienciar menos doenças devido à infecção de cerca de 1 dia até cerca de 1 ano após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.

[00289] Em uma décima terceira modalidade, a invenção é um método de acordo com a décima primeira modalidade, em que o paciente continua a experienciar menos doenças devido à infecção durante pelo

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81/84 menos 1 mês e até cerca de 1 ano após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.

[00290] Em uma décima quarta modalidade, a invenção é um método de acordo com a décima primeira modalidade, em que o paciente continua a experienciar menos doenças devido à infecção durante pelo menos 3 meses e até cerca de 1 ano após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.

[00291] Em uma décima quinta modalidade, a invenção é um método de acordo com a décima primeira modalidade, em que o paciente continua a experienciar menos doenças devido à infecção durante pelo menos 6 meses após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.

[00292] Em uma décima sexta modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a décima quinta modalidade, em que o paciente é administrado com baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como uma monoterapia.

[00293] Em uma décima sétima modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a décima quinta modalidade, em que o paciente é administrado com baixa dose de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como uma monoterapia.

[00294] Em uma décima oitava modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a décima quinta modalidade, em que o paciente é administrado tanto com baixa dose

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82/84 de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo quanto com baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como uma terapia de combinação.

[00295] Em uma décima nona modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a décima sexta ou décima oitava modalidade, em que a variabilidade de AUC farmacêutica de pacientes que recebem a baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é menor do que a de um paciente que recebe uma dose maior de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00296] Em uma vigésima modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a décima quinta, décima sétima, ou décima oitava modalidade, em que RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é na forma neutra.

[00297] Em uma vigésima primeira modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a décima sexta ou décima oitava modalidade, em que BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é o sal de monotosilato.

[00298] Em uma vigésima segunda modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a décima quinta ou décima sétima até a vigésima primeira modalidade, compreendendo a administração de 0,01 a 0,2 mg de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00299] Em uma voigésima terceira modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a décima sexta ou décima oitava até a vigésima segunda modalidade, compreendendo a administração de 1 a 50 mg de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00300] Em uma vigésima quarta modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a vigésima terceira

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83/84 modalidade, em que o indivíduo é imunocomprometido.

[00301] Em uma vigésima quinta modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a vigésima quarta modalidade, em que o indivíduo tem uma resposta imune prejudicada.

[00302] Em uma vigésima sexta modalidade, a invenção é um método de acordo com qualquer uma da primeira até a vigésima quinta modalidade, em que o indivíduo é imunoscenessente.

[00303] Em uma vigésima sétima modalidade, a invenção é um método de superregulação de pelo menos um gene indutor de interferon (ISG), compreendendo administração de (a) uma dose baixa de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) uma dose baixa de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo, a um paciente.

[00304] Em uma vigésima oitava modalidade, a invenção é um método de superregulação de pelo menos uma proteína envolvida em remodelamento de matriz extracelular, compreendendo administração de (a) uma dose baixa de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; (b) uma dose baixa de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo, a um paciente.

[00305] Em uma vigésima nona, a invenção é o método da vigésima oitava modalidade, em que a proteína envolvida em remodelamento de matriz extracelular é significativamente superregulada após o tratamento durante pelo menos cerca de 1 semana; pelo menos cerca de 2 semanas; pelo menos cerca de 3 semanas, ou pelo menos cerca de 6 semanas.

[00306] Em uma trigésima modalidade, a invenção é um método de tratamento de uma doença ou condição associada com remodelamento de matriz extracelular anormal, compreendendo administração de (a) uma dose baixa de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitá

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84/84 vel do mesmo; (b) uma dose baixa de BEZ235 ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou (c) uma combinação do mesmo, a um paciente.

[00307] Em uma trigésima primeira modalidade, a invenção é o método da trigésima modalidade, em que a doença ou condição associada com remodelamento de matriz extracelular anormal é selecionada de insuficiência cardíaca, insuficiência cardíaca with fração de ejeção preservada, insuficiência renal crônica, glomerunefropatia, envelhecimento da pele, NASH, fibrose/cirrose de hepatite, fibrose pulmonar incluindo fibrose pulmonar idiopática, enrijecimento/disfunção do tendão relacionada com envelhecimento, artrite incluindo osteoartrite, sarcopenia, mielofibrose, mielodisplasia, disfunção relacionada ao envelhecimento da barrera hematocefálica, nefropatia diabética, aterosclerose, ou cicatrização de ferida.

Claims (35)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Uso de (a) RAD001, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo;

   (b) BEZ235, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; ou (c) uma combinação dos mesmos, caracterizado pelo fato de que é para preparação de um medicamento para promoção e/ou realce de uma resposta imune em um paciente, sendo que o paciente experimenta menos doenças devido à infecção do que um paciente não administrado com RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou uma combinação do mesmo.
2. 2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a imunidade inata do paciente é realçada.
3. 3. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a imunidade específica de antígeno não é realçada.
4. 4. Uso, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que pelo menos um gene indutor de interferon (ISG) é super regulado.
5. 5. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a infecção é uma infecção do trato urinário.
6. 6. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a infecção é uma infecção do trato respiratório.
7. 7. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a infecção é uma infecção oral incluindo uma infecção periodontal.

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   2/6
8. 8. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a

   4, caracterizado pelo fato de que a infecção é uma infecção viral.
9. 9. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o paciente é idoso.
10. 10. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o paciente apresenta pelo menos 65 anos de idade.
11. 11. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o paciente apresenta pelo menos 75 anos de idade.
12. 12. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o paciente apresenta pelo menos 85 anos de idade.
13. 13. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que a baixa dose de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, a baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo, é administrada ao paciente durante cerca de até 6 semanas consecutivas.
14. 14. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o paciente continua a experimentar menos doenças devido à infecção de cerca de 1 dia até cerca de 1 ano após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.
15. 15. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o paciente continua a experimentar menos doenças devido à infecção durante pelo menos 1 mês e até cerca de 1 ano após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável

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    3/6 do mesmo, ou combinação do mesmo.
16. 16. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o paciente continua a experimentar menos doenças devido à infecção durante pelo menos 3 meses e até cerca de 1 ano após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.
17. 17. Uso, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que o paciente continua a experimentar menos doenças devido à infecção durante pelo menos 6 meses após a administração do RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, do BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ou combinação do mesmo.
18. 18. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o paciente é administrado com baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como uma monoterapia.
19. 19. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o paciente é administrado com baixa dose de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como uma monoterapia.
20. 20. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o paciente é administrado tanto com baixa dose de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo quanto com baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo como uma terapia de combinação.
21. 21. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18 ou 20, caracterizado pelo fato de que a variabilidade de AUC farmacêutica de pacientes que recebem a baixa dose de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é menor do que a de um

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    4/6 paciente que recebe uma dose maior de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
22. 22. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, 19, ou 20, caracterizado pelo fato de que RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é na forma neutra.
23. 23. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18 ou 20, caracterizado pelo fato de que BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo é o sal de monotosilato.
24. 24. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17 ou 19 a 23, caracterizado pelo fato de que o dito tratamento compreende administrar de 0,01 a 0,2 mg de RAD001 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
25. 25. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18 ou 20 a24, caracterizado pelo fato de que o dito tratamento compreende administrar de 1 a 20 mg de BEZ235 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
26. 26. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é imunocomprometido.
27. 27. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 26, caracterizado pelo fato de que o indivíduo apresenta uma resposta imune prejudicada.
28. 28. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 27, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é imunosenescente.
29. 29. Uso de (a) RAD001, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo;

    (b) BEZ235, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; ou (c) uma combinação dos mesmos, caracterizado pelo fato de que é para preparação de um

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    5/6 medicamento para superregulação de pelo menos um gene indutor de interferon (ISG) em um paciente.
30. 30. Uso de (a) RAD001, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo;

    (b) BEZ235, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; ou (c) uma combinação dos mesmos, caracterizado pelo fato de que é para preparação de um medicamento para superregulação de pelo menos uma proteína envolvida em remodelamento de matriz extracelular em um paciente.
31. 31. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizada pelo fato de que a proteína envolvida em remodelamento de matriz extracelular é significativamente superregulada após o tratamento durante pelo menos cerca de 3 semanas.
32. 32. Uso de (a) RAD001, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo;

    (b) BEZ235, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; ou (c) uma combinação dos mesmos, caracterizado pelo fato de que é para preparação de um medicamento para tratamento de uma doença ou condição associada com remodelamento de matriz extracelular anormal em um paciente.
33. 33. Uso, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição associada com remodelamento de matriz extracelular anormal é selecionada de insuficiência cardíaca, insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada, insuficiência renal crônica, glomerunefropatia, envelhecimento da pele, NASH, fibrose/cirrose de hepatite, fibrose pulmonar incluindo fibrose pulmonar

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    6/6 idiopática, enrijecimento/disfunção do tendão relacionada com envelhecimento, artrite incluindo osteoartrite, sarcopenia, mielofibrose, mielodisplasia, disfunção relacionada ao envelhecimento da barreira hematocefálica, nefropatia diabética, aterosclerose, ou cicatrização de ferida.
34. 34. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende:

    (a) RAD001, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo;

    (b) BEZ235, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo; ou (c) uma combinação dos mesmos, e pelo menos um veículo farmacêuticamente aceitável.
35. 35. Invenção, caracterizada por quaisquer de suas concretizações ou categorias de reivindicação englobadas pela matéria inicialmente revelada no pedido de patente ou em seus exemplos aqui apresentados