BR102018010042A2

BR102018010042A2 - método para preparar um composto, composição farmacêutica, uso de um composto, e, composto

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Publication number: BR102018010042A2
Application number: BR102018010042-4A
Authority: BR
Inventors: Steven M. Peckham; Roger E. Harrington; Jebrena C. Jacobs
Original assignee: Warsaw Orthopedic, Inc.
Priority date: 2017-05-19
Filing date: 2018-05-17
Publication date: 2018-12-18
Also published as: EP3404035B1; ZA201803316B; CN108948118A; AU2018203248A1; US20190269701A1; MX2018006216A; US10434106B2; AU2018203248B2; WO2018213055A1; US11324759B2; JP2019006762A; EP3404035A1; EP3831838A1; US20180333424A1

Abstract

os compostos de estatina-oxiesterol e os métodos de sintetizar os mesmos são fornecidos para uso na promoção da osteogênese, osteoindução e/ou osteocondução. métodos para sintetizar em um recipiente único compostos de oxy133-estatina com altos rendimentos e melhor segurança do processo também são fornecidos. métodos para sintetizar os compostos de oxy133-estatina que são estereosseletivos também são fornecidos.

Description

“MÉTODO PARA PREPARAR UM COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, USO DE UM COMPOSTO, E, COMPOSTO” FUNDAMENTOS [001] Os produtos biológicos são comumente empregados para promover o crescimento ósseo em aplicações médicas, incluindo a cura de fratura e o tratamento cirúrgico de distúrbios da coluna vertebral. A fusão da coluna é frequentemente realizada por cirurgiões ortopédicos e neurocirurgiões para tratar doenças degenerativas do disco e artrite que afetam a coluna cervical e lombar. Historicamente, o enxerto ósseo autógeno, comumente retirado da crista ilíaca do paciente, tem sido usado para aumentar a fusão entre os níveis vertebrais.

[002] Uma proteína que é osteoindutora e comumente usada para promover a fusão da coluna é a proteína morfogenética óssea humana recombinante-2 (rhBMP-2). Seu uso foi aprovado pela Food e Drug Administration (FDA) dos EUA para fusão intercorporal lombar anterior de nível único. Desde então, o uso de rhBMP-2 aumentou significativamente e se expandiu para incluir a fusão espinhal lombar posterior, bem como a fusão da coluna cervical.

[003] Os oxiesteróis formam uma grande família de derivados oxigenados do colesterol que estão presentes no sangue e nos tecidos humanos e animais. Verificou-se que os oxiesteróis estão presentes nas lesões ateroscleróticas e desempenham um papel importante em vários processos fisiológicos, tais como diferenciação celular, inflamação, apoptose e produção de esteroides. Alguns oxiesteróis naturais têm propriedades osteogênicas robustas e podem ser usados para o crescimento ósseo. O oxiesterol natural osteogênico mais potente, o 20 (S)-hidroxicolesterol, é tanto osteogênico quanto antiadipogênico quando aplicado a células mesenquimais multipotentes capazes de se diferenciar em osteoblastos e adipócitos.

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2/99 [004] Um tal oxiesterol é OXY133 ou (3S, 5S, 6S, 8R, 9S, 10R, 13S,

14S, 17S) 17-((S)-2-hidroxioctan-2-il)- 10, 13-dimetil-hexadeca-hidro-lHciclopenta[a]fenantreno-3,6-diol, que apresenta as seguintes estruturas:

[005] Para sintetizar OXY133, muitas vezes há reações químicas complexas de múltiplas etapas que são difíceis de realizar em um único recipiente. Por exemplo, para sintetizar OXY133 pode-se usar vários reagentes de proteção para proteger os grupos terminais à medida que a molécula está sendo sintetizada. Além disso, vários reagentes de desproteção também são usados para aumentar o custo, reduzir a segurança e ter um impacto ambiental adverso. Além disso, a rota de síntese de OXY133 pode ter um rendimento muito baixo de menos de 30%.

[006] As versões produzidas de forma recombinante de proteínas humanas que ocorrem naturalmente, tais como rhBMP-2 e rhPDGF, foram estudadas durante décadas pela sua capacidade de induzir ou melhorar a formação de osso novo. Embora estas proteínas tenham sido eficazes no apoio à cicatrização óssea, existem desvantagens no que diz respeito à complexidade da fabricação e aos custos associados. Uma forma de abordar estas desvantagens tem sido identificar pequenas moléculas que regulam partes das vias de sinalização óssea para estimular ou melhorar a cicatrização óssea. Dois exemplos são os oxiesteróis e as estatinas osteoindutivas.

[007] As estatinas são inibidoras da enzima HMG-CoA redutase amplamente usadas para reduzir o colesterol. Algumas estatinas também demonstraram estimular a formação óssea tanto in vitro como in vivo. Acredita-se que as estatinas aumentam a formação óssea estimulando a

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 10/133 / 99 diferenciação de osteoblastos e reduzindo a apoptose de osteoblastos através de cascatas de sinalização de receptores de MAPK e TGFp.

[008] Embora os oxiesteróis e as estatinas tenham demonstrado melhorar a cicatrização óssea in vivo, nenhum deles demonstrou ser tão potente quanto a rhBMP-2. Portanto, apesar de ser mais fácil e menos dispendioso de fabricar, sua utilidade final pode ser limitada. Como os oxiesteróis e as estatinas mostraram ser produzidos na formação óssea e funcionam por mecanismos diferentes, a coaplicação local na forma de um pró-fármaco ou composto de estatina-oxiesterol pode levar a um efeito sinérgico maior do que quando administrado independentemente.

[009] Portanto, há uma necessidade de um método de baixo custo para sintetizar um composto de oxiesterol-estatina para uso na promoção de osteogênese, osteoindução e/ou osteocondução. Em particular, os métodos de sintetizar compostos de OXY133-estatina com um rendimento elevado e melhora na segurança do processo seriam benéficos. Os métodos para sintetizar um composto de OXY133-estatina, conjugado ou pró-fármaco a partir de material de partida endógeno, que é estereosseletivo, também seriam benéficos.

SUMÁRIO [0010] Os compostos de oxiesterol-estatina e os métodos para sintetizar os mesmos são fornecidos para uso na promoção de osteogênese, osteoindução e/ou osteocondução. Os métodos para sintetizar em um único recipiente os Compostos de OXY133-estatina ou conjugados com rendimentos elevados e melhor segurança de processo são também fornecidos. Os métodos para sintetizar os compostos de OXY133-estatina que são estereosseletivos também são fornecidos. Os métodos para sintetizar os conjugados de OXY133-estatina que reduzem o impacto ambiental e apresentam um baixo custo do produto também são fornecidos.

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4/99 [0011] Em algumas modalidades, é fornecido um composto correspondente a estrutura de Fórmula III:

ou um sal, hidrato ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Ri é um grupo de proteção e R3 é um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um carbono. Em outros aspectos, Ri é um grupo metila, etila, silila ou carbamato e R3 é (C6-C26) alquila ou heteroalquila, uma (C2-C20) arila ou heteroarila, uma (C6-C26) arila alquila ou heteroalquila e uma (C5-C20) arila alquila ou heteroarila-heteroalquila, uma (C4-C10) alquildi-ila ou heteroalquildi-ila, ou um (C4-C10) alquileno ou heteroalquileno ou carbamato ou benzila ou silila, com a condição de que Ri não é terc-butil dimetil silila quando R3 é (C6-C26) alquila.

[0012] Em outras modalidades, é fornecido um composto de oxiesterol-estatina correspondente à estrutura de Fórmula V:

(Fórmula V), em que Ri é um grupo de proteção como descrito acima e R4 é uma fração de estatina.

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5/99 [0013] Em certas modalidades, quando Ri na Fórmula V é H, então um composto com a estrutura correspondente à Fórmula VI é fornecido:

fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina ou sinvastatina. As estruturas químicas do composto de OXY133-atorvastatina, composto de OXY133-cerivastatina, composto de OXY133-fluvastatina, composto de OXY133-mevastatina, composto de OXY133-pitavastatina, composto de OXY133-pravastatina, composto de OXY133-rosuvastatina e composto de OXY133-sinvastatina resultantes são ilustrados na FIG. 9 a FIG. 16.

[0014] Em uma modalidade, quando R₄ é uma fração de lovastatina, uma estrutura de oxiesterol-estatina correspondente à Fórmula VII é fornecida:

(Fórmula VII).

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6/99 [0015] Algumas modalidades são direcionadas a um método para fazer um composto de oxiesterol-estatina, o método compreendendo reagir pregnenolona de Fórmula I

(Fórmula I) com RiX na presença de uma base para formar um derivado de pregnenolona de Fórmula II:

(Fórmula II).

O derivado de pregnenolona de Fórmula II é reagido com um composto organometálico para formar um derivado de diol protegido em C3 de Fórmula

III:

um composto de boro para formar um derivado de oxiesterol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de Fórmula IV:

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obtido. Em algumas modalidades na Fórmula IV, Ri é um grupo de proteção, X é um haleto e R3 é um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um carbono. Em outras modalidades, Ri é um grupo metila, etila, carbamato ou silila e R3 é (C6-C26) alquila ou heteroalquila, uma (C2-C20) arila ou heteroarila, uma (C6-C26) arila alquila ou heteroalquila e uma (C5-C20) arila alquila ou heteroarila -heteroalquila, uma (C4-C10) alquildi-ila ou heteroalquildi-ila, ou um (C4-C10) alquileno ou heteroalquileno. Em outras modalidades, R3 é um grupo hexila.

[0016] Em algumas modalidades, o composto organometálico usado no método de fabricação o composto de oxiesterol-estatina desta divulgação é de Fórmula RsMgX, onde X é um haleto e R3 compreende um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um carbono. Em outras modalidades, o composto organometálico pode ser de Fórmula R3L1, onde R3 compreende um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um carbono. Em um aspecto, RsMgX é cloreto de n-hexil magnésio e é reagido com um composto de Fórmula III em tetra-hidrofurano para formar um composto de Fórmula

Illa:

(Fórmula Illa).

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8/99 [0017] Um composto de borano útil no método de preparação do composto de estatina-oxiesterol desta divulgação inclui BH3. O composto de Fórmula Illa é reagido com BH3 para formar um intermediário de borano, o qual é então reagido com peróxido de hidrogênio em um meio básico para formar um composto de Fórmula Va.:

Ca(OH)₂.

[0019] Em certas modalidades, o composto de Fórmula IV pode ser reagido com uma estatina compreendendo atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina ou sinvastatina para formar a composto de oxiesterol-estatina protegido em C3 correspondente à Fórmula IVa:

[0020] Em certas modalidades, o composto de Fórmula Va pode ser reagido com uma estatina compreendendo atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina ou sinvastatina para formar a composto de oxiesterol-estatina protegido em C3 correspondente à Fórmula V:

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e R4 é uma fração de estatina, como pode ser fornecido por atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina ou sinvastatina.

[0021] Em outros aspectos, compostos de Fórmula V pode ser desprotegido em C3 utilizando uma fonte de iodo, uma fonte de fluoreto ou

outros métodos	de desproteção adequados para obter um composto de
Fórmula VI:	OH


	Η 1 ÕR4	(Fórmula VI),

em que R4 é uma fração de estatina, a estatina compreendendo atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina ou sinvastatina. Em uma modalidade, a fração de estatina R4 é derivada de lovastatina para formar um composto correspondente à Fórmula VII:

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(Fórmula VII).

[0022] Em algumas modalidades, o composto de Fórmula Va pode ser reagido com um composto compreendendo anidrido succínico, ácido aspártico, ácido etilcarbâmico ou polietileno glicol; e acoplar o composto resultante a uma fração de estatina R4 para obter um composto de Fórmula VIII:

(Fórmula VIII), em que L é um ligante. O Ligante L pode ser um ligante à base de polietileno glicol, um ligante à base de aspartato, um ligante à base de succinato ou um ligante à base de uretano. A fração de estatina R4, é derivada de atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina ou sinvastatina. Em outros aspectos, o composto de Fórmula VIII pode ser desprotegido em C3 com uma fonte de iodo, uma

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11/99 fonte de flúor ou outros métodos de desproteção adequados para obter um composto de Fórmula IX:

(Fórmula IX), em que a fonte de iodo é o iodeto de trimetilsilila, a fonte de fluoreto é o fluoreto de tetra-n-butilamônio ou o complexo de piridina HF e a fonte de hidrogênio é o hidrogênio gasoso como fornecido em um processo de hidrogenação catalítica.

[0023] Em várias modalidades, os métodos anteriores de preparação de um composto ou conjugado de oxiesterol-estatina com ou sem um ligante

E podem ser realizados em um único recipiente para produzir um composto de oxiesterol-estatina ou um sal, hidrato ou solvato farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

[0024] Em certas modalidades, esta divulgação prevê composições farmacêuticas compreendendo (i) um composto de Fórmula V:

(Fórmula V); ou (ii) um composto de Fórmula VI:

(iii) um composto de Fórmula VII:

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(Fórmula VII); ou (iv) um composto de Fórmula VIII:

(Fórmula VIII); ou (v) um composto de Fórmula IX:

ÕLR4 (Fórmula IX);

e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável, em que Ri é um grupo de proteção, R4 é uma fração de estatina e L é um ligante.

[0025] Em outras modalidades, esta divulgação fornece um método de tratamento de um mamífero que sofre de um distúrbio ósseo. O método de tratamento compreende administrar ao mamífero uma quantidade eficaz de (i) um composto de Fórmula V:

(Fórmula V); ou (ii) um composto de Fórmula VI:

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(iii) um composto de Fórmula VII:

(Fórmula VII); ou (iv) um composto de Fórmula VIII:

(Fórmula VIII); ou (v) um composto de Fórmula IX:

e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável, em que Ri é um grupo de proteção, R4 é uma fração de estatina e L é um ligante. O composto de oxiesterol-estatina é administrado ao mamífero por (i) aplicação localizada ou (ii) aplicação sistêmica. O distúrbio ósseo compreende uma fratura óssea, osteoporose ou osteopenia.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 21/133 / 99 [0026] Características e vantagens adicionais de várias modalidades serão apresentadas em parte na descrição que segue, e em parte será evidente a partir da descrição, ou pode ser aprendido pela prática de várias modalidades. Os objetivos e outras vantagens de várias modalidades serão realizadas e obtidas por meio dos elementos e combinações particularmente indicados na descrição e reivindicações anexas.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [0027] Em parte, outros aspectos, características, benefícios e vantagens das modalidades serão evidentes em relação à descrição seguinte, reivindicações anexas e desenhos anexos, em que:

A FIG. 1 ilustra uma reaçãa etapa a passo para sintetizar OXY133 com reagentes de partida compreendendo acetato de pregnenolona, como mostrado em uma modalidade desta divulgação. A pregnenolona reage com um composto organometálico para produzir um esterol ou diol tendo dois grupos hidroxila. O esterol ou diol é então reagido com borano e peróxido de hidrogênio e purificado para produzir OXY133;

A FIG. 2 é uma ilustração gráfica dos dados de ¹H NMR obtidos a partir de OXY133 isolado e purificado;

A FIG. 3 é uma ilustração gráfica dos dados de ¹³C NMR obtidos de OXY133;

A FIG. 4 é uma ilustração gráfica dos dados de espectroscopia de infravermelhos obtidos de OXY133;

A FIG. 5 é uma ilustração gráfica dos dados de espectroscopia de massa obtidos a partir de OXY133;

A FIG. 6 é uma ilustração gráfica dos dados de ¹H NMR obtidos a partir do esterol ou diol intermediário para sintetizar OXY133;

A FIG. 7 é uma ilustração gráfica de dados de ¹³C NMR obtidos a partir do esterol ou diol intermediário para sintetizar OXY133;

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A FIG. 8 é um esquema da síntese do composto de OXY133lovastatina;

A FIG. 9 é a estrutura química do composto de OXY133atorvastatina;

A FIG. 10 é a estrutura química do composto de OXY133cerivastatina;

A FIG. 11 é a estrutura química do composto de OXY133fluvastatina;

A FIG. 12 é a estrutura química do composto de OXY133mevastatina;

A FIG. 13 é a estrutura química do composto de OXY133pitavastatina;

A FIG. 14 é a estrutura química do composto de OXY133pravastatina;

A FIG. 15 é a estrutura química do composto de OXY133rosuvastatina; e

A FIG. 16 é a estrutura química do composto de OXY133sinvastatina.

[0028] Deve ser entendido que os números não são desenhados em escala. Além disso, a relação entre os objetos em uma figura pode não ser em escala, e pode, de fato, ter uma relação reversa quanto ao tamanho. As figuras pretendem proporcionar compreensão e clareza para a estrutura de cada objeto mostrado, e, portanto, algumas características podem ser exageradas, a fim de ilustrar uma característica específica de uma estrutura.

DESCRIÇÃO DETALHADA [0029] Para os propósitos deste relatório descritivo e reivindicações anexas, salvo indicação em contrário, todos os números expressando quantidades de ingredientes, porcentagens ou proporção de materiais, condições de reação, e outros valores numéricos usados no relatório descritivo

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 23/133 / 99 e reivindicações, devem ser entendidos como sendo modificados em todas os casos pelo termo “cerca de”. Consequentemente, a menos que indicado em contrário, os parâmetros numéricos estabelecidos no seguinte relatório descritivo e reivindicações anexas são aproximações que podem variar dependendo das propriedades desejadas que se pretende obter pelo presente pedido. No mínimo, e não como uma tentativa de limitar a aplicação da doutrina dos equivalentes ao escopo das reivindicações, cada parâmetro numérico deve, pelo menos, ser interpretado à luz do número de dígitos significativos relatados e pela aplicação de técnicas comuns de arredondamento.

[0030] Embora as faixas numéricas e parâmetros que estabelecem o amplo escopo do presente pedido sejam aproximações, os valores numéricos estabelecidos nos exemplos específicos são relatados com a maior precisão possível. Qualquer valor numérico, no entanto, inerentemente contém certos erros necessariamente resultantes do desvio padrão encontrado em suas respectivas medições de teste. Além disso, todas as faixas aqui divulgadas devem ser entendidas como abrangendo quaisquer e todas as subfaixas aí incluídas. Por exemplo, uma faixa de “1 a 10” inclui quaisquer e todas as subfaixas entre (e incluindo) o valor mínimo de 1 e o valor máximo de 10, ou seja, todas e quaisquer subfaixas com um valor mínimo igual ou maior que 1 e um valor máximo igual ou menor que 10, por exemplo, 5,5 a 10.

Definições [0031] Nota-se que, como usado neste relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um”, “uma” e “o, a” incluem referentes plurais a menos que expressamente e inequivocamente limitados a um referente. Assim, por exemplo, a referência a “uma alcanolamina” inclui uma, duas, três ou mais alcanolaminas.

[0032] O termo “agente bioativo” como usado aqui é geralmente usado para se referir a qualquer substância que altera a fisiologia de um

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 24/133 / 99 paciente. O termo “agente bioativo” pode ser usado indiferentemente aqui com os termos “agente terapêutico”, “quantidade terapeuticamente eficaz” e “ingrediente farmacêutico ativo”, “API” ou “fármaco”. Os termos composição “bioativa” ou composição “farmacêutica” são usados aqui indiferentemente. Ambos os termos se referem a composições que podem ser administradas a um indivíduo, usadas para revestir ou que estão presentes em um dispositivo médico que é introduzido em um indivíduo, ou semelhante.

[0033] Um “indivíduo”, como usado aqui, inclui qualquer animal que exiba um sintoma de uma condição que possa ser tratada com um composto. Os indivíduos adequados (pacientes) incluem animais de laboratório (como camundongos, ratos, coelhos ou porquinhos da Índia), animais de fazenda e animais domésticos ou animais de estimação (como um gato, um cachorro ou um cavalo). Primatas não humanos e humanos, incluindo pacientes humanos, estão incluídos. Os indivíduos típicos incluem animais que exibem quantidades aberrantes (quantidades inferiores a um indivíduo “normal” ou “saudável”) de uma ou mais atividades fisiológicas que são estimuladas pela sinalização de Hedgehog. As atividades aberrantes podem ser reguladas por qualquer um de uma variedade de mecanismos, incluindo a ativação de uma atividade de Hedgehog. As atividades aberrantes podem resultar em uma condição patológica.

[0034] O termo “biodegradável” inclui os compostos ou componentes que se degradarão ao longo do tempo pela ação de enzimas, por ação hidrolítica e/ou por outros mecanismos semelhantes no corpo humano. Em várias modalidades, “biodegradável” inclui os componentes podem se decompor ou degradar dentro do corpo para componentes não tóxicos como células (por exemplo, células ósseas) infiltrar os componentes e permitir a reparação do defeito. Por “bioerodível” entende-se que os compostos ou componentes irão erodir ou degradar com o tempo devido, pelo menos em parte, a quando entram em contato com substâncias encontradas no tecido

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 25/133 / 99 circundante, fluidos ou por ação celular. Por “bioabsorvível” entende-se que os compostos ou componentes serão decompostos e absorvidos no corpo humano, por exemplo, por uma célula ou tecido. “Biocompatível” significa que os compostos ou componentes não causarão irritação ou necrose substancial do tecido no local do tecido-alvo e/ou não serão carcinogênicos. [0035] O termo “alquila”, como usado aqui, se refere a um radical hidrocarboneto monovalente saturado ou insaturado, ramificado, de cadeia linear ou cíclica derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um alcano, alqueno ou alquino de origem. Grupos alquílicos típicos incluem, mas não se limitam a, metila; etilas como etanol, etila; propilas como propan-1-ila, propan-2-ila, ciclopropan-1-ila, prop-1-en-

1- ila, prop-1-en-2-ila, prop-2-en-1-ila, cicloprop-1-en-1-ila; cicloprop-2-en-1ila, prop-1-in-1-ila, prop-2-in-1-ila, etc.; butilas como butan-1-ila, butan-2-ila,

2- metil-propan-1-ila, 2-metil-propan-2-ila, ciclobutan-1-ila, but-1-en-1-ila, but-1-en-2-ila, 2-metil-prop-1-en-1-ila, but-2-en-1-ila, but-2-en-2-ila, buta1,3-dien-1-ila, buta-1,3-dien-2-ila, ciclobut-1-en-1-ila, ciclobut-1-en-3-ila, ciclobuta-1,3-dien-1-ila, but-1-in-1-ila, but-1-in-3-ila, but-3-in-1-ila, etc.; e semelhantes. Quando os níveis específicos de saturação são pretendidos, a nomenclatura “alquenila” é usada, como definido abaixo. Em algumas modalidades, os grupos alquila são (C1-C40) alquila. Em algumas modalidades, os grupos alquila são (C1-C6) alquila.

[0036] O termo “alquenila”, como usado aqui, se refere a um radical alquila de cadeia ramificada ou linear ou cíclica, saturada, derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um alcano de origem. Grupos alquenila típicos incluem, mas não estão limitados a, metanol; etanol; propanóis como propan-1-ila, propan-2-ila (isopropila), ciclopropan-1-ila, etc.; butanilas como butan-1-ila, butan-2-ila (sec-butila), 2metil-propan-1-ila (isobutila), 2-metil-propan-2-ila (t-butila), ciclobutan-1-ila, etc.; e semelhantes. Em algumas modalidades, os grupos alcanila são (C1

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C40) alcanila. Em algumas modalidades, os grupos alcanila são (C1-C6) alcanila.

[0037] O termo “alquenila”, como usado aqui, se refere a um radical alquila de cadeia ramificada, linear ou cíclica insaturada tendo pelo menos uma ligação dupla de carbono-carbono derivada da remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um alqueno de origem. O radical pode estar na conformação cis ou trans em torno da(s) ligação(ões) dupla(s). Grupos alquenila típicos incluem, mas não estão limitados a, etenila; propenilas como prop-1-en-1-ila, prop-1-en-2-ila, prop-2-en-1-ila, prop-2-en2-ila, cicloprop-1-en-1-ila; cicloprop-2-en-1-ila; butenilas como but-1-en-1ila, but-1-en-2-ila, 2-metil-prop-1-en-1-ila, but-2-en-1-ila, but-2-en-1-ila, but2-en-2-ila, buta-1,3-dien-1-ila, buta-1,3-dien-2-ila, ciclobut-1-en-1-ila, ciclobut-1-en-3-ila, ciclobuta-1,3-dien-1-ila, etc.; e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo alquenila é (C2-C40) alquenila. Em algumas modalidades, o grupo alquenila é (C2-C6) alquenila.

[0038] O termo “alquinila”, como usado aqui, se refere a um radical alquila de cadeia ramificada, linear ou cíclico insaturada tendo pelo menos uma ligação tripla de carbono-carbono derivada da remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um alquino de origem. Grupos alquinila típicos incluem, mas não se limitam a, etinila; propinilas como prop1-in-1-ila, prop-2-in-1-ila, etc.; butinilas como but-1-in-1-ila, but-3-in-1-ila, etc.; e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo alquinila é (C2-C40) alquinila. Em algumas modalidades, o grupo alquinila é (C2-C6) alquinila.

[0039] O termo “alquildi-ila”, como usado aqui, se refere a um radical hidrocarboneto bivalente de cadeia ramificada, linear ou cíclica saturada ou insaturada, derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de cada um dos dois átomos de carbono diferentes de um alcano, alqueno, ou alquino de origem, ou pela remoção de dois átomos de hidrogênio de um único átomo de carbono de um alcano, alqueno ou alquino de origem. Os dois centros de

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 27/133 / 99 radicais monovalentes ou cada valência do centro de radical divalente podem formar ligações com os mesmos ou diferentes átomos. As alquildi-ilas típicas incluem, mas não se limitam a metandi-ila; etildi-ilas como etan-1,1-di-ila, etan-1,2-di-ila, eten-1,1-di-ila, eten-1,2-di-ila; propildi-ilas como propan-1,1di-ila, propan-1,2-di-ila, propan-2,2-di-ila, propan-1,3-di-ila, ciclopropan-1,1di-ila, ciclopropan-1,2-di-ila, prop-1-en-1,1-di-ila, prop-1-en-1,2-di-ila, prop2-en-1,2-di-ila, prop-1-en-1,3-di-ila cicloprop-1-en-1,2-di-ila, cicloprop-2-en1,2-di-ila, cicloprop-2-en-1,1-di-ila, prop-1-in-1,3-di-ila, etc.; butildi-ilas como, butan-1,1-di-ila, butan-1,2-di-ila, butan-1,3-di-ila, butan-1,4-di-ila, butan-2,2-di-ila, 2-metil-propan-1,1-di-ila, 2-metil-propan-1,2-di-ila, ciclobutan-1,1-di-ila; ciclobutan-1,2-di-ila, ciclobutan-1,3-di-ila, but-1-en1,1-di-ila, but-1-en-1,2-di-ila, but-1-en-1,3-di-ila, but-1-en-1,4-di-ila, 2-metilprop-1-en-1,1-di-ila, 2-metanilideno-propan-1,1-di-ila, buta-1,3-dien-1,1-diila, buta-1,3-dien-1,3-di-ila, ciclobut-1-en-1,2-di-ila, ciclobut-1-en-1,3-di-ila, ciclobut-2-en-1,2-di-ila, ciclobuta-1,3-dien-1,2-di-ila, ciclobuta-1,3-dien-1,3di-ila, but-1-in-1,3-di-ila, but-1-in-1,4-di-ila, buta-1,3-di-in-1,4-di-ila, etc.; e semelhantes. Quando níveis específicos de saturação são pretendidos, a nomenclatura alcaniladi-ila, alqueniladi-ila e/ou alquiniladi-ila é usada. Em algumas modalidades, o grupo alquildi-ila é (C1-C40) alquildi-ila. Estão também contemplados radicais alcanildi-ila acíclicos saturados nos quais os centros do radical estão nos carbonos terminais, por exemplo, metandi-ila (metano); etan-1,2-di-ila(etano); propan-1,3-di-ila(propano); butan-1,4-diila(butano); e semelhantes (também chamados de alquilenos, definidos infra). [0040] O termo “alquileno” como usado aqui se refere a um radical de alquildi-ila de cadeia linear tendo dois centros de radical monovalente terminal derivados pela remoção de um átomo de hidrogênio de cada um dos dois átomos de carbono terminais de alcano, alqueno ou alquino de cadeia linear. Grupos de alquileno típicos incluem, mas não estão limitados a, metano; etilenos como etano, eteno, etino; propilenos como propano,

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 28/133 / 99 prop[1]eno, propa[1,2]dieno, prop[1]ino, etc.; butilenos como butano, but[1]eno, but[2]eno, buta[1,3]dieno, but[1]ino, but[2]ino, but[1,3]di-ino, etc.; e semelhantes. Quando níveis de saturação específicos são pretendidos, a nomenclatura alcano, alqueno e/ou alquino é usada. Em algumas modalidades, o grupo alquileno é (C1-C40) alquileno. Em algumas modalidades, o grupo alquileno é (C1-C6) alquileno.

[0041] Os termos “heteroalquila”, “heteroalcanila,” “heteroalquenila,” “heteroalquildi-ila” e “heteroalquileno” como usados aqui se referem a radicais alquila, alcanila, alquenila, alquinila, alquildi-ila e alquileno, respectivamente, em que um ou mais dos átomos de carbono são, cada um, independentemente substituídos pelos mesmos ou diferentes grupos heteroatômicos. Grupos heteroatômicos típicos que podem ser incluídos nestes radicais incluem, mas não estão limitados a, —O—, —S—, —O—O— , —S—S—, —O—S—, —NR', =N—N=, —N=N—, —N(O)N—, — N=N—NR'—, —PH—, —P(O)2—, —O—P(O)2—, —SH2—, —S(O)2—, ou semelhantes, onde cada R' é independentemente hidrogênio, alquila, alcanila, alquenila, alquinila, arila, arilarila, arila alquila, heteroarila, heteroarila alquila ou heteroarila -heteroarila como definido aqui.

[0042] O termo “arila” como usado aqui se refere a um radical hidrocarboneto aromático monovalente derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um sistema de anel aromático de origem. Grupos arila típicos incluem, mas não estão limitados a, radicais derivados de aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno, antraceno, azuleno, benzeno, criseno, coroneno, fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexileno, as-indaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno, e semelhantes. Em algumas

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 29/133 / 99 modalidades, o grupo arila é (C5-C14) arila ou uma (C5-C10) arila. Em algumas modalidades, as arilas são fenila e naftila.

[0043] O termo “arildi-ila” como usado aqui se refere a um radical hidrocarboneto aromático divalente derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de cada um de dois átomos de carbono diferentes de um sistema de anel aromático de origem ou pela remoção de dois átomos de hidrogênio de um único átomo de carbono de um sistema de anel aromático de origem. Os dois centros de radicais monovalentes ou cada valência do centro divalente podem formar ligações com o(s) mesmo(s) ou diferente(s) átomo(s). Grupos arildi-ila típicos incluem, mas não estão limitados a, radicais divalentes derivados de aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno, antraceno, azuleno, benzeno, criseno, coroneno, fluoranteno, fluorine, hexaceno, hexafeno, hexileno, as-indaceno, s-indaceno, indano, indeno, naftaleno, octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno, e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo arildi-ila é (C5-C14) arildi-ila ou (C5-C10) arildi-ila. Por exemplo, alguns grupos arildi-ila são radicais divalentes derivados de benzeno e naftaleno, especialmente fena-1,4-di-ila, nafta-2,6-di-ila e nafta2,7-di-ila.

[0044] O termo “arileno” como usado aqui se refere a um radical de ponte divalente tendo dois centros de radical monovalente adjacentes derivados pela remoção de um átomo de hidrogênio de cada um dos dois átomos de carbono adjacentes de um sistema de anel aromático de origem. A fixação de um radical de ponte de arileno, por exemplo, benzeno, a um sistema de anel aromático de origem, por exemplo, benzeno, resulta em um sistema de anel aromático fundido, por exemplo, naftaleno. Presume-se que a ponte tenha o número máximo de ligações duplas não cumulativas consistentes com sua fixação ao sistema de anéis fundidos resultante. De

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 30/133 / 99 modo a evitar a contagem dupla de átomos de carbono, quando um substituinte arileno é formado tomando em conjunto dois substituintes adjacentes em uma estrutura que inclui substituintes alternativos, os átomos de carbono da ponte de arileno substituem os átomos de carbono de ponte da estrutura. Como exemplo, considere a seguinte estrutura:

R² em que R¹, quando tomado sozinho é hidrogênio, ou quando tomado em conjunto com R² é (C5-C14) arileno; e R², quando tomado sozinho é hidrogênio, ou quando tomado em conjunto com R¹ é (C5-C14) arileno.

[0045] Quando R¹ e R² são, cada um, hidrogênio, o composto resultante é benzeno. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é C6 arileno (benzeno), o composto resultante é naftaleno. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é C10 arileno (naftaleno), o composto resultante é antraceno ou fenantreno. Grupos típicos de arileno incluem, mas não estão limitados a, aceantrileno, acenaftileno, acefenantrileno, antraceno, azuleno, benzeno (benzo), criseno, coroneno, fluoranteno, fluoreno, hexaceno, hexafeno, hexileno, as-indaceno, s-indaceno, indeno, naftaleno (nafto), octaceno, octafeno, octaleno, ovaleno, penta-2,4-dieno, pentaceno, pentaleno, pentafeno, perileno, fenaleno, fenantreno, piceno, pleiadeno, pireno, pirantreno, rubiceno, trifenileno, trinaftaleno, e semelhantes. Quando uma conectividade específica é pretendida, os átomos de carbono de ligação envolvidos (da ponte de arileno) são denotados entre parênteses, por exemplo, [1,2]benzeno ([1,2]benzo), [1,2]naftaleno, [2,3]naftaleno, etc. Dessa forma, no exemplo acima, quando R¹ tomado em conjunto com R² é [2,3]naftaleno, o composto resultante é antraceno. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 31/133 / 99 [1,2]naftaleno, o composto resultante é fenantreno. Em uma modalidade, o grupo arileno é (C5-C14) ou (C5-C10).

[0046] O termo “arilrila” como usado aqui se refere a um radical hidrocarboneto monovalente derivado da remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de carbono de um sistema de anéis no qual dois ou mais sistemas de anéis aromáticos idênticos ou não idênticos são unidos diretamente em conjunto por uma única ligação, onde o número de tais junções de anel diretas é um a menos que o número de sistemas de anéis aromáticos de origem envolvidos. Grupos arilarila típicos incluem, mas não estão limitados a, bifenila, trifenila, fenil-naftila, binaftila, bifenil-naftila e semelhantes. Quando o número de átomos de carbono compreendendo um grupo arilarila é especificado, os números se referem aos átomos de carbono compreendendo cada anel aromático de origem. Por exemplo, (C1-C14) arilrila é um grupo arilrila em que cada anel aromático é compreende de 5 a 14 carbonos, por exemplo, bifenila, trifenila, binaftila, fenilnaftila, etc. Em alguns casos, cada sistema de anel aromático de origem de um grupo arilarila é independentemente um (C5-C14) aromático ou (C1-C10) aromático. Em algumas modalidades, os grupos arilarila são grupos em que todos os sistemas de anel aromático de origem são idênticos, por exemplo, bifenila, trifenila, binaftila, trinaftila, etc.

[0047] O termo “biarila” como usado aqui se refere a um radical arilrila com dois sistemas aromáticos de origem idênticos diretamente juntos por uma única ligação. Grupos biarila típicos incluem, mas não estão limitados a, bifenila, binaftila, biantracila, e semelhantes. Em alguns casos, os sistemas de anéis aromáticos são anéis aromáticos (C5-C14) ou anéis aromáticos (C5-C10). Em uma modalidade, o grupo biarila é bifenila.

[0048] O termo “arilalquila” como usado aqui se refere a um radical alquila acíclica em que um dos átomos de hidrogênio ligados a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp2, é substituído com

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 32/133 / 99 um radical arila. Grupos arilalquila típicos incluem, mas não estão limitados a, benzila, 2-feniletan-1-ila, 2-fenileten-1-ila, naftilmetila, 2-naftiletan-1-ila, 2-naftileten-1-ila, naftobenzila, 2-naftofeniletan-1-ila e semelhantes. Quando frações específicas de alquila são pretendidas, a nomenclatura arila alcanila, arila akenila e/ou arila alquinila é usada. Em algumas modalidades, o grupo arilalquila é (C6-C40) arilalquila, por exemplo, a fração alcanila, alquenila ou alquinila do grupo arilalquila é (C1-C26) e a fração arila é (C5-C14). Em algumas modalidades, o grupo arilalquila é (C6-C13), por exemplo, a fração alcanila, alquenila ou alquinila do grupo arilalquila é (C1-C3) e a fração arila é (C5-C10).

[0049] O termo “heteroarila” como usado aqui se refere a um radical heteroaromático monovalente derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de um sistema de anel heteroaromático de origem. Grupos heteroarila típicos incluem, mas não estão limitados a, radicais derivados de acridina, arsindol, carbazol, β-carbolina, cromano, cromeno, cinolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, piran, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno, e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo heteroarila é uma heteroarila de 5-14 membros ou uma heteroarila de 5-10 membros. Em algumas modalidades, os radicais heteroarila são aqueles derivados de sistemas de anel heteroaromáticos de origem em que todos os heteroátomos de anel são nitrogênios, como imidazol, indol, indazol, isoindol, naftiridina, pteridina, isoquinolina, ftalazina, purina, pirazol, pirazina, piridazina, piridina, pirrol, quinazolina, quinolina, etc.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 33/133 / 99 [0050] O termo “heteroarildi-ila” se refere a um radical heteroaromático divalente derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de cada um de dois átomos diferentes de um sistema de anel heteroaromático de origem ou pela remoção de dois átomos de hidrogênio de um únco átomo de um sistema de anel heteroaromático de origem. Os dois centros de radical monovalentes ou cada valência de centro divalente único podem formar ligações com o(s) mesmo(s) ou diferente(s) átomo(s). Grupos heteroarildi-ila típicos incluem, mas não estão limitados a, radicais divalentes derivados de acridina, arsindol, carbazol, β-carbolina, cromano, cromeno, cinolina, furano, imidazol, indazol, indol, indolina, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindol, isoindolina, isoquinolina, isotiazol, isoxazol, naftiridina, oxadiazol, oxazol, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, piran, pirazina, pirazol, piridazina, piridina, pirimidina, pirrol, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, tetrazol, tiadiazol, tiazol, tiofeno, triazol, xanteno, e semelhantes. Em algumas modalidades, o grupo heteroarildi-ila é uma heteroarildi-ila de 5-14 membros ou uma heteroarildi-ila de 5-10 membros. Em algumas modalidades, grupos heteroarildi-ila são radicais divalentes derivados de sistemas de anéis heteroaromáticos de origem em que quaisquer heteroátomos de anel são nitrogênios, como imidazol, indol, indazol, isoindol, naftiridina, pteridina, isoquinolina, ftalazina, purina, pirazol, pirazina, piridazina, piridina, pirrol, quinazolina, quinolina, etc.

[0051] O termo “heteroarileno” como usado aqui se refere a um radical de ponte divalente com dois centros de radical monovalente adjacentes derivados pela remoção de um átomo de hidrogênio de cada um dos átomos adjacentes de um sistema de anel heteroaromático de origem. A fixação de um radical de ponte de heteroarileno, por exemplo, piridinoa um sistema de anel aromático de origem, por exemplo, benzeno, resulta em um sistema de anel heteroaromático fundido, por exemplo, quinolina. Presume-se que a

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 34/133 / 99 ponte tenha o número máximo de ligações duplas não cumulativas consistentes com sua fixação ao sistema de anéis fundidos resultante. De modo a evitar átomos de anel com contagem dupla, quando um substituinte heteroarileno é formado tomando em conjunto dois substituintes adjacentes em uma estrutura que inclui substituintes alternativos, os átomos de anel da ponte de heteroarileno substituem os átomos de anel de ponte da estrutura. Como exemplo, considere a seguinte estrutura:

R² em que R¹, quando tomado sozinho é hidrogênio, ou quando tomado em conjunto com R² é heteroarileno de 5-14 membros; e R², quando tomado sozinho é hidrogênio, ou quando tomado em conjunto com R¹ é heteroarileno de 5-14 membros.

[0052] Quando R¹ e R² são, cada um, hidrogênio, o composto resultante é benzeno. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é um heteroarileno piridino de 6 membros, o composto resultante é isoquinolina, quinolina ou quinolizina. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é um heteroarileno de 10 membros (por exemplo, isoquinolina), o composto resultante é, por exemplo, acridina ou fenantridina. Grupos heteroarileno típicos incluem, mas não estão limitados a, acridina, carbazol, β-carbolina, cromeno, cinolina, furano, imidazol, indazoleno, indoleno, indolizina, isobenzofurano, isocromeno, isoindoleno, isoquinolina, isotiazoleno, isoxazoleno, naftiridina, oxadiazoleno, oxazoleno, perimidina, fenantridina, fenantrolina, fenazina, ftalazina, pteridina, purina, pirano, pirazina, pirazoleno, piridazina, piridina, pirimidina, pirroleno, pirrolizina, quinazolina, quinolina, quinolizina, quinoxalina, tetrazoleno, tiadiazoleno, tiazoleno, tiofeno, triazoleno, xanteno, ou semelhantes. Quando uma conectividade

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 35/133 / 99 específica é pretendida, os átomos em ponte envolvidos (da ponte heteroarileno) são denotados entre parênteses, por exemplo, [1,2]piridina, [2.3] piridina, [3,4]piridina, etc. Sendo assim, no exemplo acima, quando R¹tomado em conjunto com R² é [1,2]piridina, o composto resultante é quinolizina. Quando R¹ tomado em conjunto com R2 é [2,3]piridina, o composto resultante é quinolina. Quando R¹ tomado em conjunto com R² é [3.4] piridina, o composto resultante é isoquinolina. Em algumas modalidades, o grupo heteroarileno é heteroarileno de 5-14 membros ou heteroarileno de 510 membros. Em algumas modalidades, os radicais heteroarileno são os derivados dos sistemas de anéis heteroaromáticos de origem em que quaisquer heteroátomos de anel são nitrogênios, como imidazol, indolo, indazol, isoindolo, naftiridina, pteridina, isoquinolina, ftalazina, purina, pirazol, pirazina, piridazina, pindmo, pirrolo, quinazolina, quinolina, etc.

[0053] O termo “heteroarila-heteroarila” como usado aqui se refere a um radical heteroaromático monovalente derivado pela remoção de um átomo de hidrogênio de um único átomo de um sistema de anel em que dois ou mais sistemas de anéis heteroaromáticos de origem idênticos e não idênticos são unidos diretamente em conjunto por uma ligação simples, em que o número de tais junções de anel diretas é um a menos que o número de sistemas de anel heteroaromáticos envolvidos. Grupos heteroarila-heteroarila típicos incluem, mas não estão limitados a, bipiridi-ila, tripiridi-ila, piridilpurinila, bipurinila, etc. Quando o número de átomos do anel é especificado, os números se referem ao número de átomos compreendendo cada sistema de anel heteroaromático de origem. Por exemplo, heteroarila -heteroarila de 5-14 membros é um grupo heteroarila -heteroarila em que cada sistema de anel heteroaromático de origem compreende de 5 a 14 átomos, por exemplo, bipiridi-ila, tripiridi-ila, etc. Em algumas modalidades, cada sistema de anel heteroaromático de origem é independentemente a heteroaromático de 5-14 membros, ou um heteroaromático de 5-10 membros. Em algumas

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 36/133 / 99 modalidades, os grupos heteroarila -heteroarila são grupos em que todos os sistemas de anéis heteroaromáticos de origem são idênticos. Em algumas modalidades, os radicais heteroarila -heteroarila são aqueles em que cada grupo heteroarila é derivado de sistemas de anéis heteroaromáticos de origem em que quaisquer heteroátomos de anel são nitrogênios, como imidazol, indol, indazol, isoindol, naftiridina, pteridina, isoquinolina, ftalazina, purina, pirazol, pirazina, piridazina, piridina, pirrol, quinazolina, quinolina, etc.

[0054] O termo “bi-heteroarila”, como usado aqui, se refere a um radical heteroarila-heteroarila tendo dois sistemas de anel heteroaromático de origem, idênticos, unidos diretamente em conjunto por uma ligação simples. Grupos bi-heteroarila típicos incluem, mas não se limitam a, bipiridila, bipurinila, biquinolinila e semelhantes. Em algumas modalidades, os sistemas de anel heteroaromático são anéis heteroaromáticos de 5-14 membros ou anéis heteroaromáticos de 5-10 membros. Em algumas modalidades, os radicais bi-heteroarila são aqueles em que os grupos heteroarila são derivados de um sistema de anel heteroaromático de origem em que quaisquer heteroátomos no anel são nitrogênios, tais como bi-imidazolila, bi-indolila, biindazolila, bi-isoindolila, binaftiridinila, bipteridinila, bi-isoquinolinila, biftalazinila, bipurinila, bipirazolila, bipirazinila, bipiridazinila, bipiridinila, bipirrolila, biquinazolinila, biquinolinila, etc.

[0055] O termo “heteroarilalquila”, como usado aqui, se refere a um radical alquila acíclico em que um dos átomos de hidrogênio ligado a um átomo de carbono, tipicamente um átomo de carbono terminal ou sp2, é substituído por um radical heteroarila. Quando frações alquila específicas são pretendidas, a nomenclatura heteroarilalcanila, heteroarilalquenila e/ou heteroalquinila é usada. Em algumas modalidades, o grupo heteroarilalquila é uma heteroarilalquila com 6-20 membros, por exemplo, a fração alcanila, alquenila ou alquinila do heteroarilalquila tem 1-6 membros e a fração heteroarila é uma heteroarila com 5-14 membros. Em algumas modalidades,

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 37/133 / 99 uma heteroarilalquila é uma heteroarilalquila com 6-13 membros, por exemplo, a fração alcanila, alquenila ou alquinila tem 1-3 membros e a fração heteroarila é uma heteroarila com 5-10 membros.

[0056] O termo “substituído”, como usado aqui, se refere a um radical no qual um ou mais átomos de hidrogênio são, cada um, independentemente substituídos com o(s) mesmo(s) ou diferente(s) substituinte(s). Substituintes típicos incluem, mas não estão limitados a, —X, —R, —O-, =O, —OR, — O—OR, —SR, —S-, =S, —NRR, =NR, perhalo (C1-C6) alquila, —CX3, — CF3, —CN, —OCN, —SCN, —NCO, —NCS, —NO, —NO2, =N2, —N3, —S(O)2O-, —S(O)2OH, —S(O)2R, —C(O)R, —C(O)X, —C(S)R, — C(S)X, —C(O)OR, —C(O)O-, —C(S)OR, —C(O)SR, —C(S)SR, — C(O)NRR, —C(S)NRR e —C(NR)NRR, onde cada X é independentemente um halogênio (por exemplo, —F ou —Cl) e cada R é independentemente hidrogênio, alquila, alcanila, alquenila, alcanila, arila, arilalquila, arilarila, heteroarila, heteroarilalquila ou heteroarila -heteroarila, como definido aqui. O substituinte real que substitui qualquer grupo particular dependerá da identidade do grupo que está sendo substituído.

[0057] O termo “ solvato”, como usado aqui, se refere a um agregado que compreende uma ou mais moléculas de um composto da divulgação com uma ou mais moléculas de solvente. Exemplos de solventes que formam solvatos incluem, mas não estão limitados a, água, isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etila, ácido acético e etanolamina. O termo “hidrato” se refere ao agregado ou complexo em que a molécula de solvente é água. O solvente pode ser solvente inorgânico, como, por exemplo, água em cujo caso o solvato pode ser um hidrato. Alternativamente, o solvente pode ser um solvente orgânico, tal como etanol. Assim, os compostos da presente divulgação podem existir como um hidrato, incluindo um mono-hidrato, dihidrato, hemi-hidrato, sesqui-hidrato, tri-hidrato, tetra-hidrato ou semelhante, bem como as formas solvatadas correspondentes. O composto da divulgação

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 38/133 / 99 pode ser solvatos verdadeiros, enquanto em outros casos, o composto da divulgação pode apenas reter água acidental ou ser uma mistura de água mais algum solvente adventício.

[0058] O termo “oxiesterol” como usado aqui pretende englobar uma ou mais formas de colesterol oxidado. Os oxiesteróis aqui descritos são quer de forma independente quer coletivamente ativos para o crescimento ósseo em um paciente, como descrito no documento WO 2013169399 A1, que é aqui incorporado por referência na sua totalidade.

[0059] O oxiesterol, esterol ou diol podem estar em um sal farmaceuticamente aceitável. Alguns exemplos de sais potencialmente farmaceuticamente aceitáveis incluem os ácidos e bases formadores de sais que não aumentam substancialmente a toxicidade de um composto, tais como sais de metais alcalinos tais como magnésio, potássio e amônio, sais de ácidos minerais tais como cloridrato, ácido iodídrico, bromídrico, fosfórico, metafosfórico, nítrico e sulfúrico, bem como sais de ácidos orgânicos tais como ácidos tartárico, acético, cítrico, málico, benzoico, glicólico, glucônico, gulônico, succínico, arilsulfônico, por exemplo, ácidos p-toluenossulfônico, ou semelhantes.

[0060] Os sais farmaceuticamente aceitáveis de oxiesterol, esterol ou diol incluem sais preparados a partir de bases ou ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis incluindo bases inorgânicas ou orgânicas, ácidos inorgânicos ou orgânicos e ácidos graxos. Os sais derivados de bases inorgânicas incluem alumínio, amônio, cálcio, cobre, férrico, ferroso, lítio, magnésio, sais mangânicos, manganoso, potássio, sódio, zinco, e semelhantes. Os sais derivados de bases orgânicas não tóxicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas e resinas de troca iônica básicas, tais como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N’- dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 39/133 / 99 dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenodiamina, N-etilmorfolina, Netilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, poliamina resinas, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina e semelhantes. Quando o composto do presente pedido de patente é básico, os sais podem ser preparados a partir de ácidos não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis, incluindo ácidos inorgânicos e orgânicos. Tais ácidos incluem ácidos acético, benzenossulfônico, benzoico, canforsulfônico, cítrico, etanossulfônico, fórmico, fumárico, glucônico, glutâmico, bromídrico, clorídrico, isetiônico, láctico, maleico, málico, mandélico, metanossulfônico, malônico, mucínico, nítrico, pamárico, pantotênico, fosfórico, propiônico, succínico, sulfúrico, tartárico, ptoluenossulfônico, trifluoroacético e semelhantes. Sais de ácidos graxos podem também ser usados, por exemplo, sais de ácidos graxos com mais que 2 átomos de carbono, mais que 8 átomos de carbono ou mais que 16 átomos de carbono, tais como butírico, caproico, caprílico, cáprico, láurico, mirístico, palmítico, esteárico, araquídico ou semelhantes.

[0061] Em algumas modalidades, a fim de reduzir a solubilidade do oxiesterol, esterol ou diol para auxiliar na obtenção de um efeito de depósito de liberação controlada, o oxiesterol, esterol ou diol é usado como base livre ou usado em um sal que tem relativamente menor solubilidade. Por exemplo, o presente pedido de patente pode utilizar um sal insolúvel, tal como um sal de ácido graxo. Sais de ácidos graxos representativos incluem sais de ácido oleico, ácido linoleico ou sais de ácido graxo com uma solubilidade entre 8 a 20 carbonos, tal como por exemplo, palmeato ou estearato.

[0062] O termo “solvato” é um complexo ou agregado formado por uma ou mais moléculas de um soluto, por exemplo, um composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e uma ou mais moléculas de um solvente. Tais solvatos podem ser sólidos cristalinos com uma razão molar

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 40/133 / 99 substancialmente fixa de soluto e solvente. Solventes adequados incluem, por exemplo, água, etanol, etc.

[0063] Os termos composição “bioativa” ou composição “farmacêutica”, como usados aqui podem ser usados indiferentemente. Ambos os termos se referem a composições que podem ser administradas a um indivíduo. As composições bioativas ou farmacêuticas são por vezes aqui referidas como “composições farmacêuticas” ou “composições bioativas” da divulgação atual. Por vezes, a frase “administração de OXY133” é aqui usada no contexto da administração deste composto a um indivíduo (por exemplo, contatar o indivíduo com o composto, injetar o composto, administrar o composto em um depósito de fármaco, etc.). Deve ser entendido que o composto para tal uso pode geralmente estar na forma de uma composição farmacêutica ou composição bioativa compreendendo o OXY133.

[0064] Uma “quantidade terapeuticamente eficaz” ou “quantidade eficaz” é tal que, quando administrado, o oxiesterol (por exemplo, OXY133), esterol, diol, resulta em alteração da atividade biológica, como, por exemplo, aumento do crescimento ósseo, etc.. A dosagem administrada a um paciente pode ser uma dose única ou múltipla, dependendo de uma variedade de fatores, incluindo as propriedades farmacocinéticas administradas do fármaco, a via de administração, condições e características do paciente (sexo, idade, peso corporal, saúde, tamanho, etc.) e extensão dos sintomas, tratamentos concomitantes, frequência de tratamento e o efeito desejado. Em algumas modalidades, a formulação é projetada para liberação imediata. Em outras modalidades, a formulação é projetada para liberação sustentada. Em outras modalidades, a formulação compreende uma ou mais superfícies de liberação imediata e uma ou mais superfícies de liberação sustentada.

[0065] Um “veículo farmaceuticamente aceitável” pretende significar um material que não é biologicamente ou, de outra forma, indesejável, por exemplo, o material pode ser administrado a um indivíduo, sem causar

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 41/133 / 99 quaisquer e produzidos biológicos indesejáveis ou interagir de um modo prejudicial com qualquer um dos outros componentes da composição farmacêutica em que está contido.

[0066] Os termos “análogo” ou “derivado” como usados aqui se referem a uma molécula química que é semelhante a outra substância química em relação à estrutura e função, frequentemente diferindo estruturalmente por um único elemento ou grupo, que pode diferir por modificação de mais de um grupo (por exemplo, 2, 3 ou 4 grupos) se mantiver a mesma função que a substância química de origem. Tais modificações são de rotina para um versado na técnica e incluem, por exemplo, frações químicas adicionais ou substituídas, tais como ésteres ou amidas de um ácido, grupos de proteção tais como um grupo benzila para um álcool ou tiol, e grupos terc- butoxilcarbonila para uma amina. Também estão incluídas modificações nas cadeias laterais de alquila, tais como substituições de alquila (por exemplo, metila, dimetila, etila, etc.), modificações no nível de saturação ou insaturação de cadeias laterais, e a adição de grupos modificados, tais como fenila e fenóxi substituídos. Os derivados podem também incluir conjugados, tais como frações de biotina ou avidina, enzimas tais como peroxidase de rábano e semelhantes, e frações radiomarcadas, bioluminescentes, quimioluminescentes ou fluorescentes. Além disso, as frações podem ser adicionadas aos agentes aqui descritos para alterar as suas propriedades farmacocinéticas, tais como aumentar a meia vida in vivo ou ex vivo, ou para aumentar as suas propriedades de penetração celular, entre outras propriedades desejáveis. Também estão incluídos os derivados de OXY133, que são conhecidos por melhorar numerosas qualidades desejáveis de produtos farmacêuticos (por exemplo, solubilidade, biodisponibilidade, fabricação, etc.). O termo “derivado” também inclui dentro do seu escopo alterações que foram feitas em uma sequência de origem incluindo adições,

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 42/133 / 99 deleções e/ou substituições que proporcionam moléculas funcionalmente equivalentes ou funcionalmente melhoradas.

[0067] O termo “fração” se refere a uma parte de uma molécula.

[0068] Um “depósito” inclui, mas não está limitado a, cápsulas, microesferas, micropartículas, microcápsulas, partículas de microfibra, nanoesferas, nanopartículas, revestimentos, matrizes, wafers, pílulas, péletes, emulsões, lipossomas, micelas, géis ou outras composições farmacêuticas ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, os materiais adequados para o depósito são biodegradáveis farmaceuticamente aceitáveis e/ou de quaisquer materiais bioabsorvíveis que são aprovados pela FDA ou materiais de GRAS. Estes materiais podem ser poliméricos ou não poliméricos, bem como sintéticos ou de ocorrência natural, ou uma combinação dos mesmos.

[0069] O termo “implantável”, como usado aqui, se refere a um dispositivo de compatibilidade biocompatível (por exemplo, depósito de fármaco) para uma colocação com sucesso em um mamífero. A expressão “dispositivo implantável” e expressões semelhantes, como usado aqui, se refere a um objeto implantável através de cirurgia, injeção ou outros meios adequados cuja função principal é conseguida através da sua presença física ou propriedades mecânicas.

[0070] A aplicação “localizada” inclui a aplicação onde um ou mais fármacos são depositados dentro de um tecido, por exemplo, uma cavidade óssea, ou em estreita proximidade (dentro de cerca de 0,1 cm, ou, de preferência, dentro de cerca de 10 cm, por exemplo). Por exemplo, a dose de fármaco administrada localmente a partir do depósito de fármaco pode ser, por exemplo, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99%, 99,9% ou 99,999% menos que a dose oral ou dose injetável.

[0071] O termo “mamífero” se refere a organismos da classe taxonômica “mamífero” incluindo, mas não se limitando a, humanos, outros

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 43/133 / 99 primatas tais como chimpanzés, símios, orangotangos e macacos, ratos, camundongos, gatos, cães, vacas, cavalos, etc.

[0072] O oxiesterol pode ser “osteogênico”, onde ele pode aumentar ou acelerar o crescimento interno de novos tecidos ósseos por um ou mais mecanismos, como osteogênese, osteocondução e/ou osteoindução.

[0073] Novas composições e métodos são fornecidos para produzir oxiesteróis de maneira eficiente e segura, incluindo o OXY133. Os métodos e composições que podem gerar o OXY133 de forma eficiente e segura também são fornecidos.

[0074] Os títulos das seções abaixo não devem ser restringidos e podem ser intercambiados com outros títulos de seção.

Oxiesteróis [0075] A presente divulgação inclui um oxiesterol osteogênico (por exemplo, OXY133), esterol ou diol e sua capacidade de promover a diferenciação osteogênica in vitro. OXY133 é um agente osteogênico particularmente eficaz. Em várias aplicações, o OXY133 é útil no tratamento de condições que beneficiariam da estimulação localizada da formação óssea, como, por exemplo, fusão espinhal, reparação de fraturas, aplicações regenerativas/teciduais ósseas, aumento da densidade óssea na mandíbula para implantes dentários, osteoporose ou semelhante. Uma vantagem particular do OXY133 é que ele fornece maior facilidade de síntese e melhor tempo de fusão quando comparado a outros oxiesteróis osteogênicos. OXY133 é uma molécula pequena que pode servir como um agente terapêutico anabólico para o crescimento ósseo, bem como um agente útil para o tratamento de uma variedade de outras condições.

[0076] Um aspecto da divulgação da aplicação é um composto, chamado OXY133, tendo a Fórmula:

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ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo. O OXY133 pode ser usado como uma composição bioativa ou farmacêutica compreendendo OXY133 ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo e um veículo farmaceuticamente aceitável.

[0077] Outro aspecto da divulgação é um método para induzir (estimular, intensificar) uma resposta mediada pela via hedgehog (Hh), em uma célula ou tecido, compreendendo o contato da célula ou tecido com uma quantidade terapeuticamente eficaz de OXY133. A célula ou tecido pode ser in vitro ou em um indivíduo, tal como um mamífero. A resposta mediada pela via hedgehog (Hh) envolve a estimulação da diferenciação osteoblástica, osteomorfogênese e/ou osteoproliferação; a estimulação do crescimento capilar e/ou formação de cartilagem; a estimulação da neovasculogênese, por exemplo, angiogênese, aumentando assim o fornecimento de sangue aos tecidos isquêmicos; ou é a inibição da diferenciação de adipócitos, morfogênese de adipócitos e/ou proliferação de adipócitos; ou a estimulação de células progenitoras a sofrerem neurogênese. A resposta mediada por Hh pode compreender a regeneração de qualquer uma de uma variedade de tipos de tecidos, para uso em medicina regenerativa. Outro aspecto da divulgação é um método para o tratamento de um indivíduo com um distúrbio ósseo, osteopenia, osteoporose ou uma fratura óssea compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz de uma composição bioativa ou composição farmacêutica compreendendo OXY133. O indivíduo pode administrar a composição bioativa ou composição farmacêutica a uma dose terapeuticamente eficaz em uma forma de dosagem eficaz em um intervalo selecionado para, por exemplo, aumentar a massa óssea, melhorar os sintomas

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 45/133 / 99 de osteoporose, reduzir, eliminar, prevenir ou tratar lesões aterosclericas, ou semelhante. O indivíduo pode ser administrado com a composição bioativa ou composição farmacêutica a uma dose terapeuticamente eficaz em uma forma de dosagem eficaz em um intervalo selecionado para melhorar os sintomas da osteoporose. Em algumas modalidades, uma composição compreendendo OXY133 pode incluir células-tronco mesenquimais para induzir a diferenciação osteoblástica das células em uma área cirúrgica alvo.

[0078] Em vários aspectos, o OXY133 pode ser administrado a uma célula, tecido ou órgão por administração local. Por exemplo, o OXY133 pode ser aplicado localmente com um creme ou semelhante, ou pode ser injetado ou introduzido diretamente em uma célula, tecido ou órgão, ou pode ser introduzido com um dispositivo médico adequado, como um depósito de fármaco como discutido aqui.

[0079] Em algumas modalidades, a dosagem de OXY133, esterol ou diol é de aproximadamente 10 pg/dia a aproximadamente 80 mg/dia.

Dosagens adicionais	de OXY133, esterol ou diol incluem de
aproximadamente	2,4	ng/dia	a	aproximadamente	50	mg/dia;
aproximadamente	50	ng/dia	a	aproximadamente	2,5	mg/dia;
aproximadamente	250	ng/dia	a	aproximadamente	250	mcg/dia;
aproximadamente	250	ng/dia	para	aproximadamente	50	mcg/dia;
aproximadamente	250	ng/dia	a	aproximadamente	25	mcg/dia;
aproximadamente	250	ng/dia	a	aproximadamente	1	mcg/dia;
aproximadamente	300	ng/dia	a aproximadamente 750 ng/dia ou

aproximadamente 0,50 mcg/dia a 500 ng/dia. Em várias modalidades, a dose pode ser de cerca de 0,01 a aproximadamente 10 mcg/dia ou aproximadamente 1 ng/dia a cerca de 120 mcg/dia.

[0080] Em adição ao composto de OXY133, esterol, ou diol outras modalidades da divulgação abrangem quaisquer e todos os estereoisômeros individuais em qualquer um dos estereocentros presentes em OXY133,

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 46/133 / 99 incluindo diastereoisômeros, racematos, enantiômeros e outros isômeros do composto. Em algumas modalidades da divulgação, OXY133, esterol, oxiesterol, diol podem incluir todos os polimorfos, solvatos ou hidratos do composto, tais como hidratos e aqueles formados com solventes orgânicos. [0081] A capacidade de preparar sais depende da acidez ou basicidade de um composto. Sais adequados do composto incluem, mas não estão limitados a, sais de adição de ácido, tais como aqueles produzidos com ácido clorídrico, bromídrico, iodídrico, perclórico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, acético, propiônico, glicólico, láctico, pirúvico, malônico, succínico, maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, benzoico, cinâmico, carbônico, mandélico, metanossulfônico, etanossulfônico, hidroxietanossulfônico, benzenossulfônico, p-toluenossulfônico, ciclo-hexanossulfâmico, salicíclico, p-aminossalicílico, 2-fenoxibenzoico e 2-acetoxibenzoico; sais produzidos com sacarina; sais de metais alcalinos, tais como sais de sódio e potássio; sais de metais alcalino-terrosos, tais como sais de cálcio e magnésio; e sais formados com ligantes orgânicos ou inorgânicos, tais como sais de amônio quaternário. Sais adequados adicionais incluem, mas não estão limitados a, acetato, benzenossulfonato, benzoato, bicarbonato, bissulfato, bitartarato, borato, brometo, edetato de cálcio, camsilato, carbonato, cloreto, clavulanato, citrato, dicloridrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilearanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromidrato, cloridrato, hidroxinaftoato, iodeto, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbrometo, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, sal de N-metilglucamina amônio, oleato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, sulfato, subacetato, succinato, tanato, tartarato, teoclato, tosilato, trietiodeto e valerato dos compostos.

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40/99 [0082] Em várias modalidades, ο OXY133, esterol ou diol incluem uma ou mais funções biológicas. Isto é, OXY133, esterol ou diol podem induzir uma resposta biológica quando contatados com uma célula-tronco mesenquimal ou com uma célula estromal da medula óssea. Por exemplo, o OXY133, o esterol ou o diol podem estimular a diferenciação osteoblástica. Em algumas modalidades, uma composição bioativa incluindo OXY133 esterol, ou diol pode incluir uma ou mais funções biológicas quando administrada a uma célula de mamífero, por exemplo, uma célula in vitro ou uma célula em um humano ou em um animal. Por exemplo, tal composição bioativa pode estimular a diferenciação osteoblástica. Em algumas modalidades, tal função biológica pode surgir da estimulação da via de hedgehog.

Métodos de Preparação de um Diol Intermediário [0083] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece um método para a preparação de um diol intermediário usado na produção de OXY133, como mostrado abaixo. O diol pode ser usado para promover o crescimento ósseo também. Os métodos anteriores de síntese para a produção de OXY133 eram ineficientes e inadequados para a fabricação em escala. Alguns estereoisômeros de OXY133 têm um desempenho menos ideal que outros. O método divulgado é estereosseletivo e produz um alto rendimento da forma isomérica específica do diol mostrado abaixo, que foi mostrado para produzir uma forma isomérica opticamente eficaz de OXY133.

[0084] São divulgadas múltiplas modalidades de reações para sintetizar o diol intermediário. O diol sintetizado tem a designação IUPAC

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41/99 (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-dimeil-17-[(S)-2-hidroxioctan-il]

2,3,4,7,8,9,ll,12,14,15,16,17-dodecahidro-lH-ciclopenta[a]fenantren-3-ol.

Geralmente, o método de sintetizar o diol inclui reagir pregnenolona, acetato de pregnenolona ou um derivado de pregnenolona com um reagente organometálico para facilitar a alquilação da posição C20, como mostrado abaixo:

Esquema 1

^C23^H34°3 mw 358,51 g/m ^C27^H46°2 mw 402,67 g/m

Acetato de Pregnenolona Diol [0085] Em uma modalidade, como mostrado acima no esquema 1, o acetato de pregnenolona (Fórmula 1) pode ser alquilado por um reagente organometálico para sintetizar o diol intermediário, mostrado acima como Fórmula 2. Em algumas modalidades, acetato de pregnenolona é reagido com um reagente de Grignard para facilitar alquilação da posição C20 na molécula de acetato de pregnenolona. Em algumas modalidades, o cloreto de nhexilmagnésio é usado como o reagente organometálico.

Esquema 2

mw 316,48 g/m mw 402,67 g/m

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 49/133 / 99 [0086] Em algumas modalidades, como mostrado acima no esquema

2, a pregnenolona é reagida com um reagente de Grignard tal como cloreto de n- hexilmagnésio para facilitar a alquilação da posição C20 da molécula de pregnenolona para formar o diol intermediário mostrado como Fórmula 2.

[0087] O método para sintetizar o diol intermediário (Fórmula 2) ou (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-dimetil-17-[(S)-2-hidroxioctan-il]2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1 H-cyclopenta[a]phenanthren-3ol é estereosseletivo e produz um elevado rendimento do diol. Por exemplo, em algumas modalidades, o rendimento do estereoisômero desejado do diol é entre cerca de 60% e cerca de 70%. Em algumas modalidades, o rendimento do estereoisômero desejado do diol é entre cerca de 50% e cerca de 60%. No entanto, é contemplado que o rendimento percentual pode ser maior ou menor que essas quantidades. Por exemplo, o rendimento percentual da Fórmula 2, como mostrado acima, pode ser cerca de 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou 95%. Em algumas modalidades, o rendimento percentual pode ser maior que 95%.

[0088] Em várias modalidades, a reação de alquilação é realizada em um solvente orgânico polar, tal como o tetra-hidrofurano. Contudo, a reação pode ser realizada em uma variedade de solventes orgânicos polares. Por exemplo, a reação pode ser realizada em éter dietílico, éter etílico, éter dimetílico ou semelhante.

[0089] Em algumas modalidades, a pregnenolona ou acetato de pregnenolona é usada como um reagente de partida. Contudo, em outras modalidades, podem ser usados derivados de acetato de pregnenolona. Por exemplo, outros exemplos específicos de compostos que podem ser usados na presente invenção incluem: sulfato de pregnenolona, fosfato de pregnenolona, formiato de pregnenolona, hemioxalato de pregnenolona, hemimalonato de pregnenolona, hemiglutarato de pregnenolona, 20-oxopregn-5-en-3P-il carboximetil éter, sulfato de 3P-hidróxi-pregn-5-en-20-ona, 3-hidróxi-19

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 50/133 / 99 norpregna-1,3,5(10)-trien-20-ona, 3-hidróxi-19-norpregna-1,3,5(10),6,8pentaen-20-ona, sulfato de 17a-isopregnenolona, sulfato de 17-acetóxipregnenolona, sulfato de 21-hidróxi-pregnenolona, 20e-acetóxi-3e-hidróxipregn-5-ene-sulfato, sulfato de pregnenolona 20-etilenocetal, sulfato de pregnenolona 20-carboximetiloxima, sulfato de 20-deóxi-pregnenolona, sulfato de 21-acetóxi-17-hidróxi-pregnenolona, sulfato de 17-propilóxipregnenolona, sulfato de 17-butilóxi-pregnenolona, 21-tiol ésteres de sulfato de pregnenolona, piridínio, imidazólio, sulfato de 6-metilpregnenolona, sulfato de 6,16a-dimetilpregnenolona, sulfato de 33-hidróxi-6-metilpregna5,16-dien-20-ona, sulfato de 3e-hidróxi-6,16-dimetilpregna-5,16-dien-20-ona, sulfato de 3P-hidróxi-pregna-5,16-dien-20-ona, sulfato de diosgenina, sulfato de éster metílico de ácido 3e-hidroxiandrost-5-en-173-carboxílico, formato de 3α hidróxi-5P-pregnan-20-ona, 3a-hidróxi-5P-pregnan-20-ona hemioxalato, 3a-hidróxi-5e-pregnan-20-ona hemimalonato, hemisuccinato de 3a-hidróxi5P-pregnan-20-ona, hemiglutarato de 3a-hidróxi-5P-pregnan-20-ona, estradiol-3-formato, estradiol-3-hemioxalato, estradiol-3-hemimalonato, estradiol-3-hemisuccinato, estradiol-3-hemiglutarato, estradiol-17-metil éter, estradiol-17-formato, estradiol-17-hemioxalato, estradiol-17-hemimalonato, hemisuccinato de estradiol-17-, hemiglutarato de estradiol-17-, estradiol-3metil éter, 17-deoxiestrona, e 17P-hidroxiestra-1,3,5(10)-trien-3-il carboximetil éter.

[0090] Em algumas modalidades, o organometálico compreende cloreto de n-hexilmagnésio. Contudo, em algumas modalidades, a reação de alquilação pode ser realizada com o uso de um alquil-lítio, tal como, por exemplo, n-hexil-lítio. Em várias modalidades, o organometálico inclui um haleto de alquila. Por exemplo, o reagente organometálico pode ter a seguinte Fórmula:

R-Mg-X,

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 51/133 / 99 onde Mg compreende magnésio, X compreende cloro, bromo, flúor, iodo ou astatina e R compreende uma alquila, uma heteroalquila, uma alcanila, uma heteroalcanila, uma alquenila, uma heteroalquenila, uma alquinila, uma alquildi-ila, uma heteroalquildi-ila, um alquileno, um heteroalquileno, uma arila, uma arildi-ila, um arileno, uma arilarila, uma biarila, uma arilalquila, uma heteroarila, uma heteroarildi-ila, um heteroarileno, uma heteroarilheteroarila, uma bi-heteroarila, uma heteroarilalquila ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o substituinte R compreende um grupo alquila (C1-C20) ou heteroalquila, (C1-C20) alquila ou heteroalquila, uma (C2-C20) arila ou heteroarila, uma (C6-C26) arilalquila ou heteroalquila e uma (C5-C20) arilalquila ou heteroaril-heteroalquila, uma (C4-C10) alquildi-ila ou heteroalquildi-ila, ou um (C4-C10) alquileno ou heteroalquileno. O substituinte R pode ser cíclico ou acíclico, de cadeia ramificada ou não ramificada, substituída ou não substituída, aromática, saturada ou insaturada, ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o substituinte R é um grupo alifático. Em algumas modalidades, o substituinte R é um grupo cíclico. Em algumas modalidades, o substituinte R é um grupo hexila.

[0091] Alternativamente, o organometálico pode compreender a

Fórmula: R-Li, em que Li compreende lítio e R compreende uma alquila, uma heteroalquila, uma alcanila, uma heteroalcanila, uma alquenila, uma heteroalquenila, uma alquinila, uma heteroalcanila, uma alquildi-ila, uma heteroalquildi-ila, um alquileno, um heteroalquileno, uma arila, uma arildi-ila, um arileno, uma arilarila, uma biarila, uma arilalquila, uma heteroarila, uma heteroarildi-ila, um heteroarileno, uma heteroaril-heteroarila, uma biheteroarila, um heteroarilalquila ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o substituinte R compreende uma (C1-C20) alquila ou heteroalquila, uma (C2-C20) arila ou heteroarila, uma (C6-C26) arilalquila ou heteroalquila e uma (C5-C20) arilalquila ou heteroaril-heteroalquila, uma (C4C10) alquildi-ila ou heteroalquildi-ila, ou uma (C4-C10) alquileno ou

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 52/133 / 99 heteroalquileno. O substituinte R pode ser de cadeia cíclica ou acíclica, ramificada ou não ramificada, substituída ou não substituída, aromática, saturada ou insaturada, ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o substituinte R é um grupo alifático. Em algumas modalidades, o substituinte R é um grupo cíclico. Em algumas modalidades, o substituinte R é um grupo hexila.

[0092] Em algumas modalidades, a reação de alquilação é exotérmica e o vaso de reação pode ser controlado por temperatura para manter a cinética de reação ótima. Em algumas modalidades, a reação exotérmica libera cerca de 1000 BTU por libra de solução. Devido à natureza fortemente exotérmica da reação, o reagente de Grignard, portanto, deve ser adicionado lentamente, de modo que componentes voláteis, como por exemplo, éteres, não são vaporizados em função do calor de reação. Em algumas modalidades, o vaso de reação pode ser resfriado por serpentinas internas de resfriamento. As serpentinas de resfriamento podem ser fornecidas com um líquido de resfriamento por meio de um unidade de refrigeração de gás/líquido externa. Em algumas modalidades, uma temperatura interna do vaso de reação é mantida a menos de 15°C, 10°C, 5°C ou 1°C. Em algumas modalidades, o vaso de reação é mantido a cerca de 0°C durante a reação de alquilação para formar o diol intermediário de Fórmula 2.

[0093] Em várias modalidades, o diol da Fórmula 2 é sintetizado juntamente com subprodutos e pode ser purificado. Por exemplo, o diol resultante de Fórmula 2 pode ser um subproduto de uma mistura diastereoisomérica. Em várias modalidades, o diol de Fórmula 2 pode ser isolado e purificado. Isto é, o diol de Fórmula 2 pode ser isolado e purificado até a pureza desejada, por exemplo, de cerca de 95% a cerca de 99,9% por filtração, centrifugação, destilação, que separa líquidos voláteis com base nas suas volatilidades relativas, cristalização, recristalização, evaporação para remover líquidos voláteis de solutos não voláteis, extração por solventes para

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 53/133 / 99 remover impurezas, dissolvendo a composição em um solvente em que outros componentes são solúveis ou outros métodos de purificação. O diol pode ser purificado por contato com solventes orgânicos e/ou inorgânicos, por exemplo, THF, água, éter dietílico, diclorometano, acetato de etila, acetona, n,n-dimetilformamida, acetonitrila, dimetilsulfóxido, amônia, t-butanol, npropanol, etanol, metanol, ácido acético ou uma combinação dos mesmos.

[0094] Em várias modalidades, a etapa de alquilação e a etapa de purificação ocorrem no mesmo vaso de reação.

[0095] Em algumas modalidades, o diol é resfriado bruscamente com cloreto de amônio aquoso ou ácido acético para reduzir a quantidade de ânions presentes e neutralizar a reação, que é, então, separada da camada orgânica resultante. O resíduo separado é recuperado por evaporação e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel.

[0096] O diol pode ser anidro ou na forma mono-hidratada. Contudo, em outras modalidades, o diol purificado pode ser cristalizado em outras formas hidratadas, tais como, por exemplo, um di-hidrato, um hemi-hidrato, um sesqui-hidrato, um tri-hidrato, um tetra-hidrato e semelhantes, bem como as formas solvatadas correspondentes. Em outras modalidades, o diol purificado é cristalizado como um co-cristal ou um sal farmaceuticamente aceitável.

Métodos para Fabricação de OXY133 [0097] Em algumas modalidades, a presente divulgação fornece um método para a preparação de um OXY133, como mostrado abaixo. Os métodos anteriores de síntese para OXY133 produzem misturas diastereoisoméricas de intermediários de OXY133 que requerem métodos de purificação para separação. Como discutido acima para formar o diol intermediário, o método divulgado é estereosseletivo e produz um alto rendimento das formas isoméricas específicas de OXY133. A Fórmula do OXY133 é mostrada abaixo.

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[0098] São divulgadas múltiplas modalidades de reações para sintetizar OXY133. OXY133 tem a designação (3S,5S,6S,8R,9S,10R,13S,14S,17S)-17-((S)-2-hidroxioctan-2-il)-10,13dimetilhexadecahydro-lH-cyclopenta[a]phenanthrene-3,6-diol. OXY133 foi previamente sintetizado através de um processo complexo não adequado para o aumento de escala, como mostrado abaixo:

Esquema 3

[0099] No entanto, a reação tem dificuldade em ser realizada em um único recipiente. A reação mostrada acima envolve mais reagentes para realizar etapas de reação (por exemplo, grupos e etapas de bloqueio e desproteção) que têm um impacto ambiental adverso. Adicionalmente, os métodos conhecidos envolvem reagentes que são caros e frequentemente difíceis de obter. Além disso, o método mostrado no Esquema 3 produz rendimentos relativamente baixos, tem mais produtos de degradação, impurezas e cria muitos subprodutos tóxicos.

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48/99 [00100] Geralmente, o método para sintetizar OXY133 como aqui divulgado inclui reagir o diol sintetizado como aqui descrito com borano na reação mostrada abaixo:

Esquema 4

mw 402,67 g/m mw 420,67 g/m

Diol [00101] Em algumas modalidades, OXY133 bruto e não purificado é produzido através de uma reação de hidroboração e oxidação do diol intermediário tendo Fórmula 2 no Esquema De reação 4. Os compostos de borano que podem ser usados na reação incluem BH3, B2H6, BH3S(CH3)2 (BMS), adutos de borano com fosfinas e aminas, por exemplo, borano trietilamina; boranos monossubstituídos da forma RBH2 onde R = alquila e haleto, boranos monoalquílicos (por exemplo, IpcBH₂, monoisopinocamfeilborano), monobromo- e monocloro borano, complexos de monocloroborano e 1,4-dioxano, boranos dissubstituídos incluindo boranos volumosos, tais como, por exemplo, compostos tais como dietilborano dialquilborano, bis-3-metil-2-butilborano (disiamilborano), 9borabiciclo[3,3,l]nonano (9-BBN), disiamilborano (Sia2BH), diciclohexilborano (Chx2BH), trialquilboranos, dialquilhalogenoboranos, dimesitilborano (ΕοίΕΜε,ΕΒΗ, alquenilboranos, pinacolborano, ou catecolborano ou uma combinação dos mesmos.

[00102] Resumidamente, uma reação de hidroboração e oxidação é uma reação em duas etapas. O boro e hidrogênio são adicionados através da ligação dupla de um alqueno para formar um complexo com o alqueno. Assim, a fase de boração da reação é estereosseletiva e regiosseletiva. A fase

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 56/133 / 99 de oxidação da reação envolve peróxido de hidrogênio aquoso básico para fornecer um substituinte hidroxila no lugar do boro. Ver Vollhart, KP, Schore, NE, 2007, Organic Chemistry: Structure and Function, quinta Ed., New York, NY, Custom Publishing Company. Assim, o diol intermediário protegido com a Fórmula 2 reage com borano e peróxido de hidrogênio para formar o OXY133 protegido em C3 em bruto. Em algumas modalidades, a etapa de formar OXY133 bruto ocorre no mesmo recipiente de reação que a reação de alquilação. Em outras modalidades, a etapa de formação de OXY133 bruto ocorre em um vaso de reação diferente do de reação de alquilação.

[00103] A etapa de hidroboração-oxidação da síntese de OXY133, como a etapa de formação de diol intermediário, é estereosseletiva e produz um elevado rendimento. Por exemplo, em algumas modalidades, o rendimento percentual de OXY133 bruto pode ser maior ou menor que estas quantidades. Por exemplo, o rendimento percentual da Fórmula 2, como mostrado acima, pode ser cerca de 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou 95%. Em algumas modalidades, o rendimento percentual pode ser maior que 95%.

[00104] Em várias modalidades, a reação de hidroboração-oxidação é realizada em um solvente orgânico polar, tal como tetra-hidrofurano. Contudo, a reação pode ser realizada em uma variedade de solventes orgânicos polares. Por exemplo, a reação pode ser realizada em éter dietílico, éter etílico, éter dimetílico ou semelhante.

[00105] Em algumas modalidades, a reação de oxidação-hidratação é exotérmica e o vaso de reação deve ter temperatura controlada para manter a cinética de reação ideal. Especificamente, a fase de oxidação é extremamente exotérmica. Devido à natureza fortemente exotérmica da reação, o peróxido de hidrogênio, portanto, pode ser adicionado lentamente, de modo que componentes voláteis, por exemplo, éteres, não são vaporizados em função do

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 57/133 / 99 calor de reação. Em algumas modalidades, o vaso de reação pode ser resfriado por serpentinas internas de resfriamento. As serpentinas de resfriamento podem ser fornecidas com um líquido de resfriamento por meio de uma unidade de refrigeração gás/líquido externa. Em algumas modalidades, uma temperatura interna do vaso de reação é mantida a menos de 10°C, 5°C, 1°C ou 0°C. Em algumas modalidades, o vaso de reação é mantido a cerca de -5°C durante a reação de hidroboração-oxidação.

[00106] Em certas modalidades, o diol protegido pode ter uma cristalinidade percentual de uma forma de sal, hidrato, solvato ou cristalino de diol como sendo pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, em pelo menos 50%, pelo menos, 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 99%. Em algumas modalidades, a cristalinidade percentual pode ser substancialmente 100%, em que substancialmente 100% indica qual a quantidade total de diol parece ser cristalina que pode ser determinada melhor utilizando métodos conhecidos na técnica. Consequentemente, quantidades terapeuticamente eficazes de diol podem incluir quantidades que variam em cristalinidade. Estes incluem casos em que uma quantidade do diol cristalizado em uma forma sólida é subsequentemente dissolvida, parcialmente dissolvida, suspensa ou dispersa em um líquido.

Purificação de OXY133 [00107] Em algumas modalidades, o OXY133 bruto deve ser separado da mistura de reação antes da purificação. Em algumas modalidades, um solvente orgânico tal como diclorometano é adicionado à em mistura de reação de OXY133 bruto e a camada orgânica resultante é separada. Uma vez separado, o OXY133 bruto existe como uma massa viscosa semissólida. O OXY133 bruto pode ser dissolvido por qualquer meio adequado (por exemplo, diclorometano, etc.) e colocado em uma coluna de sílica gel com um solvente orgânico, tal como metanol-acetato de etila, para solvatar o

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ΟΧΥ133 bruto. Em algumas modalidades, ο OXY133 bruto pode ser cristalizado ou recristalizado. Em algumas modalidades, ο OXY133 purificado é formado por recristalização do OXY133 bruto em uma mistura 3:1 de acetona/água, como mostrado abaixo:

Esquema 5

^C27^H48°3 ^C27^H48°3 * ^H2° mw 420,67 g/m mw 438,69 g/m [00108] Como mostrado acima, após a cristalização, ο OXY133 purificado forma um hidrato. No entanto, pode estar na forma anidra. Em algumas modalidades, a cristalinidade percentual de qualquer uma das formas cristalinas de OXY133 aqui descritas pode variar em relação à quantidade total de OXY133.

[00109] Em certas modalidades, ο OXY133 pode ter uma cristalinidade percentual de um sal, hidrato, solvato ou forma cristalina de OXY133 como sendo pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos, 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 99%. Em algumas modalidades, a cristalinidade percentual pode ser substancialmente 100%, em que substancialmente 100% indica qual a quantidade total de OXY133 parece ser cristalina, que pode ser melhor determinado utilizando métodos conhecidos na técnica. Consequentemente, quantidades terapeuticamente eficazes de OXY133 podem incluir quantidades que variam em cristalinidade. Estes incluem casos em que uma quantidade de OXY133 cristalizado em uma forma sólida é subsequentemente dissolvida, parcialmente dissolvida, ou suspensa ou dispersa em um líquido.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 59/133 / 99 [00110] Em uma modalidade, o OXY133 purificado é cristalizado como um mono-hidrato. Contudo, em outras modalidades, o OXY133 purificado pode ser cristalizado em outras formas hidratadas, tais como, por exemplo, um di-hidrato, um hemi-hidrato, um sesqui-hidrato, um tri-hidrato, um tetra-hidrato e semelhantes, bem como as formas solvatadas correspondentes. Em outras modalidades, o OXY133 purificado é cristalizado como um co-cristal ou um sal farmaceuticamente aceitável.

[00111] Em algumas modalidades, a mistura de reação contendo o OXY133 bruto pode ser solidificado por mistura com heptanos. O produto pode subsequentemente ser filtrado e suspenso em cloreto de metileno. Em algumas modalidades, o OXY133 bruto pode ser filtrado da suspensão e cristalizado com o uso de acetona e água ou outros solventes orgânicos ou inorgânicos (por exemplo, éter dietílico, diclorometano, acetato de etila, acetona, n,n-dimetilformamida, acetonitrila, sulfóxido de dimetila, amônia, tbutanol, n-propanol, etanol, metanol, ácido acético ou uma combinação dos mesmos).

[00112] Em várias modalidades, o OXY133 bruto pode ser isolado e purificado por quaisquer outros meios tradicionais. Ou seja, o OXY133 bruto pode ser isolado e purificado até a pureza desejada, por exemplo, de cerca de 95% a cerca de 99,9% por filtração, centrifugação, destilação para separar líquidos voláteis com base em suas volatilidades relativas, cristalização, recristalização, evaporação para remover líquidos voláteis de solutos não voláteis, extração por solventes para remover impurezas, dissolvendo a composição em um solvente em que outros componentes são solúveis na mesma ou outros métodos de purificação. Em várias modalidades, a etapa de hidroboração-oxidação e a etapa de purificação ocorrem no mesmo vaso de reação. Em várias modalidades, a etapa de alquilação, a etapa de hidroboraçao-oxidação e a etapa de purificação ocorrem no mesmo vaso de reação.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 60/133 / 99 [00113] O método para sintetizar o diol intermediário (Fórmula 2) é estereosseletivo e produz um elevado rendimento de OXY133. Por exemplo, em algumas modalidades, o rendimento do OXY133 purificado é entre cerca de 20% e cerca de 99%. Em algumas modalidades, o rendimento do OXY133 purificado está entre cerca de 20% e cerca de 80%. Em algumas modalidades, o rendimento do OXY133 purificado está entre cerca de 25% e cerca de 70% ou cerca de 28%. No entanto, é contemplado que o rendimento percentual possa ser maior ou menor que essas quantidades.

[00114] Em algumas modalidades, o OXY133 purificado é formado na forma de cristais através de cristalização, que separa o OXY133 a partir da corrente de alimentação líquida por resfriamento da corrente de alimentação líquida ou adição de precipitantes que reduzem a solubilidade de subprodutos e reagentes não usados na mistura de reação assim que o OXY133 forma cristais. Em algumas modalidades, os cristais sólidos são então separados do licor restante por filtração ou centrifugação. Os cristais podem ser ressolubilizados em um solvente e depois recristalizados e os cristais são então separados do licor restante por filtração ou centrifugação para obter uma amostra altamente pura de OXY133. Em algumas modalidades, os cristais podem então ser granulados para o tamanho de partícula desejado.

[00115] Em algumas modalidades, a pureza do OXY133 obtido é verificada através de ressonância magnética nuclear ou espectroscopia de massa. Como mostrado nas FIGS. 2-5, as análises de ¹H NMR, ¹³C NMR, espectroscopia no infravermelho e espectroscopia de massa indicaram que o produto OXY133 tinha elevada pureza (por exemplo, com 98% a cerca de 99,99% em peso de pureza).

[00116] Em algumas modalidades, o OXY133 bruto pode ser purificado, onde o OXY133 purificado é formado na forma cristalizada em um solvente e, em seguida, removido do solvente para formar um OXY133 com elevado grau de pureza tendo uma pureza de cerca de 98% a cerca de

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99,99%. Em algumas modalidades, ο OXY133 pode ser recuperado por filtração ou filtração a vácuo antes ou depois da purificação.

Métodos para Preparação de Derivados de Pregnenolona [00117] Em algumas modalidades, esta divulgação fornece métodos para a preparação de derivados de pregnenolona que são materiais de partida úteis na preparação de derivados de diol, que, por sua vez, são adequados para a preparação de análogos de OXY133. Estes derivados de pregnenolona são protegidos na posição C3. Derivados de pregnenolona úteis incluem

benzila, carbamato ou um silila. Em algumas modalidades, os derivados de pregnenolona incluem compostos em que Ri pode ser um grupo metila, etila, benzila, terc-butildimetilsilila (TBS), terc-butila, alila, tri-isopropilsilila, ou terc-butildimetilsilila. Geralmente, os métodos para sintetizar derivados de pregnenolona são conhecidos na técnica e incluem a síntese de éter de Williamson e a condensação de Ullmann.

[00118] Em certas modalidades, seguindo a síntese de Williamson, a fim de fornecer um éter à base de alquila em C3, pregnenolona é reagida com um haleto de alquila, como RiX na presença de uma base. Em diversas modalidades, Ri pode ser um grupo alquila primário C1-C5 incluindo, por exemplo, metila, etila, propila, terc-butila. Bases úteis incluem bases fortes, por exemplo, hidróxido de sódio, hidróxido de potássio ou hidróxido de cálcio.

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55/99 [00119] Em outras modalidades, derivados de pregnenolona úteis incluem grupos aromáticos na posição C3, por exemplo, grupos (C2-C10) arila ou heteroarila. Em algumas modalidades, a fim de acoplar um grupo fenol na posição C3 da pregnenolona, pode ser usada a condensação de Ullman ou a síntese de éter de Williamson. Na condensação de Ullmann, um álcool aromático como a pregnenolona pode ser reagido com um haleto aromático na presença de cobre e uma base forte a cerca de 160°C para produzir um éter aromático em C3 de pregnenolona. Tal como na síntese de éter de Williamson, as bases fortes úteis incluem hidróxido de potássio, hidróxido de sódio ou hidróxido de cálcio.

Métodos de Fabricação de Derivados de Diol [00120] Em certas modalidades, são fornecidos métodos para a preparação de um diol protegido em C3 intermediário útil na produção de análogos de OXY133. Geralmente, o método para sintetizar um derivado de diol intermediário protegido na posição C3 inclui reagir um derivado de pregnenolona, por exemplo, um éter, carbamato ou éster de pregnenolona com um reagente organometálico para facilitar a alquilação na posição C20 da pregnenolona como ilustrado abaixo:

Fórmula I Fórmula Illa em que Ri pode ser um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um átomo de carbono. Em outras modalidades, Ri pode ser um grupo terc-butila, alila, tri-isopropilsilila, terc-butildimetilsilila, carbamato ou silila. No entanto, em algumas modalidades, quando existe um grupo n-hexila na posição C20 do diol protegido, então Ri não pode ser terc-butil dimetil silila (TBS).

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56/99 [00121] Em várias modalidades, o método para preparação de um derivado de um oxiesterol compreende reagir um derivado de preagenolona de Fórmula II:

(Fórmula II), com um composto organometálico para formar um derivado de diol protegido em C3 de Fórmula III:

(Fórmula III), em que Ri é um grupo de proteção e R3 é (C₆-C2ó) alquila ou heteroalquila, uma (C2-C20) arila ou heteroarila, uma (C₆-C2ó) arilalquila ou heteroalquila e uma (C5-C20) arilalquila ou heteroaril-heteroalquila, uma (C4-C10) alquildi-ila ou heteroalquildi-ila, ou uma (C4-C10) alquileno ou heteroalquileno.

[00122] Um composto organometálico útil na preparação do composto de fórmula IV é um composto de fórmula RsMgX, onde X é um haleto e R3 compreende um substituinte alifático ou cíclico com pelo menos um carbono.

Em outros aspectos, o composto organometálico compreende a fórmula R3L1, em que R3 compreende um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um carbono. Em outros aspectos, R3 é (C6-C26) alquila ou heteroalquila, uma (C2-C20) arila ou heteroarila, uma (C6-C26) arilalquila ou heteroalquila e uma (C5-C20) arilalquila ou heteroaril-heteroalquila, uma (C4-C10) alquildiila ou heteroalquildi-ila, ou um (C4-C10) alquileno ou heteroalquileno. Em algumas modalidades, R3 é um grupo hexila.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 64/133 / 99 [00123] O método para sintetizar o diol intermediário protegido em C3 (Fórmula III) é estereosseletivo e produz um alto rendimento do diol protegido em C3. Por exemplo, em algumas modalidades, o rendimento do estereoisômero desejado do diol é entre cerca de 60% e cerca de 70%. Em algumas modalidades, o rendimento do estereoisômero desejado do diol é entre cerca de 50% e cerca de 60%. No entanto, é contemplado que o rendimento percentual pode ser maior ou menor que essas quantidades. Por exemplo, o rendimento percentual da Fórmula 2, como mostrado acima, pode ser cerca de 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%., 80%, 85%, 90% ou 95%. Em algumas modalidades, o rendimento percentual pode ser maior que 95%.

[00124] Em várias modalidades, a reação de alquilação com um reagente de Grignard é realizada em um solvente orgânico polar, tal como o tetra-hidrofurano. Contudo, a reação pode ser realizada em uma variedade de solventes orgânicos polares. Por exemplo, a reação pode ser realizada em éter dietílico, éter etílico, éter dimetílico ou semelhante.

[00125] Em algumas modalidades, o reagente organometálico de Grignard compreende cloreto de n-hexilmagnésio. No entanto, em algumas modalidades, a reação de alquilação pode ser realizada com o uso de um alquil-lítio, tal como, por exemplo, n-hexil-lítio. Em várias modalidades, o reagente organometálico inclui um haleto de alquila. Por exemplo, o reagente organometálico pode ter a seguinte fórmula:

R3-Mg-X, onde Mg compreende magnésio, X compreende cloro, bromo, flúor, iodo ou astatina e R3 compreende uma alquila, uma heteroalquila, uma alcanila, uma heteroalcanila, uma alquenila, uma heteroalquenila, uma alquinila, uma heteroalcanila, uma alquildi-ila, uma heteroalquildi-ila, um alquileno, um heteroalquileno, uma arila, uma arildi-ila, uma arileno, uma arilarila, uma biarila, uma arilalquila, uma heteroarila, uma heteroarildi-ila, uma

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 65/133 / 99 heteroarileno, uma heteroaril-heteroarila, uma bi-heteroarila, uma heteroarilalquila ou combinações dosa mesmos Em algumas modalidades, o substituinte R3 compreende uma (C1-C20) alquila ou heteroalquila, uma (C2C20) arila ou heteroarila, uma (C6-C26) arilalquila ou heteroalquila e uma (C5C20) arilalquila ou heteroarila -heteroalquila, uma (C4-C10) alquildi-ila ou heteroalquildi-ila, ou um (C4-C10) alquileno ou heteroalquileno. O substituinte R3 pode ser de cadeia cíclica ou acíclica, ramificada ou não ramificada, substituída ou não substituída, aromática, saturada ou insaturada, ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o substituinte R3 é um grupo alifático. Em algumas modalidades, o substituinte R3 é um grupo cíclico. Em algumas modalidades, o substituinte R3 é um grupo hexila.

[00126] Alternativamente, o reagente organometálico pode compreender a fórmula:

R3-Li, onde Li compreende lítio e R3 compreende uma alquila, a heteroalquila, uma alcanila, uma heteroalcanila, uma alquenila, uma heteroalquenila, uma alquinila, uma heteroalcanila, uma alquildi-ila, uma heteroalquildi-ila, um alquileno, um heteroalquileno, uma arila, uma arildi-ila, uma arileno, uma arilarila, uma biarila, uma arilalquila, uma heteroarila, uma heteroarildi-ila, um heteroarileno, uma heteroarila-heteroarila, uma bi-heteroarila, uma heteroarilalquila ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o substituinte R3 compreende uma (C1-C20) alquila ou heteroalquila, uma (C2C20) arila ou heteroarila, uma (C6-C26) arilalquila ou heteroalquila e uma (C5C20) arilalquila ou heteroarila -heteroalquila, uma (C4-C10) alquildi-ila ou heteroalquildi-ila, ou um (C4-C10) alquileno ou heteroalquileno. O substituinte R3 pode ser de cadeia cíclica ou acíclica, ramificada ou não ramificada, substituída ou não substituída, aromática, saturada ou não saturada, ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o R3 substituinte é um

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 66/133 / 99 grupo alifático. Em algumas modalidades, o substituinte R3 é um grupo cíclico. Em algumas modalidades, o substituinte R3 é um grupo hexila.

[00127] Em algumas modalidades, a reação de alquilação é exotérmica e o vaso de reação pode ter temperatura controlada para manter a cinética de reação ideal. Em algumas modalidades, a reação exotérmica libera cerca de 1000 BTU por libra de solução. Devido à natureza fortemente exotérmica da reação, o reagente de Grignard pode, portanto, ser adicionado lentamente, de modo que componentes voláteis, por exemplo, éteres, não são vaporizados devido ao calor da reação. Em algumas modalidades, o vaso de reação pode ser resfriado por serpentinas internas de resfriamento. As serpentinas de resfriamento podem ser fornecidas com um refrigerante por meio de uma unidade externa de refrigeração de gás/líquido. Em algumas modalidades, uma temperatura interna do vaso de reação é mantida a menos de 15°C, 10°C, 5°C ou 1°C. Em algumas modalidades, o vaso de reação é mantido a cerca de 0 °C durante a reação de alquilação para formar o diol protegido intermediário de Fórmula III.

[00128] Em várias modalidades, o diol protegido da Fórmula III é sintetizado juntamente com subprodutos e pode ser purificado. Por exemplo, o diol protegido resultante de Fórmula III pode ser um subproduto de uma mistura diastereoisomérica. Em várias modalidades, o diol protegido da Fórmula III pode ser isolado e purificado. Ou seja, o diol protegido em C3 da Fórmula III pode ser isolado e purificado até a pureza desejada, por exemplo, de cerca de 95% a cerca de 99,9% por filtração, centrifugação, destilação, que separa líquidos voláteis com base em suas volatilidades relativas, cristalização, recristalização, evaporação para remover líquidos voláteis de solutos não voláteis, extração por solventes para remover impurezas, dissolvendo a composição num solvente em que outros componentes são solúveis no mesmo ou outros métodos de purificação. O diol protegido em C3 pode ser purificado por contato com solventes orgânicos e/ou inorgânicos, por

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60/99 exemplo, THF, água, éter dietílico, diclorometano, acetato de etila, acetona, η,η-dimetilformamida, acetonitrila, dimetilsulfóxido, amônia, t- butanol, npropanol, etanol, metanol, ácido acético ou uma combinação dos mesmos.

[00129] Em várias modalidades, a etapa de alquilação e a etapa de purificação ocorrem no mesmo vaso de reação.

[00130] Em algumas modalidades, o diol protegido em C3 é resfriado bruscamente com cloreto de amônio aquoso ou ácido acético para reduzir a quantidade de ânions presentes e neutralizar a reação e separá-lo da camada orgânica resultante. O resíduo separado é recuperado por evaporação e purificado por cromatografia em coluna de sílica gel.

[00131] O diol protegido em C3 pode ser anidro ou na forma monohidratada. Contudo, em outras modalidades, o diol purificado pode ser cristalizado em outras formas hidratadas, tais como, por exemplo, um dihidrato, um hemi-hidrato, um sesqui-hidrato, um tri-hidrato, um tetra-hidrato ou semelhantes, bem como as formas solvatadas correspondentes. Em outras modalidades, o diol protegido purificado é cristalizado como um co-cristal ou um sal farmaceuticamente aceitável.

[00132] Em algumas modalidades, o derivado diol de fórmula III pode ser reagido com um composto de borano para formar um derivado do oxiesterol protegido em C3 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo

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61/99 [00133] Geralmente, o método para sintetizar OXY133 protegido em C3, como aqui divulgado inclui a reação do diol protegido sintetizado como descrito acima com borano na reação mostrada abaixo:

Esquema 6

Diol protegido em C3 OXY133 protegido em C3

Fórmula Illa

Fórmula Va [00134] Em algumas modalidades, o OXY 133 protegido em C3 bruto e não purificado é produzido através de uma reação de hidroboração e oxidação do diol intermediário protegido com Fórmula Illa no esquema de reação 6. Os compostos de borano que podem ser usados na reação incluem BH3, B2H6, BH₃S(CH₃)2 (BMS), adutos de borano com fosfinas e aminas, por exemplo, borano trietilamina; boranos monossubstituídos da forma RBH2 em que R = alquila e haleto, monoalquila boranos (por exemplo, IpcBH2, monoisopinocanfeilborano), monobromo- e monocloro-borano, complexos de monocloroborano e 1,4-dioxano, boranos dissubstituídos incluindo boranos volumosos, como por exemplo, compostos de dialquilborano tais como dietilborano, bis-3-metil-2-butilborano (disiamilborano), 9-borabi-ciciclo [3,3,1] nonano (9-BBN), disiamilborano (Sia2BH), diciclo-hexilborano (Chx2BH), trialquilboranos, dialquil- halogenoboranos, dimesitilborano (CeFEMe^BH, alquenilboranos, pinacolborano ou catecolborano ou uma combinação dos mesmos.

[00135] Resumidamente, como ilustrado no esquema 6, uma reação de hidroboração e oxidação é uma reação em duas etapas. O boro e o hidrogênio são adicionados através da ligação dupla de um alqueno para formar um complexo com o alqueno. Assim, a fase de boração da reação é estereosseletiva e regiosseletiva. A fase de oxidação da reação envolve

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 69/133 / 99 peróxido de hidrogênio aquoso básico para fornecer um substituinte hidroxila no lugar do boro. Ver Vollhart, KP, Schore, NE, 2007, Organic Chemistry: Structure and Function, Quinta Ed., New York, NY, Custom Publishing Company. Assim, o diol intermediário protegido em C3 tendo a Fórmula III é reagido com borano e peróxido de hidrogênio para formar o OXY133 bruto protegido em C3. Em algumas modalidades, a etapa de formação de OXY133 protegido em C3 bruto ocorre no mesmo vaso de reação que a reação de alquilação. Em outras modalidades, a etapa de formação de OXY133 protegido em C3 bruto ocorre num vaso de reação diferente como a reação de alquilação.

[00136] A etapa de hidroboração-oxidação da síntese de OXY133 protegido em C3, tal como a etapa de formação de diol intermediário, é estereosseletiva e produz um rendimento elevado. Por exemplo, em algumas modalidades, o rendimento percentual de OXY133 bruto pode ser maior ou menor que estas quantidades. Por exemplo, o rendimento percentual da Fórmula 2, como mostrado acima, pode ser cerca de 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%., 80%, 85%, 90% ou 95%. Em algumas modalidades, o rendimento percentual pode ser maior que 95%.

[00137] Em várias modalidades, a reação de oxidação-hidratação é realizada em um solvente orgânico polar, tal como o tetra-hidrofurano. Contudo, a reação pode ser realizada em uma variedade de solventes orgânicos polares. Por exemplo, a reação pode ser realizada em éter dietílico, éter etílico, éter dimetílico ou semelhante.

[00138] Em algumas modalidades, a reação de oxidação-hidratação é exotérmica e o vaso de reação pode ter temperatura controlada para manter a cinética de reação ideal. Especificamente, a fase de oxidação é extremamente exotérmica. Devido à natureza fortemente exotérmica da reação, o peróxido de hidrogênio pode por isso ser adicionado lentamente de modo que os componentes voláteis, por exemplo, os éteres, não sejam vaporizados devido

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 70/133 / 99 ao calor da reação. Em algumas modalidades, o vaso de reação pode ser resfriado por serpentinas internas de resfriamento. As serpentinas de resfriamento podem ser fornecidas com um refrigerante por meio de uma unidade externa de refrigeração de gás/líquido. Em algumas modalidades, uma temperatura interna do vaso de reação é mantida a menos de 10°C, 5°C, 1°C ou 0°C. Em algumas modalidades, o vaso de reação é mantido a cerca de -5°C durante a reação de hidroboração-oxidação.

[00139] Em certas modalidades o diol protegido em C3 pode ter uma cristalinidade percentual de um sal, hidrato, solvato ou forma cristalina de diol a pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, em pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 99%. Em algumas modalidades, a cristalinidade percentual pode ser substancialmente 100%, em que substancialmente 100% indica qual a quantidade total do diol protegido em C3 parece ser cristalina, como pode ser melhor determinado utilizando métodos conhecidos na técnica. Consequentemente, as quantidades terapeuticamente eficazes de diol podem incluir quantidades que variam em cristalinidade. Estas incluem os exemplos em que uma quantidade do diol cristalizado protegido em C3 em uma forma sólida é subsequentemente dissolvida, parcialmente dissolvida, ou suspensa ou dispersa em um líquido.

[00140] O composto de OXY133 pode atuar como um potente oxiesterol osteogênico, que induz a diferenciação osteogênica das células osteoprogenitoras in vitro e a formação robusta de osso in vivo em modelos de fusão de espinha de rato e coelho. Como resultado, o OXY133 é um candidato a fármaco para administração local com potencial aplicação na fusão da coluna e reparo de fraturas não unidas.

[00141] Ao considerar a molécula de OXY133 protegido em C3 de Fórmula Va, é evidente que existem apenas dois outros locais disponíveis para a formação de um composto de OXY133-estatina ou um complexo com

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64/99 outra fração composta, nomeadamente em C6 e C20. Na molécula de OXY133 protegido em C3 da Fórmula Va, o grupo C6 hidroxila é mais reativo a outro fármaco do que o grupo hidroxila na localização C20 porque não há outros grupos ao redor para impedir a reação com o grupo hidroxila em oposição ao grupo hidroxila na posição C20, que, em algumas modalidades, tem um grupo alquila de cadeia linear.

[00142] Em várias modalidades, a molécula OXY133 protegida pode reagir através do grupo C6 hidroxila com um fármaco tal como um inibidor da HMG-CoA redutase ou uma fração de estatina, por exemplo, uma fração de rosuvastatina (Crestor®), atorvastatina (Eipitor®), pravastatina (Pravachol®), fluvastatina (Eescol®), pitavastatina (Eivalo®), sinvastatina (Zocor®) ou lovastatina (Mevacor®) ilustradas na Tabela 1 abaixo.

Estatina	Estrutura	Estatina	Estrutura
	A	o ^x		OH OH 0
	\y	H \				o V
Atorvastatina				Mevastatina
		o		A			•
				F			\Y\y^
				OH OH O
				AyyLqh			[ OH OH O
		tÈL
Cerivastatina		U		Pitavastatina	II
						Λρ.
		Ό 1		F
		Y		OH OH 0			°<y^OH
							HO.J
						o ^H0Y
Fluvastatina					Pravastatina		u
			Λ				Y/Y''

			F				HO ^'^
		HO_V	YYí>°
		O					'Y' OH OH 0
Sinvasatatina		X^°			Rosuvastatina	O Ω	nAYYVy^oh
	i	A Ϊ	H			_s 11 Λ
						<Y<_F

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Estatina	Estrutura	Estatina	Estrutura
Lovastatina	o Ç°

[00143] Em uma modalidade, a molécula de OXY133 protegida em C3 pode reagir em C6 conlovastatina para formar um composto de oxiesterolestatina com a Fórmula Vila:

(Fórmula Vila).

[00144]

Uma vez formado, o composto de lovastatina ΟΧΥ133 protegido em C3 pode ser desprotegido em C3 utilizando métodos químicos clássicos conhecidos por um versado na técnica. Por exemplo, se o grupo de proteção em C3 é um grupo silila, de modo a desprotegê-lo, pode-se usar uma fonte de fluoreto, tal como o fluoreto de tetra-n-butilamônio (TBAF) ou o complexo de piridina e HF. Em outros aspectos, quando o grupo de proteção em C3 é metila ou outro alquila de cadeia linear, uma fonte de iodo, tal como iodeto de trimetilsilila, (CI-DsSi-I, iodotrimetilsilano (TMSI) pode ser usada. Após desproteção do composto de fórmula Vila, um composto de ΟΧΥ133lovastatina da fórmula VII é formado:

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(Fórmula VII).

[00145] A síntese completa de um composto de oxiesterol-estatina é ilustrada na FIG. 8.

[00146] A FIG. 9 é a estrutura química do composto de OXY133atorvastatina. A FIG. 10 é a estrutura química do composto de OXY133cerivastatina. A FIG. 11 é a estrutura química do composto de OXY133fluvastatina. A FIG. 12 é a estrutura química do composto de OXY133mevastatina. A FIG. 13 é a estrutura química do composto de OXY133pitavastatina. A FIG. 14 é a estrutura química do composto de OXY133pravastatina. A FIG. 15 é a estrutura química do composto de OXY133rosuvastatina. A FIG. 16 é a estrutura química do composto de OXY133sinvastatina.

[00147] Em certas modalidades, agentes de fornecimento de fármaco específicos de osso tais como estatinas podem ser fixos a moléculas de OXY133 protegidas em C3 através de ligações de ligantes hidrolisáveis, L. Por exemplo, a fixações de ligantes a uma estatina ou suas unidades incluem, mas não estão limitados a, ligantes à base de succinato, ligantes à base de aspartato e/ou ligantes à base de carbamato.

[00148] Em várias modalidades, as estatinas podem ser ligadas a moléculas de fármaco através de ligações de ligantes hidrolisáveis. As ligações não hidrolisáveis podem ser utilizadas nos casos em que a molécula

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67/99 do fármaco, após conjugação com a estatina, retém a atividade farmacológica. Grupos de ésteres podem ser usados, pois eles preenchem uma faixa de estabilidade favorável em relação aos tioésteres mais lábeis e amidas mais estáveis (L. Gil et al., Bioorg. Med. Chem. 1999, 7, 901-919). A estabilidade in vivo dos grupos éster pode ser adicionalmente ajustada por substituições colocadas adjacentes ao grupo éster (T.C. Bruice et al., Bioorganic Mechanisms, Vol. 1, W. A. Benjamin, New York, 1966, 1-258). Em algumas modalidades, um composto de OXY133-estatina protegido em C3 pode ser adequado para dosagem sistêmica (oral, ip ou iv) que implica na deposição seletiva no tecido ósseo seguido por hidrólise enzimática do ligante e liberação do agente osteogênico, OXY133 e estatina em taxas controladas no tecido alvo. Tal ligação de uma estatina ou fração de estatina R4 à posição 6 de um OXY133 protegido em C3 para formar o complexo de OXY133estatina protegido em C3 pode ser conseguida por um acoplamento direto ao anidrido succínico na presença de l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI) através de uma ligação éster, como representado:

1) Εΐ₃Ν, dmap, ch₂ci₂

2) EDCI, Et₃N, CH₂C1₂,

em que Ri é como definido acima e R4 é uma fração de estatina ou estatina.

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68/99 [00149] Ligantes, L, úteis em outras modalidades para conjugação com OXY133 protegido em C3 incluem, sem limitações, ligantes à base de aspartato, ligantes à base de succinato ou ligantes à base de uretano como

Oxy 133 protegido ilustraoxy 133 protegido

Oxy 133 protegido

Protected Oxy 133 ^0 «Ah *y0 HfEstatina

Statin

Ligante à base de aspartato Ligante à base de succinato

Ligante à base de uretano

Uso de Compostos de oxiesterol-estatina ou pró-fármaco [00150] Os oxiesteróis são derivados do colesterol que demonstraram ter uma série de atividades, incluindo apoptose celular e homeostase do colesterol. Foi identificado um grupo de oxiesteróis osteoindutores que estimulam a diferenciação de células-tronco mesenquimais in vitro, induzem a formação óssea e suportam a fusão espinhal in vivo. Acredita-se que os oxiesteróis afetam a formação de osso por meio da ativação da via de sinalização de hedgehog.

[00151] Em uso, OXY133 fornece tratamento terapêutico para condições ósseas. OXY133 facilita a formação óssea, diferenciação osteoblástica, osteomorfogênese e/ou osteoproliferação. O tratamento pode ser administrado para tratar fraturas expostas e fraturas com alto risco de não união e em indivíduos com distúrbios da coluna vertebral. Ou seja, OXY133 pode induzir a fusão espinhal e pode ajudar a tratar doenças degenerativas do disco ou artrite que afetam as vértebras lombares ou cervicais.

[00152] Células-tronco mesenquimais tratadas com OXY133 mostraram ter maior diferenciação de osteoblastos. Assim, em algumas modalidades, OXY133 pode ser implantado em um sítio espinhal com células tronco mesenquimais para induzir o crescimento ósseo através da diferenciação de osteoblastos. O tecido periósteo é um tipo de tecido que está

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 76/133 / 99 envolvido precocemente durante o processo normal de reparo da fratura óssea e pode recrutar vários tipos de células (por exemplo, células-tronco mesenquimais) e fatores de crescimento ósseo, necessários para o reparo de fraturas ósseas. Assim, em algumas modalidades, o tecido periósteo é utilizado como fonte de células tronco mesenquimais e/ou fatores de crescimento em uma composição óssea desmineralizada.

[00153] Versões produzidas de forma recombinante de proteínas humanas que ocorrem naturalmente, tais como rhBMP-2 e rhPDGF, foram estudadas durante décadas pela sua capacidade de induzir ou melhorar a formação de novos ossos. Embora estas proteínas tenham sido eficazes no apoio à cicatrização óssea, existem desvantagens no que diz respeito à complexidade da fabricação e aos custos associados. Um único sentido de abordar estas desvantagens tem sido identificar pequenas moléculas que regulam partes das vias de sinalização óssea para estimular ou melhorar a cicatrização óssea. Dois exemplos são os oxiesteróis e estatinas osteoindutivos.

[00154] As estatinas são inibidores da enzima HMG-CoA redutase amplamente utilizada para baixar o colesterol. Algumas estatinas também demonstraram estimular a formação óssea tanto in vitro como in vivo. Pensase que as estatinas aumentam a formação óssea estimulando a diferenciação de osteoblastos e reduzindo a apoptose de osteoblastos através de cascatas de sinalização de receptores de MAPK e TGF.

[00155] Embora os oxiesteróis e as estatinas tenham demonstrado melhorar a cicatrização óssea in vivo, nenhum deles demonstrou ser tão potente quanto a rhBMP-2. Portanto, apesar de ser mais fácil e menos dispendioso de fabricar, sua utilidade final pode ser limitada. Como tanto os oxiesteróis e as estatinas mostraram ter efeitos na formação óssea e funcionam por mecanismos diferentes, a co-liberação na forma de um pró

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 77/133 / 99 fármaco ou composto de oxiesterol-estatina pode levar a um efeito sinérgico maior do que o administrado independentemente.

[00156] Em algumas modalidades, o composto OXY133-estatina pode ser implantado ou injetado diretamente em um sítio cirúrgico em um paciente. Em algumas modalidades, o composto OXY133-estatina obtido a partir dos métodos delineados acima está na forma de um depósito. Em várias modalidades, uma pluralidade de depósitos (por exemplo, péletes) pode ser administrada a um sítio cirúrgico. Em algumas modalidades, uma pluralidade de depósitos é fornecida (por exemplo, em um kit) e administrados a um sítio cirúrgico e triangulam e/ou circundam o sítio necessário para o crescimento ósseo. Em várias modalidades, uma pluralidade de depósitos compreende cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 depósitos. Em algumas modalidades, um plastificante é utilizado para baixar a temperatura de transição vítrea, a fim de afetar a estabilidade do dispositivo.

[00157] Em várias modalidades, o depósito compreende composto OXY133-estatina e um polímero biodegradável na forma amorfa, cristalina ou semicristalina; onde a forma cristalina pode incluir polimorfos, solvatos ou hidratos.

[00158] Em algumas modalidades, o composto OXY133-estatina é administrado em um dispositivo que é sólido ou na forma semissólida. A forma sólida ou semissólida do dispositivo pode ter uma viscosidade prédoseada na faixa de cerca de 1 a cerca de 2000 centipoise (cps), 1 a cerca de 200 cps, ou 1 a cerca de 100 cps. Após o dispositivo sólido ou semissólido ser administrado ao sítio alvo, a viscosidade do depósito sólido ou semissólido aumentará e o semissólido terá um módulo de elasticidade na faixa de cerca de 1x10² a cerca de 6x10⁵ dines/cm^2, ou 2x10⁴ a cerca de 5x10⁵ dines/cm^2, ou 5x10⁴ a cerca de 5x10⁵ dines/cm²· [00159] Em várias modalidades, o depósito sólido ou semissólido pode compreender um polímero com um peso molecular (MW), como mostrado

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 78/133 / 99 pela viscosidade inerente, de cerca de 0,10 dL/g a cerca de 1,2 dL/g ou de cerca de 0,20 dL/g a cerca de 0,50 dL/g. Outras faixas de viscosidade inerente incluem, mas não se limitam a, cerca de 0,05 a cerca de 0,15 dL/g, cerca de 0,10 a cerca de 0,20 dL/g, cerca de 0,15 a cerca de 0,25 dL/g, cerca de 0,20 a cerca de 0,30 dL/g, cerca de 0,25 a 0,35 dL/g, cerca de 0,30 a cerca de 0,35 dL/g, cerca de 0,35 a cerca de 0,45 dL/g, cerca de 0,40 a cerca de 0,45 dL/g, cerca de 0,45 a cerca de 0,55 dL/g, cerca de 0,50 a cerca de 0,70 dL/g, cerca de 0,55 a cerca de 0,6 dL/g, cerca de 0,60 a cerca de 0,80 dL/g, cerca de 0,70 a cerca de 0,90 dL/g, cerca de 0,80 a cerca de 1,00 dL/g, cerca de 0,90 a cerca de 1,10 dL/g, cerca de 1,0 a cerca de 1,2 dL/g, cerca de 1,1 a cerca de 1,3 dL/g, cerca de 1,2 a cerca de 1,4 dL/g, cerca de 1,3 a cerca de 1,5 dL/g, cerca de 1,4 a cerca de 1,6 dL/g, cerca de 1,5 a cerca de 1,7 dL/g 1,6 a cerca de 1,8 dL/g, cerca de 1,7 a cerca de 1,9 dL/g, ou cerca de 1,8 a cerca de 2,1 dL/g.

[00160] Em algumas modalidades, o depósito pode não ser totalmente biodegradável. Por exemplo, o dispositivo pode compreender poliuretano, poliureia, poliéter (amida), PEBA, olefina elastomérica termoplástica, copoliéster e elastômero termoplástico estirênico, aço, alumínio, aço inoxidável, titânio, ligas metálicas com alto teor de metais não ferrosos e uma baixa razão relativa de ferro, dispositivo de carbono, dispositivo de vidro, plásticos, cerâmicas, metacrilatos, poli (N-isopropil acrilamida), PEO-PPOPEO (plurônicos) ou combinações dos mesmos. Tipicamente, esses tipos de matrizes podem precisar ser removidos após um determinado período de tempo.

[00161] Em várias modalidades, o depósito (por exemplo, dispositivo) pode compreender um biopolímero bioerodível, bioabsorvível e/ou biodegradável que pode fornecer libertação imediata, ou liberação sustentada do composto OXY133-estatina. Exemplos de biopolímeros de liberação sustentada adequados incluem, mas não se limitam a, poli (ácidos alfahidróxi), poli (lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA), polilactídeo (PLA),

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 79/133 / 99 poliglicolídeo (PG), conjugados de polietileno glicol (PEG) de poli (alfahidroxiácidos), poli (ortoéster)s (POE), poli (esteramida), poliaspirinas, polifosfagêneos, amido, amido pré-gelatinizado, ácido hialurônico, quitosana, gelatina, alginatos, albumina, fibrina, compostos de vitamina E, tais como acetato de alfa tocoferila, succinato de d-alfa tocoferila, D, L-lactida ou Llactida-caprolactona, dextranas, vinilpirrolidona, álcool polivinílico (PVA), PVA-g-PLGA, copolímero PEGT-PBT (poliativo), copolímeros PEO-PPOPAA, PLGA-PEO-PLGA, PEG-PLG, PLA-PLGA, poloxâmero 407, copolímeros em tri bloco PEG-PLGA-PEG, SAIB (acetato isobutirato de sacarose) ou combinações dos mesmos.

[00162] Em algumas modalidades, o depósito compreende pelo menos um polímero biodegradável, em que o pelo menos um polímero biodegradável compreende um ou mais de poli (lactídeo-co-glicolídeo) (PLGA), polilactídeo (PLA), poliglicolídeo (PGA), D-lactida, D, L-lactida, L-lactida, D, L-lactidaco-e-caprolactona, L-lactida-co-e-caprolactona, D, L-lactida-co-glicolídeo-coca-caprolactona, poli (D, L-lactida-co-caprolactona), poli (L-lactida-cocaprolactona), poli (D-lactida-co-caprolactona), poli (D, L-lactida), poli (Dlactida), poli (L-lactida), poli (esteramida) ou combinação dos mesmos.

[00163] Em algumas modalidades, o depósito compreende pelo menos um material biodegradável em uma % em peso de cerca de 99,5%, 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 76%, 75%, 74%, 73%, 72 %, 71%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 35%, 25%, 20%, 15%, 10% ou 5% com base no peso total do depósito e o restante é ingredientes farmacêuticos ativos e/ou inativos.

[00164] Manitol, trealose, dextrano, mPEG e/ou PEG podem ser utilizados como um plastificante para o polímero. Em algumas modalidades, o polímero e/ou plastificante pode também ser revestido no depósito para proporcionar o perfil de libertação desejado. Em algumas modalidades, a

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 80/133 / 99 espessura do revestimento pode ser fina, por exemplo, de cerca de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 mícrons para revestimentos mais espessos 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100 mícrons para retardar a liberação do composto OXY133-estatina, esterol ou diol a partir do depósito (por exemplo, dispositivo). Em algumas modalidades, a faixa do revestimento no depósito varia de cerca de 5 mícrons a cerca de 250 mícrons ou 5 mícrons a cerca de 200 mícrons para atrasar a liberação a partir do dispositivo.

[00165] O depósito (por exemplo, dispositivo) pode ter diferentes tamanhos, formatos e configurações. Existem vários fatores que podem ser considerados na determinação do tamanho, formato e configuração do depósito. Por exemplo, tanto o tamanho como o formato podem permitir facilidade no posicionamento do depósito no sítio do tecido alvo. Além disso, o formato e o tamanho do sistema devem ser selecionados de forma a minimizar ou impedir que o depósito se mova após a implantação. Em várias modalidades, o depósito pode ter o formato de uma haste ou de uma superfície plana, tal como uma película ou folha (por exemplo, tipo fita) ou similares. A flexibilidade pode ser uma consideração para facilitar a colocação do dispositivo.

[00166] Marcadores radiográficos podem ser incluídos no dispositivo para permitir que o usuário posicione o depósito (por exemplo, dispositivo) com precisão no sítio de destino do paciente. Esses marcadores radiográficos também permitirão ao usuário rastrear o movimento e a degradação do depósito (por exemplo, dispositivo) no sítio ao longo do tempo. Nesta modalidade, o usuário pode posicionar com precisão o depósito (por exemplo, dispositivo) no sítio utilizando qualquer um dos numerosos procedimentos de diagnóstico por imagem. Tais procedimentos de diagnóstico de imagem incluem, por exemplo, imagens de raios X ou fluoroscopia. Exemplos de tais marcadores radiográficos incluem, mas não se limitam a, bário, fosfato, bismuto, iodo, tântalo, tungstênio e/ou esferas ou partículas de metal. Em

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 81/133 / 99 várias modalidades, o marcador radiográfico pode ter uma forma esférica ou um anel à volta do depósito (por exemplo, dispositivo).

[00167] Em algumas modalidades, o composto OXY133-estatina pode ser administrado ao sítio alvo utilizando uma “cânula” ou “agulha” que pode ser parte de um dispositivo de administração, por exemplo, uma seringa, um dispositivo de entrega de armas ou qualquer dispositivo médico adequado para a aplicação de OXY133, esterol ou diol a um órgão alvo ou região anatômica. A cânula ou agulha do dispositivo é projetada para causar um trauma físico e psicológico mínimo ao paciente.

[00168] Em algumas modalidades, o depósito pode ser suturado a um sítio de tecido alvo utilizando uma agulha de sutura. As dimensões da agulha, entre outras coisas, dependerão do sítio para implantação. Por exemplo, a largura dos planos musculares em diferentes procedimentos cirúrgicos pode variar de 1-40 cm. Assim, a agulha, em várias modalidades, pode ser concebida para estas áreas específicas.

[00169] As modalidades da presente revelação são úteis como composições farmacêuticas preparadas com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da revelação, conforme definido aqui, e um veículo farmaceuticamente aceitável ou diluente. Os compostos da revelação podem ser formulados como composições farmacêuticas e administrados a um indivíduo com necessidade de tratamento, por exemplo, um mamífero, tal como um paciente humano, em uma variedade de formatos adaptados à via de administração escolhida, por exemplo, oralmente, via nasal, intraperitoneal ou parenteral, por via intravenosa, intramuscular, tópica ou subcutânea, ou por injeção em tecido.

[00170] Assim, os compostos da presente revelação podem ser sistemicamente administrados, por exemplo, oralmente, em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável, tal como um diluente inerte ou um veículo comestível assimilável, ou por inalação ou insuflação. Podem ser

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 82/133 / 99 contidos em cápsulas de gelatina dura ou mole, podem ser comprimidos em comprimidos ou podem ser incorporados diretamente no alimento da dieta do paciente. Para administração terapêutica oral, os compostos podem ser combinados com um ou mais excipientes e utilizados no formato de comprimidos ingeríveis, comprimidos bucais, trocisco, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, pastilhas e similares. Os compostos podem ser combinados com um veículo em pó inerte e inalados pelo indivíduo ou insuflado. Tais composições e preparações devem conter pelo menos 0,1% de um composto de uma modalidade da presente revelação. A percentagem das composições e preparações pode, evidentemente, ser variada e pode estar entre cerca de 2% e cerca de 60% do peso de um determinado formato de dosagem unitária. A quantidade de composto em tais composições terapeuticamente úteis é tal que seja obtido um nível de dosagem eficaz.

[00171] Os comprimidos, trocisco, pílulas, cápsulas e similares podem também conter o seguinte: aglutinantes tais como goma tragacanta, goma arábica, amido de milho ou gelatina; excipientes tais como fosfato dicálcico; um agente de desintegração, tal como amido de milho, amido de batata, ácido algínico e similares; um lubrificante tal como estearato de magnésio; e um agente edulcorante tal como sacarose, frutose, lactose ou aspartame ou um agente flavorizante tal como hortelã-pimenta, óleo de gualtéria ou aromatizante de cereja podem ser adicionados. Quando o formato de dosagem unitária é uma cápsula, pode conter, além dos materiais do tipo acima, um veículo líquido, tal como um óleo vegetal ou um polietileno glicol. Vários outros materiais podem estar presentes como revestimentos ou de outro modo modificar a forma física do formato de dosagem unitária sólida. Por exemplo, comprimidos, pílulas ou cápsulas podem ser revestidos com gelatina, cera, goma laca ou açúcar e similares. Um xarope ou elixir pode conter o composto ativo, sacarose ou frutose como agente edulcorante, metilparabeno e propilparabeno como conservantes, um corante e aromatizante tal como

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 83/133 / 99 aroma de cereja ou laranja. Naturalmente, qualquer material utilizado na preparação de qualquer formato de dosagem unitária deve ser farmaceuticamente aceitável e substancialmente não tóxico nas quantidades utilizadas. Além disso, os compostos podem ser incorporados em preparações e dispositivos de libertação sustentada. Por exemplo, os compostos podem ser incorporados em cápsulas de liberação temporizada, comprimidos de liberação temporizada, pílulas de liberação temporizada e polímeros ou nanopartículas de liberação temporizada.

[00172] Os compostos descritos nesta revelação também podem ser administrados intravenosamente ou intraperitonealmente ou subcutaneamente por infusão ou injeção. As soluções dos compostos podem ser preparadas em água, opcionalmente misturadas com um agente tensoativo não tóxico. Dispersões podem também ser preparadas em glicerol, polietileno glicóis líquidos, triacetina e misturas dos mesmos e em óleos. Sob condições normais de armazenamento e utilização, estas preparações podem conter um conservante para prevenir o crescimento de micro-organismos.

[00173] Os formatos de dosagem farmacêutica adequadas para injeção ou infusão podem incluir soluções ou dispersões aquosas estéreis ou pós estéreis compreendendo os compostos que estão adaptados para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões estéreis injetáveis ou para infusão, opcionalmente encapsuladas em lipossomas. Em todos os casos, o formato de dosagem final deve ser estéril, fluida e estável sob as condições de fabricação e armazenamento. O veículo líquido ou veículo pode ser um solvente ou meio de dispersão líquida compreendendo, por exemplo, água, etanol, um poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, polietileno glicóis e similares), óleos vegetais, ésteres de glicerila e misturas dos mesmos adequadas. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pela formação de lipossomas, pela manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersões ou pelo uso de tensoativos. A prevenção da ação de microrganismos pode ser

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 84/133 / 99 provocada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal e similares. Em muitos casos, irá de preferência incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, tampões ou cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser conseguida pela utilização de agentes que retardam a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.

[00174] As soluções injetáveis estéreis são preparadas incorporando os compostos na quantidade requerida no solvente apropriado com uma variedade dos outros ingredientes enumerados acima, conforme necessário, seguido de esterilização por filtração. No caso de pós esterilizados para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os modos de preparação são técnicas de secagem a vácuo e liofilização, que produzem um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente desejado adicional presente nas soluções previamente filtradas com esteril.

[00175] Para administração tópica, os compostos podem ser aplicados na forma pura. No entanto, pode ser desejável administrá-los à pele como composições ou formulações, em combinação com um veículo dermatologicamente aceitável, que pode ser um sólido ou um líquido.

[00176] Veículos sólidos úteis incluem sólidos finamente divididos tais como talco, argila, celulose microcristalina, sílica, alumina e similares. Outros veículos sólidos incluem nanopartículas poliméricas não tóxicas ou micropartículas. Veículos líquidos úteis incluem água, álcoois ou glicóis ou misturas de água/álcool/glicol, nos quais os compostos podem ser dissolvidos ou dispersos a níveis eficazes, opcionalmente com o auxílio de tensoativos não tóxicos. Compostos auxiliares como fragrâncias e agentes antimicrobianos adicionais podem ser adicionados para otimizar as propriedades para um determinado uso. As composições líquidas resultantes podem ser aplicadas através de almofadas absorventes, bandagens

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 85/133 / 99 impregnadas e outras bandagens, ou pulverizadas sobre a área afetada utilizando pulverizadores tipo bomba ou aerossol.

[00177] Espessantes, tais como polímeros sintéticos, ácidos graxos, sais e ésteres de ácidos graxos, álcoois graxos, celuloses modificadas ou materiais minerais modificados podem também ser empregues com veículos líquidos para formar pastas, géis, pomadas, sabões e similares, para aplicações diretamente sobre a pele do usuário.

[00178] Exemplos de composições dermatológicas úteis que podem ser utilizadas para distribuir os compostos na pele são conhecidos na técnica; por exemplo, ver Jacquet et al. (Patente US 4.608.392), Geria (Patente US 4.992.478), Smith et al. (Patente US 4.559.157) e Wortzman (Patente US 4.820.508), todas as quais são aqui incorporadas por referência.

[00179] As dosagens úteis dos compostos descritos nesta revelação podem ser determinadas comparando a sua atividade in vitro e a atividade in vivo em modelos animais. Métodos para a extrapolação de dosagens eficazes em ratinhos e outros animais para humanos são conhecidos na técnica; por exemplo, consulte a Patente US 4.938.949, que está aqui incorporada, por referência.

[00180] Por exemplo, a concentração dos compostos em uma composição líquida, tal como uma loção, pode ser de cerca de 0,1 a cerca de 25% em peso, ou de cerca de 0,5-10% em peso. A concentração em uma composição semissólida ou sólida tal como um gel ou um pó pode ser de cerca de 0,1 a cerca de 5% em peso, ou de cerca de 0,5 a cerca de 2,5% em peso.

[00181] A quantidade dos compostos necessários para utilização no tratamento irá variar não só com o sal particular selecionado, mas também com a via de administração, a natureza da condição a ser tratada, a idade e condição do paciente e será, em última análise, a critério do médico assistente ou clínico.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 86/133 / 99 [00182] Dosagens eficazes e vias de administração dos pró-fármacos da revelação são convencionais. A quantidade exata (dose eficaz) do agente irá variar de indivíduo para indivíduo, dependendo, por exemplo, da espécie, idade, peso e condição geral ou clínica do indivíduo, da gravidade ou mecanismo de qualquer distúrbio a ser tratado, do agente específico ou veículo utilizado, o modo e o escalonamento da administração e similares. Uma dose terapeuticamente eficaz pode ser determinada empiricamente, por procedimentos convencionais conhecidos pelos versados na técnica. Ver, por exemplo, The Pharmacological Basis of Therapeutics, Goodman e Gilman, eds., Macmillan Publishing Co., New York. Por exemplo, uma dose eficaz pode ser estimada inicialmente em ensaios de cultura de células ou em modelos animais adequados. O modelo animal também pode ser usado para determinar as faixas de concentração apropriadas e as vias de administração. Tal informação pode então ser usada para determinar doses e vias úteis para administração em humanos. Uma dose terapêutica pode também ser selecionada por analogia com dosagens para agentes terapêuticos comparáveis.

[00183] O modo particular de administração e o regime de dosagem serão selecionados pelo médico assistente, tendo em consideração as particularidades do caso (por exemplo, o indivíduo, a doença, o estado de doença envolvido e se o tratamento é profilático). O tratamento pode envolver doses diárias ou multi-diárias de composto (s) durante um período de alguns dias a meses, ou mesmo anos.

[00184] Em geral, contudo, uma dose adequada estará na faixa de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg, por exemplo, de cerca de 0,01 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia, tal como acima de cerca de 0,1 mg por quilograma ou em uma faixa de cerca de 1 a cerca de 10 mg por quilograma de peso corporal do receptor por dia. Por exemplo, uma dose adequada pode ser cerca de 1 mg/kg, 10 mg/kg ou 50 mg/kg de peso corporal por dia.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 87/133 / 99 [00185] Os compostos são convenientemente administrados em formato de dosagem unitária; por exemplo, contendo 0,05 a 10.000mg, 0,5 a 10.000mg, 5 a 1.000 mg, ou cerca de 100mg de ingrediente ativo por formato de dosagem unitária.

[00186] Os compostos pró-fármacos descritos nesta revelação podem ser administrados para atingir picos de concentrações plasmáticas de, por exemplo, de cerca de 0,5 a cerca de 75pM, de cerca de 1 a 50pM, de cerca de 2 a cerca de 30pM, ou de cerca de 5 a cerca de 25pM. As concentrações plasmáticas exemplificativas incluem pelo menos ou não mais que 0,25, 0,5, 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100 ou 200pM. Por exemplo, os níveis no plasma podem ser de cerca de 1 a 100 micromolar ou de cerca de 10 a cerca de 25 micromolar. Isto pode ser conseguido, por exemplo, pela injeção intravenosa de uma solução de 0,05 a 5% dos compostos, opcionalmente em solução salina, ou administrada oralmente como um bólus contendo cerca de 1-100 mg dos compostos. Os níveis sanguíneos desejáveis podem ser mantidos por infusão contínua para proporcionar cerca de 0,00005-5 mg por kg de peso corporal por hora, por exemplo pelo menos ou não mais que 0,00005, 0,0005, 0,005, 0,05, 0,5 ou 5 mg/kg/h. Alternativamente, tais níveis podem ser obtidos por infusões intermitentes contendo cerca de 0,0002-20 mg por kg de peso corporal, por exemplo, pelo menos ou não mais do que 0,0002, 0,002, 0,02, 0,2, 2, 20 ou 50 mg dos compostos por kg de peso corporal.

[00187] Os compostos de pró-fármaco podem ser convenientemente apresentados em uma dose única ou como doses divididas administradas a intervalos apropriados, por exemplo, como uma dose por dia ou como duas, três, quatro ou mais subdoses por dia. A subdose propriamente dita pode ser dividida, por exemplo, em várias administrações discretamente espaçadas; como inalações múltiplas de um insuflador.

[00188] Um aspecto da revelação é uma composição bioativa ou farmacêutica compreendendo um composto OXY133-estatina aqui

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 88/133 / 99 apresentado ou um sal ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmos e um veículo farmaceuticamente aceitável. Estas composições bioativas ou farmacêuticas são por vezes aqui referidas como “composições farmacêuticas” ou “composições bioativas da revelação”. Por vezes a frase “administração de um composto” é aqui utilizada no contexto da administração deste composto pró-fármaco a um indivíduo (por exemplo, contatar o indivíduo com o composto). Deve ser entendido que o composto pró-fármaco para tal utilização pode geralmente estar no formato de uma composição farmacêutica ou composição bioativa compreendendo o composto pró-fármaco.

[00189] Outro aspecto da revelação é um método para induzir (estimular, intensificar) uma resposta mediada pela via de Hedgehog (Hh), em uma célula ou tecido, por exemplo, em um indivíduo, compreendendo o contato da célula ou tecido com uma quantidade eficaz (por exemplo, quantidade terapeuticamente eficaz) do pró-fármaco de oxiesterol-estatina, em que a resposta mediada pela via Hedgehog (Hh) é a estimulação da diferenciação osteoblástica, osteomorfogênese e/ou osteoproliferação. A resposta mediada por Hh pode ser útil na medicina regenerativa.

[00190] Outro aspecto da revelação é um método para tratar um indivíduo que tem uma desordem óssea, osteopenia, osteoporose ou uma fratura óssea, compreendendo administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de uma composição bioativa ou composição farmacêutica compreendendo um pró-fármaco OXY133-estatina. O indivíduo pode administrar a composição bioativa ou composição farmacêutica a uma dose terapeuticamente eficaz em um formato de dosagem eficaz em uma faixa selecionada para, por exemplo, aumentar a massa óssea, melhorar sintomas de osteoporose, ou reduzir, eliminar, prevenir ou tratar outras condições que se beneficiam de um aumento na osteomorfogênese e/ou osteoproliferação. O indivíduo pode administrar a composição bioativa ou composição farmacêutica a uma dose

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 89/133 / 99 terapeuticamente eficaz em um formato de dosagem eficaz em uma faixa selecionada para melhorar os sintomas da osteoporose. Em uma modalidade, o indivíduo é tratado para induzir a formação óssea colhendo células-tronco mesenquimais de mamíferos (por exemplo, do indivíduo ou de um mamífero adequado, ou de um tecido ou banco de células), tratando as células mesenquimais de mamíferos com um composto para induzir osteoblastos diferenciação das células, e administrar as células diferenciadas ao indivíduo. [00191] Em qualquer um dos métodos da revelação, o composto OXY133-estatina pode ser administrado a uma célula, tecido ou órgão por administração ao sítio. Por exemplo, o composto OXY133-estatina pode ser aplicado localmente com um creme ou similar, ou pode ser injetado ou introduzido diretamente em uma célula, tecido ou órgão, ou pode ser introduzido com um dispositivo médico adequado (por exemplo, um implante). Alternativamente, o composto pode ser administrado sistemicamente, por exemplo, oralmente, intravenosamente (através de IV), ou via injeção tal como injeção intraperitoneal (ip) ou injeção subcutânea.

[00192] Outro aspecto da revelação é um kit para operacionalizar um ou mais dos métodos aqui descritos. O kit pode compreender uma quantidade eficaz (por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz) de um composto, opcionalmente em um recipiente.

[00193] Outro aspecto da revelação é um implante para utilização no corpo de um indivíduo (por exemplo, um animal tal como um humano) compreendendo um substrato tendo uma superfície. A superfície ou interior do implante compreende uma composição bioativa ou composição farmacêutica compreendendo o composto OXY133-estatina em uma quantidade suficiente para induzir a formação óssea no tecido ósseo circundante.

[00194] Em adição aos compostos aqui revelados, outras modalidades da revelação abrangem quaisquer e todos os estereoisômeros individuais em

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 90/133 / 99 qualquer um dos estereocentros apresentados nas fórmulas, incluindo diastereômeros, racematos, enantiômeros e outros isômeros dos compostos. Em modalidades da revelação, todos os polimorfos e solvatos do composto, tais como hidratos e aqueles formados com solventes orgânicos são incluídos. Tais solvatos podem ser sólidos cristalinos com uma razão molar substancialmente fixa de soluto e solvente. Os solventes adequados serão conhecidos pelos versados na técnica,, por exemplo, água, etanol ou dimetilsulfóxido. Tais isômeros, polimorfos e solvatos podem ser preparados com o uso de métodos conhecidos na técnica, tal como por síntese e resolução regioespecífica e/ou enantioseletiva.

[00195] A capacidade de preparar sais depende da acidez ou basicidade do composto de oxiesterol-estatina ou pró-fármaco. Sais adequados do composto incluem, mas não se limitam a, sais de adição de ácido, tais como aqueles feitos com ácido clorídrico, bromídrico, iodídrico, perclórico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, acético, propiônico, glicólico, láctico pirúvico, malônico, succínico, maleico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, benzoico, carbônico, cinâmico, mandélico, metanossulfônico, etanossulfônico, hidroxietanossulfônico, benzenossulfônico, p-toluenossulfônico, ciclohexanossulfâmico, salicílico, p-aminossalicílico, 2-fenoxibenzóico e 2acetoxibenzóico; sais feitos com sacarina; sais de metais alcalinos, tais como sais de sódio e potássio; sais de metais alcalino-terrosos, tais como sais de cálcio e magnésio; e sais formados com ligantes orgânicos ou inorgânicos, tais como sais de amônio quaternário.

[00196] Sais adequados adicionais incluem, mas não se limitam a, acetato, benzenossulfonato, benzoato, bicarbonato, bissulfato, bitartarato, borato, brometo, edetato de cálcio, camsilato, carbonato, cloreto, clavulanato, citrato, dicloridrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilearanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromidrato, cloridrato, hidroxinaftoato, iodeto, isotionato, lactato,

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 91/133 / 99 lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbrometo, metilnitrato, metilsulfato, mutato, napsilato, nitrato, N-metilglucamina sal de amônio, oleato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, sulfato, subacetato, succinato, tanato, tartarato, teoclato, tosilato, trieti-iodeto e valerato dos compostos descritos nesta revelação. Deve ser entendido que as referências aos compostos incluem os sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

[00197] Em qualquer um dos métodos, composições ou kits da revelação, particularmente para utilização no tratamento de um indivíduo, uma composição da revelação pode opcionalmente estar em combinação com um ou mais outros agentes terapêuticos adequados. Qualquer agente terapêutico que seja adequado para o tratamento de uma condição particular pode ser usado. Agentes ou drogas adequadas serão evidentes para o versado na técnica. Por exemplo, para o tratamento de desordens ósseas, um fármaco terapêutico convencional pode ser utilizado em combinação com uma composição da revelação. Alguns desses agentes incluem, por exemplo, hormônio da paratireoide, fluoreto de sódio, fator de crescimento similar à insulina I (ILGF-I), fator de crescimento similar à insulina II (ILGF-II), fator de crescimento transformador beta (TGF-β), um citocromo P450 inibidor, um prostanoide osteogênico, BMP2, BMP4, BMP7, BMP14 e/ou bisfosfonatos ou outros inibidores da reabsorção óssea.

[00198] Em algumas modalidades, uma composição ou composto desta revelação pode ser formulado como uma composição farmacêutica, que compreende uma composição desta revelação e um veículo farmaceuticamente aceitável. O veículo é naturalmente selecionado para minimizar qualquer degradação do ingrediente ativo e para minimizar quaisquer efeitos secundários adversos no indivíduo, como seria bem conhecido dos versados na técnica. Para uma discussão de veículos

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 92/133 / 99 farmaceuticamente aceitáveis e outros componentes de composições farmacêuticas, ver, por exemplo, Remingtorís Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing Company, 1990. Alguns veículos farmaceuticamente adequados serão evidentes para um versado na técnica e incluem, por exemplo, água (incluindo água estéril e/ou desionizada), tampões adequados (tais como PBS), solução salina fisiológica, meio de cultura celular (tal como DMEM), fluido de espinal artificial cerebral, dimetilsulfóxido (DMSO) ou similares.

[00199] Um versado na técnica apreciará que uma formulação particular da revelação dependerá, pelo menos em parte, do agente ou combinação particular de agentes que é empregue e da via de administração escolhida. Por conseguinte, existe uma grande variação de formulações adequadas de composições da presente revelação. Algumas formulações representativas são discutidas abaixo. Outras serão evidentes para o versado na técnica. Um composto pode ser administrado localmente ou diretamente a uma célula, tecido ou órgão necessitado de tratamento, ou pode ser administrado sistemicamente.

[00200] As formulações ou composições adequadas para administração oral podem compreender soluções líquidas, tais como uma quantidade eficaz de composto dissolvido em diluentes, tais como água, solução salina ou suco de fruta; cápsulas, saché ou comprimidos, cada um contendo uma quantidade predeterminada do ingrediente ativo, como sólidos, grânulos ou células criodessecadas; soluções ou suspensões em um líquido aquoso; e emulsões óleo em água ou emulsões de água em óleo. Os formatos de comprimidos podem incluir uma ou mais de lactose, manitol, amido de milho, amido de batata, celulose microcristalina, acácia, gelatina, dióxido de silício coloidal, croscarmelose sódica, talco, estearato de magnésio, ácido esteárico e outros excipientes, corantes, diluentes, agentes tamponantes, agentes umidificantes, conservantes, agentes aromatizantes e veículos farmacologicamente

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 93/133 / 99 compatíveis. As formulações adequadas para liberação oral também podem ser incorporadas em microesferas poliméricas naturais e sintéticas, ou outros meios para proteger os agentes da presente revelação da degradação no trato gastrointestinal.

[00201] As formulações adequadas para administração parenteral (por exemplo, intravenosa) incluem soluções injetáveis estéreis, aquosas e não aquosas, isotônicas, que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostáticos e solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do receptor pretendido e soluções aquosas e suspensões estéreis não aquosas que podem incluir agentes de suspensão, solubilizantes, espessantes, estabilizantes e conservantes. As formulações podem ser apresentadas em recipientes selados de doses unitárias ou multidose, tais como ampolas e frascos, e podem ser armazenados em condições liofilizadas (por exemplo, liofilizadas), exigindo apenas a adição do veículo líquido estéril, por exemplo, água, para injeções, imediatamente antes do uso. Soluções e suspensões para injeção extemporâneas podem ser preparadas a partir de pós, grânulos e comprimidos estéreis do tipo anteriormente descrito.

[00202] Um composto, sozinho ou em combinação com outros agentes terapêuticos incluindo um pró-fármaco OXY133-estatina, pode ser feito em formulações de aerossol para ser administrado via inalação. Estas formulações de aerossol podem ser colocadas em propulsores aceitáveis sob pressão, tais como diclorodifluorometano, propano, nitrogênio e similares.

[00203] As formulações adequadas para administração tópica incluem pastilhas compreendendo o ingrediente ativo em um aroma, normalmente sacarose e acácia ou tragacanta; pastilhas compreendendo o ingrediente ativo em uma base inerte, tal como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia; colutórios compreendendo o ingrediente ativo em um veículo líquido adequado; ou cremes, emulsões, suspensões, soluções, géis, pastas, espumas, lubrificantes, sprays, supositórios ou similares.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 94/133 / 99 [00204] Outras formulações adequadas incluem, por exemplo, hidrogéis e polímeros adequados para liberação temporizada de um composto, ou nanopartículas para administração de doses pequenas de um composto.

[00205] Um versado na técnica apreciará que uma formulação adequada ou apropriada pode ser selecionada, adaptada ou desenvolvida com base na aplicação particular em questão. Adicionalmente, as composições farmacêuticas da presente revelação podem ser preparadas para administração por uma variedade de vias diferentes, sejam sistêmicas, locais ou ambas. Tais exemplos incluem, mas não se limitam a, administrações realizadas intraarticularmente, intracranialmente, intradermicamente, intrahepaticamente, intramuscularmente, intraocularmente, intraperitonealmente, intratecalmente, intravenosamente, subcutaneamente, transdermicamente, ou diretamente em um sítio aterosclerótico da região óssea, tal como por injeção direta, introdução com um cateter ou outro dispositivo médico, aplicação tópica, aplicação direta e/ou pela implantação de um dispositivo em uma artéria ou em outro sítio de tecido apropriado.

[00206] Um composto pode ser formulado para ser contido ou adaptado para ser liberado por um dispositivo ou implante cirúrgico ou médico. Em certos aspectos, um implante pode ser revestido ou tratado de outro modo com um composto. Por exemplo, podem utilizar-se hidrogéis ou outros polímeros, tais como polímeros biocompatíveis e/ou biodegradáveis, para revestir um implante com as composições da presente revelação (por exemplo, a composição pode ser adaptada para utilização com um dispositivo médico utilizando um hidrogel ou outro polímero). Polímeros e copolímeros para revestimento de dispositivos médicos com um agente são bem conhecidos na técnica. Exemplos de dispositivos e implantes médicos incluem, mas não se limitam a, suturas e próteses tais como articulações protéticas, e podem estar no formato, por exemplo, de um pino, parafuso, placa ou articulação protética.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 95/133 / 99 [00207] Em algumas modalidades da revelação, um composto pode estimular ou inibir uma resposta terapêutica, medida por qualquer de uma variedade de ensaios convencionais, em cerca de 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 150%, 200% ou mais do que uma amostra controle não tratada. Valores intermediários nessas faixas também estão incluídos.

[00208] As dosagens para um composto podem estar no formato de dosagem unitária, tal como um comprimido ou cápsula. O termo “formato de dosagem unitária”, como aqui utilizado, refere-se a unidades fisicamente discretas adequadas como dosagens unitárias para indivíduos animais (por exemplo, humanos), cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de um agente da revelação, sozinho ou em combinação com outros agentes terapêuticos, calculados em uma quantidade suficiente para produzir o efeito desejado em associação com um diluente, veículo ou veículo farmaceuticamente aceitável.

[00209] Um versado na técnica pode determinar rotineiramente a dose, o calendário e o método de administração para a formulação exata da composição a ser utilizada, de modo a alcançar a quantidade eficaz desejada ou a concentração eficaz do agente no paciente individual. Um versado da técnica também pode facilmente determinar e utilizar um indicador apropriado da “concentração eficaz” dos compostos por uma anise direta ou indireta de amostras de pacientes apropriadas (por exemplo, sangue e/ou tecidos), em adição a análise dos sintomas clínicos apropriados da doença, distúrbio ou condição.

[00210] A dose exata de um composto ou composição administrada a um animal, tal como um humano, no contexto da presente revelação variará de indivíduo para indivíduo, dependendo da espécie, idade, peso e estado geral do indivíduo, o gravidade ou mecanismo de qualquer distúrbio a ser tratado, o agente ou veículo particular usado, seu modo de administração, outros medicamentos que o paciente está tomando e outros fatores

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 96/133 / 99 normalmente considerados por um médico assistente ao determinar um regime individual e nível de dose apropriado para um determinado paciente e assim por diante. A dose utilizada para atingir uma concentração desejada in vivo será determinada pela potência do formato do composto, a farmacodinâmica associada ao composto no hospedeiro, com ou sem agentes adicionais, a gravidade do estado de doença de indivíduos infectados, como bem como, no caso da administração sistêmica, o peso corporal e a idade do indivíduo. O tamanho da dose pode também ser determinado pela existência de quaisquer efeitos secundários adversos que possam acompanhar o agente particular, ou sua composição, empregue. É geralmente desejável, sempre que possível, manter os efeitos colaterais adversos ao mínimo.

[00211] Por exemplo, uma dose pode ser administrada na faixa de cerca de 5ng (nanogramas) a cerca de 1000mg (miligramas), ou de cerca de 100ng a cerca de 600mg, ou de cerca de 1 mg a cerca de 500mg, ou de cerca de 20mg a cerca de 400mg. Por exemplo, a dose pode ser selecionada para atingir uma razão entre a dose e o peso corporal de cerca de 0,0001mg/kg a cerca de 1500mg/kg, ou de cerca de 1mg/kg a cerca de 1000mg/kg, ou de cerca de 5 mg/kg a cerca de 150mg/kg, ou de cerca de 20mg/kg a cerca de 100mg/kg. Por exemplo, uma unidade de dosagem pode estar na faixa de cerca de 1 ng a cerca de 5000 mg, ou de cerca de 5 ng a cerca de 1000mg, ou de cerca de 100 ng a cerca de 600 mg, ou de cerca de 1 mg a cerca de 500 mg ou de cerca de 20 mg a cerca de 400 mg, ou de cerca de 40 mg a cerca de 200 mg de um composto ou de uma composição compreendendo um composto. Em uma modalidade da revelação, as quantidades de um composto descrito nesta revelação (por exemplo, alguns gramas) são administradas localmente, tal como em um procedimento de fusão da coluna como parte de um esqueleto.

[00212] Uma dose do composto de oxiesterol-estatina pode ser administrada uma vez por dia, duas vezes por dia, quatro vezes por dia, ou

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 97/133 / 99 mais de quatro vezes por dia, conforme requerido para induzir um efeito terapêutico desejado. Por exemplo, um regime de administração de dose pode ser selecionado para obter uma concentração no soro sanguíneo de um composto da presente revelação na faixa de cerca de 0,01 a cerca de 1000 nM, ou de cerca de 0,1 a cerca de 750 nM, ou de cerca de 1 a cerca de 500 nM, ou de cerca de 20 a cerca de 500 nM, ou de cerca de 100 a cerca de 500 nM, ou de cerca de 200 a cerca de 400 nM. Por exemplo, um regime de administração de dose pode ser selecionado para obter uma concentração no soro sanguíneo com uma metade da dose mínima de um composto da presente revelação na faixa de cerca de 1 mg/L (microgramas por litro) a cerca de 2000 mg/L ou de cerca de 2 pg/L a cerca de 1000 pg/L, ou de cerca de 5 pg/L a cerca de 500 pg/L, ou de cerca de 10 pg/L a cerca de 400 pg/L, ou de cerca de 20 pg/L para cerca de 200 pg/L, ou de cerca de 40 pg/L para cerca de 100 pg/L.

[00213] Certas modalidades da revelação também podem incluir o tratamento com um agente adicional que atua independentemente ou sinergicamente com o composto oxiesterol-estatina para melhorar os resultados terapêuticos. Quando administrado em terapia combinada, o agente diferente do composto de oxiesterol-estatina pode ser administrado ao mesmo tempo que o composto, ou a dosagem pode ser escalonada conforme desejado. Os dois (ou mais) fármacos também podem ser combinados em uma composição. As doses de cada um podem ser menores quando usadas em combinação do que quando são usadas sozinhas. Doses adequadas podem ser determinadas por um versado na técnica, utilizando parâmetros de dosagem padrão.

[00214] Em uma modalidade da revelação, um kit é útil para qualquer um dos métodos aqui divulgados, in vitro ou in vivo. Um tal kit compreende um composto ou uma composição bioativa ou farmacêutica do mesmo, e pode compreender um ou mais outros oxiesteróis, por exemplo, que resultam num aumento de uma atividade mediada pela via de Hh, ou outros agentes

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 98/133 / 99 terapêuticos adequados. Opcionalmente, os kits incluem instruções para realizar o método. Elementos opcionais de um kit da revelação incluem tampões adequados, veículos farmaceuticamente aceitáveis, ou similares, recipientes ou materiais de embalagem. Os reagentes do kit podem estar em recipientes nos quais os reagentes são estáveis, por exemplo, no formato liofilizado ou em líquidos estabilizados. Os reagentes podem também estar no formato de uso único, por exemplo, no formato de dosagem única. Um versado da técnica reconhecerá componentes de kits adequados para realizar qualquer dos métodos da revelação.

[00215] Uma variedade de condições pode ser tratada com um composto de oxiesterol-estatina, usado sozinho ou em combinação com outros agentes terapêuticos. Um composto de oxiesterol-estatina pode resultar em um aumento na atividade da via Hedgehog.

[00216] Um efeito de um composto de oxiesterol-estatina pode ser direcionar células pluripotentes para induzir a sua diferenciação específica de linhagem em vários tipos de células, por exemplo, osteoblastos. Por exemplo, as células tronco mesenquimais tratadas com um composto podem mostrar expressão induzida de marcadores de diferenciação de osteoblastos. Sem o desejo de se vincular à teoria a qualquer mecanismo em particular, sugere-se que essa diferenciação específica da linhagem se deva à indução da sinalização de Hedgehog nessas células. Contudo, os métodos de tratamento aqui discutidos estão incluídos na presente revelação, independentemente do mecanismo pelo qual o composto funciona. Um composto de oxiesterolestatina pode ser útil para o tratamento de condições que beneficiariam da estimulação da formação óssea, diferenciação osteoblástica, osteomorfogênese e/ou osteoproliferação. Entre estas condições ou tratamentos estão, por exemplo, terapia osteoindutora para estimulação de formação óssea localizada em fusão espinhal ou osteoporose, reparo de fratura óssea ou cicatrização, procedimentos dentários para os quais o

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 99/133 / 99 aumento da formação óssea na mandíbula é de benefício clínico, reparo de defeitos ósseos craniofaciais induzidos por trauma ou defeitos congênitos, como fenda palatina/lábio, e um número de outros distúrbios musculoesqueléticos em que o crescimento ósseo nativo é inadequado, o que será evidente para os trabalhadores qualificados. O tratamento pode ser administrado para tratar fraturas expostas e fraturas com alto risco de não união, e em indivíduos com distúrbios espinhais, incluindo indivíduos com necessidade de fusão da coluna (por exemplo, fusão intersomática lombar anterior, fusão espinhal lombar posterior e fusão da coluna cervical) ou indivíduos com doença degenerativa do disco ou artrite que afetam a coluna lombar e cervical. Além disso, um composto de oxiesterol-estatina pode ser usado para tratar a osteoporose, particularmente no envelhecimento e na população pós-menopausa, resultante do aumento da reabsorção óssea pelos osteoclastos em paralelo com a formação óssea diminuída pelos osteoblastos. [00217] Mais particularmente, os seguintes tipos de tratamentos relacionados com os ossos podem ser realizados. Em algumas modalidades, um composto pode ser utilizado como um agente osteogênico distribuído localmente no corpo de modo a estimular a formação óssea localizada, utilizando um suporte que é composto por uma molécula compatível tal como mas não limitada a colágeno I, que absorve o composto e então é colocado dentro do corpo. Por exemplo, o suporte contendo o composto de oxiesterolestatina pode ser colocado entre processos transversais ou no disco intervertebral, onde a fusão de duas ou mais vértebras é indicada, por exemplo em fusão espinhal, pseudoartrose e fusões não-unidas. Em outras modalidades, o suporte que contém o composto de oxiesterol-estatina é colocado em um osso fraturado de modo a estimular a formação óssea e a cicatrização da fratura; é colocado em um defeito ósseo, como defeitos ósseos calvários ou maxilo-faciais, onde a regeneração óssea pelo composto é indicada; ou é colocado no osso da mandíbula, a fim de estimular a formação

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 100/133 / 99 óssea como meio de regenerar o osso antes de procedimentos odontológicos, como implantes dentários. Em outras modalidades, um composto de oxiesterol-estatina pode ser utilizado como agente osteogênico in vitro. Por exemplo, pode ser administrado a células osteoprogenitoras, por exemplo células tronco mesenquimais, de modo a estimular a sua diferenciação osteogênica antes da aplicação de tais células em procedimentos ortopédicos e outros como indicado acima, a fim de estimular a formação óssea localizada. Ainda em outras modalidades, um composto de oxiesterol-estatina pode ser utilizado in vitro para estimular a via de sinalização de Hedgehog em células osteoprogenitoras, conduzindo assim à diferenciação osteogênica das células in vitro ou in vivo.

[00218] No supracitado e nos exemplos seguintes, todas as temperaturas são apresentadas em graus Celsius; e, salvo indicação em contrário, todas as partes e percentagens são em peso. Os oxiesteróis osteogênicos descritos acima são úteis para administração direta localizada a células alvo, tecidos ou órgãos de interesse.

[00219] Estes e outros aspectos do presente pedido serão ainda apreciados após consideração dos Exemplos seguintes, que se destinam a ilustrar certas modalidades particulares do pedido, mas não pretendem limitar o seu escopo, tal como definido pelas reivindicações.

EXEMPLOS

Exemplo 1

Preparação do acetato de pregnenolona [00220] 8,25 mL de cloreto de n-hexilmagnésio (2 M, 16,5 mmol) em

THF foi adicionado a uma solução de acetato de pregnenolona em THF sob agitação eletromagnética vigorosa e arrefecimento em banho de gelo. A solução de acetato de pregnenolona continha 1,79 g do composto 1, acetato de pregnenolona (5 mmol) em 4,5 mL de THF. A adição ocorreu durante 2 minutos. Após a adição estar completa, a mistura foi agitada à temperatura

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94/99 ambiente durante 3,5 horas, até o ponto em que a mistura se transformou em um gel. O gel foi em seguida digerido com uma mistura de NH4CI e MTBE (éter metil-terc-butílico)aquoso saturado. A camada orgânica foi separada, lavada com água três vezes e evaporada. O resíduo foi separado por cromatografia em coluna de gel de sílica utilizando uma mistura de EtOAc (acetato de etila)/éter de petróleo (razão 70/30) para dar o composto 2, um diol, como um sólido branco. 1,29 g (3,21 mmol) do diol sólido foram extraídos para um rendimento isolado de 64%. A reação é mostrada abaixo em A:

mw 358,51 g/m

%7^H4é% mw 420,67 g/m [00221] Os dados de ^!H NMR do diol em CDCI3 a 400 MHz ilustrou o seguinte: δ: 0,8-1,9 (40H), 1,98 (m, 1H), 2,09 (m, 1H), 2,23 (m, 1H), 2,29 (m, 1H), 3,52 (m, 1H), 5,35 (m, 1H), mostrado na Figura 6. Os dados de ¹³C

NMR C do diol em CDCI3 a 100 MHz na Figura 7 ilustra o seguinte: d: 13,6,

[00222] O diol criado tem um nome IUPAC de (3S, 8S, 9S, 10R, 13R, 14S, 17R)-10,13-dimetil-17-[(S)-2-hidroxioctan-il]-2,3,4,7,8,9,ll,12,14,15,

16,17-dodeca-hidro-lH-ciclopenta [a] fenantren-3-ol.

Exemplo 2

Preparação a partir de pregnenolona [00223] Alternativamente ao Exemplo 1, o composto 2 do esquema de reação A acima pode ser preparado a partir da pregnenolona mostrada abaixo no esquema B utilizando o mesmo procedimento que utilizado para a

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95/99 conversão do composto 1 no composto 2. Neste procedimento, 10 g de pregnenolona foram convertidos em 7,05 g do composto 2, o que representou um rendimento de 55%.

C__H._Omw 316,48 g/m mw 402,67 g/m iiim I I I W H-UZ. .U f yj Γ11

Esquema de Reação B [00224] 2500 ml de cloreto de n-hexilmagnésio (2 M, 5 moles) foram carregados em um reator e a solução foi arrefecida a -5°C. Uma solução de acetato de pregnenolona em THF foi carregada no reator a uma taxa que manteve a temperatura interna da reação abaixo de 1°C. A solução de pregnenolona continha 500g de pregnenolona (1,4 mol) em 8 litros de THF. Depois da adição estar completa, a mistura foi mantida a 0°C durante 1 hora e depois deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação tornou-se uma massa sólida gelatinosa. 2 litros de THF adicional foi adicionado seguido de 10 ml de ácido acético glacial. A mistura de reação foi arrefecida até 5°C e desativada pela adição de 350 mE de ácido acético glacial, que deu uma solução. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida a um xarope espesso. O composto foi dissolvido em diclorometano, lavado com água e finalmente lavado com bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica foi concentrada sob pressão reduzida até um óleo âmbar. A recuperação em massa foi de cerca de 800 gramas. O material bruto foi utilizado como está na próxima etapa.

[00225] O diol criado tem um nome IUPAC de (3S, 8S, 9S, 10R, 13R, 14S, 17R)-10,13-dimetil-17 - [(S)-2-hidroxioctan-il] -2,3,4,7,8,9,11,12,14,15, 16,17-dodeca-hidro-lH-ciclopenta [a] fenantren-3-ol.

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Exemplo 3 [00226] O produto hexil diol bruto (800 gramas) foi dissolvido em 8 litros de THF, carregado em um reator e foi arrefecido a -5°C. 6300 mL do complexo borano-THF (1 M, 6,3 mols, 4,5 equivalentes) em THF foram carregados a uma velocidade que manteve a temperatura interna da reação abaixo de 1°C. Uma vez completada a adição, agitou-se a mistura de reação a 0°C durante 1,5 horas e depois deixou-se aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. A reação é mostrada abaixo.

C

27^4.15^2

mw 420,67 g/m mw 402,67 g/m [00227] A mistura de reação foi desativada por adição de uma mistura de hidróxido de sódio a 10% (4750 mL) e peróxido de hidrogênio a 30% (1375 mL). A desativação foi extremamente exotérmica e exigiu várias horas para ser concluída. A temperatura interna foi mantida abaixo de 10°C. Depois da adição do volume de desativação estar completa, a mistura foi mantida fria durante 1,5 horas e depois deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite. 8 litros de diclorometano foram então adicionados. A camada orgânica foi isolada e lavada com 7 litros de água fresca e foi concentrada sob pressão reduzida. O produto foi isolado como uma massa viscosa e oleosa que solidificou em repouso.

[00228] O produto foi dissolvido em 4 litros de diclorometano e foi colocado em uma coluna de gel de sílica preparada em diclorometano. A coluna foi eluída primeiro com 25% de acetato de etila para eluir o subproduto álcool 7-metil-7-tridecílico. Subsequentemente, a coluna foi eluída com 10% de acetato de metil-etila para solvatar ο OXY133. As frações

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97/99 coletadas foram combinadas e concentradas sob pressão reduzida até um sólido ceroso. O composto foi dissolvido em mistura de acetona-água (3:1) e concentrado sob pressão reduzida para remover os solventes residuais. O OXY133 bruto resultante foi utilizado na etapa seguinte.

[00229] Alternativamente, o produto viscoso recuperado a partir da hidroboração/oxidação pode ser solidificado por agitação com heptanos, e o produto isolado por filtração. O produto isolado é suspenso em cloreto de metileno (7,3 mL de cloreto de metileno/g de sólido). O produto foi isolado por filtração e usado na próxima etapa.

Exemplo 4

Acetona, água ⁽-'27^Η43°3 mw 420,67 g/m

^C27^H<8°3 mw 438,69 g/m [00230] OXY133 foi recristalizado dissolvendo 630 gramas de

OXY 133 bruto em 1500 ml de uma mistura de acetona/água 3:1 a refluxo, depois arrefecendo à temperatura ambiente. O sólido cristalino foi recuperado por filtragem a vácuo e seco para proporcionar 336 g, que foi um rendimento global de 28% a partir do composto 1. Ο OXY133 produzido era monohidratado e tem um nome IUPAC de (35, 55, 65, SR, 9S, 1QR, 135, 145, 175)

17-((5)-2-hidroxoctan-2-il)-10,13-dimetil-hexadeca-hidro-7H-ciclopenta[a] fenantreno-3,6-diol, mono-hidratado.

[00231] A Figura 1 ilustra a reação gradual para sintetizar OXY133 com reagentes de partida compreendendo acetato de pregnenolona. A pregnenolona reage com um composto organometálico para produzir um esterol ou diol tendo dois grupos hidroxila. O esterol ou diol é então reagido com borano e peróxido de hidrogênio e purificado para produzir OXY133.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 105/133 / 99 [00232] Os dados de Ή NMR de OXY133 em CDCI3 a 400 MHz ilustrados a seguir: δ: 0,66 (m, 1H), 0,85 (m, 10H), 1,23 (m, 18H), 1,47 (m, 9H), 1,68 (m, 4H), 1,81 (m, 1H), 1,99 (m, 1H), 2,06 (m, 1H), 2,18 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,58 (m, 1H). Os dados de ¹³C NMR de OXY133 em CDCE a 400 MHz ilustrados a seguir: d: 13,7, 14,0, 14,3, 21,2, 22,5, 22,8, 23,9, 24,4, 26,6, 30,1, 31,1, 32,1, 32,5, 33,9, 36,5, 37,5, 40,4, 41,7, 43,1, 44,3, 51,9, 53,9, 56,5, 57,9, 69,6, 71,3, 75,4. Os dados de espectroscopia no infravermelho de OXY133 mostraram picos a 3342 cm^-1, 2929 cm^-1, 2872 cm^-1, 2849 cm^-1. Os dados de espectrometria de massa do turbo spray do OXY133 mostraram picos a 438,4 m/z [M+NH4]+, 420,4 m/z (M-H2O+NH4]+, 403,4 m/z [MH2O+H]+, 385,4 m/z [M-2H2O+H]+.. O ¹H NMR de, ¹³C NMR, IR, e MS de OXY133 dados são mostrados nas Figuras. 2, 3, 4 e 5, respectivamente. A Figura 6 é uma ilustração gráfica dos dados de ¹H NMR obtidos a partir do intermediário de esterol ou diol para sintetizar OXY133. A Figura 7 é uma ilustração gráfica de dados ¹³C NMR obtidos a partir do intermediário de esterol ou diol para sintetizar OXY133;

Exemplo 5 [00233] Procedimento alternativo de um recipiente a partir de acetato de pregnenolona [00234] 100 mL de cloreto de n-hexilmagnésio (2 M em THF, 200 mmol) foi carregado em um balão e arrefecido a -10°C. Uma solução contendo 20 g de acetato de pregnenolona (56 mmol) em 200 mL de THF anidro foi adicionada gota a gota, enquanto se mantinha a temperatura interna da reação abaixo de -10°C. Após a adição estar completa, a mistura foi agitada durante 30 minutos e depois deixada aquecer até à temperatura ambiente. Após 4 horas à temperatura ambiente, a mistura tornou-se uma massa gelatinosa que pode ser agitada. A mistura foi arrefecida a 0°C e foram adicionados, gota a gota, 200 mL de complexo de borano-THF (1 M em THF, 200 mmol), mantendo a temperatura interna abaixo de 0. Uma vez

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 106/133 / 99 completada a adição, a solução resultante foi deixada aquecer até à temperatura ambiente durante a noite.

[00235] A mistura foi arrefecida at0 e desativada pela adição lenta de uma mistura de NaOH a 10% (190 mL) e H2O2 a 30% (55 mL). Uma vez terminada a desativação, a mistura foi extraída com MTBE (total de 800 mL) resultando em uma emulsão. Solução salina foi adicionada e as camadas foram separadas. A fase orgânica foi concentrada sob pressão reduzida até um óleo claro e viscoso. O óleo foi purificado adicionalmente utilizando o método de coluna de tampão anteriormente descrito.

[00236] Será evidente para os versados na técnica que várias modificações e variações podem ser feitas para várias modalidades aqui descritas sem se afastar do escopo ou âmbito dos ensinamentos da presente invenção. Assim, pretende-se que várias modalidades abranjam outras modificações e variações de várias modalidades dentro do escopo dos presentes ensinamentos.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para preparar um composto de oxiesterol-estatina, o método caracterizado pelo fato de que compreende o reagir a pregnenolona de Fórmula I (Fórmula I) com RiX na presença de uma base para formar um derivado de pregnenolona de Fórmula II:

(Fórmula II);

reagir o derivado de pregnenolona de Fórmula II com um composto organometálico para formar um derivado de diol de Fórmula III:

reagir o derivado de diol de Fórmula III com um composto de boro para formar um oxiesterol ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de Fórmula IV:

(Fórmula IV) reagir o oxiesterol de Fórmula IV com uma estatina para formar o composto de oxiesterol-estatina, em que Ri é um grupo de proteção,

X é um haleto e R3 é um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um carbono.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 108/133
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2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Ri é um grupo metila, etila, silila ou carbamato e R3 é (C6-C26) alquila ou heteroalquila, uma (C2-C20) arila ou heteroarila, uma (C6-C26) arilalquila ou heteroalquila ou uma (C5-C20) arilalquila ou heteroarila heteroalquila, uma (C4-C10) alquildi-ila ou heteroalquildi-ila, ou um (C4-C10) alquileno ou heteroalquileno.
3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que n (i) o composto organometálico compreende a Fórmula RsMgX, onde X é um haleto e R3 é um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um carbono; ou (ii) o composto organometálico compreende a Fórmula R3L1, onde R3 é um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um carbono; ou (iii) Ri é um grupo metila, etila, terc-butila, alila, carbamato ou silila; ou (iv) Ri é um grupo metila, etila, terc-butila, alila, carbamato, triisopropilsilila, ou terc-butildimetilsilila.
4. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que R3MgX é n-cloreto de hexil magnésio e é reagido com tetrahidrofurano para formar um composto de Fórmula Illa:

HO^ (Fórmula Illa).
5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o composto de boro é (i) BH3, que após reagir com a Fórmula Illa forma um intermediário de borano; (ii) o intermediário de borano da etapa (i) é regido com peróxido de hidrogênio em NaOH, KOH ou Ca(OH)₂ para formar um composto de Fórmula Va:

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 109/133

3/9 (Fórmula Va).
6. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente reagir o composto de Fórmula Va com a estatina compreendendo atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina ou sinvastatina para formar o composto de oxiesterol-estatina tendo a Fórmula:

(Fórmula V), em que Ri é um grupo metila, etila, silila ou carbamato e R4 é uma fração de estatina.
7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente desproteger o composto de oxiesterol-estatina protegido em C3 com uma fonte de iodo ou uma fonte de fluoreto para obter um composto de Fórmula VI:

em que R4 é uma fração de atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina ou sinvastatina.
8. Método de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que R4 é um composto de oxiesterol-estatina de Fórmula VII:

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 110/133

4/9 (Fórmula VII).
9. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente reagir o composto de Fórmula Va com um composto compreendendo anidrido succínico, ácido aspártico, ácido etilcarbâmico ou polietileno glicol; acoplar o composto resultante a uma fração de estatina R4 para obter um composto de Fórmula VIII:

(Fórmula VIII), em que L é um ligante, o ligante é um ligante à base de aspartato, um ligante à base de succinato ou um ligante à base de uretano e a fração de estatina R4 é atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina ou sinvastatina.
10. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente desproteger o composto de Fórmula VIII com uma fonte de iodo ou uma fonte de fluoreto para obter um composto de Fórmula IX:

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 111/133

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11. Método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a fonte de iodo é iodeto de trimetilsilila, a fonte de flúor é fluoreto de tetra-n-butilamômio ou complexo de piridina HF.
12. Método de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que as reações são realizadas em um único recipiente para produzir um composto de oxiesterol-estatina ou um sal, hidrato ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
13. Método de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que as reações são realizadas em um único recipiente para produzir um composto de oxiesterol-estatina contendo o Ligante L ou um sal, hidrato ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
14. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende (i) um composto de Fórmula V:

(Fórmula V); ou (ii) um composto de Fórmula VI:

(iii) um composto de Fórmula VII:

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 112/133

6/9 (Fórmula VII); ou (iv) um composto de Fórmula VIII:

(Fórmula VIII); ou (v) um composto de Fórmula IX:

(Fórmula IX);

e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável, em que

Ri é um grupo de proteção, R4 é uma fração de estatina e L é um ligante.
15. Uso de um composto, o composto sendo (i) da Fórmula V:

(Fórmula V); ou (ii) um composto de Fórmula VI:

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 113/133

7/9 (iii) um composto de Fórmula VII:

(Fórmula VII); ou (iv) um composto de Fórmula VIII:

(Fórmula VIII); ou (v) um composto de Fórmula IX:

e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável, em que Ri é um grupo de proteção, R4 é uma fração de estatina e L é um ligante, caracterizado pelo fato de que é para manufatura de um medicamento para tratar um mamífero que sofre de um distúrbio ósseo, em que o composto é administrado ao mamífero por aplicação localizada ou aplicação sistêmica.

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 114/133

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16. Uso de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o distúrbio ósseo compreende uma fratura óssea, osteoporose ou osteopenia.
17. Composto, caracterizado pelo fato de que corresponde à estrutura:

ou um sal, hidrato ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que Ri é um grupo de proteção e R3 é um substituinte alifático ou cíclico tendo pelo menos um carbono.
18. Composto de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que Ri é um grupo metila, etila, silila ou carbamato e R3 é (CôC26) alquila ou heteroalquila, uma (C2-C20) arila ou heteroarila, uma (C6-C26) arilalquila ou heteroalquila e uma (C5-C20) arilalquila ou heteroarila heteroalquila, uma (C4-C10) alquildi-ila ou heteroalquildi-ila, ou um (C4-C10) alquileno ou heteroalquileno ou carbamato ou benzila ou silila, com a condição de que Ri não é terc-butil dimetil silila quando R3 é (C6-C26) alquila.
19. Composto de oxiesterol-estatina, caracterizado pelo fato de que corresponde à estrutura:

(Fórmula V), em que Ri é um grupo metila, etila ou silila e R4 é uma fração de estatina.
20. Composto de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que corresponde à estrutura:

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 115/133

9/9 (Fórmula VI), em que R4 é uma fração de atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, lovastatina, mevastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina ou sinvastatina ou R4 é uma fração de lovastatina e o composto de oxiesterol-estatina correspondente à estrutura:

(Fórmula VII).

Petição 870180041386, de 17/05/2018, pág. 116/133