WO2023282346A1 - 析出抑制剤 - Google Patents

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WO2023282346A1
WO2023282346A1 PCT/JP2022/027105 JP2022027105W WO2023282346A1 WO 2023282346 A1 WO2023282346 A1 WO 2023282346A1 JP 2022027105 W JP2022027105 W JP 2022027105W WO 2023282346 A1 WO2023282346 A1 WO 2023282346A1
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sugar
antisense oligomer
pharmaceutical composition
precipitation
antisense
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由輝子 塩谷
佑樹 沼倉
健太郎 岡本
寿規 阿形
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日本新薬株式会社
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing

Definitions

  • the present invention provides an agent for suppressing precipitation of antisense oligomers in the urine of a subject to whom a pharmaceutical composition containing an antisense oligomer containing sugar is administered, and an antisense oligomer in the urine of a subject to whom the pharmaceutical composition is administered. and a pharmaceutical composition containing the precipitation inhibitor.
  • Antisense oligomers are nucleic acids that sequence-specifically hybridize to target mRNAs and pre-mRNAs. Antisense oligomers exert their effects through degradation of mRNA and pre-mRNA, exon skipping, exon inclusion, translation inhibition, etc., and are used as therapeutic agents for several diseases.
  • Patent Document 1 discloses an antisense nucleic acid capable of treating Fukuyama muscular dystrophy or the like by normalizing aberrant splicing of fukutin gene having an insertion mutation of SVA-type retrotransposon.
  • Non-Patent Document 1 morpholino oligomers accumulate in the kidney (Non-Patent Document 1, Figure 2)
  • nephrotoxicity occurs due to administration of morpholino oligomers
  • Non-Patent Document 2 Figure 3, Table 5
  • the present invention provides an agent for suppressing deposition of antisense oligomers in urine in a subject to whom a pharmaceutical composition containing an antisense oligomer containing a sugar other than glucose described below was administered, and the pharmaceutical composition to which the pharmaceutical composition was administered.
  • the precipitation inhibitor according to (1) which is used in an amount such that the sugar concentration in the pharmaceutical composition is 2.6 mg/mL to 1694.1 mg/mL.
  • the deposition inhibitor according to any one of (1) to (6), wherein the sugar is trehalose.
  • (15-1) A method for suppressing precipitation of an antisense oligomer in the urine of a subject to whom a pharmaceutical composition containing an antisense oligomer is administered, comprising adding a sugar other than glucose to the pharmaceutical composition.
  • a method comprising adding sugar in an amount that results in a concentration of 0.5 mg/mL to 3000 mg/mL.
  • (15-2) The method according to (15-1), wherein the sugar is added in an amount such that the sugar concentration in the pharmaceutical composition is 2.6 mg/mL to 1694.1 mg/mL.
  • (15-3) The method according to (15-1) or (15-2), wherein the concentration of the antisense oligomer in the pharmaceutical composition is 0.05 mg/mL to 2000 mg/mL.
  • (16-1) A method for suppressing precipitation of an antisense oligomer in urine in a subject to whom an antisense oligomer has been administered, comprising administering a sugar other than glucose to the subject, is administered in an amount such that the weight ratio of sugar to 1 is 0.1 to 100.
  • (16-2) The method according to (16-1), wherein the antisense oligomer and the saccharide are administered separately.
  • (16-3) The method according to (16-1) or (16-2), wherein the sugar is used in such an amount that the weight ratio of the sugar to the weight of the antisense oligomer is 1-53.
  • (17-1) A pharmaceutical composition containing an antisense oligomer, wherein the pharmaceutical composition contains a sugar other than glucose, and an antisense oligomer precipitation inhibitor in the urine of a subject to whom the pharmaceutical composition is administered is 0.5 mg/mL to A pharmaceutical composition comprising a concentration of 3000 mg/mL.
  • an agent for suppressing the precipitation of antisense oligomers in urine in a subject to whom a pharmaceutical composition containing an antisense oligomer is administered, and the precipitation of antisense oligomers in urine in a subject to which the pharmaceutical composition is administered is provided.
  • Absorbance measurements at 620 nm under the conditions shown in Table 4 are shown. Absorbance measurements at 620 nm under the conditions shown in Table 5 are shown. Absorbance measurements at 620 nm under the conditions shown in Table 6 are shown. Absorbance measurements at 620 nm under the conditions shown in Table 7 are shown. Absorbance measurements at 620 nm under the conditions shown in Table 8 are shown. Absorbance measurements at 620 nm under the conditions shown in Table 9 are shown. Absorbance measurements at 620 nm under the conditions shown in Table 10 are shown. Absorbance measurements at 620 nm under the conditions shown in Table 11 are shown. PMO No.
  • PMO No. 8 shows hematoxylin and eosin staining images of kidneys when 10 mL/kg of 8 administration solution (50 mg/mL PMO No. 8) was administered.
  • PMO No. 8 shows hematoxylin and eosin staining images of kidneys when 10 mL/kg of 8 administration solution (50 mg/mL PMO No. 8, 20 mg/mL sucrose) was administered.
  • PMO No. 8 shows hematoxylin and eosin staining images of kidneys when 10 mL/kg of 8 administration solution (50 mg/mL PMO No. 8, 50 mg/mL sucrose) was administered.
  • the present invention relates to an antisense oligomer deposition inhibitor in the urine of a subject to whom a pharmaceutical composition containing an antisense oligomer has been administered.
  • the term “precipitation inhibitor” means an agent for inhibiting the precipitation of antisense oligomers in the urine of a subject to whom a pharmaceutical composition containing antisense oligomers has been administered.
  • the inhibition of deposition reduces the accumulation of antisense oligomers in the kidney, it is expected to lead to a reduction in nephrotoxicity.
  • Nephrotoxicity means tissue damage or decreased renal function due to increased accumulation of the administered antisense oligomer in the kidney.
  • precipitation in body fluids such as blood is suppressed in vivo, it is predicted that the concentration of antisense oligomers in body fluids will become uniform, leading to stabilization of efficacy and/or reduction of toxicity. be.
  • the presence or absence of the precipitation inhibitory effect was determined by adding an antisense oligomer and a precipitation inhibitor to a solvent simulating urine, and determining whether the precipitation inhibitor reduced the increase in absorbance due to the precipitation of the antisense oligomer. can be determined by examining the For example, after adding the antisense oligomer and the precipitation inhibitor to the solvent (e.g., after 5 minutes, 10 minutes, 15 minutes, 20 minutes, 25 minutes, 30 minutes, 40 minutes, 50 minutes, After 60 minutes, 70 minutes, 80 minutes, or 90 minutes), the absorbance can be measured at 37°C.
  • the time until precipitation is observed is, for example, 5% or more. , 10% or more, 20% or more, 30% or more, 40% or more, or 50% or more, it can be determined that there is a precipitation suppressing effect.
  • Solvents simulating urine include, for example, KCl at 20 nmol/mL to 9000 nmol/mL, 50 nmol/mL to 3600 nmol/mL, or 100 nmol/mL to 1800 nmol/mL, and NaCl at 15 nmol/mL to 2400 nmol/mL and 40 nmol/mL.
  • Aqueous solutions containing ⁇ 900 nmol/mL, or 77 nmol/mL to 462 nmol/mL can be used.
  • the dose of sugar to the subject and the concentration in urine may have linearity, so the concentration of sugar in a solvent that simulates urine (hereinafter also referred to as "urinary concentration").
  • the concentration of sugar in a solvent that simulates urine (hereinafter also referred to as "urinary concentration").
  • the urine concentration can be converted to a glucose dosage using the following formula, and the glucose dosage can be calculated from body weight and administration Based on the liquid volume, it can be converted to the concentration in the formulation at the time of administration (at the time of use).
  • Glucose dose urine concentration (mg/mL)/estimated urine concentration in cynomolgus monkeys (127.5 (mg/mL)) x dose to cynomolgus monkeys (500 (mg/kg))
  • D-mannitol concentration in formulation D-mannitol dose (mg/kg) ⁇ body weight (kg) ⁇ administration liquid volume (mL)
  • a body weight of, for example, 3 to 80 kg, and an administration volume of, for example, 50 to 200 mL can be assumed.
  • the concentration of antisense oligomers in a solvent that simulates urine can be converted to the concentration of antisense oligomers in the formulation as described in the Examples.
  • the deposition inhibitor of the present invention may consist of sugars (excluding glucose) or may contain sugars (excluding glucose).
  • the sugar may be, for example, a disaccharide or higher sugar, or a disaccharide sugar.
  • sugars include disaccharides such as sucrose, lactose, lactulose, trehalose, maltose, isomaltose; trisaccharides such as raffinose, melezitose, maltotriose; galactose, mannose, fructose, ribose; Monosaccharides such as xylose, arabinose, and lyxose are included.
  • the sugar is or comprises sucrose.
  • the sugar is or comprises trehalose.
  • the deposition inhibitor of the present invention contains a component other than sugar
  • the deposition inhibitor is formulated by appropriately blending sugar with a pharmaceutically acceptable carrier or additive (and optionally the deposition inhibitor of the present invention).
  • a pharmaceutically acceptable carrier or additive may be changed.
  • oral agents such as tablets, coated tablets, pills, powders, granules, capsules, solutions, suspensions, and emulsions
  • parenteral agents such as injections, infusions, suppositories, ointments, and patches
  • Parenteral agents are preferred.
  • the injection may be a freeze-dried preparation.
  • the blending ratio of the carrier or additive may be appropriately set based on the range normally employed in the pharmaceutical field.
  • the carriers or additives that can be incorporated are not particularly limited, but for example, water, physiological saline, other aqueous solvents, various carriers such as aqueous or oily bases, excipients, binders, pH adjusters, disintegrants, absorption Various additives such as accelerators, lubricants, coloring agents, corrigents, and perfumes are included.
  • excipients examples include binders such as gelatin, cornstarch, tragacanth and gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, cornstarch, gelatin, alginic acid and the like. Raising agents, lubricants such as magnesium stearate, sweetening agents such as sucrose, lactose or saccharin, flavoring agents such as peppermint, redwood oil or cherries, and the like may be used.
  • the dosage unit form is a capsule, the above type of material may further contain a liquid carrier such as oil.
  • Sterile compositions for injection can be prepared according to routine pharmaceutical practice (eg, dissolving or suspending the active ingredient in a solvent such as water for injection, natural vegetable oil, etc.).
  • Aqueous solutions for injection include, for example, physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants (e.g., sodium chloride), and the like. ), polyalcohols (eg, propylene glycol, polyethylene glycol), nonionic surfactants (eg, polysorbate 80 TM , HCO-50), and the like.
  • the oily liquid for example, sesame oil, soybean oil and the like are used, and they may be used in combination with dissolution aids such as benzyl benzoate and benzyl alcohol.
  • buffers e.g., phosphate buffer, sodium acetate buffer
  • soothing agents e.g., benzalkonium chloride, procaine hydrochloride, etc.
  • stabilizers e.g., human serum albumin, polyethylene glycol, etc.
  • preservatives agents eg, benzyl alcohol, phenol, etc.
  • antioxidants and the like.
  • it may be a freeze-dried preparation.
  • antisense oligomers may be either oligonucleotides, morpholino oligomers, or peptide nucleic acid (PNA) oligomers (hereinafter each referred to as “antisense oligos described herein. (also referred to as “nucleotides”, “antisense morpholino oligomers as described herein”, or “antisense peptide nucleic acid oligomers as described herein”).
  • PNA peptide nucleic acid
  • An antisense oligonucleotide is an antisense oligomer whose constituent units are nucleotides, and such nucleotides may be ribonucleotides, deoxyribonucleotides, or modified nucleotides.
  • Modified nucleotides refer to those in which all or part of the nucleobases, sugar moieties, and phosphate-binding moieties that make up ribonucleotides or deoxyribonucleotides have been modified.
  • Nucleic acid bases include, for example, adenine, guanine, hypoxanthine, cytosine, thymine, uracil, or modified bases thereof.
  • modified bases include pseudouracil, 3-methyluracil, dihydrouracil, 5-alkylcytosine (eg, 5-methylcytosine), 5-alkyluracil (eg, 5-ethyluracil), 5-halouracil (eg, , 5-bromouracil), 6-azapyrimidine, 6-alkylpyrimidine (e.g., 6-methyluracil), 2-thiouracil, 4-thiouracil, 4-acetylcytosine, 5-(carboxyhydroxymethyl)uracil, 5-carboxy methylaminomethyl-2-thiouracil, 5-carboxymethylaminomethyluracil, 1-methyladenine, 1-methylhypoxanthine, 2,2-dimethylguanine, 3-methylcytosine, 2-methyladenine, 2-methylguanine, N
  • Modifications of the sugar moiety can include, for example, modifications at the 2' position of ribose and modifications at other parts of the sugar.
  • Modifications at the 2'-position of ribose include, for example, -OH group at the 2'-position of ribose with -OR, -R, -R'OR, -SH, -SR, -NH 2 , -NHR, -NR 2 , Modifications substituted for -N 3 , -CN, -F, -Cl, -Br, -I can be mentioned.
  • R represents alkyl or aryl.
  • R' represents alkylene.
  • Modifications of other parts of the sugar include, for example, those in which the 4'-position of ribose or deoxyribose is replaced with S, those in which the 2'-position and 4'-position of the sugar are crosslinked, for example, LNA (Locked Nucleic Acid ) or ENA (2′-O,4′-C-Ethylene-bridged Nucleic Acids), but are not limited thereto.
  • LNA Locked Nucleic Acid
  • ENA (2′-O,4′-C-Ethylene-bridged Nucleic Acids
  • Modifications of the phosphate binding moiety include, for example, phosphodiester linkages, phosphorothioate linkages, phosphorodithioate linkages, alkylphosphonate linkages, phosphoramidate linkages, boranophosphate linkages (e.g., Enya et al: Bioorganic & Medicinal Chemistry , 2008, 18, 9154-9160) (see, eg, Republished Patent Publication No. 2006/129594 and Republished Patent Publication No. 2006/038608).
  • alkyl is preferably linear or branched alkyl having 1 to 6 carbon atoms. Specific examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, tert-pentyl, n-hexyl and isohexyl. be done.
  • the alkyl may be substituted, and examples of such substituents include halogen, alkoxy, cyano, and nitro, and may be substituted with 1 to 3 of these.
  • cycloalkyl having 3 to 12 carbon atoms is preferred as cycloalkyl.
  • Specific examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, cyclodecyl and cyclododecyl.
  • halogen includes fluorine, chlorine, bromine, and iodine.
  • alkoxy refers to linear or branched alkoxy having 1 to 6 carbon atoms, such as methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, isobutoxy, sec-butoxy, tert. -butoxy, n-pentyloxy, isopentyloxy, n-hexyloxy, isohexyloxy and the like.
  • Alkoxy having 1 to 3 carbon atoms is particularly preferred.
  • aryl having 6 to 10 carbon atoms is preferred as aryl.
  • Specific examples include phenyl, ⁇ -naphthyl, and ⁇ -naphthyl. Phenyl is particularly preferred.
  • the aryl may be substituted, and examples of such substituents include alkyl, halogen, alkoxy, cyano, and nitro, which may be substituted 1-3 times.
  • alkylene is preferably linear or branched alkylene having 1 to 6 carbon atoms.
  • Specific examples include methylene, ethylene, trimethylene, tetramethylene, pentamethylene, hexamethylene, 2-(ethyl)trimethylene, and 1-(methyl)tetramethylene.
  • acyl includes linear or branched alkanoyl or aroyl.
  • Alkanoyl includes, for example, formyl, acetyl, 2-methylacetyl, 2,2-dimethylacetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, pentanoyl, 2,2-dimethylpropionyl, hexanoyl and the like.
  • Aroyl includes, for example, benzoyl, toluoyl and naphthoyl. Such aroyl may be optionally substituted at any substitutable position or may be substituted with alkyl.
  • the antisense oligonucleotides described herein can be easily synthesized using various automated synthesizers (e.g., AKTA oligopilot plus 10/100 (GE Healthcare)), or can be synthesized by a third party ( For example, it can be produced by entrusting to Promega or Takara) or the like.
  • automated synthesizers e.g., AKTA oligopilot plus 10/100 (GE Healthcare)
  • a third party For example, it can be produced by entrusting to Promega or Takara
  • the antisense morpholino oligomer described in this specification is an antisense oligomer having a group represented by the following general formula as a structural unit.
  • Base represents a nucleobase
  • W represents a group represented by any one of the following formulas.
  • the morpholino oligomer is preferably an oligomer (phosphorodiamidate morpholino oligomer (hereinafter referred to as "PMO")) having a group represented by the following formula as a constituent unit.
  • PMO phosphorodiamidate morpholino oligomer
  • Morpholino oligomers can be produced, for example, according to the method described in WO 1991/009033 or WO 2009/064471.
  • PMO can be produced according to the method described in WO2009/064471 or WO2013/100190.
  • the antisense peptide nucleic acid oligomer described in this specification is an antisense oligomer having a group represented by the following general formula as a structural unit.
  • Peptide nucleic acid oligomers can be produced, for example, according to the following literature. 1) P. E. Nielsen, M. Egholm, R. H. Berg, O. Buchardt, Science, 254, 1497 (1991) 2) M. Egholm, O. Buchardt, P. E. Nielsen, R. H. Berg, JACS, 114, 1895 (1992) 3) K. L. Dueholm, M. Egholm, C. Behrens, L. Christensen, H. F. Hansen, T. Vulpius, K. H. Petersen, R. H. Berg, P. E. Nielsen, O. Buchardt, J. Org.
  • the antisense oligomers described herein may be in a pharmaceutically acceptable salt form, a hydrate form, or a hydrate form of a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Examples of pharmaceutically acceptable salts of the antisense oligomers described herein include alkali metal salts such as sodium, potassium and lithium salts, alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium salts. metal salts such as aluminum salts, iron salts, zinc salts, copper salts, nickel salts, cobalt salts; ammonium salts; t-octylamine salts, dibenzylamine salts, morpholine salts, glucosamine salts, phenylglycine alkyl ester salts, ethylenediamine salt, N-methylglucamine salt, guanidine salt, diethylamine salt, triethylamine salt, dicyclohexylamine salt, N,N'-dibenzylethylenediamine salt, chloroprocaine salt, procaine salt, diethanolamine salt, N-benzyl-phenethylamine salt, piperazine salts, organic amine salts such as tetramethylammonium salts
  • inorganic acid salts such as nitrates, perchlorates, sulfates and phosphates; lower alkanesulfonates such as methanesulfonates, trifluoromethanesulfonates and ethanesulfonates; benzenesulfonates, p - arylsulfonates such as toluenesulfonates; organic acid salts such as acetates, malate, fumarates, succinates, citrates, tartrates, oxalates, maleates; glycinates. , lysine salts, arginine salts, ornithine salts, glutamates, and amino acid salts such as aspartates.
  • these salts can be produced by known methods.
  • the antisense oligomers described herein may be in their hydrate form.
  • the 5' end of the antisense oligomer described herein may be any group represented by the following chemical formulas (1) to (3). Preferably, it is the group (1) or (2).
  • group (1) groups represented by (1), (2), and (3) above are referred to as “group (1),” “group (2),” and “group (3),” respectively.
  • the base sequence of the antisense oligomer described herein is not limited, it may contain, for example, four consecutive purine bases in the base sequence. Also, at least two of the four consecutive purine bases may be guanine.
  • the antisense oligomers described herein have (i) a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1-12, (ii) a base selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1-12 80% or more, 85% or more, 86% or more, 87% or more, 88% or more, 89% or more, 90% or more, 91% or more, 92% or more, 93% or more, 94% or more, 95% or more, 96% or more, 97% or more, 98% or more, or 99% or more sequence identity, or (iii) one or several nucleotide sequences selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1 to 12 contains or consists of a base sequence in which the bases of are added, deleted, or substituted.
  • the antisense oligomer described herein is the genome of an insertion mutant fukutin gene in which an SVA-type retrotransposon sequence (GenBank ACCESSION: AB185332) is inserted into the genome sequence of the fukutin gene (GenBank ACCESSION: AB038490).
  • the target sequence is the range from position 115937 to position 115981 of the sequence (SEQ ID NO: 13), or this range is not the target sequence.
  • Examples of antisense oligomers targeting the range of positions 115937 to 115981 of SEQ ID NO: 13 include antisense oligomers containing a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 1-7.
  • Examples of antisense oligomers that do not target the range of positions 115937 to 115981 of SEQ ID NO: 13 include antisense oligomers containing a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOS: 8-12.
  • the antisense oligomers described herein are conjugates with attached functional peptides, such as cell penetrating peptides (CPPs).
  • functional peptides such as cell penetrating peptides (CPPs).
  • Known functional peptides or commercially available functional peptides can be used herein.
  • Functional peptides that can be used herein include, for example, arginine-rich peptides disclosed in WO2008/036127; or organs disclosed in WO2009/005793.
  • Targeting peptides such as RXR, RBR, etc.; or peptides comprising amino acid subunits disclosed in WO2012/150960 are included.
  • CPPs Cell-penetrating peptides
  • Known CPPs or commercially available CPPs can be used herein.
  • CPPs that can be used herein are, for example, Pharmacology & Therapeutics 154 (2015) 78-86, Table 1 on page 80, for example TAT(48-60), penetratin, polyarginine, Oct4, WT1-pTj, DPV3, transportan, MAP , VP22, Rep1, KW, KFGF, FGF12, Intefrin ⁇ 3 peptide, C105Y, TP2; Paragraph [0085] of Japanese Patent Publication No. 2017-500856 (International Publication No.
  • CPPs listed in Table 1 Examples include DPV10/6, DPV15b, YM-3, Tat, LR11, C45D18, Lyp-1, Lyp-2, BMV GAG, hLF1-22, C45D18, LR20 and the like.
  • CPPs are available from Funakoshi, Co., for example. , Ltd. It is commercially available from Commercially available CPPs such as TAT (Funakoshi, Co., Ltd.), penetratin (Funakoshi, Co., Ltd.), or known CPPs, such as R8, can be used herein.
  • Preferred CPPs that can be used herein include, for example, hLIMK, TAT, penetratin, R8, etc.
  • the CPP can be directly attached to the antisense oligomers herein or can be attached via a linker that can attach the CPP to the antisense oligomer.
  • linkers can be used herein. Such linkers include, for example, Japanese Patent Publication No. 2017-500856 (International Publication No. 2015/089487), International Publication No. 2015/089487, International Publication No. 2009/073809, International Publication No. 2013/ 075035 pamphlet, International Publication No. 2015/105083 pamphlet, International Publication No.
  • linkers that can be used herein include, for example, 4-maleimidobutyric acid, linkers that can bind to the functional peptides or antisense oligomers herein via disulfide bonds, and the like.
  • the conjugates herein can be prepared by methods known to those skilled in the art.
  • the pharmaceutical composition described herein may be formulated by appropriately blending a pharmaceutically acceptable carrier or additive (and optionally the sugar of the present invention).
  • the pharmaceutical composition is the same as described for the deposition inhibitor of the present invention except that the pharmaceutically acceptable carrier or additive and formulation are the antisense nucleic acid as an active ingredient.
  • the precipitation inhibitor of the present invention is used in an amount such that the sugar concentration in the pharmaceutical composition described herein is between 0.5 mg/mL and 3000 mg/mL, such as between 2.6 mg/mL and 1694 mg/mL. used and/or added to pharmaceutical compositions.
  • the precipitation inhibitor of the present invention has a sugar concentration in the pharmaceutical composition of 0.5 mg/mL or higher, 1 mg/mL or higher, 1.5 mg/mL or higher, 2 mg/mL or higher, 2.5 mg/mL or higher.
  • the deposition inhibitor of the present invention can be used, for example, when the sugar concentration in the pharmaceutical composition is 3000 mg/mL or less, 2500 mg/mL or less, 2500 mg/mL or less, 2000 mg/mL or less, 1500 mg/mL or less, or 1000 mg/mL. The following amounts are used and/or added to the pharmaceutical composition:
  • the concentration of antisense oligomer in the pharmaceutical composition described herein is 0.05 mg/mL to 2000 mg/mL, such as 0.3 mg/mL to 350 mg/mL. In one embodiment, the concentration of antisense oligomer in the pharmaceutical composition described herein is 0.05 mg/mL or greater, 0.1 mg/mL or greater, 0.2 mg/mL or greater, 0.3 mg/mL or greater, 0.4 mg/mL or greater.
  • the present invention provides a deposition inhibitor for a pharmaceutical composition containing an antisense oligomer, which contains a sugar, and the weight ratio of the sugar to the weight of the antisense oligomer is 0.1 to 100, such as 1 to 100. It relates to a deposition inhibitor, used in an amount of 53. Pharmaceutical compositions and saccharides containing antisense oligomers are described above.
  • the deposition inhibitor of the present invention has a sugar weight ratio of 0.05 or more, 0.1 or more, 0.15 or more, 0.2 or more, 0.3 or more, 0.4 or more, 0.5 or more, 0.6 or more when the antisense oligomer is 1.
  • the deposition inhibitor of the present invention has a sugar weight ratio of 100 or less, 53 or less, 40 or less, 30 or less, 25 or less, 20 or less, 15 or less, or 10 or less, relative to the weight of the antisense oligomer. The following amounts are used.
  • the deposition inhibitor of the present invention is contained in a pharmaceutical composition described herein and administered together with the pharmaceutical composition described herein.
  • a pharmaceutical composition in which the antisense oligomer described herein is lyophilized optionally together with a carrier such as glucose and dissolved in a solvent such as water for injection is mixed with the precipitation inhibitor described herein. , and then optionally adjusted with a solvent and administered to the subject.
  • the antisense oligomer described herein is freeze-dried together with the precipitation inhibitor of the present invention, dissolved in a solvent such as water for injection to form a pharmaceutical composition, and then the amount is arbitrarily adjusted with the solvent. may be administered to a subject.
  • the deposition inhibitors of the present invention are not included in the pharmaceutical compositions described herein and are administered separately (simultaneously or sequentially) from the pharmaceutical compositions described herein.
  • a pharmaceutical composition prepared by dissolving a lyophilized antisense oligomer described herein in a solvent such as water for injection and the deposition inhibitor described herein may be separately administered to a subject.
  • administering the deposition inhibitor and the pharmaceutical composition "simultaneously” means administering the deposition inhibitor and the pharmaceutical composition at the same time.
  • administering the deposition inhibitor and the pharmaceutical composition "sequentially” means administering at different times. Specifically, it can be administered before or after the deposition inhibitor, and the interval between administration of the deposition inhibitor and the pharmaceutical composition in this case is not limited, but for example, several minutes, several hours, or up to about a day. It's okay.
  • the subject to which the pharmaceutical composition and/or deposition inhibitor is administered is not limited, but examples include mammals such as primates such as humans, laboratory animals such as rats, mice, and rats, pigs, and cows. , horses, and domestic animals such as sheep, preferably humans.
  • the dosage for administering the pharmaceutical composition and/or the deposition inhibitor includes the type of sugar contained in the antisense oligomer and the deposition inhibitor contained in the pharmaceutical composition, the dosage form of the pharmaceutical composition and the precipitation inhibitor, and age. and weight of the subject, route of administration, nature and symptoms of the disease.
  • the amount of sugar can be, for example, 0.1 mg to 200 g/human, such as 1 mg to 100 g/human, such as in the range of 10 mg to 50 g/person, such as in the range of 100 mg to 50 g/person, such as in the range of 100 mg to 40 g/person, such as in the range of 100 mg to 30 g/person, such as in the range of 100 mg to 20 g/person, such as It may be in the range of 1 g to 20 g/person, such as in the range of 2 g to 20 g/person, such as in the range of 1 g to 10 g/person, such as in the range of 100 mg to 1 g/person.
  • the number of administrations and the administration frequency are not limited, but for example, the administration can be performed once a day or two or three times at an interval of one day to two or three days. Also, for example, it can be administered only once, and can be administered again several days later for a total of two administrations.
  • the present invention provides a method or a pharmaceutical composition for inhibiting precipitation of an antisense oligomer in urine in a subject administered an antisense oligomer or a pharmaceutical composition comprising an antisense oligomer. comprising adding sugar in an amount such that the concentration of sugar in said pharmaceutical composition is between 0.5 mg/mL and 3000 mg/mL.
  • the antisense oligomer, the pharmaceutical composition, the saccharide, the concentration of the saccharide in the pharmaceutical composition, etc. are as described herein.
  • the present invention provides a method for suppressing precipitation of an antisense oligomer in urine in a subject administered an antisense oligomer or a pharmaceutical composition comprising an antisense oligomer, comprising: to the subject, in an amount such that the weight ratio of saccharide to 1 of the antisense oligomer is 0.1-100.
  • the weight ratio of the antisense oligomer, the pharmaceutical composition, the sugar, the precipitation inhibitor, the sugar to 1 for the antisense oligomer, and the like are as described in this specification.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising an antisense oligomer, the pharmaceutical composition comprising a sugar-containing deposition inhibitor at a concentration of 0.5 mg/mL to 3000 mg/mL.
  • the antisense oligomer, the pharmaceutical composition, the saccharide, the concentration of the saccharide in the pharmaceutical composition, etc. are as described herein.
  • Antisense oligomers (PMO Nos. 1 to 12 (SEQ ID NOS: 1 to 12)) shown in Table 1 were synthesized according to the method described in International Publication WO2013/100190. The theoretical and ESI-TOF-MS molecular weights of each antisense oligomer are also shown.
  • Example 2 Preliminary examination of evaluation of precipitation inhibitory action by sugar
  • D-mannitol which is equivalent to the reduced form of D-mannose, which is a monosaccharide
  • antisense oligomers were administered to cynomolgus monkeys in order to establish test conditions such as concentrations of sugar and antisense oligomers assuming urine, and changes in plasma concentrations were observed. and the urinary concentration in the short time after administration was estimated from the systemic clearance.
  • the urinary concentration in a short time after administration of 500 mg/kg of D-mannitol was estimated to be 127.5 mg/mL. Since D-mannitol is hardly distributed in the body and is rapidly excreted in the urine without being metabolized, it can be assumed that the dosage and urinary concentration are linear.
  • the urinary concentration was converted to D-mannitol dosage, and the dosage was converted to the concentration in the formulation at the time of administration (at the time of use) based on the body weight and the volume of the administered solution.
  • D-mannitol dose urine concentration (mg/mL)/127.5 (mg/mL) x 500 (mg/kg)
  • D-mannitol concentration in formulation D-mannitol dose (mg/kg) ⁇ body weight (kg) ⁇ administration liquid volume (mL)
  • body weight was 3-80 kg, and the volume of the administered liquid was 50-200 mL.
  • an aqueous sugar solution with an assumed urine concentration of 135 mg/mL can be converted to a urine concentration when 529.4 mg/kg of sugar is administered, and a preparation with a sugar concentration of 7.9 to 847.1 mg/mL is administered ( use).
  • PMO No. The antisense oligomer of 12 (SEQ ID NO: 12) was dissolved in physiological saline at 1 and 6 mg/mL, and administered at 10 mL/kg to three 1-year-old male cynomolgus monkeys. Plasma concentrations were measured at 0.25 hours, 0.5 hours, 1 hour, 2 hours, 6 hours and 24 hours (Table 3, values a, b, c, d, e, f, g, each value is average of 3 animals). From these values, the area under the plasma concentration-time curve (AUC 0-24 hr ) and systemic clearance (CL tot ) up to 24 hours after administration were calculated (Table 3, values h, i).
  • Antisense oligomer dose urinary concentration (mg/mL)/estimated urinary concentration in cynomolgus monkeys (mg/mL) x dose to cynomolgus monkeys (mg/kg)
  • Antisense oligomer concentration in preparation antisense oligomer dose (mg/kg) x body weight (kg) ⁇ administered liquid volume (mL)
  • the value obtained when 60 mg/kg of antisense oligomer was administered was used as the estimated urinary concentration in cynomolgus monkeys.
  • the body weight was 3 to 80 kg, and the volume of the administered liquid was 50 to 200 mL.
  • an antisense oligomer aqueous solution with an assumed urinary concentration of 24.75 mg/mL can be converted to a urine concentration when an antisense oligomer of 43.41 mg/kg is administered, and the antisense oligomer concentration is 0.7-69. It is envisioned that a 5 mg/mL formulation will be administered (used).
  • Example 3 Evaluation of precipitation suppression effect of sucrose
  • Each antisense oligomer was dissolved in water for injection or in an aqueous sucrose solution and mixed with an aqueous solution containing potassium chloride and sodium chloride assuming urine.
  • the evaluated conditions are shown in Tables 4 to 11.
  • the absorbance at 620 nm of the mixed solution was measured under heating conditions of 37° C. using a plate reader Infinite F200 Pro (manufactured by TECAN).
  • the concentrations of antisense oligomers, potassium chloride, and sodium chloride will vary depending on the dose of antisense oligomers and urine volume. was used to set the conditions under which precipitation was observed.
  • Example 5 Evaluation of the inhibitory effect of sucrose on precipitation in the kidney
  • PMO No. 11 SEQ ID NO: 11
  • the 11 antisense oligomers were dissolved in physiological saline to prepare a control dosing solution containing the antisense oligomers at the concentrations shown in Table 14 and no sucrose.
  • mice were necropsied and formalin-fixed, paraffin-embedded specimens of kidneys were prepared. Sections obtained by slicing the specimens were stained with hematoxylin and eosin and subjected to histopathological examination. Precipitation was determined to be suppressed when improvement was observed in renal histopathological examination findings in mice administered an administration solution containing sucrose compared to mice administered an administration solution containing no sucrose. .
  • Evaluation results The tested antisense oligomers showed improvement in renal histopathological examination findings in mice administered with a dosing solution containing sucrose, confirming that sucrose suppresses precipitation. The results are shown in Table 14.
  • Example 6 Evaluation of precipitation suppression effect of sucrose
  • PMO No. for 1, 2, and 7, in order to further verify the usefulness for medical applications, the amount of precipitation in the presence of ions assuming urine and the inhibition of precipitation by sucrose were evaluated.
  • Example 7 Evaluation of precipitation suppression effect of trehalose
  • Each antisense oligomer was dissolved in water for injection or an aqueous trehalose solution and mixed with an aqueous solution containing potassium chloride and sodium chloride assuming urine.
  • the evaluated conditions are shown in Tables 18-21.
  • the absorbance at 620 nm of the mixed solution was measured under heating conditions of 37° C. using a plate reader Infinite F200 Pro (manufactured by TECAN).
  • the concentrations of antisense oligomers, potassium chloride, and sodium chloride will vary depending on the dose of antisense oligomers and urine volume. was used to set the conditions under which precipitation was observed.

Abstract

【課題】一実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤、当該医薬組成物が投与された対象において、尿中のアンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための方法を提供することを課題とする。 【解決手段】一実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤であって、グルコースではない糖を含み、前記医薬組成物中の糖の濃度が0.5mg/mL～3000mg/mLになる量で使用される、析出抑制剤に関する。

Description

析出抑制剤
　本発明は、糖を含む、アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤、当該医薬組成物が投与された対象において、尿中のアンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための方法、当該析出抑制剤を含む医薬組成物などに関する。
　アンチセンスオリゴマーは、標的とするmRNA及びmRNA前駆体に配列特異的にハイブリダイゼーションする核酸である。アンチセンスオリゴマーは、mRNA及びmRNA前駆体の分解、エキソンスキッピング、エキソンインクルージョン、翻訳阻害等を介してその作用を発揮し、幾つかの疾患の治療薬として用いられている。例えば、特開2015-91229（特許文献１）は、ＳＶＡ型レトロトランスポゾンの挿入変異を有するフクチン遺伝子の異常スプライシングを正常化することにより、福山型筋ジストロフィー等を治療し得るアンチセンス核酸を開示している。
　しかし、アンチセンスオリゴマーに関しては、例えばモルホリノオリゴマーが腎臓に集積すること（非特許文献１、図２）、モルホリノオリゴマー投与により腎毒性が発現すること（非特許文献２、図３、表５）、モルホリノオリゴマー投与により腎臓尿細管に好塩基性物質が認められること（非特許文献３、図１）が知られていた。この腎毒性及び尿細管内の好塩基性物質の出現を回避する方法は不明であった。一方、単量体形態におけるよりも高い毒性を凝集体形態において有するオリゴヌクレオチドについて、凝集を崩壊させるマンニトール等の化学種を使用して加熱することで、治療用オリゴヌクレオチドの製剤中での多量体形成を抑制可能であること（特許文献２）、液体製剤中の糖、糖アルコール類がオリゴヌクレオチドの凝集を抑制すること（特許文献３）が知られていた。
特開2015-91229 国際公開2002/036767 国際公開2010/009038
Heemskerk HA, de Winter CL, de Kimpe SJ, van Kuik-Romeijn P,Heuvelmans N, Platenburg GJ, van Ommen GJ, van Deutekom JC, Aartsma-Rus A. In vivo comparison of 2'-O-methyl phosphorothioate and morpholino antisense oligonucleotides for Duchenne muscular dystrophy exon skipping. J Gene Med. 2009 Mar;11(3):257-66. doi: 10.1002/jgm.1288. Sazani P, Ness KP, Weller DL, Poage D, Nelson K, Shrewsbury AS. Chemical and mechanistic toxicology evaluation of exon skipping phosphorodiamidate morpholino oligomers in mdx mice. Int J Toxicol. 2011 May;30(3):322-33. doi: 10.1177/1091581811403504. Epub 2011 May 3. Carver MP, Charleston JS, Shanks C, Zhang J, Mense M, SharmaAK, Kaur H, Sazani P. Toxicological Characterization of Exon Skipping Phosphorodiamidate Morpholino Oligomers (PMOs) in Non-human Primates. J Neuromuscul Dis. 2016 Aug 30;3(3):381-393. doi: 10.3233/JND-160157.
　このような状況において、改善されたアンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物を提供することが望まれる。
　すなわち、本発明は、以下に記載するグルコースではない糖を含む、アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤、当該医薬組成物が投与された対象において、尿中のアンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための方法、当該析出抑制剤を含む医薬組成物などを提供する。
（１）アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤であって、グルコースではない糖を含み、前記医薬組成物中の糖の濃度が0.5mg/mL～3000mg/mLになる量で使用される、析出抑制剤。
（２）前記医薬組成物中の糖の濃度が2.6mg/mL～1694.1mg/mLになる量で使用される、（１）に記載の析出抑制剤。
（３）前記医薬組成物中のアンチセンスオリゴマーの濃度が、0.05mg/mL～2000mg/mLである、（１）又は（２）に記載の析出抑制剤。
（４－１）アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤であって、グルコースではない糖を含み、アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が0.1～100となる量で使用される、析出抑制剤。
（４－２）前記医薬組成物と析出抑制剤が別々に投与される、（４－１）に記載の析出抑制剤。
（５）アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が1～53となる量で使用される、（４－１）又は（４－２）に記載の析出抑制剤。
（６）糖が、二糖類の糖である、（１）～（５）のいずれかに記載の析出抑制剤。
（７）糖が、スクロースである、（１）～（６）のいずれかに記載の析出抑制剤。
（８）糖が、トレハロースである、（１）～（６）のいずれかに記載の析出抑制剤。
（９）アンチセンスオリゴマーがモルホリノオリゴマーである、（１）～（８）のいずれかに記載の析出抑制剤。
（１０）アンチセンスオリゴマーがホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、（１）～（９）のいずれかに記載の析出抑制剤。
（１１）アンチセンスオリゴマーの5'末端が、下記化学式（１）～（２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
のいずれかの基である、（１）～（１０）のいずれかに記載の析出抑制剤。
（１２）前記アンチセンスオリゴマーが、その塩基配列中に４つの連続するプリン塩基を含む、（１）～（１１）のいずれかに記載の析出抑制剤。
（１３）前記４つの連続するプリン塩基のうちの少なくとも２つがグアニンである、（１２）に記載の析出抑制剤。
（１４）前記アンチセンスオリゴマーが、配列番号１～１２からなる群から選択される塩基配列を含む、（１）～（１３）のいずれかに記載の析出抑制剤。
（１５－１）アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象において、尿中のアンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための方法であって、グルコースではない糖を、前記医薬組成物中の糖の濃度が0.5mg/mL～3000mg/mLになる量で添加することを含む、方法。
（１５－２）糖を、前記医薬組成物中の糖の濃度が2.6mg/mL～1694.1mg/mLになる量で添加する、（１５－１）に記載の方法。
（１５－３）前記医薬組成物中のアンチセンスオリゴマーの濃度が、0.05mg/mL～2000mg/mLである、（１５－１）又は（１５－２）に記載の方法。
（１６－１）アンチセンスオリゴマーが投与された対象において、尿中のアンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための方法であって、グルコースではない糖を前記対象に投与することを含み、アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が0.1～100となる量で投与される、方法。
（１６－２）前記アンチセンスオリゴマーと前記糖が別々に投与される、（１６－１）に記載の方法。
（１６－３）糖が、アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が1～53となる量で使用される、（１６－１）又は（１６－２）に記載の方法。
（１７－１）アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物であって、グルコースではない糖を含む、前記医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤を0.5mg/mL～3000mg/mLの濃度で含む、医薬組成物。
（１７－２）糖を含む析出抑制剤を2.6mg/mL～1694.1mg/mLの濃度で含む、（１７－１）に記載の医薬組成物。
（１７－３）前記医薬組成物中のアンチセンスオリゴマーの濃度が、0.05mg/mL～2000mg/mLである、（１７－１）又は（１７－２）に記載の医薬組成物。
（１８）糖が、二糖類の糖である、（１５－１）～（１７－３）のいずれかに記載の方法又は医薬組成物。
（１９）糖が、スクロースである、（１５－１）～（１８）のいずれかに記載の方法又は医薬組成物。
（２０）糖が、トレハロースである、（１５－１）～（１８）のいずれかに記載の方法又は医薬組成物。
（２１）アンチセンスオリゴマーがモルホリノオリゴマーである、（１５－１）～（２０）のいずれかに記載の方法又は医薬組成物。
（２２）アンチセンスオリゴマーがホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、（１５－１）～（２１）のいずれかに記載の方法又は医薬組成物。
（２３）アンチセンスオリゴマーの5'末端が、下記化学式（１）～（２）：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
のいずれかの基である、（１５－１）～（２２）のいずれかに記載の方法又は医薬組成物。
（２４）前記アンチセンスオリゴマーが、その塩基配列中に４つの連続するプリン塩基を含む、（１５－１）～（２３）のいずれかに記載の方法又は医薬組成物。
（２５）前記４つの連続するプリン塩基のうちの少なくとも２つがグアニンである、（２４）に記載の方法又は医薬組成物。
（２６）前記アンチセンスオリゴマーが、配列番号１～１２からなる群から選択される塩基配列を含む、（１５－１）～（２５）のいずれかに記載の方法又は医薬組成物。
　本発明により、アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤、当該医薬組成物が投与された対象において、尿中のアンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための方法が提供される。
表４に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表５に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表６に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表７に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表８に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表９に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表１０に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表１１に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 ＰＭＯ Ｎｏ．８投与液（５０ｍｇ／ｍＬ　ＰＭＯ　Ｎｏ．８）を１０ｍＬ／ｋｇで投与した時の腎臓のヘマトキシリン・エオシン染色像を示す。 ＰＭＯ Ｎｏ．８投与液（５０ｍｇ／ｍＬ　ＰＭＯ　Ｎｏ．８、２０ｍｇ／ｍＬ　スクロース）を１０ｍＬ／ｋｇで投与した時の腎臓のヘマトキシリン・エオシン染色像を示す。 ＰＭＯ Ｎｏ．８投与液（５０ｍｇ／ｍＬ　ＰＭＯ　Ｎｏ．８、５０ｍｇ／ｍＬ　スクロース）を１０ｍＬ／ｋｇで投与した時の腎臓のヘマトキシリン・エオシン染色像を示す。 ＰＭＯ Ｎｏ．８投与液（５０ｍｇ／ｍＬ　ＰＭＯ　Ｎｏ．８、１００ｍｇ／ｍＬ　スクロース）を１０ｍＬ／ｋｇで投与した時の腎臓のヘマトキシリン・エオシン染色像を示す。 表１５に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表１６に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表１７に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表１８に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表１９に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表２０に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。 表２１に示す条件での６２０nmにおける吸光度測定値を示す。
　一実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤に関する。本明細書において、「析出抑制剤」とはアンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象の尿において、アンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための薬剤を意味する。生体内では、析出が抑制されることにより腎臓へのアンチセンスオリゴマーの蓄積が軽減するのであれば、腎毒性の軽減につながることが予測される。腎毒性とは、投与されたアンチセンスオリゴマーの腎臓への蓄積が高度化することにより、組織に障害が生じること、又は腎機能が低下することを意味する。また、生体内で、血液等の体液中での析出が抑制されるのであれば、体液中のアンチセンスオリゴマーの濃度が均一となり、薬効の安定化及び／又は毒性の軽減につながることが予測される。
　析出抑制効果の有無は、尿を模した溶媒にアンチセンスオリゴマーと析出抑制剤を加え、アンチセンスオリゴマーの析出に起因する吸光度の増加を析出抑制剤が低減するか否かを実施例に記載のとおりに調べることによって決定することができる。例えば、溶媒にアンチセンスオリゴマーと析出抑制剤を加えた後（例えば、５分後、１０分後、１５分後、２０分後、２５分後、３０分後、４０分後、５０分後、６０分後、７０分後、８０分後、又は９０分後）に、３７℃の条件で吸光度を測定することができる。このとき、析出抑制剤を加えない場合と比べて析出抑制剤を加えた場合に、析出がみられる（６２０nmでの吸光度上昇が認められる）までの時間又は６２０nmでの吸光度が、例えば5％以上、10%以上、20%以上、30%以上、40%以上、又は50%以上低下した場合に、析出抑制効果があると決定することができる。尿を模した溶媒としては、例えばKClを20nmol/mL～9000nmol/mL、50nmol/mL～3600nmol/mL、又は100nmol/mL～1800nmol/mL含み、NaClを15nmol/mL～2400nmol/mL、40nmol/mL～900nmol/mL、又は77nmol/mL～462nmol/mL含む水溶液を用いることができる。
　本願実施例の結果から、対象への糖の投与量と尿中濃度には線形性があり得ると仮定できるから、尿を模した溶媒における糖濃度（以下、「尿中濃度」とも記載する）は、以下のとおり製剤中の糖濃度に換算することができる。例えば、カニクイザルに500 mg/kgのマンニトールを投与した場合の結果に基づき、以下の計算式を用いて、尿中濃度を糖投与量に換算することができ、さらに糖投与量を、体重及び投与液量に基づいて、投与時（使用時）の製剤中濃度に換算することができる。
　糖投与量（ｍｇ／ｋｇ）＝尿中濃度（ｍｇ／ｍＬ）／カニクイザルにおける推定尿中濃度（１２７．５（ｍｇ／ｍＬ））×カニクイザルへの投与量（５００（ｍｇ／ｋｇ））
　Ｄ－マンニトール製剤中濃度（ｍｇ／ｍＬ）＝Ｄ－マンニトール投与量（ｍｇ／ｋｇ）×体重（ｋｇ）÷投与液量（ｍＬ）
　体重は、例えば３～８０ｋｇ、投与液量は、例えば５０～２００ｍＬを想定することができる。
　同様に、実施例に記載のとおりに尿を模した溶媒におけるアンチンセンスオリゴマーの濃度を、製剤中のアンチンセンスオリゴマー濃度に換算することができる。
　一実施形態において、本発明の析出抑制剤は、糖（グルコースを除く）からなるものでもよく、又は糖（グルコースを除く）を含むものであってもよい。糖は例えば二糖以上の糖であってもよく、二糖類の糖であってもよい。限定するものではないが、糖の例としては、スクロース、ラクトース、ラクツロース、トレハロース、マルトース、イソマルトース等の二糖；ラフィノース、メレジトース、マルトトリオース等の三糖；ガラクトース、マンノース、フルクトース、リボース、キシロース、アラビノース、及びリキソース等の単糖が挙げられる。一実施形態において、糖は、スクロースであるか、又はスクロースを含む。別の一実施形態において、糖は、トレハロースであるか、又はトレハロースを含む。
　本発明の析出抑制剤が、糖以外の成分を含む場合、析出抑制剤は、糖に薬学的に許容される担体又は添加剤（及び任意に本発明の析出抑制剤）を適宜配合して製剤化してもよい。具体的には錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の経口剤；注射剤、輸液、坐剤、軟膏、パッチ剤等の非経口剤とすることができる。好ましくは、非経口剤である。注射剤は凍結乾燥製剤としてもよい。担体または添加剤の配合割合については、医薬品分野において通常採用されている範囲に基づいて適宜設定すればよい。配合できる担体又は添加剤は特に制限されないが、例えば、水、生理食塩水、その他の水性溶媒、水性又は油性基剤等の各種担体、賦形剤、結合剤、ｐＨ調整剤、崩壊剤、吸収促進剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、香料等の各種添加剤が挙げられる。
　錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、上記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は通常の製剤業務（例えば有効成分を注射用水、天然植物油等の溶媒に溶解または懸濁させる等）に従って調製することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート８０ＴＭ、ＨＣＯ－５０）などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。さらに、凍結乾燥製剤としてもよい。
　本明細書において、アンチセンスオリゴマーは、オリゴヌクレオチド、モルホリノオリゴマー、又はペプチド核酸（Peptide Nucleic Acid：ＰＮＡ）オリゴマーのいずれであってもよい（以下、それぞれを、「本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド」、「本明細書に記載のアンチセンスモルホリノオリゴマー」、又は「本明細書に記載のアンチセンスペプチド核酸オリゴマー」ともいう。）。
　アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチドを構成単位とするアンチセンスオリゴマーであり、かかるヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、又は修飾ヌクレオチドのいずれであってもよい。
　修飾ヌクレオチドとは、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドを構成する核酸塩基、糖部分、及びリン酸結合部分の全部又は一部が修飾されているものをいう。
　核酸塩基としては、例えば、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、シトシン、チミン、ウラシル、又はそれらの修飾塩基を挙げることができる。かかる修飾塩基としては、例えば、シュードウラシル、３－メチルウラシル，ジヒドロウラシル、５－アルキルシトシン（例えば、５－メチルシトシン）、５－アルキルウラシル（例えば、５－エチルウラシル）、５－ハロウラシル（例えば、５－ブロモウラシル）、６－アザピリミジン、６－アルキルピリミジン（例えば、６－メチルウラシル）、２－チオウラシル、４－チオウラシル、４－アセチルシトシン、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、１－メチルアデニン、１－メチルヒポキサンチン、２，２－ジメチルグアニン、３－メチルシトシン、２－メチルアデニン、２－メチルグアニン、Ｎ６－メチルアデニン、７－メチルグアニン、５－メトキシアミノメチル－２－チオウラシル、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メチルカルボニルメチルウラシル、５－メチルオキシウラシル、５－メチル－２－チオウラシル、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸、２－チオシトシン、プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノプリン、イソグアニン、インドール、イミダゾール、キサンチン等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
　糖部分の修飾としては、例えば、リボースの２’位の修飾及び糖のその他の部分の修飾を挙げることができる。リボースの２’位の修飾としては、例えば、リボースの２’位の－ＯＨ基を－ＯＲ、－Ｒ、－Ｒ’ＯＲ、－ＳＨ、－ＳＲ、－ＮＨ２、－ＮＨＲ、－ＮＲ２、－Ｎ３、－ＣＮ、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉに置換する修飾を挙げることができる。ここで、Ｒはアルキル又はアリールを表す。Ｒ’はアルキレンを表す。
　糖のその他の部分の修飾としては、例えば、リボース又はデオキシリボースの４’位のＯをＳに置換したもの、糖の２’位と４’位を架橋したもの、例えば、ＬＮＡ（Locked Nucleic Acid）又はＥＮＡ（2'-O,4'-C-Ethylene-bridged Nucleic Acids）などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。　　　
　リン酸結合部分の修飾としては、例えば、ホスホジエステル結合をホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、アルキルホスホネート結合、ホスホロアミデート結合、ボラノフォスフェート結合（例えば、Enya et al: Bioorganic & Medicinal Chemistry,2008, 18, 9154-9160を参照）に置換する修飾を挙げることができる（例えば、再公表特許公報第２００６／１２９５９４号及び再公表特許公報第２００６／０３８６０８号を参照）。
　本明細書において、アルキルとしては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１～６のアルキルが好ましい。具体的には、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、イソヘキシルが挙げられる。当該アルキルは置換されていてもよく、かかる置換基としては、例えば、ハロゲン、アルコキシ、シアノ、ニトロを挙げることができ、これらで１～３個置換されていてもよい。
　本明細書において、シクロアルキルとしては、炭素数３～１２のシクロアルキルが好ましい。具体的には、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロデシル、シクロドデシルが挙げられる。
　本明細書において、ハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素を挙げることができる。
　本明細書において、アルコキシとしては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１～６のアルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ－プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ－ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ－ブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ、ｎ－ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ｎ－ヘキシルオキシ、イソヘキシルオキシ等を挙げることができる。とりわけ、炭素数１～３のアルコキシが好ましい。
　本明細書において、アリールとしては、炭素数６～１０のアリールが好ましい。具体的には、例えば、フェニル、α－ナフチル、β－ナフチルを挙げることができる。とりわけフェニルが好ましい。当該アリールは置換されていてもよく、かかる置換基としては、例えば、アルキル、ハロゲン、アルコキシ、シアノ、ニトロを挙げることができ、これらが１～３個置換されていてもよい。
　本明細書において、アルキレンとしては、直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１～６のアルキレンが好ましい。具体的には、例えば、メチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、２－（エチル）トリメチレン、１－（メチル）テトラメチレンを挙げることができる。
　本明細書において、アシルとしては、直鎖状若しくは分枝鎖状のアルカノイル又はアロイルを挙げることができる。アルカノイルとしては、例えば、ホルミル、アセチル、２－メチルアセチル、２，２－ジメチルアセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、ペンタノイル、２，２－ジメチルプロピオニル、ヘキサノイル等が挙げられる。アロイルとしては、例えば、ベンゾイル、トルオイル、ナフトイルを挙げることができる。かかるアロイルは置換可能な位置において置換されていてもよく、アルキルで置換されていてもよい。
　本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、各種自動合成装置（例えば、AKTA oligopilot plus 10 / 100（GE Healthcare））を用いて容易に合成することが可能であり、あるいは、第三者機関（例えば、Promega社又はTakara社）等に委託して作製することもできる。
　本明細書に記載のアンチセンスモルホリノオリゴマーは、下記一般式で表される基を構成単位とするアンチセンスオリゴマーである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
（式中、Baseは、核酸塩基を表し；
　Ｗは、以下のいずれかの式で表わされる基を表す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
（式中、Ｘは、－ＣＨ２Ｒ１、－Ｏ－ＣＨ２Ｒ１、－Ｓ－ＣＨ２Ｒ１、－ＮＲ２Ｒ３、又はＦを表し；
　Ｒ１は、Ｈ、アルキルを表し；
　Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、又はアリールを表し；
　Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、又はＮＲ１を表し；
　Ｙ２は、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１を表し；
　Ｚは、Ｏ又はＳを表す。））
　本明細書において、モルホリノオリゴマーは、好ましくは、以下の式で表わされる基を構成単位とするオリゴマー（ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（以下、「ＰＭＯ」という））である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
（式中、Base、Ｒ２、Ｒ３は、前記と同義である。）
　モルホリノオリゴマーは、例えば、国際公開公報第１９９１／００９０３３号、又は国際公開公報第２００９／０６４４７１号に記載の方法に従って製造することができる。特に、ＰＭＯは、国際公開公報第２００９／０６４４７１号、又は国際公開公報第２０１３／１００１９０号に記載の方法に従って製造することができる。
　本明細書に記載のアンチセンスペプチド核酸オリゴマーは、下記一般式で表される基を構成単位とするアンチセンスオリゴマーである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
（式中、Baseは、前記と同義である。）
　ペプチド核酸オリゴマーは、例えば、以下の文献に従って製造することができる。
１）P. E. Nielsen, M. Egholm, R. H. Berg, O. Buchardt，Science, 254, 1497 (1991)２）M. Egholm, O. Buchardt, P. E. Nielsen, R. H. Berg，JACS, 114, 1895 (1992)
３）K. L. Dueholm, M. Egholm, C. Behrens, L. Christensen, H. F. Hansen, T. Vulpius, K. H. Petersen, R. H. Berg, P. E. Nielsen, O. Buchardt，J. Org. Chem., 59, 5767 (1994)
４）L. Christensen, R. Fitzpatrick, B. Gildea, K. H. Petersen, H. F. Hansen, T. Koch, M. Egholm，O. Buchardt, P. E. Nielsen, J. Coull, R. H. Berg, J. Pept. Sci., 1, 175 (1995)5）T. Koch, H. F. Hansen, P. Andersen, T. Larsen, H. G. Batz, K. Otteson, H. Orum, J. Pept. Res., 49, 80 (1997)
　本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーは、その医薬的に許容可能な塩の形態、水和物の形態、又は医薬的に許容可能な塩の水和物の形態であってもよい。
　本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーの医薬的に許容可能な塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩などの金属塩；アンモニウム塩；ｔ－オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ－メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ－ベンジル－フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機アミン塩；弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩のようなハロゲン化水素酸塩；硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩のようなアリールスルホン酸塩；酢酸塩、りんご酸塩、フマール酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩；グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩などが挙げられる。これらの塩は、公知の方法で製造することができる。あるいは、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーは、その水和物の形態にあってもよい。
　本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーは、５’末端が、下記化学式（１）～（３）のいずれかの基であってもよい。好ましくは（１）又は（２）のいずれかの基である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
　以下、上記（１）、（２）、及び（３）で示される基を、それぞれ「基（１）」、「基（２）」、及び「基（３）」と呼ぶ。
　本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーの塩基配列は限定しないが、例えばその塩基配列中に４つの連続するプリン塩基を含んでもよい。また、４つの連続するプリン塩基のうちの少なくとも２つがグアニンであってよい。
　一実施形態において、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーは、（i）配列番号１～１２からなる群から選択される塩基配列、（ii）配列番号１～１２からなる群から選択される塩基配列に対して80％以上、85％以上、86％以上、87％以上、88％以上、89％以上、90％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、又は99％以上の配列同一性を有する塩基配列、又は（iii）配列番号１～１２からなる群から選択される塩基配列において1又は数個の塩基が付加、欠失、又は置換された塩基配列を含む、又はからなる。
　本明細書において塩基配列の「同一性」とは、2つの塩基配列をアライメントした場合に一致する塩基の割合を意味する。配列同一性は、FASTA（Science 227 (4693): 1435-1441, (1985)）や、カーリン及びアルチュールによるアルゴリズムBLAST（Basic Local Alignment Search Tool）（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 872264-2268, 1990; Proc Natl Acad Sci USA 90: 5873, 1993）を用いて決定できる。BLASTのアルゴリズムに基づいたblastn、blastx、tblastnやtblastxと呼ばれるプログラムが開発されている（Altschul SF, et al: J Mol Biol 215: 403, 1990）。blastnを用いて塩基配列を解析する場合は、パラメーターは、例えばscore＝100、wordlength＝12とする。BLASTとGapped　BLASTプログラムを用いる場合は、各プログラムのデフォルトパラメーターを用いる。
　本明細書において、1又は数個の塩基が付加、欠失、又は置換された塩基配列における数個は、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、又は10個を意味する。
　一実施形態において、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーは、フクチン遺伝子のゲノム配列（GenBank ACCESSION: AB038490）にSVA型レトロトランスポゾン配列（GenBank ACCESSION: AB185332）が挿入された挿入変異型フクチン遺伝子のゲノム配列（配列番号１３）の第１１５９３７位～第１１５９８１位の範囲を標的配列とするものであるか、又は当該範囲を標的配列とするものではない。配列番号１３の第１１５９３７位～第１１５９８１位の範囲を標的配列とするアンチセンスオリゴマーの例として、配列番号１～７からなる群から選択される塩基配列を含むアンチセンスオリゴマーが挙げられる。配列番号１３の第１１５９３７位～第１１５９８１位の範囲を標的配列としないアンチセンスオリゴマーの例として、配列番号８～１２からなる群から選択される塩基配列を含むアンチセンスオリゴマーが挙げられる。
　一実施形態において、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーは、機能性ペプチド、例えば細胞浸透性ペプチド（ＣＰＰ）が結合しているコンジュゲートである。公知の機能性ペプチド又は市販の機能性ペプチドを本明細書において使用することができる。本明細書で使用することができる機能性ペプチドには、例えば、国際公開第２００８／０３６１２７号パンフレットに開示されているアルギニンリッチペプチド；又は国際公開第２００９／００５７９３号パンフレットに開示されている臓器を標的とするペプチド、例えば、ＲＸＲ、ＲＢＲなど；又は国際公開第２０１２／１５０９６０号パンフレットに開示されているアミノ酸サブユニットを含むペプチドが含まれる。細胞浸透性ペプチド（ＣＰＰ）は、哺乳動物細胞の細胞膜を通過することができ、したがって、細胞ドラッグデリバリーを改善することができる１０～約３０アミノ酸の短いペプチド配列を表す（例えば、Hum Mol Genet. 2011 Aug 15; 20(16): 3151-3160; Pharmacology & Therapeutics 154 (2015) 78-86を参照されたい）。公知のＣＰＰ又は市販のＣＰＰを本明細書において使用することができる。本明細書において使用することができるＣＰＰは、例えば、Pharmacology
& Therapeutics 154 (2015) 78-86の８０頁の表１に列挙されたＣＰＰが含まれ、例えば、ＴＡＴ（４８－６０）、ペネトラチン、ポリアルギニン、Ｏｃｔ４、ＷＴ１－ｐＴｊ、ＤＰＶ３、トランスポータン、ＭＡＰ、ＶＰ２２、Ｒｅｐ１、ＫＷ、ＫＦＧＦ、ＦＧＦ１２、インテフリンβ３ペプチド、Ｃ１０５Ｙ、ＴＰ２；特表２０１７－５００８５６明細書（国際公開第２０１５／０８９４８７号パンフレット）の段落［００８５］、表１に列挙されるＣＰＰ、例えばＤＰＶ１０／６、ＤＰＶ１５ｂ、ＹＭ－３、Ｔａｔ、ＬＲ１１、Ｃ４５Ｄ１８、Ｌｙｐ－１、Ｌｙｐ－２、ＢＭＶ　ＧＡＧ、ｈＬＦ１－２２、Ｃ４５Ｄ１８、ＬＲ２０などが挙げられる。ＣＰＰは、例えば、Ｆｕｎａｋｏｓｈｉ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から市販されている。ＴＡＴ（Ｆｕｎａｋｏｓｈｉ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ペネトラチン（Ｆｕｎａｋｏｓｈｉ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）などの市販のＣＰＰ、又は公知のＣＰＰ、例えばＲ８などを本明細書において使用することができる。本明細書において用いることができる好ましいＣＰＰは、例えば、ｈＬＩＭＫ、ＴＡＴ、ペネトラチン、Ｒ８などを含む（国際公開第２０１６／１８７４２５号パンフレット、国際公開第２０１８／１１８６６２号パンフレット、国際公開第２０１８／１１８５９９号パンフレット、国際公開第２０１８／１１８６２７号パンフレット、EBioMedicine 45 (2019) 630-645などを参照されたい）。ＣＰＰは、本明細書のアンチセンスオリゴマーに直接結合することができ、又はＣＰＰをアンチセンスオリゴマーに結合することができるリンカーを介して結合することができる。公知のリンカーを本明細書において使用することができる。このようなリンカーには、例えば、特表２０１７－５００８５６明細書（国際公開第２０１５／０８９４８７号パンフレット）、国際公開第２０１５／０８９４８７号パンフレット、国際公開第２００９／０７３８０９号パンフレット、国際公開第２０１３／０７５０３５号パンフレット、国際公開第２０１５／１０５０８３号パンフレット、国際公開第２０１４／１７９６２０号パンフレット、国際公開第２０１５／００６７４０号パンフレット、国際公開第２０１７／０１０５７５号パンフレットなどに記載されるものが含まれる。本明細書において使用することができる好ましいリンカーは、例えば、４－マレイミド酪酸、ジスルフィド結合を介して本明細書の機能性ペプチド又はアンチセンスオリゴマーに結合することができるリンカーなどを含む。本明細書のコンジュゲートは、当業者に公知の方法によって調製することができる。
　本明細書に記載の医薬組成物は、薬学的に許容される担体又は添加剤（及び任意に本発明の糖）を適宜配合して製剤化してもよい。医薬組成物はについて、薬学的に許容される担体又は添加剤及び製剤化については、アンチセンス核酸が有効成分であること以外は、本発明の析出抑制剤に記載したのと同様である。
　一実施形態において、本発明の析出抑制剤は、本明細書に記載の医薬組成物中の糖の濃度が0.5mg/mL～3000mg/mL、例えば2.6mg/mL～1694mg/mLになる量で使用される、及び／又は医薬組成物に添加される。一実施形態において本発明の析出抑制剤は、例えば前記医薬組成物中の糖の濃度が0.5mg/mL以上、1mg/mL以上、1.5mg/mL以上、2mg/mL以上、2.5mg/mL以上、3mg/mL以上、5mg/mL以上、10mg/mL以上、20mg/mL以上、30mg/mL以上、40mg/mL以上、50mg/mL以上、又は100mg/mL以上になる量で使用される、及び／又は医薬組成物に添加される。また、本発明の析出抑制剤は、例えば前記医薬組成物中の糖の濃度が3000mg/mL以下、2500mg/mL以下、2500mg /mL以下、2000mg/mL以下、1500mg/mL以下、又は1000mg/mL以下になる量で使用される、及び／又は医薬組成物に添加される。
　一実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物中のアンチセンスオリゴマーの濃度は、0.05mg/mL～2000mg/mL、例えば0.3mg/mL～350mg/mLである。一実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物中のアンチセンスオリゴマーの濃度は、0.05mg/mL以上、0.1mg/mL以上、0.2mg/mL以上、0.3mg/mL以上、0.4mg/mL以上、0.5mg/mL以上、1mg/mL以上、5mg/mL以上、又は10mg/mL以上であってよく、2000mg/mL以下、1500mg/mL以下、1000mg/mL以下、750mg/mL以下、500mg/mL以下、400mg/mL以下、350mg/mL以下、300mg/mL以下又は250mg/mL以下であってよい。
　一実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物の析出抑制剤であって、糖を含み、アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が0.1～100、例えば1～53となる量で使用される、析出抑制剤に関する。アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物及び糖については上記のとおりである。一実施形態において、本発明の析出抑制剤は、アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が0.05以上、0.1以上、0.15以上、0.2以上、0.3以上、0.4以上、0.5以上、0.6以上、0.7以上、0.8以上、0.9以上、1以上、1.2以上、2以上、又は5以上となる量で使用される。一実施形態において、本発明の析出抑制剤は、アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が100以下、53以下、40以下、30以下、25以下、20以下、15以下、又は10以下となる量で使用される。
　一実施形態において、本発明の析出抑制剤は、本明細書に記載の医薬組成物中に含まれ、本明細書に記載の医薬組成物と共に投与される。例えば、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーを任意にグルコース等の担体と共に凍結乾燥したものを、注射用水等の溶媒に溶かした医薬組成物と、本明細書に記載の析出抑制剤を混合し、その後任意に溶媒により量を調節して対象に投与してもよい。また、例えば、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーを本発明の析出抑制剤と共に凍結乾燥したものを、注射用水等の溶媒に溶かして医薬組成物とし、その後任意に溶媒により量を調節して対象に投与してもよい。
　別の実施形態において、本発明の析出抑制剤は、本明細書に記載の医薬組成物中に含まれず、本明細書に記載の医薬組成物とは別々に（同時に又は逐次的に）投与される。例えば、本明細書に記載のアンチセンスオリゴマーの凍結乾燥剤を、注射用水等の溶媒に溶かした医薬組成物と、本明細書に記載の析出抑制剤を別々に対象に投与してもよい。本明細書において、析出抑制剤及び医薬組成物を「同時に」投与するとは、析出抑制剤及び医薬組成物を同一の時点で投与することを意味する。本明細書において、析出抑制剤及び医薬組成物を「逐次的に」投与するとは、異なる時点で投与することを意味する。具体的には、析出抑制剤の前又は後に投与することができ、この場合の析出抑制剤と医薬組成物の投与間隔は、限定しないが、例えば数分間、数時間、又は一日程度までであってよい。
　本明細書において、医薬組成物及び／又は析出抑制剤を投与する対象としては、限定しないが、例えば哺乳動物、例えばヒト等の霊長類、ラット、マウス、及びドブネズミ等の実験動物、ブタ、ウシ、ウマ、及びヒツジ等の家畜動物等が挙げられ、好ましくはヒトである。
　医薬組成物及び／又は析出抑制剤を投与する際の用量としては、医薬組成物に含まれるアンチセンスオリゴマー及び析出抑制剤に含まれる糖の種類、医薬組成物及び析出抑制剤の剤形、年齢や体重等の対象の状態、投与経路、疾患の性質と症状を考慮した上で調整され得るが、アンチセンスオリゴマーの量として、例えば1日当たり0.1mg～10g/ヒトの範囲内、例えば1mg～1g/ヒトの範囲内、例えば10mg～100mg/ヒトの範囲内とすることができ、糖の量として、例えば1日当たり0.1mg～200g/ヒトの範囲内、例えば1mg～100g/ヒトの範囲内、例えば10mg～50g/ヒトの範囲内、例えば100mg～50g/ヒトの範囲内、例えば100mg～40g/ヒトの範囲内、例えば100mg～30g/ヒトの範囲内、例えば100mg～20g/ヒトの範囲内、例えば1g～20g/ヒトの範囲内、例えば2g～20g/ヒトの範囲内、例えば1g～10g/ヒトの範囲内、例えば100mg～1g/ヒトの範囲内とすることができる。投与回数及び投与頻度は限定しないが、例えば1日1回から2、3回の投与回数で、1日から2、3日間の間隔をあけて投与することができる。また、例えば1回のみで投与することもでき、その数日後にもう一回投与して合計2回投与することもできる。
　一実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴマー又はアンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物を投与した対象において、尿中のアンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための方法、又は当該医薬組成物を生産するための方法であって、糖を、前記医薬組成物中の糖の濃度が0.5mg/mL～3000mg/mLになる量で添加することを含む、方法に関する。本実施形態において、アンチセンスオリゴマー、医薬組成物、糖、医薬組成物中の糖の濃度等については、本明細書に記載するとおりである。
　一実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴマー又はアンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物を投与した対象において、尿中のアンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための方法であって、糖又は析出抑制剤を前記対象に投与することを含み、アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が0.1～100となる量で投与される、方法に関する。本実施形態において、アンチセンスオリゴマー、医薬組成物、糖、析出抑制剤、アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比等については、本明細書に記載するとおりである。
　一実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物であって、糖を含む析出抑制剤を0.5mg/mL～3000mg/mLの濃度で含む、医薬組成物に関する。本実施形態において、アンチセンスオリゴマー、医薬組成物、糖、医薬組成物中の糖の濃度等については、本明細書に記載するとおりである。
［実施例１：アンチセンスオリゴマー(ＰＭＯ)の製造］
　国際公開公報WO2013/100190に記載の方法に従い、表１に示すアンチセンスオリゴマー（ＰＭＯ　Ｎｏ．１～１２（配列番号１～１２））を合成した。各アンチセンスオリゴマーの分子量の理論値及びＥＳＩ－ＴＯＦ－ＭＳによる実測値も示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　上記表における「基（１）」及び「基（２）」は以下の通りである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
［実施例２：糖による析出抑制作用の評価の予備検討］
　尿中を想定した糖及びアンチセンスオリゴマーの濃度等の試験条件設定のため、単糖であるＤ－マンノースの還元体に相当するＤ－マンニトール及びアンチセンスオリゴマーをカニクイザルに投与し、血漿中濃度推移と全身クリアランスから投与後短時間における尿中濃度を推定した。
　２０％Ｄ－マンニトールを生理食塩水で５０ｍｇ／ｍＬに希釈し、１０ｍＬ／ｋｇで１～２歳齢のカニクイザル雌雄それぞれ３匹に投与し、投与後０時間（投与終了直後）、０．２５時間、１時間、４時間、８時間、２４時間の血漿中濃度を測定した（表２、値ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、各値は３匹の平均値）。その値から投与後２４時間までの血漿中濃度―時間曲線下面積（ＡＵＣ０－２４ ｈｒ）、全身クリアランス（ＣＬｔｏｔ）を算出した（表２、値ｇ、ｈ）。さらに、投与後０時間、０．２５時間における血漿中濃度（表２、値ａ、ｂ）を平均して０時間から０．２５時間におけるまでの平均血漿中濃度（表２、値ｉ）を算出し、ＣＬｔｏｔ（表２、値ｈ）を用いて０．２５時間までに***される体重あたりのＤ－マンニトール量を算出した（表２、値ｊ）。投与後０．２５時間までの尿量は、カニクイザル（体重：５ｋｇ）の１日尿量３７５ｍＬ（Ｂ　Ｃｌａｒｋ，　Ｄ　Ａ
　Ｓｍｉｔｈ　　Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｔｅｓｔｉｎｇ．　Ｃｒｉｔ　Ｒｅｖ　Ｔｏｘｉｃｏｌ．　１９８４；１２（４）：３４３－８５．）から３．９１ｍＬとし、投与後０．２５時間の尿中マンニトール濃度を推定した（表２、値ｋ）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　以上のようにして得られた推定尿中濃度を平均し、Ｄ－マンニトール５００ｍｇ／ｋｇを投与した場合の投与後短時間における尿中濃度は１２７．５ｍｇ／ｍＬと推定した。Ｄ－マンニトールは体内にほとんど分布せず、代謝を受けずに速やかに尿中***されるため、投与量と尿中濃度には線形性があると仮定できることから、以下の計算式を用いて、尿中濃度をＤ－マンニトール投与量に換算し、投与量は体重及び投与液量によって、投与時（使用時）の製剤中濃度に換算した。
　Ｄ－マンニトール投与量（ｍｇ／ｋｇ）＝尿中濃度（ｍｇ／ｍＬ）／１２７．５（ｍｇ／ｍＬ）×５００（ｍｇ／ｋｇ）
　Ｄ－マンニトール製剤中濃度（ｍｇ／ｍＬ）＝Ｄ－マンニトール投与量（ｍｇ／ｋｇ）×体重（ｋｇ）÷投与液量（ｍＬ）
　この時、体重を３～８０ｋｇ、投与液量を５０～２００ｍＬとした。
　スクロースをはじめ、本明細書中に記載のある糖類は尿細管において再吸収を受けず、Ｄ－マンニトールと類似の体内動態を示す（Ａ　Ｗ　Ｗｉｎｋｌｅｒ，　Ｊ　Ｐａｒｒａ．　Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｉｎｖｅｓｔ．　１９３７　Ｎｏｖ；１６（６）：８５９－６７．）ため、同じ換算式を使用して投与時（使用時）の製剤中濃度に換算することができる。例えば、尿中濃度１３５ｍｇ／ｍＬを想定した糖水溶液は、糖５２９．４ｍｇ／ｋｇを投与した場合の尿中濃度に換算でき、糖濃度が７．９～８４７．１ｍｇ／ｍＬの製剤を投与（使用）することを想定している。
　また、ＰＭＯ　Ｎｏ．１２（配列番号１２）のアンチセンスオリゴマーを生理食塩水で１、６ｍｇ／ｍＬに溶解し、１０ｍＬ／ｋｇで１歳齢の雄性カニクイザル３匹に投与し、投与後０時間（投与終了直後）、０．２５時間、０．５時間、１時間、２時間、６時間、２４時間の血漿中濃度を測定した（表３、値ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、各値は３匹の平均値）。その値から投与後２４時間までの血漿中濃度―時間曲線下面積（ＡＵＣ０－２４ ｈｒ）、全身クリアランス（ＣＬｔｏｔ）を算出した（表３、値ｈ、i）。さらに、投与後０時間、０．２５時間における血漿中濃度（表３、値ａ、ｂ）を平均して０時間から０．２５時間におけるまでの平均血漿中濃度（表３、値ｊ）を算出し、ＣＬｔｏｔ（表３、値i）を用いて０．２５時間までに***される体重あたりのアンチセンスオリゴマー量を算出した（表３、値ｋ）。投与後０．２５時間までの尿量は、カニクイザル（体重：５ｋｇ）の１日尿量３７５ｍＬから３．９１ｍＬとし、投与後０．２５時間の尿中アンチセンスオリゴマー濃度を推定した（表３、値ｌ）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000012
　表３よりアンチセンスオリゴマー投与量と尿中濃度には線形性があると仮定できることから、以下の計算式を用いて、尿中濃度をアンチセンスオリゴマー投与量に換算し、アンチセンスオリゴマー投与量は体重及び投与液量によって、投与時（使用時）の製剤中濃度に換算した。
　アンチセンスオリゴマー投与量（ｍｇ／ｋｇ）＝尿中濃度（ｍｇ／ｍＬ）／カニクイザルにおける推定尿中濃度（ｍｇ／ｍＬ）×カニクイザルへの投与量（ｍｇ／ｋｇ）
　アンチセンスオリゴマー製剤中濃度（ｍｇ／ｍＬ）＝アンチセンスオリゴマー投与量（ｍｇ／ｋｇ）×体重（ｋｇ）÷投与液量（ｍＬ）
　この時、カニクイザルにおける推定尿中濃度は、アンチセンスオリゴマー６０ｍｇ／ｋｇを投与した際の値を使用した。また、体重を３～８０ｋｇ、投与液量を５０～２００ｍＬとした。例えば、尿中濃度２４．７５ｍｇ／ｍＬを想定したアンチセンスオリゴマー水溶液は、アンチセンスオリゴマー４３．４１ｍｇ／ｋｇを投与した場合の尿中濃度に換算でき、アンチセンスオリゴマー濃度が０．７～６９．５ｍｇ／ｍＬの製剤を投与（使用）することを想定している。
［実施例３：スクロースによる析出抑制作用の評価］
　表１に示すアンチセンスオリゴマーのうち、ＰＭＯ　Ｎｏ．８、９、１０、１１について、医薬用途への有用性をさらに検証するため、尿中を想定したイオン存在下での析出量及びスクロースによる析出抑制作用を評価した。
試験方法
　各アンチセンスオリゴマーを注射用水又はスクロース水溶液に溶解し、尿を想定した塩化カリウム及び塩化ナトリウムを含む水溶液と混和した。評価した条件（溶液の組成）を、表４～１１に示す。混和した溶液をプレートリーダーＩｎｆｉｎｉｔｅ　Ｆ２００　Ｐｒｏ（ＴＥＣＡＮ社製）を用いて３７℃加温条件下、６２０nmでの吸光度を測定した。尿中でのアンチセンスオリゴマーの析出を想定した場合、アンチセンスオリゴマーの濃度、塩化カリウム濃度及び塩化ナトリウム濃度は、アンチセンスオリゴマーの投与量や尿量によって変動するため、配列ごとに注射用水を媒体に用いて析出がみられる条件を設定した。得られた条件から媒体のみをスクロース水溶液に変更した条件で測定し、両条件において得られた吸光度の比較を行った。吸光度が上昇した場合に、析出がみられたと判断し、析出がみられるまでの時間及び吸光度上昇値を評価した。スクロース水溶液を媒体とした場合に、注射用水を媒体とした場合よりも析出がみられるまでの時間が遅い、又は吸光度上昇値が小さい場合に、析出抑制作用があると判定した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000014
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000017
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
試験結果
　試験した各アンチセンスオリゴマーは、全てスクロース水溶液を媒体とした場合に、析出がみられるまでの時間が遅延し、吸光度の上昇を抑制したことから、スクロースはアンチセンスオリゴマーの析出を抑制することが示された。それぞれの結果について、図１～８に示す。
　以上の結果より、スクロースはアンチセンスオリゴマーの尿中での析出を抑制することが示された。
［実施例４：スクロースによる腎臓における析出抑制作用の評価］
　表１に示すアンチセンスオリゴマーのうち、ＰＭＯ　Ｎｏ．８（配列番号８）について、医薬用途へのさらなる有用性を検証するため、腎臓における尿からの析出及びスクロースによる析出抑制について評価した。
（１）評価方法
　ＰＭＯ　Ｎｏ．８のアンチセンスオリゴマーを０．９％の塩化ナトリウムを含む注射用水に溶解し、さらにスクロース（富士フィルム和光純薬製）を生理食塩水で溶解した溶液を加えて、各アンチセンスオリゴマーとスクロースを表１２、１３に記載の濃度で含む投与液を作製した。
　これらの投与液をＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄性６週齢マウス（Ｎ＝３）の尾静脈内へ表１２に記載の投与液量（１０ｍＬ／ｋｇ）で投与した。翌日、ＰＭＯ　Ｎｏ．８のアンチセンスオリゴマーを投与した一部マウスを剖検し、腎臓のホルマリン固定パラフィン包埋標本を作製した。標本を薄切した切片をヘマトキシリン・エオシン染色し、病理組織学的検査を実施した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
（２）評価結果
　病理組織学的検査により、スクロースを含まない対照の投与液を投与したマウスの腎臓において尿細管の管腔内に好塩基性物質が認められた。この変化は核酸の析出を反映したものと考えられた。スクロース濃度に応じて析出物は減少し、析出抑制作用が認められた。結果を、表１３及び図９、１０、１１、１２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
［実施例５：スクロースによる腎臓における析出抑制作用の評価］
　表１に示すアンチセンスオリゴマーのうち、ＰＭＯ　Ｎｏ．１１（配列番号１１）について、医薬用途へのさらなる有用性を検証するため、腎臓における尿からの析出及びスクロースによる析出抑制について評価した。
（１）評価方法
　ＰＭＯ　Ｎｏ．１１のアンチセンスオリゴマーを生理食塩水に溶解し、アンチセンスオリゴマーを表１４に記載の濃度で含みスクロースを含まない対照の投与液を作製した。
　次に、ＰＭＯ　Ｎｏ．１１のアンチセンスオリゴマーとスクロースを生理食塩水に溶解し、アンチセンスオリゴマーとスクロースを表１４に記載の濃度で含む投与液を作製した。
　これらの投与液をＣ５７ＢＬ／６Ｊ雄性６週齢マウス（Ｎ＝５）の尾静脈内へ２０ｍＬ／ｋｇで投与した。翌日、マウスを剖検し、腎臓のホルマリン固定パラフィン包埋標本を作製した。標本を薄切した切片をヘマトキシリン・エオシン染色し、病理組織学的検査を実施した。スクロースを含まない投与液を投与したマウスと比較して、スクロースを含む投与液を投与したマウスにおいて腎臓の病理組織学的検査における所見に改善が認められた場合に、析出を抑制したと判定した。
（２）評価結果
　試験したアンチセンスオリゴマーは、スクロースを含む投与液を投与したマウスにおいて、腎臓の病理組織学的検査における所見で改善が認められたため、スクロースが析出を抑制することを確認した。結果を、表１４に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
［実施例６：スクロースによる析出抑制作用の評価］
　表１に示すアンチセンスオリゴマーのうち、ＰＭＯ　Ｎｏ．１、２、７について、医薬用途への有用性をさらに検証するため、尿中を想定したイオン存在下での析出量及びスクロースによる析出抑制作用を評価した。
試験方法
　各アンチセンスオリゴマーを注射用水又はスクロース水溶液に溶解し、尿を想定した塩化カリウム及び塩化ナトリウムを含む水溶液と混和した。評価した条件（溶液の組成）を、表４～１１、１５～１７に示す。混和した溶液をプレートリーダーＩｎｆｉｎｉｔｅ　Ｆ２００　Ｐｒｏ（ＴＥＣＡＮ社製）を用いて３７℃加温条件下、６２０nmでの吸光度を測定した。尿中でのアンチセンスオリゴマーの析出を想定した場合、アンチセンスオリゴマーの濃度、塩化カリウム濃度及び塩化ナトリウム濃度は、アンチセンスオリゴマーの投与量や尿量によって変動するため、配列ごとに注射用水を媒体に用いて析出がみられる条件を設定した。得られた条件から媒体のみをスクロース水溶液に変更した条件で測定し、両条件において得られた吸光度の比較を行った。吸光度が上昇した場合に、析出がみられたと判断し、析出がみられるまでの時間及び吸光度上昇値を評価した。スクロース水溶液を媒体とした場合に、注射用水を媒体とした場合よりも析出がみられるまでの時間が遅い、又は吸光度上昇値が小さい場合に、析出抑制作用があると判定した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000024
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000025
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
試験結果
　試験した各アンチセンスオリゴマーは、全てスクロース水溶液を媒体とした場合に、析出がみられるまでの時間が遅延し、吸光度の上昇を抑制したことから、スクロースはアンチセンスオリゴマーの析出を抑制することが示された。それぞれの結果について、図１３～１５に示す。
　以上の結果より、スクロースはアンチセンスオリゴマーの尿中での析出を抑制することが示された。
［実施例７：トレハロースによる析出抑制作用の評価］
　表１に示すアンチセンスオリゴマーのうち、ＰＭＯ　Ｎｏ．１、２、７、８について、医薬用途への有用性をさらに検証するため、尿中を想定したイオン存在下での析出量及びトレハロースによる析出抑制作用を評価した。
試験方法
　各アンチセンスオリゴマーを注射用水又はトレハロース水溶液に溶解し、尿を想定した塩化カリウム及び塩化ナトリウムを含む水溶液と混和した。評価した条件（溶液の組成）を、表１８～２１に示す。混和した溶液をプレートリーダーＩｎｆｉｎｉｔｅ　Ｆ２００　Ｐｒｏ（ＴＥＣＡＮ社製）を用いて３７℃加温条件下、６２０nmでの吸光度を測定した。尿中でのアンチセンスオリゴマーの析出を想定した場合、アンチセンスオリゴマーの濃度、塩化カリウム濃度及び塩化ナトリウム濃度は、アンチセンスオリゴマーの投与量や尿量によって変動するため、配列ごとに注射用水を媒体に用いて析出がみられる条件を設定した。得られた条件から媒体のみをトレハロース水溶液に変更した条件で測定し、両条件において得られた吸光度の比較を行った。吸光度が上昇した場合に、析出がみられたと判断し、析出がみられるまでの時間及び吸光度上昇値を評価した。トレハロース水溶液を媒体とした場合に、注射用水を媒体とした場合よりも析出がみられるまでの時間が遅い、又は吸光度上昇値が小さい場合に、析出抑制作用があると判定した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000028
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000029
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000030
  
試験結果
　試験した各アンチセンスオリゴマーは、全てトレハロース水溶液を媒体とした場合に、析出がみられるまでの時間が遅延し、吸光度の上昇を抑制したことから、トレハロースはアンチセンスオリゴマーの析出を抑制することが示された。それぞれの結果について、図１６～１９に示す。
　以上の結果より、トレハロースはアンチセンスオリゴマーの尿中での析出を抑制することが示された。

Claims (17)

  1. 　アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤であって、グルコースではない糖を含み、前記医薬組成物中の糖の濃度が0.5mg/mL～3000mg/mLになる量で使用される、析出抑制剤。
  2. 　前記医薬組成物中の糖の濃度が2.6mg/mL～1694.1mg/mLになる量で使用される、請求項１に記載の析出抑制剤。
  3. 　前記医薬組成物中のアンチセンスオリゴマーの濃度が、0.05mg/mL～2000mg/mLである、請求項１又は２に記載の析出抑制剤。
  4. 　アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤であって、グルコースではない糖を含み、アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が0.1～100となる量で使用される、析出抑制剤。
  5. 　アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が1～53となる量で使用される、請求項４に記載の析出抑制剤。
  6. 　糖が、二糖類の糖である、請求項１～５のいずれか一項に記載の析出抑制剤。
  7. 　糖が、スクロースである、請求項１～６のいずれか一項に記載の析出抑制剤。
  8. 　糖が、トレハロースである、請求項１～６のいずれか一項に記載の析出抑制剤。
  9. 　アンチセンスオリゴマーがモルホリノオリゴマーである、請求項１～８のいずれか一項に記載の析出抑制剤。
  10. 　アンチセンスオリゴマーがホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーである、請求項１～９のいずれか一項に記載の析出抑制剤。
  11. 　アンチセンスオリゴマーの5'末端が、下記化学式（１）～（２）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     のいずれかの基である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の析出抑制剤。
  12. 　前記アンチセンスオリゴマーが、その塩基配列中に４つの連続するプリン塩基を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の析出抑制剤。
  13. 　前記４つの連続するプリン塩基のうちの少なくとも２つがグアニンである、請求項１２に記載の析出抑制剤。
  14. 　前記アンチセンスオリゴマーが、配列番号１～１２からなる群から選択される塩基配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の析出抑制剤。
  15. 　アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物が投与された対象において、尿中のアンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための方法であって、グルコースではない糖を、前記医薬組成物中の糖の濃度が0.5mg/mL～3000mg/mLになる量で添加することを含む、方法。
  16. 　アンチセンスオリゴマーが投与された対象において、尿中のアンチセンスオリゴマーの析出を抑制するための方法であって、グルコースではない糖を前記対象に投与することを含み、アンチセンスオリゴマーを1としたときの糖の重量比が0.1～100となる量で投与される、方法。
  17. 　アンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物であって、グルコースではない糖を含む、前記医薬組成物が投与された対象における尿中のアンチセンスオリゴマーの析出抑制剤を0.5mg/mL～3000mg/mLの濃度で含む、医薬組成物。
PCT/JP2022/027105 2021-07-08 2022-07-08 析出抑制剤 WO2023282346A1 (ja)

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