WO2023132279A1 - 生体細胞凍結保存用具 - Google Patents

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WO2023132279A1
WO2023132279A1 PCT/JP2022/047712 JP2022047712W WO2023132279A1 WO 2023132279 A1 WO2023132279 A1 WO 2023132279A1 JP 2022047712 W JP2022047712 W JP 2022047712W WO 2023132279 A1 WO2023132279 A1 WO 2023132279A1
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WO
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biological cell
cell cryopreservation
cane
main body
bottomed
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PCT/JP2022/047712
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English (en)
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Inventor
太 井上
Original Assignee
株式会社北里コーポレーション
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61J—CONTAINERS SPECIALLY ADAPTED FOR MEDICAL OR PHARMACEUTICAL PURPOSES; DEVICES OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR BRINGING PHARMACEUTICAL PRODUCTS INTO PARTICULAR PHYSICAL OR ADMINISTERING FORMS; DEVICES FOR ADMINISTERING FOOD OR MEDICINES ORALLY; BABY COMFORTERS; DEVICES FOR RECEIVING SPITTLE
    • A61J3/00—Devices or methods specially adapted for bringing pharmaceutical products into particular physical or administering forms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues

Definitions

  • the present invention relates to a biological cell cryopreservation tool used for cryopreserving biological cells such as mammalian eggs, eggs such as embryos, sperm, hematopoietic stem cells, and stem cells such as pluripotent stem cells.
  • the egg cryopreservation device (biological cell cryopreservation device 1) of Patent Document 1 includes a body portion 2 formed of a cold-resistant material, and attached to one end of the body portion 2, and is made of a flexible, transparent, and liquid nitrogen-resistant material. and a tubular member 4 formed of a cold-resistant material, one end of which is closed and detachably attached to the main body 2 so as to enclose the egg-adhering and retaining strip 3.
  • the biological cell cryopreservation device holding the biological cell is placed in the device with a bottom.
  • the device is inserted into the canister, and the canister containing the device is placed in a cryopreservation tank containing a liquefied refrigerant (usually liquid nitrogen). In this way, living cells are cryopreserved.
  • the canister containing the biological cell holder holding the biological cells of the target individual is taken out from the cryopreservation tank. Since the canister also contains living cell holders holding living cells of an individual other than the target individual, the target individual is selected and extracted from the canister. The canister is then reinserted into the cryopreservation tank.
  • the vitrification method has become popular and established as the standard method.
  • the number of biological cells to be cryopreserved specifically, the number of biological cell cryopreservation devices holding the biological cells to be cryopreserved, is increasing year by year.
  • the number of facilities for cryopreservation of biological cells is increasing, and it is desired that more efficient cryopreservation can be achieved.
  • An object of the present invention is to provide a biological cell cryopreservation tool having one cane holding a bottomed tube, which can accommodate a biological cell cryopreservation tool that holds a larger number of biological cells.
  • a biological cell cryopreservation tool stored in a cryopreservation tank containing a liquefied refrigerant comprises four bottomed tubes, a cane having a sandwiching part for the four bottomed tubes, and at least four elongated biological cell cryopreservation tools,
  • the cane holds the four bottomed tubes in series and at approximately equal intervals
  • the biological cell cryopreservation device includes a rod-shaped main body, an elongated biological cell holding section fixed to the distal end of the rod-shaped main body, and can be attached to the rod-shaped main body in a state in which the biological cell holding section is wrapped.
  • the biological cell cryopreservation device has an overall length in a state where the cylindrical member is attached to the rod-shaped body portion is shorter than the distance between the outer bottom surfaces of the adjacent bottomed tubes, It has a length that can be inserted into each bottomed tube held by the cane,
  • the cane has an elongated cane body, and the clamping portion of the bottomed tube extends forward from the side of the cane body and is formed by facing extending portions,
  • the bottomed tube has an upper end opening into which a plurality of the biological cell cryopreservation devices can be inserted, and the upper end opening is an inclined opening that descends forward from the cane main body.
  • the cylindrical member is attached to the rod-shaped main body, and the cylindrical member and the rod-shaped main body are accommodated in the bottomed tube so that the cylindrical member faces downward.
  • a biological cell cryopreservation tool in which the lower part of the part is housed in the bottomed tube, and the upper part of the rod-shaped main body part is exposed.
  • FIG. 1 is a front view of a biological cell cryopreservation device according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 2 is a right side view of the biological cell cryopreservation device shown in FIG. 1;
  • FIG. 3 is a rear view of the biological cell cryopreservation tool shown in FIG. 1;
  • FIG. 4 is an explanatory diagram for explaining a vertical cross section of the device for cryopreserving biological cells according to the embodiment of the present invention.
  • FIG. 5 is an enlarged front view of a bottomed tube containing a plurality of biological cell cryopreservation devices used in the biological cell cryopreservation device of the present invention.
  • FIG. 6 is an explanatory diagram for explaining a planar state of a bottomed tube containing a plurality of biological cell cryopreservation devices used in the biological cell cryopreservation device of the present invention.
  • 7 is a front view of a cane holding a bottomed tube used in the biological cell cryopreservation device shown in FIG. 1.
  • FIG. 8 is an enlarged front view of a bottomed tube used in the biological cell cryopreservation device shown in FIG. 1.
  • FIG. 9 is a right side view of the bottomed tube shown in FIG. 8.
  • FIG. 10 is an enlarged front view of the biological cell cryopreservation device used in the biological cell cryopreservation device shown in FIG. 1.
  • FIG. 11 is a cross-sectional view taken along the line AA of FIG. 10.
  • FIG. FIG. 12 is an enlarged front view of the biological cell cryopreservation device with the cylindrical member removed.
  • FIG. 13 is a bottom view of the biological cell cryopreservation device with the cylindrical member shown in FIG. 12 removed.
  • 14 is an enlarged left side view of the biological cell cryopreservation device from which the cylindrical member shown in FIG. 12 is removed;
  • FIG. 15 is an enlarged right side view of the biological cell cryopreservation device from which the cylindrical member shown in FIG. 12 is removed;
  • FIG. FIG. 16 is a front view of a canister housing the device for cryopreserving biological cells of the present invention.
  • FIG. 17 is an explanatory diagram for explaining the cryopreservation tank in which a plurality of canisters shown in FIG. 16 are stored.
  • a biological cell cryopreservation tool 1 of the present invention is a biological cell cryopreservation tool that is stored in a cryopreservation tank containing a liquefied refrigerant.
  • the biological cell cryopreservation tool 1 includes four bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d) and sandwiching portions 11, 12, 13 of the four bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d). , 14 and at least four or more elongate biological cell cryopreservation devices 4.
  • the cane 2 holds four bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d) in series at substantially equal intervals.
  • the biological cell cryopreservation device 4 includes a rod-shaped body portion 41, an elongated biological cell holding portion 42 fixed to the distal end portion of the rod-shaped body portion 41, and the rod-shaped body portion 41 in a state where the biological cell holding portion 42 is wrapped. and a mountable tubular member 50 .
  • the total length of the biological cell cryopreservation device 4 in a state where the cylindrical member 50 is attached to the rod-shaped main body 41 is greater than the distance (L1) between the outer bottom surfaces of the adjacent bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d). It is short and has a length that can be inserted into each bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d) held by the cane 2.
  • the cane 2 has an elongated cane main body 21, the clamping parts 11, 12, 13, 14 of the bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d) extend forward from the side of the cane main body 21, and It is formed by opposing extensions.
  • the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d) has an upper end opening 33 into which a plurality of biological cell cryopreservation tools 4 can be inserted. The opening is inclined downward.
  • the biological cell cryopreservation device 4 is stored in the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d) so that the tubular member 50 is attached to the rod-shaped main body 41 and the tubular member 50 faces downward.
  • the cylindrical member 50 and the lower portion of the rod-shaped body portion 41 are housed in the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d), and the upper portion of the rod-shaped body portion 41 is exposed.
  • the cell cryopreservation tool 1 of this embodiment is an egg cryopreservation tool
  • the biological cell holding member 42 is an egg holding part.
  • the cell cryopreservation tool of the present invention can be used for cryopreserving cells such as eggs such as embryos, ova, sperm, hematopoietic stem cells, stem cells such as pluripotent stem cells, and particularly the above biological cells. can.
  • the biological cell cryopreservation tool 1 of this embodiment includes four bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d) and four bottomed tubes 3 (3a, 3d). 3b, 3c, 3d) and a plurality of elongated biological cell cryopreservation devices 4.
  • the cane 2 includes a cane body portion 21 formed in a substantially semi-cylindrical shape, and clamping portions 11, 12, 13, and 14 for clamping the bottomed tube 3.
  • the clamping portions 11, 12, 13, and 14 extend forward from the side portion of the cane main body portion 21 and are formed by extending portions facing each other. Specifically, the extending portions forming the clamping portions 11, 12, 13, and 14 extend in the axial direction of the cane main body portion 21 for a predetermined length and are curved toward the center of the cane main body portion 21 to form two opposing curved extensions. It is formed by the part.
  • the cane 2 has gaps provided between the facing extending portions forming the holding portions 11, 12, 13, and 14, and a portion of the cane body portion 21 where the holding portions 11, 12, 13, and 14 are formed. It has openings 11a, 12a, 13a, and 14a provided in. Furthermore, in this embodiment, the cane 2 is provided at the upper end of the cane body portion 21 and has an upper end protrusion portion 22 which protrudes forward, and a lower end protrusion portion 23 which is provided at the lower end of the cane body portion 21 and protrudes forward. It has also, in this embodiment, the cane 2 has four clamping portions 11, 12, 13, 14 that individually clamp the four bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d).
  • the total length of the cane 2 (biological cell cryopreservation device 1) is preferably 270-300 mm, particularly preferably 280-290 mm.
  • the cane 2 is made of a cold-resistant material such as a metal such as aluminum or a cold-resistant synthetic resin.
  • the total length of the cane 2 (biological cell cryopreservation tool 1) is shorter than the total length of the cylindrical storage portion 76 (specifically, the hollow portion 77) of the canister 7 used. It's becoming Therefore, the cane 2 can be stored in the cylindrical storage portion 76 in a state in which the bottom portion of the cane 2 is in contact with the bottom plate member 78 of the cylindrical storage portion 76 . Further, as shown in FIG.
  • the cane 2 can be accommodated in the tubular storage portion 76 so that the upper end projecting portion 22 of the cane 2 is suspended from the opening edge portion of the tubular storage portion 76 .
  • the total length of the cane 2 (the biological cell cryopreservation device 1) is shorter than the depth of the cylindrical storage portion 76 of the canister 7 by 2 to 10 mm.
  • the cane 2 holds four bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d).
  • the cane 2 holds four bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d) in series and at substantially equal intervals. Therefore, the distance L1 between the outer bottom surfaces of the vertically adjacent bottomed tubes 3 is substantially equal.
  • the distance between the outer bottom surface of the bottomed tube 3a positioned most upward and the lower surface of the upper end protrusion 22 of the cane 2 is the distance between the outer bottom surfaces of the vertically adjacent bottomed tubes 3. It is almost equal to L1.
  • the distance L1 between the outer bottom surfaces is preferably 65 to 75 mm, particularly preferably 67 to 73 mm.
  • the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d) is, as shown in FIGS. 32 , an upper end opening 33 provided at the upper end of the tubular main body 31 .
  • a plurality of biological cell cryopreservation devices 4 can be inserted into the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d).
  • the upper end opening 33 is an inclined opening that descends forward from the cane body portion 21 .
  • the inclination angle R (FIG. 9) of the upper end opening 33 of the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d) with respect to the central axis X of the bottomed tube 3 is preferably 20 to 60 degrees, particularly 30 to 60 degrees. 50 degrees is preferred.
  • the lower end 33a of the upper end opening 33 which is an inclined opening that descends forward from the cane main body 21, extends to form the clamping portions 11, 12, 13, and 14 facing each other. It is preferably located above the gap provided between the parts.
  • the lower end 33a of the upper end opening 33 which is an inclined opening, is located in the space provided between the facing extensions forming the clamping portions 11, 12, 13, 14. It is preferably located above the central portion.
  • the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d) is preferably capable of accommodating four or more biological cell cryopreservation devices 4 in a state where the cylindrical member 50 is attached to the rod-shaped main body 41.
  • four biological cell cryopreservation devices 4 can be accommodated.
  • the total length of the bottomed tube 3 is preferably 45-55 mm. Moreover, the distance from the outer bottom surface of the bottomed tube 3 to the lower end 33a of the upper end opening 33 is preferably 35 to 45 mm. Moreover, the inner diameter of the bottomed tube 3 is preferably 7 to 9 mm.
  • the distance (L3, FIG. 1 See) is preferably 25 mm to 35 mm, particularly preferably 27 to 33 mm.
  • the bottomed tube 3 allows the stored living cell cryopreservation device 4 to be visually recognized from the outside of the side portion of the bottomed tube 3 .
  • the bottomed tube is preferably made of a cold-resistant transparent or translucent resin.
  • the bottomed tubes 3a, 3b, 3c, 3d are attached to the cane 2 so as to close the openings 11a, 12a, 13a, 14a provided in the portions where the holding portions 11, 12, 13, 14 are formed. It is
  • the cane 2 has gaps provided between the facing extending portions that form the holding portions 11, 12, 13, and 14, and the holding portions 11, 12, 13, and 14. It has openings 11a, 12a, 13a, and 14a provided in the cane body 21 of the portion where the openings 11a, 12a, 13a, and 14a are provided.
  • the belt-shaped adhesive tapes 15, 16, 17, 18 are exposed on the outer surfaces of the extending portions facing each other forming the holding portions 11, 12, 13, 14, the gaps, and the bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c). , 3d).
  • detachment and vertical movement of the bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d) within the cane 2 are reliably restricted.
  • strip-shaped adhesive tapes 15, 16, 17, 18 various resin-made adhesive tapes based on cellophane tape, vinyl tape, polyester tape, polyamide tape, polyolefin tape (for example, polyethylene tape), etc. are preferably used. . In addition to being transparent, materials having water resistance can be used.
  • the strip-shaped adhesive tapes 15, 16, 17, and 18 preferably have optical transparency that does not hinder the visibility of the bottomed tube, and are particularly preferably transparent.
  • the biological cell cryopreservation device 4 includes a rod-shaped main body portion 41 and an elongated biological cell holding portion 42 fixed to the distal end portion of the rod-shaped main body portion 41; A cylindrical member 50 that can be attached to the rod-shaped main body 41 in a state where the biological cell holding portion 42 is enclosed is provided.
  • the total length of the biological cell cryopreservation device 4 in a state where the cylindrical member 50 is attached to the rod-shaped main body 41 is greater than the distance (L1) between the outer bottom surfaces of the adjacent bottomed tubes 3 (3a, 3b, 3c, 3d). It is short and has a length that can be inserted into each bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d) held by the cane 2.
  • the biological cell cryopreservation device 4 is stored in the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d) so that the tubular member 50 is attached to the rod-shaped main body 41 and the tubular member 50 faces downward.
  • the cylindrical member 50 and the lower portion of the rod-shaped body portion 41 are housed in the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d), and the upper portion of the rod-shaped body portion 41 is exposed.
  • the biological cell cryopreservation device 4 is stored in the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d) so that the tubular member 50 is attached to the rod-shaped main body 41 and the tubular member 50 faces downward. It is preferable that the distance L2 (see FIG. 1) between the upper end of the rod-shaped main body 41 and the outer bottom surface of the bottomed tube 3 (3a, 3b, 3c, 3d) positioned above is 3 mm to 8 mm. , particularly preferably 4 to 7 mm.
  • the biological cell cryopreservation device 4 has a total length in a state where the cylindrical member 50 is attached to the rod-shaped main body 41, which is shorter than the distance L1 between the outer bottom surfaces of the adjacent bottomed tubes 3 and is 60 to 70 mm. is preferred, and 63 to 68 mm is particularly preferred.
  • the total length of the tubular member 50 of the biological cell cryopreservation device 4 is preferably 30-40 mm, particularly preferably 32-38 mm.
  • the storage device main body 40 includes a rod-shaped main body portion 41 and an elongated biological cell holding portion 42 fixed to the distal end portion of the rod-shaped main body portion 41 .
  • the rod-shaped body portion 41 holds one end of the biological cell holding portion 42 .
  • the length of the rod-like main body 41 is preferably about 30-50 mm, more preferably 35-45 mm.
  • the width is preferably 1.5 to 3.0 mm, particularly preferably 1.7 to 2.5 mm.
  • the thickness is preferably 1.5 to 3.0 mm, more preferably 1.7 to 2.5 mm.
  • the outer diameter is preferably 1.5 to 3.0 mm, more preferably 1.7 to 2.5 mm.
  • annular rib 44 is provided at the tip of the rod-shaped body portion 41 .
  • the annular rib 44 is preferably about 0.3 to 0.7 mm larger than the rod-shaped main body. 0 to 3.0 mm is preferred.
  • the thickness is preferably 1.3 to 3.7 mm, more preferably 2.0 to 3.0 mm.
  • the outer diameter is preferably 1.3 to 3.7 mm, more preferably 2.0 to 3.0 mm.
  • the biological cell cryopreservation device 4 of this embodiment is provided with a tapered portion 46 extending forward from the distal end surface of the annular rib 44 .
  • the tapered portion 46 tapers toward its tip.
  • a holding portion 43 of the biological cell holding portion is provided that extends forward from the tapered portion 46 .
  • the holding portion 43 becomes thinner toward the tip and has a rounded tip.
  • one end (proximal end) of the biological cell holding portion 42 is located inside the holding portion 43 and fixed.
  • the rear end portion 45 of the rod-shaped body portion 41 is a bulging portion, and a marker is provided on the surface thereof.
  • the marker is attached to a portion of the rod-shaped main body 41 that is on the upper surface side of the living cell holding portion 42 .
  • the rod-shaped main body 41 is made of polyester (eg, polyethylene terephthalate, polybutylene terephthalate), polyolefin (eg, polyethylene, ultra-high molecular weight polyethylene, polypropylene, ethylene-propylene copolymer, ethylene-vinyl acetate copolymer), styrene resin.
  • polystyrene e.g., polystyrene, methacrylate-styrene copolymer, methacrylate-butylene-styrene copolymer
  • polyamide e.g., 6 nylon, 66 nylon
  • polysulfone e.g., fluororesin, polyimide and other cold-resistant resins
  • a material that can withstand the temperature of liquid nitrogen is preferred.
  • the biological cell holding part 42 is made of a flexible, transparent and cold-resistant (specifically, liquid nitrogen-resistant) material, and in this embodiment, it has an elongated flat sheet shape.
  • the living cell holding portion 42 is preferably a flat sheet-like one having light transmission properties, preferably transparency, in order to facilitate attachment of living cells (for example, eggs).
  • a colorless and transparent flat sheet is particularly preferred. Furthermore, it may have flexibility.
  • a tip portion 47 of the living cell holding portion 42 has a triangular shape with the apex at the center. Further, the tip portion 47 is provided with a marker.
  • the marker is formed by coloring one surface (specifically, the surface of the water-absorbing sheet or the base portion) of the tip portion of the living cell holding portion 42 (coloring with oil-based ink).
  • the protruding length of the living cell holding part 42 (the length protruding from the holding part 43) is about 10 to 20 mm, the width is about 0.5 to 1.5 mm, and the thickness is about 0.01 to 0.5 mm. Used.
  • light-transmitting resin sheets such as 3-fluoropolyethylene, low-density polyethylene, medium-density polyethylene, high-density polyethylene, polycarbonate, nylon, polysulfone, and polyester are used. (eg, PET), polystyrene, polyimide, ultra-high molecular weight polyethylene, ethylene-vinyl acetate copolymer, and other synthetic resin films or laminates thereof.
  • cold-resistant, specifically liquid nitrogen-resistant materials in other words, materials that do not become embrittled when in contact with liquid nitrogen are preferred.
  • the cylindrical member 50 is detachably attached to the storage device main body 40 so as to enclose the living cell holding portion 42, and has openings at both ends.
  • the tubular member 50 is made of a cold-resistant material. It should be noted that an air-permeable sealing member may be accommodated inside one end portion (inside the tip portion) of the tubular member 50 .
  • a weight 52 is housed at the tip of the tubular main body 51 .
  • the tip side of the cylindrical member 50 put into the liquid nitrogen tank and the biological cell cryopreservation device 4 to which it is attached is surely directed downward.
  • the cylindrical member 50 has an inner diameter and length that allow it to be encapsulated without coming into contact with the biological cell holding section 42 .
  • the cylindrical main body 51 may have a colored portion on the outer surface of the rear end (opening) 53 to facilitate recognition of the opening.
  • the total length of the storage member 50 is preferably about 25-45 mm, more preferably 30-40 mm. Also, the outer diameter of the storage member 50 is preferably 2 to 5 mm, more preferably 2.5 to 3.5 mm.
  • Materials for forming the housing member 50 include, for example, 3-fluorinated polyethylene, low-density polyethylene, medium-density polyethylene, high-density polyethylene, polycarbonate, nylon, polysulfone, polyester (eg, PET), polystyrene, polyimide, and ultra-high molecular weight polyethylene. , films made of synthetic resins such as ethylene-vinyl acetate copolymers, or laminates thereof. Particularly preferred are liquid nitrogen resistant materials, in other words, materials that do not embrittle when in contact with liquid nitrogen.
  • the biological cell cryopreservation tool 1 of the present invention is housed in a canister 7, and as shown in FIG. 17, the canister 7 is filled with a liquefied refrigerant (usually liquid nitrogen). stored in cryopreservation tanks.
  • a liquefied refrigerant usually liquid nitrogen
  • the canister 7 for example, the one shown in Fig. 17 is used.
  • the canister 7 includes a tubular housing portion 76 and a shaft portion 70 whose lower portion is fixed to the tubular housing portion 76 .
  • the cylindrical storage portion 76 includes a cylindrical member (hollow portion) 77 and a bottom plate member 78 fixed to the lower portion of the cylindrical member 77.
  • the bottom plate member 78 has a hollow portion inside.
  • a coolant liquid nitrogen has a number of openings for flow.
  • the shaft portion 70 includes a shaft body 71, an upper suspension portion 72 provided at the upper end portion, and a lower suspension portion 73 provided at the lower portion.
  • cryopreservation tank 8 for example, the one shown in Fig. 16 is used.
  • the cryopreservation tank 8 has an annular projecting portion 82 projecting upward from the periphery of the opening.
  • the upper suspension portion 72 and the lower suspension portion 73 of the canister 7 can be suspended on the annular projecting portion 82 .
  • the cryopreservation tank 8 includes a container body 81 having a storage space 80 inside, and an opening forming member attached to the opening of the container body 81 .
  • the opening forming member includes a disk-shaped main body and an annular protrusion 82 in which the inner edge of the disk-shaped main body (peripheral edge of the opening) protrudes upward.
  • An upper suspension portion and a lower suspension portion of the canister 7 can be suspended.
  • the cryopreservation tank 8 is provided with a small-diameter portion extending from the opening of the storage space 80 with substantially the same inner diameter, and an enlarged-diameter portion with a widened inner diameter below the small-diameter portion. This expanded diameter portion serves as a portion for accommodating the tubular storage portion of the canister 7 .
  • the cryopreservation tank 8 has a bulging portion 85 that protrudes from the bottom surface of the storage space 80 .
  • the container body 81 of the cryopreservation tank 8 has an outer layer portion 84, an inner layer portion 86 forming the storage space 80, and a heat insulating layer 83 filled between the outer layer portion 84 and the inner layer portion 86. .
  • the opening of the biological cell cryopreservation tank 8 is covered with a lid member (not shown) to close the opening and prevent the upper suspension from being exposed to the outside. Become.
  • cryopreserving an ovum which is a living cell
  • an egg is collected at the tip of a pipette, the intracellular fluid of the egg is replaced with the equilibrium solution, and then the extracellular fluid is replaced with the vitrification fluid.
  • the ovum is placed on the biological cell holding portion 42 of the biological cell cryopreservation device 4 used in the biological cell cryopreservation device 1 of the present invention, together with a small amount of vitrification liquid, and adhered to the surface thereof.
  • the biological cell holding portion 42 of the biological cell cryopreservation device 4 to which the ovum is adhered is immersed in liquid nitrogen prepared in advance and frozen (vitrified). Then, the biological cell holder 42 to which the ovum is attached is inserted into the tubular member 4 , and the tubular member is attached to the biological cell cryopreservation tool 4 . Then, the biological cell cryopreservation device 4 with the cylindrical member attached thereto is inserted into the bottomed tube held by the cane 2 of the biological cell cryopreservation device 1 . After the biological cell cryopreservation tool 1 is inserted into the cylindrical storage portion 76 (hollow portion 77) of the canister 7, the canister 7 is placed in the cryopreservation tank 8 and stored.
  • the biological cell cryopreservation tool of the present invention is a biological cell cryopreservation tool that is stored in a cryopreservation tank containing a liquefied refrigerant.
  • the biological cell cryopreservation device includes four bottomed tubes, a cane having four bottomed tube sandwiching portions, and at least four elongated biological cell cryopreservation devices. The cane holds four bottomed tubes in series and at approximately equal intervals.
  • the biological cell cryopreservation device includes a rod-shaped main body, an elongated biological cell holder fixed to the distal end of the rod-shaped main body, and a cylindrical member that can be attached to the rod-shaped main body while covering the biological cell holder.
  • the biological cell cryopreservation device has a total length shorter than the distance between the outer bottom surfaces of adjacent bottomed tubes in a state where the cylindrical member is attached to the rod-shaped main body, and has a length that can be inserted into each bottomed tube held by the cane. It is
  • the cane has an elongated cane body portion, and the clamping portion of the bottomed tube extends forward from the side portion of the cane body portion and is formed by opposing extensions.
  • the bottomed tube has an upper end opening into which a plurality of biological cell cryopreservation devices can be inserted, and the upper end opening is an inclined opening that descends forward from the cane main body.
  • the tubular member is attached to the rod-shaped main body, and in a state in which the tubular member is housed in the bottomed tube so that the tubular member faces downward, the tubular member and the lower part of the rod-shaped main body are bottomed. It is housed in a tube, and the upper part of the rod-shaped main body is exposed.
  • This biological cell cryopreservation device is equipped with four bottomed tubes held at approximately equal intervals in one cane.
  • the biological cell cryopreservation device used has a total length shorter than the distance between the outer bottom surfaces of the adjacent bottomed tubes when the tubular member is attached to the rod-shaped main body. Since each bottomed tube can accommodate a plurality of biological cell cryopreservation tools, one biological cell cryopreservation tool can accommodate a biological cell cryopreservation tool that holds a large number of biological cells. Therefore, one canister and one cryopreservation tank can store a living cell cryopreservation device holding many living cells. In addition, the operation of inserting and removing the biological cell cryopreservation device from the bottomed tube can be performed satisfactorily.
  • the biological cell cryopreservation tool of the present invention is as follows. (1) A biological cell cryopreservation tool stored in a cryopreservation tank containing a liquefied refrigerant, The biological cell cryopreservation tool comprises four bottomed tubes, a cane having a sandwiching part for the four bottomed tubes, and at least four elongated biological cell cryopreservation tools, The cane holds the four bottomed tubes in series and at approximately equal intervals, The biological cell cryopreservation device includes a rod-shaped main body, an elongated biological cell holding section fixed to the distal end of the rod-shaped main body, and can be attached to the rod-shaped main body in a state in which the biological cell holding section is wrapped.
  • the biological cell cryopreservation device has an overall length in a state where the cylindrical member is attached to the rod-shaped body portion is shorter than the distance between the outer bottom surfaces of the adjacent bottomed tubes, It has a length that can be inserted into each bottomed tube held by the cane,
  • the cane has an elongated cane body, and the clamping portion of the bottomed tube extends forward from the side of the cane body and is formed by facing extending portions,
  • the bottomed tube has an upper end opening into which a plurality of the biological cell cryopreservation devices can be inserted, and the upper end opening is an inclined opening that descends forward from the cane main body.
  • the cylindrical member is attached to the rod-shaped main body, and the cylindrical member and the rod-shaped main body are accommodated in the bottomed tube so that the cylindrical member faces downward.
  • a biological cell cryopreservation tool in which the lower part of the part is housed in the bottomed tube, and the upper part of the rod-shaped main body part is exposed.
  • This biological cell cryopreservation device is equipped with four bottomed tubes held at approximately equal intervals in one cane.
  • the biological cell cryopreservation device used has a total length shorter than the distance between the outer bottom surfaces of the adjacent bottomed tubes when the tubular member is attached to the rod-shaped main body. Since each bottomed tube can accommodate a plurality of biological cell cryopreservation tools, one biological cell cryopreservation tool can accommodate a biological cell cryopreservation tool that holds a large number of biological cells. Therefore, one canister and one cryopreservation tank can store a living cell cryopreservation device holding many living cells. In addition, the operation of inserting and removing the biological cell cryopreservation device from the bottomed tube can be performed satisfactorily.
  • the device for cryopreservation of biological cells includes a band-shaped adhesive tape that is wound around the clamping portion of the cane and the bottomed tube clamped by the clamping portion to regulate the movement of the bottomed tube.
  • the cane has a gap provided between the facing extending portions forming the holding portion, and an opening provided in the cane main body portion at the portion where the holding portion is formed, and the belt-shaped
  • the cylindrical member is attached to the rod-shaped main body, and in a state where the cylindrical member is housed in the bottomed tube so that the cylindrical member faces downward, the rod-shaped main body is The biological cell cryopreservation device according to (1) to (3) above, wherein the distance between the upper end and the outer bottom surface of the bottomed tube positioned above is 3 mm to 8 mm.
  • the distance between the outer bottom surface of the bottomed tube positioned most upward and the lower surface of the upper end projection of the cane is substantially the same as the distance between the outer bottom surfaces of the bottomed tubes that are vertically adjacent to each other.
  • the tubular member is attached to the rod-shaped main body, and the tubular member is housed in the uppermost bottomed tube so that the tubular member faces downward,
  • the biological cell cryopreservation device according to (9) or (10) above, wherein the distance between the upper end of the rod-shaped main body and the lower surface of the upper end protrusion is 3 mm to 8 mm.

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Abstract

生体細胞凍結保存用具１は、４本の有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）と、有底管の挟持部１１，１２，１３，１４を備えるケーン２と、複数の生体細胞凍結保存具４とを備える。ケーン２は、４本の有底管を直列かつほぼ等間隔に保持している。生体細胞凍結保存具４は、筒状部材５０が棒状本体部４１に装着された状態における全長が、隣り合う有底管の外底面間距離Ｌ１より短い。有底管の上端開口３３は、ケーン本体部２１より前方に向かって、下降する傾斜開口となっている。生体細胞凍結保存具４は、筒状部材５０が下方となるように有底管に収納された状態において、棒状本体部４１の上部が露出した状態となる。

Description

生体細胞凍結保存用具
　本発明は、哺乳動物の卵子、胚などの卵、***、造血幹細胞、多能性幹細胞等の幹細胞などの生体細胞を凍結保存する際に使用する生体細胞凍結保存用具に関する。
　近年、生殖医療の分野では、卵子および胚の凍結保存がＩＶＦ治療の基幹技術として重要な役割を果たしている。我が国だけでも年間２０万件を超える。ＩＶＦ治療において近年、開発、実用化されたガラス化保存法がその標準法として普及定着している。ガラス化法を用いることができる卵凍結保存用具としては、本願発明者は、特許文献１（特開２００２－３１５５７３、ＷＯ　０２－０８５１１０　Ａ１）を提案している。特許文献１の卵凍結保存具（生体細胞凍結保存具１）は、耐寒性材料により形成された本体部２と、本体部２の一端に取り付けられ、可撓性かつ透明性かつ液体窒素耐性材料により形成された卵付着保持用ストリップ３と、卵付着保持用ストリップ３を被包可能に本体部２に着脱自在に取り付けられる一端が封鎖され、かつ耐寒性材料により形成された筒状部材４とからなるものである。
　生体細胞凍結保存具を収納可能な有底管と、この有底管を保持するケーン（クライオケーンともいう）とを備える器具を用い、生体細胞を保有する生体細胞凍結保存具を器具の有底管に挿入した後、キャニスターに器具を挿入し、さらに、器具を保有したキャニスターは、液化冷媒（通常、液体窒素）が収容された凍結保存用タンクに収納される。このようにして、生体細胞は、凍結保存される。
　そして、生体細胞の必要時、例えば、ＩＶＦ実行時には、凍結保存用タンクより、対象個体の生体細胞を保有した生体細胞保有具を収納するキャニスターを取り出す。そして、キャニスター内には、対象個体とは、別の個体の生体細胞を保有した生体細胞保有具も収納されているので、その中より、対象個体のものを選択して、抜き出す。そして、キャニスターは、再び、凍結保存用タンク内に挿入される。
特開２００２－３１５５７３（ＷＯ ０２－０８５１１０ Ａ１）
　上述したように、生殖医療の分野では、ガラス化保存法がその標準法として普及定着してきている。これにより、凍結保存される生体細胞数、具体的には、凍結保存される生体細胞を保有する生体細胞凍結保存具の数は、年々増加している。これにより、生体細胞凍結保存のための施設も増加しているが、より効率のよい凍結保存ができることが望まれている。
　本発明の目的は、有底管を保持する１つのケーンを備える生体細胞凍結保存用具において、より多くの生体細胞を保有する生体細胞凍結保存具を収納可能なものを提供するものである。
 上記目的を達成するものは、以下のものである。
　液化冷媒が収容された凍結保存用タンクに収納される生体細胞凍結保存用具であって、
　前記生体細胞凍結保存用具は、４本の有底管と、前記４本の有底管の挟持部を備えるケーンと、少なくとも４本以上の細長い生体細胞凍結保存具とを備え、
　前記ケーンは、前記４本の有底管を直列かつほぼ等間隔に保持しており、
　前記生体細胞凍結保存具は、棒状本体部と、前記棒状本体部の先端部に固定された細長い生体細胞保持部と、前記生体細胞保持部を被包した状態にて前記棒状本体部に装着可能な筒状部材とを備え、かつ、前記生体細胞凍結保存具は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着された状態における全長が、隣り合う前記有底管の外底面間距離より短く、前記ケーンに保持された各有底管に挿入可能な長さとなっており、
　前記ケーンは、細長いケーン本体部を備え、前記有底管の挟持部は、前記ケーン本体部の側部より前方に延び、かつ向かい合う延出部により形成されており、
　前記有底管は、上端開口を備え、複数本の前記生体細胞凍結保存具を挿入可能であり、さらに、前記上端開口は、前記ケーン本体部より前方に向かって、下降する傾斜開口となっており、
　前記生体細胞凍結保存具は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着され、前記筒状部材が下方となるように前記有底管に収納された状態において、前記筒状部材および前記棒状本体部の下部は、前記有底管に収納され、前記棒状本体部の上部が露出した状態となる生体細胞凍結保存用具。
図１は、本発明の実施例の生体細胞凍結保持用具の正面図である。 図２は、図１に示した生体細胞凍結保持用具の右側面図である。 図３は、図１に示した生体細胞凍結保持用具の背面図である。 図４は、本発明の実施例の生体細胞凍結保持用具の縦断面を説明するための説明図である。 図５は、本発明の生体細胞凍結保持用具に用いられる複数本の生体細胞凍結保存具を収納した状態の有底管の拡大正面図である。 図６は、本発明の生体細胞凍結保持用具に用いられる複数本の生体細胞凍結保存具を収納した状態の有底管の平面状態を説明するための説明図である。 図７は、図１に示した生体細胞凍結保存具に用いられている有底管を保持したケーンの正面図である。 図８は、図１に示した生体細胞凍結保存具に用いられている有底管の拡大正面図である。 図９は、図８に示した有底管の右側面図である。 図１０は、図１に示した生体細胞凍結保存具に用いられている生体細胞凍結保存具の拡大正面図である。 図１１は、図１０のＡ－Ａ線断面図である。 図１２は、筒状部材を取り外した状態の生体細胞凍結保存具の拡大正面図である。 図１３は、図１２に示した筒状部材を取り外した状態の生体細胞凍結保存具の底面図である。 図１４は、図１２に示した筒状部材を取り外した状態の生体細胞凍結保存具の拡大左側面図である。 図１５は、図１２に示した筒状部材を取り外した状態の生体細胞凍結保存具の拡大右側面図である。 図１６は、本発明の生体細胞凍結保持用具を収納した状態のキャニスターの正面図である。 図１７は、図１６に示したキャニスターを複数個収納した状態の凍結保存用タンクを説明するための説明図である。
　本発明の生体細胞凍結保存用具を図面に示す実施例を用いて説明する。
　本発明の生体細胞凍結保存用具１は、液化冷媒が収容された凍結保存用タンクに収納される生体細胞凍結保存用具である。生体細胞凍結保存用具１は、４本の有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）と、４本の有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の挟持部１１，１２，１３，１４を備えるケーン２と、少なくとも４本以上の細長い生体細胞凍結保存具４とを備える。ケーン２は、４本の有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）を直列かつほぼ等間隔に保持している。生体細胞凍結保存具４は、棒状本体部４１と、棒状本体部４１の先端部に固定された細長い生体細胞保持部４２と、生体細胞保持部４２を被包した状態にて棒状本体部４１に装着可能な筒状部材５０とを備える。生体細胞凍結保存具４は、筒状部材５０が棒状本体部４１に装着された状態における全長が、隣り合う有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の外底面間距離（Ｌ１）より短く、ケーン２に保持された各有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）に挿入可能な長さとなっている。ケーン２は、細長いケーン本体部２１を備え、有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の挟持部１１，１２，１３，１４は、ケーン本体部２１の側部より前方に延び、かつ向かい合う延出部により形成されている。有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）は、上端開口３３を備え、複数本の生体細胞凍結保存具４を挿入可能であり、さらに上端開口３３は、ケーン本体部２１より前方に向かって、下降する傾斜開口となっている。生体細胞凍結保存具４は、筒状部材５０が棒状本体部４１に装着され、筒状部材５０が下方となるように有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）に収納された状態において、筒状部材５０および棒状本体部４１の下部は、有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）に収納され、棒状本体部４１の上部が露出した状態となるものとなっている。
　特に、この実施例の細胞凍結保存用具１は、卵凍結保存用具であり、生体細胞保持部材４２は、卵保持部となっている。なお、本発明の細胞凍結保存用具は、胚などの卵、卵子、***、造血幹細胞、多能性幹細胞等の幹細胞などの細胞、特に上記のような生体細胞を凍結保存するために用いることができる。
　この実施例の生体細胞凍結保存用具１は、図１ないし図３に示すように、４本の有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）と、４本の有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の挟持部１１，１２，１３，１４を備えるケーン２と、複数本の細長い生体細胞凍結保存具４とを備える。
　ケーン２は、図１ないし図４および図７に示すように、略半筒状に形成されたケーン本体部２１と、有底管３を挟持するための挟持部１１，１２，１３，１４とを備える。挟持部１１，１２，１３，１４は、ケーン本体部２１の側部より前方に延び、かつ向かい合う延出部により形成されている。具体的には、挟持部１１，１２，１３，１４を形成する延出部は、所定長ケーン本体部２１の軸方向に延びかつケーン本体部２１の中心方向に湾曲した向かい合う２つの湾曲延出部により形成されている。
　また、ケーン２は、挟持部１１，１２，１３，１４を形成する向かい合う延出部間に設けられた空隙部と、挟持部１１，１２，１３，１４が形成された部分のケーン本体部２１に設けられた開口部１１ａ，１２ａ，１３ａ，１４ａを備えている。
　さらに、この実施例では、ケーン２は、ケーン本体部２１の上端に設けられ、前方に突出する上端突出部２２と、ケーン本体部２１の下端に設けられ、前方に突出する下端突出部２３とを備えている。また、この実施例では、ケーン２は、４つの有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）を個々に挟持する４つの挟持部１１，１２，１３，１４を備えている。
　ケーン２（生体細胞凍結保存用具１）の全長は、２７０～３００ｍｍであることが好ましく、特に、２８０～２９０ｍｍであることが好ましい。ケーン２は、耐寒性材料、例えば、アルミニウムなどの金属、耐寒性合成樹脂などにより形成される。そして、図１６に示すように、ケーン２（生体細胞凍結保存用具１）の全長は、使用されるキャニスター７の筒状収納部７６（具体的には、中空部７７）の全長より短いものとなっている。このため、ケーン２が、その底部が筒状収納部７６の底板部材７８に当接する状態にて筒状収納部７６に収納可能である。また、図１６に示すように、ケーン２の上端突出部２２が、筒状収納部７６の開口縁部に懸架するように、筒状収納部７６に収納可能である。また、ケーン２（生体細胞凍結保存用具１）の全長は、キャニスター７の筒状収納部７６の深さより、２～１０ｍｍ短いことが好ましい。
　この実施例の生体細胞凍結保存用具１では、ケーン２に、４本の有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）が保持されている。ケーン２は、４本の有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）を、直列かつほぼ等間隔に保持している。このため、上下に隣り合う有底管３の外底面間距離Ｌ１はほぼ等しいものとなっている。さらに、この実施例では、最も上方に位置する有底管３ａの外底面とケーン２の上端突出部２２の下面間の距離は、上記の上下方向に隣り合う有底管３の外底面間距離Ｌ１とほぼ等しいものとなっている。外底面間距離Ｌ１は、６５～７５ｍｍであることが好ましく、特に、６７～７３ｍｍであることが好ましい。
　有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）は、図１ないし図６、図８および図９に示すように、筒状本体部３１，筒状本体部３１の下端に設けられた底板部３２，筒状本体部３１の上端に設けられた上端開口３３を備える。有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）は、複数本の生体細胞凍結保存具４を挿入可能である。さらに上端開口３３は、ケーン本体部２１より前方に向かって、下降する傾斜開口となっている。有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）における上端開口３３の有底管３の中心軸Ｘに対する傾斜角度Ｒ（図９）は、２０～６０度であることが好ましく、特に、３０～５０度であることが好ましい。
　また、図７に示すように、ケーン本体部２１より前方に向かって、下降する傾斜開口となっている上端開口３３の下端３３ａは、挟持部１１，１２，１３，１４を形成する向かい合う延出部間に設けられた空隙部の上方に位置することが好ましい。特に、図７に示す実施例のように、傾斜開口となっている上端開口３３の下端３３ａは、挟持部１１，１２，１３，１４を形成する向かい合う延出部間に設けられた空隙部の中央部上方に位置することが好ましい。
　有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）としては、筒状部材５０が棒状本体部４１に装着された状態の生体細胞凍結保存具４を４本以上収納可能であることが好ましい。この実施例では、図６に示すように、５本の生体細胞凍結保存具４を収納可能である。
　有底管３の全長としては、４５～５５ｍｍが好ましい。また、有底管３の外底面から上端開口３３の下端３３ａまでの距離は、３５～４５ｍｍであることが好ましい。また、有底管３の内径は、７～９ｍｍであることが好ましい。
　有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の上端開口３３の下端３３ａと、上方に隣り合う有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の外底面間の距離（Ｌ３、図１参照）は、２５ｍｍ～３５ｍｍであることが好ましく、特に、２７～３３ｍｍであることが好ましい。
　有底管３は、収納した生体細胞凍結保存具４を有底管３の側部外方より視認可能であることが好ましい。有底管は、耐寒性を有する透明もしくは半透明の樹脂により形成することが好ましい。
　また、有底管３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄは、それぞれの挟持部１１，１２，１３，１４の形成部分に設けられた開口部１１ａ，１２ａ，１３ａ，１４ａを閉鎖するようにケーン２に装着されている。
　さらに、この実施例の生体細胞凍結保存用具１では、図１ないし図４および図７に示すように、ケーン２の挟持部１１，１２，１３，１４および挟持部１１，１２，１３，１４により挟持された有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）に巻き回され、有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の移動を規制する帯状粘着性テープ１５，１６，１７，１８を備えている。
　具体的には、ケーン２は、上述したように、挟持部１１，１２，１３，１４を形成する向かい合う延出部間に設けられた空隙部と、挟持部１１，１２，１３，１４が形成された部分のケーン本体部２１に設けられた開口部１１ａ，１２ａ，１３ａ，１４ａを備えている。帯状粘着性テープ１５，１６，１７，１８は、挟持部１１，１２，１３，１４を形成する向かい合う延出部の外面、空隙部および開口部において露出する有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の外面に貼着している。これにより、ケーン２内での有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の離脱、上下方向への移動を確実に規制している。
　帯状粘着性テープ１５，１６，１７，１８としては、セロファンテープ、ビニルテープ、ポリエステルテープ、ポリアミドテープ、ポリオレフィンテープ（例えばポリエチレンテープ）などを基材とした各種樹脂製粘着テープが好適に使用される。透明の他、耐水性を有する材料が使用できる。帯状粘着性テープ１５，１６，１７，１８としては、有底管の視認性を阻害しない光透過性を有することが好ましく、特に、透明であることが好ましい。
　生体細胞凍結保存具４は、図１０ないし図１５に示すように、棒状本体部４１と、棒状本体部４１の先端部に固定された細長い生体細胞保持部４２とを備える保存具本体４０と、生体細胞保持部４２を被包した状態にて棒状本体部４１に装着可能な筒状部材５０とを備える。
　生体細胞凍結保存具４は、筒状部材５０が棒状本体部４１に装着された状態における全長が、隣り合う有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の外底面間距離（Ｌ１）より短く、ケーン２に保持された各有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）に挿入可能な長さとなっている。生体細胞凍結保存具４は、筒状部材５０が棒状本体部４１に装着され、筒状部材５０が下方となるように有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）に収納された状態において、筒状部材５０および棒状本体部４１の下部は、有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）に収納され、棒状本体部４１の上部が露出した状態となるものとなっている。
　生体細胞凍結保存具４は、筒状部材５０が棒状本体部４１に装着され、筒状部材５０が下方となるように有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）に収納された状態において、棒状本体部４１の上端と上方に位置する有底管３（３ａ，３ｂ，３ｃ，３ｄ）の外底面との距離Ｌ２（図１参照）が、３ｍｍ～８ｍｍとなるものであることが好ましく、特に、４～７ｍｍが好ましい。
　生体細胞凍結保存具４は、筒状部材５０が棒状本体部４１に装着された状態における全長が、上述した隣り合う有底管３の外底面間距離Ｌ１より短く、かつ、６０～７０ｍｍであることが好ましく、特に、６３～６８ｍｍであることが好ましい。生体細胞凍結保存具４の筒状部材５０の全長は、３０～４０ｍｍであることが好ましく、特に、３２～３８ｍｍであることが好ましい。
　保存具本体４０は、図１２ないし図１５に示すように、棒状本体部４１と、棒状本体部４１の先端部に固定された細長い生体細胞保持部４２とを備えている。
　棒状本体部４１は、生体細胞保持部４２の一端を保持している。棒状本体部４１の長さとしては、３０～５０ｍｍ程度が好適であり、３５～４５ｍｍがより好ましい。棒状本体部が、角柱状の場合、幅としては、１．５～３．０ｍｍが好適であり、特に、１．７～２．５ｍｍが好適である。また、厚さも、１．５～３．０ｍｍが好適であり、特に、１．７～２．５ｍｍが好適である。棒状本体部４１が、円柱状の場合、外径は、１．５～３．０ｍｍが好適であり、特に、１．７～２．５ｍｍが好適である。
　そして、この実施例の生体細胞凍結保存具４では、棒状本体部４１の先端に環状リブ４４が設けられている。環状リブ４４は、棒状本体部より、０．３～０．７ｍｍ程度大きいことが好ましい、環状リブが角柱状の場合、幅としては、１．３～３．７ｍｍが好適であり、特に、２．０～３．０ｍｍが好適である。また、厚さも、１．３～３．７ｍｍが好適であり、特に、２．０～３．０ｍｍが好適である。環状リブ４４が円柱状の場合、外径は、１．３～３．７ｍｍが好適であり、特に、２．０～３．０ｍｍが好適である。
　そして、この実施例の生体細胞凍結保存具４では、環状リブ４４の先端面より前方に延びるテーパー部４６が設けられている。テーパー部４６は、先端に向かって縮径している。さらに、テーパー部４６よりより前方に延びる生体細胞保持部の保持部４３が設けられている。保持部４３は、先端に向かって肉薄となり、丸みを帯びた先端となっている。この実施例の生体細胞凍結保存具４では、生体細胞保持部４２の一端（基端）は、保持部４３内に位置し、固定されている。
　この実施例の生体細胞凍結保存具４では、棒状本体部４１の後端部４５は、膨出部となっており、その表面には、マーカーが設けられている。マーカーは、棒状本体部４１の生体細胞保持部４２の上面側となる部位に付されている。
　棒状本体部４１は、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート）、ポリオレフィン（例えば、ポリエチレン、超高分子量ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン－プロピレン共重合体、エチレン－酢酸ビニル共重合体）、スチレン系樹脂（例えば、ポリスチレン、メタクリレート－スチレン共重合体、メタクリレート－ブチレン－スチレン共重合体）、ポリアミド（例えば、６ナイロン，６６ナイロン）、ポリサルホン、フッ素樹脂、ポリイミド等の耐寒性樹脂が使用され、特に、液体窒素の温度に耐え得るものが好ましい。
　生体細胞保持部４２は、可撓性かつ透明性かつ耐寒性（具体的には、液体窒素耐性）材料により形成されており、この実施例では、細長い平坦シート状のものとなっている。生体細胞保持部４２は、生体細胞（例えば、卵）の付着作業を容易にするために、光透過性、好ましくは、透明性を有する平坦シート状のものが好ましい。特に、無色透明の平坦シートが好ましい。さらには、可撓性を有するものであってもよい。
　生体細胞保持部４２の先端部４７は、中央が頂点となった三角形状となっている。また、先端部４７には、マーカーが設けられている。マーカーは、生体細胞保持部４２の先端部の一方の表面（具体的には、吸水シートまたはベース部の表面）に、有色を付する（油性インクで着色する）ことにより形成される。生体細胞保持部４２の突出長さ（保持部４３より突出する長さ）は、１０～２０ｍｍ程度、幅０．５～１．５ｍｍ程度、厚さが０．０１～０．５ｍｍ程度のものが用いられる。
　生体細胞保持部４２に使用されるシート形成材料としては、光透過性を有する樹脂シート、例えば、３－フッ化ポリエチレン、低密度ポリエチレン、中密度ポリエチレン、高密度ポリエチレン、ポリカーボネート、ナイロン、ポリスルホン、ポリエステル（例えば、ＰＥＴ）、ポリスチレン、ポリイミド、超高分子量ポリエチレン、エチレン－酢酸ビニル共重合体などの合成樹脂からなるフィルムあるいはそれらの積層体が挙げられる。特に、耐寒性、具体的には、液体窒素耐性材料、言い換えれば、液体窒素に接触しても脆化しないものが好ましい。
　筒状部材５０は、図１０および図１１に示すように、生体細胞保持部４２を被包可能に保存具本体４０に着脱自在に取り付けられるものであり、両端が開口している。筒状部材５０は、耐寒性材料により形成されている。なお、筒状部材５０の一端部内（先端部内）に通気性封止部材を収納したものであってもよい。
　さらに、この実施例の筒状部材５０では、筒状本体５１の先端部には、錘５２が収納されている。錘５２を設けることにより、液体窒素タンクに投入された筒状部材５０およびそれが装着された生体細胞凍結保存具４は、その先端側が下方を確実に向くものとなる。また、筒状部材５０は、生体細胞保持部４２に接触することなく被包できる内径および長さを備えている。また、筒状本体５１は、後端（開口部）５３の外面に、開口部の認識を容易とするための着色部を備えていてもよい。
　収納部材５０の全長は、２５～４５ｍｍ程度が好適であり、３０～４０ｍｍがより好ましい。また、収納部材５０の外径は、２～５ｍｍが好適であり、２．５～３．５ｍｍがより好ましい。
　収納部材５０の形成材料としては、例えば、３－フッ化ポリエチレン、低密度ポリエチレン、中密度ポリエチレン、高密度ポリエチレン、ポリカーボネート、ナイロン、ポリスルホン、ポリエステル（例えば、ＰＥＴ）、ポリスチレン、ポリイミド、超高分子量ポリエチレン、エチレン－酢酸ビニル共重合体などの合成樹脂からなるフィルムあるいはそれらの積層体が挙げられる。特に、液体窒素耐性材料、言い換えれば、液体窒素に接触しても脆化しないものが好ましい。
　そして、本発明の生体細胞凍結保存用具１は、図１６に示すように、キャニスター７に収納し、さらに、図１７に示すように、キャニスター７は、液化冷媒（通常、液体窒素）が充填された凍結保存用タンクに収納される。
　キャニスター７としては、例えば、図１７に示すようなものが使用される。このキャニスター７は、筒状収納部７６と、筒状収納部７６に下部が固定されたシャフト部７０とを備える。筒状収納部７６は、円筒部材（中空部）７７と、円筒部材７７の下部に固定された底板部材７８とを備え、内部に中空部を有するものとなっている、底板部材７８は、液化冷媒（液体窒素）が流通用の多数の開口を有している。
　シャフト部７０は、シャフト本体７１と、上端部に設けられた上部懸架部７２と、下部に設けられた下部懸架部７３とを備える。
　凍結保存用タンク８としては、例えば、図１６に示すようなものが使用される。この凍結保存用タンク８は、開口部の周縁部から上方に突出する環状突出部８２を備える。キャニスター７の上部懸架部７２および下部懸架部７３は、この環状突出部８２に懸架可能となっている。
　凍結保存用タンク８は、内部に収納空間８０を有する容器本体８１と、容器本体８１の開口部に取り付けられた開口部形成部材を備えている。そして、開口部形成部材は、円盤状本体部と、円盤状本体部の内縁部（開口部の周縁部）が上方に突出した環状突出部８２を備えており、この環状突出部８２に、上述したキャニスター７の上部懸架部、下部懸架部が懸架可能となっている。そして、この凍結保存用タンク８では、収納空間８０の開口部より所定ほぼ同一内径にて延びる小径部と、小径部の下部には、内径が広がった拡径部が設けられている。この拡径部が、キャニスター７の筒状収納部を収納する部分となっている。また、凍結保存用タンク８は、収納空間８０の底面より突出する膨出部８５を備えている。
　また、凍結保存用タンク８の容器本体８１は、外層部８４と、収納空間８０を形成する内層部８６と、外層部８４と内層部８６間に充填された断熱層８３とを有している。そして、保管時には、生体細胞凍結凍結保存用タンク８の開口部には、蓋部材（図示せす）が、被嵌され、開口部が閉塞されるとともに、上部懸架部も外部に露出しないものとなる。
　次に、本発明の生体細胞凍結保存用具１の使用方法について説明する。
　この説明では、生体細胞である卵子を凍結保存する場合を例にとり説明する。
　まず、ピペットの先端に卵子を採取し、卵子の細胞内液を平衡液に置換する作業を行い、さらに、細胞外液をガラス化液に置換する作業を行う。そして、顕微鏡下において、本発明の生体細胞凍結保存用具１に用いられる生体細胞凍結保存具４の生体細胞保持部４２に卵子を少量のガラス化液とともに配置させ、その表面に付着させる。卵子が付着した生体細胞凍結保存具４の生体細胞保持部４２をあらかじめ準備しておいた液体窒素に浸漬し凍結（ガラス化）させる。そして、筒状部材４内に、卵子が付着した生体細胞保持部４２を挿入し、筒状部材を生体細胞凍結保存具４に装着する。そして筒状部材を装着した生体細胞凍結保存具４を、生体細胞凍結保存用具１のケーン２に保持された有底管内に挿入する。そして、生体細胞凍結保存用具１をキャニスター７の筒状収納部７６（中空部７７）に挿入した後、キャニスター７を凍結保存用タンク８に入れ保存する。
　本発明の生体細胞凍結保存用具は、液化冷媒が収容された凍結保存用タンクに収納される生体細胞凍結保存用具である。生体細胞凍結保存用具は、４本の有底管と、４本の有底管の挟持部を備えるケーンと、少なくとも４本以上の細長い生体細胞凍結保存具とを備える。ケーンは、４本の有底管を直列かつほぼ等間隔に保持している。生体細胞凍結保存具は、棒状本体部と、棒状本体部の先端部に固定された細長い生体細胞保持部と、生体細胞保持部を被包した状態にて棒状本体部に装着可能な筒状部材とを備える。生体細胞凍結保存具は、筒状部材が棒状本体部に装着された状態における全長が、隣り合う有底管の外底面間距離より短く、ケーンに保持された各有底管に挿入可能な長さとなっている。ケーンは、細長いケーン本体部を備え、有底管の挟持部は、ケーン本体部の側部より前方に延び、かつ向かい合う延出部により形成されている。有底管は、上端開口を備え、複数本の生体細胞凍結保存具を挿入可能であり、さらに、上端開口は、ケーン本体部より前方に向かって、下降する傾斜開口となっている。生体細胞凍結保存具は、筒状部材が棒状本体部に装着され、筒状部材が下方となるように有底管に収納された状態において、筒状部材および棒状本体部の下部は、有底管に収納され、棒状本体部の上部が露出した状態となるものとなっている。
　この生体細胞凍結保存用具は、１つのケーンにほぼ等間隔に保持された４つの有底管を備える。用いられる生体細胞凍結保存具は、筒状部材が棒状本体部に装着された状態における全長が、隣り合う有底管の外底面間距離より短い。各有底管は、生体細胞凍結保存具を複数本収納可能であるので、１つの生体細胞凍結保存用具は、多くの生体細胞を保有する生体細胞凍結保存具を収納可能である。このため、１つのキャニスター、１つの凍結保存用タンクにて、多くの生体細胞を保有する生体細胞凍結保存具を保存可能である。また、有底管への生体細胞凍結保存具の挿入操作および取り出し操作も良好に行うことができる。
　本発明の生体細胞凍結保存用具は、以下のものである。
　（１）　液化冷媒が収容された凍結保存用タンクに収納される生体細胞凍結保存用具であって、
　前記生体細胞凍結保存用具は、４本の有底管と、前記４本の有底管の挟持部を備えるケーンと、少なくとも４本以上の細長い生体細胞凍結保存具とを備え、
　前記ケーンは、前記４本の有底管を直列かつほぼ等間隔に保持しており、
　前記生体細胞凍結保存具は、棒状本体部と、前記棒状本体部の先端部に固定された細長い生体細胞保持部と、前記生体細胞保持部を被包した状態にて前記棒状本体部に装着可能な筒状部材とを備え、かつ、前記生体細胞凍結保存具は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着された状態における全長が、隣り合う前記有底管の外底面間距離より短く、前記ケーンに保持された各有底管に挿入可能な長さとなっており、
　前記ケーンは、細長いケーン本体部を備え、前記有底管の挟持部は、前記ケーン本体部の側部より前方に延び、かつ向かい合う延出部により形成されており、
　前記有底管は、上端開口を備え、複数本の前記生体細胞凍結保存具を挿入可能であり、さらに、前記上端開口は、前記ケーン本体部より前方に向かって、下降する傾斜開口となっており、
　前記生体細胞凍結保存具は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着され、前記筒状部材が下方となるように前記有底管に収納された状態において、前記筒状部材および前記棒状本体部の下部は、前記有底管に収納され、前記棒状本体部の上部が露出した状態となる生体細胞凍結保存用具。
　この生体細胞凍結保存用具は、１つのケーンにほぼ等間隔に保持された４つの有底管を備える。用いられる生体細胞凍結保存具は、筒状部材が棒状本体部に装着された状態における全長が、隣り合う有底管の外底面間距離より短い。各有底管は、生体細胞凍結保存具を複数本収納可能であるので、１つの生体細胞凍結保存用具は、多くの生体細胞を保有する生体細胞凍結保存具を収納可能である。このため、１つのキャニスター、１つの凍結保存用タンクにて、多くの生体細胞を保有する生体細胞凍結保存具を保存可能である。また、有底管への生体細胞凍結保存具の挿入操作および取り出し操作も良好に行うことができる。
　また、上記の実施態様は、以下のものであってもよい。
　（２）　前記生体細胞凍結保存用具は、前記ケーンの前記挟持部および前記挟持部により挟持された有底管に巻き回され、前記有底管の移動を規制する帯状粘着性テープを備えている上記（１）に記載の生体細胞凍結保存用具。
　（３）　前記ケーンは、前記挟持部を形成する向かい合う延出部間に設けられた空隙部と、前記挟持部が形成された部分の前記ケーン本体部に設けられた開口部を備え、前記帯状粘着性テープは、前記向かい合う延出部の外面、前記空隙部および前記開口部において露出する前記有底管の外面に貼着している上記（２）に記載の生体細胞凍結保存用具。
　（４）　前記生体細胞凍結保存具は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着され、前記筒状部材が下方となるように前記有底管に収納された状態において、前記棒状本体部の上端と上方に位置する前記有底管の外底面との距離が、３ｍｍ～８ｍｍである上記（１）ないし（３）に記載の生体細胞凍結保存用具。
　（５）　前記ケーンは、前記４つの有底管を個々に挟持する４つの挟持部を備えている上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。
　（６）　上下方向に隣り合う前記有底管の外底面間距離は、６５～７５ｍｍである上記（１）ないし（５）のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。　
　（７）　前記生体細胞凍結保存具の前記筒状部材の全長は、３０～４０ｍｍである上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。
　（８）　前記有底管の上端開口の下端と、上方に隣り合う前記有底管の外底面間の距離は、２５ｍｍ～３５ｍｍである上記（１）ないし（７）のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。　
　（９）　前記ケーンは、前記ケーン本体部の上端に設けられ、前方に突出する上端突出部と、前記ケーン本体部の下端に設けられ、前方に突出する下端突出部とを備えている上記（１）ないし（８）のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。
　（１０）　最も上方に位置する前記有底管の外底面と前記ケーンの前記上端突出部の下面間の距離は、上下方向に隣り合う前記有底管の外底面間距離とほぼ同じとなっている上記（９）に記載の生体細胞凍結保存用具。　
　（１１）　前記生体細胞凍結保存具は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着され、前記筒状部材が下方となるように最も上方に位置する前記有底管に収納された状態において、前記棒状本体部の上端と前記上端突出部の下面間の距離が、３ｍｍ～８ｍｍである上記（９）または（１０）に記載の生体細胞凍結保存用具。
　（１２）　前記有底管は、収納した前記生体細胞凍結保存具を前記筒状部材の側部外方より視認可能である上記（１）ないし（１１）のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。
　（１３）　前記有底管は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着された状態の前記生体細胞凍結保存具を４本以上収納可能である上記（１）ないし（１２）のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。

Claims (13)

  1. 液化冷媒が収容された凍結保存用タンクに収納される生体細胞凍結保存用具であって、
    　前記生体細胞凍結保存用具は、４本の有底管と、前記４本の有底管の挟持部を備えるケーンと、少なくとも４本以上の細長い生体細胞凍結保存具とを備え、
    　前記ケーンは、前記４本の有底管を直列かつほぼ等間隔に保持しており、
    　前記生体細胞凍結保存具は、棒状本体部と、前記棒状本体部の先端部に固定された細長い生体細胞保持部と、前記生体細胞保持部を被包した状態にて前記棒状本体部に装着可能な筒状部材とを備え、かつ、前記生体細胞凍結保存具は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着された状態における全長が、隣り合う前記有底管の外底面間距離より短く、前記ケーンに保持された各有底管に挿入可能な長さとなっており、
    　前記ケーンは、細長いケーン本体部を備え、前記有底管の挟持部は、前記ケーン本体部の側部より前方に延び、かつ向かい合う延出部により形成されており、
    　前記有底管は、上端開口を備え、複数本の前記生体細胞凍結保存具を挿入可能であり、さらに、前記上端開口は、前記ケーン本体部より前方に向かって、下降する傾斜開口となっており、
    　前記生体細胞凍結保存具は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着され、前記筒状部材が下方となるように前記有底管に収納された状態において、前記筒状部材および前記棒状本体部の下部は、前記有底管に収納され、前記棒状本体部の上部が露出した状態となることを特徴とする生体細胞凍結保存用具。
  2. 前記生体細胞凍結保存用具は、前記ケーンの前記挟持部および前記挟持部により挟持された有底管に巻き回され、前記有底管の移動を規制する帯状粘着性テープを備えている請求項１に記載の生体細胞凍結保存用具。
  3. 前記ケーンは、前記挟持部を形成する向かい合う延出部間に設けられた空隙部と、前記挟持部が形成された部分の前記ケーン本体部に設けられた開口部を備え、前記帯状粘着性テープは、前記向かい合う延出部の外面、前記空隙部および前記開口部において露出する前記有底管の外面に貼着している請求項２に記載の生体細胞凍結保存用具。
  4. 前記生体細胞凍結保存具は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着され、前記筒状部材が下方となるように前記有底管に収納された状態において、前記棒状本体部の上端と上方に位置する前記有底管の外底面との距離が、３ｍｍ～８ｍｍである請求項１ないし３に記載の生体細胞凍結保存用具。
  5. 前記ケーンは、前記４つの有底管を個々に挟持する４つの挟持部を備えている請求項１ないし４のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。
  6. 上下方向に隣り合う前記有底管の外底面間距離は、６５～７５ｍｍである請求項１ないし５のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。　
  7. 前記生体細胞凍結保存具の前記筒状部材の全長は、３０～４０ｍｍである請求項１ないし６のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。
  8. 　前記有底管の上端開口の下端と、上方に隣り合う前記有底管の外底面間の距離は、２５ｍｍ～３５ｍｍである請求項１ないし７のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。　
  9. 　前記ケーンは、前記ケーン本体部の上端に設けられ、前方に突出する上端突出部と、前記ケーン本体部の下端に設けられ、前方に突出する下端突出部とを備えている請求項１ないし８のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。
  10. 　最も上方に位置する前記有底管の外底面と前記ケーンの前記上端突出部の下面間の距離は、上下方向に隣り合う前記有底管の外底面間距離とほぼ同じとなっている請求項９に記載の生体細胞凍結保存用具。　
  11. 　前記生体細胞凍結保存具は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着され、前記筒状部材が下方となるように最も上方に位置する前記有底管に収納された状態において、前記棒状本体部の上端と前記上端突出部の下面間の距離が、３ｍｍ～８ｍｍである請求項９または１０に記載の生体細胞凍結保存用具。
  12. 前記有底管は、収納した前記生体細胞凍結保存具を前記筒状部材の側部外方より視認可能である請求項１ないし１１のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。
  13. 前記有底管は、前記筒状部材が前記棒状本体部に装着された状態の前記生体細胞凍結保存具を４本以上収納可能である請求項１ないし１２のいずれかに記載の生体細胞凍結保存用具。
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