WO2020139142A1 - Тест-система для определения ферментальной активности бактерий по аммиаку - Google Patents

Тест-система для определения ферментальной активности бактерий по аммиаку Download PDF

Info

Publication number
WO2020139142A1
WO2020139142A1 PCT/RU2019/000906 RU2019000906W WO2020139142A1 WO 2020139142 A1 WO2020139142 A1 WO 2020139142A1 RU 2019000906 W RU2019000906 W RU 2019000906W WO 2020139142 A1 WO2020139142 A1 WO 2020139142A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
bacteria
enzymatic activity
determining
test system
ammonia
Prior art date
Application number
PCT/RU2019/000906
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Марина Александровна ДМИТРИЕНКО
Евгений Матвеевич АКСЕНОВ
Вадим Сергеевич ДМИТРИЕНКО
Елена Олеговна КОЛОМИНА
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Ассоциация Медицины и Аналитики" (ООО "АМА")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Ассоциация Медицины и Аналитики" (ООО "АМА") filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Ассоциация Медицины и Аналитики" (ООО "АМА")
Priority to EP19905217.6A priority Critical patent/EP3904497B1/de
Publication of WO2020139142A1 publication Critical patent/WO2020139142A1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/46—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of cellular or enzymatic activity or functionality, e.g. cell viability
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/34—Measuring or testing with condition measuring or sensing means, e.g. colony counters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/58—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving urea or urease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G01N33/525—Multi-layer analytical elements
    • G01N33/526—Multi-layer analytical elements the element being adapted for a specific analyte
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses

Definitions

  • Test system for determining the enzymatic activity of bacteria by ammonia.
  • the invention relates to medicine, in particular, to test systems for determining the enzymatic activity of bacteria by ammonia, namely the enzymatic activity of bacteria that cause periodontal disease, stomach, urogenital system of humans and animals.
  • the enzymatic activity of bacteria is widely used in medicine as an indicator of infection with various bacteria.
  • An example is the detection of H pylori in the human stomach by urease activity.
  • urease activity There is literature information that, depending on the biomaterial under study, other bacteria with enzymes that catalyze the reaction of cleavage of the substrate with the release of ammonia can be detected.
  • many microorganisms with urease activity and capable of causing an inflammatory process for example, Streptococcus sanguis, Bacteroides melaninogenicus, Prevotella melaninogenica, Actinomyces viscosus, can enter the microbial oral cavity.
  • urine samples are prepared in the wells of the microplate, the contents of the wells of the microplate are mixed, then the optical densities are measured by the photometric method at a wavelength of 620 nm on a microplate reader, the microplate is sealed with a film and the contents of the wells are thermostated for 1 h at 37 ° C, after which the contents of the wells are again mixed and the optical density of urine samples is measured, then a calibration curve is built and the urease activity of urine in U / L is calculated by the formula
  • UA (E / L) AO * 1 1655, where UA (E / L) - urease activity in (E / L);
  • AD is the difference in optical density of the experimental sample and the control sample after thermostating
  • 11655 is the conversion factor to urease activity.
  • the urease activity was determined as follows: in one of the wells of the microplate, an aqueous solution of urea with a phosphate buffer was added, in the other two, aqueous solutions of urea with a phosphate buffer containing urease with a known concentration of 5 and 10 U / L, respectively, were added, and the remaining wells An aqueous urea solution with phosphate buffer and oral fluid samples was added, then phenol / nitroprusside reagent and hypochlorite were added to all wells, after which the optical density was measured on a microplate reader at a wavelength of 546 nm and the urease concentration in the oral fluid samples in E / L was calculated.
  • a known set for laboratory diagnosis of infections (patent RU2553548 "Set for laboratory diagnosis of infections caused by Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum", IPC C12Q 1/02, published on 06/20/2015), which can be used for the cultivation and identification of urogenital mycoplasmas, in particular Mycoplasma hominis u Ureaplasma urealyticum for laboratory diagnosis of urogenital mycoplasmosis by detecting mycoplasmas in clinical material, for the semi-quantitative determination of the titer of the pathogen, as well as to determine their antibiotic sensitivity.
  • Such a kit contains a lyophilized transport medium for storing the biological material under study, a lyophilized growth medium for the detection of Mycoplasma hominis and / or Ureaplasma urealyticum and strips for the identification of Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum, for the semi-quantitative determination of the pathogen titer and for um um ies um ies ies ict omy in , which contains three types of strips, the first of which is used to identify Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum and to semi-quantify their titer, and part of the holes of the first type of strips, which are used to identify and determine the titer of Mycoplasma hominis, contain arginine, diamond blue and clarithromycin, the other part of the holes of this strip, which are designed to detect and determine the titer of Ureaplasma urealyticum, contains urea and lincomycin, the second type of strips
  • kits allows you to simultaneously detect Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum, evaluate their titer and determine sensitivity to a different spectrum of antibiotics, and different antibiotics are used for Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum.
  • test systems for determining the enzymatic activity of bacteria by ammonia for the detection of Helicobacter pylori bacteria for example, WO201 1112106, IPC C12Q1 / 58, publ. 15.09.2011; US2010028937, IPC C12M1 / 00; C12Q1 / 02, publ. 04.02.2010; W09319200, IPC C12Q1 / 00; C12Q1 / 04, publ.
  • test systems are based on constructive solutions that allow the study of biological material containing a small amount of the liquid phase (biopsy).
  • biopsy biological material containing a small amount of the liquid phase
  • the presence of a diffuse element reduces the sensitivity of such test systems and does not allow to determine the urease activity of other bacteria.
  • the studied biological material is placed on the sensitive layer of the reactive element, then the urea splits the sensitive layer. Through the viewing window, the final color change of the indicator layer is observed, according to which the presence of urease activity of the bacteria, for example Helicobacter pylori, is judged.
  • test system is characterized by a significant reaction time due to the fact that the layers of the reactive element are freely placed in the well. This leads to a loss of released ammonia, which in turn increases the time for determining the enzymatic activity of bacteria.
  • the objective of the invention is the creation of a test system for determining the enzymatic activity of bacteria by ammonia, which allows to achieve a technical result, which consists in reducing the time for determining the activity of enzymatic reactions and in expanding the scope by expanding the types of test samples.
  • the essence of the invention lies in the fact that in the test system for determining the enzymatic activity of bacteria by ammonia containing a substrate with a window for viewing the results, on which a reactive element is placed, consisting of an indicator layer that overlaps the window for viewing the results and a sensitive layer containing a substrate for detecting enzymatic activity; in addition, a fixing sheet with a hole for placing on the sensitive layer of the reactive element of the investigated biological material, the dimensions of which ensure the fixation of the sensitive layer, a cover sheet is placed on the fixing sheet, covered with a resealable fastening coating from the side facing the fixing sheet, while the surfaces of the substrate and the fixing sheet facing each other are connected by an adhesive layer, and the reactive element organized in such a way that the area of the sensitive layer, which is a semipermeable hydrophobic membrane, is larger than the area of the opaque indicator layer containing the indicator sensitive to ammonia, while the substrate, fixing and covering the explicit sheets are made of impermeable hydrophobic material, and their
  • the indicator layer of the reactive element may be made of a hydrophilic polymer material.
  • the hydrophilic polymer material is selected from the range of: paper, polyester fibers, polyvinyl alcohol film.
  • An ammonia sensitive indicator is selected from the range: pH indicators, Nessler reagent, chromium (II) chloride.
  • the impermeable hydrophobic material of which the substrate is made, the fixing and cover sheets are selected from the range: polypropylene, polyvinyl chloride, polyester.
  • the sensitive layer of the reactive element, which is a semipermeable hydrophobic membrane, is made of either polyethylene or polytetrafluoroethylene or polypropylene.
  • the substrate for detecting the enzymatic activity of the sensitive layer of the reactive element is selected from the series: urea, arginine, ornithine.
  • the resealable fastening coating is made of one-component adhesive, which is selected from the range: polyurethane, acetophenone, polyvinyl acetate, polyisobutylene
  • the adhesive layer by which the surfaces of the substrate and the fixing sheet are connected facing each other is made of a single-component adhesive, which is selected from the range of polyurethane, polyvinyl acetate, acornylate, polyisobutylene isochenic.
  • the cover sheet can be made with an arcuate front edge in the form of a tongue on one side.
  • the cover sheet from the side opposite the arcuate front edge can be attached with a layer of hot melt adhesive.
  • the cover sheet can be made either transparent or having a transparent zone corresponding to the size of the holes of the fixing sheet.
  • the main difference of the claimed test system is that the fixing sheet and the substrate are rigidly bonded to each other with an adhesive layer and the reactive element placed between them allows the formation of an ammonia chamber, which is released during targeted reactions, including the cleavage reaction of the substrate of the sensitive layer (urea, arginine, ornithine, depending on the bacteria being detected) and the interaction of ammonia with an indicator.
  • the small thickness of the fixing sheet, substrate and layers of the reactive element comprising from 50 to 300 microns, the size of the chamber is minimized sufficient for the fast interaction of ammonia with the indicator in this chamber, which allows you to reduce the reaction time to 5 minutes, while for analogs - from 15 minutes.
  • the thickness range of the fixing sheet, substrate and layers of the reactive element is due to the fact that material with a thickness of up to 50 ⁇ m is characterized by insufficient strength, and more than 300 ⁇ m will form too large a chamber and slow down the reaction between ammonia and the indicator.
  • the inventive test system provides the ability to analyze both semi-solid (biopsy) and liquid test biological materials (urine, saliva), which is also provided by the design of the test system. Protection of the indicator layer of the reactive element from ingress of the analyzed liquid is ensured by: hydrophobicity of the material from which the sensitive layer of the reactive element is made; and also that the area of the sensitive layer should be greater than the area of the indicator layer.
  • the indicator layer placed on the substrate sheet is covered with a sensitive layer on top, which provides protection against contact with the analyzed liquid.
  • the hydrophobic impermeable material of which the fixing sheet is made helps to remove excess fluid from the surface and prevent it from leaking into the reactive element.
  • the presence of a cover sheet in the test system ensures the tightness of the test system and, in addition, eliminates the drying of the biological material under study during the study.
  • the inventive test system does not require additional preparations before the study due to the fact that all necessary sufficient substances (indicator, substrate) are hermetically enclosed in the test system.
  • the invention is illustrated by the following graphic images.
  • Figure 1 Cross section of a test system.
  • Figure 2 A simplified view in disassembled state of the test system
  • the test system (Fig. 1) is a substrate 1, with a window for viewing the results 2.
  • an indicator layer of the reactive element On the substrate 1 there is a two-layer reactive element, an indicator layer of the reactive element 3, which overlaps the window for viewing the results 2.
  • a sensitive layer of the reactive element 4 is placed on the indicator the layer of the reactive element 3, while the area of the sensitive layer of the reactive element 4 is larger than the area of the indicator layer of the reactive element 3.
  • the fixing sheet 6 is fixed with an adhesive layer 5 with a hole for placement on the sensitive layer of the reactive element of the biological material under study 8 * whose dimensions provide the fixation of the sensitive layer of the reactive element 4.
  • a cover sheet 9 with a transparent zone 10 On the fixing sheet 6 by means of a resealable fixing coating 7, a cover sheet 9 with a transparent zone 10 is fixed.
  • the cover sheet 9 is fixed on one side by a layer of hot-melt adhesive 11, and on the other has a tongue 12 for gripping when opened and closed cover sheet 9.
  • test system The organization of the test system is illustrated in layers in FIG. 2, in which an axonometric view of the layers of the test system without an adhesive layer and a resealable adhesive coating is presented. In the assembled state, the test system is presented in Fig.Z.
  • the cover sheet 9 is opened using the tongue 12, and a sample of the biological material under study is placed in the window 8 of the fixing sheet 6 on the sensitive layer of the reactive element 4. Next, the placed sample of the biological material under study is tightly closed with the cover sheet 9 and the test is turned over. a system for observing a reaction in a window for viewing results 2. Wait 5 minutes and evaluate changing the color of the indicator sheet of the reactive element 3 in the window to view the results 2.
  • the enzymatic activity of bacteria that cause periodontal disease is determined by the color change of the indicator layer of the reactive element when placing the studied samples of mixed oral fluid. In the presence of urease-positive bacteria in the test samples, a red or raspberry stain appears on the surface of the indicator layer of the reactive element for 5 minutes.
  • the enzymatic activity of bacteria that cause a disease such as urolithiasis is determined by the color change of the indicator layer of the reactive element when placing urine samples on it. If there are bacteria Proteus mirabilis and Corynebacterium urealyticum in the studied samples, a red or raspberry stain appears on the surface of the indicator layer of the reactive element.
  • the enzymatic activity of bacteria that cause gynecological or urological diseases is determined as follows: in the presence of Mycoplasma and Ureaplasma bacteria in the test samples, a red or raspberry stain appears on the surface of the indicator layer of the reactive element within 5 minutes. Samples for research can serve:
  • test system design for determining the enzymatic activity of Mycoplasma by ammonia in a sample of the studied biological material - endocervical mucus.
  • the substrate, the fixing sheet, the cover sheet are made in the form of squares measuring 25x25 mm of polypropylene, the thickness of which is 250 ⁇ m.
  • the indicator layer of the reactive element is made of WHATMAN TYPE 1 filter paper, impregnated with a phenol red pH indicator, in the form of a 5x5 mm square 100 ⁇ m thick.
  • the sensitive layer of the reactive element is implemented in the form of a membrane of polyethylene terephthalate, on which arginine is deposited, which is a substrate of the determined activity of a complex of enzymes that break down arginine to ammonia, and is made in the form of a 10x10 mm square 150 ⁇ m thick.
  • the fixing sheet has a hole with a diameter of 5 mm for placement on the sensitive layer of the reactive element of the studied biological material - endocervical mucus.
  • the adhesive layer that connects the surfaces of the substrate and the fixing sheet facing each other is made of a single-component adhesive based on KIWOTHERM D 123 polyvinyl acetate.
  • the cover sheet is attached to the fixing sheet with LOCTITE DURO-TAK 4003 adhesive and has a transparent zone corresponding to the size of the opening of the fixing sheet 5 mm.
  • the window for viewing the results of the substrate is made in the form of a square measuring 5x5 mm.
  • the cover sheet is provided with a tongue on one side for easy opening of the test system and on the other hand is attached with a layer of LUNAMELT HS-3500 hot-melt adhesive to securely fix this sheet.
  • substitution of the substrate from arginine to urea or ornithine allows the study of other bacteria, for example, Proteus mirabilis, Corynebacterium urealyticum, Helicobacter pylori, Ureaplasma urealyticum, etc., using different types of test samples: liquid, semi-solid and solid.
  • the claimed test system allows you to expand the scope by expanding the types of test samples and reduce the time to determine the activity of enzymatic reactions.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложена тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку. Тест-система содержит подложку с реактивным элементом, фиксирующий лист на подложке с отверстием для размещения биологического материала, покровный лист на фиксирующем листе. Реактивный элемент состоит из содержащего индикатор чувствительного к аммиаку непрозрачного индикаторного слоя и содержащего субстрат для обнаружения ферментативной активности и представляющего собой полупроницаемую гидрофобную мембрану чувствительного слоя. При этом обращенные друг к другу поверхности подложки и фиксирующего листа соединены клеевым слоем, площадь чувствительного слоя элемента больше площади индикаторного слоя. Причём подложка, фиксирующий и покровный листы выполнены из непроницаемого гидрофобного материала, а их толщина, а также толщина каждого из слоев реактивного элемента составляет от 50 до 300 мкм. Изобретение обеспечивает сокращение времени определения активности ферментативных реакций и расширение исследуемых образцов.

Description

Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку.
Изобретение относится к медицине, в частности, к тест-системам для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку, а именно ферментативной активности бактерий, вызывающих заболевания пародонта, желудка, мочеполовой системы человека и животных.
Ферментативная активность бактерий широко используется в медицине, как показатель инфицированности различными бактериями. Примером служит обнаружение Н pylori в желудке человека по уреазной активности. Есть литературные сведения, что в зависимости от исследуемого биоматериала можно обнаружить и другие бактерии, обладающие ферментами, которые катализируют реакцию расщепления субстрата с выделением аммиака. Так, в микробном ротовой полости может входить множество микроорганизмов, обладающих уреазной активностью и способных вызвать воспалительный процесс, например, Streptococcus sanguis, Bacteroides melaninogenicus, Prevotella melaninogenica, Actinomyces viscosus. Кроме этого, в последние годы рассматривается существенная роль локальных инфекций уреазопродуцирующими микроорганизмами {Proteus mirabilis, Corynebacterium urealyticum, Ureaplasma urealyticum и др.) в возникновении аммоний- и кальций-фосфатных камней («инфекционный уролитиаз»). Инвазивные и цитотоксические свойства патогенных штаммов бактерий приводят к повреждению слизистых поверхностей мочевыводящих путей, а продукция уреазы способствует защелачиванию мочи и образованию струвитных конкрементов. Кроме образования камней в почках Ureaplasma urealyticum может быть причиной воспалительных заболеваний репродуктивной системы, обнаружить ее по уреазной активности можно с помощью дифференциально-диагностических сред. Похожим способом можно обнаружить другую бактерию, передающуюся половым путем- Mycoplasma. В случае данного микроорганизма определение происходит благодаря комплексу ферментов, разлагающих аргинин до аммиака.
Известен способ определения уреазной активности («Урология и нефрология», 1997, N°4, с.13-14), заключающийся в том, что в две пробирки помещают по 2 мл исследуемой мочи. В пробирку N2I добавляют 0,4 мл 10% хлористого кальция, перемешивают, измеряют экстинкцию (оптическую плотность) относительно воды при 691 нм на КФК-3. В пробирку N«2 добавляют 0,4 мл дистиллированной воды. Обе пробирки термостатируют при 37°С в течение часа. Проводят измерение пробирок N°1 и N°2 сразу после термостатирования при тех же условиях. Полученный после расчетов показатель уреазной активности сравнивают с показателем нормы (0-50 ммоль/л). При его превышении говорят о присутствии уреазообразующей микрофлоры, создающей благоприятные условия для кристаллообразования и способствующие росту камней, что может привести к мочекаменной болезни.
Известно использование микропланшетов для подготовки проб исследуемой биологической жидкости (патент RU2521201 «Способ раннего выявления инфекции мочевыводящих путей у детей 3-7 лет», МПК G01N 33/52, опубл. 27.06.2014). При реализации способа подготавливают пробы мочи в лунках микропланшета, содержимое лунок микропланшета перемешивают, затем измеряют значения оптических плотностей фотометрическим методом при длине волны 620 нм на микропланшетном ридере, микропланшет заклеивают пленкой и содержимое лунок термостатируют в течение 1 ч при температуре 37°С, после чего содержимое лунок снова перемешивают и измеряют оптическую плотность проб мочи, далее строят калибровочную кривую и вычисляют уреазную активность мочи в Е/л по формуле
УА(Е/л)=АО* 1 1655, где УА (Е/л) - уреазная активность в (Е/л);
AD - разница оптической плотности опытной пробы и контрольной пробы после термостатирования, 11655 - коэффициент перевода в уреазную активность. При значении уреазной активности мочи выше 1621,73 Е/л относят конкретного ребенка к группе риска формирования инфекции мочевыводящих путей.
В способе по патенту RU 2597777 («Способ определения уреазной активности ротовой жидкости для скрининга обсемененности полости рта уреазопозитивной микробиотой», МПК G01N 33/50, G01N 33/52, опубл. 20.06.2016) также используют микропланшеты для подготовки исследуемой биологической жидкости. Для этого проводили определение уреазной активности следующим образом: в одну из лунок микропланшета вносили водный раствор мочевины с фосфатным буфером, в две другие вносили водные растворы мочевины с фосфатным буфером, содержащие уреазу с известной концентрацией 5 и 10 Е/л соответственно, а в остальные лунки вносили водный раствор мочевины с фосфатным буфером и образцами ротовой жидкости, затем во все лунки вносили фенол/нитропруссидный реагент и гипохлорит, после чего измеряли оптическую плотность на микропланшетном ридере при длине волны 546 нм и рассчитывали концентрацию уреазы в образцах ротовой жидкости в Е/л. При значении уреазной активности выше 15,85±2,11 Ед/л регистрировали обсемененность полости рта уреазопозитивной микробиотой. Результат позволяет выявить необходимость противомикробной терапии для профилактики образования твердых зубных отложений и воспалительных заболеваний пародонта.
Известен набор для лабораторной диагностики инфекций (патент RU2553548 «Набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum», МПК C12Q 1/02, опубл.20.06.2015), который может быть использован для культивирования и идентификации урогенитальных микоплазм, в частности Mycoplasma hominis u Ureaplasma urealyticum для лабораторной диагностики урогенитальных микоплазмозов путем выявления микоплазм в клиническом материале, для полуколичественного определения титра возбудителя, а также для определения их антибиотикочувствительности.
Такой набор содержит лиофилизированную транспортную среду для хранения исследуемого биологического материала, лиофилизированную питательную среду для выявления Mycoplasma hominis и/или Ureaplasma urealyticum и стрипы для идентификации Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, для полуколичественного определения титра возбудителя и для определения чувствительности Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum к антибиотикам, который содержит три вида стрипов, первый из которых предназначен для идентификации Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum и для полуколичественного определения их титра, причем часть лунок первого вида стрипов, которые предназначены для выявления и определения титра Mycoplasma hominis, содержат аргинин, бриллиантовый синий и кларитромицин, другая часть лунок этого стрипа, которые предназначены для выявления и определения титра Ureaplasma urealyticum, содержат мочевину и линкомицин, второй вид стрипов предназначен для определения антибиотикочувствительности Mycoplasma hominis, содержит специфические реагенты для выявления Mycoplasma hominis - аргинин, бриллиантовый синий и кларитромицин, а также восемь антибиотиков - доксициклин, джозамицин, мидекамицин, офлоксацин, ципрофлоксацин, спарфлоксацин, моксифлоксацин, клиндамицин, сорбированных в лунки стрипов в одной концентрации, третий вид стрипов предназначен для определения антибиотикочувствительности Ureaplasma urealyticum, содержит специфические реагенты для выявления Ureaplasma urealyticum - мочевина и линкомицин, а также восемь антибиотиков - доксициклин, джозамицин, кларитромицин, эритромицин, рокситромицин, азитромицин, офлоксацин и спарфлоксацин, сорбированных в лунки стрипов в одной концентрации. Использование набора позволяет одновременно выявлять Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, оценивать их титр и определять чувствительность к различному спектру антибиотиков, причем для Mycoplasma hominis и для Ureaplasma urealyticum используют разные антибиотики.
Представленные выше тест-системы для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку используются в лабораторных условиях, предполагают применение дополнительных аппаратурных средств (фотоколориметр, термостат), что влечет за собой привлечение квалифицированного персонала.
Известны тест-системы для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку для выявления бактерии Helicobacter pylori (например, WO201 1112106, МПК C12Q1/58, опубл.15.09.2011; US2010028937, МПК С12М1/00; C12Q1/02, опубл.04.02.2010; W09319200, МПК C12Q1/00; C12Q1/04, опубл.30.09.1993), которые представляют собой многослойное многоэлементное тестовое устройство, в основном состоящее из субстратного элемента, содержащего мочевину для определения уреазной активности исследуемого биологического материала, диффузионный элемент для предотвращения ложных реакций и пропускания аммиака к индикаторному элементу, изменение цвета которого позволяет оценить результат.
Однако такие тест-системы основаны на конструктивных решениях, позволяющих исследовать биологический материал, содержащий незначительное количество жидкой фазы (биоптат). Наличие диффузного элемента снижает чувствительность таких тест-систем и не позволяет определять уреазную активность иных бактерий.
Наиболее близким к заявляемому является техническое решение, представленное в патенте ЕР3009519 («Test device, reactive element and arrangement for urease activity» МПК B01L3/00, C12Ql/58,G01N33/487, опубл. 14.10.2014), которое содержит подложку с, по меныпей мере, одной лункой, в которой размещен реактивный элемент, состоящий из двух слоев, индикаторного и чувствительного, последний для размещения исследуемого биологического материала, а индикаторный размещен на дне лунки со смотровым окном.
Для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку исследуемый биологический материал помещают на чувствительный слой реактивного элемента, далее происходит реакция расщепления мочевины чувствительного слоя. Через смотровое окно наблюдают окончательное изменение цвета индикаторного слоя, по которому судят о наличии уреазной активности бактерии, например Helicobacter pylori.
Конструктивное решение такой тест-системы позволяет исследовать биологический материал, содержащий незначительное количество жидкой фазы (например, биоптат), так как жидкий исследуемый материал проникнет к индикаторному слою, что приведет к недостоверности результата. Это ограничивает область применения тест-системы.
Кроме того, такая тест-система характеризуется значительной длительностью реакции из-за того, что слои реактивного элемента свободно размещены в лунке. Это приводит к потере выделяемого аммиака, в свою очередь увеличивая время определения ферментативной активности бактерий.
Задачей заявляемого изобретения является создание тест-системы для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку, позволяющих достигать технический результат, заключающийся в сокращении времени определения активности ферментативных реакций и в расширении области применения за счет расширения типов исследуемых образцов.
Сущность изобретения заключается в том, что в тест-системе для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку, содержащей подложку с окном для просмотра результатов, на которой размещен реактивный элемент, состоящий из индикаторного слоя, перекрывающего окно для просмотра результатов и чувствительного слоя, содержащего субстрат для обнаружения ферментативной активности, дополнительно на подложке расположен фиксирующий лист с отверстием для размещения на чувствительном слое реактивного элемента исследуемого биологического материала, размеры которого обеспечивают фиксацию чувствительного слоя, на фиксирующем листе размещен покровный лист, покрытый повторно закрываемым прикрепляющим покрытием со стороны, обращенной к фиксирующему листу, при этом поверхности подложки и фиксирующего листа, обращенные друг к другу, соединены клеевым слоем, а реактивный элемент организован таким образом, что площадь чувствительного слоя, представляющего собой полупроницаемую гидрофобную мембрану больше площади непрозрачного индикаторного слоя, содержащего индикатор чувствительный к аммиаку, при этом подложка, фиксирующий и покровный листы выполнены из непроницаемого гидрофобного материала, а их толщина, а также толщина каждого из слоев реактивного элемента находятся в диапазоне от 50 до 300 мкм.
Индикаторный слой реактивного элемента может быть выполнен из гидрофильного полимерного материала.
Гидрофильный полимерный материал выбирают из ряда: бумага, полиэфирные волокна, пленка поливинилового спирта.
Индикатор, чувствительный к аммиаку, выбирают из ряда: pH индикаторы, реактив Несслера, хлорид хрома (II).
Непроницаемый гидрофобный материал, из которого выполнены подложка, фиксирующий и покровный листы выбирают из ряда: полипропилен, поливинилхлорид, полиэфир. Чувствительный слой реактивного элемента, представляющий собой полупроницаемую гидрофобную мембрану, выполняют либо из полиэтилена, либо из политетрафторэтилена, либо полипропилена.
Субстрат для обнаружения ферментативной активности чувствительного слоя реактивного элемента выбирают из ряда: мочевина, аргинин, орнитин.
Повторно закрываемое прикрепляющие покрытие выполнено из однокомпонентного клея, который выбирают из ряда: полиуретан, ацетофенон, поливинилацетат, полиизобутилен
Клеевой слой, которым соединены поверхности подложки и фиксирующего листа, обращенные друг к другу выполнен из однокомпонентного клея, который выбирают из ряда полиуретан, поливинилацетат, изоборнил акрилат, полиизобутилен.
Покровный лист может быть выполнен с дугообразным передним краем в виде язычка с одной из сторон.
Покровный лист со стороны, противоположной дугообразному переднему краю, может быть прикреплен слоем термоклея.
Покровный лист может быть выполнен либо прозрачным, либо имеющим прозрачную зону, соответствующую размерам отверстия фиксирующего листа.
Основным отличием заявляемой тест-системы является то, что фиксирующий лист и подложка жестко скрепленные между собой клеевым слоем и размещенный между ними реактивный элемент позволяет образовать камеру для аммиака, который выделяется в ходе целевых реакций, включающих в себя реакцию расщепления субстрата чувствительного слоя (мочевина, аргинин, орнитин- в зависимости от определяемой бактерии) и взаимодействия аммиака с индикатором. При этом благодаря малой толщине фиксирующего листа, подложки и слоев реактивного элемента, составляющей от 50 до 300 мкм, размер камеры является минимально достаточным, для быстрого взаимодействия аммиака с индикатором в этой камере, что позволяет сократить время реакции до 5 минут, в то время как у аналогов - от 15 минут. Диапазон толщин фиксирующего листа, подложки и слоев реактивного элемента обусловлен тем, что материал толщиной до 50 мкм характеризуется недостаточной прочностью, а более 300 мкм будет образовывать слишком большую камеру и замедлять реакцию между аммиаком и индикатором. Заявляемая тест-система обеспечивает возможность - анализировать как полутвердые (биоптат), так и жидкие исследуемые биологические материалы (моча, слюна), что также обеспечивается конструкцией тест-системы. Защиту индикаторного слоя реактивного элемента от попадания анализируемой жидкости обеспечивают: гидрофобность материала, из которого изготовлен чувствительный слой реактивного элемента; а также то, что площадь чувствительного слоя должна быть больше площади индикаторного слоя. Благодаря этому индикаторный слой, помещенный на лист подложки, сверху укрывается чувствительным слоем, что обеспечивает защиту от контакта с анализируемой жидкостью. Гидрофобный непроницаемый материал, из которого изготовлен фиксирующий лист помогает отводить излишки жидкости с поверхности и не давать протекать ей внутрь реактивного элемента. Наличие в тест системе покровного листа, обеспечивает герметичность тест-системы и кроме того исключает высыхание исследуемого биологического материала в ходе исследования. Заявляемая тест-система не требует дополнительных приготовлений перед исследованием за счет того, что все необходимо достаточные вещества (индикатор, субстрат) герметично заключены в тест- системе.
Изобретение поясняют следующие графические изображения.
Фиг.1 Поперечный разрез тест-системы. Фиг.2 Упрощенный вид в разобранном состоянии тест-системы
(аксонометрия).
Фиг.З Тест-система в собранном состоянии (аксонометрия).
Тест-система (фиг. 1) представляет собой подложку 1, с окном для просмотра результатов 2. На подложке 1 размещен двухслойный реактивный элемент, индикаторный слой реактивного элемента 3, которого перекрывает окно для просмотра результатов 2. Чувствительный слой реактивного элемента 4 размещен на индикаторном слое реактивного элемента 3, при этом площадь чувствительного слоя реактивного элемента 4 больше площади индикаторного слоя реактивного элемента 3. На подложке 1 с реактивным элементом фиксирующий лист 6 закреплен клеевым слоем 5 с отверстием для размещения на чувствительном слое реактивного элемента исследуемого биологического материала 8* размеры которого обеспечивают фиксацию чувствительного слоя реактивного элемента 4. На фиксирующем листе 6 посредством повторно закрываемого прикрепляющего покрытия 7 закреплен покровный лист 9 с прозрачной зоной 10. Покровный лист 9 с одной из сторон закреплен слоем термоклея 11, а с другой имеет язычок 12 для захвата при открывании и закрывании покровного листа 9.
Организацию тест-системы послойно иллюстрирует Фиг. 2, на которой в аксонометрическом виде представлены слои тест-системы без клеевого слоя и повторно закрываемого прикрепляющего покрытия. В собранном состоянии тест-система представлена на Фиг.З.
Для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку открывают покрывной лист 9, используя язычок 12, и размещают образец исследуемого биологического материала в окне 8 фиксирующего листа 6 на чувствительном слое реактивного элемента 4. Далее размещенный образец исследуемого биологического материала плотно закрывают покрывным листом 9 и переворачивают тест-систему для возможности наблюдения за реакцией в окне для просмотра результатов 2. Ожидают 5 минут и оценивают изменение окраски индикаторного листа реактивного элемента 3 в окне для просмотра результатов 2.
Ферментативную активность бактерий, вызывающих заболевания пародонта, определяют по изменению цвета индикаторного слоя реактивного элемента при размещении на нем исследуемых образцов смешанной ротовой жидкости. При наличии в исследуемых образцах уреазоположительных бактерий в течение 5 минут на поверхности индикаторного слоя реактивного элемента появляется красное или малиновое пятно.
Ферментативную активность бактерий, вызывающих такое заболевание, как мочекаменная болезнь, определяют по изменению цвета индикаторного слоя реактивного элемента при размещении на нем исследуемых образцов мочи. При наличии в исследуемых образцах бактерий Proteus mirabilis и Corynebacterium urealyticum на поверхности индикаторного слоя реактивного элемента появляется красное или малиновое пятно.
Ферментативную активность бактерий, вызывающих гинекологические или урологические заболевания, определяют следующим образом: при наличии в исследуемых образцах бактерий Mycoplasma и Ureaplasma на поверхности индикаторного слоя реактивного элемента в течение 5 минут появляется красное или малиновое пятно. Образцами для исследования могут служить:
• для мужчин - мазок из уретры;
• для женщин - влагалищные выделения или эндоцервикальная слизь.
Примером конкретной реализации заявляемой тест-системы может служить следующая конструкция тест системы для определения ферментативной активности Mycoplasma по аммиаку в образце исследуемого биологического материала - эндоцервикальная слизь. Подложка, фиксирующий лист, покровный лист выполнены в виде квадратов размером 25x25 мм из полипропилена, толщина которого составляет 250 мкм.
Индикаторный слой реактивного элемента изготовлен из фильтровальной бумаги WHATMAN ТИП 1 , пропитанной pH индикатором феноловым красным, в виде квадрата 5x5 мм толщиной 100 мкм.
Чувствительный слой реактивного элемента реализован в виде мембраны из полиэтилентерефталата, на которую нанесен аргинин, который является субстратом определяемой активности комплекса ферментов, которые расщепляют аргинин до аммиака, и изготовлен в виде квадрата 10x10 мм толщиной 150 мкм.
Фиксирующий лист имеет отверстие диаметром 5 мм для размещения на чувствительном слое реактивного элемента исследуемого биологического материала- эндоцервикальная слизь.
Клеевой слой, которым соединены поверхности подложки и фиксирующего листа, обращенные друг к другу выполнен из однокомпонентного клея на основе поливинилацетата KIWOTHERM D 123.
Покровный лист прикреплен к фиксирующему листу клеем LOCTITE DURO -ТАК 4003 и имеет прозрачную зону, соответствующую по размерам отверстию фиксирующего листа 5 мм.
Окно для просмотра результатов подложки выполнено в виде квадрата размером 5x5 мм.
Покровный лист снабжен язычком с одной стороны для удобства открывания тест-системы и с другой стороны прикреплен слоем термоклея LUNAMELT HS-3500 для надежной фиксации этого листа.
При сохранении всех конструктивных размеров или изменении их в допустимых пределах замена субстрата с аргинина на мочевину или орнитин позволяет исследовать другие бактерии, например, Proteus mirabilis, Corynebacterium urealyticum, Helicobacter pylori, Ureaplasma urealyticum и др., используя разные типы исследуемых образцов: жидкие, полутвердые и твердые.
Таким образом, заявляемая тест-система позволяет расширить область применения за счет расширения типов исследуемых образцов и сократить время определения активности ферментативных реакций.

Claims

Формула
1. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку, содержащая подложку с окном для просмотра результатов, на которой размещен реактивный элемент, состоящий из индикаторного слоя, перекрывающего окно для просмотра результатов, и чувствительного слоя, содержащего субстрат для обнаружения ферментативной активности, отличающаяся тем, что дополнительно на подложке расположен фиксирующий лист с отверстием для размещения на чувствительном слое реактивного элемента исследуемого биологического материала, размеры которого обеспечивают фиксацию чувствительного слоя, на фиксирующем листе размещен покровный лист, покрытый повторно закрываемым прикрепляющим покрытием со стороны, обращенной к фиксирующему листу, при этом поверхности подложки и фиксирующего листа, обращенные друг к другу, соединены клеевым слоем, а реактивный элемент организован таким образом, что площадь чувствительного слоя, представляющего собой полупроницаемую гидрофобную мембрану, больше площади непрозрачного индикаторного слоя, содержащего индикатор чувствительный к аммиаку, при этом подложка, фиксирующий и покровный листы выполнены из непроницаемого гидрофобного материала, а их толщина, а также толщина каждого из слоев реактивного элемента находятся в диапазоне от 50 до 300 мкм.
2. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку по п. 1, отличающаяся тем, что индикаторный слой реактивного элемента выполнен из гидрофильного полимерного материала.
3. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку по п. 2, отличающаяся тем, что гидрофильный полимерный материал представляет собой бумагу, полиэфирные волокна или пленку поливинилового спирта.
4. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку по п. 2, отличающаяся тем, индикатор, чувствительный к аммиаку, представляет собой pH индикаторы, реактив Несслера, или хлорид хрома (II).
5. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку по п. 1, отличающаяся тем, что непроницаемый гидрофобный материал, из которого выполнены подложка, фиксирующий и покровный листы, представляет собой полипропилен, поливинилхлорид или полиэфир.
6. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку по п. 1, отличающаяся тем, что чувствительный слой реактивного элемента, представляющий собой полупроницаемую гидрофобную мембрану, представляет собой полиэтилен, политетрафторэтилен или полипропилен.
7. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку по п. 1, отличающаяся тем, что субстрат для обнаружения ферментативной активности чувствительного слоя реактивного элемента представляет собой мочевину, аргинин или орнитин.
8. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку по п. 1, отличающаяся тем, что повторно закрываемое прикрепляющие покрытие выполнено из однокомпонентного клея, который представляет собой полиуретан, ацетофенон, поливинилацетат или полиизобутилен.
9. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку по п. 1, отличающаяся тем, что клеевой слой, которым соединены поверхности подложки и фиксирующего листа, обращенные друг к другу, выполнен из однокомпонентного клея, который представляет собой полиуретан, поливинилацетат, изоборнил акрилат или полиизобутилен.
10. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку, по п. 1, отличающаяся тем, что покровный лист выполнен с дугообразным передним краем в виде язычка с одной из сторон.
11. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку по п. 1, отличающаяся тем, что покровный лист со стороны, противоположной дугообразному переднему краю, прикреплен слоем термоклея.
12. Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку по п. 1, отличающаяся тем, что покровный лист выполнен либо прозрачным, либо имеющим прозрачную зону, соответствующую размерам отверстия фиксирующего листа.
PCT/RU2019/000906 2018-12-24 2019-12-05 Тест-система для определения ферментальной активности бактерий по аммиаку WO2020139142A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP19905217.6A EP3904497B1 (de) 2018-12-24 2019-12-05 Testsystem zur bestimmung der enzymatischen aktivität von bakterien auf ammoniak

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018146363 2018-12-24
RU2018146363A RU2715405C1 (ru) 2018-12-24 2018-12-24 Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020139142A1 true WO2020139142A1 (ru) 2020-07-02

Family

ID=69630902

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2019/000906 WO2020139142A1 (ru) 2018-12-24 2019-12-05 Тест-система для определения ферментальной активности бактерий по аммиаку

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP3904497B1 (ru)
RU (1) RU2715405C1 (ru)
WO (1) WO2020139142A1 (ru)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993019200A1 (en) 1992-03-24 1993-09-30 Serim Research Corporation TEST FOR $i(HELICOBACTER PYLORI)
US20100028937A1 (en) 2008-02-12 2010-02-04 Chia-Chen Liu Test strip for detecting gastric problems and detecting method thereof
WO2011112106A2 (en) 2010-03-10 2011-09-15 Kafel Stanislaw Urease test for detecting helicobacter pylori bacteria
RU2521201C1 (ru) 2013-04-02 2014-06-27 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ раннего выявления возможности инфекции мочевыделяющих путей у детей 3-7 лет фотометрическим методом
RU2553548C1 (ru) 2014-04-11 2015-06-20 Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера" (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) Набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых mycoplasma hominis и ureaplasma urealyticum
EP3009519A1 (en) 2014-10-14 2016-04-20 AMA-Med Oy Test device, reactive element and arrangement for urease activity
RU2597777C1 (ru) 2015-07-02 2016-09-20 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Тверской ГМУ Минздрава России) Способ определения уреазной активности ротовой жидкости для скрининга обсемененности полости рта уреазопозитивной микробиотой
RU2630651C9 (ru) * 2016-07-04 2017-10-30 Общество с ограниченной ответственностью "Ассоциация Медицины и Аналитики" (ООО "АМА") Заготовка для изготовления тест-системы для проведения экспресс-диагностики инфекции Helicobacter pylori по уреазной активности биоптата и способ изготовления тест-системы

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7087398B2 (en) * 2001-10-15 2006-08-08 Marshall Barry J Method for detecting urease
US20120094371A1 (en) * 2010-10-19 2012-04-19 Philip Ross Test strip for h. pylori detection

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993019200A1 (en) 1992-03-24 1993-09-30 Serim Research Corporation TEST FOR $i(HELICOBACTER PYLORI)
US5314804A (en) * 1992-03-24 1994-05-24 Serim Research Corporation Test for Helicobacter pylori
US20100028937A1 (en) 2008-02-12 2010-02-04 Chia-Chen Liu Test strip for detecting gastric problems and detecting method thereof
WO2011112106A2 (en) 2010-03-10 2011-09-15 Kafel Stanislaw Urease test for detecting helicobacter pylori bacteria
RU2521201C1 (ru) 2013-04-02 2014-06-27 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ раннего выявления возможности инфекции мочевыделяющих путей у детей 3-7 лет фотометрическим методом
RU2553548C1 (ru) 2014-04-11 2015-06-20 Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера" (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) Набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых mycoplasma hominis и ureaplasma urealyticum
EP3009519A1 (en) 2014-10-14 2016-04-20 AMA-Med Oy Test device, reactive element and arrangement for urease activity
RU2597777C1 (ru) 2015-07-02 2016-09-20 федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Тверской ГМУ Минздрава России) Способ определения уреазной активности ротовой жидкости для скрининга обсемененности полости рта уреазопозитивной микробиотой
RU2630651C9 (ru) * 2016-07-04 2017-10-30 Общество с ограниченной ответственностью "Ассоциация Медицины и Аналитики" (ООО "АМА") Заготовка для изготовления тест-системы для проведения экспресс-диагностики инфекции Helicobacter pylori по уреазной активности биоптата и способ изготовления тест-системы

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See also references of EP3904497A4
UROLOGIE UND NEPHROLOGIE, 1997, pages 13 - 14

Also Published As

Publication number Publication date
RU2715405C1 (ru) 2020-02-27
EP3904497B1 (de) 2024-03-27
EP3904497A4 (de) 2022-05-04
EP3904497A1 (en) 2021-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0712495B1 (en) Lateral flow medical diagnostic assay device with sample extraction means
EP2134857B1 (en) Detection and identification of microorganisms on transparent permeable membranes
US8247220B2 (en) Optical indicator for detecting bacterial pathogens
EP1337658B1 (en) A method for the detection of viable microorganisms
US6395504B1 (en) Use of phage associated lytic enzymes for the rapid detection of bacterial contaminants
US20100081125A1 (en) amplification for solid phase immunoassay
AU2002223985A1 (en) A method for the detection of viable microorganisms
US20070202611A1 (en) Simple membrane assay method and kit
CA2337208A1 (en) Evacuated sensor device for detecting microorganisms in blood samples, and method therefor
WO2014180172A1 (zh) 生物芯片及其应用
CN102131915A (zh) 用于计数抗生素抗性微生物的方法和组合物
Santos et al. A review on urinary tract infections diagnostic methods: Laboratory-based and point-of-care approaches
Boreland et al. Dipstick analysis for screening of paediatric urine.
US20100120073A1 (en) Methods and devices for detecting organisms causing urinary tract infections
RU2715405C1 (ru) Тест-система для определения ферментативной активности бактерий по аммиаку
US8067154B2 (en) Method and device for rapid detection of microorganisms by changing the shape of micro-colonies in micro-channels
US11519904B2 (en) Infection detection device and method using same
CN215250842U (zh) 一种可封闭的核酸检测装置
CN213680644U (zh) 一种可固定检测试纸的核酸检测装置
GB2409519A (en) Microorganism detector
WO1984003903A1 (en) Method and device for detecting microorganisms
US11851643B2 (en) Selective thin-film culture device for enumerating microorganisms
AU2815584A (en) Method and device for detecting microorganisms
UA61645A (en) Method for detecting helicobacter pylory microorganisms

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 19905217

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019905217

Country of ref document: EP

Effective date: 20210726