RU2521201C1 - Способ раннего выявления возможности инфекции мочевыделяющих путей у детей 3-7 лет фотометрическим методом - Google Patents
Способ раннего выявления возможности инфекции мочевыделяющих путей у детей 3-7 лет фотометрическим методом Download PDFInfo
- Publication number
- RU2521201C1 RU2521201C1 RU2013114453/15A RU2013114453A RU2521201C1 RU 2521201 C1 RU2521201 C1 RU 2521201C1 RU 2013114453/15 A RU2013114453/15 A RU 2013114453/15A RU 2013114453 A RU2013114453 A RU 2013114453A RU 2521201 C1 RU2521201 C1 RU 2521201C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- urine
- wells
- added
- urease activity
- well
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для скрининга детей дошкольного возраста с целью раннего выявления у них возможности инфекции мочевыводящих путей. Способ основан на методике подготовки проб мочи в лунках микропланшета, включающей термостатирование, и заключается в количественном определении уреазной активности мочи на микропланшетном ридере при длине волны 620 нм, построении калибровочной кривой и вычислении уреазной активности мочи в Е/л по формуле: УА=ΔD*11655, где УА (Е/л) - уреазная активность в (Е/л); ΔD - изменение оптической плотности проб мочи пациента после термостатирования; 11655 - коэффициент перевода на уреазную активность. При значении уреазной активности мочи выше 1621,73 Е/л ребенка относят к группе риска формирования инфекции мочевыводящих путей. Использование способа позволяет увеличить пропускную способность лаборатории. 1 табл., 2 пр., 2 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно педиатрии, и может быть использовано для скрининга детей дошкольного возраста и раннего выявления у них инфекции мочевыводящих путей.
В качестве прототипа авторы выбрали способ определения уреазной активности, предложенный в 1997 году сотрудниками клинико-биохимической лаборатории Научного Центра Урологии им. Б.У. Джарбусынова («Урология и нефрология», 1997, №4, с.13-14).
Способ основан на том, что микробы в процессе жизнедеятельности выделяют в мочу фермент - уреазу, которая имеет различную степень активности в зависимости от вида микроорганизма. При инфицировании мочи образуются микроколонии на уроэпителиальной поверхности, создающие благоприятные условия для кристаллообразования и способствующие росту камней.
Суть способа в том, что в две пробирки помещают по 2 мл исследуемой мочи. В пробирку №1 добавляют 0,4 мл 10% хлористого кальция, перемешивают, замеряют экстинкцию (оптическую плотность) против воды при 691 нм на КФК-3. В пробирку №2 добавляют 0,4 мл дистиллированной воды. Обе пробирки термостатируют при 37 градусах Цельсия в течение часа. Проводят измерение пробирок №1 и №2 сразу после термостатирования при тех же условиях.
Расчеты ведут по формуле УА=((Е2-Е1)*K*10)/100, где
Е1 - экстинкция пробы до термостатирования,
Е2 - экстинкция пробы после термостатирования в течение часа,
K - коэффициент соотношения концентрации углекислого кальция (СаСО3) в мг % к его экстинкции (находится опытным путем по калибровочной кривой для серии разведении),
10 - коэффициент перевода мг % в ммоль/л,
100 - ММ СаСО3.
Полученный показатель уреазной активности сравнивают с показателем нормы (0-50 ммоль/л) и при его превышении говорят о присутствии уреазообразующей микрофлоры.
Недостатком данного способа является то, что:
данная методика выполняется в пробирках и пропускная способность лаборатории достаточно низкая и не может быть использована для скрининга - профилактических и диспансерных обследований больших групп населения.
В предлагаемом авторами способе данный недостаток устранен.
Задачей настоящего изобретения явилось создание нового неинвазивного и пригодного для скрининга способа раннего выявления возможности инфекции мочевыводящих путей у детей 3-7 лет фотометрическим методом.
Технический результат изобретения заключается в том, что:
с целью увеличения пропускной способности лаборатории авторами предложено выполнять исследование в 96-луночном микропланшете, что позволяет исследовать 92 пробы мочи (контроль и опыт) у 46 пациентов одновременно и восьмикратно сократить расход реактивов, таким образом снизить себестоимость анализа (фото №1).
Уреазную активность определяли у 46 детей одновременно в 96-луночном микропланшете фотометрически на микропланшетном ридере.
Для количественного определения уреазной активности мочи использовали международные единицы активности ферментов - Е/л.
Заявленный технический результат достигается путем измерения значений оптических плотностей каждой лунки после взаимодействия мочи с 10% водным раствором хлорида кальция после термостатирования в течение 1 час при температуре 37°, в 96-луночном микропланшете фотометрически на микропланшетном ридере при длине волны 620 нм. Уреазную активность определяли у 46 детей одновременно.
Для исследования берется утренняя моча в сухую стерильную банку. Анализ мочи проводится не позднее 1 часа с момента взятия.
1 | 2 | 17 | 18 | 33 | 34 | 49 | 50 | 65 | 66 | 81 | 82 |
3 | 4 | 19 | 20 | 35 | 36 | 51 | 52 | 67 | 68 | 83 | 84 |
5 | 6 | 21 | 22 | 37 | 38 | 53 | 54 | 69 | 70 | 85 | 86 |
7 | 8 | 23 | 24 | 39 | 40 | 55 | 56 | 71 | 72 | 87 | 88 |
9 | 10 | 25 | 26 | 41 | 42 | 57 | 58 | 73 | 74 | 89 | 90 |
11 | 12 | 27 | 28 | 43 | 44 | 59 | 60 | 75 | 76 | 91 | 92 |
13 | 14 | 29 | 30 | 45 | 46 | 61 | 62 | 77 | 78 | 93 | 94 |
15 | 16 | 31 | 32 | 47 | 48 | 63 | 64 | 79 | 80 | 95 | 96 |
В лунку 1 вносят 0,275 мл дистиллированной воды (контроль планшета).
В лунку 2 вносят 0,25 мл дистиллированной воды+0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция (контроль реактивов).
Лунки 1 и 2 - это отрицательный контроль.
В лунку 3 вносят 0,25 мл оксалата натрия+0,025 мл дистиллированной воды; в лунку 4 вносят 0,25 мл оксалата натрия +0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция.
Лунки 3 и 4 - это положительный контроль (стандарт). На основании значений оптических плотностей строится калибровочная кривая.
Во все последующие лунки вносят пробы мочи пациентов: 5 и 6 - пробы пациента №1, 7 и 8 - №2 и т.д. (всего 46 обследованных за 1 раз).
Мочу вносят по 0,25 мл во все лунки, затем в нечетные вносят по 0,025 мл дистиллированной воды, а во все четные - по 0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция. Содержимое лунок микропланшета осторожно перемешивают. Затем измеряют значение оптических плотностей фотометрически на микропланшетном ридере (микропланшетном мультидетекторе Zenyth 1100 (Австрия)) при длине волны 620 нм (фото №2).
Микропланшет заклеивают пленкой и содержимое лунок термостатируют в течение 1 часа при температуре 37°. После чего снова перемешивают содержимое лунок и измеряют значения оптических плотностей на микропланшетном ридере при длине волны 620 нм. Затем рассчитывают уреазную активность мочи в Е/л по формуле
УА(Е/л)=ΔD*11655, где
УА (Е/л) - уреазная активность в (Е/л);
ΔD - разница оптической плотности опыта и контроля пробы мочи пациента после термостатирования;
11655 - коэффициент перевода на уреазную активность (получен опытным путем).
Для определения коэффициента перевода на уреазную активность мочи использовался раствор уреазы (с активностью 10000 Е/л) из коммерческого набора реагентов для определения мочевины в биологических жидкостях уреазным фенол/гипохлоритным методом (Мочевина-02-ВИТАЛ, LOT серия 0349, REF B08.02). Для расчета коэффициента перевода на уреазную активность провели опыты с пробами мочи (моча одного пациента в трехкратном повторе) в микропланшете:
Проба №1 - 0,25 мл мочи пациента №1+0,050 мл дистиллированной Н2О;
Проба №2 - 0,25 мл мочи пациента №1+0,025 мл дистиллированной. Н2О+0,025 мл CaCl2;
Проба №3 - 0,25 мл мочи пациента №1+0,025 мл уреаза+0,025 мл 10% CaCl2.
Результаты проведенного опыта приведены в таблице №1.
Таблица №1 | |||||
Проведение опыта по расчету коэффициента перевода на уреазную активность мочи | |||||
Среднее D | |||||
до термостатирования | D1 | D2 | D3 | ΔD | |
Проба №1 | 0,042 | 0,058 | 0,047 | 0,049 | |
Проба №2 | 0,06 | 0,056 | 0,051 | 0,056 | |
Проба №3 | 0,489 | 0,539 | 0,424 | 0,484 | |
после термостатирования | |||||
Проба №1 | 0,046 | 0,06 | 0,053 | 0,053 | 0,004 |
Проба №2 | 0,242 | 0,164 | 0,180 | 0,195 | 0,139 |
Проба №3 | 1,458 | 1,464 | 1,522 | 1,481 | 0,997 |
Формула расчета коэффициента: K=10000/(0,997-0,139)=11655 Е/л.
Формула расчета уреазной активности в Е/л
УА(Е/л)=ΔD*11655, где
УА - уреазная активность в (Е/л);
ΔD - разница оптических плотностей проб мочи пациента после термостатирования;
11655 - коэффициент перевода на уреазную активность (получен опытным путем).
Определение биологических нормальных (референтных) величин осуществлялось в группе пациентов с медицинского осмотра в детском дошкольном учреждении (случайный выбор). Всего было обследовано 112 клинически здоровых детей 3-7 лет.
Норма 0-1621,73 Е/л (рассчитанные авторами референтные величины).
Полученный показатель уреазной активности сравнивают с показателем нормы и при его превышении говорят о присутствии уреазообразующей микрофлоры, что свидетельствует о возможности инфекции мочевыводящих путей.
Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.
Пример 1
Амбулаторная карта №19
Зелинская Ксения, 5 лет, обратилась по поводу рецидивирующего вульвита. После термостатирования проб мочи оптическая плотность контроля 0,283, оптическая плотность опыта 0,875.
УА мочи - (0,875-0,283)*11655=6889,75 Е/л
6889,75 Е/л>1621,73 Е/л
Заключаем, что инфекция мочевыводящих путей возможна.
Ребенок обследован в условиях нефрологического отделения детской областной больницы г.Твери. При бактериологическом посеве мочи высеяны микроорганизмы: кишечная палочка и энтеробактерии в диагностически значимых количествах. Ребенку был выставлен диагноз:
Вторичный дисметаболический пиелонефрит.
Пример 2
Амбулаторная карта №7
Васильева Наташа, 6 лет, обратилась по поводу резей при мочеиспускании.
После термостатирования проб мочи оптическая плотность контроля - 0,063, оптическая плотность опыта - 0,104.
УА мочи=(0,104-0,063)*11655=0,041*11655=477,855 Е/л
477,855 Е/л<1621,73 Е/л
Заключаем, что инфекция мочевыводящих путей маловероятна. Ребенок обследован у нефролога. При бактериологическом посеве мочи микрофлора высеяна не была. Клинический анализ мочи, моча по Нечипоренко в пределах нормы. УЗИ почек: без патологии. У ребенка выявили пищевую сенсибилизацию на белок яиц. Проходит лечение у аллерголога.
Список литературы
1. Меркушева, Н.В. Уреазная активность мочи у больных мочекаменной болезнью / Меркушева, Н.В., Юшина Л.В., Махонина И.А. // Урология и нефрология, 1997. С.13-14.
Claims (1)
- Способ раннего выявления инфекции мочевыводящих путей у детей 3-7 лет, заключающийся в том, что исследуют пробы мочи от 46 детей одновременно, в 96-луночный микропланшет в лунку 1 вносят 0,275 мл дистиллированной воды - отрицательный контроль планшета, в лунку 2 вносят 0,25 мл дистиллированной воды + 0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция - отрицательный контроль реактивов; в лунку 3 вносят 0,25 мл оксалата натрия + 0,025 мл дистиллированной воды, а в лунку 4 вносят 0,25 мл оксалата натрия + 0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция, где лунки 3 и 4 - положительный контроль; во все последующие лунки вносят пробы мочи по 0,25 мл, затем в нечетные лунки вносят по 0,025 мл дистиллированной воды, а во все четные - по 0,025 мл 10% водного раствора хлористого кальция, содержимое лунок микропланшета перемешивают, затем измеряют значения оптических плотностей фотометрическим методом при длине волны 620 нм на микропланшетном ридере, микропланшет заклеивают пленкой и содержимое лунок термостатируют в течение 1 ч при температуре 37°C, после чего содержимое лунок снова перемешивают и измеряют оптическую плотность проб мочи, далее строят калибровочную кривую и вычисляют уреазную активность мочи в Е/л по формуле
УА(Е/л)=ΔD*11655, где
УА (Е/л) - уреазная активность в (Е/л);
ΔD - разница оптической плошости опытной пробы и контрольной пробы после термостатирования,
11655 - коэффициент перевода на уреазную активность, при значении уреазной активности мочи выше 1621,73 Е/л относят конкретного ребенка к группе риска формирования инфекции мочевыводящих путей.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013114453/15A RU2521201C1 (ru) | 2013-04-02 | 2013-04-02 | Способ раннего выявления возможности инфекции мочевыделяющих путей у детей 3-7 лет фотометрическим методом |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013114453/15A RU2521201C1 (ru) | 2013-04-02 | 2013-04-02 | Способ раннего выявления возможности инфекции мочевыделяющих путей у детей 3-7 лет фотометрическим методом |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2521201C1 true RU2521201C1 (ru) | 2014-06-27 |
Family
ID=51218163
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013114453/15A RU2521201C1 (ru) | 2013-04-02 | 2013-04-02 | Способ раннего выявления возможности инфекции мочевыделяющих путей у детей 3-7 лет фотометрическим методом |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2521201C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2679629C1 (ru) * | 2018-07-05 | 2019-02-12 | Антонина Ни | Способ диагностики воспалительного процесса органов мочевыделительной системы у детей раннего возраста |
WO2020139142A1 (ru) | 2018-12-24 | 2020-07-02 | Общество с ограниченной ответственностью "Ассоциация Медицины и Аналитики" (ООО "АМА") | Тест-система для определения ферментальной активности бактерий по аммиаку |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2263918C2 (ru) * | 2003-07-17 | 2005-11-10 | Наеф Ибрагим Мухаммед Эльнашави | Способ диагностики острого пиелонефрита |
RU2283033C1 (ru) * | 2005-06-06 | 2006-09-10 | Марина Леонидовна Чехонацкая | Способ пренатального прогнозирования инфекции мочевой системы у новорожденного |
WO2010148216A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods and compositions for diagnosis of urosepsis and urinary tract infection |
-
2013
- 2013-04-02 RU RU2013114453/15A patent/RU2521201C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2263918C2 (ru) * | 2003-07-17 | 2005-11-10 | Наеф Ибрагим Мухаммед Эльнашави | Способ диагностики острого пиелонефрита |
RU2283033C1 (ru) * | 2005-06-06 | 2006-09-10 | Марина Леонидовна Чехонацкая | Способ пренатального прогнозирования инфекции мочевой системы у новорожденного |
WO2010148216A1 (en) * | 2009-06-17 | 2010-12-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods and compositions for diagnosis of urosepsis and urinary tract infection |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
МЕРКУШЕВА Н.В. Уреазная активность мочи у больных мочекаменной болезнью / Меркушева, Н.В., Юшина Л.В., Махонина И.А. // Урология и нефрология, 1997. С.13-14. * |
ПЕТРОВ С.Б., БАБКИН П.А. Бактериальные неосложненные инфекции мочевыводящих путей. Дата документа: Август 2009. найдено в Google: http://medi.ru/doc/g561203.htm * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2679629C1 (ru) * | 2018-07-05 | 2019-02-12 | Антонина Ни | Способ диагностики воспалительного процесса органов мочевыделительной системы у детей раннего возраста |
WO2020139142A1 (ru) | 2018-12-24 | 2020-07-02 | Общество с ограниченной ответственностью "Ассоциация Медицины и Аналитики" (ООО "АМА") | Тест-система для определения ферментальной активности бактерий по аммиаку |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Graham et al. | ACP Best Practice No 167: the laboratory diagnosis of urinary tract infection | |
Patel | The abnormal urinalysis | |
Dagan et al. | Identification of infants unlikely to have serious bacterial infection although hospitalized for suspected sepsis | |
Sundvall et al. | Interleukin-6 concentrations in the urine and dipstick analyses were related to bacteriuria but not symptoms in the elderly: a cross sectional study of 421 nursing home residents | |
Seo et al. | A rapid plasma neutrophil gelatinase-associated lipocalin assay for diagnosis of acute pyelonephritis in infants with acute febrile urinary tract infections: a preliminary study | |
Ayele et al. | Evaluation of circulating cathodic antigen (CCA) strip for diagnosis of urinary schistosomiasis in Hassoba school children, Afar, Ethiopia | |
Liao et al. | Pediatric Urine Tesing | |
Rahimkhani et al. | Asymptomatic bacteriuria and pyuria in pregnancy | |
RU2521201C1 (ru) | Способ раннего выявления возможности инфекции мочевыделяющих путей у детей 3-7 лет фотометрическим методом | |
Baig | Biochemical composition of normal urine | |
Elo-Ilo et al. | Prevalence of asymptomatic bacteriuria among pre-school children in Nnewi, South-East Nigeria | |
Siegel et al. | Asymptomatic and symptomatic urinary tract infection in infancy | |
Atalabi et al. | Ultrasonographic renal sizes, cortical thickness and volume in Nigerian children with acute falciparum malaria | |
RU2488829C2 (ru) | Способ прогнозирования течения неонатальных гепатитов у детей первого года жизни | |
Gur'ev et al. | Coherent fluctuation nephelometry: a rapid method for urine screening for bacterial contamination | |
RU2521366C1 (ru) | Способ раннего выявления дисметаболической нефропатии у детей 3-7 лет нефелометрическим методом | |
EP1760456A1 (en) | Reagent system and its use in spectrometric determination of low and high molecular weight PEGs in an aqueous fluid, method for determining the intestinal permeability with said system | |
Bagińska et al. | Non-invasive markers in the management of pediatric neurogenic bladder over the last two decades–A review | |
Dunn et al. | Search by Clinical Methods for Persistent Urinary Infectious in Children | |
Tasian et al. | Unilateral hypercalciuria: a stealth culprit in recurrent ipsilateral urolithiasis in children | |
Heilmann | Important and novel laboratory parameters and biomarkers for canine chronic enteropathy | |
Edgar et al. | A low serum sICAM-1 level may assist in the exclusion of neonatal infection | |
Eriksen et al. | Can we trust urine dipsticks? | |
RU2734670C1 (ru) | Способ диагностики осложнений вирусной и бактериальной этиологии у больных хроническим лимфолейкозом | |
RU2597777C1 (ru) | Способ определения уреазной активности ротовой жидкости для скрининга обсемененности полости рта уреазопозитивной микробиотой |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170403 |