WO2019207724A1 - 血液成分分離デバイス、血液成分分離方法、及び血液成分分析方法 - Google Patents

血液成分分離デバイス、血液成分分離方法、及び血液成分分析方法 Download PDF

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WO2019207724A1
WO2019207724A1 PCT/JP2018/017040 JP2018017040W WO2019207724A1 WO 2019207724 A1 WO2019207724 A1 WO 2019207724A1 JP 2018017040 W JP2018017040 W JP 2018017040W WO 2019207724 A1 WO2019207724 A1 WO 2019207724A1
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WO
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flow path
blood
filter
separation device
plasma
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Application number
PCT/JP2018/017040
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English (en)
French (fr)
Inventor
遼 小林
慶治 三井
哲臣 高崎
百合香 越智
耕磨 林
久皇 鈴木
Original Assignee
株式会社ニコン
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers

Definitions

  • the present invention relates to a blood component separation device, a blood component separation method, and a blood component analysis method.
  • the blood cell component and the plasma component are usually separated and analyzed separately.
  • the method for separating the blood cell component and the plasma component include a centrifugal separation method and a method using a blood cell separation filter.
  • the centrifugal separation method the centrifugal operation is complicated.
  • a blood cell separation filter for example, Patent Document 1 describes a glass fiber filter for blood filtration and the like.
  • the conventional method using a blood cell separation filter cannot sufficiently prevent the mixing of plasma components into the blood cell fraction.
  • One embodiment of the present invention includes a first flow path including a first introduction port into which a solution containing blood cells and plasma is introduced, and a filter unit in which a filter for capturing blood cells is installed, and the first flow
  • a blood component separation device including a second flow path connected to the filter portion of the path.
  • the second flow path may have a second introduction port, and may intersect the first flow path at the filter portion of the first flow path.
  • One embodiment of the present invention is a method for separating blood components using the blood component separation device, wherein (a) a solution containing blood cells and plasma is introduced from the first inlet into the first. Introducing into the flow path, causing the filter to capture blood cells in the solution, and moving the plasma in the solution in the first flow path; and (b) from the first inlet or the second inlet. Introducing a hemolytic agent, hemolyzing blood cells in the filter, and moving blood cell components released by hemolysis in the second flow path.
  • One embodiment of the present invention is a method for analyzing blood components using the blood component separation device, wherein (a) a solution containing blood cells and plasma is introduced from the first inlet into the first. A step of introducing into the flow channel and causing the filter to capture blood cells in the solution; and (b) after the step (a), the cleaning liquid is supplied from the first introduction port or the second introduction port. A step of removing the plasma in the filter by introducing into the passage, and (c) after the step (b), introducing a hemolytic agent from the first inlet or the second inlet, and blood cells in the filter And (d) analyzing the blood cells hemolyzed in the step (c).
  • One embodiment of the present invention is a method for analyzing hemoglobin A1c, wherein (a) a filter for separating blood cells and plasma captures blood cells in a solution containing blood cells and plasma; and (b) ) After the step (a), passing the washing solution through the filter and removing the plasma in the filter; (c) after the step (b), introducing a hemolytic agent into the filter; And hemolyzing A1c in the blood cells hemolyzed in the step (c), and (d) analyzing the hemoglobin A1c in the blood cells hemolyzed in the step (c).
  • FIG. 1 shows an example of the structure of the pump parts P1 and P2 of the blood component separation device 700 of FIG.
  • (A)-(d) is sectional drawing explaining operation
  • Experimental example 2 it is a graph which shows the result of having evaluated the influence of the plasma content which has on the measured value of HbA1c.
  • FIG. 6 is a schematic diagram showing the structure of a blood component separation device used in Experimental Examples 3 to 7.
  • Experimental example 3 it is a graph which shows the result of having measured the plasma in a blood cell fraction.
  • Experimental example 4 it is a graph which shows the result of having measured the plasma in a blood cell fraction.
  • Experiment 5 it is a photograph of each blood component separation device after hemolyzing and collecting blood cells after washing the filter with 20 ⁇ L, 25 ⁇ L or 30 ⁇ L of washing solution.
  • Experimental Example 6 it is a graph which shows the result of having evaluated the reproducibility of the measured value of HbA1c.
  • Experimental Example 7 it is a graph which shows the result of having evaluated the reproducibility of the HbA1c measured value.
  • the present invention is connected to a first flow path that includes a first inlet and a filter section in which a filter that separates blood cells and plasma is installed, and to the filter section of the first flow path.
  • a blood component separation device including a second flow path.
  • FIG. 1 is a schematic diagram showing an example of a blood component separation device of the present embodiment.
  • the blood component separation device 100 includes a first channel 10, a second channel 20, a third channel 30, a plasma analyzer 50, and a blood cell analyzer 60.
  • the first flow path 10 has a first introduction port 12 and a filter unit 11.
  • the second flow path 20 and the third flow path 30 are connected to the filter part 11 of the first flow path 10 and intersect the first flow path 10 at the filter part 11.
  • the first flow path 10, the second flow path 20, and the third flow path 30 may be formed of, for example, a tube such as a glass tube or a resin tube, and a groove is formed between two bonded plates.
  • a flow path may be formed by forming.
  • the width and height of the first channel 10, the second channel 20, and the third channel 30 are not particularly limited, and may be arbitrarily selected according to the type of sample. For example, the width and height of these channels can be set to such a size that the sample can pass through, and examples thereof include 1 ⁇ m or more, 10 ⁇ m or more, 50 ⁇ m or more, 100 ⁇ m or more.
  • the widths of the first flow path 10, the second flow path 20, and the third flow path 30 may be the same or different.
  • the diameter of the first channel 10 can be 50 ⁇ m or more, 80 ⁇ m or more, 100 ⁇ m or more, and the like.
  • the upper limits of the width and height of these channels are not particularly limited, and may be appropriately selected according to the size of the blood component separation device. Examples of the upper limit values of the width and height of these channels include 100 mm or less, 50 mm or less, 10 mm or less, 5 m or less, 2 mm or less, and the like. An example is a width of about 0.5 to 2.0 mm and a height of about 0.2 mm to 2.0 mm.
  • the shapes of the first flow path 10, the second flow path 20, and the third flow path 30 are not particularly limited, and the cross section of the flow path may be circular or rectangular.
  • the first flow path 10 includes a first inlet 12, a filter unit 11, and a valve V1.
  • the first inlet 12 introduces a solution containing blood cells and plasma into the first flow path 10. Moreover, it may be used to introduce other samples, reagents, and the like.
  • the first inlet 12 may have a funnel shape so that the sample can be easily introduced.
  • the filter unit 11 is a part where a filter for capturing blood cells is installed in the flow path.
  • the filter that captures blood cells selectively captures blood cells in the blood and separates them from components other than blood cells in the blood, including plasma. Therefore, it is possible to separate blood cells and plasma in blood.
  • the filter is not particularly limited as long as it has a material and a structure capable of capturing blood cells and allowing plasma to pass through, and a known blood cell separation filter can be used.
  • Examples of the filter include a porous film and a glass fiber film.
  • Examples of the filter material include polypropylene, polyethylene, polyethylene terephthalate, polybutylene terephthalate, polystyrene, polyvinyl alcohol, urethane, acrylic, rayon, and glass.
  • the filter examples include, for example, a fiber in which the above-described material is integrated in a nonwoven fabric, a molded body such as an open-cell foam in which continuous pores are formed using the above-described material, and a substantially spherical fine particle formed from the above-described material.
  • a fiber in which the above-described material is integrated in a nonwoven fabric a molded body such as an open-cell foam in which continuous pores are formed using the above-described material, and a substantially spherical fine particle formed from the above-described material.
  • a fiber in which the above-described material is integrated in a nonwoven fabric
  • a molded body such as an open-cell foam in which continuous pores are formed using the above-described material
  • a substantially spherical fine particle formed from the above-described material are integrated so as to form a close-packed structure, or are integrally molded by sintering the accumulated material, or are formed by forming a through-hole in a film formed
  • the average pore diameter of the filter is not limited so long as it captures blood cells and does not inhibit the passage of plasma, and examples thereof include 2 to 10 ⁇ m or 3 to 8 ⁇ m.
  • the average pore diameter is measured by a bubble point test method (JIS K 3832), an actual measurement method using an enlarged image by an electron microscope, or the like.
  • the porosity of the filter is not particularly limited, and examples thereof include 20 to 97% and 30 to 95% in order to ensure a practical filtration time and maintain the filter stability.
  • the valve V1 is for controlling the first flow path 10 in an open state or a closed state.
  • the valve V ⁇ b> 1 is disposed on the opposite side of the first introduction port 12 with respect to the filter unit 11 in the first flow path 10.
  • bulb V1 are located in this order.
  • the first inlet 12 is on the upstream side of the first flow path 10
  • the valve portion V1 is on the downstream side.
  • the solution introduced from the first introduction port 12 passes through the filter unit 11 and flows toward the valve unit V1.
  • the structure of the valve V1 is not particularly limited, and any valve used for a fluid device or the like can be used.
  • the valve V ⁇ b> 1 is disposed in the vicinity of the downstream end of the filter unit 11.
  • the valve V1 and the filter unit 11 are preferably in contact with each other.
  • the distance between the end of the valve V1 and the end of the filter unit 11 is at most about several millimeters. Is preferred.
  • the distance between the end of the valve V1 and the end of the filter unit 11 is about 0 to 10 mm, and is about 0 to 5 mm.
  • the blood cell fraction hemolyzed by the hemolysis process described later can be efficiently collected via the second flow path 20 or the third flow path 30.
  • the blood component separation device of the present embodiment may be configured without the valve V1.
  • a valve may be provided between the first introduction port 12 and the filter unit 11.
  • the plasma analysis unit 50 is for analyzing the plasma that has passed through the filter unit 11.
  • the plasma analysis unit 50 can be configured to analyze any plasma component according to the purpose.
  • the plasma analysis unit 50 may be a glucose analysis unit.
  • the plasma analysis unit 50 analyzes total cholesterol, LDL, HDL, TG, UA, blood creatinine, albumin, total protein, ALT, AST, ⁇ GTP, BUN, K ion, Na ion, Ca ion, Cl ion, and the like. It may be a thing.
  • the plasma analysis unit 50 may analyze BV, HCV, CRP, cTnT, cTnI, BNP, H-FAB, CK-MB, IL-6, etc., and analyze tumor markers, miRNA, etc. You may do.
  • the plasma analysis unit 50 may analyze a single item, or may analyze a plurality of items.
  • the blood component separation device includes the plasma analysis unit 50, the plasma component separated by the filter unit 11 can be directly analyzed in the device. Since the plasma component is sent from the filter unit 11 to the plasma analysis unit 50 through the flow path on the blood component separation device, there is no risk of contamination or contamination of the apparatus, and simple plasma. Analysis of components becomes possible. In addition, since the plasma component can be measured directly from the separation of blood cell components, the loss of non-specific measurement objects is eliminated, the accuracy is improved, and the examination time is further shortened.
  • the blood component separation device of the present embodiment may be provided with a plasma analysis unit 50 and / or a plasma recovery unit.
  • the blood component separation device of the present embodiment may be configured to provide a plasma recovery unit instead of the plasma analysis unit 50 and recover the plasma that has passed through the filter unit 11.
  • the collected plasma may be analyzed manually or using a plasma analyzer or the like, and may be stored for later analysis.
  • it is good also as a structure which provides a plasma collection
  • FIG. the plasma that has been analyzed by the plasma analysis unit 50 can be collected by the plasma collection unit.
  • the first flow path 10 may further include a fluid control unit that controls the flow of fluid in the flow path.
  • a fluid control part is arrange
  • the filter unit 11 is disposed between the first introduction port 12 and the fluid control unit, the speed at which the sample introduced into the first flow path from the first introduction port 12 passes through the filter unit 11 is increased. It can be controlled by the fluid control unit.
  • the fluid control unit may employ any configuration used for controlling the flow of fluid in the flow path by a fluid device or the like. Examples of the fluid control unit include an intake port, a pump, and a valve connected to the intake pump.
  • the fluid moves in the axial direction of the flow path from upstream to downstream.
  • This direction may be referred to as the first direction or the axial direction of the first flow path.
  • the first direction is a direction from the first inlet 12 toward the filter unit 11, and when the valve V1 is provided, the first direction is a direction from the filter unit 11 toward the valve V1.
  • the first flow path 10 may further include a waste liquid recovery unit that recovers the cleaning liquid in a cleaning process described later.
  • the second flow path 20 is connected to the filter unit 11 of the first flow path 10 in a direction different from the axial direction of the first flow path 10.
  • the second flow path 20 intersects the first flow path 10 at the filter unit 11.
  • the second flow path 20, the second introduction port 22, and valves V ⁇ b> 2 a and V ⁇ b> 2 b disposed on both sides sandwiching the connecting portion between the first flow path 10 are provided.
  • the angle at which the second flow path 20 intersects the first flow path 10 is not particularly limited, and may be an arbitrary angle.
  • the second flow path 20 is orthogonal to the first flow path 10.
  • the second flow path 20 and the first flow path 10 are disposed on substantially the same plane. By arranging these flow paths on substantially the same plane, the blood component separation device can be miniaturized.
  • the second inlet 22 is used to introduce a reagent such as a hemolytic agent into the second flow path 20.
  • the second inlet 22 may have a funnel shape so that a reagent or the like can be easily introduced.
  • the second introduction port 22 may be configured to be connected to a chemical solution port or the like (not shown).
  • the valves V2a and V2b are for controlling the second flow path 20 to an open state or a closed state.
  • the structure of the valves V2a and V2b is not particularly limited, and any valve used for a fluid device or the like can be used. As an example, a valve similar to the above-described valve V1 may be employed.
  • the valves V2a and V2b are arranged in the vicinity of the filter unit 11 as an example. In order to reduce the dead volume, for example, the valves V2a and V2b are preferably in contact with the filter unit 11.
  • the distance between the ends of the valves V2a, V2b and the filter unit 11 is a few millimeters at most. It is preferable that it is a grade.
  • the distance between the ends of the valves V2a and V2b and the end of the filter unit 11 is about 0 to 10 mm, and is about 0 to 5 mm.
  • valve V2a By providing the valve V2a, the valve V2a is closed while the blood cell component and the plasma component are separated in the first flow path 10, and the valve V2a is released after the separation reaction between the blood cell component and the plasma component. It becomes possible. This is effective when a reagent is introduced into the second inlet 22 in advance. In addition, by providing the valve V2b, it is possible to retain a reagent or the like in the second flow path 20. This is effective when it takes time to react the components in the filter unit 11 with the reagents.
  • the side of the second flow path 20 opposite to the second introduction port 22 with respect to the filter unit 11 may be closed or opened. Alternatively, it may be connected to a waste liquid recovery unit or the like.
  • the fluid moves in a second direction different from the first direction.
  • the second direction is a direction different from the axial direction of the first flow path, and is the axial direction of the second flow path.
  • the second direction is a direction from the second introduction port 22 toward the filter unit 11.
  • the third flow path 30 is connected to the filter unit 11 of the first flow path 10 in a direction different from the axial direction of the first flow path 10.
  • the third flow path 30 intersects the first flow path 10 at the filter unit 11 at a position different from the second flow path 20.
  • the first introduction port 12, the connection portion with the second flow path 20, and the connection portion with the third flow path 30 are arranged in this order.
  • the connection part with the 1st inlet 12, the 3rd flow path 30, and the 2nd flow path 20 may be arrange
  • the third flow path 30 includes valves V3a and V3b that are arranged on both sides of the connection portion with the first flow path 10.
  • the angle at which the third flow path 30 intersects the first flow path 10 is not particularly limited, and can be any angle.
  • the second channel 20 and the third channel may intersect the first channel 10 at substantially the same angle.
  • the third flow path 30 is orthogonal to the first flow path 10.
  • the third flow path 30 is disposed on substantially the same plane as the first flow path 10 and the second flow path 20. By arranging these flow paths on substantially the same plane, the blood component separation device can be miniaturized.
  • the valves V3a and V3b are for controlling the third flow path 30 to an open state or a closed state.
  • the valves V3a and V3b are disposed on both sides of the connection portion with the first flow path 10.
  • the valve V3a, the connection portion with the first flow path 10, and the valve V3b are arranged in this order.
  • the structure of the valves V3a and V3b is not particularly limited, and any valve used for a fluid device or the like can be used. As an example, valves similar to the above-described valves V1, V2a, and V2b may be employed.
  • the valves V3a and V3b are arranged in the vicinity of the filter unit 11 as an example.
  • the valves V3a and V3b and the filter unit 11 are preferably in contact with each other.
  • the distance between the ends of the valves V3a, V3b and the filter unit 11 is a few millimeters at most. It is preferable that it is a grade.
  • the distance between the ends of the valves V3a and V3b and the end of the filter unit 11 is about 0 to 10 mm, and is about 0 to 5 mm.
  • the blood component separation device of the present embodiment may be configured not to provide the valves V3a and V3b, or may be configured to provide only one of the valves V3a and V3b.
  • the valve V3a By providing the valve V3a, the valve V3a is closed while the blood cell component and the plasma component are separated in the first flow path 10, and the valve V3a is released after the separation reaction between the blood cell component and the plasma component. It becomes possible.
  • the valve V3b it is possible to retain a reagent or the like in the third flow path 30. This is effective when it takes time to react the components in the filter unit 11 with the reagents.
  • the third flow path 30 is connected to the blood cell analysis unit 60.
  • the blood cell analyzer 60 is for analyzing the blood cells captured by the filter unit 11. As will be described later, the blood cells captured by the filter unit 11 are hemolyzed by a hemolyzing agent or the like, and are carried to the blood cell analysis unit 60 via the third flow path 30.
  • the blood cell analyzer 60 can be configured to analyze any blood cell component according to the purpose.
  • the blood cell analysis unit 60 may be configured to analyze hemoglobin A1c (HbA1c) (HbA1c measurement unit).
  • the blood cell analysis unit 60 includes a configuration for measuring HbA1c by a latex agglutination method.
  • the blood cell analyzer 60 may have a configuration for measuring the amount of hemoglobin.
  • the blood cell analyzer 60 may have a configuration for measuring the activity of erythrocyte enzymes, typified by glucose 6-phosphate dehydrogenase and pyruvate kinase.
  • the blood cell analysis unit 60 may analyze a single item, or may analyze a plurality of items. Since the blood component separation device includes the blood cell analysis unit 60, the blood cell component separated by the filter unit 11 can be directly analyzed in the device. Since the blood cell component is fed from the filter unit 11 to the blood cell analysis unit 60 via the flow path on the blood component separation device, there is no risk of contamination and the blood cell component can be easily analyzed. .
  • the blood component separation device of the present embodiment may include a blood cell analysis unit 60 and / or a blood cell collection unit.
  • the blood component separation device of the present embodiment may have a configuration in which a blood cell collection unit is provided instead of the blood cell analysis unit 60 and the blood cell component captured by the filter unit 11 and hemolyzed is collected.
  • the collected blood cell components may be analyzed using a manual operation, a blood cell analyzer (such as a HbA1c measuring device), or the like, or may be stored for later analysis. Moreover, it is good also as a structure which provides a blood cell collection
  • the third flow path 30 may further include a fluid control unit that controls the flow of fluid in the flow path. Since the third flow path 30 includes the fluid control unit, the flow of fluid from the filter unit 11 to the third flow path 30 can be controlled.
  • the fluid control unit may employ any configuration used for controlling the flow of fluid in the flow path by a fluid device or the like. Examples of the fluid control unit include an intake port, a pump, and a valve connected to the intake pump.
  • the other end of the third flow path 30 that is not connected to the blood cell analyzer 60 may be closed or open. Alternatively, it may be connected to a waste liquid recovery unit or the like.
  • the fluid moves in a third direction different from the first direction.
  • the third direction is the axial direction of the third flow path 30.
  • the third direction is a direction from the filter unit 11 toward the blood cell analysis unit 60 or the blood cell collection unit.
  • the second flow path 20 and the third flow path 30 may be substantially parallel. In this case, the second direction and the third direction are substantially the same.
  • the valve V1 is opened, and the valves V2a, V2b, V3a, V3b are closed.
  • a blood sample is introduced into the first channel 10 from the first inlet 12.
  • the blood sample is not particularly limited as long as it contains a blood cell component and a plasma component, and an example is a whole blood sample.
  • the blood sample may be a blood sample obtained by removing white blood cells and the like.
  • the blood sample introduced into the first flow path 10 from the first introduction port 12 passes through the filter unit 11. At this time, blood cells are selectively captured by the filter. Most of the plasma passes through the filter. Some plasma may remain on the filter.
  • the first flow path 10 includes a fluid control unit
  • the flow of the blood sample passing through the filter unit 11 may be controlled by the fluid control unit. By controlling the flow of the blood sample, the blood sample passing speed in the filter unit 11 can be shortened.
  • the plasma that has passed through the filter unit 11 is analyzed in the plasma analysis unit 50 connected to the first flow path 10.
  • the plasma may be recovered in the plasma recovery unit.
  • the washing solution is not particularly limited as long as it does not destroy blood cells, and a known cell washing solution or the like can be used.
  • the washing liquid include phosphate buffered saline (PBS), physiological saline, and the like.
  • PBS phosphate buffered saline
  • the flow of the cleaning liquid that passes through the filter unit 11 may be controlled by the fluid control unit.
  • the washing solution that has washed the filter unit may be collected by the plasma analysis unit 50, and if the first flow path 10 includes a plasma collection unit or a waste solution collection unit, they may be collected by these.
  • the above-described cleaning process may be performed by opening the valve V2a and introducing the cleaning liquid from the second introduction port 22.
  • the cleaning liquid introduced from the second introduction port 22 is introduced into the filter unit 11 via the second flow path 20.
  • the plasma remaining in the filter unit 11 can be removed by the washing liquid introduced into the filter unit 11 as described above.
  • the valve V1 when one end of the third flow path 30 having the valve V3a is connected to the waste liquid recovery unit, the valve V1 is closed, the valve V3a is opened, and the cleaning liquid is supplied from the first introduction port 12. It may be introduced.
  • the plasma remaining in the filter unit 11 can be collected together with the washing solution in the waste liquid collecting unit connected to the third channel 30 via the third channel 30.
  • the valves V2a and V3a may be opened and the cleaning liquid may be introduced from the second introduction port 22 into the filter unit 11 via the second flow path.
  • the plasma remaining in the filter unit 11 can be collected together with the washing solution in the waste liquid collecting unit connected to the third channel 30 via the third channel 30.
  • a hemolytic agent is introduced into the second flow path 20 from the second introduction port 22.
  • Any hemolytic agent may be used as long as it can destroy blood cells (for example, erythrocytes), and any known hemolytic agent can be used without particular limitation.
  • the hemolytic agent include hypotonic solution, water and the like.
  • the hemolytic agent introduced from the second introduction port 22 reaches the filter unit 11 via the second flow path 20, and the filter unit 11 is in the same direction as the direction in which the blood sample has moved through the filter unit 11 (first direction). To move.
  • blood cells for example, red blood cells
  • the blood cell component released by hemolysis moves through the filter unit 11 together with the hemolytic agent, and moves to the third channel 30 when it reaches the connection with the third channel 30.
  • the fluid control unit causes the hemolytic agent to flow from the second flow path to the filter unit 11 and the third flow from the filter unit 11 to the third flow.
  • the flow of blood cell components to the path 30 may be controlled. By controlling these flows, the time required for the blood cell component to reach the blood cell analyzer 60 can be shortened.
  • the blood cell component moved from the filter unit 11 to the third flow path 30 is analyzed in the blood cell analysis unit 60 connected to the third flow path 30.
  • the blood cell component separation device includes a blood cell collection unit instead of the blood cell analysis unit 60, the blood cell component may be collected by the blood cell collection unit.
  • the hemolysis step may be performed by closing the valves V1, V2a, V2b, and V3a, opening the valve V3b, and introducing the hemolytic agent from the first introduction port 12.
  • the hemolytic agent introduced from the first introduction port 12 hemolyzes the blood cells captured by the filter unit 11, and the released blood cell components are sent to the blood cell analysis unit 60 via the third flow path in the same manner as described above. And move.
  • the plasma and blood cells can be separated and then each collected or analyzed.
  • the blood component separation device includes both the plasma analysis unit 50 and the blood cell analysis unit 60
  • plasma analysis and blood cell analysis can be performed simultaneously with one device, so that blood analysis can be performed quickly and easily. It can be performed. Since the blood cell separation part (filter part) and the plasma analysis part, and the blood cell separation part (filter part) and the blood cell analysis part are connected by the flow path, there is an advantage that there is no risk of contamination.
  • the conventional blood cell separation method cannot prevent the plasma from being mixed into the blood cell fraction, and the analysis result of the blood cell component may become unstable due to the plasma being mixed.
  • the measurement value becomes unstable, and a reliable measurement value cannot be obtained.
  • the plasma remaining on the filter can be removed by the washing liquid, so that the amount of plasma mixed into the blood cell fraction can be reduced. As a result, the influence of plasma in blood cell component analysis can be reduced, and stable blood cell component measurement values can be obtained.
  • the blood component separation device of the present embodiment is not limited to the aspect described above, and each component can be changed as appropriate without departing from the spirit of the present invention.
  • the following modifications 1 to 6 are also within the scope of the blood component separation device of the present embodiment.
  • FIG. 2 is a schematic diagram showing Modification 1 of the blood component separation device of the present embodiment.
  • Blood component separation device 200 has the same configuration as blood component separation device 100 except that it does not have third flow path 30.
  • the side of the second channel 20 opposite to the second inlet 22 with respect to the connection with the first channel is connected to the blood cell analyzer 60.
  • the valve V1 in the hemolysis step of hemolyzing the blood cells captured by the filter unit 11, the valve V1 is closed, the valves V2a and V2b are opened, and the second flow path 20 is opened from the second introduction port 22.
  • Introduce a hemolytic agent The hemolytic agent introduced into the second flow path 20 reaches the filter unit 11 via the second flow path 20, and a direction (second direction) different from the direction (first direction) in which the blood sample moves through the filter unit 11.
  • the filter unit 11 is moved in the direction).
  • the blood cells captured in the second direction in which the hemolytic agent moves are hemolyzed by the hemolytic agent.
  • the blood cell component released by hemolysis is transported from the filter unit 11 to the blood cell analysis unit 60 via the second flow path 20 and analyzed by the blood cell analysis unit 60.
  • the second flow path 20 may include a blood cell collection unit instead of the blood cell analysis unit 60 or in addition to the blood cell analysis unit 60.
  • the second flow path 20 may include a fluid control unit that controls the flow of fluid in the second flow path 20. The same applies to Modifications 4 and 5 described later.
  • FIG. 3 is a schematic diagram showing Modification Example 2 of the blood component separation device of the present embodiment.
  • the blood component separation device 300 has the same configuration as the blood component separation device 100 except that the second flow path 20 and the third flow path 30 do not intersect the first flow path 10.
  • the second flow path 20 and the third flow path 30 are configured to protrude from the filter unit 11, respectively.
  • the valve V1 in the hemolysis step of hemolyzing the blood cells captured by the filter unit 11, the valve V1 is closed, the valves V2a and V3a are opened, and the second flow path 20 is opened from the second introduction port 22. Introduce a hemolytic agent.
  • the hemolyzed hemolytic agent introduced into the second flow path 20 reaches the filter unit 11 via the second flow path 20 and is in the same direction as the direction in which the blood sample has moved through the filter unit 11 (first direction).
  • the filter unit 11 is moved.
  • blood cells captured by the filter are hemolyzed by the hemolytic agent.
  • the blood cell component released by hemolysis moves through the filter unit 11 together with the hemolytic agent, and moves to the third channel 30 when it reaches the connection with the third channel 30. Then, it is carried to the blood cell analyzer 60 via the third flow path 30 and analyzed by the blood cell analyzer 60.
  • FIG. 4 is a schematic diagram showing a third modification of the blood component separation device of the present embodiment.
  • the blood component separation device 400 has the same configuration as the blood component separation device 300 except that the second flow path 20 and the third flow path 30 are arranged in the same direction with respect to the first flow path 10. .
  • the hemolysis process can be performed in the same manner as the blood component separation device 300.
  • FIG. 5 is a schematic diagram showing a fourth modification of the blood component separation device of the present embodiment.
  • the blood component separation device 500 does not have the third flow path 30, and the second flow path 20 does not intersect the first flow path 10.
  • the second flow path 20 is connected to the blood cell analyzer 60.
  • the valve V1 in the hemolysis step of hemolyzing the blood cells captured by the filter unit 11, the valve V1 is closed, the valve V2a is opened, and the first introduction port 12 is connected to the first flow path 10.
  • Introduce hemolytic agent The hemolytic agent introduced into the first channel 10 reaches the filter unit 11 and moves the filter unit 11 in the same direction as the direction in which the blood sample has moved the filter unit 11 (first direction). At this time, blood cells captured by the filter are hemolyzed by the hemolytic agent.
  • the blood cell component released by hemolysis moves through the filter unit 11 together with the hemolytic agent, and moves to the second channel 20 when it reaches the connection with the second channel 20. Then, it is carried to the blood cell analyzer 60 via the second flow path 20 and analyzed in the blood cell analyzer 60.
  • the second flow path 20 may include a blood cell collection unit instead of the blood cell analysis unit 60 or in addition to the blood cell analysis unit 60.
  • the second flow path 20 may include a fluid control unit that controls the flow of fluid in the second flow path 20.
  • FIG. 6 is a schematic diagram showing a fifth modification of the blood component separation device of the present embodiment.
  • the blood component separation device 600 does not have the third flow path 30 and the second flow path 20 does not intersect the first flow path 10.
  • the second flow path 20 is connected to the blood cell analyzer 60.
  • the fourth flow path 40 is connected between the first introduction port 12 of the first flow path 10 and the filter unit 11.
  • the fourth flow path 40 includes a fourth introduction port 42 and a valve V4a.
  • the valve V1 in the hemolysis step of hemolyzing the blood cells captured by the filter unit 11, the valve V1 is closed, the valves V2a and V4a are opened, and the fourth flow path 40 is opened from the fourth inlet 42. Introduce a hemolytic agent.
  • the hemolyzed hemolytic agent introduced into the fourth flow path 40 reaches the first flow path 10 through the fourth flow path 40, moves through the first flow path 10, and reaches the filter unit 11.
  • the hemolytic agent moves through the filter unit 11 in the same direction as the direction in which the blood sample moves through the filter unit 11 (first direction). At this time, blood cells captured by the filter are hemolyzed by the hemolytic agent.
  • the blood cell component released by hemolysis moves through the filter unit 11 together with the hemolytic agent, and moves to the second channel 20 when it reaches the connection with the second channel 20. Then, it is carried to the blood cell analyzer 60 via the second flow path 20 and analyzed in the blood cell analyzer 60.
  • FIG. 7 is a schematic diagram showing Modification 6 of the blood component separation device of the present embodiment.
  • the blood component separation device 700 has a first flow path and a second flow path formed in the plate 70.
  • the first flow path is composed of first flow paths 10a and 10b
  • the second flow path is composed of second flow paths 20a, 20b and 20c.
  • the first flow paths 10a and 10b are connected to each other via a valve V1a.
  • the first flow path 10 a has a first introduction port 12 and a filter unit 11.
  • the first channel 10b includes a pump unit P1 as a channel controller and a plasma analyzer 50.
  • the first flow path 10b is connected to the inlet I1 through the valve V1f.
  • the inlet I1 is connected to a reagent reservoir (not shown) disposed below the plate 70. Therefore, the reagent can be introduced from the inlet I1 into the first flow path 10b by opening the valve V1f.
  • the first flow path 10b is connected to the waste liquid recovery unit W1 via the valve V1c or V1d.
  • the first flow path 10b forms a circulation flow path (first circulation path) by closing the valves V1a, V1c, V1d, and V1f and opening the valves V1b and V1e.
  • the first flow path 10b and the waste liquid collection unit W1 close the valves V1a, V1b, and V1f, and open the valves V1c, V1d, and V1e, thereby allowing fluid to be discharged from the first flow path 10b.
  • a flow path (first discharge path) for discharging to W1 is formed.
  • the second flow paths 20a and 20b are connected to each other via a valve V2e.
  • the second flow paths 20b and 20c are connected to each other via valves V2k and V2m.
  • the second flow path 20 a has a second introduction port 22.
  • the second inlet 22 is connected to a hemolytic agent reservoir (not shown) disposed below the plate 70, and the hemolytic agent can be introduced into the second flow path 20 a from the second inlet 22.
  • the second flow path 20a is connected to the filter portion 11 of the first flow path 10a and intersects the first flow path 10a.
  • Valves V2a and V2b are installed on both sides of the connection portion with the first flow path 10a in the second flow path 20a.
  • the second flow path 20a is connected to the inlet I2 via the valve V2d.
  • the inlet I2 is connected to a reagent reservoir (not shown) disposed below the plate 70. Therefore, the reagent can be introduced from the inlet I2 into the second flow path 20a by opening the valve V2d. Furthermore, the reagent can be introduced into the second flow path 20b by opening the valve V2e. Further, the second flow path 20a is connected to the air inlet A via a valve V2c.
  • the second flow path 20b includes a pump unit P2 as a fluid control unit and a blood cell analysis unit 60.
  • the second flow path 20b is connected to the waste liquid recovery unit W2 via the valve V2h or V2i. Therefore, the waste liquid can be discharged from the second flow path 20b to the waste liquid recovery part W2 by opening the valve V2h or V2i.
  • the second flow path 20c is connected to the inlet I3 through the valve V2n.
  • the inlet I3 is connected to a reagent reservoir (not shown) disposed below the plate 70.
  • the reagent can be introduced from the inlet I3 into the second flow path 20c by opening the valve V2n. Furthermore, the reagent can be introduced into the second flow path 20b by opening the valve V2k or the valve V2m.
  • the second flow path 20c is connected to the waste liquid recovery unit W2 via the valve V2j. Therefore, the waste liquid can be discharged from the second flow path 20c to the waste liquid recovery unit W2 by opening the valve V2j.
  • the second flow path 20b forms a circulation flow path (second circulation path) by closing the valves V2e, V2h, V2i, V2k, V2m and opening the valves V2f, V2g, V2l.
  • the second flow paths 20b and 20c are configured so that the valves V2e, V2h, V2i, V2j, V2l, and V2n are closed, and the valves V2f, V2g, V2k, and V2m are opened, so that the circulation flow path (third (Circulation path) is formed.
  • the second flow path 20b and the waste liquid collection unit W2 close the valves V2e, V2g, V2k, and V2m and open the valves V2f, V2h, V2i, and V2l, thereby allowing fluid to flow into the second flow path 20b.
  • a flow path (second discharge path) for discharging from the waste liquid to the waste liquid recovery unit W2 is formed.
  • the second flow paths 20b and 20c and the waste liquid recovery unit W2 close the valves V2e, V2g, V2i, V2k, V2l, and V2n and open the valves V2f, V2h, V2j, and V2m,
  • a flow path (third discharge path) for discharging the fluid from the second flow paths 20b and 20c to the waste liquid recovery unit W2 is formed.
  • the pump parts P1 and P2 are composed of three valves.
  • the valve include a diaphragm valve including a diaphragm member, and examples of the diaphragm member include an elastomer material.
  • FIGS. 8A and 8B are cross-sectional views for explaining an example of the structure of the diaphragm valve.
  • 8A shows the opened state of the diaphragm valve 800
  • FIG. 8B shows the closed state of the diaphragm valve 800.
  • the diaphragm valve 800 includes a first substrate 310, a diaphragm member 330 made of an elastomer material, and a second substrate 320.
  • the second substrate 320 and the diaphragm member 330 are bonded in close contact.
  • the space between the first substrate 310 and the diaphragm member 330 forms a flow path 315 through which a fluid flows.
  • a through hole 340 is provided in part of the second substrate 320. Further, the diaphragm member 330 is exposed in the through hole 340.
  • the diaphragm valve 800 is arranged in the flow path 315 (the first flow path 10b or the second flow path 20b in the blood component separation device 700), and adjusts the flow of fluid inside the flow path 315.
  • a convex portion is formed in the region of the first substrate 310 facing the through hole 340. 311 may be formed.
  • valve control fluid examples include N2 gas, gas such as air, and liquid such as water and oil.
  • the fluid for valve control can be supplied by, for example, a tube connected to the through hole 340.
  • the elastomer material forming the diaphragm member 330 is not particularly limited as long as it is a material that can be deformed in the axial direction of the through hole 340 in accordance with a change in pressure inside the through hole 340.
  • PDMS polydimethylsiloxane
  • Silicone elastomers such as polymethylphenylsiloxane and polydiphenylsiloxane.
  • a pump can be formed by three or more valves, that is, by arranging three or more valves.
  • FIGS. 9A to 9D are cross-sectional views illustrating the operation of an example of a pump including three diaphragm valves 800a, 800b, and 800c.
  • valve 800a is controlled to be closed, and the valves 800b and 800c are left open. As a result, the fluid flow inside the flow path 315 is blocked by the valve 800a.
  • valves 800a and 800b are controlled to be closed, and the valve 800c is left open.
  • the diaphragm member 330 is deformed, so that the fluid existing around the valve 800b is pushed away.
  • the valve 800a is in the closed state, the displaced fluid moves to the right in the direction indicated by the arrow in FIG. 9C, that is, FIG. 9C. As a result, the fluid flows in the direction indicated by the arrow.
  • valves 800b and 800c are controlled to be closed.
  • the diaphragm member 330 is deformed, so that the fluid existing around the valve 800c is pushed away.
  • the valve 800a since the valve 800a is in the closed state, the displaced fluid moves to the right side in the direction indicated by the arrow in FIG. 9D, that is, in FIG. 9D.
  • the valve 800a may be controlled to an open state as shown in FIG. 9D, or may be maintained in a closed state.
  • valves 800a, 800b and 800c are all controlled to be opened.
  • the fluid inside the flow path 315 may continue to move to the right as viewed in FIG. 9A due to inertia.
  • the flow of fluid inside the flow path 315 can be controlled by repeating the above steps.
  • the above process is an example of a method for controlling a pump including three valves, and the method for controlling a pump including three valves is not limited thereto.
  • the flow of the fluid inside the flow path 315 can be controlled in the opposite direction to that described above by reversing the timing of opening and closing the valves 800a and 800c. It is also possible to control the flow rate by adjusting the cycle in which the operations in FIGS. 9A to 9D are repeated to form a pulsed minute solution flow.
  • the flow velocity can also be controlled by adjusting the pressure of the gas driving the valves 800a to 800c and the diameter of the valve.
  • the structure of the diaphragm valve is not limited to that described above.
  • a diaphragm valve a cylindrical structure having an outer cylinder part and an inner cylinder part described in International Publication No. 2016/006615, and a thin film part arranged to cover one end of the inner cylinder part
  • a valve provided with a diaphragm member having a circumference of the thin film portion and an anchor portion closely attached along the inner wall of the outer cylinder portion and the outer wall of the inner cylinder portion may be used.
  • other usable valves include, for example, a two-color molded valve obtained by continuously molding a resin portion and an elastomer portion using two molds. Illustrated.
  • the two-color molded valve has advantages that the time required for production is short and the adhesiveness between the resin and the elastomer is high.
  • the substrate 909 includes a recess (eg, a flow path) 940A formed on a lower surface (one surface) 909a, a bottom of the recess 940A (eg, an upper side of the recess 90A in FIG. 10), and the substrate 909. And an opening 952 opening (penetrating) in the upper surface (other surface) 909b.
  • a valve driven unit 970 is provided in the opening 952.
  • the valve driven part 970 is made of the same soft material as the valve part 950 described above, and includes a valve part (deformation part) 971 and a cylinder part (connection part) 973.
  • the valve portion 971 closes the lower surface 909 a side of the substrate 909 in the opening 952.
  • the tubular portion 973 is formed of a single member with the valve portion 971, is provided along the inner peripheral surface of the opening portion 952, and is integrally connected to the valve portion 971 at the lower end.
  • the inner space of the cylinder portion 973 is closed at the lower end by the valve portion 971 and forms an opening 970a having an upper end opened.
  • a fluid eg, a solution containing a sample substance, a cleaning liquid, etc.
  • the lower surface 909a of the substrate 909 is joined to the upper surface 908b of the lower plate 908.
  • a curved surface (eg, hemispherical) concave surface 980 is formed on the upper surface 908b at a position facing the depression 940A.
  • the valve driven unit 970 having the above-described configuration is configured such that, for example, when a downward force (eg, air pressure, hydraulic pressure, mechanical force, etc.) is applied to the valve unit 971 through the opening 970a,
  • a downward force eg, air pressure, hydraulic pressure, mechanical force, etc.
  • the open / close state of the flow path eg, the depression 940A
  • the valve portion 971 is deformed and bent toward the recess 940 ⁇ / b> A and contacts the concave surface 980 to close the flow path (e.g., the recess 940 ⁇ / b> A) (the valve is closed).
  • valve driven portion 970 is released from the downward force applied to the valve portion 971, so that the deformation (eg, bending) of the valve portion 971 is eliminated and the flow path ( For example, the recess 940A) is opened (the valve is open).
  • the above-described two-color molded valve can be manufactured, for example, by the method described in International Publication No. 2018/012429.
  • known ones such as those described in International Publication No. 2018/012429 can be used without particular limitation.
  • the valves V1a, V1b, and V1e are opened, and the other valves are closed, and a blood sample (eg, a whole blood sample or the like) is introduced from the first inlet 12 into the first flow path 10a.
  • a blood sample eg, a whole blood sample or the like
  • the blood sample introduced into the first flow path 10a reaches the filter unit 11, and moves the filter unit 11 in the direction of the valve V1a (first direction). At this time, blood cells in the blood sample are captured by the filter.
  • most of the plasma passes through the filter unit 11 and reaches the first flow path 10b.
  • the valve V1a is closed and the pump unit P1 is operated as appropriate, the plasma that has reached the first flow path 10b can be circulated through the first circulation path including the first flow path 10b.
  • a reagent for plasma analysis is introduced from the inlet I1, and circulated through the first circulation path to be mixed with plasma.
  • the plasma analysis unit 50 can perform plasma analysis while circulating the plasma in the first circulation path.
  • the fluid circulating in the first circulation path can be discharged to the waste liquid recovery unit W1 through the first discharge path with the valves V1b and V1f being closed and the valves V1c, V1d and V1e being opened as necessary. .
  • valves V1a, V1c, V1d, and V1e are opened, the other valves are closed, and the cleaning liquid is introduced from the first introduction port 12 into the first flow path 10a.
  • the cleaning liquid introduced into the first flow path 10a reaches the filter unit 11, and moves the filter unit 11 in the valve V1a direction (first direction).
  • the plasma remaining on the filter moves in the first direction together with the washing liquid, and is introduced into the first flow path 10b through the valve V1a.
  • the washing liquid containing plasma introduced into the first flow path 10b can be discharged to the waste liquid collecting part W1 through the first discharge path with the valves 1b and V1f closed and the valves V1c, V1d and V1e opened. .
  • valves V2a, V2b, V2e, V2f, V2g, V2l are opened, the other valves are closed, and the hemolytic agent is introduced from the second inlet 22 into the second flow path 20a.
  • the hemolytic agent introduced into the second flow path 20a reaches the filter unit 11 and moves the filter unit 11 in the valve V2b direction (second direction).
  • the blood cells captured by the filter are hemolyzed by the hemolytic agent.
  • the blood cell component released by hemolysis moves in the second flow path 20a along with the hemolytic agent in the axial direction, and is introduced from the valve V2b to the second flow path 20b via the valve V2e.
  • valve V2b is closed, the valve V2c is opened, and air is blown into the second flow path 20a from the air inlet A. It can guide to the flow path 20b.
  • the blood cell component introduced into the second flow path 20b can be circulated through the second circulation path including the second flow path 20b by closing the valve V2e and appropriately operating the pump part P2.
  • a reagent for blood cell analysis is introduced from inlet I2, and circulated through the second circulation path to be mixed with blood cell components.
  • a reagent for blood cell analysis is introduced from the inlet I3 and circulated through the third circulation path including the second flow paths 20b and 20c to be mixed with the blood cell component.
  • the blood cell analysis unit 60 can perform blood cell analysis while circulating the blood cell component in the second circulation path or the third circulation path.
  • the fluid circulating through the second circulation path or the third circulation path can be discharged to the waste liquid recovery unit W2 through the second discharge path or the third discharge path as necessary.
  • the present invention provides a method for separating blood components using the blood component separation device of the above embodiment.
  • the method of this embodiment includes (a) introducing a blood sample from the first introduction port into the first flow path, and causing the filter to capture blood cells in the blood sample; and (b) the first A hemolysis step of introducing a hemolytic agent from the introduction port or the second introduction port and hemolyzing the blood cells in the filter.
  • the blood component separation method of the present embodiment can be performed in the same manner as the method exemplified in “(Usage method)” described in the above “[Blood component separation device]”.
  • the cleaning liquid is supplied from the first introduction port or the second introduction port.
  • the present invention provides a method for analyzing blood components using the blood component separation device of the above embodiment.
  • the method of this embodiment includes (a) introducing a blood sample from the first introduction port into the first flow path, and causing the filter to capture blood cells in the blood sample; and (b) the step ( After a), a step of introducing a washing liquid into the first flow path from the first introduction port or the second introduction port to remove plasma in the filter, and (c) after the step (b) Introducing a hemolytic agent from the first inlet or the second inlet and hemolyzing the blood cells in the filter; (d) analyzing the blood cells hemolyzed in the step (c); including.
  • the blood component analysis method of the present embodiment can be performed in the same manner as the method exemplified in “(Usage method)” described in “[Blood component separation device]” above.
  • the blood cell analysis unit 60 can analyze the blood cell component in the step (d).
  • the method of the present embodiment further includes (d) a step of analyzing the plasma that has passed through the filter after the step (a) or the step (b). May be included.
  • a blood component separation device including the plasma analysis unit 50 the plasma analysis can be performed by the plasma analysis unit 50.
  • the present invention provides a method for analyzing hemoglobin A1c.
  • the method of this embodiment includes (a) a step of capturing blood cells in a blood sample with a filter that separates blood cells and plasma, and (b) a washing liquid is passed through the filter after the step (a), Removing the plasma in the filter; (c) after the step (b), introducing a hemolytic agent into the filter and hemolyzing the blood cells in the filter; and (d) in the step (c) Analyzing hemoglobin A1c in the hemolyzed blood cells.
  • the method of the present embodiment can be performed in the same manner as the method exemplified in “(Usage method)” described in “[Blood component separation device]” above. Further, the method of this embodiment may be performed using a column or the like equipped with a blood cell separation filter without using the blood component separation device of the above embodiment.
  • HbA1c can be performed using a known HbA1c measurement method.
  • a method for measuring hemoglobin A1c include latex agglutination.
  • latex agglutination method latex particles are adsorbed with HbA1c (adsorption reaction), reacted with an anti-HbA1c antibody (mouse IgG or the like), and further reacted with a secondary antibody (anti-mouse IgG antibody or the like).
  • HbA1c is cross-linked by the anti-HbA1c antibody and the secondary antibody, and latex particles aggregate (aggregation reaction). The higher the HbA1c concentration, the greater the amount of latex particles aggregated.
  • Non-aggregated latex particles do not reflect light, but when aggregated, light is reflected, so the amount of transmitted light varies depending on the amount of latex particles aggregated. Therefore, the HbA1c concentration can be measured by measuring the absorbance after the aggregation reaction. As an example, the HbA1c concentration can be calculated from a value obtained by subtracting the absorbance at 800 nm from the absorbance at 660 nm.
  • the measured value of HbA1c becomes unstable when plasma is present, and a highly reliable measured value cannot be obtained.
  • blood cells are captured by the filter, and then the filter is washed with a washing solution to remove plasma in the filter. Thereby, the amount of plasma mixed in the blood cell component hemolyzed by the hemolytic agent can be greatly reduced. Therefore, a highly reliable HbA1c measurement value can be obtained.
  • HbA1c concentration 6.1%, HbA1c concentration 10%; hemoglobin A1c cut-off test certified reference material, laboratory medicine reference material mechanism Human plasma was added so as to be 60% (v / v).
  • the HbA1c concentration of the HbA1c standard test reagent to which human plasma was added was measured by a latex agglutination method using Lapidia (registered trademark) Auto HbA1c-L (Fujirebio).
  • the plasma content in the sample is desirably 15% (v / v) or less.
  • Cyra-added rabbit whole blood was prepared by adding 1 ⁇ L of Cy5 and mixing it with 1000 ⁇ L of rabbit whole blood to trace plasma components.
  • the Cy5-added rabbit whole blood sample was centrifuged (centrifugal force (1000 ⁇ g), 5 minutes) to separate a blood cell fraction and a plasma fraction.
  • a dilution series of the blood cell fraction and the plasma fraction was prepared, and a calibration curve for the amount of hemoglobin and the amount of Cy5 was prepared using each dilution series.
  • the blood cell separation of the Cy5-added rabbit whole blood sample was performed using a blood component separation device having the structure shown in FIG.
  • the ports a and c of the second flow path are closed, 100 ⁇ L of hypotonic solution is introduced from the port d of the third flow path, the blood cell fraction captured by the filter is dissolved, and hemolysis is performed from the port b.
  • the collected blood cell fraction was collected.
  • the collected blood cell fraction was measured for hemoglobin absorbance and Cy5 fluorescence, and the plasma content in the blood cell fraction was calculated from the calibration curve prepared above.
  • FIG. 16 is a photograph of each blood component separation device after the blood cell fraction was collected after washing the filter with each PBS amount. Comparing the color of the liquid immediately after passing through the filter (dotted oval), it was qualitatively shown that the blue component of Cy5 becomes lighter as the amount of cleaning liquid increases. When the blue portion of Cy5 was plasma, it was considered that most of the plasma in the filter was removed with a washing liquid volume of 25 ⁇ L.
  • Example 5 Reproducibility evaluation of measured values of HbA1c (Example 1) Using a blood component separation device having the structure shown in FIG. 11, blood cell separation of human refrigerated blood (normal human whole blood / type O, Kojin Bio) was performed. From the inlet, 10 ⁇ L of human chilled blood was introduced into the first flow path, negative pressure was applied at 10 kPa for 2 minutes from the opposite side of the inlet, and the human chilled blood was passed through the filter. Next, PBS 25 ⁇ L, 25 ⁇ L, or 30 ⁇ L was introduced into the first channel from the inlet (10 kPa negative pressure: 2 minutes), and the filter was washed.
  • human refrigerated blood normal human whole blood / type O, Kojin Bio
  • the port a of the second flow path and the port d of the third flow path are closed, 100 ⁇ L of hypotonic solution is introduced from the port c of the second flow path, and the blood cell fraction captured by the filter is dissolved.
  • the hemolyzed blood cell fraction was collected from port b of the third flow path.
  • a latex agglutination method using Lapidia (registered trademark) Auto HbA1c-L was performed using 5 ⁇ L of the hemolyzed blood collected as described above, and absorbance at 660 nm and 800 nm was measured. From the measured absorbance, the HbAc1 concentration and the coefficient of variation (CV) were calculated.
  • Example 1 The results of Example 1 and Comparative Examples 1 and 2 are shown in FIG. In Example 1, as compared with Comparative Examples 1 and 2, it was confirmed that the coefficient of variation (CV) was small and measurement with high reproducibility was possible.
  • CV coefficient of variation
  • the port a of the second channel and the port d of the third channel are closed, 50 ⁇ L of hypotonic solution is introduced from the port c of the second channel, and the blood cell fraction captured by the filter is dissolved.
  • the hemolyzed blood cell fraction was collected from port b of the third flow path.
  • the recovery of the hemolyzed blood was finished.
  • a latex agglutination method using Lapidia (registered trademark) Auto HbA1c-L was performed, and absorbance at 660 nm and 800 nm was measured.
  • the coefficient of variation (CV) was calculated from the measured absorbance.
  • the blood cell fraction of human whole blood was separated by centrifugal separation (centrifugal force (1000 ⁇ g), 5 minutes), and the absorbance at 660 nm and 800 nm was measured in the same manner.
  • HbAc1 concentration of human whole blood was measured using Affinion (registered trademark) HbAic (Alere)
  • the HbAc1 concentration was 5.06%.
  • Results are shown in FIG. In FIG. 18, a standard specimen (HbA1c concentration 6.1%, HbA1c concentration 10%; hemoglobin A1c cut-off test certified reference material, laboratory medicine reference material mechanism) was measured using Rapidia (registered trademark) Auto HbA1c-L. The results are also shown.
  • the measured HbA1c value equivalent to the blood cell fraction obtained by the centrifugation method was obtained.
  • the coefficient of variation (CV) was small compared with the centrifugation method.
  • the blood cell fraction separated using the blood component separation device had a lower measured value by the latex agglutination method than the standard specimen.
  • the HbA1c concentration of normal human whole blood is 6% or less. Therefore, the reliability of the measured value by this method was shown by comparison with the measured value of the standard specimen (HbA1c concentration 6.1%, HbA1c concentration 10%).

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Abstract

第１導入口（１２）と、血球と血漿とを分離するフィルターが設置されたフィルター部（１１）と、を備える第１流路（１０）と、前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路（２０）と、を含む、血液成分分離デバイス。

Description

血液成分分離デバイス、血液成分分離方法、及び血液成分分析方法
　本発明は、血液成分分離デバイス、血液成分分離方法、及び血液成分分析方法に関する。
　血液検査を行う際には、通常、血球成分と血漿成分とに分離され、それぞれ分析が行われる。血球成分と血漿成分とを分離する方法としては、遠心分離法、血球分離フィルターを用いる方法等がある。
　しかし、遠心分離法では、遠心分離の操作が煩雑であった。また、血球分離フィルターとしては、例えば、特許文献１には、血液濾過用のガラス繊維フィルター等が記載されている。しかし、従来の血球分離フィルターを用いた方法では、血球画分への血漿成分の混入を十分に防ぐことができなかった。
特開２００６－３８５１２号公報
　本発明の一実施態様は、血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、を含む、血液成分分離デバイス、である。前記第２流路は、第２導入口を有し、且つ前記第１流路の前記フィルター部で前記第１流路と交差していてもよい。
　また、本発明の一実施態様は、前記血液成分分離デバイスを用いて、血液成分を分離する方法であって、（ａ）前記第１導入口から、血球と血漿とを含む溶液を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記溶液中の血球を捕捉させ、前記溶液中の血漿を前記第１流路において移動させる工程と、（ｂ）前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させ、溶血により放出された血球成分を前記第２流路において移動させる工程と、を含む、方法である。
　また、本発明の一実施態様は、前記血液成分分離デバイスを用いて、血液成分を分析する方法であって、（ａ）前記第１導入口から、血球と血漿とを含む溶液を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記溶液中の血球を捕捉させる工程と、（ｂ）前記工程（ａ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、（ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球を分析する工程と、を含む、方法である。
　また、本発明の一実施態様は、ヘモグロビンＡ１ｃを分析する方法であって、（ａ）血球と血漿とを分離するフィルターに血球と血漿とを含む溶液中の血球を捕捉させる工程と、（ｂ）前記工程（ａ）の後、前記フィルターに洗浄液を通過させ、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記フィルターに溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、（ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球中のヘモグロビンＡ１ｃを分析する工程と、を含む、方法である。
本発明の１実施形態に係る血液成分分離デバイスの一例を示す模式図である。 本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例１を示す模式図である。 本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例２を示す模式図である。 本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例３を示す模式図である。 本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例４を示す模式図である。 本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例５を示す模式図である。 本発明に係る血液成分分離デバイスの変形例６を示す模式図である。 （ａ）及び（ｂ）は、図７の血液成分分離デバイス７００のポンプ部Ｐ１、Ｐ２の構造の一例を示す断面図である。 （ａ）～（ｄ）は、図８のポンプ部の一例の動作を説明する断面図である。 図７の血液成分分離デバイス７００のポンプ部Ｐ１、Ｐ２に適用可能な２色成型バルブの構造の一例を示す断面図である。 図７の血液成分分離デバイス７００のポンプ部Ｐ１、Ｐ２に適用可能な２色成型バルブの構造の一例を示す断面図である。 実験例２において、ＨｂＡ１ｃ測定値に及ぼす血漿含有量の影響を評価した結果を示すグラフである。 実験例３～７で用いた血液成分分離デバイスの構造を示す模式図である。 実験例３において、血球画分中の血漿を測定した結果を示すグラフである。 実験例４において、血球画分中の血漿を測定した結果を示すグラフである。 実験例５において、２０μＬ、２５μＬ又は３０μＬの洗浄液でフィルターを洗浄後、血球を溶血して回収した後の各血液成分分離デバイスの写真である。 実験例６において、ＨｂＡ１ｃ測定値の再現性を評価した結果を示すグラフである。 実験例７において、ＨｂＡ１ｃ測定値の再現性を評価した結果を示すグラフである。
　以下、場合により図面を参照しつつ、本発明の実施形態について詳細に説明する。なお、図面中、同一又は相当部分には同一又は対応する符号を付し、重複する説明は省略する。なお、各図における寸法比は、説明のため誇張している部分があり、必ずしも実際の寸法比とは一致しない。
［血液成分分離デバイス］
　１実施形態において、本発明は、第１導入口と、血球と血漿とを分離するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、を含む、血液成分分離デバイスを提供する。
　図１は、本実施形態の血液成分分離デバイスの一例を示す模式図である。血液成分分離デバイス１００は、第１流路１０、第２流路２０、第３流路３０、血漿分析部５０、及び血球分析部６０を備えている。第１流路１０は、第１導入口１２とフィルター部１１とを有している。第２流路２０及び第３流路３０は、第１流路１０のフィルター部１１に接続し、フィルター部１１で第１流路１０と交差している。
　第１流路１０、第２流路２０、及び第３流路３０は、例えば、ガラス管、樹脂管等の管で形成してもよく、貼り合された２枚のプレートの間に溝を形成することにより流路を形成してもよい。
　第１流路１０、第２流路２０、及び第３流路３０の幅及び高さは、特に限定されず、試料の種類に応じて、任意に選択すればよい。例えば、これらの流路の幅及び高さは、試料が通過できる程度の大きさとすることができ、１μｍ以上、１０μｍ以上、５０μｍ以上、１００μｍ以上等が例示される。第１流路１０、第２流路２０、及び第３流路３０の幅は、それぞれ同じであってもよく、異なっていてもよい。例えば、全血試料を用いる場合、第１流路１０の直径としては、５０μｍ以上、８０μｍ以上、１００μｍ以上等が例示できる。これらの流路の幅及び高さの上限値は、特に限定されず、血液成分分離デバイスのサイズに応じて適宜選択すればよい。これらの流路の幅及び高さの上限値としては、例えば、１００ｍｍ以下、５０ｍｍ以下、１０ｍｍ以下、５ｍ以下、２ｍｍ以下等が挙げられる。一例として、幅０．５～２．０ｍｍ程度、高さ０．２ｍｍ～２．０ｍｍ程度が挙げられる。
　第１流路１０、第２流路２０、及び第３流路３０の形状は、特に限定されず、流路断面が円形であってもよく、矩形であってもよい。
（第１流路）
　第１流路１０は、第１導入口１２、フィルター部１１、及びバルブＶ１を備えている。
　第１導入口１２は、第１流路１０に血球と血漿とを含む溶液を導入する。また、その他の試料や試薬等を導入するために用いられてもよい。第１導入口１２は、試料を導入しやすいように漏斗状になっていてもよい。
　フィルター部１１は、流路内に血球を捕捉するフィルターが設置された部位である。血球を捕捉するフィルターは、血液中の血球を選択的に捕捉して、血漿を含む、血液中の血球以外の成分から分離する。そのため、血液中の血球と血漿とを分離することが可能となる。フィルターは血球を捕捉し、且つ血漿が通過可能な材質及び構造を備えるものであれば特に限定されず、公知の血球分離フィルターを用いることができる。
　フィルターとしては、例えば、多孔質膜や、ガラス繊維膜等が例示される。フィルターの材料としては、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリビニルアルコール、ウレタン、アクリル、レーヨン、ガラス等が挙げられる。
　フィルターとしては、例えば、上記素材を成形した繊維を不織布状に集積させたもの、上記素材を用いて連続孔が形成された連続気泡発泡体などの成形体、上記素材を成形した略球形の微粒子を細密充填構造となるように集積したもの、あるいはこの集積したものを焼結することにより一体成形したもの、上記素材を成形したフィルムに貫通孔を形成させたもの、あるいはフィルムの片面ないし両面にコロナ放電やプレス加工によりシボ加工したシートを多数枚積層したもの等が挙げられる。
　フィルターの平均孔径は、血球を捕捉し且つ血漿の通過を阻害しない程度であればよく、例えば、２～１０μｍ、又は３～８μｍ等が挙げられる。平均孔径は、バブルポイント試験法（ＪＩＳ　Ｋ　３８３２）や電子顕微鏡による拡大画像を用いた実測法などにより計測される。
　フィルターの空隙率は、特に限定されないが、実用可能な濾過時間の確保及びフィルタの安定性を維持するために、例えば、２０～９７％、３０～９５％等が例示される。
　バルブＶ１は、第１流路１０を開状態又は閉状態に制御するためのものである。バルブＶ１は、第１流路１０において、フィルター部１１に対して、第１導入口１２とは逆側に配置されている。第１流路１０において、第１導入口１２、フィルター部１１、及びバルブＶ１が、この順に並んでいる。この時、第１導入口１２が第１流路１０の上流側であり、バルブ部Ｖ１は下流側である。第１導入口１２から導入された溶液は、フィルター部１１を通過し、バルブ部Ｖ１に向かって流れる。バルブＶ１の構造は、特に限定されず、流体デバイス等に使用される任意のバルブを用いることができる。一例として、後述する、図７におけるポンプ部Ｐ１、Ｐ２を構成するバルブと同様のものを用いることができる。
　バルブＶ１は、一例として、フィルター部１１の下流側の末端の近傍に配置されている。デッドボリュームを小さくするため、例えば、バルブＶ１とフィルター部１１とが接していることが好ましい。あるいは、バルブＶ１とフィルター部１１との間が離れて配置されている場合であっても、バルブＶ１の端部とフィルター部１１の端部との間の距離は広くとも数ミリ程度であることが好ましい。バルブＶ１の端部とフィルター部１１の端部との距離は、０～１０ｍｍ程度であり、０～５ｍｍ程度である。バルブＶ１をフィルター部１１の近傍に配置することにより、後述する溶血工程により溶血された血球画分を第２流路２０又は第３流路３０を介して、効率よく回収することができる。
　なお、本実施形態の血液成分分離デバイスは、バルブＶ１を設けない構成としてもよい。また、第１導入口１２とフィルター部１１とが離れて配置されている場合には、第１導入口１２とフィルター部１１との間にもバルブを設けるようにしてもよい。
　第１流路１０の、フィルター部１１に対する、第１導入口１２とは逆側は、血漿分析部５０に接続している。血漿分析部５０は、フィルター部１１を通過した血漿を分析するためのものである。血漿分析部５０は、目的に応じて任意の血漿成分を分析可能な構成とすることができる。例えば、血漿分析部５０は、グルコース分析部であってもよい。血漿分析部５０は、全コレステロール、ＬＤＬ、ＨＤＬ、ＴＧ、ＵＡ、血中クレアチニン、アルブミン、総タンパク質、ＡＬＴ、ＡＳＴ、γＧＴＰ、ＢＵＮ、Ｋイオン、Ｎａイオン、Ｃａイオン、及びＣｌイオン等を分析するものであってもよい。また、血漿分析部５０は、ＢＶ、ＨＣＶ、ＣＲＰ、ｃＴｎＴ、ｃＴｎＩ、ＢＮＰ、Ｈ－ＦＡＢ、ＣＫ－ＭＢ、及びＩＬ－６等を分析するものであってもよく、腫瘍マーカー、ｍｉＲＮＡ等を分析するものであってもよい。血漿分析部５０は、単独項目を分析するものであってもよく、複数項目を分析するものであってもよい。　血液成分分離デバイスが、血漿分析部５０を備えることにより、フィルター部１１で分離した血漿成分をそのままデバイス内で分析することができる。フィルター部１１から血漿分析部５０までは血液成分分離デバイス上の流路を介して、血漿成分が送液されるため、コンタミネーション等のおそれや、装置の汚染等の心配がなく、簡便な血漿成分の分析が可能となる。また、血球成分の分離からダイレクトに血漿成分を測定できるので、非特異的な測定物のロスがなくなり精度が上がり、さらに検査時間が短時間になる。
　本実施形態の血液成分分離デバイスは、血漿分析部５０及び／又は血漿回収部を設けてもよい。あるいは、本実施形態の血液成分分離デバイスは、血漿分析部５０の替わりに、血漿回収部を設け、フィルター部１１を通過した血漿を回収する構成としてもよい。回収した血漿は、手作業や血漿分析装置等を用いて分析を行ってもよく、後の分析等のために保存してもよい。また、血漿分析部５０とともに、血漿回収部を設ける構成としてもよい。この場合、血漿分析部５０で分析を終えた血漿を、血漿回収部で回収する構成とすることができる。
　第１流路１０は、さらに、流路内の流体の流れを制御する流体制御部を備えていてもよい。第１流路１０が、流体制御部を備える場合、一例として、流体制御部は、フィルター部に対して、第１導入口とは逆側に配置される。この場合、第１導入口１２と流体制御部との間にフィルター部１１が配置されるため、第１導入口１２から第１流路内に導入された試料がフィルター部１１を通過する速度を、流体制御部により制御することができる。
　流体制御部は、流体デバイス等で流路内の流体の流れを制御するために用いられる任意の構成を採用することができる。流体制御部としては、例えば、吸気ポンプに接続する吸気ポート、ポンプ、バルブ等が挙げられる。
　第１流路１０において、流体は、流路の軸方向を上流から下流に向かって移動する。この方向を第１方向、または、第１流路の軸方向と称してもよい。第１方向とは、第１導入口１２からフィルター部１１へと向かう方向であり、また、バルブＶ１を備える場合、フィルター部１１からバルブＶ１に向かう方向である。
　また、第１流路１０は、さらに、後述する洗浄工程において、洗浄液を回収する廃液回収部等を備えていてもよい。
（第２流路）
　第２流路２０は、第１流路１０の軸方向とは異なる方向において、第１流路１０のフィルター部１１に接続している。第２流路２０は、フィルター部１１で第１流路１０と交差している。第２流路２０、第２導入口２２と、第１流路１０との接続部を挟んだ両側に配置されるバルブＶ２ａ、Ｖ２ｂとを備えている。
　第２流路２０が、第１流路１０と交差する角度は、特に限定されず、任意の角度とすることができる。一例として、第２流路２０は、第１流路１０と直交している。また、一例として、第２流路２０と第１流路１０とは、略同一平面上に配置される。これらの流路を略同一平面上に配置することにより、血液成分分離デバイスを小型化することができる。
　第２導入口２２は、第２流路２０に、溶血剤等の試薬を導入するために用いられる。第２導入口２２は、試薬等を導入しやすいように漏斗状になっていてもよい。また、第２導入口２２は、図示しない薬液ポート等に接続する構成であってもよい。
　バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂは、第２流路２０を開状態又は閉状態に制御するためのものである。バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂの構造は、特に限定されず、流体デバイス等に使用される任意のバルブを用いることができる。一例として、上述のバルブＶ１と同様のバルブを採用してもよい。
　バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂは、一例として、フィルター部１１の近傍に配置されている。デッドボリュームを小さくするため、例えば、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂとフィルター部１１とが接していることが好ましい。あるいは、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂとフィルター部１１との間が離れて配置されている場合であっても、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂの端部とフィルター部１１の端部との間の距離は広くとも数ミリ程度であることが好ましい。バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂの端部とフィルター部１１の端部との距離は、０～１０ｍｍ程度であり、０～５ｍｍ程度である。バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂをフィルター部１１の近傍に配置することにより、フィルター部１１における血液成分の分離を効率よく行うことができる。
　なお、本実施形態の血液成分分離デバイスは、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂを設けない構成としてもよく、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂのいずれか一方のみを設ける構成としてもよい。バルブＶ２ａを備えることにより、第１流路１０において血球成分と血漿成分とを分離している間はバルブＶ２ａを閉じておき、血球成分と血漿成分との分離反応後にバルブＶ２ａを解放することが可能となる。このことは、事前に第２導入口２２に試薬を導入しておく場合などに有効である。また、バルブＶ２ｂを備えることにより、第２流路２０に試薬などを滞留することが可能となる。このことは、フィルター部１１中の成分と試薬との反応に時間を要する場合などに有効である。
　第２流路２０の、フィルター部１１に対する第２導入口２２とは逆側は、閉鎖されていてもよく、開放されていてもよい。あるいは、廃液回収部等に接続していてもよい。
　第２流路２０において、流体は第１方向とは異なる第２方向に移動する。第２方向は、第１流路の軸方向と異なる方向であり、第２流路の軸方向である。第２方向とは、第２導入口２２からフィルター部１１にむかう方向である。
（第３流路）
　第３流路３０は、第１流路１０の軸方向とは異なる方向において、第１流路１０のフィルター部１１に接続している。第３流路３０は、第２流路２０とは異なる位置において、フィルター部１１で第１流路１０と交差している。第１流路１０においては、第１導入口１２、第２流路２０との接続部、第３流路３０との接続部が、この順番で配置されている。また、第１流路１０においては、第１導入口１２、第３流路３０との接続部、及び第２流路２０との接続部が、この順番で配置されていてもよい。第３流路３０は、第１流路１０との接続部を挟んだ両側に配置されるバルブＶ３ａ、Ｖ３ｂとを備えている。
　第３流路３０が、第１流路１０と交差する角度は、特に限定されず、任意の角度とすることができる。第２流路２０と第３流路とは、実質同一の角度で第１流路１０と交差してもよい。一例として、第３流路３０は、第１流路１０と直交している。また、一例として、第３流路３０は、第１流路１０及び第２流路２０と、略同一平面上に配置される。これらの流路を略同一平面上に配置することにより、血液成分分離デバイスを小型化することができる。
　バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂは、第３流路３０を開状態又は閉状態に制御するためのものである。バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂは、第１流路１０との接続部を挟んだ両側に配置されている。第３流路３０において、バルブＶ３ａ、第１流路１０との接続部、及びバルブＶ３ｂが、この順に配置されている。バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂの構造は、特に限定されず、流体デバイス等に使用される任意のバルブを用いることができる。一例として、上述のバルブＶ１、Ｖ２ａ、Ｖ２ｂと同様のバルブを採用してもよい。
　バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂは、一例として、フィルター部１１の近傍に配置されている。デッドボリュームを小さくするため、例えば、バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂとフィルター部１１とが接していることが好ましい。あるいは、バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂとフィルター部１１との間が離れて配置されている場合であっても、バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂの端部とフィルター部１１の端部との間の距離は広くとも数ミリ程度であることが好ましい。バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂの端部とフィルター部１１の端部との距離は、０～１０ｍｍ程度であり、０～５ｍｍ程度である。バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂをフィルター部１１の近傍に配置することにより、フィルター部１１における血液成分の分離を効率よく行うことができる。
　なお、本実施形態の血液成分分離デバイスは、バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂを設けない構成としてもよく、バルブＶ３ａ、Ｖ３ｂのいずれか一方のみを設ける構成としてもよい。バルブＶ３ａを備えることにより、第１流路１０において血球成分と血漿成分とを分離している間はバルブＶ３ａを閉じておき、血球成分と血漿成分との分離反応後にバルブＶ３ａを解放することが可能となる。また、バルブＶ３ｂを備えることにより、第３流路３０に試薬などを滞留することが可能となる。このことは、フィルター部１１中の成分と試薬との反応に時間を要する場合などに有効である。
　第３流路３０は、血球分析部６０に接続している。血球分析部６０は、フィルター部１１により捕捉された血球を分析するためのものである。後述するように、フィルター部１１に捕捉された血球は、溶血剤等により溶血され、第３流路３０を介して血球分析部６０に運ばれる。血球分析部６０は、目的に応じて任意の血球成分を分析可能な構成とすることができる。例えば、血球分析部６０は、ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）を分析可能な構成（ＨｂＡ１ｃ測定部）であってもよい。一例として、血球分析部６０は、ラテックス凝集法により、ＨｂＡ１ｃを測定する構成を備える。血球分析部６０は、ヘモグロビン量を測定する構成を備えていてもよい。また、血球分析部６０は、グルコース６リン酸脱水素酵素やピルピン酸キナーゼ等に代表される、赤血球酵素の活性を測定する構成を備えていてもよい。血球分析部６０は、単独項目を分析するものであってもよく、複数項目を分析するものであってもよい。
　血液成分分離デバイスが、血球分析部６０を備えることにより、フィルター部１１で分離した血球成分をそのままデバイス内で分析することができる。フィルター部１１から血球分析部６０までは血液成分分離デバイス上の流路を介して、血球成分が送液されるため、コンタミネーション等のおそれがなく、また簡便な血球成分の分析が可能となる。
　本実施形態の血液成分分離デバイスは、血球分析部６０及び／又は血球回収部を設けてもよい。本実施形態の血液成分分離デバイスは、血球分析部６０の替わりに、血球回収部を設け、フィルター部１１に捕捉され溶血された血球成分を回収する構成としてもよい。回収した血球成分は、手作業や血球成分析装置（ＨｂＡ１ｃ測定装置など）等を用いて分析を行ってもよく、後の分析等のために保存してもよい。また、血球分析部６０とともに、血球回収部を設ける構成としてもよい。この場合、血球分析部６０で分析を終えた血球成分を、血球回収部で回収する構成とすることができる。
　第３流路３０は、さらに、流路内の流体の流れを制御する流体制御部を備えていてもよい。第３流路３０が、流体制御部を備えることにより、フィルター部１１から第３流路３０への流体の流れを制御することができる。
　流体制御部は、流体デバイス等で流路内の流体の流れを制御するために用いられる任意の構成を採用することができる。流体制御部としては、例えば、吸気ポンプに接続する吸気ポート、ポンプ、バルブ等が挙げられる。
　第３流路３０の血球分析部６０に接続しない他端は、閉鎖されていてもよく、開放されていてもよい。あるいは、廃液回収部等に接続していてもよい。
　第３流路３０において、流体は第１方向とは異なる第３方向に移動する。第３方向は、第３流路３０の軸方向である。第３方向とは、フィルター部１１から血球分析部６０または血球回収部に向かう方向である。第２流路２０と第３流路３０とは略平行であってもよく、この場合第２方向と第３方向とは略同一である。
（使用方法）
　上記のような構成を備えた血液成分分離デバイス１００の使用方法について、例を挙げて説明する。
　まず、バルブＶ１を開状態にし、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂ、Ｖ３ａ、Ｖ３ｂを閉状態にする。この状態で、第１導入口１２から、第１流路１０に、血液試料を導入する。血液試料は、血球成分と血漿成分とを含むものであれば、特に限定されないが、一例として全血試料が挙げられる。また、血液試料は、全血試料から、白血球等を除去したものであってもよい。
　第１導入口１２から第１流路１０に導入された血液試料は、フィルター部１１を通過する。この際、血球はフィルターに選択的に捕捉される。血漿の大部分はフィルターを通過する。一部の血漿はフィルターに残存することもある。第１流路１０が、流体制御部を有する場合には、流体制御部により、フィルター部１１を通過する血液試料の流れを制御してもよい。血液試料の流れを制御することにより、フィルター部１１における血液試料の通過速度を短縮することができる。
　フィルター部１１を通過した血漿は、第１流路１０に接続する血漿分析部５０において分析される。なお、血球成分分離デバイスが、血漿分析部５０に替えて血漿回収部を備える場合には、血漿回収部において血漿を回収してもよい。
　次に、第１導入口１２から、第１流路１０に、洗浄液を導入する。洗浄液は、血球を破壊しないものであれば、特に限定されず、公知の細胞洗浄液等を用いることができる。洗浄液としては、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（Phosphate buffered saline：ＰＢＳ）、生理食塩水等が挙げられる。これにより、フィルター部１１に残っている血漿を除去することができる。血液成分分離デバイス１００が、流体制御部を有する場合には、流体制御部により、フィルター部１１を通過する洗浄液の流れを制御してもよい。洗浄液の流れを制御することにより、フィルター部１１の洗浄を短縮することができる。
　フィルター部を洗浄した洗浄液は、血漿分析部５０において回収してもよく、第１流路１０が血漿回収部や廃液回収部を備えている場合には、これらにより回収してもよい。
　上記の洗浄工程は、バルブＶ２ａを開状態にし、第２導入口２２から洗浄液を導入することにより行ってもよい。第２導入口２２から導入された洗浄液は、第２流路２０を介して、フィルター部１１に導入される。フィルター部１１に導入された洗浄液により、上記と同様に、フィルター部１１に残っている血漿を除去することができる。
　あるいは、第３流路３０のバルブＶ３ａを有する一端が、廃液回収部に接続している場合には、バルブＶ１を閉状態にし、バルブＶ３ａを開状態にして、第１導入口１２から洗浄液を導入してもよい。この場合、第３流路３０を介して、第３流路３０に接続する廃液回収部に、フィルター部１１に残っている血漿を洗浄液とともに回収することができる。
　また、バルブＶ２ａ、Ｖ３ａを開状態とし、第２導入口２２から、第２流路を介して、洗浄液をフィルター部１１に導入してもよい。この場合も、第３流路３０を介して、第３流路３０に接続する廃液回収部に、フィルター部１１に残っている血漿を洗浄液とともに回収することができる。
　次に、バルブＶ１、Ｖ２ｂ、Ｖ３ａを閉状態にし、バルブＶ２ａ、Ｖ３ｂを開状態にする。この状態で、第２導入口２２から、第２流路２０に溶血剤を導入する。溶血剤は、血球（例えば、赤血球）を破壊できるものであればよく、公知の溶血剤と特に限定なく用いることができる。溶血剤としては、例えば、低張液、水等が挙げられる。第２導入口２２から導入れた溶血剤は、第２流路２０を介してフィルター部１１に到達し、血液試料がフィルター部１１を移動した方向（第１方向）と同じ方向にフィルター部１１を移動する。この際に、フィルターに捕捉されている血球（例えば、赤血球）が溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、溶血剤とともにフィルター部１１を移動し、第３流路３０との接続部に到達すると、第３流路３０へと移動する。
　第２流路２０又は第３流路３０が、流体制御部を有する場合には、流体制御部により、第２流路からフィルター部１１への溶血剤の流れ、及びフィルター部１１から第３流路３０への血球成分の流れを制御してもよい。これらの流れを制御することにより、血球成分が血球分析部６０に到達する時間を短縮することができる。
　フィルター部１１から第３流路３０に移動した血球成分は、第３流路３０に接続する血球分析部６０において分析される。なお、血球成分分離デバイスが、血球分析部６０に替えて血球回収部を備える場合には、血球回収部において血球成分を回収してもよい。
　上記の溶血工程は、バルブＶ１、Ｖ２ａ、Ｖ２ｂ、Ｖ３ａを閉状態にし、バルブＶ３ｂを開状態にして、第１導入口１２から溶血剤を導入することにより行ってもよい。第１導入口１２から導入された溶血剤は、フィルター部１１に捕捉されている血球を溶血し、放出された血球成分は、上記と同様に、第３流路を介して血球分析部６０へと移動する。
　上記のように、本実施形態の血液成分分離デバイスを用いることにより、血漿と血球とを分離した後、それぞれ回収又は分析を行うことができる。特に、血液成分分離デバイスが、血漿分析部５０と血球分析部６０との両方を備える場合には、血漿分析と血球分析とを１つのデバイスで同時に行うことができるため、迅速且つ簡易に血液分析を行うことができる。血球分離部（フィルター部）と血漿分析部、また、血球分離部（フィルター部）と血球分析部とが、流路で接続されているため、コンタミネーションのおそれがないというメリットがある。
　また、従来の血球分離方法では、血球画分への血漿の混入を防ぐことができず、当該血漿の混入により血球成分の分析結果が不安定となる場合があった。例えば、後述する実施例で示すように、血漿が存在する血球試料でＨｂＡ１ｃを測定した場合、測定値が不安定となり、信頼できる測定値を得ることができない。
　本実施形態の血液成分分離デバイスでは、フィルターで血球を捕捉した後、洗浄液でフィルターに残っている血漿を除去することができるため、血球画分への血漿の混入量を低減することができる。これにより、血球成分分析における血漿の影響を低減し、安定した血球成分測定値を得ることが可能となる。
　本実施形態の血液成分分離デバイスは、上記で説明した態様に限定されず、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、各構成要素を適宜変更することができる。例えば、以下のような変形例１～６も、本実施形態の血液成分分離デバイスの範囲内である。
＜変形例１＞
　図２は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例１を示す模式図である。血液成分分離デバイス２００は、第３流路３０を有さない以外は、血液成分分離デバイス１００と同様の構成となっている。第２流路２０の、第１流路との接続部に対する、第２導入口２２とは逆側は、血球分析部６０に接続している。
　血液成分分離デバイス２００では、フィルター部１１に捕捉された血球を溶血させる溶血工程において、バルブＶ１を閉状態とし、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂを開状態として、第２導入口２２から、第２流路２０に、溶血剤を導入する。第２流路２０に導入された溶血剤は、第２流路２０を介してフィルター部１１に到達し、血液試料がフィルター部１１を移動した方向（第１方向）とは異なる方向（第２方向）にフィルター部１１を移動する。溶血剤が移動する第２方向上に捕捉されている血球は、溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、フィルター部１１から第２流路２０を介して血球分析部６０に運ばれ、血球分析部６０において分析される。
　第２流路２０は、血球分析部６０に替えて、又は血球分析部６０に加えて、血球回収部を備えていてもよい。また、第２流路２０は、第２流路２０における流体の流れを制御する流体制御部を備えていてもよい。後述する変形例４、変形例５でも同様である。
＜変形例２＞
　図３は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例２を示す模式図である。血液成分分離デバイス３００は、第２流路２０及び第３流路３０が第１流路１０と交差していない以外は、血液成分分離デバイス１００と同様の構成となっている。血液成分分離デバイス３００において、第２流路２０及び第３流路３０は、それぞれフィルター部１１から突き出るような構成となっている。
　血液成分分離デバイス３００では、フィルター部１１に捕捉された血球を溶血させる溶血工程において、バルブＶ１を閉状態とし、バルブＶ２ａ、Ｖ３ａを開状態として、第２導入口２２から、第２流路２０に、溶血剤を導入する。第２流路２０に導入された溶血された溶血剤は、第２流路２０を介してフィルター部１１に到達し、血液試料がフィルター部１１を移動した方向（第１方向）と同じ方向にフィルター部１１を移動する。この際に、フィルターに捕捉されている血球が溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、溶血剤とともにフィルター部１１を移動し、第３流路３０との接続部に到達すると、第３流路３０へと移動する。そして、第３流路３０を介して血球分析部６０に運ばれ、血球分析部６０において分析される。
＜変形例３＞
　図４は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例３を示す模式図である。血液成分分離デバイス４００は、第２流路２０及び第３流路３０が第１流路１０に対して同方向に配置されている以外は、血液成分分離デバイス３００と同様の構成となっている。
　溶血工程は、血液成分分離デバイス３００と同様に行うことができる。
＜変形例４＞
　図５は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例４を示す模式図である。血液成分分離デバイス５００は、第３流路３０を有さず、第２流路２０が第１流路１０と交差しない構成となっている。第２流路２０は、血球分析部６０に接続している。
　血液成分分離デバイス５００では、フィルター部１１に捕捉された血球を溶血させる溶血工程において、バルブＶ１を閉状態とし、バルブＶ２ａを開状態として、第１導入口１２から、第１流路１０に、溶血剤を導入する。第１流路１０に導入された溶血剤は、フィルター部１１に到達し、血液試料がフィルター部１１を移動した方向（第１方向）と同じ方向にフィルター部１１を移動する。この際に、フィルターに捕捉されている血球が溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、溶血剤とともにフィルター部１１を移動し、第２流路２０との接続部に到達すると、第２流路２０へと移動する。そして、第２流路２０を介して血球分析部６０に運ばれ、血球分析部６０において分析される。
　第２流路２０は、血球分析部６０に替えて、又は血球分析部６０に加えて、血球回収部を備えていてもよい。また、第２流路２０は、第２流路２０における流体の流れを制御する流体制御部を備えていてもよい。
＜変形例５＞
　図６は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例５を示す模式図である。血液成分分離デバイス６００は、第３流路３０を有さず、第２流路２０が第１流路１０と交差しない構成となっている。第２流路２０は、血球分析部６０に接続している。また、第１流路１０の第１導入口１２とフィルター部１１との間に、第４流路４０が接続している。第４流路４０は、第４導入口４２と、バルブＶ４ａとを備えている。
　血液成分分離デバイス６００では、フィルター部１１に捕捉された血球を溶血させる溶血工程において、バルブＶ１を閉状態とし、バルブＶ２ａ、Ｖ４ａを開状態として、第４導入口４２から、第４流路４０に、溶血剤を導入する。第４流路４０に導入された溶血された溶血剤は、第４流路４０を介して第１流路１０に到達し、第１流路１０を移動して、フィルター部１１に到達する。フィルター部１１において、溶血剤は、血液試料がフィルター部１１を移動した方向（第１方向）と同じ方向にフィルター部１１を移動する。この際に、フィルターに捕捉されている血球が溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、溶血剤とともにフィルター部１１を移動し、第２流路２０との接続部に到達すると、第２流路２０へと移動する。そして、第２流路２０を介して血球分析部６０に運ばれ、血球分析部６０において分析される。
＜変形例６＞
　図７は、本実施形態の血液成分分離デバイスの変形例６を示す模式図である。血液成分分離デバイス７００は、プレート７０内に、第１流路及び第２流路が形成されている。第１流路は第１流路１０ａ、１０ｂから構成されており、第２流路は第２流路２０ａ、２０ｂ、２０ｃから構成されている。
　第１流路１０ａ、１０ｂは、バルブＶ１ａを介して互いに接続されている。
　第１流路１０ａは、第１導入口１２、及びフィルター部１１を有している。
　第１流路１０ｂは、流路制御部としてのポンプ部Ｐ１、及び血漿分析部５０を備えている。第１流路１０ｂは、バルブＶ１ｆを介して、インレットＩ１に接続している。インレットＩ１は、プレート７０の下方に配置される図示しない試薬貯留部に接続している。そのため、バルブＶ１ｆを開状態とすることにより、インレットＩ１から、第１流路１０ｂに試薬を導入することができる。第１流路１０ｂは、バルブＶ１ｃ又はＶ１ｄを介して、廃液回収部Ｗ１に接続している。そのため、バルブＶ１ｃ又はＶ１ｄを開状態とすることにより、第１流路１０ｂから廃液回収部Ｗ１に廃液を排出することができる。
　第１流路１０ｂは、バルブＶ１ａ、Ｖ１ｃ、Ｖ１ｄ、Ｖ１ｆを閉状態とし、バルブＶ１ｂ、Ｖ１ｅを開状態とすることにより、循環流路（第１循環経路）を形成する。
　また、第１流路１０ｂ及び廃液回収部Ｗ１は、バルブＶ１ａ、Ｖ１ｂ、Ｖ１ｆを閉状態とし、バルブＶ１ｃ、Ｖ１ｄ、Ｖ１ｅを開状態とすることにより、流体を第１流路１０ｂから廃液回収部Ｗ１へと排出する流路（第１排出経路）を形成する。
　第２流路２０ａ、２０ｂは、バルブＶ２ｅを介して互いに接続されている。第２流路２０ｂ、２０ｃは、バルブＶ２ｋ、Ｖ２ｍを介して互いに接続されている。
　第２流路２０ａは、第２導入口２２を有している。第２導入口２２は、プレート７０の下方に配置される図示しない溶血剤貯留部に接続しており、第２導入口２２から、第２流路２０ａに溶血剤を導入することができる。第２流路２０ａは、第１流路１０ａのフィルター部１１に接続し、第１流路１０ａと交差している。第２流路２０ａにおける、第１流路１０ａとの接続部の両側には、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂが設置されている。バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂを開状態とし、第２導入口２２から第２流路２０ａに溶血剤を導入すると、溶血剤は、第２流路２０ａの軸方向に移動して、フィルター部１１を通過する。第２流路２０ａは、バルブＶ２ｄを介して、インレットＩ２に接続している。インレットＩ２は、プレート７０の下方に配置される図示しない試薬貯留部に接続している。そのため、バルブＶ２ｄを開状態とすることにより、インレットＩ２から、第２流路２０ａに試薬を導入することができる。さらに、バルブＶ２ｅを開状態とすることにより、第２流路２０ｂに試薬を導入することができる。また、第２流路２０ａは、バルブＶ２ｃを介して、エア導入口Ａに接続している。そのため、バルブＶ２ｅを開状態とすることにより、エア導入口Ａから、第２流路２０ａにエアを導入することができる。さらに、バルブＶ２ｅを開状態とすることにより、第２流路２０ｂにエアを導入することができる。
　第２流路２０ｂは、流体制御部としてのポンプ部Ｐ２、及び血球分析部６０を備えている。第２流路２０ｂは、バルブＶ２ｈ又はＶ２ｉを介して、廃液回収部Ｗ２に接続している。そのため、バルブＶ２ｈ又はＶ２ｉを開状態とすることにより、第２流路２０ｂから廃液回収部Ｗ２に廃液を排出することができる。
　第２流路２０ｃは、バルブＶ２ｎを介して、インレットＩ３に接続している。インレットＩ３は、プレート７０の下方に配置される図示しない試薬貯留部に接続している。そのため、バルブＶ２ｎを開状態とすることにより、インレットＩ３から、第２流路２０ｃに試薬を導入することができる。さらに、バルブＶ２ｋ又はバルブＶ２ｍを開状態とすることにより、第２流路２０ｂに試薬を導入することができる。また、第２流路２０ｃは、バルブＶ２ｊを介して、廃液回収部Ｗ２に接続している。そのため、バルブＶ２ｊを開状態とすることにより、第２流路２０ｃから廃液回収部Ｗ２に廃液を排出することができる。
　第２流路２０ｂは、バルブＶ２ｅ、Ｖ２ｈ、Ｖ２ｉ、Ｖ２ｋ、Ｖ２ｍを閉状態とし、バルブＶ２ｆ、Ｖ２ｇ、Ｖ２ｌを開状態とすることにより、循環流路（第２循環経路）を形成する。また、第２流路２０ｂ及び２０ｃは、バルブＶ２ｅ、Ｖ２ｈ、Ｖ２ｉ、Ｖ２ｊ、Ｖ２ｌ、Ｖ２ｎを閉状態とし、バルブＶ２ｆ、Ｖ２ｇ、Ｖ２ｋ、Ｖ２ｍを開状態とすることにより、循環流路（第３循環経路）を形成する。
　また、第２流路２０ｂ及び廃液回収部Ｗ２は、バルブＶ２ｅ、Ｖ２ｇ、Ｖ２ｋ、Ｖ２ｍを閉状態とし、バルブＶ２ｆ、Ｖ２ｈ、Ｖ２ｉ、Ｖ２ｌを開状態とすることにより、流体を第２流路２０ｂから廃液回収部Ｗ２へと排出する流路（第２排出経路）を形成する。また、第２流路２０ｂ、２０ｃ、及び廃液回収部Ｗ２は、バルブＶ２ｅ、Ｖ２ｇ、Ｖ２ｉ、Ｖ２ｋ、Ｖ２ｌ、Ｖ２ｎを閉状態とし、バルブＶ２ｆ、Ｖ２ｈ、Ｖ２ｊ、Ｖ２ｍを開状態とすることにより、流体を第２流路２０ｂ、２０ｃから廃液回収部Ｗ２へと排出する流路（第３排出経路）を形成する。
　ポンプ部Ｐ１、Ｐ２は、３連のバルブから構成されている。前記バルブとしては、ダイアフラム部材を備えるダイアフラムバルブが例示され、ダイアフラム部材としてはエラストマー材料が例示される。
　図８（ａ）及び（ｂ）は、ダイアフラムバルブの構造の一例を説明する断面図である。
図８（ａ）はダイアフラムバルブ８００の開状態を示し、図８（ｂ）はダイアフラムバルブ８００の閉状態を示す。図８（ａ）及び（ｂ）に示すように、ダイアフラムバルブ８００は、第１の基板３１０と、エラストマー材料からなるダイアフラム部材３３０と、第２の基板３２０とを備えている。第２の基板３２０とダイアフラム部材３３０とは密着した状態で接着されている。また、第１の基板３１０とダイアフラム部材３３０との間の空間は流体が流れる流路３１５を形成している。また、第２の基板３２０の一部には貫通孔３４０が設けられている。また、貫通孔３４０においては、ダイアフラム部材３３０が露出している。
　ダイアフラムバルブ８００は、流路３１５（血液成分分離デバイス７００では第１流路１０ｂ又は第２流路２０ｂ）に配置されており、流路３１５の内部の流体の流れを調節するものである。
　図８（ａ）に示すダイアフラムバルブ８００の開状態では、流路３１５の内部を流体が流れることができる。一方、図８（ｂ）に示すように、ダイアフラムバルブ８００の貫通孔３４０からバルブ制御用の流体を供給し、貫通孔３４０の内部を加圧すると、ダイアフラム部材３３０が変形し、変形したダイアフラム部材３３０の一部が第１の基板３１０と密着する。この状態は、ダイアフラムバルブ８００の閉状態である。その結果、流路３１５の内部の流体の流れが遮断される。
　ここで、図８（ａ）及び（ｂ）に示すように、ダイアフラムバルブ８００の閉状態をより強固なものとするために、貫通孔３４０と対向する第１の基板３１０の領域には凸部３１１が形成されていてもよい。
　バルブ制御用の流体としては、Ｎ２ガス、空気等の気体、水、油等の液体等が挙げられる。バルブ制御用の流体は、例えば、貫通孔３４０に接続されたチューブ等により供給することができる。
　また、ダイアフラム部材３３０を形成するエラストマー材料としては、貫通孔３４０の内部の圧力変化に応じて貫通孔３４０の軸線方向に変形可能な材料であれば特に限定されず、例えば、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）、ポリメチルフェニルシロキサン、ポリジフェニルシロキサン等のシリコーン系エラストマー等が挙げられる。
　図８（ｂ）に示す閉状態のダイアフラムバルブ８００において、貫通孔３４０の内部に印加していた圧力を低下させると、変形していたダイアフラム部材３３０が元の形状に戻り、再び図８（ａ）に示す開状態となる。その結果、再び流路３１５の内部を流体が流れることができるようになる。
　３連以上のバルブにより、すなわちバルブを３個以上並べることにより、ポンプを形成することができる。図９（ａ）～（ｄ）は、３個のダイアフラムバルブ８００ａ、８００ｂ及び８００ｃを備えるポンプの一例の動作を説明する断面図である。
　図９（ａ）に示す状態では、３個のバルブ８００ａ、８００ｂ及び８００ｃは、いずれも開状態である。この状態では、流路３１５の内部の流体の流れは制御されていないため、流体は図９（ａ）に向かって右側に流れる場合もあるし、左側に流れる場合もあるし、流体の流れが停止している場合もある。
　続いて、図９（ｂ）に示すように、バルブ８００ａを閉状態に制御し、バルブ８００ｂ及び８００ｃは開状態のままにする。この結果、流路３１５の内部の流体の流れはバルブ８００ａによって堰き止められる。
　続いて、図９（ｃ）に示すように、バルブ８００ａ及びバルブ８００ｂを閉状態に制御し、バルブ８００ｃは開状態のままにする。ここで、バルブ８００ｂが開状態から閉状態に変化する過程で、ダイアフラム部材３３０が変形することにより、バルブ８００ｂの周囲に存在していた流体が押しのけられる。ところが、バルブ８００ａが閉状態にあることから、押しのけられた流体は図９（ｃ）の矢印で示す方向、すなわち、図９（ｃ）に向かって右側に移動する。この結果、流体に矢印で示す方向の流れが生じる。
　続いて、図９（ｄ）に示すように、バルブ８００ｂ及び８００ｃを閉状態に制御する。
すると、バルブ８００ｃが開状態から閉状態に変化する過程で、ダイアフラム部材３３０が変形することにより、バルブ８００ｃの周囲に存在していた流体が押しのけられる。ところが、バルブ８００ａが閉状態にあることから、押しのけられた流体は図９（ｄ）の矢印で示す方向、すなわち、図９（ｄ）に向かって右側に移動する。この結果、流体に矢印で示す方向の流れが更に加速される。この時、バルブ８００ａは図９（ｄ）に示すように開状態に制御してもよいし、閉状態のまま維持してもよい。
　続いて、再び図９（ａ）に示すように、バルブ８００ａ、８００ｂ及び８００ｃを、いずれも開状態に制御する。ここでは、慣性により、流路３１５の内部の流体は、図９（ａ）に向かって右側に移動し続けている場合がある。
　更に、以上の工程を繰り返すことにより、流路３１５の内部の流体の流れを制御することができる。
　以上の工程は、３個のバルブを備えるポンプの制御方法の一例であり、３個のバルブを備えるポンプの制御方法はこれに限られない。例えば、上述したバルブの制御において、バルブ８００ａとバルブ８００ｃの開閉のタイミングを逆にすることにより、流路３１５の内部の流体の流れを上述したものと逆方向に制御することもできる。また、図９（ａ）～図９（ｄ）の動作を繰り返す周期を調節して、パルス的な微小溶液のフローを形成し、流速を制御したりすることもできる。また、バルブ８００ａ～８００ｃを駆動する気体の圧力やバルブの径を調節することによっても、流速を制御することができる。
　また、バルブを４個以上備えるポンプにより、流路３１５の内部の流体の流れを制御することも可能である。
　また、ダイアフラムバルブの構造も、上述したものに限られない。例えば、ダイアフラムバルブとして、国際公開第２０１６／００６６１５号に記載された、外筒部と内筒部とを有する筒状構造体と、前記内筒部の一端を覆うように配置された薄膜部と、前記薄膜部の周縁を一周し、前記外筒部の内壁及び前記内筒部の外壁に沿って密着したアンカー部と、を有するダイアフラム部材と、を備えたバルブを用いることもできる。
　本実施形態の血液成分分離デバイスにおいて、他に使用可能なバルブとしては、例えば、２つの金型を使って、樹脂部分とエラストマー部分を連続的に成形して得られた、２色成型バルブが例示される。２色成型バルブは、製造に要する時間が短く、樹脂とエラストマーとの密着性が高い利点がある。
　２色成型バルブの具体例を図１０及び図１１に例示する。図１０に例示するバルブ９００では、基板９０９は、下面（一面）９０９ａに形成された窪み（例、流路）９４０Ａと、窪み９４０Ａの底部（例、図１０の窪み９０Ａの上側）および基板９０９の上面（他面）９０９ｂに開口（貫通）する開口部９５２とを有している。開口部９５２には、被バルブ駆動部９７０が設けられている。被バルブ駆動部９７０は、上述のバルブ部９５０と同様の軟質材で形成されており、バルブ部（変形部）９７１、および筒部（接続部）９７３を備えている。バルブ部９７１は、開口部９５２における基板９０９の下面９０９ａ側を閉塞する。例えば、筒部９７３は、バルブ部９７１と単一部材で構成され、開口部９５２の内周面に沿って設けられ、下端においてバルブ部９７１に一体的に接続されている。筒部９７３の内部空間は下端がバルブ部９７１によって閉塞され、上端が開口する開口部９７０ａを形成している。例えば、図１０における窪み９０Ａが流路の場合、図面の左側から右側へ流体（例、試料物質を含む溶液、洗浄液等）が流れるように構成される。
　基板９０９の下面９０９ａは、下板９０８の上面９０８ｂと接合されている。上面９０８ｂには、窪み９４０Ａと対向する位置に曲面状（例、半球状）の凹面９８０が形成されている。
　上記構成の被バルブ駆動部９７０は、例えば、開口部９７０ａを介してバルブ部９７１に下側への力（例、空圧、液圧、機械的な力など）が加わったときに、バルブ部９７１の変形によって流路（例、窪み９４０Ａ）の開閉状態を制御する。一例として、図１１に示すように、バルブ部９７１が窪み９４０Ａ側に変形して撓んで凹面９８０に接触することにより流路（例、窪み９４０Ａ）を閉塞する（バルブが閉じた状態）。また、被バルブ駆動部９７０は、バルブ部９７１に下側への力が加わることが解除されることによりバルブ部９７１の変形（例、撓み）が解消されて凹面９８０から離れることで流路（例、窪み９４０Ａ）が開放される（バルブが開いた状態）。
　上述の２色成型バルブは、例えば、国際公開第２０１８／０１２４２９号に記載された方法により製造することができる。その他、２色成型バルブとしては、国際公開第２０１８／０１２４２９号に記載されたもの等の公知のものを特に制限なく用いることができる。
　上記のような構成を備えた血液成分分離デバイス７００の使用方法について、例を挙げて説明する。
　まず、バルブＶ１ａ、Ｖ１ｂ、Ｖ１ｅを開状態とし、他のバルブを閉状態として、第１導入口１２から第１流路１０ａに血液試料（例、全血試料等）を導入する。第１流路１０ａに導入された血液試料は、フィルター部１１に到達し、フィルター部１１をバルブＶ１ａ方向（第１方向）に移動する。この際に、血液試料中の血球は、フィルターに捕捉される。一方、血漿の大部分は、フィルター部１１を通過し、第１流路１０ｂに到達する。ここで、バルブＶ１ａを閉状態とし、ポンプ部Ｐ１を適宜作動させると、第１流路１０ｂに到達した血漿を、第１流路１０ｂからなる第１循環経路に循環させることができる。必要に応じて、血漿分析のための試薬をインレットＩ１から導入し、第１循環経路を循環させて血漿と混合する。血漿を第１循環経路に循環させながら、血漿分析部５０で血漿分析を行うことができる。第１循環経路を循環する流体は、必要に応じて、バルブＶ１ｂ、Ｖ１ｆを閉状態とし、バルブＶ１ｃ、Ｖ１ｄ、Ｖ１ｅを開状態として、第１排出経路により廃液回収部Ｗ１に排出することができる。
　次に、バルブＶ１ａ、Ｖ１ｃ、Ｖ１ｄ、Ｖ１ｅを開状態とし、他のバルブを閉状態として、第１導入口１２から第１流路１０ａに洗浄液を導入する。第１流路１０ａに導入された洗浄液は、フィルター部１１に到達し、フィルター部１１をバルブＶ１ａ方向（第１方向）に移動する。この際に、フィルターに残っていた血漿が洗浄液とともに第１方向に移動し、バルブＶ１ａを介して第１流路１０ｂに導入される。第１流路１０ｂに導入された血漿を含む洗浄液は、バルブ１ｂ、Ｖ１ｆを閉状態とし、バルブＶ１ｃ、Ｖ１ｄ、Ｖ１ｅを開状態として、第１排出経路により廃液回収部Ｗ１に排出することができる。
　次に、バルブＶ２ａ、Ｖ２ｂ、Ｖ２ｅ、Ｖ２ｆ、Ｖ２ｇ、Ｖ２ｌを開状態とし、他のバルブを閉状態として、第２導入口２２から第２流路２０ａに溶血剤を導入する。第２流路２０ａに導入された溶血剤は、フィルター部１１に到達し、フィルター部１１をバルブＶ２ｂ方向（第２方向）に移動する。この際に、フィルターに捕捉されていた血球が溶血剤により溶血される。溶血により放出された血球成分は、溶血剤とともに第２流路２０ａを軸方向に移動して、バルブＶ２ｂからバルブＶ２ｅを介して、第２流路２０ｂに導入される。ここで、バルブＶ２ｂを閉状態とし、バルブＶ２ｃを開状態として、エア導入口Ａから第２流路２０ａにエアを吹き込むことにより、第２流路２０ａに滞留していた血球成分を、第２流路２０ｂへと導くことができる。第２流路２０ｂに導入された血球成分は、バルブＶ２ｅを閉状態とし、ポンプ部Ｐ２を適宜作動させることにより、第２流路２０ｂからなる第２循環経路に循環させることができる。必要に応じて、血球分析のための試薬をインレットＩ２から導入し、第２循環経路を循環させて血球成分と混合する。あるいは、必要に応じて、血球分析のための試薬をインレットＩ３から導入し、第２流路２０ｂ、２０ｃからなる第３循環経路を循環させて血球成分と混合する。血球成分を、第２循環経路又は第３循環経路に循環させながら、血球分析部６０で血球分析を行なうことができる。第２循環経路又は第３循環経路を循環する流体は、必要に応じて、第２排出経路又は第３排出経路により、廃液回収部Ｗ２に排出することができる。
［血液成分分離方法］
　１実施形態において、本発明は、上記実施形態の血液成分分離デバイスを用いて、血液成分を分離する方法を提供する。本実施形態の方法は、（ａ）前記第１導入口から、血液試料を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記血液試料中の血球を捕捉させる工程と、（ｂ）前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる溶血工程と、を含む。
　本実施形態の血液成分分離方法は、上記「［血液成分分離デバイス］」で説明した「（使用方法）」で例示した方法と同様に行うことができる。
　一例として、本実施形態の方法は、前記工程（ａ）の後であり前記工程（ｂ）の前に、（ｃ）前記第１導入口又は前記第２導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する血漿除去工程、を更に含むことができる。
［血液成分分析方法］
　１実施形態において、本発明は、上記実施形態の血液成分分離デバイスを用いて、血液成分を分析する方法を提供する。本実施形態の方法は、（ａ）前記第１導入口から、血液試料を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記血液試料中の血球を捕捉させる工程と、（ｂ）前記工程（ａ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、（ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球を分析する工程と、を含む。
　本実施形態の血液成分分析方法は、上記「［血液成分分離デバイス］」で説明した「（使用方法）」で例示した方法と同様に行うことができる。本実施形態の方法に血球分析部６０を備える血液成分分離デバイスを用いる場合には、工程（ｄ）における血球成分の分析は、血球分析部６０で行うことができる。血球分析部６０を備えない血液成分分離デバイスを用いる場合には、血液成分分離デバイスから溶血させた血球成分を回収し、回収した血球成分を分析すればよい。
　本実施形態の方法は、上記（ａ）～（ｄ）の工程に加えて、（ｄ）前記工程（ａ）又は前記工程（ｂ）の後、フィルターを通過した血漿を分析する工程、をさらに含んでいてもよい。血漿分析部５０を備える血液成分分離デバイスを用いる場合には、血漿の分析は、血漿分析部５０で行うことができる。血漿分析部５０を備えない血液成分分離デバイスを用いる場合には、血液成分分離デバイスから溶血させた血漿を回収し、回収した血漿を分析すればよい。
［ヘモグロビンＡ１ｃ分析方法］
　１実施形態において、本発明は、ヘモグロビンＡ１ｃを分析する方法を提供する。本実施形態の方法は、（ａ）血球と血漿とを分離するフィルターに血液試料中の血球を捕捉させる工程と、（ｂ）前記工程（ａ）の後、前記フィルターに洗浄液を通過させ、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、（ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記フィルターに溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、（ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球中のヘモグロビンＡ１ｃを分析する工程と、を含む。
　本実施形態の方法は、上記「［血液成分分離デバイス］」で説明した「（使用方法）」で例示した方法と同様に行うことができる。また、本実施形態の方法は、上記実施形態の血液成分分離デバイスを用いることなく、血球分離フィルターを備えたカラム等を用いて行ってもよい。
　ＨｂＡ１ｃの分析は、公知のＨｂＡ１ｃ測定方法を用いて行うことができる。ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法としては、例えば、ラテックス凝集法が挙げられる。
　ラテックス凝集法では、ラテックス粒子にＨｂＡ１ｃを吸着させて（吸着反応）、抗ＨｂＡ１ｃ抗体（マウスＩｇＧ等）を反応させ、さらに二次抗体（抗マウスＩｇＧ抗体等）を反応させる。これにより、ＨｂＡ１ｃが抗ＨｂＡ１ｃ抗体及び二次抗体で架橋され、ラテックス粒子が凝集する（凝集反応）。ＨｂＡ１ｃ濃度が高いほど、ラテックス粒子の凝集量が多くなる。凝集していないラテックス粒子は、光を反射しないが、凝集すると光を反射するため、光の透過量はラテックス粒子の凝集量により変化する。そのため、凝集反応後の吸光度を測定することにより、ＨｂＡ１ｃ濃度を測定することができる。一例として、６６０ｎｍの吸光度から８００ｎｍの吸光度を差し引いた値から、ＨｂＡ１ｃ濃度を算出することができる。
　後述する実施例で示すように、ＨｂＡ１ｃの測定値は、血漿が存在すると不安定になり、信頼性の高い測定値を得ることができない。本実施形態の方法は、フィルターに血球を捕捉させた後、洗浄液でフィルターを洗浄してフィルター中の血漿を除去する。これにより、溶血剤により溶血させた血球成分中に混入する血漿の量を大幅に低減することができる。そのため、信頼性の高いＨｂＡ１ｃ測定値を得ることができる。
　以上、本発明の実施形態について図面を参照して詳述したが、具体的な構成はこの実施形態に限られるものではなく、この発明の要旨を逸脱しない範囲の設計等も含まれる。
　以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
［実験例１］ＨｂＡ１ｃ測定値に及ぼす血漿含有量の影響
　ＨｂＡ１ｃ標準検査試薬（ＨｂＡ１ｃ濃度６．１％、ＨｂＡ１ｃ濃度１０％；ヘモグロビンＡ１ｃカットオフテスト認証標準物質、検査医学標準物質機構）に０～６０％（ｖ／ｖ）となるようにヒト血漿を添加した。前記ヒト血漿を添加したＨｂＡ１ｃ標準検査試薬のＨｂＡ１ｃ濃度を、ラピディア（登録商標）　オートＨｂＡ１ｃ－Ｌ（富士レビオ）を用いたラテックス凝集法により測定した。各サンプルについて、６６０ｎｍの吸光度及び８００ｎｍの吸光度を測定し、６６０ｎｍの吸光度－８００ｎｍの吸光度の値を求めた。
　その結果を表１及び図１２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　血漿含有量が１５％（ｖ／ｖ）以下であれば、ＨｂＡ１ｃ濃度１０％の標準検査試薬で変動係数（Coefficient of Variation；ＣＶ）は２．０％以下であり、ラテックス凝集反応が安定した。そのため、ＨｂＡ１ｃを安定的に測定するためには、試料中の血漿含有量を１５％（ｖ／ｖ）以下とすることが望ましいことが確認された。
［実験例２］血球画分中の血漿成分測定
　ウサギの全血１０００μＬに、血漿成分をトレースするためにＣｙ５を１μＬを添加して混合して、Ｃｙ５添加ウサギ全血を調製した。
　前記Ｃｙ５添加ウサギ全血試料を遠心分離（遠心力（１０００×ｇ）、５分）し、血球画分と血漿画分とを分離した。血球画分と血漿画分の希釈系列をそれぞれ調製し、各希釈系列を用いてヘモグロビン量及びＣｙ５量に対する検量線を作成した。
　次に、図１３に示す構造を備えた血液成分分離デバイスを用いて、前記のＣｙ５添加ウサギ全血試料の血球分離を行った。導入口からＣｙ５添加ウサギ全血試料１５μＬを第１流路に導入し（大気圧：１分間）、導入口の逆側から５ｋＰａで２分間陰圧印加して、Ｃｙ５含有ウサギ全血試料をフィルターに通した。その後、第３流路のポートｂ及びｄを塞ぎ、第２流路のポートｃから１００μＬの低張液（超純水）を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、ポートａから溶血した血球画分を回収した。同様に、第２流路のポートａ及びｃを塞ぎ、第３流路のポートｄから１００μＬの低張液を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、ポートｂから溶血した血球画分を回収した。回収した血球画分について、ヘモグロビン吸光度及びＣｙ５蛍光を測定し、上記で作成した検量線から、血球画分中の血漿含有量を算出した。
　結果を図１４に示す。低張液を第２流路に導入して血球画分を回収した場合には、血漿画分含有量は２６％（ｖ／ｖ）であった。一方、低張液を第３流路に導入して血球画分を回収した場合には、血漿画分含有量は４２％（ｖ／ｖ）であった。
［実験例３］血球画分中の血漿成分測定（洗浄の影響）
　上記実験例１と同様に、Ｃｙ５添加ウサギ全血試料を調製し、図１１に示す構造を備えた血液成分分離デバイスを用いて、前記のＣｙ５添加ウサギ全血試料の血球分離を行った（大気圧：１分間、５ｋＰａ陰圧：２分間）。次いで、導入口からＰＢＳ　１５μＬを第１流路に導入し（５ｋＰａ陰圧：２分間）、フィルターの洗浄を行った。その後、第３流路のポートｂ及びポートｄを塞ぎ、第２流路のポートｃから１００μＬの低張液を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、ポートａから溶血した血球画分を回収した。実験例１と同様に、回収した血球画分中の血漿含有量を算出した。
　結果を図１３に示す。図１５３中、「洗浄なし」は、ＰＢＳ洗浄を行わなかった場合であり、実験例１の第２流路にて血球画分を回収した場合と同様である。「洗浄あり」は、ＰＢＳ洗浄を行った場合であり、「洗浄なし」と比較して、血漿成分含有量が大きく低減した。
［実験例４］フィルター洗浄液量の評価
　ウサギの全血９μＬに、血漿をトレースするためにＣｙ５を１μＬを添加して混合して、Ｃｙ５添加ウサギ全血試料を調製した。
　次に、図１３に示す構造を備えた血液成分分離デバイスを用いて、前記のＣｙ５添加ウサギ全血試料の血球分離を行った。導入口からＣｙ５添加ウサギ全血試料１０μＬを第１流路に導入し、導入口の逆側から１０ｋＰａで２分間陰圧印加して、Ｃｙ５含有ウサギ全血試料をフィルターに通した。次いで、導入口からＰＢＳ　２０μＬ、２５μＬ、又は３０μＬを第１流路に導入し（１０ｋＰａ陰圧：２分間）、フィルターの洗浄を行った。その後、第２流路のポートａ及び第３流路のポートｄを塞ぎ、第２流路のポートｃから５０μＬの低張液を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、第３流路のポートｂから溶血した血球画分を回収した。血液画分の大部分が押し出されたところで、低張液の導入を停止した。
　図１６は、各ＰＢＳ量でフィルターを洗浄後、血球画分を回収した後の各血液成分分離デバイスの写真である。フィルター通過直後（点線の楕円部分）の液体の色を比較すると、洗浄液量が多いほど、Ｃｙ５の青色成分が薄くなっていくことが定性的に示された。Ｃｙ５の青色部分が血漿とすると、洗浄液量２５μＬでフィルター内の血漿の大部分が除去されたと考えられた。
［実験例５］ＨｂＡ１ｃ測定値の再現性評価
（実施例１）
　図１１に示す構造を備えた血液成分分離デバイスを用いて、ヒト冷蔵血液（正常ヒト全血液・Ｏ型、コージンバイオ）の血球分離を行った。導入口からヒト冷蔵血液１０μＬを第１流路に導入し、導入口の逆側から１０ｋＰａで２分間陰圧印加して、ヒト冷蔵血液をフィルターに通した。次いで、導入口からＰＢＳ　２５μＬ、２５μＬ、又は３０μＬを第１流路に導入し（１０ｋＰａ陰圧：２分間）、フィルターの洗浄を行った。その後、第２流路のポートａ及び第３流路のポートｄを塞ぎ、第２流路のポートｃから１００μＬの低張液を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、第３流路のポートｂから溶血した血球画分を回収した。溶血液が約１５μＬ押し出された時点で、溶血液の回収を終了した。
　前記のように回収した溶血液５μＬを用いて、ラピディア（登録商標）　オートＨｂＡ１ｃ－Ｌを用いたラテックス凝集法を行い、６６０ｎｍ及び８００ｎｍの吸光度を測定した。測定された吸光度から、ＨｂＡｃ１濃度、及び変動係数（ＣＶ）を算出した。
（比較例１）
　Ｃｏｂａｓ（登録商標）　ｃ１０１（Ｒｏｃｈｅ）のカートリッジ内で、ヒト冷蔵血液２．０μＬを用いたラテックス凝集阻害法を行い、ＨｂＡｃ１濃度、及び変動係数（ＣＶ）を算出した。
（比較例２）
　Ａｆｆｉｎｉｏｎ（登録商標）　ＨｂＡｉｃ（Ａｌｅｒｅ）のカートリッジ内で、ヒト冷蔵血液１．５μＬの溶血処理を行った。その後、ボロン酸アフィニティ―法により、ＨｂＡ１ｃに起因する発色を測定した。発色の測定値から、ＨｂＡｃ１濃度、及び変動係数（ＣＶ）を算出した。
（結果）
　実施例１、並びに比較例１及び２の結果を図１５に示す。実施例１では、比較例１及び２と比較して、変動係数（ＣＶ）を小さく、再現性の高い測定が可能であることが確認された。
［実験例６］ＨｂＡ１ｃ測定値の再現性評価
　図１３に示す構造を備えた血液成分分離デバイスを用いて、ヒト全血（正常ヒト全血液・Ｏ型、コージンバイオ）の血球分離を行った。導入口からヒト全血１５μＬを第１流路に導入し、導入口の逆側から１０ｋＰａで２分間陰圧印加して、標準検査試薬をフィルターに通した。次いで、導入口からＰＢＳ２５μＬを第１流路に導入し（１０ｋＰａ陰圧：２分間）、フィルターの洗浄を行った。その後、第２流路のポートａ及び第３流路のポートｄを塞ぎ、第２流路のポートｃから５０μＬの低張液を導入し、フィルターに捕捉されていた血球画分を溶解させて、第３流路のポートｂから溶血した血球画分を回収した。溶血液が約５０μＬ押し出された時点で、溶血液の回収を終了した。
　前記のように回収した溶血液を用いて、ラピディア（登録商標）　オートＨｂＡ１ｃ－Ｌを用いたラテックス凝集法を行い、６６０ｎｍ及び８００ｎｍの吸光度を測定した。測定された吸光度から、変動係数（ＣＶ）を算出した。
　また、遠心分離法（遠心力（１０００×ｇ）、５分）により、ヒト全血の血球画分を分離し、同様に６６０ｎｍ及び８００ｎｍの吸光度を測定した。
　なお、Ａｆｆｉｎｉｏｎ（登録商標）　ＨｂＡｉｃ（Ａｌｅｒｅ）を用いて、ヒト全血のＨｂＡｃ１濃度を測定ところ、ＨｂＡｃ１濃度は５．０６％であった。
　結果を図１８に示す。図１８には、標準検体（ＨｂＡ１ｃ濃度６．１％、ＨｂＡ１ｃ濃度１０％；ヘモグロビンＡ１ｃカットオフテスト認証標準物質、検査医学標準物質機構）を、ラピディア（登録商標）　オートＨｂＡ１ｃ－Ｌを用いて測定した結果も併せて示す。血液成分分離デバイスを用いて全血から分離された血球画分では、遠心分離法で得られた血球画分と同等のＨｂＡ１ｃ測定値が得られた。また、変動係数（ＣＶ）は、遠心分離法と比較して、小さかった。さらに、血液成分分離デバイスを用いて分離された血球画分では、標準検体よりもラテックス凝集法による測定値が低かった。一般的に、正常ヒト全血のＨｂＡ１ｃ濃度は、６％以下である。そのため、標準検体（ＨｂＡ１ｃ濃度６．１％、ＨｂＡ１ｃ濃度１０％）の測定値との比較により、本方法による測定値の信頼性が示された。
　１０，１０ａ，１０ｂ　　第１流路、
　１１　　フィルター部
　１２　　第１導入口
　２０，２０ａ，２０ｂ，２０ｃ　　第２流路
　２２　　第２導入口
　３０　　第３流路
　４０　　第４流路
　４２　　第４導入口
　５０　　血漿分析部
　６０　　血球分析部
　７０　　プレート
　１００，２００，３００，４００，５００，６００，７００　血液成分分離デバイス
　３１０　　第１の基板
　３１１，３１１ａ，３１１ｂ，３１１ｃ　　凸部
　３１５　　流路
　３２０　　第２の基板
　３３０　　ダイアフラム部材
　３３１　　アンカー部
　３４０，３４０ａ，３４０ｂ，３４０ｃ　　貫通孔
　８００，８００ａ，８００ｂ，８００ｃ　　ダイアフラムバルブ
　Ｖ１、Ｖ１ａ～Ｖ１ｆ，Ｖ２ａ～Ｖ２ｎ　　バルブ
　Ｐ１，Ｐ２　　ポンプ部
　Ｉ１～Ｉ３　　インレット
　Ｗ１，Ｗ２　　廃液回収部
　Ａ　　エア導入口

Claims (22)

  1. 　血球と血漿とを含む溶液が導入される第１導入口と、血球を捕捉するフィルターが設置されたフィルター部と、を備える第１流路と、
    　前記第１流路の前記フィルター部に接続する第２流路と、
    　を含む、血液成分分離デバイス。
  2. 　前記第２流路は、第２導入口を有し、且つ前記第１流路の前記フィルター部で前記第１流路と交差する、請求項１に記載の血液成分分離デバイス。
  3. 　前記第１導入口から導入された溶液は、前記フィルター部の内部を前記第１流路の軸方向に流れ、
    　前記第２導入口から導入された溶液は、前記フィルター部の内部を前記第１流路の軸方向とは異なる方向に流れる、請求項２に記載の血液成分分離デバイス。
  4. 　前記第１流路に接続する血漿分析部をさらに備える、
    　請求項１～３のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイス。
  5. 　血漿回収部をさらに備える、
    　請求項１～４のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイス。
  6. 　前記第１流路は、
    　前記第１流路内の流体の流れを制御する流体制御部をさらに備え、
    　前記第１導入口と前記流体制御部との間に、前記フィルター部が配置されている、
    　請求項１～５のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイス。
  7. 　前記流体制御部が、吸気ポンプに接続する吸気ポート、ポンプ、又はバルブを有する、請求項６に記載の血液成分分離デバイス。
  8. 　前記第１流路は、前記フィルター部を挟んで前記第１導入口とは逆側に配置されるバルブを少なくとも１つ備える、
    　請求項１～７のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイス。
  9. 　前記第２流路は、前記第１流路との接続部を挟んだ一方又は両方の流路に配置されるバルブを少なくとも１つ備える、
    　請求項２～８のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイス。
  10. 　前記第１流路の前記フィルター部に接続する第３流路をさらに含み、
    　前記第１流路において、前記第１導入口、前記第２流路との接続部、及び前記第３流路との接続部が、この順番で配置されている、
    　請求項１～９のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイス。
  11. 　前記フィルター部において、
    　前記第２流路との接続部は前記フィルター部の一端に配置され、
    　前記第３流路との接続部は前記フィルター部の他端に配置される
    　請求項１０に記載の血液成分分離デバイス。
  12. 　前記第３流路は、前記第１流路の前記フィルター部で、前記第１流路と交差している、請求項１１に記載の血液成分分離デバイス。
  13. 　前記第３流路は、前記第１流路との接続部を挟んだ一方又は両方の流路に配置されるバルブを少なくとも１つ備える　請求項１０～１２のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイス。
  14. 　溶血された血球を分析する血球分析部をさらに備える、請求項１～１３のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイス。
  15. 　前記血球分析部は、前記第２流路又は前記第３流路に接続している、請求項１４に記載の血液成分分離デバイス。
  16. 　前記血球分析部は、ヘモグロビンＡ１ｃを測定するヘモグロビンＡ１ｃ測定部である、請求項１４又は１５に記載の血液成分分離デバイス。
  17. 　血球回収部をさらに備える、
    　請求項１～１６のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイス。
  18. 　請求項１～１７のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイスを用いて、血液成分を分離する方法であって、
    （ａ）前記第１導入口から、血球と血漿とを含む溶液を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記溶液中の血球を捕捉させ、前記溶液中の血漿を前記第１流路において移動させる工程と、
    （ｂ）前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させ、溶血により放出された血球成分を前記第２流路において移動させる工程と、
    　を含む、方法。
  19. （ｃ）前記工程（ａ）の後であり前記工程（ｂ）の前に、前記第１導入口又は前記第２導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する血漿除去工程、を更に含む、請求項１８に記載の方法。
  20. 　請求項１～１６のいずれか一項に記載の血液成分分離デバイスを用いて、血液成分を分析する方法であって、
    （ａ）前記第１導入口から、血球と血漿とを含む溶液を前記第１流路に導入し、前記フィルターに前記溶液中の血球を捕捉させる工程と、
    （ｂ）前記工程（ａ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から、洗浄液を前記第１流路に導入し、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、
    （ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記第１導入口又は前記第２導入口から溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、
    （ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球を分析する工程と、
    　を含む、方法。
  21. 　（ｄ）前記工程（ａ）又は前記工程（ｂ）の後、前記フィルターを通過した血漿を分析する工程、をさらに含む、
    　請求項２０に記載の血液成分を分析する方法。
  22. 　ヘモグロビンＡ１ｃを分析する方法であって、
    （ａ）血球と血漿とを分離するフィルターに血球と血漿とを含む溶液中の血球を捕捉させる工程と、
    （ｂ）前記工程（ａ）の後、前記フィルターに洗浄液を通過させ、前記フィルター内の血漿を除去する工程と、
    （ｃ）前記工程（ｂ）の後、前記フィルターに溶血剤を導入し、前記フィルター内の血球を溶血させる工程と、
    （ｄ）前記工程（ｃ）で溶血させた前記血球中のヘモグロビンＡ１ｃを分析する工程と、
    　を含む、方法。
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