WO2018174369A1 - 초유의 유산균 발효산물과 이를 이용한 화장품 조성물 - Google Patents

초유의 유산균 발효산물과 이를 이용한 화장품 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2018174369A1
WO2018174369A1 PCT/KR2017/013582 KR2017013582W WO2018174369A1 WO 2018174369 A1 WO2018174369 A1 WO 2018174369A1 KR 2017013582 W KR2017013582 W KR 2017013582W WO 2018174369 A1 WO2018174369 A1 WO 2018174369A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
colostrum
lactic acid
acid bacteria
fermented
lactobacillus
Prior art date
Application number
PCT/KR2017/013582
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
송혁
곽태일
김준혁
Original Assignee
주식회사 팜스킨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 팜스킨 filed Critical 주식회사 팜스킨
Publication of WO2018174369A1 publication Critical patent/WO2018174369A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A61K8/981—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of mammals or bird
    • A61K8/986—Milk; Derivatives thereof, e.g. butter
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine

Definitions

  • the present invention relates to a fermented product of colostrum and a cosmetic composition using the same, and more particularly, a fermentation product obtained by fermenting colostrum with a specific lactic acid bacterium and a functional composition obtained by using a new composition having an anti-inflammatory and skin irritant effect. It relates to a cosmetic composition.
  • the skin consists of the epidermis and the dermis.
  • the epidermis is constantly dividing cells, forming a variety of layers.
  • the outermost cells die and become hard, which is one of the best defenses to protect the body from external stress, and bacteria can't penetrate the skin.
  • the skin has sebaceous glands and sweat glands, the sebaceous glands secrete sebum, and the glands secrete water to create sebum membranes and protect the stratum corneum. Therefore, human skin is always moist, glossy and smooth. It becomes possible.
  • Cosmetics are intended to protect the skin from the outside, remodeling, and cleanliness, but when you look closely at the composition of the cosmetics, the ingredients that are necessary for the formation of the product, contrary to the original meaning, may be irritating to the skin. have. Examples include emulsifiers, fragrances and preservatives. They are most often made by chemical reaction synthesis, which increases the chances of inflammatory reactions, allergies and erythema in sensitive skin.
  • Lactic acid bacteria refers to bacteria that break down carbohydrates into lactic acid by metabolism. If the lactic acid is increased, the acidity is lowered, and the acidity occurs when the lactic acid bacteria themselves die. Therefore, fermentation time is important, and it is also a method to be resistant to oxidative stress.
  • Lactic acid produced by lactic acid bacteria plays a very large role. Antioxidant, anticancer, anti-radioactivity detoxification role and also has anti-inflammatory effect. It also has the ability to increase the water binding of the stratum corneum, which can improve fine wrinkles and soften the skin.
  • Interleukin-1 is a type of cytokine that is produced by several cells, such as activated monocytes, epithelial cells or vascular endothelial cells, and mediates inflammatory responses.
  • Another representative inflammatory component is the cytokine Tumor Necrosis Factor- ⁇ (TNF- ⁇ ).
  • Interleukin-10 inhibits the expression of enzymes related to inflammation, such as inducible nitric oxide synthase (iNOS) and inducible cyclooxyganase (COX-2), which are present in macrophages (Niiro, Hiroaki, et al, 1995). )
  • iNOS inducible nitric oxide synthase
  • COX-2 inducible cyclooxyganase
  • Lactoferrin is well known to play a role in the regulation of Tumor Necrosis Factor- ⁇ (TNF- ⁇ ) or Interleukin-1 (IL-1) (Yamanaka, 2003).
  • TNF- ⁇ Tumor Necrosis Factor- ⁇
  • IL-1 Interleukin-1
  • Colostrum also contains Insulin-like Growth Factor-1 (IGF-1), which is known to promote overall growth and have the ability to regulate cell growth and amplification (Uruakpa et al. , 2002).
  • IGF-1 Insulin-like Growth Factor-1
  • Casein which is contained in colostrum, accounts for 3% of the whole milk and about 80% of milk proteins, and it has been found to cause allergic effects on the body when ingested (G. H. Docena et al, 1996). Casein is also used as a cosmetic ingredient, but studies have not been fully conducted.
  • colostrum contains exfoliating ingredients (Kwon, Yu et al. 2007), and it is also known to contain TGF-beta, which inhibits melanin pigment and causes whitening effect (Martinez-Esparza M, et al. , 1997), and colostrum contains a lot of hyaluronic acid, which has been proven to have an excellent moisturizing effect (Pedersen, et al, 2014).
  • Korean Patent No. 10-0964831 proposes a cosmetic composition for promoting keratin differentiation containing colostrum as an active ingredient, wherein colostrum is used for anti-inflammatory, anti-allergic, and moisturizing effects.
  • This article describes the various usefulness of cosmetic application including the efficacy of promoting keratin differentiation of colostrum ingredients.
  • Korean Patent No. 10-1003740 discloses a novel Streptococcus thermophilus strain and fermented colostrum probiotic for swine using the same to improve the weight gain of livestock and to proliferate harmful microorganisms such as Escherichia coli and Salmonella. It is proposed to reduce the use of antibiotics and to improve productivity by preventing bacterial diarrhea disease and inhibiting the death of livestock.
  • Korean Patent Publication No. 10-2002-0021908 is a health supplement food that fermented colostrum using lactic acid bacteria, by reducing the content of harmful microorganisms present in colostrum by fermentation method using lactic acid bacteria, various functional substances possessed by colostrum. A health supplement that can be used as is is proposed.
  • Korean Patent No. 10-0619289 discloses a method for preparing a whitening cosmetics in which colostrum of colostrum is linked to arbutin, a whitening agent, and Korean Patent Publication No. 10-2009-0071998 discloses a skin keratin having colostrum as an active ingredient.
  • a composition for promoting differentiation has been proposed, and US Patent No. 5750149 proposes a technology relating to cosmetics containing substances derived from colostrum of horses.
  • Patent Document 1 Korean Registered Patent No. 10-0964831
  • Patent Document 2 Korean Registered Patent No. 10-1003740
  • Patent Document 3 Korean Patent Publication No. 10-2002-0021908
  • Patent Document 4 Korean Registered Patent No. 10-0619289
  • Patent Document 5 Korean Patent Publication No. 10-2009-0071998
  • Patent Document 6 US Patent No. 5,750,149
  • the present invention solves the problems of the prior art as described above, based on the results of the study of the availability of colostrum component, to prepare a high-functional fermentation product by fermenting colostrum component with lactic acid bacteria as a natural component.
  • an object of the present invention is to provide a colostrum fermentation product of a new composition in which colostrum is fermented with lactic acid bacteria.
  • Another object of the present invention to provide a use of colostrum lactic acid bacteria fermentation products as anti-inflammatory and skin irritation cosmetics.
  • Another object of the present invention to provide a method for producing a colostrum fermentation product of a new composition by fermenting colostrum component with lactic acid bacteria.
  • the present invention is colostrum Lactobacillus vulgaris ( Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus ) and Lactobacillus rhamnosus GG ), lactic acid bacteria, or Lactobacillus bacteria ( Lactobacillus ) and Streptococcus ( Streptococcus ) to provide a fermentation product of colostrum containing fermented lactic acid bacteria, including a composite lactic acid bacteria mixed ( Streptococcus ).
  • the present invention provides a cosmetic composition for anti-inflammatory and skin irritation relief comprising a specific colostrum lactic acid bacteria fermentation product.
  • the present invention is the step of quenching colostrum and then pasteurized to prepare a fermentation raw material; It provides a method for producing a colostrum lactic acid bacteria fermentation product comprising the step of inoculating and fermenting lactic acid bacteria to the fermentation raw material obtained in the step.
  • the present invention further comprises the step of obtaining a fermentation extract using the fermentation product enzyme; It provides a method for producing a colostrum lactic acid bacteria fermentation product comprising a.
  • Fermentation products by lactic acid bacteria fermentation of colostrum according to the present invention by using the lactic acid bacteria as a natural component to increase the specific active ingredients contained in colostrum and further improve the extraction efficiency by the active ingredient excellent compared to similar ingredients such as colostrum or milk It is contained.
  • the lactic acid bacteria fermented product of colostrum according to the present invention is simple and easy to manufacture, and because it is made of natural microorganisms conventionally used in food production, it is highly safe.
  • the colostrum fermentation product obtained by the lactic acid bacteria fermentation is very excellent anti-inflammatory effect compared to the existing shows an increased anti-inflammatory effect and skin irritation relief effect.
  • FIG. 1 is a process diagram illustrating an example of a process for preparing lactic acid bacteria fermented colostrum extract of colostrum according to an embodiment of the present invention, which is applied in an embodiment.
  • Figure 2 is an experimental example of the lactic acid bacteria fermented product of colostrum according to the present invention, a graph showing the experimental results for the anti-inflammatory effect of the lactic acid bacteria fermented colostrum extract prepared in Example.
  • FIG. 3 is an experimental example of the lactic acid bacteria fermented product of colostrum according to the present invention, it is a graph showing the experimental results for the skin irritation relaxation effect of the lactic acid bacteria fermented colostrum extract prepared in Example.
  • Figure 4 is an experimental example for the lactic acid bacteria fermented product of colostrum according to the present invention, a graph showing the experimental results for the antioxidant effect of the lactic acid bacteria fermented colostrum extract prepared in Example.
  • Figure 5 is an experimental example of the lactic acid bacteria fermented product of colostrum according to the present invention, a graph showing the experimental results for the cytotoxicity of the lactic acid bacteria fermented colostrum extract prepared in Example.
  • the present invention relates to a fermentation product of colostrum of a new composition obtained by fermentation with a specific lactic acid bacteria as a fermentation product having excellent utility obtained from colostrum.
  • Fermentation products obtained by the lactic acid bacteria fermentation of colostrum obtained in the present invention is excellent in anti-inflammatory activity, in order to replace and supplement the conventional chemical synthetic cosmetic composition, when applied to the production of natural cosmetic composition through lactic acid bacteria fermentation effect and skin irritation relief It can be provided as a new cosmetic composition with enhanced effect.
  • the present invention starts from the use of colostrum as a fermentation raw material to increase its utility.
  • the colostrum Lactobacillus vulgaris Lactobacillus Lactobacillus ( Lactobacillus ) Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus ) or Lactobacillus rhamnosus It provides a fermented product of colostrum lactic acid bacteria fermented with lactic acid bacteria, including GG ).
  • colostrum provides a fermented product of colostrum, fermented with lactic acid bacteria, including lactic acid bacteria mixed Lactobacillus ( Lactobacillus ) and Streptococcus ( Streptococcus ) mixed.
  • colostrum Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus provides a colostrum lactobacillus fermentation product, fermented with a lactic acid bacteria including a complex lactic acid bacteria mixed with at least one lactic acid bacteria selected from Streptococcus , more preferably Streptococcus thermophilus Can be.
  • Colostrum used as a fermentation raw material in the present invention can be preferably used salty milk within three days after delivery.
  • colostrum used as a fermentation raw material may preferably use bovine colostrum, where colostrum is a concept including colostrum of domestic animals such as goats and goats, but is not limited thereto.
  • the colostrum in order to use colostrum, for example, is rapidly cooled and then pasteurized to prepare a fermentation raw material.
  • Pasteurization treatment in the present invention can be carried out by a conventional pasteurization method.
  • the fermentation material obtained in the above step is inoculated with lactic acid bacteria and fermented to obtain a fermentation broth.
  • lactobacillus fermentation is Lactobacillus vulgaris ( Lactobacillus delbrueckii) subsp . bulgaricus ), Lactobacillus rhamnosus GG ) It is preferable to use one or more lactic acid bacteria selected from the group or complex lactic acid bacteria in which Streptococcus thermophilus is mixed. The selective use of such specific lactic acid bacteria can be an important factor in achieving the desired purpose.
  • Lactobacillus Bulgaria kusu (Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus) are D- lactic acid from the fermentation process (D-Lactic acid) by a production represents a detoxification role and anti-inflammatory effects, effects to improve the anti-wrinkle and skin texture Can be expressed.
  • Lactobacillus rhamnosus GG is epithelialization material given to help eczema prevention, eczema can exhibit an effect in the prevention and Gram-positive bacteria is Staphylococcus aureus (staphylococcus aureus), or impede the growth perched on dead skin cells, keratinocyte migration and cell reproduction ( can contribute to re-epithelialization).
  • Lactobacillus Lactobacillus
  • Streptococcus thermophilus may have a desirable effect on the skin, such as the formation of the stratum corneum layer structure or increase the amount of ceramide necessary for this function.
  • Lactobacillus rhamnosus GG and Streptococcus thermophilus ( Streptococcus thermophilus ) to produce interleukin-10 as a synergistic effect by using the mixture, excellent anti-inflammatory Can be effective.
  • lactic acid bacteria when using the lactic acid bacteria as described above, due to the use of these lactic acid bacteria will exhibit a synergistic effect to enhance the anti-inflammatory effect with lactoferrin of colostrum.
  • Lactobacillus delbrueckii used as lactic acid bacteria Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus
  • Streptococcus thermophilus can provide a more favorable synergistic effect for mixed use in that both bacteria provide polyamines to protect themselves from oxidative stress.
  • a composite lactic acid bacteria mixed Lactobacillus ( Lactobacillus ) and Streptococcus ( Streptococcus ) is preferably induce the production of lactic acid and antibacterial, anti-inflammatory effect As it improves the synergistic effect can be expected.
  • Lactobacillus Bulgaria kusu Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus
  • Lactobacillus ramno suspension support Lactobacillus rhamnosus GG
  • Streptococcus thermophilus Streptococcus thermophilus
  • the fermentation of lactic acid bacteria can be inoculated with the above lactic acid bacteria in pasteurized colostrum which is a fermentation raw material and can be fermented for 30 to 120 minutes at a temperature of 30 ⁇ 50 °C.
  • the fermentation product of colostrum after undergoing the lactic acid bacteria fermentation process, can be obtained through centrifugation to obtain a fermentation broth.
  • the lactic acid bacterium fermentation product of the present invention may be one in which casein is removed.
  • the lactic acid bacteria fermentation product of colostrum may preferably include additionally obtaining the fermentation extract using the fermentation broth enzyme.
  • the step of obtaining the fermentation extract by using the fermentation broth is preferably, for example, undergoing an agglomeration process to purify the colostrum fermentation broth after the lactic acid bacteria fermentation.
  • the fermentation broth may include a step of obtaining lactic acid bacteria fermented colostrum extract by aggregating using an enzyme.
  • the functional component content can be increased by removing those that may have a negative effect such as casein contained in the fermentation broth obtained by the lactic acid bacteria fermentation, or by removing the high-casein in milk protein. Therefore, the enzyme is added to remove the casein and other components through the aggregation reaction.
  • the enzyme may further comprise a purification process comprising the step of centrifuging and filtering the enzyme additive.
  • a purification process comprising the step of centrifuging and filtering the enzyme additive.
  • an enzyme complex for the role of a coagulant may be used, and specifically, for example, rennet may be preferably used.
  • Rennet illustrated herein refers to an enzyme complex in the stomach of a ruminant animal.
  • rennet is a coagulase containing rennin, one of the proteolytic enzymes, and it is known to be contained in the calf's gastric juice with pepsin. It is known that it has a characteristic of precipitating, and cheese that is aged shortly using bovine gastrointestinal enzyme rennet has a good aroma and a smooth mouth feel.
  • Enzymes used in the present invention can be understood to include all enzymes exhibiting properties similar to the aforementioned rennet.
  • an enzyme represented by such a rennet when used, it can be preferably used to cause the aggregation of casein contained in lactic acid bacteria fermented colostrum to remove casein.
  • the fermentation broth of colostrum obtained after the lactic acid bacteria fermentation may be aggregated for 30 to 120 minutes after the enzyme is added at 30 to 40 ° C.
  • the enzyme addition process may be further subjected to the aggregation process for the components such as casein and then centrifuged and filtered to recover the fermentation broth.
  • the lactic acid bacteria fermented product of colostrum which is substantially free of casein components, can be obtained.
  • the lactic acid bacteria fermented product of colostrum thus obtained may be prepared in the form of lactic acid bacteria fermented colostrum extract from which casein has been removed.
  • the lactic acid bacteria fermentation product of colostrum may be prepared by further filtering and sterilizing.
  • the lactic acid bacteria fermented colostrum extract obtained according to the present invention may be used by removing bacteria that may be present after filtration twice or several times.
  • Lactic acid bacteria fermented colostrum extract obtained through the above steps according to the present invention is an example of the lactic acid bacteria fermented product of colostrum, it was confirmed that exhibits a very useful property different from any components previously derived from colostrum.
  • the lactic acid bacteria fermented product of colostrum according to the present invention includes any one or more of fermentation broth obtained by fermenting colostrum into specific lactic acid bacteria, fermentation broth substantially free of casein, sterilized fermentation broth, and lactic acid bacteria fermented colostrum extract purified from fermentation broth. can do.
  • An example of the most preferred type of fermentation product of colostrum according to the present invention may be purified lactic acid bacteria fermented colostrum extract that is sterilized without casein by purifying the fermentation broth.
  • the colostrum by treating the colostrum with a specific lactic acid bacteria as described above, it can exhibit an excellent effect unlike the prior art, in particular, since the combined use of the lactic acid bacteria of the present invention exhibits a synergistic effect, It was confirmed that it shows the outstandingly excellent activity compared with the use of lactic acid bacteria.
  • the lactic acid bacteria fermented product of colostrum according to the present invention in particular, lactic acid bacteria fermented colostrum extract obtains the effect on useful effects such as inhibition of cytokine generation and anti-inflammatory activity by lactic acid bacteria fermentation, and when purified by casein, etc.
  • lactic acid bacteria fermented colostrum extract obtains the effect on useful effects such as inhibition of cytokine generation and anti-inflammatory activity by lactic acid bacteria fermentation, and when purified by casein, etc.
  • the present invention in order to replace and supplement the chemical synthetic cosmetic composition is a cosmetic that is used in the past, by producing a natural cosmetic composition using the lactic acid bacteria fermentation products of acetic acid according to the present invention to reduce the skin inflammation and skin irritation effect The provision of enhanced new cosmetic compositions.
  • the skin in the case of the cosmetic composition containing the colostrum fermentation product of colostrum of the present invention, the skin is very significant by inhibiting the occurrence of pro-inflammatory satokine and promoting the expression of Interleukin-10. It can exhibit anti-inflammatory and skin stimulating effects.
  • the lactic acid bacteria fermentation product of colostrum in the cosmetic composition may be contained in an amount of 0.01 to 40% by weight based on the total weight of the composition. Outside the lower limit of the above content range, the effect is remarkably reduced. Outside the upper limit, it is difficult to prepare a cosmetic formulation, or it is not preferable in terms of economics.
  • the lactic acid bacteria fermented product of colostrum prepared by the method as described above may be added to the cosmetic composition, for example, as a lactic acid bacteria fermented colostrum extract, for example, powdery, liquid, nanocapsules, complex It may be added in the form of, and the like, and may be added in a liquid phase as a preferred example.
  • a lactic acid bacteria fermented colostrum extract for example, powdery, liquid, nanocapsules, complex It may be added in the form of, and the like, and may be added in a liquid phase as a preferred example.
  • a cosmetic composition containing lactic acid bacteria fermentation product of colostrum can be used in cosmetic formulations such as lotion (skin lotion), nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, nutrition essence, cleanser, mask pack, and the like. It is not limited, and may be used in other hair preparations or skin preparations for various functional effects.
  • the lactic acid bacteria fermented product of colostrum contained in the cosmetic composition prepared according to the present invention is the raw material used in the manufacturing process is colostrum and the lactic acid bacteria used to ferment it is a natural microorganism that has conventionally been used in food production, and thus stability of the extract itself.
  • the excellent anti-inflammatory and skin irritation-relieving effect expressed synergistically through the lactic acid bacteria fermentation it is possible to prevent the occurrence of inflammation in advance, as well as remarkably excellent dermatitis when using cosmetics containing these ingredients in the skin It is expected to be very useful as a new concept cosmetic composition because it can exhibit a relaxing effect and skin irritation relaxing effect.
  • Fermented colostrum extract was prepared by the same process as in the process of FIG.
  • Step 1 prepare raw materials
  • Second step production of lactic acid bacteria fermentation broth
  • Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , ATCC 11842), Streptococcus thermophilus ( ATCC 19258), Lactobacillus rhamnosus GG , ATCC 53103) three kinds of complex bacteria were inoculated into the fermentation raw material of the first step and fermented at a temperature of 35 °C 60 minutes to obtain a fermentation product (fermentation liquid).
  • Step 3 Preparation of Lactic Acid Bacteria Fermented Colostrum Extract
  • the fermentation broth obtained in the second step is centrifuged at 2000 rpm for 20 minutes to remove the suspended matter, and the supernatant except the precipitate is recovered to obtain the fermented colostrum as a fermentation product of colostrum.
  • the fermented colostrum is adjusted to 33 ° C., and agnetted for 60 minutes by adding Rennet to recover the fermented colostrum.
  • the fermented colostrum obtained above was centrifuged at 13000 rpm for 60 minutes to obtain a supernatant as a fermented colostrum extract that is a lactic acid bacteria fermentation product.
  • Example 1 the lactic acid bacteria fermentation products were prepared in the same manner as in Example 1 by adjusting the microorganisms or complex bacteria inoculated into the fermentation raw material of the first step.
  • Example 2 Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , ATCC 11842) Example 3 Lactobacillus rhamnosus GG, ATCC 53103 Example 4 Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , ATCC 11842) + Lactobacillus rhamnosus GG, ATCC 53103 Example 5 Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , ATCC 11842) + Streptococcus thermophilus ( ATCC 19258) Example 6 Lactobacillus rhamnosus GG ( ATCC 53103) + Streptococcus thermophilus ( ATCC 19258)
  • the fermentation product of colostrum was prepared in the same manner as in Example 1, using Streptococcus thermophilus ( ATCC 19258) alone as a bacterium used for fermentation.
  • Lactobacillus Bulgaria kusu same as in the method of Example 2, except that Figure the Lactobacillus ash instead of (Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus, ATCC 11842) using the filler's (Lactobacillus acidophilus, ATCC 4356) It carried out by the method, the lactic acid bacteria fermented colostrum extract was prepared.
  • Lactobacillus Bulgaria kusu Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus, ATCC 11842
  • Streptococcus Thermo filler's Streptococcus thermophilus, ATCC 19258
  • Lactobacillus fermented colostrum extract was prepared in the same manner as in Example 6 except for using Streptococcus thermophilus ( ATCC 19258).
  • LPS Lipopolysaccharide
  • Activated macrophages are TNF ⁇ , an inflammation-inducing cytokine. Increases the expression level of IL-1 ⁇ , IL-12, IFN ⁇ and the like.
  • Inflammatory cytokines produce Nitric oxide (NO). Therefore, the anti-inflammatory effect was evaluated by reducing the amount of NO expression.
  • RAW 264.7 cells were suspended in DMEM (Dubelccos Modified Eagle Medium, Gibco) animal cell culture medium containing 10% FBS, and 5 X 10 5 was added to each well of a 24 well plate at 37 ° C and 5% CO 2. Incubate for one day at. Thereafter, the medium was washed twice, group A was LPS, group B was LPS + unfermented colostrum extract, group C was LPS + Streptococcus thermophilus ( ATCC 19258) fermented colostrum extract , group D was LPS + Fermented colostrum extract (Example 1) was put together and further incubated for 18 hours.
  • DMEM Dubelccos Modified Eagle Medium, Gibco
  • the grease reagent was added to the cell supernatant for quantification of NO and reacted for 15 minutes, and the absorbance was measured at 540 nm with an ELISA reader. Sodium nitrite was used as a standard solution.
  • the fermented colostrum extract As shown in Table 2 and Figure 2, it can be confirmed that the fermented colostrum extract, a colostrum fermentation product according to the embodiment, has a superior NO inhibitory effect by LPS treatment as compared to the unfermented colostrum extract.
  • a patch test was performed on the forearm of 20 adult men and women (10 males and 10 females) in their 20s. Skin irritation was used 0.1% by weight of sodium lauryl sulfate (SLS), group A fermented SLS only, group B fermented SLS + non-fermented colostrum extract, group C fermented SLS + Streptococcus thermophilus ( ATCC 19258) Colostrum extract, D group was applied to the skin for 1 day as SLS + fermented colostrum extract (Example 1). After the patch was finished, the test site was marked with a pen, and after 24 hours, the skin reaction of the test site was determined according to the criteria of Table 3 below.
  • SLS sodium lauryl sulfate
  • group A fermented SLS only group B fermented SLS + non-fermented colostrum extract
  • group C fermented SLS + Streptococcus thermophilus ATCC 19258 Colostrum extract
  • D group was applied to the skin for 1 day as S
  • Free radical Free radical for fermented colostrum extract according to the embodiment under the same conditions as unfermented colostrum extract , Streptococcus thermophilus ( ATCC 19258) fermented colostrum extract through DPPH ( ⁇ -diphenyl- ⁇ -picrylhydrazyl) method Radical) scavenging effect was measured.
  • Experimental methods include group A (unfermented colostrum extract), group B Streptococcus thermophilus ( ATCC 19258) fermented colostrum extract, and group C (fermented colostrum extract) in 0.2 ml of DPPH dissolved in ethanol in 96 well plates. Each 0.2 ml of Example 1) was dispensed, and then reacted at room temperature for 30 minutes. Thereafter, absorption adsorption was measured at 525 nm. The control group added ethanol instead of the sample.
  • DPPH radical scavenging ability was calculated by the method of the following formula (2).
  • DPPH radical scavenging activity (%) (absorbance of 1-extract additive / absorbance of control) X 100
  • the fermented colostrum extract of the fermentation product of colostrum according to the embodiment is superior to the free lyric scavenging effect than the unfermented colostrum extract.
  • the EZ-cytox Cell Viability Assay method is a method for measuring cell viability by using the dehydrogenase of mitochondria of living cells, and evaluated the toxicity of fermented colostrum extract according to the example.
  • RAW 264.7 cells were used as a cell line, and DMEM (Dubelccos Modified Eagle Medium, Gibco) containing 10% FBS and 100UL S / P was used as an animal cell culture medium.
  • 24 well plate 5x10 5 cells were added to each well and incubated for 24 hours at 37 °C, 5% CO 2 incubator. Thereafter, 12 wells were added to the culture medium plate without addition of the extract (control), and the remaining 12 were fermented colostrum extract (Example experimental group) and further cultured for 24 hours.
  • EZ-cytox solution was added to all wells and reacted for 1 hour and measured at 450 nm with a plate reader.
  • the fermented colostrum extract of the fermentation product of colostrum according to the embodiment can be confirmed that there is no cytotoxicity.
  • LPS Lipopolysaccharide
  • Activated macrophages are TNF- ⁇ , an inflammation-inducing cytokine. Increase the expression levels of IL-1 ⁇ , IL-12, IFN ⁇ and the like. Inflammatory cytokines produce Nitric oxide (NO). Therefore, the anti-inflammatory effect was evaluated by reducing the amount of NO expression.
  • RAW 264.7 cells were suspended in DMEM (Dubelccos Modified Eagle Medium, Gibco) animal cell culture medium containing 10% FBS, and 5 X 10 5 was added to each well of a 24 well plate at 37 ° C and 5% CO 2. Incubate for one day at. Thereafter, the medium was washed twice and the sample was prepared, and then the LPS was mixed with the prepared sample at a concentration of 1 ⁇ g / ml and treated at the same time in a cell at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator for 18 hours.
  • DMEM Dubelccos Modified Eagle Medium, Gibco
  • the skin response of the test site was also determined according to the above criteria.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 초유의 유산균 발효산물과 이를 유효성분으로 하는 화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것으로써, 초유를 종래부터 식품제조에 이용되고 있는 천연 미생물로 발효처리 하여 안정성이 높으며, 특히 특정 유산균 발효를 통해 상승된 항염 효과 및 피부자극완화 효과를 갖는 초유의 유산균 발효산물을 제공하는 것이다, 본 발명에서 제조된 초유의 유산균 발효산물은 항염 및 피부자극완화용 화장품 조성물에 사용할 수 있다.

Description

초유의 유산균 발효산물과 이를 이용한 화장품 조성물
본 발명은 초유의 유산균 발효산물과 이를 이용한 화장품 조성물에 관한 것으로써, 더욱 상세하게는 초유를 특정 유산균으로 발효 처리하여 얻어지는 발효산물과 이를 이용하여 항염 및 피부자극완화 효과가 있는 새로운 조성으로 얻어지는 기능성 화장품 조성물에 관한 것이다.
인간이 가지고 있는 기관 중 가장 큰 기관이 피부이다. 피부는 표피와 진피로 구성이 되어있다. 표피는 지속적으로 세포가 분열을 하며, 여러 종류의 층을 만들게 된다. 이때 가장 바깥쪽의 세포들은 죽고 단단해 지게 되어 외부의 스트레스로부터 신체를 보호하여 주는 가장 뛰어난 방어기관 중에 하나이며, 세균 또한 이 피부를 뚫지 못한다.
피부의 경우 피지선과 땀샘을 가지고 있기 때문에 피지선에서는 피지를, 땀샘에서는 수분을 분비하여 인간 스스로 피지 막을 만들어 내고 각질층을 보호하게 되는데, 이 때문에 사람의 피부는 항상 촉촉하며, 윤기가 흐르고 매끄러운 상태를 유지할 수 있게 된다.
사람의 경우 이 각질층의 수분함량이 20%가 되었을 때가 가장 이상적인 피부이며, 아름다움이 한껏 돋보이는 상태이다. 하지만, 수분 함량이 10% 이하로 떨어지게 되면 피부를 지켜주어야 할 각질이 제자리에 있을 수 없고 떨어져 나가거나 그 사이가 벌어지게 되어, 이물질이나 세균의 침투가 용이하게 되어 염증이 생기거나 질병, 알레르기 등이 발생할 확률이 증가한다. 또한, 신진대사를 원활히 못하게 되어 위와 같은 자극이 더 가중된다. 게다가 자연 공해, 자외선, 실내 환경 등에 의해 민감성 피부를 가진 사람들이 증가하고 있는 추세다. 이런 민감성 피부의 경우, 대중적인 피부 화장품 조성물을 사용할 때에 부작용을 일으켜, 홍반, 따가움, 가려움, 심할 경우 염증반응을 나타내게 된다.
화장품이란 피부를 외부로부터 보호, 단장, 청결을 목적으로 하는 것이지만, 화장품의 조성물을 자세히 보게 되면 본래의 뜻과는 다르게 제품의 형성에 있어서 꼭 필요한 성분이 들어가게 되어 그 성분들이 오히려 피부를 자극할 수 있다. 예를 들어, 유화제, 향료 그리고 방부제 등이 이에 속한다. 이들은 화학 반응 합성으로 만들어지는 경우가 대부분이기 때문에 민감성 피부의 경우, 염증 반응, 알러지, 홍반 등을 동반할 확률이 증가하게 된다.
유산균은 물질대사에 의해 탄수화물을 젖산으로 분해시키는 세균을 칭한다. 젖산이 많아지면 산도가 낮아지게 되고 그 산도에 의해서 유산균 스스로 죽는 경우가 발생한다. 그렇기 때문에 발효시키는 시간은 중요하며, 산화적 스트레스에 내성을 가지게 하는 것 또한 방법이다.
유산균이 내놓는 젖산은 굉장히 많은 역할을 한다. 항산화, 항암, 항방사능 등 해독 역할을 하며 또한 항염 효과도 있다. 또한, 각질층의 수분결합을 증가시키는 능력도 있어 피부의 미세한 주름을 개선시키고 피부를 부드럽게 만들어 주기도 한다.
인터루킨(Interleukin)-1(IL-1)은 활성화 된 단핵식균세포, 상피세포 또는 혈관내피세포 등 여러 세포에서 만들어지며, 염증반응을 매개하는 사이토카인(cytokine)의 한 종류이다. 또 다른 대표적인 염증성분에는 cytokine Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α)가 존재한다.
반대로 염증 반응을 감소시키는 사이토카인도 있는데 Interleukin-10이다. Interleukin-10의 경우는 대식세포에 존재하는 inducible nitric oxide synthase(iNOS)와 inducible cyclooxyganase(COX-2) 등 염증과 관계되는 효소의 표현을 억제하는 역할을 한다.(Niiro, Hiroaki, et al, 1995)
기존의 초유에는 락토페린(Lactoferrin)이 존재하기 때문에 항염의 효과가 있다. 락토페린의 경우, Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α)나 Interleukin-1(IL-1)등의 조절에 대한 역할을 하는 것으로 익히 알려져 있다(Yamanaka, 2003).
또한, 초유에는 Insulin-like Growth Factor-1(IGF-1)이 함유되어 있는데, IGF-1은 전체적인 성장을 촉진하며, 세포 성장과 증폭을 조절할 수 있는 능력을 가지고 있는 것으로 알려져 있다(Uruakpa et al, 2002).
초유에 함유되어 있는 카세인(casein)의 경우 우유 전체 성분의 3%, 유단백질중 약 80%를 차지하고 있고, 섭취 시 우리 몸에 알러지를 일으키는 성분으로 밝혀져 있다(G. H. Docena et al, 1996). 또한, 카세인은 화장품 성분으로 쓰이고 있으나, 연구가 충분히 진행되어 있지 않다.
그 외에도, 초유에는 각질제거 성분이 함유되어 있으며(권유빈, et al. 2007), 멜라닌 색소를 억제하여 미백효과를 야기하는 TGF-beta가 함유되어 있는 것으로도 알려져 있고(Martinez-Esparza M, et al, 1997), 또 초유에는 보습효과가 뛰어나다고 증명된 히알루론산이 많이 함유되어 있다(Pedersen, et al, 2014).
기존에 이러한 초유를 이용한 화장품 조성물로써, 한국등록특허 제10-0964831호에서는 초유를 유효성분을 함유하는 피부 각질분화 촉진용 화장료 조성물이 제안되어 있는데, 여기서는 초유 성분이 항염, 항알러지, 보습 효과에 대해 설명하고 있는 등 초유 성분의 피부각질분화 촉진 효능을 비롯한 화장품 적용의 다양한 유용성에 대해 설명하고 있다.
또한, 한국등록특허 제10-1003740호에서는 신규한 스트렙토코쿠스 서머필루스(Streptococcus thermophilus) 균주 및 이를 이용한 양돈용 발효초유 프로바이오틱으로 가축의 증체율을 향상시키고, 대장균과 살모넬라 등 장내 유해 미생물의 증식을 억제시켜 세균성 설사 질병을 예방하고 가축의 폐사를 억제시켜 항생제 사용의 감소 및 생산성 향상에 관하여 제안하고 있다. 또한, 한국공개특허 제10-2002-0021908호에서는 초유를 젖산균을 이용해 발효시킨 건강보조식품으로써, 젖산균을 이용한 발효의 방법으로 초유 내 존재하는 유해 미생물의 함량을 줄이고, 초유가 지니는 각종 기능성 물질을 그대로 이용하는 것이 가능한 건강보조식품에 관하여 제안하고 있다.
그 외에도, 한국등록특허 제10-0619289호에서는 초유의 알부민을 미백제인 알부틴과 연계한 미백 화장품의 제조방법에 대해 공지되어 있고, 한국공개특허 10-2009-0071998호에서는 초유를 유효성분으로 하는 피부각질분화 촉진용 조성물이 제안되어 있으며, 미국등록특허 제5750149호에서는 말의 초유로부터 유래되는 물질을 함유하는 화장품에 관한 기술이 제안되어 있다.
그러나 상기와 같은 특허발명에서는 일부 초유의 유산균 발효 기술이 알려져 있고, 초유 성분의 여러 효능과 알부틴에 의한 미백 효과 및 초유의 면역 요소의 피부로의 흡수 효과를 제안하고 있지만, 화장품 등으로 적용 가능한 실효성이 있는 추출물이나 우수한 항염, 피부자극완화 효과가 향상된 화장료 성분에 관한 기술을 제대로 제안하고 있지 못하다.
{선행기술문헌}
{특허문헌}
(특허문헌 1) 한국등록특허 제10-0964831호
(특허문헌 2) 한국등록특허 제10-1003740호
(특허문헌 3) 한국공개특허 제10-2002-0021908호
(특허문헌 4) 한국등록특허 제10-0619289호
(특허문헌 5) 한국공개특허 제10-2009-0071998호
(특허문헌 6) 미국등록특허 제5,750,149호
본 발명은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하고 초유 성분의 활용성을 연구하던 결과를 토대로 하여, 초유 성분을 천연 성분인 유산균으로 발효 처리하여 고기능성 발효산물을 제조하는 것을 해결과제로 한다.
따라서 본 발명의 목적은 초유를 유산균으로 발효 처리한 새로운 조성의 초유 발효산물을 제공하는데 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 초유의 유산균 발효산물을 항염 및 피부자극완화용 화장품으로 적용하는 용도를 제공하는데 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 초유성분을 유산균으로 발효 처리하여 새로운 조성의 초유 발효산물을 제조하는 방법을 제공하는데 있다.
상기와 같은 과제해결을 위하여, 본 발명은 초유가 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus)와 락토바실러스 람노서스지지 (Lactobacillus rhamnosus GG) 중 하나 이상의 유산균, 또는 락토바실러스균(Lactobacillus)과 스트렙토코커스균(Streptococcus)이 혼합된 복합 유산균을 포함하는 유산균으로 발효된 것을 함유하는, 초유의 유산균 발효산물을 제공한다.
또한, 본 발명은 특정의 초유의 유산균 발효산물을 포함하는 항염 및 피부자극완화용 화장품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 초유를 급냉한 다음 저온 살균 처리하여 발효원료를 준비하는 단계; 상기 단계에서 얻은 발효원료에 유산균을 접종하고 발효하여 발효액을 얻는 단계를 포함하는 초유의 유산균 발효산물을 제조하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 발효산물을 추가적으로 효소를 이용하여 발효추출물을 얻는 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는 초유의 유산균 발효산물을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 초유의 유산균 발효에 의한 발효산물은 천연 성분인 유산균을 이용하여 초유에 함유된 특정 유효성분을 증대시키고 나아가 추출 효율을 개선함으로써 기존의 초유나 우유 등 유사 성분에 비해 우수한 활성성분이 함유되어 있다.
특히, 본 발명에 따른 초유의 유산균 발효산물은 그 제조가 간단하고 용이하며, 종래부터 식품제조에 이용되고 있는 천연 미생물을 이용한 것이므로 안전성이 높다. 또한, 유산균 발효에 의해 얻어진 초유 발효산물은 기존에 비해 항염 효과가 매우 우수하여 상승된 항염 효과 및 피부자극완화 효과를 나타낸다.
그러므로 본 발명에 따른 초유의 유산균 발효산물을 이용하여 화장품을 제조하는 경우 기존 초유성분에서 발현되는 미백, 보습, 각질 제거 효과 이외에도 피부염증 및 피부트러블의 완화 효과를 얻을 수가 있어서, 항염 및 피부자극완화용 화장품 제조에 매우 유용한 효과가 있다.
도 1은 본 발명에 따른 초유의 유산균 발효산물에 대한 일 구현예로써, 실시예에서 적용한 유산균 발효 초유 추출물의 제조과정의 일예를 도식화한 공정도이다.
도 2는 본 발명에 따른 초유의 유산균 발효산물에 대한 실험예로써, 실시예에서 제조된 유산균 발효 초유 추출물의 항염 효과에 대한 실험결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 초유의 유산균 발효산물에 대한 실험예로써, 실시예에서 제조된 유산균 발효 초유 추출물의 피부자극완화 효과에 대한 실험결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 초유의 유산균 발효산물에 대한 실험예로써, 실시예에서 제조된 유산균 발효 초유 추출물의 항산화 효과에 대한 실험결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 초유의 유산균 발효산물에 대한 실험예로써, 실시예에서 제조된 유산균발효 초유 추출물의 세포 독성에 대한 실험결과를 나타낸 그래프이다.
이하, 본 발명을 하나의 구현예로써 더욱 상세하게 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 초유에서 얻어지는 보다 활용성이 우수한 발효산물로써 특정의 유산균으로 발효하여 얻어지는 새로운 조성의 초유의 유산균 발효산물에 관한 것이다.
본 발명에서 얻어진 초유의 유산균 발효로 얻어지는 발효산물은 항염 활성이 우수하므로 기존에 화학합성 화장품 조성물을 대체 및 보완하기 위하여, 유산균 발효를 통하여 천연 화장품 조성물 제조에 적용하면 피부염증완화 효과 및 피부자극완화 효과를 증진시킨 새로운 화장품 조성물로 제공될 수 있다.
본 발명은 발효 원료로써 초유를 효율적으로 사용하여 그 활용성을 높이고자 하는 것에서 출발한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 초유가 특정 락토바실러스균(Lactobacillus)인 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus) 또는 락토바실러스 람노서스지지(Lactobacillus rhamnosus GG)를 포함하는 유산균으로 발효된, 초유의 유산균 발효산물을 제공한다.
본 발명의 더욱 바람직한 구현예에 따르면, 초유가 락토바실러스균(Lactobacillus)과 스트렙토코커스균(Streptococcus)이 혼합된 복합 유산균을 포함하는 유산균으로 발효된, 초유의 유산균 발효산물을 제공한다.
본 발명의 더욱 바람직한 구현예에 따르면, 초유가 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus), 락토바실러스 람노서스지지 (Lactobacillus rhamnosus GG) 중에서 선택된 하나 이상의 유산균과 여기에 스트렙토코커스균(Streptococcus), 더욱 좋기로는 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)를 혼합한 복합 유산균을 포함하는 유산균으로 발효된, 초유의 유산균 발효산물이 제공될 수 있다.
본 발명에서 발효 원료로써 사용되는 초유는 통상적으로 분만 후 3일 이내에 짠 젖을 바람직하게 사용할 수 있다.
본 발명은 발효 원료로써 사용되는 초유는 바람직하게는 소 초유를 사용할 수 있고, 여기서 초유는 통상적으로 염소, 산양 등 가축동물의 초유를 포함하는 개념이며, 이에 한정된 것은 아니다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 초유를 이용하기 위해서는 예컨대 초유를 급속 냉각한 다음 저온살균 처리하여 발효원료를 준비하는 단계를 거친다.
본 발명에서의 저온살균 처리는 통상의 저온 살균법에 의해 수행할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 단계에서 얻은 발효원료에 유산균을 접종하고 발효하여 발효액을 얻는 단계를 거친다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 유산균 발효에는 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus), 락토바실러스 람노서스지지 (Lactobacillus rhamnosus GG) 중에서 선택된 하나 이상의 유산균 또는 여기에 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)를 혼합한 복합 유산균을 바람직하게 사용할 수 있다. 이러한 특정 유산균의 선택적 사용은 바람직한 목적 달성을 위해 중요한 요소가 될 수 있다.
본 발명에 따르면, 예컨대 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus)는 발효 과정에서 D-락트산(D-Lactic acid)를 생산하여 해독 역할 및 항염 효과를 나타내고, 주름개선 및 피부결을 개선하는 효과를 발현할 수 있다.
또한, 락토바실러스 람노서스지지 (Lactobacillus rhamnosus GG)는 습진 예방과 아토피 예방에 효과를 발현할 수 있으며, 그람양성균인 황색 포도상구균(staphylococcus aureus)이 각질세포에 자리 잡고 성장하는데 방해하거나, 각질 세포 이동과 세포 번식에 도움을 주어 재상피화(re-epithelialization)에 기여하는 효과를 발현할 수 있다.
그러므로 본 발명에서 락토바실러스균(Lactobacillus)만을 단일로 사용하는 경우는 상기 2개의 균에서 선택하여 사용하는 것이 바람직하다. 만일, 다른 락토바실러스균을 사용하는 경우는 본 발명의 목적을 기대하기 어렵다.
또한, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)는 피부 각질층 구조 형성이나 이 기능에 필수적인 세라마이드 양을 증가시키는 등 피부에 바람직한 영향을 줄 수 있다.
또한, 본 발명에 따르면 예컨대 락토바실러스 람노서스지지(Lactobacillus rhamnosus GG)와 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)는 그 혼합 사용에 의한 상승효과로써 인터루킨-10(Interleukin-10)을 생성하여, 우수한 항염 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명에 따르면 상기한 바와 같은 유산균을 사용하는 경우 이러한 유산균들의 사용으로 인해 초유의 락토페린과 함께 항염 효과를 증진시키는 상승효과를 나타내게 된다.
또한, 본 발명에 따르면, 예컨대 유산균으로 사용되는 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus)와 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)는 두 균의 서로에게 폴리아민을 제공하여 산화적 스트레스로부터 스스로를 지킬 수 있게 된다는 점에서 혼합 사용의 경우 더욱 바람직한 상승효과를 기대할 수 있다.
상기와 같은 결과로부터, 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 락토바실러스균(Lactobacillus)과 스트렙토코커스균(Streptococcus)이 혼합된 복합 유산균을 사용하는 경우는 젖산의 생성을 바람직하게 유도하고 항균, 항염 효과를 증진시키므로 상기와 같은 상승효과를 기대할 수 있을 것이다.
더욱 바람직하게는 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), 락토바실러스 람노서스지지(Lactobacillus rhamnosus GG) 및 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus) 등 상기 3종의 균을 함께 사용하는 경우에는 더욱 증진된 상승효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 유산균의 발효는 발효 원료인 저온 살균한 초유에 상기와 같은 유산균을 접종하고 온도 30~50℃에서 30~120분간 발효시킬 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 유산균 발효 과정을 거친 다음에는 이를 원심분리하여 발효액을 얻는 단계를 거쳐서 초유의 유산균 발효산물을 얻을 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명이 초유의 유산균 발효산물은 카세인이 제거된 것일 수 있다.
따라서 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 초유의 유산균 발효산물은 바람직하게도 추가적으로 상기 발효액을 효소를 이용하여 발효추출물을 얻는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명에 따르면 상기 발효액을 효소를 이용하여 발효추출물을 얻는 단계는 예컨대, 유산균 발효과정을 거친 초유 발효액을 정제하기 위한 응집과정을 거치는 것이 바람직하다.
그러므로 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 발효액을 효소를 이용하여 응집하여 유산균 발효 초유 추출물을 얻는 단계를 포함할 수 있다.
이 과정에서는 유산균 발효에 의해 얻어진 발효액에 함유된 카세인(casein) 등의 부정적 영향을 줄 수 있는 것들을 제거하기 위하여, 또는 유단백질 중 함유량이 많은 카세인을 제거함으로써 기능성 성분 함량을 증가시킬 수 있다. 그러므로 효소를 첨가하여 응집반응을 통해 카세인 등의 성분을 제거하는 과정을 거치는 것이다.
따라서 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 효소 첨가 이후에는 추가적으로 효소 첨가물을 원심분리하고 여과하는 단계를 포함하는 정제 과정을 포함할 수 있다. 이러한 과정을 거친 후 보다 정제된 발효산물인 유산균 발효 초유 추출물 형태로 초유의 유산균 발효산물을 얻을 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 카세인 등의 제거를 위해 사용되는 효소로써는 예컨대 응고효소 역할을 위한 효소 복합체를 사용할 수 있으며, 구체적으로는 예를 들어 렌넷(rennet)을 바람직하게 사용할 수 있다.
여기서 예시된 렌넷은 반추동물의 배속에 있는 효소 복합체를 뜻한다. 즉, 렌넷은 단백질 가수 분해 효소의 하나인 레닌(rennin)을 함유하는 응고효소(凝固酵素)로써, 송아지의 위액(胃液) 속에 펩신과 함께 들어 있는 것으로 알려져 있으며, 이러한 렌넷은 우유에 작용하여 카세인을 침전시키는 특성을 가지는 것으로 알려져 있고, 소의 위장 효소 렌넷을 사용해 짧게 숙성시킨 치즈는 향이 좋고 입에 닿는 느낌이 매끄럽다고 알려져 있다.
본 발명에서 사용되는 효소는 상기 언급한 렌넷과 유사한 성질을 나타내는 효소를 모두 포함하는 것으로 이해될 수 있다.
본 발명에 따르면 이러한 렌넷으로 대표되는 효소를 사용하는 경우 유산균 발효 초유에 함유된 카세인과 응집반응을 일으켜 카세인을 제거하는데 바람직하게 사용될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 효소 첨가 과정에서는 바람직하게는 유산균 발효 후 얻어진 초유의 발효액을 30~40℃에서 효소를 첨가한 다음 30~120분간 응집시킬 수 있다.
또한, 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 효소 첨가 과정에서는 추가적으로 이렇게 카세인 등의 성분에 대한 응집과정을 거친 다음 원심분리하고 여과하여 발효액을 회수하는 단계를 거칠 수 있다. 이러한 과정을 거침으로써 카세인 성분이 실질적으로 제거된 초유의 유산균 발효산물을 얻을 수가 있는 것이다. 이렇게 얻어진 초유의 유산균 발효산물은 예컨대 카세인이 제거된 유산균 발효 초유 추출물의 형태로 제조될 수 있는 것이다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 초유의 유산균 발효산물은 추가적으로 여과하여 살균하는 단계를 거쳐 제조될 수 있다.
이와 같이 본 발명에 따라 얻어진 유산균발효 초유 추출물은 제조 후에 2회 또는 수회의 여과를 거쳐 혹시 있을지 모를 균을 제거하여 사용할 수도 있다.
본 발명에 따라 상기와 같은 단계를 거쳐 얻은 유산균 발효 초유 추출물은 초유의 유산균 발효산물의 일예로써, 기존에 초유로부터 유래된 어느 성분과도 상이한 매우 유용한 성질을 나타내는 것으로 확인되었다.
따라서 이러한 본 발명에 따른 초유의 유산균 발효산물은 초유를 특정 유산균으로 발효하여 얻어지는 발효액, 실질적으로 카세인이 제거된 발효액, 살균 처리된 발효액, 발효액이 정제 처리된 유산균 발효 초유 추출물 중에서 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 초유의 발효산물로써 가장 바람직한 유형의 일예는 발효액을 정제하여 카세인이 함유되지 않고 살균 처리한 정제된 유산균 발효 초유 추출물일 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기와 같이 초유를 특정 유산균으로 발효 처리함으로써 종래와는 달리 우수한 효과를 나타낼 수 있으며, 특히 본 발명의 유산균을 복합적으로 사용하게 되면 상승효과를 발휘하기 때문에, 단독의 유산균을 사용하는 것에 비해 월등하게 우수한 활성을 나타내는 것이 확인되었다.
이와 같이, 본 발명에 따른 초유의 유산균 발효산물, 예컨대 특히 유산균발효 초유 추출물은 유산균 발효에 의해 사이토카인 발생의 억제, 항염 활성 등 유용한 효과에 대한 효과를 얻음과 동시에 정제 과정을 거치는 경우 카세인 등에 의한 단점을 배제함과 동시에 기능성 성분의 함유량을 증가시킴으로써, 항염과 피부자극완화 효과를 동시에 얻을 수가 있는 예측할 수 없었던 우수한 상승효과를 나타낼 수 있는 것이다.
한편, 본 발명은 기존에 사용되고 있는 화장품인 화학 합성 화장품 조성물을 대체 및 보완하기 위하여, 본 발명에 따른 초산의 유산균 발효산물을 이용하여 천연 화장품 조성물을 제조함으로써 피부염증완화 효과 및 피부자극완화 효과를 증진시킨 새로운 화장품 조성물의 제공을 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 초유의 유산균 발효산물을 함유하는 화장품 조성물의 경우 염증유발 사토카인의 발생을 억제하고 인터루킨-10 (Interleukin-10) 발현이 촉진됨으로써 매우 유의성이 있는 피부의 항염 및 피부자극완화 효과를 나타낼 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 화장품 조성물에서 초유의 유산균 발효산물은 조성물 총 중량에 대하여 0.01~40중량%의 양으로 함유될 수 있다. 상기의 함량 범위의 하한치를 벗어나면 그 효과가 현저하게 감소되며, 상한치를 벗어나면 화장료 제형으로 제조하기 곤란하거나, 경제적인 측면에서 바람직하지 아니하다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기와 같은 방법으로 제조된 초유의 유산균 발효산물은 예컨대 유산균 발효 초유 추출물로써 화장품 조성물에 여러 가지 성상으로 첨가할 수 있으며, 예컨대, 분말상, 액상, 나노캡슐, 복합체 등의 형태로 첨가될 수 있으며, 바람직한 예로써는 액상으로 첨가될 수 있다.
본 발명에 따르면, 초유의 유산균 발효산물이 함유된 화장품 조성물로써는 화장수(스킨로션), 영양로션, 영양크림, 마사지 크림, 영양에센스, 클렌져, 마스크팩 등의 화장료 제형으로 사용될 수 있으며, 특별히 여기에 한정하는 것은 아니며, 기타 모발용 제제나 다양한 기능성 효과를 위한 피부용 제제에 사용될 수 있다.
본 발명에 따라 제조된 화장품 조성물에 함유된 초유의 유산균 발효산물은 그 제조과정에서 사용된 원료는 초유이고 이를 발효하는데 사용된 유산균은 종래부터 식품제조에 이용되고 있는 천연 미생물이므로 추출물 자체에 대한 안정성이 높으며, 특히 유산균 발효를 통해 상승효과로 발현되는 우수한 항염 및 피부자극완화 효과로 인하여 이러한 성분이 함유된 화장품을 피부에 사용하는 경우 염증 발생을 사전에 예방할 수 있을 뿐만 아니라, 현저하게 우수한 피부염증완화 효과 및 피부자극완화 효과를 나타낼 수 있어서 신개념 화장품 조성물로 매우 유용할 것으로 기대된다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세하게 설명하겠는바, 본 발명이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1
초유로부터 유산균 발효산물인 유산균발효 초유 추출물을 제조하기 위하여 도 1의 공정도와 같은 과정을 거쳐서 발효 초유 추출물을 제조하였다.
각 단계별 과정은 다음과 같이 실시하였다.
제1단계 : 원료 준비
갓 짠 소의 초유를 급속 냉각한 후 항온수조에 넣어 초유의 온도가 63℃가 된 후부터 30분간 살균처리한 후 35℃까지 온도를 낮추어 발효 원료를 준비한다.
제2단계 : 유산균 발효액의 제조
락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , ATCC 11842), 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus , ATCC 19258), 락토바실러스 람노서스지지(Lactobacillus rhamnosus GG , ATCC 53103)의 3종의 복합균을 상기 제1단계의 발효 원료에 접종하고 온도 35℃에서 60분간 발효시켜 발효물(발효액)을 얻는다.
제3단계 : 유산균 발효 초유 추출물의 제조
상기 제2단계에서 얻은 발효액을 2000rpm, 20분 원심분리하여 부유물을 제거하고 침전물을 제외한 상층액을 회수하여 발효초유액을 초유의 발효산물로 얻는다.
상기 발효초유액을 33℃로 맞추고 렌넷(Rennet)을 첨가하여 60분간 응집시킨 후 발효액 초유가공물을 회수한다. 상기에서 얻은 발효액 초유가공물을 13000rpm에서 60분 원심분리하여 상층액을 유산균 발효산물인 발효 초유 추출물로 얻는다.
상기 상층액을 0.4 ㎛와 0.2㎛의 여과지로 2차 여과시킨 후 최종적인 유산균 발효산물로써 유산균발효 초유 추출물을 제조하였다.
실시예 2 - 6
상기 실시예 1에서 제1단계의 발효 원료에 접종시킨 균 또는 복합균을 하기 표 1과 같이 조정하여 실시예 1과 동일한 방법으로 유산균 발효산물을 제조하였다.
구분 사용 균주
실시예 2 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , ATCC 11842)
실시예 3 락토바실러스 람노서스지지(Lactobacillus rhamnosus GG, ATCC 53103)
실시예 4 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , ATCC 11842)+ 락토바실러스 람노서스지지 (Lactobacillus rhamnosus GG, ATCC 53103)
실시예 5 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , ATCC 11842)+ 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus, ATCC 19258)
실시예 6 락토바실러스 람노서스지지(Lactobacillus rhamnosus GG, ATCC 53103)+ 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus, ATCC 19258)
비교예 1
상기 실시예 1과 동일하게 실시하되 발효에 사용된 균으로 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus , ATCC 19258)를 단독으로 사용하여 초유의 발효산물을 제조하였다.
비교예 2
상기 실시예 2의 방법에서, 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , ATCC 11842) 대신에 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus, ATCC 4356)를 사용한 것을 제외하고는 실시예 2의 방법과 동일한 방법으로 실시하여, 유산균 발효 초유 추출물을 제조하였다.
실시예 7
상기 실시예 6의 방법에서, 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus , ATCC 11842), 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus , ATCC 19258) 대신에 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus, ATCC 4356), 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus , ATCC 19258)를 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 6의 방법과 동일한 방법으로 실시하여, 유산균 발효 초유 추출물을 제조하였다.
실험예 1 : 항염증 효능의 평가
염증 모델로 주로 사용되는 Lipopolysaccharide(LPS)는 대식세포를 활성화 시킨다. 활성화된 대식세포는 염증 유발 사이토카인인 TNFα. IL-1β, IL-12, IFNγ 등의 발현양을 증가시킨다. 염증 유발 사이토카인은 Nitric oxide (NO)을 생성한다. 따라서 NO 발현양 감소를 통해 항염증 효과를 평가했다.
실험 방법으로는 RAW 264.7 cell을 10%FBS를 포함하는 DMEM(Dubelccos Modified Eagle Medium, Gibco) 동물세포배양 배지에 현탁하여 24 well plate 각 well 당 5 X 105 개씩 넣어 37℃, 5% CO2 조건에서 하루 동안 배양한다. 그 후, 배지를 2번 세척하고 A군은 LPS, B군은 LPS + 미발효 초유 추출물, C군은 LPS + 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus , ATCC 19258) 발효 초유 추출물, D군은 LPS + 발효 초유 추출물(실시예1)을 각각 함께 넣고 18시간을 더 배양하였다.
배양 후에는 NO 정량을 위해 세포 상등액에 그리스 시약을 넣고 15분간 반응시킨 후 ELISA reader로 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준액으로는 Sodium nitrite를 사용하였다.
이렇게 평가된 항염증 평가 결과는 다음 표 2 및 도 2에 도시한 바와 같다.
시험군 Nitric Oxide concentration(μM) STDEV
A 7.298 0.030806
B 6.704 0.049003
C 6.414 0.077087
D 5.808 0.043016
상기 표 2 및 도 2에서 나타낸 바와 같이, 미발효 초유 추출물에 비하여 실시예에 따른 초유 발효산물인 발효 초유 추출물이 LPS 처리에 의한 NO 발현 저해 효과가 우수한 것을 확인할 수 있다.
실험예 2 : 피부자극완화 효과 평가
피부반응은 CTFA(The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association) 가이드라인에 제시된 방법에 의거하여 검사하였고, 평균 피부반응도(Mean score)는 하기의 수학식 1에 따라 산정하였다.
<수학식 1>
평균 반응도 = (반응값 X 반응인원수) / (최대값 X 전체인원수 X No. of visual scoring) x 100
실험 방법으로는 피시험자 20대 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)의 전완부에 IQ 챔버를 이용하여 첩포 시험을 실시하였다. 피부자극은 0.1중량% SLS(sodium lauryl sulfate)를 사용하였고, A군은 SLS만, B군은 SLS + 비발효 초유 추출물, C군 은 SLS + 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus , ATCC 19258) 발효 초유 추출물, D군은 SLS + 발효 초유 추출물(실시예1)로 하여 각각 피부에 하루 동안 첩포하였다. 첩포가 끝난 후에는 펜으로 시험 부위를 표시하고 24시간 경과한 다음 시험 부위의 피부 반응을 하기 표 3의 판정기준에 따라 판정하였다.
점수 판정기준
0.0 염증성의 징후를 보이지 않음(건강하고 정상적 피부).
0.5 부위 외관에 광택이 있거나 또는 겨우 인지될 정도의 홍반 발생
1.0 약간의 홍반 발생
2.0 중등도의 홍반 발생, 가장자리에 겨우 인지될 정도의 부종을 수반하는 가능성, 구진(丘疹)의 가능성
3.0 전체에 부종을 수반하는 중등도의 홍반 발생
4.0 강도의 부종을 수반하는 강도의 홍반 발생, 그러나 작은 수포를 수반하거나 수반하지 않음.
5.0 첩포부위를 넘어서 퍼진 강도의 반응을 나타냄.
상기와 같은 피부자극완화 효과에 대한 평가결과는 다음 표 4와 도 3에 도시한 바와 같다.
시험군 평균 반응도
A 5.41
B 3.49
C 3.03
D 1.67
표 4 및 도 3의 결과에 따르면, 실시예에 의한 초유의 발효산물은 미발효 초유 추출물보다 피부자극을 현저하게 완화시킴을 확인할 수 있었다.
실험예 3 ; 황산화 효과 확인
DPPH(α-diphenyl-β-picrylhydrazyl)법을 통해 미발효 초유 추출물, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus , ATCC 19258) 발효 초유 추출물과 동일한 조건에서 실시예에 따른 발효 초유 추출물에 대하여 자유라디칼(Free Radical) 소거 효과를 측정하였다.
실험 방법으로는 96 well plate에 에탄올에 용해한 DPPH 0.2㎖에 A군(미발효 초유 추출물), B군 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus , ATCC 19258) 발효 초유 추출물, C군(발효 초유 추출물; 실시예1)을 각각 0.2㎖를 분주한 다음 실온에서 30분간 반응시켰다. 그 후, 525nm에서 흡광고를 측정하였다. 대조군은 시료 대신 에탄올을 첨가하였다.
여기서, DPPH 라디칼 소거능은 다음 수학식 2의 방법으로 산출하였다.
[수학식 2]
DPPH 라디칼 소거능 (%) = (1-추출물첨가구의 흡광도/대조군의 흡광도)X100
이와 같이 평가된 항산화 효과 확인 결과는 다음 표 5 및 도 4와 같다.
시험군 % Antioxidant activity STDEV
A 32.23 0.785031
B 35,11 1.170034
C 44,76 1.594315
상기 표 5 및 도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 실시예에 따른 초유의 발효산물인 발효 초유 추출물이 미발효 초유 추출물보다 자유 라이칼 소거 효과가 우수함을 확인할 수 있다.
실험예 4 ; 세포 독성 실험
EZ-cytox Cell Viability Assay 방법은 살아있는 세포의 미트콘드리아가 가지고 있는 탈수소효소를 이용해서 세포 생존율을 측정하는 방법으로써, 실시예에 따른 발효 초유 추출물의 독성여부를 평가했다.
세포주는 RAW 264.7 cell를 사용하고, 동물세포배양 배지로는 10% FBS와 100UL S/P를 포함하는 DMEM(Dubelccos Modified Eagle Medium, Gibco) 사용하였다. 24 well plate 각 well에 5x105 cell을 넣어 37℃, 5% CO2 incubator에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 배양된 배지 plate에 12개 well에는 추출물을 비첨가하고(대조군), 나머지 12개에는 발효 초유 추출물을 첨가하여(실시예 실험군) 24시간동안 추가 배양하였다. EZ-cytox solution을 모든 well에 넣고 1시간 동안 반응시키고 plate reader로 450nm에서 측정하였다.
상기 측정결과는 다음 표 6과 도 5에 비교하여 나타내었다.
Relative Viability (%)
대조군 100%
실험군 101.6%
상기 표 6과 도 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 실시예에 따른 초유의 발효산물인 발효 초유 추출물은 세포 독성이 없는 것을 확인할 수 있다.
실험예 5 : 발효균에 따른 Nitric oxide(NO) 생성 억제 활성 측정
상기 실시예와 비교에에서 사용된 각 사용균을 이용하여 제조한 초유의 발효산물에 대하여 항염 효과를 비교 확인하기 위하여 상기 실험예 1과 비슷한 방법으로 실험을 진행하였다.
염증 모델로 주로 사용되는 Lipopolysaccharide(LPS)는 대식세포를 활성화 시킨다. 활성화된 대식세포는 염증 유발 사이토카인인 TNF-α. IL-1β, IL-12, IFNγ 등의 발현 양을 증가시킨다. 염증 유발 사이토카인은 Nitric oxide(NO)을 생성한다. 따라서 NO 발현 양 감소를 통해 항염증 효과를 평가했다.
실험 방법으로는 RAW 264.7 cell을 10%FBS를 포함하는 DMEM(Dubelccos Modified Eagle Medium, Gibco) 동물세포배양 배지에 현탁하여 24 well plate 각 well 당 5 X 105 개씩 넣어 37℃, 5% CO2 조건에서 하루 동안 배양한다. 그 후, 배지를 2번 세척하고 시료를 준비한 후 준비된 시료에 LPS를 1㎍/㎖의 농도로 혼합하여 cell에 동시에 처리하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 18시간 더 배양하였다. 배양 후에는 세포 상등액 100㎕와 Griess 시약 100㎕를 혼합하여 96 well plate에서 10분 동안 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정한다. 생성된 NO의 양은 Griess 시약을 이용하여 세포 배양액에 존재하는 NO2 -의 형태로 측정하였으며 sodium nitrite (NaNO2)를 standard로 사용하였다.
LPS 단독 처리 군은 NO의 생성을 유도하였고, 각 시료에 대한 NO 생성 억제 활성을 측정하였다. 각 시료는 실시예 1-7과 비교예에서 제조된 초유의 발효산물을 사용하였으며, 그 실험결과는 하기 표 7에 기재하였다.
Sample NO production (%)
LPS ( - ) -
LPS (+, 1 ㎍/㎖ ) 100
LPS (1㎍/㎖) + a 발효 초유 추출물(실시예2) 48.8 ± 2.7
LPS (1㎍/㎖) + b 발효 초유 추출물(실시예3) 50.3 ± 2.0
LPS (1㎍/㎖) + c 발효 초유 추출물(비교예1) 60.7 ± 1.8
LPS (1㎍/㎖) + d 발효 초유 추출물(비교예2) 63.4 ± 3.6
LPS (1㎍/㎖) + (a + b) 발효 초유 추출물(실시예4) 49.8 ± 2.4
LPS (1㎍/㎖) + (a + c) 발효 초유 추출물(실시예5) 28.1 ± 3.9
LPS (1㎍/㎖) + (b + c) 발효 초유 추출물(실시예6) 30.6 ± 1.7
LPS (1㎍/㎖) + (c + d) 발효 초유 추출물(실시예7) 38.9 ± 2.8
LPS (1㎍/㎖) + (a + b + c) 발효 초유 추출물(실시예1) 21.6 ± 2.3
LPS (1㎍/㎖) + (a + b + c) 초유 발효액(실시예1의 2단계) 24.9 ± 1,9
a : 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, ATCC 11842)b : 락토바실러스 람노서스지지(Lactobacillus rhamnosus GG, ATCC 53103)c : 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus, ATCC 19258)d : 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus, ATCC 4356)
이 실험 결과, 상기와 같이 실시예 1에서 제조된 발효 초유 추출물을 사용하였을 때 복합균의 상승효과로 인해 NO 생성 억제 효과가 가장 우수한 것을 확인할 수 있었다.
특히, 특정 유산균을 사용한 경우와 복합균을 사용한 경우가 비교예에 비해 월등하게 우수함을 확인할 수 있었다.
이 결과로부터, 초유의 발효산물 중에서 특정 유산균을 선택적으로 사용한 경우 우수한 항균 효과가 있고, 또한 유산균과 스크렙토코커스균의 복합균을 사용하는 경우에는 복합균에 의한 상승효과가 있는 것으로 확인되었다.
실험예 6 : 발효균에 따른 피부자극완화 효과 평가
상기 실시예와 비교예에서 사용된 초유의 발효균에 대한 각각의 초유의 발효산물에 대하여 피부자극완화 효과를 비교 확인하기 위하여, 상기 실험예 2와 동일한 방법으로 하여 피부반응은 CTFA(The Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association) 가이드라인에 제시된 방법에 의거하여 검사하였고, 평균 피부반응도(Mean score)를 산정하였다.
실험결과로써, 시험 부위의 피부 반응 역시 상기 판정기준에 따라 판정하였다.
상기와 같은 피부자극완화 효과에 대한 평가결과는 하기 표 8에 도시한 바와 같다.
Sample 평균 반응도
0.1% SLS 5.41
0.1% SLS + a 발효 초유 추출물(실시예2) 2.93
0.1% SLS + b 발효 초유 추출물(실시예3) 2.99
0.1% SLS + c 발효 초유 추출물(비교예1) 3.41
0.1% SLS + d 발효 초유 추출물(비교예2) 3.45
0.1% SLS + (a + b) 발효 초유 추출물(실시예4) 2.96
0.1% SLS + (a + c) 발효 초유 추출물(실시예5) 2.25
0.1% SLS + (b + c) 발효 초유 추출물(실시예6) 2.33
0.1% SLS + (C + d) 발효 초유 추출물(실시예7) 2.73
0.1% SLS + (a + b + c) 발효 초유 추출물(실시예1) 1.67
0.1% SLS + (a + b + c) 초유 발효액(실시예1의 2단계) 1.98
a : 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, ATCC 11842)b : 락토바실러스 람노서스지지(Lactobacillus rhamnosus GG, ATCC 53103)c : 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus, ATCC 19258)d : 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus, ATCC 4356)
상기 표 8의 결과에 따르면, 실시예 1에 의한 발효 초유 추출물이 다른 발효 초유 추출물보다 피부자극을 현저하게 완화시킴을 확인할 수 있었다.
특히, 특정 유산균을 사용한 경우와 복합균을 사용한 경우가 비교예에 비해 월등하게 우수함을 확인할 수 있었다.
이 결과로부터, 초유의 발효산물 중에서 특정 유산균을 선택적으로 사용한 경우 피부자극을 현저하게 완화시키는 효과가 있고, 또한 유산균과 스크렙토코커스균의 복합균을 사용하는 경우에는 피부자극완화 효과에서도 복합균에 의한 상승효과가 있는 것으로 확인되었다.

Claims (13)

  1. 초유가 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus)와 락토바실러스 람노서스지지(Lactobacillus rhamnosus GG) 중 하나이상의 유산균, 또는 락토바실러스균(Lactobacillus)과 스트렙토코커스균(Streptococcus)이 혼합된 복합 유산균을 포함하는 유산균으로 발효된 것을 함유하는, 초유의 유산균 발효산물.
  2. 청구항 1에 있어서, 유산균으로 발효된 것은 발효액, 카세인이 제거된 발효액, 살균 처리된 발효액, 발효액이 정제 처리된 유산균 발효 초유 추출물 중에서 어느 하나 이상을 포함하는 것임을 특징으로 하는 초유의 유산균 발효산물.
  3. 청구항 1에 있어서, 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)와 락토바실러스(Lactobacillus)로 초유를 발효하여 얻은 용해물을 여과한 락토바실러스 스트렙토코커스 써모필러스 초유 발효 용해 여과물인 것을 특징으로 하는 초유의 유산균 발효산물.
  4. 청구항 1에 있어서, 복합 유산균으로 발효된 것은 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus), 락토바실러스 람노서스지지 (Lactobacillus rhamnosus GG) 중에서 선택된 하나 이상의 유산균과 여기에 스트렙토코커스 써모필러스(Streptococcus thermophilus)를 혼합한 복합 유산균 포함하는 유산균으로 발효된 유산균 발효 초유 추출물인 것을 특징으로 하는 초유의 유산균 발효산물.
  5. 청구항 1에 있어서, 카세인 성분이 제거된 유산균 발효 초유 추출물인 것을 특징으로 하는 초유의 유산균 발효산물.
  6. 초유를 급냉한 다음 저온 살균 처리하여 발효원료를 준비하는 단계와;
    상기 단계에서 얻은 발효원료에 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp . bulgaricus)와 락토바실러스 람노서스지지(Lactobacillus rhamnosus GG) 중 하나이상의 유산균, 또는 락토바실러스균(Lactobacillus)과 스트렙토코커스균(Streptococcus)이 혼합된 복합 유산균을 포함하는 유산균을 접종하고 발효하여 발효액을 얻는 단계;
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 초유의 유산균 발효산물의 제조방법.
  7. 청구항 6에 있어서, 발효액은 유산균 접종 발효 후에 얻어진 발효물을 원심분리하여 발효액을 얻는 단계를 추가적으로 포함하여 얻어지는 것을 특징으로 하는 초유의 유산균 발효산물의 제조방법.
  8. 청구항 6에 있어서, 상기 발효액을 효소를 이용하여 유산균 발효 초유 추출물을 얻는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 초유의 유산균 발효산물의 제조방법.
  9. 청구항 8에 있어서, 효소로는 렌넷(rennet)을 사용하는 것을 특징으로 하는 초유의 유산균 발효산물의 제조방법.
  10. 청구항 8에 있어서, 효소 첨가 이후에는 추가적으로 효소 첨가물을 원심분리하고 여과하는 단계를 포함하는 과정을 거친 후 유산균 발효 초유 추출물을 얻는 것을 특징으로 하는 초유의 유산균 발효산물의 제조방법.
  11. 청구항 1 내지 청구항 5 중에서 선택된 어느 하나의 항에 따른 초유의 유산균 발효산물을 함유하는 화장품 조성물.
  12. 청구항 11에 있어서, 초유의 유산균 발효산물을 0.01~40중량%의 양으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장품 조성물.
  13. 청구항 11에 있어서, 항염 및 피부자극완화용인 것을 특징으로 하는 화장품 조성물.
PCT/KR2017/013582 2017-03-24 2017-11-27 초유의 유산균 발효산물과 이를 이용한 화장품 조성물 WO2018174369A1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2017-0037930 2017-03-24
KR20170037930 2017-03-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2018174369A1 true WO2018174369A1 (ko) 2018-09-27

Family

ID=63584518

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2017/013582 WO2018174369A1 (ko) 2017-03-24 2017-11-27 초유의 유산균 발효산물과 이를 이용한 화장품 조성물
PCT/KR2018/003492 WO2018174669A1 (ko) 2017-03-24 2018-03-23 초유의 발효산물과 이를 이용한 화장료 조성물

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2018/003492 WO2018174669A1 (ko) 2017-03-24 2018-03-23 초유의 발효산물과 이를 이용한 화장료 조성물

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR20180108504A (ko)
WO (2) WO2018174369A1 (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110075004A (zh) * 2019-06-05 2019-08-02 惠州学院 一种复合生物酶医用修复面膜及其制备方法
CN113952284A (zh) * 2020-02-26 2022-01-21 广州留今科学研究有限公司 一种共生菌组合发酵物及其制备方法和应用
CN116121088A (zh) * 2022-08-12 2023-05-16 华熙生物科技股份有限公司 一种酿酒酵母菌及其应用

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102311097B1 (ko) * 2017-12-29 2021-10-08 주식회사 팜스킨 초유의 호기성 발효산물
KR102248535B1 (ko) * 2019-09-17 2021-05-06 주식회사 팜스킨 초유 유래 항산화 조성물
US20210275612A1 (en) * 2020-03-09 2021-09-09 Glac Biotech Co., Ltd. Method for alleviating inflammation-related disorder
KR102366276B1 (ko) * 2020-03-12 2022-02-23 주식회사 팜스킨 미세먼지에 의한 세포독성으로부터 피부를 보호하기 위한 피부보호용 조성물
CN112370390B (zh) * 2020-11-27 2022-06-28 奥克斯路株式会社 一种抗衰老、去皱、修护肌肤屏障的发酵液及其制备方法
CN112940968B (zh) * 2021-02-07 2022-07-01 山东凤凰生物科技股份有限公司 一种发酵乳杆菌、发酵乳杆菌的培养物及其制备方法
CN114262675A (zh) * 2021-12-20 2022-04-01 无锡弘焕微生态科技有限公司 复合菌发酵滤液的制备及其美白功效在化妆品中的应用
CN114081901B (zh) * 2021-12-23 2023-08-29 山东锦鲤生物工程有限公司 一种益生菌组合物、制备方法及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08214888A (ja) * 1995-02-16 1996-08-27 Iwakoshi Takeshi 発酵時の温度制御に特徴のあるグルジア乳酸品−１の 製造法
US20050095317A1 (en) * 2002-02-15 2005-05-05 Compagnie Gervais Danone Novel method for the production of fermented milk products
WO2009007655A1 (fr) * 2007-07-03 2009-01-15 Danisco A/S Procede de fabrication de lait fermente pour l'alimentation d'animaux nourris au lait
KR20120041494A (ko) * 2010-10-21 2012-05-02 순천대학교 산학협력단 유청과 초유를 이용한 액상 발효사료 및 이의 제조방법
JP2016164144A (ja) * 2010-05-21 2016-09-08 株式会社明治 皮膚状態の改善用組成物

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100964831B1 (ko) * 2007-12-28 2010-06-24 충남대학교산학협력단 초유를 함유하는 피부외용제 조성물
JP6579605B2 (ja) * 2015-05-20 2019-09-25 再生ファーマ株式会社 皮膚改善剤

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08214888A (ja) * 1995-02-16 1996-08-27 Iwakoshi Takeshi 発酵時の温度制御に特徴のあるグルジア乳酸品−１の 製造法
US20050095317A1 (en) * 2002-02-15 2005-05-05 Compagnie Gervais Danone Novel method for the production of fermented milk products
WO2009007655A1 (fr) * 2007-07-03 2009-01-15 Danisco A/S Procede de fabrication de lait fermente pour l'alimentation d'animaux nourris au lait
JP2016164144A (ja) * 2010-05-21 2016-09-08 株式会社明治 皮膚状態の改善用組成物
KR20120041494A (ko) * 2010-10-21 2012-05-02 순천대학교 산학협력단 유청과 초유를 이용한 액상 발효사료 및 이의 제조방법

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110075004A (zh) * 2019-06-05 2019-08-02 惠州学院 一种复合生物酶医用修复面膜及其制备方法
CN113952284A (zh) * 2020-02-26 2022-01-21 广州留今科学研究有限公司 一种共生菌组合发酵物及其制备方法和应用
CN113952284B (zh) * 2020-02-26 2023-08-01 广州留今科学研究有限公司 一种共生菌组合发酵物及其制备方法和应用
CN116121088A (zh) * 2022-08-12 2023-05-16 华熙生物科技股份有限公司 一种酿酒酵母菌及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2018174669A1 (ko) 2018-09-27
KR20180108504A (ko) 2018-10-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2018174369A1 (ko) 초유의 유산균 발효산물과 이를 이용한 화장품 조성물
WO2011010770A1 (ko) 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물
WO2010064777A1 (ko) 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물
WO2014193014A1 (ko) 나노형 김치 유산균
WO2020040407A1 (ko) 신규의 큐티박테리움 아비덤 균주, 및 이러한 균주 또는 이의 배양물을 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 조성물
WO2022086041A1 (ko) 신규 락토바실러스 속 균주 및 그의 용도
WO2018030732A1 (ko) 바실러스 속 세균 유래 나노소포 및 이의 용도
WO2014069874A1 (ko) 녹차 유산균을 포함하는 피부 각질 제거용 조성물
WO2018056600A1 (ko) 밀배아 발효물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부진정 외용제 조성물
WO2018084528A1 (ko) 항산화 및 피부 개선용 조성물
WO2021162415A1 (ko) 다당류, 효모추출물 및 프로바이오틱스 특성을 갖는 균주 발효물을 유효 성분으로 포함하는 피부 개선용 화장료 조성물
WO2017164681A1 (ko) 락토바실러스 람노서스 배양액, 또는 락토바실러스 람노서스 배양액 및 공액리놀레산을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물
WO2010064778A1 (ko) 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물
KR102311097B1 (ko) 초유의 호기성 발효산물
AU2021212021B2 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating atopic disease containing Akkermansia muciniphila strain
KR102615147B1 (ko) 초유 발효산물의 항여드름용 화장료
WO2019059668A2 (ko) 유산균의 유크림 발효액을 유효성분으로 포함하는 피부용 조성물
WO2020111674A1 (ko) 녹차 유래 유산균을 포함하는 미세먼지에 의한 탈모 케어용 조성물
WO2020101414A1 (ko) 아피게닌을 포함하는 피부 재생 및 육모 촉진용 조성물
WO2019088421A1 (ko) 녹차 유래 유산균을 포함하는 미세먼지에 의한 피부 세포 손상 케어용 조성물
WO2019172554A1 (ko) 유산균 배양물 혼합액을 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물
CN116077415A (zh) 一种用于调节皮肤微生态平衡的三元益生因子组合物
TW202220681A (zh) 皮膚細菌叢改善劑及皮膚細菌叢改善用皮膚外用劑
WO2021040086A1 (ko) 신규한 유산균, 이를 포함하는 조성물 및 건강기능식품
KR101541843B1 (ko) 발효 밤송이 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 방지 및 항균 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17901418

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 17901418

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1