WO2018115145A1 - Vorrichtung und verfahren zum benetzen von biologischem material - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to a device for wetting biological material with at least one liquid.
- the invention relates to a method for wetting biological material with at least one liquid using a corresponding device.
- Devices for wetting biological material have been known in practice for many years and exist in a wide variety of embodiments.
- the device of DE 102 18 988 C1 which comprises a device for supporting a slide. This is designed so that the slide is spaced from a platform.
- the illustrated incubation chamber is configured such that the slide can be raised or lowered within the incubation chamber by means of a further device relative to the platform.
- the side of the slide on which the material to be examined is applied faces the platform, and the space between the slide and the platform can be filled, within the chamber, with a liquid reagent.
- US Patent 5,338,358 B2 discloses a device for wetting biological material.
- This device also includes means for carrying a slide. However, this is designed so that the slide is objected to in a non-parallel position of a plateau. To ensure that the biological material is completely and sufficiently wetted with a liquid reagent, the wedge-shaped space between the slide and plateau must be filled with a relatively large volume of reagent.
- US Patent 8,877,485 B2 discloses a method and apparatus for processing biological samples. In the machine, at least one staining unit is provided which includes an array of slides and a corresponding array of lids.
- the likewise known device of US Pat. No. 8,337,786 B2 represents an incubation chamber which is produced by pushing a cover onto a slide, whereby a space closed off from the cover is formed above the material located on the slide. This space in turn be filled with Einwirk79.
- the introduction of the monolayer into the incubation chamber takes place in the known device by means of a liquid reservoir located outside the chamber, from which the chamber chamber can be filled passively due to the resulting capillary forces.
- the lid must be pressed by means of a clamping action on the slide to ensure the tightness of the incubation during the Einwirkluies. To empty the chamber, the clamping action is released and the liquid is sucked off at the opposite end of the liquid reservoir of the chamber.
- the present invention has for its object to design a device and a method for wetting biological material in such a way and further that is optimized with simple design means the introduction and removal of the necessary liquids for wetting.
- the device according to the invention comprises a deflection device and a platform for receiving a at least approximately triangular, preferably approximately square, the biological material comprising the slide, wherein the slide of the deflection of a relatively parallel to the platform engagement position in a non-parallel to the platform Collective position is deflected, with only a corner region of the slide in the collection position is not or only slightly raised, such that the liquid collects in this corner region.
- exposure position is to be understood in the broadest sense and describes, in particular, a position of the slide parallel to the platform, in which a capillary gap can form between the platform and the slide, which capillary gap can be filled with the single-solution
- the capillary gap-facing side of the slide can, regardless of the spatial orientation of the slide, as "bottom" of the slide to be called.
- selection position is also to be understood in the broadest sense and describes in particular a position of the slide in the exclusively one Corner of the slide is not or only slightly raised. In this, thus in comparison to the other corner regions of the slide lying lower corner region, the liquid for wetting the biological material is collectable and advantageously removable.
- silica is also to be understood in the broadest sense and describes an element that can be designed so that it has a surface on which the biological material to be wetted can be applied and which form a parallel capillary gap with a corresponding surface
- the term thus includes both commercially available square microscope slides known from the field of microscopy and microscope slides present in other geometric forms.
- the underlying object can be achieved by a suitable deflection device of the device in a surprisingly simple manner.
- the movement of the slide that can be generated by the device according to the invention is particularly well suited for wetting biological material on a slide with the liquid reagents necessary for immunohistochemical tissue examinations or staining
- the device according to the invention is also particularly suitable for efficiently and completely mixing the reagents, so that the chemical and biochemical reactions in such tissue examinations or dyeings can be accelerated.
- both the so-called pre-treatment steps of "de-waxing” and “antigen retrieval” in immunohistochemical staining and “de-waxing” in an in-sf hybridization study as well as the actual tissue staining in detection methods such as
- biochemical binding reactions in the device according to the invention can be accelerated accelerate.
- the wetting of biological material on slides, in particular protein and / or RNA-containing material on so-called biochips can be realized particularly efficiently in the incubation chamber according to the invention.
- substrate solutions are often used to wet biological material which must be prepared from two or more components immediately prior to use.
- substrate solutions are not only expensive but very often also unstable, so that they can disintegrate and become worthless in a short time.
- solutions in the device according to the invention if designed as an incubation chamber, can be produced directly in a mixing zone of the incubation chamber. Consequently, such solutions can thus be prepared immediately prior to their use.
- hydrophobic regions are often formed, for example by the retention of wax or paraffin in the material to be wetted.
- a further inventive manner can be obtained by the deflection of the slide, a fluid movement of the liquid, which allows a particularly uniform wetting of biological material, even if the biological material has hydrophobic areas.
- the deflection device can have a deflection means, which in turn comprises a support for the slide and, preferably, an anchor element.
- the deflection device may be a rocker.
- the deflection means or the rocker can be moved by at least one lifting means in a raised position and in a tilted position. In the raised position at least two corner regions of the slide are not or only slightly raised, wherein the slide is then in the tilted position in the collection position.
- slides that are to be used in the device according to the invention may comprise a labeling field in the labeling part of the slide.
- the label field may be provided with a barcode that allows identification of the slide and the biological material thereon.
- the inscription field can be located on the side of the inscription part of the object carrier facing away from the capillary gap. The side facing away from the capillary, the labeling field comprehensive side of the slide can, regardless of the spatial orientation of the slide, be referred to as the "top" of the slide.
- the deflection means comprises a receiving area for the at least one lifting means.
- the lifting means may be formed as a plunger which projects into the receiving area.
- the receiving region comprises an anchoring element for the lifting means, so that the anchoring element defines an axis of the deflection means about which the deflection means is rotatable to the tilted position.
- the receiving area may be as a corresponding with the shape of the plunger recess, wherein the anchoring element, preferably in the form of a pin, projects into the recess.
- the corresponding with the shape of the recess plunger may preferably in turn contain a corresponding with the shape of the pin opening so that plunger and Pin can be brought into a relatively rotatable connection.
- the lifting means may also come into direct contact with the slide.
- the deflection means and / or the anchor element of the deflection means can be designed so that it can be brought into contact with a corresponding anchor surface.
- the anchor member may be formed as a protruding portion, preferably as an abutment lip of the deflection means.
- the corresponding armature surface may be formed as a material projection of the device, in particular as a stop. The stop may in turn preferably be designed as a protruding edge of a side wall of the deflection device, preferably an inner side wall of the deflection device.
- the device according to the invention comprises a deflection device which on the one hand may comprise on a inner side wall a protruding edge and on the other hand a liftable and rotatable deflection means with a abutment lip.
- abutment lip of the deflection means comes into contact with the corresponding stop of the deflection, the movement of the lifting means can lead to a movement of the deflection, which deflects the slide from the acting parallel to the platform position in the relatively non-parallel to the platform collection position.
- the corresponding anchor surface may be curved.
- the armature surface may be configured as a side surface of a substantially cylindrically shaped abutment.
- the device according to the invention comprises, on the one hand, a stop provided by a curved surface and, on the other hand, a liftable and rotatable deflection means which can come into contact with the essentially cylindrically shaped stop.
- the deflection means can continue to rotate over the curved side surface of the stop, so that the slide is deflected from the operative position to the collection position.
- the receiving area for the at least one lifting means may be a recess of the deflection means configured as a guide rail.
- the lifting means is a plunger which projects into the guide rail.
- a movement of the plunger within the guide rail can lead to a predetermined by the shape of the guide rail movement of the deflection.
- this movement may be a multi-directional movement.
- This predetermined by the guide rail movement can in turn cause the deflection of the slide from the operative position to the collection position.
- the deflection of the slide from the exposure position to the collection position corresponds to a three-dimensional movement (3-D movement) of the slide.
- the 3-D movement includes raising and lowering the slide along the Y-axis, sliding the slide laterally along the X-axis, and tilting the slide about the Z-axis.
- the sequence of the respective movements along one of the three geometric axes mentioned above need not be defined and can be combined as desired.
- the deflection of the slide by means of the device according to the invention can be carried out continuously or discontinuously. For example, an upward movement of the lifting means may cause the deflection of the slide from the operative position to the collecting position, the counter-downward movement of the lifting means returning the slide back from the collecting position to the operative position.
- the deflection of the slide can thus also be controlled and, if appropriate, stopped at an arbitrary position between the acting position and the collecting position.
- the controlled 3-D movement of the slide allows precise control of the liquid, with the the biological material on the slide can be wetted in the device.
- a capillary gap can be formed between the slide and the platform in the operative position.
- a targeted steering of a liquid located in the capillary gap can be made possible.
- the liquid can be directed to the complete collection in the not in the collection position or only slightly raised corner region of the slide.
- a repeated mixing of the slide from the exposure position into the collection position advantageously enables thorough mixing of the liquid in the capillary gap, removal of bubbles from the capillary gap and / or acceleration of biochemical reactions in the capillary gap.
- the capillary gap may be formed between the platform, which may be a bottom plate of the device, and the surface of the slide on which the biological material is applied, i. the active area of the slide.
- the active area of a slide may include the total area of one side of the slide minus the area of the label portion.
- the volume of the capillary gap can be determined by the distance of the slide to the platform or base plate.
- the device has special spacers which space the slide in the parallel operative position of the platform or bottom plate.
- the spacers may be formed as projections or elevations of the platform. In other embodiments, the spacers may be formed as protrusions of one or more side walls of the device. In particular, the spacers form support points or surfaces on which the slide rests in the parallel engagement position.
- the spacers may be configured such that the gap between the slide and the platform in the parallel engagement position has a height that is at least greater than the thickness of the biological material applied to the slide.
- the spacers can be designed such that the gap between the slide and the platform or base plate in the parallel engagement position has a height of 0.005 mm 0.5 mm, in particular 0.01 mm to 0.3 mm, in particular 0, 05 mm to 0.2 mm.
- any other constructions which space the slide from the platform so that a parallel capillary gap extending over the entire active area of the slide can be formed are conceivable here.
- the at least one liquid with which the slide is to be wetted there are several possibilities.
- the at least one liquid is a Einwirkslosung, which preferably from the
- Antibody solutions Washings; staining solutions; Cleaning solutions; Entwachsungsaten; Deparaffinization solutions, alcohol solutions;
- the controlled 3-D movement of the slide can be used to mix several reagents in a liquid.
- the device may comprise an outlet.
- the outlet may be an opening for the liquid, wherein the outlet may be configured to be in fluid communication with the only non-elevated or only slightly raised corner region of the slide in the collection position.
- the liquid can be removed from the device through the outlet, in particular can be sucked out.
- the liquid can be completely removed through the outlet. In a particularly advantageous manner, the liquid can be completely sucked out through the outlet.
- the device For deflecting the slide from the operative position to the collecting position, it is further advantageous that the device comprises an abutment.
- the abutment can be brought into contact with the slide, preferably on the surface facing away from the support.
- the contact of the slide with the abutment supports the deflection of the slide from the exposure position to the collection position.
- the device according to the invention may be an incubation chamber for slides, in particular an incubation chamber for immunohistochemical examinations, in s / fu hybridization studies, tissue stains, biochip stains or the like of the biological material.
- the biological material may be tissue or cell sections. Such tissue sections may be, for example, sections of tumor tissue.
- this may comprise a base body with a bottom plate and a deflection device with a rocker housing and a rocker according to the invention for the three-dimensional deflection of the slide located in the chamber.
- the incubation chamber can advantageously comprise a lid so that a closed atmosphere in the interior of the chamber, a saturated atmosphere can be generated.
- the lid may include a reading window which is arranged so that it is associated with the labeling field of the slide in the closed state of the chamber, so that a barcode is readable by the reading window.
- the material of the barcode reading window is designed such that it does not or only slightly deflects laser or infrared rays for reading the barcode on the labeling field, so that the barcode readability through the barcode reading window has a bearing.
- the base body and the rocker housing of the incubation chamber are constructed as separate components, which can be locked by the cover when closing the chamber relative to each other.
- the rocker housing can be fastened on a base plate, so that the base body of the chamber by closing the lid not only relative to the rocker housing but also relative to the Base plate is lockable.
- the base plate can preferably be the base plate of an instrument, in particular of a stainer, on which the base body can be locked so that the platform or base plate of the incubation chamber can be brought into contact with a temperature element of the stainer.
- the temperature element may be a cooling element and / or a heat source.
- the temperature element can be designed so that it can both heat and cool the platform or base plate.
- the heat source may be a heating plate or a heating block.
- the saturated atmosphere in the closed incubation chamber can be generated in particular by the action of heat, preferably by the action of heat via the platform.
- the saturated atmosphere can be generated by the slight evaporation of the inactive solutions and / or by the evaporation of a non-reactive liquid.
- the non-reactive liquid can be, for example, water, which can additionally be introduced into the incubation chamber.
- the incubation chamber may comprise one or more fluid reservoirs, which may be filled by slight overfilling of the capillary gap with monovalent solution and remain in fluid communication with the monolayer solution in the capillary gap. From these reservoirs, a possible, low evaporation loss of Einwirk79 is compensated in the capillary gap.
- the total amount of valuable and expensive Einwirksen can be reduced by the generated steam atmosphere in the incubation chamber according to the invention, since overall lower evaporation A / sdampfungsutze be recorded. Especially in reaction steps that require high temperatures.
- the generated vapor atmosphere advantageously enables the above-described repeated deflection can be carried out from the exposure to the Sannnnelposition even in a high-temperature phase of the investigation method of the slide without the water content of valuable and required for the biochemical reactions Einwirkaten evaporates unfavorably quickly.
- the device according to the invention can be designed as an incubation chamber, comprising:
- a deflection device which can be brought into contact with the base body in a positive and non-positive connection and by which the slide can be deflected from a position of engagement parallel to the platform of the base body into a collection position not parallel to the platform of the base body, wherein only one corner region of the slide in FIG the collection position is not or only slightly raised, such that the liquid collects in this corner region, and
- the base body can be designed in one piece or in several parts.
- a one-piece base body can also comprise a liquid reservoir, which can be configured as a collecting or overflow basin for liquids introduced in excess.
- the one-piece base body may comprise a coupling element, which may allow a movement of the main body in a positive and non-positive connection with a holding block of the lid.
- the device according to the invention may comprise a multi-part main body, which may be composed of a plurality of units positively and non-positively.
- a multi-part body of a designed as a catchment or overflow basin first unit, as a Platform configured second unit and configured as a coupling element third unit be composable.
- the platform may be formed as a bottom plate of the device, wherein the bottom plate may consist of an inert material or at least on the side facing the slide may be coated with an inert material.
- the inert material ensures that the in vivo solutions react only with the biological material applied to the slide.
- the bottom plate can be formed as an inert film of polyimide, in particular Kapton, or polyether ketone (PEEK) or, preferably, be an inertly coated aluminum plate.
- the bottom plate may be configured such that it enables most efficient temperature transfer between a temperature element located under the bottom plate and the liquid in the capillary gap between the bottom plate and the active surface of the slide.
- the bottom plate can be designed so that temperature changes of the temperature element can be forwarded with minimum delay to the liquid in the capillary gap.
- this delay both during heating and during cooling can be between 1 and 5 ° C / second.
- the temperature delay should not exceed a value of 5 ° C / second.
- the thermal conductivity of the platform or base plate can be influenced by the material thickness of the base plate, on the other hand by the material properties per se.
- the material thickness in the region of the bottom plate can be between 0.01 mm and 2 mm.
- the material thickness in the region of the bottom plate can be between 0.03 mm and 0.8 mm.
- the material thickness in the region of the bottom plate can be between 0.3 mm and 0.6 mm, in particular 0.55 mm.
- the bottom plate is an inert polyimide film, especially Kapton, polyether ketone (PEEK) or another inert material may be formed, a material thickness of the film of 0.1 mm should not be exceeded.
- the platform or base plate should have a high evenness in order to be able to produce a parallel capillary gap between the slide and the platform or base plate on the one hand, and on the other hand to be able to produce a connection with the temperature element that is as positive as possible, thus ensuring temperature transfer between the platform or bottom plate and the liquid located in the capillary gap advantageous to be able to influence.
- Flatness is according to "Tolerance Management" by Prof. Bernd Klein, University of Kassel, FB15, FG lightweight construction, Mönchbergstr 7, 34109 Kassel, 201 1, pages 40-45, the disclosure of which is fully included in the present application a claim for a surface "in itself".
- the flatness deviation is the largest distance between an adjacent plane and the real surface.
- the tolerance zone is limited by two parallel planes at a distance tE. All points of the real surface or derived midplane lie between the two parallel planes with the tolerance distance tE.
- the real surface of the platform or base plate may have production-related unevenness.
- the platform or bottom plate can be designed so that it has no bumps whose height could prevent the formation of the parallel capillary gap.
- the platform or base plate can be designed such that it has elevations of less than 0.1 mm, in particular less than 0.05 mm, in particular less than 0.03 mm.
- the platform or bottom plate can be made according to the invention include inert temperature-conductive materials and / or materials which may be provided with an inert coating.
- the platform or bottom plate made of aluminum, stainless steel, a copper alloy or an iron sheet can be made.
- the platform or base plate may be made of aluminum, in particular of anodized aluminum. It is known to the person skilled in the art that the oxidic layer produced by the anodization process is provided by a conversion of the uppermost layer of the aluminum into an oxide or hydroxide.
- the term "coating" as used herein is thus to be understood in the broadest sense and includes both a layer of the material of the platform or base plate produced by anodizing process and a coating by a coating, for example a galvanic coating method, on the material of the platform
- the entire device may be formed from the material of the platform, particularly aluminum
- the platform or base plate may be incorporated into another material, for example Parts of the device, in particular a main body of the device, made of an inert plastic, which has a temperature resistance of at least 130 ° C, are prepared, in which the platform or bottom plate is incorporated d polyether ketone (PEEK) or polyoxymethylene (POM).
- PEEK polyether ketone
- POM polyoxymethylene
- the materials have suitable resistance under the operating conditions of the device.
- the material of the device on the one hand should have resistance to the partly highly reactive monolayer solutions, on the other hand to ensure resistance under strongly fluctuating temperature effects.
- the volume of the capillary gap can be kept surprisingly low.
- the device may be designed such that the capillary gap can be filled with a liquid volume of at least 50 ⁇ in such a way that a parallel capillary gap extending over the entire active surface of the specimen slide can be formed.
- the volume of liquid needed to fill the capillary gap should be between 50 ⁇ and 400 ⁇ , advantageously between 50 ⁇ and 150 ⁇ .
- the bottom plate of the device according to the invention can be designed so that it can bring about an effective limitation of the capillary gap volume.
- the bottom plate may have an edge, which may preferably adjoin the collecting or overflow basin.
- this edge can form a borderline for the propagating fluid meniscus when the capillary gap is filled with an adequate volume of fluid.
- This effect can be enhanced by the fact that the edge of the bottom plate is designed as a collection.
- a volume of liquid which does not significantly exceed the intended volume of the capillary gap here represents an adequate volume of liquid.
- the platform or bottom plate may comprise an overflow lip for directing any excess liquid from the capillary gap into the collection or overflow basin.
- the overflow basin of the apparatus may also be used to provide a small amount of non-reactive liquid, for example water, in the incubation chamber so that the vapor atmosphere may be generated largely by evaporation of the non-reactive liquid.
- a particularly advantageous manner is defined by an edge of the bottom plate a boundary line for the meniscus of the liquid located in the capillary gap.
- the capillary gap can be delimited by the edge of the bottom plate, so that a tear-off edge can form for the liquid present in the capillary gap.
- the precise confinement of the liquid propagating in the capillary gap within the device or incubation chamber can be the same Significantly reduce the risk of contamination. For example, it can be ensured that only the active surface of the slide comes into contact with the respective single-acting solutions. Contamination of the label portion of the slide, however, can be avoided. This can substantially reduce the risk of contamination with potentially mutagenic, carcinogenic, or otherwise toxic liquids and reagents to a user of the device and manipulators of the slides.
- the device according to the invention may preferably be a sealable incubation chamber into which a slide with biological material can be introduced and deflected according to the invention so that all process steps of an examination protocol, for example an immunohistochemical (IHC) tissue staining protocol, an in situ hybridization assay or a biochip Coloring, can be carried out as efficiently and inexpensively.
- an examination protocol for example an immunohistochemical (IHC) tissue staining protocol, an in situ hybridization assay or a biochip Coloring
- the single-solution solutions required in the respective process steps can be introduced into the incubation chamber, but can also be completely removed again, so that the slide can remain in the incubation chamber during the entire protocol.
- an examination protocol for example an immunohistochemical (IHC) tissue staining protocol, an in situ hybridization assay or a biochip Coloring
- the single-solution solutions required in the respective process steps can be introduced into the incubation chamber, but can also be completely removed again, so that the slide can remain in the incubation chamber during the entire protocol
- the inventive design of the incubation chamber can also advantageously facilitate the elimination of the in-solution solutions / reagents used in the chamber.
- the chamber may allow the complete removal, in particular aspiration, of a single-solution solution used in the chamber without mixing it with other solutions used in previous or subsequent process steps.
- a prescribed separation and / or elimination be advantageously ensured the resulting chemical waste.
- suitable single-solution solutions can be effectively recycled.
- the slide can remain in the chamber during all process steps can also substantially reduce the risk of contamination of the immediate environment, especially for a user of the chamber with one of the inducible solutions. Even in circumstances in which the capillary gap of the chamber should be overfilled, the risk of contamination to the user remains low as the excess fluid is collected in an overflow basin.
- the platform or bottom plate can be designed so that excess liquid can be preferably passed into the overflow basin, it can further be ensured that only the active surface of the slide, but not the inscription part is wetted with the reactive liquids. This can further reduce the risk of contamination to the user.
- a spread of the introduced into the chamber liquids can be avoided in the deflection. This can avoid that the deflection can be exposed unfavorable effects of the fluids.
- time-consuming cleaning of the deflection can be reduced to a minimum, which in addition to the obvious time savings continue to have the advantage of counteracting premature wear.
- the device according to the invention can comprise an outlet for the fluid, which is in fluid communication with the only one, which is not elevated or only slightly raised, in the collecting position in the collecting position.
- the liquid can be removed from the device through the outlet.
- the outlet can be designed as an exhaust pipe guided through the lid of the chamber.
- the suction nozzle can be anchored in the lid so that it can be brought to a predetermined position of the incubation chamber when closing the lid, which is assigned to the corner region of the slide.
- the suction nozzle can be designed so that it in the closed state of Incubation chamber with the not or only slightly raised in the collection position corner region of the slide can enter into a positive and non-positive connection and / or the slide can provide a further abutment, which supports the tilting movement of the slide in the collection position.
- the suction nozzle may be formed of a deformable material such as rubber or silicone, so that the positive and non-positive connection of the suction nozzle is sealed to the slide. Thus, it can be ensured that a negative pressure in the suction can be generated.
- the suction nozzle can be arranged in the incubation chamber so that the suction opening encloses the corner of the not in the collecting position or only slightly raised corner region of the slide.
- the end of the suction nozzle which meets the slide can be funneled out like a funnel or trumpet, so that the suction nozzle can be brought into a positive and non-positive connection with the corner region of the slide by closing the lid of the incubation chamber.
- the funnel or trumpet-like everted end of the suction can be designed so that on the one hand, a fluid connection between the liquid located in the capillary gap and the suction opening of the suction can be generated and the positive and non-positive connection on the other hand can allow the generation of a negative pressure in the suction ,
- the end of the suction nozzle which meets the object carrier can be provided with a recess which can receive the corner region of the object carrier which is not or only slightly raised in the collecting position in a positive and non-positive connection.
- the corner of the slide can protrude into the suction opening of the suction nozzle, so that by closing the lid of the incubation on the one hand, a fluid connection between the located in the capillary liquid and the suction opening of the Absaugstutzens can be generated and the positive and non-positive connection on the other hand can allow the generation of a negative pressure in the exhaust.
- the outlet can be designed so that it can be connected to at least one suction element.
- the suction element may be part of an exhaust system for the separate disposal of the introduced into the capillary liquid.
- the suction channel can receive a suction element, in particular a pipette tip or a pipetting needle, so that the liquid can be removed or sucked out of the incubation chamber through the suction nozzle and via the pipette tip or pipetting needle.
- the suction element may be a suction hose.
- the suction channel can lead through the lid of the incubation chamber. In such embodiments, the suction channel is usually rectilinear.
- the suction channel may comprise a bend, which makes it possible to remove or suck the liquid not through the lid of the incubation chamber but through a side wall of the main body from the incubation chamber.
- the suction channel lead to a passage in a side wall of the main body.
- the implementation can be designed so that they can accommodate a suction hose. By closing the cover of the incubation chamber, the suction channel can be brought into a non-positive and positive connection with the suction tube.
- the suction channel leads through the lid of the incubation chamber and can be connected to a suction tube
- the suction tube must be flexible or movable so that the lid of the incubation can be fully opened and closed without restriction.
- a flexible or movable configuration of the suction hose is not absolutely necessary. This can bring constructive advantages.
- the device according to the invention is designed as an incubation chamber for use in a stainer.
- the slide can be deflected into a mixing position that is not parallel to the platform.
- the mixing position may be a position between the exposure position and the collection position, in which the space between the slide and the platform can form a flow connection between a mixing zone of the device and the only not completely raised in the collection position corner region of the slide.
- Reagents that are introduced into a mixing zone while the slide is at the collection position may flow through the flow connection into the non-elevated or slightly elevated corner region as the slide is deflected into the mixing position.
- the liquid for wetting the biological material may be a highly reactive and short-lived liquid which must be prepared from two or more components immediately prior to their use.
- the liquid may be a substrate solution for an enzymatic reaction.
- substrate solutions are often unstable and can disintegrate in a short time and are often usable only in a short time window after their preparation. Because of its short life (low durability) lengthy mixing procedures and / or service lives of such liquids should be avoided after their preparation.
- such liquids can be advantageously provided directly in the device and thus immediately prior to their use.
- a 3,3'-diaminobenzidine (DAB) solution and a hydrogen peroxide-containing buffer solution may be introduced into the mixing zone, and then, by repeatedly deflecting the slide from the collection position to the mixing position into a DAB peroxidase substrate solution to wet the biological material to be mixed.
- the DAB peroxidase substrate solution can be brought into contact with the biological material immediately after its preparation.
- the mixing position can advantageously be selected so that the reagents to be mixed do not come into contact with the biological material during the mixing process.
- the mixing position may be farther away from the collection position, the farther away the biological material from the corner region not or only slightly raised in the collection position is applied to the active surface of the slide.
- the mixing zone can be arranged so that it can be assigned to a first edge of the slide, wherein the first edge is part of the not or only slightly raised corner region of the slide and on the other hand farther away from the biological material than the second edge of the not or only slightly raised corner region.
- This further method may include the following steps:
- the non-parallel mixing position may be selectable so that the reagents do not contact the biological material during steps (a) through (c) of the process.
- the at least two reagents may be a 3,3'-diaminobenzidine (DAB) solution and a hydrogen peroxide-containing buffer solution, such that the by the complete mixing of the two reagents may be a DAB peroxidase substrate solution.
- DAB 3,3'-diaminobenzidine
- Fig. 1 in a schematic, perspective view a
- Fig. 2 shows the device according to the invention according to Figure 1, in which the
- FIGS. 1 and 2 shows the device according to the invention according to FIGS. 1 and 2 in the closed state
- FIG. 4 shows a schematic, perspective view of a deflection means of a device according to the invention
- FIG. 5 in a schematic, perspective view of a
- Deflection device of a device according to the invention 6 is a schematic, perspective view of a one-piece main body of a device according to the invention.
- FIG. 7 is a schematic representation of another embodiment of a device according to the invention in the closed state
- FIG. 8 in a schematic, perspective view another
- FIG. 9 is a schematic, perspective view of a multipart, in particular three-part body in positive connection with a deflection device of a device according to the invention.
- FIG. 10 is a schematic perspective view of a coupling element of a multi-part main body of a device according to the invention.
- FIG. 1 1 in a schematic, perspective view another
- FIG. 12 is a schematic, perspective view of a deflection means of a device according to the invention.
- FIG. 13 is a schematic, perspective view of an outlet of a device according to the invention.
- FIG. 14 is a schematic, perspective view of part of a device according to the invention in an enlarged detail
- 15 is a schematic, perspective view of an outlet of a device according to the invention
- 16 shows a schematic perspective view of an extraction system that can be connected to the outlet of the device according to the invention.
- 17 is a schematic, perspective view of a platform for
- Fig. 18 in a schematic, perspective view of a platform for
- 19 is a schematic, perspective view of a platform for
- Fig. 20 is a schematic, perspective view of another
- Embodiment of a device according to the invention in which the slide is in the operative position.
- Fig. 21 is a schematic, perspective view of a lid with extended side walls.
- FIG. 1 shows a device 1 according to the invention, which is designed as an incubation chamber 1 'for a slide 2.
- the incubation chamber V comprises a deflection device 3, a one-piece base body 4 with a platform for receiving the slide 2 and a cover 5.
- the platform lies in the incubation chamber 1 'below the slide 2 and is therefore not visible in FIGS. 1 and 2.
- the incubation chamber V serves to wet biological material deposited on the active surface of the slide 2 with at least one liquid and is particularly useful in immunohistochemistry, s / fu hybridization studies, tissue staining, biochip staining or the like of the biological material. in particular of tissue or cell sections, suitable.
- the slide 2 is within the incubation chamber 1 'deflected into a collecting position in which a corner region 6 of the slide 2 is not or only slightly raised, so that a liquid for wetting the applied on the slide 2 biological material 6 collects in this corner.
- the deflection device 3 comprises a deflection means 7, which is designed as a rocker 7 ', and a rocker housing 8.
- the slide 2 comprises at one end a labeling field 9 with a bar code 10 and lies with this end on the rocker 7' on.
- the designed as an incubation V, inventive device 1 is shown with an open lid 5, which can be fixed via a support block 1 1 at a designated, not shown in Figure 1, base plate.
- the cover 5 further comprises an outlet 12, which may be formed as a suction nozzle 12 'and anchored in the lid 5.
- the impact on the slide 2 end 13 of the suction 12 ' is funnel-shaped or trumpet-like everted and is pressed when closing the lid 5 on the corner region 6 of the slide 2, so that in the suction 12' a negative pressure can be generated.
- the suction nozzle 12 ' In the collecting position of the slide 2, the suction nozzle 12 'is in fluid communication with the corner region 6 through the connection with the slide 2, so that the liquid for wetting the biological material can be completely sucked by the negative pressure which can be generated in the suction nozzle 12'.
- the cover 5 comprises a plurality of abutments 14 which, with the cover 5 of the incubation chamber 1 'closed, can come into contact with the surface of the slide 2 facing away from the support 24 of the rocker 7, so that the deflection of the slide 2 from the action position into the collection position is supported becomes.
- a saturated atmosphere can be generated, in particular by heat, preferably by heat through the platform or bottom plate of the base body 4.
- a closure 15 is provided, through which the base body 4 with the Deflection device 3 is connected.
- the closure 15 has a receiving region 16 for a locking element 17.
- the closure 15 causes when closing the lid 5 not only that the Base 4 is locked relative to the rocker housing 8, but also relative to the base plate.
- the shutter 15 is provided with a gripping lip 18 which can facilitate the user to open and close the lid 5. All other constructive embodiments of a lid closure, which can provide the described functions, are conceivable.
- the platform or bottom plate of the base 4 can be exactly and advantageously positioned on an underlying temperature element, for example on a hot plate or on a heating block. Furthermore, depending on the design of the receiving region 16 of the closure 15 and of the corresponding locking element 17, the platform or bottom plate of the base body 4 can be positioned on the temperature element in a force-fitting manner. This enables effective and precise temperature transfer from the temperature element via the platform or bottom plate of the main body 4 into the capillary gap between the slide 2 and the platform or bottom plate 34.
- the lid 5 of the incubation chamber V comprises a bar code reading window 19 which, in the closed state, can be assigned to the labeling field 9 of the slide 2 resting on the rocker 7 ', so that the bar code 10 also passes through the lid 5 in the closed state of the incubation chamber 1' can be read.
- the bar code reading window 19 may be made of a transparent plastic, which does not or only slightly deflects the corresponding laser or infrared rays for reading the bar code, so that the bar code readability is enduring.
- the lid 5 comprises at least one passage 20 for the introduction of liquids into the closed incubation chamber V.
- a coloring process of the biological material requires the multiple exchange of reagents.
- the reagents can be introduced through the passage 20 in the lid 5 laterally of the slide 2 into the incubation chamber 1 '.
- the passage 20 In order to maintain the saturated atmosphere in the closed incubation chamber V, the passage 20 must be on the one hand be closed, on the other hand allow the piercing with a pipette tip or pipetting needle and close again after the introduction of the liquid.
- the passage 20 may be provided, for example, with a silicone closure with a cross recess, which closes automatically after retraction of the pipette tip or pipetting needle again.
- the closure can be configured as a displaceable cover, which can initially be pushed aside by the pipette tip or pipetting needle and automatically closes again after retraction of the pipette tip or pipetting needle due to an elastic bias. If the cover has several feedthroughs for introducing liquids into the closed incubation chamber 1 ', then the described closure possibilities of the feedthrough 20 are also conceivable for the further feedthroughs.
- FIG. 2 shows the incubation chamber 1 'according to FIG. 1, the slide 2 being in the action position. For this purpose, the non-visible rocker 7 'is lowered.
- FIG. 3 shows the incubation chamber V according to FIGS. 1 and 2 in the closed state. To avoid repetition relating to FIGS. 2 and 3, reference is made to the description of FIG.
- FIG. 4 shows the deflection means 7, designed as a rocker T, of the deflection device 3.
- the rocker T may comprise a receiving region 21 for a lifting means, for example a plunger.
- the plunger can be anchored in the receiving region 21 via an anchoring element 22, for example via the pin 22 ', so that the deflection means 7 configured as a rocker T can be moved from the bottom to the top into a raised position and into a tilted position.
- the raised position of the rocker 7 ' at least two corner regions of the slide 2 are not or only slightly raised, wherein the slide 2 is present in the tilted position in the collection position.
- an anchor element 23 of the rocker 7 'designed as abutment lip 23' can come into contact with a corresponding armature surface of the device 1, for example an armature surface of the rocker housing 8, so that the rocker 7 'moves from the raised position into the tilted position turns.
- the armature surface of the rocker housing 8 can be used as a material projection, for Example be formed as a protruding edge of a side wall of the rocker housing 8, which serves the abutment lip 23 'as a stop.
- a first lateral rocker wall 25 may limit the sliding movement of the slide 2.
- the first rocker wall 25 is configured slightly higher than the opposite, second rocker wall 26 so that they can bump in the closed incubation chamber 1 'against the lid 5, the abutment lip 23' in particularly strong inclination of the rocker 7 'contact with the lose corresponding anchor surface of the rocker housing 8.
- the abutment of the first rocker wall 25 against the cover 5 form another abutment, which can support the tilting movement of the rocker 7 'and thus the deflection of the slide 2 in the collection position.
- the rocker 7 ' is shown in the tilted position in the rocker housing 8, which is connectable to the main body 4 of the incubation chamber V.
- the tilting movement of the slide 2 is supported in the closed incubation V as already described above by the abutment 14.
- the tilting movement of the slide 2 can be supported against the forces acting in the capillary gap adhesion forces.
- the rocker 7 ' is further provided with a rear wall 27, which prevents the slide 2, the front inner wall 28 of the rocker housing 8 touches and jammed with this when lowering.
- the rocker housing 8 may be attached to fixing points 29, for example by means of screws to a base plate of an instrument or machine. By attaching the rocker housing 8 to a base plate of the base body 4 may be arranged stationary when closing the shutter 15 relative to the base plate.
- the rocker housing 8 comprises a positioning element, which is designed as a depression / bulge 30, and can receive a corresponding positioning element of the base body 4.
- the circumferential walls 31, 32 and 33 of the rocker housing 8 are designed so that they can be connected to a corresponding recess of the lid 5.
- the inner sides 31 'of the peripheral wall 31 of the rocker housing 8 may be correspondingly far away from each other, as corresponding lateral boundary elements of the base body 4.
- the inner sides of the rocker walls 25 and 26 a Limit lateral slippage of the slide 2.
- FIG. 6 shows a one-piece basic body 4 of the device designed as incubation chamber 1 '.
- the main body 4 comprises the platform or bottom plate 34, which consists of an inert material, or at least on the side facing the slide 2 with an inert material is coated.
- the bottom plate 34 is an inert film of polyimide, especially Kapton, or polyether ketone (PEEK), or a coated aluminum plate.
- PEEK polyether ketone
- a capillary gap is formed between the slide 2 and the platform or bottom plate 34, which may be filled by the liquid for wetting the biological material applied to the slide 2.
- the deflection of the slide 2 by the deflection device 3 allows a targeted steering of the liquid in the corner region 6, which is associated with a suction point 35 of the base body 4.
- the base body 4 comprises spacers 36.
- the spacers 36 may have, in particular, a height of 0.05 mm to 0.2 mm relative to the platform or base plate 34.
- the base body 4 comprises limiting elements 37, 38, 39, which can limit the lateral movement or the slippage of the slide 2 in the incubation chamber 1 '.
- the delimiting element 39 can prevent the possibly sharp-edged slide 2 from being moved out of the action position into the collecting position on the inner rear wall 40 of the Can block body 4, the deflection of the slide 2 would affect.
- direct pressure can be exerted on the surrounding walls 41, 42, 43 of the main body 4 as well as on the peripheral walls 31, 32, 33 of the rocker housing 8 by closing the cover 5, which pressure is indirectly applied to the housing Platform or bottom plate 34 of the base body 4 results.
- the indirect pressure supports the most direct possible temperature transfer from a temperature element lying below the platform or bottom plate 34 to the platform or bottom plate 34.
- the main body 4 comprises a positioning element designed as a material projection 44, which can be connected to the depression / bulge 30 of the rocker housing 8. Furthermore, the main body 4 comprises an overflow basin 45. A wall of the overflow basin 45 defines a tear-off edge 46 for the liquid in the capillary gap, so that the liquid can flow into the overflow basin 45 only when the capillary gap is overfilled.
- the main body 4 shown in FIG. 6 has a region 47 into which liquids can be introduced.
- the region 47 may be in fluid communication with the outlet 12 of the device 1, preferably via the capillary gap.
- the main body 4 comprises a further indentation 48 which is assigned to the region 47 and can facilitate the introduction, for example the pipetting in, of a liquid into the region 47.
- the region 47 may also be located in other locations in other embodiments of the device 1 according to the invention. If, however, the region 47 also functions as a mixing zone 47 'in a method according to the invention, it is to be arranged in the base body 4 such that a flow connection between the region 47 and the corner region 6 can be formed in a non-parallel mixing position of the slide 2.
- reagents which are introduced into the mixing zone 47 'and flow through the flow connection into the corner region 6 can be completely mixed by repeatedly deflecting the slide 2 from the collection position into the mixing position.
- the liquid for wetting the biological material can be provided.
- a 3,3'-dianninobenzidine (DAB) solution and a hydrogen peroxide-containing buffer solution may be introduced into the mixing zone 47 'such that a DAB peroxidase substrate solution for wetting the biological material directly into the incubation chamber 1' may be prepared by a mixing method of the present invention.
- FIG. 7 shows a schematic representation of the possible arrangement of the region 47 and of the mixing zone 47 'relative to the slide 2 in the closed device 1 designed as incubation chamber 1'.
- the incubation chamber 1 ' in particular the lid 5, the slide 2 and the base 4, are shown.
- both the lid 5 and the slide 2 are shown transparently so that underlying features are visible in the figure.
- FIG. 7 shows a passage 20 'assigned to the mixing zone 47' for introducing liquids to be mixed into the incubation chamber 1 '.
- the mixing zone 47 ' can be arranged so that it is associated with the first edge 49 of the slide, on the one hand part of the not or only slightly raised corner portion 6 of the slide 2 and on the other hand is further away from the biological material than the second edge 50 of the no or only slightly raised corner region 6. This ensures that contact of the reagents to be mixed with the applied on the underside of the slide 2 biological material 51 can be prevented during mixing.
- FIG. 7 shows a passage 20 'assigned to the mixing zone 47' for introducing liquids to be mixed into the incubation chamber 1 '.
- the mixing zone 47 ' can be arranged so that it is associated with the first edge 49 of the slide, on the one hand part of the not or only slightly raised corner portion 6 of the slide 2 and on the other hand is further away from the biological material than the second edge 50 of the no or only slightly raised corner region 6.
- FIG. 8 shows a device 1 according to the invention designed as an incubation chamber 1 'with a design of the cover 5 deviating from the incubation chambers of FIGS. 1 to 3.
- the cover 5 also comprises a passage for a suction nozzle 12', an abutment 14, a bar code reading window 19 and at least one passage 20 for introducing liquids into the closed incubation chamber 1 '.
- the lid 5 of the In the incubation chamber 1 'shown in FIGS. 1 to 3 several passages for introducing liquids into the closed incubation chamber 1' are conceivable for the cover 5 of the incubation chamber 1 'shown in FIG. 8, for example corresponding to the passages 20 and 20' as shown in FIG ,
- a pressure exerted on the cover 5 on the base body 4 that a platform or bottom plate 34 of the base body 4 is pressed onto an underlying heating element and so a direct and improved temperature transfer via the platform or bottom plate 34 in the capillary gap feasible is.
- the cover construction of Figure 7 provides this effect by means of a locking arm 52 ready.
- the locking arm 52 is in turn fixable via a holding block 1 1 to a base plate of an instrument or a machine, not shown.
- the hinge of the locking arm 52 in the holding block 1 1 is designed such that it is biased to urge the lid 5 in a closed position. This can be achieved for example by a spring in the holding block 1 1. Due to the bias of the locking arm 52, the cover 5 of the incubation chamber V exerts a pressure both on the main body 4 and on the rocker housing 8 in the closed state of the chamber.
- FIG. 9 shows a device 1 designed as an incubation chamber V with a multipart base body 4.
- the base body 4 consists of an overflow basin 45, a platform 34 and a coupling element 53.
- the apparatus 1 shown includes a deflection device 3 according to the figure 5.
- the units of the multi-part base body 4 can over the already described construction possibilities of the lid 5 with each other and with the Deflection device 3 are connected.
- the platform 34 may be formed as a bottom plate of the device 1.
- the bottom plate 34 shown in Figure 9 may be an inertly coated aluminum plate, wherein the spacers 36, the limiting elements 37, 38, 39 and the trailing edge 46 may be an integral part of the bottom plate 34. This has the advantage that the entire platform 34 can be produced as a single workpiece, giving the required evenness the platform 34 can ensure.
- the platform or bottom plate 34 is incorporated in a base body 4, the resulting forces on the platform or bottom plate 34 must be compensated so that the flatness of the platform or bottom plate 34 remains.
- FIG. 10 shows a coupling element 53 of a multipart base body 4, in which the suction channel 54 of the device 1 passes through the peripheral wall 42 of the main body 4 and can be connected to a suction hose. Furthermore, the coupling element 53 comprises bearing surfaces 55 for the platform 34 so that it can be connected to the coupling element 53.
- Figure 1 1 shows an alternative embodiment of the device 1 according to the invention, which comprises a deflection device 3 and a base body 4. Due to the shown position of the deflection device 3, the slide 2 is in the collection position.
- the rocker 7 'on a designed as a guide rail recess which serves as a receiving area 21 for the lifting means.
- the lifting means which may be designed as a plunger, may protrude into the receiving region 21 and deflect the rocker 7 'into a predetermined by the shape of the guide rail movement.
- the deflection of the object carrier 2 from the engagement position into the collection position can be achieved by the shape of the receiving region 21 designed as a guide rail.
- the liquid in the capillary gap between the slide 2 and the platform 34 can be deflected in such a way that it collects in the corner region 6.
- FIG. 12 shows the rocker 7 'of the device 1 of Figure 1 1 in detail, which is referred to the description of Figure 1 1.
- FIG. 13 shows a suction nozzle 12 'which is designed in such a way that the suction channel 50 is guided through the lid 5 of an incubation chamber V.
- the suction nozzle 12 ' comprises a recess 56 which can receive the corner region 6 of the slide 2.
- both the suction opening 57 and the suction channel 54 of the suction nozzle 12 ' can be brought into fluid communication with the liquid present in the capillary gap.
- FIG. 14 shows the suction nozzle 12 'according to FIG. 13 in a suction position as it may be in the closed state of an incubation chamber 1'.
- the slide 2 can be present in the incubation chamber 1 'and how the recess 56 can receive the corner region 6 of the slide 2 so that both the suction opening 57 and the suction channel 54 of the suction nozzle 12' are in fluid communication with that in the capillary gap Liquid can be brought.
- FIG. 15 shows an alternative embodiment of the suction nozzle 12 'in which the suction channel 54 is guided by the peripheral wall 42 of the base body 4.
- the suction channel 54 in the intake 12 thus includes a bend.
- the suction tube In embodiments in which the suction channel 54 leads through the lid 5 of the incubation chamber 1 '(as shown in FIGS. 12 and 13), the suction tube must be designed such that the lid 5 of the incubation chamber V can be fully opened and closed without restriction.
- the suction channel 54 leads through the circumferential wall 42 of the main body 4 and can be connected to a suction hose, a flexible or movable configuration of the suction hose is not absolutely necessary.
- FIG. 16 schematically shows an exhaust system 58 which can be connected to the outlet 12 or the exhaust pipe 12 'via a suction element 59.
- the suction element 59 is shown as the pipette tip 59 ', which may be anchored in a pipette tip holder 60.
- the suction system 58 serves for the separate disposal of the liquids used in the capillary gap of the device 1 designed as an incubation chamber V according to the invention. Therefore, as shown, a plurality of pipette tips 59 'in the Pipette tip holder 60 be anchored, which are each intended for sucking a liquid from the device 1.
- a negative pressure can be generated in the suction hoses 61 and the waste containers 63.
- the negative pressure may be generated by a vacuum pump 64 in communication with the waste containers 63.
- the connection of the vacuum pump 64 with the waste containers 63 is ensured in the illustrated suction system 58 via a central vacuum tank 65, which in turn can be connected via hose connections 66 to the respective waste containers 63.
- a negative pressure in all suction hoses 61 can be generated via a single vacuum pump 64, which enables the suction of the liquids located in the capillary gap via the pipette tips 59 '.
- the suction can be performed by one of the pipette tips 59 '.
- a suction element 59 which is associated with a liquid to be sucked off and is connected to the corresponding waste container 63 for this liquid, must be connected to the outlet 12 or the suction nozzle 12 'and the corresponding valve 67 to be opened, if this liquid flows out of the Incubation chamber V should be removed.
- the suction system 58 described here can be a unit of a stainer for the device according to the invention, and the steps described can be part of an automated process, which run in conjunction with the wetting of the biological material 51 applied to the slide 2 in the incubation chamber 1 ' can.
- the steps described can be part of an automated process, which run in conjunction with the wetting of the biological material 51 applied to the slide 2 in the incubation chamber 1 ' can.
- the complete removal, in particular suction, of the single-solution solutions used can be possible so that a prescribed separation and / or removal of the resulting waste solutions is advantageously possible.
- 58 suitable Einwirktheen can be effectively recycled with appropriate design of the extraction system.
- FIG. 17 to 19 show further exemplary embodiments of a platform 34 which can each be used with a device 1 having a multipart base body 4 designed as an incubation chamber 1 '.
- FIG. 17 shows a platform 34, wherein the spacers 36, the limiting elements 37, 38, 39 and the tear-off edge 46 are an integral part of the platform 34.
- the limiting elements 37, 38, 39 are formed by a deformation of the material, for example by bending, of the circumferential side walls 41, 42, 43.
- a platform 34 can be provided by simple means and thus extremely cost-efficient, which meets the requirements with respect to a planar design.
- the limiting elements 37, 38, 39 do not extend to the surface of the base plate 34. This has the advantage that adhesion and / or capillary effects are avoided or minimized by contact of the boundary elements 37, 38, 39 with the liquid reagents.
- the limiting elements 37, 38, 39 ensures that slipping of the slide 2 is limited. Furthermore, jamming of the slide 2 under one of the limiting elements 37, 38 or 39 is effectively prevented.
- the limiting element (s) 38 the distance of the slide 2 to the vertical or oblique side wall 43 is defined, this distance allows the insertion of a pipetting needle or pipette tip.
- the limiting elements 37 and 39 ensure that the non-recessed parts of a suction nozzle 12, 12 ', shown for example in FIG. 15, have sufficient space to form-fit around a corner of the slide 2, thereby allowing the aspiration of liquid reagents.
- FIG. 17 shows that the peripheral walls 41, 43 of the platform 34 are configured obliquely or at an angle of more than 90 ° to the surface of the bottom plate 34.
- This facilitates the insertion of a pipetting needle or pipette tip through a passage 20 provided in the opening 20 so that liquids or reagents are easier to introduce into the incubation chamber 1 '.
- the angle of more than 90 ° between the surface of the platform 34 and the sidewalls 41, 43 prevents the liquid reagents from initially spreading along the edge before passing under the light In the experiment, it has been found that this cornering effect is reduced when the side walls 41, 43 are inclined obliquely outwards as in FIGS. 17 and 18.
- the angle between the surface of the platform 34 and the side walls 41, 43 between 95 and 120 °, in particular between 95 and 1 15 °, in particular between 95 and 1 10 °, in particular between 100 and 1 10 ° , in particular between 105 and 110 ° C.
- the platform 34 according to Figure 17 is shown in Figure 18, the limiting element 38 is not present, however, by tilting the side wall 43 even without limiting element 38 a sufficient distance to a liquid reagent is introduced along the inside of the side wall 43 into the incubation chamber V.
- the reagent is at approximately half the height of the side wall d 43 can be introduced into the incubation chamber 1 'so that it flows into the non-rectangular edge between the surface of the bottom plate 34 and the side wall 43 and from there can flow directly under the slightly raised or parallel slides 36 lying on the spacers 36.
- the area of the platform 34 shown in Figure 18 is reduced in width such that the freedom of movement of the slide 2 is limited to the same extent as in a platform 34, which has a limiting element 38.
- FIG. 19 shows a further embodiment of the platform 34, in which the spacers 36, the delimiting elements 37, 38, 39 and the tear-off edge 46 are an integral part of the platform 34.
- the limiting elements 37, 38, 39 are likewise formed by forming the material of the circumferential side walls 41, 42, 43.
- the limiting elements 37, 38, 39 are formed as material projections (bulges).
- a platform 34 can be provided by simple means and thus extremely cost-efficient, which meets the requirements with respect to a planar design.
- the limiting elements 37, 38, 39 ensures that slipping of the slide 2 is limited.
- FIG. 20 shows a device 1 according to the invention, which is designed as an incubation chamber 1 'for a slide 2.
- the incubation chamber 1 ' comprises a deflection device 3, a platform 34 as shown in FIG. 17 for receiving the slide 2 and a cover 5.
- the device 1 according to the invention designed as an incubation chamber V, is shown in FIG. 20 with an open lid 5, which has a holding block 1 1 is fixed to a designated base plate 69.
- the platform 34 rests directly on the heating block 70 provided on the base plate 69.
- the lid 5 further comprises extended sidewalls 71, which extend down to the base plate 69 when the lid is closed and thus seal the incubation chamber without requiring a seal running along the underside of the lid 5.
- This has particular constructive advantages in incubation chambers 1 'with multi-part basic bodies 4, as shown for example in FIGS. 9 and 20.
- FIGS. 9 and 20 In the case of the deck constructions illustrated in FIGS.
- the sealing of the incubation chambers V is realized by a silicone seal or a form-fitting connection between the underside of the cover 5 with the base body 4 and the deflection device 3.
- 3 corresponding surfaces may be formed on the base body 4 and on the deflection device.
- the cover 5 of the incubation chamber V from FIG. 20 is shown separately.
- the side walls 71 are fastened by screws 72 on the sides of the lid 5.
- mounting holes 73 which are connected to a corresponding fastener of the Holding block 1 1 are connectable.
- the bushing closure 74 of the bushing 20 is shown.
- this feedthrough closure 74 can be made of silicone and have a cross slot so that a pipetting needle or pipette tip can be pushed through the passage while maintaining the saturated atmosphere in the incubation chamber 1 '.
- the cover 5 shown in FIG. 21 can be produced, for example, as a separate workpiece by injection molding.
- the cover 5 may have a barcode reading window 19 for reading the barcode 10 of the slide 2.
- the bar code reading window 19 may be made of transparent material, for. As glass or macro ion exist. Alternatively, the entire cover 5 can be made of a transparent material, for example a macroion.
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Abstract
Die vorliegende Erfindung betrifft eine Vorrichtung zum Benetzen von biologischem Material mit wenigstens einer Flüssigkeit. Zudem betrifft die Erfindung ein Verfahren zum Benetzen von biologischem Material mit wenigstens einer Flüssigkeit unter Verwendung einer entsprechenden Vorrichtung.
Description
VORRICHTUNG UND VERFAHREN ZUM BENETZEN VON
BIOLOGISCHEM MATERIAL
Die vorliegende Erfindung betrifft eine Vorrichtung zum Benetzen von biologischem Material mit wenigstens einer Flüssigkeit. Zudem betrifft die Erfindung ein Verfahren zum Benetzen von biologischem Material mit wenigstens einer Flüssigkeit unter Verwendung einer entsprechenden Vorrichtung.
Vorrichtungen zum Benetzen von biologischem Material sind seit vielen Jahren aus der Praxis bekannt und existieren in den unterschiedlichsten Ausführungsformen. Lediglich beispielhaft sei dazu auf die Vorrichtung der DE 102 18 988 C1 verwiesen, welche eine Einrichtung zum Tragen eines Objektträgers umfasst. Diese ist so ausgebildet, dass der Objektträger von einer Plattform beabstandet ist. Weiterhin ist die dargestellte Inkubationskammer so ausgestaltet ist, dass der Objektträger innerhalb der Inkubationskammer mittels einer weiteren Einrichtung relativ zur Plattform angehoben oder abgesenkt werden kann. Die Seite des Objektträgers auf der das zu untersuchende Material aufgebracht ist, ist der Plattform zugewandt und der Raum zwischen Objektträger und Plattform kann, innerhalb der Kammer, mit einer flüssigen Reagenz befüllt werden.
Weiterhin ist eine Vorrichtung zum Benetzen von biologischem Material in US Patent 5,338,358 B2 beschrieben. Diese Vorrichtung umfasst ebenfalls eine Einrichtung zum Tragen eines Objektträgers. Allerdings ist diese so ausgestaltet, dass der Objektträger in einer nicht-parallelen Position von einem Plateau beanstandet ist. Um sicherzustellen, dass das biologische Material vollständig und ausreichend mit einem flüssigen Reagenz benetzt wird, muss der keilförmige Raum zwischen Objektträger und Plateau einem verhältnismäßig großen Volumen der Reagenz befüllt werden. US Patent 8,877,485 B2 offenbart eine Methode und einen Automaten zum Aufbereiten biologischer Proben. In dem Automaten wird wenigstens eine Färbeeinheit bereitgestellt, die eine Anordnung von Objektträgern und eine entsprechenden Anordnung von Deckeln enthält. Diese beiden Anordnungen werden zueinander in eine Position verbracht, in der sich zwischen den jeweiligen,
in Schräglage befindlichen Objektträgern und den entsprechenden Deckeln Kapillarspalte ausbilden. Die so erzeugten Kapillarspalte können dann mit einer Färbelösung zum Färben der Probe gefüllt werden, welche entgegen der Schwerkraft in den schrägen Kapillarspalten verbleibt. Für alle anderen Aufbereitungsschritte werden die Objektträger zu anderen Einheiten des Automaten transportiert. Beispielsweise zu einer Einheit zum Deparaffinisieren oder einer Einheit zum Waschen.
Die veröffentlichte US Patentanmeldung US 2015/01 1 1202 A1 beschreibt einen weiteren Färbeautomaten für auf einem Objektträger aufgebrachtes biologisches Material. Insbesondere wird eine in dem Automaten verwendbare, deckellose Reaktionskammer beschrieben, in die ein das biologische Material tragender Objektträger hineingelegt werden kann. In der Kammer befindet sich der Objektträger in einem Abstand von einer Plattform, sodass sich zwischen der Seite des Objektträgers auf der das biologische Material aufgebracht ist und der Plattform ein nicht-paralleler Spalt bildet. Der Spalt kann mit einer Reaktionslösung gefüllt werden. Während der Spalt mit Lösung gefüllt ist, wird ruht der Objektträger auf dafür vorgesehenen Abstandshaltern ohne bewegt zu werden, sodass die im Spalt befindliche Lösung erst wieder beim Entleeren des Spaltes fließt.
Die ebenfalls bekannte Vorrichtung der US 8,337,786 B2 stellt eine Inkubationskammer dar, welche durch das Aufschieben eines Deckels auf einen Objektträger erzeugt wird, wodurch ein von dem Deckel abgeschlossener Raum über dem auf den Objektträger befindlichen Material gebildet wird. Dieser Raum dann wiederum mit Einwirklösung gefüllt werden. Das Zuführen der Einwirklösung in die Inkubationskammer erfolgt in der bekannten Vorrichtung mittels eines außerhalb der Kammer liegenden Flüssigkeitsreservoirs, aus dem der Kammerraum aufgrund der entstehenden Kapillarkräfte passiv befüllt werden kann. Allerdings muss der Deckel mittels einer Klemmwirkung auf den Objektträger aufgepresst werden, um die Dichtigkeit der Inkubationskammer während des Einwirkprozesses zu gewährleisten. Um die Kammer zu leeren, wird die Klemmwirkung aufgehoben und die Flüssigkeit an dem dem Flüssigkeitsreservoir gegenüberliegenden Ende der Kammer abgesaugt. Aufgrund des Aufpressens des Deckels auf den Objektträger und der darauffolgenden Entspannung entstehen
allerdings Kapillarkräfte, welche eine bestimmte Menge der Einwirklösung unter die Auflageflächen des Deckels ziehen. Somit verbleibt eine Restmenge der Einwirklösung, welche bei einem direkt aufeinanderfolgenden Befüllen der Kammer mit unterschiedlichen Lösungen zur Verunreinigung der jeweils nächsten, eingebrachten Lösung führt. Außerdem verbleiben Lösungsreste beim Entfernen der Kammer auf den Objektträger, welche ein erhöhtes Kontaminationsrisiko für den Anwender zur Folge haben.
Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Vorrichtung und ein Verfahren zum Benetzen von biologischem Material derart auszugestalten und weiterzubilden, dass mit konstruktiv einfachen Mitteln das Einbringen und Entnehmen der zum Benetzen notwendigen Flüssigkeiten optimiert ist.
Erfindungsgemäß wird die voranstehende Aufgabe durch die Merkmale des Patentanspruchs 1 gelöst. Danach umfasst die erfindungsgemäße Vorrichtung eine Auslenkeinrichtung und eine Plattform zur Aufnahme eines mindestens in etwa dreieckigen, vorzugsweise in etwa viereckigen, das biologische Material umfassenden Objektträgers, wobei der Objektträger von der Auslenkeinrichtung aus einer relativ zur Plattform parallelen Einwirkposition in eine relativ zur Plattform nicht-parallele Sammelposition auslenkbar ist, wobei ausschließlich ein Eckbereich des Objektträgers in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehoben ist, derart, dass sich die Flüssigkeit in diesem Eckbereich sammelt.
Der Begriff „Einwirkposition" ist im weitesten Sinne zu verstehen und beschreibt insbesondere eine relativ zur Plattform parallele Position des Objektträgers, in der sich zwischen der Plattform und dem Objektträger ein Kapillarspalt ausbilden kann. Dieser Kapillarspalt ist mit der Einwirklösung befüllbar, sodass das auf der dem Kapillarspalt zugewandten Seite des Objektträgers aufgebrachte biologische Material mit der Einwirklösung benetzbar ist. Die dem Kapillarspalt zugewandte Seite des Objektträgers kann, unabhängig von der räumlichen Ausrichtung des Objektträgers, als„Unterseite" des Objektträgers bezeichnet werden.
Der Begriff „Sammelposition" ist ebenfalls im weitesten Sinne zu verstehen und beschreibt insbesondere eine Position des Objektträgers in der ausschließlich ein
Eckbereich des Objektträgers nicht oder nur geringfügig angehoben ist. In diesem, somit im Vergleich zu den anderen Eckbereichen des Objektträgers niedriger gelegenen Eckbereich, ist die Flüssigkeit zum Benetzen des biologischen Materials sammelbar und vorteilhafterweise entnehmbar.
Der Begriff „Objektträger" ist ebenfalls im weitesten Sinne zu verstehen und beschreibt ein Element, das so ausgestaltet sein kann, dass es eine Fläche aufweist, auf der das zu benetzende biologische Material aufgebracht werden kann und welche mit einer die korrespondierenden Fläche einen parallelen Kapillarspalt ausbilden kann. Der Begriff schließt somit sowohl handelsübliche, aus dem Bereich der Mikroskopie bekannte, viereckige Objektträger als auch in anderen geometrischen Formen vorliegende Objektträger ein.
In erfindungsgemäßer Weise ist zunächst erkannt worden, dass die zu Grunde liegende Aufgabe durch eine geeignete Auslenkeinrichtung der Vorrichtung in überraschend einfacher Weise gelöst werden kann. Insbesondere ist erkannt worden, dass die durch die erfindungsgemäße Vorrichtung erzeugbare Bewegung des Objektträgers besonders gut geeignet ist biologisches Material auf einem Objektträger mit den für immunohistochemische Gewebeuntersuchungen bzw. -färbungen notwendigen flüssigen Reagenzien zu benetzen
Weiterhin eignet sich die erfindungsgemäße Vorrichtung auch besonders dazu die Reagenzien effizient und vollständig zu vermischen, sodass die chemischen und biochemischen Reaktionen bei solchen Gewebeuntersuchungen bzw. -färbungen beschleunigt werden können.
Insbesondere können sowohl die sogenannten Vorbehandlungsschritte des „Entwachsens bzw. Deparaffinisierens" und des „Antigen-Retrievals" bei einer immunohistochemischen Färbung und des„Entwachsens bzw. Deparaffinisierens" bei einer in s/fu-Hybridisierungsuntersuchung als auch die eigentlichen Gewebefärbungen bei Nachweismethoden, wie zum Beispiel bei immunohistochemischen Färbungen und bei in situ- Hybridisierungsuntersuchungen, beschleunigt werden. Zudem können biochemische Bindungsreaktionen in der erfindungsgemäßen Vorrichtung
beschleunigt ablaufen. Beispielsweise ist die Benetzung von biologischem Material auf Objektträgern, insbesondere Protein- und/oder RNS-haltigem Material auf sogenannten BioChips, in der erfindungsgemäßen Inkubationskammer besonders effizient realisierbar.
Besonders in enzymbedingten Untersuchungsmethoden werden oft hoch-reaktive und kurzlebige Substratlösungen zum Benetzen von biologischem Material verwendet, welche aus zwei oder mehreren Komponenten unmittelbar vor ihrer Verwendung hergestellt werden müssen. Allerdings sind solche Substratlösungen nicht nur teuer sondern sehr häufig auch instabil, sodass sie in kurzer Zeit zerfallen und wertlos werden können. Vorteilhafterweise können solche Lösungen in der erfindungsgemäßen Vorrichtung, wenn diese als Inkubationskammer ausgestaltet ist, direkt in einer Mischzone der Inkubationskammer hergestellt werden. Folglich können solche Lösungen somit unmittelbar vor ihrer Verwendung hergestellt werden.
Weiterhin werden durch wiederholtes Auslenken des Objektträgers aus der Einwirkposition in die Sammelposition und zurück in die Einwirkposition neben der vorteilhaften Durchmischung und Ausbreitung der Flüssigkeit auch Blasen aus dem Kapillarspalt zwischen dem Objektträger und der Bodenplatte der Plattform entfernt. Dies wiederum trägt vorteilhaft dazu bei, dass die chemischen und biochemischen Reaktionen im Kapillarspalt homogener und effizienter ablaufen können.
Bei der Durchführung immunohistochemischer Färbungen und/oder in situ- Hybridisierungsuntersuchungen von auf einem Objektträger aufgebrachten, biologischen Material entstehen häufig hydrophobe Bereiche, zum Beispiel durch das Verbleiben von Wachs bzw. Paraffin in dem zu benetzenden Material. In weiterhin erfindungsgemäßer Weise kann durch die Auslenkung des Objektträgers eine Fließbewegung der Flüssigkeit erwirkt werden, die eine besonders gleichmäßige Benetzung von biologischem Material ermöglicht, selbst wenn das biologische Material hydrophobe Bereiche aufweist.
Die Auslenkeinrichtung kann ein Auslenkmittel aufweisen, das wiederum eine Auflage für den Objektträger und, vorzugsweise, ein Ankerelement umfasst.
Vorteilhafterweise kann die Auslenkeinrichtung eine Wippe sein. In besonders vorteilhafter Weise kann das Auslenkmittel bzw. die Wippe durch wenigstens ein Hebemittel in eine angehobene Position und in eine gekippte Position verbracht werden. In der angehobenen Position sind wenigstens zwei Eckbereiche des Objektträgers nicht oder nur geringfügig angehoben, wobei der Objektträger in der gekippten Position dann in der Sammelposition vorliegt.
Der Objektträger kann mit einem Bereich auf der Auflage des Auslenkmittels aufliegen, der zur Beschriftung bzw. Identifizierung des Objektträgers und des darauf befindlichen biologischen Materials vorgesehen ist, d.h. mit einem Bereich der auch als Beschriftungsteil des Objektträgers bezeichnet werde kann. Vorteilhafterweise können Objektträger, die in der erfindungsgemäßen Vorrichtung zur Verwendung kommen sollen, in dem Beschriftungsteil des Objektträgers ein Beschriftungsfeld umfassen. Das Beschriftungsfeld kann mit einem Barcode versehen bzw. beschriftet sein, der die Identifizierung des Objektträgers und des darauf befindlichen biologischen Materials ermöglicht. Das Beschriftungsfeld kann sich auf der dem Kapillarspalt abgewandten Seite des Beschriftungsteils des Objektträgers befinden. Die dem Kapillarspalt abgewandte, das Beschriftungsfeld umfassende Seite des Objektträgers kann, unabhängig von der räumlichen Ausrichtung des Objektträgers, als „Oberseite" des Objektträgers bezeichnet werden.
In weiter vorteilhafter Weise umfasst das Auslenkmittel einen Aufnahmebereich für das wenigstens eine Hebemittel. Zum Beispiel kann das Hebemittel als Stößel ausgebildet sein, der in den Aufnahmebereich hineinragt. Alternativ oder zusätzlich ist denkbar, dass der Aufnahmebereich ein Verankerungselement für das Hebemittel umfasst, sodass das Verankerungselement eine Achse des Auslenkmittels definiert, um die das Auslenkmittel in die gekippte Position drehbar ist. Zum Beispiel kann der Aufnahmebereich als eine mit der Form des Stößels korrespondierende Aussparung sein, wobei das Verankerungselement, vorzugsweise in Form eines Zapfens, in die Aussparung hineinragt. Der mit der Form der Aussparung korrespondierende Stößel kann vorzugsweise wiederum eine mit der Form des Zapfens korrespondierende Öffnung enthalten, sodass Stößel und
Zapfen in eine relativ zueinander drehbare Verbindung gebracht werden können. Alternativ kann das Hebemittel auch direkt mit dem Objektträger in Kontakt treten.
Weiterhin können das Auslenkmittel und/oder das Ankerelement des Auslenkmittels so ausgestaltet sein, dass es mit einer korrespondierenden Ankerfläche in Kontakt bringbar ist. Durch einen solchen Kontakt des Auslenkmittels und/oder des Ankerelements mit der Ankerfläche dreht sich das Auslenkmittel aus der angehobenen Position in die gekippte Position. Das Ankerelement kann als ein hervorstehender Bereich, vorzugsweise als eine Anstoß-Lippe, des Auslenkmittels ausgebildet sein. Die korrespondierende Ankerfläche kann als Materialvorsprung der Vorrichtung, insbesondere als ein Anschlag, ausgebildet sein. Der Anschlag kann wiederum vorzugsweise als eine hervorstehende Kante einer Seitenwand der Auslenkeinrichtung, vorzugsweise einer inneren Seitenwand der Auslenkeinrichtung, ausgebildet sein.
In vorteilhaften Ausführungsformen enthält die erfindungsgemäße Vorrichtung eine Auslenkeinrichtung die einerseits an einer inneren Seitenwand eine hervorstehende Kante und andererseits ein hebbares und drehbares Auslenkmittel mit einer Anstoß- Lippe umfassen kann. Indem die Anstoß-Lippe des Auslenkmittels mit dem korrespondierenden Anschlag der Auslenkeinrichtung in Kontakt tritt, kann die Bewegung des Hebemittels zu einer Bewegung des Auslenkmittels führen, welche den Objektträger aus der relativ zur Plattform parallelen Einwirkposition in die relativ zur Plattform nicht-parallele Sammelposition auslenkt. Anstatt die Form einer hervorstehenden Kante einzunehmen, kann die korrespondierende Ankerfläche gewölbt sein. Beispielsweise kann die Ankerfläche als Seitenfläche eines im Wesentlichen zylindrisch geformten Anschlags ausgestaltet sein. Indem bei einer solchen Ausführungsform das Auslenkmittel mit der gewölbten Ankerfläche in Kontakt tritt, dreht sich das Auslenkmittel im Wesentlichen entlang der durch die Wölbung vorgegeben Kurve. In alternativen, vorteilhaften Ausführungsformen enthält die erfindungsgemäße Vorrichtung einerseits einen durch eine gewölbte Fläche bereitgestellten Anschlag und andererseits ein hebbares und drehbares Auslenkmittel, welches mit dem im Wesentlichen zylindrisch geformten Anschlag in Kontakt treten kann. Durch die
Bewegung des Hebemittels kann sich das Auslenkmittel weiterhin über die gewölbte Seitenfläche des Anschlags drehen, sodass der Objektträger aus der Einwirkposition in die Sammelposition ausgelenkt wird. Der Aufnahmebereich für das wenigstens eine Hebemittel kann eine als Führungsschiene ausgestaltete Aussparung des Auslenkmittels sein. Beispielsweise ist in solchen Ausführungsformen das Hebemittel ein Stößel, welcher in die Führungsschiene hineinragt. Dadurch kann eine Bewegung des Stößels innerhalb der Führungsschiene zu einer durch die Form der Führungsschiene vorbestimmten Bewegung des Auslenkmittels führen. Vorzugsweise kann diese Bewegung eine multidirektionale Bewegung sein. Diese durch die Führungsschiene vorbestimmte Bewegung kann wiederum das Auslenken des Objektträgers aus der Einwirkposition in die Sammelposition bewirken.
Die Auslenkung des Objektträgers aus der Einwirkposition in die Sammelposition entspricht einer dreidimensionalen Bewegung (3-D Bewegung) des Objektträgers. Vorzugsweise beinhaltet die 3-D Bewegung ein Heben und Senken des Objektträgers entlang der Y-Achse, ein seitliches Verschieben des Objektträgers entlang der X-Achse und ein Kippen bzw. Drehen des Objektträgers über bzw. um die Z-Achse. Dabei muss die Reihenfolge der jeweiligen Bewegungen entlang einer der drei oben genannten, geometrischen Achsen nicht festgelegt sein und ist beliebig kombinierbar. Die Auslenkung des Objektträgers mittels der erfindungsgemäßen Vorrichtung kann kontinuierlich oder diskontinuierlich ausgeführt werden. Zum Beispiel kann eine Aufwärtsbewegung des Hebemittels die Auslenkung des Objektträgers aus der Einwirkposition in die Sammelposition bewirken, wobei die gegenläufige Abwärtsbewegung des Hebemittels den Objektträger wieder aus der Sammelposition in die Einwirkposition verbringt. Durch die Steuerung der Bewegung des Hebemittels kann somit auch die Auslenkung des Objektträgers gesteuert werden und, gegebenenfalls, an einer beliebigen Position zwischen der Einwirkposition und der Sammelposition gestoppt werden. Die gesteuerte 3-D Bewegung des Objektträgers erlaubt die präzise Lenkung der Flüssigkeit, mit der
das auf dem Objektträger befindliche biologische Material in der Vorrichtung benetzt werden kann.
In vorteilhafter Weise kann in der Einwirkposition ein Kapillarspalt zwischen dem Objektträger und der Plattform ausgebildet sein. Durch das Auslenken des Objektträgers durch die Auslenkeinrichtung und unter Zuhilfenahme der wirkenden Adhäsionskräfte kann eine gezielte Lenkung einer im Kapillarspalt befindlichen Flüssigkeit ermöglicht werden. Insbesondere kann die Flüssigkeit zum vollständigen Sammeln in den in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehoben Eckbereich des Objektträgers gelenkt werden. Zudem ist vorteilhafterweise durch ein wiederholtes Auslenken des Objektträgers aus der Einwirkposition in die Sammelposition eine Durchmischung der Flüssigkeit im Kapillarspalt, ein Entfernen von Blasen aus dem Kapillarspalt und/oder eine Beschleunigung biochemischer Reaktionen im Kapillarspalt realisierbar.
Insbesondere kann der Kapillarspalt zwischen der Plattform, welche eine Bodenplatte der Vorrichtung sein kann, und der Fläche des Objektträgers ausgebildet sein, auf der das biologische Material aufgebracht ist, d.h. der Aktiv- Fläche des Objektträgers. Die Aktiv-Fläche eines Objektträgers kann die Gesamtfläche einer Seite des Objektträgers abzüglich der Fläche des Beschriftungsteils umfassen.
Das Volumen des Kapillarspalts ist durch den Abstand des Objektträgers zu der Plattform bzw. Bodenplatte bestimmbar. Insbesondere weist die Vorrichtung spezielle Abstandshalter auf, welche den Objektträger in der parallelen Einwirkposition von der Plattform bzw. Bodenplatte beabstanden. Die Abstandshalter können als Vorsprünge bzw. Erhebungen der Plattform ausgebildet sein. In anderen Ausführungsformen können die Abstandshalter als Vorsprünge einer oder mehrerer Seitenwände der Vorrichtung ausgebildet sein. Insbesondere bilden die Abstandshalter Auflagepunkte oder -flächen auf denen der Objektträger in der parallelen Einwirkposition ruht. Die Abstandshalter können so ausgestaltet sein, dass der Spalt zwischen dem Objektträger und der Plattform bzw. Bodenplatte in der parallelen Einwirkposition eine Höhe aufweist, welche mindestens größer ist als die Dicke des auf dem Objektträger aufgebrachten biologischen Materials.
Vorteilhafterweise können die Abstandshalter so ausgestaltet sein, dass der Spalt zwischen dem Objektträger und der Plattform bzw. Bodenplatte in der parallelen Einwirkposition eine Höhe von 0,005 mm 0,5 mm, insbesondere von 0,01 mm bis 0,3 mm, insbesondere von 0,05 mm bis 0,2 mm, aufweist. Zudem sind hier jegliche anderen Konstruktionen, die den Objektträger von der Plattform so beabstanden, dass ein sich über die gesamte Aktiv-Fläche des Objektträgers erstreckender, paralleler Kapillarspalt ausgebildet werden kann, denkbar.
Hinsichtlich der wenigstens einen Flüssigkeit, mit der der Objektträger zu benetzen ist, ergeben sich mehrere Möglichkeiten. In besonders vorteilhafter Weise ist die wenigstens eine Flüssigkeit eine Einwirkslosung, welche vorzugsweise aus der
Gruppe bestehend aus: Pufferlösungen; Wachstumslösungen;
Entwässerungslösungen; Blockierungslösungen; Ligandenlösungen;
Antikörperlösungen; Waschlösungen; Färbelösungen; Reinigungslösungen; Entwachsungslösungen; Deparaffinisierungslösungen, Alkohollösungen;
Rehydrierungslösungen; Aktivierungs- oder Inaktivierungslösungen; Antigen-
Retrieval Lösungen; Hybridisierungslösungen; und Substratlösungen ausgewählt ist. Weiterhin kann die gesteuerte 3-D Bewegung des Objektträgers dazu genutzt werden, mehrere Reagenzien in einer Flüssigkeit zu vermischen. Dazu kann die Auslenkung des Objektträgers aus der Einwirkposition in die Sammelposition und wieder zurück wiederholt ausgeführt werden. In vorteilhafter Weise kann die Vorrichtung einen Auslass umfassen. Vorzugsweise kann der Auslass eine Öffnung für die Flüssigkeit sein, wobei der Auslass so ausgestaltet sein kann, dass er mit dem ausschließlich einen nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich des Objektträgers in der Sammelposition in einer Fluidverbindung steht. Dadurch ist die Flüssigkeit durch den Auslass aus der Vorrichtung entnehmbar, insbesondere absaugbar. In vorteilhafter Weise kann die Flüssigkeit durch den Auslass vollständig entnommen werden. In besonders vorteilhafter Weise kann die Flüssigkeit durch den Auslass vollständig abgesaugt werden.
Zum Auslenken des Objektträgers aus der Einwirkposition in die Sammelposition ist es von weiterem Vorteil, dass die Vorrichtung ein Widerlager umfasst. Das Widerlager ist mit dem Objektträger, vorzugsweise auf der der Auflage abgewandten Oberfläche, in Kontakt bringbar. Somit unterstützt der Kontakt des Objektträgers mit dem Widerlager das Auslenken des Objektträgers aus der Einwirkposition in die Sammelposition.
Bei der erfindungsgemäßen Vorrichtung kann es sich um eine Inkubationskammer für Objektträger, insbesondere eine Inkubationskammer für immunohistochemische Untersuchungen, in s/fu-Hybridisierungsuntersuchungen, Gewebefärbungen, Biochipfärbungen oder dgl. des biologischen Materials, handeln. Das biologische Material können Gewebe- oder Zellschnitte sein. Solche Gewebeschnitte können beispielsweise Schnitte von Tumorgeweben sein. Bei einer Realisierung der erfindungsgemäßen Vorrichtung als Inkubationskammer kann diese einen Grundkörper mit einer Bodenplatte und eine Auslenkeinrichtung mit einem Wippengehäuse und einer erfindungsgemäßen Wippe zur dreidimensionalen Auslenkung des in der Kammer befindlichen Objektträgers umfassen.
Die Inkubationskammer kann vorteilhafterweise einen Deckel umfassen, sodass im geschlossenen Zustand im Inneren der Kammer eine gesättigte Atmosphäre erzeugbar ist. Der Deckel kann ein Lesefenster umfassen, welches so angeordnet ist, dass es im geschlossenen Zustand der Kammer dem Beschriftungsfeld des Objektträgers zugeordnet ist, sodass ein Barcode durch das Lesefenster lesbar ist. Insbesondere ist das Material des Barcode-Lesefensters so ausgestaltet, dass es Laser- oder Infrarot-Strahlen zum Lesen des Barcodes auf dem Beschriftungsfeld nicht oder nur geringfügig ablenkt, sodass die Barcode-Lesbarkeit durch das Barcode-Lesefenster Bestand hat. Vorzugsweise sind der Grundkörper und das Wippengehäuse der Inkubationskammer als separate Bauteile konstruiert, welche durch den Deckel beim Verschließen der Kammer relativ zueinander arretierbar sind. Insbesondere kann das Wippengehäuse auf einer Grundplatte befestigbar ausgebildet sein, sodass der Grundkörper der Kammer durch das Verschließen des Deckels nicht nur relativ zu dem Wippengehäuse sondern auch relativ zu der
Grundplatte arretierbar ist. Die Grundplatte kann vorzugsweise die Basisplatte eines Instruments, insbesondere eines Färbeautomaten, sein, auf welcher der Grundkörper so arretierbar ist, dass die Plattform bzw. Bodenplatte der Inkubationskammer mit einem Temperaturelement des Färbeautomaten in Verbindung gebracht werden kann. Das Temperaturelement kann ein Kühlelement und/oder eine Wärmequelle sein. Insbesondere kann das Temperaturelement so ausgestaltet sein, dass es die Plattform bzw. Bodenplatte sowohl aufheizen als auch abkühlen kann. Die Wärmequelle kann eine Heizplatte oder ein Heizblock sein. Die gesättigte Atmosphäre in der geschlossenen Inkubationskammer ist insbesondere durch Wärmeeinwirkung, vorzugsweise durch Wärmeeinwirkung über die Plattform, erzeugbar. Insbesondere ist die gesättigte Atmosphäre durch das geringfügige Verdampfen der Einwirklösungen und/oder durch das Verdampfen einer nichtreaktiven Flüssigkeit erzeugbar. Die nicht-reaktive Flüssigkeit kann zum Beispiel Wasser sein, welches zusätzlich in die Inkubationskammer einbringbar ist. So ist durch das Erhitzen der Plattform bzw. Bodenplatte eine nahezu 100-prozentige, gesättigte Dampfatmosphäre erzeugbar.
Durch die Erzeugung der Dampfatmosphäre in der geschlossenen Inkubationskammer kann eine weitere Verdampfung der im Kapillarspalt benötigten Einwirklösungen weitestgehend verhinderbar sein. Nichtsdestotrotz kann die Inkubationskammer ein oder mehrere Flüssigkeitsreservoire umfassen, welche durch geringfügiges Überfüllen des Kapillarspalts mit Einwirklösung befüllbar sind und in Fluidkommunikation mit der Einwirklösung im Kapillarspalt verbleiben. Aus diesen Reservoirs ist ein möglicher, geringer Verdampfungsverlust der Einwirklösung im Kapillarspalt ausgleichbar. Die Gesamtmenge der wertvollen und teuren Einwirklösungen ist durch die erzeugte Dampfatmosphäre in der erfindungsgemäßen Inkubationskammer verringerbar, da insgesamt geringere Verdunstungs-A/erdampfungsverluste zu verzeichnet werden können. Insbesondere bei Reaktionsschritten, die hohe Temperaturen erfordern. Zum Beispiel sind während der Vorbehandlung von Gewebeschnitten zur späteren immunohistochemischen Färbung während des Entwachsens/Deparaffinisierens oder während des Antigen-Retrievals üblicherweise Temperaturen von über 100°C erforderlich. Weiterhin ermöglicht die erzeugte Dampfatmosphäre vorteilhafterweise, dass das voranstehend beschriebene, wiederholte Auslenken
des Objektträgers aus der Einwirkposition in die Sannnnelposition selbst in einer Hochtemperatur-Phase der Untersuchungsmethode durchgeführt werden kann, ohne dass der Wasseranteil der wertvollen und für die biochemischen Reaktionen benötigten Einwirklösungen unvorteilhaft schnell verdampft.
Die erfindungsgemäße Vorrichtung kann als Inkubationskammer ausgebildet sein, umfassend:
(a) einen Grundkörper mit einer Plattform zur Aufnahme eines mindestens in etwa dreieckigen, vorzugsweise in etwa viereckigen, das biologische Material umfassenden Objektträgers;
(b) eine mit dem Grundkörper in eine form- und kraftschlüssige Verbindung verbringbare Auslenkeinrichtung durch welche der Objektträger aus einer relativ zur Plattform des Grundkörpers parallelen Einwirkposition in eine relativ zur Plattform des Grundkörpers nicht-parallele Sammelposition auslenkbar ist, wobei ausschließlich ein Eckbereich des Objektträgers in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehoben ist, derart, dass sich die Flüssigkeit in diesem Eckbereich sammelt, und
(c) einen sowohl mit dem Grundkörper als auch der Auslenkeinrichtung in form- und kraftschlüssiger Weise verschließbaren Deckel,
wobei das Verschließen des Deckels die form- und kraftschlüssige Verbindung zwischen dem Grundkörper und der Auslenkeinrichtung vermittelt.
In der erfindungsgemäßen Vorrichtung kann der Grundkörper einteilig oder mehrteilig ausgestaltet sein. Beispielsweise kann ein einteiliger Grundkörper neben der Plattform auch ein Flüssigkeitsreservoir umfassen, welches als Auffang- bzw. Überlaufbecken für im Überschuss eingebrachte Flüssigkeiten ausgestaltet sein kann. Weiterhin kann der einteilige Grundkörper ein Kupplungselement umfassen, welches ein Verbringen des Grundkörpers in eine form- und kraftschlüssige Verbindung mit einem Halteblock des Deckels ermöglichen kann.
Die erfindungsgemäße Vorrichtung kann einen mehrteiligen Grundkörper umfassen, welcher form- und kraftschlüssig aus mehreren Einheiten zusammengesetzt sein kann. Beispielsweise kann ein mehrteiliger Grundkörper aus einer als Auffang- oder Überlaufbecken ausgestalteten ersten Einheit, einer als
Plattform ausgestalteten zweiten Einheit und einer als Kupplungselement ausgestalteten dritten Einheit zusammensetzbar sein.
Wie bereits erwähnt kann die Plattform als eine Bodenplatte der Vorrichtung ausgebildet sein, wobei die Bodenplatte aus einem inerten Material bestehen kann oder wenigstens auf der dem Objektträger zugewandten Seite mit einem inerten Material beschichtet sein kann. Das inerte Material gewährleistet, dass die Einwirklösungen ausschließlich mit dem auf den Objektträger aufgebrachten biologischen Material reagieren. Insbesondere kann die Bodenplatte als eine inerte Folie aus Polyimid, insbesondere Kapton, oder Polyetherketon (PEEK) ausgebildet sein oder, vorzugsweise, eine inert beschichtete Aluminiumplatte sein.
Die Bodenplatte kann derart ausgestaltet sein, dass sie eine möglichst effiziente Temperaturübertragung zwischen einem unter der Bodenplatte befindlichen Temperaturelement und der Flüssigkeit im Kapillarspalt zwischen der Bodenplatte und der Aktiv-Fläche des Objektträgers ermöglicht. Insbesondere kann die Bodenplatte so ausgestaltet sein, dass Temperaturänderungen des Temperaturelements mit minimaler Verzögerung an die Flüssigkeit im Kapillarspalt weitergeleitet werden können. Vorteilhafterweise kann diese Verzögerung (Temperaturverzögerung) sowohl beim Aufheizen als auch beim Abkühlen zwischen 1 und 5°C/Sekunde betragen. Um die erfindungsgemäße Beschleunigung der oben genannten chemischen oder biochemischen Reaktionen zu gewährleisten, sollte die Temperaturverzögerung einen Wert von 5°C/Sekunde nicht überschreiten.
Einerseits kann die Temperaturleitfähigkeit der Plattform bzw. Bodenplatte durch die Materialstärke der Bodenplatte beeinflussbar sein, andererseits durch die Materialbeschaffenheit an sich. In manchen Ausführungsformen der erfindungsgemäßen Vorrichtung kann die Materialstärke im Bereich der Bodenplatte zwischen 0,01 mm und 2 mm betragen. Vorteilhafterweise kann die Materialstärke im Bereich der Bodenplatte zwischen 0,03 mm und 0,8 mm betragen. Besonders vorteilhafterweise kann die Materialstärke im Bereich der Bodenplatte zwischen 0,3 mm und 0,6 mm, insbesondere 0,55 mm, betragen. In Ausführungsformen, in denen die Bodenplatte als eine inerte Folie aus Polyimid,
insbesondere Kapton, Polyetherketon (PEEK) oder einem anderen inerten Material ausgebildet sein kann, sollte eine Materialstärke der Folie von 0,1 mm nicht überschritten werden. Zudem sollte die Plattform bzw. Bodenplatte eine hohe Ebenheit aufweisen, um einerseits einen parallelen Kapillarspalt zwischen den Objektträger und der Plattform bzw. Bodenplatte herstellen zu können, und andererseits eine möglichst formschlüssige Verbindung zu dem Temperaturelement herstellen zu können, um somit die Temperaturübertragung zwischen der Plattform bzw. Bodenplatte und der im Kapillarspalt befindlichen Flüssigkeit vorteilhaft beeinflussen zu können.
Ebenheit ist gemäß„Toleranzmanagement" von Prof. Dr. Bernd Klein, Universität Kassel, FB15, FG Leichtbau-Konstruktion, Mönchbergstr. 7, 34109 Kassel, 201 1 , Seiten 40-45, deren Offenbarungsgehalt in vorliegende Anmeldung vollumfänglich mit eingeschlossen wird eine Forderung für eine Fläche „in sich". Die Ebenheitsabweichung ist der größte Abstand zwischen einer anliegenden Ebene und der realen Fläche. Die Toleranzzone wird begrenzt durch zwei parallele Ebenen im Abstand tE. Sämtliche Punkte der realen Fläche oder abgeleiteten Mittelebene liegen zwischen den zwei parallelen Ebenen mit dem Toleranzmaß Abstand tE.
Beispielsweise kann die reale Fläche der Plattform bzw. Bodenplatte fertigungsbedingte Unebenheiten aufweisen. In vorteilhafter Weise kann die Plattform bzw. Bodenplatte so ausgestaltet sein, dass sie keine Unebenheiten aufweist, deren Höhe die Ausbildung des parallelen Kapillarspalts verhindern könnte. Insbesondere kann die Plattform bzw. Bodenplatte so ausgestaltet sein, dass sie Erhebungen von weniger als 0,1 mm, insbesondere weniger als 0,05 mm, insbesondere weniger als 0,03 mm aufweist.
Materialien aus denen die Plattform bzw. Bodenplatte erfindungsgemäß gefertigt werden können, umfassen inerte temperaturleitende Materialien und/oder Materialien, welche mit einer inerten Beschichtung versehen sein können. Beispielsweise kann die Plattform bzw. Bodenplatte aus Aluminium, Edelstahl, einer Kupferlegierung oder aus einem Eisenblech gefertigt werden. Insbesondere kann die Plattform bzw. Bodenplatte aus Aluminium bestehen, insbesondere aus
eloxiertem Aluminium. Dem Fachmann ist hierbei bekannt, dass die durch das Eloxal-Verfahren erzeugte oxidische Schicht durch eine Umwandlung der obersten Schicht des Aluminiums in ein Oxid bzw. Hydroxid bereitgestellt wird. Der hier verwendete Begriff der„Beschichtung" ist somit im weitesten Sinne zu verstehen und schließt sowohl eine durch Eloxal-Verfahren erzeugte Schicht des Materials der Plattform bzw. Bodenplatte als auch eine durch ein Überzug verfahren, beispielsweise ein galvanisches Überzugverfahren, auf dem Material der Plattform bzw. Bodenplatte niedergeschlagene Beschichtung ein. In manchen Ausführungsformen kann die gesamte Vorrichtung aus dem Material der Plattform bzw. Bodenplatte, insbesondere aus Aluminium, gebildet sein. In anderen Ausführungsformen, kann die Plattform bzw. Bodenplatte in ein anderes Material eingearbeitet sein. Beispielsweise, können Teile der Vorrichtung, insbesondere ein Grundkörper der Vorrichtung, aus einem inerten Kunststoff, welcher eine Temperaturbeständigkeit von mindestens 130°C aufweist, hergestellt werden, in welche die Plattform bzw. Bodenplatte eingearbeitet ist. Beispielhafte inerte Kunststoffe mit der erforderlichen Temperaturbeständigkeit sind Polyetherketon (PEEK) oder Polyoxymethylen (POM). Allerdings sei bemerkt, dass bei der Kombination verschiedener Materialien besonders darauf zu achten ist, dass die Vorrichtung weiterhin die voranstehend beschriebene Ebenheit der Plattform bzw. Bodenplatte, also die voranstehend beschriebene Ebenheitszone der Vorrichtung, umfassen kann.
Weiterhin sollte bei der Wahl aller Materialien der Vorrichtung bzw. Inkubationskammer besonders berücksichtigt werden, dass die Materialien unter den Betriebsbedingungen der Vorrichtung geeignete Beständigkeit aufweisen. Wie bereits erwähnt sollte das Material der Vorrichtung einerseits Beständigkeit gegenüber den teils hochreaktiven Einwirklösungen aufweisen, andererseits Beständigkeit unter stark schwankenden Temperatureinwirkungen gewährleisten.
In der erfindungsgemäßen Vorrichtung kann das Volumen des Kapillarspalts überraschend gering gehalten werden. Somit können die oben beschriebenen Techniken und Methoden zur Untersuchung des auf den Objektträger aufgebrachten biologischen Materials mit einer überraschend geringen Menge der
zu verwendenden Flüssigkeiten erfolgreich und effizient durchgeführt werden. Zum Beispiel kann die Vorrichtung so ausgestaltet sein, dass der Kapillarspalt mit einem Flüssigkeitsvolumen von wenigstens 50 μΙ so befüllbar ist, dass ein sich über die gesamte Aktiv-Fläche des Objektträgers erstreckender paralleler Kapillarspalt ausbildbar ist. Generell sollte das benötigte Flüssigkeitsvolumen zum Füllen des Kapillarspalts zwischen 50 μΙ und 400 μΙ, vorteilhafterweise zwischen 50 μΙ und 150 μΙ, liegen.
Zudem kann die Bodenplatte der erfindungsgemäßen Vorrichtung so ausgestaltet sein, dass sie eine effektive Begrenzung des Kapillarspaltvolumens herbeiführen kann. Insbesondere kann die Bodenplatte eine Kante aufweisen, welche vorzugsweise an das Auffang- bzw. Überlaufbecken angrenzen kann. Durch die oben erwähnten Adhäsionskräfte im Kapillarspalt kann diese Kante bei Befüllung des Kapillarspalts mit einem adäquaten Flüssigkeitsvolumen eine Grenzlinie für den sich ausbreitenden Flüssigkeitsmeniskus bilden. Dieser Effekt kann dadurch verstärkt werden, dass die Kante der Bodenplatte als eine Erhebung ausgestaltet ist. Ein Flüssigkeitsvolumen, welches das vorgesehene Volumen des Kapillarspalts nicht wesentlich überschreitet, stellt hier ein adäquates Flüssigkeitsvolumen dar. Zudem kann die Plattform bzw. Bodenplatte eine Überlauflippe umfassen, um etwaige überschüssige Flüssigkeit aus dem Kapillarspalt in das Auffang- bzw. Überlaufbecken zu leiten.
Das Auffang- bzw. Überlaufbecken der Vorrichtung kann ebenso dafür verwendet werden eine geringe Menge einer nicht reaktiven Flüssigkeit, zum Beispiel Wasser, in der Inkubationskammer bereitzustellen, sodass die Dampfatmosphäre größtenteils durch das Verdampfen bzw. Verdunsten der nicht-reaktiven Flüssigkeit erzeugt werden kann. In besonders vorteilhafter Weise wird durch eine Kante der Bodenplatte eine Grenzlinie für den Meniskus der im Kapillarspalt befindlichen Flüssigkeit definiert. In der erfindungsgemäßen Vorrichtung kann der Kapillarspalt durch die Kante der Bodenplatte begrenzt werden, sodass sich eine Abrisskante für die im Kapillarspalt befindliche Flüssigkeit bilden kann.
Wie bereits erwähnt, kann die präzise Eingrenzung der sich im Kapillarspalt ausbreitenden Flüssigkeit innerhalb der Vorrichtung bzw. Inkubationskammer das
Kontaminationsrisiko signifikant verringern. Zum Beispiel, kann gewährleistet werden, dass nur die Aktiv-Fläche des Objektträgers mit den jeweiligen Einwirklösungen in Kontakt tritt. Eine Kontamination des Beschriftungsteils des Objektträgers kann dagegen vermieden werden. Dies kann das Kontaminationsrisiko mit möglicherweise mutagenen, carcinogenen, oder anderweitig giftigen Flüssigkeiten und Reagenzien für einen Benutzer der Vorrichtung und Handhaber der Objektträger wesentlich verringern.
Die erfindungsgemäße Vorrichtung kann vorzugsweise eine verschließbare Inkubationskammer sein, in die ein Objektträger mit biologischem Material eingebracht und erfindungsgemäß ausgelenkt werden kann, sodass alle Prozessschritte eines Untersuchungsprotokolls, zum Beispiel eines Untersuchungsprotokolls für eine immunohistochemische (IHC) Gewebefärbung, eine in situ Hybndisierungsuntersuchung oder eine BioChip-Färbung, möglichst effizient und kostengünstig durchgeführt werden können. Insbesondere können die in den jeweiligen Prozessschritten notwendigen Einwirklösungen in die Inkubationskammer eingebracht aber auch vollständig wieder entnommen werden, sodass der Objektträger während des gesamten Protokolls in der Inkubationskammer verbleiben kann. Dadurch können besonders mechanische Einwirkungen auf das biologische Material während der Durchführung des Untersuchungsprotokolls vermieden werden. Beispielsweise können unvorteilhafte Vibrationen vermieden werden. Zudem können besonders unvorteilhafte mechanische Abrasionen des biologischen Materials vom Objektträger durch manuelles oder automatisiertes Transportieren des Objektträgers während des Untersuchungsprotokolls weitestgehend ausgeschlossen werden.
Durch die erfindungsgemäße Ausgestaltung der Inkubationskammer kann zudem die Beseitigung der in der Kammer verwendeten Einwirklösungen/Reagenzien vorteilhaft erleichterbar sein. Insbesondere kann die Kammer das vollständige Entnehmen, insbesondere Absaugen, einer in der Kammer verwendeten Einwirklösungen ermöglichen, ohne dass diese mit anderen in vorherigen oder darauffolgenden Prozessschritten verwendeten Lösungen vermischt werden. Dadurch kann beispielsweise eine vorgeschriebene Trennung und/oder Beseitigung
der entstehenden chemischen Abfälle vorteilhaft gewährleistet werden. Zudem können dafür geeignete Einwirklösungen effektiv recycelt werden.
Die Tatsache, dass der Objektträger während aller Prozessschritte in der Kammer verbleiben kann, kann außerdem das Kontaminationsrisiko der unmittelbaren Umgebung, insbesondere für einen Benutzer der Kammer mit einer der Einwirklösungen wesentlich verringern. Selbst unter Umständen in denen der Kapillarspalt der Kammer überfüllt werden sollte, bleibt das Kontaminationsrisiko für den Benutzer gering, da die überschüssige Flüssigkeit in einem Überlaufbecken gesammelt wird. Indem die Plattform bzw. Bodenplatte so ausgestaltet sein kann, dass überschüssige Flüssigkeit vorzugsweise in das Überlaufbecken geleitet werden kann, kann weiterhin gewährleistet werden, dass ausschließlich die Aktiv- Fläche des Objektträgers, nicht aber der Beschriftungsteil mit den reaktiven Flüssigkeiten benetzt wird. Dadurch kann das Kontaminationsrisiko für den Benutzer weiter verringert werden. Zudem kann durch das Sammeln überschüssiger Flüssigkeit im Überlaufbecken eine Ausbreitung der in die Kammer eingebrachten Flüssigkeiten in die Auslenkeinrichtung vermieden werden. Dadurch kann vermieden werden, dass die Auslenkeinrichtung unvorteilhaften Auswirkungen der Flüssigkeiten ausgesetzt sein kann. Zudem kann zeitaufwendiges Reinigen der Auslenkeinrichtung auf ein Minimum reduziert werden, was neben der offensichtlichen Zeitersparnis weiterhin den Vorteil haben kann vorzeitigem Verschleiß entgegenwirken.
Wie bereits beschrieben kann die erfindungsgemäße Vorrichtung einen Auslass für die Flüssigkeit umfassen, welcher mit dem ausschließlich einen nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich des Objektträgers in der Sammelposition in einer Fluidverbindung steht. Dadurch ist die Flüssigkeit durch den Auslass aus der Vorrichtung entnehmbar. In einer erfindungsgemäßen Vorrichtung, die als Inkubationskammer ausgestaltet sein kann, kann der Auslass als ein durch den Deckel der Kammer hindurchgeführter Absaugstutzen ausgebildet sein. Der Absaugstutzen kann so im Deckel verankert sein, dass er beim Schließen des Deckels an eine vorbestimmte Position der Inkubationskammer verbringbar ist, die dem Eckbereich des Objektträgers zugeordnet ist. Insbesondere kann der Absaugstutzen so konstruiert sein, dass er im geschlossenen Zustand der
Inkubationskammer mit dem in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich des Objektträger eine form- und kraftschlüssige Verbindung eingehen kann und/oder dem Objektträger ein weiteres Widerlager bieten kann, welches die Kippbewegung des Objektträgers in die Sammelposition unterstützt. Vorzugsweise kann der Absaugstutzen aus einem verformbaren Materialwie zum Beispiel Gummi oder Silikon ausgebildet sein, sodass die form- und kraftschlüssige Verbindung des Absaugstutzens mit dem Objektträger dicht ist. Somit kann sichergestellt werden, dass ein Unterdruck in dem Absaugstutzen erzeugbar ist. Um die Fluidverbindung zwischen der im Kapillarspalt befindlichen Flüssigkeit und der Öffnung des durch den Absaugstutzen verlaufenden Absaugkanals zu gewährleisten, kann zumindest ein Teilbereich dieser Absaugöffnung über die dem Absaugstutzen zugewandte Fläche des Objektträgers hinausragen. Vorteilhafterweise kann der Absaugstutzen so in der Inkubationskammer angeordnet sein, dass die Absaugöffnung die Ecke des in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereichs des Objektträgers umschließt.
Beispielsweise kann das auf den Objektträger treffende Ende des Absaugstutzens Trichter- bzw. Trompeten-ähnlich ausgestülpt sein, sodass der Absaugstutzen durch das Schließen des Deckels der Inkubationskammer in eine form- und kraftschlüssige Verbindung mit dem Eckbereich des Objektträgers verbringbar ist. Das Trichter- bzw. Trompeten-ähnlich ausgestülpte Ende des Absaugstutzens kann so ausgestaltet sein, dass einerseits eine Fluidverbindung zwischen der im Kapillarspalt befindlichen Flüssigkeit und der Absaugöffnung des Absaugstutzens erzeugbar ist und die form- und kraftschlüssige Verbindung andererseits die Erzeugung eines Unterdrucks im Absaugstutzen ermöglichen kann.
Alternativ kann das auf den Objektträger treffende Ende des Absaugstutzens mit einer Aussparung versehen sein, welche den in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich des Objektträgers in einer form- und kraftschlüssigen Verbindung aufnehmen kann. Zudem kann die Ecke des Objektträgers in die Absaugöffnung des Absaugstutzens hineinragen, sodass durch das Schließen des Deckels der Inkubationskammer einerseits eine Fluidverbindung zwischen der im Kapillarspalt befindlichen Flüssigkeit und der Absaugöffnung des
Absaugstutzens erzeugbar ist und die form- und kraftschlüssige Verbindung andererseits die Erzeugung eines Unterdrucks im Absaugstutzen ermöglichen kann. Alle geometrischen Ausgestaltungen eines geeigneten Absaugstutzens, welche eine form- und kraftschlüssige Verbindung des Absaugstutzens mit dem Objektträger ermöglichen, sodass im Absaugstutzen ein Unterdruck erzeugbar ist, sind denkbar. Der Auslass kann so ausgestaltet sein, dass er mit wenigstens einem Absaugelement verbindbar ist. Insbesondere kann das Absaugelement Teil eines Absaugsystems zur getrennten Entsorgung der in den Kapillarspalt eingebrachten Flüssigkeiten sein. Je nach Ausgestaltung des Absaugstutzens kann der Absaugkanal ein Absaugelement, insbesondere eine Pipettenspitze oder eine Pipettiernadel, aufnehmen, sodass die Flüssigkeit durch den Absaugstutzen und über die Pipettenspitze oder Pipettiernadel aus der Inkubationskammer entnehmbar bzw. absaugbar ist. Alternativ kann das Absaugelement ein Absaugschlauch sein. Der Absaugkanal kann durch den Deckel der Inkubationskammer führen. In solchen Ausführungsformen ist der Absaugkanal meist geradlinig ausgestaltet.
In alternativen Ausgestaltungen kann der Absaugkanal eine Biegung umfassen, welche es ermöglicht die Flüssigkeit nicht durch den Deckel der Inkubationskammer sondern durch eine Seitenwand des Grundkörpers aus der Inkubationskammer zu entnehmen bzw. abzusaugen. Insbesondere kann beispielsweise der Absaugkanal zu einer Durchführung in einer Seitenwand des Grundkörpers führen. Die Durchführung kann so ausgestaltet sein, dass sie einen Absaugschlauch aufnehmen kann. Durch das Schließen des Deckels der Inkubationskammer kann der Absaugkanal in eine kraft- und formschlüssige Verbindung mit dem Absaugschlauch gebracht werden.
In Ausführungsformen in denen der Absaugkanal durch den Deckel der Inkubationskammer führt und mit einem Absaugschlauch verbunden werden kann,
muss der Absaugschlauch so flexibel bzw. beweglich ausgebildet sein, dass der Deckel der Inkubationskammer ohne Einschränkung vollständig geöffnet und geschlossen werden kann. In Ausführungsformen in denen der Absaugkanal durch eine Seitenwand des Grundkörpers führt und mit einem Absaugschlauch verbunden werden kann, ist eine flexible bzw. bewegliche Ausgestaltung des Absaugschlauches nicht zwingend erforderlich. Dies kann konstruktive Vorteile mit sich bringen. Insbesondere wenn die erfindungsgemäße Vorrichtung als Inkubationskammer für die Verwendung in einem Färbeautomaten ausgestaltet ist.
In der erfindungsgemäßen Vorrichtung kann der Objektträger in eine relativ zur Plattform nicht-parallele Mischposition auslenkbar sein. Die Mischposition kann eine Position zwischen der Einwirkposition und der Sammelposition sein, in welcher der Raum zwischen Objektträger und Plattform eine Strömungsverbindung zwischen einer Mischzone der Vorrichtung und dem ausschließlich einen in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich des Objektträgers bilden kann. Reagenzien, welche in eine Mischzone eingebracht werden, während sich der Objektträger der Sammelposition befindet, können durch die Strömungsverbindung in den nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich fließen, sobald der Objektträger in die Mischposition ausgelenkt wird. Durch wiederholtes Auslenken des Objektträgers aus der Mischposition in die Sammelposition können die Reagenzien vollständig vermischt werden, um so die Flüssigkeit zum Benetzen des biologischen Materials bereitzustellen.
Dies ist besonders vorteilhaft, da die Flüssigkeit zum Benetzen des biologischen Materials eine hoch-reaktive und kurzlebige Flüssigkeit sein kann, welche aus zwei oder mehreren Komponenten unmittelbar vor ihrer Verwendung hergestellt werden muss. Beispielsweise kann die Flüssigkeit eine Substratlösung für eine enzymatische Reaktion sein. Allerdings sind solche Substratlösungen häufig instabil und können in kurzer Zeit zerfallen und sind oft nur in einem kurzen Zeitfenster nach ihrer Herstellung verwendbar. Wegen ihrer Kurzlebigkeit (geringen Haltbarkeit)
sollten langwierige Mischverfahren und/oder Standzeiten solcher Flüssigkeiten nach ihrer Herstellung vermieden werden.
Mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung können solche Flüssigkeiten direkt in der Vorrichtung und damit unmittelbar vor ihrer Verwendung vorteilhaft bereitgestellt werden. Beispielsweise können eine 3,3'-Diaminobenzidine (DAB) Lösung und eine Wasserstoffperoxid-enthaltende Pufferlösung in die Mischzone eingebracht werden, um dann, mittels wiederholten Auslenkens des Objektträgers aus der Sammelposition in die Mischposition in eine DAB-Peroxidase Substratlösung zum Benetzen des biologischen Materials, gemischt zu werden. Durch das weitere Auslenken in die Einwirkposition kann die DAB-Peroxidase Substratlösung unmittelbar nach ihrer Herstellung mit dem biologischen Material in Kontakt gebracht werden. Zudem kann die Mischposition vorteilhafterweise so gewählt werden, dass die zu vermischenden Reagenzien während des Mischvorgangs nicht mit dem biologischen Material in Kontakt kommen. Der Fachmann wird verstehen, dass bei einem Objektträger auf den das biologische Material großflächig aufgebracht ist, eine steilere, näher an der Sammelposition liegende Mischposition zu wählen wäre, wenn ein Kontakt der Reagenzien mit dem biologischen Material verhindert werden soll. In diesem Fall kann es erforderlich sein, die Anzahl der Auslenkungen zwischen der Mischposition und der Sammelposition zu erhöhen, um ein vollständiges Mischen der Reagenzien zu gewährleisten. Andererseits, kann die Mischposition weiter von der Sammelposition entfernt liegen, je weiter entfernt das biologische Material von dem in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich auf der Aktiv-Fläche des Objektträgers aufgebracht ist. Um einen Kontakt der zu mischenden Reagenzien mit dem biologischen Material zu verhindern, kann die Mischzone so angeordnet sein, dass sie einen ersten Rand des Objektträgers zugeordnet sein kann, wobei der erste Rand einerseits Teil des nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereichs des Objektträgers ist und andererseits weiter von dem biologischen Material entfernt ist als der zweite Rand des nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereichs.
Die voranstehende Aufgabe ist zudem durch ein Verfahren mit den Merkmalen des Patentanspruchs 15 gelöst. Insbesondere ist erkannt worden, dass unter Verwendung der erfindungsgemäßen Vorrichtung ein Verfahren zum Benetzen von biologischem Material mit wenigstens einer Flüssigkeit durchführbar ist, welches wenigstens das Einbringen und Entnehmen der zum Benetzen notwendigen Flüssigkeiten optimiert, und somit die voranstehende Aufgabe löst.
Weiterhin wird ein Verfahren zum Mischen von mindestens zwei flüssigen Reagenzien unter Verwendung der erfindungsgemäßen Vorrichtung bereitgestellt. Dieses weitere Verfahren kann die folgenden Schritte umfassen:
(a) Einbringen der flüssigen Reagenzien in eine Mischzone der Vorrichtung während sich der Objektträger in der Sammelposition befindet;
(b) Auslenken des Objektträgers aus der Sammelposition in eine relativ zur Plattform nicht-parallele Mischposition, wobei die Mischposition eine Position zwischen der relativ zur Plattform parallelen Einwirkposition und der relativ zur Plattform nicht-parallelen Sammelposition ist und wobei sich, in der Mischposition, der Raum zwischen Objektträger und Plattform eine Strömungsverbindung zwischen der Mischzone und einem ausschließlich einen in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich des Objektträgers bilden kann durch welchen die Reagenzien in den Eckbereich fließen können,
(c) vollständiges Mischen der Reagenzien durch wiederholtes Auslenken des Objektträgers aus der Mischposition in die Sammelposition, wobei durch das vollständige Mischen der Reagenzien eine Flüssigkeit zum Benetzen des biologischen Materials bereitgestellt wird, und
(d) Auslenken des Objektträgers in die Einwirkposition, sodass die Flüssigkeit aus Schritt (c) das biologische Material benetzen kann. Wie bereits voranstehend erläutert kann die nicht-parallele Mischposition so wählbar sein, dass die Reagenzien während der Schritte (a) bis (c) des Verfahrens nicht mit dem biologischen Material in Kontakt treten. Beispielsweise können die mindestens zwei Reagenzien eine 3,3'-Diaminobenzidine (DAB) Lösung und eine Wasserstoffperoxid-enthaltende Pufferlösung sein, sodass die durch das
vollständige Mischen der beiden Reagenzien bereitgestellte Flüssigkeit eine DAB- Peroxidase Substratlösung sein kann.
Es wird darauf hingewiesen, dass die zuvor erörterten Merkmale zu der erfindungsgemäßen Vorrichtung auch eine verfahrensmäßige Ausprägung haben können. Eine Kombination dieser Merkmale mit den die Verfahrensansprüche betreffenden Merkmalen ist von Vorteil und ausdrücklich Teil der Offenbarung.
Es gibt nun verschiedene Möglichkeiten, die Lehre der vorliegenden Erfindung in vorteilhafter Weise auszugestalten und weiterzubilden. Dazu ist einerseits auf die dem Vorrichtungsanspruch 1 und dem Verfahrensanspruch 18 nachgeordneten Ansprüche und andererseits auf die nachfolgende Erläuterung bevorzugter Ausführungsbeispiele der Erfindung anhand der Zeichnung zu verweisen, die auch zur Beschreibung der erfindungsgemäßen Verfahren dienen. In Verbindung mit der Erläuterung der bevorzugten Ausführungsbeispiele der Erfindung anhand der Zeichnung werden auch im Allgemeinen bevorzugte Ausgestaltungen und Weiterbildungen der Lehre erläutert. In den Zeichnungen zeigen
Fig. 1 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung ein
Ausführungsbeispiel einer erfindungsgemäßen Vorrichtung, bei der sich der Objektträger in der Sammelposition befindet,
Fig. 2 die erfindungsgemäße Vorrichtung gemäß Figur 1 , bei der sich der
Objektträger in der Einwirkposition befindet,
Fig. 3 die erfindungsgemäße Vorrichtung gemäß Figuren 1 und 2 in geschlossenem Zustand,
Fig. 4 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung ein Auslenkmittel einer erfindungsgemäßen Vorrichtung,
Fig. 5 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung eine
Auslenkeinrichtung einer erfindungsgemäßen Vorrichtung,
Fig. 6 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung einen einteiligen Grundkörper einer erfindungsgemäßen Vorrichtung,
Fig. 7 in einer schematischen Darstellung ein weiteres Ausführungsbeispiel einer erfindungsgemäßen Vorrichtung in geschlossenem Zustand,
Fig. 8 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung ein weiteres
Ausführungsbeispiel einer erfindungsgemäßen Vorrichtung in geschlossenem Zustand,
Fig. 9 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung einen mehrteiligen, insbesondere dreiteiligen Grundkörper in formschlüssiger Verbindung mit einer Auslenkeinrichtung einer erfindungsgemäßen Vorrichtung,
Fig. 10 in einer schematisch perspektivischen Darstellung ein Kupplungselement eines mehrteiligen Grundkörpers einer erfindungsgemäßen Vorrichtung,
Fig. 1 1 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung ein weiteres
Ausführungsbeispiel einer erfindungsgemäßen Vorrichtung, bei der sich der Objektträger in der Sammelposition befindet,
Fig. 12 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung ein Auslenkmittel einer erfindungsgemäßen Vorrichtung,
Fig. 13 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung einen Auslass einer erfindungsgemäßen Vorrichtung,
Fig. 14 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung einen Teil einer erfindungsgemäßen Vorrichtung in einem vergrößerten Ausschnitt,
Fig. 15 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung einen Auslass einer erfindungsgemäßen Vorrichtung, und
Fig. 16 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung ein Absaugsystem, das mit dem Auslass der erfindungsgemäßen Vorrichtung verbindbar ist.
Fig. 17 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung eine Plattform zur
Verwendung in einer als Inkubationskammer ausgestalteten Vorrichtung mit einem mehrteiligen Grundkörper.
Fig. 18 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung eine Plattform zur
Verwendung in einer als Inkubationskammer ausgestalteten Vorrichtung mit einem mehrteiligen Grundkörper.
Fig. 19 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung eine Plattform zur
Verwendung in einer als Inkubationskammer ausgestalteten Vorrichtung mit einem mehrteiligen Grundkörper.
Fig. 20 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung ein weiteres
Ausführungsbeispiel einer erfindungsgemäßen Vorrichtung, bei der sich der Objektträger in der Einwirkposition befindet.
Fig. 21 in einer schematischen, perspektivischen Darstellung ein Deckel mit verlängerten Seitenwänden.
Figur 1 zeigt eine erfindungsgemäße Vorrichtung 1 , welche als Inkubationskammer 1 ' für einen Objektträger 2 ausgestaltet ist. Die Inkubationskammer V umfasst eine Auslenkeinrichtung 3, einen einteiligen Grundkörper 4 mit einer Plattform zur Aufnahme des Objektträgers 2 und einen Deckel 5. Die Plattform liegt in der gezeigten Inkubationskammer 1 ' unter dem Objektträger 2 und ist somit in den Figuren 1 und 2 nicht sichtbar. Die Inkubationskammer V dient zum Benetzen von biologischem Material, welches auf der Aktiv-Fläche des Objektträgers 2 aufgebracht ist, mit wenigstens einer Flüssigkeit und ist besonders für immunohistochemische Untersuchungen, in s/fu-Hybridisierungsuntersuchungen, Gewebefärbungen, Biochipfärbungen oder dgl. des biologischen Materials, insbesondere von Gewebe- oder Zellschnitten, geeignet.
Wie in Figur 1 , gezeigt befindet sich der Objektträger 2 innerhalb der Inkubationskammer 1 ' in eine Sammelposition ausgelenkt, in der ein Eckbereich 6 des Objektträgers 2 nicht oder nur geringfügig angehoben ist, sodass sich eine Flüssigkeit zum Benetzen des auf dem Objektträger 2 aufgebrachten biologischen Materials in diesem Eckbereich 6 sammelt. Die Auslenkeinrichtung 3 umfasst ein Auslenkmittel 7, welches als Wippe 7' ausgestaltet ist, und ein Wippengehäuse 8. Der Objektträger 2 umfasst an einem Ende ein Beschriftungsfeld 9 mit einem Barcode 10 und liegt mit diesem Ende auf der Wippe 7' auf. Die als Inkubationskammer V ausgestaltete, erfindungsgemäße Vorrichtung 1 ist mit offenem Deckel 5 dargestellt, der über einen Halteblock 1 1 an einer dafür vorgesehenen, in Figur 1 nicht-gezeigten, Grundplatte fixiert sein kann. Der Deckel 5 umfasst weiterhin einen Auslass 12, der als Absaugstutzen 12' ausgebildet und im Deckel 5 verankert sein kann. Das auf den Objektträger 2 treffende Ende 13 des Absaugstutzens 12' ist Trichter- bzw. Trompeten-ähnlich ausgestülpt und wird beim Schließen des Deckels 5 auf den Eckbereich 6 des Objektträgers 2 gedrückt, sodass im Absaugstutzen 12' ein Unterdruck erzeugbar ist. In der Sammelposition des Objektträgers 2 steht der Absaugstutzen 12' durch die Verbindung mit dem Objektträger 2 in einer Fluidverbindung mit dem Eckbereich 6, sodass die Flüssigkeit zum Benetzen des biologischen Materials durch den im Absaugstutzen 12' erzeugbaren Unterdruck vollständig absaugbar ist. Weiterhin umfasst der Deckel 5 mehrere Widerlager 14, welche bei geschlossenem Deckel 5 der Inkubationskammer 1 ' mit der der Auflage 24 der Wippe 7' abgewandten Oberfläche des Objektträgers 2 in Kontakt treten können, sodass das Auslenken des Objektträgers 2 aus der Einwirkposition in die Sammelposition unterstützt wird. Im geschlossenen Zustand der Inkubationskammer 1 ' ist in der Kammer eine gesättigte Atmosphäre erzeugbar, insbesondere durch Wärmeeinwirkung, vorzugsweise durch Wärmeeinwirkung über die Plattform bzw. Bodenplatte des Grundkörpers 4. In dem Deckel 5 ist ein Verschluss 15 vorgesehen, durch den der Grundkörper 4 mit der Auslenkeinrichtung 3 verbunden ist. Dazu weist der Verschluss 15 einen Aufnahmebereich 16 für ein Arretierelement 17 auf. Da üblicherweise sowohl das Wippengehäuse 8 als auch der Halteblock 1 1 auf einer Grundplatte befestigt sind, bewirkt der Verschluss 15 beim Verschließen des Deckels 5 nicht nur, dass der
Grundkörper 4 relativ zum Wippengehäuse 8, sondern auch relativ zur Grundplatte arretiert wird. Der Verschluss 15 ist mit einer Greif-Lippe 18 ausgestattet, welche dem Benutzer das Öffnen und Schließen des Deckels 5 erleichtern kann. Alle weiteren konstruktiven Ausgestaltungen eines Deckelverschlusses, die die beschriebenen Funktionen bereitstellen können, sind denkbar.
Durch das Arretieren der Inkubationskammer 1 ' relativ zur Grundplatte kann die Plattform bzw. Bodenplatte des Grundkörpers 4 exakt und vorteilhaft auf einer darunterliegenden Temperaturelement, beispielsweise auf einer Heizplatte oder auf einem Heizblock, positioniert werden. Weiterhin kann die Plattform bzw. Bodenplatte des Grundkörpers 4, je nach Ausgestaltung des Aufnahmebereichs 16 des Verschlusses 15 und des korrespondierenden Arretierelements 17 kraftschlüssig auf dem Temperaturelement positioniert werden. Dies ermöglicht eine effektive und präzise Temperaturübertragung von dem Temperaturelement über die Plattform bzw. Bodenplatte des Grundkörpers 4 in den Kapillarspalt zwischen dem Objektträger 2 und der Plattform bzw. Bodenplatte 34.
Weiterhin umfasst der Deckel 5 der Inkubationskammer V ein Barcode- Lesefenster 19, welches in geschlossenen Zustand dem auf der Wippe 7' aufliegenden Beschriftungsfeld 9 des Objektträgers 2 zugeordnet sein kann, sodass der Barcode 10 auch im geschlossenen Zustand der Inkubationskammer 1 ' durch den Deckel 5 gelesen werden kann. Das Barcode-Lesefenster 19 kann aus einem transparenten Kunststoff bestehen, der die entsprechenden Laser- oder Infrarot- Strahlen zum Lesen des Barcodes nicht oder nur geringfügig ablenkt, sodass die Barcode-Lesbarkeit Bestand hat.
Weiterhin umfasst der Deckel 5 wenigstens eine Durchführung 20 für das Einbringen von Flüssigkeiten in die geschlossene Inkubationskammer V. Beispielsweise erfordert ein Färbevorgang des biologischen Materials den mehrfachen Austausch von Reagenzien. Um zu vermeiden, dass der Deckel 5 für den Reagenzien-Austausch geöffnet werden muss, sind die Reagenzien durch die Durchführung 20 im Deckel 5 seitlich des Objektträgers 2 in die Inkubationskammer 1 ' einbringbar. Um die gesättigte Atmosphäre in der geschlossenen Inkubationskammer V aufrechtzuerhalten, muss die Durchführung 20 einerseits
verschlossen sein, andererseits das Durchstoßen mit einer Pipettenspitze bzw. Pipettiernadel ermöglichen und sich nach dem Einbringen der Flüssigkeit wieder verschließen. Hierzu kann die Durchführung 20 beispielsweise mit einem Silikonverschluß mit Kreuzschlitz versehen sein, welcher sich nach dem Zurückziehen der Pipettenspitze bzw. Pipettiernadel selbstständig wieder schließt. Alternativ kann der Verschluss als verschiebbare Abdeckung ausgestaltet sein, welche sich von der Pipettenspitze bzw. Pipettiernadel zunächst zur Seite schieben lässt und sich nach dem Zurückziehen der Pipettenspitze bzw. Pipettiernadel aufgrund einer elastischen Vorspannung selbstständig wieder schließt. Sollte der Deckel mehrere Durchführungen zum Einbringen von Flüssigkeiten in die geschlossene Inkubationskammer 1 ' aufweisen, so sind die beschriebenen Verschlussmöglichkeiten der Durchführung 20 ebenso für die weiteren Durchführungen denkbar. Figur 2 zeigt die Inkubationskammer 1 ' gemäß Figur 1 , wobei sich der Objektträger 2 in der Einwirkposition befindet. Hierzu wird die nicht-sichtbare Wippe 7' abgesenkt. Figur 3 zeigt die Inkubationskammer V gemäß Figuren 1 und 2 in geschlossenem Zustand. Zur Vermeidung von Wiederholungen betreffend die Figuren 2 und 3 wird auf die Beschreibung von Figur 1 verwiesen.
Figur 4 zeigt das als Wippe T ausgestaltete Auslenkmittel 7 der Auslenkeinrichtung 3. Die Wippe T kann einen Aufnahmebereich 21 für ein Hebemittel, beispielsweise einen Stößel, umfassen. Der Stößel kann in dem Aufnahmebereich 21 über ein Verankerungselement 22, beispielsweise über den Zapfen 22', verankert sein, sodass das als Wippe T ausgestaltete Auslenkmittel 7 von unten nach oben in eine angehobene Position und in eine gekippte Position verbracht werden kann. In der angehobenen Position der Wippe 7' sind wenigstens zwei Eckbereiche des Objektträgers 2 nicht oder nur geringfügig angehoben, wobei der Objektträger 2 in der gekippten Position in der Sammelposition vorliegt. Beim Verbringen in die gekippte Position kann ein als Anstoß-Lippe 23' ausgebildetes Ankerelement 23 der Wippe 7' mit einer korrespondierenden Ankerfläche der Vorrichtung 1 , beispielsweise einer Ankerfläche des Wippengehäuses 8, in Kontakt treten, sodass die Wippe 7' aus der angehobenen Position in die gekippte Position dreht. Die Ankerfläche des Wippengehäuses 8 kann als Materialvorsprung, zum
Beispiel als hervorstehende Kante einer Seitenwand des Wippengehäuses 8 ausgebildet sein, die der Anstoß-Lippe 23' als Anschlag dient. Der auf der Auflage 24 aufliegende Objektträger 2 dreht sich durch das Anheben der Wippe 7' um seine Längsachse und rutscht gleichzeitig etwas zur abgesenkten Seite der Wippe 7'. Eine erste seitliche Wippenwand 25 kann die Rutschbewegung des Objektträgers 2 begrenzen. Die erste Wippenwand 25 ist etwas höher ausgestaltet als die gegenüberliegende, zweite Wippenwand 26, damit sie in der geschlossenen Inkubationskammer 1 ' gegen den Deckel 5 stoßen kann, sollte die Anstoß-Lippe 23' bei besonders starker Neigung der Wippe 7' den Kontakt zu der korrespondierenden Ankerfläche des Wippengehäuses 8 verlieren. Somit kann das Anstoßen der ersten Wippenwand 25 gegen den Deckel 5 ein weiteres Widerlager bilden, welches die Kippbewegung der Wippe 7' und damit das Auslenken des Objektträgers 2 in die Sammelposition unterstützen kann. In Figur 5 ist die Wippe 7' in der gekippten Position in dem Wippengehäuse 8 dargestellt, welches mit dem Grundkörper 4 der Inkubationskammer V verbindbar ist. Die Kippbewegung des Objektträgers 2 ist in der geschlossenen Inkubationskammer V wie voranstehend bereits beschrieben auch durch das Widerlager 14 unterstützbar. Durch das Widerlager 14 kann die Kippbewegung des Objektträgers 2 entgegen der im Kapillarspalt wirkenden Adhäsionskräfte unterstützt werden. Die Wippe 7' ist des Weiteren mit einer Rückwand 27 versehen, die verhindert, dass der Objektträger 2 die vordere Innenwand 28 des Wippengehäuses 8 berührt und sich mit dieser beim Absenken verklemmt. Das Wippengehäuse 8 kann an Fixierpunkten 29 beispielsweise mittels Schrauben an einer Grundplatte eines Instruments oder Automaten befestigt sein. Durch die Befestigung des Wippengehäuses 8 an einer Grundplatte kann der Grundkörper 4 beim Schließen des Verschlusses 15 gegenüber der Grundplatte ortsfest angeordnet sein. Hierzu umfasst das Wippengehäuse 8 ein Positionierelement, das als Vertiefung/Ausbuchtung 30 ausgestaltet ist, und ein korrespondierendes Positionierelement des Grundkörpers 4 aufnehmen kann. Die umlaufenden Wände 31 , 32 und 33 des Wippengehäuses 8 sind so ausgestaltet, dass sie mit einer korrespondierenden Vertiefung des Deckels 5 verbindbar sind.
Um das Verrutschen des Objektträgers 2 auf der Auflage 24 zu begrenzen, können die Innenseiten 31 ' der umlaufenden Wand 31 des Wippengehäuses 8 entsprechend weit voneinander entfernt sein, wie korrespondierende, seitliche Begrenzungselemente des Grundkörpers 4. Ebenso können die Innenseiten der Wippenwände 25 und 26 ein seitliches Verrutschen des Objektträgers 2 begrenzen.
Figur 6 zeigt einen einteiligen Grundkörper 4 der als Inkubationskammer 1 ' ausgestalteten Vorrichtung. Der Grundkörper 4 umfasst die Plattform bzw. Bodenplatte 34, welche aus einem inerten Material besteht, oder wenigstens auf der dem Objektträger 2 zugewandten Seite mit einem inerten Material beschichtet ist. Vorzugsweise ist die Bodenplatte 34 eine inerte Folie aus Polyimid, insbesondere Kapton, oder Polyetherketon (PEEK), oder eine beschichtete Aluminiumplatte. In der Einwirkposition des Objektträgers 2 ist ein Kapillarspalt zwischen dem Objektträger 2 und der Plattform bzw. Bodenplatte 34 ausgebildet, der von der Flüssigkeit zum Benetzen des auf den Objektträger 2 aufgebrachten biologischen Materials ausgefüllt sein kann. Das Auslenken des Objektträgers 2 durch die Auslenkeinrichtung 3 ermöglicht eine gezielte Lenkung der Flüssigkeit in den Eckbereich 6, der einer Absaugstelle 35 des Grundkörpers 4 zugeordnet ist. Durch wiederholtes Auslenken des Objektträgers 2 aus der Einwirkposition in die Sammelposition, ohne dass die Flüssigkeit über den Absaugstutzen 12' aus dem Eckbereich 6 an der Absaugstelle 35 abgesaugt wird, kann die Flüssigkeit im Kapillarspalt durchmischt werden, können Blasen aus dem Kapillarspalt entfernt werden und/oder können die biochemischen Reaktionen im Kapillarspalt beschleunigt werden. Zur Ausbildung des Kapillarspaltes sowie zur Regulierung des Volumens des Kapillarspaltes umfasst der Grundkörper 4 Abstandshalter 36. Die Abstandshalter 36 können relativ zur Plattform bzw. Bodenplatte 34 insbesondere eine Höhe von 0,05 mm bis 0,2 mm aufweisen. Weiterhin umfasst der Grundkörper 4 Begrenzungselemente 37, 38, 39, welche die seitliche Bewegung bzw. das Verrutschen des Objektträgers 2 in der Inkubationskammer 1 ' begrenzen können. Beispielsweise kann das Begrenzungselement 39 verhindern, dass sich der möglicherweise scharfkantige Objektträger 2 beim Verbringen aus der Einwirkposition in die Sammelposition an der inneren Rückwand 40 des
Grundkörpers 4 verklemmen kann, die Auslenkung des Objektträgers 2 beeinträchtigen würde.
Wie bereits erwähnt kann durch das Schließen des Deckels 5 ein unmittelbarer Druck sowohl auf die umlaufenden Wände 41 , 42, 43 des Grundkörpers 4 als auch auf die umlaufenden Wände 31 , 32, 33 des Wippengehäuses 8 ausgeübt werden, welcher in einem mittelbaren Druck auf die Plattform bzw. Bodenplatte 34 des Grundkörpers 4 resultiert. Der mittelbare Druck unterstützt eine möglichst direkte Temperaturübertragung von einem unter der Plattform bzw. Bodenplatte 34 liegenden Temperaturelement auf die Plattform bzw. Bodenplatte 34.
Der Grundkörper 4 umfasst ein als Materialvorsprung 44 ausgebildetes Positionierelement, welches mit der Vertiefung/Ausbuchtung 30 des Wippengehäuses 8 verbindbar ist. Weiterhin umfasst der Grundkörper 4 ein Überlaufbecken 45. Eine Wand des Überlaufbeckens 45 definiert eine Abrisskante 46 für die Flüssigkeit im Kapillarspalt, sodass die Flüssigkeit nur beim Überfüllen des Kapillarspalts in das Überlaufbecken 45 fließen kann.
Weiterhin weist der in Figur 6 gezeigte Grundkörper 4 einen Bereich 47 auf, in den Flüssigkeiten eingebracht werden können. Der Bereich 47 kann, vorzugsweise über den Kapillarspalt, mit dem Auslass 12 der Vorrichtung 1 in Fluidverbindung stehen. Der Grundkörper 4 umfasst eine weitere Ausbuchtung 48, die dem Bereich 47 zugeordnet ist und das Einbringen, beispielsweise das Einpipettieren, einer Flüssigkeit in den Bereich 47 erleichtern kann. Der Bereich 47 kann sich in anderen Ausführungsformen der erfindungsgemäßen Vorrichtung 1 auch an anderen Stellen befinden. Sollte der Bereich 47 allerdings auch als Mischzone 47' in einem erfindungsgemäßen Verfahren fungieren, ist diese so im Grundkörper 4 anzuordnen, dass in einer nicht-parallelen Mischposition des Objektträgers 2 eine Strömungsverbindung zwischen dem Bereich 47 und dem Eckbereich 6 gebildet werden kann. Dadurch können Reagenzien, welche in die Mischzone 47' eingebracht werden und durch die Strömungsverbindung in den Eckbereich 6 fließen, durch wiederholtes Auslenken des Objektträgers 2 aus der Sammelposition in die Mischposition vollständig vermischt werden. Dadurch kann die Flüssigkeit zum Benetzen des biologischen Materials bereitgestellt werden. Beispielsweise
können eine 3,3'-Dianninobenzidine (DAB) Lösung und eine Wasserstoffperoxidenthaltende Pufferlösung in die Mischzone 47' eingebracht werden, sodass durch ein erfindungsgemäßes Mischverfahren eine DAB-Peroxidase Substratlösung zum Benetzen des biologischen Materials direkt in der Inkubationskammer 1 ' hergestellt werden kann.
Figur 7 zeigt die mögliche, zum Objektträger 2 relative Anordnung des Bereichs 47 und der Mischzone 47' in der geschlossenen, als Inkubationskammer 1 ' ausgestalteten, erfindungsgemäßen Vorrichtung 1 in einer schematischen Darstellung. Zur Vereinfachung sind nur ausgewählte Merkmale der Inkubationskammer 1 ', insbesondere des Deckels 5, des Objektträgers 2 und des Grundkörpers 4, dargestellt. Weiterhin zur Vereinfachung sind sowohl der Deckel 5 als auch der Objektträger 2 transparent dargestellt, sodass darunterliegende Merkmale in der Figur sichtbar sind.
Insbesondere zeigt die Figur 7 eine der Mischzone 47' zugeordnete Durchführung 20' zum Einbringen von zu mischenden Flüssigkeiten in die Inkubationskammer 1 '. Die Mischzone 47' kann so angeordnet sein, dass sie dem ersten Rand 49 des Objektträgers zugeordnet ist, der einerseits Teil des nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereichs 6 des Objektträgers 2 ist und andererseits weiter von dem biologischen Material entfernt ist als der zweite Rand 50 des nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereichs 6. Dadurch wird gewährleistet, dass ein Kontakt der zu mischenden Reagenzien mit dem auf der Unterseite des Objektträgers 2 aufgebrachten biologischen Material 51 während des Mischens verhindert werden kann. Zur Vermeidung von Wiederholungen wird auf die Beschreibung der weiteren in Figur 7 gekennzeichneten Merkmale auf die vorausgegangenen Erörterungen zu den Figuren 1 bis 6 verwiesen.
Figur 8 zeigt eine als Inkubationskammer 1 ' ausgestaltete, erfindungsgemäße Vorrichtung 1 mit einer zu den Inkubationskammern der Figuren 1 bis 3 abweichenden Konstruktion des Deckels 5. Der Deckel 5 umfasst auch eine Durchführung für einen Absaugstutzen 12', ein Widerlager 14, ein Barcode- Lesefenster 19 und mindestens eine Durchführung 20 zum Einbringen von Flüssigkeiten in die geschlossene Inkubationskammer 1 '. Wie für den Deckel 5 der
in den Figuren 1 bis 3 gezeigten Inkubationskammer 1 ' sind für den Deckel 5 der in Figur 8 gezeigten Inkubationskammer 1 ' mehrere Durchführungen zum Einbringen von Flüssigkeiten in die geschlossene Inkubationskammer 1 ' denkbar, beispielsweise entsprechend den Durchführungen 20 und 20' wie in Figur 7 dargestellt.
Wie bereits beschrieben ermöglicht eine Druckausübung über den Deckel 5 auf den Grundkörper 4, dass eine Plattform bzw. Bodenplatte 34 des Grundkörpers 4 auf einen darunter liegendes Heizelement gepresst wird und so eine direkte und verbesserte Temperaturübertragung über die Plattform bzw. Bodenplatte 34 in den Kapillarspalt realisierbar ist. Die Deckel konstruktion der Figur 7 stellt diesen Effekt mittels eines Arretier-Arms 52 bereit. Der Arretier-Arm 52 ist wiederum über einen Halteblock 1 1 an einer nicht-gezeigten Grundplatte eines Instruments oder eines Automaten fixierbar. Das Gelenk des Arretier-Arms 52 im Halteblock 1 1 ist derart ausgestaltet, dass es unter Vorspannung steht, um den Deckel 5 in eine geschlossene Position zu drängen. Dies kann beispielsweise durch eine Feder im Halteblock 1 1 erreicht werden. Durch die Vorspannung des Arretier-Arms 52 übt der Deckel 5 der Inkubationskammer V im geschlossenen Zustand der Kammer einen Druck sowohl auf den Grundkörper 4 als auch auf das Wippengehäuse 8 aus.
In Figur 9 ist eine als Inkubationskammer V ausgestaltete Vorrichtung 1 mit einem mehrteiligen Grundkörper 4 dargestellt. Der Grundkörper 4 besteht aus einem Überlaufbecken 45, einer Plattform 34 und einem Kupplungselement 53. Weiterhin umfasst die gezeigte Vorrichtung 1 eine Auslenkeinrichtung 3 gemäß der Figur 5. Die Einheiten des mehrteiligen Grundkörpers 4 können über die bereits beschriebenen Konstruktionsmöglichkeiten des Deckels 5 miteinander und mit der Auslenkeinrichtung 3 verbunden werden.
Wie bereits erwähnt, kann die Plattform 34 als eine Bodenplatte der Vorrichtung 1 ausgebildet sein. Die in Figur 9 gezeigte Bodenplatte 34 kann eine inert beschichtete Aluminiumplatte sein, wobei die Abstandshalter 36, die Begrenzungselemente 37, 38, 39 und die Abrisskante 46 integraler Bestandteil der Bodenplatte 34 sein können. Dies hat den Vorteil, dass die gesamte Plattform 34 als ein einziges Werkstück produziert werden kann, was die erforderliche Ebenheit
der Plattform 34 gewährleisten kann. In Ausführungsformen in welchen die Plattform bzw. Bodenplatte 34 in einen Grundkörper 4 eingearbeitet ist, müssen die entstehenden Spanungskräfte auf die Plattform bzw. Bodenplatte 34 so ausgeglichen werden, dass die Ebenheit der Plattform bzw. Bodenplatte 34 bestehen bleibt. Einerseits, damit ein paralleler Kapillarspalt ausbildbar ist, und andererseits damit eine effiziente und schnelle Temperaturübertragung von einem unter der Plattform bzw. Bodenplatte 34 liegenden Temperaturelement, beispielsweise einer Wärmequelle, über die Plattform bzw. Bodenplatte 34 in die Inkubationskammer 1 ' möglich bleibt.
Figur 10 zeigt ein Kupplungselement 53 eines mehrteiligen Grundkörpers 4, in dem der Absaugkanal 54 der Vorrichtung 1 durch die umlaufende Wand 42 des Grundkörpers 4 führt und mit einem Absaugschlauch verbunden werden kann. Weiterhin umfasst das Kupplungselement 53 Auflageflächen 55 für die Plattform 34, sodass diese mit dem Kupplungselement 53 verbindbar ist.
Figur 1 1 zeigt eine alternative Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung 1 , welche eine Auslenkeinrichtung 3 und einen Grundkörper 4 umfasst. Durch die gezeigte Position der Auslenkeinrichtung 3 befindet sich der Objektträger 2 in der Sammelposition. In der hier dargestellten Ausführungsform weist die Wippe 7' eine als Führungsschiene ausgestaltete Aussparung auf, die als Aufnahmebereich 21 für das Hebemittel dient. Das Hebemittel, das als Stößel ausgebildet sein kann, kann in den Aufnahmebereich 21 hineinragen und die Wippe 7' in eine durch die Form der Führungsschiene vorgebestimmte Bewegung auslenken. So kann durch die Form des als Führungsschiene ausgestalteten Aufnahmebereichs 21 das Auslenken des Objektträgers 2 aus der Einwirkposition in die Sammelposition erwirkt werden. Dadurch ist auch die Flüssigkeit im Kapillarspalt zwischen dem Objektträger 2 und der Plattform 34 derart ausgelenkbar, dass sie sich im Eckbereich 6 sammelt.
Figur 12 zeigt die Wippe 7' der Vorrichtung 1 der Figur 1 1 im Detail, das auf die Beschreibung von Figur 1 1 verwiesen wird.
Figur 13 zeigt einen Absaugstutzen 12' der so ausgestaltet ist, dass der Absaugkanal 50 durch den Deckel 5 einer Inkubationskannnner V geführt wird. Der Absaugstutzen 12' umfasst eine Aussparung 56, die den Eckbereich 6 des Objektträgers 2 aufnehmen kann. Somit sind sowohl die Absaugöffnung 57 als auch der Absaugkanal 54 des Absaugstutzens 12' in eine Fluidverbindung mit der im Kapillarspalt befindlichen Flüssigkeit bringbar.
Figur 14 zeigt den Absaugstutzen 12' gemäß Figur 13 in einer Absaugposition wie sie im geschlossenen Zustand einer Inkubationskammer 1 ' vorliegen kann. Insbesondere ist gezeigt wie der Objektträger 2 in der Inkubationskammer 1 ' vorliegen kann und wie die Aussparung 56 den Eckbereich 6 des Objektträgers 2 aufnehmen kann, sodass sowohl die Absaugöffnung 57 als auch der Absaugkanal 54 des Absaugstutzens 12' in eine Fluidverbindung mit der im Kapillarspalt befindlichen Flüssigkeit gebracht werden kann.
Figur 15 zeigt eine alternative Ausführungsform des Absaugstutzens 12' bei der der Absaugkanal 54 durch die umlaufende Wand 42 des Grundkörpers 4 geführt wird. Der Absaugkanal 54 im Ansaugstutzen 12 umfasst somit eine Biegung. In Ausführungsformen in denen der Absaugkanal 54 durch den Deckel 5 der Inkubationskammer 1 ' führt (wie in Figuren 12 und 13 gezeigt) muss der Absaugschlauch so ausgebildet sein, dass der Deckel 5 der Inkubationskammer V ohne Einschränkung vollständig geöffnet und geschlossen werden kann. In Ausführungsformen in denen der Absaugkanal 54 durch die umlaufende Wand 42 des Grundkörpers 4 führt und mit einem Absaugschlauch verbunden werden kann, ist eine flexible bzw. bewegliche Ausgestaltung des Absaugschlauches nicht zwingend erforderlich.
In Figur 16 ist ein Absaugsystem 58 schematisch dargestellt, das mit dem Auslass 12 bzw. dem Absaugstutzen 12' über ein Absaugelement 59 verbindbar ist. Das Absaugelement 59 ist als die Pipettenspitze 59' dargestellt, welche in einem Pipettenspitzenhalter 60 verankert sein kann. Das Absaugsystem 58 dient zur getrennten Entsorgung der in dem Kapillarspalt der erfindungsgemäßen als Inkubationskammer V ausgestalteten Vorrichtung 1 verwendeten Flüssigkeiten. Daher können, wie gezeigt, mehrere Pipettenspitzen 59' in dem
Pipettenspitzenhalter 60 verankert sein, welche jeweils zum Absaugen einer Flüssigkeit aus der Vorrichtung 1 bestimmt sind. Die Pipettenspitzen 59' sind mit entsprechenden Absaugschläuchen 61 verbunden, welche wiederum über Schlaucholiven 62 mit einem jeweiligen Abfallbehälter 63 verbindbar sind. In den Absaugschläuchen 61 und den Abfallbehältern 63 ist ein Unterdruck erzeugbar. Der Unterdruck kann von einer mit den Abfallbehältern 63 in Verbindung stehenden Vakuumpumpe 64 erzeugt werden. Die Verbindung der Vakuumpumpe 64 mit den Abfallbehältern 63 ist in dem dargestellten Absaugsystem 58 über einen zentralen Unterdruckbehälter 65 gewährleistet, welcher wiederum über Schlauchverbindungen 66 mit den jeweiligen Abfallbehältern 63 verbunden sein kann. So kann über eine einzige Vakuumpumpe 64 ein Unterdruck in allen Absaugschläuchen 61 erzeugt werden, welcher das Absaugen der im Kapillarspalt befindlichen Flüssigkeiten über die Pipettenspitzen 59' ermöglicht. Durch selektives Öffnen und Schließen der Ventile 67 kann das Absaugen durch jeweils eine der Pipettenspitzen 59' durchgeführt werden. Somit muss jeweils ein Absaugelement 59, welches einer abzusaugenden Flüssigkeit zugeordnet ist und mit dem entsprechenden Abfallbehälter 63 für diese Flüssigkeit verbunden ist, mit dem Auslass 12 bzw. dem Absaugstutzen 12' verbunden werden und das entsprechende Ventil 67 geöffnet werden, wenn diese Flüssigkeit aus der Inkubationskammer V entnommen werden soll. Das hier beschriebene Absaugsystem 58 kann eine Einheit eines Färbeautomaten für die erfindungsgemäße Vorrichtung sein, und die beschriebenen Schritte können Teil eines automatisierten Verfahrens sein, welches im Zusammenspiel mit den erfindungsgemäßen Benetzen des auf dem in der Inkubationskammer 1 ' befindlichen Objektträgers 2 aufgebrachten biologischen Materials 51 ablaufen kann. Dadurch kann nicht nur das Benetzen des biologischen Materials 51 optimiert sein, sondern auch die Beseitigung der verwendeten Einwirklösungen/Reagenzien. Insbesondere kann mittels der erfindungsgemäßen Vorrichtung 1 das vollständige Entnehmen, insbesondere Absaugen, der verwendeten Einwirklösungen möglich sein, sodass eine vorgeschriebene Trennung und/oder Beseitigung der entstehenden Abfalllösungen vorteilhaft möglich ist. Zudem können bei entsprechender Ausgestaltung des Absaugsystems 58 dafür geeignete Einwirklösungen effektiv recycelt werden.
In Figuren 17 bis 19 sind weitere Ausführungsbeispiele einer Plattform 34 dargestellt, welche jeweils mit einer als Inkubationskammer 1 ' ausgestalteten Vorrichtung 1 mit mehrteiligen Grundkörper 4 verwendbar sind. Figur 17 zeigt eine Plattform 34, wobei die Abstandshalter 36, die Begrenzungselemente 37, 38, 39 sowie die Abrisskante 46 integraler Bestandteil der Plattform 34 sind. Insbesondere sind die Begrenzungselemente 37, 38, 39 durch eine Umformung des Materials, beispielsweise durch Biegen, der umlaufenden Seitenwände 41 , 42, 43 ausgebildet. Somit kann mit einfachen Mitteln und somit äußerst kosteneffizient eine Plattform 34 angegeben werden, die den Erfordernissen in Bezug auf eine ebene Ausgestaltung genügt. Insbesondere in der Darstellung des Begrenzungselements 37 ist zu sehen, dass die Begrenzungselemente 37, 38, 39 nicht bis auf die Fläche der Bodenplatte 34 reichen. Dies hat den Vorteil, dass Adhäsions- und/oder Kapillarwirkungen durch Kontakt der Begrenzungselemente 37, 38, 39 mit den flüssigen Reagenzien vermieden bzw. minimiert werden. Durch die Begrenzungselemente 37, 38, 39 ist gewährleistet, dass ein Verrutschen des Objektträgers 2 begrenzt ist. Weiterhin wird ein Verklemmen des Objektträgers 2 unter einem der Begrenzungselemente 37, 38 oder 39 effektiv verhindert. Durch die Begrenzungselement(e) 38 ist der Abstand des Objektträgers 2 zur senkrechten oder schrägen Seitenwand 43 definiert, wobei dieser Abstand das Einführen einer Pipettiernadel oder Pipettenspitze ermöglicht. Weiterhin gewährleisten die Begrenzungselemente 37 und 39, dass die nicht ausgesparten Teile eines beispielsweise in Figur 15 gezeigten Absaugstutzens 12, 12' genügend Raum haben, um eine Ecke des Objektträgers 2 formschlüssig zu umfassen, wodurch das Absaugen flüssiger Reagenzien möglich ist.
Weiterhin zeigt Figur 17, dass die umlaufenden Wände 41 , 43 der Plattform 34 schräg bzw. mit einem Winkel von mehr als 90° zur Fläche der Bodenplatte 34 ausgestaltet sind. Dies erleichtert das Einführen einer Pipettiernadel oder Pipettenspitze durch eine im Deckel 5 vorhandene Durchführung 20, sodass Flüssigkeiten bzw. Reagenzien leichter in die Inkubationskammer 1 ' einbringbar sind. Zusätzlich wird durch den Winkel von mehr als 90° zwischen der Fläche der Plattform 34 und den Seitenwänden 41 , 43 vermieden, dass sich die flüssigen Reagenzien zunächst entlang der Kante ausbreiten, bevor sie unter den leicht
angehobenen oder parallel zur Bodenplatte 34 auf den Abstandshaltern 36 liegenden Objektträger 2 fließen („Eckeneffekt"). In Versuchen hat sich herausgestellt, dass dieser Eckeneffekt verringert wird, wenn die Seitenwände 41 , 43 wie in Figuren 17 und 18 schräg nach außen geneigt sind. Dabei ist es von Vorteil, wenn die Winkel zwischen der Fläche der Plattform 34 und den Seitenwänden 41 , 43 zwischen 95 und 120°, insbesondere zwischen 95 und 1 15°, insbesondere zwischen 95 und 1 10°, insbesondere zwischen 100 und 1 10°, insbesondere zwischen 105 und 1 10°, liegen. In Figur 18 ist die Plattform 34 gemäß Figur 17 gezeigt, wobei das Begrenzungselement 38 nicht vorhanden ist. Allerdings ergibt sich durch die Schrägstellung der Seitenwand 43 auch ohne Begrenzungselement 38 ein ausreichender Abstand, um eine flüssige Reagenz entlang der Innenseite der Seitenwand 43 in die Inkubationskammer V einzubringen. Insbesondere ist die Reagenz auf ungefähr halber Höhe der Seitenwand 43 in die Inkubationskammer 1 ' einbringbar, sodass sie in die nicht-rechtwinklige Kante zwischen der Fläche der Bodenplatte 34 und der Seitenwand 43 fließt und von dort direkt unter den leicht angehobenen oder parallel auf den Abstandshaltern 36 liegenden Objektträger 2 fließen kann. Die Fläche der in Figur 18 gezeigten Plattform 34 ist in ihrer Breite derart reduziert, dass die Bewegungsfreiheit des Objektträgers 2 im selben Maße eingeschränkt ist wie bei einer Plattform 34, welche ein Begrenzungselement 38 aufweist.
In Figur 19 ist eine weitere Ausführungsform der Plattform 34 gezeigt, bei der die Abstandshalter 36, die Begrenzungselemente 37, 38, 39 sowie die Abrisskante 46 integraler Bestandteil der Plattform 34 sind. Insbesondere sind die Begrenzungselemente 37, 38, 39 ebenfalls durch Umformung des Materials der umlaufenden Seitenwände 41 , 42, 43 ausgebildet. Im Gegensatz zu den in den Figuren 17 und 18 gezeigten Plattformen 34 sind die Begrenzungselemente 37, 38, 39 als Materialvorsprünge (Ausbuchtungen) ausgebildet. Somit kann mit einfachen Mitteln und somit äußerst kosteneffizient eine Plattform 34 angegeben werden, die den Erfordernissen in Bezug auf eine ebene Ausgestaltung genügt. Durch die Begrenzungselemente 37, 38, 39 ist gewährleistet, dass ein Verrutschen des Objektträgers 2 begrenzt ist. Weiterhin wird ein Verklemmen des Objektträgers 2
unter einem der Begrenzungselemente 37, 38 oder 39 effektiv verhindert. Die Begrenzungselemente 38 definieren den Abstand des Objektträgers 2 zur senkrechten Seitenwand 43, wobei dieser Abstand das Einführen einer Pipettiernadel oder Pipettenspitze ermöglicht. Zusätzlich sind bei der in Figur 19 gezeigten Ausführungsform der Plattform 34 Halteelemente 68 vorgesehen, welche die Plattform 34 durch eine kraftschlüssige Verbindung mit komplementären Materialausbuchtungen des Grundkörpers 4 oder des Deckels 5 vor einem Verrutschen sichern. Ähnlich wie Figur 1 , zeigt Figur 20 eine erfindungsgemäße Vorrichtung 1 , welche als Inkubationskammer 1 ' für einen Objektträger 2 ausgestaltet ist. Die Inkubationskammer 1 ' umfasst eine Auslenkeinrichtung 3, eine wie in Figur 17 dargestellte Plattform 34 zur Aufnahme des Objektträgers 2 und einen Deckel 5. Die als Inkubationskammer V ausgestaltete, erfindungsgemäße Vorrichtung 1 ist in Figur 20 mit offenem Deckel 5 dargestellt, der über einen Halteblock 1 1 an einer dafür vorgesehenen Grundplatte 69 fixiert ist. Somit liegt die Plattform 34 direkt auf dem auf der Grundplatte 69 vorhandenen Heizblock 70 auf. Der Deckel 5 umfasst weiterhin verlängerte Seitenwände 71 , welche bei geschlossenem Deckel bis zur Grundplatte 69 hinunterreichen und so die Inkubationskammer abdichten, ohne eine entlang der Unterseite des Deckels 5 verlaufende Dichtung zu benötigen. Dies hat insbesondere konstruktive Vorteile bei Inkubationskammern 1 ' mit mehrteiligen Grundkörpern 4, wie beispielsweise in den Figuren 9 und 20 dargestellt. Bei den in den Figuren 1 bis 3 und 8 dargestellten Deckerkonstruktionen, wird die Abdichtung der Inkubationskammern V durch eine Silikondichtung oder eine formschlüssige Verbindungen zwischen der Unterseite des Deckels 5 mit Grundkörper 4 und der Auslenkeinrichtung 3 realisiert. Hierzu können auf dem Grundkörper 4 und auf der Auslenkeinrichtung 3 korrespondierende Flächen ausgebildet sein. In Figur 21 ist der Deckel 5 der Inkubationskammer V aus Figur 20 separat dargestellt. Insbesondere ist dargestellt, dass die Seitenwände 71 über Schrauben 72 an den Seiten des Deckels 5 befestigt sind. Zur Verbindung mit dem Halteblock 1 1 der Inkubationskammer 1 ' enthalten die Seitenwände 71 Befestigungsöffnungen 73, die mit einem korrespondierenden Befestigungselement des
Halteblocks 1 1 verbindbar sind. Weiterhin ist der Durchführungsverschluss 74 der Durchführung 20 dargestellt. Wie bereits beschrieben, kann dieser Durchführungsverschluss 74 aus Silikon hergestellt sein und einen Kreuzschlitz aufweisen, sodass eine Pipettiernadel oder Pipettenspitze durch die Durchführung gestoßen werden kann, gleichzeitig aber die gesättigte Atmosphäre in der Inkubationskammer 1 ' erhalten bleibt. Der in Figur 21 dargestellte Deckel 5 kann beispielsweise als separates Werkstück im Spritzgussverfahren hergestellt werden. Zusätzlich kann der Deckel 5 ein Barcode-Lesefenster 19 zum Lesen des Barcodes 10 des Objektträgers 2 aufweisen. Das Barcode-Lesefenster 19 kann aus transparentem Material, z. B. aus Glas oder Makroion, bestehen. Alternativ kann der gesamte Deckel 5 aus einem transparenten Material, bspw. Makroion, hergestellt sein.
Hinsichtlich weiterer vorteilhafter Ausgestaltungen der erfindungsgemäßen Vorrichtung sowie der erfindungsgemäßen Verfahren wird zur Vermeidung von Wiederholungen auf den allgemeinen Teil der Beschreibung sowie auf die beigefügten Ansprüche verwiesen.
Schließlich sei ausdrücklich darauf hingewiesen, dass die voranstehend be- schriebenen Ausführungsbeispiele der erfindungsgemäßen Vorrichtung lediglich zur Erörterung der beanspruchten Lehre dienen, diese jedoch nicht auf die Ausführungsbeispiele einschränken.
-
Bezugszeichenliste
Vorrichtung
' Inkubationskammer
Objektträger
Auslenkeinrichtung
Grundkörper
Deckel
In der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehobener Eckbereich des Objektträgers Auslenkmittel
' Wippe
Wippengehäuse
Beschriftungsfeld
Barcode
Halteblock
Auslass
' Absaugstutzen
auf den Objektträger treffendes Ende des Absaugstutzens
Widerlager
Verschluss
Aufnahmebereich des Verschlusses für ein Arretierelement
Arretierelement
Greif-Lippe
Barcode-Lesefenster
Durchführung
Aufnahmebereich für Hebemittel
Verankerungselement
' Zapfen
Ankerelement
-
23' Anstoß-Lippe
24 Auflage
25 erste Wippenwand
26 zweite Wippenwand
27 Rückwand Wippe
28 Vordere Innenwand
29 Fixierpunkte
30 Vertiefung/Ausbuchtung Wippengehäuse, 32, 33 Umlaufende Wände Wippengehäuse
31 ' Innenseiten
34 Plattform bzw. Bodenplatte
35 Absaugstelle
36 Abstandshalter
, 38, 39 Begrenzungselement
40 Innere Rückwand Grundkörper
, 42, 43 Umlaufende Wände Grundkörper
44 Materialvorsprung Grundkörper
45 Überlaufbecken
46 Abrisskante
47 Bereich zum Einbringen von Flüssigkeit
47' Mischzone
48 Ausbuchtung
49 Erster Rand des Objektträgers
50 Zweiter Rand des Objektträgers
51 Biologisches Material
52 Arretier-Arm
53 Kupplungselement
54 Absaugkanal
55 Auflagefläche Kupplungselement
56 Aussparung
57 Absaugöffnung
58 Absaugsystem
59 Absaugelement
59' Pipettenspitze
-
60 Pipettenspitzenhalter
61 Absaugschlauch
62 Schlaucholive
63 Abfallbehälter
64 Vakuumpumpe
65 Zentraler Unterdruckbehälter
66 Schlauchverbindung
67 Ventil
68 Halteelemente
69 Grundplatte
70 Heizblock
71 verlängerte Seitenwände
72 Schrauben
73 Befestigungsöffnungen
74 Durchführungsverschluss
Claims
1 . Vorrichtung zum Benetzen von biologischem Material mit wenigstens einer Flüssigkeit, umfassend eine Auslenkeinrichtung (3) und eine Plattform (34) zur
Aufnahme eines mindestens in etwa dreieckigen, vorzugsweise in etwa viereckigen, das biologische Material (51 ) umfassenden Objektträgers (2), wobei der Objektträger (2) von der Auslenkeinrichtung (3) aus einer relativ zur Plattform (34) parallelen Einwirkposition in eine relativ zur Plattform (34) nicht-parallele Sammelposition auslenkbar ist, wobei ausschließlich ein Eckbereich (6) des Objektträgers (2) in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehoben ist, derart, dass sich die Flüssigkeit in diesem Eckbereich (6) sammelt.
2. Vorrichtung nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Auslenkeinrichtung (3) ein Auslenkmittel (7), vorzugsweise eine Wippe (7'), aufweist, wobei das Auslenkmittel (7) eine Auflage (24) für den Objektträger (2) und, vorzugsweise, ein Ankerelement (23) umfasst.
3. Vorrichtung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Auslenkmittel (7) durch wenigstens ein Hebemittel in eine angehobene Position und in eine gekippte Position verbringbar ist, wobei in der angehobenen Position wenigstens zwei Eckbereiche des Objektträgers (2) nicht oder nur geringfügig angehoben sind, und wobei der Objektträger (2) in der gekippten Position in der Sammelposition vorliegt.
4. Vorrichtung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Auslenkmittel (7) einen Aufnahmebereich (21 ) für das wenigstens eine Hebemittel, insbesondere für einen Stößel, umfasst, wobei der Aufnahmebereich (21 ) wahlweise ein Verankerungselement (22) für das Hebemittel, vorzugsweise einen Zapfen (22'), umfasst, welches eine Achse des Auslenkmittels (7) definiert um die sich das Auslenkmittel (7) in die zweite, gekippte Position dreht.
5. Vorrichtung nach Anspruch 3 oder Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Auslenkmittel (7), vorzugsweise das Ankerelement (23) des
Auslenkmittels (7), so ausgestaltet ist, dass es mit einer korrespondieren Ankerfläche in Kontakt bringbar ist, sodass der Kontakt des Auslenkmittels (7), vorzugsweise des Ankerelements (23), mit der Ankerfläche das Auslenkmittel (7) aus der angehobenen Position in die gekippte Position dreht.
6. Vorrichtung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Ankerelement (23) als ein hervorstehender Bereich, vorzugsweise als eine Anstoß- Lippe (23'), des Auslenkmittels (7) ausgebildet ist, und/oder die korrespondierende Ankerfläche als Materialvorsprung der Vorrichtung (1 ), insbesondere als ein Anschlag, vorzugsweise als eine hervorstehende Kante einer Seitenwand der Auslenkeinrichtung (3), vorzugsweise einer inneren Seitenwand der Auslenkeinrichtung (3), ausgebildet ist.
7. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Vorrichtung (1 ) einen Auslass (12), vorzugsweise eine Öffnung, für die
Flüssigkeit umfasst, wobei der Auslass (12) so ausgestaltet ist, dass er mit dem ausschließlich einen nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich (6) des Objektträgers (2) in der Sammelposition in einer Fluidverbindung steht, sodass die Flüssigkeit durch den Auslass (12) aus der Vorrichtung (1 ) entnehmbar, insbesondere absaugbar, vorzugsweise vollständig entnehmbar, insbesondere vollständig absaugbar, ist.
8. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Vorrichtung (1 ) ein Widerlager (14) umfasst, wobei der Objektträger (2), vorzugsweise auf der der Auflage (24) abgewandten Oberfläche, mit dem Widerlager (14) in Kontakt bringbar ist, sodass das Auslenken des Objektträgers (2) aus der Einwirkposition in die Sammelposition durch den Kontakt des Objektträgers (2) mit dem Widerlager (14) unterstützbar ist.
9. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Vorrichtung (1 ) eine Inkubationskammer (1 ') für einen Objektträger (2) ist, insbesondere eine Inkubationskammer (1 ') für immunohistochemische Untersuchungen, in s/fu-Hybridisierungsuntersuchungen, Gewebefärbungen,
Biochipfärbungen oder dgl. des biologischen Materials (51 ), insbesondere von Gewebe- oder Zellschnitten.
10. Vorrichtung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Inkubationskammer (1 ') einen Deckel (5) umfasst, wobei, im geschlossenen Zustand, im Inneren der Inkubationskammer (1 ') eine gesättigte Atmosphäre erzeugbar ist, insbesondere ist die gesättigte Atmosphäre durch Wärmeeinwirkung, vorzugsweise durch Wärmeeinwirkung über die Plattform (34), erzeugbar.
1 1 . Vorrichtung nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass der Deckel
(5) ein Barcode-Lesefenster (19) umfasst, welches im geschlossenen Zustand der Inkubationskammer (1 ') dem Beschriftungsfeld (9) zugeordnet ist, sodass ein Barcode (10) durch das Lesefenster (19) lesbar ist, insbesondere lenkt das Material des Barcode-Lesefensters (19) Laser- oder Infrarot-Strahlen zum Lesen des Barcodes (10) nicht oder nur geringfügig ab, sodass die Barcode-Lesbarkeit des Barcodes (10) durch das Barcode-Lesefenster (19) Bestand hat.
12. Vorrichtung nach Anspruch 10 oder Anspruch 1 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Plattform (34) als eine Bodenplatte der Vorrichtung (1 ) ausgebildet ist, und wobei die Bodenplatte aus einem inerten Material besteht oder wenigstens auf der dem Objektträger (2) zugewandten Seite mit einem inerten Material beschichtet ist, insbesondere ist die Bodenplatte eine inerte Folie aus Polyimid, insbesondere Kapton, oder Polyetherketon (PEEK) oder, vorzugsweise, eine inert beschichtete Aluminiumplatte.
13. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass in der parallelen Einwirkposition ein Kapillarspalt zwischen dem Objektträger (2) und der Plattform (34) ausgebildet ist, und wobei das Auslenken des Objektträgers (2) durch die Auslenkeinrichtung (3) eine gezielte Lenkung einer im Kapillarspalt befindlichen Flüssigkeit ermöglicht, insbesondere zum vollständigen Sammeln der Flüssigkeit in dem nicht oder nur geringfügig angehoben Eckbereich
(6) des Objektträgers (2) in der Sammelposition.
14. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass durch ein wiederholtes Auslenken des Objektträgers (2) aus der Einwirkposition in die Sannnnelposition eine Durchmischung der Flüssigkeit im Kapillarspalt, ein Entfernen von Blasen aus dem Kapillarspalt und/oder eine Beschleunigung biochemischer Reaktionen im Kapillarspalt realisierbar ist.
15. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass die wenigstens eine Flüssigkeit eine Einwirkslosung ist, welche vorzugsweise aus der Gruppe bestehend aus: Pufferlösungen; Wachstumslösungen; Entwässerungslösungen; Blockierungslösungen; Ligandenlösungen;
Antikörperlösungen; Waschlösungen; Färbelösungen; Reinigungslösungen;
Entwachsungslösungen; Deparaffinisierungslösungen, Alkohollösungen;
Rehydrierungslösungen; Aktivierungs- oder Inaktivierungslösungen; Antigen-
Retrieval Lösungen; Hybridisierungslösungen; und Substratlösungen ausgewählt ist.
16. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 15, wobei der Objektträger (2) in eine relativ zur Plattform (34) nicht-parallele Mischposition auslenkbar ist, wobei die Mischposition eine Position zwischen der Einwirkposition und der Sammelposition ist, in welcher der Raum zwischen Objektträger (2) und Plattform (34) eine Strömungsverbindung zwischen einer Mischzone (47') der Vorrichtung (1 ) und dem ausschließlich einen in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich (6) des Objektträgers (2) bildet, sodass Reagenzien, welche in die Mischzone (47') eingebracht werden, durch die Strömungsverbindung in den nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich (6) fließen können und durch wiederholtes Auslenken des Objektträgers (2) aus der Sammelposition in die Mischposition vollständig vermischt werden können, um die Flüssigkeit zum Benetzen des biologischen Materials (51 ) bereitzustellen.
17. Vorrichtung nach Anspruch 16, wobei eine 3,3'-Diaminobenzidine (DAB) Lösung und eine Wasserstoffperoxid-enthaltende Pufferlösung in die Mischzone (47') eingebracht werden können und die Flüssigkeit zum Benetzen des biologischen Materials (51 ) eine DAB-Peroxidase Substratlösung ist.
18. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass der Auslass (12) so ausgestaltet ist, dass er mit einem wenigstens einem Absaugsystem (Absaugelement (59) verbindbar ist, insbesondere ist das Absaugelement (59) Teil eines Absaugsystems (58) zur getrennten Entnahme der in den Kapillarspalt eingebrachten Flüssigkeiten.
19. Verfahren zum Benetzen von biologischem Material mit wenigstens einer Flüssigkeit, insbesondere unter Verwendung einer Vorrichtung (1 ) nach einem der Ansprüche 1 bis 18, wobei ein mindestens in etwa dreieckiger, vorzugsweise in etwa viereckiger, das biologische Material (51 ) umfassender Objektträger (2), aus einer relativ zu einer Plattform (34) parallelen Einwirkposition durch eine Auslenkeinrichtung (3) in eine relativ zur Plattform (34) nicht-parallele Sammelposition ausgelenkt wird, wobei ausschließlich ein Eckbereich (6) des Objektträgers (2) in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehoben wird, sodass sich die Flüssigkeit in diesem Eckbereich (6) sammelt.
20. Verfahren zum Mischen von mindestens zwei flüssigen Reagenzien unter Verwendung der Vorrichtung (1 ) nach einem der Ansprüche 1 bis 16, wobei das Verfahren die folgenden Schritte umfasst:
(a) Einbringen der Reagenzien in eine Mischzone (47') der Vorrichtung (1 ) während der Objektträger (2) in eine relativ zur Plattform (34) nichtparallele Sammelposition ausgelenkt ist;
(b) Auslenken des Objektträgers (2) aus der Sammelposition in eine relativ zur Plattform (34) nicht-parallele Mischposition, wobei die Mischposition eine Position zwischen der relativ zur Plattform (34) parallelen Einwirkposition und der relativ zur Plattform (34) nicht-parallelen Sammelposition ist und wobei, in der Mischposition, der Raum zwischen Objektträger (2) und Plattform (34) eine Strömungsverbindung zwischen der Mischzone (47') und dem ausschließlich einen in der Sammelposition nicht oder nur geringfügig angehobenen Eckbereich (6) des Objektträgers (2) bildet, durch welchen die Reagenzien in den Eckbereich (6) fließen können,
(c) vollständiges Mischen der Reagenzien durch wiederholtes Auslenken des Objektträgers (2) aus der Sammelposition in die Mischposition, wobei durch das vollständige Mischen der Reagenzien eine Flüssigkeit zum Benetzen des biologischen Materials (51 ) bereitgestellt wird, und (d) Auslenken des Objektträgers (2) in die relativ zur Plattform (34) parallele
Einwirkposition, sodass die Flüssigkeit aus Schritt (c) das biologische Material (51 ) benetzen kann.
21 . Verfahren nach Anspruch 20, wobei die nicht-parallele Mischposition so wählbar ist, dass die Reagenzien während der Schritte (a) bis (c) des Verfahrens nicht mit dem biologischen Material (51 ) in Kontakt treten.
22. Verfahren nach Anspruch 20 oder Anspruch 21 , wobei die mindestens zwei Reagenzien eine 3,3'-Diaminobenzidine (DAB) Lösung und eine Wasserstoffperoxid-enthaltende Pufferlösung sind, und wobei die durch das vollständige Mischen der beiden Reagenzien bereitgestellte Flüssigkeit eine DAB- Peroxidase Substratlösung ist.
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