WO2018101251A1 - バブル含有液体およびバブル含有液体の製造方法 - Google Patents

バブル含有液体およびバブル含有液体の製造方法 Download PDF

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WO2018101251A1
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liquid
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bubbles
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克郎 立花
Original Assignee
ＳｏｎｏＣｏｒｅ株式会社
学校法人福岡大学
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/22—Echographic preparations; Ultrasound imaging preparations ; Optoacoustic imaging preparations
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
    • B01F23/00—Mixing according to the phases to be mixed, e.g. dispersing or emulsifying
    • B01F23/20—Mixing gases with liquids
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01F—MIXING, e.g. DISSOLVING, EMULSIFYING OR DISPERSING
    • B01F31/00—Mixers with shaking, oscillating, or vibrating mechanisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F1/00—Treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F1/68—Treatment of water, waste water, or sewage by addition of specified substances, e.g. trace elements, for ameliorating potable water
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K23/00—Use of substances as emulsifying, wetting, dispersing, or foam-producing agents

Definitions

  • the present invention relates to a bubble-containing liquid containing microbubbles or nanobubbles, and a method for producing the bubble-containing liquid.
  • micro-sized bubbles In recent years, in various fields such as medical care, food, seafood culture, wastewater treatment, etc., the use of micro-sized (about several hundreds of micrometers) or nano-sized (less than several hundred nanometers) bubbles has been studied. .
  • ultrasonic diagnosis for diagnosing a site to be diagnosed such as a chest or abdomen using such a bubble as an ultrasound contrast agent is known.
  • a bubble is injected into a blood vessel, an ultrasonic wave is irradiated to a diagnostic target part where the bubbles are accumulated, and a reflected wave (reflected echo) from the diagnostic target part is imaged and diagnosed.
  • the bubble used as an ultrasonic contrast agent can be manufactured by the manufacturing method of the bubble described in patent document 1, for example.
  • This bubble is used in the state of a bubble-containing liquid in which bubbles are dispersed in an aqueous liquid.
  • the number of bubbles in the bubble-containing liquid that has passed for a long time depends on the external factors such as temperature, pressure, vibration, etc. to which the bubble-containing liquid is exposed. There was a significant decrease in the number.
  • the present invention has been made in view of the above-described conventional problems, and an object of the present invention is to provide a bubble-containing liquid having excellent temporal stability of bubbles dispersed in an aqueous liquid. Another object is to provide a method for producing a bubble-containing liquid that can produce the bubble-containing liquid stably and easily.
  • a bubble-containing liquid having an aqueous liquid and gas-containing bubbles dispersed in the aqueous liquid, A bubble-containing liquid, further comprising a bubble retention agent that acts to stably retain the bubbles in the aqueous liquid.
  • the gas may include at least one selected from the group consisting of oxygen, hydrogen, nitrogen, helium, perfluoropropane, perfluorobutane, and perfluoropentane.
  • the ratio between the content [wt%] of the aqueous liquid in the bubble-containing liquid and the content [wt%] of the bubble retention agent in the bubble-containing liquid is 50:50 to 99.999.
  • the bubble-containing liquid according to any one of (1) to (4), which is 0.001.
  • a method for producing a bubble-containing liquid comprising an aqueous liquid and gas-containing bubbles dispersed in the aqueous liquid, Preparing a liquid mixture comprising the aqueous liquid and a bubble retention agent that acts to stably retain the bubbles in the aqueous liquid; Injecting the mixed liquid to a predetermined height of the container; Obtaining the bubble-containing liquid by vibrating the container at a predetermined rotational speed so that the mixed liquid repeatedly collides with the inner surface of the container. .
  • a method for producing a bubble-containing liquid comprising an aqueous liquid, a gas-containing bubble dispersed in the aqueous liquid, and a bubble retention agent that acts to stably hold the bubble in the aqueous liquid. Because Preparing a first liquid having the aqueous liquid, a gas-containing bubble dispersed in the aqueous liquid, and a second liquid containing the bubble retention agent; Mixing the first liquid and the second liquid to obtain the bubble-containing liquid, and a method for producing the bubble-containing liquid.
  • the first liquid is a step of injecting the aqueous liquid to a predetermined height of the container, and vibrates the container at a predetermined rotational speed so that the aqueous liquid repeatedly collides with the inner surface of the container. And a step of causing the bubble-containing liquid to be produced according to the above (7).
  • bubbles can be stably retained (stored) in an aqueous liquid by the action of the bubble retention agent. Therefore, even when the bubble-containing liquid of the present invention is stored for a long period of time, fluctuations in the number and size of contained bubbles are suppressed, and the stability of the bubbles over time is excellent.
  • FIG. 1 is a schematic view for explaining the bubble-containing liquid of the present invention.
  • FIG. 2 is a perspective view showing a state in which a part of the bubble contained in the bubble-containing liquid of the present invention is cut.
  • FIG. 2 (a) shows a state in which a part of a bubble enclosing gas is cut, and
  • FIGS. 2 (b) and 2 (c) show a part of the bubble enclosing gas and drug. Indicates a disconnected state.
  • FIG. 3 is a flowchart for explaining the first embodiment of the method for producing a bubble-containing liquid of the present invention.
  • 4A to 4D are cross-sectional views for explaining a first embodiment of the method for producing a bubble-containing liquid of the present invention.
  • FIG. 1 is a schematic view for explaining the bubble-containing liquid of the present invention.
  • FIG. 2 is a perspective view showing a state in which a part of the bubble contained in the bubble-containing liquid of the present invention is cut.
  • FIG. 5 is a partially enlarged view for explaining a state in which the aqueous liquid and the inner surface (upper surface) of the container collide violently in the step of vibrating the container shown in FIG.
  • FIG. 6 is a flowchart for explaining a second embodiment of the method for producing a bubble-containing liquid of the present invention.
  • 7 (a) to (d) are graphs showing bubble diameter distributions of the samples obtained in Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 immediately after production, 5 days later, and 10 days later.
  • FIGS. 8A to 8C are graphs showing bubble diameter distributions of the samples obtained in Examples 4 and 5 and Comparative Example 2 immediately after production and after 10 days.
  • FIG. 9 (a) is a graph showing the bubble diameter distribution immediately after the production of the samples obtained in Examples 6-8.
  • FIG. 9 (b) is a graph showing the bubble size distribution after 12 days for the samples obtained in Examples 6-8.
  • FIG. 10A is a graph showing the bubble diameter distribution immediately after the production of the sample obtained in Example 9.
  • FIG. 10 (b) shows the bubble size distribution after the sample obtained in Example 9 was stored at 4 ° C. for 5 days.
  • FIG. 10 (c) shows the bubble size distribution after the sample obtained in Example 9 was stored at room temperature for 5 days.
  • FIG. 10 (d) shows the bubble size distribution after the sample obtained in Example 9 was stored at 37 ° C. for 5 days.
  • FIG. 11 is a graph showing the change over time of the concentration of bubbles having a bubble diameter of 200 to 1000 nm in the samples obtained in Examples 10 to 12 and Comparative Example 4.
  • FIG. 10A is a graph showing the bubble diameter distribution immediately after the production of the sample obtained in Example 9.
  • FIG. 10 (b) shows the bubble size distribution after the sample obtained in Example 9 was stored at 4 ° C. for 5 days.
  • FIG. 12 is a graph showing the change over time in the concentration of bubbles having a bubble diameter of 200 to 1000 nm in the samples obtained in Examples 13 to 15 and Comparative Example 5.
  • FIG. 13 is a graph showing the change over time in the concentration of bubbles having a bubble diameter of 200 to 1000 nm in the samples obtained in Examples 16 to 18 and Comparative Example 6.
  • 14 (a) to 14 (c) show the ratio of the concentration of bubbles having a bubble diameter of less than 200 nm and the concentration of bubbles having a bubble diameter of more than 200 nm in the samples obtained in Examples 19-24 and Comparative Examples 4-6. It is a graph which shows a time-dependent change.
  • FIG. 1 is a schematic view for explaining the bubble-containing liquid of the present invention.
  • the bubble-containing liquid 100 of this embodiment has an aqueous liquid and bubbles 1 (bubbles) containing a gas 3 dispersed in the aqueous liquid.
  • This bubble-containing liquid 100 can be used in various fields such as medical care, food, seafood culture, and wastewater treatment. This embodiment demonstrates the case where the bubble containing liquid 100 is inject
  • aqueous liquid examples include water such as distilled water, pure water, ultrapure water, ion exchange water, and RO water, Saline (physiological saline having a sodium chloride concentration of about 0.9%), and PBS (phosphate buffered saline).
  • water such as distilled water, pure water, ultrapure water, ion exchange water, and RO water
  • Saline physiological saline having a sodium chloride concentration of about 0.9%)
  • PBS phosphate buffered saline
  • Salt aqueous solution such as KCl drip solution, sugar aqueous solution such as glucose and sucrose, amino acid aqueous solution, protein aqueous solution, metal ion aqueous solution containing metal ions such as copper, iron, gold, platinum, sodium, magnesium, phosphorus, potassium, calcium, Mineral aqueous solution containing various minerals such as manganese, chromium, zinc, etc., water-soluble vitamins such as vitamin B 1 , vitamin B 2 , vitamin B 6 , vitamin B 12 , vitamin C and / or vitamin A, vitamin D, vitamin E, vitamin Vitamin aqueous solution and carbohydrate water containing fat-soluble vitamins such as K Examples include aqueous solutions, antibody aqueous solutions, nucleic acid aqueous solutions containing nucleic acids containing RNA, DNA and derivatives thereof, aqueous dye solutions containing various dyes, and aqueous gadolinium compounds containing gadolinium compounds such as gadolinium chloride and gadolinium sulfide
  • the content of the aqueous liquid in the bubble-containing liquid 100 is preferably 50 wt% or more. Thereby, a bubble retention agent can fully be disperse
  • the gas 3 is a gaseous substance at the temperature (about 20 ° C.) when the bubble 1 is manufactured. Further, the gas 3 is a gaseous substance even when the bubble 1 is injected into the body, that is, at a temperature inside the body (about 37 ° C.).
  • the gas 3 is not particularly limited.
  • gas such as air, nitrous oxide, oxygen, carbon dioxide, hydrogen, inert gas such as nitrogen, helium, argon, xenon, and krypton, sulfur hexafluoride, Sulfur fluoride such as disulfur decafluoride, trifluoromethyl sulfur pentafluoride, methane, ethane, propane, butane, pentane, cyclopropane, cyclobutane, cyclopentane, ethylene, propylene, propadiene, butene, acetylene, propyne, Low molecular weight hydrocarbons such as perfluoropropane, perfluorobutane, perfluoropentane, or halides thereof, ethers such as dimethyl ether, ketones, esters, etc., and one or two of them A combination of more than one species can be used.
  • At least one selected from the group consisting of oxygen, hydrogen, nitrogen, helium, perfluoropropane, perfluorobutane, and perfluoropentane is particularly preferable.
  • the bubble 1 in the bubble-containing liquid 100 is formed by using an aqueous liquid in which a predetermined amount of gas 3 is finely dispersed or dissolved.
  • aqueous liquid in which a predetermined amount of gas 3 is finely dispersed or dissolved.
  • the content of the gas 3 in the aqueous liquid is larger, the coalescence and extinction due to the collision of the bubbles 1 can be suppressed while a sufficiently large amount of the bubbles 1 are present in the aqueous liquid.
  • the bubble-containing liquid 100 can contain a large amount of the bubble 1 and the stability of the bubble 1 with time can be further improved.
  • the bubble 1 in the aqueous liquid is stabilized due to the cluster structure of water molecules existing on the surface thereof (the gas-liquid interface between the gas 3 and the aqueous liquid).
  • the cluster structure of water molecules includes a slight amount of hydrogen ions (H +) and hydroxide ions (OH ⁇ ) generated by ionizing a part of the water molecules.
  • Bubble 1 is charged under the influence of these ions (particularly hydroxide ions). Thereby, it is considered that the bubbles 1 are prevented from being combined (attached) by the electric repulsive force.
  • the present inventor can make certain molecules and ions exist stably in the aqueous liquid near the surface of the bubble 1 and between the adjacent bubbles 1.
  • a bubble retention agent such as saccharides, salts and proteins in the bubble-containing liquid.
  • saccharides and proteins in the aqueous liquid exist in the vicinity of the bubble 1 surface and between the bubbles 1 and the steric hindrance action prevents the bubbles 1 from adhering over a long period of time. It is done.
  • the salts in the aqueous liquid are ionized and adsorbed on the surface of the bubble 1 and the chargeability of the bubble 1 is maintained for a long period of time.
  • the bubble-containing liquid of the present invention further includes a bubble retention agent.
  • the bubble retention agent is dispersed or dissolved in the aqueous liquid and acts to stably hold the bubble 1 in the aqueous liquid. Therefore, in the bubble-containing liquid 100, the bubbles 1 can be stably held (stored) in the aqueous liquid. Therefore, even when the bubble-containing liquid 100 is stored for a long period of time, fluctuations in the number and size of the contained bubbles 1 are suppressed and the stability of the bubbles 1 over time is excellent.
  • the bubble retention agent contains at least one of saccharides, salts and proteins.
  • sugars including polysaccharides
  • examples of the protein include albumin and globulin.
  • examples of the salts include NaCl, KCl, Na 2 HPO 4 , KH 2 PO 4 and C 3 H 5 NaO 3 , chlorides of various metal ions such as iron ions, gold ions, and copper ions.
  • saccharides are preferable, and glucose is particularly preferable.
  • the content of the bubble retention agent in the bubble-containing liquid 100 is not particularly limited, but is preferably changed as appropriate according to the type of aqueous liquid to be used.
  • the content of the bubble retention agent in the bubble-containing liquid 100 is preferably 0.001 to 50 wt%, and more preferably 0.005 to 50 wt%. If the content of the bubble retention agent is within the above range, the bubble-containing liquid 100 can more reliably suppress fluctuations in the number and size of the bubbles 1 contained even when stored for a long period of time. Stability can be further improved.
  • the ratio between the content [wt%] of the aqueous liquid in the bubble-containing liquid 100 and the content [wt%] of the bubble retention agent in the bubble-containing liquid 100 is 50:50 to 99.999: 0. 001 is preferable. As long as the content ratio of the aqueous liquid and the bubble retention agent is within the above range, even when the bubble-containing liquid 100 is stored for a long period of time, fluctuations in the number and size of the bubbles 1 contained can be more reliably suppressed. 1 can be further improved in stability over time.
  • the physiological saline content [wt%] in the bubble-containing liquid 100 and the bubble-containing liquid 100 is preferably 50:50 to 85:15, and more preferably 50:50 to 80:20.
  • the content [wt%] of water in the bubble-containing liquid 100 and the saccharide content in the bubble-containing liquid 100 The ratio with the amount [wt%] is preferably 50:50 to 97: 3, and more preferably 50:50 to 96: 4.
  • content [wt%] of the aqueous liquid in the bubble containing liquid 100 and content [wt%] of the protein in the bubble containing liquid 100 The ratio is preferably 50:50 to 99.999: 0.001, and more preferably 50:50 to 99.995: 0.005.
  • the diameter of the bubble 1 composed of such components is changed by changing the conditions of each step of the method for producing a bubble-containing liquid of the present invention described later. That is, the produced bubble 1 has a micron size (about several hundreds of micrometers) or a nano size (about several hundreds of nanometers).
  • the average diameter of the bubble 1 is not particularly limited, but is preferably about 10 nm to 1000 ⁇ m, more preferably about 10 nm to 100 ⁇ m, and further preferably about 50 to 2000 nm. If the average diameter of the bubble 1 is within the above range, when the bubble 1 is injected into the body by intravenous injection, the diameter of the bubble 1 is sufficiently small so that the bubble 1 moves smoothly in the blood vessel due to blood flow. Can do. Further, the bubble having such a diameter has high stability in the blood vessel, and is reliably transported to the target site without disappearing while moving in the blood vessel. In particular, since nanobubbles have high stability in blood vessels, they are reliably transported to a target site without almost disappearing.
  • a bubble containing a gas has a property of efficiently reflecting ultrasonic waves at the interface between the liquid and the gas. Therefore, the bubble 1 having an average diameter in the above range has a sufficiently large area at the interface between the liquid (aqueous liquid or blood when injected into the body as an ultrasound contrast agent) and the gas 3, It is effectively used as a sonic contrast agent.
  • the bubble 1 having the above-described configuration can be used in fields other than the medical field such as food, seafood culture, and wastewater treatment.
  • the bubble 1 having an average diameter in the above range can be sufficiently applied to various fields because of its sufficiently high stability and easy handling.
  • the bubble 1 in the bubble-containing liquid 100 may be a bubble having the configuration shown in FIGS.
  • FIG. 2 is a perspective view showing a state in which a part of the bubble contained in the bubble-containing liquid of the present invention is cut.
  • FIG. 2 (a) shows a state in which a part of a bubble enclosing gas is cut
  • FIGS. 2 (b) and 2 (c) show a part of the bubble enclosing gas and drug. Indicates a disconnected state.
  • it demonstrates centering around difference with the bubble 1 shown in FIG. 1 mentioned above, The description is abbreviate
  • a bubble 1 (bubble) shown in FIG. 2A has an outer shell 2 (spherical film) constituting the shell of the bubble 1 and a gas 3 enclosed in the outer shell 2.
  • Such an outer shell 2 is mainly composed of an amphiphilic material (outer shell material) such as albumin having both hydrophobic and hydrophilic properties (substituents) in one molecule.
  • amphiphilic material such as albumin having both hydrophobic and hydrophilic properties (substituents) in one molecule.
  • various proteins like albumin are mentioned, Among these, 1 type or 2 types or more can be used in combination.
  • a bubble 1 shown in FIG. 2B and FIG. 2C has an outer shell 2 constituting a shell of the bubble 1, a gas 3 and a drug 4 enclosed in the outer shell 2. This bubble 1 is used for ultrasonic therapy and ultrasonic diagnosis.
  • 2B shows the bubble 1 in which the drug 4 is sealed in the outer shell 2 in a gas state or a solid state
  • FIG. 2C shows the outer shell 2 in the drug 4 in the liquid state. The bubble 1 enclosed in the inside is shown.
  • the outer shell 2 has a function of holding the gas 3 and the drug 4 sealed inside thereof in the bubble 1 and has a function of protecting the drug 4 until the bubble 1 is carried to the affected part.
  • the drug 4 is an effective component for treating various diseases such as prostate cancer, uterine fibroids, myocardial infarction, and cerebral infarction.
  • the drug 4 is transported to the affected part while being contained in the bubble 1 and is administered to the affected part by rupturing the outer shell 2 near the affected part by ultrasonic irradiation.
  • the drug 4 may be contained in the outer shell 2 itself or may be adsorbed on the outer surface of the outer shell 2.
  • the volume ratio between the drug 4 and the gas 3 is preferably about 1:99 to 90:10, more preferably about 10:90 to 70:30, and about 40:60 to 60:40. More preferably.
  • the volume ratio of the drug 4 and the gas 3 is within the above range, the stability of the bubble 1 is improved, and the bubble 1 can be more reliably transported to the vicinity of the affected part.
  • the outer shell 2 is ruptured in the vicinity of the affected area, a sufficient amount of drug can be administered to the affected area. Therefore, the affected part can be treated more efficiently.
  • the drug 4 is not particularly limited as long as it is effective for treating diseases, but includes a gene, a drug, and the like. Specifically, peptides, antibodies, oligosaccharides, polysaccharides, genes, oligonucleotides, antisense oligonucleotides, siRNA, ribozymes, triple helix molecules, viral vectors, plasmids, low molecular organic compounds, anticancer agents, metals, etc. One or more of these can be used in combination. In addition, the content of the drug 4 in the bubble-containing liquid 100 is preferably 0.1 to 35 wt%, and more preferably 20 to 35 wt%.
  • the content of bubble 1 in bubble-containing liquid 100 is preferably 1.0 ⁇ 10 5 / ml or more, more preferably 1.0 ⁇ 10 6 / ml or more, and 1.0 ⁇ More preferably, it is 10 7 / ml or more.
  • a clearer ultrasound diagnostic image can be obtained by using a small amount of the bubble-containing liquid 100.
  • the affected area can be more efficiently treated by using a small amount of the bubble-containing liquid 100.
  • the bubble 1 has an average diameter of about 200 to 300 nm, the bubble 1 can be smoothly transported into the new blood vessel and reach cancer cells. That is, the bubble 1 can be suitably used for cancer treatment. Also, some of the bubbles 1 can be taken into cancer cells through the blood vessel wall. Further, the bubble 1 having an average diameter of about 600 to 900 nm is smoothly transported in the blood vessel of the brain, and the position thereof can be reliably specified in the ultrasonic image. Therefore, it can be suitably used for brain treatment (for example, intravascular treatment).
  • 2A to 2C is, for example, a laser diffraction / scattering method, a nanoparticle tracking analysis method, an electric resistance method, an AFM (Atomic Force Microscope), or a laser microscope. It can be measured by observation by the
  • a flow cytometer (trade name: CytoFlex) manufactured by Beckman Coulter, Inc. can be used.
  • a nanoparticle analysis system (trade name: nanosight) manufactured by Malvern can be used.
  • a resonance type particle measuring system (trade name: Archimedes) manufactured by Malvern, Inc. can be used.
  • the bubble-containing liquid 100 as described above can be manufactured by the bubble-containing liquid manufacturing method of the present invention described below. Hereinafter, the manufacturing method of the bubble containing liquid of this invention is demonstrated in detail.
  • FIG. 3 is a flowchart for explaining the first embodiment of the method for producing a bubble-containing liquid of the present invention.
  • 4A to 4D are cross-sectional views for explaining a first embodiment of the method for producing a bubble-containing liquid of the present invention.
  • FIG. 5 is a partially enlarged view for explaining a state in which the aqueous liquid and the inner surface (upper surface) of the container collide violently in the step of vibrating the container shown in FIG.
  • FIGS. 4 (a) to 4 (d) and FIG. 5 the upper side in FIGS. 4 (a) to 4 (d) and FIG. 5 is referred to as “upper”, and the lower side in FIGS. 4 (a) to (d) and FIG. To tell.
  • the method for producing a bubble-containing liquid includes five steps (S1) to (S5).
  • Step (S1) is a step of preparing a mixed liquid containing an aqueous liquid and a bubble retention agent, and a bubble manufacturing container (hereinafter simply referred to as “manufacturing container”) into which the mixed liquid is injected.
  • Step (S2) is a step of injecting the mixed solution to a predetermined height of the production container.
  • Step (S3) is a step of sealing the manufacturing container in a state where the manufacturing container is filled with gas and the inside of the manufacturing container is pressurized.
  • Step (S4) is a step of vibrating the production container at a predetermined rotational speed so that the mixed solution repeatedly collides with the inner surface of the container.
  • Step (S5) is a step of standing the production container.
  • a bubble-containing liquid can be obtained by dispersing or dissolving a bubble retention agent in an aqueous liquid in advance to form a mixed liquid, and generating bubbles in the mixed liquid. it can.
  • these steps will be sequentially described.
  • aqueous liquid and bubble retention agent As the aqueous liquid and bubble retention agent, the above-described aqueous liquid and bubble retention agent are used, respectively.
  • the liquid mixture 10 which further contains the outer shell material mentioned above is prepared.
  • the outer shell material and the drug 4 described above are further included.
  • a mixed solution 10 is prepared.
  • the manufacturing container 20 includes an opening, and includes a container main body 21 that contains the mixed liquid 10 and a lid 22 that seals the container main body 21.
  • the container body 21 is not particularly limited, but it is preferable that the outer shape as shown in FIG.
  • a vial with a capacity of about 0.5 to 20 ml is used as the container body 21.
  • a bubble-containing liquid of about 0.3 to 0.6 ml required for one ultrasonic diagnosis is placed in one manufacturing container 20. Can be manufactured.
  • the bubble-containing liquid 100 in one manufacturing container 20 can be used up in ultrasonic diagnosis, waste of the bubble-containing liquid 100 to be manufactured can be eliminated.
  • the dimensions of the vial with such a small capacity are such that the length X in the longitudinal direction is about 35 to 60 mm and the outer diameter R is about 10 to 40 mm.
  • the lid 22 has a disk-shaped rubber stopper (septum) 221 that is in close contact with the bottle mouth of the container body 21, and the rubber stopper 221 is fixed to the bottle mouth of the container body 21 And a tightening portion 222 to be tightened.
  • a disk-shaped rubber stopper (septum) 221 that is in close contact with the bottle mouth of the container body 21, and the rubber stopper 221 is fixed to the bottle mouth of the container body 21 And a tightening portion 222 to be tightened.
  • [S2] Step of injecting the mixed liquid into the production container The prepared mixed liquid 10 is injected to a predetermined height of the container body 21 (production container 20). In this embodiment, as shown to Fig.4 (a), it inject
  • the height (length in the longitudinal direction) of the container body 21 is X [mm]
  • the container When the height of the liquid surface of the liquid mixture 10 in the main body 21 is Y [mm], it is preferable that the relationship of 0.2 ⁇ Y / X ⁇ 0.7 is satisfied.
  • the mixed solution 10 is vigorously collided with the upper and lower surfaces and side surfaces (particularly the upper and lower surfaces) of the production container 20. be able to. Due to this collision, a shock wave is generated in the mixed liquid 10, and the bubble 1 can be easily formed in the mixed liquid 10.
  • the relationship preferably satisfies the relationship of 0.3 ⁇ Y / X ⁇ 0.5, and more preferably satisfies the relationship of 0.35 ⁇ Y / X ⁇ 0.4. Thereby, the bubble 1 can be more easily formed in the liquid mixture 10 in the step (S4).
  • the container body 21 into which the mixed liquid 10 has been injected is moved into the chamber.
  • the air in the chamber is replaced with gas 3.
  • the mixed liquid 10 and the gas 3 can be sealed in the production container 20 by fastening the lid 22 to the opening of the container body 21.
  • the gas 3 the various gases described above are used.
  • a syringe filled with gas 3 is prepared. Then, the injection needle of the syringe is pierced through the rubber stopper 221. Thereafter, the inside of the production container 20 is pressurized by further adding the gas 3 from the syringe into the production container 20. Thereafter, the injection needle is removed from the rubber stopper 221. Thereby, the manufacturing container 20 sealed with the inside of the manufacturing container 20 pressurized with the gas 3 can be obtained.
  • the pressure in the production container 20 (the pressure of the gas 3 filled in the gap 11) is made larger than 1.0 atm.
  • the pressure in the production container 20 is preferably 1.5 to 10 atm, and more preferably 2 to 5 atm. Thereby, a part of the gas 3 is finely dispersed or dissolved in the mixed liquid 10.
  • the bubble 1 is easily generated when the mixed liquid 10 and the manufacturing container 20 collide with each other and a shock wave is generated in the step (S 4). Thereby, in the step (S4), more bubbles 1 can be generated in the mixed liquid 10.
  • generated in the liquid mixture 10 can be adjusted more easily by setting the pressure in the manufacturing container 20 to the arbitrary values larger than 1.0 atm.
  • the inside of the manufacturing container 20 is pressurized (the pressure in the manufacturing container 20 is greater than 1.0 atm), but the next step (without pressurizing the inside of the manufacturing container 20) S4) may be performed.
  • the manufacturing container 20 is vibrated so that the mixed liquid 10 repeatedly collides with the upper and lower surfaces and side surfaces (particularly the upper and lower surfaces) of the manufacturing container 20.
  • the manufacturing container 20 is vibrated so that the manufacturing container 20 reciprocates substantially in the longitudinal direction (vertical direction in FIG. 4C).
  • the production container 20 sealed in the step (S3) (the lower diagram in FIG. 4C) is vibrated upward (the middle diagram in FIG. 4C).
  • the liquid mixture 10 moves to the vicinity of the middle of the manufacturing container 20.
  • the mixed solution 10 moves to the upper part of the production container 20 and collides with the lower surface (rubber plug 221) of the lid 22 (upper view of FIG. 4C).
  • a shock wave is generated as shown in FIG. Due to the pressure of the shock wave, the gas 3 is finely dispersed in the mixed liquid 10 to form a bubble 1.
  • the bubble 1 contains a gas 3 finely dispersed or dissolved in the liquid mixture 10 by vibration.
  • the manufacturing container 20 (the upper diagram in FIG. 4C) is vibrated downward (the middle diagram in FIG. 4C). Thereby, the liquid mixture 10 moves to the vicinity of the middle of the manufacturing container 20.
  • the manufacturing container 20 is further vibrated downward, the mixed liquid 10 moves to the lower part of the manufacturing container 20 and collides with the lower surface of the manufacturing container 20 (the lower diagram in FIG. 4C). Also at this time, shock waves are generated as shown in FIG.
  • the method for producing a bubble-containing liquid it is preferable to vibrate the production container 20 at 5000 rpm or more in order to obtain a sufficiently fine and uniform bubble 1.
  • size (pressure) of the shock wave generated when the liquid mixture 10 and the production container 20 collide becomes sufficiently large, the bubbles 1 generated in the liquid mixture 10 are miniaturized, and the size is made uniform. be able to.
  • the number of rotations of the manufacturing container 20 is set to a low value within the above range, the magnitude of the generated shock wave becomes small, so that the bubble 1 having a relatively large diameter can be generated.
  • the “number of rotations” of the manufacturing container 20 means the number of times that the manufacturing container 20 moves through the entire vibration path per unit time. For example, the fact that the manufacturing container 20 vibrates at 5000 rpm means that the manufacturing container 20 moves (vibrates) all vibration paths 5000 times per minute.
  • the rotation speed of the production container 20 is more preferably 5500 rpm or more, and further preferably 6000 to 20000 rpm. By making the rotation speed of the production container 20 within the above range, it is possible to more reliably prevent the bubbles 1 generated by vibration from collapsing due to collision or coalescing and coarsening. Thereby, it is possible to produce a large amount of bubbles 1 having a more uniform size in the mixed liquid 10 while reducing the diameter of the bubbles 1.
  • a bead type high-speed cell disruption system can be used as an apparatus that can vibrate the production container 20 at the number of rotations as described above.
  • homogenizer a high-speed cell disruption system
  • Precellys manufactured by Bertin Technologies, Inc. can be used.
  • the pressure of the shock wave generated when the mixed solution 10 and the production container 20 collide is preferably 40 kPa to 1 GPa.
  • the pressure of the shock wave generated at the time of the collision between the mixed liquid 10 and the production container 20 falls within the above range, the bubbles 1 generated in the mixed liquid 10 can be made finer and the size thereof can be made more uniform.
  • the finer bubble 1 can be generated.
  • the vibration width in the longitudinal direction of the production container 20 is preferably about 0.7X to 1.5X [mm], more preferably about 0.8X to 1X [mm]. More preferred.
  • the manufacturing container 20 vibrates, the liquid mixture 10 and the lower surface of the manufacturing container 20 and the lid 22 can be reliably collided, and the number of times of collision between the liquid mixture 10 and the lower surface of the manufacturing container 20 and the lid 22 is sufficient. Can be much more.
  • the speed at which the mixed liquid 10 moves in the production container 20 is increased. Therefore, the magnitude of the shock wave generated when the mixed liquid 10 collides with the lower surface of the manufacturing container 20 and the lid 22 becomes sufficiently large. As a result, a large amount of fine bubbles 1 can be generated in the mixed liquid 10.
  • the production container 20 when the production container 20 is reciprocated in the vertical direction, the production container 20 is preferably vibrated in the short direction (horizontal direction). Thereby, since the liquid mixture 10 also collides with the inner side surface of the manufacturing container 20, more shock waves can be generated in the liquid mixture 10.
  • the vibration width in the short direction of the production container 20 is preferably about 0.3X to 0.8X [mm], and more preferably about 0.5X to 0.7X [mm]. Thereby, the effect mentioned above becomes more remarkable.
  • the direction in which the manufacturing container 20 is vibrated may be only the short direction.
  • the vibration width in the short direction (horizontal direction) of the manufacturing container 20 is preferably the same as the vibration width in the short direction described above. With such a vibration width, the liquid mixture 10 reliably collides with the inner side surface of the manufacturing container 20, so that more shock waves can be generated in the liquid mixture 10. As a result, a large amount of fine bubbles 1 can be generated in the mixed liquid 10.
  • the manufacturing is performed so that the instantaneous relative speed between the manufacturing container 20 and the mixed liquid 10 in the manufacturing container 20 is 40 km / h or more when the mixed liquid 10 collides with the upper and lower surfaces and side surfaces of the manufacturing container 20. It is preferable to vibrate the container 20. Moreover, it is more preferable to vibrate the production container 20 so that the instantaneous relative speed is 50 km / h or more.
  • the pressure of the shock wave generated when the mixed liquid 10 and the production container 20 collide can be sufficiently increased. As a result, the bubbles 1 generated in the mixed liquid 10 can be made finer and the size thereof can be made more uniform.
  • the time for vibrating the production container 20 under the above conditions is preferably about 10 to 120 seconds, and more preferably about 30 to 60 seconds.
  • generated in the liquid mixture 10 can be adjusted by changing the rotation speed of the manufacturing container 20 within the range mentioned above.
  • nanobubbles having a size of approximately several tens to several hundreds of nanometers can be stably generated.
  • the manufacturing container 20 is vibrated so that the manufacturing container 20 reciprocates substantially in the longitudinal direction, but the method of vibrating the manufacturing container 20 is not limited to this.
  • the manufacturing container 20 may be vibrated so that the manufacturing container 20 rotates mainly in the lateral direction and / or the longitudinal direction thereof.
  • the mixed liquid 10 in the production container 20 repeatedly impacts the upper and lower surfaces and side surfaces of the production container 20 to generate shock waves. Even if such a vibration method is used, a uniform amount of bubbles 1 can be stably generated in a large amount in the liquid mixture 10.
  • the above-described steps (S2) to (S4) are preferably performed at a constant temperature. If the temperature condition in the manufacturing process is constant, the characteristics (viscosity, etc.) of the liquid mixture 10 (aqueous liquid) are stabilized in each step (S2) to (S4). Can be generated.
  • a method for keeping the temperature of each solution constant for example, a method of performing each of the above-described steps (S2) to (S4) in a glove box or a thermostat can be mentioned.
  • the production container 20 is vibrated at a high speed in the step (S4), the production container 20 is likely to generate heat due to a collision between the mixed liquid 10 and the inner surface of the production container 20.
  • the bubble-containing liquid 100 containing the bubbles 1 having an average diameter of about 10 nm to 1000 ⁇ m is manufactured.
  • the conventional bubble manufacturing method requires a large-scale reflux device and various systems (tubes, nozzles, compressors, etc.) constituting the bubble manufacturing device. For this reason, it has been difficult to maintain a clean and sterile environment when producing bubbles used in the food and medical fields.
  • the highly airtight production container 20 is used for producing the bubble-containing liquid 100
  • the mixed liquid 10 and the gas 3 are contained in the production container 20, for example, ⁇ -ray sterilization or the like.
  • the sterilization process by the above may be applied to the manufacturing container 20 mixed solution 10.
  • the bubble-containing liquid 100 can be produced in a sterilized environment.
  • the bubble 1 can exist stably. Therefore, the obtained bubble-containing liquid 100 can be stored for a long time at room temperature. Specifically, it can be stored for a period of 10 to 36 months. Further, even after being stored for such a long period of time, since the stability of the bubble 1 in the mixed solution 10 is high, it is possible to use it without having to vibrate the bubble-containing container again. Moreover, since the manufacturing container 20 with a small capacity
  • the bubble-containing liquid production method of the present embodiment is subjected to a centrifugal separation treatment on the production container 20 after the step (S4), before the step (S5), or after the step (S5). May be performed.
  • a centrifugal separation treatment on the production container 20 after the step (S4), before the step (S5), or after the step (S5). May be performed.
  • the bubbles 1 generated in the manufacturing container 20 can be separated according to a desired diameter.
  • the bubble 1 having a large diameter tends to move to the upper layer of the manufacturing container 20, and the bubble 1 having a small diameter moves to the lower layer of the manufacturing container 20. Tend to.
  • the average diameter of the bubbles 1 in the bubble-containing liquid remaining in the production container 20 is the step (S5). It becomes smaller than the average diameter of the bubbles 1 in the bubble-containing liquid 100 obtained later. Moreover, the average diameter of the bubble 1 in the bubble containing liquid (supernatant liquid) attracted
  • the bubble 1 which has a more monodispersed bubble diameter distribution can be obtained by using a centrifugation process.
  • the bubble 1 having a larger diameter can be easily moved to an upper layer, and the bubble 1 having a smaller diameter is moved to a lower layer. As a result, the bubble 1 having a more monodispersed bubble diameter distribution can be obtained.
  • the conditions for the centrifugal separation process are appropriately set according to the average diameter of the bubbles 1 to be separated.
  • the centrifugal acceleration of about 1 ⁇ g to 22000 ⁇ g is applied to the bubble-containing liquid 100 for about 30 seconds to 24 hours.
  • the centrifugal acceleration is set to a small value (about 1 ⁇ g to 100 ⁇ g)
  • a bubble 1 having a more monodispersed bubble diameter distribution is obtained by processing for a long time (about 12 hours to about 24 hours). Can do.
  • the centrifugal acceleration when the centrifugal acceleration is set to a large value (100 ⁇ g to 22000 ⁇ g), a bubble 1 having a more monodispersed bubble diameter distribution is obtained by processing for a relatively short time (about 30 seconds to 12 hours). be able to.
  • the centrifuge capable of performing the centrifugal separation process on the bubble-containing container with the centrifugal acceleration as described above is not particularly limited.
  • a micro high-speed such as a trade name “TOMY MX-301” (manufactured by Tommy Seiko Co., Ltd.)
  • a cooling centrifuge can be used.
  • the centrifugal acceleration (centrifugal force) in the above range is loaded on the bubble-containing liquid by setting the rotation speed to about 50 to 2000 rpm. Moreover, the centrifugation process may be performed once or multiple times.
  • step (S6) described above may be performed after the step (S4) is performed, and then the bubble-containing liquid 100 may be obtained through the step (S5). Further, after step (S5), step (S4) may be repeated at least once.
  • FIG. 6 is a flowchart for explaining a second embodiment of the method for producing a bubble-containing liquid of the present invention.
  • the method for producing a bubble-containing liquid includes five steps (S1) to (S5).
  • Step (S1) is a step of preparing a first liquid containing an aqueous liquid, a second liquid containing a bubble retention agent, and a production container into which the first and second liquids are injected.
  • Step (S2) is a step of injecting the first liquid to a predetermined height of the production container.
  • Step (S3) is a step of sealing the manufacturing container in a state where the manufacturing container is filled with gas and the inside of the manufacturing container is pressurized.
  • Step (S4) is a step of vibrating the manufacturing container at a predetermined rotational speed so that the first liquid repeatedly collides with the inner surface of the container.
  • Step (S5) is a step of injecting the second liquid into the production container after vibration and mixing the first liquid and the second liquid to obtain a bubble-containing liquid. That is, in the method for producing a bubble-containing liquid of the present embodiment, after the bubble 1 is generated in an aqueous liquid (first liquid) that does not include a bubble retention agent, the second that includes the bubble retention agent in step (S5). This is the same as the method for producing the bubble-containing liquid of the first embodiment except that the liquid is added.
  • the first liquid containing the aqueous liquid described above, the second liquid containing the bubble retention agent, and the production container are prepared.
  • the first liquid the above-described aqueous liquid is used.
  • an aqueous liquid, an outer shell material or the like are placed in a preparation container, and the outer shell material and the like are dissolved in an aqueous liquid. Thereby, the first liquid is prepared.
  • the second liquid can be obtained by dispersing or dissolving the above-described bubble retention agent in an aqueous liquid.
  • the aqueous liquid constituting the second liquid is preferably the same aqueous liquid as the aqueous liquid used in the first liquid, but different types of aqueous liquids can also be used.
  • Steps (S2) to (S4) are performed using the first liquid thus adjusted in the same manner as in the first embodiment described above. Thereby, a large amount of bubbles 1 of uniform size can be generated in the first liquid.
  • the inside of the manufacturing container 20 is pressurized. Therefore, when removing the lid 22 of the production container 20, if the pressure inside the production container 20 is suddenly reduced, the particle size of the bubble 1 in the first liquid may change and a phenomenon such as a decrease in content may occur. There is. Therefore, in this step, when removing the lid 22 of the production container 20, it is preferable to reduce the pressure in the production container 20 to atmospheric pressure in advance.
  • a decompression syringe for decompressing the inside of the production container 20 is prepared, and the injection needle is inserted into the rubber stopper 221. At that time, the injection needle of the decompression syringe is prevented from coming into contact with the first liquid.
  • the pressure in the production container 20 is reduced to atmospheric pressure by operating the plunger of the syringe for decompression and sucking the gas 3 in the production container 20. Thereafter, the lid 22 is removed from the production container 20. If such a method is used, the phenomenon as described above does not occur in the generated bubble 1.
  • the bubble-containing liquid 100 containing the bubbles 1 having an average diameter of about 10 nm to 1000 ⁇ m is manufactured. Moreover, after performing a process (S5), the process (S6) of 1st Embodiment mentioned above can also be performed. Thereby, the bubble containing liquid 100 which contains the bubble 1 of a uniform size more stably in the production container 20 in large quantities can be obtained.
  • the second liquid containing the bubble retention agent is added to the first liquid in which the bubble 1 is generated, and then mixed to obtain the bubble-containing liquid.
  • the present invention is not limited to this.
  • a first liquid in which nanobubbles are dispersed using a method other than the above steps (S1) to (S4) can also be used.
  • commercially available nanobubble (ultra fine bubble) water containing nanobubbles having an average diameter of about 10 nm to 1000 nm can be used as the first liquid.
  • the bubble-containing liquid manufacturing method of the second embodiment produces the same operations and effects as the bubble-containing liquid manufacturing method of the first embodiment.
  • the bubble-containing liquid and the method for producing the bubble-containing liquid of the present invention have been described based on the illustrated embodiment.
  • the present invention is not limited to this, and each step exhibits the same function. It can be replaced with any step obtained.
  • Example 1 [Preparation process] First, in a 15 ml vial as an adjustment container, 6 ml of physiological saline (0.9 w / v% NaCl aqueous solution) and 50% glucose solution in which 10 g of glucose is dissolved in 20 ml of physiological saline (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) , Otsuka sugar solution 50%) 4 ml. Then, the liquid mixture was obtained by stirring physiological saline and 50% glucose solution. The content of glucose (glucose) in the mixed solution was 20 wt%. Moreover, a 2 ml vial (height X: 45 mm, outer diameter R: 13 mm) as a production container was prepared. This vial has the same shape as the manufacturing container 20 shown in FIG.
  • Step of injecting the mixed solution into the container 700 ⁇ l of the mixed solution was injected into a 2 ml vial.
  • the liquid surface height Y of the mixed liquid was 25 mm.
  • Step of vibrating container Next, using Precellys (high-speed cell disruption system) manufactured by Bertin Technologies, the sealed vial was vibrated at 6500 rpm for 120 seconds and then allowed to stand for 20 seconds. In this step, the closed vial reciprocated in the vertical direction and the horizontal direction, and it was confirmed that the mixed solution repeatedly collided with the upper and lower surfaces and side surfaces of the vial.
  • the vibration width in the longitudinal direction (vertical direction) of the sealed vial was 40 mm
  • the vibration width in the short direction (horizontal direction) of the sealed vial was 20 mm.
  • the instantaneous relative speed between the vial and the mixed solution was set to 40 km / h or more for any vial.
  • Example 2 A bubble-containing liquid was obtained in the same manner as in Example 1 except that the mixed solution of Example 1 was replaced with a mixed solution of 2 ml of physiological saline and 8 ml of 50% glucose solution. In addition, content of the glucose in a liquid mixture was 40 wt%.
  • Example 3 A bubble-containing liquid was obtained in the same manner as in Example 1 except that the mixed solution of Example 1 was changed to 10 ml of 50% glucose solution. In addition, content of the glucose in a liquid mixture was 50 wt%.
  • Example 4 The mixed solution of Example 1 was replaced with a mixed solution of 2 ml of distilled water and 8 ml of 5% glucose solution (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd., Otsuka Sugar Solution 5%) in which 1 g of glucose was dissolved in 20 ml of physiological saline. Except for the above, a bubble-containing liquid was obtained in the same manner as in Example 1. In addition, content of the glucose in a liquid mixture was 4 wt%.
  • Example 5 A bubble-containing liquid was obtained in the same manner as in Example 1 except that the mixed solution of Example 1 was replaced with a mixed solution of 4 ml of distilled water and 6 ml of 5% glucose solution. In addition, content of the glucose in a liquid mixture was 3 wt%.
  • Example 6 A bubble-containing liquid was obtained in the same manner as in Example 1 except that nitrogen (N 2 ) was used instead of perfluoropropane as the gas to be used. In addition, content of the glucose in a liquid mixture was 20 wt%.
  • Example 7 A bubble-containing liquid was obtained in the same manner as in Example 2 except that nitrogen was used instead of perfluoropropane as the gas to be used. In addition, content of the glucose in a liquid mixture was 40 wt%.
  • Example 8 A bubble-containing liquid was obtained in the same manner as in Example 3 except that nitrogen was used instead of perfluoropropane as the gas to be used. In addition, content of the glucose in a liquid mixture was 50 wt%.
  • Example 9 Except that the mixed solution of Example 1 was replaced with a mixed solution of 12 ml of physiological saline and 30 ⁇ l of an albumin solution containing 25 mg / ml of albumin (Albminer 25% manufactured by CSL Behring), the same as in Example 1 above. Thus, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.06 wt%.
  • Example 10 In distilled water, 30 ⁇ l of an albumin solution (Albminer 25% manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of oxygen ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanox Co., Ltd.) having an average bubble diameter of about 100 nm and containing oxygen. . Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.06 wt%.
  • Example 11 In distilled water, 57 ⁇ l of an albumin solution (Albminer 25% manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of oxygen ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanocus Co., Ltd.) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.12 wt%.
  • Example 12 In distilled water, 121 ⁇ l of an albumin solution (Albminer 25% manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of oxygen ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanocus Co., Ltd.) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.25 wt%.
  • Example 13 In distilled water, 30 ⁇ l of albumin solution (CSL Behring's Albminer 25%) 30 ⁇ l was added to 12 ml of nitrogen ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanocus Co., Ltd.) having an average bubble diameter of about 100 nm and stirred. . Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.06 wt%.
  • Example 14 In distilled water, 57 ⁇ l of an albumin solution (Albminer 25% manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of nitrogen ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanocus Co., Ltd.) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.12 wt%.
  • Example 15 In distilled water, 121 ⁇ l of albumin solution (Albminer 25% manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of nitrogen ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanocus Co., Ltd.) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.25 wt%.
  • Example 16 In distilled water, 30 ⁇ l of an albumin solution (CSL Behring Albminer 25%) 30 ⁇ l was added to 12 ml of air ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanocus Co., Ltd.) having an average bubble diameter of about 100 nm and stirred. . Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.06 wt%.
  • Example 17 In distilled water, 57 ⁇ l of an albumin solution (Albminer 25%, manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of air ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanox Corporation) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.12 wt%.
  • Example 18 In distilled water, 121 ⁇ l of albumin solution (Albminer 25%, manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of air ultra fine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanox Corporation) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.25 wt%.
  • Example 19 In distilled water, 245 ⁇ l of an albumin solution (Albminer 25%, manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of oxygen ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanox Corporation) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.5 wt%.
  • Example 20 In distilled water, 3 ml of an albumin solution (Albminer 25% manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of oxygen ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanocus Co., Ltd.) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 5 wt%.
  • Example 21 In distilled water, 245 ⁇ l of an albumin solution (Albminer 25% manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of nitrogen ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanocus Co., Ltd.) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.5 wt%.
  • Example 22 In distilled water, 3 ml of albumin solution (Albminer 25%, manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of nitrogen ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanocus Co., Ltd.) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 5 wt%.
  • Example 23 In distilled water, 245 ⁇ l of albumin solution (Albminer 25%, manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of air ultrafine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanox Corporation) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 0.5 wt%.
  • Example 24 In distilled water, 3 ml of an albumin solution (Albminer 25%, manufactured by CSL Behring) was added to 12 ml of air ultra fine bubble (nanobubble) water (manufactured by Nanocus Co., Ltd.) and stirred. Thereby, a bubble-containing liquid was obtained.
  • the albumin content in the mixed solution was 5 wt%.
  • Example 1 A bubble-containing liquid was obtained in the same manner as in Example 1 except that the mixed solution of Example 1 was replaced with only 10 ml of physiological saline.
  • Example 2 A bubble-containing liquid was obtained in the same manner as in Example 1 except that the mixed liquid in Example 1 was replaced with only 10 ml of water.
  • the samples of Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 were stored with the lid of the container opened at 4 ° C. under atmospheric pressure, and in the samples immediately after production of the bubble-containing liquid, 5 days, and 10 days later.
  • the bubble diameter distribution was measured using a nanoparticle analysis system (trade name: nanosight).
  • the samples of Examples 4 and 5 and Comparative Example 2 were stored under the atmospheric pressure at 4 ° C. with the container open, and the bubbles in the sample immediately after the production of the bubble-containing liquid and after 10 days.
  • the diameter distribution of was measured in the same manner as described above.
  • the samples of Examples 6 to 8 and Comparative Example 3 were stored under the atmospheric pressure at 4 ° C.
  • Example 9 three samples were prepared. Each sample is stored under atmospheric pressure at 4 ° C., room temperature (about 20 ° C.) and 37 ° C. with the lid of the container opened, immediately after the production of the bubble-containing liquid and after 5 days. The bubble diameter distribution in the sample was measured in the same manner as described above. These results are shown in FIGS.
  • FIGS. 7 (a) to (d) are graphs showing bubble diameter distributions of the samples obtained in Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 immediately after production, 5 days later, and 10 days later.
  • FIGS. 8A to 8C are graphs showing bubble diameter distributions of the samples obtained in Examples 4 and 5 and Comparative Example 2 immediately after production and after 10 days.
  • FIG. 9 (a) is a graph showing the bubble diameter distribution immediately after the production of the samples obtained in Examples 6-8.
  • FIG. 9 (b) is a graph showing the bubble size distribution after 12 days for the samples obtained in Examples 6-8.
  • FIG. 10A is a graph showing the bubble diameter distribution immediately after the production of the sample obtained in Example 9.
  • FIG. 10 (b) shows the bubble size distribution after the sample obtained in Example 9 was stored at 4 ° C. for 5 days.
  • FIG. 10 (c) shows the bubble size distribution after the sample obtained in Example 9 was stored at room temperature for 5 days.
  • FIG. 10 (d) shows the bubble size distribution after the sample obtained in Example 9 was stored
  • the bubble content in the sample after 5 days is less than the bubble content in the sample immediately after production.
  • the bubble diameter decreased by about 70% in the range of 100 to 300 nm.
  • the bubble diameter decreased by about 33% in the range of 100 to 300 nm.
  • the bubble diameter decreased by about 30% in the range of 100 to 300 nm.
  • the shape of the bubble diameter distribution curve did not change significantly (see FIGS. 7A to 7C). That is, in the samples of Examples 1 to 3, fluctuations in the particle size of the contained bubbles were suppressed even after 5 days from production.
  • the bubble content in the sample after 10 days was almost the same as the bubble content in the sample after 5 days, and the shape of the bubble diameter distribution curve was almost the same.
  • the bubble content in the sample after 10 days is smaller than the bubble content in the sample after 5 days in the range of the bubble diameter of 100 to 200 nm, but the bubble diameter is In the range larger than 200 nm, it hardly changed.
  • the bubble content in the sample after 10 days is smaller than the bubble content in the sample immediately after the production in the bubble diameter range of 0 to 200 nm. In the range larger than 200 nm, it hardly changed.
  • the bubble content in the sample decreased by about 95% after 5 days, and most of the bubbles disappeared after 10 days (Fig. 7 (d)). Therefore, it was found that the bubble-containing liquid of the present invention has excellent stability over time of the contained bubbles and small fluctuations in the bubble diameter.
  • Example 1 in the samples of Examples 4 and 5 obtained by mixing distilled water and a low-concentration glucose solution (5% glucose solution), Example 1 It was found that a lower concentration of glucose than the samples of ⁇ 3 improves the stability of the bubble over time.
  • the bubble content in the sample after 10 days was reduced by about 90% from the bubble content in the sample immediately after production in the range of the bubble diameter of 100 to 300 nm.
  • the bubble content in the sample after 10 days was reduced by about 90% from the bubble content in the sample immediately after production in the range of the bubble diameter of 100 to 300 nm. .
  • the bubble-containing liquids of Examples 6 to 8 containing a bubble retention agent had high time stability of the contained bubbles as in Examples 1 to 5 above. .
  • the bubble content in the sample after 12 days was about 20% less than the bubble content in the sample immediately after production.
  • the bubble content in the sample after 12 days was almost the same as the bubble content in the sample immediately after production.
  • the bubble content in the sample after 12 days was about 94% less than the bubble content in the sample immediately after production (see FIG. 9B).
  • the bubble-containing liquid of Example 9 in the bubble-containing liquid of Example 9, the above Examples 1 to 5 were used even though the content of the bubble retention agent was small (albumin content: 0.06 wt%). It was confirmed that the aging stability of the contained bubbles was high in the same manner. Further, the bubble-containing liquid stored at a low temperature (4 ° C.) had a more monodispersed bubble diameter distribution than the bubble-containing liquid stored at room temperature and a temperature higher than room temperature (37 ° C.).
  • the time-dependent stability of the bubble was evaluated about the bubble containing liquid obtained by adding albumin as a bubble retention agent to the water (ultra fine bubble water) containing commercially available nanobubble.
  • the bubble-containing liquids (samples) of Examples 10 to 18 and Comparative Examples 4 to 6 were stored under the atmospheric pressure at 4 ° C. with the container open, immediately after the production of the bubble-containing liquid (0 day).
  • the bubble size distribution in the sample after 1 day (1 day), 3 days (3 day) and 7 days (7 day) was measured using a flow cytometer (trade name; CytoFlex) manufactured by Beckman Coulter.
  • Examples of Examples 19 to 24 and Comparative Examples 4 to 6 were stored with the container lid opened at 4 ° C., and the bubble diameter distribution stored under the following conditions was The measurement was performed using a nanoparticle analysis system (trade name: nanosight).
  • Example 19 After 3 days (3 day)
  • Example 20 After 13 days (13 days)
  • Example 21 After 13 days (13 days), after 14 days (14 days), after 35 days (35 days)
  • Example 22 13 days later (13 days), 14 days later (14 days), 38 days later (38 days)
  • Example 23 Immediately after manufacture (0 day)
  • Example 24 10 days later (10 day) Comparative Example 4: After 3 days (3 days) Comparative Example 5: Immediately after production (0 day) Comparative Example 6: Immediately after manufacture (0 day)
  • FIG. 11 is a graph showing the change over time of the concentration of bubbles having a bubble diameter of 200 to 1000 nm in the samples obtained in Examples 10 to 12 and Comparative Example 4.
  • FIG. 12 is a graph showing the change over time in the concentration of bubbles having a bubble diameter of 200 to 1000 nm in the samples obtained in Examples 13 to 15 and Comparative Example 5.
  • FIG. 13 is a graph showing the change over time in the concentration of bubbles having a bubble diameter of 200 to 1000 nm in the samples obtained in Examples 16 to 18 and Comparative Example 6.
  • the minimum is less than 200 nm. It was confirmed that a sufficient amount of bubbles was present in the bubble-containing liquid.
  • the above evaluation was performed when the container for storing bubble-containing liquid was stored with the lid open, and was evaluated in order to evaluate the temporal stability of the bubble in a short period of time. Therefore, after the production, when the bubble-containing liquid of each example is stored without opening the lid of the production container, the number of bubbles contained in the bubble-containing liquid and the bubble diameter change over a long period of several years. It is considered that the bubble-containing liquid is suppressed and has excellent bubble stability over time.
  • the bubble-containing liquid of the present invention can be used in various fields such as medical care, food, seafood culture, and wastewater treatment.
  • the bubble-containing liquid includes a bubble retentive agent that acts to stably retain the bubble in the aqueous liquid. It can be retained (saved). Therefore, even when the bubble-containing liquid of the present invention is stored for a long period of time, fluctuations in the number and size of contained bubbles are suppressed, and the stability of the bubbles over time is excellent. That is, it is possible to provide a bubble-containing liquid whose quality is maintained over a long period of time. Therefore, the molecular targeted drug bubble of the present invention has industrial applicability.

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Abstract

本発明のバブル含有液体は、水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルとを有する。かかるバブル含有液体は、バブルを水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤を含むことを特徴とする。バブル保持剤としては、塩類、糖類およびタンパク質が挙げられ、糖類であるグルコースを含んでいることが好ましい。また、上記ガスとしては、酸素、水素、窒素、ヘリウム、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン、パーフルオロペンタンからなる群から選択される少なくとも１種を含むことが好ましい。

Description

バブル含有液体およびバブル含有液体の製造方法
　本発明は、マイクロバブルまたはナノバブルを含有するバブル含有液体、およびそのバブル含有液体の製造方法に関する。
　近年、医療、食品、魚介類の養殖、排水処理等の様々な分野において、マイクロサイズ（数百マイクロメートル程度）、または、ナノサイズ（数百ナノメートル以下）のバブルの利用が検討されている。
　特に、医療分野では、かかるバブルを超音波造影剤として用いて、胸部や腹部等の診断対象部位を診断する超音波診断が知られている。超音波診断では、バブルを血管内へ注入し、バブルが集積した診断対象部位に超音波を照射して、診断対象部位からの反射波（反射エコー）を画像化して診断する。超音波造影剤として用いられるバブルは、例えば、特許文献１に記載されたバブルの製造方法によって製造することができる。
　また、近年では、バブルを用いた超音波治療も検討されている（例えば、特許文献２）。超音波治療では、遺伝子や薬剤（薬物）を封入したバブルを体内へ注入し、血流により患部にまで搬送する。そして、バブルが患部付近に到達した際に、超音波をバブルに照射して、バブルを破裂させる。そうすることにより、バブルに封入された薬物を患部に集中的に投与することができる。
　このバブルは、水性液体中にバブルが分散したバブル含有液体の状態で使用される。しかしながら、水性液体中でバブルを安定的に保存することは難しかった。例えば、バブル含有液体を調整後、長期間経過したバブル含有液体中のバブルの数は、バブル含有液体が晒される温度、圧力、振動等の外的要因により、調整直後のバブル含有液体中のバブルの数よりも著しく減少することがあった。
特許第５９２７３２５号公報 特開２００２－２０９８９６号公報
　本発明は、上記従来の問題点を鑑みたものであり、その目的は、水性液体中に分散したバブルの経時安定性に優れたバブル含有液体を提供することである。また、別の目的は、かかるバブル含有液体を安定かつ容易に製造することができるバブル含有液体の製造方法を提供することである。
　このような目的は以下の（１）～（８）の本発明により達成される。
　（１）　水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルとを有するバブル含有液体であって、
　前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤をさらに含むことを特徴とするバブル含有液体。
　（２）　前記バブル保持剤は、塩類、糖類およびタンパク質のうちの少なくとも１種を含む上記（１）に記載のバブル含有液体。
　（３）　前記糖類は、グルコースを含む上記（２）に記載のバブル含有液体。
　（４）　前記ガスは、酸素、水素、窒素、ヘリウム、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン、パーフルオロペンタンからなる群から選択される少なくとも１種を含む上記（１）ないし（３）のいずれかに記載のバブル含有液体。
　（５）　前記バブル含有液体中の前記水性液体の含有量［ｗｔ％］と、前記バブル含有液体中の前記バブル保持剤の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０～９９．９９９：０．００１である上記（１）ないし（４）のいずれかに記載のバブル含有液体。
　（６）　水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルとを有するバブル含有液体の製造方法であって、
　前記水性液体と、前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤とを含む混合液を準備する工程と、
　前記混合液を、容器の所定の高さまで注入する工程と、
　前記混合液が前記容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で前記容器を振動させることにより、前記バブル含有液体を得る工程と、を有することを特徴とするバブル含有液体の製造方法。
　（７）　水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルと、前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤とを有するバブル含有液体の製造方法であって、
　前記水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルとを有する第１の液体と、前記バブル保持剤を含む第２の液体とを準備する工程と、
　前記第１の液体と前記第２の液体とを混合して、前記バブル含有液体を得る工程と、を有することを特徴とするバブル含有液体の製造方法。
　（８）　前記第１の液体は、前記水性液体を、容器の所定の高さまで注入する工程と、前記水性液体が前記容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で前記容器を振動させる工程と、を経て得られる上記（７）に記載のバブル含有液体の製造方法。
　本発明によれば、バブル保持剤の作用により、水性液体中にバブルを安定的に保持（保存）することができる。そのため、本発明のバブル含有液体は、長期間保存した場合でも、含まれるバブルの数およびサイズの変動を抑え、バブルの経時安定性に優れている。
図１は、本発明のバブル含有液体を説明するための模式図である。 図２は、本発明のバブル含有液体中に含まれるバブルの一例について、その一部を切断した状態を示す斜視図である。図２（ａ）は、ガスが封入されたバブルの一部を切断した状態を示しており、図２（ｂ）および図２（ｃ）は、ガスおよび薬物が封入されたバブルの一部を切断した状態を示す。 図３は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第１実施形態を説明するためのフローチャートである。 図４（ａ）～（ｄ）は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第１実施形態を説明するための断面図である。 図５は、図４（ｃ）に示す容器を振動させる工程において、水性液体と容器の内面（上面）とが激しく衝突した状態を説明するための部分拡大図である。 図６は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第２実施形態を説明するためのフローチャートである。 図７（ａ）～（ｄ）は、実施例１～３および比較例１で得られたサンプルの、製造直後、５日後、および１０日後のバブル径分布を示すグラフである。 図８（ａ）～（ｃ）は、実施例４、５および比較例２で得られたサンプルの、製造直後および１０日後のバブル径分布を示すグラフである。 図９（ａ）は、実施例６～８で得られたサンプルの製造直後のバブル径分布を示すグラフである。図９（ｂ）は、実施例６～８で得られたサンプルの１２日後のバブル径分布を示すグラフである。 図１０（ａ）は、実施例９で得られたサンプルの製造直後のバブル径分布を示すグラフである。図１０（ｂ）は、実施例９で得られたサンプルを４℃で５日間保管した後のバブル径分布である。図１０（ｃ）は、実施例９で得られたサンプルを室温で５日間保管した後のバブル径分布である。図１０（ｄ）は、実施例９で得られたサンプルを３７℃で５日間保管した後のバブル径分布である。 図１１は、実施例１０～１２および比較例４で得られたサンプルにおける２００～１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。 図１２は、実施例１３～１５および比較例５で得られたサンプルにおける２００～１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。 図１３は、実施例１６～１８および比較例６で得られたサンプルにおける２００～１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。 図１４（ａ）～（ｃ）は、実施例１９～２４および比較例４～６で得られたサンプルにおける、バブル径が２００ｎｍ未満のバブルの濃度およびバブル径が２００ｎｍより大きいバブルの濃度の比率の経時変化を示すグラフである。
　以下、本発明のバブル含有液体およびバブル含有液体の製造方法を添付図面に示す好適な実施形態に基づいて説明する。
１．バブル含有液体
　まず、バブル含有液体について説明する。
　図１は、本発明のバブル含有液体を説明するための模式図である。
　図１に示すように、本実施形態のバブル含有液体１００は、水性液体と、水性液体中に分散した、ガス３を含むバブル１（気泡）とを有する。
　このバブル含有液体１００は、医療、食品、魚介類の養殖、排水処理等の様々な分野に用いることができる。本実施形態では、バブル含有液体１００を体内に注入して、バブル含有液体１００中のバブル１を超音波診断または超音波治療に用いる場合について説明する。
　水性液体としては、例えば、蒸留水、純水、超純水、イオン交換水、ＲＯ水等の水、Ｓａｌｉｎｅ（塩化ナトリウム濃度が０．９％程度の生理食塩水）、ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ）、ＫＣｌ点滴液等の塩水溶液、グルコース、スクロース等の糖水溶液、アミノ酸水溶液、タンパク質水溶液、銅、鉄、金、プラチナ等の金属イオンを含む金属イオン水溶液、ナトリウム、マグネシウム、リン、カリウム、カルシウム、マンガン、クロム、亜鉛等の各種ミネラルを含むミネラル水溶液、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ等の水溶性ビタミンおよび／またはビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ等の脂溶性ビタミンを含むビタミン水溶液、炭水化物水溶液、抗体水溶液、ＲＮＡ、ＤＮＡおよびこれらの誘導体等を含む核酸を含む核酸水溶液、各種色素を含む色素水溶液、塩化ガドリニウム、硫化ガドリニウム等のガドリニウム化合物を含むガドリニウム水溶液等が挙げられる。これらは、１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
　バブル含有液体１００中の水性液体の含有量は、５０ｗｔ％以上であるのが好ましい。これにより、バブル保持剤を水性液体に十分に分散または溶解させることができ、より均一な混合液１０を得ることができる。
　ガス３は、バブル１を製造する際の温度（２０℃程度）において、気体状の物質である。また、ガス３は、バブル１を体内に注入した状態において、すなわち、体内の温度（３７℃程度）においても、気体状の物質である。
　ガス３としては、特に限定されないが、例えば、空気、亜酸化窒素、酸素、二酸化炭素、水素等のガスや、窒素、ヘリウム、アルゴン、キセノン、クリプトンのような不活性ガス、六フッ化硫黄、十フッ化二硫黄、トリフルオロメチル硫黄ペンタフルオリドのようなフッ化硫黄、メタン、エタン、プロパン、ブタン、ペンタン、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、エチレン、プロピレン、プロパジエン、ブテン、アセチレン、プロピン、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン、パーフルオロペンタンのような低分子量炭化水素類またはこれらのハロゲン化物、ジメチルエーテルのようなエーテル類、ケトン類、エステル類等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。これらの物質の中でも、特に、酸素、水素、窒素、ヘリウム、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン、パーフルオロペンタンからなる群から選択される少なくとも１種が好ましい。バブル１中にこれらのガスが封入されることにより、バブル１の水性液体中での安定性を向上させることができる。また、これらのガスが封入されたバブル１は、体内において安定性が高く、血管を通して患部（治療対象部位）または診断対象部位までより確実に運搬される。
　なお、バブル含有液体１００中のバブル１は、所定量のガス３が微分散または溶解している水性液体を用いることにより形成される。ここで、水性液体中のガス３の含有量が多いほど、水性液体中に、十分に多量のバブル１を存在させつつ、バブル１同士の衝突による合体や消滅を抑制することができる。これにより、バブル含有液体１００中に、バブル１を多量に含ませることができるとともに、バブル１の経時安定性をより向上させることができる。
　ところで、水性液体中のバブル１は、その表面（ガス３と水性液体との間の気液界面）に存在する水分子のクラスター構造に起因して、安定化が図られると考えられる。水分子のクラスター構造は、水分子の一部が電離することで生じた若干量の水素イオン（Ｈ＋）および水酸化物イオン（ＯＨ－）を含んでいる。これらのイオン（特に、水酸化物イオン）の影響で、バブル１は帯電している。これにより、バブル１同士は、電気的な反発力により合体（付着）することが抑制されると考えられる。
　そこで、本発明者は、バブル１同士の電気的な反発力に加え、バブル１の表面付近や、隣接するバブル１同士の間に何らかの分子、イオンを安定的に存在させることが、水性液体中でのバブル１の経時安定性を向上させると考え、検討を重ねた。その結果、バブル含有液体中に、糖類、塩類およびタンパク質等のバブル保持剤を含ませることにより、水性液体中でのバブルの経時安定性が飛躍的に向上することが明らかとなった。
　これは、水性液体中の糖類やタンパク質が、バブル１表面付近やバブル１同士の間に存在し、その立体障害作用により、バブル１同士が付着することを長期間にわたって抑制するからであると考えられる。また、水性液体中の塩類が、イオン化して、バブル１の表面に吸着し、バブル１の帯電性が長期間にわたって維持されるからであると考えられる。
　このように、本発明のバブル含有液体は、バブル保持剤をさらに含んでいる。このバブル保持剤は、水性液体中に分散または溶解しており、バブル１を水性液体中に安定的に保持するように作用する。したがって、バブル含有液体１００では、水性液体中にバブル１を安定的に保持（保存）することができる。そのため、バブル含有液体１００は、長期間保存した場合でも、含まれるバブル１の数およびサイズの変動を抑え、バブル１の経時安定性に優れる。
　バブル保持剤は、糖類、塩類およびタンパク質のうちの少なくとも一種を含む。
　糖類（多糖類を含む）としては、例えば、グルコース、スクロース、デキストリン等が挙げられる。また、タンパク質としては、例えば、アルブミン、グロブリン等が挙げられる。塩類としては、例えば、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＫＨ２ＰＯ４およびＣ３Ｈ５ＮａＯ３や、鉄イオン、金イオン、銅イオン等の各種金属イオンの塩化物等が挙げられる。これらの物質の中でも、バブル保持剤としては、糖類が好ましく、グルコースが特に好ましい。
　バブル含有液体１００中のバブル保持剤の含有量は、特に限定されないが、使用する水性液体の種類に応じて、適宜変更することが好ましい。例えば、バブル含有液体１００中のバブル保持剤の含有量は、０．００１～５０ｗｔ％であることが好ましく、０．００５～５０ｗｔ％であることがより好ましい。バブル保持剤の含有量が上記範囲内であれば、バブル含有液体１００は、長期間保存した場合でも、含まれるバブル１の数およびサイズの変動をより確実に抑えることができ、バブル１の経時安定性をより向上させることができる。
　なお、バブル含有液体１００中の水性液体の含有量［ｗｔ％］と、バブル含有液体１００中のバブル保持剤の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０～９９．９９９：０．００１であることが好ましい。水性液体とバブル保持剤との含有比率が上記範囲内であれば、バブル含有液体１００を長期間保存した場合でも、含まれるバブル１の数およびサイズの変動をより確実に抑えることができ、バブル１の経時安定性をより向上させることができる。
　特に、バブル保持剤として糖類（グルコース等）を用いるとともに、水性液体として生理食塩水を用いる場合には、バブル含有液体１００中の生理食塩水の含有量［ｗｔ％］と、バブル含有液体１００中の糖類の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０～８５：１５であることが好ましく、５０：５０～８０：２０であることがより好ましい。
　また、バブル保持剤として糖類（グルコース等）を用いるとともに、水性液体として水を用いる場合には、バブル含有液体１００中の水の含有量［ｗｔ％］と、バブル含有液体１００中の糖類の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０～９７：３であることが好ましく、５０：５０～９６：４であることがより好ましい。
　また、バブル保持剤としてタンパク質（アルブミン等）を用いる場合には、バブル含有液体１００中の水性液体の含有量［ｗｔ％］と、バブル含有液体１００中のタンパク質の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０～９９．９９９：０．００１であることが好ましく、５０：５０～９９．９９５：０．００５であることがより好ましい。
　このような成分で構成されたバブル１の径は、後述する本発明のバブル含有液体の製造方法の各工程の条件を変更することにより変化する。すなわち、製造されるバブル１は、ミクロンサイズ（数百マイクロメートル程度）、または、ナノサイズ（数百ナノメートル程度）を有することとなる。
　具体的に、バブル１の平均径は、特に限定されないが、１０ｎｍ～１０００μｍ程度であるのが好ましく、１０ｎｍ～１００μｍ程度であるのがより好ましく、５０～２０００ｎｍ程度であるのがさらに好ましい。バブル１の平均径が上記範囲内であれば、バブル１を静脈注射により体内に注入した際に、バブル１の径が十分に小さいため、血流によりバブル１が血管内を滑らかに移動することができる。また、このような径のバブルは、血管内での安定性が高く、血管内を移動している間に消滅することなく、目的の部位まで確実に運ばれる。特に、ナノバブルは、血管内での安定性が高いため、ほぼ消滅することなく、目的の部位まで確実に搬送される。
　一般的に、気体を内包するバブルは、液体と気体との界面において効率良く超音波を反射する性質を有している。そのため、上記範囲の平均径を有するバブル１は、液体（水性液体、または、超音波造影剤として体内に注入された際には、血液）とガス３との界面の面積が十分に大きく、超音波造影剤として有効に用いられる。
　また、上述したような構成のバブル１は、食品、魚介類の養殖、排水処理等の医療分野以外の分野にも用いることができる。特に、上記範囲の平均径を有するバブル１は、その安定性を十分に高くすることができ、取扱いが容易なため、様々な分野に適用することができる。
　なお、バブル含有液体１００中のバブル１としては、図２（ａ）～（ｃ）に示す構成のバブルであってもよい。
　図２は、本発明のバブル含有液体中に含まれるバブルの一例について、その一部を切断した状態を示す斜視図である。図２（ａ）は、ガスが封入されたバブルの一部を切断した状態を示しており、図２（ｂ）および図２（ｃ）は、ガスおよび薬物が封入されたバブルの一部を切断した状態を示す。
　なお、上述した図１に示すバブル１との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
　図２（ａ）に示すバブル１（気泡）は、バブル１の殻を構成する外殻２（球状の膜）と、外殻２内に封入されたガス３とを有している。
　このような外殻２は、主として１つの分子中に疎水性と親水性との両方の性質（置換基）を有する、アルブミンのような両親媒性材料（外殻材料）から構成されている。
　両親媒性材料としては、特に限定されないが、例えば、アルブミンのような各種タンパク質が挙げられ、そのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
　また、バブル含有液体１００中のバブル保持剤の含有量は、外殻材料および水性液体の各種類の組み合わせによって変わるが、０．００１～３５ｗｔ％であることが好ましく、０．００５～２０ｗｔ％であることがより好ましい。
　図２（ｂ）および図２（ｃ）に示すバブル１は、バブル１の殻を構成する外殻２と、外殻２内に封入されるガス３および薬物４を有している。このバブル１は、超音波治療および超音波診断に用いられる。なお、図２（ｂ）では、薬物４が気体状態あるいは固体状態で外殻２内に封入されているバブル１を示しており、図２（ｃ）では、薬物４が液体状態で外殻２内に封入されているバブル１を示している。
　外殻２は、その内側に封入されるガス３や薬物４をバブル１内に保持する機能を有し、バブル１が患部に運ばれるまで薬物４を保護する機能を有している。
　また、図２（ｂ）および図２（ｃ）に示すバブル１において、薬物４は、前立腺癌、子宮筋腫、心筋梗塞、脳梗塞等の様々な疾病の治療に有効な成分である。薬物４は、バブル１に包含された状態で患部に運搬され、超音波照射により患部付近で外殻２を破裂させることにより、患部に投与される。なお、図示しないが、薬物４は、外殻２自体に含有されてもよいし、外殻２の外表面に吸着されていてもよい。
　なお、薬物４とガス３との体積比率は、１：９９～９０：１０程度であるのが好ましく、１０：９０～７０：３０程度であるのがより好ましく、４０：６０～６０：４０程度であるのがさらに好ましい。薬物４とガス３との体積比率が上記範囲内であれば、バブル１の安定性が向上し、患部付近までより確実にバブル１を運搬することができる。また、患部付近で外殻２を破裂させた際に、患部に対して、十分な量の薬物を投与することができる。そのため、患部をより効率良く治療することができる。
　薬物４としては、疾病の治療に有効であれば特に限定されないが、遺伝子、薬剤等を含む。具体的には、ペプチド、抗体、オリゴ糖、多糖、遺伝子、オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、リボザイム、トリプルヘリックス分子、ウイルスベクター、プラスミド、低分子有機化合物、抗癌剤、金属等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて用いることができる。
　また、バブル含有液体１００中の薬物４の含有量は、０．１～３５ｗｔ％であることが好ましく、２０～３５ｗｔ％であることがより好ましい。
　なお、バブル含有液体１００中のバブル１の含有量は、１．０×１０５／ｍｌ以上であることが好ましく、１．０×１０６／ｍｌ以上であることがより好ましく、１．０×１０７／ｍｌ以上であることがさらに好ましい。このようなバブル含有液体１００を超音波造影剤として用いることにより、少量のバブル含有液体１００の使用でより明確な超音波診断画像を得ることができる。また、このようなバブル含有液体１００を超音波治療に用いることにより、少量のバブル含有液体１００の使用でより効率よく患部を治療することができる。
　ここで、癌細胞が存在する患部では、その周囲の血管から癌細胞へと、正常血管よりも細径の新生血管が伸びている。平均径が２００～３００ｎｍ程度のバブル１であれば、バブル１が、新生血管内にも円滑に搬送され、癌細胞にまで到達することができる。すなわち、かかるバブル１は、癌治療に好適に用いられることができる。また、一部のバブル１を、血管壁を通過させて、癌細胞に取り込ませることもできる。
　また、バブル１の平均径が６００～９００ｎｍ程度のバブル１は、脳の血管内を円滑搬送されるとともに、その位置を超音波画像において確実に特定することができる。そのため、脳治療（例えば、脳血管内治療等）に好適に用いることができる。
　なお、図１および図２（ａ）～（ｃ）に示すバブル１の平均径は、例えば、レーザー回折・散乱法、ナノ粒子トラッキング解析法、電気抵抗法、ＡＦＭ（Ａｔｏｍｉｃ　Ｆｏｒｃｅ　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ）、レーザー顕微鏡による観測等により測定することができる。なお、レーザー回折・散乱法によるバブルの平均径を測定する装置としては、ベックマン・コールター社製のフローサイトメーター（商品名；ＣｙｔｏＦｌｅｘ）を用いることができる。また、ナノ粒子トラッキング解析法によるバブルの平均径を測定する装置としては、Ｍａｌｖｅｒｎ社製のナノ粒子解析システム（商品名：ｎａｎｏｓｉｇｈｔ）を用いることができる。また、ＡＦＭを測定する装置としては、Ｍａｌｖｅｒｎ社製の共振式粒子計測システム（商品名：アルキメデス）を用いることができる。
　上述したようなバブル含有液体１００は、以下に記載する本発明のバブル含有液体の製造方法により製造することができる。以下、本発明のバブル含有液体の製造方法について、詳細に説明する。
　２．バブル含有液体の製造方法
　＜第１実施形態＞
　次に、本発明のバブル含有液体の製造方法の第１実施形態について説明する。
　図３は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第１実施形態を説明するためのフローチャートである。図４（ａ）～（ｄ）は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第１実施形態を説明するための断面図である。図５は、図４（ｃ）に示す容器を振動させる工程において、水性液体と容器の内面（上面）とが激しく衝突した状態を説明するための部分拡大図である。
　なお、以下の説明では、図４（ａ）～（ｄ）および図５中の上側を「上」と言い、図４（ａ）～（ｄ）および図５中の下側を「下」と言う。
　本実施形態のバブル含有液体の製造方法は、図３に示すように、工程（Ｓ１）～（Ｓ５）の５つの工程を有する。工程（Ｓ１）は、水性液体とバブル保持剤とを含む混合液、および混合液が注入されるバブル製造用容器（以下、単に「製造容器」という）を準備する工程である。工程（Ｓ２）は、混合液を製造容器の所定の高さまで注入する工程である。工程（Ｓ３）は、製造容器内にガスを充填して、製造容器内を加圧した状態で製造容器を密閉する工程である。工程（Ｓ４）は、混合液が容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で製造容器を振動させる工程である。工程（Ｓ５）は、製造容器を静置する工程である。
　本実施形態のバブル含有液体の製造方法では、あらかじめ、水性液体中にバブル保持剤を分散または溶解させて混合液とし、この混合液中にバブルを生成させることにより、バブル含有液体を得ることができる。以下、これらの工程について順次説明する。
　［Ｓ１］　準備工程
　図１に示すバブル１を含有するバブル含有液体１００を製造する際には、まず、水性液体およびバブル保持剤を調製容器に入れて、バブル保持剤を水性液体に分散または溶解させる。これにより、混合液１０を調製する。すなわち、調製容器内にバブル保持剤および水性液体を所定量加えた後、攪拌して、バブル保持剤を水性液体に分散または溶解させる。
　なお、バブル保持剤、水性液体を調製容器に入れる順番は、特に限定されない。バブル保持剤を水性液体に分散または溶解させる方法としては、例えば、攪拌子による攪拌、超音波処理等を用いることができる。
　水性液体およびバブル保持剤としては、それぞれ、前述した水性液体およびバブル保持剤が使用される。
　また、図２（ａ）のバブル１を含有するバブル含有液体１００を製造する際には、上述した水性液体およびバブル保持剤に加え、前述した外殻材料をさらに含有する混合液１０を調製する。
　また、図２（ｂ）および（ｃ）のバブル１を含有するバブル含有液体１００を製造する際には、上述した水性液体およびバブル保持剤に加え、前述した外殻材料および薬物４をさらに含有する混合液１０を調製する。
　次に、製造容器２０を準備する。
　製造容器２０は、開口部を備え、混合液１０を収容する容器本体２１と、容器本体２１を密閉するための蓋２２とを有している。
　容器本体２１は、特に限定されないが、図４（ａ）に示すような外形が有底円筒状をなしていることが好ましい。本実施形態では、容器本体２１として、容量が０．５～２０ｍｌ程度のバイアル瓶を用いる。本発明のバブル含有液体の製造方法では、容器本体２１として、このような容量の小さなバイアル瓶を用いた場合であっても、容器本体２１を蓋２２で密閉した際に、容器本体２１内の密閉空間で適切な圧力が混合液１０に付与されるので、均一なサイズのバブル１を安定的に得ることができる。特に、容量が０．５～２．５ｍｌ程度のバイアル瓶であれば、１つの製造容器２０内に、１回の超音波診断に必要となる０．３～０．６ｍｌ程度のバブル含有液を製造することができる。この場合、超音波診断の際に、１つの製造容器２０内のバブル含有液体１００を使い切ることができるため、製造されるバブル含有液体１００の無駄をなくすことができる。
　このように容量の小さいバイアル瓶（容量：０．５～２０ｍｌ程度）の寸法は、長手方向の長さＸが、３５～６０ｍｍ程度であり、外径Ｒが、１０～４０ｍｍ程度である。
　蓋２２は、図４（ｂ）～（ｄ）に示すように、容器本体２１の瓶口に密着する円盤状のゴム栓（セプタム）２２１と、ゴム栓２２１を容器本体２１の瓶口に固定する締付部２２２とを備えている。
　［Ｓ２］混合液を製造容器に注入する工程
　調製された混合液１０を容器本体２１（製造容器２０）の所定の高さまで注入する。本実施形態では、図４（ａ）に示すように、Ｙ［ｍｍ］まで注入する。したがって、図４（ａ）に示すように、混合液１０が注入された状態の容器本体２１は、その上部に空隙部１１を有する。
　本実施形態では、混合液１０が注入された容器本体２１（製造容器２０）を水平に静置した状態において、容器本体２１の高さ（長手方向の長さ）をＸ［ｍｍ］とし、容器本体２１における混合液１０の液面の高さをＹ［ｍｍ］としたとき、０．２≦Ｙ／Ｘ≦０．７の関係を満足するのが好ましい。上記関係を満足することにより、十分な大きさの空隙部１１が存在するので、工程（Ｓ４）において、混合液１０を製造容器２０の上下面および側面（特に、上下面）により勢いよく衝突させることができる。この衝突により、混合液１０中に衝撃波が生じ、混合液１０中にバブル１を容易に形成することができる。
　なお、前記関係は、０．３≦Ｙ／Ｘ≦０．５の関係を満足するのがより好ましく、０．３５≦Ｙ／Ｘ≦０．４の関係を満足するのがさらに好ましい。これにより、工程（Ｓ４）において、混合液１０中にバブル１をより容易に形成することができる。
　［Ｓ３］製造容器を密閉する工程
　次に、容器本体２１にガス３を充填させて、製造容器２０内を加圧した状態で密閉する（図４（ｂ）参照）。具体的には、混合液１０が注入された容器本体２１の空隙部１１を、ガス３でパージした後、蓋２２を容器本体２１の開口部（瓶口）に締付ける。これにより、製造容器２０内に混合液１０とガス３とが密閉される。
　容器本体２１の空隙部１１をガス３でパージする方法としては、例えば、混合液１０が注入された容器本体２１をチャンバー内に移動させる。次に、チャンバー内の空気をガス３で置換する。その後、蓋２２を容器本体２１の開口部に締付けることにより、製造容器２０内に混合液１０とガス３とを密閉することができる。
　ガス３としては、前述した各種ガスが使用される。
　次に、ガス３が充填された注射器を準備する。そして、注射器の注射針をゴム栓２２１に刺通する。その後、注射器から製造容器２０内にさらにガス３を加えることにより、製造容器２０内が加圧される。その後、ゴム栓２２１から注射針を抜去する。これにより、製造容器２０内がガス３により加圧された状態で密閉された製造容器２０を得ることができる。
　本実施形態のバブル含有液体の製造方法では、製造容器２０内の圧力（空隙部１１に充填されたガス３の圧力）を１．０ａｔｍより大きくする。特に、製造容器２０内の圧力は、１．５～１０ａｔｍであるのが好ましく、２～５ａｔｍであるのがより好ましい。これにより、ガス３の一部が混合液１０に微分散または溶解する。
　混合液１０にガス３が微分散または溶解することにより、工程（Ｓ４）において、混合液１０と製造容器２０とが衝突して衝撃波が発生する際に、バブル１が発生し易くなる。これにより、工程（Ｓ４）において、混合液１０中により多くのバブル１を生成させることができる。
　また、製造容器２０中の圧力を１．０ａｔｍよりも大きい任意の値に設定することにより、混合液１０中に生成するバブル１の径および含有量をより容易に調整することができる。
　なお、本実施形態では、製造容器２０内を加圧した状態（製造容器２０内の圧力を１．０ａｔｍよりも大きくした状態）としているが、製造容器２０内を加圧することなく、次工程（Ｓ４）を行ってもよい。
　［Ｓ４］製造容器を振動させる工程
　次に、混合液１０が、製造容器２０の上下面および側面（特に、上下面）に繰り返し衝突するように、製造容器２０を振動させる。本実施形態では、図４（ｃ）に示すように、製造容器２０が、ほぼその長手方向（図４（ｃ）では、鉛直方向）に往復運動するように、製造容器２０を振動させる。
　本工程では、工程（Ｓ３）で密閉した製造容器２０（図４（ｃ）の下図）を上方向に振動させる（図４（ｃ）の真中の図）。これにより、混合液１０は、製造容器２０の中間付近に移動する。更に製造容器２０を上方向に振動させると、混合液１０が製造容器２０の上部に移動して、蓋２２の下面（ゴム栓２２１）に衝突する（図４（ｃ）の上図）。この際に、図５に示すように、衝撃波が発生する。この衝撃波の圧力により、ガス３が混合液１０中に微分散し、バブル１が形成する。このバブル１内には、振動により混合液１０に微分散または溶解したガス３が含まれる。
　一方、製造容器２０（図４（ｃ）の上図）を下方向に振動させる（図４（ｃ）の真中の図）。これにより、混合液１０は、製造容器２０の中間付近に移動する。更に製造容器２０を下方向に振動させると、混合液１０が製造容器２０の下部に移動して、製造容器２０の下面に衝突する（図４（ｃ）の下図）。この時も、図５に示すように、衝撃波が発生する。
　また、製造容器２０を鉛直方向に振動させる際に、混合液１０は、製造容器２０の内側の側面とも衝突する。この時も、図５に示すように、衝撃波が発生する。
　以上の操作を繰り返し行うことによって、混合液１０中に均一なサイズのバブル１を多量に安定的に生成させることができる。
　本実施形態のバブル含有液体の製造方法では、十分に微細で、均一なサイズのバブル１を得るために、製造容器２０を５０００ｒｐｍ以上で振動させるのが好ましい。これにより、混合液１０と製造容器２０とが衝突する際に発生する衝撃波の大きさ（圧力）が十分に大きくなり、混合液１０中に生じるバブル１が微細化され、そのサイズを均一にすることができる。また、製造容器２０の回転数を上記範囲内で低めに設定した場合には、発生する衝撃波の大きさが小さくなるので、比較的径の大きなバブル１を生成することができる。また、回転数を高めに設定した場合には、発生する衝撃波の大きさが大きくなるので、比較的径の小さいバブル１を生成することができる。なお、本明細書において、製造容器２０の「回転数」とは、単位時間当たりに、製造容器２０がその全振動経路を移動する回数を意味する。例えば、製造容器２０が５０００ｒｐｍで振動するとは、製造容器２０が、１分間に全振動経路を５０００回移動（振動）することを意味する。
　また、製造容器２０の回転数は、５５００ｒｐｍ以上であることがより好ましく、６０００～２００００ｒｐｍであることがさらに好ましい。製造容器２０の回転数を上記範囲内とすることにより、振動により生成したバブル１同士が、衝突により崩壊したり、合体して粗大化するのをより確実に防止することができる。これにより、バブル１の径を微細化しつつ、より均一なサイズのバブル１を多量に混合液１０中に生成させることができる。
　上記のような回転数で製造容器２０を振動させることができる装置としては、例えば、ビーズ方式の高速細胞破砕システム（ホモジナイザー）を用いることができる。具体例としては、バーティンテクノロジーズ（ｂｅｒｔｉｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）社製のプレセリーズ（Ｐｒｅｃｅｌｌｙｓ）等を用いることができる。
　また、混合液１０と製造容器２０とが衝突する際に発生する衝撃波の圧力は、４０ｋＰａ～１ＧＰａとなることが好ましい。混合液１０と製造容器２０との衝突時に発生する衝撃波の圧力が上記範囲内となることにより、混合液１０中に生じるバブル１をより微細化し、そのサイズをより均一にすることができる。特に、混合液１０と製造容器２０との衝突時に発生する衝撃波の圧力が大きくなるほど、より微細なバブル１を生成することができる。
　製造容器２０を振動させる際に、製造容器２０の長手方向の振動幅は、０．７Ｘ～１．５Ｘ［ｍｍ］程度であるのが好ましく、０．８Ｘ～１Ｘ［ｍｍ］程度であるのがより好ましい。これにより、製造容器２０の振動時に、混合液１０と製造容器２０の下面および蓋２２とを確実に衝突させることができ、混合液１０と製造容器２０の下面および蓋２２との衝突回数を十分に多くすることができる。また、このように十分な振動幅で製造容器２０を振動させることにより、混合液１０が製造容器２０内を移動する速度が大きくなる。そのため、混合液１０と製造容器２０の下面および蓋２２との衝突時に発生する衝撃波の大きさが十分に大きくなる。結果として、混合液１０中に微細なバブル１を多量に生成させることができる。
　また、製造容器２０を鉛直方向に往復運動させる際に、製造容器２０は、その短手方向（水平方向）にも振動させるのが好ましい。これにより、製造容器２０の内側の側面にも混合液１０が衝突するので、混合液１０に衝撃波をより多く発生させることができる。製造容器２０の短手方向への振動幅は、０．３Ｘ～０．８Ｘ［ｍｍ］程度であるのが好ましく、０．５Ｘ～０．７Ｘ［ｍｍ］程度であるのがより好ましい。これにより、上述した効果はより顕著となる。
　なお、製造容器２０を振動させる方向は、その短手方向のみであってもよい。この場合、製造容器２０の短手方向（水平方向）への振動幅は、上述した短手方向への振動幅と同じであることが好ましい。かかる振動幅であれば、製造容器２０の内側の側面に混合液１０が確実に衝突するので、混合液１０に衝撃波をより多く発生させることができる。その結果、混合液１０中に微細なバブル１を多量に生成させることができる。
　また、本工程では、混合液１０を製造容器２０の上下面および側面に衝突させる際における製造容器２０と製造容器２０内の混合液１０との瞬間相対速度が４０ｋｍ／ｈ以上となるように製造容器２０を振動させることが好ましい。また、かかる瞬間相対速度が５０ｋｍ／ｈ以上となるように製造容器２０を振動させることがより好ましい。上記条件を満足することにより、混合液１０と製造容器２０とが衝突する際に生じる衝撃波の圧力を十分に大きくすることができる。その結果、混合液１０中に生じるバブル１をより微細化し、そのサイズをより均一にすることができる。
　なお、製造容器２０を上記条件で振動させる時間は、１０～１２０秒程度であるのが好ましく、３０～６０秒程度であるのがより好ましい。製造容器２０の振動時間を上記範囲内とすることにより、混合液１０が製造容器２０と衝突する回数が十分に多くなるため、混合液１０中に、多量のバブル１を生成させることができる。なお、製造容器２０の振動時間を上記範囲内で長く設定することにより、混合液１０中に生成されるバブル１の量をより多くすることができる。
　なお、混合液１０中に生成されるバブル１の平均径は、製造容器２０の回転数を前述した範囲内で変更することにより調整することができる。本実施形態では、おおよそ数十～数百ナノメーターサイズのナノバブルを安定的に生成することができる。
　なお、本実施形態では、製造容器２０が、ほぼその長手方向に往復運動するように、製造容器２０を振動させているが、製造容器２０を振動させる方法は、これに限定されない。例えば、製造容器２０が、主として、その短手方向および／または長手方向に回転運動するように、製造容器２０を振動させてもよい。この場合であっても、製造容器２０内の混合液１０は、製造容器２０の上下面および側面に繰り返し衝突することにより、衝撃波が発生する。このような振動方法を用いても、混合液１０中に、均一なサイズのバブル１を多量に安定的に生成することができる。
　［Ｓ５］製造容器を静置する工程
　上記条件で製造容器２０を振動させた後、製造容器２０を静置する（図４（ｄ）参照）。これにより、製造容器２０内に、均一なサイズのバブル１（図１参照）を多量に含有するバブル含有液体１００を製造することができる。また、同時に、バブル含有液体１００が封入されたバブル含有容器（以下、単に「バブル含有容器」という）を得ることができる。
　なお、上述した工程（Ｓ２）～（Ｓ４）は、一定の温度下で行われるのが好ましい。製造過程における温度条件が一定であれば、各工程（Ｓ２）～（Ｓ４）において、混合液１０（水性液体）の特性（粘性等）が安定するため、混合液１０中にバブル１を安定的に生成することができる。各溶液の温度を一定に維持するための方法としては、例えば、上述した各工程（Ｓ２）～（Ｓ４）をグローブボックスや恒温槽内で行う方法が挙げられる。特に、工程（Ｓ４）において、製造容器２０を高速で振動させるため、混合液１０と製造容器２０の内面との衝突により製造容器２０が発熱し易い。しかし、恒温槽内で製造容器２０を振動させることにより、混合液１０の温度が上昇するのを確実に防止することができる。その結果、混合液１０中に均一な径のバブル１を安定的に生成することができる。
　以上の工程（Ｓ１）～（Ｓ５）を経て、平均径が１０ｎｍ～１０００μｍ程度のバブル１を含有するバブル含有液体１００が製造される。
　なお、従来のバブルの製造方法では、大掛かりな還流装置や、バブルの製造装置を構成する様々なシステム（チューブ、ノズル、コンプレッサ等）が必要であった。そのため、食品分野や医療分野等に用いられるバブルを製造する際に、清潔で、かつ無菌環境を維持するのが困難であった。これに対して、本発明では、バブル含有液体１００の製造に気密性の高い製造容器２０を用いるため、混合液１０およびガス３を製造容器２０内に含有した状態で、例えば、γ線滅菌等による滅菌処理を製造容器２０混合液１０に施せばよい。これにより、製造容器２０内が滅菌されるため、バブル含有液体１００を滅菌環境下で製造することができる。
　上記のようにして得られたバブル含有液体１００中において、バブル１は安定的に存在することができる。そのため、得られたバブル含有液体１００は、室温にて長期保存することができる。具体的には、１０～３６か月間もの期間にわたって保存することができる。また、これだけ長期間保存した後でも、混合液１０中でのバブル１の安定性が高いため、再度バブル含有容器を振動させたりする必要なく、使用することが可能である。また、製造容器として、容量が小さい製造容器２０を用いることができるので、バブル含有容器の単価を抑えることができる。そのため、上記のようにして得られたバブル含有容器は、医療機関等にとっては、取扱い易いというメリットがある。
　［Ｓ６］遠心分離処理工程
　本実施形態のバブル含有液体の製造方法は、工程（Ｓ４）後、工程（Ｓ５）前に、または、工程（Ｓ５）後に、製造容器２０に対して、遠心分離処理を行ってもよい。この処理により、製造容器２０内に生成されたバブル１を、所望の径別に分離することができる。
　具体的には、バブル含有容器に対して遠心分離処理を行うことにより、径の大きいバブル１が製造容器２０の上層へ移動する傾向があり、径の小さいバブル１が製造容器２０の下層へ移動する傾向がある。したがって、製造容器２０の上層の液体（上澄み液）を吸引手段（注射器、ピペット等）により除去すれば、製造容器２０内に残存するバブル含有液中のバブル１の平均径は、工程（Ｓ５）後に得られたバブル含有液体１００中のバブル１の平均径よりも小さくなる。また、吸引手段により吸引したバブル含有液体（上澄み液）中のバブル１の平均径は、工程（Ｓ５）後に得られたバブル含有液体１００中のバブル１の平均径よりも大きくなる。このように、遠心分離処理を用いることにより、より単分散なバブル径分布を有するバブル１を得ることができる。
　また、混合液１０と比重の異なる物質をバブル含有液体１００に加えて、遠心分離処理することにより、径の大きいバブル１がより上層へと移動し易くなり、径の小さいバブル１がより下層へと移動し易くなる、その結果、より単分散なバブル径分布を有するバブル１を得ることができる。
　工程（Ｓ１）～（Ｓ４）を経て、例えば、平均径が６００ｎｍのバブル１を含有するバブル含有液体１００を経た場合、遠心分離の条件を適宜設定することにより、平均径が２００～３００ｎｍのバブル１を含有するバブル含有液を得ることができる。このバブル含有液体１００を超音波造影剤として用いた場合には、比較的径が大きいバブル１が存在しないため、解像度が高く、より高精細な画像を得ることができる。
　遠心分離処理の条件は、分離するバブル１の平均径によって適宜設定され、例えば、バブル含有液体１００に１×ｇ～２２０００×ｇ程度の遠心加速度が３０秒～２４時間程度かかるようにする。遠心加速度を小さく設定（１×ｇ～１００×ｇ程度）する場合には、長時間（１２時間～２４時間程度）にわたって処理することにより、より単分散なバブル径分布を有するバブル１を得ることができる。また、遠心加速度を大きく設定（１００×ｇ～２２０００×ｇ）する場合には、比較的短時間（３０秒～１２時間程度）の処理により、より単分散なバブル径分布を有するバブル１を得ることができる。遠心分離処理を上記条件で行うことにより、所望の平均径を有するバブル１を効率良く分離することができる。
　上記のような遠心加速度でバブル含有容器に遠心分離処理を行うことができる遠心分離機としては、特に限定されないが、例えば、商品名「ＴＯＭＹ　ＭＸ－３０１」（トミー精工社製）等の微量高速冷却遠心機を用いることができる。なお、上記微量高速冷却遠心機を用いる場合には、その回転数が５０～２０００ｒｐｍ程度に設定することにより、上記範囲の遠心加速度（遠心力）がバブル含有液に負荷される。
　また、遠心分離処理は、１回でもよいし、複数回にわたって行ってもよい。
　上述したように、本実施形態では、工程（Ｓ１）～（Ｓ５）を行うことにより、均一なサイズのバブル１を多量に安定的に含有するバブル含有液体１００を製造することができる。ただし、本実施形態のバブル含有液体の製造方法は、これに限定されない。例えば、前述した工程（Ｓ６）を、工程（Ｓ４）を行った後に行い、その後、工程（Ｓ５）を経て、バブル含有液体１００を得てもよい。また、工程（Ｓ５）の後に、工程（Ｓ４）を少なくとも１回以上繰り返し行うようにしてもよい。
　＜第２実施形態＞
　次に、本発明のバブル含有液体の製造方法およびバブル製造容器の第２実施形態について説明する。
　図６は、本発明のバブル含有液体の製造方法の第２実施形態を説明するためのフローチャートである。
　以下、第２実施形態のバブル含有液体の製造方法について、前記第１実施形態のバブル含有液体の製造方法との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
　本実施形態のバブル含有液体の製造方法は、図６に示すように、工程（Ｓ１）～（Ｓ５）の５つの工程を有する。工程（Ｓ１）は、水性液体を含む第１の液体と、バブル保持剤を含む第２の液体と、第１および第２の液体が注入される製造容器とを準備する工程である。工程（Ｓ２）は、第１の液体を製造容器の所定の高さまで注入する工程である。工程（Ｓ３）は、製造容器内にガスを充填して、製造容器内を加圧した状態で製造容器を密閉する工程である。工程（Ｓ４）は、第１の液体が容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で製造容器を振動させる工程である。工程（Ｓ５）は、振動後の製造容器内に第２の液体を注入し、第１の液体と第２の液体とを混合して、バブル含有液体を得る工程である。
　すなわち、本実施形態のバブル含有液体の製造方法では、バブル保持剤を含まない水性液体（第１の液体）中にバブル１を生成させた後、工程（Ｓ５）においてバブル保持剤を含む第２の液体を添加する以外は、前述した第１実施形態のバブル含有液体の製造方法と同様である。
　［Ｓ１］　準備工程
　まず、前述した水性液体を含む第１の液体、バブル保持剤を含む第２の液体、および製造容器を準備する。
　第１の液体は、前述した水性液体が用いられる。なお、図２（ａ）～（ｃ）に示すバブル１を含有するバブル含有液体１００を製造する場合には、第１の液体として、水性液体と、外殻材料等（外殻材料、または、外殻材料および薬物４）とを調製容器に入れて、外殻材料等を水性液体に溶解させる。これにより、第１の液体を調製する。外殻材料等を水性液体に溶解させる方法としては、例えば、攪拌子による攪拌、超音波処理等を用いることができる。
　また、第２の液体は、前述したバブル保持剤を、水性液体中に分散または溶解させることにより得られる。なお。第２の液体を構成する水性液体は、第１の液体で用いる水性液体と同じ水性液体が好ましいが、異なる種類の水性液体を用いることもできる。
　このようにして調整された第１の液体を用いて、前述した第１実施形態と同様に、工程（Ｓ２）～（Ｓ４）を行う。これにより、第１の液体中に、均一なサイズのバブル１を多量に生成することができる。
　［Ｓ５］第１の液体と第２の液体とを混合する工程
　次に、工程（Ｓ４）で振動させた後の製造容器２０の蓋２２を外し、第２の液体を容器本体２１に注入する。これにより、第１の液体と第２の液体とが混合されて、バブル含有液体１００を得る。
　なお、第２の液体を容器本体２１に注入した後、第１の液体と第２の液体とを、例えば、撹拌子による撹拌、超音波処理等を用いて混合してもよい。
　また、製造容器２０内は加圧されている。そのため、製造容器２０の蓋２２を外す際に、製造容器２０内を急激に減圧すると、第１の液体中のバブル１の粒径が変化し、含有量が減少する等の現象が生じる可能性がある。そのため、本工程において、製造容器２０の蓋２２を外す際に、あらかじめ、製造容器２０内の圧力を大気圧まで減圧しておくことが好ましい。
　例えば、製造容器２０内を減圧するための減圧用注射器を用意し、その注射針をゴム栓２２１に刺通する。その際に、減圧用注射器の注射針が第１の液体に接触しないようにする。次に、減圧用注射器のプランジャーを操作して、製造容器２０内のガス３を吸引することにより、製造容器２０内の圧力を大気圧まで減圧する。その後、製造容器２０から蓋２２を外す。かかる方法を用いれば、生成されたバブル１に上述したような現象が生じない。
　以上の工程（Ｓ１）～（Ｓ５）を経て、平均径が１０ｎｍ～１０００μｍ程度のバブル１を含有するバブル含有液体１００が製造される。
　また、工程（Ｓ５）を行った後に、前述した第１実施形態の工程（Ｓ６）を行うこともできる。これにより、製造容器２０内により均一なサイズのバブル１を多量に安定的に含有するバブル含有液体１００を得ることができる。
　なお、上記の説明では、バブル１が生成された第１の液体にバブル保持剤が含まれる第２の液体を添加し、その後混合してバブル含有液体を得ているが、これに限定されない。第１の液体として、上記工程（Ｓ１）～（Ｓ４）以外の方法を用いてナノバブルが分散した第１の液体を用いることもできる。例えば、市販されている平均径が１０ｎｍ～１０００ｎｍ程度のナノバブルを含有するナノバブル（ウルトラファインバブル）水等を第１の液体として用いることができる。
　かかる第２実施形態のバブル含有液体の製造方法によっても、前記第１実施形態のバブル含有液体の製造方法と同様の作用・効果を生じる。
　以上、本発明のバブル含有液体およびバブル含有液体の製造方法を図示の実施形態に基づいて説明したが、本発明は、これに限定されるものではなく、各工程は、同様の機能を発揮し得る任意の工程と置換することができる。
　次に、本発明の具体的実施例について説明する。
　（実施例１）
　［準備工程］
　まず、調整容器としての１５ｍｌのバイアル瓶に、生理食塩水（０．９ｗ／ｖ％ＮａＣｌ水溶液）６ｍｌと、生理食塩水２０ｍｌに対して１０ｇのブドウ糖が溶解した５０％ブドウ糖液（大塚製薬社製、大塚糖液５０％）４ｍｌとを入れた。その後、生理食塩水と５０％ブドウ糖液とを撹拌することにより、混合液を得た。なお、混合液中のブドウ糖（グルコース）の含有量は、２０ｗｔ％であった。また、製造容器としての２ｍｌのバイアル瓶（高さＸ：４５ｍｍ、外径Ｒ：１３ｍｍ）を準備した。なお、このバイアル瓶は、図４に示す製造容器２０と同様の形状をなしている。
　［混合液を容器に注入する工程］
　２ｍｌバイアル瓶内に、混合液７００μｌを注入した。なお、混合液の液面の高さＹは、２５ｍｍであった。
　［容器を密閉する工程］
　次に、混合液が注入されたバイアル瓶内の空隙をパーフルオロプロパンでパージした後、バイアル瓶の瓶口に図４に示す蓋２２と同様の形状の蓋を挿着した。次に、パーフルオロプロパンが充填された注射器を準備した。注射器の注射針で蓋のゴム栓を刺通して、注射器からバイアル瓶内にさらに２ｍｌのパーフルオロプロパンを加えた。これにより、内部の圧力が１．３ａｔｍの密閉バイアル瓶を得た。
　［容器を振動させる工程］
　次に、ｂｅｒｔｉｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のＰｒｅｃｅｌｌｙｓ（高速細胞破砕システム）を用いて、密閉バイアル瓶を、６５００ｒｐｍで１２０秒間振動させた後に２０秒間静置させた。本工程において、密閉バイアル瓶は、上下方向および左右方向に往復運動し、混合液がバイアル瓶の上下面および側面に繰り返し衝突することを確認した。なお、密閉バイアル瓶を振動させる際に、密閉バイアル瓶の長手方向（鉛直方向）の振動幅は、４０ｍｍであり、密閉バイアル瓶の短手方向（水平方向）の振動幅は、２０ｍｍであった。上記条件に設定することにより、いずれのバイアル瓶についても、バイアル瓶と混合液との瞬間相対速度が４０ｋｍ／ｈ以上となるようにした。
　［容器を静置させる工程］
　振動後、密閉バイアル瓶を静置させ、バブル含有液体を得た。
　（実施例２）
　実施例１の混合液を、生理食塩水２ｍｌと、５０％ブドウ糖液８ｍｌとの混合液に代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、４０ｗｔ％であった。
　（実施例３）
　実施例１の混合液を、５０％ブドウ糖液１０ｍｌにした以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、５０ｗｔ％であった。
　（実施例４）
　実施例１の混合液を、蒸留水２ｍｌと、生理食塩水２０ｍｌに対して１ｇのブドウ糖が溶解した５％ブドウ糖液（大塚製薬社製、大塚糖液５％）８ｍｌとの混合液に代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、４ｗｔ％であった。
　（実施例５）
　実施例１の混合液を、蒸留水４ｍｌと、５％ブドウ糖液６ｍｌとの混合液に代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、３ｗｔ％であった。
　（実施例６）
　使用するガスとして、パーフルオロプロパンの代わりに窒素（Ｎ２）を用いた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、２０ｗｔ％であった。
　（実施例７）
　使用するガスとして、パーフルオロプロパンの代わりに窒素を用いた以外は、前記実施例２と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、４０ｗｔ％であった。
　（実施例８）
　使用するガスとして、パーフルオロプロパンの代わりに窒素を用いた以外は、前記実施例３と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のブドウ糖の含有量は、５０ｗｔ％であった。
　（実施例９）
　実施例１の混合液を、生理食塩水１２ｍｌと、アルブミンが２５０ｍｇ／ｍｌ含まれるアルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）３０μｌとの混合液に代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．０６ｗｔ％であった。
　（実施例１０）
　蒸留水中に、酸素を含む平均バブル径１００ｎｍ程度の酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）３０μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．０６ｗｔ％であった。
　（実施例１１）
　蒸留水中に、酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）５７μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．１２ｗｔ％であった。
　（実施例１２）
　蒸留水中に、酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）１２１μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．２５ｗｔ％であった。
　（実施例１３）
　蒸留水中に、窒素を含む平均バブル径１００ｎｍ程度の窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）３０μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．０６ｗｔ％であった。
　（実施例１４）
　蒸留水中に、窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）５７μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．１２ｗｔ％であった。
　（実施例１５）
　蒸留水中に、窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）１２１μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．２５ｗｔ％であった。
　（実施例１６）
　蒸留水中に、空気を含む平均バブル径１００ｎｍ程度の空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）３０μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．０６ｗｔ％であった。
　（実施例１７）
　蒸留水中に、空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）５７μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．１２ｗｔ％であった。
　（実施例１８）
　蒸留水中に、空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）１２１μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．２５ｗｔ％であった。
　（実施例１９）
　蒸留水中に、酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）２４５μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．５ｗｔ％であった。
　（実施例２０）
　蒸留水中に、酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）３ｍｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、５ｗｔ％であった。
　（実施例２１）
　蒸留水中に、窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）２４５μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．５ｗｔ％であった。
　（実施例２２）
　蒸留水中に、窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）３ｍｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、５ｗｔ％であった。
　（実施例２３）
　蒸留水中に、空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）２４５μｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、０．５ｗｔ％であった。
　（実施例２４）
　蒸留水中に、空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）１２ｍｌに、アルブミン溶液（ＣＳＬ　Ｂｅｈｒｉｎｇ社製　アルブミナー２５％）３ｍｌを添加して、撹拌した。これにより、バブル含有液体を得た。なお、混合液中のアルブミンの含有量は、５ｗｔ％であった。
　（比較例１）
　実施例１の混合液を、生理食塩水１０ｍｌのみに代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。
　（比較例２）
　実施例１の混合液を、水１０ｍｌのみに代えた以外は、前記実施例１と同様にして、バブル含有液体を得た。
　（比較例３）
　使用するガスとして、パーフルオロプロパンの代わりに窒素を用いた以外は、前記比較例１と同様にして、バブル含有液体を得た。
　（比較例４）
　バブル含有液体として、酸素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）を用いた。
　（比較例５）
　バブル含有液体として、窒素ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）を用いた。
　（比較例６）
　バブル含有液体として、空気ウルトラファインバブル（ナノバブル）水（株式会社ナノクス社製）を用いた。
＜バブルの経時安定性評価＞
　上記のようにして得られた実施例１～９および比較例１～３のバブル含有液体を含むバブル含有容器に対して、微量高速冷却遠心機（トミー精工社製、「ＴＯＭＹ　ＭＸ－３０１」）を用いて、１２００ｒｐｍで５分間遠心分離処理を行った。この遠心分離処理により、バブル含有液体は、バブル含有容器の上側に濃い白濁部分と、バブル含有容器の中間に淡い白濁部分と、バブル含有容器の下側にほぼ透明な部分との３つの部分に分離された。次に、マイクロピペットにより、バブル含有容器の上側の濃い白濁部分を吸引して除去した。その後、他のマイクロピペットを、その先端がバブル含有容器の底付近に到達するように、バブル含有容器に挿入し、バブル含有容器の下側のほぼ透明な部分を吸引した。次に、吸引したバブル含有液体をエッペンドルフテストチューブ内に吐出して、サンプルを得た。
　実施例１～３および比較例１のサンプルについては、大気圧下、４℃の条件で容器の蓋を開けた状態で保管し、バブル含有液体の製造直後、５日後、および１０日後のサンプル中のバブルの径分布を、ナノ粒子解析システム（商品名：ｎａｎｏｓｉｇｈｔ）を用いて測定した。
　また、実施例４、５および比較例２のサンプルについては、大気圧下、４℃の条件で容器の蓋を開けた状態で保管し、バブル含有液体の製造直後および１０日後のサンプル中のバブルの径分布を、上記と同様にして測定した。
　また、実施例６～８および比較例３のサンプルについては、大気圧下、４℃の条件で容器の蓋を開けた状態で保管し、バブル含有液体の製造直後および１２日後のサンプル中のバブルの径分布を、上記と同様にして測定した。
　さらに、実施例９については、３つのサンプルを準備した。各サンプルを、大気圧下にて、４℃、室温（２０℃程度）および３７℃のそれぞれの温度下で、容器の蓋を開けた状態で保管し、バブル含有液体の製造直後および５日後のサンプル中のバブルの径分布を、上記と同様にして測定した。
　これらの結果を、図７～図１０に示す。
　図７（ａ）～（ｄ）は、実施例１～３および比較例１で得られたサンプルの、製造直後、５日後、および１０日後のバブル径分布を示すグラフである。図８（ａ）～（ｃ）は、実施例４、５および比較例２で得られたサンプルの、製造直後および１０日後のバブル径分布を示すグラフである。図９（ａ）は、実施例６～８で得られたサンプルの製造直後のバブル径分布を示すグラフである。また、図９（ｂ）は、実施例６～８で得られたサンプルの１２日後のバブル径分布を示すグラフである。図１０（ａ）は、実施例９で得られたサンプルの製造直後のバブル径分布を示すグラフである。図１０（ｂ）は、実施例９で得られたサンプルを４℃で５日間保管した後のバブル径分布である。図１０（ｃ）は、実施例９で得られたサンプルを室温で５日間保管した後のバブル径分布である。図１０（ｄ）は、実施例９で得られたサンプルを３７℃で５日間保管した後のバブル径分布である。
　まず、図７（ａ）～（ｃ）に示すように、実施例１～３のサンプルは、５日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも減少していることが分かった。具体的には、実施例１のサンプルでは、バブル径が１００～３００ｎｍの範囲において、約７０％減少していた。また、実施例２のサンプルでは、バブル径が１００～３００ｎｍの範囲において、約３３％減少していた。また、実施例３のサンプルでは、バブル径が１００～３００ｎｍの範囲において、約３０％減少していた。しかし、そのバブル径分布曲線の形状は、大きく変わっていなかった（図７（ａ）～（ｃ）参照）。すなわち、実施例１～３のサンプルでは、製造してから５日間経っても、含まれるバブルの粒径の変動が抑えられていた。
　また、実施例１のサンプルでは、１０日後のサンプル中のバブルの含有量が、５日後のサンプル中のバブルの含有量とほとんど変わらず、そのバブル径分布曲線の形状もほぼ変わらなかった。また、実施例２のサンプルでは、１０日後のサンプル中のバブルの含有量は、バブル径が１００～２００ｎｍの範囲において、５日後のサンプル中のバブルの含有量よりも減少するものの、バブル径が２００ｎｍよりも大きい範囲において、ほとんど変わらなかった。また、実施例３のサンプルでは、１０日後のサンプル中のバブルの含有量は、バブル径が０～２００ｎｍの範囲において、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも減少するものの、バブル径が２００ｎｍよりも大きい範囲において、ほとんど変わらなかった。
　これに対して、比較例１のサンプルでは、５日後の時点でサンプル中のバブルの含有量が約９５％も減少しており、１０日後の時点では、ほとんどのバブルが消失していた（図７（ｄ）参照）。
　したがって、本発明のバブル含有液体では、含まれるバブルの経時安定性が優れており、バブル径の変動も小さいことが分かった。
　また、図８（ａ）および（ｂ）に示すように、蒸留水と低濃度のブドウ糖溶液（５％ブドウ糖溶液）とを混合して得られた実施例４および５のサンプルでは、実施例１～３のサンプルよりも低濃度のブドウ糖が、バブルの経時安定性を向上させることが分かった。なお、実施例４のサンプルでは、バブル径が１００～３００ｎｍの範囲において、１０日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも約９０％減少していた。また、実施例５のサンプルでは、バブル径が１００～３００ｎｍの範囲において、１０日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも約９０％減少していた。また、比較例２のサンプルでは、１０日後のサンプル中のバブルが、バブル径が１００～３００ｎｍの範囲において、完全に消失していた。
　また、上記実施例１～５のサンプルについて、ガスをヘリウム（Ｈｅ）および酸素（Ｏ２）に代えてバブル含有液体を作製し、上記のバブルの経時安定性評価を行ったところ、上記実施例１～５のバブル含有液体と同様の評価結果が得られた。
　また、図９に示すように、バブル保持剤を含有する実施例６～８のバブル含有液体では、上記実施例１～５と同様に、含まれるバブルの経時安定性が高いことが確認された。具体的には、実施例６のサンプルでは、１２日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも約２０％減少していた。また、実施例７および８のサンプルでは、１２日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量とほぼ同じであった。一方、比較例３のサンプルでは、１２日後のサンプル中のバブルの含有量が、製造直後のサンプル中のバブルの含有量よりも約９４％減少していた（図９（ｂ）参照）。
　また、図１０に示すように、実施例９のバブル含有液体では、含まれるバブル保持剤の含有量が少ない（アルブミン含有量：０．０６ｗｔ％）のにもかかわらず、上記実施例１～５と同様に、含まれるバブルの経時安定性が高いことが確認された。また、低温（４℃）で保管されたバブル含有液体は、室温および室温よりも高い温度（３７℃）で保管されたバブル含有液体に比べ、より単分散なバブル径分布を有していた。
　次に、市販のナノバブルを含む水（ウルトラファインバブル水）にバブル保持剤としてのアルブミンを添加して得られたバブル含有液体について、バブルの経時安定性を評価した。
　実施例１０～１８および比較例４～６のバブル含有液体（サンプル）について、大気圧下、４℃の条件で容器の蓋を開けた状態で保管し、バブル含有液体の製造直後（０ｄａｙ）、１日後（１ｄａｙ）、３日後（３ｄａｙ）および７日後（７ｄａｙ）のサンプル中のバブルの径分布を、ベックマン・コールター社製のフローサイトメーター（商品名；ＣｙｔｏＦｌｅｘ）を用いて測定した。
　また、実施例１９～２４および比較例４～６のバブル含有液体（サンプル）について、４℃の条件で容器の蓋を開けた状態で保管し、以下の条件で保管したバブルの径分布を、ナノ粒子解析システム（商品名：ｎａｎｏｓｉｇｈｔ）を用いて測定した。
　実施例１９：３日後（３ｄａｙ）
　実施例２０：１３日後（１３ｄａｙ）
　実施例２１：１３日後（１３ｄａｙ）、１４日後（１４ｄａｙ）、３５日後（３５ｄａｙ）
　実施例２２：１３日後（１３ｄａｙ）、１４日後（１４ｄａｙ）、３８日後（３８ｄａｙ）
　実施例２３：製造直後（０ｄａｙ）
　実施例２４：１０日後（１０ｄａｙ）
　比較例４：３日後（３ｄａｙ）
　比較例５：製造直後（０ｄａｙ）
　比較例６：製造直後（０ｄａｙ）
　これらの結果を、図１１～図１４に示す。
　図１１は、実施例１０～１２および比較例４で得られたサンプルにおける２００～１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。図１２は、実施例１３～１５および比較例５で得られたサンプルにおける２００～１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。図１３は、実施例１６～１８および比較例６で得られたサンプルにおける２００～１０００ｎｍのバブル径を有するバブルの濃度の経時変化を示すグラフである。図１４（ａ）～（ｃ）は、実施例１９～２４および比較例４～６で得られたサンプルにおける、バブル径が２００ｎｍ未満のバブルの濃度およびバブル径が２００ｎｍより大きいバブルの濃度の比率の経時変化を示すグラフである。
　図１１～１３に示すように、市販のウルトラファインバブル水にバブル保持剤としてのアルブミンを添加した場合でも、２００～１０００ｎｍのバブルの濃度が経時的に減少するのを抑制する効果が確認された。また、バブルに含まれるガスとして、酸素（Ｏ２）や窒素（Ｎ２）を用いた場合には、ガスとして空気を用いたバブルよりもバブルの経時安定性が優れていることが分かった。さらに、アルブミンの添加量が多くなるに従い、バブルの経時安定性が向上することも確認された。
　さらに、図１４に示すように、２００ｎｍ未満のバブル径を測定することが可能なナノ粒子解析システム（商品名：ｎａｎｏｓｉｇｈｔ）によるバブル径分布測定では、長期間にわたって保管した場合でも、２００ｎｍ未満の極小バブルがバブル含有液体中に十分な量存在していることが確認された。
　なお、上記評価は、バブル含有液体を保管する容器の蓋を開けた状態で保管した場合の評価であり、短期間でバブルの経時安定性を評価するために行った。したがって、製造後、製造容器の蓋を開けずに各実施例のバブル含有液体を保管した場合には、数年の長期間にわたって、バブル含有液体中に含まれるバブルの数およびバブル径の変動が抑えられた、バブルの経時安定性に優れるバブル含有液体となると思われる。
　本発明のバブル含有液体は、医療、食品、魚介類の養殖、排水処理等の様々な分野に用いることができる。本発明によれば、バブル含有液体が、バブルを水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤を含むことにより、バブル保持剤の作用により、水性液体中にバブルを安定的に保持（保存）することができる。そのため、本発明のバブル含有液体は、長期間保存した場合でも、含まれるバブルの数およびサイズの変動を抑え、バブルの経時安定性に優れている。すなわち、長期間にわたって品質が維持されたバブル含有液体を提供することができる。したがって、本発明の分子標的薬バブルは、産業上の利用可能性を有する。

Claims (8)

  1. 　水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルとを有するバブル含有液体であって、
    　前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤をさらに含むことを特徴とするバブル含有液体。
  2. 　前記バブル保持剤は、塩類、糖類およびタンパク質のうちの少なくとも１種を含む請求項１に記載のバブル含有液体。
  3. 　前記糖類は、グルコースを含む請求項２に記載のバブル含有液体。
  4. 　前記ガスは、酸素、水素、窒素、ヘリウム、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン、パーフルオロペンタンからなる群から選択される少なくとも１種を含む請求項１ないし３のいずれかに記載のバブル含有液体。
  5. 　前記バブル含有液体中の前記水性液体の含有量［ｗｔ％］と、前記バブル含有液体中の前記バブル保持剤の含有量［ｗｔ％］との比率は、５０：５０～９９．９９９：０．００１である請求項１ないし４のいずれかに記載のバブル含有液体。
  6. 　水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルとを有するバブル含有液体の製造方法であって、
    　前記水性液体と、前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤とを含む混合液を準備する工程と、
    　前記混合液を、容器の所定の高さまで注入する工程と、
    　前記混合液が前記容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で前記容器を振動させることにより、前記バブル含有液体を得る工程と、を有することを特徴とするバブル含有液体の製造方法。
  7. 　水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルと、前記バブルを前記水性液体中に安定的に保持するように作用するバブル保持剤とを有するバブル含有液体の製造方法であって、
    　前記水性液体と、前記水性液体中に分散した、ガスを含むバブルとを有する第１の液体と、前記バブル保持剤を含む第２の液体とを準備する工程と、
    　前記第１の液体と前記第２の液体とを混合して、前記バブル含有液体を得る工程と、を有することを特徴とするバブル含有液体の製造方法。
  8. 　前記第１の液体は、前記水性液体を、容器の所定の高さまで注入する工程と、前記水性液体が前記容器の内面に繰り返し衝突するように、所定の回転数で前記容器を振動させる工程と、を経て得られる請求項７に記載のバブル含有液体の製造方法。
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