WO2018056470A1

WO2018056470A1 - Epithelial-mesenchymal transition induced cell inhibitor

Info

Publication number: WO2018056470A1
Application number: PCT/JP2017/034819
Authority: WO
Inventors: 大村　智; 高橋　洋子; 中島　琢自; 厚子松本; 中西　淳; 洋孝松尾
Original assignee: 学校法人北里研究所; 国立研究開発法人物質・材料研究機構
Priority date: 2016-09-26
Filing date: 2017-09-26
Publication date: 2018-03-29
Also published as: JP7057945B2; JPWO2018056470A1

Abstract

The purpose of the present invention is to provide a novel compound that selectively damages cells that have become mesenchymal cells by epithelial-mesenchymal transition. Compounds, etc., represented by formula (I). [In the formula, R¹ represents a C1-6 alkyl group, and R² represents a C1-6 alkoxycarbonyl group, a carboxy group, or a C1-6 alkyl group substituted by a hydroxyl group.]

Description

上皮間葉転換誘導細胞阻害剤Epithelial-mesenchymal transition-inducing cell inhibitor

クロスレファレンスCross reference

　本願は日本国特許庁に対して２０１６年９月２６日に出願された日本国特許第２０１６－１８６９７０号からの優先権を主張する。本願が優先権を主張する日本国特許第２０１６－１８６９７０号記載の内容は全て参照によりそのまま本願に組み込まれる。また、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。 This application claims the priority from Japanese Patent No. 2016-186970 filed on September 26, 2016 to the Japan Patent Office. The contents of Japanese Patent No. 2016-186970 to which the present application claims priority are incorporated herein by reference in their entirety. In addition, all documents cited throughout the present application are incorporated herein by reference in their entirety.

　本発明は、新規ナナオマイシン類（ｎａｎａｏｍｙｃｉｎ）化合物、その製造方法、及びナナオマイシンを有効成分として含有する医薬組成物及び上皮間葉転換（Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　Ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ：ＥＭＴ）誘導細胞阻害薬に関する。 The present invention relates to a novel nanaomycin compound, a method for producing the compound, a pharmaceutical composition containing nanaomycin as an active ingredient, and an epithelial mesenchymal transition (EMT) -induced cell inhibitor.

　上皮細胞は、様々な刺激により間葉系細胞へと形質転換することが知られている。この形質転換は上皮間葉転換と呼ばれ、正常な細胞においては創傷治癒や繊維化にかかわると考えられている。 Epithelial cells are known to transform into mesenchymal cells by various stimuli. This transformation is called epithelial-mesenchymal transition and is considered to be involved in wound healing and fibrosis in normal cells.

　ナナオマイシンＡ及びＢは、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ＯＳ－３９６６から新規の抗生物質として見出された化合物であり、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ　ＫＰ－１３への抗菌作用が報告されている（非特許文献１）。 Nanaomycin A and B are compounds found as novel antibiotics from Streptomyces OS-3966, and antibacterial activity against Mycoplasma gallicepticum KP-13 has been reported (Non-patent Document 1).

　本発明は、上皮間葉転換により間葉細胞化した細胞に対して選択的に傷害を与える新規化合物を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a novel compound that selectively damages cells that have become mesenchymal cells by epithelial-mesenchymal transition.

　本発明者らは種々の化合物の探索を行い、その生物活性について鋭意検討を行った結果、新規物質であるナナオマイシン及びその誘導体が、上皮間葉転換により間葉細胞化した細胞に対して選択的に傷害を与えることを見出した。 As a result of investigating various compounds and diligently examining their biological activities, the present inventors selected a novel substance, nanaomycin and its derivatives, for cells that have become mesenchymal cells by epithelial-mesenchymal transition. Found to cause injury.

　本発明はかかる知見に基づきなされたものであり、よって、本発明は以下の発明に関する。
（１）　下記式（Ｉ）で表される化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物若しくは溶媒和物（以下、本明細書において「本発明の前記式（Ｉ）で表わされる化合物等」ということがある） This invention is made | formed based on this knowledge, Therefore, this invention relates to the following invention.
(1) A compound represented by the following formula (I) or an ester derivative thereof, or a salt, hydrate or solvate thereof (hereinafter referred to as “the compound represented by the above formula (I) of the present invention, etc.”) ”)

［式中、Ｒ^１は、Ｃ１～６アルキル基を示し、Ｒ^２は、Ｃ１～６アルコキシカルボニル基、カルボキシ基、又は水酸基で置換されたＣ１～６アルキル基を示し、Ｒ^３は、以下のいずれかで表される基を示す。］

（２）　（１）に記載の化合物において、Ｒ^１がメチル基であり、Ｒ^２がカルボキシ基である化合物を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中に該化合物を蓄積せしめ、該培養物から該化合物を採取することを特徴とする、請求項１に記載の化合物において、Ｒ^１がメチル基であり、Ｒ^２がカルボキシ基である化合物の製造方法。
（３）　（１）に記載の化合物において、Ｒ^１がメチル基であり、Ｒ^２がカルボキシ基である化合物を生産する能力を有する放線菌に属する微生物が、ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｋ１５－０５９１（受領番号　ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２３０４）である請求項２に記載の製造方法。
（４）　ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｋ１５－０５９１（受領番号　ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２３０４）。
（５）　（１）に記載の化合物を有効成分として含有する医薬組成物。
（６）　（１）に記載の化合物を有効成分として含有する上皮間葉転換が誘導された細胞を傷害するための薬剤。

[Wherein R ¹ represents a C1-6 alkyl group, R ² represents a C1-6 alkoxycarbonyl group, a carboxy group, or a C1-6 alkyl group substituted with a hydroxyl group, and R ³ represents the following: The group represented by either is shown. ]

(2) In the compound according to (1), a microorganism belonging to actinomycetes having an ability to produce a compound in which R ¹ is a methyl group and R ² is a carboxy group is cultured in a medium, The method for producing a compound according to claim 1, wherein the compound is accumulated and the compound is collected from the culture, wherein R ¹ is a methyl group and R ² is a carboxy group.
(3) In the compound according to (1), a microorganism belonging to actinomycetes having an ability to produce a compound in which R ¹ is a methyl group and R ² is a carboxy group is a Streptomyces sp. The production method according to claim 2, which is K15-0591 (reception number NITE ABP-02304).
(4) Streptomyces sp. K15-0591 (receipt number NITE ABP-02304).
(5) A pharmaceutical composition comprising the compound according to (1) as an active ingredient.
(6) A drug for injuring cells in which epithelial-mesenchymal transition is induced, comprising the compound according to (1) as an active ingredient.

　よって、一態様において本発明は、ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｋ１５－０５９１株の培養液から単離された、式（Ｉ）で表わされる、新規化合物ナナオマイシン類又はそのエステル誘導体あるいはそれらの塩又は水和物を提供するものである。 Therefore, in one aspect, the present invention relates to a novel compound nanaomycin represented by the formula (I) or an ester derivative thereof, isolated from a culture solution of Streptomyces sp. K15-0591 strain, Those salts or hydrates are provided.

　本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ^１は、直鎖又は分岐状のＣ１～６アルキル基である。本明細書において、「Ｃ１～６アルキル基」とは、直鎖又は分岐状の炭素数が１～６個の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｉ－プロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔ－ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、２，３－ジメチルプロピル基、ヘキシル基、及びシクロヘキシル基などが挙げられ、好ましくは、Ｃ１～５アルキル基であり、より好ましくは、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｉ－プロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔ－ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、又は２，３－ジメチルプロピル基である。更に好ましくは、Ｃ１～３アルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、及びｉ－プロピル基、であり、最も好ましくは、メチル基、エチル基、又はプロピル基である。 In the compound represented by the formula (I) of the present invention, R ¹ is a linear or branched C 1-6 alkyl group. In the present specification, the “C1-6 alkyl group” means a linear or branched saturated hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms, such as a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, Examples include i-propyl group, n-butyl group, sec-butyl group, t-butyl group, isobutyl group, pentyl group, isopentyl group, 2,3-dimethylpropyl group, hexyl group, and cyclohexyl group. C1-5 alkyl group, more preferably methyl group, ethyl group, n-propyl group, i-propyl group, n-butyl group, sec-butyl group, t-butyl group, isobutyl group, pentyl group, An isopentyl group or a 2,3-dimethylpropyl group. More preferred is a C1-3 alkyl group, for example, a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, and an i-propyl group, and most preferred is a methyl group, an ethyl group, or a propyl group.

　本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ^２は、Ｃ１～６アルコキシカルボニル基、カルボキシ基（ＣＯＯＨ基）、又は水酸基で置換されたＣ１～６アルキル基である。本明細書において、「Ｃ１～６アルコキシカルボニル基」とは、（Ｃ１～６アルキル基）－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－基のことであり、該アルキル基部分は直鎖状であっても分岐状であってもよい。Ｃ１～６アルコキシカルボニル基とは、前記アルキル基部分の炭素原子数が１～６個であることを意味する。Ｃ１～６アルコキシカルボニル基としては、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、１－プロピルオキシカルボニル基、２－プロピルオキシカルボニル基、２－メチル－１－プロピルオキシカルボニル基、２－メチル－２－プロピルオキシカルボニル基、２，２－ジメチル－１－プロピルオキシカルボニル基、１－ブチルオキシカルボニル基、２－ブチルオキシカルボニル基、２－メチル－１－ブチルオキシカルボニル基、３－メチル－１－ブチルオキシカルボニル基、２－メチル－２－ブチルオキシカルボニル基、３－メチル－２－ブチルオキシカルボニル基、１－ペンチルオキシカルボニル基、２－ペンチルオキシカルボニル基、３－ペンチルオキシカルボニル基、２－メチル－１－ペンチルオキシカルボニル基、３－メチル－１－ペンチルオキシカルボニル基、２－メチル－２－ペンチルオキシカルボニル基、３－メチル－２－ペンチルオキシカルボニル基、１－ヘキシルオキシカルボニル基、２－ヘキシルオキシカルボニル基、３－ヘキシルオキシカルボニル基などが挙げられる。Ｃ１～６アルコキシ基として、好ましくはＣ１～５アルコキシ基であり、より好ましくは、メトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロピルオキシカルボニル基、ｉ－プロピルオキシカルボニル基、ｎ－ブチルオキシカルボニル基、ｓｅｃ－ブチルオキシカルボニル基、ｔ－ブチルオキシカルボニル基、イソブチルオキシカルボニル基、ペンチルオキシカルボニル基、イソペンチルオキシカルボニル基、及び２，３－ジメチルプロピルオキシカルボニル基であり、更に好ましくは、Ｃ１～３アルコキシカルボニル基（メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基及びプロピルオキシカルボニル基）であり、より更に好ましくは、メトキシカルボニル基又はエトキシカルボニル基である。 In the compound represented by the formula (I) of the present invention, R ² is a C1-6 alkoxycarbonyl group, a carboxy group (COOH group), or a C1-6 alkyl group substituted with a hydroxyl group. In the present specification, the “C1-6 alkoxycarbonyl group” means a (C1-6 alkyl group) —O—C (═O) — group, and the alkyl group moiety may be linear. It may be branched. The C1-6 alkoxycarbonyl group means that the alkyl group moiety has 1 to 6 carbon atoms. Examples of the C1-6 alkoxycarbonyl group include methoxycarbonyl group, ethoxycarbonyl group, 1-propyloxycarbonyl group, 2-propyloxycarbonyl group, 2-methyl-1-propyloxycarbonyl group, 2-methyl-2- Propyloxycarbonyl group, 2,2-dimethyl-1-propyloxycarbonyl group, 1-butyloxycarbonyl group, 2-butyloxycarbonyl group, 2-methyl-1-butyloxycarbonyl group, 3-methyl-1-butyl Oxycarbonyl group, 2-methyl-2-butyloxycarbonyl group, 3-methyl-2-butyloxycarbonyl group, 1-pentyloxycarbonyl group, 2-pentyloxycarbonyl group, 3-pentyloxycarbonyl group, 2-methyl -1-pentyloxycarbonyl group, 3- Tyl-1-pentyloxycarbonyl group, 2-methyl-2-pentyloxycarbonyl group, 3-methyl-2-pentyloxycarbonyl group, 1-hexyloxycarbonyl group, 2-hexyloxycarbonyl group, 3-hexyloxycarbonyl Group and the like. The C1-6 alkoxy group is preferably a C1-5 alkoxy group, more preferably a methoxy group, ethoxy group, n-propyloxycarbonyl group, i-propyloxycarbonyl group, n-butyloxycarbonyl group, sec- A butyloxycarbonyl group, a t-butyloxycarbonyl group, an isobutyloxycarbonyl group, a pentyloxycarbonyl group, an isopentyloxycarbonyl group, and a 2,3-dimethylpropyloxycarbonyl group, and more preferably a C1-3 alkoxycarbonyl group Groups (methoxycarbonyl group, ethoxycarbonyl group and propyloxycarbonyl group), and more preferably a methoxycarbonyl group or an ethoxycarbonyl group.

　本明細書において、水酸基で置換されたＣ１～６アルキル基とは、１個の水酸基で置換された、前記Ｃ１～６アルキル基を意味し、例えば、ヒドロキシメチル基、１－ヒドロキシエチル基、２－ヒドロキシエチル基、１－ヒドロキシプロピル基、２－ヒドロキシプロピル基、１－ヒドロキシブチル基、２－ヒドロキシブチル基、３－ヒドロキシブチル基、１－ヒドロキシペンチル基、２－ヒドロキシペンチル基、３－ヒドロキシペンチル基、４－ヒドロキシペンチル基、１－ヒドロキシヘキシル基、２－ヒドロキシヘキシル基、３－ヒドロキシヘキシル基、４－ヒドロキシヘキシル基、５－ヒドロキシヘキシル基、及びヒドロキシシクロヘキシル基などが挙げられ、好ましくは、１個の水酸基で置換されたＣ１～３アルキル基であり、例えば、ヒドロキシメチル基、１－ヒドロキシエチル基、２－ヒドロキシエチル基である。 In the present specification, the C1-6 alkyl group substituted with a hydroxyl group means the C1-6 alkyl group substituted with one hydroxyl group, such as a hydroxymethyl group, a 1-hydroxyethyl group, 2 -Hydroxyethyl group, 1-hydroxypropyl group, 2-hydroxypropyl group, 1-hydroxybutyl group, 2-hydroxybutyl group, 3-hydroxybutyl group, 1-hydroxypentyl group, 2-hydroxypentyl group, 3-hydroxy Examples include pentyl group, 4-hydroxypentyl group, 1-hydroxyhexyl group, 2-hydroxyhexyl group, 3-hydroxyhexyl group, 4-hydroxyhexyl group, 5-hydroxyhexyl group, and hydroxycyclohexyl group. A C1-3 alkyl group substituted with one hydroxyl group, for example , Hydroxymethyl group, 1-hydroxyethyl group, a 2-hydroxyethyl group.

　本発明の式（Ｉ）で表される化合物として、以下の式で表されるナナオマイシンＨが含まれる。 The compound represented by the formula (I) of the present invention includes nanaomycin H represented by the following formula.

　また、別の態様において、本発明は、前記式で表わされるナナオマイシンＨを生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中前記式で表わされるナナオマイシンＨを蓄積せしめ、該培養物から前記式で表わされるナナオマイシンＨを採取することを特徴とする、前記式で表わされるナナオマイシンＨの製造方法に関する。 In another aspect, the present invention provides a method of culturing a microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce nanaomycin H represented by the above formula in a medium, and accumulating the nanaomycin H represented by the above formula in the culture. The present invention relates to a method for producing nanaomycin H represented by the above formula, characterized in that nanaomycin H represented by the above formula is collected from the culture.

　本明細書において、ナオマイシンＨとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：８０４
（３）分子式：Ｃ_３３Ｈ_４４Ｎ_２Ｏ_１９Ｓ
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］^＋　理論値（ｍ／ｚ）８０５．２３０７、実測値（ｍ／ｚ）８０５．２３３７
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２５．７＝－７．６７５（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λ_ｍａｘ（ε）：２３１（４０２００）、２７０（１６６４３，ｓｈ）、３５３（１３３４６）
（７）赤外部吸収極大ν_ｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４１２，１６３７ｃｍ^－１に極大吸収を有する
（８）^１Ｈ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１．７５２（３Ｈ，ｄ，８．０），１．９０７（３Ｈ，ｓ），２．０５３（１Ｈ，ｄ，１２．０），２．２７８（１Ｈ，ｄｄ，９．５，１２．０），２．４３３（１Ｈ，ｄｄ，８．０，１２．５），２．６１２（２Ｈ，ｄ，６．０），２．８０８（１Ｈ，ｄｄ，５．０，１２．５），３．１５１（１Ｈ，ｔ，９．５），３．３０９（１Ｈ，ｄｄ，９．５，１０．０），３．３４（１Ｈ，ｄｄ，２．５，９．５），３．４３（１Ｈ，ｄｄ，３．０，１０．０），３．５９２（１Ｈ，ｄｄ，９．５，１０．０），３．６４５（１Ｈ，ｄｄ，７．０，１２．０），３．７１９（１Ｈ，ｄｄ，９．５，１０．０），３．７７２（１Ｈ，ｄｄ，９．５，１０．０），３．８１９（１Ｈ，ｄｄｄ，２．５，７．０，１０．０），３．８５（１Ｈ，ｄｄ，２．５，１２．０），３．８５（１Ｈ，ｄｄ，３．５，１０．０），４．１１８（１Ｈ，ｄｄ，２．５．　３．０），４．２２（１Ｈ，ｄｄ，８．０，１５．０），４．４４（１Ｈ，ｄｄ，５．０，９．０），４．７（１Ｈ，ｄｄｄ，６．０，６．０，９．５），５．０４２（１Ｈ，ｄ，３．５），７．２４２（１Ｈ，ｄｄ，１．０，８．５），７．５７（１Ｈ，ｄｄ，１．０，８．０），７．６９８（１Ｈ，ｄｄ，８．０，８．５）
（９）^１３Ｃ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１６．２，２２．６，３１．５，３３．６，４１．５，５４．２，５５．６，６０．１，６２．８，６４．６，７２．３，７２．８，７３．２，７３．４，７４．０，７４．１，７４．４，７５．５，７６．４，７７．５，８０．４，１００．１，１１６．０，１２０．０，１２４．６，１３４．７，１３７．９，１６２．８，１７２．０，１７３．６，１７５．６，１９０．６，２００．５
（１０）溶解性：水、エタノール及びメタノールに易溶、アセトン及びヘキサンに難溶。 In the present specification, naomycin H is a compound having the following physical properties:
(1) Property: white powder or pale yellow powder (2) molecular weight: 804
(3) Molecular formula: C ₃₃ H ₄₄ N ₂ O ₁₉ S
(4) [M + H] ⁺ theoretical value (m / z) 805.2307 by high-resolution mass spectrometry, measured value (m / z) 805.2337
(5) Specific rotation: [α] _D ^25.7 = −7.675 (c = 0.1, methanol)
(6) Ultraviolet absorption maximum (in methanol) λ _max (ε): 231 (40200), 270 (16643, sh), 353 (13346)
(7) Infrared absorption maximum ν _max (KBr tablet): maximum absorption at 3412, 1637 cm ⁻¹ (8) ¹ H NMR (in heavy methanol) δ ppm: 1.752 (3H, d, 8.0) , 1.907 (3H, s), 2.053 (1H, d, 12.0), 2.278 (1H, dd, 9.5, 12.0), 2.433 (1H, dd, 8. 0, 12.5), 2.612 (2H, d, 6.0), 2.808 (1H, dd, 5.0, 12.5), 3.151 (1H, t, 9.5), 3.309 (1H, dd, 9.5, 10.0), 3.34 (1H, dd, 2.5, 9.5), 3.43 (1H, dd, 3.0, 10.0) , 3.592 (1H, dd, 9.5, 10.0), 3.645 (1H, dd, 7.0, 12.0), 3.719 (1H, dd, 9.5, 0.0), 3.772 (1H, dd, 9.5, 10.0), 3.819 (1H, ddd, 2.5, 7.0, 10.0), 3.85 (1H, dd , 2.5, 12.0), 3.85 (1H, dd, 3.5, 10.0), 4.118 (1H, dd, 2.5.3.0), 4.22 (1H, dd, 8.0, 15.0), 4.44 (1H, dd, 5.0, 9.0), 4.7 (1H, ddd, 6.0, 6.0, 9.5), 5 .042 (1H, d, 3.5), 7.242 (1H, dd, 1.0, 8.5), 7.57 (1H, dd, 1.0, 8.0), 7.698 ( 1H, dd, 8.0, 8.5)
(9) ¹³ C NMR (in heavy methanol) δ ppm: 16.2, 22.6, 31.5, 33.6, 41.5, 54.2, 55.6, 60.1, 62.8, 64.6, 72.3, 72.8, 73.2, 73.4, 74.0, 74.1, 74.4, 75.5, 76.4, 77.5, 80.4, 100. 1,116.0,120.0,124.6,134.7,137.9,162.8,172.0,173.6,175.6,190.6,200.5
(10) Solubility: Easily soluble in water, ethanol and methanol, hardly soluble in acetone and hexane.

　本発明の式（Ｉ）で表される化合物として、以下の式で表されるナナオマイシンＩが含まれる。 The compound represented by the formula (I) of the present invention includes nanaomycin I represented by the following formula.

　また、別の態様において、本発明は、前記式で表わされるナナオマイシンＩを生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中前記式で表わされるナナオマイシンＩを蓄積せしめ、該培養物から前記式で表わされるナナオマイシンＩを採取することを特徴とする、前記式で表わされるナナオマイシンＩの製造方法に関する。 In another aspect, the present invention provides a method of culturing a microorganism belonging to actinomycetes having an ability to produce nanaomycin I represented by the above formula in a medium, and accumulating the nanaomycin I represented by the above formula in the culture. The present invention relates to a method for producing nanaomycin I represented by the above formula, characterized in that nanaomycin I represented by the above formula is collected from the culture.

　本明細書において、ナナオマイシンＩとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：淡黄色粉末又は淡黄色非晶質固体
（２）分子量：４８１
（３）分子式：Ｃ_２１Ｈ_２３ＮＯ_１０Ｓ
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］^＋　理論値（ｍ／ｚ）４８２．１１１５、実測値（ｍ／ｚ）４８２．１１２９
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２6＝－１４２.７（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λ_ｍａｘ（ε）：２０４（１５３９２）、２３１（１５９６９）、２６７（ｓｈ）、３５３（５０５０）
（７）赤外部吸収極大ν_ｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４５１，１６４６，１５２７ｃｍ^－１に極大吸収を有する
（８）^１Ｈ　ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド中）δ　ｐｐｍ：１．６１（３Ｈ，ｄ，７．２），１．７２（１Ｈ，ｓ），１．８２（１Ｈ，ｄ，１３．５），２．１３（１Ｈ，ｄｄ，１３．５，１２．０），２．３３（１Ｈ，ｄｄ，１２．６，８．４）, ２．３９（１Ｈ，ｄｄ，１５．３，９．０），２．５４（１Ｈ，ｄｄ，１５．３，３．６），２．６４（１Ｈ，ｄｄ，１２．６，４．８），４．１３（１Ｈ，ｑ，７．２），４．１９（１Ｈ，ｍ），４．５０（１Ｈ，ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，８．１），７．４５（１Ｈ，ｄ，７．６），７．７２（１Ｈ，ｄｄ，８．１，７．６）
（９）^１３Ｃ　ＮＭＲ（重ジメチルスルホキシド中）δ　ｐｐｍ：１５．５，２２．２，２９．９，３１．９，４０．３，５１．３，５８．４，６２．８，７２．６，７５．９，１１４．４，１１８．６，１２３．６，１３２．９，１３７．０，１６０．３，１６９．２，１７１．３，１７２．１，１８９．２，１９８．７
（１０）溶解性：ＤＭＳＯ、メタノールに易溶。ヘキサン、酢酸エチル及びクロロホルムに難溶。 In this specification, nanaomycin I is a compound having the following physical properties:
(1) Properties: pale yellow powder or pale yellow amorphous solid (2) molecular weight: 481
(3) Molecular formula: C ₂₁ H ₂₃ NO ₁₀ S
(4) [M + H] by high resolution mass spectrometry ⁺ theoretical value (m / z) 482.1115, actual measurement value (m / z) 482.1129
(5) Specific rotation: [α] _D ²⁶ = −142.7 (c = 0.1, methanol)
(6) Ultraviolet absorption maximum (in methanol) λ _max (ε): 204 (15392), 231 (15969), 267 (sh), 353 (5050)
(7) Infrared absorption maximum ν _max (KBr tablet): maximum absorption at 3451, 1646, 1527 cm ⁻¹ (8) ¹ H NMR (in heavy dimethyl sulfoxide) δ ppm: 1.61 (3H, d, 7 .2), 1.72 (1H, s), 1.82 (1H, d, 13.5), 2.13 (1H, dd, 13.5, 12.0), 2.33 (1H, dd) , 12.6, 8.4), 2.39 (1H, dd, 15.3, 9.0), 2.54 (1H, dd, 15.3, 3.6), 2.64 (1H, dd, 12.6, 4.8), 4.13 (1H, q, 7.2), 4.19 (1H, m), 4.50 (1H, m), 7.28 (1H, d, 8.1), 7.45 (1H, d, 7.6), 7.72 (1H, dd, 8.1, 7.6)
(9) ¹³ C NMR (in deuterated dimethyl sulfoxide) δ ppm: 15.5, 22.2, 29.9, 31.9, 40.3, 51.3, 58.4, 62.8, 72.6 75.9, 114.4, 118.6, 123.6, 132.9, 137.0, 160.3, 169.2, 171.3, 172.1, 179.2, 198.7
(10) Solubility: Easily soluble in DMSO and methanol. Insoluble in hexane, ethyl acetate and chloroform.

　本発明の式（Ｉ）で表される化合物として、以下の式で表されるナナオマイシンＪが含まれる。 The compound represented by the formula (I) of the present invention includes nanaomycin J represented by the following formula.

　また、別の態様において、本発明は、前記式で表わされるナナオマイシンJを生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中前記式で表わされるナナオマイシンJを蓄積せしめ、該培養物から前記式で表わされるナナオマイシンJを採取することを特徴とする、前記式で表わされるナナオマイシンJの製造方法に関する。 In another embodiment, the present invention comprises culturing a microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce nanaomycin J represented by the above formula in a medium, and accumulating nanaomycin J represented by the above formula in the culture. The present invention relates to a method for producing nanaomycin J represented by the above formula, characterized in that nanaomycin J represented by the above formula is collected from the culture.

　本明細書において、ナナオマイシンＪとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：淡黄色粉末又は淡黄色非晶質固体
（２）分子量：６４３
（３）分子式：Ｃ_２７Ｈ_３４Ｎ_２Ｏ_１４Ｓ
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］^＋　理論値（ｍ／ｚ）６４３．１８０３、実測値（ｍ／ｚ）６４３．１８３３
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２6＝－１２５.５（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λ_ｍａｘ（ε）：２０４（２４０７５）、２３２（１８７４６）、２６７（ｓｈ）、３５３（５７７８）
（７）赤外部吸収極大ν_ｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４６３，１６４３，１５２７ｃｍ^－１に極大吸収を有する
（８）^１Ｈ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１．７６（３Ｈ，ｄ，７．２），１．８７（１Ｈ，ｓ），２．０６（１Ｈ，ｄ，１４．１），２．２７（１Ｈ，ｄｄ，１４．１，４．８），２．４０（１Ｈ，ｄｄ，１２．６，９．０）, ２．６１（１Ｈ，ｄ，６．０），２．７７（１Ｈ，ｄｄ，１２．６，５．１），３．３７（１Ｈ，ｄｄ，９．０，９．０），３．６８（１Ｈ，ｄｄ，１０．０，９．０），３．６９（１Ｈ，ｄｄ，１２．０，６．０），３．７６（１Ｈ，ｄｄ，１０．０，３．０），３．７９（１Ｈ，ｄｄ，１２．０，３．０），３．７９（１Ｈ，ｄｄｄ，９．０，６．０，３．０），４．２１（１Ｈ，ｑ，７．２），４．５０（１Ｈ，ｄｄ，９．０，５．１），４．６９（１Ｈ，ｍ），５．０３（１Ｈ，ｄ，３．０），７．２４（１Ｈ，ｄ，８．４，０．９），７．５６（１Ｈ，ｄ，７．５，０．９），７．６９（１Ｈ，ｄｄ，８．４，７．５）
（９）^１３Ｃ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１６．１，２２．４，３１．３，３３．８，４１．６，５３．７，５６．１，６０．１，６２．８，６４．６，７２．４，７２．６，７３．２，７５．５，７７．５，９２．４，１１６．０，１１９．９，１２４．６，１３４．６，１３７．９，１６２．６，１７２．１，１７３．２，１７５．６，１９０．７，２００．５
（１０）溶解性：ＤＭＳＯ、メタノールに易溶。ヘキサン、酢酸エチル及びクロロホルムに難溶。 In this specification, nanaomycin J is a compound having the following physical properties:
(1) Properties: pale yellow powder or pale yellow amorphous solid (2) molecular weight: 643
(3) Molecular _{_{_{_{formula: C 27 H 34 N 2 O}}}} 14 S
(4) [M + H] ⁺ theoretical value (m / z) 643.18033, measured value (m / z) 643.1833 by high resolution mass spectrometry
(5) Specific rotation: [α] _D ²⁶ = −125.5 (c = 0.1, methanol)
(6) Ultraviolet absorption maximum (in methanol) λ _max (ε): 204 (24075), 232 (18746), 267 (sh), 353 (5778)
(7) Infrared absorption maximum ν _max (KBr tablet): maximum absorption at 3463, 1643, 1527 cm ⁻¹ (8) ¹ H NMR (in heavy methanol) δ ppm: 1.76 (3H, d, 7. 2), 1.87 (1H, s), 2.06 (1H, d, 14.1), 2.27 (1H, dd, 14.1, 4.8), 2.40 (1H, dd, 12.6, 9.0), 2.61 (1H, d, 6.0), 2.77 (1H, dd, 12.6, 5.1), 3.37 (1H, dd, 9.0) , 9.0), 3.68 (1H, dd, 10.0, 9.0), 3.69 (1H, dd, 12.0, 6.0), 3.76 (1H, dd, 10. 0, 3.0), 3.79 (1H, dd, 12.0, 3.0), 3.79 (1H, ddd, 9.0, 6.0, 3.0), 4.21 (1H , Q, 7. ), 4.50 (1H, dd, 9.0, 5.1), 4.69 (1H, m), 5.03 (1H, d, 3.0), 7.24 (1H, d, 8) .4, 0.9), 7.56 (1H, d, 7.5, 0.9), 7.69 (1H, dd, 8.4, 7.5)
(9) ¹³ C NMR (in heavy methanol) δ ppm: 16.1, 22.4, 31.3, 33.8, 41.6, 53.7, 56.1, 60.1, 62.8, 64.6, 72.4, 72.6, 73.2, 75.5, 77.5, 92.4, 116.0, 119.9, 124.6, 134.6, 137.9, 162. 6, 172.1, 173.2, 175.6, 190.7, 200.5
(10) Solubility: Easily soluble in DMSO and methanol. Insoluble in hexane, ethyl acetate and chloroform.

　本発明の式（Ｉ）で表される化合物として、以下の式で表されるナナオマイシンＫが含まれる。 The compound represented by the formula (I) of the present invention includes nanaomycin K represented by the following formula.

　また、別の態様において、本発明は、前記式で表わされるナナオマイシンＫを生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中前記式で表わされるナナオマイシンＫを蓄積せしめ、該培養物から前記式で表わされるナナオマイシンＫを採取することを特徴とする、前記式で表わされるナナオマイシンＫの製造方法に関する。 In another aspect, the present invention provides a method of culturing a microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce nanaomycin K represented by the above formula in a medium, and accumulating nanaomycin K represented by the above formula in the culture. The present invention relates to a method for producing nanaomycin K represented by the above formula, characterized in that nanaomycin K represented by the above formula is collected from the culture.

　本明細書において、ナナオマイシンＫとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：橙色粉末又は橙色非晶質固体
（２）分子量：５４７
（３）分子式：Ｃ_２５Ｈ_２９Ｎ_３Ｏ_９Ｓ
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］^＋　理論値（ｍ／ｚ）５４８．１６９７、実測値（ｍ／ｚ）５４８．１７０９
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２6＝－２００.１（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λ_ｍａｘ（ε）：２０４（１８４８８）、２３５（２６９６７）、３５６（５９０７）
（７）赤外部吸収極大ν_ｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３２，１６７７，１５２７ｃｍ^－１に極大吸収を有する
（８）^１Ｈ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１．８７（３Ｈ，ｂｒ　ｄ），１．９４（１Ｈ，ｄ，４．９），２．２７（１Ｈ，ｄｄ，１２．０，１２．０），２．５７（１Ｈ，ｄ，１４．９，８．０），２．７０（１Ｈ，ｄｄ，１４．９，４．０）, ３．１０-３．２８（２Ｈ，ｍ），３．２５（９Ｈ，ｓ），３．９５（１Ｈ，ｂｒ　ｄ），４．２８（１Ｈ，ｑ，６．９），４．８６（１Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐ），７．０３（１Ｈ，ｓ），７．２４（１Ｈ，ｄ，８．２），７．４１（１Ｈ，ｄ，６．９），７．６６（１Ｈ，ｂｒ　ｔ）
（９）^１３Ｃ　ＮＭＲ（重メタノール中）δ　ｐｐｍ：１６．２，２７．４，３２．１，４１．８，５２．９，６３．５，６４．５，７５．４，７７．０，７９．４，１１６．１，１２０．５，１２２．２，１２４．５，１３２．７，１３４．８，１３８．１，１３８．６，１６３．０，１７１．０，１７５．２，１９０．７，２００．３
（１０）溶解性：ＤＭＳＯ、メタノールに易溶。ヘキサン、酢酸エチル及びクロロホルムに難溶。 In this specification, nanaomycin K is a compound having the following physical properties:
(1) Property: Orange powder or orange amorphous solid (2) Molecular weight: 547
(3) Molecular _{_{_{_{formula: C 25 H 29 N 3 O}}}} 9 S
(4) [M + H] ⁺ theoretical value (m / z) 548.1697, measured value (m / z) 548.1709 by high resolution mass spectrometry
(5) Specific rotation: [α] _D ²⁶ = −20.1 (c = 0.1, methanol)
(6) Ultraviolet absorption maximum (in methanol) λ _max (ε): 204 (18488), 235 (26967), 356 (5907)
(7) Infrared absorption maximum ν _max (KBr tablet): maximum absorption at 3432, 1677, 1527 cm ⁻¹ (8) ¹ H NMR (in heavy methanol) δ ppm: 1.87 (3H, br d), 1.94 (1H, d, 4.9), 2.27 (1H, dd, 12.0, 12.0), 2.57 (1H, d, 14.9, 8.0), 2.70 (1H, dd, 14.9, 4.0), 3.10-3.28 (2H, m), 3.25 (9H, s), 3.95 (1H, br d), 4.28 ( 1H, q, 6.9), 4.86 (1H, overlap), 7.03 (1H, s), 7.24 (1H, d, 8.2), 7.41 (1H, d, 6. 9), 7.66 (1H, br t)
(9) ¹³ C NMR (in heavy methanol) δ ppm: 16.2, 27.4, 32.1, 41.8, 52.9, 63.5, 64.5, 75.4, 77.0, 79.4, 116.1, 120.5, 122.2, 124.5, 132.7, 134.8, 138.1, 138.6, 163.0, 171.0, 175.2, 190. 7,200.3
(10) Solubility: Easily soluble in DMSO and methanol. Insoluble in hexane, ethyl acetate and chloroform.

　本明細書において、本発明の式（Ｉ）で表わされる化合物の塩とは、式（Ｉ）で表わされる化合物に金属等が配位して形成する錯塩を意味する。また、本発明の式（Ｉ）で表わされる化合物の水和物又は溶媒和物及び本発明の式（Ｉ）で表わされる化合物の塩の水和物又は溶媒和物も本発明に包含される。好ましくは、本発明の式（Ｉ）で表わされる化合物の塩、及び、本発明の式（Ｉ）で表わされる化合物の水和物又は溶媒和物及び本発明の式（Ｉ）で表わされる化合物の塩の水和物又は溶媒和物は、薬理学的に許容されるものである。また、本発明の式（Ｉ）で表わされる化合物又はその塩は結晶であってもよいし、非晶体であってもよい。 In the present specification, the salt of the compound represented by the formula (I) of the present invention means a complex salt formed by coordination of a metal or the like with the compound represented by the formula (I). Further, the hydrate or solvate of the compound represented by the formula (I) of the present invention and the hydrate or solvate of the salt of the compound represented by the formula (I) of the present invention are also included in the present invention. . Preferably, the salt of the compound represented by the formula (I) of the present invention, and the hydrate or solvate of the compound represented by the formula (I) of the present invention and the compound represented by the formula (I) of the present invention. The hydrate or solvate of the salt is pharmacologically acceptable. Further, the compound represented by the formula (I) of the present invention or a salt thereof may be a crystal or an amorphous body.

　本発明の化合物は、上記化合物の他、これらの化合物の薬理学的に許容されるエステル誘導体を包含する。ここで、「薬理学的に許容されるエステル誘導体」は、生体内において代謝されて、本願発明の化合物を与える基を含む化合物であって、医薬として体内に投与することが許容可能なエステルのことである。本明細書において、エステルは、エステル結合した化合物の他、アミド結合した化合物を含む。エステルは、生体内のエステラーゼにより分解されて活性型の化合物を与えてもよい。例えば、エステルとしては、置換され又は置換されていない、低級アルキルエステル、低級アルケニルエステル、低級アルキルアミノ低級アルキルエステル、アシルアミノ低級アルキルエステル、アシルオキシ低級アルキルエステル、アリールエステル、アリール低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、水酸化アミドを挙げることができる。エステルとして、好ましくは、プロピオオン酸エステル又はアシルエステルである。 The compounds of the present invention include pharmacologically acceptable ester derivatives of these compounds in addition to the above compounds. Here, the “pharmacologically acceptable ester derivative” is a compound containing a group that is metabolized in vivo to give the compound of the present invention, and is an ester that can be administered to the body as a pharmaceutical. That is. In the present specification, the ester includes not only an ester-bonded compound but also an amide-bonded compound. Esters may be degraded by in vivo esterases to give active compounds. For example, as the ester, substituted or unsubstituted lower alkyl ester, lower alkenyl ester, lower alkylamino lower alkyl ester, acylamino lower alkyl ester, acyloxy lower alkyl ester, aryl ester, aryl lower alkyl ester, amide, lower Examples thereof include alkylamides and hydroxide amides. The ester is preferably a propionate or an acyl ester.

　本発明の化合物は不斉炭素を有することがあることから、光学異性体が存在することがある。本発明の化合物としては、右旋性（＋）又は左旋性（－）の何れの化合物であってもよいし、ラセミ体などのこれらの異性体の混合物であってもよい。また、本発明の化合物は、特に断らない限り、いずれの互変異性体、又は幾何異性体（例えば、Ｅ体、Ｚ体など）も含むものである。 Since the compound of the present invention may have an asymmetric carbon, optical isomers may exist. The compound of the present invention may be either a dextrorotatory (+) or levorotatory (−) compound, or a mixture of these isomers such as a racemate. In addition, unless otherwise specified, the compound of the present invention includes any tautomer or geometric isomer (for example, E-form, Z-form, etc.).

　あるいは、本発明は、前記式（Ｉ）で表わされる化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する医薬組成物に関する。 Alternatively, the present invention relates to a pharmaceutical composition containing the compound represented by the formula (I) or an ester derivative thereof, or a salt or hydrate thereof as an active ingredient.

　更に、本発明は、前記式（Ｉ）で表わされる化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する医薬組成物に関する。別の態様において、本発明は、前記式（Ｉ）で表わされる化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を有効成分として含有する、上皮間葉転換が誘導された細胞を障害するための薬剤に関する。本明細書において、「上皮間葉転換が誘導された細胞を傷害するための薬剤」とは、上皮細胞から間葉細胞への転換が誘導された細胞に特異的に傷害を与え、殺傷し、又はアポトーシスを誘導するための薬剤を意味する。 Furthermore, the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising the compound represented by the formula (I) or an ester derivative thereof, or a salt or hydrate thereof as an active ingredient. In another embodiment, the present invention is for the purpose of damaging a cell in which epithelial-mesenchymal transition is induced, containing the compound represented by the formula (I) or an ester derivative thereof, or a salt or hydrate thereof as an active ingredient. Concerning drugs. In the present specification, the "agent for damaging cells in which epithelial-mesenchymal transition is induced" specifically damages and kills cells in which transformation from epithelial cells to mesenchymal cells is induced, Or means an agent for inducing apoptosis.

　本発明の医薬組成物は、好ましくは上皮細胞から間葉細胞への転換が誘導された細胞に特異的に傷害を与える。本明細書において、上皮細胞から間葉細胞への転換が誘導された細胞に特異的に傷害を与えるとは、上皮細胞にはほとんど傷害を与えないが、上皮細胞から間葉細胞に転換された細胞には傷害を与えることを意味する。ここで、ほとんど障害を与えないとは、全く毒性がないことを意味するものではなく、医薬として用いた場合に問題とならない程度に毒性がないことを意味し、例えば、３０μＭで全く毒性を示さないか、又は、１００μＭで８５％以上の生存率を示すことを意味する。 The pharmaceutical composition of the present invention preferably specifically damages cells in which conversion from epithelial cells to mesenchymal cells is induced. In the present specification, the specific damage to the cell in which the conversion from the epithelial cell to the mesenchymal cell is induced means that the epithelial cell is hardly damaged but the epithelial cell is converted to the mesenchymal cell. Means that cells are damaged. Here, almost no damage does not mean that there is no toxicity at all, but means that there is no toxicity to the extent that it does not cause a problem when used as a medicine. For example, it shows no toxicity at 30 μM. It means no or a survival rate of 85% or more at 100 μM.

　また、本発明において医薬組成物、細胞障害剤、治療薬、予防薬、転移抑制剤、及び浸潤抑制剤（以下「医薬組成物等」という）としては、その種類が特に限定されるものではなく、剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、座剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は常法に従って調製することができる。また、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発明の化合物を水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水或いはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。経口投与用又は非経口投与用の任意の製剤形態で提供される。例えば、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤又は液剤等の形態の経口投与用医薬組成物、静脈内投与用、筋肉内投与用、若しくは皮下投与用などの注射剤、点滴剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、点鼻剤、吸入剤、坐剤などの形態の非経口投与用医薬組成物として調製することができる。注射剤や点滴剤などは、凍結乾燥形態などの粉末状の剤形として調製し、用時に生理食塩水などの適宜の水性媒体に溶解して用いることもできる。 In the present invention, the type of the pharmaceutical composition, cytotoxic agent, therapeutic agent, prophylactic agent, metastasis inhibitor, and infiltration inhibitor (hereinafter referred to as “pharmaceutical composition etc.”) is not particularly limited. Examples of the dosage form include tablets, capsules, granules, powders, syrups, suspensions, suppositories, ointments, creams, gels, patches, inhalants, injections, and the like. These preparations can be prepared according to a conventional method. In the case of a liquid preparation, it may be dissolved or suspended in water or other appropriate solvent at the time of use. Tablets and granules may be coated by a known method. In the case of injection, it is prepared by dissolving the compound of the present invention in water, but it may be dissolved in physiological saline or glucose solution as necessary, and a buffer or preservative may be added. Good. It is provided in any dosage form for oral or parenteral administration. For example, a pharmaceutical composition for oral administration in the form of granules, fine granules, powders, hard capsules, soft capsules, syrups, emulsions, suspensions or liquids, for intravenous administration, for intramuscular administration, Alternatively, it can be prepared as a pharmaceutical composition for parenteral administration in the form of injections, drops, transdermal absorbents, transmucosal absorbents, nasal drops, inhalants, suppositories, etc. for subcutaneous administration. Injections, infusions, and the like can be prepared as powdered dosage forms such as freeze-dried forms, and can be used by dissolving in an appropriate aqueous medium such as physiological saline at the time of use.

　本発明の化合物は、上皮間葉転換した細胞に対して特異的に傷害を与えることができる。 The compound of the present invention can specifically damage cells that have undergone epithelial-mesenchymal transition.

図１はコンフルエント状態および薄まき状態におけるナナオマイシンＨのＭＤＣＫ細胞に対する増殖抑制・毒性効果（ＭＴＳアッセイ）を示すグラフである。縦軸に吸光度４９０ｎｍ、横軸にＤＭＳＯ（コントロール）またはナナオマイシンＨ処理群、左がＢＳＦ添加、右がＴＧＦを添加させ、上皮間葉転換を誘導させた群になる。FIG. 1 is a graph showing growth inhibitory and toxic effects (MTS assay) of nanaomycin H on MDCK cells in a confluent state and a thinned state. Absorbance is 490 nm on the vertical axis, DMSO (control) or nanaomycin H treatment group is on the horizontal axis, BSF is added on the left, TGF is added on the right, and epithelial-mesenchymal transition is induced. 図２は移動する細胞への薬剤の影響を観察した結果を示す写真である。（Ａ：ＤＭＳＯ（コントロール）、Ｂ：ナナオマイシンＨ），スケールバー：１００μｍFIG. 2 is a photograph showing the results of observing the effect of the drug on the moving cells. (A: DMSO (control), B: nanaomycin H), scale bar: 100 μm 図３はＴＧＦ－βにより上皮間葉転換誘導したＭＤＣＫ細胞に対する、ナナオマイシン類の殺細胞効果を示すグラフである。コントロールとして、ＴＧＦ－βを加えない群にはＢＳＡを加えた。上段は、ナナオマイシン類を５μｇ／ｍｌで添加した結果を示し、下段はナナオマイシン類を５０μｇ／ｍｌ（ただし、ナナオマイシンＨのみ１００μｇ／ｍｌ）で添加した結果を示す。縦軸は、ナナオマイシン類添加前の細胞数を１とした場合の細胞生存率を表す。白抜きグラフはＭＤＣＫ細胞を６０００細胞播種したウェルの結果を示し、黒塗りグラフはＭＤＣＫ細胞を２０００細胞播種したウェルの結果を示す。横軸のＢＳＡはＴＧＦ－β未添加のコントロール群を表し、ＴＧＦはＴＧＦ－β添加群を表す。「Ｈ」、「Ｉ」、「Ｊ」及び「Ｋ」はそれぞれ添加したナナオマイシン類の種類を表す。FIG. 3 is a graph showing the cytocidal effect of nanaomycins on MDCK cells induced to undergo epithelial-mesenchymal transition by TGF-β. As a control, BSA was added to the group to which TGF-β was not added. The upper part shows the result of adding nanaomycin at 5 μg / ml, and the lower part shows the result of adding nanaomycin at 50 μg / ml (however, only nanaomycin H is 100 μg / ml). The vertical axis represents the cell viability when the number of cells before addition of nanaomycin is 1. The white graph shows the results of wells seeded with 6000 MDCK cells, and the black graph shows the results of wells seeded with 2000 MDCK cells. BSA on the horizontal axis represents a control group not added with TGF-β, and TGF represents a group added with TGF-β. “H”, “I”, “J”, and “K” represent the types of added nanaomycins, respectively.

　本発明の前記式（Ｉ）で表わされる化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物は、ナオマイシンＨを生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中ナオマイシンＨを蓄積せしめ、該培養物からナナオマイシンを採取（分離・抽出・精製）することにより、あるいは、得られたナナオマイシンを更に化学的に変換又は修飾することにより製造することができる。 The compound represented by the above formula (I) of the present invention, or an ester derivative thereof, or a salt or hydrate thereof is obtained by culturing a microorganism belonging to actinomycetes having an ability to produce naomycin H in a medium, Can be produced by collecting (separating, extracting, and purifying) nanaomycin from the culture, or by further chemically converting or modifying the obtained nanaomycin.

　本発明のナオマイシン類（ナナオマイシンＨ、ナナオマイシンＩ、ナナオマイシンＪ、及びナナオマイシンＫ）の製造方法において、「ナオマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物」は、放線菌に属する菌であって、ナオマイシン類を生産する能力を有する微生物であれば特に限定されない。本発明のナオマイシン類の製造方法に用いることのできる菌株には、上記菌株の他、その変異株をはじめ、放線菌に属するナオマイシンＨを生産する能力を有する菌のすべてが含まれる。微生物が「ナオマイシンＨを生産する能力を有する放線菌に属する微生物」であるか否かは、例えば、以下の方法により決定することができる。スターチ２．４％、グルコース０．１％、ペプトン０．３％、カツオエキス０．３％、酵母エキス０．５％、炭酸水素カルシウム０．４％からなる液体培地（ｐＨ　７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに、液体培地で培養した被験微生物１ｍＬを植菌し、２７℃で３日間振盪培養後、得られた種培養液を、スターチ５．０％、グリセロール０．５％、脱脂小麦胚芽１．０％、ドライ酵母１．０％、炭酸水素カルシウム０．５％からなる液体培地（ｐＨ７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに、１ｍＬ植菌し、２７℃で８日間振盪培養することにより得られた培養物の中に、ナオマイシンＨが存在すれば当該微生物はナオマイシンＨを生産する能力を有する放線菌に属する微生物であると決定することができる。好ましくは、ナオマイシンＨを生産する能力を有する放線菌に属する微生物は、石川県七尾市の土壌より分離された、ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｋ１５－０５９１株である。本微生物は、２０１７年９月２６日付にて、独立行政法人製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に受領番号　ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２３０４として寄託されている。 In the method for producing naomycins of the present invention (Nanaomycin H, Nanaomycin I, Nanaomycin J, and Nanaomycin K), “microorganisms belonging to actinomycetes capable of producing naomycins” are bacteria belonging to actinomycetes. And it will not be specifically limited if it is a microorganism which has the capability to produce naomycins. The strains that can be used in the method for producing naomycins of the present invention include all of the strains having the ability to produce naomycin H belonging to actinomycetes, in addition to the above strains. Whether or not a microorganism is “a microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce naomycin H” can be determined, for example, by the following method. 100 mL liquid medium (pH 7.0) consisting of starch 2.4%, glucose 0.1%, peptone 0.3%, skipjack extract 0.3%, yeast extract 0.5%, calcium bicarbonate 0.4% 1 mL of a test microorganism cultured in a liquid medium was inoculated into a 500 mL Erlenmeyer flask, and after shaking culture at 27 ° C. for 3 days, the obtained seed culture solution was mixed with 5.0% starch, 0.5% glycerol, 1 mL is inoculated into a 500 mL Erlenmeyer flask containing 100 mL of a liquid medium (pH 7.0) composed of 1.0% defatted wheat germ, 1.0% dry yeast, and 0.5% calcium bicarbonate, and is treated at 27 ° C. for 8 days. If naomycin H is present in the culture obtained by shaking culture, the microorganism can be determined to be a microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce naomycin H. Preferably, the microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce naomycin H is Streptomyces sp. K15-0591 strain isolated from the soil of Nanao City, Ishikawa Prefecture. This microorganism was deposited on September 26, 2017 as a receipt number NITE ABP-02304 at the Patent Microorganism Depositary Center of the National Institute of Technology and Evaluation (2-5-8 Kazusa-Kamashita, Kisarazu City, Chiba Prefecture). Yes.

　本明細書において、「変異株」とは、人工的又は自然界における変異誘発刺激によりＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．Ｋ１５－０５９１株とは異なる菌学的性状又は遺伝子を有する株のことであり、このような変異株にはＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．Ｋ１５－０５９１株から派生した菌株の他、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．Ｋ１５－０５９１株を派生させた元の菌株も含まれる。本明細書において、変異株は実際の派生の痕跡の有無を問うものではなく、例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．Ｋ１５－０５９１株遺伝子（例えば、１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子）と高い相同性（例えば、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上など）を有する遺伝子を有する菌株もまた変異株に含まれる。また、このような変異株は、ナナオマイシン類の産生能を維持している限り、人工的に作製したものであるか、天然から採取したものであるかを問わない。 As used herein, “mutant strain” refers to Streptomyces sp. By artificial or natural mutagenesis stimulation. It is a strain having a mycological property or gene different from that of the K15-0591 strain, and such mutant strains include Streptomyces sp. In addition to strains derived from the K15-0591 strain, Streptomyces sp. The original strain derived from the K15-0591 strain is also included. In the present specification, the mutant strain does not ask for the presence or absence of actual derivation. For example, Streptomyces sp. A strain having a gene having high homology (for example, 80% or more, 85% or more, 90% or more, 95% or more, etc.) with a K15-0591 strain gene (for example, 16S rRNA gene) is also included in the mutant strain. Moreover, as long as such a mutant strain is maintaining the production ability of nanaomycin, it does not ask | require whether it was produced artificially or extract | collected from nature.

　ナナオマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培養するための培地には、栄養源として、放線菌の栄養源として使用し得るものを含有することができる。例えば、市販のペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、綿実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、ＮＺ－アミン、カゼインの水和物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の窒素源、グリセリン、スターチ、グルコース、ガラクトース、マンノース等の炭水化物、あるいは脂肪等の炭素源、及び食塩、リン酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム等の無機塩を単独あるいは組み合わせて使用することができる。その他、培地には、必要に応じて微量の金属塩、消泡剤として動・植・鉱物油等を添加することもできる。これらのものは生産菌を利用したマングロマイシン類の生産の役だつものであればよく、公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができる。 The medium for culturing microorganisms belonging to actinomycetes having the ability to produce nanaomycins can contain a nutrient that can be used as a nutrient source for actinomycetes. For example, commercially available peptone, meat extract, corn steep liquor, cottonseed flour, peanut flour, soy flour, yeast extract, NZ-amine, casein hydrate, nitrogen sources such as sodium nitrate, ammonium nitrate, ammonium sulfate, glycerin , Carbohydrates such as starch, glucose, galactose, and mannose, or carbon sources such as fat, and inorganic salts such as sodium chloride, phosphate, calcium carbonate, and magnesium sulfate can be used alone or in combination. In addition, if necessary, a trace amount of a metal salt, a moving / planting / mineral oil or the like as an antifoaming agent can be added to the medium. Any of these may be used for the production of mangromycins using the produced bacteria, and all known actinomycete culture materials can be used.

　また、ナナオマイシン類を生産する能力を有する放線菌に属する微生物の培養は、生産菌が発育しナナオマイシン類を生産できる温度範囲（例えば、１０℃～４０℃、好ましくは、２５～３０℃）で数日～２週間振盪培養することにより行うことができる。培養条件は、本明細書の記載を参照しながら、使用するナナオマイシン類生産菌の性質に応じて適宜選択して行なうことができる。 In addition, the culture of microorganisms belonging to actinomycetes having the ability to produce nanaomycins is performed in a temperature range in which the producing bacteria can grow and produce nanaomycins (for example, 10 ° C. to 40 ° C., preferably 25 to 30 ° C.). Can be carried out by shaking culture for several days to 2 weeks. The culture conditions can be appropriately selected according to the nature of the nanomycin-producing bacterium used while referring to the description of the present specification.

　ナナオマイシン類の採取は、培養液より酢酸エチル等の水不混和性の有機溶媒を用いて抽出することにより行うことができる。本抽出法に加え、脂溶性物質の採取に用いられる公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーよりのかき取り、遠心向流分配クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を適宜組合わせあるいは繰返すことによって純粋になるまで精製することができる。 Nanaomycins can be collected by extraction from a culture solution using a water-immiscible organic solvent such as ethyl acetate. In addition to this extraction method, known methods used for collecting fat-soluble substances, such as adsorption chromatography, partition chromatography, gel filtration chromatography, scraping from thin layer chromatography, centrifugal countercurrent distribution chromatography, high performance liquid It can be purified until it becomes pure by appropriately combining or repeating chromatography.

　本発明の前記式（Ｉ）で表わされる化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物は、ナナオマイシン類を適宜、化学的変換又は修飾することにより合成することができる。あるいは、本発明の前記式（Ｉ）で表わされる化合物は、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．Ｋ１５－０５９１株を生産菌として用いて、上述のナナオマイシン類の産生及び精製と同様の方法で単離することにより取得することができる。 The compound represented by the formula (I) of the present invention or an ester derivative thereof, or a salt or hydrate thereof can be synthesized by appropriately chemically converting or modifying nanaomycins. Alternatively, the compound represented by the above formula (I) of the present invention is Streptomyces sp. It can be obtained by using the K15-0591 strain as a production bacterium and isolating it in the same manner as in the above-mentioned production and purification of nanaomycins.

　本発明の医薬組成物は、通常の薬学的に許容される担体を用いて、常法により製剤化することができる。本発明の前記式（Ｉ）で表わされる化合物等を有効成分として含有する医薬組成物を製剤化するための剤型に制限はなく錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等の固形剤、溶液、懸濁液、乳剤などの液状製剤として経口的に、あるいは、静脈内、筋肉内、皮下などの注射剤、坐剤、貼付剤などとして非経口的に使用することができる。経口用固形製剤を調製する場合は、主薬に賦形剤、更に必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えた後、常法により溶剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等とする。注射剤を調製する場合には、主薬に必要によりｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤等を添加し、常法により皮下又は静脈内用注射剤とすることができる。 The pharmaceutical composition of the present invention can be formulated by a conventional method using a normal pharmaceutically acceptable carrier. There is no limitation on the dosage form for formulating a pharmaceutical composition containing the compound represented by the formula (I) of the present invention as an active ingredient, and solid preparations such as tablets, pills, capsules, powders, granules and the like It can be used orally as liquid preparations such as solutions, suspensions and emulsions, or parenterally as injections such as intravenous, intramuscular and subcutaneous, suppositories and patches. When preparing a solid preparation for oral administration, add excipients to the active ingredient and, if necessary, binders, disintegrants, lubricants, etc., and then add solvents, granules, powders, capsules, etc. by conventional methods. And When preparing an injection, a pH adjuster, a buffer, a stabilizer, a solubilizing agent, etc. may be added to the main drug as necessary to obtain a subcutaneous or intravenous injection by a conventional method.

　本発明はさらに、それを必要とする患者に有効量の本発明の前記式（Ｉ）で表わされる化合物若しくはそのエステル誘導体又はそれらの塩若しくは水和物を投与することを備える、上皮間葉転換が発症又は増悪化に関係し又は寄与する疾患又は障害の治療方法又は予防方法に使用することができる。例えば、本発明の前記式（Ｉ）で表わされる化合物等を治療又は予防目的で使用する場合、本発明の前記式（Ｉ）で表わされる化合物等を有効成分として含有する医薬組成物を、経口投与形態、又は注射剤、点滴剤等の非経口投与形態で投与することができる。本発明の前記式（Ｉ）で表わされる化合物等を哺乳動物等に投与する場合、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等として経口投与してもよいし、又は、注射剤、点滴剤として非経口的に投与してもよい。投与量は、症状、年齢、性別、体重、投与形態等により異なるが、例えば成人に経口的に投与する場合には、通常１日量は０．１－１０００ｍｇである。 The present invention further comprises epithelial-mesenchymal transition comprising administering to a patient in need thereof an effective amount of a compound represented by the above formula (I) of the present invention or an ester derivative thereof, or a salt or hydrate thereof. Can be used in a method of treating or preventing a disease or disorder related to or contributing to the onset or exacerbation. For example, when the compound represented by the formula (I) of the present invention is used for treatment or prevention, a pharmaceutical composition containing the compound represented by the formula (I) of the present invention as an active ingredient is orally administered. It can be administered in a dosage form or a parenteral dosage form such as an injection or infusion. When the compound represented by the above formula (I) of the present invention is administered to a mammal or the like, it may be orally administered as a tablet, powder, granule, syrup, etc., or non-injectable as an infusion or infusion. It may be administered orally. The dose varies depending on symptoms, age, sex, body weight, dosage form, etc. For example, when administered orally to an adult, the daily dose is usually 0.1-1000 mg.

　以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。 Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to examples, but the present invention is not limited thereto. It should be noted that all documents cited throughout this application are incorporated herein by reference in their entirety.

（実施例１）　ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｋ１５－０５９１株の菌学的性状
　本発明者等によって石川県七尾市の土壌より新たに、ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｋ１５－０５９１株を分離した。ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｋ１５－０５９１株の菌学的性状は以下の通りであった。 (Example 1) Bacteriological properties of Streptomyces sp. K15-0591 strain A new Streptomyces sp. K15 strain from Nanao City, Ishikawa Prefecture by the present inventors. -0591 strain was isolated. The bacteriological properties of Streptomyces sp. K15-0591 were as follows.

（Ｉ）形態的性質
　栄養菌糸は各種寒天培地上でよく発達し、分断は観察されない。気菌糸はスターチ無機塩寒天で豊富に着生し、黄色の色調を呈する。約０．１μｍの気菌糸を形成する。胞子のう及び遊走子は見出されない。 (I) Morphological properties Vegetative mycelium develops well on various agar media, and no fragmentation is observed. The aerial hyphae are abundant in starch inorganic salt agar and have a yellow color. Forms about 0.1 μm aerial hyphae. Spore and zoospores are not found.

（ＩＩ）各種培地上での性状
　イー・ビー・シャーリング（Ｅ．Ｂ．Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）とデー・ゴットリーブ（Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）の方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・システィマティック・バクテリオロジー、１６巻、３１３頁、１９６６年）によって調べた本菌株の培養性状を表１に示す。色調は標準色として、カラー・ハーモニー・マニュアル第４版（コンテナー・コーポレーション・オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８年）を用いて決定することができ、色票名は括弧内のコードと併せて記されている。以下は特記しない限り、２７℃、１週間目の各培地における観察の結果である。 (II) Properties on various media Methods of EB Shirring and D. Gottlieb (International Journal of Systematic Bacteriology, Vol. 16, page 313) Table 1 shows the culture properties of this strain examined by 1966). The color tone can be determined using the Color Harmony Manual 4th edition (Container Corporation of America Chicago, 1958) as a standard color, and the color chart name is written with the code in parentheses. ing. The following are the results of observation in each medium at 27 ° C. for 1 week unless otherwise specified.

（ＩＩＩ）生理学的諸性質
　（１）メラニン色素の生成：陽性
　（２）チロシナーゼ反応：陽性
　（３）Ｈ_２Ｓ産生：陰性
　（４）スターチの加水分解：陽性
　（５）ゼラチンの液化（単純ゼラチン培地）（２１～２３℃）：陽性
　（６）脱脂乳のペプトン化（３７℃）：陽性
　（７）脱脂乳の凝固（３７℃）：陽性
　（８）セルロースの分解：弱い陽性
　（９）生育温度範囲：１５～４５℃
　（１０）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地）
　　利用する：Ｄ－グルコース、Ｄ－キシロース、Ｄ－マンニトール、Ｌ－アラビノース、スクロース、ラムノース、ラフィノース
　　利用しない：Ｄ－フルクトース、ｉ－イノシトール (III) Physiological Properties (1) production of melanin pigment: positive (2) Tyrosinase reaction: positive (3) _{H 2} S production: negative (4) Starch hydrolysis: positive (5) Liquefaction of gelatin (simple gelatin Medium) (21-23 ° C): Positive (6) Peptation of skim milk (37 ° C): Positive (7) Coagulation of skim milk (37 ° C): Positive (8) Degradation of cellulose: Weak positive (9) Growth Temperature range: 15-45 ° C
(10) Usability of carbon source (Prideham Goat Leve Agar)
Use: D-glucose, D-xylose, D-mannitol, L-arabinose, sucrose, rhamnose, raffinose Not used: D-fructose, i-inositol

（ＩＶ）細胞の化学組成
　細胞壁のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。 (IV) Cell chemical composition Diaminopimelic acid in the cell wall is LL type.

（Ｖ）１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子解析
　１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子のうち約１４００塩基配列を決定し、ＤＮＡデータベースに登録され公開されているストレプトマイセス属に属する菌株およびその他の放線菌のデータを用いた近隣結合法による系統解析の結果から、本菌株はストレプトマイセス属に分類することが妥当であり、ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）に最も近縁である。 (V) 16S rRNA gene analysis About 1400 base sequences of 16S rRNA genes were determined, and by the neighbor binding method using data of strains belonging to the genus Streptomyces and other actinomycetes registered in the DNA database and published. From the results of phylogenetic analysis, it is appropriate to classify this strain into the genus Streptomyces, which is most closely related to Streptomyces sp.

（ＶＩ）結論
　以上、本菌の菌学的性状を要約すると次のとおりである。細胞壁中のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。豊富に着生する気菌糸はらせん状を形成する。コロニーは黄土色を呈し、メラニン色素は産生する。これらの結果および１６Ｓ　ｒＲＮＡ遺伝子の解析結果から、本菌株はストレプトマイセス属に属する１菌種であると判断された。本菌株はストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｋ１５－０５９１として、２０１７年９月２６日付にて独立行政法人製品評価技術基盤機構　特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に寄託した（受領番号　ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２３０４）。 (VI) Conclusion As described above, the bacteriological properties of this bacterium are summarized as follows. Diaminopimelic acid in the cell wall is LL type. Abundant aerial hyphae form a spiral. The colonies have an ocher color and melanin pigments are produced. From these results and the analysis results of the 16S rRNA gene, it was determined that this strain is one species belonging to the genus Streptomyces. This strain is Streptomyces sp. K15-0591 as of September 26, 2017, the National Institute for Product Evaluation Technology Patent Microorganism Depositary Center (2-5 Kazusa Kamashichi, Kisarazu City, Chiba Prefecture) 8) (receipt number NITE ABP-02304).

（実施例２）ナナオマイシンＨの取得
　スターチ２．４％、グルコース０．１％、ペプトン（極東製薬工業株式会社製）０．３％、カツオエキス（極東製薬工業株式会社製）０．３％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業株式会社製）０．５％、炭酸水素カルシウム０．４％からなる液体培地（ｐＨ　７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに１００本に、液体培地で培養したＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．Ｋ１５－０５９１（受領番号　ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２３０４）を各１ｍｌずつ植菌し、２７℃で３日間振盪培養した。得られた種培養液を、スターチ５．０％、グリセロール０．５％、脱脂小麦胚芽（日清ファルマ株式会社製）１．０％、ドライ酵母（ＪＴフーズ株式会社製）１％、炭酸水素カルシウム０．５％からなる液体培地（ｐＨ７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに１００本に、各１ｍＬずつ植菌し、２７℃で６日間振盪培養した。 (Example 2) Acquisition of nanaomycin H Starch 2.4%, glucose 0.1%, peptone (manufactured by Kyokuto Pharmaceutical Co., Ltd.) 0.3%, skipjack extract (manufactured by Kyokuto Pharmaceutical Industrial Co., Ltd.) 0.3% In a 500 mL Erlenmeyer flask containing 100 mL of a liquid medium (pH 7.0) consisting of 0.5% yeast extract (produced by Oriental Yeast Co., Ltd.) and 0.4% calcium hydrogen carbonate, 100 cells were cultured in the liquid medium. Streptomyces sp. 1 ml each of K15-0591 (reception number NITE ABP-02304) was inoculated and cultured with shaking at 27 ° C. for 3 days. The obtained seed culture solution was starch 5.0%, glycerol 0.5%, defatted wheat germ (Nisshin Pharma Co., Ltd.) 1.0%, dry yeast (JT Foods Co., Ltd.) 1%, bicarbonate 100 mL of a 500 mL Erlenmeyer flask containing 100 mL of a liquid medium (pH 7.0) composed of 0.5% calcium was inoculated into 1 mL each and cultured at 27 ° C. for 6 days with shaking.

　培養の終了した５００ｍＬ容三角フラスコ１００本にそれぞれ１００ｍＬのエタノールを加えて１時間激しく撹拌した。次にその抽出液中のエタノールを減圧留去し、得られた水溶液に１０Ｌの酢酸エチルを加えよく撹拌後、酢酸エチル層を回収した。エバポレーターを用い、濃縮乾固して４．７ｇの粗精製物１を得た。これを少量のメタノールに溶解し、シリカゲル（ＭＥＲＣＫ社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、クロロホルム－メタノール溶媒系で段階溶出（１００：０，１００：１，５０：１，１０：１，１：１，０：１００）させ、ナナオマイシンＨを含む１：１画分および０：１００画分（粗精製物２）を１７７４ｍｇ得た。 100 mL of ethanol was added to 100 500 mL Erlenmeyer flasks that had been cultured, and stirred vigorously for 1 hour. Next, ethanol in the extract was distilled off under reduced pressure, and 10 L of ethyl acetate was added to the resulting aqueous solution and stirred well, and then the ethyl acetate layer was recovered. Using an evaporator, it was concentrated to dryness to obtain 4.7 g of a crude product 1. This was dissolved in a small amount of methanol, and step elution (100: 0, 100: 1, 50: 1, 10: 1, 1: 1 :) with a chloroform-methanol solvent system using silica gel (MERCK) open column chromatography. 1,0: 100) to obtain 1774 mg of a 1: 1 fraction containing nanaomycin H and a 0: 100 fraction (crude product 2).

　粗精製物２を少量のメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、メタノール－水系で段階溶出（メタノール濃度０％，２０％，３０％，４０％，５０％，６０％，７０％，８０％，９０％，１００％）し、ナナオマイシンＨを含む２０％画分（粗精製物３）を３９２ｍｇ得た。粗精製物３をメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎｅｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ－４，φ１４×２５０ｍｍ，流速６．５ｍＬ／ｍｉｎ，検出２５４ｎｍ）に注入し、０．１％ギ酸含有３０％メタノール水で溶出した。保持時間２２分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりナナオマイシンＨを淡黄色粉末として４．１ｍｇ得た。 The crude purified product 2 is dissolved in a small amount of methanol and is eluted stepwise in methanol-water system using ODS (Fuji Silysia Chemical Co., Ltd.) open column chromatography (methanol concentration 0%, 20%, 30%, 40%). , 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%), and 392 mg of a 20% fraction (crude product 3) containing nanaomycin H was obtained. Crude product 3 was dissolved in methanol and injected into an octadecylsilyl column (Inertsil ODS-4, φ14 × 250 mm, flow rate 6.5 mL / min, detection 254 nm) by high performance liquid chromatography, and contained 0.1% formic acid 30 Elution was performed with% methanol water. A peak around a retention time of 22 minutes was collected, and concentrated under reduced pressure to obtain 4.1 mg of nanaomycin H as a pale yellow powder.

　得られたナナオマイシンＨの理化学的性状を測定した結果、次の通りであった。 As a result of measuring the physicochemical properties of the obtained nanaomycin H, it was as follows.

ナナオマイシンＨ
（１）性状：白色粉末または淡黄色粉末
（２）分子量：８０４
（３）分子式：Ｃ_３３Ｈ_４４Ｎ_２Ｏ_１９Ｓ
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］^＋　理論値（ｍ／ｚ）８０５．２３０７、実測値（ｍ／ｚ）８０５．２３３７
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２５．７＝－７．６７５（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λ_ｍａｘ（ε）：２３１（４０２００）、２７０（１６６４３，ｓｈ）、３５３（１３３４６）
（７）赤外部吸収極大ν_ｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４１２，１６３７ｃｍ^－１に極大吸収を有する
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表１に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（９）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表１に示す。
（１０）溶剤に対する溶解性：水、エタノール、メタノールに易溶。アセトン、ヘキサンに難溶。 Nanaomycin H
(1) Property: white powder or pale yellow powder (2) molecular weight: 804
(3) Molecular formula: C ₃₃ H ₄₄ N ₂ O ₁₉ S
(4) [M + H] ⁺ theoretical value (m / z) 805.2307 by high-resolution mass spectrometry, measured value (m / z) 805.2337
(5) Specific rotation: [α] _D ^25.7 = −7.675 (c = 0.1, methanol)
(6) Ultraviolet absorption maximum (in methanol) λ _max (ε): 231 (40200), 270 (16643, sh), 353 (13346)
(7) Infrared absorption maximum ν _max (KBr tablet): maximum absorption at 3412, 1637 cm ⁻¹ (8) Proton nuclear magnetic resonance spectrum: chemical shift (ppm) in heavy methanol is shown in Table 1. (In the table, s is a single line, d is a double line, m is a multiple line, and H is the number of protons.)
(9) Carbon nuclear magnetic resonance spectrum: Table 1 shows the chemical shift (ppm) in deuterated methanol.
(10) Solubility in solvents: Easily soluble in water, ethanol and methanol. Insoluble in acetone and hexane.

　以上のとおり各種理化学的性状が得られたナナオマイシンＨに一致する化合物はこれまで報告されていないことから、ナナオマイシンＨは新規物質であると考えられる。 As described above, since no compound corresponding to nanaomycin H that has obtained various physicochemical properties has been reported so far, nanaomycin H is considered to be a novel substance.

（実施例３）ＴＧＦ－βにより上皮間葉転換誘導されたＭＤＣＫ（イヌ上皮細胞株）に対する影響
　細胞培養用ディッシュにイヌ腎臓尿細管上皮由来細胞株ＭＤＣＫ（以下、「ＭＤＣＫ細胞」という。）を、イーグル最少必須培地（以下、「ＭＥＭ培地」という。）（１０％ウシ胎児血清アルブミン、１％ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液、１％ピルビン酸ナトリウム，１％ペニシリン－ストレプトマイシン溶液、１％グルタミン）中、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターでセミコンフルエントに維持されるように継代培養を行った。この細胞をトリプシン－ＥＤＴＡ溶液で処理し、終濃度１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦ－βと０．００１％のＢＳＡを含む前記培地に細胞を播種し、３日間培養した。ブランクとしてＴＧＦ－βを加えず、ＢＳＡのみを添加した培地中で同様に３日間培養した細胞を用意した。これらの細胞を９６ウェルにＭＤＣＫ細胞を２０，０００細胞／ウェル（コンフルエント状態）および２，０００細胞／ウェル（薄まき状態）で調整した。 Example 3 Effect on MDCK (Canine Epithelial Cell Line) Induced to Epithelial-mesenchymal Transition by TGF-β A canine kidney tubular epithelium-derived cell line MDCK (hereinafter referred to as “MDCK cell”) is used as a dish for cell culture. Eagle's minimum essential medium (hereinafter referred to as “MEM medium”) (10% fetal bovine serum albumin, 1% MEM non-essential amino acid solution, 1% sodium pyruvate, 1% penicillin-streptomycin solution, 1% glutamine) Subculture was carried out so as to be maintained semi-confluent in a 37 ° C., 5% CO ₂ incubator. The cells were treated with a trypsin-EDTA solution, the cells were seeded in the medium containing TGF-β having a final concentration of 10 ng / mL and 0.001% BSA, and cultured for 3 days. As a blank, cells cultured in the same manner for 3 days in a medium supplemented with only BSA without adding TGF-β were prepared. These cells were adjusted to 96 wells and MDCK cells were adjusted to 20,000 cells / well (confluent state) and 2,000 cells / well (thinned state).

　それぞれのウェルに終濃度５０μｇ／ｍｌになるようにＤＭＳＯに溶解したナナオマイシンＨ（終濃度０．５％ＤＭＳＯ）あるいはナナオマイシンメチルエステル体（終濃度０．５％ＤＭＳＯ）を添加して、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターで２４時間培養し、形態観察および生細胞定量キット（ＭＴＳアッセイ）で毒性・増殖試験を行った。その結果を図１に示した。ナナオマイシンＨはコンフルエント状態ではほとんど毒性を示さなかったが，薄まき状態になって４０％程度の細胞毒性を示した（ＤＭＳＯ比）。一方でＴＧＦβを処理してＥＭＴを誘導した細胞群では，ほとんどの細胞が死滅した。 Nanaomycin H (final concentration 0.5% DMSO) or nanaomycin methyl ester (final concentration 0.5% DMSO) dissolved in DMSO to a final concentration of 50 μg / ml was added to each well. The cells were cultured for 24 hours in a 5% CO ₂ incubator at 0 ° C., and the toxicity / proliferation test was performed using a morphology observation and live cell quantification kit (MTS assay). The results are shown in FIG. Nanaomycin H showed almost no toxicity in the confluent state, but showed a cytotoxicity of about 40% in the thinned state (DMSO ratio). On the other hand, most cells died in the cell group in which EMT was induced by treating TGFβ.

（実施例４）移動細胞に対する毒性
　光照射に応じて細胞パターニングが可能な機能性基板（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，　２０１２，　Ｖｏｉ．　３３，　ｐｐ．　２４０９－２４２８；Ｓｈｉｍｉｚｕ　ｅｔ　ａｌ．　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，印刷中）を利用して，幾何学的に規定された円形領域（φ＝１５０μｍ）にＭＤＣＫ細胞のコロニーを形成した後，その後に２次照射によって細胞移動を誘導した。この際に，終濃度５０μｇ／ｍｌのナナオマイシンＨおよび０．５％ＤＭＳＯ，５０μｇ／ｍｌのナナオマイシンＨメチルエステル体および０．５％ＤＭＳＯ，もしくはＤＭＳＯのみを添加した培地を用意し，これらの培地中での細胞の移動挙動を，培養装置を装着した位相差顕微鏡下で観察した。 (Example 4) Toxicity to mobile cells Using a functional substrate (Biomaterials, 2012, Voi. 33, pp. 2409-2428; Shimizu et al. Analytical Sciences, in print) capable of cell patterning in response to light irradiation. Then, after colonies of MDCK cells were formed in a geometrically defined circular region (φ = 150 μm), cell migration was then induced by secondary irradiation. At this time, a medium containing a final concentration of 50 μg / ml nanaomycin H and 0.5% DMSO, 50 μg / ml nanaomycin H methyl ester and 0.5% DMSO, or DMSO alone was prepared. The cell migration behavior in the culture medium was observed under a phase contrast microscope equipped with a culture device.

　ＤＭＳＯのみを含む培地では，コロニーが拡大していく様子が観察されるが，ナナオマイシンＨやナナオマイシンＨメチルエステル体を添加したほうではコロニー周りの細胞が選択的に死んでいく様子が観察された。ＭＤＣＫ細胞は先導端に上皮間葉転換した細胞を出現させて集団で移動するため，この結果から上皮間葉転換した細胞に特異的に効果をしていることがわかった（図２）。 In the medium containing only DMSO, the colony is observed to expand, but the cells around the colony are selectively killed when nanomycin H or nanomycin H methyl ester is added. It was. Since MDCK cells appeared in the epithelial-mesenchymal transition cells at the leading end and migrated in the population, it was found that this result has a specific effect on epithelial-mesenchymal transition cells (FIG. 2).

　以上の結果から、ナナオマイシンＨおよびナナオマイシンＨメチルエステル体は上皮間葉転換が誘導された細胞の増殖抑制効果があることが示された。 From the above results, it was shown that nanaomycin H and nanaomycin H methyl ester have an effect of suppressing the proliferation of cells in which epithelial-mesenchymal transition was induced.

（実施例５）ナナオマイシンＩ、Ｊ及びＫの取得
　スターチ２．４％、グルコース０．１％、ペプトン（極東製薬工業株式会社製）０．３％、カツオエキス（極東製薬工業株式会社製）０．３％、酵母エキス（オリエンタル酵母工業株式会社製）０．５％、炭酸水素カルシウム０．４％からなる液体培地（ｐＨ　７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに６０本に、液体培地で培養したＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．Ｋ１５-０５９１（受領番号　ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２３０４）を各１ｍｌずつ植菌し、２７℃で３日間振盪培養した。得られた種培養液を、スターチ５．０％、グリセロール０．５％、脱脂小麦胚芽（日清ファルマ株式会社製）１．０％、ドライ酵母（ＪＴフーズ株式会社製）１％、炭酸水素カルシウム０．５％からなる液体培地（ｐＨ７．０）１００ｍＬを含む５００ｍＬ容三角フラスコに６０本に、各１ｍＬずつ植菌し、２７℃で６日間振盪培養した。 (Example 5) Acquisition of nanaomycin I, J and K Starch 2.4%, glucose 0.1%, peptone (manufactured by Kyokuto Pharmaceutical Co., Ltd.) 0.3%, skipjack extract (manufactured by Kyokuto Pharmaceutical Industrial Co., Ltd.) In a 500 mL Erlenmeyer flask containing 100 mL of a liquid medium (pH 7.0) consisting of 0.3%, yeast extract (produced by Oriental Yeast Co., Ltd.) 0.5%, calcium bicarbonate 0.4%, liquid in 60 Streptomyces sp. 1 ml each of K15-0591 (reception number NITE ABP-02304) was inoculated and cultured with shaking at 27 ° C. for 3 days. The obtained seed culture solution was starch 5.0%, glycerol 0.5%, defatted wheat germ (Nisshin Pharma Co., Ltd.) 1.0%, dry yeast (JT Foods Co., Ltd.) 1%, bicarbonate 60 mL of a 500 mL Erlenmeyer flask containing 100 mL of a liquid medium (pH 7.0) composed of 0.5% calcium was inoculated in an amount of 1 mL each and cultured with shaking at 27 ° C. for 6 days.

　培養の終了した５００ｍＬ容三角フラスコ６０本を遠心分離により菌体と上清に分け、得られた上清をＨＰ-２０カラムに通し、水で洗浄した。吸着物をメタノール３Ｌで溶出し、エバポレーターを用い、濃縮乾固して３．２ｇの粗精製物１を得た。これを少量のメタノールに溶解してシリカゲルに吸着させ、シリカゲル（ＭＥＲＣＫ社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、クロロホルム－メタノール溶媒系で段階溶出（５０：１，２５：１，１０：１，６：４，４：６，０：１）させ、ナナオマイシンＩおよびＪを含む４：６画分（粗精製物１）およびナナオマイシンＫを含む０：１００画分（粗精製物２）をそれぞれ１．０２ｇ、０．６５ｇ得た。 After completion of the culture, 60 500 mL Erlenmeyer flasks were separated into cells and supernatant by centrifugation, and the obtained supernatant was passed through an HP-20 column and washed with water. The adsorbed material was eluted with 3 L of methanol and concentrated to dryness using an evaporator to obtain 3.2 g of a crude product 1. This was dissolved in a small amount of methanol and adsorbed on silica gel, and step elution (50: 1, 25: 1, 10: 1, 6) in a chloroform-methanol solvent system using silica gel (MERCK) open column chromatography. : 4,4: 6,0: 1), and 4: 6 fraction containing nanaomycin I and J (crude product 1) and 0: 100 fraction containing nanaomycin K (crude product 2), respectively. 1.02 g and 0.65 g were obtained.

　粗精製物１を少量のメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、メタノール－水系で溶出（メタノール濃度０％から１００％までの６０分間グラディエント）し、ナナオマイシンＩを含む画分（粗精製物３）を４１６ｍｇ、及びナナオマイシンＪを含む画分（粗精製物４）を１６３ｍｇ得た。粗精製物３をメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、メタノール－水系で溶出（メタノール濃度０％から１００％までの６０分間グラディエント）し、ナナオマイシンＩを含む画分（粗精製物５）を２８ｍｇ得た。粗精製物５を高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（Ｉｎａｒｔｓｉｌ　ＯＤＳ-４，φ１０×２５０ｍｍ，流速４．０ｍＬ／ｍｉｎ，検出ＰＤＡ）に注入し、０．１％ギ酸含有２０％メタノール水で溶出した。保持時間１５分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりナナオマイシンＩを淡黄色粉末として９．４ｍｇ得た。粗精製物４をメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、メタノール－水系で溶出（メタノール濃度０％から１００％までの６０分間グラディエント）し、ナナオマイシンＪを含む画分（粗精製物６）を９５ｍｇ得た。粗精製物６を高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（ＹＭＣ-Ｔｒｉａｒｔ　C-１８，φ２０×２５０ｍｍ，流速１０．０ｍＬ／ｍｉｎ，検出ＰＤＡ）に注入し、０．１％ギ酸含有１５％メタノール水で溶出し、ナナオマイシンＪを含む画分（粗精製物７）を得た。粗精製物７を高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（ＹＭＣ-Ｔｒｉａｒｔ　ＰＦＰ，φ１０×２５０ｍｍ，流速４．０ｍＬ／ｍｉｎ，検出ＰＤＡ））に注入し、０．１％ギ酸含有２０％メタノール水で溶出した。保持時間１０分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりナナオマイシンＪを淡黄色粉末として５．５ｍｇ得た。粗精製物２を少量のメタノールに溶解し、ＯＤＳ（富士シリシア化学株式会社社製）オープンカラムクロマトグラフィーを用いて、メタノール－水系で溶出（メタノール濃度０％から１００％までの６０分間グラディエント）し、ナナオマイシンＫを含む画分（粗精製物８）を７４ｍｇ得た。粗精製物８を高速液体クロマトグラフィーにてオクタデシルシリルカラム（ＹＭＣ-Ｔｒｉａｒｔ　ＰＦＰ，φ１０×２５０ｍｍ，流速４．０ｍＬ／ｍｉｎ，検出ＰＤＡ））に注入し、０．１％ギ酸含有１５％メタノール水で溶出した。保持時間１２分付近のピークを分取し、減圧濃縮によりナナオマイシンＫを橙色粉末として１６．８ｍｇ得た。 Crude product 1 is dissolved in a small amount of methanol and eluted with methanol-water system using ODS (Fuji Silysia Chemical Co., Ltd.) open column chromatography (gradient for 60 minutes from 0 to 100% methanol concentration). , 416 mg of a fraction containing nanaomycin I (crude product 3) and 163 mg of a fraction containing nanaomycin J (crude product 4) were obtained. Crude product 3 was dissolved in methanol and eluted with methanol-water system using ODS (Fuji Silysia Chemical Co., Ltd.) open column chromatography (gradient for 60 minutes from methanol concentration 0% to 100%). 28 mg of a fraction containing mycin I (crude product 5) was obtained. The crude product 5 was injected into an octadecylsilyl column (Inartsil ODS-4, φ10 × 250 mm, flow rate 4.0 mL / min, detection PDA) by high performance liquid chromatography and eluted with 20% methanol water containing 0.1% formic acid. did. A peak with a retention time of about 15 minutes was collected, and concentrated under reduced pressure to obtain 9.4 mg of nanaomycin I as a pale yellow powder. Crude product 4 was dissolved in methanol and eluted with methanol-water system using ODS (Fuji Silysia Chemical Co., Ltd.) open column chromatography (gradient for 60 minutes from methanol concentration 0% to 100%). 95 mg of a fraction (crude product 6) containing mycin J was obtained. The crude product 6 was injected into an octadecylsilyl column (YMC-Triart C-18, φ20 × 250 mm, flow rate 10.0 mL / min, detection PDA) by high performance liquid chromatography, and 0.1% formic acid-containing 15% methanol water. To obtain a fraction containing nanaomycin J (crude product 7). The crude product 7 was injected into an octadecylsilyl column (YMC-Triart PFP, φ10 × 250 mm, flow rate 4.0 mL / min, detection PDA) by high performance liquid chromatography, and with 20% methanol water containing 0.1% formic acid. Eluted. A peak with a retention time of around 10 minutes was collected, and concentrated under reduced pressure to obtain 5.5 mg of nanaomycin J as a pale yellow powder. The crude product 2 is dissolved in a small amount of methanol, and eluted with methanol-water system using ODS (Fuji Silysia Chemical Co., Ltd.) open column chromatography (gradient for 60 minutes from methanol concentration 0% to 100%). Thus, 74 mg of a fraction (crude product 8) containing nanaomycin K was obtained. The crude product 8 was injected into an octadecylsilyl column (YMC-Triart PFP, φ10 × 250 mm, flow rate 4.0 mL / min, detection PDA) by high performance liquid chromatography, and with 15% methanol water containing 0.1% formic acid. Eluted. A peak around a retention time of 12 minutes was collected and concentrated under reduced pressure to obtain 16.8 mg of nanaomycin K as an orange powder.

　得られたナナオマイシンＨ、Ｉ、Ｊ及びＫの理化学的性状を測定した結果、次の通りであった。 As a result of measuring the physicochemical properties of the obtained nanaomycins H, I, J and K, it was as follows.

ナナオマイシンＩ
（１）性状：淡黄色粉末又は淡黄色非晶質固体
（２）分子量：４８１
（３）分子式：Ｃ_２１Ｈ_２３ＮＯ_１０Ｓ
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］^＋　理論値（ｍ／ｚ）４８２．１１１５、実測値（ｍ／ｚ）４８２．１１２９
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２6＝－１４２.７（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λ_ｍａｘ（ε）：２０４（１５３９２）、２３１（１５９６９）、２６７（ｓｈ）、３５３（５０５０）
（７）赤外部吸収極大ν_ｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４５１，１６４６，１５２７ｃｍ^－１に極大吸収を有する
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重ジメチルスルホキシド中の化学シフト（ｐｐｍ）を表３に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（９）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重ジメチルスルホキシド中の化学シフト（ｐｐｍ）を表３に示す。
（１０）溶解性：ＤＭＳＯ、メタノールに易溶。ヘキサン、酢酸エチル及びクロロホルムに難溶。 Nanaomycin I
(1) Properties: pale yellow powder or pale yellow amorphous solid (2) molecular weight: 481
(3) Molecular formula: C ₂₁ H ₂₃ NO ₁₀ S
(4) [M + H] by high resolution mass spectrometry ⁺ theoretical value (m / z) 482.1115, actual measurement value (m / z) 482.1129
(5) Specific rotation: [α] _D ²⁶ = −142.7 (c = 0.1, methanol)
(6) Ultraviolet absorption maximum (in methanol) λ _max (ε): 204 (15392), 231 (15969), 267 (sh), 353 (5050)
(7) Infrared absorption maximum ν _max (KBr tablet): maximum absorption at 3451, 1646, 1527 cm ⁻¹ (8) proton nuclear magnetic resonance spectrum: chemical shift (ppm) in deuterated dimethyl sulfoxide is shown in Table 3. . (In the table, s is a single line, d is a double line, m is a multiple line, and H is the number of protons.)
(9) Carbon nuclear magnetic resonance spectrum: Table 3 shows the chemical shift (ppm) in deuterated dimethyl sulfoxide.
(10) Solubility: Easily soluble in DMSO and methanol. Insoluble in hexane, ethyl acetate and chloroform.

　本明細書において、ナナオマイシンＪとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：淡黄色粉末又は淡黄色非晶質固体
（２）分子量：６４３
（３）分子式：Ｃ_２７Ｈ_３４Ｎ_２Ｏ_１４Ｓ
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］^＋　理論値（ｍ／ｚ）６４３．１８０３、実測値（ｍ／ｚ）６４３．１８３３
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２6＝－１２５.５（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λ_ｍａｘ（ε）：２０４（２４０７５）、２３２（１８７４６）、２６７（ｓｈ）、３５３（５７７８）
（７）赤外部吸収極大ν_ｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４６３，１６４３，１５２７ｃｍ^－１に極大吸収を有する
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表４に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（９）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重メタノール中の化学シフト（ｐｐｍ）を表４に示す。
（１０）溶解性：ＤＭＳＯ、メタノールに易溶。ヘキサン、酢酸エチル及びクロロホルムに難溶。 In this specification, nanaomycin J is a compound having the following physical properties:
(1) Properties: pale yellow powder or pale yellow amorphous solid (2) molecular weight: 643
(3) Molecular _{_{_{_{formula: C 27 H 34 N 2 O}}}} 14 S
(4) [M + H] ⁺ theoretical value (m / z) 643.18033, measured value (m / z) 643.1833 by high resolution mass spectrometry
(5) Specific rotation: [α] _D ²⁶ = −125.5 (c = 0.1, methanol)
(6) Ultraviolet absorption maximum (in methanol) λ _max (ε): 204 (24075), 232 (18746), 267 (sh), 353 (5778)
(7) Infrared absorption maximum ν _max (KBr tablet): maximum absorption at 3463, 1643, 1527 cm ⁻¹ (8) proton nuclear magnetic resonance spectrum: chemical shift (ppm) in deuterated methanol is shown in Table 4. (In the table, s is a single line, d is a double line, m is a multiple line, and H is the number of protons.)
(9) Carbon nuclear magnetic resonance spectrum: Table 4 shows the chemical shift (ppm) in deuterated methanol.
(10) Solubility: Easily soluble in DMSO and methanol. Insoluble in hexane, ethyl acetate and chloroform.

　本明細書において、ナナオマイシンＫとは、以下の物性を有する化合物である：
（１）性状：橙色粉末又は橙色非晶質固体
（２）分子量：５４７
（３）分子式：Ｃ_２５Ｈ_２９Ｎ_３Ｏ_９Ｓ
（４）高分解能質量分析による［Ｍ＋Ｈ］^＋　理論値（ｍ／ｚ）５４８．１６９７、実測値（ｍ／ｚ）５４８．１７０９
（５）比旋光度：［α］_Ｄ ^２6＝－２００.１（ｃ＝０．１、メタノール）
（６）紫外部吸収極大（メタノール中）λ_ｍａｘ（ε）：２０４（１８４８８）、２３５（２６９６７）、３５６（５９０７）
（７）赤外部吸収極大ν_ｍａｘ（ＫＢｒ錠）：３４３２，１６７７，１５２７ｃｍ^－１に極大吸収を有する
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重ジメチルスルホキシド中の化学シフト（ｐｐｍ）を表５に示す。（表中、ｓは一重線、ｄは二重線、ｍは多重線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（９）カーボン核磁気共鳴スペクトル：重ジメチルスルホキシド中の化学シフト（ｐｐｍ）を表５に示す。
（１０）溶解性：ＤＭＳＯ、メタノールに易溶。ヘキサン、酢酸エチル及びクロロホルムに難溶。 In this specification, nanaomycin K is a compound having the following physical properties:
(1) Property: Orange powder or orange amorphous solid (2) Molecular weight: 547
(3) Molecular _{_{_{_{formula: C 25 H 29 N 3 O}}}} 9 S
(4) [M + H] ⁺ theoretical value (m / z) 548.1697, measured value (m / z) 548.1709 by high resolution mass spectrometry
(5) Specific rotation: [α] _D ²⁶ = −20.1 (c = 0.1, methanol)
(6) Ultraviolet absorption maximum (in methanol) λ _max (ε): 204 (18488), 235 (26967), 356 (5907)
(7) Infrared absorption maximum ν _max (KBr tablet): maximum absorption at 3432, 1677, 1527 cm ⁻¹ (8) proton nuclear magnetic resonance spectrum: chemical shift (ppm) in deuterated dimethyl sulfoxide is shown in Table 5 . (In the table, s is a single line, d is a double line, m is a multiple line, and H is the number of protons.)
(9) Carbon nuclear magnetic resonance spectrum: Table 5 shows chemical shifts (ppm) in deuterated dimethyl sulfoxide.
(10) Solubility: Easily soluble in DMSO and methanol. Insoluble in hexane, ethyl acetate and chloroform.

　以上のとおり各種理化学的性状が得られたナナオマイシンＨ、Ｉ、Ｊ及びＫに一致する化合物はこれまで報告されていないことから、これらナナオマイシン類は新規物質であると考えられる。 As described above, since no compounds corresponding to nanaomycins H, I, J and K that have obtained various physicochemical properties have been reported so far, these nanaomycins are considered to be novel substances.

（実施例６）ＴＧＦ－βにより上皮間葉転換誘導されたＭＤＣＫ（イヌ上皮細胞株）に対するナナオマイシン類縁体の殺活性
　細胞培養用ディッシュにＭＤＣＫ細胞を、ＭＥＭ培地（１０％ウシ胎児血清アルブミン、１％ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液、１％ピルビン酸ナトリウム，１％ペニシリン-ストレプトマイシン溶液、１％グルタミン）中、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターでセミコンフルエントに維持されるように継代培養を行った。この細胞をトリプシン-ＥＤＴＡ溶液で処理し、終濃度１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦ－βと０．００１％のＢＳＡを含む前記培地に細胞を播種し、３日間培養した。ブランクとしてＴＧＦ－βを加えず、ＢＳＡのみを添加した培地中で同様に３日間培養した細胞を用意した。これらの細胞を９６ウェルにＭＤＣＫ細胞を６，０００細胞／ウェルおよび２，０００細胞／ウェルで調整した。 (Example 6) Nanaomycin analog killing activity against MDCK (canine epithelial cell line) induced epithelial-mesenchymal transition by TGF-β MDCK cells were placed in a MEM medium (10% fetal bovine serum albumin, 1% MEM non-essential amino acid solution, 1% sodium pyruvate, 1% penicillin-streptomycin solution, 1% glutamine) were subcultured so as to be maintained semiconfluent at 37 ° C. in a 5% CO ₂ incubator. . The cells were treated with a trypsin-EDTA solution, and the cells were seeded in the medium containing TGF-β having a final concentration of 10 ng / mL and 0.001% BSA, and cultured for 3 days. As a blank, cells cultured in the same manner for 3 days in a medium supplemented with only BSA without adding TGF-β were prepared. These cells were adjusted to 96 wells and MDCK cells were adjusted to 6,000 cells / well and 2,000 cells / well.

　それぞれのウェルに終濃度１００μｇ／ｍｌおよび５μｇ／ｍｌになるようにＤＭＳＯに溶解したナナオマイシンＨ（終濃度０．５％ＤＭＳＯ）あるいは終濃度５０μｇ／ｍｌおよび５μｇ／ｍｌになるようにＤＭＳＯに溶解したナナオマイシンＩ、ＪおよびＫ（終濃度０．５％ＤＭＳＯ）を添加して、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターで２４時間培養し、形態観察および生細胞定量キット（ＭＴＳアッセイ）で毒性・増殖試験を行った。その結果を図３に示した。ナナオマイシンＨは６，０００細胞／ウェルで調整した試験では１００μｇ／ｍｌおよび５μｇ／ｍｌにＴＧＦ－βにより上皮間葉転換誘導した細胞に対しより高い殺活性を示した。同様に、ナナオマイシンＩ、ＪおよびＫもナナオマイシンＨと同様な効果が認められた。 Nanaomycin H (final concentration 0.5% DMSO) dissolved in DMSO to a final concentration of 100 μg / ml and 5 μg / ml in each well or dissolved in DMSO to a final concentration of 50 μg / ml and 5 μg / ml , And cultivated in a 37 ° C, 5% CO ₂ incubator for 24 hours, followed by morphological observation and live cell quantification kit (MTS assay). A proliferation test was performed. The results are shown in FIG. Nanaomycin H showed higher killing activity against cells induced to undergo epithelial-mesenchymal transition by TGF-β at 100 μg / ml and 5 μg / ml in studies adjusted at 6,000 cells / well. Similarly, nanaomycin I, J, and K showed the same effect as nanaomycin H.

Claims

　下記式（Ｉ）で表される化合物。

［式中、Ｒ^１は、Ｃ１～６アルキル基を示し、Ｒ^２は、Ｃ１～６アルコキシカルボニル基、カルボキシ基、又は水酸基で置換されたＣ１～６アルキル基を示し、Ｒ^３は、以下のいずれかで表される基を示す。］

A compound represented by the following formula (I).

[Wherein R ¹ represents a C1-6 alkyl group, R ² represents a C1-6 alkoxycarbonyl group, a carboxy group, or a C1-6 alkyl group substituted with a hydroxyl group, and R ³ represents the following: The group represented by either is shown. ]
　請求項１に記載の化合物において、Ｒ^１がメチル基であり、Ｒ^２がカルボキシ基である化合物を生産する能力を有する放線菌に属する微生物を培地で培養し、培養物中に該化合物を蓄積せしめ、該培養物から該化合物を採取することを特徴とする、請求項１に記載の化合物において、Ｒ^１がメチル基であり、Ｒ^２がカルボキシ基である化合物の製造方法。 The compound according to claim 1, wherein a microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce a compound in which R ¹ is a methyl group and R ² is a carboxy group is cultured in a medium, and the compound is accumulated in the culture. The method for producing a compound according to claim 1, wherein R ¹ is a methyl group and R ² is a carboxy group, wherein the compound is collected from the culture.
　請求項１に記載の化合物において、Ｒ^１がメチル基であり、Ｒ^２がカルボキシ基である化合物を生産する能力を有する放線菌に属する微生物が、ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｋ１５－０５９１（受領番号　ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２３０４）である請求項２に記載の製造方法。 The compound according to claim 1, wherein the microorganism belonging to actinomycetes having the ability to produce a compound in which R ¹ is a methyl group and R ² is a carboxy group is Streptomyces sp. K15- The manufacturing method according to claim 2, which is 0591 (reception number NITE ABP-02304).
　ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｋ１５－０５９１（受領番号　ＮＩＴＥ　ＡＢＰ－０２３０４）。 Streptomyces sp. K15-0591 (reception number NITE ABP-02304).
　請求項１に記載の化合物を有効成分として含有する医薬組成物。 A pharmaceutical composition comprising the compound according to claim 1 as an active ingredient.
　請求項１に記載の化合物を有効成分として含有する、上皮間葉転換が誘導された細胞を傷害するための薬剤。 A drug for damaging cells in which epithelial-mesenchymal transition is induced, comprising the compound according to claim 1 as an active ingredient.