WO2017196210A1 - Новая кристаллическая солевая форма 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1,3,5-триазин-2-ил)амино)-2h-пиридо[3,2-b][1,4]оксазин-3(4h)-она для медицинского применения - Google Patents

Новая кристаллическая солевая форма 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1,3,5-триазин-2-ил)амино)-2h-пиридо[3,2-b][1,4]оксазин-3(4h)-она для медицинского применения Download PDF

Info

Publication number
WO2017196210A1
WO2017196210A1 PCT/RU2017/050037 RU2017050037W WO2017196210A1 WO 2017196210 A1 WO2017196210 A1 WO 2017196210A1 RU 2017050037 W RU2017050037 W RU 2017050037W WO 2017196210 A1 WO2017196210 A1 WO 2017196210A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
kinase
salt
compound
amino
hydrate
Prior art date
Application number
PCT/RU2017/050037
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Владимир Евгеньевич НЕБОЛЬСИН
Федор Николаевич НОВИКОВ
Гермес Григорьевич ЧИЛОВ
Олег Валентинович СТРОГАНОВ
Виктор Сергеевич СТРОЙЛОВ
Илья Юрьевич ТИТОВ
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Молекулярные Технологии"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Молекулярные Технологии" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Молекулярные Технологии"
Priority to PL17796477T priority Critical patent/PL3456720T3/pl
Priority to ES17796477T priority patent/ES2892274T3/es
Priority to AU2017264302A priority patent/AU2017264302B2/en
Priority to JP2019512598A priority patent/JP6980299B2/ja
Priority to EA201892589A priority patent/EA037460B1/ru
Priority to DK17796477.2T priority patent/DK3456720T3/da
Priority to EP17796477.2A priority patent/EP3456720B1/en
Priority to CN201780043307.1A priority patent/CN109526221B/zh
Priority to US16/301,148 priority patent/US10745414B2/en
Priority to CA3023231A priority patent/CA3023231A1/en
Priority to KR1020187036184A priority patent/KR102522102B1/ko
Publication of WO2017196210A1 publication Critical patent/WO2017196210A1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5383—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Definitions

  • This invention relates to the chemistry of organic compounds, pharmacology and medicine, namely to the salt form of the compound, as well as its crystalline (polymorphic) forms, which are promising for the treatment of diseases of the musculoskeletal system associated with impaired metabolism of bone and / or cartilage in particular osteoporosis, osteoarthrosis and osteochondrosis.
  • Osteoporosis is the most common bone disease in humans. This is a chronic systemic disease of bone tissue, which is characterized by a decrease in bone mass and the development of violations of the bone microarchitecture, which leads to a decrease in bone strength and a predisposition to pathological fractures.
  • Currently, two main types of osteoporosis are distinguished - primary and secondary.
  • drugs for the treatment of osteoporosis drugs that slow bone resorption (estrogens, selective modulators of estrogen receptors, tissue-selective regulators of estrogenic activity, calcitones, bisphosphonates and other drugs (odanakatib, denosumab and others) are used); drugs that stimulate bone formation (fluorides, growth hormone, anabolic steroids, androgens); multidimensional drugs (strontium ranelate, active metabolites of vitamin D, ossein-hydroxyapatite complex).
  • Osteoarthrosis is considered as an organ lesion, i.e. a disease of the entire joint, in which all components of the joint are involved in the pathological process: cartilage, subchondral bone, synovial membrane, ligaments, capsule, muscles. So far, OA treatment is primarily aimed at the symptoms of the disease, i.e. to reduce pain, improve the functional state of the joints and slow the development of pathology. Symptomatic effects are achieved by a combination of non-pharmacological and drug methods described in numerous recommendations. Existing methods of treatment in most cases do not allow to achieve restoration of joint tissues, prevent the development of pathology, or at least a long and reliable restriction of disease progression.
  • Protein kinases are an important family of proteins involved in the regulation of key cellular processes, the violation of the activity of which can lead to various diseases.
  • a promising approach for the treatment of diseases associated with impaired activity of protein kinases is the use of low molecular weight chemical compounds to inhibit their activity.
  • Examples of such inhibitors approved for use in clinical practice are: Imatinib (Imatinib), Nilotinib (Nilotinib), Dasatinitib (Dasatinib), Sunitinib (Soitenib), Sorafenib (Sorafenib), Lapatinib (Lapatinib), Gefitinib ( Erlotinib), Crizotinib (Crizotinib).
  • Imatinib Imatinib
  • Nilotinib Nilotinib
  • Dasatinitib Dasatinitib
  • Sunitinib Soitenib
  • Sorafenib Sorafen
  • c-Src kinase Proton-oncogene tyrosine-protein kinase is a tyrosine kinase that is not associated with the cellular receptor and is involved in embryonic development and cell growth. In various in vitro models, inhibition of c-Src kinase has been shown to block actin ring formation and prevent osteoclast-mediated bone destruction. In addition, c-Src kinase is involved in signaling cascades leading to hypertrophic changes in chondrocytes associated with aberrant cartilage metabolism characteristic of diseases associated with degenerative-degenerative processes of this tissue.
  • Saracatinib has previously been shown to be a new competitive inhibitor of Src kinase, which inhibits bone resorption in vitro. During phase I clinical trials, it was found that Saracatinib inhibits osteoclast-mediated bone resorption in healthy men without any side effects (RA Hannon, G. Clack, M. Rimmer et al. Effects of the Src kinase inhibitor saracatinib ( AZD0530) on bone turnover in healthy men: a randomized, doubleblind, placebo- controlled, multiple ascending dose phase I trial.// J Bone Miner Res. 2010. V. 25. N ° 3. P. 463-71.). However, as further clinical studies have shown, the high toxicity of Saracatinib with daily use in a therapeutically effective dose makes it impossible to use this drug in clinical practice for the treatment of diseases of the musculoskeletal system.
  • the present invention is to develop a new drug effective for the treatment of diseases of the musculoskeletal system, in particular, osteoarthritis, osteoporosis, and with acceptable pharmacokinetic parameters.
  • the technical result of this invention is the development and preparation of an effective kinase inhibitor, in particular c-Src kinase, characterized by high inhibitory activity and pharmacokinetic characteristics, in particular, a high maximum and average daily concentration, as well as a high value of the parameter AUC ⁇ (area under the curve "concentration - time ”) in the blood of animals and humans, allowing the use of this inhibitor for the treatment of diseases associated with aberrant kinase activity, leading to impaired m metabolic bone and cartilage, in particular for diseases of the musculoskeletal system, in particular, osteoarthritis, osteoporosis.
  • a kinase inhibitor in particular c-Src kinase, characterized by ease of scaling of the preparation and purification process, as well as by high purity of the obtained product with minimal use of purification steps of the obtained compound.
  • the salt of 4-methylbenzenesulfonic acid and a 2,2-dimethyl-6 - base is ((4 - ((3,4,5-trimethoxyphenyl) amino) -1, 3,5-triazin-2-yl) amino) -2H-pyrido [3,2-b] [1, 4] oxazin-3 (4H) -one is a hydrate, as well as its polymorphic modifications.
  • Some embodiments of the invention are 4-methylbenzenesulfonic acid monohydrate and 2,2-dimethyl-6 - (- 4 - ((3,4,5-trimethoxyphenyl) amino) -1, 3,5-triazin-2-yl) amino monohydrate -2H-pyrido [3,2-b] [1, 4] oxazin-3 (4H) -one, as well as its polymorphic modifications.
  • Space group P2 c The positions of the characteristic diffraction peaks on the Debye of this polymorphic modification (2 ⁇ ): 6.2; 8.8; 9.6; 10.7; 1 1, 0; 1 1, 6; 12.4; 15.3; 16.2; 16.5; 17.0; 17.4; 17.6; 17.9; 18.3; 18.6; 19.3; 19.3; 19.6; 20.6; 20.9; 23.5; 25.2; 26.2; 26.5; 27.2; 27.6; 30.2.
  • the present invention also relates to the use of a salt or its hydrate, solvate, as well as the polymorphic modifications of the invention as an inhibitor of aberrant kinase activity.
  • the kinase is a non-receptor protein kinase, in particular, the kinase is selected from the Syk kinase or kinase of the Src family.
  • the kinase of the Src family is c-Src, Yes, Fyn, Fgr, Yrk, Lyn, Blk, Hck or Lck kinase.
  • the kinase is a non-receptor protein kinase, in particular, the kinase is selected from the Syk kinase or kinase of the 8gs family.
  • the kinase of the Src family is c-Src, Yes, Fyn, Fgr, Yrk, Lyn, Blk, Hck or Lck kinase.
  • compositions for the prevention and / or treatment of a disorder associated with aberrant kinase activity contain an effective amount of the salt of the invention and at least one pharmaceutically acceptable excipient.
  • the excipient is a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient.
  • Such compositions are intended to modulate the activity of kinases representing a non-receptor protein kinase, in particular, the kinase selected from the Syk kinase or kinase of the Src family.
  • the kinase of the Src family is c-Src, Yes, Fyn, Fgr, Yrk, Lyn, Blk, Hck or Lck kinase.
  • the invention also includes a method of preventing and / or treating a disorder associated with aberrant kinase activity in the body, comprising administering to the specified organism a pharmaceutical composition of the invention.
  • a disorder associated with aberrant kinase activity is a disease associated with a violation of the metabolism of bone and cartilage, in particular, diseases of the musculoskeletal system.
  • the disease of the musculoskeletal system is osteoarthrosis or osteoporosis.
  • the organism is a human or animal.
  • the animal is a cat, dog, or horse.
  • the method for producing crystals of the compounds of the invention comprising the following steps: but. introducing a solution of 4-methylbenzenesulfonic acid or its hydrate in an organic solvent into a suspension or solution of 2,2-dimethyl-6 - ((4- ((3,4,5-trimethoxyphenyl) amino) -1, 3,5-triazin-2- il) amino) -2H-pyrido [3,2-b] [1, 4] oxazin-3 (4H) -one in an organic solvent or mixture of solvents; the introduction of a solution of 4-methylbenzenesulfonic acid or its hydrate can be carried out both at room temperature and by heating or cooling each of the components; the reverse order of mixing reagents can also be used;
  • the solvent in step (a) used to prepare the solution of 4-methylbenzenesulfonic acid or its hydrate is ethanol.
  • the salt is recrystallized after step (c).
  • an additional stage is used to initiate the formation of crystals in cases of obtaining salt from solutions.
  • the initiation of crystal formation can be achieved by adding 4-methylbenzenesulfonic acid salt and 2,2-dimethyl-6 - ((4 - ((3,4,5-trimethoxyphenyl) amino) -1, 3,5-triazine- 2-yl) amino) - 2H-pyrido [3,2-b] [1, 4] oxazin-3 (4H) -one or by any other known method.
  • Compound 1 2,2-dimethyl-6 - ((4- ((3,4,5-trimethoxy-phenyl) amino) -1 5-triazin-2-yl) amino) -2H-pyrido [3,2-b] [1, 4] oxazine-3 (4H) -one (hereinafter referred to as Compound 1) has modulating activity against Src kinases, in particular, against a human c-Src kinase with a half-maximal inhibitory concentration of nanomolar range.
  • this compound does not have acceptable pharmacokinetic characteristics that can be used in clinical practice as a medicine for the treatment of diseases associated with aberrant kinase activity leading to aberrant metabolism of bone and cartilage tissue. So, in particular, when studying the pharmacokinetics of Compound 1 when administered orally to rats at a dose of 30 mg / kg, the maximum concentration in the blood plasma of animals was 100 times lower than the minimum effective concentration determined in the efficacy studies (for more details, see the “Examples” section).
  • Such diseases include, for example, osteoporosis, in particular secondary osteoporosis and especially secondary osteoporosis in rheumatoid arthritis.
  • the salt of 4-methylbenzenesulfonic acid and Compound 1, as well as its hydrate (in particular monohydrate) and / or polymorphic modifications can be used to treat diseases associated with a decrease in mineral mass and bone density, a change in bone quality due to impaired microarchitectonics, accumulation microdamages, mineralization disorders and bone remodeling rate.
  • 4-methylbenzenesulfonic acids and Compounds 1, as well as its solvate, hydrate (in particular, monohydrate) and polymorphic modifications, have suitable pharmacokinetic parameters and can be used for therapy diseases characterized by aberrant metabolism of bone and cartilage. It was unexpectedly found that the use of a salt of 4-methylbenzenesulfonic acid and Compound 1 with a single administration can be carried out in a significantly lower dose compared to other salt forms of Compound 1 to achieve the desired therapeutic effect.
  • the hydrate of the salt of 4-methylbenzenesulfonic acid and Compound 1 has linear pharmacokinetics in a wide range of doses - with intragastric administration of the drug to Wistar rats.
  • the average daily concentration of Compound 1 in target organs (bone and cartilage) is more than three times the average daily concentration of Compound 1 in animal blood plasma.
  • an Src kinase inhibitor in particular, the c-Src kinase of the invention, as a drug for monotherapy or in combination with other therapies for diseases of the musculoskeletal system will allow achieving a significant and long-term remission.
  • the c-Src kinase inhibitor according to the invention can be used as a maintenance therapy designed to prevent possible relapses in patients in need of such treatment.
  • Figure 4 X-ray diffraction patterns of hydrochloric acid salt powder and Compound 1: a) sample S-3-10-B-HCI; b) sample S-3-1 1 -C2-HCI.
  • Figure 13 1 H and 13 C nuclear magnetic resonance spectra of a sample of 4-methylbenzenesulfonic acid salt hydrate and Compound 1 (polymorphic modification “A”): a) 1 H-NMR spectrum (Bruker DRX500.13400, 500, 13 MHz, DMSO-iser ⁇ );
  • Figure 14 1 H and 13 C nuclear magnetic resonance spectra of a sample of 4-methylbenzenesulfonic acid salt hydrate and Compound 1 (polymorphic modification “B”): a) 1 H-NMR spectrum (Bruker DRX500, 13, 500, 13 MHz, flMCO-d6 );
  • Figure 18 Effect of Saracatinib, Bosutinib, and Compound 1 on the relative resorption of the mineralized matrix.
  • Figure 19 Average plasma concentrations of Compound 1 in Wistar rats after a single oral administration of a free base at a dose of 30 mg / kg. For each time point, average values are determined based on individual data from three animals.
  • Figure 20 Average concentrations of Compound 1 in the blood plasma of Wistar rats after a single oral administration of Compound 1 mesylate at a dose of 30 mg / kg (in terms of free base). For each time point, average values are determined based on individual data from three animals.
  • Figure 21 Average concentrations of Compound 1 in the blood plasma of Wistar rats after a single oral administration of 4-methylbenzenesulfonic acid salt hydrate and Compound 1 (polymorphic modification “A”) at a dose of 21 mg / kg (in terms of free base). For each time point, average values are determined based on individual data from six animals.
  • Compound 1 refers to 2,2-dimethyl-6 - ((4 - ((3,4,5-trimethoxy-phenyl) amino) -1, 3,5-triazine-2- il) amino) -2H-pyrido [3,2-b] [1, 4] oxazin-3 (4H) -one, also represented by the structural formula:
  • C when used with reference to temperature means a centigrade or Celsius temperature scale.
  • IC 50 means the concentration of the test compound at which half-maximum inhibition of kinase activity is achieved.
  • suspension refers to a solid suspended in a liquid medium, usually water or an organic solvent.
  • modulation refers to a change in the catalytic activity of a kinase.
  • modulation refers to the activation or inhibition of the catalytic activity of a kinase.
  • polymorphic modification refers to the solid phase of a substance, which manifests itself in several different forms, due to the different arrangement and / or conformation of the molecules in the crystal lattice. Polymorphic modifications usually have different chemical and physical properties.
  • polymorphic modification also refers to solvates, hydrates (ie, crystalline forms containing a solvent or water), as well as various unsolvated and non-hydrated crystalline forms of the compound.
  • solvate is used to describe a molecular complex comprising a compound of the invention and one or more molecules of a pharmaceutically acceptable solvent, for example ethanol.
  • hydrate is used when the specified solvent is water.
  • X-ray powder diffraction pattern or “PXRD pattern” refers to the experimentally observed diffraction pattern or the parameters obtained from it. Usually, X-ray powder diffraction patterns are characterized by the position of the peak (along the abscissa) and the intensity of the peak (along the ordinate).
  • peak intensity refers to the relative signal intensity in a given X-ray diffraction pattern. Factors affecting the relative peak intensity are sample thickness and preferred orientation (i.e., the distribution of crystalline particles is not random).
  • peak position refers to the position of the x-ray reflex, measured and observed in experiments by powder diffraction.
  • Peaks identified by their respective position are obtained from the diffraction pattern for various polymorphic forms of the salts of 2,2-dimethyl-6 - ((4 - ((3,4,5-trimethoxyphenyl) amino) -1 5-triazin-2 -yl) amino) -2H-pyrido [3,2-b] [1, 4] oxazin-3 (4H) - she.
  • 2 theta value refers to the position of the peak in degrees, based on the experimental X-ray diffraction data, and basically represents the unit of measurement on the abscissa axis in the diffraction patterns.
  • ⁇ is the angle at which the diffraction condition is satisfied for a given wavelength.
  • the angle between the direction of the diffraction beam and the primary beam is 2 ⁇ . It should be understood that reference in this application to specific 2 ⁇ values for a specific polymorphic form implies a 2 ⁇ value in degrees, measured using the experimental X-ray diffraction conditions disclosed in this application.
  • aberrant activity of a kinase in this document means a kinase activity that is significantly different from the base level of activity of this kinase in cells in the absence of pathology. Aberrant activity can be caused by a change in the kinase expression level, disruption of the processes leading to kinase activation, deregulation of degradation pathways, and other factors.
  • excipient means any pharmaceutically acceptable substance of inorganic or organic origin that is part of the drug or used in the manufacturing process, manufacture of the drug to give it the necessary physicochemical properties.
  • AUC area under the curve
  • AUC means a pharmacokinetic parameter characterizing the total concentration of a drug in a blood plasma during the entire observation period. Mathematically defined as an integral from 0 to
  • 00 functions of the concentration of the drug (pharmacokinetic curve) in blood plasma versus time and is equal to the area of the figure bounded by the pharmacokinetic curve and coordinate axes.
  • Src family kinase is a family of mammalian non-receptor tyrosine protein kinases that are similar in structure to c-Sre kinase. In vertebrates, nine kinases of the Src family are known: Src. Yes, Fgr, Fyn, Lyn, Hck, Lck, Blk, Frk. Kinases of this family are involved in the regulation of cell growth, intracellular signal transmission, and in particular, the signaling pathways of T and B cell receptors, adhesive cell interactions, etc.
  • c-Src kinase plays a key role in the formation of the actin ring, a unique osteoclast cytoskeleton necessary for bone resorption.
  • Syk kinase is a non-receptor cytoplasmic tyrosine kinase involved in signal transduction by antigenic and Fc receptors, BCR, and other receptors. Syk kinase is most intensively expressed in hematopoietic cells (such as macrophages, mast cells, white blood cells, platelets and red blood cells), to a lesser extent - in epithelial cells, fibroblasts, neuronal cells, hepatocytes, etc. (Yanagi, S., et al., Biochem Biophys Res Commun, 2001, 288, 495-8).
  • hematopoietic cells such as macrophages, mast cells, white blood cells, platelets and red blood cells
  • Syk kinase is involved in the development of adaptive immunity and is important in the function of additional cell types, including platelets, phagocytes, fibroblasts, and osteoclasts. Syk kinase plays a role in the differentiation and functioning of osteoclasts. In addition, Syk kinase plays a role in osteolysis.
  • treatment cover the treatment of pathological conditions in mammals, preferably in humans, and include: a) reduction, b) blocking (suspension) of the course of the disease, c) alleviation of the severity of the disease, i.e. inducing a regression of the disease; d) reversing the disease or condition to which the term is applied, or one or more symptoms of the disease or condition.
  • prevention covers the elimination of risk factors, as well as the prophylactic treatment of subclinical stages of the disease in mammals, preferably in humans, aimed at reducing the likelihood of clinical stages of the disease.
  • Patients for prophylactic therapy are selected based on factors that, based on known data, entail an increased risk of clinical stages of the disease compared with the general population.
  • Preventive therapy includes a) primary prevention and b) secondary prevention.
  • Primary prophylaxis is defined as prophylactic treatment in patients whose clinical stage of the disease has not yet begun. Secondary prophylaxis is the prevention of the repeated onset of the same or similar clinical condition of the disease.
  • the compounds of the present invention are promising for the treatment of diseases of the musculoskeletal system associated with a violation of the metabolism of bone and / or cartilage tissue and degenerative degenerative processes in them, in particular, osteoporosis, osteoarthritis (deforming arthrosis) and osteochondrosis of any etiology having both systemic and and local nature, including those due to primary pathological changes in these tissues, or associated with various diseases or prolonged use of certain medications atov.
  • the compounds of the invention can be used to treat postmenopausal osteoporosis, senile, drug osteoporosis, osteoporosis in malignant neoplasms, secondary osteoporosis in rheumatoid arthritis, gonarthrosis, coxarthrosis, lumbar, thoracic, cervical osteochondrosis, etc.
  • Finding the right salt for the right drug is an important point in the preclinical phase of drug development.
  • Changing the salt form of the active substance of the drug is a common means of modifying its chemical and biological characteristics, not leading to a modification of its structure.
  • the choice of a particular salt form can deeply affect the physicochemical properties of a given drug (for example, dissolution rate, solubility, stability, and hygroscopicity).
  • Replacing one salt form in a drug with another can change the therapeutic efficacy, safety of use and / or quality, which are especially important for the optimal composition of the dosage form of large-scale production.
  • Solid salt forms are usually preferred for oral formulations, since they are the ones that tend to exhibit the desired physical characteristics; and in the case of essential drugs, acid addition salts are often the preferred salt form.
  • different salt forms vary greatly in their ability to impart desired properties (such as storage stability, ease of preparation and purification process, pharmacokinetic parameters), and such properties cannot be predicted with sufficient accuracy.
  • some salts are solids at ambient temperature, while other salts are liquids, viscous oils, or resins.
  • some salt forms are stable to heat and light under extreme conditions, while others decompose easily under much milder conditions.
  • the development of a suitable form of an acid addition salt of an essential drug for use in a pharmaceutical composition is an extremely important and far from always predictable process.
  • Pharmacokinetic parameters are the most important characteristics that determine the suitability of a solid salt form (or a specific polymorphic modification) for use as a medicine.
  • the average daily and maximum concentration of the drug in the blood of animals and humans can significantly depend on the composition of the salt form and its polymorphic modification.
  • the possibility of large-scale production of the selected salt form of the drug substance and the purity (or difficulty of purification) of the resulting product are also extremely important characteristics that significantly depend on the selected salt form.
  • suitable salt forms should not show significant changes in physicochemical characteristics (chemical composition, water content, density, hygroscopicity, solubility, etc.) during storage for a substantial period of time.
  • Solids including pharmaceutically active compounds, often have more than one crystalline form, known as polymorphism.
  • Polymorphism occurs when a compound crystallizes in many different solid phases, which differ in crystalline packing.
  • polymorphic modifications have different physical characteristics, including solubility and physical and chemical stability.
  • Different solid salt forms of the same drug substance, moreover, different polymorphs of the same solid salt form can differ in the rate of release of the drug, in the stability of the solid state of the salt form, and in suitability for the manufacture of a pharmaceutical preparation.
  • the subject of the invention also includes the administration to a subject in need of appropriate treatment of a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
  • a therapeutically effective amount is meant an amount of a compound administered or delivered to a patient in which the patient is most likely to exhibit the desired response to treatment (prophylaxis).
  • the exact amount required can vary from subject to subject, depending on the age, body weight and general condition of the patient, the severity of the disease, the method of administration of the drug, combined treatment with other drugs, etc.
  • the compound of the invention or a pharmaceutical composition containing the compound can be administered to the patient in any quantity (preferably, the daily dose of the active substance is up to 1.5 g per patient per day, most preferably the daily dose is 200-500 mg / day) and any route of administration (preferably an oral route of administration) effective for treating or preventing a disease.
  • the daily dose of the active substance is up to 1.5 g per patient per day, most preferably the daily dose is 200-500 mg / day
  • any route of administration preferably an oral route of administration
  • compositions comprising the essence of the invention can be administered orally, parenterally, topically, and the like to the human or other animals.
  • the introduction can be carried out both once and several times a day, week (or any other time interval), or from time to time.
  • the compound can be introduced into the patient’s body daily for a certain period of days (for example, 2-10 days), and then a period without taking the substance (for example, 1-30 days).
  • a dose of each of the components of the combination therapy is administered during the required treatment period.
  • the compounds that make up the combination therapy can be administered to the patient as a single dose, in the form of a dosage containing all the components, and in the form of individual dosages of the components.
  • the invention also relates to pharmaceutical compositions that contain the compounds of the invention (or a prodrug or other pharmaceutically acceptable derivative) and one or more pharmaceutically acceptable carriers, adjuvants, solvents and / or excipients, such as can be administered to the patient along with the compound constituting the essence of the present invention, and which do not destroy the pharmacological activity of this compound, and are non-toxic when administered in doses sufficient to delivering a therapeutic amount of a compound.
  • compositions of this invention comprise the compounds of this invention together with pharmaceutically acceptable carriers, which may include any solvents, diluents, dispersions or suspensions, surfactants, isotonic agents, thickeners and emulsifiers, preservatives, astringents, lubricants materials, etc., suitable for a particular dosage form.
  • pharmaceutically acceptable carriers may include any solvents, diluents, dispersions or suspensions, surfactants, isotonic agents, thickeners and emulsifiers, preservatives, astringents, lubricants materials, etc.
  • Materials that may serve as pharmaceutically acceptable carriers include, but are not limited to, mono- and oligosaccharides, as well as their derivatives; gelatin; talc; excipients such as cocoa butter and suppository wax; oils such as peanut, cottonseed, safrole, sesame, olive, corn and soybean oil; glycols such as propylene glycol; esters such as ethyl oleate and ethyl laurate; agar; buffering agents such as magnesium hydroxide and aluminum hydroxide; alginic acid; pyrogen-free water; isotonic solution, Ringer's solution; ethyl alcohol and phosphate buffers.
  • excipients such as cocoa butter and suppository wax
  • oils such as peanut, cottonseed, safrole, sesame, olive, corn and soybean oil
  • glycols such as propylene glycol
  • esters such as ethyl oleate and ethyl laur
  • composition of the composition may be other non-toxic compatible lubricants, such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate, as well as dyes, release fluids, film-forming agents, sweeteners, flavors and fragrances, preservatives and antioxidants.
  • non-toxic compatible lubricants such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • dyes such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • release fluids such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • film-forming agents such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • sweeteners such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • flavors and fragrances such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • preservatives and antioxidants such as sodium lauryl sulfate and magnesium stearate
  • the subject of this invention is also dosage forms — a class of pharmaceutical compositions whose composition is optimized for a particular route of administration into the body in a therapeutically effective dose, for example, for administration to the body orally, topically, pulmonally, for example, as an inhalation spray, or intravascularly, intranasally , subcutaneously, intramuscularly, as well as by the infusion method, in recommended dosages.
  • Dosage forms of the present invention may contain formulations prepared using liposome methods, microencapsulation methods, methods for preparing nanoforms of the preparation, or other methods known in the pharmaceutical art.
  • the active principle is mixed with one or more pharmaceutical excipients such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, silica, gum arabic, mannitol, microcrystalline cellulose, hypromellose or the like.
  • pharmaceutical excipients such as gelatin, starch, lactose, magnesium stearate, talc, silica, gum arabic, mannitol, microcrystalline cellulose, hypromellose or the like.
  • Tablets may be coated with sucrose, a cellulosic derivative, or other suitable coating materials. Tablets can be prepared in various ways, such as direct compression, dry or wet granulation, or hot fusion.
  • a pharmaceutical composition in the form of a gelatin capsule can be prepared by mixing the active principle with a solvent and filling the mixture with soft or hard capsules.
  • aqueous suspensions, isotonic saline solutions or sterile injectable solutions are used that contain pharmacologically compatible agents, for example propylene glycol or butylene glycol.
  • compositions can be used for the prophylaxis and / or treatment of diseases of humans or animals in the form of the following formulations ("Substance" means the active ingredient):
  • composition for injection I 50 mg / ml
  • Tablets (l) - (ll) can be enteric coated using, for example, cellulose acetate phthalate.
  • Polymorphic modification “B” of the monohydrate of the salt of 4-methylbenzenesulfonic acid and the base 2,2-dimethyl-6 - ((4 - ((3,4,5-trimethoxyphenyl) amino) -1, 3,5-triazin-2- il) amino) -2H-pyrido [3,2-b] [1, 4] oxazin-3 (4H) -one can also be obtained by treating polymorphic modification "A” with ethanol or another solvent.
  • salt forms of Compound 1 were synthesized.
  • the main goal of optimizing the salt form was to obtain a salt form of Compound 1 with the following characteristics: crystallinity, consistency of composition, therapeutic efficacy, safety of use in therapy, ease of scaling of the preparation process , the use of a pharmacologically acceptable counterion (preferably anion), the use of low toxic organic dissolve lei.
  • the preparation of salt forms of Compound 1 was carried out in organic solvents with high polarity and low toxicity (Class 3). Counterions were used on the basis of pharmacological acceptability and high acid strength (pKa not higher than 3.25). The requirement for a high acid strength is due to the fact that the protonated pyridine nitrogen atom of Compound 1 is a weak base with pKa 4.
  • test samples S-3-1-B-TSA (hereinafter S3-1), S-3-2-B-HBr (S3-2), S-3-4 -B-HCI (S3-4), S-3-8-B-HBr (S3-8), S-3-9-B-CSA (S3-9), S-3-10-B-HCI ( S3-10), S-3-1 1 -C2-HCI (S3-1 1), S-3-12-A1-TSA (S3-12), S-3-16-D-SA (S3-16 ) M S-3-17-D-MSA (S3-17)) had crystalline phases.
  • Sample S-3-10-B-HCI is an individual crystalline phase, however, due to the large line width and low reflectivity of the sample, the indication is ambiguous.
  • Space group Pi
  • Sample S-3-1 1 -C2-HCI also represents a crystalline phase and is also ambiguously indicated.
  • the non-crystalline phase peak observed in the region of 22.7 ° 2 ⁇ refers to the Kapton substrate (see Figure 9a).
  • the positions and intensities of the characteristic, visually distinguishable peaks in the de-gram of sample S-3-12-A1-TSA are presented in Table 2.
  • Table 2 General view of the independent part of the unit cell of the 4-methylbenzenesulfonic acid salt hydrate and Compound 1 in polymorphic modification “A” (sample S-3 -12-A1-TSA) is shown in Figure 1 1a.
  • Table 2 Positions and intensities of characteristic, visually distinguishable peaks on the de-gram of a sample of 4-methylbenzenesulfonic acid salt hydrate and base of Compound 1 (Polymorphic modification “A”). Intensities are heights (adjusted for background) of peaks. The provisions correspond to the maximums on the de-gram, and not to the calculated positions of the reflections.
  • sample S-3-10-B-HCI S-3-10
  • S-3-1 1 -C2-HCI S3-1 1
  • S-3-12-A1-TSA S3-12
  • sample S3-12-A1-TSA is a monohydrate.
  • DSC differential scanning calorimetry
  • TGA thermogravimetry of the sample
  • the measuring system was calibrated according to ISO 11357-1 according to the phase transition parameters of standard substances (C 6 H 12 ; Nd; benzoic acid; Ga; KN0 3 ; In; Sn; Bi; CsCI; 99.99% purity).
  • the systematic error of the temperature calibration is 0.1 °.
  • TGA measurements were performed on a NETZSCH TG 209 F1 thermobalance equipped with an alundum holder with a protective shield and a type P temperature sensor.
  • the device was calibrated by the melting points of standard substances (Ag; AI; Bi; In; Sn; 99.99% purity).
  • the error in determining the mass does not exceed 0.1% (determined according to the standard CaC 2 0 4 -2H 2 0).
  • the experimental data were processed using the NETZSCH Proteus Analysis analysis package according to ISO / CD 1 1358.
  • the sample was weighed on an AND GH 202 analytical balance with an accuracy of ⁇ 0.01 mg.
  • the material was not machined prior to measurement to avoid dehydration.
  • Table 3 Positions and intensities of characteristic, visually distinguishable peaks on the de-gram of a sample of 4-methylbenzenesulfonic acid salt hydrate and base of Compound 1 (Polymorphic modification “B”). Intensities are the heights (corrected for background) of the peaks.
  • the provisions correspond to the maximums on the de-gram, and not to the calculated positions of the reflections.
  • Table 4 The results of the analysis of the content of impurities in the sample of Compound 1 (in the form of a free base).
  • Compound 1 in the form of a free base showed a high content of various unidentified impurities in the samples, the presence of which can lead to toxic effects, and can also cause side effects due to the introduction of this compound into the human and animal body as a medicine. Therefore, to use Compound 1 as a drug candidate, additional purification steps are required. The use of additional stages of purification will inevitably lead to a complication of the technological scheme and an increase in the cost of production of the final drug.
  • the residual activity of c-Src kinase in the presence of a salt of 4-methylbenzenesulfonic acid and Compound 1 at a concentration of 0.5 ⁇ mol / L was 6% of the control values, Yes and Lck kinases - 12%, Lyn kinases - 13%, Blk - 20%, Fgr - 23%, Fyn and Hck - 25%.
  • the concentrations of half-maximal inhibition (IC 50 ) of the enzymatic activity of the kinase were determined.
  • the inhibitory effect of the 4-methylbenzenesulfonic acid salt and Compound 1 on the recombinant human tyrosine kinase c-Src was shown.
  • the pharmacokinetics of the free base of Compound 1 was studied after oral administration of the substance to three Wistar rats at a dose of 30 mg / kg.
  • the results of the study are shown in Figure 19 and Table 9.
  • the maximum concentration of the substance in the plasma is 4, 12 ng / ml, which corresponds to 9, 1 nmol / L, and the average daily concentration of the substance is 4.8 nmol / L .
  • the effective concentration of the free base is about 1 ⁇ mol / L.
  • the pharmacokinetic parameters of the free base exclude the possibility of its use as a medicine, since in order to achieve the necessary therapeutic effect it is necessary to introduce a large the dose of Compound 1, which is extremely inconvenient technically for practical implementation, leads to a significant consumption of the substance, and can also potentially lead to the development of toxic side effects from the gastrointestinal tract.
  • Table 9 Basic pharmacokinetic parameters of Compound 1 when administered as a free base to Wistar rats at a dose of 30 mg / kg. For each time point, average values are determined based on individual data from three animals.
  • FIG. 1 after oral administration of the substance to Wistar rats at a dose of 37 mg / kg (30 mg / kg in terms of free base).
  • Figure 20 and table 10 show the results of a study of the pharmacokinetic parameters of the methanesulfonic acid salt and Compound 1.
  • the maximum concentration of a substance in plasma is 333 ng / ml, which corresponds to 735 nmol / L, and the average concentration of a substance is 104 nmol / L.
  • the effective concentration of Compound 1 is of the order of 1 ⁇ mol / L.
  • Table 10 Basic pharmacokinetic parameters of methanesulfonic acid salt and Compound 1 when administered to Wistar rats at a dose of 30 mg / kg (calculated on the free base). For each time point, average values are determined based on individual data from three animals.
  • the maximum concentration of the substance in plasma is 416 ng / ml, which corresponds to approximately 1 ⁇ mol / L, and the average daily concentration of the substance exceeds 200 nmol / L.
  • Table 11 The main pharmacokinetic parameters of the 4-methylbenzenesulfonic acid salt hydrate and Compound 1 (polymorphic modification "A") when Wistar rats were administered at a dose of 21 mg / kg (calculated on the free base). For each time point, average values are determined based on individual data from six animals.
  • the 4-methylbenzenesulfonic acid and Compound 1 salt hydrate has linear pharmacokinetics in a wide dose range - with intragastric administration of the 4-methylbenzenesulfonic acid and Compound 1 salt hydrate in a dose range of 30 to 200 mg / kg, the concentration of Compound 1 in rat blood plasma increases in proportion to the dose.
  • the proliferation medium was removed and the cells were differentiated in a differentiation medium (aMEM / FCS-10% with 100 ng / ml RANKL and 25 ng / ml M-CSF).
  • aMEM / FCS-10% with 100 ng / ml RANKL and 25 ng / ml M-CSF.
  • the cells were harvested and subcultured in a 96-well plate coated with a synthetic mineralized matrix and cultured for another 48 hours (in the presence of the studied compounds) to evaluate osteoclast resorption. Then an estimate was made of the number of mature osteoclasts and an assessment of the degree of resorption.
  • Isolated chondrocytes in a culture medium minimum maintenance medium A needle modified by the Dulbecco / fetal calf serum method (DMEM / FCS) - 10%, 4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazine ethanesulfonic acid (HEPES) - 25 mM) were stored frozen at -80 ° C. The obtained chondrocytes were thawed a day before the start of the experiment, planted in 12 well plates and cultured as a monolayer for 24 hours. 11 _- ⁇ - the induced activation of chondrocytes and treatment with the test compounds was started after 24 hours of incubation and continued for 3 days.
  • DMEM / FCS Dulbecco / fetal calf serum method
  • HEPES 4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazine ethanesulfonic acid
  • the salt of 4-methylbenzenesulfonic acid and Compound 1 as well as its hydrate (in particular, monohydrate), solvate and polymorphic modifications of the salt, hydrate or solvate are effective inhibitors of Syk kinase and Src kinases, in particular c-Src kinases, and have pharmacokinetic parameters that allow the use of these salts as a drug for administration to a human or animal organism for the treatment of diseases associated with aberrant activity kinases leading to aberrant metabolism of bone and cartilage, in particular, osteoarthritis, osteoporosis and osteochondrosis.

Abstract

Изобретение относится к химии органических соединений, фармакологии и медицине, и касается профилактики и лечения заболеваний человека и животных, ассоциированных с нарушением метаболизма костной и/или хрящевой тканей, в частности, заболеваний опорно-двигательного аппарата, таких как остеоартроз или остеопороз, с помощью новой солевой формы 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5- триметоксифенил)амино)-1,3,5-триазин-2-ил)амино)-2H-пиридо[3,2-b][1,4]оксазин-3(4H)- она. Соль данного соединения с 4-метилбензолсульфокислотой, (I) в том числе ее гидраты, сольваты и полиморфные модификации соли, гидратов и сольватов характеризуется повышенной эффективностью в ингибировании киназ семейства Src и Syk киназы, а также других терапевтически значимых киназ, и приемлемыми фармакокинетическими параметрами. Данное изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим терапевтически эффективное количество соли по изобретению.

Description

Новая кристаллическая солевая форма
2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)- 2Н-пиридо[3,2-Ь][1,4]оксазин-3(4Н)-она
для медицинского применения
Область техники
Данное изобретение относится к химии органических соединений, фармакологии и медицине, а именно, к солевой форме соединения, а также к её кристаллическим (полиморфным) формам, являющихся перспективными для лечения заболеваний опорно- двигательного аппарата, связанных с нарушением метаболизма костной и/или хрящевой тканей, в частности, остеопороза, остеоартроза и остеохондроза.
Уровень техники
Проблема увеличения таких заболеваний опорно-двигательного аппарата как остеопороз, остеоартроз и остеохондроз приобретает все большую актуальность, что отражено в многочисленных публикациях на эту тему. Несмотря на усилия специалистов разного профиля, эта проблема еще далека от разрешения.
Остеопороз является наиболее распространенным заболеванием костей у человека. Это хроническое системное заболевание костной ткани, которое характеризуется уменьшением костной массы и развитием нарушений микроархитектуры костной ткани, что приводит к снижению прочности кости и предрасположенности к патологическим переломам. В настоящее время выделяют два основных типа остеопороза - первичный и вторичный. В качестве лекарственных средств для лечения остеопороза используют препараты, замедляющие костную резорбцию (эстрогены, селективные модуляторы эстрогенных рецепторов, тканеселективные регуляторы эстрогенной активности, кальцитоны, бисфосфонаты и другие средства (оданакатиб, деносумаб и прочие)); препараты, стимулирующие костеобразование (фториды, гормон роста, анаболические стероиды, андрогены); препараты многопланового действия (стронция ранелат, активные метаболиты витамина Д, оссеин-гидроксиапатитный комплекс).
Проблема медикаментозной терапии остеопороза остается актуальной, несмотря на большой выбор одобренных средств. Серьезные побочные эффекты, вызванные продолжительным приемом лекарственных средств, и низкая приверженность к длительной терапии— основные недостатки существующей терапии.
Остеоартроз (OA) рассматривается как органное поражение, т.е. заболевание всего сустава, при котором в патологический процесс вовлекаются все компоненты сустава: хрящ, субхондральная кость, синовиальная оболочка, связки, капсула, мышцы. До сих пор лечение OA направлено прежде всего на симптомы болезни, т.е. на уменьшение боли, улучшение функционального состояния суставов и замедление развития патологии. Симптоматическое воздействие достигается комбинацией нефармакологических и медикаментозных методов, изложенных в многочисленных рекомендациях. Существующие методы лечения в большинстве случаев не позволяют добиваться восстановления тканей сустава, предотвращения развития патологии или хотя бы длительного и надежного ограничения прогрессирования заболевания.
Таким образом, существует потребность в разработке новых эффективных лекарственных средств с другими механизмами действия для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата, связанных с нарушением метаболизма костной и/или хрящевой тканей, таких как остеопороз, остеоартроз и остеохондроз. Одним из наиболее интересных направлений представляется использование модулирования внутриклеточных сигнальных путей.
Протеинкиназы являются важным семейством белков, участвующим в регуляции ключевых клеточных процессов, нарушение активности которых может приводить к различным заболеваниям. Перспективным подходом для терапии заболеваний, ассоциированных с нарушенной активностью протеинкиназ, является применение низкомолекулярных химических соединений для ингибирования их активности. Примерами таких ингибиторов, одобренных для применения в клинической практике, являются: Иматиниб (Imatinib), Нилотиниб (Nilotinib), Дазатитниб (Dasatinib), Сунитиниб (Sunitinib), Сорафениб (Sorafenib), Лапатиниб (Lapatinib), Гефитиниб (Gefitinib), Эрлотиниб (Erlotinib), Кризотиниб (Crizotinib). Большое количество лекарственных кандидатов - ингибиторов киназ, находятся в настоящее время на стадии клинических испытаний или на стадии доклинической разработки.
c-Src киназа (Proto-oncogene tyrosine-protein kinase) - не связанная с клеточным рецептором тирозинкиназа, участвующая в процессах эмбрионального развития и клеточного роста. На различных in vitro моделях было показано, что ингибирование c-Src киназы блокирует образование актинового кольца и предотвращает опосредованное остеокластами разрушение кости. Кроме того, c-Src киназа участвует в сигнальных каскадах, приводящих к гипертрофическим изменениям хондроцитов, ассоциированным с аберрантным метаболизмом хрящевой ткани, характерным для заболеваний, связанных с дистрофически-дегенеративным процессами этой ткани.
Ранее было показано, что саракатиниб является новым конкурентным ингибитором Src киназы, который ингибирует резорбцию костной ткани in vitro. В ходе проведения I фазы клинических испытаний было установлено, что саракатиниб ингибирует остеокласт- опосредованную резорбцию костной ткани у здоровых мужчин без каких-либо побочных эффектов (R.A. Hannon, G. Clack, М. Rimmer et al. Effects of the Src kinase inhibitor saracatinib (AZD0530) on bone turnover in healthy men: a randomized, doubleblind, placebo- controlled, multiple ascending dose phase I trial.// J Bone Miner Res. 2010. V. 25. N°3. P. 463- 71.). Однако, как показали дальнейшие клинические исследования, высокая токсичность саракатиниба при ежедневном применении в терапевтически эффективной дозе, делает невозможным применения данного препарата в клинической практике для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата.
Таким образом, ингибирование c-Src киназы является крайне перспективной стратегией борьбы с остеопорозом, остеоартрозом и другими заболеваниями опорно- двигательного аппарата, патогенез которых связан с аберрантным метаболизмом костной и хрящевой тканей.
Однако на сегодняшний день препараты на основе ингибиторов Src-киназы отсутствуют в клинической практике лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата. Таким образом, возникает задача поиска и создания новых эффективных лекарственных средств, ингибиторов киназы c-Src , для лечения остеопороза, остеоартроза и других заболеваний опорно-двигательного аппарата.
Раскрытие изобретения
Задачей настоящего изобретения является разработка нового лекарственного средства, эффективного для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата, в частности, остеоартроза, остеопороза, и обладающего приемлемыми фармакокинетическими параметрами.
Техническим результатом данного изобретения является разработка и получение эффективного ингибитора киназы, в частности c-Src киназы, характеризующегося высокой ингибирующей активностью и фармакокинетическими характеристиками, в частности, высокой максимальной и среднесуточной концентрацией, а также высоким значением параметра AUC^ (площади под кривой «концентрация-время») в крови животных и человека, позволяющих использовать данный ингибитор для лечения заболеваний, связанных с аберрантной активностью киназ, приводящей к нарушению метаболизма костной и хрящевой ткани, а именно для заболеваний опорно- двигательного аппарата, в частности, остеоартроза, остеопороза.
Дополнительным техническим результатом является разработка и получение ингибитора киназы, в частности c-Src киназы, характеризующегося легкостью масштабирования процесса получения и очистки, а также характеризующейся высокой чистотой получаемого продукта при минимальном использовании стадий очистки получаемого соединения.
Указанный технический результат достигается путем получения соли
4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил) амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она
Figure imgf000006_0001
или её гидрата, сольвата, а также полиморфных модификаций, обладающих способностью ингибировать аберрантную активность иназ Src-семвйства, в частности с- Src киназы, а также Syk киназы
В частных вариантах воплощения изобретения соль 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил) амино)-1 ,3,5-триазин-2- ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она представляет собой гидрат, а также его полиморфные модификации.
Некоторыми вариантами воплощения изобретения являются моногидрат 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил) амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она, а также его полиморфные модификации.
Одним из предпочтительных вариантов воплощения изобретения является полиморфная модификация моногидрата 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н- пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она, представляющая собой кристаллическую фазу со следующими параметрами элементарной ячейки, определенными методом порошковой рентгеновской дифракции при 25±5° С с использованием CuKal излучения при длине волны 1 ,5406 А, равными а = 10,98±0,05 A, b = 28,48±0,05 А, с = 10,60±0,05 А, β = 1 13,7±0, 1 ° и объемом V = 3037, 5±0, 5 А3. Пространственная группа P2 c. Положения характеристических дифракционных пиков на дебаеграмме данной полиморфной модификации (2Θ): 6,2; 8,8; 9,6; 10,7; 1 1 ,0; 1 1 ,6; 12,4; 15,3; 16,2; 16,5; 17,0; 17,4; 17,6; 17,9; 18,3; 18,6; 19,3; 19,3; 19,6; 20,6; 20,9; 23,5; 25,2; 26,2; 26,5; 27,2; 27,6; 30,2.
Другим предпочтительным вариантом воплощения изобретения является полиморфная модификация моногидрата 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н- пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она, представляющая собой кристаллическую фазу со следующими параметрами элементарной ячейки, определенными методом порошковой рентгеновской дифракции при 25±5° С с использованием CuKal излучения при длине волны 1 ,5406 А, равными а = 11 ,09±0,05 A, b = 14,38±0,05 А, с = 10,53±0,05 A, a = 90,06°, β = 1 14,6±0, 1 °, γ = 91 , 1 °, объемом V = 1525,9±0,5 А3 Пространственная группа ΡΪ. Положения характеристических пиков на дебаеграмме данной полиморфной модификации (2Θ): 6,1 ; 8,8; 10,6; 11 ,0; 11 ,5; 12,3; 15,0; 15,2; 15,5; 15,8; 16, 1 ; 16,3; 17,3; 17,6; 17,9; 18,5; 19,5; 20,5; 20,7; 20,8; 24,6; 24,8; 25,1 ; 26,1 ; 26,5; 26,9; 30,1 ; 43,0. Настоящее изобретение также относится к применению соли или её гидрата, сольвата, а также полиморфных модификаций по изобретению в качестве ингибитора аберрантной активности киназы. Причем в некоторых вариантах воплощения изобретения киназа представляет собой нерецепторную протеинкиназу, в частности, киназа выбрана из Syk киназы или киназы Src-семейства. Киназа Src-семейства представляет собой c-Src, Yes, Fyn, Fgr, Yrk, Lyn, Blk, Hck или Lck киназу.
Указанный технический результат достигается также посредством применения соли или её гидрата, сольвата, а также полиморфных модификаций по изобретению для получения фармацевтической композиции для предупреждения и/или лечения расстройства, связанного с аберрантной активностью киназы. Причем в некоторых вариантах воплощения изобретения киназа представляет собой нерецепторную протеинкиназу, в частности, киназа выбрана из Syk киназы или киназы 8гс-семейства. Киназа Src-семейства представляет собой c-Src, Yes, Fyn, Fgr, Yrk, Lyn, Blk, Hck или Lck киназу.
Кроме того, изобретение предусматривает фармацевтические композиции для предупреждения и/или лечения расстройства, связанного с аберрантной активностью киназы, и характеризующиеся тем, что они содержит эффективное количество соли по изобретению и, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В некоторых вариантах воплощениях изобретения вспомогательное вещество представляет собой фармацевтически приемлемый носитель и/или эксципиент. Такие композиции предназначены для модулирования активности киназ, представляющих собой нерецепторную протеинкиназу, в частности, киназа выбрана из Syk киназы или киназы Src-семейства. Киназа Src-семейства представляет собой c-Src, Yes, Fyn, Fgr, Yrk, Lyn, Blk, Hck или Lck киназу.
Изобретение также включает способ предупреждения и/или лечения расстройства, связанного с аберрантной активностью киназы в организме, включающий введение в указанный организм фармацевтической композиции по изобретению. Такое расстройство, связанное с аберрантной активностью киназы, представляет собой заболевание, связанное с нарушением метаболизма костной и хрящевой тканей, в частности, заболевания опорно-двигательного аппарата. В некоторых неограничивающих вариантах воплощения изобретения заболевание опорно-двигательного аппарата представляет собой остеоартроз или остеопороз. В частных случаях воплощения изобретения организм представляет собой человека или животного. В некоторых вариантах воплощения изобретения животное представляет собой кошку, собаку или лошадь.
Достижение указанного технического результата обеспечивается также за счет способа получения кристаллов соединений по изобретению, включающего следующие этапы: а. введение раствора 4-метилбензолсульфокислоты или ее гидрата в органическом растворителе в суспензию или раствор 2,2-диметил-6-((4- ((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2- Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она в органическом растворителе или смеси растворителей; введение раствора 4-метилбензолсульфокислоты или ее гидрата может быть осуществлено как при комнатной температуре, так и при нагревании или охлаждении каждого из компонентов; также может быть использован обратный порядок смешивания реагентов;
Ь. кристаллизацию получившейся соли;
с. отделение кристаллов соли от растворителя.
В некоторых вариантах воплощения изобретения растворитель на стадии (а), используемый в качестве среды для суспендирования 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5- триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)- она, представляет собой ацетон.
В частных случаях воплощения изобретения растворитель на стадии (а), используемый для приготовления раствора 4-метилбензолсульфокислоты или ее гидрата представляет собой этанол.
В некоторых вариантах воплощения изобретения после стадии (с) дополнительно осуществляют перекристаллизацию соли.
В некоторых других частных случаях воплощения изобретения после стадии (а) дополнительно применяют стадию инициирования образования кристаллов в случаях получения соли из растворов. Инициирование образования кристаллов может быть достигнуто путем введения в раствор кристаллов соли 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)- 2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она или любым иным известным способом.
В частных случаях воплощения изобретения до стадии (а) дополнительно применяют стадию очистки основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)- 1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она путем превращения его в соль серной, соляной, бензолсульфо-, 4-метилбензолсульфо-, 2-метилбензолсульфо-, метансульфо-, лимонной, фосфорной, трифторуксусной, 4-нитробензолсульфо-, тетрафторборной, гексафторфосфорной или иной кислоты с последующим получением из этой соли основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин- 2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она и повторным синтезом из этого основания соли с 4-метилбензолсульфокислотой.
Свободное основание 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5- триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-он известно и описано в патенте RU2509770. Подробное раскрытие изобретения
В результате проведенных исследований было обнаружено, что 2,2-диметил-6-((4- ((3,4,5-триметокси-фенил)амино)-1 5-триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин- 3(4Н)-он (далее - Соединение 1) обладает модулирующей активностью в отношении киназ семейства Src, в частности, в отношении киназы c-Src человека с полумаксимальной ингибирующей концентрацией в наномолярном диапазоне. В то же время, было установлено, что данное соединение не обладает приемлемыми фармакокинетическими характеристиками, позволяющими использовать его в клинической практике в качестве лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с аберрантной активностью киназ, приводящей к аберрантному метаболизму костной и хрящевой ткани. Так, в частности, при исследовании фармакокинетики Соединения 1 при пероральном введении крысам в дозе 30 мг/кг максимальная концентрация в плазме крови животных была в 100 раз ниже минимальной действующей концентрации, определенной в исследованиях эффективности (подробнее см. в разделе «примеры»).
Данная проблема, как это описано в настоящем изобретении, решается посредством разработки и создания новой солевой формы, представляющей собой соль 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 , выступающего в роли основания.
Было обнаружено, что соль 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 наиболее эффективно ингибирует активность c-Src киназы (IC50 = 14 нмоль/л). Кроме того был обнаружен выраженный ингибирующий эффект данной солевой формы Соединения 1 на катаболизм костной ткани. Указанный эффект связан с ингибированием остеокласт- опосредованной резорбции костной ткани, что было доказано в экспериментах in vitro на модельной системе с использованием зрелых остеокластов человека. Соединения по изобретению являются перспективными для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата, связанных с аберрантным метаболизмом костной ткани, и в особенности для лечения заболеваний, резистентных к другим способам терапии. К подобным заболеваниям относится, например, остеопороз, в частности вторичный остеопороз и особенно, вторичный остеопороз при ревматоидном артрите. Кроме того, соль 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 , а также ее гидрат (в частности моногидрат) и/или полиморфные модификации могут применяться для лечения заболеваний, связанных с уменьшением минеральной массы и плотности кости, изменением качества кости из-за нарушения микроархитектоники, накопления микроповреждений, нарушения минерализации и скорости ремоделирования костной ткани.
В ходе исследования было неожиданно обнаружено, что соль
4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 , а также её сольват, гидрат (в частности, моногидрат) и полиморфные модификации, обладают подходящими фармакокинетическими параметрами и могут быть использованы для терапии заболеваний, характеризующихся аберрантным метаболизмом костной и хрящевой тканей. Неожиданно оказалось, что использование соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 при однократном введении можно осуществлять в существенно более низкой дозе по сравнению с другими солевыми формами Соединения 1 для достижения необходимого терапевтического эффекта.
В эксперименте in vivo также было обнаружено, что гидрат соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 обладает линейной фармакокинетикой в широком диапазоне доз - при внутрижелудочном введении лекарственного средства крысам линии Wistar. Среднесуточная концентрация Соединения 1 в органахмишенях (костной и хрящевой тканях) более чем втрое превышает среднесуточную концентрацию Соединения 1 в плазме крови животных.
Помимо этого, исследование биологической активности солевой формы Соединения 1 по изобретению позволило установить выраженный дозозависимый положительный эффект на I L-1 β индуцированные гипертрофические изменения хондроцитов, ассоциированные с аберрантным метаболизмом хрящевой ткани, характерные для остеоартроза, заключающиеся в значительном повышении экспрессии аггрекана. Данный эффект приводит к ускорению анаболизма хрящевой ткани, связанному с более чем четырехкратным увеличением продукции аггрекана— одного из основных компонентов хрящевой ткани.
Таким образом, использование ингибитора киназ семейства Src, в частности, киназы c-Src по изобретению как препарата для монотерапии или в сочетании с другими средствами терапии заболеваний опорно-двигательного аппарата позволит достигнуть существенной и длительной ремиссии. Также ингибитор киназы c-Src по изобретению может быть использован как средство поддерживающей терапии, предназначенное для предотвращения возможных рецидивов у пациентов, нуждающихся в таком лечении.
Описание рисунков
Рисунок 1. Кристаллизация солей Соединения 1 в масштабе 100 мг.
Рисунок 2. Кристаллизация солей Соединения 1 в масштабе 2000 мг.
Рисунок 3. Результаты элементного анализа солевых форм Соединения 1. В скобках приведены рассчитанные значения для моногидратов соответствующих солей.
Рисунок 4. Картины дифракции рентгеновских лучей на порошке соли соляной кислоты и Соединения 1 : а) образец S-3-10-B-HCI; б) образец S-3-1 1 -C2-HCI.
Рисунок 5. Картины дифракции рентгеновских лучей на порошке соли бромоводородной кислоты и Соединения 1 (образец S-3-8-B-HBr).
Рисунок 6. Картины дифракции рентгеновских лучей на порошке соли серной кислоты и Соединения 1 (образец S-3-16-D-SA). Рисунок 7. Картины дифракции рентгеновских лучей на порошке соли камфорной кислоты и Соединения 1 (образец S-3-9-B-CSA).
Рисунок 8. Картины дифракции рентгеновских лучей на порошке соли метансульфокислоты и Соединения 1 (образец S-3-17-D-MSA).
Рисунок 9. Картины дифракции рентгеновских лучей на порошке моногидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 :
а) образец S-3-12-A1 -TSA, полиморфная модификация «А»;
б) образец SYK 91/1 , полиморфная модификация «В».
Рисунок 10. Кривые ТГА (термогравиметрический анализ) и ДСК (дифференциальная сканирующая калориметрия) гидрата соли 4-метилбензол- сульфокислоты и Соединения 1 (образец S-3-12-A1 -TSA, полиморфная модификация «А»).
Рисунок 11. Общий вид независимой части элементарной ячейки гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 :
а) образец S-3-12-A1 -TSA, полиморфная модификация «А»;
б) образец SYK 91/1 , полиморфная модификация «В».
Рисунок 12. Влияние гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (полиморфная модификация «А») на активность c-Src киназы человека.
Рисунок 13. Спектры ядерного магнитного резонанса 1 Н и 13С образца гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (полиморфная модификация «А»): а) 1 Н-ЯМР спектр (Bruker DRX500.13400, 500, 13 МГц, ДМСО-сШ);
б) 13С-ЯМР спектр (Bruker DRX500, 125,76 МГц, flMCO-d6).
Рисунок 14. Спектры ядерного магнитного резонанса 1 Н и 13С образца гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (полиморфная модификация «В»): а) 1 Н-ЯМР спектр (Bruker DRX500, 13, 500, 13 МГц, flMCO-d6);
б) 13С-ЯМР спектр (Bruker DRX500, 13 125,76 МГц, ДМСО-сШ).
Рисунок 15. Кривые ВЭЖХ анализа образца свободного основания Соединения 1.
Рисунок 16. Кривые ВЭЖХ анализа образца соли метансульфокислоты и Соединения 1.
Рисунок 17. Кривые ВЭЖХ анализа образца гидрата соли 4-метилбензол- сульфокислоты и Соединения 1 :
а) полиморфная модификация «А»;
б) полиморфная модификация «В».
Рисунок 18. Влияние Саракатиниба, Босутиниба и Соединения 1 на относительную резорбцию минерализированной матрицы.
Рисунок 19. Средние концентрации Соединения 1 в плазме крови крыс линии Wistar после однократного перорального введения свободного основания в дозе 30 мг/кг. Для каждой временной точки средние значения определены на основе индивидуальных данных, полученных от трех животных.
Рисунок 20. Средние концентрации Соединения 1 в плазме крови крыс линии Wistar после однократного перорального введения мезилата Соединения 1 в дозе 30 мг/кг (в пересчете на свободное основание). Для каждой временной точки средние значения определены на основе индивидуальных данных, полученных от трех животных.
Рисунок 21. Средние концентрации Соединения 1 в плазме крови крыс линии Wistar после однократного перорального введения гидрата соли 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (полиморфная модификация «А») в дозе 21 мг/кг (в пересчёте на свободное основание). Для каждой временной точки средние значения определены на основе индивидуальных данных, полученных от шести животных.
Термины и определения
Как используется в настоящем документе, термин «Соединение 1» относится к 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметокси-фенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н- пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-ону, также представленному структурной формулой:
Figure imgf000012_0001
Термин «С», когда он используется со ссылкой на температуру, означает стоградусную шкалу или температурную шкалу Цельсия.
Термин «IC50» означает концентрацию тестируемого соединения, при которой достигается полумаксимальное ингибирование активности киназы.
Термин «суспензия» относится к твердому веществу, суспендированному в жидкой среде, обычно воде или органическом растворителе.
Термин «модулирование» в настоящем документе относится к изменению каталитической активности киназы. В частности, модулирование относится к активации или ингибированию каталитической активности киназы.
Термин «полиморфная модификация» относится к твердой фазе вещества, которая проявляется в нескольких отличающихся формах, вследствие разного расположения и/или конформации молекул в кристаллической решетке. Полиморфные модификации обычно имеют разные химические и физические свойства. Кроме того, термин «полиморфная модификация» также относится к сольватам, гидратам (т.е. кристаллическим формам, содержащим растворитель или воду), равно как и к разным несольватированным и негидратированным кристаллическим формам соединения. Термин «сольват» используется для описания молекулярного комплекса, содержащего соединение по изобретению и одну или более молекул фармацевтически приемлемого растворителя, например этанола. Термин «гидрат» используется, когда указанным растворителем является вода.
Термин «картина порошковой рентгеновской дифракции» или «PXRD-картина» относится к экспериментально наблюдаемой дифрактограмме или полученным из нее параметрам. Обычно картины порошковой рентгеновской дифракции характеризуются положением пика (по оси абсцисс) и интенсивностью пика (по оси ординат). Термин «интенсивность пика» относится к относительной интенсивности сигнала на данной картине рентгеновской дифракции. Факторами, влияющими на относительную интенсивность пика, являются толщина образца и предпочтительная ориентация (т.е. распределение кристаллических частиц не является случайным). Термин «положения пика», как используется в настоящей заявке, относится к положению рентгеновского рефлекса, измеренного и наблюдаемого в экспериментах порошковой дифракции. Положения пиков напрямую связаны с размерами элементарной ячейки. Пики, идентифицированные по их соответствующему положению, получают, исходя из картины дифракции для различных полиморфных форм солей 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5- триметоксифенил)амино)-1 5-триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)- она.
Термин «значение 2 тета» или «2Θ» относится к положению пика в градусах, исходя из экспериментальных данных рентгеновской дифракции, и в основном представляет собой единицу измерения на оси абсцисс на картинах дифракции. Θ - угол, при котором выполняется условие дифракции для данной длины волны. Угол между направлением дифракционного луча и первичным пучком составляет 2Θ. Следует понимать, что отсылка в данной заявке на специфические значения 2Θ для специфической полиморфной формы предполагает значение 2Θ в градусах, измеренные с использованием экспериментальных условий рентгеновской дифракции, раскрытых в настоящей заявке.
Термин «аберрантная активность» киназы в настоящем документе означает киназную активность, существенно отличающуюся от базового уровня активности этой киназы в клетках при отсутствии патологии. Аберрантная активность может быть вызвана изменением уровня экспрессии киназы, нарушением процессов, приводящих к активации киназы, дерегулированием путей деградации, а также другими факторами.
Термин «вспомогательное вещество» означает любое фармацевтически приемлемое вещество неорганического или органического происхождения, входящее в состав лекарственного препарата или используемое в процессе производства, изготовления лекарственного препарата для придания ему необходимых физико- химических свойств. Термин «AUC» (area under the curve) означает фармакокинетический параметр, характеризующий суммарную концентрацию лекарственного препарата в плазме крови в течение всего времени наблюдения. Математически определяется как интеграл от 0 до
00 функции концентрации препарата (фармакокинетической кривой) в плазме крови от времени и равен площади фигуры, ограниченной фармакокинетической кривой и осями координат.
Src-семейство киназ (Src family kinase)— семейство нерецепторных тирозиновых протеинкиназ млекопитающих, схожих по структуре с c-Sre киназой. У позвоночных известно девять киназ Src-семейства: Src. Yes, Fgr, Fyn, Lyn, Hck, Lck, Blk, Frk. Киназы данного семейства участвуют в регуляции клеточного роста, внутриклеточной передаче сигнала и в частности, сигнальных путях Т- и В-клеточных рецепторов, адгезивных взаимодействиях клеток и т.д. Киназы Src-семейства принимают активное участие в процессах, связных с метаболизмом хрящевой и костной ткани, а так же в развитии воспалительных процессов аутоиммунной природы. c-Src киназа играет ключевую роль в образовании актинового кольца— уникального цитоскелета остеокластов, необходимого для резорбции костной ткани.
Syk-киназа (Spleen tyrosine kinase) - нерецепторная цитоплазматическая тирозинкиназа, участвующая в передаче сигнала антигенными и Fc рецепторами, BCR и другими рецепторами. Наиболее интенсивно Syk киназа экспрессируется в гематопоэтических клетках (таких как макрофаги, тучные клетки, лейкоциты, тромбоциты и эритроциты), в меньшей степени - в эпителиальных клетках, фибробластах, нейрональных клетках, гепатоцитах и т.д. (Yanagi, S., et al., Biochem BiophysRes Commun, 2001 , 288, 495-8). Syk киназа участвует в развитии адаптивного иммунитета и имеет важное значение в функции дополнительных типов клеток, в том числе тромбоцитов, фагоцитов, фибробластов, и остеокластов. Syk киназа играет роль в дифференцировке и функционировании остеокластов. Кроме того, Syk киназа играет определенную роль в процессе остеолиза.
Термины «лечение», «терапия» охватывают лечение патологических состояний у млекопитающих, предпочтительно у человека, и включают: а) снижение, б) блокирование (приостановку) течения заболевания, в) облегчение тяжести заболевания, т.е. индукцию регрессии заболевания, г) реверсирование заболевания или состояния, к которому данный термин применяется, или одного или более симптомов данного заболевания или состояния.
Термин «профилактика», «предотвращение» охватывает устранение факторов риска, а также профилактическое лечение субклинических стадий заболевания у млекопитающих, предпочтительно у человека, направленное на уменьшение вероятности возникновения клинических стадий заболевания. Пациенты для профилактической терапии отбираются на основе факторов, которые, на основании известных данных, влекут увеличение риска возникновения клинических стадий заболевания по сравнению с общим населением. К профилактической терапии относится а) первичная профилактика и б) вторичная профилактика. Первичная профилактика определяется как профилактическое лечение у пациентов, клиническая стадия заболевания у которых ещё не наступила. Вторичная профилактика - это предотвращение повторного наступления того же или близкого клинического состояния заболевания.
Соединения настоящего изобретения перспективны для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата, связанных с нарушением метаболизма костной и/или хрящевой тканей и дистрофически-дегенеративным процессами в них, в частности, остеопороза, остеоартроза (деформирующего артроза) и остеохондроза любой этиологии, имеющих как системный, так и локальный характер, в том числе, обусловленных первичными патологическими изменениями в этих тканях, или связанных с различными заболеваниями или длительным приемом некоторых лекарственных препаратов. В некоторых частных вариантах соединения по изобретению могут быть использованы для лечения постменопаузального остеопороза, сенильного, лекарственного остеопороза, остеопороза при злокачественных новообразованиях, вторичного остеопороза при ревматоидном артрите, гонартроза, коксартроза, поясничного, грудного, шейного остеохондроза и др.
Солевая форма
Поиск подходящей соли для соответствующего лекарства является важным моментом в доклинической фазе разработки лекарства. Изменение солевой формы действующего вещества лекарства является общераспространенным средством модификации его химических и биологических характеристик, не ведущей к модификации его структуры. Выбор конкретной солевой формы может глубоко повлиять на физико- химические свойства данного лекарства (например, скорость растворения, растворимость, устойчивость и гигроскопичность). Замена одной солевой формы в лекарстве на другую может изменить терапевтическую эффективность, безопасность применения и/или качество, которые являются особо важными для оптимального состава лекарственной формы крупномасштабного производства. Тем не менее, отсутствует надежный способ точного прогнозирования, как повлияет изменение солевой формы активного вещества лекарства на его биологическую активность. Более того, даже после приготовления большого количества солей на основе одного главного компонента, эффективный метод отбора, облегчающий подбор наиболее подходящей соли, обладающей желаемыми фармакокинетическими свойствами, растворимостью и рецептурным профилем, не был разработан. Коротко говоря, не существует надежного способа предсказания влияния конкретных видов солей на поведение исходного соединения в лекарственных формах (Berge et al., Pharmaceutical Salts// Journal Pharm. Sci., 1977, Vol.66, No.1 ; Verbeeck et al. Generic substitution: The use of medicinal products containing different salts and implications for safety and efficacy // EP Journal Pharm. Sci, 28, 2006, 1 -6.).
Твердые солевые формы обычно являются предпочтительными для пероральных препаратов, поскольку именно они склонны к проявлению желаемых физических характеристик; и в случае основных лекарственных средств соли присоединения кислоты часто являются предпочтительной солевой формой. Как уже упоминалось выше, различные солевые формы сильно различаются по их способности придавать желаемые свойства (такие как стабильность при хранении, легкость процесса получения и очистки, фармакокинетические параметры), и такие свойства не могут быть предсказаны с достаточной точностью. Например, некоторые соли представляют собой твердые вещества при температуре окружающей среды, в то же время другие соли представляют собой жидкости, вязкие масла или смолы. Кроме того, некоторые солевые формы являются стабильными к воздействию тепла и света в экстремальных условиях, а другие легко разлагаются при гораздо более мягких условиях. Таким образом, разработка подходящей формы соли присоединения кислоты основного лекарственного средства для использования в фармацевтической композиции является крайне важным и далеко не всегда предсказуемым процессом.
Фармакокинетические параметры являются важнейшими характеристиками, определяющими пригодность твердой солевой формы (или конкретной полиморфной модификации) для использования в качестве лекарственного средства. Среднесуточная и максимальная концентрация лекарственного препарата в крови животных и человека может существенно зависеть от состава солевой формы и ее полиморфной модификации. Возможность крупномасштабного производства выбранной солевой формы лекарственного вещества и чистота (или сложность очистки) получаемого продукта также являются крайне важными характеристиками, существенно зависящими от выбранной солевой формы. Кроме того, поскольку фармацевтические композиции, содержащие лекарственное вещество, должны иметь адекватную продолжительность хранения, пригодные солевые формы не должны проявлять значительных изменений в физико-химических характеристиках (химический состав, содержание воды, плотность, гигроскопичность, растворимость и т.д.) при хранении в течение существенного периода времени.
Твердые вещества, включая фармацевтически активные соединения, часто имеют более чем одну кристаллическую форму, известную как полиморфизм. Полиморфизм имеет место, когда соединение кристаллизуется во множестве разных твердых фаз, которые отличаются кристаллической упаковкой. Обычно полиморфные модификации (полиморфы) имеют разные физические характеристики, включая растворимость и физическую и химическую стабильность. Различные твёрдые солевые формы одного и того же лекарственного вещества, более того, различные полиморфы одной и той же твердой солевой формы, могут различаться по скорости высвобождения лекарственного средства, по стабильности твердого состояния солевой формы и по пригодности для изготовления фармацевтического препарата.
Таким образом, в производстве коммерчески жизнеспособных и фармацевтически приемлемых лекарственных композиций важно, по возможности, представлять лекарство в, по существу, кристаллической и стабильной форме(ах).
Способ терапевтического применения соединений
Предмет данного изобретения также включает введение субъекту, нуждающемуся в соответствующем лечении, терапевтически эффективного количества соединения по изобретению. Под терапевтически эффективным количеством подразумевается такое количество соединения, вводимого или доставляемого пациенту, при котором у пациента с наибольшей вероятностью проявится желаемая реакция на лечение (профилактику). Точное требуемое количество может меняться от субъекта к субъекту в зависимости от возраста, массы тела и общего состояния пациента, тяжести заболевания, методики введения препарата, комбинированного лечения с другими препаратами и т.п.
Соединение по изобретению или фармацевтическая композиция, содержащая соединение, может быть введено в организм пациента в любом количестве (предпочтительно, суточная доза действующего вещества составляет до 1 ,5 г на пациента в сутки, наиболее предпочтительно, суточная доза составляет 200- 500мг/сутки) и любым путем введения (предпочтительно, пероральный путь введения), эффективным для лечения или профилактики заболевания.
После смешения лекарственного препарата с конкретным подходящим фармацевтически допустимым носителем в желаемой дозировке, композиции, составляющие суть изобретения, могут быть введены в организм человека или других животных перорально, парентерально, местно и т.п.
Введение может осуществляться как разово, так и несколько раз в день, неделю (или любой другой временной интервал), или время от времени. Кроме того, соединение может вводиться в организм пациента ежедневно в течение определенного периода дней (например, 2-10 дней), а затем следует период без приема вещества (например, 1 -30 дней).
В том случае, когда соединение по изобретению используется как часть режима комбинированной терапии, доза каждого из компонентов комбинированной терапии вводится в течение требуемого периода лечения. Соединения, составляющие комбинированную терапию, могут вводиться в организм пациента как единовременно, в виде дозировки, содержащей все компоненты, так и в виде индивидуальных дозировок компонентов.
Фармацевтические композиции
Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, которые содержат соединения по изобретению (или пролекарственную форму или другое фармацевтически приемлемое производное) и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, адъювантов, растворителей и/или наполнителей, таких, которые могут быть введены в организм пациента совместно с соединением, составляющем суть данного изобретения, и которые не разрушают фармакологической активности этого соединения, и являются нетоксичными при введении в дозах, достаточных для доставки терапевтического количества соединения.
Фармацевтические композиции, заявляемые в данном изобретении, содержат соединения данного изобретения совместно с фармацевтически приемлемыми носителями, которые могут включать в себя любые растворители, разбавители, дисперсии или суспензии, поверхностно-активные вещества, изотонические агенты, загустители и эмульгаторы, консерванты, вяжущие вещества, смазочные материалы и т.д., подходящие для конкретной формы дозирования. Материалы, которые могут служить фармацевтически приемлемыми носителями, включают, но не ограничиваются, моно- и олигосахариды, а также их производные; желатин; тальк; эксципиенты, такие как какао-масло и воск для суппозиториев; масла, такие как арахисовое, хлопковое, сафроловое, кунжутное, оливковое, кукурузное и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные вещества, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновая кислота; апирогенная вода; изотонический раствор, раствор Рингера; этиловый спирт и фосфатные буферные растворы. Также в составе композиции могут быть другие нетоксичные совместимые смазочные вещества, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также красители, разделительные жидкости, пленкообразователи, подсластители, вкусовые добавки и ароматизаторы, консерванты и антиоксиданты.
Предметом данного изобретения являются также лекарственные формы - класс фармацевтических композиций, состав которых оптимизирован для определённого пути введения в организм в терапевтически эффективной дозе, например, для введения в организм орально, местно, пульмональным, например, в виде ингаляционного спрея, или внутрисосудистым способом, интраназально, подкожно, внутримышечно, а также инфузионным способом, в рекомендованных дозировках. Лекарственные формы данного изобретения могут содержать составы, полученные методами использования липосом, методами микрокапсулирования, методами приготовления наноформ препарата, или другими методами, известными в фармацевтике.
При получении композиции, например в форме таблетки, активное начало смешивают с одним или несколькими фармацевтическими эксципиентами, такими как желатин, крахмал, лактоза, стеарат магния, тальк, кремнезем, аравийская камедь, маннит, микрокристаллическая целлюлоза, гипромеллоза или аналогичные соединения.
Таблетки можно покрыть сахарозой, целлюлозным производным или другими веществами, подходящими для нанесения оболочки. Таблетки могут быть получены различными способами, такими как непосредственное сжатие, сухое или влажное гранулирование или горячее сплавление в горячем состоянии.
Фармацевтическую композицию в форме желатиновой капсулы можно получить, смешивая активное начало с растворителем и заполняя полученной смесью мягкие или твердые капсулы.
Для введения парентеральным путем используются водные суспензии, изотонические солевые растворы или стерильные растворы для инъекций, которые содержат фармакологически совместимые агенты, например пропиленгликоль или бутиленгликоль.
Примеры фармацевтических композиций
Вещества, описанные в данном изобретении, могут быть использованы для профилактики и/или лечения болезней человека или животных в виде следующих составов (под «Веществом» понимается активный ингредиент):
Таблетка I мг/таблетка
Вещество 50
Лактоза Ph. Eur 223.75
Кроскармеллоза натрия 6.0
Кукурузный крахмал 15
Поливинилпироллидон (5% w/v паста) 2.25
Стеарат магния 3.0 Таблетка II мг/таблетка
Вещество 200
Лактоза Ph. Eur 182.75
Кроскармеллоза натрия 12.0 Кукурузный крахмал (5% w/v паста) 2.25
Стеарат магния 3.0
Капсула мг/капсула
Вещество 10
Лактоза Ph. Eur 488.5
Магнезия 1 .5
Состав для инъекций I (50 мг/мл)
Вещество 5.0% w/v
1 М раствор гидроксида натрия 15.0% w/v
1 М раствор соляной кислоты до рН 7.6
Полиэтиленгликоль 400 4.5% w/v
Вода для инъекций до 100%
Мазь мл
Вещество 40 мг
Этанол 300 μπ
Вода 300 μπ
1 -додецилазациклогептанон 50 μπ
Пропиленгликоль до 1 мл
Данные составы могут быть приготовлены в соответствии со стандартными фармацевтическими методиками. Таблетки (l)-(ll) могут быть покрыты кишечнорастворимой оболочкой с использованием, например, фталата ацетата целлюлозы.
Примеры
Получение соединений по изобретению
Синтез 2,2-диметил-6-((4-((ЗЛ,5-триметоксифенил)амино) -1,3,5-триазин-2- ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-ЫП,41оксазин-3(4Н)-она (Соединение 1) К раствору 165 г (1 , 1 моль) 2,4-дихлортриазина и 98.5 г (1 ,2 моль) безводного ацетата натрия в 2000 мл ледяной уксусной кислоты при перемешивании, порциями, в течение 30 мин, поддерживая температуру не выше 30°С, прибавляют 193,2 г (1 моль) 6-амино-2,2-диметил-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она. Реакционную смесь оставляют на ночь, осадок отфильтровывают, промывают на фильтре уксусной кислотой (2x500 мл), затем водой до нейтральной реакции и сушат. Получают 220 г 6-((4-хлор- 1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2,2-диметил-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она. К 3 л безводного дегазированного этиленгликоля при интенсивном перемешивании прибавляют 306,7 г (1 моль) 6-((4-хлор-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2,2-диметил-2Н- пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она и 384,7 г (2, 1 моль) 3,4,5-триметоксианилина. После чего нагревают реакционную смесь до 1 10°С и перемешивают при этой температуре 4 часа. Через 4 часа температуру реакционной смеси поднимают до 125°С, перемешивают еще 4 часа. Затем, реакционную смесь охлаждают до 60° С, осадок отфильтровывают, промывают этиленгликолем (2x500 мл), затем ацетоном (3x600 мл), а затем водой (4x1500 мл) и сушат. Выход - 365 г 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5- триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)- она.
Синтез моногидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2- диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)- 1,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н- пиридо[3,2-Ы[1,41оксазин-3(4Н)-она (полиморфная модификация «А»). К кипящей суспензии 45,3 г (0.1 моль) 2,2-диметил-6-([4-[(3,4,5- триметоксифенил)амино]-1 ,3,5-триазин-2-ил]амино)-2Н-пирид[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она в 1200 мл ацетона прибавляют одной порцией раствор 20,0 г (~0, 105 моль) гидрата 4-метилбензолсульфокислоты в 20 мл этанола. Смесь кипятят в течение 30 минут, затем медленно охлаждают до комнатной температуры и оставляют на ночь. Осадок отфильтровывают, промывают на фильтре ацетоном (2x50 мл), а затем диэтиловым эфиром (2x100 мл) и сушат. Выход продукта 90 %.
Спектр ЯМР 1 Н (400 МГц, DMSO-d6): 1 1.13 (с, 1 Н), 8,57 (с, 1 Н) 7.52-7.44 (м, ЗН) 7,12 (д, 2Н, и=8Гц) 7,02 (с, 2Н), 4.4-3.9 (уш.с, 4Н), 3,8 (с, 6Н), 3,7 (с, ЗН), 2,3 (с, ЗН), 1 ,5 (с, 6Н) Масс-спектр, m/z: 454.18 ([М+пН]+)
Спектры ЯМР 1 Н и 13С моногидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)- 2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она (полиморфная модификация «А») приведены на рисунке 13. Синтез моногидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2- диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)- 1,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н- пиридо[3,2-Ы[1,4]оксазин-3(4Н)-она (полиморфная модификация «В»). 64.4 г (0.1 моль) моногидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2- диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2- Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она (полиморфная модификация «А») выдерживают 2 часа при 1 10- 1 15°С и остаточном давлении 6 мбар, затем охлаждают в вакууме. Выход продукта 100%.
Полиморфная модификация «В» моногидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2- ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она также может быть получена путем обработки полиморфной модификации «А» этанолом или другим растворителем.
Спектр ЯМР 1 Н (400 МГц, DMSO-cfe): 1 1.13 (с, 1 Н), 8,57 (с, 1 Н) 7.52-7.44 (м, ЗН) 7,12 (д, 2Н, и=8Гц) 7,02 (с, 2Н), 4.4-3.9 (уш.с, 4Н), 3,8 (с, 6Н), 3,7 (с, ЗН), 2,3 (с, ЗН), 1 ,5 (с, 6Н) Масс-спектр, m/z: 454.18 ([М+пН]+).
Спектры ЯМР 1 Н и 13С моногидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)- 2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она (полиморфная модификация «В») приведены на рисунке 14.
Оптимизация солевой формы Соединения 1
Для получения формы с наилучшими биологическими и физическими свойствами были синтезированы разные солевые формы Соединения 1. Основной целью оптимизации солевой формы было получение солевой формы Соединения 1 , обладающей следующими характеристиками: кристалличность, постоянство состава, терапевтическая эффективность, безопасность применения в терапии, легкость масштабирования процесса получения, использование фармакологически приемлемого противоиона (предпочтительно аниона), использование малотоксичных органических растворителей. Получение солевых форм Соединения 1 проводилось в органических растворителях, обладающих высокой полярностью и низкой токсичностью (Класс 3). Противоионы использовались исходя из фармакологической приемлемости и высокой силы кислоты (рКа не выше 3.25). Требование к высокой силе кислоты обусловлено тем, что протонируемый пиридиновый атом азота Соединения 1 представляет собой слабое основание с рКа 4.
На первом этапе проводилось исследование растворимости исходного основания в выбранных органических растворителях. Максимальный объем растворителя для данного испытания был выбран равным 10 мл на 100 мг основания из соображений дальнейшего масштабирования процесса. Результаты исследования растворимости исходного основания в выбранных органических растворителях приведены в таблице 1.
Таблица 1— Растворимость Соединения 1 в различных растворителях.
Figure imgf000022_0001
На втором этапе исследования была предпринята попытка получения солей, исходя из 100 мг основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5- триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она. Для этого этапа разработки отбирались такие пары растворитель/кислота, в которых происходило либо полное растворение образца в растворителе и выпадение осадка после прибавления кислоты, либо гомогенизация системы после прибавления кислоты и выпадение осадка после охлаждения системы до комнатной температуры. Результаты исследования кристаллизации солей Соединения 1 представлены на рисунке 1. На основании проведенных исследований для третьего этапа были отобраны следующие пары кислота- растворитель: этанол-HCI, ацетон- 4-метилбензолсульфокислота, а так же н-бутанол и диоксан с метансульфокислотой, камфорсульфокислотой, 4- метилбензолсульфокислотой, HCI, НВг и H2S04.
На третьем этапе было проведено получение солей в отобранных системах растворитель/кислота, исходя из 2000 мг основания. Была проведена оценка масштабируемости процесса фильтрования. Результаты этих исследований представлены на рисунке 2. Образцы, для которых процесс фильтрования был оценен как легко масштабируемый, были подвергнуты элементному анализу (с целью установления постоянства состава и стехиометричности) и анализу методом порошковой рентгеновской дифрактометрии (с целью исследования кристалличности структуры). Все дифрактограммы в настоящем документе были получены при 25°С (±5°С) и относительной влажности воздуха «70 % на порошковом рентгеновском дифрактометре Bruker D8 Advance в геометрии Брэгг-Брентано (напряжение на аноде 40kV, ток 40mA), оснащенным никелевым фильтром (излучение CuKal , длина волны = 1 ,5406 А) и позиционно-чувствительным детектором LynxEye, шаг съемки - 0.02° 2Θ, угловой диапазон - 4-65° 2Θ. Уточнение полученных дифрактограмм проводилось в программном пакете Bruker TOPAS5.
Исходя из возможности масштабирования процесса получения соответствующей солевой формы, для дальнейших исследований были отобраны пары растворитель/противоион (кислота), для которых происходило осаждение осадка при добавлении кислоты или охлаждении раствора, и полученный осадок был легко фильтруемым. Таким образом, для дальнейших исследований были отобраны образцы: S-3-1 -B-TSA (далее S3-1 ), S-3-2-B-HBr (S3-2), S-3-4-B-HCI (S3-4), S-3-8-B-HBr (S3-8), S-3-9- B-CSA (S3-9), S-3-10-B-HCI (S3-10), S-3-1 1 -C2-HCI (S3-1 1 ), S-3-12-A1 -TSA (S3-12), S-3-16- D-SA (S3-16) и S-3-17-D-MSA (S3-17).
Образцы данных соединений были исследованы посредством элементного анализа. В результате было установлено, что наилучшую сходимость полученных результатов с рассчитанным элементным составом демонстрируют образцы соли Соединения 1 и 4-метилбензолсульфокислоты, представляющие собой моногидраты (см. Рисунок 3).
Дальнейшие исследования кристалличности образцов методом порошковой рентгеновской дифракции показали, что исследуемые образцы (S-3-1 -B-TSA (далее S3-1 ), S-3-2-B-HBr (S3-2), S-3-4-B-HCI (S3-4), S-3-8-B-HBr (S3-8), S-3-9-B-CSA (S3-9), S-3-10-B- HCI (S3-10), S-3-1 1 -C2-HCI (S3-1 1 ), S-3-12-A1 -TSA (S3-12), S-3-16-D-SA (S3-16) M S-3-17-D- MSA (S3-17)) имели в составе кристаллические фазы. Разное уширение пиков и невозможность установить и описать дифрактограммы с использованием отражений фазы с одной элементарной ячейкой свидетельствовали о наличии нескольких кристаллических фаз в исследуемых образцах (см. рисунки 4— 8). В образцах отсутствовали одинаковые кристаллические фазы: положение и интенсивность пиков в разных образцах были различны. Размер кристаллитов в образце S-3-17-D-MSA низкий, линии сильно уширены, что, вероятно, было вызвано разрушением кристаллической структуры вещества (см. рисунок 8). В остальных образцах доля пиков с высоким размером кристаллитов выше.
Образец S-3-10-B-HCI является индивидуальной кристаллической фазой, однако из-за большой ширины линий и малой отражающей способности образца индицирование неоднозначно. Наиболее вероятные параметры элементарной ячейки: а = 10,99±0,05 А; Ь = 28,53±0,05 А; с = 10,62±0,05 А; а = 95,98±0, 1 °; β = 95,85±0,1 °; γ = 92,74±0, 1 °. Пространственная группа Pi.
Образец S-3-1 1 -C2-HCI также представляет собой кристаллическую фазу и также неоднозначно индицируется. Предполагаемая ячейка: а = 10,36±0,05 А; b = 18,20±0,05 А; с = 28,08±0,05 А; а = 87,36±0, 1 °; β = 87,54±0,1 °; γ = 92,29±0, 1 °.
Пространственная группа Р1.
Образец S-3-12-A1 -TSA представляет собой индивидуальную кристаллическую фазу со следующими параметрами элементарной ячейки: а = 10,98±0,05 А; b = 28,48±0,05 А и с = 10,60±0,05 А, β = 1 13,7±0, 1 °, V = 3037,5±0,5 А3. Пространственная группа P2i/c. Не относящийся к кристаллической фазе пик, наблюдаемый в районе 22,7° 2Θ, относится к каптоновой подложке (см. рисунок 9а). Положения и интенсивности характеристических, визуально различимых пиков в дебаеграмме образца S-3-12-A1 -TSA представлены в таблице 2. Общий вид независимой части элементарной ячейки гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 в полиморфной модификации «А» (образец S-3-12-A1 -TSA) представлен на рисунке 1 1а.
Таблица 2— Положения и интенсивности характеристических, визуально различимых пиков на дебаеграмме образца гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и основания Соединения 1 (Полиморфная модификация «А»). Интенсивности представляют собой высоты (с поправкой на фон) пиков. Положения отвечают максимумам на дебаеграмме, а не расчетным положениям отражений.
Figure imgf000025_0001
Таким образом, только три образца S-3-10-B-HCI (S3-10), S-3-1 1 -C2-HCI (S3-1 1) и S-3-12-A1 -TSA (S3-12) представляют собой кристаллические вещества и только у образца S-3-12-A1 -TSA (S3-12) тип пространственной группы идентифицируется однозначно. Исходя из данных элементного анализа, образец S-3-12-A1 -TSA является моногидратом. Для подтверждения состава были выполнены дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК) и термогравиметрия образца (ТГА). ДСК проводили на приборе NETZSCH DSC 204 F1. Измерительную систему калибровали согласно норме ISO 11357-1 по параметрам фазовых переходов стандартных веществ (С6Н12; Нд; бензойная кислота; Ga; KN03; In; Sn; Bi; CsCI; чистота 99,99%). Систематическая ошибка температурной калибровки (определена по In) составляет 0, 1 °. Образцы тестировали в стандартных алюминиевых ячейках (V = 56 мм3, d = 6 мм), завальцованных крышкой с отверстием (отношение площади дна ячейки к площади отверстия составляло порядка 40) в потоке (20 мл/мин) искусственного воздуха, в интервале температур 30 - 300°С при скорости нагревания 10°/мин. ТГА измерения проводили на термовесах NETZSCH TG 209 F1, оснащенных алундовым держателем с защитным экраном и температурным сенсором типа Р. Прибор калибровали по точкам плавления стандартных веществ (Ag; AI; Bi; In; Sn; чистота 99.99%). Погрешность определения массы не превышает 0, 1 % (определено по стандарту СаС204-2Н20). Эксперимент проводили в стандартном открытом алундовом контейнере ( \/= 85 мм3, с/ = 6,7 мм) в потоке искусственного воздуха, в интервале температур 30 - 300°С при скорости нагревания 10°/мин. Экспериментальные данные обрабатывали с помощью пакета анализа NETZSCH Proteus Analysis согласно стандарту ISO/CD 1 1358. Взвешивание образца проводили на аналитических весах AND GH 202 с точностью ±0,01 мг. Материал не подвергали механической обработке перед измерениями во избежание дегидратации.
Результаты тестирования образца представлены на рисунке 10. Первичная потеря массы и характер переходов, соответствующих эффектам на кривых ДСК, соответствует потере кристаллической воды. Последний эффект на кривых ДСК и соответствующая ему потеря массы относятся к плавлению образца с разложением. Этот вывод можно сделать из конечного вида продуктов исследования.
Дальнейшее изучение влияния термической обработки на кристаллическую структуру гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и основания Соединения 1 показало, что нагревание полиморфной модификации «А» до 1 10-1 15°С в течении 2-х часов при остаточном давлении 6 мбар приводит к изменению кристаллической структуры соли и образованию полиморфной модификации «В» (образец SYK 91 /1 ). Дальнейшие исследования кристалличности образца методом порошковой рентгеновской дифракции показали, что образец представляет собой индивидуальную кристаллическую фазу со следующими параметрами элементарной ячейки: а = 11 ,09±0,05 А; b = 14,38±0,05 А и с = 10,53±0,05 А, а= 90,06±0, 1 °; β = 1 14,610, 1 ° и γ = 91 , 1±0, 1 °, V = 1525, 9±0, 5 А3 и пространственной группой PI (см. рисунок 96). Положения и интенсивности характеристических, визуально различимых пиков в дебаеграмме образца SYK 91/1 представлены в таблице 3. Общий вид независимой части элементарной ячейки гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 в полиморфной модификации «В» (образец SYK 91/1) представлен на рисунке 1 16.
Таблица 3— Положения и интенсивности характеристических, визуально различимых пиков на дебаеграмме образца гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и основания Соединения 1 (Полиморфная модификация «В»). Интенсивности представляют собой высоты (с поправкой на фон) пиков. Положения отвечают максимумам на дебаеграмме, а не расчетным положениям отражений.
Figure imgf000027_0001
24,6 5,9 38,0 1,7 54,1 1,0
24,8 9,4 38,8 2,6 55,2 0,4
25,1 93,3
Примечание:
курсивом выделены пики с относительной интенсивностью больше 5,0;
На основании проведенного исследования было обнаружено, что единственной кристаллической солевой формой Соединения 1 , которая может быть получена в малотоксичных органических растворителях, по легко масштабируемой методике, и содержащей фармакологически приемлемый противоион, является соль 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1.
Анализ содержания посторонних примесей в различных
солевых формах Соединения 1
Для оценки качества полученных солевых форм Соединения 1 был проведен анализ содержания посторонних примесей в различных солевых формах. Определение содержания посторонних примесей проводили методом ВЭЖХ. При расчете содержания единичной примеси не учитывали площади пиков, соответствующих по временам удерживания пикам на бланк-хроматограмме и пику противоиона. Суммированием результатов, полученных для единичных примесей, получали общее содержание примесей.
На первом этапе исследования была разработана ВЭЖХ методика определения посторонних примесей. Затем был проведен анализ посторонних примесей в образцах свободного основания и нескольких солевых форм Соединения 1. Результаты проведённых исследований представлены на рисунках 15— 17 и в таблицах 4— 7.
Таблица 4 — Результаты анализа содержания посторонних примесей в образце Соединения 1 (в виде свободного основания).
Figure imgf000028_0001
Пик N°12 - пик 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2- ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она.
Таблица 5— Результаты анализа содержания посторонних примесей в образце соли метансульфокислоты и Соединения 1.
Figure imgf000029_0001
Таблица 6— Результаты анализа содержания посторонних примесей в образце гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (Полиморфная модификация А).
Figure imgf000029_0002
Примечание:
* мЕП - милли единицы поглощения;
Пик N°9 - пик 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2- ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4]оксазин-3(4Н)-она. Таблица 7— Результаты анализа содержания посторонних примесей в образце гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (Полиморфная модификация В).
Figure imgf000030_0001
В результате проведенного анализа содержания посторонних примесей в образце
Соединения 1 в форме свободного основания было показано высокое содержание различных не идентифицированных примесей в образцах, наличие которых может приводить к токсическим эффектам, а также может вызывать появление побочных эффектов в результате введения этого соединения в организм человека и животного в качестве лекарственного средства. Поэтому для использования Соединения 1 в качестве лекарственного кандидата требуется проведение дополнительных стадий очистки. Использование дополнительных стадий очистки неизбежно приведет к усложнению технологической схемы и увеличению себестоимости производства конечного лекарственного средства.
В результате проведенного анализа содержания посторонних примесей в образце соли метансульфокислоты и Соединения 1 было показано некоторое уменьшение содержания посторонних примесей по сравнению с содержанием примеси в свободным основании (Соединение 1). Однако, как видно из рисунка 16 и таблицы 5, содержание двух примесей превышает 0,5 %. Хотя в соответствии с требованиями ЮН (International Conference on Harmonisation - Международная конференция по гармонизации) и российской нормативной документации данное содержание примесей допустимо для производства лекарственного средства, столь высокая концентрация примесей может приводить к токсическим эффектам при введении в организм человека и животных, в связи с чем применение такой соли в клинической практики возможно только после исследования токсичности данных примесей и/или дополнительных стадий очистки образцов соли.
В результате проведенного анализа содержания посторонних примесей в образце гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 неожиданно было обнаружено отсутствие примесей с содержанием выше 0, 1 %. Стоит отметить, что при использовании 4-метилбензолсульфокислоты низкого качества гидрат соли 4-метилбензолсульфокислоты и свободного основания может содержать до 0, 15 % орто- толуолсульфокислоты, однако данная примесь может быть легко устранена перекристаллизацией 4-метилбензолсульфокислоты. Столь низкие (менее 0, 1 %) концентрации примесей в соответствии с действующей нормативной документацией считаются безопасными и не требуют проведения идентификации структуры примесей или дополнительных стадий очистки.
Таким образом, в результате анализа содержания посторонних примесей в образцах различных солевых форм Соединения 1 неожиданно оказалось, что среди исследованных солей гидрат соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 обладает наибольшей чистотой и не содержит примесей более 0,15 %.
Характеристика биологической активности соединений по изобретению
Биологическая активность соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 , а также её кристаллических форм, являющихся предметом настоящего изобретения, была изучена в различных экспериментах.
Исследование влияния соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 на ферментативную активность киназ человека in vitro.
В ходе исследований влияния соединений по изобретению на ферментативную активность киназ человека in vitro впервые было обнаружено прямое ингибирующее действие соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (на примере полиморфной модификации «А») на ряд рекомбинантных тиразинкиназ человека, в частности, на рекомбинантную тирозинкиназу человека c-Src.
Измерения влияния Соединения 1 на рекомбинантную тирозинкиназу человека с- Src осуществлялись по следующей методике: пептидный субстрат растворяли до концентрации 0,2 мг/мл в реакционном буфере. Добавляли раствор рекомбинантной с- Src-киназы до концентрации 2 нМ и исследуемое соединение до нужной концентрации (в диапазоне 1 нМ - 10 мкМ). Добавляли раствор 33Р-АТР до концентрации 10 мкМ (финальная специфическая активность которого 0,01 мкКи). Через 120 минут инкубации реакционная смесь наносилась на ионообменную бумагу, которая промывалась избытком фосфорной кислоты. Степень протекания реакции определялась по радиоактивности продуктов реакции.
Проведенные исследования показали, что соль 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 в концентрации 0,5 мкмоль/л более чем на 50% подавляет активность следующих киназ: Blk, c-Src, Syk, Fgr, Frk, Fyn, Hck, Lck, Lyn, Yes. Наиболее выраженное подавление каталитической активности было обнаружено для киназ семейства Src— действие соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 в концентрации 0,5 мкмоль/л понижает остаточную активность киназ семейства Src до 25% и менее от контрольных значений. В частности, остаточная активность c-Src киназы в присутствии соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 в концентрации 0,5 мкмоль/л составила 6 % от контрольных значений, Yes и Lck киназ - 12 %, Lyn-киназы - 13 %, Blk - 20 %, Fgr - 23 %, Fyn и Hck - 25 %.
Для уточнения полученных данных по приведенной выше методике были определены концентрации полумаксимального ингибирования (IC50) ферментативной активности киназы. В результате было показано ингибирующее действие соли 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 на рекомбинантную тирозинкиназу человека c-Src (см. Рисунок 12) в наномолярном диапазоне концентраций (IC50 = 14 нмоль/л). Кроме того, в наномолярном диапазоне концентраций соль 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 ингибирует также Syk-киназу (IC50 = 40 нмоль/л.
Сравнение фармакокинетических характеристик свободного основания и солевых форм Соединение I
Для анализа применимости полученных солевых форм Соединения 1 в качестве лекарственных препаратов были исследованы их фармакокинетические параметры.
На первом этапе работ была исследована фармакокинетика свободного основания Соединения 1 после перорального введения вещества трем крысам линии Wistar в дозе 30 мг/кг. Результаты исследования приведены на рисунке 19 и в таблице 9. Как видно из приведённых результатов, максимальная концентрация вещества в плазме составляет 4, 12 нг/мл, что соответствует 9, 1 нмоль/л, а среднесуточная концентрация вещества составляет 4,8 нмоль/л. В то же время, на основе данных по биологической активности Соединения 1 , действующая концентрация свободного основания составляет порядка 1 мкмоль/л. Таким образом, фармакокинетические параметры свободного основания исключают возможность его применения в качестве лекарственного средства, поскольку для достижения необходимого терапевтического эффекта необходимо вводить большую дозу Соединения 1 , что крайне неудобно технически для практической реализации, приводит к существенному расходу вещества, а также потенциально может приводить к развитию токсических побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта. Таблица 9— Основные фармакокинетические параметры Соединения 1 при введении в виде свободного основания крысам линии Wistar в дозе 30 мг/кг. Для каждой временной точки средние значения определены на основе индивидуальных данных, полученных от трех животных.
Figure imgf000033_0001
Также была исследована фармакокинетика нескольких солевых форм Соединения
1 после перорального введения вещества крысам линии Wistar в дозе 37 мг/кг (30 мг/кг в пересчёте на свободное основание). На рисунке 20 и в таблице 10 приведены результаты исследования фармакокинетических параметров соли метансульфокислоты и Соединения 1. Как видно из приведённых результатов, соль метансульфокислоты и Соединения 1 обладает существенно лучшими фармакокинетическими параметрами по сравнению со свободным основанием. Максимальная концентрация вещества в плазме составляет 333 нг/мл, что соответствует 735 нмоль/л, а средняя концентрация вещества составляет 104 нмоль/л. В то же время, на основе данных по биологической активности Соединения 1 , действующая концентрация Соединения 1 составляет порядка 1 мкмоль/л. Таким образом, для применения соли метансульфокислоты и Соединения 1 в качестве лекарственного средства необходимо или существенно увеличить дозу вводимого вещества, или использовать многократное введение субстанции.
Таблица 10— Основные фармакокинетические параметры соли метансульфокислоты и Соединения 1 при введении крысам линии Wistar в дозе 30 мг/кг (в пересчёте на свободное основание). Для каждой временной точки средние значения определены на основе индивидуальных данных, полученных от трех животных.
Figure imgf000033_0002
В ходе исследования фармакокинетических параметров гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 после перорального введения вещества крысам линии Wistar, неожиданно оказалось, что данная солевая форма обладает лучшими фармакокинетическими параметрами по сравнению со свободным основанием и другими исследованными солевыми формами Соединения 1. На рисунке 21 и в таблице 1 1 приведены результаты исследования фармакокинетических параметров гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1. При введении крысам линии Wistar моногидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 в дозе 30 мг/кг (21 мг/кг в пересчёте на свободное основание) максимальная концентрация вещества в плазме составляет 416 нг/мл, что соответствует примерно 1 мкмоль/л, а среднесуточная концентрация вещества превышает 200 нмоль/л.
Таблица 11 — Основные фармакокинетические параметры гидрата соли 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (полиморфная модификация «А») при введении крысам линии Wistar в дозе 21 мг/кг (в пересчёте на свободное основание). Для каждой временной точки средние значения определены на основе индивидуальных данных, полученных от шести животных.
Figure imgf000034_0001
Дальнейшее исследование фармакокинетических параметров гидрата соли 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 на крысах показало, что препарат быстро всасывается в кровоток, достигая максимальной концентрации через 1 , 1 -1 ,3 часа и распределяется по органам и тканям. Средняя концентрация вещества в костной и хрящевой ткани более чем втрое превышает среднесуточную концентрацию вещества в плазме крови животных. Гидрат соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 обладает линейной фармакокинетикой в широком диапазоне доз - при внутрижелудочном введении гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 в диапазоне доз от 30 до 200 мг/кг концентрация Соединения 1 в плазме крови крыс увеличивается пропорционально дозе. Высокие концентрации Соединения 1 были зафиксированы практически во всех исследованных тканях, достигая максимума через 2— 4 часа после введения гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1. Среднесуточная концентрация Соединения 1 в органах мишенях (костной и хрящевой тканях) более чем втрое превышает среднесуточную концентрацию Соединения 1 в плазме крови животных. Наименьшая концентрация Соединения 1 была зафиксирована в мышцах.
В результате изучения фармакокинетики при однократном внутрижелудочном введении кроликам гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 в дозе 50 мг/кг было показано, что концентрация вещества в плазме крови кроликов достигает 8,6 мкг/мл (~16 мкмоль/л), время полувыведения составляет более 7 часов.
В результате исследования фармакокинетических параметров различных солевых форм Соединения 1 неожиданно было обнаружено, что соль 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 является оптимальной солевой формой Соединения 1 , позволяющей использовать однократное пероральное введение в существенно более низкой дозе, по сравнению с другими исследованными солевыми формами Соединения 1.
Исследование влияния гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 на остеокласт-опосредованную резорбцию костной ткани.
В данном эксперименте впервые было показано действие гидрата соли 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (полиморфная модификация «А») на остеокласт-опосредованную резорбцию костной ткани. Исследование было проведено по следующей методике: моноциты CD15+ (клетки-предшественники остеокластов) культивировали в течение 3-х дней в среде для пролиферации (а-модифицированная минимальная поддерживающая среда Игла /фетальная телячья сыворотка (aMEM/FCS) — 10% с 25 нг/мл колониестимулирующего фактора макрофагов (M-CSF)). В ходе данной фазы M-CSF стимулировал пролиферацию и экспрессию рецептора-активатора ядерного фактора кВ (RANK - Receptor Activator of Nuclear Factor карра-В, мембранный белок типа I). Среду для пролиферации удаляли и клетки дифференцировали в среде дифференциации (aMEM/FCS- 10% с 100 нг/мл RANKL и 25 нг/мл M-CSF). После обнаружения зрелых остеокластов в культуре (4-й день исследования), клетки собирали и пересеивали в 96-луночный планшет, покрытый синтетической минерализованной матрицей, и культивировали в течение еще 48 часов (в присутствии изучаемых соединений) для оценки резорбции остеокластов. Затем проводили оценку количества зрелых остеокластов и оценку степени резорбции. Влияния различных концентраций соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 на концентрацию зрелых остеокластов и степень резорбции оценивали в сравнении с контрольными образцами (положительный контроль, растворитель — 0,3% ДМСО) и референсными ингибиторами — Саракатинибом и Босутинибом (см. рисунок 18). Близкие значения среднего количества зрелых остеокластов на лунку (488 ± 43 и 451 ± 11) и степени резорбции минерализованной матрицы (32,62 ± 1 , 16% и 35,53 ± 2,40%) в контрольных образцах (положительный контроль, растворитель) подтверждали отсутствие влияния растворителя на выживаемость остеокластов и остеокласт-опосредованную резорбцию. В ходе проведенных исследований было показано, что Соединение 1 оказывает дозозависимый ингибирующий эффект на остеокласт-опосредованную резорбцию минерализированной матрицы. Сильный, статистически значимый ингибирующий эффект был обнаружен при концентрациях 1 , 1 мкМ и 10 мкМ моногидрата соли 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (см. рисунок 18).
Статистически значимый, дозозависимый ингибирующий эффект на остеокласт- опосредованную резорбцию минерализированной матрицы также был обнаружен при использовании гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 в полиморфной модификации «В» в концентрациях от 1 ,0 мкМ.
Исследование влияния гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и
Соединения 1 на метаболизм хрящевой ткани
Впервые было показано действие на метаболизм хрящевой ткани соли 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 на примере моногидрата соли 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (полиморфная модификация «А»). Исследование было проведено по следующей методике: хондроциты были изолированы из хряща коленного сустава молодых крыс (возраст — 3 недели, линия — Sprague Dawley). Изолированные хондроциты в культуральной среде (минимальная поддерживающая среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко /фетальная телячья сыворотка (DMEM/FCS) - 10%, 4-(2-гидроксиэтил)-1 -пиперазин этансульфоновоя кислота (HEPES) - 25мМ) хранили замороженными при -80°С. Полученные хондроциты размораживали за день до начала эксперимента, высаживали в 12 луночные планшеты и культивировали в виде монослоя в течение 24 часов. 11_-^-индуцированную активацию хондроцитов и обработку исследуемыми соединениями начинали после 24 часов инкубации и продолжали в течение 3-х дней.
В ходе проведенных исследований было обнаружено, что гидрат соли 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (полиморфная модификация А) оказывает статистически значимый дозозависимый положительный эффект на ΙΙ_-1 β индуцированные гипертрофические изменения хондроцитов, заключающийся в значительном повышении экспрессии аггрекана.
Таким образом, на основании проведенных исследований было обнаружено выраженное защитное действие гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 на метаболизм костной и хрящевой ткани. Данные эффекты могут быть достигнуты только при использовании солевых форм Соединения 1 , обладающих удовлетворительными фармакокинетическими параметрами. Было обнаружено, что фармакокинетические параметры свободного основания Соединения 1 не позволяют использовать данное соединение для блокирования остеокласт-опосредованного метаболизма костной ткани и ΙΙ_-1 β индуцированного гипертрофического изменения хондроцитов. В то же время, соль 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 , и в частности её моногидрат, обладает подходящими фармакокинетическими параметрами и может быть использован для терапии заболеваний, характеризующихся аберрантным метаболизмом костной и хрящевой тканей.
Исследование влияния соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 на разрушения коленного сустава в модели остеоартроза у крыс, индуцированного внутрисуставным введением йодацетата натрия
В ходе проведенных исследований на животных было показано прямое фармакологическое действие соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 , на примере моногидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (полиморфная модификация «А»), на разрушения коленного сустава в модели остеоартроза у крыс линии Sprague-Dawley, индуцированного внутрисуставным введением йодацетата натрия. Внутрисуставное введение ингибитора аэробного гликолиза (йодацетата натрия) приводит к гибели хондроцитов и развитию острой воспалительной реакции в синовиальной полости. В отсутствии терапии на 10-й день с момента индукции патологии начинает наблюдаться хроническая боль, вызванная разрушением тканей хряща и, в ряде случаев, развитием хронического воспаления [J Musculoskel Neuron Interact 2001 ; 1 (4):363-376]. Оценку степени развития остеоартроза у крыс проводили путем сравнения порога болевой чувствительности конечности после введения йодацетата натрия с фоновыми значениями, измеренными до индукции патологии. Порог болевой чувствительности оценивали в тесте тактильной аллодинии, измерения проводили с использованием нитей фон Фрея (см. таблицу 8).
Для проведения исследования были выбраны самцы крыс весом 150— 200 г. Перед проведением эксперимента все животные прошли акклиматизацию в течение 14 дней. Животные содержались при двенадцатичасовом цикле освещения в поликарбонатных клетках фирмы Charles River laboratories Inc тип ЗН в соответствии с ГОСТ Р 53434-2009. Корм и воду животным предоставляли ad libitum. Индукцию патологии проводили путем введения 50 мкл раствора, содержащего 2 мг йодацетата натрия в синовиальную полость коленного сустава животных. Тактильную аллодинию, вызванную механическим раздражением, оценивали с помощью нитей фон Фрея весом от 0,06 до 23,96 г. Для каждой нити тестирование проводится в пяти повторах с интервалом 1-2 с, в качестве порога чувствительности принимали минимальный порог реакции, вызывающий отдергивание лапы в одном из пяти повторов. Результаты оценки влияния перорального введения моногидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 (полиморфная модификация «А») на разрушения коленного сустава в модели остеоартроза у крыс, индуцированного внутрисуставным введением йодацетата натрия приведены в таблице 8.
Таблица 8 — Исследование болевой чувствительности поврежденных конечностей животных с использованием теста тактильной аллодинии— нити фон Фрея. Приведено значение минимального порога реакции, вызывающего отдергивание поврежденной лапы, в процентах от значения порога реакции до индукции патологии (n=10,M±m)
Figure imgf000038_0001
Введение гидрата соли 4-метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 в дозе 100 и 500 мг/кг, начиная со дня индукции патологии, и в дозе 500 мг/кг, начиная с седьмого дня после индукции патологии, приводит к полному подавлению развития тактильной аллодинии. Проведенный эксперимент позволяет сделать выводы о том, что данное соединение подавляет аберрантный метаболизм костной и хрящевой тканей, что и подавляет, в свою очередь, развитие тактильной аллодинии и снижение порога болевой чувствительности в модели остеоартроза у крыс. Таким образом, в ходе проведенных экспериментов было обнаружено, что соль 4- метилбензолсульфокислоты и Соединения 1 , а также ее гидрат (в частности, моногидрат), сольват и полиморфные модификации соли, гидрата или сольвата являются эффективным ингибиторами киназы Syk и киназ семейства Src, в частности c-Src киназы, и обладают фармакокинетическими параметрами, позволяющими использовать указанные соли в качестве лекарственного средства для введения в организм человека или животного для лечения заболеваний, связанных с аберрантной активностью киназ, приводящей к аберрантному метаболизму костной и хрящевой ткани, в частности, остеоартроза, остеопороза и остеохондроза.
Несмотря на то, что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные эксперименты приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения. Должно быть понятно, что возможно осуществление различных модификаций без отступления от сути настоящего изобретения.

Claims

Формула изобретения
1 . Соль 4-метилбензолсульфокислоты и основания 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5- триметоксифенил)амино)-1 ,3,5-триазин-2-ил)амино)-2Н-пиридо[3,2-Ь][1 ,4] оксазин- 3(4Н)-она:
Figure imgf000040_0001
её гидрат, сольват или полиморфная модификация соли, гидрата или сольвата.
2. Соль по п.1 , представляющая собой гидрат или полиморфную модификацию гидрата.
3. Соль по п.2, в которой полиморфная модификация гидрата представляет собой кристаллическую фазу, характеризующуюся параметрами элементарной ячейки, равными а = 10,98±0,05 A, b = 28,48±0,05 А, с = 10,60±0,05 А, β = 113,7±0, 1 °, V = 3037, 5±0, 5 А3; пространственной группой
4. Соль по п.2, в которой полиморфная модификация гидрата представляет собой кристаллическую фазу, характеризующуюся характеристическими пиками на дебаеграмме при углах дифракции (2Θ) 6,2; 8,8; 9,6; 10,7; 1 1 ,0; 1 1 ,6; 12,4; 15,3; 16,2; 16,5; 17,0; 17,4; 17,6; 17,9; 18,3; 18,6; 19,3; 19,3; 19,6; 20,6; 20,9; 23,5; 25,2; 26,2; 26,5; 27,2; 27,6 и 30,2, полученными методом порошковой рентгеновской дифракции при температуре 25±5°С с использованием СиКсИ излучения при длине волны 1 ,5406 А.
5. Соль по п.2, в которой полиморфная модификация гидрата представляет собой кристаллическую фазу, характеризующуюся параметрами элементарной ячейки равными а = 11 ,09±0,05 A, b = 14,38±0,05 А, с = 10,53±0,05 А, а = 90,06±0, 1 °, β = 1 14,6±0, 1 °, γ= 91 , 1±0, 1 °, V = 1525,9±0,5 А3; пространственной группой ΡΪ.
6. Соль по п.2, в которой полиморфная модификация гидрата представляет собой кристаллическую фазу, характеризующуюся характеристическими пиками на дебаеграмме при углах дифракции (2Θ) 6,1 ; 8,8; 10,6; 1 1 ,0; 1 1 ,5; 12,3; 15,0; 15,2; 15,5; 15,8; 16,1 ; 16,3; 17,3; 17,6; 17,9; 18,5; 19,5; 20,5; 20,7; 20,8; 24,6; 24,8; 25,1 ; 26,1 ; 26,5; 26,9; 30, 1 ; и 43,0, полученными методом порошковой рентгеновской дифракции при температуре 25±5°С с использованием СиКсИ излучения при длине волны 1 ,5406 А.
7. Применение соли по любому из пп.1 -6 для предупреждения и/или лечения расстройства, связанного с аберрантной активностью киназы.
8. Применение по п.7, характеризующееся тем, что киназа представляет собой нерецепторную протеинкиназу.
9. Применение по п.8, характеризующееся тем, что нерецепторная протеинкиназа выбрана из Syk киназы или киназы Src-семейства.
10. Применение по п.9, характеризующееся тем, что киназа Src-семейства представляет собой c-Src, Yes, Fyn, Fgr, Yrk, Lyn, Blk, Hck или Lck киназу.
1 1 . Фармацевтическая композиция для предупреждения и/или лечения расстройства, связанного с аберрантной активностью киназы, содержащая терапевтически эффективное количество соли по любому из пп.1-6 и, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество
12. Фармацевтическая композиция по п.1 1 , характеризующаяся тем, что вспомогательное вещество представляет собой носитель и/или эксципиент.
13. Фармацевтическая композиция по п.1 1 , характеризующееся тем, что киназа представляет собой нерецепторную протеинкиназу.
14. Фармацевтическая композиция по п.13, характеризующееся тем, что нерецепторная протеинкиназа выбрана из Syk киназы или киназы Src-семейства.
15. Фармацевтическая композиция по п.14, характеризующаяся тем, что киназа Src- семейства представляет собой c-Src, Yes, Fyn, Fgr, Frk, Lyn, Blk, Hck или Lck киназу.
16. Фармацевтическая композиция по п.1 1 , характеризующаяся тем, что расстройство, связанное с аберрантной активностью киназы, представляет собой заболевание, ассоциированное с нарушением метаболизма костной и/или хрящевой тканей.
17. Фармацевтическая композиция по п.16, характеризующаяся тем, что заболевание, ассоциированное с нарушением метаболизма костной и/или хрящевой тканей, представляет собой заболевание опорно-двигательного аппарата.
18. Фармацевтическая композиция по п.17, характеризующаяся тем, что заболевание опорно-двигательного аппарата представляет собой остеоартроз, остеопороз или остеохондроз.
PCT/RU2017/050037 2016-05-13 2017-05-10 Новая кристаллическая солевая форма 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1,3,5-триазин-2-ил)амино)-2h-пиридо[3,2-b][1,4]оксазин-3(4h)-она для медицинского применения WO2017196210A1 (ru)

Priority Applications (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL17796477T PL3456720T3 (pl) 2016-05-13 2017-05-10 Nowa postać soli krystalicznej 2,2-dimetylo-6-((4-((3,4,5-trimetoksyfenylo)amino)-1,3,5-triazyn-2-ilo)amino)-2h-pirydo[3,2-b][1,4]oksazyn-3(4h)-onu do zastosowań medycznych
ES17796477T ES2892274T3 (es) 2016-05-13 2017-05-10 Novedosa forma de sal cristalina de 2,2-dimetil-6-((4-((3,4,5-trimetoxifenil)amino)-1,3,5-triazin-2-il)amino)-2H-pirido[3,2-b][1,4]oxazin-3(4H)-ona para aplicación médica
AU2017264302A AU2017264302B2 (en) 2016-05-13 2017-05-10 Novel crystalline salt form of 2,2-dimethyl-6-((4-((3,4,5-trimethoxyphenyl)amino)-1,3,5-triazin-2-yl)amino)-2H-pyrido[3,2-B][1,4]oxazin-3(4H)-one for medical application
JP2019512598A JP6980299B2 (ja) 2016-05-13 2017-05-10 医療用途のための２，２−ジメチル−６−（（４−（（３，４，５−トリメトキシフェニル）アミノ）−１，３，５−トリアジン−２−イル）アミノ）−２ｈピリド［３，２−ｂ］［１，４］オキサジン−３（４ｈ）−オンの新規結晶塩形
EA201892589A EA037460B1 (ru) 2016-05-13 2017-05-10 НОВАЯ КРИСТАЛЛИЧЕСКАЯ СОЛЕВАЯ ФОРМА 2,2-ДИМЕТИЛ-6-((4-((3,4,5-ТРИМЕТОКСИФЕНИЛ)АМИНО)-1,3,5-ТРИАЗИН-2-ИЛ)АМИНО)-2H-ПИРИДО[3,2-b][1,4]ОКСАЗИН-3(4H)-ОНА ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ
DK17796477.2T DK3456720T3 (da) 2016-05-13 2017-05-10 Hidtil ukendt krystallinsk saltform af 2,2-dimethyl-6-((4-((3,4,5-trimethoxyphenyl)amino)-1,3,5-triazin-2-yl)amino)-2h-pyrido[3,2-b][1,4]oxazin-3(4h)-on til medicinsk anvendelse
EP17796477.2A EP3456720B1 (en) 2016-05-13 2017-05-10 Novel crystalline salt form of 2,2-dimethyl-6-((4-((3,4,5-trimethoxyphenyl)amino)-1,3,5-triazin-2-yl)amino)-2h-pyrido[3,2-b][1,4]oxazin-3(4h)-one for medical application
CN201780043307.1A CN109526221B (zh) 2016-05-13 2017-05-10 一种激酶抑制剂的晶体盐形式
US16/301,148 US10745414B2 (en) 2016-05-13 2017-05-10 Crystal salt form of 2,2-dimethyl-6-((4-((3,4,5-trimethoxyphenyl)amino)-1,3,5-triazine-2-yl)amino)-2H-pyrido[3,2-b][1,4]oxazine-3(4H)-one for human use
CA3023231A CA3023231A1 (en) 2016-05-13 2017-05-10 A new crystal salt form of 2,2-dimethyl-6-((4-((3,4,5-trimethoxyphenyl)amino)-1,3,5-triazin-2-yl)amino)-2h-pyrido[3,2-b][1,4]oxazine-3(4h)-one for human use
KR1020187036184A KR102522102B1 (ko) 2016-05-13 2017-05-10 의학적 적용을 위한 2,2-디메틸-6-((4-((3,4,5-트리메톡시페닐)아미노)-1,3,5-트리아진-2-일)아미노)-2h-피리도[3,2-b][1,4]옥사진-3(4h)-온의 신규한 결정질 염 형태

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2015147258 2016-05-13
RU2015147258A RU2621187C1 (ru) 2016-05-13 2016-05-13 Новая кристаллическая солевая форма 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1,3,5-триазин-2-ил)амино)-2н-пиридо[3,2-в][1,4]оксазин-3(4н)-она для медицинского применения

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017196210A1 true WO2017196210A1 (ru) 2017-11-16

Family

ID=59032468

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2017/050037 WO2017196210A1 (ru) 2016-05-13 2017-05-10 Новая кристаллическая солевая форма 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1,3,5-триазин-2-ил)амино)-2h-пиридо[3,2-b][1,4]оксазин-3(4h)-она для медицинского применения

Country Status (13)

Country Link
US (1) US10745414B2 (ru)
EP (1) EP3456720B1 (ru)
JP (1) JP6980299B2 (ru)
KR (1) KR102522102B1 (ru)
CN (1) CN109526221B (ru)
AU (1) AU2017264302B2 (ru)
CA (1) CA3023231A1 (ru)
DK (1) DK3456720T3 (ru)
EA (1) EA037460B1 (ru)
ES (1) ES2892274T3 (ru)
PL (1) PL3456720T3 (ru)
RU (1) RU2621187C1 (ru)
WO (1) WO2017196210A1 (ru)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007124221A1 (en) * 2006-04-18 2007-11-01 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cell proliferative disorders by using pyrimidinediamine compounds
RU2509770C2 (ru) * 2012-06-22 2014-03-20 Общество с ограниченной ответственностью "Молекулярные Технологии" Новые химические соединения производные 2,4-диамино-1,3,5-триазина для профилактики и лечения заболеваний человека и животных

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001051919A2 (en) * 2000-01-07 2001-07-19 Transform Pharmaceuticals, Inc. High-throughput formation, identification, and analysis of diverse solid-forms
CN102358738A (zh) * 2003-07-30 2012-02-22 里格尔药品股份有限公司 2,4-嘧啶二胺化合物及其预防和治疗自体免疫疾病的用途
WO2015047124A1 (ru) * 2013-09-26 2015-04-02 Общество с ограниченной ответственностью "Молекулярные Технологии" Новые химические соединения производные 2,4-диамино-1,3,5-триазина для профилактики и лечения заболеваний человека и животных

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007124221A1 (en) * 2006-04-18 2007-11-01 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cell proliferative disorders by using pyrimidinediamine compounds
RU2509770C2 (ru) * 2012-06-22 2014-03-20 Общество с ограниченной ответственностью "Молекулярные Технологии" Новые химические соединения производные 2,4-диамино-1,3,5-триазина для профилактики и лечения заболеваний человека и животных

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RAKITINA TATIANA V. ET AL.: "Efficacy of novel Syk-kinase inhibitors MT-SYK-03 and MT-SYK-322 in cellular models of autoimmunity and cancer", MENDELEEV COMMUNICATIONS, vol. 22, no. 6, 2012, pages 287 - 289, XP055439315 *
See also references of EP3456720A4 *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017264302A1 (en) 2019-01-03
EP3456720A1 (en) 2019-03-20
JP6980299B2 (ja) 2021-12-15
CA3023231A1 (en) 2017-11-16
EA201892589A1 (ru) 2019-04-30
PL3456720T3 (pl) 2021-12-06
JP2019515053A (ja) 2019-06-06
ES2892274T3 (es) 2022-02-03
KR102522102B1 (ko) 2023-04-13
AU2017264302B2 (en) 2021-05-27
US20190292198A1 (en) 2019-09-26
EA037460B1 (ru) 2021-03-30
DK3456720T3 (da) 2021-09-27
CN109526221A (zh) 2019-03-26
EP3456720B1 (en) 2021-06-30
CN109526221B (zh) 2022-06-21
KR20190005996A (ko) 2019-01-16
US10745414B2 (en) 2020-08-18
EP3456720A4 (en) 2019-10-30
RU2621187C1 (ru) 2017-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11667627B2 (en) Salt and crystal forms of PLK-4 inhibitor
AU2016377782B2 (en) CFTR regulators and methods of use thereof
AU2012324405B2 (en) New salt and medical use
AU2016379444B2 (en) CFTR regulators and methods of use thereof
WO1990015600A2 (en) Treatment of chronic inflammatory joint disease with arylsulfonamides
RU2621187C1 (ru) Новая кристаллическая солевая форма 2,2-диметил-6-((4-((3,4,5-триметоксифенил)амино)-1,3,5-триазин-2-ил)амино)-2н-пиридо[3,2-в][1,4]оксазин-3(4н)-она для медицинского применения
KR20120099215A (ko) 다운 증후군을 치료하기 위한 방법 및 약학적 조성물
JP2020525415A (ja) 医薬組成物及びその製造方法
US11945814B2 (en) Salt form
US7338970B2 (en) Pharmaceutical composition based on a polymorphic form I of idazoxan
EP4324827A1 (en) Pharmaceutically acceptable salt of sphingosine-1-phosphate receptor agonist, and crystalline form thereof
EP3170819A1 (en) Novel crystalline form of 5-chloro-n-({(5s)-2-oxo-3-[4-(5,6-dihydro-4h-[1,2,4]triazin-1-yl)phenyl]-1,3-oxazolidin-5-yl}methyl)thiophene-2-carboxamide methanesulfonate and pharmaceutical composition containing same
WO2023087034A1 (en) Salts and solid forms of 4-bromo-2,5-dimethoxyphenethylamine
BR112019019649A2 (pt) forma hidratada e cristalina de dimaleato de afatinibe, composição farmacêutica, e, métodos para tratamento de doença em um paciente e para produção da forma z.

Legal Events

Date Code Title Description
ENP Entry into the national phase

Ref document number: 3023231

Country of ref document: CA

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2019512598

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 17796477

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20187036184

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017264302

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20170510

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017796477

Country of ref document: EP

Effective date: 20181213