WO2016146605A1 - Substituierte phenylalanin-derivate - Google Patents

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WO2016146605A1
WO2016146605A1 PCT/EP2016/055494 EP2016055494W WO2016146605A1 WO 2016146605 A1 WO2016146605 A1 WO 2016146605A1 EP 2016055494 W EP2016055494 W EP 2016055494W WO 2016146605 A1 WO2016146605 A1 WO 2016146605A1
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WO
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amino
mmol
salts
methyl
solvates
Prior art date
Application number
PCT/EP2016/055494
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Ulrike RÖHN
Manuel ELLERMANN
Susanne Röhrig
Robert Alan WEBSTER
Martina Victoria Schmidt
Adrian Tersteegen
Kristin BEYER
Martina SCHÄFER
Anja BUCHMÜLLER
Christoph Gerdes
Michael Sperzel
Jan Stampfuss
Alexander Hillisch
Jens Ackerstaff
Carsten TERJUNG
Astrid WENDT
Original Assignee
Bayer Pharma Aktiengesellschaft
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Publication date
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Definitions

  • the invention relates to substituted phenylalanine derivatives and processes for their preparation and their use for the preparation of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular blood loss in hyperfibrinolytic conditions, organ transplants or cardiac surgery, especially with cardiopulmonary bypass or as part of a fibrin sealant ,
  • Blood clotting is a protective mechanism of the organism that can rapidly and reliably "seal" defects in the blood vessel wall, thus preventing or minimizing blood loss, and hemostasis following vascular injury is essentially through the coagulation system, where an enzymatic cascade becomes more complex It involves numerous clotting factors, each of which, once activated, converts the next inactive precursor to its active form, transforming the soluble fibrinogen into the insoluble fibrin at the end of the cascade Traditionally, one differentiates between the intrinsic and the extrinsic system in blood coagulation, which culminate in a final common pathway, where factors Xa and IIa (thrombin) play key roles: Factor Xa bundles the signals of the two Ge since it is formed by Factor VIIa / Tissue Factor (extrinsic pathway) as well as the Tenase complex (intrinsic pathway) by reaction of Factor X. The activated serine protease Xa cleaves prothrombin to thrombin, which
  • a key component of the transition from initiation to amplification and propagation of coagulation is factor XIa.
  • Thrombin activated in positive feedback loops in addition to Factor V and Factor VIII and Factor XI to Factor XIa, which converts Factor IX to Factor IXa and on the thus generated Factor IXa / Factor VIIIa complex quickly larger amounts of Factor Xa produced. This triggers the production of large amounts of thrombin, which leads to strong thrombus growth and stabilizes the thrombus.
  • fibrinolysis Upon activation of plasminogen by tissue plasminogen activator (tPA), the active serine protease, plasmin, is formed which cleaves the polymerized fibrin and thus degrades the thrombus. This process is called fibrinolysis - with plasmin as the key enzyme.
  • tissue plasminogen activator tPA
  • PK plasma kallikrein
  • PK is a multifunctional trypsin-like serine protease for which several physiological substrates are known.
  • the PK-mediated release of bradykinin from high-molecular-weight kininogen leads to the release of t-PA, NO and prostacyclin from endothelial cells, thereby affecting fibrinolysis, blood pressure and inflammation.
  • antifibrinolytics In hyperfibrinolytic conditions, there is no sufficient closure of the wound, which results in severe, sometimes life-threatening bleeding. For the prevention and treatment of such bleeding, antifibrinolytics are available in the clinic. Antifibrinolytics inhibit specific steps of fibrinolysis. Indirect antifibrinolytics such as tranexamic acid inhibit the activation of plasminogen; Direct acting antifibrinolytic drugs block plasmin itself. Corresponding effects have been demonstrated with the plasminogen inhibitor tranexamic acid in various clinical studies.
  • W089 / 11852 describes inter alia substituted phenylalanine derivatives for the treatment of pancreatitis
  • WO 2007/070816 describes substituted thiophene derivatives as factor XIa inhibitors
  • JP 2014227401 describes substituted phenylalanine derivatives as factor XIa inhibitors.
  • the invention relates to compounds of the formula
  • R 12 is [(2iS) -1-methoxypropan-2-yl] amino, [(2iS) -1-hydroxypropan-2-yl] amino or
  • Compounds of the invention are the compounds of the formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts, as well as the compounds of formula (I), hereinafter referred to as embodiment (e) and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as it is in the compounds of formula (I), mentioned below are not already salts, solvates and solvates of the salts.
  • the compounds of the invention may exist in different stereoisomeric forms depending on their structure, i. in the form of configurational isomers or, if appropriate, also as conformational isomers (enantiomers and / or diastereomers, including those of atropisomers).
  • the present invention therefore includes the enantiomers and diastereomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform components can be isolated in a known manner; Preferably, chromatographic methods are used for this, in particular HPLC chromatography on achiral or chiral phase.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • the present invention also includes all suitable isotopic variants of the compounds of the invention.
  • An isotopic variant of a compound according to the invention is understood to mean a compound in which at least one atom within the compound according to the invention is exchanged for another atom of the same atomic number but with a different atomic mass than the atomic mass that usually or predominantly occurs in nature.
  • isotopes which can be incorporated into a compound of the invention are those of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, sulfur, fluorine, chlorine, bromine and iodine, such as 2 H (deuterium), 3 H (tritium), 13 C, 14 C, 15 N, O, 18 O, 32 P, 33 P, 33 S, 34 S, 35 S, 36 S, 18 F, 36 C, 82 Br, 123 I, 124 I, 129 I, and 131 I.
  • isotopic variants of a compound of the invention such as in particular those in which one or more radioactive isotopes are incorporated, may be useful, for example for the study of the mechanism of action or distribution of the drug in the body; Because of the comparatively easy production and detectability, compounds labeled with 3 H or 14 C isotopes are particularly suitable for this purpose. Moreover, the incorporation of isotopes such as deuterium may result in certain therapeutic benefits as a result of greater metabolic stability of the compound, such as prolonging the body's half-life or reducing the required effective dose; Such modifications of the compounds of the invention may therefore optionally also constitute a preferred embodiment of the present invention.
  • Isotopic variants of the compounds according to the invention can be prepared by the processes known to the person skilled in the art, for example by the methods described below and by the methods described below. Examples reproduced by appropriate isotopic modifications of the respective reagents and / or starting compounds are used.
  • Salts used in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention. However, also included are salts which are not suitable for pharmaceutical applications themselves but can be used, for example, for the isolation or purification of the compounds according to the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds of the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, e.g. Salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention also include salts of customary bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines having from 1 to 16 carbon atoms.
  • alkali metal salts for example sodium and potassium salts
  • alkaline earth salts for example calcium and magnesium salts
  • ammonium salts derived from ammonia or organic amines having from 1 to 16 carbon atoms such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines having from 1 to 16 carbon atoms.
  • Atoms such as, by way of example and by way of preference, ethylamine, diethylamine, triethylamine, ethyldiisopropylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, procaine, dibenzylamine, V-methylmorpholine, arginine, lysine, ethylenediamine, V-methylpiperidine and choline.
  • Solvates in the context of the invention are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water.
  • the present invention also includes prodrugs of the compounds of the invention.
  • prodrugs includes compounds which may themselves be biologically active or inactive, but during their residence time in the body are converted to compounds of the invention (for example metabolically or hydrolytically).
  • the enantiomers can either be separated directly after the coupling of the L-phenylalanine intermediates with the amine of the formula (VIII) or at a later intermediate of the synthesis or else the compounds according to the invention per se.
  • the separation of the enantiomers directly after the coupling of the L-phenylalanine intermediates with the amine of the formula (VIII) is preferred.
  • treatment includes inhibiting, delaying, arresting, alleviating, attenuating, restraining, reducing, suppressing, restraining or curing a disease, a disease, a disease, an injury or a medical condition , the unfolding, the course or progression of such conditions and / or the symptoms of such conditions.
  • therapy is understood to be synonymous with the term “treatment”.
  • prevention means the avoidance or reduction of the risk, a disease, a disease, a disease, an injury or a health disorder, a development or a Progression of such conditions and / or to get, experience, suffer or have the symptoms of such conditions.
  • the treatment or prevention of a disease, a disease, a disease, an injury or a health disorder can be partial or complete.
  • the end point of the line next to each of which represents a # does not represent a carbon atom or a CE group but is part of the bond to the atom to which R 1 is bonded ,
  • # is the point of attachment to the phenyl ring, and their salts, their solvates and the solvates of their salts.
  • R 12 is [(2iS) -1-methoxypropan-2-yl] amino, [(2iS) -1-hydroxypropan-2-yl] amino or
  • the invention further provides a process for the preparation of the compounds of the formula (I), or their salts, their solvates or the solvates of their salts, wherein
  • R 1 has the meaning given above, are reacted with an acid, or [B] the compounds of the formula
  • R 1 has the meaning given above, be reacted with an acid.
  • the reaction according to process [A] is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to 60 ° C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, or ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, dioxane is preferred.
  • Acids are for example trifluoroacetic acid or hydrogen chloride in dioxane, preferred is hydrogen chloride in dioxane.
  • reaction according to method [B] is carried out as described for method [A].
  • the compounds of formula (III) are known or can be prepared by reacting compounds of formula (II) with a base.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to the reflux of the solvent at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons, such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, alcohols, such as methanol or ethanol, ethers, such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, or other solvents, such as dimethylformamide. Dimethylacetamide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of solvents, or mixtures of solvent with water, preferred is a mixture of tetrahydrofuran and water.
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium, lithium or potassium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or alcoholates such as potassium or sodium tert-butoxide, preferably sodium hydroxide or lithium hydroxide.
  • alkali metal hydroxides such as sodium, lithium or potassium hydroxide
  • alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate
  • alcoholates such as potassium or sodium tert-butoxide, preferably sodium hydroxide or lithium hydroxide.
  • reaction generally takes place in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from 0 ° C. to reflux of the solvents under normal pressure.
  • Suitable dehydrating reagents for this purpose are, for example, carbodiimides, such as e.g. JV, JV-diethyl, V, V'-dipropyl, V, V'-diisopropyl, V, V'-dicyclohexylcarbodiimide, V- (3-dimethylamino-isopropyl) -V'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) ( optionally in the presence of pentafluoroquinol (PFP)), V-cyclohexylcarbodiimide-V'-propyloxymethyl-polystyrene (PS-carbodiimide) or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1,2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-1, 2-oxazolium-3-sulphate or 2-tert.-butyl-5-methylisoxazolium perchlorate
  • Bases are, for example, alkali carbonates, e.g. Sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases such as trialkylamines, e.g. Triethylamine, V-methylmorpholine, A-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, preference is Diisopro- pylethylamin.
  • alkali carbonates e.g. Sodium or potassium carbonate
  • hydrogen carbonate e.g. Sodium or potassium carbonate
  • organic bases such as trialkylamines, e.g. Triethylamine, V-methylmorpholine, A-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, preference is Diisopro- pylethylamin.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane or trichloromethane, hydrocarbons such as benzene, or other solvents such as nitromethane, tetrahydrofuran, dioxane, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of the solvents, preferably tetrahydrofuran or dimethylformamide or a mixture of dimethylformamide and pyridine.
  • the compound of formula (V) is known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
  • the compounds of the formula (IV) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • R 1 has the meaning given above, be reacted with an acid.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to 60 ° C at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane, or ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, dioxane is preferred.
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, trichloromethane, carbon tetrachloride or 1,2-dichloroethane
  • ethers such as tetrahydrofuran or dioxane, dioxane is preferred.
  • Acids are for example trifluoroacetic acid or hydrogen chloride in dioxane, preferred is hydrogen chloride in dioxane.
  • the compounds of the formula (VI) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • reaction is carried out as described for the reaction of compounds of the formula (IV) with the compound of the formula (V).
  • the compound of formula (VIII) is known or can be synthesized by known methods from the corresponding starting compounds.
  • the compounds of formula (VII) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula
  • X is bromine or iodine, with compounds of the formula
  • Q 1 is -B (OH) 2 , a boronic acid ester, preferably boronic acid pinacol ester, or -BF 3 ⁇ K + , can be reacted under Suzuki coupling conditions.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, in the presence of a catalyst, optionally in the presence of an additional reagent, optionally in a microwave, preferably in a temperature range from room temperature to 150 ° C at atmospheric pressure to 3 bar.
  • catalysts are conventional palladium catalysts for Suzuki reaction conditions, preferably catalysts such as e.g. Dichlorobis (triphenylphosphine) palladium, tetrakistriphenylphosphinepalladium (O), palladium (II) acetate / triscyclohexylphosphine, tris (dibenzylideneacetone) dipalladium, bis (diphenylphosphineferrocenyl) palladium (II) chloride, 1,3-bis (2,6-bis) diisopropylphenyl) imidazol-2-ylidene (1,4-naphthoquinone) palladium dimer, allyl (chloro) - (1,3-dimesityl-l, 3-dihydro-2H-imidazol-2-ylidene) palladium, palladium (II) acetate / Dicyclohexyl- (2 ', 4
  • Additional reagents are for example potassium acetate, cesium, potassium or sodium carbonate, potassium tert-butoxide, cesium fluoride or potassium phosphate, which may be present in aqueous solution, preference is given to additional reagents such as potassium acetate or a mixture of potassium acetate and sodium carbonate.
  • Inert solvents are, for example, ethers, such as dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, hydrocarbons, such as benzene, xylene or toluene, or carboxamides, such as dimethylformamide or dimethylacetamide, alkylsulfoxides, such as dimethylsulfoxide, or N-methylpyrrolidone or acetonitrile, or mixtures of the solvents with alcohols, such as methanol or ethanol and / or water, preferred is toluene, dimethylformamide or dimethyl sulfoxide.
  • ethers such as dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane
  • hydrocarbons such as benzene, xylene or toluene
  • carboxamides such as dimethylformamide or dimethylacetamide
  • alkylsulfoxides such as dimethylsulfoxide, or N-
  • R 12 has the meaning given above
  • R 12 has the meaning given above
  • reaction generally takes place in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, preferably in a temperature range from 0 ° C. to reflux of the solvents under normal pressure.
  • Suitable dehydrating reagents for this purpose are, for example, carbodiimides, such as e.g. JV, JV-diethyl, V, V'-dipropyl, V, V'-diisopropyl, V, V'-dicyclohexylcarbodiimide, V- (3-dimethylamino-isopropyl) -V'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) ( optionally in the presence of pentafluoroquinol (PFP)), V-cyclohexylcarbodiimide-V'-propyloxymethyl-polystyrene (PS-carbodiimide) or carbonyl compounds such as carbonyldiimidazole, or 1,2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5-phenyl-1, 2-oxazolium-3-sulphate or 2-tert.-butyl-5-methylisoxazolium perchlorate
  • Bases are, for example, alkali carbonates, e.g. Sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases such as trialkylamines, e.g. Triethylamine, V-methylmorpholine, A-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, preference is Diisopro- pylethylamin.
  • alkali carbonates e.g. Sodium or potassium carbonate
  • hydrogen carbonate e.g. Sodium or potassium carbonate
  • organic bases such as trialkylamines, e.g. Triethylamine, V-methylmorpholine, A-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, preference is Diisopro- pylethylamin.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane or trichloromethane, hydrocarbons such as benzene, or other solvents such as nitromethane, tetrahydrofuran, dioxane, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of the solvents, preferably tetrahydrofuran or dimethylformamide or a mixture of dimethylformamide and pyridine.
  • halogenated hydrocarbons such as dichloromethane or trichloromethane
  • hydrocarbons such as benzene
  • other solvents such as nitromethane, tetrahydrofuran, dioxane, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, acetonitrile or pyridine, or mixtures of the solvents, preferably tetrahydrofuran or dimethylformamide or a mixture of dimethylformamide and pyridine.
  • the compounds of the formula (IIIa) are a subset of the compounds of the formula (III).
  • the compound of the formula (XI) is known, can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds or can be prepared analogously to the processes described in the Examples section.
  • the compounds of the formula (XII) are known or can be synthesized by known processes from the corresponding starting compounds.
  • the compounds of the invention show an unpredictable, valuable pharmacological activity spectrum and a good pharmacokinetic behavior. These are compounds which influence the proteolytic activity of the serine proteases plasmin, plasma kallikrein and factor XIa.
  • the compounds of the invention inhibit the enzymatic cleavage of substrates which play an essential role in the activation of the blood coagulation cascade and in fibrinolysis.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, especially blood loss in hyperfibrinolytic conditions, organ transplants or cardiac surgery, especially with cardiopulmonary bypass or as part of a fibrin sealant.
  • Prophylaxis and / or treatment can reduce or eliminate severe perioperative blood loss. Strong bleeding occurs in severe surgery, such as. Coronary artery bypass graft surgery, organ transplantation or hysterectomy, as well as trauma, haemorrhagic shock, or postpartum hemorrhage.
  • extracorporeal circulation systems or filter systems such as, for example, heart lung machine, hemofiltration, hemodialysis, extracorporeal membrane oxygenation or ventricular support system, such as artificial heart, may occur.
  • Possible thrombotic complications induced by the activation of the intrinsic coagulation system in the extracorporeal circulation systems should be reduced with the compounds according to the invention.
  • the compounds of the invention can also be used as part of a fibrin sealant. Fibrin sealants are used in the bonding of wound edges instead of a traditional surgical suture and the closure of injured tissue, hemostasis, and to support and accelerate wound healing. Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
  • Another object of the present invention are the compounds of the invention for use in a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
  • Another object of the present invention are pharmaceutical compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients.
  • compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients are pharmaceutical compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients, in particular for the treatment and / or prophylaxis of the aforementioned diseases.
  • suitable combination active ingredients may be mentioned by way of example and preferably:
  • Lipid-lowering drugs in particular HMG-CoA (3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A) reductase inhibitors such as lovastatin (Mevacor), simvastatin (Zocor), pravastatin (pravachol), fluvastatin (Lescol) and atorvastatin (Lipitor) ;
  • Coronary / vasodilators in particular ACE (angiotensin converting enzyme) inhibitors such as captopril, lisinopril, enalapril, ramipril, cilazapril, benazepril, fosinopril, quinapril and perindopril, or AII (angiotensin II) receptor antagonists such as for example, embusartan, losartan, valsartan, irbesartan, candesartan, eprosartan and Temisarta, or ⁇ -adrenoceptor antagonists such as carvedilol,
  • ACE angiotensin converting enzyme
  • Alprenolol bisoprolol, acebutolol, atenolol, betaxolol, carteolol, metoprolol, nadolol, penbutolol, pindolol, propranolol and timolol, or alpha- 1 - adrenoceptor antagonists such as prazosin, bunazosin, doxazosin and terazosin, or diuretics such as hydrochlorothiazide, furosemide, Bumetanide, piretanide, torasemide, amiloride and dihydralazine, or calcium channel blockers such as verapamil and diltiazem, or dihydropyridine derivatives such as nifedipine (adalate) and nitrendipine (Bayotensin), or nitro preparations such as isosorbide-5-mononitrate, isosorbide dinit
  • Anticoagulant substances such as heparin (UFH), low molecular weight heparins (LMWH) such as tinzaparin, certoparin, parnaparin, nadroparin, ardeparin, enoxaparin, reviparin, dalteparin, danaparoid, semuloparin (AVE 5026), adomiparin (Ml 18) and EP-42675 / ORG42675; ⁇ As well as antiarrhythmics;
  • heparin UHF
  • LMWH low molecular weight heparins
  • Vasopressors such as norepinephrine, dopamine and vasopressin;
  • Inotropic therapy such as dobutamine
  • ⁇ Corticosteroids such as hydrocortisone and fludrocortisone
  • Recombinant human activated protein C such as Xigris
  • blood products such as red blood cell concentrates, platelet concentrates,
  • Combinations in the sense of the invention not only pharmaceutical forms containing all components (so-called. Fixed combinations) and combination packs containing the components separated from each other understood, but also simultaneously or temporally staggered applied components, if they are for prophylaxis and / or It is likewise possible to combine two or more active substances with one another, ie in each case in two or more combinations
  • the compounds according to the invention can have a systemic and / or local action be applied in a suitable manner, such as oral, parenteral, pulmonary, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otic or as an implant or stent.
  • the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • Parenteral administration can be accomplished by bypassing a resorption step (e.g., intravenously, intraarterially, intracardially, intraspinal, or intralumbar) or by resorting to absorption (e.g., intramuscularly, subcutaneously, intracutaneously, percutaneously, or intraperitoneally).
  • a resorption step e.g., intravenously, intraarterially, intracardially, intraspinal, or intralumbar
  • absorption e.g., intramuscularly, subcutaneously, intracutaneously, percutaneously, or intraperitoneally.
  • parenteral administration are suitable as application forms u.a. Injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
  • parenteral administration Preference is given to parenteral administration.
  • routes of administration are, for example, inhalant medicines (including powder inhalers, nebulizers), nasal drops, solutions, sprays; lingual, sublingual or buccal tablets, films / wafers or capsules, suppositories, ear or ophthalmic preparations, vaginal capsules, aqueous suspensions (lotions, shake mixtures), lipophilic suspensions, ointments, creams, transdermal therapeutic systems (such as patches), milk, Pastes, foams, scattering powders, implants or stents.
  • the compounds according to the invention can be converted into the stated administration forms. This can be done in a conventional manner by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients.
  • excipients for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecylsulfate, polyoxysorbitanoleate
  • binders for example polyvinylpyrrolidone
  • synthetic and natural polymers for example albumin
  • Stabilizers eg, antioxidants such as ascorbic acid
  • dyes eg, inorganic pigments such as iron oxides
  • flavor and / or odoriferous include, among others.
  • Excipients for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecyl
  • compositions containing at least one compound of the invention preferably together with one or more inert non-toxic, pharmaceutically suitable excipient, as well as their use for the purposes mentioned above.
  • Method 1 Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Column: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 ⁇ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.25 ml of 99% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.25 ml of 99% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A -> ⁇ 1.2 min 5% A -> 2.0 min 5% A Furnace: 50 ° C; Flow: 0.40 ml / min; UV detection: 208-400 nm.
  • Microwave The microwave reactor used was a Biotage TM initiator.
  • the compounds of the invention may be in salt form, for example as trifluoroacetate, formate or ammonium salt, if the Compounds according to the invention contain a sufficiently basic or acidic functionality.
  • a salt can be converted into the corresponding free base or acid by various methods known to those skilled in the art.
  • Weaker salts can be converted to the corresponding chlorides by addition of some hydrochloride.
  • 6-Bromo-2-isopropyl-5-methyl-l_f / -benzimidazole 500 mg, 1.98 mmol
  • 4,4,4 ', 4', 5,5,5 ', 5'-octamethyl-2,2' -bi-1, 3,2-dioxaborolane 602 mg, 2.37 mmol
  • potassium acetate 582 mg, 5.93 mmol
  • DMSO 8 ml
  • reaction mixture was stirred for 2 h at 120 ° C (oil bath), cooled to RT and 4-bromo-V- (but-tert-butoxycarbonyl) -L-phenylalanine (567 mg, 1.65 mmol) and degassed again with argon. Then, 2N aqueous sodium carbonate solution (2.47 ml, 4.94 mmol) and [l, l-bis (diphenylphosphino) ferrocene] dichloalladium dichloromethane complex (134.4 mg, 0.165 mmol) were added and the reaction became 3 h 110 ° C stirred in the microwave.
  • 6-Bromo-2-isopropyl-5-methyl-1 J f / -imidazo [4,5-b] pyridine 500 mg, 1.97 mmol
  • 4,4,4 ', 4', 5,5,5 '5'-Octamethyl-2,2'-bi-l, 3,2-dioxaborolane 600 mg, 2.36 mmol
  • potassium acetate 579 mg, 5.90 mmol
  • DMSO 8 ml
  • argon degassed and then [1,1 -Bis- (diphenylphosphino) ferrocene] -dichlo alladium-dichloromethane complex (80.3 mg, 0.098 mmol) was added.
  • reaction mixture was stirred for 2 h at 120 ° C (oil bath), cooled to RT and 4-bromo / V- (fer? -Butoxycarbonyl) -L-phenylalanine (564 mg, 1.64 mmol) and degassed again with argon. Then, 2N aqueous sodium carbonate solution (2.46 ml, 4.92 mmol) and [l, l-bis (diphenylphosphino) ferrocene] dichloalladium dichloromethane complex (134 mg, 0.164 mmol) were added and the reaction became 2 h 120 ° C stirred in the microwave.
  • 6-bromo-2-isopropyl-5-methyl-1,2-dihydro-3H-indazol-3-one 500 mg, 1.86 mmol
  • 4,4,4 ', 4', 5,5,5 ', 5'-Octamethyl-2,2'-bi-l, 3,2-dioxaborolane 566 mg, 2.23 mmol
  • potassium acetate 547 mg, 5.57 mmol
  • DMSO 8 ml
  • [1-, 1-bis (diphenylphosphino) ferrocene] -dichloroalladium dichloromethane complex 76 mg, 0.093 mmol.
  • reaction mixture was stirred for 2 h at 120 ° C (oil bath), cooled to RT and 4-bromo-V- (fer? -Butoxycarbonyl) -L-phenylalanine (532 mg, 1.55 mmol) and degassed again with argon. Then, 2N aqueous sodium carbonate solution (2.32 ml, 4.64 mmol) and [l, l-bis (diphenylphosphino) ferrocene] dichloalladium dichloromethane complex (126 mg, 0.16 mmol) were added and the reaction became 2 h 120 ° C stirred in the microwave.
  • Example 14A Methyl 3- ⁇ 5- [4- ( ⁇ N - [(trans-4- ⁇ [(fer-butoxycarbonyl) amino] methyl ⁇ cyclohexyl) carbonyl] -4- (2-isopropyl-5-methyl) 3-oxo-2,3-dihydro-l-f / -indazol-6-yl) -L-phenylalanyl ⁇ -amino) -phenyl] -4 - f / - 1, 2,4-triazol-3-yl ⁇ -2,2,3 , 3-tetrafluoropropanoate
  • N, N-diisopropylethylamine (6.3 ml, 36.3 mmol) and a 2,4,6-tripropyl-1,3, 5,2,4,6-trioxatriphosphinane-2,4,6-trioxide solution (50% in DMF, 21.2 ml, 36.3 mmol).
  • the reaction mixture was stirred for 3 h at reflux (oil bath temperature 85 ° C), then cooled to RT and diluted with ethyl acetate.
  • the organic phase was washed twice with water, once with dilute sodium bicarbonate solution and once with saturated aqueous sodium chloride solution, dried over sodium sulfate, filtered and the solvent removed on a rotary evaporator. 7.5 g (87% of theory) of the title compound were obtained.
  • Example 18A Methyl 4 '- [(2iS) -2- ⁇ [( ⁇ '-5-4 - ⁇ [(fer-butoxycarbonyl) amino] methyl ⁇ cyclohexyl) carbonyl] amino ⁇ - 3-oxo-3 ( ⁇ 4- [3- (1,1,2,2-tetrafluoro-3-methoxy-3-oxopropyl) -H-1, 2,4-triazol-5-yl] -phenyl ⁇ -amino) -propyl] -2- methylbiphenyl-4-carboxylate
  • reaction mixture was made slightly acidic with 1 N hydrochloric acid and extracted twice with ethyl acetate.
  • the organic phase was washed with saturated aqueous sodium chloride solution, dried over sodium sulfate, filtered and the solvent removed on a rotary evaporator to give 2.89 g (83% of theory) of the title compound.
  • reaction mixture was filtered through a Millipore filter and purified by preparative HPLC (mobile phase: acetonitrile / water with 0.1% trifluoroacetic acid (gradient)). 50 mg (34% of theory) of the title compound were obtained (with about 25% without fert-butoxycarbonyl protective group).
  • the solution was adjusted to pH 5-6 with 1N hydrochloric acid, then frozen and lyophilized.
  • the residue was dissolved in dioxane (1 ml), treated with a 4 M hydrochloride solution in 1,4-dioxane (0.094 ml, 0.38 mmol) and stirred at RT overnight.
  • the solvent was removed on a rotary evaporator and the residue was dissolved in DMSO / acetonitrile (about 3 ml).
  • the solution was filtered through a Millipore filter and purified by preparative HPLC (mobile phase: gradient of acetonitrile / water with 0.1% trifluoroacetic acid).
  • the resulting substance was treated with 4 M hydrochloride solution in 1,4-dioxane (about 0.2 ml) and the mixture was lyophilized. 8.9 mg (43% of theory) of the title compound were obtained.
  • the solution was adjusted to pH 5-6 with 1N hydrochloric acid, then frozen and lyophilized.
  • the residue was dissolved in dioxane (1 ml), admixed with a 4 M hydrochloride solution in 1,4-dioxane (0.08 ml, 0.32 mmol) and stirred at RT overnight.
  • the solvent was removed on a rotary evaporator and the residue was dissolved in DMSO / acetonitrile (about 3 ml).
  • the solution was filtered through a Millipore filter and purified by preparative HPLC (mobile phase: gradient of acetonitrile / water with 0.1% trifluoroacetic acid).
  • a biochemical test system is used in which the reaction of a peptide factor Xla substrate is used to determine the enzymatic activity of human factor XIa.
  • Factor XIa from the peptic factor XIa substrate cleaves the C-terminal aminomethylcoumarin (AMC) whose fluorescence is measured. The determinations are carried out in microtiter plates.
  • Test substances are dissolved in dimethyl sulfoxide and serially diluted in dimethylsulfoxide (3000 ⁇ to 0.0078 ⁇ , resulting final concentrations in the test: 50 ⁇ to 0.00013 ⁇ ). 1 ⁇ each of the diluted substance solutions are placed in the wells of white microtiter plates from Greiner (384 wells). Subsequently, 20 ⁇ assay buffer (50 mmol / l Tris buffer pH 7.4, 100 mmol / l sodium chloride, 5 mmol / l calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin) and 20 ⁇ factor XIa from Kordia (0.45 nM in assay buffer) are added successively.
  • assay buffer 50 mmol / l Tris buffer pH 7.4, 100 mmol / l sodium chloride, 5 mmol / l calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin
  • 20 ⁇ factor XIa from Kordia (0.45 nM in assay buffer
  • a biochemical test system is used in which the reaction of a peptidic plasmin substrate is used to determine the enzymatic activity of human plasmin. Plasmin separates from the peptic plasmin substrate the C-terminal aminomethylcoumarin (AMC), whose fluorescence is measured. The determinations are carried out in microtiter plates.
  • AMC C-terminal aminomethylcoumarin
  • Test substances are dissolved in dimethyl sulfoxide and serially diluted in dimethylsulfoxide (3000 ⁇ to 0.0078 ⁇ , resulting final concentrations in the test: 50 ⁇ to 0.00013 ⁇ ). 1 ⁇ each of the diluted substance solutions are placed in the wells of white microtiter plates from Greiner (384 wells).
  • assay buffer 50 mmol / l Tris buffer pH 7.4, 100 mmol / l sodium chloride, 5 mmol / l calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin
  • 20 ⁇ l plasmin from Kordia 20 ⁇ l plasmin from Kordia
  • the enzyme reaction is started by adding 20 ⁇ l of the plasmin substrate MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC (150 ⁇ l in assay buffer) dissolved in assay buffer, incubated for 30 min at room temperature (22 ° C.) and then a fluorescence measurement was carried out (excitation: 360 nM, emission: 460 nM).
  • Plasma kallikrein inhibition of the substances according to the invention is a biochemical test system, in which the reaction of a peptidic plasma kallikrein substrate is used to determine the enzymatic activity of human plasma kallikrein.
  • Plasma kallikrein separates from the peptic plasma kallikrein substrate the C-terminal aminomethyl coumarin (AMC) whose fluorescence is measured. The determinations are carried out in microtiter plates.
  • Test substances are dissolved in dimethyl sulfoxide and serially diluted in dimethylsulfoxide (3000 ⁇ to 0.0078 ⁇ , resulting final concentrations in the test: 50 ⁇ to 0.00013 ⁇ ). 1 ⁇ each of the diluted substance solutions are placed in the wells of white microtiter plates from Greiner (384 wells). Subsequently, 20 ⁇ of assay buffer (50 mmol / l Tris buffer pH 7.4, 100 mmol / l sodium chloride, 5 mmol / l calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin) and 20 ⁇ human plasma kallikrein from Kordia (0.6 nM in assay buffer) are successively added. added.
  • assay buffer 50 mmol / l Tris buffer pH 7.4, 100 mmol / l sodium chloride, 5 mmol / l calcium chloride, 0.1% bovine serum albumin
  • Kordia 20 ⁇ human plasma kallikrein from Kordia (0.6 n
  • test substances are tested for their inhibition of other human serine proteases, such as factor Xa and trypsin.
  • factor Xa 1.3 nmol / l of Kordia
  • trypsin 83 mU / ml of Sigma
  • these enzymes are dissolved (50 mmol / l Tris buffer [C, C, C-tris (hydroxymethyl) - aminomethane], 100 mmol / l sodium chloride, 0.1%> BSA [bovines Seramalbumin], 5 mmol / l calcium chloride, pH 7.4) and incubated for 15 min with test substance in various concentrations in dimethyl sulfoxide and with dimethyl sulfoxide without test substance.
  • the enzymatic reaction is started by adding the appropriate substrates (5 ⁇ 1 / 1 Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC from Bachem for factor Xa and trypsin). After an incubation period of 30 min at 22 ° C, the fluorescence is measured (excitation: 360 nm, emission: 460 nm). The measured emissions of the test mixtures with test substance are compared with the test batches without test substance (excluding dimethyl sulfoxide instead of test substance in dimethylsulfoxide) and IC50 values are calculated from the concentration-effect relationships. a.5) Determination of the anticoagulant effect
  • the anticoagulant activity of the test substances is determined in vitro in human and animal plasma (eg mouse, rat, rabbit, porcine and canine plasma).
  • human and animal plasma eg mouse, rat, rabbit, porcine and canine plasma.
  • blood is removed using a 0.11 molar sodium citrate solution as a template in a mixing ratio of sodium citrate / blood 1/9.
  • the blood is mixed well immediately after collection and centrifuged for 15 minutes at approximately 4000 g. The supernatant is pipetted off.
  • the prothrombin time (PT, synonyms: thromboplastin time, quick test) is determined in the presence of varying concentrations of test substance or the corresponding solvent using a commercially available test kit (Neoplastin® from Boehringer Mannheim or Hemoliance® RecombiPlastin from Instrumentation Laboratory). The test compounds are incubated for 3 minutes at 37 ° C with the plasma. Subsequently, coagulation is triggered by the addition of thromboplastin and the time of coagulation is determined. The concentration of test substance is determined which causes a doubling of the prothrombin time.
  • the activated partial thromboplastin time is determined in the presence of varying concentrations of test substance or the corresponding solvent using a commercially available test kit (CK Perst from the company Diagnostica Stago).
  • the test compounds are incubated for 3 minutes at 37 ° C with the plasma and the PTT reagent (cephalin, kaolin). Subsequently, coagulation is triggered by addition of a 25 mM aqueous calcium chloride solution and the time of coagulation is determined.
  • the concentration of test substance is determined which causes a 1.5-fold prolongation of the aPTT. Action data from this test are listed in Table D below: Table D
  • Tissue factor (1 pM)
  • tPA tissue plasminogen activator
  • the antithrombotic activity of FXIa inhibitors is tested in an arterial thrombosis model.
  • the thrombus formation is triggered by chemical damage to a portion of the carotid artery in the rabbit. Simultaneously, the ear bleeding time is determined.
  • the vascular damage is produced by wrapping a piece of filter paper (10 mm x 10 mm) on a Parafilm® (25 mm x 12 mm) strip around the carotid artery without affecting the blood flow.
  • the filter paper contains 100 ⁇ . a 13% solution of ferrous chloride (Sigma) in water. After 5 minutes, the filter paper is removed and the vessel rinsed twice with aqueous 0.9% sodium chloride solution. 30 minutes after the injury, the carotid artery is dissected out in the area of the damage and any thrombotic material is removed and weighed.
  • the test substances are either administered intravenously via the femoral vein anesthetized or orally by gavage to the awake animals each 5 min or 2 h before damage.
  • the ear bleeding time is determined 2 minutes after the injury to the carotid artery.
  • the left ear is shaved and a defined section of 3 mm in length (blade Art.No. 10-150-10, Martin, Tuttlingen, Germany) is set parallel to the longitudinal axis of the ear. Care is taken not to injure any visible vessel. Any escaping blood is collected at 15-second intervals with accurately weighed pieces of filter paper without touching the wound directly.
  • the bleeding time is calculated as the time from placement of the incision to the time when no more blood is detectable on the filter paper.
  • the leaked blood volume is calculated after weighing the pieces of filter paper.
  • the determination of the antifibrinolytic action in vivo is carried out in hyper-fibrinolytic rats. Following anesthesia and catheterization of the animals, hyper-fibinolysis is initiated by infusion of tissue plasminogen activator (tPA) (8 mg / kg / h). 10 minutes after starting the tPA infusion, the substances are administered as iV bolus. After another 15 minutes, the tPA infusion is terminated and a tail transsection performed. The subaquale bleeding (37 ° C tempered physiological sodium chloride solution) is observed over 30 minutes and determines the bleeding time.
  • tissue plasminogen activator tPA
  • the substances according to the invention can, for example, be converted into pharmaceutical preparations as follows:
  • composition
  • Example 1 100 mg of the compound of Example 1, 50 mg of lactose (monohydrate), 50 mg of corn starch, 10 mg of polyvinylpyrrolidone (PVP) and 2 mg of magnesium stearate.
  • lactose monohydrate
  • corn starch 50 mg of corn starch
  • PVP polyvinylpyrrolidone
  • composition Composition:
  • a single dose of 100 mg of the compound of the invention corresponds to 10 ml of oral suspension. production:
  • the rhodigel is suspended in ethanol, the compound of Example 1 is added to the suspension. While stirring, the addition of water. Until the swelling of the Rhodigels swirling is about 6 h stirred.
  • the compound of the invention is suspended in the mixture of polyethylene glycol and polysorbate with stirring. The stirring is continued until complete dissolution of the compound according to the invention.
  • i.v. solution The compound of the invention is dissolved in a concentration below the saturation solubility in a physiologically acceptable solvent (e.g., isotonic sodium chloride solution, glucose solution 5% and / or polyethylene glycol 400 / water 30% m / m). The solution is sterile filtered and filled into sterile and pyrogen-free injection containers.
  • a physiologically acceptable solvent e.g., isotonic sodium chloride solution, glucose solution 5% and / or polyethylene glycol 400 / water 30% m / m.

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Abstract

Die Erfindung betrifft substituierte Phenylalanin-Derivate und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers.

Description

Substituierte Phenylalanin-Derivate
Die Erfindung betrifft substituierte Phenylalanin-Derivate und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers.
Die Blutgerinnung ist ein Schutzmechanismus des Organismus, mit dessen Hilfe Defekte in der Gefäßwand rasch und zuverlässig „abgedichtet" werden können. So kann ein Blutverlust vermieden beziehungsweise minimiert werden. Die Blutstillung nach Gefäßverletzung erfolgt im Wesentlichen durch das Gerinnungssystem, bei dem eine enzymatische Kaskade komplexer Reaktionen von Plasmaproteinen ausgelöst wird. Hierbei sind zahlreiche Blutgerinnungsfaktoren beteiligt, von denen jeder, sobald aktiviert, die jeweils nächste inaktive Vorstufe in ihre aktive Form überführt. Am Ende der Kaskade steht die Umwandlung des löslichen Fibrinogens in das unlösliche Fibrin, so dass es zu einem Blutgerinnsel kommt. Traditionell unterscheidet man bei der Blutgerinnung zwischen dem intrinsischen und dem extrinsischen System, die in einem abschließenden gemeinsamen Reaktionsweg münden. Hierbei kommen den Faktoren Xa und IIa (Thrombin) Schlüsselrollen zu: Faktor Xa bündelt die Signale der beiden Gerinnungswege, da er sowohl über Faktor VIIa/Tissue Factor (extrinsischer Weg) wie auch den Tenase Komplex (intrinsischer Weg) durch Umsetzung von Faktor X entsteht. Die aktivierte Serinprotease Xa spaltet Prothrombin zu Thrombin, das über eine Reihe von Umsetzungen die Impulse aus der Kaskade auf den Gerinnungsstatus des Blutes überträgt.
In der jüngeren Vergangenheit ist die traditionelle Theorie der zwei getrennten Bereiche der Koagulationkaskade (extrinsischer beziehungsweise intrinsischer Pfad) aufgrund neuer Erkenntnisse modifiziert worden: In diesen Modellen wird die Koagulation durch Bindung von aktiviertem Faktor Vlla an Tissue Faktor (TF) initiiert. Der entstandene Komplex aktiviert Faktor X, was wiederum zur Thrombin-Generierung mit anschließender Herstellung von Fibrin und Thrombozyten- Aktivierung (via PAR-1) als verletzungsverschließende Endprodukte der Hämostase führt. Im Vergleich zur anschließenden Amplifikations-/Propagationsphase ist die Geschwindigkeit der Thrombin-Herstellung klein und durch das Auftreten von TFPI als Hemmer des TF-FVIIa-FX-Komplexes zeitlich begrenzt.
Ein zentraler Bestandteil des Übergangs von der Initiation zur Amplifikation und Propagation der Koagulation ist Faktor XIa. Thrombin aktiviert in positiven Rückkopplungsschleifen neben Faktor V und Faktor VIII auch Faktor XI zu Faktor XIa, was Faktor IX zu Faktor IXa umsetzt und über den so generierten Faktor IXa/ Faktor VIIIa-Komplex schnell größere Mengen Faktor Xa produziert. Dies löst die Produktion großer Mengen Thrombin aus, die zu starkem Thrombuswachstum führt und den Thrombus stabilisiert.
Die Bildung eines Thrombus beziehungsweise eines Blutgerinnsels wird durch die Fibrinolyse gegenreguliert. Nach Aktivierung von Plasminogen durch Tissue-Plasminogenaktivator (tPA) entsteht die aktive Serinprotease, Plasmin, die das polymerisierte Fibrin spaltet und somit den Thrombus abbaut. Dieser Prozess wird als Fibrinolyse bezeichnet - mit Plasmin als Schlüsselenzym.
Eine weitere wichtige Protease des Gerinnungssystems ist das Plasmakallikrein (PK). PK ist eine multifunktionelle, trypsinartige Serinprotease, für die mehrere physiologische Substrate bekannt sind. Die PK- vermittelte Freisetzung von Bradykinin aus hochmolekularem Kininogen führt zur Freisetzung von t-PA, NO und Prostacyclin aus Endothelzellen und beeinflußt dadurch die Fibrinolyse, den Blutdruck und das Entzündungsgeschehen.
Bei hyperfibrinolytischen Zuständen kommt es nicht zu einem ausreichenden Wundverschluß was starke, zum Teil lebensbedrohliche Blutungen zur Folge hat. Zur Prophylaxe und Therapie solcher Blutungen stehen in der Klinik Antifibrinolytika zur Verfügung. Antifibrinolytika hemmen spezifische Schritte der Fibrinolyse. Indirekt wirkende Antifibrinolytika wie Tranexamsäure hemmen die Aktivierung von Plasminogen; direkt wirkende Antifibrinolytika blockieren Plasmin selbst. Entsprechende Wirkungen konnten mit dem Plasminogeninhibitor Tranexamsäure in verschiedenen klinischen Studien gezeigt werden. Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist daher die Bereitstellung neuer Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers.
W089/11852 beschreibt unter anderem substituierte Phenylalanin-Derivate zur Behandlung von Pankreatitis, WO 2007/070816 beschreibt substituierte Thiophen-Derivate als Faktor XIa Inhibitoren und JP 2014227401 beschreibt substituierte Phenylalanin-Derivate als Faktor XIa Inhibitoren. Gegenstand der Erfindung sind Verbindungen der Formel
Figure imgf000004_0001
für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000004_0002
steht, wobei # die Anknüpfstelle an den Phenylring ist, und R12 für [(2iS)-l-Methoxypropan-2-yl]amino, [(2iS)-l-Hydroxypropan-2-yl]amino oder
(2.S)-2-(Hydroxymethyl)pyrrolidm- 1 -yl steht, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungs- beispiel(e) genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in unterschiedlichen stereoisomeren Formen existieren, d.h. in Gestalt von Konfigurationsisomeren oder gegebe- nenfalls auch als Konformationsisomere (Enantiomere und/oder Diastereomere, einschließlich solcher bei Atropisomeren). Die vorliegende Erfindung umfasst deshalb die Enantiomere und Diastereomere und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/ oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren; vorzugsweise werden hierfür chromatographische Verfahren verwendet, insbesondere die HPLC-Chromatographie an achiraler beziehungsweise chiraler Phase.
Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegende Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Die vorliegende Erfindung umfasst auch alle geeigneten isotopischen Varianten der erfindungsgemäßen Verbindungen. Unter einer isotopischen Variante einer erfindungsgemäßen Verbindung wird hierbei eine Verbindung verstanden, in welcher mindestens ein Atom innerhalb der erfindungsgemäßen Verbindung gegen ein anderes Atom der gleichen Ordnungszahl, jedoch mit einer anderen Atommasse als der gewöhnlich oder überwiegend in der Natur vorkommenden Atommasse ausgetauscht ist. Beispiele für Isotope, die in eine erfindungsgemäße Verbindung inkorporiert werden können, sind solche von Wasserstoff, Kohlenstoff, Stickstoff, Sauerstoff, Phosphor, Schwefel, Fluor, Chlor, Brom und Iod, wie 2H (Deuterium), 3H (Tritium), 13C, 14C, 15N, O, 180, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36C1, 82Br, 123I, 124I, 129I und 131I. Bestimmte isotopische Varianten einer erfindungsgemäßen Verbindung, wie insbesondere solche, bei denen ein oder mehrere radioaktive Isotope inkorporiert sind, können von Nutzen sein beispielsweise für die Untersuchung des Wirkmechanismus oder der Wirkstoff- Verteilung im Körper; aufgrund der ver- gleichsweise leichten Herstell- und Detektierbarkeit sind hierfür insbesondere mit 3H- oder 14C- Isotopen markierte Verbindungen geeignet. Darüber hinaus kann der Einbau von Isotopen, wie beispielsweise von Deuterium, zu bestimmten therapeutischen Vorteilen als Folge einer größeren metabolischen Stabilität der Verbindung führen, wie beispielsweise eine Verlängerung der Halbwertszeit im Körper oder eine Reduktion der erforderlichen Wirkdosis; solche Modifikationen der erfindungsgemäßen Verbindungen können daher gegebenenfalls auch eine bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung darstellen. Isotopische Varianten der erfindungsgemäßen Verbindungen können nach den dem Fachmann bekannten Verfahren hergestellt werden, so beispielsweise nach den weiter unten beschriebenen Methoden und den bei den Ausführungs- beispielen wiedergegebenen Vorschriften, indem entsprechende isotopische Modifikationen der jeweiligen Reagentien und/oder Ausgangsverbindungen eingesetzt werden.
Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kalium- salze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C- Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, V-Methyl- morpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin, V-Methylpiperidin und Cholin. Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.
Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff „Prodrugs" umfaßt Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch).
Folgende zwei Darstellungsweisen (A) und (B) eines 1,4-disubstituierten Cyclohexylderivats sind äquivalent zueinander und gleichbedeutend und in beiden Fällen deskriptiv für ein trans-1,4- disubsituiertes Cyclohexylderivat.
Figure imgf000007_0001
(A) (B)
Dies gilt insbesondere für das Strukturelement des Tranexamsäureamids, beispielsweise N-[(?ra«s- 4- {[(fert-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl und ?ra«s-4-(Aminomethyl)- cyclohexyl]carbonyl} . In der vorliegenden Erfindung wird die Darstellung (A) verwendet. Folgende drei Tautomer-Darstellungsweisen (C), (D) und (E) eines Triazolderivates sind äquivalent zueinander und gleichbedeutend und in allen Fällen deskriptiv für ein 1,4- disubsituiertes Triazolderivat.
Figure imgf000007_0002
(C) (D) (E)
Dies gilt insbesondere für folgende Strukturelemente: l_f/-l,2,4-triazol-3-yl, l_f/-l,2,4-triazol-5-yl, 4_£/-l,2,4-triazol-3-yl und 4H-l,2,4-triazol-5-yl. Y1 und Y2 sind dabei unterschiedliche Substituenten.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel
Figure imgf000007_0003
sowie alle L-Phenylalanin-Intermediate sind an dem in der obigen Formel mit einem * markierten Stereozentrum als (S)-Konfiguration beschrieben, da L-Phenylalanin-Derivate als zentrale Bausteine in die Synthese eingebracht werden. Bei der Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen kann es bei der Kupplung der L-Phenylalanin-Intermediate mit dem Amin der Formel
Figure imgf000008_0001
zur teilweisen Epimerisierung an dem mit einem * markierten Stereozentrum kommen. Damit kann ein Gemisch der erfindungsgemäßen Verbindungen aus (S)-Enantiomer und (R)-Enantiomer entstehen. Die Hauptkomponente ist das jeweils abgebildete (S)-Enantiomer. Die Gemische aus (S)-Enantiomer und (R)-Enantiomer können nach dem Fachmann bekannten Methoden, zum Beispiel durch Chromatograpie an chiraler Phase, in ihre Enantiomere getrennt werden.
Die Enantiomere können entweder direkt nach der Kupplung der L-Phenylalanin-Intermediate mit dem Amin der Formel (VIII) oder auf einer späteren Zwischenstufe der Synthese oder aber die erfindungsgemäßen Verbindungen an sich können getrennt werden. Bevorzugt ist die Trennung der Enantiomere direkt nach der Kupplung der L-Phenylalanin-Intermediate mit dem Amin der Formel (VIII).
Im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst der Begriff "Behandlung" oder "behandeln" ein Hemmen, Verzögern, Aufhalten, Lindern, Abschwächen, Einschränken, Verringern, Unterdrücken, Zurückdrängen oder Heilen einer Krankheit, eines Leidens, einer Erkrankung, einer Verletzung oder einer gesundheitlichen Störung, der Entfaltung, des Verlaufs oder des Fortschreitens solcher Zustände und/oder der Symptome solcher Zustände. Der Begriff "Therapie" wird hierbei als synonym mit dem Begriff "Behandlung" verstanden.
Die Begriffe "Prävention", "Prophylaxe" oder "Vorbeugung" werden im Rahmen der vorliegenden Erfindung synonym verwendet und bezeichnen das Vermeiden oder Vermindern des Risikos, eine Krankheit, ein Leiden, eine Erkrankung, eine Verletzung oder eine gesundheitliche Störung, eine Entfaltung oder ein Fortschreiten solcher Zustände und/oder die Symptome solcher Zustände zu bekommen, zu erfahren, zu erleiden oder zu haben.
Die Behandlung oder die Prävention einer Krankheit, eines Leidens, einer Erkrankung, einer Ver- letzung oder einer gesundheitlichen Störung können teilweise oder vollständig erfolgen. In den Formeln der Gruppe, die für R1 stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, neben der jeweils ein # steht, nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CE -Gruppe sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem Atom, an das R1 gebunden ist.
Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000009_0001
steht, wobei # die Anknüpfstelle an den Phenylring ist, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze. Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000009_0002
steht, wobei # die Anknüpfstelle an den Phenylring ist, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4- {[ V- {[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}-4-(2- isopropyl-5-methyl-l_f/-benzimidazol-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4/ -l,2,4-triazol-3-yl]- 2,2,3, 3 -tetrafluorprop ansäure mit der folgenden Formel
Figure imgf000010_0001
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4- {[Ar- {[;ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}-4-(2- isopropyl-5-methyl-l -benzimidazol-6-yl)-L^henylalanyl]amino}phenyl)-4/ -l,2,4-triazol-3-yl]- 2,2,3, 3-tetrafluorpropansäure-Hydrochlorid mit der folgenden Formel
Figure imgf000010_0002
Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4- {[7V- {[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}-4-(2- isopropyl-5-methyl //-imidazo[4,5-b]pyridin-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4//-l ,2,4- triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetraf!uorpropansäure mit der folgenden Formel F OH
Figure imgf000011_0001
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4-{[ V-{[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}-4-(2- isopropyl-5-methyl- l_f/-imidazo[4,5-b]pyridin-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/- 1 ,2,4- triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure-Hydrochlorid mit der folgenden Formel
Figure imgf000011_0002
Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4-{[ V-{[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}-4-(2- isopropyl-5-methyl-3-oxo-2,3-dihydro- l/ -indazol-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/- 1 ,2,4- triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure mit der folgenden Formel
Figure imgf000012_0001
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4- {[ V- {[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}-4-(2- isopropyl-5-methyl-3-oxo-2,3-dihydro-l/ ndazol-6-yl)-L^henylalanyl]amino}phenyl)-4/ -l,2,4- triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure-Hydrochlorid mit der folgenden Formel
Figure imgf000012_0002
Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000013_0001
steht, wobei # die Anknüpfstelle an den Phenylring ist, und R12 für [(2iS)-l-Methoxypropan-2-yl]amino, [(2iS)-l-Hydroxypropan-2-yl]amino oder
(21S)-2-(Hydroxymethyl)pyrrolidin- 1 -yl steht, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Besonders bevorzugt ist 3-[5-(4- {[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}-amino)- 3-(4'- {[(2iS)- 1 -methoxypropan-2-yl]carbamoyl} -2'-methylbiphenyl-4-yl)propanoyl]-amino}phenyl)- l//-l,2,4 riazol-3-yl]-2,2,3,3 etrafluorpropansäure mit der folgenden Formel
Figure imgf000013_0002
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4- {[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}- amino)-3-(4'- {[(2iS)- 1 -methoxypropan-2-yl]carbamoyl} -2'-methylbiphenyl-4-yl)propanoyl]- amino}phenyl)- IH- 1 ,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ro ansäure-Hydroclllorid
folgenden Formel
Figure imgf000014_0001
Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4- {[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}- amino)-3-(4'- {[(2iS)- 1 -hydroxypropan-2-yl]carbamoyl} -2'-methylbiphenyl-4-yl)propanoyl]amino} - phenyl)-l_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure mit der folgenden Formel
Figure imgf000014_0002
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4- {[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}- amino)-3-(4'- {[(2iS)- 1 -hydroxypropan-2-yl]carbamoyl} -2'-methylbiphenyl-4-yl)propanoyl]amino} - henyl)-l_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ro ansäure-Hydroclllorid mit der folgenden Formel
Figure imgf000015_0001
Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4- {[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}- amino)-3-(4'- {[(2iS)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin- 1 -yljcarbonyl} -2'-methylbiphenyl-4-yl)- propanoyl]amino}pllenyl)-l_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure mit der folgenden Formel
Figure imgf000015_0002
oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze. Besonders bevorzugt ist auch 3-[5-(4- {[(2iS)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}- amino)-3-(4'- {[(2iS)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin- 1 -yljcarbonyl} -2'-methylbiphenyl-4-yl)- propanoyl]amino}phenyl)- \H- 1 ,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure-Hydrochlorid mit der folgenden Formel
Figure imgf000016_0001
Die in den jeweiligen Kombinationen bzw. bevorzugten Kombinationen von Resten im einzelnen angegebenen Reste-Definitionen werden unabhängig von den jeweiligen angegebenen Kombinationen der Reste beliebig auch durch Reste-Definitionen anderer Kombinationen ersetzt.
Ganz besonders bevorzugt sind Kombinationen von zwei oder mehreren der oben genannten Vorzugsbereiche.
Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der Formel (I), oder ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze, wobei
[A] die Verbindungen der Formel
Figure imgf000016_0002
in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung hat, mit einer Säure umgesetzt werden, oder [B] die Verbindungen der Formel
Figure imgf000017_0001
in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung hat, mit einer Säure umgesetzt werden. Die Umsetzung nach Verfahren [A] erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 60°C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, oder Ether wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, bevorzugt ist Dioxan. Säuren sind beispielsweise Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff in Dioxan, bevorzugt ist Chlorwasserstoff in Dioxan.
Die Umsetzung nach Verfahren [B] erfolgt wie für Verfahren [A] beschrieben.
Die Verbindungen der Formel (III) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel (II) mit einer Base umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck. Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, Alkohole wie Methanol oder Ethanol, Ether wie Diethylether, Methyl-tert-butylether, 1,2-Dimethoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, oder andere Lösungsmittel wie Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische von Lösungsmitteln, oder Gemische von Lösungsmittel mit Wasser, bevorzugt ist ein Gemisch aus Tetrahydrofuran und Wasser.
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium-, Lithium- oder Kaliumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder Alkoholate wie Kalium- oder Natrium-tert-butylat, bevorzugt ist Natriumhydroxid oder Lithiumhydroxid. Die Verbindungen der Formel (II) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000018_0001
in welcher
R die oben angegebene Bedeutung hat, mit der Verbindung der Formel
Figure imgf000018_0002
in Gegenwart von Dehydratisierungsreagenzien umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.
Als Dehydratisierungsreagenzien eignen sich hierbei beispielsweise Carbodiimide wie z.B. JV,JV- Diethyl-, V, V'-Dipropyl-, V, V'-Diisopropyl-, V, V'-Dicyclohexylcarbodiimid, V-(3-Dimethylamino- isopropyl)- V'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (EDC) (gegebenenfalls in Gegenwart von Penta- fluo henol (PFP)), V-Cyclohexylcarbodiimid- V'-propyloxymethyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-l,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert.-Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxycarbonyl-l,2-dihydrochinolin, oder Propanphos- phonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)-phosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)phosphoniumhexafluorophosphat, oder 0-(Benzotria- zol- 1 -yl)-N,N,N', TV'-tetra-methyluronium-hexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo- 1 -(2H)-pyridyl)- 1 , 1 ,3,3-tetramethyluroniumtetrafluoroborat (TPTU), (Benzotriazol- 1 -yloxy)bisdimethylamino- methyliumfluoroborat (TBTU) oder 0-(7-Azabenzotriazol-l-yl)- V, V, V', V'-tetramethyl-uronium- hexafluorophosphat (HATU), oder 1 -Hydroxybenztriazol (HOBt), oder Benzotriazol- 1-yloxy- tris(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorophosphat (BOP), oder Ethyl-cyan(hydroxy- imino)acetat (Oxyma), oder (l-Cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidenaminooxy)dimethylamino- mo holino-carbenium hexafluorophosphat (COMU), oder N-[(Dimethylamino)(3_f/- [ l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methyliden]-N-methylmethanaminium-hexafluorophosphat, oder 2,4,6-Tripropyl-l,3,5,2,4,6-trioxatriphosphinan-2,4,6-trioxid (T3P), oder Mischungen aus diesen, bevorzugt ist N-[(Dimethylamino)(3/ -[l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methyliden]- N-methylmethan-aminium-hexafluorophosphat oder 2,4,6-Tripropyl- 1 ,3,5,2,4,6-trioxatri- phosphinan-2,4,6-trioxid (T3P). Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hy- drogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine, z.B. Triethylamin, V-Methylmorpholin, A -Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin, bevorzugt ist Diisopro- pylethylamin.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan oder Tri- chlormethan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, oder andere Lösungsmittel wie Nitromethan, Tetrahydrofuran, Dioxan, Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische der Lösungsmittel, bevorzugt ist Tetrahydrofuran oder Dimethylformamid oder ein Gemisch aus Dimethylformamid und Pyridin. Die Verbindung der Formel (V) ist bekannt oder läßt sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
Die Verbindungen der Formel (IV) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000020_0001
in welcher
R1 die oben angegebene Bedeutung hat, mit einer Säure umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 60°C bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan oder 1,2-Dichlorethan, oder Ether wie Tetrahydrofuran oder Dioxan, bevorzugt ist Dioxan.
Säuren sind beispielsweise Trifluoressigsäure oder Chlorwasserstoff in Dioxan, bevorzugt ist Chlorwasserstoff in Dioxan.
Die Verbindungen der Formel (VI) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000020_0002
in welcher
R die oben angegebene Bedeutung hat, mit der Verbindung der Formel
Figure imgf000021_0001
in Gegenwart von Dehydratisierungsreagenzien umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt wie für die Umsetzung von Verbindungen der Formel (IV) mit der Verbindung der Formel (V) beschrieben.
Die Verbindung der Formel (VIII) ist bekannt oder läßt sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren. Die Verbindungen der Formel (VII) sind bekannt oder können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel
Figure imgf000021_0002
in welcher
X für Brom oder Iod steht, mit Verbindungen der Formel
R1-Q1 (X), in welcher
R die oben angegebene Bedeutung hat, und
Q1 für -B(OH)2, einen Boronsäure-Ester, bevorzugt Boronsäurepinakolester, oder -BF3 ~K+ steht, unter Suzuki-Kupplungsbedingungen umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart eines Katalysators, gegebenenfalls in Gegenwart eines Zusatzreagenzes, gegebenenfalls in einer Mikrowelle, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis 150°C bei Normaldruck bis 3 bar.
Katalysatoren sind beispielsweise für Suzuki-Reaktionsbedingungen übliche Palladium- Katalysatoren, bevorzugt sind Katalysatoren wie z.B. Dichlorbis(triphenylphosphin)-palladium, Tetrakistriphenylphosphinpalladium(O), Palladium(II)acetat/Triscyclohexylphosphin, Tris(dibenzylidenaceton)dipalladium, Bis-(diphenylphosphanferrocenyl)-palladium-(II)-chlorid, l,3-Bis(2,6-diisopropylphenyl)imidazol-2-yliden(l,4-napthtochinon)palladiumdimer, Allyl(chlor)- (l,3-dimesityl-l,3-dihydro-2H-imidazol-2-yliden)palladium, Palladium(II)acetat/Dicyclohexyl- (2',4',6'-triisopropyl-biphenyl-2-yl)-phosphin, [1,1 -Bis-(diphenylphosphino)-ferrocen]- palladium(II)chlorid-Monodichlormethan-addukt oder XPhos Prekatalysator [(2'-Aminobiphenyl- 2-yl)(chlor)palladium-Dicyclohexyl(2',4',6'-triisopropylbiphenyl-2-yl)phosphan (1 : 1)], bevorzugt ist Tetrakistriphenylphosphin-palladium(O), [1,1 -Bis-(diphenylphosphino)-ferrocen]- palladium(II)chlorid-Monodichlormethan-addukt oder XPhos Prekatalysator [(2'-Aminobiphenyl- 2-yl)(chlor)palladium-Dicyclohexyl(2',4',6'-triisopropylbiphenyl-2-yl)phosphan (1 : 1)].
Zusatzreagenzien sind beispielsweise Kaliumacetat, Cäsium-, Kalium- oder Natriumcarbonat, Kalium-tert.-butylat, Cäsiumfluorid oder Kaliumphosphat, wobei diese in wässriger Lösung vorliegen können, bevorzugt sind Zusatzreagenzien wie Kaliumacetat oder eine Mischung aus Kaliumacetat und Natriumcarbonat. Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Dioxan, Tetrahydrofuran oder 1,2- Dimethoxyethan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol oder Toluol, oder Carbonsäureamide wie Dimethylformamid oder Dimethylacetamid, Alkylsulfoxide wie Dimethylsulfoxid, oder N- Methylpyrrolidon oder Acetonitril, oder Gemische der Lösungsmittel mit Alkoholen wie Methanol oder Ethanol und/oder Wasser, bevorzugt ist Toluol, Dimethylformamid oder Dimethylsulfoxid. Die Verbindungen der Formeln (IX) und (X) sind bekannt, lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren oder können analog den im Beispielteil beschriebenen Verfahren hergestellt werden. Die Verbindungen der Formel
Figure imgf000023_0001
in welcher
R12 die oben angegebene Bedeutung hat,
sind bekannt oder können hergestellt werden, indem die Verbindung der Formel
Figure imgf000023_0002
mit Verbindungen der Formel
H-R12 (XII), in welcher
R12 die oben angegebene Bedeutung hat,
in Gegenwart von Dehydratisierungsreagenzien umgesetzt werden. Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.
Als Dehydratisierungsreagenzien eignen sich hierbei beispielsweise Carbodiimide wie z.B. JV,JV- Diethyl-, V, V'-Dipropyl-, V, V'-Diisopropyl-, V, V'-Dicyclohexylcarbodiimid, V-(3-Dimethylamino- isopropyl)- V'-ethylcarbodiimid-Hydrochlorid (EDC) (gegebenenfalls in Gegenwart von Penta- fluo henol (PFP)), V-Cyclohexylcarbodiimid- V'-propyloxymethyl-Polystyrol (PS-Carbodiimid) oder Carbonylverbindungen wie Carbonyldiimidazol, oder 1,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5-phenyl-l,2-oxazolium-3-sulfat oder 2-tert.-Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, oder Acylaminoverbindungen wie 2-Ethoxy-l-ethoxycarbonyl-l,2-dihydrochinolin, oder Propanphos- phonsäureanhydrid, oder Isobutylchloroformat, oder Bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)-phosphorylchlorid oder Benzotriazolyloxy-tri(dimethylamino)phosphoniumhexafluorophosphat, oder 0-(Benzotria- zol- 1 -yl)-N,N,N', TV'-tetra-methyluronium-hexafluorophosphat (HBTU), 2-(2-Oxo- 1 -(2H)-pyridyl)- 1 , 1 ,3,3-tetramethyluroniumtetrafluoroborat (TPTU), (Benzotriazol- 1 -yloxy)bisdimethylamino- methyliumfluoroborat (TBTU) oder 0-(7-Azabenzotriazol-l-yl)- V, V, V', V'-tetramethyl-uronium- hexafluorophosphat (HATU), oder 1 -Hydroxybenztriazol (HOBt), oder Benzotriazol- 1-yloxy- tris(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorophosphat (BOP), oder Ethyl-cyan(hydroxy- imino)acetat (Oxyma), oder (l-Cyano-2-ethoxy-2-oxoethylidenaminooxy)dimethylamino- mo holino-carbenium hexafluorophosphat (COMU), oder N-[(Dimethylamino)(3_f/- [ l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methyliden]-N-methylmethanaminium-hexafluorophosphat, oder 2,4,6-Tripropyl-l,3,5,2,4,6-trioxatriphosphinan-2,4,6-trioxid (T3P), oder Mischungen aus diesen, bevorzugt ist N-[(Dimethylamino)(3/ -[l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methyliden]- N-methylmethan-aminium-hexafluorophosphat oder 2,4,6-Tripropyl- 1 ,3,5,2,4,6-trioxatri- phosphinan-2,4,6-trioxid (T3P).
Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hy- drogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine, z.B. Triethylamin, V-Methylmorpholin, A -Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin, bevorzugt ist Diisopro- pylethylamin.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan oder Tri- chlormethan, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, oder andere Lösungsmittel wie Nitromethan, Tetrahydrofuran, Dioxan, Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Acetonitril oder Pyridin, oder Gemische der Lösungsmittel, bevorzugt ist Tetrahydrofuran oder Dimethylformamid oder ein Gemisch aus Dimethylformamid und Pyridin.
Die Verbindungen der Formel (lila) sind eine Untermenge der Verbindungen der Formel (III). Die Verbindung der Formel (XI) ist bekannt, läßt sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren oder kann analog den im Beispielteil beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Die Verbindungen der Formel (XII) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
Die Herstellung der Ausgangsverbindungen und der Verbindungen der Formel (I) kann durch die folgenden Syntheseschemata verdeutlicht werden.
Schema 1:
Figure imgf000025_0001
Schema 2:
Figure imgf000026_0001
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches Wirkspektrum und ein gutes pharmakokinetisches Verhalten. Es handelt sich dabei um Verbindungen, die die proteolytische Aktivität der Serinproteasen Plasmin, Plasmakallikrein und Faktor XIa beeinflussen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen hemmen die enzymatische Spaltung von Substraten, die eine wesentliche Rolle bei der Aktivierung der Blutgerinnungskaskade und bei der Fibrinolyse einnehmen.
Sie eigenen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers. Durch die Prophylaxe und/oder Behandlung kann ein starker perioperativer Blutverlust reduziert oder aufgehoben werden. Starke Blutungen treten bei schweren Operationen, wie z. B. Koronararterien-Bypass-Chirurgie, Organtransplantationen oder Hysterektomie, sowie bei Trauma, bei haemorrhagischem Schock oder bei postpartaler Hämorrhagie auf. In den zuvor genannten Indikationen kann es perioperativ zum Einsatz von extrakorporalen Kreislaufsytemen oder Filtersystemen, wie z.B. Herzlungenmaschine, Hemofiltration, Hämodialyse, extrakorporale Membranoxygenierung oder ventrikuläres Unterstützungssystem, wie z.B. Kunstherz, kommen. Mögliche thrombotische Komplikationen, induziert durch die Aktivierung des intrinsischen Gerinnungssystems in den extrakorporalen Kreislaufsystemen, sollen mit den erfindungsgemäßen Verbindungen reduziert werden.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können darüber hinaus auch als Bestandteil eines Fibrinklebers eingesetzt werden. Fibrinkleber finden Einsatz bei der Verklebung von Wundrändern anstelle einer klassischen chirurgischen Naht und zum Verschluss von verletztem Gewebe, bei der Blutstillung sowie der Unterstützung und Beschleunigung der Wundheilung. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt:
• Lipidsenker, insbesondere HMG-CoA-(3-Hydroxy-3-methylglutaryl-Coenzym A)-Reduktase- Inhibitoren wie beispielsweise Lovastatin (Mevacor), Simvastatin (Zocor), Pravastatin (Pravachol), Fluvastatin (Lescol) und Atorvastatin (Lipitor);
• Koronartherapeutika/V asodilatatoren, insbesondere ACE-(Angiotensin-Converting-Enzyme)- Inhibitoren wie beispielsweise Captopril, Lisinopril, Enalapril, Ramipril, Cilazapril, Benazepril, Fosinopril, Quinapril und Perindopril, oder AII-(Angiotensin II)-Rezeptor- Antagonisten wie beispielsweise Embusartan, Losartan, Valsartan, Irbesartan, Candesartan, Eprosartan und Temisarta, oder ß-Adrenozeptor- Antagonisten wie beispielsweise Carvedilol,
Alprenolol, Bisoprolol, Acebutolol, Atenolol, Betaxolol, Carteolol, Metoprolol, Nadolol, Penbutolol, Pindolol, Propanolol und Timolol, oder alpha- 1 - Adrenozeptor- Antagonisten wie beispielsweise Prazosin, Bunazosin, Doxazosin und Terazosin, oder Diuretika wie beispielsweise Hydrochlorothiazid, Furosemid, Bumetanid, Piretanid, Torasemid, Amilorid und Dihydralazin, oder Calciumkanal-Blocker wie beispielsweise Verapamil und Diltiazem, oder Dihydropyridin-Derivate wie beispielsweise Nifedipin (Adalat) und Nitrendipin (Bayotensin), oder Nitropräparate wie beispielsweise Isosorbid-5-mononitrat, Isosorbid- dinitrat und Glyceroltrinitrat, oder Substanzen, die eine Erhöhung von cyclischem Guanosin- monophosphat (cGMP) bewirken, wie beispielsweise Stimulatoren der löslichen Guanylatcyclase, wie beispielsweise Riociguat;
• antikoagulatorisch wirksame Substanzen (Antikoagulantien) wie beispielsweise Heparin (UFH), niedermolekulare Heparine (NMH) wie beispielsweise Tinzaparin, Certoparin, Parnaparin, Nadroparin, Ardeparin, Enoxaparin, Reviparin, Dalteparin, Danaparoid, Semuloparin (AVE 5026), Adomiparin (Ml 18) und EP-42675/ORG42675; · sowie Antiarrhythmika;
• verschiedene Antibiotika oder antifungale Medikamenten, entweder als kalkulierte Therapie (vor Vorliegen des mikrobiellen Befundes) oder als spezifische Therapie;
• Vasopressoren wie beispielsweise Norepinephrine, Dopamine und Vasopressin;
• Inotrope Therapie wie beispielsweise Dobutamin; · Kortikosteroide wie beispielsweise Hydrokortison und Fludrokortison; • rekombinantes humanes aktivierte Protein C wie beispielsweise Xigris;
• Blutprodukte wie beispielsweise Erythrozytenkonzentrate, Thrombozytenkonzentrate,
Erythropietin und Fresh Frozen Plasma.
Unter„Kombinationen" im Sinne der Erfindung werden nicht nur Darreichungsformen, die alle Komponenten enthalten (sog. Fixkombinationen) und Kombinationspackungen, die die Komponenten voneinander getrennt enthalten, verstanden, sondern auch gleichzeitig oder zeitlich versetzt applizierte Komponenten, sofern sie zur Prophylaxe und/oder Behandlung derselben Krankheit eingesetzt werden. Ebenso ist es möglich, zwei oder mehr Wirkstoffe miteinander zu kombinieren, es handelt sich dabei also jeweils um zwei- oder mehrfach-Kombinationen. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otisch oder als Implantat beziehungsweise Stent.
Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.
Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/ oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen. Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.
Bevorzugt ist die parenterale Applikation. Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen, -sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (wie beispielsweise Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige Poly- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natrium- dodecylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und / oder Geruchskorrigentien.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, vorzugsweise zusammen mit einem oder mehreren inerten nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken. Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 5 bis 250 mg je 24 Stunden zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Menge etwa 5 bis 500 mg je 24 Stunden.
Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt beziehungsweise Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. Die Angabe "w/v" bedeutet "weight/volume" (Gewicht/Volumen). So bedeutet beispielsweise " 10% w/v": 100 ml Lösung oder Suspension enthalten 10 g Substanz. A) Beispiele Abkürzungen: bs / br. s. breites Singulett (bei NMR)
bd breites Duplett (bei NMR)
cat. katalytisch
CI chemische Ionisation (bei MS)
dd Dublett vom Dublett (bei NMR)
DMF Dimethylformamid
DMSO Dimethylsulfoxid
dt Dublett vom Triplett (bei NMR)
d. Th. der Theorie (bei Ausbeute)
EI Elektronenstoß-Ionisation (bei MS)
eq. Äquivalent(e)
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS)
h Stunde (n)
HATU 0-(7-Azabenzotriazol- 1 -yl)-NNN',N -tetramethyl-uronium- hexafluorophosphat
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektrometrie m Multiplett (bei NMR)
M molar
min Minute(n)
MS Massenspektrometrie
N normal
NMR Kernresonanzspektrometrie
q Quartett (bei NMR)
quant. quantitativ
quint Quintett (bei NMR)
RT Raumtemperatur
Rt Retentionszeit (bei HPLC)
s Singulett (bei NMR)
TFA Trifluoressigsäure
THF Tetrahydrofuran
UV Ultraviolett-Spektrometrie HPLC- und LC/MS-Methoden:
Methode 1 (LC-MS): Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 mm x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A — >■ 1.2 min 5% A -> 2.0 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.40 ml/min; UV-Detektion: 208 - 400 nm.
Mikrowelle: Als Mikrowellenreaktor wurde ein Gerät vom Typ Biotage™ Initiator verwendet.
Bei Aufreinigungen von erfindungsgemäßen Verbindungen per präparativer HPLC nach den oben beschriebenen Methoden, in denen die Elutionsmittel Zusatzstoffe wie beispielsweise Trifluoressigsäure, Ameisensäure oder Ammoniak enthalten, können die erfindungsgemäßen Verbindungen in Salz-Form, beispielsweise als Trifluoracetat, Formiat oder Ammonium-Salz anfallen, sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen eine ausreichend basische beziehungsweise saure Funktionalität enthalten. Ein solches Salz kann durch verschiedene dem Fachmann bekannte Methoden in die entsprechende freie Base beziehungsweise Säure überführt werden. Schwächere Salze können durch Zugabe von etwas Hydrochlorid in die entsprechenden Chloride überführt werden.
Wenn bei den im Folgenden beschriebenen Synthese-Intermediaten und Ausführungsbeispielen der Erfindung eine Verbindung in der Form eines Salzes der korrespondierenden Base beziehungseise Säure aufgeführt ist, so ist die exakte stöchiometrische Zusammensetzung eines solchen Salzes, wie es nach dem jeweiligen Herstell- und/oder Reinigungsverfahren erhalten wurde, in der Regel nicht bekannt. Sofern nicht genauer spezifiziert, sind daher Namens- und Strukturformel-Zusätze wie beispielsweise "Hydrochlorid", "Trifluoracetat", "Natrium-Salz" bzw. "x HCl", "x CF3COOH", "x Na+" bei solchen Salzen nicht stöchiometrisch zu verstehen, sondern haben allein deskriptiven Charakter bezüglich der enthaltenen salzbildenden Komponenten.
Sinngemäß gleiches gilt für den Fall, dass Synthese-Intermediate oder Ausführungsbeispiele oder Salze hiervon nach den beschriebenen Herstell- und/oder Reinigungsverfahren in Form von Solvaten, wie beispielsweise Hydraten, erhalten wurden, deren stöchiometrische Zusammensetzung (sofern definierter Art) nicht bekannt ist. Wenn die Ausgangsverbindungen und Beispiele als zentralen Baustein ein L-Phenylalanin-Derivat enthalten, ist das entsprechende Stereozentrum als (S)-Konfiguration beschrieben. Wenn nicht weiter angegeben, wurde nicht überprüft, ob in Einzelfällen bei der Kupplung der L-Phenylalanin- Intermediate mit dem Amin der Formel (VIII) eine teilweise Epimerisierung des Stereozentrums stattfand. Damit kann ein Gemisch der erfindungsgemäßen Verbindungen aus (S)-Enantiomer und (R)-Enantiomer vorliegen. Die Hauptkomponente ist das jeweils abgebildete (S)-Enantiomer. Ausgangsverbindungen
Beispiel 1A V-(fert-Butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-l/ -benzimidazol-6-yl)-L-phenylalanin
Figure imgf000033_0001
6-Brom-2-isopropyl-5-methyl-l_f/-benzimidazol (500 mg, 1.98 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'- Octamethyl-2,2'-bi-l,3,2-dioxaborolan (602 mg, 2.37 mmol) und Kaliumacetat (582 mg, 5.93 mmol) wurden in DMSO (8 ml) in einem Mikrowellengläschen vorgelegt, mit Argon entgast und anschließend mit [1,1 -Bis-(Diphenylphosphino)-ferrocen]-Dichlo alladium-Dichlormethan- Komplex (80.6 mg, 0.099 mmol) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2 h bei 120°C (Ölbad) gerührt, auf RT gekühlt und mit 4-Brom- V-(fert-butoxycarbonyl)-L-phenylalanin (567 mg, 1.65 mmol) versetzt und nochmal mit Argon entgast. Anschließend wurden 2N wässerige Natriumcarbonat-Lösung (2.47 ml, 4.94 mmol) und [l,l-Bis-(Diphenylphosphino)-ferrocen]- Dichlo alladium-Dichlormethan-Komplex (134.4 mg, 0.165 mmol) zugegeben und die Reaktion wurde 3 h bei 110°C in der Mikrowelle gerührt. Der Rückstand wurde mit DMSO/Wasser/Acetonitril (ca. 5 ml) verdünnt, über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von AcetonitrilAVasser mit 0.1% Trifluoressigsäure). Man erhielt 175 mg (23% d. Th., 92.6%o Reinheit) der Titelverbindung.
Ή NMR (400 MHz, DMSO-ok) δ ppm 1.33 (s, 9 H), 1.45 (s, 3 H), 1.47 (s, 3 H), 2.33 (s, 3 H), 2.89 (dd, 1 H), 3.11 (dd, 1 H), 4.14 - 4.23 (m, 1 H), 7.19 (d, 1 H), 7.28 (d, 2 H), 7.37 (d, 2 H), 7.48 (s, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 12.65 (br. s, 1 H), 14.62 (br. s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.68 min; MS (ESIneg): m/z = 436 [M-H]\
Beispiel 2A
Methyl-3-[5-(4- {[/V-(fer?-butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-l_f/-benzimidazol-6-yl)-L- phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/- 1 ,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluorpropanoat
Figure imgf000034_0001
Eine Suspension aus /V-(fer?-Butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-l_f/-benzimidazol-6-yl)-L- phenylalanin (172 mg, 0.364 mmol, 92.6% Reinheit), Methyl-3-[5-(4-aminophenyl)-4#- 1,2,4- triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropanoat (127.4 mg, 0.400 mmol), N,N-Diisopropylethylamin (0.19 ml, 1.092 mmol) in Essigsäureethylester (4 ml) wurde mit einer 2,4,6-Tripropyl- 1,3, 5,2,4,6- trioxatriphosphinan-2,4,6-trioxid-Lösung (50% in DMF, 0.638 ml, 1.092 mmol) versetzt und dann 3 h bei Rückfluss (Ölbad Temperatur 80°C) gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit DMSO (1 ml) versetzt und der Essigsäureethylester wurde am Rotationsverdampfer entfernt. Der Rückstand wurde über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von Acetonitril/W asser mit 0.1 %> Trifluoressigsäure). Man erhielt 57 mg (21% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (400 MHz, DMSO-i/e) δ ppm 1.34 (s, 9 H), 1.44 (s, 3 H), 1.46 (s, 3 H), 2.29 (s, 3 H), 2.94 (dd, 1 H), 3.04 - 3.14 (m, 1 H), 4.37 - 4.49 (m, 1 H), 7.29 (d, 3 H), 7.44 (d, 2 H), 7.47 (s, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 7.80 (d, 2 H), 7.96 (d, 2 H), 10.36 (br. s, 1 H), 14.33 (br. s, 1 H), 15.18 (br. s, 1 H). LC-MS (Methode 1): Rt = 0.92 min; MS (ESIneg): m/z = 736 [M-H]". Beispiel 3A
Methyl-2,2,3,3-tetrafluor-3-[5-(4- {[4-(2-isopropyl-5-methyl-l/ -benzimidazol-6-yl)-L- phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/-l,2,4-triazol-3-yl]propanoat-Hydrochlorid
Figure imgf000035_0001
Eine Lösung aus Methyl-3-[5-(4- {[ V-(fer?-butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-l/ -benz- imidazol-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetraίΊuo ropanoat (56 mg, 0.076 mmol) in Dioxan (1.5 ml) wurde mit einer 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1 ,4-Dioxan (0.29 ml, 1.14 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Der ausgefallene Feststoff wurde abfiltriert und mit Dioxan/Acetonitril gewaschen. Der Feststoff wurde am Hochvakuum nachgetrocknet. Man erhielt 58 mg (quant.) der Titelverbindung, die direkt weiter ohne Reinigung umgesetzt wurde.
'H NMR (400 MHz, DMSO-ok) δ ppm 1.45 (s, 3 H), 1.47 (s, 3 H), 2.26 (s, 3 H), 3.19 - 3.32 (m, 2 H), 4.30 - 4.38 (m, 1 H), 7.32 (d, 2 H), 7.42 (d, 2 H), 7.45 (s, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 7.76 (d, 2 H), 8.01 (d, 2 H), 8.39 - 8.52 (m, 3 H), 10.99 (br. s, 1 H), 14.68 (br. s, 1 H), 15.29 (s, 1 H). LC-MS (Methode 1): Rt = 0.60 min; MS (ESIneg): m/z = 636 [M-H-HC1]\
Beispiel 4A
Methyl-3- {5-[4-({ V-[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)amino]methyl} cyclohexyl)carbonyl]-4-(2- isopropyl-5-methyl- l_f/-benzimidazol-6-yl)-L-phenylalanyl} amino)phenyl]-4_f/- 1 ,2,4-triazol-3-yl} - 2,2,3, 3-tetrafluorpropanoat
Figure imgf000036_0001
Eine Lösung von Methyl-2,2,3,3-tetrafluor-3-[5-(4- {[4-(2-isopropyl-5-methyl-l_f/-benzimidazol-6- yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4/ -l,2,4-triazol-3-yl]propanoat-Hydrochlorid (56 mg, 0.083 mmol) in DMF (1 ml) wurde mit ?ra«s-4-{[(fer^Butoxycarbonyl)amino]methyl}- cyclohexancarbonsäure (23.5 mg, 0.091 mmol) und N,N-Diisopropylethylamin (0.043 ml, 0.25 mmol) versetzt. Die Lösung wurde mit HATU (38 mg, 0.10 mmol) versetzt und 4 h bei RT gerührt. Der Rückstand wurde mit wenig Wasser und Acetonitril versetzt, über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure). Man erhielt 47 mg (32%o d. Th.) der Titelverbindung, als 1 : 1 Gemisch mit einem Undefinierten Nebenprodukt. Die Mischung wurde weiter eingesetzt ohne weitere Reinigung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.95 min; MS (ESIneg): m/z = 875 [M-H]\ Beispiel 5A 3- {5-[4-( {N-[(trans-4- {[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]methyl} cyclohexyl)carbonyl]-4-(2-isopropyl- 5-methyl- l_f/-benzimidazol-6-yl)-L-phenylalanyl} amino)phenyl]-4_f/- 1 ,2,4-triazol-3-yl} -2,2,3,3- tetrafluorpropansäure
Figure imgf000037_0001
Methyl-3- {5-[4-({A^-[(?ra«5-4-{[(fer^butoxycarbonyl)amino]methyl} cyclohexyl)carbonyl]-4-( isopropyl-5-methyl- l_f/-benzimidazol-6-yl)-L-phenylalanyl} amino)phenyl]-4//- 1 ,2,4-triazol-3-yl} - 2,2,3, 3-tetrafluorpropanoat (46 mg, 0.052 mmol, 1 : 1 Gemisch mit einem Undefinierten Nebenprodukt) wurde in Tetrahydrofuran/Wasser 4/1 (1.5 ml) gelöst, mit Lithiumhydroxid- monohydrat (22 mg, 0.525 mmol) versetzt und 1 h bei RT gerührt. Die Lösung wurde mit IN Salzsäure auf pH 5-6 eingestellt. Das ausgefallene Öl wurde von der wässerigen Phase abdekantiert und am Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 38 mg (47% d.Th.) der Titelverbindung, als Gemisch, das ohne weitere Reinigung weiter eingesetzt wurde. LC-MS (Methode 1): Rt = 0.84 min; MS (ESIneg): m/z = 861 [M-H]\
Beispiel 6A
6-Brom-2-isopropyl-5-methyl-l_f/-imidazo[4,5-b]pyridin
Figure imgf000037_0002
5-Brom-6-methylpyridin-2,3-diamin (3.00 g, 14.85 mmol) und 2-Methylpropionaldehyd (1.29 g, 17.82 mmol) wurden in Ethanol vorgelegt, mit Cobaltdihydroxid (138 mg, 1.49 mmol) versetzt und 2 Tage bei RT gerührt. Zusätzliches Cobaltdihydroxid (345 mg, 3.71 mmol) wurde dazugegeben und die Mischung wurde noch 3 Tage bei 50°C gerührt. Das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt und der Rückstand wurde mittels Flash-Chromatographie (Laufmittel: Gradient von Cyclohexan/Essigsäureethylester 2: 1 bis 1 :2) gereinigt. Die produkthaltigen Fraktionen wurden am Rotationsverdampfer eingeengt und der Rückstand am Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 2.80 g (72% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.63 min; MS (ESIneg): m/z = 252 [M-H]\ Beispiel 7A
/V-(fer?-Butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-l_f/-imidazo[4,5-b]pyridin-6-yl)-L-phenylalanin
Figure imgf000038_0001
6-Brom-2-isopropyl-5-methyl-lJf/-imidazo[4,5-b]pyridin (500 mg, 1.97 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'- Octamethyl-2,2'-bi-l,3,2-dioxaborolan (600 mg, 2.36 mmol) und Kaliumacetat (579 mg, 5.90 mmol) wurden in DMSO (8 ml) in einem Mikrowellengläschen vorgelegt, mit Argon entgast und anschließend mit [1,1 -Bis-(Diphenylphosphino)-ferrocen]-Dichlo alladium-Dichlormethan- Komplex (80.3 mg, 0.098 mmol) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2 h bei 120°C (Ölbad) gerührt, auf RT gekühlt und mit 4-Brom-/V-(fer?-butoxycarbonyl)-L-phenylalanin (564 mg, 1.64 mmol) versetzt und nochmal mit Argon entgast. Anschließend wurden 2N wässerige Natriumcarbonat-Lösung (2.46 ml, 4.92 mmol) und [l,l-Bis-(Diphenylphosphino)-ferrocen]- Dichlo alladium-Dichlormethan-Komplex (134 mg, 0.164 mmol) zugegeben und die Reaktion wurde 2 h bei 120°C in der Mikrowelle gerührt. Der Rückstand wurde mit DMSO/Wasser/Acetonitril (ca. 5 ml) verdünnt, über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure). Man erhielt 138 mg (76%o Reinheit, 15%o d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.65 min; MS (ESIneg): m/z = 437 [M-H]". Beispiel 8A
Methyl-3-[5-(4- {[A -(fer^butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-meth^
yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4/ -l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafΊuo ropanoat
Figure imgf000039_0001
Eine Suspension aus V-(fer?-Butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-l_f/-imidazo[4,5-b]pyridin- 6-yl)-L-phenylalanin (135 mg, 76% Reinheit, 0.233 mmol), Methyl-3-[5-(4-aminophenyl)-4_f/- l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluorpropanoat (82 mg, 0.26 mmol), N,N-Diisopropylethylamin (0.12 ml, 0.70 mmol) in Essigsäureethylester (3 ml) wurde mit einer 2,4,6-Tripropyl- 1,3, 5,2,4,6- trioxatriphosphinan-2,4,6-trioxid-Lösung (50% in DMF, 0.41 ml, 0.70 mmol) versetzt und dann 3 h bei Rückfluss (Ölbad Temperatur 80°C) gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit DMSO (1 ml) versetzt und der Essigsäureethylester wurde am Rotationsverdampfer entfernt. Der Rückstand wurde über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von Acetonitril/W asser mit 0.1 %> Trifluoressigsäure). Man erhielt 55 mg (32%o d. Th.) der Titelverbindung. Ή NMR (400 MHz, DMSO-rf6) δ ppm 1.34 (s, 9 H), 1.40 (s, 3 H), 1.42 (s, 3 H), 2.47 (s, 3 H), 2.95 (dd, 1 H), 3.10 (dd, 1 H), 3.29 - 3.38 (m, 1 H), 4.38 - 4.47 (m, 1 H), 7.30 (d, 1 H), 7.36 (d, 2 H), 7.47 (d, 2 H), 7.80 (d, 2 H), 7.93 (br. s., 1 H), 7.97 (d, 2 H), 10.37 (br. s, 1 H), 15.17 (br. s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.95 min; MS (ESIneg): m/z = 737 [M-H]\
Beispiel 9A Methyl-2,2,3,3-tetrafluor-3-[5-(4- {[4-(2-isopropyl-5-methyl-l/ -imidazo[4,5-b]pyridin-6-yl)-L- phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/-l,2,4-triazol-3-yl]propanoat-Hydrochlorid
Figure imgf000040_0001
Eine Lösung aus Methyl-3-[5-(4- {[ V-(fer?-butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-l_f/- imidazo[4,5-b]pyridin-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3- tetrafluorpropanoat (54 mg, 0.073 mmol) in Dioxan (1.5 ml) wurde mit einer 4 M Hydrochlorid- Lösung in 1,4-Dioxan (0.27 ml, 1.1 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Das Gemisch wurde am Rotationsverdampfer eingeengt und am Hochvakuum nachgetrocknet. Man erhielt 54 mg (quant.) der Titelverbindung, die direkt weiter ohne Reinigung umgesetzt wurde.
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.62 min; MS (ESIneg): m/z = 637 [M-H-HCl]", Beispiel 10A
Methyl-3- {5-[4-({ V-[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)amino]methyl} cyclohexyl)carbonyl]-4-(2- isopropyl-5-methyl- l_f/-imidazo[4,5-b]pyridin-6-yl)-L-phenylalanyl} amino)phenyl]-4_f/- 1 ,2,4- triazol-3-yl} -2,2,3, 3 -tetrafluorpropanoat
Figure imgf000041_0001
Eine Lösung von Methyl-2,2,3,3-tetrafluor-3-[5-(4- {[4-(2-isopropyl-5-methyl-l_f/-imidazo[4,5- b]pyridin-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/-l,2,4-triazol-3-yl]propanoat-Hydrochlorid (52 mg, 0.077 mmol) in DMF (1 ml) wurde mit ?ra«s-4-{[(fer^Butoxycarbonyl)amino]methyl}- cyclohexancarbonsäure (21.8 mg, 0.085 mmol) und N,N-Diisopropylethylamin (0.040 ml, 0.23 mmol) versetzt. Die Lösung wurde mit HATU (35 mg, 0.092 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Der Rückstand wurde mit wenig Wasser und Acetonitril versetzt, über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure). Man erhielt 23 mg (28% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.93 min; MS (ESIneg): m/z = 876 [M-H]\
Beispiel IIA
/V-(fer?-Butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-3-oxo-2,3-dihydro-l/ -indazol-6-yl)-L- Phenylalanin
Figure imgf000042_0001
6-Brom-2-isopropyl-5-methyl-l,2-dihydro-3H-indazol-3-on (500 mg, 1.86 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'- Octamethyl-2,2'-bi-l,3,2-dioxaborolan (566 mg, 2.23 mmol) und Kaliumacetat (547 mg, 5.57 mmol) wurden in DMSO (8 ml) in einem Mikrowellengläschen vorgelegt, mit Argon entgast und anschließend mit [l,l-Bis-(Diphenylphosphino)-ferrocen]-Dichlo alladium-Dichlormethan- Komplex (76 mg, 0.093 mmol) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2 h bei 120°C (Ölbad) gerührt, auf RT gekühlt und mit 4-Brom- V-(fer?-butoxycarbonyl)-L-phenylalanin (532 mg, 1.55 mmol) versetzt und nochmal mit Argon entgast. Anschließend wurden 2N wässerige Natriumcarbonat-Lösung (2.32 ml, 4.64 mmol) und [l,l-Bis-(Diphenylphosphino)-ferrocen]- Dichlo alladium-Dichlormethan-Komplex (126 mg, 0.16 mmol) zugegeben und die Reaktion wurde 2 h bei 120°C in der Mikrowelle gerührt. Der Rückstand wurde mit DMSO/Wasser/Acetonitril (ca. 5 ml) verdünnt, über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von AcetonitrilAVasser mit 0.1% Trifluoressigsäure). Man erhielt 143 mg (83% Reinheit, 17%o d. Th.) der Titelverbindung. LC-MS (Methode 1): Rt = 0.88 min; MS (ESIneg): m/z = 452 [M-H]\
Beispiel 12A
Methyl-3-[5-(4- {[/V-(fer?-butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-3-oxo-2,3-dihydro-l/ -indazol- 6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropanoat
Figure imgf000043_0001
Eine Suspension aus V-(fert-Butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-3-oxo-2,3-dihydro-l/ - indazol-6-yl)-L-phenylalanin (135 mg, 83% Reinheit, 0.257 mmol), Methyl-3-[5-(4-aminophenyl)- 4_£M,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluorpropanoat (90 mg, 0.28 mmol), N,N-Diisopropylethylamin (0.13 ml, 0.77 mmol) in Essigsäureethylester (3 ml) wurde mit einer 2,4,6-Tripropyl- 1,3, 5,2,4,6- trioxatriphosphinan-2,4,6-trioxid-Lösung (50% in DMF, 0.45 ml, 0.77 mmol) versetzt und dann 3 h bei Rückfluss (Ölbad Temperatur 80°C) gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit DMSO (1 ml) versetzt und der Essigsäureethylester wurde am Rotationsverdampfer entfernt. Der Rückstand wurde über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von Acetonitril/Wasser mit 0.1 %> Trifluoressigsäure). Man erhielt 66 mg (92%> Reinheit, 3 P/o d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.09 min; MS (ESIneg): m/z = 752 [M-H]\
Beispiel 13A
Methyl-2,2,3,3-tetrafluor-3-[5-(4- {[4-(2-isopropyl-5-methyl-3-oxo-2,3-dihydro-l/ -indazol-6-yl)-L- phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/- 1 ,2,4-triazol-3-yl]propanoat-Hydrochlorid
Figure imgf000044_0001
Eine Lösung aus Methyl-3-[5-(4- {[ V-(fer?-butoxycarbonyl)-4-(2-isopropyl-5-methyl-l_f/- imidazo[4,5-b]pyridin-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3- tetrafluorpropanoat (65 mg, 0.086 mmol) in Dioxan (1.5 ml) wurde mit einer 4 M Hydrochlorid- Lösung in 1,4-Dioxan (0.32 ml, 1.29 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Das Gemisch wurde am Rotationsverdampfer eingeengt und am Hochvakuum nachgetrocknet. Man erhielt 70 mg (quant.) der Titelverbindung, die direkt weiter ohne Reinigung umgesetzt wurde.
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.70 min; MS (ESIneg): m/z = 652 [M-H-HC1]\
Beispiel 14A Methyl-3- {5-[4-( {N-[(trans-4- {[(fer?-butoxycarbonyl)amino]methyl} cyclohexyl)carbonyl]-4-(2- isopropyl-5-methyl-3-oxo-2,3-dihydro- l_f/-indazol-6-yl)-L-phenylalanyl} amino)phenyl]-4_f/- 1 ,2,4- triazol-3-yl} -2,2,3, 3 -tetrafluorpropanoat
Figure imgf000045_0001
Eine Lösung von Methyl-2,2,3,3-tetrafluor-3-[5-(4- {[4-(2-isopropyl-5-methyl-3-oxo-2,3-dihydro- l/ -indazol-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/-l,2,4-triazol-3-yl]propanoat-Hydrochlorid (68 mg, 0.99 mmol) in DMF (1 ml) wurde mit ?ra«s-4-{[(fer^Butoxycarbonyl)amino]methyl}- cyclohexancarbonsäure (28 mg, 0.108 mmol) und N,N-Diisopropylethylamin (0.05 ml, 0.30 mmol) versetzt. Die Lösung wurde mit HATU (45 mg, 0.12 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Der Rückstand wurde mit wenig Wasser und Acetonitril versetzt, über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure). Man erhielt 20 mg (19% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.05 min; MS (ESIneg): m/z = 891 [M-H]\
Beispiel 15A
(2iS)-2-[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]-3-[4'-(methoxycarbonyl)-2'-methylbiphenyl-4- yl]propansäure
Figure imgf000046_0001
CH3
Zu einer Lösung aus 4-Brom- V-(fert-butoxycarbonyl)-L-phenylalanin (10.39 g, 30.18 mmol) und Methyl-3-methyl-4-(4,4,5,5-tetramethyl-l,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzoat (10.0 g, 36.21 mmol) in 1,2-Dimethoxyethan (233 ml) wurden Ethanol (93 ml), 2N wässerige Natriumcarbonat-Lösung (30.2 ml, 60.36 mmol) und [l,l-Bis-(Di henyl hos hino)-ferrocen]-Dichlo alladium- Dichlormethan-Komplex (1.23 g, 1.51 mmol) gegeben. Es wurde 4 h bei Rückfluss (Ölbad Temperatur 100°C) nachgerührt. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert und das Filtrat wurde am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand wurde in Essigsäureethylester gelöst und die organische Phase wurde einmal mit 0.5N Salzsäure und einmal mit gesättiger wässeriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer wurde das Lösungsmittel entfernt. Der Rückstand wurde mit Flash- Chromatographie gereinigt (Laufmittel: Gradient Essigsäureethylester/Cyclohexan, 3:7 - 1 : 1, Essigsäureethylester pur, Essigsäureethylester/Methanol 1 : 1 - 1 :4). Die produkthaltigen Fraktionen wurden gesammelt und das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt. Man erhielt 12.09 g (96% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (400 MHz, DMSO-i ) δ ppm 1.32 (s, 9 H), 2.29 (s, 3 H), 2.83 - 2.94 (m, 1 H), 3.08 (d, 1 H), 3.87 (s, 3 H), 4.11 - 4.21 (m, 1 H), 7.10 (br. s., 1 H), 7.25 - 7.40 (m, 5 H), 7.82 (dd, 1 H), 7.89 (s, 1 H), 12.70 (br. s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.09 min; MS (ESIneg): m/z = 412 [M-H]\ Beispiel 16A
Methyl-4'-[(2iS)-2-[(fer?-butoxycarbonyl)amino]-3-oxo-3-({4-[3-(l,l,2,2-tetrafluor-3-methoxy-3- oxopropyl)- IH- 1 ,2,4-triazol-5-yl]phenyl} amino)propyl]-2-methylbiphenyl-4-carboxylat
Figure imgf000047_0001
CH3
Eine Suspension von (2iS)-2-[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]-3-[4'-(methoxycarbonyl)-2'- methylbiphenyl-4-yl]propansäure (5.0 g, 12.09 mmol) in Essigsäureethylester (120 ml) wurde mit Methyl-3-[5-(4-aminopllenyl)-l_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropanoat (4.23 g, 13.3 mmol), N,N-Diisopropylethylamin (6.3 ml, 36.3 mmol) und einer 2,4,6-Tripropyl- 1,3, 5,2,4,6- trioxatriphosphinan-2,4,6-trioxid-Lösung (50% in DMF, 21.2 ml, 36.3 mmol) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 h bei Rückfluss (Ölbad Temperatur 85°C) gerührt, anschließend auf RT gekühlt und mit Essigsäureethylester verdünnt. Die organishe Phase wurde zweimal mit Wasser, einmal mit verdünnter Natriumhydrogencarbonat-Lösung und einmal mit gesättiger wässeriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt. Man erhielt 7.5 g (87% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.25 min; MS (ESIneg): m/z = 712 [M-H]\ Beispiel 17A
Methyl-4'-[(21S)-2-amino-3-oxo-3-({4-[3-(l, 1,2,2 -tetrafluor-3-methoxy-3-oxopropyl)-l#- 1,2,4- triazol-5-yl]phenyl}amino)propyl]-2-methylbiphenyl-4-carboxylat-Hydrochlorid
Figure imgf000048_0001
Eine Lösung aus Methyl-4'-[(2iS)-2-[(fer?-butoxycarbonyl)amino]-3-oxo-3-({4-[3-(l, 1,2,2- tetrafluor-3-methoxy-3-oxopropyl)- IH- 1 ,2,4-triazol-5-yl]phenyl} amino)propyl]-2-methylbiphenyl- 4-carboxylat (7.49 g, 0.055 mmol) in Dioxan (100 ml) wurde mit einer 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan (39.4 ml, 157.4 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt und der Rückstand am Hochvakuum nachgetrocknet. Man erhielt 7.67 g (quant.) der Titelverbindung, die ohne Reinigung weiter umgesetzt wurde.
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.85 min; MS (ESIneg): m/z = 612 [M-H-HC1]-.
Beispiel 18A Methyl-4'-[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]amino}- 3-oxo-3-( {4-[3-(l ,1 ,2,2-tetrafluor-3-methoxy-3-oxopropyl)- IH- 1 ,2,4-triazol-5-yl]phenyl} - amino)propyl]-2-methylbiphenyl-4-carboxylat
Figure imgf000049_0001
Eine Lösung aus Methyl-4'-[(2iS)-2-amino-3-oxo-3-({4-[3-(l,l,2,2-tetrafluor-3-methoxy-3- oxopropyl)- IH- 1 ,2,4-triazol-5-yl]phenyl} amino)propyl]-2-methylbiphenyl-4-carboxylat- Hydrochlorid (7.66 g, 10.7 mmol) in DMF (40 ml) wurde mit fer?-Butyl-[(trans-4- carbamoylcyclohexyl)methyl]carbamat (3.04 g, 1 1.8 mmol), N,N-Diisopropylethylamin (5.6 ml, 32.2 mmol) und HATU (4.90 g, 12.9 mmol) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei RT gerührt. Die Reaktionslösung wurde mit Wasser (400 ml) versetzt und der ausgefallene Feststoff wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und am Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 9.23 g (83% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 1.21 min; MS (ESIneg): m/z = 851 [M-H]\
Beispiel 19A
Methyl-4'- {(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]amino}- 3-[(4- {3-[3-(dimethylamino)- 1 ,1 ,2,2-tetrafluor-3-oxopropyl]- IH- 1 ,2,4-triazol-5-yl}phenyl)amino]- 3-oxopropyl} -2-methylbiphenyl-4-carboxylat
Figure imgf000050_0001
Figure imgf000050_0002
Eine Lösung aus Methyl-4'-[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)- carbonyljamino} -3-oxo-3-( {4-[3-(l , 1 ,2,2-tetrafluor-3-methoxy-3-oxopropyl)- IH- 1 ,2,4-triazol-5- yl]phenyl}amino)propyl]-2-methylbiphenyl-4-carboxylat (1.80 g, 2.1 1 mmol) in THF (18 ml) wurde mit einer 2M Dimethylamin-Lösung in THF (5.3 ml, 10.56 mmol) versetzt und das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei RT gerührt. Die Reaktionslösung wurde am Rotationsverdampfer eingeengt und der Rückstand wurde am Hochvakuum getrocknet. Man erhielt 2.06 g (quant.) der Titelverbindung, die ohne Reinigung weiter umgesetzt wurde. LC-MS (Methode 1): Rt = 1.20 min; MS (ESIneg): m/z = 864 [M-H]\
Beispiel 20A
4'-[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]amino} -3-({4-[3- (2-carboxy- 1 , 1,2,2 -tetrafluorethyl)- IH- 1 ,2,4-triazol-5-yl]phenyl} amino)-3-oxopropyl]-2- methylbiphenyl-4-carbonsäure
Figure imgf000051_0001
Methyl-4'- {(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer^butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]am 3-[(4- {3-[3-(dimethylamino)- 1 ,1 ,2,2-tetrafluor-3-oxopropyl]- IH- 1 ,2,4-triazol-5-yl}phenyl)amino]- 3-oxopropyl}-2-methylbiphenyl-4-carboxylat (3.35 g, 3.89 mmol) wurde in Tetrahydrofuran/Wasser 4/1 (35 ml) gelöst, mit Lithiumhydroxid-Monohydrat (1.62 g, 38.7 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit 1 N Salzsäure leicht sauer gestellt und mit Essigsäureethylester zweimal extrahiert. Die organishe Phase wurde mit gesättiger wässeriger Natriumchlorid-Lösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt.Man erhielt 2.89 g (83% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.89 min; MS (ESIneg): m/z = 823 [M-H]\
Beispiel 21 A
3-[5-(4- {[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]amino}-3- (4'- {[(2iS)-l-methoxypropan-2-yl]carbamoyl}-2'-methylbiphenyl-4-yl)propanoyl]amino}phenyl)- \H- 1 ,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluorpropansäure
Figure imgf000052_0001
(2-carboxy- 1 , 1,2,2 -tetrafluorethyl)- IH- 1 ,2,4-triazol-5-yl]phenyl} amino)-3-oxo-propyl]-2- methylbiphenyl-4-carbonsäure (100 mg, 0.12 mmol) und (iS)-(+)-l-Methoxy-2-propylamin (22 mg, 0.24 mmol) wurden in 1.5 ml Dimethylformamid gelöst und mit N,N-Diisopropyl-ethylamin (0.04 ml, 0.24 mmol) sowie N-[(Dimethylamino)(3/ -[l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methyliden]- N-methyl-methanaminium-hexafluorophosphat (55.3 mg, 0.15 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde über einen MiUiporefüter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure (Gradient)). Man erhielt 51 mg (44%o d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.93 min; MS (ESIpos): m/z = 896 [M+H]+.
Beispiel 22A
3-[5-(4- {[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fert-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]amino}-3- (4'- {[(2iS)-l-hydroxypropan-2-yl]carbamoyl}-2'-methylbiphenyl-4-yl)propanoyl]amino}phenyl)- \H- 1 ,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluorpropansäure
Figure imgf000053_0001
CH3
Figure imgf000053_0002
(2-carboxy- 1 , 1,2,2 -tetrafluorethyl)- IH- 1 ,2,4-triazol-5-yl]phenyl} amino)-3-oxo-propyl]-2- methylbiphenyl-4-carbonsäure (100 mg, 0.12 mmol) und (iS)-(+)-2-Amino-l-propanol (18 mg, 0.24 mmol) wurden in 1.5 ml Dimethylformamid gelöst und mit N,N-Diisopropyl-ethylamin (0.04 ml, 0.24 mmol) sowie N-[(Dimethylamino)(3_f/-[l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3-yloxy)methyliden]-N- methyl-methanaminium-hexafluorophosphat (55.3 mg, 0.15 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde über einen Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure (Gradient)). Man erhielt 50 mg (34%o d. Th.) der Titelverbindung (mit ca. 25%o ohne fert-Butoxycarbonyl- Schutzgruppe).
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.85 min; MS (ESIneg): m/z = 880 [M-H]\ Beispiel 23A
3-[5-(4- {[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fert-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)carbonyl]amino}-3- (4'- {[(2iS)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin- 1 -yljcarbonyl} -2'-methylbiphenyl-4-yl)propanoyl]amino} - phenyl)- \H- 1 ,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluorpropansäure
Figure imgf000054_0001
(2-carboxy- 1 , 1,2,2 -tetrafluorethyl)- IH- 1 ,2,4-triazol-5-yl]phenyl} amino)-3-oxo-propyl]-2- methylbiphenyl-4-carbonsäure (100 mg, 0.12 mmol) und (iS)-(+)-2-(Hydroxymethyl)pyrrolidin (24.5 mg, 0.24 mmol) wurden in 1.5 ml Dimethylformamid gelöst und mit N,N-Diisopropyl- ethylamin (0.04 ml, 0.24 mmol) sowie N-[(Dimethylamino)(3_f/-[l,2,3]triazolo[4,5-b]pyridin-3- yloxy)methyliden]-N-methyl-methanaminium-hexafluoropliospliat (55.3 mg, 0.15 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Die Reaktionsmischung wurde über einen Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure (Gradient)). Man erhielt 55 mg (38%> d. Th.) der Titelverbindung (mit ca. 17% ohne tert- Butoxycarbonyl-S chutzgruppe) .
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.95 min; MS (ESIneg): m/z = 906 [M-H]".
Ausführungsbeispiele Beispiel 1
3-[5-(4- {[A - {[?ra?M-4-(Aminomethyl)cyclohex
benzimidazol-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3- tetrafluo ropansäure-Hydrochlorid
Figure imgf000055_0001
Eine Lösung aus 3- {5-[4-({ V-[(?ra«5-4-{[(fert-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)- carbonyl]-4-(2-isopropyl-5-methyl-l_f/-benzimidazol-6-yl)-L-phenylalanyl}amino)phenyl]-4_f/- l,2,4-triazol-3-yl}-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure (38 mg, 0.025 mmol, 56% Reinheit) in Dioxan (1 ml) wurde mit einer 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan (0.092 ml, 0.37 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt und der Rückstand in DMSO/Acetonitril (ca. 3 ml) gelöst. Die Lösung wurde über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure). Die erhaltene Substanz wurde mit 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1 ,4- Dioxan (ca. 0.2 ml) versetzt und die Mischung wurde lyophilisiert. Man erhielt 11.7 mg (57%o d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (400 MHz, DMSO-i ) δ ppm 0.83 - 1.03 (m, 2 H), 1.12 - 1.35 (m, 2 H), 1.45 (s, 3 H), 1.47 (s, 3 H), 1.53 - 1.63 (m, 1 H), 1.76 (d, 3 H), 2.12 - 2.22 (m, 1 H), 2.27 (s, 3 H), 2.64 (m, 2 H), 2.97 (dd, 1 H), 3.17 (dd, 1 H), 3.42 - 3.53 (m, 1 H), 4.71 - 4.82 (m, 1 H), 7.26 (d, 2 H), 7.37 - 7.45 (m, 3 H), 7.64 (s, 1 H), 7.78 (m, 5 H), 7.97 (d, 2 H), 8.27 (d, 1 H), 10.44 (br. s, 1 H), 15.08 (br. s, 1 H). LC-MS (Methode 1): Rt = 0.58 min; MS (ESIneg): m/z = 761 [M-H-HC1]\
Beispiel 2
3-[5-(4- {[ V- {[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}-4-(2-isopropyl-5-methyl-l_f/- imidazo[4,5-b]pyridin-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3- tetrafluo ropansäure-Hydrochlorid
Figure imgf000056_0001
Methyl-3- {5-[4-({ V-[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)amino]methyl} cyclohexyl)carbonyl]-4-(2- isopropyl-5-methyl- l_f/-imidazo[4,5-b]pyridin-6-yl)-L-phenylalanyl} amino)phenyl]-4_f/- 1 ,2,4- triazol-3-yl} -2,2,3, 3-tetrafluorpropanoat (22 mg, 0.025 mmol) wurde in Tetrahydrofuran/Wasser 4/1 (1 ml) gelöst, mit Lithiumhydroxidmonohydrat (10.5 mg, 0.251 mmol) versetzt und 1 h bei RT gerührt. Die Lösung wurde mit IN Salzsäure auf pH 5-6 eingestellt, anschließend eingefroren und lyophilisiert. Der Rückstand wurde in Dioxan (1 ml) gelöst, mit einer 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan (0.094 ml, 0.38 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt und der Rückstand in DMSO/Acetonitril (ca. 3 ml) gelöst. Die Lösung wurde über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure). Die erhaltene Substanz wurde mit 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1 ,4-Dioxan (ca. 0.2 ml) versetzt und die Mischung wurde lyophilisiert. Man erhielt 8.9 mg (43%o d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (400 MHz, DMSO-i ) δ ppm 0.82 - 1.03 (m, 2 H), 1.12 - 1.36 (m, 3 H), 1.42 (s, 3 H), 1.44 (s, 3 H), 1.54 - 1.63 (m, 1 H), 1.70 - 1.86 (m, 3 H), 2.1 1 - 2.23 (m, 1 H), 2.47 (s, 3 H), 2.60 - 2.70 (m, 2 H), 2.98 (dd, 1 H), 3.14 - 3.20 (m, 1 H), 3.34 - 3.44 (m, 1 H), 4.71 - 4.83 (m, 1 H), 7.35 (d, 2 H), 7.45 (d, 2 H), 7.79 (br. d, 5 H), 7.93 (br. s, 1 H), 7.98 (d, 2 H), 8.28 (d, 1 H), 10.49 (br. s, 1 H), 15.13 (br. s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.58 min; MS (ESIneg): m/z = 762 [M-H-HC1]\ Beispiel 3 3-[5-(4- {[ V- {[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}-4-(2-isopropyl-5-methyl-3-oxo-2,3- dihydro- l_f/-indazol-6-yl)-L-phenylalanyl]amino}phenyl)-4_f/- 1 ,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3- tetrafluorpropansäure-Hydrochlorid
Figure imgf000057_0001
Methyl-3- {5-[4-({ V-[(?ra«5-4-{[(fer?-butoxycarbonyl)amino]methyl} cyclohexyl)carbonyl]-4-(2- isopropyl-5-methyl-3-oxo-2,3-dihydro- l_f/-indazol-6-yl)-L-phenylalanyl} amino)phenyl]-4_f/- 1 ,2,4- triazol-3-yl}-2,2,3,3-tetrafluorpropanoat (19 mg, 0.021 mmol) wurde in Tetrahydrofuran/Wasser 4/1 (1 ml) gelöst, mit Lithiumhydroxidmonohydrat (9 mg, 0.21 mmol) versetzt und 1 h bei RT gerührt. Die Lösung wurde mit IN Salzsäure auf pH 5-6 eingestellt, anschließend eingefroren und lyophilisiert. Der Rückstand wurde in Dioxan (1 ml) gelöst, mit einer 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan (0.08 ml, 0.32 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt und der Rückstand in DMSO/Acetonitril (ca. 3 ml) gelöst. Die Lösung wurde über ein Milliporefilter filtriert und mit präparativer HPLC gereinigt (Laufmittel: Gradient von Acetonitril/Wasser mit 0.1% Trifluoressigsäure). Die erhaltene Substanz wurde mit 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1 ,4-Dioxan (ca. 0.2 ml) versetzt und die Mischung wurde lyophilisiert. Man erhielt 7.8 mg (41% d. Th.) der Titelverbindung. Ή NMR (400 MHz, DMSO-rf6) δ ppm 0.83 - 1.02 (m, 2 H), 1.10 - 1.20 (m, 1 H), 1.28 (m, 7 H), 1.42 - 1.52 (m, 1 H), 1.53 - 1.62 (m, 1 H), 1.75 (br. s., 3 H), 2.10 - 2.22 (m, 4 H), 2.64 (br. s., 2 H), 2.91 - 3.01 (m, 1 H), 3.17 (s, 1 H), 4.54 - 4.63 (m, 1 H), 4.72 - 4.83 (m, 1 H), 6.97 (s, 1 H), 7.26 (d, 2 H), 7.40 (d, 2 H), 7.51 (s, 1 H), 7.65 - 7.76 (m, 3 H), 7.80 (d, 2 H), 7.98 (d, 2 H), 8.24 (d, 1 H), 9.80 (br. s, 1 H), 10.47 (br. s, 1 H), 15.11 (br. s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.67 min; MS (ESIneg): m/z = 777 [M-H-HC1]".
Beispiel 4
3-[5-(4- {[(21S)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)-3-(4'- {[(21S)-l- methoxypropan-2-yl]carbamoyl} -2'-methylbiphenyl-4-yl)propanoyl]amino}phenyl)- \H- 1 ,2,4- triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluoipropansäure-Hydrochlorid
Figure imgf000058_0001
Eine Lösung aus 3-[5-(4- {[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)- carbonyljamino} -3-(4'- {[(2iS)- 1 -methoxypropan-2-yl]carbamoyl} -2'-methylbiphenyl-4- yl)propanoyl]amino}phenyl)-l_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure (47 mg, 0.052 mmol) in Dioxan (1.5 ml) wurde mit einer 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan (0.20 ml, 0.79 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Der ausgefallene Feststoff wurde ab filtriert und mit Dioxan/Acetonitril gewaschen. Der Feststoff wurde am Hochvakuum nachgetrocknet. Man erhielt 40 mg (88% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (400 MHz, DMSO-i ) δ ppm 0.84 - 1.00 (m, 2 H), 1.14 (d, 3 H), 1.18 - 1.35 (m, 2 H), 1.42 - 1.52 (m, 1 H), 1.54 - 1.64 (m, 1 H), 1.68 - 1.82 (m, 3 H), 2.10 - 2.20 (m, 1 H), 2.23 (s, 3 H), 2.59 - 2.69 (m, 2 H), 2.95 (dd, 1 H), 3.13 (dd, 1 H), 3.27 (s, 3 H), 3.28 - 3.31 (m, 1 H), 3.41 (dd, 1 H), 4.16 - 4.25 (m, 1 H), 4.70 - 4.80 (m, 1 H), 7.23 (d, 1 H), 7.26 (d, 2 H), 7.38 (s, 2 H), 7.65 - 7.82 (m, 7 H), 7.97 (d, 2 H), 8.19 (d, 1 H), 8.23 (d, 1 H), 10.46 (br. s, 1 H), 15.10 (br. s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.68 min; MS (ESIneg): m/z = 794 [M-H-HCl]".
Beispiel 5 3-[5-(4- {[(21S)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)-3-(4'- {[(21S)-l- hydroxypropan-2-yl]carbamoyl} -2'-methylbiphenyl-4-yl)propanoyl]amino}phenyl)- IH- 1 ,2,4- triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluoipropansäure-Hydrochlorid
Figure imgf000059_0001
Eine Lösung aus 3-[5-(4- {[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)- carbonyljamino} -3-(4'- {[(2iS)- 1 -hydroxypropan-2-yl]carbamoyl} -2'-methylbiphenyl-4- yl)propanoyl]amino}phenyl)-l_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure (50 mg, 0.057 mmol) in Dioxan (1.5 ml) wurde mit einer 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan (0.21 ml, 0.85 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Der ausgefallene Feststoff wurde ab filtriert und mit Dioxan/Acetonitril gewaschen. Der Feststoff wurde am Hochvakuum nachgetrocknet. Man erhielt 42 mg (82% d. Th.) der Titelverbindung.
Ή NMR (400 MHz, DMSO-ok) δ ppm 0.84 - 1.03 (m, 2 H), 1.14 (d, 3 H), 1.17 - 1.37 (m, 2 H), 1.42 - 1.51 (m, 1 H), 1.54 - 1.62 (m, 1 H), 1.66 - 1.83 (m, 3 H), 2.10 - 2.19 (m, 1 H), 2.23 (s, 3 H), 2.59 - 2.69 (m, 2 H), 2.90 - 2.99 (m, 1 H), 3.13 (dd, 1 H), 3.34 (dd, 1 H), 3.47 (dd, 1 H), 3.97 - 4.07 (m, 1 H), 4.71 - 4.80 (m, 1 H), 7.22 (d, 1 H), 7.26 (d, 2 H), 7.39 (d, 2 H), 7.65 - 7.83 (m, 7 H), 7.97 (d, 2 H), 8.06 (d, 1 H), 8.23 (d, 1 H), 10.47 (br. s, 1 H), 15.14 (br. s, 1 H). LC-MS (Methode 1): Rt = 0.61 min; MS (ESIneg): m/z = 780 [M-H-HC1]". Beispiel 6
3-[5-(4- {[(21S)-2-({[?ra«5-4-(Aminomethyl)cyclohexyl]carbonyl}amino)-3-(4'- {[(21S)-2- (hydroxymethyl)pyrrolidin- 1 -yljcarbonyl} -2'-methylbiphenyl-4-yl)propanoyl]amino}phenyl)- \H- 1 ,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure-Hydrochlorid
Figure imgf000060_0001
Eine Lösung aus 3-[5-(4- {[(2iS)-2- {[(?ra«5-4-{[(fer?-Butoxycarbonyl)amino]methyl}cyclohexyl)- carbonyljamino} -3-(4'- {[(2iS)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin- 1 -yljcarbonyl} -2'-methylbiphenyl-4- yl)propanoyl]amino}phenyl)-l_f/-l,2,4-triazol-3-yl]-2,2,3,3-tetrafluo ropansäure (55 mg, 0.061 mmol) in Dioxan (1.5 ml) wurde mit einer 4 M Hydrochlorid-Lösung in 1,4-Dioxan (0.23 ml, 0.91 mmol) versetzt und über Nacht bei RT gerührt. Der ausgefallene Feststoff wurde ab filtriert und mit Dioxan/Acetonitril gewaschen. Der Feststoff wurde am Hochvakuum nachgetrocknet. Man erhielt 48 mg (88% d. Th.) der Titelverbindung.
'H NMR (400 MHz, DMSO-rf6) δ ppm 0.83 - 1.00 (m, 2 H), 1.09 - 1.35 (m, 2 H), 1.41 - 1.52 (m, 1 H), 1.54 - 1.62 (m, 1 H), 1.66 - 1.81 (m, 4 H), 1.83 - 2.00 (m, 3 H), 2.21 (s, 4 H), 2.59 - 2.69 (m, 2 H), 2.89 - 3.02 (m, 1 H), 3.08 - 3.17 (m, 1 H), 3.30 - 3.40 (m, 1 H), 3.41 - 3.53 (m, 2 H), 3.58 - 3.66 (m, 1 H), 4.08 - 4.18 (m, 1 H), 4.70 - 4.80 (m, 1 H), 7.19 (d, 1 H), 7.23 - 7.46 (m, 6 H), 7.63 - 7.76 (m, 3 H), 7.79 (d, 2 H), 7.97 (d, 2 H), 8.23 (d, 1 H), 10.46 (br. s, 1 H), 15.1 1 (br. s, 1 H).
LC-MS (Methode 1): Rt = 0.65 min; MS (ESIneg): m/z = 806 [M-H-HC1]-. B) Bewertung der physiologischen Wirksamkeit
Die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von thromboembolischen oder hyperfibrinolytischen Erkrankungen kann in folgenden Assaysystemen gezeigt werden: a) Testbeschreibungen (in vitro) a.l) Messung der FXIa-Hemmung
Zur Bestimmung der Faktor XIa-Hemmung der erfindungsgemäßen Substanzen wird ein biochemisches Testsystem verwendet, in dem die Umsetzung eines peptidischen Faktor Xla- Substrates zur Ermittlung der enzymatischen Aktivität von humanem Faktor XIa benutzt wird. Dabei spaltet Faktor XIa von dem peptischen Faktor XIa-Substrat das C-terminale Aminomethylcoumarin (AMC) ab, dessen Fluoreszenz gemessen wird. Die Bestimmungen werden in Mikrotiterplatten durchgeführt.
Prüfsubstanzen werden in Dimethylsulfoxid aufgelöst und seriell in Dimethylsulfoxid verdünnt (3000 μΜ bis 0.0078 μΜ; resultierende Endkonzentrationen im Test: 50 μΜ bis 0.00013 μΜ). Jeweils 1 μΐ der verdünnten Substanzlösungen werden in die Vertiefungen von weißen Mikrotiterplatten der Firma Greiner (384 Vertiefungen) vorgelegt. Anschließend werden nacheinander 20 μΐ Assaypuffer (50 mmol/1 Tris-Puffer pH 7.4; 100 mmol/1 Natriumchlorid; 5 mmol/1 Calciumchlorid; 0.1% bovines Serumalbumin) und 20 μΐ Faktor XIa der Firma Kordia (0.45 nM in Assaypuffer) hinzugefügt. Nach 15 min Inkubation wird die Enzymreaktion durch Zugabe von 20 μΐ des in Assaypuffer gelösten Faktor XIa Substrates Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg- AMC (10 μΜ in Assaypuffer) der Firma Bachem gestartet, für 30 min bei Raumtemperatur (22°C) inkubiert und anschließend eine Fluoreszensmessung durchgeführt (Anregung: 360 nM, Emission: 460 nM). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit denen von Kontrollansätzen ohne Prüfsubstanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen ICso-Werte berechnet. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle A aufgeführt:
Tabelle A
Beispiel-Nr. ICso [nM] Beispiel-Nr, ICse |n.Mj
1 0.34 2 < 0.13
3 0.31 4 0.43
5 0.5 6 0.85 a.2) Messung der Plasmin-Hemmung
Zur Bestimmung der Plasmin-Hemmung der erfindungsgemäßen Substanzen wird ein biochemisches Testsystem verwendet, in dem die Umsetzung eines peptidischen Plasmin- Substrates zur Ermittlung der enzymatischen Aktivität von humanem Plasmin benutzt wird. Dabei spaltet Plasmin von dem peptischen Plasmin-Substrat das C-terminale Aminomethylcoumarin (AMC) ab, dessen Fluoreszenz gemessen wird. Die Bestimmungen werden in Mikrotiterplatten durchgeführt.
Prüfsubstanzen werden in Dimethylsulfoxid aufgelöst und seriell in Dimethylsulfoxid verdünnt (3000 μΜ bis 0.0078 μΜ; resultierende Endkonzentrationen im Test: 50 μΜ bis 0.00013 μΜ). Jeweils 1 μΐ der verdünnten Substanzlösungen werden in die Vertiefungen von weißen Mikrotiterplatten der Firma Greiner (384 Vertiefungen) vorgelegt. Anschließend werden nacheinander 20 μΐ Assaypuffer (50 mmol/1 Tris-Puffer pH 7.4; 100 mmol/1 Natriumchlorid; 5 mmol/1 Calciumchlorid; 0.1% bovines Serumalbumin) und 20 μΐ Plasmin der Firma Kordia (0.3 μg/ml in Assaypuffer) hinzugefügt. Nach 15 min Inkubation wird die Enzymreaktion durch Zugabe von 20 μΐ des in Assaypuffer gelösten Plasmin Substrates MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC (150 μΜ in Assaypuffer) der Firma Bachem gestartet, für 30 min bei Raumtemperatur (22°C) inkubiert und anschließend eine Fluoreszensmessung durchgeführt (Anregung: 360 nM, Emission: 460 nM). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit denen von Kontrollansätzen ohne Prüfsubstanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen IC50- Werte berechnet. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle B aufgeführt:
Tabelle B (Plasmin Hemmung)
Figure imgf000062_0001
a.3) Messung der Kallikrein-Hemmung
Zur Bestimmung der Plasma-Kallikrein-Hemmung der erfindungsgemäßen Substanzen wird ein biochemisches Testsystem verwendet, in dem die Umsetzung eines peptidischen Plasma- Kallikrein-Substrates zur Ermittlung der enzymatischen Aktivität von humanem Plasma- Kallikrein benutzt wird. Dabei spaltet Plasma-Kallikrein von dem peptischen Plasma-Kallikrein Substrat das C-terminale Aminomethylcoumarin (AMC) ab, dessen Fluoreszenz gemessen wird. Die Bestimmungen werden in Mikrotiterplatten durchgeführt.
Prüfsubstanzen werden in Dimethylsulfoxid aufgelöst und seriell in Dimethylsulfoxid verdünnt (3000 μΜ bis 0.0078 μΜ; resultierende Endkonzentrationen im Test: 50 μΜ bis 0.00013 μΜ). Jeweils 1 μΐ der verdünnten Substanzlösungen werden in die Vertiefungen von weißen Mikrotiterplatten der Firma Greiner (384 Vertiefungen) vorgelegt. Anschließend werden nacheinander 20 μΐ Assaypuffer (50 mmol/1 Tris-Puffer pH 7.4; 100 mmol/1 Natriumchlorid; 5 mmol/1 Calciumchlorid; 0.1% bovines Serumalbumin) und 20 μΐ humanes Plasma-Kallikrein der Firma Kordia (0.6 nM in Assaypuffer) hinzugefügt. Nach 15 min Inkubation wird die Enzymreaktion durch Zugabe von 20 μΐ des in Assaypuffer gelösten Plasma-Kallikrein-Substrates H-Pro-Phe-Arg-AMC (15 μΜ in Assaypuffer) der Firma Bachem gestartet, für 30 min bei Raumtemperatur (22°C) inkubiert und anschließend eine Fluoreszensmessung durchgeführt (Anregung: 360 nM, Emission: 460 nM). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit denen von Kontrollansätzen ohne Prüfsubstanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen IC50- Werte berechnet. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle C aufgeführt:
Tabelle C (Kallikrein Hemmung)
Figure imgf000063_0001
a.4) Bestimmung der Selektivität
Zum Nachweis der Selektivität der Substanzen bezüglich FXIa-Hemmung werden die Prüfsubstanzen auf ihre Hemmung anderer humaner Serinproteasen wie Faktor Xa und Trypsin hin untersucht. Zur Bestimmung der enzymatischen Aktivität von Faktor Xa (1.3 nmol/1 von Kordia) und Trypsin (83 mU/ml von Sigma) werden diese Enzyme gelöst (50 mmol/1 Tris-Puffer [C,C,C- Tris(hydroxymethyl)-aminomethan], 100 mmol/1 Natriumchlorid, 0.1 %> BSA [bovines Seramalbumin], 5 mmol/1 Calciumchlorid, pH 7.4) und für 15 min mit Prüfsubstanz in verschiedenen Konzentrationen in Dimethylsulfoxid sowie mit Dimethylsulfoxid ohne Prüfsubstanz inkubiert. Anschließend wird die enzymatische Reaktion durch Zugabe der entsprechenden Substrate gestartet (5 μηιο1/1 Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC von Bachem für Faktor Xa und Trypsin). Nach einer Inkubationszeit von 30 min bei 22°C wird die Fluoreszenz gemessen (Anregung: 360 nm, Emission: 460 nm). Die gemessenen Emissionen der Testansätze mit Prüfsubstanz werden mit den Kontrollansätzen ohne Prüfsubstanz (ausschließlich Dimethylsulfoxid anstatt Prüfsubstanz in Dimethylsulfoxid) verglichen und aus den Konzentrations-Wirkungs-Beziehungen IC50- Werte berechnet. a.5) Bestimmung der antikoagulatorischen Wirkung
Die antikoagulatorische Wirkung der Prüfsubstanzen wird in vitro in Human- und Tierplasma (z. B. Maus-, Ratten-, Kaninchen- , Schwein- und Hundeplasma) bestimmt. Dazu wird Blut unter Verwendung einer 0.11 molaren Natriumcitrat-Lösung als Vorlage in einem Mischungsverhältnis Natriumcitrat/Blut 1/9 abgenommen. Das Blut wird unmittelbar nach der Abnahme gut gemischt und 15 Minuten bei ca. 4000 g zentrifugiert. Der Überstand wird abpipettiert.
Die Prothrombinzeit (PT, Synonyme: Thromboplastinzeit, Quick-Test) wird in Gegenwart variierender Konzentrationen an Prüfsubstanz oder dem entsprechenden Lösungsmittel mit einem handelsüblichen Testkit (Neoplastin® von der Firma Boehringer Mannheim oder Hemoliance® RecombiPlastin von der Firma Instrumentation Laboratory) bestimmt. Die Testverbindungen werden 3 Minuten bei 37°C mit dem Plasma inkubiert. Anschließend wird durch Zugabe von Thromboplastin die Gerinnung ausgelöst und der Zeitpunkt des Gerinnungseintritts bestimmt. Es wird die Konzentration an Prüfsubstanz ermittelt, die eine Verdoppelung der Prothrombinzeit bewirkt.
Die aktivierte partielle Thromboplastinzeit (aPTT) wird in Gegenwart variierender Konzentrationen an Prüfsubstanz oder dem entsprechenden Lösungsmittel mit einem handelsüblichen Testkit (C.K. Prest von der Firma Diagnostica Stago) bestimmt. Die Testverbindungen werden 3 Minuten bei 37°C mit dem Plasma und dem PTT Reagenz (Cephalin, Kaolin) inkubiert. Anschließend wird durch Zugabe von einer 25 mM wässrigen Calciumchlorid- Lösung die Gerinnung ausgelöst und der Zeitpunkt des Gerinnungseintritts bestimmt. Es wird die Konzentration an Prüfsubstanz ermittelt, die eine 1.5 fache Verlängerung der aPTT bewirken. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle D aufgeführt: Tabelle D
Figure imgf000065_0001
a.6) Bestimmung der fibrinolytischen Wirkung
Die anti-fibrinolytische Wirkung in vitro wird in humanem, Plättchen-freien Plasma bewertet. Tissue Faktor (TF) (1 pM) und Tissue Plasminogenaktivator (tPA) (40 nM) werden zusammen mit 12.5 mM wässriger Calciumchlorid-Lösung und Substanz in Plasma pipettiert. Nach erfolgter Clot- Bildung wird die sich anschließende Clot-Lyse über einen Zeitraum von 30 Minuten photometrisch bestimmt. Wirkdaten aus diesem Test sind in der folgenden Tabelle E aufgeführt:
Tabelle E
Figure imgf000065_0002
b) Bestimmung der antithrombotischen Wirkung (in vivo) b. l) Arterielles Thrombose-Modell (Eisen(II)chlorid- induzierte Thrombose) in Kombination mit Ohrblutungszeit im Kaninchen
Die antithrombotische Aktivität der FXIa-Inhibitoren wird in einem arteriellen Thrombose-Modell getestet. Dabei wird die Thrombusbildung durch chemische Beschädigung eines Bereichs der Arteria carotis im Kaninchen ausgelöst. Simultan wird die Ohrblutungszeit bestimmt.
Männliche Kaninchen (CrhKBL (NZW)BR, Charles River) unter normaler Diät mit einem Gewicht von 2.2 - 2.5 kg Körpergewicht werden durch intramuskuläre Applikation von Xylazin und Ketamin (Rompun, Bayer, 5 mg/kg und Ketavet, Pharmacia & Upjohn GmbH, 40 mg/kg Körpergewicht) anästhesiert. Die Anästhesie wird weiterhin durch intravenöse Gabe derselben Präparate (bolus: Dauerinfusion) über die rechte Ohrvene unterstützt.
Nach Freipräparation der rechten Arteria carotis wird der Gefäßschaden dadurch erzeugt, dass ein Stück Filterpapier (10 mm x 10 mm) auf einem Streifen Parafilm® (25 mm x 12 mm) um die A. carotis gewickelt wird, ohne den Blutfluß dadurch zu beeinträchtigen. Das Filterpapier enthält 100 μΐ. einer 13%igen Lösung von Eisen(II)chlorid (Sigma) in Wasser. Nach 5 min wird das Filterpapier entfernt und das Gefäß zweimal mit wässriger 0.9%iger Natriumchlorid-Lösung gespült. 30 min nach der Verletzung wird die Arteria carotis im Bereich der Schädigung herauspräpariert und eventuell vorhandenes thrombotisches Material entnommen und gewogen. Die Prüfsubstanzen werden entweder intravenös über die Vena femoralis den anästhesierten oder oral mittels Schlundsonde den wachen Tieren jeweils 5 min beziehungsweise 2 h vor Schädigung verabreicht.
Die Ohrblutungszeit wird 2 min nach der Schädigung der Arteria carotis bestimmt. Hierzu wird das linke Ohr rasiert und ein definierter Schnitt von 3 mm Länge (Klinge Art.Nummer 10-150-10, Martin, Tuttlingen, Germany) parallel zur Ohrlängsachse gesetzt. Dabei wird darauf geachtet, kein sichtbares Gefäß zu verletzen. Eventuell austretendes Blut wird in 15 Sekunden-Intervallen mit genau gewogenen Filterpapierstücken aufgenommen, ohne die Wunde direkt zu berühren. Die Blutungszeit wird berechnet als die Zeitspanne vom Setzen des Schnitts bis zu dem Zeitpunkt, an dem am Filterpapier kein Blut mehr nachweisbar ist. Das ausgetretene Blutvolumen wird nach Wiegen der Filterpapierstücke berechnet. c) Bestimmung der fibrinolytischen Wirkung (in vivo) c.l) hvper-fibrinolvtische Ratten
Die Bestimmung der antifibrinolytischen Wirkung in vivo wird in hyper-fibrinolytischen Ratten durchgeführt. Nach Narkotisierung und Kathetrisierung der Tiere wird die Hyper-Fibinolyse durch Infusion von Tissue Plasminogenaktivator (tPA) (8 mg/kg/h) ausgelöst. 10 Minuten nach Beginn der tPA-Infusion wird die Substanzen als i.V. Bolus appliziert. Nach weiteren 15 Minuten wird die tPA-Infusion beendet und eine Transsektion des Schwanzes durchgeführt. Die subaquale Blutung (in 37°C temperierter physiologischer Natriumchlorid-Lösung) wird über 30 Minuten beobachtet und die Blutungszeit bestimmt. C) Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zubereitungen
Die erfindungsgemäßen Substanzen können beispielsweise folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden:
Tablette: Zusammensetzung:
100 mg der Verbindung des Beispiels 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke, 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP) und 2 mg Magnesiumstearat.
Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.
Herstellung: Die Mischung aus der Verbindung des Beispiels 1, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat für 5 min. gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben).
Orale Suspension: Zusammensetzung:
1000 mg der Verbindung des Beispiels 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel und 99 g Wasser.
Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension. Herstellung:
Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die Verbindung des Beispiels 1 wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels wird ca. 6 h gerührt. Oral applizierbare Lösung:
Zusammensetzung:
500 mg der erfindungsgemäßen Verbindung, 2.5 g Polysorbat und 97 g Polyethylenglycol 400. Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 20 g orale Lösung. Herstellung:
Die erfindungsgemäße Verbindung wird in der Mischung aus Polyethylenglycol und Polysorbat unter Rühren suspendiert. Der Rührvorgang wird bis zur vollständigen Auflösung der erfindungsgemäßen Verbindung fortgesetzt. i.v.-Lösung: Die erfindungsgemäße Verbindung wird in einer Konzentration unterhalb der Sättigungslöslichkeit in einem physiologisch verträglichen Lösungsmittel (z.B. isotonische Natriumchloridlösung, Glucoselösung 5% und/oder Polyethylenglykol 400 / Wasser 30% m/m) gelöst. Die Lösung wird steril filtriert und in sterile und pyrogenfreie Injektionsbehältnisse abgefüllt.

Claims

Patentansprüche
1. Verbindung der Formel
Figure imgf000069_0001
in welcher
R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000069_0002
steht, wobei # die Anknüpfstelle an den Phenylring ist, und
R12 für [(2iS)-l-Methoxypropan-2-yl]amino, [(2iS)-l-Hydroxypropan-2- yljamino oder (2iS)-2-(Hydroxymethyl)pyrrolidin-l-yl steht, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000070_0001
steht,
wobei # die Anknüpfstelle an den Phenylring ist, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass
R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000070_0002
steht,
wobei # die Anknüpfstelle an den Phenylring ist, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000070_0003
steht, wobei # die Anknüpfstelle an den Phenylring ist, und
R12 für [(2iS)-l-Methoxypropan-2-yl]amino, [(2iS)-l-Hydroxypropan-2- yljamino oder (2iS)-2-(Hydroxymethyl)pyrrolidin-l-yl steht, oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) oder eines ihrer Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass
[A] eine Verbindung der Formel
Figure imgf000071_0001
in welcher
R1 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, mit einer Säure umgesetzt wird, oder
[B] eine Verbindung der Formel
Figure imgf000071_0002
in welcher R1 die in Ansprach 1 angegebene Bedeutung hat, mit einer Säure umgesetzt wird.
6. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten. 7. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers.
8. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
9. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines Fibrinklebers.
10. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 in Kombination mit einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff.
11. Arzneimittel nach Anspruch 10 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Blutverlust bei hyperfibrinolytischen Zuständen, bei Organtransplantationen oder herzchirurgischen Eingriffen vor allem mit kardiopulmonalem Bypass oder als Bestandteil eines
Fibrinklebers.
12. Verfahren zur Bekämpfung von Blutverlust in Menschen und Tieren durch Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge mindestens einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, eines Arzneimittels nach Anspruch 10 oder eines nach Ansprach 8 oder 9 erhaltenen Arzneimittels.
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