WO2016064009A1 - 라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2016064009A1
WO2016064009A1 PCT/KR2014/010057 KR2014010057W WO2016064009A1 WO 2016064009 A1 WO2016064009 A1 WO 2016064009A1 KR 2014010057 W KR2014010057 W KR 2014010057W WO 2016064009 A1 WO2016064009 A1 WO 2016064009A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
disease
ramalin
bace1
expression
treatment
Prior art date
Application number
PCT/KR2014/010057
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
임정한
김일찬
한세종
조동규
Original Assignee
한국해양과학기술원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국해양과학기술원 filed Critical 한국해양과학기술원
Priority to CN202110657170.7A priority Critical patent/CN113456623A/zh
Priority to EP14904372.1A priority patent/EP3210602B1/en
Priority to CN201480083562.5A priority patent/CN107205973A/zh
Priority to US15/520,100 priority patent/US9968576B2/en
Priority to JP2017540950A priority patent/JP6398014B2/ja
Priority to PCT/KR2014/010057 priority patent/WO2016064009A1/ko
Publication of WO2016064009A1 publication Critical patent/WO2016064009A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A61K31/175—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine having the group, >N—C(O)—N=N— or, e.g. carbonohydrazides, carbazones, semicarbazides, semicarbazones; Thioanalogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system

Definitions

  • the present invention relates to a new use of ramalin (Ramalin) for the treatment of degenerative brain disease, and more particularly to the prevention of degenerative brain disease containing ramalin having inflammasome and the expression inhibitory activity of BACE1 or A therapeutic composition.
  • ramalin ramalin
  • Alzheimer's disease is the most common degenerative brain disease that causes dementia and is a progressive neurodegenerative disorder with neuronal loss and cognitive impairment (Donev et al., J Cell Mol Med , 13: 4329-48, 2009). . Alzheimer's disease exhibits neuropathological features of extracellular amyloid- ⁇ : A ⁇ plaques and intracellular neurofibrillary tangles (Querfurth et al., N Engl J Med . 362 (4): 329-44; LaFerla et al., Biochem Soc Trans . 38 (4): 993-5).
  • Amyloid-beta is a continuous cleavage of amyloid-beta precursor protein (APP), mediated by BACE1 (Beta-secretase 1) and pricinillin / gamma-secretase (presenilin / ⁇ -secretase) Is generated by The production and aggregation of amyloid-beta plays an important role in triggering complex pathological induction that causes neurodegeneration, entanglement of nerve fibers, inflammation and loss of neurons.
  • BACE1 Beta-secretase 1
  • pricinillin / gamma-secretase presenilin / ⁇ -secretase
  • microglial glial cells that exhibit neuroinflammatory is another pathological feature in the brain of Alzheimer's disease patients (McGeer et al., Neurosci Lett , 79: 195-200, 1987).
  • microglia have many central nervous systems, including chronic neurodegenerative diseases such as AD, PD (Parkinson's disease), HIV (human immunodeficiency virus) dementia and multiple sclerosis. system) plays a role as a potential pathogen in disease (Block et al., Nat Rev Neurosci , 8: 57-69, 2007).
  • Activated glial cells and leukocytes produce a variety of inflammatory mediators including anaphylatoxin complement, cytokines, chemokines and prostaglandins (Gelderblom et al., Stroke 40 (5): 1849-57, 2009; Iadecola et al., Nature Neuroscience 14 (11): 1363-1368, 2011).
  • NLRP1 NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 1
  • NLRP3 NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3 inflammasomes are NLRP1 / 3 receptors, apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain ), Precursor caspase-1, precursor caspase-11 (equivalent to human precursor caspase-4 or 5) and XIAP (X-linked inhibitor of apoptosis) Polymer complex (Boyden et al., Nat Genet 38 (2): 240-4, 2006; Martinon et al., Mol Cell 10 (2): 417-26, 2002).
  • NLRP1 and NLRP3 receptors Activation and homo-oligomerization of NLRP1 and NLRP3 receptors automatically activates precursor caspase-1 and converts to cleavage caspase-1, forming NLRP1 and NLRP3 inflammasomes (Lamkanfi et al., Annu Rev Cell Dev . Biol 28: 137-61; Martinon et al, Mol Cell 10 (2):. 417-26, 2002). Chronic accumulation of ⁇ promotes activation of microglia in Alzheimer's disease (Goldmann et al., Cell Res. 23: 595-6).
  • IL-1 ⁇ increases in IL-1 ⁇ levels are associated with the accumulation of A ⁇ (Lucin et al., Neuron , 64: 110-22, 2009), and IL-1 ⁇ is in an inactive pro-form for the activation and secretion of caspase-1.
  • Produced, and caspase-1 activity is regulated by inflamasomes.
  • NLRP3 inflasomes detect inflammatory crystals and aggregated proteins such as A ⁇ and are associated with chronic inflammatory diseases (Halle et al., Nat Immunol 9 (8) 857-65, 2008; Martinon et al., Annu Rev Immunol 27 : 229-65, 2009; Heneka et al., Nature 493 (7434): 674-8).
  • Inflammatory substances induced by the activation of NLRP inflamasomes play a role in mediating synaptic dysfunction, cognitive impairment, and functional limitation of microglial cells.
  • Treatment that inhibits the activation of NLRP inflammasomes and inflammasome-derived cytokines, which play a major role in A ⁇ -mediated inflammatory responses, can effectively inhibit the progression of Alzheimer's disease.
  • Ramalin has an antioxidant effect at concentrations with little cytotoxicity in human keratinocytes and fibroblasts (Paudel et al., Phytomedicine. 18 (14): 1285-90), and is known as an antioxidant that inhibits the inflammatory response. .
  • the present inventors have made diligent efforts to develop effective strategies for treating Alzheimer's disease and Alzheimer's disease-like diseases.
  • ramalin inhibits amyloid production by inhibiting expression of inflammatory markers such as BACE1 expression and NLRP inflammasome protein, and Alzheimer's disease. It was confirmed that the cognitive function was significantly improved in the disease model mouse, and the present invention was completed.
  • An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the treatment or prevention of degenerative brain diseases containing ramalin as an active ingredient.
  • Another object of the present invention to provide a food composition for the prevention or improvement of degenerative brain disease containing ramalin as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the treatment or prophylaxis of degenerative brain disease, which contains a RAMALIN represented by the formula (I) as an active ingredient.
  • the present invention also provides a food composition for preventing or ameliorating degenerative brain disease, which contains a RAMALIN represented by the formula (I) as an active ingredient.
  • FIG. 1 is a schematic diagram of (a) the chemical structure of ramalin and (b) animal experimental plan for behavioral test after ramalin treatment.
  • Figure 2 is a result showing the prevention of learning and memory impairment according to ramalin administration in APP / PS1 transgenic mice, which is an animal model of Alzheimer's disease.
  • the platform under water was found faster than the control;
  • Probe test conducted on day 6 after start of aquatic experiments showed that RAMALIN improves memory retention in animal models of dementia;
  • C there was no difference between the experimental groups as a result of measuring the swimming speed of the experimental animal groups;
  • Figure 3 is a result showing that the neuron plaque (neuritic plaque) formation and A ⁇ production significantly reduced after the application of ramallin in Alzheimer's disease animal model APP / PS1 transgenic mice.
  • ELISA enzyme immunoassay
  • FIG. 5 is a result confirming the inhibitory effect of iNOS and COX-2 expression in Alzheimer's disease animal model APP / PS1 transgenic mouse brain after ramallin administration. (a) confirming that the amount of protein of iNOS and COX-2 in the brain tissue of dementia animals was decreased by the administration of ramalin; (b) Statistical measurement of the amount of protein by Western blotting method.
  • Figure 6 shows the effect on the MAPK signaling pathway protein in the Alzheimer's disease animal model APP / PS1 transgenic mouse brain after ramallin administration.
  • the amount of phosphorylated stress kinase (p38, JNK and ERK) in brain tissue of demented animals is significantly reduced by ramalin administration;
  • Figure 7 shows the effect on the inflammasome protein in the Alzheimer's disease animal model APP / PS1 transgenic mouse brain after ramallin administration.
  • Figure 8 is the result of confirming the effect of ramalin on the inflammation induced by LPS in microglial cells.
  • iNOS, COX-2 key factors
  • the novel learning and prevention of memory impairment of the compound ramalin ( ⁇ -glutamyl-N '(2-hydroxyphenyl) hydrazide) of the molecular formula C 11 H 16 N 3 O 4 isolated from the Antarctic lichen ramalina terebrata was identified.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for the treatment or prevention of degenerative brain diseases, which contains, as an active ingredient, RAMALIN represented by the following general formula (I) at an integrated point.
  • the degenerative brain disease may be selected from the group consisting of Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Lou Gehrig's disease, Pick's disease, Creutzfeldt-Jakob disease, Huntington's disease and dementia, preferably Alzheimer's disease, It is not limited.
  • the RAMALIN may be characterized by inhibiting BACE1 expression and inhibiting the expression of NALP inflammasome protein. In addition, it may be characterized by inhibiting the expression of inflammatory mediators iNOS, COX-2, MAPK signaling pathway proteins.
  • composition containing ramalin of the present invention may further comprise a suitable carrier, excipient or diluent according to conventional methods.
  • Carriers, excipients and diluents that may be included in the composition comprising the compound include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate , Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.
  • composition containing ramalin of the present invention is prepared from the group consisting of powders, pills, granules, capsules, suspensions, solvents, emulsions, syrups, sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, lyophilizers and suppositories according to conventional methods. It may have any of the formulations selected.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose ( It is prepared by mixing sucrose or lactose and gelatin.
  • excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose ( It is prepared by mixing sucrose or lactose and gelatin.
  • lubricants such as magnesium stearate and talc are also used.
  • Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized formulations, suppositories.
  • the non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate and the like can be used.
  • As the base of the suppository witepsol, macrogol, tween 60, cacao butter, laurin butter, glycero gelatin and the like can be used.
  • Preferred dosages of the compounds of the present invention depend on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration and the duration, but may be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the compound of the present invention is preferably administered at 0.001-100 / kg, preferably 0.01-10 / kg. Administration may be administered once a day or may be divided orally.
  • the dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
  • the present invention relates to a food composition for preventing or ameliorating degenerative brain disease, which comprises a ramine represented by the following formula (I) as an active ingredient.
  • the food composition of the present invention includes all forms such as functional foods, nutritional supplements, health foods and food additives.
  • Health foods of this type can be prepared in various forms according to conventional methods known in the art.
  • ramalin of the present invention may be prepared in the form of tea, juice, and drink for drinking, or may be consumed by granulation, encapsulation, and powdering.
  • Functional foods include beverages (including alcoholic beverages), fruits and processed foods (e.g. canned fruit, canned foods, jams, marmalade, etc.), fish, meat and processed foods (e.g. ham, sausage corned beef, etc.), Breads and noodles (e.g.
  • the health functional food also includes a variety of forms, such as functional foods, nutritional supplements, health foods, food additives, etc. as a food composition, and various forms, for example, the aforementioned ramalin in accordance with conventional methods known in the art Prepared in the form of tea, juice, drink, granulated, encapsulated, powdered or added to a variety of foods such as beverages, fruits and processed foods, fish, meat and processed foods, breads, noodles, seasonings, etc. It can be provided by manufacturing.
  • Ramalin was separated from Ramalana terebrata, which was collected from Barton Peninsula (S62 ° 13.1, W58 ° 47.0) of King George Island, Antarctica. It was used separately (KR 10-1025612), or was also used to synthesize a stable ramine showing the same efficacy as that of natural products derived from ramin (KR 10-1182334) (Fig. 1a).
  • mice were divided into three groups (control, 10 mg / kg ramalin, 20 mg / kg ramalin), 6 per group, and oral administration of ramalin once a day for 38 days.
  • APP / PS1 transgenic mice were administered with ramalin for 4 weeks to improve hippocampal function, followed by experiments with Morris underwater rice, and also for 1 week during the test. As a result, it was confirmed that the time to reach the platform is shortened by the improved memory after being trained on the position of the platform.
  • the time to reach the platform on day 4 was shortened (FIG. 2A).
  • the time to stay in the target quadrant increased depending on the ramalin (10 and 20 mg / kg) concentration (FIG. 2B). There was no difference in swimming speed in the ramalin group and the control group (FIG. 2C).
  • the Y maze has three arms extending in a Y shape, each passage being 40 cm long, 12 cm high and 3 cm wide, each positioned at an angle of 120 °.
  • the labyrinth floor and walls are made of opaque dark polyvinyl plastic and mice were placed in order in the first single passageway (i.e., ABCAB etc.) and recorded passage through the passage for 8 minutes. The movement of the mouse was expressed as the number of crossings and was defined as one crossing only when passing through three passages in succession (i.e., ABC, CAB, or BCA but not BAB).
  • the passage of the labyrinth was cleaned by removing odors, and the inhibition of memory damage by ramalin was measured one hour after the last ramalin administration (10 and 20 mg / kg).
  • the crossover ratio is defined as
  • % Crossover [(number of crossings) / (total passage passages)] ⁇ 100.
  • Mouse brain tissue was fixed with 4% paraformaldehyde, frozen at 4 ° C. for 48 hours at 30% sucrose, and cut to 45 ⁇ m thickness. Plaque formation was confirmed by DAB staining using anti-A ⁇ antibody (400: 1, 4G8, Covance). As a result, plaque formation was significantly reduced in the brain cortex and hippocampus of the ramalin-administered group (FIG. 3B).
  • ⁇ was quantified by solid phase sandwich ELISA systems (IBL, 27713 and 27711).
  • the brain tissue was homogenized with PBS containing 1x Protease Cocktail (Calbiochem), centrifuged at 13,000 rpm for 10 minutes at 4 ° C, and 100 ⁇ g of standard A ⁇ and sample per well were added to the A ⁇ antibody and O / N at 4 ° C. After the reaction, it was reacted with antimouse IgG-HRP at room temperature for 1 hour, washed, and 100 ⁇ l of stabilized chromogen per well was added for 30 minutes of dark reaction at room temperature, followed by addition of a stop solution, and analyzed at 450 nm. As a result, it was confirmed that A [beta] 40, A [beta] 42, etc. were significantly reduced in APP / PS1 mouse brain tissue by the RAMALIN treatment (FIG. 3C).
  • BACE1 levels of the ramalin group and control group were analyzed by immunofluorescence staining and Western blot.
  • BACE1 mRNA levels were analyzed by real-time polymerase chain reaction.
  • Immunofluorescence staining method was the same as in Example 4, and analyzed using a BACE1 antibody (400: 1, R & D system).
  • proteins were extracted using T-per (Pierce) extraction buffer and Complete Mini Protease Inhibitor Tablets (Roche) from APP / PS1 mouse brain tissue.
  • the extracted protein was electrophoresed with 8-17% SDS-PAGE, transferred to 0.45 ⁇ M PVDF, and confirmed by BACE1 antibody (Cell Signaling).
  • Real time polymerase chain reaction was performed by Ribospin RNA purification system (GeanAll) to extract the total RNA, RT using 1 ⁇ g of RNA using the iScript system cDNA synthesis kit (Bio-Rad).
  • Real-time polymerase chain reaction was performed using the CFX96TM system (Bio-Rad)
  • PCR amplification was performed using SYBR Premix EX TaqTMII (TaKaRa Bio Inc.) and relative quantification by the 2- ⁇ ct method.
  • Primers for each gene are as follows.
  • BACE1 forward 5'-ATGTGGAGATGACCGTAGGC-3 '(SEQ ID NO: 1)
  • GAPDH forward 5'-GACATCAAGAAGGTGGTGAA-3 '(SEQ ID NO: 3)
  • BACE1 expression levels are expressed as% of GAPDH expression levels.
  • Example 6 Effect of Ramalin Treatment on iNOS, COX-2, MAPK and Inflammasomes in APP / PS1 Mouse Brain
  • Ramalin is a well-known anti-inflammatory compound that inhibits nitric oxide production and increases neuroprotective activity. Therefore, the anti-inflammatory effects of ramalin and the effects on ramalin neuro-inflammation in the AD model APP / PS1 mice were confirmed through nitric oxide production.
  • MAPK mitogen-activated protein kinases
  • NALP inflammasome protein NALP inflammasome protein
  • Example 7 Effect of Ramalin on NO, iNOS and COX-2 Induced by LPS
  • HT-22 hippocampal cells and BV-2 microglia were cultured in CO 2 incubator at 37 ° C. with DMEM (Hyclone, USA) containing 10% FBS and 1% pen / strep (Gibco, USA).
  • Ramalin was dissolved in distilled water at a concentration of 0.1% (v / v), and cells of all experiments were treated with ramalin at respective concentrations in serum-free DMEM medium with or without LPS (1 ⁇ g / ml). And incubated.
  • NO measurement was carried out in the culture medium by the Griess reaction, pre-treatment with RAMALIN BV-2 microglial cells (2.5 ⁇ 10 5 cells / well in 24 well plate), and then treated with LPS (1 ⁇ g / ml) for 24 hours Cultures were analyzed. 50 ⁇ l of each sample was mixed with the same amount of Griess reagent [5% phosphoric acid containing 0.1% N- (1-naphthyl) -ethylenediamine dihydrochloride and 1% sulfanilamide] and reacted for 10 minutes in a 96 well plate. The nitrate concentration was analyzed with a standard solution of sodium nitrate in the culture and measured at 540 nm.
  • the NO production by 1 ⁇ g / ml LPS treatment was 18.52 ⁇ M in BV-2 microglia glial cells, and 15.17 ⁇ M by 1 ⁇ g / ml ramine treatment and 5.64 ⁇ M by 10 ⁇ g / ml ramine treatment. Production decreased. In addition, NO production was markedly suppressed at 0.53 ⁇ M by 100 ⁇ g / ml ramine treatment (FIG. 8A).
  • iNOS and COX-2 protein levels analyzed by Western blot increased about 48% compared to the control group, but again increased by 46.67% and 55.33% by 10 ⁇ g / ml ramine treatment.
  • iNOS and COX-2 protein levels were markedly inhibited by 126.3% and 232% by 100 ⁇ g / ml ramine treatment (FIG. 8C, d).
  • 1 ⁇ g / ml LPS treatment of BV-2 microglia cells resulted in 503.7%, 99%, 58% and 89% of p38, JNK, ERK MAPK and NF- ⁇ B p65 compared to the control group.
  • 10 and 100 ⁇ g / ml ramine treatment reduced NF- ⁇ B by 41.67% and 131%, whereas 100 ⁇ g / ml ramine treatment reduced phosphorylation of p38, JNK and ERK MAPK by 516.5%, 116%.
  • inflammasome constituents NALP3, NALP3, Caspase-1
  • TLR4 which are innate immune receptors
  • BACE1 which are innate immune receptors
  • Ramalin according to the present invention has the effect of improving the cognitive ability through the inhibition of the expression of inflammatory factors and BACE1 including the NLRP inflammasome protein, it is useful for the prevention or treatment of memory disorders and degenerative brain diseases. .

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 라말린의 새로운 용도인 퇴행성 뇌질환 치료용도에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 인플라마솜(inflammasome) 및 BACE1의 발현 억제 활성을 갖는 라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 라말린은 NLRP 인플라마솜(inflammasome) 단백질을 포함하는 염증인자 및 BACE1의 발현을 억제를 통하여 인지능력을 향상시키는 효과가 있어, 기억장애 및 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료에 유용하다.

Description

라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물
본 발명은 라말린(Ramalin)의 새로운 용도인 퇴행성 뇌질환 치료용도에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 인플라마솜(inflammasome) 및 BACE1의 발현 억제 활성을 갖는 라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
알츠하이머병(Alzheimer's disease : AD)은 치매를 일으키는 가장 일반적인 퇴행성 뇌질환이며, 진행형 신경 퇴행성 질환 증상으로 뉴런 손실 및 인지 장애가 있다(Donev et al., J Cell Mol Med, 13:4329-48, 2009). 알츠하이머병은 세포외 아밀로이드-베타(amyloid-β:Aβ) 플라크 및 세포 내 신경섬유 엉킴의 신경 병리학적 특징을 나타낸다(Querfurth et al., N Engl J Med. 362(4):329-44; LaFerla et al., Biochem Soc Trans. 38(4):993-5). 아밀로이드-베타는 BACE1(Beta-secretase 1) 및 프리시닐린/감마-세크레타제(presenilin/γ-secretase)에 의해 매개되는, 아밀로이드-베타 전구체 단백질(amyloid-β precursor protein:APP)의 연속 분열에 의해 생성된다. 아밀로이드-베타의 생성 및 응집은 신경퇴화, 신경섬유의 엉킴 현상, 염증 및 뉴런의 손실을 일으키는 복잡한 병리학적 유발을 촉발시키는 중요한 역활을 한다.
신경염증을 나타내는 미세신경아교세포의 활성화는 알츠하이머병 환자 뇌에서의 또 다른 병리학적 특성이다(McGeer et al., Neurosci Lett, 79:195-200, 1987). 또한, 미세신경아교세포는 AD, PD(파킨슨병:Parkinson's disease), HIV(인간 면역 결핍 바이러스:human immunodeficiency virus) 치매 및 다발성 경화증과 같은 만성 신경변성 질환을 포함하여 많은 CNS(중추신경계통:central nervous system) 질환에서 잠재적인 발병원의 역활을 한다(Block et al., Nat Rev Neurosci, 8:57-69, 2007). 활성화된 신경아교세포 및 백혈구는 아나필라톡신 보체(anaphylatoxin complement), 사이토카인(cytokine), 케모카인(chemokine) 및 프로스타글라딘(prostaglandin)을 포함하는 다양한 염증성 매개 물질을 생산한다(Gelderblom et al., Stroke 40(5):1849-57, 2009; Iadecola et al., Nature Neuroscience 14(11):1363-1368, 2011).
말초조직에서 인플라마솜 복합체(inflammasome complex)에 대한 연구는, 염증성 사이토카인의 생산 및 분비, apoptotic 및 pyroptotic 세포사멸에 관한 것이다(Lamkanfi et al., Annu Rev Cell Dev Biol. 28:137-61). NLRP1(NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 1) 및 NLRP3(NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3) 인플라마솜은 NLRP1/3 수용체, ASC(apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain), 전구체 카스파제-1(procaspase-1), 전구체 카스파제-11(procaspase-11)(인간의 전구체 카스파제-4 또는 5와 상동) 및 XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis)로 구성된 세포질의 고분자 복합체이다(Boyden et al., Nat Genet 38(2):240-4, 2006; Martinon et al., Mol Cell 10(2):417-26, 2002). NLRP1 및 NLRP3 수용체의 활성화 및 호모-올리고머화에 의해 전구체 카스파제-1이 자동 활성화되어 절단 카스파제-1으로 전환되고, NLRP1 및 NLRP3 인플라마솜을 형성한다(Lamkanfi et al., Annu Rev Cell Dev Biol. 28:137-61; Martinon et al., Mol Cell 10(2):417-26, 2002). Aβ의 만성 축적은 알츠하이머병에서 미세신경아교세포의 활성화를 촉진한다(Goldmann et al., Cell Res. 23:595-6). IL-1β 수준의 증가는 Aβ의 축적과 연관이 있으며(Lucin et al., Neuron, 64:110-22, 2009), IL-1β은 카스파제-1의 활성화 및 분비를 위해 비활성 프로-형태로 생산되며, 카스파제-1 활성은 인플라마솜에 의해 조절된다. NLRP3 인플라솜은 Aβ와 같은 염증성 결정 및 응집 단백질을 감지하며, 만성 염증질환과 관련이 있다(Halle et al., Nat Immunol 9(8)857-65, 2008; Martinon et al., Annu Rev Immunol 27:229-65, 2009; Heneka et al., Nature 493(7434):674-8). NLRP 인플라마솜의 활성화에 의해 유도된 염증성 물질은 시냅스 기능장애, 인지장애 및 미세신경교세포의 기능제한 등을 매개하는 역활을 한다. Aβ-매개 염증성 반응에서 주요 역활을 하는 NLRP 인플라마솜 및 인플라마솜-유래 사이토카인의 활성화를 억제하는 치료를 통하여 알츠하이머병의 진행을 효과적으로 방해할 수 있다.
라말린은 인간 각질세포 및 섬유아세포에서 세포 독성이 거의 나타나지 않는 농도에서 항산화 효과를 나타냈으며(Paudel et al., Phytomedicine. 18(14):1285-90), 염증 반응을 억제하는 항산화제로 알려져 있다.
본 발명자들은 이전 연구에서 남극 킹조지섬에 자생하는 지의류인 라말리나 테라브라타(Ramalina terebrata)로부터 신규 화합물인 라말린을 분리하였으며(KR 10-1025612), 라말린의 합성 방법을 제공하였다(KR 10-1182334). 또한, 상기 분리 및 합성한 라말린의 염증 또는 면역질환 에방 또는 치료 효과(KR 10-1290745) 및 간섬유화 및 간경화의 예방 또는 치료 효과(KR 10-1326256)를 밝혔다. 그러나, 라말린의 퇴행성 뇌질환 관련 예방 또는 치료 효과에 대해서는 아직까지 알려진 바가 없다.
이에, 본 발명자들은 알츠하이머병 및 알츠하이머병 유사 질환 치료를 위한 효과적인 전략을 개발하고자 예의 노력한 결과, 라말린이 BACE1 발현 및 NLRP 인플라마솜 단백질 같은 염증성 마커의 발현을 억제함으로써 아밀로이드 생성을 저해하고, 알츠하이머병 모델 마우스에서 인지기능을 현저히 향상시키는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
발명의 요약
본 발명의 목적은 라말린을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 라말린을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 I로 표시되는 라말린을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.
화학식 1
본 발명은 또한, 상기 화학식 I로 표시되는 라말린을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
도 1은 (a) 라말린의 화학 구조에 대한 도식도 및 (b) 라말린 처리 후 행동기능 검사를 위한 동물 실험 계획의 도식도이다.
도 2는 알츠하이머병 동물모델인 APP/PS1 형질전환 마우스를 대상으로 라말린 투여에 따른 학습 및 기억 장애 예방 효과를 나타낸 결과이다. (a) 라말린이 4주 동안 투여된 실험군들에서는 수면 아래의 플랫폼을 대조군 (vehicle)에 비해 빠르게 찾아감; (b) 수중미로 테스트 시작 후 6일 째 되는 날에 수행된 프로브 테스트 결과, 라말린은 치매 동물모델의 기억유지능의 개선 효과를 보임; (C) 실험 동물군들의 수영 속도를 측정한 결과 실험군 간의 차이가 없음; (d) 공간기억능력을 평가하기 위해서 Y-maze test를 실시한 결과, 라말린(20 mg/kg)이 4주 동안 투여된 실험군에서 변경행동력이 크게 증가함.
도 3은 알츠하이머병 동물모델인 APP/PS1 형질전환 마우스에서 라말린 투여 후, 신경반(neuritic plaque) 형성 및 Aβ 생성이 현저히 감소하는 것을 나타내는 결과이다. (a) 피질과 해마에서 Aβ 염색정도가 라말린 투여 동물에서 감소한 것을 현미경 사진으로 관찰함; (b) 피질과 해마에서 모두 라말린 투여에 의해 Aβ 노인반의 숫자 또한 감소한 것을 이미지 분석 정량으로 확인함; (c) 효소면역측정법(ELISA)를 이용한 수용성 Aβ 측정결과, 라마린 투여군에서 Aβ40과 Aβ42 모두 감소한 것을 확인함.
도 4는 라말린 투여 후 알츠하이머병 동물모델 APP/PS1 형질전환 마우스에서 BACE1 레벨 억제를 확인한 결과로 라말린이 뇌내 BACE1의 전사체 및 단백질의 양을 감소시키는 효능이 있으며, 이로 인해 치매 원인 물질인 Aβ의 생산이 감소한다는 것을 의미하는 결과이다. (a) 라말린 투여 후 동물의 피질에서 Aβ를 생산하는 효소인 BACE1에 특이적인 항체를 이용한 면역화학염색법을 통해 BACE1의 발현이 라말린 투여에 의해 줄어들어 있는 것을 확인함; (b) 라말린 투여 후 동물의 해마에서 Aβ를 생산하는 효소인 BACE1에 특이적인 항체를 이용한 면역화학염색법을 통해 BACE1의 발현이 라말린 투여에 의해 감소하는 것을 확인함; (c) 웨스턴블랏 (Western blotting) 방법에 의해 단백질의 양을 측정했을 때 라말린 투여 동물의 뇌조직에서 BACE1과 Aβ 전구체이자 BACE1의 기질인 C99 또한 감소한 것을 확인함; (d) 웨스턴블랏 (Western blotting) 방법에 의해 단백질의 양을 측정을 통계처리한 값을 나타낸 것임; (e) 라말린 투여에 의해 치매 동물의 뇌조직에서 BACE1의 전사체(mRNA) 발현이 감소한 것을 확인함.
도 5는 라말린 투여 후 알츠하이머병 동물모델 APP/PS1 형질전환 마우스 뇌의 iNOS 및 COX-2 발현 억제 효과를 확인한 결과이다. (a) 라말린 투여에 의해 치매 동물의 뇌조직에서 iNOS와 COX-2의 단백질 양이 감소한 것을 확인함; (b) 웨스턴블랏(Western blotting) 방법에 의해 단백질의 양의 측정을 통계 처리한 값임.
도 6은 라말린 투여 후 알츠하이머병 동물모델 APP/PS1 형질전환 마우스 뇌에서의 MAPK 신호전달 경로 단백질에 대한 영향을 확인한 결과이다. (a) 치매 동물의 뇌조직에서 인산화된 스트레스 카이네이즈(p38, JNK 및 ERK)의 양이 라말린 투여에 의해 크게 감소함; (b) 웨스턴블랏 (Western blotting) 방법에 의해 p38, JNK 및 ERK 단백질의 양을 측정을 통계처리한 값임.
도 7은 라말린 투여 후 알츠하이머병 동물모델 APP/PS1 형질전환 마우스 뇌에서의 인플라마솜(inflammasome) 단백질에 대한 영향을 확인한 결과이다. (a) 치매 동물들의 뇌조직에서 인플라마좀 구성 단백질들(NALP1, NALP3, caspase-1, IL-1β, TLR4 및 XIAP)의 양이 라말린 투여에 의해 크게 감소함; (b) 웨스턴블랏(Western blotting) 방법에 의해 NALP1, NALP3, caspase-1, IL-1β, TLR4 및 XIAP 단백질의 양을 측정을 통계처리한 값임.
도 8은 LPS에 의해 유도되는 염증에 대한 라말린의 영향을 미세신경교세포에서 확인한 결과이다. (a) 미세신경교세포에 LPS를 처리하여 염증반응을 유도하면 크게 증가하는 NO가 라말린 처리에 의해 완전히 억제되는 결과를 확인함; (b) 웨스턴블랏을 통해 미세신경교세포에서 LPS에 의해 증가되는 염증 신호전달의 주요 인자들 (iNOS, COX-2)의 발현이 라말린에 의해 완전히 억제되는 결과를 확인함; (c) 웨스턴블랏(Western blotting) 방법에 의해 iNOS의 양을 측정을 통계처리한 값임; (d) 웨스턴블랏(Western blotting) 방법에 의해 COX-2의 양을 측정을 통계처리한 값임.
도 9는 LPS에 의해 유도되는 NF-κB 및 MAPK의 활성에 대한 라말린의 영향을 미세신경교세포에서 확인한 결과이다. (a) 미세신경교세포에서 LPS에 의해 억제되는 NF-κB (인산화된 p65)가 라말린 처리에 의해 감소되는 결과를 확인함; (b) 미세신경교세포에서 LPS에 의해 억제되는 NF-κB (인산화된 p65)를 통계처리한 값임; (c) LPS가 처리된 미세신경교세포에서 활성화되는 스트레스 카이네이즈들(p38, JNK, ERK)이 라말린 처리에 의해 억제되는 결과를 확인함; (d) 미세신경교세포에서 LPS에 의해 억제되는 스트레스 카이네이즈들을 통계처리한 값임.
도 10은 LPS에 의해 유도되는 인플라마솜(inflammasome), IL-1β, TLR4 및 BACE1의 발현에 대한 라말린의 영향을 미세신경교세포에서 확인한 결과이다. (a) 웨스턴블랏(Western blotting) 방법을 통해 미세신경교세포에서 LPS에 의해 증가되는 인플라마솜 구성분자들 (NALP3, NALP3, Caspase-1)과 선청성 면역수용체인 TLR4 및 Aβ 생산 효소인 BACE1의 발현이 라말린 처리에 의해 억제되는 결과를 확인함; (b) 웨스턴블랏(Western blotting) 방법에 의해 인플라마솜 구성분자들 및 선청성 면역수용체의 양을 측정하여 통계처리한 값임.
발명의 상세한 설명 및 바람직한 구현예
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 및 이하에 기술하는 실험 방법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명에서는, 남극 지의류 라말리나 테레브라타로부터 분리한 분자식 C11H16N3O4의 화합물 라말린(γ-glutamyl-N'(2-hydroxyphenyl)hydrazide)의 신규한 학습 및 기억장애 예방 효과를 규명하였다.
따라서, 본 발명은 일관점에서 하기 화학식 I로 표시되는 라말린을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다.
화학식 1
Figure PCTKR2014010057-appb-I000002
본 발명에 있어서, 상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머병, 파킨슨병, 루게릭병, 픽크병, 크로이츠펠트-야콥병, 헌팅턴병 및 치매로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있으며, 알츠하이머병인 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 라말린은 BACE1 발현 억제 및 NALP 인플라마솜 단백질의 발현을 억제하는 것을 특징으로 할 수 있다. 또한, 염증 매개 인자 iNOS, COX-2, MAPK 신호전달 경로 단백질의 발현을 억제하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명의 라말린을 함유하는 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가적으로 포함할 수 있다. 화합물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈,수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 라말린을 함유하는 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 환제, 과립제, 캡슐제, 현탁액, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수용액제, 현탁액, 동결 건조제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 60, 카카오지, 라우린지, 글리세로 제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 화합물은 1일 0.001~100/kg으로, 바람직하게는 0.01~10/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 경구 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명은 다른 관점에서, 하기 화학식 I로 표시되는 라말린을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
화학식 1
Figure PCTKR2014010057-appb-I000003
본 발명의 식품 조성물은, 기능성 식품(functional food), 영양 보조제(nutritional supplement), 건강식품(health food) 및 식품 첨가제(food additives) 등의 모든 형태를 포함한다. 상기 유형의 건강기능 식품은 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태로 제조할 수 있다. 예를 들면, 건강식품으로는 본 발명의 라말린을 차, 쥬스 및 드링크의 형태로 제조하여 음용하도록 하거나, 과립화, 캡슐화 및 분말화하여 섭취할 수 있다. 또한, 기능성 식품으로는 음료(알콜성 음료 포함), 과실 및 그의 가공식품(예: 과일통조림, 병조림, 잼, 마말레이드 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(예: 햄, 소시지 콘비프등), 빵류 및 면류(예: 우동, 메밀국수, 라면, 스파게티, 마카로니 등), 과즙, 각종 드링크, 쿠키, 엿, 유제품(예: 버터, 치즈 등), 식용식물유지, 마가린, 식물성 단백질, 레토르트 식품, 냉동식품, 각종 조미료(예: 된장, 간장, 소스 등) 등에 본 발명의 라말린을 첨가하여 제조할 수 있다.
상기 건강 기능식품 또한, 식품조성물로써 기능성 식품, 영양보조제, 건강 식품, 식품 첨가제 등의 다양한 형태를 포함하는 것이며, 당업계에 공지된 통상적인 방법에 따라 다양한 형태, 예컨대, 앞서 언급한 라말린을 차, 쥬스, 드링크의 형태로 제조하거나, 과립화, 캡슐화, 분말화 하거나, 이러한 화합물 또는 추출물을 음료, 과실 및 가공식품, 어류, 육류 및 그 가공식품, 빵류, 면류, 조미료 등 각종 식품에 첨가하여 제조함으로써 제공될 수 있다.
실시예
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 라말린의 분리/합성 및 동물모델 디자인
본 발명의 하기 실시예에서는 2008년 1월, 남극 킹조지섬의 바튼반도(S62°13.1, W58°47.0)에서 채집한 라말리나 테레브라타르(Ramalina terebrata)로부터 메탄올을 이용한 분리방법으로 라말린을 분리(KR 10-1025612)하여 사용하거나, 또한, 천연물 유래의 라말린과 같은 효능을 나타내는 안정한 라말린을 합성(KR 10-1182334)하여 사용하였다(도 1a)
C57BL/6J 종의 반접합성 형질전환 마우스 APP/PS1(APPswe/PSEN1dE9)를 12시간-명(light), 12시간-암(dark)으로 유지하면서 실험을 실시하였다. 7개월령, 암컷 APP/PS1 마우스를 그룹당 6마리씩, 3개의 그룹(대조군, 10mg/kg 라말린, 20mg/kg 라말린)으로 나누고, 라말린을 38일간 하루에 한번 씩 구강 투여하였다.
모리스 수중 미로 테스트는 31일째부터 35일째까지 실시하였으며, 36일째 기억력 유지 검사 및 38일째 Y 미로 테스트를 실시하였다. 40일째에는 마우스를 희생시킨 후, 뇌조직을 -70℃에 보관하였다(도 1b).
실시예 2: 모리스 수중 미로 테스트
APP/PS1 형질전환 마우스에 대한 라말린의 기억력 향상 효과를 확인하기 위하여, 기존에 알려진 모리스 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 수조는 높이 35cm, 지름 100cm의 원형으로 무독성의 수용성 검은 염료를 넣고, 수온을 20℃로 유지하였다. 수조를 4등분 하고, 그 중 하나의 중간에 수면으로부터 1cm 정도 아래에 검은 플랫폼(높이 10cm, 지름 8cm)을 위치시켰다. 여러 가지 공간 단서들을 담은 수조의 플랫폼에서 수영을 시작시킨 마우스들을 비디오 시스템(Ethovirion system Noldus, Wageningen, Netherlands)으로 관찰하였다. 수중미로 교육은 마우스가 60초 동안 플랫폼을 찾지 못하면, 하루에 2번의 기회를 더 부여하였다. 각각의 시도는 15분의 휴식시간을 가진 후 실시하였고, 4일 연속 실시하였다. 각각의 마우스가 각각의 실험에서의 보여주는 시간을 측정하여 평균치를 얻었다. 마우스가 플랫폼을 찾으면 10초간 머무르게 하였고, 만약 마우스가 120초 내에 플랫폼을 찾지 못하면, 실험자가 플랫폼에 10초간 있도록 유도하였다. 6일째에는 수조에서 플랫폼을 제거한 후, 60초 동안 프로브 테스트를 하였다.
APP/PS1 형질전환 마우스에 4주간 라말린을 투여하여 해마기능을 향상시킨 후 모리스 수중미로 실험을 실시하였으며, 테스트를 실시하는 1주일간 역시 라말린을 투여하였다. 그 결과, 플랫폼의 위치를 교육받은 후, 향상된 기억력에 의해 플랫폼에 도착하는 시간이 짧아지는 것을 확인하였다. 라말린(10 및 20mg/kg) 투여군에서 4일째 플랫폼에 도착하는 시간이 단축되었다(도 2a). 또한, 마지막날 플랫폼을 제거 후, 목표 사분면에 머무는 시간을 측정했을 때, 라말린(10 및 20mg/kg) 농도에 의존적으로 증가하였다(도 2b). 라말린 투여군과 대조군에서 수영 속도에는 차이가 없었다(도 2c).
실시예 3: Y 미로 테스트
Y 미로는 3개의 통로(arm)가 Y자 모양으로 뻗어 있고, 각 통로는 길이 40cm, 높이 12cm, 폭 3cm로 각각 120°의 각도로 위치한다. 미로 바닥과 벽은 불투명한 어두운 색의 폴리비닐 플라스틱 재질이며, 마우스들은 처음 한 개의 통로에서 순서대로 위치(i.e., ABCAB etc.)시킨 후, 8분간 통로를 통과하는 것을 기록하였다. 마우스의 움직임을 교차횟수로 나타내고, 연속적으로 3개의 통로를 통과하였을 경우만 한번 교차한 것으로 정의하였다(i.e., ABC, CAB, 또는 BCA 그러나 BAB는 아님). 미로의 통로는 냄새를 깨끗하게 제거하여 청소하였으며, 마지막 라말린을 투여(10 및 20mg/kg) 한 다음 한 시간 후에 라말린에 의한 기억손상 억제를 측정하였다. 교차 비율은 다음과 같이 정의된다.
％교차=[(교차횟수)/(총 통로 통과 횟수)]×100.
그 결과, 라말린 농도 20mg/kg 투여군에서 기억력이 증진된 것을 확인할 수 있었다(도 2d).
실시예 4: APP/PS1 마우스 뇌의 Aβ 생성과 신경반(neuritic plaque) 형성
APP/PS1 마우스 뇌의 아밀로이드 축적에 대한 라말린의 영향을 조사하기 위하여, 라말린 투여군과 대조군의 Aβ40, Aβ42 및 Aβ 플라크 형성을 분석하였다. 라말린 처리에 대한 Aβ 플라크 축적은 뇌를 면역염색하여 확인하였다.
마우스의 뇌조직은 4% 파라포름알데하이드로 고정하고, 30% 수크로즈로 4℃에서 48시간동안 동결시켜 45㎛ 두께로 절단하였다. 항-Aβ 항체(400:1, 4G8, Covance)를 사용하여, DAB 염색으로 플라크 형성을 확인하였다. 그 결과, 라말린 투여군의 뇌 피질과 해마에서 플라크 형성이 현저하게 감소되었다(도 3b).
또한, Aβ를 고체상 샌드위치 ELISA 시스템(IBL, 27713 및 27711)으로 정량하였다. 뇌 조직을 1x 프로테아제 칵테일(Calbiochem)이 함유된 PBS로 균질화한 후, 4℃에서 13,000rpm으로 10분간 원심분리하고, well 당 100㎍의 표준 Aβ 및 시료를 넣고 Aβ 항체와 4℃에서 O/N 반응시킨 후, antimouse IgG-HRP와 상온에서 1시간 반응시키고, 세척하여 well당 100㎕의 안정화된 크로모젠을 첨가하여 상온에서 30분간 암반응시킨 후, 정지 용액을 첨가하여 450nm에서 분석하였다. 그 결과, 라말린 처리에 의해 APP/PS1 마우스 뇌조직에서 Aβ40 및 Aβ42 등이 현저하게 감소한 것을 확인하였다(도 3c).
실시예 5: 라말린 처리된 APP/PS1 마우스 뇌의 BACE1 발현 감소
APP/PS1 마우스 뇌의 BACE1 발현에 대한 라말린의 영향을 조사하기 위하여, 라말린 투여군과 대조군의 BACE1 레벨을 면역형광염색법 및 웨스턴블롯으로 분석하였다. 또한, 실시간 중합효소 연쇄반응으로 BACE1 mRNA 레벨을 분석하였다.
면역형광염색법은 실시예 4의 방법과 동일하며, BACE1 항체(400:1, R＆D system)를 사용하여 분석하였다.
웨스턴블롯을 수행하기 위해, APP/PS1 마우스 뇌 조직에서 T-per(Pierce) 추출버퍼와 Complete Mini Protease Inhibitor Tablets(Roche)를 사용하여 단백질을 추출하였다. 추출한 단백질은 8-17% SDS-PAGE로 전기영동한 후, 0.45μM PVDF로 트랜스퍼한 후, BACE1 항체(Cell Signaling)로 확인하였다.
실시간 중합효소 연쇄반응은 Ribospin RNA purification system(GeanAll)로 총 RNA를 추출하고, iScript system cDNA 합성 키트(Bio-Rad)를 이용하여 1㎍의 RNA로 RT를 실시하였다. 실시간 중합효소 연쇄반응은 CFX96TM system(Bio-Rad)을 사용하여 수행하였으며, PCR 증폭은 SYBR Premix EX TaqTMII(TaKaRa Bio Inc.)를 사용하였고, 2-△△ct 방법으로 상대적 정량을 하였다. 각각의 유전자에 대한 프라이머는 하기와 같다.
BACE1: forward 5'-ATGTGGAGATGACCGTAGGC-3' (서열번호 1)
reverse 5'-TACACACCCTTTCGGAGGTC-3' (서열번호 2)
GAPDH: forward 5'-GACATCAAGAAGGTGGTGAA-3' (서열번호 3)
reverse 5'-TGTCATACCAGGAAATAGGC-3' (서열번호 4)
BACE1 발현 레벨은 GAPDH 발현 레벨에 대한 %로 표시하였다.
그 결과, 면역형광염색으로 라말린 투여군의 뇌 피질과 해마에서 BACE1 면역 반응이 감소한 것을 확인하였다(도 4a). 그 다음, 라말린 처리한 APP/PS1 마우스 뇌에서 BACE1, C99 및 C83의 단백질 발현을 측정하였다. 그 결과, 1개월 동안 라말린 처리 조건에서 BACE1 발현이 현저하게 감소한 것을 확인하였다(도 4d). 또한, 라말린 처리는 BACE1의 mRNA 레벨도 감소시킴을 실시간 중합효소 연쇄반응 분석으로 확인하였다(도 4e).
실시예 6: 라말린 처리가 APP/PS1 마우스 뇌에서 iNOS, COX-2, MAPK 및 인플라마솜에 미치는 효과
라말린은 잘 알려진 항염증 화합물로 산화질소 생성을 억제하여 신경 보호작용을 증가시킨다. 따라서, 산화질소 생성을 통해 라말린의 항염증 효과 및 AD 모델인 APP/PS1 마우스에서 라말린의 신경염증에 대한 효과를 확인하였다.
그 결과, 라말린 처리에 의해 APP/PS1 마우스 뇌에서 iNOS 및 COX-2의 발현이 현저히 억제된 것을 확인 할 수 있었다(도 5).
또한, 라말린 처리에 의한 MAPK(Mitogen-activated protein kinases) 및 NALP 인플라마솜 단백질(NALP inflammasome protein) 발현에 대한 효과를 분석하였다. p38, JNK, ERK, NALP3, NALP1, Caspase1 및 XIAP의 단백질 발현을 웨스턴블롯으로 확인하였다.
그 결과, p-p38, p-JNK, P-ERK, NALP1, NALP3, pre-caspase1, cleaved-caspase1 및 TLR4는 라말린 처리에 의해 발현이 감소하였으나, t-p38, t-JNK, t-ERK, pre-IL-1β 및 XIAP는 큰 차이를 나타내지 않았다(도 6 및 7).
실시예 7: LPS에 의해 유도된 NO, iNOS 및 COX-2에 대한 라말린의 영향
HT-22 해마세포와 BV-2 미세신경아교세포는 10% FBS 및 1% pen/strep(Gibco, USA)가 포함된 DMEM(Hyclone, USA)으로 37℃에서 CO2 배양기로 배양하였다. 라말린은 0.1%(v/v)의 농도로 증류수에 녹여 사용하였고, 모든 실험의 세포는 LPS(1㎍/ml)가 존재하거나 존재하지 않는 무혈청 DMEM 배지에 각각의 농도의 라말린을 처리하여 배양하였다.
NO 측정은 배양 배지를 Griess 반응으로 수행하였으며, BV-2 미세신경아교세포(2.5×105 cell/well in 24 well plate)에 라말린을 전처리 후, LPS(1㎍/ml) 24시간 동안 처리하여 배양액을 분석하였다. 각 샘플 50㎕ 배양액을 동량의 Griess 시약[0.1% N-(1-naphthyl)-ethylenediamine dihydrochloride 및 1% sulfanilamide가 포함된 5% phosphoric acid]과 혼합하여 96 well plate에서 10분간 암반응 하였다. 질산염 농도는 배양액의 질산나트륨의 표준용액으로 분석하였으며, 540nm에서 측정하였다.
그 결과, BV-2 미세신경아교세포에서 1㎍/ml LPS 처리에 의한 NO 생성은 18.52μM이며, 1㎍/ml 라말린 처리에 의해 15.17μM 및 10㎍/ml 라말린 처리에 의해 5.64μM으로 NO 생성이 감소하였다. 또한, 100㎍/ml 라말린 처리에 의해 0.53μM으로 NO 생성이 현저하게 억제되었다(도 8a).
1㎍/ml LPS 처리 후, 웨스턴블롯으로 분석한 iNOS 및 COX-2 단백질 레벨은 대조군에 비해 48% 정도 증가하였으나, 10㎍/ml 라말린 처리에 의해 다시 46.67% 및 55.33% 증가가 억제되었다. 또한, 100㎍/ml 라말린 처리에 의해 iNOS 및 COX-2 단백질 레벨은 126.3% 및 232%의 현저한 증가 억제가 나타났다(도 8c, d).
실시예 8: LPS에 의해 유도된 p38, JNK, ERK 및 NF-κB의 인산화 및 인플라마솜 단백질에 대한 라말린의 영향
도 8에 나타난 바와 같이, BV-2 미세신경아교세포에 1㎍/ml LPS 처리는 p38, JNK, ERK MAPK 및 NF-κB p65를 대조군과 비교하여 503.7%, 99%, 58% 및 89%의 비율로 빠르게 인산화시키는데 반하여, 10 및 100㎍/ml 라말린 처리는 NF-κB를 41.67% 및 131% 감소시켰고, 100㎍/ml 라말린 처리는 p38, JNK 및 ERK MAPK의 인산화를 516.5%, 116% 및 42% 감소시켜, LPS를 처리한 미세신경교세포에서 라말린이 증가되는 NF-κB (인산화된 p65)를 감소시켰으며, LPS가 처리된 미세신경교세포에서 활성화되는 스트레스 카이네이즈들 (p38, JNK, ERK)이 라말린 처리에 의해 억제되는 것으로 나타났다(도 9).
또한, BV-2 미세신경아교세포에서 LPS에 의해 증가되는 인플라마솜 구성분자들(NALP3, NALP3, Caspase-1)과 선천성면역수용체인 TLR4 및 Aβ 생산 효소인 BACE1 발현이 라말린 처리에 의해 현저히 억제되는 것으로 나타났다(도 10).
본 발명에 따른 라말린은 NLRP 인플라마솜(inflammasome) 단백질을 포함하는 염증인자 및 BACE1의 발현을 억제를 통하여 인지능력을 향상시키는 효과가 있어, 기억장애 및 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료에 유용하다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
전자파일 첨부하였음.

Claims (7)

  1. 하기 화학식 I로 표시되는 라말린을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물:
    화학식 1
    Figure PCTKR2014010057-appb-I000004
  2. 제1항에 있어서, 상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머병, 파킨슨병, 루게릭병,픽크병, 크로이츠펠트-야콥병, 헌팅턴병 및 치매로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머병인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  4. 제1항에 있어서, BACE1 발현 억제 및 NALP 인플라마솜 단백질의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  6. 하기 화학식 I로 표시되는 라말린을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물:
    화학식 1
    Figure PCTKR2014010057-appb-I000005
  7. 제6항에 있어서, 상기 퇴행성 뇌질환은 알츠하이머병, 파킨슨병, 루게릭병,픽크병, 크로이츠펠트-야콥병, 헌팅턴병 및 치매로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 식품 조성물.
PCT/KR2014/010057 2014-10-24 2014-10-24 라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물 WO2016064009A1 (ko)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110657170.7A CN113456623A (zh) 2014-10-24 2014-10-24 用于预防或治疗神经变性疾病的含有Ramalin的组合物
EP14904372.1A EP3210602B1 (en) 2014-10-24 2014-10-24 Composition for preventing or treating neurodegenerative diseases, containing ramalin
CN201480083562.5A CN107205973A (zh) 2014-10-24 2014-10-24 用于预防或治疗神经变性疾病的含有Ramalin的组合物
US15/520,100 US9968576B2 (en) 2014-10-24 2014-10-24 Composition for preventing or treating neurodegenerative diseases, containing Ramalin
JP2017540950A JP6398014B2 (ja) 2014-10-24 2014-10-24 ラマリンを含有する退行性脳疾患の予防または治療用組成物
PCT/KR2014/010057 WO2016064009A1 (ko) 2014-10-24 2014-10-24 라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/KR2014/010057 WO2016064009A1 (ko) 2014-10-24 2014-10-24 라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2016064009A1 true WO2016064009A1 (ko) 2016-04-28

Family

ID=55761039

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2014/010057 WO2016064009A1 (ko) 2014-10-24 2014-10-24 라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물

Country Status (5)

Country Link
US (1) US9968576B2 (ko)
EP (1) EP3210602B1 (ko)
JP (1) JP6398014B2 (ko)
CN (2) CN107205973A (ko)
WO (1) WO2016064009A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230070702A (ko) * 2021-11-15 2023-05-23 한국해양과학기술원 신규한 라말린 유도체 및 이의 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료 용도

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100052130A (ko) * 2008-11-10 2010-05-19 한국해양연구원 신규 화합물인 Ｒａｍａｌｉｎ 및 그 용도
KR20110132938A (ko) * 2010-06-03 2011-12-09 한국해양연구원 라말린을 함유하는 염증질환 또는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR20130098745A (ko) * 2012-02-28 2013-09-05 한국해양과학기술원 라말린을 함유하는 간섬유화 및 간경화의 예방 또는 치료용 약학 조성물

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10338678A (ja) * 1997-06-06 1998-12-22 Takeda Chem Ind Ltd アゾール誘導体、その製造法および用途
ES2250731T3 (es) * 2001-11-09 2006-04-16 Aventis Pharma S.A. Derivados de 2-amino-4-heteroariletil tiazolina y su utilizacion como inhibidores de no-sintasa inductible.
KR101182334B1 (ko) 2010-07-14 2012-09-20 한국해양연구원 라말린의 합성방법

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20100052130A (ko) * 2008-11-10 2010-05-19 한국해양연구원 신규 화합물인 Ｒａｍａｌｉｎ 및 그 용도
KR20110132938A (ko) * 2010-06-03 2011-12-09 한국해양연구원 라말린을 함유하는 염증질환 또는 면역질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR20130098745A (ko) * 2012-02-28 2013-09-05 한국해양과학기술원 라말린을 함유하는 간섬유화 및 간경화의 예방 또는 치료용 약학 조성물

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHANG, YUN - HEE ET AL.: "Inhibition of Melanogenesis by Ramalin from the Antarctic Lichen Ramalina terebrata", J. SOC. COSMET. SCIENTISTS KOREA, vol. 38, no. 3, 2012, pages 247 - 254, XP055275447 *
PAUDEL, BABITA ET AL.: "Antibacterial activities of Ramalin, usnic acid and its three derivatives isolated from the Antarctic Lichen Ramalina terebrata", ZEITSCHRIFT FUR NATURFORSCHUNG. C, A JOURNAL OF BIOSCIENCES, vol. 65, no. 1-2, 2010, pages 34 - 38, XP055275443 *

Also Published As

Publication number Publication date
US9968576B2 (en) 2018-05-15
EP3210602A4 (en) 2018-04-18
US20170304244A1 (en) 2017-10-26
CN107205973A (zh) 2017-09-26
CN113456623A (zh) 2021-10-01
EP3210602A1 (en) 2017-08-30
JP6398014B2 (ja) 2018-09-26
EP3210602B1 (en) 2021-02-17
JP2017533261A (ja) 2017-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chuang et al. Rhinacanthin C Alleviates Amyloid‐β Fibrils’ toxicity on neurons and attenuates neuroinflammation triggered by LPS, Amyloid‐β, and Interferon‐γ in Glial cells
KR101807953B1 (ko) 고수 추출물을 유효성분으로 하는 치매 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2021107585A1 (ko) 오미자 추출물 및 아스코르브산 혼합물을 유효성분으로 함유하는 인지기능, 기억력 및 활동성 증진용 조성물
WO2016064009A1 (ko) 라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR20150040618A (ko) 검은생강으로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 포함하는 알츠하이머성 치매의 예방 또는 치료용 조성물
KR20180130268A (ko) 괭생이모자반추출물을 유효성분으로 포함하는 퇴행성신경질환 예방, 개선 또는 치료용 약학조성물
KR20200027644A (ko) 아스타잔틴을 유효 성분으로 포함하는 알츠하이머 질환 또는 치매를 예방, 치료 또는 지연하기 위한 약학적 조성물
KR20120025826A (ko) 곰취 추출물을 포함하는 뇌신경세포 보호용 조성물
WO2018080157A1 (ko) 천선과나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
KR20170040177A (ko) 톱니모자반 추출물을 유효성분으로 포함하는 항치매용 조성물
KR101637240B1 (ko) 라말린을 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2018080158A1 (ko) 좁은잎보리장나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 인지기능 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
JP2013053076A (ja) アルツハイマー病予防薬
KR20140142871A (ko) 감마 망고스틴을 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR102612407B1 (ko) Ｂｍｓ－７５４８０７ 화합물을 유효성분으로 포함하는 신경염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20200000048A (ko) 체불라닌을 포함하는 인지장애 관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR102343023B1 (ko) 아트락틸놀리드-ⅰ 및 이의 염을 유효성분으로 포함하는 신경염증 예방 또는 치료용 조성물
WO2023171969A1 (ko) 팥꽃나무 꽃봉오리 추출물을 유효성분으로 함유하는 신경 염증의 예방 또는 치료용 조성물
WO2022235023A1 (ko) 허혈성 뇌질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101934527B1 (ko) 신규 화합물 및 이를 유효성분으로 함유하는 퇴행성 뇌질환 예방 또는 치료용 조성물
WO2011068386A2 (ko) 캄페라이드 화합물을 유효성분으로 함유하는 항암용 조성물
KR102089376B1 (ko) 디아민 유도체를 포함하는 뇌졸중, 신경 세포 손상, 파킨슨병 또는 루게릭병의 예방 또는 치료용 조성물
WO2021085741A1 (ko) 번행초를 유효성분으로 포함하는 알츠하이머성 치매 개선 또는 치료용 조성물
WO2017111457A1 (ko) 오스모틴 또는 이의 활성화된 펩타이드를 함유하는 우울증 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물
KR20240018372A (ko) 로메리진을 유효성분으로 포함하는 신경염증, 아밀로이드및 타우 관련 질병 또는 퇴행성 뇌질환의 예방 또는 치료용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 14904372

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 15520100

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017540950

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2014904372

Country of ref document: EP