WO2016060298A1

WO2016060298A1 - Abh 항원의 발현을 조절하는 물질을 포함하는 조성물

Info

Publication number: WO2016060298A1
Application number: PCT/KR2014/009742
Authority: WO
Inventors: 홍용덕; 김겸손; 박준성; 한상훈
Original assignee: 주식회사 아모레퍼시픽
Priority date: 2014-10-15
Filing date: 2014-10-16
Publication date: 2016-04-21
Also published as: JP6577581B2; SG11201703027RA; US20170239159A1; CN106794123A; CN106794123B; JP2017537880A; MY183051A; US20190142721A1

Abstract

본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 포함하는 조성물에 관한 것으 로서, 보다 구체적으로는 ABH 항원의 발현을 조절함으로써 피지의 생성 조절과 함 께 피부 트러블을 개선할 수 있고, 항산화 효과를 제공하여 모공이 넓어지는 것을 예방하며, 또한 피부 자극의 생성을 방어할 수 있는 조성물에 관한 것이다.

Description

【명세서】

【발명의 명칭】

ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 포함하는 조성물

【기술분야】

<ι> 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 포함하는 조성물에 관한 것으 로서， 보다 구체적으로는 ABH 항원의 발현을 조절함으로써 피지의 생성 조절과 함 께 피부 트러블을 개선할 수 있고， 항산화 효과를 제공하여 모공이 넓어지는 것을 예방하며， 또한 피부 자극의 생성올 방어할 수 있는 조성물에 관한 것이다.

【배경기술】

<2> 혈액형 항원은 혈액의 적혈구 표면의 당단백질 혹은 당지질에서 발견된 특정 한 항원성을 띄는 구조를 말한다. 대표적으로 AB0식 혈액형 항원 (ABH 항원)， 루이 스 (Lewi s )식 혈액형 항원 등이 있으며， 특정구조의 당질화 말단기 구조에 따라 혈 액형이 결정된다. AB0식 혈액형 항원 및 루이스식 혈액형 항원은 적혈구에서만 발 현되는 것이 아니라， 인체의 다양한 부위에서 발견되며， 특히 AB0식 혈액형 항원은 개인의 혈액형에 따라 몸 안의 식도， 위장， 소장 등의 상피에서도 발현되는 것이 알려져 있고， 피부에서는 표피의 과립층에서 발현된다.

<3> 이러한 AB0식 혈액형 항원의 표피의 과립층에서의 발현은， 해부학적인 위치 상 피부의 가장 바깥층에서 나타나므로， 피부관련 질환， 특히 염증 질환과 밀접한 관계가 있다.

<4> 이와 같이， AB0식 혈액형 항원은 수혈과 장기이식의 거부반응의 주원인이 되 는 매우 중요한 항원이지만, 1900년에 발견된 이래로 아직까지 거부반응 이외의 생 리적 기능에 대해서는 연구된 바가 거의 없다.

【발명의 상세한 설명】

. 【기술적 과제】

<5> 이에 본 발명자들은 ABH 항원 발현의 조절이 피지 조절， 피부 트러블 개선， 모공 확대 예방 등과 관련이 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

<6> 따라서， 본 발명의 목적은 ABH 항원의 발현을 조절함으로써 피지 조절 또는 피부 트러블 개선에 효과적인 조성물을 제공하는 것이다.

<7> 또한， 본 발명의 다른 목적은 ABH 항원의 발현을 조절함으로써 모공 축소 또 는 확대 예방， 피부 노화 예방에 효과적인 물질을 포함하는 조성물올 제공하는 것 이다.

【기술적 해결방법】 <8> 상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질 을 유효성분으로 포함하는 피지 조절용 조성물을 제공한다.

<9> 또한， 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 포함하는 피부 트러블 개선용 조성물을 제공한다.

<ιο> 또한， 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 포함하는 모공 축소용 조성물을 제공한다.

<π> 또한, 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 포함하는 모공 확대 예방용 조성물을 제공한다.

<12> 또한， 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 예방용 조성물을 제공한다.

【유리한 효과】

<13> 본 발명의 조성물은 ABH 항원의 발현을 조절함으로써， 우수한 피지 조절 또 는 피부 트러블 개선 효과를 제공함과 더불어， 활성 산소 제거와 콜라겐 합성 촉진 을 통하여 모공을 축소시키며， 우수한 항산화력으로 인해 피부 자극의 생성을 방어 하는 효과가 탁월하다.

【도면의 간단한 설명】

<14> 도 1은 ABH 항원 및 루이스식 혈액형 항원의 구조를 나타낸 것이다.

<15> 도 2는 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질에 의해 HaCaT 세포주에서 B 항원의 발현이 증가되는 것을 나타내는 것이다.

【발명의 실시를 위한 최선의 형태】

<16> 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 함유하는 조성 물에 관한 것이다.

<17> 특히， 본 발명의 조성물은 ABH 항원의 발현을 조절함으로써 피지 조절 또는 피부 트러블 개선 효과를 나타낸다.

<18> 또한， 본 발명의 조성물은 ABH 항원의 발현을 조절함으로써 모공 축소， 모공 확대 예방 또는 피부 노화 예방 효과를 나타낸다.

<19> 본 명세서에서, "ABH 항원"은 혈액의 적혈구 표면의 당단백질 혹은 당지질에 서 발현된 특정한 항원성을 띄는 구조를 말하며， 대표적으로 ABH 항원은 도 1에 표 현된 ABH 항원， 루이스식 혈액형 항원 등 ABH 항원 유사체의 집합체를 모두 포함하 는 의미로 사용한다. ABH 항원 유사체는 단당류， 아미노산 등이 추가로 결합되어 있는 물질로서 ABH 항원 본래의 기능과 동일한 기능을 하는 물질을 의미한다. 도 1 에 ABH 항원 및 루이스식 혈액형 항원의 구조를 나타내었다. <20> 본 명세서에서 "유효성분"은 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미하는 것이다.

<2i> 본 발명의 조성물에 있어서， 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질을 포함한다.이러한 ABH 항원의 발현 증가는 구체적 으로 HaCaT세포주에서의 B 항원의 발현 증가를 통하여 나타나는 것일 수 있다.

<22> 본 발명의 조성물에 있어서， 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 1,3- 디카페오일퀴닉산 (1,3-dicaffeoylquinic acid) (화학식 1), 1,5ᅳ디카페오일퀴닉산 (1,5-dicafeoylquinic acidK화학식 2) 및 아멘토플라본 (amentof lavon) (화학식 3) 으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물， 이의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 이의 염을 포함한다.

<23> 【화학식 1】

<24>

1,5ᅳ^[:!카¾19、¾뛰!4산 【화학식 3】

아 S!!토 ¾S

<28>

<29> 본 명세서에서 "유도체' '는 상기 화합물의 치환 가능한 위치에서 다른 치환기 로 변경되는 모든 화합물을 의미하는 것이며 이러한 치환기의 종류에는 제한이 없 다.

<30> 본 명세서에서 "약학적으로 허용가능"이란 통상의 의약적 복용량 (medi cinal dosage)으로 이용할 때 상당한 독성 효과를 피함으로써， 동물, 더 구체적으로는 인 . 간에게 사용할 수 있다는 정부 또는 이에 준하는 규제 기구의 승인을 받을 수 있거 나 승인 받거나， 또는 약전에 열거되거나 기타 일반적인 약전으로 인지되는 것을 의미한다.

<31> 본 명세서에서 "약학적으로 허용가능한 염 ''은 약학적으로 허용가능하고 모 화합물 (parent, compound)의 바람직한 약리 활성을 갖는 본 발명의 일 관점에 따른 염을 의미한다. 상기 염은 ( 1) 염산， 브름화수소산， 황산， 질산， 인산 등과 같은 무기산으로 형성되거나; 또는 아세트산， 프로파이온산， 핵사노산, 시클로펜테인프 로피온산， 글라이콜산， 피루브산， 락트산， 말론산, 숙신산, 말산， 말레산, 푸마르 산， 타르타르산， 시트르산， 벤조산， 3-(4-히드록시벤조일) 벤조산， 신남산, 만델 산， 메테인설폰산， 에테인설폰산， 1， 2-에테인 -디설폰산， 2-히드록시에테인설폰산， 밴젠설폰산， 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산 4-를루엔설폰산， 감퍼설폰산， 4-메틸바이시클로 [2，2 , 2]-0 -2-엔-1-카르복실산， 글루코헵톤산, 3ᅳ페닐프로파이 온산， 트리메틸아세트산， tert-부틸아세트산， 라우릴 황산， 글루콘산， 글루탐산， 히드록시나프토산， 살리실산， 스테아르산， 뮤콘산과 같은 유기산으로 형성되는 산 부가염 (acid addi t ion sal t ) ; 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 프로톤이 치환 될 때 형성되는 염을 포함할 수 있다.

<32> 본 발명의 조성물은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 조성물 총 중량에 대하여 0.001중량 % 내지 20중량 %의 양으로 포함할 수 있다. <33> 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 상기 범위로 사용할 경우， 본 발명 이 의도하는 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라， 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서 유용하다. 상기와 같은 관점에 서， 본 발명의 조성물은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 조성물 총 중량에 대 하여 0.005중량 ¾> 내지 19.5중량 %， 0.이중량% 내지 19중량 %， 0.015중량 % 내지 18.5 중량 %， 0.02중량 % 내지 18중량 %， 0.025증량 % 내지 17.5중량 %， 0.03증량 % 내지 17중 량% , 0.035중량 % 내지 16.5중량 %， 0.04중량 % 내지 16중량 % 또는 0.045중량 % 내지 15.5중량>의 양으로 포함할 수 있다.

<34> 본 발명의 일 관점인 피지 조절용 조성물에 있어서, 상기 조성물은 5 α -리덕 테이즈의 발현올 억제할 수 있다. 구체적으로 본 발명의 조성물은 5 α -리덕테이즈 유전자의 발현을 방해하여 억제 또는 저해시키거나， 5 α -리덕테이즈 단백질의 활성 을 저해하여 그 작용을 방해할 수 있다.

<35> 또한, 본 발명의 다른 관점인 모공 축소 또는 확대 예방용 조성물에 있어서， 상기 조성물은 활성 산소 제거와 콜라겐 합성을 촉진하여 모공을 축소시키고ᅳ 모공 확대 또는 피부 노화를 예방할 수 있으며， 또한 우수한 항산화력으로 인해 활성 산 소종의 생성을 억제하여 피부 염증을 억제함으로써 피부 자극의 생성을 방어할 수 있다.

<36> 본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.

<37> 상기 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 유연화장수 (스킨로션 및 밀크로션)， 영양화장 수， 에센스， 영양크림， 마사지크림， 팩， 젤， 에센스， 아이크림， 아이에센스， 클렌 징크림， 클렌징품, 클렌징워터, 팩， 파우더, 보디로션， 보디크림， 보디오일 및 보 디 에센스로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있 으나， 이에 제한되는 것은 아니다. 아울러， 상기 화장료 조성물은 연고， 패치 등의 형태로 피부 외용제의 제형으로 사용하는 것을 포함할 수 있다.

<38> 본 발명에 따른 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면， 용액， 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀견， 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀견， 현탁액， 고체， 겔, 분말， 페이스트， 포말 ( foam ) 또는 에어 로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통 상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

<39> 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서， 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다 . 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 보습제， 에몰리언트제 , 자 외선 흡수제， 방부제 , 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 넁감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며， 그 배 합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 으이중량 내지 5중량 %， 구체적으로 0.이중량 내지 3중량 %일 수 있다.

<40> 본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서， 상기 조성물은 약학 조성물일 수 있 다.

<41 > 본 발명에 따른 약학 조성물의 제형은 용액제， 현탁제， 유액제， 겔, 점적제， 좌제， 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 제형은 당 해 분야의 통상적인 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있으며， 부형제, 수화제， 유 화 촉진제， 현탁제， 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제， 착색제, 향신료， 안정화 제， 방부제， 보존제 또는 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

<42> 본 발명의 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령， 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이 러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용 량은 예를 들어 0.000025mg/g/일 내지 (U)25mg/g/일, 보다 구체적으로는 0.00025mg/g/일 내지 0 .01nig/g/일이 될 수 있으나， 이에 제한되는 것은 아니다. <43> 본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 경피로 투여될 수 있으나, 이에 제한되 는 것은 아니다.

<44> 또한， 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 스크리닝하는 방법을 제공하며， 상기 방법은

<45> 1) 시험 피부 세포에서 발현하는 ABH 항원의 발현 수준을 확인하는 단계;

<46> 2) 상기 시험 피부 세포에 후보 물질을 처리하는 단계 ;

<47> 3) 상기 2) 단계의 세포에서 ABH 항원의 발현 수준을 확인하는 단계 ; 및

<48> 4) 상기 1) 단계와 3) 단계의 결과를 비교하여 ABH 항원의 발현을 증가시키 는 물질인지 여부를 결정하는 단계;

<49> 를 포함한다.

<50> 본 발명의 일 관점인 스크리닝 방법에 있어서， 상기 ABH 항원의 발현을 조절 하는 물질은 피지 생성 억제 또는 피부 트러블 완화 활성을 갖는 물질이다.

<5 i > 또한， 본 발명의 다른 관점인 스크리닝 방법에 있어서, 상기 ABH 항원의 발 현을 조절하는 물질은 모공 축소 또는 모공 확대 억제 활성을 갖거나， 또는 피부 노화 억제 활성을 갖는 물질이다.

<52> 본 발명의 방법에 있어서, 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 1,3-디 카페오일퀴닉산 (l,3-dicaffeoylquinic acid), 1，5-디카페오일퀴닉산 (1,5- dicafeoylquinic acid) 및 아멘토폴라본 (amentof lavon)으로 이루어진 군에서 선택 되는 1종 이상의 화합물， 이의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 이의 염을 포함 한다.

【발명의 실시를 위한 형태】

<53> 이하， 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로， 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의 해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있 어서 자명할 것이다.

<54>

<55> [시험예 1] HaCaT세포주에서 B 항원의 발현증가 효과

<56> 다양한 종류의 화합물이 ABH 항원의 발현에 미치는 영향을 실험하였다. 이를 위하여, HaCaT 세포 (provided by Prof. Dr. N.E. Fusenig, DKFZ Heidelberg, Germany)를 35隱 디쉬에서 10% FBS-DMEM으로 24시간 동안 배양한 후， 24시간 동안 0% FBS-DMEM으로 배양하여 기아 상태로 만들었다. 다시 0% FBS—DMEM으로 배지를 갈 아주면서 시험 물질로서 다양한 종류의 화합물을 각각 2yg/ml의 농도로 HaCaT 세 포에 처리한 후， 48시간 동안 배양하였다. 이 때 비교를 위하여 대조군은 DMS0를 시료와 동일한 농도로 처리하였다. 시험 물질 중 ABH 항원의 발현을 유의적으로 증 가시키는 3가지 물질, 즉 1，3_디카페오일퀴닉산 (1，3— dicaffeoylquinic acid), 1,5- 디카페오일퀴닉산 (1,5-dicafeoylquinic acid) 및 아멘토플라본 (amentoflavon)을 확 인하였으며 (데이터 미제시)， 이들 3가지 화합물을 처리한 경우에 있어서 세포에서 단백질을 추출하여 세포 용해물을 동량으로 로딩하여 웨스턴 블랏으로 B형 항원의 발현을 조사하였다. 대조군으로는 알파-튜블린 단백질올 사용하였다. 측정 결과는 도 2에 나타내었다.

<57> 도 2를 보면, 1,3—디카페오일퀴닉산, 1， 5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토폴라본 모두 HaCaT 세포에서 B형 항원의 발현을 증가시키는 효과가 있음을 확인할 수 있 다.

<58>

<59> [시험예 2] 5α-리덕테이즈 활성 억제 효과 5α—리덕테이즈 활성 억제 효과를 확인하기 위해서 HEK293-5aR2 세포에서

14 14

[ C]테스토스테론이 [ C]디하이드로테스토스테론으로 변환되는 비율을 측정하였다. HEK293 세포는 p3 x FLAG-CMV-5 a R2를 형질감염 (transfection)시켜서 24웰 플레이 트에 웰당 2.5 X 10⁵세포로 넣고 배양하였다 (Park et al . , 2003, JDS. Vol. 31, ppl 91-98). 다음날 효소 기질과 저해제가 들은 새로운 배지로 바꿔주었다. 배지의 기 질로는 0.05 uCi [^½C]테스토스테론 (Amersham Pharmacia biotech, UK)을 사용하였 다. 저해 정도를 확인하기 위해서 시험물질로서 1,3-디카페오일퀴닉산， 1,5ᅳ디카페 오일퀴닉산 및 아멘토플라본을 각각 2yg/ml 넣고 2시간 동안 37^°C， 5% C0₂배양기에 서 배양하였다. 이때， 비교를 위하여 음성대조군으로는 상기 시험물질 중 어느 것 도 함유하지 않은 것을 사용하고， 양성대조군으로는 피나스테라이드 (Finasteride) 를 배지에 2yg/ml 넣고 동일 조건에서 배양한 것을 사용하였다. 배양 배지를 수거 하여 테스토스테론을 800 에틸아세테이트로 추출하였다. 상부의 유기용매층을 분 리하여 말린 후에 남은 잔유물을 다시 50 에틸아세테이트로 녹여서 실리카 플라 스틱시트 카이젤겔 60에프 254(Silica plastic sheet kieselgel F254) 상에서 전개 용매로서 에틸아세테이트 -핵산 (1:1)을 사용하여 전개하였다.

플라스틱 시료를 공기 중에서 건조한 후， 동위원소의 양을 측정하기 위해 바 스 시스템을 사용하였는데， 건조된 플라스틱 시트와 엑스레이 필름을 함께 바스 카 셋트에 넣어 1주일 후에 필름에 남아 있는 테스토스테론과 디하이드로테스토스테론 의 동위 원소양을 측정하였다. 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

【표 1】

<63> (1) 전환율: DHT영역에의 방사능 /총 방사능

<64> (2) 저해율: 100*(_.대조군의 전환율-시료의 전환율) I 대조군의 전환율

<65>

<66> 상기 표 1의 결과로부터， 본 발명의 1,3ᅳ디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일

퀴닉산 및 아멘토플라본은 테스토스테론을 디하이드로테스토스테론으로 전환시켜 세포질 내에 있는 수용체 단백질과 결합해 핵 내로 들어가 피지선 세포를 활성화하 고 분화를 촉진시킴으로써 피지선 내의 피지를 과분비시키는 5α-리덕테이즈의 활 성을 효과적으로 억제함으로써 테스토스테론의 디하이드로테스토스테론으로의 전환 을 차단하는 것을 알 수 있었다.

<67> 따라서, 본 발명의 1 ,3-디카페오일퀴닉산， 1 , 5-디카페오일퀴닉산 및 아맨토 플라본은 우수한 5 α -리덕테이즈의 활성 억제 효과가 있어 피지의 과분비를 억제하 는데 효과적이다.

<68>

<69> [참조예 1] 실시예 1~3 및 비교예 1의 제조

<70> 하기 표 2에 기재된 조성에 따라 로션 제형의 실시예 1~3 및 비교예 1을 통 상적인 제조 방법으로 제조하였다 (단위: 증량 %) .

<71> 【표 2】

<72> · <실시예 및 비교예의 제조방법〉

<73> 1) 상기 11~14 성분을 70^°C까지 가열하면서 균일하게 흔합하여 수상 파트를 제조하였다.

<74> 2) 상기 1~10 성분을 70^°C까지 가열하면서 균일하게 흔합하여 유상 파트를 제조하였다.

<75> 3) 상기 1)의 수상 파트에 상기 2)의 유상 파트를 투입하고 7 , 200rpm에서 6 분간 호모믹싱하였다.

<76> 4) 상기 3)의 흔합물을 실온까지 넁각하였다.

<77>

<78> [시험예 3] 피지 분비 억제 효과 <79> 상기 실시예 1~3 및 비교예 1의 피지 분비 억제 효과를 알아보기 위하여 다 음과 같이 평가하였다. 피지분비가 많다고 느끼는 피험자 남녀 40명을 선정하여 10 명씩 4개 군으로 나누고 각 군에 대하여 실시예 1~3 및 비교예 1의 로션을 각각 지 정된 부위에 4주간 매일 바르게 하였다. 피지 감소의 효과에 대한 판정은 피지량 측정기 (Sebumeter815, Germany) 를 사용하여 측정하였으며, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.

<80> 【표 3】

<8 ΐ > 상기 표 3의 결과로부터， 본 발명에 따론 1 ,3-디카페오일퀴닉산， 1 , 5-디카페 오일퀴닉산 또는 아맨토플라본을 함유하는 실시예 1 내지 3은 이들 물질을 함유하 지 않은 비교예 1보다 과잉으로 분비되는 피지를 효과적으로 억제할 수 있음을 알 수 있다.

<82> 따라서， 본 발명에 따론 피부 외용제 조성물은 우수한 피지 분비 억제 효과 가 있다.

<83>

<84> [시험예 4] 피부 염증 인자의 발현 감소 효과

<85> 본 발명의 1，3-디카페오일퀴닉산, 1，5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본의 피부 염증 인자인 PGE-2의 발현을 억제하는 효과를 측정하기 위해서 EL I SA ( EnzymeL i nked Immunosorbent Assay)를 실시하였다 (SE Dunsmore , et al . , J Biol Chem, 271： 24576-24582 , 1996) .

<86> 사람의 표피조직에서 분리한 각질형성세포 (kerat inocyte)를 24-웰 시험플레 이트에 5X 10⁴개씩 넣고 24시간동안 부착시켰다. FBS가 포함되지 않은 배지로 교체 하고, 아스피린 처리를 하여 프로스타글란딘 생합성효소 (prostaglandin H2 synthetase , 또는 cyclooxygenase)의 활성을 제거하였다. 아스피린 처리 2시간 후 에 각질형성세포가 들어있는 각 웰을 PBS 로 2회 세척하고, 각웰에 의 PBS를 넣었다ᅳ 이 각질형성세포에 자외선 B JV B)램프 (Model : F15T8 , UV B15W, Sankyo

Dennki社, Japan)를 이용하여 자외선 30mJ/cm²를 조사한 후， PBS를 덜어내고 각 웰 에 각질형성세포 배양액 (kerat inocyte growth media, Clonet ics BioWhittacker社 ,MD,USA) 250 «를 첨가하였다. 여기에 상기 물질 1ᅳ 3-디카페오일퀴닉산， 1 , 5-디카 페오일퀴닉산 및 아멘토플라본을 2yg/ml 만큼씩 처리한 후， 16시간 동안 배양하였 다. 배양 상층액을 적당량 취하여 16시간 동안 생합성된 PGE— 2를 정량함으로써， 1,3—디카페오일퀴닉산， 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본 의 프로스타글란딘 억제효과를 판단하였다. PGE-2의 발현 억제 효과는 하기 수학식 1에 의하여 산출하 였으며 , 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다.

<87> 【수학식 1】

PGE-2의 발현 억제을 (%) = (A-B)/A*100

A: 시험물질을 첨가하지 않은 웰의 흡광도

<90> B: 시험물질을 첨가한 웰의 흡광도

<91>

<92> 【표 4】

<93> 상기 표 4의 결과로부터， 본 발명의 조성물에 함유되는 1,3-디카페오일퀴닉 산， 1,5—디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본은 피부의 염증 인자인 PGE-2의 발현을 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있다. 따라서， 본 발명의 조성물에 함유되는 1,3-디카페오일퀴닉산， 1,5ᅳ디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본은 피부 염증 인자의 발현을 억제하여 피부 트러블을 방지하는 효과가 우수함을 알 수 있다.

<94>

<95> [시험예 5] 활성 산소종 (reactive oxygen species) 생성 억제 효과

<96> 사람의 표피 조직에서 분리한 각질형성세포 (keratinocyte)를 24웰 (well) 세 포배양 플레이트의 각 웰에 5?0⁴개를 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 배양액을 제거 한 후, 각 웰에 의 인산완층염액 (PBS)올 넣었다. 이 각질형성세포에 자외선

B(UV B) 램프 (Model: F15T8.UV B 15W, Sankyo Dennki社， Japan)를 이용하여 자외선 30mJ/cuf를 조사한 후， PBS를 덜어내고 각 웰에 각질형성세포 배양액 200^를 첨가 하였다. 여기에 시험 물질로서 1,3-디카페오일 ^'퀴닉산， 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아 멘토플라본을 각각 2yg/nil 처리하고 일정 시간대별로 자외선 자극에 의해 증가한 활성 산소종 (reactive oxygen species, R0S)의 양을 정량하였다. 이 때， 비교를 위 하여 시험 물질을 처리하지 않고 (무처리) 자외선 자극도 하지 않은 것 및 시험 물 질을 처리하지 않고 자외선 자극을 한 것에 대한 활성 산소종의 양도 측정하였다. ROS의 .양은 ROS에 의해 산화되는 DCF-DA(dichloroflLiorescin diacetate)의 형광을 측정하는 Tan의 방법을 참고하여 정량하였으며 (Tan et al.,1998, J. Cell Biol. Vol. 141， ppl423-1432), 대조군의 ROS에 대한 비율을 하기 표 5에 나타내었다.

<97> 【표 5】

<98> 상기 표 5에 나타낸 결과로부터， 본 발명의 1,3ᅳ디카페오일퀴닉산, 1ᅳ 5-디카 페오일퀴닉산 및 아멘토플라본은 자외선에 의해 피부 세포 손상을 일으키는 것으로 알려진 R0S의 생성을 효과적으로 억제한다는 것을 확인할 수 있으며， 따라세 이들 물질은 항산화 효능이 뛰어나다는 것을 알 수 있다.

<99> 따라서， 본 발명의 조성물에 함유되는 1,3-디카페오일퀴닉산， 1， 5-디카페오

일퀴닉산 및 아멘토플라본은 활성 산소종의 생성을 억제하여 피부 염증을 억제함으 로써 피부 자극의 생성을 방어할 수 있고， 또한 피부 세포 손상을 방지하여 피부 노화를 막음으로써 모공이 넓어지는 것을 예방할 수 있다.

<100>

<ιοι> [시험예 6] 콜라겐 생합성 촉진

<102> 본 발명에서 사용되는 1，3-디카페오일퀴닉산， 1，5-디카페오일퀴닉산 및 아멘 토폴라본의 콜라겐 생합성 촉진 효과를 TGF-베타와 비교하여 측정하였다.

<103> 우선， 섬유아세포 (fibroblast)를 24웰 플레이트의 각 웰에 10°개씩 파종

(seeding)하여 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 이를 24시간 동안 무혈청 DMEM 배지로 배양한 후, 여기에 1，3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토 플라본과 TGF-베타를 각각 2yg/ml 로 처리하고 24시간 동안 C0₂배양기에서 배양하 였다. 이들의 상층액을 떠내어 프로콜라겐 형 (I) ELISA 키트 (procollagen typed )) 를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen)의 증감여부를 보았다. 그 결과를 표 6에 나 타내었으며， 콜라겐의 합성능은 비처리군을 100으로 하여 대비하였다.

<104> 【표 6】 구분 콜라계합성능 (%)

비처리군 100

TNF-베타 183.5±13.1

1.3-디카페오임퀴닉산 142.1±13.1

1,5-디카페오일퀴닉산 144.2± L0

아멘토 *라본 147.7±15.8

<105> 상기 표 6에 나타낸 결과로부터， 본 발명의 1，3ᅳ디카페오일퀴닉산， 1,5-디카

페오일퀴닉산 및 아멘토플라본은 양성대조군인 TGF—베타와 같이 높은 콜라겐 합성 능을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.

<106> 따라서， 본 발명의 1,3-디카페오일퀴닉산， 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토 플라본은 모공 주변의 콜라겐 생성량을 증가시켜 넓어진 모공을 축소시킬 수 있다 는 것을 알 수 있다.

<107>

<108> [시험예 7] 피부 모공 수축 효과 평가

<109> 1,3-디카페오일퀴닉산， 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본의 모공축소 효과를 토코페를 및 EGCG와 비교하여 측정하였다. 리노마우스 60마리를 10마리씩 6 개 군으로 나누고， 각 군의 리노마우스에 1,3—디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴 닉산 및 아멘토플라본， 토코페롤 또는 EGCG의 V 용액 (용매로는 1,3ᅳ부틸렌글리콜: 에탄을 =7:3 사용)을 0.5i 씩 도포하였다. 이 때 비교를 위하여 하나의 군에는 용매 만올 0.5 도포하였다. 1주 동안 물질을 처리하고 마지막 처리 24시간 후 등쪽 부 분을 생검하였다. 표피를 분리하여 0.5%의 아세트산에 담근 후 10% 포르말린에 고 정한 후 6誦로 수직으로 잘랐다. 헤마록실린과 에오신으로 염색한 후， 기계 접안 마이크로미터 (Mechanical eyepiece micrometer)를 이용하여 모공의 크기를 측정하 였다. 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.

<ιιο> 【표 7】

상기 표 7에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 1,3-디카페오일퀴닉산， 1，5-디카 페오일퀴닉산 및 아멘토플라본은 토코페를 및 EGCG와 비교하여 모공의 크기를 감소 시키는 효과가 뛰어남을 알 수 있다.

<Π2>

<1 13> [참조예 2] 실시예 4~6 및 비교예 2의 제조

<H4> 하기 표 8에 기재된 조성에 따라 유연화장수 (스킨로션) 제형의 실시예 4~6 및 비교예 2를 통상적인 제조 방법으로 제조하였다 (단위: 중량 %) .

<1 15> 【표 8】

<1 16>

<1 17> [시험예 8] 모공 수축에 대한 관능평가

<Π 8> 시험 대상으로는 20~50세 여성층으로서 지성피부의 소유자 60명을 무작위로

15명씩 4개군으로 나누었다. 각 군에 대하여 세안 후 일정 시간이 지난 후 상기 실 시예 4 내지 6 또는 비교예 2의 제품을 각각 도포하게 하였고， 이를 아침， 저녁으 로 1일 2회 수행하게 한 후 4 주 후에 모공 크기를 육안으로 측정하였다. 그 결과 는 하기의 표 9에 나타내었다 (평가 등급 ： 0. 전혀 축소 되지 않았다; 5. 매우 축 소되었다) . _,

<1 19> 【표 9】

120> 상기 표 9의 결과에서 알 수 있듯이， 본 발명의 1，3-디카페오일퀴닉산， 1 , 5- 디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본을 함유하는 조성물은 모공 수축 효과가 어느 것 도 함유하지 않은 비교예의 조성물 보다 우수하다고 웅답한 사용자가 유의하게 많 았다. <i 2i> 따라서， 본 발명의 1 ,3-디카페오일퀴닉산， 1 , 5ᅳ디카페오일퀴닉산 및 아멘토 플라본을 함유하는 피부 외용제 조성물의 모공 수축 효과가 우수함을 알 수 있었 다.

<122>

<123> 이하， 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나， 약학 조성물 및 화장료 조성물은 여러 가지 제형으로 웅용 가능하며， 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아 닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

<124>

<125> [제형예 1] 화장수

<126> 아래 표 10에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 화장수를 제조한다.

<127> 【표 10】

<128>

<129> [제형예 2] 영양 크림

<130> 아래 표 11에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 영양 크림을 제조한다. <131 > 【표 11】 , _c

lb

<132>

<133> [제형예 3] 마사지 크림

< 134> 아래 표 12에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 마사지 크림을 제조한다.

<135> 【표 12】

< 136>

<137> [제형예 4] 팩

<138> 아래 표 13에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 팩을 제조한다. <139> 【표 13】

<140> ^■

<141> [제형예 5] 젤

<142> 아래 표 14에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 젤을 제조한다. <143> 【표 14】 .

<144>

<145> [제형예 6] 연고

<146> 아래 표 15에 기재된 조성으로 통상적인 방법으로 연고를 제조하였다.

<147> 【표 15】 .

<148>

<149> [제형예 7] 연질캅셀제

<150> 1，3-디카페오일퀴닉산， 1 , 5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물 0.0025g, 비타민 C 0.0025g, 팜유 2mg, 팜경화유 8mg, 황납 4nig 및 레시틴 6mg올 혼합하고， 통상의 방법에 따라 1 캡슐당 400 mg씩 층진하여 연질갑샐을 제조하였다.

<151>

<152> [제형예 8] 정제

<153> 1 ,3-디카페오일퀴닉산, 1 , 5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물 0.0025g, 비타민 C 0.0025g, 포도당 lOOmg, 전분 96mg 및 마그네슘 스테아레이트 4mg을 흔합하고 30% 에탄올을 40mg 첨가하여 과립 을 형성한 후, 60^°C에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정하였다.

<154>

<155> [제형예 9] 과립제

<156> 1 ,3-디카페오일퀴닉산， 1 , 5—디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물 150mg, 비타민 C 150mg, 포도당 lOOmg, 및 전분 600mg을 흔합하고 30% 에탄을을 100 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60^°C에서 건조 하여 과립을 형성한 다음 포에 층진하였다. 내용물의 최종 증량은 1 g으로 하였다.

<1 57>

<158> [제형예 10] 드링크제 <159> 1，3-디카페오일퀴닉산， 1 , 5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물 0.0025g, 비타민 C 0.0025g, 포도당 10g, 구연산 2g 및 정제수 187.8g을 흔합하고 병에 충진하였다. 내용물의 최종 용량은 200ml로 하였다.

<160>

<161> 이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분올 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통 상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며， 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따 라서， 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정 의된다고 할 것이다.

Claims

【청구의 범위】

【청구항 1】

ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 포함하는 조성물.

【청구항 2]

제 1항에 있어서， 상기 조성물은 피지 조절용임을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 3]

제 1항에 있어서， 상기 조성물은 피부 트러블 개선용임을 특징으로 하는 조성

【청구항 4]

제 1항에 있어서， 상기 조성물은 모공 축소용임을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 5】

제 1항에 있어서， 상기 조성물은 모공 확대 예방용임을 특징으로 하는 조성

【청구항 6]

제 1항에 있어서， 상기 조성물은 피부 노화 예방용임을 특징으로 하는 조성 물

【청구항 71

제 1항에 있어서， 상기 조성물은 항산화용임을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 8】

제 1항 내지 게 7항 증 어느 한 항에 있어서， 상기 ABH 항원의 발현을 조절하 는 물질은 1 , 3ᅳ디카페오일퀴닉산 ( 1 ,3-di caf feoy uini c acid) , 1，5-디카페오일퀴닉 산 ( l , 5-di cafeoylquini c acid) 및 아멘토플라본 (amentof lavon)으로 이루어진 군에 서 선택된 1종 이상의 화합물, 이의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 이의 염임 을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 9】

제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 ABH 항원의 발현 을 조절하는 물질을 조성물 총 증량에 대하여 0.0이중량 % 내지 20중량 ¾의 양으로 포함함을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 10]

제 1항 내지 제 7항에 있어서， 상기 유효성분은 ABH 항원의 발현을 증가시킴을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 11] 제 1항 내지 제 7항에 있어서， 상기 조성물은 피부 외용제임을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 12]

제 1항 내지 제 7항에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물 또는 약학 조성물 임을 특징으로 하는 조성물.

【청구항 13]

1) 시험 피부 세포에서 발현하는 ABH 항원의 발현 수준을 확인하는 단계;

2) 상기 시험 피부 세포에 후보 물질올 처리하는 단계;

3) 상기 2) 단계의 세포에서 ABH 항원의 발현 수준을 확인하는 단계; 및

4) 상기 1) 단계와 3) 단계의 결과를 비교하여 ABH 항원의 발현을 증가시키 는 물질인지 여부를 결정하는 단계;

를 포함하는， ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 스크리닝하는 방법 .

【청구항 14】

제 13항에 있어서， 상기 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질은 1，3-디카페오 일퀴닉산 ( l , 3-di caf feoylquini c ac id) , 1，5ᅳ디카페오일퀴닉산( 1，5_(3 3£60 1(1 11 acid) 및 아멘토플라본 (amentof l avon)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물， 이의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 이의 염임을 특징으로 하는, ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 스크리닝하는 방법.

【청구항 15】

제 13항에 있어서 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 물질은 피지 생 성 억제 또는 피부 트러블 완화 활성올 갖는 물질임을 특징으로 하는, ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 스크리닝하는 방법.

【청구항 16】

제 13항에 있어서， 상기 . ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 모공 축소 또는 모공 확대 억제 활성을 갖거나 또는 피부 노화 억제 활성을 갖는 물질임을 특징으 로 하는， ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 스크리닝하는 방법.