WO2015184661A1

WO2015184661A1 - 化合物及其制备方法和用途

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Publication number: WO2015184661A1
Application number: PCT/CN2014/080887
Authority: WO
Inventors: 许勇; 王学海; 李莉娥; 黄璐; 田华; 杨仲文; 夏庆丰; 肖强; 郭涤亮; 涂荣华; 余艳平; 于静; 黄翔; 范昭泽; 何震宇; 张毅; 杨菁
Original assignee: 人福医药集团股份公司
Priority date: 2014-06-06
Filing date: 2014-06-26
Publication date: 2015-12-10
Also published as: CN104086551A; CN104086551B

Abstract

一种化合物及其制备方法和用途被公开，该化合物为式I所示化合物或式I所示化合物的立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药，其中X、R₁，R₂如说明书所定义。

Description

化合物及其制备方法和用途技术领域

本发明涉及医药领域，具体的，本发明涉及化合物及其制备方法和用途，更具体的，本发明涉及化合物及其制备方法、药物组合物、化合物及药物组合物在制备药物中的用途。背景技术

Bruton酪氨酸激酶 (Bruton's tyrosine kinase, BTK)是 Tec激酶家族的一种非受体酪氨酸激酶，是 B细胞发育、激活、信号传导和存活的关键调节物，在 B细胞受体（BCR)信号转导中发挥重要作用。在激活 BCR时， BTK首先被其他酪氨酸激酶 (如 Lyn与 SYK)活化，导致 B细胞增殖与分化的必需转录因子获得活化。除此之外， BTK也参与了与 B细胞迁移及黏附相关的受体信号转导，其中包括趋化因子受体 CXCR4、 CXCR5与黏附分子（整合素）。 BTK激酶活跃失控则导致细胞无规则繁殖而引发或增进癌变。

BTK抑制剂 ibrutinib于 2013年 11月获 FDA批准用于治疗套细胞淋巴瘤， 2014年 2 月获批治疗慢性淋巴细胞白血病。 Ibrutinib能够与 BTK上的半胱氨酸残基选择性、不可逆性的形成强有力共价键，抑制恶性 B细胞中过度活跃的细胞生存信号的传输从而达到抗癌的功效， ibrutinib也是目前唯一一个上市的 BTK抑制剂。但是 ibrutinib溶解度低、与血浆蛋白的结合率（PPB) 高、口服生物利用度低，直接导致了患者口服后疗效不高。

因此，目前的 BTK抑制剂仍有待改进。发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种用作激酶抑制剂的化合物。

本发明的另一个目的是提供制备式 I所示化合物、或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药的方法及中间体。

本发明的另一个目的是提供一种包含本发明的化合物的药物组合物，所述药物组合物进一歩包含一种或多种药学上可接受的赋形剂和治疗有效量的至少一种本发明的化合物、或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药。

本发明的另一个目的是提供本发明的化合物、或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，所述药物作为 BTK抑制剂，可治疗由 B细胞介导的疾病，用于制备***疾病、增殖性疾病、 ***反应性疾病、自身免疫性疾病和炎症性疾病的药物。本发明的再一个目的是提供治疗由 B细胞介导的疾病的方法。根据本发明的实施例，本发明的化合物或药物组合物具有较高的 BTK激酶抑制活性，能够有效用于治疗由 B细胞介导的疾病。

本发明所示化合物的这些和其它目的、特点和优点在随后本专利公开的详细说明中披下面详细描述本发明：

在本发明的第一方面，本发明提出了一种化合物。根据本发明的实施例，所述化合物为式 I所示化合物或式 I所示化合物的立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或

其中， X为选自下列之一：取代或未取代的苯基、取代或未取代的 3元到 7元饱和或不饱和碳环、取代或未取代的 8元到 10元饱和或不饱和双环或芳基环、取代或未取代的具有 1到 4个杂原子的 5元到 6元单环杂芳基环、取代或未取代的具有 1到 3个杂原子的 4 元到 7元饱和或不饱和杂环、取代或未取代的具有 1到 5个杂原子的 7元到 10元饱和或不饱和双环杂环、取代或未取代的具有 1到 5个杂原子的 8元到 10元双环杂芳基环；为选自 -R、卤素、 -OR、 -0(CH₂)aOR、 -CN、 -N0₂、 -S0₂R、 -S0₂N(R)₂、 -SOR、 -C(0)R、 -C0₂R、 -C(0)N(R)₂、 -NRC(0)R、 - RC(0) R₂> -NRS0₂R和 -N(R)₂中的任意一种； R₂为选自 -R、卤素、 -OR、 -0(CH₂)aOR、 -CN、 -N0₂、 -S0₂R、 -S0₂N(R)₂、 -SOR、 -C(0)R、 -C0₂R、 -C(0)N(R)₂、 - RC(0)R -NRC(0)NR₂ -NRS0₂R和 -N(R)₂中的任意一种；其中， a为 1至 5的整数， R 基团各自独立地为选自下列之一：氢、取代或未取代的脂肪族基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的具有 1到 2个杂原子的 4元到 7元杂环、取代或未取代的具有 1到 4 个杂原子的 5元到 6元单环杂芳基环，所述杂原子各自独立地选自氮、氧和硫的任意一种。

进一步的，根据本发明的实施例， ' 为选自下列之 

于描绘化学键，所述化学键为部分或取代基与核心结构或骨架结构相连的点。

由此，在本说明书通篇中，本领域技术人员可对基团及其取代基进行选择，以提供本发明的实施例中所述的、稳定的式 I所示化合物或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药。

在本发明中所使用的术语，将本发明化合物的所有立体异构体（无论是混合物形式还是纯的形式或基本纯的形式）都考虑在内。在本发明中所使用的术语"立体异构体"可包括通过拥有一个或多个手性原子而为光学异构体的化合物，以及通过围绕一个或多个键受限旋转而为光学异构体的化合物。本发明化合物的定义涵盖所有可能的立体异构体和它们的混合物。非常具体地涵盖外消旋形式和具有特定活性的经分离的光学异构体。可通过物理方法拆分外消旋形式，所述物理方法包括但不限于分级结晶、非对映异构衍生物的分离或结晶或通过手性柱色谱法分离。可通过常规方法由外消旋体获得单独的光学异构体，所述常规方法包括但不限于与光学活性酸形成盐，然后结晶。

在本发明中所使用的术语，式 I所示化合物及其盐可按它们的互变异构形式存在，在所述互变异构形式中氢原子转移到分子的其它部分，并且分子中原子之间的化学键因此发生重排。应该理解的是，所有互变异构形式（只要它们可以存在），就包括在本发明中。此外，本发明式 I所示化合物可具有反式异构体和顺式异构体。

在本发明中所使用的术语， "可药用盐"为通式 I所示化合物与无机酸或有机酸反应形成的常规的无毒盐。例如，所述常规的无毒盐可通过通式 I所示化合物与无机酸或有机酸反应制得，所述无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、胺基磺酸和磷酸等，以及所述有机酸包括柠檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、萘磺酸、乙磺酸、萘二磺酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、富马酸、琥珀酸、丙酸、草酸、三氟乙酸、硬酯酸、扑酸、羟基马来酸、苯乙酸、苯甲酸、水杨酸、谷氨酸、抗坏血酸、对胺基苯磺酸、 2-乙酰氧基苯甲酸和羟乙磺酸等；或者通式 I所示化合物与丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸或谷氨酸形成酯后再与无机碱形成的钠盐、钾盐、钙盐、铝盐或铵盐；或者通式 I所示化合物与有机碱形成的甲胺盐、乙胺盐或乙醇胺盐；或者通式 I所示化合物与赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸形成酯后再与盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸形成的对应的无机酸盐或与甲酸、乙酸、苦味酸、甲磺酸和乙磺酸形成的对应的有机酸盐。

在本发明中所使用的术语， "前药 "表示一旦将所述化合物给予受试者，所述化合物就通过代谢过程或化学过程来进行化学转化，从而得到式 I所示化合物和 /或其盐和 /或溶剂化物。可在体内转化以提供生物活性物质（即式 I所示化合物）的任何化合物是在本发明的范围和主旨内的前药。例如，含有羧基的化合物可形成生理上可水解的酯，其通过在体内水解以得到式 I所示化合物本身而充当前药。所述前药优选口服给药，这是因为水解在许多情况下主要在消化酶的影响下发生。当酯本身具有活性或水解发生在血液中时，可使用肠胃外给药。

还应该理解的是，本发明式 I所示化合物的水合物、溶剂化物（例如甲醇化物、 DMSO 化物）也在本发明的范围内。溶剂化的方法是本领域公知的。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种制备式 I所示化合物或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药的方法和中间体。

根据本发明的实施例，制备式 I所示化合物或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药的方法包括：（1 )使所述式 1所示化合物与式 2所示化合物进行接触，以便获得式 3所示化合物；（2) 使所述式 3所示化合物与式 4 所示化合物（丙烯酰氯）进行接触，以便获得式 5所示化合物；（3 ) 使所述式 5所示化合物与式 6a所示化合物进行接触，以便获得式 I所示化合物。

其中， X、以及 R₂为如前面所定义的。

发明人发现，利用本发明的该方法能够快速有效地制备式 I所示化合物或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药，且合成路线短、环境友好、目标产物的收率和纯度较高，原料易得、操作及后处理简单、适合工业化生产。

下面对本发明的实施例中所采用的制备式 I所示化合物的一般方法进行描述：

1 ) 式 3所示化合物（中间体）的制备

使式 1所示化合物与式 2所示化合物进行接触，以便获得式 3所示化合物；具体地，在三口瓶中加入式 1所示化合物、式 2所示化合物、以及四氢呋喃（THF)，再加入碳酸铯，回流 12 24小时，反应结束后，浓縮得油状液，先用甲醇溶解，再用丙酮重结晶，析出固体，过滤，干燥得式 3所示化合物，无需进一步纯化。

2) 式 5所示化合物（中间体 ) 的制备

使所述式 3所示化合物与式 4所示化合物进行接触，以便获得式 5所示化合物；具体地，将式 3所示化合物与 N-甲基吡咯垸酮（NMP)在 -5 °C~5 °C下混合，缓慢加入式 4所示化合物，并在 0°C下保温搅拌反应 60分钟，然后加入水继续搅拌半小时，接着加入饱和 NaHC0₃溶液碱化水溶液，随后用乙酸乙酯萃取 3次。先后用水、盐水洗涤合并的乙酸乙酯萃取物， Na₂S0₄干燥并在减压下浓缩，得到式 5所示化合物。

3 ) 式 I所示化合物的制备

使所述式 5所示化合物与式 6a所示化合物进行接触，以便获得式 I所示化合物；具体地，将式 5所示化合物、式 6a所示化合物（式 5所示化合物与式 6a所示化合物的摩尔比为 1 : 1.5 ) 加入 N-甲基吡咯垸酮的溶液中，进行微波照射（100°C~20(TC， 5-30 分钟）。冷却反应混合物，用水稀释，并用乙酸乙酯萃取 3次。先后用水、盐水洗涤合并的乙酸乙酯萃取物， Na₂S0₄干燥并在减压下浓缩，再用异丙醇溶解，在 -5°C~5°C下重结晶，过滤，得白色固体，减压干燥，即得式 I所示化合物。

在本发明的实施例中，所述式 I所示化合物可为：式 I所示化合物或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药。

本发明的发明人发现，本发明的化合物还显示出提高的溶解性以及更不易从细胞中流出的性质，从而提高了生物利用度。

在本发明的第三方面，本发明提供一种药物组合物，所述组合物包含式 I所示化合物或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药中的至少一种。根据本发明的实施例，所述药物组合物可以进一步包括药学上可接受的赋形剂。该药用组合物还可以进一步包含气味剂、香味剂等常规添加剂。

本发明所提供的药物组合物优选含有重量比为 0.1%~99%的式 I所示化合物作为活性成份，更优选的是，式 I所示化合物作为活性成分占药物组合物总重量的 10%〜40%，其余部分为药学上可接受的载体和 /或常规添加剂。

本发明所提供的化合物和药物组合物可以是多种形式，如片剂、胶囊、注射剂、注射用粉针、粉剂、糖浆、溶液状、悬浮液和气雾剂等，并可以存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中和适宜的用于注射或滴注的消毒器具中。

本发明的药物组合物的各种剂型可按照药学领域的常规制备方法制备。本发明的化合物和药物组合物可对哺乳动物临床使用，包括人和动物，可以通过口、鼻、皮肤、肺或者胃肠道等的途径给药。不管采用何种服用方法，个人的最佳剂量应依据具体的治疗方案而定。通常情况下是从小剂量开始，逐渐增加剂量一直到找到最适合的剂量。最优选的给药途径为口服。

在本发明的第四方面，本发明提出了式 I所示化合物或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，所述药物用作激酶抑制剂。根据本发明的实施例，本发明的化合物可调节激酶活性，包括对 BTK进行调节，可用作激酶抑制剂，可由本发明化合物调节的其它类型的激酶活性包括但不限于 Tec家族的成员，如 BMX、 BTK、 ITK、 Txk和 Tec及它们的突变体。因此，上述药物能够有效作为 BTK抑制剂，进而可治疗由 B细胞介导的疾病，用于治疗肿瘤疾病、增殖性疾病、 ***反应性疾病、自身免疫性疾病和炎症性疾病。

进一步的，本发明所述式 I所示化合物比现有 BTK抑制剂依鲁替尼具有更高的 BTK 激酶抑制活性。而且，本发明的式 I所示化合物预处理重组 BTK后，用不含抑制剂的培养基重复洗涤，其活性不会恢复，表明 BTK被本发明的化合物不可逆抑制。

具体的，本发明所述药物适用于治疗一种或一种以上与 BTK活性有关的疾病，所述疾病包括但不限于实体瘤、淋巴瘤、软组织肉瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、 ***性红斑狼疮、牛皮癣、类风湿性脊椎炎、痛风性关节炎等。

进一步的，在牛胶原蛋白诱导的鼠关节炎模型（CIA)实验中，本发明实施例的化合物表现出了比依鲁替尼更好的疗效。

本发明所述的用作激酶抑制剂的式 I所示化合物，其作为 BTK抑制剂，成功克服了现有 BTK抑制剂 ibrutinib药物本身溶解度低、口服生物利用度低的缺陷，具有良好的临床应用和医药用途。

在本发明的第五方面，本发明提供了一种治疗由 B细胞介导的疾病的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：对患者给药前面所述的化合物或药物组合物。发明人发现，前面所述的化合物或药物组合物具有较高的 BTK激酶抑制活性，能够有效用于治疗由 B细胞介导的疾病。

根据本发明的实施例，由 B细胞介导的疾病的种类不受特别限制。根据本发明的实施例，由 B细胞介导的疾病可以为选自肿瘤疾病、增殖性疾病、 ***反应性疾病、自身免疫性疾病和炎症性疾病的至少一种。由此，能够获得较好的治疗效果。

根据本发明的实施例，由 B细胞介导的疾病可以为选自实体瘤、淋巴瘤、软组织肉瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、 ***性红斑狼疮、牛皮癣、类风湿性脊椎炎和痛风性关节炎中的至少一种。由此，治疗效果较佳。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

本发明的实施例提供了式 I所示化合物或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药，制备式 I所示化合物或其立体异构体、互变异构体、药物活性代谢物、可药用盐、水合物、溶剂化物或前药的方法和中间体、药物组合物、以及本发明的化合物

实施例 1 : 制备式 3所示化合物（中间体）

在三口瓶中加入式 1所示化合物（17.0克， 0.1摩尔）、式 2所示化合物（11.1克， 0.11 摩尔）、以及四氢呋喃（800毫升），再加入碳酸铯（39.1克， 0.12摩尔），回流 15小时，反应结束后，浓縮得油状液，先用甲醇（60亳升）溶解，再用丙酮（180亳升）搅拌重结晶，析出固体，过滤，干燥得式 3所示化合物（18.7克，收率 74.0%)，无需进一步纯化。

实施例 2: 制备式 3所示化合物（中间体）

在三口瓶中加入式 1所示化合物（17.0克， 0.1摩尔）、式 2所示化合物（15.2克， 0.15 摩尔）、以及四氢呋喃（800毫升），再加入碳酸铯（48.9克， 0.15摩尔），回流 12小时，反应结束后，浓縮得油状液，先用甲醇（60亳升）溶解，再用丙酮（180亳升）搅拌重结晶，析出固体，过滤，干燥得式 3所示化合物（18.2克，收率 72.1%)，无需进一步纯化。实施例 3 : 制备式 3所示化合物（中间体）

在三口瓶中加入式 1所示化合物（17.0克， 0.1摩尔）、式 2所示化合物（10.6克， 0.105 摩尔）、以及四氢呋喃（800毫升），再加入碳酸铯（39.1克， 0.12摩尔），回流 24小时，反应结束后，浓缩得油状液，先用甲醇（60毫升）溶解，再用丙酮（180毫升）搅拌重结晶，析出固体，过滤，干燥得式 3所示化合物（18.4克，收率 72.8%)，无需进一步纯化。

实施例 4: 制备式 5所示化合物（中间体）

将式 3所示化合物（25.3克， 0.1摩尔）与 N-甲基吡咯垸酮（300毫升）在 -5°C〜5°C下混合，缓慢加入式 4所示化合物（ 19.9克， 0.22摩尔），并在 0°C下保温搅拌反应 60分钟，然后加入水（50毫升）继续搅拌半小时，接着加入饱和 NaHC0₃溶液碱化水溶液，随后用乙酸乙酯萃取 3次，每次 300亳升。先后用水、盐水洗涤合并的乙酸乙酯萃取物， Na₂S0₄ 干燥并在减压下浓缩，得到式 5所示化合物（23.9克，收率 66.3%)。

实施例 5: -1所示化合物

根据下面所述的方案、步骤制备式 1-1所示化合物。具体如下：

将式 5所示化合物（36.1克， 0.1摩尔）、式 6a-l所示化合物（15.2克， 0.15摩尔）加入 N-甲基吡咯垸酮（600毫升）的溶液中，进行微波照射（100°C， 30分钟）。冷却反应混合物，用水 500毫升稀释，并用乙酸乙酯萃取 3次，每次 400亳升。先后用水、盐水洗涤合并的乙酸乙酯萃取物， Na₂S0₄干燥并在减压下浓缩，再用异丙醇 300 毫升溶解，在 -5°C~5°C下重结晶，过滤，得白色固体，减压干燥，即得式 1-1所示化合物（得量 34.5克，收率 78.0%)。

实施例 6: 制备式 1-2所示化合物

将式 5所示化合物（36.1克， 0.1摩尔）、式 6a-2所示化合物（25.1克， 0.15摩尔）加入 N-甲基吡咯烷酮（600亳升）的溶液中，进行微波照射（160°C， 10分钟）。后处理同实施例 5，得式 1-2所示化合物（得量 40.2克，收率 81.6%)。

将式 5所示化合物（36.1克， 0.1摩尔）、式 6a-2所示化合物（30.8克， 0.15摩尔）加入 N-甲基吡咯烷酮（500毫升）的溶液中，进行微波照射（200°C， 5分钟）。后处理同实施例 5，得式 1-3所示化合物（得量 38.1克，收率 72.0%)。

根据本发明的实施例，同理，式 1-4所示化合物至式 1-26所示化合物的制备方法同实施例 5至实施例 Ί中制备式 1-1所示化合物至式 1-3所示化合物的方法。其中式 5所示化合物与式 6a所示化合物的投料摩尔比为 1 : 1.5。例如，以式 6a-15所示化合物为起始原料，用式 5所示化合物与式 6a-15所示化合物进行接触，最后得到的是对应的式 1-15所示化合物。具体化合物及数据见下表 1。

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实施例 8: 人类 B细胞刺激的方案

人类 B细胞从 150 ml血液纯化。具体地，血液用 PBS稀释 1/2，经 Ficoll密度梯度离心。使用来自 Milenyi (Auburn, CA) 的 B细胞分离试剂盒 II通过阴性选择而从单核细胞分离 B细胞。然后，在 96孔板中每孔 50000B细胞用 10 g/ml山羊 F(ab')2抗人 IgM抗体 (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA)刺激。实施例 1-7中制备获得的式 1-1〜式 1-26所示化合物用 DMSO (二甲基亚砜）稀释并添加至细胞。 DMSO的终浓度为 0.5 %。 3天后使用 PromegaCellTiter-Glo (Madison, WI) 测量增殖。结果发现本发明所述式 I所示化合物被测试均是有活性的。

实施例 9: 人重组体 BTK酶测定

向 V形底 384孔板中加入测试化合物、人重组体 BTK ( InM, Invitrogen Corporation) 、荧光素化肽 (fluoresceinated peptide) ( 1.5μΜ)、 ATP (20μΜ)和测定缓冲液（20mM HEPES (pH 7.4) 、 10mM MgCl₂、 0.015 % Brij35和 4mM DTT于 1.6%DMSO中的溶液），其中最终体积为 30 L。在室温孵育 60分钟后，通过向每个样品中加入 45μ 135ηιΜ ΕϋΤΑ来终止反应。在 Caliper LabChip3000 (Caliper, Hopkinton, MA) 上通过对荧光底物和憐酸化产物进行电泳分离来对反应混合物进行分析。通过与作为 100 %抑制的无酶对照反应和作为 0 %抑制的无抑制剂对照进行比较来计算抑制数据。生成剂量响应曲线以确定抑制 50 % 激酶活性所需的浓度 (IC50)。将化合物以 10 mM溶于二甲基亚砜（DMSO)中，然后以 11 个浓度进行评价。使用该测定，确定本发明所述化合物以及现有 BTK抑制剂化合物依鲁替尼的 IC50值。结果见表 2。

表 2显示了选定的本发明化合物在体外 BTK激酶抑制测定中的活性。化合物编号对应于表 1中的化合物编号。活性指定为" A"的化合物提供的 IC50≤10 nM; 活性指定为 "B "的化合物提供的 IC50为 10-100 nM; 活性指定为" C"的化合物提供的 IC50为 100-1000 nM; 活性指定为" D"的化合物提供的 IC50为 1000-10000 nM; 而活性指定为 'Έ"的化合物提供的 IC50> 10000 nM。本发明所述式 I所示化合物比依鲁替尼具有更高的 BTK激酶抑制活性。而且，本发明的化合物预处理重组 BTK后，用不含抑制剂的培养基重复洗涤，其活性不会恢复，表明 BTK被这些化合物不可逆抑制。

表 2: BTK抑制数据

化合物编号抑制 BTK的 50(μΜ;> 活性指定

1-1 0.018 A

1-2 0.025 A

1-3 0.016 A

1-4 0.54 A

1-5 1.2 A

1-6 0.41 A

1-7 0.94 A

1-8 1.2 A

1-9 1.7 A

1-10 0.45 A

1-11 0.58 A

1-12 0.028 A

1-13 0.049 A

1-14 0.80 A

1-15 1.7 A

1-16 2.3 A

1-17 0+44 A 1-18 0.050 A

1-19 0.045 A

1-20 0.39 A

1-21 0.038 A

1-22 1.3 A

1-23 0.50 A

1-24 0.80 A

1-25 0.016 A

1-26 0.48 A

依鲁替尼 2.5 A

实施例 10: 牛胶原蛋白诱导的鼠关节炎模型（CIA)

1、乳剂配制：称取牛胶原溶于乙酸中，配成浓度为 8 mg/ml的牛胶原溶液， 4摄氏度过夜。向牛胶原溶液中添加等体积的完全弗氏佐剂（CFA， 1 mg/ml )，配成终浓度为 4 mg/ml 的牛胶原 CFA混合液，再在湿冰上用高速匀浆器匀浆，直到形成白色乳剂。

在第 0天，将大鼠用 II型牛胶原在完全弗氏佐剂（CFA) 中的乳剂注射，在背部上的几个位置皮内注射（i.d. ) 50微升。在约第 7天在尾巴基部或背部的备选位点提供胶原乳剂的加强注射（i.d. ) 50微升。在初始胶原注射之后的 12天至 14天通常观察到关节炎。从第 14天起，如下面所述（关节炎的评价）可以评价动物的关节炎的进展。

关节炎的评价：

在两种模型中，使用评分***对爪和肢关节的炎症发展进行定量，所述的评分***包括按照下面所述的标准对 4个爪的评估，评分标准见表 3。

表 3 : 评分标准

第 21天，对所有动物进行分组，使每组动物体重、发病率（即动物发病个数占总数的百分比）基本一致。在第 21天开始口服灌胃给药，每天一次（QD ) ，每组动物给药剂量见表 4。给药 14天后，计算各组药物对关节炎大鼠的抑制率。表 4:

注： * p<0.01

从表 4可看出，第 6组（依鲁替尼， 10mg/kg)与本发明的第 2组（式 I -2化合物， 5 mg/kg), 第 5组（式 1 -18化合物， 10 mg/kg)抑制率相当。但是本发明的第 4组（式 1 -11化合物， 10 mg/kg) 的抑制率明显高于第 6组（依鲁替尼， 10mg/kg) 。

实施例 11: 水溶解性测定

以化合物 1-2为例，将本发明所述化合物 1-2的水溶解度与依鲁替尼作比较。测定方法如下：

在 pH为 7.4的缓冲水溶液中测定平衡溶解度。 pH为 7.4的缓冲溶液通过用 10摩尔 / 升的氢氧化钠将 0.07M的磷酸二氢钠溶液的 pH调节至 7.4，该溶液的离子强度为 0.15。将至少 1毫克的粉末与 1毫升的缓冲液混合，制备浓度大于 1毫克 /毫升的混合物。将这些样品振荡超过 2小时，并且在室温下放置过夜。然后通过先用样品饱和的 0.45 μηι的尼龙注射器过滤器过滤样品，从滤液中连续取样 2次。以在 50%甲醇中制备的标准溶液作参比，通过 HPLC测定滤液。化合物 1-2的溶解度为 44毫克 /毫升，依鲁替尼的溶解度为 12毫克 / 实施例 12: 用于口服给药的胶囊

将上表中的成分混合，并且活性成分（本发明的化合物）分配在胶囊中，共制备成 1000 克粉末，灌装成胶囊，每粒胶囊的活性成分为 200mg。

实施例 13: 用于口服给药的胶囊

活性成分 40.0%

预胶化玉米淀粉 59.5%

硬脂酸镁 0.5% 将上表中的成分混合，并且活性成分（本发明的化合物）分配在胶囊中，共制备成 1000 克粉末，灌装成胶囊，每粒胶囊的活性成分为 400mg。

实施例 14: 用于口服给药的片剂

将上表中的成分混合，并且使用溶剂如乙醇制粒。然后将制剂干燥，共制备成 1000克粉末，并且用合适的压片机形成为片剂，每片的活性成分（本发明的化合物）为 200 mg。

实施例 15 : 用于注射给药的注射液

将活性成分（本发明的化合物）溶解在部分注射用水中。然后在搅拌下加入足够量的氯化钠，以使溶液等渗。用剩余的注射用水将该溶液补足重量，用 0.2微米膜过滤器过滤，并且在无菌条件下包装，得注射液。在本说明书的描述中，参考术语"一个实施例"、 "一些实施例"、 "示例"、 "具体示例" 或"一些示例"等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

权利要求书

1、一种化合物，其特征在于，所述化合物为式 I所示化合物或式 I所示化合物的立体异构体、互变异构体、药物或前药，

其中，

X为选自下列之一：取代或未取代的苯基、取代或未取代的 3元到 7元饱和或不饱和碳环、取代或未取代的 8元到 10元饱和或不饱和双环或芳基环、取代或未取代的具有 1到 4个杂原子的 5元到 6元单环杂芳基环、取代或未取代的具有 1到 3个杂原子的 4元到 Ί 元饱和或不饱和杂环、取代或未取代的具有 1到 5个杂原子的 Ί元到 10元饱和或不饱和双环杂环、取代或未取代的具有 1到 5个杂原子的 8元到 10元双环杂芳基环；

Ri为选自 -R、卤素、 -OR、 -0(CH₂)aOR、 -CN、 -N0₂、 -S0₂R、 -S0₂N(R)₂、 -SOR、 -C(0)R、 -C0₂R、 -C(0)N(R)₂、 -NRC(0)R、 -NRC(0) R₂ -NRS0₂R和 -N(R)₂中的任意一种；

R₂为选自 -R、卤素、 -OR、 -0(CH₂)aOR、 -CN、 -N0₂、 -S0₂R、 -S0₂N(R)₂、 -SOR、 -C(0)R、 -C0₂R、 -C(0)N(R)₂、 - RC(0)R、 -NRC(0) R₂、 -NRS0₂R和 -N(R)₂中的任意一种；

其中， a为 1至 5的整数，

R基团各自独立地为选自下列之一：氢、取代或未取代的脂肪族基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的具有 1到 2个杂原子的 4元到 7元杂环、取代或未取代的具有 1到 4个杂原子的 5元到 6元单环杂芳基环，

所述杂原子各自独立地为选自氮、氧和硫的任意

2、根据权利要求 1所述的化合物，其特征在于，

自下列之

、一种制备权利要求 1或 2所述的化合物的方法，其特征在于，包括：

( 1 ) 使式 1所示化合物与式 2所示化合物进行接触，以便获得式 3所示化合物; (2) 使所述式 3所示化合物与式 4所示化合物进行接触，以便获得式 5所示化合物；

( 化合物，

4、一种药物组合物，其特征在于，包括：

权利要求 1或 2所述的化合物。

5、根据权利要求 4所述的药物组合物，其特征在于，进一歩包括：

药学上可以接受的赋形剂。

6、权利要求 1或 2所述的化合物或权利要求 4或 5所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用作激酶抑制剂。

7、根据权利要求 6所述的用途，其特征在于，所述药物用作 BTK抑制剂。

8、根据权利要求 6所述的用途，其特征在于，所述药物用于治疗由 B细胞介导的疾病。

9、根据权利要求 6所述的用途，其特征在于，所述药物用于***疾病、增殖性疾病、 ***反应性疾病、自身免疫性疾病和炎症性疾病的至少一种。

10、根据权利要求 6所述的用途，其特征在于，所述药物用于治疗实体瘤、淋巴瘤、软组织肉瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、 ***性红斑狼疮、牛皮癣、类风湿性脊椎炎和痛风性关节炎中的至少一种。

11、一种治疗由 B细胞介导的疾病的方法，其特征在于，对患者给药权利要求 1或 2 所述的化合物或者权利要求 4或 5所述的药物组合物。

12、根据权利要求 11所述的方法，其特征在于，所述由 B细胞介导的疾病为选自肿瘤疾病、增殖性疾病、 ***反应性疾病、自身免疫性疾病和炎症性疾病的至少一种。

13、根据权利要求 11所述的方法，其特征在于，所述由 B细胞介导的疾病为选自实体瘤、淋巴瘤、软组织肉瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、 ***性红斑狼疮、牛皮癣、类风湿性脊椎炎和痛风性关节炎中的至少一种。