WO2015125640A1 - カンプトテシン誘導体とｈｓｐ９０阻害剤の結合した高分子化合物及びその用途 - Google Patents

カンプトテシン誘導体とｈｓｐ９０阻害剤の結合した高分子化合物及びその用途 Download PDF

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hsp90 inhibitor
polymer compound
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compound
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麻奈美 岡▲崎▼
丸山　佐起子
亮 増田
啓一朗 山本
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日本化薬株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a polymer compound in which a camptothecin derivative and an HSP90 inhibitor are bound to the same molecule.
  • the polymer compound of the present invention relates to a drug delivery system for simultaneously delivering a camptothecin derivative and an HSP90 inhibitor to an affected area, and also relates to a pharmaceutical compound exhibiting excellent antitumor activity.
  • Camptothecin is a plant alkaloid extracted from the Chinese plant "Yuki” and is a type I topoisomerase inhibitor. This selectively binds to type I topoisomerase complexed with DNA and stabilizes its structure. As a result, the cleaved DNA cannot be recombined, and is a drug that induces cell death by stopping DNA synthesis. Camptothecin showed a high antitumor effect and was developed as an anticancer drug in the 1960s. However, clinical trials were canceled due to myelosuppression and hemorrhagic cystitis as strong toxicity.
  • topotecan and irinotecan were developed as derivatives that are more soluble in water than camptothecin and have stronger antitumor activity but lower toxicity.
  • Topotecan exerts an antitumor effect without undergoing metabolism, and side effects of diarrhea are mild because 20-40% of the dose is renal excretion.
  • irinotecan itself has an antitumor effect, it is metabolized in vivo by carboxylesterase to the active metabolite 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin (hereinafter sometimes referred to as EHC) and is stronger. Demonstrate antitumor effect.
  • irinotecan and EHC are characterized by being present in plasma as a lactone type that is more biologically active than topotecan and having a longer half-life.
  • camptothecin derivatives are used in many cancer types.
  • Topotecan has been approved for use in small cell lung cancer and ovarian cancer that has been pre-treated with cancer chemotherapeutic agents.
  • irinotecan is small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, cervical cancer, ovarian cancer, gastric cancer (inoperable or recurrent), colorectal cancer (inoperable or recurrent), breast cancer (inoperable or recurrent), spiny cells. Approved with broad indications for cancer and malignant lymphoma (non-Hodgkin lymphoma).
  • Patent Document 1 describes a polymerized camptothecin derivative prepared by esterifying a camptothecin derivative having a phenolic hydroxyl group with a copolymer in which polyethylene glycols and a polymer having a carboxy group in the side chain are linked. .
  • a camptothecin derivative is bound by a phenyl ester bond that is easily chemically cleaved, and a camptothecin derivative having pharmacological activity is slowly released after administration in vivo.
  • the polymerized camptothecin derivative has a self-association property and forms a micelle-like aggregate to exhibit a high distribution in the tumor tissue, thereby selectively exerting a medicinal effect on the tumor tissue and causing side effects. It is described that there are few antitumor agents.
  • This high molecular weight camptothecin derivative is considered to have an advantage that the release of EHC, which is a medicinal component, does not depend on the enzyme, and thus is hardly affected by individual differences in the therapeutic effect.
  • Heat shock protein is a molecular chaperone present in cells, and is a functional molecule classified into several families such as HSP90, HSP70, HSP60, HSP40, and small HSPs depending on the molecular weight.
  • Molecular chaperone is a general term for proteins that temporarily form a complex with a target protein in order to promote the formation of a functional higher-order structure of the protein. That is, molecular chaperones have the activity of helping protein folding and association and inhibiting aggregation.
  • HSP is known to interact with various proteins involved in intracellular signal transduction systems. Molecules to which HSP binds are called client proteins, and about 200 molecules of HSP90 client proteins have been reported.
  • HSP90 is often necessary for the functional expression of various proteins, and the mechanism of action is that HSP90 specifically recognizes a client protein in an unstable folded state and binds to it to form a complex. Based on biochemical properties that form.
  • Various proteins steroid receptors, Raf serine kinases, tyrosine kinases) involved in cancer-related signal transduction depend on the structure of HSP90, and HSP90 regulates the cell cycle, canceration / proliferation / survival of cells It is clear that it is deeply involved in the signal. Human tumors are abnormal in the regulation of many signal molecules, and HSP90 is required to maintain the function of these signal molecules.
  • the HSP90 inhibitor has an action of changing the configuration of a chaperone complex containing a client protein and HSP90. Thereafter, the client protein released from the complex is decomposed mainly in the ubiquitin / proteasome system. As a result, the amount of HSP90 client protein decreases, and accordingly, downstream signal transduction is blocked and cancer cell growth is suppressed, thereby providing an antitumor effect. Cancer cells are expected to be more sensitive to HSP90 inhibitors than normal cells. Therefore, exploratory studies of HSP90 inhibitors targeting HSP90 as well as verification of their antitumor effects have been made.
  • HSP90 inhibitors have been performed previously with geldanamycin derivatives.
  • the geldanamycin derivative 17-AAG has been clinically tested for hematopoietic tumors, breast cancer, melanoma, and gastrointestinal stromal tumor (GIST).
  • GIST gastrointestinal stromal tumor
  • Patent Documents 2 to 4 report 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivatives useful as HSP90 inhibitors.
  • Patent Document 5 discloses a polymerized 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivative and a polymerized 1,2 which is a polymerized HSP90 inhibitor aimed at the sustained release of the drug. 1,4-triazol-3-one substituted resorcin derivatives have been described. In the polymerized HSP90 inhibitor, a 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivative, which is an HSP90 inhibitor, was bound to a block copolymer having a polyethylene glycol segment and a polymer segment having a carboxy group. It is a polymerized drug-binding compound.
  • Patent Document 6 describes the combined use of a 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivative that is an HSP90 inhibitor and camptothecin that is a type I topoisomerase inhibitor.
  • Non-Patent Document 1 reports a phase I clinical trial using a combination of 17-AAG, which is an HSP90 inhibitor, and irinotecan.
  • Patent Document 7 and Non-Patent Document 2 report a polymer compound retaining doxorubicin and another anticancer agent. However, there are no reports on drug delivery compounds that take into account optimal drug delivery of two drugs in combination therapy of camptothecin derivatives and HSP90 inhibitors.
  • a drug delivery system DDS
  • the present inventors have created a polymer compound in which a camptothecin derivative and an HSP90 inhibitor, particularly a 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivative having HSP90 inhibitory activity, are bound to the same molecule,
  • the present inventors have found that a compound can provide a satisfactory therapeutic effect as a chemotherapeutic agent, and have reached the present invention. That is, the gist of the present invention is the following configurations 1) to 8).
  • D + e + f + g + h represents an integer of 6 to 60
  • the ratio of d to d + e + f + g + h is 5 to 50%
  • the ratio of e is 5 to 90%
  • the ratio of f is 0 to 90%
  • the ratio of g is 0 to 90%
  • h the ratio is 0 ⁇ 90%
  • R 2 represents a hydrogen atom or a (C1 ⁇ C4) acyl group
  • R 3 represents aspartic acid residue bound binding residue or HSP90 inhibitors of HSP90 inhibitors
  • R 4 represents an aspartic acid residue or an aspartic imide residue
  • R 5 represents —N (R 6 ) CONH (R 7 )
  • R 6 and R 7 may be the same or different and may be branched or Annular (C3-C6) Al A branched or straight-chain (C1-C5) alkyl group optionally substituted with a thio group or a tertiary amino group, wherein the poly
  • R 3 is a binding residue of an HSP90 inhibitor, and the HSP90 inhibitor is represented by the general formula (2) [Wherein, X 1 represents a linear or branched (C1 to C6) alkyl group or —CONR 11 R 12 , wherein R 11 and R 12 may be the same or different (C1 to C6) It is a chain, branched or cyclic alkyl group, and X 2 represents an aryl group which may have a substituent.
  • the polymer compound according to 1) above which is a 1,2,4-triazol-3-one-substituted resorcin derivative represented by formula (I), wherein the hydroxyl group of the resorcin moiety is a binding residue of an HSP90 inhibitor having an ester bond.
  • R 3 is an aspartic acid residue to which an HSP90 inhibitor is bound, and the aspartic acid residue is represented by the general formula (3) or (4) [Wherein R 8 and R 9 each independently represent a hydrogen atom or a (C1-C6) alkyl group, R 10 represents a hydrogen atom, a (C1-C40) alkyl group, a (C1-C40) aralkyl group, an aromatic group, One or more substituents selected from the group consisting of amino acid residues in which a group group and a carboxy group are protected, CX-CY represents CH—CH or C ⁇ C (double bond), and D represents HSP90. The binding residues of the inhibitor are indicated. ] The polymer compound according to 1) above.
  • the HSP90 inhibitor of the binding residue of the HSP90 inhibitor of D is represented by the general formula (2) [Wherein, X 1 represents a linear or branched (C1 to C6) alkyl group or —CONR 11 R 12 , and R 11 and R 12 may be the same or different, and may be linear, branched or A cyclic (C1 to C6) alkyl group, and X 2 represents an aryl group which may have a substituent.
  • the polymer compound according to 3) above which is a 1,2,4-triazol-3-one-substituted resorcin derivative represented by formula (II), wherein the hydroxyl group of the resorcin moiety is a binding residue of an HSP90 inhibitor having an ester bond.
  • An antitumor agent comprising the polymer compound according to any one of 1) to 6) as an active ingredient. 8) The antitumor agent according to 7) above, which is prescribed for a malignant tumor treated with an anticancer treatment with a camptothecin derivative in the previous treatment.
  • a camptothecin derivative which is a key drug in cancer chemotherapy
  • an HSP90 inhibitor particularly a 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivative having HSP90 inhibitory activity.
  • the drug delivery system of the present invention can deliver two drugs to the affected area at the same time, and can act on the drug at an ideal drug concentration and drug sensitization time, thus producing a synergistic effect of the two drugs. Enables theoretical combination therapy and can achieve enhanced antitumor effects and reduced side effects. Thus, efficient and safe cancer chemotherapy can be achieved.
  • the ratio of the released amount of EHC and compound 5 to the total amount of bound drug at 37 ° C. in PBS solution of compound 1 (phosphate buffered saline; pH 7.1) is shown.
  • the ratio of the released amount of EHC and Compound 5 to the total amount of bound drug at 37 ° C. in PBS solution of Compound 2 (phosphate buffered saline; pH 7.1) is shown.
  • the ratio of the released amounts of EHC and compound 5 to the total amount of bound drug at 37 ° C. in PBS solution of compound 3 (phosphate buffered saline; pH 7.1) is shown.
  • mouth is shown.
  • the present invention is a block copolymer in which a polyethylene glycol segment and a polyglutamic acid segment in which a camptothecin derivative and an HSP90 inhibitor are bonded to the same molecule are linked, and the general formula (1) [Wherein R 1 represents a hydrogen atom or an optionally substituted (C1 to C4) alkyl group, t represents an integer of 45 to 450, and A represents a (C1 to C6) alkylene group.
  • D + e + f + g + h represents an integer of 6 to 60
  • the ratio of d to d + e + f + g + h is 5 to 50%
  • the ratio of e is 5 to 90%
  • the ratio of f is 0 to 90%
  • the ratio of g is 0 to 90%
  • h the ratio is 0 ⁇ 90%
  • R 2 represents a hydrogen atom or a (C1 ⁇ C4) acyl group
  • R 3 represents aspartic acid residue bound binding residue or HSP90 inhibitors of HSP90 inhibitors
  • R 4 represents an aspartic acid residue or an aspartic imide residue
  • R 5 represents —N (R 6 ) CONH (R 7 )
  • R 6 and R 7 may be the same or different, (C3 To C6) branched or cyclic alkyl Or a (C1-C5) branched or straight chain alkyl group optionally substituted with a tertiary amino group, wherein the polyglutamic acid segment
  • R 1 is a terminal modification group of the polyethylene glycol segment, and is a hydrogen atom or an optionally substituted (C1-C4) alkyl group.
  • the (C1-C4) alkyl group which may have a substituent for R 1 is a linear or branched (C1-C4) alkyl group. Specific examples are methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl or tert-butyl.
  • substituent of the (C1-C4) alkyl group which may have a substituent include an amino group, a dialkylamino group, an alkyloxy group, and a carboxyl group.
  • R 1 is preferably a methyl group or an ethyl group, and particularly preferably a methyl group.
  • t in the general formula (1) indicating the number of unit repeating structures of an ethyleneoxy group; (OCH 2 CH 2 ) group is 45 to 450, preferably 90 to 340. is there. That is, the molecular weight of the polyethylene glycol moiety is preferably 2,000 to 20,000, and more preferably 4,000 to 15,000.
  • a in the general formula (1) is a linking group that connects a polyethylene glycol segment and a polyglutamic acid segment.
  • a in the general formula (1) is an alkylene group of (C1 to C6), and examples thereof include a methylene group, an ethylene group, a trimethylene group, a tetramethylene group, and a hexamethylene group. Among them, an ethylene group or a trimethylene group is preferable, and a trimethylene group is particularly preferable.
  • the polyglutamic acid segment of the polymer compound of the present invention represented by the general formula (1) is a structure in which glutamic acid units are amide-bonded.
  • the amide bond is mainly a structure bonded with an ⁇ -amide bond type, but may include a structure bonded with a ⁇ -amide bond type.
  • the glutamic acid of each glutamic acid unit may be L-type or D-type.
  • the total number of glutamic acid units (number of polyglutamic acid polymerizations) in the general formula (1) is represented by d + e + f + g + h and is 6 to 60.
  • d + e + f + g + h is 8 to 40. Therefore, the average molecular weight of the polyglutamic acid segment is about 600 to 15,000, preferably about 800 to 10,000.
  • R 2 in the general formula (1) includes a hydrogen atom or a (C1 to C4) acyl group.
  • R 2 is preferably a (C1 to C4) acyl group, for example, a formyl group, an acetyl group, a propionyl group, etc. Among them, an acetyl group or a propionyl group is preferable, and an acetyl group is particularly preferable.
  • R 5 in the general formula (1) is a urea structure substituent represented by —N (R 6 ) CONH (R 7 ), and R 6 and R 7 may be the same or different, and may be branched or cyclic (C3 To C6) a branched or straight chain (C1 to C5) alkyl group optionally substituted with an alkyl group or a tertiary amino group.
  • Examples of the branched or cyclic (C3 to C6) alkyl group include isopropyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, 1-methylbutyl group, 2-methylbutyl group, neopentyl group, cyclohexyl group and the like.
  • isopropyl group and cyclohexyl group More preferred are isopropyl group and cyclohexyl group.
  • examples of the branched or straight chain (C1 to C5) alkyl group optionally substituted with the tertiary amino group include an ethyl group and a dimethylaminopropyl group.
  • R 6 and R 7 it is preferable that R 6 and R 7 are both an isopropyl group or a cyclohexyl group, or R 6 and R 7 are a combination of an ethyl group and a dimethylaminopropyl group.
  • a substituent in which R 6 and R 7 are both an isopropyl group or a cyclohexyl group is particularly preferable.
  • EHC 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin
  • R 3 in the general formula (1) is a binding residue of the HSP90 inhibitor or an aspartic acid residue to which the HSP90 inhibitor is bound.
  • the HSP90 inhibitor is a drug that inhibits the binding of HSP90 to the client protein by binding to the ATP binding site of HSP90, and finally suppresses cell proliferation, such as a geldanamycin derivative.
  • substituted resorcin derivatives Particularly preferred is a substituted resorcin derivative having a hydroxyl group that can be bonded to the polyglutamic acid segment by an ester bond.
  • Examples of the substituted resorcin derivative include those represented by the general formula (2) [Wherein, X 1 represents a linear or branched (C1 to C6) alkyl group or —CONR 11 R 12 , and R 11 and R 12 may be the same or different and may be linear, branched or A cyclic (C1 to C6) alkyl group, and X 2 represents an aryl group which may have a substituent. And 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivatives.
  • X 1 in the general formula (2) represents a linear or branched (C1 to C6) alkyl group or —CONR 11 R 12 , and the R 11 and R 12 may be the same or different linear, A branched or cyclic (C1-C6) alkyl group.
  • Examples of the linear or branched (C1-C6) alkyl group in X 1 include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, an n-butyl group, a sec-butyl group, an isobutyl group, and a tert-butyl group.
  • Examples of the linear, branched or cyclic (C1-C6) alkyl group which may be the same or different in R 11 and R 12 include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, and n-butyl.
  • X 1 is an isopropyl group, sec-butyl group, isobutyl group, tert-butyl group or —CONR 11 R 12 , preferably R 11 is a methyl group and R 12 is an n-butyl group.
  • the X 2 group in the general formula (2) is an aryl group which may have a substituent.
  • the aryl group which may have a substituent include a carbocyclic aryl group which may have a substituent and a heterocyclic aryl group which may have a substituent.
  • examples of the carbocyclic aryl group include a phenyl group and a naphthyl group.
  • the carbocyclic aryl group which may have a substituent includes a carbocyclic aryl group having an alkyl group as a substituent, a carbocyclic aryl group having a halogen atom as a substituent, and a carbocyclic aryl having an alkoxy group as a substituent.
  • the carbocyclic aryl group having an alkyl group as the substituent is a carbocyclic aryl group in which at least one linear, branched, or cyclic (C1 to C30) alkyl group is substituted.
  • Preferred is a phenyl group substituted by a linear or branched (C1-C8) alkyl group.
  • the carbocyclic aryl group having a halogen atom as the substituent is a carbocyclic aryl group in which at least one halogen atom is substituted.
  • a monohalogen-substituted phenyl group or a dihalogen-substituted phenyl group is preferable. Examples include 2-chlorophenyl group, 4-chlorophenyl group, 2,4-dichlorophenyl group, 2-bromophenyl group, 4-bromophenyl group, 2,4-dibromophenyl group and the like.
  • the carbocyclic aryl group having an alkoxy group as the substituent is a carbocyclic aryl group having at least one primary, secondary, or tertiary (C1-C10) alkoxy group.
  • Examples thereof include a 4-methoxyphenyl group, a 3-methoxyphenyl group, a 3,4-dimethoxyphenyl group, and a 3,4-methylenedioxyphenyl group. Of these, a 4-methoxyphenyl group is preferable.
  • the carbocyclic aryl group having an amino group as a substituent in X 2 includes, as the amino group, an unsubstituted amino group, an acyclic primary or secondary amino group, or a cyclic secondary amino group as a substituent. And a carbocyclic aryl group provided.
  • examples of the non-cyclic primary amino group include a linear, branched or cyclic (C1-C10) alkyl group, or an amino group substituted with an aryl group.
  • acyclic secondary amino group which may be the same or different, is a linear, branched or cyclic (C1-C10) alkyl group, or an amino group in which an aryl group is N, N-disubstituted. It is a group.
  • Examples thereof include a dimethylamino group, a diisopropylamino group, an N-methyl-N-cyclohexylamino group, an N-methyl-N-phenylamino group, an N-methyl-N-pyridylamino group, and a diphenylamino group.
  • Examples of the cyclic secondary amino group include a morpholino group, a piperazin-1-yl group, a 4-methylpiperazin-1-yl group, a piperidin-1-yl group, and a pyrrolidin-1-yl group.
  • the amino group of the substituent is preferably an acyclic aliphatic primary or acyclic secondary amino group or a cyclic aliphatic secondary amino group. That is, preferred examples of the acyclic aliphatic primary amino group include a methylamino group, an isopropylamino group, a neopentylamino group, an n-hexylamino group, a cyclohexylamino group, and an n-octylamino group. .
  • Preferred examples of the acyclic aliphatic secondary amino group include a dimethylamino group, a diisopropylamino group, and an N-methyl-N-cyclohexylamino group.
  • Preferred examples of the cyclic aliphatic secondary amino group include a morpholino group, a piperazin-1-yl group, a 4-methylpiperazin-1-yl group, a piperidin-1-yl group, and a pyrrolidin-1-yl group.
  • Examples of the carbocyclic aryl group in the carbocyclic aryl group having an amino group as a substituent include a phenyl group and a naphthyl group.
  • the carbocyclic aryl group is preferably a phenyl group.
  • the substitution position of the amino group on the phenyl group is not particularly limited, and any substitution product at the 2-6 position may be used. A substituted amino group at the 3-position or 4-position is preferred.
  • a preferred embodiment is a phenyl group in which an acyclic aliphatic secondary amino group is substituted at the 4-position, or a cyclic aliphatic secondary amino group at the 4-position.
  • Examples include substituted phenyl groups.
  • 4-dimethylaminophenyl group, 4- (morpholino) phenyl group, or 4- (4-methylpiperazin-1-yl) phenyl group is preferable.
  • the carbocyclic aryl group having an aminoalkyl group as a substituent for X 2 includes, as the amino group, an unsubstituted amino group, an acyclic primary or acyclic secondary amino group, or a cyclic secondary amino group And a carbocyclic aryl group substituted with a (C1 to C8) alkyl group having as a substituent.
  • Examples of the non-cyclic primary amino group include a linear, branched or cyclic (C1-C10) alkyl group, or an amino group substituted with an aryl group.
  • acyclic secondary amino group which may be the same or different, is a linear, branched or cyclic (C1-C10) alkyl group, or an amino group in which an aryl group is N, N-disubstituted. It is a group.
  • Examples include dimethylamino group, diisopropylamino group, N-methyl-N-cyclohexylamino group, N-methyl-N-phenylamino group, N-methyl-N-pyridylamino group, diphenylamino group and the like.
  • Examples of the cyclic secondary amino group include a morpholino group, a piperazin-1-yl group, a 4-methylpiperazin-1-yl group, a piperidin-1-yl group, and a pyrrolidin-1-yl group.
  • the amino group of the substituent is preferably an acyclic aliphatic primary or acyclic secondary amino group or a cyclic aliphatic secondary amino group. That is, preferred examples of the acyclic aliphatic primary amino group include a methylamino group, an isopropylamino group, a neopentylamino group, an n-hexylamino group, a cyclohexylamino group, and an n-octylamino group. .
  • Preferred examples of the acyclic aliphatic secondary amino group include a dimethylamino group, a diisopropylamino group, and an N-methyl-N-cyclohexylamino group.
  • Preferred examples of the cyclic aliphatic secondary amino group include a morpholino group, a piperazin-1-yl group, a 4-methylpiperazin-1-yl group, a piperidin-1-yl group, and a pyrrolidin-1-yl group.
  • Examples of the (C1 to C8) alkyl group having an amino group as a substituent include a methyl group, an ethyl group, a propyl group, a butyl group, a pentyl group, and an octyl group.
  • Examples of the carbocyclic aryl group having an aminoalkyl group as a substituent include a phenyl group and a naphthyl group.
  • the carbocyclic aryl group is preferably a phenyl group.
  • the substitution position of the aminoalkyl group on the phenyl group is not particularly limited, and any substitution product at the 2-6 position may be used.
  • a substituted amino group at the 3-position or 4-position is preferred.
  • a preferred embodiment is that a cyclic aliphatic secondary amino group is substituted at the terminal position of the (C1 to C5) alkyl group, and the other terminal group is a phenyl group. In which the 4-position is substituted.
  • 4- (morpholinomethyl) phenyl group 4- (4-methylpiperazin-1-ylmethyl) phenyl group, 4- (2-morpholinoethyl) phenyl group, 4- [2- (4-methylpiperazine- A 1-yl) ethyl] phenyl group, a 4- (4-morpholinobutyl) phenyl group, and a 4- [5- (4-methylpiperazin-1-yl) pentyl] phenyl group are preferred.
  • a more preferred embodiment is 4- (morpholinomethyl) phenyl group or 4- (4-methylpiperazin-1-ylmethyl) phenyl group.
  • the heterocyclic aryl group which may have a substituent for X 2 includes a pyridyl group which may have a substituent, a pyrimidinyl group which may have a substituent, and a substituent. May have a quinolyl group, a quinazolinyl group which may have a substituent, a naphthyridinyl group which may have a substituent, a furyl group which may have a substituent, or a substituent A pyrrolyl group, an indolyl group which may have a substituent, an imidazolyl group which may have a substituent, a pyrazolyl group which may have a substituent, an oxazolyl group which may have a substituent , An isoxazolyl group which may have a substituent, a triazolyl group which may have a substituent, and the like.
  • a pyridyl group which may have a substituent a pyrimidinyl group which may have a substituent, an indolyl group which may have a substituent, an imidazolyl group which may have a substituent
  • a pyridyl group which may have a substituent a pyrimidinyl group which may have a substituent
  • an indolyl group which may have a substituent an indolyl group which may have a substituent.
  • a pyridyl group a pyridyl group having an alkyl group as a substituent, and a pyridyl group having an amino group as a substituent
  • Examples of the pyridyl group having an alkyl group as a substituent include a 6-methylpyridin-3-yl group and a 5-methylpyridin-2-yl group.
  • Examples of the pyridyl group having an amino group as a substituent include a 5-dimethylaminopyridin-2-yl group.
  • Examples of the pyrimidinyl group having an alkyl group as a substituent include a 2-methylpyrimidin-4-yl group and a 2-methylpyrimidin-3-yl group.
  • Examples of the pyrimidinyl group having an amino group as a substituent include 2-dimethylaminopyrimidin-5-yl group, 2-morpholinopyrimidin-5-yl group, 2- (4-methylpiperazin-1-yl) pyrimidine-5- Yl group and the like.
  • Examples of the indolyl group having an alkyl group as a substituent include a 1-methylindol-5-yl group and a 1-ethylindol-5-yl group.
  • X 1 is an isopropyl group or —CONR 11 R 12 , R 11 is a methyl group, and R 12 is n-butyl. It is a group.
  • X 2 is selected from the group consisting of 2-methylphenyl group, 4- (morpholinomethyl) phenyl group, 4- (4-methylpiperazin-1-ylmethyl) phenyl group and 1-methylindol-5-yl group The substituent compounds are preferred.
  • HSP inhibitor that binds to the block copolymer, preferably 5- (2,4-dihydroxy-5-isopropyl, wherein X 1 is an isopropyl group and X 2 is a 1-methylindol-5-yl group Phenyl) -4- (1-methyl-1H-indol-5-yl) -2,4-dihydro- [1,2,4] triazol-3-one (the following general formula (5); compound 5); X 5- (2,4-dihydroxy-5- (N-methyl), wherein 1 is —CONR 11 R 12 , R 11 is a methyl group, R 12 is an n-butyl group, and X 2 is a 2-methylphenyl group -N-butylamido))-4- (2-methylphenyl) -2,4-dihydro- [1,2,4] triazol-3-one (general formula (6) below; compound 6); or X 1 There is an isopropyl group, X 2 is 4-
  • each compound of the combination of the X 1 group and the X 2 group is synthesized based on known literature. be able to.
  • the following documents can be cited as known documents for the synthesis of the 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivatives.
  • the compound 5 represented by the general formula (5) is a known compound, and can be produced, for example, according to the description in International Publication No. 2007/139552.
  • the compound 6 represented by the general formula (6) is a known compound, and can be produced, for example, according to the description in International Publication No. 2008/086857.
  • Compound 7 represented by the general formula (7) is a known compound, and can be produced, for example, according to the description in International Publication No. 2006/095783.
  • the polymer compound in the present invention has a structure in which an HSP90 inhibitor is bound to a polyglutamic acid segment. That is, the HSP90 inhibitor is bound using the carboxylic acid side chain of the polyglutamic acid segment.
  • the binding mode is not particularly limited, and the carboxylic acid side chain of the polyglutamic acid segment and the substituent of the HSP90 inhibitor may be chemically bonded in an appropriate binding mode.
  • the polyglutamic acid segment and the HSP90 inhibitor are preferably bonded via an ester bond.
  • the HSP90 inhibitor has a phenolic hydroxyl group in the molecule
  • the phenolic hydroxyl group and the side chain carboxy group of the polyglutamic acid segment may be bound by an ester bond.
  • the ester bond is gradually cleaved non-enzymatically. That is, the release of the HSP90 inhibitor from the polymer compound of the present invention can be controlled to cause sustained release. Since the 1,2,4-triazol-3-one-substituted resorcin derivative preferable as the HSP90 inhibitor has a phenolic hydroxyl group in the resorcin moiety, the resorcin hydroxyl group and the side chain carboxy group of the polyglutamic acid segment are ester-bonded. A mode of bonding by the above can be used.
  • the polyglutamic acid segment is bound to the HSP90 inhibitor according to another embodiment.
  • an aspartic acid derivative is used as a linker between the HSP90 inhibitor and the side chain carboxy group of the polyglutamic acid segment.
  • a method of bonding can be mentioned. That is, the aspartic acid derivative serving as a linker is a derivative in which one carboxy group is amidated, and the amino group of the aspartic acid derivative and the side chain carboxy group of the polyglutamic acid segment of the block copolymer are bonded by an amide bond. A bonded group.
  • the HSP90 inhibitor can be bound to the polyglutamic acid segment by ester-linking the remaining carboxy group of this aspartic acid derivative and the alcoholic hydroxyl group of the HSP90 inhibitor.
  • the HSP90 inhibitor conjugate using the aspartic acid derivative as a linker is administered in vivo, the HSP90 inhibitor dissociates non-enzymatically, and the drug can be released slowly.
  • examples of the aspartic acid residue include the following general formula (3) or general formula (4).
  • R 8 and R 9 each independently represent a hydrogen atom or a (C1 to C6) alkyl group
  • R 10 represents a hydrogen atom, a (C1 to C40) alkyl group, a (C1 to C40) aralkyl group, an aromatic group
  • One or more substituents selected from the group consisting of amino acid residues in which a group group and a carboxy group are protected CX-CY represents CH—CH or C ⁇ C (double bond)
  • D represents HSP90.
  • the binding residues of the inhibitor are indicated.
  • the aspartic acid derivative used as a linker in the present invention is preferably a group represented by the general formula (3) or the general formula (4).
  • CX-CY is C ⁇ C (double bond)
  • the E configuration is preferable.
  • D is a binding residue of the HSP90 inhibitor, and the terminal carboxyl group of the aspartic acid derivative and the HSP90 inhibitor are bonded by an ester bond.
  • Examples of the (C1 to C6) alkyl group in R 8 and R 9 include, for example, methyl group, ethyl group, n-propyl group, isopropyl group, n-butyl group, s-butyl group, isobutyl group, n-pentyl group, n -Hexyl group and the like.
  • R 8 and R 9 are preferably hydrogen atoms.
  • the (C1 to C40) alkyl group in R 10 is a (C1 to C40) alkyl group which may have a substituent, and examples thereof include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, and an n-butyl group.
  • the substituent include a phenyl group, a naphthyl group, a methoxy group, an ethoxy group, and a dimethylamino group.
  • the (C1-C40) aralkyl group is an optionally substituted (C1-C40) aralkyl group, and examples thereof include a benzyl group, a naphthylmethyl group, a phenethyl group, and a 4-phenylbutyl group.
  • substituent include a methyl group, an ethyl group, a nitro group, a chlorine atom, a bromine atom, and a dimethylamino group.
  • the aromatic group is an aromatic group which may have a substituent, and examples thereof include a phenyl group, a 4-nitrophenyl group, a 4-chlorophenyl group, a naphthyl group, and a fluorenyl group.
  • the substitution position of the substituent in each group of R 8 , R 9 , and R 10 is not particularly limited as long as substitution is possible, and the number of substituents is not particularly limited.
  • amino acid of the amino acid residue in which the carboxy group in R 10 is protected includes an amino acid in which the carboxy group used in normal peptide synthesis is protected, and the carboxy group of the amino acid is protected by an ester or an amide. Are preferred.
  • the amino acid protected with an ester is, for example, a (C1-C12) alkyl ester optionally having an amino acid substituent, such as a (C1-C12) alkyl ester of alanine, an ⁇ of aspartic acid or ⁇ - (C1-C12) alkyl ester, ⁇ - or ⁇ - (C1-C12) alkyl ester of glutamic acid, (C1-C12) alkyl ester of phenylalanine, (C1-C12) alkyl ester of cysteine, (C1-C12 of glycine) ) Alkyl esters, (C1-C12) alkyl esters of leucine, (C1-C12) alkyl esters of isoleucine, (C1-C12) alkyl esters of histidine, (C1-C12) alkyl esters of proline, (C1-C12) of serine ) Alkyl esters, (C
  • phenylalanine methyl ester Particularly preferred are phenylalanine methyl ester, glycine methyl ester, glycine (4-phenyl-1-butanol) ester, leucine methyl ester, phenylalanine benzyl ester, phenylalanine (4-phenyl-1-butanol) ester and the like.
  • the amino acid may be D-form, L-form or a mixture thereof.
  • R 10 is particularly preferably an n-butyl group, a 4-phenylbutyl group, etc. Among them, a phenylbutyl group is particularly preferable. Further, CX-CY is preferably CH—CH.
  • D is a binding residue of the HSP90 inhibitor.
  • the embodiment in which the HSP90 inhibitor is bonded to the terminal carboxyl group of the aspartic acid derivative by an ester bond is preferable.
  • the HSP90 inhibitor include several developed compounds such as geldanamycin derivatives and substituted resorcin derivatives.
  • a substituted resorcin derivative having a hydroxyl group that can be bonded to the polyglutamic acid segment by an ester bond is particularly preferable.
  • Examples of the substituted resorcin derivative include those represented by the general formula (2) [Wherein, X 1 represents a linear or branched (C1 to C6) alkyl group or —CONR 11 R 12 , and R 11 and R 12 may be the same or different and may be linear, branched or A cyclic (C1 to C6) alkyl group, and X 2 represents an aryl group which may have a substituent]], 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivatives it can.
  • the definition of the substituent in X ⁇ 1 >, X ⁇ 2 >, R ⁇ 11> , R ⁇ 12 > in General formula (2) is synonymous with the above-mentioned.
  • R 4 in the general formula (1) is an aspartic acid residue represented by the following general formula (8) or general formula (9) and / or an aspartic imide residue represented by the following general formula (10).
  • R 8 , R 9 , R 10 and CX-CY are the same as the substituent groups defined in the general formulas (3) and (4).
  • a substituent selected from the group of groups is preferred. When these substituents are present in the polymer compound, these groups may be mixed.
  • R 8, R 9, R 10 , CX-CY is the same as R 8, R 9, R 10 , CX-CY in the R 3, it is the same preferable groups.
  • a glutamic acid moiety to which any of EHC, R 3 , R 4 and R 5 is not bonded may be present.
  • a glutamic acid residue having a free acid type carboxy group is shown, but the carboxy group may be an alkali metal salt or an alkaline earth metal salt, and a glutamic acid moiety containing such a carboxyl group is included.
  • the polymer compound of the general formula (1) having the formula is also included in the present invention.
  • the alkali metal salt or alkaline earth metal salt include lithium salt, sodium salt, potassium salt, magnesium salt, calcium salt and the like.
  • it when it is provided parenterally as an anticancer agent, it is prepared as a solution in a solution, but it may be a glutamate based on a salt of the pH buffer of the solution with a cation.
  • a glutamic acid unit (containing d is the number of glutamic acid units) in which EHC is bonded to the side chain carboxy group, and a glutamic acid unit (including the number of units containing the R 3 is bonded to the side chain carboxy group).
  • the side chain carboxy group has a glutamic acid unit (containing unit is h) which is a free carboxy group or a salt thereof.
  • the glutamic acid unit to which EHC is bound and the glutamic acid unit to which R 3 which is a binding residue of the HSP90 inhibitor is bound are essential constituent units.
  • the glutamic acid unit to which R 4 is bonded, the glutamic acid unit to which R 5 is bonded, and the glutamic acid unit which is a free carboxy group or a salt thereof are arbitrary constituent units. Each of these glutamic acid units is independently and randomly arranged.
  • the total number of glutamic acid units in the polyglutamic acid segment of the general formula (1) is represented by d + e + f + g + h.
  • the ratio of d is 5 to 50%, preferably 5 to 40%
  • the ratio of e is 5 to 90%, preferably 5 to 80%
  • the ratio of f is 0 to 90%, preferably 0 to 60%.
  • the proportion is 0 to 90%, preferably 5 to 40%
  • the proportion of h is 0 to 90%, preferably 0 to 30%.
  • the ratio of the drug content of EHC, which is a camptothecin derivative, and an HSP90 inhibitor is not particularly limited, and can be arbitrarily set at a mixture ratio that provides a synergistic effect enhancing action by the combined use of EHC and HSP90 inhibitor. can do.
  • the mixing ratio of EHC and HSP90 inhibitor is indicated by the amount of each drug bound in the polyglutamic acid segment, and is set by the d value and e value representing the ratio of each unit of the polyglutamic acid segment.
  • EHC and HSP90 inhibitor are released from the block copolymer and have a medicinal effect.
  • the binding amount of each drug should be set to a combined concentration ratio that exhibits a synergistic effect enhancing action in consideration of the dissociation rate of the drug from the block copolymer.
  • a 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivative represented by the general formula (2) is used as an HSP90 inhibitor, a mixture of EHC and 1,2,4-triazol-3-one substituted resorcin derivative
  • the polymer compound represented by the general formula (1) of the present invention may form a micelle having a polyethylene glycol segment as an outer shell and a polyglutamic acid segment to which a drug or the like is bound as an inner shell in water. That is, the polymer compound of the present invention is an antitumor agent using a block copolymer in which polyethylene glycol and polyglutamic acid are linked as a carrier, but becomes a polymer having a higher molecular weight due to the formation of a self-aggregate.
  • the self-aggregate is preferably a high molecular weight body having a molecular weight of about 10 6, and has a pharmacokinetics depending on the molecular weight. That is, the drug is expected to have desirable pharmacokinetic properties for improving the efficacy of antitumor agents such as an increase in half-life, improved permeability to tumor tissues, and accumulation in tumor tissues.
  • the manufacturing method of the high molecular compound of this invention is not limited to the manufacturing method described here, and the method as described in the Example and reference example of a postscript.
  • the method for constructing the main chain of the block copolymer having a polyethylene glycol segment and a polyglutamic acid segment which is a polymer compound of the present invention represented by the general formula (1), is a method of binding a polyethylene glycol segment and a polyglutamic acid segment, Any method of sequentially polymerizing glutamic acid structural units to polyethylene glycol segments may be used.
  • N -A method of constructing a polyglutamic acid segment by sequentially reacting carbonyl glutamic anhydride in accordance with the method described in International Publication No. 2006/120914 pamphlet or the like, for example, polyethylene glycol modified with a modifying group such as a methyl group at one end and an aminopropyl group at the other end, N -A method of constructing a polyglutamic acid segment by sequentially reacting carbonyl glutamic anhydride.
  • the N-carbonylglutamic acid anhydride may be a derivative of EHC, in which the carboxy group of the glutamic acid side chain may be modified with an appropriate carboxylic acid protecting group, and is a derivative having a predetermined carboxy group substituent in advance.
  • Conjugates conjugates of HSP90 inhibitors according to R 3 of general formula (1), conjugates of R 4 of general formula (1), conjugates of R 5 of general formula (1), free carboxylic acids, etc. There may be.
  • N-carbonylglutamic acid anhydride it is preferable to use an N-carbonylglutamic acid anhydride in which the side chain carboxy group is modified with an appropriate carboxylic acid protecting group.
  • the carboxylic acid protecting group is not particularly limited, but an ester protecting group is preferable.
  • the N-carbonylglutamic acid anhydride modified with an appropriate carboxylic acid protecting group is used for the side chain carboxy group, and the N-carbonylglutamic acid anhydride is reacted with a polyethylene glycol compound modified with an amino group at one end.
  • a block copolymer in which polyethylene glycol and a polyglutamic acid derivative are linked to which EHC, an HSP90 inhibitor corresponding to R 3 according to the general formula (1), and a general formula (1
  • the terminal amino group of the polyglutamic acid segment of the block copolymer may be acylated.
  • a polyethylene glycol compound modified with a methoxy group at one end and an amino group at the other end and a ⁇ -benzyl-N-carbonylglutamic anhydride are reacted sequentially, and then by subsequent polymerization, polyethylene glycol and poly (ethylene glycol) are reacted.
  • a block copolymer linked with glutamic acid benzyl ester is prepared. Thereafter, by deprotecting the benzyl group of polyglutamic acid by a suitable method, a block copolymer in which the polyethylene glycol and polyglutamic acid are linked can be prepared. Examples of the deprotection reaction of the benzyl group include a hydrolysis reaction and a hydrogenation reduction reaction under alkaline conditions.
  • a reaction in which EHC, an HSP90 inhibitor, an aspartic acid derivative to which an HSP90 inhibitor is bound, or the like is bound to the block copolymer in which the polyethylene glycol segment and the polyglutamic acid segment are linked is performed.
  • the binding method is not particularly limited, and the ESP is bound first, and then the HSP90 inhibitor or the aspartic acid derivative to which the HSP90 inhibitor is bound may be bound simultaneously or in the reverse order. Also good.
  • a block copolymer in which a polyethylene glycol segment and a polyglutamic acid segment are linked to an aspartic acid derivative to which an EHC and HSP90 inhibitor or an HSP90 inhibitor is bonded is subjected to a dehydration condensation reaction in the presence of a carbodiimide dehydration condensation agent.
  • a —N (R 6 ) CONH (R 7 ) group corresponding to R 4 can be introduced into the block copolymer simultaneously with EHC and HSP90 inhibitors and the like.
  • the carbodiimide dehydrating condensing agent dicyclohexylcarbodiimide (DCC), diisopropylcarbodiimide (DIPCI), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (WSC) and the like can be used.
  • a reaction aid such as N, N-dimethylaminopyridine (DMAP) may be used.
  • DMAP N, N-dimethylaminopyridine
  • the binding amount of EHC and HSP90 inhibitor can be adjusted by appropriately increasing or decreasing the amount of each drug charged in the dehydration condensation reaction.
  • R 6 and R 7 of —N (R 6 ) CONH (R 7 ) are cyclohexyl groups.
  • DIPCI diisopropylcarbodiimide
  • R 6 and R 7 are isopropyl groups.
  • R 6 and R 7 of —N (R 6 ) CONH (R 7 ) are an ethyl group and 3-dimethylaminopropyl It becomes a mixed substitution product.
  • the polymer compound of the present invention can be produced via an optional purification step.
  • the polymer compound of the present invention gradually dissociates and releases EHC and HSP90 inhibitors, which are antitumor active ingredients, in a phosphate buffered saline (PBS) solution. This indicates that even when administered in vivo, it has physical properties to release the EHC and HSP90 inhibitors gradually.
  • PBS phosphate buffered saline
  • high molecular weight compounds and low molecular weight compounds have greatly different pharmacokinetic behaviors in the body and their distribution in the body. From this, the high molecular compound of the present invention is different in drug expression characteristics and side effect expression characteristics from low molecular weight drugs, and can provide a new therapeutic method using a camptothecin derivative and an HSP90 inhibitor.
  • the polymer compound of the present invention can be used as an anticancer agent, and the use of the anticancer agent is also included in the present invention.
  • the anticancer agent can be used in commonly used preparations such as injections, drops, tablets, capsules, powders and the like.
  • commonly used pharmaceutically acceptable carriers and additives such as binders, lubricants, disintegrants, solvents, excipients, solubilizers, dispersants, stabilizers, suspensions Agents, preservatives, soothing agents, pigments, fragrances and the like can be used. Among them, it is preferably used as an injection or a drip infusion.
  • Water physiological saline, 5% glucose or mannitol solution, water-soluble organic solvent (for example, glycerol, ethanol, dimethyl sulfoxide, N-methylpyrrolidone, polyethylene glycol, cremophor, etc. And a mixture thereof, and a mixture of water and the water-soluble organic solvent are preferred.
  • water-soluble organic solvent for example, glycerol, ethanol, dimethyl sulfoxide, N-methylpyrrolidone, polyethylene glycol, cremophor, etc. And a mixture thereof, and a mixture of water and the water-soluble organic solvent are preferred.
  • the dose of the polymer compound represented by the general formula (1) is appropriately set in consideration of the patient's sex, age, physique, physiological condition, disease state, therapeutic effect and the like.
  • the dose per body surface area of a patient is 0.01 to 500 mg / m 2 , preferably 1 to 200 mg / m 2 parenterally, in terms of EHC, which is an active ingredient, per day for an adult.
  • the dose per body surface area of the patient is 0.01 to 500 mg / m 2 , preferably 1 to 200 mg / m 2 .
  • the polymer compound of the present invention can be used in combination with other antitumor agents.
  • Other antitumor agents are not particularly limited, and pharmaceuticals approved as antitumor agents and malignant tumor therapeutic agents can be used. That is, alkylating agents such as cyclophosphamide, ifosfamide and mitomycin C, platinum complexes such as cisplatin, carboplatin and oxaliplatin, anthracycline antitumor agents such as doxorubicin, epirubicin, pirarubicin and amrubicin, etoposide, etoposide phosphate, teniposide Etoposides, paclitaxel, docetaxel and other taxanes, vincristine, vinblastine, vindesine, vinca albinoids such as vinorelbine, 5-fluorouracil, tegafur, tegafur / uracil combination (UFT), tegafur / gimeracil /
  • the polymer compound of the present invention is used for the treatment of malignant tumor diseases.
  • the malignant tumor applied to the treatment with the polymer compound of the present invention is not particularly limited, and breast cancer, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, colorectal cancer, non-Hodgkin lymphoma (NHL), renal cell carcinoma, Prostate cancer, hepatocellular carcinoma, gastric cancer, pancreatic cancer, soft tissue sarcoma, Kaposi sarcoma, carcinoid carcinoma, head and neck cancer, melanoma, ovarian cancer, bile duct cancer, mesothelioma, and multiple myeloma, etc. widely It can be applied to general cancer treatment.
  • breast cancer non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, colorectal cancer, non-Hodgkin lymphoma (NHL), renal cell carcinoma, Prostate cancer, hepatocellular carcinoma, gastric cancer, pancreatic cancer, soft tissue sarcoma, Kaposi sarcoma,
  • non-small cell lung cancer, cervical cancer, ovarian cancer, gastric cancer (inoperable or recurrent), colorectal cancer (inoperable or recurrent), breast cancer (inoperable or recurrent) for which camptothecin derivatives are being treated Suitable for the treatment of squamous cell carcinoma, malignant lymphoma (non-Hodgkin lymphoma).
  • high therapeutic effects can be expected in chemotherapy for various cancers that have undergone pretreatment with a camptothecin derivative and have decreased sensitivity to the camptothecin derivative in the pretreatment.
  • the present invention will be further described below with reference to examples. However, the present invention is not limited to these examples.
  • the present invention products Gaussian distribution analysis showing the size of the particles constituting in aqueous solution (particle size) were performed at Zeta Potential / Particlesizer NICOMP TM 380ZLS ( Particle Sizing Systems , Inc.).
  • the methoxypolyethylene glycol-polyglutamic acid block copolymer (with a molecular weight of 12,000 at one end is a methyl group and the other end is at aminopropyl) by a method according to the method described in the pamphlet of International Publication No.
  • EHC 7-ethyl-10-hydroxycamptothecin
  • DIPCI diisopropylcarbodiimide
  • DMAP N, N-dimethylaminopyridine
  • the contents of EHC and compound 5 bound to compound 1 were analyzed by HPLC (high performance liquid chromatography) after adding 1N sodium hydroxide aqueous solution to compound 1 and stirring at 37 ° C. for 1 hour. And calculated from the amount obtained from the calibration curve obtained with EHC and Compound 5. As a result, the contents of bound EHC and compound 5 were 3.4% (w / w) and 15.4% (w / w), respectively. Further, according to 1 H-NMR method, the bond content of —N (R 6 ) CONH (R 7 ) (R 6 and R 7 are isopropyl groups) corresponding to R 5 according to the general formula (1) is 3.0 % (W / w).
  • 2006/120914 pamphlet It consists of a polyethylene glycol segment and a polyglutamic acid segment (terminal N acetyl group) having a polymerization number of 23, and the binding group is A block copolymer which is a rimethylene group) was prepared.
  • the methoxypolyethylene glycol-polyglutamic acid block copolymer (389 mg), EHC (70 mg) and Compound 5 (70 mg) obtained in Synthesis Example 1 were dissolved in DMF (7.0 mL), stirred at 35 ° C. for 30 minutes, and then stirred at 20 ° C. for 2 hours. did. To this was added 167 ⁇ L of DIPCI and 6.9 mg of DMAP, and the mixture was stirred at 20 ° C. for 21 hours.
  • the content of EHC and compound 5 bound to compound 2 was determined by adding 1N sodium hydroxide aqueous solution to compound 1 and stirring at 37 ° C. for 1 hour, and then measuring the content of free EHC and compound 5 by HPLC (high performance liquid chromatography). And calculated from the amount obtained from the calibration curve obtained with EHC and Compound 5. As a result, the contents of bound EHC and compound 5 were 10.9% (w / w) and 9.0% (w / w), respectively.
  • the bond content of —N (R 6 ) CONH (R 7 ) (R 6 and R 7 are isopropyl groups) corresponding to R 5 according to the general formula (1) was 2.9% by 1 H-NMR method. (W / w).
  • a block copolymer comprising a glycol segment and a polyglutamic acid segment (terminal acetyl group) having a polymerization number of 10 .
  • the methoxypolyethylene glycol-polyglutamic acid block copolymer 473 mg, EHC 32 mg, and Compound 5 150 mg obtained in Synthesis Example 1 were dissolved in DMF 10 mL, stirred at 35 ° C. for 25 minutes, and then stirred at 25 ° C. for 2 hours. Then, 235 ⁇ L of DIPCI and 9 mg of DMAP were added and stirred at 25 ° C. for 20 hours. Thereafter, 118 ⁇ L of DIPCI was added, and the mixture was further stirred for 5 hours.
  • the reaction solution was slowly added dropwise to a mixed solution of 30 mL of ethyl acetate and 120 mL of diisopropyl ether, and stirred at room temperature for 2 hours.
  • the precipitate was collected by filtration and washed with ethyl acetate.
  • the obtained precipitate was dissolved in 11.0 mL of acetonitrile and 2.0 mL of water, an ion exchange resin (Dow Chemical Dowex 50 (H + ), 5.0 mL) was added, and the mixture was stirred and filtered.
  • the obtained filtrate was transferred to a dialysis membrane and dialyzed overnight at 5 ° C., and then the solution in the dialysis membrane was recovered.
  • Acetonitrile in the obtained solution was distilled off under reduced pressure, and then freeze-dried to obtain Compound 3 (500 mg).
  • the content of EHC and compound 5 bound to compound 3 was determined by adding 1N sodium hydroxide aqueous solution to compound 1 and stirring at 37 ° C. for 1 hour, and then determining the content of free EHC and compound 5 by HPLC (high performance liquid chromatography). And calculated from the amount obtained from the calibration curve obtained with EHC and Compound 5. As a result, the contents of bound EHC and compound 5 were 3.6% (w / w) and 16.6% (w / w), respectively.
  • the bond content of —N (R 6 ) CONH (R 7 ) (where R 6 and R 7 are isopropyl groups) corresponding to R 5 according to the general formula (1) is 3.4% by 1 H-NMR method. (W / w).
  • control drug 1 was hydrolyzed at room temperature for 10 minutes with a 1N-sodium hydroxide aqueous solution, and then the liberated EHC was quantitatively analyzed by the HPLC method to obtain an EHC content of 21% (w / w )Met.
  • the bond content of —N (R 6 ) CONH (R 7 ) (where R 6 and R 7 are isopropyl groups) corresponding to R 5 according to the general formula (1) was 5.6% by 1 H-NMR method. (W / w).
  • DIPCI diisopropylcarbodiimide
  • DMAP N, N-dimethylaminopyridine
  • the bond content of the group —N (R 6 ) CONH (R 7 ) (where R 6 and R 7 are isopropyl groups) corresponding to R 5 according to the general formula (1) by 1 H-NMR method is 3 0.0% (w / w).
  • the high molecular compounds of the present invention release and release both EHC and compound 5 slowly in a PBS solution without hydrolase. I was able to.
  • the drug release rates of EHC and Compound 5 varied depending on the composition of the block copolymer in which polyethylene glycol and polyglutamic acid were linked and the amount of each drug bound. It has been shown that the release rate of EHC and compound 5 can be controlled.

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Abstract

患部に効率的に２つの薬剤を送達して、副作用が低減され、薬効の増強がもたらされる高分子化合物、及びそれを有効成分とする抗腫瘍剤を提供する。該高分子化合物は、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体の側鎖におけるカルボキシル基にカンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤とがエステル結合したものである。

Description

カンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤の結合した高分子化合物及びその用途
　本発明はカンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤が同一分子に結合された高分子化合物に関する。本発明の高分子化合物は、カンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤を患部へ同時に送達するための薬物送達システムに関し、また、優れた抗腫瘍活性を示す医薬品化合物に関する。
　カンプトテシンは、中国産の植物「喜樹」より抽出された植物アルカロイドでＩ型トポイソメラーゼ阻害剤である。これはＤＮＡと複合体を形成したＩ型トポイソメラーゼに選択的に結合し、その構造を安定化させる。その結果、切断されたＤＮＡの再結合が不可能となり、ＤＮＡの合成を止めて細胞死を誘導する薬剤である。
　カンプトテシンは高い抗腫瘍効果を示し１９６０年代に抗癌剤として開発が進められたが、強い毒性として骨髄抑制と***が見られたために臨床試験が中止となった。
　その後、カンプトテシンよりも水に溶けやすく、抗腫瘍活性はより強いが毒性はより低い誘導体としてトポテカンとイリノテカンが開発された。トポテカンは、代謝を経ずに抗腫瘍効果を発揮し、投与量の２０～４０％が腎***であるため副作用の下痢が軽度である。イリノテカンはそれ自体でも抗腫瘍効果を有しているが、生体内でカルボキシルエステラーゼにより活性代謝物の７－エチル－１０－ヒドロキシカンプトテシン（以下、ＥＨＣと記載することもある）に代謝され、より強い抗腫瘍効果を発揮する。またイリノテカンとＥＨＣは、トポテカンよりも生物学的に活性であるラクトン型として血漿中に存在する割合が多く、半減期が長いという特徴を有する。
　臨床においてカンプトテシン誘導体は多くの癌種に使用されている。トポテカンは小細胞肺癌や癌化学療法剤による前治療を実施した卵巣癌に対する適応が承認された。一方、イリノテカンは小細胞肺癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、胃癌（手術不能または再発）、結腸・直腸癌（手術不能または再発）、乳癌（手術不能または再発）、有棘細胞癌、悪性リンパ腫（非ホジキンリンパ腫）に対する広い適応で承認された。
　抗腫瘍剤の薬理活性を効率的に引き出すために、高分子担体を利用する手法が知られており、カンプトテシン誘導体を用いた高分子－カンプトテシン誘導体結合体の報告がされている。特許文献１には、フェノール性水酸基を有するカンプトテシン誘導体を、ポリエチレングリコール類と側鎖にカルボキシ基を有するポリマーが連結した共重合体にエステル結合させて調製した高分子化カンプトテシン誘導体が記載されている。該高分子化誘導体では、化学的に開裂しやすいフェニルエステル結合でカンプトテシン誘導体が結合されており、生体内に投与した後、薬理活性を有するカンプトテシン誘導体が緩徐に放出されることが記載されている。更に、該高分子化カンプトテシン誘導体は、自己会合性を有しており、ミセル様会合体を形成して高い腫瘍組織内分布を示すことにより、腫瘍組織に選択的に薬効を示して、副作用が少ない抗腫瘍剤であることが記載されている。この高分子化カンプトテシン誘導体は、薬効成分であるＥＨＣの放出が酵素に依存しないため、治療効果発現において患者の個体差に影響されにくい利点を有すると考えられる。
　熱ショックタンパク（Ｈｅａｔ　Ｓｈｏｃｋ　Ｐｒｏｔｅｉｎ；ＨＳＰ）は細胞内に存在する分子シャペロンであり、その分子量によってＨＳＰ９０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ４０、ｓｍａｌｌ　ＨＳＰｓなど、幾つかのファミリーに分類される機能性分子である。分子シャペロンとは、タンパク質の機能的高次構造の形成を促進するため、標的タンパク質と一時的に複合体を形成するタンパク質の総称である。すなわち、分子シャペロンは、タンパク質の折り畳みや会合を助け、凝集を抑止する活性を持つ。
　ＨＳＰは、細胞内のシグナル伝達系に関わる多様なタンパク質と相互作用することが知られている。ＨＳＰが結合する分子はクライアントタンパク質と呼ばれ、ＨＳＰ９０のクライアントタンパク質はおよそ２００分子が報告されている。すなわちＨＳＰ９０は、多様なタンパク質の機能発現に必要な場合が多く、その作用機作は、ＨＳＰ９０が不安定な折り畳み状態にあるクライアントタンパク質を特異的に認識して、これと結合して複合体を形成する生化学的特性に基づいている。癌関連のシグナル伝達に関わる多様なタンパク質（ステロイドレセプター、Ｒａｆ　セリンキナーゼ、チロシンキナーゼ類）は、ＨＳＰ９０にその構造構築を依存しており、ＨＳＰ９０が細胞周期の制御、細胞の癌化・増殖・生存シグナルに深く関与していることが明らかになっている。
　ヒト腫瘍では多くのシグナル分子の調節に異常を来しており、これらのシグナル分子の機能を維持するためにＨＳＰ９０を必要としている。近年、ＨＳＰ９０に作用してその機能を阻害する化合物は、癌関連のシグナル伝達に関わる多様なクライアントタンパク質の分解を引き起こし、癌細胞の増殖を抑制できることが報告された。すなわちＨＳＰ９０阻害剤は、クライアントタンパク質とＨＳＰ９０を含むシャペロン複合体の構成を変化させる作用を有する。その後、該複合体から離脱したクライアントタンパク質は、主にユビキチン・プロテアソ－ム系で分解される。これにより、ＨＳＰ９０のクライアントタンパク質量が減少し、それに伴い下流へのシグナル伝達を遮断し、癌細胞の増殖を抑制する事により抗腫瘍効果をもたらす。癌細胞は、ＨＳＰ９０阻害剤に対する感受性が、正常細胞と比較して高いことが期待される。そこでＨＳＰ９０を標的分子とするＨＳＰ９０阻害剤の探索的研究、並びにその抗腫瘍効果の検証がなされている。
　ＨＳＰ９０阻害剤の臨床応用は、ゲルダナマイシン誘導体で先行して実施されてきた。ゲルダナマイシン誘導体である１７－ＡＡＧについては、造血器腫瘍、乳癌、メラノーマおよび消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）を対象に臨床試験が行われてきたが、難溶解性である問題と共に、肝毒性が発現する問題があった。そこで、ゲルダナマイシン誘導体の問題点を克服し得る、新規低分子ＨＳＰ９０阻害剤の探索及び構造最適化研究が進められ、その結果、幾つかの複素環型ＨＳＰ９０阻害剤が見出された。
　例えば特許文献２～４には、ＨＳＰ９０阻害剤として有用な１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体が報告されている。また特許文献５には、１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体の薬物動態の改善と、薬剤の徐放化を指向した高分子化ＨＳＰ９０阻害剤である高分子化１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体が記載されている。該高分子化ＨＳＰ９０阻害剤は、ポリエチレングリコールセグメントとカルボキシ基を有するポリマーセグメントを有するブロック共重合体に、ＨＳＰ９０阻害剤である１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体を結合させた高分子化薬剤結合化合物である。これは自己会合性を有しており、ミセル様会合体を形成して高い腫瘍組織内分布を示すことにより、腫瘍組織に選択的に薬剤を作用させて薬効を示し、副作用が少ない抗腫瘍剤であることが記載されている。つまり、該高分子化ＨＳＰ９０阻害剤を生体に投与すると、腫瘍組織に高濃度で分布すると共に、ＨＳＰ９０阻害活性を有する１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体を徐放して抗腫瘍効果を発揮する抗腫瘍剤であると記載されている。
　ＨＳＰ９０阻害剤は、殺細胞性の抗腫瘍剤と組み合わせることで、抗腫瘍効果が増強されることが期待され、ＨＳＰ９０阻害剤と他の抗腫瘍剤との併用による癌治療の開発が進められている。
　特許文献６には、ＨＳＰ９０阻害剤である１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体とＩ型トポイソメラーゼ阻害剤であるカンプトテシンとの併用が記載されている。また、非特許文献１には、ＨＳＰ９０阻害剤である１７－ＡＡＧとイリノテカンの併用による第Ｉ相臨床試験が報告されている。
　薬理活性機構の異なる複数の薬剤の併用投与は、相乗的な薬理活性増強効果を奏することがあり、高い治療効果を得るために種々の組合せが検討されている。しかしながら、細胞レベルでの相乗的な薬理活性増強効果を実際の疾病に対して効果奏功させるためには、疾病患部に複数の薬剤を所望の濃度及び感作時間で作用させる必要があり、複数の薬剤を送達するための薬物送達システムを開発する必要がある。特許文献７及び非特許文献２には、ドキソルビシンと他の抗癌剤を保持させた高分子化合物が報告されている。しかしながら、カンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤との併用療法において、２つの薬剤の至適な薬物送達を考慮した薬剤送達性化合物に関する報告は知られていない。
国際公開ＷＯ２００４／０３９８６９号パンフレット 国際公開ＷＯ２００６／０５５７６０号パンフレット 国際公開ＷＯ２００６／０８７０７７号パンフレット 国際公開ＷＯ２００６／０９５７８３号パンフレット 交際公開ＷＯ２００８／０４１６１０号パンフレット 国際公開ＷＯ２０１３／０６７１６２号パンフレット 特表２０１０－５１９３０５号公報
Ｔｓｅ　Ａ．Ｎ．　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，１４：２０，６７０４‐６７１１（２００８） Ｙｏｕｎｓｏｏ　Ｂａｅ　＆　Ｋａｚｕｎｏｒｉ　Ｋａｔａｏｋａ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．，６１，７６８‐７８４（２００９）
　本発明の目的は、カンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤、特に１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体を疾病患部に効率的に同時に送達して薬物を放出し、所望の濃度及び感作時間で作用させる薬物送達システム（ＤＤＳ）を提供することにより、正常細胞に対する細胞障害が抑制されて副作用が低減され、優れた抗腫瘍効果が得られる医薬品化合物を提供することにある。
　本発明者らは、カンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤、特にＨＳＰ９０阻害活性を有する１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体が、同一分子に結合している高分子化合物を創出し、該化合物により化学療法剤として満足できる治療効果が得られることを見出して本発明に至った。
　すなわち本発明は、以下の構成１）～８）を要旨とする。
１）　ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体にカンプトテシン誘導体及びＨＳＰ９０阻害剤が結合した高分子化合物であって、該高分子化合物は一般式（１）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
 ［式中、Ｒ１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５～４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈは６～６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈに対するｄの割合が５～５０％、ｅの割合が５～９０％、ｆの割合が０～９０％、ｇの割合が０～９０％、ｈの割合が０～９０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１～Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３はＨＳＰ９０阻害剤の結合残基またはＨＳＰ９０阻害剤が結合したアスパラギン酸残基を示し、Ｒ４はアスパラギン酸残基またはアスパラギン酸イミド残基を示し、Ｒ５は－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）を示し、Ｒ６及びＲ７は同一でも異なってもいてもよく、分岐若しくは環状の（Ｃ３～Ｃ６）アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐若しくは直鎖の（Ｃ１～Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７－エチル－１０－ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基にＲ４基が結合したグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基にＲ５基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化合物。
２）　Ｒ３がＨＳＰ９０阻害剤の結合残基であり、該ＨＳＰ９０阻害剤が一般式（２）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
 ［式中、Ｘ１は直鎖若しくは分岐の（Ｃ１～Ｃ６）のアルキル基または－ＣＯＮＲ１１Ｒ１２を示し、前記Ｒ１１及びＲ１２は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１～Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］で示される１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体であり、レゾルシン部分の水酸基がエステル結合したＨＳＰ９０阻害剤の結合残基である、前記１）に記載の高分子化合物。
３）　Ｒ３が、ＨＳＰ９０阻害剤が結合したアスパラギン酸残基であり、該アスパラギン酸残基が一般式（３）または一般式（４）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
 ［式中、Ｒ８及びＲ９はそれぞれ独立して水素原子または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を示し、Ｒ１０は水素原子、（Ｃ１～Ｃ４０）アルキル基、（Ｃ１～Ｃ４０）アラルキル基、芳香族基及びカルボキシ基が保護されたアミノ酸残基からなる群から選択される１種以上の置換基を示し、ＣＸ－ＣＹはＣＨ－ＣＨ若しくはＣ＝Ｃ（二重結合）を示し、ＤはＨＳＰ９０阻害剤の結合残基を示す。］である、前記１）に記載の高分子化合物。
４）　前記ＤのＨＳＰ９０阻害剤の結合残基の該ＨＳＰ９０阻害剤が、一般式（２）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
 ［式中、Ｘ１は直鎖若しくは分岐の（Ｃ１～Ｃ６）のアルキル基または－ＣＯＮＲ１１Ｒ１２を示し、前記Ｒ１１及びＲ１２は同一でも異なっていてもよい直鎖状、分岐状または環状の（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］で示される１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体であり、レゾルシン部分の水酸基がエステル結合したＨＳＰ９０阻害剤の結合残基である、前記３）に記載の高分子化合物。
５）　一般式（１）のｄとｅの比率がｄ：ｅ＝１：０．５～１５である前記１）～４）のいずれか一項に記載の高分子化合物。
６）　Ｒ１がメチル基またはエチル基、Ａがエチレン基またはプロピレン基、Ｒ２がアセチル基またはプロピオニル基、Ｒ６、Ｒ７が共にシクロヘキシル基または共にイソプロピル基であり、ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈに対するｄの割合が５～４０％、ｅの割合が５～８０％、ｆの割合が０～６０％、ｇの割合が５～４０％、ｈの割合が０～３０％である、前記１）～５）のいずれか一項に記載の高分子化合物。
７）　前記１）～６）のいずれか一項に記載の高分子化合物を有効成分とする抗腫瘍剤。
８）　前治療においてカンプトテシン誘導体による抗癌治療を処置された悪性腫瘍に処方される前記７）に記載の抗腫瘍剤。
　本発明の高分子化合物は、癌化学療法においてキードラッグとなるカンプトテシン誘導体と、ＨＳＰ９０阻害剤、特にＨＳＰ９０阻害活性を有する１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体が結合していることを特徴とし、カンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤の２つの薬剤を、同一部位に至適用量で、至適時間で薬物送達することができる薬物送達システムを提供することができる。本発明の薬物送達システムは、２つの薬剤を患部に同時に送達させることができ、且つ理想的な薬物濃度及び薬物感作時間にて薬剤を作用させることができ、２つの薬剤による相乗効果を奏する理論的な併用療法を可能とし、抗腫瘍効果の増強と副作用の低減を達成できる。したがって、効率的かつ安全な癌の化学療法を達成することができる。
化合物１のＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）中、３７℃での全結合薬剤量に対するＥＨＣ及び化合物５の放出量の割合を示す。 化合物２のＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）中、３７℃での全結合薬剤量に対するＥＨＣ及び化合物５の放出量の割合を示す。 化合物３のＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）中、３７℃での全結合薬剤量に対するＥＨＣ及び化合物５の放出量の割合を示す。 マウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ３８移植マウスに、本発明の高分子化合物（化合物１）、対照薬１及び２を投与した時の、投与開始日からの相対腫瘍体積の変化を示す。
　本発明は、カンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤が同一分子に結合しているポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体であり、一般式（１）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
 ［式中、Ｒ１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５～４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈは６～６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈに対するｄの割合が５～５０％、ｅの割合が５～９０％、ｆの割合が０～９０％、ｇの割合が０～９０％、ｈの割合が０～９０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１～Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３はＨＳＰ９０阻害剤の結合残基またはＨＳＰ９０阻害剤が結合したアスパラギン酸残基を示し、Ｒ４はアスパラギン酸残基またはアスパラギン酸イミド残基を示し、Ｒ５は－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）を示し、Ｒ６、Ｒ７は同一でも異なってもいてもよく、（Ｃ３～Ｃ６）分岐若しくは環状アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１～Ｃ５）分岐若しくは直鎖アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７－エチル－１０－ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基にＲ４基が結合したグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基にＲ５基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシル基であるグルタミン酸単位がそれぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される。
　一般式（１）において、Ｒ１はポリエチレングリコールセグメントの末端修飾基であり、水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基である。
　Ｒ１における置換基を有していてもよい（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基は、直鎖状又は分岐状の（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基である。具体例を挙げるとメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基またはｔｅｒｔ－ブチル基である。置換基を有していてもよい（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基の置換基としては、例えば、アミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキルオキシ基、カルボキシル基などが挙げられる。Ｒ１としてはメチル基またはエチル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。
　一般式（１）におけるポリエチレングリコールセグメントにおいて、エチレンオキシ基；（ＯＣＨ２ＣＨ２）基の単位繰り返し構造数を示す一般式（１）のｔは、４５～４５０であり、好ましくは９０～３４０である。すなわち、ポリエチレングリコール部分の分子量は、２，０００～２０，０００のものを用いることが好ましく、４，０００～１５，０００がより好ましい。
　一般式（１）におけるＡは、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントをつなぐ結合基である。一般式（１）におけるＡは（Ｃ１～Ｃ６）のアルキレン基であり、例えば、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基等が挙げられる。中でも好ましくはエチレン基またはトリメチレン基であり、特に好ましくはトリメチレン基である。
　一般式（１）で表される本発明の高分子化合物のポリグルタミン酸セグメントは、グルタミン酸ユニットがアミド結合した構造体である。アミド結合は、主としてα‐アミド結合型で結合した構造であるが、γ－アミド結合型で結合した構造を含んでいても良い。各グルタミン酸ユニットのグルタミン酸は、Ｌ型でもＤ型でもよい。一般式（１）におけるグルタミン酸ユニット総数（ポリグルタミン酸重合数）は、ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈで表され、６～６０である。好ましくはｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈが８～４０である。したがって、ポリグルタミン酸セグメントの平均分子量は６００～１５，０００程度、好ましくは８００～１０，０００程度である。
　一般式（１）におけるＲ２としては、水素原子または（Ｃ１～Ｃ４）アシル基が挙げられる。Ｒ２としては（Ｃ１～Ｃ４）アシル基が好ましく、例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基等が挙げられ、中でもアセチル基またはプロピオニル基が好ましく、アセチル基が特に好ましい。
　一般式（１）におけるＲ５は、－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）で示されるウレア構造置換基あり、Ｒ６及びＲ７は同一でも異なっていてもよく、分岐若しくは環状の（Ｃ３～Ｃ６）アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐若しくは直鎖の（Ｃ１～Ｃ５）アルキル基である。該分岐若しくは環状（Ｃ３～Ｃ６）アルキル基としては、例えば、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、１－メチルブチル基、２－メチルブチル基、ネオペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられ、より好ましくはイソプロピル基、シクロへキシル基が挙げられる。該三級アミノ基で置換されていてもよい分岐若しくは直鎖（Ｃ１～Ｃ５）アルキル基としては、例えば、エチル基、ジメチルアミノプロピル基等が挙げられる。Ｒ６及びＲ７としては、Ｒ６とＲ７が共にイソプロピル基またはシクロへキシル基、若しくはＲ６とＲ７がエチル基とジメチルアミノプロピル基の組み合せであることが好ましい。Ｒ６とＲ７が共にイソプロピル基またはシクロへキシル基である置換基が特に好ましい。
　一般式（１）に示すように、本発明の高分子化合物のポリグルタミン酸セグメントには、カンプトテシン誘導体である７－エチル－１０－ヒドロキシカンプトテシン（ＥＨＣ）が、その１０位の水酸基とポリグルタミン酸の側鎖カルボキシ基がエステル結合している。
　一般式（１）におけるＲ３はＨＳＰ９０阻害剤の結合残基またはＨＳＰ９０阻害剤が結合したアスパラギン酸残基である。本発明において、ＨＳＰ９０阻害剤とは、ＨＳＰ９０のＡＴＰ結合部位に結合することでＨＳＰ９０のクライアントタンパク質との結合を阻害し、最終的に細胞増殖を抑制する薬物であり、例えば、ゲルダナマイシン誘導体や置換レゾルシン誘導体等のいくつかの開発化合物が挙げられる。
　特に好ましくは、エステル結合によりポリグルタミン酸セグメントに結合することができる水酸基を有する置換レゾルシン誘導体である。該置換レゾルシン誘導体としては、一般式（２）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
 ［式中、Ｘ１は直鎖若しくは分岐の（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基または－ＣＯＮＲ１１Ｒ１２を示し、前記Ｒ１１及びＲ１２は同一でも異なってもいてもよい直鎖状、分岐状または環状の（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］で示される１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体を挙げることができる。
　一般式（２）におけるＸ１は、直鎖若しくは分岐の（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基または－ＣＯＮＲ１１Ｒ１２を示し、前記Ｒ１１及びＲ１２は同一でも異なってもいてもよい直鎖状、分岐状または環状の（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基である。Ｘ１における該直鎖または分岐の（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、１－ペンチル基、１－エチル－プロピル基、１－へキシル基等が挙げられる。Ｒ１１及びＲ１２における同一でも異なってもいてもよい直鎖状、分岐状または環状の（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、１－ペンチル基、１－エチル－プロピル基、１－へキシル基、シクロへキシル基等を挙げることができる。Ｘ１としては、イソプロピル基、ｓｅｃ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基または－ＣＯＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ１１がメチル基でＲ１２がｎ－ブチル基が好ましい。
　一般式（２）におけるＸ２基は、置換基を有していてもよいアリール基である。該置換基を有していてもよいアリール基としては、置換基を有していてもよい炭素環アリール基、置換基を有していてもよい複素環アリール基が挙げられる。
　Ｘ２における置換基を有していてもよい炭素環アリール基において、炭素環アリール基としては、フェニル基、ナフチル基が挙げられる。置換基を有していてもよい炭素環アリール基としては、置換基としてアルキル基を有する炭素環アリール基、置換基としてハロゲン原子を有する炭素環アリール基、置換基としてアルコキシ基を有する炭素環アリール基、置換基としてアミノ基を有する炭素環アリール基、または置換基としてアミノアルキル基を有する炭素環アリール基が挙げられる。
　前記置換基としてアルキル基を有する炭素環アリール基としては、直鎖状、分岐状、又は環状の（Ｃ１～Ｃ３０）アルキル基が少なくとも１つ以上を置換する炭素環アリール基である。好ましくは直鎖状、又は分岐状の（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基が置換するフェニル基である。例えば、２－メチルフェニル基、４－メチルフェニル基、３－イソプロピルフェニル基、４－イソプロピルフェニル基、ｎ－ヘキシルフェニル基、ｎ－オクチルフェニル基、１－エチルプロピルフェニル基、２－メチルプロピルフェニル基等が挙げられる。
　前記置換基としてハロゲン原子を有する炭素環アリール基としては、少なくとも１つ以上のハロゲン原子が置換された炭素環アリール基である。好ましくはモノハロゲン置換フェニル基、またはジハロゲン置換フェニル基である。例えば２－クロロフェニル基、４－クロロフェニル基、２，４－ジクロロフェニル基、２－ブロモフェニル基、４－ブロモフェニル基、２，４－ジブロモフェニル基等が挙げられる。
　前記置換基としてアルコキシ基を有する炭素環アリール基としては、少なくとも１つ以上の１級、２級、または３級の（Ｃ１～Ｃ１０）アルコキシ基を有する炭素環アリール基である。例えば、４－メトキシフェニル基、３－メトキシフェニル基、３，４－ジメトキシフェニル基、３，４－メチレンジオキシフェニル基が挙げられる。中でも４－メトキシフェニル基が好ましい。
　Ｘ２における置換基としてアミノ基を有する炭素環アリール基としては、前記アミノ基として、無置換のアミノ基、非環状の１級若しくは２級アミノ基、または環状の２級アミノ基を置換基として備える炭素環アリール基が挙げられる。
　置換基として備わる前記アミノ基において、非環状の１級アミノ基としては、直鎖状、分岐状若しくは環状の（Ｃ１～Ｃ１０）アルキル基、またはアリール基が置換したアミノ基が挙げられる。例えば、メチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ネオペンチルアミノ基、ｎ－ヘキシルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、ｎ－オクチルアミノ基、フェニルアミノ基等が挙げられる。
　非環状の２級アミノ基としては、同一であっても異なっていても良く、直鎖状、分岐状若しくは環状の（Ｃ１～Ｃ１０）アルキル基、またはアリール基がＮ，Ｎ－ジ置換したアミノ基である。例えば、ジメチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、Ｎ－メチル－Ｎ－シクロヘキシルアミノ基、Ｎ－メチル－Ｎ－フェニルアミノ基、Ｎ－メチル－Ｎ－ピリジルアミノ基、ジフェニルアミノ基等が挙げられる。
　環状の２級アミノ基としては、モルフォリノ基、ピペラジン－１－イル基、４－メチルピペラジン－１－イル基、ピペリジン－１－イル基、ピロリジン－１－イル基等が挙げられる。
　前記置換基のアミノ基は、非環状の脂肪族１級若しくは非環状の２級アミノ基、または環状の脂肪族２級アミノ基が好ましい。すなわち、非環状の脂肪族１級アミノ基としては、メチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ネオペンチルアミノ基、ｎ－ヘキシルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、ｎ－オクチルアミノ基を好ましい例として挙げることができる。
　非環状の脂肪族２級アミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、Ｎ－メチル－Ｎ－シクロヘキシルアミノ基を好ましい例として挙げる事ができる。
　環状の脂肪族２級アミノ基としては、モルフォリノ基、ピペラジン－１－イル基、４－メチルピペラジン－１－イル基、ピペリジン－１－イル基、ピロリジン－１－イル基を好ましい例として挙げることができる。
　置換基としてアミノ基を有する炭素環アリール基における、炭素環アリール基としてはフェニル基またはナフチル基が挙げられる。炭素環アリール基としてはフェニル基が好ましい。該フェニル基上のアミノ基の置換位置は特に限定されるものではなく、２～６位の何れの置換体であって良い。３位または４位のアミノ基置換体が好ましい。
　置換基としてアミノ基を有する炭素環アリール基において、好ましい態様としては、４位に非環状の脂肪族２級アミノ基が置換されたフェニル基、または４位に環状の脂肪族２級アミノ基が置換されたフェニル基が挙げられる。特に４－ジメチルアミノフェニル基、４－（モルフォリノ）フェニル基、または４－（４－メチルピペラジン－１－イル）フェニル基が好ましい。
　Ｘ２における置換基としてアミノアルキル基を有する炭素環アリール基としては、前記アミノ基として、無置換のアミノ基、非環状の１級若しくは非環状の２級アミノ基、または環状の２級アミノ基を置換基として有する（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基が置換した炭素環アリール基が挙げられる。
　非環状の１級アミノ基としては、直鎖状、分岐状若しくは環状の（Ｃ１～Ｃ１０）アルキル基、またはアリール基が置換したアミノ基が挙げられる。例えばメチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ネオペンチルアミノ基、ｎ－ヘキシルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、ｎ－オクチルアミノ基、フェニルアミノ基等が挙げられる。
　非環状の２級アミノ基としては、同一であっても異なっていても良く、直鎖状、分岐状若しくは環状の（Ｃ１～Ｃ１０）アルキル基、またはアリール基がＮ，Ｎ－ジ置換したアミノ基である。例えばジメチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、Ｎ－メチル－Ｎ－シクロヘキシルアミノ基、Ｎ－メチル－Ｎ－フェニルアミノ基、Ｎ－メチル－Ｎ－ピリジルアミノ基、ジフェニルアミノ基等が挙げられる。
　環状の２級アミノ基としては、モルフォリノ基、ピペラジン－１－イル基、４－メチルピペラジン－１－イル基、ピペリジン－１－イル基、ピロリジン－１－イル基等が挙げられる。
　前記置換基のアミノ基は、非環状の脂肪族１級若しくは非環状の２級アミノ基、または環状の脂肪族２級アミノ基が好ましい。すなわち、非環状の脂肪族１級アミノ基としては、メチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ネオペンチルアミノ基、ｎ－ヘキシルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、ｎ－オクチルアミノ基を好ましい例として挙げることができる。
　非環状の脂肪族２級アミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、Ｎ－メチル－Ｎ－シクロヘキシルアミノ基を好ましい例として挙げる事ができる。
　環状の脂肪族２級アミノ基としては、モルフォリノ基、ピペラジン－１－イル基、４－メチルピペラジン－１－イル基、ピペリジン－１－イル基、ピロリジン－１－イル基を好ましい例として挙げることができる。
　前記アミノ基を置換基として有する（Ｃ１～Ｃ８）アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、オクチル基、等を挙げることができる。
　置換基としてアミノアルキル基を有する炭素環アリール基としては、フェニル基またはナフチル基が挙げられる。炭素環アリール基としてはフェニル基が好ましい。該フェニル基上の、アミノアルキル基の置換位置は特に限定されるものではなく、２～６位の何れの置換体であって良い。３位または４位のアミノ基置換体が好ましい。
　置換基としてアミノアルキル基を有する炭素環アリール基において、好ましい態様としては、（Ｃ１～Ｃ５）アルキル基の末端位に環状の脂肪族２級アミノ基が置換され、もう一方の末端基がフェニル基の４位に置換された態様が挙げられる。特に、４－（モルフォリノメチル）フェニル基、４－（４－メチルピペラジン－１－イルメチル）フェニル基、４－（２－モルフォリノエチル）フェニル基、４－［２－（４－メチルピペラジン－１－イル）エチル］フェニル基、４－（４－モルフォリノブチル）フェニル基、４－［５－（４－メチルピペラジン－１－イル）ペンチル］フェニル基が好ましい。更に好ましい態様としては、４－（モルフォリノメチル）フェニル基、または４－（４－メチルピペラジン－１－イルメチル）フェニル基である。
　Ｘ２における置換基を有していてもよい複素環アリール基としては、置換基を有していても良いピリジル基、置換基を有していても良いピリミジニル基、置換基を有していても良いキノリル基、置換基を有していても良いキナゾリニル基、置換基を有していても良いナフチリジニル基、置換基を有していても良いフリル基、置換基を有していても良いピロリル基、置換基を有していても良いインドリル基、置換基を有していても良いイミダゾリル基、置換基を有していても良いピラゾリル基、置換基を有していても良いオキサゾリル基、置換基を有していても良いイソキサゾリル基、置換基を有していても良いトリアゾリル基、等が挙げられる。好ましくは、置換基を有していても良いピリジル基、置換基を有していても良いピリミジニル基、置換基を有していても良いインドリル基、置換基を有していても良いイミダゾリル基を挙げることができる。特に好ましくは置換基を有していても良いピリジル基、置換基を有していても良いピリミジニル基、置換基を有していても良いインドリル基である。
　すなわち、本発明における、Ｘ２における置換基を有していてもよい複素環アリール基の好ましい態様としては、ピリジル基、置換基としてアルキル基を有するピリジル基、置換基としてアミノ基を有するピリジル基、置換基としてアルキル基を有するピリミジニル基、置換基としてアミノ基を有するピリミジニル基、置換基としてアルキル基を有するインドリル基、置換基としてアミノ基を有するインドリル基である。
　置換基としてアルキル基を有するピリジル基としては、６－メチルピリジン－３－イル基、５－メチルピリジン－２－イル基等が挙げられる。置換基としてアミノ基を有するピリジル基としては、５－ジメチルアミノピリジン－２－イル基等が挙げられる。置換基としてアルキル基を有するピリミジニル基としては、２－メチルピリミジン－４－イル基、２－メチルピリミジン－３－イル基等が挙げられる。置換基としてアミノ基を有するピリミジニル基としては、２－ジメチルアミノピリミジン－５－イル基、２－モルフォリノピリミジン－５－イル基、２－（４－メチルピペラジン－１－イル）ピリミジン－５－イル基等が挙げられる。置換基としてアルキル基を有するインドリル基としては、１－メチルインドール－５－イル基、１－エチルインドール－５－イル基等が挙げられる。
　本発明におけるＨＳＰ９０阻害剤として好ましい１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体において、Ｘ１はイソプロピル基または－ＣＯＮＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ１１はメチル基でＲ１２がｎ－ブチル基である。また、Ｘ２が２－メチルフェニル基、４－（モルフォリノメチル）フェニル基、４－（４－メチルピペラジン－１－イルメチル）フェニル基及び１－メチルインドール－５－イル基からなる群から選択される置換基の化合物が好ましい。
　ブロック共重合体に結合するＨＳＰ阻害剤として、好ましくは、Ｘ１がイソプロピル基であり、Ｘ２が１－メチルインドール－５－イル基である、５－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）－４－（１－メチル－１Ｈ－インドール－５－イル）－２，４－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾール－３－オン（下記一般式（５）；化合物５）；Ｘ１が－ＣＯＮＲ１１Ｒ１２でＲ１１がメチル基でＲ１２がｎ－ブチル基であり、Ｘ２が２－メチルフェニル基である、５－（２，４－ジヒドロキシ－５－（Ｎ－メチル－Ｎ－ブチルアミド））－４－（２－メチルフェニル）－２，４－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾール－３－オン（下記一般式（６）；化合物６）；または、Ｘ１がイソプロピル基であり、Ｘ２が４－（４－メチルピペラジン－１－イルメチル）フェニル基である、５－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）－４－［４－（４－メチルピペラジン－１－イルメチル）フェニル］－２，４－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾール－３－オン・２塩酸塩（下記一般式（７）；化合物７）などを挙げることができる。
　Ｒ３の置換基となる化合物は、式（１）で表される化合物の同一高分子内あるいは分子間において単一種類であっても複数種類であってもよいが、単一種類であることが好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
　一般式（２）で示される１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体において、前記Ｘ１基及び前記Ｘ２基のそれぞれの組み合せの化合物は、何れも公知の文献に基づき合成することができる。該１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体の合成のための公知文献としては、以下の文献を挙げることができる。
　一般式（５）で表される化合物５は公知の化合物であり、例えば、国際公開第２００７／１３９９５２号パンフレットの記載に従い製造することができる。
　一般式（６）で表される化合物６は公知の化合物であり、例えば、国際公開第２００８／０８６８５７号パンフレットの記載に従い製造することができる。
　一般式（７）で表される化合物７は公知の化合物であり、例えば、国際公開第２００６／０９５７８３号パンフレットの記載に従い製造することができる。
　本発明における高分子化合物は、ポリグルタミン酸セグメントにＨＳＰ９０阻害剤を結合させた構造を有する。すなわち、ポリグルタミン酸セグメントのカルボン酸側鎖を用いて、ＨＳＰ９０阻害剤を結合させる。その結合様式は特に限定されるものではなく、ポリグルタミン酸セグメントのカルボン酸側鎖と、ＨＳＰ９０阻害剤の置換基を、適当な結合様式にて化学結合させれば良い。好ましくは、ポリグルタミン酸セグメントとＨＳＰ９０阻害剤を、エステル結合を介して結合させることが好ましい。例えば、ＨＳＰ９０阻害剤が分子内にフェノール性水酸基を有する場合には、該フェノール性水酸基と、ポリグルタミン酸セグメントの側鎖カルボキシ基を、エステル結合により結合させればよい。フェノール性水酸基を用いたエステル結合を有する本発明における高分子化合物を生体内に投与すると、そのエステル結合が非酵素的に徐々に開裂する。すなわち、本発明の高分子化合物からのＨＳＰ９０阻害剤の放出を制御して、徐放的な解離をさせることができる。前記のＨＳＰ９０阻害剤として好ましい１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体は、レゾルシン部分にフェノール性水酸基を有することから、このレゾルシン水酸基とポリグルタミン酸セグメントの側鎖カルボキシ基とをエステル結合により結合させる態様を用いることができる。
　他の態様として、ＨＳＰ９０阻害剤が分子内にフェノール性水酸基を持たない場合には、他の態様によりポリグルタミン酸セグメントと、ＨＳＰ９０阻害剤を結合させる。ＨＳＰ９０阻害剤の分子内に一級または二級のアルコール性水酸基を有する場合には、該ＨＳＰ９０阻害剤とポリグルタミン酸セグメントの側鎖カルボキシ基の間に、アスパラギン酸誘導体をリンカーに用い、これを介して結合させる方法を挙げることができる。すなわち、リンカーとなるアスパラギン酸誘導体は、１つのカルボキシ基がアミド化された誘導体であり、該アスパラギン酸誘導体のアミノ基と、ブロック共重合体のポリグルタミン酸セグメントの側鎖カルボキシ基が、アミド結合により結合した結合基である。このアスパラギン酸誘導体の残余のカルボキシ基と、ＨＳＰ９０阻害剤のアルコール性水酸基をエステル結合させることで、ＨＳＰ９０阻害剤をポリグルタミン酸セグメントに結合させることができる。該アスパラギン酸誘導体をリンカーとして用いたＨＳＰ９０阻害剤結合体は、生体内に投与すると非酵素的にＨＳＰ９０阻害剤が解離して、徐放的に薬剤を放出させることができる。
　Ｒ３がＨＳＰ９０阻害剤が結合したアスパラギン酸残基である場合、そのアスパラギン酸残基としては、例えば、下記一般式（３）または一般式（４）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 ［式中、Ｒ８、Ｒ９はそれぞれ独立して水素原子または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を示し、Ｒ１０は水素原子、（Ｃ１～Ｃ４０）アルキル基、（Ｃ１～Ｃ４０）アラルキル基、芳香族基及びカルボキシ基が保護されたアミノ酸残基からなる群から選択される１種以上の置換基を示し、ＣＸ－ＣＹはＣＨ－ＣＨ若しくはＣ＝Ｃ（二重結合）を示し、ＤはＨＳＰ９０阻害剤の結合残基を示す。］で表される基が挙げられる。すなわち、本発明においてリンカーとするアスパラギン酸誘導体としては、一般式（３）または一般式（４）で表される基であることが好ましい。ここで、ＣＸ－ＣＹがＣ＝Ｃ（二重結合）の場合はＥ配置が好ましい。また、ＤがＨＳＰ９０阻害剤の結合残基であり、アスパラギン酸誘導体の末端カルボキシル基とＨＳＰ９０阻害剤とがエステル結合により結合している態様が好ましい。
　Ｒ８及びＲ９における（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基として、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓ－ブチル基、イソブチル基、ｎ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基等が挙げられる。Ｒ８及びＲ９は共に水素原子が好ましい。
　Ｒ１０における（Ｃ１～Ｃ４０）アルキル基は、置換基を有していても良い（Ｃ１～Ｃ４０）アルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓ－ブチル基、イソブチル基、ｎ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基、ｎ－ステアリル基等が挙げられる。該置換基としては、例えば、フェニル基、ナフチル基、メトキシ基、エトキシ基、ジメチルアミノ基等が挙げられる。
　該（Ｃ１～Ｃ４０）アラルキル基は、置換基を有していてもよい（Ｃ１～Ｃ４０）アラルキル基であり、例えば、ベンジル基、ナフチルメチル基、フェネチル基、４－フェニルブチル基等が挙げられる。該置換基としては、例えば、メチル基、エチル基、ニトロ基、塩素原子、臭素原子、ジメチルアミノ基等が挙げられる。
　該芳香族基は、置換基を有していてもよい芳香族基であり、例えば、フェニル基、４－ニトロフェニル基、４－クロロフェニル基、ナフチル基、フルオレニル基等が挙げられる。
　なお、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０の各基における置換基の置換位置は、置換可能であれば特に限定されず、置換基数も特に限定されない。
　また、Ｒ１０におけるカルボキシ基が保護されたアミノ酸残基のアミノ酸としては、通常のペプチド合成で用いられるカルボキシ基が保護されたアミノ酸が挙げられ、該アミノ酸のカルボキシ基がエステルあるいはアミドにより保護されている化合物が好ましい。
　エステルで保護されているアミノ酸としては、例えば、アミノ酸の置換基を有していてもよい（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステルであり、例えば、アラニンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、アスパラギン酸のα若しくはβ－（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、グルタミン酸のα若しくはγ－（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、フェニルアラニンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、システインの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、グリシンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、ロイシンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、イソロイシンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、ヒスチジンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、プロリンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、セリンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、スレオニンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、バリンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、トリプトファンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル、チロシンの（Ｃ１～Ｃ１２）アルキルエステル等が挙げられる。
　特に好ましくはフェニルアラニンメチルエステル、グリシンメチルエステル、グリシン（４－フェニル－１－ブタノール）エステル、ロイシンメチルエステル、フェニルアラニンベンジルエステル、フェニルアラニン（４－フェニル－１－ブタノール）エステル等が挙げられる。該アミノ酸についてはＤ体でもＬ体でもそれらの混合物であってもよい。
　Ｒ１０として特に好ましくはｎ－ブチル基、４－フェニルブチル基等が挙げられ、中でもフェニルブチル基が殊更好ましい。また、ＣＸ－ＣＹがＣＨ－ＣＨであるのが好ましい。
　一般式（３）または一般式（４）において、ＤはＨＳＰ９０阻害剤の結合残基である。該ＨＳＰ９０阻害剤は、アスパラギン酸誘導体の末端カルボキシル基とエステル結合により結合している態様が好ましい。該ＨＳＰ９０阻害剤としては、ゲルダナマイシン誘導体や置換レゾルシン誘導体等のいくつかの開発化合物を挙げることができる。
　前記Ｄに用いるＨＳＰ９０阻害剤として、エステル結合によりポリグルタミン酸セグメントに結合することができる水酸基を有する置換レゾルシン誘導体が特に好ましい。該置換レゾルシン誘導体としては、一般式（２）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
 ［式中、Ｘ１は直鎖若しくは分岐の（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基または－ＣＯＮＲ１１Ｒ１２を示し、前記Ｒ１１及びＲ１２は同一でも異なってもいてもよい直鎖状、分岐状または環状の（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す］で示される１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体を挙げることができる。なお、一般式（２）におけるＸ１、Ｘ２、Ｒ１１、Ｒ１２における置換基の定義は、前述と同義である。
　一般式（１）におけるＲ４は、下記一般式（８）、一般式（９）で示されるアスパラギン酸残基及び／または下記一般式（１０）で示されるアスパラギン酸イミド残基である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 　一般式（８）、（９）及び（１０）において、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ－ＣＹは上記一般式（３）及び（４）において定義された置換基群と同義である置換基群から選ばれる置換基が好ましい。これらの置換基が、高分子化合物中に存在する場合にはこれらの基が混在していてもよい。
　ここでＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ－ＣＹは前記Ｒ３におけるＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、ＣＸ－ＣＹと同様であり、好ましい基も同様である。
　一般式（１）におけるポリグルタミン酸セグメントには、ＥＨＣ、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５の何れもが結合していないグルタミン酸部分が存在してもよい。一般式（１）では遊離酸型カルボキシ基を有するグルタミン酸残基で示しているが、カルボキシ基がアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩になっていてもよく、そのようなカルボキシル基を含むグルタミン酸部分を有する一般式（１）の高分子化合物も本発明に含まれる。該アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等が挙げられる。更に、抗癌剤として非経口投与にて供せられる場合、溶解液にて溶液調製されるが、該溶液のｐＨ緩衝剤の陽イオンとの塩に基づくグルタミン酸塩であってもよい。
　本発明におけるポリグルタミン酸セグメントには、側鎖カルボキシ基にＥＨＣが結合しているグルタミン酸単位（含ユニット数はｄ）、側鎖カルボキシ基に前記Ｒ３が結合しているグルタミン酸単位（含ユニット数はｅ）があり、更に側鎖カルボキシ基に前記Ｒ４が結合しているグルタミン酸単位（含ユニット数はｆ）、側鎖カルボキシ基に前記Ｒ５が結合しているグルタミン酸単位（含ユニット数はｇ）、側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基またはその塩であるグルタミン酸単位（含ユニット数はｈ）を有している。これらのうち、ＥＨＣが結合しているグルタミン酸単位及びＨＳＰ９０阻害剤の結合残基であるＲ３が結合しているグルタミン酸単位は、必須の構成単位である。一方、前記Ｒ４が結合しているグルタミン酸単位、Ｒ５が結合しているグルタミン酸単位及び遊離カルボキシ基またはその塩であるグルタミン酸単位は任意の構成単位である。これらの各グルタミン酸単位は、それぞれが独立してランダムに配列している。
　一般式（１）の、ポリグルタミン酸セグメントにおけるグルタミン酸ユニット総数は、ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈで表される。ｄの割合は５～５０％、好ましくは５～４０％、ｅの割合は５～９０％、好ましくは５～８０％、ｆの割合は０～９０％、好ましくは０～６０％、ｇの割合は０～９０％、好ましくは５～４０％、ｈの割合は０～９０％、好ましくは０～３０％である。
　本発明において、カンプトテシン誘導体であるＥＨＣと、ＨＳＰ９０阻害剤の薬剤含量の比率は特に限定されるものではなく、ＥＨＣとＨＳＰ９０阻害剤の併用により相乗的効果増強作用が得られる混合比率において任意に設定することができる。本発明において、ＥＨＣとＨＳＰ９０阻害剤との混合比率は、ポリグルタミン酸セグメントにおけるそれぞれの薬剤の結合量で示され、ポリグルタミン酸セグメントの各ユニットの比率を表すｄ値とｅ値により設定される。なお、本発明の高分子化合物は、ＥＨＣとＨＳＰ９０阻害剤はブロック共重合体から遊離して薬効を示すと考えられる。このため、各薬剤の結合量は、薬剤のブロック共重合体からの解離速度を考慮して、相乗的効果増強作用を示す併用濃度比率となるよう設定すべきである。好ましくは、ＥＨＣとＨＳＰ９０阻害剤の混合比率であるｄ：ｅとしては、ｄ：ｅ＝１：０．５～１５の範囲である。より好ましくは１：１～１０である。
　ＨＳＰ９０阻害剤として、一般式（２）で表される１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体を用いる場合、ＥＨＣと１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体の混合比率であるｄ：ｅとしては、ｄ：ｅ＝１：０．５～１５の範囲であり、ｄ：ｅ＝１：１～１０であることがより好ましい。ＨＳＰ９０阻害剤として、一般式（５）；化合物５、一般式（６）；化合物６及び一般式（７）；化合物７からなる群から選択される化合物を用いる場合も、同様に、ｄ：ｅとしては、ｄ：ｅ＝１：０．５～１５の範囲であり、ｄ：ｅ＝１：１～１０であることがより好ましい。
　本発明の一般式（１）で示される高分子化合物は、水中でポリエチレングリコールセグメントを外殻とし薬剤等が結合しているポリグルタミン酸セグメントを内殻とするミセルを形成してもよい。すなわち、本発明の高分子化合物は、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸が連結したブロック共重合体を担体とした抗腫瘍剤であるが、自己会合体形成によりさらに分子量の高い高分子体となる。該自己会合体は、好ましくは分子量が１０６程度の高分子量体となり、分子量に依存した体内動態をとる。すなわち半減期の増大や、腫瘍組織への浸透性向上及び腫瘍組織での蓄積といった抗腫瘍剤の薬効発現の効率化に望ましい薬物動態特性が期待される薬剤である。
　次に、本発明の高分子化合物の製造方法を説明する。なお、本発明の高分子化合物の製造方法はここに記載の製造方法や後記の実施例及び参考例に記載の方法に限定されない。
　一般式（１）で表される本発明の高分子化合物であるポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントを有するブロック共重合体の主鎖の構築方法は、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントを結合させる方法、ポリエチレングリコールセグメントにグルタミン酸構造単位を順次に遂次重合させる方法のいずれの方法であってもよい。
　後者の方法としては、国際公開２００６／１２０９１４号パンフレット等に記載の方法に準じて、例えば、片末端にメチル基等の修飾基、他方片末端にアミノプロピル基で修飾されたポリエチレングリコールに、Ｎ－カルボニルグルタミン酸無水物を順次反応させ、ポリグルタミン酸セグメントを構築する方法が挙げられる。この場合、Ｎ－カルボニルグルタミン酸無水物は、グルタミン酸側鎖のカルボキシ基が適当なカルボン酸保護基で修飾されていてもよく、また、あらかじめ所定のカルボキシ基置換体を備えた誘導体である、ＥＨＣの結合体、一般式（１）のＲ３に係るＨＳＰ９０阻害剤の結合体、一般式（１）のＲ４の結合体、一般式（１）のＲ５の結合体、遊離カルボン酸体等であってもよい。Ｎ－カルボニルグルタミン酸無水物としては、側鎖カルボキシ基は適当なカルボン酸保護基で修飾したＮ－カルボニルグルタミン酸無水物を用いることが好ましい。
　当該カルボン酸保護基としては、特に限定されるものではないが、エステル保護基が好ましい。すなわち、側鎖カルボキシ基は、適当なカルボン酸保護基で修飾したＮ－カルボニルグルタミン酸無水物を用い、片末端にアミノ基を修飾したポリエチレングリコール化合物と反応させることにより、該Ｎ－カルボニルグルタミン酸無水物を逐次重合して、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸誘導体を連結したブロック共重合体を構築し、これに、ＥＨＣ、一般式（１）に係るＲ３に相当するＨＳＰ９０阻害剤、並びに、一般式（１）に係るＲ４、Ｒ５に相当する置換基を導入する方法を用いることが好ましい。脱保護前に該ブロック共重合体のポリグルタミン酸セグメントの末端アミノ基をアシル化しておいてもよい。
　より具体的には、片末端にメトキシ基、他方片末端にアミノ基を修飾したポリエチレングリコール化合物と、γ－ベンジル－Ｎ－カルボニルグルタミン酸無水物を順次反応させ、遂次重合により、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸ベンジルエステルが連結したブロック共重合体を調製する。その後、適当な方法により、ポリグルタミン酸のベンジル基を脱保護することにより、該ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸が連結したブロック共重合体を調製できる。ベンジル基の脱保護反応としては、アルカリ条件による加水分解反応や水素添加還元反応が挙げられる。
　次に、一般式（１）で表される高分子化合物の調製において、ポリグルタミン酸セグメントの側鎖カルボキシ基に、ＥＨＣ、ＨＳＰ９０阻害剤等を結合させる方法について説明する。
　前記ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体に、ＥＨＣ、ＨＳＰ９０阻害剤又はＨＳＰ９０阻害剤が結合したアスパラギン酸誘導体等を結合させる反応を行う。該結合方法は特に限定されるものではなく、先にＥＨＣを結合させ、その後、該ＨＳＰ９０阻害剤またはＨＳＰ９０阻害剤が結合したアスパラギン酸誘導体等を結合させても、その逆順でも、同時に結合させてもよい。
　好ましくは、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体と、ＥＨＣ及びＨＳＰ９０阻害剤またはＨＳＰ９０阻害剤が結合したアスパラギン酸誘導体を、カルボジイミド脱水縮合剤の存在下で脱水縮合反応させればよい。この製造方法によれば、該ブロック共重合体に、Ｒ４に相当する－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）基を、ＥＨＣ及びＨＳＰ９０阻害剤等と同時に導入させることができる。
　該カルボジイミド脱水縮合剤としては、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）等を用いることができる。該脱水縮合反応の際に、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）等の反応補助剤を用いてもよい。
　本発明において、ＥＨＣとＨＳＰ９０阻害剤の結合量は、脱水縮合反応において、各薬剤の仕込み量を適宜増減させることで調整することができる。なお、カルボジイミド縮合剤としてジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いた場合、－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）のＲ６及びＲ７はシクロへキシル基となる。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）を用いて縮合反応を行った場合、Ｒ６及びＲ７はイソプロピル基となる。１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）を用いた場合、－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）のＲ６及びＲ７はエチル基と３－ジメチルアミノプロピルの混合置換体となる。
　前記反応終了後に任意の精製工程を経由して本発明の高分子化合物を製造することができる。
　本発明の高分子化合物は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液中で徐々に抗腫瘍活性成分であるＥＨＣ及びＨＳＰ９０阻害剤を解離し放出する。このことは生体投与においてもＥＨＣ及びＨＳＰ９０阻害剤を徐放的に遊離する物性を備えることを示す。
　高分子化合物と低分子化合物とは体内薬物動態挙動が大きく異なり、体内分布も大きく異なることが知られている。このことから本発明の高分子化合物は、低分子化合物の薬剤とは薬効発現特性及び副作用発現特性が異なることとなり、カンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤を用いた新しい治療方法を提供することができる。
　本発明の高分子化合物は、抗癌剤として使用することができ、該抗癌剤用途も本発明に含まれるものである。当該抗癌剤は注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、散剤等の通常使用されている製剤で使用することができる。製剤化に当たり、通常使用される薬学的に許容される担体や添加剤、例えば、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、溶剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、保存剤、無痛化剤、色素、香料等を使用することができる。中でも、注射剤、点滴剤としての使用が好ましく、水、生理食塩水、５％ブドウ糖またはマンニトール液、水溶性有機溶媒（例えば、グリセロール、エタノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ－メチルピロリドン、ポリエチレングリコール、クレモフォア等及びそれらの混合液等）並びに水と該水溶性有機溶媒の混合液等の使用が好ましい。
　一般式（１）に示す高分子化合物の投与量は、患者の性別、年齢、体格、生理的条件、病態、治療効果等を勘案し適宜設定される。例えば、成人１日当たり、非経口的に、有効成分であるＥＨＣ換算で、患者の体表面積当たりの投与量としては０．０１～５００ｍｇ／ｍ２、好ましくは１～２００ｍｇ／ｍ２である。また、ＨＳＰ９０阻害剤換算で、患者の体表面積当たりの投与量としては０．０１～５００ｍｇ／ｍ２、好ましくは１～２００ｍｇ／ｍ２である。
　本発明の高分子化合物は、他の抗腫瘍剤を組み合せて用いる事もできる。他の抗腫瘍剤は特に限定されるものではなく、抗腫瘍剤や悪性腫瘍治療剤として認可されている医薬品を用いる事ができる。すなわち、シクロホスファミド、イホスファミド、マイトマイシンＣ等のアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン等の白金錯体、ドキソルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、アムルビシン等のアントラサイクリン系抗腫瘍剤、エトポシド、エトポシドホスフェート、テニポシド等のエトポシド類、パクリタキセル、ドセタキセル等のタキサン類、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン等のビンカアルカロイド類、５―フルオロウラシル、テガフール、テガフール・ウラシル合剤（ＵＦＴ）、テガフール・ギメラシル・オテラシルカルシウム配合剤（ＴＳ－１）、フルツロン、カペシタビン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド等の核酸代謝拮抗剤、メトトレキサート、ペメトレキセド等の葉酸代謝拮抗剤、プレドニゾロン、デキサメタゾン等のステロイド類、トラスツズマブ、セツキシマブ等の抗ＥＧＦＲ抗体、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ等のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ソラフェニブ、スニチニブ等のＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ、エベロリムス、テムシロリムス等のｍＴＯＲ阻害剤、ベバシツズマブ等の抗ＶＥＧＦ抗体を用いることができる。
　本発明の高分子化合物は、悪性腫瘍疾患の治療に用いられる。本発明の高分子化合物による治療に適用される悪性腫瘍は、特に限定されるものではなく、乳癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、直腸結腸癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝細胞癌、胃癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭部及び頸部の癌、メラノーマ、卵巣癌、胆管癌、中皮腫、及び多発性骨髄腫、等広く一般の癌治療に適用することができる。特に、カンプトテシン誘導体が治療に供せられている非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、胃癌（手術不能または再発）、結腸・直腸癌（手術不能または再発）、乳癌（手術不能または再発）、有棘細胞癌、悪性リンパ腫（非ホジキンリンパ腫）の治療に適する。特に、カンプトテシン誘導体による前治療を受けており、前治療のカンプトテシン誘導体に対する感受性が低下した各種癌の化学療法において高い治療効果が期待できるものである。
　以下、本発明を実施例により更に説明する。ただし、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。なお、本発明品が水溶液中で構成する粒子の大きさ（粒径）を示すガウス分布分析はＺｅｔａ　Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ／Ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｒ　ＮＩＣＯＭＰＴＭ　３８０ＺＬＳ（Ｐａｒｔｉｃｌｅ　Ｓｉｚｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）にて行った。
［合成例１］
　５－（２，４－ジヒドロキシ－５－イソプロピルフェニル）－４－（１－メチル－１Ｈ－インドール－５－イル）－２，４－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾール－３－オン（化合物５（一般式（５）で表される化合物））の合成
　国際公開ＷＯ２００７／１３９９５２号パンフレットの記載に基づき、化合物５を合成した。得られた化合物５の１Ｈ－ＮＭＲを以下に示す。
１Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，ｐｐｍ）：１１．８４１（ｓ，１Ｈ）、９．５０７（ｓ，１Ｈ）、９．４０７（ｓ，１Ｈ）、７．４１７－７．３６６（ｍ，３Ｈ）、６．９２１（ｄｄ，１Ｈ）、６．７６１（ｓ，１Ｈ）、６．４０６（ｄｄ，１Ｈ）、６．２０５（ｓ，１Ｈ）、３．７７７（ｓ，３Ｈ）、２．９１１（ｈｅｐｔ，１Ｈ）、０．８６６（ｄ，６Ｈ）
［実施例１］
　ＥＨＣとＲ３として化合物５が結合した高分子化合物（化合物１：一般式（１）においてＲ１＝メチル基、Ｒ２＝アセチル基、Ａ＝トリメチレン基、Ｒ４に相当する置換基がなく（ｆ＝０）、Ｒ６＝Ｒ７＝イソプロピル基、ｄ＋ｅ＋ｇ＋ｈ＝２３、ｔ＝２７３，ｄ＋ｅ＋ｇ＋ｈに対するｄの割合が１０％、ｅの割合が３５％、ｇの割合が２０％、ｈの割合が３５％）の合成
　国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法に準じた方法により、メトキシポリエチレングリコール－ポリグルタミン酸ブロック共重合体（分子量１２，０００の片末端がメチル基、他片末端がアミノプロピル基であるメトキシポリエチレングリコールセグメントと重合数が２３のポリグルタミン酸セグメント（末端Ｎアセチル基）からなり、結合基がトリメチレン基であるブロック共重合体）を調製した。
　該メトキシポリエチレングリコール－ポリグルタミン酸ブロック共重合体６２１ｍｇ、７－エチル－１０－ヒドロキシカンプトテシン（ＥＨＣ）３８ｍｇ及び合成例１で得た化合物５　１８０ｍｇを、ＤＭＦ１１．２ｍＬに溶解し、３５℃にて１５分攪拌した後、２０℃にて１時間攪拌した。その後、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）２６７μＬ、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）１０．９ｍｇを加えて、２０℃にて２１時間撹拌した。これに、ＤＩＰＣＩを１３４μＬ追加し、更に２時間攪拌した。反応液を、酢酸エチル１１．２ｍＬ、エタノール１１．２ｍＬ及びジイソプロピルエーテル９０ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し、室温にて１時間攪拌し、沈析物を濾取し、酢酸エチルで洗浄した。得られた沈析物を、アセトニトリル４６ｍＬ及び水４．６ｍＬに溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、９．２ｍＬ）を加え攪拌し濾過した。得られた濾液中のアセトニトリルを減圧下留去し、次いで凍結乾燥することにより化合物１（６８１ｍｇ）を得た。
　化合物１に結合したＥＨＣ及び化合物５の含量は、化合物１に１Ｎ－水酸化ナトリウム水溶液を加えて３７℃で１時間攪拌後、遊離したＥＨＣ及び化合物５を、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で分析し、ＥＨＣ及び化合物５にて得られた検量線から求めた量から算出した。その結果、結合したＥＨＣ及び化合物５の含量はそれぞれ３．４％（ｗ／ｗ）、１５．４％（ｗ／ｗ）であった。また、１Ｈ－ＮＭＲ法により、一般式（１）に係るＲ５に相当する－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）（Ｒ６及びＲ７がイソプロピル基）の結合含量は、３．０％（ｗ／ｗ）であった。
　化合物１の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、得られた数値は２２ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ　ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物１は水中で自己会合しミセル様会合体を形成しているものと考えられた。
［実施例２］
　ＥＨＣと化合物５の結合した高分子化合物（化合物２：一般式（１）においてＲ１＝メチル基、Ｒ２＝アセチル基、Ａ＝トリメチレン基、Ｒ４に相当する置換基がなく（ｆ＝０）、Ｒ６＝Ｒ７＝イソプロピル基、ｄ＋ｅ＋ｇ＋ｈ＝２３、ｔ＝２７３，ｄ＋ｅ＋ｇ＋ｈに対するｄの割合が３０％、ｅの割合が２０％、ｇの割合が２０％、ｈの割合が３０％）の合成
　国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法に準じた方法によりメトキシポリエチレングリコール－ポリグルタミン酸ブロック共重合体（分子量１２，０００の片末端がメチル基、他片末端がアミノプロピル基であるメトキシポリエチレングリコールセグメントと重合数が２３のポリグルタミン酸セグメント（末端Ｎアセチル基）からなり、結合基がトリメチレン基であるブロック共重合体）を調製した。
　該メトキシポリエチレングリコール－ポリグルタミン酸ブロック共重合体３８９ｍｇ、ＥＨＣ７０ｍｇ及び合成例１で得た化合物５　７０ｍｇを、ＤＭＦ７．０ｍＬに溶解し、３５℃にて３０分攪拌した後、２０℃にて２時間攪拌した。これにＤＩＰＣＩを１６７μＬ、ＤＭＡＰを６．９ｍｇを加えて、２０℃にて２１時間撹拌した。その後、ＤＩＰＣＩを８４μＬ追加し、更に２時間攪拌した。反応液を、酢酸エチル７ｍＬ、エタノール７ｍＬ及びジイソプロピルエーテル５６ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し、室温にて１時間攪拌した。沈析物を濾取し、酢酸エチルで洗浄した。得られた沈析物をアセトニトリル２９ｍＬ及び水２．９ｍＬに溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、７．６ｍＬ）を加え攪拌し濾過した。得られた濾液中のアセトニトリルを減圧下留去し、次いで凍結乾燥することにより化合物２（４５０ｍｇ）を得た。
　化合物２に結合したＥＨＣ及び化合物５の含量は、化合物１に１Ｎ－水酸化ナトリウム水溶液を加えて３７℃で１時間攪拌後、遊離したＥＨＣ及び化合物５の含量を、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で分析し、ＥＨＣ及び化合物５にて得られた検量線から求めた量から計算した。その結果、結合したＥＨＣ及び化合物５の含量はそれぞれ１０．９％（ｗ／ｗ）、９．０％（ｗ／ｗ）であった。また、１Ｈ－ＮＭＲ法により一般式（１）に係るＲ５に相当する－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）（Ｒ６及びＲ７がイソプロピル基）の結合含量は、２．９％（ｗ／ｗ）であった。
　化合物２の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、得られた数値は２９ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ　ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２は水中で自己会合しミセル様会合体を形成しているものと考えられた。
［実施例３］
　ＥＨＣと化合物５の結合した高分子化合物（化合物３：一般式（１）においてＲ１＝メチル基、Ｒ２はアセチル基、Ａ＝プロピレン基、Ｒ４に相当する置換基がなく（ｆ＝０）、Ｒ６＝Ｒ７＝イソプロピル基、ｄ＋ｅ＋ｇ＋ｈ＝１０、ｔ＝１１４，ｄ＋ｅ＋ｇ＋ｈに対するｄの割合が１０％、ｅの割合が４０％、ｇの割合が２０％、ｈの割合が３０％）の合成
　国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法に準じた方法によりメトキシポリエチレングリコール－ポリグルタミン酸ブロック共重合体（分子量５，０００の片末端がメチル基、他片末端がアミノプロピル基であるポリエチレングリコールセグメントと重合数が１０のポリグルタミン酸セグメント（末端アセチル基）からなるブロック共重合体）を調製した。
　該メトキシポリエチレングリコール－ポリグルタミン酸ブロック共重合体４７３ｍｇ、ＥＨＣ３２ｍｇ及び合成例１で得た化合物５　１５０ｍｇを、ＤＭＦ１０ｍＬに溶解し、３５℃にて２５分攪拌した後、２５℃にて２時間攪拌した。その後、ＤＩＰＣＩを２３５μＬ、ＤＭＡＰを９ｍｇを加えて、２５℃にて２０時間撹拌した。その後、ＤＩＰＣＩを１１８μＬを追加し、更に５時間攪拌した。反応液を、酢酸エチル３０ｍＬ、ジイソプロピルエーテル１２０ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し、室温にて２時間攪拌した。沈析物を濾取し、酢酸エチルで洗浄した。得られた沈析物を、アセトニトリル１１.０ｍＬ及び水２．０ｍＬに溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、５．０ｍＬ）を加え攪拌し、濾過した。得られた濾液を透析膜に移し、５℃にて一晩透析した後、透析膜中の溶液を回収した。得られた溶液中のアセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物３（５００ｍｇ）を得た。
　化合物３に結合したＥＨＣ及び化合物５の含量は、化合物１に１Ｎ－水酸化ナトリウム水溶液を加えて３７℃で１時間攪拌後、遊離したＥＨＣ及び化合物５の含量を、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で分析し、ＥＨＣ及び化合物５にて得られた検量線から求めた量から計算した。その結果、結合したＥＨＣ及び化合物５の含量はそれぞれ３．６％（ｗ／ｗ）、１６．６％（ｗ／ｗ）であった。また、１Ｈ－ＮＭＲ法により一般式（１）に係るＲ５に相当する－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）（Ｒ６及びＲ７がイソプロピル基）の結合含量は、３．４％（ｗ／ｗ）であった。
　化合物３の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、得られた値は２１ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ　ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物３は水中で自己会合しミセル様会合体を形成しているものと考えられた。
［合成例２］
　ＥＨＣ結合ポリエチレングリコール－ポリグルタミン酸ブロック共重合体（対照薬１；一般式（１）においてＲ１＝メチル基、Ｒ２＝アセチル基、Ａ＝トリメチレン基、Ｒ３に相当する置換基がなく（ｅ＝０）、Ｒ４に相当する置換基がなく（ｆ＝０）、Ｒ６＝Ｒ７＝イソプロピル基、ｄ＋ｇ＋ｈ＝２３、ｔ＝２７３，ｄ＋ｇ＋ｈに対するｄの割合が５０％、ｇの割合が４０％、ｈの割合が１０％）の合成
　国際公開ＷＯ２００４／３９８６９号の記載に基づき、メトキシポリエチレングリコール－ポリグルタミン酸ブロック共重合体（分子量１２，０００の片末端がメチル基、他片末端がアミノプロピル基であるメトキシポリエチレングリコール構造部分とＮ末端がアセチル基で修飾された重合数が２３のポリグルタミン酸構造部分であり、結合基がトリメチレン基であるブロック共重合体）と７－エチル－１０－ヒドロキシカンプトテシン（ＥＨＣ）をジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下で反応させ、次いでイオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）にて処理することにより、対照薬１を得た。
　得られた対照薬１を、１Ｎ－水酸化ナトリウム水溶液、室温、１０分で加水分解した後、遊離するＥＨＣをＨＰＬＣ法により定量分析して、ＥＨＣ含量を求めたところ、２１％（ｗ／ｗ）であった。また、１Ｈ－ＮＭＲ法により一般式（１）に係るＲ５に相当する－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）（Ｒ６及びＲ７がイソプロピル基）の結合含量は、５．６％（ｗ／ｗ）であった。
［合成例３］
　ＨＳＰ９０阻害剤結合ポリエチレングリコール－ポリグルタミン酸ブロック共重合体（対照薬２；一般式（１）においてＲ１＝メチル基、Ｒ２＝アセチル基、Ａ＝トリメチレン基、ＥＨＣ結合グルタミン酸単位がなく（ｄ＝０）、Ｒ３が一般式（５）で示される化合物５の結合残基であり、Ｒ４に相当する置換基がなく（ｆ＝０）、Ｒ６＝Ｒ７＝イソプロピル基、ｄ＋ｇ＋ｈ＝２３、ｔ＝２７３，ｅ＋ｇ＋ｈに対するｅの割合が４０％、ｇの割合が２０％、ｈの割合が４０％）の合成
　国際公開ＷＯ２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法に準じ、調製したメトキシポリエチレングリコール－ポリグルタミン酸ブロック共重合体（分子量１２，０００の片末端がメチル基、他片末端がアミノプロピル基であるメトキシポリエチレングリコールセグメントと重合数が２３のポリグルタミン酸セグメント（末端Ｎアセチル基）からなり、結合基がトリメチレン基であるブロック共重合体）５１９ｍｇ、合成例１により得られた化合物５（式（５））で表される化合物）１５０ｍｇをＤＭＦ１０ｍＬに溶解し、３５℃にて１５分攪拌した後、２５℃にて１時間攪拌した。その後、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）２３４μＬ、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）１３．７ｍｇを加えて、２５℃にて１６時間撹拌した。これに、ＤＩＰＣＩを１１７μＬ追加し、更に４時間攪拌した。反応液を、エタノール２０ｍＬ及びジイソプロピルエーテル８０ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し、室温にて１時間攪拌し、沈析物を濾取して、ジイソプロピルエーテルで洗浄した。得られた沈析物を、アセトニトリル５．０ｍＬ及び水５．０ｍＬに溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、２．０ｍＬ）を加え攪拌し濾過した。得られた濾液中のアセトニトリルを減圧下留去し、次いで凍結乾燥することにより対照薬２（５２５ｍｇ）を得た。
　対照薬２に結合した化合物５の含量は、対照薬２に１Ｎ－水酸化ナトリウム水溶液を加えて３７℃で１時間攪拌後、遊離した化合物５の含量を、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で分析し、化合物５にて得られた検量線から求めた量から計算した。その結果、結合した化合物５の含量は１７．２％（ｗ／ｗ）であった。また、１Ｈ－ＮＭＲ法による一般式（１）に係るＲ５に相当する－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）（Ｒ６及びＲ７がイソプロピル基）である基の結合含量は、３．０％（ｗ／ｗ）であった。
［試験例１］　酵素非存在下における化合物１～３からのＥＨＣ及び化合物５の放出
　化合物１、化合物２及び化合物３を、それぞれＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）に１ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、３７℃にてインキュベートした。各化合物からＰＢＳ溶液中に放出されたＥＨＣ及び化合物５の量を経時的にＨＰＬＣにて分析し、標準曲線を用いて定量した。溶液中に検出されたＥＨＣ及び化合物５の量を、化合物１～３の薬剤含有量から求めた全薬剤量に対する割合として、図１～３に示した。
　図１～３から明らかなように、本発明の高分子化合物（化合物１～３）は、加水分解酵素が存在しないＰＢＳ溶液で、ＥＨＣ及び化合物５をともに徐放的に解離して放出することができた。ＥＨＣ及び化合物５の薬剤放出速度は、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸を連結したブロック共重合体の組成や、各薬剤結合量によって変化した。ＥＨＣ及び化合物５の放出速度は制御し得ることが示された。
［試験例２］　抗腫瘍効果試験
　マウス皮下で継代しているマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ３８を約２ｍｍ角のブロックにし、套管針を用いて有毛マウスの背側部皮下に移植した。腫瘍移植後１６日目に、本発明の高分子化合物（化合物１）及び対照薬１、対照薬２を、表１に示す投与量で静脈内に単回投与した。なお、化合物１、対照薬１及び２は５％ブドウ糖溶液若しくは生理食塩水で溶解して使用した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000015
　投与開始日及び投与開始後の腫瘍体積を、腫瘍の長径（Ｌ（ｍｍ））及び短径（Ｗ（ｍｍ））をノギスで経時的に計測し、（Ｌ×Ｗ２）／２の式により腫瘍体積を計算して、それぞれの投与群における投与開始日の腫瘍体積に対する相対腫瘍体積の変化を図４に示した。
　図４に示すように、ＨＳＰ９０阻害活性を有する１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体が結合した対照薬２には、抗腫瘍活性が全く認められなかった。一方、カンプトテシン誘導体であるＥＨＣが結合した対照薬１では投与５日目まで腫瘍縮小効果が認められたが、その後、腫瘍の再増殖が観察された。これに対し、本発明の高分子化合物である化合物１を投与した場合には、高い腫瘍縮小効果が、単回投与にも拘わらず長期間にわたって認められた。以上の結果から、本発明の高分子化合物は、強い腫瘍縮小活性と、長期間にわたって発揮される腫瘍増殖抑制活性の２つの特徴を示す抗腫瘍剤となり得ることが示された。

Claims (8)

  1. 　ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体にカンプトテシン誘導体及びＨＳＰ９０阻害剤が結合した高分子化合物であって、該高分子化合物は一般式（１）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     ［式中、Ｒ１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５～４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１～Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈは６～６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈに対するｄの割合が５～５０％、ｅの割合が５～９０％、ｆの割合が０～９０％、ｇの割合が０～９０％、ｈの割合が０～９０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１～Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３はＨＳＰ９０阻害剤の結合残基またはＨＳＰ９０阻害剤が結合したアスパラギン酸残基を示し、Ｒ４はアスパラギン酸残基またはアスパラギン酸イミド残基を示し、Ｒ５は－Ｎ（Ｒ６）ＣＯＮＨ（Ｒ７）を示し、Ｒ６及びＲ７は同一でも異なってもいてもよく、分岐若しくは環状の（Ｃ３～Ｃ６）アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐若しくは直鎖の（Ｃ１～Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７－エチル－１０－ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基にＲ４基が結合したグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基にＲ５基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化合物。
  2. 　Ｒ３がＨＳＰ９０阻害剤の結合残基であり、該ＨＳＰ９０阻害剤が一般式（２）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     ［式中、Ｘ１は直鎖若しくは分岐の（Ｃ１～Ｃ６）のアルキル基または－ＣＯＮＲ１１Ｒ１２を示し、前記Ｒ１１及びＲ１２は同一でも異なってもいてもよい（Ｃ１～Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］で示される１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体であり、レゾルシン部分の水酸基がエステル結合したＨＳＰ９０阻害剤の結合残基である、請求項１に記載の高分子化合物。
  3. 　Ｒ３が、ＨＳＰ９０阻害剤が結合したアスパラギン酸残基であり、該アスパラギン酸残基が一般式（３）または一般式（４）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     ［式中、Ｒ８及びＲ９はそれぞれ独立して水素原子または（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を示し、Ｒ１０は水素原子、（Ｃ１～Ｃ４０）アルキル基、（Ｃ１～Ｃ４０）アラルキル基、芳香族基及びカルボキシ基が保護されたアミノ酸残基からなる群から選択される１種以上の置換基を示し、ＣＸ－ＣＹはＣＨ－ＣＨ若しくはＣ＝Ｃ（二重結合）を示し、ＤはＨＳＰ９０阻害剤の結合残基を示す。］である、請求項１に記載の高分子化合物。
  4. 　前記ＤのＨＳＰ９０阻害剤の結合残基の該ＨＳＰ９０阻害剤が、一般式（２）
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     ［式中、Ｘ１は直鎖若しくは分岐の（Ｃ１～Ｃ６）のアルキル基または－ＣＯＮＲ１１Ｒ１２を示し、前記Ｒ１１及びＲ１２は同一でも異なってもいてもよい直鎖状、分岐状または環状の（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］で示される１，２，４－トリアゾール－３－オン置換レゾルシン誘導体であり、レゾルシン部分の水酸基がエステル結合したＨＳＰ９０阻害剤の結合残基である、請求項３に記載の高分子化合物。
  5. 　一般式（１）のｄとｅの比率がｄ：ｅ＝１：０．５～１５である請求項１～４のいずれか一項に記載の高分子化合物。
  6. 　Ｒ１がメチル基またはエチル基、Ａがエチレン基またはプロピレン基、Ｒ２がアセチル基またはプロピオニル基、Ｒ６、Ｒ７が共にシクロヘキシル基または共にイソプロピル基であり、ｄ＋ｅ＋ｆ＋ｇ＋ｈに対するｄの割合が５～４０％、ｅの割合が５～８０％、ｆの割合が０～６０％、ｇの割合が５～４０％、ｈの割合が０～３０％である、請求項１～５のいずれか一項に記載の高分子化合物。
  7. 　請求項１～６のいずれか一項に記載の高分子化合物を有効成分とする抗腫瘍剤。
  8. 　前治療においてカンプトテシン誘導体による抗癌治療を処置された悪性腫瘍に処方される請求項７に記載の抗腫瘍剤。
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