JP6461088B2 - 高分子化カンプトテシン誘導体及び高分子化ｈｓｐ９０阻害剤誘導体を含む医薬組成物 - Google Patents

高分子化カンプトテシン誘導体及び高分子化ｈｓｐ９０阻害剤誘導体を含む医薬組成物 Download PDF

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本発明は高分子化カンプトテシン誘導体と高分子化ＨＳＰ９０阻害剤誘導体を組み合わせて投与する悪性腫瘍を治療するための医薬組成物に関する。特にＨＳＰ９０阻害剤として、１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を含む高分子化ＨＳＰ９０阻害剤誘導体と高分子化カンプトテシン誘導体を併用する抗腫瘍性医薬組成物に関する。
カンプトテシンは、中国産の植物「喜樹」より抽出された植物アルカロイドで、Ｉ型トポイソメラーゼ阻害剤である。これはＤＮＡと複合体を形成したＩ型トポイソメラーゼに選択的に結合し、その構造を安定化させる。その結果、切断されたＤＮＡの再結合が不可能となり、ＤＮＡの合成を止めて細胞死を誘導する薬剤である。
カンプトテシンは高い抗腫瘍効果を示し、１９６０年代に抗腫瘍剤として開発が進められたが、強い毒性として骨髄抑制と***が見られたために臨床試験が中止となった。
その後、カンプトテシンよりも水に溶けやすく、抗腫瘍活性はより強く且つ毒性がより低い誘導体としてトポテカンとイリノテカンが開発された。トポテカンは、代謝を経ずに抗腫瘍効果を発揮し、投与量の２０〜４０％が腎***であるため副作用の下痢が軽度である。一方、イリノテカンは、それ自体でも抗腫瘍効果を有しており、また生体内でカルボキシルエステラーゼにより活性代謝物の７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（以下、ＥＨＣと記載することもある）に代謝され、より強い抗腫瘍効果を発揮する。またイリノテカンとＥＨＣは、生物学的に活性であるラクトン型として血漿中に存在する割合がトポテカンよりも多く、半減期が長い特徴を有する。
臨床においてカンプトテシン誘導体は多くの癌種に使用されている。トポテカンは小細胞肺癌や癌化学療法剤による前治療を実施した卵巣癌に対する適応が承認された。一方、イリノテカンは小細胞肺癌、非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、胃癌（手術不能または再発）、結腸・直腸癌（手術不能または再発）、乳癌（手術不能または再発）、有棘細胞癌、悪性リンパ腫（非ホジキンリンパ腫）に対する広い適応で承認された。
抗腫瘍剤の薬理活性を効率的に引き出すために高分子担体を利用する手法が知られており、カンプトテシン誘導体を用いた高分子−カンプトテシン誘導体結合体の報告がされている。特許文献１には、フェノール性水酸基を有するカンプトテシン誘導体を、ポリエチレングリコール類と側鎖にカルボキシ基を有するポリマーが連結した共重合体にエステル結合させて調製した高分子化カンプトテシン誘導体が記載されている。該高分子化誘導体では、化学的に開裂しやすいフェニルエステル結合でカンプトテシン誘導体が結合されており、生体内に投与した後、薬理活性を有するカンプトテシン誘導体が緩徐に放出されることが記載されている。更に、該高分子化カンプトテシン誘導体は自己会合性を有しており、ミセル様会合体を形成して高い腫瘍組織内分布を示すことにより、腫瘍組織に選択的に薬効を示して、副作用が少ない抗腫瘍剤であることが記載されている。この高分子化カンプトテシン誘導体は、薬効成分であるＥＨＣの放出が酵素に依存しないため、治療効果発現において患者の個体差に影響されにくい利点を有すると考えられる。
熱ショックタンパク（Ｈｅａｔ Ｓｈｏｃｋ Ｐｒｏｔｅｉｎ；ＨＳＰ）は細胞内に存在する分子シャペロンであり、その分子量によってＨＳＰ９０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ４０、ｓｍａｌｌ ＨＳＰｓなど、幾つかのファミリーに分類される機能性分子である。分子シャペロンとは、タンパク質の機能的高次構造の形成を促進するため、標的タンパク質と一時的に複合体を形成するタンパク質の総称である。すなわち、分子シャペロンは、タンパク質の折り畳みや会合を助け、凝集を抑止する活性を持つ。
ＨＳＰは、細胞内のシグナル伝達系に関わる多様なタンパク質と相互作用することが知られている。ＨＳＰが結合する分子はクライアントタンパク質と呼ばれ、ＨＳＰ９０のクライアントタンパク質はおよそ２００分子が報告されている。すなわちＨＳＰ９０は、多様なタンパク質の機能発現に必要な場合が多く、その作用機作は、ＨＳＰ９０が不安定な折り畳み状態にあるクライアントタンパク質を特異的に認識して、これと結合して複合体を形成する生化学的特性に基づいている。癌関連のシグナル伝達に関わる多様なタンパク質（ステロイドレセプター、Ｒａｆ セリンキナーゼ、チロシンキナーゼ類）は、ＨＳＰ９０にその構造構築を依存しており、ＨＳＰ９０が細胞周期の制御、細胞の癌化・増殖・生存シグナルに深く関与していることが明らかになっている。
ヒト腫瘍では多くのシグナル分子の調節に異常を来しており、これらのシグナル分子の機能を維持するためにＨＳＰ９０を必要としている。近年、ＨＳＰ９０に作用してその機能を阻害する化合物は、癌関連のシグナル伝達に関わる多様なクライアントタンパク質の分解を引き起こし、癌細胞の増殖を抑制できることが報告された。すなわちＨＳＰ９０阻害剤は、クライアントタンパク質とＨＳＰ９０を含むシャペロン複合体の構成を変化させる作用を有する。その後、該複合体から離脱したクライアントタンパク質は、主にユビキチン・プロテアソ−ム系で分解される。これにより、ＨＳＰ９０のクライアントタンパク質量が減少し、それに伴い下流へのシグナル伝達を遮断し、癌細胞の増殖を抑制する事により抗腫瘍効果をもたらす。癌細胞は、ＨＳＰ９０阻害剤に対する感受性が、正常細胞と比較して高いことが期待される。そこでＨＳＰ９０を標的分子とするＨＳＰ９０阻害剤の探索的研究、並びにその抗腫瘍効果の検証がなされている。
ＨＳＰ９０阻害剤の臨床応用は、ゲルダナマイシン誘導体で先行して実施されてきた。ゲルダナマイシン誘導体である１７−ＡＡＧについては、造血器腫瘍、乳癌、メラノーマ及び消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）を対象に臨床試験が行われてきたが、難溶解性である問題と共に、肝毒性が発現する問題があった。そこで、ゲルダナマイシン誘導体の問題点を克服し得る、新規低分子ＨＳＰ９０阻害剤の探索及び構造最適化研究が進められ、その結果、幾つかの複素環型ＨＳＰ９０阻害剤が見出された。
例えば特許文献２〜４には、ＨＳＰ９０阻害剤として有用な１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が報告されている。また特許文献５には、１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の薬物動態の改善と、薬剤の徐放化を指向した高分子化ＨＳＰ９０阻害剤である高分子化１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が記載されている。該高分子化ＨＳＰ９０阻害剤は、ポリエチレングリコールセグメントとカルボキシ基を有するポリマーセグメントを有するブロック共重合体に、ＨＳＰ９０阻害剤である１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を結合させた高分子化薬剤結合化合物である。これは自己会合性を有しており、ミセル様会合体を形成して高い腫瘍組織内分布を示すことにより、腫瘍組織に選択的に薬剤を作用させて薬効を示し、副作用が少ない抗腫瘍剤であることが記載されている。つまり、該高分子化ＨＳＰ９０阻害剤を生体に投与すると、腫瘍組織に高濃度で分布すると共に、ＨＳＰ９０阻害活性を有する１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を徐放して抗腫瘍効果を発揮する抗腫瘍剤であると記載されている。
またＨＳＰ９０阻害剤は、殺細胞性の抗腫瘍剤と組み合わせることで、抗腫瘍効果が増強されることが期待され、ＨＳＰ９０阻害剤と他の抗腫瘍剤との併用による癌治療の開発が進められている。
特許文献６には、ＨＳＰ９０阻害剤である１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体とＩ型トポイソメラーゼ阻害剤であるカンプトテシンとの併用が記載されている。また、非特許文献１には、ＨＳＰ９０阻害剤である１７−ＡＡＧとイリノテカンの併用による第Ｉ相臨床試験が報告されている。しかしながら、有効成分の徐放性を示す高分子化カンプトテシン誘導体と高分子化ＨＳＰ９０阻害剤の誘導体の併用に関する報告は知られていない。
国際公開ＷＯ２００４／０３９８６９号パンフレット 国際公開ＷＯ２００６／０５５７６０号パンフレット 国際公開ＷＯ２００６／０８７０７７号パンフレット 国際公開ＷＯ２００６／０９５７８３号パンフレット 国際公開ＷＯ２００８／０４１６１０号パンフレット 国際公開ＷＯ２０１３／０６７１６２号パンフレット
Ｔｓｅ Ａ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００８ １４：２０ ６７０４−６７１１
本発明の目的は、抗腫瘍効果が高い癌化学療法剤を提供することである。特に、癌化学療法においてキードラッグとなるカンプトテシン誘導体を用い、その抗腫瘍効果を増強させた抗腫瘍性医薬組成物を提供することを課題とする。また、カンプトテシン誘導体を用いた抗腫瘍剤において、その効果を一層増強させるための抗腫瘍効果増強剤を提供することを課題とする。更にカンプトテシン誘導体を用いた、より抗腫瘍効果が増強された治療方法を提供することを課題とする。
本発明者らは、高分子化カンプトテシン誘導体とＨＳＰ９０阻害剤である１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が結合している高分子化ＨＳＰ９０阻害剤とを組み合せたことを特徴とする抗腫瘍性医薬組成物が、化学療法剤として著しく高い治療効果を発揮することを見出して本発明に至った。すなわち、高分子化カンプトテシン誘導体と１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を徐放する高分子化ＨＳＰ９０阻害剤を併用することにより、正常細胞に対して毒性が低く、患部に効率的に薬剤を送達し放出することにより薬効の向上をもたらすことができる。
すなわち本発明は、以下の構成１）〜９）を要旨とする。
１） ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を含む高分子化カンプトテシン誘導体と、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を含む高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を含有する抗腫瘍性医薬組成物であって、
前記高分子化カンプトテシン誘導体は、一般式（１）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１は水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５〜４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ、ｅ及びｆはそれぞれ整数であり、ｄ＋ｅ＋ｆは６〜６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆに対するｄの割合が１〜１００％、ｅの割合が０〜６０％、ｆの割合が０〜６０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３は−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）を示し、Ｒ４及びＲ５は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐若しくは直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化カンプトテシン誘導体であり、
前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は一般式（２）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｕは４５〜４５０の整数を示し、Ａａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｇ、ｈ及びｉはそれぞれ整数であり、ｇ＋ｈ＋ｉは６〜６０の整数を示し、ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が１〜１００％、ｈの割合が０〜６０％、ｉの割合が０〜６０％であり、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）を示し、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐または環状アルキル基もしくは三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、Ｒ１４が１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基であり、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基にＲ１４が結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ１３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体であり、
前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が下記一般式（３）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］であり、前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基が、該レゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した該残基である高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体であり、前記高分子化カンプトテシン誘導体と前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体とを同時に、順次に又は間隔をおいて投与する、抗腫瘍性医薬組成物。
２） 前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基が、Ｘ１がイソプロピル基であり、Ｘ２が５−（Ｎ−メチルインドリル）基または４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル基である、前記１）に記載の抗腫瘍性医薬組成物。
３） 前記高分子化カンプトテシン誘導体におけるカンプトテシン誘導体残基の含有モル当量と前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基の含有モル当量の比が、１：０．１〜２０である、前記１）または２）に記載の抗腫瘍性医薬組成物。
４） カンプトテシン誘導体に対する感受性が低下した悪性腫瘍の治療に用いる、前記１）〜３）のいずれか一項に記載の抗腫瘍性医薬組成物。
５） 一般式（２）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｕは４５〜４５０の整数を示し、Ａａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｇ、ｈ及びｉはそれぞれ整数であり、ｇ＋ｈ＋ｉは６〜６０の整数を示し、ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が１〜１００％、ｈの割合が０〜６０％、ｉの割合が０〜６０％であり、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）を示し、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐または環状アルキル基もしくは三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、Ｒ１４が１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基であり、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基にＲ１４が結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ１３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を含むカンプトテシン誘導体の抗腫瘍効果増強剤であって、
前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が下記一般式（３）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］であり、前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基が、該レゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した該残基である、抗腫瘍効果増強剤。
６） 前記カンプトテシン誘導体が、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を含む高分子化カンプトテシン誘導体であって、該高分子化カンプトテシン誘導体が一般式（１）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５〜４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ、ｅ及びｆはそれぞれ整数であり、ｄ＋ｅ＋ｆは６〜６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆに対するｄの割合が１〜１００％、ｅの割合が０〜６０％、ｆの割合が０〜６０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３は−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）を示し、Ｒ４及びＲ５は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される、前記５）に記載の抗腫瘍効果増強剤。
７） １，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基が、Ｘ１がイソプロピル基であり、Ｘ２が５−（Ｎ−メチルインドリル）基または４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル基である、前記５）または６）に記載の抗腫瘍効果増強剤。
８） ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を含む高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体と組み合わせて用いることを特徴とする、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を含む高分子化カンプトテシン誘導体を含有する抗腫瘍剤であって、該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が一般式（２）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｕは４５〜４５０の整数を示し、Ａａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｇ、ｈ及びｉはそれぞれ整数であり、ｇ＋ｈ＋ｉは６〜６０の整数を示し、ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が１〜１００％、ｈの割合が０〜６０％、ｉの割合が０〜６０％であり、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）を示し、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐または環状アルキル基もしくは三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、Ｒ１４が１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基であり、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基にＲ１４が結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ１３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造であり、
前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が下記一般式（３）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］であり、前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基におけるレゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した該残基である。］で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体、と組み合わせて用いることを特徴とし、
前記ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を含む高分子化カンプトテシン誘導体が、一般式（１）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１は水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５〜４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ、ｅ及びｆはそれぞれ整数であり、ｄ＋ｅ＋ｆは６〜６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆに対するｄの割合が１〜１００％、ｅの割合が０〜６０％、ｆの割合が０〜６０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３は−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）を示し、Ｒ４及びＲ５は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される、前記抗腫瘍剤。
９）一般式（１）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１は水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５〜４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ、ｅ及びｆはそれぞれ整数であり、ｄ＋ｅ＋ｆは６〜６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆに対するｄの割合が１〜１００％、ｅの割合が０〜６０％、ｆの割合が０〜６０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３は−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）を示し、Ｒ４及びＲ５は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］
で表される高分子化カンプトテシン誘導体と、一般式（２）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｕは４５〜４５０の整数を示し、Ａａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｇ、ｈ及びｉはそれぞれ整数であり、ｇ＋ｈ＋ｉは６〜６０の整数を示し、ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が１〜１００％、ｈの割合が０〜６０％、ｉの割合が０〜６０％であり、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）を示し、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐または環状アルキル基もしくは三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、Ｒ１４が１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基であり、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基にＲ１４が結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ１３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造であり、
前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が下記一般式（３）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］であり、前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基におけるレゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した該残基である。］
で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の組合せを含む医薬キットであって、前記高分子化カンプトテシン誘導体と前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を、同時に、順次に又は間隔をおいて投与する、腫瘍の治療のための医薬キット。
本発明の抗腫瘍性医薬組成物は、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＥＨＣ）を結合し、該ＥＨＣを遊離する高分子化カンプトテシン誘導体と、ＨＳＰ９０阻害活性を有する１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を結合し、該レゾルシン誘導体を遊離する高分子化１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を組み合せたことを特徴とする抗腫瘍性医薬組成物である。該医薬組成物は、抗腫瘍効果の向上と副作用の低減を可能とし、効率的かつ安全な癌の化学療法を達成することができる。また、高分子化１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は、カンプトテシン誘導体の抗腫瘍効果を増強させる効果を有し、癌化学療法においてキードラッグとなるカンプトテシン誘導体及び高分子化カンプトテシン誘導体の抗腫瘍効果増強剤として使用することができる。したがって、カンプトテシン誘導体に対し抵抗性を示す腫瘍に対する抗腫瘍剤を提供することができる。
化合物１のＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）中、３７℃での有効成分である化合物４の放出量の全結合薬剤量に対する割合を示す。 化合物２のＰＢＳ溶液（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）中、３７℃での有効成分である化合物４の放出量の全結合薬剤量に対する割合を示す。 マウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ３８移植マウスに、高分子化１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体（化合物１）及び高分子化カンプトテシン誘導体（化合物３）の併用投与、化合物１を単独投与及び化合物３を単独投与し、それぞれの投与群における相対腫瘍体積の変化を示す。
本発明は、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＥＨＣ）を結合した高分子化カンプトテシン誘導体と、ＨＳＰ９０阻害活性を有する１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を結合した高分子化１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の組み合せを含む、腫瘍治療のための抗腫瘍性医薬組成物に関する。以下に本発明の詳細について説明する。
本発明の高分子化カンプトテシン誘導体は、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体において、ポリグルタミン酸セグメントの側鎖のカルボキシ基と、カンプトテシン誘導体であるＥＨＣの１０位水酸基がエステル結合した高分子−薬剤結合型抗腫瘍剤である。
前記ポリエチレングリコールセグメントは、エチレンオキシ基；（−ＯＣＨ２ＣＨ２）基を単位構造とした重合体であり、末端基が化学修飾されたセグメントである。一方、前記ポリグルタミン酸セグメントは、グルタミン酸が重合して側鎖として複数のγ−カルボキシ基を具備し、末端基が修飾されたセグメントである。本発明の高分子化カンプトテシン誘導体は、該ポリエチレングリコールセグメントと該ポリグルタミン酸セグメントが適当な結合基で連結した多価カルボン酸含有ブロック共重合体を主鎖とし、側鎖カルボン酸とカンプトテシン誘導体であるＥＨＣの水酸基がエステル結合により結合した構造を有する。すなわち、本発明の高分子化カンプトテシン誘導体は、下記一般式（１）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１は水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５〜４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ、ｅ及びｆはそれぞれ整数であり、ｄ＋ｅ＋ｆは６〜６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆに対するｄの割合が１〜１００％、ｅの割合が０〜６０％、ｆの割合が０〜６０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３は−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）を示し、Ｒ４及びＲ５は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化カンプトテシン誘導体である。
一般式（１）にて、Ｒ１はポリエチレングリコールセグメントの末端修飾基であり、水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基である。該Ｒ１は、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基であることが好ましい。具体例を挙げるとメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基またはｔｅｒｔ−ブチル基である。置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基の置換基としては、例えば、アミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキルオキシ基、ホルミル基、カルボキシ基などが挙げられる。該Ｒ１としてはメチル基またはエチル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。
一般式（１）において、ポリエチレングリコールセグメントは、そのセグメントにおけるポリエチレングリコール部分は分子量２，０００〜２０，０００のものを用いることが好ましく、４，０００〜１５，０００がより好ましい。すなわち、エチレンオキシ基；（−ＯＣＨ２ＣＨ２）基の単位繰り返し構造数であるｔは、４５〜４５０であり、好ましくは９０〜３４０である。
一般式（１）におけるＡは、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントをつなぐ結合基であり、（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキレン基である。例えば、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基等が挙げられる。中でも好ましくはエチレン基またはトリメチレン基であり、特に好ましくはトリメチレン基である。
一般式（１）で表される本発明の高分子化カンプトテシン誘導体のポリグルタミン酸セグメントは、グルタミン酸ユニットがアミド結合した構造である。アミド結合は、主としてα−アミド結合型で結合した構造であるが、γ−アミド結合型で結合した構造を含んでも良い。各グルタミン酸ユニットのグルタミン酸はＬ型でもＤ型でもよい。一般式（１）におけるグルタミン酸ユニット総数（ポリグルタミン酸重合数）は、ｄ＋ｅ＋ｆで表され、６〜６０である。好ましくはｄ＋ｅ＋ｆが８〜４０である。したがって、ポリグルタミン酸セグメントの平均分子量は６００〜１５，０００程度、好ましくは８００〜１０，０００程度である。
一般式（１）におけるＲ２としては水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基が挙げられる。Ｒ２としては（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基が好ましく、例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基等が挙げられ、中でもアセチル基またはプロピオニル基が好ましく、アセチル基が特に好ましい。
一般式（１）におけるＲ３は−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）であり、Ｒ４及びＲ５は同一でも異なっていてもよく、（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基、または三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）の分岐若しくは直鎖アルキル基である。
該（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基としては、例えば、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、ネオペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられ、より好ましくはイソプロピル基、シクロへキシル基が挙げられる。
該三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）の分岐若しくは直鎖アルキル基としては、例えば、エチル基、ジメチルアミノプロピル基等が挙げられる。
Ｒ４及びＲ５としては、Ｒ４とＲ５が共にイソプロピル基またはシクロへキシル基、若しくはＲ４とＲ５がエチル基とジメチルアミノプロピル基の組み合せであることが好ましい。Ｒ４とＲ５が共にイソプロピル基またはシクロへキシル基である基が特に好ましい。
一般式（１）に示すように、本発明の高分子化合物のポリグルタミン酸セグメントにはカンプトテシン誘導体であるＥＨＣが、その１０位の水酸基とポリグルタミン酸の側鎖カルボキシ基とエステル結合した構造体である。
ポリグルタミン酸セグメントは、ＥＨＣ及びＲ３の何れもが結合していないグルタミン酸単位が存在して良い。一般式（１）において、ＥＨＣ及びＲ３が結合していない当該グルタミン酸単位における側鎖カルボン酸は、遊離酸型カルボキシ基を有するグルタミン酸残基として示されている。しかしながら、カルボキシ基がアルカリ金属、またはアルカリ土類金属塩型の形態であってもよく、そのようなカルボキシ基を含むグルタミン酸部分を有する一般式（１）の高分子化カンプトテシン誘導体も本発明に含まれる。アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩の塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩が挙げられる。また、本高分子化カンプトテシン誘導体を、非経口投与にて供する場合、医薬品として許容される溶解液にて溶液調製されるが、該遊離カルボン酸側鎖の態様は、その溶液のｐＨ、緩衝溶液の塩に依存し、グルタミン酸塩の態様を取り得る。
本発明におけるポリグルタミン酸セグメントは、各グルタミン酸単位において、側鎖カルボキシ基にＥＨＣが結合しているグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基に前記Ｒ３が結合しているグルタミン酸単位、または側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基またはその塩であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムな配列にて存在する。
当該ポリグルタミン酸セグメントにおいて、前記ＥＨＣ結合グルタミン酸単位は、一般式（１）のｄでその存在量が表され、該グルタミン酸セグメントにおける１〜１００％を占める。また、前記Ｒ３結合グルタミン酸単位は、一般式（１）のｅでその存在量が表され、該グルタミン酸セグメントにおける０〜６０％を占める。一方、前記遊離グルタミン酸単位は、一般式（１）のｆでその存在量が表され、該グルタミン酸セグメントにおける０〜６０％を占める。全グルタミン酸セグメントに対する各グルタミン酸単位に関するｄ、ｅ、ｆの、好ましい範囲は、ｄが２０〜７０％、ｅが１〜４０％、ｆが１〜４０％である。
次に、本発明における高分子化カンプトテシン誘導体の製造方法を説明する。なお、本発明の高分子化カンプトテシン誘導体は、国際公開ＷＯ２００４／０３９８６９号に開示される内容を要旨とするものであり、該開示内容を包含する。好ましくは、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を用い、これの側鎖のカルボキシ基とＥＨＣを縮合反応させる方法を挙げることができる。
本発明におけるポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体の構築方法は、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントを結合させる方法、ポリエチレングリコールセグメントにポリグルタミン酸を順次に遂次重合させる方法のいずれの方法であっても良い。
好適なポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体の合成方法は、片末端がメトキシ基等の修飾基を有し、他方片末端にアミノ基を修飾したポリエチレングリコール化合物に、Ｎ−カルボニルグルタミン酸無水物を順次反応させ、ポリグルタミン酸セグメントを構築する方法を挙げることができる。この場合、Ｎ−カルボニルグルタミン酸無水物において、グルタミン酸側鎖のカルボキシ基は、ＥＨＣ結合体、一般式（１）に係るＲ３の結合体、遊離カルボン酸体またはカルボン酸保護基結合体等を用いることができる。Ｎ−カルボニルグルタミン酸無水物として、側鎖カルボキシ基が適当なカルボン酸保護基で修飾されたＮ−カルボニルグルタミン酸無水物を用いることが好ましい。当該カルボン酸保護基としては、特に限定されるものではないが、エステル結合型保護基が好ましい。すなわち、側鎖カルボキシ基が適当なカルボン酸保護基で修飾されたＮ−カルボニルグルタミン酸無水物を用い、片末端にアミノ基を修飾したポリエチレングリコール化合物と反応させることにより、該Ｎ−カルボニルグルタミン酸無水物を逐次重合して、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸誘導体を連結したブロック共重合体を構築し、これに、ＥＨＣ及び任意に一般式（１）に係るＲ３で表される置換基を導入する方法を用いることが好ましい。
より具体的には、片末端にメトキシ基、他方片末端にアミノ基を修飾したポリエチレングリコール化合物と、γ−ベンジル−Ｎ−カルボニルグルタミン酸無水物を順次反応させ、遂次重合により、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸ベンジルエステルが連結したブロック共重合体を調製する。その後、適当な方法により、ポリグルタミン酸のベンジル基を脱保護することにより、該ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸が連結したブロック共重合体を調製できる。ベンジル基の脱保護反応としては、アルカリ条件による加水分解反応や水素添加還元反応が挙げられる。
次に本発明における一般式（１）で示される高分子化カンプトテシン誘導体の合成方法を説明する。前記ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体のグルタミン酸側鎖に対し、ＥＨＣ及び一般式（１）のＲ３である−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）基を結合反応させることで、本発明に係る高分子化カンプトテシン誘導体を調製することができる。該ＥＨＣと該−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）基の結合反応方法は、特に限定されるものではなく、先にＥＨＣを結合反応させ、その後、該−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）基を結合反応させても、その逆工程でも良く、同時に結合反応させても良い。
好ましくは、前記ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体に、ＥＨＣをカルボジイミド縮合剤の共存下で縮合反応させる方法が、該ブロック共重合体にＥＨＣと−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）基を同時に結合させることができることから、有利な反応である。該カルボジイミド縮合剤としては、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）が挙げられる。上記縮合反応の際に、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）等の反応補助剤を用いてもよい。なお、カルボジイミド縮合剤としてジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いた場合、−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）のＲ４及びＲ５はシクロへキシル基となる。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）を用いて縮合反応を行った場合、Ｒ４及びＲ５はイソプロピル基となる。１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）を用いた場合、−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）のＲ４及びＲ５は、エチル基と３−ジメチルアミノプロピルの混合置換体となる。
上記反応によりポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体のグルタミン酸側鎖に対し、ＥＨＣ、及び一般式（１）のＲ３として−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）基を結合させた後、任意に精製工程を経由し、本発明の高分子化カンプトテシン誘導体を合成することができる。
当該高分子化カンプトテシン誘導体は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液中で徐々に抗腫瘍活性成分であるＥＨＣを解離し、放出し続ける性能を有する。すなわち、生体投与において、当該高分子化カンプトテシン誘導体は、ＥＨＣを徐放的に遊離させる物性を備える。一般的に臨床に用いられている低分子薬剤は、投与直後に薬剤の最高血中濃度を示し、その後比較的速やかに体外に排出される。これに対し当該高分子化カンプトテシン誘導体は、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体からＥＨＣが徐放的に遊離し、ＥＨＣの血中濃度推移が持続的に維持される体内薬物動態推移を特徴とする製剤である。加えて高分子担体結合体は、投与後の体内分布が低分子薬剤とは大きく異なると言われており、従来の薬剤とは全く異なる体内薬物動態挙動を示すものである。このことから、本高分子化カンプトテシン誘導体は、トポテカンやイリノテカン等の低分子カンプトテシン製剤とは薬学的に薬効発現特性及び副作用発現特性が全く異なることが考えられ、カンプトテシン誘導体の臨床上の新しい治療方法を提供できる抗腫瘍性製剤である。
本発明の高分子化カンプトテシン誘導体は、抗腫瘍剤として使用するものである。当該高分子化カンプトテシン誘導体は注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、散剤等の通常使用されている剤型にて使用される。製剤化に当たり、通常使用されている薬学的に許容される担体、例えば結合剤、滑沢剤、崩壊剤、溶剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、保存剤、無痛化剤、色素、香料が使用できる。好ましくは、注射剤、点滴剤としての使用が望まれ、通常、水、生理食塩水、５％ブドウ糖又はマンニトール液、水溶性有機溶媒（例えばグリセロール、エタノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール、クレモフォア等、及びそれらの混合液）並びに水と該水溶性有機溶媒の混合液等が使用される。
次に、本発明の高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体について説明する。これは、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体において、ポリグルタミン酸セグメントの側鎖のカルボキシ基と、トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した高分子結合型薬剤である。以下に、その高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体について詳しく説明する。
本発明の高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが適当な結合基で連結した多価カルボン酸含有ブロック共重合体を主鎖とし、側鎖カルボン酸とトリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した構造を有する。すなわち、当該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は、下記一般式（２）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１１は水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｕは４５〜４５０の整数を示し、Ａａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｇ、ｈ及びｉはそれぞれ整数であり、ｇ＋ｈ＋ｉは６〜６０の整数を示し、ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が１〜１００％、ｈの割合が０〜６０％、ｉの割合が０〜６０％であり、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）を示し、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐または環状アルキル基もしくは三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、Ｒ１４が１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基であり、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基にＲ１４が結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ１３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体であり、
前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が下記一般式（３）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］であり、前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基が、該レゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した該残基である高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体である。
一般式（２）におけるＲ１１は、ポリエチレングリコールセグメントの末端修飾基であり、水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基である。該Ｒ１１は、置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基が好ましい。具体的には、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基またはｔｅｒｔ−ブチル基である。置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基の置換基としては、例えば、アミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキルオキシ基、ホルミル基、カルボキシ基などが挙げられる。Ｒ１１としてはメチル基またはエチル基が好ましく、メチル基が特に好ましい。
一般式（２）において、ポリエチレングリコールセグメントは、そのセグメントにおけるポリエチレングリコール部分は分子量２，０００〜２０，０００のものを用いることが好ましく、４，０００〜１５，０００がより好ましい。すなわち、エチレンオキシ基；（−ＯＣＨ２ＣＨ２）基の単位繰り返し構造数であるｕは４５〜４５０であり、好ましくは９０〜３４０である。
ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントをつなぐ結合基である一般式（２）におけるＡａとしては、（Ｃ１〜Ｃ６）のアルキレン基が挙げられ、例えば、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基等が挙げられる。中でも好ましくはエチレン基またはトリメチレン基であり、特に好ましくはトリメチレン基である。
一般式（２）で表される本発明の高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体のポリグルタミン酸セグメントは、複数のグルタミン酸ユニットがアミド結合したセグメント構造体である。アミド結合の態様としては、α−アミド結合型で結合した構造であるが、γ−アミド結合型で結合した構造を含んでも良い。各グルタミン酸ユニットはＬ型でもＤ型でもよい。一般式（２）におけるグルタミン酸ユニット総数はｇ＋ｈ＋ｉで表され６〜６０である。好ましくはｇ＋ｈ＋ｉが８〜４０である。したがって、ポリグルタミン酸セグメントの平均分子量は６００〜１５，０００程度、好ましくは８００〜１０，０００程度である。
一般式（２）におけるＲ１２としては水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基が挙げられる。Ｒ１２としては（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基が好ましく、例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基等が挙げられ、中でもアセチル基またはプロピオニル基が好ましく、アセチル基が特に好ましい。
一般式（２）におけるＲ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）であり、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよく、（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基、または三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）の分岐若しくは直鎖アルキル基である。
該（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基としては、例えば、イソプロピル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、ネオペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられ、より好ましくはイソプロピル基、シクロへキシル基が挙げられる。
該三級アミノ基で置換されていてもよい（Ｃ１〜Ｃ５）の分岐若しくは直鎖アルキル基としては、例えば、エチル基、ジメチルアミノプロピル基等が挙げられる。
Ｒ１５及びＲ１６としては、Ｒ１５とＲ１６が共にイソプロピル基若しくはシクロへキシル基、またはＲ１５とＲ１６がエチル基とジメチルアミノプロピル基の組み合せであることが好ましい。Ｒ１５とＲ１６が共にイソプロピル基またはシクロへキシル基である基が特に好ましい。
一般式（２）におけるＲ１４は、ＨＳＰ９０阻害剤であるトリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の結合残基であり、レゾルシン部分の水酸基がポリグルタミン酸セグメントの側鎖カルボキシ基とエステル結合している結合残基である。当該トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体としては、一般式（３）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］で示される１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を挙げることができる。
一般式（３）におけるＸ１は、（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基である。
Ｘ１における該（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖または分岐のアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、１−ペンチル基、１−エチル−プロピル基、１−へキシル基等が挙げられる。
Ｒ１７及びＲ１８における同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、１−ペンチル基、１−エチル−プロピル基、１−へキシル基、シクロへキシル基等を挙げることができる。
Ｘ１としては、イソプロピル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８であり、Ｒ１７がメチル基でＲ１８がｎ−ブチル基が好ましい。
一般式（２）におけるＸ２基は、置換基を有していてもよいアリール基である。該置換基を有していてもよいアリール基としては、置換基を有していてもよい炭素環アリール基、置換基を有していてもよい複素環アリール基が挙げられる。
Ｘ２における置換基を有していてもよい炭素環アリール基において、炭素環アリール基としては、フェニル基、ナフチル基が挙げられる。置換基を有していてもよい炭素環アリール基としては、置換基としてアルキル基を有する炭素環アリール基、置換基としてハロゲン原子を有する炭素環アリール基、置換基としてアルコキシ基を有する炭素環アリール基、置換基としてアミノ基を有する炭素環アリール基、または置換基としてアミノアルキル基を有する炭素環アリール基が挙げられる。
前記置換基としてアルキル基を有する炭素環アリール基としては、（Ｃ１〜Ｃ３０）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基が少なくとも１つ以上を置換する炭素環アリール基である。好ましくは（Ｃ１〜Ｃ８）の直鎖状または分岐状アルキル基が置換するフェニル基である。例えば、２−メチルフェニル基、４−メチルフェニル基、３−イソプロピルフェニル基、４−イソプロピルフェニル基、ｎ−ヘキシルフェニル基、ｎ−オクチルフェニル基、１−エチルプロピルフェニル基、２−メチルプロピルフェニル基等が挙げられる。
前記置換基としてハロゲン原子を有する炭素環アリール基としては、少なくとも１つ以上のハロゲン原子が置換された炭素環アリール基である。好ましくはモノハロゲン置換フェニル基またはジハロゲン置換フェニル基である。例えば２−クロロフェニル基、４−クロロフェニル基、２，４−ジクロロフェニル基、２−ブロモフェニル基、４−ブロモフェニル基、２，４−ジブロモフェニル基等が挙げられる。
前記置換基としてアルコキシ基を有する炭素環アリール基としては、少なくとも１つ以上の（Ｃ１〜Ｃ１０）の１級、２級または３級アルコキシ基を有する炭素環アリール基である。例えば、４−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、３，４−ジメトキシフェニル基、３，４−メチレンジオキシフェニル基が挙げられる。中でも４−メトキシフェニル基が好ましい。
Ｘ２における置換基としてアミノ基を有する炭素環アリール基としては、前記アミノ基として、無置換のアミノ基、非環状の１級または２級アミノ基若しくは環状の２級アミノ基を置換基として備える炭素環アリール基が挙げられる。
置換基として備わる前記アミノ基において、非環状の１級アミノ基としては、（Ｃ１〜Ｃ１０）の直鎖状、分岐状若しくは環状アルキル基、またはアリール基が置換したアミノ基が挙げられる。例えばメチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ネオペンチルアミノ基、ｎ−ヘキシルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、ｎ−オクチルアミノ基、フェニルアミノ基等が挙げられる。
非環状の２級アミノ基としては、同一であっても異なっていても良く、（Ｃ１〜Ｃ１０）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基、若しくはアリール基がＮ，Ｎ−ジ置換したアミノ基である。例えばジメチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−シクロヘキシルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−フェニルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−ピリジルアミノ基、ジフェニルアミノ基等が挙げられる。
環状の２級アミノ基としては、モルフォリノ基、ピペラジン−１−イル基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基等が挙げられる。
前記置換基のアミノ基は、非環状の脂肪族１級若しくは非環状の２級アミノ基、または環状の脂肪族２級アミノ基が好ましい。すなわち、非環状の脂肪族１級アミノ基としては、メチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ネオペンチルアミノ基、ｎ−ヘキシルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、ｎ−オクチルアミノ基を好ましい例として挙げることができる。非環状の脂肪族２級アミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−シクロヘキシルアミノ基を好ましい例として挙げる事ができる。環状の脂肪族２級アミノ基としては、モルフォリノ基、ピペラジン−１−イル基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基を好ましい例として挙げることができる。
置換基としてアミノ基を有する炭素環アリール基における、炭素環アリール基としてはフェニル基またはナフチル基が挙げられる。炭素環アリール基としてはフェニル基が好ましい。該フェニル基上のアミノ基の置換位置は特に限定されるものではなく、２〜６位の何れの置換体であって良い。３位または４位のアミノ基置換体が好ましい。
置換基としてアミノ基を有する炭素環アリール基において、好ましい態様としては、４位に非環状の脂肪族２級アミノ基が置換されたフェニル基、または４位に環状の脂肪族２級アミノ基が置換されたフェニル基が挙げられる。特に４−ジメチルアミノフェニル基、４−（モルフォリノ）フェニル基、または４−（４−メチルピペラジン−１−イル）フェニル基が好ましい。
Ｘ２における置換基としてアミノアルキル基を有する炭素環アリール基としては、前記アミノ基として、無置換のアミノ基、非環状の１級若しくは非環状の２級アミノ基、または環状の２級アミノ基を置換基として有する（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル基が置換した炭素環アリール基が挙げられる。
非環状の１級アミノ基としては、（Ｃ１〜Ｃ１０）の直鎖状、分岐状若しくは環状アルキル基、またはアリール基が置換したアミノ基が挙げられる。例えばメチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ネオペンチルアミノ基、ｎ−ヘキシルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、ｎ−オクチルアミノ基、フェニルアミノ基等が挙げられる。
非環状の２級アミノ基としては、同一であっても異なっていても良く、（Ｃ１〜Ｃ１０）の直鎖状、分岐状若しくは環状アルキル基、またはアリール基がＮ，Ｎ−ジ置換したアミノ基である。例えばジメチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−シクロヘキシルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−フェニルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−ピリジルアミノ基、ジフェニルアミノ基等が挙げられる。
環状の２級アミノ基としては、モルフォリノ基、ピペラジン−１−イル基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基等が挙げられる。
前記置換基のアミノ基は、非環状の脂肪族１級若しくは非環状の２級アミノ基、または環状の脂肪族２級アミノ基が好ましい。すなわち、非環状の脂肪族１級アミノ基としては、メチルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ネオペンチルアミノ基、ｎ−ヘキシルアミノ基、シクロヘキシルアミノ基、ｎ−オクチルアミノ基を好ましい例として挙げることができる。
非環状の脂肪族２級アミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−シクロヘキシルアミノ基を好ましい例として挙げる事ができる。
環状の脂肪族２級アミノ基としては、モルフォリノ基、ピペラジン−１−イル基、４−メチルピペラジン−１−イル基、ピペリジン−１−イル基、ピロリジン−１−イル基を好ましい例として挙げることができる。
前記アミノ基を置換基として有する（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、オクチル基等を挙げることができる。
置換基としてアミノアルキル基を有する炭素環アリール基としては、フェニル基またはナフチル基が挙げられる。炭素環アリール基としてはフェニル基が好ましい。該フェニル基上の、アミノアルキル基の置換位置は特に限定されるものではなく、２〜６位の何れの置換体であって良い。３位または４位のアミノ基置換体が好ましい。
置換基としてアミノアルキル基を有する炭素環アリール基において、好ましい態様としては、（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基の末端位に環状の脂肪族２級アミノ基が置換され、もう一方の末端基がフェニル基の４位に置換された態様が挙げられる。
特に、４−（モルフォリノメチル）フェニル基、４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）フェニル基、４−（２−モルフォリノエチル）フェニル基、４−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル］フェニル基、４−（４−モルフォリノブチル）フェニル基、４−［５−（４−メチルピペラジン−１−イル）ペンチル］フェニル基が好ましい。更に好ましい態様としては、４−（モルフォリノメチル）フェニル基または４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）フェニル基である。
Ｘ２における置換基を有していてもよい複素環アリール基としては、置換基を有していてもよいピリジル基、置換基を有していてもよいピリミジニル基、置換基を有していてもよいキノリル基、置換基を有していてもよいキナゾリニル基、置換基を有していても良いナフチリジニル基、置換基を有していても良いフリル基、置換基を有していてもよいピロリル基、置換基を有していてもよいインドリル基、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいピラゾリル基、置換基を有していてもよいオキサゾリル基、置換基を有していてもよいイソキサゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基等が挙げられる。
好ましくは、置換基を有していてもよいピリジル基、置換基を有していてもよいピリミジニル基、置換基を有していてもよいインドリル基、置換基を有していてもよいイミダゾリル基を挙げることができる。特に好ましくは置換基を有していても良いピリジル基、置換基を有していてもよいピリミジニル基、置換基を有していてもよいインドリル基である。
Ｘ２における置換基を有していてもよい複素環アリール基の好ましい態様としては、ピリジル基、置換基としてアルキル基を有するピリジル基、置換基としてアミノ基を有するピリジル基、置換基としてアルキル基を有するピリミジニル基、置換基としてアミノ基を有するピリミジニル基、置換基としてアルキル基を有するインドリル基、置換基としてアミノ基を有するインドリル基である。
置換基としてアルキル基を有するピリジル基としては、６−メチルピリジン−３−イル基、５−メチルピリジン−２−イル基等が挙げられる。
置換基としてアミノ基を有するピリジル基としては、５−ジメチルアミノピリジン−２−イル基等が挙げられる。
置換基としてアルキル基を有するピリミジニル基としては、２−メチルピリミジン−４−イル基、２−メチルピリミジン−５−イル基等が挙げられる。
置換基としてアミノ基を有するピリミジニル基としては、２−ジメチルアミノピリミジン−５−イル基、２−モルフォリノピリミジン−５−イル基、２−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピリミジン−５−イル基等が挙げられる。
置換基としてアルキル基を有するインドリル基としては、１−メチルインドール−５−イル基、１−エチルインドール−５−イル基等が挙げられる。
本発明におけるＨＳＰ９０阻害剤として好ましい１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体において、Ｘ１はイソプロピル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８でありＲ１７がメチル基でＲ１８がｎ−ブチル基である。また、Ｘ２が２−メチルフェニル基、４−（モルフォリノメチル）フェニル基、４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）フェニル基及び１−メチルインドール−５−イル基からなる群から選択される置換基の化合物が好ましい。
ブロック共重合体に結合するＨＳＰ阻害剤として、好ましくは、Ｘ１がイソプロピル基でありＸ２が１−メチルインドール−５−イル基である、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピルフェニル）−４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン（下記一般式（４）；化合物４）；Ｘ１が−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８でありＲ１７がメチル基でＲ１８がｎ−ブチル基であり、Ｘ２が２−メチルフェニル基である、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−（Ｎ−メチル−Ｎ−ブチルアミド））−４−（２−メチルフェニル）−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン（下記一般式（５）；化合物５）；または、Ｘ１がイソプロピル基であり、Ｘ２が４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）フェニル基である、５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピルフェニル）−４−［４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）フェニル］−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン・２塩酸塩（下記一般式（６）；化合物６）などを挙げることができる。
Figure 0006461088
一般式（３）で示される１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体において、前記Ｘ１基及び前記Ｘ２基のそれぞれの組み合せの化合物は、何れも公知の文献に基づき合成することができる。該１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の合成のための公知文献としては、以下の文献を挙げることができる。
化合物４は公知の化合物で、例えば、国際公開ＷＯ２００７／１３９９５２号パンフレットの記載に従い製造することが出来る。
化合物５は公知の化合物で、例えば、国際公開ＷＯ２００８／０８６８５７号パンフレットの記載に従い製造することが出来る。
化合物６は公知の化合物で、例えば、国際公開ＷＯ２００６／０９５７８３号パンフレットの記載に従い製造することが出来る。
Ｒ１４の置換基となる化合物は、式（２）で表される化合物の同一高分子内あるいは高分子間で、式（３）に係る１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体であれば単一種類であっても複数種類であってもよいが、単一種類であることが好ましい。
一般式（２）に係るポリグルタミン酸セグメントには、Ｒ１４基に相当するＨＳＰ９０阻害剤、及びＲ１３の何れもが結合していないグルタミン酸単位が存在して良い。一般式（２）において、Ｒ１４に相当するＨＳＰ９０阻害剤及びＲ１３基が結合していない当該グルタミン酸単位における側鎖カルボン酸は、遊離酸型カルボキシ基を有するグルタミン酸残基として示される。しかしながら、当該カルボキシ基がアルカリ金属、またはアルカリ土類金属塩型の形態になっていてもよく、そのようなカルボキシル基を含むグルタミン酸部分を有する一般式（２）の高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体も本発明に含まれる。アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩の塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩が挙げられる。また、本高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を、非経口投与にて供する場合、医薬品として許容される溶解液にて溶液調製されるが、該遊離カルボキシ基の態様は、その溶液のｐＨ、緩衝溶液の塩に依存し、グルタミン酸塩の態様を取り得る。
本発明におけるポリグルタミン酸セグメントは、各グルタミン酸単位において、側鎖カルボキシ基にＲ１４に相当するＨＳＰ９０阻害剤が結合しているグルタミン酸単位、側鎖カルボキシ基に前記Ｒ１３が結合しているグルタミン酸単位、または側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基またはその塩であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムな配置にて存在するものである。
当該ポリグルタミン酸セグメントにおいて、前記Ｒ１４に相当するＨＳＰ９０阻害剤結合グルタミン酸単位は、一般式（２）のｇでその存在量が表され、該グルタミン酸セグメントにおける１〜１００％を占める。また、前記Ｒ１３結合グルタミン酸単位は、一般式（２）のｈでその存在量が表され、該グルタミン酸セグメントにおける０〜６０％を占める。一方、前記遊離グルタミン酸単位は、一般式（２）のｉでその存在量が表され、該グルタミン酸セグメントにおける０〜６０％を占める。全グルタミン酸セグメントに対する各グルタミン酸単位に関するｇ、ｈ、ｉの好ましい範囲は、ｇが２０〜７０％、ｈが１〜４０％、ｉが１〜４０％である。
次に、本発明における高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の製造方法を説明する。
本発明におけるポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体の構築方法は、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントを結合させる方法、ポリエチレングリコールセグメントにポリグルタミン酸を順次に遂次重合させる方法、のいずれの方法であっても良い。
好適なポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体の合成方法は、片末端にメトキシ基等の修飾基を有し、他方片末端にアミノ基を修飾したポリエチレングリコール化合物に、Ｎ−カルボニルグルタミン酸無水物を順次反応させ、ポリグルタミン酸セグメントを構築する方法を挙げることができる。この場合、Ｎ−カルボニルグルタミン酸無水物において、グルタミン酸側鎖のカルボキシ基は、一般式（２）に係るＲ１４の結合体、一般式（２）に係るＲ１３の結合体、遊離カルボン酸体またはカルボン酸保護基結合体等を用いることができる。Ｎ−カルボニルグルタミン酸無水物としては、側鎖カルボキシ基は適当なカルボン酸保護基で修飾したＮ−カルボニルグルタミン酸無水物を用いることが好ましい。当該カルボン酸保護基としては、特に限定されるものではないが、エステル結合型保護基であることが好ましい。すなわち、側鎖カルボキシ基は適当なカルボン酸保護基で修飾したＮ−カルボニルグルタミン酸無水物を用い、片末端にアミノ基を修飾したポリエチレングリコール化合物と反応させることにより、該Ｎ−カルボニルグルタミン酸無水物を逐次重合して、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸誘導体を連結したブロック共重合体を構築し、これに、一般式（２）に係るＲ１４で表される１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体及び任意に一般式（２）に係るＲ１３で表される置換基を導入する方法を用いることが好ましい。
より具体的には、片末端にメトキシ基、他方片末端にアミノ基を修飾したポリエチレングリコール化合物に対し、γ−ベンジル−Ｎ−カルボニルグルタミン酸無水物を順次反応させ、遂次重合により、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸ベンジルエステルが連結したブロック共重合体を調製する。その後、適当な方法により、ポリグルタミン酸のベンジル基を脱保護することにより、該ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸が連結したブロック共重合体を調製できる。ベンジル基の脱保護反応としては、アルカリ条件による加水分解反応や水素添加還元反応が挙げられる。
次に本発明における一般式（２）で示される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の合成方法を説明する。なお、本発明の高分子化合物の製造方法はここに記載の製造方法や後記の実施例・参考例に記載の方法に限定されない。
前記ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体のグルタミン酸側鎖に対し、トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体及び一般式（２）のＲ１３として−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）基を結合反応させることで、本発明に係る高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を調製することができる。該トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体と該−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）基の結合反応方法は、特に限定されるものではなく、先にトリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を結合反応させ、その後、該−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）基を結合反応させても、その逆工程でも良く、同時に結合反応させても良い。
好ましくは、前記ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体に、該トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体をカルボジイミド縮合剤の共存下で縮合反応させる方法が、当該ブロック共重合体に該該トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体と該−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）基を同時に結合させることができることから、有利な反応である。該カルボジイミド縮合剤としては、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）が挙げられる。上記縮合反応の際に、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）等の反応補助剤を用いてもよい。なお、カルボジイミド縮合剤としてジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いた場合、−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）のＲ１５及びＲ１６はシクロへキシル基となる。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）を用いて縮合反応を行った場合、Ｒ１５及びＲ１６はイソプロピル基となる。１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）を用いた場合、−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）のＲ１５及びＲ１６はエチル基と３−ジメチルアミノプロピルの混合置換体となる。
上記反応によりポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体のグルタミン酸側鎖に対し、トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体、及び一般式（２）のＲ１３として−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）基を結合させた後、任意に精製工程を経由し、本発明の高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を合成することができる。
当該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）溶液中で、徐々に薬効成分であるトリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を解離し、放出し続ける性能を有する。すなわち、生体投与において、当該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体はトリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を徐放的に遊離させる物性を備える。一般的に臨床に用いられている低分子薬剤は、投与直後に薬剤の最高血中濃度を示し、その後比較的速やかに体外に排出される。これに対し当該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体から遊離したトリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の血中濃度推移が持続的な体内薬物動態推移をとることを特徴とする製剤である。加えて高分子担体結合体は投与後の体内分布が低分子薬剤とは大きく異なると言われており、従来の薬剤とは全く異なる体内薬物動態挙動を示すものである。このことから、本高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は低分子トリアゾール−３−オン置換レゾルシン製剤とは薬学的に薬効発現特性及び、副作用発現特性が全く異なることが考えられ、トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の臨床上の新しい治療方法を提供できる抗腫瘍性製剤である。
本発明の高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は抗腫瘍剤として使用するものである。当該高分子結合体は注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、散剤等の通常使用されている剤型にて使用される。製剤化に当たり、通常使用されている薬学的に許容される担体、例えば結合剤、滑沢剤、崩壊剤、溶剤、賦形剤、可溶化剤、分散剤、安定化剤、懸濁化剤、保存剤、無痛化剤、色素、香料が使用できる。好ましくは、注射剤、点滴剤としての使用が望まれ、通常、水、生理食塩水、５％ブドウ糖又はマンニトール液、水溶性有機溶媒（例えばグリセロール、エタノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール、クレモフォア等、及びそれらの混合液）並びに水と該水溶性有機溶媒の混合液等が使用される。
本発明の一般式（１）で示される高分子カンプトテシン誘導体及び一般式（２）で示される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は、水中でポリエチレングリコールセグメントを外殻とし薬剤等が結合しているポリグルタミン酸セグメントを内殻とするミセルを形成してもよい。すなわち、本発明の２つの高分子化抗腫瘍剤は、ポリエチレングリコールとポリグルタミン酸が連結したブロック共重合体を担体とした抗腫瘍剤であるが、自己会合体形成により更に分子量の高い高分子体となる。該自己会合体は、好ましくは分子量が１０６程度の高分子量体となり、分子量に依存した体内動態をとる。すなわち半減期の増大や、腫瘍組織への浸透性向上及び腫瘍組織での蓄積といった抗腫瘍剤の薬効発現の効率化に望ましい薬物動態特性が期待される薬剤である。
本発明は、前記一般式（１）で表される高分子化カンプトテシン誘導体と、一般式（２）で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を組み合せた抗腫瘍性医薬組成物であり、これらを同時に、順次に又は間隔をおいて投与する抗腫瘍性医薬組成物に関する。すなわち、本発明の抗腫瘍性医薬組成物は、該高分子化カンプトテシン誘導体と該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の併用療法として使用することができる。本発明において、該高分子化カンプトテシン誘導体と該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は、それぞれを別の製剤として調製され、これを同時に、順次に又は間隔をおいて投与する態様であって良い。また、これらの２つの高分子化医薬製剤を同一梱包として、これらを組み合わせて用いるキットの態様であっても良い。また、該高分子化カンプトテシン誘導体と該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を同一製剤に含有する合剤の態様であっても良い。
なお、該高分子化カンプトテシン誘導体と該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が同時に投与されるとは、前記２つの高分子化薬剤の投与が重複して行われる態様であり、一方の高分子化薬剤の投与中にもう一方の高分子化薬剤を投与することを表す。また、該高分子化カンプトテシン誘導体と該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が順次に投与される態様とは、一方の高分子化薬剤の投与後、間隔をあけずにもう一方の高分子化薬剤を投与することを表す。別の態様として、該高分子化カンプトテシン誘導体と該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が間隔をおいて投与される態様とは、一方の高分子化薬剤の投与後、間隔をあけてもう一方の高分子化薬剤を投与することを表す。ここで間隔とは、任意に設定されて良いが、一方の高分子化薬剤を投与した後、数時間〜数日の間隔であって良い。また、順次に又は間隔をおいて投与する場合において、該高分子化カンプトテシン誘導体と該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は、どちらが先に投与されていても良く、投与順は任意に設定されていて良い。
すなわち、本発明は該高分子化カンプトテシン誘導体と該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の併用療法に関する発明であり、これらの２種類の高分子化薬剤の相互作用に基づく増強された抗腫瘍効果が発揮される併用の投与レジメンであれば、特に投与タイミングや投与順は限定されるものではなく、本発明に含まれる。
本発明において、一般式（１）に示す高分子化カンプトテシン誘導体と、一般式（２）に示す高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の用量は、十分な抗腫瘍効果が奏せられる任意の用量に設定し得る。当該高分子化カンプトテシン誘導体の投与量は、患者の性別、年齢、体格、生理的条件、病態、治療効果等を勘案し適宜設定される。例えば、成人１日当たり、非経口的に、有効成分であるＥＨＣ換算で患者の体表面積当たりの投与量としては０．０１〜５００ｍｇ／ｍ２、好ましくは１〜１００ｍｇ／ｍ２である。一方、当該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の投与量は、患者の性別、年齢、体格、生理的条件、病態、治療効果等を勘案し適宜設定される。例えば、成人１日当たり、非経口的に、有効成分であるトリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体換算で患者の体表面積当たりの投与量としては０．０１〜５００ｍｇ／ｍ２、好ましくは１〜２００ｍｇ／ｍ２である。
該高分子化カンプトテシン誘導体と、該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の併用における投与量の比率または混合比率としては、該高分子化カンプトテシン誘導体のカンプトテシン誘導体結合残基の含有モル当量と、該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体のトリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基の含有モル当量によると、カンプトテシン誘導体結合残基：トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基として、１：１〜２０の範囲で用いられることが好ましい。より好ましくは、１：１〜１０の投与量の比率または混合比率で用いることが望まれる。
本発明の抗腫瘍性医薬組成物は、悪性腫瘍疾患の治療に用いられる。本発明による治療に適用される悪性腫瘍は、特に限定されるものではなく、乳癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、直腸結腸癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝細胞癌、胃癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭部及び頸部の癌、メラノーマ、卵巣癌、胆管癌、中皮腫、及び多発性骨髄腫、等広く一般の癌治療に適用することができる。特に、カンプトテシン誘導体が治療に供せられている非小細胞肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、胃癌（手術不能または再発）、結腸・直腸癌（手術不能または再発）、乳癌（手術不能または再発）、有棘細胞癌、悪性リンパ腫（非ホジキンリンパ腫）の治療に適する。特に、カンプトテシン誘導体による前治療を受けており、前治療のカンプトテシン誘導体に対する感受性が低下した各種癌の化学療法において高い治療効果が期待できるものである。
本発明の抗腫瘍性医薬組成物は、更に他の抗腫瘍剤を組み合せて用いる事もできる。他の抗腫瘍剤は特に限定されるものではなく、抗腫瘍剤や悪性腫瘍治療剤として認可されている医薬品を用いる事ができる。すなわち、シクロホスファミド、イホスファミド、マイトマイシンＣ等のアルキル化剤、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン等の白金錯体、ドキソルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、アムルビシン等のアントラサイクリン系抗腫瘍剤、エトポシド、エトポシドホスフェート、テニポシド等のエトポシド類、パクリタキセル、ドセタキセル等のタキサン類、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン等のビンカアルカロイド類、５―フルオロウラシル、テガフール、テガフール・ウラシル合剤（ＵＦＴ）、テガフール・ギメラシル・オテラシルカルシウム配合剤（ＴＳ−１）、フルツロン、カペシタビン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド等の核酸代謝拮抗剤、メトトレキサート、ペメトレキセド等の葉酸代謝拮抗剤、プレドニゾロン、デキサメタゾン等のステロイド類、トラスツズマブ、セツキシマブ等の抗ＥＧＦＲ抗体、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ラパチニブ等のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤、ソラフェニブ、スニチニブ等のＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ、エベロリムス、テムシロリムス等のｍＴＯＲ阻害剤、ベバシツズマブ等の抗ＶＥＧＦ抗体を用いることができる。
本発明は、前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の、カンプトテシン誘導体の抗腫瘍増強剤としての新たな用途も提供する。イリノテカンやトポテカン等のカンプトテシン誘導体は、強力な抗腫瘍効果を示す化合物であり、幅広い悪性腫瘍に対する治療剤として、臨床にて用いられている。しかしながら、臨床では多様な腫瘍があり、カンプトテシン誘導体に対して応答性が低い腫瘍や、化学療法に対する感受性が低下した腫瘍が存在する。このため、カンプトテシン誘導体による治療効果を高めるための効果増強剤が求められている。
本発明の一般式（２）で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は、この単独使用では腫瘍増殖阻害作用は示さない腫瘍に対しても、カンプトテシン誘導体と併用で用いることにより、カンプトテシン誘導体の単独療法と比較して顕著な抗腫瘍効果を発揮させることができる。
本発明の高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体により効果増強される該カンプトテシン誘導体として、好ましくは、前記一般式（１）で表される高分子化カンプトテシン誘導体である。一般式（１）で表される高分子化カンプトテシン誘導体は、生体に投与すると、高分子化に伴う薬物動態特性に従い腫瘍組織に高濃度で分布し、腫瘍組織部位にて抗腫瘍効果を有する７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＥＨＣ）を徐放し、腫瘍増殖阻害効果を発揮する新たな抗腫瘍製剤である。本発明の一般式（２）で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を、一般式（１）で示される該高分子化カンプトテシン誘導体と併用で用いることにより、該高分子化カンプトテシン誘導体の単独療法と比較して顕著な抗腫瘍効果を発揮させることができる。
高分子化カンプトテシン誘導体の抗腫瘍効果増強剤としての高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体としては、一般式（２）：
Figure 0006461088
 ［式中、Ｒ１１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｕは４５〜４５０の整数を示し、Ａａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｇ、ｈ及びｉはそれぞれ整数であり、ｇ＋ｈ＋ｉは６〜６０の整数を示し、ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が１〜１００％、ｈの割合が０〜６０％、ｉの割合が０〜６０％であり、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）を示し、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐または環状アルキル基もしくは三級アミノ基で置換されていてもよい分岐又は直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、Ｒ１４が１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基であり、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基にＲ１４が結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ１３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体であり、
前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が下記一般式（３）
Figure 0006461088
 ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］であり、前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基が、該レゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した該残基である高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体である。ここで一般式（２）において、Ｒ１１〜Ｒ１８、Ａａ、Ｘ１及びＸ２、ｕ、ｇ、ｈ、ｉは前述と同義である。
また、一般式（１）で表される高分子化カンプトテシン誘導体は、一般式（２）で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体と組み合わせて用いることにより抗腫瘍効果が顕著に増強される。したがって、本発明は、該高分子カンプトテシンを該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体との併用療法で用いる新たな用途も提供する。
本発明の一般式（１）で表される高分子化カンプトテシン誘導体と一般式（２）で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の組み合わせは、カンプトテシン誘導体の治療効果を高めることを可能とするものであり、乳癌、卵巣癌、肺癌、甲状腺癌、骨髄性白血病、肝芽腫、結腸癌、胆嚢癌等に適応可能である。特にカンプトテシン誘導体にて前治療した各種癌の化学療法において高い治療効果が期待できる。
以下、本発明を実施例により更に説明する。ただし、本発明がこれらの実施例に限定されるものではない。なお、本発明品が水溶液中で構成する粒子の大きさ（粒径）を示すガウス分布分析は、Ｚｅｔａ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ／Ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｒ ＮＩＣＯＭＰＴＭ ３８０ＺＬＳ（Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製）にて測定した。
［合成例１］
５−（２，４−ジヒドロキシ−５−イソプロピルフェニル）−４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）−２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン（化合物４（一般式（４）））の合成例
国際公開ＷＯ２００７／１３９９５２号パンフレットの記載に基づき合成した。得られた化合物４の１Ｈ−ＮＭＲデータを示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，ｐｐｍ）：１１．８４１（ｓ，１Ｈ）、９．５０７（ｓ，１Ｈ）、９．４０７（ｓ，１Ｈ）、７．４１７−７．３６６（ｍ，３Ｈ）、６．９２１（ｄｄ，１Ｈ）、６．７６１（ｓ，１Ｈ）、６．４０６（ｄｄ，１Ｈ）、６．２０５（ｓ，１Ｈ）、３．７７７（ｓ，３Ｈ）、２．９１１（ｈｅｐｔ，１Ｈ）、０．８６６（ｄ，６Ｈ）
［合成例２］
一般式（２）で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体（化合物４が結合した高分子化合物；化合物１：一般式（２）においてＲ１１＝メチル基、Ｒ１２＝アセチル基、Ａａ＝トリメチレン基、Ｒ１５＝Ｒ１６＝イソプロピル基、ｇ＋ｈ＋ｉ＝２３、ｕ＝２７３，ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が４０％、ｈの割合が２０％、ｉの割合が４０％）
国際公開ＷＯ２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法に準じ、調製したメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体（分子量１２，０００の片末端がメチル基、他片末端がアミノプロピル基であるメトキシポリエチレングリコールセグメントと重合数が２３のポリグルタミン酸セグメント（末端Ｎアセチル基）からなり、結合基がトリメチレン基であるブロック共重合体）５１９ｍｇ、合成例１により得られた化合物４（式（４）で表される化合物）１５０ｍｇをＤＭＦ１０ｍＬに溶解し、３５℃にて１５分攪拌した後、２５℃にて１時間攪拌した。その後、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）２３４μＬ、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）１３．７ｍｇを加えて、２５℃にて１６時間撹拌した。これに、ＤＩＰＣＩを１１７μＬ追加し、更に４時間攪拌した。反応液を、エタノール２０ｍＬ及びジイソプロピルエーテル８０ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し、室温にて１時間攪拌し、沈析物を濾取して、ジイソプロピルエーテルで洗浄した。得られた沈析物を、アセトニトリル５．０ｍＬ及び水５．０ｍＬに溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、２．０ｍＬ）を加え攪拌し濾過した。得られた濾液中のアセトニトリルを減圧下留去し、次いで凍結乾燥することにより化合物１（５２５ｍｇ）を得た。
化合物１に結合した化合物４の含量は、化合物１に１Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を加えて３７℃で１時間攪拌後、遊離した化合物４の含量を、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で分析し、化合物４にて得られた検量線から求めた量から計算した。その結果、結合した化合物４の含量は１７．２％（ｗ／ｗ）であった。また、１Ｈ−ＮＭＲ法による一般式（２）に係るＲ１３に相当する−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）（Ｒ１５及びＲ１６がイソプロピル基）である基の結合含量は、３．０％（ｗ／ｗ）であった。
化合物１の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、得られた数値は３３ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物１は水中で自己会合しミセル様会合体を形成しているものと考えられた。
［合成例３］
一般式（２）で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体（化合物４の結合した高分子化合物；化合物２：一般式（２）においてＲ１１＝メチル基、Ｒ１２＝アセチル基、Ａａ＝トリメチレン基、Ｒ１５＝Ｒ１６＝イソプロピル基、ｇ＋ｈ＋ｉ＝１０、ｕ＝１１４，ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が４０％、ｈの割合が２０％、ｉの割合が４０％）
国際公開２００６／１２０９１４号パンフレットに記載された方法に準じ、調製したメトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体（分子量５，０００の片末端がメチル基、他片末端がアミノプロピル基であるポリエチレングリコールセグメントと重合数が１０のポリグルタミン酸セグメント（末端アセチル基）からなるブロック共重合体）４７３ｍｇ、合成例１により得られた化合物４（式（４）で表される化合物）１５０ｍｇをＤＭＦ１０ｍＬに溶解し、３５℃にて１５分攪拌した後、２５℃にて１時間攪拌した。その後、ＤＩＰＣＩを２３４μＬ、ＤＭＡＰを１３．７ｍｇを加えて、２５℃にて２２時間撹拌した。ＤＩＰＣＩを１１７μＬ追加し、更に２時間攪拌した。反応液を、酢酸エチル３０ｍＬ及びジイソプロピルエーテル１２０ｍＬの混合溶液にゆっくり滴下し、室温にて２１時間攪拌した後、沈析物を濾取し、ジイソプロピルエーテルで洗浄した。得られた沈析物を、アセトニトリル８．０ｍＬ及び水２．０ｍＬに溶解後、イオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）、２．０ｍＬ）を加え攪拌し濾過した。得られた濾液中のアセトニトリルを減圧下留去し、次いで凍結乾燥した。得られた凍結乾燥体をアセトニトリル２０ｍＬ及び水２０ｍＬに溶解後、その溶液を透析膜に移し、５℃にて一晩透析した後、透析膜中の溶液を回収した。得られた溶液中のアセトニトリルを減圧下留去し、次いで、凍結乾燥することにより化合物２（４６０ｍｇ）を得た。
化合物２に結合した化合物４の含量は、化合物１に１Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を加えて３７℃で１時間攪拌後、遊離した化合物４の含量を、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で分析し、化合物４にて得られた検量線から求めた量から計算した。その結果、結合した化合物４の含量は１８．９％（ｗ／ｗ）であった。また、１Ｈ−ＮＭＲ法による一般式（２）に係るＲ１３に相当する−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）（Ｒ１５及びＲ１６がイソプロピル基）である基の結合含量は、３．０％（ｗ／ｗ）であった。
化合物２の水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を用いてガウス分布分析を行ったところ、得られた数値は２２ｎｍ（ｖｏｌｕｍｅ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ）だった。よって、化合物２は水中で自己会合しミセル様会合体を形成しているものと考えられた。
［合成例４］
一般式（１）で表される高分子化カンプトテシン誘導体（化合物３：一般式（１）においてＲ１＝メチル基、Ｒ２＝アセチル基、Ａ＝トリメチレン基、Ｒ４＝Ｒ５＝イソプロピル基、ｄ＋ｅ＋ｆ＝２３、ｕ＝２７３、ｄ＋ｅ＋ｆに対するｄの割合が５０％、ｅの割合が４０％、ｆの割合が１０％）
国際公開ＷＯ２００４／３９８６９号の記載に基づき、メトキシポリエチレングリコール−ポリグルタミン酸ブロック共重合体（分子量１２，０００の片末端がメチル基、他片末端がアミノプロピル基であるメトキシポリエチレングリコールセグメントとＮ末端がアセチル基で修飾された重合数が２３のポリグルタミン酸セグメントであり、結合基がトリメチレン基であるブロック共重合体に、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＥＨＣ）をジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）及びＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を用いて反応させ、次いでイオン交換樹脂（ダウケミカル製ダウエックス５０（Ｈ＋）にて処理することにより、化合物３を得た。
得られた化合物３を、１Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液、室温、１０分で加水分解した後、遊離するＥＨＣをＨＰＬＣ法により定量分析して、ＥＨＣ含量を求めたところ、２１％（ｗ／ｗ）であった。また、１Ｈ−ＮＭＲ法により一般式（１）に係るＲ３に相当する−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）（Ｒ４及びＲ５がイソプロピル基である基）の結合含量を測定したところ、結合含量は５．６％（ｗ／ｗ）であった。
［試験例１］ 酵素非存在下における化合物１及び化合物２からの薬剤放出試験
化合物１及び化合物２をそれぞれＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水；ｐＨ７．１）に１ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、３７℃にてインキュベートした。化合物１及び２からＰＢＳ溶液中に放出された化合物４を経時的にＨＰＬＣにて分析し、標準曲線を用いて定量した。化合物１及び２の薬剤含有量から求めた全薬剤量に対する、遊離した化合物４の割合を経時的に計測し、その結果を図１及び図２に示した。
図１及び図２から明らかなように、化合物１及び化合物２は、加水分解酵素が存在しなくても化合物４を放出した。ブロック共重合体の組成によって、化合物４の放出速度は変化することが認められ、ポリエチレングリコールセグメント及びポリグルタミン酸セグメントの重合数が大きい分子量の大きい担体を用いた場合、化合物４の放出速度が抑制される傾向であった。したがって、担体分子量により、薬剤放出速度が制御できることが示された。
［実施例１］ 高分子化抗腫瘍剤の抗腫瘍効果試験
マウス皮下で継代しているマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ３８を約２ｍｍ角のブロックにし、套管針を用いて有毛マウスの背側部皮下に移植した。腫瘍移植後１６日目に、化合物１及び化合物３を順次の連続して投与する併用投与、化合物１の単独投与、化合物３の単独投与にて、それぞれ静脈内に単回投与した。各投与群における投与量を表１に示した。なお、各供試化合物は、５％ブドウ糖溶液若しくは生理食塩水で溶解して使用した。
［表１］
Figure 0006461088
投与開始日及び投与開始後の腫瘍体積を、腫瘍の長径（Ｌ（ｍｍ））及び短径（Ｗ（ｍｍ））をノギスで経時的に計測し、（Ｌ×Ｗ２）／２の式により腫瘍体積を計算して、それぞれの投与群における投与開始日の腫瘍体積に対する相対腫瘍体積の変化を図３に示した。
抗腫瘍活性試験の結果、本発明に係る高分子化１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体である化合物１と高分子化カンプトテシン誘導体である化合物３とを併用した群（実施例群）において、高分子化カンプトテシン誘導体である化合物３の単独投与及び高分子化１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体である化合物１の単独投与群と比較して、同じ投与量においてより一層の強い抗腫瘍効果が示された。特に、高分子化１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体である化合物１は、単独投与では抗腫瘍効果が全く認められなかった。したがって、本発明に係る化合物１と化合物３の併用は、各化合物の治療効果の相加的な上乗せ効果ではなく、化合物１と化合物３の薬理作用が相互に関連して強力な腫瘍増殖阻害活性を発揮したと考えられ、相乗的な効果を奏するものと考察される。
また、高分子化１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体である化合物１は、単独では抗腫瘍効果を発揮しないものの、高分子化カンプトテシン誘導体である化合物３の抗腫瘍効果を顕著に増強させる結果を示したことから、カンプトテシン誘導体の抗腫瘍効果増強剤として機能することが示された。

Claims (7)

  1. ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を用いた高分子化カンプトテシン誘導体と、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を用いた高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を含む医薬組成物であって、
    前記高分子化カンプトテシン誘導体は、一般式（１）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｒ１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５〜４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ、ｅ及びｆはそれぞれ整数であり、ｄ＋ｅ＋ｆは６〜６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆに対するｄの割合が１〜１００％、ｅの割合が０〜６０％、ｆの割合が０〜６０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３は−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）を示し、Ｒ４及びＲ５は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐若しくは直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化カンプトテシン誘導体であり、
    前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体は、一般式（２）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｒ１１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｕは４５〜４５０の整数を示し、Ａａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｇ、ｈ及びｉはそれぞれ整数であり、ｇ＋ｈ＋ｉは６〜６０の整数を示し、ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が１〜１００％、ｈの割合が０〜６０％、ｉの割合が０〜６０％であり、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）を示し、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐または環状アルキル基もしくは三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、Ｒ１４が１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基であり、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基にＲ１４が結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ１３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体であり、
    前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が、下記一般式（３）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］であり、前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基が、該レゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した該残基である高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体であり、前記高分子化カンプトテシン誘導体におけるカンプトテシン誘導体残基の含有モル当量と前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基の含有モル当量の比が、１：１〜２０であり、前記高分子化カンプトテシン誘導体と前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体とを同時に、順次に又は間隔をおいて投与する、医薬組成物を含む抗腫瘍剤。
  2. 前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基が、Ｘ１がイソプロピル基であり、Ｘ２が５−（Ｎ−メチルインドリル）基または４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル基である、請求項１に記載の抗腫瘍剤。
  3. カンプトテシン誘導体に対する感受性が低下した悪性腫瘍の治療に用いる、請求項１または２に記載の抗腫瘍剤。
  4. 一般式（２）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｒ１１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｕは４５〜４５０の整数を示し、Ａａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｇ、ｈ及びｉはそれぞれ整数であり、ｇ＋ｈ＋ｉは６〜６０の整数を示し、ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が１〜１００％、ｈの割合が０〜６０％、ｉの割合が０〜６０％であり、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）を示し、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐または環状アルキル基もしくは三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、Ｒ１４が１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基であり、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基にＲ１４が結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ１３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を含む、カンプトテシン誘導体の抗腫瘍効果増強剤であって、
    前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が、下記一般式（３）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］であり、前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基が、該レゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した該残基であり、
    前記カンプトテシン誘導体が、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を用いた高分子化カンプトテシン誘導体であり、該高分子化カンプトテシン誘導体が、一般式（１）
    Figure 0006461088
    ［式中、Ｒ １ は水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５〜４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ、ｅ及びｆはそれぞれ整数であり、ｄ＋ｅ＋ｆは６〜６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆに対するｄの割合が１〜１００％、ｅの割合が０〜６０％、ｆの割合が０〜６０％であり、Ｒ ２ は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ ３ は−Ｎ（Ｒ ４ ）ＣＯＮＨ（Ｒ ５ ）を示し、Ｒ ４ 及びＲ ５ は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ ３ 基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表されるカンプトテシン誘導体であり、
    前記高分子化カンプトテシン誘導体におけるカンプトテシン誘導体残基の含有モル当量と前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基の含有モル当量の比が、１：１〜２０である、抗腫瘍効果増強剤。
  5. １，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基が、Ｘ１がイソプロピル基であり、Ｘ２が５−（Ｎ−メチルインドリル）基または４−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）フェニル基である、請求項４に記載の抗腫瘍効果増強剤。
  6. ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を用いた高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体と組み合わせて用いることを特徴とする、ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を用いた高分子化カンプトテシン誘導体を含有する抗腫瘍剤であって、該高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が、一般式（２）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｒ１１は水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｕは４５〜４５０の整数を示し、Ａａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｇ、ｈ及びｉはそれぞれ整数であり、ｇ＋ｈ＋ｉは６〜６０の整数を示し、ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が１〜１００％、ｈの割合が０〜６０％、ｉの割合が０〜６０％であり、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）を示し、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐または環状アルキル基もしくは三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、Ｒ１４が１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基であり、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基にＲ１４が結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ１３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造であり、
    前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が、下記一般式（３）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］であり、前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基におけるレゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した該残基である。]で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体であり、
    前記ポリエチレングリコールセグメントとポリグルタミン酸セグメントが連結したブロック共重合体を用いた高分子化カンプトテシン誘導体が、一般式（１）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｒ１は水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５〜４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ、ｅ及びｆはそれぞれ整数であり、ｄ＋ｅ＋ｆは６〜６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆに対するｄの割合が１〜１００％、ｅの割合が０〜６０％、ｆの割合が０〜６０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３は−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）を示し、Ｒ４及びＲ５は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］で表され、
    前記高分子化カンプトテシン誘導体におけるカンプトテシン誘導体残基の含有モル当量と前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基の含有モル当量の比が、１：１〜２０である、前記抗腫瘍剤。
  7. 一般式（１）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｒ１は水素原子または置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｔは４５〜４５０の整数を示し、Ａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｄ、ｅ及びｆはそれぞれ整数であり、ｄ＋ｅ＋ｆは６〜６０の整数を示し、ｄ＋ｅ＋ｆに対するｄの割合が１〜１００％、ｅの割合が０〜６０％、ｆの割合が０〜６０％であり、Ｒ２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ３は−Ｎ（Ｒ４）ＣＯＮＨ（Ｒ５）を示し、Ｒ４及びＲ５は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐若しくは環状アルキル基または三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基に７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンが結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造である。］
    で表される高分子化カンプトテシン誘導体と、一般式（２）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｒ１１は水素原子又は置換基を有していてもよい（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を示し、ｕは４５〜４５０の整数を示し、Ａａは（Ｃ１〜Ｃ６）アルキレン基であり、ｇ、ｈ及びｉはそれぞれ整数であり、ｇ＋ｈ＋ｉは６〜６０の整数を示し、ｇ＋ｈ＋ｉに対するｇの割合が１〜１００％、ｈの割合が０〜６０％、ｉの割合が０〜６０％であり、Ｒ１２は水素原子または（Ｃ１〜Ｃ４）アシル基を示し、Ｒ１３は−Ｎ（Ｒ１５）ＣＯＮＨ（Ｒ１６）を示し、Ｒ１５及びＲ１６は同一でも異なっていてもよい（Ｃ３〜Ｃ６）の分岐または環状アルキル基もしくは三級アミノ基で置換されていてもよい分岐または直鎖の（Ｃ１〜Ｃ５）アルキル基を示し、Ｒ１４が１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基であり、前記ポリグルタミン酸セグメントは、側鎖カルボキシ基にＲ１４が結合したグルタミン酸単位と、側鎖カルボキシ基にＲ１３基が結合したグルタミン酸単位及び側鎖カルボキシ基が遊離カルボキシ基であるグルタミン酸単位が、それぞれ独立して、ランダムに配列したポリグルタミン酸構造であり、
    前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体が下記一般式（３）
    Figure 0006461088
     ［式中、Ｘ１は（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖若しくは分岐のアルキル基または−ＣＯＮＲ１７Ｒ１８を示し、前記Ｒ１７及びＲ１８は同一でも異なっていてもよい（Ｃ１〜Ｃ６）の直鎖状、分岐状または環状アルキル基であり、Ｘ２は置換基を有していてもよいアリール基を示す。］であり、前記１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基におけるレゾルシン誘導体の水酸基がエステル結合した該残基である。］
    で表される高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体の組合せを含む医薬キットであって、
    前記高分子化カンプトテシン誘導体におけるカンプトテシン誘導体残基の含有モル当量と前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体における１，２，４−トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体結合残基の含有モル当量の比が、１：１〜２０であり、前記高分子化カンプトテシン誘導体と前記高分子化トリアゾール−３−オン置換レゾルシン誘導体を、同時に、順次に又は間隔をおいて投与する、腫瘍の治療のための医薬キット。
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