WO2015096640A1 - 含噻唑基雷帕霉素类衍生物及其应用 - Google Patents

含噻唑基雷帕霉素类衍生物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
WO2015096640A1
WO2015096640A1 PCT/CN2014/093929 CN2014093929W WO2015096640A1 WO 2015096640 A1 WO2015096640 A1 WO 2015096640A1 CN 2014093929 W CN2014093929 W CN 2014093929W WO 2015096640 A1 WO2015096640 A1 WO 2015096640A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
group
compound
atom number
formula
alkyl
Prior art date
Application number
PCT/CN2014/093929
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
谢立君
程元荣
黄捷
李邦良
潘福生
李夸良
余辉
杨国新
金东伟
白海波
吕裕斌
Original Assignee
福建省微生物研究所
杭州华东医药集团新药研究院有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 福建省微生物研究所, 杭州华东医药集团新药研究院有限公司 filed Critical 福建省微生物研究所
Publication of WO2015096640A1 publication Critical patent/WO2015096640A1/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D498/18—Bridged systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia

Definitions

  • the present invention belongs to the field of medical technology and relates to novel rapamycin derivatives, optically active substances thereof and pharmaceutically acceptable salts thereof, including a process for the preparation thereof and a pharmaceutical composition containing the same.
  • the invention also relates to the use of the compounds and derivatives thereof for the preparation of a medicament for the treatment and/or prevention of cancer.
  • Rapamycin is a multifunctional drug produced by fermentation of Streptomyces hygroscopicus FC904, now known as sirolimus. Rapamycin is a macrolide compound that is used as an organ transplant anti-rejection drug in clinical practice and later as a drug-coated stent for the treatment of coronary artery restenosis. It is a mammalian intracellular serine/threonine. Protein kinase mTOR (mammalian target of rapamycin, mammalian target of rapamycin). mTOR is the central regulator of cell growth and proliferation. The mTOR pathway is dysregulated in various tumor cells.
  • the mTOR inhibitor developed as a target can effectively inhibit tumor cell proliferation, induce tumor cell apoptosis and reverse cytotoxic drug resistance. Medicinal. Therefore, several chemical semi-synthetic derivatives of rapamycin are now approved by the FDA for late use. Cancer treatment; representative drugs are: Temsirolimus (CCI-779) developed by Wyeth, approved by the FDA for advanced kidney cancer; Everolimus developed by Novartis, approved by the FDA in 2009 For the treatment of advanced kidney cancer. Deferolimus was developed by Ariad and has no immunosuppressive activity. The drug was approved by the FDA in 2005 for rapid treatment of soft tissue and skeletal malignancies. In recent years, it has been found to have the effect of prolonging the lifespan of mammals, and has a very broad application prospect.
  • the present invention relates to a compound of the formula I, a derivative thereof, an optical isomer thereof, and a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • X is "single bond", or -O(CH 2 )n-;
  • n is an integer of 2-4;
  • R 1 is hydrogen, an alkyl group having 1 to 10 carbon atoms, an alkenyl group having 3 to 7 cycloalkyl groups, 2 to 10 C atoms or an alkynyl group having 2 to 10 C atoms;
  • R 2 is hydrogen, halogen, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, hydroxy, carboxy, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, N-alkylamino, N,N-dialkylamino, Alkylthio, alkylsulfinyl, alkylsulfonyl, alkoxymethyl, alkoxyethyl, alkyl acyl, carbamoyl, N-alkylcarbamoyl, N,N-dioxane a carbamoyl group, an aminosulfonyl group, an N-alkylaminosulfonyl group, an N,N-dialkylaminosulfonyl group or an alkylenedioxy group having a C atom number of 1-3, wherein the alkyl group C The number of atoms is 1-4, and the number of C atoms of the alkoxy group is 1-4.
  • X is "single bond” or -O(CH 2 )n-;
  • n is an integer of 2-4;
  • R 1 is hydrogen, an alkyl group having a C atom number of 1-3 or a C atom number of 3-7 cycloalkyl;
  • R 2 is hydrogen, halogen, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, hydroxy, carboxy, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, N-alkylamino, N,N-dialkylamino, Alkylthio, alkylsulfonyl, alkoxymethyl, alkoxyethyl, carbamoyl, N-alkylcarbamoyl, N,N-dialkylcarbamoyl, N-alkylamino a sulfonyl group, an N,N-dialkylaminosulfonyl group or an alkylenedioxy group having a C atom number of from 1 to 3, wherein the alkyl group has a C atom number of from 1 to 4, and the alkoxy group has C The number of atoms is 1-4.
  • X is "single bond” or -O(CH 2 )n-;
  • n is an integer of 2-4;
  • R 1 is an alkyl group having a C atom number of 1-3;
  • R 2 is hydrogen, halogen, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, hydroxy, carboxy, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, N-alkylamino, N,N-dialkylamino, Alkylthio, alkylsulfonyl, alkoxymethyl, alkoxyethyl, carbamoyl, N-alkylcarbamoyl, N,N-dialkylcarbamoyl, N-alkylamino a sulfonyl group, an N,N-dialkylaminosulfonyl group or an alkylenedioxy group having a C atom number of from 1 to 3, wherein the alkyl group has a C atom number of from 1 to 4, and the alkoxy group has C The number of atoms is 1-4.
  • X is "single bond"
  • R 1 is an alkyl group having a C atom number of 1-3;
  • R 2 is hydrogen, halogen, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, hydroxy, carboxy, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, N-alkylamino, N,N-dialkylamino, Alkylthio, alkylsulfonyl, alkoxymethyl, alkoxyethyl, carbamoyl, N-alkylcarbamoyl, N,N-dialkylcarbamoyl, N-alkylamino a sulfonyl group, an N,N-dialkylaminosulfonyl group or an alkylenedioxy group having a C atom number of from 1 to 3, wherein the alkyl group has a C atom number of from 1 to 4, and the alkoxy group has C The number of atoms is 1-4.
  • X is -O(CH 2 )n-;
  • n 2;
  • R 1 is an alkyl group having a C atom number of 1-3;
  • R 2 is hydrogen, halogen, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, hydroxy, carboxy, nitro, cyano, alkyl, alkoxy, N-alkylamino, N,N-dialkylamino, Alkylthio, alkylsulfonyl, alkoxymethyl, alkoxyethyl, carbamoyl, N-alkylcarbamoyl, N,N-dialkylcarbamoyl, N-alkylamino a sulfonyl group, an N,N-dialkylaminosulfonyl group or an alkylenedioxy group having a C atom number of from 1 to 3, wherein the alkyl group has a C atom number of from 1 to 4, and the alkoxy group has C The number of atoms is 1-4.
  • R 1 is preferably a methyl group.
  • a pharmaceutical composition comprising a compound of the formula I according to the invention, a derivative thereof, an optical isomer thereof and a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient and a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the cancer is a solid tumor or a non-solid tumor.
  • cancer is breast, lung, colon, rectum, stomach, prostate, bladder, pancreas Or ovarian cancer.
  • the cancer is cervical cancer, renal cancer, leukemia, melanoma, nasopharyngeal cancer or gastric cancer.
  • the amino compound A-2 is formed from the compound A-1, and the compound A-2 and the quaternary ammonium salt compound A-3 are subjected to an organic base catalytic reaction to obtain a formula I. compound of;
  • R 1 , R 2 , X and n are as defined above, respectively.
  • the derivatives of the invention may exist in stereoisomeric forms which may be enantiomers or diastereomers.
  • the invention relates both to enantiomers or diastereomers, as well as to their respective mixtures, which, like diastereomers, can be separated into stereoisomeric individual components according to methods known per se.
  • derivatives of the compounds of the invention may be prodrugs.
  • the prodrug itself may have weaker activity or even no activity, but after administration, it is converted to the corresponding biologically active form under physiological conditions (e.g., by metabolism, solvolysis, or otherwise).
  • the invention also includes esters of the compounds of the invention.
  • halogen as used herein, unless otherwise indicated, means a fluorine, chlorine, bromine or iodine atom;
  • alkyl means a straight or branched substituted or unsubstituted alkyl group;
  • alkylene means Straight chain or branch a substituted or unsubstituted alkylene group;
  • cycloalkyl means a substituted or unsubstituted cycloalkyl group;
  • a heteroaryl group means a substituted or unsubstituted heteroaryl group which includes one or more selected from O
  • the hetero atom of N and S may be monocyclic or polycyclic, and the cyclic system is aromatic, and examples thereof include imidazolyl, pyridyl, pyrimidinyl, (1, 2, 3)- and (1, 2,4)-triazolyl, pyrazinyl, tetrazolyl, furyl, thienyl, isoxazolyl, oxazolyl,
  • the present invention includes a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a rapamycin compound of the formula I, an optical isomer thereof, and a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, and a pharmaceutically acceptable excipient.
  • the pharmaceutically acceptable excipient refers to any diluent, adjuvant and/or carrier that can be used in the pharmaceutical field.
  • the derivatives of the present invention can be used in combination with other active ingredients as long as they do not cause other adverse effects such as allergic reactions.
  • compositions of the present invention may be formulated in several dosage forms containing some of the excipients commonly used in the pharmaceutical arts; for example, oral preparations (such as tablets, capsules, solutions or suspensions); injectable preparations (such as Injectable solutions or suspensions, or injectable dry powders, ready to use by injecting water before injection; topical preparations (such as ointments or solutions).
  • oral preparations such as tablets, capsules, solutions or suspensions
  • injectable preparations such as Injectable solutions or suspensions, or injectable dry powders, ready to use by injecting water before injection
  • topical preparations such as ointments or solutions.
  • the carrier used in the pharmaceutical composition of the present invention is a common type available in the pharmaceutical field, including: a binder for an oral preparation, a lubricant, a disintegrant, a solubilizer, a diluent, a stabilizer, a suspending agent, and a non-pigment. , flavoring agents, etc.; preservatives, solubilizers, stabilizers, etc. for injectable preparations; bases, diluents, lubricants, preservatives, etc. for topical preparations.
  • the pharmaceutical preparations can be administered orally or parenterally (e.g., intravenously, subcutaneously, intraperitoneally, or topically), and if certain drugs are unstable under gastric conditions, they can be formulated into enteric coated tablets.
  • the compound of the present invention has an activity of inhibiting tumor cell growth in vitro, and therefore, it can be used as a medicament for preparing a cancer for treating and/or preventing cancer.
  • a cancer for treating and/or preventing cancer.
  • the compounds of the invention are also expected to be useful in the treatment of other cell proliferative disorders such as psoriasis, benign prostatic hypertrophy, atherosclerosis and restenosis.
  • the rapamycins of the invention will have activity against leukemia, malignant lymphoma, and solid tumors such as cancer and sarcoma in tissues such as liver, kidney, prostate, and pancreas.
  • the derivative according to the present invention can be used as an active ingredient for the preparation of a medicament for treating and/or preventing various cancers, and the present invention also provides a method for treating or preventing the above-mentioned diseases, comprising administering a therapeutically effective amount to a patient suffering from or susceptible to the disease.
  • the clinical dose of the rapamycin compound of Formula I for use in a patient must depend on the subject being treated, the particular route of administration, the severity of the condition being treated, and the optimal dosage will be determined by the physician treating the particular patient.
  • the active compounds of the invention may be used as the sole anticancer drug or may be used in combination with one or more other antineoplastic agents. Combination therapy is achieved by administering the individual therapeutic components simultaneously, sequentially or separately.
  • Compound A-1 is reacted in steps 2-4 to form amino compound A-2.
  • the compound A-2 and the quaternary ammonium salt compound A-3 are subjected to an organic base-catalyzed reaction to obtain a derivative of the formula I.
  • n, R 1 , R 2 and X are as defined in the Summary of the Invention.
  • A-2 is prepared according to the method described in the first step: using A-1 as a raw material, reacting with trifluoromethanesulfonic anhydride to obtain B-1, and then reacting with sodium azide to obtain B- 2, finally restored to A-2.
  • A-2 is prepared according to the method described in Step 2: A-1 is used as a raw material, and etherification, azide and reduction are carried out to obtain A-2.
  • the preparation method of the invention is simple, and the prepared compounds all have significant antitumor activity.
  • the compounds of the starting materials A-1, A-3 and C-1 can be prepared by a method well known to those skilled in the art of organic chemistry or are commercially available.
  • the preparation method of the invention is simple, and the prepared compound has good antitumor activity.
  • the nuclear magnetic resonance spectrum of the compound prepared in the present invention was measured by Bruker ARX-300, and the mass spectrum was measured by Agilent 1100 LC/MSD; the reagents used were either analytically pure or chemically pure.
  • Step A Preparation of C-40 triflate rapamycin
  • Rapamycin (11 mmol, 10 g) was added to 50 mL of dichloromethane solution. After the addition was completed, it was cooled to 0 ° C, 2,6-lutidine (52 mmol, 5.6 g) was added, and then trifluoromethane was added dropwise. Anhydride (17.7 mmol, 5 g) was incubated for 2 hours. The reaction was completed. After adding 1 mL of water, stirring was continued for 10 minutes. The reaction mixture was poured into water (80 mL), extracted with dichloromethane, and the combined extracts were washed with water and dried over anhydrous sodium sulfate. The oil was triturated with 9.3 mg of triflate rapamycin in a yield of 79.5%, MS: 1068.5 (M+Na).
  • Step B Preparation of C-40 azide rapamycin
  • the triflate rapamycin (8.6 mmol 9.0 g) was gradually added to 130 mL of acetone solution, and an aqueous solution of sodium azide (34.4 mmol, 2.24 g, 5 mL of H 2 O) was added at room temperature. After completion, the reaction was carried out at room temperature for 16 hours. After the completion of the reaction, the reaction mixture was poured into a large amount of water, extracted with ethyl acetate, evaporated, evaporated, evaporated, evaporated, MS: 961 (M+Na).
  • Azide rapamycin (3.2 mmol, 3.0 g) was added to a tetrahydrofuran solution, and triphenylphosphine (12.8 mmol, 3.35 g) was added at room temperature. After the addition was completed, the mixture was stirred and heated to 50 ° C for 2 hours. 1 mL of distilled water was added dropwise, and the reaction was continued for 6 hours. After the completion of the reaction, the reaction mixture was cooled to EtOAc.
  • Step D Preparation of 40-N-(6-chloro-3-methylbenzothiazol-2-ylidene)-amino rapamycin
  • Examples 2-5 were prepared according to the procedure of Example 1 by selecting the appropriate starting materials and reagents.
  • the technology is well versed in this field. Personnel can select the appropriate materials and reagents according to the needs of the examples.
  • Step A Preparation of 40-O-(2-bromoethyl)oxyrapamycin
  • Rapamycin (3.3 mmol, 3 g) was added to 60 mL of toluene solution, 12 g of 2-bromoethyl trifluoromethanesulfonate and 4 mL of diisopropylethylamine (DIPEA) were added, and the temperature was raised to 60 ° C. After the completion of the reaction, the reaction mixture was poured into 100 mL of water, and washed with water, diluted with hydrochloric acid and saturated sodium hydrogen carbonate and brine, and dried over anhydrous sodium sulfate. The oil was evaporated to dryness (yield: 41 g,yield: 41.7%, MS: 1044.6 (M+Na).
  • DIPEA diisopropylethylamine
  • Step B Preparation of 40-O-(2-azidoethyl)oxyrapamycin
  • Step D 40-O-(2-(3-methylbenzothiazole-2-imino)ethyl)oxyrapamycin (RAP-T6)
  • lymphocyte transformation assay LTT
  • the spleen of clean-grade Kunming mice (20-22 g) was aseptically placed in a dish containing PBS buffer, and the spleen was gently squeezed through a 100-mesh screen with a glass syringe handle. After the pipette is fully blown, the cell liquid is aspirated into a 15 ml centrifuge tube, centrifuged for 5 minutes (1000 r/min), and the precipitate is washed twice with 1640 medium, centrifuged for 5 minutes (1000 r/min), and the precipitate is adjusted with 1640 medium.
  • the cell concentration was 1 x 107 cells/ml.
  • Concanavalin A (ConA)-induced lymphocyte transformation in mice weigh the powder to be tested, dissolved in absolute ethanol as the sample mother liquor, and then use 1640 culture solution to prepare test solutions of various concentrations, add 50 ⁇ l
  • the sample test solution was added to a 96-well cell culture plate, and 100 ⁇ l of the above mouse spleen lymphocyte suspension was added thereto, and 50 ⁇ l of ConA (20 ⁇ g/ml) was separately added.
  • 100 ⁇ l of the cell suspension and 100 ⁇ l of the 1640 medium were used as a blank control, and 100 ⁇ l of the cell suspension and 100 ⁇ l of ConA were added as a ConA control.
  • the 96-well cell culture plate was cultured at 37 ° C for 72 hours in a 5% CO 2 incubator. Add 4 ⁇ l of MTT (5 mg/ml) to each well 4 hours before termination of culture, continue to culture for 4 hours, centrifuge for 10 minutes (4000 r/min), discard the supernatant, and add 150 ⁇ l of dimethyl sulfoxide (DMSO) per well.
  • the plate reader measures the light absorption value (OD 570 ) of the sample and calculates the inhibition rate of the sample on the lymphocyte reaction I:
  • the immunosuppressive activity of the compounds is shown in Table 2.
  • Example 1 and Examples 2 It has no immunosuppressive activity at different concentration gradients.
  • Example 3 has no immunosuppressive activity at low concentrations, while high concentration is significantly lower than rapamycin activity.
  • the immunological activities of Example 4 and Example 5 were weaker than rapamycin.
  • cervical cancer cells CasKi renal cancer cells SK-NEP-1, human leukemia cells HL-60, human malignant melanoma cells A-375, human nasopharyngeal carcinoma cells CNE2 and human gastric cancer cells 7901 cells
  • the strain was resuscitated and passaged 2-3 times to stabilize cell viability for in vitro cell viability assays.
  • the suspended cells do not need to be digested, the adherent cells trypsin (0.25%) is digested, the serum-containing cell culture solution is added to terminate the digestion, and the cell liquid is transferred to a centrifuge tube by a pipette, centrifuged at 1500 r/min for 3 min, and gently discarded.
  • the culture solution was added, and the cells were mixed by blowing, counted, 5000-10000 cells/well of adherent cells, 20,000 cells/well of suspension cells, added to a 96-well plate, cultured at 37 ° C, 5% CO 2 , and cultured for 24 cells.
  • the test drug was added after an hour.
  • test sample As a mother liquid with dimethyl sulfoxide, and then dilute the test sample with the cell culture solution: take 10 ul of the sample mother liquid, add 990 ul of the cell culture solution, and dilute the sample to the test concentration.
  • the sample dilutions were added to the cell culture medium which had been cultured in a 96-well plate for 24 hours, and each well was added to 3 wells, and a blank control (no drug treatment) was placed.
  • the 96-well plate was further cultured at 37 ° C, 5% CO 2 for 72 h, and 20 ⁇ L of MTT (tetrazole) (5 mg/mL) was added to each well.
  • the IC 50 value of the drug can be determined by the Bliss method.
  • the IC 50 ( ⁇ mol/L) of the strain is shown in Table 3.
  • the compound of the formula I to be protected by the present invention has no immunosuppressive activity or low immunosuppressive activity and exhibits superior anticancer activity, and the compound of the example is applied to most cancerous strains.
  • the antitumor activity is stronger than rapamycin.
  • Example 2 has no immunological activity, but the antitumor activity against SK-NEP-1 is about 30 times higher than that of rapamycin. Therefore, the compound of the present invention has a good potential application prospect, and it is more likely to develop no or A novel rapamycin candidate compound with low immunosuppressive activity but strong antitumor activity.
  • the compounds of the present invention have strong anticancer activity against a wide range of cancers including cervical cancer, renal cancer, leukemia, melanoma, nasopharyngeal cancer or gastric cancer, in the treatment of solid tumors and non-solid tumors. Both have good application prospects.

Abstract

本发明涉及一种雷帕霉素类衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐。本发明还涉及上述化合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途，以及所述雷帕霉素类衍生物的制备方法。

Description

含噻唑基雷帕霉素类衍生物及其应用 技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及新的雷帕霉素类衍生物、其光学活性体及其药学上可接受的盐，包括它们的制备方法以及含有所述化合物的药物组合物。本发明还涉及该化合物及其衍生物用于制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。
背景技术
恶性肿瘤严重危害人类健康。全球每年肿瘤新发病人数超过1200万人，我国每年因恶性肿瘤死亡的人数约有130万人。现有抗肿瘤药物的临床应用使肿瘤在一定程度上得到了抑制，然而，对危害人类生命健康最严重的恶性肿瘤的治疗仍未能达到满意的效果。面对巨大的用药人群，急需开发新型靶向抗肿瘤药物。
雷帕霉素(rapamycin)是由吸水链霉菌FC904(Streptomyces hygroscopicus FC904)发酵产生的多功能药物，现称西罗莫司(sirolimus)。雷帕霉素是大环内酯类化合物，作为器官移植抗排斥药物应用于临床，后来又作为治疗冠状动脉再狭窄的药物涂层支架应用于临床；它是哺乳动物细胞内丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶mTOR(mammalian target of rapamycin，哺乳动物雷帕霉素靶位)抑制剂。mTOR作为细胞生长增生的中心调控者，人体多种肿瘤细胞中可见mTOR通路的失调，以其为靶点开发的mTOR抑制剂可有效抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡和逆转细胞毒药物耐药性。因此，雷帕霉素的多个化学半合成衍生物现已由FDA批准应用于晚期 癌症的治疗；其中代表性的药物有：惠氏制药(Wyeth)开发的Temsirolimus(CCI-779)，已被FDA批准治疗晚期肾癌；诺华公司(Novartis)研发的Everolimus，于2009年被FDA批准用于晚期肾癌治疗。Deferolimus为Ariad公司研发，无免疫抑制活性。该药于2005年由FDA经快速审批通道批准用于治疗软组织和骨骼恶性肿瘤。近年来又发现它具有延长哺乳动物寿命的作用，有十分广阔的应用前景。
相关研究表明，在上述西罗莫司衍生物中，以C40位经化学半合成方法得到的衍生物抗肿瘤活性突出，且免疫抑制活性较低，本发明人在参考文献的基础上，设计合成了一系列雷帕霉素类衍生物，经体外免疫抑制活性测试和抗肿瘤活性筛选，结果表明具有无或低免疫抑制活性且具有强抗肿瘤活性。
发明内容
本发明涉及通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
Figure PCTCN2014093929-appb-000001
其中，
X为“单键”、或-O(CH2)n-；
n为2-4的整数；
R1为氢、C原子数为1-10的烷基、C原子数为3-7环烷基、C原子数为2-10的烯基或C原子数为2-10的炔基；
R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、羧基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、烷基硫基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、烷氧基甲基、烷氧基乙基、烷基酰基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、氨基磺酰基、N-烷基氨基磺酰基、N，N-二烷基氨基磺酰基或C原子数为1-3的亚烷基二氧基，其中所述烷基的C原子数为1-4，所述烷氧基的C原子数为1-4。
通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
其中，
X为“单键”或-O(CH2)n-；
n为2-4的整数；
R1为氢、C原子数为1-3的烷基或C原子数为3-7环烷基；
R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、羧基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、烷基硫基、烷基磺酰基、烷氧基甲基、烷氧基乙基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、N-烷基氨基磺酰基、N，N-二烷基氨基磺酰基或C原子数为1-3的亚烷基二氧基，其中所述烷基的C原子数为1-4，所述烷氧基的C原子数为1-4。
通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
其中，
X为“单键”或-O(CH2)n-；
n为2-4的整数；
R1为C原子数为1-3的烷基；
R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、羧基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、烷基硫基、烷基磺酰基、烷氧基甲基、烷氧基乙基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、N-烷基氨基磺酰基、N，N-二烷基氨基磺酰基或C原子数为1-3的亚烷基二氧基，其中所述烷基的C原子数为1-4，所述烷氧基的C原子数为1-4。
通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
其中，
X为“单键”；
R1为C原子数为1-3的烷基；
R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、羧基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、烷基硫基、烷基磺酰基、烷氧基甲基、烷氧基乙基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、N-烷基氨基磺酰基、N，N-二烷基氨基磺酰基或C原子数为1-3的亚烷基二氧基，其中所述烷基的C原子数为1-4，所述烷氧基的C原子数为1-4。
通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
其中，
X为-O(CH2)n-；
n为2；
R1为C原子数为1-3的烷基；
R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、羧基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、烷基硫基、烷基磺酰基、烷氧基甲基、烷氧基乙基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、N-烷基氨基磺酰基、N，N-二烷基氨基磺酰基或C原子数为1-3的亚烷基二氧基，其中所述烷基的C原子数为1-4，所述烷氧基的C原子数为1-4。
通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
40-N-(6-氯-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T1)
40-N-(5-氯-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T2)
40-N-(3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T3)
40-N-(4-氟-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T4)
40-N-(6-氟-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T5)
40-O-(2-(3-甲基苯并噻唑-2-亚胺基)乙基)氧雷帕霉素(RAP-T6)
其中R1优选为甲基。
一种药用组合物，其包含本发明所述的通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐作为活性成分以及药学上可接受的赋型剂。
本发明的通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防各种癌症的药物中的应用。
上述应用，其中所述癌症为实体瘤或非实体瘤。
其中，所述癌症为乳腺、肺、结肠、直肠、胃、***、膀胱、胰腺 或卵巢的癌。
其中，所述癌症为***、肾癌、白血病、黑色素瘤、鼻咽癌或胃癌。
本发明的通式I的化合物的制备方法，由化合物A-1生成氨基化合物A-2，将化合物A-2与季氨盐类化合物A-3经有机碱催化反应得到通式为I所示的化合物；
Figure PCTCN2014093929-appb-000002
，其中，R1、R2、X和n的定义分别如前所述。
本发明衍生物可以以立体异构体形式存在，这些立体异构形式可以是对映体或非对映体。本发明既涉及对映体或非对映体，也涉及它们各自的混合物，象非对映体一样，可按照自身已知的方法将外消旋形式分离成为立体异构的单一组分。
此外，本发明化合物的衍生物可以为前药。依据本发明，前药自身可能具有较弱的活性或甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。
此外，本发明还包括本发明化合物的酯。
除非另外指出，本发明所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘原子；“烷基”是指直链或支链的取代或未取代的烷基；“亚烷基”是指直链或支链 的取代或未取代的亚烷基；“环烷基”是指取代或未取代的环烷基；杂芳基是指取代或未取代的杂芳基，其包括含有一个或多个选自O、N和S的杂原子，可以是单环或多环的，环状体系是芳香性的，可以举出例如咪唑基、吡啶基、嘧啶基、(1，2，3)-和(1，2，4)-***基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噁唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、苯并咪唑基、吡啶并咪唑基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、吲哚基、喹啉基、吡啶并嘧啶基等。
本发明包括药物组合物，该组合物含有通式I的雷帕霉素类化合物、其旋光异构体、及其药学上可接受的盐作为活性成分，以及药学上可接受的赋型剂。所述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。本发明的衍生物可以与其他活性成分组合使用，只要它们不产生其他不利的作用，例如过敏反应。
本发明的药物组合物可配制成若干种剂型，其中含有药学领域中常用的一些赋形剂；例如，口服制剂(如片剂，胶囊剂，溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射用水可立即使用)；局部制剂(例如软膏或溶液)。
用于本发明药物组合物的载体是药学领域中可得到的常见类型，包括：口服制剂用的粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、无色素、矫味剂等；可注射制剂用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。
我们已发现本发明化合物体外具有抑制肿瘤细胞生长活性，因此，它可以用作制备治疗和/或预防癌症的药物。尤其治疗乳腺、肺、结肠、直肠、胃、***、膀胱、胰腺和卵巢的癌。本发明化合物也被期望可以用于治疗其他细胞增生疾病如牛皮癣、良性***肥大、动脉粥样硬化和再狭窄。另外预期本发明的雷帕霉素类化合物将具有抗白血病、恶性淋巴瘤和固体肿瘤如在组织如肝、肾、***和胰腺中的癌和肉瘤范围的活性。
根据本发明的衍生物可作为活性成分用于制备治疗和/或预防各种癌症，本发明也提供治疗或预防上述疾病的方法，包括给予患有或易患有此病的病人治疗有效量的根据本发明的衍生物。通式I的雷帕霉素类化合物用于患者的临床剂量必需依赖被治疗的主体、给药的具体途径、被治疗疾病的严重性而变化，而最佳剂量由治疗具体患者的医生确定。
本发明活性化合物可作为唯一的抗癌药物使用，或者可以与一种或多种其它抗肿瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。
下文中提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方法。应当理解，下述实施例和制备例的范围并不以任何方式限制本发明的范围。
下面合成路线A描述了本发明的通式I化合物的制备，所有的原料都是通过这些示意图中描述的方法、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的全部最终化合物都是通过这些示意图中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。这些示意图中应用的全部可变因数可以为如下文的定 义。
将化合物A-1经2-4步反应，生成氨基化合物A-2。将化合物A-2与季氨盐类化合物A-3经有机碱催化反应得到通式为I所示的衍生物。
按照本发明的通式I化合物，在路线A中，n、R1、R2和X如发明内容所定义。
Figure PCTCN2014093929-appb-000003
其中，当X为“-”，A-2根据步骤1描述的方法制备：以A-1为原料，与三氟甲磺酸酐反应得到B-1，后经与叠氮化钠反应得B-2，最后经还原得A-2。
Figure PCTCN2014093929-appb-000004
当X为O(CH2)n时，A-2根据步骤2描述的方法制备：以A-1为原料，经醚化、叠氮化和还原得到A-2。
Figure PCTCN2014093929-appb-000005
本发明制备方法简单，制备的化合物均具有显著的抗肿瘤活性。
上述路线中，原料A-1、A-3和C-1所示化合物可以通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备或者可商购。本发明制备方法简单，制备的化合物具有较好的抗肿瘤活性。
具体实施方式
实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。本发明中所制备化合物的核磁共振氢谱用Bruker ARX-300测定，质谱用Agilent 1100LC/MSD测定；所用试剂均为分析纯或化学纯。
Figure PCTCN2014093929-appb-000006
表1.实施例1-6的结构式
实施例 X R1 R2
1 -* CH3 6-Cl
2 -* CH3 5-Cl
3 -* CH3 H
4 -* CH3 4-F
5 -* CH3 6-F
6 OCH2CH2 CH3 6-Cl
其中-表示单键
实施例1：40-N-(6-氯-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T1)的制备
步骤A：C-40三氟甲磺酸酯雷帕霉素的制备
将雷帕霉素(11mmol，10g)加入到50mL二氯甲烷溶液中，加料完毕后冷却至0℃，加入2，6-二甲基吡啶(52mmol，5.6g)，然后滴加三氟甲磺酸酐(17.7mmol，5g)，保温反应2小时。反应完全，加入1mL水后继续搅拌10分钟，将反应液倾入80mL水中，二氯甲烷提取，合并提取液，水洗，无水硫酸钠干燥。蒸干得油状物三氟甲磺酸酯雷帕霉素9.1g，收率为79.5％，MS：1068.5(M+Na)。
步骤B：C-40叠氮雷帕霉素的的制备
将三氟甲磺酸酯雷帕霉素(8.6mmol 9.0g)逐渐加入到130mL丙酮溶液中，在室温条件下，加入叠氮化钠的水溶液(34.4mmol，2.24g，5mLH2O)，加料完毕后，室温反应16小时。反应完毕后，将反应液倒入大量水中，用乙酸乙酯萃取，干燥减压浓缩，经柱层析(石油醚∶丙酮＝3∶1)分享得到淡黄色固体3.0g，收率：37.2％，MS：961(M+Na)。
步骤C：C-40氨基雷帕霉素的的制备
将叠氮雷帕霉素(3.2mmol，3.0g)加入到四氢呋喃溶液中，在室温条件下，加入三苯基磷(12.8mmol 3.35g)，加料完毕后，搅拌升温至50℃反应2小时，滴加1mL蒸馏水，继续反应6h。反应完毕后，将反应液冷却至室温，减压浓缩，经柱层析分享得到淡黄色油状物2.4g，收率：82.7％，MS：913.5(M+1)。
步骤D：40-N-(6-氯-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素的制备
在室温下，将C-40氨基雷帕霉素(0.44mmol，0.4g)、A-3(1.17mmol0.4g)加入到乙腈中，向反应液中加入三乙胺3.6g(2mmol，0.7g)，室温搅拌反应3h。反应完毕后，加入200mL H2O，乙酸乙酯萃取，干燥减压浓缩，经柱层析分离(PE/Ac＝4∶1)得纯品0.27g，收率：56.1％，MS(ESI)m/z：1093.6(M+1)；1H NMR(500MHz，DMSO)δ7.61(s，1H)，7.27(d，J＝7.9Hz，1H)，7.04(d，J＝8.5Hz，1H)，6.44(s，1H)，6.43-6.38(m，1H)，6.22(m，1H)，6.20-6.14(m，1H)，6.13-6.07(m，1H)，5.46(dd，J＝15.3，9.1Hz，1H)，5.24(s，1H)，5.10(d，J＝9.7Hz，1H)，5.09(m，1H)，5.06-5.00(m，1H)，4.96(d，J＝4.7Hz，1H)，4.06-3.96(m，2H)，3.90(d，J＝4.1Hz，1H)，3.68-3.59(m，1H)，3.50-3.40(m，2H)，3.36(s，3H)，3.21(s，3H)，3.16(s，3H)，3.06(s，3H)，2.77(d，J＝16.8Hz，1H)，2.47-2.29(m，2H)，2.19(s，1H)，2.15-1.97(m，2H)，1.93-1.78(m，2H)，1.75(s，3H)，1.66(s，3H)，1.64-1.00(m，14H)，0.97(d，J＝6.3Hz，3H)，0.89(d，J＝6.4Hz，3H)，0.83(d，J＝6.3Hz，3H)，0.80(d，J＝6.5Hz，3H)，0.73(d，J＝6.4Hz，3H)；13C NMR(126MHz，DMSO)δ210.64，207.50，199.01，169.15，166.98，151.31，139.72，139.29，137.83，137.19，132.27，130.42，127.00，126.95，126.09，125.20，124.26，123.37，121.77，109.73，98.99，85.70，82.32，81.18，75.68，73.59，66.19，61.16，56.99，55.45，55.40，50.59，45.19，43.43，35.20，34.78，33.07，32.94，32.80，30.17，30.10，29.57，27.52，26.39，26.22，24.46，21.61，20.32，15.54，15.52，14.65，13.53，13.19，10.47。
按照实施例1的方法，选择合适的原料和试剂，分别制得实施例2-5的化合物。当提到特定的反应原料时，应该理解的是，精通此领域的技术 人员可以根据实施例的需要选择出合适的原料和试剂。
实施例2：
40-N-(5-氯-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T2)
MS(ESI)m/z：1093.6(M+H)+；13C NMR(126MHz，DMSO)δ210.64，207.50，199.01，169.15，166.98，151.65，142.04，139.30，137.83，137.19，132.29，131.04，130.43，127.00，126.95，125.19，123.24，120.33，120.17，108.78，99.00，85.71，82.33，81.18，75.67，73.59，66.19，61.23，56.99，55.46，55.41，50.59，45.19，43.44，40.07，39.64，39.54，39.20，39.00，35.21，34.78，33.06，32.95，32.81，30.14，30.10，29.56，27.52，26.39，26.22，24.47，21.61，20.33，15.54，15.53，14.66，13.53，13.20，10.47；1H NMR(500MHz，DMSO)δ7.47(d，J＝8.2Hz，1H)，7.15(s，1H)，7.00(d，J＝8.2Hz，1H)，6.43(s，1H)，6.42(dd，J＝14.5，11.1Hz，1H)，6.26-6.20(m，1H)，6.21-6.13(m，1H)，6.11(dd，J＝10.8，5.5Hz，1H)，5.46(dd，J＝14.8，9.6Hz，1H)，5.23(s，1H)，5.10(d，J＝10.2Hz，1H)，5.06-5.00(m，1H)，4.95(d，J＝5.2Hz，1H)，4.06-3.96(m，2H)，3.90(d，J＝4.8Hz，1H)，3.63(d，J＝10.3Hz，1H)，3.44(dd，J＝12.0，2.1Hz，2H)，3.37(s，3H)，3.20(s，3H)，3.15(s，3H)，3.06(s，3H)，2.77(dd，J＝17.6，2.0Hz，1H)，2.48-2.36(m，2H)，2.23-2.16(m，1H)，2.07-1.99(m，1H)，1.90-1.78(m，2H)，1.74(s，3H)，1.65(s，3H)，1.64-1.46(m，4H)，1.46-1.20(m，8H)，1.13-0.99(m，3H)，0.97(d，J＝6.4Hz，3H)，0.89(d，J＝6.5Hz，3H)，0.83(d，J＝6.4Hz，3H)，0.80(d，J＝6.7Hz，3H)，0.73(d，J＝6.6Hz，3H).
实施例3：
40-N-(3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T3)
MS(ESI)m/z：1060.5(M+H)+；1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.46(d，J＝7.6Hz，1H)，7.24(t，J＝7.8Hz，1H)，7.04(d，J＝7.9Hz，1H)，6.97(t，J＝7.6Hz，1H)，6.47(s，1H)，6.45-6.35(m，1H)，6.25(m，1H)，6.23-6.16(m，1H)，6.13(m，1H)，5.46(dd，J＝14.7，9.7Hz，1H)，5.27(d，J＝4.5Hz，1H)，5.09(d，J＝10.1Hz，1H)，5.05-5.00(m，1H)，4.96(d，J＝5.1Hz，1H)，4.02(m，2H)，3.92(d，J＝4.7Hz，1H)，3.63(d，J＝12.2Hz，1H)，3.52-3.39(m，2H)，3.37(s，3H)，3.31-3.24(m，3H)，3.21(s，3H)，3.15(s，3H)，3.06(s，3H)，2.78(d，J＝16.9Hz，1H)，2.48-2.34(m，2H)，2.26(m，3H)，2.14-2.01(m，2H)，1.92-1.80(m，2H)，1.75(s，3H)，1.66(s，3H)，1.63-1.21(m，10H)，0.96(d，J＝6.4Hz，3H)，0.88(d，J＝6.4Hz，3H)，0.83(d，J＝6.6Hz，3H)，0.80(d，J＝7.0Hz，3H)，0.73(d，J＝6.6Hz，3H)；13C NMR(101MHz，DMSO)δ211.18，207.93，199.54，169.65，167.50，152.32，141.17，139.81，138.35，137.73，132.79，130.94，127.52，127.47，126.82，125.72，122.61，121.83，121.14，109.22，103.51，99.51，86.23，82.84，81.73，76.18，74.10，66.71，61.59，60.21，57.51，55.97，55.87，51.10，45.70，43.94，35.73，35.30，33.61，33.45，33.38，30.68，30.43，30.08，28.07，26.90，26.73，24.95，22.13，21.22，16.04，15.15，14.55，14.06，13.69.实施例4：
40-N-(4-氟-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T4)
MS(ESI)m/z：1077.5(M+H)+；1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.31(m，J＝6.9Hz，1H)，7.11(dd，J＝12.1，8.7Hz，1H)，7.01-6.90(m，1H)，6.46(s，1H)，6.41(dd，J＝14.2，11.4Hz，1H)，6.23(m，1H)，6.17(d，J＝13.4Hz，1H)， 6.11(m，1H)，5.46(dd，J＝14.6，9.7Hz，1H)，5.26(s，1H)，5.09(d，J＝10.0Hz，1H)，5.05-4.98(m，1H)，4.95(m，1H)，4.08-3.97(m，2H)，3.93(m，1H)，3.66-3.59(m，1H)，3.29(m，3H)，3.20(s，3H)，3.18(s，3H)，3.15(s，3H)，3.05(s，3H)，2.76(d，J＝16.0Hz，1H)，2.41(dd，J＝24.6，8.9Hz，1H)，2.29-1.94(m，3H)，1.85(dd，J＝21.1，9.0Hz，2H)，1.75(s，3H)，1.64(s，3H)，1.62-0.99(m，16H)，0.96(d，J＝6.4Hz，3H)，0.87(d，J＝6.5Hz，3H)，0.83(d，J＝7.0Hz，3H)，0.80(d，J＝7.2Hz，3H)，0.73(d，J＝6.5Hz，3H)；13C NMR(101MHz，DMSO)δ211.08，208.03，199.49，169.68，167.48，139.78，138.35，137.68，132.78，130.94，128.67，128.57，127.53，127.46，125.60，124.51，124.49，121.70，119.04，114.60，99.51，86.14，82.81，81.67，76.20，74.06，66.70，61.87，57.46，55.96，55.91，51.14，45.70，43.96，35.71，35.28，33.72，33.55，33.45，30.77，30.58，30.10，27.99，26.91，26.74，24.98，22.11，20.85，16.07，16.03，15.19，13.95，13.79，10.97。
实施例5：
40-N-(6-氟-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T5)
MS(ESI)m/z：1077.6(M+H)+；1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.46(dd，J＝8.3，1.9Hz，1H)，7.08(t，J＝7.9Hz，1H)，7.03(d，J＝4.5Hz，1H)，6.46(s，1H)，6.42(m，1H)，6.24(d，1H)，6.17(d，J＝13.7Hz，1H)，6.10(m，1H)，5.45(dd，J＝14.6，9.7Hz，1H)，5.27(s，1H)，5.08(d，J＝10.1Hz，1H)，5.05-4.98(m，1H)，4.95(d，J＝5.2Hz，1H)，4.03(m，1H)，4.01(d，J＝4.2Hz，1H)，3.91(d，J＝4.7Hz，1H)，3.62(d，J＝12.1Hz，1H)，3.43(m，2H)，3.35(s，3H)，3.20(s，3H)，3.15(s，3H)，3.05(s，3H)，2.77(d，J＝16.1Hz，1H)，2.48-2.31(m， 2H)，2.25-1.94(m，3H)，1.85(m，2H)，1.74(s，3H)，1.65(s，3H)，1.63-1.46(m，5H)，1.44-1.00(m，10H)，0.96(d，J＝6.4Hz，3H)，0.87(d，J＝6.5Hz，)，0.82(d，J＝6.5Hz，3H)，0.79(d，J＝6.9Hz，3H)，0.73(d，J＝6.6Hz，3H)；13CNMR(101MHz，DMSO)δ211.16，208.02，199.54，169.66，167.50，158.58，156.23，152.08，139.81，138.35，137.82，137.72，132.78，130.95，127.52，127.47，125.70，123.30，110.36，109.56，99.51，86.21，82.83，81.70，76.19，74.09，66.70，61.56，57.49，55.97，55.89，51.10，45.70，43.95，35.72，35.29，33.58，33.44，33.34，30.73，30.66，30.08，28.03，26.90，26.73，24.98，22.12，20.84，16.06，16.03，15.14，14.03，13.71，10.98。
实施例6：40-O-(2-(3-甲基苯并噻唑-2-亚胺基)乙基)氧雷帕霉素(RAP-T6)的制备
步骤A：40-O-(2-溴乙基)氧雷帕霉素的制备
将雷帕霉素(3.3mmol，3g)加入到60mL)甲苯溶液中，加入12g 2-溴乙基三氟甲磺酸酯和4mL二异丙基乙胺(DIPEA)，升温至60℃反应3小时，反应完全后，将反应液倾入100mL水中，分别经水洗，稀盐酸和饱和碳酸氢钠和饱和食盐水萃取，有机层经无水硫酸钠干燥。蒸干得油状物1.4g，收率为41.7％，MS：1044.6(M+Na)。
步骤B：40-O-(2-叠氮乙基)氧雷帕霉素的制备
将40-O-(2-溴乙基)氧雷帕霉素(1.17mmol，1.2g)加入到30mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中，加入叠氮化钠(4.6mmol 0.3g)和碘化钾(0.1g)，升温至60℃反应2小时。反应完全后，将反应液倾入100mL水中，加入乙酸乙酯，分别经水洗，饱和食盐水萃取，有机层经无水硫酸钠干燥。经 柱层析分享得到黄色固体0.62g，收率为53.7％，MS：1005.6(M+Na)。
步骤C：40-O-(2-氨基乙基)氧雷帕霉素的制备
将40-O-(2-叠氮乙基)氧雷帕霉素(0.2mmol，0.21g)逐渐加入到四氢呋喃溶液中，在室温条件下，分批加入三苯基磷(0.8mmol，0.21g)，加料完毕后，搅拌升温至60℃反应2小时，滴加1mL蒸馏水，继续反应36。反应完毕后，将反应液冷却至室温，减压浓缩，经柱层析分享得到淡黄色油状物0.16g，收率：80％，MS：958.6(M+1)。
步骤D：40-O-(2-(3-甲基苯并噻唑-2-亚胺基)乙基)氧雷帕霉素(RAP-T6)
在室温下，将40-O-(2-氨基乙基)氧雷帕霉素(300mmol，0.16g，)、A-34.1g(300mmol)加入到乙腈中，向反应液中加入三乙胺3.6g(900mmol)，室温搅拌反应3h。反应完毕后，加入200mL H2O，乙酸乙酯萃取，干燥减压浓缩，经柱层析分享得到淡黄色油状物2.0g，经柱层析分离得纯品0.27g，收率：78.7％，MS(ESI)m/z：1128.6(M+H)+；1H NMR(400MHz，DMSO)δ7.66(s，1H)，7.29(d，J＝8.5Hz，1H)，7.08(d，J＝8.6Hz，1H)，6.47(s，1H)，6.45-6.34(m，1H)，6.23(m，1H)，6.17(m，1H)，6.14-6.06(m，1H)，5.46(dd，J＝14.6，9.6Hz，1H)，5.29(s，1H)，5.09(d，J＝10.0Hz，1H)，5.01-4.96(m，1H)，4.94(d，J＝5.4Hz，1H)，4.05-3.98(m，2H)，3.94(d，J＝4.4Hz，1H)，3.79-3.57(m，4H)，3.49-3.38(m，2H)，3.34(s，3H)，3.33(s，3H)，3.30-3.19(m，2H)，3.15(s，3H)，3.05(s，3H)，2.86-2.67(m，2H)，2.45-2.32(m，2H)，2.20(m，1H)，2.14-1.79(m，4H)，1.74(s，3H)，1.63(s，3H)，1.61-0.99(m，12H)，0.97(d，J＝6.4Hz，3H)，0.87(d，J＝6.4Hz，3H)，0.82(d，J＝ 6.2Hz，3H)，0.77(d，J＝6.6Hz，3H)，0.73(d，J＝6.6Hz，3H).
13C NMR(101MHz，DMSO)δ211.03，208.02，199.44，169.68，167.49，155.02，148.32，140.34，140.28，139.81，138.33，137.67，132.83，130.91，127.50，126.75，125.50，124.88，123.75，122.36，110.50，99.58，86.05，83.09，82.93，82.76，76.22，74.07，69.94，66.70，57.70，57.45，55.95，55.20，51.21，45.69，43.98，38.76，36.64，35.69，35.30，33.85，32.77，31.40，30.54，30.31，29.45，26.93，26.71，24.96，22.15，20.86，16.04，15.19，13.95，13.84，10.96。
本发明产物的药理研究
体外免疫抑制活性测试
采用淋巴细胞转化实验(LTT)方法检测其体外免疫抑制活性：
(1)无菌取清洁级昆明小鼠(20-22g)的脾脏，置于盛有PBS缓冲液的平皿中，用玻璃注射器柄将脾脏轻轻挤过100目筛网。吸管充分吹打后，吸取细胞液到15ml离心管，离心5分钟(1000r/min)，沉淀物加1640培养液洗涤2次，洗涤后离心5分钟(1000r/min)，沉淀物用1640培养液调整细胞浓度至1×107个/ml。
(2)刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠淋巴细胞转化，称取待测样品粉末，用无水乙醇溶解作为样品母液，再用1640培养液配成各个浓度的样品测试液，加50μl样品测试液于96孔细胞培养板，各加入上述小鼠脾淋巴细胞悬液100μl，再分别加入ConA(20μg/ml)50μl。其中，以单加100μl细胞悬液和100μl 1640培养液作为空白对照，以加有100μl细胞悬液和100μl ConA作为ConA对照。加样完毕后，96孔细胞培养板于37℃，5％CO2培养箱培养72小时。终止培养前4小时每孔加入MTT(5mg/ml)20μl， 继续培养4小时，离心10分钟(4000r/min)，甩弃上清液，每孔加入150μl二甲基亚砜(DMSO)，用酶标仪测定样品的光吸收值(OD570)，计算样品对淋巴细胞反应的抑制率I：
Figure PCTCN2014093929-appb-000007
化合物的免疫抑制活性见表2。
表2实施例化合物体外免疫抑制活性
Figure PCTCN2014093929-appb-000008
以雷帕霉素为对照药，采用LTT法检测结果表明，雷帕霉素新衍生物实施例1到实施例5的免疫活性较阳性对照药雷帕霉素显著降低，实施例1和实施例2在不同浓度梯度其无免疫抑制活性，实施例3在低浓度无免疫抑制活性，而高浓度较雷帕霉素活性显著降低。实施例4和实施例5的免疫活性较雷帕霉素弱。
由于实施例化合物表现出低或无的免疫抑制活性，因此我们按照本发明的上式I的雷帕霉素类衍生物进行了体外抗肿瘤活性筛选。
体外抗肿瘤活性测试
(1)将***细胞CasKi、肾癌细胞SK-NEP-1、人白血病细胞HL-60、人恶性黑色素瘤细胞A-375、人鼻咽癌细胞CNE2和人胃癌细胞7901细胞 株复苏并传代2-3次，使细胞活力稳定以用于体外细胞活性测试。悬浮细胞不需消化，贴壁细胞胰蛋白酶(0.25％)进行消化，加入含血清的细胞培养液终止消化，用移液管转移细胞液至离心管，1500r/min下离心3min，轻轻弃去上清液后加入5mL培养液，吹打混匀细胞，计数，贴壁细胞5000-10000个/孔，悬浮细胞20000个/孔，加入96孔板，于37℃、5％CO2培养，细胞培养24小时后加入测试药物。
(2)用二甲基亚砜溶解受试样品作为母液，然后用细胞培养液稀释受试样品：取10ul样品母液，加入990ul细胞培养液，稀释样品至测试浓度。将样品稀释液加入已经在96孔板中培养24h的细胞培养液中，每个浓度加入3孔，设空白对照(未加药物处理)。将96孔板于37℃、5％CO2继续培养72h，在每孔中加入MTT(四氮唑)(5mg/mL)20μL，放入培养箱中4h后，悬浮细胞于4000r/min离心10min，弃去上清液，加入二甲基亚砜150μL，使存活细胞与MTT反应产物甲臜充分溶解，放入酶标仪中测定结果，通过Bliss法可求出药物IC50值，化合物对肿瘤细胞株的IC50(μmol/L)见表3。
表3实施例化合物体外抗肿瘤活性
Figure PCTCN2014093929-appb-000009
Figure PCTCN2014093929-appb-000010
注：-表示未测活性。
从上述试验结果可以清楚地看出，本发明所要保护的通式I的化合物，具有无免疫抑制活性或低免疫抑制活性，且表现出较优异的抗癌活性，其实施例化合物对多数癌株的抗肿瘤活性强于雷帕霉素。其实施例2无免疫活性，但对SK-NEP-1的抗肿瘤活性较雷帕霉素提高30倍左右，因此本发明的化合物具有很好的潜在应用前景，有较大可能开发出无或低免疫抑制活性，但抗肿瘤活性强的新型雷帕霉素类候选化合物。
如前所述，本发明实施例化合物对***、肾癌、白血病、黑色素瘤、鼻咽癌或胃癌在内的广泛的癌症具有较强的抗癌活性，在治疗实体瘤和非实体瘤方面都具有良好的应用前景。

Claims (10)

  1. 通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
    Figure PCTCN2014093929-appb-100001
    其中，
    X为“单键”、或-O(CH2)n-；
    n为2-4的整数；
    R1为氢、C原子数为1-10的烷基、C原子数为3-7环烷基、C原子数为2-10的烯基或C原子数为2-10的炔基；
    R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、羧基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、烷基硫基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、烷氧基甲基、烷氧基乙基、烷基酰基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、氨基磺酰基、N-烷基氨基磺酰基、N，N-二烷基氨基磺酰基或C原子数为1-3的亚烷基二氧基，其中所述烷基的C原子数为1-4，所述烷氧基的C原子数为1-4。
  2. 权利要求1的通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
    其中，
    X为“单键”或-O(CH2)n-；
    n为2-4的整数；
    R1为氢、C原子数为1-3的烷基或C原子数为3-7环烷基；
    R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、羧基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、烷基硫基、烷基磺酰基、烷氧基甲基、烷氧基乙基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、N-烷基氨基磺酰基、N，N-二烷基氨基磺酰基或C原子数为1-3的亚烷基二氧基，其中所述烷基的C原子数为1-4，所述烷氧基的C原子数为1-4。
  3. 权利要求2的通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
    其中，
    X为“单键”或-O(CH2)n-；
    n为2-4的整数；
    R1为C原子数为1-3的烷基；
    R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、羧基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、烷基硫基、烷基磺酰基、烷氧基甲基、烷氧基乙基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、N-烷基氨基磺酰基、N，N-二烷基氨基磺酰基或C原子数为1-3的亚烷基二氧基，其中所述烷基的C原子数为1-4，所述烷氧基的C原子数为1-4。
  4. 权利要求3的通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
    其中，
    X为“单键”；
    R1为C原子数为1-3的烷基；
    R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、羧基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、烷基硫基、烷基磺酰基、烷氧基甲基、烷氧基乙基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、N-烷基氨基磺酰基、N，N-二烷基氨基磺酰基或C原子数为1-3的亚烷基二氧基，其中所述烷基的C原子数为1-4，所述烷氧基的C原子数为1-4。
  5. 权利要求3的通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
    其中，
    X为-O(CH2)n-；
    n为2；
    R1为C原子数为1-3的烷基；
    R2为氢、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、羟基、羧基、硝基、氰基、烷基、烷氧基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、烷基硫基、烷基磺酰基、烷氧基甲基、烷氧基乙基、氨基甲酰基、N-烷基氨基甲酰基、N，N-二烷基氨基甲酰基、N-烷基氨基磺酰基、N，N-二烷基氨基磺酰基或C原子数为1-3的亚烷基二氧基，其中所述烷基的C原子数为1-4，所述烷氧基的C 原子数为1-4。
  6. 权利要求1的通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐，
    40-N-(6-氯-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T1)
    40-N-(5-氯-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T2)
    40-N-(3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T3)
    40-N-(4-氟-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T4)
    40-N-(6-氟-3-甲基苯并噻唑-2-亚基)-氨基雷帕霉素(RAP-T5)
    40-O-(2-(3-甲基苯并噻唑-2-亚胺基)乙基)氧雷帕霉素(RAP-T6)。
  7. 一种药用组合物，其包含权利要求1-6中任何一项所述的通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐作为活性成分以及药学上可接受的赋型剂。
  8. 权利要求1-6中任何一项的的通式I的化合物、其衍生物、其旋光异构体及其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防癌症的药物中的应用。
  9. 权利要求8所述的应用，其中所述癌症为实体瘤或非实体瘤。
  10. 权利要求1-6中任何一项的通式I的化合物的制备方法，由化合物A-1生成氨基化合物A-2，将化合物A-2与季氨盐类化合物A-3经有机碱催化反应得到通式为I所示的化合物；
    Figure PCTCN2014093929-appb-100002
    ，其中，R1、R2、X和n的定义分别如前所述。
PCT/CN2014/093929 2013-12-27 2014-12-16 含噻唑基雷帕霉素类衍生物及其应用 WO2015096640A1 (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310737656.7A CN103739616B (zh) 2013-12-27 2013-12-27 含噻唑基雷帕霉素类衍生物及其应用
CN201310737656.7 2013-12-27

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015096640A1 true WO2015096640A1 (zh) 2015-07-02

Family

ID=50496701

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2014/093929 WO2015096640A1 (zh) 2013-12-27 2014-12-16 含噻唑基雷帕霉素类衍生物及其应用

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN103739616B (zh)
WO (1) WO2015096640A1 (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103739616B (zh) * 2013-12-27 2015-12-30 福建省微生物研究所 含噻唑基雷帕霉素类衍生物及其应用
CN104341434B (zh) * 2014-10-16 2016-04-06 福建省微生物研究所 取代的雷帕霉素三氮唑衍生物和用途
CN107501294B (zh) * 2017-05-17 2019-09-10 福建省微生物研究所 雷帕霉素胍基衍生物和用途
CN107827908B (zh) * 2017-11-20 2020-01-21 福建省微生物研究所 一种雷帕霉素三氮唑衍生物及其制备方法和用途
CN108864148B (zh) * 2018-07-04 2021-09-03 福建省微生物研究所 一种雷帕霉素-40-苹果酸钠盐及其制备方法和应用
CN110917194A (zh) * 2019-11-07 2020-03-27 福建省微生物研究所 雷帕霉素噻唑类衍生物在制备抗阿尔茨海默症药物中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5504091A (en) * 1993-04-23 1996-04-02 American Home Products Corporation Biotin esters of rapamycin
WO1998009972A1 (en) * 1996-09-09 1998-03-12 American Home Products Corporation Rapamycin derivatives with unnatural stereochemistries
CN102731527A (zh) * 2012-07-12 2012-10-17 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 一种西罗莫司42－醚衍生物的合成方法
CN103739616A (zh) * 2013-12-27 2014-04-23 福建省微生物研究所 含噻唑基雷帕霉素类衍生物及其应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5221740A (en) * 1992-01-16 1993-06-22 American Home Products Corporation Oxepane isomers of rapamycin useful as immunosuppressive agents
ZA935110B (en) * 1992-07-17 1994-02-04 Smithkline Beecham Corp Rapamycin derivatives
DE69624921T2 (de) * 1995-06-09 2003-09-11 Novartis Ag Rapamycinderivate
TW557297B (en) * 1997-09-26 2003-10-11 Abbott Lab Rapamycin analogs having immunomodulatory activity, and pharmaceutical compositions containing same

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5504091A (en) * 1993-04-23 1996-04-02 American Home Products Corporation Biotin esters of rapamycin
WO1998009972A1 (en) * 1996-09-09 1998-03-12 American Home Products Corporation Rapamycin derivatives with unnatural stereochemistries
CN102731527A (zh) * 2012-07-12 2012-10-17 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 一种西罗莫司42－醚衍生物的合成方法
CN103739616A (zh) * 2013-12-27 2014-04-23 福建省微生物研究所 含噻唑基雷帕霉素类衍生物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN103739616A (zh) 2014-04-23
CN103739616B (zh) 2015-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2021129820A1 (zh) 含螺环的喹唑啉化合物
WO2015096640A1 (zh) 含噻唑基雷帕霉素类衍生物及其应用
WO2021190467A1 (zh) 含螺环的喹唑啉化合物
CN109422752A (zh) 一类具有抑制并降解布鲁顿酪氨酸蛋白激酶Btk活性的化合物
TW201728579A (zh) 作為檢測點激酶1 (chk1)抑制劑之3,5-二取代吡唑及其製備及應用
US20140235568A1 (en) Gemcitabine amide derivative and preparation method and use thereof
NZ735715A (en) Maleate salts of a b-raf kinase inhibitor, crystalline forms, methods of preparation, and uses therefore
CN111484435B (zh) 四氢吡咯烷类化合物或其药学上可接受的盐及其制备方法和应用
CN114736214B (zh) 一种倍半萜衍生物、其药物组合物及其制备方法和用途
CN104230952A (zh) 含有嘧啶骨架的化合物及其制备方法和用途
CN113416199B (zh) 一种石蒜碱β-芳基丙烯酸酯衍生物及其制备方法和用途
EP3418277A1 (en) Substituted amino six-membered nitric heterocyclic ring compound and preparation and use thereof
US10899744B2 (en) Crystalline form of compound suppressing protein kinase activity, and application thereof
WO2018019188A1 (zh) 核苷氨基磷酸酯类前药的多晶型及其制备方法
CN110143995B (zh) 氮杂环取代18β-甘草次酸衍生物及其制备和应用
CN111943906B (zh) 脒类衍生物、及其制法和药物组合物与用途
CN102010422B (zh) 含有胍基的青蒿素类衍生物及其应用
EP2872505A1 (en) Combination therapy for the treatment of cancer and immunosuppression
CN106397408A (zh) 5-甲基-2(1h)吡啶酮衍生物及其制备方法和用途
CN104530081A (zh) 雷帕霉素的氮杂环衍生物和用途
US20230029066A1 (en) Crystal forms of fused ring compound, and composition thereof, preparation method therefor and application thereof
KR20230008767A (ko) 거대고리형 티로신 키나제 억제제의 결정형 및 그의 제조 방법
KR102606167B1 (ko) 불소 함유 치환 벤조티오펜 화합물, 그의 약학적 조성물 및 응용
EP3369740B1 (en) New cytidine derivative dimers and applications thereof
CN110981865B (zh) 一种用于治疗脑胶质瘤的药物及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 14875060

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 14875060

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1