WO2015060746A1 - Комбинация для лечения и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях цнс различного генеза - Google Patents

Комбинация для лечения и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях цнс различного генеза Download PDF

Info

Publication number
WO2015060746A1
WO2015060746A1 PCT/RU2014/000362 RU2014000362W WO2015060746A1 WO 2015060746 A1 WO2015060746 A1 WO 2015060746A1 RU 2014000362 W RU2014000362 W RU 2014000362W WO 2015060746 A1 WO2015060746 A1 WO 2015060746A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
memantine
melatonin
manifestations
amyloid
cognitive
Prior art date
Application number
PCT/RU2014/000362
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Аллан Герович БЕНИАШВИЛИ
Максим Эдуардович ЗАПОЛЬСКИЙ
Маргарита Алексеевна МОРОЗОВА
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект"
Publication of WO2015060746A1 publication Critical patent/WO2015060746A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A61K31/4045—Indole-alkylamines; Amides thereof, e.g. serotonin, melatonin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Definitions

  • the invention relates to the field of pharmacology and practical medicine, namely to the combined use of drugs with a neurotropic effect, facilitating the manifestation of mental, behavioral, cognitive disorders in organic damage to the central nervous system of various origins, as well as with manifestations of amyloid intoxication.
  • the share of the psycho-organic syndrome which does not reach the degree of dementia, of vascular origin, accounts for 25% of the diagnosed cases of mental pathology in people older than 60 who have turned to a general clinic [Mikhailova N. M., 1996].
  • psycho-organic disorders with torpid phenomena, delayed psychomotor reactions, mild dysmnesthetic disorders, attention disorders can largely be determined and meet the criteria for “mild cognitive impairment” (ICD-10, heading F06.7 “Mild cognitive impairment”).
  • somatic pathology not only have a direct biological effect on the mental state, but also include a powerful psycho-traumatic factor, since they are regarded by patients as a threat to their physical health and life itself (Krylov V.I. et al., 1985; Neznanov N.G. , 1985; Gnezdilov A.V., 2002, and others).
  • the main clinical manifestation of the psycho-organic syndrome along with a disorder of memory, attention, asthenia, is a specific disorder of the sleep-wake cycle, with a decrease in the level of wakefulness during the day and a disturbance in night sleep.
  • a rhythm disorder is a factor both independently impairing the functioning of the patient, and exacerbating other symptoms of the disease.
  • Chronic traumatic encephalopathy is in many ways similar to other neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's disease, in particular with regard to the metabolism and aggregation of tau, amyloid beta and TDP-43 (TAR-DNA binding protein) [Neuron. 2012 Dec 6; 76 (5): 886-99. doi: 10.1016 / j.neuron.2012.11.021.
  • the neuropathology and neurobiology of traumatic brain injury are in many ways similar to other neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's disease, in particular with regard to the metabolism and aggregation of tau, amyloid beta and TDP-43 (TAR-DNA binding protein) [Neuron. 2012 Dec 6; 76 (5): 886-99. doi: 10.1016 / j.neuron.2012.11.021. The neuropathology and neurobiology of traumatic brain injury.
  • cyclooxygenase-1 in beta-amyloid-induced neuroinflammation was also studied, and attempts were made to use COX inhibitors (cyclooxygenase) as protectors for the development of Alzheimer's disease (A role for cyclooxygenase-1 in beta-amyloid-induced neuroinflammation, Eduardo Candelario-Jalario-Jalario-Jalario-Jalario Vol 1, No. 4, pp 350-353).
  • NMDA receptor antagonists In neurodegenerative processes, as well as in cerebral ischemia, an important pathogenetic role is played by hyperactivation of the glutaminergic system. Therefore, the researchers suggested the use of NMDA receptor antagonists to treat mild cognitive impairment.
  • EA 007632 The combination of NMDA antagonist and acetylcholinesterase inhibitors for the treatment of Alzheimer's disease
  • EA 008863 Combination therapy using derivatives of 1-aminocyclohexane and acetylcholinesterase inhibitors
  • EA 009668 IFN-beta alone or in combination with other drugs for the treatment of Alzheimer's disease and disorders associated with dementia
  • EA 010430 The combination of an NMDA receptor antagonist and a selective serotonin reuptake inhibitor for the treatment of depression and other mental disorders.
  • these combinations are effective in specific CNS pathologies.
  • Memantine is a voltage-dependent, medium affinity, non-competitive antagonist of NMDA receptors. Memantine blocks the effects of pathologically elevated levels of glutamate, which can lead to neuronal dysfunction. It has a neuroprotective, antispastic, antiparkinsonian effect. It inhibits glutamatergic neurotransmission and the progression of neurodegenerative processes, has a neuromodulating effect. It contributes to the normalization of mental activity, improves memory, increases the ability to concentrate, correct motor disorders [Ditzler K. Efficacy and tolerability of memantine in patients with dementia syndrome. A double-blind, placebo controlled trial. Arzneistoff-Forschung. 1991; 41: 773-80.]. In addition to the main mechanism of action (effect on glutamatergic transmission), memantine has an additional serotonergic effect
  • the second aspect of the therapeutic activity of memantine is a neuroprotective effect.
  • This effect is a direct result of blockade of NMDA receptors, closure of ionotrophic channels and, accordingly, stabilization of the cell membrane, which protects cells from death.
  • the neuroprotective effect of memantine has been proven in a model of cerebral ischemia in an experiment [Danysz W, Parsons CG, Mobius HJ etal. NeurotoxRes 2000; 2: 85-97.].
  • the preventive administration of memantine reduced the area of ischemic penumbra, the severity of cerebral edema, and also reduced the area of the focus of ischemia. A similar result was obtained on other models of brain damage.
  • memantine can have a stimulating effect on the synthesis of a number of neurotrophic factors, in particular, brain-specific neurotrophic factor (brain-derived neurotrophic factor), which also leads to stabilization of the neuronal membrane and protect the cell from death.
  • brain-specific neurotrophic factor brain-derived neurotrophic factor
  • NMDA receptor antagonists have a positive effect on the cognitive functions of patients with Parkinson’s disease [Damulin I.V. Rus honey. journal 2001; 9 (25): 1178-82., Litvinenko I.V., Odinak M.M. Zhurn. nevrol. and psychiatrist them. S.S. Korsakova. 2004; 4: 76-81.].
  • Memantine (1-amino-3,5-dimethyl adamantane) is an analogue of 1-amino-cyclohexane.
  • the formula is disclosed, for example, in US patents NN 4,122, 193; 4.273, 774; 5,061, 703.
  • Memantine and other 1-aminoalkylcyclohexanes have been shown to be useful in reducing various progressive neurodegenerative disorders, such as dementia in patients with moderate to severe Alzheimer's disease, Parkinson's disease, and muscle spasticity as disclosed in US Pat. Nos. 5,061,703; 5.614, 560 and 6.034, 134.
  • memantine as a neuroprotective agent for amyloid intoxication is also known (Hidalgo JJM, Alvarez XA, Cacabelos R, Quack G. Neuroprotection by memantine against neurodegeneration induced by beta-amyloid (1-40). Brain Research, 2002, v.958, 210- 221).
  • Melatonin N-acetyl-5-methoxytryptamine
  • circadian circadian
  • NMDA M-methyl-E-aspartate
  • Melatonin protects neurons from NO aggression, an excess of which can potentiate glutamate neurotoxicity [Guerrero JM, ReiterRJ., OrtizG. etal. Melatonin prevents increases in neuronal nitric oxide and cyclic GMP production after transient brain ischemia and reperfusion in the Mangolian gerbil // J. Pineal Res. - 1997. - V.23. - p.24-31.]. Melatonin also normalizes mitochondrial activity [El-Abhar HS, Shaalan M., Barakat M. et al. Effect of melatonin and nifedipine on some antioxidant enzymes and different energy fuels in the blood and brain of global ischemic rats // J.
  • the combination may be presented in the form of a tablet, including sublingual forms, capsules, modified-release dosage forms, injection forms, suppositories, powder for the preparation of a drink, drops, including drops in the nose, transdermal, buccal, aerosol form.
  • Pharmaceutically acceptable excipients are selected to ensure the delivery of a therapeutically effective single dose amount of Memantine and Melatonin in a unit dosage form and to optimize the cost, ease and stability of the manufacturing process.
  • a prerequisite for excipients is inertness, chemical and physical compatibility with Memantine and Melatonin.
  • Excipients used in solid dosage forms, such as tablets and capsules may further include colorants and pigments, taste masking agents, flavors, sweeteners and adsorbents.
  • Gelatinized starch may be a preferred, but not exclusive, disintegrant.
  • Another preferred disintegrant is sodium carboxymethyl cellulose.
  • Binders are used as auxiliary pharmaceutically acceptable substances for wet granulation to increase the concentration of therapeutically active substances and other auxiliary ingredients in the forming granules. A binder is added to improve the fluidity of the powder and to improve compression. Binders include cellulose derivatives such as microcrystalline cellulose, methyl cellulose, carboxymethyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, hydroxyethyl cellulose and hydroxypropyl cellulose.
  • the composition of Memantine with Melatonin is mixed with various auxiliary products to obtain a solid form of Memantine with Melatonin.
  • An additional aspect of the present invention includes a method for the preparation of the claimed composition. This method involves obtaining a solid dosage form of the claimed composition, preferably by wet mixing of the active ingredients and excipients with water, and with further drying and grinding of the granular mixture.
  • the active principle is about 40.0% by weight of the composition
  • lactose monohydrate is about 28.7%
  • microcrystalline cellulose is about 10.4%
  • starch is about 10.9%
  • carboxymethyl cellulose is about 4.0 %
  • polyvinylpyrrolidone is about 5.2%
  • magnesium stearate is about 0.8%.
  • Memantine and Melatonin comprise from about 70-80% by weight of the composition.
  • the composition comprises a diluent, such as lactose monohydrate, preferably from about 3-20% by weight of the composition; a disintegrant, such as, for example, cross-linked sodium carboxymethyl cellulose, preferably from about 2-10% by weight of the composition; a binder such as, for example, polyvinylpyrrolidone, preferably from about 2-10% by weight of the composition; and a lubricant, such as magnesium stearate, preferably from about 0.2 to 2.0% by weight of the composition.
  • a diluent such as lactose monohydrate, preferably from about 3-20% by weight of the composition
  • a disintegrant such as, for example, cross-linked sodium carboxymethyl cellulose, preferably from about 2-10% by weight of the composition
  • a binder such as, for example, polyvinylpyrrolidone, preferably from about 2-10% by weight of the composition
  • the implementation of Memantine and Melatonium is from about 90% by weight of the composition.
  • the composition comprises a diluent, such as lactose monohydrate, in the range of 3-10% by weight of the composition; a disintegrant, for example, carboxymethyl cellulose, preferably from about 2-5% by weight of the composition; a binder, such as polyvinylpyrrolidone, preferably from about 2-5% by weight of the composition; and a lubricant, for example magnesium stearate, preferably from about 0.2-2.0% by weight of the composition.
  • a diluent such as lactose monohydrate
  • a disintegrant for example, carboxymethyl cellulose, preferably from about 2-5% by weight of the composition
  • a binder such as polyvinylpyrrolidone
  • a lubricant for example magnesium stearate, preferably from about 0.2-2.0% by weight of the composition.
  • Memantine with Melatonin comprises from about 60 to 90% or 70-80%) of the composition.
  • these compositions comprise one or more of starches, such as corn starch, lactose monohydrate, microcrystalline cellulose, gelatinized starch, carboxymethyl cellulose; sodium salt of carboxymethyl starch ether; polyvinylpyrrolidone; hydroxypropyl methylcellulose; magnesium stearate; and a mineral salt such as talc.
  • these compositions comprise lactose monohydrate, corn starch, sodium carboxymethyl cellulose, polyvinylpyrrolidone, talc and magnesium stearate.
  • FIG. 1 shows the design of the experiments in Example 1 on the study of substances for functional and morphological disorders caused by the introduction of the beta-amyloid peptide into the lateral ventricle of the mouse brain.
  • FIG. 3 depicts a representative black and white micrograph of a superimage of a section of a brain passing through the dorsal hippocampus.
  • the arrow indicates the route of administration of the beta-amyloid peptide. Rectangles indicate CA1, SAZ of the hippocampus and the area of the sensory-motor cortex.
  • FIG. 4 depicts the effect of test substances on memory impairment in mice caused by amyloid beta in a new object recognition test. Presents the average values of the preference index of the new object.
  • FIG. 5 depicts representative black and white micrographs of the CA1 hippocampus region in control (A) and after administration of amyloid beta into the lateral ventricle of the brain (B).
  • Micrographs B and D show the effect of the combination of memantine 5 mg / kg + melatonin 3 mg / kg (B), memantine 10 mg / kg + melatonin 6 mg / kg (G) on neurodegeneration caused by the introduction of beta-amyloid.
  • Microphotographs were taken at x200 magnification.
  • the arrow shows pycnotic cells stained with hematoxylin-eosin.
  • FIG. 6 depicts representative black and white micrographs of the SAZ hippocampus region in control (A) and after administration of amyloid beta into the lateral ventricle of the brain (B).
  • Micrographs B and D show the effect of the combination of memantine 5 mg / kg + melatonin 3 mg / kg (B), memantine 10 mg / kg + melatonin 6 mg / kg (G) on neurodegeneration caused by the introduction of beta-amyloid.
  • Microphotographs were taken at x200 magnification.
  • the arrow shows pycnotic cells stained with hematoxylin-eosin.
  • FIG. 7 shows representative black and white microphotographs of the sensory motor region of the cortex mouse brain in control (A) and after the introduction of beta-amyloid into the lateral ventricle of the brain (B.
  • Micrographs B and D show the effect of the combination of memantine 5 mg / kg + melatonin 3 mg / kg (B), memantine 10 mg / kg + melatonin 6 mg / kg (G) for neurodegeneration caused by the introduction of beta-amyloid.
  • Microphotographs were taken at a magnification of x200.
  • the arrow shows pycnotic cells stained with hematoxylin-eosin.
  • mice All experiments were performed on male mice of the C57BL / 6 line. Animals were purchased from Harlan (England). The average age of the animals at the time of arrival at the vivarium of the Biomedical Center of the University of Tartu was 5.5 (40 mice) and 6 weeks (20 mice). Upon arrival, animals were quarantined for 2 weeks at the vivarium of the Biomedical Center of the University of Tartu. After which the animals were transferred to the vivarium of the Institute of Pharmacology (room number 3028). Animals were kept in plastic cages (5 mice per cage) measuring 25 cm x 45 cm x 12 cm (WxDxH) without restriction in food and water with a 12-hour light cycle (the light turns on automatically at 8.00).
  • Table 1 shows the scheme of administration of substances.
  • the first administration of the test substances was carried out 24 hours after the injection of amyloid beta into the lateral ventricle of the mouse brain. Substances were administered within 8 days (once a day), at the same time from 9.00 to 11.00 hours. All solutions the test substances were prepared every day immediately before administration and after their preparation were encoded by the leader and transmitted in encoded form to the experimenter. On the 6th and 7th day of the introduction of the test substances with animals, behavioral experiments were carried out (see Figure 1).
  • memantine HCL 5 mg was dissolved in 9 ml of water. Separately, 3 mg of melatonin was weighed, placed in a mortar and 2 drops of Tween-80 emulsifier were added, triturated until a homogeneous mass was formed, adding 1 ml of water in portions. The resulting emulsion was mixed with a solution of memantine (9 ml). Before administration, the emulsion was vigorously shaken on a shaker. The resulting emulsion was administered in a volume of 0.1 ml per 10 g of mouse body weight, which corresponds to doses of memantine 5 mg / kg and melatonin 3 mg / kg.
  • Solutions 1-5 were introduced into the stomach using a metal probe for mice (FTSS-20S-38) from Salomon Scientific (USA).
  • peptide substance 1 mg was dissolved in 1 ml of sterile water and placed in a sterile incubator at a temperature 37 ° C for 96 hours for peptide aggregation (oligomeric form). Immediately before use, the solution was diluted with sterile water to a peptide concentration of 16 nM and introduced into the left lateral ventricle of the mouse brain in the amount of 48 picograms in a volume of 3 microliters.
  • beta-amyloid peptide The introduction of the beta-amyloid peptide into the lateral ventricle of the mouse brain.
  • amyloid beta into the lateral ventricle of the mouse brain was performed under general anesthesia.
  • a mixture of hypnorm (Hypnorm, VetaPharma; Lot P736 / 001; contains 0.315 mg of fentanyl and 10 mg of fluanisone in 1 ml), dormicum (Dormicum, Roche; Lot: F1038F71, 5 mg / ml) and water in a ratio of 1: 1 was used : 2.
  • the mixture was administered ip in a volume of 0.1 ml per 10 g of body weight.
  • the coordinates for introducing amyloid beta into the lateral ventricle were found using a Computer-assisted Stereotaxic system using the parameters of the mouse brain atlas (The Mouse Brain, in Stereotaxic Coordinates, KBJ Franklin and G. Paxinos, 2012).
  • the coordinates for the introduction of amyloid beta with respect to Bregma were as follows: forward - 0.5 mm, laterally - 1 mm, ventrally - 2 mm.
  • a solution of the substance was injected at a speed of 0.75 ⁇ l / min and after the end of the infusion, the needle remained in the brain for 1 min.
  • the control group received an infusion of sterile water in a volume of 3 ⁇ l. After this, the wound was treated with an antiseptic solution, sutured and animals were placed on a heated table until the anesthesia was completely exited.
  • mice Surgical operation caused the death of four mice, one animal in groups intended for the introduction of the studied substances.
  • the animal groups to which memantine or memantine + melatonin was to be administered consisted of 9 mice.
  • a recognition test of a new object was used. This test is widely used. to assess episodic memory in animals and its violation is characteristic of Alzheimer's patients. The test is based on the fact that healthy animals examine a new object much more time than the old one.
  • the experience consisted of three phases: the addictive phase, the training phase and the retention phase.
  • mice were individually placed in a wooden box measuring 50 cm x 50 cm x 50 cm (length x width x height), located in an experimental room dimly lit by incandescent lamps, with a constant light of 60 lux.
  • the box floor was divided into 16 identical squares with a side length of 12.5 cm.
  • the animal was in the box for 5 minutes and the experimenter recorded the number of crossed squares. This indicator, in the future, was used to assess the motor activity of mice. After 5 minutes, the animal was removed from the box and the floor of the box was rubbed with a 5% ethanol solution to eliminate odor.
  • the training phase was conducted. For this, the animal was again placed in the center of the box on the floor of which two identical objects were installed. The objects were two wooden cubes located in opposite corners of the box (Fig. 2). The animal was given the opportunity to examine objects for 5 minutes, and at the same time, the time during which the animal examined each of the objects was recorded. These data are necessary to assess the degree of motivation and research activity of animals. After each animal, the box floor was wiped with a 5% ethanol solution. At the end of the experiment, the animal was placed in a home cage. 3) Retention phase
  • test substances were administered to the mice (seventh injection) and 1 hour after the administration of the substances, the animals were again placed in the study box, in which one object was replaced with a new object of a different shape and color (Fig. 3) .
  • the research preference coefficient of a new object was presented as the ratio of the time of research of a new object in relation to the total time of research of the old and new objects according to the formula (Tnov x100) / (Tst + Tnov), where Tst and Tnov are the time of investigation of the old and new objects.
  • Sagittal sections of the brain (40 ⁇ m thick) passing through the dorsal hippocampus were prepared using a vibrating microtome (Leica, Germany). Slices were placed on plates (one slice per well) filled with 0.1 M phosphate buffer and stored at 4 ° C (shelf life 3-4 days). For each animal, 4 sections were selected passing through the dorsal hippocampus. For this, all slices from each animal were distributed into a series of 6 slices each. For each animal, the selection of sections was carried out based on the Cavalieri principle: first, a section was randomly selected from the first series and then from each subsequent series was taken slice with the same serial number.
  • Staining was performed on free-floating sections in a 24-seater plate. Sections were washed in 0.1 M phosphate buffer, then incubated in a solution of 0.025% trypsin (Sigma, USA) and 0.1% CaC in phosphate buffer for 10 min. After washing the sections in phosphate buffer, 0.25% Triton x-100 solution (Sigma, USA) was added to them and the sections were incubated for 1 hour.
  • pycnotic cells were analyzed and counted in the structures CA1 and CAS of the hippocampus and sensorimotor region of the cortex. Pycnotic cells were defined as cells containing condensed hyperchromic nuclei, nuclear fragments, and condensed cytoplasm. Counting was carried out in each square, as shown in FIG. 5, 6, 7. The square area was set by the NewCast program and, depending on the size of the structure and cell density, it varied in the range of 0.1-0.5 mm 2 .
  • the number of pycnotic cells and the area on which they were determined on four selected sections were summed up and the average density of pycnotic cells per 1 mm 2 section was calculated and calculated.
  • the obtained mean densities of pycnotic cells in the CA1, SAH areas of the hippocampus and the sensorimotor region of the cortex for each animal were subsequently used for statistical analysis.
  • mice For each group of mice, the mean values (M) were calculated ⁇ the standard error of the mean (t). Further, the data were analyzed using the Student's ⁇ -test (control and beta-amyloid), one-way analysis of variance, followed by the retrospective Bonferroni criterion (action of the studied substances, dose effect). In a comparative assessment of the action of combinations of substances, two-way analysis of variance was used. Differences between groups were considered significant at p ⁇ 0.05. Statistical data processing was performed using statistical software GraphPad PRISM-5 (USA).
  • a therapeutic daily dose of memantine of 20 mg / day provides a plasma concentration level of 0.5-1 ⁇ mol / liter of plasma (12).
  • memantine concentrations (1 ⁇ mol / liter of plasma) were observed after administration of memantine at a dose of 30 mg / kg / day (9). Since the aim of the study was to analyze whether melatonin can enhance the action of memantine, in the study, memantine was used in doses lower than those that give the maximum therapeutic plasma concentrations. In this study, doses of memantine 5 and 10 mg / kg were used, and, accordingly, the concentrations of memantine in these doses should be lower than the maximum therapeutic (1 ⁇ mol / liter of plasma).
  • mice have reverse rhythms, and their sleep phase coincides with daytime, the calming effect of the memantine + melatonin combination on hyperactivity of mice in the daytime indicates the restoration of normal circadian rhythms, which may have therapeutic value in patients with Alzheimer's disease.
  • mice of the control group showed a pronounced preference in the study of a new object: the index of preference in the control group was 87.8 D2.3%. 7 days after the injection of beta amyloid into the lateral ventricle of the brain in mice, a decrease in the preference index of the new object to 49.7 P 14% was observed. Statistical analysis showed a highly reliable (p ⁇ 0.0001, Student t-test) difference compared with the control group. A decrease in the preference index indicates memory impairment in mice after administration of beta-amyloid. Memantine and memantine in combination with melatonin increased the preference index, which indicates an improvement in memory impaired by the introduction of beta-amyloid.
  • the next step in the statistical analysis was to compare whether the combination of memantine + melatonin is different from the action of memantine in terms of anti-amnestic effect.
  • two-way analysis of variance was used, where one factor was “substance” and another factor was “dose” (Table 4).
  • Table 4 shows the average values of the index of preference for a new object ⁇ standard errors of the mean per group of 9 animals.
  • the effect of the melatonin + memantine combination on neuronal death caused by the administration of amyloid beta in the CA1 region is shown in FIG. 5.
  • the results of statistical analysis are shown in Table 5.
  • the active substances Melatonin 3 mg / Memantine 10 mg were taken; Melatonin 5 mg / Memantine 20 mg;
  • the passive avoidance reaction test is the main model for assessing the effect of substances on the formation and reproduction of short-term memory in normal and in the conditions of its violation, artificial amnesia. And passive avoidance reaction is the most informative of the methods used today to assess the effectiveness of substances with the effect on the central nervous system of mammals ("Guide to experimental (preclinical) study of new pharmacological substances ”, 2000).
  • the passive avoidance reaction (conditioned reflex of passive avoidance in a dark, light chamber) in mice was performed on the basis of electrodermal reinforcement according to the method of Cumin et al. (1982) taking into account the recommendations of Mondadori et al. (1990).
  • the mouse installation of Lafayette Instrument Co., USA was a black chamber with an electrode floor and a white plastic platform, which was placed on the floor in the center of the chamber. Mice, one at a time, were placed on a plastic platform. Animals descend / jump from the platform onto the electrode floor, where they receive an electric shock, the so-called punishment. Electric current was supplied, the field as the animal rested with all four paws. The natural reaction of the animal is to return to a dead or safe platform. After several minutes of training, on average about 5 minutes, passive avoidance reaction was developed in mice and they remained on a safe platform. Tests for memorizing passive avoidance reaction were carried out at successive intervals after an amnesic effect.
  • test substances and isotonic sodium chloride solution were carried out in comparison with Melatonin 5 mg (monopoly) and Memantine 10 mg (monopoly), in accordance with the above the formula for adapting to animal models in / b the introduction to the training of mice, once a day, for 5 days.
  • the combination can be indicated in medical conditions that are accompanied by clinical manifestations of organic psychosyndrome (and its most significant component - dementia): Alzheimer's disease, vascular (multi-infarction) dementia, alcoholism, intracranial volume processes - tumors, subdural hematomas and brain abscesses, anoxia, cranial brain injury, normotensive hydrocephalus, Parkinson's disease, Huntington's chorea, progressive supranuclear palsy, Peak's disease, amyotrophic lateral sclera h, spinocerebellar degeneration, ophthalmoplegia in combination with metachromatic leukodystrophy (adult form), Gellerwarden-Spatz disease, hash psychosis, advanced stages, infections, Creutzfeldt-Jakob disease, viral encephalitis, progressive multifocal leukocytic leukemic leukemia, meningitis; Deficit states, Gaye-Wernicke-Korsakov

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области фармакологии и практической медицины, а именно к комбинированному применению лекарственных препаратов, обладающих нейротропным действием, облегчающим проявления психических, поведенческих, когнитивных расстройств при органическом поражении ЦНС различного генеза, а также при проявлениях амилоидной интоксикации. Фармацевтическая комбинация содержит Мелатонин и Мемантин в терапевтически эффективных количествах.

Description

Комбинация для лечения и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях ЦНС различного генеза
Область техники
Изобретение относится к области фармакологии и практической медицины, а именно к комбинированному применению лекарственных препаратов, обладающих нейротропным действием, облегчающим проявления психических, поведенческих, когнитивных расстройств при органическом поражении ЦНС различного генеза, а также при проявлениях амилоидной интоксикации.
Предшествующий уровень техники
Известно [«Эндогенно-органические психические заболевания» - Тиганов А.С. (под. ред.)], что психоорганические расстройства возникают, например, на фоне медленно прогрессирующего клинически «безинсультного» течения болезни, нейродегенеративных заболеваний, токсического повреждения мозга, метаболического повреждения мозга, повреждении мозга вследствие употребления психоактивных веществ или любых других экзогенных симптоматических заболеваний ЦНС или в результате острых нарушений мозгового кровообращения.
Например, на долю психоорганического синдрома, не достигающего степени деменции, сосудистого генеза приходится 25% диагностированных случаев психической патологии, у лиц старше 60 лет, обратившихся в общую поликлинику [Михайлова Н. М., 1996]. У таких больных могут определяться психоорганические расстройства с явлениями торпидности, замедленностью психомоторных реакций, легкими дисмнестическими расстройствами, нарушениями внимания и в значительной мере соответствуют критериям «мягкого когнитивного расстройства» (МКБ-10, рубрика F06.7 «Легкое когнитивное расстройство»).
О наличии органического психосиндрома при сосудистых заболеваниях головного мозга говорят обычно, когда наблюдающиеся изменения личности свидетельствуют о более или менее выраженном снижении ее уровня (утрата более тонких и дифференцированных личностных установок и форм поведения, черты расторможенности низших влечений и т.п.). Кроме того, обнаруживаются дисмнестические расстройства, неточности ориентировки («нарушение внутренних часов»), снижение продуктивности умственной деятельности, критики и уровня суждений, оскуднение и обеднение представлений, снижение объема и четкости восприятия. Во время гипертонических кризов возможны отдельные психотические проявления, рудиментарные галлюцинозы - расцениваемые как преходящие психические расстройства, которые исчезают с понижением уровня артериального давления.
Из перечня расстройств, входящих в органический психосиндром, вытекает близость, если не идентичность, этих состояний с нерезко выраженными, находящимися в начальной стадии своего развития, симптомами деменций.
Выраженность проблемы психических нарушений, в частности, сосудистого генеза во многом предопределяется широкой распространенностью. У лиц старше 45 лет, имеющих в своем анамнезе: гипертоническую болезнь и атеросклероза мозговых сосудов (Кушаковский М.С., 1995; Гогин Е.Е., 1997; Виленский Б.С., 1999; Волков B.C., Поздняков Ю.М., 1999; Мякотных B.C. с соавт., 1999; Кузьменко В.М., 2001; Скворцова В.И. с соавт., 2006; Kaplan N.M., Lieberman Е, 1994; Glassman A.H, 1997; Hypertension control, 1997; Gross-Magnat G, 2000; Martin G.M., 2000, и др.). Эти данные подтверждают значительную роль указанных форм патологии, как причину психических нарушений в этом возрасте. Установлено, что в этом случае, присутствуют признаки органических изменений, не достигающих, тем не менее, степени развернутой деменций (Гаврилова СИ. с соавт., 1995; Медведев А.В., 1999; WHO Task Force, 1989; Hachinski V., 1994; Murphy E., Alexopoulos G., 1995, и др.). Такая совокупность и есть понятие "психоорганический синдром" (Штернберг Э.Я., 1983; Тиганов А.С., 1983, 1999; Пивень Б.Н., 1996; Вандыш-Бубко В.В., 2003; Gerts HJ., anowski S., 1983; Reisberg В., 1986; Schmage N. et al., 1989; Yanagihara Т., 1991 ; Holmes C, et al., 1999; Holland A. J., 2000; Wesnes K.A., Harrison J.E., 2003, и др.). В то же время при данном состоянии отмечена типичность сочетания когнитивных нарушений с другими психопатологическими проявлениями, главным образом непсихотическими (Лебедев Б.А., 1988; Михайлова Н.М., 1996; Попов Ю.В., Вид В.Д., 1997; Челышева И. А, 1997; Михайлова Н.М., ладова А.Ю., 1999; Пивень Б.Н. с соавт., 2006; Finkel S.I., 1996; Kurz А., 1998; Lyketsos C.G. et al, 1999, и др.).
Манифестация проявлений психоорганического синдрома, например сосудистого происхождения, в большей части, имеет место в зрелом, пожилом и старческом возрасте (по классификации ВОЗ) /Мельник Е.М., 1990; Тибилова А.У., 1991, и др./. Что предопределяет необходимость рассмотрения соответствующих терапевтических подходов в контексте общих принципов терапии соответствующих нарушений. В этой связи важно заметить, что снижение компенсаторных возможностей у пожилых пациентов способствует их повышенной чувствительности к психотравмирующим и сомато-биологическим воздействиям, которые могут затруднять осуществление лечебного процесса и снижать его результативность (Тибилова А.У., 1990; Тибилова А.У., Мельник Е.М., 1993; Finch Е., irkwood Т., 2000, и др.). В возрасте старше 45 лет подобные воздействия отмечаются достаточно часто. К ним относятся потеря близких с формированием ситуации одиночества, выход на пенсию, снижение физических возможностей, "накопление" хронических соматических заболеваний (Шахматов Н.Ф., 1996; Анисимов В.Н., Соловьев М.В., 1999; Шабалин В.Н., 1999; Victor К., 1987; Eisendrath S.J, 1992; Murphy Е.А., 1994; Arking R, 1998, и др.). При этом некоторые варианты соматической патологии не только оказывают прямое биологическое влияние на психическое состояние, но и включают мощный психотравмирующий фактор, поскольку расцениваются пациентами как угроза их физическому здоровью и самой жизни (Крылов В. И. с соавт., 1985; Незнанов Н.Г, 1985; Гнездилов А.В., 2002, и др.).
Поскольку, имеется тенденция к увеличению срока жизни (так называемого срока дожития), улучшения медицинского обслуживания, увеличение информационной нагрузки и других, в том, числе стрессовых ситуаций, актуальность проблемы психоорганичекого синдрома нарастает.
Отдельную проблему представляет рациональное проведение фармакотерапии с учетом возраста пациентов. В этом плане, наряду со значимостью соблюдения общих принципов применения медикаментозных средств в терапии, существенные особенности имеет и лечение больных позднего возраста специализированными средствами для коррекции как возрастных изменений, так когнитивных функций. Причем расширение круга препаратов нового поколения во многом должно решить проблему безопасного проведения психофармакотерапии этих возрастных групп.
Основным клиническим проявлением психоорганического синдрома наряду с расстройством памяти, внимания, астении, является специфическое расстройство цикла «сон-бодрствование», со снижением уровня бодрствования днем и расстройством ночного сна. Такое расстройство ритма является фактором как самостоятельно ухудшающим функционирование больного, так и усугубляющим другие симптомы заболевания.
Имеется данные о том, что при острых и долгосрочных последствиях спортивной черепно-мозговой травмы (ЧМТ), повреждение аксона вызывает как регенеративные и дегенеративные реакции в тканях мозга и повторяющиеся сотрясения могут инициировать долгосрочный нейродегенеративный процесс, вызывающий, т.н. боксерскую деменцию или хроническую травматическую энцефалопатию (СТЕ). Хроническая травматическая энцефалопатия во многом напоминает другие нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера, в частности в отношении метаболизма и агрегации тау, бета-амилоида и TDP-43 (TAR- DNA binding protein) [Neuron. 2012 Dec 6; 76 (5): 886-99. doi: 10.1016/j.neuron.2012.11.021. The neuropathology and neurobiology of traumatic brain injury. Blennow K, Hardy J, Zetterberg H.]. Известно, что у больных с гиперпродукцией бета- амилоида стабилизации состояния способствовало применение НПВС, в частности индометацина (Rogers J„ et al., Clinical trial of indomethacin in Alzheimer's disease Neurology, 1993 Aug; 43 (8): 1609-11).
Также было изучена роль циклооксигеназы- 1 в бета- амилоида-индуцированной нейровоспалении и предприняты попытки использования ингибиторов ЦОГ (циклооксигеназы) в качестве протекторов от развития болезни Альцгеймера (А role for cyclooxygenase- 1 in beta-amyloid-induced neuroinflammation, Eduardo Candelario-Jalil AGING, Vol 1, No 4, pp 350-353).
При нейродегенеративных процессах, а также при ишемии головного мозга важную патогенетическую роль играет гиперактивация глютаминергической системы. Поэтому для лечения легкого когнитивного расстройства исследователями предполагалась возможность использования антагонистов NMDA рецепторов.
Несмотря на многочисленные работы, подтверждающие полезность использования препаратов в клинической практике ведения больных с органическими поражениями ЦНС различного генеза, попытки разработать более эффективные средства и способы лечения больных с подобными нарушениями в связи с ростом заболеваний, сопровождающихся целым комплексом нарушений. В частности, были предприняты попытки создания комбинаций препаратов.
Известны патенты: ЕА 007632 «Комбинация NMDA- антагониста и ингибиторов ацетилхолинэстеразы для лечения болезни Альцгеймера»; ЕА 008863 «Комбинированная терапия с использованием производных 1-аминоциклогексана и ингибиторов ацетилхолинэстеразы»; ЕА 009668 «IFN-бета в отдельности или в комбинации с другими лекарственными средствами для лечения болезни Альцгеймера и нарушений, связанных с деменцией»; ЕА 010430 «Сочетание антагониста NMDA-рецептора и селективного ингибитора обратного захвата серотонина для лечения депрессии и других психических расстройств». Однако указанные комбинации эффективны при конкретных патологиях ЦНС.
Мемантин - потенциалзависимый, средней аффинности неконкурентный антагонист NMDA-рецепторов. Мемантин блокирует эффекты патологически повышенного уровня глутамата, который может привести к дисфункции нейронов. Оказывает нейропротективное, антиспастическое, противопаркинсоническое действия. Тормозит глутаматергическую нейротрансмиссию и прогрессирование нейродегенеративных процессов, оказывает нейромодулирующее действие. Способствует нормализации психической активности, улучшает память, повышает способность к концентрации внимания, коррекции двигательных нарушений [Ditzler К. Efficacy and tolerability of memantine in patients with dementia syndrome. A double-blind, placebo controlled trial. Arzneimittel-Forschung. 1991 ; 41 : 773- 80.]. Помимо основного механизма действия (влияние на глутаматергическую трансмиссию), мемантин обладает дополнительным серотонинэргическим эффектом
(неконкурентный антагонист 5НТЗ -рецепторов) и, возможно, его антидепрессивный эффект обусловлен именно этим механизмом. Клинически антидепрессивное действие мемантина показано в ряде работ на модели большой депрессии [Ferguson JM, Shingleton P N. An open-label, flexible- dose study of memantine in major depressive disorder. Clin.Neuropharmacol 2007; 30 (3); 136-44.].
При однократном введении мемантина пик его концентрации в головном мозге достигается через 1 ч. Период полувыведения мемантина достаточно длителен и составляет около 100 ч. Столь долгий период полувыведения позволяет предположить, что данный лекарственный препарат обладает эффектом накопления при хроническом приеме. Так, при однократном введении мемантина концентрация дофамина остается неизменной, но при длительном применении концентрация дофамина в передних отделах головного мозга возрастает в 10 раз и более. Чем длительнее применяется мемантин, тем больше нарастает концентрация дофамина. Анализ концентрации метаболитов дофамина показал, что результатом применения мемантина является увеличение не только высвобождения, но и синтеза дофамина [Hesselink MB, De Boer AG, Breimer DD et al. J Neural Transm 1999; 106: 803- 18.].
Из данных литературы известно, что хроническое введение мемантина оказывает влияние на увеличение концентрации не только дофамина, но и ацетилхолина, а также способствует увеличению количества мускариновых церебральных рецепторов. Таким образом, можно предположить, что этот препарат оказывает сложное опосредованное медиаторное действие как на нейроны коры лобных долей, так и на энторинальную кору и ее связи с теменно-височными отделами головного мозга.
Второй аспект терапевтической активности мемантина - нейропротективное действие. Этот эффект является непосредственным результатом блокады NMDA-рецепторов, закрытия ионотрофных каналов и, соответственно, стабилизации клеточной мембраны, что защищает клетки от гибели. Нейропротективное действие мемантина было доказано на модели церебральной ишемии в эксперименте [Danysz W, Parsons CG, Mobius H-J etal. NeurotoxRes 2000; 2: 85-97.]. Превентивное введение мемантина уменьшало зону ишемической полутени, выраженность церебрального отека, а также уменьшало площадь самого очага ишемии. Сходный результат был получен на других моделях поражения головного мозга. Предполагается, что мемантин может оказывать стимулирующий эффект на синтез ряда нейротрофических факторов, в частности, мозгоспецифического нейротрофического фактора (brain- derived neurotrophic factor), что также приводит к стабилизации нейрональной мембраны и защите клетки от гибели.
Было показано, что применение антагонистов NMDA- рецепторов оказывает позитивный эффект на когнитивные функции пациентов при болезни Паркинсона [Дамулин И.В. Рус. мед. журн. 2001 ; 9 (25): 1178-82., Литвиненко И.В., Одинак М.М. Журн. неврол. и психиатр, им. С.С.Корсакова. 2004; 4: 76-81.].
Мемантин (1-амино-3,5-диметил адамантана) является аналогом 1-амино-циклогексана. Формула раскрыта, например, в патентах США NN 4,122, 193; 4,273, 774; 5,061, 703. Мемантин и другие 1-аминоалкилциклогексаны доказали свою полезность в снижение различных прогрессивных нейродегенеративных расстройств, таких как деменция у пациентов с умеренной и тяжелой болезнью Альцейгемера, болезнь Паркинсона, и мышечная спастичность что раскрыто в патентах США ° 5,061, 703; 5,614, 560 и 6,034, 134.
Известно также применение мемантина в качестве нейропротектора при амилоидной интоксикации (Hidalgo JJM, Alvarez ХА, Cacabelos R, Quack G. Neuroprotection by memantine against neurodegeneration induced by beta-amyloid (1- 40). Brain Research, 2002, v.958, 210-221). Мелатонин (N- ацетил-5-метокситриптамин) - нейропептид, синтезирующийся в основном эпифизом, и обладающий рядом уникальным свойств на организм человека и млекопитающих. Значимым является факт циркадианной (околосуточной) периодичности выработки в пинеалоците биологически активных соединений. Синтез мелатонина эффективно происходит только с наступлением темноты и падает в светлую фазу суток - факт, впервые показанный R.Wurtman в 1960 году. Достаточно короткого светового импульса (силой 0,1-1 lux), чтобы подавить этот процесс. В дневные часы в ткани железы, напротив, накапливается серотонин. Дневной ритм продукции мелатонина зависит от активности NAT в сетчатке, которая, в свою очередь, зависит от ионов кальция, дофамина и гамааминомасляной кислоты (ГАМК). С помощью мелатонина эпифиз участвует в организации суточного периодизма и в регуляции циклических процессов, выступаяпосредником между пейсмекерным механизмом супрахиазматических ядер (СХЯ) и периферическими органами. Эпифиз вместе с СХЯ гипоталамуса входит в систему так называемых биологических часов организма, играющих ключевую роль в механизмах «счета внутреннего времени» и старения [Арушанян Э.Б., 2005; Анисимов В.Н., 2007]. Основными функциями эпифиза в организме являются: регуляция циркадианных и сезонных ритмов; регуляция репродуктивной функции; антиоксидантная защита и противоопухолевая защита [Анисимов В.Н., 1998, 2003]. Хотя основным источником мелатонина, циркулирующего в крови, является эпифиз, обнаружен и паракринный синтез мелатонина практически во всех органах и тканях: тимусе, желудочно- кишечном тракте, гонадах, соединительной ткани [Reiter R.J.; Райхлин И.М., Кветной И.М.; Huether G.].
По мере возраста эпифиз людей и животных, как и тимус, инволюцирует. Уменьшается число активных секреторных элементов железы, пинеалоцитов, с падением выработки мелатонина. Примерно к 45 годам в плазме содержится лишь половина того количества гормона, которое вырабатывается в юношестве. У пожилых людей, при этом, еще и меняются амплитуда и динамика суточной секреции мелатонина [Коркушко О.В., Хавинсон В.Х., Шатило В. Б. Пинеальная железа: пути коррекции при старении. СПб. Наука - 2006. 204 с, Reiter RJ. The aging pineal gland and its physiological consequences // BioEssays - 1992. - V.14. - p.169-
175., Skene D.J., Swaab D.F. Melatonin rhythmicity: effect of age and Alzheimer disease // Exp. Gerontol. - 2003. - V.38. - p.199-
206.1. В экспериментах на животных и наблюдение за терапией пожилых людей, как в норме, так и при различных формах церебральной патологии, включая сосудистого характера, мелатонин улучшает процессы памяти, зрительного и слухового восприятия, концентрация внимания. Данными фактами определяются лечебные возможности мелатонина в качестве потенциального ноотропного агента [Арушанян Э.Б. Гормон эпифиза мелатонин - новое ноотропное средство? // Экспер. и клин, фармакол. - 2005. - Т.68. - с.74-79., Арушанян Э.Б. Эпифизарный гормон мелатонин и неврологическая патология // Рус. мед. журн. - 2006. - Т.14. - с.1057-1063.]. В опытах на моделях острого нарушения мозговой гемодинамики у животных: тотальная или фокальная ишемия за счет окклюзии артерий, фототромбоз мелатонин неизменно оказывал отчетливый нейропротективный эффект [Reiter R.J., Tan D.X, Leon J. etal. When melatonin gets of your nerves: its beneficial actions in experimental models of stroke // Exp. Biol. Med. - 2005. - V.230. - p.104-117.]. У мышей на модели закрытой травме мозга, применение гормона в течение недели ускоряло нормализацию поведения животных и восстановительные процессы в очаге повреждения в виде уменьшения его размеров с повышением плазменного содержания ряда антиоксидантов, включая аскорбиновую кислоту [Beni S.M., Kohen R., Reiter R.J. etal. Melatonin-induced neuroprotection after closed head injury is associated with increased brain antioxidants and attenuated late-phase activation ofNF-kB and AP-1 // FASEB J. - 2004. - V.18. - p.149- 151., Mesenge C, Verrecchia C, Boulu R.G. Neuroprotection by melatonin in mice submitted to brain injury // Naunyn. Schmiedeberg's Arch. Pharmacol. - 1998. V.358. - p.R32/]. Данные, полученные с помощью объективных методов визуализации (магнитно-ядерногорезонанса), показали, что повторное введение крысам мелатонина в 2 раза снижает объем ишемического отека мозга [Torii К., Uneyama Н., Nishino Н. Melatonin suppresses cerebral edema caused by middle cerebral artery occlusion/reperfusion in rats assessed by magnetic resonance imaging. // J.PinealRes. - 2004. - V.36. - p.18-24.]. Учет морфометрических характеристик нейронов различных церебральных образований таких как: неокортекса, гиппокампа, стриатума, с данными с магнитно-ядерного резонансной томографии позволяет выявить статистически значимый защитный эффект эпифизарного гормона, где с его помощью удавалось сохранить жизнеспособность значительного числа клеточных элементов. При этом существенно ограничивалась выраженность мозгового отека. Отмечен факт, что в коре больших полушарий отек ослабевал сильнее, чем в полосатом теле [Kondoh Т., Uneyama N., Nishino Н. Melatonin reduces cerebral edema formation caused by transient for ebrainis chemiak in rats // LifeSci. -. 2002. - V.72. - p.583-590., Regriny O., Delagrange P., Scalbert E. et al. Melatonin improves cerebral circulation security margin in rats // Am. J. Physiol. - 1998. - V.275. - p.H139-H134., Sinha K., Degaonkar M.N., Jagannathan N.R. Effect of melatonin on ischemia/reperfusion injury induced by middle cerebral artery occlusion in rats // Eur. J. Pharmacol. - 2002. - V.428. - p.185-192.]. Имеется предположение, что мелатонин эволюционно входит в естественную систему защиты мозга от ишемического повреждения, о чем свидетельствуют результаты опытов на животных, у которых разными способами, экстирпация эпифиза, длительное содержание при ярком освещении, создавали дефицит гормона. При таких условиях оказывались гораздо выраженной очаги инфаркта мозговой ткани при моделировании инсульта путем кортикального фототромбоза или локальной окклюзии срединной церебральной артерии. В то время как инъекции мелатонина на фоне эпифизэктомии, приводили к достоверной защите корковых нейронов от ишемии различной этиологии [Kilic Е., Ozdemir Y., Bolay Н. Pinealectomy aggravates and melatonin administration attenuates brain damage in focal ischemia. // J. Cerebr. BloodFlowMetabol. - 1999. - V.19. - p.511-516.].
Выраженным фактором оксидантного стресса при нарушениях мозгового кровообращения по причине атеросклероза, инсульта или черепно-мозговой травмы признается патологическая гиперактивность глутаминовой кислоты [Гусев Е.И., Скворцова В.И. Глутаматная нейротрансмиссия и метаболизм кальция в норме и при ишемии головного мозга // Успехи физиол. наук. - 2002. - Т.ЗЗ - с.80-93.]. Накопление глутамата в синапсах и межклеточном пространстве ведет к запуску глутамат-кальциевого каскада. Посредством возбуждения М-метил-Э-аспартатных (NMDA) рецепторов глутамат отрывает каналы в нейрональных мембранах для ионов кальция и внутриклеточное накопление их в больших количествах, что неизбежно определяет повреждение клеточных структур. Мелатонин отчетливо сдерживает глутаматную нейротоксичность. Как установлено на культуре изолированных кортикальных нейронов, их повреждение при избытке глутамата или NMDA заметно тормозилось после добавления в инкубационную среду мелатонина. Это происходит в определенной мере за счет его способности связывать кальмодулин и ограничивать функцию NMDA-рецепторов. А эпифизэктомия приводила к увеличению плотности последних с одновременным усилением ПОЛ в различных мозговых образованиях. Мелатонин обеспечивает защиту нейронов от агрессии NO, избыток которого может потенцировать глутаматную нейротоксичность [Guerrero J.M., ReiterRJ., OrtizG. etal. Melatonin prevents increases in neuronal nitric oxide and cyclic GMP production after transient brain ischemia and reperfusion in the Mangolian gerbil // J. Pineal Res. - 1997. - V.23. - p.24-31.]. Мелатонин, также нормализует деятельность митохондрий [El-Abhar H.S., Shaalan М., Barakat М. et al. Effect of melatonin and nifedipine on some antioxidant enzymes and different energy fuels in the blood and brain of global ischemic rats // J. Pineal Res. - 2002. - V.33. - p.87-94.], нетолько лимитирует вследствии гипоксии, дефекты митохондриальной функции, и гиперфосфорилирование белков и дезорганизацию цитоскелета, а также и восстанавливает функцию тирозинкиназного рецепторного аппарата. Который является важным элементом системы фосфорилирования и участвует в репаративных процессах нервной ткани за счет вовлечения в это нейротрофинов [Olivieri G., Often U., Meier F. etal. Beta- amyloid modulates tyrosine kinase В receptor expression in SH SY SY neuroblastome cells: influence of the antioxidant melatonin // Neurosci. - 2003. - V.120. - p.659-665.]. Мелатонин, вероятно, стимулирует нейрогенез и во взрослой нервной ткани.В культуре стволовых клеток выявлено, что они могут экспрессировать мелатониновые рецепторы, преимущественно 1-го типа. Добавление к ним раствором мелатонина в низкой концентрации провоцирует среди прочего индукцию мРНК одного из нейротрофинов - глиального ростового фактора (GDNF) [Niles L.P., Armstrong .J., RinconCastro L.M. etal. Neural stem cells express melatonin receptors and neurotrophic factors: colocalization of the MT 1 receptors with neuronal and glial markers // BMC Neurosci. - 2004. - V.5. - p.41-50.].
Из представленного уровня техники, таким образом, известно применение мемантина или мелатонина при лечении ряда заболеваний ЦНС. Однако клинически эффекты данных препаратов при монотерапии умеренных когнитивных расстройств (УКР) незначительны.
Раскрытие изобретения
Задача настоящего изобретения - создание более эффективной комбинации для устранения нарушений у больных с патологиями мозга, для профилактики, коррекции и терапии проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях ЦНС различного генеза и амилоидной интоксикации. В том числе в случаях умеренных когнитивных расстройств, трудно поддающихся коррекции. Настоящая задача решается применением комбинации, содержащий Мелатонин и Мемантин в терапевтически эффективных количествах, а также разработкой их препаративных форм.
Данную комбинацию назначают млекопитающему, в то числе и человеку.
Для лечения и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях ЦНС различного генеза терапевтически эффективные количества предпочтительно составляют для мелатонина от 0,01 мг до 50 мг и мемантина - от 0,01 до 100 мг. При амилоидной интоксикация в случаях УКР, когнитивного снижения при сосудистых поражениях и посттравматических состояниях терапевтически эффективные количества предпочтительно составляют от 5 до 300 мг мемантина и от 3 до 10 мг мелатонина. При необходимости содержание в лекарственных формах может быть увеличено для Мелатонина до 700 мг и Мемантина до 200 мг.
Комбинация может применяться от 1 до 5 раз в сутки.
Комбинация может быть представлена в виде таблетки, включая сублингвальные формы, капсулы, лекарственной формы с модифицированным высвобождением, инъекционной формы, свечи, порошка для приготовления напитка, капель, включая капли в нос, трансдермальной, трансбуккальной, аэрозольной формы. Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества выбирают для обеспечения доставки терапевтически эффективного в разовой дозе количества Мемантина и Мелатонина в обычной единичной лекарственной форме и для оптимизации стоимости, облегчения и стабильности процесса производства. Необходимое условие для вспомогательных веществ - это инертность, химико-физическая совместимость с Мемантином и Мелатонином. Вспомогательные вещества, используемые в твердых лекарственных формах, как таблетки и капсулы, могут дополнительно включать красители и пигменты, вещества, маскирующие вкус, ароматизаторы, подсластители и адсорбенты.
Разбавители способствуют увеличению размера таблетки при незначительном количестве активного лекарственного вещества. К разбавителям относят лактозу, в формах - альфа- лактоза или бета-лактоза. Различные типы лактозы могут состоять из моногидрата лактозы, моногидрат альфа-лактозы, безводная альфа-лактоза, безводную бета-лактоза и агломерированную лактозу. Прочие разбавители могут включать в себя сахара, такие как сукроза, инвертирований сахар, декстроза и декстраты.
Более предпочтительным разбавителем считается моногидрат лактозы. Еще одним разбавителем может быть микрокристаллическая целлюлоза, в том числе микронизированная. Разбавители могут включать крахмал и производные крахмала. Крахмалы включают природные крахмалы, полученные из различных зерновых и/или других сельскохозяйственных культур. Крахмалы могут также включать предварительно крахмал и крахмал, модифицированный гликолатом натрия. Крахмалы и производные крахмалов несут также в себе свойство дезинтегрирующих веществ. Многие разбавители также действуют как дезинтегрирующие вещества и связующие вещества, и эти дополнительные свойства должны стоит учитывать при технологии изготовления лекарственной композиции. Дезинтегрирующие вещества добавляют с целью разрушения таблетки на частицы активного фармацевтического компонента и вспомогательные, для облегчения растворения и повышения биодоступности терапевтически активных ингредиентов. Крахмал и производные крахмала, в том числе натриевая соль карбоксиметилового эфира крахмала как, например, крахмал, модифицированный гликолатом натрия, являются применяемыми дезинтегрирующими веществами.
Предпочтительным, но не исключительным, дезинтегрирующим веществом может быть желатинированный крахмал. Другим предпочтительным дезинтегрирующим веществом является карбоксиметилцеллюлоза натрия. Связующие вещества используют в качестве вспомогательных фармацевтически приемлемых веществ для влажной грануляции для повышения концентрации терапевтически активных веществ и других вспомогательных ингредиентов в образующих гранулах. Связующее вещество добавляют для улучшения текучести порошка и для улучшения прессования. Связующие вещества включают в себя производные целлюлозы, такие как микрокристаллическая целлюлоза, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза и гидроксипропилцеллюлоза. Другие связующие ингредиенты выбраны из таких веществ, как повидон, поливинилпирролидон, желатин, природная камедь, а именно акациевая, трагакантовая, гуаровая и пектиновая смола, крахмальная паста, предварительно желатинированный крахмал, полиэтиленгликоли и альгинат натрия.
Антифрикционными агентами являются смазывающие и скользящие вещества, которые применяются в производстве твердых лекарственных формах с целью препятствования склеивания таблетки с технологическими поверхностями и для уменьшения налипания во время стадий прессования. Такие вещества включают стеариновую кислоту, соли стеариновой кислоты, например стеарат кальция, стеарат магния и стеарил фумарат натрия, тальк, бензоат натрия, ацетат натрия и олеат натрия. Лекарственные формы для ректального применения могут представлять собой растворы или суспензии или их можно получать в форме суппозиториев, содержащих активные вещества в смеси с нейтральной жировой основой, или желатиновых ректальных капсул, содержащих активные вещества в смеси с растительным маслом или вазелиновым маслом.
Растворы для парентерального применения посредством инъекции можно получить в виде водного раствора водорастворимой фармацевтически приемлемой соли активных веществ, предпочтительно в концентрации от приблизительно 0,5% до приблизительно 2% по массе. Эти растворы могут содержать также стабилизаторы и/или буферные вещества и их можно для удобства получать в ампулах с различными единицами дозирования.
Один из вариантов включает применение комбинаций для лечения заболевания и/или нарушения у людей, нуждающегося в этом, которое включает пероральное введение ее терапевтически эффективного количества по настоящему изобретению.
Сочетание активных компонентов влючают в фармацевтическую композицию для орального введения, которая предпочтительно выполнена в виде твердой лекарственной формы, содержащей мемантин и мелатонин в и вспомогательные вещества, включающие, по крайней мере, один разбавитель, выбранный из лактозы, крахмала, производного крахмала, микрокристаллической целлюлозы, сукрозы, инвертированого сахара, декстрозы и декстрата, по крайней мере, один дезинтегрирующегий агент, выбранный из натрий карбокиметилцеллюлозы, Кроскармелозы, желатинированного крахмал, связующее, выбранное из поливинилпирролидона, желатина, производных целлюлозы, природных камедей, полиэтиленгликолей, альгината натрия,антифрикционный агент, выбранный из стеариновой кислоты и/или ее солей, коллоидного диоксида кремния, талька, бензоата натрия, ацетата натрия и олеата натрия при следующем содержании компонентов в мас.%:
Мемантин 40,0-90,0
Мелатонин 2,0-5,0
Разбавитель 2,0-50,0
Связующее 3,5-10,0
Дезинтегрирующий агент 1 ,5-10.0
Антифрикционный агент 0,2-3,0
Для получения препарата, в частности, композицию Мемантина с Мелатонином смешивают с различными вспомогательными с получением твердой формы Мемантина с Мелатонином.
Дополнительный аспект настоящего изобретения включает способ получения препаративных форм заявляемой композиции. Данный способ предусматривает получение твердой лекарственной формы заявляемой композиции, предпочтительно путем мокрого смешивания активных ингредиентов и вспомогательных веществ с водой, и с дальнейшим сушкой и измельчением гранулированной смеси.
В некоторых наиболее выбранных вариантах реализации активное начало составляет примерно 40,0% от массы композиции, моногидрат лактозы составляет примерно 28,7%, микрокристаллическая целлюлоза составляет примерно 10,4%, крахмал составляет примерно 10,9%, карбоксиметилцеллюлоза составляет примерно 4,0%, поливинилпирролидон составляет примерно 5,2% и стеарат магния составляет примерно 0,8%.
В еще вариантах осуществления Мемантин и Мелатонин составляет примерно от 70-80% от массы композиции. Предпочтительно данная композиция содержит разбавитель, такой как моногидрат лактозы, предпочтительно примерно от 3-20% от массы композиции; дезинтегрирующее вещество, как, например, поперечно-сшитая карбоксиметилцеллюлоза натрия, предпочтительно примерно от 2-10% от массы композиции; связующее вещество как, например, поливинилпирролидон, предпочтительно примерно от 2-10% от массы композиции; и смазывающее вещество, как, например, стеарат магния, предпочтительно примерно от 0,2- 2,0% от массы композиции.
В дополнительных вариантах осуществления Мемантин и Мелатонин составляет примерно 80% от массы композиции, разбавитель представляет собой моногидрат лактозы, который составляет от 8 до 15% от массы композиции; дезинтегрирующее вещество представляет собой карбоксиметилцеллюлозу, которая составляет от 1 до 10% от массы композиции; связующее вещество представляет собой поливинилпирролидон, который составляет от 1 до 10% от массы композиции; и антифрикционный смазывающий агент представляет собой стеарат магния, который составляет 0,2- 2,0% от массы композиции.
В некоторых более предпочтительных вариантах осуществления разбавитель представляет собой моногидрат лактозы, и он может составлять примерно 9,5% от массы композиции, дезинтегрирующее вещество представляет собой кроскармелозу, и оно может составлять примерно 5% от массы композиции, связующее вещество представляет собой Повидон, и оно может составлять примерно 5% от массы композиции, и смазывающее вещество представляет собой стеарат магния, и оно может составлять примерно 0,5% от массы композиции.
В других вариантах осуществления Мемантин и Мел атонии составляет около от 90% от массы композиции. Предпочтительно, но не исключительно, данная композиция содержит разбавитель, как моногидрат лактозы, в пределах от 3-10% от массы композиции; дезинтегрирующее вещество, например, карбоксиметилцеллюлоза, предпочтительно примерно от 2-5% от массы композиции; связующее вещество, как например, поливинилпирролидон, предпочтительно примерно от 2-5% от массы композиции; и смазывающее вещество, например, стеарат магния, предпочтительно примерно от 0,2-2,0% от массы композиции. В других более предпочтительных вариантах осуществления разбавитель представляет собой моногидрат лактозы, и он может составлять примерно 3,5% от массы композиции, дезинтегрирующее вещество представляет собой кроскамелозу, и оно может составлять примерно 3% от массы композиции, связующее вещество представляет собой Повидон, и оно может составлять примерно 3% от массы композиции, и смазывающее вещество представляет собой стеарат магния, и оно может составлять примерно 1% от массы композиции.
В другом варианте осуществления описываемого изобретения предусматривает содержание 50, 100 или 150 мг Мемантина и 3 мг, 5 мг или 10 мг Мелатонина, где Мемантини/ Мелатонин составляют от 45 до 90% от массы композиции. В других вариантах реализации Мемантина с Мелатонином составляет примерно от 60 до 90% или 70-80%) композиции. В другом варианте осуществления данные композиции содержат один и более из крахмалов, такой как кукурузный крахмал, моногидрат лактозы, микрокристаллическую целлюлозу, желатинированный крахмал, карбоксиметилцеллюлозу; натриевую соль карбоксиметилового эфира крахмала; поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюлозу; стеарат магния; и минеральную соль, такую как тальк. В дополнительном варианте осуществления данные композиции содержат моногидрат лактозы, кукурузный крахмал, карбоксиметилцеллюлозу натрия, поливинилпирролидон, тальк и стеарат магния.
В следующем варианте осуществления данные композиции содержат моногидрат лактозы, микрокристаллическую целлюлозу, желатинированный крахмал, карбоксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и стеарат магния. В другом варианте осуществления данные композиции содержат моногидрат лактозы, карбоксиметилцеллюлозу натрия, поливинилпирролидон и стеарат магния.
Краткое описание фигур чертежей На Фиг. 1 отображена схема постановки опытов в Примере 1 по изучению веществ на функциональные и морфологические нарушения, вызванные введением пептида бета-амилоида в латеральный желудочек мозга мышей.
На Фиг. 2 представлена схема опыта в Примере 1 по изучению эпизодической памяти в тесте распознавания нового объекта у мышей
Фиг. 3 отображает репрезентативную черно-белую микрофотографию суперимиджа среза мозга, проходящего через дорсальный гиппокамп. Стрелкой отмечен путь введения пептида бета-амилоида. Прямоугольниками отмечены СА1 , САЗ области гиппокампа и область сенсорно-моторной коры. Фиг. 4 отображает влияние исследуемых веществ на нарушения памяти у мышей, вызванные бета-амилоидом, в тесте распознавания нового объекта. Представлены средние значения индекса предпочтения нового объекта.
Фиг. 5 отображает репрезентативные черно-белые микрофотографии области гиппокампа СА1 в контроле (А) и после введения бета-амилоида в латеральный желудочек мозга (Б). На микрофотографиях В и Г показано действие комбинации мемантин 5 мг/кг +мелатонин 3 мг/кг (В), мемантин 10 мг/кг + мелатонин 6 мг/кг (Г) на нейродегенерацию, вызванную введением бета-амилоида. Микрофотографии были получены при увеличении х200. Стрелкой, в качестве иллюстрации, показаны пикнотические клетки, окрашенные гематоксилин-эозином.
Фиг. 6 отображает репрезентативные черно-белые микорофотографии области гиппокампа САЗ в контроле (А) и после введения бета-амилоида в латеральный желудочек мозга (Б). На микрофотографиях В и Г показано действие комбинации мемантин 5 мг/кг +мелатонин 3 мг/кг (В), мемантин 10 мг/кг + мелатонин 6 мг/кг (Г) на нейродегенерацию, вызванную введением бета-амилоида. Микрофотографии были получены при увеличении х200. Стрелкой, в качестве илюстрации, показаны пикнотические клетки, окрашенные гематоксилин-эозином.
Фиг. 7 отображает репрезентативные черно-белые микорофотографии сенсорно-моторной области коры головного мозга мыши в контроле (А) и после введения бета- амилоида в латеральный желудочек мозга (Б. На микрофотографиях В и Г показано действие комбинации мемантин 5 мг/кг +мелатонин 3 мг/кг (В), мемантин 10 мг/кг + мелатонин 6 мг/кг (Г) на нейродегенерацию, вызванную введением бета-амилоида. Микрофотографии были получены при увеличении х200. Стрелкой, в качестве илюстрации, показаны пикнотические клетки, окрашенные гематоксилин- эозином.
Лучший пример осуществления изобретения
Возможность осуществления изобретения может быть продемонстрирована ниже представленными примерами.
Пример 1. Исследование активности против амилоидной интоксикации заявленной комбинации
Исследование проводилось по двум направлениям:
1) Изучение влияния комбинации мемантин + мелатонин в сравнении с мемантином на нарушения двигательной активности и эпизодической памяти, вызванных введением пептида бета-амилоида в латеральный желудочек мозга мыши;
2) Изучение влияние комбинации мемантин + мелатонин в сравнении с мемантином на нейродегенерацию, вызванную введением пептида бета-амилоида в латеральный желудочек мозга мыши. Исследование было проведено на базе Института Фармакологии Тартуского университета по адресу Биомедицинский Центр Тартуского университета, ул. Равила 19, 51014 Тарту, Эстония.
Методы исследования
Все эксперименты проводились в соответствии с принципами работы с лабораторными животными (Principles of Animal Care, директива 86/609/ЕЕС) согласно Хельсинкской декларации. Закупка животных и проведение опытов были сделаны на основании соответствующей лицензии от Комитета по этике (Министерство Сельского хозяйства Эстонской республики). Все лица, осуществляющие уход за животными и проводившие эксперименты обладают персональными лицензиями, позволяющими проводить опыты на животных. При проведении экспериментов были предприняты все усилия, чтобы минимизировать количество животных и их страдания.
Все эксперименты проводились на мышах самцах линии C57BL/6. Животные были закуплены в фирме Harlan (Англия). Средний возраст животных в момент прибытия в виварий Биомедицинского центра Тартуского университета был 5,5 (40 мышей) и 6 недель (20 мышей). По прибытии, животные были помещены на 2 недели на карантин в виварий Биомедицинского центра Тартуского университета. После чего животные были перенесены в виварий Института Фармакологии (комната номер 3028). Животные содержались в пластиковых клетках (5 мышей в клетке) размерами 25 см х 45см х 12см (ШхДхВ) без ограничения в пище и воде с 12- часовым световым циклом (свет включается автоматически в 8.00). Клетки с животными находились в специальных климатических контейнерах (Scanbur, Дания). Контейнеры снабжены фильтрами НЕРА для очистки воздуха и имеют 24- часовой мониторинг влажности и температуры воздуха. Относительная влажность в контейнерах поддерживается в пределах 50±2%, температура 22+1°С. Доступ к животным разрешен только персоналу, имеющему соответствующую лицензию. Чистка клеток и обеспечение кормом и водой проводятся один раз в сутки. Корм животных: гранулированный R70 (Lactamin, Stockholm, Швеция). Животные находились в климатических контейнерах в течение 1 недели до начала опытов. Таким образом, возраст животных к началу опытов составлял 8,5-9 недель. Масса тела мышей к началу опытов составляла 25,8±0,30 г (п=60). Перед началом опытов животных разделили на 6 групп (Таблица 1), по 10 животных в каждой, с помощью программы рандомизации.
Постановка опыта и введение исследуемых веществ
Схема постановки опытов представлена на Фиг. 1. В Таблице 1 приведена схема введения веществ. Первое введение исследуемых веществ проводилось спустя 24 часа после введения бета-амилоида в латеральный желудочек мозга мышей. Вещества вводились в течение 8 дней (один раз в день), в одно и тоже время с 9.00 до 11.00 часов. Все растворы исследуемых веществ приготавливались каждый день непосредственно перед введением и после их приготовления кодировались руководителем и передавались в кодированном виде экспериментатору. На 6-ой и 7-ой день введения исследуемых веществ с животными проводились поведенческие опыты (см. Фиг.1).
Мемантин был представлен в виде соли (мемантина гидорохлорид), молекулярная масса=215,8, партия номер 8061 1. Имеется сертификат качества. Все дозы мемантина рассчитывались на соль. Мелатонин: молекулярная масса 232.278, партия номер 20110915. Имеется сертификат качества.
Таблица 1.
Группы животных (п=10) и схема введения исследуемых веществ
Nfi группы Дозы исследуемых Концентрация и объем Концентрация и объем животных веществ бета-амилоида, растворов исследуемых вводимого в веществ, вводимых латеральный желудочек внутрь
1 Контроль Стерильная вода (3 мкл) Контрольный раствор 0,1 мл/10 г массы тела
2 Контроль для исследуемых 48 пикогр/3 мкл Контрольный раствор 0,1 веществ мл/10 г массы тела
3 Мемантин 5 мг/кг 48 пикогр/3 мкл Раствор мемантина (0,5 мг/мл), 0,1 мл/10 г массы тела
4 Мемантин 10 мг/кг 48 пикогр/3 мкл Раствор мемантина (1 мг/мл), 0,1 мл/10 г массы тела
5 Мемантин 5 мг/кг + 48 пикогр/3 мкл Раствор мемантина (0,5 мелатонин 3 мг/кг мг/мл) и мелатонина (0,3 мг/мл), 0,1 мл/10 г массы тела
6 Мемантин 10 мг/кг + 48 пикогр/3 мкл Раствор мемантина (1 мелатонин 6 мг/кг мг/мл) + мелатонина (0,6 мг/мл), 0,1 мл/10 г массы тела Приготовление растворов исследуемых веществ
1) Раствор мемантина гидрохлорида (0,5 мг/мл) + мелатонина (0,3 мг/мл)
5 мг мемантина HCL растворяли в 9 мл воды. Отдельно отвешивали 3 мг мелатонина, помещали в ступу и добавляли 2 капли эмульгатора Твин-80, растирали до образования однородной массы, добавляя порциями 1 мл воды. Полученную эмульсию смешивали с раствором мемантина (9 мл). Перед введением эмульсию интенсивно встряхивали на шейкере. Полученную эмульсию вводили в объеме 0,1 мл на 10 г массы тела мыши, что соответствует дозам мемантина 5 мг/кг и мелатонина 3 мг/кг.
2) Раствор мемантина гидрохлорида (1 мг/мл) + мелатонина (0,6 мг/мл)
10 мг мемантина HCL растворяли в 9 мл воды. Отдельно отвешивали 6 мг мелатонина, помещали в ступу и добавляли 2 капли эмульгатора Твин-80, растирали до образования однородной массы, добавляя порциями 1 мл воды. Полученную эмульсию смешивали с раствором мемантина (9 мл). Перед введением эмульсию интенсивно встряхивали на шейкере. Полученную эмульсию вводили в объеме 0,1 мл на 10 г массы тела мыши, что соответствует дозам мемантина 10 мг/кг и мелатонина 6 мг/кг.
3) Раствор мемантина гидрохлорида 0,5 мг/мл 5 мг мемантина HCL растворяли в 10 мл воды, куда добавляли 2 капли эмульгатора Твин-80 и смешивали при интенсивном встряхивании с помощью шейкера. Полученную эмульсию вводили в объеме 0, 1 мл на 10 г массы тела мыши, что соответствует дозе 5 мг/кг.
4) Раствор мемантина гидрохлорида 1 мг/мл
10 мг мемантина гидрохлорида растворяли в 10 мл воды, добавляли 2 капли эмульгатора Твин-80 и смешивали при интенсивном встряхивании с помощью шейкера. Полученную эмульсию вводили в объеме 0,1 мл на 10 г массы тела мыши, что соответствует дозе 10 мг/кг.
5) Контрольный раствор
К 10 мл воды добавляли 2 капли эмульгатора Твин-80 и смешивали при интенсивном встряхивании с помощью шейкера. Полученную эмульсию вводили в объеме 0,1 мл на 10 г массы тела мыши.
Растворы 1-5 вводили внутрь желудка с помощью металлического зонда для мышей (FTSS-20S-38) фирмы Salomon Scientific (США).
6) Раствор пептида бета-амилоида (48 пикограмм/3 мкл) Пептидный фрагмент бета-амилоида, соответствующий аминокислотной последовательности бета-амилоида человека (25-35), был получен от фирмы Tocris (Англия) (Batch No: 6, молекулярная масса: 1060,27, имеется сертификат качества).
1 мг субстанции пептида растворяли в 1 мл стерильной воды и помещали в стерильный инкубатор при температуре 37°C на 96 часов для агрегации пептида (олигомерная форма). Непосредственно перед употреблением раствор разводили стерильной водой до концентрации пептида 16 нМ и вводили в левый латеральный желудочек мозга мыши в количестве 48 пикограмм в объеме 3 микролитра.
7) Контроль для бета-амилоида
Стерильная вода в объеме 3 микролитра вводилась в левый латеральный желудочек мозга мыши.
Введение пептида бета-амилоида в латеральный желудочек мозга мыши.
Введение бета-амилоида в латеральный желудочек мозга мыши проводили под общей анестезией. Для анестезии использовалась смесь гипнорма (Hypnorm, VetaPharma; Lot Р736/001 ; содержит 0,315 мг фентанила и 10 мг флуанизона в 1 мл), дормикума (Dormicum, Roche; Lot: F1038F71 , 5 мг/ мл) и воды в соотношении 1 : 1 :2. Смесь вводили в/б в объеме 0,1 мл на 10 гр массы тела. Спустя 2-3 мин после введения анестетика у животных развивалась хирургическая стадия анестезии, после чего животное фиксировалось в стереотаксическом аппарате David Kopf (Leica Microsystems, Германия). На черепе мыши делался разрез, очищалась поверхность кости и находилась брегма. Координаты для введения бета-амилоида в латеральный желудочек находились с помощью компьютерной системы (Computer-assisted Stereotaxic system), использующей параметры атласа мозга мыши (The Mouse Brain, in Stereotaxic Coordinates, KBJ Franklin and G. Paxinos, 2012). Координаты для введения бета-амилоида по отношению к брегме были следующими: вперед - 0,5 мм, латерально - 1 мм, вентрально - 2 мм.
В черепе просверливалось отверстие с помощью бора и в левый латеральный желудочек мозга вводилась игла, соединенная с программируемым микронасосом (Syringe pump SP101 IZ, Gentaur, Германия), подающим раствор бета- амилоида. Раствор вещества вводился со скоростью 0,75 мкл/мин и после окончания инфузии игла оставалась в мозге в течение 1 мин. Контрольная группа получала инфузию стерильной воды в объеме 3 мкл. После этого рану обрабатывали раствором антисептика, зашивали и животных помещали на подогреваемый столик до полного выхода из анестезии.
Хирургическая операция вызвала гибель четырех мышей, по одному животному в группах, предназначенных для введения исследуемых веществ. Таким образом, группы животных, которым должен был вводиться мемантин или мемантин + мелатонин состояли из 9 мышей.
Определение двигательной активности и эпизодической памяти на модели распознавания нового объекта у мышей На 6-ой день опыта, спустя 1 час после введения исследуемых веществ животные брались в поведенческие опыты для изучения когнитивных функций.
Для оценки когнитивных функций использовался тест распознавания нового объекта. Этот тест широко используется для оценки эпизодической памяти у животных и ее нарушение характерно для больных Альцгеймера. Тест основан на том, что здоровое животные исследует значительно больше времени новый объект, чем старый.
Опыт состоял из трех фаз: фазы привыкания, фазы тренировки и фазы ретенции.
1) Фаза привыкания
В течение этой фазы мышей индивидуально помещали в деревянный ящик размерами 50 cm х50 cm х50 cm (длина х ширина х высота), находящийся в экспериментальной комнате, слабо освещенной лампами накаливания, с постоянным освещением 60 люкс. Пол ящика был разделен на 16 одинаковых квадратов с длиной стороны 12,5 см. Животное находилось в ящике в течение 5 мин и экспериментатор регистрировал число пересеченных квадратов. Этот показатель, в дальнейшем, использовался для оценки двигательной активности мышей. Спустя 5 мин животное извлекалось из ящика и пол ящика протирался 5% раствором этанола для устранения запаха.
2) Фаза тренировки
Спустя 2 часа после окончания фазы привыкания, проводилась фаза тренировки. Для этого животное снова помещали в центр ящика на полу которого были установлены два одинаковых объекта. Объекты представляли собой два деревянных кубика, расположенных в противоположных углах ящика (Фиг. 2). Животному давалась возможность исследовать объекты в течение 5 мин и при этом фиксировалось время, в течение которого животное исследовало каждый из объектов. Эти данные необходимы для оценки степени мотивации и исследовательской активности животных. После каждого животного, пол ящика протирался 5% раствором этанола. По окончанию опыта животное помещалась в домашнюю клетку. 3) Фаза ретенции
Спустя 24 часа после проведения фазы тренировки, мышам вводились исследуемые вещества (седьмое введение) и спустя 1 час после введения веществ, животные снова помещались в ящик для исследования, в котором один объект был заменен на новый объект другой формы и цвета (Фиг. 3).
Животному снова давалась возможность исследовать старый и новый объекты в течение пяти минут и время исследования каждого объекта регистрировалось экспериментатором.
Коэффициент предпочтения исследования нового объекта представлялся как отношение времени исследования нового объекта по отношению к общему времени исследования старого и нового объектов по формуле (Тнов х100)/(Тст+Тнов), где Тст и Тнов - время исследования старого и нового объектов.
Приготовление гистологических препаратов и определение гибели клеток Спустя 24 часа после окончания поведенческих тестов животным вводились последний раз исследуемые вещества и, спустя 1 час после введения, мышам вводили раствор анестетика хлоралгидрата (350 мг/кг, в/б). В течение 5 мин у животных развивалась глубокая анестезия. По достижению анестезии животных фиксировали, вскрывали грудную клетку и вводили перфузионную иглу в левый желудочек сердца. Одновременно вскрывали правое предсердие и проводили транскардиальную перфузию кровеносной системы, сначала физиологическим раствором (0,9% NaCl), затем 4%) раствором параформальдегида в 0,1М фосфатном буфере. Перфузия проводилась с помощью перистальтического насоса Biorad Econo Pump (Biorad, Швеция). По окончании перфузии извлекался мозг и помещался на 24 часа в 4% раствор параформальдегида (постфиксация) .
Сагиттальные срезы мозга (толщиной 40 мкм), проходящие через дорсальный гиппокамп, приготавливали с помощью вибрационного микротома (Leica, Германия). Срезы помещались в планшеты (по одному срезу в лунку), заполненные 0,1 М фосфатным буфером и хранились при 4°С (срок хранения 3-4 дня). Для каждого животного выбирались 4 среза, проходящие через дорсальный гиппокамп. Для этого, все срезы от каждого животного распределялись на серии по 6 срезов в каждой. Для каждого животного выборка срезов проводилась исходя из принципа Кавальери: сначала рандомизированно выбирался срез из первой серии и затем из каждой последующей серии брался срез с тем же порядковым номером.
Окрашивание проводилось на свободно-плавающих срезах в 24-местном планшете. Срезы промывались в 0,1 М фосфатом буфере, затем инкубировались в растворе 0,025% трипсина (Sigma, США) и 0,1% СаС в фосфатном буфере в течение 10 мин. После промывания срезов в фосфатном буфере, к ним добавлялся 0,25% раствор Тритона х- 100 (Sigma, США) и срезы инкубировались в течение 1 часа. После этого, срезы снова промывались и к ним добавлялся раствор гематоксилин-эозина на 2 мин, после чего срезы промывались проточной водой и погружались на 5 секунд в спиртовой раствор соляной кислоты (1% НС1 в 70% этаноле) и снова промывались водой. Окрашенные срезы помещались на предметные стекла, заливались средой Vectashild (Vector Laboratories, США) и покрывались покровными стеклами.
Анализ гибели клеток проводился с помощью микроскопа ВХ51 (Olympus, Япония). Микроскоп снабжен видеокамерой DFC495 (Leica, Германия). Работа микроскопа управляется программным обеспечением NewCAST фирмы Visiopharm (Дания). Сначала под малым увеличением с помощью объектива UPlan АРО 4х/0.16 и с помощью программы Newcast конструировался суперимидж, на котором определялись интересующие нас структуры (Фиг.З) и программа записывала координаты структур, в которых должно проводиться определение числа пикнотических клеток.
Затем, с использованием объектива LCAch 20х/0.40 PhC оо/1 , анализировались и подсчитывал ись пикнотические клетки в структурах СА1 и САЗ области гиппокампа и сенсорно- моторной области коры. Пикнотические клетки определялись как клетки, содержащие конденсированные гиперхромные ядра, фрагменты ядер и конденсированную цитоплазму. Подсчет проводился в каждом квадрате, как показано на Фиг. 5, 6, 7. Площадь квадратов задавалась программой NewCast и, в зависимости от размеров структуры и плотности клеток, она вариировала в пределах 0,1-0,5 мм2. Для каждого животного, число пикнотических клеток и площади, на которых они определялись на четырех выбранных срезах, суммировались и рассчитывалась средняя плотность пикнотических клеток на 1 мм2 среза. Полученные средние значения плотности пикнотических клеток в областях СА1, САЗ гиппокампа и сенсорно-моторной области коры для каждого животного в дальнейшем использовались для статистического анализа.
Статистический анализ
Для каждой группы мышей рассчитывались средние значения (М) ± стандартная ошибка среднего значения (т). Далее, данные анализировалиь с помощью τ-теста Стьюдента (контроль и бета-амилоид), однофакторного дисперсионного анализа с последующим применением ретроспективного критерия Бонферрони (действие исследуемых веществ, влияние дозы). При сравнительной оценке действия комбинаций веществ использовался двухфакторный дисперсионный анализ. Различия между группами считались достоверными при р<0,05. Статистическая обработка данных проводилась с использованием статистического программного обеспечения GraphPad PRISM-5 (США).
Результаты исследования и обсуждение результатов
Обоснование выбора доз мемантина и мелатонина для исследований
В клинической практике терапевтическая дневная доза мемантина 20 мг/день обеспечивает уровень концентрации вещества в плазме 0,5-1 мкмоль/литр плазмы (12). У грызунов (мыши), соответствующие концентрации мемантина (1 мкмоль/литр плазмы) наблюдались после введения мемантина в дозе 30 мг/кг/день (9). Поскольку целью исследования было проанализировать может ли мелатонин усилить действие мемантина, то в исследовании мемантин использовался в дозах меньших, чем те, которые дают максимальные терапевтические концентрации в плазме. В данном исследовании использовались дозы мемантина 5 и 10 мг/кг, и, соответственно, концентрации мемантина в этих дозах должны быть ниже максимальной терапевтической (1 мкмоль/литр плазмы).
Дозы мелатонина подбирались из соотношения мемантин: мелатонин = 5:3. Таким образом, исследуемые дозы комбинации мемантин + мелатонин были 5+3 мг/кг и 10+6 мг/кг. Отдельно, взятый для сравнения, мемантин изучался в дозах 5 и 10 мг/кг. Характеристика популяции животных, используемых в опытах
В данном исследовании, для анализа гомогенности популяции животных, использовались показатели массы тела (Таблица 2). Как видно из таблицы 2, группы животных не отличались по массе тела (данные дисперсионного анализа: F5,59=0,93; р=0,47; различия статистически недостоверны). Это свидетельствует о том, что по этому показателю в опытах использовалась гомогенная группа животных.
Влияние исследуемых веществ на двигательную активность и уровень исследовательской мотивации у мышей, после введения бета-амилоида в латеральный желудочек мозга.
Данные по влиянию исследуемых веществ на двигательную активность в фазе привыкания и уровень исследовательской мотивации в фазе тренировки приведены в Таблице 2. Как видно из Таблицы 2, спустя 6 дней после введения бета-амилоида в латеральный желудочек мозга, у животных наблюдалась повышенная двигательная активность по сравнению с контрольной группой мышей. Повторное введение мемантина в дозах 5 и 10 мг/кг не влияло на повышенную локомоторную активность. Введение комбинации веществ мемантин + мелатонин в дозах 5+3 мг/кг и 10+6 мг/кг снижало двигательную активность до контрольного уровня. Однофакторный дисперсионный анализ показал достоверное влияние комбинации веществ (F2,27= 16,97; р<0,0001), причем тест Бонферрони показал высокодостоверное действие обеих комбинаций: мемантин 5 мг/кг + мелатонин 3 мг/кг (р<0,01) и мемантин 10 мг/кг + мелатонин 6 мг/кг (р<0,01).
При оценке мотивационного поведения животных, после введения бета амилоида и исследуемых веществ, статистически достоверных различий выявлено не было (Таблица 2).
Многочисленные исследования свидетельствуют, что у больных болезнью Альгеймера, нарушены суточные ритмы, причем, в течение ночной фазы у них наблюдается психомоторная активация. Поскольку у мышей существует обратная ритмика, и фаза сна у них совпадает с дневным временем суток, то успокаивающее действие комбинации мемантин + мелатонин на гиперактивность мышей в дневное время суток свидетельствует о восстановлении нормальных суточных ритмов, что может иметь терапевтическое значение у пациентов с болезнью Альцгеймера.
Масса тела, двигательная активность (число пересеченных секторов) в фазе привыкания и время исследования объектов (уровень мотивации) в фазе тренировки у мышей после введения бета амилоида и исследуемых веществ. Представлены средние значения стандартные ошибки среднего значения (М+т) для групп из 9- 10 животных. ##р<0,0001 по сравнению с контролем; **р<0,01 по сравнению с бета-амилоидом.
Таблица 2.
Figure imgf000048_0001
Влияние исследуемых веществ на нарушения памяти у мышей, вызванные введением бета-амилоида, в тесте распознавания нового объекта
Результаты изучения влияния исследуемых веществ на нарушение эпизодической памяти у мышей, вызванное внутримозговым введением бета- амилоида, представлены в Таблице 3 и на Фиг. 4.
У животных контрольной группы наблюдалось выраженное предпочтение в исследовании нового объекта: индекс предпочтения в контрольной группе составлял 87,8D2,3%. Спустя 7 дней после введения бета амилоида в латеральный желудочек мозга у мышей наблюдалось снижение индекса предпочтения нового объекта до 49,7 П 14%. Статистический анализ показал высокодостоверное (р<0,0001, т-тест Стьюдента) различие по сравнению с контрольной группой. Снижение индекса предпочтения указывает на нарушение памяти у мышей после введения бета-амилоида. Мемантин и мемантин в комбинации с мелатонином увеличивали индекс предпочтения, что свидетельствует об улучшении памяти, нарушенной введением бета-амилоида. Для статистического анализа действия исследуемых веществ применялся однофакторный дисперсионный анализ, где в качестве контроля использовалась группа с введением бета- амилоида. Анализ действия мемантина выявил улучшение памяти (F2,27=34,23; ρΟ,ΟΟΟΙ), причем это действие мемантина проявлялось в обеих дозах 5 мг/кг (р<0,01) и 10 мг/кг (р<0,01). Изучение влияния комбинации мемантин + мелатонин выявило более значительное улучшающее влияние на память: F2,27=71,90; р<0,0001, причем тест Бонферрони выявил высокодостоверное действие обеих комбинаций мемантин 5 мг/кг + мелатонин 3 мг/кг (р<0,01) и мемантин 10 мг/кг + мелатонин 6 мг/кг (р<0,01).
Влияние исследуемых веществ на нарушения памяти у мышей, вызванные бета-амилоидом, в тесте распознавания нового объекта отображены в Таблице 3. Представлены средние значения индекса предпочтения нового объекта стандартные ошибки среднего значения (М+т) для групп из 9- 10 животных. Таблица 3.
Figure imgf000050_0001
Следующим этапом статистического анализа было сравнить, отличаются ли между собой по антиамнестическому действию комбинация мемантин + мелатонин от действия мемантина. Для сравнения использовался двухфакторный дисперсионный анализ, где одним фактором было «вещество» и другим фактором «доза» (Таблица 4). Анализ показал сильное влияние фактора «вещество» (F 1,32= 17,72; р=0,0002) и отсутствие влияния фактора «доза» (F 1 ,32=1, 837; р=0,18), а также отсутствие взаимодействия «вещество» х «доза» (F 1 ,32=0,04; р=0,8). Из данных анализа следует, что антиамнестическое действие комбинации мемантин + мелатонин достоверно превосходит антиамнестическое действие мемантина на модели амнезии у мышей, вызванной введением бета-амилоида, в тесте распознавания нового объекта. Кроме того, улучшающее влияние на нарушение памяти, вызванное бета-амилоидом, проявлялось уже в дозах комбинации мемантин 5 мг/кг + мелатонин 3 мг/кг.
Матрица для сравнения антиамнестического действия комбинации мемантин + мелатонин с действием мемантина на нарушения памяти у мышей, вызванные бета-амилоидом, в тесте распознавания нового объекта. В Таблице 4 приведены средние значения индекса предпочтения нового объекта ± стандартные ошибки средней на группы из 9 животных.
Таблица 4.
Figure imgf000051_0001
Влияние исследуемых веществ на гибель нейронов, вызванную введением бета-амилоида.
Данные по влиянию исследуемых веществ на гибель нейронов в областях СА1 , САЗ гиппокампа и сенсорно- моторной области коры после введения бета-амилоида представлены в Таблице 5. Как видно из таблицы, в мозге мышей контрольной группы во всех исследуемых структурах были выявлены единичные пикнотические клетки, что, по- видимому, связано с механическим повреждением ткани мозга при введении контрольного раствора в латеральный желудочек. Введение бета-амилоида вызывало значительную гибель нейронов во всех исследуемых структурах мозга: СА1, САЗ гиппокампа и область сенсорно-моторной коры. Статистический анализ показал высокодостоверное (р<0,0001; т-тест Стьюдента) действие бета-амилоида, по сравнению с контролем во всех исследуемых структурах (Таблица 5). Введение мемантина снижало гибель клеток, причем однофакторный дисперсионный анализ выявил достоверное влияние вещества: показатели дисперсионного анализа для области СА1 были (F2,27=9,42; р<0,001). Последующий анализ с помощью теста Бонферрони показал достоверное влияние дозы мемантина 10 мг/кг (р<0.01) и не выявил достоверного эффекта мемантина в дозе 5 мг/кг. Влияние комбинации мелатонин + мемантин на гибель нейронов, вызванную введением бета-амилоида в области СА1 показаны на Фиг. 5. Результаты статистического анализа показаны в Таблице 5. Комбинация мемантин + мелатонин высокодостоверно снижала плотность пикнотических клеток в СА1 области гиппокампа (F2,27= 14,13; ρΟ,ΟΟΟΙ), причем этот эффект проявлялся после введения комбинаций мемантин 5 мг/кг + мелатонин 3 мг/кг (р<0,001) и мемантин 10 мг/кг + мелатонин 6 мг/кг (р<0,001).
Введение мемантина также снижало гибель клеток в области САЗ, причем однофакторный дисперсионный анализ выявил достоверное влияние вещества: показатели дисперсионного анализа для области САЗ были (F2,27=20,84; ρΟ,ΟΟΟΙ). Последующий анализ с помощью теста Бонферрони показал достоверное влияние дозы мемантина 5 мг/кг (р<0,001) и 10 мг/кг (рО.0001) (Таблица 5). Влияние комбинации мелатонин + мемантин на гибель нейронов, вызванную введением бета-амилоида в САЗ области гиппокампа представлены на Фиг. 6.
Результаты статистического анализа показаны в таблице 5. Комбинация мемантин + мелатонин высокодостоверно снижала плотность пикнотических клеток в САЗ области гиппокампа (F2,27=34,45; ρΟ,ΟΟΟΙ), причем этот эффект проявлялся после введения комбинаций мемантин 5 мг/кг + мелатонин 3 мг/кг (р<0,001) и мемантин 10 мг/кг + мелатонин 6 мг/кг (р<0,001).
Мемантин также достоверно снижал плотность пикнотических клеток в сенсорно-моторной коре (F2,27=48,08; р<0,0001), причем обе дозы 5 мг/кг и 10 мг/кг оказывали достоверный эффект (Таблица 5). Комбинация мемантин + мелатонин также высокодостоверно снижала плотность пикнотических клеток в сенсорно-моторной области коры (F2,27=34,45; р<0,0001), причем этот эффект проявлялся после доз комбинации мемантин 5 мг/кг + мелатонин 3 мг/кг (р<0,001) и мемантин 10 мг/кг + мелатонин 6 мг/кг (р<0,001) (Фиг.7, Таблица 5).
Влияние исследуемых вещества на плотность пикнотических клеток в мозге мышей после введения бета- амилоида в латеральный желудочек мозга. Приведены средние значения плотности (N/mm ) + стандартная ошибка среднего значения (М+т) на группу из 9-10 мышей. ##р<0.001 (т-тест Стьюдента) по сравнению с контролем, **р<0,01 ; ***р<0,0001 по сравнению с группой получившей бета-амилоид.
Таблица 5.
Figure imgf000054_0001
Следующим этапом статистического анализа было сравнение влияния комбинации мемантин + мелатонин и мемантина на гибель нейронов в областях СА1 и САЗ гиппокампа и в сенсорно-моторной области коры головного мозга мышей после введения бета-амилоида. Для этих целей использовался двухфакторный дисперсионный анализ на основе матричной Таблицы 6. Матрица для сравнения влияния комбинации мемантин+мелатонин с мемантином на гибель нейронов, вызванную бета-амилоидом, у мышей. В таблице приведены средние значения плотности (N/mm2) пикнотических клеток в областях СА1, САЗ гиппокампа и сенсорно-моторной области коры головного мозга мышей + стандартные ошибки среднего значения на группу из 9 животных.
Таблица 6.
Figure imgf000055_0001
Для области СА1 , двухфакторный дисперсионный анализ выявил достоверное влияние фактора "вещество" (F 1,32=7,77; р<0,01), достоверное влияние фактора «доза» (F1 , 32=5,53; р<0,05) и отсутствие интеракции между факторами «вещество» и «доза» (F 1,32=3 ,38; р=0,07).
Для области САЗ двухфакторный дисперсионный анализ не выявил достоверного влияния фактора "вещество" (f 1,32=2.09; p=0,15), показал достоверное влияние фактора «доза» (F 1,32=5,46; р=0,03) и отсутствие достоверного взаимодействия между факторами «вещество» и «доза» (Fl ,32=0,63; p=0,4).
Для сенсорно-моторной области коры, двухфакторный дисперсионный анализ выявил достоверное влияние фактора "вещество" (Fl,32=13,35; р=0,0009), достоверное влияние фактора «доза» (F 1 ,32=44, 17; р=0,0001) и достоверное взаимодействие между факторами «вещество» и «доза» (Fl,32=16,66; p=0,0003).
Таким образом, на основании проведенного статистического анализа можно сделать вывод, что комбинация мемантин + мелатонин оказывает более выраженное нейропротективное действие, чем отдельно вводимый мемантин при нейродегенерации, вызванной бета- амилоидом в СА1 области гиппокампа и сенсорно-моторной области коры головного мозга мышей.
Пример 2. Фармакологическое взаимодействие
Для подтверждения синергии эффектов, были проведены несколько опытов на животных моделях.
Для этого брали активные вещества Мелатонин 3 мг/Мемантин 10 мг; Мелатонин 5 мг/Мемантин 20 мг;
Мелатонин 10 мг/Мемантин 20 мг, и переводили дозировки, рекомендуемые для человека, адаптированные для мыши, по формуле «(активное вещество/70(ср. масса человека))х7». Для этого указанные композиции растворяли в 5 мл раствора и в соответствии с приведенной формулой, вводили животным внутрибрюшинно, один раз в день, в течение 5-ти дней.
Действие композиций на факторы обучения и памяти исследовали на белых нелинейных мышах-самцах, массой 20 +/-4гр., используя условную реакцию пассивного избегания (УРПИ) электросудорожного шока (ЭСШ) (Я.Буреш и соавт., 1991 ; К.М.Дюмаев и соавт., 1995).
В качестве амнезирующего воздействия применили электросудорожный шок (ЭСШ), параметры электрического тока: 50 Гц, 50 мА, 0,3 с, который наносили мышам с помощью электродов в виде клипс, фиксируемых на ушных раковинах, транспиннеально, сразу после обучения УРПИ («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», 2000). У животных контрольной группы вызывали псевдоэлектросудорожный шок: накладывали пиннеальные электроды для нанесения ЭСШ без подачи электрического тока. Тестирование мышей на сохранение УРПИ производили через определенные промежутки времени после ЭСШ.
Тест УРПИ является основной моделью для оценки влияния веществ на формирование и воспроизведение кратковременной памяти в норме и в условиях его нарушения, искусственная амнезия. И УРПИ наиболее информативный из применяемых сегодня методов оценки эффективности веществ с влиянием на ЦНС млекопитающих («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», 2000). Выработку УРПИ (условный рефлекс пассивного избегания в темной, светлой камере) у мышей производили на основе электрокожного подкрепления по методу Cumin et al. (1982) с учетом рекомендаций Mondadori et al. (1990). Установка для мышей Lafayette Instrument Co., США представляла собой камеру черного цвета с электродным полом и белой пластиковой платформой, которую располагали на полу в центре камеры. Мышей, по одному помещали на пластиковую платформу. Животные спускаются/спрыгивают с платформы на электродный пол, где они получают удар электрическим током, т.н. наказание. Электрический ток подавали, поле того как животное опиралось всеми четырьмя лапами. Естественной реакцией животного является возвращение на бестоковую или же безопасную платформу. После нескольких минут обучения, в среднем около 5 мин., у мышей вырабатывалась УРПИ и они оставались на безопасной платформе. Тесты на запоминание УРПИ проводили через последовательные промежутки времени после амнезирующего воздействия. В случае, когда животное спускал ось/спрыгивал о на платформу в течение 1 мин, у него отмечали ретроградную амнезию навыка пассивного избегания. Изучение композиций проводились в сравнении с Мелатонином 5 мг (моноприменение) и Мемантином 10 мг (моноприменение), в соответствии с вышеприведенной формулой адаптирования к животным моделям.
Таблица 7.
Figure imgf000059_0001
Таким образом, ЭСШ вызывал у большинства мышей ретроградную амнезию навыка пассивного избегания, у 80% животных (р<0,001) через 24 ч наблюдалась амнезия усвоенных навыков. Мелатонин и Мемантин изменяли амнестическое действие. Композиции, содержащая Мемантин и Мелатонин,значимо (р<0,05) ослабляла амнестический эффект. При этом по выраженности действия исследуемых композиций превосходили и Мелатонин, и Мемантин по отдельности. Влияние исследуемых композиции на амнезию у мышей, вызванную электросудорожным шоком (ЭСШ)
5
Таблица 8.
Figure imgf000060_0001
Достоверность отличий по сравнению с группой контроль + ложный ЭСШ крыс при р<0,05 (t-тест Стьюдента; %)
** Достоверность отличий по сравнению с группой контроль + 10 ЭСШ при р<0,05 (t-тест Стьюдента; %) Также антиамнестическое действие исследуемых композиций на модели амнезии, вызванной скополамином, исследовали на белых нелинейных мышах-самцах массой 20- 24 г с применением выработки у животных УРПИ по описанной выше методике. Модель скополаминовой амнезии - это м-холиноблокатор (скополамин) воспроизводили путем введения мышам в/б в дозе 1 мг/кг сразу после обучения УРПИ («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», 2000). Исследуемые указанные композиции растворяли в 5 мл. раствора и в соответствии с приведенной формулой, вводили животным внутрибрюшинно, один раз в день, в течение 5-ти дней.
Таблица 9.
Терапевтический агент Общее Число мышей, (доза) и ЭСШ число обучившихся мышей УРПИ (%)
Р-р NaCl изотонический 1 1 90,9
(контроль)
Скополамин (1 мг/кг) 12 58,3
Мелатонин 5 мг+ скополамин 1 1 66,7
Мемантин 10 мг+ скополамин 10 70
Мелатонин 3 мг/Мемантин 10 12 75
мг+ скополамин
Мелатонин 5 мг/Мемантин 20 1 1 72,7
мг + скополамин
Мелатонин 10 мг/Мемантин 20 11 81 ,8
мг + скополамин Влияние исследуемых композиции на амнезию у мышей, вызванную скополамином
Таблица 10.
Figure imgf000062_0001
5
Скополамин провоцировал у значительной части животных ретроградную амнезию навыка у 90% животных р<0,001 - через 24 ч наблюдалась амнезия УРПИ. Моноприменение Мелатонина и Мемантина не существенно, но влияло на амнезию полученных навыков.
Композиции, содержащие Мелатонин+Мемантин, значимо ослабляла амнестический эффект в 1 ,5 раза в разной степени вариации. Композиции, содержащи
Мелатонин+Мемантин, превосходили эффекты моноприменение Мелатонин+Мемантин и предотвращала развитие амнезии УРПИ.
Антиамнестическое действие исследуемых композиций на модели амнезии, индуцированное плаванием мышей в холодной воде с вращением колеса до изнеможения. Исследования проводились на белых нелинейных мышах- самцах массой 20-24 г с применением выработки у животных УРПИ, как и в предыдущих исследованиях. Животное, по одному, помещали в заполненную водой емкость размером с вращающимся колесом. Плавание мышей в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения производили после обучения УРПИ. Сохранность УРПИ проверяли через периодичные промежутки времени. В качестве ложного имитации плавания мышей в холодной воде помещали животное в клетку с подстилкой из мокрой холодной ваты. Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) проводились в сравнении с Мелатонином 5 мг (моноприменение) и Мемантином 10 мг (моноприменение), в соответствии с вышеприведенной формулой адаптирования к животным моделям в/б введением до обучения мышей, один раз в день, в течение 5-ти дней.
Влияние исследуемых композиций на амнестический эффект, вызванный плаванием мышей в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения
Таблица 1 1.
Figure imgf000064_0001
Таблица 12.
Группа Воспроизведение УРПИ
ивотных сутки после 3 сут после 7 сут после 10 сут после обучения обучения обучения обучения латентное коли- латентное коли- латентное коли- латентное коли- время чество время чество время чество время чество захода в крыс, захода в крыс, захода в крыс, захода в крыс, темную не темную не темную не темную не камеру, с вошед- камеру, с вошед- камеру, с вошед- камеру, с вошед- ших в ших в ших в их в темную темную темную темную камеру, камеру, камеру, камеру,
% % % %
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Р-р NaCI 152, 90 150, 70 147. 60 145, 60 иэотонический+ 2±13,2 3±Н4 2 123,5 2+18,5 иммитация
плавания в
холодной воде
(контроль)
Р-р NaCI 69,4 36,3 72,5 45,4 74,1 54,5 75,1 54,5 изотонический
+ плавание ±27,2 ±12,9 ±18,3 ±12,7 мышей в
холодной
воде с
одновременным
вращением
колеса до
изнеможения
елатонин 5 мг+ 109, 61 ,5 105,4 46,1 104,6 38,5 100,9 30,7 плавание мышей 3+9,8 ±13,5 ±15,1 ±17,4 в холодной
воде с
одновременным
вращением
колеса до
изнеможения
емантин 10 мг+ 111,3 41,6 115,9 50 117,4 66,6 118,0 66,6 плавание мышей ±22,3 ±16,5 ±28,1 ±23,3 в олодной
воде с
одновременным
вращением
колеса до
изнеможения Продолжение Таблицы 12.
Figure imgf000066_0001
Влияние исследуемых композиций на УРПИ животных в условиях методики открытого поля после острой
5 нормобарической гипоксической гипоксией с гиперкапнией
Таблица 13.
Группа животных Горизонталь- Вертикальная Обследо- ная двигательная вание двигательная активность отверстий активность
1 2 4 4
1-е сутки после операции
Р-р NaCI изотонический +ложная 14,9+5,2 6,2+2,1 4,3+1,3 гипоксия (контроль) Продолжение Таблицы 13.
1 2 4 4
Р-р NaCI изотонический + гипоксия 6,1±3,1 3,0+1 ,2 1 ,5+0,9
Мелатонин 5 мг+ гипоксия 6,9±2,3 3,2+1 ,2 1 ,7+0,6
Мемантин 10 мг+ гипоксия 7,1+2,7 3,7±1,9 2,1±1 ,1
Мелатонин 3 мг/Мемантин 10 мг + 8,5+1 ,9 4,6+3,1 1 ,3+2,4 гипоксия
Мелатонин 5 мг/Мемантин 20 мг + 8,7±2,1 4,3+2,8 2,3+2,4 гипоксия
Мелатонин 10 мг/Мемантин 20 мг + 8,4+1,5 4,2±2,7 2,0+1 ,6 гипоксия
3-й сутки после операции
Р-р NaCI изотонический + ложная 14,1+1,6 5,7+2,1 2,8+1 ,2 гипоксия (контроль)
Р-р NaCI изотонический + гипоксия 5,9±1 ,8 3,1+1,2 1 ,3+1,0
Мелатонин 5 мг + гипоксия 8,2+1 ,4* 3,5+0,9 1 ,9+0,8
Мемантин 10 мг + гипоксия 8,9+4,9 3,3±1 ,2 2,5±1 ,1
Мелатонин 3 мг/Мемантин 10 мг + 11 ,7+3,1 4,2+1 ,7 2,5±0,9 гипоксия
Мелатонин 5 мг/Мемантин 20 мг + 12,1 ±2,5 4,4+1 ,5 2,9+1,3 гипоксия
Мелатонин 10 мг/Мемантин 20 мг + 11 ,9±3,2 4,5+2,1 2,1+1 ,4 гипоксия
7-е сутки после операции
Р-р NaCI изотонический +ложная 13,5+1 ,9 5,1+2,1 3,4±2,5 гипоксия (контроль)
Р-р NaCI изотонический + гипоксия 7,0+1 ,6 2,9+2,4 1 ,9+1,3
Мелатонин 5 мг + гипоксия 8,3±2,8 3,2+1,3 2,4+0,5
Мемантин 10 мг+ гипоксия 9,6±3,4 3,7+1 ,8 3,0+2,7
Мелатонин 3 мг/Мемантин 10 мг + 14,2+2,6** 5,1 ±3,1 3,2±1,4 гипоксия
Мелатонин 5 мг/Мемантин 20 мг + 16,1+1,6** 5,3+2,2 3,8+1,7** гипоксия
Мелатонин 10 мг/Мемантин 20 мг + 14,7+2,6 5,3±3,5 2,7±2,4 гипоксия Продолжение Таблицы 13.
Figure imgf000068_0001
* Достоверность отличий по сравнению с группой животных с ложной гипоксией при р<0,05 (t-тест Стьюдента)
** Достоверность отличий по сравнению с гипоксией при р<0,05 (t-тест Стьюдента)
Таким образом, новая комбинация проявляет высокую эффективность, выражающуюся в облегчении проявления психических, поведенческих, когнитивных расстройств при органических поражениях ЦНС различного генеза.
Пример 3. Клинические испытания
Обследовано 25 больных со смешанной деменцией, 12 больных с болезнью Альцгеймера. Средний возраст больных составлял 70±3 года. Диагностику деменции проводили в соответствии с критериями деменции МКБ- 10 [Международная статистическая классификация болезней и проблем, связанных со здоровьем. Десятый пересмотр (МКБ- 10). T.l (часть 1). Женева: ВОЗ, 1995; с.315, 510-1]. Тяжесть деменции оценивалась по клинической шкале оценки тяжести деменции (Clinical Dementia Rating Scale - CDR) [Hughes CP, Berg L, Danziger WL et al. A new clinical scale for the staging of dementia. Brit J Psychiatry 1982; 140: 566-72]. В группе больных со смешанной деменцией она составила 1,2±0,3, а в группе с болезнью Альцгеймера 1,1±0,36. Все пациенты были разделены на две группы. Первой группе назначали мемантин по 50 мг 1 раз в день. Второй группе назначали капсулы согласно примеру 4. В течение полгода у пациентов проводили комплексное неврологическое исследование, включая краткую оценку психического статуса (MMSE), тест на зрительную и слухоречевую память шкалы деменции, тест рисования часов (Clock Drawing Test), а также тест на внимание - проба Шульте. Обработку полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ SPSS, версия 10,0.
Результаты: Через 1 ,5 мес. после начала приема препарата у пациентов обеих групп было отмечено достоверное уменьшение выраженности когнитивных нарушений. В первой группе через 6 месяцев общий балл оценки психического статуса вырос на 1,5±0,3, зрительная память - на 0,5±0,2, тест рисования часов - 0,2±0,1. проба Шульте снижение - на 20,5±3,6, во второй группе соответственно: на 2,4+0,5, 0,8±0,2, 0,4+0,1 , 36,2±4,5. В первой группе у 2-х пациентов возникла необходимость снижения дозы, так как наблюдалось повышение внутричерепного давления.
В первой группе положительный эффект терапии был отмечен у 25% пациентов с болезнью Альцгеймера, 86% у пациентов со смешанной деменцией. Во второй группе положительный эффект наблюдался у больных с болезнью Альцгеймера 40%, у пациентов со смешанной деменцией- 92%, не наблюдалось выраженных побочных эффектов. У остальных испытуемых наблюдался эффект стабилизации состояния.
Таким образом, явно прослеживается значительное усиление эффекта мемантина при комбинировании его с мелатонином.
Пример 4. Препаративные формы
Состав таблеток Мемантин и Мелатонин
Таблица 14.
Вещество мг мас.%
Мемантин 100 40,00%
Мелатонин 5 2,00%
Лактоза 70 28,00%
Микрокристаллическая целлюлоза 24,75 9,90%
Крахмал 26 10,40%
Повидон 12,5 5,00%
Кроскармелоза 9,75 3,90%
Стеарат кальция 2 0,80%
Общая масса таблетки 250 100,00% Таблица 15.
Figure imgf000071_0001
Таблица 16.
Составы с высокой дозой Мемантин и Мелатонин
Figure imgf000071_0002
Таблица 17.
Состав капсул Мемантин и Мелатонин
Вещество мг % мг %
Мемантин 50 40,13% 100 80,0%
Мелатонин 3 2,41% 5 4,0%
Лактоза 59,5 47,75% 9,25 7,4%
Повидон 5,75 4,62% 2 1,6%
Кроскармелоза 5,75 4,61% 6,75 5,4%
Стеарат кальция 0,6 0,48% 2 1 ,6%
Общая масса капсулы 124,6 100% 125 100% Промышленная применимость
Комбинация может быть показана при медицинских состояниях, которые сопровождаются клиническими проявлениями органического психосиндрома (и его наиболее существенного компонента - деменции): болезнь Альцгеймера, сосудистая (мультиинфарктная) деменция, алкоголизм, внутричерепные объемные процессы - опухоли, субдуральные гематомы и мозговые абсцессы, аноксия, черепно-мозговая травма, нормотензивная гидроцефалия, болезнь Паркинсона, хорея Гентингтона, прогрессирующий супрануклеарный паралич, болезнь Пика, боковой амиотрофический склероз, спиноцеребеллярные дегенерации, офтальмоплегия в сочетании с метахроматической лейкодистрофией (взрослая форма), болезнь Геллервордена-Шпатца, гашишный психоз, поздние стадии, инфекции, болезнь Крейтцфельдта-Якоба, вирусные энцефалиты, прогрессирующая мультифокальная лейкоэнцефалопатия, нейросифилис, болезнь Бехчета, хронические бактериальные и грибковые менингиты; Дефицитные состояния, синдром Гайе-Вернике-Корсакова- недостаточность тиамина, недостаточность витамина В 12, недостаточность фолиевой кислоты, недостаточность витамина ВЗ, пеллагра; Метаболические нарушения, диализная деменция, гипо- и гиперфункция щитовидной железы, тяжелая почечная недостаточность, синдром Кушинга, печеночная недостаточность, болезни паращитовидных желез, системная красная волчанка и другие коллагеновые болезни, сопровождающиеся церебральными васкулитами, рассеянный склероз, болезнь Уиппла.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Фармацевтическая комбинация для лечения и/или коррекции и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях ЦНС различного генеза, проявлений амилоидной интоксикации, характеризующаяся тем, что она содержит Мелатонин и Мемантин в терапевтически эффективных количествах.
2. Фармацевтическая комбинация по п.1, характеризующаяся тем, что для лечения и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях ЦНС различного генеза она содержит Мелатонин в количестве от 0,01 мг до 50 мг и Мемантин в количестве от 0,01 до 100 мг.
3. Фармацевтическая комбинация по п.1, характеризующаяся тем, что для лечения, профилактики или коррекции проявлений амилоидной интоксикации она содержит от 5 до 300 мг мемантина и от 3 до 10 мг мелатонина.
4. Фармацевтическая комбинация по любому из пунктов п.1-3, характеризующаяся тем, что она предназначена для введения млекопитающему, в том числе человеку.
5. Фармацевтическая комбинация по любому из пунктов п.1-3, характеризующаяся тем, что композиция представлена в виде: таблетки, включая сублингвальные формы, капсулы, лекарственные формы с модифицированным высвобождением, инъекционной форме, свечи, порошок для приготовления напитка, капли, включая капли в нос, трансдермальную, трансбуккальную, аэрозольные формы.
6. Фармацевтическая композиция для лечения и/или коррекции и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях ЦНС различного генеза, проявлений амилоидной интоксикации, характеризующаяся тем, что она содержит в качестве активного начала Мелатонин и Мемантин в эффективном количестве и вспомогательные вещества.
7. Фармацевтическая композиция по п.6, характеризующаяся тем, что она выполнена в виде твердой лекарственной формы для орального введения, содержащей в качестве вспомогательных веществ, по крайней мере, один разбавитель, выбранный из лактозы, крахмала, производного крахмала, микрокристаллической целлюлозы, сукрозы, инвертированого сахара, декстрозы и декстрата, по крайней мере, один дезинтегрирующегий агент, выбранный из натрий карбокиметилцеллюлозы, Кроскармелозы, желатинированного крахмал, связующее, выбранное из поливинилпирролидона, желатина, производных целлюлозы, природных камедей, полиэтиленгликолей, альгината натрия,антифрикционный агент, выбранный из стеариновой кислоты и/или ее солей, коллоидного диоксида кремния, талька, бензоата натрия, ацетата натрия и олеата натрия при следующем содержании компонентов в мас.%:
Мемантин 40,0-90,0
Мелатонин 2,0-5,0
разбавитель2,0-50,0
связующее 3,5-10,0
дезинтегрирующий агент 1,5-10.0
Антифрикционный агент 0,2-3,0
8. Применение комбинации Мелатонина и Мемантина по любому из п.п.1-5 для получения препарата для лечения и/или коррекции и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях ЦНС различного генеза, проявлений амилоидной интоксикации.
9. Применение по п.8, где проявление амилоидной интоксикации наблюдается в случаях когнитивного снижения при сосудистых поражениях и посттравматических состояниях.
PCT/RU2014/000362 2013-10-21 2014-05-21 Комбинация для лечения и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях цнс различного генеза WO2015060746A1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013146812 2013-10-21
RU2013146812/15A RU2536270C1 (ru) 2013-10-21 2013-10-21 Комбинация для коррекции неврологического и психоэмоционального статуса при органических нарушениях цнс

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2015060746A1 true WO2015060746A1 (ru) 2015-04-30

Family

ID=52993225

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2014/000362 WO2015060746A1 (ru) 2013-10-21 2014-05-21 Комбинация для лечения и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях цнс различного генеза

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2536270C1 (ru)
WO (1) WO2015060746A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018004391A1 (ru) * 2016-06-29 2018-01-04 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" Фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию мемантина и мелатонина
RU2654713C1 (ru) * 2016-06-29 2018-05-22 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" Фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию мемантина и мелатонина

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2623865C1 (ru) * 2016-06-29 2017-06-29 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" Фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию мемантина и мелатонина

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130116215A1 (en) * 2011-10-28 2013-05-09 Mireia Coma Combination therapies for treating neurological disorders
RU2488388C1 (ru) * 2012-05-24 2013-07-27 Ооо "Валента Интеллект" Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения психических, поведенческих, когнитивных расстройств

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050031651A1 (en) * 2002-12-24 2005-02-10 Francine Gervais Therapeutic formulations for the treatment of beta-amyloid related diseases

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130116215A1 (en) * 2011-10-28 2013-05-09 Mireia Coma Combination therapies for treating neurological disorders
RU2488388C1 (ru) * 2012-05-24 2013-07-27 Ооо "Валента Интеллект" Фармацевтическая композиция для профилактики и лечения психических, поведенческих, когнитивных расстройств

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018004391A1 (ru) * 2016-06-29 2018-01-04 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" Фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию мемантина и мелатонина
RU2654713C1 (ru) * 2016-06-29 2018-05-22 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" Фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию мемантина и мелатонина
KR20190025647A (ko) * 2016-06-29 2019-03-11 엘티디 "발렌타-인텔렉트" 메만틴 및 멜라토닌의 배합물을 함유하는 약제학적 조성물
AU2017288035B2 (en) * 2016-06-29 2020-12-03 Ltd "Valenta-Intellekt" Pharmaceutical composition containing combination of memantine and melatonin
KR102280457B1 (ko) 2016-06-29 2021-07-23 엘티디 "발렌타-인텔렉트" 메만틴 및 멜라토닌의 배합물을 함유하는 약제학적 조성물
IL263976B1 (en) * 2016-06-29 2023-05-01 Valenta Intellekt Ltd Preparations containing memantin and melatonin
IL263976B2 (en) * 2016-06-29 2023-09-01 Valenta Intellekt Ltd Preparations containing memantin and melatonin

Also Published As

Publication number Publication date
RU2536270C1 (ru) 2014-12-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103596562B (zh) 基于巴氯芬和阿坎酸的神经性障碍疗法
ES2733954T3 (es) Composición que comprende torasemida y baclofeno para tratar trastornos neurológicos
US11116773B2 (en) Method of treating dementia
ES2938546T3 (es) Método de tratamiento de la esclerosis lateral amiotrófica con pridopidina
KR101581611B1 (ko) 정신, 행동, 인지 장애의 예방 및 치료용 약학적 조성물
US20220202798A1 (en) Use of pridopidine for the treatment of fragile x syndrome
JP2022536017A (ja) 精神障害、行動障害、認知障害を処置する方法
CN112566641A (zh) 治疗和/或预防与年龄相关的神经变性的进展和/或发病的方法和组合物
US20230285408A1 (en) Method of treating dementia
US20210038589A1 (en) Uses, compositions and methods
US11311530B2 (en) Lewy body disease therapeutic agent containing pyrazoloquinoline derivative
WO2015060746A1 (ru) Комбинация для лечения и/или профилактики проявлений психических, когнитивных, поведенческих и неврологических нарушений при органических заболеваниях цнс различного генеза
JP2017523982A (ja) Ｇｐｃｒ１９作用剤を有効成分として含有する、アルツハイマー病または認知症を予防、治療、または遅延させるための薬学的組成物
Gorgani et al. Taurine prevents passive avoidance memory impairment, accumulation of amyloid-β plaques, and neuronal loss in the hippocampus of scopolamine-treated rats
EP3628315A1 (en) Combination of acetylcholinesterase inhibitor and 5-ht4 receptor agonist as neuroprotective agent in the treatment of neurodegenerative diseases
JP7249433B2 (ja) 蜂毒抽出物を有効成分として含有する神経炎症疾患の予防または治療用組成物
Tang et al. Rhodiola rosea L extract shows protective activity against Alzheimer’s disease in 3xTg-AD mice
AU2012391533B2 (en) Combination for the prophylaxis and treatment of behavioural, mental and cognitive disorders
Freyssin et al. Fluoroethylnormemantine (FENM) shows synergistic protection in combination with a sigma-1 receptor agonist in a mouse model of Alzheimer's disease
Villalba The role of pharmacogenetics in the treatment of neurocardiac dysfunction in two mouse models of epilepsy
Giubilei Beyond Cholinesterase inhibition: anti-inflammatory role and pharmacological profile of current drug therapy for Alzheimer’s disease
US20110224300A1 (en) USE OF POTASSIUM 2-(a- HYDROXYPENTYL) BENZOATE IN THE MANUFACTURE OF MEDICAMENTS FOR PREVENTING AND/OR TREATING SENILE DEMENTIA
BR112021004938A2 (pt) métodos e composições para tratamento de danos associados com o envelhecimento usando inibidores de ccr3
Antenora et al. Friedreich Ataxia: 150 years of bench and bedside studies
TW201929850A (zh) 醫藥組成物於製備預防或治療不正常乙型-澱粉樣蛋白聚集類疾病之藥物上之用途

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 14854983

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 14854983

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1