WO2014154117A1 - 异硫氰酸酯及其制备方法和抗癌应用 - Google Patents

异硫氰酸酯及其制备方法和抗癌应用 Download PDF

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WO2014154117A1
WO2014154117A1 PCT/CN2014/073923 CN2014073923W WO2014154117A1 WO 2014154117 A1 WO2014154117 A1 WO 2014154117A1 CN 2014073923 W CN2014073923 W CN 2014073923W WO 2014154117 A1 WO2014154117 A1 WO 2014154117A1
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cancer
isothiocyanate
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dichloromethane
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黄蓬
文石军
罗冰玲
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Huang Peng
Wen Shijun
Luo Bingling
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    • C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
    • C07D295/18—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carboxylic acids, or sulfur or nitrogen analogues thereof
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    • C07C331/22—Isothiocyanates having isothiocyanate groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton
    • C07C331/24—Isothiocyanates having isothiocyanate groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton the carbon skeleton containing six-membered aromatic rings

Definitions

  • This invention relates to the field of chemical derivatives and, more particularly, to an isothiocyanate and a process for the preparation thereof. Background technique
  • Isothiocyanates are an important class of natural products found in cruciferous vegetables such as watercress and broccoli. These isothiocyanate-containing vegetables generally have a certain tumor prevention effect. A number of other groups and our team have done a lot of work on the anti-tumor effects of isothiocyanates, especially phenethyl isothiocyanate (PEITC). A growing body of research has shown that PEITC and its analogues can kill cancer cells efficiently, which has attracted the attention of scientists. The synthesis of novel isothiocyanates with higher antitumor activity has attracted our research interest.
  • PEITC phenethyl isothiocyanate
  • isothiocyanate mostly uses highly toxic phosgene or expensive reagents, which limits the mass production of these compounds. It has recently been reported that isothiocyanate has been successfully prepared using p-tolyxyl chloride (TsCl) or dimethyldichlorosilane (J. Org. Chem. 2007, 3969-3971; CN1880302A). We used the two reagents in the initial study to prepare partial isothiocyanates, but they were also found to have some shortcomings during the experiment.
  • the present invention provides a novel isothiocyanate having a structural formula of the formula (I):
  • At least one of R 1 and R 2 is hydrogen but not hydrogen at the same time.
  • the n is 1 ⁇ 3,
  • the R 1 and R 2 are -H,
  • the R 3 is methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, n-pentylhexyl, phenyl, 2-pyridyl, benzyl or phenethyl ,
  • the R4 is an oxygen atom, a carbon atom, a nitrogen methyl group, a nitrogen ethyl group or a nitrogen propyl group.
  • the R 2 is preferably or
  • the R is particularly selected from methyl, pentyl, ethyl, propyl, butyl or decyl t
  • the R 4 is preferably a carbon atom, an oxygen atom or a nitrogen methyl group.
  • the base is trimethylamine, triethylamine or potassium carbonate;
  • the solvent is tetrahydrofuran or dichloromethane;
  • the oxime is acetyl chloride, acetic anhydride, benzoyl chloride or sulfonyl chloride, preferably acetyl chloride.
  • reaction formula 1 The reaction formula is derived as shown in the following reaction formula 1:
  • the aromatic group-containing amine is an amine corresponding to the above isothiocyanate, and has the general formula (11):
  • At least one of R 1 and R 2 is hydrogen but not hydrogen at the same time.
  • n 1 ⁇ 3
  • the R 1 and R 2 are -H
  • the R 3 is methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, n-pentyl, n-hexyl, phenyl, 2-pyridyl, benzyl or benzene Ethyl,
  • the R 4 is an oxygen atom, a nitrogen methyl group, a nitrogen ethyl group, or a nitrogen propyl group.
  • the invented compounds were found to have significant killing effects in a variety of tumor cells and have great potential for antitumor drug applications.
  • Compound 2 has the best overall inhibitory effect on human pancreatic cancer, gastric cancer, intestinal cancer, nasopharyngeal carcinoma, liver cancer, glioma, myeloma, lung cancer or leukemia, and has a good prospect in the application of antitumor drugs.
  • Figure 1 Drugs 1 ⁇ mol per liter of Compound 1, 2 and PEITC, respectively, after 72 hours of dosing A control map of DLD1 aggregation in human intestinal cancer cells.
  • Figure 2 A comparison of the drug 1, 2 and PEITC, respectively, causing apoptosis of human intestinal cancer cell DLD1 after 72 hours of dosing.
  • Triethylamine (0.71 mL, 5.45 mmol) and carbon disulfide (0.11 mL, 1.82 mmol) tetrahydrofuran (1.5) were added dropwise to a solution of phenethylamine (200 mg, 1.65 mmol) in tetrahydrofuran (2.5 mL). mL) solution. After reacting for 15 minutes in an ice water bath, the reaction solution was allowed to warm to room temperature and stirring was continued for 1 hour. Then, acetyl chloride (0.18 mL, 2.47 mmol) was added dropwise under ice water.
  • Compound 1 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC by using compound la, using acetyl chloride.
  • Example 3 Synthesis of Compound 2 Oh, Compound 2 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC using Compound 2a, using acetyl chloride.
  • Compound 5 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC using Compound 5a using acetyl chloride.
  • 5b was dissolved in 2 ml of dichloromethane, 0.2 ml of trifluoroacetic acid was added, stirred at room temperature for 1 hour, then spun dry, added with 15 ml of dichloromethane and 1 ml of water, neutralized with sodium bicarbonate solid to alkaline, dichloromethane. The hydrazine was extracted 4 times (15 ml * 4), the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated to give 5a.
  • Compound 6 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC using Compound 6a using acetyl chloride.
  • Compound 7 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC using Compound 7a using acetyl chloride.
  • Example 10 Synthesis of Compound 9
  • EDCi.. DCM Compound 10 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC using Compound 10a using acetyl chloride.
  • Compound 11 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC using compound la, using acetyl chloride.
  • Compound 12 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC using Compound 12a, using acetyl chloride.
  • Example 15 Synthesis of Compound 14 C:S Compound 14 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC using compound 14a using acetyl chloride.
  • N-ethyl-4-aldehydebenzamide 180 mg, 1.02 mmol
  • triphenylphosphinoacetonitrile 367 mg, 1.22 mmol
  • IS Compound 15 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC using Compound 15a, using acetyl chloride.
  • the structure of compound 15 is characterized by: iH MR OOHz ⁇ DCb): 57.14-7.32 (m, 9H), 4.59 (s, 2H) ppm ; 13 C MR (100 Hz, CDC): 5136.0, 133.7, 131.8, 130.8, 129.7, 128.6, 126.6, 126.6, 47.3 ppm.
  • Compound 16 was prepared by the same conditions as in the synthesis of PEITC using Compound 16a using acetyl chloride.
  • the structure of compound 16 is characterized by: iH MR OOHz ⁇ DCb): 57.41-7.17 (m, 9H), 4.66 (s, 2H) ppm ; 13 C MR (100 Hz, CDCh): 5137.7, 135.3, 134.4, 132.0, 130.0, 129.6, 129.4, 128.9, 128.3, 128.2, 127.7, 126.8, 125.1 ppm.
  • the cell survival rate was calculated as: the average absorbance value of the drug-treated group/the average absorbance value of the control group x100%, and the IC 5 Q of 1-16 resulted in the drug concentration at the time of 50% tumor cell death, and IC 5 was calculated using Prism software. Value and plot the cell survival curve.
  • Compound 1-16 significantly killed human intestinal cancer DLD1, gastric cancer HGC27 and pancreatic cancer Panel in vitro MTT assay.
  • Compound 1-2 also significantly kills human liver cancer in vitro MTT assay.
  • Compound 2 also significantly killed human pancreatic cancer Apscl in in vitro MTT assay, Myeloma 8226, anti-cisplatin lung cancer A549/DDP and lung cancer NCI-H460.
  • Compound 1-2 causes human liver cancer (SK-Hepl, Huh-7, HepG2), leukemia (ML-1, HL-60, Molml3), gastric cancer 7901, nasopharyngeal Concentration of cancer CNE-2 and glioma U87 50% death (IC 50 , unit ⁇ ), compound ⁇ cancer cell SK-Hepl Huh-7 HepG2 ML-1 HL-60 7901 Molml3 CNE-2 U87

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Abstract

一种具有如下结构通式（I）的异硫氰酸酯，所述异硫氰酸酯的合成工艺如下：利用常规有机碱、二硫化碳、乙酰氯，在低温或室温环境下反应制得，所述异硫氰酸酯对肿瘤细胞有杀伤效果。

Description

异硫氰酸酯及其制备方法和抗癌应用 技术领域
本发明涉及化学衍生物领域，更具体地，涉及一种异硫氰酸酯及其制备方法。 背景技术
异硫氰酸酯是一类重要的天然产物，主要存在于西洋菜和西兰花等十字花科 蔬菜中。这些含有异硫氰酸酯的蔬菜一般具有一定的肿瘤预防作用。其他课题组 以及我们团队在异硫氰酸酯特别是苯乙基异硫氰酸酯 (PEITC)的抗肿瘤作用研究 上进行了大量工作。 越来越多的研究结果表明 PEITC以及类似物能够高效杀死 癌细胞， 这引起了科学家的重视。合成新颖抗肿瘤活性更高的异硫氰酸酯引起了 我们的研究兴趣。
目前异硫氰酸酯的合成方法存大多使用剧毒的硫光气或者价格昂贵的试剂， 限制了这些化合物的大规模生产。 最近有人报道使用对甲苯黄酰氯 (TsCl)或者二 甲基二氯硅垸成功制备了异硫氰酸酯 （ J. Org. Chem. 2007, 3969-3971； CN1880302A)。 我们在最初的研究中使用这两种试剂可以制备部分异硫氰酸，但 是在实验过程中也发现它们存在一些不足。 在制备极性较小的异硫氰酸酯时，过 量的对甲苯黄酰氯由于过于稳定以及极性很小，给极性较小产品的分离和纯化带 来很大困难， 容易污染产品。 另一试剂二甲基二氯硅垸挥发性比较强， 对眼睛以 及呼吸道产生强烈剌激。基于异硫氰酸酯潜在的抗肿瘤活性以及目前合成方法的 局限性， 寻找异硫氰酸酯的新的简易制备方法具有重要意义。
发明内容
以下对本发明方案结合反应式作进一步的阐释，所列的反应式仅为理论推导 所得， 其不能作为本发明保护范围的限制。
本发明提供一种新型的异硫氰酸酯， 结构通式如结构式 （I) 所示：
Figure imgf000002_0001
(I)
所述的 R1和 R2至少有一个为氢但不同时为氢，
所述的 n为 1~3， 所述的 R1和 R2为 -H、
Figure imgf000003_0001
Figure imgf000003_0002
所述的 R3为甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁基、 正戊 正己基、 苯基、 2-吡啶基、 苄基或苯乙基，
所述的 R4为氧原子、 碳原子、 氮甲基、 氮乙基、 氮丙基。
所述的 R2优选为
Figure imgf000003_0003
或
Figure imgf000003_0004
所述的 R 尤选为甲基、 戊基、 乙基、 丙基、 丁基或已基 t
所述的 R4优选为碳原子、 氧原子或氮甲基。
以下为优选的 16种化合物：
Figure imgf000004_0001
另外提供一种异氰酸酯的制备方法， 包括以下步骤，
51. 将对应的含有芳香基的胺溶于有机溶剂， 再加入碱， 然后滴入溶有二硫 化碳的有机溶剂，
52. 在温度为 0°C， 反应 5~15分钟后， 室温搅拌 15~30分钟，
53.在温度为 0°C下， 加入 Y， 然后室温反应 15~30分钟，
54. 淬灭反应， 纯化， 即得。
所述的碱为三甲胺、 三乙胺或碳酸钾； 所述的溶剂为四氢呋喃或二氯甲垸； 所述的 Υ为乙酰氯、 乙酸酐、 苯甲酰氯或磺酰氯， 优选为乙酰氯。
反应式推导如下反应式 1所示：
8 ) 032, «s溶剂
Ar.^ iNCS
、 m
薩
Y; AcC AcgO, B C , SO.gC½
所述的含有芳香基的胺为与前述异硫氰酸酯对应的胺， 通式为以下结构式 (11)：
Figure imgf000005_0001
所述的 R1和 R2至少有一个为氢但不同时为氢，
所述的 n为 1~3，
所述的 R1和 R2为 -H、
Figure imgf000005_0002
Figure imgf000005_0003
所述的 R3为甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁基、 正戊 基、 正己基、 苯基、 2-吡啶基、 苄基或苯乙基，
所述的 R4为氧原子、 氮甲基、 氮乙基、 氮丙基。
更进一步提供异氰酸酯在制备抗癌药物中的应用。
所述化合物 1在制备人胰腺癌、 胃癌、 肠癌、 鼻咽癌、 肝癌、 脑胶质瘤或 白血病药物中的应用。
所述化合物 2在制备人胰腺癌、 胃癌、 肠癌、 鼻咽癌、 肝癌、 脑胶质瘤、 骨髓瘤、 肺癌或白血病的药物中的应用。
本发明提供的有益效果如下：
1. 发明了一系列新的异硫氰酸酯化合物
2. 发明了一种新的合成异硫氰酸酯的方法， 具有广普、 快速、 高效率的特 征。
3. 发现所发明的化合物在多种肿瘤细胞中具有明显杀伤效果， 在抗肿瘤药 物应用中具有很大可能性。
4. 化合物 2对人胰腺癌、 胃癌、 肠癌、 鼻咽癌、 肝癌、 脑胶质瘤、 骨髓瘤、 肺癌或白血病的总体抑制效果最好， 在抗肿瘤药物应用中具有良好前景。
附图说明
图 1 : 药物分别为 1微摩尔每升的化合物 1、 2和 PEITC, 在给药 72小时后影响 人肠癌细胞 DLD1聚集的对照图。
图 2: 药物分别为 1微摩尔每升的化合物 1、 2和 PEITC, 在给药 72小时后引起 人肠癌细胞 DLD1凋亡的对照图。
具体实 IS^式
下面结合附图和具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明， 本发明 采用的试剂、设备和方法为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。
实施例一， 乙酰氯介导的苯乙基异硫氰酸酯 (PEITC)的制备方法 ^^,Α、 CSs,* THF' -' ¾γ- -: N:CS
| I ,、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、 ■■ [ ,|
、、 a ) AcQ THF 、
PE!TG 冰水浴下， 往苯乙胺 （200mg， 1.65 mmol) 的四氢呋喃 （2.5 mL)溶液中分 别滴加三乙胺 （0.71 mL， 5.45 mmol) 以及二硫化碳 （0.11 mL， 1.82 mmol) 四 氢呋喃 （1.5mL) 溶液。 冰水浴下反应 15分钟后， 反应液升至室温并继续搅拌 1小时。 然后， 在冰水浴下滴加乙酰氯 （0.18 mL， 2.47mmol)。 室温下反应 1小 时后， 冰水浴下往反应液滴加 1M盐酸（5mL)淬灭反应。 水相用乙酸乙酯萃取 (15mLx3), 合并的有机相用饱和氯化钠溶液洗涤 （5mLxl)， 然后用无水硫 酸钠干燥。过滤干燥的有机相，减压除去溶剂，残留物用硅胶柱层析进行纯化（乙 酸乙酯 /石油醚 =1/20) 得到苯乙基异硫氰酸酯 （252 mg， 产率 94%)。
当乙酸酐、苯酰氯以及磺酰氯作为亲电试剂时， 在同样的条件下进行反应得 到苯乙基异硫氰酸酯的产率分别达到 96%， 42%和 80% (表 1)。 从这些数据可 以看出， 除了苯酰氯外， 乙酰氯、 乙酸酐以及磺酰氯都给出了比文献或专利报道 的对甲苯磺酰氯以及二甲基二氯硅垸要高或者相当的产率。 同时， 我们还使用碳 酸钾作为碱代替三乙胺， 以乙酰氯作为亲电试剂， 也得到了 85%的反应产率。这 一新的发明提供了一种高效和简便的异硫氰酸酯制备方法。
表 1: 相对于报道的对甲苯磺酰氯以及二甲基二氯硅垸， 序列号 1 2 3 4 5 6
试剂 乙酰氯 乙酸酐 苯酰氯 磺酰氯 对甲苯磺酰氯 二甲基二氯 产率 94% 96% 42% 80% 70% 79% 考虑到乙酰氯容易处理，所以我们随后使用乙酰氯在相同的条件下进行了其 它异硫氰酸酯的制备， 并取得了很好的结果 （表二）。 这些数据表明了本专利中 的亲电体特别是乙酰氯能够高效简便的制备异硫氰酸酯，避免了使用对甲苯磺酰 氯对低极性产物带来的分离问题以及使用二甲基二氯硅垸剌激性很强的问题。
表 2 Q: 异硫氰酸酯的制备以及产率 Q ) cCU THF
； 化^ 3 化^ ¾ 产率（％)
1 '- 93
2 95
3 入 JW 96
Ϊ
4 f 、 91
6 86
7 97
8 、 91
9 87
i
、 Ί V、:
10 80
Figure imgf000008_0001
实施例二， 化合物 1的合成
Figure imgf000008_0002
通过化合物 la， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 1。化合物 1的结构表征为： ¾ MR (400Hz,CDCl3): δ 8.01(d, 2H, J=8.2Hz,), 7.29(d 2H, J=8.2Hz), 3.91(s, 3H), 3.75 (t, 2H, J=6.8Hz), 3.04(t, 2H, J=6.8Hz) ppm; 13C MR(100Hz, CDC13): δ 166.9, 142.4, 130.2, 129.3, 129.0, 52.2, 46.0, 36.5 ppm。 MS (ESI, m/z) 221.0 (M+H+)。
化合物 la的制备过程： 0.5ml 乙酰氯加入到 5ml甲醇中，常温搅拌 0.5h后， 加入 4-(2-氨基乙基)苯甲酸盐酸盐 SI ( 500mg, 2.48mmol)。 65 °C回流 2h, 旋干， 加入 10ml乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液，萃取 3次，有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩干燥得到黄色液体 la (440mg, 99%)。
实施例三， 化合物 2的合成
Figure imgf000009_0001
丫、
Figure imgf000009_0002
通过化合物 2a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 2。化合物 2的结构表征为： 1H MR(400Hz,CDCl3): δ 7.67(d, 2H, J=8.0Hz)， 7.2 l(d, 2H, J=8.0Hz), 6.04(s, 1H)， 3.68 (t, 2H, J=6.4Hz)， 3.43(t, 2H, J=6.4Hz), 2.96(t, 2H, J=6.4Hz); 1.20(t, 3H, J=7.2Hz) ppm; 13C MR (100Hz, CDCh): δ 167.1, 140.6, 134.0, 129.1, 127.5, 46.2, 36.4, 35.1, 15.0 ppm。 MS (ESI, m/z) 235.1 (M+H+), 263.1 (M+ H4 +), 469.2 (2M+H+)。
化合物 2a的制备过程： 4-(2-氨基乙基)苯甲酸盐酸盐 SI (200mg„ 0.99mmol ) 和 Boc2OC260mg, 1.19mmol) 溶解于 3ml 四氢呋喃中， 在冰浴下滴加 1M的氢氧 化钠溶液 2ml, 常温反应 2小时后， 用 1M盐酸中和至酸性， 乙酸乙酯萃取三次， 有机相收集并用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩， 得到白色的固体 2c (240mg, 产 率 91%)。
2c溶解于 15ml 二氯甲垸， 往溶液中快速加入 HOBt ( 183mg, 1.35mmol )和 三乙胺 (0.25ml, 1.98mmol), 冰浴下快速加入 EDCI(259mg, 1.35mmol), 常温搅拌 0.5小时； 冰浴下滴加 70%乙胺溶液 (0.15ml, 1.81mmol), 常温搅拌 1小时后， 力口 入饱和氯化铵溶液， 用二氯甲垸萃取 3次， 饱和氯化钠洗涤一次， 有机相用无水 硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩液体用硅胶柱层析纯化（乙酸乙酯 /石油醚 =2: 1 )得到白 色固体 2b (223mg, 产率 85%)。 2b溶解于 3ml 二氯甲垸中，加入三氟乙酸 0.3ml, 常温搅拌 1小时后， 旋干， 加入 15ml二氯甲垸和 lml水， 用碳酸氢钠固体中和 至碱性， 二氯甲垸萃取 4次 （15ml*4)， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩 得到白色固体 2a ( 142mg, 产率 97% )。
实施例四， 化合物 3的合成 NsHCC¾.
Figure imgf000010_0001
3 通过化合物 3a，使用乙酰氯，采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 3。 化合物 3的结构表征为： ¾ MR (400Hz, CDCh): δ 7.68 (d, 2Η, J=8.0 Hz), 7.20(d, 2H, J=8.0 Hz), 6.23(s, 1H) , 3.68(t, 2H, J=6.8Hz), 3.34(dd, 2H, J=6.8, 13.6Hz): 2.95(t, 2H, J=6.8Hz), 1.57(dd, 2H, J=7.2, 14.4Hz), 0.9 l(t, 3H, J=7.2Hz) ppm; 13C
MR (100Hz, CDCh): δ 167.2, 140.6, 134.0, 129.1, 127.5, 46.2, 419, 36.4, 23.0, 11.5 ppm。
化合物 3a的制备： 2c (200mg, 0.75mmol) 溶解于 10ml 二氯甲垸， 往溶液 中快速加入 HOBt ( 112mg, 0.83mmol)和三乙胺 (0.22ml, 1.66mmol), 冰浴下快速 加入 EDCI(217mg, 1.13mmol), 常温搅拌 0.5小时； 冰浴下滴加丙胺溶液 (0.14ml, 1.66mmol), 常温搅拌 1小时后， 加入饱和氯化铵溶液， 用二氯甲垸萃取 3次， 饱和氯化钠洗涤一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩液体用硅胶柱层析 纯化 （乙酸乙酯 /石油醚 =2: 1 )得到白色固体 3b (220mg, 产率 95% )。 3b溶解于 3ml 二氯甲垸中， 加入三氟乙酸 0.3ml, 常温搅拌 1小时后， 旋干， 加入 15ml 二氯甲垸和 lml水， 用碳酸氢钠固体中和至碱性， 二氯甲垸萃取 4次（15ml*4)， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得到白色固体 3a ( 135mg, 产率 99% )。 实施例五， 化合物 4的合成
、 HO¾ ¾ . 關 TFA.DO
. E L P
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r i)C%( . THF
Figure imgf000010_0002
通过化合物 4a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 4。化合物 4的结构表征为： iH MR OOHz DCh): δ 7.78(d, 2H, J=7.6Hz), 7.57(d 2H, J=8.0Hz), 7.32-7.07(m, 5H), 3.70 (t, 2H, J=6.8Hz), 2.98(t, 2H, J=6.8Hz) ppm; 13C MR (100Hz, CDC13): δ 165.5, 141.3, 138.0, 134.1, 129.4, 127.7, 124.8, 120.4, 46丄 36.4 ppm。
化合物 4a的制备： 2c ( 200mg, 0.75mmol) 溶解于 10ml 二氯甲垸， 往溶液 中快速加入 HOBt ( 112mg, 0.83mmol)和三乙胺 (0.22ml, 1.66mmol), 冰浴下快速 加入 EDCI(217mg, 1.13mmol), 常温搅拌 0.5小时；冰浴下滴加苯胺溶液， 常温搅 拌 1小时后，加入饱和氯化铵溶液，用二氯甲垸萃取 3次，饱和氯化钠洗涤一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩液体用硅胶柱层析纯化 （乙酸乙酯 /石油 醚 =2: 1 ) 得到白色固体 4b (270mg, 产率 95%)。 4b溶解于 4ml二氯甲垸中， 加 入三氟乙酸 0.4ml， 常温搅拌 1小时后， 旋干， 加入 15ml二氯甲垸和 1ml水， 用碳酸氢钠固体中和至碱性， 二氯甲垸萃取 4次 （15ml*4)， 有机相用无水硫酸 钠干燥， 过滤， 浓缩得到白色固体 4a ( l lOmg, 产率 60%)。
实施例六， 化合物 5的合成
Figure imgf000011_0001
通过化合物 5a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 5。化合物 5的结构表征为： 1H MR(400Hz,CDCh): δ 8.68 (s, 1H), 8.39 (d, 1H, J = 8.4Hz), 8.31 (d, 1H, J = 4.0Hz), 7.93 (d, 2H, J = 8.0Hz), 7.78 (dt, 1H, J =1.6, 8.4Hz), 7.37 (d, 2H, J = 8.0Hz), 7.09 (m, 1H), 3.79 (t, 2H, J = 7.2Hz), 3.08 (t, 2H, J = 7.2Hz) ppm。 MS (ESI, m/z) 284.1 (M+H+)。
化合物 5a的制备： 2c ( lOOmg, 0.38mmol )和 2-氨基吡啶 ( 39mg, 0.41mmol ) 溶解于 4ml二氯甲垸，往溶液中快速加入三乙胺 (0.08ml, 0.57mmoi;^P EDCI(88mg: 0.45mmol), 常温搅拌过夜后， 加入饱和氯化铵溶液， 用二氯甲垸萃取 3次， 饱 和氯化钠洗涤一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩液体用硅胶柱层析纯 化 （乙酸乙酯 /石油醚 =1 : 1 )， 得到 5b。 5b溶解于 2ml 二氯甲垸中， 加入三氟乙 酸 0.2ml, 常温搅拌 1小时后， 旋干， 加入 15ml二氯甲垸和 lml水， 用碳酸氢钠 固体中和至碱性， 二氯甲垸萃取 4次 （15ml*4)， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过 滤， 浓缩得到 5a。
实施例七， 化合物 6的合成
Figure imgf000012_0001
通过化合物 6a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 6。 化合物 6的结构表征为： iH MR OOHz^DCb): δ 7.67(d, 2H, J=8.0Hz), 7.25-7.16(m, 7H), 6.39(s, 1H), 4.54(d, 2H, J=5.6Hz), 3.64(t,2H, J=6.8Hz), 2.92(t,2H, J=6.8Hz) ppm; 13C MR (100Hz, CDCh): δ 166.9, 140.8, 138.1, 133.4, 129.0, 128.8, 127.9, 127.6, 127.5, 46.1 , 44.2, 36.3.
化合物 6a的制备： 2c ( 300mg, 1.13mmol ) 溶解于 10ml 二氯甲垸， 往溶液 中快速加入 HOBt ( 168mg, 1.24mmol)和三乙胺 (0.44ml, 3.39mmol), 冰浴下快速 加入 EDCI(325mg, 1.70mmol), 常温搅拌 0.5小时； 冰浴下滴加苯乙胺 （0.25ml, 2.26mmol), 常温搅拌 2小时后， 加入饱和氯化铵溶液， 用二氯甲垸萃取 3次， 饱和氯化钠洗涤一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩液体用硅胶柱层析 纯化 （乙酸乙酯 /石油醚 =1 : 1 )得到白色固体 6b (408mg, 产率 99%)。 6b溶解于 4ml 二氯甲垸中， 加入三氟乙酸 0.4ml, 常温搅拌 1小时后， 旋干， 加入 15ml 二氯甲垸和 lml水， 用碳酸氢钠固体中和至碱性， 二氯甲焼 /甲醇 （1/10)萃取 4 次 （15ml*4)， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得到白色固体 6a (274mg, 产率 97%)。 实施例八， 化合物 7的合成
Figure imgf000013_0001
通过化合物 7a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 7。 化合物 7的结构表征为： ¾ MR(400Hz,CDCb): δ 7.60(d, 2H, J=8.0Hz), 7.27-7.16(m, 7H), 6.13(s, 1H), 3.68-3.62(m, 4H), 2.94(t, 2H, J=6.8Hz), 2.86(t, 2H, J=6.8Hz) ppm; 13C MR (100Hz, CDCh): δ 167.2, 140.8, 139.0, 133.8, 129.1, 128.9: 128.8, 127.5, 126.7, 46.1, 41.3, 36.4， 35.8 ppm.
化合物 7a的制备： 2c ( 300mg, 1.13mmol ) 溶解于 10ml 二氯甲垸， 往溶液 中快速加入 HOBt ( 168mg, 1.24mmol )和三乙胺 (0.44ml, 3.39mmol), 冰浴下快速 加入 EDCI(325mg, 1.70mmol), 常温搅拌 0.5小时； 冰浴下滴加苯乙胺 （0.29ml, 2.26mmol), 常温搅拌 2小时后， 加入饱和氯化铵溶液， 用二氯甲垸萃取 3次， 饱和氯化钠洗涤一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩液体用硅胶柱层析 纯化 （乙酸乙酯 /石油醚 =1 : 1 )得到白色固体 7b ( 395mg, 产率 93%)。 7b溶解于 4ml 二氯甲垸中， 加入三氟乙酸 0.4ml, 常温搅拌 1小时后， 旋干， 加入 15ml 二氯甲垸和 lml水， 用碳酸氢钠固体中和至碱性， 二氯甲焼 /甲醇 （1/10)萃取 4 次 （15ml*4)， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得到白色固体 7a (281mg, 产率 100%)。
实施例九， 化合物 8的合成：
Figure imgf000014_0001
通过化合物 8a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 8。化合物 8的结构表征为：
Figure imgf000014_0002
δ 7.22-7.34(m, 4H), 3.72(t, 2H J=6.8Hz), 3.52(brs, 2H), 3.24(brs, 2H), 2.99(t, 2H, J=6.8Hz), 1.10-1.24(m, 6H) ppm; 13C MR (100Hz, CDC13): δ 171.1, 138.2, 136.3, 129.0, 126.9, 46.2, 43.4, 39.4, 36.3, 14.3, 13.0ppm.
化合物 8a的制备： 2c (200mg, 0.75mmol ) 溶解于 10ml 二氯甲垸， 往溶液 中快速加入 HOBt ( 112mg, 0.83mmol)和三乙胺 (0.22ml, 1.66mmol), 冰浴下快速 加入 EDCI(217mg, 1.13mmol), 常温搅拌 0.5小时；冰浴下滴加二乙胺溶液 (0.18ml, 1.66mmol), 常温搅拌 1小时后， 加入饱和氯化铵溶液， 用二氯甲垸萃取 3次， 饱和氯化钠洗涤一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩液体用硅胶柱层析 纯化 （乙酸乙酯 /石油醚 =2: 1 )得到白色固体 8b (221mg, 产率 92% )。 8b溶解于 3ml 二氯甲垸中， 加入三氟乙酸 0.3ml, 常温搅拌 1小时后， 旋干， 加入 15ml 二氯甲垸和 lml水， 用碳酸氢钠固体中和至碱性， 二氯甲垸萃取 4次（15ml*4)， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得到白色固体 8a ( 131mg, 产率 97% )。
实施例十， 化合物 9的合成 通过化合物 9a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 9化合物 9的结构表征为： iH MR OOHz DCls): δ 7.39 (d, 2H, J=8.0 Hz), 7.26(d, 2H, J=8.0 Hz), 3.44-3.76(m, 10H), 3.02(t, 3H, J=6.4 Hz) ppm; 13C MR (100Hz, CDC ): 5170.1, 139.0, 134.3, 129.0, 127.7, 66.9, 46.1, 36.2 ppm。 MS (ESI, m/z) 277.2 (M+H+)。
Figure imgf000015_0001
化合物 9a的制备： 2c ( 150mg, 0.57mmol) 溶解于 10ml 二氯甲垸， 往溶液 中快速加入 DMPA ( lOmg) 和三乙胺 (0.25ml, 1.87mmol), 冰浴下快速加入 EDCI(163mg, 0.85mmol), 常温搅拌 0.5小时； 冰浴下滴加***啉 （0.11ml, 1.24mmol), 常温搅拌 45min后， 加入饱和氯化铵溶液， 用二氯甲垸萃取 3次， 饱和氯化钠洗涤一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩液体用硅胶柱层析 纯化 （乙酸乙酯 /石油醚 =2: 1 )得到白色固体 9b ( 175mg, 产率 93 9b溶解于 3ml二氯甲垸中， 加入三氟乙酸 0.3ml, 常温搅拌 1小时后， 旋干， 加入 15ml二 氯甲垸和 lml水， 用碳酸氢钠固体中和至碱性， 二氯甲垸萃取 4次 （15ml*4)， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得到白色固体 9a (90mg, 产率 76 实施例 ^一， 化合物 10的合成
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HO、 ■— W" ¾H
Figure imgf000015_0002
'、,」 EDCi.. DCM:
Figure imgf000015_0003
通过化合物 10a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 10。 化合物 10的结构表征为： ¾ NMR(400Hz,CDCl3): δ 7.16-7.30(m, 4H), 3.38-3.72(m, 4H), 3.65(t, 2H, J=6.8Hz), 2.92(t,2H, J=6.8Hz), 2.32-2.41(m, 4H), 2.24(s, 3H) ppm ; 13C MR (100Hz, CDC13): δ 170.2, 139.0, 134.8, 129.1, 127.8, 55.2, 46.2, 46.0, 36.4, 21.2 ppm.
化合物 10a的制备： 2c ( 350mg, 1.32mmol )溶解于 10ml 二氯甲垸， 往溶液 中快速加入 HOBt ( 197mg, 1.45mmol )和三乙胺 (0.85ml, 6.60mmol), 冰浴下快速 加入 EDCI(379mg, 1.98mmol), 常温搅拌 0.5小时； 冰浴下滴加 1-甲基哌嗪 219mg, 2.19mmol)水溶液， 常温搅拌 2h后， 加入饱和氯化铵溶液， 用二氯甲垸 萃取 3次， 饱和氯化钠洗涤一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩液体用 硅胶柱层析纯化 （乙酸乙酯） 得到白色固体 10b (448mg, 产率 98%)。 10b溶解 于 8ml二氯甲垸中， 加入三氟乙酸 0.8ml, 常温搅拌 1小时后， 旋干， 加入 30ml 二氯甲垸和 lml水， 用碳酸氢钠固体中和至碱性， 二氯甲垸萃取 6次（15ml*6)， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得到白色固体 10a ( 141mg, 产率 45%)。
实施例十二， 化合物 11的合成：
Figure imgf000016_0001
通过化合物 l la， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 11。化合物 11的结构表征为： ¾ MR(400Hz,CDCl3): δ 9.90 (s, 1H)， 7.52 (d, 2H, J=8.2Hz), 7.19 (d, 2H, J=8.2 Hz) , 3.86 (t, 2H, J=6.4 Hz), 2.89 (t, 2H, J=6.4 Hz), 2.03 ( s, 3H) ppm; 13C MR (100Hz, DMSO): 5167.9, 137.8, 131.8, 128.9, 118.8， 45.8， 34.6， 23.7 ppm。 MS (ESI, m/z) 221.1 (M+H+), 441.1 (2M+H+)。
化合物 11a的制备： 4-氨基苯乙腈 （300mg, 2.27mmol )， DMAP(30mg) , Et3N(0.6ml, 4.54mmol)溶解于 6ml二氯甲垸中， 冰浴下， 滴加乙酸酐 （0.33ml, 3.40mmol), 搅拌 5min后， 升至室温， 反应 3h; 加入 3ml水和 10ml二氯甲垸， 萃取 3次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤浓缩， 硅胶层析柱纯化 （乙酸乙酯： 石油醚 =1 : 1 )， 得到白色固体 l lc(371mg, 94%)。 11c与 Boc20溶解于 10ml乙酸 乙酯中，加入钯碳，在氢气氛围下，常温搅拌过夜，得到 l ib; l ib加入 0.5mlTFA 和 4ml DCM, 常温搅拌 2h, 旋干， 加入 20ml二氯甲垸和 2ml水， 用碳酸氢钠固 体中和至碱性， 二氯甲垸萃取 4次（15ml*4)， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得到 l la。
实施例十三， 化合物 12的合成：
Figure imgf000017_0001
通过化合物 12a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合 物 12。 化合物 12的结构表征为： iH MR OOHz DCh): δ 7.42-7.96(m, 4H), 3.92(s, 3H), 3.76(t, 2H, J=6.8Hz), 3.04(t,2H, J=6.8Hz) ppm; 13C MR (100Hz, CDC13): δ 166.8, 137.4, 133.4, 130.7, 129.8, 128.9, 128.5, 52.2, 46.1, 36.2 ppm. 化合物 12a的制备： 0.5ml 乙酰氯加入到 5ml甲醇中， 常温搅拌 0.5h后，加 入 3-羧基苯甲醛 S3。 65°C回流 2h, 旋干， 加入 10ml乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶 液， 萃取 3次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩干燥得到黄色液体 12d。 12d, 硝基甲垸、 乙醇和水混合， 冰浴下滴加氢氧化钠 （0.2 eqUiv) 溶液， 反应 2h, 滴加 1M盐酸溶液至中性， 二氯甲垸萃取 3次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤浓缩， 得到 12c。 12c (316mg, 1.40mmol) 溶解于 4ml乙酸酐中， 加入三乙 胺 （0.4ml, 2.81mmol)， 常温搅拌 lh, 乙酸乙酯萃取 3次， 有机相用无水硫酸钠 干燥， 过滤浓缩， 硅胶层析柱纯化 （乙酸乙酯 /石油醚 =1 :3 )， 得到浅绿色固体 12b(215mg, 74%)。 12b、硅胶粉、异丙醇和二氯甲垸混合， 搅拌下加入硼氢化钠， 搅拌 30min， 冰浴下加入 1M HC1, 搅拌 20min后， 过滤， 收集滤液， 滤液用饱 和氯化钠溶液洗一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤浓缩， 钯碳氢化还原，得 到 12a(160mg, 产率 88%)。
实施例十四， 化合物 13的合成：
Figure imgf000018_0001
通过化合物 13a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合物 13。化合物 13的结构表征为： 1H MR(400Hz,CDCl3): δ 7.69-7.33(m, 4H), 6.57(s, 1H), 3.71(dd, 2H, J=6.8, 11.2Hz), 3.47(m, 2H), 2.99(dd, 2H, J=6.4, 11.2Hz), 1.23(t, 3H, J=8.0Hz) ppm; 13C MR (100Hz, CDCh): δ 167.4, 137.5, 135.6, 131.8, 129.1, 127.6, 126.0, 46.3, 36.4, 35.1, 14.9 ppm.
化合物 13a的制备： 3-羧基苯甲醛 S3溶解于 10ml二氯甲垸， 往溶液中快速 加入 HOBt和三乙胺， 冰浴下快速加入 EDCI, 常温搅拌 0.5小时；冰浴下滴加 70% 乙胺溶液， 常温搅拌 lh后， 加入饱和氯化铵溶液， 用二氯甲垸萃取 3次， 饱和 氯化钠洗涤一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩液体用硅胶柱层析纯化 (乙酸乙酯:石油醚 =1 : 1 )得到白色固体 13d (参考 2b)。 13d, 硝基甲垸 (24 equiv)、 乙醇和水混合， 冰浴下滴加氢氧化钠 （0.2 equiv)溶液， 反应 2h, 滴加 1M盐酸 溶液至中性， 二氯甲垸萃取 3次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤浓缩， 得到 13c。 13c (413mg, 1.73mmol) 溶解于 4.5ml乙酸酐中， 加入三乙胺 (0.45ml, 3.47mmol), 常温搅拌 lh, 乙酸乙酯萃取 3次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤 浓缩， 硅胶层析柱纯化 （乙酸乙酯 /石油醚 =1 :3 )， 得到浅绿色固体 12b(341mg, 90%)。 13b、二氧化硅、异丙醇和二氯甲垸混合，搅拌下加入硼氢化钠，搅拌 30min， 冰浴下加入 1M HC1, 搅拌 20min后， 过滤， 收集滤液， 滤液用饱和氯化钠溶液 洗一次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤浓缩， 钯碳氢化还原， 得到 12a(276mg, 产率 93%)。
实施例十五， 化合物 14的合成 C:S
Figure imgf000019_0001
通过化合物 14a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合 物 14。化合物 14的结构表征为： ¾ MR(400Hz,CDCl3): δ 7.71 (d, 2H, J=8.0Hz)， 7.25 (d, 2H, J=8.0Hz), 6.10 (s, 1H), 3.53-3.46 (m, 4H), 2.80 (t, 2H, J=6.8Hz), 2.03 (dd, 2H, J=6.8, 14.4Hz) 1.25 (t, 3H, J=7.2Hz) ppm; 13C MR (100Hz, CDC13): 5167.4， 143.7, 133.0, 128.7， 127.4, 44.2， 35.0, 32.5, 31.2, 15.0 ppm。 MS (ESI, m/z) 249.1 (M+H+), 497.2 (2M+H+)。
化合物 14a的制备： 称取 N-乙基 -4-醛基苯甲酰胺 （180mg, 1.02mmol)和三 苯基膦乙腈（367mg, 1.22mmol)溶解于 10ml 二氯甲垸中，加热 40°C回流 3h后， 旋干溶剂， 硅胶层析柱纯化 （乙酸乙酯： 石油醚 =1:5— 1:1)， 得到 N-乙基 -4-(2- 氰基乙烯基)苯甲酰胺 （160mg, 产率 79%)。 加入 10mlBoc2O(470mg, 1.2mmol) 的四氢呋喃溶液和 50mgRaney-Ni, 在氢气环境， 室温下搅拌过夜。 过滤， 硅胶 层析柱纯化 (乙酸乙酯： 石油醚 =1:1)， 得到白色固体（124mg); 溶解于 3ml 二氯 甲垸中， 加入三氟乙酸 0.3ml, 常温搅拌 1小时后， 旋干， 加入 15ml二氯甲垸和 1ml水， 用碳酸氢钠固体中和至碱性， 二氯甲垸萃取 3次 （15ml*3)， 有机相用 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩得到 14a (71mg, 产率 100%)。
实施例十六， 化合物 15的合成
Figure imgf000019_0002
IS 通过化合物 15a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合 物 15。化合物 15的结构表征为： iH MR OOHz^DCb): 57.14-7.32(m, 9H),4.59(s, 2H)ppm; 13C MR(100Hz, CDC ): 5136.0, 133.7, 131.8, 130.8, 129.7, 128.6, 126.6, 126.6, 47.3 ppm.
化合物 15a的制备： 根据文献 Buchwald, S. L. etal. Org. lett.2002, 35.利用苯 硫醇和对碘苯甲腈合成 15c。 16c(394mg, 1.86mmol), Boc20(488mg, 2.24mmol)溶 解在 8ml THF中， 加入 50mg Raney-Ni, 氢气氛围下， 常温搅拌过夜， 过滤， 旋 干， 硅胶层析柱纯化 （乙酸乙酯： 石油醚 =1 : 10)， 得到 15b; 加入 0.3ml TFA和 3ml二氯甲垸， 常温搅拌 0.5h, 旋干， 加入 10ml二氯甲垸和 lml水， 碳酸氢钠 固体中和至碱性， 二氯甲垸萃取 3-4次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩 得到黄色油状物 15a。
实施例十七， 化合物 16的合成
Figure imgf000020_0001
倫 1© 通过化合物 16a， 使用乙酰氯， 采用合成 PEITC 的同样条件制备得到化合 物 16。化合物 16的结构表征为： iH MR OOHz^DCb): 57.41-7.17(m, 9H), 4.66(s, 2H) ppm; 13C MR (100Hz, CDCh): 5137.7, 135.3 , 134.4, 132.0, 130.0, 129.6, 129.4, 128.9, 128.3 , 128.2, 127.7， 126.8, 125.1 ppm.
化合物 16a的制备： 根据文献 Buchwald, S. L. etal. Org. lett.2002, 35.利用苯 硫醇和间碘苯甲腈合成 16c。 16c(394mg, 1.86mmol), Boc20(488mg, 2.24mmol)溶 解在 8ml THF中， 加入 50mg Raney-Ni, 氢气氛围下， 常温搅拌过夜， 过滤， 旋 干， 硅胶层析柱纯化 （乙酸乙酯： 石油醚 =1 : 10)， 得到 16b; 加入 0.3ml TFA和 3ml二氯甲垸， 常温搅拌 0.5h, 旋干， 加入 10ml二氯甲垸和 lml水， 碳酸氢钠 固体中和至碱性， 二氯甲垸萃取 3-4次， 有机相用无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓缩 得到黄色油状物 16a。
实施例十八
实施例 2~17所分别得到的化合物 1-16的抗肿瘤效果： 体外 MTT方法测定 药物分子对肿瘤细胞的杀伤效果：取对数期生长的人肿瘤细胞，消化离心并计数， 使细胞密度在 3xl04个左右， 将细胞接种在 96孔板， 即每孔接种 3000个细胞， 待细胞贴壁后，加入含不同浓度的 DPI类似物的培养液（每个药物浓度设三个复 孔， 另设空白孔进行调零， DPI类似物中 DMSO的浓度控制在 0.1%以内）， 在二 氧化碳培养箱中孵育 72小时后， 加入 5mg/ml 的 MTT， 作用 4小时之后， 加入 200ul DMSO溶解紫色的甲瓚 （活细胞的数量与甲瓚的生产量成正比）， 室温摇 床上震荡 10分钟之后， 用酶标仪检测 96-孔板在波长为 570纳米的吸光度值，实 验重复三次。 细胞生存率的计算公式为： 药物治疗组的平均吸光度值 /对照组的 平均吸光度值 xl00%， IC5Q为 1-16导致 50%肿瘤细胞死亡时的药物浓度，用 Prism 软件计算 IC5。值并绘制细胞生存曲线图。
化合物 1-16在体外 MTT实验中显著杀伤人肠癌 DLD1、 胃癌 HGC27和胰腺 癌 Panel等。 除此之外， 化合物 1-2在体外 MTT实验中还显著杀伤人肝癌
( SK-Hepl、 Huh-7、 HepG2), 白血病 （ML-1、 HL-60、 Molml3 ), 胃癌 7901 和神经胶质瘤 U87; 化合物 2在体外 MTT实验中还显著杀伤了人胰腺癌 Apscl， 骨髓瘤 8226， 抗顺铂肺癌 A549/DDP和肺癌 NCI-H460。
对比被广泛研究的苯乙基异硫氰酸酯，本专利发明的大部分化合物表现了更 高的活性， 特别是化合物 2的抗肿瘤活性最好， 人肠癌 DLD1、 食管癌 HGC27 以及胰腺癌 HGC27的半抑制浓度 IC5Q分别可达 0.63， 0.46以及 2.04微摩尔每升。 表 3: 化合物 1-16引起人肠癌 DLD 1、 胃癌 HGC27以及胰腺癌 Panel 50%死亡 的浓度 （IC5Q， 单位为 μΜ)， 注： PEITC作为对照。 化合物 \癌细胞 DLD1 HGC27 Panel
PEITC 3.55±0.55 2.95±0.41 10.80±0.25
1 1.23±0.04 1.09±0.07 4.55±0.32
2 0.63±0.09 0.46±0.02 2.04±0.21
3 0.47±0.04 0.15±0.01 2.43±0.38
4 0.86±0.27 0.34±0.00 2.78±0.72
5 1.50±0.18 0.77±0.18 4.70±0.27 6 0.91±0.16 0.72±0.08 2.14±0.79
7 1.45±0.13 0.82±0.06 4.06±0.57
8 0.81±0.04 0.62±0.04 2.25±0.21
9 2.77±0.03 1.68±0.00 3.76±0.05
10 3.92 ± 0.10 2.37 ± 0.43 6.24 ± 0.13
11 1.30±0.12 0.93±0.41 2.68±0.21
12 1.31±0.35 0.74±0.01 5.78±0.56
13 1.34±0.04 0.84±0.06 3.52±0.11
14 1.66±0.06 1.47±0.10 5.08±0.02
15 5.23±0.17 2.73±0.29 14.24±0.50
16 1.25±0.06 3.44±0.23 6.12±0.13 表 4:化合物 1-2引起人肝癌（SK-Hepl， Huh-7, HepG2)、白血病（ML-1， HL-60, Molml3 )、胃癌 7901、鼻咽癌 CNE-2以及神经胶质瘤 U87 50%死亡的浓度（IC50， 单位为 μΜ) , 化合物 \癌细胞 SK-Hepl Huh-7 HepG2 ML-1 HL-60 7901 Molml3 CNE-2 U87
1 2.55 10 14.99 3.69 3.02 1.38 10.7±2.69 8.19 7.71
2 0.62 2.89 3.48 1.57 1.15 5.68 4.44 ± 1.27 3.62 3.03 表 5: 化合物 2弓 I起人胰腺癌 Apscl、 骨髓瘤 8226、 抗顺铂肺癌 A549/DDP以及 肺癌 NCI-H460 50%死亡的浓度 （IC5Q， 单位为 μΜ) 化合物 \癌细胞 Aspcl 8226 A549/DDP NCI-H460
2 2.48 5.18±1.15 5.33±0.00 4.12±0.59 1 合物 1和 2还能够显著影响人肠癌细胞 DLD1生长聚集以及引起癌细胞凋 亡。

Claims

权 利 要 求 书
1. 一种异硫氰酸酯， 其特征在于， 结构通式如结构式 （I) 所示:
Figure imgf000024_0001
(I)
所述的 R1和 R2至少有- 个为氢但不同时为氢，
所述的 n为 1~3，
所述的 R1和 R2为 -H、
Figure imgf000024_0002
Figure imgf000024_0003
所述的 R3为甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 正丁基、 异丁基、 叔丁基、 正戊 基、 正己基、 苯基、 2-吡啶基、 苄基或苯乙基，
所述的 R4为氧原子、 碳原子、 氮甲基、 氮乙基或氮丙基。
2. 根据权利要求 1所述的异硫氰酸酯， 其特征在于， 所述的 R2为
Figure imgf000024_0004
Figure imgf000024_0005
3. 根据权利要求 1所述的异硫氰酸酯， 其特征在于， 所述的 R3为甲基、 乙基、 丙基、 丁基、 戊基或已基。
4. 根据权利要求 1所述的异硫氰酸酯， 其特征在于， 所述的 R4为碳原子、 氧原 子或氮甲基。
5. 根据权利要求 1所述的异硫氰酸酯， 其特征在于，
Figure imgf000025_0001
6. 一种根据权利要求 1至 5任一所述的异氰酸酯的制备方法， 其特征在于包括 以下步骤，
S1. 将对应的含有芳香基的胺溶于有机溶剂， 再加入碱， 然后滴入溶有二硫 化碳的有机溶剂，
52. 在温度为 0°C， 反应 5~15分钟后， 室温搅拌 15~30分钟，
53.在温度为 0°C下， 加入 Y， 然后室温反应 15~30分钟，
54. 淬灭反应， 纯化， 即得。
7. 根据权利要求 6所述的异氰酸酯的制备方法， 所述的碱为三甲胺、 三乙胺或 碳酸钾； 所述的溶剂为四氢呋喃或二氯甲垸； 所述的 Υ为乙酰氯、 乙酸酐、 苯 甲酰氯或磺酰氯。
8. 根据权利要求 1~5任一所述的异氰酸酯在抗肿瘤中的应用。
9. 根据权利要求 5所述的异氰酸酯的应用， 其特征在于， 所述化合物 1在人胰 腺癌、 胃癌、 肠癌、 鼻咽癌、 肝癌、 脑胶质瘤或白血病中的应用。
10. 根据权利要求 5所述的异氰酸酯的应用， 其特征在于， 所述化合物 2在人胰 腺癌、 胃癌、肠癌、鼻咽癌、肝癌、脑胶质瘤、骨髓瘤、肺癌或白血病中的应用。
11. 根据权利要求 5所述的异氰酸酯的应用，其特征在于，所述的肿瘤为淋巴瘤、 卵巢癌、 骨髓瘤、 人胰腺癌、 胃癌、 肠癌、 鼻咽癌、 肝癌、 脑胶质瘤、 肺癌或白 血病。
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