WO2014086127A1 - 阿霉素键合药及其制备方法 - Google Patents

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WO2014086127A1
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formula
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carboxylated
acid
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庄秀丽
丁建勋
张建成
陈学思
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中国科学院长春应用化学研究所
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    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia

Definitions

  • the invention relates to the technical field of polymer drugs, in particular to doxorubicin bonding drugs and a preparation method thereof.
  • Doxorubicin also known as hydroxydaunorubicin, hydroxyd-dentamicin, doxorubicin or ADR, is a broad-spectrum anti-tumor drug of anthracycline antibiotics, a cell cycle non-specific drug with the strongest effect on S phase. It also has effects on ⁇ 1, G1 and G2 phases. Its mechanism of action is to embed DNA molecules and destroy nucleic acid structures to inhibit the synthesis of biological macromolecules.
  • Doxorubicin is mainly used for the treatment of acute leukemia, malignant lymphoma, liver cancer, lung cancer, gastric cancer, esophageal cancer, cervical cancer, bladder cancer, testicular cancer, verrucous adenocarcinoma, soft tissue tumor, osteosarcoma and neuroblastoma.
  • the main clinical mode of administration of doxorubicin is intravenous infusion.
  • the drug is rapidly distributed throughout the body, thus lacking the target for tumor tissue, and the ratio of doxorubicin that can reach the tumor site and exert its therapeutic effect is very high. Low, resulting in low bioavailability and inefficiency. Therefore, clinical administration requires frequent administration, thereby causing a large toxic side effect on normal tissues and organs of the body.
  • doxorubicin In order to solve the clinical problems of doxorubicin, the development of new doxorubicin dosage forms has been a hot spot for researchers. Among them, nanoscale drug delivery systems have been developed rapidly, including liposomes, polymer nanoparticles, and micelles. Among them, micelles prepared from amphiphilic block copolymers or graft copolymers have become the focus of research on drug carriers. There are two main ways in which micelles are loaded with drugs, one is physical encapsulation and the other is chemical bonding. Among them, chemical bonding has been more widely studied due to the more stable drug entrapment, the more sustained drug release process, and longer drug release times.
  • the Chinese Patent Publication No. CN101234204 A discloses a polymer doxorubicin-bonding compound, which performs a ring-opening polymerization reaction of an aliphatic cyclic ester under the action of a solvent of a polyethylene glycol and a catalyst to obtain a polyethylene glycol- Polylactic acid block copolymer; the terminal hydroxyl group of the block copolymer is converted into a terminal carboxyl group, and amidation reaction with doxorubicin under the action of a condensing agent to obtain a polymer
  • CN101234205 A discloses a polymer-type doxorubicin-bonded drug having a targeting function, which is assembled by mixing two kinds of polyethylene glycol-polylactic acid block copolymers.
  • the polylactic acid chain block copolymer of the first type of polyethylene glycol-polylactic acid block copolymer is linked with doxorubicin, and the polyethylene glycol chain end of the second polyethylene glycol-polylactic acid block copolymer is linked with lactose.
  • Doxorubicin is protected by both polyethylene glycol and polylactic acid, and has a sustained release function; lactose has a targeting function and can achieve targeted delivery of doxorubicin.
  • Biomaterials discloses a carboxyl group modified with polyethylene glycol monoterpene ether and cis-3-carboxypentadienoic anhydride on the surface amino group of a polyamide-amine dendrimer.
  • the doxorubicin thereby obtaining a polymer doxorubicin bonding drug, which can be quickly translated and released in tumor tissues and cells under acidic conditions, thereby realizing the intelligence of drug release, but the mold
  • the carrier material used for the drug bonding is a polyamide-amine dendrimer, which is cumbersome to prepare and has poor biocompatibility, which is not conducive to the practical application of the doxorubicin bond.
  • the technical problem to be solved by the present invention is to provide an adriamycin bonding drug and a preparation method thereof, and the doxorubicin bonding drug provided by the invention has simple preparation process, good biocompatibility, and can be realized in a tumor site. Aggregation with pH responsiveness and active targeting.
  • the present invention provides an adriamycin-bonding drug comprising a first repeating unit having the structure of the formula (I), a second repeating unit of the formula (II), a third repeating unit of the formula (III), and the formula (IV)
  • R is selected from one of the structures of the formula (1) to (4):
  • Lactonibic acid is lactobionic acid, which has the structure of formula (5):
  • FA is folic acid, which has the structure of formula (6):
  • the number of moles of the first repeating unit, the number of moles of the second repeating unit, the number of moles of the third repeating unit, the number of moles of the fourth repeating unit, and the first repeating unit and the second repeating unit satisfies the following condition: 0.02 ⁇ h / (h + i + j + k) ⁇ 0.3; 0 ⁇ i / (h + i + j + k) ⁇ 0.3; 0 ⁇ j / (h + i + j + k) ⁇ 0.3.
  • the doxorubicin bond has a number average molecular weight of 6000 to 100,000.
  • the invention also provides a preparation method of an adriamycin bonding drug, comprising the following steps:
  • the molar ratio of the carboxylated doxorubicin derivative, lactobionic acid, folic acid to the glucose repeating unit on the dextran backbone is (2 ⁇ 30): (0 ⁇ 30): (0 ⁇ 30): 100 .
  • the molar ratio of the carboxylated doxorubicin derivative, lactobionic acid, folic acid to the glucose repeating unit on the dextran backbone is (8 ⁇ 25): (5 ⁇ 25): (5 ⁇ 25): 100 .
  • the dextran has a molecular weight of 6000 to 100,000.
  • the organic solvent is dimethyl sulfoxide.
  • the carboxylated doxorubicin derivative is prepared according to the following method:
  • Doxorubicin hydrochloride, anhydride and triethylamine are reacted in an organic solvent to obtain a carboxylated doxorubicin derivative;
  • the anhydride is selected from the group consisting of 1,2-dicarboxycyclohexene anhydride, succinic anhydride, 2 One of 2,3,3-tetradecylsuccinic anhydride and cis-3-carboxypentenedioic anhydride.
  • the molar ratio of the doxorubicin hydrochloride, anhydride and triethylamine is 1: (0.5 ⁇ 2): (0.5-2).
  • the present invention is derived from glucan, carboxylated doxorubicin having the structure of formula (II-a), formula (II-b), formula (II-c) or formula ( ⁇ -d).
  • the substance, lactobionic acid and folic acid are used as raw materials to cause a condensation reaction to obtain an adriamycin bonding drug.
  • lactobionic acid and folic acid have active targeting functions, and the doxorubicin bonding agent provided by the invention can achieve drug accumulation at the tumor site through enhanced penetration and retention effects and active targeting function.
  • the polymer doxorubicin-bonded drug provided by the invention has pH responsiveness, and the doxorubicin bonded to the polymer drug by the amide bond can be quickly translated under the pH condition of the tumor tissue or the tumor cell. Thereby enhancing the effect of the drug.
  • the present invention uses glucan as a raw material, and has not only good biocompatibility, but also simple and easy to purchase, which is advantageous for the in-depth utilization of doxorubicin-based drugs.
  • Example 1 is a nuclear magnetic resonance spectrum of a carboxylated doxorubicin derivative prepared in Example 1 of the present invention
  • FIG. 2 is an infrared analysis spectrum of a carboxylated doxorubicin derivative prepared in Example 1 of the present invention
  • FIG. 3 is a nuclear magnetic resonance spectrum of a carboxylated doxorubicin derivative prepared in Example 5 of the present invention.
  • the present invention provides an adriamycin-bonding drug comprising a first repeating unit having the structure of the formula (I), a second repeating unit of the formula (II), a third repeating unit of the formula (III), and the formula (IV)
  • the fourth repeating unit of the structure is:
  • R is selected from one of the structures of the formulae (1) to (4):
  • Lactonibicacid is lactobionic acid with the structure of formula (5):
  • FA is folic acid and has the structure of formula (6):
  • the ratio of the total number of moles of the third repeating unit and the fourth repeating unit satisfies the following condition: 0.02 ⁇ h / (h + i + j + k) ⁇ 0.3; 0 ⁇ i / (h + i + j + k) ⁇ 0.3;0 ⁇ j/(h+i+j+k) ⁇ 0.3; Preferably, the following conditions are satisfied: 0.15 ⁇ h/(h+i+j+k) ⁇ 0.3, 0.10 ⁇ i/(h+i+j +k) ⁇ 0.20, 0.10 ⁇ j/(h+i+j+k) ⁇ 0.20; More preferably, the following conditions are satisfied: 0.18 ⁇ h/(h+i+j+k) ⁇ 0.28, 0.12 ⁇ i/
  • the main chain is dextran
  • the glucose repeating unit is condensed with the doxorubicin derivative to obtain a repeating unit having the structure of the formula (I);
  • the glucose repeating unit Condensation with lactobionic acid gives a repeating unit having the structure of formula (II);
  • the glucose repeating unit is condensed with folic acid to obtain a third repeating unit having the structure of formula (III).
  • the number average molecular weight of the doxorubicin bond is preferably from 6000 to 100,000, more preferably from 7,000 to 90,000, and most preferably from 8,000 to 80,000.
  • the invention also provides a preparation method of a doxorubicin bond, comprising the following steps: glucan, carboxylated doxorubicin derivative, lactobionic acid having the structure of formula (V) and folic acid having the structure of formula (VI) 1-(3-Diaminoaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide' hydrochloride and 4-diguanidinoaminopyridine are reacted in an organic solvent to obtain an adriamycin-binding drug, the carboxylated A
  • the derivative of the formula has the structure of the formula (VII-a), the formula (VII-b), the formula (VII-c) or the formula (VII-d):
  • the invention firstly adds dextran, carboxylated doxorubicin derivative, lactobionic acid having the structure of formula (V) and folic acid having the structure of formula (VI) to an organic solvent, and then adding 1-(3-diaminoamino group).
  • the propyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride is reacted with 4-diaminopyridine to give an adriamycin bond.
  • the molar ratio of the carboxylated doxorubicin derivative, lactobionic acid, folic acid to the glucose repeating unit on the dextran main chain is preferably (2 to 30): (0 to 30): (0 to 30) 100: More preferably (8 ⁇ 25): (5 ⁇ 25): (5 ⁇ 25): 100; the 1-(3-diaminoaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide.
  • the ratio of the number of moles of the hydrochloride to the sum of the moles of the carboxylated doxorubicin derivative, lactobionic acid and folic acid is preferably 1: (4 to 6); more preferably 1: (4.5 to 5.5);
  • the ratio of the number of moles of 4-diaminopyridine to the sum of the moles of the carboxylated doxorubicin derivative, lactobionic acid and folic acid is preferably 1: (1 to 3), more preferably 1: (1.5 ⁇ 2.5);
  • the molecular weight of the glucan is preferably from 6000 to 100000, more preferably from 7000 to 90,000, most preferably from 8,000 to 80,000;
  • the organic solvent is preferably dimercaptosulfoxide;
  • the reaction is preferably under stirring conditions Go on.
  • the reaction temperature is preferably room temperature;
  • the reaction time is preferably from 3 to 5 days, more preferably from 3.5 to 4 days.
  • the reaction solution is dialyzed into a dialysis bag, and lyophilized to obtain an adriamycin-binding drug.
  • the molecular weight cut off of the dialysis bag is preferably 3,500 Dalton; the time of the dialysis is preferably 3 to 5 More preferably, it is 3.5 to 4 days; in the dialysis process, water is preferably changed every 3 to 5 hours, more preferably 3.5 to 4.5 hours; the present invention is not limited to freeze drying, and those skilled in the art It is well known to freeze and dry.
  • the present invention has no limitation on the source of the glucan, and it is commercially available.
  • the present invention has no limitation on the source of the lactobionic acid and folic acid, and is commercially available.
  • the carboxylated doxorubicin derivative has a structure of the formula (VII-a), the formula (VII-b), the formula (VII-c) or the formula (Vll-d), preferably prepared according to the following method:
  • doxorubicin hydrochloride, the acid anhydride and the triethylamine are reacted in an organic solvent to obtain a carboxylated doxorubicin derivative, which is 1,2-dicarboxycyclohexene anhydride, succinic anhydride, 2 , 2,3,3-tetradecyl succinic anhydride or cis-3-carboxypentene dianhydride.
  • doxorubicin hydrochloride, anhydride and triethylamine are dissolved in an organic solvent, and doxorubicin hydrochloride and an acid anhydride are reacted to obtain a carboxylated doxorubicin derivative.
  • the organic solvent is preferably ruthenium, osmium-dimercaptoamide; the molar ratio of the doxorubicin hydrochloride, anhydride and triethylamine is preferably 1: (0.5 ⁇ 2): (0.5 ⁇ 2), More preferably, it is 1: (1-1.5): (1 to 1.5).
  • the doxorubicin hydrochloride and the acid anhydride are preferably reacted under stirring, and the temperature of the reaction is preferably from 10 ° C to 40 ° C, more preferably from 15 ° C to 35 ° C, and most preferably 20 °C ⁇ 30°C, the time is preferably 101! ⁇ 50h, more preferably 15h ⁇ 40h, most preferably 20h ⁇ 30h.
  • the obtained reaction mixture was poured into 20 volumes of ethyl acetate, and then washed with a saturated aqueous solution of sodium chloride, dried, filtered, and concentrated to give a carboxylated doxorubicin derivative.
  • the acid anhydride is 1,2-dicarboxycyclohexene anhydride, succinic anhydride, 2,2,3,3-tetradecyl succinic anhydride or cis-3-carboxypentene dianhydride.
  • the obtained carboxylated doxorubicin derivative has a structure of the formula (VII-a); when the acid anhydride is succinic anhydride, the obtained carbamate
  • the derivative of the formula has the structure of the formula (VII-b); when the anhydride is 2,2,3,3-tetradecylsuccinic anhydride, the obtained carboxylated doxorubicin derivative has the structure of the formula (VII-c)
  • the acid anhydride is cis-3-carboxypentadienoic anhydride
  • the obtained carboxylated doxorubicin derivative has a structure of the formula (V11-d).
  • the present invention uses dextran, a carboxylated doxorubicin derivative having the structure of formula (II-a), formula (II-b), formula (II-c ) or formula (II-d), lactobionic acid and folic acid.
  • the raw material is subjected to a condensation reaction to obtain an adriamycin-bonding drug.
  • lactobionic acid and folic acid have active targeting functions, and the present invention provides Adriamycin-based drugs can achieve drug accumulation at the tumor site through enhanced penetration and retention effects and active targeting.
  • the polymer doxorubicin-bonded drug provided by the invention has pH responsiveness, and the doxorubicin bonded to the polymer drug by the amide bond can be quickly released under the pH condition of the tumor tissue or the tumor cell. , thereby enhancing the effect of the drug.
  • the invention uses dextran as a raw material, has not only good biocompatibility, but also is easy to purchase, which is beneficial to the in-depth utilization of the doxorubicin bond.
  • FIG. 1 is a nuclear magnetic resonance spectrum of the carboxylated doxorubicin derivative prepared in Example 1 of the present invention; infrared analysis of the carboxylated doxorubicin derivative, the results are shown in FIG. 2, and FIG. 2 is an embodiment of the present invention.
  • An infrared analysis spectrum of the prepared carboxylated doxorubicin derivative, as shown in Fig. 1 and Fig. 2, the carboxylated doxorubicin derivative prepared in the examples of the present invention has a structure of the formula ( ⁇ -d).
  • Example 3 580.0 mg (0.0 billion mol) of doxorubicin hydrochloride, 126.1 mg (0.0 billion mol) of succinic anhydride and 101.2 mg (0.0 billion mol) of triethylamine were placed in a dry reaction flask, and 5 mL of anhydrous hydrazine was added. , ⁇ -dimercaptoamide is dissolved, and reacted at 25 ° C with stirring under stirring for 24 h. After the reaction is completed, the obtained reaction mixture is poured into 100 mL of ethyl acetate and diluted with a saturated aqueous solution of sodium chloride. Washing, drying, filtration, and concentration give a carboxylated doxorubicin derivative.
  • reaction mixture was subjected to a molecular weight cutoff of 3,500 Dalton.
  • the dialysis bag was dialyzed for 3 days, the water was changed every 5 hours, and the reaction solution was lyophilized to obtain an adriamycin-binding drug.
  • Example 3 is a nuclear magnetic resonance spectrum of the doxorubicin-bonded drug prepared in Example 5 of the present invention.
  • the results are as follows: 8.57 ppm, 7,95 ppm, 7.61 ppm are characteristic peaks of -FA (folic acid); 4.0 to 5.0 ppm, 3.8 to 3.0 ppm are characteristic peaks of dextran; 3.3 ppm is characteristic peak of water; 4.0 ppm is ⁇ Characteristic peak of doxorubicin derivative; 2.5ppm is a characteristic peak of deuterated DMSO.
  • the result shows that this The doxorubicin-bonded drug prepared in Inventive Example 5 has the structure of the formula (I), wherein the values of h, j, and k are shown in Table 1.
  • the polymer doxorubicin bonding drugs prepared in the preparation of 20 to 22 have values of h, j, and k.
  • the dialysis bag with a molecular weight cut off of 3500 Dalton was dialyzed for 3 days, and the water was changed every 5 hours.
  • the reaction solution was lyophilized to obtain a polymer doxorubicin bond.
  • the nuclear magnetic resonance analysis and infrared analysis of the polymer doxorubicin-bonded materials prepared in Examples 23 to 25 of the present invention respectively showed that they all have the structure of the formula (I), wherein the values of h, j and k are shown in Table 7. .
  • reaction mixture was dialyzed against a dialysis bag with a molecular weight cutoff of 3,500 Dalton for 3 days, and the water was changed every 5 hours.
  • the reaction solution was lyophilized to obtain a polymer doxorubicin bond. .
  • the polymer doxorubicin bonding drugs prepared by the preparation of the compounds 36 to 38 have values of h, i, k
  • lactobionic acid 0.29735g, 0.49560g and 0.79295g of 1-(3-diaminoaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride, 0.01895g, 0.03158g and 0.05053g of 4-diaminopyridine, after mixing uniformly, add 25mL of dimercaptosulfoxide to dissolve the reaction system, react at room temperature for 3 days under light agitation, and after the reaction is finished, separately mix the obtained reaction.
  • the solution was dialyzed against a dialysis bag having a molecular weight cutoff of 3,500 Dalton for 3 days, and the water was changed every 5 hours, and the reaction solution was lyophilized to obtain a polymer doxorubicin bond.
  • reaction mixture is respectively subjected to molecular weight cut off.
  • the 3500 Dalton dialysis bag was dialyzed for 3 days, the water was changed every 5 hours, and the reaction solution was lyophilized to obtain a polymer doxorubicin bond.
  • the obtained reaction mixture was dialyzed against a dialysis bag having a molecular weight cutoff of 3,500 Dalton for 3 days, and the water was changed every 5 hours. Once, the reaction solution was lyophilized to obtain a polymer doxorubicin bond.
  • reaction mixture was dialyzed against a dialysis bag having a molecular weight cutoff of 3,500 Dalton for 3 days, and the water was changed every 5 hours.
  • the reaction solution was lyophilized to obtain a polymer doxorubicin bond.

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Abstract

本发明提供了阿霉素键合药，包括具有式（I）结构的第一重复单元、式（II）结构的第二重复单元、式（III）结构的第三重复单元和式（IV）结构的第四重复单元。本发明还提供了阿霉素键合药的制备方法。本发明以葡聚糖、羧基化阿霉素衍生物、乳糖酸和叶酸为原料发生缩合反应得到阿霉素键合药。其中，乳糖酸和叶酸具有主动靶向功能，本发明提供的阿霉素键合药可通过增强的渗透和滞留效应及主动靶向功能实现药物在肿瘤部位的聚集。同时，本发明提供的高分子阿霉素键合药具有pH响应性，通过酰胺键键合在高分子药物上的阿霉素在肿瘤组织或肿瘤细胞内的pH值条件下可以快速译放，从而增强药物效果。

Description

阿霉素键合药及其制备方法 本申请要求于 2012 年 12 月 4 日提交中国专利局、 申请号为 201210512758.4、发明名称为"阿霉素键合药及其制备方法"的中国专利申 请的优先权， 其全部内容通过引用结合在本申请中。 技术领域
本发明涉及高分子药物技术领域，尤其涉及阿霉素键合药及其制备方 法。
背景技术
阿霉素， 又名羟柔红霉素、 羟正定霉素、 多柔比星或 ADR, 是一种 蒽环抗生素类广谱抗肿瘤药物， 是细胞周期非特异性药， 对 S 期作用最 强， 对^1、 G1和 G2期也有作用， 其作用机制是嵌入 DNA分子、 破坏核 酸结构从而抑制生物大分子的合成。 阿霉素主要用于治疗急性白血病、恶 性淋巴瘤、 肝癌、 肺癌、 胃癌、 食道癌、 ***、 膀胱癌、 睾丸癌、 曱状 腺癌、 软组织肿瘤、 骨肉瘤和神经母细胞癌等。 目前， 阿霉素最主要的临 床给药方式是静脉滴注，然而静脉滴注后药物会迅速分布全身，从而缺少 对肿瘤组织的靶向， 能达到肿瘤部位并发挥疗效的阿霉素比例很低，致使 其生物利用度不高， 效率低下。 因此， 临床需频繁给药， 从而对身体的正 常组织和器官造成较大的毒副作用。
为解决阿霉素在临床上存在的问题，阿霉素新剂型的开发一直是研究 者研究的热点。其中纳米尺度的药物传输***的研究发展较为迅速， 包括 脂质体， 聚合物纳米颗粒， 胶束等。 其中， 由两亲性嵌段共聚物或接枝共 聚物制备而成的胶束成为药物载体的研究重点。胶束包载药物的方式主要 分为两种， 一种是物理包载， 一种是化学键合。 其中， 化学键合由于药物 包载方式更稳定、药物译放过程更持续以及药物译放时间更长久而获得了 更广泛的研究。
公开号为 CN101234204 A的中国专利公开了一种高分子阿霉素键合 药， 在聚乙二醇在溶剂和催化剂的作用下进行脂肪族环酯的开环聚合反 应， 得到聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物； 再将该嵌段共聚物的端羟基转化 为端羧基，在缩合剂的作用下与阿霉素进行酰胺化反应，得到高分子阿霉 素键合药； 公开号为 CN101234205 A的中国专利公开了一种具有靶向功 能的高分子阿霉素键合药 , 由两种聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物混合组装 而成， 第一种聚乙二醇 -聚乳酸嵌段共聚物的聚乳酸链端连接有阿霉素， 第二种聚乙二醇 -聚乳酸嵌段共聚物的聚乙二醇链端连接有乳糖， 阿霉素 受聚乙二醇和聚乳酸的双重保护， 具有緩释功能； 乳糖具有靶向功能， 能 够实现阿霉素的靶向输送。但是，上述两种阿霉素键合药均存在连结的化 学键过于稳定、载药量低、 阿霉素的译放缺乏智能性等问题。 Biomaterials ( Vol. 31 , pl360-1371 , 2010 )公开了一种在聚酰胺 -胺树枝状高分子的 表面氨基上键合聚乙二醇单曱醚和顺 -3-羧基戊烯二酸酐修饰的羧基化阿 霉素， 从而得到的高分子阿霉素键合药， 该键合药在酸性条件下， 在肿瘤 组织和细胞内能够快速译放，从而实现药物译放的智能性，但是该阿霉素 键合药所使用的载体材料为聚酰胺 -胺树枝状高分子， 其制备过程繁瑣、 生物相容性差， 不利于阿霉素键合药的实际应用。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供阿霉素键合药及其制备 方法， 本发明提供的阿霉素键合药制备过程简单、生物相容性较好、 可以 实现在肿瘤部位的聚集， 且具有 pH值响应性及主动靶向功能。
本发明提供了阿霉素键合药， 包括具有式（I )结构的第一重复单元、 式（II )结构的第二重复单元、 式（III ) 结构的第三重复单元和式（IV ) 结构的第四重复单元：
式（I );
Figure imgf000004_0001
Figure imgf000005_0001
（IV);
R选自式（1 ) 〜（4)结构中的一种:
Figure imgf000005_0002
Lactonibic acid为乳糖酸， 其具有式 (5) 结构:
Figure imgf000006_0001
(5)；
FA为叶酸， 其具有式（6)结构:
Figure imgf000006_0002
式（I)中， 所述第一重复单元的摩尔数 h、 第二重复单元的摩尔数 第三重复单元的摩尔数^ 第四重复单元的摩尔数 k与第一重复单元、 第 二重复单元、第三重复单元和第四重复单元的总摩尔数的比例满足以下条 件： 0.02≤h/(h+i+j+k)≤0.3; 0<i/(h+i+j+k)<0.3; 0≤j/(h+i+j+k)≤0.3。
优 选 的 ， 0.15≤h/(h+i+j+k)≤0.3 , 0.10<i/(h+i+j+k)<0.20,
0.10<j7(h+i+j+k)<0.20o
优选的， 所述阿霉素键合药的数均分子量为 6000〜100000。
本发明还提供了阿霉素键合药的制备方法， 包括以下步骤：
葡聚糖、 羧基化阿霉素衍生物、 具有式（V)结构的乳糖酸和具有式 (VI)结构的叶酸与 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐和 4-二 曱氨基吡啶在有机溶剂中反应，得到阿霉素键合药，所述羧基化阿霉素衍 生物具有式（VII-a)、 式 (VII-b)、 式 ( VII-c )或式 ( VII-d )结构：
Figure imgf000007_0001
优选的， 所述羧基化阿霉素衍生物、 乳糖酸、叶酸与葡聚糖主链上葡 萄糖重复单元的摩尔比为 （2〜30 ) ： ( 0〜30 )： ( 0〜30 )： 100。
优选的， 所述羧基化阿霉素衍生物、 乳糖酸、叶酸与葡聚糖主链上葡 萄糖重复单元的摩尔比为 （8〜25 ) ： ( 5〜25 )： ( 5〜25 )： 100。
优选的， 所述葡聚糖的分子量为 6000〜100000。
优选的， 所述有机溶剂为二曱基亚砜。
优选的， 所述羧基化阿霉素衍生物按照以下方法制备：
阿霉素 .盐酸盐、 酸酐和三乙胺在有机溶剂中反应， 得到羧基化的阿 霉素衍生物； 所述酸酐选自 1,2-二羧基环己烯酸酐、 丁二酸酐、 2,2,3,3- 四曱基丁二酸酐和顺 -3-羧基戊烯二酸酐中的一种。
优选的， 所述阿霉素 '盐酸盐、 酸酐和三乙胺的摩尔比为 1: ( 0.5〜2 )： ( 0.5-2 )。
与现有技术相比，本发明以葡聚糖、具有式（II-a )、式（II-b )、式（II-c ) 或式（Π-d )结构的羧基化阿霉素衍生物、 乳糖酸和叶酸为原料， 使其发 生缩合反应得到阿霉素键合药。 其中， 乳糖酸和叶酸具有主动靶向功能， 本发明提供的阿霉素键合药可通过增强的渗透和滞留效应及主动靶向功 能实现药物在肿瘤部位的聚集。 同时，本发明提供的高分子阿霉素键合药 具有 pH响应性，通过酰胺键键合在高分子药物上的阿霉素在肿瘤组织或 肿瘤细胞内的 pH值条件下可以快速译放， 从而增强药物效果。 此外， 本 发明以葡聚糖为原料， 不仅具有良好的生物相容性， 而且简单易购， 有利 于阿霉素键合药的深入利用。 附图说明
图 1 为本发明实施例 1制备的羧基化阿霉素衍生物的核磁共振氢谱 图；
图 2为本发明实施例 1制备的羧基化阿霉素衍生物的红外分析谱图； 图 3为本发明实施例 5制备的羧基化阿霉素衍生物的核磁共振氢谱 图。 具体实施方式 本发明提供了阿霉素键合药， 包括具有式（I)结构的第一重复单元、 式（II)结构的第二重复单元、 式（III) 结构的第三重复单元和式（IV) 结构的第四重复单元：
Figure imgf000009_0001
R选自式（1)〜（4)结构中的一种:
0 OH 0
Figure imgf000009_0002
Figure imgf000010_0001
Lactonibicacid为乳糖酸， 具有式 (5)结构:
Figure imgf000010_0002
(5);
FA为叶酸， 具有式（6)结构:
H2N
Figure imgf000010_0003
(6);
式（I)中， 所述第一重复单元的摩尔数 h、 第二重复单元的摩尔数 第三重复单元的摩尔数^ 第四重复单元的摩尔数 k和第一重复单元、 第 二重复单元、第三重复单元和第四重复单元的总摩尔数的比例满足以下条 件： 0.02<h/(h+i+j+k)<0.3; 0<i/(h+i+j+k)<0.3; 0<j/(h+i+j+k)<0.3; 优选的 满 足 以 下 条 件 ： 0.15<h/(h+i+j+k)<0.3 , 0.10<i/(h+i+j+k)<0.20, 0.10<j/(h+i+j+k)<0.20; 更优选的， 满足以下条件： 0.18<h/(h+i+j+k)<0.28, 0.12<i/(h+i+j+k)<0.18, 0.12<j/(h+i+j+k)<0.18。
在本发明中， 在所述阿霉素键合药中， 其主链为葡聚糖， 葡萄糖重复 单元与阿霉素衍生物发生缩合， 得到具有式（I)结构的重复单元； 葡萄 糖重复单元与乳糖酸发生缩合， 得到具有式（II)结构的重复单元； 葡萄 糖重复单元与叶酸发生缩合， 得到具有式（III)结构的第三重复单元。 所 述阿霉素键合药的数均分子量为优选为 6000〜100000, 更优选为 7000-90000, 最优选为 8000〜80000。
本发明还提供了阿霉素键合药的制备方法， 包括以下步骤： 葡聚糖、 羧基化阿霉素衍生物、 具有式（V)结构的乳糖酸和具有式 (VI)结构的叶酸与 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐和 4-二 曱氨基吡啶在有机溶剂中反应，得到阿霉素键合药，所述羧基化阿霉素衍 生物具有式（VII-a)、 式 (VII-b)、 式 ( VII-c )或式 ( VII-d )结构：
Figure imgf000011_0001
(V);
Figure imgf000011_0002
(VI)；
Figure imgf000012_0001
本发明首先将葡聚糖、 羧基化阿霉素衍生物、 具有式（V)结构的乳 糖酸和具有式（VI) 结构的叶酸加入到有机溶剂中， 再加入 1-(3-二曱氨 基丙基 )-3-乙基碳二亚胺.盐酸盐和 4-二曱氨基吡啶进行反应，得到阿霉素 键合药。 在本发明中， 所述羧基化阿霉素衍生物、 乳糖酸、 叶酸与葡聚糖 主链上葡萄糖重复单元的摩尔比优选为 （2〜30)： (0〜30)： (0〜30)： 100; 更优选为 （8〜25) ： (5〜25)： (5〜25)： 100; 所述 1-(3-二曱氨基丙基 )-3- 乙基碳二亚胺.盐酸盐的摩尔数与所述羧基化阿霉素衍生物、 乳糖酸和叶 酸的摩尔数的总和的比例优选为 1: (4〜6)； 更优选为 1: (4.5〜5.5)； 所 述 4-二曱氨基吡啶的摩尔数与所述羧基化阿霉素衍生物、 乳糖酸和叶酸 的摩尔数的总和的比例优选为 1: ( 1〜3), 更优选为 1: ( 1.5〜2.5)； 所述 葡聚糖的分子量优选为 6000〜100000, 更优选为 7000〜90000, 最优选为 8000-80000; 所述有机溶剂优选为二曱基亚砜； 所述反应优选在搅拌的 条件下进行。 所述反应温度优选为室温； 所述反应时间优选为 3〜5 天， 更优选为 3.5〜4天。
反应完毕后，将反应液装入透析袋中透析 ,冻干后得到阿霉素键合药。 所述透析袋的截留分子量优选为 3500Dalton;所述透析的时间优选为 3〜5 天， 更优选为 3.5〜4天； 所述透析过程中优选每隔 3〜5小时换水一次， 更 优选为 3.5〜4.5小时换水一次； 本发明对于冷冻干燥并无限制， 本领域技 术人员熟知的冷冻干燥即可。
本发明对所述葡聚糖的来源没有限制， 市场上购买即可。
本发明对所述乳糖酸和叶酸的来源没有限制， 市场上购买即可。
所述羧基化阿霉素衍生物具有式（VII-a )、 式（VII-b )、 式（VII-c ) 或式（Vll-d )结构， 优选按照以下方法制备：
阿霉素 .盐酸盐、 酸酐和三乙胺在有机溶剂中发生反应， 得到羧基化 的阿霉素衍生物， 所述酸酐为 1,2-二羧基环己烯酸酐、 丁二酸酐、 2,2,3,3- 四曱基丁二酸酐或顺 -3-羧基戊烯二酸酐。
在无水条件下， 将阿霉素.盐酸盐、 酸酐和三乙胺溶解于有机溶剂中， 阿霉素 ·盐酸盐和酸酐发生反应， 得到羧基化的阿霉素衍生物。 所述有机 溶剂优选为 Ν,Ν-二曱基曱酰胺； 所述阿霉素 '盐酸盐、 酸酐和三乙胺的摩 尔比优选为 1: ( 0.5〜2 )： ( 0.5〜2 ), 更优选为 1: ( 1-1.5 )： ( 1〜1.5 )。 所述 阿霉素 ·盐酸盐和酸酐优选在搅拌的条件下发生反应， 所述反应的温度优 选为 10°C〜40°C , 更优选为 15°C〜35°C , 最优选为 20°C〜30°C , 时间优选 为 101！〜 50h, 更优选为 15h〜40h, 最优选为 20h〜30h。 反应结束后， 将得 到的反应混合物倒入 20倍体积的乙酸乙酯中稀译， 然后用饱和氯化钠水 溶液洗涤、 干燥、 过滤、 浓缩后得到羧基化阿霉素衍生物。
在本发明中， 所述酸酐为 1,2-二羧基环己烯酸酐、 丁二酸酐、 2,2,3,3- 四曱基丁二酸酐或顺 -3-羧基戊烯二酸酐，当所述酸酐为 1,2-二羧基环己烯 酸酐时， 得到的羧基化阿霉素衍生物具有式（VII -a ) 结构； 当所述酸酐 为丁二酸酐时， 得到的羧基化阿霉素衍生物具有式（VII -b ) 结构； 当所 述酸酐为 2,2,3,3-四曱基丁二酸酐时， 得到的羧基化阿霉素衍生物具有式 ( VII -c )结构； 当所述酸酐为顺 -3-羧基戊烯二酸酐时， 得到的羧基化阿 霉素衍生物具有式（Vll -d ) 结构。
本发明以葡聚糖、 具有式（II-a )、 式（II-b )、 式 ( II-c )或式 ( ΙΙ-d ) 结构的羧基化阿霉素衍生物、乳糖酸和叶酸为原料，使其发生缩合反应得 到阿霉素键合药。 其中， 乳糖酸和叶酸具有主动靶向功能， 本发明提供的 阿霉素键合药可通过增强的渗透和滞留效应及主动靶向功能实现药物在 肿瘤部位的聚集。 进一步的， 本发明提供的高分子阿霉素键合药具有 pH 响应性，通过酰胺键键合在高分子药物上的阿霉素在肿瘤组织或肿瘤细胞 内的 pH值条件下可以快速译放， 从而增强药物效果。 此外， 本发明以葡 聚糖为原料， 不仅具有良好的生物相容性， 而且简单易购， 有利于阿霉素 键合药的深入利用。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的阿霉素键合 药及其制备方法进行详细描述。
实施例 1
将 580.0mg ( O.OOlmol ) 阿霉素 '盐酸盐、 156.1mg ( O.OOlmol )顺 -3- 氣基戊烯二酸酐和 101.2mg ( O.OOlmol ) 三乙胺置于干燥的反应瓶中， 加 入 5mL无水 Ν,Ν-二曱基曱酰胺溶解，在 25°C、搅拌子搅拌的条件下反应 24h , 反应结束后 , 将得到的反应混合液倒入 1 OOmL的乙酸乙酯中稀释 , 用饱和氯化钠水溶液洗涤、干燥、过滤、浓缩得到羧基化的阿霉素衍生物。
对所述羧基化的阿霉素衍生物进行核磁共振分析， 结果参见图 1 , 图
1为本发明实施例 1制备的羧基化阿霉素衍生物的核磁共振氢谱图；对所 述羧基化的阿霉素衍生物进行红外分析， 结果参见图 2, 图 2为本发明实 施例 1制备的羧基化阿霉素衍生物的红外分析谱图， 由图 1和图 2可知， 本发明实施例制备的羧基化阿霉素衍生物具有式（Π-d )结构。
实施例 2
将 580.0mg ( O.OOlmol ) 阿霉素 '盐酸盐、 152.2mg ( O.OOlmol ) 1,2- 二羧基环己烯酸酐和 101.2mg ( O.OOlmol ) 三乙胺置于干燥反应瓶中， 加 入 5mL无水 Ν,Ν-二曱基曱酰胺溶解，在 25°C、搅拌子搅拌的条件下反应 24h , 反应结束后 , 将得到的反应混合液倒入 1 OOmL的乙酸乙酯中稀释 , 用饱和氯化钠水溶液洗涤、 干燥、 过滤、 浓缩后得到羧基化的阿霉素衍生 物。
对所述羧基化的阿霉素衍生物进行核磁共振分析和红外分析，结果表 明， 本发明实施例 2制备的羧基化阿霉素衍生物具有式（Π-a )结构。
实施例 3 将 580.0mg ( O.OOlmol ) 阿霉素 '盐酸盐、 126.1mg ( O.OOlmol ) 丁二 酸酐和 101.2mg ( O.OOlmol )三乙胺置于干燥的反应瓶中， 加入 5mL无水 Ν,Ν-二曱基曱酰胺溶解， 在 25°C、 搅拌子搅拌的条件下反应 24h, 反应 结束后， 将得到的反应混合液倒入 lOOmL的乙酸乙酯中稀释， 用饱和氯 化钠水溶液洗涤、 干燥、 过滤、 浓缩得到羧基化的阿霉素衍生物。
对所述羧基化的阿霉素衍生物进行核磁共振分析和红外分析，结果表 明， 本发明实施例 3制备的羧基化阿霉素衍生物具有式（Π-b )结构。
实施例 4
将 580.0mg ( O.OOlmol )阿霉素 '盐酸盐， 156.2mg ( O.OOlmol ) 2,2,3,3- 四曱基丁二酸酐和 101.2mg ( O.OOlmol )三乙胺置于干燥的反应瓶中， 加 入 5mL无水 Ν,Ν-二曱基曱酰胺溶解，在 25°C ,搅拌子搅拌的条件下反应 24h , 反应结束后 , 把得到的反应混合液倒入 1 OOmL的乙酸乙酯中稀释 , 用饱和氯化钠水溶液洗涤、干燥、过滤、浓缩得到羧基化的阿霉素衍生物。
对所述羧基化的阿霉素衍生物进行核磁共振分析和红外分析，结果表 明， 本发明实施例 4制备的羧基化阿霉素衍生物具有式（ II-c )结构。
实施例 5〜7
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )，放入 3个反应瓶中， 分别加入 0.01447g ( 0.0000207mol )实施例 4制备的羧基化的阿霉素衍生 物， 0.02284g、 0.06853和 0.1371g的叶酸， 0.13890g、 0.33733g和 0.6350g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.00885g、 0.02150g 和 0.04046g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后， 再分别加入 25mL二曱基亚 砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3天，反应结束后， 将得到的 反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透析袋透析 3天， 每隔 5 h换 水一次， 将反应液冻干， 分别得到阿霉素键合药。
对实施例 5制备的阿霉素键合药进行核磁共振分析， 结果见图 3 , 图
3为本发明实施例 5制备的阿霉素键合药的核磁共振氢谱图。 结果如下： 8.57ppm、 7,95ppm、 7.61ppm 为 -FA (叶酸） 的特征峰； 4.0〜5.0ppm、 3.8〜3.0ppm为葡聚糖的特征峰； 3.3ppm为水的特征峰； 4.0ppm为^^化 阿霉素衍生物的特征峰； 2.5ppm为氘代 DMSO的特征峰。 结果表明， 本 发明实施例 5制备的阿霉素键合药具有式（I )结构， 其中， h、 j、 k取值 见表 1。
对实施例 5制备的阿霉素键合药进行红外分析，结果表明，本发明实 施例 5制备的阿霉素键合药具有式（I )结构。
分别对实施例 6和实施例 7制备的阿霉素键合药进行核磁共振分析和 红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 j、 k取值见表 1。
表 1本发明实施例 5〜7制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 j、 k取值 实施例 Mn (g mol"1) h j k
5 6000 0.02 0.05 0.93
6 6000 0.02 0.15 0.83
7 6000 0.02 0.30 0.68 实施例 8〜10
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )和 3份 0.00133g ( 0.0000207mol )实施例 2制备的羧基化的阿霉素衍生物，放入 3个反应 瓶中， 再分别加入 0.01854g、 0.05563g和 0.11125g的乳糖酸， 0.13890g、 0.33731g 和 0.63325g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.00885g、 0.02150g和 0.04046g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后, 再分 别加入 25mL二曱基亚砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天, 反应结束后， 将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透析袋 透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键 合药。
分别对本发明实施例 8〜10制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共振 分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 i、 k取值 见表 2。
表 2本发明实施例 8〜10制备 的高分子阿霉素键合药 h、 i、 k取
Figure imgf000016_0001
实施例 Mn (g mol"1) h i k
8 6000 0.02 0.05 0.93
9 6000 0.02 0.15 0.83 10 6000 O02 030 0.68 实施例 11〜13
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )和 3份 0.06667g ( 0.00010327mol ) 实施例 2制备的羧基化的阿霉素衍生物， 放入 3个反 应瓶中，再分别加入 0.01854g、 0.05563g和 0.11125g的乳糖酸， 0.29698g、 0.49497g 和 0.79197g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.01893g、 0.03154g和 0.05047g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后， 再分 别加入 25mL二曱基亚砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天, 反应结束后， 将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透析袋 透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键 合药。
分别对本发明实施例 11〜13 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 i、 k取 值见表 3。
表 3 本发明实施例 11〜13制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 i、 k 取值
实施例 Mn (g ηιοΓ1) h i k
11 6000 0.10 0.05 0.85
12 6000 0.10 0.15 0.75
13 6000 0.10 0.30 0.60 实施例 14〜16
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )和 3份 0.0133g ( 0.0002065mol )实施例 2制备的羧基化的阿霉素衍生物，放入 3个反应 瓶中， 再分别加入 0.01854g、 0.05563g和 0.11125g的乳糖酸， 0.49488g、 0.69283g 和 0.98975g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.03154g、 0.04415g和 0.06307g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后， 再分 别加入 25mL二曱基亚砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透 析袋透析 3天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉 素键合药。
分别对本发明实施例 11〜13 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 i、 k取 值见表 4。
表 4 本发明实施例 14〜16制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 i、 k 取值
实施例 Mn (g mol"1) h i k
14 6000 0.20 0.05 0.75
15 6000 0.20 0.15 0.65
16 6000 0.20 0.30 0.50 实施例 17〜19
将 3 份 0.16768g 葡聚糖（数均分子量为 6000 )和 3 份 0.20001g (0.0003098mol)实施例 2制备的羧基化的阿霉素衍生物， 放入 3个反应瓶 中， 再分别加入 0.01826g、 0.05478g和 0.10956g的乳糖酸， 0.69294g、 0.89092g 和 1.18797g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.04416g、 0.05677g和 0.06308g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后， 再分 别加入 25mL二曱基亚砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3天, 反应结束后分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透析 袋透析 3天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素 键合药。
分别对本发明实施例 17〜19制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 i、 k取 值见表 5。
表 5 本发明实施例 17〜19制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 i、 k 取值
实施例 Mn (g mol"1) h i k
17 6000 0.30 0.05 0.65
18 6000 0.30 0.15 0.55
19 6000 0.30 0.30 0.40 实施例 20〜22
将 3 份 0.16768g 葡聚糖（数均分子量为 6000 )和 3 份 0.00133g ( 0.0000207mol )实施例 2制备的羧基化的阿霉素衍生物，放入 3个反应 瓶中， 再分别加入 0.02284g、 0.06853g和 0.1371g 的叶酸， 0.13890g、 0.33733g 和 0.63498g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.00885g、 0.02150g和 0.04046g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后, 再分 别加入 25mL二曱基亚砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透 析袋透析 3天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉 素键合药。
分别对本发明实施例 20〜22制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 j、 k取 值见表 6。
表 6 本发明实施例 20〜22制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 j、 k 取值
实施例 Mn (g ηιοΓ1) h j k
20 6000 0.02 0.05 0.93
21 6000 0.02 0.15 0.83
22 6000 0.02 0.30 0.68 实施例 23〜25
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )和 3份 0.06667g ( 0.00010327mol ) 实施例 2制备的羧基化的阿霉素衍生物， 放入 3个反 应瓶中， 再分别加入 0.02284g、 0.06853g和 0.1371g的叶酸， 0.29698g、 0.49497g 和 0.79197g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.01892g、 0.03154g和 0.05047g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后， 再分 别加入 25mL二曱基亚砜溶解反应体系，室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透 析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉 素键合药。 分别对本发明实施例 23〜25 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 j、 k取 值见表 7。
表 7本发明实施例 23〜25制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 j、 k取 值
实施例 Mn (g ηιοΓ1) h j k
23 6000 0.10 0.05 0.85
24 6000 0.10 0.15 0.75
25 6000 0.10 0.30 0.60 实施例 26〜28
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )和 3份 0.0133g ( 0.0002065mol )实施例 2制备的羧基化的阿霉素衍生物，放入 3个反应 瓶中， 再分别加入 0.02284g、 0.06853g和 0.1371g 的叶酸， 0.49488g、 0.69282g 和 0.98975g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.03154g、 0.04415g和 0.06307g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后， 再分 别加入 25mL二曱基亚砜溶解反应体系，室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透 析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉 素键合药。
分别对本发明实施例 26〜28 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 j、 k取 值见表 8。
表 8 本发明实施例 26〜28制备的高分子阿霉素键合药 h、 j、 k取值 实施例 Mn (g ηιοΓ1) h j k
26 6000 0.20 0.05 0.75
27 6000 0.20 0.15 0.65
28 6000 0.20 0.30 0.50 实施例 29〜31
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )和 3份 0.20001g (0.0003098mol)实施例 2制备的羧基化的阿霉素衍生物， 放入 3个反应瓶 中，再分别加入 0.02284g、 0.06853g和 0.1371g的叶酸， 0.69294g、 0.89092g 和 1.18790g的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.04416g、 0.05677g和 0.07570g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后,再分别加入 25mL 二曱基亚砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton 的透析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键合药。
分别对本发明实施例 29〜31 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 j、 k取 值见表 9。
表 9本发明实施例 29〜31制备的高分子阿霉素键合药 h、 j、 k取值 实施例 Mn (g ηιοΓ1) h j k
29 6000 0.30 0.05 0.65
30 6000 0.30 0.15 0.55
31 6000 0.30 0.30 0.40 实施例 32〜35
将 4份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )，放入 4个反应瓶中， 分别加入 0.01447g ( 0.0000207mol )、 0.07233g ( 0.0001034mol )、 0.14465g ( 0.0002067mol )和 0.21698g(0.0003101mol) 实施例 4制备的^^化的阿 霉素衍生物， 0.03968g、 0.19824g、 0.39629g和 0.59452g的 1-(3-二曱氨基 丙基) -3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.00253g、 0.01263g、 0.02525g和 0.03788g 的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后， 再分别加入 25mL二曱基亚砜溶解反 应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反 应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水 一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键合药。
分别对本发明实施例 32〜35 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 k取值 见表 10。
表 10本发明实施例 30〜32制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 k取 实施例 Mn (g mol"1) h k
32 6000 0.02 0.98
33 6000 0.10 0.90
34 6000 0.20 0.80
35 6000 0.30 0.70 实施例 36-38
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )，放入 3个反应瓶中， 分别加入 0.01447g ( 0.0000207mol )实施例 4制备的羧基化的阿霉素衍生 物， 0.01854g、 0.05563 和 0.11125g 的乳糖酸， 0.13890g、 0.33733g和 0.6350g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 .盐酸盐， 0.00885g、 0.02150g和 0.04046g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后,再分别加入 25mL 二曱基亚砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton 的透析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键合药。
分别对本发明实施例 36〜38 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 i、 k取 值见表 11。
表 11本发明实施例 36〜38制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 i、 k 取值
实施例 Mn (g mol"1) h i k
36 6000 0.02 0.05 0.93
37 6000 0.02 0.15 0.83
38 6000 0.02 0.30 0.68 实施例 39〜41
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )，放入 3个反应瓶中， 分别加入 0.07233g ( 0.0001034mol )实施例 4制备的羧基化的阿霉素衍生 物， 0.01854g、 0.05563 和 0.11125g 的乳糖酸， 0.29735g、 0.49560g和 0.79295g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 .盐酸盐， 0.01895g、 0.03158g和 0.05053g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后,再分别加入 25mL 二曱基亚砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton 的透析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键合药。
分别对本发明实施例 39〜41 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 i、 k取 值见表 12。
表 12本发明实施例 39〜41制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 i、 k 取值
实施例 Mn (g mol"1) h i k
39 6000 0.10 0.05 0.85
40 6000 0.10 0.15 0.75
41 6000 0.10 0.30 0.60 实施例 42〜44
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )，放入 3个反应瓶中， 分别加入 0.14465g ( 0.0002067mol )实施例 4制备的羧基化的阿霉素衍生 物； 0.01854g、 0.05563 和 0.11125g 的乳糖酸， 0.49536g、 0.69350g和 0.98787g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.03157g、 0.04419g和 0.06313 lg的 4-二曱氨基吡啶，混合均匀后，再分别加入 25mL 二曱基亚砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton 的透析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键合药。
分别对本发明实施例 42〜44制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 i、 k取 值见表 13。
表 13本发明实施例 42〜44制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 i、 k 取值
实施例 Mn (g mol"1) h i k
42 6000 0.20 0.05 0.75 43 6000 0.20 0.15 0.65 44 6000 O20 030 0.50 实施例 45-47
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )，放入 3个反应瓶中， 分别加入 0.21698g(0.0003101mol)实施例 4 制备的羧基化的阿霉素衍生 物， 0.01854g、 0.05563 和 0.11125g 的乳糖酸， 0.69361g、 0.89178g和 1.18904g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.044199g、 0.05683g和 0.075770g的 4-二曱氨基吡啶，混合均勾后，再分别加入 25mL 二曱基亚砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton 的透析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键合药。
分别对本发明实施例 45〜47 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 i、 k取 值见表 14。
表 14本发明实施例 45〜47制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 i、 k 取值
实施例 Mn (g ηιοΓ1) h i k
45 6000 0.30 0.05 0.65
46 6000 0.30 0.15 0.55
47 6000 0.30 0.30 0.40 实施例 48〜51
将 4份 0.16768g葡聚糖 (数均分子量为 6000 ), 放入 4个反应瓶中， 分别加入 0.00133g ( 0.0000207mol )、 0.06667g ( 0.00010327mol )、 0.13333g ( 0.0002065mol )和 0.20001g(0.0003098mol) 实施例 2制备的羧基化的阿 霉素衍生物， 0.03968g、 0.19797g、 0.39586g和 0.59235g的 1-(3-二曱氨基 丙基) -3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.00253g、 0.01262g、 0.02523g和 0.03785g 的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后， 再分别加入 25mL二曱基亚砜溶解反 应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反 应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水 一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键合药。
分别对本发明实施例 48〜51 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 k取值 见表 1。
表 15 本发明实施例 48〜51制 到的高分子阿霉素键合药 h、 k取
Figure imgf000025_0001
实施例 Mn (g mol"1) h k
48 6000 0.02 0.98
49 6000 0.10 0.90
50 6000 0.20 0.80
51 6000 0.30 0.70 实施例 52〜54
将 3份葡聚糖 0.16768g (数均分子量为 6000 ), 放入 3个反应瓶中， 分别加入 0.07233g ( 0.0001034mol )实施例 4制备的羧基化的阿霉素衍生 物， 0.02284g、 0.06853和 0.1371g的叶酸； 0.29735g、 0.49560g和 0.79295g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.01895g、 0.03158g 和 0.05053g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后， 再分别加入 25mL二曱基亚 砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将 得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透析袋透析 3 天，每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键合药。
分别对本发明实施例 52〜54制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 j、 k取 值见表 16。
表 16本发明实施例 52〜54制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 j、 k 取值
实施例 Mn (g mol"1) h j k
52 6000 0.10 0.05 0.85
53 6000 0.10 0.15 0.75
54 6000 0.10 0.30 0.60 实施例 55〜57
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )，放入 3个反应瓶中， 分别加入 0.14465g ( 0.0002067mol )实施例 4制备的羧基化的阿霉素衍生 物， 0.02281g、0.06843和 0.13686g的叶酸，0.49536§、0.6935(^和0.98787§ 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.03157g、 0.04419g 和 0.06313 lg的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后， 再分别加入 25mL二曱基亚 砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将 得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透析袋透析 3 天，每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键合药。
分别对本发明实施例 55〜57 制备得到的高分子阿霉素键合药进行核 磁共振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 j、 k取值见表 17。
表 17本发明实施例 55〜57制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 j、 k 取值
实施例 Mn (g mol"1) h j k
55 6000 0.20 0.05 0.75
56 6000 0.20 0.15 0.65
57 6000 0.20 0.30 0.50 实施例 58〜60
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 6000 )，放入 3个反应瓶中， 分别加入 0.21698g(0.0003101mol)实施例 4 制备的羧基化的阿霉素衍生 物， 0.02281g、0.06839和 0.13688g的叶酸，0.69361g、0.89178g和 1.18904g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.044199g、 0.05683g和 0.075770g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后, 再分别加入 25mL二曱基亚 砜溶解反应体系， 室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将 得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透析袋透析 3 天，每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉素键合药。
分别对本发明实施例 58〜60制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 j、 k取 值见表 18。
表 18本发明实施例 58〜60制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 j、 k 取值
实施例 Mn (g mol"1) h j k
58 6000 0.30 0.05 0.65
59 6000 0.30 0.15 0.55
60 6000 0.30 0.30 0.40 实施例 61〜63
将 3份 0.16768g的葡聚糖 (数均分子量为 40000 )和 3份 0.00133g
( 0.0000207mol )实施例 2制备的羧基化的阿霉素衍生物，放入 3个反应 瓶中， 再分别加入 0.01854g、 0.05563g和 0.11125g的乳糖酸， 0.13890g、 0.33731g 和 0.63325g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.00885g、 0.02150g和 0.04046g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后, 再分 别加入 25mL二曱基亚砜溶解反应体系，室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透 析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉 素键合药。
分别对本发明实施例 61〜63 制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 i、 k取 值见表 19。
表 19本发明实施例 61〜63制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 i、 k 取值
实施例 Mn (g mol"1) h i k
61 40000 0.02 0.05 0.93
62 40000 0.02 0.15 0.83
63 40000 0.02 0.30 0.68 实施例 64〜66
将 3份 0.16768g的葡聚糖（数均分子量为 100000 )和 3份 0.00133g ( 0.0000207mol )实施例 2制备的羧基化的阿霉素衍生物，放入 3个反应 瓶中， 再分别加入 0.01854g、 0.05563g和 0.11125g的乳糖酸， 0.13890g、 0.33731g 和 0.63325g 的 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐， 0.00885g、 0.02150g和 0.04046g的 4-二曱氨基吡啶， 混合均匀后, 再分 别加入 25mL二曱基亚砜溶解反应体系，室温避光搅拌条件下反应 3 天， 反应结束后， 分别将得到的反应混合液用截留分子量为 3500 Dalton的透 析袋透析 3 天， 每隔 5 h换水一次， 将反应液冻干， 分别得到高分子阿霉 素键合药。
分别对本发明实施例 64〜66制备的高分子阿霉素键合药进行核磁共 振分析和红外分析， 结果表明， 其均具有式（I )结构， 其中， h、 i、 k取 值见表 20。
表 20本发明实施例 64〜66制备得到的高分子阿霉素键合药 h、 i、 k 取值
实施例 Mn (g mol"1) h i k
64 100000 0.02 0.05 0.93
65 100000 0.02 0.15 0.83
66 100000 0.02 0.30 0.68 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的 普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进 和润饰， 这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
-I-

Claims

权 利 要 求
1、 阿霉素键合药， 包括具有式（I) 结构的第一重复单元、 式（II) 结构的第二重复单元、 式（III) 结构的第三重复单元和式（IV) 结构的 第四重复单元：
（I);
式 (II)
（ III )；
Figure imgf000029_0001
（IV);
R选自式（ 1 )〜（ 4 )结构中的一种:
0 OH 0
Figure imgf000029_0002
Figure imgf000030_0001
Lactonibicacid为乳糖酸， 其具有式 (5) 结构:
Figure imgf000030_0002
(5);
FA为叶酸， 其具有式（6)结构:
H2N
Figure imgf000030_0003
(6);
式（I)中， 所述第一重复单元的摩尔数 h、 第二重复单元的摩尔数 第三重复单元的摩尔数^ 第四重复单元的摩尔数 k与第一重复单元、 第 二重复单元、第三重复单元和第四重复单元的总摩尔数的比例满足以下条 件： 0.02<h/(h+i+j+k)<0.3; 0<i/(h+i+j+k)<0.3; 0≤j/(h+i+j+k)≤0.3。
2、 根据权利要求 1 所述的阿霉素键合药， 其特征在于，
0.15<h/(h+i+j+k)<0.3 , 0.10<i/(h+i+j+k)<0.20, 0.10<j/(h+i+j+k)<0.20„
3、 根据权利要求 1所述的阿霉素键合药， 其特征在于， 所述阿霉素 键合药的数均分子量为 6000〜100000。
4、 阿霉素键合药的制备方法， 包括以下步骤：
葡聚糖、 羧基化阿霉素衍生物、 具有式（V)结构的乳糖酸和具有式 (VI)结构的叶酸与 1-(3-二曱氨基丙基 )-3-乙基碳二亚胺 '盐酸盐和 4-二 曱氨基吡啶在有机溶剂中反应，得到阿霉素键合药，所述羧基化阿霉素衍 生物具有式（VII-a)、 式 (VII-b)、 式 ( VII-c )或式 ( VII-d )结构：
Figure imgf000031_0001
(V);
Figure imgf000031_0002
(VI)
Figure imgf000032_0001
5、 根据权利要求 4所述的制备方法， 其特征在于， 所述羧基化阿霉 素衍生物、 乳糖酸、 叶酸与葡聚糖主链上葡萄糖重复单元的摩尔比为 (2〜30) ： (0〜30)： (0〜30)： 謂。
6、 根据权利要求 4所述的制备方法， 其特征在于， 所述羧基化阿霉 素衍生物、 乳糖酸、 叶酸与葡聚糖主链上葡萄糖重复单元的摩尔比为
(8〜25) ： (5〜25)： (5〜25)： 謂。
7、 根据权利要求 4所述的制备方法， 其特征在于， 所述葡聚糖的分 子量为 6000〜100000。
8、 根据权利要求 4所述的制备方法， 其特征在于， 所述有机溶剂为 二曱基亚砜。
9、 根据权利要求 4所述的制备方法， 其特征在于， 所述羧基化阿霉 素衍生物按照以下方法制备：
阿霉素 .盐酸盐、 酸酐和三乙胺在有机溶剂中反应， 得到羧基化的阿 霉素衍生物； 所述酸酐选自 1,2-二羧基环己烯酸酐、 丁二酸酐、 2,2,3,3- 四曱基丁二酸酐和顺 -3-羧基戊烯二酸酐中的一种。
10、 根据权利要求 6所述的制备方法， 其特征在于， 所述阿霉素-盐 酸盐、 酸酐和三乙胺的摩尔比为 1: (0.5〜2) ： (0.5〜2)。
+
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