WO2014053625A2 - Propionibacterium freudenreichii en tant qu'actif contre les désordres cutanés - Google Patents
Propionibacterium freudenreichii en tant qu'actif contre les désordres cutanés Download PDFInfo
- Publication number
- WO2014053625A2 WO2014053625A2 PCT/EP2013/070681 EP2013070681W WO2014053625A2 WO 2014053625 A2 WO2014053625 A2 WO 2014053625A2 EP 2013070681 W EP2013070681 W EP 2013070681W WO 2014053625 A2 WO2014053625 A2 WO 2014053625A2
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- scalp
- propionibacterium freudenreichii
- cosmetic
- microorganism
- dermatological composition
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q5/00—Preparations for care of the hair
- A61Q5/006—Antidandruff preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
Definitions
- the present invention relates in particular to the use of a lysate or culture supernatant of at least one microorganism of the species Propionibacterium freudenreichii, as an agent for treating and / or preventing disorders of the scalp.
- the scalp is an epidermis with continual renewal, like the rest of the cutaneous tissue, and rich in sebaceous glands.
- a method according to the invention is in particular implemented in individuals having a dandruff condition of the scalp.
- the lysate or culture supernatant of at least one microorganism of the species Propionibacterium freudenreichii acts by maintaining a balanced barrier of the scalp skin by its properties. anti inflammatory and immunoregulatory agents.
- a strain of Propionibacterium freudenreichii ssp. Shermanii is the strain NIZO360, NIZ0365, NIZ0367, NIZ0369 (accession number CBS1 155914), NIZO370, NIZ0371, NIZ0372, NIZ0373, NIZ0374 (accession number CBS1 15915), NIZ01 185, NIZ02336 (accession number CBS1 15916) , NIZ02663, NIZ02664, NIZ02665, NIZ02666, NIZ02667, NIZ02668, NIZ02669, NIZO2670, NIZ02671 or NIZ02672, and more particularly NIZ0365, NIZ0367, NIZ0372, NIZ0373, or NIZ01 185, more preferably the strain NIZ0372, which are available from the company NIZO food research.
- a concentration of about 0.1 to 50%, in particular from 1 to 20% and in particular about 5% by weight of active material (s) relative to the total weight of the lysate, is generally obtained.
- a “culture supernatant” also called “conditioned medium” is typically obtained by culturing the microorganism concerned in a medium suitable for the survival and / or growth of the microorganism, then by separation of the medium and the microorganism so as to harvest the medium in contact with the microorganism.
- the culture is carried out for a period of time and under conditions that allow the microorganism to release in the medium active agents having the desired properties for preventing and / or treating skin disorders.
- culture supernatant is used interchangeably to designate the entirety of the culture supernatant obtained after culture of the microorganism in question, or any fraction or sub-compound of the supernatant obtained by dialysis, fractionation, separation of phase, filtration chromatography, affinity chromatography, precipitation, concentration, lyophilization, etc.
- the lysate and / or culture supernatant of at least one microorganism of the species Propionibacterium freudenreichii according to the invention are obtained by the following method:
- anti-seborrhoeic active means a compound capable of regulating the activity of the sebaceous glands.
- sulfur in its various forms cadmium sulphide, allantoin, coal or wood tars and their derivatives, in particular cade oil, salicylic acid, undecylenic acid, fumaric acid, allylamines such as terbinafine.
- a composition according to the invention advantageously comprises from 0.001 to 10% by weight of anti-dandruff agent (s), preferably from 0.1 to 5% by weight, even more preferably from 0.2 to 2% by weight. , relative to the total weight of the composition.
- anti-dandruff agent s
- compositions according to the invention may be administered topically or orally, preferably topically.
- compositions according to the invention may be in any of the galenical forms normally used depending on the method of administration chosen.
- the fatty phase may represent more than 90% of the total weight of the composition.
- the cosmetic or dermatological composition of the invention may also contain adjuvants which are customary in the cosmetic or dermatological field, such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic active agents, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes and fillers. , filters, bactericides, odor absorbers and dyestuffs.
- adjuvants which are customary in the cosmetic or dermatological field, such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic active agents, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes and fillers. , filters, bactericides, odor absorbers and dyestuffs.
- the amounts of these various adjuvants are those conventionally used in the field under consideration, and for example from 0.01 to 20% of the total weight of the composition.
- These adjuvants depending on their nature, can be introduced into the fatty phase and / or into the aqueous phase.
- retinol vitamin A
- tocopherol vitamin E
- ceramides essential oils and unsaponifiables (tocotrienol, sesamine, gamma oryzanol, phytosterols, squalenes, waxes, terpenes).
- Table 1 Effect of extract or culture supernatant of bacteria of the species P. freudenreichii on the production of ILI O and IL12p40 by PBMCs in culture
- Example 2 activity of extract or supernatant of Propionibacterium freudenreichii on the stimulation of the expression of the markers DEFB4, RNAse 7 and cAMP
- the keratinocytes were cultured in culture medium for 24 hours. The medium was then replaced with either the control medium containing or not (control) an extract or supernatant of P. freudenreichii (at non-cytotoxic doses) or references, and the cells were incubated for 72 hours. All conditions were achieved in triplicate.
- the number of cycles is determined from the "exit" points of the fluorescence curves. For the same marker analyzed, the longer a sample leaves (high number of cycles), the lower the initial number of copies of the mRNA.
- the value of ER (relative expression) is expressed in arbitrary units according to the following formula : (-
- the standard error of the mean (esm) represents the deviation of the sample mean from the average of the true population.
- the esm is calculated by dividing the standard deviation by the square root of the sample size.
- Viability (%) (OD CO MPOSE / DO CON oin) x 100, with OD optical density.
- Antioxidant 0.50 Isopropanol 40.50
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
La présente invention concerne notamment l'utilisation d'un lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii, comme agent pour traiter et/ou prévenir les désordres du cuir chevelu.
Description
Propionibacterium freudenreichii en tant qu'actif
contre les désordres cutanés
La présente invention concerne notamment l'utilisation d'un lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii, comme agent pour traiter et/ou prévenir les désordres du cuir chevelu.
Le cuir chevelu est un épiderme à renouvellement continuel, comme le reste du tissu cutané, et riche en glandes sébacées.
Normalement, le cuir chevelu se renouvelle en éliminant les cellules superficielles de la peau, de façon insensible et non visible. Toutefois, un renouvellement excessif des cellules du stratum corneum du cuir chevelu, pour diverses raisons, peut conduire à la formation d'amas de cellules de grandes tailles, épais, visibles à l'œil nu, dénommés « pellicules ».
A titre d'exemple de facteurs favorisant l'apparition des pellicules, on peut mentionner le stress, la période hivernale, un défaut d'hydratation ou la colonisation de la peau ou des follicules pileux par la levure Malassezia sp. Le genre Malassezia sp. est constitué de levures lipophiles présentes normalement sur la peau de l'homme et de certains animaux à sang chaud. Leur répartition est fonction de l'âge, de l'activité des glandes sébacées, et de certaines pathologies. La levure Malassezia sp. représente environ 45 % de la flore commensale normale à la surface du cuir chevelu chez des sujets sans pellicule, mais peut représenter 75 % de la flore en cas de pellicules, et jusqu'à 85 % en cas de dermite séborrhéique associée.
Les états pelliculaires sont des états chroniques, fréquents, récidivants, et socialement invalidants du fait de leur caractère inesthétique manifeste. De nombreux facteurs peuvent amplifier ces phénomènes et conduire à l'apparition de troubles supplémentaires tels que des états inflammatoires du cuir chevelu. Ces états pelliculaires et/ou états inflammatoires du cuir chevelu se traduisent par une altération de la fonction barrière de l'épiderme. Qui plus est, ces états peuvent générer des sensations de démangeaison ou prurit, conduisant à des comportements de grattage amplifiant le phénomène d'apparition des pellicules.
Les états pelliculaires du cuir chevelu peuvent être de type gras ou de type sec.
Les états pelliculaires secs du cuir chevelu se manifestent plus fréquemment et sont amplifiés lors de troubles de l'hydratation de la peau, et notamment lors de sécheresse importante de l'épiderme du cuir chevelu.
Ainsi, le traitement des états pelliculaires secs, et la résolution de leurs manifestations inesthétiques, impliquent de pouvoir réhydrater de manière suffisante le cuir chevelu.
Par ailleurs, comme indiqué précédemment, le cuir chevelu est riche en glandes sébacées. Or, il a été observé que les pellicules se développent plus facilement en présence excessive de sébum et sont plus facilement prurigineuses.
La sécrétion de sébum est un phénomène normal et utile à la peau comme à la chevelure. Le sébum protège le cuir chevelu et assure la brillance des cheveux en lubrifiant la cuticule. Toutefois, une hypersécrétion de sébum, ou séborrhée, peut entraîner des désagréments, des sensations d'inconfort, des désordres esthétiques, voire une pathologie cutanée. Ainsi, une sécrétion excessive de sébum favorise l'apparition d'un état pelliculaire gras du cuir chevelu ou pellicules grasses.
Il a en outre été récemment démontré que les levures de type Malassezia possèdent une activité lipase importante conduisant à l'hydrolyse des triglycérides du sébum en acides gras. Ces acides gras sont alors capables d'entraîner les états pelliculaires chez les personnes sensibles, c'est-à-dire possédant une fonction barrière altérée, et donc plus particulièrement susceptibles à l'action destructrice des acides gras sur la barrière cutanée.
Ainsi, les pellicules grasses se développent d'autant plus facilement que la présence de sébum est importante. Par ailleurs, elles ont tendance à être plus facilement prurigineuses.
Les états pelliculaires gras répondent, en général, à différents traitements antifongiques locaux ou systémiques. Ainsi, différentes préparations combinant antifongiques et anti-séborrhéiques ont été proposées afin de traiter les états gras pelliculaires sévères. Les traitements à base d'antifongiques démontrent une certaine efficacité sur les états pelliculaires gras.
Cependant, l'efficacité de ces traitements n'est que suspensive et implique un suivi rigoureux de la part de l'utilisateur (fréquence d'utilisation et temps d'application suffisant).
En conséquence, de nombreux échecs surviennent dans la mise en œuvre de ces traitements et sont habituellement imputables aux facteurs suivants : mauvais suivi du protocole ; non respect de la fréquence d'utilisation ; aspect non cosmétique du produit ; irritation de la base lavante ; mauvaise observance de la durée d'application ; lassitude.
Il demeure donc un besoin de disposer de nouveaux actifs susceptibles d'exercer une action cosmétique ou thérapeutique bénéfique sur les états du cuir chevelu.
Il subsiste également un besoin de disposer d'actifs permettant de rétablir l'écoflore du cuir chevelu et notamment de prévenir la colonisation excessive du cuir chevelu par Malassezia sp, notamment Malassezia restricta ou Malassezia globosa.
Il existe également un besoin de disposer de nouvelles compositions efficaces pour prévenir et/ou traiter les états pelliculaires du cuir chevelu, gras ou sec, et qui soient agréables et confortables à mettre en œuvre, favorisant ainsi l'observance du traitement.
Il existe également un besoin de disposer de nouveaux actifs permettant de prévenir et/ou traiter les états prurigineux et les dermites séborrhéiques du cuir chevelu.
Il existe également un besoin de disposer de nouveaux actifs permettant de prévenir et/ou traiter les états inflammatoires du cuir chevelu.
Il existe également un besoin de disposer de nouveaux actifs permettant d'hydrater le cuir chevelu, et de renforcer ses propriétés de fonction barrière.
La présente invention a pour objet de satisfaire ces besoins. Les lysats, extraits et surnageants de Propionibacterium freudenreichii, en particulier P. freudenreichii ssp. freudenreichii et P. freudenreichii ssp. shermanii permettront de traiter et/ou prévenir les désordres du cuir chevelu en agissant sur l'hydratation, sur la fonction barrière de la peau du cuir chevelu, en activant les systèmes de défenses et d'immunorégulation, ce qui contribuera à réduire les états inflammatoires de la peau du cuir chevelu et d'avoir une barrière équilibrée, de préserver son intégrité et de conserver une écoflore équilibrée.
La peau du cuir chevelu pourra alors être moins irritée et prurigineuse, moins fragile et les pellicules pourront alors être réduites. Traitement/prévention cosmétique /ou dermatologique des désordres cutanés
L'invention concerne ainsi l'utilisation d'une quantité efficace d'un lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii, à titre d'actif dans une composition cosmétique ou dermatologique, pour traiter et/ou prévenir les désordres du cuir chevelu.
En particulier, l'utilisation précitée permet prévenir et/ou traiter les états inflammatoires du cuir chevelu.
En effet, le renforcement des fonctions barrières de la peau du cuir chevelu permet une diminution des états inflammatoires du cuir chevelu, le maintien d'une barrière équilibrée, de son intégrité et la conservation d'une écoflore équilibrée.
Le cuir chevelu est alors moins irrité et prurigineux, moins fragile et plus hydraté et les états pelliculaires sont réduits.
Ainsi, selon un mode de réalisation, l'utilisation précitée permet de rétablir une écoflore équilibrée du cuir chevelu, en particulier via l'induction de protéines de défenses épidermiques.
En particulier, une utilisation selon l'invention permet de préserver et/ou renforcer l'intégrité des fonctions barrières de la peau du cuir chevelu.
En particulier, une telle composition s'avère efficace prévenir et/ou traiter un état pelliculaire du cuir chevelu et pour traiter les états de sécheresses ou xérose du cuir chevelu et/ou le prurit du cuir chevelu et/ou les dermites séborrhéiques du cuir chevelu. Le prurit du cuir chevelu est consécutif à la présence de métabolites irritants résultant du métabolisme des lipides du sébum par Malassezia sp.
Une composition selon l'invention peut avantageusement être mise en œuvre pour prévenir et/ou traiter les infections cutanées, et notamment du cuir chevelu, par Malassezia sp.
Selon un mode de réalisation, le lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii est présent dans une composition cosmétique, pour une utilisation non thérapeutique.
Selon un autre mode de réalisation le lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii est présent dans une composition dermatologique.
L'invention a trait également à un procédé de traitement cosmétique, non thérapeutique, pour traiter et/ou prévenir les désordres du cuir chevelu, qui comprend au moins une étape consistant à appliquer sur le cuir chevelu une quantité efficace d'une composition comprenant une quantité efficace d'un lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii.
Un procédé selon l'invention est en particulier mis en œuvre chez des individus présentant un état pelliculaire du cuir chevelu.
Au sens de la présente invention, on entend par « prévenir » le fait de diminuer le risque de survenue de la manifestation du désordre considéré.
Par « quantité efficace », on entend, au sens de la présente invention, une quantité suffisante pour obtenir l'effet de prévention et/ou traitement à l'égard les désordres du cuir chevelu. Une telle quantité peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art, par exemple au moyen d'essais in vitro, ex vivo ou in vivo, tels que des essais cliniques.
Dans le cadre de l'utilisation selon l'invention, la composition cosmétique ou dermatologique est de préférence mise en œuvre par voie topique.
Avantageusement, dans le cadre de l'utilisation ou du procédé selon l'invention, le lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii agit en maintenant une barrière équilibrée de la peau du cuir chevelu par ses propriétés anti inflammatoires et immunorégulatrices.
Microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii
Propionibacterium freudenreichii est une bactérie gram positive, qui joue un rôle important dans l'élaboration du fromage Emmental et est à la base de la création du leerdammer. Sa concentration dans le fromage suisse est bien plus importante que dans n'importe quel autre fromage. Les Propionibacteria sont souvent retrouvées dans le lait et les produits laitiers.
P. freudenreichii possède un chromosome circulaire d'environ 2,5 Mb de long. Quand le fromage Emmental est produit, la fermentation lactique de P. freudenreichii entraîne la formation d'acétate, de propionate, et de dioxide de carbone.
A la différence de la plupart des autres bactéries lactiques, cette bactérie casse les lipides en acides gras libres. De récentes recherches ont montré que la consommation de P. freudenreichii avait des effets bénéfiques au niveau du tractus gastro-intestinal tel que la réduction de l'incidence des cancers du colon.
Dans le cadre de la présente demande, ledit au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii est de préférence Propionibacterium freudenreichii ssp. Shermanii ou Propionibacterium freudenreichii ssp. Freudenreichii, ou leur mélange.
De préférence, une souche de Propionibacterium freudenreichii ssp. Shermanii est la souche NIZO360, NIZ0365, NIZ0367, NIZ0369 (numéro d'accession CBS1 155914) , NIZO370, NIZ0371 , NIZ0372, NIZ0373, NIZ0374 (numéro d'accession CBS1 15915), NIZ01 185, NIZ02336 (numéro d'accession CBS1 15916), NIZ02663, NIZ02664, NIZ02665, NIZ02666, NIZ02667, NIZ02668, NIZ02669, NIZO2670, NIZ02671 ou NIZ02672, et plus particulièrement NIZ0365, NIZ0367, NIZ0372, NIZ0373, ou NIZ01 185, de préférence encore la souche NIZ0372, qui sont disponibles auprès de la société NIZO food research.
De préférence, une souche de Propionibacterium freudenreichii ssp. freudenreichii est la souche NIZ0363, NIZ0379, NIZ0383, NIZ0384, NIZ01217 ou NIZ01219, et plus particulièrement NIZ0379, NIZ0383, NIZ0384, ou NIZ01217, de préférence encore la souche NIZ0383 ou NIZ0384, qui sont disponibles auprès de la
société NIZO food research. Un lysat désigne communément un matériau obtenu à l'issue de la destruction ou dissolution de cellules biologiques par un phénomène dit de « lyse cellulaire » provoquant ainsi la libération des constituants biologiques intracellulaires naturellement contenus dans les cellules du microorganisme considéré.
Au sens de la présente demande, le terme « lysat » est utilisé indifféremment pour désigner l'intégralité du lysat obtenu par lyse du microorganisme concerné ou seulement une fraction de celui-ci (un « extrait »). Le lysat mis en œuvre est donc formé en tout ou partie des constituants biologiques intracellulaires et des constituants des parois et membranes cellulaires. Cette lyse cellulaire peut être accomplie par différentes technologies, telles que par exemple choc osmotique, choc thermique, par ultrasons, ou encore sous contrainte mécanique de type centrifugation ou cisaillement, notamment à l'aide d'un microfluidiseur, ou encore selon la technologie décrite dans le brevet US 4,464,362, par exemple.
On obtient ainsi généralement une concentration de l'ordre de 0,1 à 50 %, en particulier de 1 à 20 % et notamment environ 5 % en poids en matière(s) active(s) par rapport au poids total du lysat.
Le lysat peut être mis en œuvre sous différentes formes, sous la forme d'une solution ou sous une forme pulvérulente.
Un « surnageant de culture » aussi appelé « milieu conditionné » est typiquement obtenu par mise en culture du microorganisme concerné dans un milieu propre à la survie et/ou la croissance du microorganisme, puis par séparation du milieu et du microorganisme de manière à récolter le milieu mis au contact du microorganisme. De préférence, la culture est mise en œuvre pendant une durée et dans des conditions susceptibles de permettre au microorganisme de libérer dans le milieu des actifs ayant les propriétés souhaitées pour prévenir et/ou traiter les désordres cutanés.
Le milieu propre à la survie et/ou la croissance du microorganisme sera tout milieu nutritif convenant à la survie et/ou la culture du microorganisme. Il contient généralement une source de carbone et d'azote, comme par exemple des acides aminés, des sucres, des protéines, des acides gras, des phosphates, des sulfates, des minéraux et des facteurs de croissances et des vitamines en quantités adéquates.
Au sens de la présente demande, le terme « surnageant de culture » est utilisé indifféremment pour désigner l'intégralité du surnageant de culture obtenu après culture du microorganisme concerné, ou toute fraction ou sous-composé du surnageant obtenu par dialyse, fractionnement, séparation de phase, chromatographie par filtration, chromatographie par affinité, précipitation, concentration, lyophilisation, etc.
Dans le cadre de la présente invention, le lysat et/ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii selon l'invention sont obtenus par la procédé suivant :
a) au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii est cultivé;
b) les culots cellulaires d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii sont récoltés et séparés des surnageants de culture; c) lesdits culots cellulaires récoltés sont resuspendus; et
d) lesdites suspensions sont lysées, de préférence avec un microfluidiseur.
En particulier, le surnageant de culture et/ou le lysat de cellules entières de bactéries de l'espèce Propionibacteria freudenreichii selon l'invention sont obtenus selon le procédé suivant.
Les bactéries sont ensemencées dans un milieu frais comprenant tryptone 5 g/1, extraits de levure 10 g/l, sirop de lactate de sodium 25 g, acétate de sodium 8 g/l, sans contrôle de pH, pendant 72h heures à 30°C avec agifetion à 200 rpm ou encore, et de préférence, dans un milieu frais comprenant 25 g/l de sodium lactate, 8 g/l de NaAc.3H20 (sodium acétate), 10 g/l de levures sans extraits animaux,Tryptone sans extraits animaux, un extrait de glucose à 1 g/L, à 30 °C, pendant 96 he res, et avec un contrôle du pH maintenu (sous agitation à 200 rpm, à pH 6, et 30 °C). Le maintien du pH se fera avec du HCI ou du NaOH.
Les culots cellulaires sont récoltés par centrifugation à 4°C à 8000g et séparés des surnageants de culture. Les culots cellulaires récoltés sont resuspendus dans du PBS et dilués jusqu'à 1 litre. Ces suspensions sont ensuite lysées avec un microfluidiseur M- 1 10Y Microfluidizer® (Microfluidics Corp., Newton, MA, Etats-Unis) en accomplissant trois passages à 1300 bars avec un refroidissement de l'échantillon à des températures inférieures à 10°C. Un traitement à ultra-haute température (UHT, 2 minutes à 80 °C) est ensuite appliqué pour tuer toute cellule vivante subsistante qui pourrait interférer avec l'analyse ou l'utilisation ultérieure des lysats de cellules entières.
Les surnageants de culture sont stérilisés par filtration (0,22 μηι).
Compositions cosmétiques ou dermatologiques
L'invention concerne aussi une composition cosmétique ou dermatologique comprenant une quantité efficace d'un lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii, dans un véhicule physiologiquement acceptable.
Cette composition peut être utilisée pour la mise en œuvre des utilisations et procédés selon l'invention.
La teneur dudit lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques selon l'invention peut varier de 0,0001 % à 30% en poids, notamment de 0,01 à 15% en poids, et en particulier de 0,1 à 10% en poids, par rapport au poids total de la composition.
La quantité de matière(s) active(s) d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii dans les compositions cosmétiques ou dermatologiques selon l'invention peut varier de 0, 1 à 2%, de préférence de 0,5% à 1 ,5% en poids de matière sèche pour les extraits et de 0,1 à 1 %, de préférence 0,1 à 0,5% en poids d'extraits secs pour les milieux conditionnés.
Selon un de ses aspects, la composition cosmétique ou dermatologique selon l'invention comprend en outre un alcool gras, notamment le caprylyl-glycol.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne une composition, cosmétique ou dermatologique telle que décrite ci-dessus, et comprenant en outre au moins un actif choisi parmi un actif anti-séborrhéique, un actif hydratant, un actif antipelliculaire, et leur mélange, notamment tels que décrits ci-après. Une telle formulation permet avantageusement d'amplifier les effets bénéfiques d'un lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii.
On entend par « actif anti-séborrhéique » un composé capable de réguler l'activité des glandes sébacées.
Un actif anti-séborrhéique convenant à l'invention peut, notamment, être choisi parmi l'acide rétinoïque, le peroxyde de benzoyle, le soufre, la vitamine B6 (ou pyridoxine), le chlorure de sélénium, la criste marine ; les mélanges d'extrait de cannelle, de thé et d'octanoylglycine tel que le Sepicontrol A5 TEA® de chez Seppic ; le mélange de cannelle, de sarcosine et d'octanoylglycine, commercialisé notamment par la société SEPPIC sous la dénomination commerciale Sepicontrol A5® ; les sels de zinc tels que le gluconate de zinc, le pyrrolidone carboxylate de zinc (ou pidolate de zinc), le lactate de zinc, l'aspartate de zinc, le carboxylate de zinc, le salicylate de zinc, le cystéate de zinc ; les dérivés de cuivre et en particulier le pidolate de cuivre tel que Cuivridone® de Solabia ; des extraits de végétaux des espèces Arnica montana, Cinchona succirubra, Eugenia caryophyllata, Humulus lupulus, Hypericum perforatum, Mentha piperita, Rosmarinus officinalis, Salvia oficinalis et Thymus vulgaris, tous commercialisés par exemple par la société MARUZEN ; les extraits de reine des prés (spiraea ulamaria) tel que celui vendu sous la dénomination Sébonormine® par la société Silab ; les extraits
d'algue Laminaria saccharina tel que celui vendu sous la dénomination Phlorogine® par la société Biotechmarine ; les mélanges d'extraits de racines de pimprenelle (Sanguisorba officinalis/Poterium officinale), de rhizomes de gingembre (Zingiber officinalis) et d'écorce de cannelier (Cinnamomum cassia) tel que celui vendu sous la dénomination Sebustop® par la société Solabia ; les extraits de graines de lin tel que celui vendu sous la dénomination Linumine® par la société Lucas Meyer ; les extraits de Phellodendron tels que ceux vendu sous la dénomination Phellodendron extract BG par la société Maruzen ou Oubaku liquid B par la société Ichimaru Pharcos ; les mélanges d'huile d'argan, d'extrait de Serenoa serrulata (saw palmetto) et d'extrait de graines de sésame tel que celui vendu sous la dénomination Regu SEB® par la société Pentapharm ; les mélanges d'extraits d'epilobe, de Terminalia chebula, de capucine et de zinc biodisponible (microalgues) tel que celui vendu sous la dénomination Seborilys® par la société Green Tech ; les extraits de Pygeum afrianum tel que celui vendu sous la dénomination Pygeum afrianum sterolic lipid extract par la société Euromed ; les extraits de Serenoa serrulata tels que ceux vendus sous les dénomination Viapure Sabal par la société Actives International, ou ceux vendus par la société Euromed ; les mélanges d'extraits de plantain, de Berberis aquifolium et de salicylate de sodium tels que celui vendu sous la dénomination Seboclear® par la société Rahn ; l'extrait de clou de girofle tel que celui vendu sous la dénomination Clove extract Powder par la société Maruzen ; l'huile d'argan telle que celle vendue sous la dénomination Lipofructyl® par les Laboratoires Sérobiologiques ; les filtrats de protéine lactique tels que celui vendu sous la dénomination Normaseb® par la société Sederma ; les extraits d'algue Laminaria, tel que celui vendu sous la dénomination Laminarghane® par la société Biotechmarine ; les oligosaccharides d'algue Laminaria digitata tel que celui vendu sous la dénomination Phycosaccharide AC par la société Codif ; les extraits de sucre de canne tel que celui commercialisé sous la dénomination Policosanol® par la société Sabinsa ; l'huile de schiste sulfonée, telle que celle vendue sous la dénomination Ichtyol Pale® par la société Ichthyol ; les extraits d'ulmaire (spiraea ulmaria) tels que celui vendu sous la dénomination Cytobiol® Ulmaire par la société Libiol ; l'acide sébacique, notamment vendu sous la forme d'un gel de polyacrylate de sodium sous la dénomination Sebosoft® par la société Sederma ; les glucomannanes extraits de tubercule de konjac et modifié par des chaînes alkyisulfonates tel que celui vendu sous la dénomination Biopol Beta par la société Arch Chemical ; les extraits de Sophora angustifolia, tels que ceux vendus sous la dénomination Sophora powder ou Sophora extract par la société Bioland ; les extraits de Cinchona succirubra bark tel que celui vendu sous la dénomination le Red bark HS par la société Alban Muller ; les extraits de Quillaja saponaria tel que celui vendu sous la
dénomination Panama wood HS par la société Alban Muller ; la glycine greffée sur chaîne undécylénique, telle que celle vendue sous la dénomination Lipacide UG OR par la société Seppic ; le mélange d'acide oléanolique et d'acide nordihydroguaïarétique, tel que celui vendus sous la forme d'un gel sous la dénomination AC.Net par la société Sederma ; l'acide phthalimidoperoxyhexanoïque ; le citrate de trialkyle(C12-C13) vendu sous la dénomination COSMACOL® ECI par la société Sasol ; le citrate de trialkyle(C14-C15) vendu sous la dénomination COSMACOL® ECL par la société Sasol ; l'acide 10-hydroxydécanoïque, et notamment les mélanges d'acide 10-hydroxydécanoïque, d'acide sébacique et de 1 ,10-décandiol tels que celui vendu sous la dénomination Acnacidol® BG par la société Vincience ; et leurs mélanges.
L'actif anti-séborrhéique est par exemple présent dans une teneur allant de 0,1 à 10 % en poids, de préférence de 0,1 à 5 % en poids, et préférentiellement de 0,5 % à 3% en poids, par rapport au poids total de la composition.
Un actif hydratant est un actif apte à réduire l'état de sécheresse d'un épiderme.
Par « actif hydratant », on entend :
- soit un composé agissant sur la fonction barrière, en vue de maintenir l'hydratation du stratum corneum, ou un composé occlusif. On peut citer les céramides, les composés à base sphingoides, les lécithines, les glycosphingolipides, les phospholipides, le cholestérol et ses dérivés, les phytostérols (stigmastérol, β-sitostérol, campestérol), les acides gras essentiels, le 1 -2 diacylglycérol, la 4-chromanone, les triterpènes pentacycliques, la vaseline, et la lanoline;
- soit un composé augmentant directement la teneur en eau du stratum corneum, tel que l'urée et ses dérivés, le thréalose et ses dérivés, l'acide hyaluronique et ses dérivés, le glycérol, le pentanediol, les pidolates, la sérine, le xylitol, l'acide lactique et le lactate de sodium, le polyacrylate de glycérol, l'ectoïne et ses dérivés, le chitosane, les oligo- et polysaccharides, les carbonates cycliques, l'acide N-lauroyl pyrrolidone carboxylique, et la N-a-benzoyl-L-arginine.
- soit un composé activant les glandes sébacées tels que les dérivés stéroidiens (dont la DHEA) et la vitamine D et ses dérivés.
Ces composés peuvent représenter de 0,001 % à 30 %, et de préférence de 0,01 à 20 %, du poids total de la composition selon l'invention.
A titre illustratif des dérivés d'urée, on peut plus particulièrement citer les dérivés hydroxyalkyl urées et notamment ceux décrits dans le document FR 2 877 222.
On entend par actif anti-pelliculaire un composé capable de prévenir l'apparition des pellicules, diminuer leur nombre et/ou les faire disparaître totalement.
Un actif anti-pelliculaire convenant à l'invention peut, notamment, être choisi parmi :
- les sels de pyridinethione notamment les sels de calcium, de magnésium, de barium, de strontium, de zinc, de cadmium, d'étain et de zirconium. Le sel de zinc de pyridinethione est particulièrement préféré. Le sel de zinc de pyridinethione est notamment commercialisé sous la dénomination Omadine de zinc par la société OLIN.
dans laquelle Z représente un atome d'halogène comme le chlore ou un groupement trihalogénoalkyle en Ci -C4 tel que CF3.
- les composés azolés tels que le climbazole, le kétoconazole, le clotrinazole, l'econazole, l'isoconazole et le miconazole.
- les polymères antifongiques tels que l'amphotéricine B ou la nystatine.
- les sulfures de sélénium en particulier ceux de formule Sx Se 8-x , x allant de 1 à 7.
- le soufre sous ses différentes formes, le sulfure de cadmium, l'allantoïne, les goudrons de houille ou de bois et leurs dérivés en particulier l'huile de cade, l'acide salicylique, l'acide undécylénique, l'acide fumarique, les allylamines telle que la terbinafine.
A titre d'exemples préférentiels d'agents antipelliculaires, on peut notamment citer la pyrithione de zinc, l'acide salicylique, le disulfure de sélénium, et leurs mélanges.
Une composition selon l'invention comprend avantageusement de 0,001 à 10 % en poids d'agent(s) antipelliculaire(s), de préférence de 0,1 à 5 % en poids, encore plus préférentiellement de 0,2 à 2 % en poids, par rapport au poids total de la composition.
Les utilisations, procédés et compositions selon l'invention, s'avèrent ainsi tout particulièrement efficaces :
- pour prévenir et/ou traiter les désordres, notamment esthétiques, du cuir chevelu liés à une sécheresse excessive, voire une xérose,
- pour prévenir et/ou traiter les désordres, notamment esthétiques, du cuir chevelu liés à un excès d'excrétion et/ou de sécrétion de sébum,
- pour prévenir et/ou traiter les états pelliculaires qu'ils soient secs ou gras du cuir chevelu,
- pour prévenir et/ou traiter les prurits et/ou dermites séborrhéiques du cuir chevelu,
- pour rétablir une écoflore équilibrée du cuir chevelu,
- pour améliorer et/ou rétablir les défenses antimicrobiennes du cuir chevelu gras,
- pour améliorer le confort des peaux et cuirs chevelus,
- pour maintenir et/ou restaurer les propriétés biomécaniques du cuir chevelu,
- pour préserver et/ou renforcer l'intégrité des fonctions barrières de la peau du cuir chevelu,
- pour prévenir et/ou traiter les états inflammatoires du cuir chevelu.
Les compositions selon l'invention peuvent être administrées par voie topique ou orale, de préférence par voie topique.
Les compositions selon l'invention peuvent en outre contenir plusieurs autres actifs.
A titre d'actifs utilisables, on peut citer, les vitamines B3, B5, B6, B8, C, D, E, ou PP, la niacine, les caroténoïdes (et en particulier le lycopène), les polyphénols et minéraux tels que zinc, calcium, magnésium, cuivre, dérivés d'12, sucres (oses), acides aminés (telle la taurine), les catéchines, les OPC, les acides aminés soufrés, les acides gras polyinsaturés 3 et 6, etc.
En particulier, on peut utiliser un complexe anti-oxydant comprenant les vitamines C et E, et au moins un caroténoïde, notamment un caroténoïde choisi parmi le β-carotène, le lycopène, l'astaxanthine, la zéaxanthine et la lutéine, des flavonoïdes telles que les catéchines, l'hespéridine, des proanthocyanidines et des antocyanines.
Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées selon le mode d'administration retenu.
Les compositions destinées à une administration par voie topique peuvent se présenter sous la forme de solutions hydroalcooliques ou huileuses, de dispersions du type des solutions ou dispersions du type lotion ou sérum, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, de suspensions ou émulsions, du type crème, de gel aqueux ou anhydre, de microémulsions, de microcapsules, de microparticules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique, de pommades, de poudres, de tampons imbibés, de sprays. Elles peuvent être également utilisées pour les cheveux sous forme de solutions, de crèmes, de gels, d'émulsions, de mousses ou encore sous
forme de compositions pour aérosol contenant également un agent propulseur sous pression, sous forme de shampoing, lotion traitante, après-shampoing, etc.
Les compositions selon l'invention peuvent également se présenter sous forme de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques ou de patchs polymériques et d'hydrogels permettant une libération contrôlée. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter soit sous forme anhydre, soit sous forme aqueuse.
Les compositions selon l'invention sont préparées selon les méthodes usuelles.
Lorsque la composition selon l'invention est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5 à 80 % en poids, et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les huiles, les émulsionnants et les coémulsionnants utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine cosmétique ou dermatologique. L'émulsionnant et le coémulsionnant peuvent être présents, dans la composition, en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, et de préférence de 0,5 à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Lorsque la composition selon l'invention est une solution ou un gel huileux, la phase grasse peut représenter plus de 90 % du poids total de la composition.
La composition cosmétique ou dermatologique de l'invention peut contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique ou dermatologique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les bactéricides, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine considéré, et par exemple de 0,01 à 20% du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse et/ou dans la phase aqueuse.
Comme matières grasses utilisables dans l'invention, outre les acides gras insaturés, on peut citer les huiles minérales comme par exemple le polyisobutène hydrogéné et l'huile de vaseline, les huiles végétales comme par exemple une fraction liquide du beurre de karité, huile de tournesol et d'amandes d'abricot, les huiles animales comme par exemple le perhydrosqualène, les huiles de synthèse notamment l'huile de Purcellin, le myristate d'isopropyle et le palmitate d'éthyl hexyle, et les huiles fluorées comme par exemple les perfluoropolyéthers. On peut aussi utiliser des alcools gras, des acides gras comme par exemple l'acide stéarique et comme par exemple des cires notamment de paraffine, carnauba et la cire d'abeilles. On peut aussi utiliser des
composés siliconés comme les huiles siliconées et par exemple les cyclométhicone et diméthicone, les cires, les résines et les gommes siliconées.
Comme émulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple le stéarate de glycérol, le polysorbate 60, le mélange alcool cétylstéarylique/alcool cétylstéarylique oxyéthyléné à 33 moles d'oxyde d'éthylène vendu sous la dénomination Sinnowax AO® par la société HENKEL, le mélange de PEG-6/PEG-32/Glycol Stéarate vendu sous la dénomination de Tefose® 63 par société GATTEFOSSE, le PPG-3 myristyl éther, les émulsionnants siliconés tels que le cétyldiméthicone copolyol et le mono- ou tristéarate de sorbitane, le stéarate de PEG-40, le monostéarate de sorbitane oxyéthyléné (20OE).
Comme solvants utilisables dans l'invention, on peut citer les alcools inférieurs, notamment l'éthanol et l'isopropanol, le propylène glycol.
Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer les polymères carboxyliques tel que le carbomer, les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides et notamment le mélange de polyacrylamide, C13-14-lsoparaffine et Laureth-7 vendu sous le nom de Sepigel 305® par la société SEPPIC, les polysaccharides comme les dérivés cellulosiques tels que les hydroxyalkylcelluloses et en particulier les hydroxypropylcellulose et hydroxyéthyl- cellulose, les gommes naturelles telles que les guar, caroube et xanthane et les argiles.
Comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras comme les stéarates d'aluminium et la silice hydrophobe, ou encore l'éthylcellulose et le polyéthylène.
Comme actifs hydrophiles, on peut utiliser les protéines ou les hydrolysats de protéine, les acides aminés, les polyols notamment en C2 à d0 comme les glycérine, sorbitol, butylène glycol et polyéthylène glycol, l'urée, l'allantoïne, les sucres et les dérivés de sucre, les vitamines hydrosolubles, l'amidon, des extraits bactériens ou végétaux comme ceux d'Aloe Vera.
Comme actifs lipophiles, on peut utiliser le rétinol (vitamine A) et ses dérivés, le tocophérol (vitamine E) et ses dérivés, les céramides, les huiles essentielles et les insaponifiables (tocotrienol, sesamine, gamma oryzanol, phytostérols, squalènes, cires, terpènes).
On peut, en outre, associer les actifs selon l'invention, à des agents actifs destinés notamment à la prévention et/ou au traitement des affections cutanées.
La composition selon l'invention peut également contenir de façon avantageuse une eau thermale et/ou minérale, notamment choisie parmi l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy et l'eau de la Roche Posay.
Le procédé de traitement cosmétique selon l'invention peut être mis en œuvre notamment en appliquant les compositions cosmétiques ou associations telles que définies ci-dessus, selon la technique d'utilisation habituelle de ces compositions, par exemple : applications de crèmes, de gels, de sérums, de lotions sur les cheveux secs, application d'une lotion pour cheveux sur cheveux mouillés, de shampooings.
Le procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en œuvre par administration topique, journalière par exemple, d'une association selon l'invention qui peut être par exemple formulée sous forme de gels, lotions, émulsions.
Le procédé selon l'invention peut comprendre une administration unique. Selon un autre mode de réalisation, l'administration est répétée par exemple 2 à 3 fois quotidiennement sur une journée ou plus et généralement sur une durée prolongée d'au moins 4 semaines, voire 4 à 15 semaines, avec le cas échéant une ou plusieurs périodes d'interruption.
Dans la description et dans les exemples suivants, sauf indication contraire, les pourcentages sont des pourcentages en poids et les plages de valeurs libellées sous la forme "entre ... et ..." incluent les bornes inférieure et supérieure précisées. Les ingrédients sont mélangés, avant leur mise en forme, dans l'ordre et dans des conditions facilement déterminées par l'homme de l'art.
Tel qu'utilisé dans la présente demande, le terme « comprendre » ou « comprend », divulgue aussi dans un sens particulier « consister en » ou « consiste en ».
La présente invention sera illustrée plus en détail par les exemples ci-dessous qui n'en limitent pas la portée. Exemple 1 : activité d'extrait ou surnageant de Propionibacterium freudenreichii sur la sécrétion de cytokines anti-inflammatoires
Après deux heures d'adhésion, des PBMC, ensemencés à la densité de 1 000 000 cellules par puits de boite de 96 puits, ont été lavés puis cultivés pendant 36 heures en milieu de culture contenant un extrait ou surnageant de P. freudenreichii.
Les doses d'actifs utilisées sont détaillées dans les tableaux de résultats sur les cytokines.
A l'issue de ces 36 heures, les surnageants ont été prélevés et analysés, purs, pour détection des cytokines IL10 et IL12p40. Les analyses ont été effectuées à l'aide de kits de multiplexage fournis par Millipore sur un appareil Luminex 100 IS utilisant la technologie xMAP.
Les résultats sont montrés dans le Tableau 1 ci-dessous.
Tableau 1 : Effet d'extrait ou surnageant de culture de bactéries de l'espèce P. freudenreichii sur la production d'ILI O et d'IL12p40 par des PBMCs en culture
Extrait Surnageant
Espèce-sous espèce souche IL-10 IL-10/IL- IL-10 IL-10/IL-
(pg/ml) 12p40 (pg/ml) 12p40
Témoin (LPS -\ μ Γη\) 47 2,74
P. freudenreichii NIZ0363 720 21 20 5 freudenreichii à 5% NIZ0379 1063 18 175 17
NIZ0383 807 17 126 31
NIZ0384 1087 6 180 18
NIZ01217 749 13 134 11
NIZ01219 669 23 175 13
P. freudenreichii NIZO360 844 18 92 18
Shermanii à 5% NIZ0365 1097 11 78 13
NIZ0367 416 15 248 41
NIZ0369 403 13 177 1 1
NIZO370 545 22 23 1 1
NIZ0371 681 12 175 1 1
NIZ0372 397 14 248 7
NIZ0373 416 18 248 10
NIZ0374 740 16 63 62
NIZ01185 436 14 279 14
NIZ02336 646 26 26 6
NIZ02663 526 22 65 14
NIZ02664 659 27 24 4
NIZ02665 648 22 35 5
NIZ02666 518 21 80 22
NIZ02667 435 27 161 14
NIZ02668 441 20 215 12
NIZ02669 31 1 20 190 1 1
NIZO2670 336 54 220 18
NIZ02671 361 50 210 17
NIZ02672 453 46 164 10
Toutes les souches testées de l'espèce P. freudenreichii montrent un effet supérieur au témoin positif (LPS) sur la production d'IU O et d'IL12p40 par les PBMCs en culture.
Neuf des souches testées (en gras), sous forme d'extrait et/ou de surnageant de culture, ont montré des niveaux d'activité intéressant dans ce test classique de mise en évidence de propriétés anti inflammatoires et immunorégulatrices.
Exemple 2 : activité d'extrait ou surnageant de Propionibacterium freudenreichii sur la stimulation de l'expression des marqueurs DEFB4, RNAse 7 et AMPc
Les tests ont été réalisés sur un modèle de kératinocytes humains normaux cultivés à 37°C, en présence de 5% CQ> et avec un milieu de culture K SFM GIBCO, contenant de l'EGF, de la gentamycine et un extrait bovin pituitaire.
L'activité d'extrait ou surnageant de Propionibacterium freudenreichii a été comparée à celles de références présentées dans le tableau 2.
Tableau 2 : références utilisées
Les kératinocytes ont été cultivé en milieu de culture pendant 24 heures. Le milieu a ensuite été remplacé par le milieu d'essai contenant ou non (témoin) un extrait ou surnageant de P. freudenreichii (à des doses non cytotoxiques) ou les références, et les cellules ont été incubées pendant 72 heures. Toutes les conditions ont été réalisées en triplicate.
A la fin de l'incubation, les surnageants de culture ont été éliminés et les tapis cellulaires ont été rincés avec une solution de PBS. Les plaques ont été immédiatement congelées à sec à -80 °C.
L'expression des marqueurs DEFB4, RNAse 7 et AMPc a été évaluée par RT-qPCR sur les ARN messagers extraits des tapis cellulaires de chaque traitement (les triplicates ont été poolés avant l'extraction de l'ARN).
La transcription inverse a été réalisée par extraction des ARN totaux de chaque échantillon à l'aide de TriPure Isolation Reagent® selon le protocole préconisé par le fournisseur. La quantification des ARN a été réalisée à l'aide du Nanovue (Amersham).
Les traces d'ADN potentiellement contaminant ont été éliminées par traitement avec le système DNA-free (Ambion réf. 1906). La réaction de transcription inverse de l'ARNm a été réalisée en présence de l'amorce oligo(dT) et de l'enzyme Superscript II (Gibco). La quantification de l'ADNc obtenu a été réalisée à l'aide du Nanovue (Amersham) et les ADNc ont été ajustés à une concentration de 10 ng/μΙ.
Les réactions de PCR (Polymerase Chain Reaction) ont été réalisées par PCR quantitative avec le système « Light Cycler » (Roche Molecular Systems Inc.) et selon les procédures recommandées par le fournisseur.
Les couples de primers qui ont été utilisés dans cette étude permettent l'amplification des fragments spécifiques mentionnés dans le tableau 3 ci-dessous.
Tableau 3 : fragments amplifiés lors de la PCR
Le mélange réactionnel (10 μΙ final) contenait pour chaque échantillon 2,5 μΙ d'ADNc à 10 ng/μΙ, les amorces des différents marqueurs utilisés, le mélange réactionnel (Roche) contenant l'enzyme taq DNA polymérase, le marqueur SYBR Green I (fluorophore qui s'intercale dans l'ADN double brin, au cours de l'étape d'élongation) et du MgCI2.
L'incorporation de fluorescence dans l'ADN amplifié est mesurée en continu au cours des cycles de PCR. Ces mesures permettent d'obtenir des courbes d'intensité de la fluorescence en fonction des cycles de PCR et d'évaluer ainsi une valeur d'expression relative pour chaque marqueur.
Le nombre de cycles est déterminé à partir des points de « sortie » des courbes de fluorescence. Pour un même marqueur analysé, plus un échantillon sort tard (nombre de cycles élevé), plus le nombre initial de copies de l'ARNm est faible. La valeur de ER (expression relative) est exprimée en unités arbitraires selon la formule suivante :(-|/2nombre
Pour une interprétation standardisée des résultats, le tableau 4 a été utilisé.
Tableau 4: tableau de classification (BlOalternatives)
Les données brutes ont été transférées et traitées sous le logiciel Microsoft
Excel®.
Les formules suivantes ont été utilisées :
- erreur standard de la moyenne : esm=écart type (Sd)/Vn
L'erreur standard de la moyenne (esm) représente l'écart de la moyenne de l'échantillon par rapport à la moyenne de la vraie population. L'esm est calculé en divisant la déviation standard par la racine carrée de la taille de l'échantillon.
- Pourcentage de viabilité : viabilité (%) = (DOCOmposé / DOtémoin) x 100, avec DO pour densité optique.
Les résultats sont présentés dans le tableau 5 ci-dessous.
Tableau 5 : activité d'extrait ou surnageant de Propionibacterium freudenreichii sur la stimulation de l'expression des marqueurs DEFB4, RNAse 7 et AMPc
ConcenDEFB4 RNASE7 AMPc
Souche/Références
tration
Moy ESM Moy EM Moy ESM
Témoin - 100 15 100 M 100 19
EtOH - 100 25 100 17 100 16
50 nM 21 7 1 13 21 204 65
Vitamine D3
100nM 33 25 1 10 20 350 78
OSM+TNF- 3 ng/ml 658629 2106 853 177 225 97 alpha+IL-17 10 ng/ml 895849 13445 1148 27 93 II
NIZO 383 (extrait) 0,20% 132 22 72 13 254 93
NIZO 384 (extrait) 0,20% 155 33 154 15 ND
NIZO
0,008% 157 10 251 ff ND
372(surnageant)
Dans le tableau 5 ci-dessus, ND signifie non détecté, les valeurs en gras et soulignées correspondent à une forte stimulation, les valeurs en gras à une stimulation nette, les valeurs soulignées à une stimulation modérée et les valeurs surlignées à une stimulation neutre, selon les critères mentionnés dans le tableau 4.
On observe que les trois souches (NIZ0383, 384 et 372) de l'espèce P. freudenreichii testées, ont un effet stimulant sur l'expression des marqueurs DEFB4, RNase 7 et AMPc. Ainsi, il est démontré que les extraits ou surnageant testés stimulent les défenses naturelles de la peau ce qui permettra à la peau d'être plus armées à combattre la progression de microorganismes délétères pour son homéostasie.
Exemple 3 : Shampoing
Ingrédients Quantité (%)*
Lysat de Propionibacterium freudenreichii freudenreichii 2,0
Lauryl ether sulfate de sodium en solution aqueuse 20.1
Cocoyl amidopropylbetaine en solution aqueuse 6,3
Eau Qsp 100
*quantité exprimée en produit total Exemple 4 : Shampoinq
Ingrédients Quantité (%)*
Pyrythione de zinc en dispersion 2.083
Lysat de Propionibacterium freudenreichii freudenreichii 2,000
Lauryl ether sulfate de sodium en solution aqueuse 20.100
Cocoyl amidopropylbetaine en solution aqueuse 6.300
Eau Qsp 100
*quantité exprimée en produit total Exemple 5 : Lotion hvdroalcooliaue
Ingrédients Quantité (%)*
Extrait de Vitreoscilla filiformis 3,00
P freudenreichii shermanii 10,00
Antioxydant 0,05
Vitamine C 2,50
Antioxydant 0,50
Isopropanol 40,50
Conservateur 0,30
Eau Qsp 100
*quantité exprimée en produit total
Claims
1 . Utilisation d'une quantité efficace d'un lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii, à titre d'actif dans une composition cosmétique ou dermatologique, pour traiter et/ou prévenir les désordres du cuir chevelu.
2. Utilisation selon la revendication 1 , pour prévenir et/ou traiter les états inflammatoires du cuir chevelu.
3. Utilisation selon la revendication 1 , pour préserver et/ou renforcer l'intégrité des fonctions barrières de la peau du cuir chevelu.
4. Utilisation selon la revendication 1 , pour rétablir une écoflore équilibrée du cuir chevelu.
5. Utilisation selon la revendication 1 , pour prévenir et/ou traiter un état pelliculaire du cuir chevelu et/ou les états de sécheresses ou xérose et/ou les prurits et/ou dermites séborrhéiques du cuir chevelu.
6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que ledit au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii est Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii, Propionibacterium freudenreichii ssp. freudenreichii, ou leur mélange.
7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que la teneur dudit lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii est de 0,0001 % à 30% en poids, par rapport au poids total de la composition cosmétique ou dermatologique.
8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que ladite composition cosmétique ou dermatologique comprend en outre au moins un autre actif choisi parmi un actif anti-séborrhéique, un actif hydratant, un actif antipelliculaire, et leur mélange.
9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que ladite la composition cosmétique ou dermatologique est de préférence mise en œuvre par voie topique.
10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que ledit lysat et/ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii sont obtenus par la procédé suivant :
a) au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii est cultivé;
b) les culots cellulaires d'au moins un microorganisme de l'espèce
Propionibacterium freudenreichii sont récoltés et séparés des surnageants de culture; c) lesdits culots cellulaires récoltés sont resuspendus; et
d) lesdites suspensions sont lysées, de préférence avec un microfluidiseur.
1 1 . Procédé cosmétique, non thérapeutique, pour traiter et/ou prévenir les désordres du cuir chevelu, qui comprend au moins une étape consistant à appliquer sur le cuir chevelu une quantité efficace d'une composition comprenant une quantité efficace d'un lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii.
12. Composition cosmétique ou dermatologique comprenant une quantité efficace d'un lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii, dans un véhicule physiologiquement acceptable.
13. Composition cosmétique ou dermatologique selon la revendication 12, caractérisée en ce que ledit au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii est Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii, Propionibacterium freudenreichii ssp. eudenreichii, ou leur mélange.
14. Composition cosmétique ou dermatologique selon la revendication 12 ou 13, caractérisée en ce la teneur dudit lysat ou surnageant de culture d'au moins un microorganisme de l'espèce Propionibacterium freudenreichii est de 0,0001 % à 30% en poids, par rapport au poids total de la composition cosmétique ou dermatologique.
15. Composition cosmétique ou dermatologique selon l'une quelconque des revendications 13 à 14, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre au moins un actif
choisi parmi un actif anti-séborrhéique, un actif hydratant, un actif antipelliculaire, et leur mélange.
16. Composition cosmétique ou dermatologique selon l'une quelconque des revendications 12 à 15, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un alcool gras, notamment le caprylyl-glycol.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR1259521A FR2996450B1 (fr) | 2012-10-05 | 2012-10-05 | Propionibacterium freudenreichii en tant qu'actif contre les desordres cutanes |
FR1259521 | 2012-10-05 | ||
US201361757916P | 2013-01-29 | 2013-01-29 | |
US61/757,916 | 2013-01-29 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
WO2014053625A2 true WO2014053625A2 (fr) | 2014-04-10 |
WO2014053625A3 WO2014053625A3 (fr) | 2014-10-23 |
Family
ID=47833096
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/EP2013/070681 WO2014053625A2 (fr) | 2012-10-05 | 2013-10-04 | Propionibacterium freudenreichii en tant qu'actif contre les désordres cutanés |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
FR (1) | FR2996450B1 (fr) |
WO (1) | WO2014053625A2 (fr) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR3124077A1 (fr) * | 2021-06-22 | 2022-12-23 | Nanyang Technological University | Utilisation d ’ un acide gras à cha î ne courte comme agent antipelliculaire |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4464362A (en) | 1980-06-27 | 1984-08-07 | Estee Lauder Inc. | Topical skin repair composition |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2912917B1 (fr) * | 2007-02-26 | 2012-05-18 | Oreal | Milieu conditionne et ses utilisations |
FR2938429B1 (fr) * | 2008-11-19 | 2012-05-18 | Oreal | Utilisation cosmetique de microorganisme(s) pour le traitement des desordres du cuir chevelu |
-
2012
- 2012-10-05 FR FR1259521A patent/FR2996450B1/fr active Active
-
2013
- 2013-10-04 WO PCT/EP2013/070681 patent/WO2014053625A2/fr active Application Filing
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4464362A (en) | 1980-06-27 | 1984-08-07 | Estee Lauder Inc. | Topical skin repair composition |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR3124077A1 (fr) * | 2021-06-22 | 2022-12-23 | Nanyang Technological University | Utilisation d ’ un acide gras à cha î ne courte comme agent antipelliculaire |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2996450B1 (fr) | 2017-01-13 |
WO2014053625A3 (fr) | 2014-10-23 |
FR2996450A1 (fr) | 2014-04-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2181702B1 (fr) | Utilisation cosmétique d'un lysat de Bifidobacterium species pour le traitement du cuir chevelu gras | |
EP2181703B1 (fr) | Utilisation d'un lysat de microorganisme pour le traitement des peaux grasses | |
EP2694032B1 (fr) | Nouvel actif utile pour prevenir et/ou traiter les etats pelliculaires du cuir chevelu | |
EP2018888A1 (fr) | Utilisation d'un extrait bactérien cultivé sur une eau thermale pour le traitement des peaux sèches | |
FR2918886A1 (fr) | Utilisation d'au moins un extrait bacterien cultive sur eau thermale pour le traitement des peaux, muqueuses et cuirs chevelus sensibles | |
EP3737352A1 (fr) | Utilisation cosmetique d'un extrait proteique des graines de moringa oleifera | |
JP6591963B2 (ja) | ラクトバチルス・ペントーサスの化粧品及び薬品への適用 | |
JP2022500348A (ja) | 皮膚科製品 | |
FR2988607A1 (fr) | Utilisation d'un lysat de culture d'une bacterie du genre vitreoscilla sp. pour prevenir et/ou traiter les etats hyperseborrheiques du cuir chevelu. | |
WO2012137169A1 (fr) | Nouvel actif pour prevenir ou traiter le cuir chevelu | |
JP2023551278A (ja) | 皮膚障害の微生物治療のための方法及び組成物 | |
WO2008071897A2 (fr) | Utilisation topique d'au moins un acide gras mono-insature pour ameliorer la chevelure | |
WO2019069007A1 (fr) | Procédé d'utilisation d'un inhibiteur de let-7b en cosmétique et/ou en nutraceutique | |
KR101841118B1 (ko) | 세네데스무스 속 미세조류의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물 | |
FR2996452A1 (fr) | Propionibacterium freudenreichii en tant qu'actif contre les peaux grasses a tendance acneique | |
EP0909557B1 (fr) | Utilisation du miel en tant qu'agent diminuant l'adhésion des micro-organismes | |
FR2984129A1 (fr) | Utilisation de la proteine mmp-12 dans la prevention et/ou le traitement des etats pelliculaires du cuir chevelu | |
WO2020127581A1 (fr) | Composition comprenant un extrait de lactobacillus rhamnosus | |
FR2844198A1 (fr) | Utilisation d'un activeur de protectin pour ameliorer la resistance de la peau, composition contenant de tels activateurs et procede de selection | |
WO2014053625A2 (fr) | Propionibacterium freudenreichii en tant qu'actif contre les désordres cutanés | |
CN116635003A (zh) | 用于皮肤障碍的微生物治疗的方法和组合物 | |
FR2938429A1 (fr) | Utilisation cosmetique de microorganisme(s) pour le traitement des desordres du cuir chevelu | |
FR3018448A1 (fr) | Principe actif obtenu a partir de l'algue hypnea musciformis et utilisations cosmetiques | |
WO2014053621A2 (fr) | Propionibacterium freudenreichii en tant qu'actif cosmétique contre les peaux grasses | |
EP2950887B1 (fr) | Utilisation de cellules végétales d'iridacée élicitées dans le traitement des peaux sensibles |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 13773724 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A2 |
|
122 | Ep: pct application non-entry in european phase |
Ref document number: 13773724 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A2 |