WO2014042262A1 - 難聴が生じにくいモデル動物 - Google Patents

難聴が生じにくいモデル動物 Download PDF

Info

Publication number
WO2014042262A1
WO2014042262A1 PCT/JP2013/074940 JP2013074940W WO2014042262A1 WO 2014042262 A1 WO2014042262 A1 WO 2014042262A1 JP 2013074940 W JP2013074940 W JP 2013074940W WO 2014042262 A1 WO2014042262 A1 WO 2014042262A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
hearing loss
fabp7
age
noise
expression
Prior art date
Application number
PCT/JP2013/074940
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
鈴木　淳
典子 大隅
雄介 高田
祐二 大和田
Original Assignee
国立大学法人 東北大学
国立大学法人山口大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 国立大学法人 東北大学, 国立大学法人山口大学 filed Critical 国立大学法人 東北大学
Priority to US14/426,202 priority Critical patent/US20160015011A1/en
Priority to JP2014535613A priority patent/JPWO2014042262A1/ja
Publication of WO2014042262A1 publication Critical patent/WO2014042262A1/ja

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A01K67/0276—Knock-out vertebrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416—Systems
    • G01N27/447—Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704—Details; Accessories
    • G01N27/44717—Arrangements for investigating the separated zones, e.g. localising zones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/05—Animals modified by non-integrating nucleic acids, e.g. antisense, RNAi, morpholino, episomal vector, for non-therapeutic purpose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A01K2217/054—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic) inducing loss of function
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
    • A01K2267/0356—Animal model for processes and diseases of the central nervous system, e.g. stress, learning, schizophrenia, pain, epilepsy
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers

Definitions

  • the present invention relates to a model animal that is less prone to hearing loss.
  • Fatty acid binding protein type 7 (fatty acid binding protein7: Fabp7) is one of the fatty acid binding proteins that bind to unsaturated fatty acids such as DHA and transport fatty acids into cells (Nature reviews Drug discovery. 2008; 7 ( 6): 489-503.).
  • Fabp7 is expressed at a high level in the brain and is thought to be involved in the proliferation and maintenance of neural stem cells (Stem Cells. 2012; 30 (7): 1532-43.).
  • An object of the present invention is to provide a model animal that is less prone to hearing loss.
  • the present inventor found that when analyzing the phenotype of Fabp7 gene knockout mice, the onset and progression of age-related deafness were delayed in these mice. Histologically, degeneration of the cochlea with aging remained mild, and the loss of neurons, fiber cells, and hair cells was suppressed. Moreover, the knockout mice were also resistant to acoustic exposure and reduced transient hearing threshold increases after acoustic exposure as occurs in wild type mice. Thus, the present inventors have completed the following invention.
  • One embodiment of the present invention is a model animal that is less prone to hearing loss and is a fatty acid-binding protein type 7 gene knockout animal.
  • the deafness is age-related deafness, and a model animal in which the onset or progression of age-related deafness is delayed may be used.
  • the deafness may be a noise-type hearing loss, and the model animal may reduce noise-related deafness.
  • Another embodiment of the present invention is a method for measuring hearing in the model animal according to aging.
  • a further embodiment is a method of measuring hearing in the model animal after sound exposure.
  • a further embodiment of the present invention is a screening method for a gene involved in age-related deafness, comprising the step of searching for a gene having a different expression from an animal causing normal age-related deafness in the model animal. Is the method.
  • a further embodiment is a method for screening a gene involved in noise-induced hearing loss, the method comprising a step of searching for a gene having an expression different from that of an animal that causes hearing loss due to normal acoustic exposure in the model animal.
  • the expression at the transcription level or the expression at the protein level may be used as an index.
  • a further embodiment of the present invention is a method for screening a substance that is a marker for age-related hearing loss, wherein a compound having a different amount or concentration from the animal that causes normal age-related hearing loss is searched in the model animal. It is a screening method including a process.
  • a further embodiment is a screening method for a substance that is a marker for noise-induced hearing loss, the method comprising a step of searching for a compound having a different amount or concentration in the model animal from that of an animal that produces normal noise-induced hearing loss. It is.
  • a further embodiment of the present invention is a method for producing a model animal in which the onset or progression of age-related hearing loss is delayed, wherein the production is characterized by suppressing expression of a fatty acid binding protein type 7 gene in an individual animal. Is the method.
  • a further embodiment is a method for producing a model animal in which noise-induced hearing loss is reduced, wherein the method comprises suppressing expression of a fatty acid binding protein type 7 gene in an individual animal.
  • a further embodiment of the present invention is a method for delaying the onset or progression of age-related deafness in a non-human vertebrate, comprising suppressing the expression of a fatty acid binding protein type 7 gene in the vertebrate. It is a characteristic method.
  • a further embodiment is a method for reducing noise-induced hearing loss in vertebrates other than humans, the method comprising suppressing expression of a fatty acid binding protein type 7 gene in the vertebrate.
  • a further embodiment of the present invention is a method for screening for a compound that delays the onset or progression of age-related hearing loss, comprising the step of detecting whether a candidate compound inhibits the expression of fatty acid binding protein type 7 Including.
  • a further embodiment is a method of screening for a compound that reduces noise-induced hearing loss, comprising detecting whether a candidate compound inhibits the expression of fatty acid binding protein type 7.
  • a further embodiment of the present invention is a marker for age-related hearing loss or noise-related hearing loss, which is a fatty acid binding protein type 7 gene.
  • (B) Fabp7 knockout mouse (Fabp7 ( ⁇ / ⁇ )) It is a figure which shows the result of having investigated.
  • a cochlea about (A to G) aged wild type mice (Fabp7 (+ / +)), (H to N) Fabp7 knockout mice (Fabp7 ( ⁇ / ⁇ )) 12 months old Histological analysis results, and (OP) 12-month-old and (Q-R) 15-20-month-old Fabp7 (+ / +) and Fabp7 (-/-) mice.
  • FIG. 1 A to G aged wild type mice (Fabp7 (+ / +)
  • H to N Fabp7 knockout mice
  • Fabp7 ( ⁇ / ⁇ ) 12 months old Histological analysis results
  • OP 12-month-old and (Q-R) 15-20-month-old Fabp7 (+ / +) and Fabp7 (-/-) mice.
  • Fabp7 (+ / +) wild type mice
  • Fabp7 hetero knockout mice Fabp7 (+ / -)
  • ABR auditory brain-stem response
  • Fabp7 (+ / +) wild type mice
  • Fabp7 hetero knockout mice Fabp7 (+/-)
  • Fabp7 knockout mice Fabp7 ( ⁇ / ⁇ )
  • ABR auditory brainstem reaction
  • ABR auditory brainstem response
  • B the hearing threshold before acoustic exposure in the transient threshold rise (TTS) experiment
  • C the acoustic in the TTS experiment.
  • D shows the change in hearing threshold after 7 days of acoustic exposure in the TTS experiment.
  • Fabp7 fatty acid binding protein 7
  • the cause of deafness is not particularly limited, and even if it is age-related deafness due to aging, transient, long-term, and permanent deafness due to noise exposure (generally referred to as noise-related deafness in this specification) ).
  • Hearing loss means that the hearing ability is significantly reduced for a sound of a certain frequency.
  • Age-related hearing loss (senile deafness in humans) refers to bilateral sensorineural hearing loss that progresses with aging.
  • a phenotype that a transient increase in hearing threshold due to sound exposure is reduced is observed, it can be used as a model animal in which noise-induced hearing loss is reduced.
  • This model animal can be produced by suppressing the expression of Fabp7 protein in an animal individual.
  • the kind of animal is not particularly limited as long as it has a cochlea in the inner ear, and examples thereof include vertebrates such as mice, rats, marmosets, monkeys, and the like as representative animals.
  • the method for suppressing the expression of Fabp7 protein is not particularly limited, and examples thereof include a knockout method for destroying an endogenous gene, a knockdown method using siRNA, and the like. In any method, it is preferable to suppress the expression almost completely.
  • the tissue that suppresses the expression of Fabp7 protein may be the whole body, but the expression may be suppressed only in the cochlea of the inner ear.
  • a substance (particularly lipid metabolite) that serves as a marker for hearing loss such as age-related hearing loss and noise-induced hearing loss can be screened by metabolomics analysis.
  • normal age-related hearing loss is detected by CE / MS (capillary electrophoresis mass spectrometry), LC / MS (liquid chromatograph mass spectrometry), GC / MS (gas chromatograph mass spectrometry), etc.
  • the resulting compound can be a candidate for a substance that promotes or suppresses the onset and progression of deafness such as age-related deafness and noise-related deafness. Therefore, the onset and progression of deafness such as age-related deafness and noise-induced deafness Such substances can be screened by ensuring that they are promoted or suppressed.
  • onset mechanism of deafness such as age-related deafness or noise-related deafness
  • noise-related deafness further agents for preventing the onset of deafness such as age-related deafness and noise-related deafness and / or Or the development of a drug that delays progression can be expected.
  • the method for suppressing the expression of the fatty acid binding protein type 7 protein is not particularly limited, and examples thereof include a knockdown method using siRNA and the like. In order to suppress the function, an inhibitory antibody or a low molecular weight compound that binds to the active site of Fabp7 protein can be considered.
  • the expression inhibitor which suppresses the expression of fatty acid binding protein type 7 protein, and the function inhibitor which suppresses the function are used as a preventive agent and / or progression delaying agent for hearing loss, particularly age-related hearing loss and noise-induced hearing loss.
  • antisense nucleic acid, siRNA, miRNA, shRNA, aptamer, function-inhibiting antibody and the like can be exemplified.
  • administration before hearing loss such as age-related deafness or noise-related deafness can prevent the onset of deafness such as age-related deafness or noise-related deafness. Even if hearing loss such as that occurs, administration from that point of time can delay the progression of hearing loss such as age-related hearing loss and noise-based hearing loss.
  • the method of administration varies depending on the active ingredient of the preventive agent or retarder, and in the case of a nucleic acid preparation, direct administration by injection or the like is preferable, and in the case of a low molecular weight compound, indirect administration by oral administration or the like is preferable.
  • the person should choose an appropriate administration method.
  • the above-mentioned preventive agent and / or progression retarder for deafness such as age-related hearing loss and noise-induced hearing loss can be obtained by screening a compound that inhibits the function and expression of Fabp7 protein.
  • the candidate compound is administered to cultured cells expressing the Fabp7 protein, and the expression of the Fabp7 protein decreases. May be detected.
  • the compound may be a low molecular compound or a high molecular compound such as a nucleic acid.
  • the marker for age-related hearing loss according to the present invention is the Fabp7 gene. In other words, by examining the expression level of the Fabp7 gene or the expression level of the Fabp7 protein, whether the onset and / or progression of age-related deafness progresses earlier or later than normal, or to what extent it progresses earlier than normal. , Delay or become predictable.
  • the marker for noise-induced hearing loss according to the present invention is the Fabp7 gene. That is, by examining the expression level of the Fabp7 gene or the expression level of the Fabp7 protein, it is possible to predict how much noise-induced hearing loss occurs.
  • the sample whose expression level is examined is not particularly problematic as long as the Fabp7 gene or Fabp7 protein is expressed, and may be a cochlea, but is preferably blood or urine for non-invasive purposes.
  • Fabp7 protein is found in satellite cells in the spiral ganglion (SG), fibrocytes in the spiral limbus (SLim), and organs of the organ. : OC) expression was detected in feeder cells (inner phalangeal cell: IPC, outer border cell of Hensen: OBCH).
  • FIG. 1 A, B and C in FIG. 1 were stained and photographed under the same conditions.
  • FIG. 1 the expression of Fabp7 protein observed in Fabp7 (+ / +) was half in Fabp7 (+/-). It was confirmed that it was attenuated to a certain extent and disappeared at Fabp7 (-/-).
  • FIG. 2 Fabp7 protein was expressed in old Fabp7 (+ / +) cochlea as in young mice, but its expression was also lost in Fabp7 ( ⁇ / ⁇ ).
  • FIGS. 3A to 3N show an overall image and enlarged images of apical turn, middle turn, and basal turn in a 12 month old mouse.
  • the number of fiber cells in the spiral plate edge (SLim) and the number of neurons in the cochlear ganglion (SG) were counted (FIGS. 1O-R).
  • 3 slices per individual were measured for each rotation, and the average was calculated as the number of cells per unit area (1 mm 2 ).
  • the number of Fabp7 (-/-) fiber cells is significantly greater than that of Fabp7 (+ / +) at the apex rotation at 12 months and basal rotation at 15 months after birth. It remained.
  • the number of Fabp7 (-/-) neurons is more than the number of Fabp7 (+ / +) cells after 12 months of birth and 15 months of apical and middle rotation. Significantly more remained.
  • Fabp7 (-/-) cochlear degeneration associated with aging remained in a mild state, and the loss of neurons and fiber cells was suppressed.
  • FIG. 4A shows the outer hair cell morphology of Fabp7 (+ / +) 12 months old and FIG. 4B shows the Fabp7 ( ⁇ / ⁇ ) mouse 12 months old.
  • FIG. 4C shows the loss rate (OHC loss) of outer hair cells.
  • Fabp7 (+ / + mice the outer hair cell morphology is disrupted due to cell loss due to randomly occurring cell death (Fig. 4A), and in Fabp7 (-/-) mice, the outer hair cell morphology is It was confirmed that they are in order (Fig. 4B).
  • the loss rate of Fabp7 (-/-) outer hair cells is quantitatively the same as that of Fabp7 (+ / +) at 7 months and 12 months after birth. Less than the loss rate of hair cells.
  • hair cell detachment with aging was suppressed.
  • Fabp7 (+ / +) had a high threshold of 32kHz, but Fabp7 (-/-) showed no increase in hearing threshold. It was.
  • the hearing threshold increased over the entire range of sounds at Fabp7 (+ / +), but the hearing threshold increased at Fabp7 (-/-).
  • Fabp7F (+/-) the hearing threshold was increased at an intermediate level between wild-type and homo-knockout individuals.
  • the hearing threshold of Fabp7 ( ⁇ / ⁇ ) was generally lower than that of Fabp7 (+ / +). In, it was kept at a significantly low value.
  • Fabp7 protein can be a quantitative marker that indicates the level of onset and / or progression of age-related hearing loss.
  • Fabp7 knockout mice (Fabp7 (-/-)) 2 months old (9-12 weeks old), and wild type mice (Fabp7) (+ / +)) was subjected to acoustic exposure, and then the hearing threshold was measured using an auditory brain-stem response (ABR) to examine transient increase in threshold (TTS). Specifically, it is as follows.
  • an anaesthetized mouse is placed in a wire mesh cage installed in a soundproof box (custom product, KAWAI), and a noise generator (SF-06, RION), frequency filter (3611, NF), power amplifier (D-75A, Crown) and loudspeakers (2446H, JBL) were overexposed under conditions of 8-10kHz band noise for 2 hours (AD) at 89 dB SPL sound pressure.
  • KAWAI soundproof box
  • SF-06, RION noise generator
  • frequency filter 3611, NF
  • power amplifier D-75A, Crown
  • loudspeakers 2446H, JBL
  • ABR was measured at five frequencies of 4, 8, 12, 16, and 32 kHz using the stimulation sound of tone burst after anesthetizing the mice with xylazine / ketamine before and after acoustic exposure.
  • TTS transient threshold elevation
  • ABR was measured before acoustic exposure (B), 4 hours after exposure, and 7 days after exposure, and the change in hearing threshold before and after exposure was calculated (C, D).
  • the hearing threshold at 32 kHz was already increased at Fabp7 (+ / +) at the stage of 2 months of age (9-12 weeks old), but Fabp7 ( In-/-), there was no increase in hearing threshold. At other frequencies, no difference in hearing threshold was observed.
  • the hearing threshold of Fabp7 (+ / +) was increased over the whole range, but at Fabp7 (-/-), the increase in hearing threshold was significantly mild at 8, 12, 16, and 32 kHz. (FIG. 6C).
  • the hearing threshold improved in Fabp7 (-/-) to the same extent as before the exposure in Fabp7 (-/-), but the improvement in hearing threshold tended to be poor at 32kHz Fabp7 (+ / +) (Fig. 6D).
  • the present invention has made it possible to provide a model animal that is less prone to hearing loss.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

　本発明は、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子のノックアウト動物を作製することによって、難聴が生じにくいモデル動物を提供する。

Description

難聴が生じにくいモデル動物
　本発明は、難聴が生じにくいモデル動物に関する。
　脂肪酸結合タンパク質７型（fatty acid binding protein7：Fabp7）は、DHAなどの不飽和脂肪酸に結合し、脂肪酸の細胞内輸送を行う脂肪酸結合タンパク質の一つである（Nature reviews Drug discovery. 2008;7(6):489-503.）。Fabp7は、脳で高レベルに発現し、神経幹細胞の増殖や維持に関与しているとされる（Stem Cells. 2012；30(7)：1532-43.）。また、内耳の蝸牛（cochlea）では、蝸牛神経節（spiral ganglion）における衛星細胞（satellite cell）、コルチ器（organ of Corti）における支持細胞（supporting cell）、らせん板縁（spiral limbus）やらせん靭帯（spiral ligament）における線維細胞（fibrocytes）で発現が検出されているが、これらの組織におけるFabp7の機能は明らかではない（Annals of anatomy. 2010;192(4):210-4.）。
　一方、これまで、加齢性難聴の遺伝学的研究においては、特定の遺伝子の欠損により先天性の難聴をきたす、または加齢性難聴の進行が加速するという表現型を示す報告は数多く存在している。一方、ある特定の遺伝子を欠損させたノックアウトマウスで加齢性難聴の発症や進行が遅れたという報告は非常に珍しく、アポトーシス促進タンパクの一種であるBak遺伝子のノックアウトマウスで加齢性難聴の発症が有意に予防された（Proc Natl Acad Sci U S A. 2009 Nov 17;106(46):19432-7.）という報告など少数である。
　本発明は、難聴が生じにくいモデル動物を提供することを目的とする。
　本発明者は、Fabp7遺伝子のノックアウトマウスの表現型を解析している時、このマウスでは、加齢性難聴の発症及び進行が遅延することを見出した。組織学的には、老化に伴う蝸牛の変性が軽度な状態に留まり、神経細胞や線維細胞、有毛細胞の脱落が抑制されていた。その上、このノックアウトマウスは、音響暴露にも耐性があり、野生型マウスで生じるような音響暴露後の一過的な聴力閾値の上昇が低減していた。このようにして、本発明者らは、以下の発明を完成させた。
　本発明の一実施態様は、難聴が生じにくいモデル動物であって、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子のノックアウト動物である。前記難聴が加齢性難聴であって、加齢性難聴の発症または進行が遅延するモデル動物であってもよい。あるいは、前記難聴が騒音性難聴であって、騒音性難聴が低減するモデル動物であってもよい。
　本発明の他の一実施態様は、上記モデル動物において、加齢に従って聴力を測定する方法である。さらなる一実施態様は、上記モデル動物において、音響暴露後に聴力を測定する方法である。
　本発明のさらなる一実施態様は、加齢性難聴に関与する遺伝子のスクリーニング方法であって、上記モデル動物において、正常な加齢性難聴を生じる動物と異なる発現を示す遺伝子を検索する工程を含む方法である。さらなる一実施態様は、騒音性難聴に関与する遺伝子のスクリーニング方法であって、上記モデル動物において、正常な音響暴露による難聴を生じる動物と異なる発現を示す遺伝子を検索する工程を含む方法である。これらの方法において、転写レベルでの発現、又はタンパク質レベルでの発現を指標に検索してもよい。
　本発明のさらなる一実施態様は、加齢性難聴のマーカーとなる物質のスクリーニング方法であって、上記モデル動物において、正常な加齢性難聴を生じる動物と異なる量または濃度を示す化合物を検索する工程を含むスクリーニング方法である。さらなる一実施態様は、騒音性難聴のマーカーとなる物質のスクリーニング方法であって、上記モデル動物において、正常な騒音性難聴を生じる動物と異なる量または濃度を示す化合物を検索する工程を含むスクリーニング方法である。
　本発明のさらなる一実施態様は、加齢性難聴の発症または進行が遅延するモデル動物の作製方法であって、動物個体において、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子の発現を抑制することを特徴とする作製方法である。さらなる一実施態様は、騒音性難聴が低減するモデル動物の作製方法であって、動物個体において、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子の発現を抑制することを特徴とする作製方法である。
　本発明のさらなる一実施態様は、ヒト以外の脊椎動物において、加齢性難聴の発症または進行を遅延させる方法であって、前記脊椎動物において、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子の発現を抑制することを特徴とする方法である。さらなる一実施態様は、ヒト以外の脊椎動物において、騒音性難聴を低減させる方法であって、前記脊椎動物において、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子の発現を抑制することを特徴とする方法である。
　本発明のさらなる一実施態様は、加齢性難聴の発症または進行を遅延させる化合物のスクリーニング方法であって、候補となる化合物が脂肪酸結合タンパク質７型の発現を阻害するかどうかを検出する工程を含む。さらなる一実施態様は、騒音性難聴を低減させる化合物のスクリーニング方法であって、候補となる化合物が脂肪酸結合タンパク質７型の発現を阻害するかどうかを検出する工程を含む。
　本発明のさらなる一実施態様は、加齢性難聴または騒音性難聴のマーカーであって、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子であるマーカーである。
＝＝関連文献とのクロスリファレンス＝＝
　本出願は、２０１２年９月１３日付で出願した日本国特許出願２０１２－２０２０２７に基づく優先権を主張するものであり、当該基礎出願を引用することにより、本明細書に含めるものとする。
本発明の一実施例において、（Ａ）生後２ヶ月の若年野生型マウス（Fabp7 (+/+)）、（Ｂ）Fabp7ヘテロノックアウトマウス（Fabp7 (+/-)）、（Ｃ）Fabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）における、Fabp7タンパク質の蝸牛における発現を調べた結果を示す図である。 本発明の一実施例において、（Ａ）生後１２ヶ月の老齢野生型マウス（Fabp7 (+/+)）、（Ｂ）Fabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）における、Fabp7タンパク質の蝸牛における発現を調べた結果を示す図である。 本発明の一実施例において、生後１２か月の（Ａ～Ｇ）老齢野生型マウス（Fabp7 (+/+)）、（Ｈ～Ｎ）Fabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）についての蝸牛の組織学的解析結果、ならびに（Ｏ～Ｐ）生後１２か月および（Ｑ～Ｒ）生後１５－２０ヶ月のFabp7 (+/+)マウス及びFabp7 (-/-)マウスにおける細胞の脱落レベルを示した図である。 本発明の一実施例において、生後１２ヶ月の（Ａ）野生型マウス（Fabp7 (+/+)）、（Ｂ）Fabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）について、頂回転におけるコルチ器の外有毛細胞（outer hair cell：OHC）数の解析結果、ならびに（Ｃ）生後７ヶ月および生後１２か月のFabp7 (+/+)マウスおよびFabp7 (-/-)マウスについて、細胞の脱落レベル（％）を示した図である。 本発明の一実施例において、生後７ヶ月（Ａ）、１２ヶ月（Ｂ）、１５－２０ヶ月（Ｃ）の野生型マウス（Fabp7 (+/+)）、Fabp7ヘテロノックアウトマウス（Fabp7 (+/-)）、Fabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）について、聴性脳幹反応（auditory brain-stem response：ABR）を用いて聴力閾値（Hearing threshold）を測定することによって、Fabp7ノックアウトマウスにおける加齢性難聴の発症および／または進行の遅延を示した図である。 本発明の一実施例において、生後２ヶ月の野生型マウス（Fabp7 (+/+)）、Fabp7ヘテロノックアウトマウス（Fabp7 (+/-)）、Fabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）について、音響曝露を行って一過性の難聴を引き起こした後、聴性脳幹反応（auditory brain-stem response：ABR）を用いて聴力閾値（Hearing threshold）を測定した結果を示した図である。Aは実験の模式図（ABRの後のアルファベットは、本図の対応するグラフを示す。）、Bは一過性閾値上昇（TTS）実験における音響暴露前の聴力閾値、CはTTS実験における音響曝露４時間後の聴力閾値変化、DはTTS実験における音響曝露７日後の聴力閾値変化を示した図である。
　実施の形態及び実施例に特に説明がない場合には、J. Sambrook, E. F. Fritsch & T. Maniatis (Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2001); F. M. Ausubel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J.G. Seidman, J. A. Smith, K. Struhl (Ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Ltd.等の標準的なプロトコール集に記載の方法、あるいはそれを修飾したり、改変した方法を用いる。また、市販の試薬キットや測定装置を用いる場合には、特に説明が無い場合、それらに添付のプロトコールを用いる。
　なお、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例等は、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示または説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図ならびに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々に修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
＝＝加齢性難聴の発症および／または進行が遅延するモデル動物＝＝
　本発明における難聴が生じにくいモデル動物は、脂肪酸結合タンパク質７型（fatty acid binding protein7：Fabp7）遺伝子のノックアウト動物である。ここで、難聴の原因は、特に限定されず、加齢による加齢性難聴であっても、騒音暴露による一過的・長期的・永久的難聴（本明細書では、総じて騒音性難聴と呼ぶ）であってもかまわない。なお、難聴とは、ある周波数の音に対し、有意に聴力が低下することを意味する。
　この動物においては、加齢性難聴の発症および／または進行が遅れるという表現型が観察されることから、加齢性難聴の発症および／または進行が遅延するモデル動物として用いることができる。なお、加齢性難聴（ヒトでは老人性難聴）とは、老化に伴い進行する両側性の感音難聴のことである。
　また、音響暴露による聴力閾値の一過的上昇が低減するという表現型が観察されることから、騒音性難聴が低減するモデル動物として用いることができる。
＜作製方法＞
　このモデル動物は、動物個体において、Fabp7タンパク質の発現を抑制することによって作製することができる。　
　ここで、動物の種類は、内耳の蝸牛を有するものであれば、特に限定されず、マウス、ラット、マーモセット、サルなどの実験動物を代表とする脊椎動物などが例示できる。　
　Fabp7タンパク質の発現を抑制する方法は特に限定されず、内在性遺伝子を破壊するノックアウト法や、siRNAなどを利用したノックダウン法等が例示できる。いずれの方法でも、ほぼ完全に発現を抑制することが好ましい。　
　Fabp7タンパク質の発現を抑制する組織は、体全体でもよいが、内耳の蝸牛においてのみ、発現を抑制してもかまわない。
＜利用方法＞
　このモデル動物を用い、聴覚を司る内耳の蝸牛を解析することにより、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴の発症メカニズムを解明することが期待できる。例えば、マイクロアレイ法によって、正常な加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴を生じる動物と異なる発現を示す遺伝子の候補を探索し、実際に、転写レベル、又はタンパク質レベルでの発現を詳細に調べてFabp7の下流の遺伝子を同定することによって、難聴を生じる遺伝子ネットワーク、とくに、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴の発症および／または進行における遺伝子ネットワークを明らかにすることができる。
　また、このモデル動物を用い、メタボロミクス解析によって、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴のマーカーとなる物質（特に脂質代謝産物）をスクリーニングすることができる。例えば、このモデル動物において、CE/MS（キャピラリー電気泳動質量分析）法、LC/MS（液体クロマトグラフ質量分析）法、GC/MS（ガスクロマトグラフ質量分析）法などによって、正常な加齢性難聴を生じる動物と異なる量または濃度を示す化合物を探索し、特定された各化合物について、その血清中の濃度などと加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴との相関を調べることによって、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴のマーカーを同定することができる。得られた化合物は、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴の発症や進行を促進または抑制する物質の候補にもなり得るため、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴の発症や進行を促進または抑制することを確かめることによって、そのような物質をスクリーニングすることができる。
　このように、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴の発症メカニズムを解明することができれば、そのメカニズムに基づいて、更に、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴の発症予防薬および／または進行遅延薬の開発も期待できる。
＝＝加齢性難聴を遅延させる方法＝＝
　Fabp7遺伝子のノックアウト動物においては、難聴が生じにくい、特に加齢性難聴の発症ならびにその進行が遅れる、音響暴露による聴力閾値の一過的上昇が低減するという表現型が観察される。従って、ヒトまたはヒト以外の動物において、Fabp7タンパク質の発現や機能を抑制することによって、難聴を生じにくくすること、特に加齢性難聴の発症および／または進行を遅延させることや、音響暴露による聴力閾値の一過的上昇を低減させることができる。ここで、脂肪酸結合タンパク質７型タンパク質の発現を抑制する方法は特に限定されず、siRNAなどを利用したノックダウン法等が例示できる。また、機能を抑制するには、Fabp7タンパク質の活性部位に結合する阻害抗体や低分子化合物などが考えられる。
　そして、脂肪酸結合タンパク質７型タンパク質の発現を抑制する発現抑制剤や、機能を抑制する機能抑制剤は、難聴特に加齢性難聴や騒音性難聴などの発症予防剤および／または進行遅延剤、として利用できる。具体的には、アンチセンス核酸、siRNA、miRNA、shRNA、アプタマー、機能阻害抗体などが例示できる。そして、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴が生じる前から投与することで、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴の発症を予防することができ、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴が起こっても、その時点から投与することで、加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴の進行を遅延させることができる。
　投与方法は、その予防剤や遅延剤の有効成分によって異なり、核酸製剤の場合は、注射などによる直接投与が好ましく、低分子化合物の場合は、経口投与などによる間接投与が好ましいが、適宜、投与者が適切な投与方法を選べばよい。
＝＝難聴の発症を予防および／または進行を遅延させる化合物のスクリーニング方法＝＝
　上述したような加齢性難聴や騒音性難聴などの難聴の発症予防剤および／または進行遅延剤は、Fabp7タンパク質の機能や発現を阻害する化合物をスクリーニングすることによって得られる。候補の化合物が、Fabp7タンパク質の機能または発現を阻害するかどうかを検出するためには、例えば、Fabp7タンパク質を発現している培養細胞に候補の化合物を投与し、Fabp7タンパク質の発現が低下することを検出すればよい。ここで、化合物としては、低分子化合物でもよく、核酸などの高分子化合物でもよい。
＝＝加齢性難聴のマーカー＝＝
　本発明にかかる加齢性難聴のマーカーは、Fabp7遺伝子である。すなわち、Fabp7遺伝子の発現量またはFabp7タンパク質の発現量を調べることによって、加齢性難聴の発症および／または進行が、正常より早く進むか、遅延するか、あるいは、どの程度、正常より早く進むか、遅延するか、が予測可能になる。また、本発明にかかる騒音性難聴のマーカーは、Fabp7遺伝子である。すなわち、Fabp7遺伝子の発現量またはFabp7タンパク質の発現量を調べることによって、騒音性難聴が、どの程度生じるか、が予測可能になる。
　その発現量を調べるサンプルは、Fabp7遺伝子またはFabp7タンパク質が発現していれば特に問題なく、蝸牛であっても良いが、非侵襲性からは血液や尿であることが好ましい。
（１）Fabp7タンパクの蝸牛における発現
　生後２ヶ月（図１）ならびに生後１２か月（図２）のFabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）、Fabp7ヘテロノックアウトマウス（Fabp7 (+/-)）及び野生型マウス（Fabp7 (+/+)）を４％パラホルムアルデヒドで灌流固定し、蝸牛を摘出した。同固定液で浸漬固定し、10％EDTAで脱灰の後、OTCコンパウンドに包埋し凍結切片を作成した。その後、抗Fabp7抗体（Kurtz et al., Development vol.120, p.2637-2649, 1994 ）を用いて免疫染色を行った。
　過去の報告と同様に、Fabp7タンパク質は、蝸牛神経節（spiral ganglion：SG）における衛星細胞（satellite cells）、らせん板縁（spiral limbus：SLim）における線維細胞（fibrocytes）、コルチ器（organ of Corti：OC）における支持細胞（inner phalangeal cell：IPC、outer border cell of Hensen：OBCH）で発現が検出された。
　図１のＡ、Ｂ、Ｃは同一条件で染色・撮影したものであり、図１に示すように、Fabp7 (+/+)で認めたFabp7タンパクの発現が、Fabp7 (+/-)では半分程度に減弱し、Fabp7 (-/-)では消失していることが確認された。また、図２に示すように、老齢Fabp7 (+/+)の蝸牛では、若年マウスと同様にFabp7タンパク質が発現していたが、やはりFabp7 (-/-)ではその発現が消失していた。
（２）Fabp7ノックアウトマウスにおける線維細胞及び神経細胞の残存
　生後１２ヶ月ならびに生後１５か月のFabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）及び野生型マウス（Fabp7 (+/+)）を４％パラホルムアルデヒド（生後１２か月）またはブアン固定液（生後１５か月）で灌流固定し、蝸牛を摘出した。同固定液で浸漬固定し、１０％ＥＤＴＡで脱灰の後、ＯＴＣコンパウンドに包埋し凍結切片を作成した。その後ＨＥ染色を行い、内耳形態を評価した。図３Ａ～Ｎに、生後１２ヶ月のマウスにおける全体像、及び、頂回転（apical turn）、中回転（middle turn）、基底回転（basal turn）の各拡大像を示す。
　生後１２ヶ月のFabp7 (+/+)の蝸牛（図３Ａ～Ｇ）においては、らせん板縁（spiral limbus：SLim）の線維細胞（fibrocyte）や蝸牛神経節（spiral ganglion：SG）の神経細胞（Neuron）の脱落を認めたが、Fabp7 (-/-)の蝸牛（図３Ｈ～Ｎ）では軽度であった。
　次に、ラセン板縁（SLim）における線維細胞及び蝸牛神経節（SG）における神経細胞の細胞数を計測した（図１Ｏ～Ｒ）。細胞数は、各回転につき１個体あたり３切片を計測し、単位面積（1mm2）当たりの細胞数としてその平均を算出した。ラセン板縁においては、生後１２か月の頂回転と生後１５か月の基底回転において、Fabp7 (-/-)の線維細胞の細胞数が、Fabp7 (+/+)の細胞数より有意に多く残存していた。蝸牛神経節においては、生後１２か月の基底回転と生後１５か月の頂回転・中回転で、Fabp7 (-/-)の神経細胞の細胞数が、Fabp7 (+/+)の細胞数より有意に多く残存していた。このように、Fabp7 (-/-)では、老化に伴う蝸牛の変性が軽度な状態にとどまり、神経細胞や線維細胞の脱落が抑制されていた。
（３）Fabp7ノックアウトマウスにおける有毛細胞の残存
　生後７ヶ月ならびに生後１２か月のFabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）及び野生型マウス（Fabp7 (+/+)）を４％パラホルムアルデヒドで灌流固定し、蝸牛を摘出した。同固定液で浸漬固定し、１０％ＥＤＴＡで脱灰した。ファロイジン・ローダミンにて有毛細胞を染色した後にコルチ器を摘出し、スライドガラス上にマウントした（surface preparation法）。頂回転における外有毛細胞（outer hair cell）数を測定し、予測される外有毛細胞数（内有毛細胞１個あたり、外有毛細胞は３個存在すると予測される）に対する欠損率を測定した。外有毛細胞10個×3列を一視野とし、３視野以上観察しその平均を算出した。図４Ａに、生後１２か月のFabp7 (+/+)、図４Ｂに生後１２か月のFabp7 (-/-)マウスの外有毛細胞形態を示す。そして、図４Ｃに外有毛細胞の欠損率（OHC loss）を示す。
　Fabp7 (+/+)マウスでは、ランダムに生じる細胞死による細胞の欠損のため、外有毛細胞形態が崩れており（図４Ａ）、Fabp7 (-/-)マウスでは、外有毛細胞形態が整然と並んでいる（図４Ｂ）ことが確認された。また、図４Ｃで示したように、定量的にも、生後７か月、１２か月ともに、Fabp7 (-/-)の外有毛細胞の欠損率は、Fabp7 (+/+)の外有毛細胞の欠損率よりも少なかった。このように、Fabp7 (-/-)では、老化に伴う有毛細胞の脱落が抑制された。
（４）Fabp7ノックアウトマウスにおける加齢性難聴の発症および／または進行の遅延
　生後７ヶ月、12ヶ月、15－20ヶ月のFabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）、Fabp7ヘテロノックアウトマウス（Fabp7 (+/-)）及び野生型マウス（Fabp7 (+/+)）に対し、聴性脳幹反応（auditory brain-stem response：ABR）を用いて聴力閾値を測定した（図５A～C）。キシラジン・ケタミンにて麻酔を施行したのち、tone burstの刺激音を用いて、4, 8, 12, 16, 32kHzの５周波数で聴力閾値を測定した。
　生後７ヶ月では、図５Aに示すように、Fabp7 (+/+)では、32kHzという高音域の聴力閾値が上昇していたが、Fabp7 (-/-)では、聴力閾値の上昇は見られなかった。生後12ヶ月では、図５Bに示すように、Fabp7 (+/+)では、音の全域に渡って聴力閾値が上昇していたが、Fabp7 (-/-)では、聴力閾値の上昇は見られず、Fabp7 (+/-)では、野生型個体とホモノックアウト個体の中間レベルで聴力閾値が上昇していた。生後15-20か月では、図５Cに示すように、Fabp7 (-/-)の聴力閾値はFabp7 (+/+)の聴力閾値に比較し全体に低値であったが、特に16、32kHzでは有意に低値に保たれていた。
　生後12ヶ月の解析結果（図５B）と、Fabp7 (+/-)ではFabp7タンパク質の発現が半分程度に減弱していたという結果（図１A-C）をふまえ、正常なFabp7遺伝子座の数に比例して、聴力の低下を生じることがわかる。従って、Fabp7タンパク質は、加齢性難聴の発症および／または進行のレベルを示す量的マーカーになり得る。
（５）Fabp7ノックアウトマウスにおける一過性聴力閾値上昇の低減
　本実施例では、生後２ヶ月齢（９－１２週齢）のFabp7ノックアウトマウス（Fabp7 (-/-)）、及び野生型マウス（Fabp7 (+/+)）に対し、音響曝露を行った後、聴性脳幹反応（auditory brain-stem response：ABR）を用いて聴力閾値を測定し、一過性閾値上昇（TTS）を調べた。具体的には、以下の通りである。
　まず、音響曝露については、無麻酔のマウスを防音箱（特注品、KAWAI）内に設置した金網ケージにいれ、騒音発生装置 (SF-06, RION)、周波数フィルター (3611, NF)、パワーアンプ (D-75A, Crown) およびスピーカー(2446H, JBL)で作成した過大音響を、8－10 kHzのバンドノイズを89 dB SPLの音圧で２時間曝露（A-D）するという条件で曝露した。
　ABRは、音響曝露前後にキシラジン・ケタミンにてマウスに麻酔したのち、tone burstの刺激音を用いて、4, 8, 12, 16, 32kHzの５周波数で測定した。一過性閾値上昇（TTS）を調べるため、ABRを音響曝露前（B）、曝露４時間後、曝露７日後に測定し、曝露前後の聴力閾値の変化を計算した（C, D）。
　図６Ｂに示すように、音響曝露前の状態では、生後２ヶ月齢（９－１２週齢）の段階で、すでにFabp7 (+/+)で32kHzの聴力閾値が上昇していたが、Fabp7 (-/-)では、聴力閾値の上昇は見られなかった。その他の周波数では、聴力閾値の差を認めなかった。
　曝露４時間後においてFabp7 (+/+)の聴力閾値が全音域にわたって上昇していたが、Fabp7 (-/-)では、聴力閾値の上昇が8、12、16、32 kHzで有意に軽度であった（図６Ｃ）。曝露7日後においては、Fabp7 (-/-)では全音域にわたって聴力閾値が曝露前同等に改善していたが、Fabp7 (+/+)の32kHzでは聴力閾値の改善が乏しい傾向があった（図６Ｄ）。
　このように、Fabp7の欠損により音響暴露による一過性閾値上昇が低減する。
　本発明によって、難聴が生じにくいモデル動物を提供できるようになった。

Claims (18)

  1. 　難聴が生じにくいモデル動物であって、
    　脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子のノックアウト動物であることを特徴とするモデル動物。
  2. 　前記難聴が加齢性難聴であって、
    　加齢性難聴の発症または進行が遅延する、請求項１に記載のモデル動物。
  3. 　前記難聴が騒音性難聴であって、
    　騒音性難聴が低減する、請求項１に記載のモデル動物。
  4. 　請求項１に記載のモデル動物において、加齢に従って聴力を測定する方法。
  5. 　請求項１に記載のモデル動物において、音響暴露後に聴力を測定する方法。
  6. 　加齢性難聴に関与する遺伝子のスクリーニング方法であって、
    　請求項１に記載のモデル動物において、正常な加齢性難聴を生じる動物と異なる発現を示す遺伝子を検索する工程を含む方法。
  7. 　騒音性難聴に関与する遺伝子のスクリーニング方法であって、
    　請求項１に記載のモデル動物において、正常な騒音性難聴を生じる動物と異なる発現を示す遺伝子を検索する工程を含む方法。
  8. 　転写レベルでの発現、又はタンパク質レベルでの発現を指標に検索することを特徴とする、請求項６または７に記載の方法。
  9. 　加齢性難聴のマーカーとなる物質のスクリーニング方法であって、
    　請求項１に記載のモデル動物において、正常な加齢性難聴を生じる動物と異なる量または濃度を示す化合物を検索する工程を含む方法。
  10. 　騒音性難聴のマーカーとなる物質のスクリーニング方法であって、
    　請求項１に記載のモデル動物において、正常な騒音性難聴を生じる動物と異なる量または濃度を示す化合物を検索する工程を含む方法。
  11. 　加齢性難聴の発症または進行が遅延するモデル動物の作製方法であって、
    　動物個体において、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子の発現を抑制することを特徴とする作製方法。
  12. 　騒音性難聴が低減するモデル動物の作製方法であって、
    　動物個体において、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子の発現を抑制することを特徴とする作製方法。
  13. 　ヒト以外の脊椎動物において、加齢性難聴の発症または進行を遅延させる方法であって、
    　前記脊椎動物において、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子の発現を抑制することを特徴とする方法。
  14. 　ヒト以外の脊椎動物において、騒音性難聴を低減させる方法であって、
    　前記脊椎動物において、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子の発現を抑制することを特徴とする方法。
  15. 　加齢性難聴の発症または進行を遅延させる化合物のスクリーニング方法であって、
    　候補となる化合物が脂肪酸結合タンパク質７型の発現を阻害するかどうかを検出する工程を含むスクリーニング方法。
  16. 　騒音性難聴を低減させる化合物のスクリーニング方法であって、
    　候補となる化合物が脂肪酸結合タンパク質７型の発現を阻害するかどうかを検出する工程を含むスクリーニング方法。
  17. 　加齢性難聴のマーカーである、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子であるマーカー。
  18. 　騒音性難聴のマーカーである、脂肪酸結合タンパク質７型遺伝子であるマーカー。
PCT/JP2013/074940 2012-09-13 2013-09-13 難聴が生じにくいモデル動物 WO2014042262A1 (ja)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14/426,202 US20160015011A1 (en) 2012-09-13 2013-09-13 Animal model resistant to hearing loss
JP2014535613A JPWO2014042262A1 (ja) 2012-09-13 2013-09-13 難聴が生じにくいモデル動物

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2012-202027 2012-09-13
JP2012202027 2012-09-13

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2014042262A1 true WO2014042262A1 (ja) 2014-03-20

Family

ID=50278367

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2013/074940 WO2014042262A1 (ja) 2012-09-13 2013-09-13 難聴が生じにくいモデル動物

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20160015011A1 (ja)
JP (1) JPWO2014042262A1 (ja)
WO (1) WO2014042262A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20230309520A1 (en) * 2020-07-29 2023-10-05 University Industry Foundation, Yonsei University Wonju Campus Age-related hearing loss animal model and construction method therefor
KR102563048B1 (ko) * 2020-07-29 2023-08-04 연세대학교 원주산학협력단 노인성 난청 동물모델 및 이의 제작방법

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2010169677A (ja) * 2008-12-25 2010-08-05 Canon Inc 有毛細胞標識剤、及び該標識剤を用いた有毛細胞標識方法
JP2010207097A (ja) * 2009-03-06 2010-09-24 Chube Univ 難聴モデル動物及びその用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2010169677A (ja) * 2008-12-25 2010-08-05 Canon Inc 有毛細胞標識剤、及び該標識剤を用いた有毛細胞標識方法
JP2010207097A (ja) * 2009-03-06 2010-09-24 Chube Univ 難聴モデル動物及びその用途

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ATSUSHI SUZUKI ET AL.: "Fabp7 no Kagyu ni Okeru Kino Kaiseki -Kareisei Nancho ni Narinikui Mouse no Hakken", OTOL. JPN., vol. 22, no. 4, 14 September 2012 (2012-09-14), pages 574 *
FURUHASHI, M ET AL.: "Fatty acid-binding proteins: role in metabolic diseases and potential as drug targets", NATURE REVIEWS DRUG DISCOVERY, vol. 7, 2008, pages 489 - 503 *
MATSUMATA, M. ET AL.: "The Effects of Fabp7 and Fabp5 on Postnatal Hippocampal Neurogenesis in the Mouse", STEM CELLS, vol. 30, 11 May 2012 (2012-05-11), pages 1532 - 1543 *
SAINO-SAITO, S. ET AL.: "Localization of fatty acid binding proteins (FABPs) in the cochlea of mice", ANNALS OF ANATOMY, vol. 192, 2010, pages 210 - 214 *
SOMEYA, S. ET AL.: "Age-related hearing loss in C57BL/6J mice is mediated by Bak-dependent mitochondrial apoptosis", PNAS, vol. 106, no. 46, 2009, pages 19432 - 19437 *
TASHIRO, R. ET AL.: "Fatty acid binding protein (Fabp7) is involved in the maintenance of neural stem/progenitor cells, survival of neurons and maturation of astrocytes", NEUROSCIENCE RESEARCH, vol. 71S, 2011, pages E127 *

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2014042262A1 (ja) 2016-08-18
US20160015011A1 (en) 2016-01-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Löwenheim et al. Gene disruption of p27Kip1 allows cell proliferation in the postnatal and adult organ of Corti
Lentz et al. Rescue of hearing and vestibular function by antisense oligonucleotides in a mouse model of human deafness
Liao et al. Full spectrum of malformations in velo-cardio-facial syndrome/DiGeorge syndrome mouse models by altering Tbx1 dosage
Caras et al. Peripheral auditory processing changes seasonally in Gambel’s white-crowned sparrow
Maison et al. Dopaminergic signaling in the cochlea: receptor expression patterns and deletion phenotypes
Pang et al. Circulating miR-34a levels correlate with age-related hearing loss in mice and humans
Simonoska et al. Inner ear pathology and loss of hearing in estrogen receptor-b deficient mice
Taylor et al. Regenerating hair cells in vestibular sensory epithelia from humans
Rocha-Sanchez et al. Mature mice lacking Rbl2/p130 gene have supernumerary inner ear hair cells and supporting cells
Lv et al. Deletion of Kcnj16 in mice does not alter auditory function
Park et al. Comparison of functional and morphologic characteristics of mice models of noise-induced hearing loss
Jeng et al. Age‐related changes in the biophysical and morphological characteristics of mouse cochlear outer hair cells
Gilels et al. Severe hearing loss and outer hair cell death in homozygous Foxo3 knockout mice after moderate noise exposure
Carlton et al. Loss of Baiap2l2 destabilizes the transducing stereocilia of cochlear hair cells and leads to deafness
Chen et al. Down regulated connexin26 at different postnatal stage displayed different types of cellular degeneration and formation of organ of Corti
Zhang et al. Evidence for excessive osteoclast activation in SIRT6 null mice
Glueckert et al. Role of class D L-type Ca2+ channels for cochlear morphology
Wang et al. Fetal antisense oligonucleotide therapy for congenital deafness and vestibular dysfunction
Chen et al. Cochlear supporting cells require GAS2 for cytoskeletal architecture and hearing
Seist et al. Cochlin deficiency protects against noise-induced hearing loss
Cao et al. The CaV1. 2 L-type calcium channel regulates bone homeostasis in the middle and inner ear
Canales et al. The role of GTF2IRD1 in the auditory pathology of Williams–Beuren Syndrome
WO2014042262A1 (ja) 難聴が生じにくいモデル動物
Chen et al. Connexin30-deficiency causes mild hearing loss with the reduction of endocochlear potential and ATP release
Fuentes-Santamaría et al. Age-related inflammation and oxidative stress in the cochlea are exacerbated by long-term, short-duration noise stimulation

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 13837866

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2014535613

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14426202

Country of ref document: US

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 13837866

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1