WO2013055252A1 - Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1 - Google Patents

Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1 Download PDF

Info

Publication number
WO2013055252A1
WO2013055252A1 PCT/RU2011/000805 RU2011000805W WO2013055252A1 WO 2013055252 A1 WO2013055252 A1 WO 2013055252A1 RU 2011000805 W RU2011000805 W RU 2011000805W WO 2013055252 A1 WO2013055252 A1 WO 2013055252A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
salts
carbomoylphosphonic
solution
acid ester
phosphonic acid
Prior art date
Application number
PCT/RU2011/000805
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Наталья Александровна ГОЛУБЕВА
Maксим Владимирович ЯСЬКО
Наталья Борисовна ТАРУСОВА
Роберт Шалвович БИБИЛАШВИЛИ
лександр Васильевич КОНОНОВА
Original Assignee
Закрытое Акционерное Общество " Производственно-Коммерческая Ассоциация Азт"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Закрытое Акционерное Общество " Производственно-Коммерческая Ассоциация Азт" filed Critical Закрытое Акционерное Общество " Производственно-Коммерческая Ассоциация Азт"
Priority to CN201180075377.8A priority Critical patent/CN104114570B/zh
Priority to KR1020147013013A priority patent/KR101976231B1/ko
Priority to PCT/RU2011/000805 priority patent/WO2013055252A1/ru
Priority to EP11874106.5A priority patent/EP2767543B1/en
Priority to ES11874106.5T priority patent/ES2650464T3/es
Publication of WO2013055252A1 publication Critical patent/WO2013055252A1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV

Definitions

  • Salts of carbomoylphosphonic acid esters which are selective inhibitors of the production of human immunodeficiency virus HIV-1.
  • the invention relates to the field of molecular biology, virology and medicine, and relates to new biologically active compounds, namely salts of carbomoylphosphonic acid esters.
  • the new compounds have the ability to selectively inhibit the production of human immunodeficiency virus (HIV), which suggests the possibility of their use in medicine for the treatment of AIDS.
  • HIV human immunodeficiency virus
  • Modified nucleosides are widely used for the treatment and prevention of many viral diseases.
  • An example of such a compound is the first Russian original anti-HIV drug - 5'H-phosphonate Z'-azido-Z'-deoxythymidine (Nikavir ® ). Being a latent form of Z'-azido-Z'-deoxythymidine, Nikavir ® has several advantages over it: it is less toxic for patients and has a narrower spectrum of side effects, its elimination time is twice as long, which reduces the frequency of administration and resistance to it is produced much more slowly and at a much lower level.
  • R is [(28.38.5K) -3-azido-5- (5-methyl-2,4-jsopyrimidin-1-yl) oxolan-2-yl] methyl
  • X is an alkali or alkaline earth metal ion, or an ammonium ion with different substituents, which are the same or different and are: hydrogen; natural ⁇ -amino acids and their esters; primary, secondary and tertiary amino acids and their esters of aliphatic, aromatic, carbocyclic and heterocyclic series; primary, secondary and tertiary amino alcohols of aliphatic, aromatic, carbocyclic and heterocyclic series; primary, secondary and tertiary amines and polyamines of aliphatic, aromatic, carbocyclic and heterocyclic series.
  • the claimed salts are not inferior in activity and toxicity to the acid form of [(28.38.5K) -3-azido-5- (5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl) oxolan-2-yl] carbomoylphosphonic acid methyl ester but at the same time surpass it in crystallization ability and stability.
  • new salts expand the range of compounds with inhibitory activity against HIV-1.
  • New substances are white crystalline substances, well soluble in water, sparingly soluble in alcohols, practically insoluble in chloroform.
  • a stability analysis of the obtained compounds was carried out in the form of 1% aqueous solutions at room temperature.
  • the acid form of the carbomoylphosphonic acid ester degrades by 40% in a month, the ammonium salt - by 2%, for the remaining salts, no degradation products were detected during the month.
  • the new compounds suppress the reproduction of the human immunodeficiency virus type 1 in the culture of transplantable MT-4 lymphocytes, protecting the cells from the cytopathogenic effect of the virus, and do not show toxicity to host cells, up to extremely high concentrations (table 1). From the obtained experimental data, it can be seen that the tested compounds, without exerting a toxic effect on the cells at effective concentrations (50% toxic doses are 2-4 orders of magnitude higher than 50% inhibitory doses), highly inhibit the reproduction of type 1 immunodeficiency virus in MT cell culture -four.
  • the therapeutic indices of the studied compounds (IS), defined as the ratio of the toxic dose of the drug to its effective dose, are comparable to those for the acid form of the carbomoylphosphonic acid ester. Virological tests are carried out in accordance with the previously described protocols.
  • the retention time on the Luna 100 C 2 column> 150x4.6 mm is 2.4 minutes.
  • mobile phase 0.05 M solution of ammonium acetate - acetonitrile in a volume ratio of 8: 1, column temperature 40 ° C, flow rate 1 ml / min).
  • Studies on the inhibition of HIV reproduction include the cultivation of primary infected lymphoid cells of the MT-4 line in the presence of the studied compounds, the final concentration of which in the culture medium is 0.001-100 ⁇ g / ml, over one passage for 4 days.
  • Inhibition of HIV reproduction in a culture of sensitive cells is determined by a decrease in the accumulation of the virus-specific protein p24 (according to enzyme-linked immunosorbent assay), as well as by an increase in cell viability in the presence of the drug compared to the control determined on the 4th day of cultivation when stained with 3- bromide (4, 5-dimethylthiazol-2-yl -) - 2,5-diphenyltetrazolium (MTT).
  • the cytotoxicity of the drug is assessed by adding dilution in serum-free RPMI-1640 medium to the MT-4 cell suspension, placed in the wells of a 96-well plate (Cel-Cult, England), to final concentrations of 0.001-100 ⁇ g / ml (three wells each dose), followed by cultivation at 37 ° C for 4 days.
  • the inoculum concentration is 0.5 x 10 6 cell particles per millimeter.
  • Cells are used as control without the addition of a drug, instead of which the same amount of serum free medium is added. Cell viability is counted on the 4th day of cultivation using the formazan method (intravital staining of MTT cells).
  • the toxicity of various doses of the drug is determined by the viability of the cells relative to the control, according to the data obtained, a dose-dependent curve is built and a concentration of 50% reducing cell viability (CD 5 o) is determined.
  • the studied compounds do not have toxic effects on MT-4 cells in effective concentrations. It should also be noted that 50% are toxic doses are 2-4 orders of magnitude higher than those effective for HIV-1 (table 1).
  • the therapeutic index or selectivity index (IS) is considered as the ratio of the 50% toxic concentration of the compound to its 50% effective dose (the results are presented in table 1). Based on these quantitative indicators of inhibition, one can judge the effectiveness of the antiviral effect of the claimed compounds, which consists in a high degree of suppression of HIV-1 replication in MT-4 cell culture, comparable to the efficiency of the acid form of carbomoylphosphonic acid ester.
  • new substances salts of carbomoylphosphonic acid esters — inhibit the propagation of HIV-1 in lymphocyte cell cultures, with approximately the same activity as was observed for the acid form of carbomoylphosphonic acid ester.
  • the toxicity of the claimed salts is also within the toxicity of the acid form of the carbomoylphosphonic acid ester.
  • new compounds are more stable, which facilitates the creation of dosage forms based on them.

Abstract

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины и касается новых биологически активных соединений, а именно солей эфиров карбомоилфосфоновой кислоты общей формулы, приведенной в описании. Новые соединения обладают способностью селективно ингибировать продукцию вируса иммунодефицита человека, что позволяет предполагать возможность их использования в медицине для лечения СПИДа. Их получение проводят добавлением к кислотной форме эфира карбомоилфосфоновой кислоты эквимолярного количества аммиака, соответствующего амино-соединения или гидроксида щелочного или щелочно-земельного металла. Образующиеся растворы солей упаривают до малых объемов, из которых начинается самопроизвольная кристаллизация и оставляют при 4°С до окончания кристаллизации, выпавшие осадки отфильтровывают и сушат в вакууме. Выход целевых соединений составляет 95-98%. Новые соединения ингибируют размножение ВИЧ-1 в культурах клеток лимфоцитов МТ-4 и являются стабильными веществами, что облегчает создание лекарственных форм на их основе.

Description

Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1.
Область техники
Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины и касается новых биологически активных соединений, а именно солей эфиров карбомоилфосфоновой кислоты. Новые соединения обладают способностью селективно ингибировать продукцию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), что позволяет предполагать возможность их использования в медицине для лечения СПИДа.
Предшествующий уровень техники
Модифицированные нуклеозиды широко применяются для лечения и профилактики многих вирусных заболеваний. Примером такого соединения является первый российский оригинальный анти-ВИЧ препарат - 5 -Н-фосфонат З'-азидо-З'-дезокситимидина (Никавир®). Будучи латентной формой З'-азидо-З'-дезокситимидина, Никавир® обладает рядом преимуществ над ним: он менее токсичен для пациентов и обладает более узким спектром побочных действий, его время выведения из организма вдвое больше, что позволяет снизить частоту приема и резистентность к нему вырабатывается гораздо медленнее и на значительно более низком уровне.
[(28,38,5К)-3-азидо-5-(5-метил-2,4-диоксопиримидин- 1 -ил)оксолан-2-ил]метиловый эфир карбомоилфосфоновой кислоты, как и Никавир®, является депо-формой З'-азидо-З'- дезокситимидина [RU 2322450 С2. Модифицированные 5'-фосфонаты АЗТ в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов; Ясько М.В., Шипицын А.В., Хандажинская А.Л. и др. //Новые производные алкил- и аминокарбонилфосфоновых кислот, содержащие З'-азидо-З'-дезокситимидин// Биоорганическая химия, 2006, 32(6), 603-608; Khandazhinskaya A.L, Yanvarev D.V., Jasko M.V. et al. //5'-Aminocarbonyl phosphonates as new zidovudine depot forms: antiviral properties, intracellular transformations, and pharmacokinetic parameters// Drug Metabolism and Disposition, 2009, 37(3), 494-501], однако создание лекарственной формы на его основе крайне затруднено из-за его нестабильности.
Раскрытие изобретения
Заявляемые соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты описываются общей формулой:
Figure imgf000004_0001
где R - [(28,38,5К)-3-азидо-5-(5-метил-2,4-джжсопиримидин-1- ил)оксолан-2-ил]метил; X - ион щелочного или щелочно-земельного металла, или ион аммония с различными заместителями, которые одинаковы или различны и представляют собой: водород; природные α-аминокислоты и их эфиры; первичные, вторичные и третичные аминокислоты и их эфиры алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов; первичные, вторичные и третичные аминоспирты алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов; первичные, вторичные и третичные амины и полиамины алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов.
Заявляемые соли по активности и токсичности не уступают кислотной форме [(28,38,5К)-3-азидо-5-(5-метил-2,4-диоксопиримидин-1-ил)оксолан-2- ил]метилового эфира карбомоилфосфоновой кислоты, но в то же время превосходят ее по способности к кристаллизации и стабильности. Кроме того, новые соли расширяют круг соединений, обладающей ингибирующей активностью в отношении ВИЧ-1.
Новые вещества представляют собой белые кристаллические вещества, хорошо растворимые в воде, ограниченно растворимые в спиртах, практически не растворимые в хлороформе.
Их получение проводят добавлением к кислотной форме эфира карбомоилфосфоновой кислоты эквимолярного количества аммиака, соответствующего амино-соединения или гидроксида щелочного или щелочно- земельного металла. Образующиеся растворы солей упаривают до малых объемов, из которых начинается самопроизвольная кристаллизация и оставляют при 4°С до окончания кристаллизации, выпавшие осадки отфильтровывают и сушат в вакууме. Выход целевых соединений составляет 95-98%.
Чистота и структура новых соединений подтверждены данными ВЭЖХ, УФ- и ЯМР -спектроскопии.
Был проведен анализ стабильности полученных соединений в виде 1% водных растворов при комнатной температуре. Кислая форма эфира карбомоилфосфоновой кислоты деградирует за месяц на 40%, аммонийная соль - на 2%, для остальных солей в течение месяца продуктов деструкции детектировано не было.
Новые соединения подавляют репродукцию вируса иммунодефицита человека 1-го типа в культуре перевиваемых лимфоцитов МТ-4, обеспечивая защиту клеток от цитопатогенного действия вируса, и не проявляют токсичности в отношении хозяйских клеток, вплоть до крайне высоких концентраций (таблица 1). Из полученных экспериментальных данных видно, что исследуемые соединения, не оказывая токсического действия на клетки в эффективных концентрациях (50% токсические дозы на 2-4 порядка превышают 50% ингибирующие дозы) в высокой степени подавляют репродукцию вируса иммунодефицита 1-го типа в культуре клеток МТ-4. Терапевтические индексы исследуемых соединений (IS), определяемые как отношение токсической дозы препарата к его эффективной дозе, сравнимы с таковыми для кислотной формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты. Вирусологические тесты проведены в соответствии с описанными ранее протоколами.
Лучшие варианты осуществления изобретения
Ниже приведены примеры, раскрывающие сущность изобретения.
Пример 1.
Синтез натриевой соли эфира карбомоилфосфоновой кислоты. К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 100 мл (0,5 моль) 5 Н раствора гидроксида натрия. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 100- 150 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 191 ,2 г (96,5%).
Время удерживания на колонке Luna 100 С г) 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8: 1 , температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λ 266,5 нм (ε 9800).
Ή-ЯМР (D20), м.д.: 7,56 (1Н, с, Н6), 6, 12 (1Н, т, J 6,7 Гц, НГ), 4,38 (1 Н, м, НЗ*), 4, 17 (ЗН, м, Η4', Н5'), 2,38 (2Н, т, J 6,2 Гц, Н2'), 1 ,79 (ЗН, с, 5-СН3).
3,Р-ЯМР (D20), м.д.: -1 ,42 (с).
Пример 2.
Синтез калиевой соли эфира карбомоилфосфоновой кислоты.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 100 мл (0,5 моль) 5 Н раствора гидроксида калия. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 100- 150 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 200,6 г (97,3%).
Время удерживания на колонке Luna 100 С г) 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8: 1 , температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λπ,3Χ 267,0 нм (ε 9600). Ή-ЯМР (D20), м.д.: 7,67 (Ш, с, H6), 6,21 (1H, т, J 6,6 Гц, HI'), 4,50 (Ш, м, Η3'), 4,19 (ЗН, м, Н4*, Н5*), 2,49 (2Н, т, J 6,6 Гц, Η2'), 1,91 (ЗН, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D20), м.д.: -1,59 (с).
Пример 3.
Синтез кальциевой соли эфира карбомоилфосфоновой кислоты.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 1000 мл (0,25 моль) 0,5 Н предварительно отфильтрованного раствора гидроксида кальция. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 200 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 192,9 г (98,1%).
Время удерживания на колонке Luna 100 С 2> 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λ™* 266,8 нм (ε 9400).
Ή-ЯМР (D20), м.д.: 7,59 (1Н, с, Н6), 6,15 (Ш, т, J 6,6 Гц, НГ), 4,41 (Ш, м, НЗ'), 4,10 (ЗН, м, Н4*, Н5'), 2,41 (2Н, т, J 5,9 Гц, Н2'), 1,82 (ЗН, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D20), м.д.: -1,59 (с).
Пример 4.
Синтез бариевой соли эфира карбомоилфосфоновой кислоты.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 1000 мл (0,25 моль) 0,5 Н предварительно отфильтрованного раствора гидроксида бария. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 300 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 216,3 г (97,9%).
Время удерживания на колонке Luna 100 Сщ2) 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λ™* 266,7 нм (ε 9400).
Ή-ЯМР (D20), м.д.: 7,65 (1Н, с, Н6), 6,20 (1Н, т, J 6,6 Гц, НГ), 4,47 (1Н, м, НЗ'), 4,16 (ЗН, м, Η4', Н5*), 2,46 (2Н, т, J 6,5 Гц, Н2'), 1,87 (ЗН, с, 5-СН3).
3,Р-ЯМР (D20), м.д.: -1,56 (с).
Пример 5.
Синтез аммониевой соли эфира карбомоилфосфоновой кислоты.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 100 мл (0,5 моль) 5 Н раствора аммиака. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 186,2 г (95,2%).
Время удерживания на колонке Luna 100 С 2) 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λ™χ 266,8 нм (ε 9650).
Ή-ЯМР (D20), м.д.: 7,65 (Ш, с, Н6), 6,20 (Ш, т, J 6,5 Гц, Н ), 4,46 (1Н, м, НЗ*), 4,16 (ЗН, м, Η4', Н5'), 2,46 (2Н, т, J 5,9 Гц, Н2'), 1,87 (ЗН, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D20), м.д.: -1,59 (с).
Пример 6.
Синтез соли L-аланина и эфира карбомоилфосфоновой кислоты. К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 200 мл (0,5 моль) 2,5 Н раствора L-аланина. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 221,5 г (95,8%).
Время удерживания на колонке Luna 100 Сщ2) 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λ,»Μ 266,8 нм (ε 9600).
Ή-ЯМР (D20), м.д.: 7,63 (Ш, с, Н6), 6,21 (1Н, т, J 6,7 Гц, НГ), 4,43 (Ш, м, НЗ'), 4,25 (1Н, кв, J 6,5 Гц, СН (аланин)), 4,10 (ЗН, м, Η4', Н5'), 2,45 (2Н, т, J 6,0 Гц, Н2'), 1,84 (ЗН, с, 5-СНз), 1,33 (ЗН, д, J 6,5 Гц, СН3 (аланин)).
31Р-ЯМР (D20), м.д.: -1,57 (с).
Пример 7.
Синтез этаноламмониевой соли эфира карбомоилфосфоновой кислоты.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 100 мл (0,5 моль) 5 Н раствора этаноламина. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 208,3 г (95,9%).
Время удерживания на колонке Luna 100 Сщ2 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин). УФ-спектр (вода): λ™» 266,8 нм (ε 9900).
Ή-ЯМР (D20), м.д.: 7,61 (1Н, с, H6), 6,17 (1Н, т, J 6,7 Гц, HI'), 4,48 (Ш, м, Η3'), 4,18 (ЗН, м, Η4', Н5*), 3,61 (2Η, τ, J 5,0 Гц, СН20 (этаноламин)), 3,19 (2Н, т, J 5,0 Гц, CH2N (этаноламин)), 2,45 (2Н, т, J 6,1 Гц, Н2'), 1,86 (ЗН, с, 5-СН3).
3,Р-ЯМР (D20), м.д.: -1,55 (с).
Пример 8.
Синтез триэтаноламмониевой соли эфира карбомоилфосфоновой кислоты.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 100 мл (0,5 моль) 5 Н раствора триэтаноламина. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 255,5 г (97,8%).
Время удерживания на колонке Luna 100 С 2) 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): таХ 266,9 нм (ε 9700).
Ή-ЯМР (D20), м.д.: 7,58 (Ш, с, Н6), 6,15 (1Н, т, J 6,5 Гц, НГ), 4,39 (1Н, м, НЗ'), 4,09 (ЗН, м, Н4*, Н5'), 3,88 (6Н, т, J 5,0 Гц, ЗСН20 (триэтаноламин)), 3,22 (6Н, т, J 5,0 Гц, 3CH2N (триэтаноламин)), 2,41 (2Н, т, J 6,0 Гц, Н2'), 1,80 (ЗН, с, 5-СНз).
31Р-ЯМР (D20), м.д.: -1,53 (с).
Пример 9.
Синтез соли 6-аминокапроновой кислоты и эфира карбомоилфосфоновой кислоты. К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 200 мл (0,5 моль) 2,5 Н раствора 6-аминокапроновой кислоты. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 232,7 г (94,9%).
Время удерживания на колонке Luna 100 СЩ2 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8: 1, температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λπ,3Χ 266,6 нм (ε 9900).
Ή-ЯМР (D20), м.д.: 7,64 (1Н, с, Н6), 6,20 (1Н, т, J 6,7 Гц, НГ), 4,46 (Ш, м, НЗ*), 4,46 (ЗН, м, Н4*, Н5'), 3,02 (2Н, т, J 7,1 Гц, CH2N (аминокапроновая кислота)), 2,45 (2Н, т, J 6,1 Гц, Н2'), 2,34 (2Н, т, J 7,1 Гц, СНЬСООН (аминокапроновая кислота)), 1,87 (ЗН, с, 5-СН3), 1,52 (6Н, м, ЗСН2 (аминокапроновая кислота)).
1Р-ЯМР (D20), м.д.: -1,57 (с).
Пример 10.
Синтез пиридоксиламмониевой соли эфира карбомоилфосфоновой кислоты.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 250 мл (0,5 моль) 2 Н раствора пиридоксиламина. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 261,2 г (96,5%). Время удерживания на колонке Luna 100 Сщ2) 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): тах 261 нм (ε 14100).
Ή-ЯМР (D20), м.д.: 8,08 (Ш, с, Аг (пиридоксиламин)), 7,65 (1Н, с, Н6),
6.20 (Ш, т, J 6,7 Гц, НГ), 4,84 (2Н, с, СЬЪОН (пиридоксиламин)), 4,48 (1Н, м, НЗ'), 4,21 (2Н, с, CH2NH2 (пиридоксиламин)), 4,09 (ЗН, м, Η4', Н5'), 2,77 (ЗН, с, СНз (пиридоксиламин)), 2,47 (2Н, т, J 6,1 Гц, Н2*), 1,89 (ЗН, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D20), м.д.: -1,51 (с).
Пример 11.
Синтез соли диметиламиноэтанола и эфира карбомоилфосфоновой кислоты.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°С и перемешивании в течение 20 мин. приливают 100 мл (0,5 моль) 5 Н раствора диметиламиноэтанола. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°С) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°С до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°С воды и сушат в вакууме. Выход: 221,2 г (95,7%).
Время удерживания на колонке Luna 100 С г) 150x4,6 мм - 2,4 мин. (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8: 1, температура колонки 40°С, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λπ,3χ 266,7 нм (ε 9800).
Ή-ЯМР (D20), м.д.: 7,67 (1Н, с, Н6), 6,24 (1Н, т, J 6,7 Гц, НГ), 4,49 (1Н, м, НЗ'), 4,18 (ЗН, м, Η4', Н5'), 3,93 (2Н, т, J 5,0 Гц, СН20 (диметиламиноэтанол)),
3.21 (2Н, т, J 5,0 Гц, CH2N (диметиламиноэтанол)), 2,51 (6Н, с, СН3 (диметиламиноэтанол)), 2,41 (2Н, м, Н2'), 1,89 (ЗН, с, 5-СНз).
31Р-ЯМР (D20), м.д.: -1,50 (с). Пример 12.
Исследования ингибирования репродукции ВИЧ включает культивирование первично инфицированных лимфоидных клеток линии МТ-4 в присутствии исследуемых соединений, конечные концентрации которых в культуральной среде составляют 0,001-100 мкг/мл, на протяжении одного пассажа - в течение 4 суток.
Ингибирование репродукции ВИЧ в культуре чувствительных клеток определяют по снижению накопления вирусспецифического белка р24 (по данным иммуноферментного анализа), а также по увеличению жизнеспособности клеток в присутствии препарата по сравнению с контролем, определяемому на 4-е сутки культивирования при окрашивании бромидом 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил-)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ).
Оценка цитотоксичности соединений.
Цитотоксичность препарата оценивают путем добавления его разведении в бессывороточной среде RPMI-1640 к клеточной суспензии МТ-4, помещенной в лунки 96-луночного планшета (Cel-Cult, England), до конечных концентраций 0,001-100 мкг/мл (по три лунки на каждую дозу) с последующим культивированием при 37°С в течение 4 суток. Посевная концентрация составляет 0,5x 106 клеточных частиц в миллиметре. Контролем служат клетки без добавления препарата, вместо которого вносят такое же количество бессывороточной среды. Жизнеспособность клеток подсчитывают на 4-е сутки культивирования, пользуясь формазановым методом (прижизненным окрашиванием клеток МТТ). Токсичность различных доз препарата определяют по жизнеспособности клеток относительно контроля, по полученным данным строят дозозависимую кривую и определяют концентрацию на 50% снижающую жизнеспособность клеток (CD5o). Исследуемые соединения не оказывают токсического действия на клетки МТ-4 в эффективных концентрациях. Следует также отметить, что 50% токсичные дозы на 2-4 порядка превышают эффективные в отношении ВИЧ-1 дозы (таблица 1).
Влияние исследуемых соединений на репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4 исследовано по известной методике.
Терапевтический индекс, или индекс селективности (IS), считают как отношение 50%-ной токсической концентрации соединения к его 50%-ной эффективной дозе (результаты представлены в таблице 1). На основании этих количественных показателей ингибирования можно судить об эффективности противовирусного действия заявляемых соединений, заключающейся в высокой степени подавления репликации ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4, сравнимой с эффективностью кислотной формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты.
Таблица 1. Противовирусная активность солей эфира карбомоилфосфоновой кислоты против ВИЧ-1 ГВК4046.
Figure imgf000014_0001
Промышленная применимость
Таким образом, новые вещества - соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты - ингибируют размножение ВИЧ-1 в культурах клеток лимфоцитов, причем примерно с той же активностью, с которой это наблюдалось и для кислотной формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты. Токсичность заявляемых солей также находится в пределах токсичности кислотной формы эфира карбомоилфосфоновой кислоты. В то же время новые соединения являются более стабильными, что облегчает создание лекарственных форм на их основе.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты общей формулы:
Figure imgf000016_0001
где R - [(28,38,5К)-3-азидо-5-(5-метил-2,4-диоксопиримидин-1- ил)оксолан-2-ил]метил; X - ион щелочного или щелочно-земельного металла, или ион аммония с различными заместителями, которые одинаковы или различны и представляют собой: водород; природные α-аминокислоты и их эфиры; первичные, вторичные и третичные аминокислоты и их эфиры алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов; первичные, вторичные и третичные аминоспирты алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов; первичные, вторичные и третичные амины и полиамины алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека ВИЧ- 1.
PCT/RU2011/000805 2011-10-14 2011-10-14 Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1 WO2013055252A1 (ru)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201180075377.8A CN104114570B (zh) 2011-10-14 2011-10-14 作为人免疫缺陷病毒hiv-1产生的选择性抑制剂的氨基甲酰基膦酸酯盐
KR1020147013013A KR101976231B1 (ko) 2011-10-14 2011-10-14 인간 면역결핍 바이러스 hiv-1 생산의 선별적인 저해제로서 작용하는 카르바모일 포스폰산 에스테르의 염
PCT/RU2011/000805 WO2013055252A1 (ru) 2011-10-14 2011-10-14 Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1
EP11874106.5A EP2767543B1 (en) 2011-10-14 2011-10-14 Salts of carbamoyl phosphonic acid esters which act as selective inhibitors of human immunodeficiency virus hiv-1 production
ES11874106.5T ES2650464T3 (es) 2011-10-14 2011-10-14 Sales de ésteres del ácido carbamoil-fosfónico que actúan como inhibidores selectivos de la producción del virus de la inmunodeficiencia humana VIH-1

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/RU2011/000805 WO2013055252A1 (ru) 2011-10-14 2011-10-14 Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013055252A1 true WO2013055252A1 (ru) 2013-04-18

Family

ID=48082151

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2011/000805 WO2013055252A1 (ru) 2011-10-14 2011-10-14 Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP2767543B1 (ru)
KR (1) KR101976231B1 (ru)
CN (1) CN104114570B (ru)
ES (1) ES2650464T3 (ru)
WO (1) WO2013055252A1 (ru)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2504078A1 (en) * 1991-07-05 1993-01-21 Wellstat Therapeutics Corporation Treatment of chemotherapeutic agent and antiviral agent toxicity with acylated pyrimidine nucleosides
RU2322450C2 (ru) 2004-11-25 2008-04-20 Закрытое акционерное общество "Производственно-коммерческая Ассоциация АЗТ" Модифицированные 5'-фосфонаты азт в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов
EA014685B1 (ru) * 2003-04-25 2010-12-30 Джилид Сайэнс, Инк. Фосфонатсодержащие антивирусные соединения (варианты) и фармацевтическая композиция на их основе

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0521622B1 (en) * 1991-07-03 1997-08-13 PHARMACIA & UPJOHN COMPANY Pyrazolopyrimidine and pyrimidinyl bisphosphonic esters as anti-inflammatories
CN101863919B (zh) * 2010-07-05 2011-11-23 武汉同源药业有限公司 一种化合物伊班膦酸钠的制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2504078A1 (en) * 1991-07-05 1993-01-21 Wellstat Therapeutics Corporation Treatment of chemotherapeutic agent and antiviral agent toxicity with acylated pyrimidine nucleosides
EA014685B1 (ru) * 2003-04-25 2010-12-30 Джилид Сайэнс, Инк. Фосфонатсодержащие антивирусные соединения (варианты) и фармацевтическая композиция на их основе
RU2322450C2 (ru) 2004-11-25 2008-04-20 Закрытое акционерное общество "Производственно-коммерческая Ассоциация АЗТ" Модифицированные 5'-фосфонаты азт в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A.L. KHANDAZHINSKAYA; D.V. YANVAREV; M.V. JASKO ET AL.: "5'-Aminocarbonyl phosphonates as new zidovudine depot forms: antiviral properties, intracellular transformations, and pharmacokinetic parameters", DRUG METABOLISM AND DISPOSITION, vol. 37, no. 3, 2009, pages 494 - 501, XP009124657, DOI: doi:10.1124/dmd.108.022269
M.V. IAS'KO; A.V. SHIPITSIN; A.L. KHANDAZHINSKAYA ET AL.: "New derivatives of alkyl- and aminocarbonylphosphonic acids containing 3'-azido-3'-deoxythymidine", BIOORG KHIM, vol. 32, no. 6, 2006, pages 603 - 608, XP019453946, DOI: doi:10.1134/S1068162006060069
See also references of EP2767543A4 *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2650464T3 (es) 2018-01-18
EP2767543A1 (en) 2014-08-20
CN104114570B (zh) 2016-08-31
EP2767543B1 (en) 2017-08-30
EP2767543A4 (en) 2015-04-01
KR20140112474A (ko) 2014-09-23
CN104114570A (zh) 2014-10-22
KR101976231B1 (ko) 2019-05-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102057751B1 (ko) 테노포비르 전구약물 및 그의 약학적 용도
WO2018009648A1 (en) Compounds, compositions, and methods for the treatment of disease
WO2008132138A1 (en) Derivatives of 4,6-disubstituted aminopyrimidines
ES2680146T3 (es) Hidrocloruro de rilpivirina
WO2014168523A4 (ru) Производные бисамидов дикарбоновых кислот, их применение, фармацевтическая композиция на их основе, способы их получения
RU2441016C1 (ru) Соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1
RU2166508C2 (ru) Фосфонолипиды карбоновых кислот и их соли и антивирусное средство на их основе
McGuigan et al. Phosphoramidates as potent prodrugs of anti-HIV nucleotides: studies in the amino region
WO2013055252A1 (ru) Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1
McGuigan et al. Novel nucleoside phosphoramidates as inhibitors of HIV: studies on the stereochemical requirements of the phosphoramidate amino acid
ES2710915T3 (es) Compuestos complejos de germanio, métodos para la producción de los mismos y fármacos
WO2006080463A1 (ja) ビタミンｋヒドロキノン誘導体を用いる癌治療剤および再発予防剤
RU2570113C1 (ru) N-(2-ацетамидопурин-6-ил)глицин, обладающий противотуберкулезной активностью
RU2207343C2 (ru) Замещенные аммониевые соли 5'-н-фосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1 и вич-2
RU2304145C1 (ru) Ди- и триникотинаты глицирризиновой кислоты и ингибитор репродукции вируса иммунодефицита человека
US7999099B2 (en) Modified 5′-phosphonate azidothymidine—potential anti-viral preparations
RU2692065C1 (ru) Глутатионаммониевые соли o,o-диорганилдитиофосфорных кислот, обладающие антиоксидантной и противоопухолевой активностью
Shirokova et al. New phosphonoformic acid derivatives of 3′-azido-3′-deoxythymidine
EP2340020B1 (en) Manganese and cobalt complexes, their preparation and use
JPH07504170A (ja) 抗ウイルス性活性を有するヒペリシン化合物のイオン対
AU2008335705A1 (en) Compounds and methods for the treatment of cancer
RU2239638C2 (ru) Фосфонатные производные ацикловира и способ их получения
Khandazhinskaya et al. New phosphonoformate and phosphonoacetate prodrugs of AZT and d4T
WO2008140345A1 (fr) Di- et/ou trinicotinates d'acide glycyrrhizique et inhibiteur de propagation du virus de l'immunodéficience humaine
WO2004111071A1 (fr) 5'-aminocarbonylphosphonates d4t utilises comme inhibiteurs de la reproduction du virus de l'immunodeficience humaine

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 11874106

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2011874106

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2011874106

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20147013013

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A