RU2441016C1 - Соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1 - Google Patents

Соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1 Download PDF

Info

Publication number
RU2441016C1
RU2441016C1 RU2010121533/04A RU2010121533A RU2441016C1 RU 2441016 C1 RU2441016 C1 RU 2441016C1 RU 2010121533/04 A RU2010121533/04 A RU 2010121533/04A RU 2010121533 A RU2010121533 A RU 2010121533A RU 2441016 C1 RU2441016 C1 RU 2441016C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
azido
deoxythymidine
aminocarbonylphosphonate
solution
salts
Prior art date
Application number
RU2010121533/04A
Other languages
English (en)
Inventor
Наталья Александровна Голубева (RU)
Наталья Александровна Голубева
Максим Владимирович Ясько (RU)
Максим Владимирович Ясько
Наталья Борисовна Тарусова (RU)
Наталья Борисовна Тарусова
Роберт Шалвович Бибилашвили (RU)
Роберт Шалвович Бибилашвили
Александр Васильевич Кононов (RU)
Александр Васильевич Кононов
Original Assignee
Закрытое акционерное общество "Производственно-коммерческая Ассоциация АЗТ"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Закрытое акционерное общество "Производственно-коммерческая Ассоциация АЗТ" filed Critical Закрытое акционерное общество "Производственно-коммерческая Ассоциация АЗТ"
Priority to RU2010121533/04A priority Critical patent/RU2441016C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2441016C1 publication Critical patent/RU2441016C1/ru

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к солям 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина с активностью против вируса ВИЧ-1 общей формулы
Figure 00000003
.
где R - ион щелочного или щелочно-земельного металла или ион аммония с различными заместителями. Технический результат - получение новых соединений, которые обладают способностью селективно ингибировать продукцию вируса иммунодефицита человека и являются стабильными веществами, что облегчает создание лекарственных форм на их основе. 1 табл.

Description

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины и касается новых биологически активных соединений, а именно солей 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина. Новые соединения обладают способностью селективно ингибировать продукцию вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), что позволяет предполагать возможность их использования в медицине для лечения СПИДа.
Модифицированные нуклеозиды широко применяются для лечения и профилактики многих вирусных заболеваний. Примером такого соединения является первый российский оригинальный анти-ВИЧ препарат - 5'-Н-фосфонат 3'-азидо-3'-дезокситимидина (Никавир®). Будучи латентной формой 3'-азидо-3'-дезокситимидина, Никавир® обладает рядом преимуществ над ним: он менее токсичен для пациентов и обладает более узким спектром побочных действий, его время выведения из организма вдвое больше, что позволяет снизить частоту приема, и, наконец, резистентность к нему вырабатывается гораздо медленнее и на значительно более низком уровне.
5'-Аминокарбонилфосфонат 3'-азидо-3'-дезокситимидина, как и Никавир®, является депо-формой 3'-азидо-3'-дезокситимидина [RU 2322450 C2. Модифицированные 5'-фосфонаты АЗТ в качестве активных компонентов для потенциальных противовирусных препаратов; Ясько М.В., Шипицын А.В., Хандажинская А.Л. и др. // Новые производные алкил- и аминокарбонилфосфоновых кислот, содержащие 3'-азидо-3'-дезокситимидин. // Биоорганическая химия, 2006, 32(6), 603-608; Khandazhinskaya A.L, Yanvarev D.V., Jasko M.V. et al. // 5'-Amino-carbonyl phosphonates as new zidovudine depot forms: antiviral properties, intracellular transformations, and pharmacokinetic parameters. // Drug Metabolism and Disposition, 2009, 37(3), 494-501], однако создание лекарственной формы на его основе крайне затруднено из-за его нестабильности.
Заявляемые соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина описываются общей формулой:
Figure 00000001
где R - ион щелочного или щелочно-земельного металла или ион аммония с различными заместителями, которые одинаковы или различны и представляют собой: водород; природные α-аминокислоты и их эфиры; первичные, вторичные и третичные аминокислоты и их эфиры алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов; первичные, вторичные и третичные аминоспирты алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов; первичные, вторичные и третичные амины и полиамины алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов.
Заявляемые соли по активности и токсичности не уступают кислотной форме 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, но в то же время превосходят ее по способности к кристаллизации и стабильности. Кроме того, новые соли расширяют круг соединений, обладающих ингибирующей активностью в отношении ВИЧ-1.
Новые вещества представляют собой белые кристаллические вещества, хорошо растворимые в воде, ограниченно растворимые в спиртах, практически не растворимые в хлороформе.
Их получение проводят добавлением к кислотной форме 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина эквимолярного количества аммиака, соответствующего амино-соединения или гидроксида щелочного или щелочно-земельного металла. Образующиеся растворы солей упаривают до малых объемов, из которых начинается самопроизвольная кристаллизация, и оставляют при 4°C до окончания кристаллизации, выпавшие осадки отфильтровывают и сушат в вакууме. Выход целевых соединений составляет 95-98%.
Чистота и структура новых соединений подтверждены данными ВЭЖХ, УФ- и ЯМР-спектроскопии.
Был проведен анализ стабильности полученных соединений в виде 1% водных растворов при комнатной температуре. Кислая форма 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина деградирует за месяц на 40%, аммонийная соль - на 2%, для остальных солей в течение месяца продуктов деструкции детектировано не было.
Новые соединения подавляют репродукцию вируса иммунодефицита человека 1-го типа в культуре перевиваемых лимфоцитов МТ-4, обеспечивая защиту клеток от цитопатогенного действия вируса, и не проявляют токсичности в отношении хозяйских клеток, вплоть до крайне высоких концентраций (таблица). Из полученных экспериментальных данных видно, что исследуемые соединения, не оказывая токсического действия на клетки в эффективных концентрациях (50% токсические дозы на 2-4 порядка превышают 50% ингибирующие дозы), в высокой степени подавляют репродукцию вируса иммунодефицита 1-го типа в культуре клеток МТ-4. Терапевтические индексы исследуемых соединений (IS), определяемые как отношение токсической дозы препарата к его эффективной дозе, сравнимы с таковыми для кислотной формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина. Вирусологические тесты проведены в соответствии с описанными ранее протоколами.
Ниже приведены примеры, раскрывающие сущность изобретения.
Пример 1.
Синтез натриевой соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 100 мл (0,5 моль) 5 Н раствора гидроксида натрия. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 191,2 г (96,5%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 266,5 нм (ε 9800).
1H-ЯМР (D2O), м.д.: 7,56 (1Н, с, Н6), 6,12 (1H, т, J 6,7 Гц, H1'), 4,38 (1Н, м, H3'), 4,17 (3H, м, Н4', Н5'), 2,38 (2Н, т, J 6,2 Гц, Н2'), 1,79 (3H, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: -1,42 (c).
Пример 2.
Синтез калиевой соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 100 мл (0,5 моль) 5 H раствора гидроксида калия. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 200,6 г (97,3%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 267,0 нм (ε 9600).
1H-ЯМР (D2O), м.д.: 7,67 (1Н, c, Н6), 6,21 (1Н, т, J 6,6 Гц, H1'), 4,50 (1Н, м, H3'), 4,19 (3H, м, Н4', Н5'), 2,49 (2Н, т, J 6,6 Гц, Н2'), 1,91 (3H, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: - 1,59 (c).
Пример 3.
Синтез кальциевой соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина. К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 1000 мл (0,25 моль) 0,5 Н предварительно отфильтрованного раствора гидроксида кальция. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 200 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 192,9 г (98,1%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 266,8 нм (ε 9400).
1H-ЯМР (D2O), м.д.: 7,59 (1Н, с, Н6), 6,15 (1H, т, J 6,6 Гц, H1'), 4,41 (1H, м, H3'), 4,10 (3H, м, Н4', Н5'), 2,41 (2Н, т, J 5,9 Гц, Н2'), 1,82 (3H, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: -1,59 (c).
Пример 4.
Синтез бариевой соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 1000 мл (0,25 моль) 0,5 Н предварительно отфильтрованного раствора гидроксида бария. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 300 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 216,3 г (97,9%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 266,7 нм (ε 9400).
1H-ЯМР (D2O), м.д.: 7,65 (1Н, с, Н6), 6,20 (1H, т, J 6,6 Гц, H1'), 4,47 (1Н, м, H3'), 4,16 (3H, м, Н4', Н5'), 2,46 (2Н, т, J 6,5 Гц, Н2'), 1,87 (3H, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: -1,56 (c).
Пример 5.
Синтез аммониевой соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 100 мл (0,5 моль) 5 H раствора аммиака. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 186,2 г (95,2%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 266,8 нм (ε 9650).
1H-ЯМР (D2O), м.д.: 7,65 (1H, с, Н6), 6,20 (1H, т, J 6,5 Гц, H1'), 4,46 (1H, м, H3'), 4,16 (3H, м, Н4', Н5'), 2,46 (2Н, т, J 5,9 Гц, Н2'), 1,87 (3H, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: -1,59 (c).
Пример 6.
Синтез соли L-аланина и 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 200 мл (0,5 моль) 2,5 Н раствора L-аланина. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 221,5 г (95,8%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 266,8 нм (ε 9600).
1H-ЯМР (D2O), м.д.: 7,63 (1H, с, Н6), 6,21 (1Н, т, J 6,7 Гц, H1'), 4,43 (1H, м, H3'), 4,25 (1Н, кв, J 6,5 Гц, СН (аланин)), 4,10 (3H, м, Н4', Н5'), 2,45 (2Н, т, J 6,0 Гц, Н2'), 1,84 (3H, с, 5-СН3), 1,33 (3H, д, J 6,5 Гц, СН3 (аланин)).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: -1,57 (c).
Пример 7.
Синтез этаноламмониевой соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 100 мл (0,5 моль) 5 Н раствора этаноламина. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 208,3 г (95,9%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 266,8 нм (ε 9900).
1H-ЯМР (D2O), м.д.: 7,61 (1H, с, Н6), 6,17 (1Н, т, J 6,7 Гц, H1'), 4,48 (1H, м, H3'), 4,18 (3H, м, Н4', Н5'), 3,61 (2Н, т, J 5,0 Гц, CH2O (этаноламин)), 3,19 (2Н, т, J 5,0 Гц, CH2N (этаноламин)), 2,45 (2Н, т, J 6,1 Гц, Н2'), 1,86 (3H, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: -1,55 (c).
Пример 8.
Синтез триэтаноламмониевой соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 100 мл (0,5 моль) 5 Н раствора триэтаноламина. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 255,5 г (97,8%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 266,9 нм (ε 9700).
1H-ЯМР (D2O), м.д.: 7,58 (1Н, с, Н6), 6,15 (1Н, т, J 6,5 Гц, H1'), 4,39 (1H, м, H3'), 4,09 (3H, м, Н4', Н5'), 3,88 (6Н, т, J 5,0 Гц, 3CH2O (триэтаноламин)), 3,22 (6Н, т, J 5,0 Гц, 3CH2N (триэтаноламин)), 2,41 (2Н, т, J 6,0 Гц, Н2'), 1,80 (3H, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: -1,53 (c).
Пример 9.
Синтез соли 6-аминокапроновой кислоты и 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 200 мл (0,5 моль) 2,5 H раствора 6-аминокапроновой кислоты. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 232,7 г (94,9%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 266,6 нм (ε 9900).
1H-ЯМР (D20), м.д.: 7,64 (1Н, с, Н6), 6,20 (1Н, т, J 6,7 Гц, H1'), 4,46 (1H, м, H3'), 4,46 (3H, м, Н4', Н5'), 3,02 (2Н, т, J 7,1 Гц, CH2N (аминокапроновая кислота)), 2,45 (2Н, т, J 6,1 Гц, Н2'), 2,34 (2Н, т, J 7,1 Гц, CH 2COOH (аминокапроновая кислота)), 1,87 (3H, с, 5-СН3), 1,52 (6Н, м, 3CH2 (аминокапроновая кислота)).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: -1,57 (c).
Пример 10.
Синтез пиридоксиламмониевой соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 250 мл (0,5 моль) 2 Н раствора пиридоксиламина. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 261,2 г (96,5%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 261 нм (ε 14100).
1H-ЯМР (D2O), м.д.: 8,08 (1Н, с, Ar (пиридоксиламин)), 7,65 (1Н, c, Н6), 6,20 (1Н, т, J 6,7 Гц, H1'), 4,84 (2Н, с, CH 2OH (пиридоксиламин)), 4,48 (1H, м, H3'), 4,21 (2Н, с, CH 2NH2 (пиридоксиламин)), 4,09 (3H, м, Н4', Н5'), 2,77 (3H, с, СН3 (пиридоксиламин)), 2,47 (2Н, т, J 6,1 Гц, Н2'), 1,89 (3H, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: -1,51 (c).
Пример 11.
Синтез соли диметиламиноэтанола и 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
К раствору 187 г (0,5 моль) кислой формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина в 350 мл дистиллированной воды при температуре 4°C и перемешивании в течение 20 мин приливают 100 мл (0,5 моль) 5 Н раствора диметиламиноэтанола. Образовавшийся раствор упаривают на роторном испарителе (температура бани 40°C) до объема 100-150 мл и оставляют при температуре 4°C до окончания кристаллизации. Выпавший мелкокристаллический осадок отделяют на стеклянном фильтре, промывают 20 мл охлажденной до 4°C воды и сушат в вакууме. Выход: 221,2 г (95,7%).
Время удерживания на колонке Luna 100 C18(2) 150×4,6 мм - 2,4 мин (подвижная фаза: 0,05 М раствор ацетата аммония - ацетонитрил в объемном соотношении 8:1, температура колонки 40°C, скорость потока 1 мл/мин).
УФ-спектр (вода): λmax 266,7 нм (ε 9800).
1H-ЯМР (D2O), м.д.: 7,67 (1Н, с, Н6), 6,24 (1Н, т, J 6,7 Гц, H1'), 4,49 (1H, м, H3'), 4,18 (3H, м, Н4', Н5'), 3,93 (2Н, т, J 5,0 Гц, CH2O (диметиламиноэтанол)), 3,21 (2Н, т, J 5,0 Гц, CH2N (диметиламиноэтанол)), 2,51 (6Н, с, СН3 (диметиламиноэтанол)), 2,41 (2Н, м, Н2'), 1,89 (3H, с, 5-СН3).
31Р-ЯМР (D2O), м.д.: -1,50 (c).
Пример 12.
Исследования ингибирования репродукции ВИЧ включает культивирование первично инфицированных лимфоидных клеток линии МТ-4 в присутствии исследуемых соединений, конечные концентрации которых в культуральной среде составляют 0,001-100 мкг/мл, на протяжении одного пассажа - в течение 4 суток.
Ингибирование репродукции ВИЧ в культуре чувствительных клеток определяют по снижению накопления вирусспецифического белка р24 (по данным иммуноферментного анализа), а также по увеличению жизнеспособности клеток в присутствии препарата по сравнению с контролем, определяемому на 4-е сутки культивирования при окрашивании бромидом 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил-)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ).
Оценка цитотоксичности соединений.
Цитотоксичность препарата оценивают путем добавления его разведения в бессывороточной среде RPMI-1640 к клеточной суспензии МТ-4, помещенной в лунки 96-луночного планшета (Cel-Cult, England), до конечных концентраций 0,001-100 мкг/мл (по три лунки на каждую дозу) с последующим культивированием при 37°C в течение 4 суток. Посевная концентрация составляет 0,5×106 клеточных частиц в миллиметре. Контролем служат клетки без добавления препарата, вместо которого вносят такое же количество бессывороточной среды. Жизнеспособность клеток подсчитывают на 4-е сутки культивирования, пользуясь формазановым методом (прижизненным окрашиванием клеток МТТ). Токсичность различных доз препарата определяют по жизнеспособности клеток относительно контроля, по полученным данным строят дозозависимую кривую и определяют концентрацию, на 50% снижающую жизнеспособность клеток (CD50). Исследуемые соединения не оказывают токсического действия на клетки МТ-4 в эффективных концентрациях. Следует также отметить, что 50% токсичные дозы на 2-4 порядка превышают эффективные в отношении ВИЧ-1 дозы (таблица 1).
Влияние исследуемых соединений на репродукцию ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4 исследовано по известной методике.
Терапевтический индекс, или индекс селективности (IS), считают как отношение 50%-ной токсической концентрации соединения к его 50%-ной эффективной дозе (результаты представлены в таблице). На основании этих количественных показателей ингибирования можно судить об эффективности противовирусного действия заявляемых соединений, заключающейся в высокой степени подавления репликации ВИЧ-1 в культуре клеток МТ-4, сравнимой с эффективностью кислотной формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина.
 
Противовирусная активность солей 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина против ВИЧ-1 ГВК4046
Соединение CD50, µM ID50, µM IS
R=Na 2,7 1,2 2250
R=K 2,5 0,9 2778
R=Ca 1,9 1 1900
R=Ва 3,5 1,3 2692
R=NH4 2,7 0,8 3375
R=NH2CH(CH3)COOH 2,9 0,9 3222
R=NH2CH2CH2OH 2,8 1,1 2545
R=N(CH2CH2OH)3 3 0,9 3333
R=NH2(CH2)5COOH 3,2 0,8 4000
R=пиридоксиламин 2,1 1 2100
R=N(CH3)2CH2CH2OH 2,7 0,9 3000
Кислая форма (контроль) 2,6 0,8 3250
Таким образом, новые вещества - соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина - ингибируют размножение ВИЧ-1 в культурах клеток лимфоцитов, причем примерно с той же активностью, с которой это наблюдалось и для кислотной формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина. Токсичность заявляемых солей 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина также находится в пределах токсичности кислотной формы 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина. В то же время новые соединения являются более стабильными, что облегчает создание лекарственных форм на их основе.

Claims (1)

  1. Соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина общей формулы:
    Figure 00000002
    ,
    где R - ион щелочного или щелочно-земельного металла или ион аммония с различными заместителями, которые одинаковы или различны и представляют собой: водород; природные α-аминокислоты и их эфиры; первичные, вторичные и третичные аминокислоты и их эфиры алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов; первичные, вторичные и третичные аминоспирты алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов; первичные, вторичные и третичные амины и полиамины алифатического, ароматического, карбоциклического и гетероциклического рядов, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1.
RU2010121533/04A 2010-05-28 2010-05-28 Соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1 RU2441016C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010121533/04A RU2441016C1 (ru) 2010-05-28 2010-05-28 Соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010121533/04A RU2441016C1 (ru) 2010-05-28 2010-05-28 Соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2441016C1 true RU2441016C1 (ru) 2012-01-27

Family

ID=45786456

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2010121533/04A RU2441016C1 (ru) 2010-05-28 2010-05-28 Соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2441016C1 (ru)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014092604A1 (ru) * 2012-12-11 2014-06-19 Petrov Sergei Yurievich Способ получения моноэтаноламиновых солей фосфоновых кислот
RU2726210C2 (ru) * 2018-12-27 2020-07-09 Общество С Ограниченной Ответственностью "Пролонгированные Лекарства" Комбинация противовирусных средств, набор и способ лечения на ее основе
RU2753518C1 (ru) * 2020-12-24 2021-08-17 Богдан Витальевич Бровченко Состав, обладающий антиретровирусной активностью, фармацевтическая композиция и лекарственное средство
RU2806172C1 (ru) * 2020-12-24 2023-10-27 Общество с ограниченной ответственностью "АЗТ Фарма К.Б." Состав, обладающий антиретровирусной активностью, фармацевтическая композиция и лекарственное средство

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ЯСЬКО М.В. и др. Биоорганическая химия, 2006, 32(6), 603-608. KHANDAZHINSKAYA A.L. ET AL, Drug Metabolism and Disposition, 2009, 37(3), 494-501. *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014092604A1 (ru) * 2012-12-11 2014-06-19 Petrov Sergei Yurievich Способ получения моноэтаноламиновых солей фосфоновых кислот
RU2529194C2 (ru) * 2012-12-11 2014-09-27 Сергей Юрьевич Петров Способ получения моноэтаноламиновых солей фосфоновых кислот
RU2726210C2 (ru) * 2018-12-27 2020-07-09 Общество С Ограниченной Ответственностью "Пролонгированные Лекарства" Комбинация противовирусных средств, набор и способ лечения на ее основе
WO2020139163A3 (ru) * 2018-12-27 2020-08-27 Общество С Ограниченной Ответственностью "Пролонгированные Лекарства" Комбинация противовирусных средств
RU2753518C1 (ru) * 2020-12-24 2021-08-17 Богдан Витальевич Бровченко Состав, обладающий антиретровирусной активностью, фармацевтическая композиция и лекарственное средство
RU2806172C1 (ru) * 2020-12-24 2023-10-27 Общество с ограниченной ответственностью "АЗТ Фарма К.Б." Состав, обладающий антиретровирусной активностью, фармацевтическая композиция и лекарственное средство

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20150046315A (ko) 테노포비르 전구약물 및 그의 약학적 용도
NO154751B (no) Analogifremgangsmaate for fremstilling av terapeutisk virksomme hydroksykarbonylfosfonsyreestere.
US20150051387A1 (en) Water soluble platinum complexes for tumor treatment and process of preparing same
RU2441016C1 (ru) Соли 5'-аминокарбонилфосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1
CN103347849B (zh) 富勒烯с60的均聚氨基酸和杂多氨基酸衍生物、其制备方法和基于该衍生物的药物组合物
McGuigan et al. Novel nucleoside phosphoramidates as inhibitors of HIV: studies on the stereochemical requirements of the phosphoramidate amino acid
RU2106353C1 (ru) Соли 5'-н-фосфоната 3'- азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся специфическими ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1 и вич-2
EP2851368B1 (en) Complex compounds of germanium, methods for producing same, and drugs
WO2013055252A1 (ru) Соли эфиров карбомоилфосфоновой кислоты, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1
RU2277908C1 (ru) Водорастворимое средство, обладающее противовирусной активностью, на основе соединения серебра с цистином и способ его получения
AU2012212707B2 (en) Homo- and hetero-polyamino-acid derivatives of fullerene C60, method for producing same, and pharmaceutical compositions based on said derivatives
CN101844811B (zh) 抗肝炎病毒的铌钨酸盐化合物
US10307424B2 (en) Drug with hepatoprotective activity
RU2207343C2 (ru) Замещенные аммониевые соли 5'-н-фосфоната 3'-азидо-3'-дезокситимидина, являющиеся селективными ингибиторами продукции вируса иммунодефицита человека вич-1 и вич-2
RU2118532C1 (ru) Противоинфекционное, противовоспалительное и противоопухолевое лекарственное средство
CN112225779B (zh) Arg(NO2)-Gly-Asp-Val-吉西他滨,其合成,抗肿瘤活性和应用
RU2570113C1 (ru) N-(2-ацетамидопурин-6-ил)глицин, обладающий противотуберкулезной активностью
JPH01501478A (ja) ９―置換グアニン
RU2751632C1 (ru) Комплексное соединение 5-гидрокси-6-метилурацила с N-ацетилцистеином, проявляющее антигипоксическую активность, и способ его получения
RU2692065C1 (ru) Глутатионаммониевые соли o,o-диорганилдитиофосфорных кислот, обладающие антиоксидантной и противоопухолевой активностью
JPH07504170A (ja) 抗ウイルス性活性を有するヒペリシン化合物のイオン対
RU2304145C1 (ru) Ди- и триникотинаты глицирризиновой кислоты и ингибитор репродукции вируса иммунодефицита человека
RU2199547C2 (ru) Амид глицирризиновой кислоты с 5-аминоурацилом, проявляющий анти-вич активность
EP0762878A1 (en) Use of a naphthalenesulfonic acid compound for inhibiting retroviral infection
WO2005026171A1 (fr) Substance manifestant une activite antivirale et antibacterienne sur la base des derives de 2,8-dithioxo-1h-pyrano-[2,3-d; 6,5-d'] dipyrimidine et ses analogues 10-aza

Legal Events

Date Code Title Description
PD4A Correction of name of patent owner
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20180426