WO2012099238A1 - 脂肪分解促進組成物 - Google Patents

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WO2012099238A1
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lipolysis
lactoferrin
promoting
composition
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鈴木 則行
倫明 村越
知二 小野
央子 藤崎
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ライオン株式会社
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    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Definitions

  • the present invention relates to a lipolysis-promoting composition.
  • Non-patent Document 1 catechins
  • Non-Patent Document 2 polyphenols
  • Patent Document 1 describes that a combination of lactoferrin and a blood circulation promoter exhibits an effect of reducing visceral fat by suppressing fat accumulation.
  • An object of the present invention is to provide a composition containing lactoferrin and other components, which has a remarkable visceral lipolysis promoting effect.
  • the present invention provides the following inventions.
  • a lipolysis-promoting composition comprising at least one component selected from the group consisting of: [2] The lipolysis-promoting composition according to [1], which is a food, feed or pharmaceutical product.
  • (A) Lactoferrin, (B) Davillia extract, raspberry ketone, artichoke leaf extract, rosemary extract, isoflavone, grape seed extract, pine bark extract, Coleus forskori extract, and cacao extract A method of adding one or more components selected from the group consisting of: to a food or feed and imparting a lipolysis promoting effect to the food or feed.
  • (A) Lactoferrin, (B) Davillia extract, raspberry ketone, artichoke leaf extract, rosemary extract, isoflavone, grape seed extract, pine bark extract, Coleus forskori extract, and cacao extract A method for promoting lipolysis of a subject by applying to the subject a lipolysis-promoting composition containing at least one component selected from the group consisting of: [5] The method for promoting lipolysis according to [4], wherein the lipolysis-promoting composition is orally administered. [6] The method for promoting lipolysis according to [5] above, wherein the lipolysis-promoting composition is in the form of food, feed or a pharmaceutical product.
  • composition for promoting lipid degradation of the present invention exhibits a synergistic effect of the component (A) and the component (B), and has an unexpected significant lipolysis promoting effect from the effects of each component alone.
  • the lipolysis promotion composition of this invention contains the following components (A) and a component (B).
  • lactoferrin selected from the group consisting of raspberry ketone, artichoke leaf extract, cacao extract, grape seed extract, pine bark extract, coleus forskohlii extract, dabilia extract, rosemary extract and isoflavone
  • Component (A) is lactoferrin.
  • lactoferrin examples are as follows: commercially available lactoferrin; mammals (eg humans, cows, sheep, goats, horses, etc.) colostrum, transitional milk, normal milk, end milk, etc., or processed products of these milks Lactoferrin separated from skim milk, whey, etc. by conventional methods (for example, ion exchange chromatography); lactoferrin produced from plants (tomato, rice, tobacco); lactoferrin obtained by genetic recombination. Lactoferrin may be a commercially available product or may be prepared and used by a known method.
  • Lactoferrin may be used alone or in combination of two or more.
  • lactoferrin bovine-derived lactoferrin is preferable.
  • the compounding amount of component (A) in the composition of the present invention is usually 5 mg to 5,000 mg / day, desirably 50 mg to 1,000 mg / day, and more desirably as the daily human intake. is 100mg ⁇ 500mg / day. By being in this range, a lipolysis-promoting composition having a significantly excellent lipolysis-promoting effect can be obtained. In addition, there is no problem in terms of cost and safety of the composition.
  • Ingredient (B) is selected from the group consisting of dabilia extract, raspberry ketone, artichoke leaf extract, rosemary extract, isoflavone, grape seed extract, pine bark extract, coleus forskori extract, and cacao extract. it is one or more of the components.
  • Davilia extract is a Davilia extract.
  • Durvillea is a seaweed belonging to the genus Durvilleaceae and Durvillea, and Durvillea antarctica, Durvillea potatorum, Durvillea villana, etc. are called Bull kelp.
  • the Davilia extract may be an extract from the whole or a part of the Daviglia plant.
  • the conditions for preparing the extract are not particularly limited, and the solvent is preferably a solvent containing an alcohol, more preferably a solvent having an alcohol / water ratio of 0/100 to 70/30 (V / V: volume ratio), More preferably, the alcohol / water is a solvent of 0/100 to 40/60.
  • the extraction temperature is not particularly limited, but is usually 5 to 80 ° C., preferably 5 to 50 ° C.
  • the extraction time is usually 1 to 24 hours.
  • the extraction is preferably carried out with stirring.
  • the extraction pH is not particularly limited as long as it is not extremely acidic or alkaline.
  • Raspberry ketone is 4- (4-hydroxyphenyl) -2-butanone and / or p-hydroxybenzylacetone. Raspberry ketone is one of the scented components of raspberry. Raspberry ketones may be derived from natural products such as plants (eg, raspberries) belonging to the genus Rosaiaceae (eg, raspberries), or artificial products by chemical synthesis, etc. Also good.
  • raspberry ketones derived from natural products include plant extracts of plants belonging to the genus Rubus, Rubus (hereinafter referred to as raspberry extract).
  • raspberry extract As a plant belonging to the genus Rosaiaceae, raspberry is preferably mentioned.
  • Raspberry (English: rasberry, French: framboise) is the scientific name of Rubus Idaeus L. Rubus strigosus, taxonomically equivalent to the subgenus Idaeobatus.
  • the plant body extraction site for obtaining the raspberry extract may be either the whole or a part of the plant body, and is preferably a shrub, fruit or the like. Preparation conditions such as extraction solvent and extraction temperature are not particularly limited.
  • the degree of purification of the raspberry extract is not particularly limited as long as it contains raspberry ketone.
  • the artichoke leaf extract is an extract of the leaf of artichoke (scientific name Cynara school of L. (Compositae)).
  • the artichoke leaf extract may be an extract from any or all of the leaves.
  • the conditions for preparing the extract are not particularly limited, and the solvent is preferably alcohol and more preferably ethanol.
  • Artichoke leaf extract includes synaropicrin (2- (hydroxymethyl) propenoic acid [(3aR, 6a ⁇ , 9a ⁇ , 9b ⁇ ) -dodecahydro-8 ⁇ -hydroxy-3,6,9-trismethylene-2-oxoazuleno [4,5 -B] furan] -4 ⁇ -yl), and its content is usually about 0.7% by weight.
  • Rosemary extract Rosemary extract is an extract of rosemary. Rosemary, also known as Mannenrou, has the scientific name Rosmarinus officinalis L. It is an evergreen shrub belonging to the family Lamiaceae.
  • the rosemary extract may be an extract from any or all of the rosemary plant.
  • the conditions for preparing the extract are not particularly limited, and the solvent is preferably water, alcohol, or a combination thereof, and more preferably a combination of water and ethanol.
  • Isoflavone is 3-phenylchromone (3-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one).
  • the isoflavone is preferably an aglycone (isoflavone aglycone) obtained by separating sugar from the glycoside form.
  • the isoflavone may be derived from a natural product or an artificial product by chemical synthesis or the like.
  • Examples of isoflavones derived from natural products include soy extract, among which fermented soy extract (hereinafter referred to as fermented soy extract) is preferable.
  • Fermented soybeans are obtained by allowing microorganisms to act on soybeans and fermenting them. Fermentation can be carried out under conditions optimal for fermentation of the fungus by adding a fungus (eg, koji mold) to soybean.
  • the conditions for preparing the fermented soybean extract are not particularly limited, and examples of the solvent include alcohol.
  • the fermented soybean extract usually contains 30 to 40% by mass of isoflavones.
  • a grape seed extract is an extract of grape seeds (Vitaceae vine shrub).
  • the extraction target of the extract is seeds.
  • the conditions for preparing the grape seed extract are not particularly limited, and the solvent is preferably water or alcohol.
  • grape seeds are preferably extracted with water at an extraction temperature range of 70 ° C. or higher (preferably 80 to 120 ° C., more preferably 80 to 100 ° C.).
  • the grape seed extract contains proanthocyanidins, and its content is usually about 38% by mass.
  • pine bark extract is an extract of the bark of a pine (Pinus plant).
  • An example of a pine is Pinus Radiata.
  • the preparation conditions of the extract are not particularly limited, but water is preferred as the solvent.
  • Pine bark extracts include proanthocyanidins, catechins, flavonoids and the like.
  • Coleus forskohlii extract is an extract of Coleus forskohlii plant.
  • Coleus forskohlii is a perennial plant belonging to the genus Coleus belonging to the family Lamiaceae, and its scientific name is Coleus Forskohlii, Coleus barbatus, Plectranthus Barbatus.
  • the Coleus forskohlii extract may be an extract from any or all of the plants of Coleus forskohlii.
  • the conditions for preparing the extract are not particularly limited.
  • the Coleus forskori extract contains forskolin, a type of diterpene.
  • the cacao extract is an extract of cacao (Aoguiridae cacao, scientific name: Theobroma cacao).
  • the cocoa extract may be an extract from the whole or a part of the cocoa plant, but examples of the extraction site include fruits (cocoa pods) and seeds. More preferably, it is a leather (cacao husk).
  • the outer shell means the skin around the cocoa beans (seed) wrapped in white pulpy pulp in the fruit.
  • the conditions for preparing the cocoa extract are not particularly limited, but the solvent is preferably alcohol, and more preferably water-containing ethanol (eg, ethanol containing 50 to 80% by volume of water-containing ethanol).
  • the cacao extract contains theobromine (3,7-dimethylxanthine), and its content is usually 10% by mass. Further, the cocoa extract contains polyphenol, and the content thereof is usually about 20% by mass. Further, phenylethylamine (2-phenylethylamine) and ⁇ -aminobutyric acid are also contained in the cocoa extract.
  • Ingredient (B) is selected from the group consisting of dabilia extract, raspberry ketone, artichoke leaf extract, rosemary extract, isoflavone, grape seed extract, pine bark extract, coleus forskori extract, and cacao extract. It may be one or more types, and may be a combination of two or more types. In the case of two or more kinds, a combination containing one or more kinds selected from the group selected from the Coleus forskohlii extract, the dalbilia extract and the rosemary extract is preferable.
  • More preferred combinations are as follows: a combination of Coleus forskori extract and dalbilia extract; a combination of coleus forskori extract and rosemary extract; a combination of davillea extract and rosemary extract; ⁇ Combination of forskori extract, dabilia extract and rosemary extract.
  • the blending amount of component (B) is usually 0.01 mg to 50 g / day, desirably 0.1 mg to 10 g / day, more desirably 1 mg to 1 as the daily human intake. , it is 000mg / day. By being in this range, a lipolysis-promoting composition having a significantly excellent lipolysis-promoting effect can be obtained. In addition, there is no problem in terms of cost and safety of the composition. In addition, when using 2 or more types of components (B), the total compounding quantity of 2 or more types is a compounding quantity of the said component (B).
  • the blending ratio of component (A) to component (B) is usually 10: 1 to 1:10, preferably 5: 1 to 1: 5, more preferably as human intake per day. 3: 1 to 1: 3. By being in this range, a lipolysis-promoting composition having a significantly excellent lipolysis-promoting effect can be obtained.
  • the lipolysis-promoting composition of the present invention accelerates fat degradation.
  • “facilitating fat degradation” means that the degree (rate, amount, etc.) of fat degradation in the living body is increased more than usual.
  • the lipolysis-promoting composition of the present invention promotes the degradation of fat
  • a sample is added to preadipocytes prepared from rat mesenteric tissue, and glycerol is quantified.
  • glycerol is quantified.
  • a commercially available kit such as F-kit glycerol (manufactured by Roche, product number: 14820) may be used.
  • F-kit glycerol manufactured by Roche, product number: 14820
  • the subject of the lipolysis promoting composition of the present invention is not particularly limited. Useful for humans or non-human vertebrates.
  • the health condition of the target human or non-human vertebrate is not particularly limited. For example, it is suitable for subjects who feel obese, subjects who want to lose weight, and subjects who want to prevent lifestyle-related diseases such as hypertension, hyperglycemia and hyperlipidemia. Even subjects who do not have any particular problems can be ingested on a daily basis for the purpose of promoting lipolysis.
  • a pharmaceutically acceptable carrier can be added to the lipolysis promoting composition of the present invention.
  • the pharmaceutically acceptable carrier include an oily component, a lubricant, an excipient, a binder, a disintegrant, and a coating agent.
  • oil component examples include various fatty acid esters, hydrocarbons, higher fatty acids, higher alcohols and the like.
  • examples of the lubricant include magnesium stearate, stearic acid, sodium stearyl fumarate, sucrose fatty acid ester, polyethylene glycol (macrogol), talc and the like.
  • binders hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, methylcellulose, gelatin, starch, dextrin, gum arabic, sodium alginate, tragacanth, purified gelatin, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, methylcellulose, polyvinyl alcohol (partially saponified product), ethylcellulose, Examples include pullulan and polyethylene glycol (macrogol).
  • Disintegrants include carboxymethylcellulose calcium (carmellose calcium), carboxymethylcellulose sodium (carmellose sodium), low-substituted hydroxypropylcellulose, carboxymethylcellulose, carboxymethylstarch sodium, crosslinked carboxymethylcellulose sodium (croscarmellose sodium), Examples thereof include powdered cellulose, cellulose or derivatives thereof, cross-linked polyvinyl pyrrolidone (crospopidone), starch, carboxymethyl starch, hydroxypropyl starch, agar and the like.
  • Excipients include the following compounds: Polysaccharides such as crystalline cellulose, sodium alginate, xanthan gum; Starches such as pregelatinized starch, hydroxypropyl starch, corn starch, potato starch and derivatives thereof; Sugars and sugar alcohols such as sucrose, glucose, xylitol, erythritol, sorbitol, lactitol, trehalose, palatinose, palatinit (reduced palatinose), mannitol, maltitol, lactitol, lactose, fructose, powdered reduced maltose varicella; Cellulose such as powdered cellulose, partially pregelatinized starch, ethylcellulose and derivatives thereof; Light anhydrous silicic acid, titanium oxide, aluminum hydroxide gel, synthetic aluminum silicate, aluminum trisilicate, silicon dioxide, kaolin, cocoa butter, citric acid or its salt, stearic acid or its salt, calcium hydrogen phosphate
  • sweeteners include aspartame, acesulfame potassium, saccharin sodium, sucralose, stevia, thaumatin and the like.
  • sour agent include citric acid, succinic acid, tartaric acid, malic acid, fumaric acid and the like.
  • flavoring agent include monoterpenes such as menthol, camphor, borneol, limonene, and various fragrances.
  • the dosage form of the lipolysis promoting composition of the present invention is not particularly limited.
  • oral administration for example, oral administration, sublingual administration, etc.
  • parenteral administration intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, transdermal administration, nasal administration, pulmonary administration, etc.
  • a less invasive dosage form is preferable, and oral administration is more preferable.
  • the dosage form of the lipolysis-promoting composition of the present invention is not particularly limited, and can be appropriately selected depending on the dosage form.
  • dosage forms for oral administration include liquid (liquid), syrup (syrup) tablets (tablets, etc.), capsules (capsules), powders (granules, fine granules), soft capsules (soft capsules) Agent), liquid (liquid), syrup (syrup), solid, semi-liquid, cream, paste and the like.
  • the method for producing the lipolysis-promoting composition is not particularly limited, and can be appropriately selected according to the dosage form.
  • the dosage form is a tablet
  • the resulting mixture is compression-molded to obtain a tablet, and the tablet obtained after compression molding as described above.
  • a method of coating with an enteric component (method of enteric solvent), and the latter method is preferred.
  • the enteric component include shellac, hydroxymethylcellulose phthalate, carboxymethylcellulose, aminoalkyl methacrylate copolymer, brewer's yeast cell wall (for example, trade name yeast wrap), tapioca starch, gelatin, pectin, etc. Among them, shellac is preferable. Whether or not it is an enteric solvent can be confirmed by the 14th Japanese Pharmacopoeia Disintegration Test Method.
  • the lipolysis-promoting composition of the present invention exhibits an excellent promoting effect on fat degradation. Therefore, it is effective for the prevention and treatment of obesity. According to the lipolysis-promoting composition of the present invention, the visceral fat reduction effect can be expected, so that the prevention and treatment of lifestyle-related diseases such as hypertension, hyperglycemia, and hyperlipidemia can be efficiently achieved. It is.
  • the administration method in the case of oral administration depends on conditions such as the concentration of each component (A) and (B), the dosage form, the age, weight, sex, and exercise load of the subject. it can be appropriately determined.
  • the dosage form is a tablet, it is preferably taken with water or the like.
  • the administration interval can be determined as appropriate, and may be any time before a meal, after a meal, or between meals.
  • compositions of the present invention In addition to administration of the lipolysis-promoting composition of the present invention, administration of one or more other lipolysis-promoting agents or compositions may be combined.
  • a composition including one or more other components having a lipolysis-promoting effect may be used. .
  • Fat degradation can be promoted by providing a lipolysis-promoting composition to humans or non-human vertebrates. Therefore, the lipolysis promoter of the present invention is also useful as a medicine, quasi drug, food, and feed.
  • the food is usually processed food, such as beverages (soft drinks, carbonated drinks, nutrition drinks, powdered drinks, fruit drinks, milk drinks, jelly drinks, etc.), confectionery (cookies, cakes, gums, candies, tablets, Gummy, Wharf, Sheep, Pudding, Jelly, Ice Cream, Sherbet, etc.), Seafood Products (Kamaboko, Chikuwa, Hanpen etc.), Livestock Products (Hamburg, Ham, Sausage, Wiener, Cheese, Butter, Yogurt, Fresh Cream, Cheese, margarine, fermented milk, etc.) soup (powder soup, liquid soup, etc.), staple foods (rice, noodles (dried noodles, raw noodles), bread, cereals, etc.), seasonings (mayonnaise, shortening, dressing, sauce) , Sauce, soy sauce, etc.).
  • beverages soft drinks, carbonated drinks, nutrition drinks, powdered drinks, fruit drinks, milk drinks, jelly drinks, etc.
  • confectionery cookies, cakes, gums, candies, tablets, G
  • the lipolysis promoter of the present invention includes, for example, health foods, functional foods, health functional foods, foods for specified health use, nutritional functional foods, nutritional supplements (supplements), medical foods, foods for the sick, infants Foods for nursing, foods for nursing care, foods for elderly people, etc. may be used.
  • the intake time of the food containing the lipolysis promoting composition is not particularly limited. For example, it can be taken before and after a meal or before and after exercise.
  • the effect of the present invention In the case of food, it is preferable to display the effect of the present invention.
  • an indication of the effect of the present invention for example, an indication that it is used for promoting the decomposition of fat can be mentioned.
  • the lipolysis-promoting composition of the present invention promotes the degradation of fat in the body by being administered to humans as a food and ingested. Therefore, the food of the present invention is useful as various foods for obesity prevention, weight loss, lifestyle-related disease prevention and the like.
  • composition for promoting lipolysis of the present invention is also useful as a feed because it can be expected to promote the degradation of fat in the body even when administered to vertebrates other than humans (for example, pets).
  • the lipolysis promoting composition of the present invention by adding the components (A) and (B) of the lipolysis promoting composition of the present invention to normal food or feed, the effect of promoting lipolysis can be imparted to the food or feed.
  • Tissue was cut with an ophthalmic scissor (25 cuts per 1 g of tissue), and a PBS solution to which 1 mg / mL collagenase (Collagenase S-1 derived from actinomycetes, Nitta Gelatin Co., Ltd.) was added at 37 ° C.
  • the tissue was dispersed with stirring every few minutes for 40 minutes.
  • one tissue was treated with 20 mL collagenase solution.
  • DMEM Dulbecco's Modified Eagle's Medium-high glucose, Sigma, D5796
  • DMEM Dulbecco's Modified Eagle's Medium-high glucose, Sigma, D5796
  • Centrifugation was performed at 800 rpm for 10 minutes.
  • Each precipitate was suspended in 5 mL DMEM (serum-free) and centrifuged at 800 rpm for 15 minutes to remove the supernatant.
  • the obtained precipitate was gently suspended in 5 mL of a visceral fat differentiation medium (Viscal Adipocyte Culture Medium 250 mL, manufactured by Primary Cell, code: VACMR). As a result of 10-fold dilution and counting the number of cells, the concentration was 1.015 ⁇ 10 7 cells / mL. From one rat, 2.54 ⁇ 10 7 cells could be recovered.
  • the culture was started at 500 ⁇ L / well in each medium so as to be 6 ⁇ 10 6 cells / 24 well. On the next day, 500 ⁇ L of the medium was added, and the medium was changed every two days. Thereafter, the medium was changed every other day, and the medium was changed to a medium containing various samples 6 days after the start. The culture supernatant was collected 48 hours after the addition, and the culture was terminated. All cultures were visually confirmed to be non-cytotoxic.
  • lactoferrin concentration of lactoferrin was adjusted to 30 ppm and 10 ppm, and used as a sample for independent evaluation at each concentration (Comparative Experimental Example 1). Each component other than lactoferrin was used as a sample for independent evaluation as described below. In addition, each component other than lactoferrin and lactoferrin were mixed at the following concentrations, and used as samples for composite evaluation (Experimental Examples 1 to 9 and Comparative Experimental Examples 2 to 4).
  • Glycerol was quantified using F-kit glycerol (Roche, product number: 14820). Absorbance was measured with Novaspec Plus (Amersham Bioscience). 1.0 mL of solution I dissolved in 11 mL of distilled water, 2.0 mL of distilled water, 0.1 mL of each sample described above, and 0.01 mL of solution II were added. The mixture was mixed well and allowed to react at room temperature for 5 minutes, and the absorbance (E1) of AB340 mm was measured. Thereto was added 0.01 mL of Solution III and mixed well. The mixture was reacted at room temperature for 7 minutes, and the absorbance (E2) was measured. Standard used the standard solution attached to the kit.
  • the glycerol concentration was calculated according to the following calculation formula 1 according to the attached instruction manual.
  • the relative value (%) of the amount of glycerol in each experimental example and comparative example when the amount of glycerol in the non-addition group was 0% was calculated, and the relative value was expressed as a lipolysis acceleration rate.
  • Table 1-1 single evaluation
  • Table 1-2 combination evaluation (combination with 30 ppm lactoferrin)
  • Table 1-3 combination evaluation (10 ppm lactoferrin) for each experimental example and comparative experimental example shown in combination
  • the lipolysis promotion rate 12.1% (Table 1-1) in the independent evaluation of 10 ppm of lactoferrin in Comparative Experimental Example 1 (Table 1-1) and the lipolysis promotion rate 0% in the single evaluation of 10 ppm of isoflavone in Comparative Example 9 were added.
  • the rate of acceleration of lipolysis was 32% in the composite evaluation of Experimental Example 9 (isoflavone 10 ppm + lactoferrin 10 ppm: Table 1-3).
  • raspberry ketone (Experimental Example 1) and pine bark extract (Experimental Example 5) each independently inhibit lipolysis at 10 ppm alone, but when combined with 10 ppm of lactoferrin, It showed an unexpected degradation promoting effect superior to that of lactoferrin 10 ppm alone (Table 1-3).
  • the lipolysis acceleration rate of Experimental Examples 10 to 13 is significantly higher than the value obtained by adding the lipolysis acceleration rate (see Table 1-1) in the individual evaluation of each component constituting each Experimental Example. It was.
  • the lipolysis promotion rates of Comparative Experimental Examples 5 to 7 were lower than the numerical value obtained by adding the lipolysis promotion rates (see Table 1-1) in the individual evaluation of each component constituting each experimental example.

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Abstract

 本発明は、ラクトフェリンを他の成分と組み合わせてなる組成物であって、顕著な内臓脂肪分解促進効果を有する組成物を提供することを目的とする。すなわち、本発明は、(A)ラクトフェリンと、(B)ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる1種以上の成分とを含有する脂肪分解促進組成物;食品、飼料又は医薬品である、前記脂肪分解促進組成物;前記成分(A)と成分(B)とを食品又は飼料に添加して、食品又は飼料に脂肪分解促進効果を付与する方法を提供する。

Description

脂肪分解促進組成物
 本発明は、脂肪分解促進組成物に関する。
 現代社会では栄養摂取量が慢性的に多く、さらに慢性的な運動不足等で体内に脂肪を蓄積する傾向にある。内臓脂肪は、高血圧、高血糖、高脂血症などのリスクを高める悪玉のアディポサイトカインを分泌する組織である。よって、内臓脂肪を無理なく減らす機能を有する素材の開発が進められている。係る素材としては、例えば、運動と共に摂取することで効果を発揮するカテキン類(非特許文献1)、脂肪の吸収を抑制するポリフェノール類(非特許文献2)等の報告がある。
 特許文献1には、ラクトフェリンと血行促進剤との組み合わせが、脂肪の蓄積を抑制することで内臓脂肪を低減する効果を発揮することが記載されている。
特開2008-69121号公報
International Journal of Obesity(2002)26,1459-1464 薬理と治療 32(6),335-342(2004)
 しかし、上記従来のラクトフェリンと血行促進剤との組み合わせによる内臓脂肪低減効果は、十分とはいえなかった。
 本発明は、ラクトフェリンと他の成分とを含有する組成物であって、顕著な内臓脂肪分解促進効果を有する組成物を提供することを目的とする。
 本発明は、以下の発明を提供する。
〔1〕(A)ラクトフェリンと、(B)ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる1種以上の成分とを含有する脂肪分解促進組成物。
〔2〕食品、飼料又は医薬品である、上記〔1〕に記載の脂肪分解促進組成物。
〔3〕(A)ラクトフェリンと、(B)ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる1種以上の成分とを食品又は飼料に添加して、食品又は飼料に脂肪分解促進効果を付与する方法。
 本発明は、以下の態様であってもよい。
〔4〕(A)ラクトフェリンと、(B)ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる1種以上の成分とを含有する脂肪分解促進組成物を被験者に適用して、被験者の脂肪分解を促進する方法。
〔5〕前記脂肪分解促進組成物が経口投与される、上記〔4〕に記載の脂肪分解促進方法。
〔6〕前記脂肪分解促進組成物が食品、飼料又は医薬品の形態である、上記〔5〕に記載の脂肪分解促進方法。
 本発明の脂質分解促進組成物は、成分(A)と成分(B)の相乗効果が発揮され、各成分単独の効果からは予想外の顕著な脂肪分解促進作用を有する。
 本発明の脂肪分解促進組成物は、以下の成分(A)と成分(B)を含む。
 (A)ラクトフェリン
 (B)ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、カカオ抽出物、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、ダービリア抽出物、ローズマリー抽出物及びイソフラボンからなる群より選ばれる1種以上の成分
 成分(A)はラクトフェリンである。ラクトフェリンの例は以下の通りである;市販のラクトフェリン;哺乳類(例えば人、牛、羊、山羊、馬等)の初乳、移行乳、常乳、末期乳等又はこれらの乳の処理物である脱脂乳、ホエー等から、常法(例えば、イオン交換クロマトグラフィー)により分離したラクトフェリン;植物(トマト、イネ、タバコ)から生産されたラクトフェリン;遺伝子組み換えによって得られたラクトフェリン。ラクトフェリンは、市販品を使用してもよいし、公知の方法により調製して使用してもよい。
 ラクトフェリンは1種単独で用いてもよいし、2種以上を適宜組み合わせて用いてもよい。ラクトフェリンとしては、牛由来のラクトフェリンが好ましい。
 本発明の組成物における成分(A)の配合量は、1日あたりのヒトの摂取量として、通常5mg~5,000mg/dayであり、望ましくは50mg~1,000mg/dayであり、更に望ましくは100mg~500mg/dayである。この範囲であることにより、脂肪分解促進効果が顕著に優れた脂肪分解促進組成物が得られる。また、該組成物のコスト、安全性等の面でも問題がない。
 成分(B)は、ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる1種以上の成分である。
(B-1)ダービリア抽出物
 ダービリア抽出物は、ダービリアの抽出物である。ダービリアは、ダービリア科(Durvilleaceae)ダービリア属(Durvillea)に属する海藻であり、Durvillea antarctica、Durvillea potatorum、Durvillea willanaなどはBull kelpと呼ばれる。ダービリア抽出物は、ダービリアの植物体の全体及び一部のいずれからの抽出物であってもよい。抽出物の調製条件は特に限定されず、溶媒としては、アルコールを含む溶媒が好ましく、アルコール/水が0/100~70/30(V/V:体積比)の溶媒であることがより好ましく、アルコール/水が0/100~40/60の溶媒であることが更に好ましい。抽出温度は、特に制限はないが、通常5~80℃、好ましくは5~50℃である。抽出時間は、通常1~24時間である。抽出は撹拌しながら行なうのが好ましい。抽出pHは、極端な酸性、アルカリ性に傾かなければ特に制限はない。
(B-2)ラズベリーケトン
 ラズベリーケトンは、4-(4-ヒドロキシフェニル)-2-ブタノン及び/又はp-ヒドロキシベンジルアセトンである。ラズベリーケトンは、ラズベリーの香り成分の一つである。ラズベリーケトンは、バラ科キイチゴ属に属する植物(例:ラズベリー)の植物体(例:低木、果実)等の天然物に由来していてもよいし、化学合成等による人工的な製造物であってもよい。
 天然物に由来するラズベリーケトンとしては、例えば、バラ科キイチゴ属(Rubus)に属する植物の植物体の抽出物(以下、ラズベリー抽出物という)が挙げられる。バラ科キイチゴ属に属する植物としては、ラズベリーが好ましく挙げられる。ラズベリー(英語:raspberry、フランス語:framboise(フランボワーズ))は、学名Rubus idaeus L.、Rubus strigosusであり、分類学的には亜属Idaeobatusに相当する。ラズベリー抽出物を得る際の植物体の抽出部位は、植物体の全体及び一部のいずれであってもよく、低木、果実などが好ましい。抽出溶媒、抽出温度などの調製条件は特に限定されない。ラズベリー抽出物の精製度は、ラズベリーケトンを含んでいれば特に限定されない。
(B-3)アーティチョーク葉抽出物
 アーティチョーク葉抽出物は、アーティチョーク(学名Cynara scolymus L.(Compositae))の葉の抽出物である。アーティチョーク葉抽出物は、葉の一部及び全部のいずれからの抽出物であってもよい。抽出物の調製条件は特に限定されず、溶媒としては、アルコールが好ましく、エタノールがより好ましい。
 アーティチョーク葉抽出物には、シナロピクリン(2-(ヒドロキシメチル)プロペン酸[(3aR,6aβ,9aβ,9bα)-ドデカヒドロ-8α-ヒドロキシ-3,6,9-トリスメチレン-2-オキソアズレノ[4,5-b]フラン]-4β-イル)が含まれており、その含有量は、通常約0.7質量%である。
(B-4)ローズマリー抽出物
 ローズマリー抽出物は、ローズマリーの抽出物である。ローズマリーは、マンネンロウともいい、学名をRosmarinus officinalis L.といい、シソ科に属する常緑性低木である。ローズマリー抽出物は、ローズマリーの植物体の全体及び一部のいずれからの抽出物であってもよい。抽出物の調製条件は特に限定されず、溶媒としては、水、アルコール又はこれらの組み合わせが好ましく、水とエタノールの組み合わせがより好ましい。
(B-5)イソフラボン
 イソフラボンは、3-フェニルクロモン(3-フェニル-4H-1-ベンゾピラン-4-オン)である。イソフラボンは、グリコシドの形態から糖を分離して得られるアグリコン(イソフラボンアグリコン)であることが好ましい。イソフラボンは、天然物に由来していてもよいし、化学合成等による人工的な製造物であってもよい。
 天然物に由来するイソフラボンとしては、例えば、大豆の抽出物が挙げられ、中でも、発酵大豆の抽出物(以下、発酵大豆抽出物という)が好ましい。発酵大豆は、大豆に微生物を作用させて発酵させて得られる。発酵は、大豆に菌(例えば麹菌)を添加してその菌の発酵に最適な条件にて進めることができる。発酵大豆の抽出物の調製条件は、特に限定されず、溶媒としては、例えばアルコールが挙げられる。発酵大豆の抽出物は、イソフラボンを通常30~40質量%含有する。
(B-6)ブドウ種子抽出物
 ブドウ種子抽出物は、ブドウ(ブドウ科(Vitaceae)のつる性低木)の種子の抽出物である。抽出物の抽出対象は、種子である。ブドウ種子抽出物の調製条件は特に限定されず、溶媒としては、水、アルコールが好ましい。溶媒として水を用いる場合には、ブドウの種子を水にて70℃以上(好ましくは80~120℃、より好ましくは80~100℃)の抽出温度範囲で抽出することが好ましい。ブドウ種子抽出物には、プロアントシアニジンが含まれ、その含有量は、通常約38質量%である。
(B-7)松樹皮抽出物
 松樹皮抽出物は、松(マツ属(Pinus)の植物)の樹皮の抽出物である。松としては、パイナス・ラジアタ(Pinus Radiata)が例示される。抽出物の調製条件は特に限定されないが、溶媒としては水が好ましい。松樹皮抽出物には、プロアントシアニジン、カテキン、フラボノイド等が含まれる。
(B-8)コレウス・フォルスコリ抽出物
 コレウス・フォルスコリ抽出物は、コレウス・フォルスコリの植物体の抽出物である。コレウス・フォルスコリは、シソ科コレウス属の多年草で、学名はColeus Forskohlii,Coleus barbatus,Plectranthus Barbatusである。コレウス・フォルスコリ抽出物は、コレウス・フォルスコリの植物体の全体及び一部のいずれからの抽出物であってもよい。抽出物の調製条件は特に限定されない。コレウス・フォルスコリ抽出物には、ジテルペンの一種であるフォルスコリンが含まれる。
(B-9)カカオ抽出物
 カカオ抽出物は、カカオ(アオギリ科カカオ、学名をTheobroma cacao)の抽出物である。カカオ抽出物は、カカオの植物体の全体及び一部のいずれからの抽出物であってもよいが、抽出部位としては例えば、果実(カカオポッド)、種子が挙げられ、種子が好ましく、外殻皮(カカオハスク)であることがより好ましい。外殻皮とは、果実の中の白いパルプ質の果肉に包まれたカカオ豆(種子)の周りの皮を意味する。カカオ抽出物の調製条件は特に限定されないが、溶媒としてはアルコールが好ましく、含水エタノール(例:エタノール50~80容量%の含水エタノール)がより好ましい。
 カカオ抽出物には、テオブロミン(3,7-ジメチルキサンチン)が含まれており、その含有量は、通常10質量%である。また、カカオ抽出物には、ポリフェノールが含まれており、その含有量は通常約20質量%である。さらに、フェニルエチルアミン(2-フェニルエチルアミン)及びγ-アミノ酪酸も、カカオ抽出物に含まれている。
 成分(B)は、ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる1種以上であればよく、2種以上の組み合わせであってもよい。2種以上の場合には、コレウス・フォルスコリ抽出物、ダービリア抽出物及びローズマリー抽出物から選ばれる群の1種又は2種以上を含む組み合わせが好ましい。より好ましい組み合わせは以下の通りである:コレウス・フォルスコリ抽出物とダービリア抽出物との組み合わせ;コレウス・フォルスコリ抽出物とローズマリー抽出物との組み合わせ;ダービリア抽出物とローズマリー抽出物との組み合わせ;コレウス・フォルスコリ抽出物とダービリア抽出物とローズマリー抽出物との組み合わせ。
 成分(B)の配合量は、1日あたりのヒトの摂取量として、通常0.01mg~50g/dayであり、望ましくは、0.1mg~10g/dayであり、更に望ましくは、1mg~1,000mg/dayである。この範囲であることにより、脂肪分解促進効果が顕著に優れた脂肪分解促進組成物が得られる。また、該組成物のコスト、安全性等の面でも問題がない。なお、成分(B)を2種類以上用いる場合、2種類以上の合計の配合量が上記成分(B)の配合量である。
 成分(A)と成分(B)の配合比は、1日あたりのヒトの摂取量として、通常10:1~1:10であり、望ましくは5:1~1:5であり、更に望ましくは3:1~1:3である。この範囲であることにより、脂肪分解促進効果が顕著に優れた脂肪分解促進組成物が得られる。
 本発明の脂肪分解促進組成物は、脂肪の分解を促進する。本発明において脂肪の分解を促進する、とは、生体における脂肪の分解の程度(速度、量など)が通常よりも増加することを意味する。
 本発明の脂肪分解促進組成物が脂肪の分解を促進することの確認は、例えば、実施例のようにして行うことができる。すなわち、ラット腸間膜組織から調製した前駆脂肪細胞に対して試料を添加し、グリセロールを定量する。定量にはF-キット グリセロール(ロシュ社製、製品番号:14820)等の市販キットを用いてもよい。得られるグリセロールの量が試料を添加しなかった場合のグリセロールの量と比較して多い場合には、脂肪の分解を促進したことが確認できる。
 本発明の脂肪分解促進組成物の対象は特には限定されない。ヒト又はヒト以外の脊椎動物に対し有用である。対象であるヒト又はヒト以外の脊椎動物の健康状態についても特に問わない。例えば、肥満気味と感じている対象者、減量を希望している対象者、高血圧、高血糖、高脂血症などの生活習慣病の予防を希望している対象者に適している。特段の問題のない対象者であっても脂肪分解促進を目的として日常的に摂取することができる。
 本発明の脂肪分解促進組成物には、有効成分としての上記成分(A)及び(B)のほかに、薬学的に許容される担体が配合され得る。薬学的に許容される担体としては、例えば油性成分、滑沢剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤などが挙げられる。また、甘味剤、酸味剤、香味剤、着色剤、色素、発色剤、矯味剤、酸化防止剤、防腐剤、呈味剤、強化剤、ビタミン剤、膨張剤、増粘剤、界面活性剤等の添加物を適宜、適量含有してもよい。
 油性成分としては、各種脂肪酸エステル、炭化水素、高級脂肪酸、高級アルコール等が例示される。滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウム、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール(マクロゴール)、タルク等が例示される。
 結合剤としては、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ゼラチン、デンプン、デキストリン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、トラガント、精製ゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ポリビニルアルコール(部分けん化物)、エチルセルロース、プルラン、ポリエチレングリコール(マクロゴール)等が例示される。
 崩壊剤としては、カルボキシメチルセルロースカルシウム(カルメロースカルシウム)、カルボキシメチルセルロースナトリウム(カルメロースナトリウム)、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋型カルボキシメチルセルロースナトリウム(クロスカルメロースナトリウム)、粉末セルロース、セルロース又はその誘導体、架橋型ポリビニルピロリドン(クロスポピドン)、デンプン、カルボキシメチルスターチ、ヒドロキシプロピルスターチ、寒天等が例示される。
 賦形剤としては、下記の化合物が例示される:
 結晶セルロース、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム等の多糖類;
 α化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、コーンスターチ、ポテトスターチ等のスターチ及びその誘導体;
 ショ糖、グルコース、キシリトール、エリスリトール、ソルビトール、ラクチトール、トレハロース、パラチノース、パラチニット(還元パラチノース)、マンニトール、マルチトール、ラクチトール、乳糖、果糖、粉末還元麦芽糖水飴等の糖類及び糖アルコール類;
 粉末セルロース、部分α化デンプン、エチルセルロース等のセルロース及びその誘導体;
 軽質無水ケイ酸、酸化チタン、水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、三ケイ酸アルミニウム、二酸化ケイ素、カオリン、カカオ脂、クエン酸又はその塩、ステアリン酸又はその塩、リン酸水素カルシウム、リン酸水素ナトリウム。
 甘味料としては、アスパルテーム、アセスルファムカリウム、サッカリンナトリウム、スクラロース、ステビア、ソーマチン等が例示される。酸味料としては、クエン酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸等が例示される。香味剤としては、メントール、カンフル、ボルネオール、リモネン等のモノテルペン類、各種香料等が例示される。
 本発明の脂肪分解促進組成物の投与形態は特に限定されない。例えば、経口投与(例えば、口腔内投与、舌下投与など)、非経口投与(静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、経皮投与、経鼻投与、経肺投与など)などが挙げられる。これらの中でも侵襲性の少ない投与形態が好ましく、経口投与であることがより好ましい。
 本発明の脂肪分解促進組成物の剤型は、特に限定されず、投与形態に応じて適宜選択され得る。経口投与される際の剤形の例としては、液状(液剤)、シロップ状(シロップ剤)錠剤(タブレットなど)、カプセル状(カプセル剤)、粉末状(顆粒、細粒)、ソフトカプセル状(ソフトカプセル剤)、液状(液剤)、シロップ状(シロップ剤)、固形状、半液体状、クリーム状、ペースト状等が挙げられる。
 脂肪分解促進組成物の製造方法は、特に限定されず、剤型に合わせて適宜選択され得る。例えば剤型がタブレットの場合、ラクトフェリン及び必要に応じて配合され得る任意の成分を混合した後、得られる混合物を圧縮成形してタブレットを得る方法、さらに上記のように圧縮成形後に得られるタブレットを腸溶性成分によりコーティングする方法(腸溶剤とする方法)、が挙げられ、後者の方法が好ましい。腸溶性成分としては、シェラック、ヒドロキシメチルセルロースフタレート、カルボキシメチルセルロース、アミノアルキルメタアクリレートコポリマー、ビール酵母細胞壁(例えば、商品名イーストラップなど)、タピオカデンプン、ゼラチン、ペクチン等が挙げられ、中でもシェラックが好ましい。なお、腸溶剤であるか否かは、第14改正日本薬局方 崩壊試験法により確認可能である。
 本発明の脂肪分解促進組成物は、脂肪の分解に対し優れた促進効果を示す。よって、肥満の予防、治療のために有効である。本発明の脂肪分解促進組成物によれば、内臓脂肪の減少効果が期待できるので、高血圧、高血糖、高脂血症などの生活習慣病の予防、治療を効率的に図ることができると期待される。
 経口投与の場合の投与方法は、成分(A)及び(B)の各配合濃度、剤型、投与対象者の年齢、体重、性別、運動前に服用する場合には運動の負荷などの条件により適宜定めることができる。例えば剤型がタブレットの場合、水等と一緒に服用することが好ましい。投与間隔は適宜定めることができ、食事の前、食事の後、及び食間のいずれであってもよい。
 なお、本発明の脂肪分解促進組成物の投与の他に、1種又は2種以上の他の脂肪分解促進剤又は組成物の投与を組み合わせてもよい。或いは、本発明の脂肪分解促進組成物として、成分(A)及び(B)の組み合わせ以外に、他の脂肪分解促進効果を有する成分を1種又は2種以上含めた形の組成物としてもよい。
 ヒト又はヒト以外の脊椎動物に対して脂肪分解促進組成物を与えることにより、脂肪の分解が促進され得る。よって本発明の脂肪分解促進剤は医薬、医薬部外品、食品、飼料としても有用である。
 食品は、通常は加工食品であり、例えば、飲料(清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、粉末飲料、果実飲料、乳飲料、ゼリー飲料など)、菓子類(クッキー、ケーキ、ガム、キャンディー、タブレット、グミ、饅頭、羊羹、プリン、ゼリー、アイスクリーム、シャーベットなど)、水産加工品(かまぼこ、ちくわ、はんぺんなど)、畜産加工品(ハンバーグ、ハム、ソーセージ、ウィンナー、チーズ、バター、ヨーグルト、生クリーム、チーズ、マーガリン、発酵乳など)、スープ(粉末状スープ、液状スープなど)、主食類(ご飯類、麺(乾麺、生麺)、パン、シリアルなど)、調味料(マヨネーズ、ショートニング、ドレッシング、ソース、たれ、しょうゆなど)が挙げられる。更に、本発明の脂肪分解促進剤は、例えば、健康食品、機能性食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、栄養補助食品(サプリメント)、医療用食品、病者用食品、乳児用食品、介護用食品、高齢者用食品等であってもよい。
 ここで、脂肪分解促進組成物を含む食品の摂取時期は、特には限定されない。例えば、食事の前後に摂取することもできるし、運動の前後に摂取することもできる。
 食品とする場合には、本発明の効果の表示を付しておくことが好ましい。本発明の効果の表示としては、例えば、脂肪の分解を促進するために用いられる旨の表示が挙げられる。
 このように、本発明の脂肪分解促進組成物は、食品としてヒトに投与し、摂取させることによって、体内の脂肪の分解を促進する。従って、本発明の食品は、肥満防止用、減量用、生活習慣病予防用等の各種食品として有用である。
 本発明の脂肪分解促進組成物は、ヒト以外の脊椎動物(例えばペット)に投与しても体内の脂肪の分解を促進する効果が期待できるので、飼料としても有用である。
 さらに、本発明の脂肪分解促進組成物の成分(A)及び(B)は、通常の食品又は飼料に添加することにより、その食品又は飼料に、脂肪分解促進効果を付与することができる。
 以下に、本発明を実施例に基づいて詳細に説明する。なお、これらの実施例により本発明が限定されることはない。
実験例1~9及び比較実験例1~4
・ラット腸間膜脂肪細胞の調製
 SDラット(オス、10週齢、日本エスエルシー(株))を2匹用いた。エーテル麻酔下でラットを安楽死させて解剖し、腸間膜脂肪組織を摘出した。摘出組織を滅菌シャーレに入れ、1%の抗生物質(Antibiotic-Antimycotic Stabilized、シグマ社製、A5955)を添加した氷冷生理食塩水(大塚生食注、大塚製薬(株))に浸し、血液及び毛を洗浄(毛が見えなくなるまで液を変えて数回洗浄)し、リンパの除去を行った。眼科鋏にて組織の切断(組織1gに対して25回切断)を行い、1mg/mLのコラゲナーゼ(放線菌由来Collagenase S-1、新田ゼラチン(株))を添加したPBS溶液で、37℃40分間、数分おきに攪拌しながら組織を分散した。目安として1匹分の組織を20mLコラゲナーゼ溶液で処理した。
 100μmのポアサイズのセルストレーナー(BD Falcon社製、REF352360)で濾過後,DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium-high glucose、シグマ社製、D5796)をそれぞれ20mL添加して液の粘性を下げ、800rpm、10分間遠心分離を行った。上層の油層をアスピレーターで除去後、再度懸濁し70μmポアサイズのセルストレーナー(BD Falcon社製、REF352350)で濾過した。800rpmで15分間遠心し、上清に浮遊細胞がないこと及びペレットを確認し上清を除去した。沈殿を各々5mL DMEM(無血清)で懸濁し、800rpmで15分間遠心し上清を除去した。
 得られた沈殿物を、5mLの内臓脂肪分化用培地(Visceral Adipocyte Culture Medium 250mL、プライマリーセル(株)製、code:VACMR)にて静かに懸濁した。10倍希釈して細胞数をカウントした結果、濃度1.015×107cells/mLであった。ラット1匹から、2.54×107cells回収できた。6×106cells/24wellとなるように、それぞれの培地で500μL/wellで培養を開始した。翌日、培地を500μL添加し、培地交換を2日ごとに行った。その後は、1日おきに培地交換を行い、開始6日後に各種サンプルを含む培地に培地交換した。添加48時間後に培養上清を回収、培養を終了した。すべての培養において細胞障害性のないことを目視にて確認した。
・試料の調製
 各実験例及び比較実験例で用いる試料を調製した。試料の成分としては、ラクトフェリン(DMV製)、ラズベリーケトン(高砂香料工業株式会社製)、アーティチョーク葉抽出物(一丸ファルコス株式会社製、商品名バイオベネフィティF)、カカオ抽出物(オリザ油化製、カカオエキス-P)、ブドウ種子抽出物(キッコーマン株式会社製、商品名グラヴィノール)、松樹皮抽出物(Enzo Nutraceuticals Limited製、エンゾジノール)、コレウス・フォルスコリ抽出物(Natural Remedie社製)、ダービリア抽出物、ローズマリー抽出物(ライオン株式会社製、商品名レオミール)、大豆イソフラボンアグリコン(キッコーマン株式会社製)、ショウガエキス(日本粉末薬品株式会社製)、エピガロカテキンガレート(和光純薬工業株式会社製)、クロロゲン酸(和光純薬工業株式会社製)を用いた。アーティチョーク葉抽出物として用いたバイオベネフィティFは、賦形剤としてデキストリンを70質量%含むが、表1に示すアーティチョーク葉抽出物の配合量は、該賦形剤を除いて換算した数値である。
 ダービリア抽出物は、以下の条件で抽出した。ダービリアの乾燥物10gを20倍量の含水エタノール(アルコール/水=30/70(V/V))にて3時間撹拌し、その上澄みを溶媒留去することにより、ダービリア抽出物を得た。
 ラクトフェリンの濃度を30ppm及び10ppmに調整し、それぞれの濃度での単独評価用の試料とした(比較実験例1)。ラクトフェリン以外の各成分は下記のとおり単独評価用の試料として用いた。また、ラクトフェリン以外の各成分とラクトフェリンとを、それぞれ下記の濃度に調整して混合し、複合評価用の試料として用いた(実験例1~9及び比較実験例2~4)。
 (単独評価用の試料)
 ・ラクトフェリン以外の各成分30ppm
 ・ラクトフェリン以外の各成分10ppm
 (複合評価用の試料(+ラクトフェリン30ppm))
 ・ラクトフェリン以外の各成分30ppm+ラクトフェリン30ppm
 ・ラクトフェリン以外の各成分10ppm+ラクトフェリン30ppm
 (複合評価用の試料(+ラクトフェリン10ppm))
 ・ラクトフェリン以外の各成分30ppm+ラクトフェリン10ppm
 ・ラクトフェリン以外の各成分10ppm+ラクトフェリン10ppm
・グリセロール濃度の定量
 グリセロールの定量は、F-キット グリセロール(ロシュ社製、製品番号:14820)を用いて行った。吸光度の測定は、Novaspec Plus(Amersham Bioscience社製)で行った。蒸留水11mLに溶解した溶液I 1.0mL、蒸留水2.0mL、上述した各試料0.1mL、溶液II 0.01mLを加えた。よく混和し、5分間室温で反応させ、AB340mmの吸光度(E1)を測定した。そこに溶液III 0.01mLを加え、よく混和した。7分間室温で反応させ、吸光度(E2)を測定した。Standardは、キット付属の標準液を用いた。
 測定した吸光度を元に、付属の取扱説明書に従って、以下の計算式1でグリセロール濃度を計算した。
(計算式1)
グリセロール[g/L]=
 V×MW/ε×d×v×1000×δE×希釈率
   δE=(E2-E1)サンプル-(E2-E1)ブランク
   V(反応液量):3.02mL
   MW(分子量):92.1
   d(光路長):1cm
   ε(吸光係数):6.3(1×mmol-1×cm-1
   v(検体量):0.1mL
(計算式1に基づくグリセロール濃度の算出)
グリセロール[g/L]
 =3.02×92.1/6.3×1×0.1×1000×δE
 =0.441×δE×希釈率
 各実験例及び比較例のグリセロール量の、無添加群のグリセロール量を0%としたときの相対値(%)を算出し、該相対値を脂肪分解促進率として表記した。各実験例及び比較実験例の脂肪分解促進率を表1-1(単独評価)、表1-2(複合評価(ラクトフェリン30ppmとの組み合わせ))、表1-3(複合評価(ラクトフェリン10ppmとの組み合わせ))に示す。
<結果>
 表1に示すように、実験例1~9における複合評価の脂肪分解促進率は、各成分の濃度に相当する単独評価における脂肪分解促進率を足し合わせた数値よりも上回っていた。
 一例を挙げると、比較実験例1のラクトフェリン10ppmの単独評価における脂肪分解促進率12.1%(表1-1)と実験例9のイソフラボン10ppmの単独評価における脂肪分解促進率0%とを加算した数値よりも、実験例9の複合評価(イソフラボン10ppm+ラクトフェリン10ppm:表1-3)における脂肪分解促進率32%が上回っていた。他の例を挙げると、ラズベリーケトン(実験例1)及び松樹皮抽出物(実験例5)は、それぞれ10ppmの単独評価では脂肪分解をむしろ阻害するが、それぞれにラクトフェリン10ppmを組み合わせた場合には、ラクトフェリン10ppm単独の場合よりも優れた、予想外の分解促進効果を示した(表1-3)。
 一方、比較実験例2の各複合評価における脂肪分解促進率は、比較実験例2の単独評価における脂肪分解促進率と比較実験例1の単独評価における脂肪分解促進率を加算した数値を下回っていた。比較実験例3及び4においても、実験例1~9のような顕著な相乗効果は観察されなかった。
 これらの結果は、本発明における成分(A)と成分(B)を組み合わせることにより相乗効果が発揮され、予想外に顕著な脂肪分解促進作用が発揮されることを示している。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
実験例10~13及び比較実験例5~7
 試料として表2に示す組み合わせを用いたほかは、実験例1と同様に脂肪分解促進率を評価した。結果を表2に示す。
 表2から明らかな通り、実験例10~13の脂肪分解促進率は、各実験例を構成する各成分の単独評価における脂肪分解促進率(表1-1参照)を加算した数値を大きく上回っていた。これに対し、比較実験例5~7の脂肪分解促進率は、各実験例を構成する各成分の単独評価における脂肪分解促進率(表1-1参照)を加算した数値を下回っていた。
 これらの結果は、本発明の組成物において、成分(B)は2種類以上の組み合わせであっても成分(B)が1種類の場合と同様に、成分(A)及び成分(B)の相乗効果が発揮され、予想外に顕著な脂肪分解促進作用が発揮されることを示している。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004

Claims (3)

  1.  (A)ラクトフェリンと、
     (B)ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる1種以上の成分と
    を含有する脂肪分解促進組成物。
  2.  食品、飼料又は医薬品である、請求項1に記載の脂肪分解促進組成物。
  3.  (A)ラクトフェリンと、
     (B)ダービリア抽出物、ラズベリーケトン、アーティチョーク葉抽出物、ローズマリー抽出物、イソフラボンアグリコン、ブドウ種子抽出物、松樹皮抽出物、コレウス・フォルスコリ抽出物、及びカカオ抽出物からなる群より選ばれる1種以上の成分と
    を食品又は飼料に添加して、食品又は飼料に脂肪分解促進効果を付与する方法。
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