WO2011113174A1

WO2011113174A1 - 阿糖胞苷衍生物及其在抗癌抗肿瘤中的用途

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Publication number: WO2011113174A1
Application number: PCT/CN2010/000320
Authority: WO
Inventors: 高峰; 徐峻
Original assignee: Gao Feng; Xu Jun
Priority date: 2010-03-15
Filing date: 2010-03-15
Publication date: 2011-09-22

Description

说明书

阿糖胞苷衍生物及其在抗癌抗肿瘤中的用途技术领域

本发明涉及医学技术领域，特别是涉及阿糖胞苷衍生物及其合成路线，本发明还涉及阿糖胞苷衍生物制剂及其制备方法和阿糖胞苷衍生物及其制剂在抗癌抗肿瘤中的用途。

背景技术

癌症是目前危害人类生命健康的最主要的疾病，治疗癌症的现有手段主要包括：手术切除、放射性疗法、化学疗法或这些方法的并用。化学疗法已经得到了广泛的应用而且已经用于多种不同类型的癌症的治疗。然而，大多数化学疗法所用的抗癌药物都仅限于延緩癌症的恶化从而延长病人的生命， 4艮难达到治愈的目的。各类癌症的发病机理虽然各不相同，但是它们其实是具有共同特征的一大类症候群。癌细胞除了代谢旺盛、不断地分化之外，与正常细胞的生理差别不是^艮大。这对于开发选择性地清除癌细胞、且不杀伤正常细胞的药物是个巨大的挑战。抗癌药物开发的另一大挑战是癌细胞耐药性，即经过一段时间化疗之后引起的耐药抗药性，用过的化疗药物，即使增加剂量，对癌细胞也不再起作用。肿瘤细胞的转移也常使得无法用化学疗法进行治疗。到目前为止，没有一种抗癌药物能够医治所有的癌症。寻找高效、高选择性、低毒、无耐药性、而且急需的新型抗癌药物仍然极具挑战性。大多化疗抗癌药物都会产生严重的副作用，从而导致化学治疗不能继续进行。因此，现有药物在治疗不同种类的肿瘤时受到极大的限制。所以，寻找高效、低毒的新型抗癌药物对维护人类健康仍然迫切需要。

阿糖胞苷是胞嘧啶核苷的类似物， DNA多聚酶的抑制剂。它能够阻止 DNA 合成，也可掺入 DNA, 干扰 DNA的复制，此外还可阻断胞嘧啶核苷酸还原成脱氧胞嘧¹ ¾核苷酸 (Sylvester, R. Κ·, Fisher, A. J., and Lobell, Μ·, Drug Intelligence & Clinical Pharmacy: Vol. 21, No. 2, pp. 177-180(1987); Boyer et al, Novel Cytarabine Monophospate Prodrugs, United States Patent Application Publication, Pub. No.： US 2007/0037774 A 1, (Feb. 15, 2007); Colon-Cesario, Μ·, Wang, J" Ramos, X., Garcia, H. G., Davila, J. J., Laguna, J., Rosado, C, and Pena de Ortiz, S. J. Neurosci., 26(20): 5524 -5533(2006))。

目前，阿糖胞苷主要用于急性白血病的治疗。对急性粒细胞白血病疗效最好，对急性单核细胞白血病及急性淋巴细胞白血病也有效，对恶性淋巴瘤、肺癌、消化道癌、头颈部癌有一定疗效，对病毒性角膜炎及流行性结膜炎等也有一定疗效，然而，对多数实体肿瘤无效。阿糖胞苷的活性不是很高，为了提高疗效，阿糖胞苷一般均与其他药物，如：曱氧柔红霉素、全反式维曱酸联合三氧化二砷、吡柔比星、拓朴替康-足叶乙甙 -环磷酰胺、氟达拉滨等合并使用。阿糖胞苷具有骨髓抑制、消化道反应等副作用，少数病人可有肝功异常、发热、皮疹等副作用（Bolwell, B.J., Cassileth, P.A., Gale, R. P. Leukemia. 2(5):253-60 (1988); Kimby, E., Nygren, P., Glimelius, B. Acta Oncol. 40(2-3):231-52 (2001); Stamatopoulos, K. Leukemia Research , Volume 22 , Issue 8 , pp 759 - 761, (2003); Burnett, A.K., Milligan, D., Prentice, A.G., Goldstone, A.H., McMullin, M.F., Hills, R.K., Wheatley, K. Cancer. 109(6): 1007-10 (2007))。

阿糖胞苷为抗代谢药物，在细胞内先经脱氧胞苷酶催化磷酸化，转变为有活性的阿糖胞苷酸，再进一步转为相应的二磷酸及三磷酸阿糖胞苷而起作用。阿糖胞苷主要通过与 DNA合成过程中所需的三磷酸脱氧胞苷竟争，而抑制 DNA多聚酶，干扰核苷酸掺入 DNA, 并能抑制核苷酸还原酶，阻止核苷酸转变为脱氧核苷酸，但对 RNA和蛋白质的合成无显著作用，属于作用于 S期的细胞周期特异性药物，对处于 S增殖期细胞的作用最为敏感，并对 G1/S及 S/G2 转换期也有作用。静脉注射后迅速从血中消失， 40 %可通过血脑屏障，药物在体内主要在肝中代谢为无活性的阿糖尿苷， 70 % ~ 90 %通过肾***。为了开发对实体肿瘤如肝癌有疗效的抗癌新药，必须寻找对肝脏靶向性的新药。显然，抗肝炎病毒的药物可以作为极好的借鉴。例如，米夫定及阿德福韦（adefovir, PMEA)己被批准作为乙型肝炎抗病毒治疗药物 (Starrett, et al., "Synthesis, oral bioavailability determination, and in vitro evaluation of prodrugs of the antiviral agent 9-[2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenine (PMEA)," J Med Chem., 37(12): 1857-64 (1994); Shaw, et al, "Pharmacokinextics and Metabolism of Selected Prodrugs of PMEA in Rats," Drug Metabolism Dis., 25(3):362-366 (1997); Wacher, V.J., et al" Advanced Drug Delivery Reviews 46:89-102 (2001); Wacher, et al" "Active Secretion and Enterocytic Drug Metabolism Barriers to Drug Absorption," Adv. Drug Del. Rev., 46:89-102 (2001); Murono, et al, "Prevention and inhibition of nasopharyngeal carcinoma growth by antiviral phosphonated nucleoside analogs," Cancer Res., 61(21):7875-7 (2001))。 2003 年， Metabasis Therapeutics, Inc 公司的科学家 K. Raja Reddy, Mark D. Erion, Michael C. Matelich, Joseph J. Kopcho 提出用环磷酸核苷类作为抗肝癌治疗药物的前药 (United States Patent 7,214,668;), 当化合物进入肝脏后，被肝脏的 CYP 3A4代谢酶催化解离成无环磷酸核苷类衍生物而具有抗癌的活性。 2007年， Metabasis Therapeutics, Inc公司又提出新的环磷酸阿糖胞苷衍生物作为抗癌前药的专利申请 (Novel Cytarabine Monophospate Prodrugs, United States Patent Application Publication, Pub. No. ： US 2007/0037774 A 1, Boyer et al., Feb. 15, 2007; Phosphonic acid based prodrugs of PMEA and its analogues, United States Patent 7,214,668, Reddy, et al. May 8, 2007)。这些专利申请的核心是将环磷酸接入阿糖胞苷的核糖环上的 -OCH2-核糖位置上，即 05位置，而对阿糖胞苷胞嘧啶环上的氨基不加修饰。

阿糖胞苷一般不能用于治疗肝癌，其原因在于当其胞核苷骨架结构进入肝脏之后，它的 N4氨基（见图 1 )被代谢失效并引起毒性；另一方面是其糖甙结构上的 05羟基（见图 1 )必须被磷酸化而激活，而此激活过程在肝内过于緩慢。发明内容

本发明旨在克服上述已有技术的不足，提供一种高效、低毒，无耐药性，能够被迅速激活的阿糖胞苷衍生物，并提供了阿糖胞苷衍生物的合成路线以及阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法，本发明还提供了阿糖胞苷衍生物及其制剂在抗癌抗肿瘤方面的应用的实 t据。

本发明的阿糖胞苷衍生物，其特征在于：所述阿糖胞苷衍生物是具有下述通式（I ) 的化合物：

其中， X是 OH、 0-P(0)(OR)₂和磷酸基中的任意一种，所述磷酸基包括单磷酸基、二磷酸基和三磷酸基；是11、 Cw₆烷基、环烷基，苄基、苯基和芳环基中的任意一种；

其中， A是多靶药中的第二片药物基或功能基，用下式中的任意一个结构式表

^是11、烷烃基、烷烯基、烷炔基和芳香基中的任意一种； R²是硝基、氨基、取代氨基、卤素原子基、腈基、和酰胺基中的任意一种；

其中， L是连接单元，用下面的任意一种结构单元表示：

其中， n = 0, 1-5; m = 0, 1-18; 曲线 "一" 表示上述连接单元 L与其相邻基团以共价键相连；所述连接 L中苯环或环己烷环上的两个基团为邻位、间位或对位相连。

在上述定义中的每一个基团可以进而取代，而且其中可含有杂原子。

本发明的通式（I ) 的阿糖胞苷前药衍生物包括具有下述结构式的代表性化

为了清晰起见但并非限制本发明，除另外说明之外，本发明所使用的所有科技术语和在本发明领域内技术人员常使用和理解的意义相同。本发明所引用的专利申请或已发表的申请及其他论文均属于原始引用并未加修改。本专利所用"一个"或"一种"或"一类"意指最少一个 /种 /类或一个 /种 /类或一个 /种 /类以上。

本发明所用"烷基" 意指各种饱和的直链的、带侧链的或环状的碳氢基团，特包括含有十个或十个碳以下的小烷基。例如曱基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、异己基、庚基、辛基和壬基等仅为本定义中的一些典型例子。

本发明所用 "烯基" 与上述 "烷基 "定义相同，但其中必须最少有一个碳碳双键（C=C ) , 所以本发明所用的烯基包括含有两个到十个碳原子的直链的、带有分支链的或环状的并至少含有一个碳碳双键的烃基，如乙烯基、丙烯基、丁烯基和戊烯基等。

本发明所用的"炔基"为上述烷基或婦基并含有至少一个碳碳三键，所以 , 炔基包括含有两个到十个碳原子并含有至少一个碳碳三键的直链的、带有分支链的或环状的烃基或炔基，如乙炔基、丙炔基、丁炔基和戊炔基等。

本发明中的"饱和" 意指该基团中不含不饱和键，如碳碳双键或碳碳三键；而"不饱和" 则指该基团中含有一个或一个以上的碳碳双键或碳碳三键。

本发明所用 "环烷基"为环状的碳氢基团并优先选用含有三到八个碳的环烷基。因此环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环庚烷和环辛烷均为本定义下的典型例子。环烷基中含有一个或两个碳碳双键即形成 "环烯基"。环烷基上还可带有烷基、烯基、炔基和其他基团。

本发明所使用的"芳香基"为环状共轭芳香***并可在环中含有一个或一个以上的非碳原子（除碳以外的其他杂原子如氮） , 如苯基、蔡基和吡啶基等。

本发明中还常用到的 "杂环基"指任何多个原子通过共价键构成的环状基团和化合物，并且至少含有一个非碳原子。特指杂环基团包括含有氮，硫或氧非碳原子的五元和六元环状***如嘧唑、吡咯、吡啶或嘧啶等。

本发明中的"烷氧基 "指把氧原子与直链或带支链的烷基连接所形成的烷基氧化基。此类烷氧基团的例子包括曱氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基等。同样地， "烷硫基"指把硫原子与直链或带支链的烷基连接所形成的烷基硫化基。此类烷硫基团的例子包括曱硫基、乙硫基、丙硫基或异丙硫基等。

本发明中的"卤原子基"为氟、氯、溴、碘。

本发明中的"氨基酸"指取代的天然和非天然的氨基酸，纯的 L- 或 D- 构型或外消旋混合物，以及其由氨基和而衍生出来的基团。

特别值得进一步说明的是，上述所定义的各种取代基还包括它们被进一步取代而构成的基团，其中这些新的取代基也可含有其他的基团。例如烷基或芳香基上的氢原子被氨基、卤素或其他基团取代即成为新的属于上述各定义中的基团。

本发明中所用的"磷酸" 或"磷酸酯" 是最高氧化态的五价磷原子上连有四个氧原子，一个氧原子以双键与磷原子相连，两个氧原子以单键与磷原子相连，而且，这两个氧原子上可以是氢原子、负电荷或如上所定义的各种烷基、芳香基等，如 -P(=0)(0-)₂, -P(0)(OR)₂。磷原子上的另外一个氧原子与本发明中的衍生物相连。

本发明中的 "多靶药" 指分子中的一个以上的结构单元通过对多个靶向作用而具有生物药效。

本发明中的 "多功能" 指分子中不同基团具有多于一种生物功能。本发明中的 "药物基" 或"功能基 "指该基团是具有某生物功能的药物或非药物基团。本发明中，阿糖胞苷衍生物是在阿糖胞苷的结构式上接入阿司匹林基团。阿司匹林 (Aspirin, 又名乙酰水杨酸)是个多功能药，具有抗血栓 (Antithrombus)、抗惊厥 (Antieclampsia)、抗呆 (Antidementia)、抗白内障 (Anticataract)、抗癌 (Anticancer)等功能特点，是以水杨酸为原料，使之与乙酸酐直接反应制备而得。阿司匹林是世界上应用最广泛的解热、镇痛和抗炎药，也是作为比较和评价其他药物的标准制剂。在体内具有抗血栓的作用，它能抑制血小板的释放反应，抑制血小板的聚集，临床上用于预防心脑血管疾病的发作。

本发明中的 "连接单元" （Linker )指用本连接单元把两个基团或药物基或功能基连接起来可以形成本发明中的分子。

本发明中的 "前药" 指本发明中的阿糖胞苷衍生物被用到体内后，在体内断裂或增加某个结构单元所形成的进而起生物作用的化合物。

本发明中所使用的曲线 /w " 是药物化学中常用的一种表示方法，代表该基团或药物基或功能基由该处与通式（I) 中的相应原子相连接。

本发明中提及的有机溶包括：六氟磷酸苯并***- 1基-氧基三吡咯烷基磷（ PyBO— P ) 、 4-二曱氨基吡啶（ DMAP ) 、 Ν,Ν-二曱基曱酰胺（ DMF ) 、二曱基亚砜（DMSO) 、多聚乙二醇（PEG) 和四氢呋喃（THF) 。

本发明解决的另一个技术问题是提供了通式（I)的阿糖胞苷衍生物的合成路线，其技术方案分别如下：

1. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 )将水杨酸与脂肪族二元醇混合，然后滴加 3~5滴浓^ 酸，加热至 80°C 反应 4~12个小时，反应结束后，减压蒸干或通过柱层析色语提纯，得到第一中间产物（B) ；

(2)将第一中间产物（ B )溶于 CH₂C1₂或四氢呋喃，然后加入酸酐化合物和 DMAP, 加热回流反应 5-12小时或室温下搅拌反应 24小时，得到的第二中间产物（C) 不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

(3)将阿糖胞苷、第二中间产物（C) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12~24小时，反应液直接通过柱层析色语提纯得到得到通式（I)的阿糖胞苷衍生物或将该反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色语提纯，得到通式（I)的阿糖胞苷衍生物。

所述脂肪族二元醇为乙二醇、丁二醇、 1,6-己二醇、 1,8-辛二醇、 1,10-癸二醇和 1,12-十二二醇中的任意一种；所述酸酐化合物为丁二酸酐、邻苯二曱酸酐、戊二酸酐和二甘醇酐中的任意一种。（参考合成路线 1、 2、 7-24)

2. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括以下步骤： ( 1 )水杨酸和碳酸钠溶于 3-氯丙醇中，加热回流 2.5小时，得到的反应液倒入冷水中分层，用 NaHC0₃溶液洗涤有机层至弱碱性，有机层再用少量饱和盐水洗涤后，加入无水克酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得到第三中间产物 ( D ) , 直接用于下一步反应；

( 2 )将第三中间产物（D )溶于 CH₂C1₂或四氢呋喃中，然后加入酸酐化合物和 DMAP, 室温下搅拌反应 24小时，过滤反应液，滤液减压蒸干，得到的第四中间产物（E ) 直接用于下一步反应；

( 3 )将阿糖胞苷、第四中间产物（ E ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12~24小时，反应液直接通过柱层析色语提纯得到通式（I )的阿糖胞苷衍生物或将先该反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯，得到通式（I )的阿糖胞苷衍生物。

所述酸酐化合物为丁二酸酐、邻苯二曱酸酐、戊二酸酐和二甘醇酐中的任意一种。（参考合成路线 3 )

3. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括以下步骤：

( 1 )水杨酸曱酯和氨基丙醇溶于二氧六环中，室温搅拌 12小时，旋转蒸发除去溶剂，加饱和盐水，用盐酸调节 PH至 4-5后，用乙酸乙酯提取多次，乙酸乙酯液用无水克酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，所得第五中间产物（F ) 直接用于下一步反应。

( 2 )将第五中间产物（F )溶于 CH₂C1₂或四氢呋喃中，然后加入酸酐化合物和 DMAP, 室温下搅拌反应 24小时，过滤反应液，滤液减压蒸干，所得粗产品的第六中间产物（G ) 不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 3 )将阿糖胞苷，第六中间产物（ G ) , PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12~24小时，得到的反应液直接通过柱层析色谱提纯得到产品或将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯，得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。所述酸酐化合物为丁二酸酐、邻苯二曱酸酐、戊二酸酐和二甘醇酐中的任意一种。（参考合成路线 4, 6 )

4. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括以下步骤：

( 1 )邻曱氧基苯曱酸和 SOCl₂溶于二氯曱烷，加热回流 4小时，旋转蒸发除去溶剂和过量的 SOCl₂得到的第七中间产物（H ) 不用进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 2 )将氨基丙醇溶于二氯曱烷中，冷至 0 °C时，滴加溶于二氯曱烷的第七中间产物（H ), 0.5小时滴加完毕，而后室温搅拌 5小时，加浓盐酸酸化至 pH=5, 旋转蒸发除去溶剂，得到的产物加少量水溶解，乙酸乙酯提取多次，乙酸乙酯液用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤，旋转蒸发除去溶剂，所得第八中间产物（J ) 不经提纯直接用于下一步反应；

( 3 )将第八中间产物（ J )溶于四氢呋喃中，然后加入酸酐化合物和 DMAP , 室温下搅拌反应 24小时，过滤，减压蒸干滤液，所得第九中间产物（K )不经提纯直接用于下一步反应；

( 4 )将阿糖胞苷，第九中间产物（ K ) , PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12~24小时，反应液直接通过柱层析色谱提纯得到产品或将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水克酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯，得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。

所述酸酐化合物为丁二酸酐，邻苯二曱酸酐、戊二酸酐和二甘醇酐中的任意一种。（参考合成路线 ⁵)

5. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 )将脂肪族二元酸加入到 S0C1₂中，加 DMF, 加热回流，反应 3小时，旋去 S0C1₂, 得到的第十中间产物（M ) 不用进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 2 )将邻硝基苯胺溶于苯再加入吡啶，滴加到溶解于苯的第十中间产物

( M ) 中，反应 4h, 将溶剂蒸去，将反应物溶于水中，调节 PH值至酸性，过滤沉淀，水洗，将沉淀溶于异丙醇中，重结晶，析出固体的第十一中间产物（N);

(3)将阿糖胞苷，固体的第十一中间产物（N) , PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12小时,反应液倒入水中，析出固体，再通过柱层析色语提纯，得到通式（I) 的阿糖胞苷衍生物。

所述脂肪族二元酸为乙二酸、丁二酸、 1,6-己二醇和 1,8-辛二酸中的任意一种。（参考合成路线 ²⁵)

6. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括以下步骤：

( 1 )将邻硝基苯曱酸和 S0C1₂溶于 DMF, 回流反应 2小时，得到的第十二中间产物（S) 不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

(2)将第十二中间产物（S)溶于四氢呋喃，滴加至氨基酸化合物的水溶液中，同时滴加氢氧化钠水溶液，控制 PH=8~9, 控制温度在 10°C左右， 30 分钟滴加完毕，搅拌 40 分钟并调节 PH值至 3, 减压蒸去四氢呋喃，水溶液用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液无水硫酸钠干燥、浓缩，放置重结晶，过滤，得淡黄色固体的第十三中间产物（T) ；所述氨基酸化合物为丙氨酸或氨基己酸； (3 )将阿糖胞苷、第十三中间产物（ T ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12小时，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯，得到第十四中间产物（U) ；

(4)将第十四中间产物（U)进一步溶于四氢呋喃，催化氢解，搅拌，过滤，滤液旋干，得到高纯度的通式（I)的阿糖胞苷衍生物。（参考合成路线 26、

27)

7. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括以下步骤：

( 1 )将硝基苯曱酸或烟酸、氨基己醇、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12小时，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色语提纯，得到第十五中间产物（V);

(2)将第十五中间产物（V)溶于四氢呋喃中，然后加入邻苯二曱酸酐和 DMAP,加热回流反应 12小时，得到的第十六中间产物（W )不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 3 )将阿糖胞苷、第十六中间产物（ W ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12小时，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯，得到第十七中间产物（Y ) ；

( 4 )将第十七中间产物（Y )进一步溶于四氢呋喃，催化氢解，搅拌，过滤，滤液旋干，得到高纯度的通式（I )的阿糖胞苷衍生物。（参考合成路线 28、 29 )

本发明的阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法，其特征在于：

( 1 )将通式（I )的阿糖胞苷衍生物溶解到水、生理盐水、环糊***溶液、水溶性的有机溶剂、非离子性的表面活性剂、水溶性的类脂、脂肪酸、脂肪酸酯和磷脂中的任意一种或多种的组合溶剂而制得制剂溶液；

( 2 )将所述制剂溶液再用生理盐水或葡萄糖注射液稀释而制成阿糖胞苷衍生物制剂。

所述有机溶剂可以是乙醇、丙二醇、甘油、甘油酯、多聚乙二醇（PEG ) 、 Ν,Ν-二曱基曱酰胺（DMF )和二曱基亚砜 (DMSO)中的任意一种或多种的组合溶剂。

本发明的阿糖胞苷衍生物制剂，其特征在于：是由上述的阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法制备得到的产品。

本发明的阿糖胞苷衍生物在抗癌抗肿瘤中的用途。通式（I )的阿糖胞苷衍生物可用于治疗或緩解某一组织或器官的癌症。癌症包括但不只限于白血病、固体瘤、肺癌、结肠癌、肝癌、中枢神经***肿瘤、卵巢癌和肾癌。

本发明的阿糖胞苷衍生物制剂在抗癌抗肿瘤中的用途。癌症包括白血病、固体瘤、肺癌、结肠癌、肝癌、中枢神经***肿瘤、卵巢癌和肾癌。本发明的阿糖胞苷衍生物制剂还可与其他化疗药物联合用在抗肿瘤化疗中，可以与本发明的阿糖胞苷衍生物的制剂联合使用的抗肿瘤药物包括但不限于烷化剂、植物生物碱类、抗菌抗肿瘤磺酰胺类药物、铂类药物、抗代谢类及其它已知的抗癌药物。本发明所指的联合用药治疗过程中，包括运用至少一种本发明所例举的阿糖胞苷衍生物。

以本发明的阿糖胞苷衍生物为成份制备成药用制剂，可以用于口服的或非肠道途径给药。此处所指的非肠道途径给药是指皮下皮内、静脉内、动脉内、月几肉内、心房内、滑膜内、胸骨内注射或滴注。

本发明采用新的设计技术构思设计出阿糖胞苷衍生物。阿糖胞苷（参照图 1 )不能用于治疗肝癌的原因一方面在于当其胞核苷骨架结构进入肝脏之后，它的 N4氨基被代谢失效并引起毒性，另一方面是其糖甙结构上的 05羟基必须被磷酸化而激活，而此激活过程在肝内过于緩慢。

本发明的阿糖胞苷衍生物的设计是通过对 N4, 05位置进行化学修饰，避免 N4氨基被代谢失效并引起毒性，让 05羟基容易被磷酸化而激活，将阿司匹林多功能药进入到阿糖胞苷的前药分子中，以增加其药物功能来提高抗实体瘤的活性，设计出了新型的抗肿瘤的前药衍生物。本发明的阿糖胞苷衍生物具有多靶多功能，主要有益效果是：增加生物利用度，减少多重抗药性 (多靶向设计技术)，增加溶解度，增加酯溶性。本发明详细提供了通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物的多种合成路线，阿糖胞苷衍生物制剂及其制备方法，并通过大量的实验数据证明了本发明的阿糖胞苷衍生物在抗癌抗肿瘤方面的用途。

附图说明

图 1表示阿糖胞苷的结构和 N4, 05修饰位置的示意图。

图 2表示本发明的具有代表性的阿糖胞苷衍生物的结构示意图。

图 3 表示本发明的阿糖胞苷衍生物抑制 BEL-7402肝癌细胞株的药物浓度 -抑制率曲线图。具体实施方式本发明的一些代表性阿糖胞苷衍生物的合成路线列举如下，本发明专利中的其他阿糖胞苷衍生物通过相同或类似的方法合成得到。

第一中间产物 B1的合成（路线 1) ：将水杨酸（ 13.8 g, 100 mmol)溶于 40 毫升丁二醇中，然后滴加 5滴浓硫酸，回流反应 4个小时，反应结束后减压蒸干，所得第一中间产物 B1直接用于下一步反应

第二中间产物 C1的合成（路线 1) ：将第一中间产物 B1 (2.1 g, 100 mmol) 溶于 10毫升四氢呋喃中，然后加入丁二酸酐（ 1.0 g, 100 mmol )和 DMAP ( 1.2 g, 100 mmol) , 室温下搅拌反应 24小时，过滤反应液，滤液减压蒸干，所得第二中间产物 C1直接用于下一步反应。

阿糖胞香衍生物 1的合成（路线 1 )：将阿糖胞苷（2.43 g, 100 mmol) , 第二中间产物 CI (3.1 g, 100 mmol) , PyBOP ( 5.7 g, 110 mmol)和 DMAP (0.12 g, 10 mmol)溶于 DMF ( 10 ml) 中，室温下搅拌 24小时。反应液通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1) , 得到阿糖胞苷衍生物 1 (42 mg) 。 LC (UV 254 nm ) 纯度 95%。 LC-MS m/z 536 [M + H]+ (分子式 0₂₄Η₂₉Ν₃Ο_π, 分子量 535 ) ; ^ΝΜΚίόΟΟ MHz, DMSO-d₆ ) δ 10.90 (s, 1H) , 10.56 (s, 1H) , 8.04 (d, 1H) , 7.79 (d, 1H) , 7.54 (t, 1H) , 7.15 ( d, 1H) , 6.99 (m, 2H ) , 6.05 (d, 1H) , 5.48 ( t, 2H) , 5.06 ( t, 1H) , 4.34 (t, 2H) , 4.09 (t, 3H) , 3.62 (t, 1H) , 3.33 ( t, 1H) , 2.69 ( d, 2H ) , 2.58 (d, 2H) , 2.50 (s, 2H ) , 1.78 ( d, 2H ) , 1.73 ( d, 2H ) 。

第一中间产物 B2的合成（路线 2) ：将水杨酸（ 13.8 g, 100 mmol)溶于 40 毫升丁二醇中，然后滴加 5滴浓硫酸，回流反应 4个小时，反应结束后减压蒸干，所得第一中间产物 B2直接用于下一步反应。

第二中间产物 C2的合成（路线 2) ：将第一中间产物 B2 (2.1 g, 100 mmol) 溶于 10毫升的四氢呋喃中，然后加入戊二酸酐（ 1.14 g, 100 mmol)和 DMAP ( 1.2 g, 100 mmol) , 在室温下搅拌反应 24小时。过滤反应混合物，滤液在减压下蒸干，所得第二中间产物 C2直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 2的合成（路线 2)：将阿糖胞苷（2.43g, 100 mmol) , 第二中间产物 C2 ( 3.24 g, 100 mmol ) , PyBOP ( 5.7 g, 110 mmol )和 DMAP ( 0.12 g, 10 mmol )溶解于 DMF (10 ml) 中。室温下搅拌 24小时。反应液通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1) , 得到阿糖胞苷衍生物 2 (93.9mg) , LC ( UV 254 nm ) 纯度 >95%。 LC-MS m/z 550 [M + H]+ (分子式 C₂₅H₃₁N₃O_u, 分子量 549) 合成路线

第三中间产

物 D3的合成 (路线 3 (31.8 g, 300 mmol )溶于 3-氯丙醇（180 ml) 中，加热回流 2.5小时。反应液倒入冷水中分层，用 NaHC0₃溶液洗涤有机层至弱碱性，少量饱和盐水洗涤后，加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，第三中间产物 D3 直接用于下一步反应。

第四中间产物 E3的合成（路线 3) ：将第三中间产物 D3 (1.96g, 100 mmol) 溶于 10毫升四氢呋喃中，然后加入丁二酸酐（ 1.0 g, 100 mmol )和 DMAP ( 1.2 g, 100 mmol) , 室温下搅拌反应 24小时，过滤反应液，滤液减压蒸干，第四中间产物 Ε3直接用于下一步反应。

阿糖胞香衍生物 3的合成（路线 3)：将阿糖胞苷（2.43 g, 100 mmol ) , 第四中间产物 E3 ( 2.96g, 100 mmol ) , PyBOP ( 5.7 g, 110 mmol )和 DMAP ( 0.12 g, 10 mmol )溶于 DMF (10 ml) 中，室温下搅拌 24小时。反应液通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1) , 得到阿糖胞苷衍生物 3 (20 mg) 。 LC (UV 254 nm ) 纯度 94%。 LC-MS m/z 522 [M + H]+ (分子式 C₂₃H₂₇N₃0„, 分子量 521 ) 。合

第五中间产物 F4的合成（路线 4) ：水杨酸曱酯（20 g, 130 mmol) , 氨基丙醇（ 15 g, 200 mmol)溶于二氧六环（ 50 ml ) 中，室温搅拌 12小时。旋转蒸发除去溶剂，加饱和盐水，用盐酸调节 PH至 4-5后，用乙酸乙酯提取十次。乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，所得第五中间产物 F4 直接用于下一步反应。

第六中间产物 G的合成（路线 4)：将第五中间产物 F4 (1.95 g, 100 mmol) 溶于 10毫升 THF中，然后加入丁二酸酐（ 1.3 g, 130 mmol )和 DMAP ( 1.56 g, 130 mmol) , 室温下搅拌反应 24小时，过滤反应液，滤液减压蒸干，所得第六中间产物 G不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 4的合成（路线 4)：将阿糖胞苷（2.43g, 100 mmol) , 第六中间产物 G (2.95g, 100 mmol) , PyBOP ( 5.7 g, 110 mmol )和 DMAP ( 0.12 g, 10 mmol )溶于 DMF (10 ml) 中，室温下搅拌 24小时。反应液通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1) , 得到阿糖胞苷衍生物 4 (75 mg) , LC (UV 254 nm ) 纯度 92%。 LC-MS m/z 521 [M + H]+ (分子式 C₂₃H₂₈N₄O₁₀, 分子量 520) 。合成路线 5：

第七中间产物 H5的合成路线（路线 5):邻曱氧基苯曱酸（ 20 g, 131.6 mmol), S0C1₂ ( 15 ml) , 溶于二氯曱烷（50ml) , 加热回流 4小时。旋转蒸发除去溶剂和过量的 S0C1₂得到第七中间产物 Η5不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

第八中间产物 J5的合成路线（路线 5)：将氨基丙醇（ 12.4 g, 164 mmol)溶于二氯曱烷（70 ml) 中，冷至 0 °C时，滴加溶于二氯曱烷（10 ml) 的第七中间产物 H5 ( 14g, 82 mmol ) , 0.5小时滴加完毕。而后室温搅拌 5小时。加浓盐酸酸化至 ρΗ=5, 旋转蒸发除去溶剂。产物加少量水溶解，乙酸乙酯提取 4 次，乙酸乙酯液用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋转蒸发除去溶剂，所得第八中间产物 J5不经提纯直接用于下一步反应。

第九中间产物 Κ5的合成路线 (路线 5 )：将第八中间产物 J5 ( 2.09 g, 10 mmol ) 溶于 10毫升 THF中，然后加入丁二酐（ 1.00 g, 10 mmol )和 DMAP ( 1.2 g, 10 mmol) , 室温下搅拌反应 24小时，过滤，减压蒸干滤液，所得第九中间产物 Κ5不经提纯直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 5的合成（路线 5) ：将阿糖胞苷（2.43 g, 10 mmol) , 第九中间产物 Κ5 ( 3.09 g, 10 mmol ) , PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol )和 DMAP ( 0.12 g, 1 mmol )溶于 DMF (10 ml) , 室温搅拌 24小时。反应液通过柱层析色谱提纯 (硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 5 (38.7 mg) ； LC ( UV 254 nm )纯度 >90%。 LC-MS m/z 535 [M + H]+ (分子式 C₂4H₃。N₄O₁₀, 分子量 534) 。合成路线 6:

第五中间产物 F6的合成（路线 6) ：水杨酸曱酯（20 g, 130 mmol) , 氨基丙醇（ 15 g, 200 mmol)溶于二氧六环（ 50 ml ) 中，室温搅拌 12小时。旋转蒸发除去溶剂，加饱和盐水，用盐酸调节 PH至 4-5后，用乙酸乙酯提取十次。乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，所得第五中间产物 F6 直接用于下一步反应。

第六中间产物 G6的合成（路线 6)：将第五中间产物 F6 (1.95 g, 10 mmol) 溶于 10毫升 THF, 然后加入戊二酸酐（ 1.14 g, 10 mmol )和 DMAP ( 1.2 g, 10 mmol) , 室温反应 24小时，过滤，减压蒸干滤液，所得第六中间产物 G6 不经纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 6的合成（路线 6)：将阿糖胞苷（2.43 g, 10 mmol) , 第六中间产物 G6 ( 3.09 g, 10 mmol ) , PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol )和 DMAP ( 0.12 g, 1 mmol )溶于 DMF (10 ml) , 室温搅拌 24小时。反应液通过柱层析色谱提纯 (硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 6 (82.2 mg) , LC ( UV 254 nm )纯度 >95% )。 LC-MS m/z 535 [M + H]+ (分子式 C₂4H₃。N₄O₁₀, 分子量 534) 。合成路线

第一中间产物 B7的合成（路线 7) ：将水杨酸（27.6 g, 200 mmol)溶于 70 克的乙二醇中，然后滴加 3 ml浓硫酸，回流反应 4个小时，反应结束后减压蒸干，所得第一中间产物 B7 (水杨酸乙二醇酯）直接用于下一步反应。

第二中间产物 C7的合成（路线 7)：第一中间产物 B7(水杨酸乙二醇酯）（2.7 g , 15 mmol) , 戊二酸酐（1.7 g, 15 mmol )和 DMAP ( 0.2 g, 1.5 mmol)溶于 CH₂C1₂ ( 30 ml ) , 加热回流 5个小时。得到的第二中间产物 C7不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞香衍生物 7的合成（路线 7)：阿糖胞苷（2.5 g, 10 mmol ) , 第二中间产物 C7 ( 3 g, 10 mmol ) , PyBOP ( 5.2 g, 10 mmol )和 DMAP ( 0.2 g, 2 mmol ) 溶于 DMF (25ml) , 室温搅拌 12小时。反应液以水混悬，用乙酸乙酯萃取，萃取液用柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 7 ( 23.7 mg ) , LC ( UV 254 nm )纯度 95%。 LC-MS m/z 522 [M + H]+ (分子式 C^H^NsOn, 分子量 521) 。合成

第一中间产物 B8的合成（路线 8 ) ：将水杨酸（27.6 g, 200 mmol )溶于 70 克的乙二醇中，然后滴加 3 ml浓硫酸，回流反应 4个小时，反应结束后减压蒸干，所得第一中间产物 B8 (水杨酸乙二醇酯）直接用于下一步反应。

第二中间产物 C8的合成（路线 8 )：第一中间产物 B8 (水杨酸乙二醇酯）（8.7 g , 47 mmol ) , 丁二酸酐（4.8 g, 48 mmol )和 DMAP ( 0.6 g, 5 mmol )溶于 CH₂C1₂ ( 50 ml ) , 加热回流 5个小时。得到的第二中间产物 C8不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苦衍生物 8的合成 (路线 8 )：阿糖胞苷（ 2.5 g， 10 mmol ) , 第二中间产物 C8 ( 5 g, 15 mmol ) , PyBOP ( 5.2 g, 10 mmol )和 DMAP ( 0.2 g, 2 mmol ) 溶于 DMF ( 25 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液以水混悬，用乙酸乙酯萃取，萃取液用柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 8 ( 298.3 mg ) , LC ( UV 254 nm )纯度 95%。 LC-MS m/z 508 [M + H]⁺ (分子式 C₂₂H₂₅N₃0„, 分子量 507 ) 。合成路线 9:

第一中间产物 B9的合成（路线 9) ：将水杨酸（ 13.8 g, 100 mmol ) 与 1,6-己二醇（ 23.6 g, 200 mmol ) 混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80 °C反应 5个小时，反应结束后，通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B9。

第二中间产物 C9的合成（路线 9)：将第一中间产物 B9 (2.4g, lOmmol)溶于 THF (30 ml),然后加入戊二酸酐（ 1.6 g, 13 mmol )和 DMAP( 1.7 g, 13 mmol), 加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C9不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 9的合成（路线 9)：将阿糖胞苷（2.4g, lOmmol) ，第二中间产物 C9 (3.5g, lOmmol) , PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol) , 和 DMAP (0.12g, 1 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ),得到阿糖胞苷衍生物 9 (67.8 mg)。 LC( UV 254 nm )纯度 95%。 LC-MS m/z 578 [M + H]⁺(分子式 C₂₇H₃₅N₃O_u, 分子量 577) 。合成路线 10:

第一中间产物 BIO的合成（路线 10 ) ：将水杨酸（6.9 g, 50 mmol ) 与 1,8-辛二醇（ 14.6 g, 100 mmol )混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 12个小时，反应结束后，通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B10。

第二中间产物 C10的合成（路线 10 )：将第一中间产物 B10 ( 1.33 g, 5 mmol ) 溶于 THF (100 ml), 然后加入戊二酸酐（ 0.74 g, 6.5 mmol )和 DMAP ( 0.79 g, 6.5 mmol ) ,加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C10不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 10的合成（路线 10 ) ：将阿糖胞苷（ 1.2 g, 5 mmol ) , 第二中间产物 C10 ( 1.9 g, 5 mmol ) , PyBOP ( 3.1 g, 5 mmol ) , 和 DMAP ( 60 mg, 0.5 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 10 (44.7 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 96%。 LC-MS m/z 606 [M + H]+ (分子式 C29H39N30H , 分子量 605 ) 。合成路线 11:

第一中间产物 Bll的合成（路线 11)：将水杨酸（13.8g, 100 mmol)与 1,10- 癸二醇（34.8 g, 200 mmol) 混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 12 个小时，反应结束后，通过柱层析色普提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1) , 得到第一中间产物 Bll。

第二中间产物 C11的合成（路线 11)：将第一中间产物 Bll (2.9g, 10 mmol) 溶于 THF (100 ml), 然后加入戊二酸酐（ 1.4 g， 12 mmol )和 DMAP ( 1.5 g, 12 mmol ) , 加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 CI 1不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苷衍生物 11的合成（路线 11) ：将阿糖胞苷（2.4g, 10 mmol) , 第二中间产物 C11 ( 4.1 g, 10 mmol ) , PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol )和 DMAP ( 0.12 g, 1 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水石克酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =25/1 )，得到阿糖胞苷衍生物 11 (88.8 mg)。 LC( UV 254 nm )纯度 96%。 LC-MS m/z 634 [M + H]+(分子式 C₃₁H4₃N₃O_u, 分子量 633 ) 。

第一中间产物 B12的合成（路线 12 ) ：将水杨酸（3.45 g, 25 mmol ) 与 1,12- 十二二醇（10.1 g, 50 mmol ) 混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 5 个小时，反应结束后，通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B12。

第二中间产物 C12的合成（路线 12 )：将第一中间产物 B12 ( 0.966 g, 3 mmol ) 溶于 THF (30 ml), 然后加入戊二酸酐（ 0.455 g, 3.9 mmol )和 DMAP ( 0.475 g, 3.9 mmol ) ,加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C12不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞香衍生物 12的合成（路线 12 ) ：将阿糖胞苷（0.729 g, 3 mmol ) , 第二中间产物 C12 ( 1.308 g, 3 mmol ) , PyBOP ( 1.848 g, 3.3 mmol )和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 12 (20.9 mg)。 LC ( UV 254 nm )纯度 80%。 LC-MS m/z 662 [M + H]+ (分子式

, 分子量 661 ) 。合成路线 13：

第一中间产物 B13的合成（路线 13 ) ：将水杨酸（3.45 g, 25 mmol )与 1,6- 己二醇（ 5.9 g, 50 mmol ) 混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 5个小时，反应结束后，通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B13。

第二中间产物 C13的合成（路线 13 )：将第一中间产物 B13 ( 0.65 g, 2.74 mmol ) 溶于 THF (30 ml), 然后加入二甘醇酐（ 0.38 g, 3.29 mmol )和 DMAP ( 0.4 g, 3.29 mmol ) , 加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C13不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苦衍生物 13的合成（路线 13 )：将阿糖胞苷（0.67 g, 2.74 mmol ) , 第二中间产物 C13 ( 0.97 g, 2.74 mmol ) , PyBOP ( 1.5 g, 2.9 mmol )和 DMAP ( 0.05 g, 0.41 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水克酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 13 (50.5 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 91%。 LC-MS m/z 580 [M + H]+ (分子式 C₂₆H₃₃N₃0₁₂, 分子量 579 ) 。合成路 14：

第一中间产物 B14的合成（路线 14) ：将水杨酸（6.9 g, 50 mmol) 与 1,8-辛二醇（ 14.6 g, 100 mmol)混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 12个小时，反应结束后，通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B14。

第二中间产物 C14的合成（路线 14)：将第一中间产物 B14(0.48g, 1.8 mmol) 溶于 THF (30 ml), 然后加入二甘醇酐（ 0.25 g, 2.2 mmol )和 DMAP ( 0.27 g, 2.2 mmol ) ,加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C14不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞香衍生物 14的合成（路线 14 ) ：将阿糖胞苷（0.44 g, 1.8 mmol) , 第二中间产物 C14 (0.69 g, 1.8 mmol) , PyBOP ( 0.94 g, 1.8 mmol )和 DMAP ( 0.022 g, 0.18 mmol)溶于 DMF (5ml) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水克酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 14 (22.9 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 85%。 LC-MS m/z 608 [M + H]+ (分子式 C₂₈H₃₇N₃0₁₂, 分子量 607) 。

第一中间产物 B15的合成（路线 15)：将水杨酸（13.8 g, lOOmmol)与 1,10- 癸二醇（34.8 g, 200mmol) 混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 12 个小时，反应结束后，通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1) , 得到第一中间产物 B15。

第二中间产物 C15的合成（路线 15)：将第一中间产物 B15 (2.7g, 9.2 mmol ) 溶于 THF (50 ml),然后加入二甘醇酐（ 1.4 g, 12mmol )和 DMAP( 1.5g, 12 mmol ), 加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C15不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞香衍生物 15的合成（路线 15 )：将阿糖胞苷（ 1.3g, 5 mmol ) , 第二中间产物 C15 (2.1g, 5 mmol ) , PyBOP (2.9 g, 5.5 mmol ) , 和 DMAP (0.06g, 0.5 mmol )溶于 DMF (10 ml) , 室温搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =25/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 15 (120.6 mg)。 LC ( UV 254 nm )纯度 93%。 LC-MS m/z 636 [M + H]+ (分子式 C₃₀H₄₁N₃O₁₂, 分子量 635 ) 。合成 16：

第一中间产物 B16的合成（路线 16 ) ：将水杨酸（3.45 g, 25 mmol ) 与 1,12- 十二二醇（10.1 g, 50 mmol ) 混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 5 个小时，反应结束后，通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B16

第二中间产物 C16的合成（路线 16 )：将第一中间产物 B16 ( 0.966 g, 3 mmol ) 溶于 THF (30 ml), 然后加入二甘醇酐（ 0.452 g, 3.9 mmol )和 DMAP ( 0.475 g, 3.9 mmol ) ,加热回流反应 12小时，得到的第二中间产物 C16不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞香衍生物 16的合成（路线 16 ) ：阿糖胞苷（0.729 g, 3 mmol ) , 第二中间产物 C16 ( 1.314 g, 3 mmol ) , PyBOP ( 1.848 g, 3.3 mmol )和 DMAP ( 0.06 g, 0.5 mmol )溶于 DMF ( 30 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 16 (26.6 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 80%。 LC-MS m/z 664 [M + H]+ (分子式 C₃₂H₄₅N₃0₁₂, 分子量 663 ) 。

第一中间产物 B17的合成（路线 17 ) ：将水杨酸（ 13.8 g, 100 mmol ) 与 1,6- 己二醇（23.6 g, 200 mmol ) 混合，然后滴加 5滴浓石克酸，加热至 80 °C反应 5 个小时，反应结束后，通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B17。

第二中间产物 C17的合成（路线 17 )：将第一中间产物 B17 ( 1.5 g, 6.3 mmol ) 溶于 THF (30 ml), 然后加入邻苯二曱酸酐（ 1.05 g, 6.3 mmol )和 DMAP ( 0.84 g, 6.9 mmol ) , 加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C17不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苦衍生物 17的合成（路线 17 )：将阿糖胞苷（ 1.5 g， 6.3 mmol ) , 第二中间产物 C17 ( 2.43 g, 6.3 mmol ) , PyBOP ( 3.28 g, 6.3 mmol )和 DMAP ( 0.08 g, 0.65 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =30/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 17 (66.1 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 96%。 LC-MS m/z 612 [M + H]+ (分子式 C₃。H₃₃N₃0„, 分子量 611 ) 。合成路线

第一中间产物 B18的合成（路线 18 )：将水杨酸（6.9 g, 50 mmol )与 1,8-辛二醇（ 14.6 g, 100 mmol ) 混合，然后滴加 3滴浓硫酸，加热至 80°C反应 5个小时，反应结束后，通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B18。

第二中间产物 C18的合成（路线 18 ) : 将第一中间产物 B18 ( 2.00 g, 7.5 mmol ) 溶于 THF (100 ml), 然后加入邻苯二曱酸酐（ 1.45 g, 9.8 mmol )和 DMAP(1.20 g, 9.8 mmol), 加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C18不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苦衍生物 18的合成（路线 18 ) ：将阿糖胞苷（1.82 g, 7.5 mmol ) , 第二中间产物 C18 ( 3.11 g, 7.5 mmol ) , PyBOP ( 4.3 g, 8.3 mmol )和 DMAP ( 91.5 mg, 0.75 mmol )溶于 DMF ( 15 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 18 (78.8 mg)。 LC ( UV 254 nm )纯度 99%。 LC-MS m/z 640 [M + H]+ ( ^ 子式 C₃₂H₃₇N₃0„, 分子量 639 ) 。

第一中间产物 B19的合成（路线 19) ：将水杨酸 (13.8 g, 100 mmol )与 1,10- 癸二醇（34.8 g, 200 mmol)混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 5个小时，反应结束后，通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B19。

第二中间产物 C19的合成（路线 19)：将第一中间产物 B19 (3.0g, 10 mmol) 溶于 THF (100 ml), 然后加入邻苯二曱酸酐（ 1.8 g, 12mmol )和 DMAP ( 1.5g, 12 mmol ) ,加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C19不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞香衍生物 19的合成（路线 19)：将阿糖胞苷（2.4 g, 10 mmol ) , 第二中间产物 C19 (4.4g, 10 mmol) , PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol) , 和 DMAP (0.12 g, 1 mmol)溶于 DMF ( 10 ml) , 室温搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =25/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 19 (48 mg)。 LC ( UV 254 nm )纯度 94%。 LC-MS m/z 668 [M + H]+ (分子式 C₃₄H₄₁N₃O_n, 分子量 667) 。

第一中间产物 B20的合成（路线 20) ：将水杨酸（ 1.38 g, 10 mmol) 与 1,12- 十二二醇（4.04 g, 20 mmol) 混合，然后滴加 3滴浓硫酸，加热至 80°C反应 5 个小时，反应结束后，通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1) , 得到第一中间产物 B20。

第二中间产物 C20的合成（路线 20): 将第一中间产物 B20( 1.96g, 6.1 mmol) 溶于 THF (40 ml), 然后加入邻苯二曱酸酐（ 0.9 g, 6.1 mmol )和 DMAP ( 0.74 g, 6.1 mmol ) ,加热回流反应 12小时，得到的第二中间产物 C20不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞香衍生物 20的合成（路线 20) ：将阿糖胞苷（1 g, 4.1 mmol) , 第二中间产物 C20 ( 2.76 g, 6.1 mmol ) , PyBOP ( 2.35 g, 4.5 mmol )和 DMAP ( 0.05 g, 0.41 mmol)溶于 DMF ( 10 ml) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 20 (18.1 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 96%。 LC-MS m/z 696 [M + H]+ (分子式 C^H NsOn, 分子量 695 ) 。合成路线 2

第一中间产物 B21的合成（路线 21) ：将水杨酸（ 13.8 g, 100 mmol ) 与 1,6- 己二醇（23.6 g, 200 mmol) 混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 5 个小时，反应结束后，通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B21。

第二中间产物 C21的合成（路线 21)：将第一中间产物 B21 (7.2g, 30 mmol ) 溶于 THF (20 ml),然后加入酸酐（ 5.6 g, 36 mmol )和 DMAP ( 4.4 g, 36 mmol ) , 加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C21不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苦衍生物 21的合成（路线 21)：将阿糖胞苷（2.4 g, 10 mmol ) , 第二中间产物 C21 (3.9 g, 10 mmol) , PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol) , 和 DMAP (0.12 g, 1 mmol)溶于 DMF ( 10 ml) , 室温搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 21 (151.3 mg)。 LC ( UV 254 nm )纯度 96%。 LC-MS m/z 618 [M + H]+ (分子式 CsoH^On, 分子量 617) 。合成路线 22:

第一中间产物 B22的合成（路线 22 ) ：将水杨酸（6.9 g, 50 mmol ) 与 1,8-辛二醇（ 14.6 g, 50 mmol )混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 5个小时，反应结束后，通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B22。

第二中间产物 C22的合成（路线 22 )：将第一中间产物 B22 ( 1.4 g, 5.3 mmol ) 溶于 THF (20 ml),然后加入酸酐（ 0.97 g, 6.3mmol )和 DMAP( 0.77 g, 6.3 mmol ), 加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C22不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苦衍生物 22的合成（路线 22 )：将阿糖胞苷（1.7 g, 6.9 mmol ) , 第二中间产物 C22 ( 2.2 g, 5.3 mmol ) , PyBOP ( 3.6 g, 6.9 mmol ) , 和 DMAP ( 0.12 g, 1 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =25/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 22 (129.2 mg)。 LC ( UV 254 nm )纯度 98%。 LC-MS m/z 646 [M + H]+ (分子式 C H NsOn , 分子量 645 ) 。合成路线 23:

第一中间产物 B²3的合成（路线 ²3) ：将水杨酸（13.8g, lOOmmol)与 1,10- 癸二醇（34.8 g, 200 mmol)混合，然后滴加 5滴浓硫酸，加热至 80°C反应 12个小时，反应结束后，通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ), 得到第一中间产物 B23。

第二中间产物 C23的合成（路线 23)：将第一中间产物 B23 (3.0g, 10 mmol) 溶于 THF (100 ml),然后加入酸酐（ 2.0 g, 13 mmol )和 DMAP( 1.6g, 13 mmol ) , 加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C23不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞香衍生物 23的合成（路线 23 )：将阿糖胞苷（3.2 g, 13 mmol) , 第二中间产物 C23 (4.5 g, 10 mmol) , PyBOP ( 7.8 g, 15 mmol) , 和 DMAP (0.12 g, 1 mmol)溶于 DMF ( 10 ml) , 室温搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =25/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 23 (98.3 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 91%。 LC-MS m/z 674 [M + H]+ (分子式

分子量 673 ) 。

第一中间产物 B24的合成（路线 24 ) ：将水杨酸（ 1.38 g, 10 mmol ) 与 1,12- 十二二醇（4.04 g, 20 mmol ) 混合，然后滴加 3滴浓硫酸，加热至 80°C反应 5 个小时，反应结束后，通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：石油醚 /乙酸乙酯 =5/1 ) , 得到第一中间产物 B24。

第二中间产物 C24的合成（路线 24 )：将第一中间产物 B24 ( 0.8g, 2.5 mmol ) 溶于 THF (30 ml),然后加入酸酐（ 0.5 g, 3.2 mmol )和 DMAP( 0.4 g, 3.2 mmol ) , 加热回流反应 12小时。得到的第二中间产物 C24不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

阿糖胞苦衍生物 24的合成（路线 24 )：将阿糖胞苷（0.9g, 3.9 mmol ) , 第二中间产物 C24 ( 1.5 g, 3.2 mmol ) , PyBOP ( 2.0 g, 3.9 mmol ) ,和 DMAP ( 0.012 g, 0.1 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 24小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =25/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 24 (26.6 mg)。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 84%。 LC-MS m/z 702 [M + H]+ (分子式 C₃₆H₅₁N₃0„, 分子量 701 ) 。合成路线 25:

'N0₂

、皿 ₂

M25

H

第十中间产物 M25的合成（路线 25 ) ：将 1,8-辛二酸（3.48 g, 20 mmol )加入到 SOCl₂ ( 15 ml )中，加 DMF ( 1滴），加热回流，反应 3小时。旋去 SOCl₂, 得到的第十中间产物 M25不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

第十一中间产物 N25的合成 (路线 25 )：将邻硝基苯胺 ( 2.76 g, 20 mmol )溶于苯（20 ml)再加入吡啶 (8 ml), 室温下将邻硝基苯胺滴加到溶于苯 (40 ml)的第十中间产物 M25 ( 4.04 g, 20 mmol ) 中，反应 4h, 将溶剂蒸去。将反应物溶于水中，调节 PH值至酸性，过滤沉淀，水洗，将沉淀溶于异丙醇中，重结晶，析出土黄色固体的第十一中间产物 N25。

阿糖胞苦衍生物 25的合成（路线 25 ) ：阿糖胞苷（0.42 g, 1.7 mmol ) , 第十一中间产物 Ν25 ( 0.5 g, 1.7 mmol ) , PyBOP ( 0.97 g, 1.87 mmol )和 DMAP ( 0.021 g, 0.17 mmol )溶于 DMF ( 5 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，析出固体，固体再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 25 ( 31.3 mg ) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 95%。 LC-MS m/z 520 [M + H]⁺ (分子式 C₂₃H₂₉N₅0₉, 分子量 519 ) 。合成路线 26:

第十二中间产物 S26的合成（路线 26 ) ：将邻硝基苯曱酸（3.34 g, 20 mmol ) 和 SOCl₂ ( 12 ml )溶于 DMF ( 10 ml ) , 回流反应 2小时。得到的第十二中间产物 S26不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

第十三中间产物 Τ26的合成（路线 26 ):将第十二中间产物 S26( 3.6 g, 20 mmol ) 溶于 THF (20 ml), 滴加至丙氨酸（ 1.8 g, 20 mmol ) 的水溶液中，同时滴加氢氧化钠（ 0.8 g, 20 mmol )水溶液，控制 PH=8-9, 控制温度在 10°C左右。 30 min 滴加完毕，搅拌 40 min。调节 PH=3 , 减压蒸去 THF, 水溶液用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液无水克酸钠干燥，浓缩，放置重结晶，过滤，得淡黄色固体的第十三中间产物 Τ26。

第十四中间产物 U26的合成（路线 26 ) ：将阿糖胞苷（1.56 g, 6 mmol ) , 第十三中间产物 Τ26 ( 1.43 g, 6 mmol ) , PyBOP ( 3.12 g, 6 mmol )和 DMAP ( 0.07 g, 0.6 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =6/1 ) , 得到第十四中间产物 U26。

阿糖胞苷衍生物 26的合成（路线 26 )：将第十四中间产物 U26 ( about 40 mg , 0.086 mmol )溶于 THF (30 ml)加入催化量 Pd/C, 通入氢气，搅拌 2 h, 过滤，滤液旋干，得到阿糖胞苷衍生物 26 ( 24.7 mg ) 。 LC ( UV 254 nm ) 纯度 94%。 LC-MS m/z 434 [M + H]⁺ (分子式 C₁₉H₂₃N₅0₇, 分子量 433 ) 。

第十二中间产物 S27的合成（路线 27 ) ：将邻硝基苯曱酸（ 1.67 g, 10 mmol ) 和 S0C1₂ ( 10 ml )溶于 DMF ( 10 ml ) , 回流反应 2小时，得到的第十二中间产物 S27不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

第十三中间产物 Τ27的合成（路线 27 ):将第十二中间产物 S27( 1.8 g, 10 mmol ) 溶于 THF (20 ml), 滴加至氨基己酸（ 1.5 g, 12 mmol ) 的水溶液中，同时滴加氢氧化钠（0.96 g, 24 mmol )水溶液，控制 PH=8-9, 控制温度在 10°C左右。 30 min滴加完毕，搅拌 40 min。调节 PH=3 , 减压蒸去 THF, 水溶液用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，减压旋干，柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ) , 得到第十三中间产物 T27。

第十四中间产物 U27的合成（路线 27 ) ：将阿糖胞苷（2.4 g, 10 mmol ) , 第十三中间产物 Τ27 ( 2.8 g, 10 mmol ) , PyBOP ( 5.7 g, 11 mmol )和 DMAP ( 0.12 g, 1 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ) , 得到第十四中间产物 U27。

阿糖胞苷衍生物 27的合成（路线 27 )：将第十四中间产物 U27 ( about 40 mg , 0.08mmol)溶于 THF(30ml)加入催化量 Pd/C, 通入氢气，搅拌 2h, 过滤，滤液旋干，得到阿糖胞苷衍生物 27 (36.2 mg) 。 LC (UV 254 nm) 纯度 97%。 LC-MS m/z 476 [M + H]⁺ (分子式 C₂₂H₂₉N₅0₇, 分子量 475 ) 。

第十五中间产物 V28的合成（路线 28)：将邻硝基苯曱酸（ 1.67 g, 10 mmol) , 氨基己醇（1.17 g, 10 mmol) , PyBOP (5.72g, 10 mmol )和 DMAP ( 0.12 g, 1 mmol )溶于 DMF (10 ml) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =50/1),得到第十五中间产物 V28。第十六中间产物 W28的合成（路线 28 ):将第十五中间产物 V28( 2.1 g, 8 mmol ) 溶于 40毫升四氢呋喃中，然后加入邻苯二曱酸酐（ 1.48 g, 10 mmol)和 DMAP ( 1.22 g, 10 mmol) , 加热回流反应 12小时。得到的第十六中间产物 W28不经进一步纯化，直接用于下一步反应。

第十七中间产物 Υ28的合成（路线 28)：将阿糖胞苷（lg, 4.1 mmol) , 第十六中间产物 W28 ( 1.86 g, 4.5 mmol ) , PyBOP ( 2.35 g, 4.5 mmol )和 DMAP ( 0.05 g, 0.4 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =10/1 ) , 得到第十七中间产物 Y28。

阿糖胞苷衍生物 28的合成（路线 28 ):将第十七中间产物 Υ28( 50 mg, O.lmmol ) 溶于 THF (30 ml)加入催化量 Pd/C, 通入氢气，搅拌 2h, 过滤，滤液旋干，得到阿糖胞苷衍生物 28 ( 45.1 mg )。 LC ( UV 254 nm )纯度 94%。 LC-MS m/z 610 [M + H]⁺ (分子式 C₃。H₃₅N₅0₉, 分子量 609) 。合成路线 29:

第十五中间产物 V29的合成（路线 29) ：将烟酸（1.35g, 11 mmol) , 6-氨基 -1-己醇 B(1.17g, 10 mmol) , PyBOP (5.72 g, 11 mmol )和 DMAP (0.12 g, 1 mmol)溶于 DMF ( 10ml) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色语提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到第十五中间产物 V29。第十六中间产物 W29的合成（路线 29)：将第十五中间产物 V29 ( 1.14g, 5.1 mmol )溶于 40毫升四氢呋喃中，然后加入邻苯二曱酸酐（ 0.83 g, 5.6 mmol ) 和 DMAP (0.68 g, 5.6 mmol ) , 加热回流反应 12小时。得到的第十六中间产物 W29不经进一步纯化，直接用于下一步反应。阿糖胞香衍生物 29的合成（路线 29 ) ：阿糖胞苷（1 g, 4.1 mmol ) , 第十六中间产物 W29 ( 1.89 g, 5.1 mmol ) , PyBOP ( 2.35 g, 4.5 mmol )和 DMAP ( 0.05 g, 0.41 mmol )溶于 DMF ( 10 ml ) , 室温搅拌 12小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯（硅胶，展开剂：二氯曱烷 /曱醇 =15/1 ) , 得到阿糖胞苷衍生物 29 ( 32.1 mg ) 。 LC ( UV 254 nm )纯度 92%。 LC-MS m/z 596 [M + H]+ (分子式 C₂₉H₃₃N₅0₉, 分子量 595 ) 。

合成药物肿瘤细胞毒性试验操作规程

本发明的阿糖胞苷衍生物及其制剂对肿瘤细胞的抑制作用试验

1.试验材料

1)细胞株：

HL-60细胞株，悬浮生长，用含 10%胎牛血清（ Hyclone公司 )的 RPMI 1640细胞培养基培养，常规培养保持初始细胞浓度在 3*10⁵/ml左右，三天一次 1 : 3传代。实验前一天传代（5* 10⁵/ml ) , 实验时细胞浓度在

7.5~10*10⁵/ml之间。

BEL-7402细胞株和 HT-29细胞株，贴壁生长，用 10%胎牛血清 ( Hyclone公司 ) 的 D-MEM细胞培养基培养，常规培养初始细胞浓度在 3*10⁵/ml左右， 2~3天 1 : 3传代一次。实验前一天 1 : 2传代，实验时细胞浓度在 5~10*10⁵/ml之间。

2)药物的溶解与稀释:根据提供的阿糖胞苷衍生物的重量和分子量，首先加入 DMSO 100~200 μΐ, 然后加入生理盐水（NS ) , 使稀释后得到的药物浓度为 5 mM (注意 DMSO终浓度不超过 10% ) 。

3) D-MEM或 RPMI 1640细胞培养基， Gibco公司

4)胎牛血清， Hyclone公司

5)细胞消化液， 0.25 % Trypsin + 0.02 % EDTA 6) PBS磷酸盐緩沖液

7) MTT液， MTT干粉 (Sigma),用 PBS充分溶解配成 5 mg/ml, 0.22 μηι 微孔滤膜过滤后分装， -20 °C保存

8) 10 %酸化 SDS, 0.01N HC1

9)离心管、吸管等（BD公司）， 96孔板（Costar公司）

2.步骤：

1)细胞接种：传代后 24小时的细胞，生长状态良好。常规收获细胞，用新鲜培养液调整细胞浓度为 2xl0⁵/ml (贴壁细胞） ~3xl0⁵/ml (悬浮细胞）。

贴壁细胞接种 100 μΐ/孔， 37 °C、 5%C0₂孵箱中培养 24 h后弃去旧培养液，加入新鲜培养液 95 μΐ/孔。

悬浮细胞直接接种 95 μΐ/孔。

2)药物处理：每一药物设 6个浓度梯度，每一浓度设 3个复孔，药物空白对照组设 5 个复孔。每次试验同时做 Ara-C 对照。 HT-29 和 BEL-7402细胞加入药物的浓度依次为 5、 2.5、 1.25、 0.625、 0.3125、 0.16 mM, 每孔 5 μ1, 终浓度依次为 0.25、 0.125、 0.0625、 0.03125、 0.016、 0.008 mM, 对照组加入 5 μΐ生理盐水； HL60细胞加入药物的浓度依次为 5χ10^-3、 2.5X10"³, 1.25X10"³, 0·625χ10^-3、 0·3125χ10^-3、 0.16xlO"³mM, 对应终浓度依次为 2.5χ1(Τ⁴、 1.25χ1(Τ⁴、 6.25χ1(Τ⁵、 3·125χ10^-5、 1·6χ10^-5、 8xlO"⁶mM, 对照组加入 5 μΐ生理盐水。

3)细胞培养与检测：加入药物后， 37。C、 5%C0₂孵箱中培养 72h, 然后每孔加入 MTT 10 μΐ,继续培养 4 h,每孔加 100 μΐ 10%SDS(含 0.01N HC1 )溶解， 24 h后用 Bio-rad 680型 ELISA读数仪测定各孔吸光度（ A ) , 检测波长为 570nm、参考波长为 630nm。

4)计算：首先平均各复孔的吸光度（去除过于悬殊的数据），计算每种细胞每个药物浓度下的抑制率 (IR), IR(%)=(1- A_n/A₀)xl00%, 实验孔平均吸光度， Ao为药物空白对照孔平均吸光度。用 EXCEL软件，绘制药物浓度效应曲线，选择合理的计算方法计算 50 %细胞存活的药物浓度 ( IC₅₀ ) 。

图 3是本发明的阿糖胞苷衍生物抑制 BEL-7402肝癌细胞株的药物浓度-抑制率曲线图。 JF007、 JF017、 JF019、 JF020和 JF029分别为根据合成路线 7、 17、 19、 20和 29合成的阿糖胞苷衍生物。

表 1列举了代表性阿糖胞苷衍生物抑制不同肿瘤细胞的生物活性。其中， JF002、 JF003、 JF004和 JF006分别为根据合成路线 2、 3、 4和 6合成的阿糖胞苷衍生物。

表 1

试验证明，本发明的阿糖胞苷衍生物具有抗实体瘤的生物活性。

Claims

权利要求书

1、阿糖胞苷衍生物，其特征在于：所述阿糖胞苷衍生物是具有下述通式 ( I ) 的化合物：

通式 -I

其中， X是 OH、 0-P(0)(OR)₂和磷酸基中的任意一种，所述磷酸基包括单磷酸基、二磷目和三磷酸基；

是11、 C_M6烷基、环烷基、苄基、苯基和芳环基中的任意一种；

L是连接单元，用下面的任意一种结构单元表示：

其中， 11 = 0, 1-5; m = 0, 1-18; 曲线"、/ " 表示上述连接单元 L与其相邻基团以共价键相连；所述连接单元 L中苯环或环己烷环上的两个基团为邻位、间位或对位相连。

2、根据权利要求 1 所述的阿糖胞苷衍生物，其特征在于：所述通式（I ) 中的 X=OH的阿糖胞苷衍生物。

3、根据权利要求 1或 2所述的阿糖胞苷衍生物，其特征在于：所述阿糖胞苷衍生物的结构式是下述结构式的任意一种：

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、阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 1 )将水杨酸与脂肪族二元醇混合，然后滴加 3~5滴浓硫酸，加热至 80°C ~12个小时，反应结束后，减压蒸干或通过柱层析色语提纯，得到第一中间产物（B ) ；

( 2 )将步骤（ 1 ) 的第一中间产物（B )溶于 CH₂C1₂或四氢呋喃，然后加入酸酐化合物和 DMAP, 加热回流反应 5-12小时或室温下搅拌反应 24小时，得到的第二中间产物（C ) 不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 3 )将阿糖胞苷、第二中间产物（C ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12~24小时，反应液直接通过柱层析色语提纯得到得到通式（I )的阿糖胞苷衍生物或将该反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色语提纯，得到通式（I )的阿糖胞苷衍生物。

5、根据权利要求 4所述的阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：所述脂肪族二元醇为乙二醇、丁二醇、 1,6-己二醇、 1,8-辛二醇、 1,10-癸二醇和 1,12- 十二二醇中的任意一种；所述酸酐化合物为丁二酸酐、邻苯二曱酸酐、戊二酸酐和二甘醇酐中的任意一种。

6. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括以下步骤：

( 1 )水杨酸和碳酸钠溶于 3-氯丙醇中，加热回流 2.5小时，得到的反应液倒入冷水中分层，用 NaHC0₃溶液洗涤有机层至弱碱性，有机层再用少量饱和盐水洗涤后，加入无水克酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，得到第三中间产物 ( D ) , 直接用于下一步反应；

( 3 )将阿糖胞苷、第四中间产物（ E ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12~24小时，反应液直接通过柱层析色语提纯得到通式（I )的阿糖胞苷衍生物或将该反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色语提纯，得到通式（I )的阿糖胞苷衍生物。

7、根据权利要求 6所述的阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：所述酸酐化合物为丁二酸酐、邻苯二曱酸酐、戊二酸酐和二甘醇酐中的任意一种。

8. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括以下步骤：

( 1 )水杨酸曱酯和氨基丙醇溶于二氧六环中，室温搅拌 12小时，旋转蒸发除去溶剂，加饱和盐水，用盐酸调节 PH至 4~5后，用乙酸乙酯提取多次，乙酸乙酯液用无水克酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸干，所得第五中间产物（F ) 直接用于下一步反应；

( 2 )将第五中间产物（F )溶于 CH₂C1₂或四氢呋喃中，然后加入酸酐化合物和 DMAP, 室温下搅拌反应 24小时，过滤反应液，滤液减压蒸干，所得的第六中间产物（G ) 不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 3 )将阿糖胞苷、第六中间产物（ G ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12~24小时，反应液直接通过柱层析色语提纯得到通式（I )的阿糖胞苷衍生物或将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色语提纯，得到通式（I ) 的阿糖胞苷 †生物。

9、根据权利要求 8所述的阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：所述酸酐化合物为丁二酸酐、邻苯二曱酸酐、戊二酸酐和二甘醇酐中的任意一种。

10. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括以下步骤：

( 1 )邻曱氧基苯曱酸和 S0C1₂溶于二氯曱烷，加热回流 4小时，旋转蒸发除去溶剂和过量的 S0C1₂得到的第七中间产物（ H )；

( 4 )将阿糖胞苷、第九中间产物（ K ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12~24小时，反应液直接通过柱层析色谱提纯得到产品或将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水克酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯，得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。

11、根据权利要求 10所述的阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：所述酸酐化合物为丁二酸酐、邻苯二曱酸酐、戊二酸酐和二甘醇酐中的任意一种。

12. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括如下步骤：

( 2 )将邻硝基苯胺溶于苯再加入吡啶，滴加到溶解于苯的第十中间产物 ( M ) 中，反应 2~4h, 将溶剂蒸去，将反应物溶于水中，调节 PH值至酸性，过滤沉淀，水洗，将沉淀溶于异丙醇中，重结晶，析出固体的第十一中间产物 ( N ) ；

( 3 )将阿糖胞苷，固体的第十一中间产物（N ) , PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12小时,反应液倒入水中，析出固体，再通过柱层析色语提纯，得到通式（I ) 的阿糖胞苷衍生物。

13、根据权利要求 12所述的阿糖胞苷衍生物的合成路线，其特征在于：所述脂肪族二元酸为乙二酸、丁二酸、 1,6-己二醇和 1,8-辛二酸中的任意一种。

14. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括以下步骤：

( 1 )将邻硝基苯曱酸和 S0C1₂溶于 DMF, 回流反应 2小时，得到的第十二中间产物（S ) 不用进一步纯化，直接用于下一步反应。

( 2 )将第十二中间产物（S )溶于四氢呋喃，滴加至氨基酸化合物的水溶液中，同时滴加氢氧化钠水溶液，控制 PH=8~9, 控制温度在 10°C左右， 30 分钟滴加完毕，搅拌 40 分钟并调节 PH值至 3, 减压蒸去四氢呋喃，水溶液用乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液无水硫酸钠干燥、浓缩，放置重结晶，过滤，得固体的第十三中间产物（T) ；

所述氨基酸化合物为丙氨酸或氨基己酸；

( 3 )将阿糖胞苷、第十三中间产物（ T ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF , 室温搅拌 12小时，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯，得到第十四中间产物（U) ；

(4)将第十四中间产物（U)溶于四氢呋喃，催化氢解，搅拌，过滤，滤液旋干，得到高纯度的通式（I) 的阿糖胞苷衍生物。

15. 阿糖胞苷衍生物的合成路线，包括以下步骤：

( 1 )将硝基苯曱酸或烟酸、氨基己醇、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12小时，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯，得到第十五中间产物（V);

(2)将第十五中间产物（V)溶于四氢呋喃中，然后加入邻苯二曱酸酐和

DMAP,加热回流反应 12小时，得到的第十六中间产物（W)不经进一步纯化，直接用于下一步反应；

( 3 )将阿糖胞苷、第十六中间产物（ W ) 、 PyBOP和 DMAP溶于 DMF, 室温搅拌 12小时，反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取三次，乙酸乙酯液用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压蒸干，再通过柱层析色谱提纯，得到第十七中间产物（Y) ；

(4)将第十七中间产物（Y)溶于四氢呋喃，催化氢解，搅拌，过滤，滤液旋干，得到高纯度的通式（I) 的阿糖胞苷衍生物。

16、阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法，其特征在于：

( 1 )将通式（I)的阿糖胞苷衍生物溶解到水、生理盐水、环糊***溶液、水溶性的有机溶剂、非离子性的表面活性剂、水溶性的类脂、脂肪酸、脂肪酸酯和磷脂中的任意一种或多种的组合溶剂而制得制剂溶液；

17、根据权利要求 16的阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法，其特征在于：所述有机溶剂是乙醇、丙二醇、甘油、甘油酯、多聚乙二醇、 Ν,Ν-二曱基曱酰胺和二曱基亚砜中的任意一种或多种的组合溶剂。

18、阿糖胞苷衍生物制剂，其特征在于：是由权利要求 16的阿糖胞苷衍生物制剂的制备方法制备得到的产品。

19、权利要求 1的阿糖胞苷衍生物在抗癌抗肿瘤中的用途。

20、根据权利要求 19 的阿糖胞苷衍生物在抗癌抗肿瘤中的用途，其特征在于：癌症包括白血病、固体瘤、肺癌、结肠癌、肝癌、中枢神经***肿瘤、卵巢癌、肾癌。

21、权利要求 18 的阿糖胞苷衍生物制剂在抗癌抗肿瘤中的用途。

22、根据权利要求 21 的阿糖胞苷衍生物制剂在抗癌抗肿瘤中的用途，其特征在于：癌症包括白血病、固体瘤、肺癌、结肠癌、肝癌、中枢神经系统肿瘤、卵巢癌和肾癌。

23、权利要求 21 的阿糖胞苷衍生物制剂在抗癌抗肿瘤中的用途，其特征在于：所述阿糖胞苷衍生物制剂与其他化疗药物联合用药，所述其他化疗药物包括烷化剂、植物生物碱类、抗菌抗肿瘤磺酰胺类药物、铂类药物、抗代谢类及其它已知的抗癌药物。

24、根据权利要求 23 的阿糖胞苷衍生物制剂在抗癌抗肿瘤中的用途，其特征在于：在联合用药过程中，包括运用至少一种具有权利要求 5的结构式的阿糖胞苷衍生物。