WO2010126011A1 - 簡易メンブレンアッセイ装置 - Google Patents

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WO2010126011A1
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fiber
assay device
membrane assay
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simple membrane
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敬伯 廣瀬
浩一 稲野
清水　英晴
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デンカ生研株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a simple test kit for clinical tests.
  • the present invention relates to a simple membrane assay device using a lateral flow immunoassay.
  • pathogen test reagents are sold at general pharmacies, and pathogen test reagents are widely used in hospitals and clinics.
  • pathogen testing if the presence or absence of infection is confirmed, treatment can be performed at an early stage, and therefore, the importance of simple test reagents in medical settings is increasing.
  • immunoassay utilizing antigen-antibody reaction is generally known as a simple test method, and many lateral flow test reagents are on the market.
  • the principle of this test reagent is a method in which a specimen sample containing an object to be detected is horizontally developed on a nitrocellulose membrane, and a complex of a label that specifically binds to the object to be detected is formed on the membrane. is there. By detecting or quantifying the label, the detection target can be detected or quantified.
  • this lateral flow immunoassay a detection part in which an antibody that specifically binds to a detection target is immobilized on a membrane strip such as nitrocellulose as a capture substance, and a specific detection target.
  • a membrane strip such as nitrocellulose as a capture substance
  • a specific detection target Supply a fixed amount of a specimen sample containing a detected substance to a test device having a labeled part containing a label to be bound, and develop it while forming a complex of the detected substance-labeled object. By capturing this complex, the label is detected or quantified.
  • an antibody that specifically binds to an object to be detected is labeled with gold particles as a label, but recently, colored latex is used instead of gold particles.
  • Measurement systems using particles, fluorescent latex particles, magnetic latex particles, and the like have been established, and the objects to be measured are being further expanded.
  • the lateral flow immunoassay method if an antibody can be prepared, a wide range of target pathogenic microorganism antigens can be measured.
  • the time required for measurement is 5 to 15 minutes.
  • a highly sensitive measurement method is required in a shorter time, and many improved studies are being conducted.
  • the label is used in a state where latex particles are labeled as a marker on an antibody that specifically binds to the detection target, and lyophilized or dried in warm air (including natural drying). Since it takes time to release and restore the labeled body, and the labeled body may stay without being developed, there is a problem in performing rapid and sensitive detection.
  • Patent Document 1 discloses that a labeled body is quickly restored and developed in a specimen sample by using a surfactant, and a saccharide is contained in the latex particles in the drying process. It discloses that self-aggregation is suppressed.
  • a simple membrane assay device using a lateral flow immunoassay that can detect a component to be detected with high sensitivity, with a substrate having a higher tensile strength than glass fiber and a good release of the labeled body as a labeled body drying pad I will provide a.
  • a detection unit having a support plate, a sample supply unit, a labeled body unit including a labeling component for labeling the detection target, and a capture substance for detecting or quantifying the detection target
  • a simple membrane assay device characterized in that a non-woven fabric containing a development part formed with a absorbent part and a fiber having a fiber diameter of 0.05 to 10 ⁇ m is used for the marker part.
  • the fiber may be a synthetic fiber.
  • the nonwoven fabric may be a nonwoven fabric in which a plurality of the fibers are bonded to each other.
  • the non-woven fabric may be a non-woven fabric formed of split fibers obtained by splitting split fiber type composite fibers in which a plurality of fiber components are bonded to each other.
  • the split fiber type composite fiber has a structure in which a plurality of second fiber components having a fiber diameter of 1 ⁇ m to 10 ⁇ m are arranged on the outer periphery of a cross section of the first fiber component having a fiber diameter of 6 ⁇ m to 20 ⁇ m. You may have.
  • the labeling component may be labeled with any of gold colloid particles, platinum colloid particles, latex particles, magnetic particles, and enzymes.
  • the labeling component and the capture substance may be an antibody or an antigen-binding fragment that binds to the detection target.
  • the detected object may be a microorganism, a biological substance that is a clinical marker, an agrochemical, an environmental hormone, or a degradation product thereof.
  • the detected object may be detected or quantified by a lateral flow type membrane assay.
  • the simple membrane assay apparatus may further include a verification unit for verifying that the labeling component has been released to the development unit.
  • a plurality of types of the labeling component and the capture substance may be used in order to detect a plurality of types of the objects to be detected.
  • the composite fiber refers to a fiber in which a plurality of fiber components continuous in the length direction of the fiber are bonded to each other as long as it includes two or more kinds of fiber components of different materials.
  • the split fiber type composite fiber means a composite fiber having a structure in which each fiber component constituting the composite fiber can be divided.
  • split fiber processing consists of split fiber type composite fiber by a method that matches the method of bonding fiber components such as applying high-pressure water flow to split fiber type composite fiber, applying heat, or immersing in solvent. It is said that each fiber component is divided, and each divided fiber component is called split fiber.
  • a lateral flow immunoassay method that can detect a component to be detected with high sensitivity and has a substrate having a tensile strength stronger than glass fiber and a good release of the labeled body as a labeled body drying pad is used.
  • a simple membrane assay device was provided.
  • Schematic diagram of a simple membrane assay device 100 according to an embodiment of the present invention Schematic diagram of split fiber type composite fiber 200 according to an embodiment of the present invention
  • glass fiber or non-woven fabric is generally used for the marker dry pad, but when the glass fiber is processed into a sheet, the marker is released, but the tensile strength is low and the manufacturing process is low. There was a drawback of being restricted. In addition, when synthetic fibers are used, there is a drawback that the tensile strength is high, but the release of the label is poor. A method for overcoming these drawbacks has been intensively studied.
  • the marker dry pad of the marker part according to the present invention is formed of a nonwoven fabric having a high tensile strength and in which a plurality of ultrafine fiber components are bonded to each other.
  • a method of forming a nonwoven fabric of ultrafine fibers a method of forming a split fiber type composite fiber by splitting, a melt blow method, a method of forming a web by a direct spinning method to form a nonwoven fabric, a sea island structure fiber There are a method of dissolving the sea part and forming a nonwoven fabric on the island part, laser stretching, electrospinning and the like.
  • the labeled body dry pad of the labeled body portion according to the present invention may be any manufacturing method as long as it is a nonwoven fabric mainly containing ultrafine fibers having a fiber diameter of 0.05 ⁇ m to 10 ⁇ m, and is not limited thereto. It is not something.
  • a lateral flow immunoassay method uses a simple membrane assay device including a membrane to which a capture substance for capturing a target is bound, and a simple membrane assay for a target in a specimen sample. It is.
  • the simple membrane assay device is characterized in that the presence of an object to be detected in a specimen sample is detected or quantified using a non-woven fabric made of ultrafine fibers as a base material constituting a labeled body portion.
  • the lateral flow immunoassay is a method in which a solution containing a detection object is spread horizontally on a membrane coated with a capture reagent or a detection substance that specifically binds to the detection object.
  • a complex of a capture substance that specifically binds to the detected substance, a detected substance, and a labeled substance that specifically binds to the detected object is formed on the membrane, and the detected or detected substance is detected.
  • This is a method for detecting or quantifying an object.
  • a detection target, a capture substance, and a label are reacted to form a sandwich-like complex having a structure of capture substance-detection target-label on the membrane, and the label is detected.
  • This is a method for detecting the presence of this complex. In this method, the presence or absence of an object to be detected in a specimen sample can be easily examined in a short time.
  • FIG. 1 is a schematic diagram of a simple membrane assay apparatus 100 according to the present embodiment.
  • the top of FIG. 1 is a top view and the bottom is a cross-sectional view.
  • a detection unit 120 for example, a detection unit 120, a nitrocellulose membrane 140 formed with a control line 130, an absorption pad 150 formed with filter paper, and a label are dried on a plastic plate 110 as a support substrate.
  • the label drying pad 160 to be held and the sample supply pad 170 installed to supply the prepared specimen sample are laminated.
  • One end region of the absorbent pad 150 and one end region of the nitrocellulose membrane 140, the other end region of the nitrocellulose membrane 140 and one end region of the marker dry pad 160, and the marker dry pad 160 are overlapped, thereby forming a continuous lateral flow channel.
  • the simple membrane assay device 100 may have a well-known configuration of the assay device except that a non-woven fabric (extra-fine fiber non-woven fabric) mainly containing ultra-fine fibers is used as the labeled body drying pad 160.
  • a non-woven fabric extra-fine fiber non-woven fabric mainly containing ultra-fine fibers
  • the composite fiber refers to a fiber in which a plurality of fiber components continuous in the length direction of each fiber are bonded to each other on the side surface, and includes two or more fiber components of different materials.
  • the split fiber type composite fiber means a composite fiber having a structure in which each fiber component constituting the composite fiber can be divided.
  • FIG. 2 is a schematic diagram showing an example of the structure of the split-fiber type composite fiber 200.
  • the split fiber composite fiber 200 includes, for example, a core fiber component 201 and an ultrafine split fiber component 202.
  • the split fiber type composite fiber 200 has, for example, a structure in which a plurality of ultrafine split fiber components 202 having a fiber diameter of 1 ⁇ m to 10 ⁇ m are arranged on the outer periphery of a cross section of a core fiber component 201 having a fiber diameter of 6 ⁇ m to 20 ⁇ m. What has is preferable.
  • split fiber type composite fiber 200 a structure in which a plurality of ultrafine fiber components 202 are arranged on the outer periphery of the cross section of the core fiber component 201 is illustrated, but two fiber components having a fiber diameter of 1 ⁇ m to 10 ⁇ m are illustrated. May be a split fiber having a two-layered parallel structure in which two fiber components having a fiber diameter of 1 ⁇ m to 10 ⁇ m are alternately laminated, or the like.
  • each fiber As a material constituting each fiber according to the present embodiment, synthetic fibers such as nylon, vinylon, acrylic, polyolefin, polyurethane, and polyester can be used from the viewpoint of strength.
  • synthetic fibers such as nylon, vinylon, acrylic, polyolefin, polyurethane, and polyester
  • the core fiber component 201 is made of a polyolefin resin such as polyethylene resin
  • the ultrafine split fiber component 202 is made of a polyester resin is a preferred example.
  • the efficiency of releasing the marker from the marker dry pad 160 is improved.
  • the ultrafine fiber nonwoven fabric according to this embodiment is manufactured by, for example, a spunbond method, which is a manufacturing method for obtaining a long fiber nonwoven fabric. Since the fiber length of the fiber produced by the spunbond method is long, the ultrafine fiber nonwoven fabric mainly including such a long fiber is sufficiently required for the ultrafine fiber nonwoven fabric for a marker dry pad according to the present embodiment. High tensile strength can be provided.
  • the ultrafine fiber nonwoven fabric for a marker dry pad according to the present embodiment may be manufactured using a melt blow method or the like as long as it mainly includes an ultrafine split fiber component having a fiber diameter of 1 ⁇ m to 10 ⁇ m. .
  • split-type composite fiber 200 When the split-type composite fiber 200 is manufactured, for example, a water splitting method (spun lace method) in which a high-pressure water flow is applied to the split-type composite fiber, a method of applying heat, a method of bonding between fiber components, such as a method of immersing in a solvent.
  • the splitting process is performed to divide each fiber component constituting the split-type composite fiber by a method according to the above, a needle punch method, or the like.
  • FIG. 3 is a schematic view showing the composite fiber 250 after the split fiber treatment.
  • the fiber is split into a core split fiber 201 having a fiber diameter of 6 ⁇ m to 20 ⁇ m and an ultrafine split fiber 202 having a fiber diameter of 1 ⁇ m to 10 ⁇ m, and the respective fibers are dissociated.
  • the dissociated core split fiber 201 and the ultrafine split fiber 202 are entangled densely to form a nonwoven fabric.
  • an ultrafine fiber nonwoven fabric mainly composed of ultrafine fibers having a fiber diameter of 1 ⁇ m to 10 ⁇ m made of split fiber type composite fibers is used as a marker dry pad. Even if the nonwoven fabric is manufactured by a method other than fiber, it can be used as a marker dry pad as long as it is an ultrafine fiber nonwoven fabric mainly containing ultrafine fibers having a fiber diameter of 0.05 ⁇ m to 10 ⁇ m.
  • the detection target according to the present embodiment is not limited at all, and may be any substance capable of antigen-antibody reaction with an antibody such as various pathogens and various clinical markers.
  • virus antigens such as influenza virus, adenovirus, RS virus, HAV, HBs, HIV, norovirus, rotavirus, bacterial antigens such as MRSA, group A streptococci, group B streptococci and legionella, bacteria, etc.
  • Toxins Mycoplasma, Chlamydia trachomatis, hormones such as human chorionic gonadotropin, C-reactive protein, myoglobin, cardiac troponin, various tumor markers, agricultural chemicals, environmental hormones, and the like can be exemplified.
  • pathogenic microorganisms or substances such as proteins derived from the pathogenic microorganisms or antibodies against them as the detection target, such as influenza virus, RS virus, adenovirus, group A streptococcus, pneumonia mycoplasma, rotavirus and norovirus
  • influenza virus RS virus
  • adenovirus adenovirus
  • group A streptococcus adenovirus
  • pneumonia mycoplasma rotavirus
  • norovirus norovirus
  • the detected substance may be an antigen capable of inducing an immune reaction alone, or a hapten capable of binding an antibody by an antigen-antibody reaction although it cannot induce an immune reaction alone.
  • the capture substance according to this embodiment may be a polyclonal antibody or a monoclonal antibody as long as it is an antibody that undergoes an antigen-antibody reaction with a target to be immunoassayed.
  • an antigen-binding fragment of the antibody may be bound to a label instead of or together with the antibody.
  • An antigen-binding fragment is an antibody fragment capable of antigen-antibody reaction with a corresponding antigen, such as an antibody Fab or F (ab ′) 2 fragment.
  • these antigen-binding fragments can be obtained by treating an antibody with a proteolytic enzyme such as papain or pepsin and purifying it.
  • an antibody produced by genetic engineering or an antigen-binding fragment thereof can be used.
  • Examples of the label according to the present embodiment include gold colloid particles, platinum colloid particles, colored latex particles, magnetic particles, fluorescent particles, and enzymes.
  • the labeled body according to the present embodiment is bound with an antibody that reacts with an object to be detected as an antigen and / or an antigen-binding fragment thereof.
  • the label can be bound to the detection object via the antibody or the antigen-binding fragment.
  • the binding property that is, the site of the analyte to which the antibody or antigen-binding fragment binds (recognizes) is prevented, so that the binding site between the capture substance and the label is prevented from competing, and the detection efficiency of the analyte is improved. Decreasing can be avoided.
  • the manufacturing method of the marker dry pad which concerns on this embodiment is demonstrated.
  • the marker In the process of drying the marker, the marker is dried while attached to the fibers of the member used as the marker drying pad.
  • a solution containing a predetermined amount of the labeled body is soaked into the ultrafine fiber nonwoven fabric for a labeled body drying pad according to this embodiment by a method such as coating, spraying or dipping. Then, it dries by warm air drying or natural drying.
  • the surface area of the fiber per unit length is larger than that of the fiber having a fiber diameter of 10 ⁇ m to 30 ⁇ m. Become. Thereby, the marker is uniformly dried in a more dispersed state throughout the nonwoven fabric. Moreover, in the ultrafine fiber nonwoven fabric according to the present embodiment mainly including ultrafine fibers, the flow of the sample liquid due to the capillary phenomenon is promoted.
  • a specimen sample in which a specimen is suspended / extracted in a specimen suspension / extraction buffer is prepared.
  • the specimen sample can be prepared using a known technique corresponding to the object to be detected.
  • a label dry pad 160 in which an antibody that reacts with a detected substance with an antigen antibody is labeled with a label, and further captures an antibody that reacts with the detected object with an antigen antibody.
  • the detection unit 120 that is solid-phased as a substance, a substance that can bind the label to a position downstream of the position where the capture substance is bonded, for example, a substance having a reactivity equivalent to that of the detection object or
  • the analyte sample is supplied to a sample supply pad 170 of an assay device including a control line 130 on which an antibody that binds to a label is solid-phased.
  • the specimen sample containing the detection object develops the label while moving on the membrane in the horizontal direction by capillary action, so that if the detection object exists, a complex of the detection object and the label is formed. Further, when the detection part 120 is reached, a complex of the capturing substance-detected object-labeled body is formed on the line. The presence of the complex is detected by the label in the complex, and as a result, the presence or absence of an object to be detected in the specimen sample is determined. In addition, it is possible to confirm for each test that the labeling body is released from the labeling body drying pad and flows on the membrane to which the capture substance is bound by the control line 130 serving as a verification unit.
  • the detection unit 120 performs an antibody-antigen-binding fragment of an antibody or an antigen-binding fragment thereof capable of antigen-antibody reaction with a substance to be detected and capable of binding to the detection object simultaneously with the antibody on the label or the antigen-binding fragment thereof. This is a region solidified in a line. Other components that are not involved in the reaction are absorbed by the absorbent pad 150.
  • the simple membrane assay device according to the present invention of the present embodiment uses a microfiber non-woven fabric for the labeled body drying pad, thereby providing a sufficient tensile strength required for the labeled body drying pad and a capillary phenomenon.
  • the release efficiency at the time of restoration of the dried label is improved, and the detection target can be measured quickly and with high sensitivity.
  • FIG. 4 is a schematic diagram of a simple membrane assay device 300 according to the second embodiment.
  • the simple membrane assay device 300 includes a detection unit A321 and a detection unit B323. Moreover, it has the control line 330 corresponding to the change to the detection part A321 and the detection part B323, and the marker dry pad 360.
  • the number of detection units is not limited to two.
  • an antibody or an antigen-binding fragment having a different detection target is solid-phased in a line shape as a capture substance.
  • the detection of a plurality of types of objects can be detected and identified by the position of each detection unit on the nitrocellulose membrane which is the development unit.
  • easy identification can be performed by changing the color of each label or the fluorescent substance.
  • the marker dry pad 360 is soaked with the two types of markers produced in this manner in the ultrafine fiber nonwoven fabric mainly including the ultrafine fibers having the fiber diameter of 0.05 ⁇ m to 10 ⁇ m described in the first embodiment. Dry.
  • the labeled body drying pad 360 according to the present embodiment mainly containing extra fine fibers is more uniformly dried than the conventional labeled body drying pad in a state where the labeled body is dispersed throughout the nonwoven fabric. Flow is promoted.
  • the labeled body drying pad Accordingly, in the labeled body drying pad according to the present embodiment, release at the time of restoration of the dried labeled body is promoted, the supply amount of components involved in the reaction to the measurement system is improved, and the reaction is efficiently performed. Progresses. For this reason, by using two or more kinds of labeled bodies, even when a predetermined amount per one type of labeled body to be soaked is reduced, a lateral flow type immunoassay reagent is used to quickly and highly sensitively detect an object to be detected. Can be measured.
  • control line 330 the above-described two types of labeled bodies and antibodies or antigen-binding fragments can be immobilized in a line. Thereby, it can be confirmed for each test that the label is released from the label dry pad and flows on the membrane to which the capture substance is bound.
  • Table 1 shows the physical properties of the nonwoven fabrics used in Example 1 and Comparative Examples 1 to 3.
  • Comparative Example 1 had a low tensile strength and was not suitable for use in manufacturing equipment. Since Example 1, Comparative Example 2, and Comparative Example 3 are nonwoven fabrics made of synthetic fibers, they were strong and could be used in manufacturing equipment.
  • Example 1 had the highest release rate
  • Comparative Example 1 and Comparative Example 2 had the same release rate
  • Comparative Example 3 had the lowest release rate. It was confirmed that the release efficiency of the labeled body from Example 1 was high.
  • a simple membrane assay apparatus having the same configuration as that shown in FIG. 4 was used.
  • An anti-influenza A virus antibody and an anti-influenza B virus antibody were linearly applied to a strip-shaped member obtained by backing the nitrocellulose membrane 140 with a plastic plate 110 and dried well under warm air.
  • An absorbent pad 150 was placed on top of this.
  • a marker dry pad 360 was placed over the lower end of the nitrocellulose membrane 140, and a sample supply pad 170 for feeding the specimen was placed over the pad.
  • a test sheet was prepared by cutting a plastic sheet covering the other part of the sample pad so that a part of the sample pad was exposed to a predetermined width.
  • influenza A virus and influenza B virus were used.
  • the specimen was used as a specimen by performing 2-fold serial dilution using a predetermined buffer for specimen suspension and extraction.
  • the test device was placed horizontally, 50 ⁇ L of the specimen sample and a negative control sample consisting only of a predetermined buffer for extraction were supplied to the sample supply pad 170, and the label was developed. The determination was made by visually observing the presence or absence of a colored line in the detection part after 8 minutes. With coloring line: Positive (+) No coloring line: Negative (-)
  • Example 1 and Comparative Examples 1 to 3 were the same as the nonwoven fabrics used in the above test, and the test was performed using the marker dry pad 360.
  • Example 3 The detection results of influenza virus antigens are shown in Table 3.
  • Example 1 the determination of influenza A virus was positive until 1: 3200, and the detection sensitivity was higher than the determination of type A in Comparative Examples 1 to 3.
  • the determination of influenza B virus in Example 1 was positive up to 1: 1600, and the sensitivity was higher than the determination of type B in Comparative Examples 1 to 3.
  • the negative control sample showed negative in all Examples and Comparative Examples.
  • Example 1 detects a smaller amount of virus in influenza A virus than in Comparative Examples 1 to 3. Also in the influenza B virus, Example 1 detects a smaller amount of virus than Comparative Examples 1 to 3.
  • the result of the detection sensitivity test reflects the measurement result of the release rate of the labeled body, and the detection sensitivity increases as the release rate of the labeled body increases.
  • the release efficiency of the labeled body from the labeled dry pad is improved, and influenza A and B viruses can be detected with high sensitivity.

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Abstract

ガラス繊維より引っ張り強度が強く、かつ標識体の放出がよい基材を標識体乾燥パッドとして備えた、高感度に被検出成分を検出することができるラテラルフロー免疫測定法を用いた簡易メンブレンアッセイ装置を提供する。本発明によると、支持板と、試料供給部と、被検出物を標識する標識成分を含む標識体部と、前記被検出物を検出または定量するための捕捉物質を有する検出部が形成された展開部と、吸収部とを有し、繊維径が０.０５～１０μｍの繊維を含む不織布を前記標識体部に用いることを特徴とする簡易メンブレンアッセイ装置が提供される。

Description

簡易メンブレンアッセイ装置
　本発明は、臨床検査用の簡易検査キットに関する。特にラテラルフロー免疫測定法を用いた簡易メンブレンアッセイ装置に関する。
　近年、ウイルスや細菌等の病原体感染の有無、妊娠の有無などの様々な検査を短時間で行う簡易検査試薬やキットが開発されている。これらは、病原体構成成分、ホルモン等が検出あるいは定量の対象である。このような簡易検査試薬の多くは、特別な設備、機器を必要とせず操作も簡便で安価であるという特徴を有している。
　例えば、妊娠検査試薬は一般薬局で販売されており、また病原体の検査試薬は病院、診療所で広く使用されている。病原体の検査に関しては、感染の有無が確認されれば、早い段階で治療措置を施すことができるため、医療の場における簡易検査試薬の重要性が高まってきている。
　現在、簡易検査の方法として、抗原抗体反応を利用した免疫測定法が一般的に知られており、ラテラルフロー方式の検査試薬が多く販売されている。この検査試薬の原理は、ニトロセルロースメンブレンに対して、被検出物を含む検体試料を水平方向に展開させ、メンブレン上に被検出物と特異的に結合する標識体の複合体を形成させる方法である。この標識体を検出または定量することにより、被検出物を検出または定量することができる。
　このラテラルフロー免疫測定法の一つの形態としては、ニトロセルロース等のメンブレンストリップ上に被検出物に特異的に結合する抗体を捕捉物質として固相化した検出部、及び被検出物に特異的に結合する標識体を含む標識体部を備えた検査デバイスに、被検出物を含む検体試料を一定量供給して、被検出物－標識体の複合体を形成させながら展開して、検出部でこの複合体を捕捉することで標識体を検出あるいは定量する。
　前記のようなメンブレンを用いた測定系において、従来は標識体として被検出物に特異的に結合する抗体に金粒子を標識したものが広く用いられていたが、最近では金粒子に代え着色ラテックス粒子、蛍光ラテックス粒子、磁性ラテックス粒子等を用いた測定系が確立され、測定対象もより拡大されつつある。特にラテラルフロー免疫測定法では、抗体を調製することができれば、広範囲の対象病原微生物抗原が測定可能となるので、有力な簡易検査試薬として大いに期待されている。
　一般的には、ラテラルフロー免疫測定法は、測定（反応）に要する時間が５～１５分である。インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ノロウイルス等の検出と治療措置に急を要する項目の簡易検査としては、より短時間で高感度な測定方法が求められており、多くの改良研究が行われている。
　標識体は、被検出物と特異的に結合する抗体にマーカーとしてラテックス粒子を標識し、凍結乾燥、または温風乾燥（自然乾燥も含む）させた状態で用いているが、検出試験の際に標識体の放出および復元に時間がかかり、また標識体が展開されずに滞留することがあるため、迅速に高感度検出を行うには問題がある。
　このような問題に対する解決手段として、例えば特許文献１は、界面活性剤を用いることで標識体を検体試料中で速やかに復元・展開すること、糖類を含有させることで乾燥工程中のラテックス粒子の自己凝集を抑制すること等を開示している。
　一方で、標識体を含ませる基材に着目すると、ラテックス粒子等の標識体を含ませる基材としてよく使用されるガラス繊維をシート状に加工した素材は、標識体の放出はよいが、引っ張り強度が弱く製造工程での制約を受けるという欠点がある。また、引っ張り強度が強い素材としては合成繊維があるが、この基材に標識体を乾燥させた標識体乾燥パッドからの標識体の放出は悪く、短時間での高感度な簡易検出試薬には適さないという欠点がある。このようにこれまでは、標識体の放出がよく、かつ引っ張り強度が強い標識体乾燥パッドとしての基材は使用されてこなかった。
特開２００８－２０３１３５号公報
　ガラス繊維より引っ張り強度が強く、かつ標識体の放出がよい基材を標識体乾燥パッドとして備えた、高感度に被検出成分を検出することができるラテラルフロー免疫測定法を用いた簡易メンブレンアッセイ装置を提供する。
　本発明の一実施形態によると、支持板と、試料供給部と、被検出物を標識する標識成分を含む標識体部と、前記被検出物を検出または定量するための捕捉物質を有する検出部が形成された展開部と、吸収部とを有し、繊維径が０．０５～１０μｍの繊維を含む不織布を前記標識体部に用いることを特徴とする簡易メンブレンアッセイ装置が提供される。
　簡易メンブレンアッセイ装置において、前記繊維が、合成繊維であってもよい。
　簡易メンブレンアッセイ装置において、前記不織布は、複数の前記繊維が互いに接着した不織布であってもよい。
　簡易メンブレンアッセイ装置において、前記不織布が、複数の繊維成分が互いに接着されてなる割繊型複合繊維を割繊処理した割繊繊維により形成された不織布であってもよい。
　簡易メンブレンアッセイ装置において、前記割繊型複合繊維が、繊維径が６μｍから２０μｍである第１の繊維成分の断面外周に繊維径が１μｍから１０μｍである第２の繊維成分を複数配置した構造を有してもよい。
　簡易メンブレンアッセイ装置において、前記標識成分が金コロイド粒子、白金コロイド粒子、ラテックス粒子、磁性粒子、酵素の何れかにより標識されてもよい。
　簡易メンブレンアッセイ装置において、前記標識成分および前記捕捉物質は、前記被検出物と結合する抗体または抗原結合性断片であってもよい。
　簡易メンブレンアッセイ装置において、前記被検出物が、微生物、臨床マーカーである生体由来物質、農薬、環境ホルモンまたは、それらの分解物であってもよい。
　簡易メンブレンアッセイ装置において、前記被検出物をラテラルフロー方式メンブレンアッセイ法で検出または定量してもよい。
　簡易メンブレンアッセイ装置において、前記展開部に前記標識成分が放出されたことを検証するための検証部をさらに有してもよい。
　簡易メンブレンアッセイ装置において、複数の種類の前記被検出物を検出するために、前記標識成分及び前記捕捉物質をそれぞれ複数の種類用いてもよい。
　ここで複合繊維とはそれぞれ繊維の長さ方向に連続した複数の繊維成分が側面同士において接着したものをいい、材料の異なる繊維成分を２種類以上含むものであればよい。
　さらに割繊型複合繊維とは、複合繊維を構成する各繊維成分が分割可能な構造を有する複合繊維をいう。
　また、割繊処理とは例えば割繊型複合繊維に高圧水流を当てる方法や熱を加える方法、溶剤に浸す方法等の繊維成分間の接着方法に合わせた方法により、割繊型複合繊維を構成する繊維成分ごとに分割することをいい、分割された各繊維成分を割繊繊維という。
　なお、不織布はスパンボンド法で製造することが好ましい。
　本発明によると、ガラス繊維より引っ張り強度が強く、かつ標識体の放出がよい基材を標識体乾燥パッドとして備えた、高感度に被検出成分を検出することができるラテラルフロー免疫測定法を用いた簡易メンブレンアッセイ装置が提供される。
本発明の一実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置１００の模式図 本発明の一実施形態に係る割繊型複合繊維２００の模式図 本発明の一実施形態に係る割繊処理した割繊型複合繊維２５０の模式図 本発明の一実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置３００の模式図
　　１００　　実施形態１に係る簡易メンブレンアッセイ装置
　　１１０　　プラスチック板
　　１２０　　検出部
　　１３０　　コントロールライン
　　１４０　　ニトロセルロースメンブレン
　　１５０　　吸収パッド
　　１６０　　標識体乾燥パッド
　　１７０　　サンプル供給パッド
　　２００　　割繊型複合繊維
　　２０１　　コア繊維成分
　　２０２　　極細割繊繊維成分
　　２５０　　割繊処理した割繊型複合繊維
　　３００　　実施形態２に係る簡易メンブレンアッセイ装置
　　３２１　　検出部Ａ
　　３２３　　検出部Ｂ
　　３３０　　コントロールライン
　　３６０　　標識体乾燥パッド
　上述したように、標識体乾燥パッドには一般的にガラス繊維や不織布が用いられるが、ガラス繊維をシート状に加工した場合には、標識体の放出はよいが、引っ張り強度が弱く製造工程での制約を受けるという欠点があった。また、合成繊維を用いた場合には、引っ張り強度は強いが、標識体の放出は悪いという欠点があった。これらの欠点を克服する方法を鋭意検討した。
　例えば、ガラス繊維に要求される引っ張り強度を付与するために、他の材料と組み合わせた複合材料による不織布とすることが考えられるが、単純に合成繊維の不織布との組み合わせでは、標識体の放出効率の改善効果は期待できない。
　そこで、合成繊維の不織布で標識体の放出効率を向上させることを検討した。合成繊維とガラス繊維の特性を比較すると、ガラス繊維は繊維径が小さいことから、極細の合成繊維の不織布を用いて標識体乾燥パッドを形成することを見出した。
　本発明に係る標識体部の標識体乾燥パッドは、引っ張り強度が強い、複数の極細繊維成分が互いに接着した不織布により形成する。極細繊維の不織布を形成する方法としては、割繊型複合繊維のウエブを割繊処理することにより生成する方法、メルトブロー法、直接紡糸法でウエブを形成して不織布とする方法、海島構造繊維の海部を溶解して島部で不織布を形成する方法、レーザ延伸、エレクトロスピニング等がある。本発明に係る標識体部の標識体乾燥パッドは、繊維径が０．０５　μｍ～１０　μｍの極細繊維を主に含む不織布であれば、いずれの製造方法を用いてもよく、これらに限定されるものではない。
　以下に一実施形態に係る本発明の簡易メンブレンアッセイ装置について、図を参照して説明する。なお、以下の実施形態は本発明の簡易メンブレンアッセイ装置の例であり、本発明の簡易メンブレンアッセイ装置は以下の実施形態に限定されるわけではない。また、同様の構成については同じ符号を付し、改めて説明しない場合がある。
（実施形態１）
　本発明の実施形態に係るラテラルフロー免疫測定法は、被検出物を捕捉するための捕捉物質が結合したメンブレンを備えた簡易メンブレンアッセイ装置を用いる、検体試料中の被検出物の簡易メンブレンアッセイ法である。本実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置は、標識体部を構成する基材として、極細繊維からなる不織布を用いて、検体試料中の被検出物の存在を検出あるいは定量することを特徴とする。
　本明細書において、ラテラルフロー免疫測定法とは、被検出物と特異的に結合する捕捉試薬や検出用物質が塗布されたメンブレンに対して、被検出物を含む溶液を水平方向に展開させ、被検出物に特異的に結合する捕捉物質、被検出物、被検出物に特異的に結合する標識体の複合体をメンブレン上に形成させて、標識体を検出あるいは定量することによって、被検出物の検出または定量を行う方法である。
　典型的には、被検出物と捕捉物質及び標識体を反応させて、捕捉物質－被検出物－標識体という構造を有するサンドイッチ状の複合体をメンブレン上に形成させ、標識体を検出することにより、この複合体の存在を検出する方法である。この方法では検体試料中の被検出物の存在の有無を短時間に簡便に検査することができる。
　図１は、本実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置１００の模式図である。図１の上が上面図、下が断面図である。簡易メンブレンアッセイ装置１００は、例えば、支持基板であるプラスチック板１１０上に、検出部１２０、コントロールライン１３０が形成されたニトロセルロースメンブレン１４０、ろ紙で形成された吸収パッド１５０、標識体が乾燥化されて保持される標識体乾燥パッド１６０、及び調製した検体試料を供給するために設置されたサンプル供給パッド１７０がそれぞれ積層されている。
　吸収パッド１５０の一方の端部領域とニトロセルロースメンブレン１４０の一方の端部領域、ニトロセルロースメンブレン１４０の他方の端部領域と標識体乾燥パッド１６０の一方の端部領域、標識体乾燥パッド１６０の他方の端部領域とサンプル供給パッド１７０の一方の端部領域がそれぞれ重ね合わされており、これにより連続したラテラルフローの流路が形成されている。
　本実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置１００は、標識体乾燥パッド１６０として極細繊維を主に含む不織布（極細繊維不織布）を用いる点を除き、アッセイ装置の構成自体は周知のものであってよい。
（標識体乾燥パッド用極細繊維不織布）
　本実施形態に係る標識体乾燥パッドに用いる極細繊維不織布の詳細について以下に説明する。本実施形態に係る標識体乾燥パッド用極細繊維不織布の製造方法を、割繊型複合繊維のウエブを割繊処理する方法を例に説明する。
　ここで複合繊維とはそれぞれ繊維の長さ方向に連続した複数の繊維成分が互いに側面で接着したものをいい、材料の異なる繊維成分を２種類以上含むものである。また、割繊型複合繊維とは、複合繊維を構成する各繊維成分が分割可能な構造を有する複合繊維をいう。
　図２は割繊型複合繊維２００の構造の一例を示す模式図である。割繊型複合繊維２００は、例えば、コア繊維成分２０１と極細割繊繊維成分２０２を含む。
　割繊型複合繊維２００は、例えば、６　μｍから２０　μｍの繊維径からなるコア繊維成分２０１の断面外周に　１　μｍから１０　μｍの繊維径からなる極細割繊繊維成分２０２を複数配置した構造を有するものが好ましい。
　また、割繊型複合繊維２００の一例としてコア繊維成分２０１の断面外周に極細繊維成分２０２が複数配置された構造のものについて例示しているが、繊維径１　μｍから１０　μｍの２つの繊維成分が接合された２層型並列構造の割繊繊維、繊維径１　μｍから１０　μｍの２つの繊維成分が交互に積層された多層型多重並列構造の割繊型複合繊維等であってもよい。
　本実施形態に係る各繊維を構成する素材としてはその強度の点から、ナイロン、ビニロン、アクリル、ポリオレフィン、ポリウレタン、ポリエステル等の合成繊維を用いることができる。割繊型複合繊維２００において、コア繊維成分２０１がポリエチレン樹脂のようなポリオレフィン系樹脂からなり、極細割繊繊維成分２０２がポリエステル系樹脂からなるものが好ましい一例である。これらの素材からなる不織布を標識体乾燥パッド１６０に用いた場合、標識体乾燥パッド１６０からの標識体の放出効率が向上する。
　本実施形態に係る極細繊維不織布は、例えば、長繊維不織布を得る製法であるスパンボンド法により製造される。スパンボンド法により生成される繊維の繊維長は長いため、このような繊維長の長い繊維を主に含む極細繊維不織布は、本実施形態に係る標識体乾燥パッド用極細繊維不織布に要求される十分な引っ張り強度を提供することができる。本実施形態に係る標識体乾燥パッド用極細繊維不織布は、１　μｍから１０　μｍの繊維径からなる極細割繊繊維成分を主に含むものであれば、メルトブロー法等を用いて製造してもよい。
　割繊型複合繊維２００は製造されると、例えば割繊型複合繊維に高圧水流を当てる水流割繊方法（スパンレース法）、熱を加える方法、溶剤に浸す方法等の繊維成分間の接着方法に合わせた方法やニードルパンチ法等により割繊型複合繊維を構成する繊維成分ごとに分割する割繊処理を施す。
　図３は割繊処理後の複合繊維２５０を示す模式図である。６　μｍから　２０μｍの繊維径を有するコア割繊繊維２０１と、１　μｍから１０　μｍの繊維径を有する極細割繊繊維２０２とに割繊され、それぞれの繊維が解離する。解離したコア割繊繊維２０１と極細割繊繊維２０２とは、緻密に交絡し、不織布を形成する。
　本実施形態において、割繊型複合繊維からなる繊維径が１　μｍから１０　μｍの極細繊維を主に含む極細繊維不織布を標識体乾燥パッドとして用いた場合について言及しているが、割繊型複合繊維以外の方法で製造した不織布であっても、繊維径が０．０５　μｍから１０　μｍの極細繊維を主に含む極細繊維不織布であれば、標識体乾燥パッドとして用いることができる。
（被検出物）
　ここで、本実施形態に係る被検出物としては何ら限定されるものではなく、各種病原体、各種臨床マーカー等、抗体と抗原抗体反応することが可能ないかなる物質であってもよい。具体例として、インフルエンザウイルス、アデノウイルス、ＲＳウイルス、ＨＡＶ、ＨＢｓ、ＨＩＶ、ノロウイルス、ロタウイルス等のウイルス抗原、ＭＲＳＡ、Ａ群溶連菌、Ｂ群溶連菌、レジオネラ属菌等の細菌抗原、細菌等が産生する毒素、マイコプラズマ、クラミジア・トラコマティス、ヒト絨毛性ゴナドトロピン等のホルモン、Ｃ反応タンパク質、ミオグロビン、心筋トロポニン、各種腫瘍マーカー、農薬、環境ホルモン等を例示することができる。
　上記の病原微生物もしくは該病原微生物由来のタンパク質等の物質またはそれらに対する抗体等を被検出物として用いる場合、インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、アデノウイルス、Ａ群溶連菌、肺炎マイコプラズマ、ロタウイルス及びノロウイルス等のように、大流行し、ごく短時間に特定する必要がある病原体の診断に、極めて有用である。
　なお、被検出物は、単独で免疫反応を誘起できる抗原であってもよいし、単独では免疫反応を誘起できないが抗体と抗原抗体反応により結合することが可能なハプテンであってもよい。
（捕捉物質）
　本実施形態に係る捕捉物質は、免疫測定する被検出物と抗原抗体反応する抗体であれば、ポリクローナル抗体であってもモノクローナル抗体であってもよい。
　本実施形態に係る簡易メンブレンアッセイ装置１００には、抗体に代え、または抗体とともに、該抗体の抗原結合性断片を標識体に結合させてもよい。抗原結合性断片とは、例えば、抗体のＦａｂやＦ（ａｂ’）２断片等のように、対応抗原と抗原抗体反応可能な抗体断片である。これらの抗原結合性断片は、周知の通り、抗体をパパインやペプシンのようなタンパク質分解酵素で処理し、精製することにより得られる。また、遺伝子工学的に生産した抗体やその抗原結合性断片を用いることもできる。
（標識体）
　本実施形態に係る標識体としては、金コロイド粒子、白金コロイド粒子、着色ラテックス粒子、磁性粒子、蛍光発光性粒子、酵素等が挙げられる。
　本実施形態に係る標識体には、被検出物と抗原抗体反応する抗体及びその抗原結合性断片、またはその何れかが結合している。これにより、標識体は、抗体や抗原結合性断片を介して被検出物に結合することができる。標識体に結合させる抗体や抗原結合性断片には、上述の捕捉物質とは被検出物に対する結合特性が異なる抗体や抗原結合性断片を用いることが好ましい。結合特性、つまり、抗体や抗原結合性断片が結合（認識）する被検出物の部位が異なることによって、捕捉物質と標識体との結合部位が競合することを防ぎ、被検出物の検出効率が低下することを回避できる。
（標識体乾燥パッド）
　本実施形態に係る標識体乾燥パッドの製造方法について説明する。標識体が乾燥する過程において、標識体は、標識体乾燥パッドとして用いられる部材の繊維に付着した状態で乾燥する。所定量の標識体を含む溶液を本実施形態に係る標識体乾燥パッド用極細繊維不織布に塗布、スプレーまたは浸漬等の方法により染み込ませる。その後、温風乾燥や自然乾燥等により乾燥化する。
　繊維径が０．０５　μｍ～１０　μｍである極細繊維を主に含む本実施形態に係る極細繊維不織布において、単位長さ当たりの繊維の表面積は、繊維径が　１０μｍ～３０　μｍの繊維に比べ大きくなる。これにより、標識体が不織布全体に、より分散された状態で均一に乾燥する。また、極細繊維を主に含む本実施形態に係る極細繊維不織布では、毛細管現象によるサンプル液の流れが促進される。
　これにより、本実施形態に係る標識体乾燥パッドにおいては、乾燥化された標識体の復元時における放出が促進され、測定系への反応に関与する成分の供給量が向上し、効率的に反応が進行するようになるため、ラテラルフロー方式の免疫測定試薬を用いて、被検出物を迅速で高感度に測定することができる。
（測定方法）
　次に本実施形態の簡易メンブレンアッセイ装置を用いた免疫測定法について説明する。まず検体を検体浮遊／抽出用緩衝液に浮遊／抽出させた検体試料を調製する。検体試料は、被検出物に応じた公知技術を用いて調製することができる。
　プラスチック板１１０上に積層されたニトロセルロースメンブレン１４０上に、被検出物と抗原抗体反応する抗体を標識体で標識した標識体乾燥パッド１６０を備え、さらに被検出物と抗原抗体反応する抗体を捕捉物質としてライン状に固相化された検出部１２０、捕捉物質が結合している位置の下流の位置に標識体を結合することができる物質、例えば被検出物と同等の反応性を有する物質または標識体に結合する抗体を固相したコントロールライン１３０を備えたアッセイ装置のサンプル供給パッド１７０に前記検体試料を供給する。
　被検出物を含む検体試料は、毛細管現象によりメンブレン上を水平方向に移動しながら標識体を展開するので、被検出物が存在すれば、被検出物－標識体の複合体を形成する。さらに検出部１２０に到達するとそのライン上に、捕捉物質－被検出物－標識体の複合体が形成される。この複合体中の標識体により、複合体の存在を検出し、その結果、検体試料中の被検出物の有無を判定する。また、検証部であるコントロールライン１３０により、標識体が標識体乾燥パッドから放出され、捕捉物質が結合したメンブレン上を流れたことを試験ごとに確認することができる。
　なお、検出部１２０は、被検出物質と抗原抗体反応し、かつ、標識体上の抗体またはその抗原結合性断片と同時に被検出物に結合することが可能な、抗体またはその抗原結合性断片をライン状に固相化した領域である。反応に関与しなかった他の成分等は、吸収パッド１５０に吸収される。
　以上説明したように、本実施形態の本発明に係る簡易メンブレンアッセイ装置は、標識体乾燥パッドに極細繊維不織布を用いることにより、標識体乾燥パッドに要求される十分な引っ張り強度とともに、毛細管現象によるサンプル液の流れが促進されることで乾燥化された標識体の復元時における放出効率が向上し、被検出物を迅速で高感度に測定することができる。
（実施形態２）
　実施形態２は、検出部１２０に替えて、２つの検出部を設ける点で実施形態１と異なる。図４は、実施形態２に係る簡易メンブレンアッセイ装置３００の模式図である。簡易メンブレンアッセイ装置３００は、検出部Ａ３２１及び検出部Ｂ３２３を有する。また、検出部Ａ３２１及び検出部Ｂ３２３への変更に対応したコントロールライン３３０及び標識体乾燥パッド３６０を有する。以下、２つの検出部を設ける例について述べるが、検出部は２つに限定されるものではない。
　これは、例えば下記実施例に記載するように、Ａ型インフルエンザウイルスとＢ型インフルエンザウイルスのような２種類の被検出物をそれぞれ捕捉し、検出するためのものである。このため、検出部Ａ３２１及び検出部Ｂ３２３には、それぞれ被検出物が異なる抗体や抗原結合性断片を捕捉物質としてライン状に固相化する。
　このような検出部を複数設けることにより、複数種類の被検出物を同時に測定することが可能である。それぞれの抗体や抗原結合性断片の抗原抗体反応の特異性が高い場合には、被検出物を２種類以上検出する簡易メンブレンアッセイ装置を実現することができる。
　なお、複数種類の被検出物の検出は、展開部であるニトロセルロースメンブレン上のそれぞれの検出部の位置により検出及び識別ができる。また、標識体に着色ラテックス粒子や蛍光発光性粒子等を用いた場合には、それぞれの標識体の色や蛍光物質を変えることにより、容易な識別が可能となる。
　また同様に、それぞれ被検出物が異なる抗体や抗原結合性断片を結合させた２種類の標識体を作製する。標識体乾燥パッド３６０には、このように作製した２種類の標識体を実施形態１で説明した繊維径が０．０５　μｍ～１０　μｍである極細繊維を主に含む極細繊維不織布に染み込ませて乾燥化する。
　極細繊維を主に含む本実施形態に係る標識体乾燥パッド３６０は、従来の標識体乾燥パッドよりも、標識体が不織布全体に分散された状態で均一に乾燥しており、毛細管現象によるサンプル液の流れが促進される。
　これにより、本実施形態に係る標識体乾燥パッドにおいては、乾燥化された標識体の復元時における放出が促進され、測定系への反応に関与する成分の供給量が向上し、効率的に反応が進行する。このため、２種類以上の標識体を用いることにより、染み込ませる標識体１種類あたりの所定量が少なくなる場合においても、ラテラルフロー方式の免疫測定試薬を用いて、被検出物を迅速で高感度に測定することができる。
　このとき、本実施形態に係るコントロールライン３３０には、上述の２種類の標識体を捕捉可能な抗体や抗原結合性断片をライン状に固相化する。これにより、標識体が標識体乾燥パッドから放出され、捕捉物質が結合したメンブレン上を流れたことを試験ごとに確認することができる。
　これら以外の構成要件は、実施形態１と同様のものを用いることができ、実施形態２に係る簡易メンブレンアッセイ装置を用いることによって、複数種類の被検出物を１つの簡易メンブレンアッセイ装置で、同時に検出することができる。
　以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。ただし、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
（標識体乾燥パッド用不織布の物性の比較）
　実施例１と比較例１～３で用いる不織布の物性を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
  
　比較例１のガラス繊維は引っ張り強度が弱く、製造機器での使用には適さなかった。実施例１、比較例２、比較例３は合成繊維からなる不織布であるため、強度が強く製造機器での使用も可能であった。
（標識体乾燥パッドからの標識体の放出率の測定）
　実施例１、比較例１～３について、以下の通り、ラテックス粒子を標識した標識体パッドの放出性を評価した。
（１．ラテックス粒子を標識した標識体乾燥パッドの作製）
　検出用の抗体として抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体および、抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体を用いた。標識体としてラテックスを用い、ラテックスに抗インフルエンザウイルス抗体を共有結合させラテックス浮遊液を調製した。調製したラテックス浮遊液を上述の各種繊維複合体に塗布し、乾燥させて、標識体乾燥パッドを作製した。
（２．ラテックス粒子放出率の測定）
　上記の方法で作製した標識体乾燥パッドを所定の緩衝液に浸し、撹拌することでラテックス粒子を溶出させた。この溶出液の吸光度（Ａ）を測定するとともに、パッドに塗布した量と同量の標識体を所定の緩衝液に添加した液を対照液として、この試料の吸光度（Ｂ）も測定した。これらの結果から以下のようにパッドからの標識体の放出率を求めた。
 
放出率（％）＝吸光度Ａ／吸光度Ｂ×１００
（３．結果）
　得られた結果を表２に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
  
　実施例１の放出率が最も高く、比較例１と比較例２が同等の放出率で、比較例３の放出率が一番低かった。実施例１からの標識体の放出効率が高いことが確認された。
（ラテラルフロー免疫測定法によるインフルエンザウイルス抗原の検出）
（１．検査デバイスの作製）
　簡易メンブレンアッセイ装置は図４に示すものと同様の構成のものを用いた。ニトロセルロースメンブレン１４０をプラスチック板１１０でバッキングした短冊状の部材に、抗Ａ型インフルエンザウイルス抗体および、抗Ｂ型インフルエンザウイルス抗体を線状に塗布し、温風下でよく乾燥させた。これの上端に重ねて吸収パッド１５０を設置した。さらにニトロセルロースメンブレン１４０の下端に重ねて標識体乾燥パッド３６０を設置し、これに重ねて検体を供給するサンプル供給パッド１７０を設けた。これにプラスチックシートでサンプルパッドの一部が露出するように他の部分を覆ったものを所定の幅に裁断して、検査デバイスを作製した。
（２．試験）
　検体として、Ａ型インフルエンザウイルス及びＢ型インフルエンザウイルスを用いた。検体は検体浮遊、抽出用の所定の緩衝液を用いて、２倍段階希釈を行い試料とした。次に検査デバイスを水平に置き、検体試料並びに、抽出用の所定の緩衝液のみからなる陰性対照試料をサンプル供給パッド１７０に５０μＬ供給し、標識体を展開させた。判定は８分後に検出部の着色ラインの有無を目視にて観察して行った。
着色ライン有り：陽性（＋）
着色ライン無し：陰性（－）
　実施例１及び比較例１から３はそれぞれ上記の試験に用いた各不織布と同様であり、標識体乾燥パッド３６０として用いて試験を行った。
（３．結果）
　インフルエンザウイルス抗原の検出結果を表３に示す。実施例１においてＡ型インフルエンザウイルスの判定は１：３２００まで陽性を示し、比較例１から比較例３のＡ型の判定に比べ、検出感度が高かった。また、実施例１においてＢ型インフルエンザウイルスの判定は１：１６００まで陽性を示し、比較例１から比較例３のＢ型の判定に比べ、感度が高かった。なお、陰性対照試料は全ての実施例、比較例において陰性を示した。
　実施例１は、Ａ型インフルエンザウイルスでは比較例１から比較例３よりも少量のウイルスを検出している。Ｂ型インフルエンザウイルスにおいても、実施例１は、比較例１から比較例３よりも少量のウイルスを検出している。この検出感度試験の結果は、上記の標識体の放出率の測定結果を反映しており、標識体の放出率が高くなると検出感度も高くなる。
　本発明の実施形態に係る標識体乾燥パッドを使用することで、標識体乾燥パッドからの標識体の放出効率が向上し、Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルスを高感度に検出できることがわかる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003

Claims (11)

  1. 支持板と、
    試料供給部と、
    被検出物を標識する標識成分を含む標識体部と、
    前記被検出物を検出または定量するための捕捉物質を有する検出部が形成された展開部と、
    吸収部とを有し、
    繊維径が０．０５～１０μｍの繊維を含む不織布を前記標識体部に用いることを特徴とする簡易メンブレンアッセイ装置。
  2. 前記繊維が、合成繊維であることを特徴とする請求項１に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
  3. 前記不織布は、複数の前記繊維が互いに接着した不織布であることを特徴とする請求項２に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
  4. 前記不織布が、複数の繊維成分が互いに接着されてなる割繊型複合繊維を割繊処理した割繊繊維により形成された不織布であることを特徴とする請求項２に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
  5. 前記割繊型複合繊維が、繊維径が６μｍから２０μｍである第１の繊維成分の断面外周に繊維径が１μｍから１０μｍである第２の繊維成分を複数配置した構造を有するものであることを特徴とする請求項４に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
  6. 前記標識成分が金コロイド粒子、白金コロイド粒子、ラテックス粒子、磁性粒子、酵素の何れかにより標識されていることを特徴とする請求項１に記載のアッセイ装置。
  7. 前記標識成分および前記捕捉物質は、前記被検出物と結合する抗体または抗原結合性断片であることを特徴とする請求項６に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
  8. 前記被検出物が、微生物、臨床マーカーである生体由来物質、農薬、環境ホルモンまたは、それらの分解物であることを特徴とする請求項７に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
  9. 前記被検出物をラテラルフロー方式メンブレンアッセイ法で検出または定量することを特徴とする請求項８に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
  10. 前記展開部に前記標識成分が放出されたことを検証するための検証部をさらに有することを特徴とする請求項９に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
  11. 複数の種類の前記被検出物を検出するために、前記標識成分及び前記捕捉物質をそれぞれ複数の種類用いることを特徴とする請求項１０に記載の簡易メンブレンアッセイ装置。
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