WO2009104556A1 - 組成物 - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to a composition applicable to, for example, foods, food additives, pharmaceuticals, feeds, pet foods and the like.
- Depression patients increased from 440,000 in 1999 to 710,000 in 2002. Depression is also problematic because it is likely to lead to suicide if left untreated. Suicide has become a major social problem, with over 30,000 people for nine consecutive years until 2006, and it is said that depression is closely related to the background.
- ⁇ ⁇ Not a few depression patients have anxiety disorders. Anxiety disorders are divided into obsessive-compulsive disorder, panic disorder, agoraphobia, acute stress disorder, generalized anxiety disorder, etc., depending on the symptoms. Panic disorder, a typical anxiety disorder, has a lifetime prevalence of 1.5 3.3%, approximately 30% are accompanied by depression, and the lifetime prevalence of depression in patients with panic disorder is more than 50%.
- Alzheimer's disease a type of dementia, is estimated to take 4 to 6% over 65 years of age and over 15% over 80 years of age.
- BDNF brain-derived neurotrophic factor
- MAP kinase Activation of MAP kinase requires that both the threonine and tyrosine residues present between the kinase subdomains 7 and 8 are phosphorylated.
- Non-patent Document 2 phosphorylated MAP kinase is decreased in the hippocampus and frontal cortex (Non-patent Document 2), which is considered to be useful for establishing short-term memory into long-term memory.
- LTD long-term potentiation
- Some drugs for treating depression have already been developed, but there are many problems. Although it is improving with the advent of a new generation of drugs, depression drugs currently used clinically have side effects such as gastrointestinal disorders and liver disorders, and are generally lacking in immediate action until the effects appear There is a problem that a certain period of time (2 to 3 weeks) is required. Benzodiazepine anti-anxiety drugs are used to treat anxiety disorders, but there are also problems such as drowsiness, lightheadedness, and dependence. Although various synthetic drugs have been developed for the treatment of Alzheimer's disease, side effects such as liver damage have been reported for acetylcholinesterase inhibitors, one of which has not yet been established. The current situation is not.
- the present invention has been made in view of the above points, and provides a composition that can be used for treatment and prevention of cranial nerve diseases and brain function improvement, has few side effects, and is highly safe even when taken for a long time. With the goal.
- the gist of the present invention is a composition containing one or more selected from the group consisting of treatment of cranial nerve disease, prevention of cranial nerve disease, and improvement of brain function, comprising peanut astringent skin and / or an extract thereof as an active ingredient. .
- the composition of the present invention contains a peanut astringent skin, a peanut astringent skin extract, or both as an active ingredient, thereby having a cranial nerve disease therapeutic effect, a cranial nerve disease preventing effect, and a brain function improving effect.
- the composition of the present invention is considered to exhibit the above-mentioned action because its active ingredient exhibits an activity similar to BDNF and has an action to enhance MAP kinase activation in brain neurons.
- the highly safe natural product is used as an active ingredient, the composition of the present invention has few side effects and is highly safe even when taken for a long time.
- Examples of the cranial nerve disease include one or more selected from the group consisting of depressive symptoms, anxiety symptoms, and memory disorders.
- Examples of the brain function improvement include improvement of memory learning ability.
- the composition may be, for example, any one of functional foods (for example, foods and drinks, food materials, health foods, foods for specified health use), food additives, pharmaceuticals, feeds, and pet foods. it can.
- functional foods for example, foods and drinks, food materials, health foods, foods for specified health use
- food additives for example, pharmaceuticals, feeds, and pet foods. it can.
- the composition of the present invention has a BDNF-like action, and further has a BDNF gene expression enhancing action.
- BDNF is known to have an effect of improving Alzheimer's disease and depressive symptoms. Therefore, Alzheimer's disease and depressive symptoms can be improved by using the composition of the present invention.
- the dosage form and form of the composition according to the present invention are arbitrary, and can be used in the form of capsules, powders, granules, solids, liquids, gels and the like.
- it can be set as the health food which has the form of a tablet or a capsule, and the pharmaceutical which has forms, such as a drink and a formulation.
- the pharmaceutical which has forms, such as a drink and a formulation.
- confectionery such as biscuits, cookies and candies
- general food and drink such as sprinkles, vegetable juice, and soup.
- it can also be used by appropriately mixing with feed or pet food.
- Peanut (Arachis hypogaea LINENE) in the present invention is a plant belonging to the genus Legumeaceae, and is also called Nanjing beans, peanuts, and Tangjin beans.
- Peanut astringent skin is also called thin skin or cuticle, but generally when peanuts are processed into various processed foods, most of them are removed and most are discarded.
- the present invention makes effective use of this unused resource, astringent skin, and produces a composition with high added value (for example, pharmaceuticals, health foods, etc.), which can be said to be very significant in that respect.
- the type of peanut in the present invention is not limited as long as it belongs to the genus Peanut, but peanut (A. hypogaea) that is generally widely used for food is preferable from the viewpoint of easy availability of raw materials. Also, there are no restrictions on the peanut production area and harvest time. Furthermore, the astringent skin can utilize what generate
- the peeled skin peeled after processing processes, such as a heating process and a roasting process. Further, as a method of the molting process, there is a case where after peeling off the shell, the astringent skin is swelled by immersing in hot water and then peeling is performed. Since the active ingredient is dissolved in the hot water used at that time, the hot water can be used as a raw material of the composition according to the present invention. That is, after filtering hot water through a filter or the like as necessary, after concentration using a concentration means such as a vacuum concentration method, a normal pressure concentration method, or a thin film distillation method, a powdering means such as a freeze drying method or a spray drying method is used. And can be pulverized. Furthermore, if necessary, extraction and purification may be performed using a solvent such as ethanol described later. Further, purification means using an adsorbing resin described later may be combined.
- a concentration means such as a vacuum concentration method, a normal pressure concentration method
- a pulverized product can be obtained by pulverizing the astringent skin obtained from peanut, and this dried pulverized product can be used as an active ingredient in the present invention.
- a drying method at this time a method generally used as a drying means such as hot air drying, vacuum drying, freeze drying, fluidized drying or the like can be used, and the method is not particularly limited.
- a pulverization method a method generally used as a pulverization means such as dry pulverization, wet pulverization, and jet mill can be used, and the method is not particularly limited.
- an astringent skin extract can be used as an active ingredient of the present invention.
- the peeled astringent peel may be extracted as it is, but it is desirable to extract the raw material that has been crushed to an appropriate particle size in order to increase the extraction efficiency.
- the solvent used for extraction for example, methanol, ethanol, propyl alcohol, isopropyl alcohol, butanol, isobutanol, etc., a single solvent selected from the group of butylene glycol, propylene glycol, glycerin, acetone, diethyl ether, ethyl acetate, Or any mixed solvent of two or more kinds of solvents, but when the extract is finally blended with food or the like, water, ethanol, or a mixed solvent thereof from the viewpoint of safety Is preferably used. Further, in order to improve the extraction rate, the extraction may be performed a plurality of times.
- the ratio of the raw material (astringent skin) and the solvent at the time of extraction is not particularly limited, but is preferably 2 to 1000 parts of solvent with respect to 1 part of the raw material, particularly in terms of extraction operation and efficiency. It is preferred to use 5 to 100 parts of solvent per part.
- the extraction temperature is not particularly limited, but it is convenient that the extraction temperature is in the range of room temperature to the boiling point of the solvent.
- the extraction time varies depending on the extraction temperature, but is preferably in the range of 30 minutes to 24 hours.
- the fraction obtained by purifying the active ingredient may be separated from the extract thus obtained, if necessary, using a separation technique such as column chromatography.
- a separation technique such as column chromatography.
- chromatography using a column or thin layer or membrane separation method can be used, and size exclusion chromatography such as gel permeation and gel filtration, distribution chromatography, adsorption chromatography, ion exchange chromatography, etc. The method can be used.
- peanut astringent skin extract is dissolved in a small amount of water, water-containing methanol, water-containing ethanol or other solvent, and Sephadex LH-20 (trade name, manufactured by GE Healthcare Biosciences), Diaion HP-20 (The product is passed through a column packed with an adsorbent resin (trade name, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), the active ingredient is adsorbed on the adsorbent resin, washed thoroughly with water, and the concentration and amount sufficient to elute the active ingredient.
- the active ingredient may be eluted with a hydrophilic solvent such as methanol, ethanol or acetone, or a mixed solvent of these with water.
- the extract or fraction is made into a concentrated solution using a concentration means such as a vacuum concentration method, a normal pressure concentration method, or a thin film distillation method, and then used as a powdered means such as a freeze drying method or a spray drying method. It can be pulverized.
- a concentration means such as a vacuum concentration method, a normal pressure concentration method, or a thin film distillation method, and then used as a powdered means such as a freeze drying method or a spray drying method. It can be pulverized.
- the active ingredient was eluted with 10 L of 40% ethanol, and fractions containing the active ingredient were collected and concentrated under reduced pressure at 40 ° C. to about 1/50 volume.
- the concentrate was freeze-dried to obtain 115.8 g of peanut astringent skin extract.
- the solution was intraperitoneally administered to 3 of the 4 mice so that the doses of peanut astringent skin extract were 30 ⁇ g / kg, 300 ⁇ g / kg, and 3000 ⁇ g / kg body weight, respectively.
- PBS alone was administered to the remaining one mouse to serve as a control group.
- mice hippocampus was removed, and the hippocampus was removed from RIPA buffer (150 mM sodium chloride, 20 mM Tris; pH 7.4, 2 mM ethylenediaminetetraacetic acid, 1% IGEPAL @ CA-630, 1% deoxycholic acid.
- RIPA buffer 150 mM sodium chloride, 20 mM Tris; pH 7.4, 2 mM ethylenediaminetetraacetic acid, 1% IGEPAL @ CA-630, 1% deoxycholic acid.
- FIG. 1 shows the results of the enhancement effect of phosphorylated MAP kinase in the hippocampus of mice when peanut astringent skin extract was administered intraperitoneally.
- the vertical axis represents the ratio of phosphorylated MAP kinase and total MAP kinase.
- mice administered with the peanut astringent skin extract was approximately 4.2 times the dose of 300 ⁇ g / kg and 3000 ⁇ g / kg of the dose compared to the hippocampus of mice (control) administered with PBS alone. It was confirmed that phosphorylation of MAP kinase was enhanced about 2.7 times.
- test animals 6-week-old male ddY mice (Japan SLC) were purchased. The mice were divided into 6 groups and reared by free eating and drinking in a plastic gauge (width 280 mm ⁇ depth 440 mm ⁇ height 180 mm) as a rearing room. The breeding room was kept at room temperature 25 ⁇ 1 ° C. and lit from 7 o'clock to 19 o'clock.
- mice After the mice were purchased and bred for 5 days, the tail suspension test described below was performed, and those with an immobilization time of 20 seconds or less or those with 2 minutes or more were excluded. The mice remaining in the selection were divided into 6 groups (6 mice in each group) from groups A to F so that the average immobilization time was equivalent.
- FIG. 2 shows the immobilization time for each group.
- shaft of FIG. 2 represents the immobilization time, and in FIG. 2, it represents with the average value +/- standard error of 6 animals in each group.
- the method of applying stress to mice in Group B, Group D, and Group F is as follows. ine. 2006; 13: 658-67.
- the mild stress method of) was partially modified and used as follows.
- the mild stress load was started two days after the selection by the tail suspension test described above.
- 15 minutes of forced swimming was performed on the mice of Group B, Group D, and Group F.
- the animals were reared for 48 hours in an inclined cage, 24 hours in a filth cage, and 24 hours in a shaking cage.
- the mice were rested without applying stress for 24 hours after applying various stresses.
- the stress after the tilt cage was repeated three times.
- Sample administration method The sample administration method was as follows.
- Samples were administered to each group of mice by repeated oral administration once a day for 3 weeks from 48 hours after forced swimming under the above-mentioned mild stress load.
- Samples to be administered were those in which the peanut astringent skin extract was dissolved in PBS for the groups C, D, E, and F. The dose was adjusted to 1 mg / kg body weight for groups C and D, and adjusted to 3 mg / kg body weight for groups E and F. For groups A and B, only PBS was administered.
- (4) Method of tail suspension test After the sample was orally administered repeatedly for 3 weeks, the tail suspension test was performed on the mice of each group as follows. About 1 cm from the tip of the tail was picked with a fingertip, fixed at a height of 10 cm from the floor, and hung upside down.
- FIG. 3 shows the results of the tail suspension test.
- the vertical axis represents the immobilization time and is expressed as the average value ⁇ standard error of 6 animals in each group. ## mark in the figure indicates a significant difference in test values (## ⁇ 0.01) between the control group (Group A) administered with PBS alone and the stress group (Group B) administered with PBS alone. ). Also. * Mark indicates a significant difference in immobilization time between the stress group (group B) administered with PBS alone and the stress group (group F) administered with 3 mg / kg peanut astringent skin extract (p ⁇ 0.05).
- the stress group administered with 1 mg / kg peanut astringent skin extract did not have a significant difference in the test values compared with the stress group administered with PBS alone (Group B), but decreased the immobilization time. I let you.
- the stress group (F group) administered with 3 mg / kg peanut astringent peel significantly reduced the immobilization time. From this, the antidepressant effect was recognized by administration of 3 mg / kg peanut astringent skin extract.
- (6) Method of glass ball cover test After the sample was orally administered repeatedly for 3 weeks, a glass ball cover test was performed on the mice of each group as follows.
- Chips are laid out in a cage (width 300 mm x depth 300 mm x height 300 mm) made of a transparent acrylic plate so that the thickness is 5 cm, and 25 transparent glass balls with a diameter of 2 cm are placed between them. It was left 5 cm in length and width. After releasing the mouse into the cage and allowing it to move freely for 15 minutes, more than two-thirds of the glass balls covered with chips were counted. Using the decrease in the number of hidden glass balls as an index, the anxiolytic or anti-obsessive disorder and anti-panic disorder effects of the administered peanut astringent skin extract were evaluated. This glass ball covering test was carried out in the time zone from 8:00 to 11:00. (7) Results of Glass Ball Covering Test FIG.
- the vertical axis indicates the number of hidden glass balls, and is expressed as an average value ⁇ standard error of 6 animals in each group.
- the # mark in the figure indicates that there is a significant difference (# ⁇ 0.05) in the test value between the control group (Group A) administered with PBS alone and the stress group (Group B) administered with PBS alone. Indicates that there is. Also. * Mark indicates a significant difference in test values (*: p ⁇ ) between the stress group administered with PBS alone (Group B) and the stress group administered with 3 mg / kg peanut astringent skin extract (Group F). 0.05).
- a cross board (width 5 cm x length 65 cm) intersecting at a right angle at the center is installed at a height of 60 cm from the floor, and a transparent acrylic with a height of 10 cm for a one-way board (closed arm). Both sides were partitioned with a metal plate. Release the mouse to this crossroad, let it move freely for 5 minutes, and the number of times it was in an arm (open arm) that was not partitioned by an acrylic board and the number of times it entered a board (closed arm) that was partitioned by an acrylic board Measured. The anxiolytic effect of the administered peanut astringent skin extract was evaluated using the length of time spent in the open arm as an index.
- FIG. 6 shows the time each group of mice was in the open arm in the elevated plus maze test.
- the vertical axis indicates the time spent in the open arm, and is expressed as the average value ⁇ standard error of 6 animals in each group.
- the # mark in the figure indicates that there is a significant difference (# ⁇ 0.05) in the test value between the control group (Group A) administered with PBS alone and the stress group (Group B) administered with PBS alone. Indicates that there is.
- * Mark indicates a significant difference in test values (*: p ⁇ ) between the stress group administered with PBS alone (Group B) and the stress group administered with 3 mg / kg peanut astringent skin extract (Group F). 0.05).
- a line was drawn at regular intervals of 4 in the vertical direction and 4 in the horizontal direction on the floor of a cage made of white acrylic plates each having a width x depth x height of 40 cm, and the floor was divided into 16 equal parts.
- the mouse was released into this cage and allowed to move freely for 5 minutes, and the time during which the mouse was in the middle 4 squares and the time during which the mouse was moving were measured.
- the anxiolytic effect of the administered peanut astringent skin extract was evaluated using the length of time in the center as an index.
- the effect of the peanut astringent skin extract on the amount of activity was evaluated using the time during which the mouse was moving as an index. This open field test was conducted in the time zone from 8:00 to 10:00.
- a Y-shaped maze was used in which the total length of the arms was 40 cm, the wall height was 30 cm, the floor width was 5 cm, and the three arms were each connected at an angle of 120 degrees.
- Mice were placed at the tip of any arm of the Y-maze 12 hours after the last sample administration, allowed to freely explore the maze for 8 minutes, and the arms selected by the mouse were recorded in the order of selection. The number of times the mouse selected each arm within the measurement time was recorded, and this was used as the total number of arm selections. Next, the combination which selected three different arms continuously from this was investigated, and this number was made into the number of replacement actions.
- FIG. 8 shows the alternating action rate in the Y-shaped maze test.
- the vertical axis represents the alternation behavior rate, and is expressed as an average value ⁇ standard error of 6 animals in each group.
- the # mark in the figure indicates that there is a significant difference (# ⁇ 0.05) in the test value between the control group and the 3 mg / kg administration group.
- mice were placed in the above-mentioned cage in which two wooden white spheres (diameter 3 cm) having the same shape were placed 10 cm apart from each other and 10 cm apart from each other. was released for 15 minutes to remember the two spheres.
- replace one of the two spheres with a black cube (length x width x height 3 cm each) let the mouse stand in the cage for 10 minutes, and place the newly placed cube (new substance).
- the time for searching and the time for searching for the stored sphere were measured.
- the total search time is the sum of the time for searching for a new substance and the time for searching for a stored sphere.
- the new substance search time is divided by the total search time and multiplied by 100 to obtain the new substance recognition index. Asked. A higher new substance recognition index indicates improved substance recognition memory with at least 24 hours of memory retention.
- the novel substance recognition test was implemented in the time slot
- FIG. 9 shows a new substance recognition index in the new substance recognition test.
- the vertical axis represents the new substance recognition index, which is expressed as an average value ⁇ standard error of 5 animals in each group.
- the # mark in the figure indicates that there is a significant difference (# ⁇ 0.05) in test values between the control group and the 1 mg / kg administration group.
- the ## mark in the figure indicates that there is a significant difference in test values (## ⁇ 0.01) between the control group and the 3 mg / kg administration group.
- the novel substance recognition index was significantly increased as compared with the control group.
- the novel substance recognition index was significantly increased. From this, the working memory improvement effect by the peanut astringent skin extract was confirmed.
- no improving action was observed.
- mice in groups Y and Z were intraperitoneally administered once a day with sterile PBS (same amount as administered to group X) for 1 week.
- (3) Administration of trimethyltin (TMT) TMT (trimethyltin chloride) dissolved in sterilized physiological saline is administered to the mice in groups X and Y at the last of the intraperitoneal administrations in (2) above.
- the intraperitoneal administration was carried out the day after the administration.
- the dose of TMT was 2.5 mg / kg body weight.
- TMT is known to cause memory impairment similar to human Alzheimer's pathology (Pharmaceutical Journal. 2007 127 (3): 451-461) and forms a useful model of Alzheimer's disease. Only sterilized physiological saline was administered to the mice in group Z.
- Y group group administered TMT but not peanut astringent extract
- group Z no TMT administration group
- memory impairment is induced.
- Group X the group to which both TMT and peanut astringent skin extract were administered
- group Y had a significantly increased alternation behavior rate and improved memory impairment by administering the peanut astringent skin extract compared to group Y. ing.
- the # mark in FIG. 10 indicates that there is a significant difference (# ⁇ 0.05) in the test value between the Y group and the Z group.
- * mark shows that there exists a significant difference (* ⁇ 0.05) in a test value between X group and Y group.
- test method Fetal cerebral cortical neurons (hereinafter also simply referred to as nerve cells) taken from Wistar pregnant rats (gestation day 17; manufactured by SLC, Japan) were treated with poly-DL- It was housed in a 6-well plate coated with ornithine. This neuron was used at a density of 1 ⁇ 10 5 cells / cm 2 using medium 1 (Dulbecos's Modified Eagle's Medium (DMEM; manufactured by Invitrogen) containing 5% FBS, sodium selenite, antibiotics). Cultured for 24 hours. Thereafter, medium 1 was replaced with medium 2 (Neurobasal Medium (manufactured by Invitrogen) containing 2% B27 supplement, 1 mM sodium pyruvate, antibiotics, and 2 mM glutamine).
- DMEM Dulbecos's Modified Eagle's Medium
- the first group contained 30 ⁇ g of peanut astringent skin extract dissolved in sterile PBS.
- the second group 100 ⁇ g / mL of peanut astringent skin extract dissolved in sterile PBS was added, and in the third group, only sterile PBS was added.
- FIG. 11 shows the results of BDNF gene expression analysis by RT-PCR.
- the vertical axis represents the ratio of BDNF and ⁇ -actin.
- BDNF mRNA expression level was significantly increased in the nerve cells to which 30 ⁇ g / mL or 100 ⁇ g / mL of the peanut astringent skin extract was added, compared to the nerve cells to which only PBS was added.
- tablet confectionery (food) was produced with the following composition.
- Granulated sugar 85 parts
- Concentrated fruit juice 5 parts
- Example 2 ⁇ 53 parts by weight of the peanut astringent skin extract prepared in Example 1 was stirred and mixed with 17 parts by weight of lactose, 27 parts by weight of crystalline cellulose, and 3 parts by weight of sucrose fatty acid ester. 340 mg of this agitated and mixed product was compression molded to produce tablets (food, pharmaceuticals) having a diameter of 10 mm.
- peanut astringent skin extract obtained in Example 1, drink (food) with the following composition Manufactured.
- Peanut astringent skin extract 50mg Vitamin B1 30mg Vitamin C 50mg Citric acid 300mg Ethyl alcohol 500mg Fructose 3000mg Fragrance 100mg Water totaled 100ml
- a pet food was produced with the following composition.
- Chicken meal 22 parts by weight Dried chicory 2.5 parts by weight The rest consists of salt, vitamins and minerals.
- peanut astringent skin for example, powder thereof
- peanut astringent skin extract may be used instead of the peanut astringent skin extract.
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Abstract
脳神経疾患の治療や予防、脳機能改善に用いることができ、副作用が少なく、長期にわたって服用しても安全性が高い組成物を提供すること。本発明の組成物は、ピーナッツの渋皮及び/又はその抽出物を有効成分として含有し、脳神経疾患治療、脳神経疾患予防、及び脳機能改善から成る群から選ばれる1以上を用途とする。前記脳神経疾患としては、うつ症状、不安症状、及び記憶障害から成る群から選ばれる1以上が挙げられる。また、前記脳機能改善としては、記憶学習能改善が挙げられる。本発明の組成物は、食品、食品添加物、医薬品、飼料、及びペットフードのうちのいずれかとすることができる。
Description
本発明は、例えば、食品、食品添加物、医薬品、飼料、及びペットフード等に適用できる組成物に関する。
我が国では、高齢化に伴い、アルツハイマー病やパーキンソン病などの認知・記憶障害や、様々なストレスに起因するうつ病など脳神経疾患患者が増加し、社会問題となっている。
うつ病患者は1999年の44万人から2002年には71万人に増加した。うつ病は治療せずに放置すると自殺につながる可能性が高いことも問題になっている。自殺者は2006年まで9年連続で3万人を越えるなど大きな社会問題となっており、その背景にはうつ病が密接に関係していると言われている。
不安障害を併発したうつ病患者も少なくない。不安障害は症状によって強迫性障害、パニック障害、広場恐怖、急性ストレス障害、全般性不安障害などに分けられるが、代表的な不安障害であるパニック障害は、世界各国で生涯有病率1.5~3.3%であり、約3割が抑うつを併発しており、パニック障害患者のうつ病生涯有病率は50%以上である。
また、高齢化社会に突入し、認知症患者も増加の一途をたどっている。認知症の一つであるアルツハイマー病は65歳以上で4~6%、80歳以上で15%以上がかかるとされ、現在国内における患者数は60万人に上る。
ところで、近年、脳の高次機能にはMAPキナーゼのシグナル伝達経路が重要な役割を果たすことが明らかになってきた。脳でMAPキナーゼを活性化する脳由来神経栄養因子(BDNF)の遺伝子多型が見出され、その解析から、BDNFの機能異常は、うつ病、アルツハイマー病、記憶障害等の危険因子になることも明らかにされた(非特許文献1)。すなわち、脳の健康を保つ上でMAPキナーゼの働きが重要と考えられる。
MAPキナーゼの活性化には、キナーゼサブドメイン7、8の間に存在するスレオニン残基とチロシン残基の両方がリン酸化されることが必要である。うつ病モデル動物を使った実験では、海馬や前頭葉皮質においてリン酸化MAPキナーゼが減少しているという報告があり(非特許文献2)、短期記憶を長期記憶へと定着させるのに役立つと考えられている長期増強(long-term potentiation; LTP)の発現にもMAPキナーゼが関与しているという報告もある(非特許文献3、非特許文献4)。このように、うつや記憶障害といった脳神経疾患とMAPキナーゼには深い関係があると考えられる。
Cell.2003 Jan 24;112(2):257-69. Behav.Brain Res.2006 Dec 15;175 (2):233-40. J.Neurosci.2000 Jun 15;20(12):4563-72. J.Neurosci.2002 July 1;22(13):5432-41.
Cell.2003 Jan 24;112(2):257-69. Behav.Brain Res.2006 Dec 15;175 (2):233-40. J.Neurosci.2000 Jun 15;20(12):4563-72. J.Neurosci.2002 July 1;22(13):5432-41.
うつ病の治療薬は既にいくつか開発されているが問題点も多い。新世代薬の登場で改善されつつあるとはいえ、現在臨床で使用されているうつ病薬には胃腸障害、肝障害などの副作用があるほか、共通して即効性に乏しく、効果が現れるまでにある程度の期間(2~3週間)が必要といった問題がある。不安障害の治療にはベンゾジアゼピン系抗不安薬などが用いられるが、眠気、ふらつき、依存性などの問題点もある。アルツハイマー病の治療薬としては、種々の合成医薬品の開発が進められているものの、その一つであるアセチルコリンエステラーゼ阻害薬には、肝障害などの副作用が報告されており、確固たる治療薬は未だ作られていないのが現状である。
本発明は以上の点に鑑みなされたものであり、脳神経疾患の治療や予防、脳機能改善に用いることができ、副作用が少なく、長期にわたって服用しても安全性が高い組成物を提供することを目的とする。
本発明は、ピーナッツの渋皮及び/又はその抽出物を有効成分として含有し、脳神経疾患治療、脳神経疾患予防、及び脳機能改善から成る群から選ばれる1以上を用途とする組成物を要旨とする。
本発明の組成物は、ピーナッツの渋皮、ピーナッツの渋皮の抽出物、又はそれらの両方を有効成分として含有することにより、脳神経疾患治療作用、脳神経疾患予防作用、脳機能改善作用を有する。本発明の組成物は、その有効成分がBDNF類似の活性を示し、脳神経細胞のMAPキナーゼ活性化亢進作用を有することにより、上記の作用を奏すると考えられる。また、本発明の組成物は、有効成分として安全性の高い天然物を用いているので、副作用が少なく、長期にわたって服用しても安全性が高い。
前記脳神経疾患としては、例えば、うつ症状、不安症状、及び記憶障害から成る群から選ばれる1以上が挙げられる。
前記脳機能改善としては、例えば、記憶学習能改善が挙げられる。
前記脳機能改善としては、例えば、記憶学習能改善が挙げられる。
前記組成物は、例えば、機能性を有した食品(例えば、飲食品、食品素材、健康食品、特定保健用食品)、食品添加物、医薬品、飼料、及びペットフードのうちのいずれかとすることができる。
本発明の組成物は、BDNF類似の作用を有し、更にはBDNFの遺伝子発現亢進作用を有する。BDNFはアルツハイマー病やうつ症状を改善する作用があることが知られている。よって、本発明の組成物を用いれば、アルツハイマー病やうつ症状を改善することができる。
本発明に係る組成物の利用形態として、剤形・形態は任意であり、カプセル、粉末、顆粒、固形、液体、ゲル等の形態で利用できる。例えば、タブレットやカプセルの形態を有する健康食品や、ドリンクや製剤等の形態を有する医薬品とすることができる。また、ビスケットやクッキー、キャンディーなどの菓子や、ふりかけ、野菜ジュース、スープなどの一般飲食品に適宜混合して使用することも可能である。さらに、飼料やペットフードに適宜混合して使用することも可能である。
本発明におけるピーナッツ(Arachis hypogaea LINNE)は、マメ科ラッカセイ属に属する植物であり、南京豆や落花生、唐人豆とも呼ばれる。ピーナッツの渋皮は薄皮、甘皮とも呼ばれるものであるが、一般にピーナッツを各種加工食品に加工する際、ほとんどが除去されており、大部分は廃棄処分されている。本発明はこの未利用資源である渋皮を有効利用し、付加価値の高い組成物(例えば医薬品や健康食品など)を生み出すものであり、その点からも非常に意義深いものと言える。
本発明におけるピーナッツは、ラッカセイ属に属する植物であればその種類は問わないが、一般に広く食用に供されているピーナッツ(A.hypogaea)が、原料入手が容易である点から好ましい。また、ピーナッツの産地、収穫時期等についてもなんら制限されない。さらに、渋皮はピーナッツ加工食品を製造する際の脱皮工程で発生するものを利用することができる。その際の渋皮の状態は乾燥状態、湿潤状態のいずれも、原料として使用するには問題がない。しかし、その後の加工で渋皮粉砕品とする場合には、粉砕工程を考慮すると、乾燥状態である方が望ましいが、一旦湿潤状態で渋皮を取り出した後、乾燥させてもなんら問題はない。また、加熱工程や焙煎工程などの加工処理が施された後に脱皮された渋皮を用いても構わない。また、脱皮工程の方法として、殻をはずした後、湯に浸漬することによって渋皮を膨潤させてから脱皮を行う場合がある。その際用いられた湯には有効成分が溶け出していることから、この湯を本発明に係る組成物の原料として使用することも可能である。すなわち、湯を必要に応じてフィルター等で濾過した後、減圧濃縮法、常圧濃縮法、薄膜蒸留法などの濃縮手段を用いて濃縮後、凍結乾燥法、噴霧乾燥法などの粉末化手段を用いて粉末化することができる。さらに必要に応じて、後述するエタノールなどの溶媒を用いて抽出精製を行っても良い。さらに後述する吸着樹脂などを用いた精製手段を組み合わせても良い。
ピーナッツから得られた渋皮を粉砕することで粉砕物を得ることができ、この乾燥粉砕物を本発明における有効成分として使用することができる。この際の乾燥方法は、熱風乾燥、真空乾燥、凍結乾燥、流動乾燥など一般に乾燥手段として用いられている方法を用いることができ、特にその方法は限定されるものではない。また、粉砕方法には乾式粉砕、湿式粉砕、ジェットミルなど一般に粉砕手段として用いられる方法を用いることができ、特にその方法は限定されるものではない。
一方、渋皮抽出物を本発明の有効成分として使用することができる。剥いた渋皮をそのまま抽出しても良いが、適当な粒度に粉砕したものを原料として抽出する方が抽出効率を高めるためには望ましい。抽出に用いる溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等、ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、アセトン、ジエチルエーテル、酢酸エチル等の群から選ばれる単独の溶媒、または2種類以上の溶媒の任意の混合溶媒のいずれであってもよいが、抽出物が最終的に食品などに配合される場合は、安全性の点で、水、エタノール、またはこれらの混合溶媒を用いるのが好ましい。また、抽出率を向上させるため、抽出は複数回実施するようにしても良い。抽出の際の原料(渋皮)と溶媒との比率は特に限定されるものではないが、原料1部に対して溶媒2~1000部とすることが好ましく、特に抽出操作、効率の点で、原料1部に対して溶媒5~100部を用いることが好ましい。また、抽出温度は特に限定される物ではないが、室温から溶媒の沸点の範囲とするのが便利である。抽出時間は抽出温度などによって異なるが、30分~24時間の範囲とするのが好ましい。
このようにして得られた抽出物から、必要に応じて、カラムクロマトグラフィーなどの分離手法を用い、有効成分を精製した分画物を分離しても良い。分離の手段としては、カラムや薄層等によるクロマトグラフィーや膜分離法を用いることができ、ゲル浸透、ゲル濾過等のサイズ排除クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー等の方法を用いることができる。具体的には、ピーナッツ渋皮抽出物を少量の水、含水メタノール、含水エタノールなどの溶媒に溶解し、セファデックスLH-20(商品名、GEヘルスケアバイオサイエンス社製)、ダイアイオンHP-20(商品名、三菱化学製)などの吸着樹脂を充填したカラムに通液し、有効成分を吸着樹脂に吸着させた後、水で十分洗浄し、さらに、有効成分を溶出させるに充分な濃度と量のメタノール、エタノール、アセトンなどの親水性溶媒、あるいはこれらと水との混合溶媒で有効成分を溶出させればよい。
更に、抽出物や分画物は、減圧濃縮法、常圧濃縮法、薄膜蒸留法などの濃縮手段を用いて濃縮液とした後、凍結乾燥法、噴霧乾燥法などの粉末化手段を用いて粉末化することができる。
以下に実施例をあげて本発明を詳細に説明する。
1.ピーナッツ渋皮抽出物の製造
乾燥ピーナッツの渋皮1000gに、16Lの60%エタノールを加え、40℃にて1時間攪拌抽出した後、ろ過し、1回目の抽出液を得た。抽出残渣に再度2Lの60%エタノールを加え、40℃にて30分攪拌抽出した後、ろ過し、2回目の抽出液を得た。1回目の抽出液と2回目の抽出液とを合わせ、40℃にて減圧濃縮し、約1/50容量まで濃縮後、ダイアイオンHP-20(商品名、三菱化学製)5Lに有効成分を吸着した。15Lの水で水洗し、糖質などを除去した後、40%エタノール10Lで有効成分を溶出させ、有効成分を含む画分を集め、40℃にて約1/50容量まで減圧濃縮した。濃縮物を凍結乾燥し、ピーナッツ渋皮抽出物115.8gを得た。
乾燥ピーナッツの渋皮1000gに、16Lの60%エタノールを加え、40℃にて1時間攪拌抽出した後、ろ過し、1回目の抽出液を得た。抽出残渣に再度2Lの60%エタノールを加え、40℃にて30分攪拌抽出した後、ろ過し、2回目の抽出液を得た。1回目の抽出液と2回目の抽出液とを合わせ、40℃にて減圧濃縮し、約1/50容量まで濃縮後、ダイアイオンHP-20(商品名、三菱化学製)5Lに有効成分を吸着した。15Lの水で水洗し、糖質などを除去した後、40%エタノール10Lで有効成分を溶出させ、有効成分を含む画分を集め、40℃にて約1/50容量まで減圧濃縮した。濃縮物を凍結乾燥し、ピーナッツ渋皮抽出物115.8gを得た。
2.マウスの海馬におけるMAPキナーゼリン酸化に及ぼすピーナッツ渋皮抽出物の亢進効果の検証
(1)試験方法
被験動物として、6週齢の雄ddYマウス(日本SLC製)であって、体重29~31gのもの4匹を使用した。ピーナッツ渋皮抽出物をPBS(2.7mM 塩化カリウム、1.5mM リン酸二水素カリウム、137mM 塩化ナトリム、10mM リン酸水素二ナトリム;pH7.4)に溶解し、ピーナッツ渋皮抽出物のPBS溶液を調製した。ピーナッツ渋皮抽出物の投与量が、それぞれ、30μg/kg、300μg/kg、3000μg/kg体重となるように、上記溶液を上記4匹のマウスのうちの3匹に腹腔内投与した。また、残りの1匹のマウスに、PBSのみを投与し、対照(Control)群とした。
(1)試験方法
被験動物として、6週齢の雄ddYマウス(日本SLC製)であって、体重29~31gのもの4匹を使用した。ピーナッツ渋皮抽出物をPBS(2.7mM 塩化カリウム、1.5mM リン酸二水素カリウム、137mM 塩化ナトリム、10mM リン酸水素二ナトリム;pH7.4)に溶解し、ピーナッツ渋皮抽出物のPBS溶液を調製した。ピーナッツ渋皮抽出物の投与量が、それぞれ、30μg/kg、300μg/kg、3000μg/kg体重となるように、上記溶液を上記4匹のマウスのうちの3匹に腹腔内投与した。また、残りの1匹のマウスに、PBSのみを投与し、対照(Control)群とした。
各濃度のサンプル投与1時間後にマウスの海馬を摘出し、その海馬をRIPAバッファー(150mM 塩化ナトリウム、20mM トリス;pH7.4、2mM エチレンジアミン四酢酸、1%IGEPAL@CA-630、1%デオキシコール酸ナトリウム、0.1%SDS;ドデシル硫酸ナトリウム、50mM フッ化ナトリウム、1mM バナジン酸ナトリウム、1mM フッ化フニルメチルスルホニル、10μg/ml ロイペプチンヘミ硫酸塩一水和物、10μg/ml アプロチニン)中に移し、氷冷下、超音波破砕して細胞溶解液とした。これを遠心分離(12,000rpm、20分)した上清をSDS化した後、ポリアクリルアミドゲルにてタンパク質を分離し、SDS-ポリアクリルアミドゲル(10%(w/v)アクリルアミド)に装填した。ゲルをポリフッ化ビニリデン(PVDF)膜に転写した。そのPVDF膜を5%スキムミルクでブロッキングした後、リン酸化MAPキナーゼ及びMAPキナーゼの抗体(cell signaling製)を用いて成分検索した。
(2)試験結果
図1は、ピーナッツ渋皮抽出物を腹腔内投与した時のマウスの海馬におけるリン酸化MAPキナーゼの亢進効果の結果である。なお、縦軸はリン酸化MAPキナーゼと全MAPキナーゼの割合を示す。ピーナッツ渋皮抽出物を投与したマウスの海馬は、PBSのみを投与したマウス(コントロール)の海馬と比べ、投与量が300μg/kgのもので約4.2倍、投与量が3000μg/kgのもので約2.7倍、MAPキナーゼのリン酸化が亢進されていることが確認できた。
(2)試験結果
図1は、ピーナッツ渋皮抽出物を腹腔内投与した時のマウスの海馬におけるリン酸化MAPキナーゼの亢進効果の結果である。なお、縦軸はリン酸化MAPキナーゼと全MAPキナーゼの割合を示す。ピーナッツ渋皮抽出物を投与したマウスの海馬は、PBSのみを投与したマウス(コントロール)の海馬と比べ、投与量が300μg/kgのもので約4.2倍、投与量が3000μg/kgのもので約2.7倍、MAPキナーゼのリン酸化が亢進されていることが確認できた。
3.ピーナッツ渋皮抽出物の抗うつ作用及び抗不安作用の検証
(1)被験動物の用意
被験動物として、6週齢の雄のddYマウス(日本SLC)を購入した。マウスは6群に分け、飼育室であるプラスチックゲージ(幅280mm×深さ440mm×高さ180 mm)内で自由飲食にて飼育した。飼育室は、室温25±1℃に保ち、7時から19時まで点灯した。
(1)被験動物の用意
被験動物として、6週齢の雄のddYマウス(日本SLC)を購入した。マウスは6群に分け、飼育室であるプラスチックゲージ(幅280mm×深さ440mm×高さ180 mm)内で自由飲食にて飼育した。飼育室は、室温25±1℃に保ち、7時から19時まで点灯した。
マウスの購入後、5日間飼育してから、後述の尾懸垂試験を行い、無動化時間が20秒以下のもの、或いは2分以上のものは排除した。選別に残ったマウスを、無動化時間の平均が同等になるように、A群~F群の6群(各群それぞれ6匹)に振り分けた。図2に、各群の無動化時間を示す。なお、図2の縦軸は無動化時間を表し、図2では各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。
(2)ストレスの付加方法
6群のうち、A群、C群、E群を、ストレスをかけない正常マウスの群(コントロール群)とした。一方、B群、D群、F群を、ストレスをかけうつ状態にしたマウスの群(ストレス群)とした。
(2)ストレスの付加方法
6群のうち、A群、C群、E群を、ストレスをかけない正常マウスの群(コントロール群)とした。一方、B群、D群、F群を、ストレスをかけうつ状態にしたマウスの群(ストレス群)とした。
B群、D群、F群のマウスにストレスをかける方法は、伊藤ら(Phytomedic
ine.2006;13:658-67.)のマイルドストレス法を一部改良して用い、以下のように行った。なお、マイルドストレスの負荷は前述の尾懸垂試験による選別の二日後から開始した。B群、D群、F群のマウスに対し、まず15分間の強制水泳を行った。その48時間後から傾斜ケージで48時間、汚物ケージで24時間、振とうケージで24時間飼育した。なお、各種ストレスをかけ終わって24時間はストレスをかけずにマウスを休ませた。傾斜ケージ以降のストレスを三回り繰り返した。
(3)サンプルの投与方法
サンプルの投与方法は、以下のようにした。各群のマウスに対し、前述のマイルドストレスの負荷における強制水泳の48時間後から1日1回、3週間、反復経口投与により、サンプルを投与した。投与するサンプルは、C群、D群、E群、F群については、ピーナッツ渋皮抽出物をPBSに溶解したものとした。投与量は、C群、D群については、1mg/kg体重となるように調整し、E群、F群については、3mg/kg体重となるように調整した。A群、B群については、PBSのみを投与した。
(4)尾懸垂試験の方法
サンプルを3週間反復経口投与した後、各群のマウスに対し、尾懸垂試験を、以下のように実施した。尻尾の先端から約1cmの所を指先で摘み、床から10cmの高さで固定し、逆さ吊りした。マウスは始めの内は激しく動き抵抗するが、次第に諦め無動化する。尾懸垂開始から6分以内の無動化時間が長いマウスほど、うつの症状が重いという指標とし、投与したピーナッツ渋皮抽出物の抗うつ効果を評価した。この尾懸垂試験の評価は19時から22時までの時間帯に実施した。
(5)尾懸垂試験の結果
図3は、尾懸垂試験の結果を表す。なお縦軸は無動化時間を示し、各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の##マークは、PBSのみを投与したコントロール群(A群)と、PBSのみを投与したストレス群(B群)との間に、試験値における有意な差(##<0.01)があることを示す。また。*マークは、PBSのみを投与したストレス群(B群)と、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物を投与したストレス群(F群)との間に、の無動化時間における有意な差(p<0.05)があることを示す。
ine.2006;13:658-67.)のマイルドストレス法を一部改良して用い、以下のように行った。なお、マイルドストレスの負荷は前述の尾懸垂試験による選別の二日後から開始した。B群、D群、F群のマウスに対し、まず15分間の強制水泳を行った。その48時間後から傾斜ケージで48時間、汚物ケージで24時間、振とうケージで24時間飼育した。なお、各種ストレスをかけ終わって24時間はストレスをかけずにマウスを休ませた。傾斜ケージ以降のストレスを三回り繰り返した。
(3)サンプルの投与方法
サンプルの投与方法は、以下のようにした。各群のマウスに対し、前述のマイルドストレスの負荷における強制水泳の48時間後から1日1回、3週間、反復経口投与により、サンプルを投与した。投与するサンプルは、C群、D群、E群、F群については、ピーナッツ渋皮抽出物をPBSに溶解したものとした。投与量は、C群、D群については、1mg/kg体重となるように調整し、E群、F群については、3mg/kg体重となるように調整した。A群、B群については、PBSのみを投与した。
(4)尾懸垂試験の方法
サンプルを3週間反復経口投与した後、各群のマウスに対し、尾懸垂試験を、以下のように実施した。尻尾の先端から約1cmの所を指先で摘み、床から10cmの高さで固定し、逆さ吊りした。マウスは始めの内は激しく動き抵抗するが、次第に諦め無動化する。尾懸垂開始から6分以内の無動化時間が長いマウスほど、うつの症状が重いという指標とし、投与したピーナッツ渋皮抽出物の抗うつ効果を評価した。この尾懸垂試験の評価は19時から22時までの時間帯に実施した。
(5)尾懸垂試験の結果
図3は、尾懸垂試験の結果を表す。なお縦軸は無動化時間を示し、各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の##マークは、PBSのみを投与したコントロール群(A群)と、PBSのみを投与したストレス群(B群)との間に、試験値における有意な差(##<0.01)があることを示す。また。*マークは、PBSのみを投与したストレス群(B群)と、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物を投与したストレス群(F群)との間に、の無動化時間における有意な差(p<0.05)があることを示す。
1mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物を投与したストレス群(D群)は、PBSのみを投与したストレス群(B群)に対し、試験値における有意な差はなかったが、無動化時間を低下させた。また、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物を投与したストレス群(F群)は、無動化時間を有意に低下させた。このことから、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物の投与により抗うつ効果が認められた。
(6)ガラス玉覆い隠し試験の方法
サンプルを3週間反復経口投与した後、各群のマウスに対し、ガラス玉覆い隠し試験を、以下のように実施した。透明なアクリル製の板で作成したケージ(幅300mm×深さ300mm×高さ300mm)にチップを厚さ5cmになるように敷き詰め、その上に直径2cmの透明なガラス玉を25個、間を縦横5cmずつ空けて置いた。このケージにマウスを放ち、15分間自由行動させた後、3分の2以上がチップで覆い隠されたガラス玉の数を数えた。隠されたガラス玉の数における減少を指標として、投与したピーナッツ渋皮抽出物の抗不安あるいは抗強迫性障害、抗パニック障害効果を評価した。このガラス玉覆い隠し試験は、8時から11時までの時間帯に実施した。
(7)ガラス玉覆い隠し試験の結果
図4は、ガラス玉覆い隠し試験の結果を表す。なお、縦軸は隠したガラス玉の個数を示し、各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の#マークは、PBSのみを投与したコントロール群(A群)と、PBSのみを投与したストレス群(B群)との間に、試験値における有意な差(#<0.05)があることを示す。また。*マークは、PBSのみを投与したストレス群(B群)と、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物を投与したストレス群(F群)との間に、試験値における有意な差(*:p<0.05)があることを示す。
(6)ガラス玉覆い隠し試験の方法
サンプルを3週間反復経口投与した後、各群のマウスに対し、ガラス玉覆い隠し試験を、以下のように実施した。透明なアクリル製の板で作成したケージ(幅300mm×深さ300mm×高さ300mm)にチップを厚さ5cmになるように敷き詰め、その上に直径2cmの透明なガラス玉を25個、間を縦横5cmずつ空けて置いた。このケージにマウスを放ち、15分間自由行動させた後、3分の2以上がチップで覆い隠されたガラス玉の数を数えた。隠されたガラス玉の数における減少を指標として、投与したピーナッツ渋皮抽出物の抗不安あるいは抗強迫性障害、抗パニック障害効果を評価した。このガラス玉覆い隠し試験は、8時から11時までの時間帯に実施した。
(7)ガラス玉覆い隠し試験の結果
図4は、ガラス玉覆い隠し試験の結果を表す。なお、縦軸は隠したガラス玉の個数を示し、各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の#マークは、PBSのみを投与したコントロール群(A群)と、PBSのみを投与したストレス群(B群)との間に、試験値における有意な差(#<0.05)があることを示す。また。*マークは、PBSのみを投与したストレス群(B群)と、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物を投与したストレス群(F群)との間に、試験値における有意な差(*:p<0.05)があることを示す。
PBSのみを投与したストレス群(B群)に対し、ピーナッツ渋皮抽出物3mg/kgを投与したストレス群(F群)では、隠したガラス玉の数が有意に減少した。このことより、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物の投与による抗不安あるいは抗強迫性障害、抗パニック障害効果を確認した。
(8)高架式十字迷路試験の試験方法
サンプルを3週間反復経口投与した後、各群のマウスに対し、高架式十字迷路試験を、以下のように実施した。図5に示すような、高架式十字迷路床を用意した。すなわち、床から高さ60cmの所に、中央で直角に交差した十字の板(幅5cm×長さ65cm)を設置し、片方向の板(クローズドアーム)については、高さ10cmの透明なアクリル製の板で両側を仕切った。この十字路にマウスを放ち、5分間自由行動させ、アクリル製の板で仕切られてないアーム(オープンアーム)にいた時間とアクリル製の板で仕切られた板(クローズドアーム)に入った回数とを計測した。オープンアームにいた時間の長短を指標として、投与したピーナッツ渋皮抽出物の抗不安効果を評価した。また、クローズドアームに入った回数を指標として、投与したピーナッツ渋皮抽出物の行動量への影響の評価とした。この高架式十字迷路試験は9時から11時までの時間帯に実施した。
(9)高架式十字迷路試験の結果
図6は、高架式十字迷路試験において、各群のマウスがオープンアームにいた時間を示す。なお、縦軸はオープンアームにいた時間を示し、各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の#マークは、PBSのみを投与したコントロール群(A群)と、PBSのみを投与したストレス群(B群)との間に、試験値における有意な差(#<0.05)があることを示す。また。*マークは、PBSのみを投与したストレス群(B群)と、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物を投与したストレス群(F群)との間に、試験値における有意な差(*:p<0.05)があることを示す。
(8)高架式十字迷路試験の試験方法
サンプルを3週間反復経口投与した後、各群のマウスに対し、高架式十字迷路試験を、以下のように実施した。図5に示すような、高架式十字迷路床を用意した。すなわち、床から高さ60cmの所に、中央で直角に交差した十字の板(幅5cm×長さ65cm)を設置し、片方向の板(クローズドアーム)については、高さ10cmの透明なアクリル製の板で両側を仕切った。この十字路にマウスを放ち、5分間自由行動させ、アクリル製の板で仕切られてないアーム(オープンアーム)にいた時間とアクリル製の板で仕切られた板(クローズドアーム)に入った回数とを計測した。オープンアームにいた時間の長短を指標として、投与したピーナッツ渋皮抽出物の抗不安効果を評価した。また、クローズドアームに入った回数を指標として、投与したピーナッツ渋皮抽出物の行動量への影響の評価とした。この高架式十字迷路試験は9時から11時までの時間帯に実施した。
(9)高架式十字迷路試験の結果
図6は、高架式十字迷路試験において、各群のマウスがオープンアームにいた時間を示す。なお、縦軸はオープンアームにいた時間を示し、各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の#マークは、PBSのみを投与したコントロール群(A群)と、PBSのみを投与したストレス群(B群)との間に、試験値における有意な差(#<0.05)があることを示す。また。*マークは、PBSのみを投与したストレス群(B群)と、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物を投与したストレス群(F群)との間に、試験値における有意な差(*:p<0.05)があることを示す。
PBSのみを投与したストレス群(B群)に対し、ピーナッツ渋皮抽出物を3mg/kg投与したストレス群(F群)では、オープンアームにいる時間が有意に増加した。このことから3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物の投与には抗不安効果があることが示された。また、PBSのみを投与したストレス群(B群)と、ピーナッツ渋皮抽出物を3mg/kg投与したストレス群(F群)との間で、クローズドアームに入った回数において有意な差が無かったことから、ピーナッツ渋皮抽出物は行動量に影響しないことが分かった。
(10)オープンフィールド試験の試験方法
サンプルを3週間反復経口投与した後、各群のマウスに対し、オープンフィールド試験を、以下のように実施した。幅×深さ×高さが各40cmである白色のアクリル板製のケージの床に、縦4本横4本等間隔に線を引き、床を16等分した。このケージにマウスを放ち、5分間自由行動させ、その間に中央の4マスにいた時間と、マウスが動いていた時間とをそれぞれ測定した。中央にいた時間の長短を指標として、投与したピーナッツ渋皮抽出物の抗不安効果を評価した。また、マウスが動いていた時間を指標として、投与したピーナッツ渋皮抽出物の活動量に与える効果を評価した。このオープンフィールド試験は8時から10時の時間帯に実施した。
(11)オープンフィールド試験の結果
図7は、オープンフィールド試験において、各群のマウスが中央の4マスにいた時間を表す。なお、縦軸は中央の4マスにいた時間を示し、各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の##マークは、PBSのみを投与したコントロール群(A群)と、PBSのみを投与したストレス群(B群)との間に、試験値における有意な差(##<0.01)があることを示す。また。**マークは、PBSのみを投与したストレス群(B群)と、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物を投与したストレス群(F群)との間に、試験値における有意な差(**:p<0.01)があることを示す。
(10)オープンフィールド試験の試験方法
サンプルを3週間反復経口投与した後、各群のマウスに対し、オープンフィールド試験を、以下のように実施した。幅×深さ×高さが各40cmである白色のアクリル板製のケージの床に、縦4本横4本等間隔に線を引き、床を16等分した。このケージにマウスを放ち、5分間自由行動させ、その間に中央の4マスにいた時間と、マウスが動いていた時間とをそれぞれ測定した。中央にいた時間の長短を指標として、投与したピーナッツ渋皮抽出物の抗不安効果を評価した。また、マウスが動いていた時間を指標として、投与したピーナッツ渋皮抽出物の活動量に与える効果を評価した。このオープンフィールド試験は8時から10時の時間帯に実施した。
(11)オープンフィールド試験の結果
図7は、オープンフィールド試験において、各群のマウスが中央の4マスにいた時間を表す。なお、縦軸は中央の4マスにいた時間を示し、各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の##マークは、PBSのみを投与したコントロール群(A群)と、PBSのみを投与したストレス群(B群)との間に、試験値における有意な差(##<0.01)があることを示す。また。**マークは、PBSのみを投与したストレス群(B群)と、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物を投与したストレス群(F群)との間に、試験値における有意な差(**:p<0.01)があることを示す。
PBSのみを投与したストレス群(B群)に対し、ピーナッツ渋皮抽出物を3mg/kg投与したストレス群(F群)では、中央の4マスにいる時間が有意に増加した。高架式十字迷路試験の試験結果に続き、この試験結果からも、3mg/kgのピーナッツ渋皮抽出物の投与には抗不安効果があることが示された。また、マウスが動いていた時間はいずれも有意な差が無かったことから、ピーナッツ渋皮抽出物は行動量に影響しないことが分かった。
4.ピーナッツ渋皮抽出物の記憶力改善作用の検証(その1)
(1)被験動物の準備
6週齢の雄のddYマウス(日本SLC)を使用した。マウスはコントロール群、ピーナッツ渋皮抽出物1mg/kg投与群、3mg/kg投与群、10mg/kg投与群の4群に分け、飼育室であるプラスチックゲージ(幅280mm×深さ440mm×高さ180mm)内で自由飲食にて一週間飼育した。飼育室は、室温25±1℃に保ち、7時から19時まで点灯した。
(2)サンプル投与方法
ピーナッツ渋皮抽出物をPBSに溶解し、ピーナッツ渋皮抽出物のPBS溶液を調製した。ピーナッツ渋皮抽出物の投与量が、それぞれ、1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg体重となるように、上記溶液を、1mg/kg投与群、3mg/kg投与群、10mg/kg投与群のマウスに、一日一回、反復経口投与した。なお、コントロール群には、上記溶液の代わりに、PBSのみを投与した。
(3)Y字迷路試験の試験方法
サンプルを2週間反復経口投与した後、各群のマウスに対し、Y字迷路試験を、以下のように実施した。アームの全長が40cm、壁の高さが30cm、床の幅が5cmで、3本のアームがそれぞれ120度の角度で接続されたY字迷路を使用した。マウスを、最後のサンプル投与から12時間後に、Y字迷路のいずれかのアームの先端に置き、8分間迷路内を自由探索させ、マウスが選択したアームを、選択した順に記録した。マウスが測定時間内に各アームを選択した回数を記録し、これを総アーム選択数とした。次に、この中から連続して異なる3本のアームを選択した組み合わせを調べ、この数を交替行動数とした。交替行動数を、総アーム選択数から2を引いた数で割り、その値に100をかけて交替行動率を求めた。交替行動率が高いほど作業記憶が改善されたことを示している。なお、Y迷路試験は8:00から11:00の時間帯に実施した。
(4)Y字迷路試験の結果
図8は、Y字迷路試験における交替行動率を表す。なお縦軸は交替行動率を示し、各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の#マークは、コントロール群と、3mg/kg投与群との間に、試験値における有意な差(#<0.05)があることを示している。ピーナッツ渋皮抽出物を3mg/kg投与した群では、コントロール群に比べ、交替行動率が有意に増加した。このことからピーナッツ渋皮抽出物による作業記憶の改善作用が確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物を過剰量投与した(10mg/kg)群には改善作用が認められなかった。
(5)新規物質認識試験の試験方法
各群のマウスに対し、新規物質認識試験を、以下のように実施した。幅、深さ、高さがいずれも30cmの白色のアクリル板製のケージを使用した。13日目のサンプル投与終了から12時間後に、試験に用いるケージに1時間マウスを放ち、ケージに慣れさせた。
次に、14日目のサンプル投与終了から12時間後に、形が同じ二つの木製の白色球体(直径3cm)を、壁から10cmの所に互いに10cmの間隔を空けて置いた前述のケージにマウスを15分間放ち、二つの球体を記憶させた。更にその24時間後、今度は二つの球体の内一つを黒色の立方体(縦×横×高さいずれも3cm)に置き換え、マウスを10分間ケージに放ち、新しく置いた立方体(新規物質)を探している時間と記憶させた球体を探している時間とをそれぞれ測定した。新規物質を探している時間と記憶させた球体を探している時間とを足した時間を総探索時間とし、新規物質探索時間を総探索時間で割り、その値に100をかけて新規物質認識指数を求めた。新規物質認識指数が高いほど、少なくとも24時間の記憶保持を有する物質認識記憶が改善されたことを示している。なお、新規物質認識試験は8:00から12:00の時間帯に実施した。
(6)新規物質認識試験の結果
図9は、新規物質認識試験における新規物質認識指数を表す。なお、縦軸は新規物質認識指数を示し、各群5匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の#マークは、コントロール群と1mg/kg投与群との間に、試験値における有意な差(#<0.05)があることを示す。また、図中の##マークは、コントロール群と3mg/kg投与群との間に、試験値における有意な差(##<0.01)があることを示す。ピーナッツ渋皮抽出物を1mg/kg投与した群と3mg/kg投与した群とでは、コントロール群に比べ、新規物質認識指数が有意に増加した。特に、ピーナッツ渋皮抽出物を3mg/kg投与した群では、顕著に新規物質認識指数が増加していた。このことからピーナッツ渋皮抽出物による作業記憶の改善作用が確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物を過剰量投与した(10mg/kg)群では、改善作用が認められなかった。
(1)被験動物の準備
6週齢の雄のddYマウス(日本SLC)を使用した。マウスはコントロール群、ピーナッツ渋皮抽出物1mg/kg投与群、3mg/kg投与群、10mg/kg投与群の4群に分け、飼育室であるプラスチックゲージ(幅280mm×深さ440mm×高さ180mm)内で自由飲食にて一週間飼育した。飼育室は、室温25±1℃に保ち、7時から19時まで点灯した。
(2)サンプル投与方法
ピーナッツ渋皮抽出物をPBSに溶解し、ピーナッツ渋皮抽出物のPBS溶液を調製した。ピーナッツ渋皮抽出物の投与量が、それぞれ、1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg体重となるように、上記溶液を、1mg/kg投与群、3mg/kg投与群、10mg/kg投与群のマウスに、一日一回、反復経口投与した。なお、コントロール群には、上記溶液の代わりに、PBSのみを投与した。
(3)Y字迷路試験の試験方法
サンプルを2週間反復経口投与した後、各群のマウスに対し、Y字迷路試験を、以下のように実施した。アームの全長が40cm、壁の高さが30cm、床の幅が5cmで、3本のアームがそれぞれ120度の角度で接続されたY字迷路を使用した。マウスを、最後のサンプル投与から12時間後に、Y字迷路のいずれかのアームの先端に置き、8分間迷路内を自由探索させ、マウスが選択したアームを、選択した順に記録した。マウスが測定時間内に各アームを選択した回数を記録し、これを総アーム選択数とした。次に、この中から連続して異なる3本のアームを選択した組み合わせを調べ、この数を交替行動数とした。交替行動数を、総アーム選択数から2を引いた数で割り、その値に100をかけて交替行動率を求めた。交替行動率が高いほど作業記憶が改善されたことを示している。なお、Y迷路試験は8:00から11:00の時間帯に実施した。
(4)Y字迷路試験の結果
図8は、Y字迷路試験における交替行動率を表す。なお縦軸は交替行動率を示し、各群6匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の#マークは、コントロール群と、3mg/kg投与群との間に、試験値における有意な差(#<0.05)があることを示している。ピーナッツ渋皮抽出物を3mg/kg投与した群では、コントロール群に比べ、交替行動率が有意に増加した。このことからピーナッツ渋皮抽出物による作業記憶の改善作用が確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物を過剰量投与した(10mg/kg)群には改善作用が認められなかった。
(5)新規物質認識試験の試験方法
各群のマウスに対し、新規物質認識試験を、以下のように実施した。幅、深さ、高さがいずれも30cmの白色のアクリル板製のケージを使用した。13日目のサンプル投与終了から12時間後に、試験に用いるケージに1時間マウスを放ち、ケージに慣れさせた。
次に、14日目のサンプル投与終了から12時間後に、形が同じ二つの木製の白色球体(直径3cm)を、壁から10cmの所に互いに10cmの間隔を空けて置いた前述のケージにマウスを15分間放ち、二つの球体を記憶させた。更にその24時間後、今度は二つの球体の内一つを黒色の立方体(縦×横×高さいずれも3cm)に置き換え、マウスを10分間ケージに放ち、新しく置いた立方体(新規物質)を探している時間と記憶させた球体を探している時間とをそれぞれ測定した。新規物質を探している時間と記憶させた球体を探している時間とを足した時間を総探索時間とし、新規物質探索時間を総探索時間で割り、その値に100をかけて新規物質認識指数を求めた。新規物質認識指数が高いほど、少なくとも24時間の記憶保持を有する物質認識記憶が改善されたことを示している。なお、新規物質認識試験は8:00から12:00の時間帯に実施した。
(6)新規物質認識試験の結果
図9は、新規物質認識試験における新規物質認識指数を表す。なお、縦軸は新規物質認識指数を示し、各群5匹の平均値±標準誤差で表示している。図中の#マークは、コントロール群と1mg/kg投与群との間に、試験値における有意な差(#<0.05)があることを示す。また、図中の##マークは、コントロール群と3mg/kg投与群との間に、試験値における有意な差(##<0.01)があることを示す。ピーナッツ渋皮抽出物を1mg/kg投与した群と3mg/kg投与した群とでは、コントロール群に比べ、新規物質認識指数が有意に増加した。特に、ピーナッツ渋皮抽出物を3mg/kg投与した群では、顕著に新規物質認識指数が増加していた。このことからピーナッツ渋皮抽出物による作業記憶の改善作用が確認された。また、ピーナッツ渋皮抽出物を過剰量投与した(10mg/kg)群では、改善作用が認められなかった。
5.ピーナッツ渋皮抽出物の記憶力改善作用の検証(その2)
(1)被験動物の準備
7週齢の雄のddYマウス(日本SLC製)を使用した。マウスを、それぞれ8匹ずつから成るX、Y、Z群に分け、プラスチックケージ(幅280mm×深さ440mm×180mm)内で自由飲食にて1週間飼育した。
(2)サンプル投与
X群のマウスには、1週間の間、滅菌したPBSに溶解したピーナッツ渋皮抽出物を1日1回腹腔内投与した。ピーナッツ渋皮抽出物の1回あたりの投与量は300μg/kg体重とした。Y群とZ群のマウスには、1週間の間、滅菌したPBS(X群に投与したものと同量)を1日1回腹腔内投与した。
(3)トリメチルスズ(TMT)の投与
X群、及びY群のマウスに対し、滅菌した生理食塩水に溶解したTMT(塩化トリメチルスズ)を、前記(2)の腹腔内投与のうちの最後の投与の翌日に腹腔内投与した。TMTの投与量は、2.5mg/kg体重とした。なお、TMTは、ヒトアルツハイマー病態に類似した記憶障害を惹起することが知られており(薬学雑誌.2007 127(3):451-461)、アルツハイマー病の有用なモデルを形成する。Z群のマウスに対しては、滅菌した生理食塩水のみを投与した。
(4)再度のサンプル投与
X群のマウスに対し、前記(3)のTMT投与の翌日と2日後において、滅菌したPBSに溶解したピーナッツ渋皮抽出物を1日1回腹腔内投与した。ピーナッツ渋皮抽出物の1回あたりの投与量は300μg/kg体重とした。また、Y群とZ群のマウスに対し、前記(3)のTMT投与の翌日と2日後において、滅菌したPBS(X群に投与したものと同量)を1日1回腹腔内投与した。
(5)試験結果
X、Y、Z群のマウスについて、前記(4)における最後のサンプル投与から1時間後に、前述のY字迷路試験を行った。その結果を図10に示す。なお、図10における縦軸は交替行動率を示し、各群8匹の平均値±標準誤差で表示している。
(1)被験動物の準備
7週齢の雄のddYマウス(日本SLC製)を使用した。マウスを、それぞれ8匹ずつから成るX、Y、Z群に分け、プラスチックケージ(幅280mm×深さ440mm×180mm)内で自由飲食にて1週間飼育した。
(2)サンプル投与
X群のマウスには、1週間の間、滅菌したPBSに溶解したピーナッツ渋皮抽出物を1日1回腹腔内投与した。ピーナッツ渋皮抽出物の1回あたりの投与量は300μg/kg体重とした。Y群とZ群のマウスには、1週間の間、滅菌したPBS(X群に投与したものと同量)を1日1回腹腔内投与した。
(3)トリメチルスズ(TMT)の投与
X群、及びY群のマウスに対し、滅菌した生理食塩水に溶解したTMT(塩化トリメチルスズ)を、前記(2)の腹腔内投与のうちの最後の投与の翌日に腹腔内投与した。TMTの投与量は、2.5mg/kg体重とした。なお、TMTは、ヒトアルツハイマー病態に類似した記憶障害を惹起することが知られており(薬学雑誌.2007 127(3):451-461)、アルツハイマー病の有用なモデルを形成する。Z群のマウスに対しては、滅菌した生理食塩水のみを投与した。
(4)再度のサンプル投与
X群のマウスに対し、前記(3)のTMT投与の翌日と2日後において、滅菌したPBSに溶解したピーナッツ渋皮抽出物を1日1回腹腔内投与した。ピーナッツ渋皮抽出物の1回あたりの投与量は300μg/kg体重とした。また、Y群とZ群のマウスに対し、前記(3)のTMT投与の翌日と2日後において、滅菌したPBS(X群に投与したものと同量)を1日1回腹腔内投与した。
(5)試験結果
X、Y、Z群のマウスについて、前記(4)における最後のサンプル投与から1時間後に、前述のY字迷路試験を行った。その結果を図10に示す。なお、図10における縦軸は交替行動率を示し、各群8匹の平均値±標準誤差で表示している。
Y群(TMTを投与し、ピーナッツ渋皮抽出物は投与していない群)は、Z群(TMT無投与群)に比べて、有意に交替行動率が低下しており、記憶障害が惹起されている。X群(TMTとピーナッツ渋皮抽出物の両方を投与した群)は、ピーナッツ渋皮抽出物を投与することにより、Y群に比べて、有意に交替行動率が増加しており、記憶障害が改善されている。
なお、図10中の#マークは、Y群とZ群との間に、試験値における有意な差(#<0.05)があることを示す。また、*マークは、X群とY群との間に、試験値における有意な差(*<0.05)があることを示す。
6.BDNF遺伝子発現亢進作用の検証
(1)試験方法
Wistar系妊娠ラット(妊娠17日目;日本SLC製)から取り出した胎仔の大脳皮質神経細胞(以下、単に神経細胞ともいう)を、ポリ-DL-オルニチンコーティングした6穴プレートに収容した。この神経細胞を、培地1(5%FBS、亜セレン酸ナトリウム、抗生物質入りのDulbeccos‘s Modified Eagle’s Medium(DMEM;Invitrogen製))を用い、1×105細胞/cm2の密度で24時間培養した。その後、培地1を培地2(2%B27サプリメント、1mMピルビン酸ナトリウム、抗生物質、2mMグルタミン入りのNeurobasal Medium(Invitrogen製))に交換した。
(1)試験方法
Wistar系妊娠ラット(妊娠17日目;日本SLC製)から取り出した胎仔の大脳皮質神経細胞(以下、単に神経細胞ともいう)を、ポリ-DL-オルニチンコーティングした6穴プレートに収容した。この神経細胞を、培地1(5%FBS、亜セレン酸ナトリウム、抗生物質入りのDulbeccos‘s Modified Eagle’s Medium(DMEM;Invitrogen製))を用い、1×105細胞/cm2の密度で24時間培養した。その後、培地1を培地2(2%B27サプリメント、1mMピルビン酸ナトリウム、抗生物質、2mMグルタミン入りのNeurobasal Medium(Invitrogen製))に交換した。
6穴プレートにおける穴を第1の群、第2の群、第3の群に区分し、培地を交換した三日後に、第1の群には、滅菌PBSに溶解したピーナッツ渋皮抽出物を30μg/mL添加し、第2の群には、滅菌PBSに溶解したピーナッツ渋皮抽出物を100μg/mL添加し、第3の群には、滅菌PBSのみを添加した。
上記の添加の3時間後に培地2を除き、氷冷した滅菌PBSで神経細胞を洗浄した。次に、TRIzol(Invitrogen)を用いて神経細胞からRNAを抽出し、その1μgを逆転写酵素(Prime Script RTase、TaKaRa製)とcDNA合成プライマーによりDNAへ逆転写した。
その後、BDNF(350bp)のプライマーを用いて標的遺伝子の増幅を行った。増幅する際の条件は、変性を94℃で45秒、アニーリングを61℃で45秒、伸長を72℃で30秒で32サイクルとし、最終的なPCR産物は2%アガロースゲルにて30分間電気泳動を行った。バンドの強度はFLA-5100(FUJIFILM製)を用いて解析した。内部標準としては、β-actin(542bp)を用いた。
(2)試験結果
図11に、RT-PCR法によるBDNF遺伝子発現解析結果を表す。なお、縦軸はBDNFとβ-アクチンの割合を示す。
(2)試験結果
図11に、RT-PCR法によるBDNF遺伝子発現解析結果を表す。なお、縦軸はBDNFとβ-アクチンの割合を示す。
ピーナッツ渋皮抽出物を30μg/mL又は100μg/mL添加した神経細胞では、PBSのみを添加した神経細胞に比べて、BDNFのmRNA発現量が有意に増加していることが確認できた。
なお、図11中の*マーク及び**マークは、ピーナッツ渋皮抽出物を添加した神経細胞と、PBSのみ添加した神経細胞との間に、試験値における有意な差(*:p<0.05、**:p<0.01)があることを示している。
実施例1により得たピーナッツ渋皮抽出物を使用して、以下の配合で錠菓(食品)を製造した。
グラニュー糖 85重量部
濃縮果汁 5重量部
クエン酸 6重量部
香料 2重量部
ピーナッツ渋皮抽出物 2重量部
グラニュー糖 85重量部
濃縮果汁 5重量部
クエン酸 6重量部
香料 2重量部
ピーナッツ渋皮抽出物 2重量部
実施例1で作製したピーナッツ渋皮抽出物0.1重量部に対し、大麦若葉の乾燥粉末を10重量部加え、青汁のもとを製造した。この粉末3gに対し、150mlの水を加えることで、ピーナッツ渋皮抽出物を含有した青汁(食品)を製造した。
実施例1で作成したピーナッツ渋皮抽出物53重量部に対し、乳糖17重量部、結晶セルロース27重量部、ショ糖脂肪酸エステル3重量部を撹拌混合した。この攪拌混合したもの340mgを圧縮成形して直径10mmの錠剤(食品、医薬品)を製造した。
実施例1により得たピーナッツ渋皮抽出物を使用して、以下の配合でドリンク(食品)
を製造した。
ピーナッツ渋皮抽出物 50mg
ビタミンB1 30mg
ビタミンC 50mg
クエン酸 300mg
エチルアルコール 500mg
果糖 3000mg
香料 100mg
水 合計で100mlとした
を製造した。
ピーナッツ渋皮抽出物 50mg
ビタミンB1 30mg
ビタミンC 50mg
クエン酸 300mg
エチルアルコール 500mg
果糖 3000mg
香料 100mg
水 合計で100mlとした
実施例1により得たピーナッツ渋皮抽出物を使用して、以下の配合でペットフードを製造した。
ピーナッツ渋皮抽出物 10重量部
トウモロコシ 58重量部
トウモロコシグルテン 5.5重量部
チキンミール 22重量部
乾燥チコリー 2.5重量部
残りは塩、ビタミン及びミネラルから成る。
ピーナッツ渋皮抽出物 10重量部
トウモロコシ 58重量部
トウモロコシグルテン 5.5重量部
チキンミール 22重量部
乾燥チコリー 2.5重量部
残りは塩、ビタミン及びミネラルから成る。
尚、本発明は前記実施例になんら限定されるものではなく、本発明を逸脱しない範囲において種々の態様で実施しうることはいうまでもない。
例えば、前記実施例では、ピーナッツの渋皮の抽出物ではなく、ピーナッツの渋皮(例えばその粉末)を用いても良い。
例えば、前記実施例では、ピーナッツの渋皮の抽出物ではなく、ピーナッツの渋皮(例えばその粉末)を用いても良い。
Claims (5)
- ピーナッツの渋皮及び/又はその抽出物を有効成分として含有し、脳神経疾患治療、脳神経疾患予防、及び脳機能改善から成る群から選ばれる1以上を用途とする組成物。
- 前記脳神経疾患は、うつ症状、不安症状、及び記憶障害から成る群から選ばれる1以上であることを特徴とする請求項1記載の組成物。
- 前記脳機能改善とは、記憶学習能改善であることを特徴とする請求項1又は2記載の組成物。
- ピーナッツの渋皮及び/又はその抽出物を有効成分として含有し、脳由来神経栄養因子の発現亢進作用を有することを特徴とする組成物。
- 食品、食品添加物、医薬品、飼料、及びペットフードのうちのいずれかであることを特徴とする請求項1~4のいずれかに記載の組成物。
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