WO2007004692A1 - Prophylactic/therapeutic agent and diagnostic agent for non-small cell lung cancer - Google Patents

Prophylactic/therapeutic agent and diagnostic agent for non-small cell lung cancer Download PDF

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WO2007004692A1
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same
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Kouji Takami
Yuichi Hikichi
Yuusuke Nakayama
Isao Kaieda
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Osaka Prefectural Hospital Organization
Takeda Pharmaceutical Company Limited
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3023—Lung
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to prevention and treatment of non-small cell lung cancer and diagnostic agents.
  • cDNA microarrays and DNA chips have been developed, enabling comprehensive analysis of gene expression.
  • it is an effective analytical technique for analyzing the genetic level of multifactorial diseases such as cancer, and is considered to play an important role in the progression of cancer research, especially cancer research.
  • it has been reported that it is possible to classify acute myeloid leukemia and acute lymphoblastic leukemia based on gene expression data (Science, 286, 531-537, 1999).
  • a group of genes thought to be involved in metastasis of primary cancer has been reported (Nature Genetics, 33, 49-54, 2003).
  • 3-phosphoglycerate dehydrogenase is a gene isolated as a human homolog of the rat 3-PHGDH gene (RefSeQ Accession No. NM006623; Gene, 245, 193-201, the year of 2000) . It is an enzyme that oxidizes 3-phosphoglycerate to produce 3-phosphohydroxypyruvate in the first stage of the L-serine biosynthesis pathway (Trends Biochem. Sci, 11, 241-243, 1986). In addition, in a report of trying to create a knockout mouse, It has been reported that they die and the development of the nervous system is immature (The Journal of Biological Chemistry, 279, 3573-3577, 2004). This gene is known to be upregulated in colorectal cancer, leukocyte and lymphocyte cancer cell lines (Gene, 245, 193-201, 2000).
  • Procol lagen-lysine 2-oxoglutarate 5-di oxygenase 2 (hereinafter abbreviated as PL0D2) was cloned as a novel enzyme involved in collagen biosynthesis. It is a new family of lysyl hydroxylases already known as enzymes involved in collagen biosynthesis and has been reported to have lysine hydroxylase activity (ReiSeq Access ion No. ⁇ 000935; The Journal of Biological Chemistry, 272 ⁇ , 6831-6834, 1997). Pyridinoline is indispensable as a molecule involved in fiber formation by cross-linking collagens, but pyridinoline in bone collagen is deficient in the disease called Black Syndrome.
  • a microtubule is a cytoskeleton and is composed of the alpha and beta heterodimers of a protein called tubul in. Widely known as a target (Oncogene, Vol. 22, 7280-7295, 2003).
  • Alpha-tubul in 2 (hereinafter sometimes abbreviated as TUBA2) was cloned as a gene belonging to the alpha family of tubulin (RefSea Access ion No. ⁇ 0060001; Genomics, 47, 125-130). 1998).
  • Proinyelocyt ic leukemia protein (hereinafter sometimes abbreviated as PML) is a fusion gene of PML and retinoic acid receptor a (hereinafter also abbreviated as PAR ⁇ ) found in acute promyelocytic leukemia (RefSeQ Access ion No. NM033238; Cel l, 66, 663-674, 1991).
  • PML is a component of a complex called promyelocytic oncogenic domains that is involved in apothesis and growth inhibitory activity, and is a transcript ional co-activator (Nature Cell Biology, Vol. 2, review E85). -E90, 2000).
  • Coagulat ion factor XI II Al polypeptide (hereinafter abbreviated as F13A1), was identified as one of the subunits that make up blood coagulation factor XI II (PNAS) 83, 8024-8028, 1986).
  • Blood coagulation factor XIII has transdalinase activity and is involved in the stabilization of fibrin clots.
  • Blood coagulation factor XII I is composed of A subunit and B subunit, and there is an enzyme active site in A subunit (Refse i Accession No. ⁇ -000129).
  • al lograft inf lammatory factor 1 (hereinafter sometimes abbreviated as AIF1) is a gene induced by cytokines and interferons (Biochem Biophys Res Coun 228, 29-37, 1996) .
  • AIF1 promotes cell migration of vascular smooth muscle cells by binding to actin (Circ Res, 92, 1107-1114, 2003).
  • Serum amyloid Al (hereinafter sometimes abbreviated as SMI) is one of the serum amyloid A families (Scand J Immunol, 34, 47-482, 2001).
  • Matrix metal loprotease is induced by the expression of Serum amylo id A (JI1, 166, 17770-17778, 2001).
  • S100 calcium binding protein A2 (hereinafter sometimes abbreviated as S100A2) is one of S100 protein families and has EF-hand calcium-binding motif. S100 protein is widely localized in the cytoplasm and nucleus, and plays a role in regulating cell cycle progression and cell differentiation. It is also considered as a tumor suppressor gene (RefseQ Accession No. NMJ05978). Tissue microarray analysis method It has been suggested that patients with stage I non-small cell lung cancer with high S100A2 protein expression have low survival rates (Int J Cancer, 116, 285-290, 2005).
  • aauaporin 1 (hereinafter sometimes abbreviated as AQP1) is a gene encoding aquaporin, which is a water channel.
  • Platelet-activating factor acetylhydrolase, isoform lb, gamma subunit 29kDa (hereinafter sometimes abbreviated as PAFAH1B3) has been cloned as an enzyme involved in brain differentiation (Biochem Biophys Res Commun, 214, 180-187) 1995). It is thought to be involved in mental retardation (Hum Mol Genet, 10, 797-806, 2001).
  • kynureninase (hereinafter sometimes abbreviated as KYNU) is an enzyme dependent on pyridoxa ⁇ 5'-phosphate, which catalyzes the cleavage of L-kynurenine and L-3_hydroxykynurenine.
  • KY ⁇ is involved in the biosynthesis of NAD cofactor via the kynurenine pathway (RefSea Accession No. NM_003937).
  • OXYSTEROL- BINDING PROTEIN-LIKE PROTEIN 9 (hereinafter abbreviated as 0SBPL9) was cloned as one of the genes with oxystero binding domains (RefSeQ Accession No. 024586) . It is presumed to be involved in the synthesis of sterol (Genomics, 78, 185-196, 2001).
  • FLJ10307 was sequenced in 2002 by the Ma ⁇ alian Gene Collection Project Team (RefSeq Accession No. 018053; PNAS, 99, 16899-16903, 2002).
  • EIF2C4 EUKA Y0TIC TRANSLATION INITIATION FACTOR 2C
  • EIF2C4 SUBUNIT 4
  • ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 4 (hereinafter sometimes abbreviated as ENTPD4) is a lysozyme with four avirase domains and It was identified as a membrane protein of autophage vesicles (J Cel Sci, 112, 2473-12484, 1999).
  • FLJ20531 was sequenced in 2002 by the Mammalian Gene Collection Project Team (RefSeq Accession No. NM — 017865; PNAS, 99, 16899-16903, 2002).
  • C0L9A2 col lagen, type IX, alpha 2
  • FAM13A1 family wi th seauence similarity 13, member Al
  • DLK1 del ta-l ike 1 homolog
  • the present inventors have acquired genes used for discrimination of non-small cell lung cancer with a poor prognosis, and PHGDH, PL0D2, TUBA2, PML, F13AL AIF1, SAAK S100A2, AQPK PAFAH1B3, and KYNU have increased expression in patients with relapse, and FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C ENTPD4, FLJ2053 L C0L9A2, and FAM13AL DLK 1 have been found to have increased expression in patients without relapse.
  • the present invention has been completed.
  • protein 1 a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, or a salt thereof (hereinafter also abbreviated as “protein 1”)
  • protein 1 an amino acid sequence identical to or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3.
  • protein or partial peptide thereof or salt thereof hereinafter referred to as “protein 1”.
  • protein 5 a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, or a partial peptide thereof Or an antibody against a salt thereof
  • protein 7 a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 or An antibody against the partial peptide or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 9”)
  • the amino acid represented by SEQ ID NO: 1 1 An antibody against a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter also abbreviated as “protein 1 1”) containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the acid sequence, (vii) in SEQ ID NO: 13 An antibody against
  • an antibody against a protein containing substantially the same amino acid sequence, a partial peptide thereof, or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 25”), (xiv) SEQ ID NO: 27 An antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown, or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 2 7”), (XV) Column No .: 29 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 9 or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 29”) (Xvi) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 An antibody against a partial peptide or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 3 1”), (xvii) containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 3 An antibody against a
  • a diagnostic agent for malignancy of non-small cell lung cancer containing a reagent for measuring at least one expression level selected from 7;
  • [1 g 2B ] Reagent for measuring protein expression level at the protein level (i) an antibody against protein 1, (ii) an antibody against protein 3, (iii) an antibody against protein 5, (iv) an antibody against protein 7, (V) an antibody against protein 9, (vi) an antibody against protein 11 (Vii) an antibody against protein 13 (viii) an antibody against protein 15 (ix) an antibody against protein 17 (X) an antibody against protein 19 (xi) an antibody against protein 21 ( xii) an antibody against protein 23, (xiii) an antibody against protein 25, (xiv) an antibody against protein 27, (XV) an antibody against protein 29,
  • the reagent is a reagent for measuring the expression level of a protein at a polynucleotide level.
  • a reagent for measuring the expression level of a protein at the polynucleotide level includes (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1 and (ii) a polynucleotide encoding protein 3 (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, and (V) a polynucleotide encoding protein 9.
  • a reagent for measuring the expression level of a protein at the polynucleotide level includes: (i) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (Ii) a polynucleotide containing the full-length nucleotide sequence of the mRNA that is a translational variant of the protein to be translated, the full-length complementary sequence thereof, or a partial nucleotide sequence thereof; (ii) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 A polynucleotide comprising the full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or a partial base sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as
  • nucleotide sequence of mRNA which is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19, or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
  • (xi) SEQ ID NO: 21 The full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (xi i) mRNA that is a translation type of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 A polynucleotide comprising the full-length base sequence, the complementary full-length sequence thereof, or a partial base sequence thereof,
  • (xv) SEQ ID NO: 29 The full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translation variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29, or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
  • (xv i) SEQ ID NO: 31 The full-length base sequence of mRNA, the full-length sequence of its complementary sequence, or the translation sequence of a protein containing the amino acid sequence identical or poorly identical to the amino acid sequence represented by 1 or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (xvi i) a translation type of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 A polynucleotide comprising the full-length base sequence of RNA, its full-length complementary sequence, or a partial base sequence thereof, (xviii) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 A polynucleotide containing the full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translation variant of the protein contained, the full-length complementary sequence thereof, or a partial nucleotide sequence thereof, And (xix) the full length nucleotide sequence of an mRNA that is a
  • the reagent is a reagent for measuring the expression level of a protein at the protein level.
  • Reagents for measuring protein expression level at the protein level are: (i) an antibody against protein 3, (ii) an antibody against protein 5, (iii) an antibody against protein 7, (iv) (V) an antibody against protein 1 9; (vi) an antibody against protein 2 5; (vii) an antibody against protein 2 7; (viii) an antibody against protein 2 9; (ix) an antibody against protein 3 1; (X) the diagnostic agent according to the above [lh 2 ], which contains at least one selected from (X) an antibody against protein 33 and (xi) an antibody against protein 35
  • the reagent is a reagent for measuring the expression level of a protein at the polynucleotide level.
  • [1 h 3 A] a reagent for measuring the expression level of evening protein polynucleotide level, (i) comprising a polynucleotide encoding a protein 3 polynucleotide, a polynucleotide encoding the (ii) protein 5 (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13 and (V) a polynucleotide encoding protein 19 (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (viii) a polynucleotide encoding protein 29 Polynucleotides containing nucleotides (Xi) a polynucleo
  • a diagnostic agent for non-small cell lung cancer malignancy containing a reagent for measuring at least one expression level selected from protein 37,
  • Reagents for measuring the protein expression level at the protein level are: (i) an antibody against protein 1, (ii) an antibody against protein 9, (iii) Antibody to protein 1 1, (iv) antibody to protein 15; (V) antibody to protein 17; (vi) antibody to protein 21; (vii) antibody to protein 23; and (viii) protein 37.
  • a reagent for measuring the expression level of a protein at the polynucleotide level includes (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1 and (ii) a polynucleotide encoding protein 9 (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11; (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; and (V) a polynucleotide encoding protein 17.
  • a polynucleotide containing a nucleotide (vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; (vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23; and (viii) encoding protein 37.
  • Polynucleotides containing polynucleotides The diagnostic agent according to the above [1 i 3 ], comprising at least one selected from leotide,
  • a reagent for measuring the expression level of a protein at a polynucleotide level (i) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (Ii) a polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence or a part thereof, or a part thereof, which is a translation type of mRNA, (ii) represented by SEQ ID NO: 9 A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of mRNA or a portion thereof that is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence (Iii) translation of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 1 (Iv) a nucleotide sequence that is complementary or substantially complementary to a part of the nucleotide sequence, or (iv) a nucleotide
  • (V) Complementary or partially complementary to the base sequence of mRNA or a part thereof, which is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17
  • a polynucleotide containing a substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof (vi) a translation of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21
  • a protein containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of mRNA or a part thereof which is a translation template of a protein containing substantially the same amino acid sequence.
  • nucleotide sequence of a nucleotide and (miii) the nucleotide sequence of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 Or the diagnostic agent according to the above [1 i 3 ], which contains at least one selected from polynucleotides containing a substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof,
  • Nucleotide, (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, and (V) a polynucleotide encoding protein 9 (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11; (vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (vi ii) encoding protein 15 A polynucleotide containing a polynucleotide; (ix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (xi) encoding protein 21 (Xi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23, (xi ii) a polyn
  • a diagnostic agent for malignancy of non-small cell lung cancer characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of a polynucleotide and a polynucleotide containing a polynucleotide encoding (xix) protein 37,
  • Nucleotide (v) an amino acid identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9
  • a polynucleotide comprising a full-length base sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing a non-acid sequence, a full-length complementary sequence thereof, or a partial base sequence thereof,
  • SEQ ID NO: 11 The full-length base sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1, the full-length complementary sequence thereof, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
  • SEQ ID NO: 13 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO.
  • SEQ ID NO: 21 The full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
  • SEQ ID NO: 23 The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full length of its complementary sequence, or the translation sequence of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 23 A polynucleotide containing a partial base sequence,
  • SEQ ID NO: 33 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, A polynucleotide containing a partial base sequence of
  • SEQ ID NO: 35 The full-length nucleotide sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the complementary sequence thereof, or the translation sequence of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35
  • a polynucleotide containing a partial base sequence and (xix) an mRNA that is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37
  • a non-small cell lung cancer malignancy diagnostic agent characterized by comprising at least one selected from a full-length base sequence, a full-length complementary sequence thereof, or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
  • (2c) (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide encoding protein 5.
  • the reagent comprises (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide encoding protein 5.
  • Reagent is (i) the full-length nucleotide sequence of mRNA that forms a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, its complementary sequence (Ii) a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical to or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3.
  • SEQ ID NO: 7 A polynucleotide containing a full-length mRNA sequence, a full-length complementary sequence thereof, or a partial sequence thereof, which is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence shown (V) the full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by S
  • SEQ ID NO: 31 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1, a full-length complementary sequence thereof, Or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
  • the reagent comprises (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, and (Hi) a polynucleotide encoding protein 7.
  • the diagnostic agent according to the description,
  • the reagent is added to (i) the base sequence of mRNA or a part thereof, which is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3.
  • a polynucleotide containing a complementary or substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof (ii) translation of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5
  • a polynucleotide containing a complementary or substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof, or a nucleotide sequence complementary to or a part of the nucleotide sequence of mRNA, which is a cage, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to or a part of the nucleotide sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence (Iv) a nucleotide sequence of
  • nucleotide sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 or a part thereof.
  • the diagnostic agent according to (2j) above which comprises at least one selected from a polynucleotide containing a complementary or substantially complementary base sequence or a part thereof,
  • the reagent is added to (i) the base sequence of mRNA or a part thereof, which is a translation type of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
  • a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to or partially complementary to the nucleotide sequence of mRNA or a part thereof, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as (Iv) SEQ ID NO: 15 The nu
  • SEQ ID NO: 11 The full-length base sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1, the full-length complementary sequence thereof, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
  • SEQ ID NO: 13 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO.
  • SEQ ID NO: 21 The full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1, Or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
  • SEQ ID NO: 33 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, A polynucleotide containing a partial base sequence of
  • SEQ ID NO: 35 The full-length nucleotide sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is the translation variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 A polynucleotide containing a partial base sequence, and (xix) an mRNA that is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37
  • Non-small cell lung cancer characterized by using at least one selected from the full-length nucleotide sequence, its full-length complementary sequence, or a polynucleotide containing a partial nucleotide sequence thereof Sex diagnostic method,
  • Xi ii a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (XV) encoding a protein 29 (Xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, (xvi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, (xvi ii) Contains a polynucleotide encoding protein 35 Polynucleotides and (xix) Non-small cell diagnostic method for lung cancer malignancy characterized by measuring at least one of the expression level selected from a polynucleotide containing Porinukure Ochido encoding the protein 3 7 that,
  • [1 2] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (iii) a polynucleotide encoding a protein 11 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (vi) a polynucleotide encoding protein 21; A low expression level of at least one selected from (vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23 and (viii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 37 Above The diagnostic method according to any one of [1 0] to [1 0 c],
  • [1 2 a) (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3. (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5 (iii) a polynucleotide encoding a protein 7 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (vi) a polynucleotide encoding protein 25; (Vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (ix) a protein 31 Polynucleotide containing the encoding polynucleotide Fault, the
  • a polynucleotide containing a polynucleotide (vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (ix) protein 3 1 A polynucleotide containing a polynucleotide encoding A low level of expression of at least one selected from a rheotide, (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, and (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 35 And (xi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (x
  • siRNA or sRNA for polynucleotide encoding protein 3 siRNA or sRNA for polynucleotide encoding protein 5, (iii) polynucleotide encoding protein 7 (Iv) siRNA or s h'RNA against a polynucleotide encoding protein 13 (v) si RNA or s hRNA against a polynucleotide encoding protein 19 (vi) protein 25 (Vii) si RNA or s hRNA against a polynucleotide encoding protein 27, (viii) si RNA or s hRNA against a polynucleotide encoding protein 29, (ix) protein SiRNA or sRNA for the polynucleotide encoding 31, (x) protein 33 A non-small cell lung cancer preventive / therapeutic agent comprising at least one selected from siRNA or sRNA against a polynucleotide encoding (xi) siRNA
  • [2 1 b] (i) SEQ ID NO: 3 identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SiRNA or sRNA for a polynucleotide containing the full-length or a part of the base sequence of mRNA, which is a translation type of a protein containing the same amino acid sequence, (ii) represented by SEQ ID NO: 5 SiRNA or sRNA against a polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence, (iii) sequence No .: against the polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of the mRNA that is the translation type of the protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by No.
  • siRNA or sRNA (iv) conversion of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 SiRNA or sRNA against a polynucleotide containing the full-length mRNA base sequence or a part of the base sequence, (v) the same or substantially the same amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 SiRNA or sRNA against a polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of the mRNA that is a translation variant of the protein containing the amino acid sequence of (vi) represented by SEQ ID NO: 25 SiRNA or sRNA against a polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as (Vii) SEQ ID NO: 27 is the full length of the nucleotide sequence of the mRNA or the translation sequence of a protein containing the same or
  • [2 2] (i) Compound or salt thereof that inhibits the activity of protein 3, (ii) Compound or salt thereof that inhibits the activity of protein 5, (iii) Compound or salt thereof that inhibits the activity of protein 7 (Iv) a compound or a salt thereof that inhibits the activity of protein 13; (V) a compound or a salt thereof that inhibits the activity of protein 19; or (vi) a compound or a salt thereof that inhibits the activity of protein 25.
  • Xi ii a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, and (XV) encoding protein 29
  • a microarray for diagnosing malignancy of non-small cell lung cancer characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of: a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding a polynucleotide encoding (xix) protein 37
  • SEQ ID NO: 13 The full length of the base sequence of mRNA, the full length of its complementary sequence, or one of them A polynucleotide containing a partial base sequence,
  • SEQ ID NO: 15 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 5, the full-length complementary sequence thereof, or their A polynucleotide containing a partial base sequence,
  • SEQ ID NO: 33 The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the complementary sequence thereof, or the translation sequence of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 3 A polynucleotide containing a partial base sequence,
  • SEQ ID NO: 35 The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 35
  • a polynucleotide containing a partial base sequence and (xix) a base sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37
  • a microarray for diagnosing malignancy of non-small cell lung cancer comprising at least one selected from full-length, full length of its complementary sequence, or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
  • nucleotide sequence of mRNA is the nucleotide sequence of 3 ′ untranslated region or 5;
  • a polynucleotide containing a polynucleotide to be encoded (xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (XV ) A polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (XV i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, and (xvi i) a polynucleotide encoding protein 33 A polynucleotide containing (xvi ii) a polynucleotide containing a protein 35 encoding polynucleotide and (xix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 37 using at least one selected from the following: How to predict the malignancy
  • Xi ii a polynucleotide containing a polynucleotide that encodes protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (XV) a protein 2 A polynucleotide comprising a polynucleotide encoding 9;
  • Vi a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11
  • a polynucleotide encoding protein 15 A polynucleotide containing a nucleotide, (ix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17;
  • X a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19;
  • encoding a protein 21 A polynucleotide containing a polynucleotide, (xi i) a polynucleotide encoding protein 21
  • xvi a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31;
  • xvi ii containing a polynucleotide encoding protein 35;
  • a method for classifying the malignancy of non-small cell lung cancer characterized by using at least one selected from the group consisting of a polynucleotide and a polynucleotide containing a polynucleotide encoding (xix) protein 37,
  • malignancy means high or low possibility of recurrence, good or bad prognosis, high or low possibility of metastasis, high or low sensitivity to therapeutic drugs, high or low mortality due to primary cancer, etc. .
  • High malignancy means that there is a high probability of recurrence, poor prognosis, high possibility of metastasis, ineffective therapeutic agents, high probability of death due to primary cancer, etc.
  • Low malignancy means low recurrence, good prognosis, low chance of metastasis, existing treatments are effective, low probability of death from primary cancer, etc. means.
  • Lung cancer includes adenocarcinoma, squamous cell carcinoma
  • Non-small cell lung cancer includes adenocarcinomas, squamous cell carcinomas, adenosquamous cell carcinomas, and large cell carcinomas.
  • a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (hereinafter sometimes abbreviated as “FLJ 10307”), SEQ ID NO: 3
  • a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented (hereinafter sometimes abbreviated as “PHGDH”), identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5
  • PAGDH amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5
  • PAGDH amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5
  • PAGDH amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5
  • PEGDH amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5
  • PEGDH amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5
  • PEGDH amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5
  • PAGDH amino acid sequence represented
  • a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 (hereinafter, sometimes abbreviated as “ENTPD4”)
  • SEQ ID NO: 19 A protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 (hereinafter, sometimes abbreviated as “ ⁇ 3 ⁇ 1”)
  • SEQ ID NO: 2 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 1 (hereinafter sometimes abbreviated as rC0L9A2j),
  • SEQ ID NO: 23 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence (hereinafter referred to as
  • a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 (hereinafter, sometimes abbreviated as “FAM13A1”)
  • a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 (hereinafter, sometimes abbreviated as “SAA1”)
  • a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 (hereinafter sometimes abbreviated as “S100A2”), SEQ ID NO: 31
  • a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence hereinafter sometimes abbreviated as “AQP 1”
  • the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 A protein containing the same amino acid sequence (hereinafter sometimes abbreviated as “PAFAH1B3”), an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 Contained protein (hereinafter abbreviated as “ ⁇ ”), or
  • a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 (hereinafter sometimes abbreviated as “DL
  • the protein used in the present invention is a human warm-blooded animal (eg, guinea pig, rat, mouse, chicken, rabbit, pig, hidge, ushi, monkey, etc.) cells (eg, retinal cells, hepatocytes, spleen cells, Nerve cells, glial cells, knees; 6 cells, bone marrow cells, mesangial cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fibrocytes, muscle cells, adipocytes, immune cells (eg, macrophages) , T cells, B cells, natural killer cells, mast cells, neutrophils, basophils, eosinophils, monocytes, platelets, etc.), megakaryocytes, synoviocytes, chondrocytes, bone cells, osteoblasts , Osteoclasts, mammary cells, hepatocytes or stromal cells, or precursor cells of these cells, stem cells
  • SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13., SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: Number: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: 37
  • SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 1 3, SEQ ID NO: 1 5, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, Sequence SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 3 1, SEQ ID NO: 3 3, SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO:
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1
  • a protein having substantially the same activity or function as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is preferred.
  • the term “activity” may be used to include activity and function.
  • substantially the same activity examples include activity possessed by FLJ 10307.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, it is preferable that the activity of FLJ 10307 is equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). However, the quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different. ,
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3
  • a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 is preferred.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of PHGDH, such as 3-phosphoglycerate oxidation activity.
  • Substantially homogeneous means that their properties are homogeneous in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, 3-phosphoglycerate oxidation activity etc. is equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times) I prefer However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5
  • a protein having substantially the same quality of activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 is preferred.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of PL0D2, such as lysine hydroxylase activity.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, lysine hydroxylase activity and the like are equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times).
  • quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7
  • a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 is preferred.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of TUBA2, such as the function of forming microtubules.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, the function of forming microtubules is equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times).
  • quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different.
  • the protein containing the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 includes, for example, the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 described above.
  • a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 is preferred.
  • Examples of the activity of substantially the same quality include the activity of 0SBPL9, for example, the function involved in sterol synthesis.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively homogeneous (eg, physiologically or pharmacologically).
  • the functions involved in sterol synthesis are equivalent (eg, about 0.01 to 100 times, preferably It is preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times), but quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of a protein containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 1 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 is preferred.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of EIF2C4, for example, the function involved in gene silencing via siRNA.
  • substantially homogeneous means that these properties are qualitatively homogeneous (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the functions involved in gene silencing via s iRNA are equivalent.
  • Quantitative factors such as molecular weight may be different.
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 is preferred.
  • the activity of substantially the same quality for example, the activity of PML, for example,
  • transcript ional co-act ivator activity examples include transcript ional co-act ivator activity.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, transcript ional co-act activator activity, etc. should be equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 That's right.
  • the substantially equivalent activity includes, for example, the activity of ENTPD4, such as phosphatase activity.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Accordingly, it is preferable that the activity of ENTPD4 is equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.1 to: L 0 times, more preferably 0.5 to 2 times). However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 is preferred.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of FU20531, such as transcription factor (transcription promoting / inhibiting) activity.
  • Substantially homogeneous means that their properties are homogeneous in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the activity of FLJ20531 is equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). It is preferred that there are some quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein.
  • Examples of a protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 And a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 is preferred.
  • the substantially equivalent activity includes, for example, the activity of F13A1, such as transdalinase activity.
  • Substantially homogeneous means that their properties are homogeneous in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, it is preferable that transdaltaminase activity and the like are equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
  • the protein comprising the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 is substantially the same as the protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 In particular, a protein having the same activity is preferred.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of C0L9A2, such as the function of forming type IX col lagen.
  • Substantially homogeneous means that their properties are homogeneous in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the function to form type IX col lagen etc. is equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times) However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23.
  • the substantially equivalent activity includes, for example, the activity of FAM13A1, such as GTPase activator activity.
  • FAM13A1 such as GTPase activator activity.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, it is preferable that the activity of FAM13A1 is equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). Quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 And a protein having substantially the same quality of activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of AIF1, such as a function of promoting cell migration of vascular smooth muscle cells by binding to actin.
  • AIF1 a function of promoting cell migration of vascular smooth muscle cells by binding to actin.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg physiologically or pharmacologically To show that they are homogeneous. Therefore, it has the same function to promote cell migration of vascular smooth muscle cells by binding to actin (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably Is preferably 0.5 to 2 times. The amount of these activities and the quantitative factors such as the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of a protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 And a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of SAA1, such as matrix metal loprotease inducing activity.
  • SAA1 such as matrix metal loprotease inducing activity.
  • substantially homogeneous means that their properties are homogeneous in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the matrix metal loprotease-inducing activity is equivalent (eg, about 0.1 to 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of a protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of S100A2, such as the function of regulating cell cycle progression and the function of regulating cell differentiation.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively homogeneous (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the function of regulating cell cycle progression, the function of regulating cell differentiation, and the like are equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0. 5 to 2 times) is preferable, but quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different.
  • the protein containing the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 is substantially the same as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31.
  • proteins having the same activity are preferred.
  • Examples of the activity of substantially the same quality include an activity of AQP1, for example, a function of forming a water channel.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, the function to form a water channel is equivalent (eg, about 0.1 to 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times) However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 And a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33.
  • Examples of the activity of substantially the same quality include the activity of PAFAH1B3, for example, functions related to brain differentiation.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, the functions related to brain differentiation, etc. are equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times).
  • quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 And a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of KYNU, for example, the cleavage catalytic activity of L-kynurenine and L-3-hydroxykynurenine.
  • Substantial homogeneity means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) the same. Show quality. Therefore, the cleavage catalytic activity of L_kynurenine and L-3-hydroxykyimreiiine is equivalent (eg, about 0.01 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times).
  • the degree of these activities and the quantitative factors such as the molecular weight of the protein may be different.
  • the protein containing the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 includes, for example, the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 described above.
  • a protein having substantially the same quality of activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 is preferred.
  • the substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of DLK1, such as a function involved in hematopoiesis.
  • Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, it is preferable that the functions related to hematopoiesis are equivalent (eg, about 0.01 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). Quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different.
  • Examples of the protein of the present invention include: (i) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, 1 or 2 or more in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: 37 (for example, about 1 to 100, preferably about 1 to 30, preferably about 1 to 10) More preferably, a number (1-5) of amino acid sequences lacking amino acids, (ii) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ
  • the position of the insertion, deletion or substitution is not particularly limited.
  • the protein in the present specification has an N-terminal (amino terminal) at the left end and a C-terminal (forced loxyl terminal) at the right end according to the convention of peptide designation.
  • the protein used in the present invention including the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, has a C-terminal group consisting of a force lpoxyl group (-C00H), a force lpoxylate (-C00-), an amide Either (-C0NH 2 ) or ester (-C00R) may be used.
  • R in the ester e.g., methyl, Echiru, n- propyl, isopropyl
  • alkyl groups such as n- butyl, for example, C 3, such as cyclohexyl cyclopentyl, to cyclo - 8 cycloalkyl group, for example, phenyl, ⁇ - naphthyl which any (6 _ 12 Ariru group, e.g., benzyl, phenyl, such as phenethyl - Fei such ⁇ alkyl group or ⁇ - naphthylmethyl - Nafuchiru C DOO 2 C 7 _ 14
  • Ararukiru group such as an alkyl group, Viva port An oxymethyl group or the like is used.
  • the force lpoxyl group is amidated or esterified.
  • the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester or the like is used.
  • an amino group of an N-terminal amino acid residue (eg, methionine residue) has a protecting group (for example, a C Hi alkacyl group such as a C H alkanoyl group such as a formyl group or a acetyl group).
  • a protecting group for example, a C Hi alkacyl group such as a C H alkanoyl group such as a formyl group or a acetyl group.
  • Etc. N-terminal dulbinamine residues generated by cleavage in vivo, and pyruvyldamine-oxidized, substituents on the side chain of amino acids in the molecule (for example, one OH one SH, amino group, imidazole group, indole group, etc. Guanijino group) that is protected with a suitable protecting group (e.g., formyl group, etc. CH Ashiru group such as C M Al force Noiru group such Asechiru group) Or a complex protein such
  • protein used in the present invention include, for example, a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, and SEQ ID NO: 5.
  • a protein containing the amino acid sequence shown a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 1 represented by 1
  • a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 and a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 A protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23, a protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27.
  • the partial peptide of the protein used in the present invention is a partial peptide of the protein used in the present invention described above, and preferably used in the present invention described above. Any protein may be used as long as it has the same properties as the protein to be used. For example, at least of the constituent amino acid sequences of the protein used in the present invention
  • a peptide having an amino acid sequence of 20 or more, preferably 50 or more, more preferably 70 or more, more preferably 100 or more, and most preferably 20 or more is used. It is done.
  • the partial peptide used in the present invention is one or more in the amino acid sequence (preferably about 1 to 20 pieces, more preferably about 1 to 10 pieces, more preferably a number (1 -5) amino acids) or 1 or 2 (preferably about 1 to 20 pieces, more preferably about 1 to 10 pieces, more preferably a number (1 to 2 pieces) in the amino acid sequence. 5) amino acids), or 1 or 2 (preferably about 1 to 20 pieces, more preferably about 1 to 10 pieces, more preferably numbers (1 to 5)) in the amino acid sequence.
  • one or more amino acids in the amino acid sequence may be substituted with other amino acids.
  • the C-terminus may be any of a force lpoxyl group (—C00H), a carboxy group (—C00—), an amide (—C0NH 2 ), or an ester (—C00R).
  • a peptide having a carboxyl group (or carboxylate) in addition to the C terminus, an N-terminal amino acid residue ( Eg, a methionine residue) with an amino group protected by a protecting group, a glutamine residue generated by cleavage of the N-terminal in vivo and pyroglutamine oxidation, a substituent on the side chain of an amino acid in the molecule Are protected with an appropriate protecting group, or complex peptides such as so-called glycopeptides to which sugar chains are bound.
  • the partial peptide used in the present invention can also be used as an antigen for antibody production.
  • a salt with a physiologically acceptable acid eg, inorganic acid, organic acid
  • base eg, alkali metal
  • Acceptable acid addition salts are preferred.
  • a salt with an inorganic acid eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid
  • an organic acid eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid
  • salts with tartaric acid, citrate, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid and the like.
  • the protein used in the present invention or a partial peptide thereof or a salt thereof can be produced from the aforementioned human warm-blooded animal cells or tissues by a known protein purification method, or a DNA encoding the protein can be obtained. It can also be produced by culturing the contained transformant. It can also be produced according to the peptide synthesis method described below.
  • a commercially available resin for protein synthesis can be used for the synthesis of the protein or its partial peptide or its salt, or its amide compound used in the present invention.
  • resins include chloromethyl resin, hydroxymethyl resin, benzhydrylamine resin, aminomethyl resin, 4-benzyloxybenzyl alcohol resin, 4-methylbenzhydrylamine resin, PAM resin, 4—Hydroxymethylmethyl phenylamidomethyl resin, 'Polyacrylamide resin, 4-— (2', 4, -dimethoxyphenyl-hydroxymethyl) phenoxy resin, 4_ (2 ', 4, -dimethoxyphenyl) Fm oc amino And ethyl) phenoxy resin.
  • the amino acid appropriately protected with ⁇ -amino group and side chain functional group is condensed on the resin according to various known condensation methods according to the sequence of the target protein.
  • the protein or partial peptide is excised from the resin, and at the same time, various protecting groups are removed, and an intramolecular disulfide bond-forming reaction is performed in a highly diluted solution to obtain the target protein or its partial peptide. Or the amide body is obtained.
  • calpositimides include DCC, N, N'-diisopropylcarposimide, N-eth Lu N '-(3-dimethylaminoprolyl) carpositimide is used.
  • a protected amino acid is added directly to the resin together with a racemization inhibitor (for example, H Bt, H OO B t), or a symmetric acid anhydride or HO B t ester or H B It can be added to the resin after previously activating the protected amino acid as a t ester.
  • the solvent used for the activation of the protected amino acid and the condensation with the resin can be appropriately selected from solvents known to be usable for protein condensation reactions.
  • acid amides such as N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methylpyridone, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and blackform, alcohols such as trifluoroethanol Sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, ethers such as pyridine, dioxane and tetrahydrofuran, nitriles such as acetonitrile and propionitryl, esters such as methyl acetate and ethyl acetate, or appropriate mixtures thereof. .
  • the reaction temperature is appropriately selected from a range known to be used for protein bond formation reaction, and is usually selected appropriately from a range of about 120 ° C. to 50 ° C.
  • the activated amino acid derivative is usually used in an excess of 1.5 to 4 times.
  • Examples of the protecting group for the starting amino group include Z, B oc, t-pentyloxy-powered sulfonyl, isoponyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, C 1- Z, Br-Z, 7 Damantyloxycarbonyl, trifluoroacetyl, phthaloyl, formyl, 12-12 tropenylsulfenyl, diphenylphosphinothioyl, Fmoc, etc. are used.
  • Forced lpoxyl groups are, for example, alkyl esterified (e.g., methyl, ethyl, propyl, butyl, t-butyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, 2-adamantyl, etc.) Alkyl esterification), aralkyl esterification (eg, benzyl ester, 4- Protected by nitrobenzyl ester, 4-methoxybenzyl ester, 4-cyclobenzyl ester, benzhydryl esterification), phenacyl esterification, benzyloxycarbonyl hydrazide, t-butoxycarbonyl hydrazide, trityl hydrazide, etc. can do.
  • alkyl esterified e.g., methyl, ethyl, propyl, butyl, t-butyl, cyclopentyl
  • the hydroxyl group of serine can be protected by, for example, esterification or etherification.
  • Groups suitable for esterification include, for example, low-grade (C ⁇ 6 ) alkanoyl groups such as acetyl groups, aroyl groups such as benzoyl groups, groups derived from carbonic acid such as benzyloxy sulfonyl groups, and ethoxycarbonyl groups. Used.
  • Examples of the group suitable for etherification include a benzyl group, a tetrahydrobilanyl group, and a t-butyl group.
  • Examples of the protecting group for the phenolic hydroxyl group of tyrosine include Bz, C 1 2 -Bz 1, 2-nitrobenzyl, B r—Z, and t-butyl.
  • protecting groups for histidine imidazole include Tos, 4-methoxy-2,3,6-trimethylbenzenesulfonyl, DNP, benzyloxymethyl, Bum, Bo c, Tr t, Fmo c, etc. Is used.
  • the activated carboxyl group of the raw material examples include the corresponding acid anhydrides, azides, active esters [alcohols (eg, Penyu-Kuroguchi phenol, 2, 4, 5-triclo-mouth phenol, 2, 4- Dinitrophenol, cyanomethyl alcohol, paranitrophenol, HONB, N-hydroxysuccinimide, N-hydroxyphenol, ester with HOB t)] and the like.
  • active esters eg, Penyu-Kuroguchi phenol, 2, 4, 5-triclo-mouth phenol, 2, 4- Dinitrophenol, cyanomethyl alcohol, paranitrophenol, HONB, N-hydroxysuccinimide, N-hydroxyphenol, ester with HOB t
  • the corresponding phosphoric acid amide is used as the activated amino group of the raw material.
  • Methods for removing (eliminating) protecting groups include, for example, catalytic reduction in a hydrogen stream in the presence of a catalyst such as Pd-black or Pd-carbon, and anhydrous hydrogen fluoride, methanesulfonic acid, trifluor.
  • Acid treatment with fluoromethanesulfonic acid, trifluoroacetic acid or a mixture of these, base treatment with diisopropylethylamine, triethylamine, piperidine, piperazine, etc., reduction with sodium in liquid ammonia, etc. Can also be used.
  • the elimination reaction by the acid treatment is generally carried out at a temperature of about 120 ° C. to 40 ° C.
  • the 2,4-dinitrophenyl group used as the imidazole protecting group of histidine was removed by thiophenol treatment
  • the formyl group used as the indodol protecting group of triftophan was the above 1,2 monoethanedithiol, 1,4—
  • it can also be removed by alkali treatment with dilute sodium hydroxide solution, dilute ammonia and the like.
  • the protection of the functional group that should not be involved in the reaction of the raw material, the protecting group, the removal of the protecting group, the activation of the functional group involved in the reaction, etc. can be appropriately selected from known groups or known means.
  • an amide form of a protein or partial peptide for example, first, the «-forceloxyl group of the carboxyoxy terminal amino acid is amidated and protected, and then the peptide (protein) chain on the amino group side has a desired chain length And the protein or partial peptide from which only the protecting group of the N-terminal amino group protecting group of the peptide chain is removed and the protecting group of the C-terminal force loxyl group are removed. And the protein or peptide is condensed in a mixed solvent as described above. The details of the condensation reaction are the same as described above.
  • an ester form of a protein or peptide for example, after condensing the 0! -Power lpoxyl group of the amino acid at the carboxy group with a desired alcohol to form an amino acid ester, the desired amide form of the protein or peptide is used. Protein or peptide ester can be obtained.
  • the partial peptide used in the present invention or a salt thereof can be produced according to a peptide synthesis method known per se, or by cleaving the protein used in the present invention with an appropriate peptidease.
  • a peptide synthesis method for example, either a solid phase synthesis method or a liquid phase synthesis method may be used. That is, for use in the present invention
  • the desired peptide can be produced by condensing a partial peptide or an amino acid that can constitute a partial peptide, and an amino acid and the remaining part, and removing the protective group when the product has a protective group. Examples of known condensation methods and protecting group removal include the methods described in (i) to (1) below.
  • a partial peptide used in the present invention can be purified and isolated in combination.
  • the partial peptide obtained by the above method is a free form, it can be converted into an appropriate salt by a known method or a method analogous thereto, and conversely, when obtained as a salt, the known method or It can be converted to a free form or other salt by a similar method.
  • any polynucleotide may be used as long as it contains the base sequence (DNA or RNA, preferably DNA) encoding the protein of the present invention described above.
  • the polynucleotide is an RNA such as DNA or mRNA encoding the protein of the present invention, and may be double-stranded or single-stranded. In the case of a double strand, a double-stranded DNA, a double-stranded RNA or a DNA: RNA hybrid may be used.
  • a single strand it may be a sense strand (ie, a coding strand) or an antisense strand (ie, a non-coding strand).
  • the DNA encoding the protein used in the present invention may be any DNA as long as it contains the base sequence encoding the protein used in the present invention described above.
  • any of genomic DNA, genomic DNA library, the above-mentioned cell / tissue-derived cDNA, the above-mentioned cell / tissue-derived cDNA library, and synthetic DNA may be used. Used for library
  • the vector to be used may be any of pacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like.
  • it can be directly amplified by reverse transcriptase polymerase chain reaction (hereinafter abbreviated as RT-PCR method) using a total RNA or mRNA fraction prepared from the above-mentioned cell tissue.
  • RT-PCR method reverse transcriptase polymerase chain reaction
  • DNA encoding the protein used in the present invention examples include: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 38, or SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 , SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 2, 2, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34
  • SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29 SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, or DNA encoding a protein having substantially the same properties as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 It may be.
  • SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20 SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or the base represented by SEQ ID NO: 38
  • DNA DNA that can be hybridized with the sequence under high stringency conditions include, for example, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, Number: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: : 36 or S
  • Hybridization can be performed according to a method known per se or a method analogous thereto, such as the method described in Molecular Cloning 2nd (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). When using a commercially available library, it can be performed according to the method described in the attached instruction manual. More preferably, it can be carried out according to highly stringent conditions.
  • the high stringent condition refers to, for example, a condition where the sodium concentration is about 19 to 40 mM, preferably about 19 to 20 mM, and the temperature is about 50 to 70 ° C, preferably about 60 to 65 ° C. In particular, it is most preferable when the sodium concentration is about 19 mM and the temperature is about 65 ° C.
  • DNA encoding the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 includes DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, etc., and SEQ ID NO: 3.
  • DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 4 encodes the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5.
  • Examples of DNA include DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 6, and DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 is represented by SEQ ID NO: 8.
  • a DNA encoding a protein containing a specific amino acid sequence a DNA containing a base sequence represented by SEQ ID NO: 12 encodes a protein containing an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13.
  • Examples of DNA include a DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 14 and a DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15.
  • DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 includes DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 20, and the like, represented by SEQ ID NO: 21
  • DNA encoding a protein containing a mino acid sequence include a DNA containing a base sequence represented by SEQ ID NO: 22 and a DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23
  • the DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 24 is represented by SEQ ID NO: 26
  • the DNA encoding the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 as the DNA containing the base sequence includes the DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 28 as the sequence As the DNA encoding the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO:
  • DNA containing the base sequence represented by SEQ ID No. 30 is the amino acid represented by SEQ ID No. 31.
  • DNA encoding a protein containing a sequence DNA containing a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 32 is used as a DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33.
  • DNA containing a base sequence encodes a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37, such as DN A containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 38. It is.
  • the DNA encoding the partial peptide used in the present invention may be any DNA that contains the base sequence encoding the partial peptide used in the present invention described above. It may be. Further, any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the cells / tissues described above, cDNA library derived from the cells / tissues described above, and synthetic DNA may be used.
  • DNA encoding the partial peptide used in the present invention examples include: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14. , SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, DNA having a part of DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 36 or SEQ ID NO: 38, or SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, sequence Number: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID
  • SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20 SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or SEQ ID NO: 38
  • a DNA that can hybridize with a base sequence has the same meaning as described above.
  • polynucleotide used in the present invention or a partial peptide thereof may be abbreviated as “polynucleotide used in the present invention” or “polynucleotide of the present invention”.
  • DNA encoding the protein or its partial peptide used in the present invention DNA encoding the protein or its partial peptide used in the present invention
  • DNA NA of the present invention can also be produced by the following genetic engineering techniques.
  • Fully encodes a protein used in the present invention or a partial peptide thereof (hereinafter, in the explanation of cloning and expression of DNA encoding these, these may be simply abbreviated as the protein of the present invention).
  • a means for cloning DNA amplification by PCR using a synthetic DNA primer having a part of the base sequence encoding the protein of the present invention, or DNA incorporated in an appropriate vector— It can be selected by hybridization with a DNA fragment encoding a part or all of the protein or labeled with synthetic DNA.
  • the hybridization method can be performed, for example, according to the method described in Molecular Cloning 2nd Ed (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989).
  • the highly stringent conditions include, for example, a sodium concentration of about 19 to 40 mM, preferably about 19 to 2 O mM, and a temperature of about 50 to 70 ° C., preferably about 60 to 6 Indicates conditions at 5 ° C. In particular, it is most preferable when the sodium concentration is about 19 mM and the temperature is about 65 ° C.
  • the DNA sequence can be converted by PCR, using known kits such as Mutan TM -super Express Km (Takara Shuzo), Mutan TM -K (Takara Shuzo), etc. Method, Gapped duplex method, Kunkel method and the like, or a method according to them.
  • the DNA encoding the cloned protein can be used as it is depending on the purpose, or can be digested with a restriction enzyme or added with a linker if desired.
  • the DNA has ATG as a translation initiation codon at its 5 'end, and Furthermore, TAA, TGA or TAG as a translation termination codon may be present on the 3 ′ terminal side. These translation initiation codons and translation termination codons can also be added using an appropriate synthetic DNA adapter.
  • the protein expression vector of the present invention is, for example, (i) excising the target DNA fragment from the DNA encoding the protein of the present invention, and (ii) ligating the DNA fragment downstream of the promoter in an appropriate expression vector. Can be manufactured.
  • plasmids derived from E. coli eg, pBR322, pBR 32 5, pUC 12, pUC 13
  • plasmids derived from Bacillus subtilis eg, pUB 110, pTP 5, pC 194
  • plasmids derived from yeast eg, p SH) 19, p SH15
  • bacteriophage such as ⁇ phage
  • animal viruses such as retrovirus, vaccinia virus, baculovirus, pAl-11, pXTl, pR cZCMV, pRc / RSV, p cDNA I / Neo is used.
  • the promoter used in the present invention may be any promoter as long as it is suitable for the host used for gene expression.
  • SRa promoter when animal cells are used as a host, SRa promoter, SV40 promoter, LTR promoter, CMV promoter, HS V-TK promoter, and the like can be mentioned.
  • CMV cytomegalovirus
  • SR promoter SR promoter
  • the host is Escherichia, trp promoter, lac promoter, recA promoter, ⁇ PL promoter, lpp promoter, T7 promoter, etc.
  • the host is Bacillus
  • yeast such as SPOl promoter, SPO2 promoter, penP promoter, etc., PHO5 promoter, PGK promoter, GAP promoter, ADH promoter, etc. are preferable.
  • a polyhedrin promoter, a P10 promoter and the like are preferable.
  • the expression vector contains an enhancer, splicing signal, poly A addition signal, selection marker, SV40 replication origin (hereinafter sometimes abbreviated as SV40 ori), etc.
  • SV40 ori SV40 replication origin
  • the selection marker include dihydrofolate reductase (hereinafter sometimes abbreviated as dhir) gene [methotrexate (MTX) resistance], ampicillin resistance gene (hereinafter abbreviated as Ampr).
  • neomycin resistance gene hereinafter sometimes referred to as “Ne or G418 resistance”.
  • the dhfr gene is used as a selection marker using dhfr gene-deficient Chinese hamster cells, the target gene can be selected even in a medium containing no thymidine.
  • a signal sequence suitable for the host is added to the N-terminal side of the protein of the present invention. If the host is Escherichia, the PhoA * signal sequence, 0 immediately A ⁇ signal sequence, etc. If the host is a Bacillus, the amylase signal sequence, subtilisin ⁇ signal sequence, etc. When yeast is yeast, MFa ⁇ signal sequence, SUC2 ⁇ signal sequence, etc. When the host is an animal cell, insulin 'signal sequence, interferon ⁇ signal sequence, antibody molecule ⁇ signal sequence, etc. are used. it can.
  • a transformant can be produced by using the vector containing the DNA encoding the protein of the present invention thus constructed.
  • hosts examples include Escherichia, Bacillus, yeast, insect cells, insects, and animal cells.
  • Escherichia include, for example, Escherichia coli
  • Bacillus bacteria examples include Bacillus subtilis (Bacillus).
  • subtil is) MI 114 (Gene, 24, 255 (1983)), 207-21 [Journal of Biochemistry, 95, 87 (1984)].
  • yeast examples include Saccharomyces cerevisiae AH22, AH22 R-, NA87-11A, DKD-5D, 20 B-12, Schizosaccharomyces pombe NC YC 1913, NCYC2036, Pichia pastor is K M71, etc. are used.
  • insect cells for example, when the virus is Ac NPV, larvae derived from larvae (Spodoptera frugiperda cell; S f cells), MG1 cells derived from the midgut of Trichoplusia ni, derived from eggs of Trichoplusia ni High Five TM cells, cells derived from Mamestra brassicae or cells derived from Estigmena acrea are used.
  • S f cells cocoon-derived cell lines (Bombyx mori N cells; BmN cells) are used.
  • S f cells include S f 9 cells (ATCC
  • insects examples include silkworm larvae [Maeda et al., Nature, 315, 592 (1985)].
  • animal cells examples include monkey cells COS-7 cells, Vero cells, Chinese hamster cells CHO (hereinafter abbreviated as CH0 cells), dh fr gene-deficient Chinese hamster cells CHO (hereinafter referred to as CHO (dh fr- Abbreviated as cell), mouse L cell, mouse 3 T 3 cell, mouse At T-20 cell, mouse ATDC 5 cell, mouse myeloma cell, human HEK293 cell, human FL cell, 293 cell, C 127 cell, BALB3T3 cells, Sp-2 / 0 cells, rat GH 3 cells, etc. are used.
  • Insect cells or insects can be transformed, for example, according to the method described in Bio / Technology, 6, 47-55 (1988).
  • To transform animal cells for example, the method described in Cell Engineering Supplement 8 New Cell Engineering Experiment Protocol 263-267 (1995) (published by Shujunsha), Virology, Vol. 52, 456 (1973) Can be done according to
  • Examples of methods for introducing expression vectors into cells include the lipofusion method (Feigner, PL et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413 (1987)), calcium phosphate method [Graham, FL and van der Eb, AJ,
  • a method for stably expressing the protein of the present invention using animal cells there is a method of selecting a cell in which the expression vector introduced into the animal cell is incorporated into a chromosome by clone selection. Specifically, transformants are selected using the above selection marker as an indicator. Furthermore, a stable animal cell line having a high expression ability of the protein of the present invention can be obtained by repeatedly selecting clones for the animal cells obtained using the selection marker.
  • the dhfr gene is used as a selection marker, the MTX concentration is gradually increased and cultured, and a resistant strain is selected to amplify DNA encoding the protein of the present invention together with the dhfr gene in the cell. It is possible to obtain animal cell lines with higher expression.
  • the protein of the present invention can be produced by culturing the above-mentioned transformant under conditions capable of expressing the DNA encoding the protein of the present invention to produce and accumulate the protein of the present invention.
  • a liquid medium is appropriate as a medium used for the culture, and a carbon source necessary for the growth of the transformant is included therein.
  • Nitrogen sources, inorganic substances, etc. are included. Examples of carbon sources include glucose, dextrin, soluble starch, and sucrose. Examples of nitrogen sources include ammonium salts, nitrates, corn sheep liquor, peptone, force zein, meat extract, soybean cake, potato extract Examples of inorganic or organic substances such as calcium chloride, sodium dihydrogen phosphate, and magnesium chloride Um.
  • yeast extract, vitamins, growth promoting factors and the like may be added.
  • the pH of the medium is preferably about 5-8.
  • M9 medium containing glucose and casamino acid As a medium for culturing Escherichia, for example, M9 medium containing glucose and casamino acid (Miller, Journal of Experiments in Molecular
  • the culture is usually performed at about 15 to 43 ° C for about 3 to 24 hours, and if necessary, aeration or agitation can be added.
  • the culture is usually carried out at about 30 to 40 ° C for about 6 to 24 hours.
  • examples of the medium include Burkholder's minimum medium [Bostian, KL et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 77, 4505 (1980 And SD media containing 0.5% casamino acid [Bitter, GA et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 5330 (1984)].
  • the pH of the medium is preferably adjusted to about 5-8. Incubate at about 20 ° C to 35 ° C for about 24 to 72 hours, and add aeration or agitation as necessary.
  • the medium When cultivating transformants whose hosts are insect cells or insects, the medium is 10% sushi serum that has been immobilized in Grace's Insect Medium (Grace, TCC, Nature, 195, 788 (1962)) What added the thing suitably is used.
  • the pH of the medium is preferably adjusted to about 6.2 to 6.4. Incubate at about 27 ° C for about 3 to 5 days with aeration or agitation as necessary.
  • examples of the medium include MEM medium containing about 5 to 20% fetal bovine serum [Science, Vol. 122, 501 (1952)], DEM medium [Virology, 8, 396 (1959)], RPMI 1640 medium [The Journal of the American Medical Association 199, 519 (1967)], 199 medium
  • the pH is preferably about 6-8.
  • Cultivation is usually carried out at about 30 ° C to 40 ° C for about 15 to 60 hours, with aeration and agitation as necessary.
  • the tongue of the present invention is applied to the inside, the cell membrane or the outside of the transformant. It is possible to generate a protein.
  • Separation and purification of the protein of the present invention from the culture can be performed, for example, by the following method.
  • the cells or cells are collected by a known method, suspended in an appropriate buffer, and subjected to ultrasound, lysozyme and Z, freeze-thawing, etc.
  • a method may be used as appropriate in which a cell or cell is lysed by, and then a crude protein extract is obtained by centrifugation or filtration.
  • the buffer solution may contain a protein denaturant such as urea or guanidine hydrochloride, or a surfactant such as Triton X-1100 TM . If the protein is secreted into the culture solution, after completion of the culture, the cells or cells are separated from the supernatant by a method known per se, and the supernatant is collected.
  • Purification of the protein contained in the culture supernatant or the extract thus obtained can be performed by appropriately combining per se known separation and purification methods.
  • These known separation and purification methods include methods that utilize solubility, such as salting out, solvent precipitation, dialysis, ultrafiltration, gel filtration, and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.
  • a method using the difference in sex and a method using the difference in isoelectric point such as isoelectric focusing can be used.
  • the protein thus obtained when it is obtained in a free form, it can be converted into a salt by a method known per se or a method analogous thereto, and conversely, when it is obtained as a salt, it is known per se. It can be converted into a free form or other salt by a method or a method similar thereto.
  • the protein produced by the recombinant can be arbitrarily modified or the polypeptide can be partially removed by allowing a suitable protein modifying enzyme to act before or after purification.
  • suitable protein modifying enzymes include trypsin, chymotrypsin, arginyl endobeptidase, protein kinase, glycosidase and the like.
  • the presence of the protein used in the present invention thus produced was determined using a specific antibody. It can be measured by Western plotting.
  • the antibody to the protein or partial peptide or salt thereof used in the present invention is an antibody capable of recognizing the protein or partial peptide or salt thereof used in the present invention
  • a polyclonal antibody or a monoclonal antibody can be used. Either may be used.
  • An antibody against a protein used in the present invention or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter, in the description of an antibody, these may be simply abbreviated as a protein used in the present invention) And can be produced according to a method for producing an antibody or antiserum known per se.
  • the protein used in the present invention is administered to a warm-blooded animal by itself, together with a carrier or a diluent, at a site where antibody production is possible.
  • Complete Freund's adjuvant or incomplete Freund's adjuvant may be administered in order to enhance the ability to produce antibodies upon administration. Administration is usually once every 2 to 6 weeks, for a total of 2 to 10 times.
  • warm-blooded animals to be used for example, monkeys, rabbits, dogs, guinea pigs, mice, rats, hidges, goats, chickens, and the like, mice and rats are preferably used.
  • Monoclonal antibody-producing hyperpridoma can be prepared by fusing the antibody-producing cells with myeloma cells of the same or different animals.
  • the antibody titer in the antiserum can be measured, for example, by reacting the labeled protein described below with the antiserum and then measuring the activity of the labeling agent bound to the antibody.
  • the fusion operation can be performed according to a known method, for example, the method of Kohler and Milstein [Nature, 256, 495 (1975)].
  • the fusion promoter for example, polyethylene glycol (PEG), Sendai virus and the like, preferably PEG is used.
  • myeloma cells are NS-1, P3U1, SP2 / 0, AP-1. Any warm-blooded animal myeloma cell can be mentioned, and P 3 U 1 is preferably used.
  • the preferred ratio between the number of antibody-producing cells (spleen cells) used and the number of myeloma cells is about 1: 1 to 20: 1, and PEG (preferably PEG 1000 to PEG6000) has a concentration of about 10 to 80%. It is added and cell fusion can be efficiently carried out by incubating at 20 to 40 ° C, preferably 30 to 37 ° C for 1 to 10 minutes.
  • Various methods can be used for screening of a monoclonal antibody-producing hybridoma.
  • a high-pridoma culture supernatant is added to a solid phase (eg, a microplate) on which a protein antigen is adsorbed directly or with a carrier.
  • a solid phase eg, a microplate
  • an anti-immunoglobulin antibody labeled with a radioactive substance or enzyme if the cell used for cell fusion is a mouse, an anti-mouse immunoglobulin antibody is used
  • protein A protein A
  • Antibody detection method Hypridoma culture supernatant added to solid phase adsorbed with anti-immunoglobulin antibody or protein A, protein labeled with radioactive substance or enzyme, etc., added to the solid phase
  • a method for detecting a clonal antibody can be mentioned.
  • the selection of monoclonal antibodies can be performed according to a method known per se or a method analogous thereto. Usually, it can be performed in a medium for animal cells supplemented with HAT (hypoxanthine, aminopterin, thymidine).
  • HAT hyperxanthine, aminopterin, thymidine
  • any medium can be used as long as it can grow a hybrid.
  • RPMI 1640 medium containing 1-20% fetal bovine serum, preferably 10-20% fetal bovine serum, GIT medium containing 1-10% fetal bovine serum (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) or High Prix A serum-free medium for dormer culture (SFM-101, Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) can be used.
  • the culture temperature is usually 20-40 ° C, preferably about 37 ° C.
  • the culture time is usually 5 days to 3 weeks, preferably 1 week to 2 weeks.
  • Culture can usually be performed under 5% carbon dioxide.
  • the antibody titer of the hyperidoma culture supernatant can be measured in the same manner as the antibody titer in the above antiserum.
  • Monoclonal antibodies can be separated and purified by methods known per se, such as immunoglobulin separation and purification methods (eg, salting out, alcohol precipitation, isoelectric precipitation, electrophoresis, ion exchanger (eg, DEAE) adsorption / desorption method, ultracentrifugation method, gel filtration method, antigen binding solid phase or active adsorbent such as protein A or protein G.
  • immunoglobulin separation and purification methods eg, salting out, alcohol precipitation, isoelectric precipitation, electrophoresis, ion exchanger (eg, DEAE) adsorption / desorption method, ultracentrifugation method, gel filtration method, antigen binding solid phase or active adsorbent such as protein A or protein G.
  • the polyclonal antibody of the present invention can be produced by a method known per se or a method analogous thereto.
  • an immune antigen protein antigen
  • a carrier protein is prepared, and a warm-blooded animal is immunized in the same manner as the above-described monoclonal antibody production method. It can be produced by collecting an antibody-containing substance against a protein and separating and purifying the antibody.
  • the type of carrier protein and the mixing ratio between carrier 1 and hapten are as follows. Any one can be cross-linked at any ratio as long as it is efficient.For example, urushi serum albumin assimiloglobulin, hemocyanin, etc. are about 0 to 1 hapten by weight ratio. A method of coupling at a ratio of 1 to 20 and preferably about 1 to 5 is used.
  • various condensing agents can be used for the force pulling between the hapten and the carrier, and active esters such as daltaraldehyde, carpositimide, maleimide active ester, thiol group, and dithiobilidyl group are used.
  • the condensation product is administered to warm-blooded animals at the site where antibody production is possible, or with a carrier or diluent.
  • a carrier or diluent In order to enhance antibody production at the time of administration, complete Freund's adjuvant or incomplete Freund's adjuvant may be administered. Investment is usually performed once every 2 to 6 weeks, approximately 3 to 10 times in total.
  • Polyclonal antibodies can be collected from blood, ascites, etc., preferably from blood of warm-blooded animals immunized by the method described above.
  • the polyclonal antibody titer in the antiserum can be measured in the same manner as the antibody titer in the antiserum described above.
  • the separation and purification of the polyclonal antibody can be performed according to the same immunoglobulin separation and purification method as the above-described separation and purification of the monoclonal antibody.
  • An antisense polynucleotide having a sequence or a part thereof has a base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of the DNA of the present invention or a part thereof, and suppresses the expression of the DNA. Any antisense polynucleotide may be used as long as it has an action to be obtained, but antisense DNA is preferred.
  • the base sequence substantially complementary to the DNA of the present invention is, for example, about 70% of the total base sequence or partial base sequence of the base sequence complementary to the DNA of the present invention (that is, the complementary strand of the DNA of the present invention). % Or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more, and most preferably about 95% or more of a base sequence having homology. In particular, among the entire base sequence of the complementary strand of the DNA of the present invention, (i) directed to translation inhibition In the case of an oxide, the protein used in the present invention
  • Antisense polynucleotide power having homology of about 95% or more (ii) In the case of an antisense polynucleotide directed to RNA degradation by RNa seH, the complementary strand of the entire base sequence of the DNA of the present invention including introns
  • Each of the antisense polynucleotides having a homology of about 70% or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more, and most preferably about 95% or more is suitable.
  • SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18 , SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, Yuki Column Number: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or SEQ ID NO: :
  • the antisense polynucleotide is usually composed of about 10 to 40 bases, preferably about 15 to 30 bases.
  • the phosphate residues (phosphates) of each nucleotide that constitutes antisense DNA are chemically modified phosphates such as phosphorophosphate, methylphosphonate, and phosphorodithionate. It may be substituted with a residue.
  • the sugar (deoxy report) of each nucleotide may be substituted with a chemically modified sugar structure such as 2'-O-methylation, and the base part (pyrimidine, purine) is also chemically modified.
  • SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 18 SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or SEQ ID NO: 38
  • an antisense polynucleotide (nucleic acid) corresponding to the gene capable of inhibiting replication or expression of the protein gene used in the present invention is cloned or DNA encoding the determined protein It can be designed and synthesized based on the nucleotide sequence information.
  • Such an antisense polynucleotide can hybridize with RNA of the protein gene used in the present invention, and can inhibit the synthesis or function of the RNA, or the protein-related RNA used in the present invention. It is possible to regulate and control the expression of the protein gene used in the present invention through this interaction.
  • Polynucleotides complementary to selected sequences of protein-related RNAs used in the present invention and polynucleotides that can specifically hybridize with protein-related RNAs used in the present invention are in vivo and in vitro. Expression of protein gene used in the present invention It is useful for regulating and controlling the disease, and is useful for the treatment or diagnosis of diseases.
  • an antisense polynucleotide preferably, antisense DNA
  • the per se known Northern hybridization or PCR-SSCP method Genomics, Vol. 5, pp. 874-879, 1989
  • corresponding means homologous to or complementary to a specific sequence of nucleotides, nucleotide sequences or nucleic acids including genes.
  • corresponding between a nucleotide, nucleotide sequence or nucleic acid and protein usually refers to the amino acid of the protein (in the direction) derived from the nucleotide (nucleic acid) sequence or its complement.
  • 5 'end hairpin loop of protein gene 5' end 6 one base pair repeat, 5 'end untranslated region, protein translation start codon, protein coding region, ORF translation stop codon, 3' end untranslated region, 3
  • the 'end palindrome region or the 3' end hairpin loop or the like can be selected as a preferred region of interest, but any region within the protein gene can be selected as a target.
  • the target nucleic acid if the target nucleic acid can hybridize with the target region, the target nucleic acid is compared with the polynucleotide of the target region. It can be said that it is “antisense”.
  • Antisense polynucleotides include polynucleotides containing 2-deoxy-D-lipose, polynucleotides containing D-lipose, other types of polynucleotides that are N-glycosides of purine or pyrimidine bases, Other polymers with non-nucleotide backbones (eg, commercially available protein nucleic acids and synthetic sequence-specific nucleic acid polymers) or other polymers containing special linkages (however, such polymers are found in DNA and RNA) Such as base pairing and nucleotides having a configuration allowing base attachment).
  • Nucleotides may be double-stranded DNA, single-stranded DNA, double-stranded RNA, single-stranded RNA, DNA: RNA hybrid, and unmodified polynucleotides (or unmodified oligos). Nucleotides), with known modifications, such as those with labels known in the art, those with caps, Methylated, substituted one or more natural nucleotides with analogues, intramolecular nucleotide modified, eg uncharged bonds (eg methylphosphonates, phosphorylesters, phosphoramidates, force With a charge-bearing or sulfur-containing bond (eg, phosphorothioate, phosphorodiate, etc.), eg proteins (eg, nucleases, nucleases, inhibitors, toxins) , Antibodies, signal peptides, poly-L-lysine, etc.) and sugars (eg, monosaccharides), etc., side chain groups, etc
  • Chelate compounds eg metal, radioactive metal, boron, oxidizable metal Etc.
  • those containing alkylating agents and those having modified bonds (for example, anomeric nucleic acids).
  • nucleoside may include not only purine and pyrimidine bases but also those having other heterocyclic bases modified. Such modifications may include methylated purines and pyrimidines, acylated purines and pyrimidines, or other heterocycles.
  • Modified nucleotides and modified nucleotides may also be modified at the sugar moiety, e.g., one or more hydroxyl groups are replaced by halogens or aliphatic groups, or functional groups such as ethers, amines, etc. It may be converted.
  • the antisense polynucleotide of the present invention is RNA, DNA or a modified nucleic acid (RNA, DNA).
  • modified nucleic acids include nucleic acid sulfur derivatives, thiophosphate derivatives, polynucleoside amides and those resistant to degradation of oligonucleotides.
  • the antisense polynucleotide of the present invention can be designed as follows. That is, to make the antisense polynucleotide in the cell more stable, to increase the cell permeability of the antisense polynucleotide, to increase the affinity for the target sense strand, If it is toxic, make the antisense polynucleotide less toxic. Many such modifications have been reported, for example, in Pharm Tech Japan, Vol. 8, 247 or 395, 1992, Ant isense Research and Application, CRC Press, 1993.
  • the antisense polynucleotide of the present invention may be altered or modified. It may contain sugars, bases, and bonds, and can be donated in special forms such as ribosomes, microspheres, applied by gene therapy, or given in added form. In this way, it can be used in addition form as a polycation such as polylysine that acts to neutralize the charge of the phosphate group skeleton, or a lipid that increases the interaction with the cell membrane or increases the uptake of nucleic acid ( Examples include hydrophobic substances such as phospholipids and cholesterol. Preferred lipids to add include cholesterol and its derivatives (eg, cholesteryl chromate formate, cholic acid, etc.).
  • nucleic acids can be attached to the 3 'or 5' end of nucleic acids and can be attached via bases, sugars, or intramolecular nucleoside linkages.
  • Other groups are cap groups that are specifically placed at the 3 'or 5' end of nucleic acids to prevent degradation by nucleases such as exonucleases and RNases. Can be mentioned. Examples of such cap groups include, but are not limited to, hydroxyl-protecting groups known in the art, such as darikols such as polyethylene glycol and tetraethylene glycol.
  • the inhibitory activity of the antisense polynucleotide can be examined using the transformant of the present invention, the in vivo or in vitro gene expression system of the present invention, or the in vivo or in vitro translation system of the protein of the present invention. .
  • the polynucleotide can be applied to cells by various known methods.
  • the full-length nucleotide sequence of mRNA (ie, mRNA encoding the protein used in the present invention) (hereinafter sometimes abbreviated as mRNA of the present invention), which is a translation variant of the protein used in the present invention.
  • the polynucleotide containing a part of the base sequence is any polynucleotide as long as it contains the base sequence of mRNA or the part of the translation RNA of the protein used in the present invention. However, it is preferably R NA (hereinafter sometimes abbreviated as R NA of the present invention).
  • RNA of the present invention examples include, for example, the coding region of the mRNA of the present invention, 5 ′ untranslated region (5′-UTR) or (and) 3 ′ untranslated region (3′-UTR) base sequence, or Examples thereof include RNA containing a part of them, and any of them can be preferably used.
  • SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 1 7, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 or sequence No .:
  • a polynucleotide containing the full-length complementary sequence of the base sequence of the mRNA of the present invention or a part of the base sequence can be synthesized by the RT-PCT method or the like.
  • the base sequence of the mRNA of the present invention or Any polynucleotide may be used as long as it contains a complementary or substantially complementary base sequence or a part thereof, but DNA (hereinafter referred to as the complementary DNA of the present invention). It may be abbreviated).
  • Examples of the complementary polynucleotide of the present invention include, for example, the coding region of the mRNA of the present invention, the base sequence of the 5 ′ untranslated region (5′-UTR) or (and) 3 ′ untranslated region (3′-UTR), Alternatively, a complementary polynucleotide containing a base sequence complementary or substantially complementary to a part of them can be mentioned, and any of them can be preferably used.
  • the base sequence substantially complementary to the base sequence of the mRNA of the present invention or a part thereof is, for example, about 70% or more, preferably about 80% or more, with the entire base sequence or partial base sequence of the mRNA of the present invention, More preferred is a base sequence having a homology of about 90% or more, most preferably about 95% or more.
  • SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 1 7, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: :
  • the base sequence of mRNA that is the translation type of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in 37 Or a polynucleotide containing a base sequence complementary or substantially complementary to a part thereof or a part thereof.
  • the phosphate residues (phosphates) of each nucleotide constituting the complementary DNA of the present invention are, for example, chemistry such as phosphoroate, methylphosphonate, and phosphorodithionate. It may be substituted with a modified phosphate residue.
  • the sugar (deoxy report) of each nucleotide may be substituted with a chemically modified sugar structure such as 2'-O-methylation, and the base part (pyrimidine, purine) is also chemically modified.
  • SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: It is hyper-hybridized to a polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by 37. if there is It may be of Re not.
  • complementary DNAs can be produced using a known DNA synthesizer. Further, it may be derived from genomic DNA, a genomic DNA library, cDNA derived from the cells / tissues described above, cDNA library derived from the cells / tissues described above, or the like.
  • the complementary polynucleotide of the present invention can be hybridized with mRNA of the protein gene used in the present invention. Therefore, by using such a complementary polynucleotide of the present invention (preferably, the complementary DNA of the present invention), the per se known Northern hybridization or PCR-SSCP method (Genomics, Vol. 5, 874- 879, 1989, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol. 86, 2766-2770, 1989) etc. be able to.
  • a protein used in the present invention or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as a protein used in the present invention), a polynucleotide encoding a protein or a partial peptide used in the present invention (example: DNA) (hereinafter sometimes abbreviated as DNA used in the present invention), used in the present invention
  • DNA DNA
  • An antibody against a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof hereinafter sometimes abbreviated as an antibody used in the present invention
  • an antisense polynucleotide of a DNA used in the present invention (hereinafter referred to as an anti-antibody used in the present invention)
  • an anti-antibody used in the present invention explain the purpose of the application (sometimes abbreviated as sense polynucleotide).
  • Non-small cell lung cancer malignancy diagnostic agent etc.
  • P ⁇ H, PL0D2, TUBA2, PML, F13AK AIF 1, SAM, S thigh 2, AQP K PAFAH1B3, KYNU are upregulated in patients with recurrent non-small cell lung cancer, FU 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 L C0L9A2, FAM13AK DLK 1 is upregulated in relapse-free patients, and the expression level of these proteins is used as an index to evaluate the malignancy of non-small cell lung cancer (eg, high or low likelihood of recurrence, prognosis, The possibility of metastasis, the sensitivity of therapeutic drugs, and the mortality rate caused by the primary cancer can be diagnosed.
  • non-small cell lung cancer eg, high or low likelihood of recurrence, prognosis, The possibility of metastasis, the sensitivity of therapeutic drugs, and the mortality rate caused by the primary cancer can be diagnosed.
  • the present invention relates to a diagnostic agent and diagnostic method for non-small cell lung cancer malignancy using as an index the height (degree) of the expression level of the protein used in the present invention; the expression level of the protein used in the present invention is measured.
  • Measuring the expression level of the protein used in the present invention means, for example, measuring or estimating the expression level of the protein used in the present invention at the protein level or the polynucleotide level.
  • Measuring the expression level of the protein used in the present invention at the protein level means, for example, measuring or estimating the expression level of the protein used in the present invention by detecting or quantifying the protein used in the present invention. To do.
  • the detection or quantification of the protein used in the present invention can be performed using, for example, an antibody against the protein used in the present invention or a partial peptide thereof or a salt thereof.
  • the expression level of the protein used in the present invention is measured at the polynucleotide level.
  • a polynucleotide containing a polynucleotide encoding the protein used in the present invention (preferably, DNA or mR It means that the expression level of the protein used in the present invention is measured or estimated by detecting or quantifying the presence or absence or expression level of NA).
  • a polynucleotide containing a polynucleotide encoding the protein used in the present invention is exemplified by For example, a polynucleotide encoding a protein used in the present invention or a partial peptide thereof; a full-length base sequence of mRNA that is a translational variant of the protein used in the present invention, a full-length complementary chain thereof, or a partial base sequence thereof Can be carried out using a polynucleotide containing.
  • the polynucleotide encoding the protein used in the present invention or a partial peptide thereof, or the full-length nucleotide sequence of mRNA that is a translational type of the protein used in the present invention, and the total length of its complementary strand Or by detecting or quantifying mRNA that is a translational variant of the protein used in the present invention, using a polynucleotide containing a partial nucleotide sequence of the protein of the present invention.
  • the expression level can be measured or estimated.
  • the expression level of the protein used in the present invention when the expression level of the protein used in the present invention is measured or estimated at the polynucleotide level, the expression level of the polynucleotide containing the polynucleotide encoding the protein used in the present invention is high.
  • the protein used in the present invention is evaluated or estimated to have a high expression level.
  • the expression level of the polynucleotide containing the polynucleotide encoding the protein used in the present invention is low, it is evaluated or estimated that the expression level of the protein used in the present invention is low.
  • the reagent for measuring the expression level of the protein used in the present invention includes, for example, a compound (eg, antibody, polynucleotide, etc.) that can be used for measuring or estimating the expression level of the protein used in the present invention.
  • a compound eg, antibody, polynucleotide, etc.
  • the reagent for measuring the expression level of the protein used in the present invention is, for example, a compound that can be used to measure or estimate the expression level of the protein used in the present invention at the protein level (e.g., antibody Or a compound (eg, polynucleotide) that can be used to measure or estimate at the polynucleotide level.
  • a reagent for measuring the expression level of the protein used in the present invention at the protein level for example, an antibody against the protein used in the present invention is used for detecting or quantifying the protein used in the present invention. Possible compounds can be used.
  • the reagent for measuring or estimating the expression level of the protein used in the present invention at the polynucleotide level include a polynucleotide encoding the protein used in the present invention or a partial peptide thereof.
  • Polynucleotide full-length nucleotide sequence of mRNA that is a translation type of the protein used in the present invention, Presence or absence of expression of a polynucleotide (eg, DNA or mRNA) containing a polynucleotide encoding the protein used in the present invention, such as a polynucleotide containing the full length of the complementary sequence, or a partial nucleotide sequence thereof.
  • a polynucleotide eg, DNA or mRNA
  • a compound that can be used to detect or quantify the expression level can be used.
  • the expression level of the protein used in the present invention is measured by means of using the above-mentioned reagent for measuring the expression level of the protein used in the present invention at the protein level, and the expression level of the protein used in the present invention.
  • reagents for measuring at the nucleotide level but also means of using electrophoresis methods such as two-dimensional electrophoresis, means of using chromatographic methods such as HPLC, T0F-MS method, etc. It is also possible to use a method using the mass spectrometry method described above, a method using an antibody such as an ELISA method, and the like.
  • P-, P-secret, Ring A2, PML, F13AK AIF1, SAAL S100A2, AQP U PAFAH1B3, and KYNU are upregulated in patients with recurrent non-small cell lung cancer. If the amount is found to be high, for example, the non-small cell lung cancer can be diagnosed, judged, predicted or classified as having high malignancy. In addition, if these proteins are not detected or are found to be low in expression, for example, non-small cell lung cancer can be diagnosed, judged, predicted or classified as having low malignancy.
  • FLJ 10307> 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 K C0L9A2, FAM13AK DLK 1 is upregulated in relapse-free patients, so if these proteins are detected or found to be high, For example, non-small cell lung cancer can be diagnosed, judged, predicted or classified as having high malignancy. If these proteins are not detected or are found to be low in expression level, for example, it can be diagnosed, judged, predicted or classified as having a high malignancy of non-small cell lung cancer.
  • DLK 1 force s is not detected or the expression level is low, for example, it can be diagnosed, judged, predicted or classified as having high malignancy of non-small cell lung cancer.
  • PHGDH, PL0D2, T ⁇ , PML, F13AL AIFK SAA1, S100A2, AQP1, PAFAH1B3 or (and) KYNU is not detected or its expression level is low
  • FLJ10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13A1 or (and) DLK1 force s is detected or expressed If the amount is found to be high, for example, it can be diagnosed, determined, predicted or classified as low malignancy of non-small cell lung cancer.
  • Known statistical analysis methods include, for example, (i) Gene Spring (Silicon Genetics) Predict Parameter Value, (ii) leave-one-out cross-validation weighted voting cross- For example, a method using a validation algorithm (Science, 286, 531-537H, 1999).
  • a method using a validation algorithm (Science, 286, 531-537H, 1999).
  • the type of protein used in the present invention used in the diagnosis, determination, prediction or classification method using such a statistical analysis method using such a statistical analysis method, but usually 2 to 19 types, preferably 3 to 10 types. More preferably, they are 4 to 8 types, particularly preferably 5 to 7 types.
  • “high expression level” or “low expression level” not only means absolute level of expression, but also means relative level of expression. .
  • the above ⁇ high expression level '' means, for example, the value obtained using GeneChip system (Hybridization Oven H010115, GeneChip Fluidics Station 400, GeneArray Scanner 3000, Microarray Suite, Human Genome U133A array) manufactured by Affymetrix. Normalization method (the median) of all probes determined to be Present by Detection Call among the probes on GeneChip is 1 If the values of all probes are corrected so that the value becomes, the value is 2.8 or more, preferably 3 or more.
  • Low expression level '' means, for example, the value when using Aifymetrix's GeneChip system (Hybridizat ion Oven H010115, GeneChip Fluidics Station 400, GeneArray Scanner 3000, Microarray Suite, Human Genome U133A array) When processed by the chip normal ionization method, the value is 2.2 or less, preferably 2 or less.
  • the antibody used in the present invention can specifically recognize the protein used in the present invention, detection or quantification of the protein used in the present invention in a test solution, particularly quantification by sandwich immunoassay. Can be used for etc.
  • the antibody used in the present invention can detect or quantify the protein used in the present invention as described above, the diagnosis or the like of diseases or conditions related to the presence or absence of the protein used in the present invention or the expression level, etc. Can be used for
  • the present invention provides: (i) a labeled book that binds to the antibody by competitively reacting the antibody used in the present invention with the test solution and the labeled protein used in the present invention.
  • a method for quantifying the protein used in the present invention in the test solution characterized in that the ratio of the protein used in the invention is measured;
  • the antibody used in the present invention insolubilized on the test solution and the carrier; and It is used in the present invention in a test solution characterized by measuring the activity of a labeling agent on an insolubilized carrier after reacting with another antibody used in the present invention that is labeled simultaneously or continuously.
  • one antibody is an antibody that recognizes the N-terminal part of the protein rod used in the present invention, and the other antibody reacts with the C-terminal part of the protein used in the present invention. It is desirable that it is an antibody.
  • the protein used in the present invention can be detected by quantification and tissue staining.
  • the antibody molecule itself may be used, or the F (ab,) 2 , F ab ′, or F ab fraction of the antibody molecule may be used.
  • the method for quantifying the protein used in the present invention using an antibody is not particularly limited, and the antibody, antigen or antibody-antigen complex corresponding to the amount of antigen (eg, amount of protein) in the test solution is not limited.
  • any measurement method may be used as long as it is a measurement method in which the amount of the body is detected by chemical or physical means and this is calculated from a standard curve prepared using a standard solution containing a known amount of antigen.
  • nephrometry, competition method, immunometric method and sandwich method are preferably used.
  • the sandwich method described later it is particularly preferable to use the sandwich method described later.
  • the labeling agent used in the measurement method using the labeling substance include radioisotopes, enzymes, fluorescent substances, and luminescent substances.
  • the radioisotope include [ 125 1], [ 131 1], [ 3 H], [ 14 C] and the like.
  • the enzyme a stable enzyme having a large specific activity is preferable.
  • 6-galactosidase, ⁇ -darcosidase, alfa phosphatase, paroxidase, malate dehydrogenase and the like are used.
  • fluorescent material for example, fluorescamine, fluorescein isothiocyanate, etc. are used.
  • luminescent substance for example, luminol, luminol derivative, luciferin, lucigenin and the like are used.
  • a piotin-avidin system can be used for the binding of the antibody or antigen and the labeling agent.
  • the insolubilization of the antigen or antibody physical adsorption may be used, or a method using a chemical bond usually used to insolubilize or immobilize a protein or an enzyme may be used.
  • the carrier include insoluble polysaccharides such as agarose, dextran, and cellulose, synthetic resins such as polystyrene, polyacrylamide, and silicon, or glass.
  • the test solution is reacted with the insolubilized monoclonal antibody used in the present invention (primary reaction), and further labeled with another monoclonal antibody used in the present invention (secondary reaction).
  • the mass of the protein used in the present invention in the test solution can be quantified.
  • the primary reaction and the secondary reaction may be performed in the reverse order, may be performed simultaneously, or may be performed at different times.
  • the labeling agent and the insolubilization method can be the same as those described above.
  • the antibody used for the solid phase antibody or the labeling antibody is not necessarily one type, and a mixture of two or more types of antibodies may be used for the purpose of improving measurement sensitivity. .
  • antibodies having different sites to which the protein used in the present invention binds are preferably used. That is, as an antibody used in the primary reaction and the secondary reaction, for example, when the antibody used in the secondary reaction recognizes the C-terminal part of the protein used in the present invention, the antibody used in the primary reaction is Preferably, an antibody that recognizes other than the C end, for example, the N end is used.
  • the antigen in the test solution and the labeled antigen are reacted competitively with the antibody, and then the unreacted labeled antigen (F) and the labeled antigen (B) bound to the antibody are separated.
  • BZ F separation Measure the amount of either B or F label and quantify the amount of antigen in the test solution.
  • a soluble antibody is used as an antibody
  • a B-ZF separation is carried out using a polyethylene glycol
  • a liquid phase method using a second antibody against the antibody and a solid-phased antibody is used as the first antibody.
  • a soluble antibody is used, and a solid phase method using a solid phased antibody as the second antibody is used.
  • the solid phase and the liquid phase are separated after a competitive reaction between the antigen in the test solution and the immobilized antigen against a certain amount of labeled antibody, or in the test solution.
  • the antigen is reacted with an excess amount of the labeled antibody, and then the solid phase antigen is added to bind the unreacted labeled antibody to the solid phase, and then the solid phase and the liquid phase are separated.
  • measure the amount of label in either phase to quantify the amount of antigen in the test solution.
  • nephrometry the amount of insoluble precipitate produced as a result of antigen-antibody reaction in gel or solution is measured.
  • a laser neck mouth memory using laser scattering is preferably used.
  • the protein used in the present invention can be quantified with high sensitivity by using the antibody used in the present invention. Further, the antibody used in the present invention can be used to detect the protein used in the present invention present in a subject such as a body fluid or tissue.
  • the antibody used in the present invention can also be used in an antibody microarray, that is, an “antibody chip” formed of an array of a plurality of or one antibody fixed on a substrate.
  • an antibody microarray can be prepared, used and analyzed by a known method or a method analogous thereto.
  • the preparation and use of such antibody microarrays include, for example: (i) MacBeath and
  • an antibody microarray of the present invention can also be used in a diagnostic kit for diagnosing a disease or condition related to the presence or absence of the protein used in the present invention or the expression level.
  • PHGDH, PL0D2, TUBA2, PML, F13AL AIFK SAAK S100A2, AQP1, PAFAH1B3, and sputum have increased expression in patients with non-small cell lung cancer recurrence. If these proteins are detected or are expressed at high levels, for example, non-small cell lung cancer is likely to recur, prognosis is poor, metastasis is possible Can be diagnosed, judged, predicted or classified as high-grade or (and) high-grade. In addition, these proteins were not detected or their expression levels were found to be low. For example, it can be diagnosed, determined, predicted or classified as having a low likelihood of non-small cell lung cancer recurrence, low malignancy, or (and) good prognosis.
  • FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053L C0L9A2, and FAM13AK DLK 1 are upregulated in relapse-free patients. If these proteins are detected or found to be highly expressed, for example, the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence is low, the prognosis is good, the probability of metastasis is low, or ( And) Low grade can be diagnosed, determined, predicted or classified. In addition, if these proteins are not detected or are found to be low in expression level, for example, the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high, the prognosis is not good, and the possibility of metastasis is high.
  • High grade can be diagnosed, determined, predicted or classified. Furthermore, P thigh, PL0D2, ⁇ 2, PML, F13AK AIFK SAA1, S100A2, AQPK PAFAH1B3 or (and) heel is detected or its expression level is high, and FLJ10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13A1 or (and) DLK 1 force S If not detected, or if the expression level is low, for example, the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high, prognosis is poor, metastasis Can be diagnosed, determined, predicted or classified as likely or (and) high grade.
  • P ⁇ , P concealment, ⁇ 2, PML, F13AK AIF1, SAAK S ⁇ 2, AQP1, PAFAH1B3 or (and) KYNU is not detected or its expression level is low
  • FLJ10307, 0SBPL9, EIF2C4, E ⁇ 4, FLJ2053K COL9A2, FAM13A1 or (and) DLK 1 force is detected or the level of expression is high, for example, the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence is low, and the prognosis is good Can be diagnosed, judged, predicted or classified as having a low probability of metastasis, or (and) low grade.
  • the production of the antibody column used for purifying the protein used in the present invention the detection of the protein used in the present invention in each fraction during purification, and the protein used in the present invention in the test cells. It can be used for quality behavior analysis.
  • the polynucleotide (preferably DNA) used in the present invention can be used, for example, as a probe to allow humans or warm-blooded animals (eg, rats, mice, guinea pigs, rabbits, birds, birds, pigs, rabbits) Presence / absence of expression of the polynucleotide (preferably DNA or mRNA) encoding the protein used in the present invention or its partial peptide in horse, cat, cat, monkey, chimpanzee, etc.
  • abnormalities can be detected. For example, the presence or absence or expression level of the DNA or mRNA, or the damage or mutation of the DNA or mRNA It is useful as a genetic diagnostic agent.
  • the above-described genetic diagnosis using the polynucleotide used in the present invention can be performed by, for example, the known Northern hyperpridition or PCR-SSCP method (Genomics, Vol. 5, pp. 874-879, 1989, Proceedings ⁇ the Nat ional Academy of Sciences of the United States of America, Volume 86, 2766-2770, 1989) Can be applied.
  • P thigh, P ⁇ , ⁇ 2, PML, F13AL AIFK SAAL S100A2, AQP1, PAFAH1B3, and KY ⁇ are upregulated in non-small cell lung cancer patients. If the mRNA power S, which is a translational type of these proteins, is detected by zeation, or if the expression level is recognized to be high, for example, the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high, the prognosis is not good, Can be diagnosed, determined, predicted or classified as having a high probability of metastasis or (and) high malignancy.
  • mRNAs that are translational variants of these proteins are not detected or are expressed at low levels, for example, the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence is low, and the prognosis is good Can be diagnosed, determined, predicted or classified as having a low probability of metastasis, or (and) low grade.
  • FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K C0L9A2, and FAM13AK DLK 1 are upregulated in relapse-free patients.
  • Northern hybridization results in a translational variant of these proteins. Is detected or is highly expressed, for example, the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence is low, the prognosis is good, the probability of metastasis is low, or (and) the grade A low can be diagnosed, judged, predicted or classified.
  • mRNAs that are translated variants of these proteins are not detected or are found to be low in expression level, for example, the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high, and the prognosis is poor. Can be diagnosed, determined, predicted, or classified as not metastatic, or (and) highly malignant.
  • mR NA which is the translation type of the PHG dish
  • mR NA which is the translation type of PL0D2
  • mR NA which is the type of translation of TUBA2
  • mR NA which is the type of translation of PML
  • F13A1 MR NA AIF1 translation type mR NA, SMI translation type mR NA, S100A2 translation type mR NA, AQP1 translation type mR NA, PAFAH1B3 translation
  • AIF1 translation type mR NA SMI translation type mR NA
  • S100A2 translation type mR NA S100A2 translation type mR NA
  • AQP1 translation type mR NA PAFAH1B3 translation
  • non-small cell lung cancer can be diagnosed, judged, predicted or classified as having a high or low probability of recurrence, good or bad prognosis, high or low probability of metastasis, and / or high or low malignancy.
  • a known statistical analysis method for example,
  • the complementary polynucleotide used in the present invention that is, the full-length complementary sequence of the nucleotide sequence of mRNA or the partial sequence of the protein used in the present invention.
  • Polynucleotides containing the base sequence can also be used, for example, as a probe, for example in humans or warm-blooded animals (eg, rats, mice, guinea pigs, rabbits, birds, Polynucleotides that code for the protein used in the present invention or its partial peptides in Hidge, Budge, Ushi, Uma, Cat, Inu, Monkey, Chimpanzee, etc.
  • Presence or absence, expression level or abnormality can be detected.
  • expression level or abnormality can be detected.
  • the presence or absence or expression level of the DNA or mRNA, or the disease or condition related to the expression or damage of the DNA or mRNA Alternatively, it is useful as a genetic diagnostic agent such as mutation.
  • Complementary DNA, etc. used in the present invention can be used to diagnose, determine, predict or predict the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence, prognosis, metastasis, or (and) high or low malignancy.
  • it can be used in the same manner as the polynucleotide used in the present invention.
  • the polynucleotide (preferably DNA) used in the present invention can be used for the microarray.
  • a microarray preferably a DNA microarray
  • Such a DNA microarray of the present invention is used in a diagnostic kit for diagnosing a disease or a condition related to the presence or absence of the expression of the polynucleotide encoding the protein used in the present invention or the expression level. You can also.
  • the antibodies used in the present invention against these proteins Preferably, an antibody having an action of neutralizing the activity or function of these proteins can be used, for example, as a preventive, therapeutic agent and / or a recurrence preventive agent for non-small cell lung cancer.
  • the agent for the above-mentioned diseases containing the antibody used in the present invention has low toxicity, and as it is as a liquid or as a pharmaceutical composition of an appropriate dosage form, it can be used for humans or mammals (eg, rats, rabbits, hidges, It can be given orally or parenterally (eg, intravenous injection) to buyu, ushi, cat, nu, monkey, etc.
  • the dose of the antibody used in the present invention varies depending on the administration subject, target disease, symptom, administration route, etc.
  • the antibody used in the present invention when orally administered for the purpose of preventing recurrence of non-small cell lung cancer
  • the antibody in general, in adults (with a body weight of 60 kg), the antibody is about 0.1 to 100 Omg, preferably about 1.0 to 30 Omg, more preferably about 3.0 to 5 per day.
  • Administer Omg When administered parenterally, the single dose of the antibody varies depending on the administration subject, target disease, symptom, administration method, etc. For example, it is used in the present invention for the purpose of preventing recurrence of non-small cell lung cancer.
  • the antibody in general, in adults (as body weight 6 O kg), the antibody is administered in an amount of about 0.01 to 3 Omg, preferably about 0.1 to 20 mg, More preferably, about 0.1-1 Omg is conveniently administered by intravenous injection. In the case of other animals, an amount converted per 6 O kg can be administered. If symptoms are particularly severe, the dose may be increased according to the symptoms.
  • the antibody used in the present invention can be administered per se or as an appropriate pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition used for the administration comprises the antibody or a salt thereof and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient.
  • Such compositions are provided as dosage forms suitable for oral or parenteral administration (eg, intravenous injection). Preferably it is provided as an inhalant.
  • compositions may contain other active ingredients as long as they do not cause an unfavorable interaction by blending with the antibody.
  • P ⁇ , P drawing, ⁇ 2, PML, F13AL AIFL SAA1, S100A2, AQP1, PAFAH1B3, and KYNU are upregulated in patients with recurrent non-small cell lung cancer, so DNA encoding these proteins Since the antisense polynucleotide used in the present invention that can bind to the DNA complementarily and suppress the expression of the DNA can suppress the function of the DNA, for example, prevention / treatment of non-small cell lung cancer It can be used as an agent and / or an agent for preventing recurrence.
  • the above antisense polynucleotide When used as the above agent, it can be formulated and administered according to a method known per se.
  • the above antisense polynucleotide may be used alone or retrovirus.
  • an appropriate vector such as a virus vector, adenovirus vector, adenovirus vector virus vector, etc.
  • a human or mammal eg, rat, rabbit, hidge, Can be administered orally or parenterally to buyu, ushi, cat, nu, monkeys, etc.
  • the antisense polynucleotide can be formulated as it is or with a physiologically recognized carrier such as an adjuvant for promoting ingestion, and can be administered through a catheter such as a gene gun or a hydrogel catheter. Alternatively, it can be aerosolized and locally administered into the trachea as an inhaler.
  • the above-mentioned antisense polynucleotides can be formulated (injection) alone or together with a carrier such as ribosome, and then intravenous, subcutaneous, joint It may be administered intracavitary or to cancerous lesions.
  • the dose of the antisense polynucleotide varies depending on the target disease, administration subject, administration route, etc.
  • the antisense polynucleotide used in the present invention for the purpose of treating non-small cell lung cancer is administered.
  • the antisense polynucleotide used in the present invention for the purpose of treating non-small cell lung cancer is administered.
  • antisense polynucleotide can also be used as a diagnostic oligonucleotide probe for examining the presence and expression status of DNA used in the present invention in tissues and cells.
  • double-stranded RNA containing a part of RNA encoding PHGDH, PL0D2, TUBA2, PML, F13AL AIF K SM1, S100A2, AQP L PAFAH1B3 or ⁇ (used in the present invention) Si R NA (smal l (short) interfering RNA), sh R NA (smal l (short) hai rp in RNA)), lipozymes, etc.
  • F13AK AIF1, SAA1, S100A2, AQPK PAFAH1B3 or ⁇ gene expression can be suppressed, and the functions of these proteins or DNA encoding these proteins can be suppressed. It can be used as a preventive / therapeutic agent for cell lung cancer and / or a preventive agent for recurrence.
  • polynucleotides containing the nucleotide sequence of mRNA as a template or part thereof are also PHGDH, PL0D2, TUBA2, PML, F13AK AIF1, SAAL S100A2, AQPK PAFAH1B3
  • the expression of KYNU gene can be suppressed, and the function of these proteins or DNA encoding these proteins can be suppressed.
  • prevention / treatment agents for non-small cell lung cancer and / or It can be used as an agent for preventing recurrence.
  • Such a double-stranded RNA may be directed to a polynucleotide containing the nucleotide sequence of the coding region of mRNA or a part thereof, or the base of a 5 ′ untranslated region or 3 ′ untranslated region. It may be against a polynucleotide containing the sequence or part thereof.
  • the double-stranded RNA can be designed and produced based on the sequence of the polynucleotide used in the present invention according to a known method (eg, Nature, 411, 494, 2001).
  • the lipozyme can be designed and manufactured based on the sequence of the polynucleotide used in the present invention according to a known method (eg, TRENDS in Molecular Medicine, Vol. 7, 221, 2001). For example, it can be produced by linking a known lipozyme to a part of RNA encoding the protein used in the present invention. Examples of a part of the RNA encoding the protein used in the present invention include a portion (RNA fragment) close to the cleavage site on the RNA used in the present invention, which can be cleaved by a known liposome.
  • RNA or lipozyme When the above double-stranded RNA or lipozyme is used as the above agent, it can be formulated and administered in the same manner as the antisense polynucleotide.
  • PHGDH, P-secret, ⁇ 2, PML, F13AL AIFL SAAL S100A2, AQPK PAFAH1B3 and KYNU are upregulated in patients with recurrent non-small cell lung cancer.
  • a compound or a salt thereof that suppresses the activity or function of these proteins is useful as an agent for preventing / treating non-small cell lung cancer and / or preventing recurrence. Therefore, DNA and NA used in the present invention Proteins are useful for screening the compounds or salts thereof. That is, the present invention relates to a compound or salt thereof that suppresses the expression of the gene using the DNA used in the present invention, and a compound or salt thereof that suppresses the activity or function of the protein using the protein used in the present invention.
  • a screening method (hereinafter sometimes abbreviated as the screening method of the present invention) is provided.
  • Specific examples of the screening method of the present invention include (i) when cells having the ability to produce the protein used in the present invention are cultured, and (ii) the protein used in the present invention in the presence of a test compound. Comparison with the case of culturing cells capable of producing.
  • the expression level of the DNA used in the present invention (specifically, the amount of protein used in the present invention or the translation of the protein)
  • the amount of mRNA to be a mold) or the activity or function of the protein used in the present invention is measured and compared.
  • the protein amount is measured by a known method, for example, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, sequence. No. 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33 or SEQ ID NO: 35 is used to detect the protein present in a cell extract or the like using an antibody that recognizes a protein containing the amino acid sequence represented by Western Measurements can be made according to methods such as analysis, ELISA, or similar methods.
  • the amount of mRNA is measured by a known method, for example, as a probe, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28.
  • SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 or SEQ ID NO: 34 Northern hybridize using a nucleic acid containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 36 or a part thereof, or SEQ ID NO: as a primer 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 or SEQ ID NO: Measurement can be carried out according to the PCR method using a nucleic acid containing the base sequence represented by 36 or a part thereof, or a method analogous thereto.
  • the expression of the gene in the case of (ii) (addition of test compound) is about 20% or more, preferably 30% or more, more preferably compared to the case of (0) (no test compound added).
  • Test compounds that inhibit about 50% or more are used in the present invention.
  • the transcriptional activity can be measured by a known method, for example, DNA containing the DNA base sequence recognized by the protein used in the present invention, repo overnight gene (eg, 1 ac Z, alkaline phosphatase, luciferase, etc.
  • the reporter activity can be used as an index, or the amount of a gene or its product that induces the expression of the protein in cells can be measured, or a method equivalent thereto can be used. Can do.
  • the activity or function of the protein used in the present invention in the case of (ii) (addition of test compound) is about 20% compared to the case of (i) (no addition of test compound).
  • a test compound that inhibits preferably 30% or more, more preferably about 50% or more can be selected as a compound that inhibits the activity of the protein used in the present invention.
  • FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13AK DLK 1 is upregulated in non-small cell lung cancer patients without recurrence.
  • a compound or a salt thereof that promotes the activity or function of a protein is useful as a preventive / therapeutic agent for non-small cell lung cancer and / or a preventive agent for recurrence. Therefore, the DNA and protein used in the present invention are useful for screening the compound or a salt thereof.
  • the present invention relates to a compound or a salt thereof that promotes the expression of the gene using the DNA used in the present invention, and a compound or a salt thereof that promotes the activity or function of the protein using the protein used in the present invention.
  • a screening method (hereinafter also abbreviated as the screening method of the present invention). Specific examples of the screening method of the present invention include (i) when cells having the ability to produce the protein used in the present invention are cultured, and (ii) the protein used in the present invention in the presence of a test compound. Compare with the case of culturing cells with the ability to produce.
  • the expression level of the DNA used in the present invention (specifically, the mass of the protein used in the present invention or the translation type of the protein) And measure the activity or function of the protein used in the present invention for comparison.
  • the protein amount is measured by a known method, for example, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 1 1, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 2 3 or array Using an antibody that recognizes the protein containing the amino acid sequence represented by No. 37, measure the protein present in the cell extract according to a method such as Western analysis or ELISA, or a method similar thereto. Can do.
  • the mRNA amount is measured by a known method, for example, as a probe, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 2, 2, Northern hybridization using a nucleic acid containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 38 or a part thereof, or as a primer SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, sequence SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, or SEQ ID NO: 38 can do.
  • the expression of the gene in the case of (ii) (addition of test compound) is about 20% or more, preferably 30% or more, more preferably compared to the case of (i) (no addition of test compound).
  • the test compound that promotes about 50% or more can be selected as the compound that promotes the expression of the gene used in the present invention.
  • the transcriptional activity is measured by a known method, for example, DNA containing a DNA sequence recognized by the protein used in the present invention, a reporter gene (eg, 1 ac Z, alkaline phosphatase, luciferase, etc.) Can be performed using the activity of the repo overnight as an indicator, or according to a method such as measuring the amount of a gene or its product that induces the expression of the protein in a cell, or a method analogous thereto. can do.
  • the activity or function of the protein used in the present invention in the case of (ii) (addition of test compound) is about 20% or more compared to the case of (i) (no addition of test compound).
  • a test compound that promotes preferably 30% or more, more preferably about 50% or more can be selected as a compound that promotes the activity or function of the protein used in the present invention.
  • the cell having the ability to produce the protein used in the present invention may be, for example, a host transformed with a vector containing a DNA encoding the protein used in the present invention (character Convertibles) are used.
  • a host for example, animal cells such as COS 7 cells, CHO cells, HEK293 cells, and yeasts are preferably used.
  • a transformant in which the protein used in the present invention is expressed by culturing by the method described above is preferably used.
  • the method for culturing cells capable of expressing the protein used in the present invention is the same as the method for culturing transformants used in the present invention.
  • Test compounds used in the screening method of the present invention include, for example, peptides, proteins, antibodies, non-peptide compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, plasma, etc. These compounds may be novel compounds or known compounds.
  • the test compound may form a salt.
  • the salt of the test compound include metal salts, ammonium salts, salts with organic salts, salts with inorganic acids, salts with organic acids, basic or acidic amino acids.
  • the metal salt include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt; alkaline earth metal salts such as calcium salt, magnesium salt and barium salt; aluminum salt and the like.
  • salts with organic bases include, for example, trimethylamine, triethylamine, pyridine, picoline, 2,6 lutidine, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, cyclohexylamine, dicyclohexylamine, N , N'-dibenzylethylenediamine and the like.
  • salts with inorganic acid include salts with hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, sulfuric acid, phosphoric acid and the like.
  • salts with organic acids include formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, benzoic acid, fuuric acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citrate, and succinic acid. And salts with malic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid and the like.
  • salts with basic amino acid include salts with arginine, lysine, ornithine and the like
  • preferable examples of the salt with acidic amino acid include, for example, aspartic acid, glutamic acid and the like. Salt.
  • physiologically acceptable salts are preferred.
  • inorganic compounds such as alkali metal salts (eg, sodium salts, potassium salts, etc.) and alkaline earth metal salts (eg, calcium salts, magnesium salts, barium salts, etc.) when the compound has an acidic functional group
  • alkali metal salts eg, sodium salts, potassium salts, etc.
  • alkaline earth metal salts eg, calcium salts, magnesium salts, barium salts, etc.
  • organic acids such as taric acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, succinic acid, succinic acid, methanesulfonic acid, and P-toluenesulfonic acid.
  • the screening kit of the present invention contains a protein used in the present invention, a polynucleotide encoding the protein used in the present invention, or a cell having the ability to produce the protein used in the present invention.
  • salt of a compound or a salt thereof obtained by using the screening method or screening kit of the present invention
  • the same salt as the protein salt used in the present invention described above can be used.
  • the compound or salt thereof obtained using the screening method or screening kit of the present invention is useful, for example, as a preventive / therapeutic agent for non-small cell lung cancer and / or a relapse preventive agent.
  • a preventive, therapeutic or relapse preventive agent when used as a preventive, therapeutic or relapse preventive agent as described above, it can be formulated according to conventional means.
  • tablets, capsules, elixirs, microcapsules, sterile solutions, suspensions and the like can be used.
  • the above-mentioned compound or a salt thereof is used as the above-mentioned prophylactic / therapeutic agent, it can be formulated according to conventional means.
  • tablets, capsules, elixirs, microcapsules, sterile solutions, suspensions and the like can be used.
  • orally as a sugar-coated tablet, capsule, elixir, microcapsule as needed, or aseptic solution with water or other pharmaceutically acceptable liquid, or suspension It can be used parenterally in the form of injections such as suspensions.
  • the amount of active ingredient in these formulations should be such that an appropriate dose in the indicated range is obtained.
  • binders such as gelatin, corn starch, tragacanth, gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, corn starch, gelatin, alginic acid, etc.
  • a bulking agent such as magnesium stearate
  • a sweetener such as sucrose, lactose or saccharin
  • a flavoring agent such as peppermint, cocoa oil or cheri.
  • the type material can further contain a liquid carrier such as fats and oils.
  • Sterile compositions can be formulated according to conventional pharmaceutical practice, such as dissolving or suspending the active substance in a vehicle such as water for injection, naturally occurring vegetable oils such as sesame oil and coconut oil.
  • aqueous solutions for injection include physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants (for example, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.).
  • Auxiliary agents such as alcohol (eg, ethanol), polyalcohol (eg, propylene glycol, polyethylene glycol, etc.), nonionic surfactants (eg, polysorbate 80 TM, HC0150) Etc.) etc.
  • oily liquid examples include sesame oil and soybean oil, and may be used in combination with benzyl benzoate, benzyl alcohol or the like as a solubilizer.
  • Buffers eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer, etc.
  • soothing agents eg, benzalkonium chloride, pro-hydrochloride-in, etc.
  • stabilizers eg, human serum albumin, polyethylene glycol, etc.
  • a preservative for example, benzyl alcohol, phenol, etc.
  • an antioxidant and the like may be blended.
  • the prepared injection is usually filled in a suitable ampoule. The preparations obtained in this way are safe and low toxic.
  • humans or other warm-blooded animals eg mice, rats, rabbits, hidges, bushes, bushes, horses, birds, cats, dogs) , Monkeys, chimpanzees, etc.
  • the dose of the compound or its salt varies depending on its action, target disease, administration subject, administration route, etc., for example, the compound or its salt is orally administered for the purpose of preventing recurrence of non-small cell lung cancer. In general, in adults (assuming 60 kg body weight), about 0.1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1. Administer 0 to 20 mg.
  • the single dose of the compound or its salt varies depending on the subject of administration, target disease, and the like.
  • the compound or a salt thereof when administered to an adult (as 60 kg) in the form of an injection for the purpose of preventing recurrence of non-small cell lung cancer, the compound or the salt thereof is about 0.0 per day.
  • About 1 to 3 O mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 1 O mg is preferably administered by intravenous injection. In the case of other animals, an amount converted per 60 kg can be administered.
  • the present invention relates to a non-human DNA having an exogenous DNA used in the present invention (hereinafter abbreviated as the exogenous DNA of the present invention) or its mutant DNA (sometimes abbreviated as the exogenous mutant DNA of the present invention). ⁇ Provide mammals.
  • a non-human mammal having an exogenous DNA of the present invention or a mutant DNA thereof is an embryo containing an unfertilized egg, a fertilized egg, a sperm and a progenitor cell thereof.
  • the calcium phosphate method, electric pulse method, lipo can be produced by transferring the target DNA by the fusion method, coagulation method, microinjection method, particle gun method, DEAE-dextran method, etc.
  • the target exogenous DNA of the present invention can be transferred to somatic cells, living organs, tissue cells, etc., and can be used for cell culture, tissue culture, etc.
  • the non-human transgenic animal of the present invention can also be produced by fusing the above-mentioned embryo cells with a known cell fusion method.
  • non-human mammals examples include ushi, buyu, hidge, goat, usagi, inu, cat, guinea pig, hamster, mouse and rat.
  • rodents especially mice (for example, C57B LZ6 strain, DBA 2 strain, etc.
  • Examples of the “mammal” in the recombinant vector that can be expressed in mammals include humans in addition to the above non-human mammals.
  • the exogenous DNA of the present invention is not the DNA of the present invention inherently possessed by a non-human mammal but the DNA of the present invention once isolated and extracted from the mammal.
  • the base sequence of the original DNA of the present invention has been mutated (for example, mutation, etc.), specifically, addition of a base, deletion, placement on another base. DNA that has undergone conversion is used, and abnormal DNA is also included.
  • the abnormal DNA means a DNA that expresses an abnormal protein of the present invention, and for example, a DNA that expresses a protein that suppresses the function of the normal protein of the present invention is used.
  • the exogenous DNA of the present invention may be derived from mammals of the same or different species as the subject animal.
  • a promoter that can be expressed in animal cells.
  • the human DNA of the present invention it is derived from various mammals (usagi, inu, cat, guinea pig, hams, rat, mouse, etc.) having the DNA of the present invention having high homology to this.
  • This DNA is constructed by microinjecting a DNA construct (for example, vector) conjugated with human DNA of the present invention downstream of various promoters capable of expressing DNA into a fertilized egg of a target mammal, for example, a mouse fertilized egg.
  • a DNA-transferred mammal that highly expresses the DNA of the invention can be produced.
  • Expression vectors for the protein of the present invention include plasmids derived from E. coli, plasmids derived from Bacillus subtilis, plasmids derived from yeast, bacteriophages such as lambda phage, retroviruses such as Moroni leukemia virus, vaccinia viruses Alternatively, animal viruses such as baculovirus are used. Of these, plasmids derived from Escherichia coli, plasmids derived from Bacillus subtilis or plasmids derived from yeast are preferably used.
  • the above-mentioned promotion of DNA expression regulation includes, for example, (i) viruses derived from viruses (eg, simian virus, cytomegalovirus, Moroni leukemia virus, JC virus, breast cancer virus, poliovirus, etc.) Promoters of NA, (ii) Promoters derived from various mammals (human, rabbit, dog, cat, guinea pig, hams, rat, mouse, etc.), eg albumin, insulin II, uroplakin II, Eras Erythropoietin, endothelin, Muscle creatine kinase, glial fibrillary acidic protein, daryuthione S— ⁇ lan spherase, platelet-derived growth factor i6, keratin Kl, 1 ⁇ 10 ⁇ 1:14, collagen types I and II, cyclic AMP dependence Protein kinase j6 I subunit, dystrophin, tartrate-resistant alfa phosphatase, atrial sodium diuretic factor
  • the vector preferably has a sequence that terminates transcription of the target mRNA in a DNA-transferred mammal (generally referred to as “termine overnight”).
  • a DNA-transferred mammal generally referred to as “termine overnight”.
  • each DN derived from viruses and various mammals The sequence A can be used, and the SV40 terminator of simian virus is preferably used.
  • the splicing signal of each DNA, the enhancer region, a part of the intron of eukaryotic DNA, etc. 5 'upstream of the promoter region, between the promoter region and the translation region Alternatively, it can be linked 3 'downstream of the translation region, depending on the purpose.
  • the normal translation region of the protein of the present invention includes livers, kidneys, thyroid cells, fibroblasts derived from humans or various mammals (such as rabbits, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, rats, mice, etc.) and commercially available DNA.
  • fibroblasts derived from humans or various mammals (such as rabbits, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, rats, mice, etc.)
  • genomic DNA obtained from the various genomic DNA libraries, or liver, kidney, thyroid cells
  • Complementary DNA prepared from fibroblast-derived RNA by a known method can be obtained as a raw material.
  • exogenous abnormal DNA can be obtained by preparing a translation region obtained by mutating the translation region of a normal protein obtained from the above cells or tissues by a point mutagenesis method.
  • the translation region can be prepared as a DNA construct that can be expressed in a metastatic animal by a conventional DNA engineering technique in which it is linked downstream of the promoter and optionally upstream of the transcription termination site.
  • the transfer of the exogenous DNA of the present invention at the fertilized egg cell stage is ensured to be present in all germ cells and somatic cells of the subject mammal.
  • the presence of the exogenous DNA of the present invention in the germ cells of the produced animal after the transfer of DNA means that all the progeny of the producing animal have the exogenous DNA of the present invention in all the germ cells and somatic cells. It means holding.
  • the offspring of this type of animal that inherited the exogenous DNA of the present invention has the exogenous DNA of the present invention in all of its germ cells and somatic cells.
  • the non-human mammal to which the exogenous normal DNA of the present invention has been transferred is confirmed to stably retain the exogenous DNA by mating, and subcultured in a normal breeding environment as the DNA-bearing animal. Can be reared.
  • exogenous DNA of the present invention is transferred at the fertilized egg cell stage to be excessively present in all germ cells and somatic cells of the subject mammal.
  • Excessive exogenous DNA of the present invention is present in the germ cells of the animal after DNA transfer because all of the offspring of the produced animal have excess of the exogenous DNA of the present invention in all the germ cells and somatic cells. It means having.
  • the offspring of this type of animal that has inherited the exogenous DNA of the present invention has an excess of the exogenous DNA of the present invention in all of its germ cells and somatic cells.
  • the non-human mammal having the normal DNA of the present invention has a high expression of the normal DNA of the present invention, and finally promotes the function of the endogenous normal DNA, thereby finally producing the protein of the present invention. It can develop hyperfunction and can be used as a model animal for the disease state. For example, by using the normal non-human transgenic animal of the present invention, hyperfunction of the protein of the present invention or diseases associated with the protein of the present invention are used. It is possible to elucidate the pathologic mechanism of the patient and investigate the treatment method for these diseases. Moreover, since the mammal of the present invention to which the exogenous normal DNA of the present invention has been transferred expresses the protein of the present invention, it can be used in screening tests for therapeutic drugs for diseases associated with the protein of the present invention. It is.
  • PHG dishes, PL0D2, TUBA2, PML, F13A AIF1, SM1, S100A2, AQPL PAFAH1B3, and sputum are upregulated in patients with recurrent non-small cell lung cancer.
  • the salts, and the compounds or salts thereof that suppress the activity or function of these proteins are useful as preventive / therapeutic agents for non-small cell lung cancer and / or preventive agents for recurrence.
  • FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 L C0L9A2, FAM13AL DLK 1 are upregulated in non-relapsed patients with non-small cell lung cancer.
  • a compound or a salt thereof that promotes the activity or function of the protein is useful as an agent for preventing / treating non-small cell lung cancer and / or preventing recurrence. Therefore, mammals transferred with exogenous normal DNA encoding FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 K C0L9A2, FAM13A1 or (and) DLK 1 are useful for screening the compound or its salts. .
  • the non-human mammal having the exogenous abnormal DNA of the present invention is confirmed to stably retain the exogenous DNA by mating, and is subcultured in the normal breeding environment as the DNA-bearing animal. I can do it.
  • the target foreign DNA can be incorporated into the aforementioned plasmid and used as a raw material.
  • a DNA construct with a promoter can be produced by ordinary DNA engineering techniques. Transfer of the abnormal DNA of the present invention at the fertilized egg cell stage is ensured to be present in all germ cells and somatic cells of the target mammal.
  • the presence of the abnormal DNA of the present invention in the germ cell of the produced animal after DNA transfer means that all the offspring of the produced animal have the abnormal DNA of the present invention in all of the germ cells and somatic cells.
  • the present invention Descendants of this type of animal that have inherited the exogenous DNA of the present invention have the abnormal DNA of the present invention in all of their germ cells and somatic cells.
  • the non-human mammal having the abnormal DNA of the present invention has a high expression of the abnormal DNA of the present invention, and finally inhibits the function of the endogenous normal DNA to inhibit the protein of the present invention. It can become a functional inactive refractory disease and can be used as a disease model animal. For example, by using the abnormal non-human transgenic animal of the present invention, it is possible to elucidate the pathological mechanism of the functional inactive refractory of the protein of the present invention and to examine a method for treating this disease.
  • the abnormal DNA high-expressing animal of the present invention is capable of inhibiting the function of the normal protein by the abnormal protein of the present invention in the functional inactive refractory disease of the protein of the present invention.
  • Model since the mammal having transferred the foreign abnormality DNA of the present invention has an increased symptom of the protein of the present invention, it can be used for a therapeutic drug screening test for the protein of the present invention or its functional inactive refractory disease. It is.
  • the other two non-human transgenic animals of the present invention can be used as, for example,
  • the mutant protein of the present invention can be isolated and purified, and its antibody can be produced. Further, the non-human transgenic animal of the present invention is used to clinically treat diseases associated with the protein of the present invention, including functional inactive refractory diseases of the protein of the present invention. Symptoms can be examined, more detailed pathological findings in each organ of the disease model related to the protein of the present invention can be obtained, development of new treatment methods, and further secondary disease caused by the disease Can contribute to research and treatment.
  • each organ is taken out from the non-human transgenic animal of the present invention, and after minced, free DNA transfer cells can be obtained, cultured or systematized by a proteolytic enzyme such as trypsin. Is possible.
  • the protein-producing cells of the present invention can be identified, their relationship with apoptosis, differentiation or proliferation, or their signal transduction mechanisms can be investigated, and their abnormalities can be investigated. It becomes an effective research material for.
  • the non-human transgenic animal of the present invention in order to develop a therapeutic agent for the diseases related to the protein of the present invention, including the functional inactive refractory of the protein of the present invention, using the non-human transgenic animal of the present invention, It is possible to provide an effective and rapid screening method for a therapeutic drug for a disease by using a test method and a quantitative method.
  • using the non-human transgenic animal of the present invention or the exogenous DNA expression vector of the present invention it is possible to examine and develop a DNA therapy for a disease associated with the protein of the present invention.
  • the present invention provides a non-human mammal embryonic stem cell in which the DNA of the present invention is inactivated and the DNA expression-deficient non-human mammal of the present invention.
  • the DNA is inactivated by introducing a reporter gene (eg, E. coli-derived 8-galactosidase gene), and the reporter gene can be expressed under the control of a promoter for the DNA of the present invention.
  • a reporter gene eg, E. coli-derived 8-galactosidase gene
  • the reporter gene can be expressed under the control of a promoter for the DNA of the present invention.
  • a screening method for a compound or a salt thereof that promotes or inhibits promoter activity against the DNA of the present invention which comprises administering a test compound to the animal described in item 7) and detecting the expression of a reporter gene, etc. I will provide a.
  • the non-human mammal embryonic stem cell in which the DNA of the present invention is inactivated refers to suppressing the DNA expression ability by artificially adding mutation to the DNA of the present invention possessed by the non-human mammal, or By substantially losing the activity or function of the protein of the present invention encoded by the DNA, the DNA has substantially no ability to express the protein of the present invention (hereinafter referred to as the knockout of the present invention).
  • Non-human mammalian embryonic stem cells hereinafter abbreviated as ES cells).
  • non-human mammal those described above are used.
  • the knockout DNA of the present invention may be prepared by shifting the reading frame of codons or destroying the function of the promoter or exon.
  • Non-human mammalian embryonic stem cell in which DNA of the present invention is inactivated include, for example, The DNA of the present invention possessed by a non-human mammal to be isolated is isolated and a neomycin resistance gene, a drug resistance gene typified by a hygromycin resistance gene, or 1 ac Z (one galactosidase gene)
  • the ability to disrupt exon function by inserting a reporter gene or the like represented by ramphenicol acetyltransferase gene) or a DNA sequence that terminates gene transcription at the intron part between exons (eg, polyA Insert the additional signal, etc.), and make it impossible to synthesize complete mRNA.
  • a DNA strand having a DNA sequence constructed in the above (hereinafter abbreviated as “getting vector 1”) is introduced into the chromosome of the animal by, for example, homologous recombination, and the obtained ES cells are used in the present invention.
  • Southern hybridization using DNA sequences on or near DNA as probes Analysis or PCR analysis using the DNA sequence on the evening-getting vector and the DNA sequence of the neighboring region other than the DNA of the present invention used for the production of the evening-getting vector as primers. It can be obtained by sorting ES cells.
  • the original ES cell for inactivating the DNA of the present invention by the homologous recombination method or the like for example, those already established as described above may be used, or the known Evans and Kaufman method may be used.
  • a newly established one may be used.
  • mouse ES cells currently 129 ES cells are generally used, but since the immunological background is unclear, an alternative and purely immunologically genetic background
  • BDF 1 mice F 1 between C 57 BLZ6 and DBAZ2 in which the number of eggs collected from C57BL / 6 mice and C 57BLZ6 was reduced by crossing with DBAZ2
  • the ones established using can also be used well.
  • BDF1 mice have the advantage of having a large number of eggs collected and strong eggs, and because they have C 57 BLZ6 mice in the background, the ES cells obtained using these mice can be used to create pathological model mice.
  • the genetic background can be advantageously replaced with C 57 BLZ 6 mice.
  • blastocysts at the 3.5th day after fertilization are generally used, but in addition to this, an 8-cell embryo is collected and cultured to the blastocyst for efficient use. Early embryos can be obtained. '
  • male ES cells are usually more convenient for producing germline chimeras.
  • One example of a method for determining the sex of ES cells is a method of amplifying and detecting a gene in the sex-determining region on the Y chromosome by PCR.
  • this method conventionally, for example G-banding method, requires about 10 6 cells for karyotype analysis, since suffices ES cell number of about 1 colony (about 50), culture
  • Initial selection of ES cells in the initial stage can be performed by male / female discrimination, and male cells can be selected at an early stage, which can greatly reduce labor in the initial stage of culture.
  • the secondary selection can be performed, for example, by confirming the number of chromosomes by the G-banding method.
  • the embryonic stem cell line obtained in this way is usually very proliferative, but it tends to lose its ability to develop on its own, so it needs to be subcultured carefully.
  • a suitable feeder cell such as STO fibroblasts (preferably 5% carbon dioxide, 95% air or 5%
  • trypsin ZE DTA solution usually 0.0 0 1 0.5%).
  • Such passage is usually performed every 1 to 3 days. At this time, cells should be observed, and if morphologically abnormal cells are found, the cultured cells should be discarded.
  • ES cells can be cultured in various types of cells such as parietal muscle, visceral muscle, and myocardium by monolayer culture to high density or suspension culture until a cell agglomeration is formed under appropriate conditions. It is possible to differentiate [MJ Evans and MH
  • the DNA-expressing incomplete cell of the present invention obtained by differentiating the ES cell of the present invention is the protein of the present invention in vitro. This is useful in cell biology studies.
  • the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention can be distinguished from normal animals by measuring the mRNA amount of the animal using a known method and comparing the expression level indirectly. .
  • non-human mammal those similar to the above can be used.
  • the DNA expression-deficient non-human mammal of the present invention is prepared, for example, as described above.
  • the introduction of the targeting vector into mouse embryonic stem cells or mouse egg cells, and introduction of the DNA sequence of the targeting vector of the present invention inactivated by DNA homologous recombination results in mouse embryonic stem cells or mouse egg cells.
  • the DNA of the present invention can be knocked out by homologous recombination that replaces the DNA of the present invention on the chromosome.
  • Cells in which the DNA of the present invention has been knocked out are used as a Southern hybridization analysis or DNA sequence on a targeting vector using the DNA sequence of or near the DNA of the present invention as a probe, and an evening targeting vector. It can be determined by analysis by PCR using primers derived from DNA sequences in the neighboring region other than the DNA of the present invention derived from the mouse.
  • a cell line in which the DNA of the present invention is inactivated is cloned by gene homologous recombination, and the cells are treated at a suitable time, for example, at the 8-cell stage.
  • the produced animal is a chimeric animal composed of both normal cells having the DNA locus of the present invention and artificially altered cells having the DNA locus of the present invention.
  • all tissues are artificially mutated from the population obtained by mating such a chimeric individual with a normal individual. It is obtained by selecting an individual composed of cells having the added DNA locus of the present invention, for example, by determining the coat color.
  • the individual thus obtained is usually an individual with deficient hetero-expression of the protein of the present invention, and individuals who have deficient hetero-expression of the protein of the present invention are mated with each other from their offspring. A quality homo-deficient individual can be obtained.
  • transgenic non-human mammals When egg cells are used, for example, transgenic non-human mammals can be obtained in which a getting vector is introduced into the chromosome by injecting a DNA solution into the nucleus of the egg cell by microinjection. Compared with transgenic non-human mammals of the present invention, it is obtained by selecting those having mutations in the DNA locus of the present invention by gene homologous recombination.
  • an individual in which the DNA of the present invention is knocked out can be reared in a normal breeding environment after confirming that the animal individual obtained by mating has also been knocked out.
  • germline acquisition and retention may be followed in accordance with conventional methods. That is, by mating male and female animals possessed by the inactivated DNA, homozygous animals having the inactivated DNA in both homologous chromosomes can be obtained. The obtained homozygous animals can be efficiently obtained by rearing the mother animal in a state where there are one normal individual and multiple homozygous animals. By crossing male and female heterozygous animals, homozygous and heterozygous animals having the inactivated DNA are bred and passaged.
  • the non-human mammal embryonic stem cell in which the DNA of the present invention is inactivated is very useful for producing the non-human mammal deficient in the expression of DNA of the present invention.
  • the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention lacks various biological activities that can be induced by the protein of the present invention
  • the non-human mammal having a disease caused by inactivation of the biological activity of the protein of the present invention Since it can be a model, it is useful for investigating the causes of these diseases and studying treatments.
  • the non-human mammal with dna expression deficiency of the present invention can be used for screening for compounds having a therapeutic / preventive effect on diseases caused by deficiency or damage of the DNA of the present invention.
  • the present invention relates to a deficiency or damage of the DNA of the present invention, which comprises administering a test compound to the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention and observing and measuring changes in the animal.
  • a method for screening a compound or a salt thereof having a therapeutic / preventive effect against an underlying disease is provided.
  • Examples of the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention used in the screening method include those described above.
  • test compounds include peptides, proteins, antibodies, non-peptide compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, plasma, and the like. It may be a novel compound or a known compound.
  • a non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention is treated with a test compound, compared with an untreated control animal, and changes in the organs, tissues, disease symptoms, etc. of the animal are indicated.
  • the therapeutic / preventive effect of a test compound can be tested as a standard.
  • test compound for example, oral administration and intravenous injection are used, and can be appropriately selected according to the symptom of the test animal, the nature of the test compound, and the like.
  • dose of the test compound can be appropriately selected according to the administration method, the nature of the test compound, and the like.
  • the compound obtained by using the screening method is a compound selected from the above-mentioned test compounds, and has a therapeutic / preventive effect on diseases caused by deficiency or damage of the protein of the present invention. It can be used as a medicine for safe and low toxicity treatment and prevention. Furthermore, compounds derived from the compounds obtained by the above screening can be used in the same manner.
  • the compound obtained by the screening method may form a salt.
  • the salt of the compound include physiologically acceptable acids (eg, inorganic acids, organic acids, etc.) and bases (eg, alkalis).
  • a salt with a metal etc. is used, and a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable.
  • such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid).
  • salts with succinic acid, tartaric acid, citrate, malic acid, succinic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc. include succinic acid, tartaric acid, citrate, malic acid, succinic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).
  • the medicament containing the compound obtained by the screening method or a salt thereof can be produced in the same manner as the aforementioned medicament containing the protein of the present invention.
  • the preparations obtained in this way are safe and have low toxicity. Inu, monkeys, etc.).
  • the dose of the compound or a salt thereof varies depending on the target disease, administration subject, administration route, etc. For example, when the compound is administered orally, it is generally not used in adults (with a body weight of 60 kg). In patients with small cell lung cancer, the compound is administered at about 0.1 to: L 0 O mg, preferably about 1.0 to 5 O mg, more preferably about 1.0 to 2 O mg per day. When administered parenterally, the single dose of the compound varies depending on the subject of administration, target disease, etc.
  • the compound is usually administered in the form of an injection for non-small cells of an adult (as 60 kg).
  • the compound per day Is conveniently administered by intravenous injection at about 0.01-3 Omg, preferably about 0.1-2 Omg, more preferably about 0.1-1 Omg.
  • an amount converted per 60 kg can be administered.
  • the present invention promotes or inhibits the activity of a promoter for the DNA of the present invention, which comprises administering a test compound to a non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention and detecting the expression of a reporter gene.
  • a method for screening a compound or a salt thereof is provided.
  • the DNA expression-deficient non-human mammal of the present invention is inactivated by introducing the reporter gene into the DNA of the present invention-deficient non-human mammal.
  • a gene capable of expressing the reporter gene under the control of a promoter for the DNA of the present invention is used.
  • test compound examples are the same as described above.
  • iS-galactosidase gene (1acZ), soluble alkaline phosphatase gene, luciferase gene and the like are preferable.
  • the reporter gene exists under the control of the promoter for DNA of the present invention. By tracing the expression of a substance coded by one gene, the activity of the promoter can be detected.
  • the tissue of the present invention is originally expressed in the tissue expressing the protein of the present invention.
  • 8-galactosidase is expressed instead of protein. Therefore, for example, by staining with a reagent that is a substrate for jS-galactosidase, such as 5-promo 4 chloro 3 indolyl 1 galactobilanoside (X-gal), It is possible to observe the expression state of the protein in the animal body.
  • the protein-deficient mouse of the present invention or a tissue section thereof is fixed with dartalaldehyde or the like, and phosphate buffered physiological After washing with saline solution (PBS), react with staining solution containing X-ga 1 at room temperature or around 37 ° C for about 30 minutes to 1 hour, and then tissue preparation is treated with I mM ED TA / PBS solution. By washing with, the j6-galactosidase reaction can be stopped and the coloration observed.
  • mRNA encoding 1 ac Z may be detected according to a conventional method.
  • the compound obtained by using the screening method or a salt thereof is a compound selected from the test compounds described above, and is a compound that promotes or inhibits promoter activity against the DNA of the present invention.
  • the compound obtained by the screening method may form a salt.
  • the salt of the compound include physiologically acceptable acids (eg, inorganic acids, organic acids) and bases (eg, alkali metals). And the like, and physiologically acceptable acid addition salts are particularly preferred.
  • physiologically acceptable acid addition salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid), or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid). Acid, tartaric acid, citrate, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid) and the like are used.
  • inorganic acids eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid
  • organic acids eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succin
  • FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, E ⁇ 4, FLJ2053 K C0L9A2, and FAM13AK DLK 1 are upregulated in non-small cell lung cancer non-relapsed patients, and therefore have promoter activity against DNA encoding these proteins.
  • the accelerating compound or a salt thereof is useful, for example, as a medicine such as a preventive / therapeutic agent for non-small cell lung cancer and / or a preventive agent for recurrence.
  • P thigh, P image, thigh 2, PML, F13A1, AIFK SAAL S thigh 2, AQPL PAFAH1B3, and KYNU are upregulated in patients with non-small cell lung cancer recurrence.
  • a compound that inhibits promoter activity or a salt thereof is useful as a pharmaceutical agent such as a preventive / therapeutic agent for non-small cell lung cancer and / or a preventive agent for recurrence.
  • a pharmaceutical containing the compound obtained by the screening method or a salt thereof can be produced in the same manner as the pharmaceutical containing the protein of the present invention or a salt thereof.
  • the preparations thus obtained are safe and low toxic.
  • humans or other mammals eg rat, mouse, guinea pig, usagi, hidge, puyu, ushi, horse, Cats, dogs, monkeys, etc.
  • the dose of the compound or a salt thereof varies depending on the target disease, administration subject, administration route, etc.For example, FLJ10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FU2053
  • FAM13A1 or (and) a compound that promotes the promoteric activity against DNA encoding DLK1 generally in adults (with a body weight of 60 kg) non-small cell lung cancer patients per day
  • the compound is administered at about 0.1-100 mg, preferably about 1.0-50 mg, more preferably about 1.0-20 mg.
  • the single dose of the compound varies depending on the administration subject, target disease, etc.
  • the compound that promotes the promoter activity against DNA of the present invention is usually administered in the form of an injection.
  • a non-small cell lung cancer patient (as 60 kg) about 0.01-30 mg, preferably about 0.1-2 Omg, more preferably about 0.1-1 Omg per day. Is conveniently administered by intravenous injection. In the case of other animals, the amount converted per 6 O kg can be administered.
  • the compound when orally administering a compound that inhibits promoter activity against DNA encoding P thigh, P ⁇ , ⁇ 2, PML, F13AL AIFK SAAK S thigh 2, AQPL PAFAH1B3 or (and) KYNU, In adults (as 6 O kg body weight) non-small cell lung cancer patients, the compound is about 0.1-100 mg, preferably about 1.0-50 mg, more preferably about 1.0-20 mg per day. Administer. When administered parenterally, the single dose of the compound varies depending on the administration subject, target disease, etc. For example, a compound that inhibits the promoter activity against the DNA of the present invention is usually administered in the form of an injection (in adults).
  • the compound is about 0.01 to 30 mg per day, preferably about 0.1 to 2 Omg, more preferably about 0.1 to It is convenient to administer about 1 Omg by intravenous injection. In the case of other animals, an amount converted per 6 O kg can be administered.
  • the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention screens a compound or a salt thereof that promotes or inhibits the activity of the promoter for the DNA of the present invention. It is extremely useful in the study of the disease, and can greatly contribute to the investigation of the causes of various diseases caused by the deficiency of DNA expression of the present invention or the development of preventive / therapeutic agents.
  • genes encoding various proteins are ligated downstream thereof, and this is injected into an egg cell of an animal to produce a so-called transgenic animal (gene If an introduced animal is prepared, it is possible to specifically synthesize the polypeptide and examine its action in the living body. Furthermore, if a suitable repo gene is bound to the above promoter portion and a cell line that expresses the gene is established, it has the effect of specifically promoting or suppressing the ability of the polypeptide of the present invention to be produced in the body. It can be used as a search system for low molecular weight compounds.
  • bases, amino acids, and the like are indicated by abbreviations based on abbreviations by IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature or conventional abbreviations in the field, examples of which are described below. If amino acids may have optical isomers, the L form is indicated unless otherwise specified.
  • Y Thymine or cytosine
  • N Thymine, cytosine, adenine or guanine
  • R adenine or guanine
  • R NA Liponucleic acid
  • d ATP Deoxyadenosine triphosphate
  • dTTP Deoxythymidine triphosphate
  • GTP Deoxyguanosine triphosphate
  • CTP Deoxycytidine triphosphate
  • EDTA ethylenediamine tetraacetic acid
  • Fu r a-2 AM 1- [6-Amino-2- (5-carboxy-2-oxazolyl) -5-benzo furanisoxy] -2- (2-amino-5-methylphenoxy) -ethane-N , N, N ', N' -tetraacetic acid methyl ester tetraacetate
  • HBS S Hanks balanced salt solution
  • NMP N-methylpyrrolidone
  • the amino acid sequence of PML is shown.
  • PAFAH1B3 The amino acid sequence of PAFAH1B3 is shown.
  • the amino acid sequence of KYNU is shown.
  • PHGDH, PL0D2, and TUBA2 had high expression values (measured expression levels) in the relapse group, and FLJ 10307 and 0SBPL9 had high expression values in the non-relapse group.
  • the detection signal cal of each gene was detected in 17 cases or more using the known signal to noise method and Random Permutat.
  • the probability value of each gene was calculated by the ion method (Science, 286 ⁇ , 53 ⁇ 537, 1999). There were 1040 genes with this probability value less than 0.05.
  • FU 10307 SEQ ID NO: 2
  • PL0D2 SEQ ID NO: 6
  • 0SBPL9 SEQ ID NO: 10
  • EIF2C4 SEQ ID NO: 12
  • PML SEQ ID NO: 14
  • GeneChip data of patient ID Nos. 1 to 36 (36 cases) described in Experimental Example 1 was used to correct expression values between microarrays using GeneSpring (Silicon Genetics).
  • the expression value was corrected by a method in which the median value of all genes whose detection ion cal was determined to be Present was set to 1.
  • a gene that satisfies the condition that “the expression value in the relapse group is greater than or equal to the patient power of ⁇ or more and the expression value in all patients is 2 or less in the non-relapse group” is specified in the relapse group.
  • Genes that satisfy the condition: ⁇ There are 3 or more patients with an expression level of 3 or more in the relapse-free group and 2 or less in all patients in the relapse group '' Selected as a specific expression gene group.
  • F13A1 was highly expressed in the relapse group, and ENTPD4, FLJ2053L C0L9A2 and FAM13A1 were high in the relapse group.
  • AIF1 SEQ ID NO: 26
  • SAA1 SEQ ID NO: 28
  • FAM13A1 SEQ ID NO: 24
  • S100A2 SEQ ID NO: 30
  • COL9A2 SEQ ID NO: 22
  • AIF1 SAAl and S100A1 were highly expressed in the relapse group, and FAM13A1 and C0L9A2 were high in the relapse-free group.
  • AQP1 was highly expressed in the relapse group, and FAM13A1, FLJ2053L ENTPD4 and C0L9A2 were genes with high expression in the non-relapse group.
  • Example 3 Among the patient ID Nos. 1 to 46 (46 cases) in Table 1, 38 patients with lung cancer histological type are adenocarcinoma. Classified. In the same manner as in Example 3, a recurrent group-specific expressed gene group and a non-recurrent group-specific expressed gene group were selected.
  • the patient's recurrence FAM13A1 (SEQ ID NO: 24), AIF1 (SEQ ID NO: 26), PAFAH1B3 (SEQ ID NO: 34), C0L9A2 (SEQ ID NO: 22), KYNU (SEQ ID NO: 36), DLK1 (SEQ ID NO: 36) : 38) and SM1 (SEQ ID NO: 28) were selected.
  • AIF1, PAFAH1B3, KY ⁇ and SMI were high in the relapse group, and FAM13AL COL9A2 and DLK1 were high in the relapse group.
  • SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 1 9, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO:
  • a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 33 or SEQ ID NO: 35 has increased expression in patients with recurrent non-small cell lung cancer.
  • SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: : Suppressing the recurrence of non-small cell lung cancer by inhibiting the activity, function, or expression of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: 35
  • An antibody against the protein, a compound or salt thereof that inhibits the activity or function of the protein, a compound or salt thereof that inhibits the expression of the protein, siRNA and sRNA against the polynucleotide encoding the protein A polynucleotide comprising the full-length complementary strand of the base sequence of mRNA or a part of the base sequence thereof,
  • the protein, a polynucleotide encoding the protein, and the like include a compound or a salt thereof that inhibits the activity or function of the protein, a compound or a salt thereof that inhibits the expression of the protein, a non-small cell lung cancer Useful for screening for prophylactic 'therapeutic and / or anti-recurrence agents.
  • SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 1 1, SEQ ID NO: 1 5, SEQ ID NO: 1 7, SEQ ID NO: 2 1, SEQ ID NO: 2 3 or SEQ ID NO: 3 7 The recurrence of non-small cell lung cancer can be suppressed by promoting the activity, function, or expression of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented.
  • a compound or a salt thereof that promotes the activity or function of the protein, a compound or a salt thereof that promotes the expression of the protein, a polynucleotide that encodes the protein, and the like. Can be used as a recurrence prevention agent.
  • the polynucleotide encoding the protein, the protein, etc. includes a compound or a salt thereof that promotes the activity or function of the protein, a compound or a salt thereof that promotes the expression of the protein, prevention of non-small cell lung cancer ⁇ Useful for screening therapeutic agents and / or anti-recurrence agents.

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Abstract

An antibody directed against a protein having an amino acid sequence depicted in SEQ ID NO:3, 5, 7, 13, 19, 25, 27, 29, 31, 33 or 35, a compound capable of inhibiting the activity or function of the protein or a salt thereof, a compound capable of inhibiting the expression of the protein or a salt thereof or the like is useful as a prophylactic/therapeutic agent and (or) a recurrence-preventive agent for non-small cell lung. A protein having an amino acid sequence depicted in SEQ ID NO:1, 9, 11, 15, 17, 21, 23 or 37, DNA encoding the protein, a compound capable of promoting the activity or function of the protein or a salt thereof, a compound capable of promoting the expression of the protein or a salt thereof or the like is also useful as a prophylactic/therapeutic agent and (or) a recurrence-preventive agent for non-small cell lung. An antibody directed against the protein, DNA encoding the protein or the like is also useful as a diagnostic agent for the grade of malignancy of non-small cell lung cancer.

Description

明細書  Specification
非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および診断薬 技術分野  Non-small cell lung cancer prevention, treatment and diagnostics
本発明は、 非小細胞肺がんの予防 '治療および診断薬などに関する。 背景技術  The present invention relates to prevention and treatment of non-small cell lung cancer and diagnostic agents. Background art
近年、 cDNAマイクロアレイや DNAチップが開発され、 網羅的に遺伝子発現を解 析することが可能となった。 特にがんをはじめとする多因子疾患の遺伝子レベル の解析には有効な解析技術であり、 臨床的な観点から見た疾患、 特にがん研究を 進める上でも重要な役割を担うと考えられる。 実際に、 遺伝子発現データに基づ いて急性骨髄性白血病および急性リンパ性白血病を分類することが可能であるこ とが報告されている （Science, 286巻、 531- 537頁、 1999年） 。 また、 原発がん の転移に関与すると考えられる遺伝子群が報告されている （Nature Genet ics, 33巻、 49- 54頁、 2003年） 。 その他、 肺がん患者由来のサンプルを用いて樹^図 解析を行い、 腺癌 （adenocarcinoma) をいくつかの亜群に分類し、 各亜群間の生 存期間について検討したところ、 有意に差が生じたことが報告されている （PNAS、 98巻、 13784- 13789頁、 画年、 PNAS、 98卷、 13790-13795頁、 2001年) 。 腺癌 (adenocarcinoma) において、 喫煙の有無と予後の良悪について Laser Capture Microdissect ion法と cDNAマイクロアレイを組み合わせた解析結果が報告されて いる (Cancer Research, 62卷、 3244- 3250頁、 2002年) 。 また、 非小細胞肺がん サンプルの cDNAマイクロアレイ解析とリアルタイム RT- PCR法とを組み合わせるこ とにより、 診断マーカ一を探す試みも報告されている （Lung Cancer, 46巻、 197- 204頁、 2004年) 。  In recent years, cDNA microarrays and DNA chips have been developed, enabling comprehensive analysis of gene expression. In particular, it is an effective analytical technique for analyzing the genetic level of multifactorial diseases such as cancer, and is considered to play an important role in the progression of cancer research, especially cancer research. In fact, it has been reported that it is possible to classify acute myeloid leukemia and acute lymphoblastic leukemia based on gene expression data (Science, 286, 531-537, 1999). In addition, a group of genes thought to be involved in metastasis of primary cancer has been reported (Nature Genetics, 33, 49-54, 2003). In addition, tree diagram analysis was performed using samples from patients with lung cancer, and adenocarcinoma was classified into several subgroups, and the survival period between each subgroup was examined. (PNAS, Vol. 98, pages 13784-13789, year of painting, PNAS, 98 卷, pages 13790-13795, 2001). In adenocarcinoma, the analysis result of the combination of Laser Capture Microdissect ion method and cDNA microarray has been reported for the presence or absence of smoking and the prognosis (Cancer Research, 62 卷, 3244-3250, 2002). An attempt to find a diagnostic marker by combining cDNA microarray analysis of non-small cell lung cancer samples with real-time RT-PCR has also been reported (Lung Cancer, 46, 197-204, 2004). .
3-phosphoglycerate dehydrogenase (以下、 PHGDHと略することもある） は、 ラットの 3- PHGDH遺伝子のヒトホモログとして単離された遺伝子である （RefSeQ Accession No. NM006623； Gene, 245巻、 193- 201頁、 2000年） 。 L- serine生合成 経路の最初の段階で 3- phosphoglycerateを酸化して、 3- phosphohydroxypyruvate を生成する酵素である (Trends Biochem. Sci,、 11巻、 241- 243頁、 1986年） 。 また、 ノックアウトマウス作出を試みた報告では、 マウス交配後 13. 5日の段階で 死ぬこと、 および神経系の発達が未熟であることが報告されている （The Journal of Biological Chemistry, 279巻、 3573- 3577頁、 2004年) 。 また、 こ の遺伝子は、 大腸がん、 白血球系およびリンパ球系のがん細胞株で発現亢進して いることが知られている (Gene, 245巻、 193- 201頁、 2000年） 。 3-phosphoglycerate dehydrogenase (hereinafter sometimes abbreviated as PHGDH) is a gene isolated as a human homolog of the rat 3-PHGDH gene (RefSeQ Accession No. NM006623; Gene, 245, 193-201, the year of 2000) . It is an enzyme that oxidizes 3-phosphoglycerate to produce 3-phosphohydroxypyruvate in the first stage of the L-serine biosynthesis pathway (Trends Biochem. Sci, 11, 241-243, 1986). In addition, in a report of trying to create a knockout mouse, It has been reported that they die and the development of the nervous system is immature (The Journal of Biological Chemistry, 279, 3573-3577, 2004). This gene is known to be upregulated in colorectal cancer, leukocyte and lymphocyte cancer cell lines (Gene, 245, 193-201, 2000).
Procol lagen-lys ine 2-oxoglutarate 5-di oxygenase 2 (以下、 PL0D2と略する こともある） は、 コラーゲン生合成に関わる新規の酵素としてクローニングされ た。 コラーゲン生合成に関わる酵素として既に知られているリジン水酸化酵素 (lysyl hydroxylase) の新規ファミリ一であり、 リジン水酸化酵素活性がある ことが報告されている （ReiSeq Access ion No. 丽 000935 ； The Journal of Biological Chemistry, 272卷、 6831 - 6834頁、 1997年) 。 ピリジノリンは、 コラ 一ゲン同士を架橋して繊維形成に関与する分子として不可欠であるが、 ブラック 症候群 （Bruck Syndrome) という疾患においては、 骨コラーゲン中のピリジノリ ンが欠損している。 このブラック症候群患者において、 PL0D2変異が観察された こと、 またピリジノリンはテロペプチド （te lopept ide) のリジン残基が水酸化 されることによって生成されることから、 PL0D2がピリジノリン生成を介してコ ラーゲンの構造維持に重要であるという報告もある （The Journal of Biological Chemistry, 278巻、 40967- 40972頁、 2003年) 。 また、 ヒトの固形が んでは低酸素状態が惹起されていることが知られているが、 ヒトの種々のがん細 胞株を低酸素状態にした場合に発現量が上昇する遺伝子のひとつとして報告され ている （Journal Nat ional Cancer Inst i tute, 93巻、 1337-1343頁、 2001年） 。 微小管は、 細胞骨格であり、 チューブリン （tubul in) というタンパク質のァ ルファ （alpha) およびベータ （beta) のへテロダイマ一によって構成されてお り、 夕キソ一ルなどの抗がん剤のターゲットとして広く知られている （Oncogene, 22巻、 7280- 7295頁、 2003年） 。 Alpha-tubul in 2 (以下、 TUBA2と略することも ある） は、 チューブリンのアルファファミリ一に属する遺伝子としてクローニン グされた (RefSea Access ion No. 匪 0060001； Genomics , 47巻、 125-130頁、 1998年) 。  Procol lagen-lysine 2-oxoglutarate 5-di oxygenase 2 (hereinafter abbreviated as PL0D2) was cloned as a novel enzyme involved in collagen biosynthesis. It is a new family of lysyl hydroxylases already known as enzymes involved in collagen biosynthesis and has been reported to have lysine hydroxylase activity (ReiSeq Access ion No. 丽 000935; The Journal of Biological Chemistry, 272 卷, 6831-6834, 1997). Pyridinoline is indispensable as a molecule involved in fiber formation by cross-linking collagens, but pyridinoline in bone collagen is deficient in the disease called Black Syndrome. In this Black syndrome patient, PL0D2 mutation was observed, and pyridinoline was produced by hydroxylation of the lysine residue of telopeptide (telopept ide), so PL0D2 became a collagen through pyridinoline formation. There is also a report that it is important for the maintenance of the structure (The Journal of Biological Chemistry, 278, 40967-40972, 2003). In addition, it is known that hypoxia is induced in human solid cancers, but it is one of the genes whose expression level increases when various human cancer cell lines are hypoxic. (Journal National Cancer Institute, 93, 1337-1343, 2001). A microtubule is a cytoskeleton and is composed of the alpha and beta heterodimers of a protein called tubul in. Widely known as a target (Oncogene, Vol. 22, 7280-7295, 2003). Alpha-tubul in 2 (hereinafter sometimes abbreviated as TUBA2) was cloned as a gene belonging to the alpha family of tubulin (RefSea Access ion No. 匪 0060001; Genomics, 47, 125-130). 1998).
Proinyelocyt ic leukemia protein (以下、 PMLと略することもある) は、 急性 前骨髄性白血病において見出されている PMLとレチノイン酸受容体 a (以下、 PAR αと略することもある） の融合遺伝子の一方としてクロ一ニングされた （RefSeQ Access ion No. NM033238 ； Cel l, 66巻、 663 - 674頁、 1991年) 。 PMLは、 アポ! ^一 シスや増殖抑制活性に関わる promyelocyt ic oncogenic domainsと呼ばれる複合 体の構成成分の一つであり、 transcript ional co- act ivatorである （Nature Cel l Biology, 2巻、 review E85- E90頁、 2000年) 。 一方で、 PMLと肺がんとの関 係については、 肺がん患者で PMLの発現が減少していること （Journal Nat ional Cancer Ins t i tute, 96巻、 269- 279頁、 2004年） 、 小細胞肺がんにおいて PMLの夕 ンパク質量が減少していることが報告されている （Internat ional Journal of Cancer, 85巻、 599- 605頁、 2000年) 。 Proinyelocyt ic leukemia protein (hereinafter sometimes abbreviated as PML) is a fusion gene of PML and retinoic acid receptor a (hereinafter also abbreviated as PAR α) found in acute promyelocytic leukemia (RefSeQ Access ion No. NM033238; Cel l, 66, 663-674, 1991). PML is a component of a complex called promyelocytic oncogenic domains that is involved in apothesis and growth inhibitory activity, and is a transcript ional co-activator (Nature Cell Biology, Vol. 2, review E85). -E90, 2000). On the other hand, regarding the relationship between PML and lung cancer, the expression of PML is decreased in patients with lung cancer (Journal National Cancer Institute, 96, 269-279, 2004). It has been reported that the mass of PML is decreasing (Internatinal Journal of Cancer, Vol. 85, 599-605, 2000).
Coagulat ion factor XI I I, Al polypept ide (以下、 F13A1と略することもあ る） は、 血液凝固第 XI I I 因子 （Coagulat ion factor XI II) を構成するサブュニ ットのひとつとして同定された （PNAS、 83巻、 8024- 8028頁、 1986年） 。 血液凝 固第 XIII 因子は、 トランスダル夕ミナーゼ活性を有しており、 フイブリン塊の 安定化に関与する。 血液凝固第 XII I 因子は Aサブユニットと Bサブユニットで構 成されており、 Aサブュニッ卜に酵素活性部位がある （Refse i Access ion No. 匪— 000129) 。  Coagulat ion factor XI II, Al polypeptide (hereinafter abbreviated as F13A1), was identified as one of the subunits that make up blood coagulation factor XI II (PNAS) 83, 8024-8028, 1986). Blood coagulation factor XIII has transdalinase activity and is involved in the stabilization of fibrin clots. Blood coagulation factor XII I is composed of A subunit and B subunit, and there is an enzyme active site in A subunit (Refse i Accession No. 匪 -000129).
al lograf t inf lammatory factor 1 (以下、 AIF1と略することもある） は、 サ ィトカインおよびインターフェロンにより誘導される遺伝子である （Biochem Biophys Res Co匪 un、 228卷、 29 - 37頁、 1996年） 。 AIF1はァクチンと結合するこ とで血管平滑筋細胞の細胞移動を促進させる （Circ Res, 92巻、 1107- 1114頁、 2003年） 。  al lograft inf lammatory factor 1 (hereinafter sometimes abbreviated as AIF1) is a gene induced by cytokines and interferons (Biochem Biophys Res Coun 228, 29-37, 1996) . AIF1 promotes cell migration of vascular smooth muscle cells by binding to actin (Circ Res, 92, 1107-1114, 2003).
serum amyloid Al (以下、 SMIと略することもある） は、 serum amyloid Aフ ァミリ一のひとつである （Scand J Immunol , 34巻、 47卜 482頁、 2001年） 。 Serum amylo id Aの発現によりマトリ ックスメタ口プテアーゼ （matrix metal loprotease) が誘導される (J I匪麵1、 166巻、 17770- 17778頁、 2001年） がある。  Serum amyloid Al (hereinafter sometimes abbreviated as SMI) is one of the serum amyloid A families (Scand J Immunol, 34, 47-482, 2001). Matrix metal loprotease is induced by the expression of Serum amylo id A (JI1, 166, 17770-17778, 2001).
S100 calc ium binding prote in A2 (以下、 S100A2と略することもある） は、 S100タンパク質フアミリーのひとつで EF- hand calcium- bindingモチーフを有し ている。 S100タンパクは細胞質および核内に広く局在しており、 細胞周期の進行 と細胞の分化を調整する役割を持っている。 また、 癌抑制遺伝子として考えられ ている （RefseQ Access ion No. NMJ05978) 。 また、 組織マイクロアレイ解析法 を用いることにより、 S100A2タンパク質の発現が高いステージ I非小細胞肺がん 患者は、 生存率が低いことが示唆されている (Int J Cancer, 116巻、 285- 290頁、 2005年） 。 S100 calcium binding protein A2 (hereinafter sometimes abbreviated as S100A2) is one of S100 protein families and has EF-hand calcium-binding motif. S100 protein is widely localized in the cytoplasm and nucleus, and plays a role in regulating cell cycle progression and cell differentiation. It is also considered as a tumor suppressor gene (RefseQ Accession No. NMJ05978). Tissue microarray analysis method It has been suggested that patients with stage I non-small cell lung cancer with high S100A2 protein expression have low survival rates (Int J Cancer, 116, 285-290, 2005).
aauaporin 1 (以下、 AQP1と略することもある） は、 水チャネル （water channel) であるアクアポリン （aciuaporin) をコードしている遺伝子である  aauaporin 1 (hereinafter sometimes abbreviated as AQP1) is a gene encoding aquaporin, which is a water channel.
(RefSea Accession No. NM_000385) 。  (RefSea Accession No. NM_000385).
platelet-activating factor acetylhydrolase, isoform lb, gamma subunit 29kDa (以下、 PAFAH1B3と略することもある） は、 脳の分化に関わる酵素として クロ一ニングされた (Biochem Biophys Res Commun、 214巻、 180-187頁、 1995 年） 。 精神遅滞に関与すると考えられている（Hum Mol Genet, 10巻、 797- 806頁、 2001年）。  Platelet-activating factor acetylhydrolase, isoform lb, gamma subunit 29kDa (hereinafter sometimes abbreviated as PAFAH1B3) has been cloned as an enzyme involved in brain differentiation (Biochem Biophys Res Commun, 214, 180-187) 1995). It is thought to be involved in mental retardation (Hum Mol Genet, 10, 797-806, 2001).
kynureninase (以下、 KYNUと略することもある） は、 pyridoxa卜 5' - phosphateに依存する酵素で、 L- kynurenineと L- 3_hydroxykynurenineの切断を触 媒する。 KY丽は、 キヌレニン経路 （kynurenine pathway) を介した NAD cofactor の生合成に関与する （RefSea Accession No. NM_003937) 。  kynureninase (hereinafter sometimes abbreviated as KYNU) is an enzyme dependent on pyridoxa 卜 5'-phosphate, which catalyzes the cleavage of L-kynurenine and L-3_hydroxykynurenine. KY 丽 is involved in the biosynthesis of NAD cofactor via the kynurenine pathway (RefSea Accession No. NM_003937).
OXYSTEROL- BINDING PROTEIN-LIKE PROTEIN 9 (以下、 0SBPL9と略することもあ る） は、 ォキシステロール結合ドメイン （oxystero卜 binding domains) を持つ 遺伝子のひとつとしてクローニングされた （RefSeQ Accession No. 丽 024586) 。 ステロール （sterol) の合成に関与すると推察されている （Genomics, 78巻、 185 - 196頁、 2001年) 。  OXYSTEROL- BINDING PROTEIN-LIKE PROTEIN 9 (hereinafter abbreviated as 0SBPL9) was cloned as one of the genes with oxystero binding domains (RefSeQ Accession No. 024586) . It is presumed to be involved in the synthesis of sterol (Genomics, 78, 185-196, 2001).
FLJ10307は、 Ma讓 alian Gene Collection Project Teamによって 2002年に配列 決定された (RefSeq Accession No. 丽 018053； PNAS、 99巻、 16899- 16903頁、 2002年） 。  FLJ10307 was sequenced in 2002 by the Ma 讓 alian Gene Collection Project Team (RefSeq Accession No. 018053; PNAS, 99, 16899-16903, 2002).
EUKA Y0TIC TRANSLATION INITIATION FACTOR 2C, SUBUNIT 4 (以下、 EIF2C4と 略することもある） は、 脳の cDNA libraryよりクローニングされた （ReiSeq Accession No. NM017629； DNA Research, 7巻、 273- 281頁、 2000年) 。 siRNAを 介した遺伝子サイレンシング （Gene Silencing) に関与する （Genes &  EUKA Y0TIC TRANSLATION INITIATION FACTOR 2C, SUBUNIT 4 (hereinafter also abbreviated as EIF2C4) was cloned from the brain cDNA library (ReiSeq Accession No. NM017629; DNA Research, 7, 273-281, 2000) ) Involved in siRNA-mediated gene silencing (Genes &
Development, 16巻、 2733- 2742頁、 2002年) 。 Development, 16: 2733-2742, 2002).
ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 4 (以下、 ENTPD4と略する こともある） は、 4つのアビラ一ゼ （apyrase) ドメインを持つリソソ一ムおよび オートファージ小胞の膜タンパク質として同定された （J Cel l Sc i、 112巻、 2473-12484頁、 1999年) 。 ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 4 (hereinafter sometimes abbreviated as ENTPD4) is a lysozyme with four avirase domains and It was identified as a membrane protein of autophage vesicles (J Cel Sci, 112, 2473-12484, 1999).
FLJ20531は、 Mammal ian Gene Col lect ion Proj ect Teamによって 2002年に配列 決定された (RefSeq Access ion No. NM_017865； PNAS, 99巻、 16899- 16903頁、 2002年） 。  FLJ20531 was sequenced in 2002 by the Mammalian Gene Collection Project Team (RefSeq Accession No. NM — 017865; PNAS, 99, 16899-16903, 2002).
col l agen, type IX, alpha 2 (以下、 C0L9A2と略することもある） は、 IX型コ ラーゲン （type IX col lagen) の 3つのアルファ鎖 （alpha chain) のひとつとし て同定された (FEBS Let t, 319巻、 177 - 180頁、 1993年） 。  col lagen, type IX, alpha 2 (hereinafter sometimes abbreviated as C0L9A2) was identified as one of the three alpha chains of type IX col lagen (FEBS Let t, 319, 177-180, 1993).
fami ly wi th seauence s imi lar i ty 13, member Al (以下、 FAM13A1と略するこ ともある） は、 新しい遺伝子ファミリ一 FAM13のひとつとしてクローニングされ た （Genomics, 84巻、 374- 383頁、 2004年) 。  family wi th seauence similarity 13, member Al (hereinafter sometimes abbreviated as FAM13A1) was cloned as one of the new gene family FAM13 (Genomics, 84, 374-383, 2004) Year) .
del ta-l ike 1 homo log (以下、 DLK1と略することもある） は、 神経内分泌分化 に関与するタンパク質としてクローニングされた（J B iol Chem、 268巻、 3817 - 3820頁、 1993年）。 DLK1は EGFスーパーファミリーのメンバーであり、 造血に関与 する（Blood、 95巻、 1616- 1625頁、 2000年）。 発明の開示  del ta-l ike 1 homolog (hereinafter sometimes abbreviated as DLK1) was cloned as a protein involved in neuroendocrine differentiation (J B iol Chem, 268, 3817-3820, 1993). DLK1 is a member of the EGF superfamily and is involved in hematopoiesis (Blood, 95, 1616-1625, 2000). Disclosure of the invention
優れた非小細胞肺がんの悪性度の診断薬、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤、 非 小細胞肺がんの再発防止剤などが望まれている。  Excellent diagnostic agents for malignancy of non-small cell lung cancer, preventive / therapeutic agents for non-small cell lung cancer, and preventive agents for non-small cell lung cancer are desired.
本発明者らは、 上記の課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、 予後が悪 い非小細胞肺がんの判別に用いる遺伝子を取得し、 PHGDH、 PL0D2, TUBA2, PML、 F13AL AIF1、 SAAK S100A2、 AQPK PAFAH1B3, KYNUが再発患者で発現が上昇し ており、 FLJ 10307, 0SBPL9、 EIF2C ENTPD4, FLJ2053 L C0L9A2, FAM13AL DLK 1が無再発患者で発現が上昇していることを明らかにし、 これらの知見に基づい て、 検討を重ねた結果、 本発明を完成するに至った。  As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have acquired genes used for discrimination of non-small cell lung cancer with a poor prognosis, and PHGDH, PL0D2, TUBA2, PML, F13AL AIF1, SAAK S100A2, AQPK PAFAH1B3, and KYNU have increased expression in patients with relapse, and FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C ENTPD4, FLJ2053 L C0L9A2, and FAM13AL DLK 1 have been found to have increased expression in patients without relapse. As a result of repeated studies based on the knowledge, the present invention has been completed.
すなわち、 本発明は、  That is, the present invention
〔1〕 (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 (以下、 「タンパク質 1」 と略記することもある） に対する抗体、 （ii) 配列番 号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含 有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質[1] (i) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, or a salt thereof (hereinafter also abbreviated as “protein 1”) (Ii) an amino acid sequence identical to or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3. Protein or partial peptide thereof or salt thereof (hereinafter referred to as “protein
3」 と略記することもある） に対する抗体、 （iii) 配列番号： 5で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もし くはその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 5」 と略記することも ある） に対する抗体、 （iv) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしく は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチド またはその塩 （以下、 「タンパク質 7」 と略記することもある） に対する抗体、 (v) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 9」 と略記することもある） に対する抗体、 （vi) 配列番号： 1 1 で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する タンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 1 1」 と略記することもある） に対する抗体、 （vii) 配列番号： 1 3で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もし くはその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 1 3」 と略記すること もある） に対する抗体、 （viii) 配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一 もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べ プチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 1 5」 と略記することもある） に対す る抗体、 （ix) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその 塩 （以下、 「タンパク質 1 7」 と略記することもある） に対する抗体、 （X) 配 列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タン パク質 1 9」 と略記することもある） に対する抗体、 （xi) 配列番号： 2 1で表 されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタン パク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 2 1」 と略 記することもある） に対する抗体、 （xii) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくは その部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 2 3」 と略記することもあ る） に対する抗体、 （xiii) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もし くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチ ドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 2 5」 と略記することもある） に対する抗 体、 （xiv) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩 (以下、 「タンパク質 2 7」 と略記することもある） に対する抗体、 （XV) 配 列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タン パク質 2 9」 と略記することもある） に対する抗体、 （xvi) 配列番号： 3 1で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 3 1」 と 略記することもある） に対する抗体、 （xvii) 配列番号： 3 3で表されるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしく はその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 3 3」 と略記することも ある） に対する抗体、 （xviii) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一 もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べ プチドまたはその塩 （以下、 「タンパク質 3 5」 と略記することもある） に対す る抗体および （xix) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまた はその塩 （以下、 「タンパク質 3 7」 と略記することもある） に対する抗体から 選ばれる少なくとも一種を含有することを特徴とする非小細胞肺がん悪性度の診 断薬、 (Iii) a protein or partial peptide thereof or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5. (Hereinafter, also abbreviated as “protein 5”), (iv) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, or a partial peptide thereof Or an antibody against a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 7”), (v) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 or An antibody against the partial peptide or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 9”), (vi) the amino acid represented by SEQ ID NO: 1 1 An antibody against a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter also abbreviated as “protein 1 1”) containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the acid sequence, (vii) in SEQ ID NO: 13 An antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence shown, or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 13”); viii) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 15”) (Ix) a tongue containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 Antibody or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter also abbreviated as “protein 17”), (X) SEQ ID NO: 19 identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 An antibody against a protein containing an amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter also abbreviated as “protein 19”); (xi) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 1; An antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 21”); (xii) SEQ ID NO: 2 3 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter referred to as “protein”) (Xiii) the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25. Or an antibody against a protein containing substantially the same amino acid sequence, a partial peptide thereof, or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 25”), (xiv) SEQ ID NO: 27 An antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown, or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 2 7”), (XV) Column No .: 29 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 9 or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 29”) (Xvi) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 An antibody against a partial peptide or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 3 1”), (xvii) containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 3 An antibody against a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as “protein 3 3”), (xviii) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 An antibody against a protein containing the amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter also abbreviated as “protein 35”) and (xix) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter abbreviated as “protein 37”) Non-small cell lung cancer malignancy diagnostic agent characterized by containing at least one selected from antibodies to also) be,
〔l a〕 （i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 1 3、 (v) タンパク質 1 9、 (vi) タンパク質 2 5、 (vii) タンパク質 2 7、 （viii) タンパク質 2 9、 （ix) タンパク質 3 1、 （X) タンパ ク質 3 3および （xi) タンパク質 3 5の少なくとも一種の発現量が高い場合、 再 発の可能性が高いおよび Zまたは予後が良好ではないと判定する上記 〔1〕 記載 の診断薬、  [La] (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 1 3, (v) Protein 1 9, (vi) Protein 2 5, (vii) Protein 2 7, ( viii) If protein 29, (ix) protein 31, (X) protein 33, and (xi) protein 35 have a high level of expression, chances of relapse and Z or prognosis are high The diagnostic agent according to the above [1], which is determined not to be good,
〔l b〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 （iii) タンパク質 1 1、 (iv) タンパク質 1 5、 （V) タンパク質 1 7、 （vi) タンパク質 2 1、 (vii) タンパク質 2 3および （viii) タンパク質 3 7の少なくとも一種の発現量が低い 場合、 再発の可能性が高いおよび zまたは予後が良好ではないと判定する上記[Lb] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 1 1, (iv) Protein 15, (V) Protein 1 7, (vi) Protein 2 1, (vii) Protein 2 3, and (Viii) Low expression level of at least one protein 37 If you suspect that the recurrence is high and the z or prognosis is not good
〔1〕 記載の診断薬、 [1] The diagnostic agent according to the above,
〔l c〕 （i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 (v) タンパク質 19、 (vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （x) タンパ ク質 33および （xi) タンパク質 35の少なくとも一種の発現量が低い場合、 再 発の可能性が低いおよび/または予後が良好であると判定する上記 〔1〕 記載の 診断薬、  [Lc] (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (v) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29 , (Ix) protein 31, (x) protein 33, and (xi) protein 35, the expression level is low and / or the prognosis is good when the expression level is low. 1) the diagnostic agent as described,
〔l d〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 （iii) タンパク質 1 1、 (iv) タンパク質 15、 （V) タンパク質 17、 （vi) タンパク質 21、 (vii) タンパク質 23および （viii) タンパク質 37の少なくとも一種の発現量が高い 場合、 再発の可能性が低いおよび Zまたは予後が良好であると判定する上記 〔1〕 記載の診断薬、  [Ld] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 1 1, (iv) Protein 15, (V) Protein 17, (vi) Protein 21, (vii) Protein 23 and (viii) Protein When the expression level of at least one of 37 is high, the diagnostic agent according to the above [1], wherein the possibility of recurrence is low and Z or the prognosis is determined to be good,
CI e (i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 （v) タンパク質 19、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 ） タンパ ク質 33および （xi) タンパク質 35の少なくとも一種の発現量の高さ （程度） を指標とする非小細胞肺がん悪性度の診断薬、  CI e (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (v) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29, (Ix) Protein 31,) Protein 33, and (xi) Protein 35, a diagnostic agent for non-small cell lung cancer malignancy using as an index the high level (degree) of expression,
〔l e2〕 (i) タンパク質 （ii) タンパク質 9、 (iii) タンパク質 11、 (iv) タンパク質 15、 （V) タンパク質 17、 （vi) タンパク質 21、 (vii) タンパク質 23および （viii) タンパク質 37の少なくとも一種の発現量の高さ (程度） を指標とする非小細胞肺がん悪性度の診断薬、 [Le 2 ] (i) Protein (ii) Protein 9, (iii) Protein 11, (iv) Protein 15, (V) Protein 17, (vi) Protein 21, (vii) Protein 23 and (viii) Protein 37 A diagnostic agent for malignancy of non-small cell lung cancer using at least one expression level (degree) as an index,
〔l e3〕 悪性度が、 再発の可能性の高さである上記 〔1〕 、 〔l e i〕 また は 〔1 e2〕 記載の診断薬、 [Le 3 ] The diagnostic agent according to [1], [l ei ] or [1 e 2 ] above, wherein the malignancy is a high possibility of recurrence,
CI f J (i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 （v) タンパク質 19、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （X) タンパ ク質 33および （xi) タンパク質 35の少なくとも一種の発現量が高い場合、 非 小細胞肺がんの再発の可能性が高いおよび Zまたは予後が良好ではないと判定す るための診断薬、 〔1 ί 2〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 （iii) タンパク質 1 1、 (iv) タンパク質 1 5、 （v) タンパク質 1 7、 （vi) タンパク質 2 1、 (vii) タンパク質 23および （viii) タンパク質 37の少なくとも一種の発現量が低い 場合、 非小細胞肺がんの再発の可能性が高いおよび/または予後が良好ではない と判定するための診断薬、 CI f J (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (v) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29 A high expression level of at least one of (ix) protein 31, (X) protein 33, and (xi) protein 35 has a high probability of non-small cell lung cancer recurrence and a poor Z or prognosis Diagnostics to determine, [1 ί 2 ] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 1 1, (iv) Protein 1 5, (v) Protein 1 7, (vi) Protein 2 1, (vii) Protein 23 And (viii) a diagnostic agent for determining that there is a high probability of non-small cell lung cancer recurrence and / or a poor prognosis if the expression level of at least one protein 37 is low,
〔l f 3〕 （i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 1 3、 （V) タンパク質 1 9、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 3 1、 （X) タンパ ク質 33および （xi) タンパク質 35の少なくとも一種の発現量が低い場合、 非 小細胞肺がんの再発の可能性が低いおよび Zまたは予後が良好であると判定する ための診断薬、 [Lf 3 ] (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (V) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii ) Protein 29, (ix) Protein 3 1, (X) Protein 33, and (xi) Protein 35 is low in expression, and the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence is low and Z or prognosis is low A diagnostic agent to determine that it is good,
〔1 f 4〕 (i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 (iii) タンパク質 1 1、 (iv) タンパク質 1 5、 （V) タンパク質 1 7、 （vi) タンパク質 2 1、 (vii) タンパク質 23および （viii) タンパク質 37の少なくとも一種の発現量が高い 場合、 非小細胞肺がんの再発の可能性が低いおよび/または予後が良好であると 判定するための診断薬、 [1 f 4 ] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 1 1, (iv) Protein 1 5, (V) Protein 1 7, (vi) Protein 2 1, (vii) Protein 23 And (viii) a diagnostic agent for determining that if the expression level of at least one of protein 37 is high, non-small cell lung cancer has a low possibility of recurrence and / or has a good prognosis,
(1 g (i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 3、 （iii) タンパク質 5、 (iv) タンパク質 7、 (v) タンパク質 9、 (vi) タンパク質 1 1、 （vii) タン パク質 1 3、 （viii) タンパク質 1 5、 （ix) タンパク質 17、 （X) タンパク質 1 9、 （xi) タンパク質 21、 （xii) タンパク質 23、 （xiii) タンパク質 25、 (xiv) タンパク質 27、 （XV) タンパク質 2 9、 (xvi) タンパク質 3 1、 (xvii) タンパク質 33、 (xviii) タンパク質 3 5および （xix) タンパク質 3 (1 g (i) Protein 1, (ii) Protein 3, (iii) Protein 5, (iv) Protein 7, (v) Protein 9, (vi) Protein 1 1, (vii) Protein 1 3, ( viii) Protein 1 5, (ix) Protein 17, (X) Protein 1 9, (xi) Protein 21, (xii) Protein 23, (xiii) Protein 25, (xiv) Protein 27, (XV) Protein 2 9, (xvi) protein 3 1, (xvii) protein 33, (xviii) protein 3 5 and (xix) protein 3
7から選ばれる少なくとも一種の発現量を測定するための試薬を含有する非小細 胞肺がん悪性度の診断薬、 A diagnostic agent for malignancy of non-small cell lung cancer containing a reagent for measuring at least one expression level selected from 7;
(1 g2) 試薬が、 タンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための 試薬である上記 〔l g l〕 記載の診断薬、 (1 g 2 ) The diagnostic agent according to [l gl ] above, wherein the reagent is a reagent for measuring the protein expression level at the protein level,
〔1 g2A〕 タンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための試薬が、 タンパク質を検出または定量するために使用しうる化合物である上記 〔1 g2〕 記載の診断薬、 [1 g 2A ] The diagnostic agent according to [1 g 2 ] above, wherein the reagent for measuring the protein expression level at the protein level is a compound that can be used for detecting or quantifying the protein,
[1 g2B] タンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための試薬が、 (i) タンパク質 1に対する抗体、 （ii) タンパク質 3に対する抗体、 （iii) タン パク質 5に対する抗体、 （iv) タンパク質 7に対する抗体、 （V) タンパク質 9 に対する抗体、 （vi) タンパク質 1 1に対する抗体、 （vii) タンパク質 1 3に 対する抗体、 （viii) タンパク質 1 5に対する抗体、 （ix) タンパク質 1 7に対 する抗体、 （X) タンパク質 1 9に対する抗体、 （xi) タンパク質 2 1に対する 抗体、 （xii) タンパク質 2 3に対する抗体、 （xiii) タンパク質 2 5に対する抗 体、 （xiv) タンパク質 2 7に対する抗体、 （XV) タンパク質 2 9に対する抗体、[1 g 2B ] Reagent for measuring protein expression level at the protein level (i) an antibody against protein 1, (ii) an antibody against protein 3, (iii) an antibody against protein 5, (iv) an antibody against protein 7, (V) an antibody against protein 9, (vi) an antibody against protein 11 (Vii) an antibody against protein 13 (viii) an antibody against protein 15 (ix) an antibody against protein 17 (X) an antibody against protein 19 (xi) an antibody against protein 21 ( xii) an antibody against protein 23, (xiii) an antibody against protein 25, (xiv) an antibody against protein 27, (XV) an antibody against protein 29,
(xvi) タンパク質 3 1に対する抗体、 （xvii) タンパク質 3 3に対する抗体、(xvi) an antibody against protein 31; (xvii) an antibody against protein 33;
(xviii) タンパク質 3 5に対する抗体および （xix) タンパク質 3 7に対する抗 体から選ばれる少なくとも一種を含有する上記 〔l g 2〕 記載の診断薬、 (xviii) the diagnostic agent according to the above [lg 2 ], comprising at least one selected from an antibody against protein 35 and (xix) an antibody against protein 37
〔l g 3〕 試薬が、 タンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定する ための試薬である上記 〔l g j 記載の診断薬、 [Lg 3 ] The reagent is a reagent for measuring the expression level of a protein at a polynucleotide level.
〔1 g 3 A〕 タンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定するための 試薬が、 （i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （ii) タンパク質 3をコードするボリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （iii) タンパク質 5をコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （V) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （vii) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （viii) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 1 7をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 1 9をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 2 1をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xii) タンパク質 2 3をコ —ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiii) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) タンパ ク質 2 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （XV) タンパク質 2 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (xvi) タンパク質 3 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオ チド、 （xvii) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （xviii) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含有する上記 〔1 g 3〕 記載の診断薬、 [1 g 3 A ] A reagent for measuring the expression level of a protein at the polynucleotide level includes (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1 and (ii) a polynucleotide encoding protein 3 (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, and (V) a polynucleotide encoding protein 9. (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11; (vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (viii) a polynucleotide encoding protein 15; Polynucleotide containing (Ix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; and (xi) a polynucleotide encoding a protein 21. (Xii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23, (xiii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) encoding a protein 27 (XV) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31 (Xvii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, (xviii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 35 and (xix) a polynucleotide encoding a protein 37 The diagnostic agent according to the above [1 g 3 ], which contains at least one selected from the polynucleotides to be contained,
〔 1 g 3 B〕 夕ンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定するための 試薬が、 （i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳銬型となる m R N Aの塩基配列全 長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオ チド、 （i i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、[1 g 3 B ] A reagent for measuring the expression level of a protein at the polynucleotide level includes: (i) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (Ii) a polynucleotide containing the full-length nucleotide sequence of the mRNA that is a translational variant of the protein to be translated, the full-length complementary sequence thereof, or a partial nucleotide sequence thereof; (ii) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 A polynucleotide comprising the full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or a partial base sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as
(i i i) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(iii) the full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the complementary sequence thereof, or the translation sequence of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 A polynucleotide containing a partial base sequence of
(iv) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その 相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(iv) the full-length base sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, the full-length complementary sequence thereof, or their A polynucleotide containing a partial base sequence,
(V) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その 相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (vi i) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (vi i i) 配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (ix) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳銬型となる m R N Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(V) The full-length nucleotide sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 (Vi) a polynucleotide containing a part of the nucleotide sequence, (vi) an mRNA that is a translation type of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (Vii) an amino acid sequence that is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13; A polynucleotide comprising the full-length base sequence of mRNA, which is a translational type of the contained protein, its full-length complementary sequence, or a partial base sequence thereof, (vi ii) an amino acid represented by SEQ ID NO: 15 A polynucleotide comprising a full-length base sequence of mRNA, a full-length complementary sequence thereof, or a partial base sequence thereof, which is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the acid sequence, (ix) The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(x) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(x) the full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19, or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(xi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (xi i) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xi) SEQ ID NO: 21 The full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (xi i) mRNA that is a translation type of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 A polynucleotide comprising the full-length base sequence, the complementary full-length sequence thereof, or a partial base sequence thereof,
(xi i i) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xi ii) The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is the translation type of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 A polynucleotide containing a partial base sequence of
(xiv) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xiv) the full-length base sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27, its complementary sequence, or their A polynucleotide containing a partial base sequence,
(xv) 配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xv) SEQ ID NO: 29 The full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translation variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29, or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(xv i) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実貧的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (xvi i) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (xviii) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳錶型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 および （xix) 配列番号： 37で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳鐯型となる m R N Aの塩基配列 全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレ ォチドから選ばれる少なくとも一種を含有する上記 〔l g3〕 記載の診断薬、 〔l g4A〕 （i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 1 3、 （V) タンパク質 1 9、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （X) タンパ ク質 33および （xi) タンパク質 35の少なくとも一種の発現量が高い場合、 再 発の可能性が高いおよび/または予後が良好ではないと判定する上記 〔1 〜 〔l g3B〕 のいずれかに記載の診断薬、 (xv i) SEQ ID NO: 31 The full-length base sequence of mRNA, the full-length sequence of its complementary sequence, or the translation sequence of a protein containing the amino acid sequence identical or poorly identical to the amino acid sequence represented by 1 or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (xvi i) a translation type of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 A polynucleotide comprising the full-length base sequence of RNA, its full-length complementary sequence, or a partial base sequence thereof, (xviii) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 A polynucleotide containing the full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translation variant of the protein contained, the full-length complementary sequence thereof, or a partial nucleotide sequence thereof, And (xix) the full length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37, or its complementary sequence, or diagnostic agent of [lg 3], wherein the at least one selected from Porinukure Ochido comprising a part of their nucleotide sequence, [lg 4A] (i) protein 3, (ii) protein 5, (iii) protein 7, (iv) Protein 1 3, (V) Protein 1 9, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29, (ix) Protein 31, (X) Protein 33 and (xi ) The diagnostic agent according to any one of the above [1 to [lg 3B ], wherein when the expression level of at least one of protein 35 is high, the possibility of relapse is high and / or the prognosis is not good.
〔l g4B〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 （iii) タンパク質 1 1、 (iv) タンパク質 1 5、 （V) タンパク質 1 7、 （vi) タンパク質 2 1、 (vii) タンパク質 23および （viii) タンパク質 37の少なくとも一種の発現量が低い 場合、 再発の可能性が高いおよび/または予後が良好ではないと判定する上記 [Lg 4B ] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 1 1, (iv) Protein 1 5, (V) Protein 1 7, (vi) Protein 2 1, (vii) Protein 23 and (Viii) If the expression level of at least one of protein 37 is low, it is determined that the possibility of recurrence is high and / or the prognosis is not good
[1 g l] 〜 〔l g3B〕 のいずれかに記載の診断薬、 [1 gl ] to the diagnostic agent according to any one of [lg 3B ],
〔l g4C〕 （i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 1 3、 （V) タンパク質 1 9、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 3 1、 （X) タンパ ク質 33および （xi) タンパク質 35の少なくとも一種の発現量が低い場合、 再 発の可能性が低いおよび/または予後が良好であると判定する上記 U g 〜 〔l g3B〕 のいずれかに記載の診断薬、 [Lg 4C ] (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 1 3, (V) Protein 1 9, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii ) If protein 29, (ix) protein 31, (X) protein 33 and (xi) protein 35 are expressed at low levels, the likelihood of relapse and / or good prognosis The diagnostic agent according to any one of the above U g to [lg 3B ] to be determined,
〔l g4D〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 （iii) タンパク質 1 1、 (iv) タンパク質 1 5、 （V) タンパク質 1 7、 （vi) タンパク質 2 1、 (vii) タンパク質 23および （viii) タンパク質 37の少なくとも一種の発現量が高い 場合、 再発の可能性が低いおよび/または予後が良好であると判定する上記 〔1 g J 〜 〔l g3B〕 のいずれかに記載の診断薬、 ' CI hj (i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 1 3、 （V) タンパク質 1 9、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 3 1、 （X) タンパ ク質 33および （xi) タンパク質 35から選ばれる少なくとも一種の発現量を測 定するための試薬を含有する非小細胞肺がん悪性度の診断薬、 [Lg 4D ] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 1 1, (iv) Protein 1 5, (V) Protein 1 7, (vi) Protein 2 1, (vii) Protein 23 and (Viii) The diagnostic agent according to any one of the above [1 g J to [lg 3B ], which is judged to have a low possibility of recurrence and / or a good prognosis when the expression level of at least one protein 37 is high , 'CI hj (i) protein 3, (ii) protein 5, (iii) protein 7, (iv) protein 1 3, (V) protein 1 9, (vi) protein 25, (vii) protein 27, (viii ) Protein 29, (ix) Protein 31, (X) Protein 33 and (xi) Protein 35 A diagnostic agent for malignancy of non-small cell lung cancer containing a reagent for
〔l h 2〕 試薬が、 タンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための 試薬である上記 〔l h j 記載の診断薬、 [Lh 2 ] The reagent is a reagent for measuring the expression level of a protein at the protein level.
〔1 h 2 A〕 タンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための試薬が、 タンパク質を検出または定量するために使用しうる化合物である上記 〔l h 2〕 記載の診断薬、 [1 h 2 A ] The diagnostic agent according to the above [lh 2 ], wherein the reagent for measuring the expression level of the protein at the protein level is a compound that can be used for detecting or quantifying the protein,
〔1 h 2 B〕 タンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための試薬が、 (i) タンパク質 3に対する抗体、 （ii) タンパク質 5に対する抗体、 （iii) タン パク質 7に対する抗体、 （iv) タンパク質 1 3に対する抗体、 （V) タンパク質 1 9に対する抗体、 （vi) タンパク質 2 5に対する抗体、 （vii) タンパク質 2 7に対する抗体、 （viii) タンパク質 2 9に対する抗体、 （ix) タンパク質 3 1 に対する抗体、 （X) タンパク質 3 3に対する抗体および （xi) タンパク質 3 5 に対する抗体から選ばれる少なくとも一種を含有する上記 〔l h 2〕 記載の診断 薬、 [1 h 2 B ] Reagents for measuring protein expression level at the protein level are: (i) an antibody against protein 3, (ii) an antibody against protein 5, (iii) an antibody against protein 7, (iv) (V) an antibody against protein 1 9; (vi) an antibody against protein 2 5; (vii) an antibody against protein 2 7; (viii) an antibody against protein 2 9; (ix) an antibody against protein 3 1; (X) the diagnostic agent according to the above [lh 2 ], which contains at least one selected from (X) an antibody against protein 33 and (xi) an antibody against protein 35
〔l h 3〕 試薬が、 タンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定する ための試薬である上記 〔l h j 記載の診断薬、 [Lh 3 ] The reagent is a reagent for measuring the expression level of a protein at the polynucleotide level.
〔 1 h 3 A〕 夕ンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定するための 試薬が、 （i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （ii) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （iii) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 9をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （vii) タンパク質 2 7をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （viii) タンパク質 2 9をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 3 1をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 ） タンパク質 3 3をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （xi) タンパク質 3 5を コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくと も一種を含有する上記 〔l h 3〕 記載の診断薬、 〔 1 h 3 B〕 夕ンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定するための 試薬が、 （i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列ま たはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有 するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もし くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列または その一部を含有するポリヌクレオチド、 （iii) 配列番号： 7で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸 型となる mR N Aの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な 塩基配列またはそ.の一部を含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 3で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列またはその一部に相補的もしくは 実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （V)配 列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R NAの塩基配列に相捕的もしくは 実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （vi)配 列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有する夕ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列に相補的もしくは 実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （vii)配 列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列に相補的もしくは 実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （viii) 配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸 配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列に相補的もしく は実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （iX) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸 配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列に相補的もしく は実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （X) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸 配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列に相補的もしく は実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチドおよび および （xi) 配列番号： 35で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型となる mRNAの塩基配列ま たはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有 するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含有する上記 〔1 i 3〕 記 載の診断薬、 [1 h 3 A] a reagent for measuring the expression level of evening protein polynucleotide level, (i) comprising a polynucleotide encoding a protein 3 polynucleotide, a polynucleotide encoding the (ii) protein 5 (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13 and (V) a polynucleotide encoding protein 19 (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (viii) a polynucleotide encoding protein 29 Polynucleotides containing nucleotides (Xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31; a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33; and (xi) a polynucleotide encoding protein 35 The diagnostic agent according to the above [lh 3 ], which contains at least one selected from polynucleotides; [1 h 3 B ] A reagent for measuring the expression level of a protein at the polynucleotide level includes: (i) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 (Ii) a polynucleotide containing a base sequence complementary to or substantially complementary to a base sequence of mRNA or a part thereof, or a part thereof, (ii) represented by SEQ ID NO: 5 A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of mRNA or a part thereof, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as (Iii) a base sequence of mRNA that is a translation template of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 or (Iv) a nucleotide sequence that is complementary or substantially complementary to a part of the nucleotide sequence, or a polynucleotide containing a part thereof; (iv) an amino acid that is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 A polynucleotide comprising a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of mRNA or a portion thereof, which is a translation variant of a protein containing the sequence, or (V) a sequence number : A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 9 A polynucleotide containing a part thereof, (vi) an mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 Phase to base sequence A polynucleotide containing a complementary or substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof, (vii) containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 A polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that is a translational type of protein, or (viii) the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 Or a polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA which is a translational variant of a protein containing substantially the same amino acid sequence, or (i X ) SEQ ID NO: 3 Complementary or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 1 A nucleotide sequence or a polynucleotide containing part thereof, (X) SEQ ID NO: 3 amino acid sequence the same or substantially the same amino acid represented by 3 A polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of an mRNA that is a translation type of a protein containing the sequence, and (xi) a sequence represented by SEQ ID NO: 35 A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA or a part thereof, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as The diagnostic agent according to the above (1 i 3 ), which contains at least one selected from polynucleotides containing a moiety;
〔l h4A〕 （i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 （V) タンパク質 19、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （x) タンパ ク質 33および （xi) タンパク質 35の少なくとも一種の発現量が高い場合、 再 発の可能性が高いおよび/または予後が良好ではないと判定する上記 〔1 hj 〜 〔l h3B〕 のいずれかに記載の診断薬、 [Lh 4A ] (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (V) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29, (ix) Protein 31, (x) Protein 33, and (xi) Protein 35, when the expression level is high, the possibility of relapse is high and / or the prognosis is not good [1 hj to [lh 3B ] diagnostic agent according to any one of
〔l h4B〕 (i) タンパク質 3、 (ii) タンパク質 5、 (iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 (v) タンパク質 19、 (vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （X) タンパ ク質 33および （xi) タンパク質 35の少なくとも一種の発現量が低い場合、 再 発の可能性が低いおよび Zまたは予後が良好であると判定する上記 〔11^〕 〜 〔l h3B〕 のいずれかに記載の診断薬、 [Lh 4B ] (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (v) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29, (ix) Protein 31, (X) Protein 33, and (xi) Protein 35, when the expression level is low, the possibility of recurrence is low and Z or prognosis is good [11 ^] to [lh 3B ], the diagnostic agent according to any one of
〔1 i J (i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 (iii) タンパク質 1 1、 (iv)( タンパク質 15、 （v) タンパク質 17、 （vi) タンパク質 21、 (vii) タンパク質 23および （viii) タンパク質 37から選ばれる少なくとも一種の発 現量を測定するための試薬を含有する非小細胞肺がん悪性度の診断薬、 [1 i J (i) protein 1, (ii) protein 9, (iii) protein 1 1, (iv) ( protein 15, (v) protein 17, (vi) protein 21, (vii) protein 23 and (viii ) A diagnostic agent for non-small cell lung cancer malignancy containing a reagent for measuring at least one expression level selected from protein 37,
〔1 i 2] 試薬が、 タンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための 試薬である上記 〔1 i ^ 記載の診断薬、 [1 i 2 ] The diagnostic agent according to [1 i ^ above, wherein the reagent is a reagent for measuring the protein expression level at the protein level,
〔1 i 2A〕 タンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための試薬が、 タンパク質を検出または定量するために使用しうる化合物である上記 〔1 i 2〕 記載の診断薬、 [1 i 2A ] The diagnostic agent according to [1 i 2 ] above, wherein the reagent for measuring the protein expression level at the protein level is a compound that can be used for detecting or quantifying the protein,
〔1 i 2B〕 タンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための試薬が、 (i) タンパク質 1に対する抗体、 （ii) タンパク質 9に対する抗体、 （iii) タン パク質 1 1に対する抗体、 （iv) タンパク質 1 5に対する抗体、 （V) タンパク 質 1 7に対する抗体、 （vi) タンパク質 2 1に対する抗体、 （vii) タンパク質 2 3に対する抗体および （viii) タンパク質 3 7に対する抗体から選ばれる少な くとも一種を含有する上記 〔1 i 2〕 記載の診断薬、 [1 i 2B ] Reagents for measuring the protein expression level at the protein level are: (i) an antibody against protein 1, (ii) an antibody against protein 9, (iii) Antibody to protein 1 1, (iv) antibody to protein 15; (V) antibody to protein 17; (vi) antibody to protein 21; (vii) antibody to protein 23; and (viii) protein 37. The diagnostic agent according to [1 i 2 ] above, which contains at least one selected from antibodies against
〔1 i 3〕 試薬が、 タンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定する ための試薬である上記 〔1 i j 記載の診断薬、 [1 i 3 ] The diagnostic agent according to the above [1 ij, wherein the reagent is a reagent for measuring the protein expression level at the polynucleotide level,
〔1 i 3 A〕 タンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定するための 試薬が、 （i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （ii) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （iii) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 7をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 1をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vii) タンパク質 2 3をコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチドおよび （viii) タンパク質 3 7をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含 有する上記 〔1 i 3〕 記載の診断薬、 [1 i 3 A ] A reagent for measuring the expression level of a protein at the polynucleotide level includes (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1 and (ii) a polynucleotide encoding protein 9 (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11; (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; and (V) a polynucleotide encoding protein 17. A polynucleotide containing a nucleotide; (vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; (vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23; and (viii) encoding protein 37. Polynucleotides containing polynucleotides The diagnostic agent according to the above [1 i 3 ], comprising at least one selected from leotide,
〔1 i 3 B〕 タンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定するための 試薬が、 （i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 —のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列ま たはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有 するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もし くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列または その一部を含有するポリヌクレオチド、 . (iii) 配列番号： 1 1で表されるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳 鍀型となる mR N Aの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的 な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 5 で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する タンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列またはその一部に相補的もしく は実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、[1 i 3 B ] A reagent for measuring the expression level of a protein at a polynucleotide level, (i) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (Ii) a polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence or a part thereof, or a part thereof, which is a translation type of mRNA, (ii) represented by SEQ ID NO: 9 A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of mRNA or a portion thereof that is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence (Iii) translation of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 1 (Iv) a nucleotide sequence that is complementary or substantially complementary to a part of the nucleotide sequence, or (iv) an amino acid sequence that is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 Complementary or partially complementary to the nucleotide sequence of mRNA or a part of it Is a polynucleotide containing a substantially complementary base sequence or a part thereof,
(V) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列またはそ の一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポ リヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの 塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその 一部を含有するポリヌクレオチド、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸 型となる mR N Aの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な 塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチドおよび （viii) 配列番号： 3 7で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列またはその一部に相補的も しくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチドか ら選ばれる少なくとも一種を含有する上記 〔1 i 3〕 記載の診断薬、 (V) Complementary or partially complementary to the base sequence of mRNA or a part thereof, which is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 A polynucleotide containing a substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof, (vi) a translation of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 A polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of mRNA or a portion thereof, or a portion thereof, (vii) identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 Alternatively, a protein containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of mRNA or a part thereof, which is a translation template of a protein containing substantially the same amino acid sequence. Complementary to the nucleotide sequence of a nucleotide and (miii) the nucleotide sequence of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 Or the diagnostic agent according to the above [1 i 3 ], which contains at least one selected from polynucleotides containing a substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof,
〔1 i 4 A〕 (i) タンパク質 （ii) タンパク質 9 .、 (iii) タンパク質 1 1、 (iv) タンパク質 1 5、 （V) タンパク質 1 7、 （vi) タンパク質 2 1、 (vii) タンパク質 2 3および （viii) タンパク質 3 7の少なくとも一種の発現量が低い 場合、 再発の可能性が高いおよび Zまたは予後が良好ではないと判定する上記 〔1 i J 〜 〔1 i 3 B〕 のいずれかに記載の診断薬、 [1 i 4 A ] (i) Protein (ii) Protein 9., (iii) Protein 1 1, (iv) Protein 1 5, (V) Protein 1 7, (vi) Protein 2 1, (vii) Protein 2 3 and (viii) any one of the above [1 i J to [1 i 3 B ], where the expression level of at least one of protein 37 is low and the possibility of recurrence is high and the Z or prognosis is not good A diagnostic agent according to
〔l i 4 B〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 （iii) タンパク質 1 1、 (iv) タンパク質 1 5、 （V) タンパク質 1 7、 (vi) タンパク質 2 1、 (vii) タンパク質 2 3および （viii) タンパク質 3 7の少なくとも一種の発現量が高い 場合、 再発の可能性が低いおよび/または予後が良好であると判定する上記 〔1 i 〕 〜 〔1 i 3 B〕 のいずれかに記載の診断薬、 [Li 4 B ] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 1 1, (iv) Protein 1 5, (V) Protein 1 7, (vi) Protein 2 1, (vii) Protein 2 3 and (viii) any one of the above [1 i] to [1 i 3 B ] that determines that the probability of recurrence is low and / or the prognosis is good when the expression level of at least one kind of protein 37 is high A diagnostic agent according to
〔2〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （i i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （V) タンパグ質 9をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 1 5をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 1 7をコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 1 9をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 2 1をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i) タンパク質 2 3を コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i i) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) タン パク質 2 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （XV) タンパク質 2 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、[2] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5. Nucleotide, (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, and (V) a polynucleotide encoding protein 9 (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11; (vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (vi ii) encoding protein 15 A polynucleotide containing a polynucleotide; (ix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (xi) encoding protein 21 (Xi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23, (xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a protein Polynucleo encoding quality 2 7 Polynucleotide comprising a de, a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding the (XV) protein 2 9,
(xvi) タンパク質 3 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオ チド、 （xvi i) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （xvi i i) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含有することを特 徴とする非小細胞肺がん悪性度の診断薬、 (xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31; (xvi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33; (xvi ii) containing a polynucleotide encoding protein 35; A diagnostic agent for malignancy of non-small cell lung cancer, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of a polynucleotide and a polynucleotide containing a polynucleotide encoding (xix) protein 37,
{ 2 a ) (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列 全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレ ォチド、 （i i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全 長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオ チド、 （i i i) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全 長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオ チド、 （iv) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (v) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その 相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、{2 a) (i) full-length base sequence of mRNA that is a translation type of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, the full-length complementary sequence thereof, Or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (ii) an mRNA that is a translation type of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3. (Iii) an amino acid sequence that is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5; (Iv) a polynucleotide containing the entire nucleotide sequence of the mRNA that is a translation variant of the contained protein, the full length of its complementary sequence, or a partial sequence thereof, (iv) represented by SEQ ID NO: 7 Polynucleotides containing the full-length base sequence of mRNA, the full length of its complementary sequence, or a partial base sequence of the mRNA that contains the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence. Nucleotide, (v) an amino acid identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A polynucleotide comprising a full-length base sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing a non-acid sequence, a full-length complementary sequence thereof, or a partial base sequence thereof,
(vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(vi) SEQ ID NO: 11 The full-length base sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1, the full-length complementary sequence thereof, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(vi i) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(vi i) SEQ ID NO: 13 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO. A polynucleotide containing a partial base sequence of
(vi i i) 配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(vi ii) The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 A polynucleotide containing a partial base sequence of
(ix) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (X) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(ix) The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (X) a translation template of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 A polynucleotide comprising the full length base sequence of RNA, the full length of its complementary sequence, or a partial base sequence thereof,
(xi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xi) SEQ ID NO: 21 The full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(xi i) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xi i) SEQ ID NO: 23 The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full length of its complementary sequence, or the translation sequence of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 23 A polynucleotide containing a partial base sequence,
(xi i i) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xi ii) The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is the translation type of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 A polynucleotide containing a partial base sequence of
(xiv) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (XV) 配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型となる m R N Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (XV i) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xiv) the full-length nucleotide sequence of mRNA, the full-length complementary sequence of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27, its complementary sequence, or one of them (XV) a nucleotide sequence that is the same as or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 A polynucleotide containing the full-length mRNA base sequence, its complementary full-length sequence, or a partial base sequence thereof, which is a translation variant of a protein containing a mino acid sequence, (XV i) SEQ ID NO: 31 A polynucleotide comprising the full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or a partial base sequence thereof, which is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown ,
(xvi i) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xvi i) SEQ ID NO: 33 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, A polynucleotide containing a partial base sequence of
(xvi i i) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳銬型となる mR N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 および （xix) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列 全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレ ォチドから選ばれる少なくとも一種を含有することを特徴とする非小細胞肺がん 悪性度の診断薬、 (xvi ii) SEQ ID NO: 35 The full-length nucleotide sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the complementary sequence thereof, or the translation sequence of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 A polynucleotide containing a partial base sequence, and (xix) an mRNA that is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 A non-small cell lung cancer malignancy diagnostic agent characterized by comprising at least one selected from a full-length base sequence, a full-length complementary sequence thereof, or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
〔2 b〕 mR NAの塩基配列が、 3 ' 非翻訳領域または 5 ' 非翻訳領域の R N Aの塩基配列である上記 〔2 a ) 記載の診断薬、  (2b) The diagnostic agent according to (2a) above, wherein the nucleotide sequence of mRNA is the nucleotide sequence of RNA in the 3 ′ untranslated region or 5 ′ untranslated region,
〔2 c〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （Π) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有する. ポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 1 5をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 1 7をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 1 9をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 2 1をコー ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i) タンパク質 2 3 をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (xi i i) タンパク 質 2 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) 夕 ンパク質 2 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (XV) タンパク質 2 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （xvi) タンパク質 3 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （xvi i) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 (xvi i i) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種の発現量を測定 するための試薬を含有する非小細胞肺がん悪性度の診断薬、 (2c) (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide encoding protein 5. (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (vi) a polynucleotide encoding protein 11 (Vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; and (ix) a polynucleotide encoding protein 17. Polynucleotide containing nucleotides Plastid, (X) a polynucleotide comprising a polynucleotide that encoding a protein 1 9, polynucleotide containing a code polynucleotide encoding the (xi) protein 2 1, (xi i) protein 2 3 (Xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, XV) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, and (xvi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33. (Xvi ii) for measuring at least one expression level selected from a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 35 and (xix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 37 Non-small cell lung cancer containing reagent Every time of diagnostic agents,
〔2 d〕 試薬が、 （i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （i i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 5·をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 1 3をコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 1 5をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 1 7をコ一 ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 1 9を コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 2 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i) タンパ ク質 2 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i i) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (xiv) タンパク質 2 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオ チド、 （XV) タンパク質 2 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 (xvi) タンパク質 3 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （xvi i) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （xvi i i) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含有す る上記 〔2 c〕 記載の診断薬、 [2d] The reagent comprises (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide encoding protein 5. A polynucleotide containing a nucleotide; (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9; (vi) a polynucleotide encoding protein 11; (Vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (ix) protein 17 Contains a polynucleotide that encodes (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; (xi i) a polynucleotide encoding protein 23; A polynucleotide containing a nucleotide; (xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25; (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27; and (XV) encoding protein 29. (Xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, (xvi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, (xvi ii) a protein 3 Polynucleotides encoding 5 Poly encoding polynucleotides and (xix) protein 3 7 containing The diagnostic agent according to (2c) above, which contains at least one selected from polynucleotides containing nucleotides,
〔2 e〕 試薬が、 （i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの 塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポ リヌクレオチド、 （i i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩 基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳錶型となる mR NAの塩 基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリ ヌクレオチド、 (iv) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基 配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌ クレオチド、 （V) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配 列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌク レオチド、 （vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配 列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌク レオチド、 (vi i) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基 配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌ クレオチド、 （vi i i) 配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩 基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリ ヌクレオチド、 （ix) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩 基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリ ヌクレオチド、 （X) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩 基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリ ヌクレオチド、 （xi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩 基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリ ヌクレオチド、 （xi i) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの 塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポ リヌクレオチド、 [2e] Reagent is (i) the full-length nucleotide sequence of mRNA that forms a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, its complementary sequence (Ii) a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical to or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3. A polynucleotide containing the full-length nucleotide sequence of mRNA, its full-length complementary sequence, or a partial nucleotide sequence thereof, (iii) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 A polynucleotide containing the full-length base sequence of mRNA, which is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence, the full-length complementary sequence thereof, or a partial base sequence thereof, (iv) SEQ ID NO: 7 A polynucleotide containing a full-length mRNA sequence, a full-length complementary sequence thereof, or a partial sequence thereof, which is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence shown (V) the full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 (Vi) a polynucleotide containing a partial nucleotide sequence, (vi) a nucleotide sequence of mRNA that is a translation type of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 A polynucleotide containing a full-length sequence, its full-length complementary sequence, or a partial nucleotide sequence thereof, (vi i) identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 Or a polynucleotide containing a full-length mRNA sequence, a complementary full-length sequence thereof, or a partial nucleotide sequence thereof, which is a translation variant of a protein containing substantially the same amino acid sequence, (vi ii) sequence No. 15 The full length of the mRNA base sequence, the full length of its complementary sequence, or a part of the same, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by the number 5 (Ix) a full-length nucleotide sequence of mRNA that forms a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 , A polynucleotide comprising the full length of the complementary sequence, or a part of the base sequence thereof, (X) the same or actual as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 A polynucleotide containing a full-length base sequence of mRNA, a full-length complementary sequence thereof, or a partial base sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing a qualitatively identical amino acid sequence, (xi) SEQ ID NO: 2 The full-length base sequence of mRNA, the full-length base sequence of its mRNA, or the base sequence of a part of them, which is the translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by 1 (Xi i) SEQ ID NO: 23 The full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23, its complement A polynucleotide containing the full length of the sequence, or a partial base sequence thereof,
(xi i i) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳銬型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (xi ii) The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is the translation type of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 A polynucleotide containing a partial base sequence of
(xiv) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳銬型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xiv) the full-length base sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27, its complementary sequence, or their A polynucleotide containing a partial base sequence,
(xv) 配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型となる m R N Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xv) the full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29, its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(xv i) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳鍀型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xvi) SEQ ID NO: 31 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1, a full-length complementary sequence thereof, Or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(xvi i) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (xvi i i) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 および （xix) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列 全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレ ォチドから選ばれる少なくとも一種を含有する上記 〔2 c〕 記載の診断薬、(xvi i) SEQ ID NO: 33 The full-length base sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33, or its full complement (Xvi ii) mRNA that is a translation type of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 A polynucleotide comprising the full-length base sequence, the full-length complementary sequence thereof, or a partial nucleotide sequence thereof, and (xix) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 Polynucleotide containing the full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translational variant of the protein contained, the full length of its complementary sequence, or a partial sequence of those sequences The diagnostic agent according to the above (2c), which contains at least one selected from
〔2 f〕 (i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 (i i i) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 9をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 7をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 2 9をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 3 1をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 3 3をコ一 ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （xi) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドの少なくとも一種 の発現量が高い場合、 再発の可能性が高いおよび/または予後が良好ではないと 判定する上記 〔2〕 〜 〔2 e〕 のいずれかに記載の診断薬、 [2 f] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7 Nucleotide, (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (vi) containing a polynucleotide encoding protein 25; (Vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (xi) encoding a protein 31 A polynucleotide containing a polynucleotide Relapse is possible when the expression level of at least one of leotide, (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33 and (xi) a polynucleotide containing a protein 35 encoding protein is high. The diagnostic agent according to any one of the above (2) to (2e), which is judged to have high sexuality and / or poor prognosis,
〔2 g〕 (i) タンパク質 1をコード fるポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 7をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 1をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド.、 (vi i) タンパク質 2 3をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （vi i i) タンパク質 3 7をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドの少なくとも一種の発現量が 低い場合、 再発の可能性が高いおよび/または予後が良好ではないと判定する上 記 〔2〕 〜 〔2 e〕 のいずれかに記載の診断薬、  [2 g] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1; (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9; and (iii) a polynucleotide encoding protein 11 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (vi) a polynucleotide encoding protein 21; Low expression level of at least one of (vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23 and (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 37 If the recurrence is likely and / Or the diagnostic agent according to any one of the above [2] to [2 e], wherein the prognosis is determined to be poor
[ 2 h) (i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 9をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 7をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 2 9をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 3 1をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 3 3をコー ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （xi) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドの少なくとも一種 の発現量が低い場合、 再発の可能性が低いおよび/または予後が良好であると判 定する上記 〔2〕 〜 〔2 e〕 のいずれかに記載の診断薬、 [2 h) (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7 Nucleotide, (iv) contains a polynucleotide encoding protein 1 3 (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25; and (vi i) a polynucleotide encoding protein 27. (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, and (X) a protein 3 3 When the expression level of at least one of a polynucleotide containing a polynucleotide that encodes and (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 35 is low, the likelihood of recurrence is low and / or the prognosis is good [2] to [2 e] above Diagnostic agent according to any Re,
〔2 i〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 7をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 1をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 3をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （vi i i) タンパク質 3 7をコード するポリヌクレオチドを含有するポリ tヌクレオチドの少なくとも一種の発現量が 高い場合、 再発の可能性が低いおよび Zまたは予後が良好であると判定する上記 〔2〕 〜 〔2 e〕 のいずれかに記載の診断薬、 [2 i] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (iii) a polynucleotide encoding protein 11 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (vi) a polynucleotide encoding protein 21; polynucleotide containing, (vi i) if at least one of the expression amount of the polypeptide t polynucleotide comprising a polynucleotide and (vi ii) a polynucleotide encoding a protein 3 7 containing polynucleotide that encodes the protein 2 3 high The likelihood of recurrence and The diagnostic agent according to any one of the above (2) to (2e) for determining that Z or prognosis is good,
〔2 j〕 (i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチドを含有 するポ.リヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 9をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 7をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 2 9をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 3 1をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 3 3をコ一 ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （xi) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少な くとも一種の発現量を測定するための試薬を含有する非小細胞肺がん悪性度の診 断薬、 [2j] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (vi) a polynucleotide encoding protein 25; (Vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (xi) a protein 31 Code (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, and (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 35, A diagnostic agent for malignancy of non-small cell lung cancer, which contains a reagent for measuring the expression level,
[ 2 k ) 試薬が、 （i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （H i) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 9をコ一ドするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 5をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 7をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (vi i i) タンパク質 2 9をコー ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 3 1を コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （xi) タン パク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ば れる少なくとも一種を含有する上記 〔2 j〕 記載の診断薬、  [2k) The reagent comprises (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, and (Hi) a polynucleotide encoding protein 7. A polynucleotide containing a nucleotide; (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (vi) a protein 25 (Vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (xi ) Contains a polynucleotide encoding protein 3 1 (2) The above [2j, which contains at least one selected from the group consisting of: a polynucleotide containing a polynucleotide encoding (X) the protein 33 and (xi) a polynucleotide encoding the protein 35; ] The diagnostic agent according to the description,
〔2 1〕 試薬が、 （i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRN Aの 塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその 一部を含有するポリヌクレオチド、 （i i) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型と なる mRN Aの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基 配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （i i i) 配列番号： 7で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク 質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的 に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番 号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRN Aの塩基配列またはその一部に相補 的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチ ド、 （V)配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列に相補 的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチ ド、 （vi)配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列に相補 的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチ ド、 （vi i)配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列に相 補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオ チド、 （vi i i)配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列に 相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレ ォチド、 （ix)配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型となる mR NAの塩基配列に 相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレ ォチド、 （X)配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳銬型となる m R N Aの塩基配列に 相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレ ォチドおよびおよび （xi) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしく は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N A の塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはそ の一部を含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含有する上記 〔2 j〕 記載の診断薬、 [2 1] The reagent is added to (i) the base sequence of mRNA or a part thereof, which is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3. A polynucleotide containing a complementary or substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof, (ii) translation of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 A polynucleotide containing a complementary or substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof, or a nucleotide sequence complementary to or a part of the nucleotide sequence of mRNA, which is a cage, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to or a part of the nucleotide sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence (Iv) a nucleotide sequence of mRNA or a part thereof, which is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 Complementary to (V) a polynucleotide containing a nucleotide sequence which is complementary or substantially complementary, or a part thereof, (V) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 (Vi) a polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that forms the translation cage, or (vi) the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 or A polynucleotide containing a nucleotide sequence that is complementary or substantially complementary to or partially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing substantially the same amino acid sequence, (vi i) sequence No. 2 Complementary or substantially complementary to the nucleotide sequence of the mRNA that is the translational variant of the protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 7 (Vi ii) a polynucleotide containing a nucleotide sequence or a part thereof, (vi ii) mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 (Ix) an amino acid sequence that is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 (X) a polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that is a translational type of a protein containing a protein, (X) an amino acid represented by SEQ ID NO: 33 A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the sequence, or a part thereof. And (xi) the nucleotide sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 or a part thereof The diagnostic agent according to (2j) above, which comprises at least one selected from a polynucleotide containing a complementary or substantially complementary base sequence or a part thereof,
〔2 m〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 7をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 1をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 3をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （vi i i) タンパク質 3 7をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種 の発現量を測定するための試薬を含有する非小細胞肺がん悪性度の診断薬、 〔2 n〕 試薬が、 （i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （i i) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 7をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 1をコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 3をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （vi i i) タンパク質 3 7 をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なく とも一種を含有する上記 〔2 m〕 記載の診断薬、 [2 m] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (iii) a polynucleotide encoding a protein 11 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (vi) a polynucleotide encoding protein 21; At least one expression level selected from a polynucleotide containing a nucleotide, (vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23, and (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 37 A diagnostic agent for non-small cell lung cancer malignancy containing a reagent for measuring urine, [2 n] a reagent comprising: (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1; (ii) encoding protein 9 (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11; (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (V) a protein 17; A polynucleotide containing the encoding polynucleotide; (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; (vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23; and (vi ii) a polynucleotide encoding a protein 37. The diagnostic agent according to [2 m] above, which contains at least one selected from polynucleotides to be
〔2 o〕 試薬が、 （i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの 塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相捕的な塩基配列またはその 一部を含有するポリヌクレオチド、 （i i) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型と なる mR NAの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基 配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （i i i) 配列番号： 1 1で表 されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン パク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実 質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配 列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列またはその一部に 相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレ ォチド、 （V) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列 またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含 有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 21で表されるアミノ酸配列と同一 もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m RNAの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列ま たはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （vii) 配列番号： 23で表される アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に 相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチドおよび （viii) 配 列番号： 37で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列またはその一部に 相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレ ォチドから選ばれる少なくとも一種を含有する上記 〔2m〕 記載の診断薬、 〔3〕 (i) タンパク質 1に対する抗体、 （ii) タンパク質 3に対する抗体、[2 o] The reagent is added to (i) the base sequence of mRNA or a part thereof, which is a translation type of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1. A polynucleotide containing a complementary or substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof, (ii) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of mRNA that is a translational type or a portion thereof, or (iii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to or partially complementary to the nucleotide sequence of mRNA or a part thereof, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as (Iv) SEQ ID NO: 15 The nucleotide sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 or one of them A polynucleotide containing a complementary or substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof, (V) containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 Contains a complementary or substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof, or a part of a mRNA sequence that is a translational type of protein. A polynucleotide having (vi) a complementary or partial nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 21; A polynucleotide containing a substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof, (vii) a translation of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 A polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA or a part thereof, or (viii) the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 or Complementary or substantially complementary base sequence to the base sequence of mRNA or a part thereof, which is a translational variant of a protein containing substantially the same amino acid sequence Or diagnostic agent of the above-mentioned [2m], wherein the at least one selected from Porinukure Ochido containing portion thereof, [3] (i) an antibody against the protein 1, antibodies to (ii) protein 3,
(iii) タンパク質 5に対する抗体、 （iv) タンパク質 7に対する抗体、 （v) 夕 ンパク質 9に対する抗体、 （vi) タンパク質 11に対する抗体、 （vii) タンパ ク質 13に対する抗体、 （viii) タンパク質 15に対する抗体、 （ix) タンパク 質 17に対する抗体、 （X) タンパク質 19に対する抗体、 （xi) タンパク質 2 1に対する抗体、 （xii) タンパク質 23に対する抗体、 （xiii) タンパク質 2 5に対する抗体、 （xiv) タンパク質 27に対する抗体、 （XV) タンパク質 29 に対する抗体、 （xvi) タンパク質 31に対する抗体、 (xvii) タンパク質 33 に対する抗体、 （xviii) タンパク質 35に対する抗体および （xix) タンパク質 37に対する抗体から選ばれる少なくとも一種を用いることを特徴とする非小細 胞肺がん悪性度の診断方法、 (iii) an antibody against protein 5, (iv) an antibody against protein 7, (v) an antibody against protein 9, (vi) an antibody against protein 11, (vii) an antibody against protein 13, (viii) against protein 15 Antibody, (ix) antibody to protein 17, (X) antibody to protein 19, (xi) antibody to protein 21, (xii) antibody to protein 23, (xiii) antibody to protein 25, (xiv) protein 27 An antibody against (XV) protein 29, (xvi) an antibody against protein 31, (xvii) an antibody against protein 33, (xviii) an antibody against protein 35 and (xix) an antibody against protein 37 Non-small cell lung cancer malignancy diagnostic method characterized by
〔3 a〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 3、 （iii) タンパク質 5、 [3 a] (i) Protein 1, (ii) Protein 3, (iii) Protein 5,
(iv) タンパク質 7、 （V) タンパク質 9、 （vi) タンパク質 11、 （vii) タン パク質 13、 （viii) タンパク質 15、 （ix) タンパク質 17、 （X) タンパク 質 19、 （xi) タンパク質 21、 （xii) タンパク質 23、 （xiii) タンパク質 25、 （xiv) タンパク質 27、 （XV) タンパク質 29、 （xvi) タンパク質 31、 (xvii) タンパク質 33、 (xviii) タンパク質 35および （xix) タンパク質 3 7から選ばれる少なくとも一種の発現量を測定することを特徴とする非小細胞肺 がん悪性度の診断方法、 〔4〕 (i) タンパク質 3、 (ii) タンパク質 5、 (iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 （v) タンパク質 19、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （x) タン パク質 33および （xi) タンパク質 35から選ばれる少なくとも一種の発現量が 高いことを指標とする上記 〔3〕 または上記 〔3 a〕 記載の診断方法、 (iv) Protein 7, (V) Protein 9, (vi) Protein 11, (vii) Protein 13, (viii) Protein 15, (ix) Protein 17, (X) Protein 19, (xi) Protein 21 , (Xii) protein 23, (xiii) protein 25, (xiv) protein 27, (XV) protein 29, (xvi) protein 31, (xvii) protein 33, (xviii) protein 35 and (xix) protein 3 7 A method for diagnosing malignancy of non-small cell lung cancer, characterized by measuring at least one selected expression level; [4] (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (v) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29 (Ix) Protein 31, (x) Protein 33, and (xi) Protein 35 The diagnostic method according to [3] or [3a] above, wherein the expression level is high.
〔5〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 （iii) タンパク質 11、 (iv) タンパク質 15、 （V) タンパク質 17、 （vi) タンパク質 21、 (vii) タンパク質 23および （viii) タンパク質 37から選ばれる少なくとも一種の発 現量が低いことを指標とする上記 〔3〕 または上記 〔3 a〕 記載の診断方法、 〔5 a〕 （i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 （V) タンパク質 19、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （x) タン パク質 33および （xi) タンパク質 35から選ばれる少なくとも一種の発現量が 高いこと、 および、 （xii) タンパク質 1、 （xiii) タンパク質 9、 (xiv) タン パク質 11、 （XV) タンパク質 15、 （xvi) タンパク質 17、 （xvii) タンパ ク質 21、 (xviii) タンパク質 23および （xix) タンパク質 37から選ばれる 少なくとも一種の発現量が低いことを指標とする上記 〔3〕 または上記 〔3 a〕 記載の診断方法、  [5] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 11, (iv) Protein 15, (V) Protein 17, (vi) Protein 21, (vii) Protein 23, and (viii) Protein 37 The diagnostic method according to [3] or [3a] above, wherein the expression level is at least one expression level selected from the above, [5a] (i) protein 3, (ii) protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (V) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29, (ix) Protein 31, (x) Protein 33 and (xi) (Xii) protein 1, (xiii) protein 9, (xiv) protein 11, (XV) protein 15, (xvi) protein 17, (xvii) ) Protein 21, (xviii) Protein 23 and (xix) above [3] as an index of at least that one of the expression level is low is selected from a protein 37 or diagnostic methods of the above-mentioned [3 a] above,
〔6〕 非小細胞肺がんの再発の可能性が高い、 または （および） 予後が良好で はないと判定する上記 〔4〕 〜 〔5 a〕 のいずれかに記載の診断方法、 [6] The diagnostic method according to any one of the above [4] to [5a], wherein the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high, or (and) the prognosis is not good.
〔7〕 (i) タンパク質 3、 (ii) タンパク質 5、 (iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 （V) タンパク質 19、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （x) タン パク質 33および （xi) タンパク質 35から選ばれる少なくとも一種の発現量が 低いことを指標とする上記 〔3〕 または上記 〔3 a〕 記載の診断方法、 [7] (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (V) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29 (Ix) Protein 31, (x) Protein 33, and (xi) Protein 35 The diagnostic method according to [3] or [3a] above, wherein the expression level is low.
〔8〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 （iii) タンパク質 11、 (iv) タンパク質 15、 （V) タンパク質 17、 （vi) タンパク質 21、 (vii) タンパク質 23および （viii) タンパク質 37から選ばれる少なくとも一種の発 ' 現量が高いことを指標とする上記 〔3〕 または上記 〔3 a〕 記載の診断方法、  [8] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 11, (iv) Protein 15, (V) Protein 17, (vi) Protein 21, (vii) Protein 23, and (viii) Protein 37 The diagnostic method according to (3) or (3a) above, wherein at least one kind selected from
[8 a) (i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 (v) タンパク質 19、 (vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （x) タン パク質 33および （xi) タンパク質 35から選ばれる少なくとも一種の発現量が 低いこと、 および、 （0 タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 (iii) タンパク 質 11、 （iv) タンパク質 15、 （V) タンパク質 17、 （vi) タンパク質 21、[8 a) (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (v) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29, (ix) Protein 31, (x) Protein 33 and (xi) Protein 35 At least one selected expression level is low, and (0 protein 1, (ii) protein 9, (iii) protein 11, (iv) protein 15, (V) protein 17, (vi) protein 21,
(vii) タンパク質 23および （viii) タンパク質 37から選ばれる少なくとも 一種の発現量が高いことを指標とする上記 〔3〕 または上記 〔3 a〕 記載の診断 方法、 (vii) the diagnostic method according to [3] or [3a] above, wherein the expression level is at least one expression level selected from protein 23 and (viii) protein 37;
〔9〕 非小細胞肺がんの再発の可能性が低い、 および （または） 予後が良好で あると判定する上記 〔7〕 〜 〔8a〕 のいずれかに記載の診断方法、  [9] The diagnostic method according to any one of the above [7] to [8a], wherein the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is low, and (or) the prognosis is good.
〔10〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （ii) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （iii) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 11をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （Vii) タンパク質 13をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （viii) タンパク質 15をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 17をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 19をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 21をコー ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xii) タンパク質 23 をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiii) タンパク 質 25をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) 夕 ンパク質 27をコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 [10] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, (vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11, (V ii) a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding the protein 13, the polynucleotide containing the polynucleotide encoding (viii) a protein 15, the polynucleotide containing the polynucleotide encoding the (ix) protein 17 (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19, (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21, and (xii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23 (Xiii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27,
(XV) タンパク質 29をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （xvi) タンパク質 31をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （xvii) タンパク質 33をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （xviii) タンパク質 35をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 37をコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を用いることを 特徴とする非小細胞肺がん悪性度の診断方法、 (XV) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, and (xvii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, (Xviii) a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding protein 35 and (xix) a polynucleotide encoding protein 37 A method for diagnosing malignancy of non-small cell lung cancer, characterized by using at least one selected from polynucleotides containing
〔1 0 a〕 (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配 列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌク レオチド、. （U) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRN Aの塩基配列 全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレ ォチド、 （i i i) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列 全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレ ォチド、 （iv) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全 長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオ チド、 （V) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 [10 a] (i) The full-length base sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, A polynucleotide containing the full-length complementary sequence, or a part of the nucleotide sequence thereof. (U) Translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3. A polynucleotide containing the full-length base sequence of mRNA, its full-length complementary sequence, or a partial base sequence thereof; (iii) an amino acid that is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Iv) a polynucleotide containing the full-length nucleotide sequence of an mRNA that contains an acid sequence, or a complementary sequence, or a partial nucleotide sequence thereof; (iv) SEQ ID NO: 7 Contains the entire length of the mRNA translation sequence, the entire length of its complementary sequence, or a portion of the base sequence of the protein that contains the same or substantially the same amino acid sequence as (V) the full-length base sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, the full-length complementary sequence thereof, Or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(vi) SEQ ID NO: 11 The full-length base sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1, the full-length complementary sequence thereof, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(vi i) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(vi i) SEQ ID NO: 13 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO. A polynucleotide containing a partial base sequence of
(vi i i) 配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(vi ii) The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 A polynucleotide containing a partial base sequence of
(ix) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (x) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(ix) The full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17, or its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (x) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 A polynucleotide comprising a full-length mRNA base sequence, a complementary full-length sequence thereof, or a partial base sequence thereof, which is a translation variant of a protein containing a mino acid sequence,
(xi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳錶型となる mR NAの塩基配列全長、 そ' の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xi) SEQ ID NO: 21 The full-length nucleotide sequence of mRNA, which is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1, Or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(xi i) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳鐯型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xi i) SEQ ID NO: 23 The total length of the base sequence of the mRNA that is the translation type of the protein containing the amino acid sequence identical or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23, its complementary sequence, Or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
(xi i i) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xi ii) SEQ ID NO: 25 The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the complementary sequence thereof, or the translation sequence of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 A polynucleotide containing a partial base sequence,
(xiv) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (XV) 配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (XV i ) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xiv) the full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27, its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (XV) mRNA that is a translation type of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 (XV i) SEQ ID NO: 31 Amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 A polynucleotide comprising the full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or a partial base sequence thereof, which is a translation variant of a protein containing
(xvi i) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xvi i) SEQ ID NO: 33 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, A polynucleotide containing a partial base sequence of
(xvi i i) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 および （xix) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型となる m R N Aの塩基配列 全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレ ォチドから選ばれる少なくとも一種を用いることを特徴とする非小細胞肺がん悪 性度の診断方法、 (xvi ii) SEQ ID NO: 35 The full-length nucleotide sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is the translation variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 A polynucleotide containing a partial base sequence, and (xix) an mRNA that is a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 Non-small cell lung cancer, characterized by using at least one selected from the full-length nucleotide sequence, its full-length complementary sequence, or a polynucleotide containing a partial nucleotide sequence thereof Sex diagnostic method,
〔1 0 b〕 mRNAの塩基配列が、 3 ' 非翻訳領域または 5 ' 非翻訳領域の R NAの塩基配列である上記 〔1 0 a〕 記載の診断方法、  [1 0 b] The diagnostic method according to the above [1 0 a], wherein the mRNA base sequence is the RNA base sequence of the 3 ′ untranslated region or the 5 ′ untranslated region,
〔1 0 c〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 1 5をコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 1 7をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 1 9をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 2 1をコ —ドするポリヌグレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i) タンパク質 2 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (xi i i) タンパ ク質 2 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) タンパク質 2 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (XV) タンパク質 2 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （xvi) タンパク質 3 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （xvi i) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （xvi i i) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種の発現量を測定 することを特徴とする非小細胞肺がん悪性度の診断方法、  [10c] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide encoding protein 5 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (vi) a polynucleotide encoding protein 11 (Vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; and (ix) a polynucleotide encoding protein 17 Polynucleotides containing nucleotides (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; and (xi i) a polynucleotide encoding protein 23. (Xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (XV) encoding a protein 29 (Xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, (xvi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, (xvi ii) Contains a polynucleotide encoding protein 35 Polynucleotides and (xix) Non-small cell diagnostic method for lung cancer malignancy characterized by measuring at least one of the expression level selected from a polynucleotide containing Porinukure Ochido encoding the protein 3 7 that,
〔1 1〕 (i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 9をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 7をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 2 9をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 3 1をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 3 3をコ一 ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （xi) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少な くとも一種の発現量が高いことを指標とする上記 〔1 0〕 〜 〔1 0 c〕 のいずれ かに記載の診断方法、 [1 1] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7 A nucleotide, (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13 and (V) a polynucleotide encoding protein 19 (Vi) a polynucleotide containing the polynucleotide encoding protein 25, (vi i) a polynucleotide containing the polynucleotide encoding protein 27, (vi ii) encoding protein 29 (Xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, and (xi) The diagnostic method according to any one of the above [10] to [10 c], wherein the expression level is at least one kind selected from a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 35,
〔1 2〕 （i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 7をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 1をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 3をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （vi i i) タンパク質 3 7をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種 の発現量が低いことを指標とする上記 〔1 0〕 〜 〔1 0 c〕 のいずれかに記載の 診断方法、  [1 2] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (iii) a polynucleotide encoding a protein 11 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (vi) a polynucleotide encoding protein 21; A low expression level of at least one selected from (vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23 and (viii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 37 Above The diagnostic method according to any one of [1 0] to [1 0 c],
[ 1 2 a ) (i) タンパク質 3.をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 9をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 7をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 2 9をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 3 1をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 3 3をコ ードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （xi) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少 なくとも一種の発現量が高いこと、 および、 (xi i) タンパク質 1をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i i) タンパク質 9をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) タンパク質 1 1を コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （XV) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xvi) タンパ ク質 1 7をコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xvi i) タンパク質 2 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (xvi i i) タンパク質 2 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレ ォチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種の発現量が低いことを指標とする 上記 〔1 0〕 〜 〔1 0 c〕 のいずれかに記載の診断方法、 [1 2 a) (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3. (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5 (iii) a polynucleotide encoding a protein 7 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (vi) a polynucleotide encoding protein 25; (Vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (ix) a protein 31 Polynucleotide containing the encoding polynucleotide Fault, the (X) protein 3 3 co A high expression level of at least one selected from a polynucleotide containing a polynucleotide to be loaded and (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 35; and (xi i) protein 1 A polynucleotide containing a polynucleotide encoding, (xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11 and (XV) protein 15 (Xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (xvi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; (xvi ii) A protein encoding protein 23 The above-mentioned [1 0] to [1 0 c], wherein the expression level is at least one selected from a polynucleotide containing a nucleotide and a polynucleotide containing a polynucleotide encoding (xix) protein 37. A diagnostic method according to any of the above,
〔1 3〕 ポリヌクレオチドが mRNAである上記 〔1 1〕 〜 〔1 2 a〕 のいず れかに記載の診断方法、  [1 3] The diagnostic method according to any one of the above [1 1] to [1 2 a], wherein the polynucleotide is mRNA.
〔1 4〕 非小細胞肺がんの再発の可能性が高い、 および （または） 予後が良好 ではないと判定する上記 〔1 1〕 〜 〔1 2 a〕 のいずれかに記載の診断方法、 [1 4] The diagnostic method according to any one of [1 1] to [1 2 a] above, wherein the recurrence of non-small cell lung cancer is high and / or the prognosis is not good.
〔1 5〕 (i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 (iv) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 9をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 7をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 2 9をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 3 1をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 3 3をコー ドするポリヌクレオチドおよび （xi) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種の発現量が低いこ とを指標とする上記 〔1 0〕 〜 〔1 0 c〕 のいずれかに記載の診断方法、 〔1 6〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 1 1をコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 7をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 1をコードするポリヌクレオ チ 1 ^を含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 3をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （vi i i) タンパク質 3 7をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種 の発現量が高いことを指標とする上記 〔1 0〕 〜 〔1 0 c〕 のいずれかに記載の 診断方法、 [15] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7 A nucleotide, (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (vi) containing a polynucleotide encoding protein 25; (Vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, and (ix) encoding protein 31 A polynucleotide containing a polynucleotide (X) a polynucleotide encoding the protein 33 and (xi) a polynucleotide containing the polynucleotide encoding the protein 35, and the above expression [1] 0] to [1 0 c], [16] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (iii) a polynucleotide encoding the protein 11 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (vi) a polynucleotide encoding protein 21; (Vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23 and (vi ii) at least one polynucleotide selected from a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 37 The above, with high expression level as an indicator Diagnostic method according to any one of 1 0] - [1 0 c],
〔1 6 a〕 (i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 3をコ一ドするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 9をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 7をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 2 9をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 3 1をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 3 3をコ ードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （xi) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少 なくとも一種の発現量が低いこと、 および、 （xi i) タンパク質 1をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i i) タンパク質 9をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) タンパク質 1 1を コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （XV) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xvi) タンパ ク質 1 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xvi i) タンパク質 2 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (xvi i i) タンパク質 2 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレ ォチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種の発現量が高いことを指標とする 上記 〔1 0〕 〜 〔1 0 c〕 のいずれかに記載の診断方法、 [16a] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, and (iii) a polynucleotide encoding protein 7 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; and (vi) encoding protein 25. A polynucleotide containing a polynucleotide, (vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (ix) protein 3 1 A polynucleotide containing a polynucleotide encoding A low level of expression of at least one selected from a rheotide, (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, and (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 35 And (xi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (xiv) a polynucleotide encoding a protein 11 (XV) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (xvi i) encoding a protein 21 A polynucleotide containing the polynucleotide; (xvi ii) The expression level is at least one kind selected from a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23 and (xix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 37. [1 0] to the diagnostic method according to any one of [1 0 c],
〔1 7〕 ポリヌクレオチドが mR NAである上記 〔1 5〕 〜 〔1 6 a〕 のいず れかに記載の診断方法、  [17] The diagnostic method according to any one of [15] to [16a] above, wherein the polynucleotide is mRNA.
〔1 8〕 非小細胞肺がんの再発の可能性が低いおよび （または） 予後が良好で あると判定する上記 〔1 5〕 〜 〔1 6 a〕 のいずれかに記載の診断方法、 〔1 9〕 (i) タンパク質 3に対する抗体、 （i i) タンパク質 5に対する抗体、 (i i i) タンパク質 7に対する抗体、 （iv) タンパク質 1 3に対する抗体、 （v) タンパク質 1 9に対する抗体、 （vi) タンパク質 2 5に対する抗体、 （vi i) 夕 ンパク質 2 7に対する抗体、 （vi i i) タンパク質 2 9に対する抗体、 （ix) タン パク質 3 1に対する抗体、 （X) タンパク質 3 3に対する抗体および （xi) タン パク質 3 5に対する抗体から選ばれる少なくとも一種を含有してなる非小細胞肺 がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤、  [18] The diagnostic method according to any one of [15] to [16a] above, wherein the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is low and / or the prognosis is good, [19] ] (I) antibody to protein 3, (ii) antibody to protein 5, (iii) antibody to protein 7, (iv) antibody to protein 13; (v) antibody to protein 19; (vi) to protein 25 Antibodies, (vi i) antibodies to protein 27, (vi ii) antibodies to protein 29, (ix) antibodies to protein 31, (X) antibodies to protein 33 and (xi) proteins 3 Non-small cell lung cancer prevention / treatment agent and / or recurrence prevention agent comprising at least one selected from antibodies to 5
〔2 0〕 (i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補 的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチ ド、 （i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もし くは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 (i i i) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは 実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質 的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （V) タンパ ク質 1 9をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相 補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的 な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 7 をコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩 基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 2 9を コードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基 配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 31をコ一 ドするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列 またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 33をコードする ポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列または その一部を含有するポリヌクレオチドおよび （xi) タンパク質 35をコードする ポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列または その一部を含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含有してな る非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤、 [20] (i) a polynucleotide containing a base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of a polynucleotide encoding protein 3, or a part thereof, (ii) a polynucleotide encoding protein 5 A polynucleotide containing a nucleotide sequence that is complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of (3), or (iii) complementary or substantially complementary to the nucleotide sequence of a polynucleotide encoding protein 7. (Iv) a polynucleotide containing a base sequence or a part thereof; (iv) a polynucleotide containing a base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of a polynucleotide encoding protein 13 or a part thereof; ) Base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of the polynucleotide encoding protein 19 or a part thereof (Vi) a polynucleotide containing a base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of a polynucleotide encoding protein 25, or a part thereof, (vi i) encoding protein 27 A polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of the polynucleotide to be prepared, or a part thereof, (vi ii) complementary or substantially complementary to the nucleotide sequence of the polynucleotide encoding protein 29 Base complementary to (Ix) a polynucleotide containing a base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of the polynucleotide encoding protein 31 or a part thereof, (X) ) A polynucleotide containing a base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of the polynucleotide encoding protein 33, or a part thereof, and (xi) complementary to the base sequence of the polynucleotide encoding protein 35 or A preventive / therapeutic agent for non-small cell lung cancer and / or an anti-recurrence agent, comprising at least one selected from polynucleotides comprising a substantially complementary nucleotide sequence or a part thereof,
〔21〕 (i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドに対する s i RN Aまたは s hRNA、 （ii) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドに対す る s i RNAまたは s hRNA、 （iii)タンパク質 7をコードするポリヌクレオ チドに対する s i RNAまたは s hRNA、 (iv) タンパク質 13をコードする ポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s h'RNA、 （v)タンパク質 19を コードするポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 （vi)タンパ ク質 25をコードするポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 (vii)タンパク質 27をコードするポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 （viii)タンパク質 29をコードするポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 （ix)タンパク質 31をコードするポリヌクレオチドに 対する s i RNAまたは s hRNA、 （x)タンパク質 33をコードするポリヌク レオチドに対する s i RNAまたは s hRNAおよび （xi) タンパク質 35をコ ードするポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNAから選ばれる少 なくとも一種を含有してなる非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再 発防止剤、  [21] (i) siRNA or sRNA for polynucleotide encoding protein 3, (ii) siRNA or sRNA for polynucleotide encoding protein 5, (iii) polynucleotide encoding protein 7 (Iv) siRNA or s h'RNA against a polynucleotide encoding protein 13 (v) si RNA or s hRNA against a polynucleotide encoding protein 19 (vi) protein 25 (Vii) si RNA or s hRNA against a polynucleotide encoding protein 27, (viii) si RNA or s hRNA against a polynucleotide encoding protein 29, (ix) protein SiRNA or sRNA for the polynucleotide encoding 31, (x) protein 33 A non-small cell lung cancer preventive / therapeutic agent comprising at least one selected from siRNA or sRNA against a polynucleotide encoding (xi) siRNA or sRNA against a polynucleotide encoding protein 35, and (Or) anti-regeneration agent,
〔21 a] (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配 列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を 含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一 もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m RNAの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列ま たはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （iii) 配列番号： 7で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻 訳铸型となる mR N Aの塩基配列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補 的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 3で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有す るタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列またはその一部に相補的もし くは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 (V)配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRN Aの塩基配列に相補的も しくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 (vi)配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列に相補的も しくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、[21 a] (i) Complementary to a nucleotide sequence of mRNA or a part thereof, which is a translation type of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3. (Ii) a translation of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Iii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7; A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to or partially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the nonacid sequence (Iv) a nucleotide sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 (V) a polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary or substantially complementary to a portion or a part thereof, (V) an amino acid identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 (Vi) a polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that is a translation variant of a protein containing the sequence, or (vi) SEQ ID NO: 25 Amino A polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the sequence. nucleotide,
(vi i)配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型となる mR NAの塩基配列に相補的 もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、(vi i) Complementary or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that forms a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 A polynucleotide containing a typical nucleotide sequence or a part thereof,
(vi i i)配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列に相補的 もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、(vi ii) Complementary or substantially complementary to the nucleotide sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 A polynucleotide containing a typical nucleotide sequence or a part thereof,
(ix)配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列に相補的も しくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 (X)配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列に相補的も しくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチドぉ よびおよび （xi) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRN Aの塩基配 列またはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を 含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含有してなる非小細胞 肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤、 (ix) Complementary or substantial to the nucleotide sequence of the mRNA that forms the translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 (X) a polynucleotide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33, A polynucleotide comprising a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of the mRNA, and (xi) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 Alternatively, from a polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of mRNA or a part thereof, which becomes a translational variant of a protein containing substantially the same amino acid sequence Selection At least one containing formed by preventing non-small cell lung cancer-therapeutic agent and (or) preventative agent,
〔2 1 b〕 (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列 全長またはその一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチドに対する s i RNA または s hRNA、 (ii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRNAの 塩基配列全長またはその一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 (iii) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一 もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m RNAの塩基配列全長またはその一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチドに 対する s i RNAまたは s hRNA、 (iv) 配列番号： 13で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸 型となる mRNAの塩基配列全長またはその一部の塩基配列を含有するポリヌク レオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 （v)配列番号： 19で表される ァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質 の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列全長またはその一部の塩基配列を含有する ポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 （vi)配列番号： 25で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長またはその一部の塩基配列を 含有するポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 （vii)配列番 号： 27で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列全長またはその一部の 塩基配列を含有するポリヌクレオチドに対する s i RNAまたはs hRNA、. · (viii)配列番号： 29で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型となる mRNAの塩基配列全長また はその一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 （ix)配列番号： 31で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列 全長またはその一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチドに対する s i RNA または s hRNA、 （x)配列番号： 33で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳銬型となる mRNAの 塩基配列全長またはその一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチドに対する s i R NAまたは s h R NAおよびおよび （xi) 配列番号： 3 5で表されるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳 踌型となる mR N Aの塩基配列全長またはその一部の塩基配列を含有するポリヌ クレオチドに対する s i RNAまたは s h R NAから選ばれる少なくとも一種を 含有してなる非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤、[2 1 b] (i) SEQ ID NO: 3 identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SiRNA or sRNA for a polynucleotide containing the full-length or a part of the base sequence of mRNA, which is a translation type of a protein containing the same amino acid sequence, (ii) represented by SEQ ID NO: 5 SiRNA or sRNA against a polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence, (iii) sequence No .: against the polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of the mRNA that is the translation type of the protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by No. 7. siRNA or sRNA, (iv) conversion of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 SiRNA or sRNA against a polynucleotide containing the full-length mRNA base sequence or a part of the base sequence, (v) the same or substantially the same amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 SiRNA or sRNA against a polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of the mRNA that is a translation variant of the protein containing the amino acid sequence of (vi) represented by SEQ ID NO: 25 SiRNA or sRNA against a polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as (Vii) SEQ ID NO: 27 is the full length of the nucleotide sequence of the mRNA or the translation sequence of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as that shown in SEQ ID NO: 27 SiRNA or shRNA against a polynucleotide containing a part of the nucleotide sequence of .. (viii) of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 SiRNA or sRNA for a polynucleotide containing the full-length or a part of the base sequence of the mRNA to be translated, (ix) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 A base sequence of mRNA which is a translation type of a protein containing the amino acid sequence of siRNA or sRNA for a polynucleotide containing the full length or a part of the base sequence, (x) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 A polynucleotide containing the full-length mRNA base sequence or a part of the base sequence of a mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as S against Chido iRNA or shRNA and (xi) Translation of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 Non-small cell lung cancer prevention / treatment agent and / or recurrence prevention agent comprising at least one selected from siRNA or shRNA against a polynucleotide containing the full length or a part of the nucleotide sequence thereof,
〔2 1 c〕 mRNAの塩基配列が、 3 ' 非翻訳領域または 5 ' 非翻訳領域の R NAの塩基配列である上記 〔2 1 b〕 記載の予防 ·治療剤および （または） 再発 防止剤、 [2 1 c] The prophylactic / therapeutic agent and / or recurrence preventing agent according to the above [2 1 b], wherein the base sequence of mRNA is the base sequence of the RNA of the 3 ′ untranslated region or the 5 ′ untranslated region,
〔2 2〕 (i) タンパク質 3の活性を阻害する化合物またはその塩、 （i i) 夕 ンパク質 5の活性を阻害する化合物またはその塩、 （i i i) タンパク質 7の活性を 阻害する化合物またはその塩、 （iv) タンパク質 1 3の活性を阻害する化合物ま たはその塩、 （V) タンパク質 1 9の活性を阻害する化合物またはその塩、 （vi) タンパク質 2 5の活性を阻害する化合物またはその塩、 （vi i) タンパク質 2 7の 活性を阻害する化合物またはその塩、 （vi i i) タンパク質 2 9の活性を阻害する 化合物またはその塩、 （ix) タンパク質 3 1の活性を阻害する化合物またはその 塩、 （X) タンパク質 3 3の活性を阻害する化合物またはその塩および （xi) タン パク質 3 5の活性を阻害する化合物またはその塩から選ばれる少なくとも一種を 含有してなる非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤、 〔2 3〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 1 1をコード,するポリヌクレオチドを含有す 'るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 1 5をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 1 7をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 2 1をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 2 3をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 および （vi i i) タンパク質 3 7をコー ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一 種を含有することを特徴とする非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤、  [2 2] (i) Compound or salt thereof that inhibits the activity of protein 3, (ii) Compound or salt thereof that inhibits the activity of protein 5, (iii) Compound or salt thereof that inhibits the activity of protein 7 (Iv) a compound or a salt thereof that inhibits the activity of protein 13; (V) a compound or a salt thereof that inhibits the activity of protein 19; or (vi) a compound or a salt thereof that inhibits the activity of protein 25. (Vi i) a compound or salt thereof that inhibits the activity of protein 27, (vi ii) a compound or salt thereof that inhibits the activity of protein 29, or (ix) a compound or salt thereof that inhibits the activity of protein 31 Prevention of non-small cell lung cancer, comprising (X) a compound or a salt thereof that inhibits the activity of protein 33 and (xi) a compound or a salt thereof that inhibits the activity of protein 35 · Therapeutic agent and / or anti-recurrence agent [2 3] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1; (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9; (iii) A polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11; (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; (vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23; and (vi ii) a polynucleotide encoding protein 37. At least selected from polynucleotides containing Non-small cell lung cancer prevention / treatment agent and / or recurrence prevention agent, characterized by containing
〔2 4〕 (i) タンパク質 1の活性を促進する化合物またはその塩、 (i i) 夕 ンパク質 9の活性を促進する化合物またはその塩、 （iii) タンパク質 11の活性 を促進する化合物またはその塩、 （iv) タンパク質 15の活性を促進する化合物 またはその塩、 （V) タンパク質 17の活性を促進する化合物またはその塩、 (vi) タンパク質 21の活性を促進する化合物またはその塩、 （vii) タンパク質 23の活性を促進する化合物またはその塩、 および (viii) タンパク質 37の活 性を促進する化合物またはその塩から選ばれる少なくとも一種を含有してなる非 小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤、 [2 4] (i) Compound or salt thereof that promotes the activity of protein 1, (ii) A compound or a salt thereof that promotes the activity of protein 9, (iii) a compound or a salt thereof that promotes the activity of protein 11, (iv) a compound or a salt thereof that promotes the activity of protein 15, (V) the activity of protein 17 (Vi) a compound or a salt thereof that promotes the activity of protein 21, (vii) a compound or a salt thereof that promotes the activity of protein 23, and (viii) an activity of protein 37 Non-small cell lung cancer prevention / treatment agent and / or recurrence prevention agent comprising at least one selected from a compound or a salt thereof,
〔25〕 （i) タンパク質 3、 （ii) タンパク質 5、 （iii) タンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 （V) タンパク質 19、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （x) タン パク質 33、 または （xi) タンパク質 35を用いることを特徴とする、 上記 (i) 〜 （xi) 記載のタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性 を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、  [25] (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (V) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Protein 29 (Ix) protein 31, (x) protein 33, or (xi) protein 35, wherein the activity of the protein or its partial peptide or salt thereof described in (i) to (xi) above is used. Screening method for inhibiting compound or salt thereof,
〔26〕 (i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （ii) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （iii) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 13をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 19をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 25をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vii) タンパク質 27をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （viii).タンパク質 29をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 31をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 33をコ一 ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 または （xi) タンパク質 35 コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドを用いることを 特徴とする、 上記 （i) 〜 （xi) 記載のポリヌクレオチドの発現を阻害する化合 物またはその塩のスクリーニング方法、  [26] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13, (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19, (vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (Vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27; (viii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29; (ix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31; (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, or (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 35, wherein (i) to (xi) A method for screening a compound or a salt thereof that inhibits the expression of the polynucleotide described above,
〔27〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 （iii) タンパク質 11、 (iv) タンパク質 15、 （V) タンパク質 17、 （vi) タンパク質 21、 (vii) タンパク質 23、 または （viii) タンパク質 37を用いることを特徴とする、 上 記 （i) 〜 （viii) 記載のタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の 活性を促進する化合物またはその塩のスクリーニング方法、 [27] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 11, (iv) Protein 15, (V) Protein 17, (vi) Protein 21, (vii) Protein 23, or (viii) Protein 37, characterized by using (I) to (viii) a method for screening a compound or a salt thereof that promotes the activity of the protein or a partial peptide thereof or a salt thereof according to (i) to (viii);
〔28〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （ii) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （iii) タンパク質 11をコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 15をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 17をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 21をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （vii) タンパク質 23をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 または （viii) タンパク質 37をコー ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドを用いることを特徴とする、 上記 （i) 〜 （viii) 記載のポリヌクレオチドの発現を阻害する化合物またはそ の塩のスクリーニング方法、  [28] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (iii) a polynucleotide encoding a protein 11 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15, (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17, and (vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21. (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23, or (viii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 37, wherein (i) to (viii) are used. The polynucleotide described A method for screening a compound or a salt thereof that inhibits the expression of
〔29〕 (i) タンパク質 3、 (ii) タンパク質 5、 (iii) 夕ンパク質 7、 (iv) タンパク質 13、 （V) タンパク質 19、 （vi) タンパク質 25、 (vii) タンパク質 27、 （viii) タンパク質 29、 （ix) タンパク質 31、 （x) タン パク質 33、 および （xi) タンパク質 35から選ばれる少なくとも一種の活性を 阻害することを特徴とする非小細胞肺がんの予防 ·治療方法および （または） 再 発防止方法、  [29] (i) Protein 3, (ii) Protein 5, (iii) Protein 7, (iv) Protein 13, (V) Protein 19, (vi) Protein 25, (vii) Protein 27, (viii) Non-small cell lung cancer prevention / treatment method characterized by inhibiting at least one activity selected from protein 29, (ix) protein 31, (x) protein 33, and (xi) protein 35 and / or ) Reoccurrence prevention method,
〔30〕 （i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （ii) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （iii) タンパク質 7をコ一ドするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 13をコ一ドするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 19をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 25をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vii) タンパク質 27をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （viii) タンパク質 29をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ ) タンパク質 31をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 33をコー ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 および （xi) タンパク質 35をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少 なくとも一種の発現を阻害することを特徴とする非小細胞肺がんの予防 ·治療方 法および （または） 再発防止方法、 [30] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5, and (iii) a polynucleotide encoding protein 7 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13, (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19, and (vi) a polynucleotide encoding protein 25. (Vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (viii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, () containing a polynucleotide encoding protein 31 Polynucleoti , (X) a polynucleotide protein 33 containing code polynucleotide encoding, and (xi) proteins A method for the prevention / treatment of non-small cell lung cancer and / or a method for preventing recurrence characterized by inhibiting the expression of at least one selected from a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding 35,
〔31〕 （i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 9、 （iii) タンパク質 11、 (iv) タンパク質 15、 （V) タンパク質 17、 （vi) タンパク質 21、 (vii) タンパク質 23、 および （viii) タンパク質 37から選ばれる少なくとも一種の 活性を促進することを特徴とする非小細胞肺がんの予防，治療方法および （また は） 再発防止法、  [31] (i) Protein 1, (ii) Protein 9, (iii) Protein 11, (iv) Protein 15, (V) Protein 17, (vi) Protein 21, (vii) Protein 23, and (viii) Protein A method for preventing, treating and / or preventing recurrence of non-small cell lung cancer, characterized by promoting at least one activity selected from 37,
〔32〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （ii) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （iii) タンパク質 11をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 15をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 17をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 21をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （vii) タンパク質 23をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 および （viii) タンパク質 37をコー ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ドから選ばれる少なくとも一種の発現を促進することを特徴とする非小細胞肺が んの予防 ·治療方法および （または） 再発防止方法などを提供する。  [32] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11 (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; (Vii) promotes expression of at least one selected from a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding protein 23, and (viii) a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding protein 37 Providing such non-small cell lung of I preventive and therapeutic methods and (or) prevent recurrence wherein the Rukoto.
さらには、  Moreover,
〔i〕 (i) タンパク質 1に対する抗体、 （ii) タンパク質 3に対する抗体、 (iii) タンパク質 5に対する抗体、 （iv) タンパク質 7に対する抗体、 （V) 夕 ンパク質 9に対する抗体、 （vi) タンパク質 11に対する抗体、 （vii) タンパ ク質 13に対する抗体、 （viii) タンパク質 15に対する抗体、 （ix) タンパク 質 17に対する抗体、 （X) タンパク質 19に対する抗体、 （xi) タンパク質 2 1に対する抗体、 （xii) タンパク質 23に対する抗体、 （xiii) タンパク質 2 5に対する抗体、 （xiv) タンパク質 27に対する抗体、 （XV) タンパク質 29 に対する抗体、 （xvi) タンパク質 31に対する抗体、 （xvii) タンパク質 33 に対する抗体、 （xviii) タンパク質 35に対する抗体および （xix) タンパク質 37に対する抗体から選ばれる少なくとも一種を含有することを特徴とする非小 細胞肺がん悪性度診断用の抗体マイクロアレイ、 [I] (i) antibody to protein 1, (ii) antibody to protein 3, (iii) antibody to protein 5, (iv) antibody to protein 7, (V) antibody to protein 9; (vi) protein 11 (Vii) antibody to protein 13, (viii) antibody to protein 15, (ix) antibody to protein 17, (X) antibody to protein 19, (xi) antibody to protein 21, (xii) (Xiii) antibody against protein 25, (xiv) antibody against protein 27, (XV) antibody against protein 29, (xvi) antibody against protein 31, (xvii) antibody against protein 33, (xviii) protein Non-small, characterized in that it contains at least one selected from an antibody against 35 and an antibody against (xix) protein 37 Antibody microarray for cell lung cancer malignancy diagnosis,
〔i i〕 上記 〔i〕 記載の抗体マイクロアレイを含有する診断用キット、  [I i] a diagnostic kit containing the antibody microarray of [i] above,
〔i i i〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （i i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 1 5をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 1 7をコ一ドするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 1 9をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 2 1をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i) タンパク質 2 3を コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i i) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) タン パク質 2 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （XV) タンパク質 2 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (xvi) タンパク質 3 1をコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオ チド、 （xvi i) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （xvi i i) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含有することを特 徵とする非小細胞肺がん悪性度診断用のマイクロアレイ、  [Iii] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5. (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11 A nucleotide, (vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13, (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15, (ix) encoding protein 17 Polynucleotide containing polynucleotide (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; and (xi i) a polynucleotide encoding a protein 23. (Xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, and (XV) encoding protein 29 A polynucleotide containing a polynucleotide, (xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, (xvi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, (xvi ii) a protein Contains polynucleotide encoding 3-5 A microarray for diagnosing malignancy of non-small cell lung cancer, characterized in that it comprises at least one selected from the group consisting of: a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding a polynucleotide encoding (xix) protein 37;
〔iv〕 (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列全 長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオ チド、 （i i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (i i i) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、[Iv] (i) the full length of the base sequence of mRNA, the full length of its complementary sequence, or the translation sequence of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 1, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (ii) a base of mRNA that is a translational type of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 A polynucleotide comprising the full length of the sequence, the full length of its complementary sequence, or a partial base sequence thereof, (iii) full-length mRNA sequence, a full-length complementary sequence thereof, or a complementary sequence thereof, or a translation variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 A polynucleotide containing a partial base sequence of
(iv) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRN Aの塩基配列全長、 その 相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (V) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRN Aの塩基配列全長、 その 相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(iv) the full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 A polynucleotide containing a partial base sequence, (V) a base of mRNA that is a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 A polynucleotide containing a full-length sequence, its full-length complementary sequence, or a partial base sequence thereof; (vi) containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 1 A polynucleotide containing the full-length nucleotide sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or a partial sequence thereof,
(vi i) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(vi i) SEQ ID NO: 13 The full length of the base sequence of mRNA, the full length of its complementary sequence, or one of them A polynucleotide containing a partial base sequence,
(vi i i) 配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳鍀型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(vi ii) SEQ ID NO: 15 The full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translation variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 5, the full-length complementary sequence thereof, or their A polynucleotide containing a partial base sequence,
(ix) 配列 ¾^号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (X) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実單的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRN Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (xi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (xi i) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRN Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 W 200 (ix) Sequence ¾ ^ No .: Full length of mRNA sequence that is the translational type of protein containing amino acid sequence identical or substantially identical to amino acid sequence represented by 7 and its complementary sequence Or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (X) a translational variant of a protein containing an amino acid sequence identical or practically identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 A polynucleotide containing the full-length nucleotide sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or a partial nucleotide sequence thereof; (xi) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 (Xi i) SEQ ID NO: 2 Polynucleotide containing the full-length nucleotide sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or a partial nucleotide sequence thereof, which is a translation type of a protein containing the amino acid sequence of Ami represented by 3 Nucleotide sequence full length of mRNA A of the same acid sequence or substantially the translation 铸型 of a protein containing the same amino acid sequence, a complementary sequence full length or polynucleotide containing a nucleotide sequence of a portion thereof, W 200
(xi i i) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xi ii) The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is the translation type of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 A polynucleotide containing a partial base sequence of
(xiv) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有する夕ンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (XV) 配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 そ の相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 (XV i) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xiv) the full-length nucleotide sequence of an mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27, its complementary sequence, or A polynucleotide containing a partial base sequence thereof, (XV) a translation type of a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 A polynucleotide containing the full-length base sequence of RNA, its full-length complementary sequence, or a partial base sequence thereof, (XV i), an amino acid identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 A polynucleotide containing a full-length mRNA base sequence, its complementary full-length sequence, or a partial base sequence thereof, which is a translation variant of a protein containing the sequence,
(xvi i) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、(xvi i) SEQ ID NO: 33 The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the complementary sequence thereof, or the translation sequence of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 3 A polynucleotide containing a partial base sequence,
(xvi i i) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同 もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド、 および （xix) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列 全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレ ォチドから選ばれる少なくとも一種を含有することを特徴とする非小細胞肺がん 悪性度診断用のマイクロアレイ、 (xvi ii) SEQ ID NO: 35 The full-length base sequence of mRNA, the full-length complementary sequence thereof, or the full-length complementary sequence thereof, which is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 35 A polynucleotide containing a partial base sequence, and (xix) a base sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 A microarray for diagnosing malignancy of non-small cell lung cancer, comprising at least one selected from full-length, full length of its complementary sequence, or a polynucleotide containing a partial base sequence thereof,
〔v〕 mR NAの塩基配列が、 3 ' 非翻訳領域または 5， 非翻訳領域の RN A の塩基配列である上記 〔iv〕 記載のマイクロアレイ、  [V] the microarray according to the above [iv], wherein the nucleotide sequence of mRNA is the nucleotide sequence of 3 ′ untranslated region or 5;
Cvi] 上記 〔i i i〕 〜 〔v〕 のいずれかに記載のマイクロアレイを含有する診断用 干ッ卜、  Cvi] Diagnostic drought containing the microarray according to any one of [i i i] to [v] above,
〔vi i〕 (i) タンパク質 1に対する抗体、 （i i) タンパク質 3に対する抗体、 ( i i i) タンパク質 5に対する抗体、 （iv) タンパク質 7に対する抗体、 （V) 夕 ンパク質 9に対する抗体、 （Yi) タンパク質 1 1に対する抗体、 （vi i) タンパ ク質 13に対する抗体、 (viii) タンパク質 15に対する抗体、 （ix) タンパク 質 17に対する抗体、 （X) タンパク質 19に対する抗体、 （xi) タンパク質 2 1に対する抗体、 （xii) タンパク質 23に対する抗体、 （xiii) タンパク質 2 5に対する抗体、 （xiv) タンパク質 27に対する抗体、 （XV) タンパク質 29 に対する抗体、 （xvi) タンパク質 31に対する抗体、 （xvii) タンパク質 33 に対する抗体、 （xviii) タンパク質 35に対する抗体および （xix) タンパク質 37に対する抗体から選ばれる少なく も一種を用いることを特徴とする非小細 胞肺がんの悪性度の予測方法、 [Vi i] (i) antibody to protein 1, (ii) antibody to protein 3, (iii) antibody to protein 5, (iv) antibody to protein 7, (V) antibody to protein 9; (Yi) protein 1 Antibody against 1, (vi i) Tampa (Viii) an antibody against protein 15, (ix) an antibody against protein 17, (X) an antibody against protein 19, (xi) an antibody against protein 21, (xii) an antibody against protein 23, (xiii ) An antibody against protein 25, (xiv) an antibody against protein 27, (XV) an antibody against protein 29, (xvi) an antibody against protein 31, (xvii) an antibody against protein 33, (xviii) an antibody against protein 35 and (xix) A method for predicting the malignancy of non-small cell lung cancer, characterized by using at least one antibody selected from antibodies to protein 37;
[viii] (i) タンパク質 1、 （ii) タンパク質 3、 (iii) タンパク質 5、 (iv) タンパク質 7、 （V) タンパク質 9、 （vi) タンパク質 11、 （vii) タン パク質 13、 （viii) タンパク質 15、 （ix) タンパク質 17、 （x) タンパク 質 19、 （xi) タンパク質 21、 （xii) タンパク質 23、 （xiii) タンパク質 25、 （xiv) タンパク質 27、 （XV) タンパク質 29、 （xvi) タンパク質 31、 (xvii) タンパク質 33、 (xviii) タンパク質 35および （xix) タンパク質 3 7から選ばれる少なくとも一種の発現量を測定することを特徴とする非小細胞肺 がんの悪性度の予測方法、  [viii] (i) Protein 1, (ii) Protein 3, (iii) Protein 5, (iv) Protein 7, (V) Protein 9, (vi) Protein 11, (vii) Protein 13, (viii) Protein 15, (ix) Protein 17, (x) Protein 19, (xi) Protein 21, (xii) Protein 23, (xiii) Protein 25, (xiv) Protein 27, (XV) Protein 29, (xvi) Protein 31, a method for predicting the malignancy of non-small cell lung cancer, characterized by measuring at least one expression level selected from (xvii) protein 33, (xviii) protein 35 and (xix) protein 37
〔ix〕 再発の可能性、 予後の良悪または （および） 転移の可能性を予測する上 記 〔vii〕 または上記 〔viii〕 記載の方法、  [Ix] The method described in [vii] or [viii] above, which predicts the likelihood of recurrence, prognosis, or (and) the possibility of metastasis,
〔x〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレ ォチド、 （ii) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （iii) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （V) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 11をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （vii) タンパク質 ί 3をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチド、 （viii) タンパク質 15をコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 17をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 19をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 21をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xii) タンパク質 23をコ —ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i i) タンパク質 2 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) タンパ ク質 2 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （XV) 夕 ンパク質 2 9をコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (XV i ) タンパク質 3 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオ チド、 （xvi i) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （xvi i i) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を用いることを特徴 とする非小細胞肺がんの悪性度の予測方法、 [X] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5 (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, (vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11, (Vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein ί 3, (viii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; (ix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19, (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21, and (xii) a protein 23. A polynucleotide containing a polynucleotide to be encoded, (xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (XV ) A polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29, (XV i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, and (xvi i) a polynucleotide encoding protein 33 A polynucleotide containing (xvi ii) a polynucleotide containing a protein 35 encoding polynucleotide and (xix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 37 using at least one selected from the following: How to predict the malignancy of non-small cell lung cancer ,
Cxi) (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （i i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 9をコ一ドするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 (vi i i) タンパク質 1 5をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 1 7をコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 1 9をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 2 1をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i) タンパク質 2 3を コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i i) タンパク質 2 5をコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) タン パク質 2 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （XV) 夕ンパク質 2 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 Cxi) (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5. (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (vi) a polynucleotide encoding protein 11 (Vi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (vi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 15; and (ix) a polynucleotide encoding protein 17 Polynucleotides containing nucleotides (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; and (xi i) a polynucleotide encoding a protein 23. (Xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide that encodes protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (XV) a protein 2 A polynucleotide comprising a polynucleotide encoding 9;
(xv i) タンパク質 3 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオ チド、 （xvi i) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （xvi i i) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種の発現量を測定する ことを特徴とする非小細胞肺がんの悪性度の予測方法、 (xv i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31, (xvi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33, (xvi ii) containing a polynucleotide encoding protein 35 Polynucleotides encoding (xix) protein 37 A method for predicting the malignancy of non-small cell lung cancer, comprising measuring at least one expression level selected from polynucleotides containing
〔xii〕 再発の可能性、 予後の良悪または （および） 転移の可能性を予測する 上記 〔χ〕 または上記 〔xi〕 記載の方法、  [Xii] the method described in the above [χ] or the above [xi] for predicting the possibility of recurrence, prognosis, or (and) the possibility of metastasis,
〔xiii〕 (i) タンパク質 1に対する抗体、 （ii) タンパク質 3に対する抗体、 [Xiii] (i) an antibody against protein 1, (ii) an antibody against protein 3,
(iii) タンパク質 5に対する抗体、 （iv) タンパク質 7に対する抗体、 （V) 夕 ンパク質 9に対する抗体、 （vi) タンパク質 11に対する抗体、 （vii) タンパ ク質 13に対する抗体、 （viii) タンパク質 15に対する抗体、 （ix) タンパク 質 17に対する抗体、 （X) タンパク質 19に対する抗体、 （xi) タンパク質 2 1に対する抗体、 （xii) タンパク質 23に対する抗体、 （xiii) タンパク質 2 5に対する抗体、 （xiv) タンパク質 27に対する抗体、 （XV) タンパク質 29 に対する抗体、 （xvi) タンパク質 31に対する抗体、 （xvii) タンパク質 33 に対する抗体、 （xviii) タンパク質 35に対する抗体および （xix) タンパク質 37に対する抗体から選ばれる少なくとも一種を用いることを特徴とする非小細 胞肺がんの悪性度の分類方法、 (iii) an antibody against protein 5, (iv) an antibody against protein 7, (V) an antibody against protein 9, (vi) an antibody against protein 11, (vii) an antibody against protein 13, (viii) against protein 15 Antibody, (ix) antibody to protein 17, (X) antibody to protein 19, (xi) antibody to protein 21, (xii) antibody to protein 23, (xiii) antibody to protein 25, (xiv) protein 27 An antibody against (XV) protein 29, (xvi) an antibody against protein 31, (xvii) an antibody against protein 33, (xviii) an antibody against protein 35 and (xix) an antibody against protein 37 A method for classifying malignancy of non-small cell lung cancer, characterized by
〔xiv〕 (i) タンパク質 （ii) タンパク質 3、 (iii) タンパク質 5、 [Xiv] (i) Protein (ii) Protein 3, (iii) Protein 5,
(iv) タンパク質 7、 （V) タンパク質 9、 （vi) タンパク質 11、 （vii) タン パク質 13、 （viii) タンパク質 15、 （ix) タンパク質 17、 （x) タンパク 質 19、 （xi) タンパク質 21、 （xii) タンパク質 23、 （xiii) タンパク質 25、 （xiv) タンパク質, 27、 （XV) タンパク質 29、 （xvi) タンパク質 31、 (xvii) タンパク質 33、 (xviii) タンパク質 35および （xix) タンパク質 3 7から選ばれる少なくとも一種の発現量を測定することを特徴とする非小細胞肺 がんの悪性度の分類方法、 (iv) Protein 7, (V) Protein 9, (vi) Protein 11, (vii) Protein 13, (viii) Protein 15, (ix) Protein 17, (x) Protein 19, (xi) Protein 21 , (Xii) protein 23, (xiii) protein 25, (xiv) protein, 27, (XV) protein 29, (xvi) protein 31, (xvii) protein 33, (xviii) protein 35 and (xix) protein 3 7 A method for classifying malignancy of non-small cell lung cancer, characterized by measuring at least one expression level selected from
〔XV〕 再発の可能性、 予後の良悪または （および） 転移の可能性を指標とする 上記 〔xiii〕 または上記 〔xiv〕 記載の方法、  [XV] The method described in the above [xiii] or [xiv] above, using as an index the possibility of recurrence, prognosis, or (and) the possibility of metastasis,
〔xvi〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （ii) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （iii) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチド、 （vii) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 1 5をコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 1 7をコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 1 9をコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 2 1をコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i) タンパク質 2 3を コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i i) タンパク質, 2 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) タン パク質 2 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （XV) タンパク質 2 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、[Xvi] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, and (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5. A nucleotide, (iv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, and (V) a polynucleotide encoding a protein 9 (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11; (vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 13; (vi ii) a polynucleotide encoding protein 15; A polynucleotide containing a nucleotide, (ix) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 17; (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (xi) encoding a protein 21; A polynucleotide containing a polynucleotide, (xi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 23, (xi ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a protein Polynucleo encoding quality 2 7 Polynucleotide comprising a de, a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding the (XV) protein 2 9,
(xvi) タンパク質 3 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオ チド、 （xvi i) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （xvi i i) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を用いることを特徴 とする非小細胞肺がんの悪性度の分類方法、 (xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31; (xvi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33; (xvi ii) containing a polynucleotide encoding protein 35; A method for classifying the malignancy of non-small cell lung cancer, characterized by using at least one selected from the group consisting of a polynucleotide and a polynucleotide containing a polynucleotide encoding (xix) protein 37,
〔xvi i〕 (i) タンパク質 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （i i) タンパク質 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （i i i) タンパク質 5をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド、 （iv) タンパク質 7をコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチド、 （V) タンパク質 9をコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （vi) タンパク質 1 1をコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 （vi i) タンパク質 1 3をコードするポリヌクレオ チドを含有するポリヌクレオチド、 （vi i i) タンパク質 1 5をコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ix) タンパク質 1 7をコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) タンパク質 1 9をコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi) タンパク質 2 1をコー ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i) タンパク質 2 3 をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xi i i) タンパク 質 2 5をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) 夕 ンパク質 2 7をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (xv) タンパク質 2 9をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （xvi) タンパク質 3 1をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （xvi i) タンパク質 3 3をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （xvi i i) タンパク質 3 5をコードするポリヌクレオチドを含 有するポリヌクレオチドおよび （xix) タンパク質 3 7をコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種の発現量を測定 することを特徴とする非小細胞肺がんの悪性度の分類方法、 [Xvi i] (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 1, (ii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 3, (iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 5 (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 7, (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 9, and (vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 11 (Vi i) a polynucleotide containing the polynucleotide encoding protein 13; (vi ii) a polynucleotide containing the polynucleotide encoding protein 15; (ix) a polynucleotide encoding protein 17 Polynuclides containing (X) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 19; (xi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 21; (xi i) a polynucleotide encoding protein 23 A polynucleotide comprising: (xi ii) protein A polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 25, (xiv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 27, (xv) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 29 (Xvi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 31; (xvi i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding protein 33; (xvi ii) a polynucleotide encoding a protein 35; A method for classifying malignancy of non-small cell lung cancer, comprising measuring at least one expression level selected from a polynucleotide comprising and a polynucleotide containing a polynucleotide encoding (xix) protein 37
Cxvi i i] 再発の可能性、 予後の良悪または （および） 転移の可能性を指標と する上記 〔xvi〕 または上記 〔xvi i〕 記載の方法などを提供する。 発明を実施するための最良の形態  Cxvi i i] The method described in [xvi] or [xvi i] described above using the possibility of recurrence, prognosis, and / or metastasis as an index. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
本明細書中、 悪性度とは、 再発の可能性の高低、 予後の良悪、 転移の可能性の 高低、 治療薬剤感受性の高低、 原発がんが原因となった死亡率の高低などを意味 する。 悪性度が高いとは、 再発の可能性が高い、 予後が良好ではない、 転移の可 能性が高い、 治療薬剤が効かない、 原発がんが原因となって死亡する確率が高い ことなどを意味する。 悪性度が低いとは、 再発の可能性が低い、 予後が良好であ る、 転移の可能性が低い、 既存治療薬剤が有効である、 原発がんが原因で死亡す る確率が低いことなどを意味する。  In this specification, malignancy means high or low possibility of recurrence, good or bad prognosis, high or low possibility of metastasis, high or low sensitivity to therapeutic drugs, high or low mortality due to primary cancer, etc. . High malignancy means that there is a high probability of recurrence, poor prognosis, high possibility of metastasis, ineffective therapeutic agents, high probability of death due to primary cancer, etc. To do. Low malignancy means low recurrence, good prognosis, low chance of metastasis, existing treatments are effective, low probability of death from primary cancer, etc. means.
肺がん (lung cancer) には、 腺癌 （adenocarcinoma) 、 扁平上皮癌  Lung cancer includes adenocarcinoma, squamous cell carcinoma
(sQuamous cel l carcinoma) 、 腺扁平上皮遞 (adenosauamous carcinoma) 、 大 細胞癌 (large cel l carcinoma) 、 小細胞癌 (smal l cel l carcinoma) が含まれ る。 非小細胞肺がん (non-smal l cel l lung cancer) には、 腺癌、 扁平上皮癌、 腺扁平上皮癌、 大細胞癌が含まれる。  (sQuamous cell carcinoma), adenosauamous carcinoma, large cell carcinoma, and small cell carcinoma. Non-small cell lung cancer includes adenocarcinomas, squamous cell carcinomas, adenosquamous cell carcinomas, and large cell carcinomas.
本明細書中、 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、 「FLJ 10307」 と略記することが ある） 、 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、 「PHGDH」 と略記することがある） 、 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質 （以下、 「PL0D2」 と略記することがある） 、 配列番 号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含 有するタンパク質 （以下、 「TUBA2」 と略記することがある） 、 配列番号： 9で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質 （以下、 「0SBPL9」 と略記することがある） 、 配列番号： 1 1で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク 質 （以下、 「EIF2C4」 と略記することがある） 、 配列番号： 1 3で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 （以 下、 「PML」 と略記することがある） 、 配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、In the present specification, a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (hereinafter sometimes abbreviated as “FLJ 10307”), SEQ ID NO: 3 A protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented (hereinafter sometimes abbreviated as “PHGDH”), identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 Identical amino acid A protein containing a sequence (hereinafter sometimes abbreviated as “PL0D2”), a protein having the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 (hereinafter referred to as “TUBA2”) A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 (hereinafter sometimes abbreviated as “0SBPL9”), SEQ ID NO: : A protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1 (hereinafter sometimes abbreviated as “EIF2C4”), amino acid represented by SEQ ID NO: 13 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the noic acid sequence (hereinafter sometimes abbreviated as “PML”), or the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 or Proteins containing qualitatively identical amino acid sequence (hereinafter,
「ENTPD4」 と略記することがある） 、 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、A protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 (hereinafter, sometimes abbreviated as “ENTPD4”)
「FLJ20531」 と略記することがある） 、 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、 「Π3Α1」 と略記することがある） 、 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、 rC0L9A2j と略記することがある） 、 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、A protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 (hereinafter, sometimes abbreviated as “Π3Α1”) SEQ ID NO: 2 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 1 (hereinafter sometimes abbreviated as rC0L9A2j), SEQ ID NO: 23 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence (hereinafter referred to as
「FAM13A1」 と略記することがある） 、 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列 と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 (hereinafter, sometimes abbreviated as “FAM13A1”)
「AIF1」 と略記することがある） 、 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同 一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、 「SAA1」 と略記することがある） 、 配列番号： 2 9で表される'アミノ酸配列と同一もしく は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、 「S100A2」 と略記 することがある） 、 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、 「AQP 1」 と略記すること がある） 、 配列蕃号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、 「PAFAH1B3」 と略記することがあ る） 、 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、 「ΚΥΝϋ」 と略記することがある） 、 ま たは、 配列番号： 37で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質 （以下、 「DLK1」 と略記することがある） を、 「本発明のタンパク質」 または 「本発明で用いられるタンパク質」 と略記するこ とがある。 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 (hereinafter, sometimes abbreviated as “SAA1”) A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 (hereinafter sometimes abbreviated as “S100A2”), SEQ ID NO: 31 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence (hereinafter sometimes abbreviated as “AQP 1”), the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 A protein containing the same amino acid sequence (hereinafter sometimes abbreviated as “PAFAH1B3”), an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 Contained protein (hereinafter abbreviated as “ΚΥΝϋ”), or Alternatively, a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 (hereinafter sometimes abbreviated as “DLK1”) is referred to as “protein of the present invention”. Alternatively, it may be abbreviated as “protein used in the present invention”.
本発明で用いられるタンパク質は、 ヒトゃ温血動物 （例、 モルモット、 ラット、 マウス、 ニヮトリ、 ゥサギ、 ブタ、 ヒッジ、 ゥシ、 サルなど） の細胞 （例、 網膜 細胞、 肝細胞、 脾細胞、 神経細胞、 グリア細胞、 膝臓 ;6細胞、 骨髄細胞、 メサン ギゥム細胞、 ランゲルハンス細胞、 表皮細胞、 上皮細胞、 内皮細胞、 線維芽細胞、 繊維細胞、 筋細胞、 脂肪細胞、 免疫細胞 （例、 マクロファージ、 T細胞、 B細胞、 ナチュラルキラー細胞、 肥満細胞、 好中球、 好塩基球、 好酸球、 単球、 血小板な ど） 、 巨核球、 滑膜細胞、 軟骨細胞、 骨細胞、 骨芽細胞、 破骨細胞、 乳腺細胞、 肝細胞もしくは間質細胞、 またはこれら細胞の前駆細胞、 幹細胞もしくは癌細胞 など） もしくはそれらの細胞が存在するあらゆる組織、 例えば、 脳、 脳の各部位 (例、 網膜、 嗅球、 扁桃核、 大脳基底球、 海馬、 視床、 視床下部、 大脳皮質、 延 髄、 小脳） 、 脊髄、 下垂体、 胃、 滕臓、 腎臓、 肝臓、 生殖腺、 甲状腺、 胆のう、 骨髄、 副腎、 皮膚、 筋肉、 肺、 消化管 （例、 大腸、 小腸） 、 血管、 心臓、 胸腺、 脾臓、 顎下腺、 末梢血、 前立腺、 睾丸、 卵巣、 胎盤、 子宮、 骨、 関節、 骨格筋な ど、 または血球系の細胞もしくはその培養細胞 （例えば、 MEL、 ML CTLL- 2、 HT- 2、 WEHI- 3、 HL- 60、 腿 - 1、 、 ML- 1、 MOLT - 3、 M0LT-4、 MOLT- 10、 CCRF- CEM、 TALL- 1、 Jurkat, CCRT- HSB - 2、 KE - 37、 SKW - 3、 HUT- 78、 HUT- 102、 H9、 U937、 . THP- 1、 HEL、 JK - 1、 CMK、 KO- 812、 MEG- 01など) に由来するタンパク質であって もよく、 合成タンパク質であってもよい。  The protein used in the present invention is a human warm-blooded animal (eg, guinea pig, rat, mouse, chicken, rabbit, pig, hidge, ushi, monkey, etc.) cells (eg, retinal cells, hepatocytes, spleen cells, Nerve cells, glial cells, knees; 6 cells, bone marrow cells, mesangial cells, Langerhans cells, epidermal cells, epithelial cells, endothelial cells, fibroblasts, fibrocytes, muscle cells, adipocytes, immune cells (eg, macrophages) , T cells, B cells, natural killer cells, mast cells, neutrophils, basophils, eosinophils, monocytes, platelets, etc.), megakaryocytes, synoviocytes, chondrocytes, bone cells, osteoblasts , Osteoclasts, mammary cells, hepatocytes or stromal cells, or precursor cells of these cells, stem cells or cancer cells) or any tissue in which these cells are present, For example, the brain, each part of the brain (eg, retina, olfactory bulb, amygdala, basal sphere, hippocampus, thalamus, hypothalamus, cerebral cortex, medulla, cerebellum), spinal cord, pituitary gland, stomach, spleen, kidney, Liver, gonad, thyroid, gallbladder, bone marrow, adrenal gland, skin, muscle, lung, digestive tract (eg, large intestine, small intestine), blood vessel, heart, thymus, spleen, submandibular gland, peripheral blood, prostate, testis, ovary, placenta , Uterus, bones, joints, skeletal muscle, etc., or blood cells or cultured cells (eg MEL, ML CTLL-2, HT-2, WEHI-3, HL-60, thigh-1, ML- 1, MOLT-3, M0LT-4, MOLT-10, CCRF-CEM, TALL-1, Jurkat, CCRT-HSB-2, KE-37, SKW-3, HUT-78, HUT-102, H9, U937, It may be a protein derived from THP-1, HEL, JK-1, CMK, KO-812, MEG-01, etc.) or a synthetic protein.
配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9、 配列番号： 1 1、 配列番号： 13.、 配列番号： 1 5、 配列番号： 17、 配列番 号： 19、 配列番号： 21、 配列番号： 23、 配列番号： 25、 配列番号： 27、 配列番号： 29、 配列番号： 31、 配列番号： 33、 配列番号： 35または配列 番号： 37で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列としては、 配 列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9、 配列 番号： 1 1、 配列番号： 1 3、 配列番号： 1 5、 配列番号： 17、 配列番号： 1 9、 配列番号： 21、 配列番号： 23、 配列番号： 25、 配列番号： 27、 配列 番号： 2 9、 配列番号： 3 1、 配列番号： 3 3、 配列番号： 3 5または配列番 号： 3 7で表わされるアミノ酸配列と約 5 0 %以上、 好ましくは約 6 0 %以上、 さらに好ましくは約 7 0 %以上、 より好ましくは約 8 0 %以上、 特に好ましくは 約 9 0 %以上、 最も好ましくは約 9 5 %以上の相同性を有するアミノ酸配列など が挙げられる。 SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13., SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: Number: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: 37 As the amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence to be determined, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 1 3, SEQ ID NO: 1 5, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, Sequence SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 3 1, SEQ ID NO: 3 3, SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: 37 and the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 or more, about 50% or more, preferably about 60% or more. Preferred examples include amino acid sequences having homology of about 70% or more, more preferably about 80% or more, particularly preferably about 90% or more, and most preferably about 95% or more.
アミノ酸配列の相同性は、 相同性計算アルゴリズム NCBI BLAST (Nat ional Center for B iotechnology Informat ion Bas ic Local Al ignment Search Tool) を用い、 以下の条件 （期待値 = 10；ギャップを許す；マトリクス =BLOSUM62；フ ィル夕リング- OFF) にて計算することができる。  The homology of the amino acid sequence was determined using the homology calculation algorithm NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Allocation Search Tool) and the following conditions (expected value = 10; allow gap; matrix = BLOSUM62; It can be calculated at Filling Ring-OFF).
配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有す るタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と 実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列を 含有するタンパク質と実質的に同質の活性または機能を有するタンパク質などが 好ましい。 以下、 用語 「活性」 を、 活性および機能を含む意味で用いることがあ る。  Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 A protein having substantially the same activity or function as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is preferred. Hereinafter, the term “activity” may be used to include activity and function.
実質的に同質の活性としては、 例えば FLJ 10307の有する活性などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的 に） 同質であることを示す。 したがって、 FLJ 10307の有する活性などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜 2倍） であることが好ましいが、 これらの活性の程度、 タンパク質の分子量など の量的要素は異なっていてもよい。 ，  Examples of substantially the same activity include activity possessed by FLJ 10307. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, it is preferable that the activity of FLJ 10307 is equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). However, the quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different. ,
配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有す るタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と 実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列を 含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。 実質的に同質の活性としては、 例えば PHGDHの有する活性、 例えば、 3 - phosphoglycerate酸化活性などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質 が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 した がって、 3 - phosphoglycerate酸化活性などが同等 (例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜 2倍） であることが好ま しいが、 これらの活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なってい てもよい。 Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 A protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 is preferred. The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of PHGDH, such as 3-phosphoglycerate oxidation activity. Substantially homogeneous means that their properties are homogeneous in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, 3-phosphoglycerate oxidation activity etc. is equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times) I prefer However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有す るタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と 実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列を 含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。 実質的に同質の活性としては、 例えば PL0D2の有する活性、 例えば、 リジン水 酸化酵素活性などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が性質的に (例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 したがって、 リ ジン水酸化酵素活性などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの 活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。  Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 A protein having substantially the same quality of activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 is preferred. The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of PL0D2, such as lysine hydroxylase activity. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, lysine hydroxylase activity and the like are equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). Although preferable, quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有す るタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と 実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列を 含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。 実質的に同質の活性としては、 例えば TUBA2の有する活性、 例えば、 微小管を 形成する機能などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が性質的に (例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 したがって、 微 小管を形成する機能などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの 活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。  Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 A protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 is preferred. The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of TUBA2, such as the function of forming microtubules. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, the function of forming microtubules is equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). Although preferable, quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有す るタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と 実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列を 含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ましい。 実質的に同質の活性としては、 例えば 0SBPL9の有する活性、 例えば、 sterol合 成に関与する機能などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が性質的 に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 したがって、 sterol合成に関与する機能などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは 約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 こ れらの活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。 The protein containing the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 includes, for example, the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 described above. A protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 is preferred. Examples of the activity of substantially the same quality include the activity of 0SBPL9, for example, the function involved in sterol synthesis. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively homogeneous (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the functions involved in sterol synthesis are equivalent (eg, about 0.01 to 100 times, preferably It is preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times), but quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different. Examples of a protein containing an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 1 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 is preferred.
実質的に同質の活性としては、 例えば EIF2C4の有する活性、 例えば、 siRNAを 介した Gene Si lencingに関与する機能などが挙げられる。 実質的に同質とは、 そ れらの性質が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを 示す。 したがって、 s iRNAを介した Gene Si lencingに関与する機能などが同等  The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of EIF2C4, for example, the function involved in gene silencing via siRNA. Substantially homogeneous means that these properties are qualitatively homogeneous (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the functions involved in gene silencing via s iRNA are equivalent.
(例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの活性の程度、 タンパク質の分子量 などの量的要素は異なっていてもよい。  (E.g., about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). Quantitative factors such as molecular weight may be different.
配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。  Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 is preferred.
実質的に同質の活性としては、 例えば PMLの有する活性、 例えば、  As the activity of substantially the same quality, for example, the activity of PML, for example,
transcript ional co - act ivator活性などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それ らの性質が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示 す。 したがって、 transcript ional co - act ivator活性などが同等 (例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） で あることが好ましいが、 これらの活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要 素は異なっていてもよい。 Examples include transcript ional co-act ivator activity. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, transcript ional co-act activator activity, etc. should be equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 1 5で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。 Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 That's right.
実質的に同質の活性としては、 例えば ENTPD4の有する活性、 例えば、 フォスフ ァターゼ活性などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が性質的に (例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 したがって、 ENTPD4の有する活性などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜 1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜： L 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの 活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。  The substantially equivalent activity includes, for example, the activity of ENTPD4, such as phosphatase activity. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Accordingly, it is preferable that the activity of ENTPD4 is equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.1 to: L 0 times, more preferably 0.5 to 2 times). However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。  Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 is preferred.
実質的に同質の活性としては、 例えば FU20531の有する活性、 例えば、 転写因 子 （転写促進/阻害） 活性などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質 が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 した がって、 FLJ20531の有する活性などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好まし くは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの活性の程度、 夕ンパク質の分子量などの量的要素は異なつていてもよい。 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。  The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of FU20531, such as transcription factor (transcription promoting / inhibiting) activity. Substantially homogeneous means that their properties are homogeneous in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the activity of FLJ20531 is equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). It is preferred that there are some quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein. Examples of a protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 And a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 is preferred.
実質的に同質の活性としては、 例えば F13A1の有する活性、 例えば、 トランス ダル夕ミナーゼ活性などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が性質 的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 したがって、 トランスダルタミナーゼ活性などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましく は約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。 The substantially equivalent activity includes, for example, the activity of F13A1, such as transdalinase activity. Substantially homogeneous means that their properties are homogeneous in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, it is preferable that transdaltaminase activity and the like are equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different. Contains the amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 1. For example, the protein comprising the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 is substantially the same as the protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 In particular, a protein having the same activity is preferred.
実質的に同質の活性としては、 ^えば C0L9A2の有する活性、 例えば、 type IX col lagenを形成する機能などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が 性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 したが つて、 type IX col lagenを形成する機能などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ま しいが、 これらの活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なってい てもよい。  The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of C0L9A2, such as the function of forming type IX col lagen. Substantially homogeneous means that their properties are homogeneous in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the function to form type IX col lagen etc. is equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times) However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。  Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23.
実質的に同質の活性としては、 例えば FAM13A1の有する活性、 例えば、 GTPase act ivator活性などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が性質的に (例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 したがって、 FAM13A1の有する活性などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜 1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの 活性の程度、 夕ンパク質の分子量などの量的要素は異なつていてもよい。  The substantially equivalent activity includes, for example, the activity of FAM13A1, such as GTPase activator activity. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, it is preferable that the activity of FAM13A1 is equivalent (eg, about 0.1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). Quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。  Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 And a protein having substantially the same quality of activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25.
実質的に同質の活性としては、 例えば AIF1の有する活性、 例えば、 ァクチンと 結合することで血管平滑筋細胞の細胞移動を促進させる機能などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的 .に） 同質であることを示す。 したがって、 ァクチンと結合することで血管平滑筋 細胞の細胞移動を促進させる機能などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ま しくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましい 力 これらの活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていても よい。 The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of AIF1, such as a function of promoting cell migration of vascular smooth muscle cells by binding to actin. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg physiologically or pharmacologically To show that they are homogeneous. Therefore, it has the same function to promote cell migration of vascular smooth muscle cells by binding to actin (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably Is preferably 0.5 to 2 times. The amount of these activities and the quantitative factors such as the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。  Examples of a protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 And a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27.
実質的に同質の活性としては、 例えば SAA1の有する活性、 例えば、 matrix metal loprotease誘導活性などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質 が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 した がって、 matrix metal loprotease誘導活性などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0 倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜 2倍） であることが 好ましいが、 これらの活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なつ ていてもよい。  The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of SAA1, such as matrix metal loprotease inducing activity. Substantially homogeneous means that their properties are homogeneous in nature (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the matrix metal loprotease-inducing activity is equivalent (eg, about 0.1 to 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 2 9で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。  Examples of a protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 And a protein having substantially the same quality of activity as a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29.
実質的に同質の活性としては、 例えば S100A2の有する活性、 例えば、 細胞周期 進行を調整する機能、 細胞分化を調整する機能などが挙げられる。 実質的に同質 とは、 それらの性質が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であ ることを示す。 したがって、 細胞周期進行を調整する機能、 細胞分化を調整する 機能などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 よ り好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの活性の程度、 夕 ンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。  The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of S100A2, such as the function of regulating cell cycle progression and the function of regulating cell differentiation. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively homogeneous (eg, physiologically or pharmacologically). Therefore, the function of regulating cell cycle progression, the function of regulating cell differentiation, and the like are equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0. 5 to 2 times) is preferable, but quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。 Contains the amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 1. For example, the protein containing the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 is substantially the same as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31. In particular, proteins having the same activity are preferred.
実質的に同質の活性としては、 例えば AQP1の有する活性、 例えば、 水チャネル (water channel)を形成する機能などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それら の性質が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 したがって、 水チャネル (water channel)を形成する機能などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的 要素は異なっていてもよい。  Examples of the activity of substantially the same quality include an activity of AQP1, for example, a function of forming a water channel. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, the function to form a water channel is equivalent (eg, about 0.1 to 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times) However, quantitative factors such as the degree of these activities and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。  Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 And a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33.
実質的に同質の活性としては、 例えば PAFAH1B3の有する活性、 例えば、 脳の分 化に関わる機能などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が性質的に (例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 したがって、 脳 の分化に関わる機能などが同等 （例、 約 0 . 0 1〜1 0 0倍、 好ましくは約 0 . 1〜1 0倍、 より好ましくは 0 . 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの 活性の程度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。  Examples of the activity of substantially the same quality include the activity of PAFAH1B3, for example, functions related to brain differentiation. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, the functions related to brain differentiation, etc. are equivalent (eg, about 0.1 1 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). Although preferable, quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。  Examples of the protein containing an amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 include, for example, an amino acid sequence substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 And a protein having substantially the same activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35.
実質的に同質の活性としては、 例えば KYNUの有する活性、 例えば、 L- kynurenineと L- 3- hydroxykynurenineの切断触媒活性などが挙げられる。 実質的 に同質とは、 それらの性質が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同 質であることを示す。 したがって、 L_kynurenineと L- 3-hydroxykyimreiiineの切 断触媒活性などが同等 （例、 約 0. 01〜100倍、 好ましくは約 0. 1〜10 倍、 より好ましくは 0. 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの活性の程 度、 夕ンパク質の分子量などの量的要素は異なつていてもよい。 The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of KYNU, for example, the cleavage catalytic activity of L-kynurenine and L-3-hydroxykynurenine. Substantial homogeneity means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) the same. Show quality. Therefore, the cleavage catalytic activity of L_kynurenine and L-3-hydroxykyimreiiine is equivalent (eg, about 0.01 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). Preferably, however, the degree of these activities and the quantitative factors such as the molecular weight of the protein may be different.
配列番号： 37で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質としては、 例えば、 前記の配列番号： 37で表されるアミノ酸配 列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、 配列番号： 37で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質などが好ま しい。  The protein containing the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 includes, for example, the amino acid sequence substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 described above. A protein having substantially the same quality of activity as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 is preferred.
実質的に同質の活性としては、 例えば DLK1の有する活性、 例えば、 造血に関与 する機能などが挙げられる。 実質的に同質とは、 それらの性質が性質的に （例、 生理学的に、 または薬理学的に） 同質であることを示す。 したがって、 造血に関 与する機能などが同等 （例、 約 0. 01〜100倍、 好ましくは約 0. 1〜10 倍、 より好ましくは 0. 5〜2倍） であることが好ましいが、 これらの活性の程 度、 タンパク質の分子量などの量的要素は異なっていてもよい。  The substantially homogeneous activity includes, for example, the activity of DLK1, such as a function involved in hematopoiesis. Substantially homogeneous means that their properties are qualitatively (eg, physiologically or pharmacologically) homogeneous. Therefore, it is preferable that the functions related to hematopoiesis are equivalent (eg, about 0.01 to 100 times, preferably about 0.1 to 10 times, more preferably 0.5 to 2 times). Quantitative factors such as the degree of activity and the molecular weight of the protein may be different.
また、 本発明のタンパク質としては、 例えば、 （i) 配列番号： 1、 配列番 号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9、 配列番号： 11、 配列番 号： 13、 配列番号： 15、 配列番号： 17、 配列番号： 19、 配列番号： 21、 配列番号： 23、 配列番号： 25、 配列番号： 27、 配列番号： 29、 配列番 号： 31、 配列番号： 33、 配列番号： 35または配列番号： 37で表されるァ ミノ酸配列中の 1または 2個以上 （例えば 1〜100個程度、 好ましくは 1〜3 0個程度、 好ましくは 1〜10個程度、 さらに好ましくは数 （1〜5) 個） のァ ミノ酸が欠失したアミノ酸配列、 （ii) 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番 号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9、 配列番号： 11、 配列番号： 13、 配列 番号： 15、 配列番号： 17、 配列番号： 19、 配列番号： 21、 配列番号： 2 3、 配列番号： 25、 配列番号： 27、 配列番号： 29、 配列番号： 31、 配列 番号： 33、 配列番号： 35または配列番号： 37で表されるアミノ酸配列に 1 または 2個以上 （例えば 1〜100個程度、 好ましくは 1〜30個程度、 好まし くは 1〜10個程度、 さらに好ましくは数 （1〜5) 個） のアミノ酸が付加した アミノ酸配列、 （iii) 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番 号： 7、 配列番号： 9、 配列番号： 11、 配列番号： 13、 配列番号： 15、 配 列番号： 17、 配列番号： 19、 配列番号： 21、 配列番号： 23、 配列番号： 25、 配列番号： 27、 配列番号： 29、 配列番号： 31、 配列番号： 33、 配 列番号： 35または配列番号： 37で表されるアミノ酸配列に 1または 2個以上 (例えば 1〜100個程度、 好ましくは 1〜30個程度、 好ましくは 1〜10個 程度、 さらに好ましくは数 （1〜5) 個） のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、 (iv) 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9、 配列番号： 11、 配列番号： 13、 配列番号： 15、 配列番号： 17、 配列 番号： 19、 配列番号： 21、 配列番号： 23、 配列番号： 25、 配列番号： 2 7、 配列番号： 29、 配列番号： 31、 配列番号： 33、 配列番号： 35または 配列番号： 37で表されるアミノ酸配列中の 1または 2個以上 （例えば 1〜10 0個程度、 好ましくは 1〜30個程度、 好ましくは 1〜10個程度、 さらに好ま しくは数 （1〜5) 個） のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、 または （V) それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパク質などのい わゆるムテインも含まれる。 Examples of the protein of the present invention include: (i) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, 1 or 2 or more in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: 37 (for example, about 1 to 100, preferably about 1 to 30, preferably about 1 to 10) More preferably, a number (1-5) of amino acid sequences lacking amino acids, (ii) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 2 3, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 or 1 or 2 in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 An amino acid sequence to which more than one (for example, about 1 to 100, preferably about 1 to 30, preferably about 1 to 10, more preferably (1 to 5)) amino acids are added, (iii) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO No .: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 or 1 or 2 or more in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 (for example, about 1 to 100) Preferably about 1-30, preferably about 1-10, more preferably a number (1-5) amino acid sequence inserted, (iv) SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, sequence SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 23 SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 Or 1 or 2 or more in the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 (for example, about 1 to 100, preferably about 1 to 30, preferably about 1 to 10, more preferably a number ( So-called muteins such as proteins containing amino acid sequences in which 1 to 5) amino acids are substituted with other amino acids, or (V) amino acid sequences combining them are also included.
上記のようにアミノ酸配列が挿入、 欠失または置換されている場合、 その挿入、 欠失または置換の位置としては、 とくに限定されない。  When the amino acid sequence is inserted, deleted or substituted as described above, the position of the insertion, deletion or substitution is not particularly limited.
本明細書におけるタンパク質は、 ペプチド標記の慣例に従って左端が N末端 (ァミノ末端） 、 右端が C末端 （力ルポキシル末端） である。 配列番号： 1で表 わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をはじめとする、 本発明で用いられ るタンパク質は、 C末端が力ルポキシル基 （- C00H) 、 力ルポキシレ ト（- C00- ) 、 アミド （- C0NH2) またはエステル （- C00R) の何れであってもよい。 The protein in the present specification has an N-terminal (amino terminal) at the left end and a C-terminal (forced loxyl terminal) at the right end according to the convention of peptide designation. The protein used in the present invention, including the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, has a C-terminal group consisting of a force lpoxyl group (-C00H), a force lpoxylate (-C00-), an amide Either (-C0NH 2 ) or ester (-C00R) may be used.
ここでエステルにおける Rとしては、 例えば、 メチル、 ェチル、 n—プロピル、 イソプロピル、 n—ブチルなどの アルキル基、 例えば、 シクロペンチル、 シ クロへキシルなどの C 3-8シクロアルキル基、 例えば、 フエニル、 α—ナフチルな どの ( 6_12ァリール基、 例えば、 ベンジル、 フエネチルなどのフエニル— ァ ルキル基もしくは α—ナフチルメチルなどのひ—ナフチルー Cト2アルキル基など の C 7_14ァラルキル基、 ビバ口ィルォキシメチル基などが用いられる。 Here, as R in the ester, e.g., methyl, Echiru, n- propyl, isopropyl, alkyl groups such as n- butyl, for example, C 3, such as cyclohexyl cyclopentyl, to cyclo - 8 cycloalkyl group, for example, phenyl, α- naphthyl which any (6 _ 12 Ariru group, e.g., benzyl, phenyl, such as phenethyl - Fei such § alkyl group or α- naphthylmethyl - Nafuchiru C DOO 2 C 7 _ 14 Ararukiru group such as an alkyl group, Viva port An oxymethyl group or the like is used.
本発明で用いられるタンパク質が C末端以外に力ルポキシル基 （または力ルポ キシレート） を有している場合、 力ルポキシル基がアミド化またはエステル化さ れているものも本発明で用いられるタンパク質に含まれる。 この場合のエステル としては、 例えば上記した C末端のエステルなどが用いられる。 When the protein used in the present invention has a force lpoxyl group (or force lpoxylate) in addition to the C-terminus, the force lpoxyl group is amidated or esterified. These are also included in the proteins used in the present invention. As the ester in this case, for example, the above-mentioned C-terminal ester or the like is used.
さらに、 本発明で用いられるタンパク質には、 N末端のアミノ酸残基 （例、 メ チォニン残基） のァミノ基が保護基 （例えば、 ホルミル基、 ァセチル基などの C Hアルカノィルなどの C Hiァシル基など） で保護されているもの、 生体内で 断 されて生成する N末端のダル夕ミン残基がピ口ダル夕ミン酸化したもの、 分子内 のアミノ酸の側鎖上の置換基 （例えば一 OH、 一 S H、 アミノ基、 イミダゾール 基、 インドール基、 グァニジノ基など） が適当な保護基 （例えば、 ホルミル基、 ァセチル基などの C Mアル力ノィル基などの C Hァシル基など） で保護されてい るもの、 あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖タンパク質などの複合タンパク質な ども含まれる。 Further, in the protein used in the present invention, an amino group of an N-terminal amino acid residue (eg, methionine residue) has a protecting group (for example, a C Hi alkacyl group such as a C H alkanoyl group such as a formyl group or a acetyl group). , Etc., N-terminal dulbinamine residues generated by cleavage in vivo, and pyruvyldamine-oxidized, substituents on the side chain of amino acids in the molecule (for example, one OH one SH, amino group, imidazole group, indole group, etc. Guanijino group) that is protected with a suitable protecting group (e.g., formyl group, etc. CH Ashiru group such as C M Al force Noiru group such Asechiru group) Or a complex protein such as a so-called glycoprotein to which a sugar chain is bound.
本発明で用いられるタンパク質の具体例としては、 例えば、 配列番号： 1で表 されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、 配列番号： 3で表されるアミノ酸配 列を含有するタンパク質、 配列番号： 5で表ざれるアミノ酸配列を含有するタン パク質、 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、 配列番 号： 9で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、 配列番号： 1 1で表され るアミノ酸配列を含有するタンパク質、 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列 を含有するタンパク質、 配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列を含有するタン パク質、 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、 配列番 号： 1 9で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、 配列番号： 2 1で表さ れるアミノ酸配列を含有するタンパク質、 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配 列を含有するタンパク質、 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質、 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、 配列 番号： 2 9で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、 配列番号： 3 1で表 されるアミノ酸配列を含有するタンパク質、 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸 配列を含有するタンパク質、 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列を含有する タンパク質、 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質など があげられる。  Specific examples of the protein used in the present invention include, for example, a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, and SEQ ID NO: 5. A protein containing the amino acid sequence shown, a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 1 represented by 1 A protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 3; a protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13; a protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15; A protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 and a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 A protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23, a protein comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27. A protein containing, an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29, a protein containing an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 1, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 3 Protein, a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35, a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37, and the like.
本発明で用いられるタンパク質の部分べプチドとしては、 前記した本発明で用 いられるタンパク質の部分ペプチドであって、 好ましくは、 前記した本発明で用 いられるタンパク質と同様の性質を有するものであればいずれのものでもよい。 例えば、 本発明で用いられるタンパク質の構成アミノ酸配列のうち少なくともThe partial peptide of the protein used in the present invention is a partial peptide of the protein used in the present invention described above, and preferably used in the present invention described above. Any protein may be used as long as it has the same properties as the protein to be used. For example, at least of the constituent amino acid sequences of the protein used in the present invention
2 0個以上、 好ましくは 5 0個以上、 さらに好ましくは 7 0個以上、 より好まし くは 1 0 0個以上、 最も好ましくは 2 0 0個以上のアミノ酸配列を有するぺプチ ドなどが用いられる。 A peptide having an amino acid sequence of 20 or more, preferably 50 or more, more preferably 70 or more, more preferably 100 or more, and most preferably 20 or more is used. It is done.
また、 本発明で用いられる部分ペプチドは.、 そのアミノ酸配列中の 1または 2 個以上 （好ましくは 1〜2 0個程度、 より好ましくは 1〜1 0個程度、 さらに好 ましくは数 （1〜5 ) 個） のアミノ酸が欠失し、 または、 そのアミノ酸配列に 1 または 2個以上 （好ましくは 1〜2 0個程度、 より好ましくは 1〜1 0個程度、 さらに好ましくは数 （1〜5 ) 個） のアミノ酸が付加し、 または、 そのアミノ酸 配列に 1または 2個以上 （好ましくは 1〜2 0個程度、 より好ましくは 1〜1 0 個程度、 さらに好ましくは数 （1〜5 ) 個） のアミノ酸が挿入され、 または、 そ のアミノ酸配列中の 1または 2個以上 （好ましくは 1〜2 0個程度、 より好まし くは 1〜1 0個程度、 さらに好ましくは数 （1 ~ 5 ) 個） のアミノ酸が他のアミ ノ酸で置換されていてもよい。  In addition, the partial peptide used in the present invention is one or more in the amino acid sequence (preferably about 1 to 20 pieces, more preferably about 1 to 10 pieces, more preferably a number (1 -5) amino acids) or 1 or 2 (preferably about 1 to 20 pieces, more preferably about 1 to 10 pieces, more preferably a number (1 to 2 pieces) in the amino acid sequence. 5) amino acids), or 1 or 2 (preferably about 1 to 20 pieces, more preferably about 1 to 10 pieces, more preferably numbers (1 to 5)) in the amino acid sequence. Or one or more amino acids in the amino acid sequence (preferably about 1 to 20, more preferably about 1 to 10, more preferably a number (1 to 5) amino acids may be substituted with other amino acids.
また、 本発明で用いられる部分ペプチドは C末端が力ルポキシル基 （-C00H) 、 カルポキシレート （-C00- ) 、 アミド （-C0NH2) またはエステル （- C00R) の何れ であってもよい。 Further, in the partial peptide used in the present invention, the C-terminus may be any of a force lpoxyl group (—C00H), a carboxy group (—C00—), an amide (—C0NH 2 ), or an ester (—C00R).
さらに、 本発明で用いられる部分ペプチドには、 前記した本発明で用いられる タンパク質と同様に、 C末端以外にカルボキシル基 （またはカルポキシレート） を有しているもの、 N末端のアミノ酸残基 （例、 メチォニン残基） のァミノ基が 保護基で保護されているもの、 N端側が生体内で切断され生成したグルタミン残 基がピログルタミン酸化したもの、 分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な 保護基で保護されているもの、 あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなど の複合ペプチドなども含まれる。  Furthermore, in the partial peptide used in the present invention, as in the protein used in the present invention described above, a peptide having a carboxyl group (or carboxylate) in addition to the C terminus, an N-terminal amino acid residue ( Eg, a methionine residue) with an amino group protected by a protecting group, a glutamine residue generated by cleavage of the N-terminal in vivo and pyroglutamine oxidation, a substituent on the side chain of an amino acid in the molecule Are protected with an appropriate protecting group, or complex peptides such as so-called glycopeptides to which sugar chains are bound.
本発明で用いられる部分べプチドは抗体作成のための抗原としても用いること ができる。  The partial peptide used in the present invention can also be used as an antigen for antibody production.
本発明で用いられるタンパク質または部分ペプチドの塩としては、 生理学的に 許容される酸 （例、 無機酸、 有機酸） や塩基 （例、 アルカリ金属） などとの塩が 用いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。 この様な塩とし ては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸） との塩、 あ るいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コ ハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベ ンゼンスルホン酸） との塩などが用いられる。 As the salt of the protein or partial peptide used in the present invention, a salt with a physiologically acceptable acid (eg, inorganic acid, organic acid) or base (eg, alkali metal) is used. Acceptable acid addition salts are preferred. Like this salt For example, a salt with an inorganic acid (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid) or an organic acid (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid) And salts with tartaric acid, citrate, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid), and the like.
本発明で用いられるタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩は、 前 述したヒトゃ温血動物の細胞または組織から自体公知のタンパク質の精製方法に よって製造することもできるし、 タンパク質をコードする D N Aを含有する形質 転換体を培養することによつても製造することができる。 また、 後述のペプチド 合成法に準じて製造することもできる。  The protein used in the present invention or a partial peptide thereof or a salt thereof can be produced from the aforementioned human warm-blooded animal cells or tissues by a known protein purification method, or a DNA encoding the protein can be obtained. It can also be produced by culturing the contained transformant. It can also be produced according to the peptide synthesis method described below.
ヒトゃ哺乳動物の組織または細胞から製造する場合、 ヒトゃ哺乳動物の組織ま たは細胞をホモジナイズした後、 酸などで抽出を行ない、 該抽出液を逆相クロマ トグラフィー、 イオン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを組み 合わせることにより精製単離することができる。  When producing from human mammal tissue or cells, homogenize human mammal tissue or cells, and then extract with acid, etc., and extract the extracted solution using reverse phase chromatography, ion exchange chromatography, etc. It can be purified and isolated by combining the above chromatography.
本発明で用いられるタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 また はそのアミド体の合成には、 通常市販のタンパク質合成用樹脂を用いることがで きる。 そのような樹脂としては、 例えば、 クロロメチル樹脂、 ヒドロキシメチル 樹脂、 ベンズヒドリルァミン樹脂、 アミノメチル樹脂、 4—ベンジルォキシベン ジルアルコール樹脂、 4—メチルベンズヒドリルァミン樹脂、 P AM樹脂、 4— ヒドロキシメチルメチルフエニルァセトアミドメチル樹脂、'ポリアクリルアミド 樹脂、 4— ( 2 ' ， 4， ージメトキシフエ二ル―ヒドロキシメチル） フエノキシ 樹脂、 4 _ ( 2 ' , 4， ージメトキシフエ二ルー Fm o cアミノエチル） フエノ キシ樹脂などを挙げることができる。 このような樹脂を用い、 《—ァミノ基と側 鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、 目的とするタンパク質の配列通りに、 自 体公知の各種縮合方法に従い、 樹脂上で縮合させる。 反応の最後に樹脂からタン パク質または部分ペプチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、 さらに高希 釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実施し、 目的のタンパク質もしく はその部分べプチドまたはそれらのアミド体を取得する。  A commercially available resin for protein synthesis can be used for the synthesis of the protein or its partial peptide or its salt, or its amide compound used in the present invention. Examples of such resins include chloromethyl resin, hydroxymethyl resin, benzhydrylamine resin, aminomethyl resin, 4-benzyloxybenzyl alcohol resin, 4-methylbenzhydrylamine resin, PAM resin, 4—Hydroxymethylmethyl phenylamidomethyl resin, 'Polyacrylamide resin, 4-— (2', 4, -dimethoxyphenyl-hydroxymethyl) phenoxy resin, 4_ (2 ', 4, -dimethoxyphenyl) Fm oc amino And ethyl) phenoxy resin. Using such a resin, the amino acid appropriately protected with <<-amino group and side chain functional group is condensed on the resin according to various known condensation methods according to the sequence of the target protein. At the end of the reaction, the protein or partial peptide is excised from the resin, and at the same time, various protecting groups are removed, and an intramolecular disulfide bond-forming reaction is performed in a highly diluted solution to obtain the target protein or its partial peptide. Or the amide body is obtained.
上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、 タンパク質合成に使用できる各種活 性化試薬を用いることができるが、 特に、 カルポジイミド類がよい。 カルポジィ ミド類としては、 D C C、 N, N ' —ジイソプロピルカルポジイミド、 N—ェチ ルー N ' - ( 3—ジメチルァミノプロリル） カルポジイミドなどが用いられる。 これらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤 （例えば、 H〇B t， H O.O B t ) とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、 対称酸無水物または HO B tエステルあるいは H〇〇B tエステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性 化を行なった後に樹脂に添加することができる。 For the above-mentioned condensation of protected amino acids, various activating reagents that can be used for protein synthesis can be used, and calpositimides are particularly preferable. Carpositimides include DCC, N, N'-diisopropylcarposimide, N-eth Lu N '-(3-dimethylaminoprolyl) carpositimide is used. For activation by these, a protected amino acid is added directly to the resin together with a racemization inhibitor (for example, H Bt, H OO B t), or a symmetric acid anhydride or HO B t ester or H B It can be added to the resin after previously activating the protected amino acid as a t ester.
保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用いられる溶媒としては、 タンパク質 縮合反応に使用しうることが知られている溶媒から適宜選択されうる。 例えば、 N, N—ジメチルホルムアミド， N, N—ジメチルァセトアミド， N—メチルピ 口リドンなどの酸アミド類、 塩化メチレン， クロ口ホルムなどのハロゲン化炭化 水素類、 トリフルォロエタノールなどのアルコール類、 ジメチルスルホキシドな どのスルホキシド類、 ピリジン， ジォキサン， テトラヒドロフランなどのエーテ ル類、 ァセトニトリル， プロピオ二トリルなどの二トリル類、 酢酸メチル， 酢酸 ェチルなどのエステル類あるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。 反応 温度はタンパク質結合形成反応に使用され得ることが知られている範囲から適宜 選択され、 通常約一 2 0 °C〜5 0 °Cの範囲から適宜選択される。 活性化されたァ ミノ酸誘導体は通常 1 . 5〜4倍過剰で用いられる。 ニンヒドリン反応を用いた テス卜の結果、 縮合が不十分な場合には保護基の脱離を行なうことなく縮合反応 を繰り返すことにより十分な縮合を行なうことができる。 反応を繰り返しても十 分な縮合が得られないときには、 無水酢酸またはァセチルイミダゾールを用いて 未反応アミノ酸をァセチル化することによって、 後の反応に影響を与えないよう にすることができる。  The solvent used for the activation of the protected amino acid and the condensation with the resin can be appropriately selected from solvents known to be usable for protein condensation reactions. For example, acid amides such as N, N-dimethylformamide, N, N-dimethylacetamide, N-methylpyridone, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and blackform, alcohols such as trifluoroethanol Sulfoxides such as dimethyl sulfoxide, ethers such as pyridine, dioxane and tetrahydrofuran, nitriles such as acetonitrile and propionitryl, esters such as methyl acetate and ethyl acetate, or appropriate mixtures thereof. . The reaction temperature is appropriately selected from a range known to be used for protein bond formation reaction, and is usually selected appropriately from a range of about 120 ° C. to 50 ° C. The activated amino acid derivative is usually used in an excess of 1.5 to 4 times. As a result of the test using the ninhydrin reaction, if the condensation is insufficient, sufficient condensation can be performed by repeating the condensation reaction without removing the protecting group. If sufficient condensation is not obtained even after repeating the reaction, the subsequent reaction can be made unaffected by acetylating the unreacted amino acid with acetic anhydride or acetyl imidazole.
原料のァミノ基の保護基としては、 例えば、 Z、 B o c、 t—ペンチルォキシ 力ルポニル、 イソポルニルォキシカルポニル、 4—メトキシベンジルォキシカル ポニル、 C 1— Z、 B r— Z、 7ダマンチルォキシカルポニル、 トリフルォロア セチル、 フタロイル、 ホルミル、 2一二トロフエニルスルフエニル、 ジフエニル ホスフイノチオイル、 Fm o cなどが用いられる。  Examples of the protecting group for the starting amino group include Z, B oc, t-pentyloxy-powered sulfonyl, isoponyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl, C 1- Z, Br-Z, 7 Damantyloxycarbonyl, trifluoroacetyl, phthaloyl, formyl, 12-12 tropenylsulfenyl, diphenylphosphinothioyl, Fmoc, etc. are used.
力ルポキシル基は、 例えば、 アルキルエステル化 (例えば、 メチル、 ェチル、 プロピル、 プチル、 tーブチル、 シクロペンチル、 シクロへキシル、 シクロヘプ チル、 シクロォクチル、 2—ァダマンチルなどの直鎖状、 分枝状もしくは環状ァ ルキルエステル化) 、 ァラルキルエステル化 (例えば、 ベンジルエステル、 4— ニトロべンジルエステル、 4ーメトキシベンジルエステル、 4—クロ口べンジル エステル、 ベンズヒドリルエステル化） 、 フエナシルエステル化、 ベンジルォキ シカルポニルヒドラジド化、 t一ブトキシカルポニルヒドラジド化、 トリチルヒ ドラジド化などによつて保護することができる。 Forced lpoxyl groups are, for example, alkyl esterified (e.g., methyl, ethyl, propyl, butyl, t-butyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, 2-adamantyl, etc.) Alkyl esterification), aralkyl esterification (eg, benzyl ester, 4- Protected by nitrobenzyl ester, 4-methoxybenzyl ester, 4-cyclobenzyl ester, benzhydryl esterification), phenacyl esterification, benzyloxycarbonyl hydrazide, t-butoxycarbonyl hydrazide, trityl hydrazide, etc. can do.
セリンの水酸基は、 例えば、 エステル化またはエーテル化によって保護するこ とができる。 このエステル化に適する基としては、 例えば、 ァセチル基などの低 級 （C^ 6) アルカノィル基、 ベンゾィル基などのァロイル基、 ベンジルォキシ 力ルポニル基、 エトキシカルポニル基などの炭酸から誘導される基などが用いら れる。 また、 エーテル化に適する基としては、 例えば、 ベンジル基、 テトラヒド ロビラニル基、 t—ブチル基などである。 The hydroxyl group of serine can be protected by, for example, esterification or etherification. Groups suitable for esterification include, for example, low-grade (C ^ 6 ) alkanoyl groups such as acetyl groups, aroyl groups such as benzoyl groups, groups derived from carbonic acid such as benzyloxy sulfonyl groups, and ethoxycarbonyl groups. Used. Examples of the group suitable for etherification include a benzyl group, a tetrahydrobilanyl group, and a t-butyl group.
チロシンのフエノール性水酸基の保護基としては、 例えば、 Bz し C 12- Bz l、 2—二トロベンジル、 B r— Z、 t一ブチルなどが用いられる。 Examples of the protecting group for the phenolic hydroxyl group of tyrosine include Bz, C 1 2 -Bz 1, 2-nitrobenzyl, B r—Z, and t-butyl.
ヒスチジンのイミダゾ一ルの保護基としては、 例えば、 To s、 4—メトキシ -2, 3, 6—卜リメチルベンゼンスルホニル、 DNP、 ベンジルォキシメチル、 Bum, Bo c、 Tr t、 Fmo cなどが用いられる。  Examples of protecting groups for histidine imidazole include Tos, 4-methoxy-2,3,6-trimethylbenzenesulfonyl, DNP, benzyloxymethyl, Bum, Bo c, Tr t, Fmo c, etc. Is used.
原料のカルボキシル基の活性化されたものとしては、 例えば、 対応する酸無水 物、 アジド、 活性エステル 〔アルコール (例えば、 ペン夕クロ口フエノール、 2, 4， 5—トリクロ口フエノール、 2， 4ージニトロフエノール、 シァノメチルァ ルコール、 パラニトロフエノール、 HONB、 N—ヒドロキシスクシミド、 N— ヒドロキシフ夕ルイミド、 HOB t) とのエステル〕 などが用いられる。 原料の ァミノ基の活性化されたものとしては、 例えば、 対応するリン酸アミドが用いら れる。  Examples of the activated carboxyl group of the raw material include the corresponding acid anhydrides, azides, active esters [alcohols (eg, Penyu-Kuroguchi phenol, 2, 4, 5-triclo-mouth phenol, 2, 4- Dinitrophenol, cyanomethyl alcohol, paranitrophenol, HONB, N-hydroxysuccinimide, N-hydroxyphenol, ester with HOB t)] and the like. For example, the corresponding phosphoric acid amide is used as the activated amino group of the raw material.
保護基の除去 （脱離） 方法としては、 例えば、 Pd—黒あるいは Pd—炭素な どの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、 また、 無水フッ化水素、 メタ ンスルホン酸、 トリフルォロメタンスルホン酸、 トリフルォロ酢酸あるいはこれ らの混合液などによる酸処理や、 ジイソプロピルェチルァミン、 トリェチルアミ ン、 ピぺリジン、 ピぺラジンなどによる塩基処理、 また液体アンモニア中ナトリ ゥムによる還元なども用いられる。 上記酸処理による脱離反応は、 一般に約一 2 0°C~40°Cの温度で行なわれるが、 酸処理においては、 例えば、 ァニツール、 フエノール、 チオアニソール、 メタクレゾール、 パラクレゾール、 ジメチルスル フイド、 1 , 4 _ブタンジチオール、 1 , 2—エタンジチオールなどのような力 チオン捕捉剤の添加が有効である。 また、 ヒスチジンのイミダゾール保護基とし て用いられる 2 , 4—ジニトロフエニル基はチォフエノ一ル処理により除去され、 トリブトファンのィンドール保護基として用いられるホルミル基は上記の 1 , 2 一エタンジチオール、 1 , 4—ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による脱 保護以外に、 希水酸化ナトリウム溶液、 希アンモニアなどによるアルカリ処理に よっても除去される。 Methods for removing (eliminating) protecting groups include, for example, catalytic reduction in a hydrogen stream in the presence of a catalyst such as Pd-black or Pd-carbon, and anhydrous hydrogen fluoride, methanesulfonic acid, trifluor. Acid treatment with fluoromethanesulfonic acid, trifluoroacetic acid or a mixture of these, base treatment with diisopropylethylamine, triethylamine, piperidine, piperazine, etc., reduction with sodium in liquid ammonia, etc. Can also be used. The elimination reaction by the acid treatment is generally carried out at a temperature of about 120 ° C. to 40 ° C. In the acid treatment, for example, anitool, phenol, thioanisole, metacresol, paracresol, dimethylsulfurate. Addition of force thione scavengers such as fluids, 1,4_butanedithiol, 1,2-ethanedithiol, etc. is effective. In addition, the 2,4-dinitrophenyl group used as the imidazole protecting group of histidine was removed by thiophenol treatment, and the formyl group used as the indodol protecting group of triftophan was the above 1,2 monoethanedithiol, 1,4— In addition to deprotection by acid treatment in the presence of butanedithiol, etc., it can also be removed by alkali treatment with dilute sodium hydroxide solution, dilute ammonia and the like.
原料の反応に関与すべきでない官能基の保護ならびに保護基、 およびその保護 基の脱離、 反応に関与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段から 適宜選択しうる。  The protection of the functional group that should not be involved in the reaction of the raw material, the protecting group, the removal of the protecting group, the activation of the functional group involved in the reaction, etc. can be appropriately selected from known groups or known means.
タンパク質または部分ペプチドのアミド体を得る別の方法としては、 例えば、 まず、 カルポキシ末端アミノ酸の《—力ルポキシル基をアミド化して保護した後、 アミノ基側にペプチド （タンパク質） 鎖を所望の鎖長まで延ばした後、 該ぺプチ ド鎖の N末端のひ—ァミノ基の保護基のみを除いたタンパク質または部分べプチ ドと C末端の力ルポキシル基の保護基のみを除去したタンパク質または部分ぺプ チドとを製造し、 これらのタンパク質またはペプチドを上記したような混合溶媒 中で縮合させる。 縮合反応の詳細については上記と同様である。 縮合により得ら れた保護夕ンパク質またはべプチドを精製した後、 上記方法によりすべての保護 基を除去し、 所望の粗タンパク質またはペプチドを得ることができる。 この粗夕 ンパク質またはペプチドは既知の各種精製手段を駆使して精製し、 主要画分を凍 結乾燥することで所望のタンパク質またはべプチドのアミド体を得ることができ る。  As another method for obtaining an amide form of a protein or partial peptide, for example, first, the «-forceloxyl group of the carboxyoxy terminal amino acid is amidated and protected, and then the peptide (protein) chain on the amino group side has a desired chain length And the protein or partial peptide from which only the protecting group of the N-terminal amino group protecting group of the peptide chain is removed and the protecting group of the C-terminal force loxyl group are removed. And the protein or peptide is condensed in a mixed solvent as described above. The details of the condensation reaction are the same as described above. After purifying the protected protein or peptide obtained by the condensation, all the protecting groups are removed by the above-mentioned method to obtain the desired crude protein or peptide. This crude protein or peptide can be purified using various known purification means, and the main fraction can be freeze-dried to obtain the desired protein or peptide amide.
タンパク質またはペプチドのエステル体を得るには、 例えば、 カルポキシ末端 アミノ酸の 0!—力ルポキシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸エステル とした後、 タンパク質またはペプチドのアミド体と同様にして、 所望のタンパク 質またはべプチドのエステル体を得ることができる。  In order to obtain an ester form of a protein or peptide, for example, after condensing the 0! -Power lpoxyl group of the amino acid at the carboxy group with a desired alcohol to form an amino acid ester, the desired amide form of the protein or peptide is used. Protein or peptide ester can be obtained.
本発明で用いられる部分ペプチドまたはそれらの塩は、 自体公知のペプチドの 合成法に従って、 あるいは本発明で用いられるタンパク質を適当なぺプチダ一ゼ で切断することによって製造することができる。 ペプチドの合成法としては、 例 えば、 固相合成法、 液相合成法のいずれによっても良い。 すなわち、 本発明で用 いられる部分べプチドを構成し得る部分べプチドもしくはアミノ酸と残余部分と を縮合させ、 生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的の ペプチドを製造することができる。 公知の縮合方法や保護基の脱離としては、 例 えば、 以下の （i) 〜 （ に記載された方法が挙げられる。 The partial peptide used in the present invention or a salt thereof can be produced according to a peptide synthesis method known per se, or by cleaving the protein used in the present invention with an appropriate peptidease. As a peptide synthesis method, for example, either a solid phase synthesis method or a liquid phase synthesis method may be used. That is, for use in the present invention The desired peptide can be produced by condensing a partial peptide or an amino acid that can constitute a partial peptide, and an amino acid and the remaining part, and removing the protective group when the product has a protective group. Examples of known condensation methods and protecting group removal include the methods described in (i) to (1) below.
(i) M. Bodanszkyおよび Μ· Α· Ondet t i, ペプチド ·シンセシス （Pept ide Synthes is) , Interscience Publ ishers, New York (1966年)  (i) M. Bodanszky and Μ · Α · Ondet t i, Pept ide Synthes is, Interscience Publ ishers, New York (1966)
(i i) Schroederおよび Luebke、 ザ ·ペプチド（The Pept ide) , Academic Press, New York (1965年）  (i i) Schroeder and Luebke, The Pept ide, Academic Press, New York (1965)
(i i i) 泉屋信夫他、 ペプチド合成の基礎と実験、 丸善 (株） （1975年）  (i i i) Nobuo Izumiya et al., Basics and Experiments of Peptide Synthesis, Maruzen Co., Ltd. (1975)
(iv) 矢島治明 および榊原俊平、 生化学実験講座 1、 タンパク質の化学 IV、 205、 （1977年）  (iv) Haruaki Yajima and Shunpei Sugawara, Biochemistry Experiment Course 1, Protein Chemistry IV, 205, (1977)
(V) 矢島治明監修、 続医薬品の開発、 第 14卷、 ペプチド合成、 広川書店 また、 反応後は通常の精製法、 例えば、 溶媒抽出 ·蒸留 ·カラムクロマトダラ フィー ·液体クロマトグラフィー ·再結晶などを組み合わせて本発明で用いられ る部分ペプチドを精製単離することができる。 上記方法で得られる部分ペプチド が遊離体である場合は、 公知の方法あるいはそれに準じる方法によって適当な塩 に変換することができるし、 逆に塩で得られた場合は、 公知の方法あるいはそれ に準じる方法によって遊離体または他の塩に変換することができる。  (V) Supervised by Yajima Haruaki, Continuing Drug Development, Chapter 14, Peptide Synthesis, Hirokawa Shoten Also, after the reaction, conventional purification methods such as solvent extraction, distillation, column chromatography, liquid chromatography, recrystallization A partial peptide used in the present invention can be purified and isolated in combination. When the partial peptide obtained by the above method is a free form, it can be converted into an appropriate salt by a known method or a method analogous thereto, and conversely, when obtained as a salt, the known method or It can be converted to a free form or other salt by a similar method.
本発明で用いられるタンパク質をコードするポリヌクレオチドとしては、 上記 した本発明のタンパク質をコードする塩基配列 （D NAまたは R NA、 好ましく は D NA) を含有するものであればいかなるものであってもよい。 該ポリヌクレ ォチドとしては、 本発明のタンパク質をコードする D NA、 mR NA等の R NA であり、 二本鎖であっても、 一本鎖であってもよい。 二本鎖の場合は、 二本鎖 D NA、 二本鎖 R NAまたは D NA： R NAのハイブリッドでもよい。 一本鎖の場 合は、 センス鎖 （すなわち、 コード鎖） であっても、 アンチセンス鎖 （すなわち、 非コード鎖） であってもよい。 本発明で用いられるタンパク質をコードする D N Aとしては、 前述した本発明で用いられるタンパク質をコードする塩基配列を含 有するものであればいかなるものであってもよい。 また、 ゲノム D NA、 ゲノム D NAライブラリー、 前記した細胞 ·組織由来の c D NA、 前記した細胞 ·組織 由来の c D NAライブラリ一、 合成 D NAのいずれでもよい。 ライブラリーに使 用するべクタ一は、 パクテリオファージ、 プラスミド、 コスミド、 ファ一ジミド などいずれであってもよい。 また、 前記した細胞 '組織より totalRNAまたは mRNA画分を調製したものを用いて直接 Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction (以下、 RT— P C R法と略称する） によって増幅することもで きる。 As the polynucleotide encoding the protein used in the present invention, any polynucleotide may be used as long as it contains the base sequence (DNA or RNA, preferably DNA) encoding the protein of the present invention described above. Good. The polynucleotide is an RNA such as DNA or mRNA encoding the protein of the present invention, and may be double-stranded or single-stranded. In the case of a double strand, a double-stranded DNA, a double-stranded RNA or a DNA: RNA hybrid may be used. In the case of a single strand, it may be a sense strand (ie, a coding strand) or an antisense strand (ie, a non-coding strand). The DNA encoding the protein used in the present invention may be any DNA as long as it contains the base sequence encoding the protein used in the present invention described above. In addition, any of genomic DNA, genomic DNA library, the above-mentioned cell / tissue-derived cDNA, the above-mentioned cell / tissue-derived cDNA library, and synthetic DNA may be used. Used for library The vector to be used may be any of pacteriophage, plasmid, cosmid, phagemid and the like. In addition, it can be directly amplified by reverse transcriptase polymerase chain reaction (hereinafter abbreviated as RT-PCR method) using a total RNA or mRNA fraction prepared from the above-mentioned cell tissue.
本発明で用いられるタンパク質をコードする DNAとしては、 例えば、 配列番 号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10、 配列番 号： 12、 配列番号： 14、 配列番号： 16、 配列番号： 18、 配列番号： 20、 配列番号： 22、 配列番号： 24、 配列番号： 26、 配列番号： 28、 配列番 号： 30、 配列番号： 32、 配列番号： 34、 配列番号： 36もしくは配列番 号： 38で表される塩基配列を含有する DNA、 または配列番号： 2、 配列番 号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10、 配列番号： 12、 配列 番号： 14、 配列番号： 16、 配列番号： 18、 配列番号： 20、 配列番号： 2 2、 配列番号： 24、 配列番号： 26、 配列番号： 28、 配列番号： 30、 配列 番号： 32、 配列番号： 34、 配列番号： 36もしくは配列番号： 38で表され る塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイプリダイズする塩基配列を含 有し、 前記した配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配 列番号： 9、 配列番号： 11、 配列番号： 13、 配列番号： 15、 配列番号： 1 7、 配列番号： 19、 配列番号： 21、 配列番号： 23、 配列番号： 25、 配列 番号： 27、 配列番号： 29、 配列番号： 31、 配列番号： 33、 配列番号： 3 5もしくは配列番号： 37で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質 的に同質の性質を有するタンパク質をコードする DN Aであれば何れのものでも よい。  Examples of the DNA encoding the protein used in the present invention include: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: : 34, SEQ ID NO: 36 or DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 38, or SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 , SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 2, 2, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or SEQ ID NO: 38 And a base sequence that is hybridized under highly stringent conditions. The above-mentioned SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29 SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, or DNA encoding a protein having substantially the same properties as the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 It may be.
配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10、 配列番号： 12、 配列番号： 14、 配列番号： 16、 配列番号： 18、 配列番 号： 20、 配列番号： 22、 配列番号： 24、 配列番号： 26、 配列番号： 28、 配列番号： 30、 配列番号： 32、 配列番号： 34、 配列番号： 36または配列 番号： 38で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下で八イブリダィ ズできる DNAとしては、 例えば、 配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10、 配列番号： 12、 配列番号： 14、 配列番号： 16、 配列番号： 18、 配列番号： 20、 配列番号： 22、 配列番号： 24、 配 列番号： 26、 配列番号： 28、 配列番号： 30、 配列番号： 32、 配列番号： 34、 配列番号： 36または配列番号： 38で表される塩基配列と約 50 %以上、 好ましくは約 60%以上、 さらに好ましくは約 70%以上、 より好ましくは約 8 0%以上、 特に好ましくは約 90%以上、 最も好ましくは約 95%以上の相同性 を有する塩基配列を含有する DN Aなどが用いられる。 SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20 SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or the base represented by SEQ ID NO: 38 Examples of DNA that can be hybridized with the sequence under high stringency conditions include, for example, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, Number: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: : 36 or SEQ ID NO: 38 and about 50% or more, preferably about 60% or more, more preferably about 70% or more, more preferably about 80% or more, particularly preferably about 90% or more. Most preferably, DNA containing a nucleotide sequence having a homology of about 95% or more is used.
塩基配列の相同性は、 相同性計算アルゴリズム NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool) を用レ 、 以下の条件 （期待値 =10；ギャップを許す；フィル夕リング =0N;マッチスコア =1；ミスマッチスコア =-3) にて計算することができる。  The homology of the nucleotide sequence is determined using the homology calculation algorithm NCBI BLAST (National Center for Biotechnology Information Basic Local Alignment Search Tool), and the following conditions (expected value = 10; allow gaps; fill ring = 0N; match score) = 1; Mismatch score = -3).
ハイブリダィゼーシヨンは、 自体公知の方法あるいはそれに準じる方法、 例え は、 Molecular Cloning 2nd (J. Sambrook et al. , Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に記載の方法などに従って行なうことができる。 また、 市販のラ イブラリーを使用する場合、 添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうこと ができる。 より好ましくは、 ハイストリンジェントな条件に従って行なうことが できる。  Hybridization can be performed according to a method known per se or a method analogous thereto, such as the method described in Molecular Cloning 2nd (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). When using a commercially available library, it can be performed according to the method described in the attached instruction manual. More preferably, it can be carried out according to highly stringent conditions.
ハイストリンジエンドな条件とは、 例えば、 ナトリウム濃度が約 19〜40m M、 好ましくは約 19〜 20 mMで、 温度が約 50〜 70 °C、 好ましくは約 60 〜 65 °Cの条件を示す。 特に、 ナトリゥム濃度が約 19 mMで温度が約 65 °Cの 場合が最も好ましい。  The high stringent condition refers to, for example, a condition where the sodium concentration is about 19 to 40 mM, preferably about 19 to 20 mM, and the temperature is about 50 to 70 ° C, preferably about 60 to 65 ° C. In particular, it is most preferable when the sodium concentration is about 19 mM and the temperature is about 65 ° C.
より具体的には、 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質 をコードする DNAとしては、 配列番号： 2で表される塩基配列を含有する DN Aなどが、 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコード する DNAとしては、 配列番号： 4で表される塩基配列を含有する DNAなどが、 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする DNA としては、 配列番号： 6で表される塩基配列を含有する DNAなどが、 配列番 号： 7で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする DNAとして は、 配列番号： 8で表される塩基配列を含有する DNAなどが、 配列番号： 9で 表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする DN Aとしては、 配列 番号： 10で表される塩基配列を含有する DN Aなどが、 、 配列番号： 11で表 されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする DNAとしては、 配列番 号： 12で表される塩基配列を含有する DNAなどが、 配列番号： 13で表され るアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする DNAとしては、 配列番号： 14で表される塩基配列を含有する DNAなどが、 配列番号： 15で表されるァ ミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする DNAとしては、 配列番号： 16 で表される塩基配列を含有する DNAなどが、 配列番号： 17で表されるァミノ 酸配列を含有するタンパク質をコードする DNAとしては、 配列番号： 18で表 される塩基配列を含有する DNAなどが、 配列番号： 19で表されるアミノ酸配 列を含有するタンパク質をコードする DNAとしては、 配列番号： 20で表され る塩基配列を含有する DN Aなどが、 配列番号： 21で表されるアミノ酸配列を 含有するタンパク質をコードする DNAとしては、 配列番号： 22で表される塩 基配列を含有する DNAなどが、 配列番号： 23で表されるアミノ酸配列を含有 するタンパク質をコードする DNAとしては、 配列番号： 24で表される塩基配 列を含有する DNAなどが、 配列番号： 25で表されるアミノ酸配列を含有する タンパク質をコードする DNAとしては、 配列番号： 26で表される塩基配列を 含有する DNAなどが、 配列番号： 27で表されるアミノ酸配列を含有するタン パク質をコードする DNAとしては、 配列番号： 28で表される塩基配列を含有 する DNAなどが、 配列番号： 29で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク 質をコードする DNAとしては、 配列番号： 30で表される塩基配列を含有する DNAなどが、 配列番号： 31で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質を コードする DNAとしては、 配列番号： 32で表される塩基配列を含有する DN Aなどが、 配列番号： 33で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコー ドする DNAとしては、 配列番号： 34で表される塩基配列を含有する DNAな どが、 配列番号： 35で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードす る D N Aとしては、 配列番号： 36で表される塩基配列を含有する D N Aなどが、 配列番号： 37で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする DN Aとしては、 配列番号： 38で表される塩基配列を含有する DN Aなどが用いら れる。 More specifically, DNA encoding the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 includes DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 2, etc., and SEQ ID NO: 3. As DNA encoding the protein containing the amino acid sequence represented, DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 4 encodes the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5. Examples of DNA include DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 6, and DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 is represented by SEQ ID NO: 8. DNA containing a nucleotide sequence that encodes a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, such as DN A containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 10 ,, SEQ ID NO: Table 11 As a DNA encoding a protein containing a specific amino acid sequence, a DNA containing a base sequence represented by SEQ ID NO: 12 encodes a protein containing an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13. Examples of DNA include a DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 14 and a DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15. As a DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17, the DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 18, The DNA encoding the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 includes DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 20, and the like, represented by SEQ ID NO: 21 Examples of DNA encoding a protein containing a mino acid sequence include a DNA containing a base sequence represented by SEQ ID NO: 22 and a DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 As the DNA encoding the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25, the DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 24 is represented by SEQ ID NO: 26 The DNA encoding the protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 as the DNA containing the base sequence includes the DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 28 as the sequence As the DNA encoding the protein containing the amino acid sequence represented by No. 29, the DNA containing the base sequence represented by SEQ ID No. 30 is the amino acid represented by SEQ ID No. 31. As DNA encoding a protein containing a sequence, DNA containing a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 32 is used as a DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33. Is a DNA encoding a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35, such as a DNA containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 34, and represented by SEQ ID NO: 36 DNA containing a base sequence encodes a protein containing the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37, such as DN A containing the base sequence represented by SEQ ID NO: 38. It is.
本発明で用いられる部分ペプチドをコードする DNAとしては、 前述した本発 明で用いられる部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであればいか なるものであってもよい。 また、 ゲノム DNA、 ゲノム DNAライブラリ一、 前 記した細胞 ·組織由来の cDNA、 前記した細胞 ·組織由来の cDNAライブラ リー、 合成 DNAのいずれでもよい。 The DNA encoding the partial peptide used in the present invention may be any DNA that contains the base sequence encoding the partial peptide used in the present invention described above. It may be. Further, any of genomic DNA, genomic DNA library, cDNA derived from the cells / tissues described above, cDNA library derived from the cells / tissues described above, and synthetic DNA may be used.
本発明で用いられる部分ペプチドをコードする DNAとしては、 例えば、 配列 番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10、 配列 番号： 12、 配列番号： 14、 配列番号： 16、 配列番号： 18、 配列番号： 2 0、 配列番号： 22、 配列番号： 24、 配列番号： 26、 配列番号： 28、 配列 番号： 30、 配列番号： 32、 配列番号： 34、 配列番号： 36もしくは配列番 号： 38で表される塩基配列を含有する DNAの一部分を有する DNA、 または 配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10、 配列番号： 12、 配列番号： 14、 配列番号： 16、 配列番号： 18、 配列番 号： 20、 配列番号： 22、 配列番号： 24、 配列番号： 26、 配列番号： 28、 配列番号： 30、 配列番号： 32、 配列番号： 34、 配列番号： 36もしくは配 列番号： 38で表される塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダ ィズする塩基配列を含有し、 本発明で用いられるタンパク質と実質的に同質の活 性を有するタンパク質をコードする D N Aの一部分を含有する D N Aなどが用レ られる。  Examples of the DNA encoding the partial peptide used in the present invention include: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14. , SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, DNA having a part of DNA containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 36 or SEQ ID NO: 38, or SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, sequence Number: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 Alternatively, it contains a base sequence represented by SEQ ID NO: 38 and a base sequence that hybridizes under highly stringent conditions, and encodes a protein having substantially the same quality of activity as the protein used in the present invention. DNA containing a part of the DNA to be used is used.
配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10、 配列番号： 12、 配列番号： 14、 配列番号： 16、 配列番号： 18、 配列番 号： 20、 配列番号： 22、 配列番号： 24、 配列番号： 26、 配列番号： 28、 配列番号： 30、 配列番号： 32、 配列番号： 34、 配列番号： 36もしくは配 列番号： 38で表される塩基配列とハイブリダィズできる DNAは、 前記と同意 義を示す。  SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20 SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or SEQ ID NO: 38 A DNA that can hybridize with a base sequence has the same meaning as described above.
ハイプリダイゼーションの方法およびハイストリンジェントな条件は前記と同 様のものが用いられる。  The same high hydration method and high stringency conditions as described above are used.
以下、 本発明で用いられるタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポ リヌクレオチドを、 「本発明で用いられるポリヌクレオチド」 または 「本発明の ポリヌクレオチド」 と略記することがある。  Hereinafter, a polynucleotide encoding a protein used in the present invention or a partial peptide thereof may be abbreviated as “polynucleotide used in the present invention” or “polynucleotide of the present invention”.
このような本発明で用いられるポリヌクレオチド （好ましくは DNA) を用い て、 公知の方法あるいはそれに準じた方法、 例えば、 実験医学増刊 「新 PCRと その応用」 1 5 ( 7 ) 、 1 9 9 7記載の方法またはそれに準じた方法により、 本 発明で用いられるタンパク質の翻訳铸型となる mR NA (すなわち、 本発明で用 いられるタンパク質をコードする mR NA) を定量することができる。 Using such a polynucleotide (preferably DNA) used in the present invention, a known method or a method equivalent thereto, for example, “Experimental Medicine Special Issue“ New PCR and Its application ”15 (7), 1 9 9 mR NA) can be quantified.
(D NAのクローニング）  (Dna cloning)
本発明で用いられるタンパク質またはその部分べプチドをコードする D N A DNA encoding the protein or its partial peptide used in the present invention
(以下、 これらを単に 「本発明の D NA」 と略記する場合がある） は、 以下の遺 伝子工学的手法によっても製造することができる。 (Hereinafter, these may be simply abbreviated as “DNA NA of the present invention”) can also be produced by the following genetic engineering techniques.
本発明で用いられるタンパク質またはその部分ペプチド （以下、 これらをコー ドする D NAのクロ一ニングおよび発現の説明においては、 これらを単に本発明 のタンパク質と略記する場合がある） を完全にコードする D NAのクローニング の手段としては、 本発明のタンパク質をコードする塩基配列の一部分を有する合 成 D NAプライマーを用いて P C R法によって増幅するか、 または適当なベクタ —に組み込んだ D N Aを本発明のタンパク質の一部あるいは全領域をコードする D N A断片もしくは合成 D N Aを用いて標識したものとのハイブリダイゼ一ショ ンによって選別することができる。 ハイブリダィゼ一シヨンの方法は、 例えば、 Molecular Cloning 2nd Ed (J. Sambrook et al. , Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989) に記載の方法などに従って行なうことができる。 また、 市販のラ イブラリーを使用する場合、 添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうこと ができる。 より好ましくは、 ハイストリンジェントな条件に従って行なうことが できる。 該ハイストリンジェントな条件とは、 例えば、 ナトリウム濃度が約 1 9 〜4 0 mM、 好ましくは約 1 9〜2 O mMで、 温度が約 5 0〜7 0 °C、 好ましく は約 6 0〜6 5 °Cの条件を示す。 特に、 ナトリウム濃度が約 1 9 mMで温度が約 6 5 °Cの場合が最も好ましい。  Fully encodes a protein used in the present invention or a partial peptide thereof (hereinafter, in the explanation of cloning and expression of DNA encoding these, these may be simply abbreviated as the protein of the present invention). As a means for cloning DNA, amplification by PCR using a synthetic DNA primer having a part of the base sequence encoding the protein of the present invention, or DNA incorporated in an appropriate vector— It can be selected by hybridization with a DNA fragment encoding a part or all of the protein or labeled with synthetic DNA. The hybridization method can be performed, for example, according to the method described in Molecular Cloning 2nd Ed (J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989). When using a commercially available library, it can be performed according to the method described in the attached instruction manual. More preferably, it can be carried out according to highly stringent conditions. The highly stringent conditions include, for example, a sodium concentration of about 19 to 40 mM, preferably about 19 to 2 O mM, and a temperature of about 50 to 70 ° C., preferably about 60 to 6 Indicates conditions at 5 ° C. In particular, it is most preferable when the sodium concentration is about 19 mM and the temperature is about 65 ° C.
D NAの塩基配列の変換は、 P C R、 公知のキット、 例えば、 Mu tan™- super Express Km (宝酒造 （株） ） 、 Mutan™- K (宝酒造 （株） ) 等を用いて、 0DA- LA PCR法、 Gapped duplex法、 Kunkel法等の自体公知の方法あるいはそれらに準じる 方法に従つて行なうことができる。  The DNA sequence can be converted by PCR, using known kits such as Mutan ™ -super Express Km (Takara Shuzo), Mutan ™ -K (Takara Shuzo), etc. Method, Gapped duplex method, Kunkel method and the like, or a method according to them.
クローン化されたタンパク質をコードする D N Aは目的によりそのまま、 また は所望により制限酵素で消化したり、 リンカ一を付加したりして使用することが できる。 該 D NAはその 5 ' 末端側に翻訳開始コドンとしての AT Gを有し、 ま た 3' 末端側には翻訳終止コドンとしての TAA、 TGAまたは TAGを有して いてもよい。 これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、 適当な合成 DNAァ ダブ夕一を用いて付加することもできる。 The DNA encoding the cloned protein can be used as it is depending on the purpose, or can be digested with a restriction enzyme or added with a linker if desired. The DNA has ATG as a translation initiation codon at its 5 'end, and Furthermore, TAA, TGA or TAG as a translation termination codon may be present on the 3 ′ terminal side. These translation initiation codons and translation termination codons can also be added using an appropriate synthetic DNA adapter.
(発現べクタ一）  (Expression vector)
本発明のタンパク質の発現ベクターは、 例えば、 （i) 本発明のタンパク質を コードする DNAから目的とする DNA断片を切り出し、 （ii) 該 DNA断片を 適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結することにより製造すること ができる。  The protein expression vector of the present invention is, for example, (i) excising the target DNA fragment from the DNA encoding the protein of the present invention, and (ii) ligating the DNA fragment downstream of the promoter in an appropriate expression vector. Can be manufactured.
ベクターとしては、 大腸菌由来のプラスミド （例、 pBR322, pBR 32 5, pUC 12, pUC 13) 、 枯草菌由来のプラスミド （例、 pUB 110, pTP 5, pC 194) 、 酵母由来プラスミド （例、 p SH 19, p SH15) 、 λファージなどのバクテリオファ一ジ、 レトロウイルス， ワクシニアウィルス, バキュロウィルスなどの動物ウィルスなどの他、 pAl— 11、 pXTl、 p R cZCMV、 pRc/RS V, p cDNA I /Ne oなどが用いられる。  As vectors, plasmids derived from E. coli (eg, pBR322, pBR 32 5, pUC 12, pUC 13), plasmids derived from Bacillus subtilis (eg, pUB 110, pTP 5, pC 194), plasmids derived from yeast (eg, p SH) 19, p SH15), bacteriophage such as λ phage, animal viruses such as retrovirus, vaccinia virus, baculovirus, pAl-11, pXTl, pR cZCMV, pRc / RSV, p cDNA I / Neo is used.
本発明で用いられるプロモ一ターとしては、 遺伝子の発現に用いる宿主に対 応して適切なプロモーターであればいかなるものでもよい。 例えば、 動物細胞を 宿主として用いる場合は、 SRaプロモーター、 SV40プロモーター、 LTR プロモー夕一、 CMVプロモータ一、 HS V-TKプロモー夕一などが挙げられ る。  The promoter used in the present invention may be any promoter as long as it is suitable for the host used for gene expression. For example, when animal cells are used as a host, SRa promoter, SV40 promoter, LTR promoter, CMV promoter, HS V-TK promoter, and the like can be mentioned.
これらのうち、 CMV (サイトメガロウィルス） プロモ一夕一、 SR プロ モーターなどを用いるのが好ましい。 宿主がェシエリヒア属菌である場合は、 t r pプロモータ一、 l a cプロモーター、 r e cAプロモータ一、 λ PLプロモ 一夕一、 l p pプロモーター、 T 7プロモ一夕一などが、 宿主がバチルス属菌で ある場合は、 SPOlプロモータ一、 SPO 2プロモーター、 p e nPプロモ一 ターなど、 宿主が酵母である場合は、 PHO 5プロモーター、 PGKプロモ一夕 一、 GAPプロモ一夕一、 ADHプロモーターなどが好ましい。 宿主が昆虫細胞 .. である場合は、 ポリヘドリンプロモータ一、 P 10プロモーターなどが好ましい。 発現ベクターには、 以上の他に、 所望によりェンハンサー、 スプライシングシ ダナル、 ポリ A付加シグナル、 選択マーカー、 SV40複製オリジン （以下、 S V40 o r iと略称する場合がある） などを含有しているものを用いることがで きる。 選択マ一カーとしては、 例えば、 ジヒドロ葉酸還元酵素 （以下、 dhi r と略称する場合がある） 遺伝子 〔メソトレキセ一ト （MTX) 耐性〕 、 アンピシ リン耐性遺伝子 （以下、 Amp rと略称する場合がある） 、 ネオマイシン耐性遺 伝子 （以下、 Ne o rと略称する場合がある、 G418耐性） 等が挙げられる。 特に、 dh f r遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞を用いて dh f r遺伝子 を選択マーカーとして使用する場合、 目的遺伝子をチミ.ジンを含まない培地によ つても選択できる。 Of these, it is preferable to use CMV (cytomegalovirus) promoter, SR promoter, or the like. If the host is Escherichia, trp promoter, lac promoter, recA promoter, λ PL promoter, lpp promoter, T7 promoter, etc. If the host is Bacillus When the host is yeast, such as SPOl promoter, SPO2 promoter, penP promoter, etc., PHO5 promoter, PGK promoter, GAP promoter, ADH promoter, etc. are preferable. When the host is an insect cell, a polyhedrin promoter, a P10 promoter and the like are preferable. In addition to the above, the expression vector contains an enhancer, splicing signal, poly A addition signal, selection marker, SV40 replication origin (hereinafter sometimes abbreviated as SV40 ori), etc. Can be used wear. Examples of the selection marker include dihydrofolate reductase (hereinafter sometimes abbreviated as dhir) gene [methotrexate (MTX) resistance], ampicillin resistance gene (hereinafter abbreviated as Ampr). And neomycin resistance gene (hereinafter sometimes referred to as “Ne or G418 resistance”). In particular, when the dhfr gene is used as a selection marker using dhfr gene-deficient Chinese hamster cells, the target gene can be selected even in a medium containing no thymidine.
また、 必要に応じて、 宿主に合ったシグナル配列を、 本発明のタンパク質の N 端末側に付加する。 宿主がェシエリヒア属菌である場合は、 PhoA*シグナル配列、 0即 A ·シグナル配列などが、 宿主がバチルス属菌である場合は、 ひ一アミラー ゼ ·シグナル配列、 サブチリシン ·シグナル配列などが、 宿主が酵母である場合 は、 MFa ·シグナル配列、 SUC2 ·シグナル配列など、 宿主が動物細胞である場合 には、 インシュリン 'シグナル配列、 ひ—インターフェロン ·シグナル配列、 抗 体分子 ·シグナル配列などがそれぞれ利用できる。  If necessary, a signal sequence suitable for the host is added to the N-terminal side of the protein of the present invention. If the host is Escherichia, the PhoA * signal sequence, 0 immediately A · signal sequence, etc. If the host is a Bacillus, the amylase signal sequence, subtilisin · signal sequence, etc. When yeast is yeast, MFa · signal sequence, SUC2 · signal sequence, etc. When the host is an animal cell, insulin 'signal sequence, interferon · signal sequence, antibody molecule · signal sequence, etc. are used. it can.
(形質転換体）  (Transformant)
このようにして構築された本発明のタンパク質をコードする DNAを含有する ベクターを用いて、 形質転換体を製造することができる。  A transformant can be produced by using the vector containing the DNA encoding the protein of the present invention thus constructed.
宿主としては、 例えば、 ェシエリヒア属菌、 バチルス属菌、 酵母、 昆虫細胞、 昆虫、 動物細胞などが用いられる。  Examples of hosts that can be used include Escherichia, Bacillus, yeast, insect cells, insects, and animal cells.
ェシェリヒア属菌の具体例としては、 例えば、 ェシェリヒア ·コリ  Specific examples of the genus Escherichia include, for example, Escherichia coli
(Escherichia col i) Kl 2 · DH1 CProc. Natl. Acad. Sci. USA, 60 巻， 160 (1968)〕 ， JM103 [Nucleic Acids Research, 9巻， 309 (1981)〕 ， J A 221 (Journal of Molecular Biology, 120巻， 517 (1978)〕 ， HB 101  (Escherichia col i) Kl 2 · DH1 CProc. Natl. Acad. Sci. USA, 60, 160 (1968)], JM103 [Nucleic Acids Research, 9, 309 (1981)], JA 221 (Journal of Molecular Biology , 120, 517 (1978)], HB 101
[Journal of Molecular Biology, 41 , 459 (1969) ] , C 600 [Genetics, 39 巻, 440(1954)〕 などが用いられる。  [Journal of Molecular Biology, 41, 459 (1969)], C 600 [Genetics, 39, 440 (1954)] and the like are used.
バチルス属菌としては、 例えば、 バチルス ·サブチルス （Bacillus  Examples of Bacillus bacteria include Bacillus subtilis (Bacillus).
subtil is) MI 114 (Gene, 24 , 255 (1983) ) ， 207 - 21 [Journal of Biochemistry, 95巻, 87 (1984)〕 などが用いられる。 subtil is) MI 114 (Gene, 24, 255 (1983)), 207-21 [Journal of Biochemistry, 95, 87 (1984)].
酵母としては、 例えば、 サッカロマイセス セレピシェ （Saccharomyces cerevisiae) AH22, AH22 R-, NA87— 11A, DKD— 5D， 20 B— 12、 シゾサッカロマイセス ボンべ （Schizosaccharomyces pombe) NC YC 1913, NCYC2036、 ピキア パス卜リス （Pichia pastor is) K M71などが用いられる。 Examples of yeast include Saccharomyces cerevisiae AH22, AH22 R-, NA87-11A, DKD-5D, 20 B-12, Schizosaccharomyces pombe NC YC 1913, NCYC2036, Pichia pastor is K M71, etc. are used.
昆虫細胞としては、 例えば、 ウィルスが Ac NPVの場合は、 夜盗蛾の幼虫由 来株化細胞 (Spodoptera frugiperda cell； S f細胞) 、 Trichoplusia niの中 腸由来の MG1細胞、 Trichoplusia niの卵由来の High Five™細胞、 Mamestra brassicae由来の細胞または Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。 ウイ ルスが BmNP Vの場合は、 蚕由来株化細胞 （Bombyx mori N細胞； BmN細 胞） などが用いられる。 該 S f細胞としては、 例えば、 S f 9細胞 （ATCC  As insect cells, for example, when the virus is Ac NPV, larvae derived from larvae (Spodoptera frugiperda cell; S f cells), MG1 cells derived from the midgut of Trichoplusia ni, derived from eggs of Trichoplusia ni High Five ™ cells, cells derived from Mamestra brassicae or cells derived from Estigmena acrea are used. When the virus is BmNP V, cocoon-derived cell lines (Bombyx mori N cells; BmN cells) are used. Examples of the S f cells include S f 9 cells (ATCC
C L1711) 、 S f 21細胞 （以上、 Vaughn, J. L.ら、 In Vivo, 13, 213- 217, (1977)) などが用いられる。 C L1711), S f 21 cells (above, Vaughn, J. L. et al., In Vivo, 13, 213-217, (1977)).
昆虫としては、 例えば、 カイコの幼虫などが用いられる 〔前田ら、 Nature, 315 巻， 592 (1985)〕 。  Examples of insects include silkworm larvae [Maeda et al., Nature, 315, 592 (1985)].
動物細胞としては、 例えば、 サル細胞 COS— 7細胞、 Ve r o細胞、 チヤィ ニーズハムスター細胞 CHO (以下、 CH〇細胞と略記） 、 dh f r遺伝子欠損 チャイニーズハムスター細胞 CHO (以下、 CHO (dh f r-) 細胞と略記） 、 マウス L細胞， マウス 3 T 3細胞、 マウス At T— 20細胞、 マウス ATDC 5 細胞、 マウスミエ口一マ細胞， ヒト HEK293細胞、 ヒト FL細胞、 293細 胞、 C 127細胞、 BALB3T3細胞、 Sp— 2/〇細胞、 ラット GH 3細胞 などが用いられる。  Examples of animal cells include monkey cells COS-7 cells, Vero cells, Chinese hamster cells CHO (hereinafter abbreviated as CH0 cells), dh fr gene-deficient Chinese hamster cells CHO (hereinafter referred to as CHO (dh fr- Abbreviated as cell), mouse L cell, mouse 3 T 3 cell, mouse At T-20 cell, mouse ATDC 5 cell, mouse myeloma cell, human HEK293 cell, human FL cell, 293 cell, C 127 cell, BALB3T3 cells, Sp-2 / 0 cells, rat GH 3 cells, etc. are used.
ェシエリヒア属菌を形質転換するには、 例えば、 Proc. Natl. Acad. Sci.  For example, Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 69巻， 2110 (1972)や Gene, 17卷， 107 (1982)などに記載の方法に従って行なうこ とができる。 The method described in USA, Vol. 69, 2110 (1972), Gene, 17 卷, 107 (1982), etc. can be used.
バチルス属菌を形質転換するには、 例えば、 Molecular & General  To transform Bacillus, for example, Molecular & General
Genetics, 168巻， 111 (1979)などに記載の方法に従って行なうことができる。 It can be carried out according to the method described in Genetics, 168, 111 (1979).
酵母を形質転換するには、 例えば、 Methods in Enzymology, 194巻， 182- 187 (1991)、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75巻， 1929 (1978) などに記載の方法に 従って行なうことができる。  To transform yeast, for example, the method described in Methods in Enzymology, 194, 182-187 (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75, 1929 (1978), etc. Can do.
昆虫細胞または昆虫を形質転換するには、 例えば、 Bio/Technology, 6, 47- 55 (1988)などに記載の方法に従って行なうことができる。 動物細胞を形質転換するには、 例えば、 細胞工学別冊 8 新細胞工学実験プロ トコ一ル 263-267 (1995) (秀潤社発行） 、 Virology, 52巻， 456 (1973)に記載の方 法に従って行なうことができる。 Insect cells or insects can be transformed, for example, according to the method described in Bio / Technology, 6, 47-55 (1988). To transform animal cells, for example, the method described in Cell Engineering Supplement 8 New Cell Engineering Experiment Protocol 263-267 (1995) (published by Shujunsha), Virology, Vol. 52, 456 (1973) Can be done according to
発現ベクターの細胞への導入方法としては、 例えば、 リポフエクシヨン法 (Feigner, P. L. et al. , Proc. Nat l. Acad. Sci. USA, 84巻， 7413頁（1987 年） 〕 、 リン酸カルシウム法 〔Graham， F. L. and van der Eb, A. J. ,  Examples of methods for introducing expression vectors into cells include the lipofusion method (Feigner, PL et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 7413 (1987)), calcium phosphate method [Graham, FL and van der Eb, AJ,
Virology, 52巻， 456- 467頁（1973年)〕 、 電気穿孔法 (Nuemann, E. et al. , ΕΜΒΟ J. , 1巻， 841- 845頁（1982年)〕 等があげられる。 Virology, 52, 456-467 (1973)], electroporation (Nuemann, E. et al., ΕΜΒΟ J., 1, 841-845 (1982)).
このようにして、 本発明のタンパク質をコードする D NAを含有する発現べク ターで形質転換された形質転換体を得ることができる。  In this way, a transformant transformed with an expression vector containing DNA encoding the protein of the present invention can be obtained.
なお、 動物細胞を用いて、 本発明のタンパク質を安定に発現させる方法として は、 上記の動物細胞に導入された発現ベクターが染色体に組み込まれた細胞をク ローン選択によって選択する方法がある。 具体的には、 上記の選択マ一カーを指 標にして形質転換体を選択する。 さらに、 このように選択マーカーを用いて得ら れた動物細胞に対して、 繰り返しクローン選択を行なうことにより本発明のタン パク質の高発現能を有する安定な動物細胞株を得ることができる。 また、 d h f r遺伝子を選択マーカ一として用いた場合、 MT X濃度を徐々に上げて培養し、 耐性株を選択することにより、 d h f r遺伝子とともに、 本発明のタンパク質を コードする D NAを細胞内で増幅させて、 さらに高発現の動物細胞株を得ること もできる。  In addition, as a method for stably expressing the protein of the present invention using animal cells, there is a method of selecting a cell in which the expression vector introduced into the animal cell is incorporated into a chromosome by clone selection. Specifically, transformants are selected using the above selection marker as an indicator. Furthermore, a stable animal cell line having a high expression ability of the protein of the present invention can be obtained by repeatedly selecting clones for the animal cells obtained using the selection marker. In addition, when the dhfr gene is used as a selection marker, the MTX concentration is gradually increased and cultured, and a resistant strain is selected to amplify DNA encoding the protein of the present invention together with the dhfr gene in the cell. It is possible to obtain animal cell lines with higher expression.
上記の形質転換体を本発明のタンパク質をコードする D N Aが発現可能な条件 下で培養し、 本発明のタンパク質を生成、 蓄積せしめることによって、 本発明の タンパク質を製造する.ことができる。  The protein of the present invention can be produced by culturing the above-mentioned transformant under conditions capable of expressing the DNA encoding the protein of the present invention to produce and accumulate the protein of the present invention.
宿主がェシエリヒア属菌、 バチルス属菌である形質転換体を培養する際、 培養 に使用される培地としては液体培地が適当であり、 その中には該形質転換体の生 育に必要な炭素源、 窒素源、 無機物その他が含有せしめられる。 炭素源としては、 例えば、 グルコース、 デキストリン、 可溶性澱粉、 ショ糖など、 窒素源としては、 例えば、 アンモニゥム塩類、 硝酸塩類、 コーンスチープ · リカー、 ペプトン、 力 ゼイン、 肉エキス、 大豆粕、 バレイショ抽出液などの無機または有機物質、 無機 物としては、 例えば、 塩化カルシウム、 リン酸二水素ナトリウム、 塩化マグネシ ゥムなどが挙げられる。 また、 酵母エキス、 ビタミン類、 生長促進因子などを添 加してもよい。 培地の pHは約 5〜8が望ましい。 When culturing a transformant whose host is Escherichia or Bacillus, a liquid medium is appropriate as a medium used for the culture, and a carbon source necessary for the growth of the transformant is included therein. Nitrogen sources, inorganic substances, etc. are included. Examples of carbon sources include glucose, dextrin, soluble starch, and sucrose. Examples of nitrogen sources include ammonium salts, nitrates, corn sheep liquor, peptone, force zein, meat extract, soybean cake, potato extract Examples of inorganic or organic substances such as calcium chloride, sodium dihydrogen phosphate, and magnesium chloride Um. In addition, yeast extract, vitamins, growth promoting factors and the like may be added. The pH of the medium is preferably about 5-8.
ェシエリヒア属菌を培養する際の培地としては、 例えば、 グルコース、 カザミ ノ酸を含む M9培地 (Miller, Journal of Experiments in Molecular  As a medium for culturing Escherichia, for example, M9 medium containing glucose and casamino acid (Miller, Journal of Experiments in Molecular
Genetics, 431-433, Cold Spring Harbor Laboratory, New York 1972] が好まし レ^ ここに必要によりプロモーターを効率よく働かせるために、 例えば、 3 )8— インドリルァクリル酸のような薬剤を加えることができる。 Genetics, 431-433, Cold Spring Harbor Laboratory, New York 1972] is preferred here. In order to make the promoter work more efficiently if necessary, for example, 3) Add a drug such as 8--indolylacrylic acid. Can do.
宿主がェシェリヒア属菌の場合、 培養は通常約 15〜 43 °Cで約 3〜 24時間 行ない、 必要により、 通気や撹拌を加えることもできる。  When the host is Escherichia, the culture is usually performed at about 15 to 43 ° C for about 3 to 24 hours, and if necessary, aeration or agitation can be added.
宿主がバチルス属菌の場合、 培養は通常約 30〜 40 °Cで約 6〜 24時間行な レ 必要により通気や撹拌を加えることもできる。  When the host is a genus Bacillus, the culture is usually carried out at about 30 to 40 ° C for about 6 to 24 hours.
宿主が酵母である形質転換体を培養する際、 培地としては、 例えば、 バークホ 一ルダ一 （Burkholder) 最小培地 〔Bostian, K. L. ら、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77巻， 4505 (1980)〕 や 0. 5 %カザミノ酸を含有する S D培地 [Bitter, G. A. ら Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81巻， 5330 (1984) 〕 が挙げられる。 培地の pH は約 5〜 8に調整するのが好ましい。 培養は通常約 20°C〜35°Cで約 24〜7 2時間行ない、 必要に応じて通気や撹拌を加える。  When cultivating a transformant whose host is yeast, examples of the medium include Burkholder's minimum medium [Bostian, KL et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 77, 4505 (1980 And SD media containing 0.5% casamino acid [Bitter, GA et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 5330 (1984)]. The pH of the medium is preferably adjusted to about 5-8. Incubate at about 20 ° C to 35 ° C for about 24 to 72 hours, and add aeration or agitation as necessary.
宿主が昆虫細胞または昆虫である形質転換体を培養する際、 培地としては、 Grace's Insect Medium (Grace, T. C. C. , Nature, 195, 788 (1962)) に非動化した 10 %ゥシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが用いられる。 培地の pHは約 6. 2〜 6. 4に調整するのが好ましい。 培養は通常約 27 °Cで約 3〜 5日間行 ない、 必要に応じて通気や撹拌を加える。  When cultivating transformants whose hosts are insect cells or insects, the medium is 10% sushi serum that has been immobilized in Grace's Insect Medium (Grace, TCC, Nature, 195, 788 (1962)) What added the thing suitably is used. The pH of the medium is preferably adjusted to about 6.2 to 6.4. Incubate at about 27 ° C for about 3 to 5 days with aeration or agitation as necessary.
宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、 培地としては、 例えば、 約 5 〜20 %の胎児牛血清を含む MEM培地 [Science, 122巻， 501 (1952)〕 ， D E M培地 〔Virology， 8巻， 396 (1959)〕 ， RPMI 1640培地 [The Journal of the American Medical Association 199巻， 519 (1967)〕 ， 199培地  When cultivating a transformant whose host is an animal cell, examples of the medium include MEM medium containing about 5 to 20% fetal bovine serum [Science, Vol. 122, 501 (1952)], DEM medium [Virology, 8, 396 (1959)], RPMI 1640 medium [The Journal of the American Medical Association 199, 519 (1967)], 199 medium
[Proceeding of the Society for the Biological Medicine, 73巻， 1 (1950) ] な どが用いられる。 pHは約 6〜8であるのが好ましい。 培養は通常約 30°C〜4 0°Cで約 15〜60時間行ない、 必要に応じて通気や撹拌を加える。  [Proceeding of the Society for the Biological Medicine, Vol. 73, 1 (1950)] is used. The pH is preferably about 6-8. Cultivation is usually carried out at about 30 ° C to 40 ° C for about 15 to 60 hours, with aeration and agitation as necessary.
以上のようにして、 形質転換体の細胞内、 細胞膜または細胞外に本発明のタン パク質を生成せしめることができる。 As described above, the tongue of the present invention is applied to the inside, the cell membrane or the outside of the transformant. It is possible to generate a protein.
上記培養物から本発明のタンパク質を分離精製するには、 例えば、 下記の方法 により行なうことができる。  Separation and purification of the protein of the present invention from the culture can be performed, for example, by the following method.
本発明のタンパク質を培養菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、 培養後、 公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、 これを適当な緩衝液に懸濁し、 超音波、 リゾチームおよび Zまたは凍結融解などによって菌体あるいは細胞を破壌したの ち、 遠心分離やろ過によりタンパク質の粗抽出液を得る方法などが適宜用いられ る。 緩衝液の中に尿素や塩酸グァニジンなどのタンパク質変性剤や、 トリトン X - 1 0 0 TMなどの界面活性剤が含まれていてもよい。 培養液中にタンパク質が 分泌される場合には、 培養終了後、 それ自体公知の方法で菌体あるいは細胞と上 清とを分離し、 上清を集める。 When extracting the protein of the present invention from cultured cells or cells, after culturing, the cells or cells are collected by a known method, suspended in an appropriate buffer, and subjected to ultrasound, lysozyme and Z, freeze-thawing, etc. For example, a method may be used as appropriate in which a cell or cell is lysed by, and then a crude protein extract is obtained by centrifugation or filtration. The buffer solution may contain a protein denaturant such as urea or guanidine hydrochloride, or a surfactant such as Triton X-1100 ™ . If the protein is secreted into the culture solution, after completion of the culture, the cells or cells are separated from the supernatant by a method known per se, and the supernatant is collected.
このようにして得られた培養上清、 あるいは抽出液中に含まれるタンパク質の 精製は、 自体公知の分離 ·精製法を適切に組み合わせて行なうことができる。 こ れらの公知の分離、 精製法としては、 塩析ゃ溶媒沈澱法などの溶解度を利用する 方法、 透析法、 限外ろ過法、 ゲルろ過法、 および S D S—ポリアクリルアミドゲ ル電気泳動法などの主として分子量の差を利用する方法、 イオン交換クロマトグ ラフィ一などの荷電の差を利用する方法、 ァフィ二ティークロマトグラフィーな どの特異的親和性を利用する方法、 逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水 性の差を利用する方法、 等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法など が用いられる。  Purification of the protein contained in the culture supernatant or the extract thus obtained can be performed by appropriately combining per se known separation and purification methods. These known separation and purification methods include methods that utilize solubility, such as salting out, solvent precipitation, dialysis, ultrafiltration, gel filtration, and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Methods that mainly use the difference in molecular weight, methods that use the difference in charge such as ion-exchange chromatography, methods that use specific affinity such as affinity chromatography, and hydrophobic properties such as reversed-phase high-performance liquid chromatography. For example, a method using the difference in sex and a method using the difference in isoelectric point such as isoelectric focusing can be used.
かくして得られるタンパク質が遊離体で得られた場合には、 自体公知の方法あ るいはそれに準じる方法によつて塩に変換することができ、 逆に塩で得られた場 合には自体公知の方法あるいはそれに準じる方法により、 遊離体または他の塩に 変換することができる。  When the protein thus obtained is obtained in a free form, it can be converted into a salt by a method known per se or a method analogous thereto, and conversely, when it is obtained as a salt, it is known per se. It can be converted into a free form or other salt by a method or a method similar thereto.
なお、 組換え体が産生するタンパク質を、 精製前または精製後に適当な蛋白修 飾酵素を作用させることにより、 任意に修飾を加えたり、 ポリペプチドを部分的 に除去することもできる。 蛋白修飾酵素としては、 例えば、 トリプシン、 キモト リプシン、 アルギニルエンドべプチダ一ゼ、 プロテインキナーゼ、 グリコシダー ゼなどが用いられる。  The protein produced by the recombinant can be arbitrarily modified or the polypeptide can be partially removed by allowing a suitable protein modifying enzyme to act before or after purification. Examples of protein modifying enzymes include trypsin, chymotrypsin, arginyl endobeptidase, protein kinase, glycosidase and the like.
かくして生成する本発明で用いられるタンパク質の存在は、 特異抗体を用いた ェンザィムィムノアツセィゃウエスタンプロッティングなどにより測定すること ができる。 The presence of the protein used in the present invention thus produced was determined using a specific antibody. It can be measured by Western plotting.
本発明で用いられるタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対す る抗体は、 本発明で用いられるタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその 塩を認識し得る抗体であれば、 ポリクロ一ナル抗体、 モノクローナル抗体の何れ であってもよい。  As long as the antibody to the protein or partial peptide or salt thereof used in the present invention is an antibody capable of recognizing the protein or partial peptide or salt thereof used in the present invention, a polyclonal antibody or a monoclonal antibody can be used. Either may be used.
本発明で用いられるタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 （以下、 抗体の説明においては、 これらを単に本発明で用いられるタンパク質と略記する 場合がある） に対する抗体は、 本発明で用いられるタンパク質を抗原として用い、 自体公知の抗体または抗血清の製造法に従って製造することができる。  An antibody against a protein used in the present invention or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter, in the description of an antibody, these may be simply abbreviated as a protein used in the present invention) And can be produced according to a method for producing an antibody or antiserum known per se.
〔モノクローナル抗体の作製〕  [Production of monoclonal antibodies]
( a ) モノクローナル抗体産生細胞の作製  (a) Preparation of monoclonal antibody-producing cells
本発明で用いられるタンパク質は、 温血動物に対して投与により抗体産生が可 能な部位にそれ自体あるいは担体、 希釈剤とともに投与される。 投与に際して抗 体産生能を高めるため、 完全フロイントアジュバントや不完全フロイントアジュ バントを投与してもよい。 投与は通常 2〜 6週毎に 1回ずつ、 計 2〜1 0回程度 行われる。 用いられる温血動物としては、 例えば、 サル、 ゥサギ、 ィヌ、 モルモ ット、 マウス、 ラット、 ヒッジ、 ャギ、 ニヮトリが挙げられる力 マウスおよび ラッ卜が好ましく用いられる。  The protein used in the present invention is administered to a warm-blooded animal by itself, together with a carrier or a diluent, at a site where antibody production is possible. Complete Freund's adjuvant or incomplete Freund's adjuvant may be administered in order to enhance the ability to produce antibodies upon administration. Administration is usually once every 2 to 6 weeks, for a total of 2 to 10 times. As warm-blooded animals to be used, for example, monkeys, rabbits, dogs, guinea pigs, mice, rats, hidges, goats, chickens, and the like, mice and rats are preferably used.
モノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、 抗原で免疫された温血動物、 例えばマウスから抗体価の認められた個体を選択し最終免疫の 2〜 5日後に脾臓 またはリンパ節を採取し、 それらに含まれる抗体産生細胞を同種または異種動物 の骨髄腫細胞と融合させることにより、 モノクローナル抗体産生ハイプリドーマ を調製することができる。 抗血清中の抗体価の測定は、 例えば、 後記の標識化夕 ンパク質と抗血清とを反応させたのち、 抗体に結合した標識剤の活性を測定する ことにより行なうことができる。 融合操作は既知の方法、 例えば、 ケーラーとミ ルスタインの方法 〔Nature、 256、 495 (1975)〕 に従い実施することができる。 融合促進剤としては、 例えば、 ポリエチレングリコール （P E G) やセンダイゥ ィルスなどが挙げられる力 好ましくは P E Gが用いられる。  When producing monoclonal antibody-producing cells, select a warm-blooded animal immunized with an antigen, such as a mouse with an antibody titer, and collect spleen or lymph nodes 2 to 5 days after the final immunization. Monoclonal antibody-producing hyperpridoma can be prepared by fusing the antibody-producing cells with myeloma cells of the same or different animals. The antibody titer in the antiserum can be measured, for example, by reacting the labeled protein described below with the antiserum and then measuring the activity of the labeling agent bound to the antibody. The fusion operation can be performed according to a known method, for example, the method of Kohler and Milstein [Nature, 256, 495 (1975)]. As the fusion promoter, for example, polyethylene glycol (PEG), Sendai virus and the like, preferably PEG is used.
骨髄腫細胞としては、 例えば、 N S— 1、 P 3 U 1、 S P 2 / 0、 A P— 1な どの温血動物の骨髄腫細胞が挙げられるが、 P 3 U 1が好ましく用いられる。 用 いられる抗体産生細胞 （脾臓細胞） 数と骨髄腫細胞数との好ましい比率は 1 ： 1 〜20 ： 1程度であり、 PEG (好ましくは PEG 1000〜PEG6000) が 10〜 80 %程度の濃度で添加され、 20〜 40 °C、 好ましくは 30〜 37 °C で 1〜10分間インキュベートすることにより効率よく細胞融合を実施できる。 モノクローナル抗体産生ハイブリド一マのスクリ一ニングには種々の方法が使 用できるが、 例えば、 タンパク質抗原を直接あるいは担体とともに吸着させた固 相 （例、 マイクロプレート） にハイプリドーマ培養上清を添加し、 次に放射性物 質や酵素などで標識した抗免疫グロプリン抗体 （細胞融合に用いられる細胞がマ ウスの場合、 抗マウス免疫グロブリン抗体が用いられる） またはプロテイン Aを 加え、 固相に結合したモノクローナル抗体を検出する方法、 抗免疫グロブリン抗 体またはプロテイン Aを吸着させた固相にハイプリドーマ培養上清を添加し、 放 射性物質や酵素などで標識したタンパク質を加え、 固相に結合したモノクローナ ル抗体を検出する方法などが挙げられる。 Examples of myeloma cells are NS-1, P3U1, SP2 / 0, AP-1. Any warm-blooded animal myeloma cell can be mentioned, and P 3 U 1 is preferably used. The preferred ratio between the number of antibody-producing cells (spleen cells) used and the number of myeloma cells is about 1: 1 to 20: 1, and PEG (preferably PEG 1000 to PEG6000) has a concentration of about 10 to 80%. It is added and cell fusion can be efficiently carried out by incubating at 20 to 40 ° C, preferably 30 to 37 ° C for 1 to 10 minutes. Various methods can be used for screening of a monoclonal antibody-producing hybridoma. For example, a high-pridoma culture supernatant is added to a solid phase (eg, a microplate) on which a protein antigen is adsorbed directly or with a carrier. Next, add an anti-immunoglobulin antibody labeled with a radioactive substance or enzyme (if the cell used for cell fusion is a mouse, an anti-mouse immunoglobulin antibody is used) or protein A, and then add the monoclonal antibody bound to the solid phase. Antibody detection method, Hypridoma culture supernatant added to solid phase adsorbed with anti-immunoglobulin antibody or protein A, protein labeled with radioactive substance or enzyme, etc., added to the solid phase For example, a method for detecting a clonal antibody can be mentioned.
モノクローナル抗体の選別は、 自体公知あるいはそれに準じる方法に従って行 なうことができる。 通常 HAT (ヒポキサンチン、 アミノプテリン、 チミジン） を添加した動物細胞用培地で行なうことができる。 選別および育種用培地として は、 ハイプリド一マが生育できるものならばどのような培地を用いても良い。 例 えば、 1〜20%、 好ましくは 10〜20%の牛胎児血清を含む RPMI 16 40培地、 1〜10%の牛胎児血清を含む G I T培地 （和光純薬工業 （株） ) あ るいはハイプリドーマ培養用無血清培地 （SFM— 101、 日水製薬 （株） ） な どを用いることができる。 培養温度は、 通常 20〜40°C、 好ましくは約 37°C である。 培養時間は、 通常 5日〜 3週間、 好ましくは 1週間〜 2週間である。 培 養は、 通常 5%炭酸ガス下で行なうことができる。 ハイプリドーマ培養上清の抗 体価は、 上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。  The selection of monoclonal antibodies can be performed according to a method known per se or a method analogous thereto. Usually, it can be performed in a medium for animal cells supplemented with HAT (hypoxanthine, aminopterin, thymidine). As a selection and breeding medium, any medium can be used as long as it can grow a hybrid. For example, RPMI 1640 medium containing 1-20% fetal bovine serum, preferably 10-20% fetal bovine serum, GIT medium containing 1-10% fetal bovine serum (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) or High Prix A serum-free medium for dormer culture (SFM-101, Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) can be used. The culture temperature is usually 20-40 ° C, preferably about 37 ° C. The culture time is usually 5 days to 3 weeks, preferably 1 week to 2 weeks. Culture can usually be performed under 5% carbon dioxide. The antibody titer of the hyperidoma culture supernatant can be measured in the same manner as the antibody titer in the above antiserum.
(b) モノクローナル抗体の精製  (b) Purification of monoclonal antibodies
モノクロ一ナル抗体の分離精製は、 自体公知の方法、 例えば、 免疫グロブリン の分離精製法 〔例、 塩析法、 アルコール沈殿法、 等電点沈殿法、 電気泳動法、 ィ オン交換体 （例、 DEAE) による吸脱着法、 超遠心法、 ゲルろ過法、 抗原結合 固相あるいはプロテイン Aあるいはプロテイン Gなどの活性吸着剤により抗体の みを採取し、 結合を解離させて抗体を得る特異的精製法〕 に従って行なうことが できる。 Monoclonal antibodies can be separated and purified by methods known per se, such as immunoglobulin separation and purification methods (eg, salting out, alcohol precipitation, isoelectric precipitation, electrophoresis, ion exchanger (eg, DEAE) adsorption / desorption method, ultracentrifugation method, gel filtration method, antigen binding solid phase or active adsorbent such as protein A or protein G. Specific purification method for obtaining an antibody by dissociating the binding and releasing the binding.
〔ポリクロ一ナル抗体の作製〕  [Preparation of polyclonal antibodies]
本発明のポリクロ一ナル抗体は、 それ自体公知あるいはそれに準じる方法に従 つて製造することができる。 例えば、 免疫抗原 （タンパク質抗原） 自体、 あるい はそれとキャリアータンパク質との複合体をつくり、 上記のモノクローナル抗体 の製造法と同様に温血動物に免疫を行ない、 該免疫動物から本発明で用いられる タンパク質に対する抗体含有物を採取して、 抗体の分離精製を行なうことにより 製造することができる。  The polyclonal antibody of the present invention can be produced by a method known per se or a method analogous thereto. For example, an immune antigen (protein antigen) itself or a complex of it and a carrier protein is prepared, and a warm-blooded animal is immunized in the same manner as the above-described monoclonal antibody production method. It can be produced by collecting an antibody-containing substance against a protein and separating and purifying the antibody.
温血動物を免疫するために用いられる免疫抗原とキャリアータンパク質との複 合体に関し、 キャリアータンパク質の種類およびキャリア一とハプテンとの混合 比は、 キャリア一に架橋させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良くできれ ば、 どの様なものをどの様な比率で架橋させてもよいが、 例えば、 ゥシ血清アル ブミンゃゥシサイログロブリン、 へモシァニン等を重量比でハプテン 1に対し、 約 0 . 1〜2 0、 好ましくは約 1〜 5の割合でカプルさせる方法が用いられる。 また、 ハプテンとキャリア一の力プリングには、 種々の縮合剤を用いることが できるが、 ダルタルアルデヒドゃカルポジィミド、 マレイミド活性エステル、 チ オール基、 ジチオビリジル基を含有する活性エステル試薬等が用いられる。 縮合生成物は、 温血動物に対して、 抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは 担体、 希釈剤とともに投与される。 投与に際して抗体産生能を高めるため、 完全 フロイントアジュバントゃ不完全フロイントアジュバントを投与してもよい。 投 •与は、 通常約 2〜 6週毎に 1回ずつ、 計約 3〜 1 0回程度行なわれる。  Regarding the complex of immunizing antigen and carrier protein used to immunize warm-blooded animals, the type of carrier protein and the mixing ratio between carrier 1 and hapten are as follows. Any one can be cross-linked at any ratio as long as it is efficient.For example, urushi serum albumin assimiloglobulin, hemocyanin, etc. are about 0 to 1 hapten by weight ratio. A method of coupling at a ratio of 1 to 20 and preferably about 1 to 5 is used. In addition, various condensing agents can be used for the force pulling between the hapten and the carrier, and active esters such as daltaraldehyde, carpositimide, maleimide active ester, thiol group, and dithiobilidyl group are used. The condensation product is administered to warm-blooded animals at the site where antibody production is possible, or with a carrier or diluent. In order to enhance antibody production at the time of administration, complete Freund's adjuvant or incomplete Freund's adjuvant may be administered. Investment is usually performed once every 2 to 6 weeks, approximately 3 to 10 times in total.
ポリクローナル抗体は、 上記の方法で免疫された温血動物の血液、 腹水など、 好ましくは血液から採取することができる。  Polyclonal antibodies can be collected from blood, ascites, etc., preferably from blood of warm-blooded animals immunized by the method described above.
抗血清中のポリクローナル抗体価の測定は、 上記の抗血清中の抗体価の測定と 同様にして測定できる。 ポリクロ一ナル抗体の分離精製は、 上記のモノクロ一ナ ル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの分離精製法に従って行なうことがで さる。 The polyclonal antibody titer in the antiserum can be measured in the same manner as the antibody titer in the antiserum described above. The separation and purification of the polyclonal antibody can be performed according to the same immunoglobulin separation and purification method as the above-described separation and purification of the monoclonal antibody.
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本発明で用いられるタンパク質または部分べプチドをコードするポリヌクレオ チド （好ましくは DNA) (以下、 ォチドの説明におい ては、 これらの DN Aを本発明の DN Aと略記する場合がある） の塩基配列に相 補的な、 または実質的に相補的な塩基配列またはその一部を有するアンチセンス ポリヌクレオチドとしては、 本発明の DNAの塩基配列に相補的な、 または実質 的に相補的な塩基配列またはその一部を有し、 該 DNAの発現を抑制し得る作用 を有するものであれば、 いずれのアンチセンスポリヌクレオチドであってもよい が、 アンチセンス DN Aが好ましい。 Polynucleotides encoding proteins or partial peptides used in the present invention Bases complementary to or substantially complementary to the base sequence of the tide (preferably DNA) (hereinafter, these DN A may be abbreviated as DN A of the present invention). An antisense polynucleotide having a sequence or a part thereof has a base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of the DNA of the present invention or a part thereof, and suppresses the expression of the DNA. Any antisense polynucleotide may be used as long as it has an action to be obtained, but antisense DNA is preferred.
本発明の DNAに実質的に相補的な塩基配列とは、 例えば、 本発明の DNAに 相補的な塩基配列 （すなわち、 本発明の DNAの相補鎖） の全塩基配列あるいは 部分塩基配列と約 70%以上、 好ましくは約 80%以上、 より好ましくは約 9 0%以上、 最も好ましくは約 95%以上の相同性を有する塩基配列などが挙げら れる。 特に、 本発明の DNAの相補鎖の全塩基配列うち、 （i) 翻訳阻害を指向
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ォチドの場合は、 本発明で用いられるタンパク質のThe base sequence substantially complementary to the DNA of the present invention is, for example, about 70% of the total base sequence or partial base sequence of the base sequence complementary to the DNA of the present invention (that is, the complementary strand of the DNA of the present invention). % Or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more, and most preferably about 95% or more of a base sequence having homology. In particular, among the entire base sequence of the complementary strand of the DNA of the present invention, (i) directed to translation inhibition
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In the case of an oxide, the protein used in the present invention
N末端部位をコードする部分の塩基配列 （例えば、 開始コドン付近の塩基配列な ど） の相補鎖と約 70%以上、 好ましくは約 80%以上、 より好ましくは約 9 0%以上、 最も好ましくは約 95%以上の相同性を有するアンチセンスポリヌク レオチド力 (ii) RNa s eHによる RNA分解を指向するアンチセンスポリ ヌクレオチドの場合は、 イントロンを含む本発明の D N Aの全塩基配列の相補鎖 と約 70%以上、 好ましくは約 80%以上、 より好ましくは約 90%以上、 最も 好ましくは約 95%以上の相同性を有するアンチセンスポリヌクレオチドがそれ ぞれ好適である。 About 70% or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more, most preferably about 70% or more of the complementary strand of the base sequence encoding the N-terminal site (for example, the base sequence near the start codon). Antisense polynucleotide power having homology of about 95% or more (ii) In the case of an antisense polynucleotide directed to RNA degradation by RNa seH, the complementary strand of the entire base sequence of the DNA of the present invention including introns Each of the antisense polynucleotides having a homology of about 70% or more, preferably about 80% or more, more preferably about 90% or more, and most preferably about 95% or more is suitable.
具体的には、 配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配 列番号： 10、 配列番号： 12、 配列番号： 14、 配列番号： 16、 配列番号： 18、 配列番号： 20、 配列番号： 22、 配列番号： 24、 配列番号： 26、 酉己 列番号： 28、 配列番号： 30、 配列番号： 32、 配列番号： 34、 配列番号： 36もしくは配列番号： 38で表わされる塩基配列を含有する DNAの塩基配列 に相補的な、 もしくは実質的に相補的な塩基配列、 またはその一部を含有するァ ンチセンスポリヌクレオチド、 好ましくは例えば、 配列番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10、 配列番号： 12、 配列番号： 1 4、 配列番号： 16、 配列番号： 18、 配列番号： 20、 配列番号： 22、 配列 番号： 24、 配列番号： 26、 配列番号： 28、 配列番号： 30、 配列番号： 3 2、 配列番号： 34、 配列番号： 36もしくは配列番号： 38で表わされる塩基 配列を含有する DN Aの塩基配列に相補的な塩基配列、 またはその一部分を有す るァンチセンスポリヌクレオチドが挙げられる。 Specifically, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18 , SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, Yuki Column Number: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or SEQ ID NO: : An antisense polynucleotide containing a base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of DNA containing the base sequence represented by 38, or a part thereof, preferably, for example, SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, array SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 3 2, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or the nucleotide sequence of DN A containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 38 An antisense polynucleotide having a base sequence complementary to the base sequence or a part thereof is exemplified.
アンチセンスポリヌクレオチドは通常、 10〜40個程度、 好ましくは 15〜 30個程度の塩基から構成される。  The antisense polynucleotide is usually composed of about 10 to 40 bases, preferably about 15 to 30 bases.
ヌクレアーゼなどの加水分解酵素による分解を防ぐために、 ァンチセンス D N Aを構成する各ヌクレオチドのりん酸残基 （ホスフェート） は、 例えば、 ホスホ 口チォェ一ト、 メチルホスホネート、 ホスホロジチォネートなどの化学修飾りん 酸残基に置換されていてもよい。 また、 各ヌクレオチドの糖 （デォキシリポー ス） は、 2' —O—メチル化などの化学修飾糖構造に置換されていてもよいし、 塩基部分 （ピリミジン、 プリン） も化学修飾を受けたものであってもよく、 配列 番号： 2、 配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 10、 配列 番号： 12、 配列番号： 14、 配列番号： 16、 配列番号： 18、 配列番号： 2 0、 配列番号： 22、 配列番号： 24、 配列番号： 26、 配列番号： 28、 配列 番号： 30、 配列番号： 32、 配列番号： 34、 配列番号： 36もしくは配列番 号： 38で表わされる塩基配列を含有する DNAにハイブリダィズするものであ ればいずれのものでもよい。 これらのアンチセンスポリヌクレオチドは、 公知の D N A合成装置などを用いて製造することができる。  In order to prevent degradation by hydrolases such as nucleases, the phosphate residues (phosphates) of each nucleotide that constitutes antisense DNA are chemically modified phosphates such as phosphorophosphate, methylphosphonate, and phosphorodithionate. It may be substituted with a residue. In addition, the sugar (deoxy report) of each nucleotide may be substituted with a chemically modified sugar structure such as 2'-O-methylation, and the base part (pyrimidine, purine) is also chemically modified. SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 18 SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36 or SEQ ID NO: 38 As long as it hybridizes to DNA containing the nucleotide sequence represented by These antisense polynucleotides can be produced using a known DNA synthesizer.
本発明に従えば、 本発明で用いられるタンパク質遺伝子の複製または発現を阻 害することのできる該遺伝子に対応するアンチセンスポリヌクレオチド （核酸） を、 クローン化した、 あるいは決定されたタンパク質をコードする DNAの塩基 配列情報に基づき設計し、 合成しうる。 かかるアンチセンスポリヌクレオチドは、 本発明で用いられるタンパク質遺伝子の RNAとハイブリダィズすることができ、 該 RN Aの合成または機能を阻害することができるか、 あるいは本発明で用いら れるタンパク質関連 RN Aとの相互作用を介して本発明で用いられるタンパク質 遺伝子の発現を調節 ·制御することができる。 本発明で用いられるタンパク質関 連 RNAの選択された配列に相補的なポリヌクレオチド、 および本発明で用いら れるタンパク質関連 RN Aと特異的にハイブリダィズすることができるポリヌク レオチドは、 生体内および生体外で本発明で用いられるタンパク質遺伝子の発現 を調節 ·制御するのに有用であり、 また病気などの治療または診断に有用である。 また、 このようなアンチセンスポリヌクレオチド （好ましくは、 アンチセンス D NA) を用いて、 自体公知のノーザンハイブリダィゼーシヨンや PCR- SSCP法 (Genomics, 第 5巻， 874〜879頁, 1989年、 Proceedings of the Nat ional According to the present invention, an antisense polynucleotide (nucleic acid) corresponding to the gene capable of inhibiting replication or expression of the protein gene used in the present invention is cloned or DNA encoding the determined protein It can be designed and synthesized based on the nucleotide sequence information. Such an antisense polynucleotide can hybridize with RNA of the protein gene used in the present invention, and can inhibit the synthesis or function of the RNA, or the protein-related RNA used in the present invention. It is possible to regulate and control the expression of the protein gene used in the present invention through this interaction. Polynucleotides complementary to selected sequences of protein-related RNAs used in the present invention and polynucleotides that can specifically hybridize with protein-related RNAs used in the present invention are in vivo and in vitro. Expression of protein gene used in the present invention It is useful for regulating and controlling the disease, and is useful for the treatment or diagnosis of diseases. In addition, using such an antisense polynucleotide (preferably, antisense DNA), the per se known Northern hybridization or PCR-SSCP method (Genomics, Vol. 5, pp. 874-879, 1989) , Proceedings of the Nat ional
Academy of Sciences of the Uni ted States of America, 第 86卷， 2766〜2770 頁， 1989年） などにより、 本発明で用いられるタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aを定量することができる。 Academy of Sciences of the United States of America, 86, pp. 2766-2770, 1989) and the like can be used to quantify the mRNA that is the translation type of the protein used in the present invention.
用語 「対応する」 とは、 遺伝子を含めたヌクレオチド、 塩基配列または核酸の 特定の配列に相同性を有するあるいは相補的であることを意味する。 ヌクレオチ ド、 塩基配列または核酸とタンパク質との間で 「対応する」 とは、 ヌクレオチド (核酸） の配列またはその相補体から誘導される （指令にある） タンパク質のァ ミノ酸を通常指している。 タンパク質遺伝子の 5 ' 端ヘアピンループ、 5 ' 端 6 一ベースペア · リピート、 5 ' 端非翻訳領域、 タンパク質翻訳開始コドン、 タン パク質コード領域、 O R F翻訳終止コドン、 3 ' 端非翻訳領域、 3 ' 端パリンド ローム領域または 3 ' 端ヘアピンループなどは、 好ましい対象領域として選択し うるが、 タンパク質遺伝子内の如何なる領域も対象として選択しうる。  The term “corresponding” means homologous to or complementary to a specific sequence of nucleotides, nucleotide sequences or nucleic acids including genes. The term “corresponding” between a nucleotide, nucleotide sequence or nucleic acid and protein usually refers to the amino acid of the protein (in the direction) derived from the nucleotide (nucleic acid) sequence or its complement. 5 'end hairpin loop of protein gene, 5' end 6 one base pair repeat, 5 'end untranslated region, protein translation start codon, protein coding region, ORF translation stop codon, 3' end untranslated region, 3 The 'end palindrome region or the 3' end hairpin loop or the like can be selected as a preferred region of interest, but any region within the protein gene can be selected as a target.
目的核酸と、 対象領域の少なくとも一部に相補的なポリヌクレオチドとの関係 については、 目的核酸が対象領域とハイブリダィズすることができる場合は、 そ の目的核酸は、 当該対象領域のポリヌクレオチドに対して 「アンチセンス」 であ るということができる。 アンチセンスポリヌクレオチドは、 2—デォキシ一 D— リポースを含有しているポリヌクレオチド、 D—リポースを含有しているポリヌ クレオチド、 プリンまたはピリミジン塩基の N—グリコシドであるその他のタイ プのポリヌクレオチド、 非ヌクレオチド骨格を有するその他のポリマー （例えば、 市販のタンパク質核酸および合成配列特異的な核酸ポリマー） または特殊な結合 を含有するその他のポリマー （但し、 該ポリマーは D NAや R NA中に見出され るような塩基のペアリングや塩基の付着を許容する配置をもつヌクレオチドを含 有する） などが挙げられる。 それらは、 2本鎖 D NA、 1本鎖 D NA、 2本鎖 R NA、 1本鎖 R NA、 D NA： R NAハイブリッドであってもよく、 さらに非修 飾ポリヌクレオチド （または非修飾オリゴヌクレオチド） 、 公知の修飾の付加さ れたもの、 例えば当該分野で知られた標識のあるもの、 キャップの付いたもの、 メチル化されたもの、 1個以上の天然のヌクレオチドを類縁物で置換したもの、 分子内ヌクレオチド修飾のされたもの、 例えば非荷電結合 （例えば、 メチルホス ホネート、 ホスホ卜リエステル、 ホスホルアミデート、 力ルバメートなど） を持 つもの、 電荷を有する結合または硫黄含有結合 （例、 ホスホロチォエート、 ホス ホロジチォェ一トなど） を持つもの、 例えばタンパク質 （例、 ヌクレア一ゼ、 ヌ クレアーゼ ·インヒビタ一、 トキシン、 抗体、 シグナルペプチド、 ポリ—Lーリ ジンなど） や糖 （例、 モノサッカライドなど） などの側鎖基を有しているもの、 インターカレント化合物 (例、 ァクリジン、 ソラレンなど） を持つもの、 キレー ト化合物 （例えば、 金属、 放射活性をもつ金属、 ホウ素、 酸化性の金属など） を 含有するもの、 アルキル化剤を含有するもの、 修飾された結合を持つもの （例え ば、 ァノマー型の核酸など） であってもよい。 ここで 「ヌクレオシド」 、 「ヌ クレオチド」 および 「核酸」 とは、 プリンおよびピリミジン塩基を含有するのみ でなく、 修飾されたその他の複素環型塩基をもつようなものを含んでいて良い。 このような修飾物は、 メチル化されたプリンおよびピリミジン、 ァシル化された プリンおよびピリミジン、 あるいはその他の複素環を含むものであってよい。 修 飾されたヌクレオチドおよび修飾されたヌクレオチドはまた糖部分が修飾されて いてよく、 例えば、 1個以上の水酸基がハロゲンまたは脂肪族基などで置換され ているか、 またはエーテル、 ァミンなどの官能基に変換されていてよい。 Regarding the relationship between the target nucleic acid and a polynucleotide complementary to at least a part of the target region, if the target nucleic acid can hybridize with the target region, the target nucleic acid is compared with the polynucleotide of the target region. It can be said that it is “antisense”. Antisense polynucleotides include polynucleotides containing 2-deoxy-D-lipose, polynucleotides containing D-lipose, other types of polynucleotides that are N-glycosides of purine or pyrimidine bases, Other polymers with non-nucleotide backbones (eg, commercially available protein nucleic acids and synthetic sequence-specific nucleic acid polymers) or other polymers containing special linkages (however, such polymers are found in DNA and RNA) Such as base pairing and nucleotides having a configuration allowing base attachment). They may be double-stranded DNA, single-stranded DNA, double-stranded RNA, single-stranded RNA, DNA: RNA hybrid, and unmodified polynucleotides (or unmodified oligos). Nucleotides), with known modifications, such as those with labels known in the art, those with caps, Methylated, substituted one or more natural nucleotides with analogues, intramolecular nucleotide modified, eg uncharged bonds (eg methylphosphonates, phosphorylesters, phosphoramidates, force With a charge-bearing or sulfur-containing bond (eg, phosphorothioate, phosphorodiate, etc.), eg proteins (eg, nucleases, nucleases, inhibitors, toxins) , Antibodies, signal peptides, poly-L-lysine, etc.) and sugars (eg, monosaccharides), etc., side chain groups, etc. Chelate compounds (eg metal, radioactive metal, boron, oxidizable metal Etc.), those containing alkylating agents, and those having modified bonds (for example, anomeric nucleic acids). As used herein, “nucleoside”, “nucleotide” and “nucleic acid” may include not only purine and pyrimidine bases but also those having other heterocyclic bases modified. Such modifications may include methylated purines and pyrimidines, acylated purines and pyrimidines, or other heterocycles. Modified nucleotides and modified nucleotides may also be modified at the sugar moiety, e.g., one or more hydroxyl groups are replaced by halogens or aliphatic groups, or functional groups such as ethers, amines, etc. It may be converted.
本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは、 R NA、 D NAまたは修飾された 核酸 （R NA、 D NA) である。 修飾された核酸の具体例としては、 核酸の硫黄 誘導体、 チォホスフェート誘導体、 ポリヌクレオシドアミドゃオリゴヌクレオシ ドアミドの分解に抵抗性のものなどが挙げられる。 本発明のアンチセンスポリヌ クレオチドは、 例えば、 以下のように設計されうる。 すなわち、 細胞内でのアン チセンスポリヌクレオチドをより安定なものにする、 アンチセンスボリヌクレオ チドの細胞透過性をより高める、 目標とするセンス鎖に対する親和性をより大き なものにする、 また、 もし毒性があるような場合はアンチセンスポリヌクレオチ ドの毒性をより小さなものにする。 このような修飾は、 例えば Pharm Tech Japan, 8巻， 247頁または 395頁， 1992年、 Ant isense Research and Appl icat ions, CRC Press, 1993年などで数多く報告されている。  The antisense polynucleotide of the present invention is RNA, DNA or a modified nucleic acid (RNA, DNA). Specific examples of modified nucleic acids include nucleic acid sulfur derivatives, thiophosphate derivatives, polynucleoside amides and those resistant to degradation of oligonucleotides. For example, the antisense polynucleotide of the present invention can be designed as follows. That is, to make the antisense polynucleotide in the cell more stable, to increase the cell permeability of the antisense polynucleotide, to increase the affinity for the target sense strand, If it is toxic, make the antisense polynucleotide less toxic. Many such modifications have been reported, for example, in Pharm Tech Japan, Vol. 8, 247 or 395, 1992, Ant isense Research and Application, CRC Press, 1993.
本発明のアンチセンスポリヌクレオチドは、 変化せしめられたり、 修飾された 糖、 塩基、 結合を含有していて良く、 リボゾーム、 ミクロスフエアのような特殊 な形態で供与されたり、 遺伝子治療により適用されたり、 付加された形態で与え られることができうる。 こうして付加形態で用いられるものとしては、 リン酸基 骨格の電荷を中和するように働くポリリジンのようなポリカチオン体、 細胞膜と の相互作用を高めたり、 核酸の取込みを増大せしめるような脂質 （例、 ホスホリ ピド、 コレステロールなど） などの疎水性のものが挙げられる。 付加するに好ま しい脂質としては、 コレステロールやその誘導体 （例、 コレステリルクロ口ホル メート、 コール酸など） が挙げられる。 こうしたものは、 核酸の 3 ' 端または 5 ' 端に付着させることができ、 塩基、 糖、 分子内ヌクレオシド結合を介して付 着させることができうる。 その他の基としては、 核酸の 3 ' 端または 5 ' 端に特 異的に配置されたキャップ用の基で、 ェキソヌクレアーゼ、 R N a s eなどのヌ クレア一ゼによる分解を阻止するためのものが挙げられる。 こうしたキヤップ用 の基としては、 ポリエチレングリコール、 テトラエチレングリコールなどのダリ コールをはじめとした当該分野で知られた水酸基の保護基が挙げられるが、 それ に限定されるものではない。 The antisense polynucleotide of the present invention may be altered or modified. It may contain sugars, bases, and bonds, and can be donated in special forms such as ribosomes, microspheres, applied by gene therapy, or given in added form. In this way, it can be used in addition form as a polycation such as polylysine that acts to neutralize the charge of the phosphate group skeleton, or a lipid that increases the interaction with the cell membrane or increases the uptake of nucleic acid ( Examples include hydrophobic substances such as phospholipids and cholesterol. Preferred lipids to add include cholesterol and its derivatives (eg, cholesteryl chromate formate, cholic acid, etc.). These can be attached to the 3 'or 5' end of nucleic acids and can be attached via bases, sugars, or intramolecular nucleoside linkages. Other groups are cap groups that are specifically placed at the 3 'or 5' end of nucleic acids to prevent degradation by nucleases such as exonucleases and RNases. Can be mentioned. Examples of such cap groups include, but are not limited to, hydroxyl-protecting groups known in the art, such as darikols such as polyethylene glycol and tetraethylene glycol.
アンチセンスポリヌクレオチドの阻害活性は、 本発明の形質転換体、 本発明の 生体内や生体外の遺伝子発現系、 または本発明のタンパク質の生体内や生体外の 翻訳系を用いて調べることができる。 該ポリヌクレオチドは公知の各種の方法で 細胞に適用できる。  The inhibitory activity of the antisense polynucleotide can be examined using the transformant of the present invention, the in vivo or in vitro gene expression system of the present invention, or the in vivo or in vitro translation system of the protein of the present invention. . The polynucleotide can be applied to cells by various known methods.
(本発明の mR N Aの塩基配列を含有するポリヌクレオチドなど）  (Such as a polynucleotide containing the nucleotide sequence of the mRNA of the present invention)
本発明で用いられるタンパク質の翻訳铸型となる mR NA (すなわち、 本発明 で用いられるタンパク質をコードする mR NA) (以下、 本発明の mR NAと略 記する場合がある） の塩基配列全長またはその一部の塩基配列を含有するポリヌ クレオチドとしては、 本発明で用いられるタンパク質の翻訳铸型となる mR N A の塩基配列またはその一部を含有するものであれば、 いずれのポリヌクレオチド であってもよいが、 R NA (以下、 本発明の R NAと略記する場合がある） であ るのが好ましい。 本発明の R N Aとしては、 例えば、 本発明の mR N Aのコード 領域、 5 ' 非翻訳領域 （5' - UTR) または （および） 3 ' 非翻訳領域 (3' - UTR)の塩 基配列、 またはそれらの一部を含有する R NAが挙げられ、 いずれも好ましく用 いることができる。 具体的には、 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配 列番号： 9、 配列番号： 1 1、 配列番号： 13、 配列番号： 15、 配列番号： 1 7、 配列番号： 19、 配列番号： 21、 配列番号： 23、 配列番号： 25、 配列 番号： 27、 配列番号： 29、 配列番号： 31、 配列番号： 33、 配列番号： 3 5もしくは配列番号： 37で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる m R N Aの塩基配列全 長またはその一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチドが挙げられる。 The full-length nucleotide sequence of mRNA (ie, mRNA encoding the protein used in the present invention) (hereinafter sometimes abbreviated as mRNA of the present invention), which is a translation variant of the protein used in the present invention. The polynucleotide containing a part of the base sequence is any polynucleotide as long as it contains the base sequence of mRNA or the part of the translation RNA of the protein used in the present invention. However, it is preferably R NA (hereinafter sometimes abbreviated as R NA of the present invention). Examples of the RNA of the present invention include, for example, the coding region of the mRNA of the present invention, 5 ′ untranslated region (5′-UTR) or (and) 3 ′ untranslated region (3′-UTR) base sequence, or Examples thereof include RNA containing a part of them, and any of them can be preferably used. Specifically, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 1 7, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 or sequence No .: A polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of an mRNA that is a translation type of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by No. 37 It is done.
また、 このようなポリヌクレオチドを用いて、 RT— PCT法などにより、 本 発明の mRNAの塩基配列の相補配列全長またはその一部の塩基配列を含有する ポリヌクレオチドを合成することができる。  Further, using such a polynucleotide, a polynucleotide containing the full-length complementary sequence of the base sequence of the mRNA of the present invention or a part of the base sequence can be synthesized by the RT-PCT method or the like.
本発明の mRNAの塩基配列の相補配列全長またはその一部の塩基配列を含有 するポリヌクレオチド （以下、 本発明の相補ポリヌクレオチドと略記することが ある） としては、 本発明の mRNAの塩基配列またはその一部に相捕的もしくは 実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するものであれば、 いずれのポ リヌクレオチドであってもよいが、 DNA (以下、 本発明の相補 DNAと略記す ることがある） であるのが好ましい。 本発明の相補ポリヌクレオチドとしては、 例えば、 本発明の mRNAのコード領域、 5' 非翻訳領域 （5'- UTR) または （お よび） 3' 非翻訳領域 (3' -UTR)の塩基配列、 またはそれらの一部に相補的もしく は実質的に相補的な塩基配列を含有する相補ポリヌクレオチドが挙げられ、 いず れも好ましく用いることができる。  As the polynucleotide containing the full-length complementary sequence of the base sequence of the mRNA of the present invention or a partial base sequence thereof (hereinafter sometimes abbreviated as the complementary polynucleotide of the present invention), the base sequence of the mRNA of the present invention or Any polynucleotide may be used as long as it contains a complementary or substantially complementary base sequence or a part thereof, but DNA (hereinafter referred to as the complementary DNA of the present invention). It may be abbreviated). Examples of the complementary polynucleotide of the present invention include, for example, the coding region of the mRNA of the present invention, the base sequence of the 5 ′ untranslated region (5′-UTR) or (and) 3 ′ untranslated region (3′-UTR), Alternatively, a complementary polynucleotide containing a base sequence complementary or substantially complementary to a part of them can be mentioned, and any of them can be preferably used.
本発明の mRNAの塩基配列またはその一部に実質的に相補的な塩基配列とは、 例えば、 本発明の mRNAの全塩基配列あるいは部分塩基配列と約 70%以上、 好ましくは約 80%以上、 より好ましくは約 90%以上、 最も好ましくは約 9 5 %以上の相同性を有する塩基配列などが挙げられる。  The base sequence substantially complementary to the base sequence of the mRNA of the present invention or a part thereof is, for example, about 70% or more, preferably about 80% or more, with the entire base sequence or partial base sequence of the mRNA of the present invention, More preferred is a base sequence having a homology of about 90% or more, most preferably about 95% or more.
具体的には、 配列番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配 列番号： 9、 配列番号： 11、 配列番号： 13、 配列番号： 15、 配列番号： 1 7、 配列番号： 19、 配列番号： 21、 配列番号： 23、 配列番号： 25、 配列 番号： 27、 配列番号： 29、 配列番号： 31、 配列番号： 33、 配列番号： 3 5もしくは配列番号： 37で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列ま たはその一部に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有 するポリヌクレオチドが挙げられる。 Specifically, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 1 7, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: : The base sequence of mRNA that is the translation type of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in 37 Or a polynucleotide containing a base sequence complementary or substantially complementary to a part thereof or a part thereof.
ヌクレア一ゼなどの加水分解酵素による分解を防ぐために、 本発明の相補 DN Aを構成する各ヌクレオチドのりん酸残基 （ホスフェート） は、 例えば、 ホスホ ロチォエート、 メチルホスホネート、 ホスホロジチォネートなどの化学修飾りん 酸残基に置換されていてもよい。 また、 各ヌクレオチドの糖 （デォキシリポー ス） は、 2' — O—メチル化などの化学修飾糖構造に置換されていてもよいし、 塩基部分 （ピリミジン、 プリン） も化学修飾を受けたものであってもよく、 配列 番号： 1、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 9、 配列番 号： 11、 配列番号： 13、 配列番号： 15、 配列番号： 17、 配列番号： 19、 配列番号： 21、 配列番号： 23、 配列番号： 25、 配列番号： 27、 配列番 号： 29、 配列番号： 31、 配列番号： 33、 配列番号： 35もしくは配列番 号： 37で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有するタンパク質の翻訳铸型となる mRN Aの塩基配列全長またはその一部 の塩基配列を含有するポリヌクレオチドにハイプリダイズするものであればいず れのものでもよい。 これらの相補 DNAなどは、 公知の DNA合成装置などを用 いて製造することができる。 また、 ゲノム DNA、 ゲノム DNAライブラリ一、 前記した細胞 ·組織由来の c DNA、 前記した細胞 ·組織由来の c DN Aライブ ラリーなどに由来するものであってもよい。  In order to prevent degradation by a hydrolase such as nuclease, the phosphate residues (phosphates) of each nucleotide constituting the complementary DNA of the present invention are, for example, chemistry such as phosphoroate, methylphosphonate, and phosphorodithionate. It may be substituted with a modified phosphate residue. In addition, the sugar (deoxy report) of each nucleotide may be substituted with a chemically modified sugar structure such as 2'-O-methylation, and the base part (pyrimidine, purine) is also chemically modified. SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: It is hyper-hybridized to a polynucleotide containing the full-length or partial nucleotide sequence of mRNA that is a translational variant of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by 37. if there is It may be of Re not. These complementary DNAs can be produced using a known DNA synthesizer. Further, it may be derived from genomic DNA, a genomic DNA library, cDNA derived from the cells / tissues described above, cDNA library derived from the cells / tissues described above, or the like.
本発明の相補ポリヌクレオチドは、 本発明で用いられるタンパク質遺伝子の m RNAとハイブリダィズすることができる。 したがって、 このような本発明の相 補ポリヌクレオチド （好ましくは、 本発明の相補 DNA) を用いて、 自体公知の ノーザンハイブリダィゼ一シヨンや PCR- SSCP法 （Genomics, 第 5巻, 874〜879頁， 1989年、 Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 第 86巻， 2766〜2770頁， 1989年) などにより本発明で用い られるタンパク質の翻訳铸型となる mRNAを定量することができる。  The complementary polynucleotide of the present invention can be hybridized with mRNA of the protein gene used in the present invention. Therefore, by using such a complementary polynucleotide of the present invention (preferably, the complementary DNA of the present invention), the per se known Northern hybridization or PCR-SSCP method (Genomics, Vol. 5, 874- 879, 1989, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol. 86, 2766-2770, 1989) etc. be able to.
以下に、 本発明で用いられるタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその 塩 （以下、 本発明で用いられるタンパク質と略記する場合がある） 、 本発明で用 いられるタンパク質または部分ペプチドをコードするポリヌクレオチド （例、 D NA) (以下、 本発明で用いられる DNAと略記する場合がある） 、 本発明で用 いられるタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体 （以下、 本発明で用いられる抗体と略記する場合がある） 、 本発明で用いられる D NAの アンチセンスポリヌクレオチド （以下、 本発明で用いられるアンチセンスポリヌ クレオチドと略記する場合がある） などの用途を説明する。 Hereinafter, a protein used in the present invention or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as a protein used in the present invention), a polynucleotide encoding a protein or a partial peptide used in the present invention (example: DNA) (hereinafter sometimes abbreviated as DNA used in the present invention), used in the present invention An antibody against a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof (hereinafter sometimes abbreviated as an antibody used in the present invention), an antisense polynucleotide of a DNA used in the present invention (hereinafter referred to as an anti-antibody used in the present invention) Explain the purpose of the application (sometimes abbreviated as sense polynucleotide).
( 1 ) 非小細胞肺がん悪性度の診断薬など  (1) Non-small cell lung cancer malignancy diagnostic agent, etc.
P腳 H、 PL0D2、 TUBA2、 PML、 F13AK AIF 1, SAM、 S腿 2、 AQP K PAFAH1B3, KYNUは非小細胞肺がんの再発患者で発現が上昇しており、 FU 10307、 0SBPL9、 EIF2C4、 ENTPD4、 FLJ2053 L C0L9A2, FAM13AK DLK 1は無再発患者で発現が上昇 しているので、 これらのタンパク質の発現量を指標として非小細胞肺がん悪性度 (例、 再発の可能性の高低、 予後の良悪、 転移の可能性の高低、 治療薬剤感受性 の高低、 原発がんが原因となった死亡率の高低など） を診断することができる。 すなわち、 本発明は、 本発明で用いられるタンパク質の発現量の高さ （程度） を 指標とする非小細胞肺がん悪性度の診断薬および診断方法；本発明で用いられる タンパク質の発現量を測定するための試薬を含有する非小細胞肺がん悪性度の診 断薬；本発明で用いられるタンパク質の発現量を測定するための手段を含有する 非小細胞肺がん悪性度の診断キッ卜などを提供する。  P 腳 H, PL0D2, TUBA2, PML, F13AK AIF 1, SAM, S thigh 2, AQP K PAFAH1B3, KYNU are upregulated in patients with recurrent non-small cell lung cancer, FU 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 L C0L9A2, FAM13AK DLK 1 is upregulated in relapse-free patients, and the expression level of these proteins is used as an index to evaluate the malignancy of non-small cell lung cancer (eg, high or low likelihood of recurrence, prognosis, The possibility of metastasis, the sensitivity of therapeutic drugs, and the mortality rate caused by the primary cancer can be diagnosed. That is, the present invention relates to a diagnostic agent and diagnostic method for non-small cell lung cancer malignancy using as an index the height (degree) of the expression level of the protein used in the present invention; the expression level of the protein used in the present invention is measured. A diagnostic agent for malignancy of non-small cell lung cancer containing a reagent for the present invention; and a diagnostic kit for malignancy of non-small cell lung cancer containing means for measuring the expression level of the protein used in the present invention.
本発明で用いられるタンパク質の発現量を測定するとは、 例えば、 本発明で用 いられるタンパク質の発現量をタンパク質レベルまたはポリヌクレオチドレベル で測定または推定することを意味する。 本発明で用いられるタンパク質の発現量 をタンパク質レベルで測定するとは、 例えば、 本発明で用いられるタンパク質を 検出または定量することにより、 本発明で用いられるタンパク質の発現量を測定 または推定することを意味する。 本発明で用いられるタンパク質の検出または定 量は、 例えば、 本発明で用いられるタンパク質もしくはその部分ペプチドまたは その塩に対する抗体を使用して行うことができる。 本発明で用いられるタンパク 質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定するとは、 例えば、 本発明で用いら れる夕ンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド （好 ましくは、 D NAまたは mR NA) の発現の有無または発現量を検出または定量 することにより、 本発明で用いられるタンパク質の発現量を測定または推定する ことを意味する。 本発明で用いられるタンパク質をコードするポリヌクレオチド を含有するポリヌクレオチドの発現の有無または発現量の検出または定量は、 例 えば、 本発明で用いられるタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリ ヌクレオチド；本発明で用いられるタンパク質の翻訳鍀型となる mR NAの塩基 配列全長、 その相補鎖全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌク レオチドを使用して行うことができる。 より具体的には、 例えば、 本発明で用い られるタンパク質もしくはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチド、 ま たは本発明で用いられるタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補鎖全長、 もしくはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド を使用して、 本発明で用いられるタンパク質の翻訳铸型となる mR NAを検出ま たは定量することにより、 本発明で用いられるタンパク質の発現量を測定または 推定することができる。 このようにして本発明で用いられるタンパク質の発現量 をポリヌクレオチドレベルで測定または推定する場合には、 本発明で用いられる 夕ンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドの発現量 が高い場合、 本発明で用いられるタンパク質の発現量が高いと評価または推定す る。 本発明で用いられるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチドの発現量が低い場合、 本発明で用いられるタンパク質の発現量が 低いと評価または推定する。 Measuring the expression level of the protein used in the present invention means, for example, measuring or estimating the expression level of the protein used in the present invention at the protein level or the polynucleotide level. Measuring the expression level of the protein used in the present invention at the protein level means, for example, measuring or estimating the expression level of the protein used in the present invention by detecting or quantifying the protein used in the present invention. To do. The detection or quantification of the protein used in the present invention can be performed using, for example, an antibody against the protein used in the present invention or a partial peptide thereof or a salt thereof. The expression level of the protein used in the present invention is measured at the polynucleotide level. For example, a polynucleotide containing a polynucleotide encoding the protein used in the present invention (preferably, DNA or mR It means that the expression level of the protein used in the present invention is measured or estimated by detecting or quantifying the presence or absence or expression level of NA). The presence or absence of expression or the expression level of a polynucleotide containing a polynucleotide encoding the protein used in the present invention is exemplified by For example, a polynucleotide encoding a protein used in the present invention or a partial peptide thereof; a full-length base sequence of mRNA that is a translational variant of the protein used in the present invention, a full-length complementary chain thereof, or a partial base sequence thereof Can be carried out using a polynucleotide containing. More specifically, for example, the polynucleotide encoding the protein used in the present invention or a partial peptide thereof, or the full-length nucleotide sequence of mRNA that is a translational type of the protein used in the present invention, and the total length of its complementary strand Or by detecting or quantifying mRNA that is a translational variant of the protein used in the present invention, using a polynucleotide containing a partial nucleotide sequence of the protein of the present invention. The expression level can be measured or estimated. Thus, when the expression level of the protein used in the present invention is measured or estimated at the polynucleotide level, the expression level of the polynucleotide containing the polynucleotide encoding the protein used in the present invention is high. The protein used in the present invention is evaluated or estimated to have a high expression level. When the expression level of the polynucleotide containing the polynucleotide encoding the protein used in the present invention is low, it is evaluated or estimated that the expression level of the protein used in the present invention is low.
本発明で用いられるタンパク質の発現量を測定するための試薬とは、 例えば、 本発明で用いられるタンパク質の発現量を測定または推定するために使用しうる 化合物 （例、 抗体、 ポリヌクレオチドなど） を意味する。 本発明で用いられる夕 ンパク質の発現量を測定するための試薬は、 例えば、 本発明で用いられるタンパ ク質の発現量をタンパク質レベルで測定または推定するために使用しうる化合物 (例、 抗体） であってもよいし、 ポリヌクレオチドレベルで測定または推定する ために使用しうる化合物 （例、 ポリヌクレオチド） であってもよい。 本発明で用 いられるタンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための試薬としては、 例えば、 本発明で用いられるタンパク質に対する抗体など、 本発明で用いられる 夕ンパク質を検出または定量するために使用しうる化合物を使用することができ る。 本発明で用いられる夕ンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定ま たは推定するための試薬としては、 例えば、 本発明で用いられるタンパク質また はその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド；本発明で用いられるタンパク質の翻訳铸型となる mR NAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチド など、 本発明で用いられるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチド （例、 D NAまたは mR NA) の発現の有無または発現量を検 出または定量するために使用しうる化合物を使用することができる。 The reagent for measuring the expression level of the protein used in the present invention includes, for example, a compound (eg, antibody, polynucleotide, etc.) that can be used for measuring or estimating the expression level of the protein used in the present invention. means. The reagent for measuring the expression level of the protein used in the present invention is, for example, a compound that can be used to measure or estimate the expression level of the protein used in the present invention at the protein level (e.g., antibody Or a compound (eg, polynucleotide) that can be used to measure or estimate at the polynucleotide level. As a reagent for measuring the expression level of the protein used in the present invention at the protein level, for example, an antibody against the protein used in the present invention is used for detecting or quantifying the protein used in the present invention. Possible compounds can be used. Examples of the reagent for measuring or estimating the expression level of the protein used in the present invention at the polynucleotide level include a polynucleotide encoding the protein used in the present invention or a partial peptide thereof. Polynucleotide: full-length nucleotide sequence of mRNA that is a translation type of the protein used in the present invention, Presence or absence of expression of a polynucleotide (eg, DNA or mRNA) containing a polynucleotide encoding the protein used in the present invention, such as a polynucleotide containing the full length of the complementary sequence, or a partial nucleotide sequence thereof. A compound that can be used to detect or quantify the expression level can be used.
本発明で用いられるタンパク質の発現量の測定は、 上述した本発明で用いられ るタンパク質の発現量をタンパク質レベルで測定するための試薬を使用する手段、 本発明で用いられるタンパク質の発現量をポリヌクレオチドレベルで測定するた めの試薬を使用する手段だけではなく、 二次元電気泳動法などの電気泳動法を使 用する手段、 H P L C法などのクロマトグラフィー法を使用する手段、 T0F- MS法 などのマススペクトログラフィ一法を使用する手段、 E L I S A法などの抗体を 使用する手段などを用いて行う—こともできる。  The expression level of the protein used in the present invention is measured by means of using the above-mentioned reagent for measuring the expression level of the protein used in the present invention at the protein level, and the expression level of the protein used in the present invention. Not only means of using reagents for measuring at the nucleotide level, but also means of using electrophoresis methods such as two-dimensional electrophoresis, means of using chromatographic methods such as HPLC, T0F-MS method, etc. It is also possible to use a method using the mass spectrometry method described above, a method using an antibody such as an ELISA method, and the like.
P應、 P匿、 環 A2、 PML、 F13AK AIF1、 SAAL S100A2、 AQP U PAFAH1B3, KYNUは非小細胞肺がんの再発患者で発現が上昇しているので、 これらのタンパク 質が検出されたり、 その発現量が高いと認められた場合、 例えば、 非小細胞肺が んの悪性度が高いと診断、 判定、 予測または分類することができる。 また、 これ らのタンパク質が検出されなかったり、 その発現量が低いと認められた場合、 例 えば、 非小細胞肺がんの悪性度が低いと診断、 判定、 予測または分類することが できる。  P-, P-secret, Ring A2, PML, F13AK AIF1, SAAL S100A2, AQP U PAFAH1B3, and KYNU are upregulated in patients with recurrent non-small cell lung cancer. If the amount is found to be high, for example, the non-small cell lung cancer can be diagnosed, judged, predicted or classified as having high malignancy. In addition, if these proteins are not detected or are found to be low in expression, for example, non-small cell lung cancer can be diagnosed, judged, predicted or classified as having low malignancy.
他方、 FLJ 10307> 0SBPL9、 EIF2C4、 ENTPD4、 FLJ2053 K C0L9A2、 FAM13AK DLK 1は無再発患者で発現が上昇しているので、 これらのタンパク質が検出されたり、 その発現量が高いと認められた場合、 例えば、 非小細胞肺がんの悪性度力 氐いと 診断、 判定、 予測または分類することができる。 また、 これらのタンパク質が検 出されなかったり、 その発現量が低いと認められた場合、 例えば、 非小細胞肺が んの悪性度が高いと診断、 判定、 予測または分類することができる。  On the other hand, FLJ 10307> 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 K C0L9A2, FAM13AK DLK 1 is upregulated in relapse-free patients, so if these proteins are detected or found to be high, For example, non-small cell lung cancer can be diagnosed, judged, predicted or classified as having high malignancy. If these proteins are not detected or are found to be low in expression level, for example, it can be diagnosed, judged, predicted or classified as having a high malignancy of non-small cell lung cancer.
さらには、 P腿、 P匿、 画 2、 PML、 F13AK AIF 1、 SAAK S匪 2、 AQPK PAFAH1B3または （および） ΚΥΝϋが検出されたり、 その発現量が高いと認められ、 かつ、 FU 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 K C0L9A2、 FAM13A1または Furthermore, P thigh, P concealment, picture 2, PML, F13AK AIF 1, SAAK S 匪 2, AQPK PAFAH1B3 or (and) sputum is detected or its expression level is recognized to be high, and FU 10307, 0SBPL9 , EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 K C0L9A2, FAM13A1 or
(および） DLK 1力 s検出されなかったり、 その発現量が低いと認められた場合、 例えば、 非小細胞肺がんの悪性度が高いと診断、 判定、 予測または分類すること ができる。 また、 PHGDH、 PL0D2, T謹、 PML、 F13AL AIFK SAA1、 S100A2、 AQP1、 PAFAH1B3または （および） KYNUが検出されなかったり、 その発現量が低い と認められ、 かつ、 FLJ10307, 0SBPL9、 EIF2C4、 ENTPD4、 FLJ2053K COL9A2, FAM13A1または （および） DLK1力 s検出されたり、 その発現量が高いと認められた 場合、 例えば、 非小細胞肺がんの悪性度が低いと診断、 判定、 予測または分類す ることができる。 (And) If DLK 1 force s is not detected or the expression level is low, for example, it can be diagnosed, judged, predicted or classified as having high malignancy of non-small cell lung cancer. Also, PHGDH, PL0D2, T 謹, PML, F13AL AIFK SAA1, S100A2, AQP1, PAFAH1B3 or (and) KYNU is not detected or its expression level is low, and FLJ10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13A1 or (and) DLK1 force s is detected or expressed If the amount is found to be high, for example, it can be diagnosed, determined, predicted or classified as low malignancy of non-small cell lung cancer.
また、 （i)PHGDH、 PL0D2, 碰 2、 PML、 F13AK AIFK SM1、 S100A2、 AQPK PAFAH1B3および KYNUから選ばれるいずれか二種以上の発現の有無もしくは発現量 の高低、 （i i)FU 10307、.0SBPL9、 EIF2C4、 ENTPD4, FLJ2053K C0L9A2、 FAM13A1 および DLK 1から選ばれるいずれか二種以上の発現の有無もしくは発現量の高低、 または、 (iii)P画、 P匿、 丽2、 PML、 F13AL AIF1、 SAA1、 S100A2、 AQPK PAFAH1B3および KYNUから選ばれるいずれか一種以上の発現の有無もしくは発現量 の高低と、 FLJ 10307、 0SBPL9、 EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053L COL9A2, FAM13A1お よび DLK 1から選ばれるいずれか一種以上の発現の有無もしくは発現量の高低と を、 公知の統計解析方法によって解析することにより、 例えば、 非小細胞肺がん の悪性度の高低を診断、 判定、 予測または分類することもできる。 公知の統計解 析方法としては、 例えば、 (i) Gene Spring (Silicon Genetics社）の Predict Parameter Valueを用レ る方法、 (ii) leave-one-out cross-validation を用レた weighted voting cross-validation algorithm (Science, 286 , 531-537H, 1999年） を用いる方法などがあげられる。 このような統計解析方法を用いた診断、 判定、 予測または分類方法に用いられる本発明で用いられるタンパク質の種類に は特に制限はないが、 通常 2種〜 19種、 好ましくは 3種〜 10種、 より好まし くは 4種〜 8種、 特に好ましくは 5種〜 7種である。  In addition, (ii) presence or absence of expression of two or more selected from PHGDH, PL0D2, 碰 2, PML, F13AK AIFK SM1, S100A2, AQPK PAFAH1B3 and KYNU, or the level of expression (ii) FU 10307, .0SBPL9 , EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K C0L9A2, FAM13A1 and DLK 1 selected from the presence or absence of expression level or high or low level, or (iii) P image, P concealment, 丽 2, PML, F13AL AIF1, SAA1 , S100A2, AQPK PAFAH1B3 and KYNU selected from the presence or absence of expression level or the level of expression, FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053L COL9A2, FAM13A1 and DLK 1 or more By analyzing the presence or absence of expression or the level of expression by a known statistical analysis method, for example, the level of malignancy of non-small cell lung cancer can be diagnosed, judged, predicted or classified. Known statistical analysis methods include, for example, (i) Gene Spring (Silicon Genetics) Predict Parameter Value, (ii) leave-one-out cross-validation weighted voting cross- For example, a method using a validation algorithm (Science, 286, 531-537H, 1999). There is no particular limitation on the type of protein used in the present invention used in the diagnosis, determination, prediction or classification method using such a statistical analysis method, but usually 2 to 19 types, preferably 3 to 10 types. More preferably, they are 4 to 8 types, particularly preferably 5 to 7 types.
なお、 本明細書において、 「発現量が高い」 または 「発現量が低い」 とは、 絶 対的な発現量の高低を意味するだけではなく、 相対的な発現量の高低をも意味す る。  In this specification, “high expression level” or “low expression level” not only means absolute level of expression, but also means relative level of expression. .
上記 「発現量が高い」 とは、 例えば、 Affymetrix社製の GeneChipシステム (Hybridization Oven H010115, GeneChip Fluidics Station 400、 GeneArray Scanner 3000、 Microarray Suite, Human Genome U133A array) を用いて取得し た数値を Per Chip Normalization法（GeneChip上に載っているプローブのうち、 Detection Callで Presentと判断された全プローブの中央値 （メディアン） が 1 となるように全プローブの数値を補正)で処理した場合に数値 2 . 8以上、 好ま しくは 3以上であることをいう。 「発現量が低い」 とは、 例えば、 Aifymetrix社 製の GeneChipシステム (Hybridizat ion Oven H010115、 GeneChip Fluidics Stat ion 400、 GeneArray Scanner 3000、 Microarray Sui te, Human Genome U133A array) を用いた場合の数値を Per Chip Normal izat ion法で処理した場合 に数値 2 . 2以下、 好ましくは 2以下であることをいう。 The above `` high expression level '' means, for example, the value obtained using GeneChip system (Hybridization Oven H010115, GeneChip Fluidics Station 400, GeneArray Scanner 3000, Microarray Suite, Human Genome U133A array) manufactured by Affymetrix. Normalization method (the median) of all probes determined to be Present by Detection Call among the probes on GeneChip is 1 If the values of all probes are corrected so that the value becomes, the value is 2.8 or more, preferably 3 or more. `` Low expression level '' means, for example, the value when using Aifymetrix's GeneChip system (Hybridizat ion Oven H010115, GeneChip Fluidics Station 400, GeneArray Scanner 3000, Microarray Suite, Human Genome U133A array) When processed by the chip normal ionization method, the value is 2.2 or less, preferably 2 or less.
( a ) 本発明で用いられる抗体を含有する診断薬など  (a) a diagnostic agent containing the antibody used in the present invention, etc.
本発明で用いられる抗体は、 本発明で用いられるタンパク質を特異的に認識す ることができるので、 被検液中の本発明で用いられるタンパク質の検出または定 量、 特にサンドイッチ免疫測定法による定量などに使用することができる。 また、 本発明で用いられる抗体は、 上述のように本発明で用いられるタンパク質を検出 または定量できるので、 本発明で用いられるタンパク質の発現の有無もしくは発 現量に関連する疾患または状態の診断などに使用することができる。  Since the antibody used in the present invention can specifically recognize the protein used in the present invention, detection or quantification of the protein used in the present invention in a test solution, particularly quantification by sandwich immunoassay. Can be used for etc. In addition, since the antibody used in the present invention can detect or quantify the protein used in the present invention as described above, the diagnosis or the like of diseases or conditions related to the presence or absence of the protein used in the present invention or the expression level, etc. Can be used for
すなわち、 本発明は、 （i) 本発明で用いられる抗体と、 被検液および標識化 された本発明で用いられるタンパク質とを競合的に反応させ、 前記抗体に結合し た標識化された本発明で用いられるタンパク質の割合を測定することを特徴とす る被検液中の本発明で用いられるタンパク質の定量法、 （Π) 被検液と担体上に 不溶化した本発明で用いられる抗体および標識化された本発明で用いられる別の 抗体とを同時あるいは連続的に反応させたのち、 不溶化担体上の標識剤の活性を 測定することを特徴とする被検液中の本発明で用いられる夕ンパク質の定量法、 および（i i i)上記（i)または（i i)の定量法などを用いた本発明で用いられるタンパ ク質の発現の有無もしくは発現量に関連する疾患または状態の診断方法および診 断薬を提供する。 上記 （i i) の定量法においては、 一方の抗体が本発明で用いら れるタンパク貲の N端部を認識する抗体で、 他方の抗体が本発明で用いられる夕 ンパク質の C端部に反応する抗体であることが望ましい。  That is, the present invention provides: (i) a labeled book that binds to the antibody by competitively reacting the antibody used in the present invention with the test solution and the labeled protein used in the present invention. A method for quantifying the protein used in the present invention in the test solution, characterized in that the ratio of the protein used in the invention is measured; (i) the antibody used in the present invention insolubilized on the test solution and the carrier; and It is used in the present invention in a test solution characterized by measuring the activity of a labeling agent on an insolubilized carrier after reacting with another antibody used in the present invention that is labeled simultaneously or continuously. And (iii) a method for diagnosing a disease or a condition associated with the presence or absence of the protein used in the present invention or the expression level using the method (i) or (ii) above. And provide diagnostics The In the quantification method of (ii) above, one antibody is an antibody that recognizes the N-terminal part of the protein rod used in the present invention, and the other antibody reacts with the C-terminal part of the protein used in the present invention. It is desirable that it is an antibody.
また、 本発明で用いられるタンパク質に対するモノクローナル抗体 （以下、 本 発明で用いられるモノクローナル抗体と称する場合がある） を用いて、 本発明で 用いられるタンパク質の定量および組織染色等による検出を行うこともできる。 これらの目的には、 抗体分子そのものを用いてもよく、 また、 抗体分子の F ( a b， ）2 、 F a b ' 、 あるいは F a b画分を用いてもよい。 本発明で用いられる 抗体を用いる本発明で用いられる夕ンパク質の定量法は、 特に制限されるべきも のではなく、 被検液中の抗原量 （例えば、 タンパク質量） に対応した抗体、 抗原 もしくは抗体一抗原複合体の量を化学的または物理的手段により検出し、 これを 既知量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測定法であれ ば、 いずれの測定法を用いてもよい。 例えば、 ネフロメトリー、 競合法、 ィムノ メトリック法およびサンドイッチ法が好適に用いられる。 感度、 特異性の点で、 後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好ましい。 標識物質を用いる測定法に 用いられる標識剤としては、 例えば、 放射性同位元素、 酵素、 蛍光物質、 発光物 質などが用いられる。 放射性同位元素としては、 例えば、 〔125 1〕 、 〔131 1〕 、 〔3H〕 、 〔14C〕 などが用いられる。 上記酵素としては、 安定で比活性の大きな ものが好ましく、 例えば、 |6—ガラクトシダーゼ、 β―ダルコシダ一ゼ、 アル力 リフォスファターゼ、 パ一ォキシダーゼ、 リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。 蛍光物質としては、 例えば、 フルォレスカミン、 フルォレツセンイソチオシァネ 一卜などが用いられる。 発光物質としては、 例えば、 ルミノール、 ルミノール誘 導体、 ルシフェリン、 ルシゲニンなどが用いられる。 さらに、 抗体あるいは抗原 と標識剤との結合にピオチン一アビジン系を用いることもできる。 In addition, by using a monoclonal antibody against the protein used in the present invention (hereinafter sometimes referred to as a monoclonal antibody used in the present invention), the protein used in the present invention can be detected by quantification and tissue staining. . For these purposes, the antibody molecule itself may be used, or the F (ab,) 2 , F ab ′, or F ab fraction of the antibody molecule may be used. Used in the present invention The method for quantifying the protein used in the present invention using an antibody is not particularly limited, and the antibody, antigen or antibody-antigen complex corresponding to the amount of antigen (eg, amount of protein) in the test solution is not limited. Any measurement method may be used as long as it is a measurement method in which the amount of the body is detected by chemical or physical means and this is calculated from a standard curve prepared using a standard solution containing a known amount of antigen. For example, nephrometry, competition method, immunometric method and sandwich method are preferably used. In view of sensitivity and specificity, it is particularly preferable to use the sandwich method described later. Examples of the labeling agent used in the measurement method using the labeling substance include radioisotopes, enzymes, fluorescent substances, and luminescent substances. Examples of the radioisotope include [ 125 1], [ 131 1], [ 3 H], [ 14 C] and the like. As the enzyme, a stable enzyme having a large specific activity is preferable. For example, | 6-galactosidase, β-darcosidase, alfa phosphatase, paroxidase, malate dehydrogenase and the like are used. As the fluorescent material, for example, fluorescamine, fluorescein isothiocyanate, etc. are used. As the luminescent substance, for example, luminol, luminol derivative, luciferin, lucigenin and the like are used. Furthermore, a piotin-avidin system can be used for the binding of the antibody or antigen and the labeling agent.
抗原または抗体の不溶化は、 物理吸着を用いてもよく、 また、 通常、 タンパク 質または酵素等を不溶化、 固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法でも よい。 担体としては、 ァガロース、 デキストラン、 セルロースなどの不溶性多糖 類、 ポリスチレン、 ポリアクリルアミド、 シリコン等の合成樹脂、 またはガラス 等が挙げられる。 サンドイッチ法においては、 不溶化した本発明で用いられるモ ノクローナル抗体に被検液を反応させ （1次反応） 、 さらに標識化した別の本発 明で用いられるモノクローナル抗体を反応させ （2次反応） たのち、 不溶化担体 上の標識剤の活性を測定することにより、 被検液中の本発明で用いられるタンパ ク質量を定量することができる。 1次反応と 2次反応は逆の順序に行っても、 ま た、 同時に行なってもよく、 時間をずらして行なってもよい。 標識化剤および不 溶化の方法は前記のそれらに準じることができる。 また、 サンドイッチ法におい て、 固相用抗体または標識用抗体に用いられる抗体は必ずしも 1種類である必要 はなく、 測定感度を向上させる等の目的で 2種類以上の抗体の混合物を用いても よい。 サンドイッチ法による本発明で用いられるタンパク質の測定法においては、 1次反応と 2次反応に用いられる本発明で用いられるモノクローナル抗体は、 本 発明で用いられるタンパク質の結合する部位が相異なる抗体が好ましく用いられ る。 すなわち、 1次反応および 2次反応に用いられる抗体としては、 例えば、 2 次反応で用いられる抗体が本発明で用いられるタンパク質の C端部を認識する場 合、 1次反応で用いられる抗体は、 好ましくは C端部以外、 例えば N端部を認識 する抗体が用いられる。 For the insolubilization of the antigen or antibody, physical adsorption may be used, or a method using a chemical bond usually used to insolubilize or immobilize a protein or an enzyme may be used. Examples of the carrier include insoluble polysaccharides such as agarose, dextran, and cellulose, synthetic resins such as polystyrene, polyacrylamide, and silicon, or glass. In the sandwich method, the test solution is reacted with the insolubilized monoclonal antibody used in the present invention (primary reaction), and further labeled with another monoclonal antibody used in the present invention (secondary reaction). Thereafter, by measuring the activity of the labeling agent on the insolubilized carrier, the mass of the protein used in the present invention in the test solution can be quantified. The primary reaction and the secondary reaction may be performed in the reverse order, may be performed simultaneously, or may be performed at different times. The labeling agent and the insolubilization method can be the same as those described above. In the sandwich method, the antibody used for the solid phase antibody or the labeling antibody is not necessarily one type, and a mixture of two or more types of antibodies may be used for the purpose of improving measurement sensitivity. . In the method of measuring the protein used in the present invention by the sandwich method, As the monoclonal antibody used in the present invention used in the primary reaction and the secondary reaction, antibodies having different sites to which the protein used in the present invention binds are preferably used. That is, as an antibody used in the primary reaction and the secondary reaction, for example, when the antibody used in the secondary reaction recognizes the C-terminal part of the protein used in the present invention, the antibody used in the primary reaction is Preferably, an antibody that recognizes other than the C end, for example, the N end is used.
競合法においては、 被検液中の抗原と標識抗原とを抗体に対して競合的に反応 させたのち、 未反応の標識抗原（F)と、 抗体と結合した標識抗原 （B ) とを分離 し （BZ F分離） 、 Bおよび Fいずれかの標識量を測定し、 被検液中の抗原量を 定量する。 この方法には、 抗体として可溶性抗体を用い、 B ZF分離をポリェチ レンダリコール、 前記抗体に対する第 2抗体などを用いる液相法、 および、 第 1 抗体として固相化抗体を用いるか、 あるいは、 第 1抗体は可溶性の抗体を用い第 2抗体として固相化抗体を用いる固相法とが用いられる。 ィムノメトリック法で は、 被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識化抗体に対して競合反応させ た後固相と液相を分離するか、 あるいは、 被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体 とを反応させ、 次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体を固相に結合させたの ち、 固相と液相を分離する。 次に、 いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗 原量を定量する。 また、 ネフロメトリーでは、 ゲル内または溶液中で抗原抗体反 応の結果生じた不溶性の沈降物の量を測定する。 被検液中の抗原量が僅かであり、 少量の沈降物しか得られない場合は、 レーザ一の散乱を利用するレーザーネフ口 メ卜リ一などが好適に用いられる。  In the competition method, the antigen in the test solution and the labeled antigen are reacted competitively with the antibody, and then the unreacted labeled antigen (F) and the labeled antigen (B) bound to the antibody are separated. (BZ F separation) Measure the amount of either B or F label and quantify the amount of antigen in the test solution. In this method, a soluble antibody is used as an antibody, a B-ZF separation is carried out using a polyethylene glycol, a liquid phase method using a second antibody against the antibody, and a solid-phased antibody is used as the first antibody. As the first antibody, a soluble antibody is used, and a solid phase method using a solid phased antibody as the second antibody is used. In the immunometric method, the solid phase and the liquid phase are separated after a competitive reaction between the antigen in the test solution and the immobilized antigen against a certain amount of labeled antibody, or in the test solution. The antigen is reacted with an excess amount of the labeled antibody, and then the solid phase antigen is added to bind the unreacted labeled antibody to the solid phase, and then the solid phase and the liquid phase are separated. Next, measure the amount of label in either phase to quantify the amount of antigen in the test solution. In nephrometry, the amount of insoluble precipitate produced as a result of antigen-antibody reaction in gel or solution is measured. When the amount of antigen in the test solution is very small and only a small amount of precipitate can be obtained, a laser neck mouth memory using laser scattering is preferably used.
これらの免疫学的測定法を本発明の定量方法に適用するにあたっては、 特別の 条件、 操作等の設定は必要とされない。 それぞれの方法における通常の条件、 操 作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発明で用いられるタンパク質の測定 系を構築すればよい。 これらの一般的な技術手段の詳細については、 総説、 成書 などを参照することができる。 例えば、 入江寛編 「ラジオィムノアツセィ」  In applying these immunological measurement methods to the quantification method of the present invention, it is not necessary to set special conditions and operations. What is necessary is just to construct | assemble the measurement system of the protein used by this invention, adding the usual technical consideration of those skilled in the art to the usual conditions and operation method in each method. For details on these general technical means, refer to reviews and textbooks. For example, Hiroshi Irie “Radio Im No Atssey”
(講談社、 昭和 4 9年発行） 、 入江寛編 「続ラジオィムノアツセィ」 （講談社、 昭和 5 4年発行） 、 石川栄治ら編 「酵素免疫測定法」 （医学書院、 昭和 5 3年発 行） 、 石川栄治ら編 「酵素免疫測定法」 （第 2版） （医学書院、 昭和 5 7年発 行） 、 石川栄治ら編 「酵素免疫測定法」 （第 3版） （医学書院、 昭和 6 2年発 行） 、 FMethods in ENZYMOLOGYj Vol. 70 (Immunochemical Techniques (Part(Kodansha, published in 1954), Hiroshi Irie “Continuing Radio Imno Atssay” (published in Kodansha, 1954), “Enzyme Immunoassay” edited by Eiji Ishikawa, et al. (Medical School, 1953) Edited by Eiji Ishikawa et al. “Enzyme Immunoassay” (2nd edition) (published by Medical Shoin, 1957), edited by Eiji Ishikawa et al. “Enzyme Immunoassay” (3rd edition) (medical school, Showa 6 Depart 2 years ), FMethods in ENZYMOLOGYj Vol. 70 (Immunochemical Techniques (Part
A) )、 「Methods in ENZYMOLOGYj Vol. 73 (Immunochemical Techniaues (PartA)), `` Methods in ENZYMOLOGYj Vol. 73 (Immunochemical Techniaues (Part
B) )、 「Methods in ENZYMOLOGYj Vol. 74 (Immunochemical Techniaues (Part 0 )、 「Methods in ENZYMOLOGYj Vol. 84 ( Immunochemical Techniaues (Part D : Selected Immunoassays) ) , rMethods in ENZYMOLOGYj Vol. 92 B)), Methods in ENZYMOLOGYj Vol. 74 (Immunochemical Techniaues (Part 0), Methods in ENZYMOLOGYj Vol. 84 (Immunochemical Techniaues (Part D: Selected Immunoassays))), rMethods in ENZYMOLOGYj Vol. 92
(Iiiunochemical Techniques (Part E: Monoclonal Ant ibodies and General Immunoassay Methods) ) , 「Methods in ENZYMOLOGY」 Vol. 121  (Iiiunochemical Techniques (Part E: Monoclonal Ant ibodies and General Immunoassay Methods)), `` Methods in ENZYMOLOGY '' Vol. 121
(Immunoche ical Techniaues (Part I :Hybridoma Technology and Monoclonal Ant ibodies) ) (以上、 アカデミックプレス社発行）などを参照することができる。 以上のようにして、 本発明で用いられる抗体を用いることによって、 本発明で用 いられるタンパク質を感度良く定量することができる。 また、 本発明で用いられ る抗体は、 体液または組織などの被検体中に存在する本発明で用いられる夕ンパ ク質を検出するために使用することができる。  (Immunocheical Techniaues (Part I: Hybridoma Technology and Monoclonal Ant ibodies)) (published by Academic Press). As described above, the protein used in the present invention can be quantified with high sensitivity by using the antibody used in the present invention. Further, the antibody used in the present invention can be used to detect the protein used in the present invention present in a subject such as a body fluid or tissue.
また、 本発明で用いられる抗体は、 抗体マイクロアレイ、 すなわち基板上に固 定された複数のまたは 1つの抗体のアレイで形成された 「抗体チップ」 に使用す ることができる。 このような抗体マイクロアレイは、 公知の方法またはそれに準 じた方法によって調製し、 使用し、 そして分析することができる。 このような抗 体マイクロアレイの調製、 使用方法などは、 例えば、 （i) MacBeathおよび  The antibody used in the present invention can also be used in an antibody microarray, that is, an “antibody chip” formed of an array of a plurality of or one antibody fixed on a substrate. Such an antibody microarray can be prepared, used and analyzed by a known method or a method analogous thereto. The preparation and use of such antibody microarrays include, for example: (i) MacBeath and
Schriber, Science, 289、 1760 - 1763頁、 2000年、 (i i) Haab, B. B.ら、 Genome Biology, 2 (2)、 2001年などに記載されている。 Schriber, Science, 289, 1760-1763, 2000, (ii) Haab, B. B. et al., Genome Biology, 2 (2), 2001, etc.
さらに、 このような本発明の抗体マイクロアレイは、 本発明で用いられるタン パク質の発現の有無もしくは発現量に関連する疾患または状態を診断するための 診断用キッ卜に使用することもできる。  Furthermore, such an antibody microarray of the present invention can also be used in a diagnostic kit for diagnosing a disease or condition related to the presence or absence of the protein used in the present invention or the expression level.
PHGDH, PL0D2, TUBA2, PML、 F13AL AIFK SAAK S100A2, AQP1、 PAFAH1B3, ΚΥΝϋは非小細胞肺がんの再発患者で発現が上昇しているので、 本発明で用いられ る抗体を用いてこれらのタンパク質の濃度を定量することにより、 これらのタン パク質が検出されたり、 その発現量が高いと認められた場合、 例えば、 非小細胞 肺がんの再発の可能性が高い、 予後が良好ではない、 転移の可能性が高い、 また は （および） 悪性度が高いと診断、 判定、 予測または分類することができる。 ま た、 これらのタンパク質が検出されなかったり、 その発現量が低いと認められた 場合、 例えば、 非小細胞肺がんの再発の可能性が低い、 悪性度が低い、 または (および） 予後が良好であると診断、 判定、 予測または分類することができる。 他方、 FLJ 10307、 0SBPL9、 EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053L C0L9A2, FAM13AK DLK 1は無再発患者で発現が上昇しているので、 本発明で用いられる抗体を用いてこ れらのタンパク質の濃度を定量することにより、 これらのタンパク質が検出され たり、 その発現量が高いと認められた場合、 例えば、 非小細胞肺がんの再発の可 能性が低い、 予後が良好である、 転移の可能性が低い、 または （および） 悪性度 が低いと診断、 判定、 予測または分類することができる。 また、 これらのタンパ ク質が検出されなかったり、 その発現量が低いと認められた場合、 例えば、 非小 細胞肺がんの再発の可能性が高い、 予後が良好ではない、 転移の可能性が高い、 または （および） 悪性度が高いと診断、 判定、 予測または分類することができる。 さらには、 P腿、 PL0D2、 丽2、 PML、 F13AK AIFK SAA1、 S100A2、 AQPK PAFAH1B3または （および） ΚΥΝϋが検出されたり、 その発現量が高いと認められ、 かつ、 FLJ10307, 0SBPL9、 EIF2C4, ENTPD4、 FLJ2053K COL9A2, FAM13A1または (および） DLK 1力 S検出されなかったり、 その発現量が低いと認められた場合、 例えば、 非小細胞肺がんの再発の可能性が高い、 予後が良好ではない、 転移の可 能性が高い、 または （および） 悪性度が高いと診断、 判定、 予測または分類する ことができる。 また、 P腦、 P匿、 丽2、 PML、 F13AK AIF1、 SAAK S匪 2、 AQP1、 PAFAH1B3または （および） KYNUが検出されなかったり、 その発現量が低い と認められ、 かつ、 FLJ10307, 0SBPL9, EIF2C4、 E腦 4、 FLJ2053K COL9A2, FAM13A1または （および） DLK 1力検出されたり、 その発現量が高いと認められた 場合、 例えば、 非小細胞肺がんの再発の可能性が低い、 予後が良好である、 転移 の可能性が低い、 または （および） 悪性度が低いと診断、 判定、 予測または分類 することができる。 PHGDH, PL0D2, TUBA2, PML, F13AL AIFK SAAK S100A2, AQP1, PAFAH1B3, and sputum have increased expression in patients with non-small cell lung cancer recurrence. If these proteins are detected or are expressed at high levels, for example, non-small cell lung cancer is likely to recur, prognosis is poor, metastasis is possible Can be diagnosed, judged, predicted or classified as high-grade or (and) high-grade. In addition, these proteins were not detected or their expression levels were found to be low. For example, it can be diagnosed, determined, predicted or classified as having a low likelihood of non-small cell lung cancer recurrence, low malignancy, or (and) good prognosis. On the other hand, FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053L C0L9A2, and FAM13AK DLK 1 are upregulated in relapse-free patients. If these proteins are detected or found to be highly expressed, for example, the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence is low, the prognosis is good, the probability of metastasis is low, or ( And) Low grade can be diagnosed, determined, predicted or classified. In addition, if these proteins are not detected or are found to be low in expression level, for example, the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high, the prognosis is not good, and the possibility of metastasis is high. Or (and) High grade can be diagnosed, determined, predicted or classified. Furthermore, P thigh, PL0D2, 丽 2, PML, F13AK AIFK SAA1, S100A2, AQPK PAFAH1B3 or (and) heel is detected or its expression level is high, and FLJ10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13A1 or (and) DLK 1 force S If not detected, or if the expression level is low, for example, the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high, prognosis is poor, metastasis Can be diagnosed, determined, predicted or classified as likely or (and) high grade. In addition, P 腦, P concealment, 丽 2, PML, F13AK AIF1, SAAK S 匪 2, AQP1, PAFAH1B3 or (and) KYNU is not detected or its expression level is low, and FLJ10307, 0SBPL9, EIF2C4, E 腦 4, FLJ2053K COL9A2, FAM13A1 or (and) DLK 1 force is detected or the level of expression is high, for example, the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence is low, and the prognosis is good Can be diagnosed, judged, predicted or classified as having a low probability of metastasis, or (and) low grade.
また、 (i) PHGDH, PL0D2、 ΤϋΒΑ2、 PML、 F13AL AIF1、 SM1、 S100A2、 AQPK PAFAH1B.3および ΚΥΝϋから選ばれるいずれか二種以上の発現の有無もしくは発現量 の高低、 (i i) FU10307、 0SBPL9、 EIF2C4、 ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13A1 および DLK 1から選ばれるいずれか二種以上の発現の有無もしくは発現量の高低、 または、 （i i i) raGDH、 PL0D2, TUBA2, PML、 F13AL AIF1、 SM1、 S100A2, AQP1、 PAFAH1B3および ΚΥΝϋから選ばれるいずれか一種以上の発現の有無もしくは発現量 の高低と、 FLJ 10307, 0SBPL9、 EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13A1お よび DLK 1から選ばれるいずれか一種以上の発現の有無もしくは発現量の高低と を、 公知の統計解析方法によって解析することにより、 例えば、 非小細胞肺がん の再発の可能性の高低、 予後の良悪、 転移の可能性の高低、 または （および） 悪 性度の高低を診断、 判定、 予測または分類することもできる。 公知の統計解析方 法としては、 例えば、 (i) Gene Spring (Si l icon Genet ics社）の Predict Also, (i) PHGDH, PL0D2, ΤϋΒΑ2, PML, F13AL AIF1, SM1, S100A2, AQPK PAFAH1B.3 and the presence or absence of expression level or the level of expression of any two or more selected from ΚΥΝϋ, (ii) FU10307, 0SBPL9 , EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13A1 and DLK 1 selected from the presence or absence or high or low expression level, or (iii) raGDH, PL0D2, TUBA2, PML, F13AL AIF1, SM1, S100A2, Presence or absence of expression or expression level of any one or more selected from AQP1, PAFAH1B3 and cocoon By analyzing the presence / absence or level of expression of any one or more selected from FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13A1 and DLK 1 by a known statistical analysis method For example, non-small cell lung cancer can be diagnosed, judged, predicted, or classified with a high or low probability of recurrence, good or bad prognosis, high or low probability of metastasis, and / or high or low severity. Known statistical analysis methods include, for example, (i) Predict of Gene Spring (Sil icon Genetics)
Parameter Valueを用レ る方法、 (i i) leave-one-out cross-val idat ion を用レた weighted vot ing cross-val idat ion algori thm (Science, 286巻， 53ト 537頁， 1999年） を用いる方法などがあげられる。 このような統計解析方法を用いた診断、 判定、 予測または分類方法に用いられる本発明で用いられるタンパク質の種類に は特に制限はないが、 通常 2種〜 1 9種、 好ましくは 3種〜 1 0種、 より好まし くは 4種〜 8種、 特に好ましくは 5種〜 7種である。 (Ii) weighted voting cross-validation ion algori thm (Science, 286, 53 pp. 537, 1999) using leave-one-out cross-validation ion The method to use etc. are mention | raise | lifted. There is no particular limitation on the type of protein used in the present invention used in the diagnosis, determination, prediction or classification method using such a statistical analysis method, but usually 2 to 19 types, preferably 3 to 1 types. 0 types, more preferably 4 to 8 types, particularly preferably 5 to 7 types.
また、 本発明で用いられるタンパク質を精製するために使用する抗体カラムの 作製、 精製時の各分画中の本発明で用いられるタンパク質の検出、 被検細胞内に おける本発明で用いられる夕ンパク質の挙動の分析などのために使用することが できる。  In addition, the production of the antibody column used for purifying the protein used in the present invention, the detection of the protein used in the present invention in each fraction during purification, and the protein used in the present invention in the test cells. It can be used for quality behavior analysis.
( b ) 本発明で用いられるポリヌクレオチドを含有する診断薬など  (b) a diagnostic agent containing the polynucleotide used in the present invention, etc.
本発明で用いられるポリヌクレオチド （好ましくは D NA) は、 例えば、 プロ ーブとして使用することにより、 ヒトまたは温血動物 （例えば、 ラット、 マウス、 モルモット、 ゥサギ、 トリ、 ヒッジ、 ブタ、 ゥシ、 ゥマ、 ネコ、 ィヌ、 サル、 チ ンパンジーなど） における本発明で用いられるタンパク質またはその部分べプチ ドをコードするポリヌクレオチド （好ましくは、 D NAまたは mR NA) の発現 の有無、 発現量もしくは異常 （遺伝子異常） を検出することができるので、 例え ば、 該 D NAまたは mR NAの発現の有無あるいは発現量に関連する疾患または 状態や、 該 D NAまたは mR NAの損傷あるいは突然変異などの遺伝子診断薬と して有用である。  The polynucleotide (preferably DNA) used in the present invention can be used, for example, as a probe to allow humans or warm-blooded animals (eg, rats, mice, guinea pigs, rabbits, birds, birds, pigs, rabbits) Presence / absence of expression of the polynucleotide (preferably DNA or mRNA) encoding the protein used in the present invention or its partial peptide in horse, cat, cat, monkey, chimpanzee, etc. Alternatively, abnormalities (gene abnormalities) can be detected. For example, the presence or absence or expression level of the DNA or mRNA, or the damage or mutation of the DNA or mRNA It is useful as a genetic diagnostic agent.
本発明で用いられるポリヌクレオチドを用いる上記の遺伝子診断は、 例えば、 自体公知のノーザンハイプリダイゼーシヨンや PCR- SSCP法 （Genomics, 第 5巻， 874〜879頁， 1989年、 Proceedings οί the Nat ional Academy of Sciences of the Uni ted States of America, 第 86巻， 2766〜2770頁， 1989年） などにより実 施することができる。 The above-described genetic diagnosis using the polynucleotide used in the present invention can be performed by, for example, the known Northern hyperpridition or PCR-SSCP method (Genomics, Vol. 5, pp. 874-879, 1989, Proceedings οί the Nat ional Academy of Sciences of the United States of America, Volume 86, 2766-2770, 1989) Can be applied.
具体的には、 P腿、 P腦、 碰 2、 PML、 F13AL AIFK SAAL S100A2, AQP1、 PAFAH1B3, KY丽は非小細胞肺がんの再発患者で発現が上昇しているので、 例えば、 ノーザンハイブリダィゼーションによりこれらのタンパク質の翻訳铸型となる m RNA力 S検出されたり、 その発現量が高いと認められた場合、 例えば、 非小細胞 肺がんの再発の可能性が高い、 予後が良好ではない、 転移の可能性が高い、 また は （および） 悪性度が高いと診断、 判定、 予測または分類することができる。 ま た、 これらのタンパク質の翻訳铸型となる mR NAが検出されなかったり、 その 発現量が低いと認められた場合、 例えば、 非小細胞肺がんの再発の可能性が低い、 予後が良好である、 転移の可能性が低い、 または （および） 悪性度が低いと診断、 判定、 予測または分類することができる。  Specifically, P thigh, P 腦, 碰 2, PML, F13AL AIFK SAAL S100A2, AQP1, PAFAH1B3, and KY 丽 are upregulated in non-small cell lung cancer patients. If the mRNA power S, which is a translational type of these proteins, is detected by zeation, or if the expression level is recognized to be high, for example, the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high, the prognosis is not good, Can be diagnosed, determined, predicted or classified as having a high probability of metastasis or (and) high malignancy. Also, if mRNAs that are translational variants of these proteins are not detected or are expressed at low levels, for example, the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence is low, and the prognosis is good Can be diagnosed, determined, predicted or classified as having a low probability of metastasis, or (and) low grade.
他方、 FLJ 10307、 0SBPL9, EIF2C4、 ENTPD4, FLJ2053K C0L9A2、 FAM13AK DLK 1は無再発患者で発現が上昇しているので、 例えば、 ノーザンハイブリダィゼー シヨンによりこれらのタンパク質の翻訳鍀型となる mR NAが検出されたり、 そ の発現量が高いと認められた場合、 例えば、 非小細胞肺がんの再発の可能性が低 レ 予後が良好である、 転移の可能性が低い、 または （および） 悪性度が低いと 診断、 判定、 予測または分類することができる。 また、 これらのタンパク質の翻 訳铸型となる mR NAが検出されなかったり、 その発現量が低いと認められた場 合、 例えば、 非小細胞肺がんの再発の可能性が高い、 予後が良好ではない、 転移 の可能性が高い、 または （および） 悪性度が高いと診断、 判定、 予測または分類 することができる。  On the other hand, FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K C0L9A2, and FAM13AK DLK 1 are upregulated in relapse-free patients.For example, Northern hybridization results in a translational variant of these proteins. Is detected or is highly expressed, for example, the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence is low, the prognosis is good, the probability of metastasis is low, or (and) the grade A low can be diagnosed, judged, predicted or classified. In addition, if mRNAs that are translated variants of these proteins are not detected or are found to be low in expression level, for example, the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high, and the prognosis is poor. Can be diagnosed, determined, predicted, or classified as not metastatic, or (and) highly malignant.
また、 （i) PHG皿の翻訳铸型となる mR NA、 PL0D2の翻訳铸型となる mR NA、 TUBA2の翻訳铸型となる mR NA、 PMLの翻訳铸型となる mR NA、 F13A1の翻訳 铸型となる mR NA、 AIF1の翻訳铸型となる mR NA、 SMIの翻訳铸型となる m R NA、 S100A2の翻訳铸型となる mR NA、 AQP1の翻訳鍀型となる mR NA、 PAFAH1B3の翻訳铸型となる mR NAおよび ΚΥΝϋの翻訳铸型となる mR NAから選 ばれるいずれか二種以上の発現の有無もしくは発現量の高低、 （i i) 0SBPL9の翻訳 踌型となる mR NA、 FLJ 10307の翻訳铸型となる mR NA、 EIF2C4の翻訳铸型と なる mR NA、 ENTPD4の翻訳铸型となる mR NA、 FU20531の翻訳铸型となる m R NA、 COL9A2の翻訳铸型となる mR NA、 FAM13A1の翻訳铸型となる mR NA および DLK 1の翻訳铸型となる mRN Aから選ばれるいずれか二種以上の発現の 有無もしくは発現量の高低、 または、 （i i i) PHGDHの翻訳铸型となる mR NA、 PL0D2の翻訳铸型となる mR NA、 TUBA2の翻訳鍀型となる mRNA、 PMLの翻訳 铸型となる mR NA、 F13A1の翻訳铸型となる mR NA、 AIF1の翻訳鍩型となる mR NA、 SMIの翻訳铸型となる mRNA、 S100A2の翻訳铸型となる mR NA、 AQP1の翻訳铸型となる mR NA、 PAFAH1B3の翻訳铸型となる mRNAおよび KYNU の翻訳铸型となる mR N Aから選ばれるいずれか一種以上の発現の有無もしくは 発現量の高低と、 0SBPL9の翻訳铸型となる mR NA、 FU10307の翻訳铸型となる mR NA, EIF2C4の翻訳銬型となる mR NA、 ENTPD4の翻訳铸型となる mR NA、 FLJ20531の翻訳铸型となる mRNA、 COL9A2の翻訳铸型となる mRNA、 Also, (i) mR NA, which is the translation type of the PHG dish, mR NA, which is the translation type of PL0D2, mR NA, which is the type of translation of TUBA2, mR NA, which is the type of translation of PML, and F13A1 MR NA, AIF1 translation type mR NA, SMI translation type mR NA, S100A2 translation type mR NA, AQP1 translation type mR NA, PAFAH1B3 translation The presence or absence or high or low expression level of any two or more selected from the mRNA that is the 铸 type and the mR NA that is the translation type of the ΚΥΝϋ type. (Ii) Translation of 0SBPL9 MR NA, the translation type of mR NA, mR NA, the translation type of ENTPD4, mR NA, the translation type of FU20531, mR NA, the translation type of COL9A2, FAM13A1 MR NA which is a translation type of And the presence or absence of expression of two or more selected from mRNAs that are translation variants of DLK 1, or the level of expression, or (iii) mRNA variants that are translation variants of PHGDH, and translation variants of PL0D2 MR NA, TUBA2 translation type mRNA, PML translation type mR NA, F13A1 translation type mR NA, AIF1 translation type mR NA, SMI translation type mRNA, S100A2 translation type mRNA, AQP1 translation type mRNA, PAFAH1B3 translation type mRNA, and KYNU translation type mRNA Presence / absence or level of expression, mSB NA as 0SBPL9 translation template, mRNA as FU10307 translation template, mRNA as EIF2C4 translation template, mRNA as ENTPD4 translation template, FLJ20531 MRNA that is a translation type, mRNA that is a translation type of COL9A2,
FAM13A1の翻訳錶型となる mRNAおよび DLK 1の翻訳铸型となる mR NAから選 ばれるいずれか一種以上の発現の有無もしくは発現量の高低とを、 公知の統計解 析方法によって解析することにより、 例えば、 非小細胞肺がんの再発の可能性の 高低、 予後の良悪、 転移の可能性の高低、 または （および） 悪性度の高低を診断、 判定、 予測または分類することもできる。 公知の統計解析方法としては、 例えば、 By analyzing the presence / absence or level of expression of one or more selected from mRNA that is a translation variant of FAM13A1 and mRNA that is a translation variant of DLK 1 by a known statistical analysis method, For example, non-small cell lung cancer can be diagnosed, judged, predicted or classified as having a high or low probability of recurrence, good or bad prognosis, high or low probability of metastasis, and / or high or low malignancy. As a known statistical analysis method, for example,
(i) Gene Spring (Sil icon Genetics社)の Predict Parameter Valueを用レ る方法、(i) Gene Spring (Sil icon Genetics) Predict Parameter Value
(i i) leave-one-out cross-val idat ion を用 ^た weighted vot ing cross- val idat ion algori thm (Science, 286巻， 531- 537頁， 1999年) を用いる方法など があげられる。 このような統計解析方法を用いた診断、 判定、 予測または分類方 法に用いられる本発明で用いられるポリヌクレオチドの種類には特に制限はない が、 通常 2種〜 1 9種、 好ましくは 3種〜 1 0種、 より好ましくは 4種〜 8種、 特に好ましくは 5種〜 7種である。 (ii) A method using weighted voting cross-validat ion algori thm (Science, 286, 531-537, 1999) using leave-one-out cross-validat ion. There is no particular limitation on the type of polynucleotide used in the present invention used in the diagnosis, determination, prediction or classification method using such statistical analysis methods, but usually 2 to 19 types, preferably 3 types. To 10 species, more preferably 4 to 8 species, and particularly preferably 5 to 7 species.
上述の本発明で用いられるポリヌクレオチドと同様に、 本発明で用いられる相 補ポリヌクレオチド、 すなわち本発明で用いられるタンパク質の翻訳铸型となる mR N Aの塩基配列の相補配列全長またはその一部の塩基配列を含有するポリヌ クレオチド （好ましくは、 本発明で用いられる相補 D NA) も、 例えば、 プロ一 ブとして使用することにより、 ヒトまたは温血動物 （例えば、 ラット、 マウス、 モルモット、 ゥサギ、 トリ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ゥマ、 ネコ、 ィヌ、 サル、 チ ンパンジーなど） における本発明で用いられるタンパク質またはその部分べプチ ドをコ一ドするポリヌクレオチド （好ましくは、 D NAまたは mRNA) の発現 の有無、 発現量もしくは異常 （遺伝子異常） を検出することができるので、 例え ば、 該 D NAまたは mR N Aの発現の有無あるいは発現量に関連する疾患または 状態や、 該 D N Aまたは mR N Aの損傷あるいは突然変異などの遺伝子診断薬と して有用である。 Similar to the polynucleotide used in the present invention described above, the complementary polynucleotide used in the present invention, that is, the full-length complementary sequence of the nucleotide sequence of mRNA or the partial sequence of the protein used in the present invention. Polynucleotides containing the base sequence (preferably, complementary DNA used in the present invention) can also be used, for example, as a probe, for example in humans or warm-blooded animals (eg, rats, mice, guinea pigs, rabbits, birds, Polynucleotides that code for the protein used in the present invention or its partial peptides in Hidge, Budge, Ushi, Uma, Cat, Inu, Monkey, Chimpanzee, etc. (preferably DNA or mRNA) expression Presence or absence, expression level or abnormality (gene abnormality) can be detected. For example, the presence or absence or expression level of the DNA or mRNA, or the disease or condition related to the expression or damage of the DNA or mRNA Alternatively, it is useful as a genetic diagnostic agent such as mutation.
本発明で用いられる相補 D NAなどを、 非小細胞肺がんの再発の可能性の高低、 予後の良悪、 転移の可能性の高低、 または （および） 悪性度の高低の診断、 判定、 予測または分類に用いる場合、 上述の本発明で用いられるポリヌクレオチドと同 様にして使用することができる。  Complementary DNA, etc. used in the present invention can be used to diagnose, determine, predict or predict the likelihood of non-small cell lung cancer recurrence, prognosis, metastasis, or (and) high or low malignancy. When used for classification, it can be used in the same manner as the polynucleotide used in the present invention.
また、 本発明で用いられるポリヌクレオチド （好ましくは D NA) 、 本発明で 用いられる相補ポリヌクレオチド （好ましくは相補 D NA) などは、 マイクロア レイに使用することができる。 マイクロアレイ （好ましくは D NAマイクロアレ ィ） は、 公知の方法またはそれに準じた方法によって調製し、 使用し、 そして分 析することができる。 マイクロアレイの調製、 使用、 分析方法などは、 例えば、 Further, the polynucleotide (preferably DNA) used in the present invention, the complementary polynucleotide (preferably complementary DNA) used in the present invention, and the like can be used for the microarray. A microarray (preferably a DNA microarray) can be prepared, used and analyzed by a known method or a method analogous thereto. Microarray preparation, use, analysis methods, etc.
(1) DNA Microarrays : A Pract ical Approach (M. Schena編集、 Oxford (1) DNA Microarrays: A Practical Approach (edited by M. Schena, Oxford
Univers i ty Press, London, 1999年） 、 (i i) Schena, M.ら、 Proc. Nat l. Acad.University Press, London, 1999), (i i) Schena, M. et al., Proc. Nat l. Acad.
Sc i. USA, 93巻、 10614- 10619頁、 1996年、 (i i i) Hel ler, R. A.ら、 Proc. Nat l.Sc i. USA, 93, 10614-10619, 1996, (i i i) Hel ler, R.A. et al., Proc. Nat l.
Acad. Sc i. USA, 94巻、 2150- 2155頁、 1997年などに記載されている。 Acad. Sci. USA, 94, 2150-2155, 1997.
さらに、 このような本発明の D NAマイクロアレイなどは、 本発明で用いられ るタンパク質をコードするポリヌクレオチドの発現の有無もしくは発現量に関連 する疾患または状態を診断するための診断用キットに使用することもできる。 Further, such a DNA microarray of the present invention is used in a diagnostic kit for diagnosing a disease or a condition related to the presence or absence of the expression of the polynucleotide encoding the protein used in the present invention or the expression level. You can also.
( 2 ) 本発明で用いられる抗体を含有する医薬 (2) Pharmaceutical containing antibody used in the present invention
P塵、 P匿、 TUBA2、 PML、 F13AK AIF1、 SM1、 S100A2, AQPL PAFAH1B3, KYNUは非小細胞肺がんの再発患者で発現が上昇しているので、 これらのタンパク 質に対する本発明で用いられる抗体、 好ましくはこれらのタンパク質の活性また は機能を中和する作用を有する抗体は、 例えば、 非小細胞肺がんの予防，治療剤 および （または） 再発予防剤などとして使用することができる。  Since the expression of P dust, P secret, TUBA2, PML, F13AK AIF1, SM1, S100A2, AQPL PAFAH1B3, and KYNU is increased in patients with relapse of non-small cell lung cancer, the antibodies used in the present invention against these proteins, Preferably, an antibody having an action of neutralizing the activity or function of these proteins can be used, for example, as a preventive, therapeutic agent and / or a recurrence preventive agent for non-small cell lung cancer.
本発明で用いられる抗体を含有する上記疾患の剤は低毒性であり、 そのまま液 剤として、 または適当な剤型の医薬組成物として、 ヒトまたは哺乳動物 （例、 ラ ット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して経口的ま たは非経口的 （例、 静脈注射） に投与することができる。 本発明で用いられる抗体の投与量は、 投与対象、 対象疾患、 症状、 投与ルート などによっても異なるが、 例えば、 非小細胞肺がんの再発予防の目的で本発明で 用いられる抗体を経口投与する場合、 一般的に成人 （体重 60 kgとして） にお いては、 1日につき該抗体を約 0. 1〜100 Omg、 好ましくは約 1. 0〜3 0 Omg、 より好ましくは約 3. 0〜5 Omg投与する。 非経口的に投与する場 合は、 該抗体の 1回投与量は投与対象、 対象疾患、 症状、 投与方法などによって も異なるが、 例えば、 非小細胞肺がんの再発予防の目的で本発明で用いられる抗 体を注射剤の形で投与する場合、 一般的に成人 （体重 6 O kgとして） において は、 1日につき該抗体を約 0. 01〜3 Omg、 好ましくは約 0. l〜20mg、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omgを静脈注射により投与するのが好都合である。 他の動物の場合も、 6 O kg当たりに換算した量を投与することができる。 症状 が特に重い場合には、 その症状に応じて増量してもよい。 The agent for the above-mentioned diseases containing the antibody used in the present invention has low toxicity, and as it is as a liquid or as a pharmaceutical composition of an appropriate dosage form, it can be used for humans or mammals (eg, rats, rabbits, hidges, It can be given orally or parenterally (eg, intravenous injection) to buyu, ushi, cat, nu, monkey, etc. The dose of the antibody used in the present invention varies depending on the administration subject, target disease, symptom, administration route, etc. For example, when the antibody used in the present invention is orally administered for the purpose of preventing recurrence of non-small cell lung cancer In general, in adults (with a body weight of 60 kg), the antibody is about 0.1 to 100 Omg, preferably about 1.0 to 30 Omg, more preferably about 3.0 to 5 per day. Administer Omg. When administered parenterally, the single dose of the antibody varies depending on the administration subject, target disease, symptom, administration method, etc. For example, it is used in the present invention for the purpose of preventing recurrence of non-small cell lung cancer. In general, in adults (as body weight 6 O kg), the antibody is administered in an amount of about 0.01 to 3 Omg, preferably about 0.1 to 20 mg, More preferably, about 0.1-1 Omg is conveniently administered by intravenous injection. In the case of other animals, an amount converted per 6 O kg can be administered. If symptoms are particularly severe, the dose may be increased according to the symptoms.
本発明で用いられる抗体は、 それ自体または適当な医薬組成物として投与する ことができる。 上記投与に用いられる医薬組成物は、 上記抗体またはその塩と薬 理学的に許容され得る担体、 希釈剤もしくは賦形剤とを含むものである。 かかる 組成物は、 経口または非経口投与 （例、 静脈注射） に適する剤形として提供され る。 好ましくは吸入剤として提供される。  The antibody used in the present invention can be administered per se or as an appropriate pharmaceutical composition. The pharmaceutical composition used for the administration comprises the antibody or a salt thereof and a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient. Such compositions are provided as dosage forms suitable for oral or parenteral administration (eg, intravenous injection). Preferably it is provided as an inhalant.
なお前記した各組成物は、 上記抗体との配合により好ましくない相互作用を生 じない限り他の活性成分を含有してもよい。  Each of the above-described compositions may contain other active ingredients as long as they do not cause an unfavorable interaction by blending with the antibody.
(3) アンチセンスポリヌクレオチド、 s i RNA、 s hRNAなどを含有す る医薬  (3) Pharmaceuticals containing antisense polynucleotides, siRNA, sRNA, etc.
P誦、 P画、 丽2、 PML、 F13AL AIFL SAA1、 S100A2、 AQP1、 PAFAH1B3お よび KYNUは、 非小細胞肺がんの再発患者で発現が上昇しているので、 これらの夕 ンパク質をコードする DNAに相補的に結合し、 該 DNAの発現を抑制すること ができる本発明で用いられるアンチセンスポリヌクレオチドは、 該 DNAの機能 を抑制することができるので、 例えば、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および (または） 再発予防剤などとして使用することができる。  P 誦, P drawing, 丽 2, PML, F13AL AIFL SAA1, S100A2, AQP1, PAFAH1B3, and KYNU are upregulated in patients with recurrent non-small cell lung cancer, so DNA encoding these proteins Since the antisense polynucleotide used in the present invention that can bind to the DNA complementarily and suppress the expression of the DNA can suppress the function of the DNA, for example, prevention / treatment of non-small cell lung cancer It can be used as an agent and / or an agent for preventing recurrence.
上記アンチセンスポリヌクレオチドを上記の剤として使用する場合、 自体公知 の方法に従って製剤化し、 投与することができる。  When the above antisense polynucleotide is used as the above agent, it can be formulated and administered according to a method known per se.
また、 例えば、 前記のアンチセンスポリヌクレオチドを単独あるいはレトロゥ ィルスべクタ一、 アデノウイルスベクター、 アデノウイルスァソシェ一テツドウ ィルスべクタ一などの適当なベクタ一に挿入した後、 常套手段に従って、 ヒトま たは哺乳動物 （例、 ラット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ネコ、 ィヌ、 サルな ど） に対して経口的または非経口的に投与することができる。 該アンチセンスポ リヌクレオチドは、 そのままで、 あるいは摂取促進のために補助剤などの生理学 的に認められる担体とともに製剤化し、 遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのよ うなカテーテルによって投与できる。 あるいは、 エアロゾル化して吸入剤として 気管内に局所投与することもできる。 In addition, for example, the above antisense polynucleotide may be used alone or retrovirus. After insertion into an appropriate vector such as a virus vector, adenovirus vector, adenovirus vector virus vector, etc., a human or mammal (eg, rat, rabbit, hidge, Can be administered orally or parenterally to buyu, ushi, cat, nu, monkeys, etc.). The antisense polynucleotide can be formulated as it is or with a physiologically recognized carrier such as an adjuvant for promoting ingestion, and can be administered through a catheter such as a gene gun or a hydrogel catheter. Alternatively, it can be aerosolized and locally administered into the trachea as an inhaler.
さらに、 体内動態の改良、 半減期の長期化、 細胞内取り込み効率の改善を目的 に、 前記のアンチセンスポリヌクレオチドを単独またはリボゾームなどの担体と ともに製剤 （注射剤） 化し、 静脈、 皮下、 関節腔内、 癌病変部等に投与してもよ い。  Furthermore, for the purpose of improving pharmacokinetics, prolonging the half-life, and improving cellular uptake efficiency, the above-mentioned antisense polynucleotides can be formulated (injection) alone or together with a carrier such as ribosome, and then intravenous, subcutaneous, joint It may be administered intracavitary or to cancerous lesions.
該アンチセンスポリヌクレオチドの投与量は、 対象疾患、 投与対象、 投与ルー トなどにより差異はあるが、 例えば、 非小細胞肺がんの治療の目的で本発明で用 いられるアンチセンスポリヌクレオチドを投与する場合、 一般的に成人 （体重 6 O k g ) においては、 一日につき該アンチセンスポリヌクレオチドを約 0 . 1〜 1 0 O m g投与する。  The dose of the antisense polynucleotide varies depending on the target disease, administration subject, administration route, etc. For example, the antisense polynucleotide used in the present invention for the purpose of treating non-small cell lung cancer is administered. In general, in adults (body weight 6 O kg), about 0.1 to 10 O mg of the antisense polynucleotide is administered per day.
さらに、 該アンチセンスポリヌクレオチドは、 組織や細胞における本発明で用 いられる D NAの存在やその発現状況を調べるための診断用オリゴヌクレオチド プロ一ブとして使用することもできる。  Further, the antisense polynucleotide can also be used as a diagnostic oligonucleotide probe for examining the presence and expression status of DNA used in the present invention in tissues and cells.
上記アンチセンスポリヌクレオチドと同様に、 PHGDH、 PL0D2、 TUBA2, PML、 F13AL AIF K SM1、 S100A2、 AQP L PAFAH1B3または ΚΥΝϋをコードする R NAの 一部を含有する二重鎖 R NA (本発明で用いられるポリヌクレオチドに対する s i R NA (smal l (short) interfer ing RNA) 、 s h R NA (smal l (short) hai rp in RNA) など） 、 リポザィムなども、 P腿、 P匿、 T編、 PML、 F13AK AIF1、 SAA1、 S 100A2, AQPK PAFAH1B3または ΚΥΝϋの遺伝子の発現を抑制すること ができ、 これらのタンパク質またはこれらのタンパク質をコードする D NAの機 能を抑制することができるので、 例えば、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および (または） 再発予防剤などとして使用することができる。  Similar to the above-mentioned antisense polynucleotide, double-stranded RNA containing a part of RNA encoding PHGDH, PL0D2, TUBA2, PML, F13AL AIF K SM1, S100A2, AQP L PAFAH1B3 or ΚΥΝϋ (used in the present invention) Si R NA (smal l (short) interfering RNA), sh R NA (smal l (short) hai rp in RNA)), lipozymes, etc. F13AK AIF1, SAA1, S100A2, AQPK PAFAH1B3 or ΚΥΝϋ gene expression can be suppressed, and the functions of these proteins or DNA encoding these proteins can be suppressed. It can be used as a preventive / therapeutic agent for cell lung cancer and / or a preventive agent for recurrence.
また、 上述の PHG皿、 PL0D2、 TUBA2, PML、 F13AK AIF1、 SAA1、 S100A2, AQP1、 PAFAH1B3または ΚΥΝϋをコードする R NAの一部を含有する二重鎖 R NAと同様に、 P醒、 P画、 T腸 2、 PML、 F13AK AIF1、 SAA1、 S100A2, AQPK PAFAH1B3また は KYNUの翻訳铸型となる mR NAの塩基配列またはその一部を含有するポリヌク レオチドに対する s i R NA, s h R NAなどの二重鎖 R NAも、 PHGDH、 PL0D2, TUBA2, PML、 F13AK AIF1、 SAAL S100A2, AQPK PAFAH1B3または KYNUの遺伝子 の発現を抑制することができ、 これらのタンパク質またはこれらのタンパク質を コードする D NAの機能を抑制することができるので、 例えば、 非小細胞肺がん の予防 ·治療剤および （または） 再発予防剤などとして使用することができる。 このような二重鎖 R NAは、 mR NAのコード領域の塩基配列またはその一部を 含有するポリヌクレオチドに対するものであってもよいし、 5 ' 非翻訳領域また は 3 ' 非翻訳領域の塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチドに対す るものであってもよい。 Also, the above-mentioned PHG pan, PL0D2, TUBA2, PML, F13AK AIF1, SAA1, S100A2, AQP1, PAFAH1B3 or double-stranded RNA containing a portion of the RNA encoding 、, as well as P awakening, P painting, T intestine 2, PML, F13AK AIF1, SAA1, S100A2, AQPK PAFAH1B3 or KYNU translation 铸Double-stranded RNAs such as siRNA, shRNA, etc. for polynucleotides containing the nucleotide sequence of mRNA as a template or part thereof are also PHGDH, PL0D2, TUBA2, PML, F13AK AIF1, SAAL S100A2, AQPK PAFAH1B3 Or the expression of KYNU gene can be suppressed, and the function of these proteins or DNA encoding these proteins can be suppressed. For example, prevention / treatment agents for non-small cell lung cancer and / or It can be used as an agent for preventing recurrence. Such a double-stranded RNA may be directed to a polynucleotide containing the nucleotide sequence of the coding region of mRNA or a part thereof, or the base of a 5 ′ untranslated region or 3 ′ untranslated region. It may be against a polynucleotide containing the sequence or part thereof.
二重鎖 R NAは、 公知の方法 （例、 Nature, 411巻， 494頁， 2001年） に準じて、 本発明で用いられるポリヌクレオチドの配列を基に設計して製造することができ る。  The double-stranded RNA can be designed and produced based on the sequence of the polynucleotide used in the present invention according to a known method (eg, Nature, 411, 494, 2001).
リポザィムは、 公知の方法 （例、 TRENDS in Molecular Medicine, 7巻, 221頁， 2001年） に準じて、 本発明で用いられるポリヌクレオチドの配列を基に設計して 製造することができる。 例えば、 本発明で用いられるタンパク質をコードする R NAの一部に公知のリポザィムを連結することによって製造することができる。 本発明で用いられるタンパク質をコードする R NAの一部としては、 公知のリポ ザィムによって切断され得る本発明で用いられる R N A上の切断部位に近接した 部分 （R NA断片） が挙げられる。  The lipozyme can be designed and manufactured based on the sequence of the polynucleotide used in the present invention according to a known method (eg, TRENDS in Molecular Medicine, Vol. 7, 221, 2001). For example, it can be produced by linking a known lipozyme to a part of RNA encoding the protein used in the present invention. Examples of a part of the RNA encoding the protein used in the present invention include a portion (RNA fragment) close to the cleavage site on the RNA used in the present invention, which can be cleaved by a known liposome.
上記の二重鎖 R NAまたはリポザィムを上記剤として使用する場合、 アンチセ ンスポリヌクレオチドと同様にして製剤化し、 投与することができる。  When the above double-stranded RNA or lipozyme is used as the above agent, it can be formulated and administered in the same manner as the antisense polynucleotide.
( 4 ) 疾病に対する医薬候補化合物のスクリーニング  (4) Screening of drug candidate compounds for disease
PHGDH, P匿、 碰2、 PML、 F13AL AIFL SAAL S100A2、 AQPK PAFAH1B3お よび KYNUは、 非小細胞肺がんの再発患者で発現が上昇しているので、 その発現を 抑制する化合物またはその塩、 および、 これらのタンパク質の活性もしくは機能 を抑制する化合物またはその塩は、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （また は） 再発予防剤として有用である。 したがって、 本発明で用いられる D NAおよ び夕ンパク質は、 前記化合物またはその塩のスクリ一二ングのために有用である。 すなわち、 本発明は、 本発明で用いられる DNAを用いる前記遺伝子の発現を抑 制する化合物またはその塩、 および本発明で用いられるタンパク質を用いる前記 タンパク質の活性もしくは機能を抑制する化合物またはその塩のスクリーニング 方法 （以下、 本発明のスクリーニング方法と略記することもある） を提供する。 本発明のスクリーニング方法の具体例としては、 （i) 本発明で用いられるタン パク質を産生する能力を有する細胞を培養した場合と、 （ii) 試験化合物の存在 下、 本発明で用いられるタンパク質を産生する能力を有する細胞を培養した場合 との比較を行う。 上記方法において、 （i) と （ii) の場合 （試験化合物の有 無） における、 本発明で用いられる DNAの発現量 （具体的には、 本発明で用い られるタンパク質量または前記タンパク質の翻訳铸型となる mRNA量） 、 また は本発明で用いられるタンパク質の活性もしくは機能を測定して、 比較する。 前 記タンパク質量の測定は、 公知の方法、 例えば、 配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 13、 配列番号： 19、 配列番号： 25、 配列番号： 27、 配列番号： 29、 配列番号： 31、 配列番号： 33または配列番号： 35 で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質を認識する抗体を用いて、 細胞抽 出液中などに存在する前記タンパク質を、 ウエスタン解析や EL I S A法などの 方法またはそれに準じる方法に従い測定することができる。 前記 mRNA量の測 定は、 公知の方法、 例えば、 プローブとして配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列 番号： 8、 配列番号： 14、 配列番号： 20、 配列番号： 26、 配列番号： 28、 配列番号： 30、 配列番号： 32、 配列番号： 34もしくは配列番号： 36で表 される塩基配列またはその一部を含有する核酸を用いるノーザンハイブリダィゼ —シヨン、 あるいはプライマーとして配列番号： 4、 配列番号： 6、 配列番号： 8、 配列番号： 14、 配列番号： 20、 配列番号： 26、 配列番号： 28、 配列 番号： 30、 配列番号： 32、 配列番号： 34もしくは配列番号： 36で表され る塩基配列またはその一部を含有する核酸を用いる PC R法またはそれに準じる 方法に従い測定することができる。 PHGDH, P-secret, 碰 2, PML, F13AL AIFL SAAL S100A2, AQPK PAFAH1B3 and KYNU are upregulated in patients with recurrent non-small cell lung cancer. A compound or a salt thereof that suppresses the activity or function of these proteins is useful as an agent for preventing / treating non-small cell lung cancer and / or preventing recurrence. Therefore, DNA and NA used in the present invention Proteins are useful for screening the compounds or salts thereof. That is, the present invention relates to a compound or salt thereof that suppresses the expression of the gene using the DNA used in the present invention, and a compound or salt thereof that suppresses the activity or function of the protein using the protein used in the present invention. A screening method (hereinafter sometimes abbreviated as the screening method of the present invention) is provided. Specific examples of the screening method of the present invention include (i) when cells having the ability to produce the protein used in the present invention are cultured, and (ii) the protein used in the present invention in the presence of a test compound. Comparison with the case of culturing cells capable of producing. In the above method, in the case of (i) and (ii) (with or without test compound), the expression level of the DNA used in the present invention (specifically, the amount of protein used in the present invention or the translation of the protein) The amount of mRNA to be a mold) or the activity or function of the protein used in the present invention is measured and compared. The protein amount is measured by a known method, for example, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, sequence. No. 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33 or SEQ ID NO: 35 is used to detect the protein present in a cell extract or the like using an antibody that recognizes a protein containing the amino acid sequence represented by Western Measurements can be made according to methods such as analysis, ELISA, or similar methods. The amount of mRNA is measured by a known method, for example, as a probe, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28. , SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 or SEQ ID NO: 34, Northern hybridize using a nucleic acid containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 36 or a part thereof, or SEQ ID NO: as a primer 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34 or SEQ ID NO: Measurement can be carried out according to the PCR method using a nucleic acid containing the base sequence represented by 36 or a part thereof, or a method analogous thereto.
例えば、 上記 （ii) の場合 （試験化合物添加） における前記遺伝子の発現を、 上記 （0 の場合 （試験化合物無添加） に比べて、 約 20%以上、 好ましくは 3 0 %以上、 より好ましくは約 50%以上阻害する試験化合物を、 本発明で用いら れる遺伝子の発現を抑制する化合物として選択することができる。 前記転写活性 の測定は、 公知の方法、 例えば、 本発明で用いられるタンパク質が認識する D N Aの塩基配列を含有する D NAを、 レポ一夕一遺伝子 （例、 1 a c Z、 アルカリ フォスファターゼ、 ルシフェラーゼなど） の上流に連結し、 そのレポーター活性 を指標に行うこともできるし、 前記タンパク質が細胞内で発現誘導する遺伝子ま たはその産物の量を測定するなどの方法またはそれに準じる方法に従い測定する ことができる。 また、 例えば、 上記 （i i) の場合 （試験化合物添加） における本 発明で用いられるタンパク質の活性もしくは機能を、 上記 （i) の場合 （試験化 合物無添加） に比べて、 約 2 0 %以上、 好ましくは 3 0 %以上、 より好ましくは 約 5 0 %以上阻害する試験化合物を、 本発明で用いられるタンパク質の活性を阻 害する化合物として選択することができる。 For example, the expression of the gene in the case of (ii) (addition of test compound) is about 20% or more, preferably 30% or more, more preferably compared to the case of (0) (no test compound added). Test compounds that inhibit about 50% or more are used in the present invention. Can be selected as a compound that suppresses the expression of the gene to be expressed. The transcriptional activity can be measured by a known method, for example, DNA containing the DNA base sequence recognized by the protein used in the present invention, repo overnight gene (eg, 1 ac Z, alkaline phosphatase, luciferase, etc. ), And the reporter activity can be used as an index, or the amount of a gene or its product that induces the expression of the protein in cells can be measured, or a method equivalent thereto can be used. Can do. In addition, for example, the activity or function of the protein used in the present invention in the case of (ii) (addition of test compound) is about 20% compared to the case of (i) (no addition of test compound). As described above, a test compound that inhibits preferably 30% or more, more preferably about 50% or more can be selected as a compound that inhibits the activity of the protein used in the present invention.
FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13AK DLK 1は、 非小細胞肺がんの無再発患者で発現が上昇しているので、 その発現を促進する化 合物またはその塩、 および、 これらのタンパク質の活性もしくは機能を促進する 化合物またはその塩は、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発予 防剤として有用である。 したがって、 本発明で用いられる D NAおよびタンパク 質は、 前記化合物またはその塩のスクリーニングのために有用である。 すなわち、 本発明は、 本発明で用いられる D NAを用いる前記遺伝子の発現を促進する化合 物またはその塩、 および本発明で用いられるタンパク質を用いる前記タンパク質 の活性もしくは機能を促進する化合物またはその塩のスクリ一二ング方法 （以下、 本発明のスクリーニング方法と略記することもある） を提供する。 本発明のスク リーニング方法の具体例としては、 （i) 本発明で用いられるタンパク質を産生 する能力を有する細胞を培養した場合と、 （i i) 試験化合物の存在下、 本発明で 用いられるタンパク質を産生する能力を有する細胞を培養した場合との比較を行 う。 上記方法において、 （i) と （i i) の場合 （試験化合物の有無） における、 本発明で用いられる D N Aの発現量 （具体的には、 本発明で用いられるタンパク 質量または前記タンパク質の翻訳铸型となる mR NA量） 、 または本発明で用い られるタンパク質の活性もしくは機能を測定して、 比較する。 前記タンパク質量 の測定は、 公知の方法、 例えば、 配列番号： 1、 配列番号： 9、 配列番号： 1 1、 配列番号： 1 5、 配列番号： 1 7、 配列番号： 2 1、 配列番号： 2 3または配列 番号： 37で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質を認識する抗体を用い て、 細胞抽出液中などに存在する前記タンパク質を、 ウェスタン解析や EL I S A法などの方法またはそれに準じる方法に従い測定することができる。 前記 mR NA量の測定は、 公知の方法、 例えば、 プローブとして配列番号： 2、 配列番 号： 10、 配列番号： 12、 配列番号： 16、 配列番号： 1 8、 配列番号： 2 2、 配列番号： 24もしくは配列番号： 38で表される塩基配列またはその一部 を含有する核酸を用いるノーザンハイブリダィゼーション、 あるいはプライマ一 として配列番号： 2、 配列番号： 10、 配列番号： 12、 配列番号： 16、 配 列番号： 18、 配列番号： 22、 配列番号： 24もしくは配列番号： 38で表さ れる塩基配列またはその一部を含有する核酸を用いる PC R法またはそれに準じ る方法に従い測定することができる。 FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053K COL9A2, FAM13AK DLK 1 is upregulated in non-small cell lung cancer patients without recurrence. A compound or a salt thereof that promotes the activity or function of a protein is useful as a preventive / therapeutic agent for non-small cell lung cancer and / or a preventive agent for recurrence. Therefore, the DNA and protein used in the present invention are useful for screening the compound or a salt thereof. That is, the present invention relates to a compound or a salt thereof that promotes the expression of the gene using the DNA used in the present invention, and a compound or a salt thereof that promotes the activity or function of the protein using the protein used in the present invention. A screening method (hereinafter also abbreviated as the screening method of the present invention). Specific examples of the screening method of the present invention include (i) when cells having the ability to produce the protein used in the present invention are cultured, and (ii) the protein used in the present invention in the presence of a test compound. Compare with the case of culturing cells with the ability to produce. In the above method, in the case of (i) and (ii) (the presence or absence of a test compound), the expression level of the DNA used in the present invention (specifically, the mass of the protein used in the present invention or the translation type of the protein) And measure the activity or function of the protein used in the present invention for comparison. The protein amount is measured by a known method, for example, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 1 1, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 2 3 or array Using an antibody that recognizes the protein containing the amino acid sequence represented by No. 37, measure the protein present in the cell extract according to a method such as Western analysis or ELISA, or a method similar thereto. Can do. The mRNA amount is measured by a known method, for example, as a probe, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 2, 2, Northern hybridization using a nucleic acid containing the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 24 or SEQ ID NO: 38 or a part thereof, or as a primer SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, sequence SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, or SEQ ID NO: 38 can do.
例えば、 上記 （ii) の場合 （試験化合物添加） における前記遺伝子の発現を、 上記 （i) の場合 （試験化合物無添加） に比べて、 約 20%以上、 好ましくは 3 0%以上、 より好ましくは約 50%以上促進する試験化合物を、 本発明で用いら れる遺伝子の発現を促進する化合物として選択することができる。 前記転写活性 の測定は、 公知の方法、 例えば、 本発明で用いられるタンパク質が認識する DN Aの塩基配列を含有する DNAを、 レポーター遺伝子 （例、 1 a c Z、 アルカリ フォスファタ一ゼ、 ルシフェラーゼなど） の上流に連結し、 そのレポ一夕一活性 を指標に行うこともできるし、 前記タンパク質が細胞内で発現誘導する遺伝子ま たはその産物の量を測定するなどの方法またはそれに準じる方法に従い測定する ことができる。 また、 例えば、 上記 （ii) の場合 （試験化合物添加） における本 発明で用いられるタンパク質の活性もしくは機能を、 上記 （i) の場合 （試験化 合物無添加） に比べて、 約 20%以上、 好ましくは 30%以上、 より好ましくは 約 50%以上促進する試験化合物を、 本発明で用いられるタンパク質の活性もし くは機能を促進する化合物として選択することができる。  For example, the expression of the gene in the case of (ii) (addition of test compound) is about 20% or more, preferably 30% or more, more preferably compared to the case of (i) (no addition of test compound). The test compound that promotes about 50% or more can be selected as the compound that promotes the expression of the gene used in the present invention. The transcriptional activity is measured by a known method, for example, DNA containing a DNA sequence recognized by the protein used in the present invention, a reporter gene (eg, 1 ac Z, alkaline phosphatase, luciferase, etc.) Can be performed using the activity of the repo overnight as an indicator, or according to a method such as measuring the amount of a gene or its product that induces the expression of the protein in a cell, or a method analogous thereto. can do. For example, the activity or function of the protein used in the present invention in the case of (ii) (addition of test compound) is about 20% or more compared to the case of (i) (no addition of test compound). A test compound that promotes preferably 30% or more, more preferably about 50% or more can be selected as a compound that promotes the activity or function of the protein used in the present invention.
本発明のスクリーニング方法において、 本発明で用いられるタンパク質を産生 する能力を有する細胞としては、 例えば、 前述した本発明で用いられるタンパク 質をコードする DNAを含有するベクターで形質転換された宿主 （形質転換体） が用いられる。 宿主としては、 例えば、 COS 7細胞、 CHO細胞、 HEK29 3細胞などの動物細胞、 酵母などが好ましく用いられる。 該スクリーニングには、 例えば、 前述の方法で培養することによって、 本発明で用いられるタンパク質を 発現させた形質転換体が好ましく用いられる。 本発明で用いられるタンパク質を 発現し得る細胞の培養方法は、 前記した本発明で用いられる形質変換体の培養法 と同様である。 In the screening method of the present invention, the cell having the ability to produce the protein used in the present invention may be, for example, a host transformed with a vector containing a DNA encoding the protein used in the present invention (character Convertibles) are used. As the host, for example, animal cells such as COS 7 cells, CHO cells, HEK293 cells, and yeasts are preferably used. For the screening, For example, a transformant in which the protein used in the present invention is expressed by culturing by the method described above is preferably used. The method for culturing cells capable of expressing the protein used in the present invention is the same as the method for culturing transformants used in the present invention.
本発明のスクリ一二ング方法で用いる試験化合物としては、 例えばべプチド、 タンパク質、 抗体、 非ペプチド性化合物、 合成化合物、 発酵生産物、 細胞抽出液、 植物抽出液、 動物組織抽出液、 血漿などが用いられ、 これら化合物は新規な化合 物であってもよいし、 公知の化合物であってもよい。 試験化合物は塩を形成して いてもよく、 試験化合物の塩としては、 例えば金属塩、 アンモニゥム塩、 有機塩 基との塩、 無機酸との塩、 有機酸との塩、 塩基性または酸性アミノ酸との塩など が挙げられる。 金属塩の好適な例としては、 例えばナトリウム塩、 カリウム塩な どのアルカリ金属塩；カルシウム塩、 マグネシウム塩、 バリウム塩などのアル力 リ土類金属塩；アルミニウム塩などが挙げられる。 有機塩基との塩の好適な例と しては、 例えばトリメチルァミン、 トリェチルァミン、 ピリジン、 ピコリン、 2 , 6ールチジン、 エタノールァミン、 ジエタノールアミン、 トリエタノールァミン、 シクロへキシルァミン、 ジシクロへキシルァミン、 N, N'—ジベンジルェチレ ンジァミンなどとの塩が挙げられる。 無機酸との塩の好適な例としては、 例えば 塩酸、 臭化水素酸、 硝酸、 硫酸、 リン酸などとの塩が挙げられる。 有機酸との塩 の好適な例としては、 例えばギ酸、 酢酸、 トリフルォロ酢酸、 プロピオン酸、 安 息香酸、 フ夕ル酸、 フマル酸、 シユウ酸、 酒石酸、 マレイン酸、 クェン酸、 コハ ク酸、 リンゴ酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸、 p—トルエンスルホ ン酸などとの塩が挙げられる。 塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、 例え ばアルギニン、 リジン、 オル二チンなどとの塩が挙げられ、 酸性アミノ酸との塩 の好適な例としては、 例えばァスパラギン酸、 グルタミン酸などとの塩が挙げら れる。  Test compounds used in the screening method of the present invention include, for example, peptides, proteins, antibodies, non-peptide compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, plasma, etc. These compounds may be novel compounds or known compounds. The test compound may form a salt. Examples of the salt of the test compound include metal salts, ammonium salts, salts with organic salts, salts with inorganic acids, salts with organic acids, basic or acidic amino acids. And salt. Preferable examples of the metal salt include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt; alkaline earth metal salts such as calcium salt, magnesium salt and barium salt; aluminum salt and the like. Suitable examples of salts with organic bases include, for example, trimethylamine, triethylamine, pyridine, picoline, 2,6 lutidine, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, cyclohexylamine, dicyclohexylamine, N , N'-dibenzylethylenediamine and the like. Preferable examples of the salt with inorganic acid include salts with hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, sulfuric acid, phosphoric acid and the like. Preferable examples of salts with organic acids include formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, benzoic acid, fuuric acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citrate, and succinic acid. And salts with malic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid and the like. Preferable examples of the salt with basic amino acid include salts with arginine, lysine, ornithine and the like, and preferable examples of the salt with acidic amino acid include, for example, aspartic acid, glutamic acid and the like. Salt.
このうち、 生理学的に許容し得る塩が好ましい。 例えば、 化合物内に酸性官能 基を有する場合にはアルカリ金属塩 （例、 ナトリウム塩， カリウム塩など） 、 ァ ルカリ土類金厲塩 （例、 カルシウム塩， マグネシウム塩， バリウム塩など） など の無機塩、 アンモニゥム塩など、 また、 化合物内に塩基性官能基を有する場合に は、 例えば臭化水素酸、 硝酸、 硫酸、 リン酸など無機酸との塩、 または酢酸、 フ タル酸、 フマル酸、 シユウ酸、 酒石酸、 マレイン酸、 クェン酸、 コハク酸、 メタ ンスルホン酸、 P—トルエンスルホン酸などの有機酸との塩が挙げられる。 Of these, physiologically acceptable salts are preferred. For example, inorganic compounds such as alkali metal salts (eg, sodium salts, potassium salts, etc.) and alkaline earth metal salts (eg, calcium salts, magnesium salts, barium salts, etc.) when the compound has an acidic functional group In the case where the compound has a basic functional group, for example, a salt with an inorganic acid such as hydrobromic acid, nitric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, acetic acid, Examples include salts with organic acids such as taric acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, succinic acid, succinic acid, methanesulfonic acid, and P-toluenesulfonic acid.
本発明のスクリーニング用キットは、 本発明で用いられるタンパク質、 本発明 で用いられるタンパク質をコードするポリヌクレオチド、 または本発明で用いら れるタンパク質を産生する能力を有する細胞を含有するものである。  The screening kit of the present invention contains a protein used in the present invention, a polynucleotide encoding the protein used in the present invention, or a cell having the ability to produce the protein used in the present invention.
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる 化合物またはその塩の 「塩」 としては、 前記した本発明で用いられるタンパク質 の塩と同様のものが用いられる。  As the “salt” of a compound or a salt thereof obtained by using the screening method or screening kit of the present invention, the same salt as the protein salt used in the present invention described above can be used.
本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング用キットを用いて得られる 化合物またはその塩は、 例えば、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （また は） 再発予防剤として有用である。 上述の予防，治療剤、 再発予防剤として使用 する場合、 常套手段に従って製剤化することができる。 例えば、 錠剤、 カプセル 剤、 エリキシル剤、 マイクロカプセル剤、 無菌性溶液、 懸濁液剤などとすること ができる。 上記化合物またはその塩を上述の予防 ·治療剤として使用する場合、 常套手段に従って製剤化することができる。 例えば、 錠剤、 カプセル剤、 エリキ シル剤、 マイクロカプセル剤、 無菌性溶液、 懸濁液剤などとすることができる。 例えば、 必要に応じて糖衣を施した錠剤、 カプセル剤、 エリキシル剤、 マイクロ カプセル剤などとして経口的に、 あるいは水もしぐはそれ以外の薬学的に許容し 得る液との無菌性溶液、 または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用でき る。 例えば、 上記化合物またはその塩を生理学的に認められる担体、 香味剤、 賦 形剤、 べヒクル、 防腐剤、 安定剤、 結合剤などとともに一般に認められた製剤実 施に要求される単位用量形態で混和することによって製造することができる。 こ れら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにす るものである。 錠剤、 カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、 例えば、 ゼラチン、 コーンスターチ、 トラガント、 アラビアゴムのような結合剤、 結晶性セルロースのような賦形剤、 コーンスターチ、 ゼラチン、 アルギン酸など のような膨化剤、 ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、 ショ糖、 乳糖また はサッカリンのような甘味剤、 ペパーミント、 ァカモノ油またはチェリ一のよう な香味剤などが用いられる。 調剤単位形態がカプセルである場合には、 前記タイ プの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。 注射のための 無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、 胡麻油、 椰子油などのよ うな天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って 処方することができる。 注射用の水性液としては、 例えば、 生理食塩水、 ブドウ 糖やその他の補助薬を含む等張液 （例えば、 D—ソルビトール、 D—マンニトー ル、 塩化ナトリウムなど） などが挙げられ、 適当な溶解補助剤、 例えば、 アルコ ール （例えば、 エタノールなど） 、 ポリアルコール （例えば、 プロピレングリコ ール、 ポリエチレングリコールなど） 、 非イオン性界面活性剤 （例えば、 ポリソ ルベート 8 0™、 H C〇一 5 0など） などと併用してもよい。 油性液としては、 例えば、 ゴマ油、 大豆油などが挙げられ、 溶解補助剤として安息香酸ベンジル、 ベンジルアルコールなどと併用してもよい。 また、 緩衝剤 （例えば、 リン酸塩緩 衝液、 酢酸ナトリウム緩衝液など） 、 無痛化剤 （例えば、 塩化ベンザルコニゥム、 塩酸プロ力インなど） 、 安定剤 （例えば、 ヒト血清アルブミン、 ポリエチレング リコールなど） 、 保存剤 （例えば、 ベンジルアルコール、 フエノールなど） 、 酸 化防止剤などと配合してもよい。 調製された注射液は、 通常、 適当なアンプルに 充填される。 このようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトまたはその他の温血動物 （例えば、 マウス、 ラット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ゥマ、 トリ、 ネコ、 ィヌ、 サル、 チンパンジーなど） に対して経口的にま たは非経口的に投与することができる。 前記化合物またはその塩の投与量は、 そ の作用、 対象疾患、 投与対象、 投与ルートなどにより差異はあるが、 例えば、 非 小細胞肺がんの再発予防の目的で前記化合物またはその塩を経口投与する場合、 一般的に成人 （体重 6 0 k gとして） においては、 一日につき前記化合物または その塩を約 0. 1〜1 0 0 m g、 好ましくは約 1 . 0〜5 0 m g、 より好ましく は約 1 . 0〜2 0 m g投与する。 非経口的に投与する場合、 前記化合物またはそ の塩の 1回投与量は投与対象、 対象疾患などによっても異なる。 例えば、 非小細 胞肺がんの再発予防の目的で前記化合物またはその塩を、 注射剤の形で成人 （6 0 k gとして） に投与する場合、 一日につき前記化合物またはその塩を約 0 . 0 1〜3 O m g程度、 好ましくは約 0 . l〜2 0 m g程度、 より好ましくは約 0 . 1〜1 O m g程度を静脈注射により投与するのが好ましい。 他の動物の場合も、 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。 The compound or salt thereof obtained using the screening method or screening kit of the present invention is useful, for example, as a preventive / therapeutic agent for non-small cell lung cancer and / or a relapse preventive agent. When used as a preventive, therapeutic or relapse preventive agent as described above, it can be formulated according to conventional means. For example, tablets, capsules, elixirs, microcapsules, sterile solutions, suspensions and the like can be used. When the above-mentioned compound or a salt thereof is used as the above-mentioned prophylactic / therapeutic agent, it can be formulated according to conventional means. For example, tablets, capsules, elixirs, microcapsules, sterile solutions, suspensions and the like can be used. For example, orally as a sugar-coated tablet, capsule, elixir, microcapsule as needed, or aseptic solution with water or other pharmaceutically acceptable liquid, or suspension It can be used parenterally in the form of injections such as suspensions. For example, the above-mentioned compound or salt thereof in a unit dosage form required for the practice of a generally accepted formulation together with a physiologically recognized carrier, flavoring agent, excipient, vehicle, preservative, stabilizer, binder, etc. It can be produced by mixing. The amount of active ingredient in these formulations should be such that an appropriate dose in the indicated range is obtained. Additives that can be mixed into tablets, capsules, etc. include, for example, binders such as gelatin, corn starch, tragacanth, gum arabic, excipients such as crystalline cellulose, corn starch, gelatin, alginic acid, etc. For example, a bulking agent, a lubricant such as magnesium stearate, a sweetener such as sucrose, lactose or saccharin, a flavoring agent such as peppermint, cocoa oil or cheri. When the dispensing unit form is a capsule, the type material can further contain a liquid carrier such as fats and oils. For injection Sterile compositions can be formulated according to conventional pharmaceutical practice, such as dissolving or suspending the active substance in a vehicle such as water for injection, naturally occurring vegetable oils such as sesame oil and coconut oil. Examples of aqueous solutions for injection include physiological saline, isotonic solutions containing glucose and other adjuvants (for example, D-sorbitol, D-mannitol, sodium chloride, etc.). Auxiliary agents, such as alcohol (eg, ethanol), polyalcohol (eg, propylene glycol, polyethylene glycol, etc.), nonionic surfactants (eg, polysorbate 80 ™, HC0150) Etc.) etc. Examples of the oily liquid include sesame oil and soybean oil, and may be used in combination with benzyl benzoate, benzyl alcohol or the like as a solubilizer. Buffers (eg, phosphate buffer, sodium acetate buffer, etc.), soothing agents (eg, benzalkonium chloride, pro-hydrochloride-in, etc.), stabilizers (eg, human serum albumin, polyethylene glycol, etc.) A preservative (for example, benzyl alcohol, phenol, etc.), an antioxidant and the like may be blended. The prepared injection is usually filled in a suitable ampoule. The preparations obtained in this way are safe and low toxic. For example, humans or other warm-blooded animals (eg mice, rats, rabbits, hidges, bushes, bushes, horses, birds, cats, dogs) , Monkeys, chimpanzees, etc.) orally or parenterally. Although the dose of the compound or its salt varies depending on its action, target disease, administration subject, administration route, etc., for example, the compound or its salt is orally administered for the purpose of preventing recurrence of non-small cell lung cancer. In general, in adults (assuming 60 kg body weight), about 0.1 to 100 mg, preferably about 1.0 to 50 mg, more preferably about 1. Administer 0 to 20 mg. When administered parenterally, the single dose of the compound or its salt varies depending on the subject of administration, target disease, and the like. For example, when the compound or a salt thereof is administered to an adult (as 60 kg) in the form of an injection for the purpose of preventing recurrence of non-small cell lung cancer, the compound or the salt thereof is about 0.0 per day. About 1 to 3 O mg, preferably about 0.1 to 20 mg, more preferably about 0.1 to 1 O mg is preferably administered by intravenous injection. In the case of other animals, an amount converted per 60 kg can be administered.
( 5 ) 本発明の D N A導入動物の作製 本発明は、 外来性の本発明で用いられる DNA (以下、 本発明の外来性 DNA と略記する） またはその変異 DN A (本発明の外来性変異 DNAと略記する場合 がある） を有する非ヒ卜哺乳動物を提供する。 (5) Preparation of the DNA-introduced animal of the present invention The present invention relates to a non-human DNA having an exogenous DNA used in the present invention (hereinafter abbreviated as the exogenous DNA of the present invention) or its mutant DNA (sometimes abbreviated as the exogenous mutant DNA of the present invention).卜 Provide mammals.
すなわち、 本発明は、  That is, the present invention
〔1〕 本発明の外来性 DNAまたはその変異 DNAを有する非ヒト哺乳動物、 〔2〕 非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第 〔1〕 記載の動物、  [1] a non-human mammal having the exogenous DNA of the present invention or a mutant DNA thereof, [2] the animal according to [1], wherein the non-human mammal is a rodent
〔3〕 ゲッ歯動物がマウスまたはラットである第 〔2〕 記載の動物、 および 〔4〕 本発明の外来性 DNAまたはその変異 DNAを含有し、 哺乳動物において 発現しうる組換えベクターを提供するものである。  [3] An animal according to [2], wherein the rodent is a mouse or a rat, and [4] a recombinant vector containing the exogenous DNA of the present invention or a mutant DNA thereof and capable of being expressed in a mammal. Is.
本発明の外来性 DNAまたはその変異 DNAを有する非ヒト哺乳動物 （以下、 本発明の非ヒトトランスジエニック動物と略記する） は、 未受精卵、 受精卵、 精 子およびその始原細胞を含む胚芽細胞などに対して、 好ましくは、 非ヒト哺乳動 物の発生における胚発生の段階 （さらに好ましくは、 単細胞または受精卵細胞の 段階でかつ一般に 8細胞期以前） に、 リン酸カルシウム法、 電気パルス法、 リポ フエクシヨン法、 凝集法、 マイクロインジェクション法、 パーティクルガン法、 DEAE—デキストラン法などにより目的とする DN Aを転移することによって 作出することができる。 また、 該 DNA転移方法により、 体細胞、 生体の臓器、 組織細胞などに目的とする本発明の外来性 DNAを転移し、 細胞培養、 組織培養 などに利用することもでき、 さらに、 これら細胞を上述の胚芽細胞と公知の細胞 融合法により融合させることにより本発明の非ヒトトランスジエニック動物を作 出することもできる。  A non-human mammal having an exogenous DNA of the present invention or a mutant DNA thereof (hereinafter abbreviated as a non-human transgenic animal of the present invention) is an embryo containing an unfertilized egg, a fertilized egg, a sperm and a progenitor cell thereof. Preferably, for cells, etc., at the stage of embryonic development in the development of non-human mammals (more preferably at the single cell or fertilized egg cell stage and generally prior to the 8-cell stage), the calcium phosphate method, electric pulse method, lipo It can be produced by transferring the target DNA by the fusion method, coagulation method, microinjection method, particle gun method, DEAE-dextran method, etc. Further, by the DNA transfer method, the target exogenous DNA of the present invention can be transferred to somatic cells, living organs, tissue cells, etc., and can be used for cell culture, tissue culture, etc. The non-human transgenic animal of the present invention can also be produced by fusing the above-mentioned embryo cells with a known cell fusion method.
非ヒト哺乳動物としては、 例えば、 ゥシ、 ブ夕、 ヒッジ、 ャギ、 ゥサギ、 ィヌ、 ネコ、 モルモット、 ハムスター、 マウス、 ラットなどが用いられる。 なかでも、 病体動物モデル系の作成の面から個体発生および生物サイクルが比較的短く、 ま た、 繁殖が容易なゲッ歯動物、 とりわけマウス （例えば、 純系として、 C57B LZ6系統， DBA 2系統など、 交雑系として、 B 6C3 F1系統， BDF1系統, B 6D2 F1系統， BALBZc系統， I CR系統など） またはラット （例えば、 Wi s t a r, SDなど） などが好ましい。  Examples of non-human mammals include ushi, buyu, hidge, goat, usagi, inu, cat, guinea pig, hamster, mouse and rat. Among them, rodents, especially mice (for example, C57B LZ6 strain, DBA 2 strain, etc. As a hybrid system, B 6C3 F1 strain, BDF1 strain, B 6D2 F1 strain, BALBZc strain, ICR strain, etc.) or rats (eg, Wi star, SD, etc.) are preferable.
哺乳動物において発現しうる組換えべクタ一における 「哺乳動物」 としては、 上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどがあげられる。 本発明の外来性 D NAとは、 非ヒト哺乳動物が本来有している本発明の D NA ではなく、 いったん哺乳動物から単離 ·抽出された本発明の D NAをいう。 Examples of the “mammal” in the recombinant vector that can be expressed in mammals include humans in addition to the above non-human mammals. The exogenous DNA of the present invention is not the DNA of the present invention inherently possessed by a non-human mammal but the DNA of the present invention once isolated and extracted from the mammal.
本発明の変異 D NAとしては、 元の本発明の D NAの塩基配列に変異 （例えば、 突然変異など） が生じたもの、 具体的には、 塩基の付加、 欠損、 他の塩基への置 換などが生じた D NAなどが用いられ、 また、 異常 D NAも含まれる。  As the mutant DNA of the present invention, the base sequence of the original DNA of the present invention has been mutated (for example, mutation, etc.), specifically, addition of a base, deletion, placement on another base. DNA that has undergone conversion is used, and abnormal DNA is also included.
該異常 D N Aとしては、 異常な本発明のタンパク質を発現させる D N Aを意味 し、 例えば、 正常な本発明のタンパク質の機能を抑制するタンパク質を発現させ る D N Aなどが用いられる。 ·  The abnormal DNA means a DNA that expresses an abnormal protein of the present invention, and for example, a DNA that expresses a protein that suppresses the function of the normal protein of the present invention is used. ·
本発明の外来性 D N Aは、 対象とする動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳 動物由来のものであってもよい。 本発明の D NAを対象動物に転移させるにあた つては、 該 D NAを動物細胞で発現させうるプロモ一夕一の下流に結合した D N Aコンストラクトとして用いるのが一般に有利である。 例えば、 本発明のヒト D N Aを転移させる場合、 これと相同性が高い本発明の D NAを有する各種哺乳動 物 （ゥサギ、 ィヌ、 ネコ、 モルモット、 ハムス夕一、 ラット、 マウスなど） 由来 の D NAを発現させうる各種プロモーターの下流に、 本発明のヒト D NAを結合 した D NAコンストラクト （例えば、 ベクター） を対象哺乳動物の受精卵、 例え ば、 マウス受精卵へマイクロインジェクションすることによって本発明の D N A を高発現する D NA転移哺乳動物を作出することができる。  The exogenous DNA of the present invention may be derived from mammals of the same or different species as the subject animal. In order to transfer the DNA of the present invention to a target animal, it is generally advantageous to use the DNA as a DNA construct bound downstream of a promoter that can be expressed in animal cells. For example, when transferring the human DNA of the present invention, it is derived from various mammals (usagi, inu, cat, guinea pig, hams, rat, mouse, etc.) having the DNA of the present invention having high homology to this. This DNA is constructed by microinjecting a DNA construct (for example, vector) conjugated with human DNA of the present invention downstream of various promoters capable of expressing DNA into a fertilized egg of a target mammal, for example, a mouse fertilized egg. A DNA-transferred mammal that highly expresses the DNA of the invention can be produced.
本発明のタンパク質の発現べクタ一としては、 大腸菌由来のプラスミド、 枯草 菌由来のプラスミド、 酵母由来のプラスミド、 λファ一ジなどのバクテリオファ —ジ、 モロニ一白血病ウィルスなどのレトロウイルス、 ワクシニアウィルスまた はバキュロウィルスなどの動物ウィルスなどが用いられる。 なかでも、 大腸菌由 来のプラスミド、 枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由来のプラスミドなどが好 ましく用いられる。  Expression vectors for the protein of the present invention include plasmids derived from E. coli, plasmids derived from Bacillus subtilis, plasmids derived from yeast, bacteriophages such as lambda phage, retroviruses such as Moroni leukemia virus, vaccinia viruses Alternatively, animal viruses such as baculovirus are used. Of these, plasmids derived from Escherichia coli, plasmids derived from Bacillus subtilis or plasmids derived from yeast are preferably used.
上記の D NA発現調節を行なうプロモー夕一としては、 例えば、 （i) ウィル ス （例、 シミアンウィルス、 サイトメガロウィルス、 モロニ一白血病ウィルス、 J Cウィルス、 乳癌ウィルス、 ポリオウイルスなど） に由来する D NAのプロモ 一ター、 （i i) 各種哺乳動物 （ヒト、 ゥサギ、 ィヌ、 ネコ、 モルモット、 ハムス 夕一、 ラット、 マウスなど） 由来のプロモーター、 例えば、 アルブミン、 インス リン I I、 ゥロプラキン I I、 エラス夕ーゼ、 エリスロポエチン、 エンドセリン、 筋クレアチンキナーゼ、 グリア線維性酸性タンパク質、 ダル夕チオン S—卜ラン スフエラーゼ、 血小板由来成長因子 i6、 ケラチン Kl， 1^10ぉょび1：14、 コ ラーゲン I型および I I型、 サイクリック AMP依存タンパク質キナーゼ j6 Iサ ブュニット、 ジストロフィン、 酒石酸抵抗性アル力リフォスファターゼ、 心房ナ トリウム利尿性因子、 内皮レセプターチ口シンキナーゼ （一般に T i e 2と略さ れる） 、 ナトリウムカリウムアデノシン三リン酸化酵素 （Na, K— ATP a s e) 、 ニューロフィラメント軽鎖、 メタ口チォネイン Iおよび I IA、 メタロブ 口ティナ一ゼ 1組織インヒビ夕一、 MHCクラス I抗原 （H— 2L) 、 H— r a s、 レニン、 ドーパミン —水酸化酵素、 甲状腺ペルォキシダーゼ （TPO) 、 ペプチド鎖延長因子 la (EF- 1 a) 、 β了クチン、 ひおよび |6ミオシン重鎖、 ミオシン軽鎖 1および 2、 ミエリン基礎タンパク質、 チログロプリン、 Thy— 1、 免疫グロブリン、 H鎖可変部 （VNP) 、 血清アミロイド Pコンポーネント、 ミオグロビン、 トロポニン C、 平滑筋ひァクチン、 プレブ口エンケフアリン A、 バソプレシンなどのプロモータ一などが用いられる。 なかでも、 全身で高発現す ることが可能なサイトメガロウィルスプロモーター、 ヒトペプチド鎖延長因子 1 (EF- 1 ) のプロモータ一、 ヒ卜および二ヮ卜リ /3ァクチンプロモーター などが好適である。 The above-mentioned promotion of DNA expression regulation includes, for example, (i) viruses derived from viruses (eg, simian virus, cytomegalovirus, Moroni leukemia virus, JC virus, breast cancer virus, poliovirus, etc.) Promoters of NA, (ii) Promoters derived from various mammals (human, rabbit, dog, cat, guinea pig, hams, rat, mouse, etc.), eg albumin, insulin II, uroplakin II, Eras Erythropoietin, endothelin, Muscle creatine kinase, glial fibrillary acidic protein, daryuthione S— 卜 lan spherase, platelet-derived growth factor i6, keratin Kl, 1 ^ 10 ぉ 1:14, collagen types I and II, cyclic AMP dependence Protein kinase j6 I subunit, dystrophin, tartrate-resistant alfa phosphatase, atrial sodium diuretic factor, endothelial receptor typhocin kinase (commonly abbreviated as T ie 2), sodium potassium adenosine triphosphate (Na, K-ATPase), neurofilament light chain, meta-mouth thionein I and I IA, metallo-blot tinase 1 tissue inhibitor, MHC class I antigen (H-2L), H-ras, renin, dopamine-hydroxylated Enzyme, thyroid peroxidase (TPO), peptide chain elongation factor la (EF-1a), | 6 myosin heavy chain, myosin light chain 1 and 2, myelin basic protein, thyroglobulin, Thy-1, immunoglobulin, heavy chain variable region (VNP), serum amyloid P component, myoglobin, troponin C, smooth muscle protein, Promoters such as preb mouth enkephalin A and vasopressin are used. Among them, the cytomegalovirus promoter capable of high expression throughout the body, the human peptide chain elongation factor 1 (EF-1) promoter, the rabbit and the two / 3actin promoters, etc. are suitable. .
上記ベクターは、 DNA転移哺乳動物において目的とする mRNAの転写を終 結する配列 （一般にターミネ一夕一と呼ばれる） を有していることが好ましく、 例えば、 ウィルス由来および各種哺乳動物由来の各 DN Aの配列を用いることが でき、 好ましくは、 シミアンウィルスの SV40ターミネ一ターなどが用いられ る。  The vector preferably has a sequence that terminates transcription of the target mRNA in a DNA-transferred mammal (generally referred to as “termine overnight”). For example, each DN derived from viruses and various mammals The sequence A can be used, and the SV40 terminator of simian virus is preferably used.
その他、 目的とする外来性 DNAをさらに高発現させる目的で各 DNAのスプ ライシングシグナル、 ェンハンサ一領域、 真核 DN Aのイントロンの一部などを プロモーター領域の 5' 上流、 プロモーター領域と翻訳領域間あるいは翻訳領域 の 3' 下流に連結することも目的により可能である。  In addition, for the purpose of further expressing the target foreign DNA, the splicing signal of each DNA, the enhancer region, a part of the intron of eukaryotic DNA, etc., 5 'upstream of the promoter region, between the promoter region and the translation region Alternatively, it can be linked 3 'downstream of the translation region, depending on the purpose.
正常な本発明のタンパク質の翻訳領域は、 ヒトまたは各種哺乳動物 （ゥサギ、 ィヌ、 ネコ、 モルモット、 ハムスター、 ラット、 マウスなど） 由来の肝臓、 腎臓、 甲状腺細胞、 線維芽細胞由来 DN Aおよび市販の各種ゲノム DN Aライブラリー よりゲノム DNAの全てあるいは一部として、 または肝臓、 腎臓、 甲状腺細胞、 線維芽細胞由来 R NAより公知の方法により調製された相補 D NAを原料として 取得することが出来る。 また、 外来性の異常 D NAは、 上記の細胞または組織よ り得られた正常なタンパク質の翻訳領域を点突然変異誘発法により変異した翻訳 領域を作製することにより取得することができる。 The normal translation region of the protein of the present invention includes livers, kidneys, thyroid cells, fibroblasts derived from humans or various mammals (such as rabbits, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, rats, mice, etc.) and commercially available DNA. As a whole or part of genomic DNA from the various genomic DNA libraries, or liver, kidney, thyroid cells, Complementary DNA prepared from fibroblast-derived RNA by a known method can be obtained as a raw material. In addition, exogenous abnormal DNA can be obtained by preparing a translation region obtained by mutating the translation region of a normal protein obtained from the above cells or tissues by a point mutagenesis method.
該翻訳領域は転移動物において発現しうる D NAコンストラクトとして、 前記 のプロモーターの下流および所望により転写終結部位の上流に連結させる通常の D NA工学的手法により作製することができる。  The translation region can be prepared as a DNA construct that can be expressed in a metastatic animal by a conventional DNA engineering technique in which it is linked downstream of the promoter and optionally upstream of the transcription termination site.
受精卵細胞段階における本発明の外来性 D NAの転移は、 対象哺乳動物の胚芽 細胞および体細胞のすべてに存在するように確保される。 D NA転移後の作出動 物の胚芽細胞において、 本発明の外来性 D NAが存在することは、 作出動物の後 代がすべて、 その胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性 D N Aを保持 することを意味する。 本発明の外来性 D N Aを受け継いだこの種の動物の子孫は その胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外来性 D N Aを有する。  The transfer of the exogenous DNA of the present invention at the fertilized egg cell stage is ensured to be present in all germ cells and somatic cells of the subject mammal. The presence of the exogenous DNA of the present invention in the germ cells of the produced animal after the transfer of DNA means that all the progeny of the producing animal have the exogenous DNA of the present invention in all the germ cells and somatic cells. It means holding. The offspring of this type of animal that inherited the exogenous DNA of the present invention has the exogenous DNA of the present invention in all of its germ cells and somatic cells.
本発明の外来性正常 D NAを転移させた非ヒ卜哺乳動物は、 交配により外来性 D NAを安定に保持することを確認して、 該 D NA保有動物として通常の飼育環 境で継代飼育することが出来る。  The non-human mammal to which the exogenous normal DNA of the present invention has been transferred is confirmed to stably retain the exogenous DNA by mating, and subcultured in a normal breeding environment as the DNA-bearing animal. Can be reared.
受精卵細胞段階における本発明の外来性 D N Aの転移は、 対象哺乳動物の胚芽 細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確保される。 D NA転移後の作 出動物の胚芽細胞において本発明の外来性 D N Aが過剰に存在することは、 作出 動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性 D N Aを過 剰に有することを意味する。 本発明の外来性 D NAを受け継いだこの種の動物の 子孫はその胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性 D NAを過剰に有する。 導入 D NAを相同染色体の両方に持つホモザィゴート動物を取得し、 この雌雄 の動物を交配することによりすべての子孫が該 D N Aを過剰に有するように繁殖 継代することができる。  The transfer of the exogenous DNA of the present invention at the fertilized egg cell stage is ensured to be excessively present in all germ cells and somatic cells of the subject mammal. Excessive exogenous DNA of the present invention is present in the germ cells of the animal after DNA transfer because all of the offspring of the produced animal have excess of the exogenous DNA of the present invention in all the germ cells and somatic cells. It means having. The offspring of this type of animal that has inherited the exogenous DNA of the present invention has an excess of the exogenous DNA of the present invention in all of its germ cells and somatic cells. By obtaining a homozygous animal having the introduced DNA in both homologous chromosomes and mating the male and female animals, all the offspring can be bred and passaged so as to have the DNA in excess.
本発明の正常 D NAを有する非ヒ卜哺乳動物は、 本発明の正常 D NAが高発現 させられており、 内在性の正常 D N Aの機能を促進することにより最終的に本発 明のタンパク質の機能亢進症を発症することがあり、 その病態モデル動物として 利用することができる。 例えば、 本発明の正常非ヒトトランスジエニック動物を 用いて、 本発明のタンパク質の機能亢進症や、 本発明のタンパク質が関連する疾 患の病態機序の解明およびこれらの疾患の治療方法の検討を行なうことが可能で ある。 また、 本発明の外来性正常 D NAを転移させた哺乳動物は、 本発明のタン パク質が発現していることから、 本発明のタンパク質に関連する疾患に対する治 療薬のスクリーニング試験にも利用可能である。 The non-human mammal having the normal DNA of the present invention has a high expression of the normal DNA of the present invention, and finally promotes the function of the endogenous normal DNA, thereby finally producing the protein of the present invention. It can develop hyperfunction and can be used as a model animal for the disease state. For example, by using the normal non-human transgenic animal of the present invention, hyperfunction of the protein of the present invention or diseases associated with the protein of the present invention are used. It is possible to elucidate the pathologic mechanism of the patient and investigate the treatment method for these diseases. Moreover, since the mammal of the present invention to which the exogenous normal DNA of the present invention has been transferred expresses the protein of the present invention, it can be used in screening tests for therapeutic drugs for diseases associated with the protein of the present invention. It is.
具体的には、 PHG皿、 PL0D2, TUBA2、 PML、 F13A AIF1、 SM1、 S100A2、 AQPL PAFAH1B3, ΚΥΝϋは非小細胞肺がんの再発患者で発現が上昇しているので、 その発 現を抑制する化合物またはその塩、 および、 これらのタンパク質の活性もしくは 機能を抑制する化合物またはその塩は、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および (または） 再発予防剤として有用である。 したがって、 I>HGDH、 PL0D2、 TUBA2, PML、 F13A1、 AIF1、 SAA1、 S100A2, AQPK PAFAH1B3または （および） 誦をコー ドする D NAが高発現している本発明の正常 D NA高発現動物、 またはこれらの 外来性正常 D NAを転移させた哺乳動物は、 前記化合物またはその塩のスクリー ニングのために有用である。  Specifically, PHG dishes, PL0D2, TUBA2, PML, F13A AIF1, SM1, S100A2, AQPL PAFAH1B3, and sputum are upregulated in patients with recurrent non-small cell lung cancer. The salts, and the compounds or salts thereof that suppress the activity or function of these proteins are useful as preventive / therapeutic agents for non-small cell lung cancer and / or preventive agents for recurrence. Therefore, I> HGDH, PL0D2, TUBA2, PML, F13A1, AIF1, SAA1, S100A2, AQPK PAFAH1B3 or (and) a normal DNA high-expressing animal of the present invention in which DNA coding for sputum is highly expressed, or Mammals that have transferred these exogenous normal DNAs are useful for screening the compounds or salts thereof.
また、 FLJ 10307、 0SBPL9、 EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 L C0L9A2, FAM13AL DLK 1は、 非小細胞肺がんの無再発患者で発現が上昇しているので、 その発現を促進 する化合物またはその塩、 および、 これらのタンパク質の活性もしくは機能を促 進する化合物またはその塩は、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発予防剤として有用である。 したがって、 FLJ 10307, 0SBPL9、 EIF2C4、 ENTPD4、 FLJ2053 K C0L9A2、 FAM13A1または （および） DLK 1をコードする外来性正常 D N Aを転移させた哺乳動物は、 前記化合物またはその塩のスクリーニングのために 有用である。  In addition, FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 L C0L9A2, FAM13AL DLK 1 are upregulated in non-relapsed patients with non-small cell lung cancer. A compound or a salt thereof that promotes the activity or function of the protein is useful as an agent for preventing / treating non-small cell lung cancer and / or preventing recurrence. Therefore, mammals transferred with exogenous normal DNA encoding FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FLJ2053 K C0L9A2, FAM13A1 or (and) DLK 1 are useful for screening the compound or its salts. .
一方、 本発明の外来性異常 D NAを有する非ヒト哺乳動物は、 交配により外来 性 D NAを安定に保持することを確認して該 D NA保有動物として通常の飼育環 境で継代飼育することが出来る。 さらに、 目的とする外来 D NAを前述のプラス ミドに組み込んで原料として用いることができる。 プロモーターとの D NAコン ス卜ラク卜は、 通常の D NA工学的手法によって作製することができる。 受精卵 細胞段階における本発明の異常 D N Aの転移は、 対象哺乳動物の胚芽細胞および 体細胞の全てに存在するように確保される。 D N A転移後の作出動物の胚芽細胞 において本発明の異常 D N Aが存在することは、 作出動物の子孫が全てその胚芽 細胞および体細胞の全てに本発明の異常 D NAを有することを意味する。 本発明 の外来性 D NAを受け継いだこの種の動物の子孫は、 その胚芽細胞および体細胞 の全てに本発明の異常 D N Aを有する。 導入 D N Aを相同染色体の両方に持つホ モザィゴート動物を取得し、 この雌雄の動物を交配することによりすべての子孫 が該 D N Aを有するように繁殖継代することができる。 On the other hand, the non-human mammal having the exogenous abnormal DNA of the present invention is confirmed to stably retain the exogenous DNA by mating, and is subcultured in the normal breeding environment as the DNA-bearing animal. I can do it. Furthermore, the target foreign DNA can be incorporated into the aforementioned plasmid and used as a raw material. A DNA construct with a promoter can be produced by ordinary DNA engineering techniques. Transfer of the abnormal DNA of the present invention at the fertilized egg cell stage is ensured to be present in all germ cells and somatic cells of the target mammal. The presence of the abnormal DNA of the present invention in the germ cell of the produced animal after DNA transfer means that all the offspring of the produced animal have the abnormal DNA of the present invention in all of the germ cells and somatic cells. The present invention Descendants of this type of animal that have inherited the exogenous DNA of the present invention have the abnormal DNA of the present invention in all of their germ cells and somatic cells. By obtaining a homozygous goat animal having the introduced DNA in both homologous chromosomes and mating the male and female animals, all the offspring can be bred to have the DNA.
本発明の異常 D NAを有する非ヒト哺乳動物は、 本発明の異常 D NAが高発現 させられており、 内在性の正常 D NAの機能を阻害することにより最終的に本発 明のタンパク質の機能不活性型不応症となることがあり、 その病態モデル動物と して利用することができる。 例えば、 本発明の異常非ヒトトランスジエニック動 物を用いて、 本発明のタンパク質の機能不活性型不応症の病態機序の解明および この疾患を治療方法の検討を行なうことが可能である。  The non-human mammal having the abnormal DNA of the present invention has a high expression of the abnormal DNA of the present invention, and finally inhibits the function of the endogenous normal DNA to inhibit the protein of the present invention. It can become a functional inactive refractory disease and can be used as a disease model animal. For example, by using the abnormal non-human transgenic animal of the present invention, it is possible to elucidate the pathological mechanism of the functional inactive refractory of the protein of the present invention and to examine a method for treating this disease.
また、 具体的な利用可能性としては、 本発明の異常 D N A高発現動物は、 本発 明のタンパク質の機能不活性型不応症における本発明の異常タンパク質による正 常タンパク質の機能阻害 （dominant negat ive作用） を解明するモデルとなる。 また、 本発明の外来異常 D NAを転移させた哺乳動物は、 本発明のタンパク質 の増加症状を有することから、 本発明のタンパク質またはの機能不活性型不応症 に対する治療薬スクリーニング試験にも利用可能である。  In addition, as a specific applicability, the abnormal DNA high-expressing animal of the present invention is capable of inhibiting the function of the normal protein by the abnormal protein of the present invention in the functional inactive refractory disease of the protein of the present invention. Model). In addition, since the mammal having transferred the foreign abnormality DNA of the present invention has an increased symptom of the protein of the present invention, it can be used for a therapeutic drug screening test for the protein of the present invention or its functional inactive refractory disease. It is.
また、 上記 2種類の本発明の非ヒ卜トランスジエニック動物のその他の利用可 能性として、 例えば、  In addition, the other two non-human transgenic animals of the present invention can be used as, for example,
( i ) 組織培養のための細胞源としての使用、  (i) use as a cell source for tissue culture;
(i i) 本発明の非ヒトトランスジエニック動物の組織中の D NAもしくは R NA を直接分析するか、 または D N Aにより発現されたタンパク質組織を分析するこ とによる、 本発明のタンパク質により特異的に発現あるいは活性化するタンパク 質との関連性についての解析、  (ii) More specifically by the protein of the present invention by directly analyzing DNA or RNA in the tissue of the non-human transgenic animal of the present invention or by analyzing the protein tissue expressed by DNA. Analysis of the relationship with the expressed or activated protein,
(i i i) D NAを有する組織の細胞を標準組織培養技術により培養し、 これらを 使用して、 一般に培養困難な組織からの細胞の機能の研究、  (i i i) Cells of tissues with DNA are cultured by standard tissue culture techniques, and these are used to study the function of cells from tissues that are generally difficult to culture,
(iv) 上記 （i i i) 記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高めるような薬 剤のスクリーニング、 および  (iv) Screening for drugs that enhance cell function by using the cells described in (i i i) above, and
( v ) 本発明の変異タンパク質を単離精製およびその抗体作製などが考えられる。 さらに、 本発明の非ヒトトランスジエニック動物を用いて、 本発明のタンパク 質の機能不活性型不応症などを含む、 本発明のタンパク質に関連する疾患の臨床 症状を調べることができ、 また、 本発明のタンパク質に関連する疾患モデルの各 臓器におけるより詳細な病理学的所見が得られ、 新しい治療方法の開発、 さらに は、 該疾患による二次的疾患の研究および治療に貢献することができる。 (v) The mutant protein of the present invention can be isolated and purified, and its antibody can be produced. Further, the non-human transgenic animal of the present invention is used to clinically treat diseases associated with the protein of the present invention, including functional inactive refractory diseases of the protein of the present invention. Symptoms can be examined, more detailed pathological findings in each organ of the disease model related to the protein of the present invention can be obtained, development of new treatment methods, and further secondary disease caused by the disease Can contribute to research and treatment.
また、 本発明の非ヒトトランスジエニック動物から各臓器を取り出し、 細切後、 トリプシンなどのタンパク質分解酵素により、 遊離した DNA転移細胞の取得、 その培養またはその培養細胞の系統化を行なうことが可能である。 さらに、 本発 明のタンパク質産生細胞の特定化、 アポトーシス、 分化あるいは増殖との関連性、 またはそれらにおけるシグナル伝達機構を調べ、 それらの異常を調べることなど ができ、 本発明のタンパク質およびその作用解明のための有効な研究材料となる。 さらに、 本発明の非ヒトトランスジエニック動物を用いて、 本発明のタンパク 質の機能不活性型不応症を含む、 本発明のタンパク質に関連する疾患の治療薬の 開発を行なうために、 上述の検査法および定量法などを用いて、 有効で迅速な該 疾患治療薬のスクリーニング法を提供することが可能となる。 また、 本発明の非 ヒトトランスジエニック動物または本発明の外来性 DNA発現ベクターを用いて、 本発明のタンパク質が関連する疾患の DNA治療法を検討、 開発することが可能 である。  In addition, each organ is taken out from the non-human transgenic animal of the present invention, and after minced, free DNA transfer cells can be obtained, cultured or systematized by a proteolytic enzyme such as trypsin. Is possible. In addition, the protein-producing cells of the present invention can be identified, their relationship with apoptosis, differentiation or proliferation, or their signal transduction mechanisms can be investigated, and their abnormalities can be investigated. It becomes an effective research material for. Further, in order to develop a therapeutic agent for the diseases related to the protein of the present invention, including the functional inactive refractory of the protein of the present invention, using the non-human transgenic animal of the present invention, It is possible to provide an effective and rapid screening method for a therapeutic drug for a disease by using a test method and a quantitative method. In addition, using the non-human transgenic animal of the present invention or the exogenous DNA expression vector of the present invention, it is possible to examine and develop a DNA therapy for a disease associated with the protein of the present invention.
(6) ノックアウト動物  (6) Knockout animal
本発明は、 本発明の DNAが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞および本 発明の DNA発現不全非ヒト哺乳動物を提供する。  The present invention provides a non-human mammal embryonic stem cell in which the DNA of the present invention is inactivated and the DNA expression-deficient non-human mammal of the present invention.
すなわち、 本発明は、  That is, the present invention
1) 本発明の DNAが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞、  1) a non-human mammalian embryonic stem cell in which the DNA of the present invention is inactivated,
2) 該 DNAがレポ一夕一遺伝子 （例、 大腸菌由来の 3—ガラクトシダーゼ遺伝 子） を導入することにより不活性化された第 1) 項記載の胚幹細胞、  2) The embryonic stem cell according to item 1), wherein the DNA has been inactivated by introducing a repo overnight gene (eg, 3-galactosidase gene derived from E. coli),
3) ネオマイシン耐性である第 1) 項記載の胚幹細胞、  3) The embryonic stem cell according to item 1), which is neomycin resistant,
4) 非ヒ卜哺乳動物がゲッ歯動物である第 1) 項記載の胚幹細胞、 4) The embryonic stem cell according to item 1), wherein the non-human mammal is a rodent,
5) ゲッ歯動物がマウスである第 4) 項記載の胚幹細胞、  5) The embryonic stem cell according to item 4), wherein the rodent is a mouse,
6) 本発明の DNAが不活性化された該 DNA発現不全非ヒ卜哺乳動物、  6) a non-human mammal having a deficient DNA expression, wherein the DNA of the present invention is inactivated,
7) 該 DNAがレポーター遺伝子 （例、 大腸菌由来の )8—ガラクトシダーゼ遺伝 子） を導入することにより不活性化され、 該レポ一ター遺伝子が本発明の DNA に対するプロモーターの制御下で発現しうる第 6) 項記載の非ヒト哺乳動物、 8) 非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第 6) 項記載の非ヒト哺乳動物、7) The DNA is inactivated by introducing a reporter gene (eg, E. coli-derived 8-galactosidase gene), and the reporter gene can be expressed under the control of a promoter for the DNA of the present invention. 6) the non-human mammal according to the item 8) The non-human mammal according to item 6), wherein the non-human mammal is a rodent,
9) ゲッ歯動物がマウスである第 8) 項記載の非ヒト哺乳動物、 および 9) The non-human mammal according to item 8), wherein the rodent is a mouse, and
10) 第 7) 項記載の動物に、 試験化合物を投与し、 レポーター遺伝子の発現を 検出することを特徴とする本発明の DNAに対するプロモーター活性を促進また は阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法などを提供する。  10) A screening method for a compound or a salt thereof that promotes or inhibits promoter activity against the DNA of the present invention, which comprises administering a test compound to the animal described in item 7) and detecting the expression of a reporter gene, etc. I will provide a.
本発明の DNAが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞とは、 該非ヒト哺乳 動物が有する本発明の DN Aに人為的に変異を加えることにより、 DNAの発現 能を抑制するか、 もしくは該 DN Aがコードしている本発明のタンパク質の活性 もしくは機能を実質的に喪失させることにより、 D N Aが実質的に本発明のタン パク質の発現能を有さない （以下、 本発明のノックアウト DNAと称することが ある） 非ヒト哺乳動物の胚幹細胞 （以下、 ES細胞と略記する） をいう。  The non-human mammal embryonic stem cell in which the DNA of the present invention is inactivated refers to suppressing the DNA expression ability by artificially adding mutation to the DNA of the present invention possessed by the non-human mammal, or By substantially losing the activity or function of the protein of the present invention encoded by the DNA, the DNA has substantially no ability to express the protein of the present invention (hereinafter referred to as the knockout of the present invention). Non-human mammalian embryonic stem cells (hereinafter abbreviated as ES cells).
非ヒト哺乳動物としては、 前記と同様のものが用いられる。  As the non-human mammal, those described above are used.
本発明の DNAに人為的に変異を加える方法としては、 例えば、 遺伝子工学的 手法により該 DNA配列の一部又は全部の削除、 他 DNAを挿入または置換させ ることによって行なうことができる。 これらの変異により、 例えば、 コドンの読 み取り枠をずらしたり、 プロモーターあるいはェクソンの機能を破壊することに より本発明のノックァゥト DNAを作製すればよい。  As a method for artificially adding a mutation to the DNA of the present invention, for example, a part or all of the DNA sequence can be deleted by genetic engineering techniques, or another DNA can be inserted or replaced. With these mutations, for example, the knockout DNA of the present invention may be prepared by shifting the reading frame of codons or destroying the function of the promoter or exon.
本発明の DN Aが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞 （以下、 本発明の D N A不活性化 E S細胞または本発明のノックアウト E S細胞と略記する） の具体 例としては、 例えば、 目的とする非ヒト哺乳動物が有する本発明の DNAを単離 し、 そのェクソン部分にネオマイシン耐性遺伝子、 ハイグロマイシン耐性遺伝子 を代表とする薬剤耐性遺伝子、 あるいは 1 a c Z ( 一ガラクトシダーゼ遺伝 子） 、 c a t (クロラムフエニコールァセチルトランスフェラ一ゼ遺伝子） を代 表とするレポーター遺伝子等を挿入することによりェクソンの機能を破壊する力 あるいはェクソン間のイントロン部分に遺伝子の転写を終結させる D N A配列 (例えば、 polyA付加シグナルなど） を挿入し、 完全な mRNAを合成できなく することによって、 結果的に遺伝子を破壊するように構築した DNA配列を有す る DNA鎖 （以下、 夕一ゲッティングベクタ一と略記する） を、 例えば相同組換 え法により該動物の染色体に導入し、 得られた ES細胞について本発明の DNA 上あるいはその近傍の D N A配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーショ ン解析あるいは夕ーゲッティングベクタ一上の DNA配列と夕ーゲッティングべ クタ一作製に使用した本発明の D N A以外の近傍領域の DN A配列をプライマー とした PC R法により解析し、 本発明のノックアウト ES細胞を選別することに より得ることができる。 Specific examples of the non-human mammalian embryonic stem cell in which DNA of the present invention is inactivated (hereinafter abbreviated as the DNA-inactivated ES cell of the present invention or the knockout ES cell of the present invention) include, for example, The DNA of the present invention possessed by a non-human mammal to be isolated is isolated and a neomycin resistance gene, a drug resistance gene typified by a hygromycin resistance gene, or 1 ac Z (one galactosidase gene) The ability to disrupt exon function by inserting a reporter gene or the like represented by ramphenicol acetyltransferase gene) or a DNA sequence that terminates gene transcription at the intron part between exons (eg, polyA Insert the additional signal, etc.), and make it impossible to synthesize complete mRNA. A DNA strand having a DNA sequence constructed in the above (hereinafter abbreviated as “getting vector 1”) is introduced into the chromosome of the animal by, for example, homologous recombination, and the obtained ES cells are used in the present invention. Southern hybridization using DNA sequences on or near DNA as probes Analysis or PCR analysis using the DNA sequence on the evening-getting vector and the DNA sequence of the neighboring region other than the DNA of the present invention used for the production of the evening-getting vector as primers. It can be obtained by sorting ES cells.
また、 相同組換え法等により本発明の DNAを不活化させる元の ES細胞とし ては、 例えば、 前述のような既に樹立されたものを用いてもよく、 また公知の Evansと Kaufmanの方法に準じて新しく樹立したものでもよい。 例えば、 マウスの ES細胞の場合、 現在、 一般的には 129系の ES細胞が使用されているが、 免 疫学的背景がはっきりしていないので、 これに代わる純系で免疫学的に遺伝的背 景が明らかな ES細胞を取得するなどの目的で例えば、 C57BL/6マウスや C 57BLZ6の採卵数の少なさを DBAZ2との交雑により改善した BDF 1 マウス （C 57 BLZ6と DBAZ2との F 1) を用いて樹立したものなども良 好に用いうる。 BDF1マウスは、 採卵数が多く、 かつ、 卵が丈夫であるという 利点に加えて、 C 57 BLZ6マウスを背景に持つので、 これを用いて得られた ES細胞は病態モデルマウス'を作出したとき、 C 57 BL/6マウスとバックク ロスすることでその遺伝的背景を C 57 BLZ 6マウスに代えることが可能であ る点で有利に用い得る。  Further, as the original ES cell for inactivating the DNA of the present invention by the homologous recombination method or the like, for example, those already established as described above may be used, or the known Evans and Kaufman method may be used. Similarly, a newly established one may be used. For example, in the case of mouse ES cells, currently 129 ES cells are generally used, but since the immunological background is unclear, an alternative and purely immunologically genetic background For example, BDF 1 mice (F 1 between C 57 BLZ6 and DBAZ2) in which the number of eggs collected from C57BL / 6 mice and C 57BLZ6 was reduced by crossing with DBAZ2 The ones established using can also be used well. BDF1 mice have the advantage of having a large number of eggs collected and strong eggs, and because they have C 57 BLZ6 mice in the background, the ES cells obtained using these mice can be used to create pathological model mice. By using back crossing with C 57 BL / 6 mice, the genetic background can be advantageously replaced with C 57 BLZ 6 mice.
また、 ES細胞を樹立する場合、 一般には受精後 3.5日目の胚盤胞を使用す るが、 これ以外に 8細胞期胚を採卵し胚盤胞まで培養して用いることにより効率 よく多数の初期胚を取得することができる。 '  In addition, when establishing ES cells, blastocysts at the 3.5th day after fertilization are generally used, but in addition to this, an 8-cell embryo is collected and cultured to the blastocyst for efficient use. Early embryos can be obtained. '
また、 雌雄いずれの ES細胞を用いてもよいが、 通常雄の ES細胞の方が生殖 系列キメラを作出するのに都合が良い。 また、 煩雑な培養の手間を削減するため にもできるだけ早く雌雄の判別を行なうことが望ましい。  Although both male and female ES cells can be used, male ES cells are usually more convenient for producing germline chimeras. In addition, it is desirable to discriminate between males and females as soon as possible in order to reduce troublesome culture.
ES細胞の雌雄の判定方法としては、 例えば、 PCR法により Y染色体上の性 決定領域の遺伝子を増幅、 検出する方法が、 その 1例としてあげることができる。 この方法を使用すれば、 従来、 核型分析をするのに約 106個の細胞数を要して いたのに対して、 1コロニー程度の ES細胞数 （約 50個） で済むので、 培養初 期における E S細胞の第一次セレクションを雌雄の判別で行なうことが可能であ り、 早期に雄細胞の選定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削減で きる。 また、 第二次セレクションとしては、 例えば、 G—バンデイング法による染色 体数の確認等により行うことができる。 得られる E S細胞の染色体数は正常数の 1 0 0 %が望ましいが、 樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、 E S細 胞の遺伝子をノックアウトした後、 正常細胞 （例えば、 マウスでは染色体数が 2 n = 4 0である細胞） に再びクローニングすることが望ましい。 One example of a method for determining the sex of ES cells is a method of amplifying and detecting a gene in the sex-determining region on the Y chromosome by PCR. Using this method, conventionally, for example G-banding method, requires about 10 6 cells for karyotype analysis, since suffices ES cell number of about 1 colony (about 50), culture Initial selection of ES cells in the initial stage can be performed by male / female discrimination, and male cells can be selected at an early stage, which can greatly reduce labor in the initial stage of culture. The secondary selection can be performed, for example, by confirming the number of chromosomes by the G-banding method. The number of chromosomes in the obtained ES cell is preferably 100% of the normal number, but if it is difficult due to physical operations during establishment, etc., after knocking out the gene of the ES cell, normal cells (for example, In mice, it is desirable to clone again into cells having a chromosome number of 2 n = 40.
このようにして得られた胚幹細胞株は、 通常その増殖性は大変良いが、 個体発 生できる能力を失いやすいので、 注意深く継代培養することが必要である。 例え ば、 S T O繊維芽細胞のような適当なフィーダ一細胞上で L I F (1 - 10000U/ml) 存在下に炭酸ガス培養器内 （好ましくは、 5 %炭酸ガス、 9 5 %空 気または 5 %酸素、 5 %炭酸ガス、 9 0 %空気） で約 3 7 °Cで培養するなどの方 法で培養し、 継代時には、 例えば、 トリプシン ZE D T A溶液 （通常 0 . 0 0 1 一 0. 5 %トリプシン Z 0. 1— 5 mM E D T A、 好ましくは約 0. 1 %トリプシ ン Z l mM E D TA) 処理により単細胞化し、 新たに用意したフィーダ一細胞 上に播種する方法などがとられる。 このような継代は、 通常 1一 3日毎に行なう が、 この際に細胞の観察を行い、 形態的に異常な細胞が見受けられた場合はその 培養細胞は放棄することが望まれる。  The embryonic stem cell line obtained in this way is usually very proliferative, but it tends to lose its ability to develop on its own, so it needs to be subcultured carefully. For example, in a carbon dioxide incubator in the presence of LIF (1-10000 U / ml) on a suitable feeder cell such as STO fibroblasts (preferably 5% carbon dioxide, 95% air or 5% For example, trypsin ZE DTA solution (usually 0.0 0 1 0.5%). % Trypsin Z 0.1—5 mM EDTA, preferably about 0.1% trypsin Z 1 mM EDTA), and then seeded on a newly prepared feeder cell. Such passage is usually performed every 1 to 3 days. At this time, cells should be observed, and if morphologically abnormal cells are found, the cultured cells should be discarded.
E S細胞は、 適当な条件により、 高密度に至るまで単層培養するか、 または細 胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、 頭頂筋、 内臓筋、 心筋などの 種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり 〔M. J. Evans及び M. H.  ES cells can be cultured in various types of cells such as parietal muscle, visceral muscle, and myocardium by monolayer culture to high density or suspension culture until a cell agglomeration is formed under appropriate conditions. It is possible to differentiate [MJ Evans and MH
Kaufman, Nature, 第 292巻、 154頁、 1981年； G. R. Mart in, Proc. Nat l. Acad. Sci. U. S. A.ゝ 第 78巻、 7634頁、 1981年； T. C. Doetschman ら、 ジャーナル-ォ ブ'ェンブリオロジー 'アンド 'ェクスペリメンタル ·モルフォロジ一、 第 87巻、 27頁、 1985年〕 、 本発明の E S細胞を分化させて得られる本発明の D NA発現不 全細胞は、 インビトロにおけ本発明のタンパク質の細胞生物学的検討において有 用である。 Kaufman, Nature, 292, 154, 1981; GR Mart in, Proc. Nat l. Acad. Sci. USA 78 78, 7634, 1981; TC Doetschman et al., Journal of the Embryology '' And 87 pp. 27, 1985), the DNA-expressing incomplete cell of the present invention obtained by differentiating the ES cell of the present invention is the protein of the present invention in vitro. This is useful in cell biology studies.
本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物は、 該動物の mR NA量を公知方法を 用いて測定して間接的にその発現量を比較することにより、 正常動物と区別する ことが可能である。  The non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention can be distinguished from normal animals by measuring the mRNA amount of the animal using a known method and comparing the expression level indirectly. .
該非ヒト哺乳動物としては、 前記と同様のものが用いられる。  As the non-human mammal, those similar to the above can be used.
本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物は、 例えば、 前述のようにして作製し た夕ーゲッティングベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入し、 導 入によりターゲッティングベクタ一の本発明の D N Aが不活性化された D N A配 列が遺伝子相同組換えにより、 マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色体上の 本発明の D NAと入れ換わる相同組換えをさせることにより、 本発明の D N Aを ノックアウトさせることができる。 The DNA expression-deficient non-human mammal of the present invention is prepared, for example, as described above. The introduction of the targeting vector into mouse embryonic stem cells or mouse egg cells, and introduction of the DNA sequence of the targeting vector of the present invention inactivated by DNA homologous recombination results in mouse embryonic stem cells or mouse egg cells. The DNA of the present invention can be knocked out by homologous recombination that replaces the DNA of the present invention on the chromosome.
本発明の D N Aがノックアウトされた細胞は、 本発明の D N A上またはその近 傍の D N A配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション解析またはター ゲッティングベクター上の D NA配列と、 夕一ゲッティングベクターに使用した マウス由来の本発明の D N A以外の近傍領域の D N A配列とをプライマーとした P C R法による解析で判定することができる。 非ヒト哺乳動物胚幹細胞を用いた 場合は、 遺伝子相同組換えにより、 本発明の D NAが不活性化された細胞株をク ローニングし、 その細胞を適当な時期、 例えば、 8細胞期の非ヒト哺乳動物胚ま たは胚盤胞に注入し、 作製したキメラ胚を偽妊娠させた該非ヒト哺乳動物の子宮 に移植する。 作出された動物は正常な本発明の D NA座をもつ細胞と人為的に変 異した本発明の D NA座をもつ細胞との両者から構成されるキメラ動物である。 該キメラ動物の生殖細胞の一部が変異した本発明の D N A座をもつ場合、 この ようなキメラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体群より、 全ての 組織が人為的に変異を加えた本発明の D N A座をもつ細胞で構成された個体を、 例えば、 コートカラーの判定等により選別することにより得られる。 このように して得られた個体は、 通常、 本発明のタンパク質のヘテロ発現不全個体であり、 本発明のタンパク質のヘテロ発現不全個体同志を交配し、 それらの産仔から本発 明の夕ンパク質のホモ発現不全個体を得ることができる。  Cells in which the DNA of the present invention has been knocked out are used as a Southern hybridization analysis or DNA sequence on a targeting vector using the DNA sequence of or near the DNA of the present invention as a probe, and an evening targeting vector. It can be determined by analysis by PCR using primers derived from DNA sequences in the neighboring region other than the DNA of the present invention derived from the mouse. When non-human mammalian embryonic stem cells are used, a cell line in which the DNA of the present invention is inactivated is cloned by gene homologous recombination, and the cells are treated at a suitable time, for example, at the 8-cell stage. It is injected into a human mammalian embryo or blastocyst, and the produced chimeric embryo is transplanted into the uterus of the non-human mammal that has been pseudopregnant. The produced animal is a chimeric animal composed of both normal cells having the DNA locus of the present invention and artificially altered cells having the DNA locus of the present invention. When some of the germ cells of the chimeric animal have the mutated DNA locus of the present invention, all tissues are artificially mutated from the population obtained by mating such a chimeric individual with a normal individual. It is obtained by selecting an individual composed of cells having the added DNA locus of the present invention, for example, by determining the coat color. The individual thus obtained is usually an individual with deficient hetero-expression of the protein of the present invention, and individuals who have deficient hetero-expression of the protein of the present invention are mated with each other from their offspring. A quality homo-deficient individual can be obtained.
卵細胞を使用する場合は、 例えば、 卵細胞核内にマイクロインジェクション法 で D N A溶液を注入することにより夕一ゲッティングベクターを染色体内に導入 したトランスジエニック非ヒ卜哺乳動物を得ることができ、 これらのトランスジ エニック非ヒト哺乳動物に比べて、 遺伝子相同組換えにより本発明の D NA座に 変異のあるものを選択することにより得られる。  When egg cells are used, for example, transgenic non-human mammals can be obtained in which a getting vector is introduced into the chromosome by injecting a DNA solution into the nucleus of the egg cell by microinjection. Compared with transgenic non-human mammals of the present invention, it is obtained by selecting those having mutations in the DNA locus of the present invention by gene homologous recombination.
このようにして本発明の D N Aがノックアウトされている個体は、 交配により 得られた動物個体も該 D N Aがノックアウトされていることを確認して通常の飼 育環境で飼育継代を行なうことができる。 さらに、 生殖系列の取得および保持についても常法に従えばよい。 すなわち、 該不活化 D NAの保有する雌雄の動物を交配することにより、 該不活化 D NAを 相同染色体の両方に持つホモザィゴート動物を取得しうる。 得られたホモザィゴ —ト動物は、 母親動物に対して、 正常個体 1， ホモザィゴ一ト複数になるような 状態で飼育することにより効率的に得ることができる。 ヘテロザィゴート動物の 雌雄を交配することにより、 該不活化 D NAを有するホモザィゴ一トおよびへテ ロザィゴート動物を繁殖継代する。 Thus, an individual in which the DNA of the present invention is knocked out can be reared in a normal breeding environment after confirming that the animal individual obtained by mating has also been knocked out. . In addition, germline acquisition and retention may be followed in accordance with conventional methods. That is, by mating male and female animals possessed by the inactivated DNA, homozygous animals having the inactivated DNA in both homologous chromosomes can be obtained. The obtained homozygous animals can be efficiently obtained by rearing the mother animal in a state where there are one normal individual and multiple homozygous animals. By crossing male and female heterozygous animals, homozygous and heterozygous animals having the inactivated DNA are bred and passaged.
本発明の D N Aが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞は、 本発明の D NA 発現不全非ヒ卜哺乳動物を作出する上で、 非常に有用である。  The non-human mammal embryonic stem cell in which the DNA of the present invention is inactivated is very useful for producing the non-human mammal deficient in the expression of DNA of the present invention.
また、 本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物は、 本発明のタンパク質により 誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、 本発明のタンパク質の生物活性の 不活性化を原因とする疾病のモデルとなり得るので、 これらの疾病の原因究明及 び治療法の検討に有用である。  In addition, since the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention lacks various biological activities that can be induced by the protein of the present invention, the non-human mammal having a disease caused by inactivation of the biological activity of the protein of the present invention Since it can be a model, it is useful for investigating the causes of these diseases and studying treatments.
( a ) 本発明の D NAの欠損や損傷などに起因する疾病に対して治療 ·予防効 果を有する化合物のスクリーニング方法  (a) a method for screening a compound having a therapeutic / preventive effect against a disease caused by deficiency or damage of DNA of the present invention
本発明の D NA発現不全非ヒ卜哺乳動物は、 本発明の D NAの欠損や損傷など に起因する疾病に対して治療 ·予防効果を有する化合物のスクリーニングに用い ることができる。  The non-human mammal with dna expression deficiency of the present invention can be used for screening for compounds having a therapeutic / preventive effect on diseases caused by deficiency or damage of the DNA of the present invention.
すなわち、 本発明は、 本発明の D N A発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を 投与し、 該動物の変化を観察 ·測定することを特徴とする、 本発明の D NAの欠 損や損傷などに起因する疾病に対して治療 ·予防効果を有する化合物またはその 塩のスクリーニング方法を提供する。  That is, the present invention relates to a deficiency or damage of the DNA of the present invention, which comprises administering a test compound to the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention and observing and measuring changes in the animal. Provided is a method for screening a compound or a salt thereof having a therapeutic / preventive effect against an underlying disease.
該スクリーニング方法において用いられる本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳 動物としては、 前記と同様のものがあげられる。  Examples of the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention used in the screening method include those described above.
試験化合物としては、 例えば、 ペプチド、 タンパク質、 抗体、 非ペプチド性化 合物、 合成化合物、 発酵生産物、 細胞抽出液、 植物抽出液、 動物組織抽出液、 血 漿などがあげられ、 これら化合物は新規な化合物であってもよいし、 公知の化合 物であってもよい。  Examples of test compounds include peptides, proteins, antibodies, non-peptide compounds, synthetic compounds, fermentation products, cell extracts, plant extracts, animal tissue extracts, plasma, and the like. It may be a novel compound or a known compound.
具体的には、 本発明の D NA発現不全非ヒト哺乳動物を、 試験化合物で処理し、 無処理の対照動物と比較し、 該動物の各器官、 組織、 疾病の症状などの変化を指 標として試験化合物の治療 ·予防効果を試験することができる。 Specifically, a non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention is treated with a test compound, compared with an untreated control animal, and changes in the organs, tissues, disease symptoms, etc. of the animal are indicated. The therapeutic / preventive effect of a test compound can be tested as a standard.
試験動物を試験化合物で処理する方法としては、 例えば、 経口投与、 静脈注射 などが用いられ、 試験動物の症状、 試験化合物の性質などにあわせて適宜選択す ることができる。 また、 試験化合物の投与量は、 投与方法、 試験化合物の性質な どにあわせて適宜選択することができる。  As a method for treating a test animal with a test compound, for example, oral administration and intravenous injection are used, and can be appropriately selected according to the symptom of the test animal, the nature of the test compound, and the like. In addition, the dose of the test compound can be appropriately selected according to the administration method, the nature of the test compound, and the like.
該スクリーニング方法を用いて得られる化合物は、 上記した試験化合物から選 ばれた化合物であり、 本発明のタンパク質の欠損や損傷などによって引き起こさ れる疾患に対して治療 ·予防効果を有するので、 該疾患に対する安全で低毒性な 治療 ·予防剤などの医薬として使用することができる。 さらに、 上記スクリー二 ングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に用いることができる。  The compound obtained by using the screening method is a compound selected from the above-mentioned test compounds, and has a therapeutic / preventive effect on diseases caused by deficiency or damage of the protein of the present invention. It can be used as a medicine for safe and low toxicity treatment and prevention. Furthermore, compounds derived from the compounds obtained by the above screening can be used in the same manner.
該スクリ一ニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、 該化合物 の塩としては、 生理学的に許容される酸 （例、 無機酸、 有機酸など） や塩基 （例、 アルカリ金属など） などとの塩が用いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付 加塩が好ましい。 この様な塩としては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化水素酸、 硫酸など） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピ オン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸など） との塩などが用いられ る。  The compound obtained by the screening method may form a salt. Examples of the salt of the compound include physiologically acceptable acids (eg, inorganic acids, organic acids, etc.) and bases (eg, alkalis). A salt with a metal etc. is used, and a physiologically acceptable acid addition salt is particularly preferable. Examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, etc.) or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid). And salts with succinic acid, tartaric acid, citrate, malic acid, succinic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, etc.).
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、 前記 した本発明のタンパク質を含有する医薬と同様にして製造することができる。 このようにして得られる製剤は、 安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトまた はその他の哺乳動物 （例えば、 ラット、 マウス、 モルモット、 ゥサギ、 ヒッジ、 ブ夕、 ゥシ、 ゥマ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して投与することができる。 該化合物またはその塩の投与量は、 対象疾患、 投与対象、 投与ルートなどによ り差異はあるが、 例えば、 該化合物を経口投与する場合、 一般的に成人 （体重 6 0 k gとして） の非小細胞肺がん患者においては、 一日につき該化合物を約 0. 1〜： L 0 O m g、 好ましくは約 1 . 0〜5 O m g、 より好ましくは約 1 . 0〜2 O m g投与する。 非経口的に投与する場合は、 該化合物の 1回投与量は投与対象、 対象疾患などによっても異なるが、 例えば、 該化合物を注射剤の形で通常成人 ( 6 0 k gとして） の非小細胞肺がん患者に投与する場合、 一日につき該化合物 を約 0. 01〜3 Omg、 好ましくは約 0. 1〜2 Omg、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omgを静脈注射により投与するのが好都合である。 他の動物の場合も、 60 k g当たりに換算した量を投与することができる。 The medicament containing the compound obtained by the screening method or a salt thereof can be produced in the same manner as the aforementioned medicament containing the protein of the present invention. The preparations obtained in this way are safe and have low toxicity. Inu, monkeys, etc.). The dose of the compound or a salt thereof varies depending on the target disease, administration subject, administration route, etc. For example, when the compound is administered orally, it is generally not used in adults (with a body weight of 60 kg). In patients with small cell lung cancer, the compound is administered at about 0.1 to: L 0 O mg, preferably about 1.0 to 5 O mg, more preferably about 1.0 to 2 O mg per day. When administered parenterally, the single dose of the compound varies depending on the subject of administration, target disease, etc. For example, the compound is usually administered in the form of an injection for non-small cells of an adult (as 60 kg). When administered to patients with lung cancer, the compound per day Is conveniently administered by intravenous injection at about 0.01-3 Omg, preferably about 0.1-2 Omg, more preferably about 0.1-1 Omg. In the case of other animals, an amount converted per 60 kg can be administered.
(b) 本発明の DNAに対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合 物のスクリーニング方法  (b) Screening method for compounds that promote or inhibit the activity of the promoter for the DNA of the present invention
本発明は、 本発明の DNA発現不全非ヒ卜哺乳動物に、 試験化合物を投与し、 レポーター遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明の DNAに対するプ 口モーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方 法を提供する。  The present invention promotes or inhibits the activity of a promoter for the DNA of the present invention, which comprises administering a test compound to a non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention and detecting the expression of a reporter gene. A method for screening a compound or a salt thereof is provided.
上記スクリーニング方法において、 本発明の DNA発現不全非ヒト哺乳動物と しては、 前記した本発明の DNA発現不全非ヒト哺乳動物の中でも、 本発明の D N Aがレポーター遺伝子を導入することにより不活性化され、 該レポーター遺伝 子が本発明の D N Aに対するプロモーターの制御下で発現しうるものが用いられ る。  In the screening method described above, the DNA expression-deficient non-human mammal of the present invention is inactivated by introducing the reporter gene into the DNA of the present invention-deficient non-human mammal. In addition, a gene capable of expressing the reporter gene under the control of a promoter for the DNA of the present invention is used.
試験化合物としては、 前記と同様のものがあげられる。  Examples of the test compound are the same as described above.
レポ一夕一遺伝子としては、 前記と同様のものが用いられ、 iS—ガラクトシダ ーゼ遺伝子 ( 1 a c Z) 、 可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子またはルシフ ェラーゼ遺伝子などが好適である。  As the repo overnight gene, the same ones as described above are used, and iS-galactosidase gene (1acZ), soluble alkaline phosphatase gene, luciferase gene and the like are preferable.
本発明の DNAをレポ一夕一遺伝子で置換された本発明の D N A発現不全非ヒ ト哺乳動物では、 レポーター遺伝子が本発—明の DN Aに対するプロモーターの支 配下に存在するので、 レポ一夕一遺伝子がコ一ドする物質の発現をトレースする ことにより、 プロモーターの活性を検出することができる。  In the non-human mammal with deficient DNA expression of the present invention in which the DNA of the present invention is replaced with a repo overnight gene, the reporter gene exists under the control of the promoter for DNA of the present invention. By tracing the expression of a substance coded by one gene, the activity of the promoter can be detected.
例えば、 本発明のタンパク質をコードする D N A領域の一部を大腸菌由来の β —ガラクトシダーゼ遺伝子 U a c Z) で置換している場合、 本来、 本発明の夕 ンパク質の発現する組織で、 本発明のタンパク質の代わりに ]8—ガラクトシダ一 ゼが発現する。 従って、 例えば、 5—プロモー 4一クロロー 3—インドリル一 —ガラクトビラノシド （X— ga l) のような jS—ガラクトシダーゼの基質とな る試薬を用いて染色することにより、 簡便に本発明のタンパク質の動物生体内に おける発現状態を観察することができる。 具体的には、 本発明のタンパク質欠損 マウスまたはその組織切片をダルタルアルデヒドなどで固定し、 リン酸緩衝生理 食塩液 ( P B S ) で洗浄後、 X— g a 1を含む染色液で、 室温または 3 7 °C付近 で、 約 3 0分ないし 1時間反応させた後、 組織標本を I mM E D TA/ P B S 溶液で洗浄することによって、 j6—ガラクトシダーゼ反応を停止させ、 呈色を観 察すればよい。 また、 常法に従い、 1 a c Zをコードする mR NAを検出しても よい。 For example, when a part of the DNA region encoding the protein of the present invention is replaced with β-galactosidase gene U ac Z derived from Escherichia coli, the tissue of the present invention is originally expressed in the tissue expressing the protein of the present invention. ] 8-galactosidase is expressed instead of protein. Therefore, for example, by staining with a reagent that is a substrate for jS-galactosidase, such as 5-promo 4 chloro 3 indolyl 1 galactobilanoside (X-gal), It is possible to observe the expression state of the protein in the animal body. Specifically, the protein-deficient mouse of the present invention or a tissue section thereof is fixed with dartalaldehyde or the like, and phosphate buffered physiological After washing with saline solution (PBS), react with staining solution containing X-ga 1 at room temperature or around 37 ° C for about 30 minutes to 1 hour, and then tissue preparation is treated with I mM ED TA / PBS solution. By washing with, the j6-galactosidase reaction can be stopped and the coloration observed. In addition, mRNA encoding 1 ac Z may be detected according to a conventional method.
上記スクリーニング方法を用いて得られる化合物またはその塩は、 上記した試 験化合物から選ばれた化合物であり、 本発明の D N Aに対するプロモータ一活性 を促進または阻害する化合物である。  The compound obtained by using the screening method or a salt thereof is a compound selected from the test compounds described above, and is a compound that promotes or inhibits promoter activity against the DNA of the present invention.
該スクリーニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、 該化合物 の塩としては、 生理学的に許容される酸 （例、 無機酸、 有機酸） や塩基 （例、 ァ ルカリ金属） などとの塩が用いられ、 とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が 好ましい。 この様な塩としては、 例えば、 無機酸 （例えば、 塩酸、 リン酸、 臭化 水素酸、 硫酸） との塩、 あるいは有機酸 （例えば、 酢酸、 ギ酸、 プロピオン酸、 フマル酸、 マレイン酸、 コハク酸、 酒石酸、 クェン酸、 リンゴ酸、 蓚酸、 安息香 酸、 メタンスルホン酸、 ベンゼンスルホン酸) との塩などが用いられる。  The compound obtained by the screening method may form a salt. Examples of the salt of the compound include physiologically acceptable acids (eg, inorganic acids, organic acids) and bases (eg, alkali metals). And the like, and physiologically acceptable acid addition salts are particularly preferred. Examples of such salts include salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid), or organic acids (eg, acetic acid, formic acid, propionic acid, fumaric acid, maleic acid, succinic acid). Acid, tartaric acid, citrate, malic acid, oxalic acid, benzoic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid) and the like are used.
FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, E腦 4、 FLJ2053 K C0L9A2、 FAM13AK DLK 1は非 小細胞肺がんの無再発患者で発現が上昇しているので、 これらのタンパク質をコ ―ドする D N.Aに対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩は、 例 えば、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発予防剤などの医薬と して有用である。  FLJ 10307, 0SBPL9, EIF2C4, E 腦 4, FLJ2053 K C0L9A2, and FAM13AK DLK 1 are upregulated in non-small cell lung cancer non-relapsed patients, and therefore have promoter activity against DNA encoding these proteins. The accelerating compound or a salt thereof is useful, for example, as a medicine such as a preventive / therapeutic agent for non-small cell lung cancer and / or a preventive agent for recurrence.
また、 P腿、 P画、 腿2、 PML、 F13A1, AIFK SAAL S腿 2、 AQPL PAFAH1B3, KYNUは非小細胞肺がんの再発患者で発現が上昇しているので、 これら のタンパク質をコードする D N Aに対するプロモーター活性を阻害する化合物ま たはその塩は、 例えば、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発予 防剤などの医薬として有用である。  In addition, P thigh, P image, thigh 2, PML, F13A1, AIFK SAAL S thigh 2, AQPL PAFAH1B3, and KYNU are upregulated in patients with non-small cell lung cancer recurrence. A compound that inhibits promoter activity or a salt thereof is useful as a pharmaceutical agent such as a preventive / therapeutic agent for non-small cell lung cancer and / or a preventive agent for recurrence.
さらに、 上記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様に 用いることができる。  Furthermore, compounds derived from the compounds obtained by the above screening can be used as well.
該スクリーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する医薬は、 前記 した本発明のタンパク質またはその塩などを含有する医薬と同様にして製造する ことができる。 W このようにして得られる製剤は、 安全で低毒性であるので、 例えば、 ヒトまた はその他の哺乳動物 （例えば、 ラッ卜、 マウス、 モルモット、 ゥサギ、 ヒッジ、 プ夕、 ゥシ、 ゥマ、 ネコ、 ィヌ、 サルなど） に対して投与することができる。 該化合物またはその塩の投与量は、 対象疾患、 投与対象、 投与ルートなどによ り差異はあるが、 例えば、 FLJ10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FU2053A pharmaceutical containing the compound obtained by the screening method or a salt thereof can be produced in the same manner as the pharmaceutical containing the protein of the present invention or a salt thereof. W The preparations thus obtained are safe and low toxic. For example, humans or other mammals (eg rat, mouse, guinea pig, usagi, hidge, puyu, ushi, horse, Cats, dogs, monkeys, etc.). The dose of the compound or a salt thereof varies depending on the target disease, administration subject, administration route, etc.For example, FLJ10307, 0SBPL9, EIF2C4, ENTPD4, FU2053
COL9A2, FAM13A1または （および） DLK1をコードする DNAに対するプロモー夕 一活性を促進する化合物を経口投与する場合、 一般的に成人 （体重 60 k gとし て） の非小細胞肺がん患者においては、 一日につき該化合物を約 0. 1〜100 mg、 好ましくは約 1. 0〜50mg、 より好ましくは約 1. 0〜20mg投与 する。 非経口的に投与する場合は、 該化合物の 1回投与量は投与対象、 対象疾患 などによっても異なるが、 例えば、 本発明の DN Aに対するプロモーター活性を 促進する化合物を注射剤の形で通常成人 （60 kgとして） の非小細胞肺がん患 者に投与する場合、 一日につき該化合物を約 0. 01〜30mg、 好ましくは約 0. 1〜2 Omg、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omgを静脈注射により.投与す るのが好都合である。 他の動物の場合も、 6 O kg当たりに換算した量を投与す ることができる。 When administered orally with COL9A2, FAM13A1 or (and) a compound that promotes the promoteric activity against DNA encoding DLK1, generally in adults (with a body weight of 60 kg) non-small cell lung cancer patients per day The compound is administered at about 0.1-100 mg, preferably about 1.0-50 mg, more preferably about 1.0-20 mg. When administered parenterally, the single dose of the compound varies depending on the administration subject, target disease, etc. For example, the compound that promotes the promoter activity against DNA of the present invention is usually administered in the form of an injection. When administered to a non-small cell lung cancer patient (as 60 kg) about 0.01-30 mg, preferably about 0.1-2 Omg, more preferably about 0.1-1 Omg per day. Is conveniently administered by intravenous injection. In the case of other animals, the amount converted per 6 O kg can be administered.
一方、 例えば、 P腿、 P匪、 碰2、 PML、 F13AL AIFK SAAK S腿 2、 AQPL PAFAH1B3または （および） KYNUをコードする DNAに対するプロモータ一 活性を阻害する化合物を経口投与する場合、 一般的に成人 （体重 6 O kgとし て） の非小細胞肺がん患者においては、 一日につき該化合物を約 0. 1〜100 mg、 好ましくは約 1. 0〜50mg、 より好ましくは約 1. 0〜20mg投与 する。 非経口的に投与する場合は、 該化合物の 1回投与量は投与対象、 対象疾患 などによっても異なるが、 例えば、 本発明の DNAに対するプロモーター活性を 阻害する化合物を注射剤の形で通常成人 （6 O kgとして） の非小細胞肺がん患 者に投与する場合、 一日につき該化合物を約 0. 01〜30mg程度、 好ましく は約 0. 1~2 Omg程度、 より好ましくは約 0. 1〜1 Omg程度を静脈注射 により投与するのが好都合である。 他の動物の場合も、 6 O kg当たりに換算し た量を投与することができる。  On the other hand, for example, when orally administering a compound that inhibits promoter activity against DNA encoding P thigh, P 匪, 碰 2, PML, F13AL AIFK SAAK S thigh 2, AQPL PAFAH1B3 or (and) KYNU, In adults (as 6 O kg body weight) non-small cell lung cancer patients, the compound is about 0.1-100 mg, preferably about 1.0-50 mg, more preferably about 1.0-20 mg per day. Administer. When administered parenterally, the single dose of the compound varies depending on the administration subject, target disease, etc. For example, a compound that inhibits the promoter activity against the DNA of the present invention is usually administered in the form of an injection (in adults). 6 O kg) as a non-small cell lung cancer patient, the compound is about 0.01 to 30 mg per day, preferably about 0.1 to 2 Omg, more preferably about 0.1 to It is convenient to administer about 1 Omg by intravenous injection. In the case of other animals, an amount converted per 6 O kg can be administered.
このように、 本発明の DNA発現不全非ヒト哺乳動物は、 本発明の DNAに対 するプロモーターの活性を促進または阻害する化合物またはその塩をスクリー二 ングする上で極めて有用であり、 本発明の D N A発現不全に起因する各種疾患の 原因究明または予防 ·治療剤の開発に大きく貢献することができる。 Thus, the non-human mammal deficient in DNA expression of the present invention screens a compound or a salt thereof that promotes or inhibits the activity of the promoter for the DNA of the present invention. It is extremely useful in the study of the disease, and can greatly contribute to the investigation of the causes of various diseases caused by the deficiency of DNA expression of the present invention or the development of preventive / therapeutic agents.
また、 本発明のタンパク質のプロモーター領域を含有する D NAを使って、 そ の下流に種々のタンパクをコードする遺伝子を連結し、 これを動物の卵細胞に注 入していわゆるトランスジエニック動物 （遺伝子導入動物） を作成すれば、 特異 的にそのポリぺプチドを合成させ、 その生体での作用を検討することも可能とな る。 さらに上記プロモーター部分に適当なレポ一夕一遺伝子を結合させ、 これが 発現するような細胞株を樹立すれば、 本発明のポリペプチドそのものの体内での 産生能力を特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物の探索系とし て使用できる。 本明細書および図面において、 塩基やアミノ酸などを略号で表示する場合、 IUPAC-IUB Commiss ion on Biochemical Nomenclature による略号あるいは当該 分野における慣用略号に基づくものであり、 その例を下記する。 またアミノ酸に 関し光学異性体があり得る場合は、 特に明示しなければ L体を示すものとする。  In addition, using DNA containing the promoter region of the protein of the present invention, genes encoding various proteins are ligated downstream thereof, and this is injected into an egg cell of an animal to produce a so-called transgenic animal (gene If an introduced animal is prepared, it is possible to specifically synthesize the polypeptide and examine its action in the living body. Furthermore, if a suitable repo gene is bound to the above promoter portion and a cell line that expresses the gene is established, it has the effect of specifically promoting or suppressing the ability of the polypeptide of the present invention to be produced in the body. It can be used as a search system for low molecular weight compounds. In the present specification and drawings, bases, amino acids, and the like are indicated by abbreviations based on abbreviations by IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature or conventional abbreviations in the field, examples of which are described below. If amino acids may have optical isomers, the L form is indicated unless otherwise specified.
D NA ：デォキシリポ核酸  D NA: Deoxyliponucleic acid
c D NA ：相補的デォキシリポ核酸  c D NA: complementary deoxyliponucleic acid
A ：アデニン  A: Adenine
T ：チミン  T: Thymine
G ：グァニン  G: Guanine
C ：シ卜シン  C: Shishin
Y ：チミンまたはシトシン  Y: Thymine or cytosine
N ：チミン、 シトシン、 アデニンまたはグァニン  N: Thymine, cytosine, adenine or guanine
R ：アデニンまたはグァニン  R: adenine or guanine
M ：シトシンまたはアデニン  M: cytosine or adenine
W ：チミンまたはアデニン  W: thymine or adenine
S ：シ卜シンまたはグァニン  S: Shishin or guanine
R NA ：リポ核酸  R NA: Liponucleic acid
mR NA ：メッセンジャーリポ核酸  mR NA: Messenger Liponucleic Acid
d AT P ：デォキシアデノシン三リン酸 dTTP ：デォキシチミジン三リン酸 d GTP ：デォキシグアノシン三リン d CTP ：デォキシシチジン三リン酸d ATP: Deoxyadenosine triphosphate dTTP: Deoxythymidine triphosphate d GTP: Deoxyguanosine triphosphate d CTP: Deoxycytidine triphosphate
ATP ：アデノシン三リン酸ATP: Adenosine triphosphate
EDTA ：エチレンジァミン四酢酸EDTA: ethylenediamine tetraacetic acid
SDS ： ドデシル硫酸ナトリウムSDS: Sodium dodecyl sulfate
TFA ： トリフルォロ酢酸 TFA: trifluoroacetic acid
E I A ：ェンザィムィムノアッセィ E I A: Enzym Im Nosey
G 1 yまたは G ：グリシン G 1 y or G: Glycine
A 1 aまたは A ：ァラニン  A 1 a or A: Alanine
Va 1または V ：バリン  Va 1 or V: Valine
L e uまたは; L ：ロイシン  L e u or L: Leucine
I 1 eまたは I ：イソロイシン  I 1 e or I: isoleucine
S e rまたは S ：セリン  Ser or S: Serine
Th rまたは T ：スレオニン  Th r or T: Threonine
Cy sまたは C ：システィン  Cy s or C: Sistine
Me tまたは M ：メチォニン  Me t or M: Methionine
G 1 uまたは E ：グルタミン酸  G 1 u or E: glutamic acid
As pまたは D ：ァスパラギン酸  As p or D: Aspartic acid
Ly sまたは K . 11ジン  Ly s or K.11 gin
A r gまたは R ：アルギニン  A r g or R: Arginine
H i sまたは H ：ヒスチジン  H i s or H: Histidine
P h eまたは F ：フエ二ルァラニン  P h e or F: Fenilanalanin
Ty rまたは Y ：チロシン  Tyr or Y: Tyrosine
T r pまたは W ： トリブトファン  T r p or W: Tribute fan
P r oまたは P ：プロリン  P ro or P: proline
A s nまたは N ：ァスパラギン  A s n or N: Asparagine
G 1 nまたは Q ：グルタミン  G 1 n or Q: glutamine
p G 1 uまたは p E ：ピログルタミン酸 p G 1 u or p E: pyroglutamic acid
Me ：メチル基 E t ：ェチル基 Me: methyl group E t: Ethyl group
B u ：ブチル基  B u: Butyl group
Ph ：フエニル基  Ph: Phenyl group
TC ：チアゾリジン一 4 (R) —力ルポキサミド基  TC: thiazolidine 1 4 (R) — force lupoxamide group
B om ：ベンジルォキシメチル  Bom: Benzyloxymethyl
NMP : N—メチルピロリドン  NMP: N-methylpyrrolidone
PAM ：フエニルァセトアミドメチル  PAM: phenylacetamidomethyl
また、 本明細書中で繁用される置換基、 保護基および試薬を下記の記号で表記 する。  In addition, the substituents, protecting groups and reagents frequently used in the present specification are represented by the following symbols.
T o s ： p—トルエンスルフォニル T o s: p-toluenesulfonyl
HONB ： N—ヒドロキシ一 5—ノルボルネンー 2 3—ジカルボキ シィミド HONB: N-hydroxy-1 5-norbornene 2 3-dicarboximide
B z 1 B z 1
Z ベンジルォキシカルポニル Z Benzyloxycarbonyl
B r -Z 2—ブロモベンジルォキシカルポニル B r -Z 2-bromobenzyloxycarbonyl
C 1一 Z 2一クロルべンジルォキシカルボニル  C 1 1 Z 2 1 Chlorbendioxycarbonyl
B o c t一ブチルォキシカルポニル  B o c t butyloxycarbonyl
HOBt  HOBt
DCC TFA トリフルォロ酢酸  DCC TFA trifluoroacetic acid
Fmo c N— 9一フルォレニルメトキシカルボニル  Fmo c N—9-Fluorenylmethoxycarbonyl
DNP ジニトロフエニル  DNP dinitrophenyl
Bum 夕一シャリーブトキシメチル  Bum Yuichi Sharybutoxymethyl
T r t トリチル  T r t Trityl
B S A ゥシ血清アルブミン B S A Usu serum albumin
CHAP S 3— [ (3—コラミドプロピル） ジメチルアンモニォ]一 一プロパンスルホナ'  CHAP S 3— [(3-Coramidopropyl) dimethylammonio] monopropanesulfona
PMS F フエ二ルメチルスルホニルフルオリド  PMS F phenylmethylsulfonyl fluoride
E 64 (L— 3—trans—力ルポキォキシラン一 2—力ルポ二 ル） L—ロイシル—ァグマチン GDP ：グアノシン一 5， 一二リン酸 E 64 (L—3—trans—Strengthened lpooxysilane 1—Strength of rupoyl) L—Leucyl-Agmatine GDP: guanosine mono-1,5-diphosphate
Fu r a-2 AM ： 1- [6-アミノ- 2- (5 -カルボキシ- 2-ォキサゾリル）- 5 -べンゾ フラニ口キシ] -2- (2 -ァミノ- 5メチルフエノキシ) -エタン- N, N, N' , N' -四酢酸べン タァセトキシメチルエステル Fu r a-2 AM: 1- [6-Amino-2- (5-carboxy-2-oxazolyl) -5-benzo furanisoxy] -2- (2-amino-5-methylphenoxy) -ethane-N , N, N ', N' -tetraacetic acid methyl ester tetraacetate
HBS S ：ハンクス平衡塩液  HBS S: Hanks balanced salt solution
F 1 u 0 - 3 AM ：卜 [2 -ァミノ— 5— (2， 7 -ジクロ口 _6 -ヒ 口キシ- 3 -ォキシー9一 キサンテニル）フエノキシ ]-2- (2-ァミノ- 5 -メチルフエノキシ）ェタン- N, N, N' , N' -四酢酸ペン夕ァセトキシメチルエステル  F 1 u 0-3 AM: 卜 [2-Amino-5- (2,7-dichroic _6-Hydroxy-3-oxy-9-xanthenyl) phenoxy] -2- (2-amino-5-methylphenoxy) Ethane-N, N, N ', N'-tetraacetic acid penacetomethyl ester
HEPES ： 2 - [4 - (2—ヒドロキシェチル） 一 1—ピペラジニル] エタンスルホン酸 HEPES: 2-[4-(2-Hydroxyethyl) 1-piperazinyl] ethanesulfonic acid
Me B z 1 ： 4一メチルベンジル  Me B z 1: 4 monomethylbenzyl
NMP : N—メチルピロリドン 本願明細書の配列表の配列番号は、 以下の配列を示す。  NMP: N-methylpyrrolidone The SEQ ID NO in the sequence listing in the present specification indicates the following sequence.
〔配列番号： 1〕  [SEQ ID NO: 1]
FU10307のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of FU10307 is shown.
〔配列番号： 2〕  [SEQ ID NO: 2]
配列番号： 1で表されるアミノ酸配列を有する FU10307をコードする DNAの塩 基配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding FU10307 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1.
〔配列番号： 3〕  [SEQ ID NO: 3]
PHGDHのァミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of PHGDH is shown.
〔配列番号： 4〕  [SEQ ID NO: 4]
配列番号： 3で表されるアミノ酸配列を有する PHGDHをコードする DNAの塩基配 列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding PHGDH having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3.
〔配列番号： 5〕  [SEQ ID NO: 5]
PL0D2のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of PL0D2 is shown.
〔配列番号： 6〕  [SEQ ID NO: 6]
配列番号： 5で表されるアミノ酸配列を有する PL0D2をコードする DNAの塩基配 列を示す。 〔配列番号： 7〕 This shows the base sequence of DNA encoding PL0D2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5. [SEQ ID NO: 7]
TUBA2のァミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of TUBA2 is shown.
〔配列番号： 8〕  [SEQ ID NO: 8]
配列番号： 7で表されるアミノ酸配列を有する TUBA2をコードする DNAの塩基配 列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding TUBA2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7.
〔配列番号： 9〕  [SEQ ID NO: 9]
0SBPL9のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of 0SBPL9 is shown.
〔配列番号： 10〕  [SEQ ID NO: 10]
配列番号： 9で表されるアミノ酸配列を有する 0SBPL9をコードする DNAの塩基 配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding 0SBPL9 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9.
〔配列番号： 11〕  [SEQ ID NO: 11]
EIF2C4のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of EIF2C4 is shown.
〔配列番号： 12〕  [SEQ ID NO: 12]
配列番号： 11で表されるアミノ酸配列を有する EIF2C4をコードする DNAの塩 基配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding EIF2C4 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11.
〔配列番号： 13〕  [SEQ ID NO: 13]
PMLのアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of PML is shown.
〔配列番号： 14〕  [SEQ ID NO: 14]
配列番号： 13で表されるアミノ酸配列を有する PMLをコードする MAの塩基配 列を示す。  This shows the base sequence of MA encoding PML having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13.
〔配列番号： 15〕  [SEQ ID NO: 15]
ENTPD4のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of ENTPD4 is shown.
〔配列番号： 16〕  [SEQ ID NO: 16]
配列番号： 15で表されるアミノ酸配列を有する ENTPD4をコードする DNAの塩 基配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding ENTPD4 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15.
〔配列番号： 17〕  [SEQ ID NO: 17]
FLJ20531のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of FLJ20531 is shown.
〔配列番号： 18〕  [SEQ ID NO: 18]
配列番号： 17で表されるアミノ酸配列を有する FLJ20531をコードする DNAの 塩基配列を示す。 〔配列番号： 19〕 This shows the base sequence of DNA encoding FLJ20531 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17. [SEQ ID NO: 19]
F13A1のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of F13A1 is shown.
〔配列番号： 20〕  [SEQ ID NO: 20]
配列番号： 19で表されるアミノ酸配列を有する F13A1をコードする DNAの塩基 配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding F13A1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19.
〔配列番号： 21〕  [SEQ ID NO: 21]
C0L9A2のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of C0L9A2 is shown.
〔配列番号： 22〕  [SEQ ID NO: 22]
配列番号： 21で表されるアミノ酸配列を有する C0L9A2をコードする DNAの塩 基配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding C0L9A2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21.
〔配列番号： 23〕  [SEQ ID NO: 23]
FAM13A1のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of FAM13A1 is shown.
〔配列番号： 24〕  [SEQ ID NO: 24]
配列番号： 23で表されるアミノ酸配列を有する FAM13A1をコードする DNAの塩 基配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding FAM13A1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23.
〔配列番号： 25〕  [SEQ ID NO: 25]
AIF1のアミノ酸配列を示す。  Amino acid sequence of AIF1 is shown.
〔配列番号： 26〕  [SEQ ID NO: 26]
配列番号： 25で表されるアミノ酸配列を有する AIF1をコードする DNAの塩基 配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding AIF1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25.
〔配列番号： 27〕  [SEQ ID NO: 27]
' SAA1のアミノ酸配列を示す。  'Shows the amino acid sequence of SAA1.
〔配列番号： 28〕  [SEQ ID NO: 28]
配列番号： 27で表されるアミノ酸配列を有する SAA1をコードする DNAの塩基 配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding SAA1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27.
〔配列番号： 29〕  [SEQ ID NO: 29]
S 100A2のァミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of S100A2 is shown.
〔配列番号： 30〕  [SEQ ID NO: 30]
配列番号： 29で表されるアミノ酸配列を有する S100A2をコードする DNAの塩 基配列を示す。 〔配列番号： 3 1〕 This shows the base sequence of DNA encoding S100A2 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29. [SEQ ID NO: 3 1]
AQP1のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of AQP1 is shown.
〔配列番号： 3 2〕  [SEQ ID NO: 3 2]
配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列を有する AQP1をコードする DNAの塩基 配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding AQP1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31.
〔配列番号： 3 3〕  [SEQ ID NO: 3 3]
PAFAH1B3のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of PAFAH1B3 is shown.
〔配列番号： 3 4〕  [SEQ ID NO: 3 4]
配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列を有する PAFAH1B3をコードする DNAの 塩基配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding PAFAH1B3 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33.
〔配列番号： 3 5〕  [SEQ ID NO: 3 5]
KYNUのアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of KYNU is shown.
〔配列番号： 3 6〕  [SEQ ID NO: 3 6]
配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列を有する ΚΥΝϋをコードする DNAの塩基 配列を示す。  This shows the base sequence of DNA encoding 配 列 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35.
〔配列番号： 3 7〕  [SEQ ID NO: 3 7]
DLK1のアミノ酸配列を示す。  The amino acid sequence of DLK1 is shown.
〔配列番号： 3 8〕  [SEQ ID NO: 3 8]
配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列を有する DLK1をコードする DNAの塩基 配列を示す。 実施例  This shows the base sequence of DNA encoding DLK1 having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37. Example
以下において、 実施例により本発明をより具体的にするが、 この発明はこれら に限定されるものではない。  In the following, the present invention will be more specifically described with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.
実験例 1 Experimental example 1
予後が悪い肺がんの判別に用いる遺伝子を取得する目的で、 以下の実験を行つ た。 非小細胞肺がん患者由来の肺がん組織 56例 （表 1 ) を、 デジタルホモジナイ ザ一 （井内盛栄堂社） を用いて氷上で冷やしながら破砕し、 RNeasy Midi Total MA Ki t (QIAGEN社） を用いて total RNAを抽出した。 この total NAを材料とし、 ol igonucleot ide microarray (Homo sapience Genome U133A； Af fynie trix¾) を 用いて遺伝子発現解析を行った。 実験方法は、 Affymetrix社の実験手引き書 (Expression analysis technical manual) に従った。 得られた実験結果につい て、 GeneSpring (Si l iconGenet ics社） および SAS前臨床パッケージ Vers ion5. 0 (SASインスティチュートジャパン社） を用いて、 以下の解析に供した。 〔表 1〕 患者 ID No. 術後 3年間の再発/無再発 組織型 The following experiments were conducted with the aim of obtaining genes used to identify lung cancer with a poor prognosis. 56 cases of lung cancer derived from patients with non-small cell lung cancer (Table 1) were crushed while cooling on ice using a digital homogenizer I (Inoue Seieido Co., Ltd.) and using RNeasy Midi Total MA Kit (QIAGEN) Total RNA was extracted. Using this total NA as a material, ol igonucleot ide microarray (Homo sapience Genome U133A; Af fynie trix¾) The gene expression analysis was performed. The experimental method was in accordance with Affymetrix's Experiment Analysis Technical Manual. The obtained experimental results were subjected to the following analysis using GeneSpring (Silicon Genetics) and SAS preclinical package Vers ion 5.0 (SAS Institute Japan). [Table 1] Patient ID No. Relapse / No recurrence 3 years after surgery Histological type
1 再発 腺扁平上皮癌  1 Recurrent adenosquamous cell carcinoma
2 再発 腺癌  2 Recurrent adenocarcinoma
3 再発 扁平上皮癌  3 Recurrent squamous cell carcinoma
4 再発 腺癌  4 Recurrent adenocarcinoma
5 再発 腺癌  5 Recurrent adenocarcinoma
6 再発 腺癌  6 Recurrent adenocarcinoma
7 再発 大細胞癌  7 Recurrent large cell carcinoma
8 無再発 大細胞癌  8 Recurrence-free large cell carcinoma
9 挺苗 腺癌  9 Kanae Adenocarcinoma
10 腺癌  10 Adenocarcinoma
11 腺癌  11 Adenocarcinoma
12 再発 扁平上皮癌  12 Recurrent squamous cell carcinoma
13 再発 腺癌  13 Recurrent adenocarcinoma
14 無再発 扁平上皮癌  14 Recurrence of squamous cell carcinoma
15 再発 大細胞癌  15 recurrent large cell carcinoma
16 無再発 fe癌  16 Recurrenceless fe cancer
17 無再発 扁平上皮癌  17 Recurrence-free squamous cell carcinoma
18 再発 腺癌  18 recurrent adenocarcinoma
19 無再発 腺癌  19 Recurrence-free adenocarcinoma
20 再発 腺癌  20 recurrent adenocarcinoma
21 無再発 腺癌  21 Recurrence-free adenocarcinoma
22 無再発 腺癌  22 Recurrence-free adenocarcinoma
23 再発 ' 腺癌  23 Recurrence '' Adenocarcinoma
24 再発 腺癌  24 recurrent adenocarcinoma
25 再発 腺癌  25 recurrent adenocarcinoma
26 再発  26 Recurrence
27 再発 腺癌  27 Recurrent adenocarcinoma
28 再発 腺  28 Recurrence Gland
29 再発 腺癌  29 recurrent adenocarcinoma
30 無再発 fe癌  30 recurrenceless fe cancer
31 無再発 腺癌  31 Recurrence-free adenocarcinoma
32 無再発 腺癌  32 Recurrence-free adenocarcinoma
33 無再発 腺癌  33 Recurrence-free adenocarcinoma
34 無再発  34 No recurrence
35 無再発 腺癌 36 再発 腺癌 35 Recurrence-free adenocarcinoma 36 recurrent adenocarcinoma
37 再発  37 Recurrence
38 再発 腺癌  38 recurrent adenocarcinoma
39 再発 腺癌  39 Recurrent adenocarcinoma
40 再発 腺 fe  40 recurrent gland fe
41 再発 fe癌  41 recurrent fe cancer
42 再発 腺癌  42 recurrent adenocarcinoma
43 再発 腺癌  43 recurrent adenocarcinoma
44 ハ、、苗 腺癌  44 C, seedling adenocarcinoma
45 無再発 腺癌  45 Recurrence-free adenocarcinoma
46 無再発 腺癌  46 Recurrence-free adenocarcinoma
47 再発 腺癌  47 Recurrent adenocarcinoma
48 再発 腺  48 Recurrence Gland
49 再発 腺癌  49 Recurrent adenocarcinoma
50 再発 腺癌  50 recurrent adenocarcinoma
51 再発 腺癌  51 recurrent adenocarcinoma
52 再発 腺癌  52 recurrent adenocarcinoma
53 再発 腺癌  53 Recurrent adenocarcinoma
54 無再発 腺趱  54 No recurrence
55 無再発 腺癌  55 Recurrence-free adenocarcinoma
56 無再発 腺癌 実施例 1  56 Recurrence-free adenocarcinoma Example 1
表 1に示す患者の再発 ·無再発データを基に、 患者を各グループに分類した。 GeneSpring (Sil iconGenet ics社) を用いて解析したところ、 患者 ID NO. 19〜36 の 18例のうち、 各遺伝子の de tect ion cal lが 1例以上で Presentと判定された遺伝 子の数は、 17301個であった。 この遺伝子の中から、 GeneSpr ingの Predict Parameter Valueの機能を用いて、 患者の再発 ·無再発を区別する遺伝子として、 FLJ 10307 (配列番号： 2 ) 、 PHGDH (配列番号： 4 ) 、 PLOD 2 (配列番号： 6 ) 、 TUBA 2 (配列番号： 8 ) および 0SBPL 9 (配列番号： 1 0 ) を選択した。  Based on the patient recurrence / no recurrence data shown in Table 1, patients were classified into groups. When analyzed using GeneSpring (Sil iconGenetics), out of 18 cases with patient ID Nos. 19-36, the number of genes determined to be present when the detect ion cal of each gene was 1 or more It was 17301 pieces. Among these genes, GeneSpring's Predict Parameter Value function is used to discriminate between relapse and no recurrence of patients. FLJ 10307 (SEQ ID NO: 2), PHGDH (SEQ ID NO: 4), PLOD 2 ( SEQ ID NO: 6), TUBA 2 (SEQ ID NO: 8) and 0SBPL 9 (SEQ ID NO: 10) were selected.
PHGDH, PL0D2および TUBA2は、 再発群で発現値 （発現量の測定値） が高く、 FLJ 10307および 0SBPL9は、 無再発群で発現値が高かった。  PHGDH, PL0D2, and TUBA2 had high expression values (measured expression levels) in the relapse group, and FLJ 10307 and 0SBPL9 had high expression values in the non-relapse group.
これらの 5遺伝子を用いて、 患者 ID NO. 1〜 18の非小細胞肺がん患者 18例につ いて、 GeneChipデータを基に、 GeneSpr ingの Predict Parameter Valueの機能を 用いて再発 ·無再発を予測した。 再発と予測されたサンプル群と、 無再発と予測 されたサンプル群の再発までの期間について、 SAS前臨床パッケージ Vers ion5. 0 (SASィンスティチュートジャパン社) を用いて力プランマイヤー法ログランク 検定を行った結果、 有意な差 （p=0. 0356) が得られた。 実施例 2 Using these 5 genes, recurrence / no recurrence is predicted using the function of Predict Parameter Value of GeneSpring based on GeneChip data for 18 non-small cell lung cancer patients with patient ID NO. 1-18 did. SAS preclinical package Vers ion 5. 0 As a result of the force plan Meyer log rank test using (SAS Institute Japan), a significant difference (p = 0.0356) was obtained. Example 2
患者 ID NO. 19〜36 ( 18例） のうち、 各遺伝子の detect ion cal lが 1例以上で Presentと判定された 17301個の遺伝子発現データを用いて、 公知の Signal to Noise法および Random Permutat ion法 （Sc ience, 286卷、 53卜 537頁、 1999年） に より、 各遺伝子の確率値を算出した。 この確率値が 0. 05未満となる遺伝子は 1040 個であった。 この遺伝子の中から、 GeneSpringの Predict Parameter Valueの機 能を用いて、 再発 ·無再発を区別する遺伝子として、 FU 10307 (配列番号： 2 ) 、 PL0D2 (配列番号： 6 ) 、 0SBPL9 (配列番号： 1 0 ) 、 EIF2C4 (配列番号： 1 2 ) および PML (配列番号： 1 4 ) を選択した。  Among patient ID Nos. 19-36 (18 cases), the detection signal cal of each gene was detected in 17 cases or more using the known signal to noise method and Random Permutat. The probability value of each gene was calculated by the ion method (Science, 286 卷, 53 卜 537, 1999). There were 1040 genes with this probability value less than 0.05. Among these genes, FU 10307 (SEQ ID NO: 2), PL0D2 (SEQ ID NO: 6), 0SBPL9 (SEQ ID NO: 10), EIF2C4 (SEQ ID NO: 12) and PML (SEQ ID NO: 14) were selected.
患者 ID No. 19〜36 (18例） に関する各遺伝子の発現値の平均値と、 それぞれ の患者の発現値を比較した結果、 PL0D2および PMLは再発群で発現値が高く、 FLJ 10307, 0SBPL9および EIF2C4は無再発群で発現値が高かった。  As a result of comparing the average expression value of each gene with respect to patient ID No. 19 to 36 (18 cases) and the expression value of each patient, PL0D2 and PML have high expression values in the relapse group, and FLJ 10307, 0SBPL9 and EIF2C4 was highly expressed in the relapse-free group.
これらの遺伝子を用いて、 患者 ID NO. 1〜 18の非小細胞肺がん患者 18例につい て、 GeneChipデータを基に、 GeneSpringの Predict Parameter Valueの機能を用 いて再発 ·無再発を予測した。 再発と予測されたサンプル群と、 無再発と予測さ れたサンプル群の再発までの期間について、 SAS前臨床パッケージ Vers ion5. 0 (SASインスティチュートジャパン社） を用いて力プランマイヤー法ログランク 検定を行ったところ、 有意な差 （p=0. 0035) が得られた。  Using these genes, recurrence / no recurrence was predicted using the function of Predict Parameter Value of GeneSpring for 18 non-small cell lung cancer patients with patient ID Nos. 1 to 18 based on GeneChip data. Using the SAS preclinical package Vers ion 5.0 (SAS Institute Japan), the power plan Meyer method log rank is used for the sample group predicted to relapse and the period until the relapse of the sample group predicted non-recurrent. When the test was performed, a significant difference (p = 0.0035) was obtained.
例えば実施例 1および 2で得られた I>HGDH、 PL0D2、 TUBA2、 PML、 0SBPL9、 FLJ 10307、 EIF2C4の 7遺伝子を用いると、 患者 ID NO. 28および 36の場合、 PHGDH、 P漏、 TUBA2および PMLの発現値が高く、 かつ、 0SBPL9、 FU 10307および EIF2C4 の発現値が低いので、 再発群と予測でき、患者 ID NO. 19、 30、 34および 35の場合、 PHGDH、 P匿、 TUBA2および PMLの発現値が低く、 かつ 0SBPL9、 FLJ 10307および EIF2C4の発現値が高いので、 無再発群である、 と予測できる。 W 実施例 3 For example, using the 7 genes I> HGDH, PL0D2, TUBA2, PML, 0SBPL9, FLJ 10307, and EIF2C4 obtained in Examples 1 and 2, for patient ID NO. 28 and 36, PHGDH, P leakage, TUBA2 and Since the expression level of PML is high and the expression levels of 0SBPL9, FU 10307 and EIF2C4 are low, it can be predicted as a relapse group, and in the case of patient ID NO. Since the expression level of 0SBPL9, FLJ 10307, and EIF2C4 are high, it can be predicted that it is a non-relapse group. W Example 3
実験例 1に記載された患者 ID No. 1〜36 ( 36例） の GeneChipデータを GeneSpring (Si l iconGenet ics社） を用いて microarray間の発現値の補正を行つ た。 発現値の補正は detect ion cal lが Presentと判定された全遺伝子の中央値を 1 とする方法で行った。  GeneChip data of patient ID Nos. 1 to 36 (36 cases) described in Experimental Example 1 was used to correct expression values between microarrays using GeneSpring (Silicon Genetics). The expression value was corrected by a method in which the median value of all genes whose detection ion cal was determined to be Present was set to 1.
補正されたデータにおいて、 「再発群で発現値力 ^以上の患者力 例以上であり、 かつ、 無再発群では全患者における発現値が 2以下である」 条件を満たす遺伝子 を、 再発群特異的発現遺伝子群とし、 「無再発群で発現値が 3以上の患者が 3例以 上であり、 かつ、 再発群では全患者における発現値が 2以下である」 条件を満た す遺伝子を無再発群特異的発現遺伝子群として選択した。 このように選択された 再発群および無再発群特異的発現遺伝子に対して、 leave- one- out cross- val idat ion を用いた weighted vot ing cross-val idat ion algori thm (Science, 286巻， 531- 537頁， 1999年） を行うことで、 患者の再発 ·無再発を区別する遺伝 子として ENTPD4 (配列番号： 1 6 )、 FLJ20531 (配列番号： 1 8 )、 F13A1 (配列 番号： 2 0 ) 、 COL9A2 (配列番号： 2 2 ) および FAM13A1 (配列番号： 2 4 ) を 選択した。  In the corrected data, a gene that satisfies the condition that “the expression value in the relapse group is greater than or equal to the patient power of ^ or more and the expression value in all patients is 2 or less in the non-relapse group” is specified in the relapse group. Genes that satisfy the condition: `` There are 3 or more patients with an expression level of 3 or more in the relapse-free group and 2 or less in all patients in the relapse group '' Selected as a specific expression gene group. Weighted voting cross-validat ion algori thm using leave-one-out cross-validat ion (Science, 286, 531) -537, 1999) ENTPD4 (SEQ ID NO: 16), FLJ20531 (SEQ ID NO: 18), F13A1 (SEQ ID NO: 20) COL9A2 (SEQ ID NO: 2 2) and FAM13A1 (SEQ ID NO: 2 4) were selected.
F13A1は再発群で発現値が高く、 ENTPD4、 FLJ2053L C0L9A2および FAM13A1は無 再発群で発現値が高かった。  F13A1 was highly expressed in the relapse group, and ENTPD4, FLJ2053L C0L9A2 and FAM13A1 were high in the relapse group.
これら 5遺伝子を用いて、 遺伝子選択に用いていない患者 ID No. 37〜56の非小 細胞肺がん患者 20例について、 GeneChipデータを基に、 weighted vot ing法を用 いて再発 ·無再発を予測した。 結果を表 2に示す。  Using these 5 genes, recurrence / no recurrence was predicted using the weighted voting method for 20 non-small cell lung cancer patients with ID numbers 37 to 56 who were not used for gene selection, based on GeneChip data . The results are shown in Table 2.
20例中 16例において、 予測結果が実際の予後と一致しており、 未知のサンプル に対して 80%の精度で予測できた。  In 16 of the 20 cases, the prediction results were consistent with the actual prognosis, and the prediction was possible with an accuracy of 80% for unknown samples.
〔表 2〕  (Table 2)
患者 ID No. 術後 3年間の再発/無再発 予測結果  Patient ID No. Recurrence / No recurrence 3 years after surgery
37 再発 再発  37 Recurrence Recurrence
38 再発 再発  38 Recurrence Recurrence
39 再発 再発  39 Recurrence Recurrence
40 再発 再発 41 再発 再発 40 Recurrence Recurrence 41 Recurrence Recurrence
42 再発 再発  42 Recurrence Recurrence
43 再発 再発  43 Recurrence Recurrence
44  44
45 S 挺 S  45 S 挺 S
46 無再発 再発  46 No recurrence Recurrence
47 再発 再発  47 Recurrence Recurrence
48 再発 再発  48 Recurrence Recurrence
49 再発 再発  49 Recurrence Recurrence
50 再発 再発  50 Recurrence Recurrence
51 再発 再発  51 Recurrence Recurrence
52 再発 再発  52 Recurrence Recurrence
53 再発 再発  53 Recurrence Recurrence
54 無再発 再発  54 No recurrence Recurrence
55 無再発 再発  55 No recurrence Recurrence
56 無再発 再発 実施例 4  56 No recurrence Recurrence Example 4
表 1の患者 ID No. 1 36 (36例） のうち、 肺がんの組織型が腺癌である 28例に ついて、 術後 3年間の再発 ·無再発データを基に、 患者を各グループに分類した。 実施例 3と同様の方法で再発群特異的発現遺伝子群および無再発群特異的発現 遺伝子群を選択した。 このように選択された再発群および無再発群特異的発現遺 伝子に対して、 leave-one-out cross-val idation法で weighted voting法を行う ことで、 患者の再発 ·無再発を区別する遺伝子として AIF1 (配列番号： 26)、 SAA1 (配列番号： 28) 、 FAM13A1 (配列番号： 24) 、 S100A2 (配列番号： 3 0) および COL9A2 (配列番号： 22) を選択した。  Of patient ID No. 1 36 in Table 1 (36 cases), 28 patients with lung cancer histological type adenocarcinoma were classified into groups based on recurrence / no recurrence data for 3 years after surgery. did. In the same manner as in Example 3, a recurrent group-specific expression gene group and a relapse-free group-specific expression gene group were selected. By using weighted voting method with leave-one-out cross-validation method for recurrent group and non-recurrent group-specific expression genes selected in this way, the patient's recurrence / no recurrence is distinguished AIF1 (SEQ ID NO: 26), SAA1 (SEQ ID NO: 28), FAM13A1 (SEQ ID NO: 24), S100A2 (SEQ ID NO: 30) and COL9A2 (SEQ ID NO: 22) were selected as genes.
AIF1 SAAlおよび S100A1は、 再発群で発現値が高く、 FAM13A1および C0L9A2は 無再発群で発現値が高かつた。  AIF1 SAAl and S100A1 were highly expressed in the relapse group, and FAM13A1 and C0L9A2 were high in the relapse-free group.
これら 5遺伝子を用いて、 患者 ID No. 37 56の非小細胞肺がん患者 20例につい て、 GeneChipデータを基に、 weighted voting法を用いて再発 ·無再発を予測し た。 結果を表 3に示す。 Using these 5 genes, recurrence / no recurrence was predicted using the weighted voting method for 20 non-small cell lung cancer patients with patient ID No. 37 56 based on GeneChip data. It was. The results are shown in Table 3.
20例中 15例において予測結果が実際の予後と一致しており、 未知のサンプルに 対して 75 %の精度で予測できた。  In 15 of the 20 cases, the prediction results were consistent with the actual prognosis, and it was possible to predict the unknown sample with 75% accuracy.
〔表 3〕 (Table 3)
Figure imgf000146_0001
実施例 5
Figure imgf000146_0001
Example 5
表 1の患者 ID No. 1 46 (46例） について、 術後 3年間の再発 .無再発データ を基に、 患者を各グループに分類した。  For patient ID No. 1 46 (46 cases) in Table 1, patients were classified into groups based on recurrence 3 years after surgery and no recurrence data.
実施例 3と同様の方法で、 再発群特異的発現遺伝子群および無再発群特異的発 現遺伝子群を選択した。 このように選択された再発群および無再発群特異的発現 遺伝子に対して、 leave-one-out cross-validation法で weighted voting法を行 うことで、 患者の再発 ·無再発を区別する遺伝子として、 FAM13A1 (配列番号： 24)、 FLJ20531 (配列番号： 18) 、 ENTPD4 (配列番号： 16) 、 AQP1 (配列 番号： 32) および C0L9A2 (配列番号： 22) を選択した。 In the same manner as in Example 3, a recurrent group-specific expressed gene group and a non-recurrent group-specific expressed gene group were selected. Recurrent group and relapse-free group-specific expression selected in this way By using the weighted voting method by leave-one-out cross-validation method for genes, FAM13A1 (SEQ ID NO: 24), FLJ20531 (SEQ ID NO: 18) ), ENTPD4 (SEQ ID NO: 16), AQP1 (SEQ ID NO: 32) and C0L9A2 (SEQ ID NO: 22).
AQP1は再発群で発現値が高く、 FAM13A1、 FLJ2053L ENTPD4および C0L9A2は無 再発群で発現値が高い遺伝子であつた。  AQP1 was highly expressed in the relapse group, and FAM13A1, FLJ2053L ENTPD4 and C0L9A2 were genes with high expression in the non-relapse group.
これら 5遺伝子を用いて、 患者 ID No. 47〜56の非小細胞肺がん患者 10例につい て、 GeneChipデ一夕を基に、 weighted voting法を用いて再発 ·無再発を予測し た。 結果を表 4に示す。  Using these 5 genes, 10 patients with non-small cell lung cancer with patient ID Nos. 47-56 were predicted to relapse / no recurrence using the weighted voting method based on GeneChip. The results are shown in Table 4.
10例中 7例において予測結果が実際の予後と一致しており、 未知のサンプルに 対して 70%の精度で予測できた。  In 7 of the 10 cases, the prediction results were consistent with the actual prognosis, and the prediction was 70% accurate for unknown samples.
ほ 4〕  E 4)
Figure imgf000147_0001
実施例 6
Figure imgf000147_0001
Example 6
表 1の患者 ID No. 1〜46 (46例） のうち、 肺がんの組織型が腺癌である 38例に ついて、 術後 3年間の再発 ·無再発データを基に、 患者を各グループに分類した。 実施例 3と同様の方法で、 再発群特異的発現遺伝子群および無再発群特異的発 現遺伝子群を選択した。 このように選択された遺伝子に対して、 leave- one-out cross-validation法で weighted voting法を行うことで、 患者の再発 ·無再発を 区別する遺伝子として、 FAM13A1 (配列番号： 24) 、 AIF1 (配列番号： 26) 、 PAFAH1B3 (配列番号： 34) 、 C0L9A2 (配列番号： 22) 、 KYNU (配列番号： 3 6) 、 DLK1 (配列番号： 38) および SM1 (配列番号 : 28) を選択した。 Among the patient ID Nos. 1 to 46 (46 cases) in Table 1, 38 patients with lung cancer histological type are adenocarcinoma. Classified. In the same manner as in Example 3, a recurrent group-specific expressed gene group and a non-recurrent group-specific expressed gene group were selected. By using the weighted voting method with leave-one-out cross-validation method for the genes selected in this way, the patient's recurrence FAM13A1 (SEQ ID NO: 24), AIF1 (SEQ ID NO: 26), PAFAH1B3 (SEQ ID NO: 34), C0L9A2 (SEQ ID NO: 22), KYNU (SEQ ID NO: 36), DLK1 (SEQ ID NO: 36) : 38) and SM1 (SEQ ID NO: 28) were selected.
AIF1、 PAFAH1B3, KY丽および SMIは再発群で発現値が高く、 FAM13AL COL9A2 および DLK1は無再発群で発現値が高かった。  AIF1, PAFAH1B3, KY 丽 and SMI were high in the relapse group, and FAM13AL COL9A2 and DLK1 were high in the relapse group.
これら 7遺伝子を用いて、 患者 ID No. 47〜56の非小細胞肺がん患者 10例につい て、 GeneChipデ一夕を基に、 weighted voting法を用いて再発 ·無再発を予測し た。 結果を表 5に示す。  Using these 7 genes, 10 patients with non-small cell lung cancer with patient ID Nos. 47 to 56 were predicted to relapse / no recurrence using the weighted voting method based on GeneChip. The results are shown in Table 5.
10例中 9例において予測結果が実際の予後と一致しており、 未知のサンプルに 対して 90%の精度で予測できた。  In 9 of the 10 cases, the prediction results were consistent with the actual prognosis, and the prediction was possible with an accuracy of 90% for unknown samples.
〔表 5〕  (Table 5)
Figure imgf000148_0001
Figure imgf000148_0001
産業上の利用可能性 Industrial applicability
配列番号： 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 1 3、 配列番号： 1 9、 配列番号： 25、 配列番号： 27、 配列番号： 29、 配列番号： 31、 配列 番号： 33または配列番号： 35で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質は、 非小細胞肺がんの再発患者にお いて発現が上昇しているので、 該タンパク質に対する抗体、 該タンパク質または その部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチド、 該タンパク質の翻訳铸型とな る mRNAの塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列 を含有するポリヌクレオチドなどは、 非小細胞肺がんの悪性度の診断薬、 非小細 胞肺がんの悪性度診断用のマイクロアレイなどとして利用することができる。 ま た、 配列番号 3、 配列番号： 5、 配列番号： 7、 配列番号： 13、 配列番号： 19、 配列番号： 25、 配列番号： 27、 配列番号： 29、 配列番号： 31、 配 列番号： 33または配列番号： 35で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の活性、 機能または発現を阻害す ることにより、 非小細胞肺がんの再発を抑制することができるので、 該タンパク 質に対する抗体、 該タンパク質の活性もしくは機能を阻害する化合物またはその 塩、 該タンパク質の発現を阻害する化合物またはその塩、 該タンパク質をコード するポリヌクレオチドに対する s i RNAおよび s hRNA、 該タンパク質の翻 訳鍀型となる mRNAの塩基配列の相補鎖全長またはその一部の塩基配列を含有 するポリヌクレオチド、 該タンパク質の翻訳铸型となる mRNAの塩基配列全長 またはその一部の塩基配列を含有するポリヌクレオチドに対する s i RNAおよ び s hRNAなどは、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止 剤などとして利用することができる。 さらに、 該タンパク質、 該タンパク質をコ —ドするポリヌクレオチドなどは、 該夕ンパク質の活性もしくは機能を阻害する 化合物またはその塩、 該タンパク質の発現を阻害する化合物またはその塩、 非小 細胞肺がんの予防 '治療剤および （または） 再発防止剤などのスクリーニングに 有用である。 SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 1 9, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 33 or SEQ ID NO: 35 has increased expression in patients with recurrent non-small cell lung cancer. The protein or The polynucleotide that codes the partial peptide, the full length of the base sequence of the mRNA that is the translation variant of the protein, the full length of its complementary sequence, or a polynucleotide that contains a partial base sequence, etc. It can be used as a diagnostic agent for malignancy of cell lung cancer and a microarray for malignancy diagnosis of non-small cell lung cancer. Also, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: : Suppressing the recurrence of non-small cell lung cancer by inhibiting the activity, function, or expression of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 or SEQ ID NO: 35 An antibody against the protein, a compound or salt thereof that inhibits the activity or function of the protein, a compound or salt thereof that inhibits the expression of the protein, siRNA and sRNA against the polynucleotide encoding the protein, A polynucleotide comprising the full-length complementary strand of the base sequence of mRNA or a part of the base sequence thereof, which is a translation type of the protein, and the protein SiRNA and sRNA for polynucleotides containing the full-length or partial nucleotide sequence of mRNA, which is the translation type of RNA, are prophylactic / therapeutic and / or anti-recurrent agents for non-small cell lung cancer. It can be used as such. Further, the protein, a polynucleotide encoding the protein, and the like include a compound or a salt thereof that inhibits the activity or function of the protein, a compound or a salt thereof that inhibits the expression of the protein, a non-small cell lung cancer Useful for screening for prophylactic 'therapeutic and / or anti-recurrence agents.
他方、 配列番号： 1、 配列番号： 9、 配列番号： 11、 配列番号： 15、 配列 番号： 17、 配列番号： 21、 配列番号： 23または配列番号： 37で表される ァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質 は、 非小細胞肺がんの無再発患者において発現が上昇しているので、 該タンパク 質に対する抗体、 該タンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチド、 該タンパク質の翻訳鐯型となる mRNAの 塩基配列全長、 その相補配列全長、 またはそれらの一部の塩基配列を含有するポ リヌクレオチドなどは、 非小細胞肺がんの悪性度の診断薬、 非小細胞肺がんの悪 性度診断用のマイクロアレイなどとして利用することができる。 また、 配列番 号： 1、 配列番号： 9、 配列番号： 1 1、 配列番号： 1 5、 配列番号： 1 7、 配 列番号： 2 1、 配列番号： 2 3または配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の活性、 機能ま たは発現を促進することにより非小細胞肺がんの再発を抑制することができるの で、 該タンパク質、 該タンパク質の活性もしくは機能を促進する化合物またはそ の塩、 該タンパク質の発現を促進する化合物またはその塩、 該タンパク質をコー ドするポリヌクレオチドなどは、 非小細胞肺がんの予防，治療剤および （また は） 再発防止剤などとして利用することができる。 さらに、 該タンパク質、 該夕 ンパク質をコードするポリヌクレオチドなどは、 該タンパク質の活性もしくは機 能を促進する化合物またはその塩、 該タンパク質の発現を促進する化合物または その塩、 非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤などのスク リ一ニングに有用である。 On the other hand, the same amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23 or SEQ ID NO: 37 Alternatively, since a protein containing substantially the same amino acid sequence is upregulated in a non-relapsed patient with non-small cell lung cancer, an antibody against the protein, a polynucleotide encoding the protein or a partial peptide thereof is used. A polynucleotide containing the mRNA of the protein to be translated Non-small cell lung cancer malignancy diagnostic agent, non-small cell lung cancer malignancy diagnostic microarray, etc. Can be used as Also, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 1 1, SEQ ID NO: 1 5, SEQ ID NO: 1 7, SEQ ID NO: 2 1, SEQ ID NO: 2 3 or SEQ ID NO: 3 7 The recurrence of non-small cell lung cancer can be suppressed by promoting the activity, function, or expression of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented. A compound or a salt thereof that promotes the activity or function of the protein, a compound or a salt thereof that promotes the expression of the protein, a polynucleotide that encodes the protein, and the like. Can be used as a recurrence prevention agent. Furthermore, the polynucleotide encoding the protein, the protein, etc. includes a compound or a salt thereof that promotes the activity or function of the protein, a compound or a salt thereof that promotes the expression of the protein, prevention of non-small cell lung cancer · Useful for screening therapeutic agents and / or anti-recurrence agents.

Claims

請求の範囲 The scope of the claims
1 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に 対する抗体、 （ii) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質もしくはその部分べプチドまたはそ の塩に対する抗体、 （iii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドま たはその塩に対する抗体、 （iv) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一も しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ぺプ チドまたはその塩に対する抗体、 （V) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部 分べプチドまたはその塩に対する抗体、 （vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質もしく はその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （vii) 配列番号： 1 3で表さ れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパ ク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （viii) 配列番号： 1 5で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （ix) 配 列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 (x) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対す る抗体、 （xi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその 塩に対する抗体、 （xii) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしぐ は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチド またはその塩に対する抗体、 （xiii) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部 分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （xiv) 配列番号： 2 7で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質もし くはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （XV) 配列番号： 2 9で表 されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタン パク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （xvi) 配列番 号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、1. (i) an antibody against a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, or a salt thereof; (ii) represented by SEQ ID NO: 3. An antibody against a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence, (iii) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Iv) an antibody against a protein containing the same amino acid sequence or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (iv) containing an amino acid sequence that is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 An antibody against a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof, (V) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 An antibody against a protein containing an amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof; (vi) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 1 Or an antibody against the partial peptide or a salt thereof, (vii) against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 13 or a partial peptide thereof or a salt thereof An antibody, (viii) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (ix) SEQ ID NO: 1 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 7 or a partial peptide thereof. Is an antibody against a salt thereof, (x) an antibody against a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 or a partial peptide thereof or a salt thereof, xi) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 2 1 or a partial peptide thereof or a salt thereof, (xii) an amino acid represented by SEQ ID NO: 23 An antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (xiii) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 An antibody against a protein containing an amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (xiv) an amino acid represented by SEQ ID NO: 27 An antibody against a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence, or (XV) the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 or An antibody against a protein containing a substantially identical amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof; (xvi) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 1 An antibody against the protein or partial peptide thereof or a salt thereof,
(xvii) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対 する抗体、 （xviii) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまた はその塩に対する抗体および （xix) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしぐはその部 分べプチドまたはその塩に対する抗体から選ばれる少なくとも一種を含有するこ とを特徴とする非小細胞肺がん悪性度の診断薬。 (xvii) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 or a partial peptide thereof or a salt thereof, (xviii) represented by SEQ ID NO: 35 An antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, and (xix) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 A diagnostic agent for malignancy of non-small cell lung cancer, characterized by containing at least one protein selected from an antibody against a protein containing the same amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof.
2 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 3で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質また はその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (iii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその 部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (V) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはそ の部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (vii) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （viii) 配列番号： 1 5で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （ix) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) 配列番号： 1 9で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （xi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xii) 配列番号： 2 3で表される アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオ チド、 （xiii) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ぺプチドをコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) 配列番号： 2 7で表さ れるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパ ク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （XV) 配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xvi) 配列番号： 3 1で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （xvii) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコ ードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xviii) 配列番号： 3 5で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドおよび （xix) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同 一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べ プチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる 少なくとも一種を含有することを特徴とする非小細胞肺がん悪性度の診断薬。2. (i) a polynucleotide comprising a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof; (ii) SEQ ID NO: (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein or a partial peptide containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 3; and (iii) represented by SEQ ID NO: 5. (Iv) a polynucleotide containing a polynucleotide that encodes a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof; (iv) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 Encodes a protein or partial peptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, or a partial peptide thereof. (Vii) a polynucleotide containing a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or a polynucleotide encoding the partial peptide, (vii) ) SEQ ID NO: 1 is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 3 (Viii) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15; a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the amino acid sequence or a partial peptide thereof; (I) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 Or a polynucleotide containing a polynucleotide encoding the partial peptide, (X) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 or A polynucleotide comprising a polynucleotide encoding a partial peptide, (xi) SEQ ID NO: 21. A polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 1 or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof, (xii) the amino acid represented by SEQ ID NO: 23 A polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the sequence or a partial peptide thereof, (xiii) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 A polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same amino acid sequence or a partial peptide thereof, (xiv) an amino acid identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 Polypeptide encoding a protein containing an acid sequence or a partial peptide thereof A polynucleotide containing a nucleotide, (XV) a polynucleotide containing a polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 or a partial peptide thereof, (Xvi) a polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof, (xvii) SEQ ID NO: : A polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 3 3 or a polynucleotide encoding the partial peptide thereof; (xviii) SEQ ID NO: 35 represented by the sequence number Containing the same or substantially the same amino acid sequence as Protein or polynucleotide, and (xix) SEQ number that contains a polynucleotide that encodes the partial peptide: the amino acid sequence represented by 7 same A diagnostic agent for malignancy of non-small cell lung cancer, comprising at least one selected from a polynucleotide containing a protein containing one or substantially the same amino acid sequence or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof .
3 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に 対する抗体、 （ii) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質もしくはその部分べプチドまたはそ の塩に対する抗体、 （iii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドま たはその塩に対する抗体、 （iv) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一も しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ぺプ チドまたはその塩に対する抗体、 . （V) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部 分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （vi) 配列番号： 1 1で表されるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしく はその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （vii) 配列番号： 1 3で表さ れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパ ク質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体、 （viii) 配列番号： 1 5で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （ix) 配 列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体、 (X) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対す る抗体、 （xi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその 塩に対する抗体、 （xii) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしく は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチド またはその塩に対する抗体、 （xiii) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部 分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （xiv) 配列番号： 2 7で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もし くはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （XV) 配列番号： 2 9で表 されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン パク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （xvi) 配列番 号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、3. (i) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (ii) represented by SEQ ID NO: 3. (Iii) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof; (iii) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Iv) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 Or an antibody against a partial peptide or a salt thereof, (V) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 (Vi) an antibody to a protein containing the amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (vi) a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 Or an antibody against the partial peptide or a salt thereof, (vii) against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 13 or a partial peptide or a salt thereof An antibody, (viii) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 or a partial peptide thereof or a salt thereof, (ix) SEQ ID NO: 1 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 7 or a partial peptide thereof Or an antibody against a salt thereof, (X) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 or a partial peptide thereof or a salt thereof, xi) an antibody against a protein containing the same amino acid sequence or substantially the same amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 1, or a partial peptide thereof, or a salt thereof; (xii) represented by SEQ ID NO: 23 An antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (xiii) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 A protein containing the amino acid sequence of or part thereof (Xiv) an antibody against an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 or an antibody against a partial peptide or a salt thereof (XV) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29, a partial peptide thereof, or a salt thereof, (xvi) SEQ ID NO: 3 1 An antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by
(xvii) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対 する抗体、 （xviii) 配列番号： 3 5で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまた はその塩に対する抗体および （xix) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部 分べプチドまたはその塩に対する抗体から選ばれる少なくとも一種を用いること を特徴とする非小細胞肺がん悪性度の診断方法。 (xvii) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 or a partial peptide thereof or a salt thereof, (xviii) represented by SEQ ID NO: 35 An antibody against a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence, and (xix) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 A method for diagnosing malignancy of non-small cell lung cancer, comprising using at least one selected from a protein containing the same amino acid sequence or an antibody against a partial peptide or a salt thereof.
4 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 (ii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （iii) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （iv) 配列番 号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （V) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vi) 配列番号： 2 5 で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する タンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vii) 配列番号： 2 7で 表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕 ンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （viii) 配列番号： 2 9で表 されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン パク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （ix) 配列番号： 3 1で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク 質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （X) 配列番号： 3 3で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質も しくはその部分ペプチドまたはその塩および （xi) 配列番号： 3 5で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質も しくはその部分べプチドまたはその塩から選ばれる少なくとも一種の発現量が高 いことを指標とする請求項 3記載の診断方法。 4. (i) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof, or a salt thereof; (ii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Iii) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7; (Iv) a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 V) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 19 or a portion thereof A peptide or a salt thereof, (vi) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 5 or a partial peptide thereof or a salt thereof, (vii) SEQ ID NO: 2 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by 7 or a partial peptide thereof, or a salt thereof; (viii) identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 or Tan containing substantially the same amino acid sequence A protein or a partial peptide thereof or a salt thereof; (ix) a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 (X) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 or its partial peptide or salt thereof, and (xi) SEQ ID NO: 35 4. The expression level is at least one protein selected from a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence shown, or a partial peptide or salt thereof. The diagnostic method described.
5 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 5. (i) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, or a salt thereof,
(ii) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （iii) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸 配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （iv) 配列 番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （V) 配列番 号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vi) 配列番号： 2 1で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有す るタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩および （viii) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩から選ばれる少なくとも 一種の発現量が低いことを指標とする請求項 3記載の診断方法。 (ii) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, or a partial peptide thereof, or a salt thereof; (iii) an amino acid represented by SEQ ID NO: 11 A protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the sequence, or (iv) containing an amino acid sequence that is the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 A protein or a partial peptide thereof or a salt thereof, (V) a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17; (vi) a sequence No .: 2 A protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1 or its A partial peptide or a salt thereof, (vii) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23, or a partial peptide thereof, or a salt thereof, and (viii) SEQ ID NO: The expression level is at least one selected from a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by 37, or a partial peptide thereof, or a salt thereof. Diagnosis method.
6 . 非小細胞肺がんの再発の可能性が高い、 または （および） 予後が良好では ないと判定する請求項 4または請求項 5記載の診断方法。  6. The diagnostic method according to claim 4 or claim 5, wherein the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high, or (and) the prognosis is not good.
7 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 (ii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （iii) 配列番号： 7で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （iv) 配列番 号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （V) 配列番号： 1 9で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vi) 配列番号： 2 5 で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する タンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vii) 配列番号： 2 7で 表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕 ンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （viii) 配列番号： 2 9で表 されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタン パク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （ix) 配列番号： 3 1で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク 質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （X) 配列番号： 3 3で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質も しくはその部分ペプチドまたはその塩おょぴ （xi) 配列番号： 3 5で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質も しくはその部分べプチドまたはその塩から選ばれる少なくとも一種の発現量が低 いことを指標とする請求項 3記載の診断方法。 7. (i) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (ii) an amino acid represented by SEQ ID NO: 5. Amino acids identical or substantially identical to the sequence A protein containing a nonacid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (iii) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, or a partial peptide thereof (Iv) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (V) represented by SEQ ID NO: 19 (Vi) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25, a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence A protein containing the amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (vii) the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 7 Or a protein containing a substantially identical amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (viii) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 A protein or a partial peptide thereof or a salt thereof, (ix) a protein or a partial peptide thereof containing the amino acid sequence identical or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 Salt, (X) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33, or a partial peptide thereof or a salt peptide (xi) A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35, or a partial peptide thereof or a salt thereof. Diagnostic method according to claim 3, wherein the type of expression level as an index of low Ikoto even without.
8 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 (ii) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （iii) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸 配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （iv) 配列 番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （V) 配列番 号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vi) 配列番号： 2 1で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有す るタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩および （viii) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩から選ばれる少なくとも 一種の発現量が高いことを指標とする請求項 3記載の診断方法。 8. (i) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (ii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9. (Iii) an amino acid sequence that is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 1 or a salt thereof, or a salt thereof, containing the same or substantially the same amino acid sequence as (Iv) a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 ) SEQ ID NO: 17 Protein or part thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 7 Minute peptide or a salt thereof, (vi) SEQ ID NO: 21 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 1 or a partial peptide thereof or a salt thereof, (vii) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 A protein containing the same amino acid sequence or a partial peptide thereof, or a salt thereof, and (viii) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 4. The diagnostic method according to claim 3, wherein an expression level of at least one selected from peptides or salts thereof is high.
9 . 非小細胞肺がんの再発の可能性が低い、 および （または） 予後が良好であ ると判定する請求項 7または請求項 8記載の診断方法。 9. The diagnostic method according to claim 7 or 8, wherein it is judged that the possibility of non-small cell lung cancer recurrence is low and / or that the prognosis is good.
1 0 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 3で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質ま たはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （iii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 7で表されるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質または その部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (V) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレ ォチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはそ の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (vii) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （viii) 配列番号： 1 5で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （ix) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) 配列番号： 1 9で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （xi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xii) 配列番号： 2 3で表される アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 またはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオ チド、 （xiii) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質またはその部分べプチドをコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xiv) 配列番号： 2 7で表さ れるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパ ク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （XV) 配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xvi) 配列番号： 3 1で 表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕 ンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （xvii) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコ ードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （xviii) 配列番号： 3 5で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有す るポリヌクレオチドおよび （xix) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同 一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べ プチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる 少なくとも一種を用いることを特徴とする非小細胞肺がん悪性度の診断方法。 (0) (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, (ii) A polynucleotide containing a polynucleotide that encodes a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof; (iii ) A polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5 or a partial peptide thereof; (iv) expressed as SEQ ID NO: 7 Encodes a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof (V) a polynucleotide containing a protein encoding an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, or a partial peptide thereof. (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 or a partial peptide thereof; vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 1 3 or a partial peptide thereof; (viii) SEQ ID NO: 15 An amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by Protein or has polynucleotide containing a polynucleotide co one de the part base peptide, (ix) SEQ ID NO: amino acid sequence identical or substantially identical to that represented by 1 7 A polynucleotide containing a protein containing the amino acid sequence of or a polynucleotide encoding the partial peptide, (X) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 (Xi) an amino acid sequence that is identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 1; a polynucleotide comprising a polynucleotide that encodes a protein containing or a partial peptide thereof; (Xii) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23, or a protein containing the same, or a polynucleotide containing a polynucleotide encoding the partial peptide A polynucleotide containing a polynucleotide encoding a partial peptide, (xiii) SEQ ID NO: : A polynucleotide containing a polynucleotide that encodes a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 5 or a partial peptide thereof, (xiv) SEQ ID NO: 2 7 (XV) a polynucleotide containing a polynucleotide that encodes a protein that contains the amino acid sequence identical to or substantially the same as the amino acid sequence represented by (XV) SEQ ID NO: 29 A polynucleotide comprising a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a polynucleotide encoding the partial peptide, (xvi) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 Polypeptides encoding proteins or partial peptides containing the same or substantially the same amino acid sequence as A polynucleotide containing a nucleotide, (xvii) a polynucleotide containing a polynucleotide that codes for a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 33, or a partial peptide thereof A nucleotide, (xviii) a polynucleotide containing a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35, or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof; xix) Use at least one selected from a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 or a polynucleotide containing a polynucleotide encoding the partial peptide. A method for diagnosing malignancy of non-small cell lung cancer.
1 1 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 5で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （iii) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 3で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質また はその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (V) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 2 5で表されるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質または その部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (vii) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （viii) 配列番号： 2 9で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （xi) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ぺプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) 配列番号： 3 3で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ドおよび （xi) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコ一ドする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種の発 現量が高いことを指標とする請求項 1 0記載の診断方法。 1 1. (i) A protein encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof (Ii) a polynucleotide encoding a protein or a partial peptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide that encodes a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, or a partial peptide thereof. Nucleotide, (iv) a polynucleotide containing a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 or a polynucleotide encoding the partial peptide thereof (V) containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein or a partial peptide thereof; (vi) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25; (Vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a peptide; (vii) a polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 or a partial peptide thereof; A polynucleotide containing a nucleotide; (viii) a polynucleotide encoding a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 or a partial peptide thereof; (Xi) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 A polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the sequence or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof, (X) identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 Or a polynucleotide containing a protein containing a substantially identical amino acid sequence or a polynucleotide encoding the partial peptide, and (xi) the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 or The diagnosis according to claim 10, wherein the expression level is at least one selected from a polynucleotide containing a polynucleotide containing a polynucleotide containing a protein containing substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof. Method.
1 2 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 9で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （iii) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質またはその部分べプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 5で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （V) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 2 1で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （viii) 配列番号： 3 7で表 されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタン パク質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチドから選ばれる少なくとも一種の発現量が低いことを指標とする請求項 1 0記載の診断方法。 1 2. (I) a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof; (ii) ) SEQ ID NO: 9 A polynucleotide containing a polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof; (iii) the amino acid represented by SEQ ID NO: 11 (Iv) a polynucleotide containing a protein encoding the same or substantially the same amino acid sequence as the sequence or a polynucleotide encoding the partial peptide; (iv) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof, (V) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 Containing a polynucleotide encoding a protein containing the same amino acid sequence or a partial peptide thereof (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 or a partial peptide thereof. (Vii) a polynucleotide comprising a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23, or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof; viii) at least selected from a polynucleotide containing a polynucleotide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 or a partial peptide thereof. The diagnostic method according to claim 10, wherein the expression level of one kind is low.
1 3 . ポリヌクレオチドが mR NAである請求項 1 1または請求項 1 2記載の 診断方法。 13. The diagnostic method according to claim 11 or claim 12, wherein the polynucleotide is mRNA.
1 4 . 非小細胞肺がんの再発の可能性が高い、 および （または） 予後が良好で はないと判定する請求項 1 1または請求項 1 2記載の診断方法。  1 4. The diagnostic method according to claim 11 or claim 12, wherein the possibility of recurrence of non-small cell lung cancer is high and / or the prognosis is not good.
1 5 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 5で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （iii) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の ァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 3で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質また はその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (V) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌク レオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 2 5で表されるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質または その部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 (vii) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌ クレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （viii) 配列番号： 2 9で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （ix) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) 配列番号： 3 3で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドおよび (xi) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有す るタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する ポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種の発現量が低いことを指標とする 請求項 1 0記載の診断方法。 (5) (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof; ) A polynucleotide containing a protein encoding the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5 or the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof; and (iii) the sequence A protein encoding a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by No. 7 or a partial peptide thereof A polynucleotide containing a nucleotide; (iv) a polynucleotide containing a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 or a partial peptide thereof; (V) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 or a partial peptide thereof, (Vi) a polynucleotide containing a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof, (vii) SEQ ID NO: : A tag containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 27 A polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein or a partial peptide thereof, (viii) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 Is a polynucleotide containing a polynucleotide encoding the partial peptide, (ix) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 A polynucleotide comprising a polynucleotide encoding a partial peptide; (X) a protein comprising the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33, or a partial sequence thereof; A polynucleotide encoding a peptide and (xi) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 At least diagnostic method according to claim 1 0, wherein one of the expression level as an index lower selected the you containing the amino acid sequence protein or its partial peptide from the polynucleotide containing the polynucleotide encoding.
1 6 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 9で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （iii) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 5で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （V) 配列番号： 1 7で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 2 1で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドおよび （viii) 配列番号： 3 7で表 されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン パク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチドから選ばれる少なくとも一種の発現量が高いことを指標とする請求項 1 0記載の診断方法。 (6) (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof; A polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, or a partial peptide thereof; (iii) SEQ ID NO: 11 A polynucleotide comprising a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1 or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof, (iv) SEQ ID NO: 15 Represented A polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof; (V) an amino acid represented by SEQ ID NO: 17 (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the acid sequence or a partial peptide thereof; (vi) identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 Or a polynucleotide containing a protein containing a substantially identical amino acid sequence or a polynucleotide encoding the partial peptide, (vii) identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 or Contains a polynucleotide that encodes a protein containing substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof And (viii) a polynucleotide comprising a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 37 or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof. The diagnostic method according to claim 10, wherein the expression level is at least one kind of expression level.
1 7 . ポリヌクレオチドが mR NAである請求項 1 5または請求項 1 6記載の 診断方法。 17. The diagnostic method according to claim 15 or claim 16, wherein the polynucleotide is mRNA.
1 8 . 非小細胞肺がんの再発の可能性が低いおよび （または） 予後が良好であ ると判定する請求項 1 5または請求項 1 6記載の診断方法。  1 8. The diagnostic method according to claim 15 or claim 16, wherein the recurrence of non-small cell lung cancer is low and / or the prognosis is good.
1 9 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 に対する抗体、 （ii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたは その塩に対する抗体、 （iii) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしく は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチド またはその塩に対する抗体、 （iv) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同 一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分 ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （V) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくは その部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （vi) 配列番号： 2 5で表される アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対する抗体、 （vii) 配列番号： 2 7 で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する タンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体、 （viii) 配列 番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩に対する抗体、 (ix) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩に対す る抗体、 （X) 配列番号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその 塩に対する抗体および （xi) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もし くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチ ドまたはその塩に対する抗体から選ばれる少なくとも一種を含有してなる非小細 胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤。 1 9. (I) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (ii) represented by SEQ ID NO: 5 An antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (iii) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 (Iv) an antibody against a protein containing the amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (iv) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 or a portion thereof An antibody against the peptide or a salt thereof, (V) identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 Antibodies to the protein or partial peptide thereof comprising an amino acid sequence, (vi) SEQ ID NO: 2 5 identical to the amino acid sequence represented by or the protein comprising substantially the same amino acid sequence Or an antibody against a partial peptide thereof or a salt thereof, (vii) an antibody against a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the amino acid sequence identical or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 7 (Viii) an antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29, or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (ix) represented by SEQ ID NO: 31 An antibody against a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (X) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 An antibody against a protein containing the same amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, and (xi) Column No: 35 Non-small comprising at least one protein selected from a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by 5 or a partial peptide thereof or a salt thereof. Prevention and treatment of cell lung cancer and / or prevention of recurrence.
2 0 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 —のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポ リヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはそ の一部を含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその 部分べプチドをコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的 に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （iii) 配列番 号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含 有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドの塩基 配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリ ヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 3で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコ一 ドするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列 またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （V) 配列番号： 1 9で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしく は実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 (vi) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌク レオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部 を含有するポリヌクレオチド、 （vii) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と 同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分 ペプチドをコードするポリヌクレオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相 補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （viii) 配列番号： 2 9で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレォチドの塩基配 列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌ クレオチド、 （ix) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコード するポリヌクレオチドの塩基配列に相捕的もしくは実質的に相補的な塩基配列ま たはその一部を含有するポリヌクレオチド、 （X) 配列番号： 3 3で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質また はその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドの塩基配列に相捕的もしくは 実質的に相補的な塩基配列またはその一部を含有するポリヌクレオチドおよび (xi) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァ ミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌク レオチドの塩基配列に相補的もしくは実質的に相補的な塩基配列またはその一部 を含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含有してなる非小細 胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤。 2 0. (I) Complementary or substantially complementary to the nucleotide sequence of a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof (Ii) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, or a partial peptide thereof (Iii) a polynucleotide containing a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of a polynucleotide encoding γ, or (iii) the same or substantially the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 Complementary or actual to the nucleotide sequence of a polynucleotide encoding a protein having the same amino acid sequence or a partial peptide thereof (Iv) a protein containing an amino acid sequence identical to or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 A polynucleotide comprising a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of the polynucleotide encoding the partial peptide, or a part thereof, (V) an amino acid represented by SEQ ID NO: 19 A nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of a polynucleotide encoding a protein or a partial peptide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the sequence, or one of the nucleotide sequences A polynucleotide containing a moiety, (vi) Complementary or substantially complementary to the nucleotide sequence of a polynucleotide encoding a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 or a partial peptide thereof (Vii) a polynucleotide encoding a protein or a partial peptide thereof comprising an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 A polynucleotide comprising a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to the nucleotide sequence of the nucleotide or a part thereof, (viii) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 Complementary to the nucleotide sequence of a polynucleotide encoding a protein containing an amino acid sequence or a partial peptide thereof, or A polynucleotide containing a qualitatively complementary nucleotide sequence or a part thereof, (ix) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 or a portion thereof A polynucleotide containing a base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of the polynucleotide encoding the peptide, or a part thereof, (X) an amino acid represented by SEQ ID NO: 33 A base sequence complementary to or substantially complementary to the base sequence of a polynucleotide that codes for a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the sequence or a partial peptide thereof, or a part thereof. And (xi) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 or Prevention / treatment of non-small cell lung cancer comprising at least one selected from a nucleotide sequence complementary to or substantially complementary to a nucleotide sequence of a polynucleotide encoding a partial peptide or a polynucleotide containing a part thereof Agent and / or anti-recurrence agent.
2 1 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポ リヌクレオチドに対する s i R NAまたは s h R NA、 (ii) 配列番号： 5で表 されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン パク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対する s i R N Aまたは s h R NA、 (iii) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしく は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドを コードするポリヌクレオチドに対する s i R NAまたは s h R NA、 （iv) 配列 番号： 13で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドに 対する s i RNAまたは s hRNA、 (v) 配列番号： 19で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその 部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRN A、 (vi) 配列番号： 25で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリ ヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 (vii) 配列番号： 27で表 されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン パク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対する s i RN Aまたは s hRNA、 (viii) 配列番号： 29で表されるアミノ酸配列と同一もし くは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチド をコードするポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hRNA、 (ix) 配 列番号： 31で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチド に対する s i RNAまたは s hRNA、 (x) 配列番号： 33で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはそ の部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対する s i RNAまたは s hR NAおよび （xi) 配列番号： 35で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質またはその部分べプチドをコードす るポリヌクレオチドに対する s i RNAまたはs h RNAから選ばれる少なくと も一種を含有してなる非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止 剤。 2 1. (i) siRNA or shRNA for a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof (Ii) siRNA or shRNA for a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, or a partial peptide thereof, (iii) SiRNA or shRNA for a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, or a partial peptide thereof, (iv) Sequence SiRNA or sRNA for a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by No. 13 or a partial peptide thereof, (v) represented by SEQ ID No. 19 SiRNA or shRNA for a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof, (vi) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 SiRNA or sRNA against a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof, (vii) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 Polynucleotide encoding protein containing amino acid sequence or partial peptide thereof SiRNA or sRNA, (viii) si against a polynucleotide encoding a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 or a partial peptide thereof RNA or sRNA, (ix) siRNA or sRNA for a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31, or a partial peptide thereof, (x) siRNA or shRNA and (xi) sequence for a polynucleotide encoding a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 or a partial peptide thereof A protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by No. 35, or a protein thereof Min base comprising a least one also selected from si RNA or sh RNA against a polynucleotide that encoding a peptide non-small cell lung cancer preventive or therapeutic agent and (or) recurrence preventing agent.
22. (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 の活性を阻害する化合物またはその塩、 （ii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくは その部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、 （iii) 配 列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する 化合物またはその塩、 （iv) 配列番号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もし くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチ ドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、 （V) 配列番号： 1 9で表 されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン パク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはそ の塩、 (vi) 配列番号： 2 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 の活性を阻害する化合物またはその塩、 （vii) 配列番号： 2 7で表されるァミノ 酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしく はその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、 （viii) 配列番号： 2 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸 配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害 する化合物またはその塩、 （ix) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一 もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べ プチドまたはその塩の活性を阻害する化合物またはその塩、 （X) 配列番号： 3 3 で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する タンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害する化合物また はその塩および （xi) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実 質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまた はその塩の活性を阻害する化合物またはその塩から選ばれる少なくとも一種を含 有してなる非小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤。 22. (i) a compound or salt thereof that inhibits the activity of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof, or a salt thereof; A compound or salt thereof that inhibits the activity of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, or a partial peptide thereof, or a salt thereof; (iii) SEQ ID NO: 7 Inhibits the activity of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by A compound or a salt thereof, (iv) a compound that inhibits the activity of a protein or a partial peptide or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 13 Or a salt thereof, (V) a compound containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 or a partial peptide thereof, or a compound that inhibits the activity of the salt, or a salt thereof (Vi) a compound containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 or a partial peptide thereof, or a salt or a salt thereof that inhibits the activity of the salt, (vii ) SEQ ID NO: 27 A protein or partial peptide containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 Or a compound that inhibits the activity of a salt thereof, or a salt thereof, (viii) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 29, or a partial peptide thereof, or a salt thereof A compound or a salt thereof that inhibits the activity; (ix) inhibits the activity of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown in SEQ ID NO: 31 or a partial peptide thereof or a salt thereof. Compound or salt thereof, (X) Compound or salt thereof that inhibits the activity of protein or partial peptide thereof or salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3 3 And (xi) a tongue containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 Click proteins or non-small prevention of a cell lung or therapeutic agent and (or) recurrence preventing agent comprising a free at least one selected active from the compound or its salt that inhibits the of the part base peptide or a salt thereof.
2 3 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 9で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （iii) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 5で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質ま たはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （V) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一 のァミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分べプチドをコードするポリ ヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 2 1で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質ま たはその部分べプチドをコ一ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチ ド、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその部分ペプチドをコードするポ リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 および （viii) 配列番号： 3 7で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質またはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチドから選ばれる少なくとも一種を含有することを特徴とする非小細胞 肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤。 2 3. (i) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, (ii) (Iii) SEQ ID NO: a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, or a partial peptide thereof; (1) a polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 1 or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof, (iv) represented by SEQ ID NO: 15 Or a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence. Or a polynucleotide containing a polynucleotide encoding the partial peptide, (V) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 or a portion thereof A polynucleotide comprising a polynucleotide encoding a peptide; (vi) a protein comprising an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21; A polynucleotide comprising a polynucleotide that codes for a partial peptide; (vii) a protein comprising the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 or a partial peptide thereof (Viii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37, and a polynucleotide containing a polynucleotide encoding Prevention of non-small cell lung cancer, comprising at least one selected from a polynucleotide containing a protein containing one or substantially the same amino acid sequence or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof Therapeutic agent and / or anti-recurrence agent.
2 4 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩 の活性を促進する化合物またはその塩、 （ii) 配列番号： 9で表されるアミノ酸 配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくは その部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、 （iii) 配 列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩の活性を促進す る化合物またはその塩、 （iv) 配列番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一も しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ぺプ チドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、 （V) 配列番号： 1 7で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を促進する化合物または その塩、 （vi) 配列番号： 2 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその 塩の活性を促進する化合物またはその塩、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるアミ ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もし くはその部分べプチドまたはその塩の活性を促進する化合物またはその塩、 およ び (viii) 配列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活 性を促進する化合物またはその塩から選ばれる少なくとも一種を含有してなる非 小細胞肺がんの予防 ·治療剤および （または） 再発防止剤。 (4) (i) a compound or a salt thereof that promotes the activity of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, or a salt thereof; ) A compound containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, or a partial peptide thereof, or a salt thereof, or a salt thereof; (iii) SEQ ID NO: 1 (Iv) a compound or salt thereof that promotes the activity of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 1 or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (iv) SEQ ID NO: 15 The activity of a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as shown, or a partial peptide thereof or a salt thereof. Or a salt thereof, (V) a compound that promotes the activity of a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 Or a salt thereof, (vi) a compound containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 or a partial peptide thereof or a salt thereof, or a salt thereof, vii) a compound containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23, or a compound or its salt that promotes the activity of its partial peptide or its salt, And And (viii) at least selected from a compound containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37, a partial peptide thereof, or a salt thereof, or a salt thereof A preventive / therapeutic agent for non-small cell lung cancer and / or an anti-recurrence agent comprising one type.
2 5 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 (ii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （iii) 配列番号： 7で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （iv) 配列番 号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （V) 配列番号： 1 9で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vi) 配列番号： 2 5 で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する タンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vii) 配列番号： 2 7で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （viii) 配列番号： 2 9で表 されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン パク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （ix) 配列番号： 3 1で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク 質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 ） 配列番号： 3 3で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質も しくはその部分ペプチドまたはその塩、 または （xi) 配列番号： 3 5で表される ァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質 もしくはその部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴とする、 上記 （i) 〜 （xi) 記載のタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩の活性を阻害 する化合物またはその塩のスクリーニング方法。 2 5. (I) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (ii) represented by SEQ ID NO: 5 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence, or a partial peptide thereof, or a salt thereof; (iii) an amino acid that is the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 (Iv) a protein containing the sequence or a partial peptide thereof, or a salt thereof; (iv) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 or a salt thereof (V) a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 or a part thereof A peptide or a salt thereof, (vi) a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 5, (vii) in SEQ ID NO: 27 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented, or a partial peptide thereof or a salt thereof, (viii) the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 A protein containing the same amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof; (ix) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 A partial peptide thereof or a salt thereof) containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 Or a partial peptide thereof or a salt thereof, or (xi) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 or a partial peptide thereof or a salt thereof A method for screening a compound or a salt thereof that inhibits the activity of the protein or a partial peptide thereof or a salt thereof described in (i) to (xi) above.
2 6 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドをコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 5で表される ァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質 もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレ ォチド、 （iii) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドをコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 3で表され るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク 質もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （V) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質もしくはその部分べプチドをコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 2 5で表 されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン パク質もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （vii) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドを コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （viii) 配列番号： 2 9で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 (ix) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一も しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ぺプ チドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) 配列番 号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 または （xi) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはそ の部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドを用 いることを特徴とする、 上記 （i) 〜 （xi) 記載のポリヌクレオチドの発現を阻 害する化合物またはその塩のスクリーニング方法。 2 6. (I) Encodes a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof A polynucleotide containing a polynucleotide, (ii) containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, or a partial peptide thereof (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7, or a partial peptide thereof, (iv) a sequence No .: 13 A polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 3 or a partial peptide thereof, (V) SEQ ID NO: 19 Amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented (Vi) a polynucleotide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 (Vii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein or a partial peptide thereof; (vii) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 or a partial portion thereof; A polynucleotide comprising a polynucleotide encoding a peptide; (viii) a polynucleotide encoding a protein comprising the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 or a partial peptide thereof; A polynucleotide containing nucleotides, (ix) SEQ ID NO: 3 in 1 A polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence shown, or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof, (X) SEQ ID NO: 33 A polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a polynucleotide encoding the partial peptide, or (xi) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 The polynucleotide according to any one of (i) to (xi) above, wherein a polynucleotide containing a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence or a polynucleotide encoding the partial peptide is used. For screening a compound or a salt thereof that inhibits the expression of.
2 7 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 (ii) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有する夕ンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （iii) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸 配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 (iv) 配列 番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （V) 配列番 号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vi) 配列番号： 2 1で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有す るタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 または （viii) 配列番 号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩を用いることを特徴 とする、 上記 （i) 〜 （viii) 記載のタンパク質もしくはその部分ペプチドまたは その塩の活性を促進する化合物またはその塩のスクリーニング方法。 2 7. (I) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (ii) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9, or a partial peptide thereof, or a salt thereof; (iii) represented by SEQ ID NO: 11 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof; (iv) an amino acid that is the same or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 A protein containing the sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (V) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 or a partial peptide thereof or a salt thereof, (Vi) a protein containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 or a part thereof A peptide or a salt thereof, (vii) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 or a partial peptide thereof or a salt thereof, or (viii) a SEQ ID NO. The protein according to (i) to (viii) above, characterized by using a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by No. 37 or a partial peptide thereof or a salt thereof Alternatively, a screening method for a compound or its salt that promotes the activity of its partial peptide or its salt.
2 8 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 —のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドをコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 9で表される アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレ ォチド、 （iii) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドをコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 5で表さ れるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕ンパ ク質もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （V) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドをコ一 ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 2 1で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしく は実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチド をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 または （viii) 配 列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチド用いることを特徴とする、 上記 （i) 〜 （viii) 記 載のポリヌクレオチドの発現を促進する化合物またはその塩のスクリーニング方 法。 2 8. (I) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the amino acid sequence identical to or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial peptide thereof; (ii ) SEQ ID NO: 9 Polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof; (iii) SEQ ID NO: 1 A polynucleotide comprising a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof, (iv) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 A partial protein or a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as (V) a polynucleotide that encodes a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 or a partial peptide thereof. (Vi) a nucleotide containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 1. (Vii) a protein containing a polynucleotide encoding a protein or a partial peptide thereof, (vii) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 23 Or a polynucleotide containing a polynucleotide encoding the partial peptide, or (viii) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 or a portion thereof A method for screening a compound or a salt thereof that promotes the expression of the polynucleotide according to any one of (i) to (viii) above, which comprises using a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a peptide.
2 9 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 (ii) 配列番号： 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （iii) 配列番号： 7で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （iv) 配列番 号： 1 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （V) 配列番号： 1 9で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vi) 配列番号： 2 5 で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する タンパク質もしくはその部分ぺプチドまたはその塩、 （vii) 配列番号 ·· 2 7で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質もしくはその部分べプチドまたは^ 1の塩、 （viii) 配列番号： 2 9で表 されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタン パク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （ix) 配列番号： 3 1で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク 質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （X) 配列番号： 3 3で表されるァ ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質も しくはその部分ペプチドまたはその塩、 および （xi) 配列番号： 3 5で表される ァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有するタンパク質 もしくはその部分べプチドまたはその塩から選ばれる少なくとも一種の活性を阻 害することを特徴とする非小細胞肺がんの予防 ·治療方法および （または） 再発 防止方法。 2 9. (I) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof, or a salt thereof; (ii) represented by SEQ ID NO: 5 (Iii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 that is identical or substantially identical to the amino acid sequence, or a partial peptide or salt thereof containing the amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence A protein containing an amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof, (iv) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 or a partial peptide thereof, or A salt thereof, (V) a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 or a part thereof A peptide or a salt thereof, (vi) a protein or a partial peptide thereof or a salt thereof containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 5, (vii) a SEQ ID NO. 2 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence represented by 7 or a partial peptide thereof, or a salt of ^ 1 ; (viii) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 29 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof; (ix) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 (X) an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 Proteins properly its partial peptide or a salt thereof with, and (xi) SEQ ID NO: 3 5 same or a Amino acid sequence represented by the protein comprising substantially the same Amino acid sequence Alternatively, a method for preventing and treating non-small cell lung cancer and / or a method for preventing recurrence, which comprises inhibiting at least one activity selected from partial peptides or salts thereof.
3 0 . (i) 配列番号： 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドをコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 5で表される アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質 もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレ ォチド、 （iii) 配列番号： 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドをコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 3で表され るァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク 質もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌク レオチド、 （V) 配列番号： 1 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的 に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドをコード するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 2 5で表 されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン パク質もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリ ヌクレオチド、 （vii) 配列番号： 2 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは 実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質もしくはその部分べプチドを コードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （viii) 配列番号： 2 9で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有 するポリヌクレオチド、 （ix) 配列番号： 3 1で表されるアミノ酸配列と同一も しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ぺプ チドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （X) 配列番 号： 3 3で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチドを 含有するポリヌクレオチド、 および （xi) 配列番号： 3 5で表されるアミノ酸配 列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはそ の部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから 選ばれる少なくとも一種の発現を阻害することを特徴とする非小細胞肺がんの予 防 ·治療方法および （または） 再発防止方法。 (I) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3, or a partial peptide thereof, (ii) (Iii) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 or a partial peptide thereof; (Iv) a polynucleotide containing a protein encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof; and (iv) an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 Proteins or partial peptides containing the same or substantially the same amino acid sequence (V) a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 or a partial peptide thereof. (Vi) a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 25 or a partial peptide thereof, (Vii) a polynucleotide containing a polynucleotide containing an amino acid sequence which is the same as or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 27 or a partial peptide thereof; (viii) ) SEQ ID NO: 29 identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 9 A polynucleotide containing a protein containing one amino acid sequence or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof; (ix) an amino acid identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 31 A polynucleotide containing a polynucleotide containing the protein containing the sequence or a partial peptide thereof, (X) containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 33 A polynucleotide containing a polynucleotide encoding the protein or a partial peptide thereof, and (xi) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 35 A method for preventing / treating non-small cell lung cancer and / or a method for preventing recurrence, which comprises inhibiting the expression of at least one selected from a polynucleotide comprising a polynucleotide encoding a partial peptide.
3 1 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 (ii) 配列番号： 9で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ ノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （iii) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸 配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドまたはその塩、 （iv) 配列 番号： 1 5で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列 を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （V) 配列番 号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vi) 配列番号： 2 1で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有 するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有す るタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩、 および （viii) 配列番 号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を 含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその塩から選ばれる少なく とも一種の活性を促進することを特徴とする非小細胞肺がんの予防 ·治療方法お よび （または） 再発防止法。  3 1. (i) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof, or a salt thereof, (ii) represented by SEQ ID NO: 9. (Iii) the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 1. (Iv) a protein containing the amino acid sequence or a partial peptide thereof or a salt thereof; (iv) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15 or a partial peptide thereof or a salt thereof (V) SEQ ID NO: 17 Protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 7 or its A partial peptide or a salt thereof, (vi) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 or a partial peptide thereof or a salt thereof, (vii) SEQ ID NO: 23 A protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by 3 or a partial peptide thereof or a salt thereof, and (viii) the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 37 A method for preventing / treating non-small cell lung cancer characterized by promoting at least one activity selected from a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence, a partial peptide thereof, or a salt thereof, and / or Recurrence prevention law.
3 2 . (i) 配列番号： 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同 一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分べプチドをコードする ポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （ii) 配列番号： 9で表される ァミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のァミノ酸配列を含有する夕ンパク質 もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレ ォチド、 （iii) 配列番号： 1 1で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に 同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドをコードす るポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （iv) 配列番号： 1 5で表さ れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパ ク質もしくはその部分ぺプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌ クレオチド、 （V) 配列番号： 1 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質 的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドをコー ドするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 （vi) 配列番号： 2 1で 表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する夕 ンパク質もしくはその部分べプチドをコードするポリヌクレオチドを含有するポ リヌクレオチド、 （vii) 配列番号： 2 3で表されるアミノ酸配列と同一もしく は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチド をコードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド、 および （viii) 配 列番号： 3 7で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配 列を含有するタンパク質もしくはその部分ペプチドをコードするポリヌクレオチ ドを含有するポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドから選ばれる少なく とも一種の発現を促進することを特徴とする非小細胞肺がんの予防 ·治療方法お よび （または） 再発防止方法。 3 2. (i) a polynucleotide comprising a polynucleotide comprising a protein comprising the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 1, or a partial peptide thereof; (ii) A polynucleotide containing a polynucleotide encoding an amino acid sequence which is the same as or substantially the same as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 9 or a partial peptide thereof; (iii) SEQ ID NO: 1 A polynucleotide containing a protein containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence represented by 1 or a polynucleotide encoding a partial peptide thereof, (iv) represented by SEQ ID NO: 15 A tamper containing an amino acid sequence identical or substantially identical to the amino acid sequence (V) a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 17 or a partial peptide thereof (Vi) encodes a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 21 or a partial peptide thereof. A polynucleotide containing a polynucleotide; (vii) containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as SEQ ID NO: 23 or a partial peptide thereof And (viii) SEQ ID NO: 3 7 Promote the expression of at least one kind selected from a polynucleotide containing a polynucleotide containing a polynucleotide encoding a protein containing the same or substantially the same amino acid sequence as the amino acid sequence or a partial peptide thereof. Non-small cell lung cancer prevention / treatment method and / or recurrence prevention method characterized by
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