WO2004006687A1

WO2004006687A1 - カロテノイド含有水畜産飼料

Info

Publication number: WO2004006687A1
Application number: PCT/JP2003/008379
Authority: WO
Inventors: Takashi Maoka; Fumio Tanimoto; Mitsuhiko Sano; Kanji Tsurukawa; Takuo Tsuno; Kenji Takii
Original assignee: Research Institute For Production Development; Dainichi Corporation; Tsuno Rice Fine Chemicals Co., Ltd.
Priority date: 2002-07-17
Filing date: 2003-07-01
Publication date: 2004-01-22
Also published as: AU2003246218A8; AU2003246218A1

Abstract

体色改善、色揚げなどの目的のために必要不可欠的にカロテノイドが配合された水畜産用の飼料において、カロテノイドの抗酸化安定性を高め、かつ、カロテノイドの添加効果を低減するメラニンの生成を抑制するために、天然植物由来のフェルラ酸、コーヒー酸、シナピン酸、γ-オリザノールなどのフェニールプロパノイド化合物及び/又はフィチン酸を配合してなる体色改善効果に優れ、かつ、生体安全性に優れるカロテノイド含有水畜産飼料を提供する。

Description

明細書

カロテノィド含有水畜産飼料技術分野本発明は、水産及び畜産飼料（以下、水畜産飼料ということがある。 ) 、特に魚介類などの体色や筋肉の色の改善（以下、色揚げとか体色改善ということがある。）などのためにカロテノイド（ c a r o t e n o i d) が配合された水畜産飼料に関する。

更に詳しくは、本発明は、（ 1 ) 前記カロテノィド含有水畜産飼料において、飼料中のカロテノィドの抗酸化安定性を高度に改善するとともに、（ 2 ) 前記飼料を食した動物において、黒ずんだ体色の原因となるメラニンの生成を抑制したり酸化ストレスを軽減するために、生体安全性に優れる特定の配合成分を添加してなる高付加価値のカロテノィド含有水畜産飼料に関する。景技術魚介類の養殖ゃニヮトリ、ゥシ、ブ夕などの畜産が盛んになるにつれて、鮮度や肉質だけでなく、体色は養殖魚や畜産動物の品質を評価する上で重要な要素になって来ている。

マダイのヒレや表皮の赤色、サケゃマス類の筋肉の赤紅色は主としてカロテノィドの一種である赤色を呈するァスタキサンチン（ a s t ax a n t h i n) に由来するものである。

ここで、マダイの体表の色素成分について詳しくみてみる。マダイの体表の色は、赤色のカロテノィドであるァスタキサンチン（ a s t ax a t h i n) と黄色のカロテノイドであるヅナキサンチン（ t un ax a n t h i n) および黒色のメラニン（me l a n i n) などの色素によつて発現されるものである。

天然マダイの体側部は鮮やかな赤色を呈し、腹部は白色を呈し、美しいコントラストをなしている。

一方、養殖マダイは天然マダイに比べ全体に体色が黒ずんでしまうという難点がある。これは養殖マダイが天然マダイの生息場所に比べ水深の浅い所で飼育するため、日焼けによってメラニンが生成、沈着し、全体に黒ずんだ体色を呈してしまうことに起因するものである。このため

、天然マダイに見られる体側部の鮮やかな赤色と腹部の白色を養殖魚で再現するためには、単に赤一黄色系の色素であるカロテノィドを投与するだけでなく、メラニンの生成を抑えることが重要であることが判る。前記したように、ァスタキサンチンなどのカロテノィドは魚介類などの養殖において体色改善、色揚げに多用されている。

また、前記ァスタキサンチンは、卵質向上効果、孵化率向上、仔稚魚の正常な生育、などに効果があることも知られている（松野隆男、幹渉、日本農芸化学会編、学会出版センタ一刊「化学と生物」、 2 8、 2 1 9一 2 2 7、 1 9 9 0 ) 。

前記したことからわかるように、ァスタキサンチンなどのカロテノィドは、マダイ、サケ、マスなどの魚介類の養 _:ゃニヮトリ、ゥシ、ブ夕などの畜産において色揚げ、卵質向上効果、孵化率向上などの観点から不可欠の飼料用配合成分である。

しかしながら、カロテノィド、例えばァスタキサンチンは光、熱、酸化に対して極めて不安定であり、酸化分解して退色してしまうという問題点がある。

例えば、ァスタキサンチンを添加した飼料を押出し成形機によりェクストルーダ一ペレット（E P ) を製造しょうとするとき、 1 2 0 °C前後の加熱による熱変性とそれに伴う酸化分解を受けてしまい、ァス夕キサンチンの配合効果を消失してしまう。

このほか、ァスタキサンチンは、飼料保存中における脂質の過酸化反応によって分解したり、さらには養殖魚にァスタキサンチンを投与してもその魚体内で起こる種々の過酸化反応によりァスタキサンチンが分解してしまい、配合効果を消失してしまうという問題がある。

一方、前記養殖マダイのところで説明したメラニンの生成による体色の黒化の問題において、従来の改善方法としては遮光ネットなどで日光を遮る方法などがとられている。しかし、遮光ネットで日覆いをするだけではマダイの体色黒化の防止に満足な効果が得られない。また、メラニン生成抑制剤であるコウジ酸（特開平 3— 3 0 6 3 7 ) 、グル夕チォン（特開平 7— 2 3 1 7 5 5 ) 、プロトアントシァニジン（特開平 1 0 一 2 2 5 2 6 6、特開 2 0 0 1— 2 9 9 2 3 2 ) を用いる方法も提案されているが、これらは飼料に添加した場合の安全性、安定性、体色鮮明化の効果などにおいて難点がある。発明の開示本発明は、前記した従来技術の問題点を解消するべく創案されたものである。

本発明者らは、水産分野や畜産分野の飼料において、体色改善'（色揚げ）の観点から必要不可欠のァスタキサンチンなどのカロテノィド配合成分の安定化を図る方策とともに、併せてカロテノィド含有飼料を食した水畜産動物においてカロテノィドの呈色効果を低減させるメラニンの生成を抑制する方策について、鋭意検討を加えた。

本発明者らは、カロテノィド含有水畜産飼料用の高度に生体安全性に優れる安定剤を開発するという観点から、数多くの植物由来の抗酸化性物質について系統的に研究した。その結果、米ぬかに含まれるフヱルラ酸、ァ—オリザノールなどのフエニールプロパノィド化合物及びフイチン酸が有効な安定剤となり得ることを見出した。更には、これらカロテノィドの安定性に寄与する化合物は、メラニンの生成を抑制する効果に優れているということも見出した。本発明は、前記した知見をベースにして完成されたものである。

本発明により、米ぬかをはじめ多くの食物に含まれヒ卜が摂取して安全性が確立されているフヱルラ酸、ァーオリザノールなどのフェニールプロパノィド化合物及びフィチン酸を、カロテノィドの抗酸化性を改善するために、かつ、メラニンの生成を抑制するために添加配合してなるカロテノィド含有水畜産飼料が提供される。

本発明を概説すれば、本発明は、カロテノィド（ c a r o t e n o i d ) 含有水畜産飼料が、前記カロテノィドの抗酸化安定剤として、かつ、メラニン生成の抑制剤としてフェラールプロパノイド化合物及びフィチン酸からなる群から選ばれた少なくとも 1種の化合物、を含有することを特徴とするカロテノィド含有水畜産飼料に関するものである。発明を実施するための最良の形態以下、本発明の技術的構成及び実施態様について詳しく説明する。本発明は、前記したように、第一にカロテノイド含有水畜産飼料において、カロテノィドの酸化劣化による不安定性を高度に改善することを目的とし、第二に前記カロテノィド含有水畜産飼料を食した水畜産動物において、カロテノィドの発色効果を低減（消失）させるメラニンの生成を高度に抑制することを目的とするものである。

本発明者らは、安定化の対象がカロテノィド含有水畜産飼料ということから、これら飼料を食べる魚介類や畜産動物にとっての安全性はもとより、これら魚介類や畜産動物を食べるヒトにとっても安全性の高い安定剤系を開発しなければならない、という観点から研究を進めた。本発明者らは、まず、ァスタキサンチンの酸化分解を防く、方法について種々の化学的、物理的な方法について検討した結果、飼料中に抗酸化剤を添加する方法が有効であるという知見を見い出した。。しかしながら、合成系の抗酸化剤、例えばプチルヒドロキシトルエン

( B H T ) 、プチルヒドロキシァ二ソール（B H A ) 、エトキシキンなどは、近年、安全性の観点から使用が控えられる傾向にあり、本発明の目的に沿わないものである。

また、前記したように天然物系のメラニンの生成抑制剤として提案されているコウジ酸（特開平 3— 3 0 6 3 7号公報）、グル夕チオン（特開平 7— 2 3 1 7 5 5号公報）、プロトアントシァニジン（特開平 1 0 - 2 2 5 2 6 6号公報、特開 2 0 0 1 - 2 9 9 2 3 2号公報）をカロテノィドに対する抗酸化安定剤として使用した場合、例えばコウジ酸は発癌性であることが見い出されており、かつ、内分泌撹乱作用を持っため飼料への使用が問題視されるなど、これら化合物は安全性や安定性の観点から難点がある。

本発明者らは、前記した従来の抗酸化剤の欠点に鑑み、水畜産飼料用として不可欠のァスタキサンチンなどのカロテノィドを高度に安定化させるための抗酸化剤の候補として、植物由来の抗酸化性物質に焦点を絞つて鋭意検討を加えた。

その結果、米ぬかに含まれるフェルラ酸、ァーオリザノールなどのフェニールプロパノィド化合物及び Z又はフィチン酸がァスタキサンチンなどのカロテノィドの酸化分解を効果的に防止することを見い出した。また、本発明者らは、前記化合物により安定化されたカロテノィド含有水畜産飼料を食した水畜産動物において、吸収されたカロテノィドの発色効果がメラニンにより低減される度合いについて、別言すればメラニン生成の抑制効果について、並行して鋭意検討を加えた。

その結果、前記したカロテノィドの抗酸化性を改善する化合物が、メラニンの生成抑制剤としても有効であることを見い出した。'

本発明は、体色改善、色揚げなどの目的のためにカロテノィドを含有した水畜産飼料において、カロテノィドの酸化劣化を高度に安定化させ、かつ、メラニンの生成を効果的に抑制するために（別言すればメラ二ン生成による体色の黒化を防止するために）、前記フヱニールプロパノィド化合物及び/又はフィチン酸を添加配合した高付加価値のカロテノィド含有水畜産飼料を提供するものである。

本発明の水畜産飼料は、

(1).水産分野においては、マダイ、プリ、ヒラメ、スズキ、サケなどの海産魚；マス、アマゴ、ャマメ、ァュなどの淡水魚；ェビ、力二などの甲殻類；キンギヨ、ニシキゴィなどの鑑賞魚、などに対するカロテノィドを配合した魚介類用飼料、

(2).畜産分野においては、ニヮトリ、ゥシ、ブ夕などに対するカロテノィドを配合した畜産用飼料、

などを例示することができる。

前記した水産分野及び畜産分野における配合飼料について、以下、具体的に説明する。

(υ·海産魚マダイ、プリ用の配合飼料：

一般的な組成は、動物性飼料（魚粉） 50〜65 %、穀類（小麦粉など） ~ 15 %、植物性油かす類（大豆脂粕）〜 10 %、そうこう類（米ぬか、ふすま）〜 5%、その他（動物油脂、ビール酵母、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）〜 1 0%である。また、これの成分組成は、粗蛋白質 45〜 55 %、粗脂肪 10〜 1 6 %以上、粗糖質 15 ~ 20 %、粗灰分〜 1 1 %、である。

例えば、キリンフィード株式会社製のマダイ育成用配合飼料（マダイ Ε Ρ 4. 5 ) の一般的な組成は、動物性飼料 60%、穀類 1 5 %、植物性油かす類 10%、そうこう類（米ぬか、ふすま） 5%、その他（動物油脂、ビール酵母、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど） 10%である。また、このものの成分組成は、粗蛋白質 48 %、粗脂肪 1 2%、粗繊維 1. 8%、粗灰分 1 5 %、カルシウム 1. 8 %、リン 1. 4 %である。

なお、マダイ、プリなどの海産魚用飼料としては、株式会社ヒガシマノレ、日清飼料株式会社、オリエンタル酵母株式会社、日本配合飼料株式会社、日本農産工業株式会社、丸紅飼料株式会社などのメーカ一がほぼ同じ組成の配合飼料を提供している。

(2).淡水魚ァュ育成用飼料：

ァュ育成用の配合飼料として、日本農産（株）は、一般的な組成が、動物性飼料（魚粉） 5 5 %、穀類（小麦粉） 2 1 %、そうこう類（米ぬか、ふすま） 1 0 %、植物性油粕類（大豆油粕） 7 %、その他（飼料用酵母、アルフアルファミール、小麦胚芽、食塩） 6 % のものを提供している。このものの成分組成は、粗蛋白質 4 5. 0 %、粗脂肪 3. 0 %以上、粗繊維 4. 0 %以下、粗灰分 1 5. 0 % である。

なお、オリエンタル酵母株式会社、日本配合飼料株式会社、日本農産工業株式会社、丸紅飼料株式会社などのメーカーがほぼ同じ組成の配合飼料を提供している。

(3).畜産用ニヮトリ用の配合飼料：

成鶏用の配合飼料として、例えば日本農産工業（株）は、一般的な組成が、榖類（とうもろこし、マイ口） 6 0 %、植物性油粕類（大豆油粕、なたね油粕、コ一ングルテンミール） 1 5 %、動物性飼料（魚粉） 1 0 %、そうこう類（コーングルテンミ一ル、米ぬか） 5 %、その他（炭酸カルシウム、動物性油脂、食塩、リン酸カルシゥム） 1 0 %、のものを提供している。この中の成分組成は、粗蛋白質 1 7. 0 %、粗脂肪 3. 0 %以上、粗繊維 5. 0 %以下、粗灰分 1 3. 0 %、カルシウム 2. 8 %、リン 0. 5 %である。

なお、オリエンタル酵母株式会社、日本配合飼料株式会社、丸紅飼料株式会社などのメーカーがほぼ同じ組成の配合飼料を出している。

(4).肉豚用配合飼料：

肉豚用配合飼料として、例えば中部飼料株式会社のナチュラル U P Cは、一般的な組成が、穀類（とうもろこし、マイ口） 6 6 %、そうこう類（コーングルテンミール、米ぬか） 30%、植物性油粕類（大豆油粕、なたね油粕） 2%、その他（炭酸カルシウム、動物性油脂、食塩、リン酸カルシウム） 2%、のものを提供している。このものの成分組成は、粗蛋白質 1 7. 0%、粗脂肪 3. 0%以上、粗繊維 5. 0 %以下、粗灰分 13. 0%、カルシウム 2. 8 %、リン 0. 5 %である。

なお、オリエンタル酵母株式会社、日本配合飼料株式会社、日本農産工業株式会社、丸紅飼料株式会社などのメーカーがほぼ同じ組成の配合飼料を出している。

本発明において、体色改善、色揚げなどの目的で前記水畜産飼料に配合されるカロテノイド（c ar o t eno i d) は、動植物界に広く分布している黄色ないし赤色の脂溶性色素で、多数の共役二重結合を含む脂肪族または脂環式のポリェン類である。

なお、天然には 60 0種あまりの化合物が存在するといわれている。前記カロテノィド（c a r o t e no i d) のうち典型的に使用されるものは、下記一般式（ 1) で示されるァスタキサンチン（a s t ax ant h i n) 〔分子式 C ₄。 H _{s 2}0₄〕である。

一般式（ 1 ) ：

ァスタキサンチン（ a s t a X a n t h i n) は、赤色を呈するカロテノィドの一種であり、微生物、植物、動物に分布する。マダイ、キンギヨの体表の色、サケの筋肉の赤色、ェビゃ力二の甲羅の色などはァスタキサンチンによるものである。

ァスタキサンチンの生理作用としては、魚類では保護色、婚姻色、紫外線防御作用、卵質向上作用、抗酸化作用が知られている。また、近年、強力な活性酸素消去作用を持つことが判り、哺乳動物で発ガン予防効果、ガン細胞増殖抑制効果、免疫増強効果なども判り注目されている。本発明において、水畜産飼料に添加配合するァスタキサンチン源としては、酵母（Phaf f i a rho d o z ima) _s 緑藻（H a fem a t o c o c cu s p l uv i a l i s) 、ォキアミやアミェビなどの甲殻類、の抽出物がある。その他、合成品（ロッシュ社製、商品名力ロフィールピンク）もある。なお、後者はマダイ、サケ、マス用飼料として限定して使用されている。

本発明のカロテノィド含有水畜産飼料において、カロテノィドとしては、前記したァスタキサンチンのほかに、 5—カロテン（C₄。H₅₆) 、ルティン ( C₄₀H₅₆O₂ ) 、ゼアキサンチン (C₄₀H₅₆O₂ ) 、カプサンチン（C₄。H ₅₆0₃ ) などを例示することができる。

本発明において、カロテノィドの抗酸化安定剤及びメラニンの生成抑制剤は、前記したようにフェルラ酸、ァ—オリザノールなどのフエ二一ルプロパノィド化合物及びフィチン酸から成る群から選ばれる少なくとも 1種のもので構成される。

前記したカロテノィドの抗酸化安定剤及びメラニンの生成抑制剤としてカロテノィド含有水畜産飼料に添加配合される化合物は、米ぬかをはじめ多くの食物に含まれ、かつ、ヒトが摂取しているものでありその安定性は確認されている。

本発明のカロテノィドの抗酸化安定剤及びメラニンの生成抑制剤として使用されるフエニールプロパノィド化合物は、下記一般式（ 2 ) で示される化合物である。一般式（ 2)

本発明の前記一般式（ 2 ) で示されるフヱニールプロパノィド化合物としては、次の化合物を例示することができる。

(1) .フェルラ酸：前記化 2において、 R i = C H₃、 R₂ - H 、 R 3 = Hの化合物である。

(2) .ァ一オリザノール：前記化 2において、 = CH₃、 R₂ = H 、： ₃ =ステロール、トロテルペンアルコール、高級アルコールから選ばれた残基の化合物である。

(3) .コ一ヒー酸：前記化 2において、 = Hs R 2 =H、 R ₃ =Hの化合物である。

(4) .シナピン酸：前記化 2において、 = C H₃、 R₂ =0 C H a 、 R₃-Hの化合物である。

前記したようにフェルラ酸、コ一ヒー酸、シナピン酸はフェニールプロパノイド化合物に属するカルボン酸である。また、 y—オリザノールはフエニールプロパノィド化合物に属するフェルラ酸と/?—シトステロ —ルゃトリテルペンアルコールなどとのエステル化合物である。

本発明のカロテノィドの抗酸化安定剤及びメラニンの生成抑制剤として使用されるフィチン酸は、下記一般式（ 3 ) で示される化合物である

0

フィチン酸は、一般式（ 3 ) において、 R =— P O ( O H ) ₂で示される化合物である。

本発明者らは、カロテノィドの酸化劣化の機構について詳しく調べた。即ち、本発明者らは、飼料中もしくは魚体内で発生する脂質ラジカルがァスタキサンチンの退色の最大要因であると想定し、抗酸化安定剤としてのフ Xニールプロパノィド化合物であるフエルラ酸、コーヒ一酸、シナビン酸、 y —オリザノール及びフィチン酸の退色防止効果を検討した。検討のために、脂質ラジカルによる過酸化反応モデル（脂質過酸化モデル）を採用した（福沢健治、寺尾純二著、「脂質過酸化実験法」、廣川書店、 1 9 9 0 ) 。

即ち、リノール酸を基質にしてァゾラジカル発生剤である 2， 2，一ァゾビス（ 2 , 4—ジメチルバレロニトリル）（A M V N ) で脂質ラジカルを発生させて過酸化反応を誘発させるというモデルを採用して、前記酸化防止剤の酸化防止メカニズムを検討した。

前記過酸化反応を誘発させた系にァスタキサンチンを添加すると、すみやかに分解、退色がおこり、これがフェルラ酸などの酸化防止剤の添加により濃度依存的に防止ないしは抑制されるかどうかを確かめた。前記した脂質過酸化モデルにより、以下のことが判明した。

1 ) .ァスタキサンチンは、ポリェン構造を持つ抗酸化剤であり、一重項酸素や脂質ラジカルに対する優れた消去特性を持つている。しかしながら、脂質ラジカルと反応するとポリェン構造の部位の酸化分解が起り退色する。 2 ) .—方、フェルラ酸、コ一ヒ一酸、シナピン酸ゃァーオリザノールはフヱニールプロパノィドに属するフエノール系抗酸化剤であり、脂質ラジカルに速やかに水素を供与し過酸化反応を停止させることができる。

3 ) .フエニールプロパノイドはァスタキサンチンより脂質ラジカルとの反応が早いためァス夕キサンチンが酸化分解される前に脂質ラジカルを消去することができ、従ってァスタキサンチンの劣化、減耗を抑えることができる。

4 ) .一方、フィチン酸は水溶性ラジカル消去剤であり、ァスタキサンチンが消去できない水溶性ラジカルを消去することができるという効果がある。

なお、フィチン酸の酸化防止メカニズムの検討のためには、水溶性系の 2価の鉄である硫酸鉄と過酸化水素によって発生するヒドロキシラジカルによる脂質過酸化反応モデル（福沢健治、寺尾純二著、「脂質過酸化実験法」、廣川書店、 1 9 9 0 ) を採用した。

ァスタキサンチンの退色防止実験において、フィチン酸がァス夕キサンチンの退色を濃度依存的に抑制することが確かめられた。フィチン酸は金属をキレ一ト化する作用があることから、金属が誘発するラジカル反応を効果的に抑制することができる。

本発明の前記カロテノィドの抗酸化安定剤及びメラニンの生成抑制剤としてのフェルラ酸、コ一ヒー酸、シナピン酸、ァーオリザノールなどのフエニールプロパノィド化合物及びフィチン酸は、前記したことからも判るように、それそれを単独で用いることができるが、これらを組合わせて用いることもできる。

本発明において、これら抗酸化安定剤は、 1 0 0 %純品（化合物そのもの）のほかに、これら化合物を含有する植物、典型的には米ぬかの抽出物、抽出濃縮物、抽出エキスを用いてもよいものである。

前記米ぬかの抽出は、有機溶媒、例えばへキサンを用いて所望に行えばよい。より具体的には、米ぬか 1 00 gにへキサン 20mlを加え、 40 °Cで抽出すればよい。

なお、米ぬかは前記抗酸化性の化合物を含有しているが、米ぬかそれ自体では含有量が極めて少なく抗酸化安定剤としての機能を発揮することができない。従って、米ぬかは前記したように各種の水畜産飼料に配合されているが、中には米ぬかを脱脂処理したものを配合しているものがあり、これら米ぬかを配合した水畜産飼料は抗酸化性に優れているということができない。

本発明において、ァスタキサンチンなどのカロテノィドは、水畜産飼料に対して所望に配合されるものであり、例えばカロテノィドの飼料への混合比（重量％) は 0. 000 1〜0. 0 1 %、好ましくは 0. 00 1〜0. 05 %である。

また、本発明において、ァスタキサンチンなどのカロテノイドの抗酸化安定剤及びメラニンの生成抑制剤（フェルラ酸、コーヒー酸、シナピン酸、ァ—オリザノールなどのフエ二一ルプロパノイド化合物及びフィチン酸で構成される。）の飼料への混合比率も所望に設定すればよく、例えばその飼料中への混合比は 0. 0001 %〜 1 0%、好ましくは 0 . 0 1〜0. 1 %である。

本発明のカロテノィド含有水畜産飼料は、カロテノィドの抗酸化安定剤として特定の安定剤を含有させているため、飼料を押出し成形機により成形してペレットタイプのェクストルーダーペレツ卜（EP) を製造するとき、飼料が加熱されても安定剤によりァスタキサンチンなどの力口テノィドの分解が効果的に防止ないし抑制される。

本発明のカロテノィドの抗酸化安定剤及びメラニンの生成抑制剤は、ドライペレット、モイストペレットをはじめ、自家製の飼料などいずれの形態の飼料にも添加配合することができる。

本発明のカロテノィド含有水畜産飼料の投与期間は、特段に制限されるものではないが、商品価値の高い美しい体色を発現させるためには数

3 ヶ月の投与が好ましい。

以下、本発明の技術的構成について実施例により更に詳しく説明する ο

なお、本発明は実施例のものに限定されないことはいうまでもないことである。

(実施例 1 )

0. 1 Mリノール酸含有エタノール溶液 1 m 1に 0. 003 %ァス夕キサンチン含有エタノール溶液 0. 5 m 1を加えた。この溶液に 0. 1 %フヱルラ酸含有エタノール溶液を加え、全量 4m 1に対し最終フェルラ酸濃度 0. 3 5mg/ml〜 0. 00003 5 m g /m 1となるよう調整した。またフェルラ酸の代わりにエタノール溶液を加えたものを対照区（コントロール区）とした。

この溶液に 0. 1M AMVNのへキサン溶液 0. 5mlを加え 37 °Cで浸盪しながら脂質過酸化反応を行い脂質ラジカルを発生させた。経時的に 470 nmの吸光度を測定しァスタキサンチンの減少率をモニタ一した。

結果を下記の表 1に示す。表 1から、フェルラ酸は濃度依存的にァスタキサンチンの脂質ラジカルによる分解を抑制したことが判る。

〔表 1〕

(実施例 2)

0. 1 Mリノール酸含有ェ夕ノ一ル溶液 1 m 1に 0. 003 %ァス夕キサンチン含有ェ夕ノ一ル溶液 0. 5 m 1を加えた。この溶液に 0. 1 % y—オリザノール含有エタノール溶液を加え、全量 4 m 1に対し最終 y—オリザノール濃度 0. 35mg/ml〜0. 000035mg/m 1となるよう調整した。またァ一オリザノールの代わりにェタノ一ル溶液を加えたものを対照区とした。

この溶液に 0. 1 M AMVNのへキサン溶液 0. 5mlを加え 37 °Cで浸盪しながら脂質過酸化反応を行い脂質ラジカルを発生させた。経時的に 47 0 rimの吸光度を測定しァスタキサンチンの減少率をモニタ —した。

結果を下記の表 2に示す。表 2から、ァ—オリザノールは濃度依存的にァスタキサンチンの脂質ラジカルによる分解を抑制したことが判る。

〔表 2〕

(実施例 3)

0. 1 Mリノール酸含有エタノール溶液 1 m 1に 0. 003 %ァス夕キサンチン含有エタノール溶液 0. 5 m 1を加えた。この溶液に 0. 1 %フェルラ酸、ァーオリザノール、シナピン酸及びコーヒー酸含有エタノール溶液をそれぞれ加え、全量 4mlに対し最終濃度 0. 35mg/ ml〜 0. 000035 mg/m 1となるよう調整し。

この溶液に 0. 1M AMVNのへキサン溶液 0. 5mlを加え 37 °Cで浸盪しながら脂質過酸化反応を行い脂質ラジカルを発生させた。経時的に 47 0 nmの吸光度を測定しァスタキサンチンの減少率をモニタ —した。

結果を下記の表 3〜表 4に示す。表 3〜表 4から、ァスタキサンチンの退色抑制効果はフェルラ酸 >ァーオリザノール >シナピン酸 >コ一ヒ一酸の順であることが判る。

〔表 3〕

(実施例 4)

0. 1 %卵黄レシチン懸濁液に 0. 0 0 3 %ァスタキサンチン含有ェタノ一ル溶被 0. 5 mlを加えた。この溶液 2. 5 mlへ 15 mM硫酸鉄水溶液 0. 5 m 1および 50 mM過酸化水素水 50 1を加えた（ヒドロキシラジカルによる脂質過酸化反応モデルの採用）。これに 0. 2 5%フィチン酸溶液を加え、全量 4 mlに対し最終濃度 0. 06 25〜 0. 5 m 1となるよう調整し、 30分室温で静置した。

その後、ァセトンおよびジェチルェ一テルにてァスタキサンチンを反応溶液から抽出して 470 nmの吸収を測定し、ァス夕キサンチン残存率を算出した。

結果を下記の表 5に示す。表 5からフイチン酸は濃度依存的にァス夕キサンチンの脂質ラジカルによる分解を抑制したことが判る。

6 〔表 5〕

(実施例 5 )

0. 1 Mリノール酸含有エタノール溶液 1 m 1に 0. 003 %ァス夕キサンチン含有エタノール溶液 0. 5mlを加えた。この溶液にフェルラ酸、ァーオリザノール及びフィチン酸をそれそれ 0. 1 %含有するェ夕ノール溶液を加え、全量 4 m 1に対しそれそれの最終抗酸化安定剤濃度が； I . 05mg7ml〜 0. 0000 1 05 m g Zm 1となるよう調整した。また抗酸化安定剤の代わりにェ夕ノ一ル溶液を加えたものを対照区（コントロール区）とした。

この溶液に 0. 1M AMVNのへキサン溶液 0. 5mlを加え 37 °Cで浸盪しながら脂質過酸化反応を行い、脂質ラジカルを発生させた。絰時的に 47 0 nmの吸光度を測定しァスタキサンチンの減少率をモニ夕一した。

結果を下記の表 6に示す。表 6から、フェルラ酸、ァーオリザノ一ル及びフイチン酸混合物は濃度依存的にァスタキサンチンの脂質ラジカルによる分解を抑制したことが'判る。

〔表 6〕

(実施例 6 ) (マダイ育成用配合飼料を用いたケースでの実験）市販配合飼料として、キリンフィード社製の魚粉 60 %、穀類 1 5% 、植物性油かす類 1 0%、そうこう類（米ぬか、ふすま） 5 %、その他

(動物油脂、ビール酵母、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム 1 0 %) から成るマダイ育成用配合飼料（マダイ EP 4. 5 ) を使用し、これにァスタキサンチン（ホフマンラロッシュ社製、商品名カロフィールピンク）を 60 ppm配合し、更に下記表 7に示すようにフェルラ酸またはァ一オリザノールを添加し、押出し成形機によって飼料 1〜8のェクストルーダ—ペレット（EP) を作成した。

飼料 1は対照区としてフェルラ酸又はァーオリザノールは添加していないものである。飼料 2— 8は下記の表 7に示す所定量のフェルラ酸又はァーオリザノールを添加したものである。

E P作成前後の各飼料に含まれるァスタキサンチン含量を吸光度法で求め、 E P作成後のァスタキサンチン残存率を求めた。結果を下記の表 7に示す。

表 7からフエルラ酸またはァ一才リザノールを添加した区は無添加区 (残存率 73. 6 %) に比べていずれも有意にァスタキサンチンの残存率が上昇した。特にフェルラ酸を 0. 5 %添加した区はァスタキサンチン残存率が 90. 4%であり、無添加区にくらべ 1. 2倍もァス夕キサンチンが残存していることが判る。

〔表 7〕

8 (実施例 7 ) (マダイでのフィールド飼育試験）：

(1).試験飼料の調整法：前記キリンフィールド社製のマダイ育成用配合飼料（マダイ EP 4. 5 ) (実施例 6参照）に対し、ァス夕キサ

• ンチンを 60 ppm加えた。更に、これに下記表 8に示す所定量のフェルラ酸またはァーォリザノールを添加し、試験飼料を調整した

(コントロール区は無添加）。

〔表 8〕

試験飼料試験区試験飼料フエルラ酸またはァーォリザノール添加量

1区飼料 1 無添加（コントロール区）

2区飼料 2. フエ^)レラ酸 0. 01 %添加

3区飼料 3 フエレラ酸 0. , 05 %添加

4区飼料 4 フエノレラ酸 0. , 1%添加

5区飼料 5 フエノレラ酸 0. . 5%添加

6区飼料 6 ァ一オリザノ- —ル 0. 05 %添加

7区飼料 7 アーオリザノ- —ル 0. 1%添カロ

8区飼料 ·8 アーオリザノ'ール 0. 5%添加

(2).飼育試験（ 1) (体色測定値）：平均体重 2 80 _g前後のマダイを一群 30尾ずつ 2 x 2 x 2. 5 mの網生簀に収容して 8試験区を設定し、海面で飼育試験を 98日行った。なお、すべての試験区には日覆ネットを施した。各試験区には所定の試験飼料を 1日 2回、 1週間に 6日給餌した。飼育 98日目に各試験区から 10尾を取り上げ、フエノキシエタノールで麻酔した直後に、背鰭基部、胸鰭基部、尾柄部及び腹鰭後部の体色を色彩色差計で L値（明度）、 a値 (赤系色調）を測定した。その結果下記の表 9に示す,

〔表 9〕

色彩色差計によるマダイの体色測定値（L :明度、 a ：赤系色調）背鰭基部胸鰭 S部尾柄部腹鰭後部

T T

J d Ju d J L

1区 32.77 8.00 62.48 12.22 68.60 13.45 82.21

2区 37.06 8.00 66.43 14.28 69.30 14.48

3区 37.86 8.14 66.70 13.74 68.05 14.59 86.12

4区 34.23 8.00 65.26 13.06 68.46 15.07 85.28

5区 38.73 8.00 64.56 14.40 72.59 13.50 84.03

6区 40.64 8.45 63.61 13.86 72.54 14.03 84.50

7区 37.08 8.52 62.44 15.74 69.53 15.04 84.98

8区 38.03 8.10 62.84 14.53 70.13 14.00 85.02 表 9に示されるように、背鰭基部において、明るさを示す L値は、コントロール区（ 1区）が 3 2 . 7 7であるのに対してフェルラ酸またはァ一ォリザノールの投与区（ 2— 8区）では 3 7— 4 0と上昇しており、これは最も日焼けする背鰭基部においてフェルラ酸およびァ一オリザノールの投与により効果的にメラニンの生成が抑制されたことを示している。

同様に、胸鰭基部、尾柄部、腹鰭後部でもフェルラ酸およびァ一オリザノ一ル投与区（ 2— 8区）ではコントロール区（ 1区）に比べ、 L値の上昇が見られる。これらの結果から、マダイにフェルラ酸およびァ一ォリザノールを投与することによりメラニンの生成が効果的に抑制されたことが判る。

一方、赤さを示す a値もフェルラ酸またはァ一ォリザノ一ルの投与区 (2— 8区）ではコントロール区（ 1区）に比べ、高い傾向が認められた。このことはフェルラ酸およびァ一ォリザノールがァスタキサンチンの蓄積にも有効に働いたことを示している。特に胸鰭基部ではコントロ —ル区（ 1区）の a値が 1 2. 22であるのに対して、フェルラ酸または "X—オリザノールの投与区（2— 8区）ではおおむね 14以上と良い結果を示している。なお、この傾向は、背鰭基部および尾柄部においても認められる。

(3).飼育試験（2) (成長性及び飼育効率について）：フェルラ酸またはァーォリザノールの添加飼料による 98日間後のマダイの成長性について調べた。結果を下記の表 10に示す。各試験区間において成長には大きな差は見られなかった。このことはフヱルラ酸およびァ一才リザノールの投与による魚の生成への負の影響がないことを示している。

また、飼料効率（％) (飼育後の増重量を摂餌量で除した値）について調べた結果を、下記の表 10にあわせて示す。表 1 0に示されるように、フェルラ酸または y—オリザノールの投与区（2- 8 区）ではコントロール区 '（ 1区）に比べ、飼料効率（％) の上昇が認められる。

2 〔表 1 0〕

飼育成績試験区 1区 2区 3区 4区 5区 ' 6区 7区 8区平均体重 (g) 開始時 293 287 285 286 294 280 287 302 終了時 665 695 672 658 695 672 673 730 増重量 (kg) 9.41 10.22 10.33 9.55 10.18 10.33 9.63 9.27 摂餌量 (kg) 17.42 17.21 17.05 17.31 17.09 17.69 17.10 16.62

飼料効率 (％〉 54.0 59.4 60.6 55.2 59.0 58.4 56.3 55.7 また、フェルラ酸またはァ一ォリザノールの投与区の魚を食したところ、コントロール区（ 1区）の魚と食味、食感の違いは認められなかつた。

(4) .飼育試験（ 3 ) (過酸化脂質生成抑制効果について）：

飼育試験を 9 8 日間行った後、各試験区から 5尾の肝臓を取り出し、肝臓中の過酸化脂質をチォバルビヅ一ル酸法で求めた。下記表 1 1に各試験区の肝臓に含まれる過酸化物量をマロンジアルデヒド（M D A ) 含量で示す。その結果、フェルラ酸またはァーオリザノールの投与により魚の過酸化ストレスが軽減され、ァスタキサンチンが有効に蓄積されたことを示している。

なお、表 1 1において a、 bの文字の付いた数字で異なる文字の付いた数字（たとえば aと bの付いた数字では）統計的に 5 % の危険率（pく 5 %で表す。 '）があること、即ち 9 5 %以上の信頼度で 2つの数字には有意な差があることを示す。〔表 1 1〕肝臓の MDA含量

試験区 1区 2区 3区 4区 5区 6区 7区 8区

MDA (nmol/g肝臓）

601.8b 522.9 540^a'^b 485. 5 a 469. 8 a 520.2a,b 507.2a.b 457.8»

(注） a， bの異なる文字間に有意差あり（pぐ 5 %)

産業上の利用可能性水畜産業において、例えば魚介類などの体表の色や筋肉の色を改善（体色改善、色揚）するためにァスタキサンチンなどのカロテノィドを含有する水畜産飼料が多用されているが、カロテノィドは酸化や熱に対する安定性が悪く、例えばァスタキサンチンは酸化されて退色し、その添加効果を消失してしまう。

本発明は、カロテノィドの酸化や熱に対する安定性を改善するために、植物由来で生体安全性に優れるフェルラ酸、コ一ヒー酸、シナピン酸、 y —オリザノールなどのフエニールプロパノィド化合物及びフィチン酸を安定剤として使用する。このため、本発明により、酸化や熱に対する安定性が高度に改善されるため体色改善に優れ、かつ生体安全性に優れたカロテノィド含有水畜産飼料が提供される。

また、前記フエニールプロパノィド化合物及びフィチン酸は、水畜産動物の体内において、黒ずんだ体色の原因となり、かつ吸収されたカロテノィドの発色効果を低減するメラニンの生成を効果的に抑制することができるため、本発明によりカロテノィドの添加効果（発色効果）を増長する体色改善性に優れたカロテノィド含有水畜産飼料が提供される。更にまた、前記フエニールプロパノィド化合物及びフィチン酸は、水畜産動物の体内において、過酸化脂質の生成を効果的に抑制することができるため、過酸化脂質による過酸化ストレスを効果的に軽減することができるため、本発明により飼育効果（動物の成長性）、飼料効果に優れたカロテノィド含有水畜産飼料が提供される。

Claims

請求の範囲

1. カロテノイド（c a r o t eno i d) 含有水畜産飼料が、

• カロテノイドの抗酸化安定性を高める機能と、メラニン（me l an i n) の生成を抑制する機能を有する化合物として、 • フエニールプロパノィド化合物及びフィチン酸からなる群から選ばれた少なくとも 1種の化合物、

を含有することを特徴とするカロテノィド含有水畜産飼料。

2. カロテノイド（c a r o t e no i d) が、ァスタキサンチン（a s t axant h i n) である請求項 1に記載のカロテノィド含有水畜産飼料。

3. フエニールプロパノイド化合物が、フェルラ酸、コ一ヒ一酸、シナビン酸及びァ一オリザノールからなる群から選ばれた少なくとも 1種の化合物である請求項 1に記載のカロテノィド含有水畜産飼料。

4. フヱニールプロパノィド化合物及びフィチン酸からなる群れから選ばれた少なくとも 1種の化合物が、米ぬかを抽出して得たものである請求項 1に記載のカロテノィド含有水畜産飼料。