WO2002006227A1

WO2002006227A1 - Matrix metalloprotease inhibitors

Info

Publication number: WO2002006227A1
Application number: PCT/JP2001/006172
Authority: WO
Inventors: Akira Okamachi; Tatsuya Tamura; Yoshiki Hayashi; Teruo Nakamura
Original assignee: Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha
Priority date: 2000-07-18
Filing date: 2001-07-17
Publication date: 2002-01-24
Also published as: AU2001271068A1

Abstract

The present invention provides matrix metalloprotease (MMP) inhibitors improved in the retention at an affected part of a living body. Specifically, cationic matrix metalloprotease inhibitors bearing cationic groups in the molecule or salts thereof are provided.

Description

明細書マトリックスメタ口プロテアーゼ阻害活性ィ匕合物技術分野 Description Matrix meta-oral protease inhibitory activity

本発明は、マトリックスメタ口プロテアーゼ（以下 MMPとも称す）阻害活性を有する化合物に関する。さらに詳細には、変形性関節症、慢性関節リウマチ等の治療に有用な MM P阻害活性化合物であって、その一部としてカチオン基を有する MM P阻害活性化合物、およびその製造方法に関する。背景技術 The present invention relates to a compound having a matrix meta-oral protease (hereinafter also referred to as MMP) inhibitory activity. More specifically, the present invention relates to an MMP inhibitory active compound useful for treating osteoarthritis, rheumatoid arthritis, etc., which has a cationic group as a part thereof, and a method for producing the same. Background art

関節軟骨は約 70%の水分と、軟骨細胞および軟骨マトリックスとから構成されている。軟骨マトリックスを構成する主成分はコラーゲンとプロテオダリカンであり、網目構造を有するコラーゲンのネットワークに水分保持能に富むプロテオダリカンが含有されている。軟骨マトリックスは粘弹性に富み、軟骨にかかる刺激ゃ負荷を軽減して、関節軟骨が正常な形態と機能を保持する上で重要な役割を果たしている。 Articular cartilage is composed of about 70% water, chondrocytes and cartilage matrix. The main components of the cartilage matrix are collagen and proteodarican, and a network of collagen having a network structure contains proteodarican having a high water retention ability. The cartilage matrix is highly viscous and plays an important role in reducing the irritating load on cartilage and maintaining the normal shape and function of articular cartilage.

変形性関節症（以下、 OAとも称す）と慢性関節リウマチ（以下、 RAとも称す）は、共に軟骨マトリックスの破壌を伴う代表的な疾患である。両疾患におけるマトリックスの破壊は、 OAでは加齢に伴うメカニカルストレス、 RAでは滑膜表層細胞の過剰増殖、パンヌス形成、炎症性細胞の浸潤などが引き金となり、いずれもプロテアーゼの誘導を介して惹起されるものと考えられている。軟骨マトリックスの分解が中性の pHを持つ細胞外で行われることから、この領域の pHを至適とするマトリックスメタ口プロテアーゼが分解の中心的な担い手と言われている [Current Opinion in Ant i-Inf lammatory & I匪翻 modulatory Inves t igat i onal Drugs, vol. 2, 16-25, (2000)]。 Both osteoarthritis (hereafter, OA) and rheumatoid arthritis (hereafter, RA) are both representative diseases accompanied by cartilage matrix rupture. Matrix destruction in both diseases is triggered by age-related mechanical stress in OA, hyperproliferation of synovial lining cells, pannus formation, and infiltration of inflammatory cells in RA, all of which are induced by protease induction. It is believed to be triggered. Since the cartilage matrix is degraded extracellularly at a neutral pH, matrix meta-oral proteases that optimize the pH in this region are said to be the main players in the degradation [Current Opinion in Ant i-Inf lammatory & I Marauder modulatory Inves tigat ional Drugs, vol. 2, 16-25, (2000)].

現在までに、 MMPに属する酵素として 20種類が報告されており、それらと結合して活性を阻害する組織メタ口プロテアーゼインヒビター（以下、 T I MP とも称す）と呼ばれる生体内タンパク質も 4種類が見いだされている [J. Biol. Ch em. , vol. 274, 21491-21494, (1999)]。また、近年、分子内にメタ口プロテア一ゼ様のドメインとデイスインテグリン様のドメインとを併せ持つ新たな MM P様タンパク質（以下、 AD AMまたは AD AMT Sとも称す）が少なくとも 30種類以上見いだされている。 ADAMや ADAMT Sの内のいくつかは、例えば、 AD 17 ^ 0!変換酵素)ゃ丁3-4, -5 (ァダリカナ一ゼ- 1, -I I) などのように、 M M P様のプロテアーゼ活性を持つことも明らかにされつつある [Current Opinion in AnU- Inf la腿 atory & I匪讓 odulatory Inves t igat ional Drugs, vol. 2, 1 6-25, (2000)] To date, 20 types of enzymes belonging to MMP have been reported, and 4 types of in vivo proteins called tissue meta-oral protease inhibitors (hereinafter also referred to as TIMPs) that bind to them and inhibit their activity have been found. [J. Biol. Ch em., vol. 274, 21491-21494, (1999)]. In recent years, at least 30 new MMP-like proteins (hereinafter, also referred to as ADAM or ADAMTS) that have both a metaprotease-like domain and a disintegrin-like domain in the molecule have been discovered. I have. Some of ADAM and ADAMT S have MMP-like protease activities such as, for example, AD 17 ^ 0! Converting enzyme) ゃ 3-4, -5 (addaricanase-1, -II). [Current Opinion in AnU- Infla thigh atory & I marauding odulatory Inves tigational Drugs, vol. 2, 16-25, (2000)]

これら一連の MMPファミリーに属する酵素群は、生理的条件下では発生、血管新生、性周期、骨リモデリング、組織修復などさまざまな機能を担っている。これらの機能が適切に発現されるよう、酵素の産生、活性化および基質との相互作用の各段階は T I MP等の生体内インヒビターによって厳密にコントロールされている。換言すれば、病態でのマトリックスの破壊は、 MM Pの調節機構に何らかの破綻が生じ、 MMPが過剰に産生、活性化されたことに起因すると考えられる。 Under the physiological conditions, these enzymes belonging to the MMP family are responsible for various functions such as development, angiogenesis, estrous cycle, bone remodeling, and tissue repair. In order for these functions to be properly expressed, the steps of enzyme production, activation and interaction with the substrate are strictly controlled by in vivo inhibitors such as TIMP. In other words, the destruction of the matrix in the pathological condition is thought to be due to some disruption in the regulatory mechanism of MMPs and excessive production and activation of MMPs.

それゆえ、 MM Pを阻害する薬物は、 OAや R A等の関節疾患における軟骨マトリックスの破壊を抑制する薬物として極めて有望である。 MMPを阻害する薬物はこれまでにも数多く報告されている (Exp. Opin. Ther. Patents (1998) vol. 8 , 259—282、 J. Enzyme Inhibi t ion (1998) vol. 13, 79-101、 Drug Discovery Tod ay (1996) vol. 1, 16-26) が、阻害活性の強さと MM Pへの特異性の高さから、マトリックスメタ口プロテアーゼ阻害剤（以下、 MMP Iとも称す）としてはヒドロキサム酸骨格を有する化合物が、現在、最も注目されている。既に経口投与でも MMP阻害作用を発揮するヒドロキサム酸骨格を有する化合物が見いだされており、そのうちのいくつかは癌患者や関節疾患の患者を対象に、臨床試験が進められている。しかし、この種の MMP Iは、程度の差こそあれ、すべての MM Pに対する阻害作用を持ち、生理的な機能に関わる MM Pをも抑制してしまう可能性がある。事実、癌患者を対象に進行中である、ヒドロキサム酸骨格を有する化合物の臨床試験では、一過性ながら骨筋肉痛などの副作用が約 30%の頻度で起こることが報告されている [Ann. NY Acad. Sc i. , vol. 878, 228-235, (1999)]。最近では、特定の MMPへの特異性を高めた改良品の開発も進められているが、未だ病態のみに関与する MMPは特定されておらず、また、続々と未知の MMPが発見されていることから、全身投与時に MM Pの何らかの生理作用を抑制してしまう可能性も払拭されていない。 Therefore, drugs that inhibit MMPs are extremely promising as drugs that suppress the destruction of the cartilage matrix in joint diseases such as OA and RA. Many drugs that inhibit MMP have been reported (Exp. Opin. Ther. Patents (1998) vol. 8, 259-282, J. Enzyme Inhibition (1998) vol. 13, 79-). 101, Drug Discovery Today (1996) vol. 1, 16-26), as a matrix meta-oral protease inhibitor (hereinafter also referred to as MMP I) due to its strong inhibitory activity and high specificity for MMP Currently, compounds having a hydroxamic acid skeleton have received the most attention. Compounds having a hydroxamic acid skeleton that exert MMP inhibitory effects even by oral administration have already been found, and some of them are undergoing clinical trials in cancer patients and joint disease patients. However, this type of MMPI has, to varying degrees, an inhibitory effect on all MMPs and may also suppress MMPs involved in physiological functions. In fact, ongoing clinical trials of compounds with a hydroxamic acid skeleton in cancer patients have reported that side effects such as bone muscle pain, which are transient, occur at a frequency of about 30% [Ann NY Acad. Sc i., Vol. 878, 228-235, (1999)]. Most Recently, the development of improved products with higher specificity for specific MMPs is also being promoted, but MMPs that are only involved in the disease state have not yet been identified, and unknown MMPs have been discovered one after another. Therefore, the possibility of suppressing any physiological effects of MMP during systemic administration has not been eliminated.

こうした問題点を解消する試みとしては、まず、 MMP Iの関節腔内への局所投与が考えられる。しかし、公知のヒドロキサム酸骨格を有する化合物では、頻回の関節腔内注射が必要となり、 OAや R A患者への長期の使用は極めて困難である。他の試みとしては、 MMP Iを標的部位にのみ限局させる、いわゆるドラッグデリバリ一システムが考えられる。しかし、従来技術では投与された MM P Iを罹患関節内に限局または貯留させる方法は確立されていない。 The first attempt to solve these problems is to administer MMP I locally into the joint cavity. However, known compounds having a hydroxamic acid skeleton require frequent intra-articular injections, and their long-term use in OA and RA patients is extremely difficult. Another attempt could be the so-called drag delivery system, which limits MMP I only to the target site. However, in the prior art, no method has been established for localizing or retaining the administered MMPI in the affected joint.

このように、 MMP Iは優れた薬理作用を有しながらも、〇Aや RAのような慢性疾患の治療薬として臨床応用するためには、依然として解決すべき問題が存在する。 Thus, although MMPI has excellent pharmacological effects, there are still problems to be solved for clinical application as therapeutic agents for chronic diseases such as 〇A and RA.

ところで、ヒアルロン酸（以下、 HAとも称す）は、 N—ァセチルダルコサミンとグルクロン酸との繰り返し単位より構成される生体内ポリカルボン酸であり、関節液を構成する主成分として関節液の粘弾性、荷重吸収作用および潤滑作用の保持に重要な働きを果たしている。また、軟骨マトリックスにおいては、軟骨プロテオダリカンと結合してァグリカンと呼ばれる重合体を形成し、水分保持能と粘弾性の維持に中心的な役割を担っている。 By the way, hyaluronic acid (hereinafter also referred to as HA) is an in vivo polycarboxylic acid composed of repeating units of N-acetyldarcosamine and glucuronic acid. It plays an important role in maintaining viscoelasticity, load absorption and lubrication. In the cartilage matrix, it binds to cartilage proteodalican to form a polymer called aggrecan, and plays a central role in maintaining water retention and viscoelasticity.

現在、関節疾患、特に OAや肩関節周囲炎においては、 HAおよびその架橋物 (以下、臨床的に使用されている HAとその架橋物を総称して HA製剤とも称す ) の関節内注入療法が臨床的に広く行われている。 HAは細胞外マトリックスの構成成分であることから軟骨マトリックスにも高い親和性を有する。またそれ自身高い粘弾性を有していることから、関節内に注入された後、関節腔内に長時間局在する特徴を有している。 Currently, in the case of joint diseases, especially in OA and periarthritis of the shoulder, intra-articular infusion therapy of HA and its cross-linked product (hereinafter, HA and its cross-linked product are also collectively referred to as HA preparations). It is widely practiced clinically. Since HA is a constituent of the extracellular matrix, it also has a high affinity for cartilage matrix. In addition, because of its high viscoelasticity, it is characterized by being localized in the joint cavity for a long time after being injected into the joint.

これまで関節腔内の貯留性を高めるため、ヒアルロン酸自体の物性を変化させるなどの試みが報告されている（特開平 6— 2 5 4 3 8 1号公報、特開平 1 1一 1 3 0 6 9 7号公報、 WO 9 9 Z 1 0 3 8 5号公報など）。しかし、 HA製剤には MMPを阻害する作用はないため、 OAや R Aの病態において進行する関節破壊を十分に止める効果は期待できない。 Attempts to change the physical properties of hyaluronic acid itself have been reported to enhance the retention in the joint cavity (Japanese Patent Application Laid-Open Nos. Hei 6-254,381, Hei 11-113). Japanese Patent Application Publication No. 0697, WO99Z1038905, etc.). However, HA preparations have no inhibitory effect on MMPs, so joint destruction that progresses in OA and RA The effect of sufficiently stopping destruction cannot be expected.

また、関節腔内において長期間貯留し局所の MMPを阻害する化合物として M M P Iとヒアルロン酸との共有結合体が報告されている（W0 9 9 / 5 9 6 0 3 号公報）。 In addition, a covalent conjugate of MMPI and hyaluronic acid has been reported as a compound that retains in the joint cavity for a long time and inhibits local MMP (WO99 / 5963).

しかし、ヒアルロン酸に化学的な修飾を施すことなく、これと併用することにより、または単独投与により、高い生体内貯留性を発揮する MMP Iは知られていない。 However, there is no known MMP I that exhibits high in vivo retention by using it in combination with hyaluronic acid without chemical modification or by administering it alone.

一方、スーパーォキシドジスムターゼなどのェンザィムに化学修飾を施しカチオン化した、いわゆるカチォニックェンザィムは、関節腔において、非修飾のェンザィムよりも長く滞留したことが報告されている [J. Cl in. Invest. , vol. 76， 1 98-205, (1985) ]。しかし、 MM P Iとしては、カチォニックな性質に基づいて高い貯留性を発揮する化合物は知られていない。発明の開示 On the other hand, it has been reported that so-called kazonic enzymes, in which enzymes such as superoxide dismutase are chemically modified and cationized, stay in the joint cavity longer than unmodified enzymes [ J. Cl in. Invest., Vol. 76, 1998-205, (1985)]. However, there is no known MMPI that exhibits high storage properties based on its cationic properties. Disclosure of the invention

本発明の目的は、生体局所における貯留性の向上した MMP阻害活性化合物を提供することである。特に、関節腔内または関節組織上にヒドロキサム酸骨格を有する MM P阻害活性化合物を貯留させ、 MMP阻害作用を関節腔内または関節組織上に限局させる化合物を提供することである。 An object of the present invention is to provide an MMP inhibitory active compound having an improved local storage property in a living body. In particular, it is an object of the present invention to provide a compound which stores an MMP inhibitory active compound having a hydroxamic acid skeleton in a joint cavity or on a joint tissue and limits the MMP inhibitory action to the joint cavity or on the joint tissue.

本発明の別の目的は上記化合物を含む医薬を提供することである。 Another object of the present invention is to provide a medicament containing the above compound.

本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を重ねた結果、 MMP Iに力チオン基を導入することにより、生体局所における貯留性が向上し得ることを見出し、この知見に基づき本発明を完成させた。 The present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, have found that the introduction of a thiothion group into MMP I can improve the storage property in a living body. Completed the invention.

すなわち、本発明によれば、カチォニック MMP阻害活性ィ匕合物またはその塩が提供される。 That is, according to the present invention, a cationic MMP inhibitory activity conjugate or a salt thereof is provided.

本発明のカチォニック MMP阻害活性ィ匕合物またはその塩は、ヒドロキサム酸誘導体であることが好ましい。 The cationic MMP inhibitory activity conjugate of the present invention or a salt thereof is preferably a hydroxamic acid derivative.

本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩においては、カチォン基がヒドロキサム酸骨格と化学的結合により結合していることが好ましい。その化学的結合は、スぺーサーを介した共有結合であることが好ましい。本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物がその一部として有するカチオン基は、ポリカチオン基であることが好ましい。 In the catonic MMP-inhibiting active compound of the present invention or a salt thereof, the cationic group is preferably bonded to the hydroxamic acid skeleton by a chemical bond. The chemical bond is preferably a covalent bond via a spacer. The cationic group of the catonic MMP inhibitory active compound of the present invention as a part thereof is preferably a polycation group.

本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩は、一般式（1) ： The catonic MMP-inhibiting compound of the present invention or a salt thereof has the general formula (1):

[式中、 1^は、水素原子、水酸基、炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のァルキル基、炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルコキシ基、炭素数 2〜8 の直鎖もしくは分岐鎖状のアルケニル基、 R₅R₆N— (CH₂) m— （ここで、 R₅、 R₆は、それぞれ独立に、水素原子、または、シクロアルキル基、ァリール基もしくは複素環基で置換されていてもよい炭素数 1〜 8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基もしくはァシル基を表す。あるいは、 R₅と R₆が環を形成していてもよい。 mは 0〜4の整数を表す。），、または、 B— SOn— (CH₂) m- (ここで、 mは 0〜4の整数を表し、 Bは、水素原子、シクロアルキル基、ァリール基、複素環基、または、シクロアルキル基、ァリール基もしくは複素環基で置換されていてもよい炭素数 1〜 8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表し、 nは 0、 1、または 2を表す）を表し； R₂及び R₃は、それぞれ独立に[Wherein 1 ^ is a hydrogen atom, a hydroxyl group, a linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, a linear or branched alkoxy group having 1 to 8 carbon atoms, 8 linear or branched alkenyl group, R ₅ R ₆ N— (CH ₂ ) m— (where R ₅ and R ₆ are each independently a hydrogen atom, a cycloalkyl group, Represents a linear or branched alkyl or acyl group having 1 to 8 carbon atoms which may be substituted with a group or a heterocyclic group, or R ₅ and R ₆ may form a ring. m represents an integer of 0 to 4.), or B—SOn— (CH ₂ ) m- (where m represents an integer of 0 to 4, and B represents a hydrogen atom, a cycloalkyl group, or aryl. Group, heterocyclic group, or C1-C8 which may be substituted with a cycloalkyl group, an aryl group or a heterocyclic group. It represents a chain or branched alkyl group, n 0, 1 or 2 are expressed) represents,; R ₂ and R ₃ are each independently

、シクロアルキル基、ァリ一ル基もしくは複素環基で置換されていてもよい炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表し； R₄は、水素原子、または炭素数 1〜4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表し、あるいは、とRepresents a linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms which may be substituted by a cycloalkyl group, an aryl group or a heterocyclic group; R ₄ represents a hydrogen atom or a carbon atom; Represents a linear or branched alkyl group of 1 to 4, or

R₃は環を形成してもよい。 ] R ₃ may form a ring. ]

で表される部分構造をすることが好ましい。 It is preferable to have a partial structure represented by

スぺーサ一としては、一般式（2) ： As a spacer, the general formula (2):

-R₇-R₈-R₉-R₁₀- (2) -R ₇ -R ₈ -R ₉ -R _10- (2)

[式中、 R₇は、炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキレン基を表し； R₈は、炭素数 1〜4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基で置換されていてもよぃメチレン基、酸素原子、またはイミノ基を表し； R₉は、 1〜3個の酸素原子が挿入されていてもよい炭素数 1〜 1 0の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキレン基を表し； R _{1 0}は、酸素原子、硫黄原子、または N R u (ここで、は、水素原子、または炭素数 1〜4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表す）を表す。 ] で表されるものが好ましい。 [Wherein, R ₇ represents a linear or branched alkylene group having 1 to ₈ carbon atoms; R ₈ is substituted with a linear or branched alkyl group having 1 to 4 carbon atoms. Represents a methylene group, an oxygen atom, or an imino group; R ₉ represents 1 to 3 oxygen atoms Represents a linear or branched alkylene group having 1 to 10 carbon atoms which may have an inserted atom; R ₁₀ is an oxygen atom, a sulfur atom, or NR u (where, is a hydrogen atom Or a linear or branched alkyl group having 1 to 4 carbon atoms). ] Is preferable.

本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩としては、一般式 ( 3 ) ： The catonic MMP inhibitory active compound of the present invention or a salt thereof is represented by the following general formula (3):

(式中、は、水素原子、水酸基、炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のァルコキシ基または炭素数 2〜 8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルケニル基を表し； R ₃は、シクロアルキル基、ァリール基もしくは複素環基で置換されていてもよい炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表し； R _{1 2}は、 1個のイミノ基および/または 1〜4個の酸素原子が挿入されていてもよい炭素数 2〜 2 3の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキレン基を表し； R _{1 3}は、水素原子、または炭素数 1〜4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表し； Dはカチオン基を表す）で表される化合物またはその塩が好ましい。 (Wherein, represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, a linear or branched § alkoxy group or a linear or branched alkenyl group having a carbon number 2-8 having 1 to 8 carbon atoms; R ₃ is R ₁₂ represents a linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms which may be substituted by a cycloalkyl group, an aryl group or a heterocyclic group; R ₁₂ represents one imino group and / or 1 Represents a linear or branched alkylene group having 2 to 23 carbon atoms which may have up to 4 oxygen atoms inserted therein; R ₁₃ is a hydrogen atom or a linear chain having 1 to 4 carbon atoms Or a branched alkyl group; D represents a cationic group) or a salt thereof.

一般式 ( 3 ) で表される化合物またはその塩においては、 Dが E x (Eは置換可ァミノ基、置換可アンモニゥム基、置換可グァニジノ基、置換可アミジノ基、もしくは置換可含窒素複素環を含むユニットを表し、 Xは 1〜2 0の整数を表し、 E xは単一ユニットの繰り返しであっても、 2種以上のユニットから構成されていてもよい。；) で表されるカチオン基であることが好ましい。 In the compound represented by the general formula (3) or a salt thereof, D is E x (E is a substituted amino group, a substituted ammonium group, a substituted guanidino group, a substituted amidino group, or a substituted nitrogen-containing heterocyclic ring. X represents an integer of 1 to 20; and Ex may be a single unit repeating unit or may be composed of two or more units.;) It is preferably a group.

本発明の他の一側面によれば、上述のカチォニックマトリヅクスメタ口プロテァーゼ阻害活性化合物またはその塩とヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体またはそれらの塩との混合物が提供される。 According to another aspect of the present invention, there is provided a mixture of the above-described catonic matrix meta-oral protease inhibitory active compound or a salt thereof and hyaluronic acid, a hyaluronic acid derivative or a salt thereof.

本発明のさらに他の一側面によれば、上述のカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩と、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体またはそれらの塩とが、非共有結合により結合した結合体が提供される。非共有結合がイオン結合であることが好ましい。 According to still another aspect of the present invention, there is provided a cationic MMP inhibitory activation compound as described above. And a salt thereof, and a hyaluronic acid, a hyaluronic acid derivative or a salt thereof, provided by a non-covalent bond. Preferably, the non-covalent bond is an ionic bond.

本発明のさらに他の一側面によれば、上述のカチォニック MM P阻害活性ィ匕合物またはその塩、混合物、あるいは結合体を含む医薬が提供される。こうした医薬としては、関節疾患治療薬が好ましい。関節疾患としては、変形性関節症、慢性関節リウマチ、または肩関節周囲炎が好ましい。 According to still another aspect of the present invention, there is provided a medicament comprising the above-described catonic MMP inhibitory activity conjugate or a salt, mixture or conjugate thereof. As such a drug, a therapeutic agent for joint disease is preferable. As the joint disease, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, or shoulder periarthritis is preferable.

上述のカチォニック MM P阻害活性ィ匕合物またはその塩、混合物、あるいは結合体は、関節疾患治療薬等の医薬あるいは医薬組成物を製造するために使用してもよい。 The above-mentioned catonic MMP inhibitory activity conjugate or a salt, mixture or conjugate thereof may be used for producing a medicament or a pharmaceutical composition such as a therapeutic agent for joint diseases.

本発明のさらに別の側面によれば、上述のカチォニック MM P阻害活性化合物またはその塩、混合物、あるいは結合体を使用する関節疾患の治療方法が提供される。例えば、こうした治療を必要とする患者に対して治療上有効量の上述の力チォニック MM P阻害活性化合物またはその塩、混合物、あるいは結合体を投与するステップを含む方法が提供される。好ましくは、関節疾患は、変形性関節症、 '隱性関節リウマチ、または肩関節周囲炎である。図面の簡単な説明 According to still another aspect of the present invention, there is provided a method for treating a joint disease using the above-described catonic MMP inhibitory active compound or a salt, mixture or conjugate thereof. For example, there is provided a method comprising the step of administering to a patient in need of such treatment a therapeutically effective amount of a compound as described above, or a salt, mixture or conjugate thereof. Preferably, the joint disease is osteoarthritis, 'hidden rheumatoid arthritis, or shoulder periarthritis. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

図 1はコントロール化合物 1 6 (白丸）、 1 7 (黒丸）のゲラチナーゼ Aに対する酵素阻害活性を示すグラフである。 FIG. 1 is a graph showing the enzyme inhibitory activities of control compounds 16 (open circles) and 17 (black circles) on gelatinase A.

図 2は、コントロール化合物 1 6 (白丸）、 1 7 (黒丸）のゲラチナーゼ Bに対する酵素阻害活性を示すグラフである。 FIG. 2 is a graph showing the enzyme inhibitory activities of control compounds 16 (open circles) and 17 (black circles) on gelatinase B.

図 3は、化合物 7 (黒四角）、 1 1 (格子入り白四角）、 1 5 (白三角）、および 1 7 (黒丸）のゲラチナーゼ Aに対する酵素阻害活性を示すグラフである。図 4は、化合物 7 (黒四角）、 1 1 (格子入り白四角）、 1 5 (白三角）、および 1 7 (黒丸）のゲラチナーゼ Bに対する酵素阻害活性を示すグラフである。図 5は、化合物 4 g (黒丸）、 5 f (黒三角）、および 6 f (黒四角）とコントロール化合物 2 8 (白丸）とのゲラチナ一ゼ Bに対する酵素阻害活性を示すグラフである。図 6は、ヒアルロン酸非共存溶液からの化合物 15 (白三角）、 16 (白丸）の放出、およびヒアルロン酸共存溶液からの化合物 7 (黒四角）、 11 (黒逆三角）、 15 (黒三角）、 16 (黒丸）の放出を示すグラフである。 FIG. 3 is a graph showing the enzyme inhibitory activities of Compounds 7 (closed squares), 11 (open squares with lattices), 15 (open triangles), and 17 (closed circles) on gelatinase A. FIG. 4 is a graph showing the enzyme inhibitory activities of Compounds 7 (closed squares), 11 (open squares with lattices), 15 (open triangles), and 17 (closed circles) on gelatinase B. Figure 5 is a graph showing the enzyme inhibitory activity of compounds 4g (solid circles), 5f (solid triangles), and 6f (solid squares) with control compound 28 (open circles) on gelatinase B. . Figure 6 shows the release of compounds 15 (open triangles) and 16 (open circles) from the solution without hyaluronic acid, and the release of compounds 7 (solid squares), 11 (black inverted triangles), and 15 (black) from the solution with hyaluronic acid. It is a graph which shows the emission of (triangle) and 16 (black circle).

図 7は、ヒアルロン酸非共存溶液からの化合物 4 g (白四角）、 5 f (白三角）および 6 f (黒丸）の放出、並びに、ヒアルロン酸共存溶液からの化合物 4 g (黒四角）、 5 f (黒三角）および 6 f (黒丸）の放出を示すグラフである。図 8は、コンドロイチン硫酸非共存溶液からの化合物 15 (白三角）および 1 Figure 7 shows the release of 4 g (open squares), 5 f (open triangles) and 6 f (closed circles) from the solution without hyaluronic acid, and 4 g (solid squares) from the solution with hyaluronic acid. , 5 f (solid triangles) and 6 f (solid circles). Figure 8 shows compounds 15 (open triangles) and 1 from chondroitin sulfate-free solution.

6 (白丸）の放出、並びに、コンドロイチン硫酸共存溶液からの化合物 15 (黒三角）および 16 (黒丸）の放出を示すグラフである。 6 is a graph showing the release of 6 (open circles) and the release of compounds 15 (closed triangles) and 16 (closed circles) from a solution containing chondroitin sulfate.

図 9は、ラット膝関節軟骨プロテオダリカン破壌に対するコントロール化合物 28の効果を示すグラフである。上から、生理食塩水 +トリス塩酸緩衝液、生理食塩水 +ストロメリシン— 1、化合物 28+ストロメリシン— 1、化合物 28/ HA混合物 +ストロメリシン— 1である。 * *は、 Turkey's 多重比較により、 Pく 0. 001であったことを示す。 FIG. 9 is a graph showing the effect of control compound 28 on proteodalican rupture in rat knee cartilage. From above, physiological saline + Tris-HCl buffer, physiological saline + stromelysin-1, compound 28 + stromelysin-1, compound 28 / HA mixture + stromelysin-1. ** indicates that it was P <0.001 by Turkey's multiple comparison.

図 10は、ラット膝関節軟骨プロテオダリ力ン破壌に対する化合物 6 f の効果を示すグラフである。上から、生理食塩水 +トリス塩酸緩衝液、生理食塩水 +ストロメリシン— 1、化合物 6 f +ストロメリシン— 1、化合物 6 f /HA混合物 +ストロメリシン一 1である。 **は、 Turkey's 多重比較により、 P<0. 0 01であったことを示す。 FIG. 10 is a graph showing the effect of compound 6f on rat prosthesis rupture in cartilage of the knee joint of rats. From the top, physiological saline + Tris-HCl buffer, physiological saline + stromelysin-1, compound 6f + stromelysin-1, compound 6f / HA mixture + stromelysin-11. ** indicates that P <0.001 by Turkey's multiple comparison.

発明を実施するための好ましい形態 BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION

なお、本出願が主張する優先権の基礎となる出願である特願 2000-216 Japanese Patent Application No. 2000-216, which is the application on which the priority claimed by the present application is based.

790号および特願 2000-398635号の開示は全て引用により本明細書の中に取り込まれる。 The disclosures of Japanese Patent Application No. 790 and Japanese Patent Application No. 2000-398635 are all incorporated herein by reference.

本発明において、カチォニック MM P阻害活性化合物とは、構造的にはその一部としてカチオン基を有し、かつ、作用的には、 MM P阻害活性を有する化合物を意味する。さらに具体的には、任意の生体（好ましくは哺乳類、特に好ましくはヒト）由来の任意の MM Pの活性を、例えばそれに結合すること等により、阻害することができる性質を有する全ての物質を意味する。 In the present invention, a catonic MMP inhibitory active compound means a compound structurally having a cationic group as a part thereof and functionally having MMP inhibitory activity. More specifically, the activity of any MMP derived from any living organism (preferably a mammal, particularly preferably a human) is inhibited by, for example, binding thereto. It means any substance that has the property of being able to harm.

より具体的には、本発明におけるカチォニック MMP阻害活性化合物とは、構造的にはその分子内にカチオン基を有し、かつ、作用的には、カルボン酸、リン酸、チオール、ヒドロキサム酸等の官能基を介して MMPの活性中心の亜鉛に結合することで酵素阻害活性を発揮する性質を有する化合物またはタンパク質（ポリペプチドを含む）を意味し、また、 MMP sあるいは、分子中にメタ口プロテァーゼ様のドメインとディスィンテグリン様のドメインとを併せ持つ新たな MM P様タンパク質（TNFひ変換酵素やァグリカナーゼ -1、 -II を始めとする AD AMや ADAMTSに属する一群のタンパク質）の酵素活性の発現を阻害する性質を有するものを意味する。 More specifically, the catonic MMP inhibitory active compound in the present invention structurally has a cationic group in its molecule, and functionally includes carboxylic acid, phosphoric acid, thiol, hydroxamic acid and the like. Means a compound or protein (including polypeptides) that has the property of exhibiting enzyme inhibitory activity by binding to zinc at the active center of the MMP via the functional group of MMPs. A new MMP-like protein with a combination of oral and disintegrin-like domains (a group of proteins belonging to ADAM and ADAMTS, including TNF-converting enzymes and aggrecanases-1, -II) It means a substance having the property of inhibiting the expression of enzyme activity.

本発明のカチォニック MMP阻害活性ィ匕合物の活性は、例えば、 Caws ton, T. E. & Barrett, A. J [Anal Biochem. , 99, 340-345 (1979 ) ] や Baici，A ら [Anal. Biochem. , 108, 230-232 (1980)]に記載された標識基質、 Masui, Y ら [Biochem. Med. , 17.215-221 (1977)]に記載された合成基質の MMP sによる分解に対する阻害活性として測定することができる。簡便には、これらの方法に基づいて開発された市販の MMP活性測定キットを用いて同様に測定することもできる。また、コラーゲン等の基質のフィルム上で培養した細胞をサイト力インで刺激した際に産生 ·活性化される MMP sの活性を、培養液中への基質分解物の遊離を指標に測定する実験系 [Gavrilovic,；[ ら： Cell. Biol. Int. Reports, 9, 1097-1107(1985): Br. J. Pharmacol., 100, 631- 635(1990)中で引用されている]、末梢白血球をリポポリサッカリド等で刺激して惹起される細胞膜表層からの TNF aの遊離を TNF α変換酵素の活性として評価する実験系 [DiMartino ら： Inflam. Res., 46, 211-215 (1997) ]、あるいは軟骨細胞をサイト力イン等で刺激した際のプロテオダリ力ン破壊を指標として評価する実験系 [Shimazu ら： Arthritis and Rheumatism vol.36, 247- 253(1993)]によって、 MMP sや TNF α変換酵素、ァグリカナーゼ- 1,- II の産生や活性化に対する阻害活性として測定することもできる。本発明の ΜΜΡ阻害活性化合物には、これら測定系の少なくとも一つにおいて、 1 OmgZm 1以下のいずれかの濃度で 45%以上、特に、 50%以上の抑制を示すィヒ合物が含まれる。本発明のカチォニック MMP阻害活性ィ匕合物としては、その一部としてカチォン基を有するヒドロキサム酸誘導体が好ましい。本発明における「ヒドロキサム酸誘導体」には、カチオン基を有し、かつ、ヒドロキサム酸骨格（N—ヒドロキシアミド）を有する物質が含まれ、具体的には、例えば、カチオン基を有し、かつ、前述の一般式（1 ) で示される部分構造を有する化合物、前述の一般式（3 ) で表される化合物などが含まれる。 The activity of the catonic MMP inhibitory activity of the present invention can be determined, for example, by the methods described in Cawston, TE & Barrett, A. J [Anal Biochem., 99, 340-345 (1979)] and Baici, A et al. , 108, 230-232 (1980)], and the inhibitory activity of synthetic substrates described in Masui, Y et al. [Biochem. Med., 17.215-221 (1977)] against degradation by MMPs. Can be measured. Conveniently, the measurement can be similarly performed using a commercially available MMP activity measurement kit developed based on these methods. In addition, the activity of MMPs, which is produced and activated when cells cultured on a film of a substrate such as collagen are stimulated with cytodynamic force, is measured using the release of substrate degradation products in the culture medium as an index. Experimental system [Gavrilovic ,; et al., Cited in Cell. Biol. Int. Reports, 9, 1097-1107 (1985): Br. J. Pharmacol., 100, 631-635 (1990)], An experimental system that evaluates the release of TNFa from the cell membrane surface induced by stimulating peripheral leukocytes with lipopolysaccharide or the like as the activity of TNFα-converting enzyme [DiMartino et al .: Inflam. Res., 46, 211-215 (1997) )] Or an experimental system [Shimazu et al .: Arthritis and Rheumatism vol. 36, 247-253 (1993)], which evaluates the destruction of proteodarin when chondrocytes are stimulated with cytoforce, etc. It can also be measured as an inhibitory activity on the production or activation of TNFα converting enzyme, aggrecanases-1,2-II. The inhibitory active compounds of the present invention include, in at least one of these assay systems, compounds that exhibit 45% or more, particularly 50% or more inhibition at any concentration of 1 OmgZm 1 or less. It is. As the cationic MMP inhibitory activity conjugate of the present invention, a hydroxamic acid derivative having a cationic group as a part thereof is preferable. The “hydroxamic acid derivative” in the present invention includes a substance having a cationic group and a hydroxamic acid skeleton (N-hydroxyamide). Specifically, for example, a substance having a cationic group, And a compound having a partial structure represented by the aforementioned general formula (1), a compound represented by the aforementioned general formula (3), and the like.

本発明において、カチオン基とは、.陽電荷を有する基を意味し、モノカチオン基、ポリカチオン基が含まれる。具体的には、例えば、前述の一般式 ( 3 ) の E Xの定義において、 Eが置換可ァミノ基、置換可アンモニゥム基、置換可グァニジノ基、置換可アミジノ基、もしくは置換可含窒素複素環を含むユニットであり、 Xが 1〜2 0の整数であり、 Eは単一のユニットからなる場合や、 2種以上のュニットからなる場合などが含まれる。 In the present invention, the cationic group means a group having a positive charge, and includes a monocation group and a polycation group. Specifically, for example, in the definition of EX in the above general formula (3), E is a substituted amino group, a substituted ammonium group, a substituted guanidino group, a substituted amidino group, or a substituted nitrogen-containing heterocyclic ring. X is an integer of 1 to 20; E includes a case where a single unit is formed, a case where two or more units are formed, and the like.

ここで、モノカチオン基とは、例えば、前述の一般式 ( 3 ) の E xの定義において Xが 1である場合等である。また、ポリカチオン基とは、例えば、 E xの定義において Xが 2以上の整数、より具体的には、 Xが 2から 2 0の整数で表される基などが含まれる。 Here, the monocation group is, for example, a case where X is 1 in the definition of Ex in the general formula (3). The polycation group includes, for example, a group in which X is an integer of 2 or more in the definition of Ex, more specifically, a group in which X is an integer of 2 to 20.

本発明のカチォニック MM P阻害活性化合物はその分子内に化学的結合する力チオン基を有することが好ましい。また、その化学的結合は、スぺーサーを介する結合であってもよくまたはスぺ一サーを介さない結合であってもよい。スぺーサ一の結合様式としては共有結合が挙げられ、スぺ一サーを介さない場合にはァミド結合、エーテル結合等が挙げられるが、スぺ一サ一を介した共有結合であることが好ましい。カチオン基の結合がスぺーサ一を介するものであっても介さないものであっても、所望の MM P阻害活性を損なわない部位に結合していることが好ましい。 The cationic MMP-inhibiting active compound of the present invention preferably has a thione group capable of chemically bonding in its molecule. Further, the chemical bond may be a bond via a spacer or a bond not via a spacer. The bonding mode of the spacer includes a covalent bond, and when not via a spacer, an amide bond, an ether bond, or the like can be used, but the covalent bond via the spacer is required. Is preferred. Regardless of whether the cation group is bonded via a spacer or not, it is preferable that the cation group be bonded to a site that does not impair the desired MMP inhibitory activity.

そのような活性を損なわない部位としては、本発明のヒドロキサム酸骨格を有する化合物においては、例えば、アミノ基、力ルポキシル基、水酸基、及びチォール基等が挙げられる。特に、末端に位置する 1級もしくは 2級のアミノ基が好ましい。また、 1つのカチォニック MMP阻害活性化合物分子において、カチォン基が複数存在してもよく（さらには、その場合、それらカチオン基は同一であつても異なっていてもよい）、これらのカチオン基の結合様式は、それぞれ独立して、スぺーサーを介した結合であっても、スぺーサーを介さない結合であってもよい。また、 1つのカチォニック MMP阻害活性化合物分子中に複数のスぺーサ一が存在する場合には、それらが同一あっても、同一でなくてもよい。 Examples of the site that does not impair such activity include, in the compound having a hydroxamic acid skeleton of the present invention, an amino group, a carbonyl group, a hydroxyl group, and a thiol group. In particular, a primary or secondary amino group located at the terminal is preferred. In addition, one cationic MMP inhibitory compound molecule may have a plurality of cationic groups (in which case, the cationic groups are the same). May be different from each other). However, the bonding mode of these cationic groups may be, independently of each other, a bond via a spacer or a bond without a spacer. Further, when a plurality of spacers are present in one cationic MMP inhibitory active compound molecule, they may or may not be the same.

本発明において、置換基の非限定的具体例としては、特に示さない限り以下の内容を含む。 In the present invention, non-limiting specific examples of the substituent include the following contents unless otherwise specified.

炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基としては、メチル基、ェチル基、 n—プロピル基、 i 一プロピル基、 n—ブチル基、 s e c—ブチル基、ィソブチル基、 t一ブチル基、 n—ペンチル基、 n—へキシル基、 n—へプチル基、 n—ォクチル基などが挙げられる。 Examples of the linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an i-propyl group, an n-butyl group, a sec-butyl group, an isobutyl group, t-butyl group, n-pentyl group, n-hexyl group, n-heptyl group, n-octyl group and the like.

炭素数 1〜 8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、イソブトキシ基、 s e c一ブトキシ基、 t e r t—ブトキシ基、ペンチルォキシ基、へキシルォキシ基、ヘプチルォキシ基、ォクチルォキシ基、イソペンチルォキシ基などが挙げられる。 Examples of the linear or branched alkoxy group having 1 to 8 carbon atoms include methoxy group, ethoxy group, propoxy group, isopropoxy group, butoxy group, isobutoxy group, sec-butoxy group, tert-butoxy group, pentyloxy group, Hexoxy, heptyloxy, octyloxy, isopentyloxy and the like.

炭素数 2〜 8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルケニル基としては、ビニル基、ァリル基、 n—ブテニル基、 i—ブテニル基、 s e c—ブテニル基、ペンテニル基、へキセニル基、ヘプテニル基、ォクテニル基等が挙げられる。 Examples of the linear or branched alkenyl group having 2 to 8 carbon atoms include a vinyl group, an aryl group, an n-butenyl group, an i-butenyl group, a sec-butenyl group, a pentenyl group, a hexenyl group, a heptenyl group, And an octenyl group.

シクロアルキル基としては、炭素数 3〜1 0、好ましくは炭素数 5〜7のシク口アルキル基が挙げられ、具体的にはシクロペンチル基、シクロへキシル基、またはシク口へプチル基等があげられる。 Examples of the cycloalkyl group include a cycloalkyl group having 3 to 10 carbon atoms, preferably 5 to 7 carbon atoms, and specific examples thereof include a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, and a cycloheptyl group. Is raised.

ァリール基としては、水酸基、メトキシ基等の置換基を有していてもよい炭素数 6〜2 0、好ましくは炭素数 6〜 1 4のァリール基が挙げられ、具体的にはフェニル基、 p—ヒドロキシフエニル基、 p—メトキシフエ二ル基、またはナフチル基等が挙げられる。 Examples of the aryl group include an aryl group having 6 to 20 carbon atoms, preferably 6 to 14 carbon atoms which may have a substituent such as a hydroxyl group and a methoxy group, and specifically, a phenyl group, Examples thereof include a p-hydroxyphenyl group, a p-methoxyphenyl group, and a naphthyl group.

複素環基としては、窒素原子、硫黄原子または酸素原子の中から選択される同一または異なる 1個以上、好ましくは 1から 3個、特に好ましくは 1個のへテロ原子を含む、原子数 5〜2 0、好ましくは原子数 5〜1 0、特に好ましくは原子数 5、 6、 9または 1 0の飽和または不飽和の複素環が挙げられる。例えば、ピリジル基、キノリル基、イミダゾリル基またはインドリル基等が挙げられる。シクロアルキル基、ァリ一ル基もしくは複素環基で置換されていてもよい炭素数；！〜 8の直鎖もしくは分岐鎖状ァシル基のァシル基成分の非限定的具体例としては、ホルミル基、ァセチル基、プロピオニル基、プチリル基、イソプチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピパロイル基、ォキサリル基、マロニル基、スクシニル基、ダルタニル基等が挙げられる。 As the heterocyclic group, one or more, preferably one to three, particularly preferably one hetero atom selected from a nitrogen atom, a sulfur atom, and an oxygen atom selected from the group consisting of 5 atoms To 20, preferably 5 to 10, particularly preferably 5, 6, 9 or 10 saturated or unsaturated heterocycles. For example, Examples thereof include a lysyl group, a quinolyl group, an imidazolyl group, and an indolyl group. The number of carbon atoms which may be substituted by a cycloalkyl group, an aryl group or a heterocyclic group; Non-limiting specific examples of the acyl group component of the straight-chain or branched-chain acyl group of the following are formyl group, acetyl group, propionyl group, butyryl group, isoptyryl group, valeryl group, isovaleryl group, piperoyl group, oxalyl Group, malonyl group, succinyl group, daltanyl group and the like.

炭素数 1〜4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基としては、メチル基、ェチル基、 n—プロピル基、 i 一プロピル基、 n—ブチル基、 s e c—ブチル基、ィソブチル基、 t一ブチル基が挙げられる。 Examples of the linear or branched alkyl group having 1 to 4 carbon atoms include methyl group, ethyl group, n-propyl group, i-propyl group, n-butyl group, sec-butyl group, isobutyl group, t-butyl group.

一般式（1 ) の R ₅および R ₆における、シクロアルキル基、ァリール基もしくは複素環基で置換されていてもよい炭素数 1〜 8の直鎖もしくは分岐鎖状のァルキル基のアルキル基成分としては、メチル基、イソブチル基、 t一ブチル基が好ましい。また、ここでの複素環基としては、好ましくはインドリル基が挙げられる。 In R ₅ and R ₆ of the general formula (1), alkyl of a linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms which may be substituted with a cycloalkyl group, an aryl group or a heterocyclic group. As the base component, a methyl group, an isobutyl group, and a t-butyl group are preferable. The heterocyclic group here preferably includes an indolyl group.

一般式（1 ) の R ₅ R ₆ N— (C H ₂) m—の非限定的具体例としては、ァミノ基、メチルァミノ基、ジメチルァミノ基、アミノメチル基、フエナシルアミノエチル基等が挙げられ、好ましくはァミノ基、アミノメチル基である。 Non-limiting specific examples of R ₅ R ₆ N— (CH ₂ ) m— in the general formula (1) include an amino group, a methylamino group, a dimethylamino group, an aminomethyl group, a phenacylaminoethyl group, and the like. And preferably an amino group and an aminomethyl group.

一般式（1 ) において、 R ₅と R ₆が環を形成する場合の非限定的具体例としては、下記の基などが挙げられる。 In the general formula (1), non-limiting specific examples of the case where R ₅ and R ₆ form a ring include the following groups.

好ましくは下記の基などが挙げられる。

Preferred are the following groups.

特に好ましくは下記の基が挙げられる c

一般式（1) において、 B— SOn— (CH₂) m—の非限定的具体例としては、下記の基が挙げられる。

好ましくは下記の基が挙げられる。

特に好ましくは下記の基が挙げられる _t

Particularly preferred are the following groups c

In the general formula (1), non-limiting specific examples of B—SOn— (CH ₂ ) m— include the following groups.

Preferred are the following groups.

Particularly preferred are the following groups _t

-s、 -s,

s 一般式（1) において、と R₃がー緒になって環を形成する場合には、 - I - J -K-L- (Iは酸素原子を含んでもよい炭素数 1〜8のアルキレン基、 Jは〇、 S、 NH、 C〇NHまたはNH C O、 Kは存在しないかあるいは置換基を有してもよい芳香環、 Lは炭素数 1〜8のアルキレン基である）を形成することが好ましい。このとき、 Iは 1^側から結合し、 Lは R ₃側から結合する。また、 Kが芳香環を表す場合には、 Jと Lはそれぞれ芳香環の任意の位置に結合することができる。 s In the general formula (1), when and R ₃ are linked together to form a ring, -I-J-KL- (I is an alkylene group having 1 to 8 carbon atoms which may contain an oxygen atom, J is 〇, S, NH, C〇NH or NHCO, K is an aromatic ring which is absent or may have a substituent, and L is an alkylene group having 1 to 8 carbon atoms. Is preferred. At this time, I is connected from the 1 ^ side, and L is connected from the R ₃ side. When K represents an aromatic ring, J and L can be respectively bonded to any positions of the aromatic ring.

Iおよび Lの非限定的具体例としては、メチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレンが挙げられ、好ましくは、 Iとしては、例えば、トリメチレンが挙げられ、 Lとしては、例えば、メチレンが挙げられる。 Kは存在しないか、あるいは置換基を有してもよい芳香環を示すが、ここで芳香環としては、フエニル、トリル、キシリル、ナフチル、ビフエニル、アントリル、フエナントリル、ピリジル、インドリル、キノリル、イミダゾリル等が挙げられ、好ましくはフエニルが挙げられる。 Non-limiting specific examples of I and L include methylene, ethylene, trimethylene, and tetramethylene, preferably, I includes, for example, trimethylene, and L includes, for example, methylene. K is absent or represents an aromatic ring which may have a substituent, wherein the aromatic ring is phenyl, tolyl, xylyl, naphthyl, biphenyl, anthryl, phenanthryl, pyridyl, indolyl, quinolyl And imidazolyl, and preferably phenyl.

— I 一 J— K— L—は、例えば、 R 側からの残基がハロゲン化アルキル基、好ましくはプロピルプロマイド基、 R ₃側からの残基が水酸基を有するアルコール誘導体またはフエノール誘導体、好ましくはパラヒドロキシベンジル基である化合物を縮合することにより得られる。 — I—J—K—L— is, for example, an alcohol derivative or a phenol derivative in which the residue from the R side has a halogenated alkyl group, preferably a propylpromide group, and the residue from the R ₃ side has a hydroxyl group. Is obtained by condensing a compound that is a parahydroxybenzyl group.

一 I— J— K— L—の非限定的具体例としては、一般式（4 ) ： One non-limiting example of I—J—K—L— is the general formula (4):

で示される基などが挙げられる。

And the like.

一般式（1 ) において、 1^としては、好ましくは、水素原子、 7酸基、メトキシ基またはァリル基である。 In the general formula (1), 1 ^ is preferably a hydrogen atom, a 7-acid group, a methoxy group or an aryl group.

一般式（1 ) において、 R₂、 R ₃としては、 R₂がイソブチル基、 R ₃が t—ブチル基、 3—インドリルメチル基であることが好ましい。 In the general formula (1), as R ₂ and R ₃ , R ₂ is preferably an isobutyl group, R ₃ is preferably a t-butyl group or a ₃ -indolylmethyl group.

一般式（1 ) において、 R₄としては、水素原子、メチル基、ェチル基、 n— プロピル基、 i—プロピル基、 n—ブチル基、 s e c—ブチル基、イソブチル基、 t一ブチル基が挙げられるが、好ましくは、メチル基、水素原子、さらに好ましくは水素原子である。 In the general formula (1), R ₄ represents a hydrogen atom, a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an i-propyl group, an n-butyl group, a sec-butyl group, an isobutyl group, Although a t-butyl group is exemplified, a methyl group, a hydrogen atom, and more preferably a hydrogen atom are preferred.

一般式（1 ) において、が水素原子または水酸基、 R ₃が 3—インドリルメチル基または t—ブチル基、 R₄が水素原子であることが好ましい。 In the general formula (1), is preferably a hydrogen atom or a hydroxyl group, R ₃ is a 3-indolylmethyl group or a t-butyl group, and R ₄ is a hydrogen atom.

一般式 ( 1 ) で表される部分構造を有するカチォニック MMP阻害活性化合物としては、一般式 ( 3 ) で表される化合物が好ましい。 As the catonic MMP inhibitory active compound having the partial structure represented by the general formula (1), a compound represented by the general formula (3) is preferable.

一般式（1 ) で表される部分構造を有するカチォニック MMP阻害活性化合物であって、一般式 ( 1 ) で表される部分構造がスぺーサーを介してカチオン基と共有結合している化合物としては、一般式（3 ) で表される化合物が好ましい。一般式（1 ) で示される構造は 1個以上の不斉炭素中心を含むが、各不斉炭素中心について、その絶対配置が R配置及び S配置のいずれのものも、本発明に含まれる。 Cationic MMP inhibitory compounds having a partial structure represented by the general formula (1), wherein the partial structure represented by the general formula (1) is covalently bonded to a cation group via a spacer. Is preferably a compound represented by the general formula (3). The structure represented by the general formula (1) contains one or more asymmetric carbon centers, and the present invention includes any asymmetric carbon center having an absolute configuration of either R configuration or S configuration. .

本発明における、スぺーサ一の種類は、 MM P阻害活性に重大な影響を及ぼさない限り特に限定されない。また、本発明のカチォニック MM P阻害活性化合物と HAまたは HA誘導体またはそれらの塩との混合物、あるいは非共有結合により結合した結合体として用いるなどの場合には、 HAまたは HA誘導体またはそれらの塩の関節液構成成分としての活性、すなわち粘弾性に重大な影響を及ぼさない限り、スぺーサ一の種類は特に限定されない。その非限定的具体例としては、例えば前述の一般式（2 ) で示されるスぺーサ一が挙げられる。 In the present invention, the type of spacer is not particularly limited as long as it does not significantly affect MMP inhibitory activity. In addition, when used as a mixture of the catonic MMP inhibitory active compound of the present invention and HA or an HA derivative or a salt thereof, or as a non-covalently bonded conjugate, the HA or HA derivative or its derivative is used. The type of spacer is not particularly limited as long as the activity of these salts as a component of synovial fluid, that is, viscoelasticity is not significantly affected. Non-limiting specific examples include, for example, spacers represented by the aforementioned general formula (2).

一般式（2 ) で示されるスぺ一サ一は、 R ₇—末端でヒドロキサム酸骨格と結合し、 R _{1 0}—末端でカチオン基と結合する。 The spacer represented by the general formula (2) binds to the hydroxamic acid skeleton at the R ₇ -terminal and binds to a cation group at the R ₁₀ -terminal.

一般式（2 ) において、 R ₇における炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基としては、メチレン基、ェタン— 1， 2—ジィル基、プロパン一 1， 3—ジィル基、ブタン一 1， 4一ジィル基、ペンタン一 1， 5 _ジィル基、へキサン _ 1， 6—ジィル基、ヘプタン— 1 , 7—ジィル基、オクタン— 1， 8—ジィル基、 2—メチルペンタン一 1， 3—ジィル基、 2—メチルブタン一 1， 4一ジィル基、 3—メチルブタン一 1， 4—ジィル基、 3—メチルペンタン一 1， 5 一ジィル基、 3—ェチルペンタン— 1 , 5—ジィル基、 3—メチルへキサン一 1， 6—ジィル基、 4—メチルへキサン— 1 , 6—ジィル基、 4—メチルヘプタン— 1， 7——ジィル基などが挙げられる。 In the general formula (2), examples of the linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms in R ₇ include a methylene group, an ethane-1,2-diyl group, a propane-1,1,3-diyl group, and a butane. 1,4-diyl group, pentane-1,5-diyl group, hexane-1,6-diyl group, heptane-1,7-diyl group, octane-1,8-diyl group, 2- Methylpentane-1,3-diyl group, 2-methylbutane1-1,4-diyl group, 3-methylbutane-1,4-diyl group, 3-methylpentane1-1,5-diyl group, 3-ethylethylpentane-1, 5-diyl group, 3-methylhexane-1,6-diyl group, 4-methylhexane-1,6-diyl group, 4-methylheptane 1, 7—diyl group and the like.

一般式（2 ) において、 R ₇としては、ェタン— 1， 2—ジィル基、プロパン —1， 3—ジィル基、ブタンー1， 4——ジィル基が好ましい。 In the general formula (2), R ₇ is preferably a ethane-1,2-diyl group, a propane-1,3-diyl group, or a butan-1,4-diyl group.

一般式（2 ) において、 R ₈における、炭素数 1〜4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基もしくはィミノ基の、炭素数 1 〜 4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基としては、メチル基、ェチル基、 n— プロピル基、 i—プロピル基、 n—ブチル基、 s e c—ブチル基、 t一ブチル基が挙げられる。 In the general formula (2), a linear or branched C 1 to C 4 methylene group or imino group of R ₈ , which may be substituted with a linear or branched alkyl group having 1 to 4 carbon atoms. Examples of the chain alkyl group include a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an i-propyl group, an n-butyl group, a sec-butyl group, and a t-butyl group.

一般式（2 ) において、代表的には R ₈は、炭素数 1〜3の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基で置換されていてもよいメチレン基、及び酸素原子が好ましく、メチレン基、及び酸素原子が特に好ましい。 In the general formula (2), typically, R ₈ is preferably a methylene group which may be substituted with a linear or branched alkyl group having 1 to 3 carbon atoms, and an oxygen atom, and methylene group, and Oxygen atoms are particularly preferred.

一般式（2 ) において、 R ₉における、 1〜 3個の酸素原子が挿入されていてもよい炭素数 1〜 1 0の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキレン基の非限定的具体例としては、メチレン基、エタンー 1， 2—ジィレ基、プロパン一 1， 3—ジイレ基、ブタン一 1， 4—ジィル基、ペンタン— 1， 5—ジィル基、へキサン一 1， 6—ジィル基、ヘプタン一 1， 7—ジィル基、オクタン一 1， 8—ジィル基、ノナン _ 1， 9一ジィル基、オクタン一 1， 1 0—ジィル基、 2—メチルペンタン一 1， 3—ジィル基、 2—メチルブタン一 1， 4一ジィル基、 3—メチルブタン —1， 4—ジィル基、 3—メチルペンタン— 1， 5 _ジィル基、 3—ェチルペンタンー 1， 5—ジィル基、 3—メチルへキサン一 1 , 6—ジィル基、 4—メチルへキサン— 1， 6—ジィル基、 4—メチルヘプ夕ンー 1， 7—ジィル基、 1ーォキサ—プロパン— 1 , 3—ジィル基、 2—ォキサブタン— 1， 4—ジィル基、 3 —ォキサペンタン一 1， 5—ジィル基、 2—ォキサへキサン一 1， 6—ジィル基、 3—ォキサへキサン— 1， 6—ジィル基、 1， 4一ジォキサへキサン— 1， 6— ジィル基、 3—ォキサヘプタン一 1， 7—ジィル基、 2 , 5—ジォキサヘプタン一 1， 7—ジィル基、 4一ォキサオクタン— 1， 8—ジィル基、 2 , 6—ジォキサオクタン一 1， 8—ジィル基、 3 , 6—ジォキサノナン— 1 , 9一ジィル基、 3 , 6—ジォキサー 4—メチルノナン— 1， 9一ジィル基、 3， 6—ジォキサー 5—ェチルノナン一 1 , 9一ジィル基、 1 , 4 , 7 _トリオキサオクタン— 1， 10—ジィル基などが挙げられる。 R ₉は、好ましくはェ夕ン一 1， 2—ジィル基、プロパン— 1， 3—ジィル基、ブタン一 1， 4—ジィル基、 3, 6—ジォキサノナン一 1， 9一ジィル基などが挙げられる。 In the general formula (2), non-limiting specific examples of a linear or branched alkylene group having 1 to 10 carbon atoms, in which 1 to 3 oxygen atoms may be inserted, in R ₉ include: Methylene group, ethane-1,2-diyl group, propane-1,3-diyl group, butane-1,4-diyl group, pentane-1,5-diyl group, hexane-1,6-diyl group, Heptane-1,7-diyl group, octane-1,8-diyl group, nonane_1,9-diyl group, octane-11,10-diyl group, 2-methylpentane-1,1,3-diyl group, 2-Methylbutane-1,4-diyl group, 3-methylbutane-1,4-diyl group, 3-methylpentane-1,5-diyl group, 3-ethylpentane-1,5-diyl group, 3-methylhexane One 1,6-diyl group, 4-methylhexane-1,6-diyl group, 4-methylheptane 1,7-diyl group, 1-oxa-propane-1,3-diyl group, 2-oxatan-1,4-diyl group, 3-oxapentane-1,5-diyl group, 2-oxahexane-1 1,6-diyl group, 3-oxahexane-1,6-diyl group, 1,4-dioxahexane-1,6-diyl group, 3-oxaheptane-1,1,7-diyl group, 2,5- Dioxaheptane 1-1,7-diyl group, 41-oxaoctane-1,8-diyl group, 2,6-dioxaoctane-1,8-diyl group, 3,6-dioxanonane-1,9-diyl group, 3,6 —Dioxer 4-methylnonane—1,9-diyl group, 3,6-dioxer 5-ethylynonane 1,9,1-diyl group, 1,4,7_trioxaoctane—1, And a 10-diyl group. R ₉ is preferably a 1,2-diyl group, a propane-1,3-diyl group, a 1,4-dibutane group, a 1,1-diyl 3,6-dioxanone group, or the like. No.

一般式（2) において、。における NRuの非限定的具体例としては、ィミノ基、メチルイミノ基、ェチルイミノ基、 n—プロピルイミノ基、 i—プロピルイミノ基、 n—プチルイミノ基、 s ec—プチルイミノ基、ィソブチルイミノ基、 t一プチルイミノ基が挙げられる。 R₁₀としては、好ましくはイミノ基またはメチルイミノ基などが挙げられ、特に好ましくはィミノ基である。 In the general formula (2),. Non-limiting specific examples of NRu in the above include imino group, methylimino group, ethylimino group, n-propylimino group, i-propylimino group, n-butylimino group, sec-butylimino group, isobutylimino group, t-butylimino group Groups. R ₁₀ is preferably an imino group or a methylimino group, and particularly preferably an imino group.

一般式（2) で示されるスぺーサ一の好ましい具体例としては、一（CH₂) ₄ 一 NH -、一 (CH₂) ₅—NH―、一 (CH₂) ₆— NH―、一 (CH₂) ₇ - NH―、 ― (CH₂) ₈— NH -、 - (CH₂) ₉— NH -、 - (CH₂) ₁₀— NH―、一 (C H₂) u— NH -、一 (CH₂) ₁₂— NH―、 ― (CH₂) ₂-〇— (CH₂) ₂ - NH―、 - (CH₂) 3-0- (CH₂) 「 ―、一 (CH₂) ₄-0- (CH₂) ₄— NH―、 - (CH₂) 3-O- (CH₂) ₂—〇一 (CH₂) ₂_0— (CH₂) ₃— NH—等が挙げられる。なかでも— （CH₂) 3-O- (CH₂) ₂—〇一 (CH₂) ₂—〇— (CH ₂) ₃— NH—が好ましい。 Preferred examples of spacer one represented by the general formula (2), one (CH ₂₎ ₄ one NH - one (CH ₂₎ ₅ -NH- one (CH ₂₎ ₆ - NH-, One (CH ₂ ) _7- NH-,-(CH ₂ ) ₈ -NH-,-(CH ₂ ) ₉ -NH-,-(CH ₂ ) ₁₀ -NH-, one (CH ₂ ) u-NH-, one _{NH-, - - (CH 2)} 12 (CH 2) 2 -〇- _{_{(CH 2) 2 - NH-,}} - (CH 2) 3-0- (CH 2) "- one (CH ₂₎ ₄ - 0- (CH ₂ ) ₄ — NH—,-(CH ₂ ) 3-O- (CH ₂ ) ₂ —〇 (CH ₂ ) ₂ _0— (CH ₂ ) ₃ — NH—, etc. But _{- (CH 2) 3-O-} (CH 2) 2 -〇 one (CH ₂₎ ₂ -〇- (CH ₂₎ ₃ - NH- are preferred.

一般式（2) で表されるスぺーサ一は、不斉炭素原子を有する場合があり、その絶対配置が R配置、 S配置である立体異性体が存在する場合があるが、その各々、あるいはそれらの任意の割合の構造単位のいずれも本発明に包含される。一般式（3) において、 1^としては、好ましくは、水素原子、水酸基、メトキシ基またはァリル基である。さらに好ましくは水酸基である。 The spacer represented by the general formula (2) may have an asymmetric carbon atom, and there may be a stereoisomer whose absolute configuration is R configuration or S configuration. Or any of the structural units in any proportion thereof are encompassed by the present invention. In the general formula (3), 1 ^ is preferably a hydrogen atom, a hydroxyl group, a methoxy group or an aryl group. More preferably, it is a hydroxyl group.

一般式（3) において、 R₃としては、 t—プチル基、 3—インドリルメチル基が好ましく、 t一ブチル基がさらに好ましい。 In the general formula (3), R ₃ is preferably a t-butyl group or a 3-indolylmethyl group, and more preferably a t-butyl group.

一般式（3) において、 R₁₂における 1個のイミノ基および/または 1〜4 個の酸素原子が揷入されていてもよい炭素数 2〜23の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキレン基としては、ェタン— 1, 2—ジィル基、プロパン一 1， 3—ジィル基、ブタン— 1， 4—ジィル基、ペンタン一 1, 5—ジィル基、へキサン一 1， 6 _ジィル基、ヘプタン一 1， 7—ジィル基、オクタン一 1， 8—ジィル基、ノナン一 1， 9一ジィル基、デカン一 1， 10—ジィル基、ゥンデカン— 1， 11 ージイレ基、ドデカン— 1， 12—ジィル基、 2—メチルペンタン一 1， 3—ジィル基、 2—メチルブタン一 1， 4—ジィル基、 3—メチルブタン一 1， 4—ジィル基、 3—メチルペンタン一 1， 5—ジィル基、 3—ェチルペンタン一 1， 5 一ジィル基、 3—メチルへキサン— 1， 6—ジィル基、 4ーメチルへキサン一 1， 6—ジィル基、 4一メチルヘプタン一 1， 7—ジィル基、一（CH₂) ₂—〇一 (CH₂) ₂ -、一 (CH₂) 3-0- (CH₂) ₃ -、 - (CH₂) 「0 - (CH₂) ₄—、 - (CH₂) ₃— O— (CH₂) ₂— 0— (CH₂) ₂—〇_ (CH₂) ₃—などが挙げられる。 In the general formula (3), one imino group and / or a linear or branched alkylene group having 2 to 23 carbon atoms which may have 1 to 4 oxygen atoms in R ₁₂ may be 1,2-diyl group, propane-1,3-diyl group, butane-1,4-diyl group, pentane-1,5-diyl group, hexane-1,1,6-diyl group, heptane-1 1 , 7-diyl group, octane-1,8-diyl group, nonane-1,1,1-diyl group, decane-1,10-diyl group, pendecane-1,11 Giyile group, dodecane-1,12-diyl group, 2-methylpentane-1,1,3-diyl group, 2-methylbutane-1,1,4-diyl group, 3-methylbutane-1,1,4-diyl group 1,3-methylpentane-1,5-diyl group, 3-ethylpentane-1,1,5-diyl group, 3-methylhexane-1,6-diyl group, 4-methylhexane-1,1,6-diyl group, 4 1-methylheptane-1,7-diyl group, 1 (CH ₂ ) ₂ -〇 (CH ₂ ) _2- , 1 (CH ₂ ) 3-0- (CH ₂ ) ₃ -,-(CH ₂ ) “0 _{_{- (CH 2) 4 -,}} - (CH 2) 3 - O- (CH 2) 2 - 0- (CH 2) 2 -〇_ (CH ₂₎ ₃ - and like et be.

R₁₂としては、好ましくはブタン— 1， 4一ジィル基、ペンタン一 1， 5— ジィル基、へキサン— 1， 6—ジィル基、ヘプタン— 1, 7—ジィル基、ォクタン一 1， 8—ジィル基、ノナン一 1， 9—ジィル基、デカン一 1， 10—ジイレ基、ゥンデカン— 1， 11—ジィル基、ドデカンー1， 12—ジィル基、一（C H₂) ₂—〇一 (CH₂) ₂—、一 (CH₂) 3-0- (CH₂) ₃—、 - (CH₂) ₄_〇一 (CH₂) ₄—、 - (CH₂) 「0 - (CH₂) ₂— O— (CH₂) ₂— 0— (CH₂) ₃ - などが挙げられる。特に好ましくは、一（CH₂) 3-0- (CH₂) ₂_〇一 (C H₂) ₂— O— (CH₂) ₃—が挙げられる。 R ₁₂ is preferably butane-1,4-diyl group, pentane-1,5-diyl group, hexane-1,6-diyl group, heptane-1,7-diyl group, octane-1,8 —Diyl group, nonane-1,9-diyl group, decane-1,10-diyle group, didecane-1,11-diyl group, dodecane-1,12-diyl group, 1 (CH ₂ ) ₂ —〇1 ( (CH ₂ ) ₂ —, one (CH ₂ ) 3-0- (CH ₂ ) ₃ —,-(CH ₂ ) ₄ _〇 one (CH ₂ ) ₄ —,-(CH ₂ ) “0-(CH ₂ ) _{_{_{2 - O- (CH 2) 2}}} - 0- (CH 2) 3 -. and the like, especially preferably, a _{_{(CH 2) 3-0- (CH 2}} ) 2 _〇 one (CH _{₂₎ 2} - O— (CH ₂ ) ₃ —.

一般式（3) において、 R₁₃としては、好ましくは水素原子及びメチル基などが挙げられ、特に好ましくは水素原子が挙げられる。 In the general formula (3), R ₁₃ preferably includes a hydrogen atom, a methyl group, and the like, and particularly preferably a hydrogen atom.

一般式（3) において、が水酸基、 R ₃が t—ブチル基、 R₁₂がー（CH ₂) ₃—〇一 (CH₂) ₂-0- (CH₂) ₂—〇— (CH₂) ₃—、 R₁₃が水素原子であることが好ましい。 In the general formula (3), is a hydroxyl group, R ₃ is a t-butyl group, and R _{12 is —} (CH ₂ ) ₃ —〇 (CH ₂ ) ₂ -0- (CH ₂ ) ₂ —〇— (CH ₂ ) ₃ — and R ₁₃ are preferably hydrogen atoms.

一般式（3) において、 Dは Exで表されるカチオン基であることが好ましい。 Eとしては、置換可ァミノ基、置換可アンモニゥム基、置換可グァニジノ基、置換可アミジノ基、もしくは置換可含窒素複素環等を構造中に含むュニットが挙げられるが、好ましくは置換可ァミノ基、置換可アンモニゥム基、置換可グァニジノ基を構造中に含むュニットであり、特に置換可グァニジノ基を構造中に含むュニットであることが好ましい。 In the general formula (3), D is preferably a cationic group represented by Ex. Examples of E include a unit containing a substituted amino group, a substituted ammonium group, a substituted guanidino group, a substituted amidino group, or a substituted nitrogen-containing heterocyclic ring in the structure, and preferably a substituted amino group. It is a unit containing a substitutable ammonium group and a substitutable guanidino group in its structure, and particularly preferably a unit containing a substitutable guanidino group in its structure.

Eにおける置換可ァミノ基、置換可アンモニゥム基、置換可グァニジノ基、置換可アミジノ基とは、 1以上の基で置換されていてもよいアミノ基、アンモニゥム基、グァニジノ基、アミジノ基のことで、置換基としては水素原子、アミノ基、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、アルケニル基、ァリール基等が例示される。好ましくは、水素原子、アルキル基等である。 The term “substituted amino group, substituted ammonium group, substituted guanidino group, or substituted amidino group in E” means an amino group, an ammonium group which may be substituted with one or more groups. And a substituent such as a hydrogen atom, an amino group, a hydroxyl group, an alkyl group, an alkoxy group, an alkenyl group, an aryl group, and the like. Preferred are a hydrogen atom, an alkyl group and the like.

Eにおける置換可含窒素複素環とは、 1以上の窒素原子を含む複素環基であつて、 1以上の基で置換されていてもよいものを表す。置換基としては水素原子、アミノ基、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、アルケニル基、ァリール基等が例示されるが、好ましくは、水素原子、アミノ基、水酸基、アルキル基等である。 The substituted nitrogen-containing heterocyclic ring in E represents a heterocyclic group containing one or more nitrogen atoms, which may be substituted with one or more groups. Examples of the substituent include a hydrogen atom, an amino group, a hydroxyl group, an alkyl group, an alkoxy group, an alkenyl group, an aryl group and the like, and preferably a hydrogen atom, an amino group, a hydroxyl group and an alkyl group.

Xは 1〜20の整数であることが好ましく、 2以上であることがさらに好ましく、 4以上であることがいっそう好ましい。 X is preferably an integer of 1 to 20, more preferably 2 or more, even more preferably 4 or more.

Exは単一ュニットの繰り返しであっても、 2種以上のュニットから構成されていてもよい。 2種以上のユニットから構成される場合としては、例えば、 Eが、アルギニン（Ar g) 、リジン（Ly s) 、ヒスチジン（H i s) 、オル二チン (〇r n) 等の塩基性アミノ酸である場合や、アデノシン、グアノシン、シチジン、ゥリジン等のリポヌクレオシドである場合であって、これら複数のユニットが、ぺプチド結合ゃヌクレオチド結合等によりポリぺプチドゃポリヌクレオチドを形成している場合等が含まれる。 Ex may be a single unit repetition or may be composed of two or more units. When composed of two or more types of units, for example, E is a basic amino acid such as arginine (Ar g), lysine (Lys), histidine (His), orditin (〇rn), etc. Or a liponucleoside such as adenosine, guanosine, cytidine, or lysine, in which a plurality of these units form a polypeptide or a polynucleotide by means of a peptide bond or a nucleotide bond. included.

Exが単一ュニットからなる場合の非限定的具体例としては、以下の式で示される基が挙げられる。 A non-limiting specific example when Ex consists of a single unit includes a group represented by the following formula.

A r g— A r g— A r g E二 Ar gで、 x= 3の場合である。 A r g—A r g—A r g E 2 Ar g, where x = 3.

Ly s— Ly s— Ly s E = Ly sで、 x = 3の場合である。 Ly s — Ly s — Ly s E = Ly s and x = 3.

H i s一 H i s— H i s Ε-Hi sで、 x=3の場合である。 His-His—HisΕ-His, where x = 3.

Orn— Orn— Orn E = Ornで、 x= 3の場合である。 Orn— Orn— Orn E = Orn and x = 3.

3の場合である。

4の場合である _c

2の場合である _c

x = 4の場合である

This is the case of 3.

_{C for} 4

_{C for} 2

x = 4

NHつNH

E= V で、 x = 4の場合である。一般式 (3) において、 Exが 2種以上のユニットからなる場合の非限定的具体例としては、以下の式で示される基が挙げられる。

E = V and x = 4. In the general formula (3), non-limiting examples of the case where Ex is composed of two or more types of units include groups represented by the following formula.

Ar g-Ly s-Ar g : E = Ar g， L y sで、 x=3の場合である。 Ly s— H i s— Ar g ： E = L y s , H i s, Ar gで、 x= 3の場合である。 Ar g-Ly s-Ar g: E = Ar g, Lys, where x = 3. Lys—His—Arg: E = Lys, His, Arg, and x = 3.

Arg Arg Arg Arg

Arg-Lys- E =—Lys——， A r gで、 x = 2の場合である。 Arg-Lys- E = —Lys——, A rg, where x = 2.

4の場合である。

一般式（3) で示される構造は 1個以上の不斉炭素中心を含む場合があるが、各不斉炭素中心について、その絶対配置が R配置及び S配置のいずれのものも、また、それらの任意の割合の混合物も全て本発明に含まれる。 This is the case of 4.

The structure represented by the general formula (3) may contain one or more asymmetric carbon centers, and each of the asymmetric carbon centers has an absolute configuration of either R configuration or S configuration. All mixtures in any proportion of are also included in the present invention.

本発明において、「ヒアルロン酸（HA) 」とは、重量平均分子量 50, 00 0〜10， 000, 000を有する、グルクロン酸と N—ァセチルダルコサミンとから成る二糖の重合体、並びにこれらの混合物を挙げられる。 HAは、粘弾性の強さの点から、重量平均分子量 700， 000〜 10, 000， 000を有するヒアルロン酸が好ましく、重量平均分子量 1, 000, 000〜10， 000, 000の H Aが特に好ましい。 In the present invention, the term "hyaluronic acid (HA)" refers to a disaccharide polymer comprising glucuronic acid and N-acetyldarcosamine having a weight-average molecular weight of 50,000 to 10,000,000, and And mixtures thereof. From the viewpoint of viscoelasticity, HA is preferably hyaluronic acid having a weight average molecular weight of 700,000 to 10,000,000, and HA having a weight average molecular weight of 1,000,000 to 100,000,000,000 is preferable. Particularly preferred.

本発明において「ヒアルロン酸誘導体」とは、ヒアルロン酸から誘導されるヒアルロン酸骨格を有する全ての物質を意味する。ヒアルロン酸誘導体の非限定的具体例としては； In the present invention, “hyaluronic acid derivative” means any substance having a hyaluronic acid skeleton derived from hyaluronic acid. Non-limiting specific examples of hyaluronic acid derivatives include;

( 1 ) 糖成分であるグルクロン酸及び/または N—ァセチルダルコサミンが還元末端を有しているヒアルロン酸誘導体； (1) a hyaluronic acid derivative in which the sugar components glucuronic acid and / or N-acetyldarcosamine have a reducing end;

(2) H A中の 1以上のカルボキシル基がエステル化されているヒアルロン酸誘導体（例えば、ベンジルエステル化 HA (Hyaff, 登録商標、 Fidia Advanced Biopolymers) リ； (2) a hyaluronic acid derivative in which one or more carboxyl groups in HA are esterified (for example, benzyl esterified HA (Hyaff, registered trademark, Fidia Advanced Biopolymers));

(3) 重量平均分子量 50， 000〜10， 000, 000を有するグルクロン酸と N—ァセチルダルコサミンとからなる二糖の重合体を、ホルムアルデヒドで架橋してさらに高分子化した誘導体（例えば、シンビスク（Synvisc、登録商標、バイオマトリックス））；並びに (3) A polymer obtained by crosslinking a disaccharide polymer consisting of glucuronic acid having a weight average molecular weight of 50,000 to 10,000,000,000,000 and N-acetyltilcosamine with formaldehyde to further polymerize (for example, , Synvisc (registered trademark, Biomatrix));

(4) その他、 HA中の 1以上の水酸基がァセチル化されているァセチル化 H A、あるいは上記した HAまたは HA誘導体に 1以上の薬効成分、例えば制癌剤 (例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アルカロイド等が挙げられる）、免疫抑制剤、抗炎症剤（ステロイド剤、非ステロイド系抗炎症剤等が挙げられる）、抗リウマチ剤、抗菌剤（3—ラク夕ム系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、新キノロン系抗生物質、ポリペプチド系抗生物質、サルファ剤等が挙げられる）などを、スぺーサーを介してまたは介さずに結合させることによって得られる誘導体等 (4) Other acetylated H in which at least one hydroxyl group in HA is acetylated A, or one or more active ingredients of HA or the above-mentioned HA derivative, for example, an anticancer agent (for example, an alkylating agent, an antimetabolite, an alkaloid, etc.), an immunosuppressant, an anti-inflammatory agent (steroid, non-steroid) Anti-rheumatic drugs, anti-rheumatic drugs, antibacterial drugs (3-lactam antibiotics, aminoglycoside antibiotics, macrolide antibiotics, tetracycline antibiotics, new quinolone antibiotics, polypeptides) Derivatives, etc., obtained by binding a compound such as an antibiotic, a sulfa drug, etc.) with or without a spacer.

が含まれる。 Is included.

HAまたは HA誘導体の塩の非限定的具体例としては、ナトリウム塩、力リウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アルミニウム塩などを挙げることができる。 Non-limiting specific examples of the salt of HA or HA derivative include sodium salt, potassium salt, magnesium salt, calcium salt, aluminum salt and the like.

HAの由来には特に制限されないが、例えば、放線菌等のバクテリア、ヒト、ブタ、ニヮトリ等に由来する HAを使用できる。 The origin of HA is not particularly limited. For example, HA derived from bacteria such as actinomycetes, humans, pigs, and chickens can be used.

HA及びそれらの塩の非限定的具体例としては、例えば、スべニール（登録商標、日本ルセル）、ァルツ（登録商標、科研製薬）、オペガン（登録商標、参天製薬）、ヒアルガン（登録商標、フィーディア）、オルトビスク（登録商標、ァ二カセラピューティックス）、ヒアロン（登録商標、フアルマシア &アップジョン）等を挙げることでき、また、和光純薬工業（株）等の各種試薬メーカーの力夕口グに記載の H A及びこれらの塩を挙げることもできる。 Non-limiting specific examples of HA and their salts include, for example, Svenir (registered trademark, Nippon Russel), Alz (registered trademark, Kaken Pharmaceutical), Opegan (registered trademark, Santen Pharmaceutical), Hyalgan (registered trademark) , Fidea), Ortobisque (registered trademark, Anika Therapeutics), Hyalon (registered trademark, Pharmacia & Upjohn), etc., and various reagent manufacturers such as Wako Pure Chemical Industries, Ltd. HA and the salts thereof described in "Kiguchi" can also be mentioned.

HAまたは HA誘導体またはそれらの塩に非共有結合により結合する本発明のカチォニック MM P阻害活性化合物は、 1種である必要はなく、 2種以上の異なる化合物であってもよい。 The catonic MMP inhibitory active compound of the present invention that binds to HA or an HA derivative or a salt thereof by non-covalent bond does not need to be one kind, and may be two or more different compounds.

本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物の有するカチオン基の陽電荷総数は、混合するあるいは非共有結合により結合する HAまたはそれらの塩のダルクロン酸残基数より少ないことが好ましく、ヒアルロン酸またはそれらの塩が沈殿しない任意の量を採りうる。好ましくは、ヒアルロン酸またはそれらの塩のダルクロン酸残基数に対して 0 . 1〜8 0 %であり、より好ましくは 1〜3 0 %である。 - 本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩、あるいは該化合物またはその塩と HA、 HA誘導体またはそれらの塩との混合物または非共有結合による結合体を医薬として適用する場合、これらカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩、混合物、または結合体は、薬学的に許容できる賦形剤または安定剤などと一緒に製剤ィ匕してから使用してもよい。 The total number of positive charges of the cationic group possessed by the catonic MMP-inhibiting compound of the present invention is preferably smaller than the number of dalcuronic acid residues of HA or a salt thereof mixed or non-covalently bound, and hyaluronic acid or a hyaluronic acid or a salt thereof is preferred. Any amount that does not precipitate the salt can be used. Preferably, it is 0.1 to 80%, more preferably 1 to 30%, based on the number of dalcuronic acid residues of hyaluronic acid or a salt thereof. -Cationic MMP-inhibiting compound of the present invention or a salt thereof, or the compound When a mixture or non-covalent conjugate of a salt or a salt thereof with HA, an HA derivative or a salt thereof is applied as a medicine, the catonic MMP-inhibiting activating compound or a salt, mixture or conjugate thereof is pharmaceutically acceptable. It may be used after being formulated together with an acceptable excipient or stabilizer.

本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩と HA、 HA誘導体またはそれらの塩との混合物あるいは結合体は、例えば、両者を適当な溶媒中で混合し、攪拌することによつても得られる。溶媒としては例えば、水、緩衝液等が挙げられ、好ましくはリン酸緩衝液 P B Sが用いられる。 The mixture or conjugate of the catonic MMP-inhibiting compound of the present invention or a salt thereof and HA, an HA derivative or a salt thereof can be obtained, for example, by mixing both in a suitable solvent and stirring. Examples of the solvent include water, a buffer and the like, and a phosphate buffer PBS is preferably used.

混合 '攪拌時の p Hは、 2. 0〜12. 0、望ましくは 4. 0〜10. 0、より望ましくは 6. 0〜8. 0 である。市販の HA製剤を使用する場合には、その製剤規格 p Hで混合 ·攪拌することが好ましい。市販の HA製剤等で、すでに溶媒に溶解されたものを使用する場合には、所定量の本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩を、直接 HA製剤に混合してもよい。混合，攪拌時の温度は約 4〜 60°C、望ましくは約 4〜30°Cである。 The pH during mixing and stirring is 2.0 to 12.0, preferably 4.0 to 10.0, and more preferably 6.0 to 8.0. When a commercially available HA preparation is used, it is preferable to mix and stir the mixture at the preparation standard pH. When a commercially available HA preparation or the like that has already been dissolved in a solvent is used, a predetermined amount of the cationic MMP inhibitory active compound of the present invention or a salt thereof may be directly mixed into the HA preparation. The temperature during mixing and stirring is about 4 to 60 ° C, preferably about 4 to 30 ° C.

本発明のカチォニック MMP阻害活性ィ匕合物またはその塩は、単独で、あるいは、 HA、 HA誘導体またはそれらの塩等を含む HA製剤と同時に、あるいは、 H A製剤投与直後に、生体内に投与してもよい。本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物を HA製剤と混和して、もしくは同時に投与した場合には、これらの静電的な結合により、 H Aに依存したカチォニック MMP阻害活性化合物の関節腔内貯留性の向上が期待できることから、関節疾患治療薬としての H A製剤の薬効向上だけでなく、 MM P阻害活性を有する物質が一般に抱える全身性の副作用を軽減することが期待できる。また、このカチオン基による静電的な結合は、投与後、本発明のカチォニック MMP阻害活性ィ匕合物が HA製剤と解離した後も、軟骨プロテオダリカンを構成する生体内 HA、コンドロイチン硫酸またはケラタン硫酸などのポリア二オンとの間にも起こり得るため、関節腔内あるいは関節軟骨や滑膜組織上にさらに長期間 MMP阻害活性を維持することが期待できる。カチォニック本発明の MMP阻害活性化合物またはその塩、結合体あるいは混合物を含む医薬の投与形態は特に限定されず、経口投与でも非経口投与でもよく、また、全身投与でも局所投与でもよい。一般的には、本発明の医薬は非経口的に局所投与するのが好ましく、例えば、注射剤として、関節内、静脈内、筋肉内または皮下に投与することができ、あるいはスプレー剤、局所用クリーム、ローシヨン、または軟膏として経皮的に投与することができる。 The catonic MMP inhibitory activity conjugate of the present invention or a salt thereof may be used alone, or simultaneously with an HA preparation containing HA, an HA derivative or a salt thereof, or immediately after administration of the HA preparation, in vivo. It may be administered. When the catonic MMP-inhibiting active compound of the present invention is mixed with or simultaneously administered with an HA preparation, the electrostatic binding of these compounds causes the HA-dependent cationic MMP-inhibiting compound to be retained in the joint cavity. Therefore, not only is it possible to improve the efficacy of HA preparations as a therapeutic agent for joint diseases, but also to reduce the general systemic side effects of substances having MMP inhibitory activity. In addition, the electrostatic binding by the cationic group may be caused by the in vivo HA, chondroitin sulfate or chondroitin sulfate constituting cartilage proteodarican even after the administration and after the dissociation of the catonic MMP inhibitory activity of the present invention from the HA preparation. Since it can also occur between polyadiones such as keratan sulfate, MMP inhibitory activity can be expected to be maintained for a longer period in the joint cavity or on articular cartilage or synovial tissue. The administration form of the medicament containing the MMP-inhibiting compound of the present invention or a salt, conjugate or mixture thereof of the present invention is not particularly limited, and may be oral administration, parenteral administration, systemic administration, or local administration. Generally, the medicament of the present invention is administered parenterally. It is preferably administered topically, for example, it can be administered intra-articularly, intravenously, intramuscularly or subcutaneously as an injection, or transdermally as a spray, topical cream, lotion or ointment Can be administered.

本発明の医薬の投与量は、患者の症状、年齢、性別などに応じて適宜選択できるが、注射剤として用いる場合は一般的には、有効成分である結合体あるいは混合物の量として 0. 0 l mgZ体重 k g/日〜 1 0 O mgZ体重 k g/日、好ましくは 0. l mgZ体重 k g/日〜 1 O mg /体重 k g/日である。前記 1日当たりの投与量の医薬を、 1日に数回に分けて投与してもよく、 1日 1回投与してもよい。あるいは、 2日〜 2 8日に 1回投与してもよい。 The dose of the medicament of the present invention can be appropriately selected according to the patient's condition, age, sex, etc., but when used as an injection, it is generally determined as the amount of the conjugate or mixture as an active ingredient. 0.0 l mgZ body weight kg / day to 10 O mgZ body weight kg / day, preferably 0.1 mgZ body weight kg / day to 10 mg / kg body weight / day. The daily dose of the medicament may be administered in divided doses several times a day, or once a day. Alternatively, it may be administered once every 2 to 28 days.

本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物の製造方法は特に限定されないが、例えば、以下に示す方法等により、またはそれを応用して製造することができる：文献記載の公知の MMP Iをその文献記載の方法により（但し、官能基を有機合成的に汎用されている適切な保護基で保護した状態で）合成し、スぺーサー部分を結合させ、カチオン基を結合させ、すべての保護基を除去する方法；文献記載の公知の MMP Iを、予めスぺーサ一部分を結合させた状態で、その文献記載の方法により（但し、官能基を有機合成的に汎用されている適切な保護基で保護した状態で）合成し、カチオン基を結合し、すべての保護基を除去する方法；または、スぺーサ一部分とカチオン基を予め結合させ、文献記載の公知の MMP I相当部分をその文献記載の方法により構築する方法。あるいは、後述の合成実施例に示す方法により、またはそれを応用して製造することができる。 The method for producing the catonic MMP inhibitory active compound of the present invention is not particularly limited. For example, the compound can be produced by the following method or by applying the method: A known MMP I described in the literature can be described in the literature. (Provided that the functional group is protected with a suitable protecting group widely used in organic synthesis), the spacer portion is bound, the cation group is bound, and all the protecting groups are bound. Removal method: The known MMP I described in the literature, with a part of the spacer previously bonded thereto, is subjected to the method described in the literature (provided that the functional group is an appropriate protecting group widely used in organic synthesis). A method of synthesizing, binding a cationic group and removing all protecting groups; or combining a spacer part and a cationic group in advance and attaching a known MMP I-equivalent part described in the literature. Sentence How to build by the method described. Alternatively, it can be produced by the method shown in the synthesis examples described later or by applying the method.

以下、合成実施例および生物活性実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定されるものではない。実施例 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Synthesis Examples and Biologically Active Examples, but the present invention is not limited to these Examples. Example

(合成実施例 1 ) N— [ 4 - (N—ヒドロキシァミノ） —2—イソプチルサクシニレ] —L—トリプトファン— N— ( 1 3— N— D—アルギニルアミノー 4， 7 , 1 0—トリオキサ—トリデカニル）アミド（化合物 7 ) の合成 Z (Synthesis Example 1) N— [4- (N-hydroxyamino) —2-isobutylsuccinyl] —L—tryptophan—N— (13—N—D—arginylamino-4,7,10— Synthesis of trioxa-tridecanyl) amide (compound 7) Z

ZLl90/l0d£/∑Jd LZZmi OAV (1) N— t一ブトキシカルボニル— 4， 7, 10—トリオキサー 1， 13— トリデカンジァミン（化合物 1) の合成 ZLl90 / l0d £ / ∑Jd LZZmi OAV (1) Synthesis of N-t-butoxycarbonyl-4,7,10-trioxa-1,13-tridecanediamine (Compound 1)

4, 7, 10—トリオキサ— 1， 13—トリデカンジァミン（16. 25 g、 74mmo 1) をメタノ一ル（750ml) に溶解し、室温攪拌下、ジ一 t—ブチルジ力ルポネート（16. l g、 74mmo 1) のメタノール（75 Oml) 溶液を 1時間かけて滴下した。滴下後、反応混合物を室温で 1時間攪拌し、反応後ェパポレー夕一にて溶媒を留去した。濃縮して得られた残留物を、クロ口ホルム—メタノールを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物を油状物として 10. 7 g (収率 45%) 得た。 4,7,10-Trioxa-1,13-tridecandamine (16.25 g, 74 mmo 1) was dissolved in methanol (750 ml), and the mixture was stirred at room temperature and stirred at room temperature. A solution of lg, 74mmo 1) in methanol (75 Oml) was added dropwise over 1 hour. After the dropwise addition, the reaction mixture was stirred at room temperature for 1 hour, and after the reaction, the solvent was distilled off in an evaporator. The residue obtained by concentration was purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol as eluent to give 10.7 g (yield 45%) of the title compound as an oil.

^-NMR (270 MHz, CDC 1₃) ： δ 1. 44 (9H、 s) 、 1. 71 - 1. 80 (4H、 m) 、 2. 36 (2H、 b r s) 、 2. 83 (2H、 t) 、 3. 13-3. 26 (2H、 m) 、 3. 52— 3. 63 (12H、 m) 、 5. 26 (1H、 b r s) ^ -NMR (270 MHz, CDC 1 3): δ 1. 44 (9H, s), 1. 71 - 1. 80 (4H, m), 2. 36 (2H, brs), 2. 83 (2H, t), 3.13-3.26 (2H, m), 3.52—3.63 (12H, m), 5.26 (1H, brs)

MS : 321 (M + H+) 。 MS: 321 (M + H +).

(2) N-9-フルォレニルメチルォキシカルポ二ルー L一トリプトファン一 N— (13— N— t—ブトキシカルポニルアミノー 4， 7, 10—トリオキサ一トリデカニル）アミド（化合物 2) の合成 (2) N-9-Fluorenylmethyloxycarbonyl 2-L-tryptophan-N- (13-N-t-butoxycarbonylamino-4,7,10-trioxa-tridecanyl) amide (Compound 2) Synthesis

N— t—ブトキシカルボ二ルー 4, 7, 10—トリオキサー 1， 13—トリデカンジァミン（化合物 1 : 10. 7 g、 33. 4mmo 1) をジクロロメタン (100ml) に溶解し、室温攪拌下、 N— 9—フルォレニルメチルォキシカルボニルトリブトファン（16. 7 g 33. 4mmo 1) を加えた。これに 1一ェチル—3— （3—ジメチルァミノプロピル）カルポジイミド塩酸塩 (EDC) N-t-butoxycarbonyl 2,7,10-trioxa-1,13-tridecandiamine (Compound 1: 10.7 g, 33.4 mmol 1) was dissolved in dichloromethane (100 ml) and stirred at room temperature. 9-Fluorenylmethyloxycarbonylcarbonyltributophan (16.7 g 33.4 mmo 1) was added. Addition of 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC)

(7. 4g、 4 Ommo 1) を添加し、室温で 16時間攪拌した。反応後、反応液を水 100mlで洗浄し、エバポレーターにて溶媒を留去した。濃縮して得られた残留物を、クロ口ホルム一メタノールを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィ一にて精製し、標題化合物を油状物として 24 g (収率 98. 6%) 得た。 (7.4 g, 4 Ommo 1) was added and stirred at room temperature for 16 hours. After the reaction, the reaction solution was washed with 100 ml of water, and the solvent was distilled off using an evaporator. The residue obtained by concentration was purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol as eluent to give 24 g (yield 98.6%) of the title compound as an oil.

^XH-NMR (270MHz, CDC 1₃) ： δ 1. 42 (9H、 s) , 1. 43- 1. 52 (2H、 m) 、 1. 61— 1. 70 (2H、 m) 、 3. 09-3. 17 (4H、 m) 、 3. 26-3. 57 (14H、 m) 、 4. 17 (1H、 t) 、 4. 30-4. 50 (3H、 m) 、 4. 93 (1H、 b r s) 、 5. 83 (1H、 b r s) , 6. 26 (1H、 b r s) , 7. 00 (1H、 s) , 7. 05-7. 17 (2H、 m) 、 7. 25— 7. 40 (5H、 m) 、 7. 52- 7. 57 (2 H、 m) 、 7. 65 (1H、 d) 、 7. 73 (2H、 d) 、 9. 15 (1H、 b r s ) o ^{X H-NMR (270MHz, CDC} 1 3): δ 1. 42 (9H, s), 1. 43- 1. 52 (2H, m), 1. 61- 1. 70 (2H, m), 3. 09-3. 17 (4H, m), 3.26-3.57 (14H, m), 4.17 (1H, t), 4.30-4.50 (3H, m), 4.93 (1H, brs) , 5.83 (1H, brs), 6.26 (1H, brs), 7.00 (1H, s), 7.05-7.17 (2H, m), 7.25-7.40 (5H , M), 7.52-7.57 (2H, m), 7.65 (1H, d), 7.73 (2H, d), 9.15 (1H, brs) o

(3) L—トリブトファン—N— (13—N— t一ブトキシカルポニルァミノ -4, 7, 10—トリオキサ—トリデカニル）アミド（化合物 3) の合成 (3) Synthesis of L-tributophan-N- (13-N-t-butoxycarbonylamino-4,7,10-trioxa-tridecanyl) amide (Compound 3)

N— 9—フルォレニルメチルォキシカルポ二ルー L—トリブトファン一 N— (13— N— t—ブトキシカルボニルァミノ— 4， 7, 10—トリオキサ—トリデカニル）アミド（化合物 2 : 12 g、 16. 5 mm o 1 ) をジクロロメタン (50ml) に溶解し、室温攪拌下、ピぺリジン（10ml) をカロえ、室温で 1 時間攪拌した。反応後、反応液を水 5 Omlで洗浄し、エバポレーターにて溶媒を留去した。濃縮して得られた残留物を、クロ口ホルム—メタノールを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物を油状物として 8. 1 g (収率 96. 9%) 得た。 N-9-Fluorenylmethyloxycarbonyl N- (13-N-t-butoxycarbonylamino-4,7,10-trioxa-tridecanyl) amide (Compound 2: 12 g) , 16.5 mmol) were dissolved in dichloromethane (50 ml), and piperidine (10 ml) was added to the solution under stirring at room temperature, followed by stirring at room temperature for 1 hour. After the reaction, the reaction solution was washed with 5 Oml of water, and the solvent was distilled off using an evaporator. The residue obtained by concentration was purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol as eluent to give 8.1 g (yield 96.9%) of the title compound as an oil. .

^-NMR (270MHz、 CDC 1₃) ： <31. 44 (9H、 s) 、 1. 67- 1. 76 (6H、 m) 、 2. 95— 3. 05 (lH、 m) 、 3. 14-3. 19 (2H, m) , 3. 28— 3. 45 (6H、 m) 、 3. 47— 3. 71 (1 0H、 m) 、 5. 05 (1H、 b r s) , 7. 05-7. 19 (3H、 m) 、 7. 35-7. 43 (2H、 m) 、 9. 10 (1H、 b r s；) 。 _{^ -NMR (270MHz, CDC 1 3} ):. <31 44 (9H, s), 1. 67- 1. 76 (6H, m), 2. 95- 3. 05 (lH, m), 3. 14 -3.19 (2H, m), 3.28-- 3.45 (6H, m), 3.47--3.71 (10H, m), 5.05 (1H, brs), 7.05- 7.19 (3H, m), 7.35-7.43 (2H, m), 9.10 (1H, brs;).

(4) N— [4一（N—ベンジルォキシァミノ）一 2—イソブチルサクシ二ル] 一 L—トリブトファン一 N— （13— N— t—ブトキシカルポニルアミノー 4, 7, 10—トリオキサ—トリデカニル）アミド（化合物 4) の合成 (4) N- [4- (N-benzyloxyamino) 1-2-isobutylsuccinyl] 1-L-tributophan-N- (13-N-t-butoxycarbonylamino-4,7,10-trioxa Synthesis of —Tridecanyl) amide (Compound 4)

L一トリブトファン— N— (13 _N— t—ブトキシカルポニルァミノ— 4, 7, 10—トリオキサ—トリデカニル）アミド（化合物 3 ： 8. l g、 16mm o 1) をジクロロメタン（100ml) に溶解し、室温攪拌下、公知の方法（特開平 6— 145148) に基づいて合成した 4— (N—ベンジルォキシァミノ） —2—イソブチルこはく酸（4. 4g、 16mmo 1) を加えた。これに EDC (3. 7 g、 19. 2mmo 1) を添加し、室温で 16時間攪拌した。反応後、反応液を水 100mlで洗浄し、エバポレー夕一にて溶媒を留去した。濃縮して得られた残留物を、クロ口ホルム一メタノールを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物を油状物として 9. 65 g (収率 8 0%) 得た。 L-Tributophan—N— (13_N—t—butoxycarponylamino—4,7,10-trioxa-tridecanyl) amide (Compound 3: 8. lg, 16 mmo 1) is dissolved in dichloromethane (100 ml) and room temperature. Under stirring, 4- (N-benzyloxyamino) -2-isobutylsuccinic acid (4.4 g, 16 mmol 1) synthesized according to a known method (Japanese Patent Laid-Open Publication No. 6-145148) was added. EDC (3.7 g, 19.2 mmol 1) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After the reaction, the reaction solution was washed with 100 ml of water, and the solvent was distilled off in an evaporator. The residue obtained by concentration was purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol as eluent to give 9.65 g (yield 80%) of the title compound as an oil.

^XH-NMR (270MHz, CDC 1₃) ： δ 0. 79— 0. 95 (6Η、 m) 、 1. 10- 1. 30 (lH、 m) 、 1. 43 (9H、 s) 、 1. 44- 1. 53 (4H、 m) 、 1. 66— 1. 78 (2H、 m) 、 2. 00— 2. 44 (2 H、 m) 、 2. 77-2. 91 (lH、 m) 、 3. 07— 3. 34 (6H、 m) 、 3. 40- 3. 70 (12H、 m) 、 4. 59— 4. 69 (lH、 m) 、 4. 7 8 (1H、 s) 、 4. 84 (1H、 s) 、 6. 32 ( 1 H、 b r s) 、 6. 87 (1H、 b r s) , 7. 03 -7. 23 (3H、 m) 、 7. 28-7. 44 (5 H、 m) 、 7. 60-7. 70 (2H、 m) 、 8. 91-9. 32 (lH、 m) 。 ^{X H-NMR (270MHz, CDC} 1 3): δ 0. 79- 0. 95 (6Η, m), 1. 10- 1. 30 (lH, m), 1. 43 (9H, s), 1. 44-1.53 (4H, m), 1.66—1.78 (2H, m), 2.00—2.44 (2H, m), 2.77-2.91 (lH, m) , 3.07—3.34 (6H, m), 3.40-3.70 (12H, m), 4.59—4.69 (lH, m), 4.78 (1H, s), 4.84 (1H, s), 6.32 (1H, brs), 6.87 (1H, brs), 7.03 -7.23 (3H, m), 7.28-7.44 (5 H, m), 7.60-7.70 (2H, m), 8.91-9.32 (lH, m).

(5) N— [4 - (N—ベンジルォキシァミノ）一 2 _イソブチルサクシ二ル] —L—トリプトファン一 N— （13—ァミノ一 4, 7, 10—トリオキサートリデカニル）アミド（化合物 5) の合成 (5) N— [4- (N-benzyloxyamino) 1-2_isobutylsuccinyl] —L-tryptophan-1-N— (13-amino-1,4,7,10-trioxatridecanyl) amide (Compound 5 Synthesis of

N— [4- (N—ベンジルォキシァミノ ) 一 2—イソプチルサクシニル] — L 一トリプトファン—N— （13—N— t—ブトキシカルポニルァミノ— 4， 7, 10—トリオキサ—トリデカニル）アミド（化合物 4： 9. 65 g、 12. 8m mo 1 ) をジクロロメタン 2 Om 1に溶解させ、トリフルォロ酢酸 1 Om 1を滴下し、室温で 30分間攪拌した。反応後エバポレー夕一で溶媒を減圧留去し、ジクロロメタン 3 Omlを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 3 Omlで洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレーターで減圧濃縮し、標題化合物を油状物として 8. 07 g (収率 94. 4%) 得た。濃縮物はそのまま次の反応に用いた。 N— [4- (N-benzyloxyamino) 1-2-isobutyltylsuccinyl] —L-tryptophan—N— (13—N—t—butoxycarponylamino—4,7,10-trioxa-tridecanyl) The amide (compound 4: 9.65 g, 12.8 mmol) was dissolved in 2 Om1 of dichloromethane, 1 Om1 of trifluoroacetic acid was added dropwise, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure in an evaporator, 3 Oml of dichloromethane was added, and the mixture was washed with 3 Oml of a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution. After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was filtered off, and the filtrate was concentrated under reduced pressure using an evaporator to obtain 8.07 g (yield: 94.4%) of the title compound as an oil. The concentrate was used for the next reaction as it was.

^-NMR (27 OMHz, CDC ") ： <50. 72— 0. 82 (6H、 m) 、 1. 02- 1. 33 (lH、 m) 、 1. 37— 1. 75 (4H、 m) 、 2. 08-2. 44 (2H、 m) 、 2. 56 (1H、 b r s) , 2. 68-2. 88 (2H、 m) 、 3. 05— 3. 28 (6H、 m) 、 3. 36- 3. 65 (12 H、 m) 、 4. 59-4. 67 (1H、 m) 、 4. 74 ( 1 H、 s) 、 4. 82 (1 H、 s) 、 5. 10 (4H、 b r s) 、 6. 80— 6. 86 (lH、 m) 、 6. 99-7. 18 (3H、 m) 、 7. 27— 7. 41 (6H、 m) 、 7. 57-7. 64 (lH、 m) 、 9. 28— 9. 43 (lH、 m) 。 ^ -NMR (27 OMHz, CDC "): <50.72—0.82 (6H, m), 1.02-1.33 (lH, m), 1.37—1.75 (4H, m) , 2.08-2.44 (2H, m), 2.56 (1H, brs), 2.68-2.88 (2H, m), 3.05—3.28 (6H, m), 3 . 36- 3.65 (12 H, m), 4.59-4.67 (1H, m), 4.74 (1H, s), 4.82 (1H, s), 5.10 (4H, brs), 6.80-6 86 (lH, m), 6.99-7.18 (3H, m), 7.27-7.41 (6H, m), 7.57-7.64 (lH, m), 9.28 — 9.43 (lH, m).

(6) N— [4— (N—ベンジルォキシァミノ）一 2 _イソプチルサクシ二ル] —L一トリプトファン一 N— [13— N— [N- a, ω 1, ω2—トリス (ベンジルォキシカルポニル）一 D—アルギニル] アミノー 4， 7, 10—トリォキサ一トリデカニル] アミド（化合物 6) の合成 (6) N— [4 -— (N-benzyloxyamino) 1-2_isobutylsuccinyl] —L-tryptophan—N— [13—N— [Na, ω1, ω2-tris (benzylo) Synthesis of [Xycarponyl) -D-arginyl] amino-4,7,10-trioxa-tridecanyl] amide (Compound 6)

Ν— [4— （Ν—ベンジルォキシァミノ） —2—イソプチルサクシニル] — L 一トリブトファン一 Ν— （13—アミノー 4， 7, 10—トリオキサ—トリデカニル）アミド（化合物 5 ： 1. 0 g 1. 5mmo 1) をジクロロメタン（10 ml) に溶解し、室温攪拌下、 N— ， ω 1, ω2—トリス（ベンジルォキシカルポニル） —D—アルギニン（0. 86 g、 1. 5mmo 1 ) を加えた。これに EDC (0. 34g、 1. 8mmo 1 ) を添加し、室温で 16時間攪拌した。反応後、反応液を水 2 Omlで洗浄し、エバポレー夕一にて溶媒を留去した。濃縮して得られた残留物を、クロ口ホルム—メタノールを溶出液としたシリカゲル力ラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物を油状物として 0. 62 g (収率 33. 7%) 得た。 Ν— [4 -— (Ν-benzyloxyamino) —2-isobutylsuccinyl] —L-tributophane —— (13-amino-4,7,10-trioxa-tridecanyl) amide (Compound 5: 1. Dissolve 0 g 1.5 mmo 1) in dichloromethane (10 ml) and add N-, ω1, ω2-tris (benzyloxycarponyl) -D-arginine (0.86 g, 1.5 mmo 1) with stirring at room temperature. added. EDC (0.34 g, 1.8 mmo 1) was added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After the reaction, the reaction solution was washed with 2 Oml of water, and the solvent was distilled off in an evaporator. The residue obtained by concentration was purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol as eluent to give 0.62 g (yield 33.7%) of the title compound as an oil. .

iH— NMR (270MHz、 CDC 1₃) ： δ 0. 73— 0. 85 (6Η、 m) 、 1. 14- 1. 37 (lH、 m) 、 1. 44- 1. 78 (8H、 m) 、 2. 15-2. 56 (2H、 m) 、 2. 77- 2. 83 (lH、 m) 、 2. 97- 3. 62 (20H、 m) 、 3. 84-4. 01 (2H、 m) 、 4. 20 (1H、 b r s) 、 4. 62-4. 68 (lH、 m) 、 4. 75-4. 86 (2H、 m) 、 5. 00-5. 28 (6H、 m) 、 6. 04-6. 15 (2H、 m) 、 6. 57 (1 H、 b r s) 、 6. 92 (2H、 b r s) , 7. 03— 7. 17 (3H、 m) 、 7. 26-7. 38 (21H、 m) 、 7. 58-7. 66 (lH、 m；) 、 8. 9 5-9. 01 (lH、 m) 、 9. 28— 9. 48 (3H、 m) 。 _{iH- NMR (270MHz, CDC 1 3} ): δ 0. 73- 0. 85 (6Η, m), 1. 14- 1. 37 (lH, m), 1. 44- 1. 78 (8H, m) , 2.15-2.56 (2H, m), 2.77-2.83 (lH, m), 2.97-3.62 (20H, m), 3.84-4.01 (2H, m) m), 4.20 (1H, brs), 4.62-4.68 (lH, m), 4.75-4.86 (2H, m), 5.00-5.28 (6H, m) , 6.04-6.15 (2H, m), 6.57 (1H, brs), 6.92 (2H, brs), 7.03—7.17 (3H, m), 7.26- 7.38 (21H, m), 7.58-7.66 (lH, m;), 9.95-9.01 (lH, m), 9.28—9.48 (3H, m).

(7) N— [4- (N—ヒドロキシァミノ）一2—イソプチルサクシニル] 一 L—トリプトファン一 N— （13— N— D——アルギニルァミノ— 4， 7, 10- トリオキサートリデカニル）アミド（化合物 7) の合成 (7) N— [4- (N-Hydroxyamino) 1-2-isobutylsuccinyl] 1-L—Tryptophan—N— (13—N—D—Arginylamino—4,7,10- Synthesis of Trioxatridecanyl) amide (Compound 7)

N— [4一（N—ベンジルォキシァミノ） —2—イソプチルサクシニル] — L —トリブトファン— N— [13-N- [N- α, ω 1, ω2—トリス（ベンジルォキシ力ルポニル） —D—アルギニル] アミノー 4， 7， 10—トリオキサートリデカニル] アミド（化合物 6 ： 0. 48 g、 0. 4 mm o 1 ) をメタノール (8ml) に溶解させ、水素雰囲気下、 10%Pd/C 0. 24gにて 7時間接触還元した。反応液をセライト濾過後、減圧濃縮したところ、標題化合物を油状物質として 0. 25 g (収率 86. 2%) 得た。 N— [4- (N-benzyloxyamino) —2-isobutylsuccinyl] —L—tributophane—N— [13-N- [N-α, ω1, ω2-tris (benzyloxypropyl) —D—Arginyl] amino-4,7,10-trioxate lidecanyl] amide (Compound 6: 0.48 g, 0.4 mmol) is dissolved in methanol (8 ml) and 10% Pd / C in a hydrogen atmosphere Catalytic reduction was performed with 0.24 g for 7 hours. The reaction solution was filtered through celite and concentrated under reduced pressure to obtain 0.25 g (yield: 86.2%) of the title compound as an oil.

— NMR (270MHz、 CD30D) ： 60. 54— 0. 87 (6H、 m) 、 1. 1 1-1. 80 (9H、 m) 、 2. 02-2. 37 (2H、 m) 、 2. 52-2. 80 (lH、 m) 、 2. 92— 3. 64 (22H、 m) 、 4. 51 - 4. 70 (lH、 m) 、 6. 93-7. 09 (3H、 m) 、 7. 28-7. 33 (1H、 m) 、 7. 55- 7. 60 (1H、 m) 。 — NMR (270MHz, CD30D): 60.54—0.87 (6H, m), 1.1-1.80 (9H, m), 2.02-2.37 (2H, m), 2. 52-2.80 (lH, m), 2.92—3.64 (22H, m), 4.51-4.70 (lH, m), 6.93-7.09 (3H, m), 7.28-7.33 (1H, m), 7.55-7.60 (1H, m).

(合成実施例 2) N— [4— （N—ヒドロキシァミノ） —2—イソプチルサクシニル] 一 L—トリブトファン— N— [1 3 - N— [N-a- (D—アルギニル） —D—アルギニル] ァミノ— 4, 7， 10—トリオキサートリデカニル] ァミド（化合物 11) の合成 (Synthesis Example 2) N- [4- (N-hydroxyamino) -2-isobutylsuccinyl] 1-L-tributane-N- [13-N- [Na- (D-arginyl) -D-arginyl Synthesis of Amino-4,7,10-trioxatridecanyl] amide (Compound 11)

、M— DArg(Z)₂— H , M—DArg (Z) ₂ — H

なお、上記合成スキーム中の「一 _DAr g (Z) ₂—」は下記の式を表す。 Note that “ _-D Ar g (Z) ₂ —” in the above synthesis scheme represents the following formula.

(1) N— [4- (N—ベンジルォキシァミノ）一 2—イソプチルサクシ二ル] —L—トリプトファン— N— [13— N— [N—ひ—ブトキシカルボニル一 Ν-ω 1, ω2—ビス（ベンジルォキシカルポニル） —D—アルギニル] ァミノ -4, 7, 10—トリオキサートリデカニル] アミド（化合物 8) の合成 (1) N— [4- (N-benzyloxyamino) 1-2-isobutylsuccinyl] —L—tryptophan—N— [13—N— [N-hybutoxycarbonyl-1 一 -ω1, ω2 Synthesis of [bis (benzyloxycarbonyl) -D-arginyl] amino-3,7,10-trioxatridecanyl] amide (Compound 8)

Ν- [4- (Ν—ベンジルォキシァミノ）一 2—イソプチルサクシニル] — L 一トリブトファン一 Ν— (13—ァミノ— 4， 7, 10—トリオキサートリデカニル）アミド（化合物 5 ： 3. 0 g、 4. 5mmo 1) をジクロロメタン（30 ml) に溶解し、室温攪拌下、 N— a— t—ブトキシカルポ二ルー N— ω 1， ω 2—ビス（ベンジルォキシカルポニル）一 D—アルギニン（2. 4g、 4. 5m mo 1 ) を加えた。これに EDC (1. 0 g、 5. 4mmo 1 ) を添加し、室温で 16時間攪拌した。反応後、反応液を水 3 Omlで洗浄し、エバポレー夕一にて溶媒を留去した。濃縮して得られた残留物を、クロ口ホルム一メタノールを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物を油状物として 2. 31 g (収率 43. 1%) 得た。 Ν- [4- (Ν-benzyloxyamino) -1-2-isobutylsuccinyl] -L-tributophane-Ν (13-amino-4,7,10-trioxatridecanyl) amide (Compound 5: Dissolve 3.0 g, 4.5 mmo 1) in dichloromethane (30 ml), and stir at room temperature with N-at-butoxycarbonyl N-ω1, ω2-bis (benzyloxycarponyl) -D —Arginine (2.4 g, 4.5 mMol) was added. EDC (1.0 g, 5.4 mmol) was added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After the reaction, the reaction solution was washed with 3 Oml of water, and the solvent was distilled off in an evaporator. The residue obtained by concentration was purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol as eluent to give 2.31 g (yield 43.1%) of the title compound as an oil. .

iH— NMR (270MHz、 CDC 1₃) : 60. 73— 0. 83 (6H、 m) 、 1. 03— 1. 34 (lH、 m) 、 l. 41 (9H、 s) 、 1. 48— 1. 80 (8H、 m) 、 2. 03-2. 42 (2H、 m) 、 2. 66-2. 89 (1 H m) , 3. 00— 3. 68 (20H、 m) 、 3. 83— 4. 06 (2H、 m) 、 4. 14 (1H、 b r s) 、 4. 64-4. 88 (3H、 m) 、 5. 02 —5. 28 (4H、 m) 、 5. 67— 5. 75 (lH、 m) 、 6. 54-6. 5 8 (lH、 m) 、 6. 86-6. 99 (2H、 m) 、 7. 00— 7. 18 (3H、 m) 、 7. 27- 7. 45 (16H、 m) 、 7. 61-7. 66 (lH、 m；) 、 9. 11-9. 48 (3H、 m) 、 9. 76— 9. 84 (lH、 m) 。 _{iH- NMR (270MHz, CDC 1 3} ):. 60. 73- 0. 83 (6H, m), 1. 03- 1. 34 (lH, m), l 41 (9H, s), 1. 48- 1.80 (8H, m), 2.03-2.42 (2H, m), 2.66-2.89 (1 Hm), 3.00—3.68 (20H, m), 3. 83—4.06 (2H, m), 4.14 (1H, brs), 4.64-4.88 (3H, m), 5.02—5.28 (4H, m), 5.67— 5.75 (lH, m), 6.54-6.58 (lH, m), 6.86-6.99 (2H, m), 7.00-7.18 (3H, m), 7.27-7.45 (16H, m), 7.61-7.66 (lH, m;), 9.11-9.48 (3H, m), 9.76—9.84 (lH, m).

(2) N- [4— (N—ベンジルォキシァミノ）一 2—イソプチルサクシ二ル] —L—トリプトファン一 N— [13-N- [N— ω 1， ω2—ビス（ベンジルォキシカルポニル) —D—アルギニル] アミノー 4， 7, 10—トリオキサートリデカニル] アミド（化合物 9) の合成 (2) N- [4 -— (N-benzyloxyamino) 1-2-isobutylsuccinyl] —L-tryptophan-1-N— [13-N- [N—ω1, ω2—bis (benzyloxycarbonyl) ) —D-Arginyl] amino-4,7,10-trioxatridecanyl] amide (Compound 9)

Ν— [4一（Ν—ベンジルォキシァミノ）一 2 _イソプチルサクシニル] — L 一トリプトファン— Ν— [13-Ν- [Ν— α—ブトキシカルポ二ルー Ν— ω 1， ω2—ビス（ベンジルォキシカルポニル）一 D—アルギニル] アミノー 4， 7， 10—トリオキサ—トリデカニル] アミド（化合物 8 ： 2. 31 g、 1. 9mm o 1) をジクロロメタン 10mlに溶解させ、トリフルォロ酢酸 5m 1を滴下し、室温で 30分間攪拌した。反応後エバポレーターで溶媒を減圧留去し、ジクロロメタン 20mlを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 20mlで洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレ一ターで減圧濃縮し、標題化合物を油状物として 2. 02g (収率 97. 3%) 得た。濃縮物はそのまま次の反応に用いた。 Ν— [4- (Ν-benzyloxyamino) 1-2_isobutyltylsuccinyl] — L-tryptophan— Ν— [13-Ν- [Ν—α-butoxycarporinol Ν—ω1, ω2-bis ( Benzyloxycarbonyl) -D-arginyl] amino-4,7,10-trioxa-tridecanyl] amide (compound 8: 2.31 g, 1.9 mmol) was dissolved in 10 ml of dichloromethane, and 5 ml of trifluoroacetic acid was added dropwise. Then, the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure using an evaporator, 20 ml of dichloromethane was added, and the mixture was washed with 20 ml of a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution. After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was removed by filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure using an evaporator to obtain 2.02 g (yield: 97.3%) of the title compound as an oil. The concentrate was used for the next reaction as it was.

^-NMR (270MHz、 CDC 1₃) δ 0. 74-0. 87 (6Η、 m) 、 1. 06- 1. 83 (9H、 m) 、 2. 01— 2. 50 (2H、 m) 、 2. 76-2. 84 (lH、 m) 、 3. 02— 3. 67 (20H、 m) 、 3. 80- 4. 03 (2H、 m) 、 4. 60-4. 68 (lH、 m) 、 4. 76— 4. 87 (2H、 m) 、 5. 07- 5. 28 (4H、 m) 、 6. 40-6. 60 (l.H、 m) 、 7. 04—7. 22 (3H、 m) 、 7. 29-7. 49 ( 16 H, m) > 7. 58- 7. 67 (lH、 m) 、 9. 12-9. 46 (2H、 m) 。 _{^ -NMR (270MHz, CDC 1 3} ) δ 0. 74-0. 87 (6Η, m), 1. 06- 1. 83 (9H, m), 2. 01- 2. 50 (2H, m), 2.76-2.84 (lH, m), 3.02—3.67 (20H, m), 3.80-4.03 (2H, m), 4.60-4.68 (lH, m) ), 4.76—4.87 (2H, m), 5.07-5.28 (4H, m), 6.40-6.60 (lH, m), 7.04—7.22 (3H , M), 7.29-7.49 (16H, m)> 7.58-7.67 (lH, m), 9.12-9.46 (2H, m).

(3) N— [4— (N—ベンジルォキシァミノ） —2—イソブチルサクシ二ル] —L一トリプトファン一 N— [13— N— CN-Q!- [N— ， ω 1, ω 2 ートリス（ベンジルォキシカルボニル） —D—アルギニル] 一 Ν— ω 1， ω 2 ~ ビス (ベンジルォキシカルポニル) 一 D—アルギニル] アミノー 4， 7, 10— トリオキサートリデカニル] アミド（化合物 10) の合成 (3) N— [4 -— (N-benzyloxyamino) —2-isobutylsuccinyl] —L-tryptophan—N— [13— N— CN-Q!-[N—, ω 1, ω 2 Tris (benzyloxycarbonyl) —D-arginyl] mono- ω 1, ω 2 ~ bis (benzyloxycarbonyl) -D-arginyl] amino-4,7,10-trioxatridecanyl] amide (compound 10) Synthesis of

Ν— [4一（Ν—ベンジルォキシァミノ） —2—イソプチルサクシニル] — L -N- [13-N- [Ν-ω 1, ω2_ビス（ベンジルォキシ力ルポニル）一 D—アルギニル] ァミノ— 4， 7, 10—トリオキサートリデカニル] アミド（ィヒ合物 9 ： 0. 7 g、 0. 64mmo 1) をジクロロメタン（1 0ml) に溶解し、室温攪拌下、 Ν_α， ω1， ω 2—トリス（ベンジルォキシ力ルポニル）一D—アルギニン（0. 37 g、 0. 64mmo 1 ) を加えた。これに EDC (0. 15g、 0. 77mmo 1) を添加し、室温で 16時間攪拌した。反応後、反応液を水 20mlで洗浄し、エバポレーターにて溶媒を留去した。濃縮して得られた残留物を、クロ口ホルム—メタノールを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物を油状物として 0. 52 g (収率 49. 2%) 得た。 Ν— [4- (benzyloxyamino) -2-isobutylsuccinyl] —L -N- [13-N- [Ν-ω1, ω2_bis (benzyloxyl-proponyl) -D-arginyl] amino-4,7,10-trioxatridecanyl] amide (compound 9: 0 .7 g, 0.64 mmo 1) was dissolved in dichloromethane (10 ml), and stirred at room temperature, Ν_α, ω1, ω2-tris (benzyloxyl-proponyl) -D-arginine (0.37 g, 0.64 mmo 1) ) Was added. EDC (0.15 g, 0.77 mmol) was added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After the reaction, the reaction solution was washed with 20 ml of water, and the solvent was distilled off using an evaporator. The residue obtained by concentration was purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol as eluent to give 0.52 g (yield: 49.2%) of the title compound as an oil. .

^-NMR (270MHz、 CDC 1₃) δ 0. 72 -0. 80 (6Η、 m) 、 1. 03— 1. 09 (lH、 m) 、 1. 29- 1. 67 (10H、 m) 、 1. 86-2. 26 (2H、 m) 、 2. 57 -2. 86 (lH、 m) 、 2. 95 —3. 50 (24H、 m) 、 3. 69 -3. 95 (2H、 m) 、 4. 08 (1H、 b r s) , 4. 19 (1H、 b r s) 、 4. 38-4. 54 ( 1 H、 m) 、 4. 75-4. 77 (2H、 m) 、 4. 90— 5. 06 (6H、 m) 、 5. 19— 5. 29 (4H、 m) , 6. 93-7. 11 (3H、 m) 、 7. 19-7. 43 (3 lH、 m) 、 7. 52-7. 56 (lH、 m) 、 9. 12 (2H、 b r s；) 。 _{^ -NMR (270MHz, CDC 1 3} ) δ 0. 72 -0. 80 (6Η, m), 1. 03- 1. 09 (lH, m), 1. 29- 1. 67 (10H, m), 1.86-2.26 (2H, m), 2.57-2.86 (lH, m), 2.95-3.50 (24H, m), 3.69 -3.95 (2H, m ), 4.08 (1H, brs), 4.19 (1H, brs), 4.38-4.54 (1H, m), 4.75-4.77 (2H, m), 4.90 — 5.06 (6H, m), 5.19— 5.29 (4H, m), 6.93-7.11 (3H, m), 7.19-7.43 (3 lH, m), 7.52-7. 56 (lH, m), 9.12 (2H, brs;).

(4) N— C4- (N—ヒドロキシァミノ）一 2—イソプチルサクシニル] ― L—トリプトファン— N— [13 -N- CN-Q!- (D—アルギニル） — D—アルギニル] アミノー 4, 7, 10_トリオキサ—トリデカニル] アミド（化合物 1 1) の合成 (4) N-C4- (N-hydroxyamino) 1-2-isobutyltylsuccinyl] -L-tryptophan-N- [13-N-CN-Q!-(D-arginyl) -D-arginyl] amino- Synthesis of 4, 7, 10_trioxa-tridecanyl] amide (Compound 11)

N— [4- (N—ベンジルォキシァミノ） —2—イソプチルサクシニル] — L 一トリプトファン一 N— [13— N— [Ν-α- [Ν-α, ω 1, ω2—卜リス (ベンジルォキシカルボニル） —D—アルギニル] _Ν— ω 1， ω2—ビス（ベンジルォキシ力ルポニル）一 D—アルギニル] アミノー 4， 7， 10—トリオキサ—トリデカニル] アミド（化合物 10 : 0. 18 g、 0. l lmmo l) をメ夕ノール（2ml) とテトラヒドロフラン（2ml) の混液に溶解させ、水素雰囲気下、 10%Pd/C 0. 18 gにて 8時間接触還元した。反応液をセライト濾過後、減圧濃縮したところ、標題化合物を油状物質として 75mg (収率 7 6. 6%) 得た。 N— [4- (N-benzyloxyamino) —2-isobutylsuccinyl] —L-tryptophan-one N— [13—N— [Ν-α- [Ν-α, ω1, ω2—tris) (Benzyloxycarbonyl) —D-arginyl] _] — ω1, ω2-bis (benzyloxyl-propionyl) -D-arginyl] amino-4,7,10-trioxa-tridecanyl] amide (Compound 10: 0.18 g, 0.1 mlm) was dissolved in a mixture of methanol (2 ml) and tetrahydrofuran (2 ml), and the mixture was catalytically reduced with 0.18 g of 10% Pd / C for 8 hours in a hydrogen atmosphere. Reaction mixture After filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure to give the title compound (75 mg, yield 76.6%) as an oil.

^-NMR (270 MHz, CD 3 OD) ： 60. 57— 0. 99 (6H、 m) 、 1. 14-1. 92 (l lH、 m) 、 2. 16-2. 39 (2H、 m) 、 2. 52-2. 80 (1H、 m) 、 3. 00— 3. 70 (26H、 m) 、 4. 5 8-4. 74 (lH、 m) 、 6. 96— 7. 15 (3H、 m) 、 7. 32— 7. 40 (lH、 m) 、 7. 59-7. 64 (lH、 m) 。 ^ -NMR (270 MHz, CD 3 OD): 60.57-0.99 (6H, m), 1.14-1.92 (l lH, m), 2.16-2.39 (2H, m ), 2.52-2.80 (1H, m), 3.00—3.70 (26H, m), 4.58-4.74 (lH, m), 6.96—7.15 ( 3H, m), 7.32—7.40 (lH, m), 7.59-7.64 (lH, m).

(合成実施例 3) N— [4一（N—ヒドロキシァミノ）一2—イソプチルサクシェル] —L—トリプトファン一N— [13 -N- [N- α- [Ν—ひー（D— アルギニル）一 D—アルギニル] —D—アルギニル] アミノー 4, 7, 10—トリォキサ一トリデカニル] アミド（化合物 15) の合成 (Synthesis Example 3) N- [4- (N-hydroxyamino) 1-2-isobutyltyl shell] —L-tryptophan-1N— [13-N- [N-α- [Ν-hi (D-arginyl) 1) Synthesis of [D-arginyl] -D-arginyl] amino-4,7,10-trioxa-tridecanyl] amide (Compound 15)

15 Fifteen

(1) N— [4- (N_ベンジルォキシァミノ）一2—イソプチルサクシ二ル] — L—トリプトファン— N— 「13— N—— [N— a— 「N—_ひ一 t—ブトキシカルポ二ルー N— ω 1， ω 2—ビス（ベンジルォキシカルポ二ル）一D—アルギニル] — Ν— ω 1， ω 2一ビス（ベンジルォキシカルボニル） — D—アルギニル] アミノー 4， 7, 10 —トリオキサ—トリデカニル] アミド (化合物 12) の合成 (1) N— [4- (N_benzyloxyamino) 1-2-isobutylsuccinyl] —L—tryptophan—N— “13—N —— [N—a—“ N—_Hiichi t— N-ω1, ω2-bis (benzyloxycarporyl) -D-arginyl] — Ν—ω1, ω2-bis (benzyloxycarbonyl) —D-arginylamino Synthesis of 4,7,10-Trioxa-tridecanyl] amide (Compound 12)

Ν- [4- (Ν—ベンジルォキシァミノ） —2—イソプチルサクシニル] 一 L 一トリプトファン一 Ν— [13— Ν— [Ν-ω 1, ω2—ビス（ベンジルォキシ力ルポニル） —D—アルギニル] アミノー 4， 7, 10—トリオキサートリデカニル] アミド（化合物 9 ： 1. 3 g、 1. 2mmo 1) をジクロロメタン（20 ml) に溶解し、室温攪拌下、 N— a— t—ブトキシカルポニル— N— ω 1， ω 2—ビス（ベンジルォキシカルボニル）一 D—アルギニン（0. 65g、 1. 2 mmo l) を加えた。これに EDC (0. 3 g、 1. 44mmo 1 ) を添加し、室温で 16時間攪拌した。反応後、反応液を水 2 Omlで洗浄し、エバポレータ一にて溶媒を留去した。濃縮して得られた残留物を、クロ口ホルム—メタノールを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物を油状物として 1. 02 g (収率 52. 6%) 得た。 Ν- [4- (Ν-benzyloxyamino) —2-isobutyl succinyl] 1 L 1 tryptophan 1 Ν— [13— Ν— [Ν-ω 1, ω2—bis (benzyloxy propylonyl) —D— Arginyl] amino-4,7,10-trioxatridecanyl] amide (Compound 9: 1.3 g, 1.2 mmo 1) was dissolved in dichloromethane (20 ml), and stirred at room temperature. Butoxycarponyl-N-ω1, ω2-bis (benzyloxycarbonyl) -D-arginine (0.65 g, 1.2 mmol) was added. EDC (0.3 g, 1.44 mmo 1) was added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After the reaction, the reaction solution was washed with 2 Oml of water, and the solvent was distilled off using an evaporator. The residue obtained by concentration was purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol as eluent to obtain 1.02 g (yield: 52.6%) of the title compound as an oil.

^-NMR (270MHz、 CDC 1₃) ： (50. 73— 0. 89 (6H、 m) 、 1. 14— 1. 28 (lH、 m) 1. 38 (9H、 s) 、 1. 4-1. 75 (10H、 m) 、 2. 16-2. 38 (2H、 m) 、 2. 79-2. 86 (lH、 m) 、 2. 93- 3. 64 (24H、 m) 、 3. 76-4. 15 (3H、 m) 、 4. 35-4. 41 (1H、 m) 、 4. 71-4. 87 (3H、 m) 、 5. 03- 5. 25 (8H、 m) 、 5. 42— 5. 48 (lH、 m) 、 6. 90-7. 16 (4H、 m) 、 7. 29 - 7. 45 (26H、 m) 、 7. 58— 7. 65 ( 1 H、 m) 、 9. 01— 9. 62 ( 6 H、 m) 。 _{^ -NMR (270MHz, CDC 1 3} ): (50. 73- 0. 89 (6H, m), 1. 14- 1. 28 (lH, m) 1. 38 (9H, s), 1. 4- 1.75 (10H, m), 2.16-2.38 (2H, m), 2.79-2.86 (lH, m), 2.93-3.64 (24H, m), 3.76-4.15 (3H, m), 4.35-4.41 (1H, m), 4.71-4 87 (3H, m), 5.03-5.25 (8H, m), 5.42—5.48 (lH, m), 6.90-7.16 (4H, m), 7.29 -7.45 (26H, m), 7.58-7.65 (1H, m), 9.01-9.62 (6H, m).

(2) N— [4- (N—ベンジルォキシァミノ） —2—イソプチルサクシ二ル] —L—トリブトファン一 N— Cl 3-N- [N— 一 CN-ω 1, ω2—ビス（ベンジルォキシカルボニル） —D—アルギニル] — Ν— ω 1， ω 2—ビス (ベンジルォキシカルポニル）一 D—アルギニル] ァミノ— 4, 7， 10—トリォキサ一トリデカニル] アミド（化合物 13) の合成 (2) N— [4- (N-benzyloxyamino) —2-isobutylsuccinyl] —L—tributane-1 N—Cl 3-N- [N—one CN-ω1, ω2-vis ( Benzyloxycarbonyl) —D-arginyl] — Ν— ω1, ω2-bis (benzyloxycarbonyl) -D-arginyl] amino—4,7,10-trioxa-tridecanyl] amide (compound 13) Synthesis

Ν- [4- (Ν—ベンジルォキシァミノ）一 2—イソプチルサクシニル] 一 L —トリブトファン— Ν— [13— N— [N- K- [N—Q!— t一ブトキシカルポニル—N— ω 1， ω 2 _ビス (ベンジルォキシカルポニル) 一 D—アルギニル] -Ν-ω 1, ω2—ビス（ベンジルォキシカルポニル） —D—アルギニル] アミノー 4， 7， 10—トリオキサ—トリデカニル] アミド（化合物 12 ： 1. 02 g、 0. 63mmo 1 ) をジクロロメタン 10m 1に溶解させ、トリフルォロ酢酸 5mlを滴下し、室温で 30分間攪拌した。反応後、エバポレー夕一で溶媒を減圧留去し、ジクロロメタン 2 Omlを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液 2 Omlで洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレーターで減圧濃縮し、標題化合物を油状物として 0. 9g (収率 94. 2%) 得た。濃縮物はそのまま次の反応に用いた。 Ν- [4- (Ν-benzyloxyamino) -1-2-isobutylsuccinyl] one L—tributane ——— [13—N— [N-K- [N—Q! —T-butoxycarbonyl—N — Ω 1, ω 2 _bis (benzyloxycarponyl) -D-arginyl] -Ν-ω 1, ω2-bis (benzyloxycarponyl) —D-arginyl] amino 4,7,10-trioxa-tridecanyl An amide (compound 12: 1.02 g, 0.63 mmol) was dissolved in 10 ml of dichloromethane, 5 ml of trifluoroacetic acid was added dropwise, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure in an evaporator, dichloromethane (2 Oml) was added, and the mixture was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (2 Oml). After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was filtered off, and the mixture was concentrated under reduced pressure using an evaporator to obtain 0.9 g (yield: 94.2%) of the title compound as an oil. The concentrate was used for the next reaction as it was.

^-NMR (270MHz、 CDC 1₃) ： δ 0. 70— 0. 89 (6Η、 m) 、 1. 17- 1. 26 (lH、 m) 1. 38- 1. 76 (10H、 m) 、 1. 80 - 2. 08 (2H、 m) 、 2. 72— 2. 84 (lH、 m) 、 3. 00-3. 60 (24H、 m) 、 3. 80— 4. 08 (3H、 m) 、 4. 32— 4. 39 (1H、 m) 、 4. 61-4. 67 (1H、 m) 、 4. 72— 4. 86 (2H. m) 5. 07- 5. 23 (8H、 m) 、 6. 99-7. 17 (4H、 m) 、 7. 27- 7. 43 (26H、 m) 、 7. 60— 7. 65 (lH、 m) 、 7. 83— 7. 88 (2H、 m) 、 9. 23— 9. 38 (4H、 m) 。 (3) N— [4- (N—ベンジルォキシァミノ) —2—イソプチルサクシ二ル] —L—トリプトファン一 N— [13-N- [N—ひー [Ν-α- [Ν-α, ω 1, ω2—トリス（ベンジルォキシカルポニル）一 D—アルギニル] — Ν— ω 1， ω2—ビス（ベンジルォキシカルポニル） —D—アルギニル] — Ν— ω 1， ω2—ビス（ベンジルォキシカルポニル）一 D—アルギニル] アミノー 4， 7, 10—トリオキサートリデカニル] アミド（化合物 14) の合成 _{^ -NMR (270MHz, CDC 1 3} ): δ 0. 70- 0. 89 (6Η, m), 1. 17- 1. 26 (lH, m) 1. 38- 1. 76 (10H, m), 1.80-2.08 (2H, m), 2.72-2.84 (lH, m), 3.00-3.60 (24H, m), 3.80-4.08 (3H, m ), 4.32—4.39 (1H, m), 4.61-4.67 (1H, m), 4.72—4.86 (2H.m) 5.07-5.23 (8H, m), 6.99-7.17 (4H, m), 7.27-7.43 (26H, m), 7.60—7.65 (lH, m), 7.83—7.88 ( 2H, m), 9.23—9.38 (4H, m). (3) N— [4- (N-benzyloxyamino) —2-isobutylsuccinyl] —L—tryptophan—N— [13-N- [N—hi [Ν-α- [Ν-α , ω 1, ω2-Tris (benzyloxycarponyl) -D-arginyl] — Ν— ω1, ω2-bis (benzyloxycarponyl) —D-arginyl] — Ν— ω1, ω2-bis (benzylo) Synthesis of [Xycarponyl) -D-arginyl] amino-4,7,10-trioxatridecanyl] amide (Compound 14)

Ν— [4一（Ν—ベンジルォキシァミノ）一 2—イソプチルサクシニル] — L —トリプトファン一 Ν— [13-Ν- [N- K- [Ν-ω 1, ω2—ビス（ベンジルォキシカルポニル） —D—アルギニル] 一 Ν— ω 1， ω2—ビス（ベンジルォキシ力ルポニル） —D—アルギニル] アミノー 4， 7, 10—トリオキサ—トリデカニル] アミド（化合物 13 : 0. 9 g、 0. 6mmo 1) をジクロ口メタン（10ml) に溶解し、室温攪拌下、 Ν-α, ω1， ω 2—トリス（ベンジルォキシカルボニル） —D—アルギニン（0. 37 g、 0. 6mmo 1) を加えた。これに EDC (0. 14g、 0. 73mmo 1) を添加し、室温で 16時間攪拌した。反応後、反応液を水 2 Omlで洗浄し、エバポレー夕一にて溶媒を留去した。濃縮して得られた残留物を、クロ口ホルム一メタノールを溶出液としたシリ力ゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物を油状物として 1. 0 3 g (収率 82. 7%) 得た。 Ν— [4-I (Ν-benzyloxyamino) -1-2-isobutyltylsuccinyl] — L —tryptophan Ν— [13-Ν- [NK- [Ν-ω1, ω2-bis (benzyl) -D-arginyl] mono-ω1, ω2-bis (benzyloxyl-propionyl) -D-arginyl] amino-4,7,10-trioxatrididecanyl] amide (Compound 13: 0.9 g , 0.6mmo1) in dichloromethane (10ml) and 攪拌 -α, ω1, ω2-tris (benzyloxycarbonyl) -D-arginine (0.37g, 0.37g) at room temperature with stirring. 6mmo 1) was added. EDC (0.14 g, 0.73 mmol 1) was added thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After the reaction, the reaction solution was washed with 2 Oml of water, and the solvent was distilled off in an evaporator. The residue obtained by concentration was purified by silica gel column chromatography using chloroform-methanol as eluent, and the title compound was obtained as an oil (1.03 g, yield 82.7%). Obtained.

— NMR (270 MHz, CDC 1₃) 80. 70— 0. 90 (6H、 m) , 1. 17-1. 29 ( 1 H、 m) 、 1. 38— 1. 77 ( 12 Η、 m) 、 2. 18-2. 37 (2H、 m) 、 2. 50 (2H、 b r s) , 2. 80— 2. 87 (lH、 m) 、 2. 95— 3. 60 (26H、 m) 、 3. 72— 4. 18 (5H、 m) 、 4. 37-4. 42 (1H、 m) 、 4. 72- 5. 25 (17H、 m) 、 6. 86-7. 12 (4H、 m) 、 7. 19— 7. 43 (41H, m) 7. 56- 7. 66 (lH、 m) 、 9. 04-9. 72 (6H、 m) 。 -. NMR (270 MHz, CDC 1 3) 80. 70- 0. 90 (6H, m), 1. 17-1 29 (1 H, m), 1. 38- 1. 77 (12 Η, m) , 2.18-2.37 (2H, m), 2.50 (2H, brs), 2.80—2.87 (lH, m), 2.95—3.60 (26H, m), 3 72—4.18 (5H, m), 4.37-4.42 (1H, m), 4.72-5.25 (17H, m), 6.86-7.12 (4H, m) 7.19—7.43 (41H, m) 7.56-7.66 (lH, m), 9.04-9.72 (6H, m).

(4) N— [4- (N—ヒドロキシァミノ）一 2—イソプチルサクシニル] 一 L—トリブトファン一 N— [13— N— [N—Q!— [N- a- (D—アルギニル） —D—アルギニル] —D—アルギニル] アミノー 4， 7, 10—トリオキサ— トリデカニル] _ァミド（化合物 15) の合成 N— [4一（N—ベンジルォキシァミノ）一 2—イソプチルサクシニル] 一 L —トリプトファン一N— [13— N— [N—ひ一 [Ν-α- [Ν- , ω 1, ω 2—トリス（ベンジルォキシカルボニル） —D—アルギニル] 一 Ν— ω 1， ω 2 一ビス（ベンジルォキシカルポニル）一 D—アルギニル] — Ν— ω ΐ, ω 2—ビス（ベンジルォキシカルポニル） —D—アルギニル] アミノー 4, 7, 1 0—トリオキサ—トリデカニル] アミド（化合物 14 : 0. 4g、 0. 19mmo 1) を、メタノール（4ml) とテトラヒドロフラン（4ml) の混液に溶解させ、水素雰囲気下、 10%Pd/C 0. 4 gにて 3時間接触還元した。反応液をセライト濾過後、減圧濃縮したところ、標題化合物を油状物質として 20 Omg (収率 99. 2%) 得た。 (4) N— [4- (N-hydroxyamino) -1-2-isobutylsuccinyl] —L—tributophane—N— [13—N— [N—Q! — [Na- (D—arginyl ) —D-Arginyl] —D-Arginyl] amino-4,7,10-trioxa-tridecanyl] _amide (Compound 15) N— [4- (N-benzyloxyamino) -1-2-isobutylsuccinyl] —L—Tryptophan—N— [13—N— [N—Hiichi [Ν-α- [Ν-, ω1, ω 2 -tris (benzyloxycarbonyl) —D-arginyl] 1 Ν— ω 1, ω 2 bis (benzyloxycarponyl) 1 D-arginyl] — Ν— ω ΐ, ω 2 —bis (benzylo) Xycarponyl) -D-arginyl] amino-4,7,10-trioxa-tridecanyl] amide (Compound 14: 0.4 g, 0.19 mmo 1) dissolved in a mixture of methanol (4 ml) and tetrahydrofuran (4 ml) The mixture was catalytically reduced with 0.4 g of 10% Pd / C for 3 hours under a hydrogen atmosphere. The reaction solution was filtered through celite, and concentrated under reduced pressure to give the title compound as an oil (20 Omg, yield 99.2%).

^-NMR (270 MHz, DMSO-D 6) ： <50. 55 - 0. 86 (6 H、 m；) 、 1. 2 1 - 1. 87 (13H、 m) 、 2. 07— 2. 27 (2H、 m) 、 2. 55- 3. 99 (31H、 m) 、 4. 45-4. 73 (1H、 m；) 、 6. 88-7. 1 1 (3H、 m) 、 7. 32— 7. 39 (lH、 m) 、 7. 52 — 7. 57 (1H、 m) 。 ^ -NMR (270 MHz, DMSO-D 6): <50.55-0.86 (6H, m;), 1.21-1.87 (13H, m), 2.07-2.27 (2H, m), 2.55-3.99 (31H, m), 4.45-4.73 (1H, m;), 6.88-7.11 (3H, m), 7.32 — 7.39 (lH, m), 7.52 — 7.57 (1H, m).

下記の合成実施例 4〜 6に示す化学式中の各保護基の略号は、下記を意味する _c Abbreviations of the protecting group in the chemical formula shown in Synthesis Example 4-6 below, _c meaning below

Z = oenzvloxycarbonvl = Boc = t-butoxvcarbonyl = Z = oenzvloxycarbonvl = Boc = t-butoxvcarbonyl =

Pmc = 2,2,5,7,8-pentamethylchroman Pmc = 2,2,5,7,8-pentamethylchroman

-6-sulfonyl = -6-sulfonyl =

(合成実施例 4) D—アルギニル一 N ⁶— D—アルギニル一 N¹— { 3— [2- (2- {3— [ (N— { (2R) —2— [ (1 S) 一 1ーヒドロキシー 2 一（ヒドロキシァミノ）一2—才キソェチル] 一 4ーメチルペンタノィル } 一 3 一メチル _L—バリル）ァミノ] プロポキシ } エトキシ）エトキシ] プロピル } —D—リジンアミド（化合物 4g) の合成 (Synthesis Example 4) D-arginyl-N ⁶ — D-arginyl-N ¹ — {3— [2- (2- {3— [(N— {(2R) —2 — [(1 S) 1 1 -Hydroxy-21- (hydroxyamino) 1-2-oxoethyl] -1-4-Methylpentanoyl} I-3 Synthesis of monomethyl_L-valyl) amino] propoxy} ethoxy) ethoxy] propyl} —D-lysinamide (compound 4g)

(1) N—べンジルォキシカルボ二ルー L一 t一口イシン— N— (13— N— t一ブトキシカルボニルアミノー 4, 7, 10—トリォキサ一卜リデカニル）ァミド（化合物 4 a) の合成 (1) N-benzyloxycarbonyl-L-t-t-isine-N- (13-N-t-butoxycarbonylamino-4,7,10-trioxatrilidecanyl) amide (Compound 4a) Synthesis

化合物 4 a Compound 4a

N— t一ブトキシカルポ二ルー 4， 7, 10—トリオキサ一 1， 13—トリデカンジァミン（0. 64 g、 2. Ommo 1 ) をジメチルホルムアミド（DM F) (5ml) に溶解し、室温攪拌下、 N—べンジルォキシカルボニル— L— t 一口イシン（0. 58 g、 2. 2mmo 1) の DMF溶液（5ml) およびジィソプロピルェチルァミン（0. 52ml、 3. Ommo 1) を加え、次いで氷冷攪拌下、〇— （7—ァザべンゾトリァゾ一リト1一ィル）一 1， 1， 3， 3—テトラメチルゥロニゥムへキサフルオロフォスフェート（HATU) (0. 84 g、 2. 2mmo 1) を加えた。得られた混合物を、氷冷下で 1時間攪拌後、室温で 17時間攪拌した。反応後、反応混合物からエバポレーターで溶媒を減圧留去した。得られた濃縮物に酢酸ェチルを加え、 10%クェン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレー夕一にて溶媒を留去した。得られた濃縮残留物を、メタノールージクロロメタンを溶出液としたシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィ一にて精製し、標題化合物 4 aを無色の液体として、 0. 94g (収率 83%) 得た。 N-t-butoxycarbone 4,7,10-trioxa-1,13-tridecandiamine (0.64 g, 2.Ommo 1) was dissolved in dimethylformamide (DMF) (5 ml) and stirred at room temperature. Add N-benzyloxycarbonyl-L-t bite isine (0.58 g, 2.2 mmo 1) in DMF (5 ml) and disopropylethylamine (0.52 ml, 3. Ommo 1). Then, under ice-cooling and stirring, 〇— (7-azabenzotriazolyl-1-yl) -11,1,1,3,3-tetramethylperonium hexafluorophosphate (HATU) (0. 84 g, 2.2 mmo 1) were added. The resulting mixture was stirred for 1 hour under ice cooling, and then for 17 hours at room temperature. After the reaction, the solvent was distilled off from the reaction mixture under reduced pressure using an evaporator. Ethyl acetate was added to the obtained concentrate, 10% aqueous citric acid solution, saturated The extract was washed sequentially with an aqueous sodium hydrogen solution and a saturated saline solution. After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was removed by filtration, and then the solvent was distilled off at an evaporator. The obtained concentrated residue was purified by silica gel gel chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to obtain 0.94 g (yield 83%) of the title compound 4a as a colorless liquid.

ー NMR (270 MHz, CDC 1₃) ： «50. 99 (9H, s) , 1. 43 (9H， s) , 2. 71-2. 84 (4Η， m) , 3. 18— 3. 65 (1 6H， m) ， 3. 83 (1Η， d) , 5. 02 (1Η， b r s) ， 5. 09 (2 Η， s) ， 5. 60 (1Η， d) 6. 48 ( 1 Η， b r s) , 7. 34 (5Η， s) 。 Chromatography _{NMR (270 MHz, CDC 1 3} ):. «50. 99 (9H, s), 1. 43 (9H, s), 2. 71-2 84 (4Η, m), 3. 18- 3. 65 (16H, m), 3.83 (1Η, d), 5.02 (1Η, brs), 5.09 (2Η, s), 5.60 (1Η, d) 6.48 (1Η, d) brs), 7.34 (5Η, s).

(2) Ν¹— [3— (2- {2- [3- ( {Ν— C (ベンジルォキシ）力ルポニル] 一 3—メチルー L—パリル} ァミノ）プロボキシ] エトキシ } エトキシ）プロピル] 一 N²， N⁶—ビス（t—ブトキシカルポニル） —D—リジンアミド (化合物 4b) _の合成 (2) Ν ¹ — [3 -— (2- {2- [3-({Ν—C (benzyloxy) caprolponyl] -1-3-methyl-L-paryl} amino) propoxy] ethoxy} ethoxy) propyl] -1-N Synthesis of ² , N ⁶ -bis (t-butoxycarbonyl) -D-lysine amide (compound 4b) _

化合物 4 b N—ベンジルォキシカルポ二ルー L— t—ロイシン—N— (13— N— t—ブトキシカルポニルアミノー 4, 7, 10—トリオキサートリデカニル）アミド (化合物 4 a) (0. 94g、 1. 66mmo 1 ) をジクロロメタン（8m 1 ) に溶解させ、氷冷下トリフルォロ酢酸 (TFA) (3ml) を滴下し、氷冷下 3 0分間攪拌した。反応後、エバポレーターで溶媒を減圧留去し、得られた濃縮物に酢酸ェチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレーターにて溶媒を留去した。得られた濃縮物を DM F (8ml) に溶解し、 N— α— N— ε—ビス一 t—ブトキシカルポ二ルー D—リジン（0. 63g、 1. 83mmo 1) の DMF溶液 (5ml) および 1ーヒドロキシベンゾトリアゾール 1水和物 (HOBT) (0. 28 g、 1. 83mmo 1) を室温攪拌下加え、氷冷攪拌下、 1一ェチル一3— (3ジメチルァミノプロピル）カルポジイミド塩酸塩（ED C) (0. 35 g、 1. 83 mmo 1) を加えた。氷冷下 30分間攪拌後、室温で 17時間攪拌した。反応後、反応混合物からエバポレーターで溶媒を減圧留去した。得られた濃縮物に酢酸ェチルを加えた後、 10%クェン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレー夕一にて溶媒を留去した。得られた濃縮残留物を、メタノールージクロロメタンを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物 4 bを無色アモルファス状固体として 0. 89g (収率 67%) 得た。 Compound 4 b N-benzyloxycarbonyl L-t-leucine-N— (13-N-t-butoxycarbonylamino-4,7,10-trioxatridecanyl) amide (Compound 4a) ( 0.94 g, 1.66 mmo 1) was dissolved in dichloromethane (8 m 1), trifluoroacetic acid (TFA) (3 ml) was added dropwise under ice cooling, and the mixture was stirred for 30 minutes under ice cooling. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure using an evaporator, and ethyl acetate was added to the obtained concentrate, which was washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was filtered off, and the solvent was distilled off using an evaporator. The obtained concentrate was dissolved in DMF (8 ml) and N-α-N- D-lysine (0.63 g, 1.83 mmo 1) in DMF (5 ml) and 1-hydroxybenzotriazole monohydrate (HOBT) (0.28 g, 1.83 mmo) 1) was added under stirring at room temperature, and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC) (0.35 g, 1.83 mmol 1) was added under ice-cooling stirring. After stirring for 30 minutes under ice cooling, the mixture was stirred at room temperature for 17 hours. After the reaction, the solvent was distilled off from the reaction mixture under reduced pressure using an evaporator. After ethyl acetate was added to the obtained concentrate, it was washed successively with a 10% aqueous solution of citric acid, a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate, and a saturated saline solution. After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was filtered off, and the solvent was distilled off at Evaporator Yuichi. The obtained concentrated residue was purified by silica gel column chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to give 0.89 g (yield 67%) of the title compound 4b as a colorless amorphous solid.

^-NMR (270 MHz, CDC 1₃) ： δ 0. 99 (9H， s) ， 1.^ -NMR (270 MHz, CDC 1 3): δ 0. 99 (9H, s), 1.

21-2. 84 (10 H, m) , 1. 43 (18 H， s) , 3. 07-3. 65 (18H, m) ， 3. 87 (1H， d) ， 4. 03 ( 1 H， b r s) ， 4. 6721-2.84 (10H, m), 1.43 (18H, s), 3.07-3.65 (18H, m), 3.87 (1H, d), 4.03 (1H , Brs), 4.67

(1H， b r s) , 5. 09 (2H, s) , 5. 35 ( 1 H， d) , 5. 69 (1H, b r s) , 6. 62 (1H， b r s) , 6. 71 ( 1 H, b r s) , 7.(1H, brs), 5.09 (2H, s), 5.35 (1H, d), 5.69 (1H, brs), 6.62 (1H, brs), 6.71 (1H, brs), 7.

34 (5H, s) 。 34 (5H, s).

(3) N²- (t—ブトキシカルポニル） -N⁵- (ィミノ { C (2， 2， 5， 7, 8—ペンタメチル一 3, 4—ジヒドロ _ 2 H—クロメンー 6—ィル) スルフォニル] ァミノ）メチル） — D—オルニチル— N⁶— [ N²— （t—ブトキシカルポニル）一N⁵— (ィミノ { [ (2, 2, 5, 7, 8—ペンタメチルー 3， 4 ージヒドロ一 2H—クロメン一6—ィル）スルフォニル] アミノ} メチル）一 D 一オル二チル] 一 N¹— [3— （2— {2- [3- ( {N— [ (ベンジルォキシ）カルボニル] 一 3—メチル— L—バリル} ァミノ）プロボキシ] エトキシ } エトキシ）プロピル] —D—リジンアミド（化合物 4c) の合成

(3) N ^2- (t-butoxycarbonyl) -N ^5- (imino {C (2,2,5,7,8-pentamethyl-1,3,4-dihydro_2H-chromene-6-yl) sulfonyl ] Amino) Methyl) — D—Ornithyl— N ⁶ — [N ² — (t-Butoxycarponyl) -N ⁵ — (Imino {[(2,2,5,7,8-Pentamethyl-3,4-dihydro-1 2H— Chromene-1-6-yl) sulfonyl] amino} methyl) 1 D-or-dityl] 1 N ¹ — [3— (2— {2- [3- ({N— [(benzyloxy) carbonyl] 1—3— Synthesis of methyl-L-valyl} amino) propoxy] ethoxy} ethoxy) propyl] —D-lysinamide (compound 4c)

化合物 4 c Compound 4c

N¹— [3— （2— {2- [3— ( {N— [ (ベンジルォキシ）力ルポニル] 一 3—メチル— L一バリル} ァミノ）プロボキシ] エトキシ } エトキシ）プロピル] 一 N²， N⁶—ビス（t—ブトキシカルボニル）一 D—リジンアミド（化合物 4b) (1. 34 g, 1. 68mmo 1) のジクロロメタン（7. 5ml) 溶液に、氷冷下、 TFA (3ml) を加え 30分間攪拌後、さらに室温にて 1時間攪拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、得られた液状物質を n—へキサンで洗浄後、さらに減圧濃縮した。濃縮物を氷冷下 DMF (20ml) に溶解し、氷冷下ジイソプロピルェチルァミン（1. 76ml， 10. lmmo l) および N²— (t—ブトキシカルポニル） — N⁵— (ィミノ { [2， 2， 5, 7， 8—ペン夕メチル一3, 4—ジヒドロー 2H—クロメンー 6—ィル）スルホニル] アミノ} メチル）一 D—オル二チン（2. 72 g, 5. 03mmo 1) を加えた後、さらに HATU (1. 91 g， 5. 02mmo 1) を加え、氷冷下 30分間攪拌後、さらに室温にて 18時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮後、得られた残渣を酢酸ェチルに溶解した。有機層を 10%クェン酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：へキサン =10 ： 1) にて精製し、標題化合物 4 c (1. 88g, 68%) を得た。N ¹ — [3— (2— {2- [3-— ({N — [(benzyloxy)] proponyl] -13-methyl—L-valyl} amino) propoxy] ethoxy} ethoxy) propyl) —N ² , To a solution of N ⁶ -bis (t-butoxycarbonyl) -D-lysine amide (Compound 4b) (1.34 g, 1.68 mmol 1) in dichloromethane (7.5 ml) was added TFA (3 ml) under ice-cooling. After stirring for 30 minutes, the mixture was further stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the obtained liquid substance was washed with n-hexane and further concentrated under reduced pressure. The concentrate was dissolved in DMF (20 ml) under ice cooling, and diisopropylethylamine (1.76 ml, 10. lmmol) and N ² — (t-butoxycarponyl) — N ⁵ — (imino {[ 2,2,5,7,8-pentyl methyl-1,3-dihydro-2H-chromen-6-yl) sulfonyl] amino} methyl) -D-ornitine (2.72 g, 5.03 mmo 1) Was added, HATU (1.91 g, 5.02 mmo 1) was further added, and the mixture was stirred under ice-cooling for 30 minutes, and further stirred at room temperature for 18 hours. After the reaction mixture was concentrated under reduced pressure, the obtained residue was dissolved in ethyl acetate. The organic layer was washed successively with 10% citric acid, a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate and saturated saline, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (dichloromethane: hexane = 10: 1) to give the title compound 4c (1.88 g, 68%).

— NMR (270MHz、 CD₃OD) ： <5 1. 01 (9H， s) , 1. 33 (12H， s) , 1. 46 ( 18 Η, s) ， 1. 40— 1. 90 (22Η, m) ， 2. 13 (6H， s) , 2. 59 (6H, s) ， 2. 60 (6H, s) , 2. 62-2. 72 (4H, m) , 3. 10-3. 30 ( 10 H, m) , 3. 4 5— 3. 65 (12H， m) ， 3. 95 ( 1 H, s) , 3. 95— 4. 14 (2 H， m) , 4. 25-4. 35 ( 1 H, m) , 5. 1 1 (2H， s) , 7. 43 一 7. 42 ( 5 H， m) 。 — NMR (270MHz, CD ₃ OD): <5 1.01 (9H, s), 1.33 (12H, s), 1.46 (18Η, s), 1.40— 1.90 (22Η, m), 2.13 (6H, s), 2.59 (6H, s), 2.60 (6H, s), 2. 62-2.72 (4H, m), 3.10-3.30 (10H, m), 3.45-5.65 (12H, m), 3.95 (1H, s) , 3.95—4.14 (2 H, m), 4.25-4.35 (1 H, m), 5.11 (2H, s), 7.43-7.42 (5 H, m) m).

(4) N²- (t一ブトキシカルポ二ル） — N⁵— （ィミノ { [ (2, 2, 5， 7, 8—ペンタメチルー 3， 4—ジヒドロ一 2H—クロメン一 6—ィル）スルフォニル] アミノ} メチル） —D—オルニチルー N⁶— C N²- (t—ブトキシカルポニル）一 N⁵— (ィミノ { [ (2, 2, 5， 7， 8—ペンタメチルー 3， 4 —ジヒドロー 2H—クロメン _6—ィル）スルフォニル] アミノ} メチル） — D 一オル二チル] — N¹— {3- [2 - (2— {3- C (3—メチル—L—バリル）ァミノ] プロポキシ } エトキシ）エトキシ] プロピル } —D—リジンアミド (化合物 4d) の合成 (4) N ^2- (t-butoxycarpenyl) — N ⁵ — (imino {[(2,2,5,7,8-pentamethyl-3,4-dihydro-12H-chromen-1-yl) sulfonyl ] Amino} methyl) —D—Ornithyl-N ⁶ — CN ^2- (t-Butoxykarponyl) -N ⁵ — (Imino {[(2,2,5,7,8-Pentamethyl-3,4—Dihydro-2H—Chromene _6 —Yl) Sulfonyl] amino} methyl) — D-Ordityl] — N ¹ — {3- [2- (2- {3-C (3-methyl-L-valyl) amino] propoxy} ethoxy) Ethoxy] propyl} —D-Lysinamide (Compound 4d)

化合物 4d 化合物 4 c (1. 86 g, 1. 13mmo 1) と 10%Pd— C (6 Omg) とのメタノール（22ml) 溶液を、水素気流下、室温にて 19時間攪拌した。反応混合物を濾過した後、濾液を減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲル力ラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：へキサン = 10 : 1-5 : 1) にて精製し、標題化合物 4 d (1. 28 g, 75%) を得た。 Compound 4d A solution of compound 4c (1.86 g, 1.13 mmol 1) and 10% Pd—C (6 Omg) in methanol (22 ml) was stirred at room temperature for 19 hours under a stream of hydrogen. After filtering the reaction mixture, the filtrate was concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (dichloromethane: hexane = 10: 1-5: 1) to give the title compound 4d (1.28 g, 75%).

一 NMR (270MHz、 CD₃OD) ： δ 1. 00 (9H， s) , 1. 34 (12 H, s) , 1. 46 (18 H, s) , . 40- 1. 90 (22H， m) , 2. 13 (6H, s) ， 2. 59 (6H, s) ， 2. 60 (6H, s) , 2. 65-2. 76 (4H， m) , 3. 03 ( 1 H, s) ， 3. 10-3. 40NMR (270 MHz, CD ₃ OD): δ 1.00 (9H, s), 1.34 (12 H, s), 1.46 (18 H, s), .40- 1.90 (22H, s) m), 2.13 (6H, s), 2.59 (6H, s), 2.60 (6H, s), 2.65-2.76 (4H, m), 3.03 (1H, s), 3.10-3.40

(10H， m) ， 3. 45-3. 70 ( 12 H, m) , 3. 97-4. 10 (2 H， m) ， 4. 25-4. 35 (1H， m) 。 (10H, m), 3.45-3.70 (12H, m), 3.97-4.10 (2H, m), 4.25-4.35 (1H, m).

(5) N²— （t—ブトキシカルボニル）一 N⁵— （ィミノ { [ (2, 2， 5, 7, 8—ペンタメチルー 3， 4—ジヒドロ一 2H—クロメン一 6—ィル）スルフォニル] アミノ} メチル） —D—オルニチルー N⁶— C N²— （t一ブトキシカルポニル）一 N⁵— (ィミノ { C (2， 2, 5， 7, 8—ペンタメチルー 3， 4 —ジヒドロー 2H—クロメンー 6—ィル）スルフォニル] アミノ} メチル）一 D —オル二チル] 一 N¹— {3- C2 - (2 - {3- [ (N— { (2R) — 2—(5) N ² — (t-butoxycarbonyl) 1 N ⁵ — (imino {[(2,2,5,7,8-pentamethyl-3,4-dihydro-1 2H-chromen-1 6-yl) sulfonyl] Amino} methyl) —D—Ornithyl-N ⁶ — CN ² — (t-Butoxycarponyl) -N ⁵ — (Imino {C (2,2,5,7,8-pentamethyl-3,4—dihydro-2H—chromene-6— Yl) sulfonyl] amino} methyl) 1 D—Ordityl] 1 N ¹ — {3- C2-(2-{3- [(N— {(2R) — 2—

[ (4 S) -2, 2—ジメチルー 5—ォキソ一 1， 3—ジォキゾランー4ーィル] 一 4—メチルペン夕ノィル } —3—メチルー Lーバリル）ァミノ] プロポキシ} エトキシ）エトキシ] _プロピル }_~D—リジンアミド（化合物 4e) の合成 [(4S) -2,2-Dimethyl-5-oxo-1,3-dioxolan-4-yl] -14-Methylpenyl} —3-Methyl-L-valyl) amino] Propoxy} Ethoxy) ethoxy] _propyl } _ ~ D—Synthesis of lysine amide (compound 4e)

化合物 4 e Compound 4e

27

化合物 4d (1. 28 g， 0. 849mmo 1) 、公知の方法（ジャーナルォブメデイシナルケミストリー 1998， Vo l. 41, No. 2, 199-2 23) に基づいて合成した（2R) — 2— [ (4S) — 2， 2—ジメトキシー 5 一ォキソ一 1， 3—ジォキソラン— 4一ィル] —4ーメチルペンタン酸（化合物 27) (254mg, 1. 1 Ommo 1 ) およびジイソプロピルェチルァミン (0. 22ml, 1. 26mmo 1) の DMF (1 Om 1 ) 溶液に、氷冷下 HA TU (452mg, 1. 19mmo 1) を加え、氷冷下 30分間攪拌後、さらに室温にて 1. 5時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮後、酢酸ェチルに溶解した。有機層を 1規定塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：へキサン = 10 ： 1) にて精製し、標題化合物 4 e (1. 41 g, 97%) を得た。 Compound 4d (1.28 g, 0.849 mmo 1), a known method (Journal of Medicinal Chemistry 1998, Vol. 41, No. 2, 199-2) (2R) — 2— [(4S) — 2, 2-dimethoxy-5-oxo-1,1,3-dioxolane-4-yl] —4-methylpentanoic acid (Compound 27) (254 mg, 1) HA TU (452 mg, 1.19 mmo 1) was added to a solution of 1 Ommo 1) and diisopropylethylamine (0.22 ml, 1.26 mmo 1) in DMF (1 Om 1) under ice-cooling. After stirring for 30 minutes, the mixture was further stirred at room temperature for 1.5 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and then dissolved in ethyl acetate. The organic layer was washed sequentially with 1N hydrochloric acid, a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate, and saturated saline, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The obtained residue was purified by silica gel column chromatography (dichloromethane: hexane = 10: 1) to obtain the title compound 4e (1.41 g, 97%).

^-NMR (270MHz、 CD₃〇D) ： δ 0. 92 (3Η, d, J =^ -NMR (270 MHz, CD ₃ 〇D): δ 0.92 (3Η, d, J =

6. 7Hz) ， 0. 95 (3H, d， J = 6. 7Hz) , 1. 03 (9H， s) , 1. 34 (12H, s) , 1. 40— 1. 90 (25H， m) ， 1. 46 (9H， s) ， 1. 46 (9H， s) ， 1. 55 ( 3 H, s) ， 1. 64 (3H， s) ， 2. 13 (6H, s) , 2. 59 (6H, s) ， 2. 60 (6H， s) , 2. 6 5-2. 75 (4H， m) ， 2. 90 -3. 02 (1H, m) , 3. 12-3. 40 (1 OH, m) , 3. 47— 3. 70 (12H, m) , 3. 98— 4. 10 (2H， m) ， 4. 21-4. 35 (1H， m) ， 4. 31 ( 1 H, s) , 4. 52 (1H， d， J = 7. 9Hz) 。 6.7Hz), 0.95 (3H, d, J = 6.7Hz), 1.03 (9H, s), 1.34 (12H, s), 1.40—1.90 (25H, m) , 1.46 (9H, s), 1.46 (9H, s), 1.55 (3H, s), 1.64 (3H, s), 2.13 (6H, s), 2.59 (6H, s), 2.60 (6H, s), 2.6 5-2.75 (4H, m), 2.90 -3.02 (1H, m), 3.12-3.40 ( 1 OH, m), 3.47-3.70 (12H, m), 3.98-4.10 (2H, m), 4.21-4.35 (1H, m), 4.31 (1 H, s), 4.52 (1H, d, J = 7.9 Hz).

(6) N²— （t—ブトキシカルポニル）一 N⁵_ (ィミノ { C (2, 2, 5，(6) N ² — (t-butoxycarponyl) i N ⁵ _ (imino {C (2, 2, 5,

7, 8—ペンタメチルー 3， 4ージヒドロー 2H—クロメンー6—ィル）スルフォニル] アミノ} メチル） —D—オルニチルー N⁶— C N²— （t一ブトキシカルポニル）一 N⁵— (ィミノ { C (2, 2, 5, 7, 8—ペンタメチル一 3， 4 ージヒドロー 2H—クロメン— 6—ィル）スルフォニル] アミノ} メチル）一 D 一オル二チル] —N¹— { 3 - [2— （2— { 3 - C (N- { (2 R) 一 2— [ (1 S) 一 1ーヒドロキシー 2— （ヒドロキシァミノ）一 2—才キソェチル] 一 4—メチルペンタノィル } —3—メチルー Lーバリル）ァミノ] プロポキシ } エトキシ）エトキシ] プロピル }_一 D—リジンアミド（化合物 4 f) の合成

7,8-Pentamethyl-3,4-dihydro-2H-chromen-6-yl) sulfonyl] amino} methyl) -D-ornityl-N ⁶ -CN ^2- (t-butoxycalponyl) -N ^5- (imino {C (2 , 2,5,7,8-Pentamethyl-1,3,4-dihydro-2H-chromene-6-yl) sulfonyl] amino} methyl) -D-ortho-dityl] —N ¹ — {3-[2— (2— {3-C (N-{(2R) 1-2-[(1S) 1-1-hydroxy-2- (hydroxyamino) -12-2-kisethyl] -14-methylpentanoyl} —3-methyl-L-valyl ) Amino] propoxy} ethoxy) ethoxy] propyl} _- D-Lysinamide (Compound 4f)

化合物 4 f 化合物 4e (832mg, 0. 484mmo 1) と 1 Mヒドロキシルァミンのメタノール溶液（2. 0ml, 2. Ommo 1) との混合物を窒素気流下、室温にて 6時間攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロ口ホルム：へキサン = 10 ： 1) にて精製し、標題化合物 4 f (706mg, 86%) を得た。 Compound 4f A mixture of compound 4e (832 mg, 0.484 mmo 1) and a 1 M hydroxylamine solution in methanol (2.0 ml, 2.0 mmo 1) was stirred at room temperature for 6 hours under a nitrogen stream. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the obtained residue was purified by silica gel column chromatography (form: hexane = 10: 1) to give the title compound 4f (706 mg, 86%).

— NMR (270MHz、 CD₃OD) ： δ 0. 92 ( 3 H, d, J = 6. 4Hz) ， 0. 96 (3H， d， J = 6. 4Hz) ， 1. 03 (9H， s) ， 1. 34 (12 H, s) ， 1. 46 (18 H, s) ， 1. 40-1. 90 (25 H， m) ， 2. 13 (6H, s) , 2. 59 (6H, s) , 2. 60 (6H， s) ， 2. 62-2. 75 (4H， m) ， 2. 81-2. 95 (lH， m) ， 3. 10— 3. 40 (1 OH, m) , 3. 45-3. 70 (12H， m) , 3. 98 -4. 10 (2H， m) ， 4. 08 (1H， d, J = 5. 9Hz) , 4. 26 (1H, s) ， 4. 22— 4. 35 (lH， m) 。 — NMR (270MHz, CD ₃ OD): δ 0.92 (3H, d, J = 6.4Hz), 0.96 (3H, d, J = 6.4Hz), 1.03 (9H, s) , 1.34 (12 H, s), 1.46 (18 H, s), 1.40-1.90 (25 H, m), 2.13 (6H, s), 2.59 (6H, s) s), 2.60 (6H, s), 2.62-2.75 (4H, m), 2.81-2.95 (lH, m), 3.10-3.40 (1 OH, m ), 3.45-3.70 (12H, m), 3.98-4.10 (2H, m), 4.08 (1H, d, J = 5.9Hz), 4.26 (1H, s) ), 4.22-4.35 (lH, m).

(7) D—アルギニル _N⁶— D—アルギニル— N¹— { 3 - [2 - (2— {3- [ (N- { (2R) -2- [ (I S) —1ーヒドロキシー 2— （ヒドロキシァミノ）一 2—才キソェチル] 一 4—メチルペンタノィル } —3—メチルー L —バリル）ァミノ] プロポキシ } エトキシ）エトキシ] プロピル } 一 D—リジンアミド（化合物 4g) の合成

(7) D-arginyl _N ⁶ — D-arginyl— N ¹ — {3-[2-(2— {3- [(N- {(2R) -2-[(IS) —1-hydroxy-2 -— (hydroxy Synthesis of (Cyamino) 12-year-old oxoethyl] 1-4-Methylpentanoyl} —3-Methyl-L-valyl) Amino] Propoxy} Ethoxy) Ethoxy] Propyl} 1-D-Lysine Amide (Compound 4g)

化合物 4g 化合物 4 f (207mg， 0. 122mmo 1 ) のジクロロメタン（3m 1 ) 溶液に、氷冷下 T FA (3ml) を加え、 5分間攪拌後、さらに室温にて 40分間攪拌した。反応混合物に 1， 2—ジクロロェ夕ン（15ml) を加え、減圧下濃縮した（さらに同じ操作を 4回行った）。得られた残渣を逆相カラムクロマトグラフィー（0. 1%TFA含有 H₂0—ァセトニトリル）にて精製後、凍結乾燥し標題化合物 4 g (40mg, 23%) を得た。 Compound 4g To a solution of compound 4f (207 mg, 0.122 mmol) in dichloromethane (3 ml) was added TFA (3 ml) under ice-cooling, and the mixture was stirred for 5 minutes, and further stirred at room temperature for 40 minutes. To the reaction mixture was added 1,2-dichloroethane (15 ml), and the mixture was concentrated under reduced pressure (the same operation was further performed four times). After the obtained residue was purified by reverse phase column chromatography (0. 1% TFA-containing H ₂ 0- Asetonitoriru), to obtain a lyophilized to give the title compound 4 g (40mg, 23%) .

一 NMR (270MHz、 CD₃〇D) ： δ 0'. 93 (3H， d, J = 6. 5Hz) , 0. 96 (3H， d, J = 6. 5Hz) ， 1. 04 (9H， s) ，NMR (270 MHz, CD ₃ 〇D): δ 0'.93 (3H, d, J = 6.5 Hz), 0.96 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.04 (9H, s ),

1. 22-2. 02 (21H, m) , 2. 82- 2. 95 (lH， m) ， 3. 2 0— 3. 40 (1 OH, m) , 3. 50 - 3. 73 (12H， m) ， 3. 901.22-2.02 (21H, m), 2.82-2.95 (lH, m), 3.20—3.40 (1 OH, m), 3.50-3.73 (12H , M), 3.90

(1H， t， J = 6. 5Hz) , 4. 04 (1H， t, J = 5. 5Hz) ， 4. 11 (1H， d， J = 5. 8Hz) , 4. 24 ( 1 H, d， J = 9. 1Hz) ,(1H, t, J = 6.5Hz), 4.04 (1H, t, J = 5.5Hz), 4.11 (1H, d, J = 5.8Hz), 4.24 (1H, d , J = 9.1 Hz),

4. 35 (1H, t, J = 6. 4Hz) ， 7. 87 ( 1 H, d, J = 9. 1H z) ， 8. 09 (1H， b r t) , 8. 24 (1H, b r t) 4.35 (1H, t, J = 6.4Hz), 7.87 (1H, d, J = 9.1Hz), 8.09 (1H, brt), 8.24 (1H, brt)

LC-MS 961. 7 (M+ 1) 。 (合成実施例 5) 化合物 5 fの合成 LC-MS 961.7 (M + 1). (Synthesis Example 5) Synthesis of compound 5f

(1) 化合物 5 aの合成 (1) Synthesis of compound 5a

化合物 5 a 合成実施例 4 (2) に従って合成された化合物 4b (2. 00 g 2. 51m mo 1) をジクロロメタン（12ml) に溶解させ、氷冷下 TFA (5ml) を滴下し、氷冷下 1時間攪拌した。反応後、エバポレー夕一で溶媒を減圧留去し、得られた濃縮物に氷冷下 n—へキサンを加え、上清を取り除いた。この作業をさらに 5回繰り返した後、残留物をエバポレー夕一で減圧濃縮した。得られた濃縮物を氷冷下 DMF (6ml) に溶解し、氷冷攪拌下、ジイソプロピルェチルアミン（4m 1、 22. 6mmo 1 ) 、 N— α— N— ε—ビス一ブトキシカルポニル — D—リジン（2. 61 g、 7. 53mmo 1) の DMF溶液（6ml) および HATU (2. 86 g、 7. 53mmo 1) を順次加えた。氷冷下 30分間攪拌後、室温で 16時間攪拌した。反応後、エバポレーターで溶媒を減圧留去した。得られた濃縮物に酢酸ェチルを加え、 10%クェン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシゥムで乾燥し、無水硫酸マグシウムを濾去後、ェパポレーターにて溶媒を留去した。得られた濃縮残留物を、メタノールージクロロメタンを溶出液としたシリ力ゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物 5 aを無色ァモルファス状固体として 2. 85 g (収率 91%) 得た。 Compound 5a Compound 4b (2.00 g 2.51 mMol) synthesized according to Synthesis Example 4 (2) was dissolved in dichloromethane (12 ml), and TFA (5 ml) was added dropwise under ice-cooling, followed by ice-cooling. Stir for 1 hour. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure in an evaporator, and n-hexane was added to the obtained concentrate under ice-cooling, and the supernatant was removed. After repeating this operation five more times, the residue was concentrated under reduced pressure at an evaporator. The resulting concentrate is dissolved in DMF (6 ml) under ice-cooling, and the mixture is stirred under ice-cooling for diisopropylethylamine. (4 ml, 22.6 mmol), N-α-N-ε-bis-butoxycarbonyl-D-lysine (2.61 g, 7.53 mmol) in DMF (6 ml) and HATU (2.86) g, 7.53 mmo 1) were added sequentially. After stirring for 30 minutes under ice cooling, the mixture was stirred at room temperature for 16 hours. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure using an evaporator. Ethyl acetate was added to the obtained concentrate, and the mixture was washed successively with a 10% aqueous solution of citric acid, a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate, and a saturated saline solution. After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was removed by filtration, and the solvent was distilled off using an evaporator. The obtained concentrated residue was purified by silica gel column chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to give 2.85 g (yield 91%) of the title compound 5a as a colorless amorphous solid. .

^-NMR (270MHz、 CD₃OD ) ： δ 0. 98 (9H， s) ， 1. 28- 1. 82 (22 Η, m) , 1. 43 (18 Η， s) , 1. 44 (18 Η, s) ， 2. 98-4. 32 (26Η, m) , 5. 08 (2H， s) ， 7. 34 (5H， s) 。 ^ -NMR (270 MHz, CD ₃ OD): δ 0.98 (9H, s), 1.28-1.82 (22 Η, m), 1.43 (18 Η, s), 1.44 (18 98, s), 2.98-4. 32 (26Η, m), 5.08 (2H, s), 7.34 (5H, s).

(2) 化合物 5 bの合成 (2) Synthesis of compound 5b

化合物 5 b 化合物 5 a (200mg、 0. 16mmo 1 ) をジクロロメタン（0. 8 m 1) に溶解させ、氷冷下 TFA (0. 3ml) を滴下し、氷冷下 30分間、その後室温で 1時間攪拌した。反応後、エバポレー夕一で溶媒を減圧留去し、得られた濃縮物に氷冷下で n—へキサンを加え、上清を取り除いた。この作業をさらに 5回繰り返した後、残留物をエバポレーターで減圧濃縮した。得られた濃縮物を氷冷下 DMF (1. 6ml) に溶解し、氷冷攪拌下、ジイソプロピルェチルアミン（0. 5ml 、 2. 88mmo 1 ) 、 N— a— t—ブトキシカルボ二ルー N — ω (2， 2， 5, 7, 8—ペン夕メチルクロマン— 6—スルフォニル）一 D— アルギニン（519mg、 0. 96mmo 1) 、 DMF (1. 6ml) 、 HAT U (365mg, 0. 96mmo 1) を順次加えた。得られた混合物を、氷冷下 30分間攪拌後、室温で 17時間攪拌した。反応後、エバポレー夕一で溶媒を減圧留去した。得られた濃縮物に酢酸ェチルを加え、 10%クェン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレーターにて溶媒を留去した。得られた濃縮残留物を、メタノール—ジクロロメタンを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物 5 bを無色アモルファス状固体として 386mg (収率 82%) 得た。 Compound 5b Compound 5a (200 mg, 0.16 mmo 1) was dissolved in dichloromethane (0.8 ml), TFA (0.3 ml) was added dropwise under ice cooling, and the mixture was stirred for 30 minutes under ice cooling and then at room temperature for 1 hour. did. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure overnight, and n-hexane was added to the obtained concentrate under ice cooling, and the supernatant was removed. After this operation was repeated five more times, the residue was concentrated under reduced pressure using an evaporator. The resulting concentrate is dissolved in DMF (1.6 ml) under ice cooling, and stirred under ice cooling with diisopropylethylamine (0.5 ml, 2.88 mmol), N-at-butoxycarboneol. N — ω (2,2,5,7,8-pentanomethylchroman-6-sulfonyl) -D-arginine (519mg, 0.96mmo1), DMF (1.6ml), HAT U (365mg, 0. 96mmo 1) was added sequentially. The resulting mixture was stirred under ice-cooling for 30 minutes and then at room temperature for 17 hours. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure overnight. Ethyl acetate was added to the obtained concentrate, and the mixture was washed sequentially with a 10% aqueous solution of citric acid, a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate, and a saturated saline solution. After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was filtered off, and the solvent was distilled off using an evaporator. The resulting concentrated residue was purified by silica gel column chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to obtain 386 mg (yield: 82%) of the title compound 5b as a colorless amorphous solid.

^XH-NMR (270MHz、 CD₃〇D ) ： 60. 97 (9H， s) ， 1. 25— 1. 85 ( 38 H, m) , 1. 29 (24H, s) , 1. 41 (36H, s) ， 1. 80 (8H， t) , 2. 08 (12H, s) , 2. 54 (12H, s) ， 2. 55 (12H， s) ， 2, 65 (8H， t) ， 3. 10-4. 38 (38H， m) ， 5. 08 (2H， s) , 7, 32 (5H， s) 。 ^X H-NMR (270 MHz, CD ₃ 〇D): 60.97 (9H, s), 1.25—1.85 (38 H, m), 1.29 (24H, s), 1.41 (36H , s), 1.80 (8H, t), 2.08 (12H, s), 2.54 (12H, s), 2.55 (12H, s), 2, 65 (8H, t), 3 10-4. 38 (38H, m), 5.08 (2H, s), 7, 32 (5H, s).

( 3 ) 化合物 5 cの合成

(3) Synthesis of compound 5c

化合物 5 c 化合物 5 b (28 Omg, 95 o 1) をメタノール（3ml) に溶解させ、水素雰囲気下、 10%PdZC (5 Omg) にて 15時間接触還元した。得られた反応物から 10%Pd/Cを濾去後、濾液をエバポレーターにて減圧濃縮した。得られた濃縮残留物を、メタノ一ルージクロロメタンを溶出液としたシリ力ゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物 5 cを無色固体として 261 mg (収率 98%) 得た。 Compound 5c Compound 5b (28 Omg, 95o1) was dissolved in methanol (3 ml) and catalytically reduced with 10% PdZC (5 Omg) under a hydrogen atmosphere for 15 hours. After filtering out 10% Pd / C from the obtained reaction product, the filtrate was concentrated under reduced pressure using an evaporator. The obtained concentrated residue was purified by silica gel column chromatography using methanol as an eluent to give 261 mg (yield 98%) of the title compound 5c as a colorless solid.

^-NMR (27 ΟΜΗζ CD₃OD) ： δ 0. 96 (9H， s) , 1. 25- 1. 85 (38 Η， m) 1. 29 (24H, s) ， 1 41 (36H, s) , 1. 8 1 (8Η, t) ， 2. 08 (12H, s ) ， 2 54 (12H, s) , 2. 55 (12Η, s) ， 2， 64 (8H, t) ， 3 10-4. 38 ( 38 Η， m) 。 ^ -NMR (27 ΟΜΗζ CD ₃ OD): δ 0.96 (9H, s), 1.25-1.85 (38 Η, m) 1.29 (24H, s), 141 (36H, s) , 1.81 (8Η, t), 2.08 (12H, s), 254 (12H, s), 2.55 (12Η, s), 2, 64 (8H, t), 3 10-4 38 (38 mm, m).

(4) 化合物 5 dの合成

(4) Synthesis of compound 5d

化合物 5 d 化合物 5 c (244mg、 87 o 1 ) を DMF (lml) に溶解し、室温下、化合物 27 (60mg、 261 zmo 1) の DMF溶液（lml) を加えた。その後氷冷攪拌下、ジイソプロピルェチルァミン（68 1 、 39 1 mo 1) 、 HATU (99mg、 261 mo 1 ) を順次加えた。氷冷下 30分間攪拌後、室温で 1 5時間攪拌した。再度氷冷下、ジイソプロピルェチルァミン (68 jt 1 、 391 nmo 1) 、 HATU (99mg、 261 τηο 1 ) を順次加えた。氷冷下 30分間攪拌後、室温で 22時間攪拌した。反応後、エバポレ一ターで溶媒を減圧留去した。得られた濃縮物に酢酸ェチルを加え、 10%クェン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレーターにて溶媒を留去した。得られた濃縮残留物を、メタノール—ジクロロメタンを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物 5 dを褐色固体として 143 m g (収率 54%) 得た。 Compound 5d Compound 5c (244 mg, 87 o 1) was dissolved in DMF (lml), and a DMF solution (lml) of compound 27 (60 mg, 261 zmo 1) was added at room temperature. Thereafter, under ice-cooling and stirring, diisopropylethylamine (681, 391 mol) and HATU (99 mg, 261 mol) were sequentially added. After stirring for 30 minutes under ice cooling, the mixture was stirred at room temperature for 15 hours. Again under ice-cooling, diisopropylethylamine (68 jt 1, 391 nmo 1) and HATU (99 mg, 261 τηο 1) were sequentially added. After stirring for 30 minutes under ice cooling, the mixture was stirred at room temperature for 22 hours. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure using an evaporator. Ethyl acetate was added to the obtained concentrate, and the mixture was washed sequentially with a 10% aqueous citric acid solution, a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and a saturated saline solution. After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was filtered off, and the solvent was distilled off using an evaporator. The obtained concentrated residue was purified by silica gel column chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to obtain 143 mg (yield 54%) of the title compound 5d as a brown solid.

^-NMR (270MHz、 CD₃OD) ： δ 0. 89 (6Η, d d) , 0. 98 (9H， s) , 1. 25- 1. 85 (47H, m) ， 1. 29 (24H, s) ， 1. 41 (36H, s) ， 1. 81 (8H, t) , 2. 08 (12H, s) , 2. 54 (12H， s) ， 2. 55 (12H, s) ， 2, 64 (8H， t) ， 3. 10-4. 38 (39H, m) ， 4. 48 (1H， d) 。 ^ -NMR (270 MHz, CD ₃ OD): δ 0.89 (6Η, dd), 0.98 (9H, s), 1.25-1.85 (47H, m), 1.29 (24H, s) ), 1.41 (36H, s), 1.81 (8H, t), 2.08 (12H, s), 2.54 (12H, s), 2.55 (12H, s), 2, 64 (8H, t), 3.10-4. 38 (39H, m), 4.48 (1H, d).

(5) 化合物 5 eの合成 (5) Synthesis of compound 5e

化合物 5 e 化合物 5 d (129mg、 43 ^mo 1) に、ヒドロキシルァミン塩酸塩と 1 Mナトリウムメトキシドから調製した 1Mヒドロキシルァミン一メタノール溶液 (1. 3ml、 1. 3mmo 1) を氷冷下加え、室温で 2時間攪拌した。反応後、エバポレーターにて溶媒を減圧留去した。得られた濃縮残留物を、メタノール一ジクロロメタンを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物 5 eを無色固体として 98mg (収率 77%) 得た。 Compound 5 e Compound 5 d (129 mg, 43 ^ mo 1) was ice-cooled with a 1 M hydroxylamine solution in methanol (1.3 ml, 1.3 mmo 1) prepared from hydroxylamine hydrochloride and 1 M sodium methoxide. The mixture was added under reduced pressure and stirred at room temperature for 2 hours. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure using an evaporator. The obtained concentrated residue was purified by silica gel column chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to obtain 98 mg (yield 77%) of the title compound 5e as a colorless solid.

, ¹H— NMR (270MHz、 CD₃〇D) ： δ 0. 90 (6H， dd) , 0. 99 (9Η， s) , 1. 25- 1. 85 (41 Η, m) ， 1. 29 (24Η， s) , 1. 41 (36Η， s) ， 1. 81 (8Η, t) , 2. 08 (12Η， s) ， 2. 54 (12 Η， s) ， 2. 55 ( 12Η, s) , 2， 64 ( 8 Η, t) ， 3. 10-4. 38 (39Η， m) ， 4. 06 ( 1 Η, d) 。 , ¹ H—NMR (270 MHz, CD ₃ 〇D): δ 0.90 (6H, dd), 0.99 (9 Η, s), 1.25-1.85 (41 Η, m), 1.29 (24Η, s), 1.41 (36Η, s), 1.81 (8Η, t), 2.08 (12Η, s), 2.54 (12Η, s), 2.55 (12Η, s) ), 2, 64 (8 8, t), 3.10-4. 38 (39Η, m), 4.06 (1Η, d).

(6) 化合物 5 fの合成 (6) Synthesis of compound 5f

化合物 5 化合物 5 e (93. 2mg， 0. 0311 mmo 1 ) のジクロロメタン（2m 1) 溶液に、氷冷下 T FA (2ml) を加え、 5分間攪拌後、さらに室温にて 2 時間攪拌した。反応混合物に 1， 2—ジクロロェタン（10ml) を加え、減圧下濃縮した（さらに同じ操作を 4回行った）。得られた残渣を逆相カラムクロマトグラフィー（0. 1 %TFA含有 H₂0—ァセトニトリル）にて精製後、凍結乾燥し標題化合物 5 f (35. 6mg， 47%) を得た。 Compound 5 To a solution of compound 5e (93.2 mg, 0.03111 mmo 1) in dichloromethane (2 ml) was added TFA (2 ml) under ice-cooling, and the mixture was stirred for 5 minutes, and further stirred at room temperature for 2 hours. 1,2-Dichloroethane (10 ml) was added to the reaction mixture, and the mixture was concentrated under reduced pressure (the same operation was further performed four times). After the obtained residue was purified by reverse phase Karamukuroma preparative chromatography (0. 1% TFA-containing H ₂ 0- Asetonitoriru), to obtain a lyophilized title compound 5 f (35. 6mg, 47% ).

XH-NMR (270MHz、 CD₃OD) ： δ 0. 94 (3Η, d, J - 7. 0Hz) ， 0. 96 (3H， d， J = 7. 0Hz) ， 1. 04 (9H， s) ， 1. 22-2. 04 (41H, m) , 2. 83— 2. 95 (lH， m) ， 3. 1 5— 3. 40 ( 18 H, m) , · 3. 50 - 3. 73 (12 H, m) , 3. 85- 3. 96 (2H， m) , 4. 00— 4. 09 (2H， m) , 4. 12 (1H， d， J = 5. 6Hz) ， 4. 20-4. 45 (4H, m) XH-NMR (270 MHz, CD ₃ OD): δ 0.94 (3Η, d, J-7.0 Hz), 0.96 (3H, d, J = 7.0 Hz), 1.04 (9H, s) , 1.22-2.04 (41H, m), 2.83-2.95 (lH, m), 3.15-3.40 (18H, m), · 3.50-3.73 (12H, m), 3.85-3.96 (2H, m), 4.00—4.09 (2H, m), 4.12 (1H, d, J = 5.6Hz), 4. 20-4. 45 (4H, m)

LC-MS 765 (M+ 2/2) 。 (合成実施例 6 ) 化合物 6 fの合成 LC-MS 765 (M + 2/2). (Synthesis Example 6) Synthesis of compound 6f

(1) 化合物 6 aの合成 (1) Synthesis of compound 6a

化合物 6 a Compound 6a

合成実施例 5 (1) に従って得られた化合物 5 a (1. 99 g 1. 59mm o 1) をジクロロメタン（8ml) に溶解させ、氷冷下 TFA (3ml) を滴下し、氷冷下 30分間そ'の後室温で 1. 5時間攪拌した。反応後、エバポレーターで溶媒を減圧留去し、氷冷下 n—へキサンを加え、上清を除いた。この作業をさらに 5回繰り返した後、残留物をエバポレーターで減圧濃縮した。得られた濃縮物を氷冷下 DM F (8ml) に溶解し、氷冷攪拌下、ジイソプロピルェチルアミン（5ml、 28. 6mmo l) 、 Ν— α— Ν— ε—ビス一ブトキシカルポ二ルー D—リジン（3. 30 g、 9. 53mmo 1) の DMF (8ml) 溶液、および HATU (3. 62g、 9. 53mmo 1) を順次加えた。氷冷下 30分間攪拌後、室温で 15時間攪拌した。反応後、エバポレーターで溶媒を減圧留去した。濃縮物に酢酸ェチルを加え、 10%クェン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレーターにて溶媒を留去した。得られた濃縮残留物を、メタノールージクロロメタンを溶出液としたシリ力ゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物 6 aを無色アモルファス状固体として 3. 16 g (収率 92%) 得た。 Compound 5a (1.99 g 1.59 mm) obtained according to Synthesis Example 5 (1) o1) was dissolved in dichloromethane (8 ml), TFA (3 ml) was added dropwise under ice cooling, and the mixture was stirred for 30 minutes under ice cooling and then stirred at room temperature for 1.5 hours. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure using an evaporator, n-hexane was added under ice cooling, and the supernatant was removed. After repeating this operation five more times, the residue was concentrated under reduced pressure using an evaporator. The obtained concentrate is dissolved in DMF (8 ml) under ice-cooling, and stirred under ice-cooling, diisopropylethylamine (5 ml, 28.6 mmol), Ν-α-Ν-ε-bis-butoxycarpineol A solution of D-lysine (3.30 g, 9.53 mmol) in DMF (8 ml) and HATU (3.62 g, 9.53 mmol) were sequentially added. After stirring for 30 minutes under ice cooling, the mixture was stirred at room temperature for 15 hours. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure using an evaporator. Ethyl acetate was added to the concentrate, which was washed sequentially with a 10% aqueous solution of citric acid, a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate, and a saturated saline solution. After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was filtered off, and the solvent was distilled off with an evaporator. The obtained concentrated residue was purified by silica gel column chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to obtain 3.16 g (yield 92%) of the title compound 6a as a colorless amorphous solid. .

— NMR (270MHz、 CD₃OD) ： δ 0. 98 (9Η, s) , 1. 25- 1. 85 (46H, m) , 1. 3 (72H, s) ， 3. 00-4. 38 (38H， m) ， 5. 09 (2H， s) ， 7. 33 (5H， s) 。 — NMR (270MHz, CD ₃ OD): δ 0.98 (9Η, s), 1.25-1.85 (46H, m), 1.3 (72H, s), 3.00-4.38 ( 38H, m), 5.09 (2H, s), 7.33 (5H, s).

(2) 化合物' 6 bの合成 (2) Synthesis of compound '6b

化合物 6 b 化合物 6 a (2. 06g、 0. 95mmo 1) をジクロロメタン（40ml) に溶解させ、氷冷下 TFA (16ml) を滴下し、氷冷下 30分間、その後室温で 1時間攪拌した。反応後、エバポレーターで溶媒を減圧留去し、氷冷下 n—へキサンを加え、上清を除いた。この作業をさらに 5回繰り返した後、残留物を工バポレーターで減圧濃縮した。得られた濃縮物を氷冷下 DMF (20ml) に溶解し、氷冷攪拌下、ジイソプロピルェチルァミン（6ml、 34. 2mmo 1) 、 N— Q!— t—ブトキシカルボ二ルー Ν— ω (2, 2， 5, 7, 8 _ペンタメチルクロマン一 6—スルフォニル） —D—アルギニン（6. 17 g、 11. 4mmo 1) 、 HATU (4. 34g、 11. 4mmo 1) を順次加えた。氷冷下 30分間攪拌後、室温で 20時間攪拌した。反応後、エバポレー夕一で溶媒を減圧留去した。得られた濃縮物に酢酸ェチルを加え、 10%クェン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシゥムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレ一夕一にて溶媒を留去した。得られた濃縮残留物を、メタノールージクロロメタンを溶出液としたシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物 6 bを無色固体として 3. 71 g (収率 70%) 得た。 Compound 6b Compound 6a (2.06 g, 0.95 mmol) was dissolved in dichloromethane (40 ml), TFA (16 ml) was added dropwise under ice cooling, and the mixture was stirred for 30 minutes under ice cooling and then at room temperature for 1 hour. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure using an evaporator, n-hexane was added under ice cooling, and the supernatant was removed. After this operation was repeated five more times, the residue was concentrated under reduced pressure using a vaporizer. The obtained concentrate is dissolved in DMF (20 ml) under ice-cooling, and stirred under ice-cooling, diisopropylethylamine (6 ml, 34.2 mmo1), N-Q! —T-butoxycarbone II- ω (2,2,5,7,8_pentamethylchroman-1-6-sulfonyl) -D-arginine (6.17 g, 11.4 mmo 1) and HATU (4.34 g, 11.4 mmo 1) were added sequentially. . After stirring for 30 minutes under ice cooling, the mixture was stirred at room temperature for 20 hours. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure in an evaporator. Ethyl acetate was added to the obtained concentrate, and the mixture was washed sequentially with a 10% aqueous solution of citric acid, a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate, and a saturated saline solution. After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, anhydrous magnesium sulfate was removed by filtration, and then the solvent was distilled off overnight. The resulting concentrated residue was purified by silica gel gel column chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to give 3.71 g (yield 70%) of the title compound 6b as a colorless solid.

— NMR (270MHz、 CD₃〇D) ： δ 0. 96 ( 9 H， s) ， 1. 25- 1. 85 (78H, m) ， 1. 26 (48H, s) ， 1. 40 (72 H， s) ， 1. 79 (16H， t) ， 2. 07 (24H， s) , 2. 53 (24H, s) , 2. 55 (24H, s) , 2, 62 (16 H, t) ， 3. 10— 4. 38— NMR (270MHz, CD ₃ 〇D): δ 0.96 (9H, s), 1. 25- 1.85 (78H, m), 1.26 (48H, s), 1.40 (72H, s), 1.79 (16H, t), 2.07 (24H, s), 2. 53 (24H, s), 2.55 (24H, s), 2, 62 (16H, t), 3.10—4.38

(62H， m) ， 5. 09 (2H, s) , 7. 32 (5H， s) 。 (62H, m), 5.09 (2H, s), 7.32 (5H, s).

(3) 化合物 6 cの合成 (3) Synthesis of compound 6c

化合物 6 C 化合物 6 b (0. 72g、 0. 13mmo 1) をメタノール（7ml) に溶解させ、水素雰囲気下、 10%Pd/C (0. 72 g) にて 16時間接触還元した。 10%Pd/Cを濾去後、濾液をエバポレー夕一にて減圧濃縮した。得られた濃縮残留物を、メタノール—ジクロロメタンを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィ一にて精製し、標題化合物 6 cを無色固体として 0. 56 g (収率 79%) 得た。 Compound 6C Compound 6b (0.72 g, 0.13 mmol) was dissolved in methanol (7 ml) and catalytically reduced with 10% Pd / C (0.72 g) in a hydrogen atmosphere for 16 hours. After removing 10% Pd / C by filtration, the filtrate was concentrated under reduced pressure at an evaporator. The resulting concentrated residue was purified by silica gel column chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to obtain 0.56 g (yield 79%) of the title compound 6c as a colorless solid.

一 NMR (270MHz CD₃OD) : <51. 02 (9H， s) ， 1. 25- 1. 85 (78H, m) 1. 27 (48H, s) ， 1. 40 (72H， s) , 1. 78 (16Η, t) 2. 07 (24H, s) , 2. 53 (24H, s) , 2. 55 (24 H， s) 2， 62 (16H, t) ， 3. 10-4. 38 ( 62 H， m) 。 (4) 化合物 6 dの合成 NMR (270MHz CD ₃ OD): <51.02 (9H, s), 1.25-1.85 (78H, m) 1.27 (48H, s), 1.40 (72H, s), 1 78 (16Η, t) 2.07 (24H, s), 2.53 (24H, s), 2.55 (24H, s) 2, 62 (16H, t), 3.10-4.38 (62H, m). (4) Synthesis of compound 6d

化合物 6 d 化合物 6 c (54 lmg、 0. lmmo 1) を DMF (3ml) に溶解し、室温下、化合物 27 (230mg、 1. Ommo l) の DMF (4ml) 溶液を加えた。その後氷冷攪拌下、ジイソプロピルェチルァミン（261 1、 1. 5m mo 1) HATU (380mg、 1. Ommo l) を順次加えた。氷冷下 30 分間攪拌後、室温で 19時間攪拌した。反応後、エバポレーターで溶媒を減圧留去した。得られた濃縮物に酢酸ェチルを加え、 10%クェン酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、無水硫酸マグネシウムを濾去後、エバポレーターにて溶媒を留去した。濃縮して得られた残留物を、メタノールージクロロメタンを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物 6 dを淡紫色固体として 434mg (収率 77%) 得た。 Compound 6d Compound 6c (54 lmg, 0.1 lmmo 1) was dissolved in DMF (3 ml), and a solution of compound 27 (230 mg, 1.0 mmol) in DMF (4 ml) was added at room temperature. Thereafter, diisopropylethylamine (261 1, 1.5 mmol) HATU (380 mg, 1.0 mmol) was sequentially added under ice-cooling and stirring. After stirring for 30 minutes under ice cooling, the mixture was stirred at room temperature for 19 hours. After the reaction, the solvent was distilled off under reduced pressure using an evaporator. Ethyl acetate was added to the obtained concentrate, and the mixture was washed sequentially with a 10% aqueous solution of citric acid, a saturated aqueous solution of sodium bicarbonate, and a saturated saline solution. After washing, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, the anhydrous magnesium sulfate was filtered off, and the solvent was distilled off using an evaporator. The residue obtained by concentration was purified by silica gel column chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to give 434 mg (yield 77%) of the title compound 6d as a pale purple solid.

^XH-NMR (270 MHz, CD₃OD) ： δ 0. 90 (6Η, dd) ， 0. ^X H-NMR (270 MHz, CD ₃ OD): δ 0.90 (6Η, dd), 0.

98 (9H， s) , 1. 24- 1. 88 (87H, m) , 1. 28 (48H, s) ， 1. 40 (72H, s) ， 1. 79 (16H, t) , 2. 07 (24H, s) ， 2. 54 (24H, s) , 2. 55 (24H, s) , 2, 62 (16H, t) ， 3. 08-4. 40 (63H, m) ， 4. 48 ( 1 H， d) 。 ( 5 ) 化合物 6 eの合成 98 (9H, s), 1. 24-1.88 (87H, m), 1.28 (48H, s), 1.40 (72H, s), 1.79 (16H, t), 2.07 (24H, s), 2.54 (24H, s), 2.55 (24H, s), 2, 62 (16H, t), 3.08-4.40 (63H, m), 4.48 ( 1H, d). (5) Synthesis of compound 6e

化合物 6 e 化合物 6d (100mg 18 mo 1) に、ヒドロキシルァミン塩酸塩と 1 Mナトリウムメトキシドから調製した 1Mヒドロキシルァミン一メタノール溶液 (lml、 lmmo 1) を加え、室温で 18時間攪拌した。反応後、エバポレーターにて溶媒を留去した。得られた濃縮残留物を、メタノール一ジクロロメタンを溶出液としたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製し、標題化合物 6 eを無色固体として 9 Omg (収率 90%) 得た。 Compound 6e To a compound 6d (100 mg, 18 mol) was added a 1 M solution of hydroxylamine in methanol (lml, lmmo 1) prepared from hydroxylamine hydrochloride and 1 M sodium methoxide, and the mixture was stirred at room temperature for 18 hours. After the reaction, the solvent was distilled off using an evaporator. The obtained concentrated residue was purified by silica gel column chromatography using methanol-dichloromethane as an eluent to obtain 9 Omg (yield 90%) of the title compound 6e as a colorless solid.

一 NMR (270MHz、 CD₃〇D) ： 60. 90 (6H, dd) , 0. 98 (9Η, s) ， 1. 25- 1. 84 (81 H, m) ， 1. 27 (48 H, s) , 1. 40 (72 H， s) , 1. 77 (16H， t) , 2 07 (24H， s) ， 2. 54 (24H, s) ， 2. 55 (24H, s) ， 2 62 (16H, t) , 3. 08-4. 56 (64H， m) 。 NMR (270 MHz, CD ₃ 〇D): 60.90 (6H, dd), 0.98 (9Η, s), 1.25-1.84 (81 H, m), 1.27 (48 H, dd) s), 1.40 (72H, s), 1.77 (16H, t), 207 (24H, s), 2.54 (24H, s), 2.55 (24H, s), 262 (16H, t), 3.08-4.56 (64H, m).

(6) 化合物 6 fの合成 (6) Synthesis of compound 6f

化合物 6 f 化合物 6 e (90mg、 16 ^mo 1) をジクロロメタン（900 ^ 1) に溶解させ、氷冷下 TFA (900 1) を滴下し、室温で 2時間攪拌した。反応後、氷冷下 1， 2—ジクロロェタン（4. 5ml ) を加えエバポレー夕一で溶媒を減圧留去した。残留物に氷冷下 1， 2—ジクロ口エタンを加え、上清を除いた。この作業をさらに 5回繰り返した後、残留物をエバポレーターで減圧濃縮した。得られた濃縮物を逆相カラムクロマトグラフィー（0. 1%TFA含有 H₂〇ーァセトニトリル）を用いて精製後、凍結乾燥することにより標題化合物 6 f を無色固体 2 lmg (29%) として得た。 Compound 6f Compound 6e (90 mg, 16 ^ mo1) was dissolved in dichloromethane (900 ^ 1), TFA (9001) was added dropwise under ice cooling, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. After the reaction, 1,2-dichloroethane (4.5 ml) was added under ice-cooling, and the solvent was distilled off under reduced pressure in an evaporator. 1,2-Dichloromethane was added to the residue under ice cooling, and the supernatant was removed. After this operation was repeated five more times, the residue was concentrated under reduced pressure using an evaporator. The obtained concentrate is purified by reversed-phase column chromatography (0.1% TFA-containing H ₂ P-acetonitrile) and lyophilized to give the title compound 6f as a colorless solid 2 lmg (29%). Obtained.

^-NMR (270MHz、 CD₃OD) ： d 0.. 90 (6H, d d) ， 1. 00 (9H， s) , 1. 24- 2. 08 ( 81 H, ra) , 2， 82-2, 94 (1H, m) ， 3. 08-4. 42 (63H, m) ^ -NMR (270 MHz, CD ₃ OD): d 0 .. 90 (6H, dd), 1.00 (9H, s), 1. 24-2.08 (81 H, ra), 2, 82-2 , 94 (1H, m), 3.08-4.42 (63H, m)

LC-MS ： 668 (M+4/4) , 890 (M+ 3/3) 。 LC-MS: 668 (M + 4/4), 890 (M + 3/3).

(生物活性実施例 1) マトリックスメタ口プロテアーゼ阻害活性 (Biological activity Example 1) Matrix meta-oral protease inhibitory activity

(1) 化合物 7、 11および 15 (1) Compounds 7, 11, and 15

ゲラチナーゼ Aとゲラチナ一ゼ Bに対する本発明のカチォニック MM P阻害活性化合物の酵素阻害活性を測定した。なお、これらの酵素に対する阻害活性は、ロッシュ ·ダイァグノスティック社製のゲラチナ一ゼ活性測定キットを用い、添付のプロトコ一ルに従って、同社製の L 2Uのゲラチナーゼ Aと 0.5mUのゲラチナーゼ Bを活性ィ匕後、それらの酵素の 37°C、 1時間の酵素反応に対して測定した。 The enzyme inhibitory activity of the catonic MMP inhibitory activity compound of the present invention on gelatinase A and gelatinase B was measured. The inhibitory activities for these enzymes were determined using a kit for measuring the activity of gelatinase manufactured by Roche Diagnostics. According to the attached protocol, L2U gelatinase A and 0.5 mU gelatinase B manufactured by the company were activated, and the enzyme reaction was measured at 37 ° C. for 1 hour.

試験物質としては、上述の合成実施例 1、 2、 3で合成された化合物 7、 11、 15を使用した。コントロールとして、下記の式に示す化合物 16及び化合物 1 7を使用した。 As test substances, compounds 7, 11, and 15 synthesized in Synthesis Examples 1, 2, and 3 described above were used. As controls, compound 16 and compound 17 shown in the following formula were used.

化合物 16

Compound 16

TF八 saltTF eight salt

化合物 17 得られた結果を図 1〜4に示す。結果は、試験物質非添加時の酵素活性を 10 0とした時の酵素活性の平均値として表示した（n=2) 。

Compound 17 The results obtained are shown in FIGS. The results were expressed as an average of the enzyme activities when the enzyme activity without the test substance added was 100 (n = 2).

図 1、 2からわかるように、コントロール化合物 16、 17のゲラチナーゼ A とゲラチナ一ゼ Bに対する酵素阻害活性は同等であった。また、図 3、 4からわかるように、化合物 7、 11、 15、および 17のゲラチナ一ゼ Aとゲラチナ一ゼ Bに対する酵素阻害活性はほぼ同等であった。 As can be seen from FIGS. 1 and 2, the enzyme inhibitory activities of control compounds 16 and 17 on gelatinase A and gelatinase B were equivalent. Further, as can be seen from FIGS. 3 and 4, the enzyme inhibitory activities of Compounds 7, 11, 15, and 17 on gelatinase A and gelatinase B were almost equivalent.

以上の結果から、化合物 16， 17にカチォニック基を導入して、化合物 7、 11、 15としても、その MMP阻害活性にはほとんど影響を与えないことがわかった。 From the above results, it was found that the introduction of a cationic group into Compounds 16 and 17 and Compounds 7, 11 and 15 hardly affected the MMP inhibitory activity.

(2) 化合物 4 g、 5： fおよび 6 f ゲラチナーゼ Bに対する本発明のカチォニック MM P阻害活性ィヒ合物の酵素阻害活性を測定した。酵素に対する阻害活性は、ロッシュ ·ダイァグノスティック社製のゲラチナーゼ活性測定キットを用い、添付のプロトコールに従って、同社製の 0. 5mUのゲラチナーゼ Bを活性化後、 37°C、 1時間の酵素反応に対して測定した。 (2) Compound 4 g, 5: f and 6 f The enzyme inhibitory activity of the cationic MMP inhibitory activity compound of the present invention on gelatinase B was measured. The inhibitory activity against the enzyme was measured using a gelase assay kit manufactured by Roche Diagnostics Inc., according to the attached protocol, after activating 0.5 mU of gelatinase B manufactured by the company, at 37 ° C for 1 hour. It was measured against.

試験物質としては、上述の合成実施例で合成された化合物 4 g、 5 f、および 6 f を用いた。コントロールとして、カチオン基を持たない化合物 2 8 (下記の式に示す）を使用した。 As test substances, 4 g, 5 f and 6 f of the compounds synthesized in the above synthesis examples were used. As a control, compound 28 having no cationic group (shown in the following formula) was used.

化合物 2 8 得られた結果を図 5に示す。結果は、試験物質非添加時の酵素活性を 1 0 0とした時の酵素活性の平均値として表示した（n = 2 ) 。 Compound 28 The obtained results are shown in FIG. The results were expressed as the average of the enzyme activities when the enzyme activity without the test substance added was 100 (n = 2).

図 5から明らかなように、化合物 4 g、 5 ί、および 6 fのゲラチナーゼ Βに対する酵素阻害活性は、コントロール化合物 2 8の阻害活性とほぼ同等であった。以上の結果から、化合物 2 8にカチオン基を導入して、化合物 4 g、 5 f、および 6 f としても、その MM P阻害活性には影響がないことが明らかとなった。 As is clear from FIG. 5, the inhibitory activities of compounds 4 g, 5 ί, and 6 f on gelatinase ほぼ were almost equivalent to those of control compound 28. From the above results, it was clarified that the introduction of a cation group into Compound 28 and Compounds 4 g, 5 f and 6 f had no effect on the MMP inhibitory activity.

(生物活性実施例 2 ) 放出試験 (Biological activity example 2) Release test

( 1 ) ヒアルロン酸共存下のカチォニック MMP阻害活性ィヒ合物の徐放化 (1) Slow release of catonic MMP inhibitory compound in the presence of hyaluronic acid

( 1— 1 ) 化合物 7、 1 1および 1 5 (1-1) Compounds 7, 11 and 15

化合物 7、 1 1、 1 5、 1 6を試験ィ匕合物として使用した。各試験化合物を、 PH7. 5、 150mMの NaClを含む 4. 6mMリン酸緩衝液に溶解させた。得られた各試験化合物溶液を、室温下に、 HAの 2糖繰り返しユニット数に対して試験物質のモル数が約 10-15%となり、かつ終 HA濃度が 0. 5%になるように、 HA製剤（スべニール；ルセル森下（株）、電気化学工業（株）、中外製薬（株） ) に加えて、ポルテックスミキサーを用いて攪拌 ·混合させ、全体が均一になったことを確認した。こうして得られた試験物質と H Aの混合溶液 1. 5mL を、ポアサイズ 0. 025μΐηのメンブレンフィルタ一（MILLIP0RE社製）で隔てた 2チャンパ一セルの一方に加え、他方には上述のリン酸緩衝液のみを 8mL加えた。リン酸緩衝液のみを入れたセルから経時的に 0. lmLずつサンプリングを行い、放出された試験物質を定量した（284nm における吸光度で定量）。対照として HA製剤を含まない系についても同様の試験を行った。結果を図 6に示す。 Compounds 7, 11, 15, and 16 were used as test conjugates. Each test compound was dissolved in a pH 7.5, 4.6 mM phosphate buffer containing 150 mM NaCl. Each of the test compound solutions obtained is mixed at room temperature such that the number of moles of the test substance is about 10 to 15% and the final HA concentration is 0.5% with respect to the number of disaccharide repeat units of HA. , HA formulation (Svenel; Roussel Morishita Co., Ltd., Denki Kagaku Kogyo Co., Ltd., Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.), and agitating and mixing using a Portex mixer to confirm that the whole became uniform. Verification did. 1.5 mL of the test substance-HA mixed solution thus obtained was added to one of the two-chamber cells separated by a membrane filter (manufactured by MILLIPORE) having a pore size of 0.025 μΐη, and the other part was the aforementioned phosphate buffer solution. Only 8 mL was added. A 0.1 mL sample was sampled over time from the cell containing only the phosphate buffer, and the released test substance was quantified (quantified by absorbance at 284 nm). As a control, a similar test was performed for a system containing no HA preparation. Fig. 6 shows the results.

図 6からわかるように、 HA非共存下ではいずれの試験物質も同様の放出パターンを示し、 8時間後には試験物質の 95%以上が放出された。一方、カチオン基として D- Arg (D—アルギニン）残基を導入した化合物 7、 1 1および 1 5については、 H A共存下では放出が遅延化された。最も放出遅延の程度が大きかったのは化合物 1 5であり、 D- Arg残基の導入数の増加が HAとの相互作用を増大させるものと思われた。 As can be seen from Fig. 6, in the absence of HA, all test substances showed similar release patterns, and after 8 hours, 95% or more of the test substances were released. On the other hand, the release of Compounds 7, 11, and 15 in which D-Arg (D-arginine) was introduced as a cationic group was delayed in the presence of HA. Compound 15 had the greatest degree of release delay, and it was thought that increasing the number of introduced D-Arg residues increased the interaction with HA.

D-Arg残基をカチオン基として導入した本発明の MMP阻害活性化合物を HA 製剤と混合して関節腔内へ投与した場合には、 HAとの相互作用により、本発明の MM P阻害活性化合物が徐放化されるものと期待される。 When the MMP-inhibiting active compound of the present invention in which a D-Arg residue is introduced as a cationic group is administered into a joint cavity by mixing with an HA preparation, the MMP-inhibiting active compound of the present invention is interacted with HA. Is expected to be sustained release.

( 1— 2 ) 化合物 4 g、 5 fおよび 6 f ' (1-2) Compounds 4 g, 5 f and 6 f '

化合物 4 g、 5 f 、 6 f を試験化合物として使用した。各試験化合物を、 PH7. 4、 150πιΜの NaCl を含む lOmMリン酸緩衝液に溶解させた。得られた各試験化合物溶液を、室温下に、 HAの 2糖繰り返しユニット数に対して試験物質のモル数が約 1%となり、かつ終 HA濃度が 0. 5%になるように、 HA製剤（スベニ一ル；ルセル森下（株）、電気化学工業（株）、中外製薬（株） ) に加えて、ポルテックスミキサーを用いて攪拌 ·混合させた後、震盪機上で室温下に約 1時間震盪'混合させ、全体が均一になったことを確認した。こうして得られた試験物質と H Aの混合溶液 1. 5mL を、ポアサイズ 0. 025μΐη のメンブレンフィルター (MILLIP0RE社製）で隔てた 2チャンパーセルの一方に加え、他方には上述のリン酸緩衝液のみを 8mL加えた。リン酸緩衝液のみを入れたセルから経時的に 0. 1 mLずつサンプリングを行い、放出された試験物質を TNBS (トリ二トリべンゼンスルホン酸）法によって定量した。対照として HA製剤を含まない系についても同様の試験を行った。 TNBS法による定量に際しては、下記 5種溶液を調製した。 Compounds 4 g, 5 f and 6 f were used as test compounds. Each test compound was dissolved in lOmM phosphate buffer containing NaCl at pH 7.4, 150πιΜ. Each of the obtained test compound solutions was subjected to HA at room temperature so that the number of moles of the test substance was about 1% based on the number of disaccharide repeating units of HA and the final HA concentration was 0.5%. In addition to the formulation (Svenile; Roussel Morishita, Inc., Denki Kagaku Kogyo, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.), the mixture was stirred and mixed using a Portex mixer, and the mixture was stirred at room temperature on a shaker. The mixture was shaken for 1 hour to confirm that the whole was uniform. 1.5 mL of the test substance-HA mixed solution obtained in this way was added to one of the two champer cells separated by a membrane filter (manufactured by MILLIPORE) with a pore size of 0.025 μΐη, and the other was only the above-mentioned phosphate buffer. Was added in an amount of 8 mL. 0.1 mL samples were taken over time from the cell containing only the phosphate buffer, and the released test substance was quantified by the TNBS (trinitrbenzensulfonic acid) method. As a control, a similar test was performed for a system containing no HA preparation. For quantification by the TNBS method, the following five solutions were prepared.

A液： 0. 1M Na₂S0₃ A solution: 0. 1M Na ₂ S0 ₃

B液： 0. 1M Na¾P0₄ Solution B: 0. 1M Na¾P0 ₄

C液： 0. 1M Na₂B₄0₇の 0. 1M NaOH溶液 Solution C: 0. 1M NaOH solution 0. 1M Na ₂ B ₄ 0 ₇

D液： A液 0. 4mLと B液 26. 3mLとを混合 Solution D: Mix 0.4 mL of Solution A and 26.3 mL of Solution B

1M TNBS溶液 1M TNBS solution

サンプル溶液 50μίに C液 5(Ηおよび 1M TNBS溶液 2μίを加え、攪拌混合した後に、室温、遮光下に 15-20 分間静置した。 D液 20(^L を加えて攪拌し、 420nm における吸光度を測定した。濃度既知の化合物 4 g、 5 fおよび 6 fそれぞれの溶液を用いて検量線を作成し、サンプル溶液中の化合物 4 g、 5 f 、 6 f の濃度を算出した。結果を図 7に示す。 To 50 μί of sample solution, add 5 μΗ of solution C (Η and 2 μί of 1 M TNBS solution), mix by stirring, and leave at room temperature for 15-20 minutes under shading. Add 20 μL of solution D and stir at 420 nm. Calibration curves were prepared using solutions of 4 g, 5 f, and 6 f of each compound having a known concentration, and the concentrations of 4 g, 5 f, and 6 f of the compound in the sample solution were calculated. Fig. 7 shows the results.

図 7からわかるように、 HA共存下ではいずれの試験物質も放出の遅延化が確認された。最も放出遅延の程度が大きかったのは化合物 6 fであり、 D_Arg残基の導入数の増加が H Aとの相互作用を増大させるものと思われた。 As can be seen from Fig. 7, it was confirmed that the release of all test substances was delayed in the presence of HA. The compound with the greatest release delay was compound 6f, and the increased number of introduced D_Arg residues seemed to increase the interaction with HA.

D-Arg残基をカチオン基として導入した本発明の MM P阻害活性化合物を、 H Aと混合して関節腔内へ投与した場合には、 HAとの相互作用により、本発明の MM P阻害活性化合物が徐放化されるものと期待される。 When the compound for inhibiting MMP inhibition of the present invention, in which a D-Arg residue is introduced as a cationic group, is mixed with HA and administered into a joint cavity, the compound for inhibiting MMP inhibition of the present invention interacts with HA. It is expected that the compound will be sustained release.

( 2 ) コンドロイチン硫酸共存下の力チォニック MM P阻害活性化合物の徐放化 (2) Sustained release of potentionic MMP inhibitory compounds in the presence of chondroitin sulfate

試験物質として化合物 1 5および 1 6を使用し、コンドロイチン硫酸としては和光純薬工業製のコンドロイチン硫酸 (サナトリウム（C S— C) を用いた。化合物 1 5、 1 6を、 C S— Cの 2糖繰り返しユニット数に対して試験物質のモル数が 10%になるように、それぞれ、室温下に 0. 5% C S— C溶液（pH7. 4、 150mM NaCl を含む 20mM リン酸緩衝液）に混合し、ポルテックスミキサーを用いて攪拌 ·混合させ、全体が均一になったことを確認した。この溶液の pHを 1M HC1で 7. 4-7. 5 に再調整し、分画分子量 25000 の透析膜（SPECTRUM MICR0G0N, INC. 製）で隔てた 2チヤンバーセルの一方に 1. 5mL加えた。他方には上述のリン酸緩衝液のみを 8. OmL加えて、経時的に 0. ImLずつサンプリングを行い、放出される試験物質を定量した（284nm における吸光度で定量）。対照として C S— Cを含まない系についても同様の試験を行った。結果を図 8に示す。 Compounds 15 and 16 were used as test substances, and chondroitin sulfate (Sanadium (CS-C) manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was used as chondroitin sulfate. Compounds 15 and 16 were replaced with CS-C 2 Mix each with 0.5% CS-C solution (pH 7.4, 20 mM phosphate buffer containing 150 mM NaCl) at room temperature so that the number of moles of the test substance is 10% based on the number of sugar repeating units. Then, the mixture was stirred and mixed using a Portex mixer, and it was confirmed that the entire solution had become uniform.The pH of this solution was readjusted to 7.4-7.5 with 1M HC1 to give a molecular weight cutoff of 25,000. 1.5 mL was added to one of two chambers separated by a dialysis membrane (manufactured by SPECTRUM MICR0G0N, INC.) To the other, 8. OmL of the above-mentioned phosphate buffer alone was added, and 0.1 mL was sampled over time. The test substance released was quantified (quantified by absorbance at 284 nm). The CS- C as the irradiation The same test was carried out for the system not containing. Fig. 8 shows the results.

図 8からわかるように、 D- Arg残基を持たない化合物 1 6は、 C S— Cの有無に関わらずほぼ同様の放出パターンを示し、試験開始 8時間後には 90%以上の化合物 1 6が放出された。一方、 D-Arg残基を導入された化合物 1 5においては、 C S— Cの共存下にその放出は遅延化された。 C S— Cの非共存下には、化合物 As can be seen from Fig. 8, compound 16 without D-Arg residue showed almost the same release pattern with or without CS-C. After 8 hours from the start of the test, 90% or more of compound 1 6 has been released. On the other hand, in the compound 15 into which the D-Arg residue was introduced, the release was delayed in the presence of CS-C. C S— In the absence of C, the compound

1 5は 8時間で約 70%、 2 時間で 95%以上放出されたのに対して、 C S— Cの共存下には 8時間では約 50%、 24時間で 80%程度の放出であった。 15 was released at about 70% in 8 hours and 95% or more in 2 hours, whereas about 50% in 8 hours and about 80% in 24 hours in the presence of CS-C. Was.

D-Arg残基を導入した化合物 1 5は、関節腔内の細胞外マトリックス成分であるコンドロイチン硫酸とも相互作用することで滞留性が増すものと期待される。 Compound 15 into which D-Arg residue has been introduced is expected to increase retention by interacting with chondroitin sulfate, which is an extracellular matrix component in the joint cavity.

(生物活性実施例 3 ) ラット膝関節軟骨プロテオダリ力ン破壊阻害活性化合物 6 f とコントロール化合物 2 8とを試験物質として、 Bayne らの方法 (Biological activity Example 3) Inhibitory activity of rat knee cartilage on proteodarin force destruction Compound 6f and control compound 28 were used as test substances and the method of Bayne et al.

(Arthr i t is & Rheumat ism 1400-1409, 1995)を改変した方法を用いて試験した。 (Arthrit is & Rheumat ism 1400-1409, 1995).

( 1 ) 化合物 2 8 (1) Compound 28

体重約 200 gの雄性 S Dラットを I〜 I Vの 4群に分け、下記のような溶液を調整し、各群ごとに両足の膝関節腔内に各 5(^Lずつ注入した。 Male SD rats weighing approximately 200 g were divided into four groups, I to IV, and the following solutions were prepared, and each group was injected into the knee joint cavity of both feet by 5 (^ L).

I群生理食塩水 (n=3) ； Group I saline (n = 3);

I I群生理食塩水（n=6) ； Group I saline (n = 6);

I I I群化合物 2 8 (最終濃度5. 5ズ10—⁴ 11101/ の生理食塩水溶液（n=6) ； I V群化合物 2 8 (最終濃度 5. 5 X 10—4 mol/L) と HA製剤（スべニール；ルセル森下（株）、電気化学工業（株）、中外製薬（株）、最終濃度 9. 2 mg/mL) との混合生理食塩水溶液（n=6) 。 III group compound 2 8 (final concentration 5.5's 10 ⁴ 11101 / saline solution (n = 6); IV group compound 2 8 (final concentration 5.5 X 10-4 mol / L) and HA preparations ( Svenir: mixed saline solution (n = 6) with Lucer Morishita Co., Ltd., Denki Kagaku Kogyo Co., Ltd., Chugai Pharmaceutical Co., Ltd., final concentration of 9.2 mg / mL).

関節注入 3時間後、 I群にはトリス塩酸緩衝液（50腿 ol/L Tris- HC1， 0. 15 mol/L NaCl, 10 mmol/L CaCl_2l pH7. 5) 50μΙ を、その他の群（1 1、 I I I、 I V群）にはトリス塩酸緩衝液にて最終濃度 160 _§ に調製した活性型ヒトリコンビナントストロメリシン一 1 (Nature 389, 77-81, 1997) を 5(^Lずつ、両足の膝関節腔内に注入した。 2時間後、頸椎脱臼によりラットを安楽死させ、Three hours after the injection of the joint, group I received 50 μΙ of Tris-HCl buffer (50 t / l Tris-HC1, 0.15 mol / L NaCl, 10 mmol / L CaCl _2l pH 7.5) and the other groups (1 In groups 1, III, and IV), 5 (^ L each) of activated human recombinant stromelysin-1 (Nature 389, 77-81, 1997) prepared in Tris-HCl buffer to a final concentration of 160 _§ was used. Two hours later, the rats were euthanized by cervical dislocation and injected into the knee joint cavity.

100 μί の生理食塩水を関節腔内に注入後、関節洗浄液を回収した。各個体の左右の関節液は合一して 1検体とした。関節液を最終濃度 10TRU のヒアルロニダーゼ（放線菌由来、天野製薬）で 60°Cで一晩、次いで最終濃度 . 5mg/mLのパパイン（Sigma) を使用して 65°Cで 5時間消化後、コンドロイチン硫酸 C (和光裨薬工業製）を標準品として、ジメチルメチレンブル一を用いる比色法により、プロテオダリカン量を測定した。 After injecting 100 μί of physiological saline into the joint cavity, the joint lavage fluid was collected. The left and right joint fluids of each individual were combined into one specimen. Synovial fluid at a final concentration of 10 TRU Chondroitin sulfate C (Wako Boshin) after digestion with Dase (actinomycetes, Amano Pharmaceutical) at 60 ° C overnight, and then with papain (Sigma) at a final concentration of 0.5mg / mL for 5 hours at 65 ° C. The amount of proteodalican was measured by a colorimetric method using dimethyl methylene blue using (manufactured by Kogyo Co., Ltd.) as a standard product.

結果は各群の平均値土平均誤差で示し、 Turkey ' s の多重比較により有意差検定を行った。図 9に示すように、ストロメリシン— 1の投与によって惹起されたプロテオダリカンの遊離に対して、カチオン基を持たない化合物 2 8の単独投与はなんら影響を示さなかった。化合物 2 8と HAの混合物投与では若干の抑制傾向が見られたが、統計学的に有意な効果ではなかった。 The results are shown as the average soil error of each group, and a significant difference test was performed by Turkey's multiple comparison. As shown in FIG. 9, administration of compound 28 without a cationic group alone had no effect on proteodalican release induced by administration of stromelysin-1. The administration of a mixture of Compound 28 and HA showed a slight trend toward inhibition, but was not statistically significant.

( 2 ) 化合物 6 f (2) Compound 6f

体重約 200 gの雄性 S Dラットを I〜I Vの 4群に分け、以下のような水溶液を調整し、各群ごとに、両足の膝関節腔内に 5( Lずつ注入した。 Male SD rats weighing about 200 g were divided into four groups, I to IV, and the following aqueous solutions were prepared. For each group, 5 (L) was injected into the knee joint cavity of both feet.

I群生理食塩水 (n=3) ； Group I saline (n = 3);

I I群生理食塩水 (n=6) ； I group I saline (n = 6);

I I I群化合物 6 f (最終濃度 6. 8X 10—⁵ inol/L) の生理食塩水溶液（n=6) ； I V群化合物 6 f (最終濃度 6. 8X 10_⁵ mol/L) と HA製剤（スべニール；ルセル森下（株）、電気化学工業（株）、中外製薬（株）、最終濃度 0. 91 mg/inL) の混合生理食塩水溶液（n=6) 。 III group compound 6 f (final concentration 6. 8X 10- ⁵ inol / L) saline solution (n = 6); IV group compound 6 f (final concentration 6. 8X 10_ ⁵ mol / L) and HA formulation (scan Benil: A mixed physiological saline solution (n = 6) with Lucer Morishita Co., Ltd., Denki Kagaku Kogyo Co., Ltd., Chugai Pharmaceutical Co., Ltd., final concentration of 0.91 mg / inL).

上述の化合物 2 8と同様に、関節注入 3時間後、 I群にはトリス塩酸緩衝液 50μ を、 I I、 I I I、 I V群には最終濃度 160 g/mL のストロメリシン一 1 を 50μίずつ、両足の膝関節腔内に注入した。 2時間後、ラットを頸椎脱臼により安楽死させ、 100 の生理食塩水を各関節腔内に注入後、関節洗浄液液を回収した。各個体の左右の関節液は合一して 1検体とした。関節液を最終濃度 lOTRU/mLのヒアル口ニダ一ゼ（放線菌由来、天野製薬）と 4. 5mg/raLのパパイン (Sigma) で順次消化後、ジメチルメチレンブルーを用いる比色法によりプロテォグリカン量を測定した。結果は各群の平均値土平均誤差で示し、 Turkey ' s の多重比較により有意差検定を行った。図 1 0に示すように、ストロメリシンー1 の投与によって惹起されたプロテオダリカンの遊離に対して、カチオン基を有する化合物 6 fは単独投与でも、また HA との混合物として投与した場合でも有意な抑制効果を示した。 As in compound 28 above, 3 hours after the joint injection, Group I received 50 μ トリ of Tris-HCl buffer, and groups II, III and IV received 50 μί of stromelysin-11 at a final concentration of 160 g / mL. It was injected into the knee joint cavity. Two hours later, the rats were euthanized by cervical dislocation, 100 saline was injected into each joint cavity, and the joint lavage fluid was collected. The left and right joint fluids of each individual were combined into one specimen. After synovial fluid was digested with hyaluronan nidase (actinomycetes, Amano Pharmaceutical) at a final concentration of lOTRU / mL and papain (Sigma) at 4.5 mg / raL, the amount of proteoglycan was determined by a colorimetric method using dimethylmethylene blue. It was measured. The results were shown as the mean soil error of each group, and a significance test was performed by Turkey's multiple comparison. As shown in Fig. 10, the release of proteodalican induced by administration of stromelysin-1 was significant when compound 6f having a cationic group was administered alone or as a mixture with HA. It showed a significant suppression effect.

これらの実験結果から、 D-Arg残基を持たないコントロール化合物 2 8は、関節腔から速やかに消失するため本実験には無効であること、および、 D- Arg (D 一アルギニン）残基 8個を導入した化合物 6 fは、おそらく、関節腔内の細胞外マトリックス成分であるコンドロイチン硫酸あるいはヒアルロン酸との相互作用により関節腔内での滞留性が増すことにより、軟骨破壊阻害作用を発現し得ることが示された。産業上の利用の可能性 These results indicate that control compound 28 without D-Arg residue is ineffective in this experiment because it disappears rapidly from the joint cavity. It is also confirmed that D-Arg (D-arginine) residue The compound 6f into which 8 were introduced probably exerted the inhibitory effect on cartilage destruction by increasing its retention in the joint cavity by interacting with chondroitin sulfate or hyaluronic acid which is an extracellular matrix component in the joint cavity It was shown that it could be done. Industrial applicability

本発明のカチォニック MMP阻害活性化合物は、例えば、単独で投与された場合には、軟骨組織のプロテオダリカン等と静電的に結合し得るために軟骨組織上への貯留を期待できる。また、 HA製剤とともに投与された場合には、 HA製剤との静電的な結合により優れた関節腔内貯留性を示し、 HAから解離した後も前述のように軟骨組織のプロテオダリカン等と静電的に結合し得るため、さらなる貯留性が期待できる。したがって、 MM P阻害効果の限局，長期化および投与回数の低減が可能となり、関節破壌抑制効果等に優れた関節疾患治療薬となり得る。また、本発明のカチォニック MMP P且害活性化合物のカチォニックな性質に基づく製薬上の有用性も期待し得る。 The catonic MMP-inhibiting compound of the present invention, when administered alone, for example, can be electrostatically bound to cartilage tissue proteodalican and the like, and can be expected to be stored on cartilage tissue. In addition, when administered together with an HA preparation, it exhibits excellent joint cavity retention due to electrostatic binding with the HA preparation, and even after dissociation from HA, as described above, proteodalican, a cartilage tissue Since it can be electrostatically coupled with, further storage properties can be expected. Therefore, the MMP inhibitory effect can be localized, prolonged, and the number of administrations can be reduced, and this can be a therapeutic agent for joint diseases excellent in joint rupture suppression effect and the like. In addition, pharmaceutical utility based on the cationic properties of the cationic active compound of the present invention can be expected.

Claims

請求の範囲 The scope of the claims

1. カチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩。 1. Cationic MMP inhibitory compound or salt thereof.

2. ヒドロキサム酸誘導体である、請求項 1記載のカチォニック MMP阻害活性ィ匕合物またはその塩。 2. The cationic MMP-inhibiting conjugate of claim 1, which is a hydroxamic acid derivative, or a salt thereof.

3. カチオン基がヒドロキサム酸骨格と化学的結合により結合している、請求項 2記載のカチォニック MMP阻害活性ィヒ合物またはその塩。 3. The cationic MMP inhibitory activity compound or a salt thereof according to claim 2, wherein the cationic group is bonded to the hydroxamic acid skeleton by a chemical bond.

4. 化学的結合がスぺーサーを介した共有結合である、請求項 3記載のカチォニック MM P阻害活性化合物またはその塩。 4. The catonic MMP inhibitory active compound or a salt thereof according to claim 3, wherein the chemical bond is a covalent bond via a spacer.

5. カチオン基がポリカチオン基である、請求項 1〜4のいずれか 1項に記載のカチォニック MMP阻害活性ィ匕合物またはその塩。 5. The cationic MMP inhibitory activity conjugate or a salt thereof according to any one of claims 1 to 4, wherein the cation group is a polycation group.

6. ヒドロキサム酸誘導体が、一般式（ 1 ) ： 6. The hydroxamic acid derivative has the general formula (1):

[式中、は、水素原子、 7酸基、炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のァルキル基、炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルコキシ基、炭素数 2〜8 の直鎖もしくは分岐鎖状のアルケニル基、 R₅R₆N— (CH₂) m- (ここで、 R₅、 R₆は、それぞれ独立に、水素原子、または、シクロアルキル基、ァリール基もしくは複素環基で置換されていてもよい炭素数 1〜 8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基もしくはァシル基を表す。あるいは、 R₅と R₆が環を形成していてもよい。 mは 0〜4の整数を表す。）、または、 B— S〇n— (CH₂) m— （ここで、 mは 0〜4の整数を表し、 Bは、水素原子、シクロアルキル基、ァリール基、複素環基、または、シクロアルキル基、ァリール基もしくは複素環基で置換されていてもよい炭素数 1〜 8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表し、 nは 0、 1、または 2を表す）を表し； R₂及び R₃は、それぞれ独立に、シクロアルキル基、ァリール基もしくは複素環基で置換されていてもよい炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表し； R₄は、水素原子、または炭素数 1〜4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表し、あるいは、と R₃は環を形成してもよい。 ] [In the formula, is a hydrogen atom, a 7-acid group, a linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, a linear or branched alkoxy group having 1 to 8 carbon atoms, 8 linear or branched alkenyl group, R ₅ R ₆ N— (CH ₂ ) m- (where R ₅ and R ₆ are each independently a hydrogen atom or a cycloalkyl group, aryl Represents a linear or branched alkyl or acyl group having 1 to 8 carbon atoms which may be substituted with a group or a heterocyclic group, or R ₅ and R ₆ may form a ring. m represents an integer of 0 to 4.) or B—S〇n— (CH ₂ ) m— (where m represents an integer of 0 to 4, B represents a hydrogen atom, a cycloalkyl group, A straight chain having 1 to 8 carbon atoms which may be substituted with an aryl group, a heterocyclic group, or a cycloalkyl group, an aryl group or a heterocyclic group. Or n represents a branched alkyl group, and n represents 0, 1, or 2); R ₂ and R ₃ each independently represent a cycloalkyl group, an aryl group or a heterocyclic group; Represents a linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms; R ₄ is a hydrogen atom; Represents a linear or branched alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, or and and R ₃ may form a ring. ]

で表される部分構造を有する、請求項 1〜 5のいずれか 1項に記載のカチォニック MM P阻害活性化合物またはその塩。 The cationic MMP inhibitory active compound or a salt thereof according to any one of claims 1 to 5, having a partial structure represented by the following formula:

7. 一般式（1) において、 1^が水素原子または水酸基、 R₃が 3—インドリルメチル基または t一ブチル基、 R₄が水素原子である、請求項 6に記載の力チォニック MM P阻害活性化合物またはその塩。 7. In the general formula (1), 1 ^ is a hydrogen atom or a hydroxyl group, R ₃ is a 3-indolylmethyl group or a t-butyl group, and R ₄ is a hydrogen atom. Active compound or a salt thereof.

8. スぺーサ一が、一般式（2) ： 8. The spacer has the general formula (2):

— k₇— k₈— Κ_₉— ιν₁₀— (2ノ — K ₇ — k ₈ — Κ_ ₉ — ιν ₁₀ — (2 ノ

[式中、 R₇は、炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキレン基を表し； R₈は、炭素数 1〜4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基で置換されていてもよぃメチレン基、酸素原子、またはイミノ基を表し； R₉は、 1〜3個の酸素原子が挿入されていてもよい炭素数 1〜 10の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキレン基を表し； R₁₀は、酸素原子、硫黄原子、または NRu (ここで、 Ruは、水素原子、または炭素数 1〜4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表す）を表す。 ] で表されるスぺ一サーである、請求項 1〜7のいずれか 1項に記載の力チォニック MM P阻害活性化合物またはその塩。 [Wherein, R ₇ represents a linear or branched alkylene group having 1 to ₈ carbon atoms; R ₈ is substituted with a linear or branched alkyl group having 1 to 4 carbon atoms. R ₉ represents a methylene group, an oxygen atom, or an imino group; R ₉ is a linear or branched alkylene having 1 to 10 carbon atoms which may have 1 to 3 oxygen atoms inserted; R ₁₀ represents an oxygen atom, a sulfur atom, or NRu (where Ru represents a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group having 1 to 4 carbon atoms). The compound according to any one of claims 1 to 7, which is a spacer represented by the following formula: or a salt thereof.

9. 一般式（3) ： 9. General formula (3):

(式中、 1^は、水素原子、水酸基、炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のァルコキシ基、または炭素数 2〜 8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルケニル基を表し； R₃は、シクロアルキル基、ァリール基もしくは複素環基で置換されていてもよい炭素数 1〜8の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表し； R₁₂は、 1 個のィミノ基および/"または 1〜 4個の酸素原子が挿入されていてもよい炭素数 2〜2 3の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキレン基を表し； R _{1 3}は、水素原子、または炭素数 1〜4の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を表し； Dはカチオン基を表す）で表される化合物またはその塩である、請求項 1〜8のいずれか 1項に記載のカチォニック MM P阻害活性化合物またはその塩。 (In the formula, 1 ^ represents a hydrogen atom, a hydroxyl group, a linear or branched alkenyl group having 1 to 8 carbon atoms, or a linear or branched alkenyl group having 2 to 8 carbon atoms; R ₃ represents a linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms which may be substituted by a cycloalkyl group, an aryl group or a heterocyclic group; R ₁₂ represents one imino group and / or "Or the number of carbon atoms which may have 1 to 4 oxygen atoms inserted R ₁₃ represents a hydrogen atom or a linear or branched alkyl group having 1 to 4 carbon atoms; D represents a cationic group The catonic MMP inhibitory active compound or a salt thereof according to any one of claims 1 to 8, which is a compound represented by the following formula: or a salt thereof.

1 0 . Dが E x (Eは置換可ァミノ基、置換可アンモニゥム基、置換可グァニジノ基、置換可アミジノ基、もしくは置換可含窒素複素環を含むユニットを表し、 Xは 1〜2 0の整数を表し、 E xは単一ユニットの繰り返しであっても、 2種以上のユニットから構成されていてもよい）で表されるカチオン基である、請求項 8または 9記載のカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩。 10 .D is E x (E is a unit containing a substituted amino group, a substituted ammonium group, a substituted guanidino group, a substituted amidino group, or a substituted nitrogen-containing heterocyclic ring, and X is 1 to 20 The cationic MMP according to claim 8 or 9, wherein Ex is a cation group represented by the following formula: Ex is a single unit repeating unit or may be composed of two or more units. An inhibitory active compound or a salt thereof.

1 1 . 請求項 1〜 1 0のいずれか 1項に記載のカチォニック MM P阻害活性化合物またはその塩と、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体またはそれらの塩との混合物。 11. A mixture of the catonic MMP inhibitory activation compound or a salt thereof according to any one of claims 1 to 10 and hyaluronic acid, a hyaluronic acid derivative or a salt thereof.

1 2. 請求項 1〜1 0のいずれか 1項に記載のカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩と、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体またはそれらの塩とが、非共有結合により結合している結合体。 1 2. The catonic MMP inhibitory activation compound or a salt thereof according to any one of claims 1 to 10 is non-covalently bound to hyaluronic acid, a hyaluronic acid derivative or a salt thereof. Union.

1 3. 非共有結合がイオン結合である請求項 1 2記載の結合体。 1 3. The conjugate according to claim 12, wherein the non-covalent bond is an ionic bond.

1 4. 請求項 1〜 1 0のいずれか 1項に記載の力チォニック MM P P且害活性化合物またはその塩、請求項 1 1に記載の混合物、あるいは、請求項 1 2または 1 3に記載の結合体を含む医薬。 1 4. The power ionic MMPP and the harm-activating compound or the salt thereof according to any one of claims 1 to 10, the mixture according to claim 11, or the claim 12 or 13 A medicament comprising the conjugate according to any of the preceding claims.

1 5 . 関節疾患治療薬である請求項 1 4記載の医薬。 15. The medicament according to claim 14, which is a therapeutic agent for joint diseases.

1 6. 関節疾患が変形性関節症、慢性関節リウマチ、または肩関節周囲炎である請求項 1 5記載の医薬。 16. The pharmaceutical according to claim 15, wherein the joint disease is osteoarthritis, rheumatoid arthritis, or periarthritis of the shoulder.

1 7. 関節疾患を治療する方法であって、こうした治療を必要とする患者に治療上有効量の請求項 1〜 1 0のいずれか 1項に記載のカチォニック MMP阻害活性化合物またはその塩、請求項 1 1に記載の混合物、あるいは、請求項 1 2または 1 3に記載の結合体を投与するステップを含む方法。 17. A method for treating a joint disease, comprising treating a patient in need of such treatment with a therapeutically effective amount of the catonic MMP inhibitory active compound or a salt thereof according to any one of claims 1 to 10. A method comprising administering the mixture of claim 11 or the conjugate of claim 12 or 13.