UA146425U - ТЕСТ-СИСТЕМА ІМУНОФЕРМЕНТНА ДЛЯ ВИЯВЛЕННЯ НУКЛЕОКАПСИДНОГО АНТИГЕНУ КОРОНАВІРУСУ SARS-CоV-2 У БІОЛОГІЧНОМУ МАТЕРІАЛІ ДИХАЛЬНИХ ШЛЯХІВ - Google Patents

ТЕСТ-СИСТЕМА ІМУНОФЕРМЕНТНА ДЛЯ ВИЯВЛЕННЯ НУКЛЕОКАПСИДНОГО АНТИГЕНУ КОРОНАВІРУСУ SARS-CоV-2 У БІОЛОГІЧНОМУ МАТЕРІАЛІ ДИХАЛЬНИХ ШЛЯХІВ Download PDF

Info

Publication number
UA146425U
UA146425U UAU202100158U UAU202100158U UA146425U UA 146425 U UA146425 U UA 146425U UA U202100158 U UAU202100158 U UA U202100158U UA U202100158 U UAU202100158 U UA U202100158U UA 146425 U UA146425 U UA 146425U
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
antigen
coronavirus
test system
detection
respiratory tract
Prior art date
Application number
UAU202100158U
Other languages
English (en)
Inventor
Олександр Анатолійович Шевчук
Володимир Григорович Сердюк
Андрій Юрійович Горлов
Олена Константинівна Кисельова
Ольга Анатоліївна Голубовська
Мічаел Олег Фаворов
Original Assignee
Приватне Акціонерне Товариство "Науково-Виробнича Компанія "Діапроф-Мед"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Приватне Акціонерне Товариство "Науково-Виробнича Компанія "Діапроф-Мед" filed Critical Приватне Акціонерне Товариство "Науково-Виробнича Компанія "Діапроф-Мед"
Priority to UAU202100158U priority Critical patent/UA146425U/uk
Publication of UA146425U publication Critical patent/UA146425U/uk

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Тест-система імуноферментна для виявлення нуклеокапсидного антигену коронавірусу SARS-CoV-2 у біологічному матеріалі дихальних шляхів, що включає в себе полістироловий планшет, в лунках якого шляхом сорбції нанесено моноклональні антитіла проти нуклеокапсидного антигену коронавірусу SARS-CoV-2, кон'югат з моноклональних антитіл з біотином до антигену, що визначається з матеріалу носоглоткових мазків дихальних шляхів, хворих на COVID-19, а також кон'югат, хімічно кон'югований стрептавідином з пероксидазою хрону, субстрату, який являє собою "3,3',5,5'-Тетраметилбензидин", що містить пероксид водню, крім того тест-система має стоп-реагент, що являє собою розчин сірчаної кислоти. 1

Description

Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для якісного виявлення нуклеокапсидного антигену коронавірусу ЗАК5-СоУ-2 у біологічному матеріалі дихальних шляхів: носоглоткових мазках методом імуноферментного аналізу (ІФА).
Може використовуватися як діагностичний тест у осіб з симптомами СОМІО-19 та як скринінговий тест для виявлення інфікованих в групах ризику, безсимптомних інфікованих та контактних.
Поширення серед людей вірусу 5БАК5З-СоуУ-2 послужило причиною інфекційного захворювання під назвою СОМІО-19, почалося в Китаї в кінці 2019 року, призвело до великого глобального спалаху, що носить характер пандемії, і в даний час є серйозною проблемою громадської охорони здоров'я в усьому світі. У зв'язку з цим однією з актуальних проблем, пов'язаних з діагностикою СОМІО-19, є розробка основних принципів і підходів до створення нових тест-систем, з урахуванням особливостей молекулярної структури вірусного збудника, що визначають його антигенні і імуногенні властивості.
В основу корисної моделі поставлено задачу створити нову високочутливу діагностичну імуноферментну тест-систему для якісного виявлення на ранніх стадіях захворювання нуклеокапсидного антигену коронавірусу ЗАКЗ-Сом-2 у біологічному матеріалі дихальних шляхів.
З рівня техніки не виявлено тест-систем аналогічних запропонованій.
Поставлена задача вирішується в тест-системі імуноферментної для виявлення нуклеокапсидного антигену коронавірусу ЗАКЗ-Сом-2 у біологічному матеріалі дихальних шляхів, що включає в себе, полістироловий планшет, в лунках якого, шляхом сорбції, нанесено моноклональні антитіла проти нуклеокапсидного антигену коронавірусу БАК5-СоуУ-2, кон'югат з моноклональних антитіл з біотином до антигену, що визначається з матеріалу носоглоткових мазків дихальних шляхів, хворих на СОМІО-19, а також кон'югат, хімічно кон'югований стрептавідином з пероксидазою хрону, субстрат, який являє собою /-"3,3,5,5'-
Тетраметилбензидин", що містить пероксид водню, крім того, тест - система має стоп-реагент, що являє собою розчин сірчаної кислоти.
Використання сукупності суттєвих ознак конструкції тест-системи дозволяє досліджувати значну кількість зразків одночасно, що принципово важливо для груп високого ризику
Зо інфікування, за рахунок високих параметрів чутливості та специфічності, ідентифікувати з високим ступенем вірогідності осіб з симптомами СОМІОЮ-19 на ранніх стадіях захворювання та найбільш контагіозних пацієнтів, проводити виявлення інфікованих в групах ризику, безсимптомних інфікованих і контактних осіб. Виявлення позитивних на антиген зразків є індикатором інфекції, що дозволяє проводити протиепідемічні заходи та інші дії в системі
Громадської Охорони Здоров'я. Визначення статусу інфікованості є наріжним каменем ухвалення рішень щодо ізоляції хворого як органами охорони здоров'я, так і самими інфікованими та є ефективним інструментом по зниженню темпів розповсюдження коронавірусної інфекції СОМІО-19.
Тест-система може надійно ідентифікувати пацієнтів, які залучені до передачі інфекції, а отже, може стати важливим новим інструментом в стратегії масового тестування. При використанні тест-системи масове виявлення контагіозних носіїв вірусу мінімум в 2 рази дешевше за сучасні діагностичні аналоги. Сучасний стан інфраструктури лабораторій в Україні дозволить проводити близько мільйона тестів на день.
Імуноферментна тест-система сконструйована у форматі "сандвіч" варіанта твердофазного імуноферментного аналізу з додатковою ампліфікацією сигналу шляхом введення біотин- стрептавідинового підсилення оптичного сигналу. "Сандвіч" базується на застосуванні однакових антигенів або антитіл у складі імуносорбенту та мічених біотином або ферментом у складі кон'югату. До іммобілізованих на твердій фазі антитіл вносять розчин аналіту, що містить антиген, під час інкубації на твердій фазі утворюється комплекс Антитіло -» (Антиген) до якого, після відмивання незв'язаних компонентів, додають розчин кон'югату, яким виступають або мічені ферментом, або біотином антитіла. Внаслідок реакції виникає потрійний комплекс
Антитіло-:(Антиген)-Антитіло-Пероксидаза або комплекс з використанням біотин- стрептавідиновим підсиленням, що має вигляд Антитіло-(Антиген)-2Антитіло-Біотин -Стрептавідин-Пероксидаза, який потім візуалізується шляхом ферментативної реакції після внесення проявника. Після інкубації з кон'югатом (або кон'югатами) відмивають надлишок незв'язаних компонентів, вносять розчин субстрату, який при окисленні пероксидом водню, в присутності пероксидази хрону, утворює сполуки з інтенсивним забарвленням, що більше антигену міститься в досліджуваному зразку, тим більше кон'югованого ферменту буде в лунці та тим більшою буде інтенсивність забарвлення, яка, в свою чергу, пропорційна концентрації антигену. Результати реакції можуть бути якісними або кількісними за умови використання калібраторів та оцінюються спектрофотометрично.
Приклад 1. Визначення нуклеокапсидного антигену коронавірусу ЗАК5-Сом-2 у біологічному матеріалі дихальних шляхів хворої И.,1979 року народження.
Визначення проводять за методикою твердофазного імуноферментного аналізу. Для якісного виявлення нуклеокапсидного антигену коронавірусу ЗАКЗ-СоМ-2 вносять в лунки планшета (стрипів) по 50 мкл розчину кон'югату Ме1 - моноклональних антитіл МКА 47Н проти інших епітопів нуклеокапсидного антигену коронавірусу БЗАК5-Соу-2, мічених біотином, та по 50 мкл досліджуваних зразків від хворої, що являє собою носоглотковий мазок у транспортному середовищі, у лунки імуносорбенту з фіксованими на ньому моноклональними антитілами МКА- 148 проти нуклеокапсидного антигену коронавірусу ЗАК5-СоУ-2 та аналогічним чином контрольні зразки: 2 позитивних і З негативних. Перемішують вміст лунок легким похитуванням планшета протягом 15-20 секунд, накривають планшет плівкою та інкубують при температурі 37 "С протягом 90 хвилин, а потім промивають планшет 8 разів розчином для промивання та вносять в лунки по 100 мкл розчину кон'югату Ме2 - стрептавідину, зв'язаного з пероксидазою хрону, накривають планшет плівкою та інкубують при температурі (18-25 С) протягом 30 хвилин. Потім промивають планшет 8 разів розчином для промивання та вносять в лунки по 100 мкл ТМБ-субстрату. Накривають планшет клейкою плівкою або кришкою та інкубують при температурі (18-25 "С) в темному місці протягом 30 хвилин. Далі вносять в лунки по 100 мкл стоп-реагенту для зупинення кольорової реакції (в тій же послідовності внесення що й ТМБ- субстрат). Не пізніше ніж через 2-3 хвилини після зупинення кольорової реакції визначають значення оптичної густини (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі (450 нм відносно 620 нм).
Досліджені зразки від хворої було ідентифіковано як позитивні на наявність нуклеокапсидного антигену коронавірусу ЗАКЗ-Сом-2; з концентрацією нуклеокапсидного антигену коронавірусу БАК5-Сом-2 більше 10 пкг/мл.
Приклад 2. Визначення чутливості та специфічності пропонованої тест-системи.
Ретроспективне дослідження діагностичних характеристик імуноферментної тест-системи для виявлення антигену коронавірусу ЗАКЗ-Сом-2 у біологічному матеріалі дихальних шляхів проводили в трьох вірусологічних лабораторіях МОЗ України в різних регіонах України при
Зо тестуванні зразків від хворих на СОМІО-19 (п-1498), що надходили до лабораторій.
У пацієнтів брали мазки з носоглотки та тестували паралельно в запропонованій тест- системі методом імуноферментного аналізу (ІФА) та методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Забір зразків проводився у транспортне середовище, використовуване у ПЛР дослідженнях.
Виявлюваність ПЛР тест-систем для даної вибірки, хворих на СОМІО-19 (п-1498) склала 72,8 95, для тест-системи ІФА по виявленню антигену коронавірусу ЗАК5-СоМ-2-68,9 95.
Співпадіння результатів тест-системи з ПЛР в залежності від числа порогових циклів (С наведено у таблиці: результатів в: т/с ІФА для виявлення антигену 314/ 226 / 130 / Зб / коронавірусу БАК5- 96,6 90 84,7 90 55,5 95 31,3 96
СоУу-2
Статистична НЕМА НЕМА Різниця Різниця й РІЗНИЦІ РІЗНИЦІ значуща значуща значимість . ! . ! результатів (Те р-маїсне ів (Те р-маїше іб(Те р-маїе іб(Тпе о р-маїше ів 0.753118 0.216042 0.002003 0.003717 а) результати тестування в ПЛР приймаються як істинно позитивні, хоча згідно зі статистично достовірними даними, з різних джерел ПЛР не має 100 95 чутливості.
БЮ) результати тестування зразків зі значеннями Сі від 1 до 30 в імуноферментній тест- системі для виявлення антигену коронавірусу ЗАК5-СоУ-2 співпадають з результатами ПЛР (різниця не достовірна). с) різниця між результатами ІФА і ПЛР для зразків з СІ від 31 до 40 достовірна, однак згідно з сучасними даними пацієнти з високими значеннями Сі не є джерелом інфекції.
Проспективне дослідження діагностичних характеристик проводилося при тестуванні зразків (п-64) від симптоматичних пацієнтів (протягом 7 днів після появи симптомів), хворих на СОМІО- 19.
У пацієнтів брали мазки з носоглотки та тестували паралельно в тест-системі імуноферментній тест-системі для виявлення антигену коронавірусу БЗАК5З-Сом-2 та ПЛР. Забір зразків проводився за допомогою "Набору для відбору матеріалу: тампон дакроновий, пробірка з транспортним середовищем", виробництва ПрАТ "НВК "ДІАПРОФ-МЕД".
Класифікація результатів, в залежності від тривалості симптомів
Позитивні результати в т/с ІФА й . . й Узгодженість позитивних результатів в т/с
Дні від появи Позитивні для виявлення . . ІФА для виявлення антигену коронавірусу симптомів |результати в ПЛР антигену ЗАВО-Соу-2 (95 95 СІ) коронавірусу БАК5З-
СоУу-2 776 | 14 | 14 | 00956(784795-100935
Виявлюваність імуноферментної тест-системи для виявлення антигену коронавірусу БЗАК5-
Сом-2 відносно ПЛР
Кількість зразків коронавірусу ЗАК5-СомМ-2 о 21негативнийвПЛРзразок.у// | 77777170
Діагностична специфічність тест-системи ІФА для виявлення антигену коронавірусу БАК5Б- боу-2 при тестуванні зразків носоглоткових змивів (п-200) від безсимптомних осіб без особливого ризику зараження СОМІО-19 склала 97,56 95 (95 95 СІ: 94.4 95-99.2 9).
Використання запропонованої консрукції тест-системи дозволить проводити на ранніх стадіях виявлення інфікованих в групах ризику, безсимптомних інфікованих і контактних осіб.
Виявлення позитивних на антиген зразків є індикатором інфекції, що дозволяє проводити протиепідемічні заходи та інші дії в системі Громадської Охорони Здоров'я. Тест-система може надійно ідентифікувати пацієнтів, які залучені до передачі інфекції, а отже, може стати важливим новим інструментом в стратегії масового тестування. При використанні тест-системи масове виявлення контагіозних носіїв вірусу мінімум в 2 рази дешевше за сучасні діагностичні аналоги. Чутливість пропонованої тест-системи становила 10 пг/мл нуклеокапсидного антигену коронавірусу БАК5З-Соум-2 в біологічного матеріалу дихальних шляхів, а специфічність - 100 95.

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Зо Тест-система імуноферментна для виявлення нуклеокапсидного антигену коронавірусу БАК5З- Соу-2 у біологічному матеріалі дихальних шляхів, що включає в себе полістироловий планшет, в лунках якого шляхом сорбції нанесено моноклональні антитіла проти нуклеокапсидного антигену коронавірусу ЗАК5-СоуУ-2, кон'югат з моноклональних антитіл з біотином до антигену, що визначається з матеріалу носоглоткових мазків дихальних шляхів, хворих на СОМІО-19, а також кон'югат, хімічно кон'югований стрептавідином з пероксидазою хрону, субстрату, який являє собою "3,3,5,5'-Тетраметилбензидин", що містить пероксид водню, крім того тест-система має стоп-реагент, що являє собою розчин сірчаної кислоти.
UAU202100158U 2021-01-16 2021-01-16 ТЕСТ-СИСТЕМА ІМУНОФЕРМЕНТНА ДЛЯ ВИЯВЛЕННЯ НУКЛЕОКАПСИДНОГО АНТИГЕНУ КОРОНАВІРУСУ SARS-CоV-2 У БІОЛОГІЧНОМУ МАТЕРІАЛІ ДИХАЛЬНИХ ШЛЯХІВ UA146425U (uk)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU202100158U UA146425U (uk) 2021-01-16 2021-01-16 ТЕСТ-СИСТЕМА ІМУНОФЕРМЕНТНА ДЛЯ ВИЯВЛЕННЯ НУКЛЕОКАПСИДНОГО АНТИГЕНУ КОРОНАВІРУСУ SARS-CоV-2 У БІОЛОГІЧНОМУ МАТЕРІАЛІ ДИХАЛЬНИХ ШЛЯХІВ

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAU202100158U UA146425U (uk) 2021-01-16 2021-01-16 ТЕСТ-СИСТЕМА ІМУНОФЕРМЕНТНА ДЛЯ ВИЯВЛЕННЯ НУКЛЕОКАПСИДНОГО АНТИГЕНУ КОРОНАВІРУСУ SARS-CоV-2 У БІОЛОГІЧНОМУ МАТЕРІАЛІ ДИХАЛЬНИХ ШЛЯХІВ

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA146425U true UA146425U (uk) 2021-02-17

Family

ID=74844307

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAU202100158U UA146425U (uk) 2021-01-16 2021-01-16 ТЕСТ-СИСТЕМА ІМУНОФЕРМЕНТНА ДЛЯ ВИЯВЛЕННЯ НУКЛЕОКАПСИДНОГО АНТИГЕНУ КОРОНАВІРУСУ SARS-CоV-2 У БІОЛОГІЧНОМУ МАТЕРІАЛІ ДИХАЛЬНИХ ШЛЯХІВ

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA146425U (uk)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Nicol et al. Assessment of SARS-CoV-2 serological tests for the diagnosis of COVID-19 through the evaluation of three immunoassays: Two automated immunoassays (Euroimmun and Abbott) and one rapid lateral flow immunoassay (NG Biotech)
Schnurra et al. Comparison of the diagnostic sensitivity of SARS-CoV-2 nucleoprotein and glycoprotein-based antibody tests
Montesinos et al. Evaluation of two automated and three rapid lateral flow immunoassays for the detection of anti-SARS-CoV-2 antibodies
Wolff et al. Monitoring antibody response following SARS-CoV-2 infection: diagnostic efficiency of 4 automated immunoassays
Naot et al. An enzyme-linked immunosorbent assay for detection of IgM antibodies to Toxoplasma gondii: use for diagnosis of acute acquired toxoplasmosis
CA1268419A (en) Immunoassay for htlv-iii antigens
Latiano et al. False-positive results of SARS-CoV-2 IgM/IgG antibody tests in sera stored before the 2020 pandemic in Italy
Lim et al. Current laboratory diagnosis of coronavirus disease 2019
Hoste et al. Two serological approaches for detection of antibodies to SARS-CoV-2 in different scenarios: a screening tool and a point-of-care test
Borkowsky et al. Human immunodeficiency virus type 1 antigenemia in children
CN113321715B (zh) 新型冠状病毒抗原及其检测用途
Valdivia et al. Qualitative assessment of SARS‐CoV‐2‐specific antibody avidity by lateral flow immunochromatographic IgG/IgM antibody assay
JP2023027183A (ja) ジカウイルスイムノアッセイの方法および試薬
Tešija Kuna et al. Comparison of diagnostic accuracy for eight SARS-CoV-2 serological assays
Jung et al. Clinical performance of a semi-quantitative assay for SARS-CoV2 IgG and SARS-CoV2 IgM antibodies
Wang et al. Development of a SARS‐CoV‐2 rapid antibody detection kit and study on dynamic changes in antibodies in infected patients
Cubel et al. Diagnosis of parvovirus B19 infection by detection of specific immunoglobulin M antibody in saliva
Kishimoto et al. Assay of Chlamydia pneumoniae-specific IgM antibodies by ELISA method―reduction of non-specific reaction and resetting of serological criteria by measuring IgM antibodies―
Arinola et al. Sars-Cov-2 Infection Screening Using Two Serological Testing Methods: Serologic diagnosis of SARS-CoV-2 infection
Tian et al. Development and Head-to-Head Comparison of Two Colloidal Gold Based Serologic Lateral Flow Assays for SARS-CoV-2 Antibody Tests
UA146425U (uk) ТЕСТ-СИСТЕМА ІМУНОФЕРМЕНТНА ДЛЯ ВИЯВЛЕННЯ НУКЛЕОКАПСИДНОГО АНТИГЕНУ КОРОНАВІРУСУ SARS-CоV-2 У БІОЛОГІЧНОМУ МАТЕРІАЛІ ДИХАЛЬНИХ ШЛЯХІВ
CN102368068A (zh) 检测肺炎衣原体IgM抗体的试剂盒
Guay et al. HIV‐1 ICD p24 antigen detection in Ugandan infants: Use in early diagnosis of infection and as a marker of disease progression
EP0236605B1 (en) Method for the assay of immunoglobulin a protease
JP7489228B2 (ja) SARS-CoV-2由来ヌクレオカプシド断片および該断片を用いて抗SARS-CoV-2抗体を検出する方法およびキット