UA127679C2 - Спосіб ідентифікації пацієнта, що характеризується наявністю сприйнятливості до лікування недрібноклітинного раку легені інгібітором prmt5 - Google Patents

Спосіб ідентифікації пацієнта, що характеризується наявністю сприйнятливості до лікування недрібноклітинного раку легені інгібітором prmt5 Download PDF

Info

Publication number
UA127679C2
UA127679C2 UAA201910005A UAA201910005A UA127679C2 UA 127679 C2 UA127679 C2 UA 127679C2 UA A201910005 A UAA201910005 A UA A201910005A UA A201910005 A UAA201910005 A UA A201910005A UA 127679 C2 UA127679 C2 UA 127679C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
cancer
remt5
patient
cell
treatment
Prior art date
Application number
UAA201910005A
Other languages
English (en)
Inventor
Дірк Бремер
Дирк Бремер
Лейс Беке
Дана Сьюзанн Гаффні
Дана Сьюзанн Гаффни
Крістофер Х. Мой
Кристофер Х Мой
Original Assignee
Янссен Фармацевтика Нв
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Янссен Фармацевтика Нв filed Critical Янссен Фармацевтика Нв
Publication of UA127679C2 publication Critical patent/UA127679C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16H—HEALTHCARE INFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR THE HANDLING OR PROCESSING OF MEDICAL OR HEALTHCARE DATA
    • G16H50/00—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics
    • G16H50/30—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics for calculating health indices; for individual health risk assessment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/112—Disease subtyping, staging or classification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A90/00—Technologies having an indirect contribution to adaptation to climate change
    • Y02A90/10—Information and communication technologies [ICT] supporting adaptation to climate change, e.g. for weather forecasting or climate simulation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Data Mining & Analysis (AREA)
  • Databases & Information Systems (AREA)
  • Primary Health Care (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Даний винахід стосується способу ідентифікації пацієнта, що характеризується наявністю сприйнятливості до лікування інгібітором білкової аргінін-N-метилтрансферази 5 (PRMT5) , який передбачає оцінювання біологічного зразка від пацієнта на наявність зміни сплайсосоми, яка включає мутацію S34F в U2AF1, де наявність вказаної зміни свідчить про більш високу ймовірність того, що вказаний пацієнт буде характеризуватися наявністю сприйнятливості до лікування зазначеним інгібітором PRMT5 при лікуванні недрібноклітинного раку легені (NSCLC), ніж за відсутності вказаної зміни.

Description

Даний винахід стосується способу ідентифікації пацієнта, що характеризується наявністю сприйнятливості до лікування інгібітором білкової аргінін-"М-метилтрансферази 5 (РАМТ5) - МН» о / оси Й
Вг М -М і Ма їх но он який передбачає оцінювання біологічного зразка від пацієнта на наявність зміни сплайсосоми, яка включає мутацію 534Е в О2АНТ, де наявність вказаної зміни свідчить про більш високу ймовірність того, що вказаний пацієнт буде характеризуватися наявністю сприйнятливості до лікування зазначеним інгібітором РАМТ?»5 при лікуванні недрібноклітинного раку легені (М5СІ С), ніж за відсутності вказаної зміни.
Галузь техніки
У даному документі передбачені способи ідентифікації пацієнта, який характеризується високою ймовірністю наявності сприйнятливості до лікування інгібітором білкової аргінін-М- метилтрансферази 5, і способи його лікування.
Передумови винаходу
Білкова аргінін-М-метилтрансфераза 5 (РКМТ5), також описана як Н5бІ7, ОУрр1і, КО,
Сарзшееп або Бай, є однією з основних метилтрансфераз, що відповідають за моно- і симетричне диметилювання аргінінів. РЕМТ5 належить до родини ферментів Бут-Аг9 диметилтрансфераз. Каталітична активність пов'язана з активацією сигнального шляху онкогенного фактора в легенях (сплайсинг і передача сигналу за участю УМУМТ) й епігенетичною репресією пухлинних супресорів, а також пухлинних імуногенних хемокінів. Рівень і локалізація білка корелює з більш високим клітинним метилюванням, втратою фенотипу бронхіального епітелію і невеликим прогресуванням захворювання.
Посттрансляційне метилювання аргініну на гістонових і негістонових білках має вирішальне значення для багатьох біологічних процесів, таких як організація генома, транскрипція, диференціація, функціонування сплайсосом, передача сигналу та регуляція проходження клітинного циклу, напрямок розвитку стовбурових клітин і Т-клітин. РЕМТ5 багатоклітинних тварин утворює функціональний комплекс із метилосомним білком 50 (МЕР5БО), що також називається УмМаг77, коактиватором андрогенового рецептора р44 і Маіоі5. Як підвищений рівень, так і цитоплазматичне накопичення білка РЕМТ5-МЕРФ5БО залучені в онкогенез раку, і нещодавно був установлений їхній взаємозв'язок з несприятливим клінічним результатом. Експерименти з відновлення клітин, які направлені як на каталітичну, так і на каркасну функцію комплексу
РАМТ5-МЕРЗБО, крім всебічних ферментативних досліджень, довели онкогенний зв'язок між рівнем білка, локалізацією та ферментативною функцією. Ця кореляція перетворює РКМТ5 у важливу мішень для низькомолекулярних лікарських засобів проти раку й інших захворювань.
РЕМТ5 є членом підродини РЕМТ і! типу, який передбачає використання 5- аденозилметіоніну (ЗАМ) для одержання симетричного диметильованого аргініну на гістонових і негістонових білкових субстратах і 5-аденозилгомоцистеїну (ЗАН). Регуляція активності РКМТ5 відбувається за допомогою величезного числа різних учасників зв'язування, посттрансляційних
Зо модифікацій, тікМА і субклітинної локалізації. Метилювання гістонів Н2А і НА за АгоЗ і гістону
НЗ за Аг9д8 регулює організацію хроматину для специфічної репресії/активації експресії генних транскриптів, які залучені в диференціацію, трансформацію, проходження клітинного циклу та пригнічення росту пухлин. Крім того, опосередковане РКЕМТ5 метилювання гістону НА за Агд3 може сприяти зв'язуванню гістону із ДНК-метилтрансферазою ОММТЗА і метилюванню ДНК для тривалого сайленсинга гена.
Негістонове метилювання може відбуватися або в цитоплазмі, або в ядрі залежно від клітинної локалізації РЕМТ5. Метилювання 5т білків О1 і 03, які потрібні для збирання ядерної сплайсосоми, відбувається в цитоплазмі як частина "метилосоми", що містить РЕМТ5.
Додаткові докази того, що РЕМТ»5 залучена у сплайсинг, були одержані за допомогою умовного нокауту РЕМТ5 у нейрональних стовбурових клітинах миші. Клітини, у яких була відсутня
РЕМТУ», показали вибіркове утримання інтронів і пропускання екзонів зі слабкими 5'-донорними сайтами. Крім участі в сплайсингу, РКЕМТ5 впливає на ключові сигнальні шляхи, залучені в спрямовування розвитку клітин і гомеостаз, шляхом безпосереднього метилювання ключових вузлів передачі сигналу, таких як р53,30 ЕСЕК, 26 СКАБЕ, З РІЗК/АКТ, 64 і МІКБ.
Оскільки РЕМТ5 являє собою одну з основних 5ут-Агуд метилтрансфераз і залучена у багато клітинних процесів, підвищена експресія білка, схоже, є важливим чинником у його онкогенності. Цікаво, що трансляція РЕМТ5 у разі лімфоми із клітин мантійної зони (МС), очевидно, регулюється тікМА. Хоча клітини МС. характеризуються меншою кількістю тЕМА і більш повільною швидкістю транскрипції РЕМТ»5, ніж нормальні В-лімфоцити, рівень РЕМТ?5 і метилювання НЗК8 і Н4АКЗ значно збільшені. Повторна експресія тікМА, у разі якої зв'язується
З'СТК ділянка РЕМТ»5, знижує рівень білла РЕМТ5. Дивовижно, що антисенсова РНК РЕМТ5 була виявлена в гені РКМТ5 людини, що підтверджує гіпотезу про специфічну регуляцію трансляції, а не про високий рівень експресії тЕМА.
Хоча РЕМТ»5 приділяється значна увага як клінічно придатній мішені, поки що є дуже мало публікацій щодо селективних інгібіторів РЕМТ5. Нещодавно був описаний новий субнаномолярний сильний інгібітор РКЕМТ5 (ЕР2015666б) із протипухлинною активністю в декількох моделях ксенотрансплантатів МСІЇ як перший хімічний зонд, придатний для подальшого встановлення біології РЕМТ5 і її ролі у випадку раку (Спап-Репебге Е, Киріаві Ка,
Маїег СВ, еї аї. А зеїесіїме іппірйог ої РАМТ5 м/йй іп мімо апа іп міго роїепсу іп МОГ. тодв!в. Маї 60 Снет Віої. дип 2015;:11(6):432-437).
У документі УйО 201410П695А1 розкриті сполуки, придатні для інгібування активності
РЕМТ»5; також описані способи застосування сполук для лікування опосередкованих РЕМТ5 порушень.
У документі УУсЄ» 2014100730А1 розкриті інгібітори РЕМТ5, що містять дигідро- або тетрагідроізохінолін, та шляхи їх застосування.
У Реукога, К. єї аІ.,, АС5 Меа Спет І ей, 2014. 5: ст. 293-297 описаний синтез ряду аналогів природного продукту синефунгіну та здатність цих аналогів інгібувати ЕНМТІ і ЕНМТ2.
У документі УМО 2003070739 розкриті часткові та повні агоністи аденозинових рецепторів А1, їх одержання і їх терапевтичне застосування.
У документі УМО 2012082436 розкриті сполуки та композиції як модулятори метилтрансфераз гістонів і застосовувані для лікування захворювань, спричинених модуляцією активності метилтрансфераз гістонів.
У документі МО 2014100719 розкриті інгібітори РЕМТ?»5 та шляхи їх застосування.
У документі М/о 03074083 розкриті комбіновані терапевтичні засоби, які селективно знищують дефіцитні за метилтінзаденозинфосфорилазою клітини. Аналоги МТА описані в даному документі як антитоксичні засоби.
У Кипоа, Р.-Р. еї аІ., Вісога Мей Спет ГГ ей, 2005. 15: ст. 2829-2833 описані структура, синтез і біологічна оцінка нових субстратів 5'-дезокси-5'-метилтіднзаденозинфосфорилази (МТАР) людини.
У документі МО 2012075500 розкриті 7/-деазапуринові модулятори метилтрансферази гістонів.
У документі МИО 2014035140 розкриті сполуки та композиції для модуляції активності метилтрансферази гістонів.
У документі МО 2015200680 описані інгібітори РЕМТ?»5 та шляхи їх застосування.
У документах УМО 2017/032840 ії МО 2017/153186 також описані інгібітори РЕМТ5 та шляхи їх застосування, і вони включені в даний документ за допомогою посилання.
РАМТ»5 був пов'язаний з раком легені шляхом декількох механізмів. Підвищена експресія
РЕМТ5 і МЕРБО у разі М5СІ С високо корелює з більш низькою виживаністю. Механістичне розуміння цієї підвищеної експресії у разі аденокарциноми легенів було показано
Зо дослідженнями, в яких висока експресія РЕМТ5 у цитоплазмі безпосередньо корелювала з несприятливим прогнозом, імовірно, опосередкована епітеліально-мезенхімальним переходом і метилюванням гістонів. Крім цього, надекспресія РЕМТ5 спричиняє утворення пухлин у голих мишей. Механізм, що лежить в основі здатностей РЕМТ5 трансформувати клітини, неясний, однак передбачається, що фермент відіграє роль у клітинній смерті, проходженні клітинного циклу, сплайсингу, рості та проліферації клітин.
Доклінічні дані демонструють, що інгібування РКЕМТ5 спричиняє загибель клітин раку легені підгрупи популяції раку легені, у той час як на інші підгрупи тривалий вплив інгібітора РЕМТ5 не має ефекту. Таким чином, існує очевидна необхідність у фармакодинамічних (РО) і/або предиктивних біомаркерах для визначення або того, чи характеризується захворювання конкретного пацієнта, опосередковане РЕМТ5, високою ймовірністю відповіді на лікування інгібітором РКМТ5, або для вимірювання фармакодинамічних ефектів лікування інгібітором
РЕМТ5 у пацієнта з М5СІС, або 5СІС, або іншими захворюваннями, опосередкованими
РЕМТУ. Такі біомаркери на сьогодні невідомі.
Стислий опис винаходу
У даному документі розкриті способи ідентифікації пацієнта, який буде характеризуватися високою ймовірністю наявності сприйнятливості до лікування інгібітором білкової аргінін-М- метилтрансферази 5 (РЕМТ5).
Інгібітори РЕМТ5 можуть зв'язувати фермент РЕМТ»5, конкуруючи із природним субстратом
ЗАМ (5-аденозилі-і -метіоніном), з інгібуванням такого ферменту.
Таким чином, передбачається, що інгібітори РЕМТ5 або фармацевтичні композиції на їх основі можуть бути придатними для лікування або попередження, зокрема лікування, захворювань, таких як порушення крові, порушення обміну речовин, аутоїмунні порушення, рак, запальні захворювання, серцево-судинні захворювання, нейродегенеративні захворювання, панкреатит, поліорганна недостатність, захворювання нирок, агрегація тромбоцитів, недостатня рухливість сперматозоїдів, відторгнення трансплантата, відторгнення трансплантата тканини, ушкодження легенів тощо.
Зокрема, інгібітори РКМТ5 або фармацевтичні композиції на їх основі можуть бути придатними для лікування або попередження, зокрема лікування, захворювань, таких як алергія, астма, рак гемопоетичної системи, рак легені, рак передміхурової залози, меланома, бо порушення обміну речовин, діабет, ожиріння, порушення крові, серповидноклітинна анемія тощо.
Інгібітори РЕМТ5 або фармацевтичні композиції на їх основі можуть бути придатними для лікування або попередження, зокрема лікування, захворювань, як, наприклад, проліферативного порушення, такого як аутоїмунне захворювання, рак, доброякісне новоутворення або запальне захворювання.
Інгібітори РЕМТ5 або фармацевтичні композиції на їх основі можуть бути придатними для лікування або попередження, зокрема лікування, захворювань, таких як порушення обміну речовин, що включає діабет, ожиріння; проліферативне порушення, що включає рак, рак гемопоетичної системи, рак легені, рак передміхурової залози, меланому або рак підшлункової залози; порушення крові; гемоглобінопатія; серповидноклітинна анемія; Д-таласемія, запальне захворювання й аутоїмунне захворювання, наприклад, ревматоїдний артрит, системний червоний вовчак, синдром Шегрена, діарея, гастроезофагеальна рефлюксна хвороба тощо.
У деяких варіантах здійснення інгібування РЕМТ5 може бути придатним для лікування або попередження, зокрема лікування, наступного необмежувального переліку видів раку: раку молочної залози, раку легені, раку стравоходу, раку сечового міхура, раку гемопоетичної системи, лімфоми, медулобластоми, аденокарциноми прямої кишки, аденокарциноми товстої кишки, раку шлунково-кишкового тракту, раку підшлункової залози, раку печінки, аденокистозної карциноми, аденокарциноми легені, плоскоклітинної карциноми голови та шиї, пухлин головного мозку, гепатоцелюлярної карциноми, нирково-клітинної карциноми, меланоми, олігодендрогліоми, світлоклітинної карциноми яєчників і серозної кистозної аденоми яєчників.
Приклади порушень обміну речовин, які можна лікувати або попереджати, зокрема лікувати, включають без обмеження діабет або ожиріння.
Приклади порушень крові, які можна лікувати або попереджати, зокрема лікувати, включають без обмеження гемоглобінопатію, таку як серповидноклітинна анемія або р- таласемія.
Приклади типів раку, які можна лікувати або попереджати, зокрема лікувати, включають без обмежень невриному слухового нерва, аденокарциному, рак надниркової залози, рак анального каналу, ангіосаркому (наприклад, лімфангіосаркому, лімфангіоендотеліальну саркому, гемангіосаркому), рак апендикса, доброякісну моноклональну гамапатію, рак жовчних проток
Зо (наприклад, холангіокарциному), рак сечового міхура, рак молочної залози (наприклад, аденокарциному молочної залози, папілярну карциному молочної залози, рак молочної залози, медулярну карциному молочної залози), рак головного мозку (наприклад, менінгіому; гліому, наприклад, астроцитому, олігодендрогліому; медулобластому), рак бронхів, карциноїдну пухлину, рак шийки матки (наприклад, аденокарциному шийки матки), хордому, хоріокарциному, краніофарингіому, колоректальний рак (наприклад, рак товстої кишки, рак прямої кишки, колоректальну аденокарциному), карциному епітелію, епендимому, ендотеліосаркому (наприклад, саркому Капоші, ідіопатичну множинну геморагічну саркому), рак ендометрію (наприклад, рак матки, саркому матки), рак стравоходу (наприклад, аденокарциному стравоходу, аденокарциному Барета), саркому Юінга, рак очей (наприклад, внутрішньоочну меланому, ретинобластому), сімейну гіпереозинофілію, рак жовчного міхура, рак шлунка (наприклад, аденокарциному шлунка), гастроінтестинальну стромальну пухлину (СІ5Т), рак голови та шиї (наприклад, плоскоклітинну карциному голови та шиї), рак ротової порожнини (наприклад, плоскоклітинну карциному ротової порожнини (О5СС), рак глотки (наприклад, фарінгеальний рак, рак гортані, рак носоглотки, рак ротоглотки)), види раку гемопоетичної системи (наприклад, лейкоз, такий як гострий лімфоцитарний лейкоз (АГ) (наприклад, В- клітинний АГ, Т-клітинний АГ), гострий мієлоцитарний лейкоз (АМІ) (наприклад, В-клітинний
АМІ, Т-клітинний АМ/У), хронічний мієлоцитарний лейкоз (СМІ) (наприклад, В-клітинний СМІ., Т- клітинний СМІ) та хронічний лімфоцитарний лейкоз (СІ) (наприклад, В-клітинний СІ, Т- клітинний СІ І); лімфому, таку як лімфома Ходжкіна (НІ) (наприклад, В-клітинна НГ, Т-клітинна
НІ) та неходжкінська лімфома (МНІ) ((наприклад, В-клітинна МНІ, така як дифузна великоклітинна лімфома (0 СІ) (наприклад, дифузна В-клітинна великоклітинна лімфома (ПІ ВС)), фолікулярну лімфому, хронічний лімфолейкоз/дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (СПУ, лімфому з клітин мантійної зони (МСІ), види лімфоми з В-клітин маргінальної зони (наприклад, види лімфоми з лімфоїдної тканини слизових оболонок (МАТ), лімфому з В-клітин маргінальної зони лімфовузлів, лімфому з В-клітин маргінальної зони селезінки), первинну медіастинальну В-клітинну лімфому, лімфому Беркіта, лімфоплазматичну лімфому (тобто "макроглобулінемію Вальденстрема"), імунобластну великоклітинну лімфому, волосатоклітинний лейкоз (НС), В-лімфобластну лімфому з клітин-попередників та первинну лімфому центральної нервової системи (СМ5); а також Т-клітинну МНІ.,, таку як Т-лімфобластна бо лімфома з клітин-попередників/І -лімфобластний лейкоз з клітин-попередників, периферична Т-
клітинна лімфома (РТС!) (наприклад, Т-клітинна лімфома шкіри (СТСІ) (наприклад, грибоподібний мікоз, синдром Сезарі), ангіоммунобластомна Т-клітинна лімфома, екстранодальна Т-клітинна лімфома із природних кіллерів, Т-клітинна лімфома з ентеропатією, підшкірна Т-клітинна лімфома типу панікуліта анапластична великоклітинна лімфома); поєднання одного або декількох лейкозів/лімфом, описаних вище; і множинну мієлому (ММ)), хворобу важких ланцюгів (наприклад, хворобу альфа-ланцюгів, хворобу гамма-ланцюгів, хворобу мю-ланцюгів), гемангіобластому, запальні міофібробластичні пухлини, імуноцитарний амілоїдоз, рак нирок (наприклад, нефробластому нирки, яка також називається пухлиною
Вільмса, нирково-клітинну карциному), рак печінки (наприклад, гепатоцелюлярний рак (НСС), злоякісну гепатому), рак легені (наприклад, бронхогенний рак, недрібноклітинний рак легені (МОЇ С), плоскоклітинний рак легені (5І С), аденокарциному легені, карциному легені Льюїса, нейроендокринні пухлини легені: типовий карциноїд, атиповий карциноїд, дрібноклітинний рак легені (5СІС) і великоклітинну нейроендокринну карциному), лейоміосаркому (І М5), мастоцитоз (наприклад, системний мастоцитоз), мієлодиспластичні синдроми (МО5), мезотеліому, мієлопроліферативне порушення (МРО)) (наприклад, справжню поліцитемію (РМ), есенціальний тромбоцитоз (ЕТ), агногенну мієлоїдну метаплазію (АММ), яка також називається мієлофіброзом (МЕ), хронічний ідіопатичний мієлофіброз, хронічний мієлоцитарний лейкоз (СМІ), хронічний нейтрофільний лейкоз (СМІ), гіпереозинофільний синдром (НЕ5)), нейробластому, нейрофіброму (наприклад, нейрофіброматоз (МЕ) 1 типу або 2 типу, шваноматоз), нейроендокринний рак (наприклад, гастроентеропанкреатичну нейроендокринну пухлину (СЗЕР-МЕТ), карциноїдну пухлину), остеосаркому, рак яєчників (наприклад, цистаденокарциному, ембріональний рак яєчників, аденокарциному яєчників), папілярну аденокарциному, рак підшлункової залози (наприклад, аденокарциному підшлункової залози, внутрішньопротокове папілярно-муцинозне новоутворення (ІРММ), інсулому), рак статевого члена (наприклад, хворобу Педжета статевого члена і мошонки), пінеалому, примітивну нейроектодермальну пухлину (РМТ), рак передміхурової залози (наприклад, аденокарциному передміхурової залози), рак прямої кишки, рабдоміосаркому, рак слюнних залоз, рак шкіри (наприклад, плоскоклітинну карциному (5СС), кератоакантому (КА), меланому, базаліому (ВСС)), рак тонкої кишки (наприклад, рак апендиксу), карциному м'яких тканин (наприклад,
Зо злоякісну фіброзну гістіоцитому (МЕН), ліпосаркому, злоякісну пухлину оболонок периферійних нервів (МРМ5Т), хондросаркому, фібросаркому, міксосаркому), карциному сальних залоз, карциному потових залоз, синовіому, рак яєчка (наприклад, семіному, ембріональну карциному яєчка), рак щитовидної залози (наприклад, папілярну карциному щитовидної залози, папілярний рак щитовидної залози (РТС), медулярний рак щитовидної залози), рак уретри, рак піхви, рак вульви (наприклад, хворобу Паджета вульви).
Приклади нейродегенеративних захворювань, які можна лікувати або попереджати, зокрема лікувати, включають без обмеження захворювання рухових нейронів, прогресуючий над'ядерний параліч, кортикобазальну дегенерацію, хворобу Піка, хворобу Альцгеймера, деменцію, асоційовану зі СНіДом, хворобу Паркінсона, бічний аміотрофічний склероз, пігментний ретиніт, спінальну м'язову атрофію та мозочкову дегенерацію.
Приклади серцево-судинних захворювань, які можна лікувати або попереджати, зокрема лікувати, включають без обмеження гіпертрофію серця, рестеноз, атеросклероз і гломерулонефрит.
Приклади запальних захворювань, які можна лікувати або попереджати, зокрема лікувати, включають без обмеження запалення, асоційоване з акне, анемію (наприклад, апластичну анемію, гемолітичну аутоїмунну анемію), риніт, астму, артеріїт (наприклад, поліартеріїт, скроневий артеріїт, вузловий періартеріїт, синдром Такаясу), артрит (наприклад, кристалічний артрит, остеоартрит, псоріатичний артрит, подагричний артрит, реактивний артрит, ревматоїдний артрит та артрит Рейтера), хворобу верхніх дихальних шляхів, анкілозуючий спондиліт, амілоз, бічний аміотрофічний склероз, аутоімунні захворювання, види алергії або алергічні реакції, атеросклероз, бронхіт, бурсит, хронічний простатит, кон'юнктивіт, хворобу
Чагаса, хронічну обструктивну хворобу легені, дивертикуліт, дерматоміозит, діабет (наприклад, цукровий діабет | типу, цукровий діабет 2 типу), захворювання шкіри (наприклад, псоріаз, екзему, реакції гіперчутливості у випадку екземи, опіки, дерматит, свербіж (коросту)), ендометріоз, синдром Гієна-Барре, інфекцію, ішемічну хворобу серця, хворобу Кавасакі, гломерулонефрит, гінгівіт, гіперчутливість, головні болі (наприклад, мігрені, головні болі напруги), кишкову непрохідність (наприклад, післяопераційну кишкову непрохідність та кишкову непрохідність при сепсисі), ідіопатичну тромбоцитопенічну пурпуру, інтерстиціальний цистит (синдром подразненого сечового міхура), порушення роботи шлунково-кишкового тракту бо (наприклад, вибрані з пептичних виразок, регіонарного ентериту, дивертикуліту, шлунково-
кишкової кровотечі, еозинофільних порушень роботи шлунково-кишкового тракту (наприклад, еозинофільного езофагіту, еозинофільного гастриту, еозинофільного гастроентериту, еозинофільного коліту), гастриту, діареї, гастроезофагеальної рефлюксної хвороби (ОКО або її синонім СЕКО), запальних захворювань кишечника (ІВО) (наприклад, хвороби Крона, виразкового коліту, колагенозного коліту, лімфоцитарного коліту, ішемічного коліту, запалення у відключеній кишці, синдрому Бехчета, неуточненого коліту) і синдрому запаленого кишечника (ІВ5)), вовчак, кільцеподібну склеродермію, міастенію, ішемію міокарда, розсіяний склероз, нефротичний синдром, звичайну пухирчатку, перніціозну анемію, пептичні виразки, поліміозит, первинний біліарний цироз, нейрозапалення, асоційоване з порушеннями роботи головного мозку (наприклад, хворобу Паркінсона, хворобу Хантінгтона та хворобу Альцгеймера), простатит, хронічне запалення, асоційоване з променевим ураженням черепа, запальне захворювання органів таза, реперфузійне пошкодження, регіонарний ентерит, ревматичну атаку, системний червоний вовчак, склеродермію, склеродерму, саркоїдо3, види спондилоартропатії, синдром Шегрена, тиреоїдит, відторгнення трансплантата, тендиніт, травму або пошкодження (наприклад, обмороження, вплив хімічних подразників, токсини, рубцювання, опіки, фізичне пошкодження), васкуліт, вітиліго та гранулематоз Вегенера.
Зокрема, запальне захворювання може являти собою гостре запальне захворювання (наприклад, запалення внаслідок інфекції). Зокрема, запальне захворювання може являти собою хронічне запальне захворювання (наприклад, стани, спричинені астмою, артритом і запальним захворюванням кишечника). Інгібітори РЕМТ5 можуть також бути придатні в лікуванні запалення, асоційованого із травмою і міалгією незапального характеру. Сполуки можуть також бути придатні в лікуванні запалення, асоційованого з раком.
Приклади аутоімунних захворювань, які можна лікувати або попереджати, зокрема лікувати, включають без обмежень артрит (зокрема ревматоїдний артрит, види спондилоартропатії, подагричний артрит, дегенеративні ураження суглобів, такі як остеоартрит, системний червоний вовчак, синдром Шегрена, анкілозуючий спондиліт, недиференційований спондиліт, хворобу
Бехчета, гемолітичні аутоїмунні анемії, бічний аміотрофічний склероз, амілоз, розсіяний склероз, гострий плечекистьовий синдром, псоріатичний та хронічний артрит у дітей), астму, атеросклероз, остеопороз, бронхіт, тендиніт, бурсит, захворювання шкіри (наприклад, псоріаз,
Зо екзему, реакції гіперчутливості у випадку екземи, опіки, дерматит, свербіж (коросту)), енурез, еозинофільну хворобу, порушення роботи шлунково-кишкового тракту (наприклад, вибрані з пептичних виразок, регіонарного ентериту, дивертикуліту, шлунково-кишкової кровотечі, еозинофільних порушень роботи шлунково-кишкового тракту (наприклад, еозинофільного езофагіту, еозинофільного гастриту, еозинофільного гастроентериту, еозинофільного коліту), гастриту, діареї, гастроезофагеальної рефлюксної хвороби (ЗОКО або її синонім СЗЕКО), запального захворювання кишечника (ІВО) (наприклад, хвороби Крона, виразкового коліту, колагенозного коліту, лімфоцитарного коліту, ішемічного коліту, запалення у відключеній кишці, синдрому Бехчета, неуточненого коліту) та синдрому запаленого кишечника (ІВ5)) і порушення, які полегшуються прокінетичними засобами (наприклад, кишкова непрохідність, післяопераційна кишкова непрохідність та кишкова непрохідність у випадку сепсису; гастроезофагеальна рефлюксна хвороба (ЗОМКО або її синонім СЕКО); еозинофільний езофагіт, парез шлунка, такий як діабетичний парез шлунка; види харчової непереносимості та харчової алергії та інші функціональні порушення роботи кишечника, такі як невиразкова диспепсія (МОЮ) та екстракурдіальний біль у грудях (МОССР, у тому числі реберний хондрит)).
У конкретному варіанті здійснення інгібітор РАМТ5 може бути придатним у перепрограмуванні соматичних клітин, як, наприклад, перепрограмуванні соматичних клітин у стовбурові клітини. У конкретному варіанті здійснення інгібітор РАМТ5 може бути придатним у розробці технології на основі зародкових клітин і, таким чином, є придатними для використання в галузях репродуктивної технології та регенеративної медицини.
Інші захворювання, які можна лікувати або попереджати, зокрема лікувати, включають без обмеження види інфаркта міокарда, асоційовані з ішемічним ушкодженням, імунні захворювання, інсульт, аритмію, захворювання печінки, спричинені токсинами або пов'язані із прийманням алкоголю, чутливий до аспірину риносинусит, муковісцидоз, болі у випадку раку і захворювання крові, наприклад, хронічну анемію й апластичну анемію.
Таким чином, даний винахід передбачає спосіб ідентифікації пацієнта, який, імовірно, буде характеризуватися наявністю сприйнятливості до лікування інгібітором білкової аргінін-М- метилтрансферази 5 (РКМТ»5), що включає оцінку біологічного зразка від пацієнта на наявність будь-якого з наступного: активуючої мутації РІСЗСА, 60 зміни сплайсосоми,
посилення сигнального шляху цикліну 01 і/або зміни сигнального шляху М/МТ, де наявність будь-яких із вказаних мутації або зміни свідчить про більш високу ймовірність того, що вказаний пацієнт буде характеризуватися наявністю сприйнятливості до лікування вказаним інгібітором РЕМТУЬ, ніж за відсутності будь-яких із вказаних мутації або зміни.
У переважному варіанті здійснення зміна сплайсосоми передбачає мутацію гена, вибраного із групи, що складається з О2АЕ1, КВМ10 і КІАА1429. У конкретному варіанті здійснення ген являє собою Ш2АНТ, і мутація являє собою 534. В іншому конкретному варіанті здійснення ген являє собою ЕВМТ0, і мутація вибрана із групи, що складається з Ібобів5, І348М, 584015. У ще одному конкретному варіанті здійснення ген являє собою КІАА1429, і мутація вибрана із групи, що складається з 1837М, Е12601, 0251її, Т1333М, М15481Ї, 5397А і 0962Е. Інші зміни сплайсосоми також можуть вказувати на більш високу ймовірність того, що пацієнт буде характеризуватися наявністю сприйнятливості до лікування інгібітором РЕМТ5.
В іншому варіанті здійснення активуюча мутація РІСЗСА, вибрана із групи, що складається з
НІТ0478, РЕ106-КТОваеєї, Т1025А і Е542К. Однак інша активуюча мутація також може вказувати на більш високу ймовірність того, що пацієнт буде характеризуватися наявністю сприйнятливості до лікування інгібітором РКЕМТ5.
В іншому варіанті здійснення посилення сигнального шляху цикліну 01 являє собою посилення експресії цикліну 01, СОКА або СОКб. Однак інші види посилення сигнального шляху цикліну Ю1 також можуть указувати на більш високу ймовірність того, що пацієнт буде характеризуватися наявністю сприйнятливості до лікування інгібітором РЕМТ5.
В іншому варіанті здійснення зміна сигнального шляху УМУМТ передбачає аутокринну передачу сигналу за участю М/МТ. Переважно зміна сигнального шляху М/МТ передбачає мутацію гена АРС або СТММВ1. У конкретному варіанті здійснення ген являє собою АРС, і мутація вибрана із групи, що складається з К2130, К26730, І1177М і 027966. В іншому конкретному варіанті здійснення ген являє собою СТММВІ1, і мутація вибрана із групи, що складається з Уб670", 545Е і Т41А. Однак інші зміни сигнального шляху МУМТ також можуть вказувати на більш високу ймовірність того, що пацієнт буде характеризуватися наявністю сприйнятливості до лікування інгібітором РЕМТ5.
У конкретному варіанті здійснення мутація або зміна відповідно до даного винаходу передбачає зміну сплайсосоми, і при цьому у пацієнта наявний М5СІ С.
В іншому конкретному варіанті здійснення мутація або зміна відповідно до даного винаходу передбачає посилення сигнального шляху цикліну ЮО1 або зміну сигнального шляху М/МТ, і при цьому у пацієнта наявний МЗСІ С.
В іншому конкретному варіанті здійснення мутація або зміна відповідно до даного винаходу передбачає активуючу мутацію РІСЗСА, а в пацієнта наявний 5СІ С.
У переважному варіанті здійснення даного винаходу інгібітор РЕМТ5 являє собою сполуку 2 або сполуку 80.
У даній заявці розкритий зв'язок між сприйнятливістю та мутаціями, що активують РІЗК, у випадку 5СІ С, і змінами сплайсосоми та підвищеною регуляцією сигнального шляху УУМТ у випадку М5СІ С. Посилення сигнального шляху цикліну О1 асоційовані з відповіддю на інгібітори
РЕМТ? у випадку М5СЇІ С.
Набори та праймери для ідентифікації наявності однієї або декількох мутацій або змін, описаних вище, у біологічному зразку додатково передбачені в даному документі.
Більш легке розуміння розкритих способів, наборів і праймерів може бути досягнуте за допомогою звертання до наступного більш докладного опису, розглянутого в комбінації із доданими фігурами, які утворюють частину даного винаходу. Слід розуміти, що розкриті способи, набори та праймери не обмежуються конкретними способами, наборами та праймерами, описаними та/(або показаними в даному документі, і що термінологія, використовувана в даному документі, представлена з метою опису конкретних варіантів здійснення тільки як приклад і не припускає обмеження заявлених способів, наборів і праймерів.
Посилання на конкретне числове значення включає у себе щонайменше це конкретне значення, якщо з контексту явно не випливає інше. Якщо приводиться діапазон значень, то будь-який варіант здійснення включає у себе значення від одного конкретного значення та/або до іншого конкретного значення. Крім того, посилання на значення, вказані в діапазонах, включає у себе всі без винятку значення в межах цього діапазону. Усі діапазони є такими, що включають, і такими, що здатні до комбінацій.
Слід розуміти, що певні властивості розкритих способів, наборів і праймерів, які для наочності описані в даному документі в контексті окремих варіантів здійснення, також можуть 60 бути передбачені в комбінації в одному варіанті здійснення. З іншого боку, різні властивості розкритих способів, наборів і праймерів, які для стислості описано в контексті одного варіанта здійснення, також можуть бути передбачені окремо або в будь-якій підкомбінації.
Використовувані в даному документі форми однини включають форми множини.
Використовуваний у даному документі термін "лікування" і подібні терміни стосуються зменшення тяжкості та/"або частоти прояву симптомів раку, усунення симптомів раку та/або причини вказаних симптомів, що лежить в їхній основі, зменшення частоти або ймовірності прояву симптомів раку та/або причини, що лежить в їхній основі, та зменшення або відновлення шкоди, спричиненої безпосередньо або опосередковано раком.
Термін "біологічні зразки" стосується будь-якого зразка від пацієнта, з якого можуть бути одержані ракові клітини та виділена РНК. Придатні біологічні зразки включають у себе без обмеження кров, лімфатичну рідину, кістковий мозок, зразок солідної пухлини або будь-яку їх комбінацію.
Використовуваний у даному документі термін "передампліфікація" стосується процедури, пов'язаної із ПЛР, яка проводиться до стадії ампліфікації з метою підвищення кількості матричної СОМА для стадії ампліфікації. Стадію передампліфікації можна здійснювати, наприклад, за допомогою майстер-міксу ТадтапФ РгеАтр Мазхіег Міх (Сіїе ТесппоіІодіез/Арріїєй
Віозузіет5Ф), Мо продукту 4391128).
Використовувані в даному документі терміни "ампліфікування, " "ампліфікувати" тощо стосуються утворення багатьох ідентичних копій зразка нуклеїнової кислоти. Придатні методики ампліфікації зразка нуклеїнової кислоти включають без обмеження полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) і полімеразну ланцюгову реакцію в реальному часі (КТ-РСК). У деяких варіантах здійснення стадія ампліфікації передбачає КТ-РСВ.
Термін "секвенування наступного покоління" або "МО5" стосується будь-якого методу секвенування, який визначає нуклеотидну послідовність або окремих молекул нуклеїнових кислот (наприклад, у разі одномолекулярного секвенування), або клонально розмножених еквівалентів індивідуальних молекул нуклеїнових кислот у високошвидкісному паралельному способі (наприклад, більше 103, 104, 105 або більше молекул можна секвенувати одночасно).
Ілюстративні методики секвенування наступного покоління включають секвенування шляхом синтезу, секвенування шляхом лігування та секвенування шляхом гібридизації. Ілюстративні
Зо методи секвенування наступного покоління включають у себе масивно-паралельне розпізнавальне секвенування (Гупх ТПпегарешіс5); 454-піросеквенування (454 Ше
Зсіепсез/Коспе Оіадповіїс5); твердофазне секвенування за методом оборотних мічених барвником термінаторів (ЗоІеха/Іштіпа); технологію ЗОЇіО (Арріїей Віозувіетв); іонне напівпровідникове секвенування (оп Тоїггеп) і секвенування ДНК на наносферах (Соптріеїе
Сепотіс5). Описи певних платформ МО5 можна знайти в наступних джерелах: Зпепаниге, еї аї, "Мехі-депегайоп ОМА 5едиепсіпо, " Майшге, 2008, мої. 26, Мо. 10, 1135-1145;
Платформи МОБ
У деяких варіантах здійснення у разі високопродуктивного масивно-паралельного секвенування використовується секвенування шляхом синтезу за методом оборотних мічених барвником термінаторів. В інших варіантах здійснення секвенування виконують за допомогою секвенування шляхом лігування. У ще одних варіантах здійснення секвенування являє собою секвенування однієї молекули. Приклади методик секвенування наступного покоління включають без обмеження піросеквенування, секвенування за методом оборотних мічених барвником термінаторів, секвенування 5ОЇЇО, іонне напівпровідникове секвенування, одномолекулярне секвенування Неїїозсоре тощо.
У системі секвенування ампліконів оп Тоггепі "м (І їе Тесппоіодіе5, Карлобад, Каліфорнія) використовується проточний підхід, який виявляє зміни значення рнН, спричинені вивільненням іонів водню під час включення немодифікованих нуклеотидів при реплікації ДНК. Для застосування в даній системі спочатку одержують бібліотеку для секвенування шляхом генерації фрагментів ДНК, фланкованих за допомогою адаптерів для секвенування. У деяких варіантах здійснення ці зразки можуть бути клонально ампліфіковані на частинках шляхом емульсійної ПЛР. Частинки з ампліфікованою матрицею потім поміщають у кремнієвий напівпровідниковий чип для секвенування. Під час реплікації чип заповнюють одним нуклеотидом за іншим, і якщо нуклеотид комплементарний молекулі ДНК у певній мікролунці в чипі, то буде відбуватися його включення. Коли нуклеотид включається за допомогою полімерази в молекулу ДНК, то природно вивільняється протон, приводячи до детектованої локальної зміни значення рн. Значення рН розчину в цій лунці потім змінюється та виявляється за допомогою іонного сенсора. Якщо гомополімерні повтори присутні в послідовності матриці, то за один цикл будуть включені декілька нуклеотидів. Це приводить до відповідної кількості бо вивільненого водню та пропорційно більш високого електронного сигналу.
У системі секвенування 454ТМ 5 Б Х "м (Коспе, Німеччина) використовується методика світлової детекції у великомасштабній паралельній системі піросеквенування. У випадку піросеквенування використовується полімеризація ДНК, додаючи по одній молекулі нуклеотиду та здійснюючи детекцію і кількісне визначення числа нуклеотидів, доданих до вказаного положення, за допомогою світла, що випромінюється у разі вивільнення приєднаних пірофосфатів. Для застосування із системою 4547 фрагменти ДНК, ліговані з адаптером, фіксують на невеликих гранулах для захоплення ДНК в емульсії по типу "вода в маслі" й ампліфікують шляхом ПЛР (емульсійна ПЛР). Кожну зв'язану із ДНК гранулу поміщають у лунку на пікотитрувальний планшет, і реагенти для секвенування доставляють в усі лунки планшета.
По чотири нуклеотиди ДНК додають послідовно у встановленому порядку в усі лунки пікотитрувального планшетного пристрою під час циклу секвенування. Під час проходження потоку нуклеотидів мільйони копій ДНК, зв'язаних з кожною із гранул, секвенують паралельно.
Коли нуклеотид, комплементарний нитці матриці, додають у лунку, нуклеотид включається в існуючу нитку ДНК, генеруючи світловий сигнал, який записується ПЗЗ-камерою в пристрої.
Технологія секвенування на основі оборотних мічених барвником термінаторів: молекули
ДНК спочатку приєднують до праймерів на пластині й ампліфікують таким чином, що утворюються локальні клональні колонії. Додають чотири типи оборотних основ-термінаторів (АТ-основ), а невключені нуклеотиди вимивають. На відміну від піросеквенування ДНК може подовжуватися тільки на один нуклеотид за один раз. Фотоапарат фіксує зображення флуоресцентно мічених нуклеотидів, потім барвник разом з кінцевим 3'-блокатором хімічно видаляють із ДНК, забезпечуючи можливість здійснення наступного циклу.
У випадку одномолекулярного секвенування Неїїсо5 використовуються фрагменти ДНК із доданими поліаденільними хвостовими адаптерами, які прикріплюються до поверхні проточної комірки. Під час кожного циклу додаються ДНК-полімераза й один вид молекул флуоресцентно міченого нуклеотиду, приводячи до залежного від матриці подовження імобілізованих на поверхні дуплексів праймер-матриця. Зчитування виконували за допомогою секвенатора
Неїїозсоре. Після одержання зображень, що покривають повний масив, хімічне відщеплення та вивільнення флуоресцентної мітки забезпечують наступний цикл подовження та візуалізації.
Секвенування шляхом синтезу (585), подібно "застарілому" електрофоретичному
Зо секвенуванню з використанням мічених барвником термінаторів, грунтується на включенні нуклеотидів за допомогою ДНК-полімерази для визначення послідовності основ. Бібліотеку ДНК із прикріпленими адаптерами денатурують на окремі нитки та прищеплюють до проточної комірки з наступною містковою ампліфікацією з утворенням високощільного масиву плям на скляному чипі. У методах на основі оборотних термінаторів використовують оборотні варіанти мічених барвником термінаторів, здійснюючи додавання по одному нуклеотиду з виявленням флуоресценції в кожному положенні в результаті повторюваного видалення блокувальної групи із забезпеченням полімеризації приєднанням іншого нуклеотиду. Сигнал, що свідчить про включення нуклеотиду, може варіювати залежно від усіх використовуваних флуоресцентно мічених нуклеотидів, опосередкованих фосфатом світлових реакцій і детекції іонів водню.
Приклади платформ 5В5 включають у себе Шитіпа СА і Нізед 2000. У системі персонального секвенування Мізеде (Шитіпа, Іпс.) також використовується секвенування шляхом синтезу за допомогою хімії оборотних термінаторів.
На відміну від методу секвенування шляхом синтезу, у методі секвенування шляхом лігування використовується ДНК-лігаза для визначення цільової послідовності. Цей метод секвенування грунтується на ферментативному лігуванні олігонуклеотидів, які розташовуються поруч у результаті локальної комплементарності на нитці матричної ДНК. У даній технології використовується поділ усіх можливих олігонуклеотидів певної довжини, мічених відповідно до положення, що підлягає секвенуванню. Олігонуклеотиди відпалюють і лігують, а переважне лігування за допомогою ДНК-лігази у випадку послідовностей, які збігаються, приводить до утворення сигналу колірного простору динуклеотиду, що кодується, в цьому положенні (шляхом вивільнення флуоресцентно міченого зонда, який відповідає відомому нуклеотиду у відомому положенні в олігонуклеотиді). Даний метод переважно використовується секвенаторами
ЗОЇО7М від Ше Тесппоіодіеєх. Перед секвенуванням ДНК ампліфікують за допомогою емульсійної ПЛР. Одержані в результаті гранули, кожна з яких містить тільки копії однієї і тієї самої молекули ДНК, поміщають на твердий плоский субстрат.
Секвенування 5МАКТ"М грунтується на секвенуванні на основі підходу з використанням синтезу. ДНК синтезується в лункоподібних контейнерах з використанням хвилеводів нульової моди (2МММ), при цьому засоби захоплення розташовані на дні лунки. Секвенування здійснюють за допомогою немодифікованої полімерази (прикріпленої до дна 2МУМ) і флуоресцентно мічених бо нуклеотидів, що вільно рухаються в розчині. Лунки конструюють таким чином, щоб виявляти тільки флуоресценцію, що відбувається на дні лунки. Флуоресцентну мітку відокремлюють від нуклеотиду під час його включення в нитку ДНК, залишаючи немодифіковану нитку ДНК.
Праймери для ампліфікації мутантних варіантів
Фахівцеві в даній галузі відомо, що для ампліфікації нуклеїнової кислоти потрібні праймери, які є комплементарними та зв'язуються з 5- і 3З'-ділянками нитки нуклеїнової кислоти, які фланкують ділянку, що підлягає ампліфікації. Використовуваний у даному документі термін "пара праймерів" стосується прямого та зворотного праймерів, використовуваних на стадії ампліфікації.
Фахівець у даній галузі може легко ідентифікувати придатні праймери для ампліфікації та виявлення певних мутацій, описаних вище, за допомогою відомих способів.
Геноміка й аналіз
Функціональна геноміка й аналіз транскрипції можуть бути використані для аналізу посилення сигнальних шляхів і генів за допомогою стандартних методик і протоколів.
Інгібітори РЕМТ?5 для застосування в розкритих способах
У даному документі передбачені придатні інгібітори РЕМТ5 для застосування в розкритих способах. У деяких варіантах здійснення у випадку, якщо одна або декілька мутацій або посилень, у тому числі активуюча мутація РІСЗСА, зміна сплайсосоми, посилення сигнального шляху цикліну Ю1 і/або зміна сигнального шляху М/МТ, присутні в зразку, пацієнта можна лікувати інгібітором РКМТ»5, розкритим у документі РСТ/ЕР2016/070097 (включеному в даний документ за допомогою посилання), у тому числі будь-якою його таутомерною або стереохімічно ізомерною формою, а також його М-оксидом, його фармацевтично прийнятними солями або його сольватом (придатні Е-групи також розкриті в РСТ/ЕР2016/070097). У деяких аспектах, наприклад, пацієнта можна лікувати сполукою 2 або сполукою 80, у тому числі будь- якою їхньою таутомерною або стереохімічно ізомерною формою, а також їх М-оксидом, їх фармацевтично прийнятними солями або їх сольватом. У деяких аспектах фармацевтично прийнятна сіль являє собою сіль НОСІ.
У деяких варіантах здійснення пацієнта можна лікувати інгібітором РЕМТ»5, якщо одна або декілька мутацій або посилень, у тому числі активуюча мутація РІСЗСА, зміна сплайсосоми, посилення сигнального шляху цикліну О1 і/або зміна сигнального шляху М/МТ присутні в зразку,
Зо при цьому інгібітор РКМТ5 являє собою антитіло до РЕМТ5.
Солі можуть бути синтезовані з вихідної сполуки, яка містить основний або кислотний фрагмент, традиційними хімічними способами, такими як способи, описані в Рпагтасеціїсаї! зав: Ргорепієв, ЗеїІесійоп, апа О5е, Р. Неїпгісн ані (Едіог), Сатійе Сі. Мептийй (Еайог), ІЗВМ: 3-90639-026-8, Нагасомег, 388 раде5, Ацйдибзі 2002, яке включено в даний документ за допомогою посилання. Як правило, такі солі можуть бути одержані шляхом реагування форм вільної кислоти або основи цих сполук із придатними основою або кислотою у воді, або в органічному розчиннику, або в суміші і того, й іншого; причому, як правило, використовують неводні середовища, такі як етер, етилацетат, етанол, ізопропанол або ацетонітрил. Інгібітори
РЕМТ?»5 для застосування в розкритих способах можуть існувати у вигляді моно- або дисолей залежно від рКа кислоти, з використанням якої утворена сіль.
Солі приєднання кислоти можуть бути утворені з використанням багатьох кислот, що є як неорганічними, так і органічними. Приклади солей приєднання кислоти включають солі, утворені за допомогою кислоти, що включає без обмеження оцтову, 2,2-дихлороцтову, адипінову, альгінову, аскорбінову (наприклад, І-аскорбінову), І -аспарагінову, бензолсульфонову, бензойну, 4-ацетамідобензойну, бутанову, (ї)-камфорну, камфорсульфонову, (ж)-(15)- камфор- 10-сульфонову, капринову, капронову, каприлову, коричну, лимонну, цикламову, додецилсірчану, етан-1,2-дисульфонову, етансульфонову, 2-гідроксиетансульфонову, мурашину, фумарову, галактарову, гентизинову, глюкогептонову, Ю-глюконову, глюкуронову (наприклад, Ю-глюкуронову), глутамінову (наприклад, І-глутамінову), «-оксоглутарову, гліколеву, гіпурову, бромистоводневу, хлористоводневу, йодистоводневу, ізетіонову, молочну (наприклад, (ж)-Ї -молочну, (ж)-ОЇ -молочну), лактобіонову, малеїнову, яблучну, (-)-І -яблучну, малонову, (х)-ОЇ -мигдальну, метансульфонову, нафталінсульфонову (наприклад, нафталін-2- сульфонову), нафталін-1,5-дисульфонову, 1-гідрокси-2-нафтойну, нікотинову, азотну, олеїнову, оротову, щавлеву, пальмітинову, памоєву, фосфорну, пропіонову, І -піроглутамінову, піровиноградну, саліцилову, 4-аміносаліцилову, себацинову, стеаринову, бурштинову, сірчисту, дубильну, (ї)-І-винну, тіоціанову, толуолсульфонову (наприклад, п-толуолсульфонову), ундециленову та валеріанову кислоти, а також ацильовані амінокислоти та катіонообмінні смоли.
Одна конкретна група солей складається із солей, утворених з оцтової, хлористоводневої, 60 йодистоводневої, фосфорної, азотної, сірчаної, лимонної, молочної, бурштинової, малеїнової,
яблучної, ізетіонової, фумарової, бензолсульфонової, толуолсульфонової, метансульфонової (мезилату), етансульфонової, нафталінсульфонової, валеріанової, оцтової, пропанової, бутанової, малонової, глюкуронової і лактобіонової кислот. Інша група солей приєднання кислоти включає солі, утворені з оцтової, адипінової, аскорбінової, аспарагінової, лимонної, Оі - молочної, фумарової, глюконової, глюкуронової, гіпурової, хлористоводневої, глутамінової, ОІ - яблучної, метансульфонової, себацинової, стеаринової, бурштинової та винної кислот.
Якщо сполука є аніонною або має функціональну групу, яка може бути аніонною (наприклад, -СООН може являти собою -200У), то можна утворювати сіль із придатним катіоном. Приклади придатних неорганічних катіонів включають без обмеження іони лужних металів, такі як Ма: і КУ, катіони лужноземельних металів, такі як Сає: і Му, й інші катіони, такі як А. Приклади придатних органічних катіонів включають без обмеження іон амонію (тобто МНа) і іони заміщеного амонію (наприклад, МНзА», МНеВ2", МНАз", МАг).
Прикладами деяких придатних іонів заміщеного амонію є іони, одержані з етиламіну, діетиламіну, дициклогексиламіну, триетиламіну, бутиламіну, етилендіаміну, етаноламіну, дієтаноламіну, піперазину, бензиламіну, фенілбензиламіну, холіну, меглуміну та трометаміну, а також амінокислот, таких як лізин і аргінін. Прикладом поширеного іона четвертинного амонію є
М(СНз)аг.
Якщо сполуки містять функціональну аміногрупу, то вони можуть утворювати солі четвертинного амонію, наприклад, шляхом реакції з алкілувальним засобом згідно зі способами, добре відомими кваліфікованому фахівцеві. Такі сполуки четвертинного амонію знаходяться у межах обсягу розкритих сполук. Сполуки, що містять функціональну аміногрупу, також можуть утворювати М-оксиди. Посилання в даному документі на сполуку, яка містить функціональну аміногрупу, також передбачає М-оксид. Якщо сполука містить декілька функціональних аміногруп, то один або декілька атомів азоту можуть бути окиснені з утворенням М-оксиду.
Конкретними прикладами М-оксидів є М-оксиди третинного аміну або атома азоту в азотвмісному гетероциклі. М-оксиди можуть бути утворені шляхом обробки відповідного аміну окиснювачем, таким як пероксид водню або перкислота (наприклад, пероксикарбонова кислота), див., наприклад, |(Аймапсей Огдапіс Спетівігу, Бу депу Магсп, 4" Еайоп, УМїеу
Іп'ег5сіепсе, радеві). Більш конкретно, М-оксиди можуть бути одержані за допомогою процедури
Зо з С. МУ. Оєаду (уп. Сотт. (1977), 7, 509-514), під час якої аміносполуку піддають реакції з м- хлорпероксибензойною кислотою (МСРВА), наприклад, в інертному розчиннику, такому як дихлорметан.
Використовуваний у даному документі термін "сольват" означає фізичний зв'язок сполуки з однією або декількома молекулами розчинника. Цей фізичний зв'язок передбачає різний ступінь іонного та ковалентного зв'язування, у тому числі водневий зв'язок. У деяких випадках сольват буде здатний до виділення, наприклад, коли одна або декілька молекул розчинника включені в кристалічну гратку кристалічної твердої речовини. Передбачається, що термін "сольват" охоплює як рідкофазові, так і сольвати, що здатні до виділення. Необмежувальні приклади придатних сольватів включають розкриті сполуки в комбінації з водою, ізопропанолом, етанолом, метанолом, ОМ5О, етилацетатом, оцтовою кислотою або етаноламіном тощо.
Сполука може виявляти свої біологічні ефекти, перебуваючи в розчині.
Сольвати добре відомі у фармацевтичній хімії. Вони можуть бути важливими для способів одержання речовини (наприклад, стосовно її очищення), зберігання речовини (наприклад, її стабільності) і зручності здійснення маніпуляцій з речовиною, і найчастіше їх утворюють як частину стадій виділення або очищення під час хімічного синтезу. Фахівець у даній галузі зможе визначити за допомогою стандартних і довго використовуваних методик, чи утворився гідрат або інший сольват за умов виділення або умов очищення, використовуваних для одержання даної сполуки. Приклади таких методик включають у себе термогравіметричний аналіз (ТА), диференціальну сканувальну калориметрію (05Ф:Х), рентгенівську кристалографію (наприклад, монокристалічну рентгенівську кристалографію або рентгенівську порошкову дифрактометрію) і
ЯМР твердого тіла (55-ММЕ, також відомий як ЯМР із обертанням зразка під магічним кутом або МА5Б-ММКЕК). Такі методики є такою ж частиною стандартного аналітичного інструментарію кваліфікованого хіміка, як ії ЯМР, ІК, НРІ С їі М5. Як альтернатива, кваліфікований фахівець зможе за необхідності утворити сольват з використанням умов кристалізації, які передбачають деяку кількість розчинника, необхідну для конкретного сольвату. Потім стандартні способи, описані вище, можуть бути використані для встановлення утворення сольватів. Також охоплюються будь-які комплекси (наприклад, комплекси включення або клатрати зі сполуками, такими як циклодекстрини, або комплекси з металами) інгібітора РКЕМТ5.
Крім того, сполука може мати одну або декілька поліморфних (кристалічних) або аморфних бо форм.
Сполуки включають сполуки з одним або декількома ізотопними заміщеннями, і посилання на конкретний елемент включає у свій обсяг усі ізотопи даного елемента. Наприклад, посилання на водень включає у свій обсяг "Н, 2Н (0) і ЗН (Т). Подібним чином, посилання на вуглець і кисень включають у свій обсяг 120, 196 1 7196 ї 1560 ї 180 відповідно. Їзотопи можуть бути радіоактивними або нерадіоактивними. В одному варіанті здійснення сполуки не містять радіоактивних ізотопів. Такі сполуки є переважними для терапевтичного застосування. В іншому варіанті здійснення, однак, сполука може містити один або декілька радіоіїзотопів. Сполуки, що містять такі радіоїзотопи, можуть бути застосовні в діагностичному контексті.
У деяких варіантах здійснення пацієнта лікують інгібітором РЕМТ»5, якщо в зразку присутній один або декілька мутантних варіантів О2АНЕ1, при цьому інгібітор РЕМТ5 являє собою сполуку 2 або сполуку 80, або їх фармацевтично прийнятну сіль або їх сольват.
Способи лікування раку в пацієнта
У даному документі розкриті способи лікування раку в пацієнта, що передбачають: оцінку біологічного зразка від пацієнта на наявність однієї або декількох мутацій або посилень, у тому числі активуючої мутації РІСЗСА, зміни сплайсосоми, посилення сигнального шляху цикліну 01 іабо зміни сигнального шляху М/МТ; і лікування пацієнта інгібітором РЕМТ5, якщо одна або декілька мутацій або посилень, у тому числі активуюча мутація РІСЗСА, зміна сплайсосоми, посилення сигнального шляху цикліну О1 і/або зміна сигнального шляху М/МТ присутні в зразку.
Розкриті способи можуть бути використані для лікування ряду типів раку, у тому числі без обмеження раку сечового міхура, метастатичного раку сечового міхура, раку яєчників, раку голови та шиї, раку стравоходу, недрібноклітинної аденокарциноми легенів, недрібноклітинної плоскоклітинної карциноми легенів, раку передміхурової залози, раку легені, раку шлунково- кишкового тракту, уротеліальної карциноми, дрібноклітинного раку легенів, раку молочної залози, раку ендометрію, холангіокарциноми, гліобластоми, гліом, карциноми товстої кишки, сарком, солідних пухлин плоскоклітинного походження та множинної мієломи.
У деяких варіантах здійснення стадія оцінки передбачає: виділення РНК із біологічного зразка; синтез СОМА на основі виділеної РНК; передампліфікацію СсОМА і ампліфікацію передампліфікованої СОМА за допомогою пари праймерів, які зв'язують й ампліфікують одну або декілька мутацій, у тому числі активуючу мутацію РІСЗСА, зміну сплайсосоми, посилення
Зо сигнального шляху цикліну 01 і/або зміну сигнального шляху УУМТ.
Виділення РНК із біологічного зразка можна здійснювати за допомогою ряду процедур, відомих фахівцеві в даній галузі. В одному варіанті здійснення РНК можна виділити з біологічного зразка за допомогою набору АПРгер ОМА/КМА ЕБЕРЕ від Оіадеп (Ме продукту 80234).
Синтез СОМА на основі виділеної РНК можна здійснювати за допомогою ряду процедур, відомих фахівцеві в даній галузі. В одному варіанті здійснення СОМА можна синтезувати на основі виділеної РНК за допомогою високопродуктивного набору на основі зворотної транскриптази СОМА з інгібітором РНКази від АВІ (Мо продукту 4374966).
Передампліфікацію СОМА можна здійснювати за допомогою ряду процедур, відомих фахівцеві в даній галузі. Процедури ампліфікації добре відомі в даній області техніки. В одному варіанті здійснення СОМА можна передампліфікувати за допомогою майстер-міксу Тадтап?
РгеАтр Маєвіег Міх (СіТе ТесппоіІодіез/Арріїеа Віозузіет5Ф), Мо продукту 4391128.
Придатні інгібітори РКЕКМТ5 для застосування в способах лікування включають описані раніше в даному документі.
Способи ідентифікації пацієнта, що має рак, який буде характеризуватися наявністю сприйнятливості до лікування інгібітором білкової аргінін-М-метилтрансферази 5 (РЕМТ5)
Набори для ідентифікації наявності мутантних або змінених генів
Додатково розкриті набори для ідентифікації наявності однієї або декількох мутацій або посилень, у тому числі активуючої мутації РІСЗСА, зміни сплайсосоми, посилення сигнального шляху 01 і/або зміни сигнального шляху МУМТ у біологічному зразку, що містять: пари праймерів, що мають послідовності їх комбінації; та інструкції для здійснення аналізу для виявлення однієї або декількох мутацій або посилень, у тому числі активуючої мутації РІСЗСА, зміни сплайсосоми, посилення сигнального шляху цикліну 01 і/або зміни сигнального шляху
ММТ.
Стислий опис, а також нижченаведений докладний опис будуть більш зрозумілі у разі їх розгляду в комбінації із доданими графічними матеріалами. З метою ілюстрації розкритих способів, наборів і праймерів у графічних матеріалах показані ілюстративні варіанти здійснення способів, наборів і праймерів; однак способи, набори та праймери не обмежені конкретними розкритими варіантами здійснення. 60 Докладний опис ілюстративних варіантів здійснення
Інгібітори РКМТ5, що являють собою сполуки 2 і 80, використовувані в прикладах, також представлені як приклад у документі РСТ/ЕР2016/070097.
Далі в даному документі термін "кт", "к. т." або "КТ" означає кімнатну температуру; "Ме" означає метил; "МеонН" означає метанол; "ЕС означає етил; "ЕН" означає етанол; "Ман" означає гідрид натрію; "СЕАЮ" означає діеєтилазодикарбоксилат; "НМРТ" означає триамід гексаметилфосфору; "Вос20" означає трет-бутоксикарбонілангідрид; "ВШОМО" означає трет- бутилнітрит; "То5ОН" означає 4-метилбензолсульфонову кислоту; "То5СіІ" означає 4- метилбензолсульфонілхлорид (також п-толуолсульфонілхлорид); "СМР" означає ціанометилентрибутилфосфоран; "ОВАЮ" означає ди-трет-бутилазодикарбоксилат; "ГАН" означає алюмогідрид літію; "Мавн(АсО)3" або "Мавн(ОАс)3" означає триацетоксиборгідрид натрію; "ЕАс" означає етилацетат; "ТЕА" або "ЕЇЗМ" означає триетиламін; "ОСМ" означає дихлорметан; "д.5." означає скільки потрібно; "Пром. спол." означає проміжну сполуку; "Месм" або "АСМ" означає ацетонітрил; "ОМЕ" означає М, М-диметилформамід; "ОМА" означає М, М- диметилацетамід; "ОМЕ-ОМА" означає М, М-диметилформаміду диметилацеталь; "Ра(аррОсСІ2" означає (|1,1-бісбідифенілфосфіно)фероцені|дихлорпаладій(І); "ТНЕ" означає тетрагідрофуран; "с34н2гвгера2.Сі2Ра" означає (|1,1-бісідифенілфосфіно)фероценідихлорпаладійії); "і-РГОН" або "ІРГОН" означає 2-пропанол; "С" означає рідинну хроматографію; "/СМ5" означає рідинну хроматографію/мас-спектрометрію; "НРГС" означає високоефективну рідинну хроматографію; "пром. спол." означає проміжну сполуку; "ргер-НРІ С" означає препаративну високоефективну рідинну хроматографію; "т-СРВА" означає мета-хлорпероксибензойну кислоту; "ТРА" означає трифтороцтову кислоту; "т. пл." означає температуру плавлення; "КР" означає обернену фазу; "хв." означає хвилину(хвилини); "год." означає годину(години); "РЕ" означає петролейний етер; "об./о06." означає співвідношення об'єму до об'єму; "СеШеФф" означає діатомову землю; "МО" означає диметилсульфоксид; "ЗЕС" означає надкритичну флюїдну хроматографію; "СІРЕ" означає дііззопропіловий етер; "Зрр"" або "ОРРЕ" означає 1,1"-бісбідифенілфосфіно)фероцен; "БІРЕА" або "рІЕА" означає М, М-діїзопропілетиламін; "РРИЗ3" означає трифенілфосфін; "Е2гО" означає діетиловий етер; "Ра/С" означає паладій на вугіллі; "РУС" означає платину на вугіллі; "РкКОН)2/С" означає гідроксид паладію на вугіллі; "СРМЕ" означає циклопентилметиловий етер; "Раг(ара)з означає трис(дибензиліденацетон)дипаладій; "ВІАО" означає
Зо дізопропілазодикарбоксилат; "ТМ5СЕЗ" означає триметил(трифторметил)силан; "ТВА" означає тетрабутиламонію фторид; "фунт/кв. дюйм" означає фунт-сила на квадратний дюйм; "БаЯМСІ" означає тетраетиламонію хлорид; "екв." означає еквівалент(еквіваленти); "РЯа(ОАс)2" означає ацетат паладію(!); "АсОН" означає оцтову кислоту; "ОМАР" означає «4- (диметиламіно)піридин; "ВИК", "ВиОкК" або "КОЇВи означає трет-бутоксид калію; "перйодинан
Десса-Мартіна" означає 1,1,1-триацетокси-1,1-дигідро-1,2-бензйодоксол-З(1Н)-он; ""ВОМ5СЇІ" означає трет-бутилдиметилсилілхлорид; "РРИЗ-полімер" або "РРИЗ-рої" означає полімер- зв'язаний трифенілфосфін; "РИЗРСОНЗВІ" означає метилтрифенілфосфонію бромід; "Вп" означає бензил; "В;" означає бензоїл; "р-ТЗА" означає 4-метилбензолсульфонову кислоту; "ВЕЗ.ЕЇ2О" означає комплекс трифториду бору-етилового етеру; "9-ВВМ" означає 9- борабіциклої|3.3.1|Інонан; "ра-118" означає дихлорі1,1"-біс(ди-трет- бутилфосфіно)фероцен|паладій(Ії); та "ТС" означає тонкошарову хроматографію; "ргер-ТІ С" означає препаративну ТІ С; "р-МеСеНаЗОзН.НгО" означає пара-толуолсульфонової кислоти гідрат; "РМВ" означає пара- метоксибензил; "КОАс" означає ацетат калію; "Р"Т5А" означає пара-толуолсульфонову кислоту; "МТВЕ" означає метил-трет-бутиловий етер; "Ккп(асасхует)а2г" означає ацетилацетонатобіс(етилен)родій(І); "(5)-МопоРпо5" означає (5)-М, М-диметилдинафтоїЇ2,1- ри2-АЦ1,3,2|діоксафосфепін-4-амін; "1120" означає ангідрид трифлатної кислоти; "Ме!" означає метилйодид; "Ме2МН" означає диметиламін; "МегМН.НС!" означає диметиламін- хлористоводневу кислоту; "Ме«МСІ" означає тетраметиламонію хлорид; "МеОМа" означає метоксид натрію; "Т5" означає тозил; "М5СіІ" означає мезилхлорид; "ОІВАН" означає діізобутилалюмінію гідрид; "ТВОМ5" означає трет-бутилдиметилсиліл; "Ра(дррОСІ2.СН2СІ2" означає П,1- бісідифенілфосфіно)фероценідихлорпаладій(І), комплекс з дихлорметаном; "РРА" означає поліфосфорну кислоту;"МНеВп" означає бензиламін; "РЯ(РРАз)2Сіг" означає дихлорбіс(трифенілфосфін)паладійцІІ).
Для проміжних сполук, які використовували на наступній стадії реакції у вигляді неочищеної або частково очищеної проміжної сполуки, в описаних нижче протоколах реакцій вказані розрахункові виражені у молях кількості (в деяких випадках вказані за допомогою «), або, альтернативно, вказані теоретичні виражені у молях кількості. бо Одержання проміжної сполуки 1
М уві д- 7 Ак-( ох . К І
М -со х и у но уко зало но о ми о п : З. ам но он То8ОН,ацетон, ОС б, щи їх
Проміжна сполука
До суміші б-хлор-7-деазапуринбета-д-рибозиду (25,0 г, 87,5 ммоль) в ацетоні (330 мл) однією порцією додавали 2,2-диметоксипропан (18,2 г, 175 ммоль) і 4-метилбензолсульфонову кислоту (ТОо5ОН) (1,51 г, 8,75 ммоль) за 25 "С в атмосфері М2. Суміш перемішували за 60 С протягом 2 годин. Суміш охолоджували до 25 "С. Реакційну суміш гасили шляхом повільного додавання насиченого МанНСОз (100 мл) і потім екстрагували етилацетатом (125 мл х 5).
Об'єднану органічну фазу промивали насиченим сольовим розчином (120 мл), висушували за допомогою безводного МаЗО»4, фільтрували та концентрували у вакуумі. Залишок очищали за допомогою хроматографії на силікагелі (градієнтне елюювання: ОСМ/етилацетат від 1:0 до 2:1) з одержанням неочищеної проміжної сполуки 1 (38,0 г) у вигляді світло-жовтої смоли.
Одержання проміжної сполуки 59 - СІ / о о М Й Х
Вг М -к |. Ме
З
Діізопропілазодикарбоксилат (0,221 мл, 1,125 ммоль) додавали по краплях у перемішану суспензію проміжної сполуки 1 (0,27 г, 0,80 ммоль), З-бромхінолін-7-олу (0,18 г, 0,80 ммоль) і трифенілфосфінової смоли (0,375 г, З ммоль/г, 1,125 ммоль) в ТНЕ (8 мл) за кімнатної температури. Після додавання реакційну суміш перемішували протягом 18 годин. Реакційну суміш фільтрували через подушку з ОісаійеФ. Залишок промивали метанолом. Розчинники з фільтрату випарювали. Залишок використовували як такий на наступній стадії.
Одержання проміжної сполуки 105 . ух Ген не у тд ки Соч
Р, во тю и
Він Й у М. . чле я Мах чер і Ми 7 в. МЕ; в МеОН, до й ра 1302С, 2 год, ра
Проміжна сполука 59 Проміжна сполука 705
Неочищену проміжну сполуку 59 (д.5., теоретично 0,83 ммоль) розчиняли в 7 М МНЗ в Меон (20 мл, 7 М, 140 ммоль). Одержаний розчин перемішували та нагрівали за 130 "С за допомогою мікрохвильового випромінювання протягом 2 годин. Розчинники випарювали. Залишок розчиняли в дихлорметані й очищали на колонці з 5іОг, типу Сгасе Кемеїегіз КС, 12 г, 5і 40, на системі очищення Сгасе Кемеїегіз Х2, використовуючи дихлорметан і метанол як елюенти із градієнтом, починаючи зі 100 95 ОСМ для 20 об'ємів колонки до 20 95 МеОнН і 80 95 ОСМ для 20 об'ємів колонки. Фракції, що містять продукт, об'єднували і випарювали розчинники з одержанням неочищеної проміжної сполуки 105 (175 мг), яку застосовували як таку на наступній стадії реакції.
Зо Одержання сполуки 2 я ту - МА т Мне (В о М ДЕ ей 5-7 чі й ща - ооов-й дор У Мои і їх
Оля яння г о 4 н. НС ху 1.4-піокевні нон а Н.Е У Те ДНеВНІ, ак МеонН. кот. 18 год. Снелука 2
Промінена сполука 195
Додавали 4 М НСІ у діоксані (0,7 мл, 2,9 ммоль) в перемішаний розчин проміжної сполуки 105 (175,1 г, неочищена, х 0,29 ммоль) в МеонН (10 мл) за кімнатної температури. Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 18 годин. Реакцію гасили додаванням 1,5 мл 7 н. розчину МНз в Меон. Розчинники випарювали. Залишок розчиняли в ОСМ. Осад відфільтровували. Фільтрат очищали на колонці з 5іО», типу сгасе Кемеїегіз 5КС, 12 г, 5і 40, на системі для очищення Аптеп рої І ОКітасе, використовуючи ЮОСМ і Меон як елюенти у градієнті, починаючи з 100 95 ЮОСМ їі закінчуючи 40 95 Меон і 60 95 ОСМ. Фракції, що містять продукт, об'єднували і розчинники випарювали з одержанням 24,5 мг сполуки 2.
Одержання проміжної сполуки 10 но р - у рі
У у і
Божа в. й?
КК
Проміжна сполука 18
Стадія а) и жи МН 1) цей дн НС
БЮ но он рккл -О пропало ПО СИ, тож М ОВ , ОЗ реал о Оу хв СС, тодиня у но С у прое я дн Ми" с-ї зм 23 ІМ НИ, 50, но он
М 2 години Проміжна сполука З
До суміші 4,6-дихлор-5-(2,2-діетоксиетил)піримідину (14,0 г, 52,8 ммоль) і гідрохлориду (1К, 25, ЗВ, 5Н8)-3-аміно-5-(гідроксиметил)циклопентан-і1,2-діолу (10,7 г, 58,1 ммоль) у пропан-2- олі/НгО (208 мл, 7:1) однією порцією додавали ЕЇЗМ (13,4 г, 132 ммоль) за 25 "С в атмосфері
М2. Суміш перемішували за 90 "С протягом 23 годин. Суміш охолоджували до 50 "С і повільно додавали 4 М НСЇІ (24 мл, 106 ммоль). Залишок потім перемішували за 50 "С протягом 2 годин.
Реакційну суміш охолоджували до 25"С і повільно додавали МансСОз (14 г, 100 ммоль).
Додавали етилацетат (230 мл) з наступним додаванням напівнасиченого розчину МанНсСоз (а.5.).
Органічну фазу виділяли і водну фазу екстрагували етилацетатом (230 мл х 2). Об'єднану органічну фазу висушували за допомогою безводного Муд5О», фільтрували та концентрували під вакуумом з одержанням проміжної сполуки 9 у вигляді жовтої твердої речовини (17,4 г, кількісний вихід за 2 стадії). Неочищений продукт безпосередньо застосовували як такий на наступній стадії реакції без додаткового очищення.
Стадія Б) д- шок С тов я ск ! МеО ОоМе ше М. и дей М. дк чим б Ту
В Меси ТовОн У й но он о х
Проміжна сполука З Проміжна сполука 1
До суміші проміжної сполуки 9 (17,4 г, 252,7 ммоль) в ацетоні (250 мл) додавали 2,2- диметоксипропан (11,0 г, 105 ммоль) і Т5ОН.Н2О (908 мг, 5,27 ммоль) однією порцією за 25 "С в
Зо атмосфері М2. Суміш перемішували за 60 "С протягом 2 годин. Суміш охолоджували до 25 С і розчин концентрували під вакуумом, повільно гасили насиченим МанНсСОз (100 мл), а потім екстрагували етилацетатом (100 мл х 3). Об'єднану органічну фазу промивали насиченим сольовим розчином (100 мл), висушували за допомогою безводного Мд5ЗО», фільтрували та концентрували під вакуумом. Залишок очищали за допомогою флеш-хроматографії на силікагелі (градієнтне елюювання: ОСМ/етилацетат від 1/0 до 2/1) з одержанням проміжної сполуки 10 у вигляді світло-жовтої смоли (15,5 г, вихід 89 Об).
Одержання проміжної сполуки 33 - -М я
СД кс Й а СІ чі реактив ЕХ но ох Десса-Маріїна чо
МИМО 00 дню у НИ
М ром вия б. а би
А М
Проміжна сполука 1 Проміжна сполука 35
До суміші проміжної сполуки 1 (2,00 г, теоретично 6,18 ммоль) в ОСМ (40 мл) однією порцією додавали перйодинан Десса-Мартіна (5,24 г, 12,36 ммоль) за 0"С в атмосфері М2. Суміш перемішували за 0 "С протягом З годин. До суміші додавали Маг52Оз (4 г) у насиченому МансСОз (20 мл) і перемішували протягом 10 хв. Водну фазу екстрагували за допомогою ОСМ (20 мл х 3). Об'єднану органічну фазу промивали насиченим сольовим розчином (20 мл х 2), висушували за допомогою безводного Мад5О»4, фільтрували та концентрували під вакуумом з одержанням проміжної сполуки 33 (1,80 г, неочищена) у вигляді світло-жовтої смоли. Неочищений продукт безпосередньо застосовували на наступній стадії реакції без додаткового очищення.
Проміжні сполуки, зазначені нижче, одержували за допомогою протоколу реакції, аналогічного застосовуваному для одержання проміжної сполуки 33, із застосуванням відповідних вихідних речовин (таблиця 7).
Таблиця 7 д- СІ х
МИ
35 с А М-/ Проміжна сполука 10 ок
Одержання проміжної сполуки 38
Спосіб 1 - с - СІ
І
РАЗРОСН»Вг о -й Ми : Й 0-4 Мити
ЗК ВиОоКк, ТАНЕ бо
Проміжна сполука 35 Проміжна сполука 38
До суміші броміду метилтрифенілфосфонію (4,87 г, 13,62 ммоль) в ТНЕ (500 мл) додавали по краплях І-ВиОК (11,4 мл, 1 М в ТНЕ, 1,27 г, 11,35 ммоль) за 0 "С в атмосфері М2. Суспензія ставала яскраво-жовтою, та її перемішували за 0 "С протягом 0,5 год., а потім нагрівали до 25"С протягом 0,5 год. Суміш охолоджували до -40 "С. Додавали по краплях розчин проміжної сполуки 35 (1,46 г, теоретично 4,54 ммоль) в ТНЕ (130,0 мл), а потім перемішували за -207С протягом 1 год., після цього суміш нагрівали до 25"С протягом 2 год. До суміші додавали
Зо насичений МНАСІ (300 мл) і перемішували протягом 10 хв. Шари розділяли і водну фазу екстрагували за допомогою ЮСМ (300 мл х 2). Об'єднану органічну фазу промивали насиченим сольовим розчином (500 мл), висушували за допомогою безводного Мао504, фільтрували та концентрували у вакуумі. Залишок очищали хроматографією на силікагелі (ІБСОФ); 80 г колонка зерапйазпФ для флеш-хроматографії на силікагелі, градієнтне елюювання: від 0 до 1595 етилацетату/петролейного етеру). Необхідні фракції збирали і розчинник випарювали. Проміжну сполуку 38 одержували у вигляді брудно-білої твердої речовини (530 мг, вихід 36 95).
Спосіб 2
Проміжна сполука 38
СІ
У сі я / -У й Ме(гпі), М У
З о ТНЕ Ел
ХХ Кк
Проміжна сполука 35 Проміжна сполука 38
Розчин проміжної сполуки 35 (10,0 г, теоретично 31,1 ммоль) в ТНЕ (100 мл) додавали по краплях в атмосфері М2 протягом періоду 30 хвилин у розчин біс(йодцинк)метану в ТНЕ (180 мл, 0,31 М, 55,9 ммоль, одержаний згідно із процедурою, описаною в Теїгапейдгоп 2002, 58, 8255-8262), при цьому перемішування продовжували до повного перетворення (приблизно 2 години). Реакційну суміш гасили повільним додаванням насиченого водного розчину МНАСІ, під час чого спостерігали утворення солі. Перед екстракцією (ЕТОАс, 2 х 200 мл) солі знову розчиняли додаванням водного розчину аміаку (25 965). Об'єднані органічні фази промивали водним розчином бісульфіту натрію та сольовим розчином, висушували за допомогою безводного МазО:, фільтрували та концентрували під вакуумом. Залишок очищали хроматографією на силікагелі (елюент: дихлорметан/Е(Ас 95/5) з одержанням проміжної сполуки 38 у вигляді брудно-білої твердої речовини (6,9 г, 66 95).
Одержання проміжної сполуки 174
Вт сич -
В "Ї т Л-СРВА, ОСМ пре
М АК я ян | , .
ЗМ шо Мн вит ва б
Промінена сполука 74
З-Бром-7-йодхінолін (5,99 г, 17,7 ммоль) розчиняли в дихлорметані (60 мл), потім додавали порціями т-СРВА (4,57 г, 26,5 ммоль). Суміш перемішували за кімнатної температури протягом 4 днів. Суміш гасили насиченим водним розчином Маг52Оз (40 мл) і насиченим водним розчином Мансоз (до рН 6-7), потім екстрагували дихлорметаном (50 мл х3). Органічну фазу промивали Н2О (50 мл), висушували за допомогою безводного Маг25О4 і випарювали за зниженого тиску. Залишок очищали за допомогою колонки із силікагелем (елюент: петролейний етер/етилацетат - від 10/1 до 1/1) з одержанням необхідного продукту, що являє собою проміжну сполуку 174 (1,9 г, вихід 14,1 95), у вигляді жовтої твердої речовини.
Одержання проміжної сполуки 175
Вг ре ща ск т В З РОС, СНСІІ ОВ лови
МО Сід сист о
Проміжна сполука 174 Проміжна сполука 175
До розчину проміжної сполуки 174 (2,9 г, 8,жА29 ммоль) у хлороформі (60 мл) додавали фосфорилтрихлорид (8,3 г, 54,1 ммоль). Суміш перемішували за 80 "С протягом 12 год. Суміш випарювали за зниженого тиску з одержанням неочищеного продукту. Неочищений продукт очищали колонковою хроматографією (елюент: петролейний етер/етилацетат - від 10/1 до 1/1).
Необхідні фракції збирали та концентрували з одержанням продукту, що являє собою проміжну сполуку 175 (1,3 г, вихід 41,5 95), у вигляді білої твердої речовини.
Одержання проміжної сполуки 176 пр РМВМН.О ТЕ то рі і ян я у тм сг ем, герметична Моди Мо за нн закаркованаз.
Промінсна сподука 175 пробірка, НЄ Проміжна сполука 176 4-Метоксибензиламін (1,34 г, 9,78 ммоль) додавали до суміші проміжної сполуки 175 (0,8 г, «1,95 ммоль) в етанолі (10 мл). Суміш нагрівали в герметично закоркованій пробірці за 100 "С протягом 12 год. Суміш випарювали під вакуумом з одержанням неочищеного продукту. Його очищали колонковою хроматографією (градієнт елюента: етилацетат/петролейний етер від 0/1 до 1/10). Необхідні фракції збирали та концентрували з одержанням продукту, що являє собою проміжну сполуку 176 (600 мг, вихід 51,6 95), у вигляді масла.
Одержання проміжної сполуки 177 179-ВВМУТНЕ, Вій у
Щ со у КЕГДЕВІЕЕЄЕ З) еру гЕЯ ре ня о 0040004 холодильником врМмав-НМ о, та ц ем. мМ тору вРкКЗерЕюЬ, КУгОх - Й ТИМ а
Н нагрівання зі зноротним тт й В холоделдьнихом, НЕ о о й
Проміжна сполука Т 76 ППромінспа сполука 177
Суміш проміжної сполуки 38 (44 мг, 0,138 ммоль) в 9-ВВМ (1,3 мл, 0,69 ммоль, 0,5 М в ТНЕ) нагрівали зі зворотним холодильником протягом 1 год. в атмосфері М». Суміш охолоджували до кімнатної температури, потім додавали КзРОх (87 мг, 0,413 ммоль) в НгО (1 мл) з наступним додаванням ТНЕ (5 мл), проміжної сполуки 176 (122,727 мг, -50,206 ммоль) і |1,7- бісідифенілфосфіно)фероценідихлорпаладію(і!) (4,48 мг, 0,007 ммоль). Реакційну суміш нагрівали зі зворотним холодильником протягом З годин. Суміш концентрували. Залишок розчиняли в етилацетаті (40 мл), промивали водою (6 мл), сольовим розчином (6 мл). Органічну фазу висушували над Ма»5О4, фільтрували та концентрували з одержанням фракції 1, що містить неочищену проміжну сполуку 177 (120 мг, вихід 71,5 Убв).
Суміш проміжної сполуки 38 (233,7 мг, 0,73 ммоль) в 9-ВВМ (7,31 мл, 3,65 ммоль, 0,5 М у
ТНЕ) нагрівали зі зворотним холодильником протягом 1 год. в атмосфері М2. Суміш охолоджували до кімнатної температури, потім додавали КзРоОх (87 мг, 0,413 ммоль) в НгО (1 мл) з наступним додаванням ТНЕ (5 мл), проміжної сполуки 176 (478 мг, «0,80 ммоль) і П1,1'- бісідифенілфосфіно)фероценідихлорпаладію(іІ!) (23,8 мг, 0,037 ммоль). Реакційну суміш нагрівали зі зворотним холодильником протягом З годин. Суміш концентрували. Залишок розчиняли в етилацетаті (40 мл), промивали водою (6 мл), сольовим розчином (6 мл). Органічну фазу висушували над Ма»5О»5, фільтрували та концентрували з одержанням фракції 2, у вигляді неочищеної проміжної сполуки 177 (600 мг, вихід 63,1 Убв).
Дві фракції об'єднували й очищали колонковою хроматографією (градієнт елюента: етилацетат/петролейний етер від 1/10 до 1/1). Необхідні фракції збирали та концентрували з
Зо одержанням проміжної сполуки 177 (300 мг, вихід 61,0 Фо) у вигляді твердої речовини.
Одержання проміжної сполуки 178
Вей за
РМ. р м я ви п щ ул с МНнаИНно емо Х дпа 3 кою" діюксан, ЗО С укр нь
КА Проміжна 000500 ям
Проміжна єполука 177 сполука 178 Х
Суміш проміжної сполуки 177 (300 мг, «0,446 ммоль) і МНз.НгО (10 мл) у діоксані (10 мл) перемішували в герметично закоркованій пробірці за 120 "С протягом 14 год. Цю реакційну суміш випарювали під вакуумом з одержанням проміжної сполуки 178 (250 мг, вихід 87,1 Фо) у вигляді масла.
Одержання проміжної сполуки 179 ве рми ТЗ рек ТЕКА в. й ї н шк ; ї я р бу яМ во ж
АК 7 на бно
Проміжна сполука 178 Проміжна сполука 479
Суміш проміжної сполуки 178 (250 мг, «0,388 ммоль) в ТЕА (5 мл) перемішували за 50 С протягом 1 год. Суміш випарювали під вакуумом з одержанням проміжної сполуки 179 (350 мг, вихід 63,4 95) у вигляді масла.
Одержання сполуки 80
Вест в 3
Й м ти ше косо» ом у, дя во нн Кол неон Й
Проміжна сполука 179 Сполука вій
Суміш проміжної сполуки 179 (350 мг) ії К»гСОз (102 мг, 0,74 ммоль) у метанолі (3 мл) перемішували за 60 "С протягом 1 год. Суміш фільтрували та випарювали під вакуумом з одержанням неочищеного продукту. Неочищений продукт очищали за допомогою ргер-НРІС (колонка: Умаїег5 Хргідде Ргер ОВО С18 150 х 30 мм, 5 мкм, умова: градієнт вода (0,05 Фо гідроксиду амонію о0б./06.)-АСМ). Необхідні фракції збирали, і розчинник випарювали з одержанням сполуки 80 (113,3 мг, вихід 94,9 95) у вигляді білої твердої речовини.
Аналітична частина
ЯМР
Для ряду сполук ТІН-ЯМР-спектри реєстрували на Вгикег ОРХ-360, що функціонує за 360
МГц, на ВгиКег Амапсе 600, що функціонує за 600 МГц, на ВгиКег Амапсе 400, що функціонує за 400 МГу, або на спектрометрі Магіап 400МЕК, що функціонує за 400 МГц. Як розчинники застосовували хлороформ-і (дейтерований хлороформ, СОСІіз), метанол-дє. або ЮМ50О-йв (дейтерований ОМ5О, диметилсульфоксид-0в). Значення хімічного зсуву (б) наведені в частинах на мільйон (рріт) відносно тетраметилсилану (ТМ5), який застосовували як внутрішній стандарт.
Спол. 80: 7 Н-ЯМР (600 МГц, ОМ50-ав) б ррт 1,50-1,56 (т, 1 Н) 1,68-1,75 (т, 1 Н) 1,85-1,92 (т, 1 Н) 1,96 (аді, У-13,0, 9,0, 6,5, 6,5 Гц, 1 Н) 2,25 (аї, 9д9-12,7, 7,9 Гц, 1 Н) 2,69-2,80 (т, 2 Н) 3,76 (г, 9-4,7 Гц, 1 Н) 4,21 (аа, 9-76, 6,0 Гу, 1 Н) 4,57 (рг 5, 1 Н) 4,72 (рі 5, 1 Н) 4,80 (аї, 9-10,5, 7,9
Гу, 1 Н) 6,50 (ре 5, 2 Н) 6,59 (а, 9-3,5 Гу, 1 Н) 7,07 (рг 5, 2 Н) 7,12 (ад, 9-8,2, 1,6 Гц, 1 Н) 7,29 (а, 93,6 Гц, 1 Н) 7,34 (в, 1 Н) 7,58 (а, 9-81 Гц, 1 Н) 8,07 (5, 1 Н) 8,91 (5, 1 Н).
ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНІ ПРОЦЕДУРИ. Аналіз іп міїго (аналіз Та і 15)
Реагенти
Фермент РЕМТ5-МЕР5БО придбали в СпПагіех Кімег (Агдепіа) Ферментний комплекс
Зо продукували в клітинах комах (519), інфікованих одночасно двома бакуловірусами. Один вірус експресує повнорозмірний РКЕМТ5 людини з Біад-міткою на М-кінці, другий вірус експресує повнорозмірний МЕР5БО із сайтом розщеплення Нізб-ТЕМ на М-кінці. Білок афінно очищали з використанням частинок, покритих антитілом до Ріад (М2), з наступним елююванням пептидом
ЗХЕГ АС, а потім Ніб-ЗеІесії, проводячи елюювання 0,5 М імідазолом. Елюйований білок потім піддавали діалізу проти трис-буферного сольового розчину (ТВ5) (рН 8,0), що містить 20 95 гліцерину та З мМ дитіотреїтол (ОТ).
Повнорозмірний немічений рекомбінантний гістон Н2А людини (залишки 1-130, номер доступу в Сепрапк ММ 021052, ММУУ-14,1 кДа), що експресується в Е. соїї, придбали в Кеасійоп
Віоіїоду Согрогаїйоп, Мо за кат. НМТ-11-146. Придбали реагенти, використовувані для одержання реакційного буфера або буфера для зупинки реакції, у тому числі основу Тгі5 (Мо за кат. Зідта
Т-1503), Масі (Мо за кат. Зідта КОБЕ-3270), МаСі» (Мо за кат. Зідта МО250), ОТ (Мо за кат.
Іпмігодеп 15508-013) і мурашину кислоту (Ме за кат. Кієдеї аеНаєп 33015).
Аналіз на високопродуктивному мас-спектрометрі
РЕМТ»5 каталізує послідовні метилювання кінцевих атомів азоту на гуанідинових групах залишків аргініну в білках, використовуючи субстратний кофактор зЗ-аденозил-!| -метіонін (АдоМеї, ЗАМ), при цьому утворюється монометил (ММА), симетричний диметиларгінін (5ОМА) і
З-аденозил-і -гомоцистеїн (АдоНсу, ЗАН). Ферментативну активність визначали після утворення продукту БАН, використовуючи високопродуктивну мас-спектрометрію (система Адііепі Каріатіге
300 із трьоххвадрупольним М5/М5 Зсіех 4000 серії ОТгарФ). Реакційний буфер являв собою 20
ММ Тті5-НСЇ, рН 8,5, 50 мМ Масі, 5 мМ Масі?» і 1 мм ОТТ. Реакцію зупиняли з використанням 1 95 мурашиної кислоти (кінцева концентрація).
Дослідження інгібування. Дослідження щодо ІСво проводили з використанням одинадцяти точок доз, одержаних для кожної сполуки шляхом послідовного розведення 12 у диметилсульфоксиді (0ОМ5О), причому точка 12 являла собою ЮМ5О як контроль. Сполуки спочатку наносили на планшети, а потім додавали суміш розчинів 2 мкМ 5АМ і 0,6 мкМ Н2гА (гістон Н2А). Такий самий об'єм ферментного розчину додавали для ініціації ферментативних реакцій. Кінцеві концентрації реакційної суміші становили 1 мкМ 5АМ, 0,3 мкМ НЗ2А і 10 нм ферменту (аналіз Та) або 1,25 нМ ферменту (аналіз 15). Реакційну суміш інкубували за 30 С протягом 60 хвилин (хв.), якщо використовували 10 нМ ферменту, і протягом 120 хв., якщо використовували 1,25 нМ ферменту. Потім реакційну суміш гасили шляхом додавання мурашиної кислоти до кінцевої концентрації 1 95. Значення інгібування утворення 5АН у присутності сполук розраховували як відсоток контролю щодо неїінгібованої реакційної суміші залежно від концентрації інгібітора. Дані підганяли в такий спосіб:
У ж Нижнє значення « (Верхнє значення - Нижнє значення)/(1--10(П09 ІС50-Х)"Й)), де ІС50 являє собою концентрацію інгібітора (у тих самих одиницях, що й Х) у випадку 50 95 інгібування, і й являє собою кутовий коефіцієнт Хілла. М являє собою відсоток інгібування, Х являє собою Ід концентрації сполуки. Нижнє значення та верхнє значення являють собою значення для плато в тих самих одиницях, що й У.
Значення ріС5О у таблиці 1 нижче являють собою усереднені значення (Мо спол. означає номер сполуки).
Таблиця 1 во Г1111111111111991111111111117111111111111111971
Приклад 1. Активуючі мутації РІКЗСА асоційовані зі сприйнятливістю до інгібіторів РЕМТ5 у випадку ЗСІ С
Профіль сприйнятливості клітин до сполуки 2 оцінювали щодо СІ С-субкатегорії широкої панелі клітинних ліній раку легені. Дивовижно, що деякі з найбільш сприйнятливих клітинних ліній містили різні мутації придбання функції в гені РІКЗСа, і вони згадані в таблиці 2. Активація
Зо сигнального шляху РІЗКа (мутації із придбанням функції або стимуляція сигнального шляху) як пухлинної відповіді на стандарт лікування (цисплатин) або навіть на засоби цілеспрямованого впливу, такі як інгібітори РАКР останнього покоління, передбачає вирішальну роль у процесі стійкості, із чим може бути пов'язана низька загальна виживаність пацієнтів з ЗСІ С після лікування.
Таблиця 2
Приклад 2. Зміни сплайсосоми асоційовані зі сприйнятливістю до інгібіторів РЕМТ5 у випадку МБСІ С
Відомо, що специфічні щодо раку явища сплайсинга ініціюють розвиток злоякісної пухлини, а також сприяють прогресуванню захворювання. До теперішнього часу були описані два білки, залучені в сплайсинг, що являють собою ШО2АЕ1 і КВМ'10, які характеризуються порушенням регуляції у випадку МЗСІ С.
О2АРБ1, що являє собою добре описаний фактор сплайсинга, містить мутацію із придбання функції типу "гарячої точки" (534) в 3-8 9о пацієнтів з М5СІ С. Нещодавно РНК-зв'язувальний білок КВМ10, що також є критичним для збирання сплайсосоми, класифікували як пухлинний супресор, який інактивується в результаті мутацій втрати функції, головним чином у пацієнтів з
МОЇ С (-8 95), в анамнезі яких наявне паління.
От білки, що є критичними для збирання сплайсосом, були описані як безпосередні субстрати РЕМТУЬ, і, таким чином, функція РКМТ5 була пов'язана з модулюванням активності сплайсосом.
Оскільки мутація із придбанням функції 534Е в О2АЕ1 була підтверджена як онкогенна, невелику панель усіх комерційно доступних клітинних ліній М5СІ С, що містять мутацію 5ЗАЕ, збирали для аналізу потенційного синтетичного летального зв'язку між О2АБ1-534Е й інгібуванням РЕМТ5.
Усі (три із трьох) клітинні лінії М5СІ С, які містять цю мутацію типу "гарячої точки", є проліфераційно-чутливими до інгібітора РЕМТ»5, що являє собою сполуку 2, див. таблицю 3.
Таблиця З . я. . Підтип гістологічного
МСІ-Н4А41 О2АБ1-554Е Аденокарцинома 98,40 НМ
І С-г2/ад О2АБ1-554Е Аденокарцинома 116,08 НМ несС7В гАБ1-554Е Аденокарцинома 107,65 нм
Приклад 3. Посилення сигнального шляху цикліну 01 асоційовані зі сприйнятливістю до інгібіторів РКМТ5 у випадку М5СІ С
Посилення та/або підвищена експресія представників родини циклінів 51 була описана у випадку багатьох видів раку, у тому числі М5СІ С. Спостерігали кореляцію між РЕМТ?5 і експресією модуляторів клітинного циклу, у тому числі цикліну 01, СОКА і СОКбЄ, указуючи на те, що РКМТ5 може виявляти регуляторний ефект на с1-фазу. Аналіз панелі ліній клітин легені, оброблених сполукою 2, виявив значну асоціацію між посиленням(посиленнями) цикліну рлу/срКка/СОКв і сприйнятливістю до РЕМТ?5Іі, вказуючи на те, що порушення сигнального шляху цикліну можуть бути використані як маркери для відбору пацієнтів. У таблиці 4 показано, що клітинні лінії МеСІС, що містять таке(такі) посилення(посилення) цикліну 01/СОКА/СОКб, сприйнятливі до обробки сполукою 2.
Таблиця 4
ЕРІ-Са72Н 98,53 нм
МСІ-Н226 СсоКА 204,52 НМ карцинома
Приклад 4. Зміни сигнального шляху М/МТ асоційовані зі сприйнятливістю до інгібіторів
РАМТ5
Клітинні лінії, що містять мутації в ключових генах сигнального шляху УУпі, у тому числі І- катеніні та АРС, характеризуються сприйнятливістю до лікування РЕМТ?5І, як показано в таблиці
Зо 5.
Таблиця 5 . я. . Підтип гістологічного
Ад427 СТММВ1/ТА1А Аденокарцинома 166,52 НМ
НесІ5 СТММВ1/545Е, У670" 266,07 НМ карцинома карцинома
ПРИКЛАДИ
Фахівцям у даній галузі буде зрозуміло, що численні зміни та модифікації можуть бути виконані щодо переважних варіантів здійснення, і що такі зміни та модифікації можуть бути виконані без відхилення від суті даного винаходу. Таким чином, передбачено, що додана

Claims (1)

  1. формула винаходу охоплює всі такі еквівалентні варіації, які перебувають у межах істинної сутності й обсягу даного винаходу.
    Розкриття кожного патенту, заявки на патент і публікації, які цитуються або описуються у даному документі, тим самим включені в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті.
    ФОРМУЛА ВИНАХОДУ Спосіб ідентифікації пацієнта, що характеризується наявністю сприйнятливості до лікування інгібітором білкової аргінін-М-метилтрансферази 5 (РЕМТ5) сполукою формули: - Мне о / о Вг М -М і Ма їз но /0оН або її фармацевтично прийнятною сіллю або її сольватом, за наявності у пацієнта МЗС С (недрібноклітинний рак легені), який передбачає:
    оцінювання біологічного зразка від пацієнта на наявність зміни сплайсосоми, де зміна сплайсосоми включає мутацію 534Е в О2АНІ, де наявність вказаної зміни свідчить про більш високу ймовірність того, що вказаний пацієнт буде характеризуватися наявністю сприйнятливості до лікування зазначеним інгібітором РЕМТ5 при лікуванні М5СІ С, ніж за відсутності вказаної зміни.
UAA201910005A 2017-02-27 2018-02-26 Спосіб ідентифікації пацієнта, що характеризується наявністю сприйнятливості до лікування недрібноклітинного раку легені інгібітором prmt5 UA127679C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762464006P 2017-02-27 2017-02-27
PCT/EP2018/054644 WO2018154104A1 (en) 2017-02-27 2018-02-26 Use of biomarkers in identifying cancer patients that will be responsive to treatment with a prmt5 inhibitor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA127679C2 true UA127679C2 (uk) 2023-11-29

Family

ID=61563368

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201910005A UA127679C2 (uk) 2017-02-27 2018-02-26 Спосіб ідентифікації пацієнта, що характеризується наявністю сприйнятливості до лікування недрібноклітинного раку легені інгібітором prmt5

Country Status (22)

Country Link
US (1) US11279970B2 (uk)
EP (1) EP3585904B1 (uk)
JP (1) JP7225106B2 (uk)
KR (1) KR102573149B1 (uk)
CN (1) CN110382707A (uk)
AU (1) AU2018225312B2 (uk)
BR (1) BR112019017466A2 (uk)
CA (1) CA3049739A1 (uk)
CL (1) CL2019002438A1 (uk)
CO (1) CO2019008390A2 (uk)
EA (1) EA201992026A1 (uk)
IL (1) IL268842B1 (uk)
JO (1) JOP20190199B1 (uk)
MA (1) MA47594A (uk)
MX (1) MX2019010150A (uk)
MY (1) MY195860A (uk)
PE (1) PE20191359A1 (uk)
PH (1) PH12019501942A1 (uk)
SG (1) SG11201907607VA (uk)
TN (1) TN2019000212A1 (uk)
UA (1) UA127679C2 (uk)
WO (1) WO2018154104A1 (uk)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW202321249A (zh) 2015-08-26 2023-06-01 比利時商健生藥品公司 使用作為ｐｒｍｔ５抑制劑之新穎經６－６雙環芳香環取代之核苷類似物
EA201892031A1 (ru) 2016-03-10 2019-02-28 Янссен Фармацевтика Нв Замещенные аналоги нуклеозидов для применения в качестве ингибиторов prmt5
CA3037998A1 (en) 2016-10-03 2018-04-12 Janssen Pharmaceutica Nv Novel monocyclic and bicyclic ring system substituted carbanucleoside analogues for use as prmt5 inhibitors
JP7225106B2 (ja) 2017-02-27 2023-02-20 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． Ｐｒｍｔ５阻害剤による治療に応答する癌患者の同定におけるバイオマーカーの使用
EP3720495A4 (en) * 2017-12-05 2021-06-02 Angex Pharmaceutical, Inc. HETEROCYCLIC COMPOUNDS AS PRMT5 INHIBITORS
KR20200097280A (ko) 2017-12-08 2020-08-18 얀센 파마슈티카 엔.브이. 신규 스피로바이사이클릭 유사체
IL262658A (en) * 2018-10-28 2020-04-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Prevention of age related clonal hematopoiesis and diseases associated therewith
AU2020256166A1 (en) 2019-04-02 2021-10-14 Aligos Therapeutics, Inc. Compounds targeting PRMT5
GB201905780D0 (en) 2019-04-25 2019-06-05 La Thangue Nicholas Cancer therapy
TW202112375A (zh) 2019-06-06 2021-04-01 比利時商健生藥品公司 使用ｐｒｍｔ５抑制劑治療癌症之方法

Family Cites Families (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4224438A (en) 1970-07-14 1980-09-23 Boehringer Mannheim Gmbh Adenosine-5'-carboxylic acid amides
US6143749A (en) 1995-06-07 2000-11-07 Abbott Laboratories Heterocyclic substituted cyclopentane compounds
CN1331326A (zh) * 2000-06-30 2002-01-16 上海博德基因开发有限公司 一种新的多肽——人精氨酸甲基转移酶(hrmt)32.12和编码这种多肽的多核苷酸
WO2003039523A2 (en) 2001-11-05 2003-05-15 Exiqon A/S OLIGONUCLEOTIDES MODIFIED WITH NOVEL α-L-RNA ANALOGUES
US7034147B2 (en) 2001-11-29 2006-04-25 Irm Llc Nucleoside analog libraries
MXPA04008008A (es) 2002-02-19 2005-03-23 Cv Therapeutics Inc Agonistas parciales y completos de receptores de adenosina a1.
US20040043959A1 (en) 2002-03-04 2004-03-04 Bloom Laura A. Combination therapies for treating methylthioadenosine phosphorylase deficient cells
AU2002951247A0 (en) 2002-09-06 2002-09-19 Alchemia Limited Compounds that interact with kinases
JPWO2005005450A1 (ja) 2003-07-15 2006-08-24 三井化学株式会社 環状ビスジヌクレオチドの合成方法
CA2548283A1 (en) 2003-12-19 2005-07-21 Koronis Pharmaceuticals, Inc. Mutagenic heterocycles
WO2006078752A2 (en) 2005-01-21 2006-07-27 Methylgene, Inc. Inhibitors of dna methyltransferase
US20110159111A1 (en) 2006-06-29 2011-06-30 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
US20080132525A1 (en) 2006-12-04 2008-06-05 Methylgene Inc. Inhibitors of DNA Methyltransferase
CA2737661C (en) 2008-09-23 2019-08-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition
US8323918B2 (en) * 2008-12-12 2012-12-04 University Of South Carolina Chloroacetamidine based inhibitors and activity based probes for the protein arginine methytransferases
EP2513298A4 (en) 2009-12-18 2013-03-27 Harvard College COMPOUNDS PROMOTING BETA CELL REPLICATION AND METHODS OF USE THEREOF
RU2013130253A (ru) 2010-12-03 2015-01-10 Эпизайм, Инк. 7-деазапуриновые регуляторы метилтрансферазы гистонов и способы их применения
CA2819620A1 (en) 2010-12-03 2012-06-21 Epizyme, Inc. Modulators of histone methyltransferase, and methods of use thereof
MX2013006951A (es) 2010-12-16 2013-10-03 Abbvie Inc Compuestos antivirales.
ES2587512T3 (es) 2011-04-04 2016-10-25 The U.S.A. As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Derivados de 2'-O-aminooximetil nucleósido para su uso en la síntesis y modificación de nucleósidos, nucleótidos y oligonucleótidos
US20150057243A1 (en) 2012-04-02 2015-02-26 Northern University Compositions and Methods for the Inhibition of Methyltransferases
WO2014035140A2 (en) 2012-08-30 2014-03-06 Kainos Medicine, Inc. Compounds and compositions for modulating histone methyltransferase activity
US20140100184A1 (en) 2012-08-31 2014-04-10 Baylor College Of Medicine Selective inhibitors of histone methyltransferase dot1l
WO2014100730A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Epizyme, Inc. Prmt5 inhibitors containing a dihydro- or tetrahydroisoquinoline and uses thereof
EA027908B1 (ru) 2012-12-21 2017-09-29 Эпизим, Инк. Ингибиторы prmt5 и их применения
EP2935241A1 (en) 2012-12-21 2015-10-28 Epizyme, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
EP2935240A1 (en) 2012-12-21 2015-10-28 Epizyme, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
US10087151B2 (en) 2014-01-09 2018-10-02 The J. David Gladstone Institutes, A Testimentary Trust Established Under The Will Of J. David Gladstone Substituted benzoxazine and related compounds
US20170198006A1 (en) 2014-06-25 2017-07-13 Epizyme, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
CR20170021A (es) 2014-07-01 2017-04-04 Millennium Pharm Inc Compuestos de heteroarilo útiles como inhibidores de enzima activadora de sumo
CR20170384A (es) 2015-02-24 2017-11-16 Pfizer Derivados de nucleosidos sustituidos utiles como agentes antineoplasicos
TW202321249A (zh) 2015-08-26 2023-06-01 比利時商健生藥品公司 使用作為ｐｒｍｔ５抑制劑之新穎經６－６雙環芳香環取代之核苷類似物
CN108884108B (zh) 2016-03-10 2021-08-31 詹森药业有限公司 用于用作prmt5抑制剂的取代核苷类似物
EA201990851A1 (ru) 2017-02-24 2019-09-30 Янссен Фармацевтика Нв Новые аналоги карбануклеозида, замещенные моноциклической и бициклической кольцевой системой, для применения в качестве ингибиторов prmt5
JP7225106B2 (ja) 2017-02-27 2023-02-20 ヤンセン ファーマシューティカ エヌ．ベー． Ｐｒｍｔ５阻害剤による治療に応答する癌患者の同定におけるバイオマーカーの使用

Also Published As

Publication number Publication date
IL268842A (en) 2019-10-31
EA201992026A1 (ru) 2020-01-24
AU2018225312A1 (en) 2019-07-25
JOP20190199B1 (ar) 2023-09-17
IL268842B1 (en) 2024-05-01
JP7225106B2 (ja) 2023-02-20
US11279970B2 (en) 2022-03-22
JOP20190199A1 (ar) 2019-08-27
EP3585904C0 (en) 2023-11-29
PE20191359A1 (es) 2019-10-01
MA47594A (fr) 2020-01-01
CO2019008390A2 (es) 2019-08-20
KR20190122677A (ko) 2019-10-30
JP2020508048A (ja) 2020-03-19
SG11201907607VA (en) 2019-09-27
BR112019017466A2 (pt) 2020-03-31
MY195860A (en) 2023-02-24
CL2019002438A1 (es) 2019-11-29
EP3585904B1 (en) 2023-11-29
US20200010881A1 (en) 2020-01-09
TN2019000212A1 (en) 2021-01-07
MX2019010150A (es) 2019-10-21
CN110382707A (zh) 2019-10-25
KR102573149B1 (ko) 2023-08-30
US20220205026A1 (en) 2022-06-30
WO2018154104A1 (en) 2018-08-30
AU2018225312B2 (en) 2024-02-08
EP3585904A1 (en) 2020-01-01
PH12019501942A1 (en) 2020-06-29
CA3049739A1 (en) 2018-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA127679C2 (uk) Спосіб ідентифікації пацієнта, що характеризується наявністю сприйнятливості до лікування недрібноклітинного раку легені інгібітором prmt5
JP6849599B2 (ja) 超明色ダイマーまたはポリマー染料
CN108778345B (zh) 治疗rna介导的疾病的化合物和方法
Halby et al. Hijacking DNA methyltransferase transition state analogues to produce chemical scaffolds for PRMT inhibitors
NZ713233A (en) Methods and compositions for the treatment and/or prophylaxis of clostridium difficile associated disease
EA032482B1 (ru) Способ анализа нуклеиновой кислоты-мишени
JPWO2011040612A1 (ja) 蛍光発生分子および標的核酸検出方法
Ge et al. Design and synthesis of phosphoryl-substituted diphenylpyrimidines (Pho-DPPYs) as potent Bruton’s tyrosine kinase (BTK) inhibitors: Targeted treatment of B lymphoblastic leukemia cell lines
Schols et al. Structural analogs of umifenovir 2*. The synthesis and antiHIV activity study of new regioisomeric (trans-2-phenylcyclopropyl)-1 Н-indole derivatives
Pfeuffer et al. Two‐Factor Fluorogenic Cyanine‐Styryl Dyes with Yellow and Red Fluorescence for Bioorthogonal Labelling of DNA
Kumar et al. Chemo-enzymatic synthesis of bicyclic 3′-azido-and 3′-amino-nucleosides
US11999993B2 (en) Use of biomarkers in identifying cancer patients that will be responsive to treatment with a PRMT5 inhibitor
EA045888B1 (ru) Применение биомаркеров при идентификации пациентов, имеющих рак, которые будут характеризоваться наличием восприимчивости к лечению ингибитором prmt5
Martín et al. Stereoselective synthesis of C-ketosides by sequential intramolecular hydrogen atom transfer–intermolecular allylation reaction
Liu et al. Synthesis of novel jusbetonin analogues and their cytotoxicity against tumor cell
Kumar et al. Preparation of C5‐Functionalized Locked Nucleic Acids (LNAs)
Lefever et al. Microwave-mediated synthesis of labeled nucleotides with utility in the synthesis of DNA probes
OA19298A (en) Use of biomarkers in identifying cancer patients that will be responsive to treatment with a PRMT5 inhibitor.
Läppchen Synthesis of GTP analogues and evaluation of their effect on the antibiotic target FtsZ and its eukaryotic homologue tubulin
Kroutil et al. Utilization of nosylepimines of 1, 6-anhydro-β-d-hexopyranoses for the preparation of halogenated aminosaccharides
Bhakta et al. Design, synthesis, molecular docking and anti-proliferative activity of novel phenothiazine containing imidazo [1, 2-a] pyridine derivatives against MARK4 protein
Kubota Development of Nucleoside Analogs and Probes for the Exploration of RNA Biology
Serhan Development of Bioorthogonal Reactions Using 3-Oxidopyridiniums and Expanding the Biological Applications of Cyclic Nitrones
CA3200390A1 (en) Dna-encoded compound library and screening method thereof
WO2021074392A1 (en) Visual detection of pbd induced dna crosslinks