UA101077U - Потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах - Google Patents
Потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах Download PDFInfo
- Publication number
- UA101077U UA101077U UAU201501985U UAU201501985U UA101077U UA 101077 U UA101077 U UA 101077U UA U201501985 U UAU201501985 U UA U201501985U UA U201501985 U UAU201501985 U UA U201501985U UA 101077 U UA101077 U UA 101077U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- urea
- biosensor
- potentiometric
- shk
- membrane
- Prior art date
Links
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 46
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 title claims abstract description 45
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 title claims abstract description 29
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000005669 field effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 5
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims 1
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 13
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- FSEUPUDHEBLWJY-HWKANZROSA-N diacetylmonoxime Chemical compound CC(=O)C(\C)=N\O FSEUPUDHEBLWJY-HWKANZROSA-N 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 1
- 208000037157 Azotemia Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 206010034960 Photophobia Diseases 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 208000012998 acute renal failure Diseases 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 201000011200 hepatorenal syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000013469 light sensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000013206 minimal dilution Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 230000022558 protein metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 150000003672 ureas Chemical class 0.000 description 1
- 208000009852 uremia Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах, що складається з потенціометричного датчика на основі двох рН-чутливих польових транзисторів, причому на перший транзистор нанесено першу мембрану на основі силікаліту, на яку далі нанесено другу ферментну мембрану на основі рекомбінантної уреази, що є чутливою до сечовини, на другий транзистор також нанесено першу мембрану на основі силікаліту та другу референтну мембрану, а вказаний біосенсор призначений для підключення до приладу для потенціометричних вимірювань, а виходи цього приладу підключені до відповідних входів комп'ютера.
Description
Пропонована корисна модель належить до галузі медицини та охорони здоров'я, і може бути використана з метою контролю процедури очищення крові від токсинів (гемодіаліз) (11, а саме для визначення концентрації сечовини, а більш конкретно до потенціометричного біосенсора на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрацій сечовини у водних розчинах.
Сечовина належить до одного з кінцевих продуктів білкового обміну (2Ї1. Вона формує основну частину залишкового азоту сироватки крові. Загальноприйнятим є положення, що сечовина малотоксична сполука, більше того, вона використовується нирками для підтримання осмотичного діурезу, а в лейкоцитах виконує роль бактерицидного агента. Однак, надлишкове накопичення карбаміду як компонента продукційної, чи ретенційної гіперазотемії вносить свій вклад в патогенез багатьох станів, що супроводжуються уремією (гостра і хронічна ниркова недостатність, печінкова недостатність, гепаторенальний синдром, спадкові гіперазотемії) ІЗ-51І.
Сечовина виконує роль важливого маркера при встановленні діагнозу гострої чи хронічної форм ниркової недостатності, а також використовується для контролю перебігу даної патології
Іб). На сьогоднішній день біохімічний тест на рівень сечовини в крові є одним з найважливіших в клінічній лабораторній діагностиці. Сучасні запропоновані методи аналізу концентрації сечовини є певною мірою недосконалі, наприклад це стосується спектрофотометричного аналізу на основі діацетилмонооксимної реакції (7Ї. Основним недоліком даного методу є світлочутливість комплексу і швидке зниження забарвлення, а також висока токсичність реактивів для проведення даної реакції. Крім того, в реакцію з діацетилмонооксимом з утворенням забарвлених комплексів вступають також похідні сечовини, що знижують селективність визначення аналіту. Більш чутливі методи грунтуються на використанні ферменту уреаза, проте потребують додаткових індикаторних реакцій, що деякою мірою ускладнюють аналіз та роблять його більш дорогим (8-12.
Інша частина методів пов'язана з біосенсорним напрямом розвитку. Варто зазначити, що всі біосенсори, які розроблені на основі уреази з бобів сої характеризуються вузьким лінійним діапазоном визначення сечовини (13-14). Дана умова є значною перешкодою при кількісному аналізі сечовини в сироватці крові хворих на ниркову недостатність при мінімальному розведенні або ж визначенні в цільній крові. Для подолання даного недоліку запропоновано при
Зо розробці уреазних біосенсорів використовувати замість звичайної уреази з бобів сої рекомбінантну з Е.соїї, оскільки рекомбінантний фермент має Км 200 мМ, а розроблений на основі вище зазначеного ензиму біосенсор характеризується розширеним лінійним діапазоном визначення до 20 мМ.
Відома розробка потенціометричних біосенсорів на основі рН-чутливих польових транзисторів та рекомбінантної уреази (15-17)|Ї. Для розробки даного типу біосенсорів було використано фотополімер РМА/5БО, який полімеризується та захоплює ензим в сітку, формуючи робочу біоселективну мембрану лише при дії жорсткого ультрафіолетового випромінення. Як відомо, ультрафіолетові промені досить негативно впливають на сітківку ока людини. Тим паче, фотополімер РУА/5БО має нетривалий термін зберігання, що робить його не зовсім вдалим іммобілізуючим агентом. Крім того, з використанням даного типу іммобілізації отримані біосенсори також характеризуються не найкращою чутливістю та швидкістю сигналу (1-2 хв.) з лінійним діапазоном визначення сечовини -0,1-10мММ.
В основу запропонованої корисної моделі поставлено задачу створення такого потенціометричного біосенсора на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах, який би характеризувався кращою чутливістю до сечовини (лінійний діапазон визначення сечовини - 0,05-15 мМ) та був більш перспективним і дешевим для подальшого масового виробництва.
Поставлена задача вирішується запропонованим потенціометричним біосенсором на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах, що складається з потенціометричного датчика на основі двох рН-чутливих польових транзисторів, а відповідно до пропозиції, на перший транзистор нанесено першу мембрану на основі силікаліту, на яку далі нанесено другу ферментну мембрану на основі рекомбінантної уреази, що є чутливою до сечовини, на другий транзистор також нанесено першу мембрану на основі силікаліту та другу референтну мембрану, а вказаний біосенсор призначений для підключення до приладу для потенціометричних вимірювань, а виходи цього приладу підключені до відповідних входів комп'ютера.
Поставлена задача вирішується за рахунок безпечної, простої та швидкої процедури іммобілізації, на основі адсорбції рекомбінантної уреази на поверхні силікалітної мемебрани.
Суть пропонованої корисної моделі пояснюється кресленнями, де на фіг. 1 схематично представлено пропонований ферментний біосенсор на основі рН-пПтТ для визначення концентрації сечовини у водних розчинах; на фіг. 2 показано блок-схему портативної потенціометричної біосенсорної системи для визначення концентрації сечовини; на фіг. З наведено калібрувальні графіки залежності величини відгуків біосенсорів на основі рекомбінантної уреази адсорбованої на силікаліті та іммобілізованої в фотополімері РМА/5БО від концентрації сечовини; на фіг. 4 продемонстровано таблицю порівняння основних робочих характеристик біосенсорів на основі рекомбінантної уреази адсорбованої на силікаліті та іммобілізованої в фотополімері РМА/5БО.
Прилад для потенціометричних вимірювань, розроблений та виготовлений в Інституті фізики напівпровідників ім. В.Є. Лашкарьова НАН України (181.
В основі роботи потенціометричниого біосенсора на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах лежить наступна ферментативна реакція 91:
Рекомбінантна уреаза
МН»СОМН» ж Нею 2НгО -» 2МНе «НСО:з:
В процесі проходження ферментативної реакції рекомбінантна уреаза розщеплює сечовину при цьому змінюється концентрація протонів у ферментній мембрані, відповідно, відбувається зміна рН, яку і можна реєструвати за допомогою рН-чутливого польового транзистора.
Пропонований потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах (Фіг.1) складається з двох рн-птТ (зигзагоподібні області затворів) - 1, 2, на які спочатку наносяться перші ідентичні мембрани на основі силікаліту - З та 4, відповідно. Далі на перший транзистор (1) з мембраною на основі силікаліту (3) наносять другу робочу мембрану з рекомбінантної уреази селективної до сечовини (5), а на другий транзистор (2) з першою мембраною на основі силікаліту (4) наносять другу референтну мембрану з сироваткового альбуміну бика (6). Зигзагоподібна геометрія затворних областей транзисторів має відношення довжини каналу до його ширини рівним 100, що забезпечує достатній рівень крутизни перехідної характеристики. р"-дифузійні шини (7) з
Зо контактами до стоку і витоку кожного з транзисторів виведені на край чипу, як ії виводи до вбудованих мікроелектродів порівняння - 8. В центрі транзисторів розташовані контакти до п- підкладок - 9. Алюмінієві контактні площини до усіх транзисторних виходів, виведені на край кожного з чипів - 10. Вказаний потенціометричний біосенсор 11 /ПБ/ (Фіг. 2) підключений до відповідних входів портативного потенціометричного приладу 12 /ПП/. Виходи приладу 12 /ПП/ підключені до відповідних входів блоку живлення 13 /БЖ/ та комп'ютера 14 /ПК/У.
Пропонований потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах працює наступним чином.
Попередньо виготовляли біоселективні мембрани. Для створення гелю для першої мембрани готували розчин з вмістом 10 95 силікаліту у 5 мМ калій-фосфатному буфері рН 7,4.
Отриманий розчин силікаліту поміщали в ультразвукову баню на дві години для гомогенізації розчину. Далі, на робочі поверхні обох рН-чутливих польових транзисторів, наносили 0,2 мкл гомогенного розчину силікаліту. Для фіксації силікаліту на поверхні транзисторів, датчик розміщували у сухо-жаровій шафі на 20-25 хв. за температури 80-100 "С. Для створення гелю для другої ферментної мембрани готували розчин з вмістом 10 95 рекомбінантної уреази, 10 95
БСА, 10 95 гліцерину у 20 мМ фосфатному буфері, рН 7,4. До складу гелів додавався гліцерин для стабілізації ферменту при іммобілізації та запобігання передчасному підсиханню розчину, нанесеного на поверхню перетворювача. В свою чергу, сироватковий альбумін бика в складі ферментних мембран відігравав роль стабілізуючого агента для ферментів. Гель для створення другої референтної мембрани готувався з вмістом 2095 БСА, 1095 гліцерину у 20 мМ фосфатному буфері, рН 7,4. Далі приготовлені ферментний та референтнийй гелі наносили на поверхню транзисторів, вкритих першими мембранами на основі силікаліту (по 0,2 мкл робочого та реферетного) і залишали на відкритому повітрі на 15-20 хв до повного висихання.
Таким чином, біоселективна мембрана біосенсора, нанесена на робочу область першого рН-чутливого польового транзистора складалась з 20 мМ фосфатного буфера, рн 7,4, та з наступних інгредієнтів у такому їх співвідношенні (у мас. Об): 4-15 силікаліт, 3-11 рекомбінантної уреази, 3-11 БСА, 5-15 гліцерин.
Ідентична референтна мембрана наносилась на робочі області обох біосенсорів, і складалась з 20 мМ фосфатного буфера, рН 7,4 та з наступних інгредієнтів у такому їх співвідношенні (у мас. 95): 2-10 силікаліт, 10-30 БСА, 5-15 гліцерин.
Співвідношення компонентів біоселективних мембран біосенсорної системи було отримано експериментально. Його підібрали для покращення аналітичних характеристик біосенсорів, таких як час відгуку, селективність, чутливість, операційна стабільність та ін.
Після процесу іммобілізації біосенсори висушували 15 хв. на повітрі за кімнатної температури. Перед початком роботи, для видалення надлишку незв'язаних силікаліту, ферменту та інших компонентів мембран, біосенсори відмивали протягом 20 хв. у буфері, в якому і проводили подальші досліди.
Приклад аналізу вмісту сечовини в розчині.
Біосенсор заздалегідь під'єднаний до приладу для потенціометричних вимірювань поміщали до вимірювальної комірки 1,5 мл, заповненої 5 мМ фосфатним буфером, рН 7,4, та витримували декілька хвилин для отримання стабільної базової лінії. Потім додавали певну аліквоту модельного розчину сечовини, отримували сигнал. Сигнал від біосенсора автоматично оброблявся комп'ютером і виводився у графічному вигляді на екран монітора. Шляхом додавання різної кількості певних аліквот модельних розчинів сечовини було побудовано калібрувальну криву для визначення концентрації сечовини (Фіг.3) та встановлено лінійні діапазони визначення сечовини. Після отримання кожного відгуку біосенсор відмивали від продукту, змінюючи робочий буфер мінімум З рази кожні 15-30 с, до виходу сигналу на базову лінію. Лінійний діапазон визначення сечовини становив -0,05-15 мМ, що є ширшим ніж у найбільш близького за технічною суттю біосенсора з діапазоном визначення сечовини 0,1-10
ММ.
Визначення концентрації сечовини в аналізованих зразках діалізату та крові здійснювали за калібрувальною кривою. Спочатку додавали аліквоту проби до вимірювальної комірки, та отримували відгук біосенсора. Далі за калібрувальною кривою вираховували концентрацію
Зо сечовини в невідомій пробі Основні робочі характеристики запропонованого потенціометричного біосенсора на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах та найбільш близького до нього за технічною суттю біосенсора на основі рекомбінантної уреази іммобілізованої в фотополімері РМА/50О дуже відрізнялись (Фіг.4). Наприклад, час відгуку запропонованого потенціометричного біосенсора на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах складав - 30- 60 с, що щонайменше в два рази швидше, ніж у біосенсорі на основі фермента, іммобілізованого в фотополімері РУА/5БО. Також, запропонований біосенсор характеризувався ширшим лінійним діапазоном, кращою чутливістю до субстрату.
Визначення сечовини запропонованим потенціометричним біосенсором на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрацій сечовини у водних розчинах, дозволило проводити більш швидкий та точний аналіз біозразків, а сам біосенсор став більш перспективним для подальшого виробництва, за рахунок відмови в процесі іммобілізації від шкідливого УФ випромінювання. В іншу чергу, застосування при створенні біосенсору методу адсорбції рекомбінантної уреази на силікаліті розширило лінійний діапазон визначення сечовини.
Джерела інформації: 1. У. НіттеїГат, Т.А. ІКілег, Нетодаіа|увів / Те Мем Епдаіапа уЧоштаї ої Медісіпе-2010.-Мої. 363.-Р. 1833-1845. 2. Ш.В. Тимеді, ОЮО. ГакзпПтіпагауапа, І.Г. КоїНагі єї аї., Роїепітеїйіс Біозепвзог їог иа деїептіпаїйоп іп тіїК // Зепзого апа Асішаюгз В: Спетісаї!. - 2009. - Мої. 140. - Р. 260-266. 3. 0. Спігігі, С Маїйезіа, Роїепіотеїгіс игеа Біозепзог Базей оп игєазе ітторбійї:еєа Бу ап еіеєстозупіпевзігейд роїу(о-рпепуіеєпедіатіпе) йт м/йй рийегіпуд сарабіїйу // Хепзогв апа Асіцайгвз В:
Спетісаї. -2011. -Мої. 157. -Р. 211-215. 4. М. Туавді, М. Тотаг, М. Сиуріа, МіО папорапісіє-бразед цгєеа Біозепзог // Віозепзог5 апа
ВіовІесігопісв. - 2013. - Мої. 41. - Р. 110-115. 5. а. Зутапа, М. баз, 5. бгімавзіама, В.О. МаїІНоїга, А помеї! игєа Біозепзог Ббазеай оп лігсопіа //
ТНіп Зоїіа Рі!тв. - 2010. - Мої. 519. - Р. 1187-1191. 6. М. 5умаїї, М.К. Назе, В. 5пмавіама, Мапоепадіпеегей оріїса! игеа Біозепзог ог евіїта(йіп9 петодіаїувів рагатеїегз іп 5репі діаузаїйе // Апа|мііса Спітіса Асіа. - 2010. - Мо!. 676. -Р. 68-74.
7. М.В. Евагоп, Пе сагбатіаде аіасецуї! геасійп: а їеві Тог сігиПпе / М.А. Еєагоп // Віоспетісаї
УЧоцтаї!-1939. - Мої. 33. - Р. 902-907. 8. Е. Суогау, Р. біта, І.М. Мінайезси, Віотоїесціаг игеавзе піп Яїтв дгомп бу Іазег Тесппіднев тог ріоса адіадповіїс арріісайіоп // МаїетіаІі5 Зсіеєпсе апа Епдіпеегіпа С -2010.-Мої!. 30.-Р. 537-541. 9. Р. Гезріпаз, Сх. Юириу, Е. Вемої еї аІ., Епгуте игеа аззау: А пем/ соіогітейіс теїйоа Бразеа оп пуагодеп регохіде теазигетенпі // Сіїіпіса! Спетівігу. - 1989. - Мої. 35. - Ме 4.-Р. 654-658. 10. М. Могізпіта, К. МаКапе, Т. РиКаїви еї аї., Кіпеїїс аззау ої зегит апа игіпе Тог цгеа м/йй иве ої шгеазе апа Івисіпе депуйгодепаз // Сііпіса! Спетівігу. - 1997. - Мої. 43.- Мо 10. -Р. 1932-1936. 11. М. Социтеїйй, В. Соцоєї А. Ттиснацй ЕІесптоде теазигтетепі ої діисозе апа цеєа іп ипайшеа затрієз // Сіїпіса! Снетівігу. - 1990. - Мої. 36.- Мо 9. - Р. 1646-1649. 12. Т. МоскКеї, О0. Моїттізоп, В. Маївсоїї, ЕмаЇІнайоп ої Ше іІ-ЗТАТ "М 5уєктет: а ропаріє спетівігу апаїузег ог Ше теазигетепі ої зодіит, роїазвішт, спіогіде, игеа, діисозе, апа Нетайостії // Сііпіса
Віоспетівігу. - 1995. - Мої. 28. - Р. 187-192. 13. ОЇ. КикКіа, 5.М. МагснпепКо, О.А. 7іпспепКо еї аї., Віобепвогї теазигетепі ої цгєа сопсепігайоп іп питап ріоод вегит // Могпід Асадету ої 5сівепсе, Епдіпеегіпд апа Тесппо!оду. - 2012. - Мої. 68. - Р. 147-151. 14. 0.0. Зоїідайкіп, 1.5. КиспегепКо, 5.МУ. МагсНепко евї а!., Арріїсайоп ої епгуте/2еоїйе зепзог тог игєа апаїувів іп зегит // Маїегіа! 5сіепсє апа Епаіпеегіпу С - 2014. - Мої. 42.-Р. 155-160. 15. А.Р. боіІдакіп, У. Мопюгіої, МУ. Запі еї аї!., А поме! игєа 5епвійме Біозепзог м/йп ехієпаєа дупатіс гапде базей оп гесотрбіпапі игеазе апа ІЗЕЕТз5 // Віозепзої5 апа Віовіесігопісв5. - 2003. -
Мої. 19.-Р. 131-135. 16. СВ. Марченко, О.П. Солдаткін, Потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для контролю вмісту сечовини в реальних біологічних зразках // Сенсорна електроніка і мікросистемні технології. - 2009. - Т. 3(9), Мо 4 -С 40-48. 17. 5.М.МагсНепко, І.5.КиспегепКо, А.М.Негезвнко евї. а!., Арріїсайоп ої роїепіотеїгіс Біозепзог разей оп гесотрбіпапі игеазе ог игеа деїептіпаїйоп іп ріоса зегит апа петодаіаугаїе // Зепзог апа
Асіцайогз В. - 2015. - Мої. 207.- Р. 981-986. 18. О.Л.Кукла, О.С.Павлюченко, О.В.Бушма, Ю.В.Голтвянський, С.В.Дзядевич,
О.П.Солдаткін, Патент України на корисну модель "Аналого-дифровий іонно-сенсорний
Зо вимірювач параметрів рідких середовищ", ША Мо48359 МПК С201М27/26, заявл. 26.10.2009, опубл. 10.03.2010, Бюл. Мео5. 18. 5.К. УНа, А. ТоркКаг, 5.Е. Б'Зоига, ОємеІортенпі ої роїепіотеїгіс цгєа Біозепзог Базей оп игеазе іттобіїї2гедіп РМА-РАА сотрозіїє таїйгіх їТог евійтайоп ої ріооа игеа пітодеп (ВОМ) // доштаї ої Віоспетісаї! апа Віорпузіса! Меїноав. - 2008. - Мої. 70. -Р.1145-1150.
Claims (1)
- ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах, що складається з потенціометричного датчика на основі двох рнН-чутливих польових транзисторів, який відрізняється тим, що на перший транзистор нанесено першу мембрану на основі силікаліту, на яку далі нанесено другу ферментну мембрану на основі рекомбінантної уреази, що є чутливою до сечовини, на другий транзистор також нанесено першу мембрану на основі силікаліту та другу референтну мембрану, а вказаний біосенсор призначений для підключення до приладу для потенціометричних вимірювань, а виходи цього приладу підключені до відповідних входів комп'ютера.и ж ГЕ шт от з - й ж дет : маш я ; р я . т яки д- А і Кн М КО ВВ я я : її Шк о Ко вам М, ; КОООВООВУ Ко ж. шк Клин юка рен т Ше в : В ! ! др с-- В ЕЕ ва й М й ет ЩО есе МЕ Вс дн М оси шко ! ей - --к й Гн Шк ся Ко дет пе от - лжУхух ШЕ З ще ї Я ях пики ЩІ ШИ ШИ мн еще ше ше нн Нм Мн и мною а - поза | яФіг. 1 з ПЕ І 12 АВ шини залю 13 БОФіг. 2ТО 1 Адсорбція на скмікаліті 3 ши дет и Шк т я в Ат у 434 р Захват а фетополімев РУДУ З і поддєттттннст- ІВ Е дет сш ра як10 . Ей й й та 25 Ко а БО як Тсечевина), жіФіг. З Робочі херактеристики 0 Адсорбція на силікалігі у Ф паці й нннтнддння рт отут ВІ сни ВВ ВАДКУКУ оон КВ 0 нт КВ Час регенерації 05 Жхв : і хв -ВНійНий діапазон 0 00515 мМсечовини 0-10 ММ сечовини Похибка вимірювання: ре вх | ву яку йх ! ер кос Е еВ : нн І ше й Й пиши шк Чухтлнвість біосенсора І (величина відгуку на З 17,43 мкА | 9,6і мкА іФіг. 4.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201501985U UA101077U (uk) | 2015-03-05 | 2015-03-05 | Потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU201501985U UA101077U (uk) | 2015-03-05 | 2015-03-05 | Потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA101077U true UA101077U (uk) | 2015-08-25 |
Family
ID=54772249
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU201501985U UA101077U (uk) | 2015-03-05 | 2015-03-05 | Потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA101077U (uk) |
-
2015
- 2015-03-05 UA UAU201501985U patent/UA101077U/uk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7112451B2 (en) | Biosensor | |
| Bossuyt et al. | Automated serum protein electrophoresis by Capillarys® | |
| BRPI0412412B8 (pt) | dispositivo, seu uso e processo para a realização simultânea da determinação de grupos sangüíneos, contraprova de soro e teste de busca de anticorpos | |
| CN102841206B (zh) | 肌钙蛋白T(Troponin-T,TNT)测定试剂盒 | |
| EP1202060B1 (en) | Biosensor and method for its preparation | |
| Day et al. | Impedance-based sensor for potassium ions | |
| Gumustas et al. | Paper based lateral flow immunoassay for the enumeration of Escherichia coli in urine | |
| Tasić et al. | Biosensing of D-dimer, making the transition from the central hospital laboratory to bedside determination | |
| TW494238B (en) | Chromatographic test pieces and chromatographic assay | |
| CN105445454A (zh) | 一种可定量的免疫层析装置 | |
| CN102866256A (zh) | 一种超敏c反应蛋白检测方法及检测试剂 | |
| UA101077U (uk) | Потенціометричний біосенсор на основі рекомбінантної уреази для визначення концентрації сечовини у водних розчинах | |
| Radovanović et al. | Microfluidic flow injection analysis with thermal lens microscopic detection for determination of NGAL | |
| CN106248668B (zh) | 基于移动反应界面电泳滴定的定量酶联免疫吸附检测方法 | |
| Kim et al. | Multiplexed detection of biomolecules using a wax printed paper-disc centrifugal optical device | |
| CN115032389A (zh) | 一种检测凝血酶及其抑制剂的纸基传感方法 | |
| CN112485453A (zh) | 一种测定糖化血红蛋白的液相层析试剂及其制备方法 | |
| JPS63196855A (ja) | 特異的な免疫学的定量方法 | |
| BR102019009657A2 (pt) | Sensor microfluídico para detecção simultânea de múltiplos adulterantes em amostras de leite | |
| JP2002340890A (ja) | タンパク質の測定方法 | |
| JP2002236127A (ja) | 銀染色による高感度微量蛋白定量法 | |
| UA101078U (uk) | Потенціометричний біосенсор на основі креатиніндеімінази для визначення концентрацій креатиніну у водних розчинах | |
| US20230147248A1 (en) | Liquid handling device | |
| Eser et al. | E. coli O157: H7 Detection Using Surface Plasmon Resonance Based Biosensor | |
| Lasne | Double-blotting: a solution to the problem of nonspecific binding of secondary antibodies in immunoblotting procedures |