TWI825086B - Her3抗原結合分子 - Google Patents

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Abstract

揭示HER3抗原結合分子。亦揭示編碼該等HER3抗原結合分子之核酸及表現載體、包含其等之組成物，以及使用其等之方法。

Description

HER3抗原結合分子
此申請案主張提申日期2018年3月29日之PCT/EP2018/058259及提申日期2018年10月25日之US 16/170,370的優先權，實際上其等的內容和要素係藉此併入本案以作為參考資料。
發明領域 本發明係有關於分子生物學領域，更特別地為抗體技術。本發明亦有關於醫學治療及預防(prophylaxis)的方法。
發明背景 增高的HER3表現於多種實性腫瘤，包括乳癌、胃癌、頭頸部癌(head & neck)、胰臟癌、卵巢癌及肺癌中與預後不良有關聯。HER3-媒介的訊息傳導對於腫瘤進程有不良後果；HER3向上調節與抗-HER2及抗-EGFR療法抗性有關連，以及對於抗-PD-1療法難治性之實性腫瘤與抗-PD-1療法的反應者相比顯示出較高的HER3表現。
HER3-結合抗體係描述於舉例而言Zhang等人，Acta Biochimica et Biophysica Sinica (2016) 48(1): 39-48之內。抗-HER3抗體LJM-716與HER3細胞外域的子域II及IV上的表位結合，將HER3鎖定於非活性構形(Garner等人，Cancer Res (2013) 73: 6024-6035)。MM-121(亦稱為塞里班土單抗(seribantumab))業已顯示出會藉由阻斷調蛋白(HRG)與HER3的結合而抑制HER3-媒介的訊息傳導(Schoeberl等人，Sci. Signal. (2009) 2(77): ra31)。帕圖單抗(Patritumab)(亦稱為U-1287及AMG-888)亦會阻斷調蛋白與HER3的結合(參見例如Shimizu等人之Cancer Chemother Pharmacol. (2017) 79(3):489-495。RG7116(亦稱為路瑞妥珠單抗(lumretuzumab)及RO-5479599)辨識HER3細胞外域的子域I上的表位(參見例如Mirschberger等人之Cancer Research (2013) 73(16) 5183-5194)。KTN3379通過與子域III的胺基酸殘基(對應於序列辨識編號：1的下列位置：Gly476、Pro477、Arg481、Gly452、Arg475、Ser450、Gly420、Ala451、Gly419、Arg421、Thr394、Leu423、Arg426、Gly427、Lys356、Leu358、Leu358、Lys356、Ala330、Lys329及Gly337)，以及子域II的Met310、Glu311及Pro328(參見Lee等人，Proc Natl Acad Sci U S A. 2015 Oct 27; 112(43):13225)的交互作用來結合HER3。AV-203(亦稱為CAN-017)業已顯示出會阻斷NRG1與HER3的結合且促進HER3降解(參見Meetze等人，Eur J Cancer 2012; 48:126)。REGN1400亦會抑制配體與HER3的結合(參見Zhang等人，Mol Cancer Ther (2014) 13:1345–1355)。RG7597(duligotuzumab)為雙重作用的Fab(DAF)其能與HER3及EGFR二者結合，以及與HER3的子域III結合(參見Schaefer等人，Cancer Cell (2011) 20(4):472-486)。MM-111及MM-141係雙專一性抗體其具有HER3-結合臂會抑制HRG配體與HER3之結合(參見McDonagh等人之Mol Cancer Ther (2012) 11:582-593及Fitzgerald等人，Mol Cancer Ther (2014) 13:410-425)。
發明概要 於第一個態樣中，本發明提供一種抗原結合分子，其可選擇地為經單離的，其能與HER3於細胞外區域子域II內結合。
於一些具體例中，該抗原結合分子抑制HER3及HER3的一交互作用伙伴之間的交互作用。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：16的該胺基酸序列或由序列辨識編號：16的該胺基酸序列所組成。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：229的該胺基酸序列。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：230及231的該胺基酸序列。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：230的該胺基酸序列。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：231的該胺基酸序列。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：23的該胺基酸序列。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：21的該胺基酸序列。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：43的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：46的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：51的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：91的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：94的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：99的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：44的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：44的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：89的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：44的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：90的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：96的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：44的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：98的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：93的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：49的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：93的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：50的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：93的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：97的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：42的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：158的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：159的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：160的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：165的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：166的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：167的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：22的該胺基酸序列。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：128的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：129的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：130的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：136的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：137的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：138的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：144的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：145的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：146的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：151的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：152的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：153的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於特定的具體例中，該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或 (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：97的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或 (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：42的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含： (i) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：24的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：74的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (ii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：25的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：75的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (iii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：26的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：76的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (iv) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：27的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：77的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (v) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：28的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：78的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (vi) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：29的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：78的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (vii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：30的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：78的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (viii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：31的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：79的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (ix) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：32的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：79的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (x) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：33的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：80的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xi) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：34的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：81的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：35的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：82的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xiii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：36的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：83的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xiv) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：37的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：84的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xv) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：38的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：85的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xvi) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：39的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：86的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xvii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：40的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：87的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xviii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：127的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：135的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xix) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：143的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：150的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xx) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：157的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：164的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性。
於特定的具體例中，該抗原結合分子包含： (i) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：36的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：83的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (ii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：37的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：84的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (iii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：38的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：85的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性。
在一些具體例中該抗原結合分子能與人類HER3及小鼠HER3、大鼠HER3及食蟹獼猴(cynomolgous macaque)HER3之一者或更多者結合。
亦提供一種抗原結合分子，其可選擇地為經單離的，其包含(i)一種如本發明之抗原結合分子，及(ii)一種能與HER3以外的抗原結合之抗原結合分子。
在一些具體例中該抗原結合分子能與細胞表面表現HER3的細胞結合。
在一些具體例中該抗原結合分子能抑制HER3-媒介的訊息傳導。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，該Fc區域含有一種多肽，該多肽具有：(i) C於對應於位置242的位置處、及C於對應於位置334的位置處，以及(ii) 下列之一者或更多者：A於對應於位置236的位置處、D於對應於位置239的位置處、E於對應於位置332的位置處、L於對應於位置330的位置處、K於對應於位置345的位置處，以及G於對應於位置430的位置處。在一些具體例中該Fc區域包含一種多肽，該多肽具有C於對應於位置242的位置處、C於對應於位置334的位置處、A於對應於位置236的位置處、D於對應於位置239的位置處、E於對應於位置332的位置處，以及L於對應於位置330的位置處。
亦提供一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如本發明之抗原結合分子。
亦提供一種核酸或多種核酸，其可選擇地為經單離的，其編碼如本發明之一抗原結合分子或一CAR。
亦提供一種表現載體或多種表現載體，其包含如本發明之一種核酸或多種核酸。
亦提供一種細胞，其包含如本發明的一抗原結合分子、一CAR、一核酸或多種核酸、或一表現載體或多種表現載體。
亦提供一種方法，其包含使一含如本發明之核酸或多種核酸或表現載體或多種表現載體的細胞，於適合從該核酸或該表現載體表現該抗原結合分子或CAR的條件下予以培養。
亦提供一種組成物，其包含如本發明之一抗原結合分子、一CAR、一核酸或多種核酸、一表現載體或多種表現載體、或一細胞。
亦提供如本發明之一抗原結合分子、一CAR、一核酸或多種核酸、一表現載體或多種表現載體、一細胞或一組成物供用於醫學治療或預防(prophylaxis)的方法。
亦提供如本發明之一抗原結合分子、一CAR、一核酸或多種核酸、一表現載體或多種表現載體、一細胞或一組成物供用於治療或預防一癌症的方法。
亦提供如本發明之一抗原結合分子、一CAR、一核酸或多種核酸、一表現載體或多種表現載體、一細胞或一組成物於製備一藥物之用途，該藥物供用於治療或預防一癌症的一方法。
亦提供一種治療或預防一癌症之方法，其包含投予治療或預防有效量之如本發明之一抗原結合分子、一CAR、一核酸或多種核酸、一表現載體或多種表現載體、一細胞或一組成物至一個體。
於依據本發明的各種態樣之一些具體例中，該方法額外包含投予一種EGFR家族成員媒介的訊息傳導之抑制劑，可選擇地其中EGFR家族成員媒介的訊息傳導之抑制劑為HER2及/或EGFR媒介的訊息傳導之抑制劑。
在一些具體例中，該癌症係選自於：一種包含表現EGFR家族成員的細胞之癌症、一種包含表現HER3的細胞之癌症、實性腫瘤、 乳癌(breast cancer)、乳癌(breast carcinoma)、管癌(ductal carcinoma)、胃癌(gastric cancer)、胃癌(gastric carcinoma)、胃腺癌、結腸直腸癌(colorectal cancer)、結腸直腸癌(colorectal carcinoma)、結腸直腸腺癌(colorectal adenocarcinoma)、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma of the head and neck (SCCHN))、肺癌、肺腺癌、鱗狀細胞肺癌、卵巢癌(ovarian cancer)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、卵巢漿液性腺癌、腎癌(kidney cancer)、腎臟細胞癌、腎臟透明細胞癌(renal clear cell carcinoma)、腎臟細胞腺癌、腎臟乳突細胞癌(renal papillary cell carcinoma)、胰臟癌(pancreatic cancer)、胰臟腺癌(pancreatic adenocarcinoma)、胰臟管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma)、子宮頸癌、子宮頸鱗狀細胞癌(cervical squamous cell carcinoma)、皮膚癌、黑色素瘤、食道癌、食道腺癌(esophageal adenocarcinoma)、肝癌、肝細胞癌、膽管癌(cholangiocarcinoma)、子宮癌、子宮體子宮內膜癌(uterine corpus endometrial carcinoma)、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺癌(thyroid carcinoma)、嗜鉻細胞瘤、副神經節結瘤、膀胱癌、膀胱泌尿上皮細胞癌(bladder urothelial carcinoma)、***癌、***腺癌(prostate adenocarcinoma)、肉瘤及胸腺瘤(thymoma)。
亦提供一種抑制HER3-媒介的訊息傳導之方法，其包含使表現HER3的細胞與如本發明之抗原結合分子接觸。
亦提供一種降低表現HER3的細胞之數目或活性之方法，該方法包含使表現HER3的細胞與如本發明之抗原結合分子接觸。
亦提供一種活體外 複合物，其可選擇地為經單離的，其包含與HER3結合之如本發明的抗原結合分子。
亦提供一種方法，其包含使一種含有或懷疑含有HER3的樣本與如本發明的抗原結合分子接觸，以及偵測該抗原結合分子與HER3形成的複合物。
亦提供一種選擇個體或將個體分組(stratifying)以供用於以HER3-標靶劑治療的方法，該方法包含於活體外 使來自該個體的一樣本與如本發明之抗原結合分子接觸以及偵測該抗原結合分子與HER3的一複合物之形成。
亦提供一種如本發明之抗原結合分子作為一活體外 或活體內 診斷劑或預後劑之用途。
亦提供一種如本發明之抗原結合分子於一種用於偵測、定位或成像一癌症方法之用途，可選擇地其中該癌症係選自於：一種包含表現EGFR家族成員的細胞之癌症、一種包含表現HER3的細胞之癌症、實性腫瘤、 乳癌(breast cancer)、乳癌(breast carcinoma)、管癌、胃癌(gastric cancer)、胃癌(gastric carcinoma)、胃腺癌、結腸直腸癌(colorectal cancer)、結腸直腸癌(colorectal carcinoma)、結腸直腸腺癌(colorectal adenocarcinoma)、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、肺癌、肺腺癌、鱗狀細胞肺癌、卵巢癌(ovarian cancer)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、卵巢漿液性腺癌、腎癌(kidney cancer)、腎臟細胞癌、腎臟透明細胞癌、腎臟細胞腺癌、腎臟乳突細胞癌、胰臟癌(pancreatic cancer)、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、子宮頸癌、子宮頸鱗狀細胞癌、皮膚癌、黑色素瘤、食道癌、食道腺癌、肝癌、肝細胞癌、膽管癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺癌(thyroid carcinoma)、嗜鉻細胞瘤、副神經節結瘤、膀胱癌、膀胱泌尿上皮細胞癌、***癌、***腺癌(prostate adenocarcinoma)、肉瘤及胸腺瘤。說明
本發明係有關於新穎的HER3-結合分子，其與已知的抗-HER3抗體相比具有改良的性質。
本發明人進行了HER3的細胞外區域內特定感興趣的區域結合之抗原結合分子之靶定生產。本發明之HER3-結合分子與先前技藝揭示的抗原結合分子相比，提供所欲的生物物理及/或功能性質組合。
在本發明的具體例中，該抗原結合分子能與HER3的細胞外區域之子域II結合(序列辨識編號：16)，且抑制結合的HER3分子與交互作用伙伴的締合。
特別地，本文所述之HER3-結合抗原結合分子證實會與HER3的一表位結合、此對於HER3與交互作用伙伴之締合提供了強大的抑制，強烈的抑制下游訊息傳導以及對抗範圍廣泛的癌症之優秀抗癌活性。 HER3
HER3(也被稱為例如ERBB3 LCCS2，MDA-BF-1)係確認為UniProt P21860蛋白。人類ERBB3 基因編碼的mRNA之選擇式剪接產出五種不同的同功型：同功型1(UniProt: P21860-1，v1；序列辨識編號：1)；同功型2(UniProt: P21860-2；序列辨識編號：2)，其包含位置141與序列辨識編號：1不同的序列，且其缺少對應於序列辨識編號：1之位置183至1342的胺基酸序列；同功型3(UniProt: P21860-3；序列辨識編號：3)，其相對於序列辨識編號：1包含取代C331F，且其缺少對應於序列辨識編號：1之位置332至1342的胺基酸序列；同功型4(UniProt: P21860-4；序列辨識編號：4)，其缺少對應於序列辨識編號：1之位置1至59的胺基酸序列；及同功型5(UniProt: P21860-5；序列辨識編號：5)，其缺少對應於序列辨識編號：1之位置1至643的胺基酸序列。
序列辨識編號：1至3之N端19個胺基酸構成一訊息胜肽，所以HER3同功型1、2及3的成熟形式(即加工移去訊息胜肽之後)分別具有序列辨識編號：6、7及8中顯示的胺基酸序列。
HER3之結構及功能係描述於舉例而言Cho and Leahy Science (2002) 297 (5585):1330-1333，Singer等人，Journal of Biological Chemistry (2001) 276, 44266-44274，Roskoski等人，Pharmacol. Res. (2014) 79: 34-74，Bazley and Gullick Endocrine-Related Cancer (2005) S17-S27以及Mujoo等人，Oncotarget (2014) 5(21):10222-10236之內，其等各者係以其等之全體藉此併入於此以作為參考資料。HER3為單程的跨膜ErbB受體酪胺酸激酶具有一N-端細胞外區域(序列辨識編號：9)，其包含二個富含白胺酸子域(域I及III，分別顯示於序列辨識編號：15及17內)及二個富含半胱胺酸子域(域II及IV，分別顯示於序列辨識編號：16及18內)。域II包含一β髮夾二聚合環(序列辨識編號：19)其涉及與其他HER受體分子之分子內交互作用。細胞外區域係經由一跨膜區域(序列辨識編號：10)與細胞質區域(序列辨識編號：11)鍵聯。細胞質區域包含一近膜節段(序列辨識編號：12)、一蛋白激酶域(序列辨識編號：13)及一C-端節段(序列辨識編號：14)。
通過HER3訊息傳導涉及了受體同質二聚合(即與其他HER3受體)或異質二聚合(與其他HER受體，例如HER2)以及由此引起的細胞質域之酪胺酸蛋白激酶域之自磷酸化。磷酸化的酪胺酸殘基補給轉接/效應子蛋白(如Grb2及磷脂酶Cγ(PLCγ)，其含有src同源域2(SH2)或磷酸酪胺酸結合(PTB)域。
通過HER3之訊息傳導能以配體依賴或配體獨立方式予以活化。於缺少配體的情況下，HER3受體分子通常以單體及防止受體二聚合的構形表現於細胞表面，受體二聚合的構形會使子域II的二聚合環與子域IV上的袋成為分子內接觸。HER3配體如神經調節蛋白(NRG)，例如NRG1(亦稱為調蛋白，HRG)或NRG2與細胞外區域的子域I及III結合會引起構形變化，此導致子域II的二聚合環暴露而促進受體二聚合及訊息傳導。HER3的一些癌症相關的突變可能破壞形成非活性‘封閉式’構形所需要的子域II及IV之交互作用且藉此造成二聚合環之組成性呈現以及於缺少配體結合的情況下活化HER3-媒介的訊息傳導(參見例如Jaiswal等人，Cancer Cell (2013) 23(5): 603-617)。
於此說明書中，“HER3”係指來自任何物種的HER3且包括來自任何物種的HER3同功型、片段、變異體(包括突變體)或同源物。
當使用於本文中，一蛋白的“片段”、“變異體”或“同源物”可選擇地特徵在於與參考蛋白(如參考同功型)的胺基酸序列，有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。於一些具體例中，一參考蛋白的片段、變異體、同功型或同源物可特徵在於執行參考蛋白所履行的功能之能力。
一“片段”通常係指參考蛋白的一部分。一“變異體”通常係指具有一胺基酸序列的一蛋白，該胺基酸序列相對於參考蛋白的胺基酸序列包含一或多個胺基酸取代、***、缺失或其他修飾，但保留與參考蛋白的胺基酸序列相當程度的序列同一性(如至少60%)。一“同功型”通常係指參考蛋白的一變異體，其係由與參考蛋白物種相同的物種所表現(諸如HER3同功型1至5為彼此全部的同功型)。一“同源物”通常係指參考蛋白的一變異體，其係由與參考蛋白物種相比，不同的物種所生產者。舉例而言，人類HER3同功型1(P21860-1, v1；序列辨識編號：1)及恆河獼猴HER3(UniProt: F7HEH3-1, v2；序列辨識編號：20)為彼此的同源物。同源物包括異種同源物(orthologues)。
參考蛋白的一“片段”可為任何長度(按胺基酸的數量計)，雖然可選擇地為參考蛋白(即，衍生出該片段的蛋白)長度的至少20%且可具有參考蛋白長度的50%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%之一者的最大長度。
HER3的片段可具有10、20、30、40、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900、1000、1100、1200個胺基酸之一者的最小長度，且可具有20、30、40、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900、1000、1100、1200或1300個胺基酸之一者的最大長度。
在一些具體例中，HER3為來自哺乳動物的HER3(如靈長類動物(恆河猴(rhesus)、食蟹獼猴(cynomolgus)、非人類靈長類動物或人類)及/或囓齒動物(如大鼠或鼠類)HER3)。HER3之同功型、片段、變異體或同源物可選擇地特徵在於與來自特定物種，例如人類的未成熟或成熟的HER3同功型之胺基酸序列，有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
同功型、片段、變異體或同源物可選擇地為功能同功型、片段、變異體或同源物，例如以該功能性質/活性合適的分析法予以分析測定時，具有參考HER3(如人類HER3同功型1)的功能性質/活性。舉例而言，HER3之同功型、片段、變異體或同源物可展現與：HER2、NRG1(第I、II、III、IV、V或VI型)或NRG2(α或β)之一或多者締合。
在一些具體例中，HER3包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與序列辨識編號：1至8中之一者有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的胺基酸序列同一性。
在一些具體例中，HER3的片段包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與序列辨識編號：9至19中之一者，如9、16或19中之一者有至少70%，較佳為80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的胺基酸序列同一性。 標靶分子上特定感興趣的區域
本發明之抗原結合分子經特別設計以靶定特定感興趣的HER3區域。於二步驟的方法中，於預測抗原性、功能及安全性的分析後，選擇要靶定的HER3區域。繼而使用對應靶定區域的胜肽作為免疫原來製備對HER3標靶區域專一的抗體以增加專一性單株抗體，且隨後篩選於天然狀態能結合HER3的經辨識抗體。此方法提供抗體表位精湛的掌握。
本發明之抗原結合分子可參照其等結合的HER3區域予以定義。本發明之抗原結合分子可與特定感興趣的HER3區域結合。在一些具體例中，該抗原結合分子可結合由相鄰的胺基酸序列組成(即胺基酸一級序列)之HER3的線形表位。在一些具體例中，該抗原結合分子可結合由胺基酸序列之不連續的胺基酸序列組成之HER3的構形表位。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子與HER3結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與HER3的細胞外區域(例如序列辨識編號：9所示的區域)結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與HER3的細胞外區域之子域II(例如序列辨識編號：16所示的區域)結合。
於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：229所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：229所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：230及231所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：230及231所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：230所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：230所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與對序列辨識編號：231所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：231所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。
於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：23所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：23所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：21所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：21所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：19所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：19所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：22所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：22所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。
於一些具體例中，該抗原結合分子不與對應於序列辨識編號：1的位置260至279之HER3的區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子不與對應於序列辨識編號：1的位置260至279的HER3區域之一胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子不與序列辨識編號：23所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子不與序列辨識編號：23所示的HER3區域之一胺基酸殘基接觸。
一抗體與一胜肽/多肽結合的區域可由熟悉此藝者使用本技藝熟知的各種方法來判定，包括抗體-抗原複合物之X射線共結晶學分析、胜肽掃描(peptide scanning)、致突變測繪(mutagenesis mapping)、由質譜法進行之氫-氘交換分析(hydrogen-deuterium exchange analysis)、噬菌體顯示、競爭ELISA及蛋白質水解為基的‘保護’法。此等方法係於，舉例而言，Gershoni等人，BioDrugs, 2007, 21(3):145-156中說明，其係以其之全體藉此併入於此以作為參考資料。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一種抗體所結合HER3區域相同的HER3區域或重疊的HER3區域結合，該抗體包含本文所述之抗體殖株10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93、10A6、4-35-B2或4-35-B4中的一者之VH及VL序列。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一種抗體所結合HER3區域相同的HER3區域或重疊的HER3區域結合，該抗體包含抗體殖株10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91中的一者之VH及VL序列。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一種抗體所結合HER3區域相同的HER3區域或重疊的HER3區域結合，該抗體包含抗體殖株10D1_c89之VH及VL序列。
當使用於本文中，一“胜肽”係指一種由肽鍵所鍵聯的二或更多個胺基酸單體的鏈。一胜肽典型於該區域具有大約2至50個胺基酸的長度。一“多肽”為二或更多種胜肽的聚合物鏈。多肽典型具有超過大約50個胺基酸的長度。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：1、3、4、6或8中之一者的胺基酸序列或由序列辨識編號：1、3、4、6或8中之一者的胺基酸序列所組成。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：9的胺基酸序列或由序列辨識編號：9的胺基酸序列所組成。一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：16的胺基酸序列或由序列辨識編號：16的胺基酸序列所組成。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：229的胺基酸序列或由序列辨識編號：229的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：230及231的胺基酸序列或由序列辨識編號：230及231的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：230的胺基酸序列或由序列辨識編號：230的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：231的胺基酸序列或由序列辨識編號：231的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：23的胺基酸序列或由序列辨識編號：23的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：21的胺基酸序列或由序列辨識編號：21的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：19的胺基酸序列或由序列辨識編號：19的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：22的胺基酸序列或由序列辨識編號：22的胺基酸序列所組成。
於一些具體例中，該抗原結合分子與對應於序列辨識編號：1的位置260至279之胺基酸序列所組成的一胜肽不能結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：23之胺基酸序列所組成的一胜肽不能結合。
一抗原結合分子與一特定的胜肽/多肽結合的能力可以藉由熟悉此藝者熟知的方法來分析，包括藉由ELISA、免疫墨點法(如西方墨點法)、免疫沉澱法、表面電漿子共振(SPR；參見諸如，Hearty等人，Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)或生物層干涉術(參見諸如Lad等人，(2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)之分析。
在該抗原結合分子能與包含一參考胺基酸序列之胜肽/多肽結合的具體例中，該胜肽/多肽可包含一或多個額外的胺基酸於該參考胺基酸序列之一或二端。在一些具體例中，該胜肽/多肽包含例如1-5、1-10、1-20、1-30、1-40、1-50、5-10、5-20、5-30、5-40、5-50、10-20、10-30、10-40、10-50、20-30、20-40或20-50個額外的胺基酸於該參考胺基酸序列之一或二端。
在一些具體例中，該參考序列之一或二端(即N端及C端末端)所提供的額外胺基酸，在HER3胺基酸序列的情況下係對應於該參考序列的末端位置。作為舉例，於該抗原結合分子與包含序列辨識編號：23的序列及額外的二個胺基酸於序列辨識編號：23的C端末端之胜肽能結合的情況中，對應於序列辨識編號：1的位置278及279之額外的二個胺基酸可以為蘇胺酸及離胺酸。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽係結合一種抗體，其包含本文所述之抗體殖株10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93、10A6、4-35-B2或4-35-B4中的一者之VH及VL序列。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽係結合一種抗體，其包含抗體殖株10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91中的一者之VH及VL序列。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽係結合一種抗體，其包含抗體殖株10D1_c89之VH及VL序列。 抗原結合分子
本發明提供能與HER3結合之抗原結合分子。
一種“抗原結合分子”係指一種分子，其能與標靶抗原結合且包含單株抗體、多株抗體、單專一性及多專一性抗體(如雙專一性抗體)及抗體片段(如Fv、scFv、Fab、scFab、F(ab’)2 、Fab2 、雙價抗體(diabodies)、三鏈抗體(triabodies)、scFv-Fc、微型抗體(minibodies)、單域抗體(如VhH)等等)，只要其等展現與相關的標靶分子之結合。
本發明之抗原結合分子包含能與標靶抗原結合的一部分。在一些具體例中，能與標靶抗原結合的該部分包含能與標靶抗原專一性結合的一抗體之一抗體重鏈可變異區域(VH)及一抗體輕鏈可變異區域(VL)。在一些具體例中，能與標靶抗原結合的該部分包含能與標靶抗原結合的適配體或由能與標靶抗原結合的適配體所組成，例如核酸適配體(舉例而言，於Zhou and Rossi Nat Rev Drug Discov. 2017 16(3):181-202內回顧)。在一些具體例中，能與標靶抗原結合的該部分包含抗原結合胜肽/多肽或由抗原結合胜肽/多肽所組成，例如胜肽適配體、硫氧化還原蛋白、單一體型(monobody)、抗運載蛋白(anticalin)、孔尼茲域(Kunitz domain)、厄維體(avimer)、打結素(knottin)、fynomer、atrimer、DARPin、親和體(affibody)、奈米抗體(nanobody) (即單域抗體(sdAb))阿菲林(affilin)、犰狳重複蛋白(armadillo repeat protein (ArmRP)、Obody或纖維接合素(fibronectin)-舉例而言於Reverdatto等人，Curr Top Med Chem. 2015；15(12): 1082-1101內回顧，其係以其之全體藉此併入於此以作為參考資料(亦可參見例如Boersma等人，J Biol Chem (2011) 286:41273-85以及Emanuel等人，Mabs (2011) 3:38-48)。
本發明之抗原結合分子一般包含抗原結合域，其包含能與標靶抗原專一性結合的一抗體之VH及VL。由VH及VL形成的抗原結合域於此亦可以稱為Fv區域。
一種抗原結合分子可以為，或可包含，一種抗原結合多肽或抗原結合多肽複合物。一種抗原結合分子可以包含一起形成抗原結合域之一種以上的多肽。多肽可以共價或非共價地締合。於一些具體例中，該多肽形成包含該多肽之較大多肽的一部分(如就scFv來說包含VH及VL，或就scFab來說包含VH-CH1及VL-CL)。
一種抗原結合分子可提及一種以上的多肽(如2、3、4、6或8種多肽)之非共價或共價複合物，舉例而言一種包含二種重鏈多肽及二種輕鏈多肽之似IgG抗原結合分子。
本發明之抗原結合分子可經設計且使用能與HER3結合之單株抗體(mAbs)的序列來製備。亦可使用/提供抗體之抗原結合區域，諸如單鏈可變異片段(scFv)、Fab及F(ab’)2 片段。“抗原結合區域”是一抗體的任何片段，其能與該特定抗體專一的標靶結合。
抗體通常包含六個互補性決定區域CDRs；三者於重鏈可變異(VH)區域：HC-CDR1、HC-CDR2及HC-CDR3，以及三者於輕鏈可變異(VL)區域：LC-CDR1、LC-CDR2及LC-CDR3。六個CDRs一起定義抗體之互補位(paratope)，其為抗體與標靶抗原結合的一部分。
VH區域和VL區域包含框架區域(FRs)於各CDR的任一方，其提供CDRs之架構。從N端至C端，VH區域包含下列結構：N端(term)-[HC-FR1]-[HC-CDR1]-[HC-FR2]-[HC-CDR2]-[HC-FR3]-[HC-CDR3]-[HC-FR4]-C端；且VL區域包含下列結構：N端-[LC-FR1]-[LC-CDR1]-[LC-FR2]-[LC-CDR2]-[LC-FR3]-[LC-CDR3]-[LC-FR4]-C端。
有幾種不同的定義抗體CDRs及FRs之規範，諸如於Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), Chothia等人，J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)中所述的該等，以及VBASE2，如Retter等人，Nucl. Acids Res. (2005) 33 (suppl 1): D671-D674中所述。本文所述之抗體殖株的VH區域及VL區域之CDRs及FRs之定義係依據國際IMGT(ImMunoGeneTics)資訊系統(LeFranc等人，Nucleic Acids Res. (2015) 43 (Database issue):D413-22)，其使用Lefranc等人，Dev. Comp. Immunol. (2003) 27:55-77中所述的IMGT V-DOMAIN編號規則。
在一些具體例中，該抗原結合分子包含一種能與HER3結合之抗原結合分子的CDRs。在一些具體例中，該抗原結合分子包含一種能與HER3結合之抗原結合分子的FRs。在一些具體例中，該抗原結合分子包含一種能與HER3結合之抗原結合分子的CDRs及FRs。亦即，在一些具體例中，該抗原結合分子包含一種能與HER3結合之抗原結合分子的VH區域及VL區域。 於一些具體例中，該抗原結合分子包含一VH區域及一VL區域，其係或其係衍生自，本文所述之HER3-結合抗體殖株的VH/VL區域(即抗-HER3抗體殖株10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93、10D1、10A6、4-35-B2或4-35-B4；如10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91；如10D1_c89)。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含如以下(1)至(10)中的一者之VH區域：
(1) (10D1衍生的) 包括有下列CDRs之VH區域： 具有序列辨識編號：43的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：46的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：51的該胺基酸序列之HC-CDR3， 或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(2) (10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c87、10D1_c92、10D1_c93) 包括有下列CDRs之VH區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：44的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3， 或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(3) (10D1_c85v1、10D1_c85v2) 包括有下列CDRs之VH區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3， 或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(4) (10D1_c85o1) 包括有下列CDRs之VH區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：49的該胺基酸序列之HC-CDR3， 或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(5) (10D1_c85o2) 包括有下列CDRs之VH區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：50的該胺基酸序列之HC-CDR3， 或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(6) (10D1_c89、10D1_c90) 包括有下列CDRs之VH區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3， 或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(7) (10D1_c91) 包括有下列CDRs之VH區域： 具有序列辨識編號：42的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3， 或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(8) (10A6) 包括有下列CDRs之VH區域： 具有序列辨識編號：158的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：159的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：160的該胺基酸序列之HC-CDR3， 或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(9) (4-35-B2) 包括有下列CDRs之VH區域： 具有序列辨識編號：128的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：129的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：130的該胺基酸序列之HC-CDR3， 或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(10) (4-35-B4) 包括有下列CDRs之VH區域： 具有序列辨識編號：144的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：145的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：146的該胺基酸序列之HC-CDR3， 或其之一變異體，其中HC-CDR1、HC-CDR2或HC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含如以下(11)至(24)中的一者之VH區域：
(11) (10D1) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：55的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：58的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：69的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：73的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(12) (10D1_c75、10D1_c92) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：52的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：56的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：61的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：70的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(13) (10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：52的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：56的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：62的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：70的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(14) (10D1_c78v2) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：52的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：57的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：62的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：70的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(15) (10D1_11B) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：224的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：60的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：63的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：70的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(16)(10D1_c85v1) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：52的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：56的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：64的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：70的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(17) (10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：52的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：57的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：64的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：70的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(18) (10D1_c87、10D1_c93) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：52的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：56的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：65的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：70的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(19) (10D1_c89) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：53的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：59的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：66的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：71的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(20) (10D1_c90) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：54的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：59的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：67的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：71的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(21) (10D1_c91) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：53的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：59的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：68的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：72的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(22) (10A6) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：161的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：162的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：163的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：73的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(23) (4-35-B2) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：131的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：132的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：133的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：134的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(24) (4-35-B4) 包括有下列FRs之VH區域： 具有序列辨識編號：147的該胺基酸序列之HC-FR1 具有序列辨識編號：148的該胺基酸序列之HC-FR2 具有序列辨識編號：149的該胺基酸序列之HC-FR3 具有序列辨識編號：73的該胺基酸序列之HC-FR4， 或其之一變異體，其中HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3或HC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含如以上(1)至(10)中的一者之CDRs以及如以上(11)至(24)中的一者之FRs。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含如以下(25)至(41)中的一者之VH區域：
(25) 包含如(1)之CDRs以及如(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、(18)、(19)、(20)或(21)之FRs的VH區域。
(26) 包含如(2)之CDRs以及如(11)之FRs的VH區域。
(27) 包含如(2)之CDRs以及如(12)之FRs的VH區域。
(28) 包含如(2)之CDRs以及如(13)之FRs的VH區域。
(29) 包含如(2)之CDRs以及如(14)之FRs的VH區域。
(30) 包含如(2)之CDRs以及如(15)之FRs的VH區域。
(31) 包含如(2)之CDRs以及如(18)之FRs的VH區域。
(32) 包含如(3)之CDRs以及如(16)之FRs的VH區域。
(33) 包含如(3)之CDRs以及如(17)之FRs的VH區域。
(34) 包含如(4)之CDRs以及如(17)之FRs的VH區域。
(35) 包含如(5)之CDRs以及如(17)之FRs的VH區域。
(36) 包含如(6)之CDRs以及如(19)之FRs的VH區域。
(37) 包含如(6)之CDRs以及如(20)之FRs的VH區域。
(38) 包含如(7)之CDRs以及如(21)之FRs的VH區域。
(39) 包含如(8)之CDRs以及如(22)之FRs的VH區域。
(40) 包含如(9)之CDRs以及如(23)之FRs的VH區域。
(41) 包含如(10)之CDRs以及如(24)之FRs的VH區域。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含如以下(42)至(61)中的一者之VH區域：
(42) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：24的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(43) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：25的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(44) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：26的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(45) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：27的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(46) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：28的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(47) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：29的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(48) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：30的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(49) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：31的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(50) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：32的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(51) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：33的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(52) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：34的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(53) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：35的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(54) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：36的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(55) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：37的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(56) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：38的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(57) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：39的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(58) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：40的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(59) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：127的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(60) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：143的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(61) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：157的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含如以下(62)至(71)中的一者之VL區域： (62) (10D1衍生的) 包括有下列CDRs之VL區域： 具有序列辨識編號：91的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：94的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：99的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(63) (10D1、10D1_c75、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c91、10D1_c93) 包括有下列CDRs之VL區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(64)(10D1_c76) 包括有下列CDRs之VL區域： 具有序列辨識編號：89的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(65)(10D1_c77) 包括有下列CDRs之VL區域： 具有序列辨識編號：90的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：96的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(66)(10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2) 包括有下列CDRs之VL區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：93的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(67)(10D1_c90) 包括有下列CDRs之VL區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：97的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(68)(10D1_c92) 包括有下列CDRs之VL區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：98的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(69) (10A6) 包括有下列CDRs之VL區域： 具有序列辨識編號：165的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：166的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：167的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(70) (4-35-B2) 包括有下列CDRs之VL區域： 具有序列辨識編號：136的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：137的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：138的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(71) (4-35-B4) 包括有下列CDRs之VL區域： 具有序列辨識編號：151的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：152的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：153的該胺基酸序列之LC-CDR3； 或其之一變異體，其中LC-CDR1、LC-CDR2或LC-CDR3之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含如以下(72)至(86)中的一者之VL區域：
(72) (10D1) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：106的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：113的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：123的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：126的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(73) (10D1_c75) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：100的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：107的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：114的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：124的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(74) (10D1_c76) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：101的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：108的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：115的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：124的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(75) (10D1_c77) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：102的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：108的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：116的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：124的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(76) (10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：103的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：108的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：117的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：124的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(77) (10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：103的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：108的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：118的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：124的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(78) (10D1_c87) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：103的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：109的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：119的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：124的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(79) (10D1_c89) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：104的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：110的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：120的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：125的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(80) (10D1_c90) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：105的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：110的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：121的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：124的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(81) (10D1_c91) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：104的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：111的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：122的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：125的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(82) (10D1_c92) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：100的該基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：112的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：114的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：124的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(83) (10D1_c93) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：103的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：108的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：119的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：124的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(84) (10A6) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：168的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：169的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：170的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：142的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(85) (4-35-B2) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：139的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：140的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：141的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：142的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
(86) (4-35-B4) 包括有下列FRs之VL區域： 具有序列辨識編號：154的該胺基酸序列之LC-FR1 具有序列辨識編號：155的該胺基酸序列之LC-FR2 具有序列辨識編號：156的該胺基酸序列之LC-FR3 具有序列辨識編號：142的該胺基酸序列之LC-FR4， 或其之一變異體，其中LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3或LC-FR4之一者或多者的一或二或三個胺基酸係以另一個胺基酸取代。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含一VL區域，該VL區域包含如以上(62)至(71)中的一者之CDRs之以及如以上(72)至(86)中的一者之FRs。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含如以下(87)至(102)中的一者之VL區域：
(87) 包含如(62)之CDRs以及如(72)、(73)、(74)、(75)、(76)、(77)、(78)、(79)、(80)、(81)、(82)或(83)之FRs的VL區域。
(88) 包含如(63)之CDRs以及如(72)之FRs的VL區域。
(89) 包含如(63)之CDRs以及如(73)之FRs的VL區域。
(90) 包含如(63)之CDRs以及如(76)之FRs的VL區域。
(91) 包含如(63)之CDRs以及如(78)之FRs的VL區域。
(92) 包含如(63)之CDRs以及如(79)之FRs的VL區域。
(93) 包含如(63)之CDRs以及如(81)之FRs的VL區域。
(94) 包含如(63)之CDRs以及如(83)之FRs的VL區域。
(95) 包含如(64)之CDRs以及如(74)之FRs的VL區域。
(96) 包含如(65)之CDRs以及如(75)之FRs的VL區域。
(97) 包含如(66)之CDRs以及如(77)之FRs的VL區域。
(98) 包含如(67)之CDRs以及如(80)之FRs的VL區域。
(99) 包含如(68)之CDRs以及如(82)之FRs的VL區域。
(100) 包含如(69)之CDRs以及如(84)之FRs的VL區域。
(101) 包含如(70)之CDRs以及如(85)之FRs的VL區域。
(102) 包含如(71)之CDRs以及如(86)之FRs的VL區域。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含如以下(103)至(119)中的一者之VL區域：
(103) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：74的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(104) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：75的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(105) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：76的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(106) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：77的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(107) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：78的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(108) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：79的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(109) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：80的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(110) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：81的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(111) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：82的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(112) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：83的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(113) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：84的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(114) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：85的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(115) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：86的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(116) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：87的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(117) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：135的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(118) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：150的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
(119) 一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：164的胺基酸序列有至少70%的序列同一性更佳為至少75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含如以上(1)至(61)中的一者之VH區域以及如以上(62)至(119)中的一者之VL區域。
在如本發明之一或更多個胺基酸係由另一個胺基酸取代的具體例中，該等取代可以為舉例而言如下表之保留式取代。在一些具體例中，中間欄位同一塊內的胺基酸為經取代的。在一些具體例中，最右邊的欄位同一行的胺基酸為經取代的：
在一些具體例中，取代可以為功能上保留型。亦即，在一些具體例中包含該取代的抗原結合分子的一或更多種功能性質(如標靶結合)與等效未經取代的分子相比，可能不受該取代影響(或可能不實質影響)。
一種抗體之抗原結合區域的VH及VL區域一起構成Fv區域。在一些具體例中，如本發明之抗原結合分子包含與HER3結合之Fv區域或由與HER3結合之Fv區域所組成。在一些具體例中，該Fv的VH及VL區域係提供為由一鏈接子區域連結的單一多肽，即單鏈Fv(scFv)。
在一些具體例中本發明之抗原結合分子包含一種免疫球蛋白重鏈恆定序列的一或多個區域。在一些具體例中該免疫球蛋白重鏈恆定序列為，或衍生自IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA(例如IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM之重鏈恆定序列。
於一些具體例中，該免疫球蛋白重鏈恆定序列為人類免疫球蛋白G 1恆定(IGHG1；UniProt: P01857-1，v1；序列辨識編號：171)。序列辨識編號：171之位置1至98形成CH1區域(序列辨識編號：172)。序列辨識編號：171之位置99至110形成CH1與CH2區域之間的一鉸鏈區域(序列辨識編號：173)。序列辨識編號：171之位置111至223形成CH2區域(序列辨識編號：174)。序列辨識編號：171之位置224至330形成CH3區域(序列辨識編號：175)。
製備例示性抗原結合分子可使用pFUSE-CHIg-hG1，其於CH3區域包含取代D356E、L358M(根據EU編號所編號的位置)。pFUSE-CHIg-hG1所編碼的CH3區域之胺基酸序列顯示於序列辨識編號：176內。將可以理解的是可以依照本文所述之抗原結合分子的Fc區域之修飾來提供CH3區域進一步的取代。
於一些具體例中，一CH1區域包含下列或由下列所組成：序列辨識編號：172的序列，或與序列辨識編號：172的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性的一序列。於一些具體例中，一CH1-CH2鉸鏈區域包含下列或由下列所組成：序列辨識編號：173的序列，或與序列辨識編號：173的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性的一序列。於一些具體例中，一CH2區域包含下列或由下列所組成：序列辨識編號：174的序列，或與序列辨識編號：174的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性的一序列。於一些具體例中，一CH3區域包含下列或由下列所組成：序列辨識編號：175或176的序列，或與序列辨識編號：175或176的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性的一序列。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含一免疫球蛋白輕鏈恆定序列之一或多個區域。在一些具體例中，免疫球蛋白輕鏈恆定序列為人類免疫球蛋白κ恆定(IGKC；Cκ；UniProt: P01834-1，v2；序列辨識編號：177)。在一些具體例中，免疫球蛋白輕鏈恆定序列為人類免疫球蛋白λ恆定(IGLC；Cλ)，例如IGLC1、IGLC2、IGLC3、IGLC6或IGLC7。於一些具體例中，一CL區域包含下列或由下列所組成：序列辨識編號：177的序列，或與序列辨識編號：177的胺基酸序列有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性的一序列。
一種抗體之抗原結合區域的VL及輕鏈恆定(CL)區域，以及VH區域及重鏈恆定1(CH1)區域一起構成Fab區域。在一些具體例中，該抗原結合分子包含一Fab區域，其包含VH、CH1、VL及CL(如Cκ或Cλ)。在一些具體例中，該Fab區域包含一種包含VH及CH1之多肽(如VH-CH1融合多肽)，以及一種包含VL及CL之多肽(如VL-CL融合多肽)。在一些具體例中，該Fab區域包含一種包含VH及CL之多肽(如VH-CL融合多肽)以及一種包含VL及CH之多肽(如VL-CH1融合多肽)；亦即在一些具體例中，該Fab區域為CrossFab區域。在一些具體例中，該Fab或CrossFab之VH、CH1、VL及CL區域係提供為由鏈接子區域連結的單一多肽，即如一單鏈Fab(scFab)或單鏈CrossFab (scCrossFab)。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含與HER3結合之Fab區域或由與HER3結合之Fab區域所組成。
在一些具體例中，本文所述之抗原結合分子包含與HER3結合之整個抗體或由與HER3結合之整個抗體所組成。當使用於本文中，“整個抗體”係指一種抗體其具有與一免疫球蛋白(Ig)實質相似的結構之結構。不同種類的免疫球蛋白及其等之結構係描述於舉例而言Schroeder and Cavacini J Allergy Clin Immunol. (2010) 125(202): S41-S52之內，其係以其之全體藉此併入於此以作為參考資料。
G類型的免疫球蛋白(即IgG)為~150 kDa醣蛋白，其包含二重鏈及二輕鏈。從N-至C-端，重鏈包含一VH接著包含三個恆定域(CH1、CH2及CH3)之重鏈恆定區域，以及同樣地輕鏈包含一VL接著一CL。免疫球蛋白取決於重鏈而可以分類為IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA(例如IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM。輕鏈可以為卡帕(kappa) (κ)或拉目達(lambda) (λ)。
在一些具體例中，本文所述之抗原結合分子包含下列或由下列所組成：一種與HER3結合之IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA(例如IgA1、IgA2)、IgD、IgE或IgM。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子對於HER3為至少單價的結合。結合價係指抗原結合分子上關於特定的抗原決定位之結合位址數量。因此，於一些具體例中，該抗原結合分子包含至少一個HER3結合位址。
在一些具體例中，該抗原結合分子包含一個以上的HER3結合位址，如2、3或4個結合位址。該結合位址可以是相同或不同的。在一些具體例中，該抗原結合分子對於HER3為例如為二價、三價或四價的。
本發明之態樣係有關於多專一性抗原結合分子。按“多專一性”其係意指該抗原結合分子展現出專一性結合一種以上的標靶。在一些具體例中，該抗原結合分子是雙專一性的抗原結合分子。在一些具體例中，該抗原結合分子包含至少二種不同的抗原決定域(即至少二種抗原決定域，例如包含非同一的VHs及VLs)。
在一些具體例中，該抗原結合分子與HER3及另一種標靶結合(例如HER3以外的抗原)，所以至少是雙專一性的。術語“雙專一性”意指該抗原結合分子能與至少二種不同的抗原決定位專一性結合。
將可以理解的是如本發明之抗原結合分子(例如多專一性抗原結合分子)可包含能與抗原結合分子專一的標靶結合之抗原結合分子。舉例而言，能與HER3及HER3以外的抗原結合之抗原結合分子可包含：(i)一種能與HER3結合的抗原結合分子，以及(ii)一種能與HER3以外的抗原結合的抗原結合分子。
亦可以理解的是如本發明之抗原結合分子(例如多專一性抗原結合分子)可包含能與抗原結合分子專一的標靶結合之抗原結合多肽或抗原結合多肽複合物。舉例而言，如本發明之抗原結合分子可包含例如(i)一種能與HER3結合的抗原結合多肽複合物，其包含一輕鏈多肽(包含結構VL-CL)及一重鏈多肽(包含結構VH-CH1-CH2-CH3)，以及(ii)一種能與HER3以外的抗原結合的抗原結合多肽複合物，其包含一輕鏈多肽(包含結構VL-CL)及一重鏈多肽(包含結構VH-CH1-CH2-CH3)。
於一些具體例中，一種較大的抗原結合分子(例如一種多專一性抗原結合分子)之組分抗原結合分子可以稱為較大的抗原結合分子之例如一“抗原結合域”或“抗原結合區域”。
在一些具體例中，該抗原結合分子包含一種能與HER3結合的抗原結合分子，以及能與HER3以外的抗原結合的一抗原結合分子。在一些具體例中，該HER3以外的抗原為免疫細胞表面分子。在一些具體例中，該HER3以外的抗原為癌細胞抗原。在一些具體例中該HER3以外的抗原為受體分子，例如細胞表面受體。在一些具體例中該HER3以外的抗原為細胞訊息傳導分子，例如細胞介素、趨化介素(chemokines)、干擾素、介白素或淋巴激素。在一些具體例中該HER3以外的抗原為生長因子或激素。
癌細胞抗原為癌細胞表現或過度表現的抗原。癌細胞抗原可為任何胜肽/多肽、醣蛋白、脂蛋白、聚醣、醣脂、脂質或其片段。癌細胞抗原表現可能與癌症有關連。癌細胞抗原可能由癌細胞異常表現(譬如癌細胞抗原可能以異常的局部化(localisation)表現)，或可能以癌細胞的異常結構表現。癌細胞抗原可能能夠引發免疫反應。在一些具體例中，該抗原表現於癌細胞之細胞表面(即癌細胞抗原為癌細胞表面抗原)。在一些具體例中，本文所述之抗原結合分子所結合之該抗原的一部份係顯現於癌細胞之外表面上(即細胞外的)。癌細胞抗原可為癌症相關的抗原。在一些具體例中，癌細胞抗原為一種抗原其之表現與癌症的發展、進程或症狀嚴重性有相關。癌症相關的抗原可能與癌症的肇因或病理有相關，或可能為癌症造成的異常表現。在一些具體例中，該癌細胞抗原為一種抗原，癌症細胞所表現的該抗原舉例來說與可比較的非癌細胞(譬如由相同組織/細胞類型衍生的非癌細胞)表現的位準相比之下，為向上調節的(譬如於RNA及/或蛋白位準)。在一些具體例中，該癌症相關的抗原可能優先由癌細胞表現，且可比較的非癌細胞(譬如由相同組織/細胞類型衍生的非癌細胞)不表現。在一些具體例中，該癌症相關的抗原可為突變的致癌基因或突變的抑瘤基因之產物。在一些具體例中，該癌症相關的抗原可為過度表現的細胞蛋白之產物、致癌病毒生產的癌抗原、瘤胎抗原或細胞表面醣脂或醣蛋白。
在一些具體例中，該HER3以外的抗原為HER3-相關的癌症細胞表現的抗原。HER3-相關的癌症可為表現HER3的癌症(如於細胞表面表現HER3蛋白)；此等癌症可稱為“HER3-陽性”癌症。HER3-相關的癌症包括HER3基因/蛋白表現為癌症之風險因子，及/或與癌症之開始、發展、進程或症狀的嚴重性及/或轉移有正相關的癌症。HER3-相關的癌症包括於Zhang等人之，Acta Biochimica et Biophysica Sinica (2016) 48(1):39-48及Sithanandam and Anderson Cancer Gene Ther (2008) 15(7):413-448之內所述的該等，其等二者係以其等之全體藉此併入於此以作為參考資料。在一些具體例中，HER3-相關的癌症可能為肺癌(如NSCLC)、黑色素瘤、乳癌、胰臟癌、***癌、卵巢癌、胃癌(gastric cancer)、結腸癌或口腔癌。
免疫細胞表面分子可為免疫細胞之細胞表面或細胞表面上表現之任何胜肽/多肽、醣蛋白、脂蛋白、聚醣、醣脂、脂質或其片段。在一些具體例中，本發明之抗原結合分子所結合之免疫細胞表面分子的一部份係位於免疫細胞之外表面上(即細胞外的)。免疫細胞表面分子可表現於任何免疫細胞之細胞表面。在一些具體例中，免疫細胞可以是一種造血來源的細胞，諸如嗜中性球、嗜酸性球、嗜鹼性球、樹突細胞、淋巴球或單核球。淋巴球可以是諸如T細胞、B細胞、自然殺手(NK)細胞、NKT細胞或先天性淋巴細胞(ILC)，或其之前驅物(諸如胸腺細胞或前-B(pre-B)細胞)。在一些具體例中，免疫細胞表面分子可以為共刺激分子(諸如CD28、OX40、4-1BB、ICOS或CD27)或其配體。在一些具體例中，免疫細胞表面分子可以為免疫查核點分子(諸如PD-1、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、VISTA、TIGIT或BTLA)或其配體。
如本發明之多專一性抗原結合分子可以呈任何合適的格式提供，諸如Brinkmann and Kontermann MAbs (2017) 9(2): 182-212之內所述的該等格式，其之整體內容藉此併入以作為參考資料。適合的格式包括Brinkmann and Kontermann MAbs (2017) 9(2): 182-212之圖2內所示的該等：抗體複合物，例如IgG2 、F(ab’)2 或CovX-Body；IgG或似IgG分子，例如IgG、嵌合IgG、κλ-體共同重鏈(κλ-body common HC)；CH1/CL融合蛋白，例如scFv2-CH1/CL、VHH2-CH1/CL；‘只有可變異域’雙專一性抗原結合分子，例如串連(tandem)scFv (taFV)、三價抗體(triplebodies)、雙價抗體(diabodies) (Db)、dsDb、Db(kih)、DART、scDB、dsFv-dsFv、tandAbs、三頭(triple head)、串連dAb/VHH、四價dAb.VHH；非Ig融合蛋白，例如scFv2 -白蛋白、scDb-白蛋白、taFv-白蛋白、taFv-毒素、迷你抗體(miniantibody)、DNL-Fab2 、DNL-Fab2 -scFv、DNL-Fab2 -IgG-細胞介素2 、ImmTAC (TCR-scFv)；經修飾的Fc及CH3融合蛋白，例如scFv-Fc(kih)、scFv-Fc(CH3電荷對(charge pair))、scFv-Fc (EW-RVT)、scFv-fc (HA-TF)、scFv-Fc(種子小體(SEEDbody))、taFv-Fc(kih)、scFv-Fc(kih)-Fv、Fab-Fc(kih)-scFv、Fab-scFv-Fc(kih)、Fab-scFv-Fc(BEAT)、Fab-scFv-Fc(種子小體)、DART-Fc、scFv-CH3(kih)、TriFabs；Fc融合，例如Di-雙價抗體、scDb-Fc、taFv-Fc、scFv-Fc-scFv、HCAb-VHH、Fab-scFv-Fc、scFv4 -Ig、scFv2 -Fcab；CH3融合，例如Dia-雙價抗體、scDb-CH3；IgE/IgM CH2融合，例如scFv-EHD2-scFv、scFvMHD2-scFv；Fab融合蛋白，例如Fab-scFv(雙抗體(bibody))、Fab-scFv2 (三抗體(tribody))、Fab-Fv、Fab-dsFv、Fab-VHH、正交性Fab-Fab；非Ig融合蛋白，例如DNL-Fab3 、DNL-Fab2 -scFv、DNL-Fab2 -IgG-細胞介素2 ；不對稱IgG或似IgG分子，例如IgG(kih)、IgG(kih)共同輕鏈(common LC)、ZW1 IgG共同輕鏈、Biclonics共同輕鏈、CrossMab、CrossMab(kih)、scFab-IgG(kih)、Fab-scFab-IgG(kih)、正交性Fab IgG(kih)、DuetMab、CH3電荷對+CH1/CL電荷對、鉸鏈/CH3電荷對、鏈交換結構域小體(SEED-body)、Duobody、四合一-CrossMab(kih)、LUZ-Y共同輕鏈；LUZ-Y scFab-IgG、FcFc*；附加及Fc-經修飾的IgGs，例如IgG(kih)-Fv、IgG HA-TF-Fv、IgG(kih)scFab、scFab-Fc(kih)-scFv2、scFab-Fc(kih)-scFv、半DVD-Ig、DVI-Ig(四合一)、CrossMab-Fab；經修飾的Fc及CH3融合蛋白，例如Fab-Fc(kih)-scFv、Fab-scFv-Fc(kih)、Fab-scFv-Fc(BEAT)、Fab-scFv-Fc-種子小體、TriFab；附加的IgGs-HC融合，例如IgG-HC、scFv、IgG-dAb、IgG-taFV、IgG-CrossFab、IgG-正交性Fab、IgG-(CαCβ) Fab、scFv-HC-IgG、串連Fab-IgG(正交性Fab) Fab-IgG(CαCβ Fab)、Fab-IgG(CR3)、Fab-鉸鏈-IgG(CR3)；附加的IgGs - LC融合，例如IgG-scFv(LC)、scFv(LC)-IgG、dAb-IgG；附加的IgGs-Hc及LC融合，例如DVD-Ig、TVD-Ig、CODV-Ig、scFv4 -IgG、Zybody；Fc融合，例如Fab-scFv-Fc、scFv4 -Ig；F(ab’)2融合，例如F(ab’)2 -scFv2 ；CH1/CL融合蛋白諸如scFv2 -CH1-鉸鏈/CL；經修飾的IgGs，例如DAF(二合一-IgG)、DutaMab、Mab2 ；及非Ig融合，例如DNL-Fab4 -IgG。
熟習此項技術者能設計及製備雙專一性抗原結合分子。生產雙專一性抗原結合分子的方法包括例如，用可還原的雙硫或非可還原的硫醚鍵進行抗原結合分子或抗體片段之化學交聯作用，舉例而言，如Segal and Bast, 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1-2.13.16之內所述者，其之整體內容藉此併入以作為參考資料。舉例而言，可以使用N -琥珀醯亞胺-3-(-2-吡啶二硫代)-丙酸酯(SPDP)、經由鉸鏈區域SH-基團予以化學交聯諸如Fab片段，以創造雙硫鍵聯的雙專一性F(ab)2 異二聚體。
其他生產雙專一性抗原結合分子的方法包括融合生產抗體的融合瘤，諸如用聚乙二醇來生產能分泌雙專一性抗體的四源雜交瘤細胞(quadroma cell)，舉例而言如D. M. and Bast, B. J. 2001. Production of Bispecific Antigen-binding molecules. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2.13:2.13.1–2.13.16之內所述者。
如本發明之雙專一性抗原結合分子亦可以從諸如一種編碼抗原結合分子的多肽之核酸建構物予以表現而重組地生產，舉例而言如Antibody Engineering: Methods and Protocols，第二版(Humana Press, 2012)，於第40章:Production of Bispecific Antigen-binding molecules: Diabodies and Tandem scFv (Hornig and Färber-Schwarz)，或法國，How to make bispecific antigen-binding molecules, Methods Mol. Med. 2000；40:333-339之內所述者，該等二者之整體內容藉此併入以作為參考資料。舉例而言，一種編碼二種抗原結合片段之輕及重鏈可變異域的DNA建構物(即，能結合HER3的抗原結合片段之輕及重鏈可變異域，以及能結合另一種標靶蛋白的抗原結合片段之輕及重鏈可變異域)，且於抗原結合片段之間包括編碼一合適的鏈接子或二聚合域之序列，可藉由分子選殖技術予以製備。重組雙專一性抗體之後能藉由於一合適的宿主細胞(諸如一種哺乳動物宿主細胞)內表現建構物(諸如於活體外 )來生產，以及表現的重組雙專一性抗體繼而能可選擇地予以純化。 Fc區域
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區域。
於IgG、IgA及IgD同型中，Fc區域包含來自一種多肽的CH2及CH3區域，以及來自另一種多肽的CH2及CH3區域。來自二種多肽的CH2及CH3區域一起形成Fc區域。於IgM及IgE同型中，Fc區域包含三種恆定域(CH2、CH3及CH4)，以及來自二種多肽的CH2至CH4一起形成Fc區域。
在依據本發明的各種態樣之較佳具體例中，一Fc區域包含二種多肽，各多肽包含一CH2區域及一CH3區域。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區域，其包含CH2及CH3區域之一者或多者內的修飾促進Fc區域的締合。一種抗原結合分子的組分多肽之重組共表現以及隨後的締合導致數種可能的組合。為了改良重組生產的抗原結合分子內所欲的多肽組合的產量，導入Fc區域修飾以促進所欲的重鏈多肽組合之締合是有利的。修飾可促進不同的多肽鏈之CH2及/或CH3區域之間的疏水及/或靜電交互作用。合適的修飾係舉例而言於Ha等人，Front. Immnol (2016) 7:394之內所述，其係以其之全體藉此併入以作為參考資料。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區域，其包含如下列格式之一者成對的取代於Fc區域的CH3區域，如Ha等人，Front. Immnol (2016) 7:394之表1所示：KiH、KiHs-s 、HA-TF、ZW1、7.8.60、DD-KK、EW-RVT、EW-RVTs-s 、鏈交換結構域或A107。
在一些具體例中，Fc區域包含“旋鈕至孔洞(knob-into-hole)”或“KiH”修飾，舉例而言如例如US 7,695,936及Carter, J Immunol Meth 248, 7-15 (2001)之內所述。在此等具體例中，Fc區域的CH3區域中之一者包含一“旋鈕”修飾，且另一CH3區域包含一“孔洞”修飾。該“旋鈕”及“孔洞”修飾係座落於各自的CH3區域內以便該“旋鈕”可以放在“孔洞”內俾以促進多肽的異質二聚合(並抑制同質二聚合)及/或穩定異二聚體。藉由用具有較大側鏈的胺基酸(例如酪胺酸或色胺酸)取代具有較小鏈的該等來建構旋鈕。藉由用具有較小側鏈的胺基酸(例如丙胺酸或蘇胺酸)取代具有較大側鏈的該等來創造孔洞。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子之Fc區域的CH3區域中之一者包含取代(本文之Fc、CH2及CH3區域的位置/取代編號係根據如下列所述之EU編號系統：Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991)T366W，且Fc區域的另一CH3區域包含取代Y407V。在一些具體例中，該抗原結合分子之Fc區域的CH3區域中之一者包含取代T366W，且Fc區域的另一CH3區域包含取代T366S及L368A。在一些具體例中，該抗原結合分子之Fc區域的CH3區域中之一者包含取代T366W，且Fc區域的另一CH3區域包含取代Y407V、T366S及L368A。
在一些具體例中，Fc區域包含如舉例而言於WO 2014/131694 A1之內所述的“DD-KK”修飾。在一些具體例中，CH3區域中之一者包含取代K392D及K409D，且Fc區域之另一CH3區域包含取代E356K及D399K。該修飾促進CH3區域之間的靜電交互作用。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含如於Labrijn等人，Proc Natl Acad Sci U S A. (2013) 110(13):5145-50之內所述予以修飾的Fc區域，稱為‘Duobody’格式。在一些具體例中，CH3區域中之一者包含取代K409R，且Fc區域之另一CH3區域包含取代K405L。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區域，其含有如於Strop等人，J Mol Biol. (2012) 420(3):204-19之內所述的“EEE-RRR”修飾。在一些具體例中，CH3區域中之一者包含取代D221E、P228E及L368E，且Fc區域之另一CH3區域包含取代D221R、P228R及K409R。
在一些具體例中，該抗原結合分子包含一Fc區域，其包含如於Choi等人，Mol Cancer Ther (2013) 12(12):2748–59之內所述的“EW-RVT”修飾。在一些具體例中，CH3區域中之一者包含取代K360E及K409W，且Fc區域之另一CH3區域包含取代Q347R、D399V及F405T。
在一些具體例中，CH3區域之一者包含取代S354C，且Fc區域的另一CH3區域包含取代Y349C。導入此等半胱胺酸殘基導致Fc區域的二CH3區域之間形成雙硫鍵，進一步穩定異二聚體(Carter (2001), J Immunol Methods 248, 7-15)。
在一些具體例中，Fc區域包含“KiHS-S ”修飾。在一些具體例中CH3區域中之一者包含取代T366W及S354C，且Fc區域之另一CH3區域包含取代T366S、L368A、Y407V及Y349C。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區域，其包含如於Davis等人，Protein Eng Des Sel (2010) 23(4):195-202之內所述的“鏈交換結構域”修飾，其中人類IgG1 CH3及IgA CH3的β-股節段有交換。
在一些具體例中，CH3區域中之一者包含取代S364H及F405A，且Fc區域之另一CH3區域包含取代Y349T及T394F(參見諸如Moore等人，MAbs (2011) 3(6):546-57)。
在一些具體例中，CH3區域中之一者包含取代T350V、L351Y、F405A及Y407V，且Fc區域之另一CH3區域包含取代T350V、T366L、K392L及T394W(參見諸如Von Kreudenstein等人，MAbs (2013) 5(5):646-54)。
在一些具體例中，CH3區域中之一者包含取代K360D、D399M及Y407A，且Fc區域之另一CH3區域包含取代E345R、Q347R、T366V及K409V(參見諸如Leaver-Fay等人，Structure (2016) 24(4):641-51)。
在一些具體例中，CH3區域中之一者包含取代K370E及K409W，且Fc區域之另一CH3區域包含取代E357N、D399V及F405T(參見諸如Choi等人，PLoS One (2015) 10(12):e0145349)。
Fc媒介的功能包括Fc受體結合、抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞媒介的吞噬作用(ADCP)、補體依賴性細胞毒性(CDC)、形成膜攻擊複合物(MAC)、細胞去顆粒作用、生產細胞介素及/或趨化介素(chemokines)，以及抗原加工與呈現。
影響Fc媒介的功能之抗體Fc區域之修飾為本技藝已知的，諸如例如於Wang等人，Protein Cell (2018) 9(1):63-73中所述的該等，其係以其之全體藉此併入以作為參考資料。已知會影響抗體效應子功能的例示性Fc區域修飾係摘要於Wang等人，Protein Cell (2018) 9(1):63-73的表1中。
Stavenhagen等人之Cancer Res. (2007)內描述取代組合F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L以增強對FcγRIIIa的結合，且藉此提升ADCC。Lazar等人，Proc Natl Acad Sci USA. (2006)103:4005-4010內描述取代組合S239D/I332E或S239D/I332E/A330L以增強對FcγRIIIa的結合，且藉此增強ADCC。亦描述取代組合S239D/I332E/A330L以減少對FcγRIIb的結合，且藉此增強ADCC。Shields等人，J Biol Chem. (2001) 276:6591-6604內描述取代組合S298A/E333A/K334A以增強對FcγRIIIa的結合，且藉此增強ADCC。Mimoto等人，MAbs. (2013): 5:229-236內描述取代組合L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A於一重鏈及取代組合D270E/K326D/A330M/K334E於另一重鏈以增強對FcγRIIIa的結合，且藉此增強ADCC。Richards等人，Mol Cancer Ther. (2008) 7:2517-2527內描述取代組合G236A/S239D/I332E以增強對FcγRIIa的結合及增強對FcγRIIIa的結合，且藉此增強ADCP。
Idusogie等人之J Immunol. (2001) 166(4):2571-5內描述取代組合K326W/E333S以增強對C1q的結合，且藉此增強CDC。Moore等人之MAbs. (2010) 2(2):181-9內描述取代組合S267E/H268F/S324T以增強對C1q的結合，且藉此增強CDC。Natsume等人，Cancer Res. (2008) 68(10):3863-72內描述的取代組合據報導會增強對C1q的結合，且藉此增強CDC。Diebolder等人之Science (2014) 343(6176):1260-3內描述取代組合E345R/E430G/S440Y以增強六聚體化，且藉此增強CDC。
Dall’Acqua等人之J Immunol. (2002) 169:5171-5180內描述取代組合M252Y/S254T/T256E以增強於pH 6.0對FcRn的結合，且藉此增高抗原結合分子半生期。Zalevsky等人之Nat Biotechnol. (2010) 28:157-159內描述取代組合M428L/N434S以增強於pH 6.0對FcRn的結合，且藉此增高抗原結合分子半生期。
於本文描述重鏈恆定區域/Fc區域/CH2-CH3區域/CH2區域/CH3區域為包含“對應於”參考位置/取代的位置/取代的情況中，可預期同源重鏈恆定區域/Fc區域/CH2-CH3區域/CH2區域/CH3區域之等效位置/取代。
於描述Fc區域為包含特定的位置/取代的情況中，該位置/取代可存在於一起形成Fc區域的一或二種多肽鏈內。
除非另有規定，否則本文之位置係指人類免疫球蛋白恆定區域胺基酸序列根據如下列所述之EU編號系統所編號的位置：Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991。作為說明，人類IgG1內的取代L242C及K334C對應於根據序列辨識編號：171所編號的人類IgG1恆定區域之位置125之L>C取代以及位置217之K>C取代。
同源重鏈恆定區域為包含一胺基酸序列之重鏈恆定區域，該胺基酸序列與人類IgG1的重鏈恆定區域(即序列辨識編號：171中顯示的胺基酸序列)，有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。同源Fc區域為包含多肽之Fc區域，該多肽與人類IgG1的CH2-CH3區域(即序列辨識編號：174及175中顯示的胺基酸序列)，有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。同源CH2區域為包含一胺基酸序列之CH2區域，該胺基酸序列與人類IgG1的CH2區域(即序列辨識編號：174中顯示的胺基酸序列)，有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。同源CH3區域為包含一胺基酸序列之CH3區域，該胺基酸序列與人類IgG1的CH3區域(即序列辨識編號：175中顯示的胺基酸序列)，有至少60%，較佳為70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
可藉由序列排比來辨識出人類IgG1內辨識的該等對應的位置之對應的位置，序列排比可例如使用序列排比軟體諸如ClustalOmega(Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)來完成。
在一些具體例中本發明之抗原結合分子包含一Fc區域，其包含修飾以增強Fc媒介的功能。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增強ADCC。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增強ADCP。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增強CDC。一種包含含有會增強Fc媒介的功能(如ADCC、ADCP、CDC)之修飾的Fc區域之抗原結合分子，與包含對應的未修飾的Fc區域之抗原結合分子相比，會誘發增高位準的相關效應子功能。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區域，其包含修飾以增強對一或更多Fc受體(如FcγRIIa、FcγRIIIa)的親和力。增強對Fc受體的親和力之修飾能增強Fc-媒介的效應子功能例如抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)及/或抗體依賴性細胞的吞噬作用(ADCP)。在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區域，其包含修飾以降低對C1q的親和力；此修飾降低補體依賴性細胞毒性(CDC)，這可能是理想的。在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含一Fc區域，其包含修飾以增強六聚體的形成。能增強對一或更多Fc受體的親和力、降低對C1q的親和力及/或增強六聚體形成之Fc區域之修飾係描述於舉例而言Saxena and Wu Front Immunol. (2016) 7:580之內，其係以其之全體藉此併入以作為參考資料。在一些具體例中本發明之抗原結合分子包含含有CH2/CH3之Fc區域，該CH2/CH包含如Saxena and Wu Front Immunol. (2016) 7:580的表1所示之一或更多取代。
在一些具體例中本發明之抗原結合分子包含一Fc，其包含修飾以增強與一Fc受體的結合。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增加與Fcγ受體的結合。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增加與FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa及FcγRIIIb之一者或多者的結合。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增加與FcγRIIIa的結合。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增加與FcγRIIa的結合。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增加與FcγRIIb的結合。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增加與FcRn的結合。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增加與補體蛋白的結合。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增加或降低與C1q的結合。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以促進抗原結合分子之六聚體化。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增加抗原結合分子半生期。在一些具體例中該Fc區域包含修飾以增加共接合(co-engagement)。
於此說明書中，“Fcγ受體”可來自任何物種，且包括來自任何物種的同功型、片段、變異體(包括突變體)或同源物。同樣地，“FcγRI”、“FcγRIIa”、“FcγRIIb”、“FcγRIIc"、“FcγRIIIa”及“FcγRIIIb”分別指來自任何物種的FcγRI/FcγRIIa/FcγRIIb/FcγRIIc/FcγRIIIa/FcγRIIIb，且包括來自任何物種的同功型、片段、變異體(包括突變體)或同源物。人類有六個不同種類的Fcγ受體(括號內顯示小鼠異種同源物)：FcγRI (mFcγRI)、FcγRIIa(mFcγRIII)、FcγRIIb(mFcγRIIb)、FcγRIIc、FcγRIIIa(mFcγRIV)及FcγRIIIb。
變異體Fcγ受體包括例如人類FcγRIIIa的158V及158F多型體以及人類FcγRIIa的167H及167R多型體。
在一些具體例中本發明之抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域或一CH2-CH3區域之再一種多肽，其含有)下列之一或更多者(例如1、2、3、4、5、6、7或8者)：C於對應於位置242的位置處；C於對應於位置334的位置處；A於對應於位置236的位置處；D於對應於位置239的位置處；E於對應於位置332的位置處；L於對應於位置330的位置處；K於對應於位置345的位置處；以及G於對應於位置430的位置處。
在一些具體例中本發明之抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域或一CH2-CH3區域之再一種多肽，其含有)下列取代(或對應的取代)之一或更多者(例如1、2、3、4、5、6、7或8者)：L242C、K334C、G236A、S239D、I332E、A330L、E345K及E430G。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)C於對應於位置242的位置處。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)C於對應於位置334的位置處。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)C於對應於位置242的位置處以及C於對應於位置334的位置處。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)A於對應於位置236的位置處。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)D於對應於位置239的位置處。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)A於對應於位置236的位置處以及D於對應於位置239的位置處。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)E於對應於位置332的位置處。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)A於對應於位置236的位置處、D於對應於位置239的位置處以及E於對應於位置332的位置處。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)L於對應於位置330的位置處。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)A於對應於位置236的位置處、D於對應於位置239的位置處、E於對應於位置332的位置處以及L於對應於位置330的位置處。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH3區域之再一種多肽，其含有)K於對應於位置345的位置處。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH3區域之再一種多肽，其含有)G於對應於位置430的位置處。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)K於對應於位置345的位置處以及G於對應於位置430的位置處。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)C於對應於位置242的位置處、C於對應於位置334的位置處、A於對應於位置236的位置處、以及D於對應於位置239的位置處。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)C於對應於位置242的位置處、C於對應於位置334的位置處、A於對應於位置236的位置處、D於對應於位置239的位置處、及E於對應於位置332的位置處。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)C於對應於位置242的位置處、C於對應於位置334的位置處、A於對應於位置236的位置處、D於對應於位置239的位置處、E於對應於位置332的位置處，以及L於對應於位置330的位置處。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域或一CH2-CH3區域之再一種多肽，其含有)C於對應於位置242的位置處、C於對應於位置334的位置處、K於對應於位置345的位置處、以及G於對應於位置430的位置處。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代L242C(或等效取代)。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代K334C(或等效取代)。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代L242C(或等效取代)及取代K334C(或等效取代)。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代G236A(或等效取代)。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代S239D(或等效取代)。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代G236A(或等效取代)及取代S239D(或等效取代)。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代I332E(或等效取代)。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代G236A(或等效取代)、取代S239D(或等效取代)及取代I332E(或等效取代)。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代A330L(或等效取代)。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代G236A(或等效取代)、取代S239D(或等效取代)、取代I332E(或等效取代)及取代A330L(或等效取代)。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH3區域之再一種多肽，其含有)取代E345K(或等效取代)。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH3區域之再一種多肽，其含有)取代E430G(或等效取代)。在一些具體例中該Fc區域包含(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代E345K(或等效取代)及取代E430G(或等效取代)。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代L242C(或等效取代)、取代K334C(或等效取代)、取代G236A(或等效取代)、及取代S239D(或等效取代)。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代L242C(或等效取代)、取代K334C(或等效取代)、取代G236A(或等效取代)、取代S239D(或等效取代)、及取代I332E(或等效取代)。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域、一CH2-CH3區域或一CH2區域之再一種多肽，其含有)取代L242C(或等效取代)、取代K334C(或等效取代)、取代G236A(或等效取代)、取代S239D(或等效取代)、取代I332E(或等效取代)、及取代A330L(或等效取代)。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域或一CH2-CH3區域之再一種多肽，其含有)取代L242C(或等效取代)、取代K334C(或等效取代)、取代E345K(或等效取代)及取代E430G(或等效取代)。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域或一CH2-CH3區域之再一種多肽，其含有)下列取代(或對應的取代)之一或更多者(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12者)：L於對應於位置243的位置處、P於對應於位置292的位置處、L於對應於位置300的位置處、I於對應於位置305的位置處及L於對應於位置396的位置處；D於對應於位置239的位置處及E於對應於位置332的位置處；D於對應於位置239的位置處、E於對應於位置332的位置處及L於對應於位置330的位置處；A於對應於位置298的位置處、A於對應於位置333的位置處及A於對應於位置334的位置處；Y於對應於位置234的位置處、Q於對應於位置235的位置處、W於對應於位置236的位置處、M於對應於位置239的位置處、D於對應於位置268的位置處、E於對應於位置270的位置處及A於對應於位置298的位置處；E於對應於位置270的位置處、D於對應於位置326的位置處、M於對應於位置330的位置處及E於對應於位置334的位置處；A於對應於位置236的位置處、D於對應於位置239的位置處及E於對應於位置332的位置處；W於對應於位置326的位置處及S於對應於位置333的位置處；E於對應於位置267的位置處、F於對應於位置268的位置處及T於對應於位置324的位置處；R於對應於位置345的位置處、G於對應於位置430的位置處及Y於對應於位置440的位置處；Y於對應於位置252的位置處、T於對應於位置254的位置處及E於對應於位置256的位置處；及L於對應於位置428的位置處及S於對應於位置434的位置處。
在一些具體例中該抗原結合分子包含一Fc區域，其含有(例如包含含有一重鏈恆定區域或一CH2-CH3區域之再一種多肽，其含有)下列取代(或對應的取代)組合之一或更多者(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12者)：F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L；S239D/I332E；S239D/I332E/A330L；S298A/E333A/K334A；L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A；D270E/K326D/A330M/K334E；G236A/S239D/I332E；K326W/E333S；S267E/H268F/S324T；E345R/E430G/S440Y；M252Y/S254T/T256E；and M428L/N434S。 多肽
本發明亦提供抗原結合分子的多肽組分。該多肽可以以經單離或實質純化的形式來提供。
本發明之抗原結合分子可以為，或可包含，一種多肽複合物。
在本說明書於一種多肽包含一種以上域或區域之處，將可以理解的是複數個域/區域較佳存在於同一個多肽鏈內。即，該包含一種以上域或區域之多肽為一種包含該等域/區域之融合多肽。
在一些具體例中，如本發明之多肽包含如本文所述之VH或由如本文所述之VH所組成。在一些具體例中，如本發明之多肽包含如本文所述之VL或由如本文所述之VL所組成。
在一些具體例中，該多肽額外包含一種或多種抗體重鏈恆定區域(CH)。在一些具體例中，該多肽額外包含一種或多種抗體輕鏈恆定區域(CL)。在一些具體例中，該多肽包含一免疫球蛋白(Ig)的CH1、CH2區域及/或CH3區域。
在一些具體例中，該多肽包含一種免疫球蛋白重鏈恆定序列的一或多個區域。在一些具體例中，該多肽包含一種如本文所述之CH1區域。在一些具體例中，該多肽包含一種如本文所述之CH1-CH2鉸鏈區域。在一些具體例中，該多肽包含一種如本文所述之CH2區域。在一些具體例中，該多肽包含一種如本文所述之CH3區域。在一些具體例中，該多肽包含一種如本文所述之CH2-CH3區域。
在一些具體例中，該多肽包含一種CH3區域，其包含下列胺基酸取代/胺基酸取代組合中任一者(顯示於Ha等人，Front. Immnol (2016) 7:394之表1中，併入上文以作為參考資料)：T366W；T366S、L368A及Y407V；T366W及S354C；T366S、L368A、Y407V及Y349C；S364H及F405A；Y349T及T394F；T350V、L351Y、F405A及Y407V；T350V、T366L、K392L及T394W；K360D、D399M及Y407A；E345R、Q347R、T366V及K409V；K409D及K392D；D399K及E356K；K360E及K409W；Q347R、D399V及F405T；K360E、K409W及Y349C；Q347R、D399V、F405T及S354C；K370E及K409W；以及E357N、D399V及F405T。
在一些具體例中，該多肽之CH2及/或CH3區域包含一或多個胺基酸取代用於促進該多肽與包含CH2及/或CH3區域之另一多肽之締合。
在一些具體例中，該多肽包含一種免疫球蛋白輕鏈恆定序列之一或多個區域。在一些具體例中，該多肽包含一種如本文所述之CL區域。
在一些具體例中，如本發明之多肽包含一種如下列之一者從N-至C-端的結構： (i) VH (ii) VL (iii) VH-CH1 (iv) VL-CL (v) VL-CH1 (vi) VH-CL (vii) VH-CH1-CH2-CH3 (viii) VL-CL-CH2-CH3 (ix) VL-CH1-CH2-CH3 (x) VH-CL-CH2-CH3
本發明亦提供包含本發明之多肽的抗原結合分子。在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含下列多肽組合中的一者： (A) VH + VL (B) VH-CH1 + VL-CL (C) VL-CH1 + VH-CL (D) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL (E) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1 (F) VL-CH1-CH2-CH3 + VH-CL (G) VL-CL-CH2-CH3 + VH-CH1 (H) VH-CH1-CH2-CH3 + VL-CL-CH2-CH3 (I) VH-CL-CH2-CH3 + VL-CH1-CH2-CH3
在一些具體例中，該抗原結合分子包含以上的(A)至(I)之中所示的一種以上的多肽組合。作為舉例，參照以上的(D)，在一些具體例中，該抗原結合分子包含二種包含結構VH-CH1-CH2-CH3的多肽，以及二種包含結構VL-CL的多肽。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子包含下列多肽組合中的一者： (J)VH(抗-HER3)+VL(抗-HER3) (K)VH(抗-HER3)-CH1+VL(抗-HER3)-CL (L)VL(抗-HER3)-CH1+VH(抗-HER3)-CL (M)VH(抗-HER3)-CH1-CH2-CH3+VL(抗-HER3)-CL (N)VH(抗-HER3)-CL-CH2-CH3+VL(抗-HER3)-CH1 (O)VL(抗-HER3)-CH1-CH2-CH3+VH(抗-HER3)-CL (P)VL(抗-HER3)-CL-CH2-CH3+VH(抗-HER3)-CH1 (Q)VH(抗-HER3)-CH1-CH2-CH3+VL(抗-HER3)-CL-CH2-CH3 (R)VH(抗-HER3)-CL-CH2-CH3+VL(抗-HER3)-CH1-CH2-CH3
其中：“VH(抗-HER3)”係指一種如本文所述能與HER3結合的抗原結合分子之VH，例如以上(1)至(61)中的一者所定義；“VL(抗-HER3)”係指一種如本文所述能與HER3結合的抗原結合分子之VL，例如以上(62)至(119)中的一者所定義。
於一些具體例中，該多肽包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與序列辨識編號：187至223之一者的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。 鏈接子及額外的序列
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子及多肽包含一鉸鏈區域。於一些具體例中，於CH1區域與CH2區域之間提供一鉸鏈區域。於一些具體例中，於CL區域與CH2區域之間提供一鉸鏈區域。於一些具體例中，該鉸鏈區域包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與序列辨識編號：173的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子及多肽於胺基酸序列之間包含一或多個鏈接子序列。可以於該抗原結合分子/多肽的VH、VL、CH1-CH2鉸鏈區域、CH2區域及CH3區域之一者或多者的一或二端提供鏈接子序列。
鏈接子序列為熟悉此藝者已知的，且於，舉例而言Chen等人，Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369之內有說明，其係以其之全體藉此併入以作為參考資料。在一些具體例中，一鏈接子序列可以為撓性鏈接子序列。撓性鏈接子序列允許鏈接子序列所鏈接的胺基酸序列之相對運動。撓性鏈接子為熟悉此藝者已知的，且於Chen等人，Adv Drug Deliv Rev (2013) 65(10): 1357-1369內確認出數種。撓性鏈接子序列通常包含高比例的甘胺酸及/或絲胺酸殘基。
在一些具體例中，鏈接子序列包含至少一甘胺酸殘基及/或至少一絲胺酸殘基。在一些具體例中，鏈接子序列係由甘胺酸及絲胺酸殘基所組成。在一些具體例中，鏈接子序列具有1-2、1-3、1-4、1-5或1-10個胺基酸的長度。
本發明之抗原結合分子及多肽可額外包含另外的胺基酸或胺基酸序列。舉例而言，該抗原結合分子及多肽可包含胺基酸序列以促進該抗原結合分子/多肽之表現、折疊、運輸、加工、純化或偵測。舉例而言，該抗原結合分子/多肽可選擇地於該抗原結合分子/多肽之N-或C-端處包含一種序列，其編碼His、(如6XHis)、Myc、GST、MBP、FLAG、HA、E或生物素標籤。在一些具體例中，該抗原結合分子/多肽包含一種可偵測的部分，例如螢光、發光、免疫可偵測的、放射、化學、核酸或酵素標記。
本發明之抗原結合分子及多肽可額外包含一訊息胜肽(也被稱為前導序列或訊息序列)。訊息胜肽通常由5-30個疏水胺基酸的序列組成，其形成一單一α螺旋。分泌的蛋白及細胞表面表現的蛋白通常包含訊息胜肽。
訊息胜肽可存在於抗原結合分子/多肽的N端，以及可存在於新合成的抗原結合分子/多肽內。提供訊息胜肽用於有效的運輸及分泌抗原結合分子/多肽。訊息胜肽通常藉由裂解來移除，因此從表現抗原結合分子/多肽的細胞分泌的成熟抗原結合分子/多肽不含有訊息胜肽。
已知許多蛋白的訊息胜肽，且記錄於資料庫中例如GenBank、UniProt、Swiss-Prot、TrEMBL、Protein Information Resource、Protein Data Bank、Ensembl及InterPro，及/或可以舉例而言使用胺基酸序列分析工具例如SignalP(Petersen等人，2011 Nature Methods 8: 785-786)或Signal-BLAST(Frank and Sippl, 2008 Bioinformatics 24: 2172-2176)來辨識/預測。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子/多肽的訊息胜肽包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與序列辨識編號：178至186之一者的胺基酸序列有至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之序列同一性。 標記及複合物(conjugate)
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子額外包含一種可偵測的部分。
在一些具體例中，該抗原結合分子包含一種可偵測的部分，例如螢光標記、磷光標記、發光標記、免疫可偵測的標記(如表位標籤)、放射標記、化學、核酸或酵素標記。抗原結合分子可能以可偵測的部分予以共價或非共價地標記。
螢光標記包括舉例而言螢光素、玫瑰紅、異藻藍蛋白、曙紅及NDB、稀土族如銪(Eu)、鋱(Tb)及釤(Sm)之綠螢光蛋白(GFP)螯合物、四甲基玫瑰紅、紅色螢光染劑(Texas Red)、4-甲基繖形酮、7-胺基-4-甲基香豆素、Cy3及Cy5。放射標記包括放射性同位素舉例而言碘123 、碘125 、碘126 、碘131 、碘133 、溴77 、鎝99m 、銦111 、銦113m 、鎵67 、鎵68 、釕95 、釕97 、釕103 、釕105 、汞207 、汞203 、錸99m 、錸101 、錸105 、鈧47 、碲121m 、碲122m 、碲125m 、銩165 、銩(Thuliuml)167 、銩168 、銅67 、氟18 、釔90 、鈀100 、鉍217 及銻211 。發光標記包括如放射發光、化學發光(例如吖啶酯(acridinium ester)、發光胺(luminol)、異發光胺)及生物發光標記。免疫可偵測的標記包括不全抗原、胜肽/多肽、抗體、受體及配體例如生物素、抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白或長葉毛地黃配質。核酸標記包括適配體。酵素標記包括舉例而言過氧化物酶、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶及螢光素酶。
在一些具體例中本發明之抗原結合分子與一化學部分複合。該化學部分可以為提供治療效應的部分。於Parslow等人，Biomedicines. 2016 Sep; 4(3):14乙文中回顧抗體-藥物複合物。在一些具體例中，該化學部分可為一藥物部分(如細胞毒性劑)。在一些具體例中，該藥物部分可為一化學治療劑。在一些具體例中，該藥物部分係選自於卡奇黴素(calicheamicin)、DM1、DM4、一甲基澳瑞他汀E(monomethylauristatin E)(MMAE)、一甲基澳瑞他汀F(monomethylauristatin F)(MMAF)、SN-38、多柔比星(doxorubicin)、倍癌黴素(duocarmycin)、D6.5及PBD。 抗原結合分子之特定的例示性具體例
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：187的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：188的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：189的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：190的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：191的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：192的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：193的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：195的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：194的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：195的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：196的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：195的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：197的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：199的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：198的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：199的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：200的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：201的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：202的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：203的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：204的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：205的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：206的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：207的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：208的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：209的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：210的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：211的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：212的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：213的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：214的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：215的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：216的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：217的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：218的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：219的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：220的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：221的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：222的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：223的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：225的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：207的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：226的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：207的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：227的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：217的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。
於一些具體例中，該抗原結合分子包含下列或由下列所組成： (i)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：228的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性；及 (ii)二種多肽，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列與編號：217的胺基酸序列有至少70%，較佳為75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%之一者的胺基酸序列同一性。 抗原結合分子之功能性質
本文所述之抗原結合分子可參考某些功能性質予以特徵化。在一些具體例中，本文所述之抗原結合分子可擁有一種或更多種下列性質： 與HER3結合(例如人類、小鼠、大鼠或食蟹獼猴(cynomolgus macaque)HER3)； 不與EGFR及/或HER2結合； 與表現HER3的細胞結合； 與HER3的細胞外區域之子域II結合； 於HER3呈開放式及封閉式構形時會與HER3結合； 獨立於NRG而與HER3結合； 不與MM-121及/或LJM-716競爭與HER3結合； 不與M-05-74及/或M-08-11競爭與HER3結合； 抑制HER3及HER3的一交互作用伙伴(例如HER3、HER2、EGFR、HER4、HGFR、IGF1R及/或cMet)之間的交互作用； 抑制HER3-媒介的訊息傳導； 抑制表現HER3的細胞之增殖(例如回應NRG刺激)； 抑制表現HER3的細胞之PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導(例如回應NRG刺激)； 與活化性Fcγ受體(例如FcγRIIIa)結合； 與活化性Fcγ受體結合增加； 與一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子相比之下，與活化性Fcγ受體之結合增加； 與一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子相比之下，與抑制性Fcγ受體之結合減少； 與一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子相比之下，與活化性Fcγ受體之結合增加超過抑制性Fcγ受體； 與一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子相比之下，與補體蛋白(如C1q)的結合增加或減少； 與一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子相比之下，六聚體化增加； 與一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子相比之下，ADCC活性增加； 與一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子相比之下，ADCP活性增加； 與一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子相比之下，CDC活性增加或減少； 與一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子相比之下，熱穩定性相似或增加； 增高表現HER3的細胞之殺滅； 降低表現HER3的細胞之數目/比例； 以及 抑制活體內 癌症的發展及/或進程。
本文所述之抗原結合分子較佳展現出與HER3專一性結合。當使用於本文中，術語“專一性結合”係指對抗原有選擇性的結合作用，且其與非標靶抗原之非專一性結合是可區別的。一種與標靶分子專一性結合的抗原結合分子較佳以其與其他非標靶分子結合更大的親和力，及/或更長的持續時間與標靶結合。
一特定的多肽與一特定的分子專一性結合的能力可以藉由本技藝已知的分析法來測定，諸如ELISA、表面電漿子共振(SPR；參見諸如，Hearty等人，Methods Mol Biol (2012) 907:411-442)、生物層干涉術(參見諸如，Lad等人，(2015) J Biomol Screen 20(4): 498-507)、流動式細胞測量術，或藉由放射性標記抗原結合分析(RIA)酶聯免疫吸附分析。與一特定的分子之結合作用可透過此分析測量並定量。在一些具體例中，結合作用可以為特定的分析偵測到的反應。
在一些具體例中，當以諸如ELISA、SPR、生物層干涉術或RIA測量時，該抗原結合分子與非標靶分子結合的程度係小於該抗體與標靶分子結合的程度之大約10%。任擇地，結合專一性可反映在結合親和力上，其中該抗原結合分子係以比該抗原結合分子對非標靶分子的解離常數(KD )更大至少0.1數量級數(即，0.1 x 10n ，n為表示數量級數的整數)之KD 進行結合。此可選擇地可為至少0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5或2.0中之一者。
於一些具體例中，該抗原結合分子與人類HER3、小鼠HER3、大鼠HER3及/或食蟹獼猴(cynomolgus macaque) (食 蟹獼猴 (Macaca fascicularis ))HER3展現出結合作用。亦即，於一些具體例中該抗原結合分子為人類HER3、小鼠HER3、大鼠HER3及/或食蟹獼猴(cynomolgus macaque)HER3交叉反應性的。於一些具體例中本發明之抗原結合分子與非人類靈長類動物的HER3展現出交叉反應性。HER3於模式物種之交叉反應性允許能以同基因模式活體內 探索功效而不倚賴代用分子。
於一些具體例中，該抗原結合分子與人類HER3、小鼠HER3、大鼠HER3及/或食蟹獼猴HER3結合；且不與HER2及/或EGFR(如人類HER2及/或人類EGFR)結合。
於一些具體例中，該抗原結合分子與EGFR(如人類EGFR)沒有顯示專一性結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與HER2(如人類HER2)沒有顯示專一性結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與HER3以外的EGFR蛋白家族成員沒有顯示專一性結合(即沒有交叉反應)。於一些具體例中，該抗原結合分子與EGFR、HER2及/或HER4沒有顯示專一性結合。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子係以10 µM或更小的KD ，較佳為≤5 µM、≤2 µM、≤1 µM、≤500 nM、≤400 nM、≤300 nM、≤200 nM、≤100 nM、≤95 nM、≤90 nM、≤85 nM、≤80 nM、≤75 nM、≤70 nM、≤65 nM、≤60 nM、≤55 nM、≤50 nM、≤45 nM、≤40 nM、≤35 nM、≤30 nM、≤25 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM ≤3 nM、≤2 nM、≤1 nM、≤900 pM、≤800 pM、≤700 pM、≤600 pM、≤500 pM、≤400 pM、≤300 pM、≤200 pM、≤100 pM、≤90 pM、≤80 pM、≤70 pM、≤60 pM、≤50 pM、≤40 pM、≤30 pM、≤20 pM、≤10 pM、≤9 pM、≤8 pM、≤7 pM、≤6 pM、≤5 pM、≤4 pM、≤3 pM、≤2 pM、≤1 pM中的一者之KD ，與HER3(如人類HER3)結合。
本發明之抗原結合分子可與特定感興趣的HER3區域結合。如本發明之抗原結合分子的抗原結合區域可結合由相鄰的胺基酸序列組成(即胺基酸一級序列)之HER3的線形表位。在一些具體例中，該抗原結合分子可結合由胺基酸序列之不連續的胺基酸序列組成之HER3的構形表位。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子與HER3結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與HER3的細胞外區域(例如序列辨識編號：9所示的區域)結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與HER3的細胞外區域之子域II(例如序列辨識編號：16所示的區域)結合。
於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：229所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：229所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：230及231所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：230及231所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：230所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：230所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：231所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：231所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：23所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：23所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：21所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：21所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：19所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：19所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：22所示的HER3區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：22所示的HER3區域之一或更多個胺基酸殘基接觸。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：1、3、4、6或8中之一者的胺基酸序列或由序列辨識編號：1、3、4、6或8中之一者的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：9的胺基酸序列或由序列辨識編號：9的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：16的胺基酸序列或由序列辨識編號：16的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：229的胺基酸序列或由序列辨識編號：229的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：230及231的胺基酸序列或由序列辨識編號：230及231的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：230的胺基酸序列或由序列辨識編號：230的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：231的胺基酸序列或由序列辨識編號：231的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：23的胺基酸序列或由序列辨識編號：23的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：21的胺基酸序列或由序列辨識編號：21的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：19的胺基酸序列或由序列辨識編號：19的胺基酸序列所組成。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一胜肽/多肽結合，該胜肽/多肽包含序列辨識編號：22的胺基酸序列或由序列辨識編號：22的胺基酸序列所組成。
於一些具體例中，該抗原結合分子不與對應於序列辨識編號：1的位置260至279之HER3的區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子不與對應於序列辨識編號：1的位置260至279的HER3區域之一胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子不與序列辨識編號：23所示的HER3的區域結合。於一些具體例中，該抗原結合分子不與序列辨識編號：23所示的HER3的區域的一胺基酸殘基接觸。於一些具體例中，該抗原結合分子與對應於序列辨識編號：1的位置260至279之胺基酸序列所組成的一胜肽不能結合。於一些具體例中，該抗原結合分子與序列辨識編號：23之胺基酸序列所組成的一胜肽不能結合。
當使用於本文中，一“胜肽”係指一種由肽鍵所鍵聯的二或更多個胺基酸單體的鏈。一胜肽典型於該區域具有大約2至50個胺基酸的長度。一“多肽”為二或更多種胜肽的聚合物鏈。多肽典型具有超過大約50個胺基酸的長度。
一抗原結合分子與一特定的胜肽/多肽結合的能力可以藉由熟悉此藝者熟知的方法來分析，包括藉由ELISA、免疫墨點法(如西方墨點法)、免疫沉澱法、表面電漿子共振及生物層干涉術之分析。
HER3配體結合會促進構形變化其會使HER3同質或異質二聚合，導致下游途徑之活化。HER3呈現‘封閉式’及‘開放式’構形。按封閉式構形其係意指HER3呈繫留構形且無法用於受體同質或異質二聚合。按開放式構形其係意指HER3呈延伸構形且可用於同質或異質二聚合。
於一些具體例中，該抗原結合分子在HER3呈開放式構形時能與HER3結合。於一些具體例中，該抗原結合分子在HER3呈封閉式構形時能與HER3結合。於一些具體例中，該抗原結合分子在HER3呈開放式及/或封閉式構形時能與HER3結合。於一些具體例中，該抗原結合分子在HER3呈開放式及/或封閉式構形時能與HER3胞外域(ectodomain)結合。於一些具體例中，該抗原結合分子在HER3呈開放式及/或封閉式構形時能與HER3二聚合臂結合。與二聚合臂結合會使抗原結合分子能防止HER3及HER3的交互作用伙伴之間的交互作用，例如本文所述。
在一些具體例中，抗原結合分子能於HER3配體存在及/或不存在下與HER3結合。在一些具體例中，抗原結合分子能獨立於HER3配體而與HER3之結合。在一些具體例中配體為NRG、NRG-1及/或NRG-2。HER3係藉由配體結合其細胞外域而促進構形變化使得HER3同質或異質二聚合來活化。抗原結合分子與HER3之結合獨立於配體結合，允許抗原結合分子以配體不存在及配體存在的構形狀態二者均能抑制HER3的作用。於一些具體例中，該抗原結合分子不與配體競爭與HER3結合。於一些具體例中，該抗原結合分子不在配體結合位址與HER3結合。
於一些具體例中，該抗原結合分子能與一種抗體所結合HER3區域相同的HER3區域或重疊的HER3區域結合，該抗體包含殖株10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93、10A6、4-35-B2或4-35-B4中的一者之VH及VL序列。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一種抗體所結合HER3區域相同的HER3區域或重疊的HER3區域結合，該抗體包含殖株10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91中的一者之VH及VL序列。於一些具體例中，該抗原結合分子能與一種抗體所結合HER3區域相同的HER3區域或重疊的HER3區域結合，該抗體包含殖株10D1_c89之VH及VL序列。
一抗體與一胜肽/多肽結合的區域可藉由熟悉此藝者使用本技藝熟知的各種方法來判定，包括抗體-抗原複合物之X射線共結晶學分析、胜肽掃描(peptide scanning)、致突變測繪(mutagenesis mapping)、由質譜法進行之氫-氘交換分析(hydrogen-deuterium exchange analysis)、噬菌體顯示、競爭ELISA及蛋白質水解為基的‘保護’法。此等方法係於，舉例而言，Gershoni等人，BioDrugs, 2007, 21(3):145-156中說明，其係以其之全體藉此併入於此以作為參考資料。此等方法亦可用來判定抗原結合分子是否能與不同構形的蛋白質結合。
一些具體例中，本發明之抗原結合分子與HER3結合的區域，與包含抗-HER3抗體殖株MM-121(例如於Schoeberl等人，Sci. Signal. (2009) 2(77): ra31之內所述)及/或LJM-716(例如於Garner等人，Cancer Res (2013) 73: 6024-6035)之VH及VL序列的一種抗體所結合的HER3區域，不是相同的HER3區域或重疊的HER3區域。在一些具體例中，本發明之抗原結合分子與一種包含抗-HER3抗體殖株MM-121及/或LJM-716之VH及VL序列的抗體，例如以SPR分析測定時不會展現出對於HER3結合之競爭性。
在一些具體例中，當HER3表現於細胞表面(即在細胞膜上或在細胞膜)時，本發明之抗原結合分子於一抗原結合分子(即，細胞外抗原結合分子)可接近的區域與HER3結合。於一些具體例中該抗原結合分子能與表現HER3的細胞之細胞表面所表現的HER3結合。於一些具體例中該抗原結合分子能與表現HER3的細胞(諸如HER3+細胞，例如HER3+癌細胞)結合。
可以分析抗原結合分子與特定細胞類型結合的能力，其係藉由接觸帶有抗原結合分子的細胞，以及例如於移去未結合的抗原結合分子之清洗步驟之後，偵測細胞結合的抗原結合分子。抗原結合分子與表現免疫細胞表面分子的細胞及/或表現癌細胞抗原的細胞結合的能力可以藉由例如流動式細胞測量術及免疫螢光顯微鏡的方法予以分析。
本發明之抗原結合分子可為HER3之拮抗劑。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及/或HER3的結合伙伴(例如HER3(即於同質二聚合的情況中)、HER2、EGFR、HER4、HGFR、IGF1R及/或cMet)所媒介的一功能或過程(例如交互作用、訊息傳導或其他活性)。於此，‘抑制’係指相對於對照條件的降低、減少或減輕。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子能抑制HER3及HER3的交互作用伙伴之間的交互作用。HER3的交互作用伙伴可由表現HER3相同的細胞所表現。HER3的交互作用伙伴可表現於細胞表面上(即在細胞膜上或在細胞膜)。於一些具體例中，HER3的交互作用伙伴可為EGFR蛋白家族的成員，例如HER3、HER2、EGFR、HER4、HGFR、IGF1R及/或cMet。於一些具體例中，HER3的交互作用伙伴可為IGF1R及/或cMet。HER3及HER3的交互作用伙伴之間的交互作用可能導致多肽複合物之形成。HER3及HER3的交互作用伙伴之間交互作用而形成多肽複合物可稱為多聚合(multimerisation)。多肽單體之間多聚合的多聚合狀況可稱為二聚合。
於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3單體之間的交互作用。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及HER2之間的交互作用。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及EGFR之間的交互作用。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及HER4之間的交互作用。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及HGFR之間的交互作用。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及IGF1R之間的交互作用。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及cMet之間的交互作用。
該抗原結合分子可藉由結合HER3及HER3的一交互作用伙伴之間的交互作用所需要的HER3區域(例如序列辨識編號：19內所示的HER3之二聚合環)來達成交互作用之抑制。於一些具體例中，該抗原結合分子係與HER3及HER3的一交互作用伙伴之間交互作用所需要的一或更多個HER3殘基接觸；該抗原結合分子通過這種方式使該區域無法使用，藉此抑制交互作用。於一些具體例中，該抗原結合分子以抑制/妨礙HER3及HER3的一交互作用伙伴之間交互作用的方式來與HER3結合。於一些具體例中，該抗原結合分子抑制/妨礙了HER3的交互作用伙伴接近HER3及HER3的交互作用伙伴之間交互作用所需要的HER3區域；甚至在該抗原結合分子沒有接觸HER3及HER3的交互作用伙伴之間的交互作用所需要的HER3區域的情況都可達成這一點，例如通過立體抑制HER3的交互作用伙伴接近HER3及該交互作用伙伴之間交互作用所需要的HER3區域。
於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3單體的同質二聚合。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及HER2之間的二聚合。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及EGFR之間的二聚合。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及HER4之間的二聚合。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及HGFR之間的二聚合。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及IGF1R之間的二聚合。於一些具體例中，該抗原結合分子能抑制HER3及cMet之間的二聚合。
抗原結合分子抑制二種因子之間交互作用的能力可以舉例而言於該抗體/片段存在下，或用該抗體/片段孵育交互作用伙伴的一或二者之後，藉由分析交互作用來判定。判定一特定抗原結合分子是否能抑制二種交互作用伙伴之間交互作用的分析法包括競爭ELISA分析法及藉由SPR之分析。於一些具體例中，該抗原結合分子為HER3及HER3的交互作用伙伴之間的交互作用之競爭性抑制劑。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子於合適的分析中能抑制HER3及HER3的交互作用伙伴(例如HER3、HER2、EGFR、HER4、HGFR、IGF1R及/或cMet)之間的交互作用達到比，抗原結合分子不存在下(或於合適的對照抗原結合分子存在下)HER3與HER3交互作用伙伴之間之交互作用的位準，更少小於1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。
抗原結合分子抑制交互作用伙伴之間的交互作用的能力亦可以藉由分析此等交互作用的下游功能性結果來判定。舉例而言，HER3與HER3交互作用伙伴之間的交互作用之下游功能性結果包括PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導。舉例而言，抗原結合分子抑制HER3與HER3交互作用伙伴的交互作用的能力可以於抗原結合分子存在下用NRG治療之後，藉由分析PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導來判定。PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導可例如使用能偵測磷酸化的訊息傳導途徑成員來偵測且定量。
抗原結合分子抑制HER3與HER3的交互作用伙伴之間交互作用的能力亦可以於抗原結合分子存在下用NRG治療之後，藉由分析表現HER3的細胞之增殖來判定。細胞增殖可舉例而言藉由偵測細胞數目隨著時間的變化，或藉由3 H-胸腺嘧啶之嵌入或藉由CFSE稀釋分析之活體外 分析予以判定，例如如Fulcher and Wong, Immunol Cell Biol (1999) 77(6): 559-564中所述，全體併入以作為參考資料。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子能抑制帶有BRAF V600E突變的細胞之增殖，例如包含BRAF V600E或V600K突變的細胞之增殖(見實施例10)。
於一些具體例中，該抗原結合分子抑制HER3-媒介的訊息傳導。HER3-媒介的訊息傳導可例如使用HER3-媒介的訊息傳導關聯值分析法來分析，例如細胞增殖及/或PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導途徑之一種或更多種訊息傳導分子之磷酸化。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子能抑制表現HER3的細胞之PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導。PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導之位準可例如於用NRG刺激後，偵測且定量PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK途徑之一種或更多種組份的磷酸化位準(見實施例4.3)。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子能，例如回應NRG刺激而抑制表現HER3的細胞之增殖。於一些具體例中，本發明之抗原結合分子於合適的分析中能抑制表現HER3的細胞之增殖達到比，於抗原結合分子不存在下(或於合適的對照抗原結合分子存在下)表現HER3的細胞之增殖位準，更少小於1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子於合適的分析中能抑制表現HER3的細胞之PI3K/AKT/mTOR及/或MAPK訊息傳導達到比，抗原結合分子不存在下(或於合適的對照抗原結合分子存在下)表現HER3的細胞之訊息傳導位準，更少小於1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。
HER3-媒介的訊息傳導能以活體外 研究，例如如實施例8.9中所述，或活體內 研究，例如如實施例11中所述。
ADCC活性可以舉例而言依據於Yamashita等人，Scientific Reports (2016) 6:19772(以其全體併入以作為參考資料)之內所述的方法，或藉由如舉例而言於Jedema等人，Blood (2004) 103: 2677-82(以其全體併入以作為參考資料)之內所述的51 Cr釋放分析法來進行。ADCC活性亦可以使用Pierce LDH細胞毒性分析套組，依據製造商的指示(如本文實施例5所述)來分析。
ADCP可以舉例而言依據於Kamen等人，J Immunol (2017) 198 (1 Supplement) 157.17(以其全體併入以作為參考資料)之內所述的方法來分析。
誘發CDC的能力可以舉例而言使用如Schlothauer等人，Protein Engineering, Design and Selection (2016), 29(10):457-466(以其全體併入以作為參考資料)之內所述的C1q結合分析法來分析。
抗原結合分子之熱穩定性可以藉由熟悉此藝者熟知的方法來分析，包括微差掃描螢光分析法(Differential Scanning Fuorimetry)及微差掃描熱量法(DSC)，其等係於舉例而言，He等人，J Pharm Sci. (2010)中所述，其係以其之全體藉此併入以作為參考資料。熱穩定性可反映在熔化溫度(Tm )、展開溫度或拆卸溫度(例如以°C或F°表達)。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子之結合親和力係以比一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子與活化性Fcγ受體(如hFcγRIIa(如hFcγRIIa167H、hFcγRIIa167R)、hFcγRIIIa(如hFcγRIIIa158V、hFcγRIIIa158F)、mFcγRIV、mFcγRIII)之結合親和力，更大1倍例如更大2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或更大20倍之結合親和力，與活化性Fcγ受體結合。於一些具體例中，本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子與活化性Fcγ受體結合之KD ，係比一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子與活化性Fcγ受體之KD 更小1倍，例如更小0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06或更小0.05倍。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子係以1000 nM或更小的KD ，較佳為≤500 nM、≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM ≤3 nM、≤2 nM或≤1 nM中的一者之KD ，與活化性Fcγ受體(如hFcγRIIa(如hFcγRIIa167H、hFcγRIIa167R)、hFcγRIIIa(如hFcγRIIIa158V、hFcγRIIIa158F)、mFcγRIV、mFcγRIII)結合。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子係以比一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子與FcRn(如hFcRn、mFcRn)之結合親和力更大1倍，例如更大2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或更大20倍之結合親和力，與FcRn結合。於一些具體例中，本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子與FcRn結合之KD ，係比一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子對於FcRn之KD 更小1倍，例如更小0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0.09、0.08、0.07、0.06或更小0.05倍。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子係以1000 nM或更小，較佳為≤500 nM、≤100 nM、≤75 nM、≤50 nM、≤40 nM、≤30 nM、≤20 nM、≤15 nM、≤12.5 nM、≤10 nM、≤9 nM、≤8 nM、≤7 nM、≤6 nM、≤5 nM、≤4 nM ≤3 nM、≤2 nM或≤1 nM中的一者之KD ，與FcRn(如hFcRn、mFcRn)結合。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子係以比一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子與抑制性Fcγ受體(如hFcγRIIb mFcγRIIb)之結合親和力，更小1倍例如更小0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或更小0.1倍之結合親和力與抑制性Fcγ受體結合。於一些具體例中，本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子與抑制性Fcγ受體結合之KD ，係比一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子對於抑制性Fcγ受體之KD 更大1倍，例如更大2、3、4、5、6、7、8、9或更大10倍。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子係以KD 1 nM或更大，較佳為≥ 5 nM、≥ 10 nM、≥ 50 nM、≥ 100 nM、≥ 500 nM、≥ 1000 nM、≥ 2000 nM、≥ 3000 nM、≥ 4000 nM或≥ 5000 nM中的一者，與抑制性Fcγ受體(如hFcγRIIb mFcγRIIb)結合。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子對於活化性Fcγ受體(如hFcγRIIa)相對於抑制性Fcγ受體(如hFcγRIIb)之結合選擇性，係比一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子展現的結合選擇性更大1倍，例如更大2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或更大20倍。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子展現比一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子展現的ADCC更大1倍，例如更大2、3、4、5、6、7、8、9、10、15或更大20倍的ADCC。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子於ADCC活性分析中測得的EC50(ng/ml)，係比一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子測得的EC50(ng/ml)更小1倍，例如更小0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2或更小0.1倍。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子於ADCC活性分析中的EC50(ng/ml)為500 ng/ml或更小，較佳為≤400 ng/ml、≤300 ng/ml、≤200 ng/ml、≤100 ng/ml、≤90 ng/ml、≤80 ng/ml、≤70 ng/ml、≤60 ng/ml、≤50 ng/ml、≤40 ng/ml、≤30 ng/ml、≤20 ng/ml或≤10 ng/ml中的一者。
於一些具體例中，如本文所述之包含Fc區域之抗原結合分子可具有一熔化溫度、展開溫度或拆卸溫度，其為一種具有包含有序列辨識編號：174-175的胺基酸序列之CH2-CH3的Fc區域之等效抗原結合分子的熔化溫度、展開溫度或拆卸溫度之≥ 0.75倍且≤ 1.25倍，例如≥ 0.8倍且≤ 1.2倍、≥ 0.85倍且≤ 1.15倍、≥ 0.9倍且≤ 1.1倍、≥ 0.91倍且≤ 1.09倍、≥ 0.92倍且≤ 1.08倍、≥ 0.93倍且≤ 1.07倍、≥ 0.94倍且≤ 1.06倍、≥ 0.95倍且≤ 1.05倍、≥ 0.96倍且≤ 1.04倍、≥ 0.97倍且≤ 1.03倍、≥ 0.98倍且≤ 1.02倍、或≥ 0.99倍且≤ 1.01倍。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子能增高表現HER3的細胞之殺滅。可通過該抗原結合分子之效應子功能來增高表現HER3的細胞之殺滅。於抗原結合分子包含Fc區域的具體例中，該抗原結合分子可通過下列之一或更多者來增高表現HER3的細胞之殺滅：補體依賴性細胞毒性(CDC)、抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)及抗體依賴性細胞的吞噬作用(ADCP)。
一種能增高表現HER3的細胞之殺滅的抗原結合分子能於合適的分析中、在該抗原結合分子存在下或用該抗原結合分子孵育表現HER3的細胞之後，藉由觀察表現HER3的細胞之殺滅位準，在與抗原結合分子不存在下(或於合適的對照抗原結合分子存在下)偵測到的細胞殺滅位準相比之下，增高而予以確認。CDC、ADCC及ADCP之分析法為熟悉此藝者熟知的。表現HER3的細胞之殺滅位準亦可以於暴露於不同的治療條件後，藉由測量活及/或非活的表現HER3的細胞之數目/比例來判定。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子能增高表現HER3的細胞(諸如表現HER3的癌細胞)之殺滅達到比，抗原結合分子不存在下(或於合適的對照抗原結合分子存在下)觀察到的殺滅位準，更大1倍，例如≥1.01倍、≥1.02倍、≥1.03倍、≥1.04倍、≥1.05倍、≥1.1倍、≥1.2倍、≥1.3倍、≥1.4倍、≥1.5倍、≥1.6倍、≥1.7倍、≥1.8倍、≥1.9倍、≥2倍、≥3倍、≥4倍、≥5倍、≥6倍、≥7倍、≥8倍、≥9倍或≥10倍。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子於一可比較的分析中能降低表現HER3的細胞之數目(諸如表現HER3的癌細胞)比，於抗原結合分子不存在下孵育之後(或於合適的對照抗原結合分子存在下孵育之後)偵測到的表現HER3的細胞(諸如表現HER3的癌細胞)之數目，更少小於1倍例如≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子抑制活體內 癌症的發展及/或進程。
於一些具體例中，該抗原結合分子造成殺滅癌細胞之增高，例如透過效應子免疫細胞來進行。於一些具體例中，該抗原結合分子例如在與合適的對照條件相比之下，造成活體內 癌細胞的數目降低。於一些具體例中，該抗原結合分子抑制了腫瘤生長，例如依照藉由測量腫瘤隨著時間的尺寸/體積予以判定。
可以合適的活體內 模式，例如細胞株衍生的異種移植模式來分析本發明之抗原結合分子抑制癌症發展及/或進程之能力。細胞株衍生的異種移植模式可衍生自表現HER3的癌細胞。在一些具體例中，該模式為N87細胞衍生的模式、SNU16細胞衍生的模式、FaDu細胞衍生的模式、OvCAR8細胞衍生的模式、HCC95細胞衍生的模式、A549細胞衍生的模式、ACHN細胞衍生的模式或HT29細胞衍生的模式。
癌症可為本文所述HER3-相關的癌症(即HER3基因/蛋白表現為該癌症之風險因子，及/或與該癌症之開始、發展、進程或症狀的嚴重性及/或轉移有正相關的癌症)。該癌症可包含表現HER3的細胞。在一些具體例中，該癌症包含HER3+腫瘤。
在一些具體例中，投予如本發明之抗原結合分子可造成下列之一者或更多者：抑制癌症發展/進程、延遲/預防癌症發病、減少/延遲/預防腫瘤生長、減少/延遲/預防轉移、降低該癌症症狀的嚴重性、減少癌細胞的數目、縮小腫瘤尺寸/體積，及/或提高存活(例如無惡化存活期)，例如以合適的表現HER3的癌細胞株衍生的異種移植模式來判定。
於一些具體例中，本發明之抗原結合分子於表現HER3的癌細胞株衍生的異種移植模式內能抑制腫瘤生長達到比，不存在抗原結合分子之治療下(或於合適的陰性對照抗原結合分子之治療後)觀察到的腫瘤生長，少於小於1倍例如 ≤0.99倍、≤0.95倍、≤0.9倍、≤0.85倍、≤0.8倍、≤0.75倍、≤0.7倍、≤0.65倍、≤0.6倍、≤0.55倍、≤0.5倍、≤0.45倍、≤0.4倍、≤0.35倍、≤0.3倍、≤0.25倍、≤0.2倍、≤0.15倍、≤0.1倍、≤0.05倍、或≤0.01倍。 嵌合抗原受體(CARs)
本發明亦提供包含本發明之抗原結合分子或多肽之嵌合抗原受體(CARs)。
CARs為重組受體，其提供抗原結合及T細胞活化功能二者。CAR結構及工程處理係舉例而言，於Dotti等人，Immunol Rev (2014) 257(1)內被回顧，其之整體藉此併入以作為參考資料。CARs包含一種抗原結合區域，其與一細胞膜錨定區域及一訊息傳導區域鍵聯。一種選擇的鉸鏈區域可以於抗原結合區域與細胞膜錨定區域之間提供分隔，以及可以作用為一種撓性鏈接子。
本發明的CAR包含一抗原結合區域，其包含本發明之抗原結合分子或由本發明之抗原結合分子所組成，或其包含如本發明之多肽或由如本發明之多肽所組成。
CAR的抗原結合區域與訊息傳導區域之間有細胞膜錨定區域且提供用於使CAR錨定至一種細胞的細胞膜，該細胞表現CAR，及細胞外空間之抗原結合區域及細胞內部的訊息傳導區域。於一些具體例中，該CAR包含一種細胞膜錨定區域，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列包含下列、由下列所組成，或是衍生自下列：CD3-ζ、CD4、CD8或CD28中一者的跨膜區域胺基酸序列。當使用於本文中，一種‘衍生自’一參考胺基酸序列之區域包含一胺基酸序列，其與參考序列有至少60%的序列同一性，例如下列中之一者：至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列同一性。
一種CAR的訊息傳導區域允許T細胞之活化。CAR的訊息傳導區域可以包含CD3-ζ的細胞內域之胺基酸序列，其提供表現CAR的T細胞之磷酸化及活化作用之免疫受體酪胺酸的活化模體(immunoreceptor tyrosine-based activation motifs) (ITAMs)。包含其他含ITAM蛋白的序列之訊息傳導區域諸如FcγRI亦已經使用於CARs(Haynes等人，2001 J Immunol 166(1):182-187)。CARs的訊息傳導區域亦可包含衍生自共刺激分子之訊息傳導區域的共刺激序列，一旦與標靶蛋白結合便用以促進表現CAR的T細胞之活化。合適的共刺激分子包括CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27。於一些情況中，CARs係予以工程處理以提供不同的細胞內訊息傳導途徑共刺激。舉例而言，與CD28共刺激有關連的訊息傳導優先活化磷脂酸肌醇3-激酶(P13K)的途徑，而4-1BB-媒介的訊息傳導係經由TNF受體相關因子(TRAF)轉接蛋白。CARs之訊息傳導區域因而有時含有衍生自超過一個共刺激分子的訊息傳導區域之共刺激序列。於一些具體例中，本發明的CAR包含一種或更多種共刺激序列，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列包含下列、由下列所組成或是衍生自下列：CD28、OX40、4-1BB、ICOS及CD27之一者或更多者的細胞內域之胺基酸序列。
一種可選擇的鉸鏈區域可以於抗原結合域與跨膜域之間提供分隔，以及可以作用為一種撓性鏈接子。鉸鏈區域可以衍生自IgG1。於一些具體例中，本發明的CAR包含一種鉸鏈區域，其包含一胺基酸序列或由一胺基酸序列所組成，該胺基酸序列包含下列、由下列所組成或是衍生自下列：IgG1之鉸鏈區域的胺基酸序列。
亦提供一種包含如本發明的CAR之細胞。如本發明的CAR可以使用來產生表現CAR的免疫細胞，例如CAR-T或CAR-NK細胞。經工程處理使CARs進入免疫細胞可以在活體外 培養的期間執行。
本發明之CAR的抗原結合區域可以呈任何合適的格式提供，例如scFv、scFab等等。 核酸及載體
本發明提供一種編碼如本發明之抗原結合分子、多肽或CAR的核酸或多種核酸。
於一些具體例中，該核酸為從例如其他的核酸或天然存在的生物材料予以純化或單離的。於一些具體例中該核酸包含DNA及/或RNA或由DNA及/或RNA組成。
本發明亦提供一種載體或多種表現載體，其包含如本發明之核酸或多種核酸。
核苷酸序列可以被包含於一載體內，如一表現載體內。當使用於本文中，一種“載體”為一種核酸分子使用作為將外來的核酸轉移至一細胞內的媒介物(vehicle)。載體可以為一載體用於表現核酸於細胞內。此載體可以包括一種啟動子序列，其可操縱地鏈接至編碼待表現的序列之核苷酸序列。一種載體亦可以包括一終止密碼子及表現增強子。本技藝已知的任何合適的載體、啟動子、增強子及終止密碼子均可以用於從本發明之載體來表現胜肽或多肽。
術語“可操縱地鏈接”可以包括一選擇的核酸序列及調節性核酸序列(諸如啟動子及/或增強子)共價鍵聯的情況，以這樣的方式以使核酸序列表現處於調節序列的影響或控制之下(藉此形成一表現匣)。因而，設若一種調節序列能夠影響核酸序列的轉錄，則該調節序列係可操縱地鏈接至選擇的核酸序列。形成的轉錄本繼而可以轉譯成所欲的胜肽/多肽。
合適的載體包括質體、二元載體(binary vector)、DNA載體、mRNA載體、病毒載體(諸如γ反轉錄病毒載體(如鼠類白血病病毒(MLV)-衍生的載體)、慢病毒(lentiviral)載體、腺病毒載體、腺病毒相關病毒載體、牛痘病毒載體及疱疹病毒載體)、轉位子基(transposon-based)載體以及人工染色體(諸如酵母人工染色體)。
於一些具體例中，載體可以為一真核載體，例如包含於真核細胞內從該載體表現蛋白所需的元素之一種載體。在一些具體例中，載體可以為一哺乳動物載體，例如包含巨細胞病毒(CMV)或SV40啟動子以驅動蛋白表現。
多種核酸之不同的核酸，或多種載體之不同的載體可編碼如本發明之抗原結合分子的組分多肽。 包含/表現該抗原結合分子及多肽的細胞
本發明亦提供一種包含或表現如本發明之抗原結合分子、多肽或CAR的細胞。亦提供一種包含或表現如本發明之一核酸、多種核酸、一載體或多種載體的細胞。
細胞可以為一種真核細胞，例如哺乳動物細胞。哺乳動物可以為靈長類動物(恆河猴(rhesus)、食蟹獼猴(cynomolgus)、非人類靈長類動物或人類)或非人類哺乳動物(諸如兔、天竺鼠、大鼠、小鼠或其他的囓齒動物(包括囓齒目的任何動物)、貓、狗、豬、綿羊、山羊、牛(包括乳牛，例如乳用母牛或牛屬目(orderBos )的任何動物)、馬(包括馬科目(orderEquidae )的任何動物)、驢以及非人類靈長類動物。
本發明亦提供一種用於生產一細胞之方法，該細胞包含如本發明之核酸或載體，該方法包含導入如本發明之一核酸、多種核酸、一載體或多種載體至一細胞內。於一些具體例中，導入如本發明之一單離的核酸或載體至一細胞內包含轉形、轉染、電穿孔或轉導(例如反轉錄病毒轉導)。
本發明亦提供一種用於生產一細胞之方法，該細胞表現/包含如本發明之抗原結合分子、多肽或CAR，該方法包含導入如本發明之一核酸、多種核酸、一載體或多種載體至一細胞。於一些具體例中，該方法額外包含於適合該細胞表現該核酸或載體的條件下培養該細胞。於一些具體例中，該方法係於活體外 執行。
本發明亦提供透過如本發明之方法所獲得或可獲得的細胞。 生產抗原結合分子及多肽
如本發明之抗原結合分子及多肽可依據熟悉此藝者已知的生產多肽的方法予以製備。
多肽可以藉由化學合成方法來製備，如液相或固相合成。舉例而言，可以使用例如，Chandrudu等人，Molecules (2013), 18: 4373-4388中所述的方法來合成胜肽/多肽，其係以其之全體藉此併入於此以作為參考資料。
任擇地，抗原結合分子及多肽可以藉由重組表現來生產。合適重組生產多肽的分子生物學技術為本技藝眾所周知的，諸如於Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual(第4版), Cold Spring Harbor Press, 2012，以及於Nat Methods. (2008); 5(2): 135-146，內闡述的該等，其等二者係以其等之全體藉此併入於此以作為參考資料。重組生產抗原結合分子的方法亦於Frenzel等人，Front Immunol. (2013); 4: 217以及Kunert and Reinhart, Appl Microbiol Biotechnol. (2016) 100: 3451-3461之內說明，其等二者係以其等之全體藉此併入於此以作為參考資料。
於一些情況中本發明之抗原結合分子包含一種以上的多肽鏈。於此等情況中，該抗原結合分子之生產可包含一種以上的多肽之轉錄及轉譯，以及多肽鏈隨後締合以形成該抗原結合分子。
可以使用合適多肽表現的任何細胞，用於如本發明之重組生產。細胞可以為一種原核細胞或真核細胞。在一些具體例中細胞為一種原核細胞，諸如古菌或細菌細胞。在一些具體例中細菌可以為革蘭氏陰性細菌諸如腸細菌科細菌，舉例而言大腸桿菌。在一些具體例中，細胞可以為一種真核細胞諸如酵母細胞、植物細胞、昆蟲細胞或哺乳動物細胞，例如CHO、HEK(如HEK293)、HeLa或COS細胞。在一些具體例中，細胞為一種暫時或穩定表現多肽的CHO細胞。
於一些情況中細胞不是原核細胞，因為一些原核細胞不允許如真核細胞一般的折疊或轉譯後修飾。此外，真核細胞可有非常高的表現位準以及能使用適當的標籤而容易地從真核細胞純化蛋白。亦可以使用會提升蛋白分泌至培養基內的特異性質體。
在一些具體例中多肽可以藉由無細胞蛋白質合成法(CFPS)來製備，舉例而言依據使用Zemella等人之Chembiochem (2015) 16(17): 2420-2431中所述的系統，其係以其之全體藉此併入於此以作為參考資料。
生產可涉及培養或發酵一種經修飾以表現感興趣的多肽的真核細胞。培養或發酵可以於一生物反應器內執行，該生物反應器提供適當的營養、空氣/氧及/或生長因子之供應。透過從細胞分區培養培養基/發酵肉湯、萃取蛋白內含物，以及分離個別的蛋白以單離分泌的多肽，而可收集分泌的蛋白。培養、發酵及分離的技術為熟悉此藝者眾所周知的，且舉例而言，於Green and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第4版；併入上文以作為參考資料)中說明。
生物反應器包括一種或更多種可以培養細胞的器皿。藉著反應物持續流入反應器，及所培養的細胞持續流出反應器，可在生物反應器中持續進行培養。任擇地，可分批進行培養。監測與控制生物反應器的環境條件，諸如器皿內的pH值、氧氣、流入與流出的流速及攪拌作用，使得以提供最佳的細胞培養條件。
表現抗原結合分子/多肽的細胞於培養後，可單離感興趣的多肽。可以使用本技藝已知從細胞分離蛋白之任何合適的方法。為了單離多肽，可能必須從營養培養基分離細胞。設若多肽係從細胞分泌，則可以藉由離心而使細胞與含有分泌的感興趣的多肽之培養基分離。設若感興趣的多肽聚集於細胞內，則蛋白單離可包含離心以從細胞培養基分離細胞，以溶解緩衝液處理細胞丸粒，以及舉例而言藉由超音波處理、快速的凍融或滲透溶解來進行細胞破碎。
繼而可能希望從上清液或培養基單離感興趣的多肽，上清液或培養基可能含有其他的蛋白及非蛋白組份。從上清液或培養基分離蛋白組份的一般做法係透過沉澱。不同溶解度的蛋白係以不同濃度的沉澱劑諸如硫酸銨予以沉澱。舉例而言，於低濃度的沉澱劑下，萃取出水溶性蛋白。因而，透過添加不同漸增濃度的沉澱劑，可以區分出不同溶解度的蛋白。隨後可以使用透析以從分離的蛋白移除硫酸銨。
其他區分不同蛋白的方法為本技藝已知的，舉例而言離子交換層析法及粒徑層析法(size chromatography)。此等方法可以使用作為沉澱之替代方案，或是可以於沉澱後執行。
一旦已經自培養物單離感興趣的多肽，可能希望或需要使多肽濃縮。一些濃縮蛋白的方法為本技藝已知的，諸如超過濾或冷凍乾燥法。 組成物
本發明亦提供包含本文所述之抗原結合分子、多肽、CARs、核酸、表現載體及細胞之組成物。
本文所述之抗原結合分子、多肽、CARs、核酸、表現載體及細胞可以調配為供臨床使用之藥學組成物或藥物，以及可以包含一種藥學上可接受的載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑。該組成物可以予以調配供局部、非經腸、全身性、體腔內、靜脈內、動脈內、肌肉內、鞘內、眼內、結膜內、腫瘤內、皮下的、皮內、鞘內、口服或經皮之投予途徑，經皮之投予途徑可包括注射或灌注(infusion)。
適宜的調配物可包含無菌或等滲透壓性介質中的抗原結合分子。可將藥物與藥學組成物調配成液態形式包括凝膠、泡沫。可調配液態調配物供藉由注射或灌注(例如經由導管)投予至人類或動物身體的所選區域。
在一些具體例中，組成物係予以調配供注射或灌注，例如至血管或腫瘤內。
依據本文所述之本發明亦提供用於生產藥學上有用的組成物之方法，此等生產方法可以包含選自於下列的一或多個步驟：生產本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)或細胞；單離本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)或細胞；及/或混合本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)或細胞以及一藥學上可接受的載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑。
舉例而言，本文所述之本發明另外的態樣係有關於一種調配或生產一藥物或藥學組成物之方法，該藥物或藥學組成物係供用於治療一疾病/病況(如癌症)，該方法包含藉由混合本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)或細胞，與一藥學上可接受的載劑、佐劑、賦形劑或稀釋劑來調配一藥學組成物或藥物。 治療及預防應用
本文所述之抗原結合分子、多肽、CARs、核酸、表現載體、細胞及組成物於治療及預防方法上得到應用。
本發明提供本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)、細胞或組成物供用於醫學治療或預防的方法。亦提供本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)、細胞或組成物於製備供用於治療或預防一疾病或病況的藥物之用途。亦提供治療或預防一疾病或病況之方法，其包含投予治療或預防有效量之本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)、細胞或組成物至一個體。
該方法可以有效減少疾病/病況的發展或進程、緩解疾病/病況的症狀或減少疾病/病況的病理。該方法可有效預防該疾病/病況的進程，例如預防該疾病/病況之惡化或減緩發展速度。在一些具體例中，該方法可導致該疾病/病況的改善，例如減少該疾病/病況的症狀或減少其他一些與該疾病/病況的嚴重性/作用關聯值。在一些具體例中，該方法可預防該疾病/病況發展晚期(例如慢性階段或轉移)。
將可以理解的是本發明之物件可用於治療/預防能從表現HER3的細胞之數目/活性下降得到治療或預防益處的任何疾病/病況。舉例而言，該疾病/病況可為表現HER3的細胞為病理上關聯的一種疾病/病況，例如表現HER3的細胞之數目/比例的增高與該疾病/病況之開始、發展或進程，及/或該疾病/病況之一或更多症狀的嚴重性有正相關，或是表現HER3的細胞數目/比例增高為該疾病/病況開始、發展或進程之風險因子的一種疾病/病況。
在一些具體例中，如本發明要治療/預防的疾病/病況係一種特徵在於表現HER3的細胞之數目/比例/活性增高之疾病/病況，舉例來說與沒有該疾病/病況之表現HER3的細胞之數目/比例/活性相比之下。
在一些具體例中，該要治療/預防的疾病/病況係一癌症。
癌症可為任何不想要的細胞增殖(或其自身表現出不想要的細胞增殖之任何疾病)、贅生物或腫瘤。癌症可能是良性或惡性的以及可能為原發性或是繼發性(轉移的)。贅生物或腫瘤可能為任何異常的細胞生長或增殖以及可能位於任何的組織內。癌症可以為衍生自例如下列的組織/細胞：腎上腺、腎上腺髓質、肛門、闌尾、膀胱、血液、骨骼、骨髓、腦、胸、盲腸、中樞神經系統(包括或是排除腦)小腦、子宮頸、結腸、十二指腸、子宮內膜、上皮細胞(例如腎臟上皮)、膽囊、食道、神經膠細胞、心臟、迴腸、空腸、腎臟、淚腺(lacrimal glad)、喉、肝臟、肺臟、淋巴、淋巴結、淋巴母細胞、上頜骨、縱膈、腸繫膜、子宮肌層、鼻咽、網膜、口腔、卵巢、胰臟、腮腺、周邊神經系統、腹膜、胸膜、***、唾腺、乙狀結腸、皮膚、小腸、軟組織、脾臟、胃、睪丸、胸腺、甲狀腺、舌、扁桃腺、氣管、子宮、女陰及/或白血球細胞。
要治療的腫瘤可為神經或非神經系統腫瘤。神經系統腫瘤可以發源於中樞或周邊神經系統，例如神經膠質瘤、神經管胚細胞瘤、腦脊髓膜瘤、神經纖維瘤、室管膜瘤、神經鞘瘤、神經纖維肉瘤、星細胞瘤及寡樹突神經膠細胞瘤。非神經系統癌症/腫瘤可以發源於任何其他非神經組織，實例包括黑色素瘤、間皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、非何杰金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma) (NHL)、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性骨髓白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(myelodysplastic syndrome)(MDS)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、肝癌、表皮樣癌、***癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、胰臟癌、胸腺癌、NSCLC、血液癌症及肉瘤。
HER3及其與癌症的關聯及角色舉例而言於Karachaliou等人，BioDrugs. (2017) 31(1):63-73及Zhang等人，Acta Biochimica et Biophysica Sinica (2016) 48(1): 39-48內被回顧，其等二者係以其等之全體藉此併入於此以作為參考資料。
在一些具體例中，該癌症係選自於：一種包含表現HER3的細胞之癌症、實性腫瘤、 乳癌(breast cancer)、乳癌(breast carcinoma)、管癌、胃癌(gastric cancer)、胃癌(gastric carcinoma)、胃腺癌、結腸直腸癌(colorectal cancer)、結腸直腸癌(colorectal carcinoma)、結腸直腸腺癌、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、肺癌、肺腺癌、鱗狀細胞肺癌、卵巢癌(ovarian cancer)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、卵巢漿液性腺癌、腎癌(kidney cancer)、腎臟細胞癌、腎臟透明細胞癌、腎臟細胞腺癌、腎臟乳突細胞癌、胰臟癌(pancreatic cancer)、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、子宮頸癌、子宮頸鱗狀細胞癌、皮膚癌、黑色素瘤、食道癌、食道腺癌、肝癌、肝細胞癌、膽管癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺癌(thyroid carcinoma)、嗜鉻細胞瘤、副神經節結瘤、膀胱癌、膀胱泌尿上皮細胞癌、***癌、***腺癌、肉瘤及胸腺瘤。
在一些具體例中，依據本發明要治療的癌症係選自於：一種表現HER3的癌症、胃癌(gastric cancer) (如胃癌(gastric carcinoma)、胃腺癌、胃腸腺癌)、頭頸部癌(如頭頸部鱗狀細胞癌)、乳癌(breast carcinoma)、卵巢癌(ovarian cancer) (如卵巢癌(ovarian carcinoma))、肺癌(如NSCLC、肺腺癌、鱗狀肺細胞癌)、黑色素瘤、***癌、口腔癌(如口咽癌)、腎癌(renal cancer) (如腎臟細胞癌)或結腸直腸癌(colorectal cancer) (如結腸直腸癌(colorectal carcinoma))、食道癌、胰臟癌、實性癌症及/或液態癌症(liquid cancer)。
治療/預防可能是針對下列之一者或更多者：延遲/預防該癌症症狀的開始/進程、減少該癌症的症狀嚴重性、減少該癌症細胞的存活/生長/侵襲/轉移、減少該癌症細胞的數目及/或增高個體的存活。
在一些具體例中，要治療/預防的癌症包含表現EGFR家族成員(例如HER3、EGFR、HER2或HER4)的細胞，及/或表現EGFR家族成員的配體之細胞。在一些具體例中，要治療/預防的癌症為EGFR家族成員陽性的癌症。在一些具體例中，該癌症過度表現EGFR家族成員及/或EGFR家族成員的配體。過度表現(Overexpression of)能藉由偵測到表現位準比等效的非癌細胞/非腫瘤組織的表現位準更大來判定。
可通過任何適宜方式來判定表現。表現可以為基因表現或蛋白質表現。基因表現可藉由譬如偵測編碼HER3的mRNA來判定，舉例而言藉由定量即時PCR(qRT-PCR)來判定。蛋白質表現可藉由譬如舉例而言抗體為基的方法來判定，例如西方墨點法、免疫組織化學、免疫細胞化學、流動式細胞測量術或ELISA。
在一些具體例中，要治療/預防的癌症包含表現HER3的細胞。在一些具體例中，要治療/預防的癌症為HER3陽性的癌症。在一些具體例中，該癌症過度表現HER3。過度表現HER3能藉由偵測到HER3表現位準比等效的非癌細胞/非腫瘤組織的表現位準更大來判定。
在一些具體例中，可以根據舉例而言從該個體獲得的樣本內偵測到表現HER3或過度表現HER3的癌症，來選擇用於本文所述之治療的患者。
在一些具體例中，要治療/預防的癌症包含表現HER3的配體(如NRG1及/或NRG2)的細胞。在一些具體例中，要治療/預防的癌症包含的細胞，其等表現的NRG1及/或NRG2的表現位準比等效的非癌細胞/非腫瘤組織的表現位準更大。
本發明之物件較佳以"治療有效"或"預防有效"量投予，此量係足以對個體顯示治療或預防益處。投予的實際量及投予的速率及時間過程會取決於疾病/病況的本質及嚴重性及投予的特定物件。治療的處方，例如決定劑量等等，係在普通科醫生及其他醫生的責任範圍內，並且典型地要考慮要治療的疾病/障礙、個別個體的狀況、遞送的位置、投予的方法以及開業醫生已知的其他因素。以上提及的技術與程序之實例可以於Remington’s Pharmaceutical Sciences，第20版，2000, pub. Lippincott, Williams & Wilkins內找到。
可以單獨投予或是組合以其他的治療同時或相繼投予，取決於待治療的病況。本文所述之抗原結合分子或組成物及一治療劑可以同時或相繼投予。
於一些具體例中，該方法包含額外的治療或預防性介入，舉例而言用於治療/預防一癌症。於一些具體例中，該治療或預防性介入係選自於化學療法、免疫療法、放射療法、外科手術、疫苗接種及/或激素療法。於一些具體例中，該治療或預防性介入包含白血球分離術(leukapheresis)。於一些具體例中，該治療或預防性介入包含幹細胞移植。
於一些具體例中，該抗原結合分子係組合以一種能抑制EGFR家族成員媒介的訊息傳導之製劑來投予。
因此，本發明提供組成物，其包含如本發明之物件(舉例而言如本發明之抗原結合分子)及另一種能抑制一EGFR家族成員(如EGFR、HER2、HER3或HER4)媒介的訊息傳導之製劑。亦提供此等組成物於醫學治療及預防本文所述之疾病/病況之方法中之用途。
亦提供用於治療/預防本文所述之疾病/病況之方法，其包含投予如本發明之物件的本發明物件(舉例而言如本發明之抗原結合分子)及另一種能抑制一EGFR家族成員媒介的訊息傳導之製劑。
能抑制EGFR家族成員媒介的訊息傳導的製劑為本技藝已知的，且包括小分子抑制劑(例如酪胺酸激酶抑制劑)、單株抗體(及其抗原結合片段)、胜肽/多肽抑制劑(例如誘餌配體/受體或胜肽適配體)及核酸(例如反義核酸、剪接轉換(splice-switching)核酸或核酸適配體)。EGFR家族成員媒介的訊息傳導之抑制劑包括通過對於EGFR家族成員的直接效應來抑制訊息傳導之製劑、其交互作用伙伴及/或涉及EGFR家族成員媒介的訊息傳導之下游因子。
在一些具體例中，EGFR家族成員媒介的訊息傳導之拮抗劑會抑制EGFR、HER2、HER4及HER3之一者或多者媒介的訊息傳導。EGFR家族成員媒介的訊息傳導之抑制劑例如於Yamaoka等人，Int. J. Mol. Sci. (2018), 19, 3491之內所述，其係以其之全體藉此併入於此以作為參考資料。在一些具體例中，該拮抗劑為泛-ErbB抑制劑。在一些具體例中，該拮抗劑為EGFR媒介的訊息傳導之抑制劑(譬如西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)、吉菲替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、拉帕替尼(lapatinib)、阿法替尼(afatinib)、布吉替尼(brigatinib)、埃克替尼(icotinib)、奥希替尼(osimertinib)、扎妥木單抗(zalutumumab)、凡德他尼(vandetanib)、耐昔妥珠單抗(necitumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、達克替尼(dacomitinib)、度立妥珠單抗(duligotuzumab)或馬妥珠單抗(matuzumab)。在一些具體例中，該拮抗劑為HER2媒介的訊息傳導之抑制劑(譬如曲妥珠單抗(trastuzumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、拉帕替尼(lapatinib)、來那替尼(neratinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)、MM-111、MCLA-128或馬吉妥昔單抗(margetuximab)。在一些具體例中，該拮抗劑為HER3媒介的訊息傳導之抑制劑(譬如塞里班土單抗(seribantumab)、路瑞妥珠單抗(lumretuzumab)、易利珠單抗(elgemtumab)、KTN3379、AV-203、GSK2849330、REGN1400、MP-RM-1、EV20、度立妥珠單抗(duligotuzumab)、MM-111、異妥拉明單抗(istiratumab)、MCLA-128、帕圖單抗(patritumab)、EZN-3920、RB200或U3-1402)。在一些具體例中，該拮抗劑為HER4媒介的訊息傳導之抑制劑(譬如拉帕替尼(lapatinib)、依魯替尼(ibrutinib)、阿法替尼(afatinib)、達克替尼(dacomitinib)或來那替尼(neratinib))。
在一些具體例中，EGFR家族成員媒介的訊息傳導之拮抗劑會抑制EGFR家族成員之訊息傳導的下游效應子。EGFR家族成員訊息傳導的下游效應子包括譬如PI3K、AKT、KRAS、BRAF、MEK/ERK及mTOR。在一些具體例中，EGFR家族成員媒介的訊息傳導之拮抗劑為MAPK/ERK途徑的抑制劑。在一些具體例中，EGFR家族成員媒介的訊息傳導之拮抗劑為PI3K/ATK/mTOR途徑的抑制劑。在一些具體例中，該拮抗劑為PI3K抑制劑(譬如必提尼西(pictilisib)、布帕尼西(buparlisib)、艾代拉里斯(idelalisib)、庫潘尼西(copanlisib)或度維利塞(duvelisib))。在一些具體例中，該拮抗劑為AKT抑制劑(譬如MK-2206、AZD5363、伊帕塔色替(ipatasertib)、VQD-002、哌立福辛(perifosine)或米替福新(miltefosine))。在一些具體例中，該拮抗劑為BRAF抑制劑(譬如威羅菲尼(vemurafenib)、達拉菲尼(dabrafenib)、SB590885、XL281、RAF265、恩考芬尼(encorafenib)、GDC-0879、PLX-4720、索拉非尼(sorafenib)或LGX818)。在一些具體例中，該拮抗劑為MEK/ERK抑制劑(譬如曲美替尼(trametinib)、考比替尼(cobimetinib))、比尼替尼(binimetinib)、司美替尼(selumetinib)、PD-325901、CI-1040、PD035901或TAK-733)。在一些具體例中，該拮抗劑為mTOR抑制劑(譬如雷帕黴素(rapamycin)、雷帕黴素衍生物地磷莫司(deforolimus)、坦羅莫司(temsirolimus)、依維莫司(everolimus)、雷帕黴素衍生物(ridaforolimus)或沙帕色替(sapanisertib))。
在一些具體例中，依據本發明的態樣要治療的癌症(包括單方療法或組合療法)係對EGFR家族成員(如EGFR、HER2、HER4及/或HER3)媒介的訊息傳導之拮抗劑治療有抗性的癌症，例如前面三個段落所述的拮抗劑。在一些具體例中，要治療的個體具有對EGFR家族成員媒介的訊息傳導之拮抗劑治療有抗性的癌症。在一些具體例中，要治療的個體具有已經發展出對EGFR家族成員媒介的訊息傳導之拮抗劑治療有抗性的癌症。在一些具體例中，要治療的個體具有一種癌症，該癌症先前曾對EGFR家族成員媒介的訊息傳導之拮抗劑治療有反應，但現在對該拮抗劑治療有抗性。在一些具體例中，要治療的個體具有一種癌症，該癌症於EGFR家族成員媒介的訊息傳導之拮抗劑治療後已經復發及/或進展(progressed)。在一些具體例中，要治療的個體具有一種癌症，該癌症最初對EGFR家族成員媒介的訊息傳導之拮抗劑治療有反應，但後來於該治療中進展。
熟悉此藝者能夠容易地辨識如前面段落的癌症及個體。此等癌症及個體可例如通過監測癌症隨著時間的發展/進展(及/或其相關性)來辨識，舉例而言於EGFR家族成員媒介的訊息傳導之拮抗劑治療過程期間。在一些具體例中，辨識此等個體/癌症可能包含於例如活體外 分析樣本(如活體組織切片)。在一些具體例中，該癌症可以確定包含具有與該拮抗劑治療感受性降低及/或有抗性有關連的突變的細胞。在一些具體例中，該癌症可以確定包含有EGFR家族成員表現向上調節的細胞。
在特定的具體例中，要治療的癌症係對EGFR及/或HER2媒介的訊息傳導之拮抗劑治療有抗性的癌症。在一些具體例中，要治療的個體具有對EGFR及/或HER2媒介的訊息傳導之拮抗劑治療有抗性的癌症。在一些具體例中，要治療的個體具有已經發展出對EGFR及/或HER2媒介的訊息傳導之拮抗劑治療有抗性的癌症。在一些具體例中，要治療的個體具有一種癌症，該癌症先前曾對EGFR及/或HER2媒介的訊息傳導之拮抗劑治療有反應，但現在對該拮抗劑治療有抗性。在一些具體例中，要治療的個體具有一種癌症，該癌症於EGFR及/或HER2媒介的訊息傳導之拮抗劑治療後已經復發及/或進展。在一些具體例中，要治療的個體具有一種癌症，該癌症最初對EGFR及/或HER2媒介的訊息傳導之拮抗劑治療有反應，但後來於該治療中癌症進展。
在特定的具體例中，要治療的癌症包含賦予對BRAF抑制劑治療抗性的突變。於一些具體例中，該突變為位於BRAF V600之突變。於一些具體例中，該突變為BRAF V600E或V600K。
在特定的具體例中，要治療的癌症包含賦予對BRAF抑制劑治療抗性的突變(如位於BRAF V600之突變)，以及治療包含投予威羅菲尼(vemurafenib)或達羅菲尼(darafenib)。
於一些具體例中，該抗原結合分子係組合以一種能抑制一免疫查核點分子媒介的訊息傳導之製劑來投予。於一些具體例中，該免疫查核點分子係例如PD-1、CTLA-4、LAG-3、VISTA、TIM-3、TIGIT或BTLA。於一些具體例中，該抗原結合分子係組合以一種能促進一共刺激受體媒介的訊息傳導之製劑來投予。於一些具體例中，該共刺激受體係例如CD28、CD80、CD40L、CD86、OX40、4-1BB、CD27或ICOS。
因此，本發明提供組成物，其包含如本發明之物件(舉例而言如本發明之抗原結合分子)及一種能抑制一免疫查核點分子媒介的訊息傳導之製劑。亦提供組成物，其包含本發明之物件及一種能促進一共刺激受體媒介的訊息傳導之製劑。亦提供此等組成物於本文所述之疾病/病況之醫學治療及預防方法中之用途。
亦提供用於治療/預防本文所述之疾病/病況之方法，其包含投予如本發明之物件的本發明物件(舉例而言如本發明之抗原結合分子)及一種能抑制一免疫查核點分子媒介的訊息傳導之製劑。亦提供用於治療/預防本文所述之疾病/病況之方法，其包含投予如本發明之物件的本發明物件(舉例而言如本發明之抗原結合分子)及一種能促進一共刺激受體媒介的訊息傳導之製劑。
能抑制免疫查核點分子媒介的訊息傳導的製劑為本技藝已知的，且包括例如能與免疫查核點分子或其等之配體結合並抑制免疫查核點分子媒介的訊息傳導的抗體。其他能抑制免疫查核點分子媒介的訊息傳導的製劑包括能降低免疫查核點分子或免疫查核點分子的配體之基因/蛋白表現的製劑(如通過抑制編碼免疫查核點分子/配體的基因之轉錄、抑制編碼免疫查核點分子/配體的RNA之轉錄後加工、降低編碼免疫查核點分子/配體的RNA之穩定性、促進編碼免疫查核點分子/配體的RNA之降解、抑制免疫查核點分子/配體的轉譯後加工、降低免疫查核點分子/配體的穩定性、或促進免疫查核點分子/配體的降解)，以及小分子抑制劑。
能促進共刺激受體媒介的訊息傳導之製劑為本技藝已知的，且包括例如能與共刺激受體結合並觸發或增高該共刺激受體媒介的訊息傳導的促效劑抗體。其他能促進共刺激受體媒介的訊息傳導的製劑包括能增高共刺激受體或共刺激受體的配體之基因/蛋白表現的製劑(如通過促進編碼共刺激受體/配體的基因之轉錄、促進編碼共刺激受體/配體的RNA之轉錄後加工、增高編碼共刺激受體/配體的RNA之穩定性、抑制編碼共刺激受體/配體的RNA之降解、促進共刺激受體/配體的轉譯後加工、增高共刺激受體/配體的穩定性、或抑制共刺激受體/配體的降解)，以及小分子促效劑。
在特定的具體例中，本發明之抗原結合分子係組合以一種能抑制PD-1媒介的訊息傳導的製劑來投予。能抑制PD-1媒介的訊息傳導的製劑可以為PD-1-或PD-L1-靶定的製劑。能抑制PD-1媒介的訊息傳導的製劑可以為例如一種能與PD-1或PD-L1結合並抑制PD-1媒介的訊息傳導的抗體。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子係組合以一種能抑制CTLA-4媒介的訊息傳導的製劑來投予。能抑制CTLA-4媒介的訊息傳導的製劑可以為CTLA-4-靶定的製劑，或靶定CTLA-4的配體例如CD80或CD86的製劑。在一些具體例中，能抑制CTLA-4媒介的訊息傳導的製劑可以為舉例而言一種能與CTLA-4、CD80或CD86結合並抑制CTLA-4媒介的訊息傳導的抗體。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子係組合以一種能抑制LAG-3媒介的訊息傳導的製劑來投予。能抑制LAG-3媒介的訊息傳導的製劑可以為LAG-3-靶定的製劑，或靶定LAG-3的配體例如第二型MHC的製劑。在一些具體例中，能抑制LAG-3媒介的訊息傳導的製劑可以為舉例而言一種能與LAG-3或第二型MHC結合並抑制LAG-3媒介的訊息傳導的抗體。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子係組合以一種能抑制VISTA媒介的訊息傳導的製劑來投予。能抑制VISTA媒介的訊息傳導的製劑可以為VISTA-靶定的製劑，或靶定VISTA的配體例如VSIG-3或VSIG-8的製劑。在一些具體例中，能抑制VISTA媒介的訊息傳導的製劑可以為舉例而言一種能與VISTA、VSIG-3或VSIG-8結合並抑制VISTA媒介的訊息傳導的抗體。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子係組合以一種能抑制TIM-3媒介的訊息傳導的製劑來投予。能抑制TIM-3媒介的訊息傳導的製劑可以為TIM-3-靶定的製劑，或靶定TIM-3的配體例如乳醣凝集素9的製劑。在一些具體例中，能抑制TIM-3媒介的訊息傳導的製劑可以為舉例而言一種能與TIM-3或乳醣凝集素9結合並抑制TIM-3媒介的訊息傳導的抗體。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子係組合以一種能抑制TIGIT媒介的訊息傳導的製劑來投予。能抑制TIGIT媒介的訊息傳導的製劑可以為TIGIT-靶定的製劑，或靶定TIGIT的配體例如CD113、CD112或CD155的製劑。在一些具體例中，能抑制TIGIT媒介的訊息傳導的製劑可以為舉例而言一種能與TIGIT、CD113、CD112或CD155結合並抑制TIGIT媒介的訊息傳導的抗體。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子係組合以一種能抑制BTLA媒介的訊息傳導的製劑來投予。能抑制BTLA媒介的訊息傳導的製劑可以為BTLA-靶定的製劑，或靶定BTLA的配體例如HVEM的製劑。在一些具體例中，能抑制BTLA媒介的訊息傳導的製劑可以為舉例而言一種能與BTLA或HVEM結合並抑制BTLA媒介的訊息傳導的抗體。
在一些具體例中，使用本發明之抗原結合分子與一種能抑制免疫查核點分子(例如PD-1)媒介的訊息傳導的製劑之組合的方法與任一製劑使用作為單方療法時觀察到的效應相比，提供了改良的治療效應。在一些具體例中，本發明之抗原結合分子與一種能抑制免疫查核點分子(例如PD-1)媒介的訊息傳導的製劑之該組合提供了增效性(即優加性(super-additive))治療效應。
同時投予係指一起投予該抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)、細胞或組成物及治療劑，舉例而言作為一種含有二製劑的藥學組成物(組合製備物)，或是彼此緊密相連地投予以及可選擇地經由相同的投予途徑，例如至相同的動脈、靜脈或其他血管。相繼投予係指投予該抗原結合分子/組成物或治療劑中之一者，接著於特定的時間間隔之後分開投予另一種製劑。二種製劑不需要以相同的途徑投予，雖然於一些具體例中是這種情況。時間間隔可以為任何的時間間隔。
化學療法及放射療法分別指用一種藥物或游離輻射(諸如利用X射線或γ射線之放射療法)來治療一癌症。藥物可以為一化學實體，例如小分子藥品、抗生素、DNA嵌入劑、蛋白抑制劑(諸如激酶抑制劑)，或是一生物製劑，例如抗體、抗體片段、適配體、核酸(諸如DNA、RNA)、胜肽、多肽或蛋白質。藥物可以調配成一藥學組成物或藥物。調配物可以包含一種或更多種藥物(諸如一種或更多種活性製劑)連同一或更多藥學上可接受的稀釋劑、賦形劑或載劑。
治療可以涉及超過一種藥物的投予。一種藥物可以單獨投予或組合以其他的治療同時或相繼投予，取決於待治療的病況。舉例而言，化學療法可以為涉及投予二種藥物的共療法，其等之一者或更多者可能是打算要治療癌症者。
化學療法可以藉由一種或更多種投予途徑予以投予，例如非經腸、靜脈內注射、口腔、皮下、皮內或腫瘤內。
化學療法可以依據一種治療攝生法(regime)來投予。治療攝生法可以是預定的化學療法投予之時刻表、計畫、方案或時間表，其可由醫師或開業醫生予以製備且可以修改以適合需要治療的患者。治療攝生法可以表示下列之一者或更多者：患者被投予的化學療法類型；各藥物或放射線的劑量；投予之間的時間間隔；各治療的長度；若有任何治療假期(treatment holiday)，則其次數及本質等等。於共療法方面，可以提供指示各藥物如何被投予之單一治療攝生法。
化學治療藥物可以選自於：玻瑪西林 (Abemaciclib)、醋酸阿比特龍(Abiraterone Acetate)、必除癌(Abitrexate) (胺甲喋呤(Methotrexate))、亞伯杉(Abraxane)(紫杉醇(Paclitaxel)白蛋白穩定的奈米粒子調配物)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、阿卡替尼(Acalabrutinib)、AC-T、雅詩力(Adcetris) ((本妥昔單抗(Brentuximab Vedotin))、ADE、阿多-曲妥珠單抗艾坦辛(Ado-Trastuzumab Emtansine)、阿德力黴素(Adriamycin)(鹽酸多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride))、二馬來酸阿法替尼(Afatinib Dimaleate)、癌伏妥(Afinitor)(依維莫司(Everolimus))、嘔可舒(Akynzeo) (奈妥吡坦和鹽酸帕洛諾司瓊(Netupitant and Palonosetron Hydrochloride))、樂得美(Aldara) (咪喹莫特(Imiquimod))、阿地白介素(Aldesleukin)、安立適(Alecensa)(阿雷替尼(Alectinib))、阿雷替尼(Alectinib)、阿來組單抗(Alemtuzumab)、愛寧達(Alimta) (培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium))、Aliqopa(鹽酸庫潘尼西(Copanlisib Hydrochloride))、注射用威克瘤(Alkeran for Injection)(鹽酸黴法蘭(Melphalan Hydrochloride))、威克瘤錠(Alkeran Tablets)(黴法蘭(Melphalan))、嘔立舒(Aloxi)(鹽酸帕洛諾司瓊(Palonosetron Hydrochloride))、布吉替尼(Alunbrig)(布吉替尼(Brigatinib))、苯丁酸氮芥(Ambochlorin)(苯丁酸氮芥(Chlorambucil))、苯丁酸氮芥(Amboclorin) (苯丁酸氮芥(Chlorambucil))、氨磷汀(Amifostine)、胺基乙醯丙酸(Aminolevulinic Acid)、阿那曲唑(Anastrozole)、阿瑞吡坦(Aprepitant)、雷狄亞(Aredia)(帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium))、安美達(Arimidex)(阿那曲唑(Anastrozole))、諾曼癌素(Aromasin) (依西美坦(Exemestane))、阿倫恩(Arranon)(奈拉濱(Nelarabine))、三氧化二砷、亞舍拉(Arzerra)(奧法木單抗(Ofatumumab))、天門冬醯胺酶酸菊歐文氏桿菌 (Asparaginase Erwinia chrysanthemi))、阿特珠單抗(Atezolizumab)、癌思停(Avastin)(貝伐單抗(Bevacizumab))、阿維魯單抗(Avelumab)、西卡思羅(Axicabtagene Ciloleucel)、阿西替尼(Axitinib)、阿扎胞苷(Azacitidine)、巴文西歐(Bavencio)(阿維魯單抗(Avelumab))、BEACOPP、卡莫司汀(Becenum)(卡莫司汀(Carmustine))、貝利司他(Beleodaq)(貝利司他(Belinostat))、貝利司他(Belinostat)、鹽酸苯達莫司汀(Bendamustine Hydrochloride)、BEP、沛斯博(Besponsa)(奥英妥珠單抗(Inotuzumab Ozogamicin))、貝伐單抗(Bevacizumab)、貝沙羅汀(Bexarotene)、百克沙(Bexxar) (托西莫單抗(Tositumomab)及碘I 131托西莫單抗)、比卡魯胺(Bicalutamide)、BiCNU(卡莫司汀(Carmustine))、博萊黴素(Bleomycin)、博納吐單抗(Blinatumomab)、百利妥(Blincyto) (博納吐單抗)、硼替佐米(Bortezomib)、伯舒替尼(Bosulif) (伯舒替尼(Bosutinib))、伯舒替尼(Bosutinib)、本妥昔單抗(Brentuximab Vedotin)、布吉替尼(Brigatinib)、BuMel、硫酸布他卡因(Busulfan)、補束剋(Busulfex)(硫酸布他卡因(Busulfan))、卡巴他賽(Cabazitaxel)、卡博替尼(Cabometyx)(卡博替尼-S-蘋果酸(Cabozantinib-S-Malate))、卡博替尼-S-蘋果酸、CAF、阿卡替尼(Calquence) (阿卡替尼(Acalabrutinib))、坎帕斯(Campath)(阿來組單抗(Alemtuzumab))、開普拓(Camptosar)(鹽酸伊立替康(Irinotecan Hydrochloride))、卡培他濱(Capecitabine)、CAPOX、Carac(氟尿嘧啶--局部(Fluorouracil--Topical))、卡鉑(Carboplatin)、卡鉑-紫杉醇(CARBOPLATIN-TAXOL)、卡非佐米(Carfilzomib)、卡莫司汀(Carmubris) (卡莫司汀(Carmustine))、卡莫司汀、卡莫司汀植入劑、可蘇多(Casodex) (比卡魯胺(Bicalutamide))、CEM、色瑞替尼(Ceritinib)、司比定(Cerubidine) (鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride))、保蓓(Cervarix) (重組型HPV二價疫苗)、西妥昔單抗、CEV、苯丁酸氮芥(Chlorambucil)、苯丁酸氮芥-強體松(CHLORAMBUCIL-PREDNISONE)、CHOP、順鉑(Cisplatin)、克拉屈濱(Cladribine)、環磷醯胺(Clafen) (環磷醯胺(Cyclophosphamide))、氯伐拉濱(Clofarabine)、氯伐拉濱(Clofarex)(氯伐拉濱(Clofarabine))、氯伐拉濱(Clolar)(氯伐拉濱(Clofarabine))、CMF、考比替尼(Cobimetinib)、卡博替尼(Cometriq)(卡博替尼-S-蘋果酸(Cabozantinib-S-Malate)、鹽酸庫潘尼西(Copanlisib Hydrochloride)、COPDAC、COPP、COPP-ABV、可美淨(Cosmegen) (放線菌素(Dactinomycin))、可泰利(Cotellic) (考比替尼(Cobimetinib))、里唑蒂尼(Crizotinib))、CVP、環磷醯胺(Cyclophosphamide)、異環磷醯胺(Cyfos)(異環磷醯胺(Ifosfamide))、欣銳擇(Cyramza) (雷莫司單抗(Ramucirumab))、阿糖胞苷(Cytarabine)、阿糖胞苷脂質體(Cytarabine Liposome)、賽德薩-U(Cytosar-U) (阿糖胞苷)、環磷醯胺(Cytoxan)(環磷醯胺(Cyclophosphamide)、達拉菲尼(Dabrafenib)、達卡巴嗪(Dacarbazine)、達克金(Dacogen)(地西他濱(Decitabine))、放線菌素(Dactinomycin)、達雷木單抗(Daratumumab)、達雷木單抗(Darzalex) (達雷木單抗(Daratumumab))、達沙替尼(Dasatinib)、鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride)、鹽酸道諾黴素及阿糖胞苷脂質體(Daunorubicin Hydrochloride and Cytarabine Liposome)、地西他濱(Decitabine)、去纖苷鈉(Defibrotide Sodium)、去纖苷鈉(Defitelio) (去纖苷鈉(Defibrotide Sodium))、加瑞克(Degarelix)、地尼白介素(Denileukin Diftitox)、地諾單抗(Denosumab)、***糖苷胞嘧啶脂質體(DepoCyt)(阿糖胞苷脂質體(Cytarabine Liposome))、***(Dexamethasone)、鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride)、丹尼托昔單抗(Dinutuximab)、多烯紫杉醇(Docetaxel)、多柔比星脂質體(Doxil) (鹽酸多柔比星脂質體(Doxorubicin Hydrochloride Liposome))、鹽酸多柔比星、鹽酸多柔比星脂質體、Dox-SL(鹽酸多柔比星脂質體)、DTIC-Dome (達卡巴嗪(Dacarbazine))、德瓦魯單抗(Durvalumab)、艾欣宜膚(Efudex)(氟尿嘧啶--局部(Fluorouracil--Topical))、埃立特(Elitek)(拉布立酶(Rasburicase))、艾倫斯(Ellence) (鹽酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride))、埃羅妥珠單抗(Elotuzumab)、益樂鉑(Eloxatin)(奥沙利鉑(Oxaliplatin))、艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine)、止敏吐(Emend)(阿瑞吡坦(Aprepitant))、恩必喜(Empliciti)(埃羅妥珠單抗(Elotuzumab))、甲磺酸恩西地平(Enasidenib Mesylate)、恩雜魯胺(Enzalutamide)、鹽酸表柔比星(Epirubicin Hydrochloride)、EPOCH、愛必妥(Erbitux) (西妥昔單抗)、甲磺酸艾日布林(Eribulin Mesylate)、愛維德(Erivedge) (維莫德吉(Vismodegib))、鹽酸厄洛替尼(Erlotinib Hydrochloride)、天門冬醯胺酶(Erwinaze)(天門冬醯胺酶酸菊歐文氏桿菌(Asparaginase Erwinia chrysanthemi))、益護爾氨磷汀(Ethyol) (氨磷汀(Amifostine))、依託泊苷(Etopophos) (依託泊苷磷酸(Etoposide Phosphate))、依託泊苷(Etoposide)、依託泊苷磷酸(Etoposide Phosphate)、鹽酸多柔比星脂質體(Evacet)((鹽酸多柔比星脂質體)、依維莫司(Everolimus)、鈣穩(Evista)(鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride))、優維寧(Evomela)(鹽酸黴法蘭(Melphalan Hydrochloride))、依西美坦(Exemestane)、5-FU(氟尿嘧啶注射液)、5-FU(氟尿嘧啶--局部)、弗瑞斯(Fareston)(托瑞米芬(Toremifene))、髓力達(Farydak) (帕比司他(Panobinostat))、法洛德(Faslodex)(氟維司群(Fulvestrant))、FEC、復乳納(Femara) (來曲唑(Letrozole))、非格司亭(Filgrastim)、福達樂(Fludara) (磷酸氟達拉濱(Fludarabine Phosphate))、磷酸氟達拉濱(Fludarabine Phosphate)、氟尿嘧啶(Fluoroplex) (氟尿嘧啶--局部)、氟尿嘧啶注射液、氟尿嘧啶--局部、氟他胺(Flutamide)、胺甲喋呤(Folex)(胺甲喋呤(Methotrexate))、胺甲喋呤PFS(Folex PFS) (胺甲喋呤(Methotrexate))、FOLFIRI、FOLFIRI-貝伐單抗、FOLFIRI-西妥昔單抗、FOLFIRINOX、FOLFOX、服瘤停(Folotyn) (普拉曲沙(Pralatrexate))、FU-LV、氟維司群(Fulvestrant)、嘉喜(Gardasil) (重組型HPV四價疫苗)、嘉喜9(Gardasil 9) (重組型HPV九價疫苗)、癌即瓦(Gazyva) (奥濱尤妥珠單抗(Obinutuzumab))、吉菲替尼(Gefitinib)、鹽酸吉西他汀(Gemcitabine Hydrochloride)、吉西他汀-順鉑(GEMCITABINE-CISPLATIN)、吉西他汀-奥沙利鉑(GEMCITABINE-OXALIPLATIN)、吉妥珠單抗奥佐米星(Gemtuzumab Ozogamicin)、健擇(Gemzar)(鹽酸吉西他汀)、妥復克(Gilotrif) (二馬來酸阿法替尼(Afatinib Dimaleate))、基利克(Gleevec) (甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate))、格立得(Gliadel) (卡莫司汀植入劑(Carmustine Implant))、格立得植入劑(Gliadel wafer) (卡莫司汀植入劑(Carmustine Implant))、谷卡匹酶(Glucarpidase)、醋酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate))、賀樂維(Halaven) (甲磺酸艾日布林(Eribulin Mesylate))、普潘奈(Hemangeol)(鹽酸普潘奈(Propranolol Hydrochloride)、賀癌平(Herceptin) (曲妥珠單抗)、HPV二價疫苗、重組型、HPV九價疫苗、重組型、HPV四價疫苗、重組型、癌康定(Hycamtin)(鹽酸托普迪肯(Topotecan Hydrochloride))、羥基脲(Hydrea)(羥基脲(Hydroxyurea))、羥基脲(Hydroxyurea)、Hyper-CVAD、愛乳適(Ibrance) (帕博西尼(Palbociclib))、替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan)、依魯替尼(Ibrutinib)、ICE、英可欣(Iclusig) (鹽酸普納替尼(Ponatinib Hydrochloride))、伊達比星(Idamycin)(鹽酸伊達比星(Idarubicin Hydrochloride))、鹽酸伊達比星(Idarubicin Hydrochloride)、艾代拉里斯(Idelalisib)、恩西地平(Idhifa)(甲磺酸恩西地平(Enasidenib Mesylate)、異環磷醯胺(Ifex) (異環磷醯胺(Ifosfamide))、異環磷醯胺(Ifosfamide)、異環磷醯胺(Ifosfamidum) (異環磷醯胺(Ifosfamide))、IL-2(阿地白介素(Aldesleukin))、甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate)、億珂(Imbruvica) (依魯替尼(Ibrutinib))、恩慈(Imfinzi)(德瓦魯單抗(Durvalumab))、咪喹莫特(Imiquimod)、伊姆利基(Imlygic)(拉他莫金(Talimogene Laherparepvec))、抑癌特(Inlyta) (阿西替尼(Axitinib)、奥英妥珠單抗奥佐米星(Inotuzumab Ozogamicin)、干擾素α-2b、重組型、介白素-2(阿地白介素)、因治隆A(Intron A) (重組型干擾素α-2b)、碘I 131托西莫單抗及托西莫單抗、伊匹單抗(Ipilimumab)、艾瑞莎(Iressa) (吉菲替尼(Gefitinib))、鹽酸伊立替康(Irinotecan Hydrochloride)、鹽酸伊立替康脂質體(Irinotecan Hydrochloride Liposome)、羅米地辛(Istodax)(羅米地辛(Romidepsin))、伊沙匹隆(Ixabepilone)、檸檬酸埃沙佐米(Ixazomib Citrate)、易莎平(Ixempra)(伊沙匹隆(Ixabepilone))、捷可衛(Jakafi) (磷酸鹽魯索利替尼(Ruxolitinib Phosphate))、JEB、去癌達(Jevtana) (卡巴他賽(Cabazitaxel))、賀癌寧(Kadcyla) (阿多-曲妥珠單抗艾坦辛(Ado-Trastuzumab Emtansine))、鹽酸雷洛昔芬(Keoxifene)(鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride))、凱望斯(Kepivance)(帕利夫明(Palifermin))、吉舒達(Keytruda)(派姆單抗(Pembrolizumab))、擊癌利(Kisqali)(瑞柏司可里布 (Ribociclib))、Kymriah (Tisagenlecleucel)、凱博斯(Kyprolis)(卡非佐米(Carfilzomib))、蘭雷歐肽乙酯(Lanreotide Acetate)、二甲苯磺酸拉帕替尼(Lapatinib Ditosylate)、拉特沃(Lartruvo)(奥拉妥單抗(Olaratumab))、雷利度胺(Lenalidomide)、甲磺酸樂伐替尼(Lenvatinib Mesylate)、樂衛瑪(Lenvima)(甲磺酸樂伐替尼(Lenvatinib Mesylate))、來曲唑(Letrozole)、甲醯四氫葉酸鈣(Leucovorin Calcium)、瘤克寧(Leukeran) (苯丁酸氮芥(Chlorambucil))、醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate)、祿斯得停(Leustatin)(克拉屈濱(Cladribine))、聚果糖(Levulan)(胺基乙醯丙酸(Aminolevulinic Acid)、苯丁酸氮芥(Linfolizin)(苯丁酸氮芥(Chlorambucil))、力得微脂體(LipoDox) (鹽酸多柔比星脂質體)、洛莫司汀(Lomustine)、朗斯弗(Lonsurf)(曲氟尿苷及鹽酸替比拉西(Trifluridine and Tipiracil Hydrochloride))、柳菩林(Lupron)(醋酸亮丙瑞林))、柳菩林持續性藥效皮下注射劑(Lupron Depot)((醋酸亮丙瑞林))、柳菩林持續性藥效皮下注射劑(Lupron Depot-Ped)(醋酸亮丙瑞林)、利普卓(Lynparza)(奧拉帕尼(Olaparib))、硫酸長春新鹼脂質體(Marqibo) (硫酸長春新鹼脂質體(Vincristine Sulfate Liposome))、甲基苄肼(Matulane)(鹽酸丙卡巴肼(Procarbazine Hydrochloride))、鹽酸甲基二(氯乙基)胺(Mechlorethamine Hydrochloride)、醋酸甲地孕酮(Megestrol Acetate)、麥欣霓(Mekinist)(曲美替尼(Trametinib))、黴法蘭(Melphalan)、鹽酸黴法蘭(Melphalan Hydrochloride)、巰嘌呤(Mercaptopurine)、美司鈉(Mesna)、美司鈉(Mesnex)(美司鈉(Mesna))、替莫唑胺(Methazolastone)(替莫唑胺(Temozolomide))、胺甲喋呤(Methotrexate)、胺甲喋呤LPF(胺甲喋呤)、溴化甲基納曲酮(Methylnaltrexone Bromide)、胺甲喋呤(Mexate)(胺甲喋呤(Methotrexate))、胺甲喋呤-AQ(Mexate-AQ) (胺甲喋呤(Methotrexate))、米哚妥林(Midostaurin)、絲裂黴素C(Mitomycin C)、鹽酸雙羥蒽醌(Mitoxantrone Hydrochloride)、絲裂黴素C(Mitozytrex)(絲裂黴素C(Mitomycin C))、MOPP、總動原(Mozobil)(普樂沙福(Plerixafor))、氮芥(Mustargen)(鹽酸甲基二(氯乙基)胺(Mechlorethamine Hydrochloride))、排多癌(Mutamycin) (絲裂黴素C(Mitomycin C))、邁樂寧(Myleran) (硫酸布他卡因(Busulfan))、阿扎胞苷(Mylosar)(阿扎胞苷(Azacitidine))、麥羅塔(Mylotarg) (吉妥珠單抗奥佐米星(Gemtuzumab Ozogamicin))、紫杉醇(Paclitaxel)奈米粒子(紫杉醇(Paclitaxel)白蛋白穩定的奈米粒子調配物)、溫諾平(Navelbine)(酒石酸長春瑞賓(Vinorelbine Tartrate))、耐昔妥珠單抗(Necitumumab)、奈拉濱(Nelarabine)、環磷醯胺(Neosar)(環磷醯胺(Cyclophosphamide))、馬來酸來那替尼(Neratinib Maleate)、來那替尼(Nerlynx)(馬來酸來那替尼(Neratinib Maleate)、奈妥吡坦和鹽酸帕洛諾司瓊(Netupitant and Palonosetron Hydrochloride))、倍血添(Neulasta)(培非格司亭(Pegfilgrastim))、優保津(Neupogen)(非格司亭(Filgrastim))、蕾莎瓦(Nexavar)(甲苯磺酸索拉非尼(Sorafenib Tosylate))、尼魯米特(Nilandron)(尼魯米特(Nilutamide))、尼洛替尼(Nilotinib)、尼魯米特(Nilutamide)、免瘤諾(Ninlaro)(檸檬酸埃沙佐米(Ixazomib Citrate))、甲苯磺酸尼拉帕尼一水物(Niraparib Tosylate Monohydrate)、納武單抗(Nivolumab)、諾瓦得士(Nolvadex)(檸檬酸泰莫西芬(Tamoxifen Citrate))、恩沛板(Nplate)(羅米司亭(Romiplostim))、奥濱尤妥珠單抗(Obinutuzumab)、索尼得吉(Odomzo)(索尼得吉(Sonidegib))、OEPA、奧法木單抗(Ofatumumab)、OFF、奧拉帕尼(Olaparib)、奥拉妥單抗(Olaratumab)、高三尖杉酯鹼(Omacetaxine Mepesuccinate)、昂卡司帕(Oncaspar)(培門冬酶(Pegaspargase))、鹽酸昂丹司瓊(Ondansetron Hydrochloride)、安能得(Onivyde) (鹽酸伊立替康脂質體(Irinotecan Hydrochloride Liposome))、地尼白介素-2(Ontak)(地尼白介素(Denileukin Diftitox))、保疾伏(Opdivo)(納武單抗(Nivolumab))、OPPA、奥希替尼(Osimertinib)、奥沙利鉑(Oxaliplatin)、紫杉醇(Paclitaxel)、紫杉醇(Paclitaxel)白蛋白穩定的奈米粒子調配物、PAD、帕博西尼(Palbociclib)、帕利夫明(Palifermin)、鹽酸帕洛諾司瓊、鹽酸帕洛諾司瓊和奈妥吡坦、帕米膦酸二鈉(Pamidronate Disodium)、帕尼單抗(Panitumumab)、帕比司他(Panobinostat)、卡鉑(Paraplat) (卡鉑(Carboplatin))、伯爾定(Paraplatin) (卡鉑(Carboplatin))、鹽酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride)、PCV、PEB、培門冬酶(Pegaspargase)、培非格司亭(Pegfilgrastim)、聚乙二醇干擾素α-2b(Peginterferon Alfa-2b)、PEG-因治隆(PEG-Intron)(聚乙二醇干擾素α-2b(Peginterferon Alfa-2b)、派姆單抗(Pembrolizumab)、培美曲塞二鈉(Pemetrexed Disodium)、賀疾妥(Perjeta)(帕妥珠單抗(Pertuzumab))、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、普拉汀諾(Platinol)(順鉑)、普拉汀諾-AQ(Platinol-AQ)(順鉑)、普樂沙福(Plerixafor)、泊馬度胺(Pomalidomide)、鉑美特(Pomalyst)(泊馬度胺(Pomalidomide))、鹽酸普納替尼(Ponatinib Hydrochloride)、搏癌莎(Portrazza)(耐昔妥珠單抗(Necitumumab))、普拉曲沙(Pralatrexate)、強體松(Prednisone)、鹽酸丙卡巴肼(Procarbazine Hydrochloride)、普留淨(Proleukin) (阿地白介素)、保骼麗(Prolia) (地諾單抗(Denosumab))、艾曲波帕(Promacta) (艾曲波帕乙醇胺(Eltrombopag Olamine))、鹽酸普潘奈(Propranolol Hydrochloride)、普羅文奇(Provenge)(西普魯塞-T(Sipuleucel-T)、巰嘌呤(Purinethol)(巰嘌呤(Mercaptopurine))、巰嘌呤(Purixan)(巰嘌呤(Mercaptopurine))、沒有項目([No Entries])、二氯化鐳223(Radium 223 Dichloride)、鹽酸雷洛昔芬(Raloxifene Hydrochloride)、雷莫司單抗(Ramucirumab)、拉布立酶(Rasburicase)、R-CHOP、R-CVP、重組型人類乳突病毒(HPV)二價疫苗(Recombinant Human Papillomavirus (HPV) Bivalent Vaccine)、重組型人類乳突病毒(HPV)九價疫苗、重組型人類乳突病毒(HPV)四價疫苗、重組型干擾素α-2b、瑞格菲尼(Regorafenib)、溴化甲基納曲酮(Relistor)(溴化甲基納曲酮(Methylnaltrexone Bromide))、R-EPOCH、瑞復美(Revlimid)(雷利度胺(Lenalidomide))、胺甲喋呤(Rheumatrex)(胺甲喋呤(Methotrexate))、瑞柏司可里布(Ribociclib)、R-ICE、利妥昔單抗(Rituxan)(利妥昔單抗(Rituximab))、利妥昔單抗玻尿酸酶(Rituxan Hycela)(利妥昔單抗及玻尿酸酶人類(Rituximab and Hyaluronidase Human))、利妥昔單抗(Rituximab)、利妥昔單抗及玻尿酸酶人類(Rituximab and Hyaluronidase Human))、鹽酸羅拉吡坦(Rolapitant Hydrochloride)、羅米地辛(Romidepsin)、羅米司亭(Romiplostim)、紅比黴素(Rubidomycin)(鹽酸道諾黴素(Daunorubicin Hydrochloride))、瑞卡帕布(Rubraca)(瑞卡帕布樟腦磺酸鹽(Rucaparib Camsylate))、瑞卡帕布樟腦磺酸鹽(Rucaparib Camsylate)、磷酸鹽魯索利替尼(Ruxolitinib 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Sulfate))、萬科(Velcade) (硼替佐米(Bortezomib))、硫酸長春鹼(Velsar)(硫酸長春鹼(Vinblastine Sulfate))、威羅菲尼(Vemurafenib)、唯可來(Venclexta)(維奈克拉(Venetoclax))、維奈克拉(Venetoclax)、玻瑪西林(Verzenio)(玻瑪西林(Abemaciclib))、醋酸亮丙瑞林植入劑(Viadur)(醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate))、委丹扎(Vidaza)(阿扎胞苷(Azacitidine))、硫酸長春鹼(Vinblastine Sulfate)、硫酸長春新鹼注射劑(Vincasar PFS)(硫酸長春新鹼)、硫酸長春新鹼(Vincristine Sulfate)、硫酸長春新鹼脂質體(Vincristine Sulfate Liposome)、酒石酸長春瑞賓(Vinorelbine Tartrate)、VIP、維莫德吉(Vismodegib)、尿苷三乙酸酯(Vistogard) (尿苷三乙酸酯(Uridine Triacetate))、谷卡匹酶(Voraxaze)(谷卡匹酶(Glucarpidase))、伏立諾他(Vorinostat)、福退癌(Votrient)(鹽酸帕唑帕尼(Pazopanib Hydrochloride))、道諾黴素及阿糖胞苷複方注射液(Vyxeos)(鹽酸道諾黴素及阿糖胞苷脂質體(Daunorubicin Hydrochloride and Cytarabine Liposome))、爾可福(Wellcovorin)(甲醯四氫葉酸鈣(Leucovorin Calcium))、截剋瘤(Xalkori) (里唑蒂尼(Crizotinib))、截瘤達(Xeloda)(卡培他濱)、XELIRI、XELOX、癌骨瓦(Xgeva) (地諾單抗(Denosumab))、鐳治骨(Xofigo)(二氯化鐳223 (Radium 223 Dichloride)、安可坦(Xtandi) (恩雜魯胺(Enzalutamide))、益伏(Yervoy) (伊匹單抗(Ipilimumab))、Yescarta(西卡思羅(Axicabtagene Ciloleucel))、友待(Yondelis)(他比特定(Trabectedin))、柔癌捕(Zaltrap)(Ziv-阿柏西普(Ziv-Aflibercept))、非格司亭生物類似藥(Zarxio)(非格司亭(Filgrastim))、則樂(Zejula)(甲苯磺酸尼拉帕尼一水物(Niraparib Tosylate Monohydrate))、日沛樂(Zelboraf)(威羅菲尼(Vemurafenib))、澤娃靈(Zevalin)(替伊莫單抗(Ibritumomab Tiuxetan))、右雷佐生(Zinecard)(鹽酸右雷佐生(Dexrazoxane Hydrochloride))、Ziv-阿柏西普(Ziv-Aflibercept)、卓弗蘭(Zofran)(鹽酸昂丹司瓊(Ondansetron Hydrochloride))、諾雷德(Zoladex)(醋酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate))、唑來磷酸(Zoledronic Acid)、伏立諾他(Zolinza)(伏立諾他(Vorinostat))、卓骨祂(Zometa)(唑來磷酸(Zoledronic Acid))、思得適(Zydelig)(艾代拉里斯(Idelalisib))、立克癌(Zykadia) (色瑞替尼(Ceritinib))及澤珂(Zytiga)(醋酸阿比特龍(Abiraterone Acetate))。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子係組合以下列之一者或更多者來投予：曲妥珠單抗、西妥昔單抗、順鉑、5-FU或卡培他濱。在一些具體例中，本發明之抗原結合分子係組合以曲妥珠單抗及順鉑，以及5-FU或卡培他濱來投予。
在一些具體例中，本發明之抗原結合分子係組合以西妥昔單抗來投予。特別預期組合西妥昔單抗之投予供用於治療頭頸部癌(例如頭頸部鱗狀細胞癌)。
可以提供多重劑量的抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)、細胞或組成物。一或更多劑量或是各劑量可以伴隨著另一種治療劑之同時或相繼投予。
多重的劑量可以相隔預定的時間間隔，時間間隔可以選自於下列中之一者：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或31天，或是1、2、3、4、5或6個月。作為舉例，可以每7、14、21或28天(加或減3、2或1天)給予劑量一次。 偵測方法
本發明亦提供本發明之物件供用於偵測、定位或成像HER3或表現HER3的細胞之方法的用途。
本文所述之抗原結合分子可用於涉及該抗原結合分子與HER3之方法中。此等方法可涉及偵測該抗原結合分子與HER3所結合的複合物。
因此，提供一種方法，其包含接觸一種含有或懷疑含有HER3的樣本，以及偵測該抗原結合分子與HER3形成的複合物。亦提供一種方法，其包含接觸一種含有或懷疑含有表現HER3的細胞的樣本，以及偵測該抗原結合分子與表現HER3的細胞形成的複合物。
合適的方法形式為本技藝眾所周知的，包括免疫分析諸如三明治分析，如ELISA。該方法可以涉及用如本文所述之可偵測的部分，例如螢光標記、磷光標記、發光標記、免疫可偵測的標記、放射標記、化學、核酸或酵素標記來標示抗原結合分子或標靶，或是二者。偵測技術為熟悉此藝者熟知的且可對應標示劑來選擇。
此種方法可以提供用於診斷及/或預後評估一疾病或病況，如癌症的方法之基礎。此等方法可以於一患者樣本或是在處理一患者樣本後，於活體外 執行。一旦收集樣本，活體外 方法執行時並不需要患者在場，且因而該方法可以為一種不於人類或動物體實施的方法。於一些具體例中，該方法係於活體內 執行。
偵測一樣本可用於診斷一疾病/病況(如癌症)、一疾病/病況的素因或提供一疾病/病況的預後(預示(prognosticating))的目的，例如本文所述之疾病/病況。診斷或預後可能與現存的(先前診斷的)疾病/病況有關。
此等方法可涉及偵測或定量，譬如一患者樣本內的HER3或表現HER3的細胞。該方法包含定量相關因子的情況中，該方法可進一步包含將所測定量與一標準或參考值相比來作為診斷或預後評估的一部分。可以使用其他的診斷/預後測試來與本文所述之該等聯合使用以提升診斷或預後的準確度或用於證實使用本文所述之測試所獲得的結果。
一樣本可以取自於任何組織或身體的流體。樣本可以包含或可以衍生自：一分量的血液；一分量衍生自個體血液的血清，其可以包含所獲得的血液移除纖維蛋白凝塊及血液細胞後的流體部分；一組織樣本或活體組織切片；胸水；腦脊髓液(CSF)；或自該個體單離的細胞。在一些具體例中，該樣本可得自或衍生自受該疾病/病況影響的一或多種組織(例如顯現該疾病的症狀之一或多種組織，或涉及該疾病/病況的致病機轉之一或多種組織)。
本發明亦提供用於選擇個體/將個體分組以供用於以HER3-標靶劑治療的方法。於一些具體例中，根據本發明來選擇治療/預防的個體，或根據譬如從個體得到的樣本內偵測/定量到HER3或表現HER3的細胞而確定為能從此種治療/預防得到好處的個體。 個體
依據本文所述之本發明的態樣的個體可以為任何動物或人類。個體較佳為哺乳動物，更佳為人類。個體可以為非人類哺乳動物，但更佳為人類。個體可以為雄性或雌性。個體可以為一患者。一個體可能業已診斷有需要治療的疾病或病況(如癌症)，可能懷疑具有此一疾病/病況，或可能處於發展/感染此一疾病/病況的風險。
於如本發明之具體例中，個體較佳為人類個體。在一些具體例中，依據本文之本發明的治療或預防方法要治療的個體為具有或處於發展癌症的風險中的個體。於如本發明之具體例中，可以根據此疾病/病況的某些標誌的特徵化來選擇依據該方法治療的個體。 套組
於本文所述之本發明的一些態樣中提供一種部件之套組(a kit of parts)。於一些具體例中該套組可具有至少一容器，其具有預定量之本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)、細胞或組成物。
於一些具體例中，該套組可包含供用於生產本文所述之抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)、細胞或組成物的材料。
該套組可提供該抗原結合分子、多肽、CAR、核酸(或多種核酸)、表現載體(或多種表現載體)、細胞或組成物與投予使用說明一起給患者俾以治療一種特定的疾病/病況。
於一些具體例中該套組可進一步包含至少一容器，其具有預定量的另一治療劑(例如抗感染劑或化學治療劑)。於此等具體例中，該套組亦可包含第二藥物或藥學組成物以使得該二種藥物或藥學組成物可同時或分開投予，其等從而針對該特定疾病或病況提供組合治療。該治療劑亦可予以調配以便供注射或灌注至腫瘤或血管。 序列同一性
當使用於本文中，“序列同一性”係指一種受試序列的核苷酸/胺基酸殘基與一參考序列的核苷酸/胺基酸殘基，於排比序列之後的序列同一性百分比，且若需要，則導入空格以達到序列之間最大的序列同一性百分比。可按本技術領域的嫻熟技術人員所知的各種方法，來完成用於測定二或更多個胺基酸或核酸序列之間的序列同一性百分比之成對與多重序列排比，舉例而言使用可公開取得的電腦軟體諸如ClustalOmega (Söding, J. 2005, Bioinformatics 21, 951-960)、T-coffee (Notredame等人2000, J. Mol. Biol. (2000) 302, 205-217)、Kalign (Lassmann and Sonnhammer 2005, BMC Bioinformatics, 6(298))及MAFFT(Katoh and Standley 2013, Molecular Biology and Evolution, 30(4) 772–780之軟體。當使用此軟體時，較佳採用預設參數，例如空格(gap)罰分或擴展罰分。 序列 編號段落
下列編號段落(paras)提供與本發明有關所預期的特徵及特徵組合之進一步說明：
1. 一種抗原結合分子，其可選擇地為經單離的，其能與HER3於細胞外區域子域II內結合。
2. 如段落1之抗原結合分子，其中該抗原結合分子抑制HER3及HER3的一交互作用伙伴之間的交互作用。
3. 如段落1或段落2之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：16的該胺基酸序列或由序列辨識編號：16的該胺基酸序列所組成。
4. 如段落1至3中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：23或序列辨識編號：229的該胺基酸序列。
5. 如段落1至4中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：21或序列辨識編號：229的該胺基酸序列。
6. 如段落1至5中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：43的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：46的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：51的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：91的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：94的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：99的該胺基酸序列之LC-CDR3。
7. 如段落1至6中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：44的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
8. 如段落1至6中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：44的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：89的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
9. 如段落1至6中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：44的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：90的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：96的該胺基酸序列之LC-CDR3。
10. 如段落1至6中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：44的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：98的該胺基酸序列之LC-CDR3。
11. 如段落1至6中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：47的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：93的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
12. 如段落1至6中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：49的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：93的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
13. 如段落1至6中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：50的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：93的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
14. 如段落1至6中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
15. 如段落1至6中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：41的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：97的該胺基酸序列之LC-CDR3。
16. 如段落1至6中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：42的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：45的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：48的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：88的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：92的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：95的該胺基酸序列之LC-CDR3。
17. 如段落1至5中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：158的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：159的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：160的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：165的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：166的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：167的該胺基酸序列之LC-CDR3。
18. 如段落1至4中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能與一多肽結合，該多肽包含序列辨識編號：22的該胺基酸序列。
19. 如段落1至4或段落18中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：128的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：129的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：130的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：136的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：137的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：138的該胺基酸序列之LC-CDR3。
20. 如段落1至4或段落18中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域： 具有序列辨識編號：144的該胺基酸序列之HC-CDR1 具有序列辨識編號：145的該胺基酸序列之HC-CDR2 具有序列辨識編號：146的該胺基酸序列之HC-CDR3；及 (ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域： 具有序列辨識編號：151的該胺基酸序列之LC-CDR1 具有序列辨識編號：152的該胺基酸序列之LC-CDR2 具有序列辨識編號：153的該胺基酸序列之LC-CDR3。
21. 如段落1至4中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含： (i) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：24的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：74的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (ii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：25的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：75的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (iii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：26的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：76的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (iv) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：27的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：77的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (v) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：28的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：78的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (vi) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：29的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：78的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (vii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：30的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：78的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (viii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：31的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：79的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (ix) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：32的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：79的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (x) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：33的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：80的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xi) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：34的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：81的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：35的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：82的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xiii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：36的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：83的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xiv) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：37的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：84的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xv) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：38的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：85的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xvi) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：39的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：86的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xvii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：40的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：87的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xviii) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：127的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：135的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xix) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：143的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：150的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性； 或 (xx) 一VH區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：157的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及 一VL區域，其包含一胺基酸序列，其與序列辨識編號：164的該胺基酸序列有至少70%的序列同一性。
22. 如段落1至21中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能與人類HER3以及小鼠HER3、大鼠HER3及食蟹獼猴HER3之一者或更多者結合。
23.一種抗原結合分子，其可選擇地為經單離的，其包含(i)一種如段落1至22中任一段落之抗原結合分子，及(ii)一種能與HER3以外的抗原結合之抗原結合分子。
24. 如段落1至23中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能與細胞表面表現HER3的細胞結合。
25. 如段落1至24中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子能抑制HER3-媒介的訊息傳導。
26. 如段落1至25中任一段落之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含一Fc區域，該Fc區域含有一種多肽，該多肽具有：(i)C於對應於位置242的位置處，及C於對應於位置334的位置處，以及(ii)下列之一者或更多者：A於對應於位置236的位置處、D於對應於位置239的位置處、E於對應於位置332的位置處、L於對應於位置330的位置處、K於對應於位置345的位置處，以及G於對應於位置430的位置處。
27. 如段落26之抗原結合分子，其中該Fc區域含有一種多肽，該多肽具有C於對應於位置242的位置處、C於對應於位置334的位置處、A於對應於位置236的位置處、D於對應於位置239的位置處、E於對應於位置332的位置處，以及L於對應於位置330的位置處。
28. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如段落1至27中任一段落之抗原結合分子。
29. 一種核酸或多種核酸，其可選擇地為經單離的，其編碼如段落1至27中任一段落之抗原結合分子或如段落28之CAR。
30.一種表現載體或多種表現載體，其包含如段落29之核酸或多種核酸。
31. 一種細胞，其包含如段落1至27中任一段落之抗原結合分子、如段落28之CAR、如段落29之核酸或多種核酸、或如段落30之表現載體或多種表現載體。
32. 一種方法，其包含使一含如段落29之核酸或多種核酸、或如段落30之表現載體或多種表現載體的細胞，於適合從該核酸或該表現載體表現該抗原結合分子或CAR的條件下予以培養。
33. 一種組成物，其包含一種如段落1至27中任一段落之抗原結合分子、如段落28之CAR、如段落29之核酸或多種核酸、如段落30之表現載體或多種表現載體，或如段落31之細胞。
34. 如段落1至27中任一段落之抗原結合分子、如段落28之CAR、如段落29之核酸或多種核酸、如段落30之表現載體或多種表現載體、如段落31之細胞，或如段落33之組成物，供用於醫學治療或預防(prophylaxis)的方法。
35. 一種如段落1至27中任一段落之抗原結合分子、如段落28之CAR、如段落29之核酸或多種核酸、如段落30之表現載體或多種表現載體、如段落31之細胞，或如段落33之組成物，供用於治療或預防一癌症的一方法。
36. 一種如段落1至27中任一段落之抗原結合分子、如段落28之CAR、如段落29之核酸或多種核酸、如段落30之表現載體或多種表現載體、如段落31之細胞，或如段落33之組成物於製備一藥物之用途，該藥物供用於治療或預防一癌症的一方法中。
37. 一種治療或預防一癌症之方法，其包含投予治療或預防有效量之如段落1至27中任一段落之抗原結合分子、如段落28之CAR、如段落29之核酸或多種核酸、如段落30之表現載體或多種表現載體、如段落31之細胞，或如段落33之組成物至一個體。
38. 如段落34或段落35之供使用的抗原結合分子、CAR、核酸或多種核酸、表現載體或多種表現載體、細胞或組成物、如段落36之用途或如段落37之方法，其中該方法額外包含投予一種EGFR家族成員媒介的訊息傳導之抑制劑，可選擇地其中EGFR家族成員媒介的訊息傳導之抑制劑為HER2及/或EGFR媒介的訊息傳導之抑制劑。
39. 如段落34至38中任一段落之供使用的抗原結合分子、CAR、核酸或多種核酸、表現載體或多種表現載體、細胞或組成物、用途或方法，其中該癌症係選自於：一種包含表現EGFR家族成員的細胞之癌症、一種包含表現HER3的細胞之癌症、實性腫瘤、 乳癌(breast cancer)、乳癌(breast carcinoma)、管癌、胃癌(gastric cancer)、胃癌(gastric carcinoma)、胃腺癌、結腸直腸癌(colorectal cancer)、結腸直腸癌(colorectal carcinoma)、結腸直腸腺癌、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、肺癌、肺腺癌、鱗狀細胞肺癌、卵巢癌(ovarian cancer)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、卵巢漿液性腺癌、腎癌(kidney cancer)、腎臟細胞癌、腎臟透明細胞癌、腎臟細胞腺癌、腎臟乳突細胞癌、胰臟癌(pancreatic cancer)、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、子宮頸癌、子宮頸鱗狀細胞癌、皮膚癌、黑色素瘤、食道癌、食道腺癌、肝癌、肝細胞癌、膽管癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺癌(thyroid carcinoma)、嗜鉻細胞瘤、副神經節結瘤、膀胱癌、膀胱泌尿上皮細胞癌、***癌、***腺癌、肉瘤及胸腺瘤。
40. 一種抑制HER3-媒介的訊息傳導之方法，其包含使表現HER3的細胞與如段落1至27中任一段落之抗原結合分子接觸。
41. 一種降低表現HER3的細胞之數目或活性之方法，該方法包含使表現HER3的細胞與如段落1至27中任一段落之抗原結合分子接觸。
42. 一種活體外 複合物，其可選擇地為經單離的，其包含與HER3結合之如段落1至27中任一段落之抗原結合分子。
43. 一種方法，其包含使一種含有或懷疑含有HER3的樣本與如段落1至27中任一段落的抗原結合分子接觸，以及偵測該抗原結合分子與HER3形成的複合物。
44. 一種選擇個體或將個體分組(stratifying)以供用於以HER3-標靶劑治療的方法，該方法包含於活體外 使來自該個體的一樣本與如段落1至27中任一段落之抗原結合分子接觸以及偵測該抗原結合分子與HER3的一複合物之形成。
45. 一種如段落1至27中任一段落之抗原結合分子作為一活體外 或活體內 診斷劑或預後劑之用途。
46. 一種如段落1至27中任一段落之抗原結合分子於一種用於偵測、定位或成像一癌症方法之用途，可選擇地其中該癌症係選自於：一種包含表現EGFR家族成員的細胞之癌症、一種包含表現HER3的細胞之癌症、實性腫瘤、 乳癌(breast cancer)、乳癌(breast carcinoma)、管癌、胃癌(gastric cancer)、胃癌(gastric carcinoma)、胃腺癌、結腸直腸癌(colorectal cancer)、結腸直腸癌(colorectal carcinoma)、結腸直腸腺癌、頭頸部癌、頭頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、肺癌、肺腺癌、鱗狀細胞肺癌、卵巢癌(ovarian cancer)、卵巢癌(ovarian carcinoma)、卵巢漿液性腺癌、腎癌(kidney cancer)、腎臟細胞癌、腎臟透明細胞癌、腎臟細胞腺癌、腎臟乳突細胞癌、胰臟癌(pancreatic cancer)、胰臟腺癌、胰臟管腺癌、子宮頸癌、子宮頸鱗狀細胞癌、皮膚癌、黑色素瘤、食道癌、食道腺癌、肝癌、肝細胞癌、膽管癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、甲狀腺癌(thyroid cancer)、甲狀腺癌(thyroid carcinoma)、嗜鉻細胞瘤、副神經節結瘤、膀胱癌、膀胱泌尿上皮細胞癌、***癌、***腺癌、肉瘤及胸腺瘤。 ***
本發明包括所述之態樣與較佳特徵之組合，除非此組合係顯然不允許或明確表示需避免者。
本文中使用之節標題僅僅係為了編制的目的以及不被解釋為限制所說明的主題。
本發明的態樣及具體例現在將參照附圖予以闡釋以作為例證。進一步的態樣與具體例對於本技藝中具有技術者會是明顯的。本文中提及的全部文件係併入本文中以作為參考資料。
貫穿本說明書，包括隨後的申請專利範圍，除非上下文另外要求，否則應理解用字「包含(comprise)」及變體例如「包含(comprises)」及「包含(comprising)」是暗示含括所述的整數或步驟或是整數或步驟組，但是不排除任何其他的整數或步驟或是整數或步驟組。
必須注意到，當使用於本說明書及隨附的申請專利範圍中，除非上下文另外明確指定，否則單數形式「一(a)」、「一(an)」，以及「該」包括複數的指示對象。範圍於本文中可以表達為由「大約」一特定的數值及/或至「大約」另一特定的數值。當表達此一範圍時，另一具體例會包括由該一特定的數值及/或至其他的特定數值。同樣地，當用先行詞「大約」、以近似值表達數值時，會瞭解到該特定的數值構成另一具體例。
於本文揭示一核酸序列之處，亦明確預期其反向互補物。
本文所述之方法較佳可於活體外 執行。術語「活體外 」打算包含以培養物內的細胞進行的程序，而術語「活體內 」打算包含以/於完整的多細胞生物進行的程序。
較佳實施例之詳細說明實施例 在下列實施例中，本發明人說明靶定HER3分子內感興趣的特定區域之新穎的抗-HER3抗體殖株之產生，以及此等抗原結合分子之生物物理學和功能特徵化以及治療評估。 實施例1：HER3標靶設計及抗-HER3抗體融合瘤生產
本發明人選擇人類HER3的細胞外區域的二區域(序列辨識編號：9)用於增加HER3-結合單株抗體。1.1 融合瘤生產
從InVivos(新加坡)獲得大約6週大的雌性BALB/c小鼠。動物安置於無特定病原條件下且遵照機構動物護理和使用委員會(IACUC)的指導方針來對待。
於融合瘤生產方面，用抗原胜肽、重組標靶蛋白或表現標靶蛋白的細胞之專有的混合物來免疫小鼠。
於收穫脾臟供融合之前，用抗原混合物增強小鼠連續三天或只有一天。於最後增強24 h之後，單離所有的脾細胞且依據製造商的指示(Stemcell Technologies，加拿大)使用ClonaCell-HY融合瘤選殖套組，用PEG而與骨髓瘤細胞株P3X63.Ag8.653(ATCC, USA)融合。
在37℃的5% CO2 孵化器內以ClonaCell-HY培養基C(Stemcell Technologies，加拿大)培養融合的細胞過夜。隔天，離心融合的細胞且再懸浮於10 ml的ClonaCell-HY培養基C內而後與90 ml含HAT組分的半固體甲基纖維素為基的ClonaCell-HY培養基D(StemCell Technologies，加拿大)溫和地混合，此結合了融合瘤選擇與選殖於一個步驟內。
融合的細胞繼而於96孔平盤內平盤培養且允許在37℃的5% CO2 孵化器內生長。7-10天後，單離單一融合瘤殖株並藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)及螢光激發細胞分選(FACs)來篩選上清液而選擇生產抗體的融合瘤。1.2 抗體 可變異區域擴增及定序
使用製造商的程序、用TRIzol試劑(Life Technologies, Inc., USA)從融合瘤細胞萃取總RNA。依據製造商的指示、使用SMARTer RACE 5'/3'套組(Clontech™, USA)來合成雙股cDNA。簡言之，依據製造商的指示、利用5'-RACE CDS引子(套組提供)、使用1 μg總RNA來產生全長cDNA，且繼而使5'轉接子(SMARTer II A引子)併入各cDNA之內。cDNA合成反應含有：5X第一股緩衝液、DTT(20 mM)、dNTP混合物(10 mM)、核糖核酸酶抑制劑(40 U/µl)及SMARTScribe反轉錄酶(100 U/µl)。
利用SeqAmp DNA聚合酶(Clontech™, USA)來擴增race-ready cDNAs。擴增反應含有SeqAmp DNA聚合酶、2X Seq AMP緩衝液、與轉接子序列互補之5’ SMARTer Race套組提供的5'通用引子，以及與個別的重鏈或輕鏈恆定區域引子黏著的3'引子。根據先前由Krebber等人之J. Immunol. Methods 1997；201：35-55, Wang等人之Journal of Immunological Methods 2000, 233；167–177或Tiller等人之Journal of Immunological Methods 2009；350:183-193所報導的引子混合物來設計5’恆定區域。使用下列熱程序：預變性循環於94℃歷時1 min；94℃，30 s，55℃，30 s及72℃，45 s的35個循環；最終的延長於72℃歷時3 min。
生成的VH及VL PCR產物，大約550 bp，係使用CloneJET PCR選殖套組(Thermo Scientific, USA)予以選殖至pJET1.2/鈍端載體之內且用來轉形高度勝任的大腸桿菌 DH5α。使用Miniprep套組(Qiagene，德國)從生成的轉形體來製備質體DNA且定序。藉由AITbiotech來進行DNA定序。使用國際IMGT(ImMunoGeneTics)資訊系統來分析此等定序資料(LeFranc等人，Nucleic Acids Res. (2015) 43 (Database issue):D413-22)以特徵化個別的CDRs及框架序列。藉由SignalP來辨識VH及VL之5’端的訊息胜肽(v 4.1；Nielsen, in Kihara, D (ed)：Protein Function Prediction (Methods in Molecular Biology vol. 1611) 59-73, Springer 2017)。
選擇四種單株抗-HER3抗體殖株用於進一步開發：10D1、10A6、4-35 B2及4-35-B4。
藉由移植互補決定區(CDRs)至包含人類抗體框架區域的VH及VL之內以電腦模擬 設計10D1之人化版本，且藉由酵母菌展示法來進一步最佳化抗原結合作用。
於酵母菌展示方面，人化序列係藉由聚合酶連鎖反應(PCR)而轉換成單鏈片段可變異(scFv)格式且用作為模板以透過隨機突變誘發來產生突變庫。突變PCR庫繼而與線性化pCTcon2載體一起電穿孔至酵母菌來產生酵母菌庫。用人類HER3抗原來染色該庫並分選頂尖的結合者。於4-5輪分選之後，定序個別的酵母菌殖株以辨識獨特的抗體序列。 實施例2：抗體生產及純化2.1 選殖VH 及VL 至表現載體內
編碼抗-HER3抗體殖株之重及輕鏈可變異區域的DNA序列予以亞選殖至pmAbDZ_IgG1_CH及pmAbDZ_IgG1_CL(InvivoGen, USA)真核表現載體內用於建構人類-小鼠嵌合抗體。
任擇地，編碼抗-HER3抗體殖株之重及輕鏈可變異區域的DNA序列予以亞選殖至pFUSE-CHIg-hG1及pFUSE2ss-CLIg-hk(InvivoGen, USA)真核表現載體內用於建構人類-小鼠嵌合抗體。相對於人類IgG1恆定區域(IGHG1；UniProt:P01857-1, v1；序列辨識編號：176)，pFUSE-CHIg-hG1編碼的人類IgG1恆定區域於CH3區域包含取代D356E、L358M(根據EU編號所編號的位置)。pFUSE2ss-CLIg-hk編碼人類IgG1輕鏈κ恆定區域(IGCK；UniProt：P01834-1, v2)。
可變異區域連同訊息胜肽係遵循製造商的程序、使用SeqAmp酵素(Clontech™, USA)從選殖載體予以擴增。使用具有與VH或VL內合適區域重疊的15-20bp加上5’端之6 bp作為限制位的順向及反向引子。用製造商推薦的限制酵素來消化DNA***子及載體以確保不會導入框移且使用T4連接酶酵素(Thermo Scientific, USA)與其個別質體連接。連接使用莫耳比率3:1之DNA***子及載體。2.2 於 哺乳動物細胞 表現 抗體
遵循製造商的指示、使用1) Expi293暫時表現系統套組(Life Technologies, USA)或2) HEK293-6E暫時表現系統(CNRC-NRC，加拿大)來表現抗體。 1) Expi293暫時表現系統： 細胞株維持：
從Life Technologies, Inc(USA)獲得HEK293F細胞(Expi293F)。用搖動平台、在37℃、8% CO2 及80%增濕的孵化器內、以增補50 IU/ml青黴素及50 µg/ml鏈黴素(Gibco, USA)之無血清、無蛋白、化學性界定培養基(Expi293表現培養基, Thermo Fisher, USA)來培養細胞。 轉染：
依據其製造商的程序、使用ExpiFectamine 293試劑套組(Gibco, USA)以表現質體來轉染Expi293F細胞。簡言之，維持中的細胞藉由旋轉降下培養物以替換培養基而移去抗生素，於轉染前1天將細胞丸粒再懸浮於沒有抗生素的新鮮培養基內。於轉染當天，每次轉染播種2.5 x 106 /ml活細胞於搖動器燒瓶內。於室溫下25 min形成DNA-ExpiFectamine複合物於血清減少的培養基內，Opti-MEM(Gibco, USA)內，然後添加給細胞。轉染後16-18 h添加增強劑給轉染的細胞。於轉染後第4天將等量的培養基加滿轉染子以防止細胞聚集。於第7天藉由4000 xg 離心15 min收穫轉染子，且過濾通過0.22 µm無菌濾器單元。 2) HEK293-6E暫時表現系統 細胞株維持：
從National Research Council Canada獲得HEK293-6E細胞。用搖動平台、在37℃、5% CO2 及80%增濕的孵化器內以增補0.1%泊洛沙姆(Kolliphor)-P188及4 mM L-麩醯胺酸(Gibco, USA)及25 µg/ml G-418之無血清、無蛋白、化學性界定Freestyle F17培養基(Invitrogen, USA)來培養細胞。 轉染：
依據其製造商的程序、使用PEIproTM (Polyplus, USA)以表現質體來轉染HEK293-6E細胞。簡言之，維持中的細胞藉由離心以替換培養基而移去抗生素，於轉染前1天以沒有抗生素的新鮮培養基使細胞丸粒再懸浮。於轉染當天，每次轉染播種1.5-2 x 106 個細胞/ml的活細胞於搖動器燒瓶內。混合DNA與PEIproTM成比率1:1且於RT歷時5 min以允許複合物於F17培養基內形成，然後添加給細胞。於轉染24-48 h後提供0.5% (w/v)胰化蛋白N1給轉染子。於第6-7天藉由4000 xg 離心15 min收穫轉染子且上清液過濾通過0.22 µm無菌濾器單元。
用編碼下列多肽組合的載體轉染細胞： 2.3 抗體純化 親和力純化、緩衝液交換及儲存：
轉染細胞分泌至培養上清液的抗體係使用液相層析法系統AKTA Start(GE Healthcare, UK)予以純化。具體地說，以結合速率5 ml/min加載上清液至HiTrap蛋白G管柱(GE Healthcare, UK)上，接著用10倍管柱體積的清洗緩衝液(20 mM 磷酸鈉，pH 7.0)來清洗管柱。結合的mAbs係用溶析緩衝液(0.1 M甘胺酸，pH 2.7)來溶析並將溶析液分量至含適量的中和緩衝液(1 M Tris, pH 9)之收集管。含純化的mAb之經中和的溶析緩衝液係使用30K MWCO蛋白濃縮器(Thermo Fisher, USA)或3.5K MWCO透析夾(Thermo Fisher, USA)交換至PBS內。單株抗體係藉由通過0.22 µm濾器予以無菌化、等分且快速冷凍於-80℃供儲存。2.4 抗體純度分析 粒徑篩析層析法(SEC)：
藉由粒徑篩析層析法(SEC)分析抗體純度，其係使用Superdex 200 10/30 GL管柱(GE Healthcare, UK)配於PBS電泳緩衝液，於AKTA Explorer液相層析術系統(GE Healthcare, UK)上進行。配於pH 7.2的500 μl PBS之150 μg的抗體係於室溫下以0.75 ml/min的流速注入至管柱。依據蛋白的分子量使其等溶析。
抗-HER3抗體殖株10D1(實施例2.2之[1])的結果顯示於圖12內。
不同的10D1變異體殖株獲得的結果顯示於圖34內。 十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)：
抗體純度亦依據標準方法、藉由還原及非還原條件之SDS-PAGE來分析。簡言之，使用Mini-Protean電泳系統(Bio-Rad, USA)、利用4%-20% TGX蛋白凝膠(Bio-Rad, USA)來分離蛋白。在非還原條件方面，藉由混合蛋白樣本與2x Laemmli樣本緩衝液(Bio-Rad, USA)予以變性且於95℃煮沸5-10 min然後裝載至凝膠。在還原條件方面，使用含5%的β-巰乙醇(βME)或40 mM DTT(二硫蘇糖醇)的2x樣本緩衝液。電泳係以SDS電泳緩衝液(25 mM Tris，192 mM甘胺酸，1% SDS，pH 8.3)，150V恒電壓進行1 h。 西方墨點法：
蛋白樣本(30 µg)係如以上所述藉由SDS-PAGE予以分級且移至硝化纖維素膜。繼而將膜封阻並用抗體於4℃進行免疫墨點過夜。以PBS-吐溫清洗三次之後接著用辣根過氧化物酶(HRP)-複合的二級抗體於室溫下孵育膜1 h。經由化學發光劑Pierce ECL基質西方墨點偵測系統(Thermo Scientific, USA)及自動放射攝影術底片(Kodak XAR底片)曝光來使結果顯現。
偵測使用的初級抗體為山羊抗人類IgG-HRP(GenScript商品目錄號A00166)及山羊抗人類κ-HRP(SouterhnBiotech商品目錄號2060-05)。
抗-HER3抗體殖株10D1(實施例2.2之[1])的結果顯示於圖13內。高濃度的10D1為容易表現、純化及加工的。 實施例3：生物物理學的特徵化3.1 藉由流動式細胞測量術分析細胞表面 抗原 - 結合
野生型HEK293細胞(沒有表現高位準的HER3)及轉染編碼人類HER3的載體之HEK293細胞(即HEK 293 HER O/E細胞)係用20 μg/ml的抗-HER3抗體或同型對照抗體於4℃孵育1.5 hr。分析中含括抗-HER3抗體殖株LJM716(例如於Garner等人，Cancer Res (2013) 73：6024-6035內所述)作為陽性對照。
用FACS緩衝液(PBS加上5mM EDTA及0.5% BSA)清洗細胞三次並再懸浮於2-8℃之FITC-複合的抗-FC抗體(Invitrogen, USA)歷時40 min。再次清洗細胞並再懸浮在200 μL FACS流動緩衝液(PBS加上5mM EDTA)中用於使用MACSQuant 10(Miltenyi Biotec，德國)之流式細胞測量術分析。於取得後，使用Flowlogic軟體來分析所有的原始資料。使用前與側散射的散布圖剖析來圈選細胞，判定天然及過度表現細胞族群之陽性細胞百分比。
結果顯示於圖1至4及30至32內。抗-HER3抗體顯示係以高專一性與人類HER3結合。10D1及LJM716顯示係以相似的程度與人類表現HER3的細胞結合。3.2 判定抗體專一性及 交叉反應性之ELISAs
使用ELISAs來判定抗體之結合專一性。分析抗體與人類HER3多肽之結合，以及個別的小鼠、大鼠及猴子的HER3同源物之結合(Sino Biological Inc.，中國)。亦分析抗體其等與人類EGFR及人類HER2(Sino Biological Inc.，中國)結合的能力。
根據標準程序來進行ELISA。簡言之，用配於磷酸鹽緩衝型鹽水(PBS)之0.1 μg/ml的標靶多肽於4℃塗覆96孔平盤(Nunc，丹麥)歷時16 h。於室溫下以配於Tris緩衝型鹽水(TBS)之1 % BSA封阻1 h之後，連續稀釋最高濃度為10 μg/ml的抗-HER3抗體，以及添加至平盤。於室溫下孵育1 h後，用含0.05%吐溫20之TBS(TBS-T)清洗平盤三次然後用HRP-複合的抗-His抗體(Life Technologies, Inc., USA)於室溫下孵育1 h。於清洗之後，平盤用比色偵測基質3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(Turbo-TMB；Pierce, USA)顯色10 min。用2M H2 SO4 來停止反應，以及測量450 nM的OD。
ELISA結果顯示於圖5至7及圖33內。
發現抗-HER3抗體殖株10D1不會與人類HER2或人類EGFR結合，即使是高濃度的抗體(圖5A)。亦發現抗-HER3抗體殖株10D1展現出與小鼠HER3、大鼠HER3及食蟹獼猴HER3實質的交叉反應性(圖5B)。
發現抗-HER3抗體殖株4-35-B2會與人類HER2及人類EGFR結合(圖6A)。抗-HER3抗體殖株4-35-B2亦展現出與小鼠HER3、大鼠HER3及食蟹獼猴HER3實質的交叉反應性(圖6B)。
發現抗-HER3抗體殖株4-35-B4會與人類HER2及人類EGFR結合(圖7A)。抗-HER3抗體殖株4-35-B4亦展現出與小鼠HER3、大鼠HER3及食蟹獼猴HER3實質的交叉反應性(圖7B)。
10D1變異體全體都證實會與人類HER3結合(圖33A及33B)。3.3 使用Octet QK384 系統之整體親和力研究
分析呈IgG1格式的抗-HER3抗體殖株與人類HER3之結合親和力。
生物層干涉術(BLI)實驗係使用Octet QK384系統(ForteBio)來執行。抗-人類IgG Capture (AHC) Octet感應器尖端(Pall ForteBio, USA)用於抗-HER3抗體(25 nM)。所有的測量均於25℃執行伴隨1000 rpm攪拌。藉由裝載不同濃度的His-標記的人類HER3抗原120 s，接著藉由將生物感應器移至含分析緩衝液的孔內120 s的解離時間來執行抗原結合之動力學測量。感應圖譜參照緩衝效應然後用Octet QK384使用者軟體(Pall ForteBio, USA)予以擬合。動力學反應係使用一位址結合模式予以整體擬合以獲得締合(K締合)、解離(K解離)速率常數及平衡解離常數(KD)。本分析只含括能與軟體可靠擬合的曲線(R2 >0.90)。
圖8顯示殖株10D1分析的代表感應圖譜。發現殖株10D1係以KD =9.58 nM的親和力與人類HER3結合。
人化/最佳化10D1變異體係以非常高的親和力與人類HER3結合。圖36A至36M顯示代表感應圖譜。
10D1殖株變異體判定的親和力顯示如下：
發現殖株4-35-B2係以KD =80.9 nM的親和力與人類HER3結合(圖9)，以及發現殖株4-35-B4係以KD =50.3 nM的親和力與人類HER3結合(圖10)。3.4 以 微差掃描螢光分析法進行之 熱穩定性 分析
簡言之，0.2 mg/mL之三複本抗體反應混合物及SYPRO Orange染料(ThermoFisher)係製備於25 μL的PBS內，移至MicroAmp光學96孔反應平盤(ThermoFisher)的孔內，並用MicroAmp光學黏著膜(ThermoFisher)予以密封。熔化曲線係以7500快速即時PCR系統(Applied Biosystems)進行，其選擇TAMRA作為報告者及ROX作為被動參考。熱剖析包括25℃之起始步驟2 min及99℃之最終步驟2 min，加上1.2%之升降溫速率。繪製原始資料之第一導數為溫度之函數的圖以獲得導數熔化曲線。從導數曲線的峰提取抗體的熔化溫度(Tm)。
圖11顯示抗體殖株10D1之熱穩定性微差掃描螢光分析法獲得的原始資料之第一導數。分析三個不同的抗體樣本。判定Tm為70.3℃。
亦執行10D1變異體殖株及LJM716之分析。圖35A至35C顯示原始資料之第一導數及判定的Tms。3.5 抗-HER3 抗體10D1 表位之分析
分析抗-HER3抗體10D1以判定其是否會與抗-HER3抗體MM-121及/或LJM-716競爭與HER3結合。MM-121的表位已經測繪於HER3的域I；其封阻NRG配體結合位址。LJM-716的表位已經測繪至分佈在域II及IV的構形表位，且其以非活性構形封阻HER3。
生物層干涉術(BLI)實驗係使用Octet QK384系統(ForteBio)來執行。使用抗-五-HIS(HIS1K)塗覆的生物感應器尖端(ForteBio, USA)來捕獲His-標記的人類HER3(75 nM；300 s)。藉由飽和抗體來偵測結合(400 nm；600 s)，接著解離步驟(120s)，接著偵測與競爭抗體之結合(300 nM；300 s)，接著解離步驟(120s)。MM-121抗體之可變異區域予以選殖至具有人類IgG2及IgKappa Fc主幹之PDZ載體內。LJM-716抗體之可變異區域予以選殖至具有人類IgG1及IgKappa Fc主幹之PDZ載體內。
分析結果顯示於圖14A及14B內。發現抗-HER3抗體不會與MM-121及/或LJM-716競爭與HER3結合。
發現10D1結合的HER3表位比起MM-121及/或LJM-716是相異且拓撲上遙遠的。
10D1之表位係使用重疊的15單元(mer)胺基酸予以測繪以涵蓋整個HER3細胞外域。各個獨特的15單元係藉由複合至384孔平盤之一獨特的孔內的C及N-端之GS鏈接子來伸長，以及用0.1、1、10及100 ug/ml的10D1抗體於4℃孵育平盤16hrs。清洗平盤然後用POD複合的山羊抗人類IgG於20℃孵育1hr。最終添加POD基質溶液至孔歷時20 min.然後使用LI-COR Odyssey成像系統測量425nm之化學發光來評估結合，以及使用PepSlide分析器套裝軟體來執行定量及分析。以二複本進行實驗。
發現10D1表位不是直接座落於位在域II的HER3二聚合臂之β-髮夾結構，而是在與β-髮夾之二聚合界面N-端。
經判定10D1及10D1-衍生的殖株與HER3結合的位址係對應於人類HER3的胺基酸序列之位置218至235(如例如序列辨識編號：1中所示)；HER3的此區域之胺基酸序列係顯示於序列辨識編號：229內。此區域內，辨識出二個一致結合位址模體，以及顯示於序列辨識編號：230及231內。
結合此HER3位置係作為阻礙HER家族異質二聚合以及由此引起的下游訊息傳導途徑(見實施例4)。結合為配體(NRG)獨立的。10D1結合位址於開放式及封閉式HER3構形二者均為溶劑可接觸的，於HER3及其他HER家族成員之間不是保留的，以及於人類、小鼠、大鼠及猴HER3異種同源物之間不是100%保留的。 實施例4：功能特徵化4.1 HER2 與HER3 二聚合 之抑制
分析抗-HER3抗體其等抑制HER3與HER2之異質二聚合的能力。
簡言之，用配於PBS之0.1 μg/ml的His-標記的HER2蛋白於4℃塗覆96孔平盤(Nunc，丹麥)歷時16 h。於室溫下以配於PBS之1 % BSA封阻1 h之後，於不同濃度的抗-HER3抗體殖株10D1存在下添加重組生物素化人類HER3蛋白，以及室溫下孵育平盤1 h。隨後清洗平盤三次，然後用HRP-複合的二級抗體於室溫下孵育1 h。於清洗之後，平盤用比色偵測基質3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(Turbo-TMB；Pierce, USA)顯色10 min。用2M H2 SO4 來停止反應，以及測量450 nM的OD。
結果顯示於圖15內。發現抗-HER3抗體殖株10D1係以劑量依賴的方式抑制HER2與HER3之間的交互作用。
於另外的實驗中，分析HER2:HER3二聚合之抑制。
於另外的實驗中，使用PathHunter帕妥珠單抗生物分析套組(DiscoverX)、依據製造商的指示來評估HER2:HER3二聚合之抑制。
簡言之，用1 ml預熱的CP5培養基來解凍過度表現HER2及HER3的U2OS細胞且每孔播種5,000個細胞並在37℃於5% CO2 氛圍下培養4 hr。繼而用從25 μg/ml開始，8點連續稀釋的10D1F.FcA或帕妥珠單抗來治療細胞。
於4 hr孵育之後，添加30 ng/ml的調蛋白-β2至各孔且進一步孵育細胞16 hr。添加10 μL的PathHunter生物分析偵測試劑1至孔，以及於黑暗中在室溫下孵育15 min。接著添加40 µL PathHunter生物分析偵測試劑2，以及於黑暗中在室溫下孵育60 min。繼而使用Synergy4 Biotek延遲1秒(with 1 second delay)讀取平盤。
結果顯示於圖65內。發現10D1F.FcA抑制HER2:HER3二聚合的效率比帕妥珠單抗更好，由帕妥珠單抗較低的IC50反映出來。4.2 辨識供用於分析的癌細胞株
本發明人特徵化癌細胞株之EGFR蛋白家族成員表現以辨識適合研究HER3抑制的細胞。
圖16A顯示根據癌細胞株百科全書(CCLE Barretina等人，Nature (2012) 483：603-607及The Cancer Cell Line Encyclopedia Consortium & The Genomics of Drug Sensitivity in Cancer Consortium, Nature (2015) 528：84-87)之N87、SNU16、HT29、FaDu、A549、HCC95、OvCAR8及AHCN細胞的EGFR家族成員及配體的mRNA表現資料。圖16A亦顯示以FlowLogic來判定之EGFR、HER2及HER3的蛋白表現資料。
實驗使用的細胞株係購自ATCC且依建議予以培養。簡言之，細胞株維持於所示的細胞培養基，增補10% FBS及1% Pen/Strep。在37℃、5% CO2 孵化器內培養細胞。培養的細胞以合適的播種密度平盤培養於96孔平盤內：HT29、HCC95、FADU及OvCar8細胞以2000個細胞/孔播種，NCl-N87細胞以5000個細胞/孔播種，SNU-16、ACHN及細胞以1500個細胞/孔播種，及A549細胞以1200個細胞/孔播種。
圖16B顯示依流動式細胞測量術來判定之EGFR、HER2及HER3的表面表現。簡言之，以含0.5% BSA及2mM EDTA的染色緩衝液加上初級抗體(20 μg/ml)於4℃染色500,000個細胞1.5 h。使用的二級抗體為10 μg/ml之抗-人類Alexafluor488於4℃歷時20 min。4.3 HER3- 媒介的 訊息傳導之 抑制
分析抗-HER3抗體10D1其抑制活體外 HER3-媒介的訊息傳導之能力。
簡言之，在37℃、5% CO2 下於具有10%血清的6孔平盤的孔內播種N87及FaDu細胞。於16 hrs之後，於1% FBS細胞培養基內培養過夜來使細胞飢餓(以降低血清內的生長因子所引發的訊息傳導)。第二天細胞用50 μg/ml抗-HER3抗體10D1治療4 hrs，接著用NRG(100 ng/ml)刺激15 min。蛋白繼而予以萃取、使用標準布拉德福蛋白質分析來定量、藉由SDS-PAGE予以分級，且移至硝化纖維素膜。繼而將膜封阻並於4℃用下列抗體進行免疫墨點過夜：抗-pHER3、抗-pAKT、泛抗-HER3、泛抗-AKT及抗-β-肌動蛋白。經由Bio-Rad Clarity Western ECL基質使墨點顯現，且使用光密度(densiometric)分析來定量電泳帶；資料正規化為β肌動蛋白對照。
結果顯示於圖17內。發現抗-HER3抗體10D1抑制HER3之磷酸化及下游的訊息傳導。
於另外的實驗中，本發明人研究受抗-HER3抗體媒介的HER3抑制所影響的細胞內訊息傳導途徑。
在37℃、5% CO2 下於具有10%血清的6孔平盤的孔內播種FaDu細胞。16 hrs之後，於1% FBS細胞培養基內培養過夜來使細胞飢餓。第二天細胞用50 μg/ml抗-HER3抗體10D1治療4 hrs，接著用NRG(100 ng/ml)刺激15 min。蛋白繼而予以萃取、使用標準布拉德福蛋白質分析來定量，且於4℃用預封阻的磷蛋白質抗體陣列膜(Ray Biotech)孵育過夜。繼而以清洗緩衝液清洗膜且用偵測抗體混合物於室溫下孵育2 hrs，接著清洗及用HRP-複合的抗-IgG孵育。於2 hrs之後，清洗膜且使用套組偵測緩衝液來探測。用Syngene Gbox成像系統捕捉影像，測量各墨點/磷蛋白質的密度且藉由與缺少抗體、以相同方式治療的細胞測得的密度比較來計算抑制百分比。
結果顯示於圖18內。發現抗-HER3抗體10D1抑制PI3K/AKT/mTOR及MAPK的訊息傳導。
本發明人於另外的實驗中研究用抗-HER3抗體10D1治療對於表現HER3的細胞增殖的效應。
簡言之，N87及FaDu細胞用從100 μg/ml開始加上9點的半對數稀釋之連續稀釋濃度的抗-HER3抗體10D1予以治療。細胞增殖係於5天期間後依據製造商的指示、使用CCK-8增殖分析(Dojindo, Japan)來測定。簡言之，每孔添加1x CCK-8溶液接著於37℃孵育2 h。繼而測定450 nm的OD。
圖19A及19B顯示相對於未治療的對照細胞之細胞融合百分比(資料點為三次重複的平均)。
抗-HER3抗體10D1展現出劑量依賴的抑制N87及FaDu細胞之細胞增殖。 實施例5：活體內 分析5.1 藥物動力學分析
大約6-8週大的雌性NCr裸鼠係安置於無特定病原條件下且遵照機構動物護理和使用委員會(IACUC)的指導方針來對待。
投予500 µg抗-HER3抗體且於投予後基線(- 2 hr)、0.5 hr、6 hr、24 hr、96 hr、168 hr及336 hr藉由心臟穿刺從3隻小鼠取得血液。藉由ELISA來定量血清內的抗體。
結果顯示於圖50內。發現抗-HER3抗體殖株10D1於NCr裸鼠的半生期為16.3天。5.2 安全性免疫毒性
使用IMGT DomainGapAlign(Ehrenmann等人，Nucleic Acids Res., 38, D301-307 (2010))及IEDB去免疫(Dhanda等人，Immunology. (2018) 153(1):118-132)工具來電腦模擬 分析抗-HER3抗體殖株10D1之安全性及免疫原性。
抗-HER3抗體殖株10D1具有的可能免疫性胜肽數目很少而足以被認為是安全的，並且沒有可能造成可能的可發展性問題之任何其他的性質。
圖37的表提供10D1變異體殖株有關安全性及可發展性的性質概述。
監測實施例5.3中所述的實驗中用抗-HER3抗體治療的小鼠之重量變化及大體屍體解剖。此等小鼠與只有媒介物治療的小鼠相比沒有偵測到差異。
以腹膜內注射單一劑量1000 μg抗-HER3 10D1抗體或等體積的PBS至6-8週大的雌性BALB/c小鼠(20-25 g)的實驗來研究血液毒性。於注射後96小時獲得血液樣本且分析由流動式細胞測量術進行之不同類型白血球的數目以及NA+ 、K+ 及Cl- 之電解質指數。
圖51A及51B顯示不同細胞類型的數目且發現電解質指數落在查爾斯河參考範圍之內(3隻小鼠)且與PBS治療組(3隻小鼠)沒有顯著差異。左邊長條代表媒介物，右邊長條代表10D1治療，虛線表示查爾斯河參考範圍的終點。不同組之間偵測到的臨床症狀、大體屍體解剖或重量沒有差異。
分析小鼠於注射後96小時之肝毒性、腎毒性及胰毒性關聯值。發現單一劑量1000 μg抗-HER3抗體投予後偵測到的丙胺酸轉胺酶(ALT)、天門冬胺酸轉胺酶(AST)、血脲氮(BUN)、肌酸酐(CREA)、鹼性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、鈣(CAL)、總膽紅素(BIL)、總蛋白(TPR)及白蛋白(ALB)位準落在查爾斯河參考範圍之內且與PBS治療組中此等標誌的位準沒有顯著差異。此等顯示於圖51C至51F內。左邊長條代表媒介物，右邊長條代表10D1治療，虛線表示查爾斯河參考範圍的終點。10D1治療對於腎、肝或胰指數沒有效應且因而不影響正常的腎、肝或胰功能。5.3 活體內治療癌症之功效 分析
大約6-8週大的雌性NCr裸鼠係購自InVivos(新加坡)。動物安置於無特定病原條件下且遵照機構動物護理和使用委員會(IACUC)的指導方針來對待。
使用的細胞株包括N87細胞(胃癌)、FaDu細胞(頭頸部癌)、OvCAR8細胞(卵巢癌)、SNU16細胞(胃癌)、HT29細胞(結腸直腸癌)、A549細胞(肺癌)、HCC95細胞(肺癌)及AHCN細胞(腎癌)。
一週使用數位卡尺測量3次並用式[L x W2/2]來計算腫瘤體積。一旦對照組腫瘤長度測得>1.5 cm時認為已經達到研究終點。 5.3.1 N87模式
研究N87細胞株衍生的小鼠胃癌模式之抗-HER3抗體10D1(實施例2.2的[1])的抗癌效應實驗所獲得的結果顯示於圖20內。藉由皮下注射1 x 106 個N87細胞至右側來建立該模式(每治療組n=6隻小鼠)。
兩週一次IP投予10D1，每劑量500 μg(總共10次劑量)；對照治療組接受等體積的PBS。
發現抗-HER3抗體殖株10D1於此模式為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~76%。
圖21顯示類似實驗所獲得的結果，其中每周一次以劑量11 mg/kg(總共4次劑量)IP投予抗-HER3抗體殖株4-35-B4。同樣發現抗-HER3抗體殖株4-35-B4於此模式為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~60%。 5.3.2 SNU16模式
研究SNU16細胞株衍生的小鼠胃癌模式之抗-HER3抗體10D1(實施例2.2的[1])的抗癌效應實驗所獲得的結果顯示於圖22內。藉由皮下注射1 x 106 個SNU16細胞至右側來建立該模式(每治療組n=6隻小鼠)。
兩週一次IP投予10D1，每劑量500 μg(總共9次劑量)；對照治療組接受等體積的PBS。
發現抗-HER3抗體殖株10D1於此模式為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~68%。 5.3.3 FaDu模式
研究FaDu細胞株衍生的小鼠頭頸部鱗狀細胞癌模式之抗-HER3抗體10D1(實施例2.2的[1])的抗癌效應實驗所獲得的結果顯示於圖23內。藉由皮下注射1 x 106 個FaDu細胞至雌性NPG小鼠右側(NOD scid γ表現型；每治療組n=6隻小鼠)來建立該模式。
每周一次IP投予10D1，每劑量500 μg(總共4次劑量)。對照治療組接受等體積的PBS或相同劑量的同型對照抗體。
發現抗-HER3抗體殖株10D1於此模式為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~85%。
研究FaDu細胞株衍生的小鼠頭頸部鱗狀細胞癌模式之抗-HER3抗體10D1(實施例2.2的[1])的抗癌效應實驗所獲得的結果顯示於圖24內。藉由皮下注射1 x 106 個FaDu細胞至雌性NCr裸鼠右側(每治療組n=6隻小鼠)來建立該模式。
兩週一次IP投予10D1，每劑量500 μg(總共8次劑量)；對照治療組接受等體積的PBS。
發現抗-HER3抗體殖株10D1於此模式為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~86%。 5.3.4 OvCAR8模式
研究OvCAR8細胞株衍生的小鼠卵巢癌模式之抗-HER3抗體10D1(實施例2.2的[1])的抗癌效應實驗所獲得的結果顯示於圖25內。藉由皮下注射1 x 106 個OvCAR8細胞至雌性NCr裸鼠右側(每治療組n=6隻小鼠)來建立該模式。
兩週一次IP投予10D1，每劑量500 μg(總共9次劑量)；對照治療組接受等體積的PBS。
發現抗-HER3抗體殖株10D1於此模式為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~74%。 5.3.5 HCC-95模式
研究HCC-95細胞株衍生的小鼠鱗狀細胞肺癌模式之抗-HER3抗體10D1(實施例2.2的[1])的抗癌效應實驗所獲得的結果顯示於圖26內。藉由皮下注射1 x 106 個HCC-95細胞至雌性NCr裸鼠右側(每治療組n=6隻小鼠)來建立該模式。
兩週一次IP投予10D1，每劑量500 μg(總共4次劑量)；對照治療組接受等體積的PBS。
發現抗-HER3抗體殖株10D1於此模式為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~90%。 5.3.6 A549模式
研究A549細胞株衍生的小鼠肺腺癌模式之抗-HER3抗體10D1(實施例2.2的[1])的抗癌效應實驗所獲得的結果顯示於圖27內。藉由皮下注射1 x 106 個A549細胞至雌性NCr裸鼠右側(每治療組n=6隻小鼠)來建立該模式。
兩週一次IP投予10D1，每劑量500 μg(總共10次劑量)；對照治療組接受等體積的PBS。
發現抗-HER3抗體殖株10D1於此模式為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~91%。
圖28顯示相似實驗所獲得的結果，該實驗研究抗HER3抗體殖株4-35-B2於A549細胞株衍生的模式之抗癌效應，該模式係藉由注射1 x 106 個A549細胞至雌性NPG小鼠右側(NOD scid γ表現型)來建立。以每劑量500 μg每周一次IP投予抗-HER3抗體殖株4-35-B2(總共4次劑量)。對照治療組接受等體積的PBS(每治療組6隻小鼠)。
同樣發現抗-HER3抗體殖株4-35-B2於此模式為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~63%。 5.3.6 ACHN模式
研究ACHN細胞株衍生的小鼠腎細胞癌模式之抗-HER3抗體10D1(實施例2.2的[1])的抗癌效應實驗所獲得的結果顯示於圖29內。藉由皮下注射1 x 106 個ACHN細胞至雌性NCr裸鼠右側(每治療組n=6隻小鼠)來建立該模式。
兩週一次IP投予10D1，每劑量500 μg(總共7次劑量)；對照治療組接受等體積的PBS。
發現抗-HER3抗體殖株10D1於此模式為非常有力的，且能抑制腫瘤生長達~61%。5.4 胃癌之治療 首先於人類
患有HER2+晚期胃癌、接受曲妥珠單抗已經失敗或無法接受曲妥珠單抗的患者係以依據安全性調整‘最小期望生物效應位準’(MABEL)方法所算出的劑量、藉由靜脈內注射選自於下列的抗-HER3抗體來治療：10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92及10D1_c93。投予後監測患者28天。
繼而依據常見不良事件評價標準(CTCAE)來評估患者，以判定治療之安全及可耐受性，且判定分子之藥物動力學。
發現以抗-HER3抗體治療是安全且可耐受的。 劑量遞增—單方療法
12-48位患有HER2+晚期胃癌、接受曲妥珠單抗已經失敗或無法接受曲妥珠單抗的患者之治療係藉由靜脈內注射選自於下列的抗-HER3抗體：10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92及10D1_c93(例如10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91；例如10D1_c89)，依據3+3模式型遞增加上超劑量對照(EWOC)劑量遞增。
繼而依據常見不良事件評價標準(CTCAE)來評估患者以判定治療之安全及可耐受性，以及評估分子之藥物動力學與治療之功效。亦判定最大耐受劑量(MTD)及最大投予劑量(MAD)。 劑量遞增—組合療法
9-18位患有HER2+晚期胃癌、已經失敗或曲妥珠單抗的患者之治療係藉由靜脈內注射選自於下列的抗-HER3抗體：10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92及10D1_c93(例如10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91；例如10D1_c89)組合曲妥珠單抗，依據3+3模式型遞增加上抗-PD-L1抗體(3 mg/kg)。
繼而依據常見不良事件評價標準(CTCAE)來評估患者以判定治療之安全及可耐受性，以及評估分子之藥物動力學與治療之功效。 劑量擴張
患有HER2+晚期胃癌、最近曲妥珠單抗已沒有作用且其之腫瘤於遺傳學及組織學上已表徵良好的患者，係用選自於下列的抗-HER3抗體：10D1、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78v1、10D1_c78v2、10D1_11B、10D1_c85v1、10D1_c85v2、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c92、10D1_c93(例如10D1_c89、10D1_c90或10D1_c91；例如10D1_c89)組合以曲妥珠單抗、順鉑及5-FU或卡培他濱來治療。
發現抗-HER3抗體是安全且可耐受的、能降低癌細胞的數目/比例、降低腫瘤細胞標識表現、增加無惡化存活期及增加整體存活期。 實施例6：親和力成熟及人化殖株
親代小鼠抗體10D1P之可變異區域的人化係藉由CDR移植來完成。供移植之人類框架序列係藉由將親代胺基酸序列對人類V域資料庫進行序列比對(blasting)來辨識出且選出與親代序列同一性最高的基因。一旦移植小鼠CDRs至所選的人類框架，使框架正準位置的殘基回復突變成親代小鼠序列以保留抗原結合。設計了總共9種10D1P之人化變異體。
對人類HER3之親和力係使用酵母菌展示進行二輪親和力成熟。在第一輪，透過隨機突變誘發來建構9種設計的變異體之混合庫且使用生物素化抗原來進行流動式細胞測量術之篩選。在第二輪，使用第一輪單離之一重鏈及一輕鏈殖株作為模板來產生及篩選第二庫。單離總共10種人化及親和力成熟的殖株。
使用電腦模擬預測工具來評估所設計及單離的人化10D1P變異體之可變異區域可能的可靠性(免疫原性、醣化位址、暴露的反應性殘基、聚集可能性)。使用IEDB去免疫工具使序列去免疫。根據最佳化的變異體之可發展性特徵以及活體外生理化學及功能性質從中選出10D1F最終序列。
殖株10D1F包含序列辨識編號：36之VH及序列辨識編號：83之VL。10D1F展現出與人類重鏈89.9%的同源性及與人類輕鏈85.3%的同源性。
包含10D1F可變異區域及人類IgG1恆定區域，以及包含序列辨識編號：206及207的多肽之抗原結合分子，稱為10D1F.FcA(於此有時亦稱為“10D1F.A”或“抗-HER3殖株10D1_c89 IgG1”–參見例如實施例2.2之[16])。 實施例7：Fc工程處理
10D1及10D1變異體經工程處理以包含CH2及/或CH3區域之突變以增加抗體的效能，例如最佳化Fc效應子功能、提升抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)及/或抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)，以及改良半生期。
修飾殖株10D1及10D1F.FcA之Fc區域以含括修飾‘GASDALIE’(G236A、S239D、A330L、I332E)及‘LCKC’(L242C、K334C)於CH2區域。發現GASDALIE取代會增加FcγRIIa(GA)及FcγRIIIa(SDALIE)受體的親和力且提升ADCP及NK-媒介的ADCC(參見實施例8.8)，同時減少對C1q(AL)之親和力且減少CDC。發現LCKC取代藉由創造新的分子內雙硫鍵而增加Fc區域之熱穩定性。
序列辨識編號：225顯示包含GASDALIE及LCKC突變之10D1F.FcA重鏈的多肽修飾版本。包含序列辨識編號：225及207的多肽之抗原結合分子稱為10D1F.FcB(於此有時亦稱為“10D1F.B”)。
製備CH2區域包含GASDALIE及LCKC取代之修飾版本10D1且藉由生物層干涉術來分析其與Fc受體FcγRIIIa的結合能力。序列辨識編號：227顯示包含對應於G236A、S239D、A330L、I332E及L242C、K334C之取代GASDALIE及LCKC的10D1 VH-CH1-CH2-CH3之序列。
簡言之，使用抗-五-HIS(HIS1K)塗覆的生物感應器尖端(Pall ForteBio, USA)來捕獲His-標記的FcγRIIIa(V158) (270 nM)歷時120 s。所有的測量均於25℃執行伴隨1000 rpm攪拌。藉由孵育不同濃度的抗-HER3抗體(500 nM至15.6 nM)60 s，接著將生物感應器移至含分析緩衝液(pH 7.2)的孔內120 s的解離時間來執行抗原結合之締合動力學測量。感應圖譜參照緩衝效應然後使用Octet QK384使用者軟體(Pall ForteBio, USA)予以擬合。動力學反應係使用一位址結合模式予以整體擬合以獲得締合(k締合 )、解離(k解離 )速率常數及平衡解離常數(KD )。本分析只含括能與軟體可靠擬合的曲線(R2 >0.90)。
變異體的熱穩定性係如實施例3.4中所述、藉由微差掃描螢光分析法予以分析。
圖38A及38B分別顯示包含GASDALIE及LCKC Fc取代之10D1的BLI分析及熱穩定性分析。與熱穩定性維持在60℃之上、Fc無經工程處理的10D1(參見圖39A)相比，Fc經工程處理的10D1變異體顯示與FcγRIIIa的結合顯著改良(親和力增加~9倍)。
亦製備CH2區域包含GASD取代之10D1建構物；序列辨識編號：228顯示包含對應於G236A和S239D之取代的10D1 VH-CH1-CH2-CH3序列。
抗-HER3抗體殖株10D1(實施例2.2之[1])及其GASD變異體之親和力係藉由生物層干涉術來分析對於FcγRIIIa的結合親和力。BLI係如以上所述予以執行。
圖39A及39B顯示代表感應圖譜、k締合 、k解離 及KD 值。如預期，與10D1(39A)相比之下，10D1 GASD變異體(39B)對於FcγRIIIa展現出大幅度增加的親和力。
10D1 GASD變異體的熱穩定性係如實施例3.4中所述、藉由微差掃描螢光分析法予以分析。結果顯示於圖40內。 另外的10D1F Fc變異體
創造CH2區域包含N297Q取代的另一抗體變異體。序列辨識編號：226顯示包含N297Q取代的10D1F VH-CH1-CH2-CH3代表序列。此‘靜默形式’防止Fc區域之N-鍵接醣化及Fc與Fcγ受體的結合以及使用作為陰性對照。
圖41A及41B顯示10D1F hIgG1 Fc變異體10D1F.FcA及10D1F.FcB與人類及小鼠Fc受體的結合親和力，如以上所述所判定。發現與未修飾的10D1F.FcA或可購得的抗體相比較，10D1F.FcB與人類及小鼠Fcγ及FcRn受體的結合顯示出顯著改良。ND=KD 因結合親和力低而未確定。 實施例8：人化及修飾的殖株之特徵化8.1 藉由流動式細胞測量術分析細胞表面 抗原 - 結合
野生型(WT)HEK293細胞(沒有表現高位準的HER3)及轉染編碼人類HER3的載體之HEK293細胞(即HEK293 HER O/E細胞)係用10 μg/ml人化的抗-HER3抗體10D1F.FcA(10D1F)、抗-HER3抗體10D1(10D1P)或同型對照抗體於4℃孵育1.5 hr。分析中含括抗-HER3抗體殖株LJM716(例如於Garner等人，Cancer Res (2013) 73：6024–6035，及實施例3.5內所述)作為陽性對照。
用緩衝液(PBS加上2mM EDTA及0.5% BSA)清洗細胞並再懸浮在4℃之10 μg/ml的FITC複合的抗-FC抗體(Invitrogen, USA)歷時20 min。再次清洗細胞並再懸浮在200 μL FACS流動緩衝液(PBS加上5mM EDTA)中用於使用MACSQuant 10(Miltenyi Biotec，德國)之流式細胞測量術分析。分析中含括未染色的WT及轉染的HEK293細胞作為陰性對照。於取得後，使用Flowlogic軟體來分析所有的原始資料。使用前與側散射的散布圖剖析來圈選細胞，判定天然及過度表現細胞族群之陽性細胞百分比。
結果顯示於圖42A及42B內。抗-HER3抗體10D1F.FcA顯示出以高專一性與人類HER3結合(42A)。10D1F.FcA、10D1P及LJM716顯示出以相似的程度與人類表現HER3的細胞結合(42B)。8.2 判定抗體專一性及 交叉反應性之ELISAs
使用ELISAs來確認10D1F.FcA抗體之結合專一性。分析抗體與人類HER3多肽以及人類HER1 (EGFR)及人類HER2(Sino Biological Inc.，中國)之結合能力。含括人類IgG同型及不相干抗原作為陰性對照。
根據標準程序來進行ELISAs。用配於磷酸鹽緩衝型鹽水(PBS)之0.1 μg/ml的標靶多肽於4℃塗覆平盤歷時16 h。於室溫下以配於Tris緩衝型鹽水(TBS)之1 % BSA封阻1 h之後，連續稀釋最高濃度為10 μg/ml的抗-HER3抗體，以及添加至平盤。於室溫下孵育1 h後，用含0.05%吐溫20之TBS(TBS-T)清洗平盤三次然後用HRP-複合的抗-His抗體(Life Technologies, Inc., USA)於室溫下孵育1 h。於清洗之後，平盤用比色偵測基質3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(Turbo-TMB；Pierce, USA)顯色10 min。用2M H2 SO4 來停止反應，以及測量450 nM的OD。
結果顯示於圖43內。發現抗-HER3抗體10D1F.FcA不會與人類HER2或人類HER1(EGFR)結合，即使是高濃度的抗體。
使用流動式細胞測量術來分析10D1F.FcA與HER4結合的能力。野生型(WT)HEK293細胞(沒有表現高位準的HER4)及轉染編碼人類HER4的載體之HEK293細胞(即HEK293 HER O/E細胞)係用10 μg/ml的抗-HER3抗體10D1F.FcA(10D1F)或同型對照抗體(陰性對照)於4℃孵育1.5 hr。分析中含括抗-HER3抗體殖株LJM716(例如於Garner等人，Cancer Res (2013) 73：6024–6035內所述)及MM-121(塞里班土單抗)，如實施例3.5中所述，作為陽性對照。亦含括商業的抗-HER4抗體(Novus, Cat：FAB11311P)。分析中含括未染色的HEK293細胞作為陰性對照。
各抗體以10 µg/ml、在4℃孵育HEK293細胞1小時。流式細胞測量術係如以上所述來執行。細胞於4℃下與FITC-複合的抗-FC抗體(Invitrogen, USA)接觸歷時30 min。
結果顯示於圖44內。發現抗-HER3抗體10D1F.FcA不會與細胞表面表現的HER4結合。
此外，分析抗體10D1F.FcA與來自小鼠、大鼠及猴的HER3多肽同源物(Sino Biological Inc.，中國)之結合能力。小鼠(M. musculus )、溝鼠(R. norvegicus )及食蟹獼猴(M. cynomolgus )HER3同源物分別與人類HER3共享91.1、91.0及98.9%的序列同一性以及HER3訊息傳導途徑於四種物種之間是保留的。
如上所述來執行ELISAs。
結果顯示於圖45內。發現10D1F.FcA抗體以高親和力與HER3食蟹獼猴(cyno)、小鼠、大鼠及人類異種同源物結合，因而於物種之間展現出實質的交叉反應性。8.3 使用Octet QK384 系統之整體親和力研究
分析抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB與人類HER3之結合親和力。
生物層干涉術(BLI)實驗係使用Octet QK384系統(ForteBio)來執行。抗體(25 nM)塗覆於抗-人類IgG Capture (AHC) Octet感應器尖端(Pall ForteBio, USA)。於基線(60 s)、裝載(120 s)、基線2(60 s)、締合(120 s)、解離(FcA 120 s, FcB 600 s)及再生(15 s)的步驟中使用滴定的HIS-標記的人類HER3來偵測結合。抗原濃度顯示於圖46A及46B之表內。感應圖譜係如實施例3.3中所述予以分析。獲得締合(k締合 )、解離(k解離 )速率常數及平衡解離常數(KD )之數值。
圖46A及46B顯示殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB分析之代表感應圖譜。10D1F.FcA以KD =72.6 pM之高親和力與人類HER3結合(46A)。10D1F.FcB以KD =22.2 pM之高親和力與人類HER3結合(46B)。8.4 以 微差掃描螢光分析法進行之 熱穩定性 分析
抗體10D1F.FcA及10D1F.FcB的微差掃描螢光分析法係如實施例3.4中所述予以執行。
圖47A顯示抗體殖株10D1F.FcA之熱穩定性微差掃描螢光分析法所獲得的原始資料之第一導數。分析三個不同的抗體樣本且判定Tm為70.0℃。
圖47B顯示抗體殖株10D1F.FcB之熱穩定性微差掃描螢光分析法所獲得的原始資料之第一導數。分析三個不同的抗體樣本且判定Tm為62.7℃。8.5 抗體純度分析
藉由粒徑篩析層析法(SEC)進行抗體10D1F.FcA及10D1F.FcB之純度分析。於室溫下分別以0.75 ml/min或0.5 min/ml的流速、將配於500 µl PBS pH 7.2之150 µg的10D1F.FcA或配於500 µl PBS pH 7.45之150 µg的10D1F.FcB注入於PBS電泳緩衝液內的Superdex 200 10/30 GL管柱，且紀錄順流的A280。
結果顯示於圖48A(10D1F.FcA)及48B(10D1F.FcB)內。8.6 抗-HER3 抗體10D1F.FcA 表位之分析
分析抗-HER3抗體10D1F.FcA以判定其是否會與抗-HER3抗體M-05-74或M-08-11(Roche)競爭與HER3結合。M-05-74及M-08-11二者之表位均測繪至座落於域II的HER3二聚合臂之β-髮夾結構。M-08-11不會與HER4結合而M-05-74辨識HER4二聚合臂。M-05-74及M-08-11與HER3之結合為配體(NRG)獨立的。
BLI實驗係如實施例3.5所述來執行且加上一個修改：使用400 nM的競爭抗體。M-05-74及M-08-11抗體之可變異區域選殖至具有人類IgG1及IgKappa Fc主幹之PDZ載體內。
分析結果顯示於圖49A及49B內。發現抗-HER3 10D1F.FcA抗體不會與M-05-74或M-08-11競爭與HER3結合。發現10D1F.FcA結合的HER3表位與M-05-74及M-08-11相比是相異且拓撲上遙遠的。10D1F.FcA與HER3結合為配體(NRG)獨立的。
結論： •10D1F.FcA與人類HER3之結合可以配體獨立方式達成。 •10D1F.FcA結合表位與M-05-74及M-08-11的結合表位是相異且拓撲上遙遠的。8.7 HER2-HER3 及EGFR-HER3 二聚合 之抑制
分析抗-HER3抗體10D1F.FcA其抑制HER3與HER2之異質二聚合的能力。
根據標準程序來進行平盤-為基的ELISA二聚合分析。用1 μg/ml的HER2-Fc蛋白塗覆平盤。於封阻及清洗之後，用不同濃度的候選抗體10D1F.FcA、MM-121、LJM716、帕妥珠單抗、Roche M05、Roche M08或同型對照及固定的HER3 His 2 µg/ml及NRG 0.1 µg/ml孵育平盤1小時。繼而清洗平盤及用二級抗-HIS-HRP抗體孵育1小時。清洗平盤，用TMB處理10 mins且使用2M H2 SO4 停止溶液來停止反應。讀取450 nm之吸光度。
結果顯示於圖52內。發現抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA係以劑量依賴的方式直接抑制HER2與HER3之間的交互作用。
於另一分析中，使用PathHunter®帕妥珠單抗生物分析套組(DiscoverX, San Francisco, USA)來偵測二聚合之抑制。用1 ml預熱的CP5培養基來解凍過度表現HER2及HER3的U20S細胞且每孔播種5K細胞於37℃、5% CO2 歷時4 hrs。細胞係用從25 μg/ml開始加上8點連續稀釋濃度的10D1F.FcA、塞里班土單抗或帕妥珠單抗予以治療。於4 hr孵育之後，添加30 ng/ml的調蛋白-β2至各孔且進一步孵育平盤16 hr。孵育後，添加10 μL的PathHunter生物分析偵測試劑1且於黑暗中在室溫下孵育15 min，接著添加40 µL PathHunter生物分析偵測試劑2，其繼而於黑暗中在室溫下孵育60 min。使用Synergy4 Biotek延遲1秒(with 1 second delay)讀取平盤。
發現10D1F.FcA對於HER2-HER3異質二聚合的抑制之EC50 值為3.715e-11。於相同的分析中，發現塞里班土單抗/MM-121之比較EC50 值為6.788e-10且發現帕妥珠單抗之比較EC50 值為2.481e-10。
分析抗-HER3抗體10D1F.FcA其抑制EGFR與HER3之異質二聚合的能力。
根據標準程序來執行平盤-為基的ELISA二聚合分析。用1 μg/ml的人類EGFR-His塗覆平盤。於封阻及清洗之後，用不同濃度的候選抗體10D1F.FcA、MM-121、LJM716、帕妥珠單抗或同型對照及固定的HER3-生物素4 µg/ml及NRG 0.1 µg/ml孵育平盤1小時。平盤繼而清洗及用二級抗-抗生物素蛋白HRP抗體孵育1小時。清洗平盤，用TMB處理10 mins且使用2M H2 SO4 停止溶液來停止反應。讀取450 nm之吸光度。
結果顯示於圖53內。發現抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA係以劑量依賴的方式直接抑制EGFR與HER3之間的交互作用。8.8 誘發ADCC 能力之 分析
分析抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB其等誘發抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)之能力。
標靶細胞(HEK293過度表現HER3)以20,000個細胞/孔的密度平盤培養於U底96孔平盤內。細胞係用連續稀釋(50,000 ng/ml-0.18 ng/ml)的下列之一者予以治療：10D1F.FcA、10D1F.FcB、10D1F.FcA_N297Q (靜默形式)、LJM-716、塞里班土單抗(MM-121)或沒有得到治療，以及於37℃及5% CO2 孵育歷時30 min。以60,000個細胞/孔的密度添加效應子細胞(人類自然殺手細胞株No-GFP-CD16.NK-92；176V)至含標靶細胞的平盤。
含括下列對照：標靶細胞最大LDH釋出(只有標靶細胞)、自發性釋出(沒有抗體之標靶細胞和效應子細胞)、背景(只有培養基)。使平盤旋轉降下且於37℃及5% CO2 孵育歷時21 hrs。
LDH釋出分析(Pierce LDH細胞毒性分析套組)：於分析之前，添加10 µl的溶解緩衝液(10X)給標靶細胞最大LDH釋出對照且於37℃及5% CO2 孵育歷時20 min。於孵育之後，使平盤旋轉降下以及將50 µL的上清液移至透明平底的96孔平盤。添加50 µl含基質的LDH分析混合物至上清液以開始反應且於37℃孵育歷時30 min。添加50 µl的停止溶液來停止反應以及用BioTek Synergy HT微量盤讀數器來紀錄490 nm及680 nm之吸光度。
關於資料分析，測試樣本的吸光度係對背景及標靶細胞及效應子細胞之自發性釋出予以校正。相對於標靶細胞最大LDH釋出對照來計算測試樣本的細胞毒性百分比以及繪製為抗體濃度的函數。
結果顯示於圖54內。發現抗-HER3抗體10D1F.FcB係以劑量依賴的方式誘發對抗HER3過度表現細胞有力的ADCC活性。8.9 HER3- 媒介的 訊息傳導之 抑制
分析抗-HER3抗體10D1F.FcA其抑制癌細胞株活體外 之HER3-媒介的訊息傳導之能力。
在37℃及5% CO2 下於具有10%血清的6孔平盤的孔內播種N87、FaDu或OvCAR8細胞過夜。細胞係以0.2% FBS培養基飢餓16 hrs，且繼而用相應於細胞株IC50之不同的抗體治療0.5小時。測試的抗體為：10D1F.FcA (10D1)、塞里班土單抗(SBT)、依萊均圖單抗(Elegemtumab) (LJM)、帕妥珠單抗(PTM)、西妥昔單抗(CTX)及曲妥珠單抗(TZ)。
收穫前，先用100 ng/ml的NRG1刺激細胞。從細胞株萃取的蛋白係使用標準布拉德福蛋白質分析來定量。蛋白樣本(50 µg)係藉由SDS-PAGE予以分級且移至硝化纖維素膜。繼而將膜封阻並用所示的抗體進行免疫墨點。經由Bio-Rad Clarity Western ECL基質來使結果顯現。使用光密度分析來定量墨點且資料正規化為β肌動蛋白。
結果顯示於圖55A至55C內。發現抗-HER3抗體10D1F.FcA抑制N87(55A)、FaDu(55B)、OvCar8(55C)及A549(55D)細胞株內HER3磷酸化及下游的訊息傳導。
關於使用N87細胞、A549細胞、OvCar8細胞及FaDu細胞的實驗，於抗體治療16 hrs後萃取總RNA予以分析以根據藉由基因集富集分析之關鍵訊息傳導途徑蛋白質的表現位準來判定途徑活化。
分析結果顯示於圖63A至63D內。10D1F.FcA為最有效的下游訊息傳導抑制劑。
於另外使用A549細胞的實驗中，如上所述來執行活體外 磷酸化分析，除了是用不同的抗體來治療細胞0.5小時或4小時之外。結果顯示於圖64內。 實施例9：人化及修飾的殖株之活體外 及活體內 分析9.1 藥物動力學分析 小鼠
大約6-8週大的雌性NCr裸鼠係安置於無特定病原條件下且遵照機構動物護理和使用委員會(IACUC)的指導方針來對待。
投予500 µg抗-HER3抗體10D1F.FcA或10D1F.FcB且於投予後基線(- 2 hr)、6 hr、24 hr、96 hr、168 hr及336 hr藉由心臟穿刺從4隻小鼠取得血液。藉由ELISA來定量血清內的抗體。
藥物動力學分析的參數係衍生自非隔間模型：最大濃度(C最大 )、AUC(0-336hr)、AUC(0-無限大)、半生期(t½ )、廓清(CL)、穩態分佈體積(Vss )。
結果顯示於圖56A及56B內。發現抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA於NCr裸鼠的半生期為253小時(56A)且發現抗-HER3抗體殖株10D1F.FcB於NCr裸鼠的半生期為273小時(56B)。大鼠
分析10D1F變異體以判定平均重量320 g的雌性史－道二氏大鼠之單一劑量藥物動力學剖析。
經由尾靜脈慢速i.v.注射來投予單一劑量4 mg(∼10 mg/kg)、10 mg(∼25 mg/kg)、40 mg(∼100 mg/kg)或100 mg(∼250 mg/kg)的抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB。投予媒介物做為陰性對照。於投予後基線(- 24 hr)、6 hr、24 hr、96 hr、168 hr及336 hr時每治療從2隻大鼠取血。藉由ELISA來定量血清內的抗體。
藥物動力學分析的參數係衍生自非隔間模型：最大濃度(C最大 )、AUC(0-336hr)、AUC(0-無限大)、半生期(t½ )、廓清(CL)、穩態分佈體積(Vd )。
結果顯示於圖57A(10 mg/kg)、57B(25 mg/kg)、57C(100 mg/kg)及57D(250 mg/kg)內。9.2 安全性免疫毒性
分析10D1F.FcA及10D1F.FcB之毒物學效應。小鼠
6-8週大的雌性BALB/c小鼠(20-25 g)以腹膜內注射下列劑量之一的單一劑量10D1F.FcA及10D1F.FcB：200 ug(∼10 mg/kg)、500 ug(∼25 mg/kg)、2 mg(∼100 mg/kg)或5 mg(∼250 mg/kg)或等體積的PBS。各治療注射3隻小鼠，4隻小鼠注射PBS對照。於注射後96小時獲得血液樣本且分析RBC指數(總RBC計數、血容比、血紅素、血小板計數、紅血球平均體積、平均血球血紅素、平均血球血紅素濃度)及WBC指數(總WBC計數、淋巴細胞計數、嗜中性球計數、單核球計數)。使用HM5血液分析器來進行分析。
結果顯示於圖58A、58B(RBC指數)及58C(WBC指數)內。抗-HER3抗體10D1F.FcA及10D1F.FcB對於RBC指數沒有效應，但是發現較高劑量(10D1F.FcA 250 mg/kg、10D1F.FcB 100 mg/kg、10D1F.FcB 250 mg/kg)對於WBC指數有效應。
亦分析注射後96小時之肝毒性、腎毒性及胰毒性。10D1F.FcA及10D1F.FcB對於丙胺酸轉胺酶、鹼性磷酸酶、白蛋白、總蛋白(肝指數；圖58D)、肌酸酐、血脲氮、葡萄糖或澱粉酶位準(腎及胰指數；圖58E)沒有效應。10D1F.FcA及10D1F.FcB對於鈉、鉀、鈣或磷酸鹽都沒有效應(圖58F)。
用10D1F.FcA或10D1F.FcB治療的小鼠在96小時後於重量、行為、皮膚狀況、口腔檢查、糞便及尿液檢查或眼睛檢查都沒有顯示出異常。用較高劑量：10D1F.FcA 250 mg/kg、10D1F.FcB 100 mg/kg、10D1F.FcB 250 mg/kg治療的小鼠觀察到約正常尺寸1.5倍擴大的脾臟(脾增大)。
BALB/c小鼠進行進一步研究以評估重複劑量500 µg(∼25 mg/kg)10D1F.FcA或10D1F.FcB之毒物學效應。每週一次投予抗體總共四週。第一次投予後28天取血。觀察到任一抗體對於RBC、肝、腎、胰或電解質指數都沒有效應，沒有臨床異常的跡象且大體屍體解剖沒有偵測到差異。觀察到用10D1F.FcA或10D1F.FcB治療的小鼠之總WBC計數、淋巴細胞計數及嗜中性球計數減少但是這不被認為是有毒的。
於另一研究中，以單一劑量10D1F.FcA或等體積的PBS(媒介物對照)投予BALB/c小鼠，且於336小時後分析。代表性結果顯示於圖69A至69C內。大鼠
6-8週大的雌性史－道二氏大鼠(400-450 g)以腹膜內注射下列劑量之一的單一劑量10D1F.FcA或10D1F.FcB抗體：4 mg(∼10 mg/kg)、10 mg(∼25 mg/kg)、40 mg(∼100 mg/kg)、100 mg(∼ 250 mg/kg)。於-24小時、6小時、24小時、96小時、168小時及336小時取血。至多到注射後366小時對於RBC指數沒有效應、對於WBC指數沒有毒性效應，且對於肝、腎、胰或電解質指數都沒有效應。沒有臨床異常的跡象且大體屍體解剖沒有偵測到差異。
從大鼠投予250 mg/kg 10D1F.FcA獲得的代表結果顯示於圖至70A至70C內。
齧齒動物毒物學模式中沒有毒性訊號表示10D1及變異體優越的臨床安全性。9.3 活體外治療癌症之功效 分析
分析抗-HER3抗體10D1F.FcA於一些腫瘤模式活體外 抑制腫瘤生長的能力：N87細胞(胃癌)、HCC95細胞(肺癌)、FaDu細胞(頭頸部癌)、SNU-16細胞(胃癌)、A549細胞(肺癌)、OvCAR8細胞(卵巢癌)、ACHN細胞(腎癌)及HT29細胞(結腸直腸癌)。10D1F.FcA之功效係與其他抗-HER3抗體塞里班土單抗(MM-121)及LJM-716，以及其他EGFR家族療法西妥昔單抗、曲妥珠單抗及帕妥珠單抗作比較。
用從1500 μg/ml開始加上9點稀釋的連續稀釋濃度的治療抗體來治療細胞。於治療後3-5天使用CCK-8細胞增殖分析來測定細胞生存力。所示的細胞抑制百分比係相對於只用緩衝液(PBS)治療的細胞。資料點表示三次重複的平均。
結果顯示於圖59A至59D內。與其他HER3抗體(59A & 59B)及EGFR家族療法(59C & 59D)相比，抗-HER3抗體10D1F.FcA於多個腫瘤模式中展現出優異的活體外 腫瘤抑制。
圖77A及77B顯示於IP投予25 mg/kg相關抗體給小鼠其等達到C最大 濃度，不同的抗-ErbB抗體抑制不同的癌細胞株之活體外 增殖的能力。10D1F.FcA展現出抑制種類繁多不同的癌細胞類型生長優秀的能力。9.4 活體內治療癌症之功效 分析
評估抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB其等於活體內 癌模式中對於腫瘤生長的效應。 9.4.1 A549模式
皮下***腫瘤細胞至雌性NCr裸鼠右側。兩週一次投予抗體(25 mg/kg 10D1F.FcA、10D1F.FcB、西妥昔單抗、LJM-716或MM-121；每種治療n=6)或媒介物(n=8)歷時六週。
結果顯示於圖60內。抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB二者於肺癌A549模式中均展現出強大的功效。發現10D1F.FcB為特別有力的且使腫瘤退化。 9.4.2 FaDu模式
皮下***腫瘤細胞及基質膠(matrigel)至雌性NCr裸鼠右側。一週一次投予抗體(10及25 mg/kg 10D1F.FcA及10D1F.FcB，或25 mg/kg西妥昔單抗、曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、LJM-716或MM-121；每種治療n=6)或媒介物(n=6)歷時六週。
結果顯示於圖61內。發現抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB二者於頭頸部癌FaDu模式中均會有效的預防腫瘤生長。 9.4.3 OvCar8模式
皮下***腫瘤細胞及基質膠至雌性NCr裸鼠右側。一週一次投予抗體(10及25 mg/kg 10D1F.FcA，或25 mg/kg西妥昔單抗、LJM-716或MM-121；n=6)或媒介物(n=6)歷時六週。
結果顯示於圖62內。發現高劑量的抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA會有效的降低腫瘤體積。 9.4.4 N87模式
皮下***腫瘤細胞及基質膠至雌性NCr裸鼠右側。兩週一次投予抗體(25 mg/kg 10D1F.FcA，或50 mg/kg曲妥珠單抗、LJM-716或MM-121；每種治療n=6)或媒介物(n=6)歷時六週。
結果顯示於圖74內。發現抗-HER3抗體10D1F.FcA及於胃癌N87模式中會有效的預防腫瘤生長。 實施例10：BRAFV600E突變甲狀腺癌細胞株之增殖抑制分析 研究下列細胞株：
藉由流動式細胞測量術來研究細胞之EGFR家族成員的表面表現。簡言之，以20 μg/ml的10D1F.FcA、西妥昔單抗或曲妥珠單抗於4℃孵育300,000個細胞歷時1 h。使用10 μg/ml之Alexafluor 488-複合的抗-人類抗體作為二級抗體(於4℃ 40 min)。
結果顯示於圖66A至66C內。SW1736、BHT101及BCPAP細胞顯示出有表現EGFR、HER2及HER3。
本發明人研究不同的HER3-結合抗體抑制帶有V600E BRAF突變之不同的甲狀腺癌細胞株於活體外 增殖的能力。
簡言之，以1.5 x 105 個細胞/孔的密度播種不同細胞株的細胞，以及隔天用從1000 μg/ml開始加上10點連續稀釋的10D1F.FcA、塞里班土單抗、LJM-716、帕妥珠單抗或同型對照抗體予以治療。於3天後，使用CCK-8細胞增殖分析來測定增殖。增殖之抑制百分比係相對於用等體積的PBS而非抗體來治療的細胞所計算出。
結果顯示於圖67A至67C內。發現10D1F.FcA於抑制帶有BRAF V600E突變之細胞株增殖方面比所分析的任何其他抗-HER3抗體更為有效。
於另外的實驗中，研究10D1F.FcA及維羅非尼之組合抑制帶有V600E BRAF突變之不同的甲狀腺癌細胞株活體外 增殖的能力。
以1.5 x 105 個細胞/孔的密度播種細胞，以及隔天於200 nM維羅非尼存在或不存在下，用從1000 μg/ml開始加上10點連續稀釋的10D1F.FcA或同型對照抗體予以治療。於3天後，使用CCK-8細胞增殖分析來測定增殖。增殖之抑制百分比係相對於用等體積的PBS而非抗體來治療的細胞所計算出。
結果顯示於圖68A至68C內。發現10D1F.FcA會提升維羅非尼抑制易受維羅非尼影響的SW1736及BHT101細胞增殖的能力。亦發現10D1F.FcA是抗維羅非尼的BCPAP細胞強大的增殖抑制劑。 實施例11：活體內 抑制HER3-媒介的訊息傳導之分析
本發明人研究10D1F.FcA抑制活體內 HER3-媒介的訊息傳導之能力。
皮下導入1 x 106 個FaDu或OvCar8細胞至NCr裸鼠內，來建立異位的異種移植腫瘤。
一旦腫瘤體積已經達到超過100 mm3 時，以兩週一次腹膜內注射劑量25 mg/kg之10D1F.FcA或等體積的媒介物(對照)來治療小鼠。於4週之後，收穫腫瘤。從腫瘤製備蛋白萃取物且經由布拉德福分析來定量，50 μg樣本係藉由SDS-PAGE予以分級，且使用抗體藉由西方墨點法來分析俾以判定HER3及AKT之活體內磷酸化，如實施例4.3中所述。
結果顯示於圖71內。發現10D1F.FcA會抑制活體內 腫瘤細胞的HER3及AKT之磷酸化。 實施例12：抗-HER3抗體之內化分析
本發明人研究表現HER3的細胞之抗-HER3抗體之內化。
簡言之，經工程處理表現HER3的100,000個HEK293細胞、HCC95、N87或OVCAR8細胞予以播種於96孔組織培養平盤的孔內且在37℃於5% CO2 下培養過夜。繼而用120 nM的10D1F.FcA、LJM-716、塞里班土單抗或曲妥珠單抗，及360 nM的pHrodo iFL Green試劑來治療細胞，且在37℃於5% CO2 下孵育。各孔的4個不同的視野中培養的細胞每30 min成像歷時24小時。在24小時定量各視野的FITC道中最大訊號強度。
結果顯示於圖72內。OvCar8細胞觀察到LJM-716及塞里班土單抗適度至中等的內化，而N87細胞觀察到曲妥珠單抗適度的內化。
HCC95、N87或OVCAR8細胞未觀察到10D1F.FcA顯著的內化。
如預期，過度表現HER3的HEK293細胞觀察到10D1F.FcA、LJM-716及塞里班土單抗顯著的內化。
於另外的實驗中，藉由流動式細胞測量術來研究抗體內化。
N87細胞以50,000個細胞/孔的密度播種於96孔組織培養平盤的孔內，且允許黏著過夜(37℃，5% CO2 )。混合10D1F.FcA或曲妥珠單抗及標記試劑，且添加經標記的複合物給細胞。於0 min、10 min、30 min、1小時、2小時及4.5小時時間點收穫樣本，其係藉由抽吸細胞培養基，用PBS清洗且用消化酶(accutase)處理。中和消化酶活性，以及使細胞再懸浮在FACs緩衝液中且藉由流式細胞測量術分析。
結果顯示於圖73A及73B內。細胞展現出10D1F.FcA最小的內化。相比之下，觀察到抗-HER2抗體曲妥珠單抗實質的內化。 實施例13：HER3-結合抗體於免疫組織化學之用途
評估呈mIgG2a格式之抗-HER3抗體10D1F其要使用於免疫組織化學用於偵測人類HER3蛋白的能力。
使用Bond試劑(Leica Biosystems)來執行切片加工。獲得市售的冷凍組織切片陣列。載玻片於乾燥器內乾燥10 min然後接受下列處理，伴隨於步驟之間水清洗及/或TBS-T沖洗：(i)藉由室溫下以100%丙酮處理10 min以進行固定；(ii)藉由室溫下用3% (v/v) H2 O2 處理15 min以進行內生的過氧化酶封阻；(iii)藉由室溫下用10%山羊血清處理30 min以進行封阻，(iv)於4℃用1:250稀釋的10D1F-mIgG2a之6.2 mg/ml溶液孵育過夜，(v)於室溫下用HRP-聚合物複合的山羊抗小鼠抗體孵育30 min，以及(vi)於室溫下用Bond Mixed DAB Refine顯影5 min，接著用去離子水沖洗及1x Bond Wash來停止反應。
繼而使載玻片再水合、以合成封固劑封固且以高解析度掃描。
結果顯示於圖 75A及75B內。10D1F優先染色惡性人類組織切片，與正常組織的交叉反應性很低。
於另外的實驗中，於冷PBS內收穫A549異種移植腫瘤，包埋於OCT冷凍包埋液內、於乾冰內冷凍且儲存於-80℃。使用低溫恆溫器來獲得10 μm切片。
載玻片於乾燥器內乾燥10 min然後接受下列處理，伴隨於步驟之間水清洗及/或TBS-T沖洗：(i)藉由室溫下以100%丙酮處理10 min以進行固定；(ii)藉由室溫下用3% (v/v) H2 O2 處理15 min以進行內生的過氧化酶封阻；(iii)藉由室溫下用10%山羊血清處理30 min以進行封阻，(iv)於4℃用1:50稀釋的10D1F.FcA之8.8 mg/ml溶液，或用1:200稀釋的Sino Biological兔抗-HER3(商品目錄號10201-T24)孵育過夜，(v)於室溫下用Invitrogen F(ab')2-山羊抗-人類IgG (H+L) HRP (A24470) (1:500)，或HRP-聚合物複合的山羊抗兔抗體孵育30 min，以及(vi)於室溫下用Bond Mixed DAB Refine顯影5 min，接著用去離子水沖洗及1x Bond Wash來停止反應。
切片繼而用蘇木素複染、再水合、以合成封固劑封固且以高解析度掃描。
結果顯示於圖76內。10D1F.FcA展現出A549腫瘤異種移植冷凍切片之特定膜及細胞質染色。
現在將參照附圖來討論具體例及實驗以闡釋本發明之原理。圖1A 及1B 。直方圖(histograms)顯示依流動式細胞測量術所判定的抗-HER3抗體染色的細胞。直方圖顯示(1A ，1B )抗-HER3抗體殖株10D1及(1B )抗-HER3抗體殖株LJM716染色的HEK293細胞(沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)。圖2A 及2B 。直方圖顯示依流動式細胞測量術所判定的抗-HER3抗體染色的細胞。直方圖顯示(2A ，2B )抗-HER3抗體殖株4-35-B2及(2B )抗-HER3抗體殖株LJM716染色的HEK293細胞(沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。圖3A 及3B 。直方圖顯示依流動式細胞測量術所判定的抗-HER3抗體染色的細胞。直方圖顯示(3A ，3B )抗-HER3抗體殖株4-35-B4及(3B )抗-HER3抗體殖株LJM716染色的HEK293細胞(沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。圖4 。直方圖顯示依流動式細胞測量術所判定的抗-HER3抗體染色的細胞。直方圖顯示抗-HER3抗體殖株10A6染色的HEK293細胞(沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。圖5A 及5B 。圖表顯示抗-HER3抗體殖株10D1與(5A )人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴(cynomolgus macaque) HER3，以及(5B )人類EGFR及人類HER2的結合作用之ELISA分析結果。顯示EC50 值。圖6A 及6B 。圖表顯示抗-HER3抗體殖株4-35-B2與(6A )人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴HER3，以及(6B )人類EGFR及人類HER2的結合作用之ELISA分析結果。圖7A 及7B 。圖表顯示抗-HER3抗體殖株4-35-B4與(7A )人類HER3、人類EGFR及人類HER2，以及(7B )人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴HER3的結合作用之ELISA分析結果。圖8 。代表感應圖譜顯示抗-HER3抗體殖株10D1與人類HER3的結合親和力分析的結果。顯示k締合 、k解離 及KD 。圖9 。代表感應圖譜顯示抗HER3抗體殖株4-35-B2與人類HER3的結合親和力分析的結果。圖10 。代表感應圖譜顯示抗HER3抗體殖株4-35-B4與人類HER3的結合親和力分析的結果。圖11 。圖表顯示以微差掃描螢光分析法進行之抗-HER3抗體殖株10D1的穩定性分析的結果。圖12 。圖表顯示以粒徑篩析層析法進行之重組表現的抗-HER3抗體殖株10D1的分析結果。圖13 。影像顯示以SDS-PAGE及西方墨點法進行之抗-HER3抗體殖株10D1表現的分析結果。道：M1=TaKaRa蛋白質標識商品目錄號3452；M2=GenScript蛋白質標識商品目錄號M00521；1=還原條件；2=非還原條件；P=陽性對照：人類IgG1，κ(Sigma商品目錄號I5154)。於西方墨點法方面，使用的初級抗體為山羊抗人類IgG-HRP(GenScript商品目錄號A00166)及山羊抗人類κ-HRP(SouterhnBiotech商品目錄號2060-05)。圖14A 及14B 。代表感應圖譜及表顯示不同的抗-HER3抗體殖株之間競爭與HER3結合之分析結果。圖15 。圖表顯示依ELISA來判定之抗-HER3抗體殖株10D1抑制HER3與HER2之間的交互作用之分析結果。圖16A 及16B 。表及直方圖顯示不同的癌細胞株之EGFR蛋白家族成員及其等之配體的基因及蛋白表現。圖17 。影像顯示以磷-西方墨點法進行之抗-HER3抗體殖株10D1治療對於N87及FaDu細胞內HER3-媒介的訊息傳導效應的分析結果。UN=未治療的；T=以抗-HER3抗體殖株10D1治療的。圖18 。影像及圖表顯示使用磷蛋白質抗體陣列分析套組進行之抗-HER3抗體殖株10D1治療對於FaDu細胞內HER3-媒介的訊息傳導效應的分析結果。未治療的=未治療的FaDu細胞；治療的=以抗-HER3抗體殖株10D1治療的FaDu細胞。圖19A 及19B 。圖表顯示依CCK8分析來判定，所示的細胞株在抗-HER3抗體殖株10D1存在下予以孵育後，相對於未治療的對照條件(100%)之細胞融合百分比。(19A )顯示N87細胞獲得的結果，以及(19B )顯示FaDu細胞獲得的結果。圖20 。圖表顯示N87細胞株衍生的小鼠胃癌模式之腫瘤體積隨著時間的分析結果。兩週一次IP投予抗-HER3抗體殖株10D1，每劑量500 μg總共10次劑量。對照治療組接受等體積的PBS(媒介物)。圖21 。圖表顯示N87細胞株衍生的小鼠胃癌模式之腫瘤體積隨著時間的分析結果。每周一次IP投予抗-HER3抗體殖株4-35-B2，每劑量11 mg/kg總共4次劑量。對照治療組接受等量的同型對照抗體(同型)。圖22 。圖表顯示SNU16細胞株衍生的小鼠胃癌模式之腫瘤體積隨著時間的分析結果。兩週一次IP投予抗-HER3抗體殖株10D1，每劑量500 μg總共9次劑量。對照治療組接受等體積的PBS(媒介物)。圖23 。圖表顯示FaDu細胞株衍生的小鼠頭頸部鱗狀細胞癌模式之腫瘤體積隨著時間的分析結果。每周一次IP投予抗-HER3抗體殖株10D1，每劑量500 μg總共4次劑量。對照治療組接受等體積的PBS(媒介物)或相同劑量的同型對照抗體(同型)。圖24 。圖表顯示FaDu細胞株衍生的小鼠頭頸部鱗狀細胞癌模式之腫瘤體積隨著時間的分析結果。兩週一次IP投予抗-HER3抗體殖株10D1，每劑量500 μg總共8次劑量。對照治療組接受等體積的PBS(媒介物)。圖25 。圖表顯示OvCAR8細胞株衍生的小鼠卵巢癌模式之腫瘤體積隨著時間的分析結果。兩週一次IP投予抗-HER3抗體殖株10D1，每劑量500 μg總共9次劑量。對照治療組接受等體積的PBS(媒介物)。圖26 。圖表顯示HCC-95細胞株衍生的小鼠鱗狀肺細胞癌模式之腫瘤體積隨著時間的分析結果。兩週一次IP投予抗-HER3抗體殖株10D1，每劑量500 μg總共4次劑量。對照治療組接受等體積的PBS(媒介物)。圖27 。圖表顯示A549細胞株衍生的小鼠肺腺癌模式之腫瘤體積隨著時間的分析結果。兩週一次IP投予抗-HER3抗體殖株10D1，每劑量500 μg總共10次劑量。對照治療組接受等體積的PBS(媒介物)。圖28 。圖表顯示A549細胞株衍生的小鼠肺腺癌模式之腫瘤體積隨著時間的分析結果。兩週一次IP投予抗-HER3抗體殖株4-35-B2，每劑量500 μg總共4次劑量。對照治療組接受等體積的PBS(媒介物)。圖29 。圖表顯示ACHN細胞株衍生的小鼠腎細胞癌模式之腫瘤體積隨著時間的分析結果。兩週一次IP投予抗-HER3抗體殖株10D1，每劑量500 μg總共7次劑量。對照治療組接受等體積的PBS(媒介物)。圖30 。直方圖顯示依流動式細胞測量術所判定的抗-HER3抗體殖株10D1_c89染色的細胞。直方圖顯示HEK293細胞(沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。圖31 。直方圖顯示依流動式細胞測量術所判定的抗-HER3抗體殖株10D1_c90染色的細胞。直方圖顯示HEK293細胞(沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。圖32 。直方圖顯示依流動式細胞測量術所判定的抗-HER3抗體殖株10D1_c91染色的細胞。直方圖顯示HEK293細胞(沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。圖33A 及33B 。圖表顯示抗-HER3抗體殖株10D1變異體殖株與人類HER3的結合作用之ELISA分析結果。(33A )顯示抗-HER3抗體殖株10D1(稱為10D1P)、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78、10D1_11B(稱為v11b78L)、10D1_c85、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91、10D1_c93、LJM716及hIgG(陰性對照)的結合作用。(33B )顯示如33A一樣的資料，但是只有殖株10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91及LJM716。圖34A 及34B 。圖表顯示以粒徑篩析層析法進行之重組表現的抗HER3抗體10D1變異體殖株的分析結果。(34A )顯示抗HER3抗體殖株10D1_c93、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77、10D1_c78、10D1_11B(稱為C78 v11b)、10D1_c85、10D1_c85o1、10D1_c85o2、10D1_c89、10D1_c90、10D1_c91及10D1_c93的結果。(34B )顯示如33A一樣的資料，但是殖株只有10D1_c89、10D1_c90及10D1_c91。圖35A 至35C 。圖表顯示以微差掃描螢光分析法進行之抗-HER3抗體10D1變異體殖株的穩定性分析的結果。(35A )顯示抗-HER3抗體殖株LJM716(亦稱為依根妥單抗)、10D1(稱為10D1(親代))、10D1_c75、10D1_c76、10D1_c77及10D1_c78。(35B )顯示10D1_c85o2、10D1_c87、10D1_c89、10D1_11B(稱為c78_V11B)、10D1_c85及10D1_c85o1的結果。(35C )顯示10D1_c90、10D1_c91及10D1_c93的結果。圖36A 至36M 。代表感應圖譜顯示抗HER3抗體10D1變異體殖株與人類HER3的親和力分析的結果。顯示k締合 、k解離 及KD 。(36A )顯示殖株10D1_c89的結果、(36B )顯示殖株10D1_c90的結果、(36C )顯示殖株10D1_c91的結果、(36D )顯示殖株10D1_c11B的結果、(36E )顯示殖株10D1_c85o2的結果、(36F )顯示殖株10D1_c87的結果、(36G )顯示殖株10D1_c93的結果、(36H )顯示殖株10D1_c76的結果、(36I )顯示殖株10D1_c77的結果、(36J )顯示殖株10D1_c78的結果、(36K )顯示殖株10D1_c75的結果、(36L )顯示殖株10D1_c85的結果以及(36M )顯示殖株10D1_c85o1的結果。圖37 。表總結抗-HER3抗體10D1變異體殖株有關安全性及可發展性的性質。圖38A 及38B 。CH2區域內包含GASDALIE及LCKC取代的Fc-修飾的抗-HER3抗體殖株10D1之生物層干涉術(38A )及熱穩定性(38B )分析。(38A )BLI顯示一代表感應圖譜，其表現出Fc-修飾的抗-HER3抗體殖株10D1與FcγRIIIa的結合親和力分析的結果。顯示k締合 、k解離 及KD 。圖39A 及39B 。代表感應圖譜顯示(39A )非-Fc-修飾的抗-HER3抗體殖株10D1及(39B )CH2區域內包含GASD取代的Fc-修飾的抗-HER3抗體殖株10D1之結合親和力分析的結果。顯示k締合 、k解離 及KD 。圖40 。圖表顯示以微差掃描螢光分析法進行之抗HER3抗體殖株10D1 GASD變異體的穩定性分析的結果。圖41A 及41B 。表顯示抗HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB(GASDALIE-LCKC變異體)之小鼠及人類Fc受體的結合親和力，與靜默變異體N297Q、同功型變異體及可購得的抗體比較。ND=KD 因結合親和力低而未確定。圖42A 及42B 。直方圖顯示依流動式細胞測量術所判定的抗-HER3抗體染色的細胞。直方圖顯示(42A )抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及(42B )抗-HER3抗體殖株10D1及LJM-716染色的HEK293細胞(沒有表現HER3)或HEK293 HER3過度表現細胞(HEK293 HER3 O/E)之染色。圖43 。圖表顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA與人類EGFR(HER1)及人類HER2的結合作用之ELISA分析結果。顯示EC50 值。圖44 。直方圖顯示依流動式細胞測量術所判定的抗-HER3及抗-HER4抗體染色的細胞。直方圖顯示抗HER3抗體殖株10D1F.FcA、抗-HER3抗體LJM-716及MM-121及商業的抗HER4抗體染色的HEK293 HER4過度表現細胞。圖45 。圖表顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA與人類、小鼠、大鼠及食蟹獼猴HER3的結合作用之ELISA分析結果。顯示EC50 值。圖46A 及46B 。代表感應圖譜顯示抗-HER3抗體殖株(46A )10D1F.FcA及(46B )10D1F.FcB與人類HER3之結合親和力分析的結果。顯示k締合 、k解離 及KD 。圖47A 及47B 。圖表顯示以微差掃描螢光分析法進行之抗-HER3抗體殖株(47A )10D1F.FcA及(47B )10D1F.FcB的穩定性分析的結果。圖48A 及48B 。圖表顯示以粒徑篩析層析法進行之抗-HER3抗體殖株(48A )10D1F.FcA及(48B )10D1F.FcB的純度分析結果。圖49A 及49B 。感應圖譜及表顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及抗-HER3抗體M-05-74及M-08-11之間競爭與HER3之結合的分析結果。圖50 。圖表及表顯示抗-HER3抗體殖株10D1於小鼠之藥物動力學分析的結果。圖51A 至51F 。圖表顯示抗-HER3抗體殖株10D1治療對於小鼠的血液細胞計數(51A )、電解質指數(51B )及肝毒性、腎毒性及胰毒性指數(51C-51F )的效應。左邊長條代表媒介物對照，右邊長條代表10D1治療。虛線表示查爾斯河(Charles River)參考範圍的終點。肝毒性、腎毒性及胰毒性指數包括丙胺酸轉胺酶(ALT)、天門冬胺酸轉胺酶(AST)、血脲氮(BUN)、肌酸酐(CREA)、鹼性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)、鈣(CAL)、總膽紅素(BIL)、總蛋白(TPR)及白蛋白(ALB)。圖52 。圖表及表顯示依ELISA來判定之抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及抗體MM-121、LJM-716及Roche M05抑制HER2與HER3之間的交互作用之分析結果。圖53 。圖表及表顯示依ELISA來判定，抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及抗體MM-121及LJM-716抑制EGFR與HER3之間的交互作用之分析結果。圖54 。圖表及表顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA (10D1F.A)、10D1F.FcB(10D1F.B)、10D1F-hIgG1(N297Q)及抗-HER3抗體LJM-716及塞里班土單抗(MM-121)誘發抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性(ADCC)之能力分析結果。顯示EC50 值。圖55A 至55C 。影像顯示以磷-西方墨點法進行之抗-HER3抗體治療對於(55A )N87、(55B )FaDu及(55C )OvCar8細胞內HER3-媒介的訊息傳導效應的分析結果。圖56A 及56B 。圖表及表顯示抗-HER3抗體殖株(56A )10D1F.FcA及(56B )10D1F.FcB於小鼠之藥物動力學分析的結果。參數：最大濃度(C最大 )、T最大 、AUC(0-336hr)、AUC(0-無限大)、半生期(t½ )、廓清(CL)、穩態分佈體積(Vss )。圖57A 至57D 。圖表及表顯示(57A )10 mg/kg、(57B )25 mg/kg、(57C )100 mg/kg及(57D )250 mg/kg的抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA及10D1F.FcB於大鼠之藥物動力學分析的結果。參數：最大濃度(C最大 )、T最大 、AUC(0-336hr)、AUC(0-無限大)、半生期(t½ )、廓清(CL)、穩態分佈體積(Vss )。圖58A 至58F 。圖表顯示200 ug(∼10 mg/kg)、500 ug(∼25 mg/kg)、2 mg(∼100 mg/kg)或5 mg(∼250 mg/kg)之抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA或10D1F.FcB治療對於(58A ，58B )紅血球指數、(58C )白血球指數、(58D )肝毒性、(58E )腎及胰指數及(58F )電解質指數的效應。圖59A 至59D 。圖表顯示抗-HER3抗體殖株10D1F.FcA治療對於使用N87細胞(胃癌)、HCC95細胞(肺癌)、FaDu細胞(頭頸部癌)、SNU-16細胞(胃癌)、A549細胞(肺癌)、OvCAR8細胞(卵巢癌)、ACHN細胞(腎癌)及HT29細胞(結腸直腸癌)之活體外 小鼠癌症模式之腫瘤抑制百分比，其係與(59A & 59B )抗-HER3抗體塞里班土單抗及LJM-716及(59C & 59D )EGFR家族療法西妥昔單抗、曲妥珠單抗及帕妥珠單抗作比較。圖60 。圖表顯示A549細胞株衍生的小鼠肺腺癌模式，在兩週一次用所示濃度的抗體治療歷時六週(n=6，媒介物對照n=8)後之腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗體投予係沿著x軸以三角形表示。圖61 。圖表顯示FaDu細胞株衍生的小鼠頭頸部鱗狀細胞癌模式，在每週一次用所示濃度的抗體治療歷時六週(n=6)後之腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗體投予係沿著x軸以三角形表示。圖62 。圖表顯示OvCAR8細胞株衍生的小鼠卵巢癌模式，在每週一次用所示濃度的抗體治療歷時六週(n=6)後之腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗體投予係沿著x軸以三角形表示。圖63A 至63D 。箱形圖顯示活體外 磷酸化分析中用10D1F.FcA、LJM-716或塞里班土單抗治療的癌細胞株之基因集富集分析的途徑活化的分析結果。63A 顯示從N87細胞獲得的結果，63B 顯示從A549細胞獲得的結果，63C 顯示從OvCar8細胞獲得的結果以及63D 顯示從FaDu細胞獲得的結果。圖64 。影像顯示於所示的時間點，以磷-西方墨點法進行之抗-HER3抗體治療對於A549細胞內HER3-媒介的訊息傳導效應的分析結果。圖65 。圖表顯示依PathHunter帕妥珠單抗生物分析來判定，10D1F.FcA或帕妥珠單抗抑制HER2:HER3交互作用之分析結果。顯示IC50(M)值。圖66A 至66C 。直方圖顯示(66A )BCPAP (66B )BHT101及(66C )SW1736細胞的EGFR、HER2及HER3表現之分析結果。1=未染色的細胞，2=同型對照，3=西妥昔單抗，4=曲妥珠單抗及5=10D1F.FcA。圖67A 至67C 。圖表顯示不同的抗-ErbB抗體抑制活體外 BRAFV600E 突變甲狀腺癌細胞株之增殖的能力分析。67A 顯示BHT101細胞獲得的結果，687 顯示BCPAP細胞獲得的結果，以及67C 顯示SW1736細胞獲得的結果。圖68A 至68C 。圖表顯示10D1F.FcA單獨或與維羅非尼組合抑制活體外 BRAFV600E 突變甲狀腺癌細胞株之增殖的能力分析。68A 顯示BHT101細胞獲得的結果，68B 顯示SW1736細胞獲得的結果，以及68C 顯示BCPAP細胞獲得的結果。圖69A 至69C 。表顯示投予10 mg/kg、25 mg/kg、100 mg/kg或250 mg/kg的10D1F.FcA或等體積的PBS之後，BALB/c小鼠之代表血液剖析。69A 顯示紅血球區劃的分析結果，69B 顯示白血球區劃的分析結果，以及69C 顯示肝、腎及胰功能關聯值及電解質位準的分析結果。RBC=紅血球，MVC=紅血球平均體積，MCH=平均血球血紅素，MCHC=平均血球血紅素濃度，WBC=白血球，ALT=丙胺酸轉胺酶，ALP=鹼性磷酸酶，CREA=肌酸酐，BUN=血脲氮，GLU=升糖素，AMY=澱粉酶，NA=鈉，K=鉀，P=磷及CA=鈣。圖70A 至70C 。表顯示投予250 mg/kg的10D1F.FcA或等體積的PBS之後，於所示的時間點之SD大鼠的代表血液剖析。70A 顯示紅血球區劃的分析結果，70B 顯示白血球區劃的分析結果，以及70C 顯示肝、腎及胰功能關聯值及電解質位準的分析結果。RBC=紅血球，MVC=紅血球平均體積，MCH=平均血球血紅素，MCHC=平均血球血紅素濃度，WBC=白血球，ALT=丙胺酸轉胺酶，ALP=鹼性磷酸酶，CREA=肌酸酐，BUN=血脲氮，GLU=升糖素，AMY=澱粉酶，NA=鈉，K=鉀，P=磷及CA=鈣。圖71 。影像顯示以磷-西方墨點法來判定，10D1F.FcA治療對於活體內 於FaDu或OvCar8細胞衍生的腫瘤之細胞內HER3-媒介的訊息傳導效應的分析結果。圖72 。箱形圖(Box blot)顯示所示的細胞株內化不同的抗-ErbB抗體之分析結果。圖73A 及73B 。直方圖及表顯示依流動式細胞測量術判定，所示的細胞株於不同的時間點內化10D1F.FcA或曲妥珠單抗之分析結果。73B 顯示從73A 顯示的直方圖所判定的中位數螢光強度及PE-陽性細胞的百分比。圖74 。圖表顯示N87細胞株衍生的小鼠胃癌模式，在兩週一次用所示濃度的所示抗-ErbB抗體治療歷時六週(n=6)後之腫瘤體積隨著時間的分析結果。抗體投予係沿著x軸以三角形表示。圖75A 及75B 。影像顯示惡性及正常人類的組織使用10D1F.FcA之免疫組織化學染色。75A 及75B 顯示不同組織的染色。圖76 。影像顯示A549腫瘤異種移植冷凍切片由10D1F或兔多株抗-HER3抗體之免疫組織化學染色，於所示的放大倍數下。有顯示只有二級對照的染色。圖77A 及77B 。長條圖顯示於IP投予25 mg/kg給小鼠後抗體達到C最大 之血清濃度下，所示的抗-ErbB抗體抑制所示的癌細胞株之活體外 增殖的能力分析結果。77A 及77B 顯示使用不同的細胞株獲得的結果。
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Claims (20)

  1. 一種抗原結合分子，其能與HER3結合，其中該抗原結合分子包含：(i)一包括有下列CDRs之重鏈可變異(VH)區域：具有序列辨識編號：41的胺基酸序列之HC-CDR1具有序列辨識編號：45的胺基酸序列之HC-CDR2具有序列辨識編號：48的胺基酸序列之HC-CDR3；及(ii)一包括有下列CDRs之輕鏈可變異(VL)區域：具有序列辨識編號：88的胺基酸序列之LC-CDR1具有序列辨識編號：92的胺基酸序列之LC-CDR2具有序列辨識編號：95的胺基酸序列之LC-CDR3。
  2. 如請求項1之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：一VH區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：36的胺基酸序列有至少70%的序列同一性；及一VL區域，其包含一胺基酸序列，該胺基酸序列與序列辨識編號：83的胺基酸序列有至少70%的序列同一性。
  3. 如請求項1或請求項2之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：一包括有下列框架區域(FRs)之VH區域：具有序列辨識編號：53之胺基酸序列的HC-FR1、具有序列辨識編號：59之胺基酸序列的HC-FR2、具有序列辨識編號：66之胺基酸序列的HC-FR3、 具有序列辨識編號：71之胺基酸序列的HC-FR4。
  4. 如請求項1或請求項2之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：一包括有下列框架區域(FRs)之VL區域：具有序列辨識編號：104之胺基酸序列的LC-FR1、具有序列辨識編號：110之胺基酸序列的LC-FR2、具有序列辨識編號：120之胺基酸序列的LC-FR3、具有序列辨識編號：125之胺基酸序列的LC-FR4。
  5. 如請求項1或請求項2之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含序列辨識編號：171之重鏈恆定序列。
  6. 如請求項1或請求項2之抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含序列辨識編號：177之輕鏈恆定序列。
  7. 一種抗原結合分子，其包含(i)一如請求項1至6中任一項之抗原結合分子，及(ii)一能與HER3以外的一抗原結合之抗原結合分子。
  8. 一種嵌合抗原受體(CAR)，其包含如請求項1至7中任一項之抗原結合分子。
  9. 一種核酸或多種核酸，其編碼如請求項1至7中任一項之抗原結合分子或如請求項8之CAR。
  10. 一種表現載體或多種表現載體，其包含如請求項9之核酸或多種核酸。
  11. 一種細胞，其包含如請求項1至7中任一項 之抗原結合分子、如請求項8之CAR、如請求項9之核酸或多種核酸、或如請求項10之表現載體或多種表現載體。
  12. 一種表現抗原結合分子或CAR的方法，其包含使一包含如請求項9之核酸或多種核酸、或如請求項10之表現載體或多種表現載體的細胞，於適合從所述核酸或所述表現載體表現該抗原結合分子或CAR的條件下予以培養。
  13. 一種組成物，其包含如請求項1至7中任一項之抗原結合分子、如請求項8之CAR、如請求項9之核酸或多種核酸、如請求項10之表現載體或多種表現載體、或如請求項11之細胞。
  14. 一種如請求項1至7中任一項之抗原結合分子、如請求項8之CAR、如請求項9之核酸或多種核酸、如請求項10之表現載體或多種表現載體、如請求項11之細胞或如請求項13之組成物於製備一藥物之用途，該藥物供用於一治療或預防一表現HER3的癌症的方法中。
  15. 如請求項14之用途，其中該表現HER3的癌症係一實性癌症或一血液癌症。
  16. 如請求項14或請求項15之用途，其中該表現HER3的癌症係選自於：胃癌、頭頸部癌、乳癌、卵巢癌、肺癌、黑色素瘤、***癌、口腔癌、腎癌、結腸直腸癌、食道癌及胰臟癌。
  17. 一種活體外複合物，其包含與HER3結合之如請求項1至7中任一項之抗原結合分子。
  18. 一種用於偵測HER3的方法，其包含在活體外使一含有或懷疑含有HER3的樣本與如請求項1至7中任一項之抗原結合分子接觸，以及偵測該抗原結合分子與HER3形成的一複合物。
  19. 一種選擇個體或將個體分組(stratifying)的方法，該個體係將要以一HER3-標靶劑來治療，該方法包含於活體外使來自該個體的一樣本與如請求項1至7中任一項之抗原結合分子接觸以及偵測該抗原結合分子與HER3的一複合物之形成。
  20. 一種如請求項1至7中任一項之抗原結合分子作為一活體外診斷劑或預後劑的用途。
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