TWI811604B - 抗體、醫藥組成物及其用途 - Google Patents
抗體、醫藥組成物及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- TWI811604B TWI811604B TW109146920A TW109146920A TWI811604B TW I811604 B TWI811604 B TW I811604B TW 109146920 A TW109146920 A TW 109146920A TW 109146920 A TW109146920 A TW 109146920A TW I811604 B TWI811604 B TW I811604B
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- antigen
- antibody
- cancer
- binding portion
- binding
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 164
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 164
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 164
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 82
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 38
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 107
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 40
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 37
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 19
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 7
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 101710135378 pH 6 antigen Proteins 0.000 claims description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 claims description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004228 ovarian endometrial cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 claims description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 claims description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims 3
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims 3
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims 2
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 claims 2
- RBORURQQJIQWBS-QVRNUERCSA-N (4ar,6r,7r,7as)-6-(6-amino-8-bromopurin-9-yl)-2-hydroxy-2-sulfanylidene-4a,6,7,7a-tetrahydro-4h-furo[3,2-d][1,3,2]dioxaphosphinin-7-ol Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=S)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1Br RBORURQQJIQWBS-QVRNUERCSA-N 0.000 claims 1
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 claims 1
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 claims 1
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 claims 1
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 claims 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 claims 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 claims 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims 1
- 101710098119 Chaperonin GroEL 2 Proteins 0.000 claims 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 claims 1
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 claims 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims 1
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 claims 1
- 101000934376 Homo sapiens T-cell differentiation antigen CD6 Proteins 0.000 claims 1
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 claims 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 claims 1
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 claims 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 claims 1
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 claims 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims 1
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 claims 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 claims 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 claims 1
- 102100025131 T-cell differentiation antigen CD6 Human genes 0.000 claims 1
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 claims 1
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 claims 1
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 claims 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 claims 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims 1
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 claims 1
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 claims 1
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 claims 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 26
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 38
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 38
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 29
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 28
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 25
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 20
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 19
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 17
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 16
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 13
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 13
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 13
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol Substances OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 7
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 6
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- -1 Globo H) Chemical class 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 4
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 4
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 4
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 4
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 3
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N almurtide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CO[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)CO)[C@@H](NC(C)=O)C=O NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 3
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 2
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 2
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 description 2
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 2
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 2
- 108700015872 N-acetyl-nor-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 108010088160 Staphylococcal Protein A Proteins 0.000 description 2
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 2
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- WQMLFJWIKARBFW-BKKMTDGVSA-N evomonoside Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C[C@@H](CC[C@H]2[C@]3(CC[C@@H]([C@@]3(C)CC[C@H]32)C=2COC(=O)C=2)O)[C@]3(C)CC1 WQMLFJWIKARBFW-BKKMTDGVSA-N 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 2
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- LLXVXPPXELIDGQ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoate Chemical compound C=1C=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=CC=1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O LLXVXPPXELIDGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N (2R)-2-hydroxy-2-phenylacetic acid Chemical compound O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1.O[C@@H](C(O)=O)c1ccccc1 QBYIENPQHBMVBV-HFEGYEGKSA-N 0.000 description 1
- YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N (4R)-4-[[(2S,3R)-2-[acetyl-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-4-[(1R)-1-carboxyethoxy]-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid Chemical compound C(C)(=O)N([C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](CCC(=O)O)C(N)=O)C1[C@H](N)[C@@H](O[C@@H](C(=O)O)C)[C@H](O)[C@H](O1)CO YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N 0.000 description 1
- WSWCOQWTEOXDQX-MQQKCMAXSA-M (E,E)-sorbate Chemical compound C\C=C\C=C\C([O-])=O WSWCOQWTEOXDQX-MQQKCMAXSA-M 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 1
- 229940123150 Chelating agent Drugs 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 235000000638 D-biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011665 D-biotin Substances 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699694 Gerbillinae Species 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-YRMXFSIDSA-N N-acetyl-alpha-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-YRMXFSIDSA-N 0.000 description 1
- BKAYIFDRRZZKNF-VIFPVBQESA-N N-acetylcarnosine Chemical compound CC(=O)NCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 BKAYIFDRRZZKNF-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 208000010505 Nose Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- SJUPVMFZNVNLSE-UHFFFAOYSA-N ON1C(CCC1=O)=O.C(C1=CC=CC=C1)(=O)O Chemical compound ON1C(CCC1=O)=O.C(C1=CC=CC=C1)(=O)O SJUPVMFZNVNLSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 1
- 208000009565 Pharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010034811 Pharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007913 Pituitary Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000005746 Pituitary adenoma Diseases 0.000 description 1
- 206010061538 Pituitary tumour benign Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N R-2-phenyl-2-hydroxyacetic acid Natural products OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032023 Signs and Symptoms Diseases 0.000 description 1
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- ZBNRGEMZNWHCGA-PDKVEDEMSA-N [(2r)-2-[(2r,3r,4s)-3,4-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]oxolan-2-yl]-2-hydroxyethyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC ZBNRGEMZNWHCGA-PDKVEDEMSA-N 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 229920000180 alkyd Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N alpha-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 230000009831 antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011116 calcium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000013354 cell banking Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000010293 colony formation assay Methods 0.000 description 1
- 239000013066 combination product Substances 0.000 description 1
- 229940127555 combination product Drugs 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M cyanate Chemical compound [O-]C#N XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000002446 fucosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O1)C)* 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 235000014413 iron hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L iron(ii) hydroxide Chemical class [OH-].[OH-].[Fe+2] NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 229960002510 mandelic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N mifamurtide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COP(O)(=O)OCCNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N 0.000 description 1
- 229960005225 mifamurtide Drugs 0.000 description 1
- 108700007621 mifamurtide Proteins 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 150000004712 monophosphates Chemical class 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- QCQYVCMYGCHVMR-AAZUGDAUSA-N n-[(2r,3r,4s,5r)-4,5,6-trihydroxy-1-oxo-3-[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhexan-2-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QCQYVCMYGCHVMR-AAZUGDAUSA-N 0.000 description 1
- 239000007908 nanoemulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000002077 nanosphere Substances 0.000 description 1
- 208000037830 nasal cancer Diseases 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 208000021310 pituitary gland adenoma Diseases 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011118 potassium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012342 propidium iodide staining Methods 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229940075554 sorbate Drugs 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N squalene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-AAJYLUCBSA-N 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001169—Tumor associated carbohydrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/00118—Cancer antigens from embryonic or fetal origin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本發明提供可結合階段特異性胚胎抗原3 (SSEA-3)的抗體或其抗原結合部分。本發明亦揭露用於抑制一有需求個體的癌細胞的醫藥組成物及方法。該醫藥組成物包含一抗體或其抗原結合部分以及至少一藥學上可接受的載體。
Description
本申請案主張於2019年12月30日提交的美國臨時申請案第62/954,669號的優先權,其內容透過引用全部併入本文。
本發明係關於腫瘤相關醣類抗原的抗體,包括對至少一種腫瘤相關醣類抗原或其片段具有特異性的特定部分或變體,亦關於編碼該抗體的核酸、互補核酸、載體(vectors)、宿主細胞(host cells)及其製備與使用方法,包括含有該抗體的治療性製劑(therapeutic formulations)及醫藥組成物。此外,本文亦提供對一個體施予在抑制癌細胞上有效量的抗體的方法。
惡性腫瘤細胞表現了許多表面醣類。例如,Globo H (Fucα1→2Galß1→3N-GalNAcß1→3Galα1→4Galß1→4Glc)已被證實在多種上皮癌過度表現,並且與乳癌及小細胞肺癌的腫瘤侵襲性與不良預後有關。先前研究顯示,在乳癌細胞及乳癌幹細胞上觀察到Globo H及階段特異性胚胎抗原3 (stage-specific embryonic antigen-3,Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1)(SSEA-3,亦稱Gb5)(Chang WWet al.
, (2008) PNAS, 105(33):11667-11672; Cheung SKet al.,
(2016) PNAS, 113(4):960-965)。此外,SSEA-4 (stage-specific embryonic antigen-4 (階段特異性胚胎抗原4))(Neu5Acα2→3Galβ1→3GalNAcβ1→3Galα1→4Galβ1→4Glcβ1)已被普遍用作人類多能胚胎幹細胞的細胞表面標記,並被用於分離間質幹細胞和濃縮神經前驅細胞(Kannagi Ret al.
, (1983) EMBO J, 2:2355-2361)。這些發現顯示Globo系列抗原(Globo H、SSEA-3及SSEA-4)是癌症治療的獨特標靶,且可用於有效引導治療劑靶向癌細胞。
這些發現成為開發對腫瘤相關醣類抗原的抗體的理由,因為有效治療及/或預防癌症的需求尚未被滿足。本發明提供了腫瘤相關醣類抗原的抗體以滿足這些及其他需求。
本發明提供了抗體或其抗原結合部分,係包含與一醣類抗原結合的一可變區,並且提供該抗體的共軛形式(conjugated versions)、編碼核酸或互補核酸、載體、宿主細胞、組成物、製劑、裝置、基因轉殖動物、相關的基因轉殖植物、及其製備與使用方法。本發明如本文所述並結合本技術領域已知的內容而得以實現。前述抗體或其抗原結合部分可具有約10E-7 M或更少、約10E-8 M或更少、約10E-9 M或更少、約10E-10 M或更少、約10E-11 M或更少、或約10E-12 M或更少的解離常數(KD)。該抗體或其抗原結合部分可為人源化的(humanized)或嵌合的(chimeric)。
在另一實施例中,本發明提供了一種抗體或其抗原結合部分,係包含一重鏈可變區(heavy chain variable domain),該重鏈可變區的胺基酸序列與SEQ ID NO: 3所示胺基酸序列具有約80%至約100%的同一性;以及一輕鏈可變區(light chain variable domain),該輕鏈可變區的胺基酸序列與SEQ ID NO: 4所示胺基酸序列具有約80%至約100%的同一性。
在一些實施例中,一抗體或其抗原結合部分包含一重鏈區(heavy chain region),其中該重鏈區包含一互補決定區(CDR),該CDR的胺基酸序列與選自SEQ ID NOs: 5、6及7所組成群組的胺基酸序列具有約80%至約100%的同一性。在其他實施例中,一抗體或其抗原結合部分包含一輕鏈區(light chain region),其中該輕鏈區包含一CDR,該CDR的胺基酸序列與選自SEQ ID NOs: 8、9及10所組成群組的胺基酸序列具有約80%至約100%的同一性。
本發明提供一種醫藥組成物,包含本文所述抗體或其抗原結合部分,以及至少一藥學上可接受的載體(pharmaceutically acceptable carrier)。
本發明亦提供一種抑制表現Globo H的癌細胞的方法,包含對一有此需求的個體施予有效量的本文所述抗體或其抗原結合部分,其中該表現Globo H的癌細胞被抑制。
本發明亦提供被命名為1E12b的融合瘤株(寄存於美國典型培養物保存中心(American Type Culture Collection,ATCC),編號 PTA-126149),以及由該融合瘤株產生的抗體或抗原結合部分。
如本文所用的冠詞「一」及「一種」係指一個或多於一個(即至少一個)該冠詞在文法上的對象。舉例來說,「一元件」係指一個元件或多於一個元件。
本文所用的「有效量」係指足以減輕癌症的症狀和跡象的疫苗或藥物組成物的劑量,該癌症的症狀和跡象例如體重減輕、疼痛及可觸摸到的腫塊,該腫塊是可被檢測的,不論是臨床上測得可觸摸到的腫塊或透過各種成像方法可被放射性檢測。術語「有效量」及「治療有效量」可互換使用。
術語「個體(subject)」可以指患有癌症的一脊椎動物或被認為需要癌症治療的一脊椎動物。個體包括所有溫血動物,例如哺乳動物,例如靈長類動物,及較佳地為人類。個體亦可以是非人靈長類動物。術語「個體」包括家養動物,如貓、狗等,家畜(例如牛、馬、豬、綿羊、山羊等)及實驗室動物(例如小鼠、兔、大鼠、沙鼠、豚鼠等)。因此,獸醫用及醫用製劑在本文的考量範疇。
「組合」係指組合療法在一個治療週期內的同一日或不同日,當依序或同時一起施予(以共同施予及/或複方製劑的方式)的抗體及/或其他化學治療劑、光動力治療劑或生物製劑的量,造成有療效且超越療效加成的協同作用。
本文中所有數字都是近似值且可用「約(about)」加以修飾。
本發明提供用於治療或抑制癌細胞的醫藥組成物及方法。 該醫藥組成物包含可辨識醣抗原的抗體,包括小鼠單株抗體、人源化抗體、嵌合抗體或前述任何一種的抗原結合部分。這些抗體(或其抗原結合部分)能中和醣抗原及/或抑制癌細胞。因此,本文中的抗體或其抗原結合部分能用於治療或抑制癌細胞。
本發明的抗體包括任何包含一重鏈或一輕鏈的至少一個互補決定區(CDR)或抗體之配體(ligand)結合部分的蛋白質或胜肽,該蛋白質或胜肽係源於本文所述名為1E12b的融合瘤(2019年11月19日寄存於美國典型培養物保存中心(ATCC),10801 University Boulevard,Manassas,Va.20110-2209,並且ATCC 編號PTA-126149)所產生的抗體(本文所述的所有ATCC寄存都是依據布達佩斯條約進行)。抗體包括抗體片段、抗體變體、單株抗體、多株抗體及重組抗體等。 抗體可以在小鼠、兔子或人類中產生。
本發明的抗體亦包括產自本發明抗體的嵌合單株抗體或人源化單株抗體。
因此,本發明的抗癌抗體包括與一重鏈可變區或一輕鏈可變區、一重鏈恆定區(constant region)或一輕鏈恆定區、一框架區(framework region)或其任何部分的組合,其為非鼠類來源,較佳為源自人類。該抗癌抗體為本發明的抗體涵蓋。
本發明的抗體能夠在體外(in vitro
)、原位(in situ
)及/或活體內(in vivo
)調節、降低、拮抗、減輕、緩解、阻斷、抑制、終止及/或干擾至少一種表現SSEA-3的癌細胞的活性。
更進一步地,術語「抗體」意在涵蓋抗體及其分解片段、特定部分及變體,包括擬抗體(antibody mimetics),或包含模擬抗癌抗體或其特定片段或部分的結構及/或功能的抗體的部分,包括單鏈抗體(single-chain antibody)及其片段。前述任一者包含源自本發明的抗癌抗體的至少一個CDR。功能性片段(functional fragments)包括與一表現SSEA-3的癌細胞相結合的抗原結合片段。例如,能夠與表現SSEA-3的癌細胞相結合的抗體片段或其部分皆包含在本發明中(參見例如Colligan, Immunology,同上),包括但不限於Fab(例如,透過木瓜酵素(papain)分解)、Fab'(例如,透過胃蛋白酶(pepsin)分解及部分還原)及F(ab')2
(例如,透過胃蛋白酶分解)、facb(例如,透過纖溶酶(plasmin)分解)、pFc'(例如,透果胃蛋白酶或纖溶酶分解)、Fd(例如,透過胃蛋白酶分解、部分還原及再聚集)、Fv或scFv(例如,藉由分子生物學技術)片段。
本文所述1E12b係指融合瘤株或由相應的融合瘤株所產生的抗體。
抗體的抗原結合部分可包括特異性結合至一醣抗原(例如,Globo H、SSEA-3或SSEA-4)的抗體的一部分。
本發明的人源化抗體是來自非人物種的抗體,其中非抗原結合區(及/或抗原結合區)的胺基酸序列被改變,使該抗體更接近於人抗體,同時保留其原有的結合能力。
人源化抗體之產生可透過用來自人類的可變區等效序列替換不直接參與抗原結合的可變區序列。該些方法包括對來自至少一個重鏈或輕鏈的全部或部分可變區的編碼核酸序列予以分離、操作及表現。這類核酸的來源是本領域技術人員所熟知的。其後,編碼人源化抗體或其片段的重組DNA可被導入一適合的表現載體。
抗體的輕鏈可變區或重鏈可變區包含被三個高度變異區(hypervariable regions,稱為CDR)間隔的框架區 。在一實施例中,人源化抗體是來自非人物種的抗體分子,其具有來自非人物種的一個、二個或全部CDR以及來自人免疫球蛋白分子的一個、二個或全部三個框架區。
依據本發明的一方面,CDR及框架殘基的位置係由以下揭露的方法確定:Kabat, E. A.et al
., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242。依據本發明的另一方面,抗體或其抗原結合部分可以具有以下結構:
領導序列-FW1-CDR1-FW2-CDR2-FW3-CDR3-
其中框架區FW1、FW2、FW3及互補決定區CDR1、CDR2、CDR3具有如表1所揭示的胺基酸序列。
本發明的人源化抗體可以用本技術領域熟知的方法生產。例如,一旦獲得非人(如鼠類)抗體,可對可變區進行定序,並確定CDR和框架殘基的位置。Kabat, E. A.et al
., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242。Chothia, C.et al
., (1987) J. Mol. Biol., 196:901-917。編碼輕鏈可變區及重鏈可變區的DNA可以任選地與相應的恆定區連接,然後導入一適合的表現載體中。CDR接枝的抗體分子可以通過CDR接枝或CDR取代而產生。可以替換一免疫球蛋白鏈的一個、二個或全部CDR。例如,一特定抗體的所有CDR可以來自非人動物的至少一部分(例如小鼠,如表1所示的CDR),或者僅部分CDR被替換。只需保留使抗體與預定醣抗原結合(例如Globo H)所需的CDR (Morrison, S.L. (1985) Science, 229:1202-1207;Oi et al, (1986) BioTechniques, 4:214;美國專利號5,585,089、5,225,539、5,693,761及5,693,762;EP專利號519596;Jones et al, (1986) Nature, 321:552-525;Verhoeyan et al, (1988) Science, 239:1534;Beidler et al, (1988) J.Immunol., 141:4053-4060)。
本發明亦涵蓋包含一或二個如本文所揭露的可變區的抗體或其抗原結合部分,其他區域由來自至少一個不同物種的序列所取代,該不同物種包括但不限於人、兔、綿羊、狗、貓、牛、馬、山羊、 豬、猴、猿、大猩猩、黑猩猩、鴨、鵝、雞、兩棲動物、爬蟲類及其他動物。
一嵌合抗體係指其中不同部分來自於不同動物物種的分子。例如,抗體可包含來自小鼠單株抗體的一可變區及一人類免疫球蛋白的恆定區。嵌合抗體可以由重組DNA技術生產(Morrisonet al.
, (1984) PNAS, 81:6851-6855)。例如,利用限制酶切割編碼鼠類(或其他物種)抗體分子的基因,以移除編碼鼠類Fc的區域,然後將編碼人類Fc恆定區的基因的等效部分替換到重組DNA分子中。嵌合抗體也可以藉由重組DNA技術創建,其中編碼鼠類可變區的DNA可以與編碼人類恆定區的DNA連接(Betteret al.
, (1988) Science, 240:1041-1043;Liuet al.
, (1987) PNAS, 84:3439-3443;Liuet al.
, (1987) J. Immunol., 139:3521-3526;Sunet al.
, (1987) PNAS,84:214-218;Nishimuraet al.
, (1987) Canc. Res., 47:999-1005;Woodet al.
, (1985) Nature, 314:446-449;Shawet al.
, (1988) J. Natl. Cancer Inst., 80:1553-1559);國際專利公開號WO1987002671及WO 86/01533;歐洲專利申請號184,187、171,496、125,023、及173,494;美國專利號4,816,567)。
該抗體可以是全長的,或者包含具備一抗原結合部分的一抗體片段(或數片段),包括但不限於抗原結合片段(Fab)、F(ab')2
、Fab'、F(ab)'、可變區片段(Fv)、單鏈Fv(scFv)、二價scFv(bi-scFv)、三價scFv(tri-scFv)、Fd、dAb片段(Wardet al.
, (1989) Nature, 341:544-546)、一分離的CDR、二價抗體(diabodies)、三價抗體(triabodies)、四價抗體(tetrabodies)、線性抗體、單鏈抗體分子以及由複數抗體片段形成的多特異性抗體。本發明亦涵蓋利用重組方法或合成的連接子(linker)連接抗體片段所產生的單鏈抗體(Birdet al.
, (1988) Science, 242:423-426;Hustonet al.
, (1988) PNAS, 85:5879-5883)。
本發明的抗體或其抗原結合部分可為單特異性、雙特異性或多特異性。多特異性或雙特異性抗體或其片段可以對一種目標醣類(例如Globo H)的不同表位(epitope)具有特異性,或者可以包含對一種以上目標醣類具有特異性的抗原結合區(例如,對Globo H、SSEA-3及SSEA-4具有特異性的抗原結合區)。 在一實施例中,一多特異性抗體或其抗原結合部分包含至少二個不同的可變區,其中每個可變區能夠特異性地結合一單獨的醣抗原或同一醣抗原上的不同表位(Tuttet al.
, (1991) J. Immunol. 147:60-69;Kuferet al.
, (2004) Trends Biotechnol. 22:238-244)。本文之抗體可與另一功能分子,例如另一胜肽或蛋白質,連接或共同表現。例如,一抗體或其片段可與一個或多個其他分子實體,例如另一抗體或抗體片段在功能上連接(例如透過化學偶聯、基因融合、非共價結合或其他方式),以產生具有第二結合特異性的一雙特異性抗體或一多特異性抗體。
本發明涵蓋抗體的所有同型(isotypes),包括免疫球蛋白G (IgG,例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、免疫球蛋白M (IgM)、免疫球蛋白A (IgA,IgA1、IgA2)、免疫球蛋白D (IgD)或免疫球蛋白E (IgE)(所有類別及子類都包含在本發明中)。抗體或其抗原結合部分可以是哺乳動物(如小鼠、人類)抗體或其抗原結合部分。抗體的輕鏈可以是κ (kappa)或λ (lambda)型。
本文之抗體或其抗原結合部分的可變區域可以來自非人類或人類來源。該抗體或其抗原結合部分的框架可以是人的、人源化的、非人的(例如,經過修飾以降低在人類的抗原性的鼠類框架)或是一合成框架(例如,一共有序列(consensus sequence))。
在一實施例中,本文之抗體或其抗原結合部分包含至少一個重鏈可變區及/或至少一個輕鏈可變區。
本文之抗體或其抗原結合部分特異性地與SSEA-3結合,其解離常數(KD
)為小於約10E-7 M、小於約10E-8 M、小於約10E-9 M、小於約10E-10 M、小於約10E-11 M或小於約10E-12 M。在一實施例中,該抗體或其抗體結合部分的解離常數(KD
)為1~10×10E-9或更小。 在另一實施例中,該KD
係由表面電漿共振(surface plasmon resonance)測定。
抗體具有的重鏈可變區及輕鏈可變區與1E12b細胞株所產生抗體的可變重鏈區及可變輕鏈區的同一性(identity)為至少約70%、 至少約75%、至少約80%、至少約81%、至少約82%、至少約83%、至少約84%、至少約85%、至少約86%、 至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%,並且可以與一醣抗原(例如SSEA-3)結合。同一性可以存在胺基酸序列或核苷酸序列中。
在一些實施例中,該抗體或其抗原結合部分包含例如由1E12b融合瘤所產生抗體的重鏈可變區及/或輕鏈可變區,如表1所示。
在相關的實施例中,該抗體或其抗原結合部分包含例如由1E12b融合瘤所產生抗體的重鏈可標區的CDR及/或輕鏈可變區的CDR。來自這些融合瘤株的重鏈可變區及輕鏈可變區的CDR如表1所示。
表1:SEQ ID NO. 1-10
融合瘤株 | 鏈區域 | 序列 | SEQ ID No. |
1E12b | 重鏈可變區 (VH) | 核酸序列 GAGGTGAAGCTTCTCGAGTCTGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTATATACTGGATGAGTTGGGTCCGGCAGGCTCCAGGGAAAGGGCTAGAATGGATTGGAGAAATTAATCAACATAGCAGTACGATAAACTATACGCCATCTCTAAAGGATAAGTTCATCATCTCCAGAGACAACGCCAAAAATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAAAGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTGCAAGACGGTATGGTAACTACGCAGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA | 1 |
1E12b | 輕鏈可變區 (VL) | 核酸序列 GAAAATGTGCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAAAAGGTCACCATGACCTGCAGGGCCAGCTCAAGTGTAAGTTCCAATTACTTGCACTGGTACCAGCAGAAGTCAGGTGCCTCCCCCAAACTCTGGATTTATAGCACATCCAACTTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGTGTGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCACCAGTGCAGTACTTACCCACTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAACTGAAACGG | 2 |
1E12b | 重鏈可變區 (VH) | 胺基酸序列 EVKLLESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSIYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINQHSSTINYTPSLKDKFIISRDNAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCARRYGNYADYFDYWGQGTTLTVSS | 3 |
1E12b | 輕鏈可變區 (VL) | 胺基酸序列 ENVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCRASSSVSSNYLHWYQQKSGASPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSVEAEDAATYYCHQCSTYPLTFGAGTKLELKR | 4 |
1E12b | 重鏈CDR1 | 胺基酸序列 GFDFSIYWMS | 5 |
1E12b | 重鏈CDR2 | 胺基酸序列 EINQHSSTINYTPS | 6 |
1E12b | 重鏈CDR3 | 胺基酸序列 RYGNYADYFDY | 7 |
1E12b | 輕鏈CDR1 | 胺基酸序列 RASSSVSSNYLHW | 8 |
1E12b | 輕鏈CDR2 | 胺基酸序列 STSNLAS | 9 |
1E12b | 輕鏈CDR3 | 胺基酸序列 CHQCSTYPL | 10 |
本發明亦涵蓋一核酸,其編碼本文之特異性地與醣抗原結合的抗體或其抗原結合部分。在一實施例中,該醣抗原是SSEA-3。在另一實施例中,該醣抗原是SSEA-4。在另一實施例中,該醣抗原是Globo H。該核酸可在細胞中表現以產生本文之抗體或其抗原結合部分。
在某些實施例中,該抗體或其抗原結合部分包含一重鏈可變區,該重鏈可變區所具有一胺基酸序列與SEQ ID NO: 3 (1E12b融合瘤)的同一性為至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約81%、至少約82%、至少約83%、至少約84%、至少約85%、至少約86%、至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%。
在某些實施例中,該抗體或其抗原結合部分包含一輕鏈可變區,該輕鏈可變區所具有一胺基酸序列與SEQ ID NO: 4 (1E12b融合瘤)的同一性為至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約81%、至少約82%、至少約83%、至少約84%、至少約85%、至少約86%、至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%。
在某些實施例中,該抗體或其抗原結合部分的一重鏈可變區所具有一胺基酸序列與SEQ ID NO: 3的同一性為至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約81%、至少約82%、至少約83%、至少約84%、至少約85%、至少約86%、至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%,並且該抗體或其抗原結合部分的一輕鏈可變區包含一胺基酸序列,該胺基酸序列與SEQ ID NO: 4的同一性為至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約81%、至少約82%、至少約83%、至少約84%、至少約85%、至少約86%、至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%。
該抗體或其抗原結合部分的一重鏈可變區可包含一個、二個、三個或更多CDR,並且包含與1E12b融合瘤所產生抗體的重鏈可變區的CDR(SEQ ID NOs. 5、6及7)有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約99%、約70%、約75%、約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%的同一性的胺基酸序列。
該抗體或其抗原結合部分的一輕鏈可變區可包含一個、二個、三個或更多CDR,並且包含與1E12b融合瘤所產生抗體的輕鏈可變區的CDR(SEQ ID NOs. 8、9及10)有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約99%、約70%、約75%、約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%的同一性的胺基酸序列。
該抗體或其抗原結合部分的一重鏈可變區可包含一個、二個、三個或更多CDR,並且包含與1E12b融合瘤所產生抗體的重鏈可變區的CDR(SEQ ID NOs. 5、6及7)有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約99%、約70%、約75%、約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%的同一性的胺基酸序列,並且該抗體或其抗原結合部分的一輕鏈可變區可包含一個、二個、三個或更多CDR,並且包含與1E12b融合瘤所產生抗體的輕鏈可變區的CDR(SEQ ID NOs. 8、9及10)有至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約99%、約70%、約75%、約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%的同一性的胺基酸序列。
在某些實施例中,與表1中的可變區相對應的可變區具有序列變化。例如,在一重鏈可變區中,1、2、3、4、5、6、7或8個殘基,或者少於40%、少於約30%、約25%、約20%、約15%、約10%、約9%、約8%、約7%、約6%、約5%、約4%、約3%、約2%或約1%的胺基酸殘基被取代或剔除,但該重鏈可變區保留基本上相同的免疫學特性,包括但不限於與一醣抗原之結合。
在某些實施例中,與表1中的CDR相對應的CDR具有序列變化。例如,在可結合一醣抗原的抗體(或其抗原結合部分)中,CDR中的1、2、3、4、5、6、7或8個殘基,或者CDR中少於20%、少於30%或少於約40%的總殘基被取代或剔除。
該抗體或該抗原結合部分可以是胜肽。 此種胜肽可包含表現出生物活性的胜肽的變體、類似物、異種同源物(orthologs)、同源物(homologs)及衍生物,該生物活性例如與一醣抗原之結合。該胜肽可以包含一胺基酸的一個或多個類似物(包括,例如,非天然存在的胺基酸、僅在不相關的生物系統中天然存在的胺基酸、來自哺乳動物系統的經修飾的胺基酸等)、具有取代鍵結的胜肽以及本技術領域中已知的其他修飾。
具有被取代、剔除或添加的特定胺基酸的抗體或其抗原結合部分也在本發明的範圍內。在一個例示性實施例中,這些變異不會對胜肽的生物性質,例如結合親和力造成實質性影響。在另一例示性實施例中,抗體可以在框架區中具有胺基酸取代,例如改善抗體與抗原的結合親和力。在另一例示性實施例中,少數選定的受體框架(acceptor framework)殘基可以被相應的供體胺基酸取代。供體框架(donor framework)可以是一成熟的或生殖的人類抗體框架序列或一共有序列。有關如何進行表型沉默胺基酸取代的指引見於Bowieet al
., (1990) Science, 247:1306-1310;Cunninghamet al
., (1989) Science, 244:1081-1085;Ausubel (編著), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (1994);T. Maniatis, E. F. Fritsch and J. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989);Pearson, (1994) Methods Mol. Biol. 243:307-31;Gonnetet al
., (1992) Science 256:1443-45。
該抗體或其抗原結合部分可以衍生而得或與另一功能分子連接。例如,一抗體可以與一個或多個其他分子實體在功能上連接(透過化學偶聯、基因融合、非共價交互作用),該其他分子實體例如另一抗體、一可檢測物、一細胞毒劑、一藥劑、可中介與另一分子之連結的一蛋白質或一胜肽(例如一鏈親和素(streptavidin)核心區或一聚組胺酸標記(polyhistidine tag))、胺基酸連接子、訊號序列(signal sequences)、免疫原載體、或可用於蛋白質純化的配體,如麩胱甘肽-S-轉移酶(glutathione-S-transferase)、組胺酸標記(histidine tag)及葡萄球菌蛋白A(staphylococcal protein A)。一種衍生蛋白質係透過交聯二種或更多蛋白質(相同類型或不同類型)而產生。適合的交聯劑包括異質雙官能基交聯劑,其具有被一適當間隔物分開的二種不同反應性基團(例如m-馬來醯亞胺苯甲酸-N-羥基琥珀醯亞胺酯(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)),或同質雙官能基交聯劑(例如二琥珀醯亞胺新二酸酯(disuccinimidyl suberate))。這類連接子可由Pierce化學公司(Pierce Chemical Company,Rockford,Ill.)獲得。可用於衍生(或標記)蛋白質的可檢測劑包括螢光化合物、各種酶、輔基(prosthetic groups)、發光材料、生物發光材料以及放射性材料。非限制性的例示性螢光可檢測劑包括螢光素(fluorescein)、異硫氰酸螢光素(fluorescein isothiocyanate)、玫瑰紅(rhodamine)及藻紅素(phycoerythrin)。亦可使用可檢測酶衍生而得一蛋白質或一抗體,該可檢測酶例如鹼性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)、山葵過氧化物酶(horseradish peroxidase,HPR)、β-半乳糖苷酶(beta-galactosidase)、乙醯膽鹼酯酶(acetylcholinesterase)、葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)等。蛋白質亦可用輔基(例如鏈親和素/生物素(biotin)及卵白素(avidin)/生物素衍生而得。
本發明亦涵蓋編碼本文之抗體或其抗原結合部分的有功能的變體的核酸。該些核酸分子可以在中等嚴格、高度嚴格或極高嚴格條件下與編碼本文之抗體或其抗原結合部分的任何核酸雜交。進行雜交反應的指引可見於Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. 6.3.1-6.3.6, 1989,該文獻透過引用併入本文。本文所指的特定雜交條件如下:1)中等嚴格雜交條件:6X SSC,約45°C,然後在0.2X SSC、0.1% SDS中於60°C進行一次或多次清洗;2)高度嚴格雜交條件:6 X SSC,約45°C,然後在0.2X SSC、0.1% SDS中於65°C進行一次或多次清洗;及3)極高嚴格雜交條件:0.5 M磷酸鈉,7% SDS,65°C,然後在0.2X SSC、1% SDS中於65°C進行一次或多次清洗。
一編碼本文之抗體或其抗原結合部分的核酸可以被導入能在適合的表現系統中表現的一表現載體,其後,對表現出的抗體或其抗原結合部分進行分離或純化。任選地,一編碼本文之抗體或其抗原結合部分的核酸能在無細胞的轉譯系統中被轉譯(美國專利號4,816,567;Queenet al.
, (1989) PNAS, 86:10029-10033 (1989)。
本文之抗體或其抗原結合部分可產自編碼所需抗體的輕鏈及重鏈(或其部分)的DNA所轉形的宿主細胞。可以使用標準技術從該些培養上清液及/或細胞中分離及純化抗體。舉例而言,宿主細胞可以用編碼一抗體的輕鏈、重鏈或該二者的DNA進行轉形。重組DNA技術亦可用於移除編碼輕鏈及重鏈之其一或二者的非結合所必須(例如恆定區)的DNA的部分或全部。
本文之核酸能被表現於各種適合的細胞中,包括原核細胞及真核細胞,例如細菌細胞(如大腸桿菌)、酵母菌細胞、植物細胞、昆蟲細胞及哺乳動物細胞。許多哺乳動物細胞株在本技術領域中是已知的,包括可由美國典型培養物保存中心(ATCC)獲得的永生細胞株。細胞的非限制性實例包括起源自哺乳動物或具有類似哺乳動物特徵的所有細胞株,包括但不限於下列細胞的親代細胞、衍生株及/或改造變體:猴腎細胞(COS,例如COS-1、COS-7)、HEK293細胞、小倉鼠腎(baby hamster kidney,BHK,例如BHK21)細胞、中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)細胞、NS0細胞、PerC6細胞、BSC-1細胞、人肝癌細胞(例如Hep G2)、SP2/0細胞、HeLa細胞、馬-達二氏牛腎(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)細胞、骨髓瘤細胞和淋巴瘤細胞。改造變體包括,例如聚糖型經過修飾及/或特定位點整合的位點衍生株。
本發明亦提供包含本文所述核酸的細胞。該細胞可為融合瘤或轉染體,例如名為1E12b的融合瘤。
或者,本文之抗體或其抗原結合部分可透過本技術領域熟知的固相程序合成。Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach by E. Atherton and R. C. Sheppard, published by IRL at Oxford University Press (1989)。Methods in Molecular Biology, Vol. 35: Peptide Synthesis Protocols (ed. M. W. Pennington and B. M. Dunn), chapter 7。Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Ed., Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984)。G. Barany and R. B. Merrifield, The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, editors E. Gross and J. Meienhofer, Vol. 1 and Vol. 2, Academic Press, New York, (1980), pp. 3-254。M. Bodansky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin (1984)。
本發明提供了特異性結合一醣抗原(例如SSEA-3)的抗體或其抗原結合部分的製備方法。例如,利用包含一醣抗原(例如SSEA-3)的一組成物免疫非人類動物,然後從該動物中分離出一特異性抗體。該方法可以進一步包含評估該抗體與一醣抗原的結合。
眾多醣抗原中的任一種,特別是SSEA-3,皆可用於實現本發明。 醣抗原的例子包括但不限於Globo抗原如Globo H、階段特異性胚胎抗原3 (SSEA-3,亦稱為Gb5)、階段特異性胚胎抗原4 (SSEA-4)、Gb-4及Gb-3,路易士(Lewis)抗原如sLex
、Lex
、sLea
、Lea
及Ley
,多醣類抗原如聚唾液酸(PSA)、sTn(c)及Tn(c),湯姆森-佛里登(Thomsen-Friedenreich)抗原(TF(c)),神經節苷脂類(ganglioside)抗原如GD1、GD2、GD3、岩藻糖GM1(fucosyl GM1)、GM1、GM2、GM3、GD1α及GM2,硫脂抗原(sulfatide antigen)如6Gal-HSO3
-SiaLex及6GluNAc-HSO3
-SiaLex。其他醣抗原包括但不限於α-半乳糖(α-Galactose)、α-甘露糖-6-磷酸(α-Man-6-phosphate)、α-L-鼠李糖(α-L-Rhamnose)、α-N-乙醯半乳糖胺(Tn) [(α-GalNAc(Tn)]、α-NeuAc-OCH2
C6
H4
-p-NHCOOCH2
、岩藻糖α1-2半乳糖ß1-4乙醯半乳糖胺β (Fucα1-2Galβ1-4GalNAcβ,H3型)、NeuAcα2-8NeuAcα、(NeuAcα2-8)2
聚唾液酸、NeuAca2-6Galb、NeuAcb2-6Gala(STn)、Gala1-3Galb1-4GlaNAcb(NeuAca2-8)3
、GalNAcα1-3(Fucα1-2)Galβ (血型A)、Galα1-3(Fucα1-2)Galβ (血型B)、6Gal-HSO3
-SiaLex、6GluNAc-HSO3
-SiaLex及α2-6唾液酸二天線型N-聚糖(α2-6 sialylated diantennary N-glycans)。
在一實施例中,如圖3所示,抗SSEA3抗體或其抗原結合部分能夠高選擇性地與其他醣抗原交叉反應或結合。該醣抗原的非限制性實例為Globo H、SSEA-4及Lewis抗原。
在一實施例中,本發明提供了一種融合瘤的製備方法,該融合瘤表現可與一醣抗原(如SSEA-3)特異性結合的一抗體。該方法包含以下步驟:(a)利用包含一醣抗原(如SSEA-3)的一組成物對一動物進行免疫;(b)自該動物分離脾臟細胞;(c)從該脾臟細胞生成融合瘤;及(d)篩選一融合瘤,該融合瘤產生特異性結合SSEA-3的一抗體。Kohler and Milstein, Nature, 256: 495, 1975。Harlow, E. and Lane, D. Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988。
在一實施例中,一醣抗原被用於對小鼠進行皮下免疫。可以給予一次或多次增強注射(boost)或可不給予。可以利用例如酵素連結免疫吸附分析法或流式細胞儀監測血漿中的抗體效價(titer)。具有足夠效價的抗醣抗原抗體的小鼠被用於融合。小鼠在犧牲及摘除脾臟前3天可以用抗原進行增強注射或可不進行。將小鼠脾臟細胞分離,並且利用聚乙二醇(PEG)將其與小鼠骨髓瘤細胞株融合。其後,對所生成融合瘤的抗原特異性抗體的產生進行篩選。該細胞被塗布並培養於選擇性培養基。接著,用酵素連結免疫吸附分析法篩選來自各孔的上清液,以檢測人類抗醣抗原單株抗體。對分泌抗體的融合瘤再次進行塗布及篩選,若其抗醣抗原抗體仍呈現陽性,可藉由有限稀釋法進行次選殖。
可使用佐劑以增加一種或多種醣抗原的免疫原性。 佐劑的非限制性實例包括磷酸鋁、氫氧化鋁、MF59 (4.3% w/v角鯊烯(squalene)、0.5% w/v聚山梨醇酯80 (Tween 80)、0.5% w/v山梨醇酐三油酸酯(sorbitan trioleate,Span 85)、含CpG的核酸、QS21(皂素佐劑)、α-半乳糖基-神經醯胺(α-galactosyl-ceramides)或其合成類似物(例如C34,見US 8,268,969)、MPL(monophosphoryl lipid A,單磷酸脂質A)、3DMPL(3-O-去乙醯基MPL)、阿奎拉(Aquilla)萃取物、ISCOMS (Sjolanderet al
., (1998) J. Leukocyte Biol. 64:713;國際專利公開號WO1990003184;WO1996011711;WO2000048630;WO1998036772;WO2000041720;WO2006134423及WO2007026190)、LT/CT突變體、聚(D,L-乳酸-甘醇酸)(poly(D,L-lactide-co-glycolide),PLG)微粒、Quil A、介白素、弗氏佐劑(Freund’s)、N-乙醯胞壁醯基-L-蘇胺醯基-D-異麩醯胺酸(N-acetyl-muramyl-L-threonyl-D-isoglutamine,thr-MDP)、N-乙醯正胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺酸(N-acetyl-nor-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine,CGP 11637,簡稱nor-MDP)、N-乙醯胞壁醯基-L-丙胺醯基-D-異麩醯胺醯基-L-丙胺酸-2-(1'-2'-二棕櫚醯基-sn-甘油-3-羥基磷醯氧基)-乙胺(N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-2-(1'-2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyphosphoryloxy)-ethylamine,CGP 19835A,簡稱MTP-PE)、以及RIBI,RIBI係在2%角鯊烯/Tween 80乳劑中含有從細菌萃取的三種成分,即單磷酸脂質A、海藻糖二黴菌酸酯及細胞壁骨架(MPL+TDM +CWS)。
免疫動物可為被施予免疫原時能夠產生恢復性抗體的任何動物,例如但不限於兔、小鼠、大鼠、倉鼠、山羊、馬、猴子、狒狒及人類。 一方面,宿主是基因轉殖的且能產生人類抗體,例如,表現人免疫球蛋白基因片段的小鼠(美國專利號8,236,311;7,625,559及5,770,429;Lonberget al
., (1994) Nature 368(6474):856-859;Lonberg, N., Handbook of Experimental Pharmacology 113:49-101 (1994);Lonberg, N. and Huszar, D., (1995) Intern. Rev. Immunol., 13:65-93;Harding, F. and Lonberg, N., (1995) Ann. N.Y. Acad. Sci., 764:536-546)。
宿主經過免疫並產生抗體後,對該抗體進行檢測以確認它們對目標抗原的特異性,並測定它們對其他抗原是否表現出任何交叉反應。進行這些檢測的一種方法是如美國專利公開號2004/0126829所述的血清篩檢法。透過多種已知技術可以識別抗醣抗原抗體與醣類的結合特性。例如,在酵素連結免疫吸附分析法試驗中,用溶於磷酸緩衝鹽溶液(PBS)的毒素或類毒素抗原塗覆微孔盤,然後用稀釋於PBS中的不相關蛋白(如牛血清白蛋白(BSA))阻斷該微孔盤。將毒素免疫小鼠的血漿稀釋液加入各孔並加以培養。然後,清洗該盤,並使該盤與結合酵素(如鹼性磷酸酶)的二級抗體一同培養。該盤經清洗後,利用酵素受質(如ABTS)呈色,並在特定吸光值(OD值)下分析。在其他實施例中,為了測定選定的單株抗體是否與目標醣抗原或表位結合,可以用生物素修飾該抗體,然後用鏈親和素標記的探針進行檢測。抗醣抗原抗體可以通過西方轉印法檢測與醣類的反應性。
然後,可以對產生與醣抗原結合(最好是具高親和力)的抗體的融合瘤進行次選殖及進一步鑒定。來自各融合瘤且保留了母細胞反應性(藉由酵素連結免疫吸附分析法)的一株可被選擇用於製作細胞庫及用於抗體純化。
本文揭露的抗體或其抗原結合片段、變體或衍生物也可以用它們與一抗原的結合親和力來描述或指定。一抗體對一醣抗原的親和力可以用任何適合的方法進行實驗測定(參見例如Berzofskyet al.
, “Antibody-Antigen Interactions,” In Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, N.Y. (1984);Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, N.Y. (1992); and methods described herein;以及本文所述的方法)。若在不同條件下(例如鹽濃度、pH值)測量,測得的特定抗體-醣抗原交互作用的親和力會有變化。因此,親和力及其他抗原結合參數(如KD
、Ka
、Kd
)的測量最好用抗體與抗原的標準溶液及一標準緩衝液進行。
本文之抗體或其抗原結合部分具有體外與活體的治療、預防及/或診斷用途。舉例而言,該些抗體可被施用於培養的細胞,例如培養於體外試管內(in vitro
)或離體(ex vivo
)的環境下,或以例如活體內的方式施予一個體,以便治療、抑制、防止復發及/或診斷癌症。
該抗體或其抗原結合部分可用在培養的細胞,例如培養於體外試管內或離體的環境下。舉例而言,可以在體外試管內的環境將細胞培養於培養基中,並使細胞接觸抗SSEA3抗體或其片段。該方法可在一個體內的細胞上進行,作為活體內(例如,治療或預防)方案的一部分。在活體內的實施例中,該接觸步驟係在一個體內執行,並且包含在允許抗體或其部分與該個體中一個或多個癌細胞(例如乳癌細胞)上表現的醣抗原(例如SSEA-3)結合的條件下,向該個體施用一抗毒素抗體或其部分。
該抗體或其抗原結合部分可以單獨施用或與另一治療劑組合施用,該另一治療劑例如一第二單株或多株抗體或其抗原結合部分或一化學治療劑。該組合產品可以是二種化合物的混合物,或者可以將它們共價連接。在一個例子中,特異性結合Globo H的抗體或其抗原結合部分係與特異性結合VEGF的抗體(單株或多株)或其抗原結合部分相結合。在另一個例子中,該第二藥劑係為一化學治療劑(例如環磷醯胺(cyclophosphamide)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)或放線菌素D (actinomycin-D))。該抗體亦可與一癌症疫苗組合施用,該癌症疫苗例如與白喉毒素結合的Globo H以及一皂素佐劑。抑制癌細胞的方法
本發明亦提供體外試管內、離體、或活體內抑制細胞生長的方法,其中該細胞如癌細胞係與有效量的本文所述抗體或其抗原結合部分接觸。病理細胞或組織如增殖性細胞或組織之處理可經由使有效量的本發明之抗體或其抗原結合部分與該細胞或組織接觸。該細胞,如癌細胞,可以是初代癌細胞,或是可由組織庫如美國典型培養物保存中心(ATCC)獲得的經培養的細胞。該病理細胞可以是表現SSEA-3的癌症細胞、膠質瘤細胞、腦膜瘤細胞、垂體腺瘤細胞、或是由全身性癌症、肺癌、***癌、乳癌、造血癌或卵巢癌轉移的中樞神經系統轉移癌細胞。該細胞可以來自一脊椎動物,較佳為一哺乳動物,更佳為人類(美國專利公開號20040087651; Balassianoet al
., (2002) Intern. J. Mol. Med. 10:785-788;Thorne,et al
., (2004) Neuroscience 127:481-496;Fernandes,et al
., (2005) Oncology Reports 13:943-947;Da Fonseca,et al
., (2008) Surgical Neurology 70:259267;Da Fonseca,et al
., (2008) Arch. Immunol. Ther. Exp. 56:267-276;Hashizume,et al
., (2008) Neuroncology 10:112-120)。 在一實施例中,該癌症是表現Globo H的癌症。在另一實施例中,該癌症是表現SSEA-3的癌症。在另一實施例中,該癌症是表現SSEA-4的癌症。表現Globo H的癌症、表現SSEA-3的癌症及表現SSEA-4的癌症包括但不限於乳癌、肺癌、***癌、胰臟癌、胃癌、卵巢癌及子宮內膜癌、結腸癌、肝癌、鼻咽癌、皮膚癌、口腔癌、腎癌、腦癌、子宮頸癌及膀胱癌。
本文之抗體或其抗原結合部分的體外功效可使用本技術領域熟知的方法來測定。例如,可透過MTT [3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物](3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)細胞毒性試驗研究該抗體或其抗原結合部分的細胞毒性。MTT試驗的原理是具代謝活性細胞吸收MTT(一種四唑鎓鹽),使其在細胞中代謝為可被光譜讀取的藍色甲䐶(formazon)產物。J. of Immunological Methods 65: 55 63, 1983。本文之抗體或其抗原結合部分的細胞毒性可透過細胞群落形成試驗來研究。 結合Globo H抗原的功能試驗可藉由酵素連結免疫吸附分析法進行。該抗體或其抗原結合部分對細胞週期的阻斷可透過碘化丙啶(propidium iodide,PI)標準染色法及流式細胞儀來研究。侵襲抑制可透過博登室(Boyden chambers)進行研究。在此種試驗中,一層重建的基底膜,即基質膠(Matrigel),被塗覆在趨化過濾器上以用作細胞在博登室中遷移的障礙。只有具有侵襲能力的細胞才能穿過基質膠屏障。其他試驗包括但不限於細胞存活試驗、細胞凋亡試驗、及形態學試驗。
亦可使用小鼠模型進行體內試驗。參見例如B. Teicher, Tumor Models for Efficacy Determination. Mol Cancer Ther 2006;5:2435-2443。醫藥組成物
在一實施例中,本發明提供包含本文所述抗體或其抗原結合部分以及一藥學上可接受的載體的醫藥組成物。在另一實施例中,該醫藥組成物包含一分離核酸,其編碼本文之抗體或其抗原結合部分,以及一藥學上可接受的載體。藥學上可接受的載體包括生理上相容的任何及所有溶劑、分散介質、等滲透劑及吸收延遲劑等。在一實施例中,該組成物能有效地抑制一個體內的癌細胞。
本文之醫藥組成物的施用途徑包括但不限於靜脈內、肌肉內、鼻內、皮下(subcutaneous)、口服、局部、皮內(intradermal)、經皮、真皮下(subdermal)、腸外、直腸、脊椎或表皮給藥。
本發明的醫藥組成物可被製成注射劑,可以是液體溶液或懸浮液或在注射前適合溶解或懸浮於液體載體的固體形式。該醫藥組成物亦可被製成固體形式、被乳化或活性成分被包埋於脂質體載體或其他顆粒載體中以用於持續給藥。例如,該醫藥組成物可以是以下形式:油乳劑、油包水乳劑、水包油包水乳劑、位置特異性乳劑、常駐乳劑、黏性乳劑、微乳劑、奈米乳劑、脂質體、微粒子、微球、奈米球、奈米粒子及各種天然或合成聚合物,例如不可吸收的非滲透性聚合物,如乙烯-乙酸乙烯酯共聚物及Hytrel®
共聚物,可膨脹聚合物,如水凝膠,或可吸收的聚合物,如膠原蛋白及某些聚酸或聚酯,如用於製造可吸收縫合線的聚酸或聚酯,使該醫藥組成物得以持續釋放。
本文之抗體或其抗原結合部分被配製成施加於一哺乳動物個體的醫藥組成物。該醫藥組成物係單獨施用,及/或與一藥學上可接受的載體(vehicle)、賦形劑或載體(carrier)混合施用。舉例而言,適合的載體為水、生理鹽水、右旋糖、甘油、乙醇或類似物,及其組合。 此外,該載體可以含有少量的輔助性物質,例如潤濕劑或乳化劑、pH緩衝劑或佐劑。藥學上可接受的載體可以含有一生理學上可接受的化合物,其作用是例如穩定、或增加或降低本發明之醫藥組成物的吸收率或清除率。舉例而言,生理上可接受的化合物可以包括碳水化合物,如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖,抗氧化劑,如抗壞血酸或麩胱甘肽,螯合劑,低分子量蛋白質,清潔劑,脂質體載體,或賦形劑或其他穩定劑及/或緩衝劑。其他生理學上可接受的化合物包括潤濕劑、乳化劑、分散劑或防腐劑。參見例如第21版的Remington’s Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (“Remington’s”)。本發明之醫藥組成物亦可包含輔助性物質,例如藥理劑、細胞激素或其他生物反應調節劑。
此外,該醫藥組成物可以配製成中性或鹽形式的醫藥組成物。 藥學上可接受的鹽包括酸加成鹽(用活性多肽的游離胺基一起形成),其係以無機酸,如鹽酸或磷酸,或有機酸如乙酸、草酸、酒石酸、苦杏仁酸等形成。由游離羧基形成的鹽類亦可衍生自無機鹼,例如鈉、鉀、銨、鈣或鐵的氫氧化物,以及有機鹼,例如異丙胺、三甲胺、2-乙胺乙醇、組胺酸、普魯卡因(procaine)等。
製備該些劑型的實際方法對於本領域技術人員而言係已知的或將是顯而易見。參見例如Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania,第21版。
醫藥組成物可以依據個體的年齡、體重及狀況,所使用的特定組成物,施用途徑,及該醫藥組成物是用於預防還是治療目的等,在適當時間區間按時間表以單劑量治療或多劑量治療的方式施用。例如,在一實施例中,本發明之醫藥組成物之施用係每月一次、每月二次、每月三次、隔週一次(qow)、每週一次(qw)、每週二次(biw)、每週三次(tiw)、每週四次、每週五次、每週六次、隔天一次(qod)、每天(qd)、每天二次(qid)或每天三次(tid)。
基於本發明之抗體的施用期間,例如,施用醫藥組成物的時間段區間,會隨眾多因素之任一者而變化,例如個體反應等。舉例而言,該醫藥組成物可以在約一秒或多秒至一小時或多小時、一天至約一週、約二週至約四週、約一個月至約二個月、約二個月至約四個月、約四個月至約六個月、約六個月至約八個月、約八個月至約1年、約1年至約2年、或約2年至約4年或更長時間的時間區間內施用。
為了便於給藥及劑量的均一性,可使用劑量單位形式的口服或腸外醫藥組成物。本文所用的劑量單位形式係指適合作為受治療個體的單位劑量的物理上分離的單位;每個單位含有一預定量的活性化合物,該量經計算可與所需藥物載體產生所需的治療效果。
從細胞培養試驗及動物研究中獲得的資料可用於訂定用於人類的劑量範圍。在一實施例中,這類化合物的劑量係在一血中濃度範圍(包括ED50
)內,且有很少毒性或沒有毒性。該劑量依據所採用的劑型及使用的施用途徑可在此範圍內變化。在另一實施例中,治療有效劑量可以從細胞培養試驗中初步估計。可以在動物模型中訂定劑量,以取得包含IC50
(即,達到症狀的半數最大抑制的受試化合物濃度)的循環血漿濃度範圍,該IC50
係由細胞培養測定 (Sonderstrup, Springer, Sem, (2003) Immunopathol. 25:35-45;Nikulaet al.
, (2000) Inhal. Toxicol. 4(12)
:123-53)。
本發明之抗體或抗原結合部分的治療性或預防性有效量的例示性、非限制性範圍為約0.001至約60 mg/kg體重、約0.01至約30 mg/kg體重、約0.01至約25 mg/kg體重、約0.5至約25 mg/kg體重、約0.1至約20 mg/kg體重、約10至約20 mg/kg體重、約0. 75至約10 mg/kg體重、約1至約10 mg/kg體重、約2至約9 mg/kg體重、約1至約2 mg/kg體重、約3至約8 mg/kg體重、約4至約7 mg/kg體重、約5至約6 mg/kg體重、約8至約13 mg/kg體重、約8. 3至約12.5 mg/kg體重、約4至約6 mg/kg體重、約4.2至約6.3 mg/kg體重、約1.6至約2.5 mg/kg體重、約2至約3 mg/kg體重、或約10 mg/kg體重。
該醫藥組成物被配製成含有有效量的本文之抗體或其抗原結合部分,其中該量取決於要治療的動物及要治療的疾病。在一實施例中,本文之抗體或其抗原結合部分的施用劑量係約0.01 mg至約10 g、約0. 1 mg至約9 g、約1 mg至約8 g、約2 mg至約7 g、約3 mg至約6 g、約10 mg至約5 g、約20 mg至約1 g、約50 mg至約800 mg、約100 mg至約500 mg、約0.01 µg至約10 g、約0.05 µg至約1.5 mg、約10 µg至約1 mg蛋白質、約30 µg至約500 µg、約40 µg至約300 µg、約0.1 µg至約200 µg、約0.1 µg至約5 µg、約5 µg至約10 µg、約10 µg至約25 µg、約25 µg至約50 µg、約50 µg至約100 µg、約100 µg至約500 µg、約500 µg至約1 mg、約1 mg至約 2mg。針對任何特定個體的特定劑量取決於多種因素,包括特定多肽的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時間、給藥途徑、***率、藥物組合及接受治療的特定疾病的嚴重程度,並且可由本領域中具普通技術者未經過度實驗而決定。
本文之抗體、其抗原結合部分、醫藥組成物及方法可用於所有脊椎動物,例如哺乳動物及非哺乳動物,包括人、小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、狗、貓、牛、馬、山羊、綿羊、豬、猴、猿、大猩猩、黑猩猩、兔、鴨、鵝、雞、兩棲動物、爬蟲類及其他動物。
以下提供的實施本發明的特定方面的例子僅係用於說明目的,而非以任何方式限制本發明的範圍。實施例 實施例 1 融合瘤之 融合及篩選
進行典型的融合瘤融合。以0.2及2.0 µg SSEA3-KLH (Keyhole Limpet Hemocyanin,鑰孔蟲血藍蛋白)疫苗加上20 µg OBI-821皂素佐劑對Balb/c小鼠進行第一次免疫,並在第0、7、14、21、28、35、42及49天透過SC注射進行8次後續增強注射。在第10、17、24、31、38、45及52天進行出血測試,並檢測血清中的抗SSEA3抗體效價。發現有二隻小鼠產生了高效價(2560x)的抗SSEA3 IgG及IgM,將其用於產生融合瘤。依據Köhler及Milstein (KÖhler G. and Milstein C,1975)的方法流程,使用小鼠骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞融合。利用親和力酵素連結免疫吸附分析法對融合瘤上清液進行篩選,並以抗SSEA3 MC-631單株抗體(BioLegend,貨號 330302)作為陽性控制組。選取未經稀釋上清液的吸光值>背景值×2的融合瘤株。被選取者為1E12b融合瘤株。實施例 2 酵素連結免疫吸附分析法結合試驗
試劑
塗覆用抗原:將SSEA3-神經醯胺儲備粉末(台灣浩鼎生技股份有限公司)溶解於
-20°C的甲醇/CHCl3
溶液(甲醇:CHCl3
:H2
O = 50:8:25)。
一級抗體:血清樣品或大鼠的抗SSEA3 IgM抗體(BioLegend,貨號330302)。
二級抗體:
1. 山羊抗小鼠IgG-AP (Southern Biotech,貨號1030-04)
2. 山羊抗小鼠IgM-AP(Southern Biotech,貨號1020-04)
3. 山羊抗大鼠IgM-AP (Jackson Immuno Research,貨號112-055-075)。
阻斷緩衝液(Sigma,貨號B6429)。
受質溶液:用於酵素連結免疫吸附分析法的鹼性磷酸酶黃色(pNPP)液體受質系統(Sigma,貨號P7998)
終止溶液:鹼性磷酸酶終止溶液(Sigma,貨號A5852)
步驟試劑製備
1. 將溶於甲醇/CHCl3
溶液(甲醇:CHCl3
:H2
O = 50:8:25)中的SSEA3-神經醯胺粉末作為儲備液儲存於-20°C (SSEA3-神經醯胺儲備液的濃度標示在玻璃瓶上)。 其後,將該儲備液等分到其他玻璃瓶以供使用,並將其儲存在4°C冰箱。
2. 10倍阻斷緩衝液:將10倍阻斷緩衝液用二次蒸餾水(d.d.H2
O)稀釋至1倍使用。
3. 清洗緩衝液:在1L PBS中加入0.5 mL Tween 20以製備含0.05% Tween 20的PBS。
4. 二級抗體:依以下步驟製備最終濃度為0.3 mg/mL的抗體。用1.0 mL d.d.H2
O使抗體再水合化(rehydrate)。將1.0 mg甘油(ACS級或更高等級)加入2 mL微量離心管(Eppendorf),以達到微量離心管的1 mL刻度。將0.5 mL再水合化的抗體轉移到甘油中。混合均勻並將1.5 mL抗體轉移回含0.5 mL抗體的瓶子。混合均勻,等分,及儲存在-20±2°C冰箱。抗原塗覆
1. 96孔盤(96-well plate):將20 µg SSEA3-神經醯胺加入乙醇至共5 mL塗覆緩衝液,並輕輕混合(0.2 µg SSEA3-神經醯胺/孔×100孔盤 = 20 µg;50 µL/孔×100孔= 5 mL)。
2. 將50 μL的塗覆的SSEA3-神經醯胺吸移至冰上的各孔。標記,蓋上蓋子,並在室溫下反應隔夜。
3. 將100 μL阻斷緩衝液吸移至各孔,並在室溫(22~26°C)培養約0.5小時。
4. 準備一個96孔的「稀釋盤」,在頂部列的上方空白處標記樣品ID。
5. 將144μL的1x阻斷緩衝液吸移至一個微量離心管。
6. 將6 μL陽性控制組[抗SSEA3抗體(儲備液:0.5 mg/mL)]吸移至該微量離心管以生成1:25稀釋液。
7. 對於標準品將120 μL的1:25稀釋抗SSEA3抗體加入第2行的頂部孔。然後將180 μL阻斷緩衝液加入第2行的其餘孔洞,使第一行(column 1)空置以作為空白控制組。
8. 對於融合瘤株上清液樣品,將120 μL原始陽性細胞株上清液加入第3-12行的頂部孔。對於血清樣品,將4.8 μL血清樣品及115.2 μL阻斷緩衝液加入第3-12行的頂部以製備1:25稀釋的血清樣品。然後將60 μL阻斷緩衝液加入第3-12行的其餘孔洞。
9. 重複吸放(pipetting)以便混合均勻。
10. 將60 μL的稀釋抗SSEA3抗體及樣品從第1孔轉移至第2孔。
11. 重複吸放以便混合均勻。
12. 對於標準品第2行中的抗SSEA3抗體稀釋液如下所示:
第1孔 = 1:25 (20000 ng/mL)
第2孔 = 1:100 (5000 ng/mL)
第3孔 = 1:400 (1250 ng/mL)
第4孔 = 1:1600 (312.5 ng/mL)
第5孔 = 1:6400 (78.125 ng/mL)
第6孔 = 1:25600 (19.53 ng/mL)
第7孔 = 1:102400 (4.88 ng/mL)
第8孔 = 1:409600 (2.11 ng/mL)
抗SSEA3抗體:1:25 (四倍稀釋)
13. 對於融合瘤上清液樣品,製備稀釋液如下:
第1孔 = 1:1
第2孔 = 1:2
第3孔 = 1:4
第4孔 = 1:8
第5孔 = 1:16
第6孔 = 1:32
第7孔 = 1:64
第8孔 = 1:128
融合瘤株上清液:1:1 (2倍稀釋)
14. 對於血清樣品,製備稀釋液如下:
第1孔 = 1:25
第2孔 = 1:50
第3孔 = 1:100
第4孔 = 1:200
第5孔 = 1:400
第6孔 = 1:800
第7孔 = 1:1600
第8孔 = 1:3200
血清樣品:1:25 (2倍稀釋)樣品添加
在測試盤上添加一級抗體
1. 用阻斷緩衝液培養後,藉由抽吸移除阻斷溶液,並且用200 μL清洗緩衝液清洗各孔3次。
2. 用移液器將50 μL稀釋的陽性株上清液及抗SSEA3抗體從稀釋盤添加到測試盤的孔洞。
3. 為「測試盤」蓋上蓋子,加上標記,並在室溫下培養約1小時。
4. 該盤經過培養後,對所有孔進行吸取,其後用200 μL清洗緩衝液清洗所有孔三次。
在測試盤上添加二級抗體
5. 對於一個96孔盤:將25 μL二級抗體[針對標準品抗SSEA3抗體使用山羊抗大鼠IgM-AP,及針對融合瘤上清液使用山羊抗小鼠IgM或IgG-AP]加入4975 μL阻斷緩衝液(1:200),並輕輕混合(50 μL/孔×100孔盤 = 5 mL)。
6. 將50 μL二級抗體溶液吸移至各孔。蓋上蓋子,標記,並在室溫下反應約45分鐘。
7. 反應完成後,吸出所有孔中的二級抗體溶液,並且用200 μL清洗緩衝液清洗所有孔四次。
在測試盤上添加受質溶液。
8. 將100 μL受質溶液吸移至各孔,並在37±2℃下反應20分鐘。
9. 添加50 μL終止溶液以終止反應,混合均勻,然後用ELISA讀盤儀在405 nm波長進行讀取。資料分析
1. 每一行的終點效價定義為讀值超過閾值(cutoff value)的最高稀釋度的倒數。
2. 將待測樣品的吸光值減去樣品稀釋盤中同一樣品的吸光值。
3. 控制組係以高定量濃度及低定樣濃度為陽性控制組,以二級抗體作為陰性控制組。
4. 閾值:X + 0.1。X為陰性控制組的平均吸光值。
5. 將陽性控制組、陰性控制組及樣品的排布以及讀盤儀的讀取結果、計算結果等記錄在實驗記錄本上。
6. 用GraphPad Prism 5軟體對資料進行曼-惠特尼檢驗(Mann-Whitney test)之統計分析。
結果
圖1顯示,透過酵素連結免疫吸附分析法試驗,1E12b與SSEA-3神經醯胺的結合親和力為5.1E-08。此外,其與SSEA-4神經醯胺及Globo H神經醯胺沒有結合。實施例 3 細胞結合試驗
試劑
0.05%胰蛋白酶(Invitrogen,貨號25300054):4°C儲存
台盼藍(Trypan Blue)溶液:0.4%於磷酸緩衝鹽溶液(Hyclone,貨號SV30084.01)
流式細胞分離(FACS)緩衝液:1%牛血清蛋白(BSA)及0.1%疊氮化鈉(Sodium azide)溶於PBS
1. BSA (Sigma,貨號SI-A4503-100G)、疊氮化鈉(Sigma,貨號S2002-25g)
2. PBS (Gibco,貨號70011-044-500 mL)
一級抗體:
1. 1E12b
2. 同型控制組抗體:人IgG Fc (Southern Biotech,貨號0160-01)
二級抗體:抗人類IgG (Fc特異性)-FITC (Sigma,貨號F9512)
步驟
細胞培養
1. 將MCF-7細胞(高Globo H/高SSEA4/高SSEA3)培養於最低限度必需培養基(Minimum essential medium;Invitrogen,貨號10370021),其中添加2 mM L-麩醯胺酸(Invitrogen,貨號25030081)及1 mM丙酮酸鈉(Invitrogen,貨號11360070)並補充0.01 mg/mL胰島素(Sigma,貨號SI-I9278)、10%胎牛血清(Invitrogen,貨號16000044)。
2. 將SKOV3細胞(低Globo H/高SSEA4/高SSEA3)培養於McCoy's 5a培養基 (McCoy's 5a Medium Modified;Invitrogen,貨號166600082),其中添加10%胎牛血清(Invitrogen,貨號16000044)。
3. 將SKBR3細胞(低Globo H/低SSEA4/低SSEA3)培養於McCoy's 5a培養基(Invitrogen,貨號166600082)及10%胎牛血清(Invitrogen,貨號16000044)。
細胞染色
懸浮受試細胞
1. 在單層細胞的情況下,從丟棄測試樣品培養瓶中的培養基。用5 mL PBS沖洗細胞二次。將1 mL 0.05%胰蛋白酶加入培養瓶,搖動以覆蓋所有表面積,並放入37°C二氧化碳培養箱中培養5-10分鐘。
2. 加入5 mL完全生長培養基(complete growth medium),並以緩和吸放方式抽取細胞。
3. 將細胞懸浮液轉移至15 mL錐形管內。
4. 在200 g離心該管5分鐘。
5. 離心後,倒出上清液,並攪拌細胞沉澱。
計算受試細胞
1. 對細胞沉澱添加1-2 mL FACS緩衝液,並通過移液混合均勻。
2. 將細胞加入帶有細胞過濾蓋的5 mL聚苯乙烯圓底管(Falcon,貨號352235),以獲得完整且存活的單一細胞。
3. 將10 μL細胞懸浮液轉移至一微量離心管。
4. 加入10 μL台盼藍溶液(0.4%台盼藍),並透過吸放混合均勻。
5. 在血球計數器上計算活細胞。
6. 調整細胞濃度為4×106
個細胞/mL,然後將50 μL細胞懸浮液轉移至聚苯乙烯圓底管中,使每管有2×105
個細胞。
添加一級抗體
1. 準備10 μg/mL的抗體稀釋液。
2. 將50 μL抗體稀釋液加入50 μL細胞懸浮液(6.2.3.6),以達到每管0.5 μg抗體。
3. 輕輕震盪各管以便細胞懸浮液及一級抗體充分混合。
4. 將管子放在冰上培養約0.5小時。
5. 各管裝入1 mL FACS緩衝液,並在400 g離心5分鐘以清洗各管一次。
6. 用真空抽吸移除上清液。注意吸取的動作,避免吸液頭觸及管底而可能造成細胞損失。
添加二級抗體
1. 將二級抗體稀釋於FACS緩衝液中至最終抗體濃度為4 μg/mL。※用1:100稀釋抗人IgG (Fc特異性)-FITC (Sigma,貨號F9512)的二級抗體。
2. 在各管中加入100 μL稀釋的二級抗體。
3. 輕輕震盪各管以便細胞懸浮液及二級抗體充分混合。
4. 將管子放在冰上避光反應約0.5小時。
5. 各管裝入1 mL FACS緩衝液,並在400 g離心5分鐘以清洗各管一次。
6. 用真空抽吸移除上清液。注意吸取的動作,避免吸液頭觸及管底而可能造成細胞損失。
7. 將300 μL 4%三聚甲醛固定液加入各管。
8. 將管子放在冰上避光反應約0.5小時。
9. 各管裝入1 mL FACS緩衝液,並在400 g離心5分鐘以清洗各管一次。
10. 用400 μL FACS緩衝液再懸浮管中受試細胞。
11. 將試管儲存在4±2°C冰箱並且避光。
流式細胞儀分析
1. 染色後立即進行流式細胞分析。或者,如果細胞用4%三聚甲醛緩衝液固定,在一週內進行流式細胞分析。
2. 用FCS Express 4 Flow Research軟體分析細胞結合的百分比。在長條圖中,同型控制組被框選,並定義5%的框選細胞為背景。依據背景的設置,測定受試細胞的結合區域(M)百分比。在此情境下,高於同型控制組5%或以上的受試細胞被視為陽性結合細胞。
結果
圖2顯示1E12b對SSEA-3高表現細胞株MCF-7(圖2A)及SKOV3(圖2B)細胞有較強的結合親和力。其與SSEA3低表現細胞株SKBR3(圖2C)細胞沒有結合。實施例 4 腫瘤相關醣類與抗 SSEA3 抗體的交叉反應
試劑
阻斷緩衝液:SuperBlock (PBS)阻斷緩衝液(ThermoFisher,貨號37515)
ELISA清洗緩衝液:0.05% Tween 20 (Sigma,貨號P2287-500 mL)/ PBS: (Sigma,貨號P5493-4L)
ELISA受質:SuperSignal ELISA豪微最高靈敏度受質(SuperSignal ELISA Femto Maximum Sensitivity Substrate;ThermoSci,貨號PIE37074)
一級抗體:
1. 抗SSEA3抗體(MC-631: BioLegend,貨號330302)
2. 1E12b 小鼠IgG2a O4MM-180320
3. 小鼠IgG2a同型控制組(BioLegend,貨號401502)
4. 大鼠IgM同型控制組(eBioscience #14-4341-85)
所有抗體在阻斷緩衝液中被稀釋為5 μg/mL。
二級抗體:
1. 山羊抗小鼠IgG-HPR (JacksonImmRes,貨號109-035-003)
2. 山羊抗大鼠IgM-HRP(JacksonImmRes,貨號112-035-020)
所有抗體均以1:50000稀釋儲存於阻斷緩衝液。
表2中列出的各種生物素修飾醣類及D-生物素(Carbosynth,貨號FB02633)係溶解於1X PBS以製成1 mg/mL溶液。
表2:與腫瘤相關的醣類列表
*NCKU:國立成功大學(臺灣)
NCKU/OBI Pharma (台灣浩鼎生技股份有限公司)提供的材料並非來自商業來源
醣類 | 製造商 / 貨號 |
α-葡萄糖 (α-Glucose) | NCKU |
α-半乳糖 (α-Galactose) | NCKU |
α-甘露糖-6-磷酸 (α-Man-6-phosphate) | NCKU |
α-L-鼠李糖 (α-L-Rhamnose) | NCKU |
H3型:Fucα1-2Galβ1-4GalNAcβ | NCKU |
(NeuAcα2-8)2 | NCKU |
NeuAcβ2-6GalNAcα | NCKU |
(NeuAcα2-8)3 | NCKU |
血型B:Galα1-3(Fucα1-2)Galβ | NCKU |
6Gal-HSO3 -SiaLex: Neu5Acα2-3(6-HSO3 )Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ | NCKU |
6GlcNAc-HSO3 -SiaLex: Neu5Acα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)(6-HSO3 )GlcNAcβ | NCKU |
α2-6唾液酸二天線型N-聚糖: (NeuAcα2-6Galα1-4GlcNAcα1-2Man)2 α1-3,6Manα1-4GlcNAcα1-4GlcNAc | NCKU |
GD2: GalNAcβ1-4(NeuAcα2-8NeuAcα2-3)Galβ1-4Glc-β | OligoTech 貨號:GLY094-NAc-sp3-Bt |
GM2: GalNAcβ1-4(NeuAcα2-3)Galβ1-4Glc-β | OligoTech 貨號:GLY093-NAc-sp3-Bt |
SSEA4六醣: Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glcβ | OligoTech 貨號:GLY131-NAc-sp3-Bt |
GD3: NeuAcα2-8NeuAcα2-3Galβ1-4Glc-β | OligoTech 貨號:GLY091-NAc-sp3-Bt |
Fucosyl-GM1: Fucα1-2Galβ1-3GalNAcβ1-4(Neu5Acα2-3)Galβ1-4Glcβ | OligoTech 貨號:GLY103-NAc-sp3-Bt |
Globo H: Fucα1-2Galβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glcβ | OBI Pharma, Inc |
SSEA3: Galβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glcβ | OBI Pharma, Inc |
SSEA4: Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glcβ | OBI Pharma, Inc |
Tn:α-GalNAc | GlycoTech 貨號:01-010 |
sTn:NeuAcα2-6GalNAcα | GlycoTech 貨號:01-059 |
唾液酸 (單體):α-N-乙醯神經胺酸 (α-Neu5Ac) | GlycoTech 貨號:01-012 |
sLewis A: NeuAcα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ | GlycoTech 貨號:01-044 |
sLewis X: NeuAcα2-3Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ | GlycoTech, 貨號:01-045 |
Lewis Y: Fucα1-2Galβ1-4(Fucα1-3)GlcNAcβ | GlycoTech 貨號:01-043 |
步驟
1. 用200 μL/孔的ELISA清洗緩衝液清洗多孔盤。
2. 用PBS將生物素修飾醣類儲備液稀釋為1 μg/mL,並將50 μL稀釋的生物素修飾醣類加入塗覆盤,以製備50 ng/孔的生物素修飾醣類,並在室溫反應2小時。
3. 用200 μL/孔的ELISA清洗緩衝液清洗該盤一次。
結果
圖3顯示與生物素標記醣類的醣類交叉反應的酵素連結免疫吸附分析結果。1E12b及MC-631(商用抗SSEA3抗體)皆可與SSEA-3及SSEA-4抗原結合。
儘管已經描述及說明了本發明的特定方面,這些方面應被視為僅係說明本發明,而非限制依據所附請求項而解釋的本發明。本說明書引用的所有公開發表及專利申請基於各種目的透過引用全部併入本文,如同每件公開發表或專利申請被具體且單獨地指出係基於各種目的透過引用全部併入本文。儘管為了清楚理解,已經藉由說明和舉例的方式對上述發明進行了一些詳細的描述,但顯而易見的,依據本發明的教示,本領域中具有通常知識者可以對其進行某些變更及修飾而未背離所附請求項的精神或範圍。
無。
圖1顯示小鼠抗SSEA3抗體(IgM-1E12b)的結合親和力特徵圖。
圖2顯示流式細胞分析直方圖。所有測試細胞均以商用抗SSEA3抗體(MC-631,BioLegend,貨號330302)、小鼠抗SSEA3抗體(IgM-1E12b)及同型控制組進行染色,其後與結合藻紅素(PE)或異硫氰酸螢光素(FITC)的二級抗體一同反應。MCF-7細胞(圖2A)、SKOV細胞(圖2B)及SKBR3細胞(圖2C)。
圖3顯示透過化學螢光三明治酵素連結免疫吸附分析法(ELISA)分析進行與生物素修飾醣類的交叉反應試驗。
國內寄存資訊
TW中華民國 財團法人食品工業發展研究所 2019/11/7 BCRC 960527
國外寄存資訊
US美國 美國典型培養物保存中心(ATCC) 2019/11/19 PTA-126149
<110> 台灣浩鼎生技股份有限公司
<120> 抗體、醫藥組成物及其用途
<130> PCT/US2020/67391
<150> 62954669
<151> 2019-12-30
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈可變區(VH)
<210> 2
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈可變區(VL)
<210> 3
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈可變區(VH)
<210> 4
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈可變區(VL)
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR1
<210> 6
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR2
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR3
<210> 8
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR1
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR2
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR3
Claims (20)
- 一種結合至階段特異性胚胎抗原3(SSEA-3)的抗體或其抗原結合部分,包含:一重鏈可變區,包含SEQ ID NO:3的胺基酸序列;以及一輕鏈可變區,包含SEQ ID NO:4的胺基酸序列。
- 一種結合至階段特異性胚胎抗原3(SSEA-3)的抗體或其抗原結合部分,包含:一第一重鏈互補決定區(HCDR1),由SEQ ID NO:5的胺基酸序列所組成;一第二重鏈互補決定區(HCDR2),由SEQ ID NO:6的胺基酸序列所組成;一第三重鏈互補決定區(HCDR3),由SEQ ID NO:7的胺基酸序列所組成;一第一輕鏈互補決定區(LCDR1),由SEQ ID NO:8的胺基酸序列所組成;一第二輕鏈互補決定區(LCDR2),由SEQ ID NO:9的胺基酸序列所組成;以及一第三輕鏈互補決定區(LCDR3),由SEQ ID NO:10的胺基酸序列所組成。
- 一種結合至階段特異性胚胎抗原3(SSEA-3)的抗體或其抗原結合部分,係以寄存編號為BCRC 960527且名為1E12b的一融合瘤所產生。
- 如請求項1-3中任一項所述的抗體或其抗原結合部分,其中該抗體或抗原結合部分能夠與另一Globo系列抗原結合。
- 如請求項4所述的抗體或其抗原結合部分,其中該另一Globo系列抗原係為Globo H或階段特異性胚胎抗原4(SSEA-4)。
- 如請求項1-3中任一項所述的抗體或其抗原結合部分,其中該抗體或抗原結合部分係選自由全免疫球蛋白分子、scFv、Fab片段、F(ab')2及雙硫鍵連接的Fv所組成的群組。
- 如請求項1-3中任一項所述的抗體或其抗原結合部分,其中該抗體係為一人源化抗體。
- 如請求項7所述的抗體或其抗原結合部分,其中該抗體係為IgG或IgM。
- 如請求項7所述的抗體或其抗原結合部分,其中該抗體進一步包含一SSEA-3特異性嵌合抗原受體(CAR)區。
- 如請求項9所述的抗體或其抗原結合部分,其中該CAR區包含一跨膜區及一細胞內訊息傳導區,其中該跨膜區包含CD8及/或CD28的跨膜區,該細胞內訊息傳導區包含選自由CD27、CD28、CD137、OX40、ICOS、CD3zeta及其任意組合所組成群組的一細胞內訊息傳導區。
- 一種雙特異性抗體或其抗原結合部分,包含:如請求項1-10中任一項所述的抗體或其抗原結合部分,其中該抗體或其抗原結合部分進一步包含特異性結合Globo系列抗原的一第一結合區及特異性結合T細胞表面抗原的一第二結合域。
- 如請求項11所述的雙特異性抗體或抗原結合部分,其中該Globo系列抗原包含Globo H、SSEA-3或SSEA-4。
- 如請求項11所述的雙特異性抗體或抗原結合部分,其中該T細胞表面抗原包含CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD8、CD28、CD40L、CD44、CD47、CD13、7OX40或TGFβ。
- 一種醫藥組成物,包含:如請求項1-10中任一項所述的抗體或其抗原結合部分;以及至少一種藥學上可接受的載體。
- 如請求項14所述的醫藥組成物,進一步包含一額外的治療劑。
- 一種如請求項1-10中任一項所述的抗體或其抗原結合部分用於製備治療癌症或抑制癌細胞增生之醫藥組成物之用途。
- 如請求項16所述的用途,其中該癌症包含乳癌、肺癌、***癌、胰臟癌、胃癌、卵巢癌及子宮內膜癌、結腸癌、肝癌、鼻咽癌、皮膚癌、口腔癌、腎癌、腦癌、子宮頸癌及膀胱癌。
- 如請求項16所述的用途,其中該醫藥組成物進一步包含一化學治療劑、一光動力治療劑或一生物製劑。
- 如請求項18所述的用途,其中該醫藥組成物在誘導或增強免疫反應方面提供協同作用。
- 一種融合瘤,其寄存編號係為BCRC 960527且名為1E12b。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201962954669P | 2019-12-30 | 2019-12-30 | |
US62/954,669 | 2019-12-30 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW202128774A TW202128774A (zh) | 2021-08-01 |
TWI811604B true TWI811604B (zh) | 2023-08-11 |
Family
ID=76686785
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW109146920A TWI811604B (zh) | 2019-12-30 | 2020-12-30 | 抗體、醫藥組成物及其用途 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20230056782A1 (zh) |
TW (1) | TWI811604B (zh) |
WO (1) | WO2021138378A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2024040194A1 (en) | 2022-08-17 | 2024-02-22 | Capstan Therapeutics, Inc. | Conditioning for in vivo immune cell engineering |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106459920A (zh) * | 2014-01-16 | 2017-02-22 | 中央研究院 | 治疗及检测癌症的组合物及方法 |
WO2019241315A1 (en) * | 2018-06-12 | 2019-12-19 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9243057B2 (en) * | 2010-08-31 | 2016-01-26 | The Regents Of The University Of California | Antibodies for botulinum neurotoxins |
WO2013006490A2 (en) * | 2011-07-01 | 2013-01-10 | Cellerant Therapeutics, Inc. | Antibodies that specifically bind to tim3 |
WO2017172990A1 (en) * | 2016-03-29 | 2017-10-05 | Obi Pharma, Inc. | Antibodies, pharmaceutical compositions and methods |
WO2018124642A2 (ko) * | 2016-12-26 | 2018-07-05 | 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단 | 치수줄기세포의 상아 모전구세포로의 분화용 조성물 및 상아모전구세포 표면에 특이적으로 결합하는 IgG 또는 IgM 타입 단일 클론 항체 |
-
2020
- 2020-12-30 US US17/789,796 patent/US20230056782A1/en active Pending
- 2020-12-30 WO PCT/US2020/067391 patent/WO2021138378A1/en active Application Filing
- 2020-12-30 TW TW109146920A patent/TWI811604B/zh active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106459920A (zh) * | 2014-01-16 | 2017-02-22 | 中央研究院 | 治疗及检测癌症的组合物及方法 |
WO2019241315A1 (en) * | 2018-06-12 | 2019-12-19 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2021138378A1 (en) | 2021-07-08 |
TW202128774A (zh) | 2021-08-01 |
US20230056782A1 (en) | 2023-02-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2018253589B2 (en) | Antibodies, pharmaceutical compositions and uses thereof | |
JP5219827B2 (ja) | invivoで抗腫瘍活性を有する抗ヒトDlk−1抗体 | |
JP6280040B2 (ja) | invivoで抗腫瘍活性を有する抗ヒトDlk−1抗体 | |
KR20090130335A (ko) | 암 세포 세포독성을 매개하는 인간화 및 키메라 항-cd59 항체 | |
JP6159010B2 (ja) | テトラスパニン8に対するハイブリドーマクローンおよびモノクローナル抗体 | |
TWI811604B (zh) | 抗體、醫藥組成物及其用途 | |
JP2021523193A (ja) | 骨髄由来抑制細胞関連疾患の予防および治療用途 | |
WO2024125331A1 (en) | ANTIBODIES AGAINST SIRPα AND USES THEREOF | |
WO2019221574A1 (ko) | 골수유래억제세포 관련 질환의 예방 및 치료 용도 | |
CN117964755A (zh) | 抗tslp抗体及其用途 | |
CN117946270A (zh) | 抗cd93抗体及其用途 | |
JP2008056647A (ja) | Fcα/μレセプターに対する抗体 |