TWI770823B - 尿沉渣檢查用之超活體染色液、尿沉渣檢查方法、於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色抑制方法、提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法 - Google Patents
尿沉渣檢查用之超活體染色液、尿沉渣檢查方法、於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色抑制方法、提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法 Download PDFInfo
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Abstract
本發明的目的在於，提供一種抑制於尿沉渣檢查中出現於尿試料中之夾雜物的染色，而可有效率地將目標成分進行染色之手法。本發明係提供一種含有具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素之尿沉渣檢查用之超活體染色液。於一個實施形態中，前述三芳基甲烷系色素較佳係對水呈可溶性之色素。於又更佳之實施形態之中，可與前述三芳基甲烷系色素組合細胞質染色成分來一起使用。本發明的超活體染色液對於上皮細胞、圓柱體等稀有成分的染色亦優異。
Description
本發明係關於一種用於尿沉渣檢查之超活體染色液以及使用該染色液之方法。尤其是，本發明係關於抑制在尿中可能含有之夾雜物的染色之方法，或可提高尿中所含有之稀有成分的檢測率之提高檢定力方法等。
尿沉渣檢查作為非侵襲性且對於受試者的負擔少而可頻繁地實施之形態學的檢查而言係重要。尿沉渣檢查以往係藉由檢查技師以手工製作標本與鏡檢進行目視評價。然而，其藉由手工之作業存在如下問題：不僅製作用於鏡檢之標本等對檢查技師而言成為大的負擔，而且因檢查技師的技術等容易在判斷上產生偏差。因此，作為為了減輕此般檢查技師的負擔且獲得一致的判斷結果之輔助，提出了於尿沉渣檢查中，自動分析檢體的成分之檢體分析裝置。檢體分析裝置存在以下種類：藉由在檢體容器內混合檢體以及藥劑，將其懸浮液流入流通槽並測定針對雷射光之散射光或螢光之流式細胞儀法；或是藉由拍攝裝置來拍攝檢體。例如，日本專利第3924870號公報(專利文獻1)揭示了一種分析裝置，係藉由於檢體加入藥劑來製備檢測用之試料並拍攝該試料。另外，非專利文獻1揭示有各種的尿沉渣的染色法。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]日本專利第3924870號公報。
[非專利文獻]
[非專利文獻1]醫學檢查 Vol.66 NO.J-STAGE-1 尿沉渣特集2017，18頁至50頁。
[發明所欲解決之課題]
以往的尿沉渣檢查之中有如下之情形：不僅測定對象的細胞，連可能存在於尿中之夾雜物亦大多被染色而產生背景雜訊，使得目標細胞的檢測變得困難。尤其是在有形成分分析裝置進行尿沉渣檢查之情形，已知存在如下情形：若出現在背景之夾雜物染色，則會重疊於應測定之成分而被拍攝，導致分類變得困難；或是以錯誤的分類來測定成分，在自動分析裝置正確地進行有形成分的分析變得困難。進而，以往的尿沉渣檢查之中，存在有夾雜物雖被染色，但上皮細胞或圓柱體(cast)等稀有成分不易被染色之情形，而有這些稀有成分的檢測變得不充分之情形。
本發明係有鑑於上述先前技術所完成，本發明之一目的在於提供一種藉由抑制於尿沉渣檢查中夾雜物的染色，而可抑制背景雜訊，可有效率地檢測測定對象的細胞之手法。此外，本發明又一目的在於提供一種提高於尿試料中之上皮細胞或圓柱體等稀有成分的檢定力，可進行高感度的尿沉渣檢查之手法。
[用以解決課題之手段]
本案發明人等為達成上述目的致力反覆研究之結果發現，藉由在用於尿沉渣檢查之超活體染色液使用特定成分，使得尿試料中出現在背景之夾雜物不被染色，而可將目標成分有效率地進行染色。進而發現，藉由將該超活體染色液與尿試料的混合比率進行最佳化，可進行於尿沉渣檢查中之稀有成分更高感度的測定，進而完成本發明。亦即，本發明係由以下的構成所構成。
[項1]一種尿沉渣檢查用之超活體染色液，係含有具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素。
[項2]如項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素係對水呈可溶性之色素。
[項3]如項1或2所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的分子量為700至900。
[項4]如項1至3中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素係選自由甲基藍(methyl blue)、專利藍V(patent blue V)、專利藍A、海王星綠SBX(neptune green SBX)、阿西侖亮藍R(Acilan brilliant blue R)、酸性第一紫BG(acid first violet BG)、亮酸性藍B(brilliant acid blue B)、亮藍R(brilliant blue R)、亮藍FCF、亮藍G、亮放電藍G(brilliant discharge blue G)、酸性藍(acid blue)、酸性藍13、酸性藍15、酸性藍100、酸性藍103、酸性藍104、以及酸性藍269所構成之群組中至少1種。
[項5]如項1至4中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含甲基藍或亮藍G作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素。
[項6]如項1至5中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含甲基藍作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素。
[項7]如項1至6中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中進而含有細胞質染色成分。
[項8]如項7所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中細胞質染色成分係選自由黃色曙紅(eosin yellow)、藍色曙紅(eosin blue)、耶奴斯綠(janus green)、三苯基四唑氯化物溶液、中性紅(neutral red)、番紅(safranin)、脈洛寧B(pyronin B)液、蘇丹III(Sudan III)、蘇丹黑、油紅(oleyl red)、乳酸品紅(lacto-fuchsin)、甲基綠(methyl green)、脈洛寧、碘化鉀、亮甲酚藍(brilliant cresyl blue)、亮綠、靛胭脂(indigo carmine)、新亞甲基藍(new methylene blue)，以及淺綠(light green)所構成之群組中至少1種。
[項9]如項7或8所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含黃色曙紅或藍色曙紅作為細胞質染色成分。
[項10]如項7至9中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含黃色曙紅作為細胞質染色成分。
[項11]如項7至10中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含甲基藍或亮藍G作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，並且，包含黃色曙紅或藍色曙紅作為細胞質染色成分。
[項12]如項7至11中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含甲基藍作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，並且，包含黃色曙紅作為細胞質染色成分。
[項13]如項7至12中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中細胞質染色成分相對於具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的莫耳比為0.5至8。
[項14]如項7至13中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中超活體染色液與尿檢體係以成為1：3至1：9之比率進行混合的方式來使用。
[項15]如項7至14中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中細胞質染色成分相對於具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的莫耳比為0.5至8，並且，超活體染色液與尿檢體以成為1：3至1：9之比率的方式進行混合來使用。
[項16]如項1至15中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中進而含有螯合劑。
[項17]如項1至16中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中實質上不含有有機溶媒。
[項18]如項1至17中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中pH6至pH7。
[項19]如項1至18中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中於尿沉渣檢查中夾雜物的染色受到抑制。
[項20]如項1至19中任一項所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中尿沉渣檢查為影像處理方式的尿中有形成分分析裝置中之尿沉渣檢查。
[項21]一種尿沉渣檢查方法，係包含藉由如項1至20中任一項所記載之超活體染色液將尿檢體進行染色之步驟。
[項22]如項21所記載之尿沉渣檢查方法，其中將超活體染色液與尿檢體以成為1：3至1：9之比率混合而進行染色。
[項23]如項21或22所記載之尿沉渣檢查方法，其中包含於尿中有形成分分析裝置中拍攝經染色之尿檢體之步驟。
[項24]一種於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色抑制方法，係包含藉由如項1至20中任一項所記載之超活體染色液將尿檢體進行染色之步驟。
[項25]如項24所記載之於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色抑制方法，其中將超活體染色液與尿檢體以成為1：3至1：9之比率混合而進行染色。
[項26]如項24或25所記載之於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色抑制方法，其中包含於尿中有形成分分析裝置中拍攝經染色之尿檢體之步驟。
[項27]一種提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法，係包含藉由如項1至20中任一項所記載之超活體染色液將尿檢體進行染色之步驟。
[項28]如項27所記載之提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法，其中稀有成分係選自由上皮細胞以及圓柱體所構成之群組中至少1種。
[項29]如項27或28所記載之提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法，其中將超活體染色液與尿檢體以成為1：3至1：9之比率混合而進行染色。
[項30]如項27至29中任一項所記載之提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法，其中係包含於尿中有形成分分析裝置中拍攝經染色之尿檢體之步驟。
[發明功效]
藉由本發明可抑制於尿沉渣檢查中夾雜物的染色。在更進一步的局面中，藉由本發明，亦可高感度地檢測於尿沉渣檢查中上皮細胞或圓柱體等稀有成分。因此，例如可在使用自動分析裝置分析尿試料中的有形成分之情形進行高精度的分析。
關於本發明的實施的形態之詳細的說明係如下所述，但本發明並非限定於此。此外，本說明書中所使用之用語，若無特別提及，應理解為是以在該領域通常所使用之意思來使用。
另外，本說明書中所記載之非專利文獻以及專利文獻所有內容皆於本說明書中援引作為参考。本說明書中的「～」係指「以上至以下」，例如在說明書中若記載為「X～Y」則表示「X以上至Y以下」。此外本說明書中的「以及／或是」係指任一者或是兩者。此外於本說明書中，單數形式的表現方式，只要沒有另外提及，應理解為亦包括其複數形式的概念。
[1.尿沉渣檢查用之超活體染色液]
於一個實施形態中，本發明係提供一種含有具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素之尿沉渣檢查用之超活體染色液。
所謂尿沉渣檢查，係例如在診斷腎臓或泌尿系統的疾患時等，作為該診斷的輔助，進行觀察、分類、測量尿檢體中的紅血球或白血球等有形成分的種類或量之檢查。以往，檢查技師係以如下之方法進行檢查：以手工在受試者的尿檢體中添加且混合染色液而製作標本，在顯微鏡下進行觀察；為了減輕檢查技師的作業負擔，且提供一致的檢查結果，故經自動化之尿中有形成分分析裝置等亦在近年被廣泛使用。作為使用了這種有形成分分析裝置之尿沉渣檢查，已知有將顯微鏡下之成分影像解析直接藉由經自動化之影像處理方式之尿沉渣檢查法、或是藉由將尿檢體與染色液的懸浮液流入流通槽測定針對雷射光之散射光或螢光等之流式細胞儀法之尿沉渣檢查法等。本發明的超活體染色液可用於任意的尿沉渣檢查中，例如亦可用於手動之尿沉渣檢查中，亦可用於有形成分分析裝置之尿沉渣檢查。就不依賴目視而以機械來判別，藉由抑制夾雜物的染色而可更正確的判定，亦可檢測稀有成分之觀點來看，本發明較佳係用於尿中有形成分分析裝置之尿沉渣檢查中，其中，較佳係用於影像處理方式的尿中有形成分分析裝置之尿沉渣檢查中。
已知有各種將活體成分進行染色之方法。之中，於活體內施用色素而將細胞進行染色之方法稱為「活體染色」，將取出至活體外之細胞在存活的狀態直接進行染色之方法稱為「超活體染色」。本發明係用作為超活體染色之染色液。
本發明的超活體染色液的其中一特徵係含有具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素。所謂三芳基甲烷系色素，係以於碳鍵結有3個苯環之三芳基甲烷結構作為基本骨架之色素的總稱。本發明特徵在於在三芳基甲烷系色素之中，係使用在其結構中具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素。作為陰離子性官能基，可列舉如磺酸基、羧基、磷酸基、硫酸酯基等，但並不限定於此。較佳係藉由使用具有磺酸基作為陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，可更高度地發揮本發明的效果。本發明所使用之三芳基甲烷系色素可於其結構中具有1個或複數(例如2個或3個)的陰離子性官能基。另外，本發明所使用之三芳基甲烷系色素除前述的陰離子性官能基以外亦可進而具有陽離子性官能基。本發明係基於如下之意外發現：在將這種具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素使用於尿沉渣檢查的超活體染色液之情形中，可一邊抑制尿中夾雜物的染色性，一邊對尿中有形成分的細胞核進行特異性染色。
於一個實施形態中，本發明所使用之具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素較佳為對水呈可溶性之色素。所謂對水呈可溶性，例如在20℃對水之溶解度為1g／L以上稱之，較佳為5g／L以上稱之，較佳為10g／L以上稱之，較佳為50g／L以上稱之，較佳為100g／L以上稱之，較佳為200g／L以上，更佳為250g／L以上(例如300g／L以上)稱之。上限值並沒有特別限定，例如可為1000g／L以下。
本發明所使用之具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的分子量，只要能發揮本發明的效果即可並沒有特別限定，例如為約500至1100，較佳為約600至1000，更佳為約700至900。藉由使用這種分子量的三芳基甲烷系色素可穩定而發揮更高的效果。
於一個實施形態中，本發明所使用之具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素較佳係在人的尿之pH附近(中性附近)呈穩定的色素。由此觀點來看，本發明所使用之具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素較佳係在pH6至pH8附近呈穩定，更佳係在pH6至pH7附近呈穩定，尤佳係在pH6至pH6.5附近呈穩定。另外，本發明所使用之具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素較佳係在前述pH的範圍內呈色者。
進而在其它局面中，本發明所使用之具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，由使操作變得容易之觀點來看較佳係致癌性低或無致癌性，另外，由存在細菌變性之顧慮的觀點來看較佳係殺菌性低或無殺菌性。進而，如後述般與細胞質染色成分組合使用之情形，較佳係呈色為不同於該細胞質染色成分之色調之色素。例如，與黃色曙紅等呈色為紅色系之成分作為細胞質染色成分組合之情形，較佳係呈色為藍色系之三芳基甲烷系色素。
具體而言，作為可用於本發明之具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，可使用在該領域公知的任意色素，例如，作為具有磺酸基之三芳基甲烷系色素，可合適地使用：甲基藍(別名：酸性藍93)、專利藍V(別名：酸性藍1)、專利藍A(別名：酸性藍7)、海王星綠SBX(別名：酸性藍11)、阿西侖亮藍R(別名：酸性藍24)、酸性第一紫BG(別名：酸性藍34)、亮酸性藍B(別名：酸性藍38)、亮藍R(別名：酸性藍83)、亮藍FCF(別名：酸性藍9)、亮藍G(別名：酸性藍90)、亮放電藍G(別名：酸性藍91)、酸性藍、酸性藍13、酸性藍15、酸性藍100、酸性藍103、酸性藍104、酸性藍269等。本發明之中作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，較佳係可使用甲基藍或亮藍G，更佳為可使用甲基藍。進而在本發明之中，亦可僅使用1種如上述般的具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，亦可組合2種以上。
甲基藍(CAS No.28983-56-4)已知係分子式以C37
H27
N3
Na2
O9
S3
來表示，對水之溶解性高之公知的化合物(對水之溶解性：300g／L(20℃)、分子量：799.8)。甲基藍至今係作為在中性附近的pH中將膠原纖維等結締組織或膠原蛋白染成藍色之色素而被熟知，已知沒有致癌性亦無殺菌性。甲基藍可使用化學性合成，亦可使用市售品。例如，混合了甲基藍與水溶藍(water blue)之苯胺藍或是將甲基藍溶解於酚、甘油、酪酸溶液中之乳酚棉藍(lactophenol cotton blue)等混合物亦作為甲基藍而可合適地用於本發明。
亮藍G(CAS No.6104-58-1)已知係分子式以C47
H48
N2
[N＋
]NaO6
[O-
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來表示，對水呈可溶性，呈色為藍色之公知的化合物(對水之溶解性：50g／L，分子量：854.0)。亮藍G可使用化學性合成，亦可使用市售品。
作為本發明的超活體染色液的一個實施形態，作為染色成分，亦可為僅含有具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，亦可含有其它以外的染色成分。由變得容易以更高感度地檢測各種的成分之觀點來看，本發明的超活體染色液較佳係包含複數的色素。例如，本發明的超活體染色液係可包含：具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素、及選自由細胞核染色成分(至少將核進行染色之染色成分)以及細胞質染色成分(至少將細胞質類進行染色之染色成分)所構成之群組之至少1種的染色成分；其中，較佳係含有具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素與細胞質染色成分之超活體染色液。
細胞核染色成分只要是至少將核進行染色之染色成分即可，可列舉如：乙酸地衣紅(orcein acetate)、乙酸洋紅(carmine acetate)、亞甲藍(methylene blue)、艾爾遜藍(alcian blue)、結晶紫(crystal violet)、甲基紫(methyl violet)、蘇木精(hematoxylin)、2,7-二氨基芴(2,7-diaminofluorene)、亞鐵氰化鉀、天青II(azure II)等，然而並不限定於此。
細胞質染色成分只要是至少將細胞質類進行染色之染色成分即可，可列舉如：黃色曙紅、藍色曙紅、耶奴斯綠、三苯基四唑氯化物溶液、中性紅、番紅、脈洛寧B液、蘇丹III、蘇丹黑、油紅、乳酸品紅、甲基綠、脈洛寧、碘化鉀、亮甲酚藍、亮綠、靛胭脂、新亞甲基藍、淺綠等，然而並不限定於此。由為了可更確實地容易獲得本發明的效果之觀點來看，作為細胞質染色成分，較佳為黃色曙紅、藍色曙紅等曙紅系色素，更佳為黃色曙紅。
於本發明的超活體染色液組合細胞核染色成分以及／或是細胞質染色成分來使用之情形，亦可細胞核染色成分以及細胞質染色成分各使用1種類，亦可組合使用2種類以上。
作為一例，並沒有特別限定，本發明的尿沉渣檢查用之超活體染色液較佳係包含甲基藍或亮藍G作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，並且，包含黃色曙紅或藍色曙紅作為細胞質染色成分。作為又更佳之實施形態，可列舉一種尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包括甲基藍作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，並且，包括黃色曙紅作為細胞質染色成分，但並沒有特別限定。
此外，作為用於幫助識別經混合如上述之染色成分等來使用之試料中的有形成分之試劑，作為一般已知者可列舉如：Sternheimer-Malbin染色法(SM染色法)、Sternheimer染色法(S染色法、NS染色法或是Sternheimer染色法的變體)、Prescott-Brodie染色法、Behre-Muhlberg染色法(BM染色法)、蘇丹III染色法、Lugol染色法、血鐵質(hemosiderin)染色法、Papanicolaou染色法、4-氯-1-萘酚(4-chloro-1-naphthol)法、Field染色法、Quaglino-Flemans法、Kaplow法、佐藤-關谷法、柏林藍(Berlin blue)法、Giemsa染色法、賴德染色法(Wright's stain)、Pappenheim 染色法、剛果紅染色法、甲基綠-脈洛寧染色法、艾爾遜藍染色法、Shorr染色法、Feulgen染色法、油紅O染色法、Brecker法、漢斯氏體(Heinz Body)染色法、中性紅-耶奴斯綠超活體染色法、亮甲酚藍染色法(「臨床檢查圖鑑 1尿沉渣」、「臨床檢查技術全書3 血液檢查」、「臨床檢查法提要」、「染色法大全MEDICAL TECHNOLOGY別冊」)等。
本案發明人等對於更新的染色法經致力研究之結果發現，在進行尿中有形成分的拍攝之分析裝置中，可不染到出現於背景之夾雜物而進行染色之染色成分。具體而言，係獲得如下見解：藉由使用具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素作為將核進行染色之成分，於尿沉渣檢查中尿中夾雜物的染色受到抑制，變得可高感度的檢測目標細胞。亦如後述的試驗例的結果所示，可確認到該效果例如於組合黃色曙紅或藍色曙紅等作為將細胞質類進行染色之成分來使用之情形可獲得較佳之結果。於更特定的態樣中，可明白本發明的超活體染色液在以往方法之中一般被認為有難以被染色之傾向之上皮細胞以及／或是圓柱體等稀有成分的檢測感度亦可提高。
本發明的超活體染色液包含細胞質染色成分之情形，細胞質染色成分相對於具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的混合比率，只要可發揮本發明的效果即可並沒有特別限定。例如，細胞質染色成分(較佳為黃色曙紅、藍色曙紅等)相對於具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素之較佳混合比率，以莫耳比率計為0.2至10，較佳為0.4至9，更佳為0.5至8，又更佳為1至4。
本發明的超活體染色液中具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的含量亦只要能發揮本發明的效果就沒有特別限定。例如，作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的含量為1.0mmol／L至15mmol／L，較佳為1.5mmol／L至12.0mmol／L，更佳為2.0mmol／L至6.0mmol／L。
本發明的超活體染色液進而包含細胞質染色成分之情形，其含量亦只要能發揮本發明的效果就沒有特別限定。例如，作為細胞質染色成分(較佳為黃色曙紅、藍色曙紅等)的含量為0.3mmol／L至12.0mmol／L，較佳為1.0mmol／L至12.0mmol／L，更佳為4.0mmol／L至12.0mmol／L。
本發明的超活體染色液為了減低尿檢體中所包含之無晶性之鹽類的影響較佳係進而含有螯合劑。藉由這樣抑制無晶性之鹽類的影響，特別是在影像處理方式的尿中有形成分分析裝置之拍攝中，變得可拍攝更鮮明的影像。螯合劑可使用在該領域公知的任意的螯合劑，可列舉例如：乙二胺四乙酸(EDTA)、氮基三乙酸(nitrilotriacetic acid；NTA)、二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、羥乙基乙二胺三乙酸(HEDTA)、三亞乙基四胺六乙酸(TTHA)、1,3-丙二胺四乙酸(PDTA)、1,3-二胺基-2-羥基丙烷四乙酸(DTPA-OH)、羥乙基亞胺基二乙酸(HIDA)、二羥乙基甘氨酸(DHEG)、乙二醇醚二胺四乙酸(EGTA)、二羧甲基谷氨酸(CMGA)、(S,S)-乙二胺二琥珀酸(EDDS)、羥基乙叉二膦酸(HEDP)、氮基三(亞甲基膦酸)(NTMP)、膦酸丁烷三羧酸(PBTC)、乙二胺四(亞甲基膦酸)(EDTMP)、葡萄糖酸、O,O′-雙(2-胺基苯基)乙二醇-N,N,N′-四乙酸、四鉀鹽、水合物(BAPTA)、N,N-雙(2-羥乙基)甘氨酸(Bicine)、反式-1,2-二胺基環己烷-N,N,N',N'-四乙酸、一水合物(CyDTA)、亞胺基二乙酸(IDA)、氮基三乙酸(NTA)、N,N,N',N'-四(2-吡啶甲基)乙二胺(TPEN)、或這些的鹽(例如乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸氫三鈉、以及這些的水合鹽等)等。添加這種螯合劑之情形的含量，只要可發揮本發明的效果則並沒有特別限定，例如可為1mmol／L至50mmol／L，較佳為5mmol／L至30mmol／L，又更佳為10mmol／L至25mmol／L。
本發明的超活體染色液可為將前述的染色成分溶解於任意的溶媒中之溶液。此處所使用之溶媒，只要能發揮本發明的效果則並沒有特別限定，例如可為水、無機溶媒、或有機溶媒等任意的液體。由不使所觀察之細胞成分萎縮之觀點來看，並非在SM染色法所使用之乙醇等有機溶媒，而較佳為水或無機溶媒，特別佳為水。
特定的實施形態之中，本發明的尿沉渣檢查用之超活體染色液較佳係實質上不含有有機溶媒。本說明書中，所謂實質上不含有有機溶媒，係指超活體染色液中有機溶媒的含量未達5容量%，較佳為未達3容量%，更佳為未達1容量%。
進而，亦可就如下目的而含有緩衝液：穩定所含有之染色成分以及調整混合試料與染色液時的pH。作為這種緩衝液可列舉如Tris緩衝液(托立斯緩衝液)、磷酸緩衝液、硼酸緩衝液、古德氏緩衝液(Good's buffer)等，但由於Tris緩衝液、磷酸緩衝液、硼酸緩衝液容易隨著濃度、溫度而pH變動，故更佳為古德氏緩衝液。
所謂古德氏緩衝液，係兩性離子緩衝液，大多使用兩性電解質的胺基酸(尤其是取代牛磺酸或是N-取代甘氨酸類)作為緩衝劑而成，但其中亦包含一部分的非脂肪族胺或非兩性離子緩衝液。作為這些古德氏緩衝劑可例示如：MES(pKa6.15)、Bis-tris(pKa6.46)、ADA(pKa6.80)、PIPES(pKa6.80)、ACES(pKa6.90)、氯化乙醇胺(cholamine chloride)(pKa7.10)、BES(pKa7.15)、MOPS(pKa7.20)、TES(pKa7.50)、HEPES(pKa7.55)、HEPPS(pKa8.00)、Tricine(pKa8.15)、甘胺醯胺(pKa8.20)、Bicine(pKa8.35)、TAPS(pKa8.40)、CHES(pKa9.50)以及CAPS(pKa10.40)等。
作為本發明所使用之緩衝液，就提高染色成分的穩定性之目的較佳係在中性附近的pH具有緩衝能力之古德氏緩衝液。更合適為在pH6至pH8具有緩衝能力之古德氏緩衝液較佳。
又更佳的是，健康者的尿的pH係通常被認為在中性附近(通常為pH6.0至pH6.5左右)，在混合了尿檢體與染色液之情形中，由可將尿中的有形成分的狀態以更直接的狀態進行分析的方面來說，較佳係在pH6.0至pH7.0具有緩衝能力之古德氏緩衝液。
具體而言，古德氏緩衝液較佳係MES(pKa6.15)、Bis-tris(pKa6.46)、ADA(pKa6.80)、PIPES(pKa6.80)、ACES(pKa6.90)。
另外，可在不對本發明的超活體染色液帶來影響之範圍內添加防腐劑、鹽類、染色成分穩定劑等。
作為防腐劑，可列舉如：ProClin 150、ProClin 200、ProClin 300、ProClin 950、疊氮化物、螯合劑、抗生素、抗菌劑等。
作為抗生素，可列舉如：慶大黴素(gentamicin)、康黴素(kanamycin)、氯黴素(chloramphenicol)等。
作為抗菌劑，可列舉如：甲基異噻唑啉酮、咪唑烷基尿素等。
作為鹽類，可列舉如：氯化鈉、氯化鉀、氯化鋁等。
作為染色成分穩定劑，可列舉如環糊精等。
作為可用於本發明的尿沉渣檢查的分析之試料，可為源自從包含人之哺乳動物所採集之尿之試料(亦稱為尿檢體)。例如，可將原尿、濃縮尿、離心分離後的尿沉渣等任意的試料用於本發明。進而本發明的超活體染色液不僅可用於尿檢體，亦可用於例如：血液、腹水、脊髓液等活體的體液、或是飲料、食品等人所攝取者等。
使用本發明的超活體染色液進行尿沉渣檢查之情形中，作為本發明的超活體染色液與試料之混合比率並沒有特別限定，例如可為1：1至1：10，較佳為1：3至1：9，其中尤佳為1：3至1：6。如後述的試驗例的結果中所示，可藉由以這種比率混合超活體染色液與尿檢體，而提高於尿沉渣檢查中上皮細胞以及／或是圓柱體等稀有成分的檢定力。
因此，本發明的超活體染色液與試料以成為如上述之混合比率的方式而被使用之情形中，該超活體染色液亦可作為用以提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之尿沉渣檢查用之超活體染色液。
作為於尿沉渣檢查中被發現之上皮細胞，可列舉例如：腎小管上皮細胞、尿道上皮細胞、柱狀上皮細胞、鱗狀上皮細胞、腎絲球上皮細胞等，然而並不限定於此。另外作為於尿沉渣檢查中被發現之圓柱體可列舉如：透明圓柱體、上皮圓柱體、顆粒圓柱體、蠟狀圓柱體、脂肪圓柱體、紅血球圓柱體、白血球圓柱體、空泡變性圓柱體、鹽類-結晶圓柱體、巨噬細胞圓柱體、纖維蛋白圓柱體、血鐵蛋白圓柱體、肌紅蛋白圓柱體、本周氏蛋白(Bence-Jones protein)圓柱體等，然而並不限定於此。可藉由改變本發明的超活體染色液與試料的混合比率，而提高這種上皮細胞以及／或是圓柱體的稀有成分的檢測率。
[2.尿沉渣檢查方法]
本發明的超活體染色液可用於進行超活體染色之任意的尿沉渣檢查法中。於一個實施形態中，本發明的尿沉渣檢查方法可為包含如下步驟之尿沉渣檢查方法：藉由前述的本發明的超活體染色液而將尿檢體進行染色。此處，尿沉渣檢查方法，例如可為檢查技師以手動進行超活體染色之尿沉渣檢查，亦可為在尿中有形成分分析裝置自動化進行超活體染色之尿沉渣檢查。作為在使用超活體染色液之尿中有形成分分析裝置之尿沉渣檢查法，可為透過流式細胞儀法之尿沉渣檢查，亦可為將在顯微鏡下之尿中有形成分分析直接自動化之影像處理方式的尿中有形成分分析裝置之尿沉渣檢查。藉由抑制尿中夾雜物的染色而減低背景雜訊，使得對焦至目標細胞的拍攝變得容易，可抑制尿中有形成分的錯誤分類的發生，由此觀點來看，較佳為在影像處理方式的尿中有形成分分析裝置之尿沉渣檢查。
於特定的實施形態中，在本發明所進行之在尿中有形成分分析裝置之尿沉渣檢查，係包含藉由前述的本發明的超活體染色液將尿檢體進行染色之步驟。該染色步驟可以在該領域公知的任意的方法來進行，例如，藉由在樣品管、反應管等容器內或用於拍攝之載玻片(沉渣用盤、鏡檢盤)上，將前述的超活體染色液與尿檢體以預定的比率添加而進行混合，可將尿檢體進行染色。尿檢體較佳係在用於尿沉渣檢查之前經攪拌後再使用。另外，亦可在採集了尿檢體之容器內添加並混合本發明的超活體染色液，亦可在預先添加了超活體染色液之容器內添加並混合尿檢體。
本發明的超活體染色液，已知藉由以預定的比率混合尿檢體，可提高上皮細胞以及／或是圓柱體等稀有成分的檢定力。因此，強烈需要提高這種稀有成分的檢定力之情形中，本發明的超活體染色液與尿檢體較佳係以成為1：3至1：9之比率混合而進行染色，更佳係以成為1：3至1：6之比率進行染色。
因此，一個實施態樣之中，本發明的尿沉渣檢查用之超活體染色液係在與尿檢體混合時，以超活體染色液與尿檢體成為1：3至1：9之比率的方式進行混合來使用之尿沉渣檢查用之超活體染色液。其中較佳之實施形態係含有具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素以及細胞質染色成分之尿沉渣檢查用之超活體染色液，細胞質染色成分相對於具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的莫耳比為0.5至8，以超活體染色液與尿檢體成為1：3至1：9之比率的方式進行混合來使用之尿沉渣檢查用之超活體染色液。
於一個實施形態中，本發明所進行之在尿中有形成分分析裝置之尿沉渣檢查，係包含於尿中有形成分分析裝置中拍攝經染色之尿檢體之步驟。拍攝步驟係可在具備將經染色之尿檢體在顯微鏡下進行拍攝之手段之尿中有形成分分析裝置中實施。例如，可在具備：拍攝經以超活體染色液染色之尿檢體中的有形成分之階段、擴大尿檢體中的有形成分的標本圖像之手段、對焦至標本圖像而拍攝該圖像之手段、根據需要處理所拍攝之影像而識別各種成分之手段等之尿中有形成分分析裝置中實施。已知在這種影像處理方式的尿中有形成分分析裝置之尿沉渣檢查之中，上皮細胞或圓柱體的詳細的分類隨著機種不同而有差異但有不充分的情形(非專利文獻1)。由於藉由本發明，即使是這種上皮細胞或圓柱體仍可提高檢定力，故特別有助於在影像處理方式的尿中有形成分分析裝置之尿沉渣檢查。
[3.於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色抑制方法]
如前所述，藉由本發明，藉由使用含有特定的色素之超活體染色液，可高度地抑制於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色。
因此，本發明進而由別的觀點來看，係提供一種於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色抑制方法，係包含藉由前述之本發明的尿沉渣檢查用之超活體染色液而將尿檢體進行染色之步驟。該方法所使用之具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的種類或濃度、其它可調配之細胞質染色成分等任意成分的種類或濃度、本發明的超活體染色液與尿檢體之混合比率等使用方法等，係與前述「1.尿沉渣檢查用之超活體染色液」以及「2.尿沉渣檢查方法」中的說明相同。
[4.提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法]
如前所述，依據本發明，藉由使用含有特定的色素之超活體染色液，然後進而藉由將該超活體染色液以特定的混合比率與尿檢體進行混合，可提高已知於尿沉渣檢查中之檢測容易變得不充分的上皮細胞以及／或是圓柱體等稀有成分的檢定力。
因此，本發明進而由別的觀點來看，係提供一種提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法，係包含藉由前述之本發明的尿沉渣檢查用之超活體染色液而將尿檢體進行染色之步驟。該方法所使用之具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的種類或濃度、其它可調配之細胞質染色成分等任意成分的種類或濃度、本發明的超活體染色液與尿檢體之混合比率等使用方法等，係與前述「1.尿沉渣檢查用之超活體染色液」以及「2.尿沉渣檢查方法」中的說明相同。
[實施例]
以下藉由實施例來表現本發明的效果，但這些實施例並不作為本發明之任何限制。
(實施例1)適用於有形成分分析裝置之染色液的比較
將尿用作為試料，使用以下的染色液、裝置針對適用於有形成分分析裝置之染色液進行了研究。此外，染色液與檢體係以1：4混合，並實施測定。
[染色液的製備]
製備由下述組成所構成之染色液。
[染色液1]
MES-NaOH 100mM pH6.3
甲基藍 3mmol／L
黃色曙紅 6mmol／L
作為比較係使用了Sternheimer染色液(S染色液)、Sternheimer-Malbin染色液(SM染色液)以及Prescott-Brodie染色法(PB染色液)、Hansel染色液(H染色液)。
[測定]
使用尿中有形成分分析裝置USCANNER(註冊商標)(E)(東洋紡製)，各自使用上述染色液1以及S染色液、SM染色液、PB染色液、H染色液，依據裝置的附加文件的測定法，測定了尿試料。
尿試料的拍攝結果如圖1至圖5所示。進而，為了使背景的夾雜物的染色的程度更明確化，各自使用了染色液之情形的二值化影像如圖6至圖10所示。如圖所示般雖然在S染色液、SM染色液、PB染色液以及H染色液之中，出現在背景之夾雜物被染色，成為成分的誤認原因，在裝置難以正確的分析，但確認到在染色液1之中夾雜物不被染色，可更正確地進行有形成分的分析。SM染色液係在95%乙醇中混合了不具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素之結晶紫與番紅O之染色液，H染色液係在含有甲醇與乙醇之磷酸緩衝生理食鹽水中混合了吩噻嗪系色素之亞甲藍與黃色曙紅之染色液。由本實施例的結果可知，重要的是至少包含具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素(甲基藍)。
(實施例2)染色成分的混合比率的研究1
製作改變了染色成分的混合比率之以下的染色液。與實施例1同樣地將尿用作為試料，使用USCANNER(註冊商標)(E)實施測定，進行了適用於有形成分分析裝置之染色液染色成分的混合比率的研究。此外，染色液與檢體係以1：3混合，以目視鏡檢相同的尿試料作為對照。
[染色液的製備]
[染色液2至染色液8]
PIPES-NaOH 100mM pH6.5
甲基藍(MB) 參照以下表1
黃色曙紅(EY) 參照以下表1
[表1]
| 染色液2 | 染色液3 | 染色液4 | 染色液5 | 染色液6 | 染色液7 | 染色液8 | |
| MB(mmol/L) | 12.0 | 6.0 | 3.0 | 2.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 |
| EY(mmol/L) | 6.0 | 6.0 | 6.0 | 8.0 | 12.0 | 0.3 | 10.0 |
| EY/MB比 | 0.5 | 1.0 | 2.0 | 4.0 | 8.0 | 0.2 | 10.0 |
尿試料的分析結果如表2所示。關於所研究之染色液，確認到雖然染色液2至染色液6係與對照的鏡檢結果同樣地為良好的分析結果，但在染色液7、染色液8中難以進行正確的成分分析。由以上可知，黃色曙紅相對於甲基藍之較佳混合比率以莫耳比率計為0.5至8。
[表2]
| 染色液2 | 染色液3 | 染色液4 | 染色液5 | 染色液6 | 染色液7 | 染色液8 | 鏡檢 | |
| 紅血球(/HPF) | ≧100 | ≧100 | ≧100 | ≧100 | ≧100 | 30-49 | 50-99 | ≧100 |
| 白血球(/HPF) | 50-99 | 50-99 | 50-99 | 50-99 | 50-99 | 30-49 | 20-29 | 50-99 |
| 上皮細胞(/HPF) | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 |
| 圓柱體(/LPF) | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 |
| 細菌(/HPF) | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 |
| 結晶(/HPF) | 5-9 | 5-9 | 5-9 | 5-9 | 5-9 | ＜1 | ＜1 | 5-9 |
(實施例3)稀有成分的分析研究
改變染色液與檢體的混合比率，實施了是否可檢測稀有成分之研究。染色液係使用如以下記載的染色液9，與實施例1同樣地將尿用作為試料，使用USCANNER(註冊商標)(E)實施了測定。作為對照以染色液：檢體＝1：4混合並以目視鏡檢了相同的尿試料。
[染色液的製備]
製備由下述組成所構成之染色液。
[染色液9]
MES-NaOH 100mM pH6.0
乙二胺四乙酸氫三鉀 20mmol／L
甲基藍 2mmol／L
黃色曙紅 4mmol／L
尿試料的分析結果如表3所示。與鏡檢比較，確認到隨著染色液：檢體的比率由1：9成為1：3，可進而檢測之成分增加。尤其是確認提高了上皮細胞(在本例中確認為腎小管上皮)、圓柱體等稀有成分的檢定力。另外得知即使在提高檢體的比率而降低染色液的比率之情形中，藉由使用本發明的染色液亦可充分地將成分染色。
[表3]
| 染色液:檢體 | 鏡檢 | |||
| 1:3 | 1:6 | 1:9 | ||
| 紅血球(/HPF) | ≧100 | ≧100 | ≧100 | ≧100 |
| 白血球(/HPF) | ≧100 | 50-99 | 50-99 | 50-99 |
| 上皮細胞(/HPF) | 1-4 | 1-4 | ＜1 | ＜1 |
| 圓柱體(/LPF) | 5-9 | 1-4 | ＜1 | ＜1 |
| 細菌(/HPF) | 5-9 | 5-9 | 1-4 | ＜1 |
| 結晶(/HPF) | 5-9 | 5-9 | 1-4 | 1-4 |
(實施例4)染色成分的混合比率的研究2
為了確認使用其它具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素之情形亦可獲得同樣的效果，進行了以下的試驗。
首先，製作改變了染色成分的混合比率之以下的染色液。本試驗例之中，使用亮藍G作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，進而使用了藍色曙紅作為細胞質染色成分。將尿用作為試料，使用USCANNER(註冊商標)(E)來實施測定，進行了適用於有形成分分析裝置之染色液染色成分的混合比率的評價。此外，染色液與檢體係以1：3混合，以目視鏡檢相同的尿試料作為對照。
[染色液的製備]
[染色液10至染色液16]
PIPES-NaOH 100mM pH6.5
乙二胺四乙酸氫三鉀 20mmol／L
亮藍G(BG) 參照以下表4
藍色曙紅(EB) 參照以下表4
[表4]
| 染色液10 | 染色液11 | 染色液12 | 染色液13 | 染色液14 | 染色液15 | 染色液16 | |
| BG(mmol/L) | 12.0 | 6.0 | 3.0 | 2.0 | 1.5 | 2.0 | 1.0 |
| EB(mmol/L) | 6.0 | 6.0 | 6.0 | 8.0 | 12.0 | 0.3 | 10.0 |
| EB/BG比 | 0.5 | 1.0 | 2.0 | 4.0 | 8.0 | 0.2 | 10.0 |
該尿試料的分析結果如表5所示。確認到包含與甲基藍同樣地為可溶性且分子量為700至900之具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素(亮藍G)之染色液與細胞質染色成分以預定量混合之情形，與對照的鏡檢結果同樣地為良好的分析結果。具體而言，確認到染色液10至染色液14雖然與對照的鏡檢結果同樣地為良好的分析結果，但在染色液15、染色液16中難以正確地分析成分。由以上表示藍色曙紅相對於亮藍G的較佳混合比率以莫耳比率計為0.5至8。由本試驗例的結果確認到，組合任意的具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素以及任意的細胞質染色成分，可獲得同樣的效果。
[表5]
| 染色液10 | 染色液11 | 染色液12 | 染色液13 | 染色液14 | 染色液15 | 染色液16 | 鏡檢 | |
| 紅血球(/HPF) | ≧100 | ≧100 | ≧100 | ≧100 | ≧100 | 30-49 | 50-99 | ≧100 |
| 白血球(/HPF) | 30-49 | 30-49 | 30-49 | 30-49 | 30-49 | 20-29 | 10-19 | 30-49 |
| 上皮細胞(/HPF) | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 |
| 圓柱體(/LPF) | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 |
| 細菌(/HPF) | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 | ＜1 |
| 結晶(/HPF) | 1-4 | 1-4 | 1-4 | 1-4 | 1-4 | ＜1 | ＜1 | 1-4 |
(實施例5)染色成分的組合之研究
進而，製作改變了染色成分的組合之以下的染色液。將尿用作為試料，使用USCANNER(註冊商標)(E)實施測定，進行了適用於有形成分分析裝置之染色液染色成分的混合比率的研究。此外，染色液與檢體以1：3混合，以目視鏡檢相同的尿試料作為對照。
[染色液的製備]
[染色液17]
PIPES-NaOH 100mM pH6.5
乙二胺四乙酸氫三鉀 20mmol／L
甲基藍(MB) 3mmol／L
藍色曙紅(EB) 6mmol／L
[染色液18]
PIPES-NaOH 100mM pH6.5
乙二胺四乙酸氫三鉀 20mmol／L
亮藍G(BG) 3mmol／L
黃色曙紅(EY) 6mmol／L
尿試料的分析結果如表6所示。確認到藉由使用將具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素(甲基藍或是亮藍G)與細胞質染色成分(藍色曙紅或是黃色曙紅)以預定量混合之染色液，可獲得與對照的鏡檢結果同樣地良好的分析結果。由以上的結果確認到，本發明的效果可藉由具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素以及細胞質染色成分的任意的組合而發揮。
[表6]
[產業可利用性]
| 染色液 17 | 染色液 18 | 鏡檢 | |
| 紅血球(/HPF) | ≧100 | ≧100 | ≧100 |
| 白血球(/HPF) | 50-99 | 50-99 | 50-99 |
| 上皮細胞(/HPF) | ＜1 | ＜1 | ＜1 |
| 圓柱體(/LPF) | ＜1 | ＜1 | ＜1 |
| 細菌(/HPF) | ＜1 | ＜1 | ＜1 |
| 結晶(/HPF) | 1-4 | 1-4 | 1-4 |
藉由本發明，可在使用有形成分分析裝置藉由拍攝來分析試料中的有形成分中，進行正確的測定與更高度分析稀有成分。
[圖1]係表示使用了染色液1之尿沉渣檢查的拍攝影像之圖。
[圖2]係表示使用了S染色液之尿沉渣檢查的拍攝影像之圖。
[圖3]係表示使用了SM染色液之尿沉渣檢查的拍攝影像之圖。
[圖4]係表示使用了PB染色液之尿沉渣檢查的拍攝影像之圖。
[圖5]係表示使用了H染色液之尿沉渣檢查的拍攝影像之圖。
[圖6]係表示使用了染色液1之尿沉渣檢查的拍攝影像的二值化影像之圖。
[圖7]係表示使用了S染色液之尿沉渣檢查的拍攝影像的二值化影像之圖。
[圖8]係表示使用了SM染色液之尿沉渣檢查的拍攝影像的二值化影像之圖。
[圖9]係表示使用了PB染色液之尿沉渣檢查的拍攝影像的二值化影像之圖。
[圖10]係表示使用了H染色液之尿沉渣檢查的拍攝影像的二值化影像之圖。
Claims (26)
- 一種尿沉渣檢查用之超活體染色液，係含有具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素、以及細胞質染色成分；前述細胞質染色成分相對於前述具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的莫耳比為0.5至8，並且，超活體染色液與尿檢體以成為1：3至1：9之比率的方式進行混合來使用。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素係對水呈可溶性之色素。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素的分子量為700至900。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素係選自由甲基藍、專利藍V、專利藍A、海王星綠SBX、阿西侖亮藍R、酸性第一紫BG、亮酸性藍B、亮藍R、亮藍FCF、亮藍G、亮放電藍G、酸性藍、酸性藍13、酸性藍15、酸性藍100、酸性藍103、酸性藍104、以及酸性藍269所構成之群組中至少1種。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含甲基藍或亮藍G作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含甲基藍作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中細胞質染色成分係選自由黃色曙紅、藍色曙紅、耶奴斯綠、三苯基四唑氯化物溶液、中性紅、番紅、脈洛寧B液、蘇丹III、蘇丹黑、油紅、乳酸品紅、甲基綠、脈 洛寧、碘化鉀、亮甲酚藍、亮綠、靛胭脂、新亞甲基藍，以及淺綠所構成之群組中至少1種。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含黃色曙紅或藍色曙紅作為細胞質染色成分。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含黃色曙紅作為細胞質染色成分。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含甲基藍或亮藍G作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，並且，包含黃色曙紅或藍色曙紅作為細胞質染色成分。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中包含甲基藍作為具有陰離子性官能基之三芳基甲烷系色素，並且，包含黃色曙紅作為細胞質染色成分。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中進而含有螯合劑。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中實質上不含有有機溶媒。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中pH6至pH7。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中於尿沉渣檢查中夾雜物的染色受到抑制。
- 如請求項1所記載之尿沉渣檢查用之超活體染色液，其中尿沉渣檢查為影像處理方式的尿中有形成分分析裝置中之尿沉渣檢查。
- 一種尿沉渣檢查方法，係包含藉由如請求項1至16中任一項所記載之超活體染色液將尿檢體進行染色之步驟。
- 如請求項17所記載之尿沉渣檢查方法，其中將超活體染色液與尿檢體以成為1：3至1：9之比率混合而進行染色。
- 如請求項17所記載之尿沉渣檢查方法，其中包含於尿中有形成分分析裝置中拍攝經染色之尿檢體之步驟。
- 一種於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色抑制方法，係包含藉由如請求項1至16中任一項所記載之超活體染色液將尿檢體進行染色之步驟。
- 如請求項20所記載之於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色抑制方法，其中將超活體染色液與尿檢體以成為1：3至1：9之比率混合而進行染色。
- 如請求項20所記載之於尿沉渣檢查中之夾雜物的染色抑制方法，其中包含於尿中有形成分分析裝置中拍攝經染色之尿檢體之步驟。
- 一種提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法，係包含藉由如請求項1至16中任一項所記載之超活體染色液將尿檢體進行染色之步驟。
- 如請求項23所記載之提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法，其中稀有成分係選自由上皮細胞以及圓柱體所構成之群組中至少1種。
- 如請求項23所記載之提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法，其中將超活體染色液與尿檢體以成為1：3至1：9之比率混合而進行染色。
- 如請求項23所記載之提高於尿沉渣檢查中之稀有成分的檢定力之方法，其中係包含於尿中有形成分分析裝置中拍攝經染色之尿檢體之步驟。
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