TWI763665B - 細胞培養用容器，及其使用方法 - Google Patents

細胞培養用容器，及其使用方法

Info

Publication number
TWI763665B
TWI763665B TW106112942A TW106112942A TWI763665B TW I763665 B TWI763665 B TW I763665B TW 106112942 A TW106112942 A TW 106112942A TW 106112942 A TW106112942 A TW 106112942A TW I763665 B TWI763665 B TW I763665B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
container
cells
filter member
cell culture
injection
Prior art date
Application number
TW106112942A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201803979A (zh
Inventor
田中郷史
戶谷貴彦
Original Assignee
日商東洋製罐集團控股股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 日商東洋製罐集團控股股份有限公司 filed Critical 日商東洋製罐集團控股股份有限公司
Publication of TW201803979A publication Critical patent/TW201803979A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI763665B publication Critical patent/TWI763665B/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/02—Membranes; Filters
    • C12M25/04—Membranes; Filters in combination with well or multiwell plates, i.e. culture inserts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/02—Membranes; Filters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/26—Inoculator or sampler
    • C12M1/28—Inoculator or sampler being part of container
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/04—Flat or tray type, drawers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/12—Well or multiwell plates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/14—Bags
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/24—Gas permeable parts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/26—Constructional details, e.g. recesses, hinges flexible
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/34—Internal compartments or partitions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
    • C12M29/04—Filters; Permeable or porous membranes or plates, e.g. dialysis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
    • C12M3/06—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus with filtration, ultrafiltration, inverse osmosis or dialysis means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
    • C12M3/08—Apparatus for tissue disaggregation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M33/00—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus
    • C12M33/14—Means for introduction, transport, positioning, extraction, harvesting, peeling or sampling of biological material in or from the apparatus with filters, sieves or membranes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

在具備容器本體(2)及注入排出用端口(3a、3b)之細胞培養用容器1中，將容器本體2的內部藉由過濾構件(4)劃分成複數個槽(1st、2nd)。藉此，以便可簡便且效率良好地施行細胞培養時所施行之各種操作。

Description

細胞培養用容器，及其使用方法
本發明係關於供予細胞培養之用途以便簡便且效率良好地施行細胞培養時所施行之各種操作之細胞培養用容器，及其使用方法。
近年來，在醫藥品的生產、基因治療、再生醫療、免疫療法等醫藥學/生化學領域中，正謀求在人工環境下效率良好地大量培養細胞(包含組織、微生物、病毒等)。
為了因應此種要求，本申請人係針對可一面構築封閉系統環境來減低污染的風險，一面有效率地施行細胞培養之細胞培養系統反覆進行檢討。
舉例而言，在專利文獻1中，已提案有將用於培養細胞之培養容器、用於預先貯藏培養基等之培養基貯藏容器、用於注入細胞之細胞注入容器、及回收培養後之細胞懸浮液之細胞回收容器藉由導管進行連結，並構築封閉系統環境而成之細胞培養用套組。依據此種細胞培養用套組，能夠在套組內一面維持封閉系統一面施行細胞注入 至培養基追加、取樣、回收。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]國際公開2013/114845號小冊
且說，在專利文獻1中，已示出當在回收經培養之細胞時，將培養容器靜置而使細胞懸浮液中之細胞發生沉降後，排出細胞懸浮液之上清液，使液量減低之後，將經濃縮之細胞懸浮液自培養容器移送至細胞回收容器之例。
此外，在細胞培養時，通常需要數日~數週的期間，因而為了使細胞的成長不會因培養基成分的枯竭或細胞之代謝物的蓄積而受到阻礙，有時會在培養期間中，視需要施行培養基更換。在施行培養基更換時，一般考慮藉由排出細胞懸浮液之上清液來去除舊的培養基，同時追加新的培養基予以代替。
然而，依此種方式施行細胞的回收或培養基更換時，必須在排出細胞懸浮液之上清液之前，先將培養容器靜置而使細胞懸浮液中之細胞發生沉降，直至使細胞發生沉降為止需要時間。另一方面，即便耗費充分的時間使細胞懸浮液中之細胞發生沉降，亦有因排出操作而使細胞混入上清液中，細胞便與上清液一起被排出之疑慮。特 定而言，當在施行培養基更換時，期望盡可能去除較多舊的培養基，並追加更多新的培養基，但上清液的排出量越多，越無法避免細胞的混入。
此外，在施行培養基更換時，為了防止細胞與舊的培養基一起被排出，一般亦考慮在培養容器所設之端口的流路安裝過濾器。
然而，端口的流路徑通常為1~10mm左右，過濾器的面積亦會變得比較小，因而會有因所捕捉之細胞而容易在過濾器發生堵塞，妨礙舊的培養基的排出之疑慮。再者，亦會有被過濾器所捕捉之細胞未返回至培養容器內，而在被過濾器捕捉之狀態下死滅之疑慮。
本發明係鑑於上述情事而完成者，其目的為提供供予細胞培養之用途以便簡便且效率良好地施行細胞培養時所施行之各種操作之細胞培養用容器，及其使用方法，其係例如可在施行培養基更換時，抑制細胞與舊的培養基一起被排出等。
本發明所涉及之細胞培養用容器為供予細胞培養之用途之細胞培養用容器，其係具備容器本體及注入排出用端口，前述容器本體的內部係呈現藉由至少一個過濾構件劃分成複數個槽之構成。
根據本發明，可簡便且效率良好地施行細胞培養時所施行之各種操作。
1‧‧‧容器(細胞培養用容器)
1st‧‧‧第一槽
2‧‧‧容器本體
2a‧‧‧頂面
2b‧‧‧底面
2nd‧‧‧第二槽
3a、3b、3c‧‧‧注入排出用端口
3rd‧‧‧第三槽
4‧‧‧過濾構件
5‧‧‧凹部
6‧‧‧凹部
7‧‧‧側壁部
Cagg‧‧‧細胞的凝集塊
Cdiv‧‧‧經分割之凝集塊
Cs‧‧‧單一細胞
Ca‧‧‧細胞
Cb‧‧‧細胞
[圖1]示出本發明之第一實施形態所涉及之細胞培養用容器之一例之說明圖。
[圖2]示出本發明之第一實施形態所涉及之細胞培養用容器之使用例之說明圖。
[圖3]示出本發明之第一實施形態所涉及之細胞培養用容器之其他使用例之說明圖。
[圖4]示出本發明之第一實施形態所涉及之細胞培養用容器之其他使用例之說明圖。
[圖5]示出本發明之第一實施形態所涉及之細胞培養用容器之其他使用例之說明圖。
[圖6]示出本發明之第二實施形態所涉及之細胞培養用容器之一例之說明圖。
[圖7]示出本發明之第二實施形態所涉及之細胞培養用容器之使用例之說明圖。
[圖8]示出本發明之第三實施形態所涉及之細胞培養用容器之一例之說明圖。
[圖9]示出本發明之第三實施形態所涉及之細胞培養用容器之使用例之說明圖。
[圖10]示出本發明之第四實施形態所涉及之細胞培養 用容器之一例之說明圖。
[圖11]示出本發明之第四實施形態所涉及之細胞培養用容器之使用例之說明圖。
[圖12]示出本發明之第五實施形態所涉及之細胞培養用容器之一例之說明圖。
以下，針對本發明之較佳實施形態，一面參照圖面一面進行說明。
[第一實施形態]
首先，針對本發明之第一實施形態進行說明。
另外，圖1為示出本實施形態所涉及之細胞培養用容器之一例之說明圖。
圖1所示作為本實施形態之一例之容器1係具備容器本體2及注入排出用端口3a、3b。且，容器本體2的內部係藉由薄片狀過濾構件4劃分成頂面2a側之第一槽1st、及底面2b側之第二槽2nd，在頂面2a側之第一槽1st、及底面2b側之第二槽2nd各具備注入排出用端口3a、3b。
容器本體2只要可在不妨礙培養之情形下收容培養基或使細胞懸浮於培養基中而成之細胞懸浮液，其具體的形態即無限定。舉例而言，可製成藉由射出成形、吹塑成形等成形為既定的形狀之容器，亦可製成將二片塑膠薄膜重疊並將周邊部封合而成之袋狀容器。
注入排出用端口3a、3b係成為將培養基或細胞注入、排出等時之出入口之部位，可藉由例如將培養基或細胞等能夠流通之管狀構件安裝於容器本體2而具備。
此外，雖然未特別圖示，在頂面2a側之第一槽1st及底面2b側之第二槽2nd，亦可另行具備例如用於對培養中之培養基或細胞進行取樣等之注入排出用端口。
藉由過濾構件4所劃分出之各槽可視需要具備二個以上的注入排出用端口。
在圖1所示之一例中，容器本體2係由塑膠薄膜所組成，周邊部被封合，其頂面2a側具有膨出成台地狀之膨出形狀，呈平坦面之頂面2a的邊緣係以傾斜並連接至周邊部之方式形成。再者，底面2b側亦具有膨出成台地狀之膨出形狀，呈平坦面之底面2b的邊緣係以傾斜並連接至周邊部之方式形成。
容器本體2可藉由具有此種膨出形狀，而抑制注入培養基或細胞時之變形。
即，在僅將二片塑膠薄膜重疊並將周邊部封合而成之平袋狀容器中，隨著容器內被內容液所填滿，底面會以周邊部抬起之方式發生變形，但藉由考慮注入量來設計容器本體2的膨出形狀，便能夠抑制注入培養基或細胞時之容器本體2的變形，而使容器本體2的底面2b保持平坦面。
從而，圖1所示之容器1係適合用於要求使培養基中之細胞均勻地沉降於容器本體2的底面2b，且沉降於底面2b之細胞的密度(每單位面積之細胞數)不會發生不均之情 況。
圖1所示之容器1可例如依下列方式予以製造。
首先，準備二片塑膠薄膜及薄片狀過濾構件4，視需要將此等裁斷，對齊其大小。然後，將其中一塑膠薄膜作為成為容器本體2的頂面2a側之頂面側塑膠薄膜，將另一塑膠薄膜作為成為容器本體2的底面2b側之底面側塑膠薄膜，並藉由真空成形、壓空成形等以保留其周邊部而膨出成台地狀之方式將此等進行成形。
其次，在已成形之頂面側塑膠薄膜與底面側塑膠薄膜之間，***薄片狀過濾構件4，並將此等的周邊部重合。然後，在頂面側塑膠薄膜與過濾構件4之間，及底面側塑膠薄膜與過濾構件4之間，在各周邊部之既定的位置，夾入形成注入排出用端口3a、3b之管狀構件，在該狀態下藉由熱熔著封合周邊部，視需要將周邊部進行修整。藉此，製造出圖1所示之容器1。
形成容器本體2之塑膠薄膜較佳為具有按照JIS K 7126之氣體穿透度試驗方法，於試驗溫度37℃測定而得之氧穿透度為5000mL/(m2．day．atm)以上的氣體穿透性者。
此外，該塑膠薄膜較佳係一部分或全部具有透明性，以便可確認細胞培養的進行狀況或細胞的狀態等。
作為形成容器本體2之塑膠薄膜所用之材料，並無特別限定。可列舉例如聚乙烯、聚丙烯、乙烯-醋酸 乙烯酯共聚物、聚酯、聚醯胺、聚矽氧系彈性體、聚苯乙烯系彈性體、四氟乙烯-六氟丙烯共聚物(FEP)等熱可塑性樹脂。此等可以單層使用，亦可積層同種或異種材料使用，較佳係具有既定的氣體穿透性。再者，若考慮到將周邊部封合時之熱熔著性，較佳係具有作為密封劑層發揮機能之層。
此外，雖然具有可撓性，但為了具有可保持容器本體2的膨出形狀之適度的形狀保持性，形成容器本體2所用之塑膠薄膜的厚度較佳為30~200μm。
此外，形成注入排出用端口3a、3b之管狀構件可使用例如聚乙烯、聚丙烯、氯乙烯、聚苯乙烯系彈性體、FEP等熱可塑性樹脂，藉由射出成形、擠出成形等，成形為既定的形狀。
此外，過濾構件4係使用具有至少容許培養基通過之細孔之多孔質體所形成，會使細胞鑽入細孔而無法逃脫者並不適合。由此種觀點而言，較佳係使用將由聚烯烴、聚酯、尼龍等聚醯胺、聚四氟乙烯等氟系樹脂等所組成之合成樹脂纖維予以編織而成之網狀薄片等來形成。
過濾構件4之細孔的大小可依容器1之使用態樣適宜選擇。對於過濾構件4，較佳係實施親水處理以便提高培養基的通過性，藉由實施親水處理，亦可使細胞難以進行接著。
此外，過濾構件4係只要在不會損及容器1之使用態樣所要求之機能之前提下，至少一部分使用如上述之多孔質 體來形成即可。舉例而言，在依前述之方式製造容器1時，藉由以裁斷成框狀之塑膠薄膜保持上述多孔質體的周圍等來形成過濾構件4，亦可使與頂面側及底面側塑膠薄膜之熱熔著更加良好。
此外，容器本體2的大小並無特別限定，較佳係設為例如縱50~500mm、橫50~500mm。
其次，針對圖1所示作為本實施形態之一例之容器1之使用例進行說明。
[第一實施形態之使用例1]
圖2係示出將圖1所示之容器1作為可簡便且效率良好地施行培養基更換等操作之培養容器來供予細胞培養之用途之例。
在本使用例中，係在被培養基所填滿之容器本體2內，由底面2b側之第二槽2nd所具備之注入排出用端口3b注入培養對象的細胞C並施行培養。此時，考慮培養對象的細胞C的大小，而選擇具有不容許該種細胞C通過之細孔者作為過濾構件4。藉此，可使培養中之細胞C留在底面2b側之第二槽2nd，不會移動至頂面2a側之第一槽1st(參照圖2(a))。
在培養期間中施行培養基更換時，係由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a排出舊的培養基(參照圖2(b))。此時，由於可使培養中之細胞C留在底面2b側之第二槽2nd，因而可使其不與舊的培養基一 起被排出，並能夠排出更多舊的培養基。排出舊的培養基後，由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a注入與其同量的新的培養基(參照圖2(c))，繼續進行培養。
如此，在本使用例中，可簡便且效率良好地施行培養期間中之培養基更換，特定而言，舊的培養基的排出操作。
此外，本使用例中之容器1可以使細胞C留在底面2b側之第二槽2nd之狀態，由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a排出容器內之內容液。因此，若使用作為例如專利文獻1之細胞培養用套組之培養容器，亦可在不耗費時間於細胞的沉降之情形下簡便且效率良好地施行專利文獻1所例示之細胞的回收操作。再者，藉由使用作為專利文獻1之細胞培養用套組之細胞回收容器，將由培養容器所回收之細胞懸浮液移送至底面2b側之第二槽2nd，並由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a交替進行洗淨液的注入、排出而施行細胞的洗淨操作，便可在專利文獻1之細胞培養用套組中導入洗淨回收機構。
此外，亦能夠以在底面2b側之第二槽2nd培養抗體產生細胞並自頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a取出所產生之抗體之方式應用為抗體產生容器。
如此，在本使用例中，藉由選擇具有不容許 培養對象的細胞C通過之細孔者作為過濾構件4，並在藉由過濾構件4所劃分出之其中一槽2nd注入細胞C並施行培養，便可以使細胞C留在該槽2nd之狀態，由藉由過濾構件4所劃分出之另一槽1st所具備之注入排出用端口3a注入排出培養基或洗淨液等。
從而，在使用圖1所示之容器1時，亦可視需要在頂面2a側之第一槽1st施行細胞培養，由底面2b側之第二槽2nd所具備之注入排出用端口3b進行培養基或洗淨液等的注入排出。
[第一實施形態之使用例2]
圖3係示出將圖1所示之容器1作為可簡便且效率良好地施行將細胞的凝集塊Cagg分割成所期望的大小之操作之凝集塊分割容器來供予細胞培養之用途之例。
在本使用例中，係在被培養基所填滿之容器本體2內，由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a連同培養基壓送凝集塊Cagg。此時，選擇具有對應於欲分割凝集塊Cagg之大小之細孔者作為過濾構件4。藉此，凝集塊Cagg係在通過過濾構件4時，一面被分割成對應於過濾構件4之細孔之大小，一面逐漸被送至底面2b側之第二槽2nd。
經分割成所期望的大小之凝集塊Cdiv可自底面2b側之第二槽2nd所具備之注入排出用端口3b取出。
如此，在本使用例中，藉由選擇具有對應於 欲分割細胞的凝集塊Cagg之大小之細孔者作為過濾構件4，並在藉由過濾構件4所劃分出之其中一槽1st中，連同培養基壓送凝集塊Cagg，便可簡便且效率良好地施行將細胞的凝集塊Cagg分割成所期望的大小之操作。
從而，在使用圖1所示之容器1時，亦可視需要由底面2b側之第二槽2nd所具備之注入排出用端口3b連同培養基壓送凝集塊Cagg。
此外，雖然未特別圖示，藉由預先將容器本體2的內部劃分成三個槽以上，並適宜調整劃分出各槽之過濾構件4之細孔的大小，亦可階段性地分割凝集塊Cagg。再者，藉由使各槽中具備注入排出用端口，亦可分別地取出經分割成不同大小之凝集塊Cdiv。
[第一實施形態之使用例3]
圖4係示出將圖1所示之容器1用作可簡便且效率良好地施行將混雜之大小相異的二種細胞(例如單一細胞Cs及其凝集塊Cagg)進行分離之操作之細胞分離容器來供予細胞培養之用途之例。
在本使用例中，係在被培養基所填滿之容器本體2內，由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a注入混雜有大小相異的二種細胞Cs、Cagg之細胞懸浮液(step 1)。注入後，將容器1靜置，視需要給予振動。此時，選擇具有容許欲分離之二種細胞Cs、Cagg中之較小的細胞Cs通過但不容許較大的細胞Cagg通過之細孔者作為 過濾構件4。藉此，可使較小的細胞Cs通過過濾構件4之細孔而逐漸沉降於底面2b側之第二槽2nd，較大的細胞Cagg則留在頂面2a側之第一槽1st。
沉降於底面2b側之第二槽2nd之較小的細胞Cs可與較大的細胞Cagg分離，並自底面2b側之第二槽2nd所具備之注入排出用端口3b取出(step 2)。另一方面，與較小的細胞Cs分離而留在頂面2a側之第一槽1st之較大的細胞Cagg可自頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a取出(step 3)。
如此，在本使用例中，藉由選擇具有容許混雜之細胞中之至少一種細胞通過但不容許其以外之細胞通過之細孔者作為過濾構件4，並在藉由過濾構件4所劃分出之其中一槽1st中，注入混雜之大小相異的細胞，自藉由過濾構件4所劃分出之另一槽2nd取出通過過濾構件4之細胞，便可簡便且效率良好地施行將混雜之大小相異的細胞進行分離之操作。
從而，雖然未特別圖示，藉由預先將容器本體2的內部劃分成三個槽以上，並適宜調整劃分出各槽之過濾構件4之細孔的大小，同時使各槽中具備注入排出用端口，亦可將大小相異的三種以上的細胞進行分離。
[第一實施形態之使用例4]
圖5係示出將圖1所示之容器1作為可簡便且效率良好地施行將相異種類的細胞Ca、Cb在同一容器內進行共培 養後，分別地取出此等之操作之共培養容器來供予細胞培養之用途之例。
在本使用例中，係在被培養基所填滿之容器本體2內，由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a注入細胞Ca，同時由底面2b側之第二槽2nd所具備之注入排出用端口3b注入細胞Cb，並將細胞Ca及細胞Cb進行共培養。此時，選擇具有不容許經共培養之所有細胞Ca、Cb通過之細孔者作為過濾構件4。藉此，可以分別地使其中一細胞Ca留在頂面2a側之第一槽1st且另一細胞Cb留在底面2b側之第二槽2nd之狀態，在兩者不會發生摻混之情形下在同一容器內進行共培養。
在培養終了後，其中一細胞Ca可自頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a取出，另一細胞Cb可自底面2b側之第二槽2nd所具備之注入排出用端口3b取出。
如此，在本使用例中，藉由選擇具有不容許經共培養之所有細胞Ca、Cb通過之細孔者作為過濾構件4，並在藉由過濾構件4所劃分出之各槽1st、2nd，按種類分別地注入相異種類的細胞Ca、Cb，便可在該細胞Ca、Cb不會發生摻混之情形下在同一容器內進行共培養，且在培養終了後，可簡便且效率良好地施行分別地取出此等之操作。
從而，雖然未特別圖示，藉由預先將容器本體2的內部劃分成三個槽以上，並使各槽中具備注入排出 用端口，亦可將三種以上的細胞進行共培養。
[第二實施形態]
其次，針對本發明之第二實施形態進行說明。
另外，圖6為示出本實施形態所涉及之細胞培養用容器之一例之說明圖。
圖6所示作為本實施形態之一例之容器1係具備容器本體2及注入排出用端口3a。且，容器本體2的內部係藉由薄片狀過濾構件4劃分成頂面2a側之第一槽1st、及底面2b側之第二槽2nd，在頂面2a側之第一槽1st，具備注入排出用端口3a。
圖6所示之容器1於底面2b側之第二槽2nd不具備注入排出用端口3b之方面，係與圖1所示作為第一實施形態之一例之容器1有所不同，但其以外之構成則共通。此種容器1可依與第一實施形態之圖1所示之容器1同樣之方式予以製造，此時，只要將形成注入排出用端口3b之管狀構件予以省略即可。
本實施形態與前述之第一實施形態不同處係在於底面2b側之第二槽2nd不具備注入排出用端口3b之方面，其以外之構成則與前述之第一實施形態共通，因而省略重複說明。
另外，與第一實施形態同樣地，容器本體2之具體的形態當然不受限定。
其次，針對圖6所示作為本實施形態之一例之 容器1之使用例進行說明。
[第二實施形態之使用例]
圖7係示出將圖6所示之容器1作為當在培養形成凝集塊Cagg之細胞Cs時，可簡便且效率良好地施行其培養基更換等操作之培養容器來供予細胞培養之用途之例。
在本使用例中，係以形成凝集塊Cagg之細胞Cs作為培養對象，並選擇具有容許形成凝集塊Cagg前之細胞(單一細胞)Cs通過但不容許凝集塊Cagg通過之細孔者作為過濾構件4。
藉此，若在被培養基所填滿之容器本體2內，由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a注入培養對象的細胞(單一細胞)Cs，則細胞Cs係通過過濾構件4，而逐漸沉降於底面2b側之第二槽2nd(參照圖7(a))。且，若進行培養，則細胞Cs會形成凝集塊Cagg，變得無法通過過濾構件4，藉此，可以使凝集塊Cagg留在底面2b側之第二槽2nd之狀態，使培養進行(參照圖7(b))。
從而，在培養期間中施行培養基更換時，藉由由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a排出舊的培養基，同時注入新的培養基(參照圖7(c))，便可在使凝集塊Cagg留在底面2b側之第二槽2nd之狀態下，施行培養基更換。再者，在培養終了後，藉由由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a交替施行洗淨液 的注入、排出，亦可在使凝集塊Cagg留在底面2b側之第二槽2nd之狀態下，洗淨凝集塊Cagg。
如此，在本使用例中，當在培養形成凝集塊Cagg之細胞Cs時，藉由選擇具有容許形成凝集塊Cagg前之細胞Cs通過但不容許凝集塊Cagg通過之細孔者作為過濾構件4，並將細胞Cs注入第一槽1st，接著，使其沉降於第二槽2nd，以使所形成之凝集塊Cagg留在第二槽2nd之狀態進行培養，便可簡便且效率良好地施行培養期間中之培養基更換、或培養終了後之洗淨等操作。
且，洗淨後，藉由在容器本體2內注入保存液等，亦可將容器1利用於經培養之細胞(凝集塊Cagg)的保管、搬送。
另外，雖然未特別圖示，與前述之第一實施形態同樣地，只要使底面2b側之第二槽2nd具備注入排出用端口3b，亦可自注入排出用端口3b取出經培養之細胞(凝集塊Cagg)。
[第三實施形態]
其次，針對本發明之第三實施形態進行說明。
另外，圖8為示出本實施形態所涉及之細胞培養用容器之一例之說明圖。
圖8所示作為本實施形態之一例之容器1係具備容器本體2及注入排出用端口3a。且，容器本體2的內部係藉由薄片狀過濾構件4劃分成頂面2a側之第一槽1st，及 底面2b側之第二槽2nd，在頂面2a側之第一槽1st，具備注入排出用端口3a，同時在容器本體2的底面2b，設有複數個凹部5。
圖8所示之容器1於在容器本體2的底面2b設有複數個凹部5之方面，係與圖6所示作為第二實施形態之一例之容器1有所不同，但其以外之構成則共通。此種容器1可依與第二實施形態之圖6所示之容器1同樣之方式予以製造，藉由在將底面側塑膠薄膜進行成形時，適宜調整模具等，便可將凹部5依所期望的形狀、排列進行成形。
藉由在容器本體2的底面2b設有複數個凹部5，在培養基中沉降之細胞係集中於各凹部5的底部，便可以細胞密度提高之狀態，效率良好地進行培養。為了使集中於各凹部5的底部之細胞不會在容器本體2內移動，而是留在一個凹部5中，維持細胞密度提高之狀態，凹部5較佳係其開口徑(直徑)為0.3~10mm，更佳為0.3~5mm，再佳為0.5~4mm，特佳為0.5~2mm，深度較佳為0.1mm以上。
此外，在所圖示之例中，係將凹部5形成為碗狀，但視需要亦可形成為圓錐狀、圓錐台狀等。
本實施形態與前述之第二實施形態不同處係在於在容器本體2的底面2b設有複數個凹部5之方面，其以外之構成則與前述之第二實施形態共通，因而省略重複說明。
另外，與第一及第二實施形態同樣地，容器本體2之 具體的形態當然不受限定。
其次，針對圖8所示作為本實施形態之一例之容器1之使用例進行說明。
[第三實施形態之使用例]
圖9係示出將圖8所示之容器1作為當在培養形成凝集塊Cagg之細胞Cs時，可以細胞密度提高之狀態效率良好地進行培養，同時簡便且效率良好地施行其培養基更換等操作之培養容器來供予細胞培養之用途之例。
在本使用例中，係以形成凝集塊Cagg之細胞Cs作為培養對象，並選擇具有容許形成凝集塊Cagg前之細胞(單一細胞)Cs通過但不容許凝集塊Cagg通過之細孔者作為過濾構件4。
藉此，若在被培養基所填滿之容器本體2內，由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a注入培養對象的細胞(單一細胞)Cs，則細胞Cs係通過過濾構件4，而逐漸沉降於底面2b側之第二槽2nd。沉降之細胞Cs係集中於各凹部5的底部，可以細胞密度提高之狀態效率良好地進行培養。且，若進行培養，則細胞Cs會形成凝集塊Cagg，變得無法通過過濾構件4，藉此，可以使凝集塊Cagg留在底面2b側之第二槽2nd之狀態，使培養進行。
從而，在培養期間中施行培養基更換時，藉由由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a排出舊的培養基，同時注入新的培養基，便可在使凝集塊Cagg 留在底面2b側之第二槽2nd之狀態下，施行培養基更換。此時，雖然未特別圖示，較佳係例如預先將過濾構件4接著於底面2b之凹部5的周圍(位於鄰接的凹部5之間之面)等，並以覆蓋凹部5之開口部之方式將過濾構件4固定於容器本體2內。藉由如此進行，可預先抑止集中於凹部5的底部之細胞(凝集塊Cagg)的移動，而更確實地留在一個凹部5中。再者，在培養終了後，藉由由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a交替施行洗淨液的注入、排出，便可在使凝集塊Cagg留在底面2b側之第二槽2nd之狀態下，洗淨凝集塊Cagg。
如此，在本使用例中，當在培養形成凝集塊Cagg之細胞Cs時，藉由選擇具有容許形成凝集塊Cagg前之細胞Cs通過但不容許凝集塊Cagg通過之細孔者作為過濾構件4，並將細胞Cs注入第一槽1st，接著，使其沉降於第二槽2nd，一面將沉降之細胞Cs集中於凹部5的底部，以細胞密度提高之狀態效率良好地進行培養，一面將所形成之凝集塊Cagg以留在第二槽2nd之狀態進行培養，便可簡便且效率良好地施行培養期間中之培養基更換、或培養終了後之洗淨等操作。
且，洗淨後，藉由在容器本體2內注入保存液等，亦可將容器1利用於經培養之細胞(凝集塊Cagg)的保管、搬送。
另外，雖然未特別圖示，與前述之第一實施形態同樣地，只要使底面2b側之第二槽2nd具備注入排出用端口 3b，亦可自注入排出用端口3b取出經培養之細胞(凝集塊Cagg)。
[第四實施形態]
其次，針對本發明之第四實施形態進行說明。
另外，圖10為示出本實施形態所涉及之細胞培養用容器之一例之說明圖。
圖10所示作為本實施形態之一例之容器1係具備容器本體2及注入排出用端口3a、3b、3c。且，容器本體2的內部係藉由二個薄片狀過濾構件4劃分成頂面2a側之第一槽1st、底面2b側之第二槽2nd、及位於此等之間之第三槽3rd。
此外，在頂面2a側之第一槽1st，具備成為其流入流出口之注入排出用端口3a(IN)、3a(OUT)，與其同樣地，在底面2b側之第二槽2nd，具備成為其流入流出口之注入排出用端口3b(IN)、3b(OUT)。再者，在第三槽3rd，具備注入排出用端口3c。
圖10所示之容器1於將容器本體2的內部劃分成三個槽，且在各槽中具備注入排出用端口，同時在頂面2a側之第一槽1st具備二個注入排出用端口3a(IN)、3a(OUT)，在底面2b側之第二槽2nd具備二個注入排出用端口3b(IN)、3b(OUT)之方面，係與圖1所示作為第一實施形態之一例之容器1有所不同，但其以外之構成則共通。此種容器1可例如依下列方式予以製造。
首先，準備二片塑膠薄膜及二片薄片狀過濾構件4，視需要將此等裁斷，對齊其大小。然後，將其中一塑膠薄膜作為成為容器本體2的頂面2a側之頂面側塑膠薄膜，將另一塑膠薄膜作為成為容器本體2的底面2b側之底面側塑膠薄膜，並藉由真空成形、壓空成形等以保留其周邊部而膨出成台地狀之方式將此等進行成形。
其次，在已成形之頂面側塑膠薄膜與底面側塑膠薄膜之間，***二片薄片狀過濾構件4，並將此等的周邊部重合。然後，在頂面側塑膠薄膜與過濾構件4之間，在其周邊部之既定的位置，夾入形成注入排出用端口3a(IN)、3a(OUT)之管狀構件，在底面側塑膠薄膜與過濾構件4之間，在其周邊部之既定的位置，夾入形成注入排出用端口3b(IN)、3b(OUT)之管狀構件，在二片薄片狀過濾構件4之間，在其周邊部之既定的位置，夾入形成注入排出用端口3c之管狀構件，在該狀態下藉由熱熔著封合周邊部，視需要將周邊部進行修整。藉此，製造出圖10所示之容器1。
本實施形態與前述之第一實施形態不同處係在於容器本體2的內部係劃分成三個槽，各槽具備注入排出用端口，同時頂面2a側之第一槽1st具備二個注入排出用端口3a(IN)、3a(OUT)，底面2b側之第二槽2nd具備二個注入排出用端口3b(IN)、3b(OUT)之方面，其以外之構成則與前述之第一實施形態共通，因而省略重複說明。
另外，與第一、第二，及第三實施形態同樣地，容器本體2之具體的形態當然不受限定。
其次，針對圖10所示作為本實施形態之一例之容器1之使用例進行說明。
[第四實施形態之使用例]
圖11係示出將圖10所示之容器1作為可簡便且效率良好地施行將培養對象的細胞C在生物體內成長、增殖、分化之環境予以再現之操作之培養容器來供予細胞培養之用途之例。
在本使用例中，係由第三槽3rd所具備之注入排出用端口3c注入培養對象的細胞C並施行培養，此時，使成分組成相異的培養基流通於頂面2a側之第一槽1st、及底面2b側之第二槽2nd各者。更詳細而言，使由頂面2a側之第一槽1st所具備之注入排出用端口3a(IN)、及底面2b側之第二槽2nd所具備之注入排出用端口3b(IN)各者所流入之成分組成相異的培養基一面在第三槽3rd中發生摻混，一面由各注入排出用端口3a(OUT)、3b(OUT)流出。
此時，考慮培養對象的細胞C的大小，而選擇具有不容許該種細胞C通過之細孔者作為過濾構件4。且，流通於頂面2a側之第一槽1st、及底面2b側之第二槽2nd各者之培養基係包含控制細胞的成長、增殖、分化之各種細胞外基質、或給予細胞刺激之各種信號物質等，並以此等 在第三槽3rd中發生摻混時，其濃度梯度或到達方向等係成為與生物體內之環境同等之方式，調整成分組成或流量/流速等。藉此，可一面在第三槽3rd中再現生物體內之環境，一面以使細胞C留在第三槽3rd之狀態施行培養。
如此，在本使用例中，藉由選擇具有不容許培養對象的細胞C通過之細孔者作為過濾構件4，並一面使成分組成相異的培養基流通於第一槽1st及第二槽2nd各者，一面在第三槽3rd注入細胞C並施行培養，便可簡便且效率良好地施行將培養對象的細胞C在生物體內成長、增殖、分化之環境予以再現之操作。
[第五實施形態]
其次，針對本發明之第五實施形態進行說明。
另外，圖12為示出本實施形態所涉及之細胞培養用容器之一例之說明圖。
以往，在細胞培養時，係廣泛使用孔盤。舉例而言，在由ES細胞或iPS細胞分化誘導成神經幹細胞、或心肌、胰臟、肝臟、軟骨等時，一般係採用將細胞接種於孔盤(例如96孔盤)中，使其在孔內形成凝集塊並進行分化誘導之方法。
然而，在使用孔盤培養細胞時，必須對各孔施行培養基更換。因此，需要以小心不使培養中之細胞混入地利用吸量管吸上並排出舊的培養基，接著，利用吸量管注入新的培養基之方式，重複進行繁雜的吸量管操作多 次達孔的數量。
本實施形態係用於在使用如孔盤般具有複數個細胞培養部之容器培養細胞時，可簡便且效率良好地施行培養基更換等操作。
圖12所示作為本實施形態之一例之容器1係具備容器本體2，該容器本體2具有成為細胞培養部之複數個凹部6，各凹部6之開口部係受到薄片狀過濾構件4所覆蓋。覆蓋各凹部6之開口部之過濾構件4係以密接於凹部6的周圍(位於鄰接的凹部6之開口部之間之面)之方式安裝於容器本體2。較佳係能夠剝離地接著於容器本體2。
在本實施形態中，容器本體2只要可在不妨礙培養之情形下將細胞或培養基等收容於各凹部6中，其具體的形態即無限定，較佳係在容器本體2中，預先設有以圍繞其周圍之方式升起之側壁部7。
此外，針對過濾構件4，係如前述之第一實施形態所說明。在本實施形態中，係以形成凝集塊之細胞作為培養對象，並選擇具有不容許凝集塊通過之細孔者作為過濾構件4。
在使用此種容器1將培養對象的細胞進行培養時，係在成為細胞培養部之各凹部6，連同培養基注入培養對象的細胞而開始進行培養。且，隨著培養進行，注入至凹部6之細胞係形成凝集塊。
當培養進行至更換培養基之時期，係由各凹部6排出舊的培養基。此時，由於覆蓋各凹部6之開口部之 過濾構件4不容許凝集塊通過，故在施行培養基更換時，便可僅藉由將容器1傾斜而僅使舊的培養基流出，可在未伴隨吸量管操作之情形下，由各凹部6排出舊的培養基。
此外，只要在容器本體2中，預先設有以圍繞其周圍之方式升起之側壁部7，便可僅藉由在側壁部7的內側注入新的培養基而使新的培養基流入至各凹部6。藉由如此進行，可在未伴隨吸量管操作之情形下，將新的培養基注入至各凹部6。
且，在培養終了後，藉由自容器本體2取下過濾構件4，並開放凹部6之開口部，便能夠在不會崩壞之情形下取出凝集塊。
另外，在培養終了後，藉由依與施行培養基更換同樣之方式，在各凹部6注入、排出洗淨液，亦可洗淨凝集塊。
如此，根據本實施形態，在培養形成凝集塊之細胞時，可簡便且效率良好地施行其培養期間中之培養基更換等操作。
以上係針對本發明示出較佳實施形態進行說明，但本發明並不限定於前述之實施形態，在本發明之範圍中當然能夠實施各種變更。
根據本發明，可簡便且效率良好地施行在細胞培養，特定而言，ES細胞或iPS細胞的繼代、及由該等幹細胞分化誘導成神經幹細胞、或心肌、胰臟、肝臟、軟骨等之過程中所形成之球體(凝集塊)培養時所施行之各 種操作。此外，關於淋巴球或融合瘤等抗體產生細胞、巨核球或紅血球等浮游細胞的培養，亦可簡便且效率良好地施行各種操作。
將本說明書所記載之文獻及成為本案之巴黎優先權的基礎之日本申請案說明書之內容全部援用於此。
[產業上之可利用性]
本發明可在醫藥學/生化學領域中，利用作為效率良好地培養細胞之技術。
1‧‧‧容器(細胞培養用容器)
1st‧‧‧第一槽
2‧‧‧容器本體
2a‧‧‧頂面
2b‧‧‧底面
2nd‧‧‧第二槽
3a、3b‧‧‧注入排出用端口
4‧‧‧過濾構件

Claims (7)

  1. 一種細胞培養用容器之使用方法，其係使用細胞培養用容器施行細胞的洗淨之該容器之使用方法，其特徵為前述細胞培養用容器，具備容器本體及注入排出用端口，前述容器本體的內部係藉由至少一個過濾構件劃分成複數個槽，選擇具有不容許培養對象的細胞通過之細孔之過濾構件作為前述過濾構件，在藉由前述過濾構件所劃分出之其中一槽，注入前述細胞並施行培養，由藉由前述過濾構件所劃分出之另一槽所具備之前述注入排出用端口，注入並排出洗淨液並施行經培養之細胞的洗淨。
  2. 一種細胞培養用容器之使用方法，其係使用細胞培養用容器分割細胞的凝集塊之該容器之使用方法，其特徵為前述細胞培養用容器，具備容器本體及注入排出用端口，前述容器本體的內部係藉由至少一個過濾構件劃分成複數個槽，選擇具有對應於欲分割細胞的凝集塊之大小之細孔之過濾構件作為前述過濾構件， 在藉由前述過濾構件所劃分出之其中一槽中，連同培養基壓送前述凝集塊並分割前述凝集塊。
  3. 一種細胞培養用容器之使用方法，其係使用細胞培養用容器分離混雜之大小相異的細胞之該容器之使用方法，其特徵為前述細胞培養用容器，具備容器本體及注入排出用端口，前述容器本體的內部係藉由至少一個過濾構件劃分成複數個槽，選擇具有容許混雜之細胞中之至少一種細胞通過但不容許其以外之細胞通過之細孔之過濾構件作為前述過濾構件，在藉由前述過濾構件所劃分出之其中一槽中，注入混雜之大小相異的細胞，自藉由前述過濾構件所劃分出之另一槽，取出通過前述過濾構件之細胞。
  4. 如請求項1~3中任一項之細胞培養用容器之使用方法，其中前述容器本體的內部係劃分成前述容器本體的頂面側之第一槽，及前述容器本體的底面側之第二槽，在前述頂面側之第一槽及前述底面側之第二槽之至少一者，具備至少一個前述注入排出用端口。
  5. 一種細胞培養用容器之使用方法，其係使用細胞培養用容器培養形成凝集塊之細胞之該容器之使用方法，其特徵為前述細胞培養用容器，具備容器本體及注入排出用端口，前述容器本體的內部係藉由過濾構件劃分成前述容器本體的頂面側之第一槽，及前述容器本體的底面側之第二槽，在前述頂面側之第一槽及前述底面側之第二槽之至少一者，具備至少一個前述注入排出用端口，選擇具有容許形成凝集塊前之細胞通過但不容許凝集塊通過之細孔之過濾構件作為前述過濾構件，將前述細胞注入前述第一槽，接著，使其沉降於前述第二槽，並以使所形成之凝集塊留在前述第二槽之狀態進行培養。
  6. 如請求項5之細胞培養用容器之使用方法，其中，在前述容器本體的底面，設有複數個凹部。
  7. 一種細胞培養用容器之使用方法，其係使用細胞培養用容器培養細胞之該容器之使用方法，其特徵為前述細胞培養用容器，具備容器本體及注入排出用端口，前述容器本體的內部係藉由過濾構件劃分成前述容器 本體的頂面側之第一槽，及前述容器本體的底面側之第二槽，及位於前述頂面側之第一槽與前述底面側之第二槽之間之第三槽，在前述頂面側之第一槽及前述底面側之第二槽，具備至少二個前述注入排出用端口，在前述第三槽，具備至少一個前述注入排出用端口，選擇具有不容許培養對象的細胞通過之細孔之過濾構件作為前述過濾構件，一面使成分組成相異的培養基流通於前述第一槽及前述第二槽各者，一面在前述第三槽注入前述細胞並施行培養。
TW106112942A 2016-04-18 2017-04-18 細胞培養用容器，及其使用方法 TWI763665B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016083193 2016-04-18
JP2016-083193 2016-04-18

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201803979A TW201803979A (zh) 2018-02-01
TWI763665B true TWI763665B (zh) 2022-05-11

Family

ID=60116735

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110136567A TW202206589A (zh) 2016-04-18 2017-04-18 細胞培養用容器，及其使用方法
TW106112942A TWI763665B (zh) 2016-04-18 2017-04-18 細胞培養用容器，及其使用方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110136567A TW202206589A (zh) 2016-04-18 2017-04-18 細胞培養用容器，及其使用方法

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20190127677A1 (zh)
EP (1) EP3447118A4 (zh)
JP (5) JP7070401B2 (zh)
KR (1) KR102296679B1 (zh)
CN (1) CN108779422A (zh)
TW (2) TW202206589A (zh)
WO (1) WO2017183570A1 (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPWO2020032042A1 (ja) * 2018-08-06 2021-08-10 日産化学株式会社 細胞塊を分割するためのデバイス、および、それを用いて細胞塊を分割する方法
JP7271903B2 (ja) * 2018-10-20 2023-05-12 東洋製罐グループホールディングス株式会社 スフェア培養部材、培養容器、穴開き部材の加工方法、及び洗浄容器
JP7348586B2 (ja) * 2019-01-18 2023-09-21 東洋製罐グループホールディングス株式会社 培養容器、培養方法、及び培養装置
JP2021103973A (ja) * 2019-12-26 2021-07-26 東洋製罐グループホールディングス株式会社 接着性細胞用培養容器、及び接着性細胞用培養容器の製造方法
WO2022075842A1 (en) * 2020-10-05 2022-04-14 Scinus Holding B.V. Cell culture bag, bioreactor and cell filtration device
KR102456955B1 (ko) 2020-12-28 2022-10-21 농업회사법인 한국발효 주식회사 바실러스 서브틸리스 낫토균 배양용 장치 및 이를 이용한 배양방법

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0402272A2 (en) * 1989-06-09 1990-12-12 Terumo Kabushiki Kaisha Cell-culturing substrate, cell-culturing substrate unit bioreactor and extracorporeal circulation type therapeutic apparatus
JP2000093159A (ja) * 1998-09-25 2000-04-04 Gsf Forsch Zentrum Fuer Umwelt & Gesundheit Gmbh 非付着性細胞の培養及び濃縮装置
JP2010158214A (ja) * 2009-01-09 2010-07-22 Olympus Corp 培養容器
JP2011244713A (ja) * 2010-05-25 2011-12-08 Shimadzu Corp 細胞培養デバイス、細胞培養システム、及び細胞培養方法
TWI394832B (zh) * 2009-04-24 2013-05-01 Univ Chang Gung Colloidal unit preparation tool and method thereof, biological sample culture device
JP5731704B1 (ja) * 2014-09-05 2015-06-10 日本写真印刷株式会社 培養容器

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5917587A (ja) * 1982-07-22 1984-01-28 キヤノン株式会社 Ｃｒｔ表示装置の制御方式
ZA839242B (en) * 1982-12-15 1984-09-26 Bio Response Inc A method and system for culturing and treating substances disposed in a flowing culture fluid
JPH0292270A (ja) * 1988-09-30 1990-04-03 Terumo Corp 細胞培養装置
JPH0310674A (ja) * 1989-06-09 1991-01-18 Terumo Corp 細胞培養用多孔質膜およびそれを用いた細胞培養器
DE19536390A1 (de) * 1995-09-29 1997-04-03 Siemens Ag Anordnung zur Messung und Regelung des Grundfeldes eines Magneten eines Kernspintomographiegerätes
US6759245B1 (en) * 1999-06-21 2004-07-06 The General Hospital Corporation Cell culture systems and methods for organ assist devices
EP1110610A1 (en) * 1999-12-23 2001-06-27 3M Innovative Properties Company Micro-titer plate with filter inserts and method of making same
JP4586192B2 (ja) * 2005-03-08 2010-11-24 財団法人生産技術研究奨励会 細胞培養チャンバー
EP2155852B1 (en) * 2007-06-15 2013-10-09 Cellution Biotech B.V. Improved flexible bioreactor
JP4362529B2 (ja) 2007-09-26 2009-11-11 テルモ株式会社 単球分離培養装置および樹状細胞回収方法
DE102008015386B4 (de) * 2008-03-20 2015-10-01 Sartorius Stedim Biotech Gmbh Bioreaktor
KR101131303B1 (ko) * 2009-06-08 2012-03-30 한국과학기술원 세포 배양 장치 및 시스템과 이를 이용한 세포 배양 방법
KR101381102B1 (ko) 2012-04-10 2014-04-04 최광식 귀금속회수장치용 음극체
US9663752B2 (en) * 2012-06-26 2017-05-30 Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. Collapsible bag with flexible vortex breaker
EP2885394A4 (en) * 2012-08-17 2016-04-20 Univ Central Florida Res Found METHODS, SYSTEMS, AND COMPOSITIONS FOR FUNCTIONAL IN VITRO CELLULAR MODELS OF MAMMALIAN SYSTEMS
LT2895595T (lt) * 2012-09-14 2019-03-12 Charm Sciences, Inc. Mitybos terpės būdas ir įtaisas
EP2966163B1 (en) * 2013-03-06 2018-01-17 Kyoto University Culture system for pluripotent stem cells and method for subculturing pluripotent stem cells
EP2971057A4 (en) * 2013-03-15 2016-11-02 Kiyatec Inc BIOREACTOR SYSTEM
JP2014233209A (ja) * 2013-05-31 2014-12-15 株式会社古河電工アドバンストエンジニアリング 細胞分離方法および細胞分離装置
US11549091B2 (en) * 2013-08-27 2023-01-10 Cytiva Sweden Ab Bioreactor with addition tube
US9944894B2 (en) * 2015-01-16 2018-04-17 General Electric Company Pluripotent stem cell expansion and passage using a rocking platform bioreactor

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0402272A2 (en) * 1989-06-09 1990-12-12 Terumo Kabushiki Kaisha Cell-culturing substrate, cell-culturing substrate unit bioreactor and extracorporeal circulation type therapeutic apparatus
JP2000093159A (ja) * 1998-09-25 2000-04-04 Gsf Forsch Zentrum Fuer Umwelt & Gesundheit Gmbh 非付着性細胞の培養及び濃縮装置
JP2010158214A (ja) * 2009-01-09 2010-07-22 Olympus Corp 培養容器
TWI394832B (zh) * 2009-04-24 2013-05-01 Univ Chang Gung Colloidal unit preparation tool and method thereof, biological sample culture device
JP2011244713A (ja) * 2010-05-25 2011-12-08 Shimadzu Corp 細胞培養デバイス、細胞培養システム、及び細胞培養方法
JP5731704B1 (ja) * 2014-09-05 2015-06-10 日本写真印刷株式会社 培養容器

Also Published As

Publication number Publication date
JP2022050529A (ja) 2022-03-30
US20190127677A1 (en) 2019-05-02
JPWO2017183570A1 (ja) 2019-02-28
JP2022050530A (ja) 2022-03-30
KR20180117174A (ko) 2018-10-26
JP2023062117A (ja) 2023-05-02
EP3447118A1 (en) 2019-02-27
TW202206589A (zh) 2022-02-16
JP2023062115A (ja) 2023-05-02
TW201803979A (zh) 2018-02-01
CN108779422A (zh) 2018-11-09
EP3447118A4 (en) 2019-12-25
JP7351359B2 (ja) 2023-09-27
JP7070401B2 (ja) 2022-05-18
WO2017183570A1 (ja) 2017-10-26
KR102296679B1 (ko) 2021-08-31
JP7302678B2 (ja) 2023-07-04
JP2023062116A (ja) 2023-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI763665B (zh) 細胞培養用容器，及其使用方法
US11667874B2 (en) Perfusion bioreactor platform
US9290731B2 (en) Filter apparatus and filter plate system
KR102527308B1 (ko) 3d 세포 응집체의 생성 및 배양을 위한 장치 및 방법
KR20210125036A (ko) 직조된 세포 배양 기판
CA2671812C (en) Highly efficient gas permeable devices and methods for culturing cells
EP3347029B1 (en) System and method for producing blood platelets
JP7092235B2 (ja) 細胞培養容器、細胞培養容器の支持治具、及び細胞培養方法
US20210238523A1 (en) Stacked Recirculating Bioreactor
JP2018023291A (ja) 細胞培養容器、これを用いた細胞培養システム、および細胞培養方法
WO2017170335A1 (ja) 細胞培養容器、細胞培養容器の支持治具、及び細胞培養方法
US20240091778A1 (en) Cell culture vessel
JP6975240B2 (ja) 重力流細胞培養装置、システム、および、それらの使用方法
JP7524985B2 (ja) 細胞培養用容器の使用方法
WO2018123619A1 (ja) フィルタ付き細胞用バッグ、及びその製造方法
WO2019014610A1 (en) CELL CULTURE CONTAINER FOR 3D CULTURE AND METHODS OF CULTURING 3D CELLS
CN111826286A (zh) 微孔装置及其制造方法