TWI749126B

TWI749126B - Cdk4/6抑制劑

Info

Publication number: TWI749126B
Application number: TW106144291A
Authority: TW
Inventors: 徐招兵; 胡利紅; 照中丁; 曙輝陳
Original assignee: 大陸商基石藥業（蘇州）有限公司; 大陸商拓石藥業（上海）有限公司; 英屬開曼群島商基石藥業
Priority date: 2016-12-16
Filing date: 2017-12-15
Publication date: 2021-12-11
Also published as: JP7044801B2; WO2018108167A1; MX2019006843A; EP3556758A4; KR20190092549A; US10676474B2; SA519402103B1; AU2017374721B2; US20190315745A1; BR112019012176A2; JP2020510083A; CN110382495B; AU2017374721A1; RU2747311C2; RU2019121926A; TW201823246A; EP3556758A1; KR102513448B1; CA3046864A1; RU2019121926A3

Abstract

本發明公開了一類作為CDK4/6抑制劑的系列化合物，具體公開了式(I)所示化合物、其藥學上可接受的鹽或其異構體、包含它們的藥物組合物以及它們在製備治療癌症藥物中的應用。

Description

CDK4/6抑制劑

本發明涉及作為CDK4/6抑制劑的系列化合物，具體公開了式(I)所示化合物、其藥學上可接受的鹽或其異構體、包含它們的藥物組合物以及它們在製備治療癌症藥物中的應用。

細胞週期是指正常連續***的細胞從前一次有絲***結束後到下一次有絲***結束所經歷的連續動態過程。哺乳動物的細胞週期由四個階段組成：分別分G1期(DNA合成前期)，S期(DNA合成期)，G2期(DNA合成後期)和M期(有絲***期)。M期之後緊接著產生胞質***，形成兩個子細胞。雖然經過細胞週期***產生的新生細胞會重新進入細胞週期，但是在G1晚期的某個時間點(稱為限制點或R點)，細胞週期調控機制會決定細胞的最終命運：繼續參與細胞週期循環，或者退出活躍的增殖狀態轉而進入靜止(G0)的狀態。細胞週期的調控主要受一系列絲氨酸/蘇氨酸激酶的影響，這類絲氨酸/蘇氨酸激酶又被稱作細胞週期蛋白依賴性激酶(CDK)，他們通過與其相對應的調節亞基週期素(cyclins)相結合從而達到調控細胞週期的目的。到現在為止，已經鑒定出至少10種細胞週期蛋白依賴性激酶(CDK)和15種週期素(cyclins)。它們可以形成如下配對複合物：CDK1與週期素A或B配對；CDK2與週期素A或E配對；CDK3與一種未知的週期素配對；CDK4與週期素D(1-3)配對；CDK5與週期素 D或p35Nck5A配對；CDK6與週期素D配對；CDK7與週期素H配對；CDK8與週期素C配對；CDK9與週期素T配對。

癌症細胞異常增殖與正常細胞週期失調是所有類型癌症共有的特徵。正因為如此，細胞週期關鍵調節因子的抑制劑已成為一個有吸引力的新穎的抗腫瘤靶點。在細胞週期的G1期早期，CDK4/6與週期素D形成的複合物被細胞外生長因子活化，這種被活化的複合物可以使視網膜母細胞瘤蛋白(RB)磷酸化，從而釋放其在未被磷酸化的狀態下緊密結合的轉錄因子E2F，E2F活化進一步轉錄推動細胞週期跨過R點並從G1期進展到S期。跨過R點後，其它的細胞週期素依次被活化從而可以調控整個細胞週期的進行，例如：週期素E與CDK2結合控制細胞進入S期；週期素A與CDK2結合控制S期的進行，然後在G2期週期素A與CDK1結合；最後是週期素B結合CDK1控制細胞進入有絲***期。CDK4/6與週期素D形成的複合物是細胞週期調控的一個關鍵「總開關」，抑制CDK4/6使之無法形成Cyclin D-CDK4/6複合物，就能夠阻滯細胞週期自G1期向S期的進程，從而達到抑制腫瘤增殖的目的，CDK4/6因此成為一個重要的抗癌靶點。

近年來，有幾個CDK4/6小分子抑制劑已經進入臨床研究階段用於癌症的治療，它們或者是單獨給藥，或者是聯合用藥。基於Ⅱ期臨床試驗PALOMA-1的中期數據，FDA於2015年2月批准了Palbociclib的上市請求，並與來曲唑聯合應用作為治療ER陽性/HER2陰性絕經後轉移性乳腺癌的一線治療，而Palbociclib治療非小細胞肺癌的研究也正處於Ⅲ期臨床階段。此外基於Ⅲ期臨床試驗MONALEESA-2研究結果，美國FDA於2016年8月授予CDK4/6抑制劑Ribociclib(LEE-011)突破性療法認定，可聯合來曲唑用於一線治療晚期或轉移性激素受體陽性/HER2陰性乳腺癌。美國禮來公司的CDK4/6抑制劑Abemaciclib(LY2835219)也正處於Ⅲ期臨床試驗 MONARCH 2階段，期待在2017年上半年得到MONARCH 2的最終臨床試驗結果。除了可用於乳腺癌的治療，這些小分子的雜環化合物在臨床上還可以用於其它多種癌症的治療。這些專利包括WO2014128588，WO2012018540，WO2012129344，WO2011101409，WO2011130232，WO2010075074，WO2009126584，WO2008032157，WO2005094830，WO2005117980，WO2003062236。

雖然在開發用於癌症和其他疾病治療的CDK4/6抑制劑的道路上已經做了很多努力，但是到目前為止只有一個針對該靶點的藥物(Palbociclib)上市，且適應症只是ER陽性/HER2陰性絕經後轉移性的乳腺癌。儘管CDK4/6抑制劑的肺癌臨床研究已進展到三期臨床，但是暫時還沒有藥物上市，因此仍然迫切需要開發新穎的、更加安全有效的、能夠治療多種癌症(包括肺癌)的CDK4/6抑制劑。另外一個方面，雖然Palbociclib已經獲批上市，但是已有文獻報導其腦部滲透性差，導致其難以透過血腦屏障，不能治療腦轉移的癌症。

一方面，本發明提供了式(I)所示化合物、其藥學上可接受的鹽或其異構體，

其中，R₁選自H，或者選自任選被1、2或3個R取代的：C_1~3烷基、C_1~3雜烷基、

R₂分別獨立地選自H、OH、CN、鹵素，或者選自任選被1、2或3個R取代的：C_1~5烷基、C_1~5雜烷基、C_3~6環烷基、3~6元雜環烷基；環A為4~11元雜環烷基；環B選自任選被1、2或3個R取代的：C_3~6環烷基、3~6元雜環烷基、苯基、5~6元雜芳基；R選自鹵素、OH、CN、NH₂、NO₂，或者選自任選被1、2或3個R'取代的：C_1~3烷基、C_1~3雜烷基；R'選自：F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂；所述C_1~3雜烷基、C_1~5雜烷基、3~6元雜環烷基、4~11元雜環烷基、5~6元雜芳基之「雜」，分別獨立地選自：N、-O-、-S-、-NH-、-(C=O)-、-(S=O)-、-(S=O)₂-；以上任何一種情況下，雜原子或雜原子團的數目分別獨立地選自1、2或3。

在本發明的一些方案中，上述R選自F、Cl、Br、OH、CN、NH₂、CH₃、CH₃CH₂、CH₃O、CF₃、CHF₂、CH₂F，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述R₁選自H，或者選自任選被1、2或3 個R取代的：CH₃、CH₃CH₂、CH₃(C=O)-、

、

，R及其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述R₁選自CH₃、CHF₂、CH₃(C=O)-、

、

、

、

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述環B選自任選被1、2或3個R取代的：環丁基、環戊基、環己基、苯基，R及其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述環B選自：環戊基、環己基、苯基，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述R₂分別獨立地選自H、OH、CN、F、 Cl，或者選自任選被1、2或3個R取代的：CH₃、

、

、

、

、

、

、

、

、氧雜環丁烷基、呱嗪基、嗎啉基，R及其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述R₂分別獨立地選自H，或者選自任選被1、2或3個R取代的：CH₃、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

，R及其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述R₂分別獨立地選自：H、CH₃、

、

、

、

、

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述環A為5~9元雜環烷基，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述結構單元

選自：

R₂及其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述結構單元

選自：

、

、

、

、

、

，R₂及其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述結構單元

選自：

、

、

，其他變量如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述化合物、其藥學上可接受的鹽或其異構體，選自：

其中，R₂、R和環A如本發明所定義。

其中，R₁和R₂如本發明所定義。

其中，R₂如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，R₁選自H，或者選自任選被1、2或3個R取代的：C_1~3烷基、C_1~3雜烷基；R₂分別獨立地選自H、OH、CN、鹵素，或者選自任選被1、2或3個R取代的：C_1~5烷基、C_1~5雜烷基、C_3~6環烷基、3~6元雜環烷基；環A選自4~11元雜環基；環B選自任選被1、2或3個R取代的：C_3~6環烷基、3~6元雜環烷基、苯基、5~6元雜芳基；R選自鹵素、OH、CN、NH₂，或者選自任選被1、2或3個R'取代的：C_1~3烷基、C_1~3雜烷基； R'選自：F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂；所述C_1~3雜烷基、C_1~5雜烷基、3~6元雜環烷基、4~11元雜環基、5~6元雜芳基之「雜」，分別獨立地選自：N、-O-、=O、-S-、-NH-、-(C=O)-、-(S=O)-、-(S=O)₂-；以上任何一種情況下，雜原子或雜原子團的數目分別獨立地選自1、2或3。

本發明的一些方案中，上述R選自F、Cl、Br、OH、CN、NH₂、CH₃、CH₃CH₂、CH₃O、CF₃、CHF₂、CH₂F，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₁選自H，或者選自任選被1、2或3個R取代的：CH₃、CH₃CH₂、CH₃(C=O)。

本發明的一些方案中，上述R₁選自CH₃、CHF₂、CH₃(C=O)，R及其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述環B選自任選被1、2或3個R取代的：環丁基、環戊基、環己基、苯基，R及其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述環B選自：環戊基、環己基、苯基，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₂選自H、OH、CN、F、Cl，或者選自任選被1、2或3個R取代的：CH₃、

、

、

、

、

、

、

本發明的一些方案中，上述R₂選自H，或者選自任選被1、2或3個 R取代的：CH₃、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

，R及其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述R₂選自：H、CH₃、

、

、

、

本發明的一些方案中，上述環A選自：

、

、

、

、

、

、

；m分別獨立地選自0、1或2；X分別獨立地選自CH₂、NH或O；Y分別獨立地選自CH或N，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述環A選自：

、

、

、

、

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述結構單元

選自：

、

、

、

、

、

，R₂及其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述結構單元

選自：

、

、

，其他變量如本發明所定義。

本發明的一些方案中，上述化合物選自：

其中，R₂、環A如本發明所定義。

在本發明的一些方案中，上述化合物選自

其中，R₂如本發明所定義。

本發明還有一些方案是由上述各變量任意組合而來。

本發明還提供一種藥物組合物，其含有治療有效量的上述任意一項所述的化合物、其藥學上可接受的鹽或其異構體和藥學上可接受的載體。

本發明還提供上述的化合物、其藥學上可接受的鹽或其異構體或上述的藥物組合物在製備治療癌症藥物中的應用。

[定義和說明]

除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。當本文中出現商品名時，意在指代其對應的商品或其活性成分。這裡所採用的術語「藥學上可接受的」，是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們在可靠的醫學判斷的範圍之內，適用於與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或併發症，與合理的利益/風險比相稱。

術語「藥學上可接受的鹽」是指本發明化合物的鹽，由本發明發現的具有特定取代基的化合物與相對無毒的酸或鹼製備。當本發明的化合物中含有相對酸性的功能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的鹼與這類化合物的中性形式接觸的方式獲得鹼加成鹽。藥學上可接受的鹼加成鹽包括鈉、鉀、鈣、銨、有機胺或鎂鹽或類似的鹽。當本發明的化合物中含有相對鹼性的官能團時，可以通過在純的溶液或合適的惰性溶劑中用足夠量的酸與這類化合物的中性形式接觸的方式獲得酸加成鹽。藥學上可接受的酸加成鹽的實例包括無機酸鹽，所述無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硝酸、碳酸、碳酸氫根、磷酸、磷酸一氫根、磷酸二氫根、硫酸、硫酸氫根、氫碘酸、亞磷酸等；以及有機酸鹽，所述有機酸包括如乙酸、丙酸、異丁酸、馬來酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、檸檬酸、酒石酸和甲磺酸等類似的酸；還包括氨基酸(如精氨酸等)的鹽，以及如葡糖醛酸等有機酸的鹽(參見Berge et al.,"Pharmaceutical Salts",Journal of Pharmaceutical Science 66：1-19(1977))。本發明的某些特定的化合物含有鹼性和酸性的官能團，從而可以被轉換成任一鹼或酸加成鹽。

優選地，以常規方式使鹽與鹼或酸接觸，再分離母體化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母體形式與其各種鹽的形式的不同之處在於某些物理性質，例如在極性溶劑中的溶解度不同。

本文所用的「藥學上可接受的鹽」屬本發明化合物的衍生物，其中，通過與酸成鹽或與鹼成鹽的方式修飾所述母體化合物。藥學上可接受的鹽的實例包括但不限於：鹼(比如胺)的無機酸或有機酸鹽、酸(比如羧酸)的鹼金屬或有機鹽等等。藥學上可接受的鹽包括常規的無毒性的鹽或母體化合物的季銨鹽，例如無毒的無機酸或有機酸所形成的鹽。常規的無毒性的鹽包括但不限於那些衍生自無機酸和有機酸的鹽，所述的無機酸或有機酸選自2-乙醯氧基苯甲酸、2-羥基乙磺酸、乙酸、抗壞血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氫根、碳酸、檸檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富馬酸、葡庚糖、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、氫碘酸鹽、羥基、羥萘、羥乙磺酸、乳酸、乳糖、十二烷基磺酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、硝酸、草酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛、丙酸、水楊酸、硬脂酸、亞乙酸、琥珀酸、氨基磺酸、對氨基苯磺酸、硫酸、單寧、酒石酸和對甲苯磺酸。

本發明的藥學上可接受的鹽可由含有酸根或鹼基的母體化合物通過常規化學方法合成。一般情況下，這樣的鹽的製備方法是：在水或有機溶劑或兩者的混合物中，經由游離酸或鹼形式的這些化合物與化學計量的適當的鹼或酸反應來製備。一般地，優選醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈等非水介質。

除了鹽的形式，本發明所提供的化合物還存在前藥形式。本文所描述的化合物的前藥容易地在生理條件下發生化學變化從而轉化成本發明的化合物。此外，前體藥物可以在體內環境中通過化學或生化方法被轉換到本發明的化合物。

本發明的某些化合物可以以非溶劑化形式或者溶劑化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶劑化形式與非溶劑化的形式相當，都包含在本發明的範圍之內。

本發明的某些化合物可以具有不對稱碳原子(光學中心)或雙鍵。外消旋體、非對映異構體、幾何異構體和單個的異構體都包括在本發明的範圍之內。

除非另有說明，用楔形實線鍵(

)和楔形虛線鍵(

)表示一個立體中心的絕對構型，用直形實線鍵(

)和直形虛線鍵(

)表示立體中心的相對構型，用波浪線(

)表示楔形實線鍵(

)或楔形虛線鍵(

)，或用波浪線(

)表示直形實線鍵(

)和直形虛線鍵(

)。

當本文所述化合物含有烯屬雙鍵或其它幾何不對稱中心，除非另有規定，它們包括E、Z幾何異構體。同樣地，所有的互變異構形式均包括在本發明的範圍之內。

本發明的化合物可以存在特定的幾何或立體異構體形式。本發明設想所有的這類化合物，包括順式和反式異構體、(-)-和(+)-對映體、(R)-和(S)-對映體、非對映異構體、(D)-異構體、(L)-異構體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對映異構體或非對映體富集的混合物，所有這些混合物都屬本發明的範圍之內。烷基等取代基中可存在另外的不對稱碳原子。所有這些異構體以及它們的混合物，均包括在本發明的範圍之內。

除非另有說明，術語「對映異構體」或者「旋光異構體」是指互為鏡像關係的立體異構體。

除非另有說明，術語「順反異構體」或者「幾何異構體」係由因雙鍵或者成環碳原子單鍵不能自由旋轉而引起。

除非另有說明，術語「非對映異構體」是指分子具有兩個或多個手性中心，並且分子間為非鏡像的關係的立體異構體。

除非另有說明，「(D)」或者「(+)」表示右旋，「(L)」或者「(-)」表示左旋，「(DL)」或者「(±)」表示外消旋。

本發明的化合物可以存在特定的。除非另有說明，術語「互變異構體」或「互變異構體形式」是指在室溫下，不同官能團異構體處於動態平衡，並能很快的相互轉化。若互變異構體是可能的(如在溶液中)，則可以達到互變異構體的化學平衡。例如，質子互變異構體(proton tautomer)(也稱質子轉移互變異構體(prototropic tautomer))包括通過質子遷移來進行的互相轉化，如酮-烯醇異構化和亞胺-烯胺異構化。價鍵異構體(valence tautomer)包括一些成鍵電子的重組來進行的相互轉化。其中酮-烯醇互變異構化的具體實例是戊烷-2,4-二酮與4-羥基戊-3-烯-2-酮兩個互變異構體之間的互變。

除非另有說明，術語「富含一種異構體」、「異構體富集」、「富含一種對映體」或者「對映體富集」指其中一種異構體或對映體的含量小於100%，並且，該異構體或對映體的含量大於等於60%，或者大於等於70%，或者大於等於80%，或者大於等於90%，或者大於等於95%，或者大於等於96%，或者大於等於97%，或者大於等於98%，或者大於等於99%，或者大於等於99.5%，或者大於等於99.6%，或者大於等於99.7%，或者大於等於99.8%，或者大於等於99.9%。

除非另有說明，術語「異構體過量」或「對映體過量」指兩種異構體或兩種對映體相對百分數之間的差值。例如，其中一種異構體或對映體的含量為90%，另一種異構體或對映體的含量為10%，則異構體或對映體過量(ee值)為80%。

可以通過的手性合成或手性試劑或者其他常規技術製備光學活性的(R)-和(S)-異構體以及D和L異構體。如果想得到本發明某化合物的一種對映體，可以通過不對稱合成或者具有手性助劑的衍生作用來製備，其中將所得非對映體混合物分離，並且輔助基團裂開以提供純的所需對映異構體。或者，當分子中含有鹼性官能團(如氨基)或酸性官能團(如羧基)時，與適當的光學活性的酸或鹼形成非對映異構體的鹽，然後通過本領域所公知的常規方法進行非對映異構體拆分，然後回收得到純的對映體。此外，對映異構體和非對映異構體的分離通常是通過使用色譜法完成的，所述色譜法採用手性固定相，並任選地與化學衍生法相結合(例如由胺生成氨基甲酸鹽)。

本發明的化合物可以在一個或多個構成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素標記化合物，比如氚(³H)，碘-125(¹²⁵I)或C-14(¹⁴C)。又例如，可用重氫取代氫形成氘代藥物，氘與碳構成的鍵比普通氫與碳構成的鍵更堅固，相比於未氘化藥物，氘代藥物有降低毒副作用、增加藥物穩定性、增強療效、延長藥物生物半衰期等優勢。本發明的化合物的所有同位素組成的變換，無論放射性與否，都包括在本發明的範圍之內。

術語「藥學上可接受的載體」是指能夠遞送本發明有效量活性物質、不干擾活性物質的生物活性並且對宿主或者患者無毒副作用的任何製劑或載體介質代表性的載體包括水、油、礦物質、膏基、洗劑基質、軟膏基質等。這些基質包括懸浮劑、增黏劑、透皮促進劑等。它們的製劑為化妝品領域或局部藥物領域的技術人員所周知。關於載體的其他信息，可以參考Remington：The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott,Williams & Wilkins(2005)，該文獻的內容通過引用的方式併入本文。

針對藥物或藥理學活性劑而言，術語「有效量」或「治療有效量」是指無毒的但能達到預期效果的藥物或藥劑的足夠用量。對於本發明中的口服劑型，組合物中一種活性物質的「有效量」是指與該組合物中另一種活性物質聯用時為了達到預期效果所需要的用量。有效量的確定因人而異，取決於受體的年齡和一般情況，也取決於具體的活性物質，個案中合適的有效量可以由本領域技術人員根據常規試驗確定。

術語「活性成分」、「治療劑」、「活性物質」或「活性劑」是指一種化學實體，它可以有效地治療目標紊亂、疾病或病症。

「任選」或「任選地」指的是隨後描述的事件或狀況可能但不是必需出現的，並且該描述包括其中所述事件或狀況發生的情況以及所述事件或狀況不發生的情況。

術語「被取代的」是指特定原子上的任意一個或多個氫原子被取代基取代，可以包括重氫和氫的變體，只要特定原子的價態是正常的並且取代後的化合物是穩定的。當取代基為氧(即=O)時，意味著兩個氫原子被取代。氧取代不會發生在芳香基上。術語「任選被取代的」是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有規定，取代基的種類和數目在化學上可以實現的基礎上可以是任意的。

當任何變量(例如R)在化合物的組成或結構中出現一次以上時，其在每一種情況下的定義都是獨立的。因此，例如，如果一個基團被0-2個R所取代，則所述基團可以任選地至多被兩個R所取代，並且每種情況下的 R都有獨立的選項。此外，取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。

當一個連接基團的數量為0時，比如-(CRR)₀-，表示該連接基團為單鍵。

當其中一個變量選自單鍵時，表示其連接的兩個基團直接相連，比如A-L-Z中L代表單鍵時表示該結構實際上是A-Z。

當一個取代基為空缺時，表示該取代基是不存在的，比如A-X中X為空缺時表示該結構實際上是A。

當一個取代基的鍵可以交叉連接到一個環上的兩個原子時，這種取代基可以與這個環上的任意原子相鍵合。當所列舉的取代基中沒有指明其通過哪一個原子連接到化學結構通式中包括但未具體提及的化合物時，這種取代基可以通過其任何原子相鍵合。取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。例如，結構單元

或

表示其可在環己基或者環己二烯上的任意一個位置發生取代。

當所列舉的連接基團沒有指明其連接方向，其連接方向是任意的，例如，

中連接基團L為-M-W-，此時-M-W-既可以按與從左往右的讀取順序相同的方向連接環A和環B構成

，也可以按照與從左往右的讀取順序相反的方向連接環A和環B構成

除非另有規定，術語「雜」表示雜原子或雜原子團(即含有雜原子的原子團)，包括碳(C)和氫(H)以外的原子以及含有這些雜原子的原子團，例如包括氧(O)、氮(N)、硫(S)、矽(Si)、鍺(Ge)、鋁(Al)、硼(B)、-O-、-S-、=O、=S、-C(=O)O-、-C(=O)-、-C(=S)-、-S(=O)、-S(=O)2-，以及任選被取代的-C(=O)N(H)-、-N(H)-、-C(=NH)-、-S(=O)2N(H)-或-S(=O)N(H)-。

除非另有規定，「環」表示被取代或未被取代的環烷基、雜環烷基、環烯基、雜環烯基、環炔基、雜環炔基、芳基或雜芳基。所謂的環包括單環、聯環、螺環、並環或橋環。環上原子的數目通常被定義為環的元數，例如，「5~7元環」是指環繞排列5~7個原子。除非另有規定，該環任選地包含1~3個雜原子。因此，「5~7元環」包括例如苯基、吡啶和呱啶基；另一方面，術語「5~7元雜環烷基環」包括吡啶基和呱啶基，但不包括苯基。術語「環」還包括含有至少一個環的環系，其中的每一個「環」均獨立地符合上述定義。

除非另有規定，術語「雜環」或「雜環基」意指穩定的含雜原子或雜原子團的單環、雙環或三環，它們可以是飽和的、部分不飽和的或不飽和的(芳族的)，它們包含碳原子和1、2、3或4個獨立地選自N、O和S的環雜原子，其中上述任意雜環可以稠合到一個苯環上形成雙環。氮和硫雜原子可任選被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已經定義過的其他取代基)。該雜環可以附著到任何雜原子或碳原子的側基上從而形成穩定的結構。如果產生的化合物是穩定的，本文所述的雜環可以發生碳位或氮位上的取代。雜環中的氮原子任選地被季銨化。一個優選方案是，當雜環中S及O原子的總數超過1時，這些雜原子彼此不相鄰。另一個優選方案是，雜環中S及O原子的總數不超過1。如本文所用，術語「芳族雜環基團」或「雜芳基」意指穩定的5、6、7元單環或雙環或7、8、9或10元雙環雜環基的芳香環，它包含碳原子和1、2、3或4個獨立地選自N、O和S的環雜原子。氮原子可以是被取代的或未取代的(即N或NR，其中R是H或本文已經定義過的其他取代基)。氮和硫雜原子可任選被氧化(即NO和S(O)p，p是1或2)。值得注意的是，芳香雜環上S和O原子的總數不超過1。橋環也包含在雜環的定義中。當一個或多個原子(即C、O、N或S)連接兩個不相鄰的碳原子或氮原子時形成橋環。優選的橋環包括但不限於：一個碳原子、兩個碳原子、一個氮原子、兩個氮原子和一個碳-氮基。值得注意的是，一個橋總是將單環轉換成三環。橋環中，環上的取代基也可以出現在橋上。

雜環化合物的實例包括但不限於：吖啶基、吖辛因基、苯並咪唑基、苯並呋喃基、苯並巰基呋喃基、苯並巰基苯基、苯並噁唑基、苯並噁唑啉基、苯並噻唑基、苯並***基、苯並四唑基、苯並異噁唑基、苯並異噻唑基、苯並咪唑啉基、哢唑基、4aH-哢唑基、哢啉基、苯並二氫吡喃基、色烯、噌啉基十氫喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氫呋喃並[2,3-b]四氫呋喃基、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氫吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、異苯並呋喃基、異吲哚基、異二氫吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、亞甲二氧基苯基、嗎啉基、萘啶基，八氫異喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、羥吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪、吩噻嗪、苯並黃嘌呤基、酚噁嗪基、酞嗪基、呱嗪基、呱啶基、呱啶酮基、4-呱啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶並噁唑、吡啶並咪唑、吡啶並噻唑、吡啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基，6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、異噻唑基噻吩基、噻吩並噁唑基、噻吩並噻唑基、噻吩並咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-***基、1,2,4-***基、1,2,5-***基、1,3,4-***基和呫噸基。還包括稠環和螺環化合物。

除非另有規定，術語「烴基」或者其下位概念(比如烷基、烯基、炔基、芳基等等)本身或者作為另一取代基的一部分表示直鏈的、支鏈的或環狀的烴原子團或其組合，可以是完全飽和的(如烷基)、單元或多元不飽和的(如烯基、炔基、芳基)，可以是單取代或多取代的，可以是一價(如甲基)、二價(如亞甲基)或者多價(如次甲基)，可以包括二價或多價原子團，具有指定數量的碳原子(如C₁-C₁₂表示1至12個碳，C_1-12選自C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁和C₁₂；C_3-12選自C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀、C₁₁和C₁₂。)。「烴基」包括但不限於脂肪烴基和芳香烴基，所述脂肪烴基包括鏈狀和環狀，具體包括但不限於烷基、烯基、炔基，所述芳香烴基包括但不限於6-12元的芳香烴基，例如苯、萘等。在一些實施例中，術語「烴基」表示直鏈的或支鏈的原子團或它們的組合，可以是完全飽和的、單元或多元不飽和的，可以包括二價和多價原子團。飽和烴原子團的實例包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、仲丁基、異丁基、環己基、(環己基)甲基、環丙基甲基，以及正戊基、正己基、正庚基、正辛基等原子團的同系物或異構體。不飽和烴基具有一個或多個雙鍵或三鍵，其實例包括但不限於乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、巴豆基、2-異戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基，3-丁炔基，以及更高級的同系物和異構體。

除非另有規定，術語「雜烴基」或者其下位概念(比如雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜芳基等等)本身或者與另一術語聯合表示穩定的直鏈的、支鏈的或環狀的烴原子團或其組合，有一定數目的碳原子和至少一個雜原子組成。在一些實施例中，術語「雜烷基」本身或者與另一術語聯合表示穩定的直鏈的、支鏈的烴原子團或其組合物，有一定數目的碳原子和至少一個雜原子組成。在一個典型實施例中，雜原子選自B、O、N和S，其中氮和硫原子任選地被氧化，氮雜原子任選地被季銨化。雜原子或雜原子團可以位於雜烴基的任何內部位置，包括該烴基附著于分子其餘部分的位置，但術語「烷氧基」、「烷氨基」和「烷硫基」(或硫代烷氧基)屬□慣用表達，是指分別通過一個氧原子、氨基或硫原子連接到分子的其餘部分的那些烷基基團。實例包括但不限於-CH₂-CH₂-O-CH₃、-CH₂-CH₂-NH-CH₃、-CH₂-CH₂-N(CH₃)-CH₃、-CH₂-S-CH₂-CH₃、-CH₂-CH₂、-S(O)-CH₃、-CH₂-CH₂-S(O)₂-CH₃、-CH=CH-O-CH₃、-CH₂-CH=N-OCH₃和-CH=CH-N(CH₃)-CH₃。至多兩個雜原子可以是連續的，例如-CH₂-NH-OCH₃。

除非另有規定，術語「環烴基」、「雜環烴基」或者其下位概念(比如芳基、雜芳基、環烷基、雜環烷基、環烯基、雜環烯基、環炔基、雜環炔基等等)本身或與其他術語聯合分別表示環化的「烴基」、「雜烴基」。此外，就雜烴基或雜環烴基(比如雜烷基、雜環烷基)而言，雜原子可以佔據該雜環附著于分子其餘部分的位置。環烴基的實例包括但不限於環戊基、環己基、1-環己烯基、3-環己烯基、環庚基等。雜環基的非限制性實例包括1-(1,2,5,6-四氫吡啶基)、1-呱啶基、2-呱啶基，3-呱啶基、4-嗎啉基、3-嗎啉基、四氫呋喃-2-基、四氫呋喃吲哚-3-基、四氫噻吩-2-基、四氫噻吩-3-基，1-呱嗪基和2-呱嗪基。

除非另有規定，術語「烷基」用於表示直鏈或支鏈的飽和烴基，可以是單取代(如-CH₂F)或多取代的(如-CF₃)，可以是一價(如甲基)、二價(如亞甲基)或者多價(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和異丙基)，丁基(如，n-丁基，異丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，異戊基，新戊基)等。

除非另有規定，「烯基」指在鏈的任何位點上具有一個或多個碳碳雙鍵的烷基，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價。烯基的例子包括乙烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基，丁間二烯基，戊間二烯基，己間二烯基等。

除非另有規定，「炔基」指在鏈的任何位點上具有一個或多個碳碳三鍵的烷基，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價。炔基的例子包括乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基等。

除非另有規定，環烷基包括任何穩定的環狀或多環烴基，任何碳原子都是飽和的，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價。這些環烷基的實例包括，但不限於，環丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二環辛烷、[4.4.0]二環癸烷等。

除非另有規定，環烯基包括任何穩定的環狀或多環烴基，該烴基在環的任何位點含有一個或多個不飽和的碳-碳雙鍵，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價。這些環烯基的實例包括，但不限於，環戊烯基、環己烯基等。

除非另有規定，環炔基包括任何穩定的環狀或多環烴基，該烴基在環的任何位點含有一個或多個碳-碳三鍵，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價。

除非另有規定，術語「鹵代素」或「鹵素」本身或作為另一取代基的一部分表示氟、氯、溴或碘原子。此外，術語「鹵代烷基」意在包括單鹵代烷基和多鹵代烷基。例如，術語「鹵代(C₁-C₄)烷基」意在包括但不僅限於三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基和3-溴丙基等等。除非另有規定，鹵代烷基的實例包括但不僅限於：三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基，和五氯乙基。

「烷氧基」代表通過氧橋連接的具有特定數目碳原子的上述烷基，除非另有規定，C_1-6烷氧基包括C₁、C₂、C₃、C₄、C₅和C₆的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限於：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和S-戊氧基。

除非另有規定，術語「芳基」表示多不飽和的芳族烴取代基，可以是單取代或多取代的，可以是一價、二價或者多價，它可以是單環或多環(比如1至3個環；其中至少一個環是芳族的)，它們稠合在一起或共價連接。術語「雜芳基」是指含有一至四個雜原子的芳基(或環)。在一個示範性實例中，雜原子選自B、N、O和S，其中氮和硫原子任選地被氧化，氮原子任選地被季銨化。雜芳基可通過雜原子連接到分子的其餘部分。芳基或雜芳基的非限制性實施例包括苯基、萘基、聯苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡嗪基、噁唑基、苯基-噁唑基、異噁唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、苯並噻唑基、嘌呤基、苯並咪唑基、吲哚基、異喹啉基、喹喔啉基、喹啉基、1-萘基、2-萘基、4-聯苯基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、3-吡唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、吡嗪基、2-噁唑基、4-噁唑基、2-苯基-4-噁唑基、5-噁唑基、3-異噁唑基、4-異噁唑基、5-異噁唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-苯並噻唑基、嘌呤基、2-苯並咪唑基、5-吲哚基、1-異喹啉基、5-異喹啉基、2-喹喔啉基、5-喹喔啉基、3-喹啉基和6-喹啉基。上述任意一個芳基和雜芳基環系的取代基選自下文所述的可接受的取代基。

除非另有規定，芳基在與其他術語聯合使用時(例如芳氧基、芳硫基、芳烷基)包括如上定義的芳基和雜芳基環。因此，術語「芳烷基」意在包括芳基附著於烷基的那些原子團(例如苄基、苯乙基、吡啶基甲基等)，包括其中碳原子(如亞甲基)已經被例如氧原子代替的那些烷基，例如苯氧基甲基、2-吡啶氧甲基3-(1-萘氧基)丙基等。

術語「離去基團」是指可以被另一種官能團或原子通過取代反應(例如親和取代反應)所取代的官能團或原子。例如，代表性的離去基團包括三氟甲磺酸酯；氯、溴、碘；磺酸酯基，如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對溴苯磺酸酯、對甲苯磺酸酯等；醯氧基，如乙醯氧基、三氟乙醯氧基等等。

術語「保護基」包括但不限於「氨基保護基」、「羥基保護基」或「巰基保護基」。術語「氨基保護基」是指適合用於阻止氨基氮位上副反應的保護基團。代表性的氨基保護基包括但不限於：甲醯基；醯基，例如鏈烷醯基(如乙醯基、三氯乙醯基或三氟乙醯基)；烷氧基羰基，如叔丁氧基羰基(Boc)；芳基甲氧羰基，如苄氧羰基(Cbz)和9-芴甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基，如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、1,1-二-(4'-甲氧基苯基)甲基；甲矽烷基，如三甲基甲矽烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲矽烷基(TBS)等等。術語「羥基保護基」是指適合用於阻止羥基副反應的保護基。代表性羥基保護基包括但不限於：烷基，如甲基、乙基和叔丁基；醯基，例如鏈烷醯基(如乙醯基)；芳基甲基，如苄基(Bn)，對甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基，DPM)；甲矽烷基，如三甲基甲矽烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲矽烷基(TBS)等等。

本發明的化合物可以通過本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。

化合物經手工或者ChemDraw®軟件命名，市售化合物採用供應商目錄名稱。

本發明採用下述縮略詞：MeCN代表乙腈；DCM代表二氯甲烷；THF代表四氫呋喃；AcOH代表乙酸；TFA代表三氟乙酸；DMF代表N,N-二甲基甲醯胺；H₂O代表水；Boc代表叔丁氧羰基，Bn代表苄基，兩者都是胺保護基團；DIPEA代表二異丙基乙胺；MnO₂代表二氧化錳；DIBAL-H代表二異丁基氫化鋁；NaH代表鈉氫；MeMgBr代表甲基溴化鎂；LiHMDS代表六甲基二矽基胺基鋰；Pd₂(dba)₃代表三(二亞苄基丙酮)二鈀；Pd(dppf)Cl₂代表[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀；Pd(OAc)₂代表醋酸鈀；Pd(PPh₃)₄代表三苯基膦鈀；Pd(PPh₃)₂Cl₂代表二(三苯基膦)二氯化鈀；PO代表口服；Xphos代表2-二環己基膦-2',4',6'-三異丙基聯苯；BINAP代表(±)-2,2'-雙-(二苯膦基)-1,1'-聯萘；Xphos-Pd-G1代表氯(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)[2-(2'-氨基乙基苯基)]鈀(II)；Xphos-PD-G₂代表氯(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-聯苯)]鈀(II)；Xphos-Pd-G3代表甲磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)[2-(2'-氨基-1,1'-聯苯)]鈀(II)；NIS代表N-碘代二丁醯亞胺；NBS代表N-溴代二丁醯亞胺；Br₂代表液溴；NH₂OH．HCl代表鹽酸羥胺；NaOAc代表醋酸鈉；Cs₂CO₃代表碳酸銫；OsO₄代表四氧化鋨；NaIO₄代表高碘酸鈉；DAST代表二乙胺基三氟化硫；PO代表灌胃給藥；QD代表每天一次。

[技術效果]

本發明化合物對CDK4和CDK6激酶具有明顯的抑制活性。同時本發明的化合物對H358肺癌細胞具有明顯的增殖抑制活性。本發明的某些化合物較參照化合物Palbociclib具有更高的NCI-H358細胞增殖的抑制活性。

與參照化合物Palbociclib和LY2835219相比，本發明化合物具有較高的滲透性，而且體內吸收及轉運受到外排轉運體影響的可能性較低。更好的滲透性使得本發明化合物在體內組織(比如肺部)中分佈更多，帶來更好的體內抗腫瘤藥效。同時，更好的滲透性使得本發明化合物有可能穿透血腦屏障，達到治療腦轉移的癌症(包括肺癌)的目的。

本發明化合物較Palbociclib具有更高的動力學溶解度。動力學溶解度可以幫助我們更好的理解體外和體內生物測試數據。此外，本發明化合物在人、大鼠、小鼠體內的肝微粒體穩定性較好，且其清除率較低。在皮下植入結直腸癌HCT-116模型試驗中，本發明化合物的動物體重減輕較少，顯示本發明化合物具有更好的安全性。

本發明化合物在LU-01-0393肺癌患者來源的基於人源性腫瘤組織異種移植(PDX)模型上展示了顯著的抗腫瘤活性。本發明某些化合物雖然在抑制腫瘤體積增長速度方面與參照化合物Palbociclib效果相當，但是其給藥劑量只須參照化合物的1/2。可見相同劑量下，本發明化合物具有更優的抗腫瘤活性優。從給藥角度出發，可以降低病患的用藥劑量，提高依從性。此外，在皮下植入非小細胞肺癌NCI-H358模型試驗中，在相同劑量條件下，給予本發明化合物的動物體重不但沒有顯著降低，還有逐漸增加的趨勢，提示本發明化合物較現有技術有相當或更優的的安全性。綜合來看，本發明化合物較現有技術具有更好的成藥前景。

[具體實施方式]

下面通過實施例對本發明進行詳細描述，但並不意味著對本發明任何不利限制。本文已經詳細地描述了本發明，其中也公開了其具體實施例方式，對本領域的技術人員而言，在不脫離本發明精神和範圍的情況下針對本發明具體實施方式進行各種變化和改進將是顯而易見的。

本發明的化合物可以通過一系列的合成步驟來製備，其中R₁、R₂、環A和環B與前述的定義相同。

當雜環芳香胺(B)中沒有N-Boc或N-Bn保護基時，在反應流程1所示上面的反應中，2-氯-1,6-萘啶-2-酮(A)與雜環芳香胺(B)反應得到式(I)所示化合物。該反應要求合適的催化劑(比如醋酸鈀)，合適的配體(比如Xphos)，合適的鹼(比如碳酸銫)，合適的溶劑(比如1,4-二氧六環)，根據反應流程1，該反應更適合在高溫下進行。

當雜環芳香胺(B)中有N-Boc或N-Bn保護基時，在反應流程1所示下面的反應中，式(I)所示化合物仍然可由2-氯-1,6-萘啶-2-酮(A)與雜環芳香胺(B)反應製備，但Boc基團要在強酸條件下(比如三氟乙酸)脫除，而Bn基團要在還原條件下(比如濕鈀碳/甲酸銨)脫除，最後脫保護後的中間體在還原的條件下(比如氰基硼氫化鈉)發生還原胺化反應或在鹼性條件下(比如碳酸鉀)發生親核取代反應，即可得到式(I)所示化合物。

當R₁是乙醯基時，在反應流程2所示上面的反應中，2-氯-3-溴-1,6-萘啶-2-酮(C)與錫試劑(D)發生偶聯反應就可以得到化合物(E)。該反應要求合適的催化劑(比如Pd(PPh₃)₄)，合適的溶劑(比如甲苯)。根據反應流程2，該反應更適合在高溫下進行。然後化合物(E)在強酸性條件下(比如三氟乙酸)發生脫保護反應，得到2-氯-1,6-萘啶-2-酮(A)。

當R₁是二氟甲基時，在反應流程2所示下面的反應中，2-氯-3-溴-1,6-萘啶-2-酮(C)與乙烯基硼試劑(F)發生偶聯反應就可以得到化合物(G)，該反應要求合適的催化劑(比如Pd(PPh₃)₂Cl₂)，合適的鹼(比如碳酸銫)，合適的溶劑(比如1,4-二氧六環/水)。根據反應流程2，該反應更適合在高溫下進行。在氧化劑存在的條件下，化合物(G)發生氧化反應製備化合物(H)，該反應要求合適的氧化劑(比如高碘酸鈉)。然後化合物(H)與氟化試劑(I)發生反應，得到2-氯-1,6-萘啶-2-酮(A)，該反應要求合適的氟化試劑(比如DAST)。

在反應流程3所示的反應中，4,6-二氯煙酸酯(J)與一個伯胺反應就可以得到化合物(K)，該反應要求合適的鹼(比如三乙胺)，合適的溶劑(比如乙腈)。而化合物(K)發生還原反應得到化合物(L)。該反應要求合適的還原劑(比如DIBAL-H)，合適的溶劑(比如無水四氫呋喃)。化合物(M)可以由化合物(L)經氧化反應製備，該反應要求合適的氧化劑(比如活性二氧化錳)。化合物(M)與甲基溴化鎂發生親核加成反應得到化合物(N)，該反應要求合適的溶劑(比如無水四氫呋喃)，根據反應流程3，該反應更適合在低溫下進行。化合物(N)發生氧化反應得到化合物(O)，該反應要求合適的氧化劑(比如活性二氧化錳)。化合物(Q)可以由化合物(O)與環化試劑(P)發生縮合和環化反應製備，該反應要求合適的環化試劑(比如磷醯基乙酸三乙酯，乙酸乙酯)，合適的鹼(比如鈉氫，LiHMDS)，合適的溶劑(比如四氫呋喃)，根據反應流程3，該反應更適合在高溫下進行。然後化合物(Q)發生鹵化反應得到化合物(C)，鹵代試劑可以是Br₂，NBS或者NIS，該反應要求合適的溶劑(比如N,N-二甲基甲醯胺，乙腈)。

反應流程4：製備雜環芳香胺(B)

在反應流程4所示的反應中，雜環芳香胺(B)可以由以下兩種方法製備：1)2,5-二溴吡嗪(R)上的一個溴原子先與硼酸酯化合物(S)在鈀催化條件下發生偶聯反應，得到化合物(T)。化合物(T)先在鈀催化條件下與二苯甲基亞胺(U)發生反應，然後在鹼性條件下與鹽酸羥胺反應得到化合物(V)，最後化合物(V)經過雙鍵還原得到雜環芳香胺(B)；2)2,5-二溴吡嗪(R)上的一個溴原子先被市售的或合成的胺(W)取代，得到化合物(X)。化合物(X)可以通過兩種方法製備雜環芳香胺(B)：①化合物(X)先在鈀催化條件下與二苯甲基亞胺(U)發生反應，然後在鹼性條件下與鹽酸羥胺反應得到雜環芳香胺(B)；②化合物(X)在鈀催化條件下與LiHMDS反應製備雜環芳香胺(B)。

方案A

中間體A和中間體B的合成：

第1步：

向4,6-二氯煙酸乙酯(化合物1)(10.00克，45.44毫莫耳，1.00當量)的乙腈(100.00毫升)溶液中，加入N,N-二異丙基乙胺(17.62克，136.32毫莫耳，3.00當量)和環戊胺(3.87克，45.44毫莫耳，1.00當量)。將反應混合物在25℃下攪拌16小時。TLC顯示起始原料剩餘，然後將反應混合物加熱至50℃，攪拌8小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=10：1)顯示反應完全。將混合物濃縮，得到的粗產品溶於乙酸乙酯(100毫升)中，用飽和食鹽水(50毫升×2)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1)純化，得到目標化合物(化合物2)(9.50克，35.35毫莫耳，收率：77.80%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.67(s,1H),8.20(d,J=4.8Hz,1H),6.58(s,1H),4.35(q,J=7.2Hz,2H), 3.88-3.80(m,1H),2.12-2.04(m,2H),1.82-1.75(m,2H),1.74-1.67(m,2H),1.63-1.57(m,2H),1.40(t,J=7.2Hz,3H)；LCMS(ESI)m/z：269.0(M+1)。

第2步：

在-30℃，氮氣保護下，向6-氯-4-(環戊基氨基)煙酸乙酯(化合物2)(9.50克，35.35毫莫耳，1.00當量)的四氫呋喃(100.00毫升)溶液中，滴加DIBAL-H(1M，70.70毫升，2.00當量)，滴加完畢後，將反應混合物升溫至25℃，攪拌16小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=5：1)顯示反應完全。混合物冷卻至0℃，用飽和的硫酸鈉水溶液(50毫升)淬滅反應，然後用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取。合併的有機相用飽和食鹽水(50毫升×2)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮，得到目標化合物(化合物3)(7.50克，33.08毫莫耳，收率：93.59%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.71(s,1H),6.51(s,1H),5.57(d,J=5.2Hz,1H),4.60(s,2H),3.86-3.77(m,1H),2.12-2.03(m,2H),1.82-1.62(m,4H),1.60-1.50(m,2H)。

第3步：

向(6-氯-4-(環戊基氨基)-吡啶-3-基)甲醇(化合物3)(7.50克，33.08毫莫耳，1.00當量)的二氯甲烷(80.00毫升)溶液中，加入活性二氧化錳(28.76克，330.80毫莫耳10.00當量)。將反應混合物在25℃下攪拌16小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=5：1)顯示反應完全。將反應混合物過濾，濾餅用二氯甲烷(50毫升)洗滌，濾液濃縮，得到目標化合物(化合物4)(7.00克，31.15毫莫耳，收率：94.18%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 9.75(s,1H),8.57(d,J=6.8Hz,1H),8.20(s,1H),6.53(s,1H),3.85-3.73(m,1H),2.05-1.94(m,2H),1.78-1.48(m,6H)。

第4步：

在-10℃且在氮氣保護下，向6-氯-4-(環戊基氨基)煙醛(化合物4)(7.0克，31.15毫莫耳，1.00當量)的四氫呋喃(70.00毫升)溶液中，緩慢滴加甲基溴化鎂(3M，25.96毫升，2.50當量)，滴加完畢後將反應混合物在此溫度下攪拌1小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=5：1)顯示反應完全。反應混合液用飽和氯化銨水溶液(30毫升)淬滅，並用乙酸乙酯(50毫升×3)萃取。合併的有機相用飽和鹽水(80毫升×2)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮，得到目標化合物(化合物5)(6.70克，27.83毫莫耳，收率：89.35%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 7.50(s,1H),6.37(s,1H),6.01(d,J=6.4Hz,1H),4.76(q,J=6.4Hz,1H),3.75-3.64(m,1H),1.97-1.90(m,2H),1.75-1.50(m,6H),1.46(d,J=6.6Hz,3H)。

第5步：

向1-(6-氯-4-(環戊基氨基)吡啶-3-基)乙醇(化合物5)(6.70克，27.83毫莫耳，1.00當量)的二氯甲烷(70.00毫升)溶液中，加入活性二氧化錳(24.20克，278.30毫莫耳，10.00當量)，將反應混合物在25℃下攪拌16小時。TLC顯示起始原料剩餘，然後將反應混合物加熱至50 ℃，攪拌8小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=5：1)表明反應完全。將反應混合物冷卻到20℃，過濾並將濾餅用二氯甲烷(50毫升)洗滌，濾液濃縮，得到目標化合物(化合物6)(6.00克，25.14毫莫耳，收率：90.32%)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ 9.22(s,1H),8.59(s,1H),6.60(s,1H),3.90-3.79(m,1H),2.58(s,3H),2.14-2.00(m,2H),1.87-1.67(m,4H),1.63-1.53(m,2H)。

第6步：

在0℃且在氮氣保護下，向磷醯基乙酸三乙酯(14.65克，65.36毫莫耳，2.60當量)的四氫呋喃(60.00毫升)溶液中，分批加入氫化鈉(2.61克，65.36毫莫耳，2.60當量，60%純度)，將反應混合物在此溫度下攪拌20分鐘，然後向反應混合物中加入1-(6-氯-4-(環戊基氨基)吡啶-3-基)乙酮(化合物6)(6.00克，25.14毫莫耳，1.00當量)。滴加完畢後，將反應混合物加熱至70℃，攪拌16小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=5：1)表明反應完全。反應混合物冷卻至25℃，用飽和氯化銨水溶液(20毫升)淬滅，再用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取。合併的有機相用飽和鹽水(50毫升×2)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=50：1至20：1)純化，得到目標化合物(化合物7)(5.00克，3.19毫莫耳，收率：75.70%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.68(s,1H),7.35(s,1H),6.54(s,1H),5.49(q,J=9.2Hz,1H),2.50(s,3H),2.24-2.00(m,6H),1.84-1.76(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：263.0(M+1)。

第7步：

中間體A

向7-氯-1-環戊基-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(化合物7)(1.00克，3.81毫莫耳，1.00當量)的乙酸(20.00毫升)溶液中，依次加入醋酸鈉(1.25克，15.22毫莫耳，4.00當量)和液溴(1.22克，7.61毫莫耳，2.00當量)。該反應混合物加熱至70℃，攪拌20小時，將反應液濃縮，得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1)純化，得到目標化合物(中間體A)(1.10克，3.22毫莫耳，收率：84.51%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.80(s,1H),7.40(s,1H),5.40-5.30(m,1H),2.73(s,3H),2.29-2.12(m,4H),2.07-1.98(m,2H),1.81-1.75(m,2H)。

第8步：

在氮氣保護下，向3-溴-7-氯-1-環戊基-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(化合物8)(500.00毫克，1.46毫莫耳，1.00當量)的甲苯(5.00毫升)溶液中，加入三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫(580.01毫克，1.61毫莫耳，1.10當量)和Pd(PPh₃)₄(168.71毫克146.00微莫耳，0.10當量)。將該反應混合物加熱至110℃，攪拌16小時。LCMS顯示反應完全。將反應液濃縮，得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=30：1)純化，得到目標化合物(化合物9)(400.00毫克，1.20毫莫耳，收率：82.32%)。¹H NMR(300MHz,CD₃OD)δ 8.84(s,1H),7.72(s,1H),5.41-5.30(m,1H),4.57(d,J=2.4Hz, 1H),4.15(d,J=2.4Hz,1H),3.94(q,J=7.2Hz,2H),2.56(s,3H),2.24-2.05(m,6H),1.84-1.78(m,2H),1.35(t,J=6.8Hz,3H)；LCMS(ESI)m/z：333.1(M+1)。

第9步：

中間體B

向7-氯-1-環戊基-3-(1-乙氧基乙烯基)-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(化合物9)(400.00毫克，1.20毫莫耳，1.00當量)的二氯甲烷(5.00毫升)溶液中，加入三氟乙酸(3.00毫升)，將該反應混合物在25℃下攪拌1小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=5：1)和LCMS均顯示反應完全。將反應液濃縮，隨後加入水(5毫升)，用乙酸乙酯(10毫升×3)萃取。合併的有機相用飽和鹽水(20毫升×2)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮，得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1至10：1)純化，得到目標化合物(中間體B)(300.00毫克，984.35微莫耳，收率：81.90%)。LCMS(ESI)m/z：305.2(M+1)。

實施例1

第1步：

向2,5-二溴吡嗪(10.00克，42.04毫莫耳，1.00當量)的1-甲基吡咯烷-2-酮(100.00毫升)溶液中，加入呱嗪-1-甲酸叔丁酯(7.83克，42.04毫莫耳，1.00當量)和碳酸鉀(8.72克，63.06毫莫耳，1.50當量)。將混合物加熱至100℃，攪拌18小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=10：1)顯示反應完全。將反應混合溶液用水(200毫升)稀釋，用乙酸乙酯(200毫升×2)萃取。合併的有機相經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1至5：1)純化，得到目標化合物(11.00克，32.05毫莫耳，收率：76.24%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.15(d,J=1.38Hz,1H),7.87(d,J=1.38Hz,1H),3.56(m,8H),1.49(s,9H)。

第2步：

在氮氣保護下，向4-(5-溴吡嗪-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(10.00克，29.14毫莫耳，1.00當量)和三叔丁基鏻四氟硼酸鹽(2.54克，8.74毫莫耳，0.30當量)的甲苯(100.00毫升)溶液中，加入LiHMDS(1M，60.00毫升，2.06當量)和Pd₂(dba)₃(2.60克，2.84毫莫耳，0.10當量)，將反應混合物加熱至65℃，攪拌16小時。LCMS顯示反應完全。反應混合物用水(50毫升)淬滅，並用乙酸乙酯(100毫升×3)萃取。將合併的有機相濃縮，得到的粗產品通過製備的HPLC(鹼性)純化，得到目標化合物(5.00克，17.90毫莫耳，收率：61.43%)。LCMS(ESI)m/z：280.1(M+1)。

第3步：

向3-乙醯基-7-氯-1-環戊基-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(中間體B)(100.00毫克，328.12微莫耳，1.00當量)，4-(5-氨基吡嗪-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(137.48毫克，492.17微莫耳，1.50的當量)和叔丁醇鉀(110.45毫克，984.35微莫耳，3.00當量)的四氫呋喃(2.00毫升)溶液中，加入Xphos-Pd-G2(25.82毫克，32.81微莫耳，0.10當量)，將反應混合物加熱至80℃，攪拌16小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=1：1)顯示原料已反應完全。將反應液冷卻至室溫並濃縮，得到的粗產品通過製備的TLC(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化，得到目標化合物(40.00毫克，73.04微莫耳，收率：22.26%)。

第4步：

在25℃下，向4-(5-((3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氫-1,6-萘-7-基)氨基)吡嗪-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(60.00毫克，109.56微莫耳，1.00當量)的二氯甲烷(1.00毫升)溶液中，加入三氟乙酸(0.5毫升)，將混合物攪拌0.5小時。LCMS顯示反應完成。將反應液濃縮，得到的粗產品通過製備的HPLC(鹽酸)純化，得到目標化合物的鹽酸鹽(22.78毫克，50.90微莫耳，收率：46.46%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.78(s,1H),8.27(s,1H),8.19(s,1H),7.30(s,1H),5.44-5.32(m,1H),3.93-3.88(m,4H),3.44-3.38(m,4H),2.51(s,3H),2.40(s,3H),2.31-2.16(m,4H),2.08(d,J=8.0Hz,2H),1.82(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：448.1(M+1)。

實施例2

在25℃下，向3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-7-[(5-呱嗪-1-基吡嗪-2-基)氨基]-1,6-萘啶-2-酮(150.00毫克，335.17微莫耳，1.00當量)的二氯乙烷(2.00毫升)溶液中，加入乙醛溶液(553.66毫克，5.03毫莫耳，700.83微升，15.00當量)和醋酸硼氫化鈉(213.11毫克，1.01毫莫耳，3.00當量)。將混合物攪拌1小時。LCMS顯示檢測到約26%的目標化合物。將混合物濃縮，得到的粗產品通過製備的HPLC(鹼性)純化，得到目標化合物(14.35毫克，27.71微莫耳，收率：8.27%，純度：91.83%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.65(s,1H),8.17(d,J=1.3Hz,1H),7.89-7.75(m,2H),7.65(s,1H),5.73(quin,J=9.3Hz,1H),3.60-3.48(m,4H),2.65-2.58(m,4H),2.55(s,3H),2.49(q,J=7.3Hz,2H),2.40(s,3H),2.29(br dd,J=12.4,7.3Hz,2H),2.13(br dd,J=7.9,5.5Hz,2H),2.02-1.95(m,2H),1.82-1.73(m,2H),1.15(t,J=7.2Hz,3H)；LCMS(ESI)m/z：492.3(M+1)。

實施例3

實施例3的合成參考實施例2。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.65(s,1H),8.17(d,J=1.3Hz,1H),7.87-7.74(m,2H),7.46(s,1H),5.74(quin,J=9.3Hz,1H),3.63-3.43(m,4H),2.77(td,J=13.0,6.5Hz,1H),2.73-2.66(m,4H),2.56(s,3H),2.41(s,3H),2.35-2.24(m,2H),2.19-2.07(m,2H),2.03-1.95(m, 2H),1.77(br d,J=4.8Hz,2H),1.11(d,J=6.5Hz,6H)；LCMS(ESI)m/z：490.2(M+1)。

實施例4

在25℃下，向3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-7-[(5-呱嗪-1-基吡嗪-2-基)氨基]-1,6-萘啶-2-酮(150.00毫克，335.17微莫耳，1.00當量)的甲醇(2.00毫升)溶液中，加入(1-乙氧基環丙基氧基)三甲基矽烷(292.12毫克，1.68毫莫耳，335.77微升，5.00當量)和加入氰基硼氰化鈉(63.19毫克，1.01毫莫耳，3.00當量)。將混合物在25℃下攪拌1小時。LCMS顯示原料未完全消耗。將反應混合物加熱至60℃並攪拌18小時。LCMS顯示檢測到目標化合物。將反應混合物濃縮，得到的粗產品通過製備的HPLC(鹼性)純化，得到目標化合物(31.98毫克，65.17微莫耳，產率：19.44%，純度：99.37%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.66(s,1H),8.17(d,J=1.4Hz,1H),7.84-7.77(m,2H),7.44(s,1H),5.74(quin,J=9.3Hz,1H),3.54-3.44(m,4H),2.83-2.73(m,4H),2.56(s,3H),2.41(s,3H),2.35-2.24(m,2H),2.19-2.08(m,2H),2.04-1.93(m,2H),1.78(br dd,J=10.3,5.5Hz,2H),0.56-0.45(m,4H)；LCMS(ESI)m/z：488.3(M+1)。

實施例5

實施例5的合成參考實施例2。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.65(s,1H),8.17(d,J=1.1Hz,1H),7.88-7.73(m,2H),7.65(s,1H),5.73(quin,J=9.3Hz,1H),3.57-3.48(m,4H),2.79(quin,J=7.8Hz,1H),2.55(s,3H),2.51-2.44(m,4H),2.40(s,3H),2.35-2.23(m,2H),2.18-2.04(m,4H),2.02-1.86(m,6H),1.83-1.70(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：502.3(M+1)。

實施例6

實施例6的合成參考實施例2。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.66(s,1H),8.19(d,J=1.1Hz,1H),7.82(s,2H),7.55(s,1H),5.74(quin,J=9.3Hz,1H),4.70(td,J=19.4,6.4Hz,4H),3.68-3.47(m,5H),2.56(s,3H),2.53-2.45(m,4H),2.41(s,3H),2.36-2.23(m,2H),2.19-2.08(m,2H),2.02-1.94(m,2H),1.81-1.75(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：504.2(M+1)。

實施例7

實施例7的合成參考實施例2。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.65(s,1H),8.17(d,J=1.4Hz,1H),7.85-7.75(m,2H),7.70-7.58(m,1H),5.73(t,J=9.3Hz,1H),3.61-3.45(m,4H),2.70-2.62(m,4H),2.61-2.48(m,4H),2.40(s,3H),2.34-2.22(m,2H),2.17-2.06(m,2H),1.98-1.87(m,4H),1.81-1.68(m,4H),1.64-1.53(m,2H),1.51-1.41(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：516.3(M+1)。

實施例8

第1步：

向(2R)-2-甲基呱嗪-1-甲酸叔丁酯(841.94毫克，4.20毫莫耳，1.00當量)的1-甲基吡咯烷-2-酮(10.00毫升)溶液中，加入2,5-二溴吡嗪(1.00克，4.20毫莫耳，1.00當量)和碳酸鉀(871.51毫克，6.30毫莫耳，1.50當量)。將混合物加熱至100℃，攪拌18小時。LCMS顯示反應完全。將反應混合物冷卻至室溫並用水(100毫升)稀釋，再用乙酸乙酯(50毫升×3)萃取。合併的有機相依次用水(50毫升×3)和鹽水(50毫升)洗滌後濃縮。得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1)純化，得到目標化合物(900.00毫克，2.52毫莫耳，收率：59.98%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.12(d,J=1.4Hz,1H),7.84(d,J=1.5Hz,1H),4.35(br s,1H),4.09-4.02(m,1H),3.96(td,J=13.2,2.0Hz,2H),3.32-3.21(m,2H),3.05(dt,J=11.9,3.8Hz,1H),1.49(s,9H),1.19(d,J=6.7Hz,3H)。

第2步：

在氮氣保護下，向(2R)-4-(5-溴吡嗪-2-基)-2-甲基-呱嗪-1-甲酸叔丁酯(900.00毫克，2.52毫莫耳，1.00當量)的1,4-二氧六環(10.00毫升)溶液中，加入二苯基甲基亞胺(502.37毫克，2.77毫莫耳，465.16 微升，1.10當量)，碳酸銫(1.64克，5.04毫莫耳，2.00當量)，Pd(OAc)₂(56.56毫克，252.00微莫耳，0.10當量)和BINAP(313.73毫克，504.00微莫耳，0.20當量)。將混合物加熱至100℃，攪拌18小時。LCMS顯示反應完全。將反應混合物冷卻至室溫，用二氯甲烷(10毫升)稀釋然後過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=40：1至10：1)純化，得到目標化合物(850.00毫克，1.86毫莫耳，收率：73.72%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.82-7.77(m,3H),7.55(d,J=1.4Hz,1H),7.51-7.47(m,1H),7.44-7.38(m,2H),7.36-7.30(m,3H),7.21-7.15(m,2H),4.32(br s,1H),4.01-3.83(m,3H),3.26-3.13(m,2H),2.93(dt,J=12.0,3.7Hz,1H),1.49(s,9H),1.18(d,J=6.8Hz,3H)。

第3步：

向(2R)-4-(5-(二苯亞甲基氨基)吡嗪-2-基)-2-甲基-呱嗪-1-甲酸叔丁酯(850.00毫克，1.86毫莫耳，1.00當量)的甲醇(10.00毫升)溶液中，加入醋酸鈉(183.09毫克，2.23毫莫耳)和鹽酸羥胺(232.65毫克，3.35毫莫耳，1.80當量)，將混合物在20℃下攪拌30分鐘。LCMS顯示反應完全。將反應混合物濃縮，得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1至3：1)純化，得到目標化合物(160.00毫克，545.40微莫耳，收率：29.32%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.69(d,J=1.3Hz,1H),7.64(d,J=1.3Hz,1H),4.36(br s,1H),4.14-4.05(m,2H),3.96(br d,J=13.4Hz,1H),3.86(br d,J=12.2Hz,1H),3.73(br d,J=12.3Hz,1H),3.24(dt,J=12.7,3.5Hz,1H),3.00(dd,J=12.4,4.0Hz,1H),2.79(dt,J=12.0,3.6Hz,1H),1.49(s,9H),1.25(d,J=7.0Hz,3H)。

第4步：

在氮氣保護下，向(2R)-4-(5-氨基吡嗪-2-基)-2-甲基-呱嗪-1-甲酸叔丁酯(160.00毫克，545.40微莫耳，1.00當量)和3-乙醯基-7-氯-1-環戊基-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(中間體B)(166.22毫克，545.40微莫耳，1.00當量)的四氫呋喃(2.00毫升)中，加入Xphos-Pd-G3(46.17毫克，54.54微莫耳，0.10當量)和叔丁醇鉀(122.40毫克，1.09毫莫耳，2.00當量)。將混合物加熱至70℃，攪拌18小時。LCMS顯示反應完全。將反應混合物冷卻至室溫，並用二氯甲烷(5毫升)稀釋，過濾，將濾液濃縮。得到的粗產品通過製備的TLC純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)，得到目標化合物(200.00毫克，313.35微莫耳，收率：57.45%，純度：88%)。LCMS(ESI)m/z：562.2(M+1)。

第5步：

在20℃下，向(2R)-4-(5-((3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-2-氧-1,6-二氮雜萘-7-基)氨基)吡嗪-2-基-2-甲基-呱嗪-1-甲酸叔丁酯(200.00毫克，313.35微莫耳，1.00當量)的二氯甲烷(2.00毫升)溶液中，加入三氟乙酸(1.00毫升)，攪拌15分鐘。LCMS顯示反應完全。將反應液濃縮至幹，得到的粗產品通過製備的HPLC(鹽酸)純化，得到目標化合物的鹽酸鹽(66.91毫克，123.94微莫耳，收率：39.55%，純度：99%)。¹H NMR(400MHz, CD₃OD)δ 8.76(s,1H),8.24(d,J=1.1Hz,1H),8.20(s,1H),7.27(s,1H),5.36(quin,J=8.7Hz,1H),4.50-4.39(m,2H),3.56-3.45(m,2H),3.31-3.21(m,2H),3.10(dd,J=14.1,10.8Hz,1H),2.49(s,3H),2.38(s,3H),2.29-2.12(m,4H),2.10-1.99(m,2H),1.87-1.72(m,2H),1.45(d,J=6.6Hz,3H)；LCMS(ESI)m/z：462.1(M+1)；SFC(AD-3S_4_40_3ML柱：Chiralpak AD-3 100×4.6mm I.D.,3μm；流動相A：40%異丙醇(含0.05%二乙胺)；流動相B：CO₂；流速：3mL/min；波長：280nm)：RT=2.834min。

實施例9

實施例9的起始原料是(2S)-2-甲基呱嗪-1-甲酸叔丁酯，其合成方法參考實施例8。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.76(s,1H),8.24(d,J=1.3Hz,1H),8.20(d,J=1.3Hz,1H),7.26(s,1H),5.37(quin,J=8.7Hz,1H),4.52-4.38(m,2H),3.58-3.44(m,2H),3.36-3.31(m,2H),3.09(dd,J=14.1,10.7Hz,1H),2.49(s,3H),2.38(s,3H),2.30-2.12(m,4H),2.10-1.99(m,2H),1.86-1.74(m,2H),1.45(d,J=6.5Hz,3H)；LCMS(ESI)m/z：462.1(M+1)；SFC(AD-3S_4_40_3ML柱：Chiralpak AD-3 100×4.6mm I.D.,3μm；流動相A：40%異丙醇(含0.05%二乙胺)；流動相B：CO₂；流速：3mL/min；波長：280nm)：RT=3.284min。

實施例10

向3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-7-[[5-[(3S)-3-甲基呱嗪-1-基]吡嗪-2-基]氨基]-1,6-萘啶-2-酮(200.00毫克，433.31微莫耳，1.00當量)的甲醇(20.00毫升)溶液中，加入甲醛溶液(351.68毫克，4.33毫莫耳，322.64微升，10.00當量)，醋酸(500.00微升)和濕鈀碳(100.00毫克)。將反應瓶依次用氮氣和氫氣吹掃三次。保持氫氣壓力(50Psi)，將反應液加熱至50℃，攪拌3小時。LCMS顯示反應完全。將反應液過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過製備的HPLC(鹼性)純化，得到目標化合物(42.66毫克，88.31微莫耳，收率：20.38%，純度：98.45%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.65(s,1H),8.16(s,1H),7.81-7.79(m,3H),5.71(quin,J=9.3Hz,1H),3.98-3.93(m,2H),3.07(dt,J=11.4,3.0Hz,1H),2.92(td,J=11.4,3.2Hz,1H),2.70-2.6(m,1H),2.56(s,3H),2.39(s,3H),2.38-2.37(m,1H),2.35(s,3H),2.31-2.20(m,3H),2.17-2.04(m,3H),2.01-1.93(m,2H),1.84-1.71(m,2H),1.17(d,J=5.6Hz,3H)；LCMS(ESI)m/z：476.3(M+1)。

實施例11

向3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-7-[[5-[(3S)-3-甲基呱嗪-1-基]吡嗪-2-基]氨基]-1,6-萘啶-2-酮(100.00毫克，216.66微莫耳，1.00當量)的乙腈(10.00毫升)溶液中，加入碳酸鉀(149.72毫克，1.08毫莫耳，5.00當量)和2- 碘丙烷(736.60毫克，4.33毫莫耳，433.29微升，20.00當量)。將反應混合物加熱至80℃，攪拌18小時。LCMS顯示約13.5%的原料剩餘，並且有約75.5%的目標化合物生成。將反應混合物冷卻至20℃，過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過製備的HPLC(鹼性)純化，得到目標化合物(9.00毫克，17.87微莫耳，收率：8.25%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.65(s,1H),8.16(d,J=1.4Hz,1H),7.81(d,J=1.3Hz,1H),7.77(s,1H),7.40(s,1H),5.74(quin,J=9.3Hz,1H),3.96-3.89(m,2H),3.33(spt,J=6.5Hz,1H),3.06(dt,J=11.4,3.0Hz,1H),2.92(td,J=11.4,3.2Hz,1H),2.85-2.70(m,2H),2.56(s,3H),2.49-2.47(m,1H),2.41(s,3H),2.35-2.24(m,2H),2.19-2.07(m,2H),2.03-1.93(m,2H),1.84-1.75(m,2H),1.17(dd,J=6.2,4.2Hz,6H),0.93(d,J=6.4Hz,3H)；LCMS(ESI)m/z：504.3(M+1)。

實施例12

實施例12的合成參考實施例1，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹HNMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.77(s,1H),8.26(d,J=1.2Hz,1H),8.24(d,J=1.2Hz,1H),7.27(s,1H),5.44-5.35(m,1H),4.58-4.54(m,2H),3.55-5.45(m,2H),3.00-2.93(m,2H),2.51(s,3H),2.40(s,3H),2.30-2.15(m,4H),2.10-2.05(m,2H),1.84-1.78(m,2H),1.46(d,J=7.2Hz,6H)；LCMS(ESI)m/z：476.3(M+1)。

實施例13

實施例13的合成參考實施例1，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.76(s,1H),8.23(d,J=8.9Hz,2H),7.26(s,1H),5.43-5.29(m,1H),3.99-3.83(m,2H),3.76(s,2H),3.50-3.39(m,2H),2.53-2.46(m,3H),2.39(s,3H),2.29-2.13(m,4H),2.11-2.01(m,2H),1.82(br d,J=5.9Hz,2H),1.51(s,6H)；LCMS(ESI)m/z：476.2(M+1)。

實施例14

向3-乙醯基-1-環戊基-7-[[5-(3,3-二甲基呱嗪-1-基)吡嗪-2-基]氨基]-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(100.00毫克，186.31微莫耳，1.00當量)，甲醛溶液(27.97毫克，931.55微莫耳，25.66微升，5.00當量)和醋酸(44.75毫克，745.24微莫耳，42.62微升，4.00當量)的二氯乙烷(1.00毫升)溶液中，加入醋酸硼氫化鈉(98.72毫克，465.77微莫耳，2.50當量)。將反應液加熱至60℃，攪拌16小時。LCMS顯示反應完全。將反應液濃縮，向得到的殘餘物中滴加飽和碳酸氫鈉水溶液，調節pH至9。得到的水相用二氯甲烷(5毫升×2)萃取，合併的有機相經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過製備的HPLC(鹼性)純化，得到目標化合物(31.00毫克，61.56微莫耳，收率：33.04%，純度：97.229%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.64(s,1H),8.14(s,1H),7.80(s,1H),7.73(s,1H),7.53(s,1H), 5.84-5.59(m,1H),3.62-3.44(m,2H),3.27(s,2H),2.68(br t,J=5.0Hz,2H),2.55(s,3H),2.39(s,3H),2.29(s,3H),2.11(br s,2H),1.97(br d,J=5.4Hz,2H),1.78(br d,J=5.8Hz,4H),1.10(s,6H)；LCMS(ESI)m/z：490.2(M+1)。

實施例15

實施例15的合成參考實施例11。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.64(s,1H),8.12(d,J=1.3Hz,1H),7.79(d,J=1.3Hz,1H),7.70(s,1H),7.44(s,1H),5.86-5.63(m,1H),3.49(br s,2H),3.39-3.28(m,1H),3.23(br s,2H),2.82-2.69(m,2H),2.55(s,3H),2.39(s,3H),2.34-2.20(m,2H),2.17-2.05(m,2H),2.03-1.91(m,2H),1.76(br dd,J=10.4,5.6Hz,2H),1.17(s,6H),1.03(br d,J=6.4Hz,6H)；LCMS(ESI)m/z：518.3(M+1)。

實施例16

實施例16的合成參考實施例1，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.75(s,1H),8.20(s,1H),8.02(s,1H),7.27(s,1H),5.45-5.20(m,1H),4.15-3.97(m,2H),3.81(br t,J=5.8Hz,2H),3.44(br d,J=4.4Hz,2H),3.39-3.33(m,2H),2.48(s,3H),2.37(s,3H),2.31-2.13(m,6H),2.05(br d,J=8.8Hz,2H),1.79(br s,2H)；LCMS(ESI)m/z：462.2(M+1)。

實施例17

實施例17的合成參考實施例1，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.74(s,1H),8.21(s,1H),7.90(s,1H),7.26(s,1H),5.35(t,J=8.3Hz,1H),5.04(br.s.,1H),4.61(s,1H),3.86-3.77(m,1H),3.77-3.69(m,1H),3.49-3.39(m,2H),2.49(s,3H),2.38(s,3H),2.32(d,J=11.2Hz,2H),2.25-2.10(m,5H),2.05(d,J=9.3Hz,2H),1.80(br.s.,2H)；LCMS(ESI)m/z：460.3(M+1)。

實施例18

實施例18的合成參考實施例11，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.74(d,J=7.9Hz,1H),8.20(d,J=4.1Hz,1H),7.94-7.87(m,1H),7.26(d,J=4.6Hz,1H),5.44-5.27(m,1H),5.03(br s,1H),4.82-4.72(m,1H),4.00-3.88(m,1H),3.85-3.67(m,2H),3.65-3.38(m,2H),2.49(s,3H),2.38(s,3H),2.36-2.25(m,2H),2.25-2.11(m,4H),2.05(br d,J=8.9Hz,2H),1.80(br s,2H),1.51(d,J=6.3Hz,2H),1.46(br d,J=5.8Hz,1H),1.43-1.35(m,1H),1.39(br d,J=6.3Hz,2H)；LCMS(ESI)m/z：502.2(M+1)。

實施例19

實施例19的合成參考實施例1和實施例2，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.77(s,1H),8.25(s,1H),8.16-8.03(m,1H),7.30(s,1H),5.44-5.26(m,1H),4.31(br d,J=13.2Hz,2H),4.21-4.06(m,2H),3.70-3.35(m,2H),2.93(s,3H),2.55-2.45(m,3H),2.38(s,3H),2.37-1.92(m,10H),1.80(br s,2H)；LCMS(ESI)m/z：488.1(M+1)。

實施例20

實施例20的合成參考實施例11，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.76(s,1H),8.31-8.20(m,1H),8.14-8.05(m,1H),7.27(s,1H),5.37(br t,J=8.5Hz,1H),4.54-4.35(m,2H),4.34-4.04(m,2H),3.67-3.45(m,2H),3.37(td,J=12.6,6.4Hz,1H),2.54-2.45(m,3H),2.38(s,3H),2.34-2.26(m,2H),2.23(br d,J=10.8Hz,2H),2.18(br d,J=7.5Hz,2H),2.14-2.08(m,2H),2.07-1.98(m,2H),1.86-1.73(m,1H),1.80(br s,1H),1.51(d,J=6.4Hz,6H)；LCMS(ESI)m/z：516.2(M+1)。

實施例21

實施例21的合成參考實施例1，得到目標化合物的三氟乙酸鹽。¹HNMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.71(s,1H),8.24(s,1H),8.07(br s,1H),7.36(s,1H),5.38(quin,J=8.7Hz,1H),4.92-4.47(m,2H),4.20-3.58(m,5H),3.31-3.01(m,2H),2.50(s,3H),2.37(s,3H),2.32-2.13(m,6H),2.09-2.01(m,2H),1.81(br d,J=5.9Hz,2H)；LCMS(ESI)m/z：488.2(M+1)。

實施例22

第1步：

向2,5-二溴吡嗪(1.00克，4.20毫莫耳，1.00當量)的1-甲基吡咯烷酮(10.00毫升)溶液中，加入1-苄基-1,7-二氮雜螺[4,4]壬烷(908.55毫克，4.20毫莫耳，1.00當量)和碳酸鉀(870.72毫克，6.30毫莫耳，1.50當量)。將反應混合物加熱至100℃，攪拌16小時。LCMS顯示反應完全。向反應混合物中加入水(15毫升)，並用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取。合併的有機相用水(20毫升×4)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1至10：1)純化，得到目標化合物(952.00毫克，2.37毫莫耳，收率：56.47%，純度：93%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.04(d,J=1.2Hz,1H),7.63-7.51(m,1H),7.29-7.20(m,4H),7.18-7.13(m,1H),3.68-3.53(m,3H),3.52-3.32(m,2H),3.29-3.18(m,1H),2.72-2.55(m,2H),2.28-2.14(m,1H),1.94-1.68(m,5H)；LCMS(ESI)m/z：375.0(M+1)。

第2步：

在氮氣保護下，向1-苄基-7-(5-溴吡嗪-2-基)-二氮雜螺[4,4]壬烷(800.00毫克，2.14毫莫耳，1.00當量)的甲苯(10.00毫升)溶液中，加入LiHMDS(1M，5.36毫升，2.50當量)，Pd₂(dba)₃(196.25毫克，214.31微莫耳，0.10當量)和三叔丁基膦四氟硼酸鹽(186.53毫克，642.93微莫耳，0.30當量)。將反應混合物加熱至65℃，攪拌16小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=10：1)顯示反應完全。將反應液濃縮，得到的殘餘物用乙酸乙酯(10毫升)稀釋。有機相加入飽和氟化鉀水溶液(10毫升)，得到的混合液在30℃下攪拌16小時。將上述混合溶液用乙酸乙酯(10毫升×3)萃取，有機相濃縮，得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1至二氯甲烷：甲醇=20：1)純化，得到目標化合物(700.00毫克，粗品)。LCMS(ESI)m/z：310.3(M+1)。

第3步：

向5-(1-苄基-1,7-二氮雜螺[4,4]壬烷-7-基)吡嗪-2-胺(400.00毫克，1.29毫莫耳，1.00當量)的四氫呋喃(5.00毫升)溶液中，加入3-乙醯基-7-氯-1-環戊基-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(中間體B)(472.80毫克，1.55毫莫耳，1.20當量)和叔丁醇鉀(435.19毫克，3.88毫莫耳，3.00當量)和Xphos-Pd-G3(191.01毫克，258.56微莫耳，0.20當量)。將反應混合物加熱至70℃，攪拌16小時。LCMS顯示反應完全。將反應液濃縮，得到的粗產品通過製備的TLC(石油醚：乙酸乙酯=3：1)純化，得到目標化合物(110.00毫克，粗品)。LCMS(ESI)m/z：578.2(M+1)。

第4步：

向3-乙醯基-7-[[5-(1-苄基-1,7-二氮雜螺[4,4]壬烷-7-基)吡嗪-2-基]氨基]-1-環戊基-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(5.00毫克，8.65微莫耳，1.00當量)的四氫呋喃(2.00毫升)和甲醇(2.00毫升)混合溶液中，加入鈀碳(5.00毫克)。保持氫氣壓力(15Psi)，將反應混合物在30℃下攪拌32小時。LCMS顯示反應完全。將反應液過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過製備的HPLC(鹽酸)純化，得到目標化合物的鹽酸鹽(550.00微克，1.05微莫耳，收率：12.13%，純度：93%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.74(s,1H),8.28-8.14(m,1H),7.93-7.84(m,1H),7.31-7.14(m,1H),5.48-5.37(m,1H), 4.08-4.06(m,1H),4.17-4.01(m,1H),3.93-3.77(m,2H),3.73-3.63(m,1H),3.55-3.50(m,1H),2.96-2.88(m,1H),2.51(s,5H),2.43-2.36(m,3H),2.31-2.13(m,8H),2.11-2.01(m,2H),1.89-1.78(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：488.2(M+1)。

實施例23

實施例23的合成參考實施例1。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.63(s,1H),8.14(d,J=1.1Hz,1H),7.63(s,1H),7.58(d,J=1.1Hz,1H),7.46(s,1H),5.84-5.59(m,1H),3.77(dd,J=9.8,7.2Hz,1H),3.72-3.63(m,1H),3.46(dt,J=9.9,6.9Hz,1H),3.37-3.25(m,1H),2.92-2.79(m,1H),2.59-2.51(m,3H),2.39(s,3H),2.34(s,6H),2.30-2.25(m,2H),2.08(br d,J=4.9Hz,2H),2.00-1.95(m,4H),1.77-1.74(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：476.2(M+1)。

實施例24

實施例24的合成參考實施例8，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.75(s,1H),8.20(s,1H),8.10(br s,1H),7.27(s,1H),5.40-5.25(m,1H),4.52(br d,J=12.3Hz,2H),3.56(br t,J=11.7Hz,1H),3.01(br t,J=12.5Hz,2H),2.92(s,6H),2.50(s,3H),2.38(s,3H),2.29-2.13(m,6H),2.07(br d,J=8.8Hz,2H),1.80(br d,J=7.8Hz,4H)；LCMS(ESI)m/z：490.2(M+1)。

實施例25

實施例25的合成參考實施例1，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.75(s,1H),8.19(d,J=1.0Hz,1H),8.01(s,1H),7.24(s,1H),5.37(quin,J=8.7Hz,1H),4.06(td,J=14.7,4.8Hz,1H),3.93-3.84(m,1H),3.75-3.59(m,2H),3.51-3.40(m,1H),2.85(d,J=1.9Hz,6H),2.51(s,3H),2.39(s,4H),2.31-2.13(m,6H),2.12-1.97(m,3H),1.91-1.71(m,4H)；LCMS(ESI)m/z：504.3(M+1)。

實施例26

第1步：

在25℃下，向4-呱啶酮-1-甲酸苄酯(10.00克，42.87毫莫耳，8.55毫升，1.00當量)，呱嗪-1-甲酸叔丁酯(9.58克，51.44毫莫耳，1.20當量)和醋酸(2.57克，42.87毫莫耳，2.45毫升，1.00當量)的甲醇(100.00毫升)溶液中，加入醋酸硼氫化鈉(22.71克，107.18毫莫耳，2.50當量)，將反應混合物攪拌20小時。LCMS顯示目標化合物已生成。將反應液濃縮，得到的殘餘物用乙酸乙酯稀釋。得到的有機相依次用水(100毫升)和飽和食鹽水(50毫升)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=10：1至1：1)純化，得到目標化合物(14.00克，27.65毫莫耳，收率：64.50%，純度：79.7%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.43-7.31(m,5H),5.16-5.12(m,2H),4.36-4.16(m,2H),4.02-3.81(m,1H),3.49-3.40(m,4H),3.23-3.09(m,1H),2.81(br s,2H),2.59-2.45(m,4H),1.81(br d,J=10.5Hz,2H),1.58-1.39(m,11H)。

第2步：

在25℃下，向4-(1-苄氧羰基-4-呱啶)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(9.00克，22.30毫莫耳，1.00當量)的四氫呋喃(90.00毫升)溶液中，加入鈀碳(1.00克)。將懸浮液在真空下脫氣，並用氫氣吹掃幾次。保持氫氣壓力(15Psi)，將混合物在25℃下攪拌16小時。LCMS顯示原料消耗完全並檢測到目標化合物的MS。將反應混合物過濾，濾液濃縮，得到目標化合物(5.25克，19.49毫莫耳，收率：87.40%)。LCMS(ESI)m/z：270.1(M+1)。

第3步：

向4-(4-呱啶基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(2.27克，8.41毫莫耳，1.00當量)和2,5-二溴吡嗪(2.00克，8.41毫莫耳，1.00當量)的二甲亞碸(30.00毫升)與水(6.00毫升)的混合溶液中，加入碳酸鉀(1.28克，9.25毫莫耳，1.10當量)，將反應混合物加熱至90℃，攪拌16小時。LCMS顯示原料消耗完全，並檢測到目標化合物的MS。將反應混合物冷卻至25℃，加入水(30毫升)，並將所得的混合物攪拌30分鐘，然後過濾。將濾餅溶解在二氯甲烷(30毫升)中，並依次用水(20毫升×2)和飽和食鹽水(20毫升×2)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮，得到目標化合物(1.92克，4.41毫莫耳，收率：52.41%，純度：97.88%)，該產物無需純化，直接用於下一步反應。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.10(d,J=1.4Hz,1H),7.87(d,J=1.4Hz,1H),4.28(br d,J=13.3Hz,2H),3.52-3.33(m,4H),2.98-2.80(m,2H),2.60-2.42(m,4H),1.92(br d,J=12.3Hz,2H),1.78(br s,1H),1.59-1.50(m,2H),1.46(s,9H)；LCMS(ESI)m/z：426.0(M+1)。

第4步：

在氮氣保護下，向4-[1-(5-溴吡嗪-2-基)-4-呱啶基]呱嗪-1-甲酸叔丁酯(1.50克，3.44毫莫耳，1.00當量)，三叔丁基膦四氟硼酸鹽(299.73毫克，1.03毫莫耳，0.30當量)的甲苯(15.00毫升)溶液中，加入LiHMDS(1M，7.09毫升，2.06當量)和Pd₂(dba)₃(315.34毫克，344.36微莫耳，0.10當量)，將反應混合物加熱至65℃，攪拌16小時。LCMS顯示大部分原料已消耗掉，而且檢測到目標化合物的MS。將反應混合物用飽和氯化銨水溶液(10毫升)淬滅，然後用乙酸乙酯(20毫升)萃取。有機相用10%的檸檬酸水溶液調節pH至2，然後分液，水相用10%的氫氧化鈉溶液調節pH至9，過濾。得到濾餅經真空乾燥後，得到目標化合物(672.00毫克，1.85毫莫耳，收率：53.72%，純度：100%)，該產物無需純化，直接用於下一步反應。LCMS(ESI)m/z：363.1(M+1)。

第5步：

在氮氣保護下，向4-[1-(5-氨基吡嗪-2-基)-4-呱啶基]呱嗪-1-甲酸叔丁酯(300.00毫克，827.65微莫耳，1.00當量)，3-乙醯基-7-氯-1-環戊基-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(中間體B)(252.24毫克，827.65微莫耳，1.00當量)和叔丁醇鉀(278.61毫克，2.48毫莫耳，3.00當量)的四氫呋喃(20.00毫升)溶液中，加入Xphos-Pd-G3(35.03毫克，41.38微莫耳，0.05當量)，將反應混合物加熱至80℃，攪拌16小時。LCMS顯示大部分原料已消耗掉，而且檢測到目標化合物的MS。將反應混合物濃縮，得到的殘餘物溶解在乙酸乙酯(15毫升)中，然後用水(10毫升×2)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮。得到粗產品通過製備的TLC(二氯甲烷：甲醇=10：1)純化，得到目標化合物(63.00毫克，82.87微莫耳，收率：10.01%，純度：82.976%)。LCMS(ESI)m/z：631.3(M+1)。

第6步：

在25℃下，向4-[1-[5-[(3-乙醯基-1-環己基-4-甲基-2-氧代-1,6-萘啶-7-基)氨基]吡嗪-2-基]-4-呱啶]呱嗪-1-甲酸叔丁酯(63.00毫克，82.87微莫耳，1.00當量)的二氯甲烷(3.00毫升)溶液中，加入三氟乙酸(1.54克，13.51毫莫耳，1.00毫升，162.98當量)，將反應混合物攪拌30分鐘。LCMS 顯示原料消耗完全並檢測到目標化合物的MS。將反應混合物濃縮，得到的粗產品通過製備的HPLC(鹽酸)純化，得到目標化合物的鹽酸鹽(13.00毫克，19.34微莫耳，收率：23.34%，純度：95.231%)。¹HNMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.73(s,1H),8.20(s,1H),8.13(s,1H),7.24(s,1H),5.35(quin,J=8.5Hz,1H),4.56(br d,J=13.1Hz,2H),4.05-3.43(m,9H),3.03(br t,J=12.3Hz,2H),2.49(s,3H),2.38(s,3H),2.34(br s,2H),2.29-2.12(m,4H),2.11-1.99(m,2H),1.96-1.84(m,2H),1.80(br d,J=5.6Hz,2H)；LCMS(ESI)m/z：531.3(M+1)。

實施例27

實施例27的合成參考實施例26，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.75(s,1H),8.22(s,1H),8.13(s,1H),7.26(s,1H),5.45-5.31(m,1H),4.56(br d,J=13.4Hz,2H),4.12(br d,J=10.1Hz,2H),3.89(br t,J=12.0Hz,2H),3.58(br d,J=12.2Hz,3H),3.30-3.20(m,2H),3.02(br t,J=12.6Hz,2H),2.51(s,3H),2.39(s,3H),2.33(br d,J=10.1Hz,2H),2.15-2.03(m,3H),2.26-2.00(m,3H),1.90-1.74(m,4H)；LCMS(ESI)m/z：532.3(M+1)。

實施例28

第1步：

在氮氣保護下，向2,5-二溴吡嗪(2.00克，8.41毫莫耳，1.00當量)的1,4-二氧六環(20.00毫升)和水(2.00毫升)的混合溶液中，加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧代硼烷-2-基)-3,6-二氫-2H-呱啶-1-甲酸叔丁酯(2.60克，8.41毫莫耳，1.00當量)、磷酸鉀(3.57克，16.82毫莫耳，2.00當量)和Pd(dppf)Cl₂(307.60毫克，420.50微莫耳，0.05當量)。將反應混合物加熱至100℃，攪拌16小時。TLC(石油醚：乙酸乙酯=20：1)顯示反應完全。將反應液濃縮，得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1至10：1)純化，得到目標化合物(1.60克，粗品)。

第2步：

在氮氣保護下，向4-(5-溴吡嗪-2-基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(1.50克，4.41毫莫耳，1.00當量)的二氧六環(20.00毫升)溶液中，加入二苯甲基亞胺(879.15毫克，4.85毫莫耳，814.03微升，1.10當量)，碳酸銫(2.87克，8.82毫莫耳，2.00當量)，Pd(OAc)₂(99.01毫克，441.00微莫耳，0.10當量)和BINAP(274.60毫克，441.00微莫耳，0.10當量)。將反應液加熱至100℃，攪拌18小時。LCMS顯示反應完全。將反應混合物冷卻至20℃，並用二氯甲烷(20毫升)稀釋，過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過製備的HPLC(鹼性)純化，得到目標化合物(1.40克，3.14毫莫耳，收率：71.12%，純度：98.7%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.36(d,J=1.1Hz,1H),7.88(d,J=1.1Hz,1H),7.82(br d,J=6.7Hz,2H),7.58-7.39(m,4H),7.30(br d,J=7.1Hz,2H),7.17(br d,J=6.2Hz,2H),6.55(br s,1H),4.11(br d,J=2.4Hz,2H),3.62(br t,J=5.5Hz,2H),2.57(br s,2H),1.48(s,9H)。

第3步：

在25℃下，向4-[5-(二苯亞甲基氨基)吡嗪-2-基]-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(500.00毫克，1.12毫莫耳，1.00當量)的甲醇(10.00毫升)溶液中，加入醋酸鈉(110.27毫克，1.34毫莫耳，1.20當量)和鹽酸羥胺(140.12毫克，2.02毫莫耳，1.80當量)，並攪拌30分鐘。LCMS顯示反應完全。將反應液濃縮，得到的粗產品通過製備TLC(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化，得到目標化合物(190.00毫克，687.58微莫耳，收率：61.38%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.10(d,J=1.2Hz,1H),7.95(d,J=1.3Hz,1H),6.42(br s,1H),4.59(br s,2H),4.11(br d,J=2.7Hz,2H),3.64(br t,J=5.6Hz,2H),2.58(br s,2H),1.49(s,9H)。

第4步：

向4-(5-氨基吡嗪-2-基)-3,6-二氫-2H-吡啶-1-甲酸叔丁酯(180.00毫克，651.40微莫耳，1.00當量)的甲醇(3.00毫升)溶液中，加入濕鈀碳(100.00毫克)。在25℃下，保持氫氣壓力(15Psi)，將反應混合物攪拌1小時。LCMS顯示約有60%原料剩餘，將反應化合物在此條件下繼續攪拌18小時。LCMS顯示反應完全。將反應液過濾，濾液濃縮，得到目標化合物(160.00毫克，574.82微莫耳，收率：88.24%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.94(d,J=1.4Hz,1H),7.87(d,J=1.4Hz,1H),4.46(br s,2H),4.25(br s,2H),2.82(br t,J=10.5Hz,2H),2.78-2.69(m,1H),1.85(br d,J=13.2Hz,2H),1.69(dd,J=12.7,4.1Hz,2H),1.48(s,9H)。

第5步：

在氮氣保護下，向4-(5-氨基吡嗪-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(150.00毫克，538.89微莫耳，1.00當量)的四氫呋喃(3.00毫升)溶液中，加入3-乙醯基-7-氯-1-環戊基-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(中間體B)(164.24毫克，538.89微莫耳，1.00當量)，叔丁醇鉀(120.94毫克，1.08毫莫耳，2.00當量)和Xphos-Pd-G3(45.61毫克，53.89微莫耳，0.10當量)。將反應混合物加熱至70℃，攪拌18小時。LCMS顯示反應完全。將反應混合物冷卻至25℃，並用二氯甲烷(10毫升)稀釋，過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過製備的TLC(石油醚：乙酸乙酯=1：2)純化，得到目標化合物(92.00毫克，168.29微莫耳，收率：31.23%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 8.70(s,1H),8.40(d,J=1.4Hz,1H),8.27(s,1H),8.29-8.23(m,1H),8.09(d,J=1.3Hz,1H),7.65(s,1H),5.82(quin,J=9.4Hz,1H),4.29(br s,2H),2.87(ddd,J=11.8, 8.4,3.8Hz,3H),2.57(s,3H),2.43(s,3H),2.39-2.28(m,2H),2.28-2.16(m,2H),2.08-1.99(m,2H),1.95-1.88(m,2H),1.87-1.71(m,4H),1.49(s,8H),1.51-1.47(m,1H)。

第6步：

向4-[5-[(3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-2-氧代-1,6-萘啶-7-基)氨基]呱嗪-2-基]呱啶-1-甲酸叔丁酯(87.00毫克，159.15微莫耳，1.00當量)的二氯甲烷(1.00毫升)溶液中，加入三氟乙酸(500.00微升)。將反應液在30℃下攪拌0.5小時。LCMS顯示反應完全。將反應液濃縮，得到的粗產品通過製備的HPLC(鹽酸)純化，得到目標化合物的鹽酸鹽(37.58毫克，70.61微莫耳，收率：44.36%，純度：97.599%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.86(s,1H),8.62(d,J=0.8Hz,1H),8.43(s,1H),7.47(s,1H),5.40(quin,J=8.6Hz,1H),3.55(br d,J=12.8Hz,2H),3.29-3.17(m,3H),2.50(s,3H),2.41(s,3H),2.30-2.01(m,10H),1.86-1.74(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：447.2(M+1)。

實施例29

實施例29的合成參考實施例1，得到目標化合物的三氟乙酸鹽。¹HNMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.69(s,1H),8.32(d,J=1.1Hz,1H),8.08(d,J=1.5Hz,1H),7.70(br s,1H),3.91-3.71(m,4H),4.88-4.87(m,1H),3.42-3.35(m, 4H),2.67-2.51(m,2H),2.48(s,3H),2.37(s,3H),2.04-1.93(m,2H),1.80(br d,J=11.8Hz,3H),1.54(q,J=13.0Hz,2H),1.40(br t,J=12.7Hz,1H)；LCMS(ESI)m/z：462.3(M+1)。

實施例30

實施例30的合成參考實施例1，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.84(s,1H),8.17(d,J=1.5Hz,1H),8.05(d,J=1.5Hz,1H),7.75-7.60(m,3H),7.47-7.36(m,2H),6.30(s,1H),3.94-3.78(m,4H),3.41-3.34(m,4H),2.52(s,3H),2.49(s,3H)；LCMS(ESI)m/z：456.1(M+1)。

方案B

實施例31

第1步：

在氮氣保護下，向3-溴-7-氯-1-環戊基-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(中間體A)(3.00克，7.86毫莫耳，1.00當量)，乙烯基三氟硼酸鉀(1.26克，9.43毫莫耳，1.20當量)和碳酸銫(5.12克，15.72毫莫耳，2.00當量)的二氧六環(30.00毫升)和水(6.00毫升)的混合溶液中，加入Pd(PPh₃)₂Cl₂(275.76毫克，392.88微莫耳，0.05當量)，將反應混合物加熱至110℃，攪拌2小時。LCMS顯示反應完全。將反應混合物冷卻至25℃，加入水(20毫升)，濃縮除去二氧六環。水相用乙酸乙酯(30毫升×3)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(30毫升×2)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=30：1)純化，得到目標化合物(化合物9)(1.00克，3.46毫莫耳，收率：44.03%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.77(s,1H),7.34(s,1H),6.82-6.72(m,1H),5.75(s,1H),5.71(dd,J=7.4,1.9Hz,1H),5.41(quin,J=8.9Hz,1H),2.60(s,3H),2.28-2.18(m,2H),2.17-2.08(m,2H),2.05-1.97(m,2H),1.82-1.74(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：251.1(M+1)。

第2步：

向7-氯-1-環戊基-4-甲基-3-乙烯基-1,6-萘啶-2-酮(化合物9)(700.00毫克，2.42毫莫耳，1.00當量)的二氧六環(8.00毫升)和水(2.00毫升)的混合溶液中，加入高碘酸鈉(1.56克，7.27毫莫耳，402.97微升，3.00當量)和四氧化鋨(24.65毫克，96.96微莫耳，5.03微升，0.04當量)，將混合物在30℃下攪拌2小時。TLC顯示反應完全。將反應混合物用水(10毫升)稀釋，過濾，濾液用乙酸乙酯(20毫升×2)萃取。合併的有機相用飽和食鹽水(20毫升×2)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥後過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1)純化，得到目標化合物(化合物10)(560.00毫克，1.93毫莫耳，收率：79.62%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 10.46(s,1H),8.87(s,1H),7.28(s,1H),5.33(quin,J=8.9Hz,1H),2.77(s,3H),2.15(br dd,J=12.1,7.6Hz,2H),2.05(br dd,J=8.4,5.4Hz,2H),1.99-1.93(m,2H),1.76-1.69(m,2H)。

第3步：

在25℃下，向7-氯-1-環戊基1-4-甲基-2-氧代-1,6-萘啶-3-甲醛(化合物10)(560.00毫克，1.93毫莫耳，1.00當量)的二氯甲烷(6.00毫升)溶液中，加入DAST(1.56克，9.65毫莫耳，1.27毫升，5.00當量)，將反應混合物攪拌16小時。LCMS顯示反應完全。將反應液濃縮，得到的粗產品通過矽膠柱層析(石油醚：乙酸乙酯=20：1)純化，得到目標化合物(化合物11)(500.00毫克，1.60毫莫耳，收率：82.84%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 10.46(s,1H),8.87(s,1H),7.28(s,1H),5.33(quin,J=8.9Hz,1H),2.77(s,3H),2.20-2.11(m,2H),2.08-2.01(m,2H),1.99-1.92(m,2H),1.78-1.70(m,2H)。

第4步：

在氮氣保護下，向7-氯-1-環戊基-3-(二氟甲基)-4-甲基-1,6-萘啶-2-酮(化合物11)(100.00毫克，319.75微莫耳，1.00當量)，4-(5-氨基吡嗪-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(107.18毫克，383.71微莫耳，1.20當量)的二氧六環(2.00毫升)中，加入碳酸銫(208.36毫克，639.51微莫耳，2.00當量)，Xphos(15.24毫克，31.98微莫耳，0.10當量)和Pd(OAc)₂(3.59毫克，15.99微莫耳，0.05當量)，將反應混合物加熱至100℃，攪拌16小時。LCMS顯示反應完全。將反應混合物冷卻至30℃，過濾，濾液濃縮。得到的粗產品通過製備的TLC(石油醚：乙酸乙酯=2：1)純化，得到目標化合物(化合物12)(16.70毫克，30.06微莫耳，收率：9.40%)。LCMS(ESI)m/z：251.1(M+1)。

第5步：

在30℃下，向4-[5-[[1-環戊基-3-(二氟甲基)-4-甲基-2-氧代-1,6-萘啶-7-基]氨基]吡嗪-2-基]呱嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物12)(20.00毫克，36.00微莫耳，1.00當量)的二氯甲烷(2.00毫升)溶液中，加入三氟乙酸(1.00毫升)，將反應液攪拌0.5小時。LCMS顯示反應完全。將反應液減壓濃縮，除去二氯甲烷和三氟乙酸。得到的粗產品通過製備的HPLC(鹽酸)純化，得到目標化合物的鹽酸鹽(15.00毫克，28.03微莫耳，收率：77.86%，純度：98.74%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.86(s,1H),8.28(d,J=0.9Hz,1H),8.22(s,1H),7.33-7.06(m,2H),5.45-5.34(m,1H),3.96-3.88(m,4H),3.45-3.39(m,4H),2.70(s,3H),2.30-2.16(m,4H),2.12-2.02(m,2H),1.83(br d,J=5.5Hz,2H)；LCMS(ESI)m/z：251.1(M+1)。

實施例32

向1-環戊基-3-(二氟甲基)-4-甲基-7-[(5-呱嗪-1-基吡嗪-2-基)氨基]-1,6-萘啶-2-酮(177.00毫克，388.58微莫耳，1.00當量)的二氯乙烷(5.00毫升)溶液中，加入丙酮(112.84毫克，1.94毫莫耳，142.84微升，5.00當量)，醋酸硼氫化鈉(205.89毫克，971.45微莫耳，2.50當量)和醋酸(46.67毫克，777.16微莫耳，44.45微升，2.00當量)。將反應混合物在30℃下攪拌2小時。LCMS顯示原料消耗完全，並檢測到目標化合物的MS。將反應液減壓濃縮，得到的粗產品通過製備的HPLC(鹽酸)純化，得到目標化合物的鹽酸鹽(49.67毫克，85.49微莫耳，收率：22.00%，純度：98.19%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.86(s,1H),8.27(d,J=1.1Hz,1H), 8.23(d,J=1.2Hz,1H),7.34-7.07(m,1H),7.24(s,1H),5.45-5.33(m,1H),4.58(br d,J=13.6Hz,2H),3.68(br d,J=13.1Hz,2H),3.72-3.66(m,1H),3.43-3.35(m,2H),3.32-3.22(m,2H),2.70(s,3H),2.32-2.13(m,4H),2.12-2.00(m,2H),1.88-1.75(m,2H),1.46(d,J=6.6Hz,6H)；LCMS(ESI)m/z：498.0(M+1)。

實施例33

向3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-7-[(5-呱嗪-1-基吡嗪-2-基)氨基]-1,6-萘啶-2-酮(0.2克，446.89微莫耳，1當量)的DMF(4毫升)溶液中加入2-溴乙醇(72.60毫克，580.96微莫耳，41.25微升，1.3當量)和碳酸鈉(142.10毫克，1.34毫莫耳，3.0當量)，將反應混合物加熱至80℃，攪拌16小時。LCMS顯示反應已完成。將反應混合物過濾，並通過製備的HPLC(鹼性)純化，得到目標化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 9.95(br s,1H),8.75(s,1H),8.54(s,1H),7.97(s,1H),7.63(s,1H),5.57(quin,J=9.1Hz,1H),3.55(t,J=6.2Hz,2H),3.48-3.41(m,4H),2.57-2.53(m,4H),2.47-2.39(m,5H),2.34(s,3H),2.25-2.06(m,4H),1.94-1.82(m,2H),1.77-1.65(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：492.4(M+1)。

實施例34

向3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-7-[(5-呱嗪-1-基吡嗪-2-基)氨基]-1,6-萘啶-2-酮(200毫克，446.89微莫耳，1當量)，2-氯-N,N-二甲基乙胺(64.37毫克，446.89微莫耳，1當量，鹽酸鹽)和碳酸鈉(142.10毫克，1.34毫莫耳，3當量)的DMF(5毫升)溶液中加入碘化鈉(13.40毫克，89.38微莫耳，0.2當量)，將反應混合物加熱至80℃，攪拌16小時。LCMS顯示反應已完成。將反應混合物過濾，濾液通過製備的HPLC(鹽酸)純化，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.75(s,1H),8.27(d,J=0.9Hz,1H),8.22(s,1H),7.25(s,1H),5.41(quin,J=8.8Hz,1H),3.82-3.70(m,4H),3.69-3.35(m,4H),3.33-3.31(m,4H),3.06(s,6H),2.51(s,3H),2.40(s,3H),2.32-2.16(m,4H),2.13-2.03(m,2H),1.83(br d,J=5.9Hz,2H)；LCMS(ESI)m/z：519.5(M+1)。

實施例35

第1步：

向3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-7-[(5-呱嗪-1-基吡嗪-2-基)氨基]-1,6-萘啶-2-酮(0.15克，335.17微莫耳，1當量)的DMF(3毫升)溶液中加入N-(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯(90.13毫克，402.21微莫耳，1.2當量)和碳酸鈉(106.57毫克，1.01毫莫耳，3.0當量)，將反應混合物加熱至80℃，攪拌16小時。LCMS顯示原料反應並檢測到目標產物生成。將反應混合物過濾，得到目標化合物的DMF溶液，未經進一步純化，直接用於下步反應。LCMS(ESI)m/z：591.5(M+1)。

第2步：

向N-[2-[4-[5-[(3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-2-氧代-1,6-萘啶-7-基)氨基]吡嗪-2-基呱嗪-1-基]乙基]甲酸叔丁酯(197.99毫克，335.17微莫耳，1當量)的DMF(3毫升)溶液中加入三氟乙酸(1毫升)，將反應混合物在20℃下攪拌15小時。LCMS顯示原料沒有轉化完全，但是有大量目標產物生成。將反應混合物過濾，濾液通過製備的HPLC(鹽酸)純化，得到目標化合物的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆)δ 11.52(br s,1H),10.72(br s,1H),8.78(s,1H),8.57(s,1H),8.46(br s,3H),8.14(d,J=1.0Hz,1H),7.67(s,1H),5.53(br t,J=8.9Hz,1H),4.34(br s,2H),3.49-3.30(m,6H),2.44(s,3H),2.33(s,3H),2.26-2.04(m,4H),1.90(br d,J=8.6Hz,2H),1.77-1.65(m,2H)；LCMS(ESI)m/z：491.4(M+1)。

實施例36

向O-乙基羥胺鹽酸鹽(130.78毫克，1.34毫莫耳，6當量)的吡啶(2毫升)溶液中加入3-乙醯基-1-環戊基-4-甲基-7-[(5-呱嗪-1-基吡嗪-2-基)氨基]-1,6-萘啶-2-酮(0.1克，223.45微莫耳，1當量)，將反應混合物加熱至70℃，攪拌16小時。LCMS顯示反應已完成。將反應混合物冷卻至20℃，濃縮至幹。得到的殘餘物通過製備的HPLC(鹽酸)純化，得到目標化合物36a或36b的鹽酸鹽。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 9.45(br s,2H),8.74(s,1H),8.53(s,1H),8.09(d,J=1.1Hz,1H),7.64(s,1H),5.57-5.46(m,1H),4.11(br d,J=7.0Hz,4H),3.76-3.71(m,4H),3.21(br s,4H),2.37(s,3H),2.23-2.09(m,4H),2.00(s,3H),1.89(br d,J=9.0Hz,2H),1.70(br s,2H),1.24(t,J=7.0Hz,3H)；LCMS(ESI)m/z：491.3(M+1)；目標化合物的HPLC：RT=2.088min。

【藥理部分】

本發明涉及的化合物是CDK4/6抑制劑。以下實驗結果證實本專利列舉的化合物確實是CDK4/6抑制劑並且可作為潛在的抗癌藥。此處用到的IC₅₀是指使用某種試劑產生50%最大抑制時對應該試劑的濃度。

實驗例一：酶活性測試

實驗材料：CDK4/cyclin D1，CDK6/cyclin D1(Life technology)。ULight標記的多肽底物ULight-4E-BP1和ULight-MBP(PerkinElmer)。銪標記的抗髓磷脂鹼蛋白抗體和銪標記的兔源抗體(PerkinElmer)，Envision多標記分析儀進行信號的檢測(PerkinElmer)。

實驗方法：將待檢測的化合物進行三倍稀釋，包括10個濃度梯度，最終的濃度範圍是5μM到0.25nM。

●CDK4/cyclin D1的酶反應體系

標準的Lance Ultra方法通過10μL的酶反應體系進行，包含0.3nM CDK4/cyclin D1蛋白，50nM ULight-4E-BP1多肽，和350μM ATP。分別將其溶解在酶緩衝液中，緩衝液的成分包括：PH7.5的羥乙基呱嗪乙硫磺酸溶液50mM，乙二胺四乙酸1mM，氯化鎂10mM，0.01% Brij-35，二硫蘇糖醇2mM。開始反應後，用頂部熱封膜TopSeal-A將OptiPlate384孔板封好，室溫孵育180分鐘。

●CDK6/cyclin D1的酶反應體系

標準的Lance Ultra方法通過10μL的酶反應體系進行，包含0.8nM CDK6/cyclin D1蛋白，50nM ULight-4E-BP1多肽，和250μM ATP。分別將其溶解在酶緩衝液中，緩衝液的成分包括PH7.5的羥乙基呱嗪乙硫磺酸溶液50mM，乙二胺四乙酸1mM，氯化鎂10mM，0.01% Brij-35，二硫蘇糖醇2mM。開始反應後，用頂部熱封膜TopSeal-A將OptiPlate384孔板封好，室溫孵育180分鐘。

準備酶反應終止緩衝液，用1倍稀釋的檢測緩衝液溶解EDTA，終止反應在室溫進行5分鐘。分別在CDK4/cyclin D1和CDK6/cyclin D1反應中加入5μL檢測混合液(分別用銪標記的抗髓磷脂鹼蛋白抗體和銪標記的兔源抗體配置)。室溫孵育60min，根據時間分辨熒光共振能量轉移原理利用Envision儀器檢測反應信號。

數據分析：利用方程式(Max-Ratio)/(Max-Min)*100%將原始數據換算成抑制率，IC₅₀的值即可通過四參數進行曲線擬合得出(XLFIT5中205模式得出，iDBS)。表1提供了本發明的化合物對CDK4/CDK6激酶的抑制活性。

實驗結果：見表1。

實驗結論：本發明化合物對CDK4和CDK6激酶具有顯著的抑制活性。

實驗例二：細胞活性測試

實驗材料：RPMI 1640培養基(Invitrogen-22400089)，胎牛血清(Gibco-10099141)，青黴素/鏈黴素抗生素(Hyclone-SV30010)，L-穀氨醯胺(Invitrogen-35050079)。NCI-H358細胞係來自藥明康德生物部細胞庫。Envision多標記分析儀(PerkinElmer)。

實驗方法：

1)向384微孔板的外圍孔中加入100μL磷酸鹽緩衝液，分別向其它孔中加40μL NCI-H358細胞懸液，其中包含250個NCI-H358細胞。然後將細胞板放到二氧化碳培養箱中過夜培養。

2)用Echo對待測化合物進行3倍梯度稀釋，將每個化合物稀釋10個濃度梯度(從25μM稀釋至1.27nM)並分別加100nL到細胞板的對應孔中，然後將細胞板放回到二氧化碳培養箱中培養7天。

3)向細胞板中加入每孔20μL的Promega CellTiter-Glo試劑，室溫避光震盪10分鐘使發光信號穩定。採用PerkinElmer Envision多標記分析儀讀數。

數據分析：利用方程式(Max-Sample)/(Max-Min)*100%將原始數據換算成抑制率，IC50的值即可通過四參數進行曲線擬合得出(GraphPad Prism中log(inhibitor)vs.response--Variable slope擬合公式計算得出)。表1提供了本發明的化合物對H358細胞增殖的抑制活性。

實驗結果：見表1。

實驗結論：本發明化合物較參照化合物Palbociclib對NCI-H358肺癌細胞具有更好的增殖抑制活性。

實驗例三：Caco-2細胞雙向滲透性評估實驗

實驗目的：Caco-2細胞是一種廣泛用於研究小腸吸收的體外模型，它是一種人的結腸癌細胞。單層Caco-2細胞模型已廣泛地應用於評估在小腸吸收過程中的被動和主動轉運過程。本實驗用於測定本發明化合物及參照化合物Palbociclib和LY2835219穿過Caco-2細胞模型的雙向滲透性。

實驗操作：實驗標準條件如下：- 測試濃度：2μM(DMSO

1%)；- 重複：n=2；- 方向：雙向轉運，包括A→B(細胞內→細胞外)和B→A(細胞外→細胞內)兩個方向；- 孵育時間：單個時間點，2小時；- 轉運緩衝液：HBSS，pH7.4；- 孵育條件：37℃,5% CO2。

孵育結束後，取給藥孔和接收孔內的樣品溶液立即與含有內標的冷乙腈溶液混合。採用LC/MS/MS方法分析待測化合物在所有樣品(包括起始給藥液，給藥孔上清液，接收液)中的濃度。並計算表觀滲透係數，外排比等參數。

實驗結果：見表2。表2列出了本發明化合物及參照化合物Palbociclib和LY2835219在Caco-2單層細胞中的滲透係數。

實驗結論：與參照化合物Palbociclib和LY2835219相比，本發明化合物具有高滲透性，而且體內吸收及轉運受到外排轉運體影響的可能性較低。更好的滲透性可使得本發明化合物在體內組織(比如肺部)中分佈更多，帶來更好的體內抗腫瘤藥效。同時，更好的滲透性使得本發明化合物有可能穿透血腦屏障，達到治療腦轉移肺癌的目的。

實驗例四：溶解度實驗

(1)動力學溶解度實驗

實驗目的：採用常規生物篩選的分析條件，測定化合物的動力學溶解度。

檢測原理：動力學溶解度和pH有關，通常測定溶液的pH值也設定在7.4。本實驗採用搖瓶法HPLC測定。將各化合物用DMSO配製成10mM的儲備液，用磷酸鹽緩衝液稀釋至理論濃度200μM(含2%DMSO)。室溫震搖平衡24小時，抽濾，取上清液，採用HPLC-UV分析檢測。

實驗操作：動力學溶解度測試溶液

緩衝液(pH 7.4)

50mM磷酸鹽緩衝液，pH 7.4。

標準溶液的製備：將50%的乙腈溶液和50%的緩衝溶液混合，得到稀釋液。

10mM(10μL/化合物)儲備液加入490μL稀釋液，混合為200μM的的檢測標準溶液。

以10倍或200倍量的稀釋液稀釋200μM的紫外檢測標準液，得到20μM，1μM的紫外標準溶液。

1、20和200μM的的紫外標準溶液作為動力學溶解性試驗的標準溶液。

方法：樣品製備，震搖和過濾

DMSO溶解化合物配製成10mM的儲配液。儲備液至少為100μL。鹽酸胺碘酮，卡馬西平，氯黴素作為溶解度試驗的QC。

分別精密量取490μL溶解介質(緩衝液)到2mL的96孔板中。

被測試化合物和QC的儲備液各10μL加入到溶解介質中(緩衝液)，對應動力學溶解度溶液在pH 7.4，試驗化合物的理論最大濃度為200μM，含DMSO 2%。蓋上瓶蓋。理論上的被檢測化合物的最大濃度200μM。如果需要更高的理論最高濃度，需增加儲備液的濃度。

在室溫下以每分鐘600轉的轉速，在搖板機上振24小時。

將樣品轉移到96孔過濾板上，抽濾。

用HPLC-UV測試化合物濾液濃度。

QC樣品：

數據分析：從低濃度到高濃度注入3個紫外標準液至HPLC中，然後注入待測化合物的濾液的測試樣品。測試樣品平行進兩針。對紫外色譜峰進行積分。模擬標準曲線並計算樣品的動力學溶解度。

實驗結果：見表3-1。表3-1列出了本發明化合物及參照化合物Palbociclib的動力學溶解度數據。

實驗結論：與參照化合物Palbociclib相比，本發明化合物具有更高的動力學溶解度。

(2)熱力學溶解度實驗

實驗目的：本實驗通過過濾和HPLC方法可以準確可靠的測定化合物的熱力學溶解度。

檢測原理：採用揺瓶法和HPLC測定化合物的熱力學溶解度。化合物的溶解度是影響化合物藥物篩選以及化合物在動物和人體內藥物吸收的一個重要屬性。檢測化合物溶解度，首先需要獲得該化合物的飽和溶液，然後用HPLC定量檢測。

實驗操作：熱力學溶解度溶液

緩衝液(pH 7.4)

50mM磷酸鹽緩衝液，pH值7.4

標準溶液的製備：將50%的乙腈溶液和50%的緩衝溶液混合，得到的稀釋液。

10mM(10μL/化合物)儲備液加入至稀釋液(490μL/化合物)中，混合為200μM的的紫外檢測標準液。

以10倍或100倍量的稀釋液稀釋200μM的紫外檢測標準液，以獲取20μM，2μM的紫外標準溶液。

2，20和200μM的的紫外標準溶液作為熱力學溶解性試驗的標準樣品。

方法：樣品製備，震搖和過濾

稱量不少於2mg的樣品粉末於Whatman miniuniprep的小瓶中。如果要求測試在多個緩衝溶液中測試樣品熱力學溶解度，則每個測試都需要一個單獨的小瓶。

分別添加450μL緩衝液(pH值7.4)到每個Whatman miniuniprep小瓶中。

加入緩衝液後，將Whatman miniuniprep帶過濾的活塞蓋裝上並壓至液面上方，使在震搖過程中過濾網與緩衝溶液液接觸。

渦旋搖動溶解度樣品2分鐘。並記錄溶液現象。

以550轉每分鐘的速度室溫(約22~25℃)震搖24小時。

按壓Whatman Miniunipreps過濾瓶蓋至底部，獲得樣品溶解度溶液的濾液。所有樣品小瓶都應進行過濾前後不溶物質及其滲漏現象。

緩衝液稀釋50倍得到樣品稀釋液。

從低濃度到高濃度注入3個紫外標準液至HPLC中，然後注入待測化合物的稀釋液和上清。待測樣品進樣兩次。

對紫外色譜峰進行積分。模擬標準曲線並計算樣品的熱力學溶解度。

QC樣品：

實驗結果：見表3-2。表3-2列出了本發明化合物及參照化合物Palbociclib的熱力學溶解度數據。

實驗結論：與參照化合物Palbociclib相比，本發明化合物具有更高的熱力學溶解度。

實驗例五：大鼠，小鼠和人肝微粒體代謝穩定性實驗

實驗目的：本試驗用於測試受試物在大鼠，小鼠和人肝微粒體的代謝穩定性

實驗操作：

1)測試化合物濃度為1μM在還原性輔酶Ⅱ再生體系作用下與蛋白濃度為0.5mg/mL的肝微粒體共同孵育在37度水浴條件中。

2)陽性對照包括：***(3A4底物)，丙胺苯丙酮(2D6底物)，雙氯芬酸(2C9底物)。陽性對照孵育條件同化合物孵育條件保持一致。

3)反應時間點為：0、5、10、20、30和60分鐘，在相應時間點時使用含內標的終止液終止反應。在沒有還原性輔酶Ⅱ再生體系作用下，化合物同樣與微粒體孵育60分鐘並作為陰性對照。

4)每個時間點是單點(n=1)。

5)樣品由LC/MS/MS測定，並且化合物濃度顯示為化合物峰面積與內標峰面積的比值(非標曲)。

6)項目報告小結中，將會計算半衰期和清除率。

7)下列公式用於計算清除率：

註：a)microsomal protein in incubation：孵育時蛋白濃度肝重體重比：大鼠，小鼠和人參數分別為40g/kg，88g/kg和20g/kg利用

計算整個肝中的清除率：

註：a)microsomes：微粒體；b)liver：肝；c)body weight：體重；

實驗結果：實驗結果見表4。

實驗結論：本發明化合物在人、大鼠、小鼠體內的肝微粒體穩定性明顯優於參照化合物LY2835219和Palbociclib。

實驗例六：體內藥效研究(一)

在皮下植入LU-01-0393肺癌患者來源的基於人源性腫瘤組織異種移植(PDX)BALB/c裸小鼠上進行體內藥效實驗。

實驗操作：BALB/c裸鼠，雌性，6-8周，體重約17-21克，將小鼠保持在一個特殊的無病原體的環境中，且在單個通風籠中(5隻小鼠每籠)。所有的籠子，鋪墊和水在使用前進行消毒。所有的動物都可以自由獲取標準認證的商業實驗室飲食。共有36隻購於北京Vital River Laboratory Animal Co.,LTD的小鼠用於研究。每隻小鼠在右後背皮下植入腫瘤LU-01-0393 FP4切片(20~30立方毫米)，用於腫瘤的生長。當平均腫瘤體積達到約150~200立方毫米時開始給藥。將試驗化合物每日口服給藥，給藥劑量如表2所示。腫瘤體積每週兩次用二維卡尺測量，體積以立方毫米計量，通過以下公式計算：V=0.5 a x b²，其中a和b分別是腫瘤的長徑和短徑。抗腫瘤藥效是通過用化合物處理過的動物的平均腫瘤增加體積除以未處理過動物的平均腫瘤增加體積來確定。

實驗結果：見表5。

實驗結論：本發明的化合物在LU-01-0393肺癌患者來源的基於人源性腫瘤組織異種移植(PDX)模型上展示了顯著的抗腫瘤活性。如表5所示，實驗開始20天后，未給藥動物組的腫瘤體積從最開始的144立方毫米快速增長至437立方毫米，而同期實施例1所在動物組的腫瘤體積從最開始的144立方毫米緩慢增長至212立方毫米，增長速度與參照化合物Palbociclib所在組相近，但是實施例1的給藥劑量(60mg/kg)只有參照化合物Palbociclib(120mg/kg)的一半，據此可知本發明化合物的抗腫瘤活性優於參考化合物。

實驗例七：體內藥效研究(二)

在皮下植入非小細胞肺癌NCI-H358模型BALB/c裸小鼠上進行體內藥效實驗。

實驗操作：實施例3的實驗動物信息如下：BALB/c裸鼠，雌性，6-8周，體重約17-20克，將小鼠保持在一個特殊的無病原體的環境中，且在單個通風籠中(3-5隻小鼠每籠)。所有的籠子，鋪墊和水在使用前進行消毒。所有的動物都可以自由獲取標準認證的商業實驗室飲食。共有86隻購於北京Vital River Laboratory Animal Co.,LTD的小鼠用於研究。實施例34的實驗動物信息如下：BALB/c裸鼠，雌性，6-8周，體重約16-18克，將小鼠保持在一個特殊的無病原體的環境中，且在單個通風籠中(4隻小鼠每籠)。所有的籠子，鋪墊和水在使用前進行消毒。所有的動物都可以自由獲取標準認證的商業實驗室飲食。共有56隻購於上海靈暢生物科技有限公司的小鼠用於研究。

每隻小鼠在右後背皮下植入NCI-H358腫瘤細胞，用於腫瘤的生長。當平均腫瘤體積達到約100-200立方毫米時開始給藥。將試驗化合物每日口服給藥，實施例3和實施例34的給藥劑量分別如表6-1和表6-2所示。腫瘤體積每週兩次用二維卡尺測量，體積以立方毫米計量，通過以下公式計算：V=0.5 a x b²，其中a和b分別是腫瘤的長徑和短徑。抗腫瘤藥效是通過用化合物處理過的動物的平均腫瘤增加體積除以未處理過動物的平均腫瘤增加體積來確定，而化合物的安全性是通過用化合物處理過的動物的體重變化來確定的。

實驗結果：見表6-1和表6-2。

實驗結論：本發明化合物在非小細胞肺癌NCI-H358模型上展示了顯著的抗腫瘤活性，且具有較好的安全性。此外，在此模型中，本發明化合物的抗腫瘤作用具有量效依賴的趨勢。

TGI：Tumor Growth Inhibition(腫瘤增長抑制率)。TGI(%)=[(1-(某處理組給藥結束時平均瘤體積-該處理組開始給藥時平均瘤體積))/(溶劑對照組治療結束時平均瘤體積-溶劑對照組開始治療時平均瘤體積)]×100%。

實驗例八：體內藥效研究(三)

在皮下植入結直腸癌HCT-116模型BALB/c裸小鼠上進行體內藥效實驗。

實驗操作：BALB/c裸鼠，雌性，6-8周，體重約18-22克，將小鼠保持在一個特殊的無病原體的環境中，且在單個通風籠中(3-5隻小鼠每籠)。所有的籠子，鋪墊和水在使用前進行消毒。所有的動物都可以自由獲取標準認證的商業實驗室飲食。共有48隻購於上海靈暢實驗動物有限公司的小鼠用於研究。將0.2mL 5×106個HCT-116細胞皮下接種於每隻裸小鼠的右後背。腫瘤平均體積達到132mm³時開始分組給藥。將試驗化合物每日口服給藥，給藥劑量如表5所示。腫瘤體積每週兩次用二維卡尺測量，體積以立方毫米計量，通過以下公式計算：V=0.5 a x b²，其中a和b分別是腫瘤的長徑和短徑。抗腫瘤藥效是通過用化合物處理過的動物的平均腫瘤增加體積除以未處理過動物的平均腫瘤增加體積來確定。

實驗結果：見表7。

實驗結論：本發明化合物在結直腸癌HCT-116模型上展示出較好的抗腫瘤活性和較高的安全性。

Claims

一種式(I)所示化合物、其藥學上可接受的鹽，
其中，R₁選自H，或者選自任選被1、2或3個R取代的：C_1~3烷基、C_1~3雜烷基、
R₂分別獨立地選自H、OH、CN、鹵素，或者選自任選被1、2或3個R取代的：C_1~5烷基、C_1~5雜烷基、C_3~6環烷基、3~6元雜環烷基；環A為4~11元雜環烷基；環B選自任選被1、2或3個R取代的：C_3~6環烷基、3~6元雜環烷基、苯基、5~6元雜芳基；R選自鹵素、OH、CN、NH₂、NO₂，或者選自任選被1、2或3個R'取代的：C_1~3烷基、C_1~3雜烷基；R'選自：F、Cl、Br、I、OH、CN、NH₂；所述C_1~3雜烷基、C_1~5雜烷基、3~6元雜環烷基、4~11元雜環烷基、5~6元雜芳基之「雜」，分別獨立地選自：N、-O-、-S-、-NH-、-(C=O)-、-(S=O)-、-(S=O)₂-；以上任何一種情況下，雜原子或雜原子團的數目分別獨立地選自1、2或3。
如請求項1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中R選自F、Cl、Br、OH、CN、NH₂、CH₃、CH₃CH₂、CH₃O、CF₃、CHF₂、CH₂F。
如請求項1或2所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中R₁選自 H，或者選自任選被1、2或3個R取代的：CH₃、CH₃CH₂、CH₃(C=O)-、
、
如請求項3所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中R₁選自 CH₃、CHF₂、CH₃(C=O)-、
、
、
、
。
如請求項1或2所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中環B選自任選被1、2或3個R取代的：環丁基、環戊基、環己基、苯基。
如請求項5所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中環B選自：環戊基、環己基、苯基。
如請求項1或2所述的化合物、其藥學上可接受的鹽或，其中R₂分別獨立地選自H、OH、CN、F、Cl，或者選自任選被1、2或3個R取代的：CH₃、
、
、
、
、
、
、
、
、氧雜環丁烷基、呱嗪基、嗎啉基。
如請求項7所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中R₂分別獨立地選自H，或者選自任選被1、2或3個R取代的：CH₃、
、
、
、
、
如請求項8所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中R₂分別獨立地選自：H、CH₃、
、
、
、
、
、
、
、
如請求項1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中環A為5~9元雜環烷基。
如請求項10所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中結構單元
選自：
如請求項11所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中結構單元
選自
、
、
、
、
、
如請求項11或12所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中結構單元
選自：
、
、
、
、
、
如請求項1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中化合物選自：

其中R₂如請求項1、7~9以及13所定義；R如請求項1或2所定義；環A如請求項1或10~13所定義。
如請求項1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中化合物選自：
其中R₁如請求項1、3或4所定義；R₂如請求項1、7~9或13所定義。
如請求項15所述的化合物、其藥學上可接受的鹽，其中化合物選自：
其中R₂如請求項1、7~9或13所定義。
一種如下式所示的化合物，其藥學上可接受的鹽：
一種藥物組合物，其含有治療有效量的如請求項1~17任意一項所述的化合物、其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體。
一種如請求項1~17任意一項所述的化合物、其藥學上可接受的鹽或如請求項18所述的藥物組合物在製備治療癌症藥物中的應用。